RU2073010C1 - Method of synthesis of lysine-vasopressin in solution - Google Patents
Method of synthesis of lysine-vasopressin in solution Download PDFInfo
- Publication number
- RU2073010C1 RU2073010C1 RU9494039975A RU94039975A RU2073010C1 RU 2073010 C1 RU2073010 C1 RU 2073010C1 RU 9494039975 A RU9494039975 A RU 9494039975A RU 94039975 A RU94039975 A RU 94039975A RU 2073010 C1 RU2073010 C1 RU 2073010C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- synthesis
- lysine
- protected
- solution
- cys
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области органической химии, в частности к области препаративного пептидного синтеза лизин-вазопрессина в растворе. The invention relates to the field of organic chemistry, in particular to the field of preparative peptide synthesis of lysine-vasopressin in solution.
Лизин-вазопрессин относится к нейрогипофизарным гормонам, продуцируемым ядрами гипоталамуса головного мозга. Лизин-вазопрессин обладает вазопрессорной и утеротонической активностью и используется в медицине (препараты Diapid, Insipidin, Lypressin). Lysine-vasopressin refers to the neurohypophysial hormones produced by the nuclei of the hypothalamus of the brain. Lysine-vasopressin has vasopressor and uterotonic activity and is used in medicine (Diapid, Insipidin, Lypressin preparations).
Известно несколько способов химического синтеза лизин-вазопрессина в растворе [1] Наиболее близким к заявляемому техническому решению является способ синтеза лизин-вазопрессина, предложенный в [2] Способ включает последовательное наращивание пептидной цепи, причем в качестве боковых защитных групп используется OBut (для гидроксильной группы тирозина), ВОС (для ε-аминогруппы лизина и a-аминогруппы Cys1), Acm (для меркаптогруппы цистеинов), Z для a-аминогруппы Pro и изопропилиденаминооксикарбонила (Раос) (для a-аминогрупп Tyr, Phe, Gln, Asn и Cys6). Циклизацию линейного пептида проводят обработкой иодом в слабокислой среде метанол/трифторэтанол. Для выделения конечного продукта из реакционной смеси используют комбинацию хроматографических методов - гельпроникающую и ионообменную хроматографию (см. фиг. 1, 2).Several methods are known for the chemical synthesis of lysine-vasopressin in solution [1]. The closest to the claimed technical solution is the method for the synthesis of lysine-vasopressin, proposed in [2]. The method includes sequential peptide chain extension, and OBu t (for hydroxyl tyrosine groups), BOC (for the ε-amino group of lysine and the a-amino group Cys 1 ), Acm (for the mercapto group of cysteines), Z for the a-amino group Pro and isopropylidene aminooxycarbonyl (Raos) (for the a-amino groups Tyr, Phe, Gln, Asn and Cys 6 ). The linear peptide is cyclized by treatment with iodine in a slightly acidic medium methanol / trifluoroethanol. To isolate the final product from the reaction mixture, a combination of chromatographic methods — gel permeation and ion exchange chromatography — is used (see Fig. 1, 2).
Недостатками известного способа являются:
1. Использование коммерчески недоступной изопропилиденаминооксикарбонильной защитной группы;
2. Использование главным образом в схеме последовательного наращивания пептидной цепи, что существенно усложняет применение этого способа для синтеза аналогов [1]
3. Использование токсичного метанола на стадии циклизации, что ухудшает технологичность схемы;
4. Наличие стадии упаривания разбавленного раствора конечного продукта по окончании реакции циклизации.The disadvantages of this method are:
1. The use of a commercially available isopropylidene aminooxycarbonyl protecting group;
2. The use mainly in the scheme of sequential peptide chain extension, which greatly complicates the application of this method for the synthesis of analogues [1]
3. The use of toxic methanol at the cyclization stage, which impairs the processability of the scheme;
4. The presence of the stage of evaporation of the dilute solution of the final product at the end of the cyclization reaction.
Целью изобретения является удешевление и расширение технологических возможностей способа. The aim of the invention is the reduction and expansion of technological capabilities of the method.
Способ заключается в том, что синтез осуществляют конденсацией фрагментов (3+4)+2, причем a-аминогруппы цистеинов, глутамина и аспарагина защищены бутилоксикарбонильной защитной группой, a-аминогруппы тирозина, фенилаланина, лизина, пролина и глицина защищены бензилоксикарбонильной защитной группой, гидроксильная группа тирозина защищена трет-бутильной защитной группой, e-аминогруппа лизина защищена бутилоксикарбонильной защитной группой, меркаптогруппы цистеинов защищены ацетамидометильной защитной группой, а карбоксильные группы фенилаланина и пролина защищены фенилгидразидной защитной группой, которая используется на стадии синтеза фрагментов и удаляется перед конденсацией фрагментов (см. фиг.3, 4). The method consists in the fact that the synthesis is carried out by condensation of (3 + 4) +2 fragments, wherein the a-amino groups of cysteines, glutamine and asparagine are protected by a butyloxycarbonyl protecting group, the a-amino groups of tyrosine, phenylalanine, lysine, proline and glycine are protected by a benzyloxycarbonyl protecting group, hydroxyl the tyrosine group is protected by a tert-butyl protecting group, the lysine e-amino group is protected by a butyloxycarbonyl protecting group, the cysteine mercapto groups are protected by an acetamidomethyl protecting group, and the carboxylic acid groups nilalanine and proline are protected by a phenylhydrazide protecting group, which is used at the stage of fragment synthesis and is removed before condensation of the fragments (see Figs. 3, 4).
Заявляемое техническое решение является новым, т.к. ранее не была описана настоящая схема синтеза. The claimed technical solution is new, because the present synthesis scheme has not been previously described.
