RS66897B1

RS66897B1 - Filer hijaluronske kiseline visoke viskoelastičnosti i visoke kohezivnosti

Info

Publication number: RS66897B1
Application number: RS20250573A
Authority: RS
Inventors: Cheol Jang; Chung Lee; Ji Sun Kim; Hyun Tae Jung; Chang Hyun Lee; Jineon So; Hwayoun Ree
Original assignee: Lg Chemical Ltd
Priority date: 2018-07-06
Filing date: 2019-07-08
Publication date: 2025-07-31
Also published as: ES3032331T3; WO2020009555A1; RU2769398C1; EP3804769A4; HUE072090T2; AU2019299812A1; EP3804769C0; BR112021000188A2; AU2019299812B2; US20210268143A1; TWI708607B; CN112423798A; CN112423798B; CA3105709C; EP3804769B1; AU2019299812A2; TW202005656A; KR102392812B1; EP3804769A1; KR20200005505A

Description

Opis

[TEHNIČKA OBLAST]

Upućivanje na povezanu prijavu(e)

[0001] Ova prijava ostvaruje pravo prvenstva na osnovu korejske patentne prijave br.10-2018-0078989 podnete 6. jula, 2018. godine.

[0002] Ovaj pronalazak se odnosi na filer hijaluronske kiseline, a konkretnije, odnosi se na filer hijaluronske kiseline visoke kohezivnosti monofaznih filera na bazi hijaluronske kiseline (HA) i visoke elastičnosti dvofaznih filera na bazi hijaluronske kiseline istovremeno i na postupak njihove pripreme.

[STANJE TEHNIKE]

[0003] Tkivo ljudske kože održava svoju strukturu zahvaljujući vanćelijskoj matrici koja uključuje proteine kao što su kolagen, elastin i slične supstance, kao i glikozaminoglikane, ali, kada dođe do oštećenja mekih tkiva usled spoljnog šoka, bolesti, starenja i slično, koristi se nadoknada tkiva, poput uvećanja mekih tkiva, u medicinske i kozmetičke svrhe. Ova nadoknada se može vršiti hirurškim putem kroz plastičnu hirurgiju, ili se može nehirurški postići ubrizgavanjem bioloških tkiva ili sintetičkih polimernih supstanci u određenu regiju kako bi se povećao i proširio volumen mekih tkiva. Supstanca koja je sličnog sastava kao kožno tkivo i koja se ubacuje u određeno mesto da bi povećala meka tkiva – čime se estetski povećava volumen obraza, usana, grudi, zadnjice itd., a koristi se i za uklanjanje bora ili korekciju kontura smanjenjem finih i dubokih bora – naziva se materijal za uvećanje mekih tkiva, a opšte je poznata kao dermalni filer. Prva generacija dermalnih filera razvijenih u vezi sa ovim uključuje proizvode kao što su Zyderm i Zyplast, koji su napravljeni ekstrakcijom životinjskih proteina poreklom od krava ili svinja, zatim Cosmoderm i Cosmoplast koji koriste humani kolagen i slične preparate, ali se ovi proizvodi danas retko koriste zbog kratkog trajanja efekta i nepraktičnosti izvođenja testa preosetljivosti kože mesec dana pre procedure.

[0004] Filer druge generacije je filer na bazi hijaluronske kiseline (u daljem tekstu označen i kao „HA“) i ima duže trajanje efekta u poređenju sa filerima na bazi kolagena. Sastoji se od polisaharida sličnih ljudskim komponentama – N-acetil-D-glukozamina i D-glukuronske kiseline – te zbog toga ima manje neželjenih efekata, a sam postupak je jednostavan kako za primenu, tako i za uklanjanje. Takođe, moguće je održavati vlažnost, volumen i elastičnost kože zahvaljujući sposobnosti vezivanja vode, zbog čega poseduje pogodnosti koje ga čine veoma prikladnim kao filer za kožu.

[0005] Međutim, sama hijaluronska kiselina ima kratak poluživot od svega nekoliko sati u ljudskom telu, zbog čega postoji ograničenje u njenoj primeni. Zbog toga su sprovedena istraživanja s ciljem povećanja poluživota (unutrašnje postojanosti) kroz proces umrežavanja. Na primer, američki patent br.4,582,865 opisuje derivat hijaluronske kiseline umrežen pomoću divinilsulfona (DVS) kao agensa za umrežavanje, a njegov hidrogelni oblik je komercijalizovan pod trgovačkim imenom Hylaform®. Takođe, američki patent br.5,827,937 opisuje postupak pripreme derivata hijaluronske kiseline umreženog proizvodom koristeći multifunkcionalno epoksi jedinjenje kao agens za umrežavanje. Među njima, Restylane® – hidrogeni oblik umreženog proizvoda hijaluronske kiseline pripremljen korišćenjem etra 1,4-butandiol-diglicidila (BDDE) kao agensa za umrežavanje – odobren je od strane američke FDA i dostupan je širom sveta kao filer za uvećanje tkiva.

[0006] Takav umreženi filer hijaluronske kiseline obuhvata filere napravljene u jednofaznom obliku (monofazni HA filer) i filere u dvofaznom obliku (bifazni HA filer). Monofazni filer hijaluronske kiseline se priprema korišćenjem homogenog, tečnog-hidrogelnog materijala koji sadrži umreženu hijaluronsku kiselinu, te zbog toga generalno ima nisku elastičnost i visoku kohezivnost. Shodno tome, kada se monofazni filer hijaluronske kiseline ubrizga u kožu, male su šanse da će se pomeriti sa mesta ubrizgavanja, ali postoje problemi jer se oblik nakon ubrizgavanja ne zadržava dugo, a period očuvanja oblika traje svega oko 2 meseca nakon procedure.

