[go: up one dir, main page]

RS64283B1 - Piridazinoni kao inhibitori parp7 - Google Patents

Piridazinoni kao inhibitori parp7

Info

Publication number
RS64283B1
RS64283B1 RS20230450A RSP20230450A RS64283B1 RS 64283 B1 RS64283 B1 RS 64283B1 RS 20230450 A RS20230450 A RS 20230450A RS P20230450 A RSP20230450 A RS P20230450A RS 64283 B1 RS64283 B1 RS 64283B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
10aryl
4alkyl
6alkyl
mmol
optionally substituted
Prior art date
Application number
RS20230450A
Other languages
English (en)
Inventor
Melissa Marie Vasbinder
Laurie B Schenkel
Kerren Kalai Swinger
Kevin Wayne Kuntz
Original Assignee
Ribon Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ribon Therapeutics Inc filed Critical Ribon Therapeutics Inc
Publication of RS64283B1 publication Critical patent/RS64283B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/50—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines
    • A61K31/501—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D451/00—Heterocyclic compounds containing 8-azabicyclo [3.2.1] octane, 9-azabicyclo [3.3.1] nonane, or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane or granatane alkaloids, scopolamine; Cyclic acetals thereof
    • C07D451/02—Heterocyclic compounds containing 8-azabicyclo [3.2.1] octane, 9-azabicyclo [3.3.1] nonane, or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane or granatane alkaloids, scopolamine; Cyclic acetals thereof containing not further condensed 8-azabicyclo [3.2.1] octane or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane; Cyclic acetals thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/08—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/10—Spiro-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/08—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/10—Spiro-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na piridazinone i srodna jedinjenja koja su inhibitori PARP7 i korisna su u lečenju kancera.
STANJE TEHNIKE
[0002] Poli(ADP-riboza) polimeraze (PARP) su članovi porodice od sedamnaest enzima koji regulišu fundamentalne ć elijske procese uključuju ć i ekspresiju gena, degradaciju proteina i višestruke ć elijske odgovore na stres (M. S. Cohen, P. Chang, Insights into biogeneza, funkcija i regulacija ADP-ribozilacije Nat Chem Biol 14, 236-243 (2018)). Sposobnost ć elija raka da prežive pod stresom je osnovni mehanizam raka i novi pristup za nove terapije. Jedan član PARP porodice, PARP1, već se pokazao kao efikasna meta raka u vezi sa ć elijskim stresom izazvanim ošte ć enjem DNK, bilo izazvanim genetskom mutacijom ili citotoksičnom hemoterapijom, sa tri odobrena leka na klinici i nekoliko drugih u kasnoj fazi razvoja (A. Ohmoto, S. Yachida, Trenutni status inhibitora poli(ADP-riboza) polimeraze i buduć i pravci. Onco Targets Ther 10, 5195-5208 (2017)).
[0003] Sedamnaest članova porodice PARP identifikovano je u ljudskom genomu na osnovu homologije unutar njihovih katalitičkih domena (S. Vyas, M. Chesarone-Cataldo, T. Todorova, Y. H. Huang, P. Chang, Sistematska analiza porodica PARP proteina identifikuje nove funkcije kritične za fiziologiju ć elije Nat Commun 4, 2240 (2013)). Međutim, njihove katalitičke aktivnosti spadaju u 3 različite kategorije (S. Vyas et al., Family-wide analisis of poli(ADP-ribose) polimerase activity. Nat Commun 5, 4426 (2014)). Već ina članova porodice PARP katalizuje prenos jedinica mono-ADP-riboze na svoje supstrate (monoPARP), dok drugi (PARP1, PARP2, TNKS, TNKS2) katalizuju prenos jedinica poli-ADP-riboze na supstrate (poliPARP). Konačno, PARP13 je do sada jedini PARP za koji katalitička aktivnost nije mogla biti demonstrirana ni in vitro ni in vivo.
[0004] Receptor aril ugljovodonika (AHR) je faktor transkripcije aktiviran ligandom uključen u regulisanje višestrukih ć elijskih funkcija uključuju ć i proinflamatorne odgovore i metabolizam ksenobiotika (S. Feng, Z. Cao, X. Wang, Uloga receptora aril ugljovodonika u raku. Biochim Biophis Acta 1836, 197-210 (2013) i B. Stockinger, P. Di Meglio, M. Gialitakis, J. H. Duarte, Receptor aril ugljovodonika: multitasking u imunološkom sistemu. Annu Rev Immunol 32, 4203-432 ). AHR se može aktivirati širokim brojem liganada uključujuć i endogene metabolite triptofana kao što je kinurenin (C.A. Opitz et al., An endogeni tumor-promoting ligand of the human aril hidrocarbon receptor. Nature 478, 197-203 (2011)) i određeni policiklični aromatični ugljovodonici kao što je 2,3,7,8-tetrahlorodibenzo-p-dioksin (TCDD) (K.W. Bock, Toward elucidation of diokin-mediated chloracne and Ah receptor functions. Biochem Pharmacol 112, 1-5 (2016)). Aktivacija AHR indukuje ekspresiju ciljnog gena uključujuć i gene uključene u metabolizam kao što su citokrom P4501A1 i P4501B1. Aktivacija AHR takođe dovodi do poveć anja AHR ciljnog gena, TCDD-inducibilne poli(ADP-riboze)polimeraze (TIPARP, koja se takođe naziva PARP7), koja funkcioniše kao negativni regulator određenih AHR transkripcionih meta (L. MacPherson et. al., represor receptora aril ugljovodonika i TIPARP (ARTD14) koriste slične, ali i različite mehanizme za potiskivanje signalizacije aril ugljovodoničnih receptora Int J Mol Sci 15, 7939-7957 (2014) i L. MacPherson et al., 2,3 ,7,8-Tetrahlorodibenzo-p-dioksin poli(ADP-riboza) polimeraza (TIPARP, ARTD14) je mono-ADP-riboziltransferaza i represor transaktivacije aril-ugljovodoničnih receptora. Nukleinske kiseline Res 41, 1604-1604-1621) (22).
[0005] PARP7 se takođe može regulisati drugim faktorima transkripcije i signalnim putevima uključujuć i androgeni receptor (E.C. Bolton et al., Cell- and gen-specific regulation of primarni ciljni geni pomoć u androgenog receptora. Genes Dev 21, 2005-2017 (2007.), faktor rasta izveden iz trombocita (J. Schmahl, C. S. Raimond, P. Soriano, Specifičnost PDGF signalizacije je posredovana kroz više neposrednih ranih gena. Nat Genet 39, 52-60 (2007)) i faktor 1 inducibilnog hipoksijom (N. Hao et al., Ksenobiotici i gubitak ć elijske adhezije dovode do različitih transkripcionih rezultata putem signalizacije aril-ugljovodoničnih receptora Mol Pharmacol 82, 1082-1093 (2012)). PARP7 gen se nalazi na hromozomu 3 (3q25) u regionu koji se često pojačava kod karcinoma skvamozne histologije (http://www.cbioportal.org/indek.do?session_id=5aelbcde498eb8b3d565d8b2). Studija asocijacije na celom genomu identifikovala je 3q25 kao mesta osetljivosti na rak jajnika što sugeriše ulogu PARP7 u ovom tipu raka (E.L. Goode et al., Studija asocijacije na celom genomu identifikuje mesta osetljivosti na rak jajnika na 2q31 i 8q24. Nat Genet 42 , 874-879 (2010). PARP7 ima više ć elijskih funkcija. U kontekstu AHR signalizacije PARP7 deluje kao mehanizam negativne povratne sprege za regulisanje ekspresije P4501A1 i P4501B1 (L. MacPherson et al., represor aril ugljovodoničnih receptora i TIPARP (ARTD14) koriste slične, ali i različite mehanizme za potiskivanje signalizacije aril ugljovodonika receptora. Int J Mol Sci 15, 7939- 7957 (2014), i L. MacPherson et al., 2,3,7,8-tetra
hlorodibenzo-p-dioksinpoli(ADP-riboza)polimeraza(TIPARP,ARTD14)isamono-ADP-riboziltransferaza i transaktivacija receptora represora faril ugljikovodika. Nucleic Acids Res 41, 1604-1621 (2013)). PARP7 je takođe opisan za ADP-ribozilatne X receptore jetre što dovodi do modulacija njihove transkripcione aktivnosti (C. Bindesboll et al., TCDD-inducibilna poli-ADP-riboza polimeraza (TIPARP/PARP7) mono-ADP-ribozilati i ko-aktivira X receptore jetre. Biochem J473, 899-910 (2016) Tokom virusne infekcije PARP7 se može vezati za Sindbis virus (SINV) kako bi promovisao degradaciju virusne RNK (T. Kozaki i saradnici, ošteć enje mitohondrija izaziva TCDD-inducibilan antivirusni odgovor poli(ADP-riboza) polimerazom posredovan. Proc Natl Acad Sci USA 114, 2681-2686 (2017)). Takođe u kontekstu virusne infekcije, PARP7 izazvan AHR-om može da stupi u interakciju sa TBK1, glavnom kinazom koja se aktivira tokom početka molekularnih puteva povezanih sa patogenom koji dovode do aktivacije tipa I interferonskog odgovora i antivirusnog imuniteta (T. Yamada et al., Signalizacija konstitutivnog arilnog ugljikovodika receptora ograničava antivirusnu urođenu odbranu posredovanu interferonom tipa I. Nat Immunol 17, 687-694 (2016.)). Pokazalo se da PARP7 deluje na ADP-ribozilat TBK1 koji sprečava njegovu aktivaciju, čime se potiskuje odgovor interferona tipa I.
[0006] Na osnovu ovih rezultata iz virusne infekcije moglo bi se pretpostaviti da ćelije raka mogu koristiti aberantno izražen i/ili aktiviran PARP7 kao mehanizam za izbegavanje imunološkog sastava domaćina putem supresije interferona tipa I i time T-ćelijama posredovanog antitumorskog imuniteta. Zaista, u nedavnom genetskom pregledu za identifikaciju faktora tumora koji suzbijaju aktivaciju T ćelija PARP7 je identifikovan kao pogodak (D. Pan i sur., Glavni regulator kromatina određuje otpornost tumorskih ćelija na ubijanje posredovano T ćelijama. Science 359, 770 -775 (2018)). Pokazalo se da nokaut PARP7 u ćelijskoj liniji mišjeg melanoma povećava proliferaciju i aktivaciju kokultiviranih T ćelija, što sugeriše da bi inhibicija PARP7 mogla biti održiva strategija za aktiviranje ubijanja tumora posredovanog T ćelijama.
[0007] WO 2016/116602 A1 opisuje metode lečenja raka davanjem TIPARP inhibitora pacijentu kome je to potrebno. WO 2019/055966 A2 opisuje piridazinone i srodne tautomere i farmaceutske kompozicije.
SUŠTINA PRONALASKA
[0008] Ovaj pronalazak je usmeren na jedinjenje Formule I:
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu su sastavni članovi definisani u nastavku.
[0009] Ovaj pronalazak je dalje usmeren na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje Formule I, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0010] Jedinjenja Formule I i njihove farmaceutski prihvatljive soli su korisni u postupku lečenja bolesti ili poremeć aja kod pacijenta kome je potrebno lečenje, gde se bolest ili poreme ć aj karakteriše prekomernom ekspresijom ili poveć anom aktivnoš ć u PARP7, postupak koji obuhvata davanje pacijentu terapeutski efikasne količine jedinjenja Formule I, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0011] Ovaj pronalazak je dalje usmeren na jedinjenje Formule I, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupku lečenja karcinoma kod subjekta kome je to potrebno, a postupak obuhvata davanje subjektu terapeutski efikasne količine agensa koji inhibira aktivnost PARP7, kao što je jedinjenje Formule I, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje ovde opisana jedinjenja za upotrebu u terapiji.
[0012] Sve reference u opisu na metode lečenja odnose se na jedinjenja, farmaceutske kompozicije i lekove pronalaska za upotrebu u postupku lečenja.
KRATAK OPIS SLIKA
[0013]
Slika 1 ilustruje (A) amplifikaciju PARP7 u uzorcima primarnog tumora TCGA; i (B) pojačanja broja kopija PARP7 odgovaraju poveć anim nivoima ekspresije PARP7 mRNK u uzorcima skvamoznog tumora plu ć a TCGA (The Cancer Genome Atlas).
Slika 2 ilustruje inhibiciju rasta ć elija raka pomo ć u inhibitora PARP7 (jedinjenja iz primera 18B, 39, 98 i 93A), pokazujuć i dozno-zavisno smanjenje rasta NCI-H1373 ć elija raka plu ć a.
Slika 3 ilustruje indukciju nivoa interferona-beta (IFN-b) inhibitorima PARP7 (jedinjenja Primera 18B i 98) u CT26 ć elijama raka debelog creva miša i RAW264.7 mišjim makrofagima u prisustvu STING agonista, DMXAA (takođe poznatog kao vadimezan ili ASA404).
Slika 4 ilustruje indukciju STAT1 fosforilacije inhibitorom PARP7 u CT26 ć elijama raka debelog creva miša i RAW264.7 mišjim makrofagima.
Slika 5 ilustruje proliferaciju u CT26 ć elijama in vitro u prisustvu inhibitora PARP7 (jedinjenje Primera 18B). Slika 6A ilustruje rast tumora u mišjem singenom modelu CT26 i u prisustvu inhibitora PARP7 (jedinjenja iz primera 98 i 93A).
Slika 6B ilustruje rast tumora u mišjem singenom modelu 4T1 i u prisustvu inhibitora PARP7 (jedinjenja Primera 98 i 93A).
Slika 7A ilustruje da primena inhibitora PARP7 iz Primera 561 jednom dnevno značajno smanjuje rast tumora kod humanog NCI-H1373 ksenografta raka pluć a.
Slika 7B ilustruje da primena inhibitora PARP7 iz Primera 561 jednom ili dva puta dnevno značajno smanjuje rast tumora kod mišjeg CT26 karcinoma debelog creva singenog modela.
Slika 8 prikazuje uzorak difrakcije rendgenskih zraka na prahu (XRPD) jedinjenja iz Primera 561 Oblika A.
Slika 9 prikazuje termogram diferencijalne skenirajuć e kalorimetrije (DSC) i termogravimetrijske analize (TGA) jedinjenja iz Primera 561 Oblika A.
Slika 10 prikazuje izotermu dinamičke sorpcije pare (DVS) jedinjenja iz Primera 561 Oblika A.
DETALJAN OPIS
[0014] Ovaj pronalazak je usmeren na jedinjenje Formule I:
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu:
X je Cl, Br, CH3, CF3, CN, OCH3, etil, ciklopropil, SCH3ili izopropil;
A je grupa koja ima formulu (A-1):
Y<1>, Y<2>i Y<3>su svaki nezavisno izabrani od O, S, NRI, C(=O), C(=O)O, C(=O)NR<Y>, S(=O), S(=O)2,S(=O)NR<Y>, S(=O)2NR<Y>ili NR<Y>C(=O)NR<Y>, pri čemu je svaki R<Y>nezavisno H ili C1-4alkil;
L je C1-3alkilen, O, S, NR<Y>, C(=O), C(=O)O, C(=O)NR<Y>, S(=O), S(=O)NR<Y>ili NR<Y>C(= O)NR<Y>;
Z je H, Cy<Z>, halo, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, CN, NO2, OR<a>, SR<a>, C(O)R<b>, C(O)NR<c>R<d>,
C(O)OR<a>, OC(O)R<b>, OC(O)NR<c>R<d>, NR<c>R<d>, NR<c>C(O)R<b>, NR<c>C(O)OR<a>, NR<c>C(O)NR<c>R<d>, C(= NR<e>)R<b>,
C(=NR<e>)NR<c>R<d>, NR<c>C(=NR<e>)NR<c>R<d>, NR<c>S(O)R<b>, NR<c>S(O)2R<b>, NR<c>S(O)2NR<c>R<d>, S(O)R<b>, S(O)NR<c>R<d>, S(O)2R<b>, i S(O)2NR<c>R<d>; pri čemu su navedeni C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil i C1-6haloalkil od Z svaki po izboru supstituisani sa 1, 2, 3, 4 ili 5 supstituenata nezavisno odabranih od Cy<Z>, halo, CN, NO2, OR<a>, SR<a>, C(O)R<b>, C(O)NR<c>R<d>, C(O)OR<a>, OC(O)R<b>, OC(O)NR<c>R<d>, C(=NR<e>)NR<c>R<d>, Nr<c>C(=NR<e>)NR<c>R<d>, NR<c>R<d>, NR<c>C(O)R<b>, NR<c>C(O)OR<a>, NR<c>C(O)NR<c>R<d>, NR<c>S(O)R<b>, NR<c>S(O)2R<b>, NR<c>S(O)2NR<c>R<d>, S(O)R<b>, S(O)NR<c>R<d>, S(O)2R<b>, i S(O)2NR<c>R<d>;
Cy<Z>se bira od C6-10arila, C3-7cikloalkila, 5-10-članog heteroarila i 4-10-članog heterocikloalkila, svaki opciono supstituisan sa 1, 2, 3 ili 4 supstituenta nezavisno izabrana od halo, C1-6alkila, C2-6alkenila, C2-6alkinila, C1-6haloalkila, CN, NO2, OR<a1>, SR<a1>, C(O)R<b1>, C(O)NR<c1>R<d1>, C(O)OR<a1>, OC(O)R<b1>, OC(O)NR<c1>R<d1>,C(=NR<e1>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(=NR<e1>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(O)R<b1>, NR<c1>C(O)OR<a1>, Nr<c1>C(O)NR<c1>R<d1>, NR<c1>S(O)R<b1>, NR<c1>S(O)2R<b1>, NR<c1>S(O)2NR<c1>R<d1>, S(O)R<b1>, S(O)NR<c1>R<d1>, S(O)2R<b1>i S(O)2NR<c1>R<d1>, pri čemu alkil, C2-6alkenil i C2-6alkinil su opciono supstituisani sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno odabrana od halo, CN, NO2, OR<a1>, SR<a1>, C(O)R<b1>, C(O)NR<c1>R<d1>, C(O)OR<a1>, OC(O)R<b1>, OC(O)NR<c1>R<d1>, C(=NR<e1>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(=NR<e1>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(O)R<b1>, NR<c1>C(O)OR<a1>, Nr<c1>C(O)NR<c1>R<d1>, NR<c1>S(O)R<b1>, NR<c1>S(O)2R<b1>, NR<c1>S(O)2NR<c1>R<d1>, S(O)R<b1>, S(O)NR<c1>R<d1>, S(O)2R<b1>i S(O)2NR<c1>R<d1>;
Prsten D je monociklična ili policiklična 4-10-člana heterocikloalkilna grupa opciono supstituisana sa 1, 2 ili 3 grupe nezavisno odabrane od halo, C1-6alkila, C2-6alkenila, C2-6alkinila, C1-6haloalkila, CN, NO2, OR<a2>, Sr<a2>, C(O)R<b2>, C(O)NR<c2>R<d2>, C(O)OR<a2>, OC(O)R<b2>, OC(O)NR<c2>R<d2>, C(= NR<e2>)NR<c2>R<d2>, Nr<c2>C(=NR<e2>)NR<c2>R<d2>, NR<c2>R<d2>, NR<c2>C(O)R<b2>, NR<c2>C(O)OR<a2>, NR<c2>C(O)NR<c2>R<d2>, NR<c2>S(O)R<b2>, NR<c2>S(O)2R<b2>, NR<c2>S(O)2NR<c2>R<d2>,
S(O)R<b2>, S(O)NR<c2>R<d2>, S(O)2R<b2>i S(O)2NR<c2>R<d2>, pri čemu su C1-6alkil, C2-6alkenil i C2-6alkinil svaki opciono supstituisani sa 1, 2 ili 3 grupe nezavisno odabrane od halo, CN, NO2, OR<a2>, SR<a2>, C(O)R<b2>,
C(O)NR<c2>R<d2>, C(O)OR<a2>, OC(O)R<b2>, OC(O)NR<c2>R<d2>, C(= NR<e2>)NR<c2>R<d2>, NR<c2>C(=NR<e2>)NR<c2>R<d2>, Nr<c2>R<d2>, NR<c2>C(O)R<b2>, NR<c2>C(O)OR<a2>, NR<c2>C(O)NR<c2>R<d2>, NR<c2>S(O)R<b2>, NR<c2>S(O)2R<b2>, NR<c2>S(O)2NR<c2>R<d2>, S(O)R<b2>, S(O)NR<c2>R<d2>, S(O)2R<b2>i S(O)2NR<c2>R<d2>;
R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, R<5>, R<6>, R<7>, R<8>, R<9>, R<10>, R<11>i R<12>su svaki nezavisno izabrani od H, halo, C1-6alkila, C2-6alkenila, C2-6alkinila, C1-6haloalkila, C6-10arila, C3-7cikloalkila, 5-10-članog heteroarila, 4-10-članog hetero-cikloalkila, C6-10arila, C1-4alkila, C3-7cikloalkila-C1-4alkila, 5-10 članog heteroarila-C1-4alkila, 4-10 članog heterocikloalkil-C1-4alkila, CN, NO2, OR<a3>, SR<a3>, C(O)R<b3>, C(O)NR<c3>R<d3>, C(O)OR<a3>, OC(O)R<b3>, OC(O)NR<c3>R<d3>, NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(O)R<b3>, NR<c3>C(O)OR<a3>, NR<c3>C(O)NR<c3>R<d3>, C(= N<e3>)R<b3>, C(=N<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>S(O)R<b3>, NR<c3>S(O)2R<b3>, NR<c3>S(O)2NNR<c3>R<d3>, S(O)R<b3>, S(O)NNR<c3>R<d3>, S(O)2R<b3>i S(O)2NR<c3>R<d3>pri čemu navedeni C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, C6-10aril, C3-7cikloalkil, 5-10 člani heteroaril, 4-10 člani heterocikloalkil, C6-10aril-C1-4alkil, C3-7cikloalkil-C1-4alkil, 5-10 člani heteroaril-C1-4alkil i 4-10 člani heterocikloalkil-C1-4alkil od navedenih R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, R<5>, R<6>, R<7>, R<8>, R<9>, R<10>, R<11>i R<12>su svaki opciono supstituisani sa 1, 2, 3, 4 ili 5 supstituenata nezavisno odabranih od halo, C1-6alkila, C2-6alkenila, C2-6alkinila, C1-6haloalkila, CN, NO2, OR<a3>, SR<a3>, C(O)R<b3>, C(O)NR<c3>R<d3>, C(O)OR<a3>, OC(O)R<b3>, OC(O)NR<c3>R<d3>, NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(O)R<b3>, NR<c3>C(O)OR<a3>, NR<c3>C(O)NR<c3>R<d3>, C(= Nr<e3>)R<b3>, C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>S(O)R<b3>, NR<c3>S(O)2R<b3>, NR<c3>S(O)2NR<c3>R<d3>, S(O)R<b3>, S(O)NR<c3>R<d3>, S(O)2R<b3>i S(O)2NR<c3>R<d3>;
ili R<1>i R<3>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani formiraju C5-10cikloalkilni prsten ili 5-10-člani heterocikloalkilni prsten, svaki opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno odabrana od halo, C1-6alkila, C2-6alkenila, C2-6alkinila, C1-6haloalkila, CN, NO2, OR<a3>, SR<a3>, C(O)R<b3>, C(O)NR<c3>R<d3>, C(O)OR<a3>, OC(O)R<b3>, OC(O)NR<c3>R<d3>, NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(O)R<b3>, NR<c3>C(O)OR<a3>, NR<c3>C(O)NR<c3>R<d3>, C(=NR<e3>)R<b3>, C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>S(O)R<b3>, NR<c3>S(O)2R<b3>, NR<c3>S(O)2NR<c3>R<d3>, S(O)R<b3>, S(O)NR<c3>R<d3>, S(O)2R<b3>i S(O)2NR<c3>R<d3>;
ili R<3>i R<5>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani formiraju C5-10cikloalkilni prsten ili 5-10-člani heterocikloalkilni prsten, svaki opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno odabrana od halo, C1-6alkila, C2-6alkenila, C2-6alkinila, C1-6haloalkila, CN, NO2, OR<a3>, SR<a3>, C(O)R<b3>, C(O)NR<c3>R<d3>, C(O)OR<a3>, OC(O)R<b3>, OC(O)NR<c3>R<d3>, NRR<c3>R<d3>, NR<c3>C(O)R<b3>, NR<c3>C(O)OR<a3>, NR<c3>C(O)NR<c3>R<d3>, C(= Nr<e3>)R<b3>, C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(=NRe3)NR<c3>R<d3>, NR<c3>S(O)R<b3>, NR<c3>S(O)2R<b3>, NR<c3>S(O)2NR<c3>R<d3>, S(O)R<b3>, S(O)NR<c3>R<d3>, S(O)2R<b3>i S(O)2NR<c3>R<d3>;
ili R<7>i R<9>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani formiraju C5-10cikloalkilni prsten ili 5-10-člani heterocikloalkilni prsten, svaki opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno odabrana od halo, C1-6alkila, C2-6alkenila, C2-6alkinila, C1-6haloalkila, CN, NO2, OR<a3>, SR<a3>, C(O)R<b3>, C(O)NR<c3>R<d3>, C(O)OR<a3>, OC(O)R<b3>, OC(O)NR<c3>R<d3>, NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(O)R<b3>, NR<c3>C(O)OR<a3>, NR<c3>C(O)NR<c3>R<d3>, C(= NR<e3>)R<b3>,
C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>S(O)R<b3>, NR<c3>S(O)2R<b3>, NR<c3>S(O)2NR<c3>R<d3>, S(O)R<b3>, S(O)NR<c3>R<d3>, S(O)2R<b3>i S(O)2NR<c3>R<d3>;
ili R<9>i R<11>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani formiraju C5-10cikloalkilni prsten ili 5-10-člani heterocikloalkilni prsten, svaki opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno odabrana od halo, C1-6alkila, C2-6alkenila, C2-6alkinila, C1-6haloalkila, CN, NO2, OR<a3>, SR<a3>, C(O)R<b3>, C(O)NR<c3>R<d3>, C(O)OR<a3>, OC(O)R<b3>, OC(O)NR<c3>R<d3>, NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(O)R<b3>, NR<c3>C(O)OR<a3>, NR<c3>C(O)NR<c3>R<d3>, C(= Nr<e3>)R<b3>, C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>S(O)R<b3>, NR<c3>S(O)2R<b3>, NR<c3>S(O)2NR<c3>R<d3>, S(O)R<b3>, S(O)NR<c3>R<d3>, S(O)2R<b3>i S(O)2NR<c3>R<d3>;
ili R<5>i R<7>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani i zajedno sa Y2 formiraju 5-10-člani heterocikloalkilni prsten opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno odabrana od halo, C1-6alkila, C2-6alkenila, C2-6alkinila, C1-6haloalkila, CN, NO2, OR<a3>, SR<a3>, C(O)R<b3>, C(O)NR<c3>R<d3>, C(O)OR<a3>, OC(O)R<b3>, OC(O)NR<c3>R<d3>, NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(O)R<b3>, NR<c3>C(O)OR<a3>, NR<c3>C(O)NR<c3>R<d3>, C(=NR<e3>)R<b3>, C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>S(O)R<b3>, NR<c3>S(O)2R<b3>, NR<c3>S(O)2NR<c3>R<d3>, S(O)R<b3>, S(O)NR<c3>R<d3>, S(O)NR<c3>R<d3>, S(O)NR<c3>R<d3>S(O)2R<b3>i S(O)2NR<c3>R<d3>;
ili R<1>i R<3>zajedno formiraju dvostruku vezu između atoma ugljenika za koje su vezani;
ili R<3>i R<5>zajedno formiraju dvostruku vezu između atoma ugljenika za koje su vezani;
ili R<7>i R<9>zajedno formiraju dvostruku vezu između atoma ugljenika za koje su vezani;
ili R<9>i R<11>zajedno formiraju dvostruku vezu između atoma ugljenika za koje su vezani;
ili R<9>, R<10>, R<11>i R<12>zajedno formiraju trostruku vezu između atoma ugljenika za koje su vezani;
svaki R<a>, R<b>, R<c>, R<d>, R<a1>, R<b1>, R<c1>, R<d1>, R<a2>, R<b2>, R<c2>, R<d2>, R<a3>, R<b3>, R<c3>i R<d3>se nezavisno bira između H, C1-6alkila, C1-6haloalkila, C2-6alkenila, C2-6alkinila, C6-10arila, C3-7cikloalkila, 5-10 članog heteroarila, 4-10 članog heterocikloalkila, C6-10aril-C1-4alkila, C3-7cikloalkil-C1-4alkila, 5-10-članog heteroaril-C1-4alkila i 4-10-članog heterocikloalkil-C1-4alkila, pri čemu navedeni C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C6-10aril, C3-7cikloalkil, 5-10 člani heteroaril, 4-10 člani heterocikloalkil, C6-10aril-C1-4alkil, C3-7cikloalkil-C1-4alkil, 5-10 člani heteroaril-C1-4alkil i 4-10 člani heterocikloalkil-C1-4alkil navedenih R<a>, R<b>, R<c>, R<d>, R<a1>, R<b1>, R<c1>, R<d1>, R<a2>, R<b2>, R<c2>, R<d2>, R<a3>, R<b3>, R<c3>i R<d3>je opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno izabrana između halo, C1-4alkila, C1-4haloalkila, C2-6alkenila, C2-6alkinila, CN, OR<a7>, SR<a7>, C(O)R<b7>, C(O)NR<c7>R<d7>, C(O)OR<a7>, OC(O)R<b7>, OC(O)NR<c7>R<d7>, NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(O)R<b7>, NR<c7>C(O)NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(O)OR<a7>, C(=NR<e7>)NR<c7>R<d7>, Nr<c7>C(=NR<e7>)NR<c7>R<d7>, NR<c7>R<d7>, S(O)NR<c7>R<d7>, S(O)2R<b7>, NR<c7>S(O)2R<b7>, NR<c7>S(O)2NR<c7>R<d7>i S(O)2NR<c7>R<d7>;
ili R<c>i R<d>zajedno sa N atomom za koji su vezani formiraju 4-7 članu heterocikloalkil grupu opciono supstituisanu sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno izabrana od CN, halo, C1-4alkila, C1-4haloalkila, C1-6haloalkila, C2-6alkenila, C2-6alkinila, CN, OR<a7>, SR<a7>, C(O)R<b7>, C(O)NR<c7>R<d7>, C(O)OR<a7>, OC(O)R<b7>, OC(O)NR<c7>R<d7>, NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(O)R<b7>, NR<c7>C(O)NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(O)OR<a7>, C(=Nr<e7>)NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(=NR<e7>)NR<c3>R<d7>, S(O)R<b7>, S(O)NR<c7>R<d7>, S(O)2R<b7>, NR<c7>S(O)2R<b7>, NR<c7>S(O)2NR<c7>R<d7>i S(O)2NR<c7>R<d7>;
ili R<c1>i R<d2>zajedno sa N atomom za koji su vezani formiraju 4-7 članu heterocikloalkil grupu opciono supstituisanu sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno izabrana od CN, halo, C1-4alkila, C1-4haloalkila, C1-6haloalkila, C2-6alkenila, C2-6alkinila, CN, OR<a7>, SR<a7>, C(O)R<b7>, C(O)NR<c7>R<d7>, C(O)OR<a7>, OC(O)R<b7>, OC(O)NR<c7>R<d7>, NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(O)R<b7>, NR<c7>C(O)NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(O)OR<a7>, C(=Nr<e7>)NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(=NR<e7>)NR<c3>R<d7>, S(O)R<b7>, S(O)NR<c7>R<d7>, S(O)2R<b7>, NR<c7>S(O)2R<b7>, NR<c7>S(O)2NR<c7>R<d7>i S(O)2NR<c7>R<d7>;
ili R<c2>i R<d2>zajedno sa N atomom za koji su vezani formiraju 4-7 članu heterocikloalkil grupu opciono supstituisanu sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno izabrana od CN, halo, C1-4alkila, C1-4haloalkila, C1-6haloalkila, C2-6alkenila, C2-6alkinila, CN, OR<a7>, SR<a7>, C(O)R<b7>, C(O)NR<c7>R<d7>, C(O)OR<a7>, OC(O)R<b7>, OC(O)NR<c7>R<d7>, NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(O)R<b7>, NR<c7>C(O)NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(O)OR<a7>, C(=Nr<e7>)NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(=NR<e7>)NR<c3>R<d7>, S(O)R<b7>, S(O)NR<c7>R<d7>, S(O)2R<b7>, NR<c7>S(O)2R<b7>, NR<c7>S(O)2NR<c7>R<d7>i S(O)2NR<c7>R<d7>;
ili R<c3>i R<d3>zajedno sa N atomom za koji su vezani formiraju 4-7 članu heterocikloalkil grupu opciono supstituisanu sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno izabrana od CN, halo, C1-4alkila, C1-4haloalkila, C1-6haloalkila, C2-6alkenila, C2-6alkinila, CN, OR<a7>, SR<a7>, C(O)R<b7>, C(O)NR<c7>R<d7>, C(O)OR<a7>, OC(O)R<b7>, OC(O)NR<c7>R<d7>, NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(O)R<b7>, NR<c7>C(O)NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(O)OR<a7>, C(=Nr<e7>)NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(=NR<e7>)NR<c3>R<d7>, S(O)R<b7>, S(O)NR<c7>R<d7>, S(O)2R<b7>, NR<c7>S(O)2R<b7>, NR<c7>S(O)2NR<c7>R<d7>i S(O)2NR<c7>R<d7>;
R<a7>, R<b7>, R<c7>i R<d7>se nezavisno biraju od H, C1-6alkila, C1-6haloalkila, C2-6alkenila, C2-6alkinila, C6-10arila, C3-7cikloalkila, 5-10-članog heteroarila, 4-10 članog heterocikloalkila, C6-10aril-C1-4alkila, C3-7cikloalkil-C1-4alkila, 5-10 članog heteroaril-C1-4alkila i 4-10 članog heterocikloalkil-C1-4alkila, pri čemu navedeni C1-6alkil, C1-6haloalkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C6-10aril, C3-7cikloalkil, 5-10 člani heteroaril, 4-10 člani heterocikloalkil, C6-10aril- C1-4alkil, C3-7cikloalkil-C1-4alkil, 5-10 člani heteroaril-C1-4alkil i 4-10 člani heterocikloalkil-C1-4alkil su svaki opciono supstituisani sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno izabrana od OH, CN, amino, halo, C1-6alkila, C1-6alkoksija, C1-6haloalkila i C1-6haloalkoksija; svaki R<e>, R<e1>, R<e2>, R<e3>i R<e7>je nezavisno izabran od H, C1-4alkila i CN;
a je 0 ili 1;
m je 0 ili 1;
n je 0 ili 1;
p je 0 ili 1;
q je 0 ili 1;
r je 0 ili 1;
pri čemu bilo koja napred navedena heteroarilna ili heterocikloalkilna grupa sadrži 1, 2, 3 ili 4 heteroatoma koji formiraju prsten, nezavisno izabran između O, N i S; i
pri čemu je jedan ili više C ili N atoma koji formiraju prsten bilo koje napred navedene heterocikloalkilne grupe opciono supstituisan sa okso (=O) grupom.