Заявляемое техническое решение имеет изобретательский уровень, т.к. оно явным образом не следует из уровня техники. The claimed technical solution has an inventive step, because it does not explicitly follow from the prior art.
Заявляемое техническое решение является промышленно применимым, т.к. настоящая схема синтеза позволяет осуществлять препаративный синтез лизин-вазопрессина. The claimed technical solution is industrially applicable, because this synthesis scheme allows for the preparative synthesis of lysine-vasopressin.
Заявляемое техническое решение иллюстрируется примерами конкретного выполнения. The claimed technical solution is illustrated by examples of specific performance.
Пример 1. Синтез Z-Gly-NH2.Example 1. Synthesis of Z-Gly-NH 2 .
8,05 г Z-Gly-OH (38,47 ммоль) растворяют в 80 мл ДМФА, добавляют 4,87 мл (38,5 ммоль) N-этилморфолина, охлаждают до -36oC и добавляют при интенсивном перемешивании порциями в течение 30 сек 5,5 мл (42,35 ммоль) изобутилхлорформиата. Через 2 мин начинают добавлять (в течение 1,5 мин) 4,45 мл 25%-ного водного аммиака. Реакционную смесь перемешивают сутки, упаривают, остаток растворяют в 400 мл хлороформа, промывают 1 н серной кислотой в насыщенном растворе хлористого натрия, насыщенным раствором хлористого натрия, насыщенным раствором карбоната натрия и водой, упаривают и остаток кристаллизуют в эфире. Выход 1,60 г, 15,4 ммоль, 40,0%
Пример 2. Синтез Z-Lys(BOC)-Gly-NH2.8.05 g of Z-Gly-OH (38.47 mmol) was dissolved in 80 ml of DMF, 4.87 ml (38.5 mmol) of N-ethylmorpholine was added, cooled to -36 ° C and added with vigorous stirring in portions over 30 sec. 5.5 ml (42.35 mmol) of isobutyl chloroformate. After 2 minutes, 4.45 ml of 25% aqueous ammonia are added (within 1.5 minutes). The reaction mixture was stirred for a day, evaporated, the residue was dissolved in 400 ml of chloroform, washed with 1 N sulfuric acid in a saturated solution of sodium chloride, saturated solution of sodium chloride, saturated solution of sodium carbonate and water, evaporated and the residue was crystallized in ether. Yield 1.60 g, 15.4 mmol, 40.0%
Example 2. Synthesis of Z-Lys (BOC) -Gly-NH 2 .
3,748 г Z-Gly-NH2 (18 ммоль) гидрируют в метаноле над Pd/C в качестве катализатора. По окончании гидрирования катализатор отфильтровывают, раствор упаривают досуха, растворяют в 20 мл ДМФА и добавляют 6,847 г Z-Lys(BOC)-OH (18 ммоль) и 2,43 г HOBt. Реакционную смесь охлаждают до 0oC и добавляют 3,78 г ДЦГК. Реакционную смесь перемешивают сутки, отфильтровывают дициклогексилмочевину, упаривают ДМФА и остаток растворяют в 500 мл этилацетата. Органический раствор промывают последовательно 1 н фосфорной кислотой, водой, 5%-ным водным раствором соды и водой до нейтральной реакции. Упаривают досуха и остаток кристаллизуют эфиром. Выход 7,44 г, 17 ммоль, 95%
Пример 3. Синтез Z-Phe-NHNH-C6H5.3.748 g of Z-Gly-NH 2 (18 mmol) was hydrogenated in methanol over Pd / C as a catalyst. After hydrogenation, the catalyst was filtered off, the solution was evaporated to dryness, dissolved in 20 ml of DMF and 6.847 g of Z-Lys (BOC) -OH (18 mmol) and 2.43 g of HOBt were added. The reaction mixture was cooled to 0 ° C. and 3.78 g of DCCH were added. The reaction mixture was stirred for 24 hours, dicyclohexylurea was filtered off, DMF was evaporated and the residue was dissolved in 500 ml of ethyl acetate. The organic solution was washed sequentially with 1 N phosphoric acid, water, 5% aqueous soda solution and water until neutral. It is evaporated to dryness and the residue is crystallized with ether. Yield 7.44 g, 17 mmol, 95%
Example 3. Synthesis of Z-Phe-NHNH-C 6 H 5 .
16,16 г Z-Phe-OH (54 ммоль), 6,48 г фенилгидразина (60 ммоль) и 7,29 г HOBt растворяют в 100 мл ДМФА, охлаждают до 0oС и добавляют 11,34 г ДЦГК. Реакционную смесь перемешивают сутки, отфильровывают дициклогексилмочевину, упаривают ДМФА и остаток растворяют в 500 мл этилацетата. Органический раствор промывают последовательно 1 н фосфорной кислотой, водой, 5%-ным водным раствором соды и водой до нейтральной реакции. Упаривают досуха и остаток кристаллизуют из этилацетата/гексана. Выход 16,844 г, 43,3 ммоль, 80,2%
Пример 4. Синтез Z-Tyr(But)-Phe-NHNH-C6H5.16.16 g of Z-Phe-OH (54 mmol), 6.48 g of phenylhydrazine (60 mmol) and 7.29 g of HOBt were dissolved in 100 ml of DMF, cooled to 0 ° C. and 11.34 g of DCCH was added. The reaction mixture was stirred for 24 hours, dicyclohexylurea was filtered off, DMF was evaporated and the residue was dissolved in 500 ml of ethyl acetate. The organic solution was washed sequentially with 1 N phosphoric acid, water, 5% aqueous soda solution and water until neutral. It is evaporated to dryness and the residue is crystallized from ethyl acetate / hexane. Yield 16.844 g, 43.3 mmol, 80.2%
Example 4. Synthesis of Z-Tyr (But) -Phe-NHNH-C 6 H 5 .
