RU2074258C1 - Method of determination of anaerobic microorganism sensitivity to antimicrobial chemotherapeutic preparations - Google Patents
Method of determination of anaerobic microorganism sensitivity to antimicrobial chemotherapeutic preparations Download PDFInfo
- Publication number
- RU2074258C1 RU2074258C1 RU93016780A RU93016780A RU2074258C1 RU 2074258 C1 RU2074258 C1 RU 2074258C1 RU 93016780 A RU93016780 A RU 93016780A RU 93016780 A RU93016780 A RU 93016780A RU 2074258 C1 RU2074258 C1 RU 2074258C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sensitivity
- tpa
- microorganisms
- chromatogram
- anaerobic
- Prior art date
Links
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 title claims abstract description 38
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 23
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 title claims description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 3
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 title abstract 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 24
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 claims description 24
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 10
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 claims description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 9
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 abstract description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 229960002227 clindamycin Drugs 0.000 description 9
- KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N clindamycin Chemical compound CN1C[C@H](CCC)C[C@H]1C(=O)N[C@H]([C@H](C)Cl)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N 0.000 description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 7
- 229960000282 metronidazole Drugs 0.000 description 7
- VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N metronidazole Chemical compound CC1=NC=C([N+]([O-])=O)N1CCO VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 4
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 3
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 3
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001148470 aerobic bacillus Species 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241001135261 Prevotella oralis Species 0.000 description 1
- 101800000874 Small capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 101800000996 Small capsid protein precursor Proteins 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- JTWOMNBEOCYFNV-NFFDBFGFSA-N azlocillin Chemical compound N([C@@H](C(=O)N[C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C=1C=CC=CC=1)C(=O)N1CCNC1=O JTWOMNBEOCYFNV-NFFDBFGFSA-N 0.000 description 1
- 229960003623 azlocillin Drugs 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 1
- 239000012259 ether extract Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к микробиологии, и касается определения чувствительности анаэробных бактерий к антимикробным химиотерапевтическим препаратам. The invention relates to medicine, in particular to microbiology, and for determining the sensitivity of anaerobic bacteria to antimicrobial chemotherapeutic drugs.
Известен способ определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным химиотерапевтическим препаратам методом серийных разведений, состоящий в том, что готовят убывающие разведения препарата в питательной среде, засевают среды исследуемой культурой микроорганизмов, инкубируют в термостате при оптимальной для данных микроорганизмов температуре до появления видимого роста, и по наличию или отсутствию роста судят о чувствительности микроорганизма к препарату [1]
Однако, этот метод является очень громоздким, длительными и трудоемким. Он требует приготовления большой серии разведений препарата, а поскольку в клинической практике необходимо бывает определить чувствительность к 20 30, а иногда и более антимикробным химиотерапевтическим препаратам, то объем исследований многократно возрастает. Кроме того, для определения чувствительности данным способом обычно затрачивается 2 3 сут (до появления видимого роста культуры микроорганизмов), что значительно затягивает срок бактериологического исследования и абсолютно не удовлетворяет потребностям клинической практики. Этот метод может быть использован только в исключительных случаях при индивидуальном подборе антимикробной химиотерапии особо тяжелым больным, но не пригоден для массовых рутинных исследований.A known method for determining the sensitivity of microorganisms to antimicrobial chemotherapeutic drugs by the method of serial dilutions, which consists in preparing decreasing dilutions of the drug in a nutrient medium, inoculating the medium with the studied culture of microorganisms, incubating in a thermostat at the optimum temperature for these microorganisms until visible growth, and by the presence or lack of growth is judged on the sensitivity of the microorganism to the drug [1]
However, this method is very cumbersome, time consuming and time consuming. It requires the preparation of a large series of dilutions of the drug, and since in clinical practice it is necessary to determine the sensitivity to 20 30, and sometimes more antimicrobial chemotherapeutic drugs, the volume of research increases many times. In addition, to determine the sensitivity of this method, it usually takes 2 3 days (before the appearance of a visible growth of the culture of microorganisms), which significantly prolongs the duration of the bacteriological study and does not satisfy the needs of clinical practice. This method can be used only in exceptional cases when individually selecting antimicrobial chemotherapy for especially severe patients, but is not suitable for mass routine studies.
