RU2067870C1 - Antitumor agent - Google Patents
Antitumor agent Download PDFInfo
- Publication number
- RU2067870C1 RU2067870C1 RU93046494A RU93046494A RU2067870C1 RU 2067870 C1 RU2067870 C1 RU 2067870C1 RU 93046494 A RU93046494 A RU 93046494A RU 93046494 A RU93046494 A RU 93046494A RU 2067870 C1 RU2067870 C1 RU 2067870C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hexapeptide
- val
- formula
- agent
- antitumor
- Prior art date
Links
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 title claims abstract description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 11
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 11
- 108010055223 bivalfor Proteins 0.000 abstract description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 abstract description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 2
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000000994 depressogenic effect Effects 0.000 abstract 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 abstract 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 12
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 5
- 208000028018 Lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 230000008533 pain sensitivity Effects 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- -1 Fmoc amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 101100315624 Caenorhabditis elegans tyr-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- HQSVPJOCETYYGA-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylformamide piperidine toluene Chemical compound CN(C=O)C.C1(=CC=CC=C1)C.N1CCCCC1 HQSVPJOCETYYGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100342977 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000012435 analytical chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 229940047120 colony stimulating factors Drugs 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000773 effect on pain Effects 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и заключается в применении гексапептида формулы Leu-Val-Val-Tyr-Pro-Trp в качестве противоопухолевого средства. The invention relates to medicine, namely to Oncology, and consists in the use of a hexapeptide of the formula Leu-Val-Val-Tyr-Pro-Trp as an antitumor agent.
Известно использование в онкологической практике полипептидов (цитокинов), таких как интерферон, колониестимулирующие факторы, интерлейкин-2. Они имеют молекулярную массу 15 70 кДа, их получают биологическим, генно-инженерным способом. Введение в организм больного этих сравнительно крупных веществ в лечебных дозах вызывает, как правило, тяжелые побочные эффекты. Гораздо предпочтительней использовать в качестве лечебных средств низкомолекулярные пептидные соединения, особенно эндогенной природы. Они эффективны в чрезвычайно малых дозах и производят, как правило, регуляторное, корригирующее влияние, не оказывая вредных для организма воздействий. Known use in cancer practice of polypeptides (cytokines), such as interferon, colony stimulating factors, interleukin-2. They have a molecular weight of 15–70 kDa, they are produced in a biological, genetic engineering way. The introduction into the patient's body of these relatively large substances in therapeutic doses causes, as a rule, severe side effects. It is much preferable to use low molecular weight peptide compounds, especially of endogenous nature, as therapeutic agents. They are effective in extremely small doses and produce, as a rule, a regulatory, corrective effect, without exerting harmful effects on the body.
Гексапептид формулы I был обнаружен в супернатанте культуры клеток костного мозга свиньи. Известно, что в смеси с гексапептидом формулы II Phe-Leu-Gly-Phe-Pro-Thr он производит модулирующее влияние на болевую чувствительность: при низком исходном пороге болевой чувствительности пептиды его повышают, при повышенном пороге болевой чувствительности его понижают. Синтез этих эндогенных пептидов позволил получить их в раздельном состоянии. Другие биологические свойства их не изучены. The hexapeptide of formula I was found in the supernatant of a pig bone marrow cell culture. It is known that, in a mixture with a hexapeptide of formula II Phe-Leu-Gly-Phe-Pro-Thr, it produces a modulating effect on pain sensitivity: with a low initial threshold of pain sensitivity, peptides increase it, and with an increased threshold of pain sensitivity it is lowered. The synthesis of these endogenous peptides made it possible to obtain them in a separate state. Other biological properties have not been studied.
Цель изобретения применить пептид Leu-Val-Val-Tyr-Pro-Trp в онкологии. The purpose of the invention to apply the peptide Leu-Val-Val-Tyr-Pro-Trp in oncology.
Поставленная цель достигается тем, что гексапептид формулы I Leu-Val-Val-Tyr-Pro-Trp отменяет ингибирующий эффект опухолевых клеток на функциональную активность Т-лимфоцитов и тормозит рост ряда мышиных перевиваемых опухолей (лимфолейкоза Р-388, меланомы В-16). This goal is achieved in that the hexapeptide of formula I Leu-Val-Val-Tyr-Pro-Trp cancels the inhibitory effect of tumor cells on the functional activity of T-lymphocytes and inhibits the growth of a number of mouse transplantable tumors (lymphocytic leukemia P-388, melanoma B-16).