7 г Z-Phe-NHNH-C6H5 (18 ммоль) гидрируют в метаноле над Pd/C в качестве катализатора. По окончании гидрирования катализатор отфильтровывают, раствор упаривают досуха, растворяют в 20 мл ДМФА и добавляют 6,685 г Z-Tyr(But)-OH (18 ммоль) и 2,43 г HOBt. Реакционную смесь охлаждают до 0oC и добавляют 3,78 г ДЦГК. Реакционную смесь перемешивают 24 ч, отфильтровывают ДЦГМ, упаривают фильтрат и остаток растворяют в 300 мл хлороформа. Раствор промывают последовательно 1 н серной кислотой, водой, 5%-ным раствором соды и снова водой до нейтральной реакции. Органический раствор упаривают досуха и остаток кристаллизуют из этилацетата/гексана. Выход 8,68 г, 14,26 ммоль, 79,2%
Пример 5. Синтез Z-Pro-NHNH-C6H5.7 g of Z-Phe-NHNH-C 6 H 5 (18 mmol) was hydrogenated in methanol over Pd / C as a catalyst. After hydrogenation, the catalyst was filtered off, the solution was evaporated to dryness, dissolved in 20 ml of DMF and 6.685 g of Z-Tyr (But) -OH (18 mmol) and 2.43 g of HOBt were added. The reaction mixture was cooled to 0 ° C. and 3.78 g of DCCH were added. The reaction mixture was stirred for 24 hours, the DCM was filtered off, the filtrate was evaporated and the residue was dissolved in 300 ml of chloroform. The solution is washed sequentially with 1 N sulfuric acid, water, a 5% soda solution and again with water until neutral. The organic solution was evaporated to dryness and the residue was crystallized from ethyl acetate / hexane. Yield 8.68 g, 14.26 mmol, 79.2%
Example 5. Synthesis of Z-Pro-NHNH-C 6 H 5 .
7,479 г Z-Pro-OH (30 ммоль), 3,78 г фенилгидразина (35 ммоль) и 1,35 г HOBt растворяют в 50 мл ДМФА, охлаждают до 0o C добавляют 6,3 г ДЦГК. Реакционную смесь перемешивают 24 ч, отфильтровывают ДЦГМ, упаривают фильтрат и остаток растворяют в 500 мл хлороформа. Раствор промывают последовательно 1 н серной кислотой, водой, 5%-ным раствором соды и снова водой до нейтральной реакции. Органический раствор упаривают досуха и остаток кристаллизуют из этилацетата/гексана. Выход 8,754 г, 25,8 ммоль, 86%
Пример 6. Синтез ВОС-Cys(Acm)-Pro-NHNH-C6H5.7.479 g of Z-Pro-OH (30 mmol), 3.78 g of phenylhydrazine (35 mmol) and 1.35 g of HOBt are dissolved in 50 ml of DMF, cooled to 0 ° C. 6.3 g of DCCH are added. The reaction mixture was stirred for 24 hours, the DCM was filtered off, the filtrate was evaporated and the residue was dissolved in 500 ml of chloroform. The solution is washed sequentially with 1 N sulfuric acid, water, a 5% soda solution and again with water until neutral. The organic solution was evaporated to dryness and the residue was crystallized from ethyl acetate / hexane. Yield 8.754 g, 25.8 mmol, 86%
Example 6. Synthesis of BOC-Cys (Acm) -Pro-NHNH-C 6 H 5 .
5,09 г Z-Pro-NHNH-C6H5 (15 ммоль) гидрируют в метаноле над Pd/C в качестве катализатора. По окончании гидрирования катализатор отфильтровывают, раствор упаривают досуха, растворяют в 50 мл ДМФА, добавляют 4,386 г BOC-Cys(Acm)-OH (15 ммоль) и 200 мг HOBt. Реакционную смесь охлаждают до 0oC и добавляют 3,15 г ДЦГК. Реакционную смесь перемешивают сутки, отфильтровывают дициклогексилмочевину, упаривают ДМФА и остаток растворяют в 500 мл смеси бутанол/хлороформ (1:5). Органический раствор промывают последовательно 1 н фосфорной кислотой в насыщенном растворе хлористого натрия, насыщенным раствором хлористого натрия, 5% -ным раствором соды в насыщенном растворе хлористого натрия, насыщенным раствором хлористого натрия до нейтральной реакции и водой. Упаривают досуха и остаток кристаллизуют из этилацетата гексаном. Выход 6,521 г, 13,6 ммоль, 90,6%
Пример 7. Синтез ВОС-Asn-Cys(Acm)-Pro-NHNH-C6H5.5.09 g of Z-Pro-NHNH-C 6 H 5 (15 mmol) is hydrogenated in methanol over Pd / C as a catalyst. After hydrogenation, the catalyst is filtered off, the solution is evaporated to dryness, dissolved in 50 ml of DMF, 4.386 g of BOC-Cys (Acm) -OH (15 mmol) and 200 mg of HOBt are added. The reaction mixture was cooled to 0 ° C. and 3.15 g of DCCH was added. The reaction mixture is stirred for a day, dicyclohexylurea is filtered off, DMF is evaporated and the residue is dissolved in 500 ml of a mixture of butanol / chloroform (1: 5). The organic solution is washed successively with 1 N phosphoric acid in a saturated solution of sodium chloride, a saturated solution of sodium chloride, a 5% solution of soda in a saturated solution of sodium chloride, a saturated solution of sodium chloride until neutral and with water. It is evaporated to dryness and the residue is crystallized from ethyl acetate with hexane. Yield 6.521 g, 13.6 mmol, 90.6%
Example 7. Synthesis of BOC-Asn-Cys (Acm) -Pro-NHNH-C 6 H 5 .
