RU2083579C1

RU2083579C1 - Alprazolam high-labeled with tritium and a method of its preparing

Info

Publication number: RU2083579C1
Application number: RU94032337A
Authority: RU
Inventors: И.Ю. Нагаев; В.П. Шевченко; А.В. Потапова; Н.Ф. Мясоедов
Original assignee: Институт молекулярной генетики РАН
Priority date: 1994-09-05
Filing date: 1994-09-05
Publication date: 1997-07-10
Also published as: RU94032337A

Abstract

FIELD: organic chemistry, biochemistry, medicine. SUBSTANCE: method involves preparing tritium-labeled water in the presence of alprazolam by contact of PdO and 5% PdO/Al₂O₃ in atmosphere of gaseous tritium under pressure 545-555 gPa at 69-71 C for 15-20 min in reactor. Then in the same reactor reaction of isotope exchange between alprazolam and tritium-labeled water is carried out in the presence of a mixture of dioxane with triethylamine taken at ratio = (9-11):1 and at ratio alprazolam : tritium-labeled water : solvent mixture = (14-16):(3.2-3.6):(45-55) mg/mcl/mcl. Reaction is carried out at 175-188 C for 55-65 min at uniform heating the reactor. EFFECT: improved method of preparing. 3 cl

Description

Изобретение относится к органической химии и может найти применение в биохимии и в медицине. The invention relates to organic chemistry and may find application in biochemistry and medicine.

Известен алпразолам- биологически активный триазолобензодиазепин, а именно 8-хлор-1-метил-6-фенил-4H-S-триазоло/4,3-α/1,4/бензодиазепин формулы

оказывающий сильное воздействие на центральную нервную систему.Known alprazolam-biologically active triazolobenzodiazepine, namely 8-chloro-1-methyl-6-phenyl-4H-S-triazolo / 4,3-α / 1,4 / benzodiazepine of the formula

having a strong effect on the central nervous system.

Высокомеченный алпразолам не описан; соответственно не описан и способ его получения. Highly labeled alprazolam not described; accordingly, the method for its preparation is not described.

Техническим результатом, достигаемым при реализации изобретения, является разработка условий, позволяющих получать новое высокомеченное биологически активное соединение. The technical result achieved by the implementation of the invention is the development of conditions allowing to obtain a new highly labeled biologically active compound.

Достигается это тем, что получен высокомеченный алпразолам. Достигается это также тем, что в способе его получения, заключающемся в проведении реакции изотопного обмена при взаимодействии алпразолама с тритиевой водой, которую получают выдерживание смеси PdO и 5% PdO/Al₂O₃ в атмосфере трития под давлением 545 555 гПа при 70^oC в течение 15 20 мин, а изотопный обмен проводят в реакторе в смеси растворителей диоксана и триэтиламина при соотношении алпразолама, тритиевой воды и смеси растворителей, равном (14-16): (3,2-3,6):(45-55) мг/мкл/мкл, при температуре 175 188^oC в течение 55-65 мин, при этом проводят равномерный обогрев всего объема реактора.This is achieved by the fact that obtained highly labeled alprazolam. This is also achieved by the fact that in the method for its preparation, which consists in carrying out an isotopic exchange reaction by the interaction of alprazolam with tritium water, which is obtained by maintaining a mixture of PdO and 5% PdO / Al ₂ O ₃ in a tritium atmosphere under a pressure of 545 555 hPa at 70 ^o C for 15 to 20 minutes, and the isotopic exchange is carried out in a reactor in a solvent mixture of dioxane and triethylamine with a ratio of alprazolam, tritium water and a mixture of solvents equal to (14-16): (3.2-3.6) :( 45-55) mg / μl / μl, at a temperature of 175 188 ^o C for 55-65 min, while conducting uniform heating about the volume of the reactor.

Целесообразно брать PdO и 5% PdO/Al₂O₃ в соотношении, равном (2,0-2,5): 3, а диоксан и триэтиламин в соотношении, равном (9-11):1.It is advisable to take PdO and 5% PdO / Al ₂ O ₃ in a ratio of (2.0-2.5): 3, and dioxane and triethylamine in a ratio of (9-11): 1.

Тритиевую воду можно получать в присутствии алпразолама. Tritium water can be obtained in the presence of alprazolam.

Установлено, что высокомеченный алпразолам наиболее целесообразно получать проведением реакции изотопного обмена с тиритевой водой. При этом оказалось, что в условиях получения тритиевой воды алпразолам не разрушается, что позволяет сразу внести его в реактор и в нем же получать тритиевую воду. It has been established that highly labeled alprazolam is most appropriate to obtain by conducting an isotopic exchange reaction with tirite water. It turned out that under the conditions of obtaining tritium water, alprazolam is not destroyed, which allows you to immediately bring it into the reactor and get tritium water in it.