Прототипом может служить способ определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным химиотерапевтическим препаратам методом диффузии в агаре с применением стандартных бумажных дисков, состоящий в том, что плотную питательную среду засевают исследуемыми, микроорганизмами, наносят бумажные диски, пропитанные антимикробными химиотерапевтическими препаратами, инкубируют в термостате при оптимальной для данных микроорганизмов температуре до появления видимого роста, и по наличию зоны задержки роста вокруг дисков судят о чувствительности микроорганизма к препарату [2]
Этот способ при определении чувствительности анаэробных микроорганизмов обладает целым рядом недостатком, существенно ограничивающих его возможности. Во-первых, способ является качественным и не позволяет получить количественной или полуколичественной оценки чувствительности тестируемых штаммов анаэробов к антимикробным химиотерапевтическим препаратам. Во-вторых, на сегодняшний день в мировой практике еще не разработаны критерии для оценки чувствительности анаэробных бактерий к антимикробным химиотерапевтическим препаратам, как это сделано для аэробных бактерий, поэтому для оценки чувствительности бактериологии вынуждены ориентировочно пользоваться критериями, разработанными для аэробных бактерий, что ведет к значительным искажениям достоверности результатов исследования. В-третьих, при определении чувствительности в анаэробных условиях, диаметры зон задержки роста у ряда антимикробных химиотерапевтических препаратов могут изменяться за счет наличия CO2 и других факторов в анаэробной атмосфере. В-четвертых, для определения чувствительности данным способом затрачивается обычно 2 3 суток (до появления видимого роста культуры микроорганизмов), что значительно затягивает срок бактериологического исследования и абсолютно не удовлетворяет потребностям клинической практики.A prototype can be a method for determining the sensitivity of microorganisms to antimicrobial chemotherapeutic drugs by agar diffusion using standard paper disks, consisting in the fact that a dense nutrient medium is inoculated with the studied microorganisms, paper disks impregnated with antimicrobial chemotherapeutic drugs are applied, incubated in an incubator with optimal data microorganisms temperature until visible growth, and the presence of a zone of growth inhibition around the discs judges ity of a microorganism to the drug [2]
This method in determining the sensitivity of anaerobic microorganisms has a number of drawbacks that significantly limit its capabilities. Firstly, the method is qualitative and does not allow to obtain a quantitative or semi-quantitative assessment of the sensitivity of the tested strains of anaerobes to antimicrobial chemotherapeutic drugs. Secondly, to date, in world practice, criteria have not yet been developed for assessing the sensitivity of anaerobic bacteria to antimicrobial chemotherapeutic drugs, as is done for aerobic bacteria, therefore, to assess the sensitivity of bacteriology, we have to tentatively use the criteria developed for aerobic bacteria, which leads to significant distortion of the reliability of the results of the study. Third, when determining sensitivity under anaerobic conditions, the diameters of growth inhibition zones in a number of antimicrobial chemotherapeutic drugs can vary due to the presence of CO 2 and other factors in the anaerobic atmosphere. Fourthly, it usually takes 2 3 days to determine the sensitivity of this method (before the appearance of a visible growth of the culture of microorganisms), which significantly prolongs the period of bacteriological research and does not satisfy the needs of clinical practice.
Цель изобретения повышение точности и ускорение определения чувствительности анаэробных бактерий к антимикробным химиотерапевтическим препаратам за счет использования инструментального учета результатов. The purpose of the invention is to increase the accuracy and accelerate the determination of the sensitivity of anaerobic bacteria to antimicrobial chemotherapeutic drugs through the use of instrumental accounting of results.