Гексапептид получают твердофазным методом, наращивая пептидную цепь по N-концу. Присоединение защищенных по аминогруппе Fmoc-аминокислот проводят карбодиимидным методом. The hexapeptide is prepared by the solid phase method by expanding the peptide chain at the N-terminus. The amino group protected Fmoc amino acids are attached using the carbodiimide method.
Пример 1. Гексапептид формулы I восстанавливает активность Т-лимфоцитов, подавленную опухолевыми клетками человека. Example 1. The hexapeptide of formula I restores the activity of T-lymphocytes suppressed by human tumor cells.
Известно, что опухолевые клетки больных ОМЛ, а также клетки линии HL-60, ведущей происхождение от лейкозных клеток костного мозга этих больных, продуцируют белки, сопрессирующие функции Т-лимфоцитов, что выражается в резком снижении их способности отвечать пролиферацией на воздействие митогена (фитогемагглютинина, ФГА). It is known that tumor cells of patients with AML, as well as cells of the HL-60 line, originating from the leukemia cells of the bone marrow of these patients, produce proteins that compress the functions of T-lymphocytes, which is expressed in a sharp decrease in their ability to respond to proliferation upon mitogen exposure (phytohemagglutinin, PHA).
Свежевыделенные Т-лимфоциты периферической крови здоровых доноров в концентрации 1•106 клеток/мл стимулировали к пролиферации ФГА (3 мкг/мл). В конце 3 суток инкубации Т-лимфоцитов с митогеном в инкубационную смесь вводили Н-тимидин (2 мкКи/мМоль), по включению которого в ДНК Т-лимфоцитов судили об их пролиферативной активности, и выдерживали 4 часа. Если в данную инкубационную смесь в начале инкубирования добавить 10% кондиционной среды (КС) от лейкозных клеток HL-60, то уровень пролиферации Т-лимфоцитов в ответ на ФГА снижается в среднем на 50% по сравнению с контролем (100% инкубация без КС HL-60) (таблица 1).Freshly isolated peripheral blood T-lymphocytes from healthy donors at a concentration of 1 × 10 6 cells / ml stimulated PHA proliferation (3 μg / ml). At the end of 3 days of incubation of T-lymphocytes with mitogen, N-thymidine (2 μCi / mmol) was introduced into the incubation mixture, by the inclusion of which proliferative activity was judged in the T-lymphocytes DNA, and held for 4 hours. If at the beginning of incubation, add to this incubation mixture 10% of the conditioned medium (CS) from HL-60 leukemia cells, the level of T-lymphocyte proliferation in response to PHA decreases by an average of 50% compared with the control (100% incubation without HL CS -60) (table 1).
Установлено, что гексапептид формулы I в отличие от близкородственного по физико-химическим свойствам гексапептида формулы II восстанавливает редуцированный лейкозными клетками ФГА ответ Т-лимфоцитов до нормального уровня. Способность гексапептида формулы II восстанавливать подавленный пролиферативный ответ Т-лимфоцитов обнаруживает четкую дозовую зависимость. Гексапептид формулы II, близкородственный по физико-химическим свойствам гексапептиду формулы I, но имеющий другую аминокислотную последовательность, не только не восстанавливает редуцированный ФГА ответ Т-лимфоцитов, но даже усиливает токсический эффект лейкозных клеток HL-60 (таблица 1). It was found that the hexapeptide of formula I, in contrast to the hexapeptide of formula II, which is closely related to the physicochemical properties, restores the response of T-lymphocytes reduced by PHA leukemia cells to a normal level. The ability of the hexapeptide of formula II to restore the suppressed proliferative response of T-lymphocytes exhibits a clear dose dependence. The hexapeptide of formula II, closely related in physicochemical properties to the hexapeptide of formula I, but having a different amino acid sequence, not only does not restore the reduced PHA response of T-lymphocytes, but even enhances the toxic effect of HL-60 leukemia cells (table 1).
Таким образом из двух гексапептидов эндогенной природы, описанных ранее как влияющие на болевую чувствительность (3), один (гексапептид формулы I) обладает еще противоопухолевой активностью. Thus, of the two hexapeptides of endogenous nature, previously described as affecting pain sensitivity (3), one (the hexapeptide of formula I) also has antitumor activity.