8,487 г ВОС-Cys(Acm)-Pro-NHNH-C6H5 (17,7 ммоль) растворяют в 50 мл трифторуксусной кислоты в присутствии 10 мл анизола. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 30 мин, упаривают на роторном испарителе и обрабатывают эфиром. Супернатант осторожно сливают, обработку эфиром повторяют и остаток растворяют в 50 мл метанола. К раствору добавляют 20 г ионообменной смолы Amberlite IRA-68 в гидроксильной форме, перемешивают, смолу отфильтровывают и фильтрат упаривают досуха. К остатку добавляют 6,359 г ВОС-Asn-ONp (18 ммоль) в ДМФА. Реакционную смесь перемешивают 24 ч, упаривают, растворяют в смеси 300 мл хлороформа и 150 мл бутанола, промывают 5% -ным раствором бикарбоната и водой, упаривают до объема 100 мл и высаживают гексаном. Осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из этилацетата гексаном. Выход 8 г, 13,48 ммоль, 76,1%
Пример 8. Синтез BOC-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-NHNH-C6H5.8.487 g of BOC-Cys (Acm) -Pro-NHNH-C 6 H 5 (17.7 mmol) was dissolved in 50 ml of trifluoroacetic acid in the presence of 10 ml of anisole. The reaction mixture was stirred at room temperature for 30 minutes, evaporated on a rotary evaporator and treated with ether. The supernatant was carefully drained, the ether treatment was repeated, and the residue was dissolved in 50 ml of methanol. To the solution was added 20 g of Amberlite IRA-68 ion exchange resin in hydroxyl form, stirred, the resin was filtered off and the filtrate was evaporated to dryness. 6.359 g of BOC-Asn-ONp (18 mmol) in DMF was added to the residue. The reaction mixture was stirred for 24 hours, evaporated, dissolved in a mixture of 300 ml of chloroform and 150 ml of butanol, washed with 5% bicarbonate and water, evaporated to a volume of 100 ml and precipitated with hexane. The precipitate was filtered off and recrystallized from ethyl acetate with hexane. Yield 8 g, 13.48 mmol, 76.1%
Example 8. Synthesis of BOC-Gln-Asn-Cys (Acm) -Pro-NHNH-C 6 H 5 .
8 г ВОС-Asn-Cys(Asm)-Peo-NHNH-C6H5 (13,48 ммоль) растворяют в 50 мл трифторуксусной кислоты в присутствии 10 мл анизола. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 30 мин, упаривают на роторном испарителе и обрабатывают эфиром. Супернатант осторожно сливают, обработку эфиром повторяют и остаток растворяют в 50 мл метанола. К раствору добавляют 20 г ионообменной смолы Amberlite IRA-68 в гидроксильной форме, перемешивают, смолу отфильтровывают и фильтрат упаривают досуха. К остатку добавляют 5,144 г ВОС-Gln-ONp (14 ммоль) в ДМФА. Реакционную смесь перемешивают 24 ч, упаривают, растворяют в смеси 400 мл хлороформа и 100 мл бутанола, промывают водой, упаривают до объема 100 мл и высаживают гексаном. Осадок отфильтровывают и промывают на фильтре гексаном. Выход 8,1 г, 11,22 ммоль, 83,2%
Пример 9. Синтез BOC-Cys(Acm)-Tyr(But)-Phe-NHNH-C6H5.8 g of BOC-Asn-Cys (Asm) -Peo-NHNH-C 6 H 5 (13.48 mmol) are dissolved in 50 ml of trifluoroacetic acid in the presence of 10 ml of anisole. The reaction mixture was stirred at room temperature for 30 minutes, evaporated on a rotary evaporator and treated with ether. The supernatant was carefully drained, the ether treatment was repeated, and the residue was dissolved in 50 ml of methanol. To the solution was added 20 g of Amberlite IRA-68 ion exchange resin in hydroxyl form, stirred, the resin was filtered off and the filtrate was evaporated to dryness. 5.144 g of BOC-Gln-ONp (14 mmol) in DMF was added to the residue. The reaction mixture was stirred for 24 hours, evaporated, dissolved in a mixture of 400 ml of chloroform and 100 ml of butanol, washed with water, evaporated to a volume of 100 ml and precipitated with hexane. The precipitate was filtered off and washed on a filter with hexane. Yield 8.1 g, 11.22 mmol, 83.2%
Example 9. Synthesis of BOC-Cys (Acm) -Tyr (But) -Phe-NHNH-C 6 H 5 .
4,869 г Z-Tyr(But)-Phe-NHNH-C6H5 (8 ммоль) гидрируют в метаноле над Pd/C в качестве катализатора. По окончании гидрирования катализатор отфильтровывают, раствор упаривают досуха, растворяют в 20 мл ДМФА и добавляют 2,339 г ВОС-Cys(Acm)-OH (8 ммоль) и 0,54 г HOBt. Реакционную смесь охлаждают до 0oC и добавляют 1,68 г ДЦГК. Реакционную смесь перемешивают 24 ч, отфильтровывают ДЦГМ, упаривают фильтрат и остаток растворяют в 300 мл хлороформа. Раствор промывают последовательно 1 н серной кислотой, водой, 5%-ным раствором соды и снова водой до нейтральной реакции. Органический раствор упаривают досуха и остаток кристаллизуют из этилацетата/гексана. Выход 4,56 г, 6,09 ммоль, 76,1%
Пример 10. Синтез BOC-Cys(Acm)-Tyr(But)-Phe-OH.4.869 g of Z-Tyr (But) -Phe-NHNH-C 6 H 5 (8 mmol) was hydrogenated in methanol over Pd / C as a catalyst. At the end of hydrogenation, the catalyst was filtered off, the solution was evaporated to dryness, dissolved in 20 ml of DMF, and 2.399 g of BOC-Cys (Acm) -OH (8 mmol) and 0.54 g of HOBt were added. The reaction mixture was cooled to 0 ° C. and 1.68 g of DCCH was added. The reaction mixture was stirred for 24 hours, the DCM was filtered off, the filtrate was evaporated and the residue was dissolved in 300 ml of chloroform. The solution is washed sequentially with 1 N sulfuric acid, water, a 5% soda solution and again with water until neutral. The organic solution was evaporated to dryness and the residue was crystallized from ethyl acetate / hexane. Yield 4.56 g, 6.09 mmol, 76.1%
Example 10. Synthesis of BOC-Cys (Acm) -Tyr (But) -Phe-OH.