[0015] U nekim realizacijama, A je grupa koja ima formulu (A-1a):
[0016] U nekim realizacijama, A je grupa koja ima formulu (A-1b):
[0017] U nekim realizacijama, A je grupa koja ima formulu (A-1c):
pri čemu su Z<1>i Z<2>svaki nezavisno izabrani između N i CH, i pri čemu je R CN, Cl ili CF3.
[0018] U nekim realizacijama, A je grupa koja ima formulu (A-1d):
pri čemu su Z<1>i Z<2>svaki nezavisno izabrani između N i CH, i pri čemu je R CN, Cl ili CF3.
[0019] U nekim realizacijama, L je NR<Y>ili O. U nekim realizacijama, L je NH2ili O. U nekim realizacijama, L je NR<Y>. U nekim realizacijama, L je O. U nekim realizacijama, L je NH2.
[0020] U nekim realizacijama, X je CF3, CH3, CN, Cl ili Br.
[0021] U nekim realizacijama, Y<1>je NR<Y>ili O. U nekim realizacijama, Y<1>je NR<Y>. U nekim realizacijama, Y<1>je O. U nekim realizacijama, Y<1>je NR<Y>, O ili S. U nekim realizacijama, Y<1>je S.
[0022] U nekim realizacijama, Y<2>je NR<Y>ili O. U nekim realizacijama, Y<2>je O. U nekim realizacijama, Y<2>je NR<Y>, O ili S. U nekim realizacijama, Y<2>je NRY. U nekim realizacijama, Y<2>je S.
[0023] U nekim realizacijama, Y<3>je C(=O). U nekim realizacijama, Y<3>je C(=O) ili S(=O)2. U nekim realizacijama, Y<3>je S(=O)2.
[0024] U nekim realizacijama, R<y>je H ili C1-4. U nekim realizacijama, R<y>je metil. U nekim realizacijama, R<y>je H.
[0025] U nekim realizacijama, Z je H, Cy<Z>, halo, C1-6alkil, C1-6haloalkil, CN, NO2, OR<a>, C(O)R<b>, C(O)NR<c>R<d>, C(O)OR<a>, NR<c>R<d>i NR<c>C(O)R<b>; pri čemu su navedeni C1-6alkil i C1-6haloalkil od Z svaki opciono supstituisani sa 1, 2, 3, 4 ili 5 supstituenata nezavisno odabranih od Cy<Z>, halo, CN, NO2, OR<a>, SR<a>, C(O)R<b>, C(O)NR<c>R<d>C(O)OR<a>, OC(O)R<b>, OC(O)NR<c>R<d>, NR<c>R<d>i NR<c>C(O)R<b>. U nekim realizacijama, Z je Cy<Z>.
[0026] U nekim realizacijama, Cy<Z>je izabran između 5-10-članog heteroarila i 4-10-članog heterocikloalkila, svaki opciono supstituisan sa 1, 2, 3 ili 4 supstituenta nezavisno odabranih od halo, C1-6alkila, C2-6alkenila, C2-6alkinila, C1-6haloalkila, CN, NO2, OR<a1>, SR<a1>, C(O)R<b1>, C(O)NR<c1>R<d1>, C(O)OR<a1>, OC(O)R<b1>, OC(O)NR<c1>R<d1>, C(=NR<e1>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(=NR<e1>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(O)R<b1>, NR<c1>C(O)OR<a1>, NR<c1>C(O)NR<c1>R<d1>, NR<c1>S(O)R<b1>, Nr<c1>S(O)2R<b1>, Nr<c1>S(O)2NR<c1>R<d1>, S(O)R<b1>, S(O)NR<c1>R<d1>, S(O)2R<b1>i S(O)2NR<c1>R<d1>, pri čemu su alkil, C2-6alkenil i C2-6alkinil opciono supstituisani sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno odabrana od halo, CN, NO2, OR<a1>, SR<a1>, C(O)R<b1>, C(O)NR<c1>R<d1>, C(O)OR<a1>, OC(O)R<b1>, OC(O)NR<c1>R<d1>, C(=NR<e1>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(=NR<e1>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(O)R<b1>, NR<c1>C(O)OR<a1>, NR<c1>C(O)NR<c1>R<d1>, NR<c1>S(O)R<b1>, Nr<c1>S(O)2R<b1>,<Nrc1S(O)>2<NRc1Rd1, S(O)Rb1, S(O)NRc1Rd1, S(O)>2<Rb1 i S(O)>2<NRc1R>d1.
[0027] U nekim realizacijama, Cy<Z>je 5-10-člani heteroaril, opciono supstituisan sa CN, CF3ili Cl. U nekim realizacijama, Cy<Z>je piridinil ili pirimidinil, svaki opciono supstituisan sa CN, CF3ili Cl. U nekim realizacijama, Cy<Z>je 5-10-člani heteroaril, opciono supstituisan sa CN, C1-6alkilom, C1-6haloalkilom, halo ili NR<c1>R<d1>, pri čemu je C1-6alkil opciono supstituisan sa CN ili NR<c1>R<d1>. U nekim realizacijama, Cy<Z>je piridinil, pirimidinil ili pirazinil, svaki opciono supstituisan sa CN, C1-6alkilom, C1-6haloalkilom, halo ili NR<c1>R<d1>, pri čemu je C1-6alkil opciono supstituisan sa CN ili NR<c1>R<d1>. U nekim realizacijama, Cy<Z>je piridinil, pirimidinil, pirazinil ili tiazolil, svaki opciono supstituisan sa CN, C1-6alkilomom, C1-6haloalkilom, halo ili NR<c1>R<d1>, pri čemu je C1-6alkil opciono supstituisan sa CN ili NR<c1>NR.
[0028] U nekim realizacijama, prsten D je monociklična ili policiklična 4-10-člana heterocikloalkilna grupa opciono supstituisana sa 1, 2 ili 3 grupe koje se nezavisno biraju između halo, C1-6alkila, C1-6haloalkila, CN, NO2, OR<a2>, C(O)R<b2>, C(O)NR<c2>R<d2>, C(O)OR<a2>, NR<c2>R<d2>, NR<c2>C(O)R<b2>, pri čemu je C1-6alkil opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 grupe nezavisno odabrane od halo, CN , NO2, OR<a2>, C(O)R<b2>, NR<c2>R<d2>i NR<c2>C(O)R<b2>.
[0029] U nekim realizacijama, prsten D je monociklična 4-10-člana heterocikloalkilna grupa. U nekim realizacijama, prsten D je piperazinil. U nekim realizacijama, prsten D je piperazinil, dihidropiridazinil, diazepanil, pirolidinil ili heksahidropirolo[3,2-b]pirol-1(2H)-il. U nekim realizacijama, prsten D je piperazinil, dihidropiridazinil, diazepanil, pirolidinil ili heksahidropirolo[3,2-b]pirol-1(2H)-il, svaki opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 grupe nezavisno odabrane od halo, C1-6alkila, C1-6haloalkila, CN, NO2, OR<a2>, C(O)R<b2>, C(O)NR<c2>R<d2>, C(O)OR<a2>, NR<c2>R<d2>, NR<c2>C(O)R<b2>, pri čemu je C1-6alkil opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 grupe nezavisno odabrane od halo, CN, NO2, OR<a2>, C(O)R<b2>, NR<c2>R<d2>i NR<c2>C(O)R<b2>. U nekim realizacijama, prsten D je piperazinil opciono supstituisan sa C1-6alkilom. U nekim realizacijama, prsten D je piperazinil opciono supstituisan sa jednim do osam atoma deuterijuma. U nekim realizacijama, prsten D je piperazin-1-il-2,2,3,3,5,5,6,6-d8.
[0030] U nekim realizacijama, R<1>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril, C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil je opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>. U nekim realizacijama, R<1>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril, 4-10 člani heterocikloalkil, C6-10aril-C1-4alkil, 5-10 člani heteroaril- C1-4alkil, ili 4-10 člani heterocikloalkil-C1-4alkil, pri čemu navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril, C6-10aril-C1-4alkil, 5-10 heteroaril-C1-4alkil ili 4-10 člani heterocikloalkil-C1-4alkil je opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>.
[0031] U nekim realizacijama, R<1>je C1-6alkil. U nekim realizacijama, R<1>je C1-6alkil, opciono supstituisan sa OR<a3>. U nekim realizacijama, R<1>je H. U nekim realizacijama, R<1>je metil, etil ili izopropil. U nekim realizacijama, R<1>je metoksimetil ili hidroksimetil. U nekim realizacijama, R<1>je fenil, fenilmetil ili piridinil. U nekim realizacijama, R<1>je 5-10 člani heteroaril-C1-4alkil ili 4-10 člani heterocikloalkil-C1-4alkil. U nekim realizacijama, R<1>je piridinilmetil, piperidinilmetil ili morfolinilmetil. U nekim realizacijama, R<1>je tetrahidrofuranil ili piperidinil. U nekim realizacijama, R<1>je fenil, piridinil, tetrahidrofuranil ili piperidinil.
[0032] U nekim realizacijama, R<2>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril, C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil je opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>. U nekim realizacijama, R<2>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril, 4-10 člani heterocikloalkil, C6-10aril-C1-4alkil, 5-10 člani heteroaril- C1-4alkil, ili 4-10 člani crveni heterocikloalkil-C1-4alkil, pri čemu navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril, C6-10aril-C1-4alkil, 5-10 člani heteroaril-C1-4alkil ili 4 -10-eročlani heterocikloalkil-C1-4alkil je opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>.
[0033] U nekim realizacijama, R<2>je OR<a3>. U nekim realizacijama, R<2>je H.
[0034] U nekim realizacijama, R<3>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril, C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu je navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>.
[0035] U nekim realizacijama, R<3>je H. U nekim realizacijama, R<3>je metil, etil ili izopropil. U nekim realizacijama, R<3>je metoksimetil ili hidroksimetil. U nekim realizacijama, R<3>je fenil, fenilmetil ili piridinil.
[0036] U nekim realizacijama, R<4>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril, C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil je opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>.
[0037] U nekim realizacijama, R<4>je H.
[0038] U nekim realizacijama, R<5>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril, C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu je navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>.
[0039] U nekim realizacijama, R<5>je H. U nekim realizacijama, R<5>je metil, etil ili izopropil. U nekim realizacijama, R<5>je metoksimetil ili hidroksimetil. U nekim realizacijama, R<5>je fenil, fenilmetil ili piridinil.
[0040] U nekim realizacijama, R<6>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril, C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil je opciono supstituisan sa ORa3ili NRc3Rd3.
[0041] U nekim realizacijama, R6je H.
[0042] U nekim realizacijama, R7je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril, C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu je navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>.
[0043] U nekim realizacijama, R<7>je C1-6alkil. U nekim realizacijama, R<7>je metil.
[0044] U nekim realizacijama, R<8>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril, ili C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil je opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>.
[0045] U nekim realizacijama, R<8>je H.
[0046] U nekim realizacijama, R<9>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril, ili C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil je opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>.
[0047] U nekim realizacijama, R<9>je H.
[0048] U nekim realizacijama, R<10>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu je navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>.
[0049] U nekim realizacijama, R<10>je H.
[0050] U nekim realizacijama, R<11>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu je navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>.
[0051] U nekim realizacijama, R<11>je H.
[0052] U nekim realizacijama, R<12>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10 člani heteroaril, ili C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu navedeni C1-6alkil, C6 -10aril, 5-10 člani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil je opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>.
[0053] U nekim realizacijama, R<12>je H.
[0054] U nekim realizacijama, R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, R<5>, R<6>, R<7>i R<8>su svaki H.
[0055] U nekim realizacijama, R<7>, R<8>, R<9>, R<10>, R<11>i R<12>su svaki H.
[0056] U nekim realizacijama, R<1>, R<2>, R<5>, R<6>, R<7>, R<8>, R<9>i R<10>su svaki H.
[0057] U nekim realizacijama, R<2>, R<5>, R<6>, R<7>, R<8>, R<9>i R<10>su svaki H.
[0058] U nekim realizacijama, R<5>, R<6>, R<7>, R<8>, R<9>i R<10>su svaki H.
[0059] U nekim realizacijama, R<3>i R<5>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani formiraju C5-10cikloalkilni prsten ili 5-10-člani heterocikloalkil prsten, svaki opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno izabran od halo, C1-6alkila, C2-6alkenila, C2-6alkinila, C1-6haloalkila, CN, NO2, OR<a3>, SR<a3>, C(O)R<b3>, C(O)NR<c3>R<d3>, C(O)OR<a3>, OC(O)R<b3>, OC(O)NR<c3>R<d3>, NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(O)R<b3>, NR<c3>C(O)OR<a3>, NR<c3>C(O)NR<c3>R<d3>, C(=NR<e3>)R<b3>, C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>S(O)R<b3>, NR<c3>S(O)2R<b3>, NR<c3>S(O)2NR<c3>R<d3>, S(O)R<b3>, S(O)NR<c3>R<d3>, S(O)2R<b3>, i S(O)2NR<c3>R<d3>.
[0060] U nekim realizacijama, R<3>i R<5>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani formiraju C5-10cikloalkil prsten ili 5-10-člani heterocikloalkil prsten.
[0061] U nekim realizacijama, R<3>i R<5>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani formiraju tetrahidrofuranilni prsten.
[0062] U nekim realizacijama, R<3>i R<5>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani formiraju ciklobutilni ili ciklopentilni prsten.
[0063] U nekim realizacijama, R<5>i R<7>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani i zajedno sa Y<2>formiraju 5-10-člani heterocikloalkilni prsten opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno odabrana od halo, C1-6alkila, C2-6alkenila, C2-6alkinila, C1-6haloalkila, CN, NO2, OR<a3>, SR<a3>, C(O)R<b3>, C(O)NR<c3>R<d3>, C(O)OR<a3>, OC(O)R<b3>, OC(O)NR<c3>R<d3>, NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(O)R<b3>, NR<c3>C(O)OR<a3>, NR<c3>C(O)NR<c3>R<d3>, C(=NR<e3>)R<b3>, C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>S(O)R<b3>, NR<c3>S(O)2R<b3>, NR<c3>S(O)2NR<c3>R<d3>, S(O)R<b3>, S(O)NR<c3>R<d3>, S(O)2R<b3>, and S(O)2NR<c3>R<d3>.
[0064] U nekim realizacijama, R<5>i R<7>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani formiraju i zajedno sa Y<2>formiraju 5-10-člani heterocikloalkilni prsten.
[0065] U nekim realizacijama, R<5>i R<7>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani i zajedno sa Y<2>formiraju tetrahidrofuranilni prsten ili tetrahidropiranilni prsten. U nekim realizacijama, R<5>i R<7>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani i zajedno sa Y<2>formiraju tetrahidrofuranilni prsten, tetrahidropiranilni prsten ili pirolidinilni prsten. U nekim realizacijama, R<5>i R<7>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani i zajedno sa Y<2>formiraju pirolidinilni prsten.
[0066] U nekim realizacijama, R<a3>je C1-6alkil ili H. U nekim realizacijama, R<a3>je metil. U nekim realizacijama, R<a3>je H.
[0067] U nekim realizacijama, R<c3>i R<d3>su svaki nezavisno izabrani između C1-6alkila i H. U nekim realizacijama, R<c3>je C1-6alkil ili H. U nekim realizacijama, R<d3>je C1-6alkil ili H. U nekim realizacijama, R<c3>i R<d3>su svaki metil. U nekim realizacijama, R<c3>i R<d3>su svaki H.
[0068] U nekim realizacijama, m je 1.
[0069] U nekim realizacijama, n je 0. U nekim realizacijama, n je 1.
[0070] U nekim realizacijama, p je 0. U nekim realizacijama, p je 1.
[0071] U nekim realizacijama, q je 0. U nekim realizacijama, q je 1.
[0072] U nekim realizacijama, r je 0.
[0073] U nekim realizacijama, a je 0.
[0074] U nekim realizacijama, ovde je obezbeđeno jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koja ima formulu IIa:
[0075] U nekim realizacijama, ovde je obezbeđeno jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koja ima formulu IIb:
[0076] U nekim realizacijama, ovde je obezbeđeno jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koja ima formulu Iic:
pri čemu su Z<1>i Z<2>svaki nezavisno izabrani između N i CH, i gde je R CN, Cl ili CF3.
[0077] U nekim realizacijama, ovde je obezbeđeno jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koja ima formulu IId:
pri čemu su Z<1>i Z<2>svaki nezavisno izabrani između N i CH, i gde je R CN, Cl ili CF3
[0078] U nekim realizacijama, X je CF3, CH3, CN, Cl ili Br.
[0079] U nekim realizacijama, Z je Cy<z>, C1-6alkil ili C(O)<Rb>, pri čemu je navedeni C1-6alkil opciono supstituisan sa halo. U nekim realizacijama, Z je CF3.
[0080] U nekim realizacijama, Cy se bira između 5-10-eročlanog heteroarila i C6-10arila, opciono supstituisanog sa C1-6alkilom, CN ili CF3, pri čemu je navedeni C1-6alkil opciono supstituisan sa CN.
[0081] U nekim realizacijama, Cy<z>je piridinil, pirimidinil ili pirazinil, opciono supstituisan sa C1-6alkilom, CN, Cl, S(O)2R<b1>ili CF3.
[0082] U nekim realizacijama, Cy<z>piridinil, pirimidinil ili pirazinil, opciono supstituisan sa metilom, CN, Cl, CF3ili S(O)2CH3.
[0083] U nekim realizacijama, Cy<z>je fenil, opciono supstituisan sa cianometilom ili CH. U nekim izvođenjima, R<b>je C1-6alkil. U nekim realizacijama, R<b>je metil.
[0084] U nekim realizacijama, R<Y>je H ili C1-4alkil. U nekim realizacijama, R<Y>je H. U nekim realizacijama, R<Y>je metil.
[0085] U nekim realizacijama, L je O ili NR<Y>.
[0086] U nekim realizacijama, R<b1>je C1-6alkil. U nekim realizacijama, R<b1>je metil. U nekim realizacijama, R<Y>je H.
[0087] U nekim realizacijama, a je 0. U nekim realizacijama, a je 1.
[0088] U nekim realizacijama, m je 0. U nekim realizacijama, m je 1.
[0089] U nekim realizacijama, n je 0. U nekim realizacijama, n je 1.
[0090] U nekim realizacijama, p je 0. U nekim realizacijama, p je 1.
[0091] U nekim realizacijama, u q je 0. U nekim realizacijama, q je 1.
[0092] U nekim realizacijama, r je 0. U nekim realizacijama, r je 1.
[0093] U nekim realizacijama, X je Cl, Br, CH3, CF3, CN, OCH3, etil, ciklopropil, SCH3ili izopropil.
[0094] U nekim realizacijama, R<a7>je H ili C1-6alkil. U nekim realizacijama, R<a7>je metil.
[0095] U nekim realizacijama, R<b7>je H ili C1-6alkil.
[0096] U nekim realizacijama, R<c7>je H ili C1-6alkil.
[0097] U nekim realizacijama, R<d7>je H ili C1-6alkil.
[0098] U nekim realizacijama, R<b7>je H ili metil.
[0099] U nekim realizacijama, R<c7>je H ili metil.
[0100] U nekim realizacijama, R<d7>je H ili metil.
[0101] U nekim realizacijama, Z je Cy<Z>, CN, C1-6alkil ili C(O)<Rb>, pri čemu je navedeni C1-6alkil opciono supstituisan sa halo. U nekim realizacijama, Z je CF3, CH3ili CN. U nekim realizacijama, Z je H.
[0102] U nekim realizacijama, R<b>je C1-6alkil, opciono supstituisan sa CN. U nekim realizacijama, R<b>je metil.
[0103] U nekim realizacijama, Cy<Z>se bira između 5-10-članog heteroarila i C6-10arila, svaki opciono supstituisan sa C1-6alkilom, halo, CN ili CF3, pri čemu je navedeni C1-6alkil opciono supstituisan sa CN. U nekim realizacijama, Cy<Z>je piridinil, pirimidinil ili pirazinil, svaki opciono supstituisan sa C1-6alkilom, CN, Cl, F, S(O)2R<b1>ili CF3. U nekim realizacijama, Cy<Z>je piridinil, pirimidinil, pirazinil, svaki opciono supstituisan sa metilom, CN, Cl, F, CF3ili S(O)2CH3. U nekim realizacijama, Cy<Z>je fenil, opciono supstituisan sa cijanometilom ili CN.
[0104] U nekim realizacijama, R<b1>je C1-6alkil. U nekim realizacijama, R<b1>je metil.
[0105] U nekim realizacijama, R<Y>je H ili C1-4alkil. U nekim realizacijama, R<Y>je H. U nekim realizacijama, R<Y>je metil.
[0106] U nekim realizacijama, a je 0.
[0107] U nekim realizacijama, m je 0. U nekim realizacijama, m je 1.
[0108] U nekim realizacijama, n je 0. U nekim realizacijama, n je 1.
[0109] U nekim realizacijama, p je 0. U nekim realizacijama, p je 1.
[0110] U nekim realizacijama, q je 0. U nekim realizacijama, q je 1.
[0111] U nekim realizacijama, r je 1.
Kristalin 5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi)propan-2-il]amino]- 4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0112] U nekim realizacijama, jedinjenje Formule I je 5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il ]propoksi)propan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on (videti Primer 561). Jedinjenje iz Primera 561, 5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi)propan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on, takođe se može nazvati:
(S)-5-((1-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propan-2-il)amino)-4-(trifluorometil) piridazin-3(2H)-on; ili
(S)-5-(1-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propan-2-ilamino)-4-(trifluorometil) piridazin-3(2H)-on.
[0113] U nekim realizacijama, 5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi)propan-2 -il]amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on je kristalan i ima karakteristike Forme A opisane u nastavku. Sinteza i karakterizacija 5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi)propan-2 -il]amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on, uključujuć i Formu A, opisan je na primer u Primeru 561.
[0114] U nekim realizacijama, Forma A ima karakteristične XRPD pikove izabrane između oko 5,8, oko 10,8, oko 11,9 i oko 17,2 stepena 2-teta. U nekim realizacijama, Forma A ima najmanje jedan karakterističan XRPD pik izabran između oko 5,8, oko 10,8, oko 11,9 i oko 17,2 stepena 2-teta. U nekim realizacijama, Forma A ima najmanje dva karakteristična XRPD pika izabrana između oko 5,8, oko 10,8, oko 11,9 i oko 17,2 stepena 2-teta. U nekim realizacijama, Forma A ima karakterističan XRPD pik na oko 5,8 stepeni 2-teta. U nekim realizacijama, Forma A ima karakterističan XRPD pik na oko 10,8 stepeni 2-teta. U nekim realizacijama, Forma A ima karakterističan XRPD pik na oko 11,9 stepeni 2-teta. U nekim realizacijama, Forma A ima karakterističan XRPD pik na oko 17,2 stepena 2-teta.
[0115] U nekim realizacijama, Forma A ima najmanje jedan karakterističan XRPD pik izabran između oko 5,8, oko 10,8, oko 11,9, oko 13,3, oko 13,5, oko 15,5 i oko 17,2 stepena 2-teta. U nekim realizacijama, Forma A ima najmanje jedan karakterističan XRPD pik izabran između oko 5,8, oko 10,8, oko 11,2, oko 11,9, oko 12,3, oko 13,3, oko 13,5, oko 15,5, oko 17,2, oko 17,0, oko 18, oko 19,5, oko 21,0 i oko 21,6 stepeni 2-teta.
[0116] U nekim realizacijama, Forma A ima najmanje dva karakteristična XRPD pika izabrana između oko 5,8, oko 10,8, oko 11,9, oko 13,3, oko 13,5, oko 15,5 i oko 17,2 stepena 2-teta. U nekim realizacijama, Forma A ima najmanje dva karakteristična XRPD pika izabrana između oko 5,8, oko 10,8, oko 11,2, oko 11,9, oko 12,3, oko 13,3, oko 13,5, oko 15,5, oko 17,2, oko 17,0, oko 18, oko 19,5, oko 21,0 i oko 21,6 stepeni 2-teta.
[0117] U nekim realizacijama, Forma A ima najmanje tri karakteristična XRPD pika izabrana između oko 5,8, oko 10,8, oko 11,9, oko 13,3, oko 13,5, oko 15,5 i oko 17,2 stepena 2-teta. U nekim realizacijama, Forma A ima najmanje tri karakteristična XRPD pika izabrana između oko 5,8, oko 10,8, oko 11,2, oko 11,9, oko 12,3, oko 13,3, oko 13,5, oko 15,5, oko 17,2, oko 17,0, oko 18. , oko 19,5, oko 21,0 i oko 21,6 stepeni 2-teta.
[0118] U nekim realizacijama, Forma A ima najmanje četiri karakteristična XRPD pika izabrana između oko 5,8, oko 10,8, oko 11,9, oko 13,3, oko 13,5, oko 15,5 i oko 17,2 stepena 2-teta. U nekim realizacijama, Forma A ima najmanje četiri karakteristična XRPD pika odabrana između oko 5,8, oko 10,8, oko 11,2, oko 11,9, oko 12,3, oko 13,3, oko 13,5, oko 15,5, oko 17,2, oko 17,0, oko 18. , oko 19,5, oko 21,0 i oko 21,6 stepeni 2-teta.
[0119] U nekim realizacijama, Forma A ima XRPD obrazac sa karakterističnim pikovima kao što je u suštini prikazano na Slici 8. U nekim realizacijama, Forma A ima endotermni pik na temperaturi od oko 174 °C. U nekim realizacijama, Forma A pokazuje gubitak težine od oko 0,5% kada se zagreje na oko 150 °C. U nekim realizacijama, Forma A ima DSC termogram u suštini kao što je prikazano na Slici 9. U nekim realizacijama, Forma A ima TGA termogram u suštini kao što je prikazano na Slici 9. U nekim realizacijama, Forma A ima DVS izotermu u suštini kao što je prikazano na Slici 10.
[0121] U nekim realizacijama, Forma A ima najmanje jedan karakterističan XRPD pik izabran između oko 5,8, oko 10,8, oko 11,9 i oko 17,2 stepena 2-teta; i ima endotermni pik na temperaturi od oko 174 °C. U nekim realizacijama, Forma A ima najmanje jedan karakterističan XRPD pik izabran između oko 5,8, oko 10,8, oko 11,9 ioko 17,2 stepena 2-teta; i DSC termogram u suštini kao što je prikazano na Slici 9. U nekim realizacijama, Forma A ima najmanje jedan karakterističan XRPD pik izabran između oko 5,8, oko 10,8, oko 11,9 i oko 17,2 stepena 2-teta; i DVS izotermu u suštini kao što je prikazano na slici 10.
[0122] U nekim realizacijama, Forma A se može izolovati sa kristalnom čistoć om od najmanje oko 80%, oko 85%, oko 90%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99%. U nekim realizacijama, Forma A se može izolovati sa kristalnom čistoć om ve ć om od oko 99%. U nekim realizacijama, Forma A se može izolovati sa kristalnom čisto ć om ve ć om od oko 99,9%. U nekim realizacijama, Forma A je u suštini bez drugih kristalnih oblika. U nekim realizacijama, Forma A je suštinski bez amorfnog oblika.
[0123] U nekim realizacijama obezbeđen je Forma A pripremljena taloženjem 5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin- 1-il]propoksi)propan-2-il] amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona iz rastvora koji sadrži jedinjenje i S1, pri čemu je S1 rastvarač. U nekim realizacijama, S1 je organski rastvarač. U nekim realizacijama, S1 je izabran između jednog od sledeć ih rastvarača: etil alkohol, metil izobutil keton, izopropil acetat, metil t-butil etar, 2-metiltetrahidrofuran, 1,4-dioksan, toluen, aceton, dihlorometan i voda. U nekim realizacijama, S1 je mešavina organskih rastvarača. U nekim realizacijama, S1 je mešavina acetonitrila i heptana. U nekim realizacijama, S1 je mešavina izopropil alkohola i etil acetata. U nekim realizacijama, S1 je mešavina hloroforma i etil acetata. U nekim realizacijama, S1 je mešavina 1,4-dioksana i metanola. U nekim realizacijama, S1 je mešavina NMP i toluena. U nekim realizacijama, S1 je mešavina petrolej etra i heksana. U nekim realizacijama, taloženje se vrši koncentracijom rastvora, isparavanjem rastvarača, smanjenjem temperature rastvora, dodavanjem antirastvarača ili njihovom kombinacijom.
