RU2080865C1

RU2080865C1 - Method of hemoglobin preparing

Info

Publication number: RU2080865C1
Application number: RU96112733A
Authority: RU
Inventors: Станислав Людвигович Люблинский; Руслан Гиглович Дзадзамия; Андрей Викторович Назаров; Анзури Борисович Гобечия; Ольга Владимировна Софронова; Ирина Николаевна Люблинская; Евгений Дмитриевич Ермолаев; Михаил Александрович Каплан; Николай Савельевич Орлов
Original assignee: Станислав Людвигович Люблинский; Руслан Гиглович Дзадзамия; Андрей Викторович Назаров; Анзури Борисович Гобечия; Ольга Владимировна Софронова; Ирина Николаевна Люблинская; Евгений Дмитриевич Ермолаев; Михаил Александрович Каплан; Николай Савельевич Орлов
Priority date: 1996-07-08
Filing date: 1996-07-08
Publication date: 1997-06-10

Abstract

FIELD: biotechnology, blood proteins. SUBSTANCE: erythrocyte hemolyzate is prepared by dilution of erythrocyte mass with distilled water at ratio = (1: 2)-(1: 4), freezing and the following concentration of hemolyzate by ultrafiltration and sterilizing filtration and lyophilization. Yield of crystalline hemoglobin is above 95%, purity is above 80%. Product is used in agriculture as food addition for treatment and prophylaxis of iron-deficiency states in animals and in human also. Product is used in diagnostic investigations and in science studies also. EFFECT: simplified method, decreased cost, increased yield, enhanced purity of product. 1 tbl

Description

Изобретение относится к выделению биологически активных веществ из животного сырья, а именно к выделению гемоглобина из крови сельскохозяйственных животных. Препарат гемоглобина применяют в диагностических исследованиях, научно-исследовательских работах, а также в качестве красителя в производстве продуктов питания. The invention relates to the allocation of biologically active substances from animal raw materials, namely the selection of hemoglobin from the blood of farm animals. The hemoglobin preparation is used in diagnostic studies, scientific research, and also as a dye in food production.

Существующие способы [1-3] выделения гемоглобина из крови животных основаны на использовании в качестве осаждающих агентов сульфата аммония или ацетона. Даже незначительные примеси этих веществ в препарате гемоглобина, в случае использования его в качестве пищевой добавки, недопустимы и требуют тщательной и длительной очистки от них диализом или другими методами. Это приводит к значительным потерям гемоглобина и отрицательно сказывается на его физико-химических свойствах (снижается растворимость, разрушается тетрамерная структура, снижается общее содержание железа и увеличивается доля трехвалентного железа). Existing methods [1-3] for isolating hemoglobin from animal blood are based on the use of ammonium sulfate or acetone as precipitating agents. Even minor impurities of these substances in the hemoglobin preparation, if used as a dietary supplement, are unacceptable and require careful and lengthy cleaning from them with dialysis or other methods. This leads to significant losses of hemoglobin and adversely affects its physicochemical properties (solubility decreases, the tetrameric structure is destroyed, the total iron content decreases and the proportion of ferric iron increases).

Известен способ получения гемоглобина [4] включающий гемолиз эритроцитов в растворе хлористого натрия при соотношении эритроцитов и хлористого натрия 1: 10 с последующим добавлением аскорбиновой кислоты, центрифугированием и очисткой с помощью микро- и ультрафильтрации. Однако данный способ многоэтапен и требует значительных временных и трудовых затрат. A known method of producing hemoglobin [4] including the hemolysis of red blood cells in a solution of sodium chloride at a ratio of red blood cells and sodium chloride of 1: 10, followed by the addition of ascorbic acid, centrifugation and purification using microfiltration and ultrafiltration. However, this method is multi-stage and requires significant time and labor costs.

Целью предлагаемого способа является упрощение и удешевление процесса получения и одновременное увеличение выхода неденатурированного кристаллического гемоглобина, применяемого в качестве пищевой добавки, предназначенной для лечения и профилактики железодефицитных состояний человека и животных. The aim of the proposed method is to simplify and reduce the cost of the production process and at the same time increase the yield of undenatured crystalline hemoglobin, which is used as a food supplement intended for the treatment and prevention of iron deficiency in humans and animals.

Поставленная цель достигается получением гемолиза эритроцитов путем разбавления эритроцитарной массы дистиллированной водой и замораживания с последующим концентрированием гемолизата ультрафильтрацией, стерилизующей фильтрацией и лиофилизацией. This goal is achieved by obtaining hemolysis of erythrocytes by diluting the erythrocyte mass with distilled water and freezing, followed by concentration of the hemolysate by ultrafiltration, sterilized filtration and lyophilization.

Пример. 10 л стабилизированной крови крупного рогатого скота или свиней сепарируют в течение 30 мин при 6000 об/мин при 4^oС. Осадок, содержащий эритроциты, разбавляют дистиллированной водой в соотношении 1:2-1:4 и замораживают при -20^oС После размораживания гемолизат сепарируют или центрифугируют при тех же условиях и супернатант после фильтрации подвергают концентрированию до объема 5 л на ультрафильтрационной половолоконной установке при 10-15^oС и рН 6,8-7,2 с последующей стерилизующей микрофильтрацией и лиофилизацией.Example. 10 l of stabilized blood of cattle or pigs is separated for 30 min at 6000 rpm at 4 ^o C. The sediment containing red blood cells, diluted with distilled water in a ratio of 1: 2-1: 4 and frozen at -20 ^o After defrosting the hemolysate is separated or centrifuged under the same conditions and the supernatant after filtration is concentrated to a volume of 5 l in an ultrafiltration hollow fiber installation at 10-15 ^° C and a pH of 6.8-7.2, followed by sterilizing microfiltration and lyophilization.

Выход кристаллического гемоглобина с чистотой более 80% составляет свыше 95% Физико-химические показатели гемоглобина представлены в таблице. The yield of crystalline hemoglobin with a purity of more than 80% is over 95%. The physicochemical parameters of hemoglobin are presented in the table.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет получать в промышленных масштабах гемоглобин, очищенный от высоко- и низкомолекулярных примесных соединений и патогенных микроорганизмов, с чистотой свыше 80% и выходом 95%
Литература
1. Авторское свидетельство СССР N 174326, 1965.Thus, the proposed method allows to obtain on an industrial scale hemoglobin, purified from high and low molecular weight impurity compounds and pathogenic microorganisms, with a purity of more than 80% and a yield of 95%
Literature
1. USSR author's certificate N 174326, 1965.

2. Украинский биохимический журнал N 1, с. 100, 1966. 2. Ukrainian biochemical journal N 1, p. 100, 1966.

3. Ферменты в экспериментальной и клинической онкологии и радиологии, вып. ХХ, ч.1, с. 26, Ленинград, 1967. 3. Enzymes in experimental and clinical oncology and radiology, vol. XX, part 1, p. 26, Leningrad, 1967.

4. Авторское свидетельство СССР N 1205910, 1986. 4. Copyright certificate of the USSR N 1205910, 1986.

Claims

The method of obtaining hemoglobin from the blood of farm animals by separating blood into plasma and red blood cells, obtaining hemolysate, purification from ballast substances by filtration, concentration using ultrafiltration, followed by filtration, sterilization and lyophilization of the target product, characterized in that the red blood cells are diluted with distilled water in a ratio of 1 2 April 1, and frozen at -20 ^o C, then concentrated by ultrafiltration after thawing at October 15 ^o C at pH 6.8 - 7.2 and the final product after sterilization phi tratsii lyophilized.