Пример 2. Введение гексапептида формулы I мышам тормозит рост привитой им опухоли лимфолейкоза Р-388. Example 2. The introduction of a hexapeptide of formula I to mice inhibits the growth of a grafted tumor of lymphocytic leukemia P-388.
В экспериментах использовали гибридных мышей-самок BDF-1. Лимфолейкоз Р-388 прививали подкожно по общепринятой методике взвесью лейкозных клеток в питательной среде 199 в количестве 1 млн. клеток на мышь. Гексапептид вводили внутрибрюшинно через 48 часов после перевивки опухоли однократно, двукратно и пятикратно с интервалами 96 и 24 часа соответственно. Использовали диапазон разовых доз от 0,5 до 4,0 мг/кг. In experiments, hybrid female mice BDF-1 were used. Lymphocytic leukemia P-388 was inoculated subcutaneously by a conventional technique by suspension of leukemia cells in 199 nutrient medium in an amount of 1 million cells per mouse. Hexapeptide was administered intraperitoneally 48 hours after transplantation of the tumor once, twice and five times at intervals of 96 and 24 hours, respectively. A single dose range of 0.5 to 4.0 mg / kg was used.
Об эффективности гексапептида судили по торможению роста опухоли (ТРО,), которое рассчитывали как разницу в средних объемах опухолей в контрольной и подопытных группах, выраженную в процентах. В таблице 2 представлены средние данные из двух серий опытов. Количество мышей в контрольных группах без лечения равно 29. Количество мышей в каждой подопытной группе равно 8. Токсичность гексапептида оценивали по числу павших мышей в подопытных группах до начала гибели животных в контрольных группах. The effectiveness of the hexapeptide was judged by the inhibition of tumor growth (TPO,), which was calculated as the difference in the average volumes of tumors in the control and experimental groups, expressed as a percentage. Table 2 presents the average data from two series of experiments. The number of mice in the control groups without treatment was 29. The number of mice in each experimental group was 8. The toxicity of hexapeptide was estimated by the number of dead mice in the experimental groups before the death of animals in the control groups.
Представленные данные показывают, что гексапептид формулы I обладает значимым и достоверным противоопухолевым действием на мышах в отношении подкожного лимфолейкоза Р-388. The data presented show that the hexapeptide of formula I has a significant and reliable antitumor effect in mice against subcutaneous lymphocytic leukemia P-388.
Данный гексапептид нетоксичен в использованных дозах. This hexapeptide is non-toxic in the doses used.
Пример 3. Введение гексапептида формулы I мышам тормозит рост привитой им солидной опухоли меланомы В-16. Example 3. The introduction of the hexapeptide of formula I to mice inhibits the growth of a graft of a solid tumor of melanoma B-16 grafted by it.
В экспериментах использовали линейных мышей C 57 BL/6. Меланому В-16 прививали по 50 мг измельченной опухолевой ткани на мышь в питательной среде 199. Гексапептид вводили 1- или 2- кратно с интервалом 96 часов. Лечение начинали через 72 часа после прививки опухоли. Дозы гексапептида, а также способ оценки его эффективности были такими же, как и в примере 2. Результаты опытов представлены в таблице 3. In experiments,
Из данных таблицы 3 следует, что противоопухолевый эффект гексапептида формулы I достоверно проявился и на этой солидной опухоли. Он был наиболее выражен на 7-й день после окончания курса лечения. From the data of table 3 it follows that the antitumor effect of the hexapeptide of formula I was significantly manifested on this solid tumor. He was most pronounced on the 7th day after the end of the course of treatment.
Как и в примере 2, пептид нетоксичен при использованных дозах введения. As in example 2, the peptide is non-toxic at the used doses of administration.
Пример 4. Синтез гексапептида формулы I Leu-Val-Val-Tyr-Pro-Trp. Example 4. Synthesis of a hexapeptide of formula I Leu-Val-Val-Tyr-Pro-Trp.