[0124] Dalje je cenjeno da određene karakteristike pronalaska, koje su, radi jasnoć e, opisane u kontekstu odvojenih realizacija, takođe mogu biti obezbeđene u kombinaciji u jednoj varijanti. Nasuprot tome, različite karakteristike pronalaska koje su, radi kratkoć e, opisane u kontekstu jedne realizacije, takođe mogu biti obezbeđene odvojeno ili u bilo kojoj pogodnoj podkombinaciji.
[0125] Na različitim mestima u ovoj specifikaciji, supstituenti jedinjenja pronalaska su prikazani u grupama ili u opsegu. Posebno je predviđeno da pronalazak uključuje svaku pojedinačnu podkombinaciju članova takvih grupa i opsega. Na primer, izraz "C1-6alkil" je posebno namenjen da pojedinačno otkrije metil, etil, C3alkil, C4alkil, C5alkil i C6alkil.
[0126] Na različitim mestima u ovoj specifikaciji opisani su različiti arilni, heteroarilni, cikloalkilni i heterocikloalkilni prstenovi. Osim ako nije drugačije naznačeno, ovi prstenovi mogu biti pričvršć eni za ostatak molekula na bilo kom članu prstena kako to dozvoljava valencija. Na primer, izraz "piridinilni", "piridilni" ili "piridinski prsten" može se odnositi na piridin-2-il, piridin-3-il ili piridin-4-il prsten.
[0127] Termin "n-član", gde je "n" ceo broj, obično opisuje broj atoma koji formiraju prsten u ostatku gde je broj atoma koji formiraju prsten "n". Na primer, piperidinil je primer 6-članog heterocikloalkilnog prstena, pirazolil je primer 5-članog heteroarilnog prstena, piridil je primer 6-članog heteroarilnog prstena, a 1,2,3,4- tetrahidro-naftalen je primer 10-člane cikloalkil grupe.
[0128] Za jedinjenja pronalaska u kojima se promenljiva pojavljuje više puta, svaka varijabla može biti različita grupa nezavisno izabrana iz grupe koja definiše promenljivu. Na primer, gde je opisana struktura koja ima dve R grupe koje su istovremeno prisutne na istom jedinjenju, dve R grupe mogu predstavljati različite ostatke nezavisno izabrane iz grupe definisane za R.
[0129] Kako se ovde koristi, izraz "opciono supstituisan" znači nesupstituisan ili supstituisan.
[0130] Kako se ovde koristi, izraz "supstituisan" znači da je atom vodonika zamenjen grupom koja nije vodonik. To je da se razume da je supstitucija na datom atomu ograničena valentnošć u.
[0131] Kako se ovde koristi, izraz "Ci-j", gde su i i j celi brojevi, korišć eni u kombinaciji sa hemijskom grupom, označava opseg broja atoma ugljenika u hemijskoj grupi sa i-j koji definiše opseg. Na primer, C1-6alkil se odnosi na alkil grupu koja ima 1, 2, 3, 4, 5 ili 6 atoma ugljenika.
[0132] Kako se ovde koristi, termin "alkil", koji se koristi sam ili u kombinaciji sa drugim terminima, odnosi se na zasić enu ugljovodoničnu grupu koja može biti linearna ili razgranata. U nekim realizacijama, alkil grupa sadrži 1 do 7, 1 do 6, 1 do 4 ili 1 do 3 atoma ugljenika. Primeri alkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, hemijske grupe kao što su metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil, sek-butil, terc-butil, n-pentil, 2-metil-1- butil, 3-pentil, n-heksil, 1,2,2-trimetilpropil, n-heptil i slično. U nekim realizacijama, alkil grupa je metil, etil ili propil.
[0133] Kako se ovde koristi, "alkenil", koji se koristi sam ili u kombinaciji sa drugim terminima, odnosi se na alkil grupu koja ima jednu ili više dvostrukih veza ugljenik-ugljenik. U nekim realizacijama, alkenil deo sadrži 2 do 6 ili 2 do 4 atoma ugljenika. Primeri alkenil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, etenil, n-propenil, izopropenil, nbutenil, sek-butenil i slično.
[0134] Kako se ovde koristi, "alkinil", koji se koristi sam ili u kombinaciji sa drugim terminima, odnosi se na alkil grupu koja ima jednu ili više trostrukih veza ugljenik-ugljenik. Primeri alkinil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, etinil, propin-1-il, propin-2-il i slično. U nekim realizacijama, alkinil deo sadrži 2 do 6 ili 2 do 4 atoma ugljenika.
[0135] Kako se ovde koristi, "halo" ili "halogen", korišć eni sami ili u kombinaciji sa drugim terminima, uključuju fluoro, hloro, bromo i jodo. U nekim realizacijama, halo je F ili Cl.
[0136] Kako se ovde koristi, termin "haloalkil", koji se koristi sam ili u kombinaciji sa drugim terminima, odnosi se na alkil grupu koja ima dopune valencije supstituenata atoma halogena, koji mogu biti ili isti ili različiti. U nekim realizacijama, atomi halogena su atomi fluora. U nekim realizacijama, alkil grupa ima 1 do 6 ili 1 do 4 atoma ugljenika.
Primeri haloalkil grupa uključuju CF3, C2F5, CHF2, CCl3, CHCl2, C2Cl5i slično.
[0137] Kako se ovde koristi, termin "alkoksi", koji se koristi sam ili u kombinaciji sa drugim terminima, odnosi se na grupu formule -O-alkil. Primeri alkoksi grupa uključuju metoksi, etoksi, propoksi (npr. n-propoksi i izopropoksi), tbutoksi i slično. U nekim realizacijama, alkil grupa ima 1 do 6 ili 1 do 4 atoma ugljenika.
[0138] Kako se ovde koristi, "haloalkoksi", koji se koristi sam ili u kombinaciji sa drugim terminima, odnosi se na grupu formule -O-(haloalkil). U nekim realizacijama, alkil grupa ima 1 do 6 ili 1 do 4 atoma ugljenika. Primer haloalkoksi grupe je -OCF3.
[0139] Kako se ovde koristi, "amino", koji se koristi sam ili u kombinaciji sa drugim terminima, odnosi se na NH2.
[0140] Kako se ovde koristi, termin "alkilamino", koji se koristi sam ili u kombinaciji sa drugim terminima, odnosi se na grupu formule -NH(alkil). U nekim realizacijama, alkilamino grupa ima 1 do 6 ili 1 do 4 atoma ugljenika. Primeri alkilamino grupa uključuju metilamino, etilamino, propilamino (npr. n-propilamino i izopropilamino) i slično.
[0141] Kako se ovde koristi, termin "dialkilamino", koji se koristi sam ili u kombinaciji sa drugim terminima, odnosi se na grupu formule -N(alkil)2. Primeri dialkilamino grupa uključuju dimetilamino, dietilamino, dipropilamino (npr. di(npropil)amino i di(izopropil)amino) i slično. U nekim realizacijama, svaka alkil grupa nezavisno ima 1 do 6 ili 1 do 4 atoma ugljenika.
[0142] Kako se ovde koristi, termin "cikloalkil", koji se koristi sam ili u kombinaciji sa drugim terminima, odnosi se na nearomatični ciklični ugljovodonik uključujuć i ciklizovane alkil i alkenil grupe. Cikloalkil grupe mogu uključiti monoili policiklične (npr., koji imaju 2, 3 ili 4 spojena, premošć ena ili spiro prstena) prstenaste sisteme. U definiciju cikloalkila su takođe uključeni delovi koji imaju jedan ili više aromatičnih prstenova (npr. aril ili heteroaril prstenove) fuzionisanih (tj. imaju zajedničku vezu sa) na cikloalkil prsten, na primer, benzo derivati ciklopentana, cikloheksena cikloheksan i slično, ili pirido derivati ciklopentana ili cikloheksana. Atomi ugljenika cikloalkilne grupe koji formiraju prsten mogu biti opciono supstituisani sa okso. Cikloalkilne grupe takođe uključuju cikloalkilidene. Termin "cikloalkil" takođe uključuje cikloalkilne grupe veze (npr. nearomatične ciklične ugljovodonične delove koji sadrže najmanje jedan ugljenik veze, kao što je admantan-1-il) i spirocikloalkilne grupe (npr. nearomatične ugljovodonične grupe koje sadrže najmanje dva ugljovodonična dela fuzionisana na jednom atomu ugljenika, kao što je spiro[2.5]oktan i slično). U nekim realizacijama, cikloalkilna grupa ima 3 do 10 članova prstena, ili 3 do 7 članova prstena. U nekim realizacijama, cikloalkilna grupa je monociklična ili biciklična. U nekim realizacijama, cikloalkilna grupa je monociklična. U nekim realizacijama, cikloalkilna grupa je C3-7monociklična cikloalkilna grupa. Primeri cikloalkilnih grupa uključuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ciklopentenil, cikloheksenil, cikloheksadienil, cikloheptatrienil, norbomil, norpinil, norkamil, tetrahidronaftalenil, tetrahidronaftalenil, i u nekim realizacijama, cikloalkilna grupa je ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil ili cikloheksil.
[0143] Kako se ovde koristi, termin "cikloalkilalkil", koji se koristi sam ili u kombinaciji sa drugim terminima, odnosi se na grupu formule cikloalkil-alkil. U nekim realizacijama, alkilni deo ima 1 do 4, 1 do 3, 1 do 2 ili 1 atom(a) ugljenika. U nekim realizacijama, alkilni deo je metilen. U nekim realizacijama, cikloalkilni deo ima 3 do 10 članova prstena ili 3 do 7 članova prstena. U nekim realizacijama, cikloalkilna grupa je monociklična ili biciklična. U nekim realizacijama, cikloalkilni deo je monocikličan. U nekim realizacijama, cikloalkil deo je C3-7monociklična cikloalkilna grupa.
[0144] Kako se ovde koristi, termin "heterocikloalkil", koji se koristi sam ili u kombinaciji sa drugim terminima, odnosi se na nearomatski prsten ili sistem prstena, koji opciono može da sadrži jednu ili više alkenilen ili alkinilen grupa kao deo strukture prstena, koji ima najmanje jedan heteroatomski član prstena nezavisno izabran između azota, sumpora, kiseonika i fosfora. Heterocikloalkilne grupe mogu uključivati mono- ili policiklične (npr., sa 2, 3 ili 4 kondenzovana, premošć ena ili spiro prstena) prstenaste sisteme. U nekim realizacijama, heterocikloalkilna grupa je monociklična ili biciklična grupa koja ima 1, 2, 3 ili 4 heteroatoma nezavisno izabrana između azota, sumpora i kiseonika. U definiciju heterocikloalkila su takođe uključeni ostaci koji imaju jedan ili više aromatičnih prstenova (npr. aril ili heteroaril prstenove) fuzionisanih (tj. imaju zajedničku vezu sa) za nearomatični heterocikloalkil prsten, na primer, 1, 2,3,4-tetrahidro-hinolin i slično. Hetero-cikloalkilne grupe mogu takođe uključiti heterocikloalkil grupe veze (npr. heterocikloalkilni deo koji sadrži najmanje jedan atom veze, kao što je azaadmantan-1-il i slično) i spiroheterociklo alkilne grupe (npr. heterocikloalkilni deo koji sadrži najmanje dva prstena spojena na jednom atomu, kao što je [1,4-dioksa-8-aza-spiro[4.5]dekan-N-il] i slično). U nekim realizacijama, heterocikloalkilna grupa ima 3 do 10 atoma koja formiraju prsten, 4 do 10 atoma koji formiraju prsten, ili oko 3 do 8 atoma koji formiraju prsten. U nekim realizacijama, heterocikloalkilna grupa ima 2 do 20 atoma ugljenika, 2 do 15 atoma ugljenika, 2 do 10 atoma ugljenika ili oko 2 do 8 atoma ugljenika. U nekim realizacijama, heterocikloalkilna grupa ima 1 do 5 heteroatoma, 1 do 4 heteroatoma, 1 do 3 heteroatoma ili 1 do 2 heteroatoma. Atomi ugljenika ili heteroatomi u prstenu(ima) heterocikloalkilne grupe mogu se oksidovati da bi se formirala karbonilna, N-oksidna ili sulfonil grupa (ili druga oksidovana veza) ili atom azota može biti kvaternizovan. U nekim realizacijama, heterocikloalkilni deo je C2-7monociklična heterocikloalkil grupa. U nekim realizacijama, heterocikloalkilna grupa je morfolinski prsten, pirolidinski prsten, piperazinski prsten, piperidinski prsten, tetrahidropiranski prsten, tetrahiropiridin, azetidinski prsten ili tetrahidrofuranski prsten.
[0145] Kako se ovde koristi, termin "heterocikloalkilalkil", koji se koristi sam ili u kombinaciji sa drugim terminima, odnosi se na grupu formule heterocikloalkil-alkil-. U nekim realizacijama, alkil deo ima 1 do 4, 1 do 3, 1 do 2 ili 1 atom(e) ugljenika. U nekim realizacijama, alkil deo je metilen. U nekim realizacijama, heterocikloalkilni deo ima 3 do 10 članova prstena, 4 do 10 članova prstena ili 3 do 7 članova prstena. U nekim realizacijama, heterocikloalkil grupa je monociklična ili biciklična. U nekim realizacijama, heterocikloalkilni deo je monocikličan. U nekim realizacijama, heterocikloalkilni deo je C2-7monociklična heterocikloalkilna grupa.
[0146] Kako se ovde koristi, termin "aril", koji se koristi sam ili u kombinaciji sa drugim terminima, odnosi se na monociklični ili policiklični (npr. kondenzovani prstenasti sistem) aromatični ugljovodonični deo, kao što je, ali ne ograničavajuć i se na, fenil, 1-naftil, 2-naftil i slično. U nekim realizacijama, arilne grupe imaju od 6 do 10 atoma ugljenika ili 6 atoma ugljenika. U nekim realizacijama, arilna grupa je monociklična ili biciklična grupa. U nekim realizacijama, arilna grupa je fenil ili naftil.
[0147] Kako se ovde koristi, termin "arilalkil", koji se koristi sam ili u kombinaciji sa drugim terminima, odnosi se na grupu formule aril-alkil-. U nekim realizacijama, alkilni deo ima 1 do 4, 1 do 3, 1 do 2 ili 1 atom(e) ugljenika. U nekim realizacijama, alkilni deo je metilen. U nekim realizacijama, arilni deo je fenil. U nekim realizacijama, arilna grupa je monociklična ili biciklična grupa. U nekim realizacijama, arilalkilna grupa je benzil.
[0148] Kako se ovde koristi, termin "heteroaril", koji se koristi sam ili u kombinaciji sa drugim terminima, odnosi se na monociklični ili policiklični (npr., kondenzovani prstenasti sistem) aromatični ugljovodonični deo, koji ima jedan ili više heteroatomskih članova prstena nezavisno izabranih od azota, sumpora i kiseonika. U nekim realizacijama, heteroarilna grupa je monociklična ili biciklična grupa koja ima 1, 2, 3 ili 4 heteroatoma nezavisno izabrana između azota, sumpora i kiseonika. Primeri heteroarilnih grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, piridil, pirimidinil, pirazinil, piridazinil, triazinil, furil, tienil, imidazolil, tiazolil, indolil, piril, oksazolil, benzofuril, benzotienil, triazilrazoil, triazilrazazol, benzotirazazol indazolil, 1,2,4-tiadiazolil, izotiazolil, purinil, karbazolil, benzimidazolil, indolinil, pirolil, azolil, hinolinil, izohinolinil, benzizoksazolil, imidazo[1,2-b]tiazolil ili slično. Atomi ugljenika ili heteroatomi u prstenu(ima) heteroarilne grupe mogu biti oksidovani da bi se formirala karbonilna, N-oksidna ili sulfonil grupa (ili druga oksidovana veza) ili atom azota može biti kvaternizovan, pod uslovom da je aromatična priroda prstena sačuvana. U nekim realizacijama, heteroarilna grupa ima od 3 do 10 atoma ugljenika, od 3 do 8 atoma ugljenika, od 3 do 5 atoma ugljenika, od 1 do 5 atoma ugljenika ili od 5 do 10 atoma ugljenika. U nekim realizacijama, heteroarilna grupa sadrži 3 do 14, 4 do 12, 4 do 8, 9 do 10 ili 5 do 6 atoma koji formiraju prsten. U nekim realizacijama, heteroarilna grupa ima 1 do 4, 1 do 3 ili 1 do 2 heteroatoma.
[0149] Kako se ovde koristi, termin "heteroarilalkil", koji se koristi sam ili u kombinaciji sa drugim terminima, odnosi se na grupu formule heteroaril-alkil-. U nekim realizacijama, alkilni deo ima 1 do 4, 1 do 3, 1 do 2 ili 1 atom(e) ugljenika. U nekim realizacijama, alkilni deo je metilen. U nekim realizacijama, heteroarilni deo je monociklična ili biciklična grupa koja ima 1, 2, 3 ili 4 heteroatoma nezavisno izabrana između azota, sumpora i kiseonika. U nekim realizacijama, heteroarilni deo ima 5 do 10 atoma ugljenika.
[0150] Jedinjenja koja su ovde opisana mogu biti asimetrična (npr., imati jedan ili više stereocentara). Svi stereoizomeri, kao što su enantiomeri i dijastereomeri, su namenjeni osim ako nije drugačije naznačeno. Jedinjenja iz ovog pronalaska koja sadrže asimetrično supstituisane atome ugljenika mogu se izolovati u optički aktivnim ili racemskim oblicima. Postupci o tome kako da se pripreme optički aktivni oblici od optički neaktivnih početnih materijala su poznati u tehnici, kao što je razdvajanje racemskih smeša ili stereoselektivna sinteza. Geometrijski izomeri olefina, C=N dvostruke veze i slično mogu takođe biti prisutni u ovde opisanim jedinjenjima, a svi takvi stabilni izomeri su razmatrani u ovom pronalasku. Cis i trans geometrijski izomeri jedinjenja iz ovog pronalaska mogu biti izolovani kao smeša izomera ili kao odvojeni izomerni oblici.
[0151] Jedinjenja pronalaska takođe uključuju tautomerne oblike. Tautomerni oblici su rezultat zamene jednostruke veze sa susednom dvostrukom vezom zajedno sa istovremenom migracijom protona. Tautomerni oblici uključuju prototropne tautomere koji su izomerna protonaciona stanja koja imaju istu empirijsku formulu i ukupni naboj. Primeri prototropnih tautomera uključuju parove keton - enol, parove amidna - imidna kiselina, parove laktam -laktim, parove enamin - imin i prstenaste forme gde proton može da zauzme dve ili više pozicija u heterocikličnom sistemu, na primer, 1H- i 3H- imidazol, 1H-, 2H- i 4H-1,2,4-triazol, 1H- i 2H- izoindol i 1H- i 2H-pirazol. Tautomerni oblici mogu biti u ravnoteži ili sterički zaključani u jedan oblik odgovarajuć om supstitucijom. Primer tautomernih oblika, piridazin-3(2H)-on i piridazin-3-ol, prikazan je u nastavku:
[0152] Jedinjenja pronalaska takođe uključuju sve izotope atoma koji se javljaju u intermedijerima ili konačnim jedinjenjima. Izotopi uključuju one atome koji imaju isti atomski broj, ali različite masene brojeve. Na primer, izotopi vodonika uključuju tricijum i deuterijum. U nekim realizacijama, jedinjenja pronalaska uključuju najmanje jedan atom deuterijuma.
[0153] Termin, "jedinjenje", kako se ovde koristi, podrazumeva sve stereoizomere, geometrijske izomere, tautomere i izotope prikazanih struktura, osim ako nije drugačije naznačeno.
[0154] Sva jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, mogu se nać i zajedno sa drugim supstancama kao što su voda i rastvarači (npr. u obliku hidrata i solvata) ili se mogu izolovati.
[0155] U nekim realizacijama, jedinjenja pronalaska, ili njihove soli, su u suštini izolovana. Pod "suštinski izolovano" se podrazumeva da je jedinjenje u najmanjem delimično ili suštinski odvojeno od sredine u kojoj je formirano ili detektovano. Delimično odvajanje može uključiti, na primer, kompoziciju obogać enu jedinjenjima pronalaska. Značajno odvajanje može uključivati kompozicije koje sadrže najmanje oko 50 %, najmanje oko 60 %, najmanje oko 70 %, najmanje oko 80 %, najmanje oko 90 %, najmanje oko 95 %, najmanje oko 97 %, ili na najmanje oko 99 % težine jedinjenja pronalaska, ili njihove soli. Postupci za izolovanje jedinjenja i njihovih soli su rutinski u struci.
[0156] Kako se ovde koristi, termin "kristalni" ili "kristalni oblik" se odnosi na kristalni čvrsti oblik hemijskog jedinjenja, uključujuć i, ali ne ograničavaju ć i se na, jednokomponentni ili višekomponentni kristalni oblik, npr. uključujuć i solvate, hidrate, klatrate i kokristale. Kako se ovde koristi, "kristalni oblik" znači da se odnosi na određenu konfiguraciju rešetke kristalne supstance. Različiti kristalni oblici iste supstance obično imaju različite kristalne rešetke (npr. jedinične ć elije) kojima se pripisuju različita fizička svojstva koja su karakteristična za svaki od kristalnih oblika. U nekim slučajevima, različite konfiguracije rešetke imaju različit sadržaj vode ili rastvarača. Različite kristalne rešetke mogu se identifikovati metodama karakterizacije čvrstog stanja kao što je difrakcija rendgenskih zraka na prahu (XRPD). Druge metode karakterizacije, kao što su diferencijalna skenirajuć a kalorimetrija (DSC), termogravimetrijska analiza (TGA), dinamička sorpcija pare (DVS), NMR u čvrstom stanju i slično, dodatno pomažu u identifikaciji kristalnog oblika, kao i u određivanju stabilnosti i sadržaja rastvarača/vode.
[0157] Kristalni oblici supstance uključuju i rastvorene (npr. hidratizovane) i nesolvatne (npr. anhidrovane) oblike. Hidrirani oblik je kristalni oblik koji uključuje vodu u kristalnoj rešetki. Hidrirani oblici mogu biti stehiometrijski hidrati, gde je voda prisutna u rešetki u određenom odnosu voda/molekul, kao što su hemihidrati, monohidrati, dihidrati, itd. Hidrirani oblici mogu biti i nestehiometrijski, gde je sadržaj vode promenljiv i zavisan od spoljašnjih uslova kao što je vlažnost.
[0158] Kako se ovde koristi, izraz "suštinski kristalan" znači da je već ina težine uzorka ili preparata soli (ili hidrata ili solvata) pronalaska kristalna, a ostatak uzorka je nekristalni oblik (npr. amorfni oblik) istog jedinjenja. U nekim realizacijama, suštinski kristalni uzorak ima najmanje oko 95 % kristalnosti (npr., oko 5 % nekristalnog oblika istog jedinjenja), poželjno najmanje oko 96 % kristalnosti (npr., oko 4 % nekristalnog oblika istog jedinjenja), poželjnije najmanje oko 97 % kristalnosti (npr. oko 3 % nekristalnog oblika istog jedinjenja), još poželjnije najmanje oko 98 % kristalnosti (npr., oko 2% od nekristalnog oblika istog jedinjenja), još poželjnije najmanje oko 99% kristalnosti (npr. oko 1 % nekristalnog oblika istog jedinjenja), a najpoželjnije oko 100 % kristalnosti (npr. oko 0 % nekristalnog oblika istog jedinjenja). U nekim realizacijama, izraz "potpuno kristalan" označava najmanje oko 99 % ili oko 100 % kristalnosti.
[0159] Kristalne forme najčešć e karakteriše XRPD. XRPD obrazac refleksija (vrhova) se obično smatra otiskom prsta određenog kristalnog oblika. Dobro je poznato da relativni intenziteti XRPD pikova mogu uveliko varirati u zavisnosti od, između ostalog, tehnike pripreme uzorka, distribucije veličine kristala, filtera, procedure postavljanja uzorka i određenog instrumenta koji se koristi. U nekim slučajevima, novi pikovi se mogu primetiti ili postojeć i pikovi mogu nestati, u zavisnosti od tipa instrumenta ili podešavanja (na primer, da li se koristi Ni filter ili ne). Kako se ovde koristi, izraz "vrh" se odnosi na refleksiju koja ima relativnu visinu/intenzitet od najmanje oko 4 % maksimalne visine/intenziteta vrha. Štaviše, varijacije instrumenta i drugi faktori mogu uticati na 2-theta vrednosti. Prema tome, dodela pikova, kao što je ona ovde navedena, mogu da variraju za plus ili minus oko 0,2° (2-teta), a izraz "značajno" kako se koristi u kontekstu XRPD ovde treba da obuhvati napred navedene varijacije.
[0160] Na isti način, očitavanja temperature u vezi sa DSC, TGA ili drugim termalnim eksperimentima mogu varirati oko 63 °C u zavisnosti od instrumenta, posebnih podešavanja, pripreme uzorka, itd. Na primer, sa DSC je poznato da posmatrane temperature ć e zavisiti od brzine promene temperature kao i od tehnike pripreme uzorka i određenog instrumenta koji se koristi. Prema tome, ovde navedene vrednosti u vezi sa DSC termogramima mogu da variraju, kao što je napred navedeno, za 63 °C. Shodno tome, kristalni oblik koji je ovde prikazan koji ima DSC termogram "u suštini" kao što je prikazano na bilo kojoj od slika, podrazumeva se da prihvata takve varijacije.
[0161] Kako se ovde koristi, i osim ako nije drugačije naznačeno, termin "oko", kada se koristi u vezi sa numeričkom vrednošć u ili opsegom vrednosti koji je obezbeđen da opiše određeni čvrsti oblik (npr. specifičnu temperaturu ili temperaturni opseg, kao što je kao opis topljenja, dehidracije ili staklene tranzicije; promena mase, kao što je promena mase u zavisnosti od temperature ili vlažnosti; sadržaja rastvarača ili vode, u smislu, na primer, mase ili procenta; ili položaja vrha , kao što je u analizi pomoć u, na primer, 13C NMR, DSC, TGA i XRPD), ukazuju na to da vrednost ili opseg vrednosti mogu da odstupaju u meri koja se smatra razumnom za prosečnog stručnjaka u ovoj oblasti, dok i dalje opisuje određeni čvrsti oblik .
[0162] Izraz "farmaceutski prihvatljiv" se ovde koristi da se odnosi na ta jedinjenja, materijale, kompozicije i/ili oblike doziranja koji su, u okviru zdrave medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i životinja bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora ili drugih problema ili komplikacija, srazmerno sa razumnim odnosom koristi i rizika.
[0163] Ovaj pronalazak takođe uključuje farmaceutski prihvatljive soli ovde opisanih jedinjenja. Kako se ovde koristi, "farmaceutski prihvatljive soli" se odnose na derivate otkrivenih jedinjenja pri čemu je matično jedinjenje modifikovano konvertovanjem postojeć e kiseline ili baze u njen oblik soli. Primeri farmaceutski prihvatljivih soli uključuju, ali nisu ograničeni na, soli mineralnih ili organskih kiselina baznih ostataka kao što su amini; alkalne ili organske soli kiselih ostataka kao što su karboksilne kiseline; i slično. Farmaceutski prihvatljive soli ovog pronalaska uključuju netoksične soli matičnog jedinjenja formirane, na primer, od netoksičnih neorganskih ili organskih kiselina. Farmaceutski prihvatljive soli ovog pronalaska mogu se sintetizovati iz matičnog jedinjenja koje sadrži bazni ili kiseli deo konvencionalnim hemijskim metodama. Generalno, takve soli se mogu dobiti reakcijom slobodnih kiselinskih ili baznih oblika ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuć e baze ili kiseline u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u smeši ova dva. Liste pogodnih soli nalaze se u Remington's Pharmaceutical Sciences, 17. izdanje, Mack Publishing Compani, Easton, Pa., 1985, str.1418 i Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977).
Sinteza
[0164] Jedinjenja pronalaska, uključujuć i njihove soli, mogu se dobiti koriš ć enjem poznatih tehnika organske sinteze i mogu se sintetizovati na bilo koji od brojnih moguć ih sintetičkih puteva.
[0165] Reakcije za dobijanje jedinjenja pronalaska mogu se izvesti u odgovarajuć im rastvaračima koje može lako da izabere neko od stručnjaka iz oblasti organske sinteze. Pogodni rastvarači mogu biti u suštini nereaktivni sa početnim materijalima (reaktantima), intermedijerima ili proizvodima na temperaturama na kojima se odvijaju reakcije, na primer, temperaturama koje mogu da variraju od temperature smrzavanja rastvarača do temperature ključanja rastvarača. Data reakcija se može izvesti u jednom rastvaraču ili mešavini više od jednog rastvarača. U zavisnosti od konkretnog reakcionog koraka, odgovarajuć e rastvarače za određeni reakcioni korak može da izabere verzirani stručnjak.
[0166] Priprema jedinjenja pronalaska može uključiti zaštitu i uklanjanje zaštite različitih hemijskih grupa. Potrebu za zaštitom i deprotekcijom, kao i izbor odgovarajuć ih zaštitnih grupa, može lako odrediti stručnjak u ovoj oblasti. Hemija zaštitnih grupa može se nać i, na primer, u T.W. Greene i P.G.M. Wuts, Zaštitne grupe u organskoj sintezi, 3. Ed., Wiley & Sons, Inc., New York (1999).
[0167] Reakcije se mogu pratiti prema bilo kom pogodnom metodu poznatom u tehnici. Na primer, formiranje proizvoda se može pratiti spektroskopskim sredstvima, kao što je spektroskopija nuklearne magnetne rezonance (npr.
1H ili 13C), infracrvena spektroskopija, spektrofotometrija (npr. UV-vidljiva) ili masena spektrometrija, ili hromatografijom kao što je visoka performansa, tečna hromatografija (HPLC) ili tankoslojna hromatografija.
[0168] Izrazi, "sobna temperatura", "sobna temperatura" i "RT", kako se ovde koriste, razumeju se u tehnici i odnose se generalno na temperaturu, npr. temperaturu reakcije, to jest oko temperature prostorije u kojoj se reakcija izvodi, na primer, temperatura od oko 20 °C do oko 30 °C.
[0169] Jedinjenja Formule I mogu se dobiti prema brojnim pripremnim putevima poznatim u literaturi. Primeri sintetičkih metoda za dobijanje jedinjenja pronalaska dati su u šemama ispod. Osim ako nije drugačije naznačeno, svi supstituenti su kao što je ovde definisano.
[0170] U procesu prikazanom na Šemi 1, odgovarajuć e supstituisano jedinjenje koje sadrži halogen (tj., Xa = Cl ili Br) formule (1-1) je zaštić eno kao 2-(trimetilsilil)etoksimetil etar ("SEM") jedinjenje formule (1-2) tretmanom sa 2-(trimetilsilil)etoksimetil hloridom ("SEM-Cl") u prisustvu natrijum hidrida (NaH).
[0171] Jedinjenje Formule (1-2) može da reaguje sa različitim nukleofilima da bi se dobila jedinjenja Formule (I) nakon uklanjanja zaštite SEM zaštitne grupe, kao što je prikazano na Šemama 2-4.