[0007] Dvofazni filer hijaluronske kiseline se priprema mešanjem čestica umrežene hijaluronske kiseline, samih ili u kombinaciji sa neumreženom hijaluronskom kiselinom koja je blizu tečnog stanja (netretirana neumrežena hijaluronska kiselina (linearna HA). Zbog toga ovaj filer generalno ima visoku elastičnost i nisku kohezivnost. Shodno tome, kada se dvofazni HA filer ubrizga, može duže da zadrži svoj oblik, ali postoji problem jer postoji velika verovatnoća da će se pomeriti sa mesta ubrizgavanja. Reprezentativan primer dvofaznog HA filera je prethodno pomenuti Restylane® (proizvod kompanije Galderma).

[0008] WO2017213404 (ista porodica kao KR 101660211 B1) odnosi se na filer hijaluronske kiseline i postupak njegove pripreme, pri čemu filer obuhvata umreženu hijaluronsku kiselinu, a postupak uključuje korak umrežavanja smeše koja sadrži hijaluronsku kiselinu, umreživač i prečišćenu vodu mešanjem te smeše sa rastvorom natrijum-hidroksida uz mešanje, kao i korak dodavanja sterilisanog natrijum-fosfat puferisanog rastvora prethodno dobijenoj umreženoj hijaluronskoj kiselini, nakon čega sledi granulacija. Umreživač može sadržati etar 1,4-butandioldiglicidila u količini od 3 mol% u odnosu na monomere hijaluronske kiseline. Molekulska masa hijaluronske kiseline iznosi između 800,000 i 1,200,000 Da. Umrežena hijaluronska kiselina može se koristiti kao facijalni filer i poseduje istovremeno svojstva i monofaznog i dvofaznog filera.

[0009] Kao što je navedeno, monofazni HA filer i dvofazni HA filer imaju svoje prednosti i mane. Tradicionalno postoji primer u kome se ovi fileri mešaju kako bi se dobile sve osobine i monofaznog i dvofaznog filera hijaluronske kiseline, ali se u tom slučaju prednosti oba filera zapravo umanjuju istovremeno, te takav filer nije pogodan za upotrebu. Stoga postoji potreba za filerom koji može da zadrži svoj oblik tokom dužeg vremenskog perioda, a da pritom ima malu verovatnoću pomeranja sa mesta ubrizgavanja.

[OTKRIVANJE]

[TEHNIČKI PROBLEM]

[0010] Ovaj pronalazak je predložen kako bi se rešili prethodno navedeni problemi, a cilj ovog pronalaska jeste da obezbedi filer visoke viskoelastičnosti i kohezivnosti, kao prednosti monofaznih HA filera i dvofaznih HA filera odnosno, filer koji može da zadrži oblik tokom dužeg vremenskog perioda, a da pri tome ima malu verovatnoću da se pomeri sa mesta ubrizgavanja, i koji se može ubrizgati u ljudsku kožu radi poboljšanja bora i oblikovanja.

[0011] Drugi cilj ovog pronalaska je da obezbedi postupak za pripremu takvog filera.

[TEHNIČKO REŠENJE]

[0012] Obim zaštite je definisan patentnim zahtevima.

[0013] Ova prijava je nastala sa ciljem rešavanja prethodno navedenih problema iz postojećeg stanja tehnike, a kada hijaluronska kiselina ispunjava određene uslove, kao što su specifična molekulska masa i stepen umrežavanja, ona istovremeno poseduje visoku kohezivnost karakterističnu za monofazne filere i visoku viskoelastičnost karakterističnu za dvofazne filere. Shodno tome, potvrđeno je da se takva hijaluronska kiselina lako može oblikovati u željeni oblik i da može da se zadrži u koži tokom željenog vremenskog perioda nakon ubrizgavanja, čime je ovaj pronalazak uspešno ostvaren.

[0014] Shodno tome, ovaj pronalazak se odnosi na filer hijaluronske kiseline koji poseduje visoku viskoelastičnost i kohezivnost, čime ispoljava osobine i monofaznog i dvofaznog filera, zatim na prethodno napunjeni špric napunjen tim filerom, biomaterijal za augmentaciju mekih tkiva koji sadrži taj filer, kao i na postupak za poboljšanje bora koji podrazumeva njegovo ubrizgavanje u biološko tkivo.

[0015] U jednom načinu ostvarivanja, ovaj pronalazak se odnosi na hidrogelni filer na bazi hijaluronske kiseline, koji obuhvata hijaluronsku kiselinu, ili njenu so, i ima kompleksnu viskoznost od 6x10<4>mPa.s (6x10<4>cP) ili više pri ugaonoj brzini od 1Hz kada je merena reometrom, i pokazuje modul elastičnosti skladištenja G' od 400 Pa ili više, i ima kohezivnost od 0,2942 N (30 gf) ili više, pri čemu je ta hijaluronska kiselina umrežena hijaluronska kiselina molekulske mase od 2,500,000 Da ili više i u obliku čestica prosečnog prečnika od 300 do 400 µm, stepen modifikacije (MOD) hijaluronske kiseline kao što je prikazano sledećom jednačinom 1 je u opsegu od 1 do 7: [Jednačina 1] Stepen modifikacije = ukupan broj molova agensa za umrežavanje / ukupan broj molova N-acetil-D-glukozamina, a odnos umrežavanja (CrR) kao što je prikazano sledećom jednačinom 2 je u opsegu od 0,1 do 0,2: [Jednačina 2] Odnos umrežavanja = broj molova umreženog agensa za umrežavanje / broj molova ukupnog agensa za umrežavanje, i hijaluronska kiselina ili njenu so su sadržane u opsegu od 1 do 3 mas.% na osnovu ukupne mase filera.