Установлено также, что наиболее эффективный изотопный обмен происходит при проведении реакции в малом объеме смеси растворителей диаксан и триэтиламин, если реактор равномерно обогревать по всему объему. It was also established that the most effective isotopic exchange occurs during the reaction in a small volume of a solvent mixture of diaxane and triethylamine, if the reactor is uniformly heated throughout the volume.

Пример 1. В реакционную ампулу помещали 15 мг алпразолама (The Upiph Company), 22 мг PdO, 30 мг 5% PdO/Al₂O₃. Ампулу вакуумировали, напускали в нее газообразный тритий до создания давления в ней 550 гПа и затем нагревали до 70^oC. Через 15 мин, когда давление в ампуле падало до130 гПа, содержимое ампулы замораживали жидким азотом, вакуумировали, заполняли аргоном, добавляли 50 мкл смеси диоксана с триэтиламином, взятых в соотношении (10:1), после чего ампулу запаивали и выдерживали 1 ч при 180^oC. Затем ампулу замораживали, вскрывали, добавляли 1 мл метанола, очистку высокомеченного тритием алпразолама проводили методом тонкослойной хроматографии на силикагельных пластинах "Силуфол" (Чехия) с использованием подвижной фазы хлороформ-метанол (9:1). Rf алпразолама 0,53. Выход высокомеченного тритием алпразолама 20% молярная радиоактивность препарата 25 27 Ки/ммоль.Example 1. 15 mg alprazolam (The Upiph Company), 22 mg PdO, 30 mg 5% PdO / Al ₂ O ₃ were placed in a reaction vial. The ampoule was evacuated, tritium gas was introduced into it until a pressure of 550 hPa was created in it and then heated to 70 ^° C. After 15 minutes, when the pressure in the ampoule dropped to 130 hPa, the contents of the ampoule were frozen with liquid nitrogen, evacuated, filled with argon, 50 μl of the mixture was added dioxane with triethylamine in the ratio (10: 1), after which the ampoule was sealed and heated 1 hour at 180 ^o C. Then, the ampoule was frozen, necropsied, was added 1 ml of methanol, purification vysokomechennogo alprazolam tritium performed by flash chromatography on silica gel GOVERNMENTAL plates "Silufol" (CZ) using a mobile phase of chloroform-methanol (9: 1). Rf alprazolam 0.53. The yield of high-tritium-labeled alprazolam 20% molar radioactivity 25 27 Ci / mmol.

Пример 2. По методике примера 1 получили высокомеченный тритием алпразолам, но для получения тритиевой воды нагревали смесь 20 мг PdO и 30 мг 5% PdO/Al₂O₃ при 69^oC в течение 20 мин. При проведении реакции изотопного обмена использовали смесь диоксана с триэтиламином в соотношении 9:1. Реакцию проводили при соотношении алпразолама, тритиевой воды и смеси растворителей, равном 14:32:45 мг/мкл/мкл, при температуре 188^oC в течение 55 мин. Очистку целевого продукта проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на хроматографе "Милихром" (Россия) на колонке Сикасорб 5 C₁₈ 2 х 60 мм в системе растворителей: метанол-50 мМ водный раствор ацетата аммония уксусная кислота (649:350:1), скорость 0,1 мл/мин, время удерживания 5,75 мин. Выход 19% молярная радиоактивность препарата - высокомеченного тритием алпразолама 24 26 Ки/ммоль.Example 2. By the method of example 1, high-tritium-labeled alprazolam was obtained, but to obtain tritium water, a mixture of 20 mg of PdO and 30 mg of 5% PdO / Al ₂ O _{3 was} heated at 69 ^° C for 20 minutes. When carrying out the isotope exchange reaction, a mixture of dioxane with triethylamine in a ratio of 9: 1 was used. The reaction was carried out at a ratio of alprazolam, tritium water and solvent mixture equal to 14:32:45 mg / μl / μl, at a temperature of 188 ^° C for 55 minutes. Purification of the target product was carried out by high performance liquid chromatography (HPLC) on a Milichrom chromatograph (Russia) on a Sicaros 5 C ₁₈ 2 x 60 mm column in a solvent system: methanol-50 mM aqueous solution of ammonium acetate acetic acid (649: 350: 1) a speed of 0.1 ml / min; retention time 5.75 min. Yield 19% molar radioactivity of the drug - high-tritium-labeled alprazolam 24 26 Ci / mmol.