[0172] U procesu prikazanom na Šemi 2, jedinjenje Formule (1-2) (gde je Y<a>je O, NR<Y>ili S) reaguje sa jedinjenjem Formule (1-3) u prisustvu baze (npr. trietilamina ili Cs2CO3) da bi se dobilo jedinjenje formule (1-4). Uklanjanje zaštite kiselinom (npr. trifluorosirć etnom kiselinom ili hlorovodoničnom kiselinom) daje jedinjenje formule (IA).
[0173] U procesu prikazanom na Šemi 3, jedinjenje formule (1-2) reaguje sa jedinjenjem formule (1-5) u prisustvu baze (npr. trietilamina ili Cs2CO3) da bi se dobilo jedinjenje sa Formule (1-6). Uklanjanje zaštite kiselinom (npr. trifluorosirć etnom kiselinom ili hlorovodoničnom kiselinom) daje jedinjenje formule (IB).
[0174] U procesu prikazanom na Šemi 4, Jedinjenje formule (1-2) reaguje sa jedinjenjem formule (1-7) u prisustvu baze (npr. trietilamina ili Cs2CO3) da bi se dobilo jedinjenje sa Formulom (1-8). Uklanjanje zaštite kiselinom (npr. trifluorosirć etnom kiselinom ili hlorovodoničnom kiselinom) daje jedinjenje formule (IC).
Metode upotrebe
[0175] Jedinjenja pronalaska mogu inhibirati aktivnost PARP7. Na primer, jedinjenja pronalaska mogu da se koriste za inhibiciju aktivnosti PARP7 u ć eliji ili kod pojedinca ili pacijenta kome je potrebna inhibicija enzima davanjem inhibirajuć e količine jedinjenja pronalaska na ć eliju, pojedinca ili pacijenta.
[0176] Kao inhibitori PARP7, jedinjenja pronalaska su korisna u lečenju različitih bolesti povezanih sa abnormalnom ekspresijom ili aktivnošć u PARP7. Na primer, jedinjenja pronalaska su korisna u lečenju kancera. U nekim realizacijama, kanceri koji se mogu lečiti prema ovom pronalasku uključuju dojke, centralni nervni sistem, endometrijum, bubreg, debelo crevo, pluć a, jednjak, jajnik, pankreas, prostatu, stomak, glavu i vrat (gornji aerodigestivni trakt), urinarni trakt, debelo crevo i dr.
[0177] U nekim realizacijama, kanceri koji se mogu lečiti u skladu sa ovim pronalaskom uključuju hematološke maligne bolesti kao što su leukemija i limfom. Primeri limfoma uključuju Hodgkinov ili ne-Hočkinov limfom, multipli mijelom, B-ć elijski limfom (npr. difuzni veliki B- ć elijski limfom (DLBCL)), hronični limfocitni limfom (CLL), T- ć elijski limfom, dlakavi limfom ć elija Burlima. Primeri leukemije uključuju akutnu limfocitnu leukemiju (ALL), akutnu mijelogenu leukemiju (AML), hroničnu limfocitnu leukemiju (CLL) i hroničnu mijelogenu leukemiju (CML).
[0178] Drugi kanceri koji se leče primenom jedinjenja pronalaska uključuju rak jetre (npr., hepatocelularni karcinom), rak mokrać ne bešike, rak kostiju, gliom, rak dojke, kancer grli ć a materice, rak debelog creva, kancer endometrijuma, kancer epitela, rak jednjaka, Juingov sarkom, rak pankreasa, rak žučne kese, rak želuca, gastrointestinalne tumore, kancer glave i vrata (karcinom gornjeg aerodigestivnog), karcinom creva, Kaposijev sarkom, rak bubrega, rak larinksa, rak jetre (npr., rak pluć a, rak prostate, rak rektuma, rak kože, rak želuca, rak testisa, rak štitne žlezde i rak materice).
[0179] U nekim realizacijama, kancer koji se leči primenom jedinjenja pronalaska je multipli mijelom, DLBCL, hepatocelularni karcinom, kancer mokrać ne bešike, kancer jednjaka, kancer glave i vrata (karcinom gornjeg aeroprobavnog sistema), kancer bubrega, rak prostate, rak rektuma, rak želuca, rak štitne žlezde, rak materice i rak dojke.
[0180] PARP7 inhibitori pronalaska mogu takođe imati terapeutsku korist kod poremeć aja povezanih sa PARP7 u oblastima bolesti kao što su kardiologija, virologija, neurodegeneracija, zapaljenje i bol, posebno tamo gde se bolesti karakteriše prekomernom ekspresijom ili poveć anom aktivnoš ć u PARP7.
[0181] Kako se ovde koristi, termin "ć elija" se odnosi na ć eliju koja je in vitro, ex vivo ili in vivo. U nekim realizacijama, ex vivo ć elija može biti deo uzorka tkiva koji je izrezan iz organizma kao što je sisar. U nekim realizacijama, in vitro ć elija može biti ć elija u ć elijskoj kulturi. U nekim realizacijama, in vivo ć elija je ć elija koja živi u organizmu kao što je sisar.
[0182] Kako se ovde koristi, termin "dovođenje u kontakt" se odnosi na spajanje naznačenih grupa u in vitro sistemu ili in vivo sistemu. Na primer, "kontaktiranje" PARP7 ili "kontaktiranje" ć elije sa jedinjenjem pronalaska uključuje davanje jedinjenja ovog pronalaska pojedincu ili pacijentu, kao što je čovek, koji ima PARP7, kao i, na primer, uvođenje jedinjenja pronalaska u uzorak koji sadržić elijski ili prečiš ć eni preparat koji sadrži PARP7.
[0183] Kako se ovde koristi, termin "pojedinac" ili "pacijent", koji se koristi naizmenično, odnosi se na sisare, a posebno na ljude.
[0184] Kako se ovde koristi, fraza "terapeutski efikasna količina" odnosi se na količinu aktivnog jedinjenja ili farmaceutskog agensa koji izaziva biološki ili medicinski odgovor u tkivu, sistemu, životinji, pojedincu ili čoveku kojiu daje istraživač, veterinar, lekar ili drugi kliničar.
[0185] Kako se ovde koristi izraz "lečenje" ili "tretman" odnosi se na 1) inhibiranje bolesti kod pojedinca koji doživljava ili pokazuje patologiju ili simptomatologiju bolesti (tj. zaustavljanje daljeg razvoja patologije i/ili simptomatologije ), ili 2) ublažavanje bolesti kod pojedinca koji doživljava ili pokazuje patologiju ili simptomatologiju bolesti (tj. poništavanje patologije i/ili simptomatologije).
[0186] Kako se ovde koristi, termin "prevencija" ili "preventiva" odnosi se na prevenciju bolesti kod pojedinca koji može biti predisponiran za bolest, ali je još nema ili ne pokazuje patologiju ili simptomatologiju bolesti.
Kombinovana terapija
[0187] Jedan ili više dodatnih farmaceutskih agenasa ili metoda lečenja kao što su, na primer, hemoterapeutici ili drugi agensi protiv raka, pojačivači imuniteta, imunosupresivi, imunoterapije, zračenje, antitumorske i antivirusne vakcine, terapija citokinom (npr. IL2, GM-CSF, itd.), i/ili kinaza (tirozin ili serin/treonin), epigenetski inhibitori ili inhibitori signalne transdukcije mogu se koristiti u kombinaciji sa jedinjenjima iz ovog pronalaska. Agensi se mogu kombinovati sa prisutnim jedinjenjima u jednom doznom obliku, ili se agensi mogu davati istovremeno ili uzastopno kao odvojeni dozni oblici.
[0188] Pogodni agensi za upotrebu u kombinaciji sa jedinjenjima iz ovog pronalaska za lečenje kancera uključuju hemoterapeutske agense, ciljane terapije raka, imunoterapije ili terapiju zračenjem. Jedinjenja ovog pronalaska mogu biti efikasna u kombinaciji sa antihormonskim agensima za lečenje raka dojke i drugih tumora. Pogodni primeri su antiestrogenski agensi uključujuć i, ali ne ograničavaju ć i se na tamoksifen i toremifen, inhibitore aromataze uključujuć i, ali ne ograničavaju ć i se na letrozol, anastrozol i eksemestan, adrenokortikosteroide (npr. prednizon), progestine (npr. megastrol acetat) i antagoniste estrogenskih receptora (npr. fulvestrant). Pogodni antihormonski agensi koji se koriste za lečenje raka prostate i drugih karcinoma takođe se mogu kombinovati sa jedinjenjima iz ovog pronalaska. Ovo uključuje antiandrogene uključujuć i, ali ne ograničavaju ć i se na flutamid, bikalutamid i nilutamid, analoge hormona koji oslobađa luteinizirajuć i hormon (LHRH), uključuju ć i leuprolid, goserelin, triptorelin i histrelin, LHRH antagoniste (npr. degareliks receptore), blokatore androgenskih receptora (npr. enzalutamid) i agense koji inhibiraju proizvodnju androgena (npr. abirateron).
[0189] Inhibitori angiogeneze mogu biti efikasni kod nekih tumora u kombinaciji sa inhibitorima FGFR. Ovo uključuje antitela protiv VEGF ili VEGFR ili inhibitore kinaze VEGFR. Antitela ili drugi terapeutski proteini anti-VEGF uključuju bevacizumab i aflibercept. Inhibitori VEGFR kinaza i drugi inhibitori anti-angiogeneze uključuju, ali nisu ograničeni na sunitinib, sorafenib, aksitinib, cediranib, pazopanib, regorafenib, brivanib i vandetanib.
[0190] Pogodni hemoterapeutski ili drugi agensi protiv karcinoma uključuju, na primer, agense za alkilovanje (uključujuć i, bez ograničenja, azotne iperite, derivate etilenimina, alkil sulfonate, nitrozouree i triazene) kao što su uracil senf, hlorometin, ciklofosfamid (citoksan<TM>), ifosfamid, melfalan, hlorambucil, pipobroman, trietilen-melamin, trietilentiofosforamin, busulfan, karmustin, lomustin, streptozocin, dakarbazin i temozolomid.
[0191] Drugi agensi protiv karcinoma uključuju terapijske antitela na kontrolnoj tački ili kostimulatorne molekule kao što su CTLA-4, PD-1, PD-L1 ili 4-1BB, respektivno, ili antitela na citokine (IL-10, TGF- b itd.). Primeri antitela za imunoterapiju raka uključuju pembrolizumab, ipilimumab, nivolumab, atezolizumab i durvalumab. Dodatni agensi protiv karcinoma uključuju terapeutike antitela usmerene na površinske molekule hematoloških karcinoma kao što su ofatumumab, rituksimab i alemtuzumab.
[0192] Metode za bezbednu i efikasnu primenu već ine ovih hemoterapeutskih agenasa su poznate stručnjacima u ovoj oblasti. Pored toga, njihova primena je opisana u standardnoj literaturi. Na primer, primena mnogih hemoterapeutskih agenasa je opisana u „Pyisicians’ Desk Reference“ (PDR, npr., izdanje iz 1996., Medical Economics Company, Montvale, NJ).
Farmaceutske formulacije i dozni oblici
[0193] Kada se koriste kao farmaceutski proizvodi, jedinjenja pronalaska se mogu davati u obliku farmaceutskih kompozicija. Farmaceutska kompozicija se odnosi na kombinaciju jedinjenja pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač. Ove kompozicije se mogu pripremiti na način dobro poznat u farmaceutskoj struci, i mogu se davati na različite načine, u zavisnosti od toga da li je poželjan lokalni ili sistemski tretman i od područja koje treba tretirati. Primena može biti oralna, lokalna (uključujuć i oftalmološke i mukozne membrane uključujuć i intranazalno, vaginalno i rektalno davanje), plu ć na (npr. inhalacijom ili insuflacijom praha ili aerosola, uključujuć i nebulizatorom; intratrahealno, intranazalno, epidermalno i transdermalno), okularno ili parenteralno.
[0194] Ovaj pronalazak takođe uključuje farmaceutske kompozicije koje sadrže, kao aktivni sastojak, jedno ili više jedinjenja iz pronalaska u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača. U pravljenju kompozicija pronalaska, aktivni sastojak se tipično meša sa ekscipijensom, razblažuje ekscipijensom ili se zatvara u takav nosač u obliku, na primer, kapsule, kesice, papira ili druge posude. Kada ekscipijens služi kao razblaživač, to može biti čvrsti, polučvrsti ili tečni materijal, koji deluje kao nosač ili medijum za aktivni sastojak. Dakle, kompozicije mogu biti u obliku tableta, pilula, prahova, pastila, kesica, eliksira, suspenzija, emulzija, rastvora, sirupa, aerosola (kao čvrsti ili u tečnom medijumu), masti koje sadrže npr. do 10 % težine aktivnog jedinjenja, meke i tvrde želatinske kapsule, supozitorije, sterilni rastvori za injekcije i sterilno upakovani praškovi.
[0195] Kompozicije se mogu formulisati u obliku jedinične doze. Termin "jedinični dozni oblik" se odnosi na fizički diskretnu jedinicu pogodnu kao jedinstvena doza za ljude i druge sisare, pri čemu svaka jedinica sadrži unapred određenu količinu aktivnog materijala izračunatu da proizvede željeni terapeutski efekat, zajedno sa odgovarajuć im farmaceutskim ekscipijensom.
[0196] Aktivno jedinjenje može biti efikasno u širokom opsegu doza i generalno se primenjuje u farmaceutski efikasnoj količini. Podrazumeva se, međutim, da ć e količinu jedinjenja koja se stvarno primenjuje obično odrediti lekar, u skladu sa relevantnim okolnostima, uključujuć i stanje koje se leči, izabrani put primene, stvarno primenjeno jedinjenje, starost, težina i odgovor pojedinačnog pacijenta, ozbiljnost simptoma pacijenta i slično.
[0197] Za pripremu čvrstih kompozicija kao što su tablete, glavni aktivni sastojak se meša sa farmaceutskim ekscipijensom da bi se formirala čvrsta kompozicija pre formulacije koja sadrži homogenu smešu jedinjenja iz ovog pronalaska. Kada se ove kompozicije pre formulacije nazivaju homogenim, aktivni sastojak je obično dispergovan ravnomerno u celoj kompoziciji tako da se kompozicija može lako podeliti na podjednako efikasne jedinične dozne oblike kao što su tablete, pilule i kapsule. Ova čvrsta predformulacija se zatim deli na jedinične dozne oblike tipa opisanog iznad koji sadrže od, na primer, 0,1 do oko 500 mg aktivnog sastojka ovog pronalaska.
[0198] Tablete ili pilule ovog pronalaska mogu biti obložene ili na drugi način spojene da bi se dobio dozni oblik koji ima prednost produženog dejstva. Na primer, tableta ili pilula može da sadrži unutrašnju dozu i spoljašnju komponentu doze, pri čemu je poslednja u obliku omotača preko prve. Dve komponente mogu biti razdvojene enteričnim slojem koji služi da se odupre dezintegraciji u želucu i dozvoli unutrašnjoj komponenti da netaknuta prođe u duodenum ili da se odloži u oslobađanju. Za takve enteričke slojeve ili obloge mogu se koristiti različiti materijali, takvi materijali uključujuć i brojne polimerne kiseline i mešavine polimernih kiselina sa takvim materijalima kao što su šelak, cetil alkohol i celulozni acetat.
[0199] Tečni oblici u kojima se jedinjenja i kompozicije iz ovog pronalaska mogu ugraditi za oralnu primenu ili injekcijom uključuju vodene rastvore, sirupe sa odgovarajuć im ukusom, vodene ili uljne suspenzije i aromatizovane emulzije sa jestivim uljima kao što je ulje semena pamuka, susam, ulje, kokosovo ulje ili ulje od kikirikija, kao i eliksir i slična farmaceutska sredstva.
[0200] Kompozicije za inhalaciju ili insuflaciju obuhvataju rastvore i suspenzije u farmaceutski prihvatljivim, vodenim ili organskim rastvaračima, ili njihove smeše, i prahove. Tečne ili čvrste kompozicije mogu da sadrže pogodne farmaceutski prihvatljive ekscipijente kao što je opisano. U nekim realizacijama, kompozicije se primenjuju oralnim ili nazalnim respiratornim putem za lokalni ili sistemski efekat. Kompozicije se mogu raspršiti upotrebom inertnih gasova. Rastvori za raspršivanje mogu da se udišu direktno iz uređaja za raspršivanje ili se uređaj za raspršivanje može pričvrstiti na maske za lice ili mašinu za disanje sa povremenim pozitivnim pritiskom. Kompozicije rastvora, suspenzije ili prah mogu se davati oralno ili nazalno iz uređaja koji daju formulaciju na odgovarajuć i način.
[0201] Količina jedinjenja ili kompozicije koja se daje pacijentu ć e varirati u zavisnosti od toga šta se primenjuje, svrhe primene, kao što je profilaksa ili terapija, stanja pacijenta, načina primene i slično. U terapijskim primenama, preparati se mogu davati pacijentu koji već pati od neke bolesti u količini koja je dovoljna da izleči ili u najmanjem delimično zaustavi simptome bolesti i njenih komplikacija. Efikasne doze ć e zavisiti od bolesti koje se leči, kao i od procene lekara koji prisustvuje u zavisnosti od faktora kao što su težina bolesti, starost, težina i opšte stanje pacijenta i slično.
[0202] Kompozicije koje se daju pacijentu mogu biti u obliku farmaceutskih kompozicija opisanih gore. Ove kompozicije mogu biti sterilisane konvencionalnim tehnikama sterilizacije, ili mogu biti sterilno filtrirane. Vodeni rastvori se mogu pakovati za upotrebu kao što jesu, ili liofilizovani, pri čemu se liofilizovani preparat kombinuje sa sterilnim vodenim nosačem pre primene.
[0203] Terapijska doza jedinjenja iz ovog pronalaska može da varira u skladu sa, na primer, određenom upotrebom za koju je tretman napravljen, načinom primene jedinjenja, zdravljem i stanjem pacijenta, i procenom lekara koji propisuje lek. Proporcija ili koncentracija jedinjenja pronalaska u farmaceutskoj kompoziciji može da varira u zavisnosti od brojnih faktora uključujuć i dozu, hemijske karakteristike (npr. hidrofobnost) i način primene. Na primer, jedinjenja pronalaska mogu biti obezbeđena u vodenom fiziološkom puferskom rastvoru koji sadrži oko 0,1 do oko 10 % tež/tež jedinjenja za parenteralnu primenu. Neki tipični rasponi doza su od oko 1 mg/kg do oko 1 g/kg telesne težine dnevno. U nekim realizacijama, opseg doze je od oko 0,01 mg/kg do oko 100 mg/kg telesne težine dnevno. Doziranje ć e verovatno zavisiti od takvih varijabli kao što su tip i stepen progresije bolesti ili poreme ć aja, sveukupni zdravstveni status određenog pacijenta, relativna biološka efikasnost odabranog jedinjenja, formulacija ekscipijensa i način njegovog davanja . Efikasne doze se mogu ekstrapolirati iz krive doza-odgovor izvedenih iz in vitro test sistema ili na životinjskim modelima.
[0204] Jedinjenja pronalaska se takođe mogu formulisati u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih aktivnih sastojaka koji mogu uključivati bilo koji farmaceutski agens kao što su antivirusni agensi, anti-tumorski agensi, vakcine, antitela, sredstva za poboljšanje imuniteta, sredstva za suzbijanje imuniteta, antiinflamatorna sredstva i sl.
PRIMERI
[0205] Pronalazak je definisan patentnim zahtevima. Svi primeri koji ne spadaju u obim patentnih zahteva dati su za referencu.
[0206] Oprema:<1>H NMR spektri su snimljeni na 300 ili 400 MHz korišć enjem Bruker AVANCE 300 MHz/400 MHz spektrometra. NMR interpretacija je izvedena korišć enjem Bruker Topspin softvera za dodeljivanje hemijskog pomeranja i višestrukosti. U slučajevima kada su primeć ena dva susedna pika jednake ili nejednake visine, ova dva pika mogu biti označena ili kao multiplet ili kao dublet. U slučaju dubleta, može se dodeliti konstanta spajanja pomoć u ovog softvera. U bilo kom datom primeru, jedan ili više protona možda ne ć e biti prime ć eni zbog zamu ć enosti vodom i/ili vrhovima rastvarača. LCMS oprema i uslovi su sledeć i:
1. LC (osnovno stanje): Shimadzu LC-20AD, binarna pumpa, detektor diode. Kolona: Kinetex 2,6 µm EVO C18 100A, 50*3,0 mm, 2,6 um. Mobilna faza: A: Voda/5 mM NH4HCO3, B: Acetonitril. Brzina protoka: 1,2 mL/min na 40 °C. Detektor: 254 nm, 220 nm. Vreme zaustavljanja gradijenta, 2,9 min. Raspored:
2. LC (kiselo stanje): Shimadzu LC-20AD, binarna pumpa, detektor diode. Kolona: Ascentis Express C18, 50*3,0 mm, 2,7 µm. Mobilna faza: A: voda/0,05 % TFA, B: acetonitril/0,05 % TFA. Brzina protoka: 1,5 mL/min na 40 °C. Detektor: 254 nm, 220 nm. Vreme zaustavljanja gradijenta, 2,9 min. Raspored:
1. S:LCMS-2020, Quadrupole LC/MS, Jonski izvor: ES-API, TIC: 90∼ 900 m/z, Fragmentor: 60, Protok gasa za sušenje: 15 L/min, Protok nebulizirajuć eg gasa: 1,5 L/min, temperatura gasa za sušenje: 250 °C, Vcap: 1100V.
2. Priprema uzorka: uzorci su rastvoreni u ACN ili metanolu pri 1~10 mg/mL, a zatim filtrirani kroz filtersku membranu od 0,22 mm. Zapremina injekcije: 1~10 mL.
[0207] XRPD analiza: Za XRPD analizu, korišć eni su PANalitical Empirean/X’ Pert3 rendgenski difraktometri u prahu. XRPD parametri koji se koriste su navedeni u nastavku:
XRPD Parametri
[0208]
[0209] Termin "2Th" se odnosi na 2-teta. Termin "FWIM" se odnosi na punu širinu na pola maksimuma. Termin "rel. int." odnosi se na relativni intenzitet.
[0210] DSC/TGA analiza: TGA podaci su prikupljeni korišć enjem TA Q5000/Q5500 TGA od TA Instrumenata. DSC je izveden korišć enjem TA Q2000/Q2500 DSC iz TA Instrumenata. Detaljni parametri koji se koriste su navedeni u nastavku:
Parametri za TGA i DSC
[0211]
[0212] DVS analiza: DVS je izmeren preko SMS (Surface Measurement Systems) DVS Intrinsic. Relativna vlažnost na 25 °C je kalibrisana prema tački razgradnje LiCl, Mg(NO3)2i KCl. Parametri za DVS test su navedeni u nastavku:
Parametri za DVS test
[0213]
[0214] Definicije: ACN (acetonitril); Ac2O (anhidrid sirć etne kiseline); AIBN (2,2'-azobis(2-metilpropionitril); BHMPO (N1,N2-bis(4-hidroksi-2,6-dimetilfenil)oksalamid); Boc (terc-butoksikarbonil); Boc2O (di-terc-butil dikarbonat ); CAN (cerijum (IV) amonijum nitrat); CsF (cezijum fluorid); CuI (bakar jodid); CCl4(ugljentetrahlorid); CH3CN (acetonitril); CDCl3(deuterovani hloroform); CD3OD (deuterovani metanol); Cu (acac)2(bakar(II) acetilacetonat); Dess Martin (1,1,1-tris(acetiloksi)-1,1-dihidro-1,2-benziodoksol-3-(1H)-on); DBU (1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en); DCM (dihlorometan); DEA (dietilamin); DEAD (dietil azodikarboksilat); DIAD (diizopropil azodikarboksilat); DIPEA (N,N-diizopropiletilamin); DMF (N,N-dimetilformamid); DMAP (4-dimetil aminopiridin); DMSO (dimetilsulfoksid); DMSO-d6(deuterovani dimetilsulfoksid); DPPA (difenilfosforil azid); ekv. (ekvivalent); EDCl (1-etil-3-(3) -dimetilaminopropil)karbodiimid); EtOAc (etil acetat); EtOH (etanol); g (gram); h (sat); Grubbsov katalizator 2. generacije (1,3-Bis(2,4,6-trimetilfenil)-2 -imidazolidiniliden)dihloro(fenilmetilen)(tricikloheksilfosfin)rutenijum; (HATU (1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat); HOBT (hidroksibenzotriazol); 1H NMR (protonska nuklearna magnetna rezonanca ); HCl (hlorovodonična kiselina); Hz (herc); IPA (izo-propil alkohol); K2CO3(kalijum karbonat); L (litar); LiCl (litijum hlorid); LCMS (tečna hromatografija- masena spektrometrija); M (molarni ); MeOH (metanol); mg (miligrami); MHz (megaherci); min (minuti); MtBE (metil terc-butil etar); mL (mililitri), mmol (milimoli); Ms2O (anhidrid metansulfonske kiseline); NaCl (natrijum hlorid); NaH (natrijum hidrid); NaHMDS (natrijum bis(trimetilsilil)amid); NH4Cl (amonijum hlorid); NaN3(natrijum azid); NBS (N-bromo sukcinimid); NMP (N-metil-2-pirolidon);Pd(alil)Cl2(Bis(ē3-alil)di(m-hloro)dipaladijum(II));Pd(dppf)Cl2([1,1'-Bis(difenilfosfino)ferocen] dihloropaladijum (II)); HPLC (preparativna tečna hromatografija visokih performansi); ppm (delovi na milion); PMB (4-metoksi benzil); Rockphos (2-Di(terc-butil)fosfino-2,4,6'-triizopropil-3-metoksi-6-metilbifenil)); RT (sobna temperatura); SEM (2-(trimetilsilil)etoksimetil); SEMCI (2-(tri-metilsilil)etoksimetil hlorid); TBAF (tetrabutil amonijum fluorid); TEA (trietil amin); THF (tetrahidrofuran); TsCl (tozil hlorid); tR (vreme zadržavanja); T3P (1-propanfosfonski anhidrid); TfOH (trifluorometansulfonska kiselina); TFA (trifluorosirć etna kiselina); TLC (tanslojna hromatografija); TMSI (jodotrimetil silan); v/v (zapremina/zapremina).
Sinteza intermedijara
Int-A1: 2-(piperazin-1-il)pirimidin-5-karbonitril dihidrohlorid
[0215]
Korak 1: terc-butil 4-(5-cijanopirimidin-2-il)piperazin-1-karboksilat
[0216] Rastvor 2-hloropirimidin-5-karbonitrila (5 g, 35,83 mmol, 1 ekv.), terc-butil piperazin-1-karboksilata (6,7 g, 35,97 mmol, 1,00 ekv.) i K2CO3, mmol (9.9 g, 71.63 mmol, 2.00 ekv.) u NMP (80 mL) je mešano 1 h na 80 °C. Dobijena smeša je razblažena sa 1 L vode, a čvrste materije su sakupljene filtracijom i osušene u peć nici da bi se dobilo 8,4 g naslovljenog jedinjenja u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]+ 290,15.
Korak 2: 2-(piperazin-1-il)pirimidin-5-karbonitril dihidrohlorid
[0217] Rastvor terc-butil 4-(5-cijanopirimidin-2-il)piperazin-1-karboksilata (8,4 g, 29,03 mmol, 1 ekv.) u HCl/dioksanu (40 mL, 4M) je mešan tokom 1 h na RT, a zatim je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 6,4 g (76%) naslovljenog jedinjenja u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]+ 190,10.
Int-A2: 2-(piperazin-1-il)-5-(trifluorometil)pirimidin dihidrohlorid
[0218]
Korak 1: terc-butil 4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-karboksilat
[0219] Rastvor 2-hloro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 g, 550 mmol, 1,05 ekviv.), terc-butil piperazin-1-karboksilata (96,7 g, 520 mmol, 1 ekv.) i K2CO3(151,8 g, 1100 mmol, 2 ekviv.) u NMP (800 mL) je mešano 1 h na 80 °C, a zatim je dodato 2,5 L H20. Čvrste materije su sakupljene filtracijom da bi se dobilo 190 g (94%) naslovljenog jedinjenja u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]+ 333,16.
Korak 2: 2-(piperazin-1-il)-5-(trifluorometil)pirimidin
[0220] Rastvor terc-butil 4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-karboksilata (190 g, 571,73 mmol, 1 ekv.) u HCl/dioksanu (800 mL/4M) je mešan tokom 1 h na RT. Čvrste materije su sakupljene filtracijom da bi se dobilo 154 g (99%) naslovljenog jedinjenja u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]+199,08.
Int-A3: 5-hloro-2-(piperazin-1-il)pirimidin dihidrohlorid
[0221]
Korak 1: terc-butil 4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-karboksilat
[0222] Rastvor 2,5-dihloropirimidina (19,4 g, 13,00 mmol, 1,05 ekv.), terc-butil piperazin-1-karboksilata (23 g, 12,40 mmol, 1 ekv.) i K2CO3(34 g, mmol, 25 ekv. 2 ekviv.) u NMP (500 mL) je mešano 1 h na 80 °C, a zatim je dodato 600 mL H20 koji je dodat u rezultujuć i rastvor. Čvrste materije su sakupljene filtracijom da bi se dobilo 41 g sirovog naslovljenog jedinjenja u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]+ 299,13.
Korak 2: 5-hloro-2-(piperazin-1-il)pirimidin dihidrohlorid
[0223] Rastvor terc-butil 4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-karboksilata (41 g, 14,00 mmol, 1 ekv.) u HCl/dioksanu (500 mL/4M) je mešan tokom 1 h na RT. Čvrste materije su sakupljene filtracijom da bi se dobilo 26,7 g naslovljenog jedinjenja u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]+ 199,08.
Int-A4: 6-(piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril dihidrohlorid
[0224]
Korak 1: terc-butil 4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-karboksilat
[0225] Rastvor 6-hloropiridin-3-karbonitrila (90 g, 650 mmol, 1,05 ekviv.), terc-butil piperazin-1-karboksilata (114,3 g, 620 mmol, 1 ekv.) i K2CO3, 171,1 g (171.1 g, 124 mmol, 2 ekv.) u NMP (500 mL) je mešano 1 h na 80 °C, a zatim je dodato 1,5 L H20 koja je dodata u rezultujuć i rastvor. Čvrste materije su sakupljene filtracijom da bi se dobilo 195 g naslovljenog jedinjenja u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]+ 289,17.
Korak 2: 6-(piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril dihidrohlorid
[0226] Terc-butil 4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-karboksilat (195 g, 680 mmol, 1 ekv.) i HCl/dioksan (800 mL/4M) su mešani 1 h na ST. Čvrste materije su sakupljene filtracijom da bi se dobilo 160 g naslovljenog jedinjenja u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]+ 189,12.
Int-A5: 1-(5-hloropiridin-2-il)piperazin dihidrohlorid
[0227]
Korak 1: terc-butil 4-(5-hloropiridin-2-il)piperazin-1-karboksilat
[0228] Rastvor terc-butil piperazin-1-karboksilata (10 g, 53,69 mmol, 1,00 ekviv.), NMP (30 mL), kalijum karbonata (13,4 g, 96,95 mmol, 1,80 ekviv.) i 2,5-dihloropiridin (8,7 g, 58,79 mmol, 1,10 ekviv.) je mešano 20 h na 110 °C. U reakcionu smešu je zatim dodato 500 mL H20. Čvrste materije su sakupljene filtracijom da bi se dobilo 10,2 g (64%) naslovljenog jedinjenja kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]+298,12.
Korak 2: 1-(5-hloropiridin-2-il)piperazin dihidrohlorid
[0229] Rastvor terc-butil 4-(5-hloropiridm-2-il)piperazin-1-karboksilata (10,2 g, 34,25 mmol, 1,00 ekviv.) i HCl/dioksana (50 mL/4M) je mešan 1 h na RT. Čvrste materije su sakupljene filtracijom da bi se dobilo 7,4 g (80%) naslovljenog jedinjenja kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]+ 198,07.