Способ осуществляют следующим образом. По общепринятой методике готовят взвесь тестируемых анаэробных микроорганизмов. Затем инокулят вносят в пробирки с жидкой питательной средой для культивирования анаэробов. Исследуемую пробу разделяют на опытную и контрольную части. Число опытных проб соответствует числу тестируемых антимикробных химиотерапевтических препаратов. Регистрируют исходный хроматографический профиль, после чего в каждую пробирку с опытной пробой помещают стандартные диски с химиотерапевтическими препаратами, причем количество дисков подбирается таким образом, чтобы в пробе создавались концентрации химиотерапевтического препарата, равная его концентрации в сыворотке крови при введении обычных терапевтических доз (табл. 1). Пробы инкубируют в термостате в анаэробных условиях в течение 12 часов, после чего определяют хроматографический профиль повторно и сравнивают между собой полученные хроматографические профили метаболитов. Схема хроматографического определения чувствительности анаэробных бактерий к антимикробным химиотерапевтическим препаратам показана на фиг. 1. The method is as follows. According to the generally accepted method, a suspension of the tested anaerobic microorganisms is prepared. Then the inoculum is introduced into test tubes with a liquid nutrient medium for the cultivation of anaerobes. The test sample is divided into the experimental and control parts. The number of test samples corresponds to the number of tested antimicrobial chemotherapeutic drugs. The initial chromatographic profile is recorded, after which standard disks with chemotherapeutic drugs are placed in each test tube with the sample, and the number of disks is selected so that the concentration of a chemotherapeutic drug is created in the sample, equal to its concentration in the blood serum when the usual therapeutic doses are introduced (Table 1 ) Samples are incubated in a thermostat under anaerobic conditions for 12 hours, after which the chromatographic profile is determined again and the obtained chromatographic profiles of the metabolites are compared. A chromatographic chart for determining the sensitivity of anaerobic bacteria to antimicrobial chemotherapeutic drugs is shown in FIG. one.
Изменение хроматографического профиля конечных продуктов метаболизма анаэробных бактерий под действием антимикробного химиотерапевтического препарата, по сравнению с контролем культурой, не подвергшейся такому воздействию, является отражением чувствительности этих микроорганизмов к испытываемому препарату и дает возможность более объективно судить о степени чувствительности анаэробных микроорганизмов по сравнению с таким известным критерием, как диаметр зоны задержки роста. Наши исследования установили, что характерными изменениями хроматографических профилей анаэробов под воздействием антимикробных химиотерапевтических препаратов являются, во-первых, выпадение большинства пиков метаболитов продуцируемых бактериальной клеткой; во-вторых, появление ряда пиков метаболитов, отсутствующих в норме в контроле; в-третьих, снижение высоты и площади пиков. Все наблюдаемые на хроматограмме изменения не являются равноценными. Наиболее часто отмечается снижение высоты и площади пиков, что свидетельствует о неглубоких обратимых изменениях метаболизма анаэробных бактерий под действием антимикробного химиотерапевтического препарата. Данный антимикробный химиотерапевтический препарат замедляет метаболические процессы в бактериальной клетке и накопление метаболитов в среде культивирования идет более медленно, чем у контрольной культуры, не подвергшейся такому воздействию. Чем больше уменьшается площадь и высота хроматографических пиков, тем выше чувствительность микроорганизма к тестируемому антимикробному химиотерапевтическому препарата (фиг. 2). The change in the chromatographic profile of the end products of the metabolism of anaerobic bacteria under the action of an antimicrobial chemotherapeutic drug, compared with the control culture that has not been exposed to this effect, reflects the sensitivity of these microorganisms to the test drug and makes it possible to more objectively judge the degree of sensitivity of anaerobic microorganisms in comparison with such a known criterion as the diameter of the growth inhibition zone. Our studies have found that the characteristic changes in the chromatographic profiles of anaerobes under the influence of antimicrobial chemotherapeutic drugs are, firstly, the loss of most peaks of metabolites produced by a bacterial cell; secondly, the appearance of a number of peaks of metabolites that are absent in the norm in the control; thirdly, a decrease in height and peak area. All changes observed in the chromatogram are not equivalent. The most frequently observed decrease in height and peak area, which indicates shallow reversible changes in the metabolism of anaerobic bacteria under the influence of an antimicrobial chemotherapeutic drug. This antimicrobial chemotherapeutic drug slows down the metabolic processes in the bacterial cell and the accumulation of metabolites in the culture medium is slower than in a control culture that has not been exposed to this effect. The more the area and height of the chromatographic peaks decreases, the higher the sensitivity of the microorganism to the tested antimicrobial chemotherapeutic drug (Fig. 2).
