RU2043110C1 - Композиция, обладающая свойством репарировать мембраны гепатоцитов - Google Patents
Композиция, обладающая свойством репарировать мембраны гепатоцитов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2043110C1 RU2043110C1 RU93012924A RU93012924A RU2043110C1 RU 2043110 C1 RU2043110 C1 RU 2043110C1 RU 93012924 A RU93012924 A RU 93012924A RU 93012924 A RU93012924 A RU 93012924A RU 2043110 C1 RU2043110 C1 RU 2043110C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- composition
- cytochrome
- inactivation
- activity
- phospholipid
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 21
- 239000012528 membrane Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 6
- LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N glycyrrhizinic acid Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]1O[C@@H]1C([C@H]2[C@]([C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@]5(C)CC[C@@](C)(C[C@H]5C4=CC3=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)CC1)(C)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N 0.000 claims abstract description 5
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 4
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 37
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 5
- 241000208818 Helianthus Species 0.000 claims description 2
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 29
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 11
- 235000020238 sunflower seed Nutrition 0.000 abstract description 10
- VTAJIXDZFCRWBR-UHFFFAOYSA-N Licoricesaponin B2 Natural products C1C(C2C(C3(CCC4(C)CCC(C)(CC4C3=CC2)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)C2C(C)(C)CC1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O VTAJIXDZFCRWBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N glycyrrhetinic acid glycoside Natural products C1CC(C2C(C3(CCC4(C)CCC(C)(CC4C3=CC2=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)C2C(C)(C)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 229960004949 glycyrrhizic acid Drugs 0.000 abstract description 4
- UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N glycyrrhizic acid Natural products CC1(C)C(CCC2(C)C1CCC3(C)C2C(=O)C=C4C5CC(C)(CCC5(C)CCC34C)C(=O)O)OC6OC(C(O)C(O)C6OC7OC(O)C(O)C(O)C7C(=O)O)C(=O)O UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 239000001685 glycyrrhizic acid Substances 0.000 abstract description 4
- 235000019410 glycyrrhizin Nutrition 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 22
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 description 20
- 102000002004 Cytochrome P-450 Enzyme System Human genes 0.000 description 20
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 15
- 208000008964 Chemical and Drug Induced Liver Injury Diseases 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 13
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 12
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 210000001589 microsome Anatomy 0.000 description 5
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 4
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 4
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 4
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 3
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000006374 N-Demethylating Oxidoreductases Human genes 0.000 description 3
- 108010058669 N-Demethylating Oxidoreductases Proteins 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 3
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 3
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 3
- 210000001853 liver microsome Anatomy 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- RMMXTBMQSGEXHJ-UHFFFAOYSA-N Aminophenazone Chemical compound O=C1C(N(C)C)=C(C)N(C)N1C1=CC=CC=C1 RMMXTBMQSGEXHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000008109 Mixed Function Oxygenases Human genes 0.000 description 2
- 108010074633 Mixed Function Oxygenases Proteins 0.000 description 2
- 108010045510 NADPH-Ferrihemoprotein Reductase Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000212 aminophenazone Drugs 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 108010085838 cytochrome P420 Proteins 0.000 description 2
- 108700010261 ferricyanide reductase Proteins 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000003228 microsomal effect Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical class C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 1
- MPDGHEJMBKOTSU-YKLVYJNSSA-N 18beta-glycyrrhetic acid Chemical compound C([C@H]1C2=CC(=O)[C@H]34)[C@@](C)(C(O)=O)CC[C@]1(C)CC[C@@]2(C)[C@]4(C)CC[C@@H]1[C@]3(C)CC[C@H](O)C1(C)C MPDGHEJMBKOTSU-YKLVYJNSSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102100030497 Cytochrome c Human genes 0.000 description 1
- 108010075031 Cytochromes c Proteins 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 108020004206 Gamma-glutamyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 101000615488 Homo sapiens Methyl-CpG-binding domain protein 2 Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100021299 Methyl-CpG-binding domain protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 108091007187 Reductases Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- JLPULHDHAOZNQI-JLOPVYAASA-N [(2r)-3-hexadecanoyloxy-2-[(9e,12e)-octadeca-9,12-dienoyl]oxypropyl] 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC JLPULHDHAOZNQI-JLOPVYAASA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 239000012675 alcoholic extract Substances 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- SIHHLZPXQLFPMC-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol;hydrate Chemical compound O.OC.ClC(Cl)Cl SIHHLZPXQLFPMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001236 detergent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000006640 gamma-Glutamyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000002443 hepatoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 231100000784 hepatotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008816 organ damage Effects 0.000 description 1
- -1 potassium ferricyanide Chemical compound 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- JVBXVOWTABLYPX-UHFFFAOYSA-L sodium dithionite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])=O JVBXVOWTABLYPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Использование: в биохимии, медицине, фармакологии. Сущность: композиция, содержащая обогащенную фракцию из семян подсолнечника и тринатриевую соль глицирризиновой кислоты в физиологически приемлемых концентрациях, пригодна для таблетирования. Полученная композиция обладает свойством репарировать мембраны гепатоцитов. 6 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, биохимии и фармакологии. Предлагаемая фосфолипидная композиция обладает свойством восстанавливать структуру и функцию поврежденных мембран гепатоцитов и может быть впоследствии использована для лечения заболеваний печени.