2,247 г ВОС-Cys(Acm)-Tyr(But)-Phe-NHNH-C6H5 (3 ммоль) растворяют в смеси, содержащей 100 мл диоксана, 50 мл 1 М водного пиридинийацетатного буфера (готовится смешиванием эквимолярных количеств пиридина и уксусной кислоты, величина рН не контролируется), 30 мл уксусной кислоты и 2,5 мл 0,2 М водного раствора медного купороса. Реакционная смесь перемешивается в условиях, обеспечивающих свободный доступ кислорода воздуха. Протекание реакции контролировали методом ТСХ. По окончании реакции реакционную смесь упарили, остаток растворили в этилацетате, промыли 1 н серной кислотой, водой до нейтральной реакции, упарили и остаток кристаллизовали из эфира гексаном. Выход 1,72 г, 2,61 ммоль, 87,01%
Пример 11. Синтез BOC-Cys(Acm)-Tyr(But)-Phe-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-NHNH-C6H5.2.247 g of BOC-Cys (Acm) -Tyr (But) -Phe-NHNH-C 6 H 5 (3 mmol) are dissolved in a mixture containing 100 ml of dioxane, 50 ml of 1 M aqueous pyridinium acetate buffer (prepared by mixing equimolar amounts of pyridine and acetic acid, pH is not controlled), 30 ml of acetic acid and 2.5 ml of 0.2 M aqueous solution of copper sulfate. The reaction mixture is stirred under conditions that allow free access of atmospheric oxygen. The progress of the reaction was monitored by TLC. At the end of the reaction, the reaction mixture was evaporated, the residue was dissolved in ethyl acetate, washed with 1 N sulfuric acid, water until neutral, evaporated and the residue was crystallized from ether with hexane. Yield 1.72 g, 2.61 mmol, 87.01%
Example 11. Synthesis of BOC-Cys (Acm) -Tyr (But) -Phe-Gln-Asn-Cys (Acm) -Pro-NHNH-C 6 H 5 .
2 г ВОС-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-NHNH-C6H5 (2,77 ммоль) растворяют в 50 мл трифторуксусной кислоты в присутствии 10 мл анизола. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 30 мин, упаривают на роторном испарителе и обрабатывают эфиром. Супернатант осторожно сливают, обработку эфиром повторяют и остаток растворяют в 50 мл метанола. К раствору добавляют 20 г ионообменной смолы Amberlite IRA-68 в гидроксильной форме, перемешивают, смолу отфильтровывают и фильтрат упаривают досуха. К остатку добавляют 1,98 г ВОС-Cys(Acm)-Tyr(But)-Phe-OH и 0,405 г HОBt в ДМФА. Реакционную смесь охлаждают и добавляют 0,63 г DCC. Смесь инкубируют 48 ч, отфильтровывают дициклогексилмочевину, фильтрат упаривают и растворяют в 50 мл бутанола и 200 мл хлороформа. Органический раствор промывают последовательно 1 н HCl, водой, карбонатом натрия и водой до нейтральной реакции, упаривают до небольшого объема и обрабатывают ацетоном. Полученный кристаллический осадок отфильтровывают, промывают на фильтре гексаном и сушат на воздухе. Выход 3,156 г, 2,5 ммоль, 90,3%
Пример 12. Синтез BOC-Cys(Acm)-Tyr(But)-Phe-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-OH.2 g of BOC-Gln-Asn-Cys (Acm) -Pro-NHNH-C 6 H 5 (2.77 mmol) are dissolved in 50 ml of trifluoroacetic acid in the presence of 10 ml of anisole. The reaction mixture was stirred at room temperature for 30 minutes, evaporated on a rotary evaporator and treated with ether. The supernatant was carefully drained, the ether treatment was repeated, and the residue was dissolved in 50 ml of methanol. To the solution was added 20 g of Amberlite IRA-68 ion exchange resin in hydroxyl form, stirred, the resin was filtered off and the filtrate was evaporated to dryness. To the residue were added 1.98 g of BOC-Cys (Acm) -Tyr (But) -Phe-OH and 0.405 g of HOBt in DMF. The reaction mixture was cooled and 0.63 g of DCC was added. The mixture was incubated for 48 hours, dicyclohexylurea was filtered off, the filtrate was evaporated and dissolved in 50 ml of butanol and 200 ml of chloroform. The organic solution was washed sequentially with 1 N HCl, water, sodium carbonate and water until neutral, evaporated to a small volume and treated with acetone. The resulting crystalline precipitate was filtered off, washed on a filter with hexane and dried in air. Yield 3.156 g, 2.5 mmol, 90.3%
Example 12. Synthesis of BOC-Cys (Acm) -Tyr (But) -Phe-Gln-Asn-Cys (Acm) -Pro-OH.