Наиболее значительные изменения хроматографических профилей анаэробных микроорганизмов получаются при воздействии на них таких высокоэффективных антианаэробных препаратов, как метронидазол и клиндамицин (фиг. 3). Метронидазол вызывает выпадение большей части хроматографических пиков метаболитов, что свидетельствует о грубых, необратимых повреждениях метаболизма бактерий. Хроматограммы штаммов, высокочувствительных к метронидазолу, напоминают изоэлектрическую линию. The most significant changes in the chromatographic profiles of anaerobic microorganisms are obtained when exposed to such highly effective antianerobic drugs as metronidazole and clindamycin (Fig. 3). Metronidazole causes the precipitation of most chromatographic peaks of metabolites, which indicates gross, irreversible damage to the metabolism of bacteria. Chromatograms of strains highly sensitive to metronidazole resemble an isoelectric line.
Следует отметить, что подобных изменений хроматографического профиля культур анаэробов под воздействием клиндамицина не наблюдается. Для повреждающего действия клиндамицина характерны изменения метаболизма клетки в виде инверсии хроматограммы, то есть наряжу с уменьшением высоты и площади и полным выпадением ряда нормальных пиков, на хроматограмме регистрировались атипичные пики, отсутствующие в норме в контроле. Причина появления этих атипичных пиков остается неизвестной, однако, есть предположение, что такие пики являются метаболическим отражением распада внутренних структур бактериальной клетки под действием антибиотика. Подтверждением сказанного может служить тот факт, что на хроматограмме штаммов анаэробов, подвергшихся воздействию клиндамицина, на 4 мин 38 с появлялся пик урацила. Как известно, урацил это азотистое основание, входящее в состав РНК. Появление пика урацила, очевидно, обусловлено освобождением этого азотистого основания при распаде рибосомальной РНК под воздействием клиндамицина. It should be noted that such changes in the chromatographic profile of anaerobic cultures under the influence of clindamycin are not observed. The damaging effect of clindamycin is characterized by changes in cell metabolism in the form of an inversion of the chromatogram, i.e., dressing with a decrease in height and area and the complete loss of a number of normal peaks, atypical peaks were recorded on the chromatogram, which are absent in the norm in the control. The reason for the appearance of these atypical peaks remains unknown, however, there is an assumption that such peaks are a metabolic reflection of the decay of the internal structures of a bacterial cell under the influence of an antibiotic. This can be confirmed by the fact that the peak of uracil appeared on the chromatogram of anaerobic strains exposed to clindamycin for 4 min 38 s. As you know, uracil is a nitrogenous base that is part of RNA. The appearance of the uracil peak is obviously due to the release of this nitrogenous base during the decay of ribosomal RNA under the influence of clindamycin.
Различия в изменения хроматографических профилей культур анаэробов, подвергшихся воздействию метронидазола и клиндамицина, можно объяснить различным механизмом антибактериального действия этих препаратов. Как известно, метронидазол, восстанавливаясь в короткоживущий промежуточный продукт, ингибирует репликацию бактериальной ДНК у анеаэробов. Точкой приложения антимикробного действия клиндамицина в бактериальной клетке являются рибосомы, он необратимо ингибирует 50 S субъединицу рибосом. Вероятно, что повреждение химиотерапевтическим препаратом различных ультратонких структур бактериальной клетки ведет к неодинаковым изменениям метаболической активности, что и регистрируется на хроматограмме. Differences in changes in the chromatographic profiles of anaerobic cultures exposed to metronidazole and clindamycin can be explained by the different mechanism of the antibacterial action of these drugs. As is known, metronidazole, being restored into a short-lived intermediate product, inhibits the replication of bacterial DNA in anaerobes. The point of application of the antimicrobial action of clindamycin in the bacterial cell is the ribosome; it irreversibly inhibits the 50 S subunit of ribosomes. It is likely that damage by a chemotherapeutic drug to various ultrathin structures of the bacterial cell leads to uneven changes in metabolic activity, which is recorded on the chromatogram.