При заболеваниях печени вне зависимости от их этиологии происходит повреждение мембран гепатоцитов с потерей их основных структурных компонентов фосфолипидов и инактивацией ферментных систем, участвующих в биосинтетических и детоксикационных процессах. Экспериментально показано, что структура и функция поврежденных мембран клеток печени может быть восстановлена путем введения фосфолипидов в составе лекарственного средства.
Наиболее распространенными и применяемыми в клинической практике препаратами для лечения заболеваний печени таких, как гепатит и цирроз, являются глицирам, ликвиритон, флакарбин (Машковский М.Д. Москва, "Медицина", т.1, с. 302, 361, 362, 1988).
Эссенциале (форте) (Машковский М.Д. т.2, 1988), выбранный нами в качестве прототипа, представляет собой смесь фосфатидилхолина и солей желчных кислот. Как известно, производные желчных кислот, в частности, дезоксихолат, являются сильными детергентами и оказывают побочные токсические эффекты.
Техническим результатом данного изобретения является создание композиции, обладающей способностью репарировать мембраны гепатоцитов, но не оказывающей побочного токсического воздействия. Присутствующая в предлагаемой композиции в качестве эмульгатора тринатриевая соль глицирризиновой кислоты помимо мягкого детергентного и гепатопротекторного действия обладает противовоспалительным, противоаллергическим, противовирусным эффектом (Ехреrientia, v. 36, р.304, 1980; Sсand. Gastrienterol. v.17, р.412, 1982; S.Nagoya City Univ. Меd. Аssoc. v.30, р.333-356, 1979).
Другим техническим результатом является расширение форм препарата. Полученная таблетированная форма позволяет избегать инъекций и избавляет больных от посторонней помощи при введении лекарств. Для больных хроническими формами заболевания становится доступным амбулаторное лечение. Этот результат достигается благодаря использованию в качестве источника фосфолипидов семян подсолнечника.
Авторами был проведен сравнительный анализ различных исходных материалов продуктов переработки семян подсолнечника и был сделан вывод, что дробленые ядра семян подсолнечника позволяют выделить фракцию фосфолипидов, пригодную для получения таблетированной формы препарата.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Способ получения обогащенной фракции фосфолипидов из продуктов переработки семян подсолнечника.
1. Исходный материал (дробленые ядра семян подсолнечника) в количестве 10 г экстрагируется 30 мл этанола в течение 15 мин.
2. Твердую массу отжимают через два слоя марли. Экстракт фильтруется (широкопористая фильтровальная бумага). Твердый остаток промывается на воронке этанолом 3 раза по 30 мл.
3. Спиртовой экстракт упаривается на роторном испарителе до объема 10 мл, добавляется 50 мл ледяного ацетона и оставляется на 2 ч при 4оС.
4. Осадок отделяется центрифугированием при 7000 об/мин в течение 15 мин на центрифуге К-24 (ротор 6х30 мл) и высушивается в вакууме.
Характеристика обогащенной фракции фосфолипидов из продуктов переработки семян подсолнечника.
Продукт представляет собой светло-желтый порошок со следующими характеристиками:
Фракция, нераст-
воримая в холодном ацетоне не менее 98%
Содержание нейт- ральных липидов не более 2%
Растворимость в толуоле 100%
Индекс окислен- ности 0,28
Выход продукта не менее 200 мг из 10 г исходного сырья.