3,156 г BOC-Cys(Acm)-Tyr(But)-Phe-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-NHNH-C6H5 (2,5 ммоль) растворяют в смеси 25 мл 1 М пиридиний ацетатного буфера в ДМФА, 50 мл диоксана и 30 мл 20%-ной водной уксусной кислоты. Добавляют 500 мг медного купороса и перемешивают 24 ч в условиях, обеспечивающих свободный доступ кислорода воздуха. По окончании реакции реакционную смесь упаривают и остаток растворяют в 200 мл смеси хлороформ/бутанол 4:1. Органический раствор промывают 1 н HCl в насыщенном растворе хлористого натрия, насыщенным раствором хлористого натрия и водой до нейтральной реакции, упаривают до небольшого объема, высаживают петролейным эфиром. Полученный кристаллический осадок фильтруют, промывают на фильтре гексаном, перекристаллизовывают из метанола с эфиром и сушат на воздухе. Выход 2,12 г, 1,8 ммоль, 72,2%
Пример 13. Синтез BOC-Cys(Acm)-Tyr(But)-Phe-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-Lys(BOC)-Gly-NH2.3.156 g of BOC-Cys (Acm) -Tyr (But) -Phe-Gln-Asn-Cys (Acm) -Pro-NHNH-C 6 H 5 (2.5 mmol) was dissolved in a mixture of 25 ml of 1 M pyridinium acetate buffer in DMF, 50 ml of dioxane and 30 ml of 20% aqueous acetic acid. Add 500 mg of copper sulfate and mix for 24 hours under conditions that allow free access of atmospheric oxygen. At the end of the reaction, the reaction mixture was evaporated and the residue was dissolved in 200 ml of a 4: 1 chloroform / butanol mixture. The organic solution was washed with 1 N HCl in a saturated solution of sodium chloride, saturated solution of sodium chloride and water until neutral, evaporated to a small volume, and precipitated with petroleum ether. The obtained crystalline precipitate was filtered, washed on a filter with hexane, recrystallized from methanol with ether and dried in air. Yield 2.12 g, 1.8 mmol, 72.2%
Example 13. Synthesis of BOC-Cys (Acm) -Tyr (But) -Phe-Gln-Asn-Cys (Acm) -Pro-Lys (BOC) -Gly-NH 2 .
1,783 г Z-Lys(BOC)-Gly-NH2 (2,0 ммоль) гидрируют в метаноле над Pd/C в качестве катализатора. По окончании гидрирования катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают досуха, растворяют в ДМФА, добавляют 2,12 г BOC-Cys(Acm)-Tyr(But)-Phe-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-OH (1,8 ммоль), охлаждают и добавляют 0,42 г ДЦГК (2 ммоль) и 0,27 г НОВТ. Реакционную смесь перемешивают 48 ч, отфильтровывают дициклогексилмочевину, упаривают фильтрат досуха и остаток кристаллизуют из метанола эфиром. Осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из ацетона. Выход 1,85 г, 1,27 ммоль, 70,5%
Пример 14. Синтез Cys(Acm)-Tyr-Phe-Gln-Asn-Сys(Acm)-Pro-Lys-Gly-NH2.1.783 g of Z-Lys (BOC) -Gly-NH 2 (2.0 mmol) was hydrogenated in methanol over Pd / C as a catalyst. After hydrogenation, the catalyst is filtered off, the filtrate is evaporated to dryness, dissolved in DMF, 2.12 g of BOC-Cys (Acm) -Tyr (But) -Phe-Gln-Asn-Cys (Acm) -Pro-OH (1.8 mmol) are added. ), cool and add 0.42 g of DCCA (2 mmol) and 0.27 g of NOVT. The reaction mixture was stirred for 48 hours, dicyclohexylurea was filtered off, the filtrate was evaporated to dryness and the residue was crystallized from methanol with ether. The precipitate was filtered off and recrystallized from acetone. Yield 1.85 g, 1.27 mmol, 70.5%
Example 14. Synthesis of Cys (Acm) -Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys (Acm) -Pro-Lys-Gly-NH 2 .