Для оценки степени чувствительности анаэробных микроорганизмов к антимикробным химиотерапевтическим препаратам мы использовали отношение суммарных площадей хроматографических пиков опытного и контрольного образцов, в обозначенное TPAR и определяемое по формуле:
где Sn площади хроматографических пиков опытного образца;
TPAR отношение суммарных площадей хроматографических пиков опытного и контрольного образцов, в
Высокая чувствительность (1 степень) определялась при показателе TPAR менее 20 средняя чувствительность (2 степень) определялась при показателе TPAR 21 40 низкая чувствительность (3 степень) 41 70 и практически отсутствие чувствительности (4 степень) 71 и выше.To assess the degree of sensitivity of anaerobic microorganisms to antimicrobial chemotherapeutic drugs, we used the ratio of the total areas of chromatographic peaks of the experimental and control samples, indicated by TPA R and determined by the formula:
where S n the area of the chromatographic peaks of the prototype;
TPA R is the ratio of the total areas of chromatographic peaks of the experimental and control samples, in
High sensitivity (1 degree) was determined with TPA R less than 20; average sensitivity (2 degrees) was determined with TPA R 21 40; low sensitivity (3 degrees) 41 70 and practically no sensitivity (4 degrees) 71 and higher.
Клиническая апробация метода проводилась на 50 больных с гнойно-воспалительными заболеваниями ЛОР-органов. Мы сравнили предложенный нами способ определения чувствительности с методом диффузии в агаре. Сравнение способов определения чувствительности анаэробных микроорганизмов к антимикробным химиотерапевтическим препаратам (хроматографическим методом и методом диффузии в агаре) приведено в табл. 3. Clinical testing of the method was carried out on 50 patients with purulent-inflammatory diseases of the ENT organs. We compared our proposed method for determining sensitivity with diffusion in agar. A comparison of the methods for determining the sensitivity of anaerobic microorganisms to antimicrobial chemotherapeutic drugs (chromatographic method and diffusion method in agar) is given in table. 3.
Процент совпадения данных хроматографического способа определения чувствительности и способа диффузии в агаре у больных с гнойно-воспалительными заболеваниями ЛОР-органов в случае высокой чувствительности (1 степени) составил 79,5 в случае средней чувствительности (2 степени) 73,9 в случаях низкой чувствительности (3 степени) 62,7 в случае отсутствия чувствительности (4 степени) 53,14
При определении чувствительности к азлоциллину процент совпадения данных испытуемых методов составил 25,8 при определении чувствительности к левомицетину 86,4 к эритромицину 74,6 к пенициллину 77,3 к клиндамицину 80,3 к метронидазолу 97,9
Конкретный пример выполнения способа.The percentage of coincidence of the data of the chromatographic method for determining the sensitivity and the diffusion method in agar in patients with purulent-inflammatory diseases of the ENT organs in the case of high sensitivity (1 degree) was 79.5 in the case of medium sensitivity (2 degrees) 73.9 in cases of low sensitivity ( 3 degrees) 62.7 in the absence of sensitivity (4 degrees) 53.14
When determining sensitivity to azlocillin, the percentage of coincidence of the data of the tested methods was 25.8 when determining sensitivity to chloramphenicol 86.4 to erythromycin 74.6 to penicillin 77.3 to clindamycin 80.3 to metronidazole 97.9
A specific example of the method.
По оптическому стандарту мутности готовят 1 млд. взвесь музейного штамма Bacteroides oralis. Затем вносят по 1 мл приготовленной взвеси в 2 пробирки с 5 мл жидкой питательной среды для анаэробов. Доводят рН пробы до 2,0 50-ным раствором серной кислоты. Проводят экстракцию этиловым эфиром 2 раза по 1 мл. Полученный эфирный экстракт в количестве 2 5 мкл вводят непосредственно в хроматограф. Регистрируют исходную хроматограмму. После этого в опытную пробу добавляют 1 стандартный диск, содержащий 80 мкг/мл метронидазола. Пробирки инкубируют 8 ч в анаэростате при 37o C. После чего извлекают и экстрагируют накопившиеся метаболиты. Вводят экстракт в хроматограф и регистрируют хроматограмму. Сравнивают хроматограммы опытной и контрольной пробы. Проводят расчет по формуле:
что соответствует высокой степени чувствительности.According to the optical turbidity standard, 1 mld is prepared. suspension of the museum strain of Bacteroides oralis. Then make 1 ml of the prepared suspension in 2 tubes with 5 ml of liquid nutrient medium for anaerobes. The pH of the sample was adjusted to 2.0 with a 50% solution of sulfuric acid. Extraction is carried out with
which corresponds to a high degree of sensitivity.