Фракция, нераст-
воримая в холодном ацетоне не менее 98%
Содержание нейт- ральных липидов не более 2%
Растворимость в толуоле 100%
Индекс окислен- ности 0,28
Выход продукта не менее 200 мг из 10 г исходного сырья.
Чистоту выделенной фракции фосфолипидов контролировали с помощью тонкослойной хроматографии на пластинках с "Силуфол" в системе метанол-хлороформ-вода (25:65:4), проявление хроматограмм 10% фосфорномолибденовой кислотой в этиловом спирте. Содержание фосфатидилхолина ≈70%
Как видно из представленных данных табл.1 имеется значительное отличие в содержании 16:0 жирной кислоты, входящей в фосфолипидные фракции, получаемые из подсолнечника и сои. Именно эти различия, очевидно, влияют на физико-химические свойства фосфатидилхолина из семян подсолнечника, который получают в виде порошка бледно-желтого цвета, в то время как соевый фосфатидилхолин имеет консистенцию застывшего масла.
Как видно из представленных данных табл.1 имеется значительное отличие в содержании 16:0 жирной кислоты, входящей в фосфолипидные фракции, получаемые из подсолнечника и сои. Именно эти различия, очевидно, влияют на физико-химические свойства фосфатидилхолина из семян подсолнечника, который получают в виде порошка бледно-желтого цвета, в то время как соевый фосфатидилхолин имеет консистенцию застывшего масла.
Способ получения фосфолипидной композиции.
Заявленную композицию получают путем смешивания фосфолипидов из семян подсолнечника и тринатриевой соли глицирризиновой кислоты (производство формы Rhone-Роulenc Rorer), взятых в порошкообразном состоянии; затем полученную смесь подвергают таблетированию.
Композиция имеет следующий количественный состав: в расчете на одну таблетку фосфолипиды из семян подсолнечника 250 мг, глицирризиновая кислота 100 мг.
Биологическую активность заявляемой композиции исследовали на модельной системе in vitro и в экспериментах in vivo.
1) Исследование влияния фосфолипидных препаратов на инактивацию изолированного очищенного цитохрома Р450 микросом печени кроликов.
Цитохром Р450 является ключевым ферментом микросомальной монооксигеназной системы печени, участвующей в окислении многих чужеродных соединений и таким образом выполняющей детоксицирующую функцию. Данный гемопротеин является мембранным ферментом и обладает способностью быстро инактивироваться при различных воздействиях на мембраны. Стабилизировать данный гемопротеин в активной форме возможно путем добавления к нему фосфолипидов. В связи с этим мы использовали регистрацию инактивации изолированного очищенного цитохрома Р450 в присутствии и отсутствии фосфолипидных препаратов в качестве модельной системы для выделения их стабилизирующего эффекта.
В основе метода регистрации инактивации цитохрома Р450 лежит переход цитохрома Р450 в цитохром Р420, являющейся неактивной формой цитохрома Р450. Снижение содержания цитохрома Р450, являющееся показателем процесса инактивации цитохрома Р450, определяли по разности оптического поглощения при длинах 450 и 490 нм, и увеличение содержания цитохрома Р420 при 420 и 490 нм (Биохимия, вып. 46, с. 280-286, 1981). Влияние фосфолипидных препаратов на инактивацию цитохрома Р450 исследовали после преинкубации гемопротеина с фосфолипидными препаратами (соотношение цитохрома и фосфолипида составляло 1 нмоль и 1 мг, соответственно) в течение 15 мин при 4оС. Затем объем смеси доводили до 6 мл 100 мМ трис-НСl буфером, рН 7,4, и разливали ее в спектрофотометрические кюветы по 3 мл. В кювету измерения пропускали в течение 1 мин СО, добавляли затем в обе кюветы несколько кристалликов дитионита натрия и регистрировали дифференциальные спектры цитохрома Р450 в диапазоне длин волн 400-500 нм в течение 20 мин при 30оС. Расчет инактивации цитохрома Р450 проводили по методу, приведенному в ж. "Биохимия", вып.46, с.280-286. Данные по измерению инактивации гемопротеина приведены в табл.2. Показано, что время полуинактивации цитохрома Р450 в отсутствии препаратов составляет 3,4 мин, добавление к белку исследуемого препарата приводило к замедлению инактивации гемопротеина и время полуинактивации (5 мин) увеличивалось. В то же время инкубация цитохрома с Эссенциале приводило к ускорению инактивации цитохрома и время полуинактивации снижалось до 1,7 мин. Ускорение инактивации белка в присутствии Эссенциале объясняется наличием в этом препарате производных желчных кислот, в частности дезоксихолата, который является сильным детергентом и может инактивировать мембранные белки в системах in vitro. В системах in vivo дестабилизирующий эффект Эссенциале на белки нивелируется путем резкого разведения дезоксихолата в организме. Таким образом предлагаемая композиция обладает способностью стабилизировать цитохром Р450 и замедлять его инактивацию in vitro.