1,85 г BOC-Cys(Acm)-Tyr(But)-Phe-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-Lys(BOC)-Gly-NH2. (1,27 ммоль) растворяют в смеси 10 мл анизола и 30 мл TFA. Реакционную смесь перемешивают 30 мин, упаривают, остаток обрабатывают эфиром, полученный осадок отфильтровывают, тщательно промывают на фильтре эфиром и гексаном и высушивают. Полученный продукт по данным ВЭЖХ имеет чистоту выше 93% и может использоваться для проведения финальной стадии циклизации (см. пример 15) без дополнительной очистки. Выход 1,6 г, 1,12 ммоль, 88%
Пример 15. Синтез
1,6 г Cys(Acm)-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-Lys-Gly-NH2 (1,12 ммоль) растворяют в 1,12 л 5%-ной уксусной кислоты и добавляют 24,6 мл 0,1 М (2,46 ммоль) раствора иода в метаноле. За протеканием реакции следят методом ВЭЖХ. По окончании реакции добавляют твердый тиосульфат натрия до обесцвечивания, и реакционную смесь наносят на колонку 5х20 см, содержащую SP-sephadex, уравновешенный 0,2 М пиридиний-ацетатным буфером. Колонку промывают тем же буфером и элюируют в градиенте ионной силы 0,2-0,5 М. Фракции, содержащие продукт с чистотой выше 95% собирают, упаривают до небольшого объема и наносят на колонку, содержащую Toyopearl HW-40, уравновешенный 2%-ной уксусной кислотой. Колонку промывают тем же элюентом и собирают фракции. Фракции, содержащие конечный продукт с чистотой выше 98% объединяют и лиофилизуют. При необходимости процедуру очистки повторяют. Выход 0,619 г, 0,53 ммоль, 47% Аминокислотный анализ (вычислено/найдено Asx 1,00/1,01, Glx 1,00/1,01, Pro 1,00/1,00, Gly 1,00/1,00, Cys 2,00/1,52, Tyr 1,00/0,87, Phe 1,00/0,99, Lys 1,00/1,02. Биологическая активность 270,3 МЕ/мг.1.85 g of BOC-Cys (Acm) -Tyr (But) -Phe-Gln-Asn-Cys (Acm) -Pro-Lys (BOC) -Gly-NH 2 . (1.27 mmol) was dissolved in a mixture of 10 ml of anisole and 30 ml of TFA. The reaction mixture was stirred for 30 minutes, evaporated, the residue was taken up in ether, the resulting precipitate was filtered off, washed thoroughly with ether and hexane, and dried. The obtained product according to HPLC has a purity higher than 93% and can be used to carry out the final stage of cyclization (see example 15) without further purification. Yield 1.6 g, 1.12 mmol, 88%
Example 15. Synthesis
1.6 g of Cys (Acm) -Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys (Acm) -Pro-Lys-Gly-NH 2 (1.12 mmol) was dissolved in 1.12 L of 5% acetic acid and added 24.6 ml of a 0.1 M (2.46 mmol) solution of iodine in methanol. The progress of the reaction is monitored by HPLC. At the end of the reaction, solid sodium thiosulfate is added until bleaching, and the reaction mixture is applied to a 5 x 20 cm column containing SP-sephadex equilibrated with 0.2 M pyridinium acetate buffer. The column is washed with the same buffer and eluted in a gradient of ionic strength of 0.2-0.5 M. Fractions containing product with a purity higher than 95% are collected, evaporated to a small volume and applied to a column containing Toyopearl HW-40, balanced 2% - acetic acid. The column is washed with the same eluent and fractions are collected. Fractions containing the final product with a purity higher than 98% are combined and lyophilized. If necessary, repeat the cleaning procedure. Yield 0.619 g, 0.53 mmol, 47% Amino acid analysis (calculated / found Asx 1.00 / 1.01, Glx 1.00 / 1.01, Pro 1.00 / 1.00, Gly 1.00 / 1 , 00, Cys 2.00 / 1.52, Tyr 1.00 / 0.87, Phe 1.00 / 0.99, Lys 1.00 / 1.02, Biological activity 270.3 IU / mg.
Пример 16. Синтез
1,6 г Cys(Acm)-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-Lys-Gly-NH2 (1,12 ммоль) растворяют в 1,12 л 20%-ной уксусной кислоты и добавляют 24,6 мл 0,1 М (2,46 ммоль) раствора иода в метаноле. За протеканием реакции следят методом ВЭЖХ. По окончании реакции добавляют твердый тиосульфат натрия до обесцвечивания, и реакционную смесь наносят на колонку 5х20 см, содержащую SP-sephadex, уравновешенный 0,2 М пиридиний-ацетатным буфером. Колонку промывают тем же буфером и элюируют в градиенте ионной силы 0,2-0,5 М. Фракции, содержащие продукт с чистотой выше 95% собирают, упаривают до небольшого объема и наносят на колонку, содержащую Toyopearl HW-40, уравновешенный 2%-ной уксусной кислотой. Колонку промывают тем же элюентом и собирают фракции. Фракции, содержащие конечный продукт с чистотой выше 98% объединяют и лиофилизуют. При необходимости процедуру очистки повторяют. Выход 0,635 г, 0,54 ммоль, 48% Аминокислотный анализ (вычислено/найдено Asx 1,00/1,01, Glx 1,00/1,01, Pro 1,00/1,00, Gly 1,00/1,00, Cys 2,00/1,52, Tyr 1,00/0,87, Phe 1,00/0,99, Lys 1,00/1,02. Биологическая активность 270,3 МЕ/мг.Example 16. Synthesis
1.6 g of Cys (Acm) -Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys (Acm) -Pro-Lys-Gly-NH 2 (1.12 mmol) was dissolved in 1.12 L of 20% acetic acid and added 24.6 ml of a 0.1 M (2.46 mmol) solution of iodine in methanol. The progress of the reaction is monitored by HPLC. At the end of the reaction, solid sodium thiosulfate is added until bleaching, and the reaction mixture is applied to a 5 x 20 cm column containing SP-sephadex equilibrated with 0.2 M pyridinium acetate buffer. The column is washed with the same buffer and eluted in a gradient of ionic strength of 0.2-0.5 M. Fractions containing product with a purity higher than 95% are collected, evaporated to a small volume and applied to a column containing Toyopearl HW-40, balanced 2% - acetic acid. The column is washed with the same eluent and fractions are collected. Fractions containing the final product with a purity higher than 98% are combined and lyophilized. If necessary, repeat the cleaning procedure. Yield 0.635 g, 0.54 mmol, 48% Amino acid analysis (calculated / found Asx 1.00 / 1.01, Glx 1.00 / 1.01, Pro 1.00 / 1.00, Gly 1.00 / 1 , 00, Cys 2.00 / 1.52, Tyr 1.00 / 0.87, Phe 1.00 / 0.99, Lys 1.00 / 1.02, Biological activity 270.3 IU / mg.