Пример 2. Аналогичным образом готовят суспензию музейного штамма и инокулируют в пробирки с жидкой питательной средой, экстрагируют и регистрируют исходную хроматограмму. Затем в опытную пробирку вносят 4 диска, содержащих по 2 мкг/мл клиндамицина. Пробирки инкубируют 12 ч в анаэростате при 37o C. После чего извлекают, экстрагируют накопившиеся метаболиты, вводят экстракт в хроматограф и регистрируют хроматограмму. Сравнивают хроматограммы опытной и контрольной проб. Проводят расчет по формуле:
что соответствует средней степени чувствительности.Example 2. In a similar manner, a suspension of the museum strain is prepared and inoculated into test tubes with a liquid nutrient medium, extracted and the initial chromatogram is recorded. Then, 4 discs containing 2 μg / ml of clindamycin are added to the test tube. The tubes are incubated for 12 hours in an anaerostat at 37 o C. After which they are removed, the accumulated metabolites are extracted, the extract is introduced into the chromatograph and the chromatogram is recorded. The chromatograms of the experimental and control samples are compared. Carry out the calculation according to the formula:
which corresponds to an average degree of sensitivity.
Корреляция данных хроматографического способа и способа диффузии в агаре по определению степени чувствительности 53,14 79,5 по определению чувствительности к отдельным антимикробным химиотерапевтическим препаратам 74,6 97,9 The correlation of the data of the chromatographic method and the method of diffusion in agar to determine the degree of sensitivity 53.14 79.5 to determine the sensitivity to individual antimicrobial chemotherapeutic drugs 74.6 97.9
Claims (1)
где Sп площадь пиков опытной хроматограммы;
ТРАр отношение суммарных площадей пиков опытной и контрольной хроматограмм,
и оценивают микроорганизмы при ТРАр < 20% как чувствительные, при ТРАр 20 40% среднечувствительные, при ТРАр 40 70% - умеренноустойчивые, а при ТРАр > 70% устойчивые.A method for determining the sensitivity of anaerobic microorganisms to antimicrobial chemotherapeutic drugs, comprising incubating the studied microorganisms in the presence of standard paper disks impregnated with an antimicrobial chemotherapeutic drug in a nutrient medium, followed by the results, characterized in that the determination is carried out in a liquid nutrient medium, an aliquot of samples is taken before incubation, these samples are taken ether and the resulting extract is chromatographed on a gas chromatograph to obtain Nia control chromatograms, further samples were incubated for 8 to 12 hours, and then subjected to extraction and chromatography under the same experimental conditions to obtain a chromatogram, and the results evaluated according to the formula
where S p the peak area of the experimental chromatogram;
TPA p ratio of total peak areas of the test and control chromatograms
and microorganisms are evaluated at TPA p <20% as sensitive, at TPA p 20 40% moderately sensitive, at TPA p 40 70% are moderately resistant, and with TPA p > 70% stable.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU93016780A RU2074258C1 (en) | 1993-03-31 | 1993-03-31 | Method of determination of anaerobic microorganism sensitivity to antimicrobial chemotherapeutic preparations |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU93016780A RU2074258C1 (en) | 1993-03-31 | 1993-03-31 | Method of determination of anaerobic microorganism sensitivity to antimicrobial chemotherapeutic preparations |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU93016780A RU93016780A (en) | 1995-10-20 |
| RU2074258C1 true RU2074258C1 (en) | 1997-02-27 |
Family
ID=20139598
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU93016780A RU2074258C1 (en) | 1993-03-31 | 1993-03-31 | Method of determination of anaerobic microorganism sensitivity to antimicrobial chemotherapeutic preparations |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2074258C1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2122025C1 (en) * | 1997-10-31 | 1998-11-20 | Александр Степанович Иванов | Device for assessing quality of organic or inorganic products |