2) Изучение влияния фосфолипидных препаратов на инактивацию цитохрома Р450 микросом печени крыс с токсическими гепатитами после введения животным фосфолипидных препаратов.
Модель острого токсического гепатита получали одноразовым введением внутрибрюшинно гепатотоксина, четыреххлористый углерод, в дозе 0,2 мл на 100 г массы крысам-самцам. Эффект действия фосфолипидных препаратов при гепатите оценивали после внутрибрюшинного введения препаратов в течение 3 дней в дозе 20 мг на 100 г массы тела. Затем животных забивали и выделяли из печени микросомальную фракцию стандартным методом, как описано в ж. "Биохимия", вып.44, с.1049-1057, 1979.
Для регистрации инактивации цитохрома Р450 суспензию микросом, полученных из трех групп животных (1 группа токсический гепатит; 2 группа токсический гепатит с последующим введением исследуемого препарата; 3 группа токсический гепатит с последующим введением Эссенциале) с содержанием 6 нмолей гемопротеина разводили в 6 мл 100 мМ трис-НСl буфера, рН 7,4, и регистрировали дифференциальные спектры в течение 20 мин при 37оС. Время полуинактивации рассчитывали, как описано выше. Как видно из данных табл.3 при токсическом гепатите время полуинактивации составляло 4,8 мин. Введение животным фосфолипидных препаратов приводило к замедлению инактивации цитохрома Р450, наиболее выраженный стабилизирующий эффект имел место в случае использования исследуемой композиции (время полуинактивации составляло 18 мин и приближалось к таковому для интактных животных).
3) Изучение влияния фосфолипидных препаратов на ферментный состав и N-деметилазную и n-гидроксилазную активности в микросомах печени крыс с токсическим гепатитом после введения животным фосфолипидных препаратов.
Для оценки репарирующего эффекта фосфолипидных препаратов в мембранах микросом печени 3-х экспериментальных групп крыс (см. выше) в суспензии микросом определяли содержание цитохрома Р450, активности НАДФН-цитохром с редуктазы, НАДН-феррицианид редуктазы и N-деметилазную и n-гидроксилазную активности с использованием аминопирина и анилина, соответственно.
Определение содержания цитохрома Р450 в микросомах основано на измерении величины поглощения комплекса восстановленного цитохрома Р450 с СО при 450 нм (J.Biol.Chem. v.239, р.2370-2378, 1964). Активность НАДФН-цитохром с редуктазы определяли по скорости восстановления цитохрома с при 550 нм, активность НАДН-феррицианид редуктазы по скорости восстановления феррицианида калия при 420 нм (Вiochemistry, v.16, р.1116-1123, 1977). N-деметилазную активность в микросхемах определяли по количеству образовавшегося в реакции окисления аминопирина формальдегида, выявляемого по образованию окрашенного продукта в присутствии реактива Наше при 412 нм (Аrch.Biochem.Bioрhys. v. 298, р.403-412, 1992). n-Гидроксилазную активность определяли по количеству образовавшегося при окислении анилина n-аминофенола, выявляемого колориметрически по реакции с фенолом и Nа2СО3, при 630 нм (Аrch.Вiochem.Вiорhys. v. 298, р.403-412).
Данные по определению в микросомах 3-х групп, указанных выше параметров, приведены в табл.4. Показано, что при токсическом гепатите происходит падение содержания цитохрома Р450, активности редуктаз и активности деметилазы и гидроксилазы. Введение животным с гепатитом фосфолипидных препаратов приводило к увеличению величин исследуемых параметров и они приближались к величинам для микросом из группы интактных животных. Таким образом, предложенная композиция обладает способностью реактивировать ферментные системы после инактивации их при токсическом гепатите.