[0016] Hijaluronska kiselina (u daljem tekstu označena i kao „HA“) sadržana u fileru ovog pronalaska predstavlja biopolimerni materijal u kojem su ponavljajuće jedinice, sastavljene od N-acetil-D-glukozamina i D-glukuronske kiseline, linearno povezane i u velikoj meri je prisutna u staklastom telu oka, sinovijalnoj tečnosti zglobova, petlovom češlju i sličnim izvorima, te se široko koristi u medicini i medicinskim proizvodima kao što su pomoćna sredstva u oftalmološkim operacijama, agensi za poboljšanje funkcije zglobova, materijali za dostavu lekova, kapi za oči, sredstva za uklanjanje bora i kozmetika – zahvaljujući svojoj izuzetnoj biokompatibilnosti. Konkretno, hijaluronska kiselina sadržana u fileru ovog pronalaska može označavati i njene soli, pored same hijaluronske kiseline. Soli hijaluronske kiseline uključuju, na primer, neorganske soli kao što su natrijum-hijaluronska kiselina, kalijum-hijaluronska kiselina, kalcijum-hijaluronska kiselina, magnezijum-hijaluronska kiselina, cink-hijaluronska kiselina, kobalt-hijaluronska kiselina i slično, kao i organske soli kao što je tetrabutil-amonijumhijaluronska kiselina, i druge, ali bez ograničenja na navedene primere.

[0017] Hijaluronska kiselina ili njena so je umrežena odgovarajućim agensom za umrežavanje.

[0018] Derivat umrežene hijaluronske kiseline je pripremljen umrežavanjem sa prethodno pomenutom samom hijaluronskom kiselinom ili njenom solju upotrebom agensa za umrežavanje. Za umrežavanje se koristi postupak koji koristi agens za umrežavanje u alkalnom vodenom rastvoru.

[0019] Alkalni vodeni rastvor uključuje NaOH, KOH, poželjno, vodeni rastvor NaOH, ali nije ograničen samo na to. Zatim, u slučaju vodenog rastvora NaOH, on se može koristiti u koncentraciji od 0,1N do 0,5N. Umrežena hijaluronska kiselina sadržana u fileru ovog pronalaska naročito pokazuje visoku viskoelastičnost i kohezivnost čak i kada se agens za umrežavanje koristi u maloj koncentraciji i u maloj količini. Koncentracija agensa za umrežavanje iznosi od 1 do 10 mol% u odnosu na 1 mol N-acetil-D-glukozamina i D-glukuronske kiseline, koji predstavljaju jedinice u hijaluronskoj kiselini ili njenoj soli.

[0020] Agens za umrežavanje je jedinjenje koje obuhvata dva ili više epoksi funkcionalnih grupa i može da varira, i kao poželjan primer, uključuje etar butandiol diglicidila (etar 1,4-butandiol diglicidila: BDDE), etar etilen glikol diglicidila (EGDGE), etar heksandiol diglicidila (etar 1,6-heksandiol diglicidila), etar propilen glikol diglicidila, etar polipropilen glikol diglicidila, etar politetrametilen glikol diglicidila, etar neopentil glikol diglicidila, etar poliglicerol poliglicidila, etar diglicerol poliglicidila, etar glicerol poliglicidila, etar tri-metilpropan poliglicidila, bisepoksipropoksi etilen (1,2-(bis(2,3-epoksipropoksi)etilen), etar pentaeritritol poliglicidila i etar sorbitol poliglicidila, i njima slične, a među njima, etar 1,4-butandiol glicidila na bazi biepoksida je naročito poželjan u smislu male toksičnosti.

[0021] Ovde, pojam „stepen modifikacije (MOD)“ označava stepen modifikacije hijaluronske kiseline koji se izračunava kao numerička vrednost (n) koja prikazuje broj molova agensa za umrežavanje (na primer, BDDE) vezanih za ceo molekul hijaluronske kiseline u odnosu na broj molova N-acetil-D-glukozamina u jedinici hijaluronske kiseline (N-acetil-D-glukozamin (GlcNAc) D-glukuronska kiselina), i može se predstaviti sledećom jednačinom 1.

stepen modifikacije = ukupan broj molova agensa za umrežavanje / ukupan broj molova N-acetil-D-glukozamina, [Jednačina 1]

[0022] U ovom pronalasku, karakteristično je to što takav stepen modifikacije pokazuje opseg od 1 do 7, poželjno, opseg od 3 do 5, postignut umrežavanjem pomoću gorepomenutog agensa za umrežavanje.

[0023] Pored toga, ovde pojam „odnos umrežavanja (CrR)“ označava odnos broja molova umreženog agensa za umrežavanje u odnosu na broj molova ukupnog agensa za umrežavanje, i može se predstaviti sledećom jednačinom 2.

odnos umrežavanja = broj molova umreženog agensa za umrežavanje / broj molova ukupnog agensa za umrežavanje [Jednačina 2]

[0024] U ovom pronalasku, karakteristično je to što pokazuje opseg od 0,1 do 0,2, poželjno od 0,14 do 0,17, postignut umrežavanjem. Poželjno je da filer hijaluronske kiseline prema ovom pronalasku ima osobinu da sinergijski pokazuje svojstva monofaznih i dvofaznih filera istovremeno, zahvaljujući navedenim opsezima MOD i CrR vrednosti.

[0025] Ovde, molekulska masa umrežene hijaluronske kiseline iznosi 2,500,000 Da ili više, poželjno 2,500,000 do 3,500,000 Da.

[0026] Pojam „elastičnost“ koji se ovde koristi označava osobinu čvrstog tela pri delovanju sile, odnosno sposobnost da menja oblik pod dejstvom sile, ali da se vrati u prvobitni oblik nakon uklanjanja sile. Ova elastičnost se izražava modulom skladištenja (G': modul elastičnosti), a njegova jedinica je paskal (Pa). Pored toga, pojam „viskoznost“ koji se ovde koristi označava osobinu tečnosti, odnosno veličinu koja opisuje otpornost fluida na tečenje. Ova viskoznost se može izraziti modulom gubitka (G": viskozni modul), a njegova jedinica takođe je paskal (Pa).