Int-A6: 5-hloro-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridazin-3(2H)-on
[0230]
Korak 1: 4,5-dibromo-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0231] U rastvor 4,5-dibromo-2,3-dihidropiridazin-3-ona (3500 g, 13,78 mol, 1,00 ekviv.) u DMF (30 L) dodat je natrijum hidrid (400 g, 16,56 mol, 1,20). ekviv.) u serijama na 0 °C pod azotom. Dobijeni rastvor je mešan 1 h na ST, a zatim je ukapavanjem na 0 °C dodavan [2-(hlorometoksi)etil]trimetilsilan (2500 g, 15.2 mol, 1.10 ekviv.). Reakciona smeša je mešana 2 h na ST. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 30 L vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 50 L EtOAc i organski slojevi su kombinovani. Organski slojevi su isprani sa 3 x 30 L slanog rastvora, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 4,2 kg naslovljenog jedinjenja. LCMS: [M+H]+ 384,70.
Korak 2: 4-bromo-5-hloro-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0232] U rastvor 4,5-dibromo-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (2200 g, 5,73 mol, 1,00 ekviv.) u NMP (6 L) je dodat hlorlitijum (231 g, 5,73 mol, 1,00 ekviv.) i dobijeni rastvor je mešan 4 h na 95 °C. Ova reakcija je ponovo ponovljena sa šaržom od 2000 g. Po završetku, dve šaržne reakcije su kombinovane i zatim razblažene dodatkom 10 L vode, ekstrahovane sa 3 x 20 L EtOAc i organski slojevi su kombinovani. Organski slojevi su isprani sa 3 x 20 L slanog rastvora, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišć en hromatografijom na koloni (EtOAc:petroleum etar, 1:50, tež/tež). Ukupno, od 4,2 kg polaznog materijala 4,5-dibromo-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on, 2,2 kg (59% prinosa) naslovljenog jedinjenja je dobijeno. LCMS: [M+H]+ 340,90.
Korak 3: 5-hloro-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0233] U rastvor 4-bromo-5-hloro-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (1100 g, 3,23 mol, 1,00 ekviv.) u NMP (6 L) na sobnoj temperaturi je dodat CuI (56 g, 0,64 mol, 0,20 ekviv.), a zatim je u kapima dodat metil 2,2-difluoro-2-(fluorosulfonil)acetat (1865 g, 9,7 mol, 3,00 ekviv.). Dobijeni rastvor je mešan 2 h na 80 °C. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 10 L vode i ekstrahovana sa 3 x 10 L EtOAc. Organski slojevi su kombinovani i isprani sa 3 x 10 L slanog rastvora, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišć en hromatografijom na koloni (EtOAc/petroleum etar, 1/100, tež/tež) da bi se dobilo 1030 g (76%) naslovljenog jedinjenja. LCMS: [M+H]+ 329,00. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7,82 (s, 1H), 5,50 (d, J = 27,3 Hz, 2H), 3,74 (dt, J = 12,9, 8,2 Hz, 2H), 0,97 (td, J = 8,3).5,0 Hz, 2H), 0,01 (d, J = 2,1 Hz, 9H).
Int-A7: 4,5-dihloro-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0234]
[0235] Rastvor 4,5-dihloro-2,3-dihidropiridazin-3-ona (10 g, 60,62 mmol, 1 ekv.) u DMF (40 mL) je mešan na 0 °C i NaH (2.9 g, 121.23 mmol, 2 ekv.) je dodato na 0 °C u nekoliko serija. Smeša je mešana 30 min na 0 °C, a zatim je polako dodavan [2-(hlorometoksi)etil]trimetilsilan (13 g, 78.80 mmol, 1.3 ekviv.) na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan dodatnih 10 min na 0 °C. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 100 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 2 x 80 mL EtOAc i organski slojevi su kombinovani. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 60 mL NaCl (ak) i organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (4/96) da bi se dobilo 9 g (50%) naslovljenog jedinjenja kao žuto ulje. LCMS: [M-Cl]+ 295,04.
Int-A8: 4,5-dibromo-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0236]
[0237] U rastvor 4,5-dibromo-2,3-dihidropiridazin-3-ona (3500 g, 13,78 mol, 1,00 ekviv.) u DMF (30 L) je dodat NaH (400 g, 16,56 mol, 1,20 ekviv. ) u serijama na 0 °C pod azotom. Dobijeni rastvor je mešan 1 h na ST, a zatim je u kapima dodat 2-(hlorometoksi)etil]trimetilsilan (2500 g, 15,2 mol, 1,10 ekviv.) na 0 °C i mešan 2 h na ST. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 30 L vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 50 L EtOAc i organski slojevi su kombinovani. Organski slojevi su isprani sa 3 x 30 L slanog rastvora, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 4,2 kg naslovnog jedinjenja. LCMS: [M+H]+ 384,70.
Int-A9: 3-[2-[(5-hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi]etoksi]propanska kiselina
[0238]
Korak 1: terc-butil 3-[2-[(5-hloro-6-okso-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi]etoksi] propanoat
[0239] Rastvor terc-butil 3-(2-hidroksietoksi)propanoata (778,8 mg, 4,09 mmol, 1,00 ekviv.), CS2CO3(2,66 g, 8,16 mmol, 2,00 ekviv.) i 4,5-dihloro-2-[2-(trimetilsilil)etoksi]metil-2,3-dihidropiridazin-3-on (1,2 g, 4,06 mmol, 1,00 ekviv.) u ACN (15 mL) je mešan 3 h na 80 °C. Čvrste materije su filtrirane i dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišć en hromatografijom na koloni silika gela sa EtOAc/petrolej etrom (1:1) da bi se dobilo 200 mg (11%) naslovljenog jedinjenja u vidu bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]+ 449,01.
Korak 2: 3-[2-[(5-hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi]etoksi]propanska kiselina
[0240] Rastvor terc-butil 3-[2-[(5-hloro-6-okso-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi]etoksi] propanoat (10 mg, 0.02 mmol, 1.00 ekviv.) u TFA (2 mL) i DCM (10 mL) je mešan 0.5 h na ST. Nakon završetka, sirovi proizvod je direktno koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 776 mg naslovljenog jedinjenja u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]+ 263,01.
Int-A10: 3-[2-[(5-hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino]etoksi]propanska kiselina
[0241]
Korak 1: metil 3-(2-(terc-butoksikarbonilamino)etoksi)propanoat
[0242] Rastvor terc-butil N-(2-hidroksietil)karbamata (6 g, 37,2 mmol, 1,00 ekv.), natrijum hidrida (2 g, 83,3 mmol, 1,50 ekviv.), metil 3-bromopropanoata (6,18 g, 37,18 g, mmol, 1,00 ekviv.) u THF (40 mL) je mešano preko noć i na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišć en hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroleterom (1:3, tež/tež) da bi se dobilo 1,6 g (17%) naslovljenog jedinjenja u vidu bezbojnog ulja. LCMS: [M+H]+ 248,14.
Korak 2: Metil 3-(2-aminoetoksi)propanoat hidrohlorid
[0243] Rastvor 3 metil 3-(2-[[(terc-butoksi)karbonil]amino]etoksi)propanoata (1,6 g, 6,47 mmol, 1,00 ekviv.) u HCl/dioksanu (20 mL/4M) je mešan za 1 h na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 900 mg (95%) naslovljenog jedinjenja kao bezbojno ulje. LCMS: [M+H]+ 148,09.
Korak 3: metil 3-[2-[(5-hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino]etoksi]propanoat
[0244] Rastvor metil 3-(2-aminoetoksi)propanoata (955 mg, 6,5 mmol, 1,00 ekviv.), 4,5-dihloro-2,3-dihidro-piridazin-3-ona (1,06 g, 6,43 mmol, 1,00 ekviv.), i TEA (1,95 g, 19,3 mmol, 3,00 ekviv.) u EtOH (20 mL) je mešan preko noć i na 80 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i prečišć ena hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (3:1) da bi se dobilo 1,2 g (67%) naslovljenog jedinjenja kao žuto ulje. LCMS:
[M+H]+ 276,07.
Korak 4: 3-[2-[(5-hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino]etoksipropanska kiselina
[0245] Rastvor metil 3-[2-[(5-hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino]etoksi]propanoata (1,2 g, 4,35 mmol, 1,00 ekviv.) i LiOH·H20 (488 mg, 11.6 mmol, 2.00 ekviv.) u vodi (50 mL) i MeOH (50 mL) su mešani preko noć i na 50°C. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 800 mg (70%) naslovljenog jedinjenja kao žuto ulje. LCMS: [M+H]+ 262,05.
Int-A11: 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)propanska kiselina
[0246]
Korak 1: terc-butil 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi] etoksi)propanoat
[0247] Rastvor Int-A6 (1,1 g, 3,4 mmol, 1 ekv.), Cs2CO3(2,2 g, 6,8 mmol, 2 ekv.), terc-butil 3-(2-hidroksietoksi)propanoata (649,2 mg, 3,41) mmol, 1 ekviv.) u MeCN (20 mL) je mešan 18 h na ST. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (16/84) da bi se dobilo 1 g (61%) naslovljenog jedinjenja kao žuto ulje. LCMS: [M+H]+ 483,21.
Korak 2: 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)propanska kiselina
[0248] Rastvor terc-butil 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il] oksi]etoksi)propanoat (450 mg, 0.93 mmol, 1 ekv.) i TFA (1 mL) u DCM (10 mL) su mešani 3 h na ST. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišć en C18 hromatografijom reverzne faze eluiranjem sa H20/CH3CN da bi se dobilo 110 mg (40%) naslovljenog jedinjenja u obliku belog ulja. LCMS: [M+H]+ 297,06.
Int-A12: 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)propanska kiselina
[0249]
Korak 1: Metil 3-(2-aminoetoksi)propanoat
[0250] Rastvor metil 3-(2-[[(terc-butoksi)karbonil]amino]etoksi)propanoata (800 mg, 3,24 mmol, 1 ekviv.) u HCl/dioksanu (10 mL) je mešan 30 minuta na RT. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 476 mg naslovljenog jedinjenja kao žuto sirovo ulje. LCMS: [M+H]+ 148,09.
Korak 2: Metil 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi) propanoat
[0251] Rastvor metil 3-(2-aminoetoksi)propanoata (476 mg, 3,23 mmol, 1 ekv.), TEA (981,8 mg, 9,70 mmol, 3 ekviv.) i Int-A6 (1,06 g, 3,23 mmol, 1 ekviv.) u EtOH (10 mL) je mešan 60 min na ST. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišć en hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrol etrom (28/72, tež/tež) da bi se dobilo 259 mg (18%) naslovljenog jedinjenja kao žuto ulje. LCMS: [M+H]+ 440,18.
Korak 3: Metil 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)propanoat
[0252] Rastvor metil 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] etoksi)propanoat (259 mg, 0.59 mmol, 1 ekv.) u HCl/dioksanu (10 mL/4M) je mešan 16 h na ST. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 182 mg naslovljenog jedinjenja kao žuto ulje. LCMS:[M+H] 310,09.
Korak 4: 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)propanska kiselina
[0253] Rastvor metil 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)propanoata (182 mg, 0,59 mmol, 1 ekv.) i LiOH·H2O (123,5 mg, 2,94 mmol, 5 ekviv.) u MeOH (5 mL) i H20 (1 mL) su mešani 3 h na ST. pH vrednost rastvora je podešena na 7 sa vodenim rastvorom HCl. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 3 mL DCM i vodeni slojevi su kombinovani i koncentrovani pod vakuumom. Posle koncentracije, ostatak je prečišć en C18 hromatografijom reverzne faze eluiranjem sa H20/ACN da bi se dobilo 100 mg (58%) naslovljenog jedinjenja u vidu bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]+ 296,08.
Int-A13: 3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi]propanska kiselina
[0254]
Korak 1: 5-[[(2S)-1-Hidroksipropan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0255] Rastvor Int-A6 (8 g, 24 mmol, 1 ekv.), TEA (2,463 g, 24 mmol, 1 ekv.) i (2S)-2-aminopropan-1-ola (1,829 g, 24 mmol , 1 ekviv.) u EtOH (60 mL) je mešano 1 h na 60 °C. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (1/1) da bi se dobilo 5,39 g (58%) naslovljenog jedinjenja kao žuto ulje. LCMS [M+H]+ 367,44.
Korak 2: 3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi]propanoat
[0256] Rastvor 5-[[(2S)-1-hidroksipropan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin -3-ona (5,39 g, 15 mmol, 1 ekv.), metil prop-2-enoata (13,24 g, 147 mmol, 10 ekviv.) i Cs2CO3(4,773 g, 15 mmol, 1 ekv.) u MeCN (50 mL) je mešan 4 h na 25 °C. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom, ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (1/1) da bi se dobilo 3,12 g (42%) naslovnog jedinjenja u vidu bele čvrste supstance. LCMS [M+H]+454,53.
Korak 3: 3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi]propanoat
[0257] Rastvor metil 3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropindazin- 4-il]amino]propoksi]propanoat (3,12 g, 1 ekv.) i TFA (10 mL) u DCM (40 mL) su mešani 0,5 h na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 2,1 g (93%) naslovljenog jedinjenja u vidu bele čvrste supstance.
Korak 4: 3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi]propanska kiselina [0258] Rastvor metil 3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi]propanoata (2,12 g, 7 mmol, 1 ekviv.), LiOHH20 (1.378 g, 33 mmol, 5 ekviv.) u MeOH (15 mL) i H20 (15 mL) su mešani 0.5 h na 25 °C. pH vrednost rastvora je podešena na 6 sa TFA. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom, a ostatak je prečišć en C18 hromatografijom reverzne faze eluiranjem sa H20/CH3CN (6:1) da bi se dobilo 2,1 g (90%) naslovljenog jedinjenja kao žuto ulje. LCMS [M+H]+ 310,25.
Int-A14: 3-[2-[(5-bromo-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi]etoksi]propanska kiselina
[0259]
Korak 1: terc-butil 3-[2-[(5-bromo-6-okso-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi]etoksi] propanoat
[0260] Rastvor Int-A8 (4 g, 10,4 mmol, 1,0 ekviv.), terc-butil 3-(2-hidroksietoksi)propanoata (1,99 g, 10,4 mmol, 1,0 ekv.) i Cs2CO3(6,82 g, 20,82 g, 20,4 mmol) 2 ekviv.) u MeCN (30 mL) je mešano 2 h na 60 °C, a zatim je čvrsta supstanca filtrirana i dobijeni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišć en hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom da bi se dobilo 2,2 g (43%) naslovljenog jedinjenja kao svetlo žuto ulje. LCMS [M+H]+ 493.13, 495.13
Korak 2: 3-[2-[(5-bromo-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi]etoksi]propanska kiselina
[0261] Rastvor terc-butil 3-[2-[(5-bromo-6-okso-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi] etoksi]propanoata (1,66 g, 1 ekv.) i TFA (2 mL) u DCM (10 mL) su mešani 2 h na ST, a zatim je dobijeni rastvor koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 380 mg (37%) naslovljenog jedinjenje kao žuto ulje. LCMS [M+H]+ 307,10.
Int-A15: 3-[2-[(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi]etoksi]propanska kiselina
[0262]
Korak 1: terc-butil 3-(2-((5-metil-6-okso-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi)etoksi)pro panoat
[0263] Rastvor terc-butil 3-[2-[(5-bromo-6-okso-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi] etoksi]propanoata (2 g, 4,05 mmol, 1 ekviv.), metilborne kiseline (485,2 mg, 8,11 mmol, 2 ekviv.), Pd(dppf)Cl2(296,6 mg, 0,41 mmol, 0,1 ekv.) i CsF (1847.0 mg, 12.16 mmol, 3 ekv.) u dioksanu (15 mL) i H20 (3 mL) je mešano 2 h na 80 °C. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom da bi se dobilo 1,5 g (86%) naslovljenog jedinjenja kao žuto ulje. LCMS [M+H]+ 429,23.
Korak 2: 3-[2-[(5-metil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi]etoksi]propanoična kiselina
[0264] Rastvor terc-butil 3-[2-[(5-metil-6-okso-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi] etoksi]propanoata (1.5 g, 1 ekv.) u HCl/dioksanu (30 mL/4M) je mešan preko noć i na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 800 mg (94%) naslovljenog jedinjenja kao žuto sirovo ulje. LCMS [M+H]+ 243,09.
Int-A16: 3-[2-[(5-cijano-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi]etoksi]propanska kiselina
[0265]
Korak 1: 3-[2-[(5-bromo-6-okso-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi]etoksi]propanoat
[0266] Rastvor Int-A8 (4 g, 10,41 mmol, 1 ekv.), Cs2CO3(10,14 g, 31,12 mmol, 2,99 ekv.) i terc-butil 3-(2-hidroksietoksi)propanoata (3,97 g, mmol 20 ekv.) 2,00 ekviv.) u DMF (40 mL) je mešano 18 h na ST. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 40 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 50 mL EtOAc i organski slojevi su kombinovani i osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata. Organski slojevi su koncentrovani pod vakuumom i ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (1/9) da bi se dobilo 2,2 g (43%) naslovljenog jedinjenja u vidu žutog ulja. LCMS [M+H]+ 493.13, 495.13. 2 g 4-bromo-5-(2-hidroksietoksi)-2-((2-(tri-metilsilil)etoksi)metil)piridazin-3(2H)-ona je izolovano kao nusproizvod reakcije tokom prečišć avanja i koriš ć en je kao početni materijal za sintezu Int-A19, korak 1. LCMS [M+H]+: 365.05, 367.05.
Korak 2: terc-butil 3-[2-[(5-cijano-6-okso-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi]etoksi] propanoat
[0267] Rastvor terc-butil 3-[2-[(5-bromo-6-okso-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi] etoksi]propanoata (2,2 g, 4,46 mmol, 1 ekv.) i CuCN (800 mg, 8,93 mmol, 2,00 ekviv.) u NMP (20 mL) su mešani 23 h na 120 °C. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 20 mL vode i dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 30 mL EtOAc i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog kalcijum hlorida. Organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišć en hromatografijom na koloni silika gela sa EtOAc/petrolej etrom (3/7) da bi se dobilo 800 mg (41%) naslovljenog jedinjenja u obliku žutog ulja. LCMS [M+H]+ 254,07.
Korak 3: 3-[2-[(5-cijano-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi]etoksi]propanska kiselina
[0268] Rastvor terc-butil 3-[2-[(5-cijano-6-okso-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi] etoksi]propanoata (800 mg, 1.82 mmol, 1 ekv.) u HCl/dioksanu (10 mL/4M) je mešan 18 h na ST. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 350 mg (76%) naslovljenog jedinjenja kao žuto sirovo ulje. LCMS [M+H]+ 254,07.
Int-A17: 2-[5-(Hidroksimetil)oksolan-2-il]-1-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il] etan-1-on
[0269]
Korak 1: 1-(benziloksi)heks-5-en-2-ol
[0270] U rastvor bromo(prop-2-en-1-il)magnezijuma (27,4 mL, 1,50 ekviv.) u THF (20 mL) dodat je u kapima 2-[(benziloksi)metil]oksiran (3 g, 18,27). mmol, 1,00 ekviv.) pod azotom na -40 °C. Dobijeni rastvor je mešan 1 h na -40 °C i dobijeni rastvor je ugašen sa 100 mL vodenog rastvora NH4Cl i ekstrahovan sa 3 x 100 mL EtOAc. Organski slojevi su kombinovani, isprani sa 1 x 100 mL slanog rastvora, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (1:5) da bi se dobilo 2,16 g (57%) naslovljenog jedinjenja kao žuto ulje. LCMS [M+H]+207,13.
Korak 2: metil (2Z)-7-(benziloksi)-6-hidroksihept-2-enoat
[0271] Pod azotom, rastvor 1-(benziloksi)heks-5-en-2-ola (2 g, 9,70 mmol, 1,00 ekviv.), metil prop-2-enoata (4,17 g, 48,44 mmol, 5,00 ekv.) i Grubbsov katalizator 2. generacije (82 mg, 0,01 ekviv.) u DCM (25 mL) je mešan 4 h na 40 °C. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišć en C18 hromatografijom reverzne faze eluiranjem sa H20/ACN da bi se dobilo 1,4 g (55%) naslovljenog jedinjenja u vidu žutog ulja. LCMS [M+H]+265,14. Korak 3: Metil 2-[5-[(benziloksi)metil]oksolan-2-il]acetat
[0272] Rastvor metil (2Z)-7-(benziloksi)-6-hidroksihept-2-enoata (46 g, 1 ekv.) i NaH (0,7 g, 0,1 ekviv.) u THF (200 mL) je mešan 12 h na 25 °C. Dobijeni rastvor je zatim ugašen sa 200 mL vode, ekstrahovan sa 3 x 200 mL DCM, a organski slojevi su kombinovani i isprani sa 1 x 100 mL slanog rastvora, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 46 g naslovljenog jedinjenja kao smeđe ulje. LCMS [M+H]+ 265,14.
Korak 4: 2-[5-[(benziloksi)metil]oksolan-2-il]sirć etna kiselina
[0273] Rastvor metil 2-[5-[(benziloksi)metil]oksolan-2-il]acetata (46 g, 174,03 mmol, 1 ekv.) i LiOHH2O (14,6 g, 350 mmol, 2 ekv.) u THF ( 200 mL) i H20 (200 mL) su mešani 2 h na 25 °C. Dobijeni rastvor je ispran sa 1 x 200 ml DCM, vodeni slojevi su kombinovani i pH vrednost vodenog sloja je podešena na 4 sa HCl (1M). Posle koncentrovanja, ostatak je rastvoren u 100 mL EtOH i čvrsta supstanca je filtrirana. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 40 g (92%) naslovljenog jedinjenja kao svetlo žuto ulje. LCMS [M+H]+ 251,12.
Korak 5: 2-[5-[(benziloksi)metil]oksolan-2-il]-1-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]etan-1-on
[0274] Rastvor 2-[5-[(benziloksi)metil]oksolan-2-il]sirć etne kiseline (3 g, 11,99 mmol, 1 ekv.), 1-[5-(trifluorometil)piridin-2- il]piperazina (1,7 g, 7,35 mmol, 0,61 ekviv.), HATU (4,6 g, 11,99 mmol, 1 ekv.) i DIPEA (4,6 g, 35,96 mmol, 3 ekviv.) u DMF (50 mL) je mešan na RT. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 100 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 60 mL EtOAc i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišć en hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (3/2) da bi se dobilo 3,2 g (58%) naslovljenog jedinjenja kao žuto ulje. LCMS [M+H]+ 464,15.
Korak 6: 2-[5-(Hidroksimetil)oksolan-2-il]-1-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]etan-1-on
[0275] U atmosferi H2(g), rastvor 2-[5-[(benziloksi)metil]oksolan-2-il]-1-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1 -il]etan-1-on (3,2 g, 6,90 mmol, 1 ekv.), paladijum 10% na ugljeniku (1 g, 9,40 mmol, 1,36 ekviv.) u MeOH (50 mL) je mešan preko noć i na 50 °C. Čvrste materije su filtrirane i dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 1,7 g (66%) naslovljenog jedinjenja u obliku bezbojnog ulja. LCMS [M+H]+ 374,10.
Int-A18: 1-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin
[0276]
[0277] Ovo jedinjenje je kupljeno iz komercijalnih izvora: CAS [132834-58-3].
Int-A19: 6-[4-(3-[2-[(5-bromo-6-okso-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi ] etoksi] propanoil)piperazin-1-il] piridin-3-karbonitril
[0278]
Korak 1: 6-[4-(3-[2-[(5-bromo-6-okso-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi]etoksi]propanoil) piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[0279] Rastvor 4-bromo-5-(2-hidroksietoksi)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (1,0 g, 2,74 mmol, 1 ekv. ), Cs2CO3(2,652 g, 8,14 mmol, 2,97 ekviv.) i Int-A25 (0,99 g, 4,09 mmol, 1,49 ekviv.) u DMF (20 mL) je mešan 24 h na ST. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 20 mL vode i dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 30 mL EtOAc i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom i ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (9/1) da bi se dobilo 350 mg (21%) naslovljenog jedinjenja u obliku žutog ulja. LCMS [M+H]+ 609,16.
Int-A20: 5-hloro-2-(4-metoksibenzil)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[0280]
Korak 1: 4,5-dibromo-2-[(4-metoksifenil)metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0281] U rastvor 4,5-dibromo-2,3-dihidropiridazin-3-ona (250 g, 984,71 mmol, 1 ekv.) u DMF (2,5 L) dodat je NaH (59.1 g, 1477.07 mmol, 1.50 ekviv., 60%) u nekoliko serija na 0-10 °C prać eno dodavanjem 1-(hlorometil)-4-metoksibenzena (230,3 g, 1470,53 mmol, 1,49 ekviv.) na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan 3 h na ST. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 5 L vode/leda i ekstrahovana sa 2 x 2,5 L DCM. Organski slojevi su kombinovani i koncentrovani. Čvrste materije su isprane sa MeOH (500 mL x 2) da bi se dobilo 290 g (79%) naslovljenog jedinjenja kao čvrste supstance. LCMS [M+H]+ 378,00.
Korak 2: 5-metoksi-2-[(4-metoksifenil)metil]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0282] Rastvor 4,5-dibromo-2-[(4-metoksifenil)metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (290 g, 775,33 mmol, 1 ekviv.), kalijum hidroksida (130,5 g, 2326,00) mmol, 3,00 ekviv.) u MeOH (2,5 L) je mešano 2 h na ST. Dobijena smeša je koncentrovana do 500 mL i čvrste materije su sakupljene filtracijom. Dobijeni kolač je suspendovan 1 h u vodi (1L) da bi se dobilo 232 g (92%) naslovljenog jedinjenja u obliku čvrste supstance. LCMS [M+H]+ 326,90.
Korak 3: 5-metoksi-2-[(4-metoksifenil)metil]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0283] Rastvor 4-bromo-5-metoksi-2-[(4-metoksifenil)metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (232 g, 713,49 mmol, 1 ekv.), metil 2,2- difluoro-2-sulfoacetata (411,2 g, 2140,44 mmol, 3,00 ekviv.) i CuI (67,9 g, 356,52 mmol, 0,50 ekviv.) u NMP (1,2 L) je mešan 3 h na 100 °C. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 1,5 L vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 1 L DCM. Organski slojevi su kombinovani i koncentrovani. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa EtOAc/petroleterom (1/1). Sakupljene frakcije su kombinovane i koncentrovane da bi se dobilo sirovo ulje u koje je dodato 1 L vode. Čvrste materije su sakupljene filtracijom i isprane sa 100 mL MeOH da bi se dobilo 170 g (76%) naslovljenog jedinjenja kao čvrste supstance. LCMS [M+H]+ 315,10.
Korak 4: 5-hidroksi-2-[(4-metoksifenil)metil]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0284] U rastvor 5-metoksi-2-[(4-metoksifenil)metil]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (170 g, 540,95 mmol, 1 ekv.) u DMF ( 850 mL) je dodat TMSI (140 g, 699,67 mmol, 1,29 ekviv.) kap po kap na 20 °C. Dobijeni rastvor je mešan 20 h na 85 °C. Reakciona smeša je zatim ugašena dodavanjem 850 mL vode i dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 850 mL DCM i organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Organski slojevi su koncentrovani pod vakuumom i sirovi proizvod je prečišć en hromatografijom na koloni silika gela i zatim rekristalizovan sa MtBE da bi se dobilo 120 g (74%) naslovljenog jedinjenja u vidu bele čvrste supstance. LCMS [M+H]+ 301,07.
Korak 5: 5-hloro-2-[(4-metoksifenil)metil]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0285] U rastvor 5-hidroksi-2-[(4-metoksifenil)metil]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (110 g, 366,38 mmol, 1 ekv.) u DMF ( 550 mL) je dodat oksalni dihlorid (93 g, 732,75 mmol, 2,00 ekviv.) kap po kap na 0 - 5 °C. Dobijeni rastvor je mešan 8 h na ST. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 550 mL vode. Čvrste materije su sakupljene filtracijom da bi se dobilo 108 g (93%) naslovljenog jedinjenja u obliku bele čvrste supstance. LCMS [M+H]+ 319,04 [M+H]+, 1H NMR (30 MHz, DMSO-d6) δ 8,22 (d, J= 0,8 Hz, 1H), 7,33 - 7,22 (m, 2H), 6,94 - 6,84 (m, 2H), 5,18 (s, 2H), 3,71 (s, 3H).
Int-A21: 1-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on
[0286]
[0287] Rastvor Int-A2 (2,2 g, 7 mmol, 1 ekv.), TEA (2,924 g, 29 mmol, 4 ekviv.) i prop-2-enoil hlorida (1,954 g, 11 mmol, 10,00 ekv.) u MeOH (20 mL) je mešan 4,5 h na 0°C. Čvrste materije su filtrirane i isprane sa 30 mL x 2 EtOAc. Organski slojevi su zatim kombinovani, koncentrovani, a zatim naneti na kolonu silika gela sa hloroformom/metanolom (11/1) da bi se dobilo 1,83 g (58%) naslovljenog jedinjenja u obliku žute čvrste supstance. LCMS [M+H]+ 287,25.
Int-A22: 1-[4-(5-hloropiridin-2-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-on
[0288]
[0289] Rastvor Int-A5 (2,4 g, 8,92 mmol, 1,00 ekviv.), TEA (4 g, 39,5 mmol, 4,00 ekviv.) i prop-2-enoil prop-2-enoata (3.64 g, 28.9 mmol, 3.00 ekviv.) u DCM (20 mL) je mešan 1.5 h na ST. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroleterom (1:1) da bi se dobilo 1280 mg (57%) naslovljenog jedinjenja u vidu žutog ulja. LCMS [M+H]+ 252,09.
Int-A23: 1-[4-(5-Hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il] prop-2-en-1-on
[0290]
[0291] Rastvor Int-A3 (1 g, 3,70 mmol, 1,00 ekviv.), TEA (1,5 g, 14,82 mmol, 4,00 ekviv.) i prop-2-enoil prop-2-enoata (700 mg, 5,55 mmol, 1,50 ekviv.) u DCM (20 mL) je mešano 1 h na ST. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (2:3) da bi se dobilo 720 mg (77%) naslovljenog jedinjenja u vidu bele čvrste supstance. LCMS [M+H]+ 253,07.
Int-A24: 2-[4-(Prop-2-enoil)piperazin-1-il]pirimidin-5-karbonitril
[0292]
[0293] Rastvor Int-A1 (6,4 g, 33,82 mmol, 1 ekv.), prop-2-enoil prop-2-enoata (5,1 g, 40,44 mmol, 1,20 ekviv.) i TEA (6,8 g, 67,20 mmol, 1,99 ekviv.) u DCM (40 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi, zatim je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je nanesen na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroleterom (7:3) do dobijanja 3,6 g (43,75%) naslovljenog jedinjenja kao bele čvrste supstance. LCMS [M+H]+: 244,12.
Int-A25: 6-[4-(Prop-2-enoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[0294]
[0295] Prop-2-enoil prop-2-enoat (17,42 g, 138,132 mmol, 1,30 ekviv.) je dodat u rastvor Int-A4 (20 g, 106,251 mmol, 1 ekviv.) i TEA (32,25 g, 2185). mmol, 3 ekviv.) u DCM (500 mL) na -40 °C. Dobijeni rastvor je mešan još 1 h na -40 °C. Reakcija je ugašena sa 500 mL vode i ekstrahovana sa 2 x 500 mL DCM. Nakon koncentracije, ostatak je nanesen na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroleterom (70:30) da bi se dobilo 16,4 g (64%) naslovljenog jedinjenja kao žuta čvrsta supstanca. LCMS [M+H]+ 243,13.