4) Изучение влияния фосфолипидных препаратов на активность ферментов сыворотки крыс с токсическим гепатитом после введения животным фосфолипидных препаратов.
Для оценки биологической активности фосфолипидных препаратов в сыворотке крови 3-х групп экспериментальных животных определяли активность аспартат- и аланин-трансфераз, щелочной фосфатазы и гамма-глютамилтрансферазы, по уровню активности которых определяют функциональное состояние печени. При многих заболеваниях печени уровень активности данных ферментов в сыворотке резко возрастает. Активность ферментов определяли с использованием стандартных наборов Воehringer Маnheim (Германия) на автоанализаторе FР-90 Labsystem (Финляндия).
Данные по определению активности указанных ферментов представлены в табл. 5. Видно, что по сравнению с контрольным уровнем при гепатите происходит резко увеличение активности данных ферментов с сыворотке крови, что говорит о повреждении органа. Введение животным фосфолипидных препаратов сопровождается снижением активности печеночных ферментов и их уровень становится сравнимым с таковым для интактных крыс. Следовательно, заявляемая композиция обладает высокой биологической активностью и способствует нормализации функционального состояния пораженной печени.
5) Изучение влияния фосфолипидных препаратов на выживаемость крыс с токсическим гепатитом после введения животным фосфолипидных препаратов.
Токсический гепатит и введение фосфолипидных препаратов осуществляли как указано выше (см. пункт 2). Как видно из табл.6 в группе крыс с токсическим гепатитом погибало 40% животных, введение фосфолипидных препаратов увеличивало выживаемость животных и она составляла 90-95% от общего количества крыс в группе.
Таким образом, заявляемая композиция обладает способностью реактивировать и репарировать мембранные ферментные системы печени, улучшает ее функциональное состояние и увеличивает выживаемость животных при токсическом поражении печени.
Claims (1)
- КОМПОЗИЦИЯ, ОБЛАДАЮЩАЯ СВОЙСТВОМ РЕПАРИРОВАТЬ МЕМБРАНЫ ГЕПАТОЦИТОВ, содержащая в физиологически приемлемых концентрациях фосфолипиды и детергент, отличающаяся тем, что композиция в качестве фосфолипидов содержит обогащенную фракцию фосфолипидов подсолнечника, а в качестве детергента тринатриевую соль глицирризиновой кислоты.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU93012924A RU2043110C1 (ru) | 1993-03-10 | 1993-03-10 | Композиция, обладающая свойством репарировать мембраны гепатоцитов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU93012924A RU2043110C1 (ru) | 1993-03-10 | 1993-03-10 | Композиция, обладающая свойством репарировать мембраны гепатоцитов |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2043110C1 true RU2043110C1 (ru) | 1995-09-10 |
| RU93012924A RU93012924A (ru) | 1996-02-20 |
Family
ID=20138459
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU93012924A RU2043110C1 (ru) | 1993-03-10 | 1993-03-10 | Композиция, обладающая свойством репарировать мембраны гепатоцитов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2043110C1 (ru) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2133122C1 (ru) * | 1998-10-14 | 1999-07-20 | Научно-исследовательский институт биомедицинской химии РАМН | Композиция, обладающая свойствами репарировать биологические мембраны |
| RU2168336C2 (ru) * | 1999-09-08 | 2001-06-10 | Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей | Способ стимуляции репаративной регенерации и гипертрофии печени при моделировании ее механического повреждения в эксперименте |
| RU2196585C2 (ru) * | 2001-03-06 | 2003-01-20 | Научно-исследовательский институт биомедицинской химии РАМН | Средство для комплексного лечения хронических дерматозов: псориаза, атопического дерматита, экземы и кератодермий и способ лечения хронических дерматозов |
| RU2304431C2 (ru) * | 2005-08-12 | 2007-08-20 | Александр Иванович Арчаков | Способ получения капсулированной лекарственной формы фосфолипидного препарата "фосфоглив" для лечения и профилактики острых и хронических заболеваний печени |
| RU2304430C2 (ru) * | 2005-08-12 | 2007-08-20 | Александр Иванович Арчаков | Способ получения инъекционной лекарственной формы фосфолипидного препарата "фосфоглив" для лечения и профилактики острых и хронических заболеваний печени |
-
1993