[0027] Pojam „viskoelastičnost“ koji se ovde koristi označava istovremeno prisustvo elastične deformacije i viskoznosti prilikom delovanja sile na objekat. Umreženi hidrogel hijaluronske kiseline sadržan u fileru prema ovom pronalasku ispoljava i viskoznost i elastičnost, te stoga poseduje viskoelastičnost. Ova viskoelastičnost se može procenjivati putem kompleksne viskoznosti, koja odražava i modul elastičnosti skladištenja (G') i viskozni modul gubitka (G"), a jedinica mere je centipoaz (cP).

[0028] Pojam „kohezivnost“ koji se ovde koristi označava privlačenje (adheziju) koje deluje između čestica filera, a može dovesti do njihovog nagomilavanja. Što je veća kohezivnost, to je veća sila koja može da podrži tkivo u koje je filer ubrizgan. Obično se kohezivnost može indirektno meriti testom kompresije, pri čemu se meri otpornost na pritiskanje određenom brzinom nakon opterećenja na reometru, a jedinica mere je gf (sila grama).

[0029] Generalno, filer hijaluronske kiseline u monofaznom obliku pokazuje kohezivni gel, zbog čega ima visoku kohezivnost i nisku viskoelastičnost. Primer za to je Juvederm® kompanije Allergan. Pored toga, filer hijaluronske kiseline u dvofaznom obliku ima oblik čestica, te je karakterističan po visokoj viskoelastičnosti i niskoj kohezivnosti. Primer za to je Restylane® kompanije Galderma.

[0030] Kao što je gore opisano, filer hijaluronske kiseline u monofaznom obliku i filer hijaluronske kiseline u dvofaznom obliku imaju svoje prednosti i nedostatke.

[0031] Filer hijaluronske kiseline prema ovom pronalasku ima visoku viskoelastičnost i kohezivnost, te je karakterističan po tome što istovremeno poseduje osobine monofaznog i dvofaznog filera. Poželjno je da filer hijaluronske kiseline prema ovom pronalasku ima kompleksnu viskoznost (viskoelastičnost) od 6 × 10⁴ cP ili više, poželjno u opsegu od 60,000 do 130,000 cP (1 cP = 1 mPa·s) pri ugaonoj frekvenciji od 1 Hz, kada je meren reometrom, da pokazuje modul elastičnosti skladištenja G' od 400 Pa ili više, poželjno između 400 i 800 Pa, i da poseduje kohezivnost od 30 gf, poželjno u opsegu od 30 do 60 gf (1 gf = 0,009807 N).

[0032] Pored toga, čestica hijaluronske kiseline, poželjno umrežena čestica hijaluronske kiseline, u fileru hijaluronske kiseline prema ovom pronalasku može imati različite oblike, ali je poželjno da bude u obliku sfere. Štaviše, prosečni prečnik ove čestice je od 300 do 400 µm.

[0033] Filer hijaluronske kiseline prema ovom pronalasku obuhvata hijaluronsku kiselinu u količini od 1 do 3 mas.% na osnovu ukupne mase filera. Pored toga, filer hijaluronske kiseline prema ovom pronalasku može dalje sadržati vodu, anestetik ili njihove kombinacije, pored hijaluronske kiseline.

[0034] Anestetik obuhvata jednu ili više vrsta anestetika, poželjno lokalne anestetike, poznate u stručnoj literaturi, a koncentracija jednog ili više anestetika je u efektivnoj količini za ublažavanje simptoma koji se javljaju prilikom ubrizgavanja sastava. Primer anestetika može biti izabran iz grupe koju čine: ambukain, amolanon, amilokain, benoksinat, benzokain, betoksikain, bifenamin, bupivakain, butakain, butamben, butanilikain, butetamin, butoksikain, kartikain, hloroprokain, kokaetilen, kokain, ciklometikain, dibukain, dimetizokvin, dimetokain, diperodon, diklonin, ekgonidin, ekgonin, etil hlorid, etidokain, beta-eukain, euprocin, fenalkomin, formokain, heksilkain, hidroksitetrakain, izobutil p-aminobenzoat, leucinokain mezilat, levoksadrol, lidokain, mepivakain, meprilkain, metabutoksikain, metil hlorid, mirtekain, naepain, oktakain, ortokain, oksetazain, paretoksikain, fenakain, fenol, piperokain, piridokain, polidokanol, pramoksin, prilokain, prokain, propanokain, proparakain, propipokain, propoksikain, pseudokokain, pirokain, ropivakain, salicilni alkohol, tetrakain, tolikain, trimekain, zolamin i njihove soli. U jednom načinu ostvarivanja, anestetik može biti lidokain, na primer u obliku lidokain-hidrohlorida.

[0035] Za filer hijaluronske kiseline prema ovom pronalasku, koncentracija anestetika sadržanog u fileru može iznositi oko 0,1 mas.% do oko 1,0 mas.% u odnosu na ukupnu masu filera, na primer, oko 0,2 mas.% do oko 0,5 mas.% kompozicije.

[0036] Koncentracija anestetika u fileru opisana ovde može biti terapijski efektivna, što označava koncentraciju koja nije štetna za pacijenta i koja je pogodna za pružanje prednosti u pogledu praktičnosti postupka i saradnje pacijenata.

[0037] Pored toga, filer prema ovom pronalasku može dodatno sadržati puferisani rastvor, pri čemu se za puferisani rastvor može koristiti bilo koji rastvor koji se koristi za pripremu hidrogelova na bazi hijaluronske kiseline, bez ograničenja. Poželjan primer puferisanog rastvora može biti puferisani rastvor koji sadrži jednu ili više vrsta iz grupe koju čine: limunska kiselina, natrijum monohidrogen fosfat, natrijum dihidrogen fosfat, sirćetna kiselina, dietil barbiturna kiselina, natrijum acetat, TAPS (tris(hidroksimetil)metilamino)propansulfonska kiselina), Bicin (2-bis(2-hidroksietil)amino)sirćetna kiselina), Tris (tris(hidroksimetil)aminometan), Tricin (N-(2-hidroksi-1,1-bis(hidroksimetil)etil)glicin), HEPES (4-(2-hidroksietil)-1-piperazin etansulfonska kiselina), TES (2-[[1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-il]amino]metansulfonska kiselina) i PIPES (piperazin-N,N'-bis(2-etansulfonska kiselina)), ali bez ograničenja na iste. Sadržaj navedenih komponenti u puferisanom rastvoru može se na odgovarajući način prilagoditi, ali je poželjno da budu prisutne u koncentraciji od 0,3 do 2,0 g/L u odnosu na puferisani rastvor.