Пример 3. По методике примера 1 получили высокомеченный алпразолам, но для получения тритиевой воды нагревали в атмосфере газообразного трития смесь 25 мг PdO и 30 мг 5% PdO/Al₂O₃ при 71^oC в течение 17 мин. При проведении реакции изотопного обмена использовали смесь диоксана с тирэтиламином в соотношении 11: 1. Реакцию проводили при соотношении алпразолама, тритиевой воды и смеси растворителей, равном 16:3,6:55 мг/мкл/мкл, при 175^oC в течение 65 мин. Очистку целевого продукта проводили методом ВЭЖХ на хроматографе "Гилсон" (Франция) на колонке 3,3 х 250 мм Сепарон 7 C₁₈, скорость 0,5 мл/мин, время удерживания 10,91 мин в системе растворителя метанол-50 мМ водный раствор ацетата аммония уксусная кислота (599:400:1). Выход высокомеченного тритием алпразолама 21% молярная радиоактивность препарата 25 26 Ки/ммоль.Example 3. By the method of example 1, high-labeled alprazolam was obtained, but to obtain tritium water, a mixture of 25 mg PdO and 30 mg 5% PdO / Al ₂ O _{3 was} heated at 71 ^° C for 17 min in a tritium gas atmosphere. When carrying out the isotope exchange reaction, a mixture of dioxane with thyretylamine in a ratio of 11: 1 was used. The reaction was carried out at a ratio of alprazolam, tritium water and a solvent mixture of 16: 3.6: 55 mg / μl / μl, at 175 ^o C for 65 min . Purification of the target product was carried out by HPLC on a Gilson chromatograph (France) on a column of 3.3 x 250 mm Separon 7 C ₁₈ , flow rate 0.5 ml / min, retention time 10.91 min in a solvent system methanol-50 mm aqueous solution ammonium acetate acetic acid (599: 400: 1). The yield of tritium-labeled alprazolam is 21% molar radioactivity 25 26 Ci / mmol.

Пример 4. Получили меченный тритием алпразолам по методике примера 1, но реакцию изотопного обмена проводили при 150^oC в течение 2 ч, при этом смесь диоксана и триэтиламина использовали в соотношении 30:1. Выход 28% молярная радиоактивность 5,2 5,4 Ки/ммоль.Example 4. Received tritium-labeled alprazolam according to the method of example 1, but the isotope exchange reaction was carried out at 150 ^o C for 2 hours, while a mixture of dioxane and triethylamine was used in a ratio of 30: 1. Yield 28% molar radioactivity 5.2 5.4 Ci / mmol.

Пример 5. Для получения меченного тритием алпразолама провели перегонку тритиевой воды из ее раствора в диоксане. При этом в ампуле находился катализатор 5% PdO/Al₂O₃, предварительно активизированный газообразным 0,1%-ным тритием, и алпразолам. Реакцию изотопного обмена проводили при перемешивании при 20^oC в течение 30 ч. Выход 11% молярная радиоактивность 1,85 Ки/ммоль.Example 5. To obtain tritium-labeled alprazolam, tritium water was distilled from its solution in dioxane. At the same time, in the ampoule was a 5% PdO / Al ₂ O ₃ catalyst, previously activated with gaseous 0.1% tritium, and alprazolam. The isotope exchange reaction was carried out with stirring at 20 ^° C. for 30 hours. Yield 11% molar radioactivity of 1.85 Ci / mmol.

Пример 6. По методике примера 5 получили меченный тритием алпразолам, но реакцию изотопного обмена проводили при 150^oC в течение 1 ч. Выход 52% молярная радиоактивность 1,75 Ки/ммоль.Example 6. According to the method of example 5, tritium-labeled alprazolam was obtained, but the isotope exchange reaction was carried out at 150 ^° C for 1 h. Yield 52% molar radioactivity 1.75 Ci / mmol.

Пример 7. При перемешивании в течение 13 ч восстанавливали PdO газообразным тритием в среде диоксана. Затем раствор замораживали жидким азотом, вакуумировали, вносили алпразолам и проводили реакцию изотопного обмена при перемешивании при 20^oC в течение 12 ч. Выход 12% молярная радиоактивность 1,25 Ки/ммоль.Example 7. With stirring for 13 hours, PdO was reduced with gaseous tritium in dioxane. Then, the solution was frozen with liquid nitrogen, evacuated, alprazolam was introduced, and the isotope exchange reaction was carried out with stirring at 20 ^° C for 12 hours. Yield 12% molar radioactivity 1.25 Ci / mmol.

Пример 8. По методике примера 7 провели реакцию изотопного обмена при 100^oC в течение 3 ч. Выход 32% молярная радиоактивность 0,9 Ки/ммоль.Example 8. By the method of example 7, an isotope exchange reaction was carried out at 100 ^° C. for 3 hours. Yield 32% molar radioactivity 0.9 Ci / mmol.