Int-A26: 5-(trifluorometil)-2-(4-(vinilsulfonil)piperazin-1-il)pirimidin
[0296]
[0297] Rastvor Int-A2, 2-hloroelhan-1-sulfonil hlorida i TEA (305,0 mg, 3,02 mmol, 3,50 ekviv.) u DCM (6 mL) je mešan 2 h na ST. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je eluiran na koloni silika gela sa EtOAc/petroleterom (1:5) da bi se dobilo 210 mg (75,7%) naslovljenog jedinjenja u vidu bele čvrste supstance. LCMS [M+H]+ 323,07.
Int-A27: 1-[5-(trifluorometil)-1,3-tiazol-2-il] piperazin hidrohlorid
[0298]
Korak 1: terc-butil 4-(5-(trifluorometil)tiazol-2-il)piperazin-1-karboksilat
[0299] Rastvor 2-bromo-5-(trifluorometil)tiazola (3,00 g, 12,9 mmol, 1,00 ekviv.), terc-butil piperazin-1-karboksilata (2,41 g, 12,9 mmol, 1,00 ekviv.) i Cs2CO3(8,43 g, 25,9 mmol, 2,00 ekviv.) u NMP (20,0 mL) je mešan 1 h na 110 °C. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 50 mL vode i ekstrahovana sa 3 x 50 mL EtOAc. Posle koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišć en hromatografijom na koloni silika gela sa EtOAc/petroleterom (15/85) da bi se dobilo 2,56 g (95%) naslovljenog jedinjenja kao žute čvrste supstance. LCMS [M+H]+ 338,11.
Korak 2: 1-[5-(trifluorometil)-1,3-tiazol-2-il]piperazin hidrohlorid
[0300] Rastvor terc-butil 4-(5-(trifluorometil)tiazol-2-il)piperazin-1-karboksilata (2,50 g, 7,41 mmol, 1,00 ekviv.) i HCl (gas) u 1,4-dioksanu ( 20.0 mL) je mešano 30 min na ST. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 2,26 g (95%) naslovljenog jedinjenja u obliku bele čvrste supstance. LCMS [M+H]+ 274,03.
Int-A28: 5-(trifluorometil)-2-(4-(vinilsulfonil)piperazin-1-il)tiazol
[0301]
[0302] Rastvor Int-A27 (2,25 g, 9,48 mmol, 1,00 ekviv.), TEA (4,80 g, 0,047 mmol, 5 ekviv.) i 2-hloroetan-1-sulfonil hlorida (1,86 g, 0,0112 hlor. ) u DCM (30.0 mL) je mešan 1 h na 0 °C u kupatilu sa vodom/ledom. Reakciona smeša je ugašena dodavanjem MeOH, a zatim koncentrovanjem pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišć en na koloni silika gela sa EtOAc/petroleterom (18/82) da bi se dobilo 1,74 g (54,9%) naslovljenog jedinjenja u vidu bele čvrste supstance. LCMS [M+H]+ 328,03.
Int-A29: 5-Merkapto-2-(4-metoksibenzil)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[0303]
[0304] Rastvor Int-A20 (2 g, 6,3 mmol, 1 ekv.), NaHS (1,4 g, 25,1 mmol, 4 ekviv.) i TEA (1,9 g, 18,9 mmol, 3 ekviv.) u EtOH (10 mL) je mešana 40 min na 70°C. Posle koncentracije pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišć en C18 hromatografijom reverzne faze eluiranjem sa H20/CH3CN da bi se dobilo 1,8 g (90,7%) naslovljenog jedinjenja u obliku žute čvrste supstance. LCMS [M+H]+ 317,06.
Sinteza primera jedinjenja
Primer 1: 5-[5-[(1-acetilpiperidin-4-il)oksi]-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4- (trifluorometil) -2,3-dihidropiridazin-3-on
[0305]
Korak 1: Sinteza 1-bromo-4,5-bis(bromometil)-2-fluorobenzena
[0306] Rastvor 1-bromo-2-fluoro-4,5-dimetilbenzena (5 g, 24,62 mmol, 1 ekv.), NBS (10,85 g, 60,96 mmol, 2,476 ekviv.), AIBN (1,98 g, 12,06 mmol, 0,490 ekviv.) u CCl4(50 mL) je mešano 12 h na 80 °C. Posle koncentracije, ostatak je prečišć en C18 hromatografijom reverzne faze eluiranjem sa H20/CH3CN da bi se dobilo 5,4 g (61%) naslovljenog jedinjenja kao žuta čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 360,80 [M+H]+.
Korak 2: Sinteza 5-bromo-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindola
[0307] Rastvor 1-bromo-4,5-bis(bromometil)-2-fluorobenzena (3 g, 8,31 mmol, 1 ekv.) u NH3/MeOH (300 mL, 1M) je mešan 2 h na 5 °C . Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 2,8 g (sirovog) naslovljenog jedinjenja kao žuta čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 215,97 [M+H]+.
Korak 3: Sinteza 5-(5-bromo-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0308] Rastvor 5-bromo-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindola (1,2 g, 5,55 mmol, 1 ekv.), Int-A6 (2,17 g, 6,60 mmol, 1,188 ekviv.), TEA ( 1,7 g, 16,80 mmol, 3,025 ekviv.) u EtOH (40 mL) je mešano 2 h na 80°C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (15/85) da bi se dobilo 870 mg (30,81%) naslovljenog jedinjenja u vidu braon čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 510,06 [M+H]+.
Korak 4: Sinteza 5-(5-fluoro-6-hidroksi-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0309] Rastvor 5-(5-bromo-6-fluoro-2,3-dihidro-lH-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsi-lil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (850 mg, 1,67 mmol, 1 ekv.), LiOH·H2O (154,6 mg, 3,68 mmol, 2,203 ekviv.), BHMPO (287 mg,0.84 mmol, 0.5 ekviv.), Cu(acac)2(220 mg, 0.84 mmol, 0.5 ekviv.) u DMSO (16 mL) i H20 (4 mL) su mešani 2 h na 80°C. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 20 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x30 ml EtOAc i organski slojevi su kombinovani i osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata. Posle koncentracije, ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroleterom (25/75) da bi se dobilo 260 mg (35 %) naslovljenog jedinjenja u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 446,14 [M+H]+.
Korak 5: Sinteza terc-butil 4-([6-fluoro-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il]oksi)piperidin-1-karboksilat
[0310] Rastvor 5-(5-fluoro-6-hidroksi-2,3-dihidro-lH-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi ]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (260 mg, 0,58 mmol, 1 ekv.), terc-butil 4-jodopiperidin-1-karboksilat (362,6 mg, 1,17 mmol, 1,997 ekviv.), K2CO3(126 mg 0,91 mmol, 1,562 ekviv.) u DMF (20 mL) je mešan 12 h na 80°C. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 20 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x30 ml EtOAc i organski slojevi su kombinovani i osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata. Posle koncentracije, ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroleterom (20/80) da bi se dobilo 500 mg (sirovog) naslovljenog jedinjenja u vidu smeđeg ulja. LCMS (ESI, m/z): 629,25 [M+H]+.
Korak 6: Sinteza 5-[5-fluoro-6-(piperidin-4-iloksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin -3-on
[0311] Rastvor terc-butil 4-([6-fluoro-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il]oksi)piperidin-1-karboksilat (500 mg, 0,80 mmol, 1 ekv.) u HCl/dioksanu (5 mL) je mešan 12 h na sobnoj temperaturi. Posle koncentracije, ostatak je prečišć en C18 hromatografijom reverzne faze eluiranjem sa H20/CH3CN da bi se dobilo 330 mg (sirovog) naslovljenog jedinjenja u vidu žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 399,25 [M+H]+.
Korak 7: Sinteza 5-[5-[(1-acetilpiperidin-4-il)oksi]-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2, 3-dihidropiridazin-3-on
[0312] Rastvor 5-[5-fluoro-6-(piperidin-4-iloksi)-2,3-dihidro-lH-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiri- dazin-3-on (330 mg, 0,83 mmol, 1 ekviv.), Ac2O (85,2 mg, 0,83 mmol, 1,007 ekviv.), TEA (372 mg, 3,68 mmol, 4,438 ekviv.) u DCM (5 mL) je mešan za na sobnoj temperaturi. Posle koncentracije, ostatak je prečišć en C18 hromatografijom reverzne faze eluiranjem sa H20/CH3CN. Zatim je ostatak dalje prečišć en Prep-HPLC daju ć i naslovljeno jedinjenje (44 mg, 12 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 441,39 [M+H]+,<1>HNMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 12.52 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.29 (dd, J= 11.8, 9.4 Hz, 2H), 4.90 (br, 4H), 4.59 (dt, J= 8.0, 4.2 Hz, 1H), 3.83 (dd, J= 13.3, 6.4 Hz, 1H), 3.73 - 3.61 (m, 1H), 3.59-3.47(m,1H),3.39 - 3.13 (m, 1H), 2.01-1.81 (m, 5H), 1.88-1.42 (m, 2H).
Primer 2: 5-[4-[(1-acetilpiperidin-4-il)oksi]-7-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0313]
Korak 1: Sinteza 2-benzil-4-bromo-7-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindola
[0314] Rastvor 1-bromo-2,3-bis(bromometil)-4-fluorobenzena (2,2 g, 6,10 mmol, 1 ekv.), fenilmetanamina (0,66 g, 6,16 mmol, 1,010 ekviv.), KHCO3(1,5 g) 14,98 mmol, 2,457 ekviv.) u ACN (200 mL) je mešano 3 h na 75°C u uljnom kupatilu. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (5/95) da bi se dobilo 660 mg (35 %) naslovljenog jedinjenja kao žuta čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 306,02 [M+H]+.
Korak 2: Sinteza 2-benzil-4-fluoro-7-metoksi-2,3-dihidro-1H-izoindola
[0315] Rastvor MeOH (5 mL), 2-benzil-4-bromo-7-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindola (700 mg, 2,29 mmol, 1 ekv.), Pd2(alil)2Cl2( 56,0 mg, 0,15 mmol, 0,067 ekviv.), RockPhos (107,2 mg, 0,23 mmol, 0,100 ekviv.), Cs2CO3(1492,1 mg, 4,58 mmol, 2,003 ekviv.) u crvenom toluenu na 12°C u ulju 3°C je mešan u kupatilu sa atmosferom azota. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (5/95) da bi se dobilo 500 mg (85 %) naslovljenog jedinjenja u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 258,12 [M+H]+.
Korak 3: Sinteza 2-benzil-7-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-ola
[0316] Rastvor 2-benzil-4-fluoro-7-metoksi-2,3-dihidro-lH-izoindola (500 mg, 1.94 mmol, 1 ekv.) u DCM (5 mL) je mešan na 0°C. Ovome je dodat BBr3(5 mL, 52,89 mmol, 27,217 ekviv.) kap po kap uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan 12 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 10 mL metanola. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (15/85) da bi se dobilo 456 mg (96,5 %) naslovljenog jedinjenja u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 244,11 [M+H]+.
Korak 4: Sinteza 7-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-ol hidrohlorida
[0317] Rastvor 2-benzil-7-fluoro-2,3-dihidro-lH-izoindol-4-ola (400 mg, 1,64 mmol, 1 ekv.), Pd/C (40,1 mg), HCl (1M, 3 mL). Dobijeni rastvor je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Čvrste materije su filtrirane. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ovo je rezultiralo sa 210 mg (67 %) naslovljenog jedinjenja u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 154,06 [M+H]+.
Korak 5: Sinteza 5-(4-fluoro-7-hidroksi-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0318] Rastvor 7-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-ol hidrohlorida (100 mg, 0,53 mmol, 1 ekv.), Int-A6 (214 mg, 0,65 mmol, 1,234 ekviv.), TEA (194,7 mg, 1,92 mmol, 3,648 ekviv.) u EtOH (3 mL) je mešan 2 h na 80°C u uljnom kupatilu. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom da bi se dobilo 140 mg (60 %) naslovljenog jedinjenja kao žuto ulje. LCMS (ESI, m/z): 446,14 [M+H]+.
Korak 6: Sinteza terc-butil 4-([7-fluoro-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazina -4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-il]oksi)piperidin-1-karboksilata
[0319] Rastvor 5-(4-fluoro-7-hidroksi-2,3-dihidro-lH-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (400 mg, 0,90 mmol, 1 ekv.), terc-butil 4-jodopiperidin-1-karboksilata (558 mg, 1,79 mmol, 1,997 ekviv.), K2CO3(193. 1,40 mmol, 1,562 ekviv.) u DMF (5 mL) je mešan 4 dana na 80°C. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 5 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x30 ml EtOAc i organski slojevi su kombinovani i osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata. Organski sloj je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (50/50) da bi se dobilo 130 mg (23 %) naslovljenog jedinjenja kao žuta čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 629,27 [M+H]+.
Korak 7: Sinteza 5-[4-fluoro-7-(piperidin-4-iloksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0320] Rastvor terc-butil 4-([7-fluoro-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-il]oksi)piperidin-1-karboksilata (130 mg, 0,21 mmol, 1,00 ekviv.) u hlorovodoniku/dioksanu (10 mL) je mešan tokom 16 h na sobnoj temperaturi. Posle koncentracije, ostatak je prečišć en C18 hromatografijom reverzne faze eluiranjem sa H20/CH3CN da bi se dobilo 80 mg (96%) naslovljenog jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 399,14 [M+H]+.
Korak 8: Sinteza 5-[4-[(1-acetilpiperidin-4-il)oksi]-7-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0321] Rastvor TEA (90 mg, 0,89 mmol, 3,00 ekviv.), 5-[4-fluoro-7-(piperidin-4-iloksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]- 4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (80 mg, 0,20 mmol, 1,00 ekv.), Ac2O (20,65 mg, 0,20 mmol, 1,00 ekviv.) u DCM (5 mL) je mešano 2 h na sobnoj temperaturi. Posle koncentracije, ostatak je prečišć en C18 hromatografijom reverzne faze eluiranjem sa H20/CH3CN. Zatim je ostatak dalje prečišć en Prep-HPLC daju ć i naslovljeno jedinjenje (18,5 mg, 21 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 441,39 [M+H]+,<1>HNMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 12.56 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.15 - 7.07 (m, 2H), 5.02 (s, 2H), 4.92 (s, 2H), 4.68 (dt, J = 6.6, 3.4 Hz,1H), 3.74 - 3.57 (m, 2H), 3.45 - 3.32 (m, 2H), 2.02 (s, 3H), 2.00 - 1.84 (m, 2H), 1.72 - 1.51 (m, 2H).
Primer 3: 5-[4-fluoro-6-(piperidin-4-iloksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on; mravlja kiselina
[0322]
Korak 1: Sinteza metil 4-bromo-2-(bromometil)-6-fluorobenzoata
[0323] Rastvor metil 4-bromo-6-fluoro-2-metilbenzoata (10 g, 40,48 mmol, 1,00 ekviv.), NBS (7,23 g, 40,62 mmol, 1,10 ekviv.) i AIBN (3,323 g, 5,0 mmol, 20,00) ekviv.) u CCl4(150 mL) je mešan 12 h na 80°C, a zatim je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom i sirovi proizvod je prečišć en C18 hromatografijom reverzne faze eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 10 g ( 76 %) naslovljenog jedinjenja kao žuto ulje. LCMS (ESI, m/z): 324,88 [M+H]+.
Korak 2: Sinteza 5-bromo-7-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-ona
[0324] Rastvor 4-bromo-2-(bromometil)-6-fluorobenzoata (10 g, 30,68 mmol, 1,00 ekviv.) u NH3(gas)/MeOH (40 mL, 7M) je mešan 40 minuta na 40° C, a zatim je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 9,1 g (sirovog) naslovljenog jedinjenja u vidu beličaste čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 230,04 [M+H]+.
Korak 3: Sinteza terc-butil 5-bromo-7-fluoro-1-okso-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-karboksilata
[0325] U rastvor 5-bromo-7-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-ona (9,1 g, 39,56 mmol, 1,00 ekviv.) i DMAP (977 mg, 8,00 mmol, 0,20 ekviv.) u THF (70 mL), dodat je (Boc)2O (12,99 g, 59,52 mmol, 1,50 ekviv.), i dobijeni rastvor je mešan 2 h na sobnoj temperaturi, a zatim je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišć en C18 hromatografijom reverzne faze eluiranjem sa H20/CH3CN da bi se dobilo 5,7 g (44 %) naslovljenog jedinjenja u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 330,15 [M+H]+.
Korak 4: Sinteza 6-bromo-4-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindola
[0326] Pod azotom, u rastvor terc-butil 5-bromo-7-fluoro-1-okso-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-karboksilata (5,7 g, 17,26 mmol, 1,00 ekviv.) i NaBH4(7,9 g, 208,83 mmol, 12,00 ekviv.) u THF (60 mL), BF3/Et2O (36,9 g, 15,00 ekviv., 1M) dodat je kap po kap, a zatim je dobijeni rastvor mešan 3 h na 70°C. Dobijeni rastvor je ugašen dodavanjem 200 mL vode, ekstrahovan sa 3x200 mL EtOAc i kombinovani organski slojevi su isprani sa 1x200 mL slanog rastvora, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom, a zatim su ostaci naneti na kolonu silika gela eluiranjem sa DCM/metanolom (2:3) da bi se dobilo 2,05 g (55 %) naslovljenog jedinjenja kao sivobele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 216,05 [M+H]+.
Korak 5: Sinteza 5-(6-bromo-4-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0327] Rastvor 6-bromo-4-fluoro-2,3-dihidro-lH-izoindola (2,05 g, 9,49 mmol, 1,00 ekviv.), 5-hloro-4-(trifluorometil)-2-[[ 2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (3,12 g, 9,49 mmol, 1,00 ekv.) i TEA (2,88 g, 28,46 mmol, 3,00 ekv.) u etanolu (20 mL) je mešan 2 h na 60°C, a zatim je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom, a zatim je ostatak nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroleterom (1:5) da bi se dobilo 2,1 g (44 %) naslovljenog jedinjenje kao svetlosmeđa čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 508,39 [M+H]+.
Korak 6: Sinteza 5-(4-fluoro-6-hidroksi-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0328] Rastvor 5-(6-bromo-4-fluoro-2,3-dihidro-lH-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (2 g, 3,93 mmol, 1,00 ekviv.), BHMPO (135 mg, 0,41 mmol, 0,10 ekviv.), Cu(acac)2(103 mg, 0,39 mmol, 0,10 ekviv.) i LiOHH2O (363 mg, 8,64 mmol, 2,20 ekviv.), DMSO (20 mL) i voda (5 mL) su mešani 12 h na 80°C, a zatim su čvrste materije filtrirane, a dobijeni rastvor je razblažen sa 100 mL H2O, ekstrahovano sa 3x100 mL EtOAc i organski slojevi su kombinovani, isprani sa 1x100 mL rastvora soli i koncentrovani pod vakuumom, a zatim je ostatak naneset na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroleumom (3:1) da bi se dobilo 680 mg (39 %) naslovljenog jedinjenja kao zelena čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 446,14 [M+H]+.
Korak 7: Sinteza terc-butil 4-([7-fluoro-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazina -4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il]oksi)piperidin-1-karboksilata
[0329] Rastvor 5-(4-fluoro-6-hidroksi-2,3-dihidro-lH-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (300 mg, 0,67 mmol, 1,00 ekviv.), terc-butil 4-jodopiperidin-1-karboksilata (629 mg, 2,02 mmol, 3,00 ekv.) i kalijum karbonata (279 mg , 2,02 mmol, 3,00 ekviv.) u DMF (5 mL) je mešan 12 h na 80 °C, a zatim je dobijeni rastvor razblažen sa 50 mL H2O, ekstrahovan sa 3x50 mL EtOAc i organski slojevi su kombinovani, isprani sa 1x50 mL slanog rastvora, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom, a zatim je ostatak nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroleterom (3:1) da bi se dobilo 153 mg (36%) naslovljenog jedinjenja kao žuto ulje. LCMS (ESI, m/z): 629,27 [M+H]+.
Korak 8: Sinteza 5-[4-fluoro-6-(piperidin-4-iloksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin -3-ona; mravlja kiselina
[0330] Rastvor terc-butil 4-([7-fluoro-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il]oksi)piperidin-1-karboksilata (135 mg, 0,21 mmol, 1,00 ekviv.) u HCl(gas)/dioksanu (6 mL , 4M) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi, a zatim je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom, a zatim je sirovi proizvod dalje prečišć en pomo ć u Pre-HPLC daju ć i naslovljeno jedinjenje (34,2 mg, 36 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 399,05 [M+H]+.<1>HNMR (DMSO-d6, 300MHz) δ 12.54 (s, 1H) ,8.32 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 6.91 (s, 1H),6.87 (d, J= 11.4 Hz, 1H), 4.96 (d, J= 12.2 Hz, 4H), 4.53 (dr, 1H), 3.05 (dr, 2H), 2.79 (dr, 2H), 2.01-1.97 (m, 2H), 1.62-1.60 (m, 2H).
Primer 4: 5-[6-[(1-acetilpiperidin-4-il)oksi]-4-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0332] Rastvor 5-[4-fluoro-6-(piperidin-4-iloksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiri- dazin-3-jedan; mravlja kiselina (110 mg, 0,28 mmol, 1,00 ekviv.), TEA (90 mg, 0,89 mmol, 3,00 ekviv.) i Ac2O (150 mg, 1,47 mmol, 5,00 ekviv.) u DCM (20 mL) je mešan 4 h na sobnoj temperaturi, a zatim je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom, a zatim je ostatak prečišć en Prep-HPLC daju ć i naslovljeno jedinjenje (18,3 mg, 15 % ) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 441,05 [M+H]+. 1HNMR (DMSO-d6, 300MHz): δ 12.56 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 6.92 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.86 (dd, J = 11.2, 2.0 Hz, 1H), 4.96 (d, J= 12.2 Hz, 4H), 4.63 (dt, J = 8.1, 4.3 Hz, 1H), 3.88-3.84 (m, 1H), 3.69-3.64 (m, 1H), 3.32-3.30 (m, 1H), 3.22-3.14 (m, 1H), 2.01 (s, 3H), 1.94-1.88 (m, 2H), 1.67-1.56 (m, 1H), 1.53-1.39 (m, 1H).
Primer 5: 5-[6-[(1-acetilpiperidin-4-il)oksi]-5-fluoro-1-metil-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil-)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0333]
Korak 1: sinteza 4-bromo-2-(bromometil)-5-fluorobenzoata
[0334] Rastvor metil 4-bromo-5-fluoro-2-metilbenzoata (9,5 g, 38,45 mmol, 1,00 ekviv.), AIBN (3,15 g, 19,18 mmol, 0,50 ekviv.), NBS (10.31 g, 57.93 mmol, 1.50 ekviv.) u CCl4(100 mL) je mešan 1 preko noć i na 80°C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroleterom (1/50) da bi se dobilo 12,5 g naslovljenog jedinjenja kao žuto sirovo ulje. LCMS (ESI, m/z): 324,88 [M+H]+.
Korak 2: Sinteza 5-bromo-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-ona
[0335] Rastvor metil 4-bromo-2-(bromometil)-5-fluorobenzoata (12,5 g, 38,35 mmol, 1,00 ekviv.) u NH3/Me-OH (150 mL, 7M) je mešan 3 h na 40 °C . Čvrste materije su sakupljene filtracijom nakon što je dobijeni rastvor ohlađen na sobnoj temperaturi. Ovo je rezultiralo sa 7,1 g (80 %) naslovljenog jedinjenja kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 229,95 [M+H]+.
Korak 3: Sinteza terc-butil 5-bromo-6-fluoro-1-okso-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-karboksilata
[0336] Rastvor 5-bromo-6-fluoro-2,3-dihidro-lH-izoindol-1-on (7,1 g, 30,87 mmol, 1,00 ekviv.), 4-dimetilaminopiridin (759 mg, 6,21 mmol, 0,20 ekv. ekviv.), (Boc)20 (8 g, 36.66 mmol, 1.20 ekviv.) u THF (100 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 100 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 2x100 mL EtOAc i organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod vakuumom. Ovo je rezultiralo sa 9,8 g (96 %) naslovljenog jedinjenja u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 330,01 [M+H]+.
Korak 4: Sinteza terc-butil 5-bromo-6-fluoro-3-metil-1-okso-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-karboksilata
[0337] Rastvor terc-butil 5-bromo-6-fluoro-1-okso-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-karboksilata (500 mg, 1,51 mmol, 1,00 ekviv.) u THF (5 mL) je mešan na -70°C. Zatim je usledilo dodavanje NaHMDS u THF (1,8 mL, 1,20 ekviv., 1M) uz mešanje na -70 °C. Dobijeni rastvor je mešan 30 min na -70°C. Ovome je dodat jodometan (213,7 mg, 1,51 mmol, 1,00 ekviv.). Dobijeni rastvor je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 10 mL vode.
Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x10 mL EtOAc i organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (1/15) da bi se dobilo 210 mg (40 %) naslovljenog jedinjenja kao braon čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 344,02 [M+H]+.
Korak 5: Sinteza terc-butil 6-bromo-5-fluoro-1-metil-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-karboksilata
[0338] Rastvor terc-butil 5-bromo-6-fluoro-3-metil-1-okso-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-karboksilata (210 mg, 0,61 mmol, 1,00 ekviv.), NaBH4(220 mg, 5,97 mmol, 10,00 ekviv.), BH3.Et2O (0,86 mL, 12,00 ekviv.) u THF (5 mL) je mešan 3 h na 70 °C. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 10 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x10 mL EtOAc i organski slojevi su kombinovani. Dobijena smeša je isprana sa 2x10 mL slanog rastvora. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ovo je rezultiralo sa 180 mg (89 %) naslovljenog jedinjenja u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 330,04 [M+H]+.
Korak 6: Sinteza 6-bromo-5-fluoro-1-metil-2,3-dihidro-1H-izoindol hidrohlorida
[0339] Rastvor terc-butil 6-bromo-5-fluoro-1-metil-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-karboksilata (180 mg, 0,55 mmol, 1,00 ekviv.) u HCl/dioksanu (5 mL, 4M) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Čvrste materije su sakupljene filtracijom da bi se dobilo 130 mg (89 %) naslovljenog jedinjenja u obliku žutog sirovog ulja. LCMS (ESI, m/z): 229,99 [M+H]+.
Korak 7: Sinteza 5-(6-bromo-5-fluoro-1-metil-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0340] Rastvor 5-hloro-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (161 mg, 0,49 mmol, 1,00 ekviv.), TEA (100 mg, 0,99 mmol, 2,00 ekviv.), 6-bromo-5-fluoro-1-metil-2,3-dihidro-1H-izoindol hidrohlorida (130 mg, 0,49 mmol, 1,00 ekviv.) u etanolu (5 mL) je mešana 3 h na 40°C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (1/6) da bi se dobilo 114 mg (45 %) naslovljenog jedinjenja u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 522,08 [M+H]+.
Korak 8: Sinteza 5-(5-fluoro-6-hidroksi-1-metil-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0341] Rastvor 5-(6-bromo-5-fluoro-1-metil-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsi)-lil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (1,5 g, 2,87 mmol, 1,00 ekviv.), BHMPO (472 mg, 1,43 mmol, 0,50 ekviv.), Cu(acac)2(376 mg, 1,44) mmol, 0,50 ekviv.), LiOH·H20 (241 mg, 5,74 mmol, 2,00 ekviv.) u DMSO (20 mL) i vode (5 mL) je mešan 2 sata na 80°C. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 50 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x20 mL EtOAc i organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela ispiruć i sa EtOAc/petrolej etrom (1/3) da bi se dobilo 136 mg (10 %) naslovljenog jedinjenja u vidu braon čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 460,19 [M+H]+.
Korak 9: Sinteza terc-butil 4-([6-fluoro-3-metil-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6 -dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1 H-izoindol-5-il]oksi)piperidin-1-karboksilata
[0342] Rastvor 5-(5-fluoro-6-hidroksi-1-metil-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilailil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (136 mg, 0,30 mmol, 1,00 ekviv.), kalijum karbonata (81,6 mg, 0,59 mmol, 2,00 ekviv.), terc-butil 4-jodopiperidin-1-jodopiperidin karboksilata (276 mg, 0,89 mmol, 3,00 ekviv.) u DMF (10 mL) je mešan 3 dana na 80 °C. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 10 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x10 mL EtOAc i organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (1/4) da bi se dobilo 190 mg naslovljenog jedinjenja u obliku žutog sirovog ulja. LCMS (ESI, m/z): 643,29 [M+H]+.
Korak 10: Sinteza 5-[5-fluoro-1-metil-6-(piperidin-4-iloksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0343] Rastvor terc-butil 4-([6-fluoro-3-metil-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il]oksi)piperidin-1-karboksilata (180 mg, 0,28 mmol, 1 ekv.) u HCl/dioksanu (5 mL) je mešan 12 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 200 mg (sirovog) naslovljenog jedinjenja u obliku žutog ulja.
Korak 11: Sinteza 5-[6-[(1-acetilpiperidin-4-il)oksi]-5-fluoro-1-metil-2,3-dihidro-1H-izoindol-2il]-4-(trifluorometil-)-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0344] Rastvor 5-[5-fluoro-1-metil-6-(piperidin-4-iloksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (120 mg, 0,29 mmol, 1 ekv.), sirć etnog anidrida (30 mg, 0,29 mmol, 1,010 ekviv.), TEA (131 mg, 1,29 mmol, 4,449 ekviv.) u DCM (5 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Posle koncentracije, ostatak je prečišć en C18 hromatografijom reverzne faze eluiranjem sa H20/CH3CN. Zatim je ostatak dalje prečišć en Prep-HPLC daju ć i naslovljeno jedinjenje (9,9 mg, 7,5 %) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 455,42 [M+H]+,<1>HNMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 12.60 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.27(s, 1H), 5.64 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 5.05 (d, J = 14.8 Hz, 1H),4.80 - 4.65 (br, 1H), 4.50 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 3.90 - 4.75 (m, 1H), 3.73 - 3.56 (m, 1H), 3.40-3.20 (m, 2H), 2.03 (s, 3H), 1.95 - 1.80 (m, 2H), 1.72- 1.80 (m, 2H), 1.49 - 1.43 (m,3H).
Primer 6: 5-[2-[(1-metilpiperidin-4-il)oksi]-SH,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2, 3-dihidropiridazin-3-on
[0345]
Korak 1: Sinteza 5-[2-hloro-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0346] Rastvor 2-hloro-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il hidrohlorida (5 g, 26,31 mmol, 1,00 ekviv.), TEA (8 g, 79,06 mmol, 3,00) ekviv.), 5-hloro-4-(trifluorometil)-2-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidropiridazin-3-ona (14,3 g, 43,49 mmol, 1,00 ekviv.) u EtOH (30 mL) je mešan 2 h na 80 °C. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (1/4) da bi se dobilo 9,3 g (79 %) naslovljenog jedinjenja u vidu žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 447,12 [M+H]+.
Korak 2: Sinteza 5-[2-hidroksi-5H, 6H, 7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0347] Rastvor 5-[2-hloro-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) )etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (1,2 g, 2,69 mmol, 1,00 ekviv.), t-BuBrettphos (196 mg, 0,15 ekviv.), K3PO4(1,711 g, 8,00 mmol, ekviv.), ekviv. (OAc)2(61 mg, 0,27 mmol, 0,10 ekviv.) u dioksanu (15 mL) i vodi (5 mL) u atmosferi azota je mešan 2 h na 100 °C. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa DCM/metanolom (9/1) da bi se dobilo 700 mg (61 %) naslovljenog jedinjenja u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 429,15 [M+H]+.