[0038] Štaviše, filer prema ovom pronalasku može dodatno sadržati i izotonični agens, koji se može koristiti bez ograničenja, pod uslovom da se koristi za pripremu hidrogelova na bazi hijaluronske kiseline. Kao poželjan izotonični agens može se koristiti natrijum-hlorid, ali nije ograničeno samo na njega. Sadržaj izotoničnog agensa može se po potrebi prilagoditi na odgovarajući način, a na primer, može biti prisutan u količini od 7,0 do 9,0 g/L u odnosu na puferisani rastvor, ali nije ograničeno na ovaj opseg.

[0039] U jednom primeru prema ovom pronalasku korišćen je puferisani rastvor koji sadrži natrijum-hlorid, natrijum monohidrogen fosfat i natrijum dihidrogen fosfat u vodi za injekcije.

[0040] Kao dodatni aspekt, sastav prema ovom pronalasku može dalje obuhvatati prihvatljive komponente koje se mogu koristiti u pripremi filera, pored prethodno navedenih komponenti.

[0041] Takođe, karakteristično je to što je preostali agens za umrežavanje u fileru hijaluronske kiseline visoke viskoelastičnosti i kohezivnosti prema ovom pronalasku prisutan u zanemarljivo malim količinama, odnosno, poželjno je da iznosi 0,5 ppm ili manje, što predstavlja granicu detekcije.

[0042] Ovaj filer hijaluronske kiseline visoke viskoelastičnosti i kohezivnosti prema ovom pronalasku može se veoma korisno koristiti u kozmetičke ili terapeutske svrhe, zahvaljujući jedinstvenim elastičnim svojstvima i kohezivnosti. Kao konkretan primer, ovaj filer hijaluronske kiseline može se koristiti za popunjavanje biološkog tkiva, uklanjanje bora popunjavanjem bora, remodelaciju lica, ili za obnavljanje ili povećanje volumena mekih tkiva kao što su usne, nos, kukovi, obrazi ili grudi, i slično, kao biomaterijal za augmentaciju mekih tkiva. Filer hijaluronske kiseline može se primenjivati u odgovarajućem obliku za takvu upotrebu, a poželjno je da to bude injekcija.

[0043] Kao drugi aspekt, ovaj pronalazak se odnosi na postupak pripreme prethodnog filera hijaluronske kiseline visoke viskoelastičnosti i kohezivnosti koji obuhvata sledeće faze:

[0047] Postupak sečenja iz faze (b) može koristiti različite poznate postupke sečenja hidrogelova na bazi hijaluronske kiseline. U jednom primeru, umreženi gel dobijen nakon reakcije ima oblik "kolača" i može se podeliti u obliku polumeseca korišćenjem alata za sečenje kao što je, na primer, sekač za slamu ili sličan uređaj, pri čemu se, na primer, može podeliti na šest delova. Zatim se postupak sečenja može izvesti tako što se prethodno podeljeni gel propusti (poželjno 2 puta ili više) kroz grubi mlin sa oštricama koje su postavljene na konstantnim razmacima.

[0048] Faza (c) je faza pripreme puferisanog rastvora koji se koristi za pranje i bubrenje umreženih hidrogelova na bazi hijaluronske kiseline isečenih u fazi (b), a puferisani rastvor može se pripremiti poznatim postupkom pripreme puferisanog rastvora. Pored toga, puferisani rastvor može dodatno sadržati anestetik. U jednom konkretnom ostvarenju ovog pronalaska, puferisani rastvor je pripremljen rastvaranjem natrijum monohidrogen fosfat hidrata, natrijum dihidrogen fosfat hidrata, natrijum hlorida i lidokain hidrohlorida u sudu sa puferom ispunjenom vodom za injekcije.

[0049] Puferisani rastvor može se koristiti bez ograničenja, sve dok se koristi za pripremu hidrogelova na bazi hijaluronske kiseline. Primer poželjnog puferisanog rastvora može biti puferisani rastvor koji sadrži jednu ili više supstanci izabrane iz grupe koju čine limunska kiselina, natrijum monohidrogen fosfat, natrijum dihidrogen fosfat, sirćetna kiselina, dietil barbiturna kiselina, natrijum acetat, TAPS (tris(hidroksimetil)metilamino)propansulfonska kiselina), Bicin (2-bis(2-hidroksietil)amino)sirćetna kiselina), Tris (tris(hidroksimetil)aminometan), Tricin (N-(2-hidroksi-1,1-bis(hidroksimetil)etil)glicin), HEPES (4-(2-hidroksietil)-1-piperazin etansulfonska kiselina), TES (2-[[1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-il]amino]metansulfonska kiselina) i PIPES (piperazin-N,N'-bis(2-etansulfonska kiselina), ali nije ograničeno na ove.

[0050] Faza (d) je faza pranja i bubrenja umreženih hidrogelova na bazi hijaluronske kiseline usitnjenih u fazi (b) puferisanim rastvorom pripremljenim u fazi (c), i ova faza (d) može se ponoviti jednom, dva puta ili više. Nakon završetka pranja i bubrenja, rastvor za pranje može se ukloniti.

[0051] Faza (e) je faza usitnjavanja opranih i nabubrenih hidrogelova, i ovo usitnjavanje može se izvesti različitim postupcima usitnjavanja, ali poželjno je da bude usitnjavanje ekstruzijom.

[0052] Pored toga, nakon faze (e), za punjenje pripremljenih hidrogelova u špric i sterilizaciju mogu se koristiti poznati postupci punjenja i sterilizacije. Na primer, u slučaju sterilizacije, može se koristiti autoklav i slično, ali bez ograničenja na isti, i postupci koji se koriste za sterilizaciju filera mogu se adekvatno izabrati i primeniti.