Пример 9. По методике примера 7 провели реакцию изотопного обмена, но в диоксан добавили триэтиламин, а реакцию проводили при 100^oC в течение 3 ч. Выход 8% молярная радиоактивность 2,75 Ки/ммоль.Example 9. By the method of example 7, an isotope exchange reaction was carried out, but triethylamine was added to dioxane, and the reaction was carried out at 100 ^° C for 3 hours. Yield 8% molar radioactivity 2.75 Ci / mmol.

Пример 10. По методике 7 получили меченный тритием алпразолам, но использовали катализатор в виде смеси PdO и 5% PdO/Al₂O₃. Реакцию изотопного обмена проводили при 20^oC в течение 12 ч. Выход 15% молярная радиоактивность 1,3 Ки/ммоль.Example 10. By method 7, tritium-labeled alprazolam was obtained, but the catalyst was used as a mixture of PdO and 5% PdO / Al ₂ O ₃ . The isotope exchange reaction was carried out at 20 ^° C. for 12 hours. Yield 15% molar radioactivity 1.3 Ci / mmol.

Пример 11. По методике примера 7 провели реакцию изотопного обмена при 150^oC в течение 1 ч. Выход 43% молярная радиоактивность 2,8 Ки/ммоль.Example 11. By the method of example 7, an isotope exchange reaction was carried out at 150 ^° C. for 1 h. Yield 43% molar radioactivity 2.8 Ci / mmol.

Пример 12. По методике примера 7 провели реакцию изотопного обмена при 150^oC в течение 2 ч. Выход 24% молярная радиоактивность 3,0 Ки/ммоль.Example 12. By the method of example 7, an isotope exchange reaction was carried out at 150 ^° C. for 2 hours. Yield 24% molar radioactivity 3.0 Ci / mmol.

Пример 13. Алпразолам наносили на катализатор и реакцию изотопного обмена вели в атмосфере трития (твердофазный метод). Изучили влияние температурного режима и продолжительности проведения реакции изотопного обмена на выход меченного тритием алпразолама и его молярную радиоактивность. Показали, что если реакцию проводили в течение 15 мин при 100^oC или 120^oC, или 150^oC, то соотношение выходов составляет 6,6:3,2:1, а соотношение молярных радиоактивностей 1:2,4:3,6. При проведении реакции при 175^oC выход составлял 5% при 195^oС десятые доли процента. Во всех изученных вариантах молярная радиоактивность не превышала 4 Ки/ммоль.Example 13. Alprazolam was applied to a catalyst and the isotopic exchange reaction was carried out in a tritium atmosphere (solid-phase method). We studied the influence of the temperature regime and the duration of the isotope exchange reaction on the yield of tritium-labeled alprazolam and its molar radioactivity. It was shown that if the reaction was carried out for 15 min at 100 ^o C or 120 ^o C, or 150 ^o C, then the output ratio is 6.6: 3.2: 1, and the ratio of molar radioactivity is 1: 2.4: 3, 6. When carrying out the reaction at 175 ^° C., the yield was 5% at 195 ^{° C.} tenths of a percent. In all studied variants, the molar radioactivity did not exceed 4 Ci / mmol.

Таким образом, оптимальными условиями для получения высокомеченного тритием алпразолама оказались условия проведения реакции по примерам 1 3, обеспечивающие наибольшую радиоактивность целевого продукта. Thus, the optimal conditions for obtaining highly labeled with tritium alprazolam were the reaction conditions according to examples 1 to 3, providing the greatest radioactivity of the target product.

Способ согласно изобретению позволяет проводить реакцию изотопного обмена в минимальном объеме растворителя, что приводит к практически теоретически возможно высокой молярной радиоактивности препарата. Тритий в этих условиях равномерно обменивается с водородами как вещества (алпразолама), так и молекул растворителя. The method according to the invention allows the isotope exchange reaction to be carried out in a minimal solvent volume, which leads to the theoretically possible high molar radioactivity of the preparation. Under these conditions, tritium evenly exchanges with the hydrogens of both the substance (alprazolam) and the solvent molecules.

Claims

1. Highly labeled tritium alprazolam.

2. A method of producing high-tritium-labeled alprazolam, characterized in that alprozolam is reacted with tritium water obtained by maintaining a mixture containing PdO and 5% PdO / Al ₂ O ₃ at a mass ratio of 2.0 to 2.5 3 in a tritium atmosphere under pressure 545 555 GPa at 69 71 ^o C for 15 20 min, and the interaction is carried out in a solvent mixture containing dioxane and triethylamine at a volume ratio of 9 11 1 at 175 188 ^o C and the ratio of alprazolam, tritium water and solvent mixture 14 16 3, 2 3.6 45 55, mg / μl / μl, for 55 65 min with uniform ohm heating the entire reactor volume.

3. The method according to claim 2, characterized in that tritium water is obtained in the reactor in the presence of alprazolam.