- 1993-03-10 RU RU93012924A patent/RU2043110C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| М.Д. Машковский. Лекарственные средства. М.: Медицина, 1986, т.2, с.46. * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2133122C1 (ru) * | 1998-10-14 | 1999-07-20 | Научно-исследовательский институт биомедицинской химии РАМН | Композиция, обладающая свойствами репарировать биологические мембраны |
| RU2168336C2 (ru) * | 1999-09-08 | 2001-06-10 | Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей | Способ стимуляции репаративной регенерации и гипертрофии печени при моделировании ее механического повреждения в эксперименте |
| RU2196585C2 (ru) * | 2001-03-06 | 2003-01-20 | Научно-исследовательский институт биомедицинской химии РАМН | Средство для комплексного лечения хронических дерматозов: псориаза, атопического дерматита, экземы и кератодермий и способ лечения хронических дерматозов |
| RU2304431C2 (ru) * | 2005-08-12 | 2007-08-20 | Александр Иванович Арчаков | Способ получения капсулированной лекарственной формы фосфолипидного препарата "фосфоглив" для лечения и профилактики острых и хронических заболеваний печени |
| RU2304430C2 (ru) * | 2005-08-12 | 2007-08-20 | Александр Иванович Арчаков | Способ получения инъекционной лекарственной формы фосфолипидного препарата "фосфоглив" для лечения и профилактики острых и хронических заболеваний печени |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Deng et al. | Molecular mechanisms of ferroptosis and relevance to inflammation | |
| Johri et al. | Piperine-mediated changes in the permeability of rat intestinal epithelial cells: the status of γ-glutamyl transpeptidase activity, uptake of amino acids and lipid peroxidation | |
| US4698360A (en) | Plant extract with a proanthocyanidins content as therapeutic agent having radical scavenger effect and use thereof | |
| Lankin et al. | Antioxidants decreases the intensification of low density lipoprotein in vivo peroxidation during therapy with statins | |
| Babizhayev et al. | Nα-Acetylcarnosine is a prodrug of L-carnosine in ophthalmic application as antioxidant | |
| Belkner et al. | The oxygenation of cholesterol esters by the reticulocyte lipoxygenase | |
| Relling et al. | Human cytochrome P450 metabolism of teniposide and etoposide. | |
| Lukivskaya et al. | Antioxidant mechanism of hepatoprotection by ursodeoxycholic acid in experimental alcoholic steatohepatitis | |
| Huh et al. | Effect of sex hormones on lipid peroxidation in rat liver | |
| Paradies et al. | Age-dependent decrease in the cytochrome c oxidase activity and changes in phospholipids in rat-heart mitochondria | |
| Nguyen et al. | Hypouricemic effects of acacetin and 4, 5-o-dicaffeoylquinic acid methyl ester on serum uric acid levels in potassium oxonate-pretreated rats | |
| Hennig et al. | Protection by vitamin E against endothelial cell injury by linoleic acid hydroperoxides | |
| Sulumer et al. | Protective effect of bromelain on some metabolic enzyme activities in tyloxapol‐induced hyperlipidemic rats | |
| RU2043110C1 (ru) | Композиция, обладающая свойством репарировать мембраны гепатоцитов | |
| Romaschin et al. | Subcellular distribution of peroxidized lipids in myocardial reperfusion injury | |
| Takayama et al. | Effects of anti-free radical intervention on phosphatidylcholine hydroperoxide in plasma after ischemia-reperfusion in the liver of rats | |
| Hong et al. | Effects of N-acetyl-L-cysteine and glutathione on antioxidant status of human serum and 3T3 fibroblasts | |
| Carvalho et al. | Quercetin treatment regulates the Na+, K+-ATPase activity, peripheral cholinergic enzymes, and oxidative stress in a rat model of demyelination | |
| WO1994027594A2 (en) | Stable copper(i) complexes and methods related thereto | |
| Chiu et al. | Edema formation and degranulation of mast cells by a basic phospholipase A2 purified from Trimeresurus mucrosquamatus snake venom | |
| Kahl | Experiments on the metyrapone reducing microsomal enzyme system | |
| Cooper et al. | The effect of lithocholic acid on red cell membranes in vivo | |
| Marche et al. | Aminoglycoside–induced alterations of phosphoinositide metabolism | |
| EP1827136B1 (en) | Formulation for oral administration having a health-promoting effect on the cardiovascular system | |
| Savolainen et al. | Neurochemical and behavioural effects of extended exposure to isopropanol vapour with simultaneous ethanol intake |