[POŽELJNI EFEKTI]

[0053] Filer prema ovom pronalasku ima sledeće efekte. Prvo, može biti koristan kao filer koji poseduje sve prednosti monofaznog filera hijaluronske kiseline i dvofaznog filera hijaluronske kiseline, odnosno filer za povećanje, obnavljanje ili volumen mekih tkiva kao što su obrazi, usne, grudi, bokovi i slično, i za poboljšanje bora smanjenjem finih i dubokih bora na koži ili ispravljanje kontura, budući da pokazuje visoku viskoelastičnost i kohezivnost, čime može dugo održavati oblik i pritom je manje sklon bekstvu sa mesta ubrizgavanja.

[KRATAK OPIS CRTEŽA]

[0054] FIG.1 je grafikon koji prikazuje rezultat merenja modula elastičnosti skladištenja i otpora pri kompresiji filera hijaluronske kiseline prema primerima 1 i 2, i uporednim primerima 1 do 6.

[DETALJAN OPIS NAČINA OSTVARIVANJA]

[0055] U nastavku će ovaj pronalazak biti opisan detaljnije kroz primere. Međutim, ovi primeri služe samo kao ilustracija ovog pronalaska i obim ovog pronalaska nije ograničen ovim primerima.

[PRIMERI]

[0056] Primer 1: Priprema filera hijaluronske kiseline prema ovom pronalasku Za pripremu filera hijaluronske kiseline prema ovom pronalasku, sproveden je sledeći postupak.

[0057] Natrijum-hijaluronska kiselina, natrijum hidroksid i BDDE (etar 1,4-butandiol diglicidila), molekulske mase od 2,5 MDa do 3,5 MDa, su odmereni. Koncentracija natrijum-hijaluronske kiseline tokom reakcije iznosila je 15 mas.%, a mol% BDDE iznosio je 4 mol% na osnovu jedinice dodate natrijum-hijaluronske kiseline (odnosno, N-acetil-D-glukozamin i D-glukuronska kiselina) u količini od 1 mola. Posebno je pripremljen i filtriran vodeni rastvor natrijum hidroksida u koncentraciji od 0,25N. Odmereni natrijum-hijaluronska kiselina, 0,25N vodeni rastvor natrijum hidroksida i BDDE (etar 1,4-butandiol diglicidila) dodati su u mešalicu i homogeno izmešani, a zatim je posuda sa smešom stavljena u vodeno kupatilo sa konstantnom temperaturom, gde je reakcija umrežavanja sprovedena na 30°C tokom noći. Nakon toga, umreženi hidrogelovi na bazi hijaluronske kiseline kod kojih je reakcija završena bili su preliminarno usitnjeni. S druge strane, puferisani rastvor je pripremljen rastvaranjem soli i anestetika u sudu sa puferom ispunjenom vodom za injekcije u sledećim koncentracijama: natrijum monohidrogen fosfat hidrati (12 hidrata) 1,26 g/L, natrijum dihidrogen fosfat hidrati (monohidrat) 0,46 g/L, natrijum hlorid 7 g/L i lidokain hidrohlorid 3 g/L.

[0058] Deo puferisanog rastvora je označen kao primarni puferisani rastvor i prenesen je u sud za pranje kroz filter od 0,22 µm, a preliminarno usitnjeni gel hijaluronske kiseline pripremljen ranije prenesen je u sud za pranje ispunjen primarnim puferisanim rastvorom i zatim je mešan radi primarnog pranja i bubrenja gela hijaluronske kiseline. Kada je bubrenje završeno, rastvor za pranje je uklonjen. Zatim je sekundarni puferisani rastvor prebačen u sud za pranje kroz filter od 0,22 µm i ponovo je izvršeno mešanje radi sekundarnog pranja i bubrenja gela hijaluronske kiseline. Kada su pranje i bubrenje završeni, rastvor za pranje je uklonjen. Nakon toga, tercijarni puferisani rastvor je prebačen u sud za pranje kroz filter od 0,22 µm i gel hijaluronske kiseline je tercijarno ispran i nabubren mešanjem. Čim su pranje i bubrenje završeni, rastvor za pranje je uklonjen.

[0059] Nakon završetka tercijarnog pranja i bubrenja, provereno je da li je pH vrednost rastvora za pranje u neutralnom opsegu, a zatim je gel hijaluronske kiseline, kod kojeg su pranje i bubrenje završeni, isečen i prenet u sud ekstrudera, gde je izmeren. Da bi se postigla željena težina gela, dodat je puferisani rastvor radi korekcije primarnog sadržaja. Kada je korekcija primarnog sadržaja završena, gel hijaluronske kiseline je ekstrudiran i usitnjen u sudu ekstrudera. Zatim je usitnjeni gel hijaluronske kiseline prenet u sterilni sud i homogenizovan, nakon čega je izvršeno merenje sadržaja i dodat je puferisani rastvor radi sprovođenja sekundarne korekcije sadržaja. Gel hijaluronske kiseline kod kojeg je korekcija sadržaja završena podvrgnut je toplotnoj obradi na temperaturi od 121°C ili višoj, tokom 1 minuta ili duže, a zatim je gel, pre punjenja, podvrgnut vakuumiranju i mešanju radi desaturacije. Zatim je gel hijaluronske kiseline u fiksnoj količini vakuumiran/punjen u špriceve i istovremeno zatvoren gumenim čepom. Napunjeni špricevi su sterilisani pod parom u završnom sterilizatoru na temperaturi od 121°C ili višoj, u trajanju od 8 minuta ili duže.

Primer 2: Priprema filera hijaluronske kiseline prema ovom pronalasku

[0060] Za pripremu filera hijaluronske kiseline prema ovom pronalasku, izveden je sledeći postupak.