Korak 3: Sinteza terc-butil 4-([6-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-2-il]oksi)piperidin-1-karboksilata
[0348] Rastvor 5-[2-hidroksi-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil))etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (500 mg, 1,17 mmol, 1,00 ekviv.), Ag2CO3(640 mg, 2,00 ekv.), terc-butil 4-jodopiperidin-1-karboksilata (1 g, 31 ekv. mmol, 3,00 ekviv.) u DMF (15 mL) je mešan 4 h na 80 °C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 15 mL vode i ekstrahovan sa 3x15 mL EtOAc, a organski slojevi su kombinovani. Dobijeni rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (1/4) da bi se dobilo 500 mg (73 %) naslovljenog jedinjenja iz naslova u vidu žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 612,28 [M+H]+.
Korak 4: Sinteza 5-[2-(piperidin-4-iloksi)-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiri - dazin-3-ona
[0349] Rastvor terc-butil 4-([6-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il] -5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-2-il]oksi)piperidin-1-karboksilata (500 mg, 0,82 mmol, 1,00 ekviv.) u HCl/dioksanu (20 mL, 4M) je mešan preko noć i na 25°C. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 200 mg (64 %) naslovljenog jedinjenja u obliku žutog sirovog ulja. LCMS (ESI, m/z): 382,14 [M+H]+.
Korak 5: Sinteza 5-[2-[(1-metilpiperidin-4-il)oksi]-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)- 2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0350] Rastvor 5-(2-(piperidin-4-iloksi)-5,7-dihidro-6H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-ona (200 mg, 0,52 mmol, 1,00 ekviv.), (HCHO)n(45 mg, 3,00 ekviv.), sirć etne kiseline (60 mg, 1,00 mmol, 2,00 ekviv.), NaBH3CN (95 mg, 1,51 mmol, 3,00 ekviv.) u MeOH (5 mL) je mešan preko noć i na 25 °C. Posle koncentracije, ostatak je prečišć en pomo ć u Prep-HPLC daju ć i naslovljeno jedinjenje (27,8 mg, 13 %) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 396.16 [M+H]+,<1>H NMR (300 MHz, Methanol-d4) δ 8.08 (s, 1H), 7.68 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.74 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 5.12 (dq, J= 8.1, 4.1 Hz, 1H), 5.02 (s, 2H), 4.92 (s, 2H), 2.78 (m, 2H), 2.35 (m, 5H), 2.09 (dd, J = 11.9, 7.5 Hz, 2H), 1.86 (qd, J = 11.8, 10.1, 3.5 Hz, 2H).
Primer 7: 5-[3-(piperidin-4-iloksi)-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0351]
Korak 1: Sinteza 5-[3-bromo-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0352] Rastvor 3-bromo-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin hidrohlorida (1 g, 4,25 mmol, 1,00 ekviv.) u etanolu (5 mL), 5-hloro-4-( trifluorometil)-2-[2-(trimetilsilil)etoksi]metil-2,3-dihidropiridazin-3-ona (1,6 g, 4,87 mmol, 1,15 ekviv.) i TEA (1,2 mL) su mešani 1 h na 80 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa EtOAc/petroleterom (1:2). Ovo je rezultiralo sa 1,5 g (72 %) naslovljenog jedinjenja kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 491,07 [M+H]+.
Korak 2: Sinteza 5-[3-hidroksi-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0353] Rastvor 5-[3-bromo-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) )etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (1 g, 2,04 mmol, 1,00 ekviv.), Pd(OAc)2(92 mg, 0,41 mmol, 0,20 ekviv.), t-Bubrettphos (200 mg), K3PO4(1,3 g, 6,12 mmol, 3,01 ekviv.) u dioksanu/H20 (12,5 mL) je mešan 4 h na 80 °C u inertnoj atmosferi azota. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 250 mL EtOAc. Dobijena smeša je isprana sa 2x50 mL vode i 1x50 mL slanog rastvora. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa DCM/metanolom (9:1). Ovo je rezultiralo sa 680 mg (78 %) naslovljenog jedinjenja kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 429,16 [M+H]+.
Korak 3: Sinteza terc-butil 4-([6-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-3-il]oksi)piperidin-1-karboksilata kao ulje.
[0354] Rastvor 5-[3-hidroksi-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetil-silil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (190 mg, 0,44 mmol, 1,00 ekviv.), Ag2CO3(370 mg) i terc-butil 4-jodopiperidin-1-karboksilata (450 mg, 1,45 mmol, 3,26 ekviv.) u DMF (5 mL) je mešan 2 h na 80 °C. Čvrste materije su filtrirane. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa DCM/metanolom (95:5). Ovo je rezultiralo sa 60 mg (22 %) naslovljenog jedinjenja u obliku ulja. LCMS (ESI, m/z): 612,28 [M+H]+.
Korak 4: Sinteza 5-[3-(piperidin-4-iloksi)-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiri - dazin-3-ona
[0355] U mešani rastvor terc-butil 4-([6-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin- 4-il]-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-3-il]oksi)piperidin-1-karboksilata (60 mg, 0,10 mmol, 1,00 ekviv.) u DCM (5 mL) i trifluorosirć etne kiseline dodata je kiselina (2 mL). Dobijeni rastvor je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Posle koncentracije, ostatak je prečišć en C18 hromatografijom reverzne faze eluiranjem sa H20/CH3CN. Zatim je ostatak dalje prečišć en Prep-HPLC daju ć i naslovljeno jedinjenje (13,1 mg, 35 %) u obliku prljavo-bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 382,15 [M+H]+.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.17 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.50 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 4.93 (s, 2H), 4.86 (s, 2H), 4.49 (tt, J = 8.6, 3.9 Hz, 1H), 3.05 - 2.95 (m, 2H), 2.71 - 2.60 (m, 2H), 2.00 - 1.90 (m, 2H), 1.58 - 1.44 (m, 2H).
Primer 8: 5-[3-[(1-acetilpiperidin-4-il)oksi]-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluoro-metil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0357] U mešani rastvor 5-[3-(piperidin-4-iloksi)-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2, dodat je 3-dihidropiridazin-3-on (150 mg, 0,39 mmol, 1,00 ekviv.) u piridinu (5 mL), Ac20 (0,5 mL). Dobijeni rastvor je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Posle koncentracije, ostatak je prečišć en C18 hromatografijom reverzne faze eluiranjem sa H20/CH3CN. Zatim je ostatak dalje prečišć en Prep-HPLC daju ć i naslovljeno jedinjenje (50,4 mg, 30 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 424,05 [M+H]+.<1>H NMR (300 MHz, Methanol-d4) δ 8.22 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.53 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 5.09 (s, 2H), 4.97 (s, 2H), 4.78 - 4.67 (m, 1H), 3.94 - 3.73 (m, 2H), 3.61 - 3.44 (m, 2H), 2.14 (s, 3H), 2.11 - 1.93 (m, 2H), 1.88 - 1.67 (m, 2H).
Primer 9: 5-[4-(piperidin-4-iloksi)-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0358]
Korak 1: Sinteza 5-[4-bromo-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0359] Rastvor 5-hloro-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (2,3 g, 7,00 mmol, 1,00 ekviv.), 4-bromo-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin hidrobromida (1,95 g, 6,97 mmol, 1,00 ekviv.), TEA (3,6 g, 35,58 mmol, 5,00 ekviv.) u EtOH (30 mL) je mešan 2 h na 80 °C. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (1/4) da bi se dobilo 1,1 g (32 %) naslovljenog jedinjenja u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 491,06 [M+H]+.
Korak 2: Sinteza 5-[4-hidroksi-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0360] Rastvor 5-[4-bromo-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) )etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (400 mg, 0,81 mmol, 1,00 ekviv.), Pd(OAc)2(19 mg, 0,08 mmol, 0,10 ekviv.), K3PO4(520 mg, 2,45 mmol) 3,00 ekviv.), t-BuBrettphos (60 mg, 0,15 ekviv.) u dioksanu (10 mL) i vodi (3 mL) u atmosferi azota je mešan 2 h na 100 °C. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa DCM/metanolom (19/1) da bi se dobilo 215 mg (62 %) naslovljenog jedinjenja u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 429,15 [M+H]+.
Korak 3: Sinteza terc-butil 4-([6-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-4-il]oksi)piperidin-1-karboksilata
[0361] Rastvor 5-[4-hidroksi-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (250 mg, 0,58 mmol, 1,00 ekv.), Ag2CO3(322 mg, 2,00 ekv.), terc-butil 4-jodopiperidin-1-karboksilata (5475 mg, mmol, 3,00 ekviv.) u DMF (15 mL) je mešano 4 h na 80 °C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 15 mL vode i ekstrahovan sa 3x15 mL EtOAc, a organski slojevi su kombinovani. Dobijeni rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa DCM/metanolom (19/1) da bi se dobilo 240 mg (67%) naslovljenog jedinjenja u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 612,28 [M+H]+.
Korak 4: Sinteza 5-[4-(piperidin-4-iloksi)-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiri - dazin-3-ona
[0362] Rastvor terc-butil 4-([6-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il] -5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-4-il]oksi)piperidin-1-karboksilata (240 mg, 0,39 mmol, 1,00 ekviv.) u dioksanu/HCl (15 mL, 4 M) je mešan 1 preko noć i na 25°C. Posle koncentracije, ostatak je prečiš ć en pomo ć u Prep-HPLC daju ć i naslovljeno jedinjenje (31,5 mg, 21 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 382,14 [M+H]+,<1>H NMR (400 MHz, Methanol- d4) δ 8.36 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.07 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 5.03 (d, J = 11.7 Hz, 4H), 4.78 (dq, J = 8.3, 4.1 Hz, 1H), 3.11 (dt, J = 12.9, 4.6 Hz, 2H), 2.79 (ddd, J = 12.7, 9.2, 3.2 Hz, 2H), 2.39 - 1.85 (m, 2H), 1.75 (dtd, J = 13.0, 8.9, 3.8 Hz, 2H).
Primer 10: 5-[4-[2-(morfolin-4-il)etoksi]-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2- [[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0363]
Korak 1: Sinteza 5-[4-[2-(morfolin-4-il)etoksi]-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0364] Rastvor 5-[4-hidroksi-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (200 mg, 0,47 mmol, 1,00 ekv.), Ag2CO3(387 mg, 3,00 ekv.), Nal (140 mg, 2,00 ekv.), 4-(2-hloroetil)morfolina (280 mg, 1,87 mmol, 4,00 ekviv.) u DMF (15 mL) je mešan 2 h na 80 °C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 15 mL vode i ekstrahovan sa 3x15 mL EtOAc, a organski slojevi su kombinovani. Dobijeni rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanesen na kolonu silika gela eluiranjem sa DCM/metanolom (9/1) da bi se dobilo 200 mg (79 %) naslovljenog jedinjenja u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 542,23 [M+H]+.
Korak 2: Sinteza 5-[4-[2-(morfolin-4-il)etoksi]-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0365] Rastvor 5-[4-[2-(morfolin-4-il)etoksi]-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (80 mg, 0,15 mmol, 1,00 ekviv.) u dioksanu/HCl (15 mL, 4 M) je mešan tokom preko noć i na 25 °C. Posle koncentracije, ostatak je prečiš ć en pomo ć u Prep-HPLC daju ć i naslovljeno jedinjenje (22,6 mg, 37 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 412,15 [M+H]+,<1>H NMR (300 MHz, Methanol-d4) δ 8.40 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.06 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.04 (d, J = 11.1 Hz, 4H), 4.38 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.91 - 3.56 (m, 4H), 2.89 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.77 - 2.51 (m, 4H).
Primer 11: 5-[6-metoksi-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0366]
Korak 1: Sinteza 5-[6-hloro-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0367] Rastvor 5-hloro-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (6 g, 18,25 mmol, 1,00 ekv.), TEA (5,5 g, 54,35 mmol, 3,00 ekv.), 6-hloro-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin hidrohlorid (3,5 g, 18,32 mmol, 1,00 ekv.) u etanolu (70mL) je mešan tokom 3 sata na 80 °C. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom i ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (4/6) čime je dobijeno 4,9 g (60 %) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 447,12 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[6-metoksi-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0368] Rastvor 5-[6-hloro-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (500 mg, 1,12 mmol, 1,00 ekv.), [Pd(ally)Cl]2(41 mg, 0,11 mmol, 0,10 ekv.), Rockphos (53 mg, 0,11 mmol, 0,10 ekv.), Cs2CO3(730 mg, 2,24 mmol, 2,00 ekv.), metanol (76 mg, 2,37 mmol, 2,12 ekv.) u toluenu (10 mL) je mešan tokom 3 sata pod atmosferom azota na 80 °C . Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (3/7) čime je dobijeno 336 mg (68 %) naslovnog jedinjenja kao ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z): 443,16 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 5-[6-metoksi-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on [0369] Rastvor 5-[6-metoksi-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (336 mg, 0,76 mmol, 1,00 ekv.) u vodonik hlorid/dioksanu (10 mL) je mešan tokom 12 sati na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Zatim je ostatak dalje prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (44,3 mg , 19%) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 313,25 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,56 (s, 1H), 8,19 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 8,00 (s, 1H), 6,88 - 6,83 (m, 1H), 4,98-4,93 (m, 4H), 3,86 (s, 3H).
Primer 12: 5-[6-(piperidin-4-iloksi)-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on.
[0370]
Korak 1: Sinteza 5-[6-hidroksi-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0371] Rastvor 5-[6-hloro-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (2,5 g, 5,59 mmol, 1,00 ekv.), Pd(OAc)2(125 mg, 0,56 mmol, 0,10 ekv.), t-Bubrettphos (407 mg, 0,84 mmol, 0,15 ekv.), K3PO4(2,4 g, 11,31 mmol, 2,00 ekv.) u dioksanu (40 mL) i vodi (4 mL) je mešan 3 sata na 100 °C. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa DCM/metanolom (9/1) čime je dobijeno 890 mg (37%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance braon boje. LCMS (ESI, m/z): 429,15 [M+H].
Korak 2: Sinteza terc-butil 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4il]-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-6-il]oksi)piperidin-1-karboksilata
[0372] Rastvor 5-[6-hidroksi-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (870 mg, 2,03 mmol, 1,00 ekv.), Ag2CO3(1,13 g, 2,00 ekv.), terc-butil 4-jodopiperidin-1karboksilat (1,27 g, 4,08 mmol, 2,00 ekv.) u DMF (25mL) je mešan tokom 10 sati na 80 °C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 20 mL vode i ekstraktovan sa 3x100 mL EtOAc. Organski slojevi su spojeni, isprani sa 3x100mL slanog rastvora, osušeni preko Na2SO4. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (3/7) čime je dobijen 1,21 g (97%) naslovnog jedinjenja kao ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z): 612,28 [M+H].
Korak 3: Sinteza 5-[6-(piperidin-4-iloksi)-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0373] Rastvor 5 terc-butil 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-6-il]oksi)piperidin-1-karboksilat (1,21 g, 1,98 mmol, 1,00 ekv.) u vodonik hloridu/dioksanu (20 mL) je mešan tokom 2 i po sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Zatim je ostatak dodatno prečišćen preparativnom HPLC dajući naslovno jedinjenje (17,3 mg, 2 %) kao čvrstu supstancu bele boje. LCMS (ESI, m/z): 382,35 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 8,17 - 8,11 (m, 1H), 8,07 (s, 1H), 6,81 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 5,14 (dt, J = 8,6, 4,5 Hz, 1H), 5,02 (m, 4H), 3,16 - 3,07 (m, 2H), 2,79 (ddd, J = 12,7, 9,4, 3,2 Hz, 2H), 2,13 - 2,01 (m, 2H), 1,72 (dtd, J = 13,0, 9,0, 3,8 Hz, 2H).
Primer 13: 5-[6-(piperidin-4-iloksi)-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0374]
[0375] Rastvor 5-[6-(piperidin-4-iloksi)-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on (290 mg, 0,76 mmol, 1,00 ekv.), TEA (154 mg, 1,52 mmol, 2,00 ekv.), Ac2O (93 mg, 0,91 mmol, 1,20 ekv.) u DCM (10mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Ostatak je zatim dalje prečišćen preparativnom HPLC dajući naslovno jedinjenje (100,1 mg, 31 %) kao čvrstu supstancu bele boje. LCMS (ESI, m/z): 424,39[M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 8,18 - 8,11 (m, 1H), 8,06 (s, 1H), 6,82 (d, J = 1,0 Hz, 1H), 5,28 (dq, J = 7,5, 3,7 Hz, 1H), 4,89 (m, 4H), 3,98 - 3,83 (m, 1H), 3,79 (ddd, J = 11,5, 7,3, 3,8 Hz, 1H), 3,48 (dd, J = 15,3, 6,4 Hz, 2H), 2,13 (s, 3H), 2,11 - 1,94 (m, 2H), 1,89 - 1,65 (m, 2H).
Primer 14: 5-[5-[2-(dimetilamino)etoksi]-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on; metanska kiselina
[0376]
Korak 1: Sinteza 5-(5-fluoro-6-hidroksiizoindolin-2-il)-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridazin-3(2H)-on.
[0377] Rastvor 5-(5-bromo-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (508 mg, 1,00 mmol, 1,00 ekv.), Cu(acac)2(27 mg, 0,10 ekv.), BHMPO (35 mg, 0,10 ekv.), LiOH.H2O (89 mg, 3,72 mmol, 2,10 ekv.), voda(1 mL) u DMSO (4 mL) je mešan 3 sata na 80°C. Rastvor je ugašen sa 20 mL vode a zatim ekstraktovan sa EtOAc (3 x 30 mL) i organski slojevi su spojeni. Nakon koncentrovanja pod vakuumom ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (7:3) čime je dobijeno 180 mg (40 %) naslovnog jedinjenja kao ulja braon boje. LCMS (ESI, m/z):446,15 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[5-[2-(dimetilamino)etoksi]-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0378] Rastvor 5-(5-bromo-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (254 mg, 0,50 mmol, 1,00 ekv.), 2-(dimetilamino)etan-1-ol (222,5 mg, 2,50 mmol, 5,00 ekv.), [Pd(allyl)Cl]2(18,3 mg, 0,05 mmol, 0,10 ekv.), Rockphos (23,4 mg, 0,05 mmol, 0,10 ekv.), Cs2CO3(326 mg, 1,00 mmol, 2,00 ekv.) u toluenu (20 mL) je mešan 3 sata na 80°C. Dobijena smeša je koncentrovana, ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (5/95) čime je dobijeno 97 mg (38 %) naslovnog jedinjenja kao ulja braon boje. LCMS (ESI, m/z): 517,00 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 5-[5-[2-(dimetilamino)etoksi]-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on; metanska kiselina
[0379] Rastvor 5-[5-[2-(dimetilamino)etoksi]-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (88 mg, 0,17 mmol, 1,00 ekv.) u HCl/dioksanu (15 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Ostatak je zatim dodatno prečišćen preparativnom HPLC dajući naslovno jedinjenje (19,5 mg, 26 %) kao čvrstu supstancu bele boje. LCMS (ESI, m/z): 387,10 [M+H]<+>,<1>HNMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8,46 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,24 - 7,21 (m, 2H), 5,04 - 5,01 (m, 4H), 4,39 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 3,52 - 3,40 (m, 2H), 2,87 (s, 6H).
Primer 15: 5-[4-(piridin-3-ilmetoksi)-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0380]
Korak 1: Sinteza 2-bromo-3,4-bis(bromometil)piridina
[0381] Rastvor 2-bromo-3,4-dimetilpiridin (5 g, 26,87 mmol, 1,00 ekv.), NBS (10 g, 56,19 mmol, 2,00 ekv.) i AIBN (2,22 g, 13,52 mmol, 0,50 ekv.) u CCl4(40 mL) je mešan 2 sata na 80°C, a zatim je dobijen rastvor koncentrovan pod vakuumom, nakon čega je ostatak nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (2:98) čime je dobijeno 5,7 g (62%) naslovnog jedinjenja kao ulja crvene boje. LCMS (ESI, m/z): 341,81 [M+H]+.
Korak 2: Sinteza 4-bromo-2-[(4-metilbenzen)sulfonil]-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridina
[0382] Rastvor 2-bromo-3,4-bis(bromometil)piridin (2,7 g, 7,85 mmol, 1,00 ekv.) i natrijum hidrid (380 mg, 15,83 mmol, 1,20 ekv.) u DMF (20 mL), TosNH2 (1,485 g, 1,10 ekv.) je dodat, nakon čega je dobijen rastvor mešan 30 minuta na 0 °C, i dodatnih sat vremena na 25 °C, nakon čega je dobijen rastvor ugašen dodavanjem 50 mL vode, ekstraktovan sa 3 x 15 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (3:7) čime je dobijeno 2 g (72 %) naslovnog jedinjenja kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 353,23 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 4-bromo-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridine hidrobromida
[0383] Rastvor 4-bromo-2-[(4-metilbenzen)sulfonil]-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin (2 g, 5,66 mmol, 1,00 ekv.) i fenol (3,2 g, 6,00 ekv.) u 48% HBr/HOAc (5 mL) i acetatnoj kiselini (10 mL) je mešan tokom jedne noći na 90 °C, nakon čega je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom, i sirov proizvod je prečišćen rekristalizacijom iz EtOAc čime je dobijeno 1,4 g (88%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 199,05 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza (5-[4-bromo-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0384] Rastvor 4-bromo-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin hidrobromid (1,4 g, 5,00 mmol, 1,00 ekv.), 5-hloro-4-(trifluorometil)-2-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidropiridazin-3-on (2,55 g, 7,76 mmol, 1,10 ekv.) i TEA (2,15 g, 21,25 mmol, 3,00 ekv.) u etanolu (15 mL) je mešan 2 sata na 60°C, nakon čega je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom, a zatim je ostatak nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (4:6) čime je dobijeno 400 mg (16 %) naslovnog jedinjenja kao tamno zelena čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 491,38 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 5-[4-(piridin-3-ilmetoksi)-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0385] Rastvor 5-[4-bromo-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (150 mg, 0,31 mmol, 1,00 ekv.), (Pd(allyl)Cl)2(14 mg, 0,10 ekv.), Rockphos (11 mg, 0,10 ekv.), piridin-3-ilmetanol (134 mg, 1,23 mmol, 4,00 ekv.) i Cs2CO3(200 mg, 0,61 mmol, 2,00 ekv.) u toluenu (5 mL) je mešan 2 sata na 80 °C pod atmosferom azota, a zatim je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom, nakon čega je ostatak nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (6:4) čime je dobijeno 80 mg (50%) naslovnog jedinjenja kao ulje žute boje. LCMS (ESI, m/z): 520,19 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 5-[4-(piridin-3-ilmetoksi)-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0386] Rastvor 5-[4-(piridin-3-ilmetoksi)-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (200 mg, 0,38 mmol, 1,00 ekv.), u HCl/dioksanu (5 mL, 4M) je mešan preko noći na sobnoj temperaturi, i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, nakon čega je ostatak prečišćen preparativnom HPLC dajući naslovno jedinjenje (2,7 mg, 2,0 %) kao čvrstu supstancu bele boje. LCMS (ESI, m/z): 390,15 [M+H]+,<1>HNMR (DMSO-d6, 400MHz) δ 8,71 (d, J = 1,6Hz, 1H), 8,54 (dd, J = 4,8, 1,6Hz, 1H), 8,16 (d, J = 5,6Hz, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,90 (d, J = 8,0Hz, 1H), 7,43 (dd, J = 8,4, 4,8Hz, 1H), 7,13 (d, J = 5,2Hz, 1H), 5,51 (s, 2H), 4,97 (d, J = 11,6Hz,4H).
Primer 16: 5-[4-(piperidin-4-iloksi)-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0387]
Korak 1: Sinteza 5-[4-bromo-1H,2H, 3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0388] Rastvor (4-bromo-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin hidrobromid (700 mg, 2,50 mmol, 1,00 ekv.), TEA (1,07 g, 10,57 mmol, 3,00 ekv.), 5-hloro-4-(trifluorometil)-2-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-2,3-dihidropiridazin-3-on (1,25 g, 3,80 mmol, 1,10 ekv.) u etanolu (20 mL, 1,00 ekv.) je mešan 2 sata na 60°C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (4/6) čime je dobijeno 300 mg (24%) naslovnog jedinjenja kao tamno zelena čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 493,06[M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[4-hidroksi-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0389] Rastvor 5-[4-bromo-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (440 mg, 0,90 mmol, 1,00 ekv.), t-BuBrettphos (65 mg, 0,15 ekv.), K3PO4(571 mg, 2,69 mmol, 3,00 ekv.), Pd(OAc)2(20 mg, 0,09 mmol, 0,10 ekv.) u dioksanu (5 mL) i vodi (1 mL) je mešan sat vremena na 100 °C. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluirajući sa etil DCM/metanolom (95/5) čime je dobijeno 125 mg (33 %) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 429,15 [M+H].
Korak 3: Sinteza terc-butil 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-1H,2H, 3H-pirolo[3,4-c]piridin-4-il]oksi)piperidin-1-karboksilat
[0390] Rastvor 5-[4-hidroksi-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (115 mg, 0,27 mmol, 1,00 ekv.), Ag2CO3(149 mg, 0,54 mmol, 20,00 ekv.), terc-butil 4-jodopiperidin-1-karboksilat (168 mg, 0,54 mmol, 2,00 ekv.) u DMF (10 mL) je mešan tokom 48 sati na 80 °C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 20 mL vode i ekstraktovan sa 3 x 20 mL EtOAc. Organski slojevi su spojeni, isprani sa 3 x 40 mL slanog rastvora, osušeni preko Na2SO4. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (1/1) čime je dobijeno 146 mg (89%) naslovnog jedinjenja kao ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z): 612,28 [M+H].
Korak 4: Sinteza 5-[4-(piperidin-4-iloksi)-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0391] Rastvor 5 terc-butil 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-1H,2H,3H-pirolo[3,4-c]piridin-4-il]oksi)piperidin-1-karboksilat (146 mg, 0,24 mmol, 1,00 ekv.) u metanolu (2 mL) i vodonik hloridu/Et2O (10 mL) je mešan 4 sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Zatim je ostatak dodatno prečišćen preparativnom HPLC dajući naslovno jedinjenje (6 mg, 7%) kao čvrstu supstancu braon boje. LCMS (ESI, m/z): 382,35 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,56(s,1H), 8,14 - 8,03 (m, 2H), 7,04 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 5,18 (dt, J = 9,0, 4,8 Hz, 1H), 4,97-4,94 (m, 2H), 4,88 - 4,83 (m, 2H), 2,97 (dd, J = 11,0, 6,4 Hz, 2H), 2,62 (t, J = 10,0 Hz, 2H), 1,94 (dd, J = 12,5, 8,1 Hz, 2H), 1,60 - 1,47 (m, 2H).
Primer 17: 5-(5-[[(piridin-4-il)amino]metil]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0392]
Korak 1: Sinteza 5-(5-bromo-2,3-dihidro-1H-izoindol-2il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0393] Rastvor 5-hloro-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (3,29 g, 10,01 mmol, 1,00 ekv.), 5-bromo-2,3-dihidro-1H-izoindol hidrohlorid (2,35 g, 10,02 mmol, 1,00 ekv.), TEA (2,02 g, 19,96 mmol, 2,00 ekv.) u etanolu (50 mL) je mešan 3 sata na 40 °C. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanet na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (1/5) čime je dobijeno 3,65 g (74%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 490,07 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro1H-izoindol-5-karbonitril
[0394] Rastvor 5-(5-bromo-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (1,3 g, 2,65 mmol, 1 ekv.), Pd(PPh3)4(0,6 g, 0,52 mmol, 0,196 ekv.), Zn(CN)2(0,62 g, 5,28 mmol, 1,991 ekv.) u NMP (15 mL) je mešan 2 sata na 120 °C u uljanoj kadi. Reakcija je nakon toga ugašena dodavanjem 20 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstraktovan sa 3 x 30 mL EtOAc, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (25/75) čime je dobijeno 1,8 g sirove supstance naslovnog jedinjenja kao ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z): 437,15 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 5-[5-(aminometil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0395] Rastvor 2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-karbonitril (1 g, 2,29 mmol, 1,00 ekv.), paladijum ugljenik (500 mg), vodonik hlorid (0,2 mL) u etanolu (20 mL) je mešan tokom 2 dana na 30 °C pod atmosferom vodonika uz pritisak od 30 atm. Čvrste supstance su isfiltrirane i filtracija je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluirajući sa DCM/metanolom (96:4) čime je dobijeno 700 mg (69 %) naslovnog jedinjenja kao ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z): 441,19 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 5-(5-[[(piridin-4-il)amino]metil]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0396] Rastvor 5-[5-(aminometil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (200 mg, 0,45 mmol, 1,00 ekv.), Pd2(dba)3.CHCl3(50 mg, 0,05 mmol, 0,10 ekv.), Xantphos (28 mg, 0,05 mmol, 0,10 ekv.), 4-bromopiridin (152 mg, 0,96 mmol, 2,00 ekv.), Cs2CO3(315 mg, 2,00 ekv.) u dioksanu (15 mL) je mešan 2 sata na 100°C u uljanoj kadi pod atmosferom azota. Nakon koncentracije ostatak je nanet na kolonu silika gela eluirajući sa DCM/metanolom (9:1) čime je dobijeno 130 mg (55%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 518,21 [M+H]<+>.
Korak 5 : Sinteza 5-(5-[[(piridin-4-il)amino]metil]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0397] Rastvor 5-(5-[[(piridin-4-il)amino]metil]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (130 mg, 0,25 mmol, 1,00 ekv.) u vodonik hloridu/dioksanu (20 mL) je mešan 14 sati na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. pH vrednost rastvora je prilagođena na 9 zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom. Dobijeni rastvor je ekstraktovan sa DCM i organski slojevi su spojeni i osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata. Nakon koncentracije ostatak je nanet na kolonu silika gela eluirajući sa DCM/metanolom (9:1). Nakon toga ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (35,7 mg, 37%) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 388,13 [M+H]<+>,<1>HNMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 12,52 (s, 1H), 8,00 (d, J= 5,2 Hz, 3H), 7,38 - 7,27 (m, 3H), 7,25 (t, J= 6,1 Hz, 1H), 6,54 - 6,48 (m, 2H), 4,95 (d, J= 9,1 Hz, 4H), 4,36 (d, J= 6,1 Hz, 2H).
Primer 18 Izomer A: 6-[4-[(3-[[(1R)-2-[6-Okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il] metoksi] fenil)karbonil] piperazin- 1-il] piridin-3-karbonitril i
Primer 18 Izomer B: 6-[4-[(3-[[(1S)-2-[6-Okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il] metoksi] fenil)karbonil] piperazin-1-il] piridin-3-karbonitril
[0398]
Korak 1: 5-[1-(Hidroksimetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3dihidropiridazin-3-on
[0399] Rastvor 5-hloro-4-(trifluorometil)-2-[2-(trimetilsilil)etoksi]metil-2,3-dihidropiridazin-3-on (Int-A6, 4,8 g, 14,60 mmol, 1,00 ekv.), 2,3-dihidro-1H-izoindol-1-ilmetanol hidrohlorid (2,7 g, 14,54 mmol, 1,00 ekv.) i TEA (4,4 g, 43,48 mmol, 2,99 ekv.) u etanolu (100 mL) je mešan sat vremena na 60 °C , nakon čega je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (45:55) čime je dobijeno 2,9 g (45 %) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance braon boje. LCMS: [M+H]<+>442,17.