Список используемых сокращений: ДМФА диметилформамид, ДЦГК - дициклогексилкарбодиимид, HOBt N-гидроксибензотриазол, AcOH уксусная кислота. Py пиридин, TFA трифторуксусная кислота, РН фенилгидразид, ТСХ тонкослойная хроматография, Z бензилоксикарбонил, ВОС - трет-бутилоксикарбонил, РАОС изопропилиденоксикарбонил, Acm - ацетамидометил, ОРСР пентахлорфенил, OSu гидроксисукцинил, ONp - пара-нитрофенил. List of abbreviations used: DMF dimethylformamide, DCCA - dicyclohexylcarbodiimide, HOBt N-hydroxybenzotriazole, AcOH acetic acid. Py pyridine, TFA trifluoroacetic acid, pH phenylhydrazide, TLC thin layer chromatography, Z benzyloxycarbonyl, BOC - tert-butyloxycarbonyl, RAOС isopropylideneoxycarbonyl, Acm - acetamidomethyl, OCPP pentachlorophenyl, OSu hydroxy-para-phenyl-nitroxenesenyl.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU9494039975A RU2073010C1 (en) | 1994-10-26 | 1994-10-26 | Method of synthesis of lysine-vasopressin in solution |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU9494039975A RU2073010C1 (en) | 1994-10-26 | 1994-10-26 | Method of synthesis of lysine-vasopressin in solution |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU94039975A RU94039975A (en) | 1996-08-20 |
| RU2073010C1 true RU2073010C1 (en) | 1997-02-10 |
Family
ID=20162079
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU9494039975A RU2073010C1 (en) | 1994-10-26 | 1994-10-26 | Method of synthesis of lysine-vasopressin in solution |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2073010C1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2355701C2 (en) * | 2004-08-11 | 2009-05-20 | Ферринг Б.В. | Peptide agonists of vasopressin receptor |
| RU2415149C2 (en) * | 2006-02-10 | 2011-03-27 | Ферринг Б.В. | Peptide compounds |
| CN110172086A (en) * | 2019-05-29 | 2019-08-27 | 深圳深创生物科技有限公司 | A kind of preparation method of antidiuresis and liter blood pressure polypeptide drugs |
-
1994
- 1994-10-26 RU RU9494039975A patent/RU2073010C1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 1. Папсуевич О.С., Чипенс Г.И., Михайлова С.В. Нейрогипофизарные гормоны. - Рига, Зинатне, 1986. 2. D.Gillesen, A.Trzeciak in Neurohypophyseal Peptide Hormones and Other Biologically Active Peptides./ Ed. by D.H.Schlesinger, 1981, Amsterdam, p.37-47. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2355701C2 (en) * | 2004-08-11 | 2009-05-20 | Ферринг Б.В. | Peptide agonists of vasopressin receptor |
| RU2415149C2 (en) * | 2006-02-10 | 2011-03-27 | Ферринг Б.В. | Peptide compounds |
| CN110172086A (en) * | 2019-05-29 | 2019-08-27 | 深圳深创生物科技有限公司 | A kind of preparation method of antidiuresis and liter blood pressure polypeptide drugs |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU94039975A (en) | 1996-08-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Rich et al. | Synthesis of tentoxin and related dehydro cyclic tetrapeptides | |
| Fujii et al. | Total synthesis of bovine pancreatic ribonuclease A. Part 1. Synthesis of the protected pentadecapeptide ester (positions 110–124) | |
| Wang et al. | SOLID PHASE SYNTHESIS OF BOVINE PITUITARY GROWTH HORMONE‐(123–131) NONAPEPTIDE | |
| US3978035A (en) | 13-Norleucine-14-desamido motilin, a method for preparing it and an agent containing it | |
| Izeboud et al. | Synthesis of substance P via its sulfoxide by the repetitive excess mixed anhydride (REMA) method | |
| US5059679A (en) | Method of selectively sulfating peptides | |
| RU2073010C1 (en) | Method of synthesis of lysine-vasopressin in solution | |
| US3749703A (en) | Asn15-bovine thyrocalcitonin | |
| WAKIMASU et al. | 4-Methoxy-2, 3, 6-trimethylbenzenesulfonyl (Mtr): a new amino and imidazole protecting group in peptide synthesis | |
| JPS60226898A (en) | Novel gonadoliberin derivative and manufacture | |
| ORLOWSKA et al. | Sequence dependence in the formation of pyroglutamyl peptides in solid phase peptide synthesis | |
| JPS58140024A (en) | Purification method of secretin | |
| US6448031B1 (en) | Process for producing LH-RH derivatives | |
| Hofmann et al. | Studies with the S-peptide-S-protein system: The role of glutamic acid-2, lysine-7, and methionine-13 in S-peptide1–14 for binding to and activation of S-protein | |
| EP0360481B1 (en) | New pentapeptide and a process for the preparation thereof | |
| GB2109796A (en) | Anorexigenic tripeptides, process for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them | |
| US4315853A (en) | Polyprenylpeptides and their production | |
| FujINo et al. | Synthesis of Porcine Motilin and Its D-Phe1-Analog by the Use of Methanesulfonic Acid | |
| Van Nispen et al. | Synthesis and charge‐transfer properties of two ACTH analogues containing pentamethylphenylalanine in position 9 | |
| Schattenkerk et al. | Studies on polypeptides xiv synthesis of possible rennin substrates | |
| US4962225A (en) | Aspartic acid derivatives | |
| Hashimoto et al. | Synthesis of a protected sperm whale myoglobin-(77-96)-eicosapeptide and circular dichroism spectra of the related peptides. | |
| KUNO et al. | Studies on Peptides. CXL.: Synthesis of Human Gastrin-Releasing Polypeptide (hGRP) | |
| OGAWA et al. | Studies on Peptides. LXIV. Synthesis of the Tritetracontapeptide corresponding to the Entire Amino Acid Sequence of Porcine Gastric Inhibitory Polypeptide (GIP) | |
| Moroder et al. | Studies on cytochrome c. Part VI. Synthesis of the protected pentadecapeptide (sequence 67–81) of Baker's yeast iso‐I‐cytochrome c |