[0061] Natrijum hijaluronska kiselina, natrijum hidroksid i BDDE (etar 1,4-butandiol diglicidila), molekulske mase od 2,5 MDa do 3,5 MDa, su izmereni. Koncentracija natrijum hijaluronske kiseline tokom reakcije bila je 16 mas.%, a mol% BDDE iznosio je 4 mol% na osnovu jedinice dodate natrijum hijaluronske kiseline (odnosno, N-acetil-D-glukozamin i D-glukuronska kiselina)

Eksperimentalni primer 1: Istraživanje svojstva viskoelastičnosti filera hijaluronske kiseline pripremljenog ovim pronalaskom

[0064] Za ispitivanje reoloških osobina pripremljenih primera 1 i 2, sprovedena je analiza pomoću reometra. Radi poređenja sa filerom prema ovom pronalasku, analizirane su i uporedno upoređene viskoelastične osobine komercijalno dostupnih priprema filera.

Komercijalno dostupne pripreme filera koje su korišćene kao uporedni primeri i uslovi analize bili su sledeći.

[0065]

− Uporedni primer 1: Belotero Snažan Lidokain

− Uporedni primer 2: Belotero Volumen Lidokain

− Uporedni primer 3: Stylage L Lidokain

− Uporedni primer 4: Stylage XL Lidokain

− Uporedni primer 5: Juvederm Volift sa lidokainom

− Uporedni primer 6: Juvederm Voluma sa lidokainom.

Uslovi za analizu oscilatornog i obrtnog reometra

[0066] U slučaju modula elastičnosti skladištenja (G') i ispitivanja kompleksne viskoznosti (η*) (1) Uređaj za ispitivanje: Reometar (Anton Paar Ltd., MCR301)

(2) Frekvencija: 1 Hz

(3) Temperatura: 25 °C

(4) Amplituda deformacije: 4 %

(5) Merni sistem: 25 mm ploča

(9) Razmak između ploča: 1,0 mm

[0067] U slučaju otpornosti prilikom kompresije (sila kompresije)

(1) Oprema za ispitivanje: Reometar (Anton Paar Ltd., MCR301)

(2) Praznina: Početni položaj: 2,5 mm, konačni položaj: 0,9 mm

(3) Brzina: 0.8 mm/min

(4) Temperatura: 25 °C

(5) Merni sistem: 25 mm ploča

(9) Položaj merne praznine normalne sile: 1,5 mm

[0068] U uslovima analize, vrednosti rezultata modula elastičnosti skladištenja (G'), kompleksne viskoznosti (η) i otpora pri sabijanju (sila sabijanja) u zavisnosti od frekvencije prikazane su u tabeli 1.

[Tabela 1]

[0069] Kao što je potvrđeno u tabeli 1, utvrđeno je da primeri 1 i 2 prema ovom pronalasku pokazuju izuzetnu viskoelastičnost u poređenju sa uporednim primerima 1 do 6. Takođe, u pogledu kohezivnosti, iako istovremeno pokazuju osobine monofaznih i dvofaznih filera, imaju veću silu sabijanja u poređenju sa monofaznim filerima, uporednim primerima 5 i 6. Dodatno, uzimajući u obzir i viskoelastičnost i kohezivnost, može se zaključiti da primeri 1 i 2 prema ovom pronalasku pokazuju izuzetna fizička svojstva u poređenju sa uporednim primerima 1 do 6.

Eksperimentalni primer 2: Analiza veličine čestica hidrogelova na bazi hijaluronske kiseline prema ovom pronalasku

[0070] Radi potvrđivanja veličine čestica hidrogelova na bazi hijaluronske kiseline kod primera 1 i 2 i uporednih primera 1 do 6, kao i njihove raspodele, izvedeno je sledeće ispitivanje. Rezultat ovog testa prikazan je u tabeli 2.

[0071] Uslovi za analizu analizatora veličine čestica laserske difrakcije

(1) Oprema za ispitivanje: analizator veličine čestica laserske difrakcije (Malvern Ltd., Mastersizer 3000)

(2) Disperzant: 0.9% NaCl solution

(3) o/m mešalice: 1,000

(4) Laserska opstrukcija: 5~25 %

[Tabela 2]

Eksperimentalni primer 3: Analiza stepena modifikacije hidrogelova na bazi hijaluronske kiseline prema ovom pronalasku

[0072] Da bi se potvrdio stepen modifikacije hijaluronske kiseline hidrogelova iz primera 1 i 2 i uporednih primera 1 do 6, sproveden je test pod sledećim uslovima. Rezultat ovog testa prikazan je u tabeli 3.

[0073] Uslovi za analizu nuklearne magnetne rezonance

(1) Oprema za ispitivanje: FT-NMR System (Jeol Ltd., ECA500/ECZ400S),

(2) Puls: 30°

(3) Skenovi: 512

(4) Vreme relaksacije (odlaganja): 5 s

(5) Temperatura: 25 °C

[Tabela 3]

Claims

[0074] Kao što se može videti u tabeli 3, može se uočiti da filer hijaluronske kiseline iz primera 1 i 2 prema ovom pronalasku pokazuje nizak stepen modifikacije uprkos tome što, kao što je ranije potvrđeno, ima izvanredna fizička svojstva, i ovo znači da je veoma biokompatibilan, jer filer koji pokazuje izvrsna fizička svojstva može biti dobijen čak i pri upotrebi male količine agensa za umrežavanje tokom pripreme filera.