Синтез пептида проводили на автоматическом синтезаторе пептидов Biosearch 9600 (США) на РАС-смоле, используя Fmoc/DIPCDI метод по стандартной программе c: FDI, прилагаемой к прибору. Конденсацию Fmoc-аминокислот проводили карбодиимидным методом, для подавления рацемизации добавляли эквимолярные количества 1-оксибензтриазола. Остаток тирозина вводили в виде его о-трет-бутилового эфира. Стартовую аминокислоту триптофан присоединяли к 5 г РАС-полимера в количестве 0,76 ммоль аминокислоты на 1 г полимера. Далее Trp-полимер обрабатывали 0,4 М растворами соответствующих защищенных аминокислот, содержащими примерно 7-кратный избыток соответствующей аминокислоты и диизопропилкарбодиимида. Отщепление Fmoc-группы после конденсации проводили смесью пиперидин-толуол-диметилформамид (30:35:35). После окончания синтеза пептид отщепляли от смолы трифторуксусной кислотой, содержащей 2,5% этандиола и 2,5% воды при охлаждении льдом в течение 1,5 часов. Полученный пептид выделяли и очищали высокоэффективной хроматографией на колонке Диасорб-130 С-16 Т, 10 мкм, размером 26х250 мм в градиенте ацетонитрила в 0,05 М фосфатном буфере рН 3,0 и обессоливали на той же колонке. После лиофилизации получали 2 г белого аморфного порошка, гомогенного по данным ВЭЖХ. Аналитическую хроматографию проводили на колонке Ультрасфера ODS-3 в градиенте ацетонитрила (20 80%) в 0,05 М фосфатном буфере рН 3,0, детекцию осуществляли при 220 нм. Аминокислотный анализ кислого гидролизата (6н HCl, 20 часов) показал наличие следующих аминокислот: Leu 1 (0,95), Val 2 (1,87), Tyr 1 (1,03), Pro 1 (0,96). The peptide was synthesized on an automated Biosearch 9600 peptide synthesizer (USA) on a PAC resin using the Fmoc / DIPCDI method according to the standard c: FDI program supplied with the device. Fmoc amino acids were condensed using the carbodiimide method; equimolar amounts of 1-hydroxybenzotriazole were added to suppress racemization. The tyrosine residue was introduced as its o-tert-butyl ether. The starting amino acid tryptophan was attached to 5 g of the PAC polymer in an amount of 0.76 mmol of amino acid per 1 g of polymer. Next, the Trp polymer was treated with 0.4 M solutions of the corresponding protected amino acids containing approximately a 7-fold excess of the corresponding amino acid and diisopropylcarbodiimide. Cleavage of the Fmoc group after condensation was carried out with a mixture of piperidine-toluene-dimethylformamide (30:35:35). After completion of the synthesis, the peptide was cleaved from the resin with trifluoroacetic acid containing 2.5% ethanediol and 2.5% water while cooling with ice for 1.5 hours. The resulting peptide was isolated and purified by high-performance chromatography on a Diasorb-130 C-16 T column, 10 μm, size 26x250 mm in an acetonitrile gradient in 0.05 M phosphate buffer pH 3.0 and desalted on the same column. After lyophilization, 2 g of a white amorphous powder homogeneous according to HPLC was obtained. Analytical chromatography was performed on an ODS-3 Ultrasphere column in an acetonitrile gradient (20–80%) in 0.05 M phosphate buffer pH 3.0, and detection was carried out at 220 nm. Amino acid analysis of an acid hydrolyzate (6N HCl, 20 hours) showed the presence of the following amino acids: Leu 1 (0.95), Val 2 (1.87), Tyr 1 (1.03), Pro 1 (0.96).