| RU2147610C1 (en) * | 1998-07-22 | 2000-04-20 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Method of estimating threshold sensitivity of bacterial cultures for biological and chemical preparations |
| RU2231554C2 (en) * | 2002-09-24 | 2004-06-27 | Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН | Method for assay of antibiotic effectiveness for treatment of inflammatory diseases of bacterial etiology |
-
1993
- 1993-03-31 RU RU93016780A patent/RU2074258C1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Лабораторные методы исследования в клинике / Справочник под ред. В.В.Меньшикова. - М.: Медицина, 1987, с.341 - 343. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2122025C1 (en) * | 1997-10-31 | 1998-11-20 | Александр Степанович Иванов | Device for assessing quality of organic or inorganic products |
| RU2147610C1 (en) * | 1998-07-22 | 2000-04-20 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Method of estimating threshold sensitivity of bacterial cultures for biological and chemical preparations |
| RU2231554C2 (en) * | 2002-09-24 | 2004-06-27 | Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН | Method for assay of antibiotic effectiveness for treatment of inflammatory diseases of bacterial etiology |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Esposito et al. | Acetate utilization and macromolecular synthesis during sporulation of yeast | |
| Chuang et al. | Biosynthesis of diacetyl in bacteria and yeast | |
| de LOUVOIS | Bacteriological examination of pus from abscesses of the central nervous system. | |
| US4038143A (en) | Test kit for the genetic detection of microorganisms | |
| Shawar et al. | Rapid screening of natural products for antimycobacterial activity by using luciferase-expressing strains of Mycobacterium bovis BCG and Mycobacterium intracellulare | |
| CA1072427A (en) | Method and apparatus for the genetic detection of microorganisms | |
| Talley et al. | Evidence for NADH-and NADPH-specific isozymes of glutamate dehydrogenase and the continuous inducibility of the NADPH-specific isozyme throughout the cell cycle of the eucaryote Chlorella | |
| CZ251094A3 (en) | Unit for detecting residues of antibacterial substances in liquids | |
| RU2074258C1 (en) | Method of determination of anaerobic microorganism sensitivity to antimicrobial chemotherapeutic preparations | |
| Stapley | Cross-resistance studies and antibiotic identification | |
| Beggs et al. | Regulation of synthesis of benzyl alcohol dehydrogenase in Acinetobacter calcoaceticus NCIB8250 | |
| US4532206A (en) | β-Streptococcus selective medium | |
| Lewis et al. | Determination of volatile acid production of Clostridium by gas chromatography | |
| Evans | A note on two uses for impedimetry in brewing microbiology | |
| Ravin | A quantitative study of autogenic and allogenic transformations in Pneumococcus | |
| Cato et al. | A routine determination of the optically active isomers of lactic acid for bacterial classification | |
| Bushell et al. | A physiological model for the control of erythromycin production in batch and cyclic fed batch culture | |
| RU93016780A (en) | METHOD FOR DETERMINING THE SENSITIVITY OF ANAEROBIC MICROORGANISMS TO ANTIMICROBIAL CHEMOTHERAPEUTIC PREPARATIONS | |
| RU2042134C1 (en) | Method for identifying mycobacteria m. tuberculosis and m. bovis | |
| Nalik et al. | Rapid identification of Legionella species from a single colony by gas-liquid chromatography with trimethylsulphonium hydroxide for transesterification | |
| TSAY et al. | Carbon dioxide fixation in Aspergillus oryzae conidia at the initial phase of germination | |
| Harvey et al. | Inhibition of RNA synthesis in Chlorella pyrenoidosa and Bacillus megaterium by the pine-blight toxin, dothistromin | |
| Lin et al. | High-pressure liquid chromatographic method for determination of rosaramicin in humans | |
| Wang et al. | Deterioration of cycloserine in drug susceptibility testing of Mycobacterium | |
| Shannon et al. | Malonate metabolism by plant tissues |