Patentni zahtevi

1. Hidrogelni filer na bazi hijaluronske kiseline, koji obuhvata hijaluronsku kiselinu, ili njenu so, i ima kompleksnu viskoznost od 6x10<4>mPa.s (6x10<4>cP) ili više pri ugaonoj brzini od 1Hz kada je merena reometrom, i pokazuje modul elastičnosti skladištenja G' od 400 Pa ili više, i ima kohezivnost od 0,2942 N (30gf) ili više,

pri čemu je ta hijaluronska kiselina umrežena hijaluronska kiselina molekulske mase od 2,500,000 Da ili više i u obliku čestica prosečnog prečnika od 300 do 400 µm,

pri čemu je stepen modifikacije (MOD) hijaluronske kiseline kao što je prikazano jednačinom 1 u nastavku u opsegu od 1 do 7:

stepen modifikacije = ukupan broj molova agensa za umrežavanje / ukupan broj molova N-acetil-D-glukozamina, [Jednačina 1] odnos umrežavanja (CrR) kao što je prikazan jednačinom 2 u nastavku je u opsegu od 0,1 do 0,2:

odnos umrežavanja = broj molova umreženog agensa za umrežavanje / broj molova ukupnog agensa za umrežavanje, i [Jednačina 2] hijaluronska kiselina ili njena so je sadržana u opsegu od 1 do 3 mas.% u odnosu na ukupnu masu filera.
2. Hidrogelni filer na bazi hijaluronske kiseline prema zahtevu 1, pri čemu taj filer ima svojstva i monofaznih i dvofaznih hidrogelnih filera na bazi hijaluronske kiseline.
3. Hidrogelni filer na bazi hijaluronske kiseline prema zahtevu 1, pri čemu je ta hijaluronska kiselina umrežena agensom za umrežavanje izabranim iz grupe koju čine etar butandiol diglicidila (etar 1,4-butandiol diglicidila: BDDE), etar etilen glikol diglicidila (EGDGE), etar heksandiol diglicidila (etar 1,6-heksandiol diglicidila), etar propilen glikol diglicidila, etar polipropilen glikol diglicidila, etar politetrametilen glikol diglicidila, etar neopentil glikol diglicidila, etar poliglicerol poliglicidila, etar diglicerol poliglicidila, etar glicerol poliglicidila, etar tri-metilpropan poliglicidila, bisepoksipropoksi etilen (1,2-(bis(2,3-epoksipropoksi)etilen), etar pentaeritritol poliglicidila i etar sorbitol poliglicidila.
4. Hidrogelni filer na bazi hijaluronske kiseline prema zahtevu 1, koji dodatno obuhvata anestetik, poželjno lidokain ili njegovu so.
5. Hidrogelni filer na bazi hijaluronske kiseline prema zahtevu 1, pri čemu je taj filer namenjen za ubrizgavanje u kožu, uklanjanje bora, augmentaciju ili povećanje volumena mekih tkiva, ili korekciju kontura.
6. Hidrogelni filer na bazi hijaluronske kiseline prema zahtevu 1, koji obuhvata agens za umrežavanje u koncentraciji od 1 do 10 mol%, poželjno 1 do 5 mol%, u odnosu na 1 mol N-acetil-D-glukozamina i D-glukuronske kiseline u hijaluronskoj kiselini ili njenoj soli.
7. Postupak pripreme hidrogelnog filera na bazi hijaluronske kiseline prema bilo kom od zahteva 1 do 6, koji obuhvata sledeće faze:

(a) priprema hidrogelova na bazi umrežene hijaluronske kiseline dodavanjem hijaluronske kiseline ili njene soli i agensa za umrežavanje, poželjno etra 1,4-butandiol diglicidila, alkalnom vodenom rastvoru, poželjno vodenom rastvoru NaOH, KOH, NaHCO3, LiOH ili njihovih kombinacija, i umešavanje;

(b) sečenje hidrogelova na bazi hijaluronske kiseline pripremljenih u fazi (a);

(c) priprema puferisanog rastvora;

(d) pranje i bubrenje hidrogelova na bazi hijaluronske kiseline isečenih u fazi (b) upotrebom puferisanog rastvora pripremljenog u fazi (c);

(e) usitnjavanje opranih i nabubrenih hidrogelova na bazi hijaluronske kiseline u fazi (d); i (f) punjenje hidrogelova pripremljenih u fazi (e) u špric a zatim sterilisanje,

pri čemu je koncentracija agensa za umrežavanje u fazi (a) 1 do 10 mol% u odnosu na jedinicu dodate hijaluronske kiseline ili njene soli od 1 mola.
8. Postupak pripreme prema zahtevu 7, pri čemu je koncentracija alkalnog vodenog rastvora 0,1N do 0,5N.
9. Postupak pripreme prema zahtevu 7, pri čemu je koncentracija hijaluronske kiseline ili njene soli 10 do 25 mas.% izražena kao maseni udeo hijaluronske kiseline ili njene soli u odnosu na ukupnu masu smeše hijaluronske kiseline ili njene soli i alkalnog vodenog rastvora.
10. Postupak pripreme prema zahtevu 7, pri čemu se faza (a) izvodi na temperaturi u opsegu od 25 do 40 °C tokom 15 do 22 sata.
11. Postupak pripreme prema zahtevu 7, pri čemu puferisani rastvor iz faze (c) obuhvata jednu ili više vrsta izabranih iz grupe koju čine limunska kiselina, natrijum monohidrogen fosfat, natrijum dihidrogen fosfat, sirćetna kiselina, dietil barbiturna kiselina, natrijum acetat, TAPS (tris(hidroksimetil)metilamino)propansulfonska kiselina, Bicin (2-bis(2-hidroksietil)amino)sirćetna kiselina, Tris (tris(hidroksimetil)amino metan, Tricin (N-(2-hidroksi-1,1-bis(hidroksimetil)etil)glicin, HEPES (4-(2-hidroksietil)-1-piperazin etansulfonska kiselina, TES (2-[[1,3-dihidroksi-2-(hidroksimetil)propan-2-il]amino]metansulfonska kiselina i PIPES (piperazin-N,N'-bis(2-etansulfonska kiselina),

ili opciono dodatno obuhvata anestetik i izotonični agens.
12. Prethodno napunjeni špric u kojem je napunjen hidrogelni filer na bazi hijaluronske kiseline prema bilo kom od zahteva 1 do 6.
13. Biomaterijal za augmentaciju mekih tkiva koji obuhvata hidrogelni filer na bazi hijaluronske kiseline prema bilo kom od zahteva 1 do 6.