Далее 1 мг полученного пептида растворяли в 0,5 мл 98%-ной муравьиной кислоты, добавляли 0,25 мл уксусного ангидрида и выдерживали 30 мин при 18oС. Далее упаривали при комнатной температуре и очищали высокоэффективной хроматографией на колонке Ультрасфера С-18 ODS (4,6х250 мм) в градиенте ацетонитрила в 0,1% -ной трифторуксусной кислоте. Получали 0,5 мг пептида. ТТТ1 ТТТ2Next, 1 mg of the obtained peptide was dissolved in 0.5 ml of 98% formic acid, 0.25 ml of acetic anhydride was added and kept for 30 min at 18 o С. Then it was evaporated at room temperature and purified by high-performance chromatography on an Ultrasphere C-18 ODS column (4.6 x 250 mm) in a gradient of acetonitrile in 0.1% trifluoroacetic acid. Received 0.5 mg of the peptide. TTT1 TTT2
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU93046494A RU2067870C1 (en) | 1993-09-30 | 1993-09-30 | Antitumor agent |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU93046494A RU2067870C1 (en) | 1993-09-30 | 1993-09-30 | Antitumor agent |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2067870C1 true RU2067870C1 (en) | 1996-10-20 |
| RU93046494A RU93046494A (en) | 1996-11-10 |
Family
ID=20147926
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU93046494A RU2067870C1 (en) | 1993-09-30 | 1993-09-30 | Antitumor agent |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2067870C1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2170101C1 (en) * | 2000-02-17 | 2001-07-10 | Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное предприятие "БИОНОКС" | Preparation for treating inflammatory diseases |
| RU2185172C2 (en) * | 2000-04-10 | 2002-07-20 | Научно-исследовательский институт клинической иммунологии СО РАМН | Method of blood index correction and span life of animals with t-lympholeukosis sick |
| RU2362579C1 (en) * | 2007-11-26 | 2009-07-27 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Сиа Пептайдс" | Pharmaceutical composition on basis of peptide possessing antitumoral action |
-
1993
- 1993-09-30 RU RU93046494A patent/RU2067870C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Патент N 4743590, кл. А 61 К 37/02, 1988. Фонина Л.А. и др. Структура двух миелопептидов, влияющих на болевую чувствительность. - Доклады Академии наук, 1991, т. 319, N 3, с.755 - 757. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2170101C1 (en) * | 2000-02-17 | 2001-07-10 | Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное предприятие "БИОНОКС" | Preparation for treating inflammatory diseases |
| RU2185172C2 (en) * | 2000-04-10 | 2002-07-20 | Научно-исследовательский институт клинической иммунологии СО РАМН | Method of blood index correction and span life of animals with t-lympholeukosis sick |
| RU2362579C1 (en) * | 2007-11-26 | 2009-07-27 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Сиа Пептайдс" | Pharmaceutical composition on basis of peptide possessing antitumoral action |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2060998C1 (en) | Method of synthesis of peptides, peptides, immunomodulating composition and a method of regulation of insufficient or excessive function of t-cells in patient | |
| US4810693A (en) | Method for inducing biological coverings in wounds | |
| US5736519A (en) | Peptide, a method for its preparation and a pharmaceutical composition containing the peptide | |
| HU211958A9 (en) | Modified polypeptide | |
| CN116421712A (en) | A D-configuration oncolytic peptide-camptothecin conjugate and its preparation method and application | |
| EP0011283A1 (en) | New lactyl tetrapeptide, processes for preparation thereof and pharmaceutical compositions containing it | |
| KR101176890B1 (en) | Protein-Binding Methotrexate Derivatives, and Medicaments Containing the Same | |
| WO1997032594A1 (en) | Synthetic peptides and pseudopeptides having osteogenic activity and pharmaceutical compositions containing the same | |
| Konopińska et al. | Synthesis of proctolin analogues and their cardioexcitatory effect on cockroach, Periplaneta americana L., and yellow mealworm, Tenebrio molitor L. | |
| US5114926A (en) | Tetrapeptide inhibiting the entry into cycle of hemopoietic stem cells processes for its preparation, and its uses | |
| RU2067870C1 (en) | Antitumor agent | |
| JP3378279B2 (en) | Peptide and method for producing the same | |
| RU2136695C1 (en) | Serum glycoprotein showing biological activity at superlow doses | |
| US5070076A (en) | Thymus-gland preparation and method for producing same | |
| RU2037499C1 (en) | Peptide derivatives or acid addition salts thereof and pharmaceutical composition | |
| EP0101929B1 (en) | Polypeptide-diesters, their production and use | |
| NZ199752A (en) | Glycoproteins and immunoactive compositions | |
| WIECZOREK et al. | The immunomodulatory diversity of the proteins of the transforming growth factor β (TGFβ) family | |
| RU2142958C1 (en) | Peptide with immuno-simulating activity and preparation based on such peptide | |
| EP0466498B1 (en) | Physiologically active peptides having immunoregulatory activities | |
| WO1994003482A1 (en) | Glycyl-hystidyle-lysine (ghl) derivatives | |
| RU2064935C1 (en) | Hexapeptide (bivalfor) showing antitumor activity | |
| US6015878A (en) | Antitumor agents isolated from intestinal mucosa, a method for their isolation and their application | |
| JP2952830B2 (en) | Antihypertensive | |
| DE3876240T2 (en) | SORBINE AND DERIVED PEPTIDES THAT INCREASE ABSORPTION BY THE MUCOSA. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20091001 |