Korak 2: Metil 3-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)benzoat
[0400] Pod azotom, rastvor 5-[1-(hidroksimetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (2,93 g, 6,64 mmol, 1,00 ekv.), metil 3-bromobenzoat (2,84 g, 13,21 mmol, 1,99 ekv.), Pd(allyl)Cl2(243 mg), Rockphos (311 mg) i Cs2CO3(4,3 g, 13,20 mmol, 1,99 ekv.) u toluenu (100 mL) je mešan 18 sati na 80 °C. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom nakon čega je ostatak nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (1:3) čime je dobijeno 3 g (79 %) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance braon boje. LCMS: [M+H]<+>576,21.
Korak 3: 3-([2-[6-Okso--5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)benzoeva kiselina
[0401] Rastvor metil 3-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)benzoat (1,15 g, 2,00 mmol, 1,00 ekv.) i LiOH (240 mg, 10,02 mmol, 5,02 ekv.) u THF (12 mL) i vodi (3 mL) je mešan 3 sata na 60 °C. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je razblažen sa 10 mL H2O, nakon čega je pH vrednost rastvora prilagođena na 5 sa HCl (36,5%). Čvrsta supstanca je prikupljena filtracijom čime je dobijen 1,1 g (98%) naslovnog jedinjenja kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>562,19.
Korak 4: 3-([2-[6-Okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)benzoeva kiselina
[0402] Rastvor 3-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)benzoeva kiselina (1,1 g, 1,96 mmol, 1,00 ekv.) u HCl/dioksanu (20 mL, 4M) je mešan 3 sata na sobnoj temperaturi, nakon čega je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom čime je dobijen 1 g naslovnog jedinjenja kao sirova čvrsta supstanca braon boje. LCMS: [M+H]<+>432,11.
Korak 5: 6-[4-[(3-[[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2, 3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi]fenil)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
i 6-[4-[(3-[[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi]fenil)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[0403] Rastvor 3-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)benzoeva kiselina (500 mg, 1,16 mmol, 1,00 ekv.), HATU (528 mg, 1,39 mmol, 1,20 ekv.), DIPEA (449 mg, 3,47 mmol, 3,00 ekv.) i Int-A4 (240 mg, 1,27 mmol, 1,1 ekv.) u DMF (5 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije redukovanim pritiskom, dobijeni rastvor je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/ACN. Ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC i hiralno preparativnom HPLC (CHIRAL Repaired IA, 5 um, 0,46 x 10 cm kolona, eluiranje sa gradijentom (heksani:DCM = 3:1) (0,1%DEA):EtOH = 50:50, pri brzini protoka 1 mL/min) čime su dobijena naslovna jedinjenja kao čvrste supstance bele boje. Apsolutna stereohemija je dodeljena na osnovu kristalne strukture proteinskog X-zraka dobijene iz Primera 18 izomera B što je potvrdilo (S)-apsolutnu stereohemiju i uočeno je da je potentniji enantiomer.
[0404] Primer 18 Izomer A: 153,2 mg, 22%, LCMS: [M+H]<+>602,05,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8,43 (d, J = 1,8Hz, 1H), 8,42 (s, 1H), 7,79 (dd, J = 9,0, 2,4 Hz, 1H), 7,53 - 7,50 (m, 1H), 7,41 - 7,35 (m, 4H), 7,05 - 6,99 (m, 2H), 6,94 -6,87 (m, 2H), 6,20 (s, 1H), 5,33 (d, J = 14,8 Hz, 1H), 4,68 (d, J = 14,7 Hz, 1H), 4,53 (dd, J = 10,2, 3,3 Hz, 1H), 4,29 (dd, J = 10,2, 6,6 Hz, 1H), 3,91-3,44 (m, 8H). tR =4,369 min.
[0405] Primer 18 Izomer B: 153,3 mg, 22%,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8,43 (d, J = 1,8Hz, 1H), 8,38 (s, 1H), 7,79 (dd, J = 9,0, 2,4 Hz, 1H), 7,52-7,50 (m, 1H), 7,41-7,35 (m, 4H), 7,04-6,99 (m, 2H), 6,94-6,87 (m, 2H), 6,19 (s, 1H), 5,32 (d, J = 14,7 Hz, 1H), 4,67 (d, J = 14,7 Hz, 1H), 4,53 (dd, J= 10,2, 3,6 Hz, 1H), 4,26 (dd, J = 10,2, 6,6 Hz, 1H), 3,92 - 3,41 (m, 8H). LCMS: [M+H]<+>602,05. tR = 5,955 min.
Primer 19: 5-[5-fluoro-6-[2-(morfolin-4-il)etoksi]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0406]
Korak 1: Sinteza 5-[5-fluoro-6-[2-(morfolin-4-il)etoksi]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0407] Rastvor 5-(5-fluoro-6-hidroksi-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (200 mg, 0,45 mmol, 1 ekv.), 4-(2-hloroetil)morfolin hidrohlorid (99,6 mg, 0,54 mmol, 1,192 ekv.), K2CO3(123,6 mg, 0,89 mmol, 1,992 ekv.) u DMF (10 mL) je mešan 12 sati na 80°C. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 5 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstraktovan sa 3 x 15 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni i osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata. Organski slojevi su koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (90/10) čime je dobijeno 180 mg (72%) naslovnog jedinjenja kao ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z): 559,23 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[5-fluoro-6-[2-(morfolin-4-il)etoksi]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0408] Rastvor 5-[5-fluoro-6-[2-(morfolin-4-il)etoksi]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil] -2,3-dihidropiridazin-3-on (180 mg, 0,32 mmol, 1 ekv.) u HCl/dioksanu (10 mL) jer mešan 12 sati na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon toga ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (52,1 mg, 37,8%) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 429,38 [M+H]<+>,<1>HNMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 12,55 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,27 (m, 2H), 4,91 (m, 4H), 4,18 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 3,64 - 3,54 (m, 4H), 3,31 (m, 2H), 2,73 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 2,48 (m, 2H).
Primer 20: 5-[5-fluoro-6-(piperidin-4-ilmetoksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0409]
Korak 1: Sinteza terc-butil 4-[([6-fluoro-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il]oksi)metil]piperidin-1-karboksilata
[0410] Rastvor 5-(5-fluoro-6-hidroksi-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (1 g, 2,24 mmol, 1,00 ekv.), kalijum karbonat (3,1 g, 22,43 mmol, 10,00 ekv.), terc-butil 4-(jodometil)piperidin-1-karboksilat (4,4 g, 13,53 mmol, 6,00 ekv.) u DMF (15 mL) je mešan sat i po vremena na 80°C. Rastvor je ugašen sa 50 mL vode, nakon čega je dobijeni rastvor ekstraktovan sa EtOAc (3 x 60 mL) i organski slojevi su spojeni. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (5/95) čime je dobijen 1 g (69%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance bele boje. LCMS (ESI, m/z): 643,30 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[5-fluoro-6-(piperidin-4-ilmetoksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0411] Rastvor terc-butil 4-[([6-fluoro-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il]oksi)metil]piperidin-1-karboksilat (200 mg, 0,31 mmol, 1,00 ekv.), trifluoroacetatna kiselina (2 mL) u DCM (10 mL) je mešan 3 sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon toga ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (24,2 mg, 19%) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 413,10 [M+H]<+>,<1>HNMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 7,98 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 7,28 - 7,18 (m, 2H), 4,90 - 4,88 (m, 4H), 3,87 (dd, J = 6,4, 3,9 Hz, 2H),3,01 - 2,95 (m, 2H), 2,45 -2,44 (m, 2H), 1,84 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 1,75 - 1,58 (m, 2H), 1,22 -1,13 (m, 2H).
Primer 21: 5-[5-[(1-acetilpiperidin-4-il)metoksi]-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0412]
[0413] Rastvor 5-[5-fluoro-6-(piperidin-4-ilmetoksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on (325,35 mg, 0,79 mmol, 1,00 ekv.), TEA (227,25 mg, 2,25 mmol, 4,00 ekv.), Ac2O (45,9 mg, 0,45 mmol, 1,00 ekv.) u DCM (15 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon toga ostatak je dodatno prečićen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (68,2 mg, 19 %) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 455,05 [M+H]<+>,<1>HNMR (Metanol- d4, 300 MHz) δ 8,04 (s, 1H), 7,14 (dd, J= 9,2, 4,7 Hz, 2H), 5,00 - 4,99 (s, 4H), 4,59 (d, J= 12,9 Hz, 1H), 4,06 - 3,84 (m, 3H), 3,25 - 3,13 (m, 1H), 2,80 - 2,56 (m, 1H), 2,13 (s, 3H), 2,12 - 2,11 (m, 1H), 2,04 - 1,84 (m, 2H), 1,50 - 1,22 (m, 2H).
Primer 22: 5-[5-fluoro-6-[(1-metilpiperidin-4-il)metoksi]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0414]
[0415] Rastvor 5-[5-fluoro-6-(piperidin-4-ilmetoksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on (150 mg, 0,36 mmol, 1,00 ekv.), (HCHO)n (62,1 mg, 3,00 ekv.), acetatna kiselina (0,5 mL), NaBH3CN (43,47 mg, 0,69 mmol, 3,00 ekv.) u metanolu (15 mL) je mešan 15 sati na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon toga, ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (57,9 mg, 37 %) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 427,10 [M+H]<+>,<1>HNMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ 8,04 (s, 1H), 7,12 (dd, J = 9,2, 4,5 Hz, 2H),4,96 (s, 4H) 3,93 (d, J = 5,7 Hz, 2H), 2,95 (d, J = 11,5 Hz, 2H), 2,31 (s, 3H), 2,11 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 1,98 -1,81 (m, 3H), 1,65 - 1,26 (m, 2H).
Primer 23: 5-(5-fluoro-6-[[(piperidin-4-il)amino]metil]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
Korak 1: Sinteza 6-fluoro-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-karbonitril
[0417] Rastvor 6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-karbonitril (600 mg, 3,70 mmol, 1 ekv.), 5-hloro-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (1,45 g, 4,41 mmol, 1,192 ekv.), TEA (1,12 g, 11,07 mmol, 2,991 ekv.) u EtOH (15 mL) je mešan 2 sata na 80°C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (15/85) čime je dobijeno 1,2 g (71%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 455,14 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[5-(aminometil)-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il}-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0418] Rastvor 6-fluoro-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-karbonitril (3 g, 6,60 mmol, 1 ekv.), Pd/C (300 mg, 2,82 mmol, 0,427 ekv.) u EtOH (30 mL) je mešan 7 dana na sobnoj temperaturi uz atmosferu vodonika. Čvrste supstance su isfiltrirane. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluirajući sa DCM/metanolom (93/7) čime je dobijeno 1,58 g (52,2 %) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 459,18 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza terc-butil 4-[([6-fluoro-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il]metil)amino]piperidin-1-karboksilat
[0419] Rastvor 5-[5-(aminometil)-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (200 mg, 0,44 mmol, 1 ekv.), terc-butil 4-oksopiperidin-1-karboksilat (104,6 mg, 0,52 mmol, 1,204 ekv.), NaBH3CN (137,34 mg, 2,19 mmol, 5,010 ekv.) u MeOH (10 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN čime je dobijeno 100 mg (35,7%) naslovnog jedinjenja kao ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z): 642,30 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 5-(5-fluoro-6-[[(piperidin-4-il)amino]metil]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2, 3-dihidropiridazin-3-on
[0420] Rastvor terc-butil 4-[([6-fluoro-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il]metil)amino]piperidin-1-karboksilat (100 mg, 0,16 mmol, 1 ekv.) u HCl/dioksanu (12 mL) je mešan 12 sati na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon toga ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (20,4mg, 31,8 %) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 412,40 [M+H]<+>,<1>HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 8,01 (s, 1H), 7,48 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,95 (s, 4H), 3,77 (s, 2H), 2,91 (d, J= 12,0 Hz, 2H), 2,47 - 2,33 (m, 3H), 1,77 (d, J = 11,9 Hz, 2H), 1,13 (m, 2H).
Primer 24: 5-(5-[[(1-acetilpiperidin-4-il)amino]metil]-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0421]
Korak 1: Sinteza 5-(5-[[(1-acetilpiperidin-4-il)amino]metil]-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0422] Rastvor 5-[5-(aminometil)-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (300 mg, 0,65 mmol, 1 ekv.), 1-acetilpiperidin-4-on (110,6 mg, 0,78 mmol, 1,197 ekv.), NaBH3CN (206 mg, 3,28 mmol, 5,01 ekv.) u MeOH (10 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN čime je dobijeno 250 mg (65,5 %) naslovnog jedinjenja kao ulje žute boje. LCMS (ESI, m/z): 584,26 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-(5-[[(1-acetilpiperidin-4-il)amino]metil]-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0423] Rastvor 5-(5-[[(1-acetilpiperidin-4-il)amino]metil]-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (250 mg, 0,43 mmol, 1 ekv.) u HCl/dioksanu (12 mL) je mešan 12 sati na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon toga ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (70,3 mg, 36,2%) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 454,43 [M+H]<+>,<1>HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 12,56 (s, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,49 (d, J= 6,8 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,95 (s, 4H), 4,14 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 3,78 (s, 2H), 3,78 - 3,72 (m, 1H), 3,05 (t, J= 11,3 Hz, 1H), 2,79 - 2,56 (m, 2H), 2,38-2,22(m, 1H), 1,99 (s, 3H), 1,88 - 1,72 (m, 2H), 1,33 -1,12 (m, 2H).
Primer 25: 5-(5-fluoro-6-[[(1-metilpiperidin-4-il)amino]metil]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0424]
Korak 1: Sinteza 5-(5-fluoro-6-[[(1-metilpiperidin-4-il)amino]metil]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0425] Rastvor 5-[5-(aminometil)-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (300 mg, 0,65 mmol, 1 ekv.), 1-metilpiperidin-4-on (89,4 mg, 0,79 mmol, 1,208 ekv.), NaBH3CN (206,01 mg, 3,28 mmol, 5,010 ekv.) u MeOH (10 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN čime je dobijeno 200 mg (55%) naslovnog jedinjenja kao ulje žute boje. LCMS (ESI, m/z): 556,27 [M+H]<+>. Korak 2: Sinteza 5-(5-fluoro-6-[[(1-metilpiperidin-4-il)amino]metil]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2, 3-dihidropiridazin-3-ona
[0426] Rastvor 5-(5-fluoro-6-[[(1-metilpiperidin-4-il)amino]metil]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (200 mg, 0,36 mmol, 1 ekv.) u HCl/dioksanu (12 mL) je mešan 12 sati na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon toga ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (41,0 mg, 26,8%) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 426,42 [M+H]<+>,<1>HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ:12,52 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,44 (d, J= 6,8 Hz, 1H), 7,17 (d, J= 10,0 Hz, 1H), 4,92 (s, 4H), 3,72 (s, 2H), 2,66 (d, J= 11,2 Hz, 2H), 2,34 - 2,24 (m, 1H), 2,10 (s, 3H), 1,89 - 1,70 (m, 5H), 1,34 - 1,16 (m, 2H).
Primer 26: 5-[5-fluoro-6-(morfolin-4-il)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on [0427]
Korak 1: Sinteza 5-[5-fluoro-6-(morfolin-4-il)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0428] Rastvor 5-(5-bromo-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (300 mg, 0,59 mmol, 1 ekv.), morfolin (62 mg, 0,71 mmol, 1,206 ekv.), Pd2(dba)3(108 mg, 0,12 mmol, 0,200 ekv.), Xantphos (68,2 mg, 0,12 mmol, 0,200 ekv.), t-BuOK (131,7 mg, 1,17 mmol, 1,989 ekv.) u toluenu (10 mL) je mešan 12 sati na 80°C uz inertnu atmosferu azota. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (25/75) čime je dobijeno 170 mg (56 %) naslovnog jedinjenja kao čvrsta supstanca žute boje. LCMS (ESI, m/z): 515,20 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[5-fluoro-6-(morfolin-4-il)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0429] Rastvor 5-[5-fluoro-6-(morfolin-4-il)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (170 mg, 0,33 mmol, 1 ekv.) u HCl/dioksanu (10 mL) je mešan 12 sati na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon toga ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (20,7 mg, 16,3 %) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 385,33 [M+H]<+>,<1>HNMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 12,54 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,22 (d, J= 12,4 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,91 (br, 4H), 3,79 -3,68 m, 4H), 3,04 - 2,94 (m, 4H).
Primer 27: 5-(4-[[1-(difenilmetil)piperidin-4-il]oksi]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0430]
Korak 1: Sinteza terc-butil 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-il]oksi)piperidin-1-karboksilata
[0431] Rastvor 5-(4-hidroksi-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (1,1 g, 2,57 mmol, 1,00 ekv.), kalijum karbonat (1,8 g, 13,02 mmol, 5,00 ekv.), terc-butil-4jodopiperidin-1-karboksilat (4,0 g, 12,86 mmol, 5,00 ekv.) u DMF (30 mL) je mešan tokom 3 dana na 80 °C u uljanoj kadi. Nakon koncentracije, ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (1:3) čime je dobijeno 1,3 g (83%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 611,28 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[4-(piperidin-4-iloksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0432] Rastvor terc-butil 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-il]oksi)piperidin-1-karboksilat (600 mg, 0,98 mmol, 1,00 ekv.) u vodonik hlorid/dioksanu (120 ml, 1M) je mešan 12 sati na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa DCM/metanolom (2:1) čime je dobijeno 270 mg (54%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 511,23 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 5-(4-[[1-(difenilmetil)piperidin-4-il]oksi]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0433] Rastvor 5-[4-(piperidin-4-iloksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (250 mg, 0,49 mmol, 1,00 ekv.), TEA (99 mg, 0,98 mmol, 2,00 ekv.), [bromo(fenil)metil]benzen (241 mg, 0,98 mmol, 2,00 ekv.) u dioksanu (8 mL) je mešan tokom 2 dana na 100 °C u uljanoj kadi. Nakon koncentracije, ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (1:3) čime je dobijeno 154 mg (46 %) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 677,31 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 5-(4-[[1-(difenilmetil)piperidin-4-il]oksi]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0434] Rastvor 5-(4-[[1-(difenilmetil)piperidin-4-il]oksi]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (154 mg, 0,23 mmol, 1,00 ekv.) u vodonik hlorid/dioksanu (15 mL) je mešan 12 sati na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je nanešen na kolonu silika gela sa DCM/metanolom (2:1) i sirov proizvod je prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (15,7 mg 13 %) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 547,22 [M+H]<+>,<1>H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 12,51 (s, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,41 (d, J= 7,4 Hz, 4H), 7,31 - 7,15 (m, 7H), 6,97-6,90 (dd, J= 14,1, 7,9 Hz, 2H), 4,95 (s, 2H), 4,84 (s, 2H), 4,53-4,49 (dr, 1H), 4,35 (s, 1H), 2,58-2,51 (m, 2H), 2,27-2,22 (m, 2H), 1,93-1,91 (dr, 2H), 1,74-1,68 (dr, 2H).
Primer 28: 5-(5-[[1-(difenilmetil)piperidin-4-il]oksi]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0435]
Korak 1: Sinteza 1-(difenilmetil)piperidin-4-ola
[0436] Rastvor piperidin-4-ol (5 g, 49,43 mmol, 1,00 ekv.), TEA (5 g, 49,41 mmol, 1,00 ekv.), [bromo(fenil)metil]benzen (9 g, 36,42 mmol, 0,80 ekv.) u THF (30 mL) je mešan 2 dana na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (1:2) čime je dobijeno 3,8 g (29%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 268,16 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 1-(difenilmetil)piperidin-4-il metansulfonata
[0437] Rastvor 1-(difenilmetil)piperidin-4-ol (3,8 g, 14,21 mmol, 1,00 ekv.), MsCl (1,44 g, 1,10 ekv.), TEA (1,52 g, 15,02 mmol, 2,00 ekv.) u DCM (20 mL) je mešan 30 minuta na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ekstraktovan sa DCM i organski slojevi su spojeni i koncentrovani pod vakuumom čime je dobijeno 3,2 g (65%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 346,14 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 5-(5-[[1-(difenilmetil)piperidin-4-il]oksi]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0438] Rastvor 5-(5-hidroksi-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (400 mg, 0,94 mmol, 1,00 ekv.), kalijum karbonat (1,3 g, 9,41 mmol, 10,00 ekv.), 1-(difenilmetil)piperidin-4-il metansulfonat (649 mg, 1,88 mmol, 2,00 ekv.) u DMF (40 mL) je mešan tokom 2 dana na 80°C u uljanoj kadi. Nakon koncentracije, ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (1:3) čime je dobijeno 200 mg (32%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 677,31 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 5-(5-[[1-(difenilmetil)piperidin-4-il]oksi]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2, 3-dihidropiridazin-3-on
[0439] Rastvor 5-(5-[[1-(difenilmetil)piperidin-4-il]oksi]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (200 mg, 0,30 mmol, 1,00 ekv.) u hlorovodonik/dioksanu (20 mL) je mešan 12 sati na sobnoj temperaturi. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (1:2). Sirov proizvod je prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (14.3 mg 9 %) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 547,22 [M+H]<+>,<1>H NMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ: 8,02 (s, 1H), 7,45-7,42 (d, J= 7,8 Hz, 4H), 7,31 - 7,14 (m, 7H), 6,92 - 6,87 (m, 2H), 4,97-4,94 (d, J= 8,4 Hz, 4H), 4,41 (dr, 1H), 4,29 (s, 1H), 2,72 (dr, 2H), 2,27-2,21 (m, 2H), 2,03-1,97 (m, 2H), 1,78-1,71 (m, 2H).
Primer 29: 6-(4-[[3-(2-[metil[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi) fenil]karbonil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[0440]
Korak 1: Sinteza 5-[(2-hidroksietil)(metil)amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0441] Rastvor 5-hloro-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (1 g, 3,04 mmol, 1,00 ekv.), TEA (600 mg, 5,93 mmol, 2,00 ekv.), 2-(metilamino)etan-1-ol (1,1 g, 14,65 mmol, 5,00 ekv.) u etanolu (14 mL) je mešan 2 sata na 60 °C u uljanoj kadi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (8:1) čime je dobijen 1,1 g (98 %) naslovnog jedinjenja kao ulje žute boje. LCMS (ESI, m/z): 368,15 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza metil 3-(2-[metil[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)benzoata
[0442] Rastvor 5-[(2-hidroksietil)(metil)amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (800 mg, 2,18 mmol, 1,00 ekv.), [Pd(allyl)Cl]2(80 mg, 0,22 mmol, 0,10 ekv.), rokfos (102 mg, 0,22 mmol, 0,10 ekv.), Cs2CO3(1,4 g, 4,30 mmol, 2,00 ekv.), metil 3-bromobenzoat (466 mg, 2,17 mmol, 1,00 ekv.) u toulenu (12 mL) je mešan 2 sata na 85 °C u uljanoj kadi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (3:2) čime je dobijeno 700 mg (64 %) naslovnog jedinjenja kao čvrsta supstanca žute boje. LCMS (ESI, m/z): 502,19 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza metil 3-(2-[metil[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)benzoata [0443] Rastvor metil 3-(2-[metil[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)benzoat (700 mg, 1,40 mmol, 1,00 ekv.) u hlorovodonik/dioksanu (30 mL) je mešan 14 sati na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom čime je dobijeno 600 mg sirove supstance naslovnog jedinjenja kao ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z):372,11 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 3-(2-[metil[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)benzoeve kiseline [0444] Rastvor metil 3-(2-[metil[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)benzoat (700 mg, 1,89 mmol, 1 ekv.), LiOH·H2O (553 mg, 13,18 mmol, 6,990 ekv.) u metanolu (10 mL) je mešan 4 sata na sobnoj temperaturi. Dobijen rastvor je ekstraktovan sa 2 x 20 mL EtOAc i vodeni su spojeni. pH vrednost rastvora je prilagođena na 2 sa HCl (10%). Čvrste supstance su sakupljene filtracijom čime je dobijeno 380 mg (56%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 358,09 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 6-(4-[[3-(2-[metil[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)fenil]karbonil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila
[0445] Rastvor 3-(2-[metil[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)benzoeva kiselina (100 mg, 0,28 mmol, 1 ekv.), HATU (111 mg, 0,29 mmol, 1,043 ekv.), DIPEA (108 mg, 0,84 mmol, 2,986 ekv.), Int-A4 (58,1 mg, 0,31 mmol, 1,103 ekv.) u DMF (2 mL) je mešan sat vremena na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon toga ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (98,0 mg , 66,4 %) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 528,50 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 12,51 (s, 1H), 8,52 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,90 (d, J = 9,1, 2,4 Hz, 1H), 7,37 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,05 - 6,89 (m, 4H), 4,26 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 3,86 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 3,62 - 3,52 (m, 6H), 3,33 (m, 2H), 3,10 (d, J= 2,3 Hz, 3H).
Primer 30 Izomer A: (R)-4-(Trifluorometil)-5-(1-((3-(4-(5-(trifluorometil)piridin-2-il)piperazin-1-karbonil) fenoksi)metil)izoindolin-2-il)piridazin-3(2H)-on i
Primer 30 Izomer B: (S)-4-(Trifluorometil)-5-(1-((3-(4-(5-(trifluorometil)piridin-2-il)piperazin-1-karbonil)fenoksi) metil)izoindolin-2-il)piridazin-3(2H)-on
[0446]
[0447] Rastvor 3-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)benzoeva kiselina (300 mg, 0,70 mmol, 1,00 ekv.), HATU (278 mg, 0,73 mmol, 1,05 ekv.), DIPEA (269 mg, 2,08 mmol, 3,00 ekv.) i Int-A18 (161 mg, 0,70 mmol, 1,00 ekv.) u DCM (2 mL) je mešan tokom noći na 25 °C. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/ACN. Ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC i hiralnom preparativnom HPLC (CHIRALPAK IA-3, 3 um, 0,46 x 5 cm kolona, eluiranje sa gradijentom MtBE (10 mM NH3):EtOH=80:20, pri brzini protoka od 1 mL/min) čime su dobijena naslovna jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. Apsolutna stereohemija je dodeljena na osnovu proteinske rendgenske kristalne strukture dobijene iz Primera 18 izomera B što je potvrdilo (S)-apsolutnu stereohemiju i primećeno je da je potentniji enantiomer (videti Tabelu A-1).
Primer 30 Izomer A: 76,1 mg, 42 %, LCMS: [M+H]<+>645,20,<1>H NMR (400 MHz,
[0448] Metanol-d4) δ 8,40 - 8,39(d, J = 3,5 Hz, 2H), 7,78 - 7,76 (dd, J = 9,1, 2,6 Hz, 1H), 7,53 - 7,51 (m, 1H), 7,42 7,37 (m, 4H), 7,05 - 7,00 (m, 2H), 6,94 - 6,92 (m, 2H), 6,20 (dr, 1H), 5,33 - 5,29 (d, J= 14,7 Hz, 1H), 4,68 - 4,64 (d, J= 14,8 Hz, 1H), 4,54 - 4,50 (dd, J= 10,3, 3,5 Hz, 1H), 4,29 - 4,25 (dd, J= 10,2, 6,8 Hz, 1H), 3,83 - 3,53 (m, 8H). tR = 1,562 min. Primer 30 Izomer B: 76,1 mg, 42 %, LCMS: [M+H]<+>645,20, tR = 1,562 min.
Primer 31: 6-[4-[(3-[[(2R)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]fenil) karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[0449]
Korak 1: Sinteza 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0450] Rastvor 5-hloro-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (15 g, 45,62 mmol, 1 ekv.), (2R)-pirolidin-2-ilmetanol (4,6 g, 45,48 mmol, 0,997 ekv.), TEA (14 g, 138,35 mmol, 3,033 ekv.) u EtOH (200 mL) je mešan 4 sata na 60 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je kristalizovan sa Et2O čime je dobijeno 8,6 g (47,9 %) naslovnog jedinjenja kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 394,17 [M+H]<+>. Korak 2: Sinteza metil 3-[[(2R)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoata
[0451] Rastvor 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (8,6 g, 21,86 mmol, 1 ekv.), metil 3-bromobenzoat (5,2 g, 24,18 mmol, 1,106 ekv.), Rokfos (1,02 g, 2,18 mmol, 0,100 ekv.), Cs2CO3(14,2 g, 43,58 mmol, 1,994 ekv.), Pd2(allyl)2Cl2(0,798 g, 2,18 mmol, 0,100 ekv.) u toluenu (100 mL) je mešan 12 sati na 80 °C uz intertnu atmosferu azota. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (20/80) čime je dobijen 7,1 g (61,6%) naslovnog jedinjenja kao ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z): 528, 21 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza metil 3-[[(2R)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoata [0452] Rastvor 3-[[(2R)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoat (9,1 g, 17,25 mmol, 1 ekv.) u HCl/dioksanu (100 mL) je mešan 12 sati na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom čime je dobijeno 9,5 g (sirovo) naslovnog jedinjenja kao ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z): 398,12 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 3-[[(2R)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-ilJpirolidin-2-il]metoksi]benzoeva kiselina
[0453] Rastvor 3-[[(2R)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoat (1,5 g, 3,78 mmol, 1 ekv.), LiOH·H2O (0,795 g, 18,94 mmol, 5,0 ekv.) u MeOH (30 mL) je mešan 4 sata na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ekstraktovan sa 3 x 30 mL EtOAc. pH vrednost rastvora je prilagođena na 2 sa HCl (12 M). Čvrste supstance su sakupljene filtracijom čime je dobijeno 600 mg (41%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance bele boje. LCMS (ESI, m/z): 384,11 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 6-[4-[(3-[[(2R)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]fenil) karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[0454] Rastvor 3-[[(2R)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoeva kiselina (100 mg, 0,26 mmol, 1 ekv.), HATU (103,7 mg, 0,27 mmol, 1,045 ekv.), DIPEA (100,6 mg, 0,78 mmol, 2,984 ekv.), Int-A4 (54 mg, 0,29 mmol, 1,100 ekv.) u DMF (2 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Ostatak je zatim dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (76,9 mg, 53 %) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 554,54 [M+H]<+>,<1>HNMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 12,44 (s, 1H), 8,53 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,91 (dd, J = 9,1, 2,4 Hz, 1H), 7,37 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 6,98 (dd, J= 18,8, 8,6 Hz, 4H), 4,83 (s, 1H), 4,15 (dd, J= 10,4, 4,0 Hz, 1H), 4,04 (dd, J= 10,3, 6,0 Hz, 1H), 3,67- 3,48 (m, 9H), 3,30 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 2,23 (s, 1H), 1,99 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 1,93 - 1,81 (m, 2H).
Primer 32: 6-[4-[(3-[[(2S)-1-[6-Okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]fenil) karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[0455]
Korak 1: 5-[(2S)-2-(Hidroksimetil)pirolidin-1-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0456] Rastvor 5-hloro-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (10 g, 30,41 mmol, 1,00 ekv.), TEA (13,4 g, 132,42 mmol, 3,00 ekv.), (S)-pirolidin-2-ilmetanol (3,4 g, 33,61 mmol, 1,10 ekv.) u etanolu (60 mL) je mešan 2 sata na 60 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom i ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (26:74) čime je dobijeno 5 g (42%) naslovnog jedinjenja. LCMS (ESI, m/z): 394,18 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza metil 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoata
[0457] Rastvor 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (1 g, 2,54 mmol, 1,00 ekv.), [Pd(allyl)Cl]2(93 mg, 0,10 ekv.), Rokfos (119 mg, 0,10 ekv.), Cs2CO3(2,5 g, 7,67 mmol, 3,00 ekv.), metil 3-bromobenzoat (1,09 g, 5,07 mmol, 2,00 ekv.) u toluenu (80 mL) je mešan 20 sati na 80 °C. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/heksan (1:1) čime je dobijeno 969 mg (72%) naslovnog jedinjenja kao ulje braon boje. LCMS (ESI, m/z): 528,22 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoeva kiselina
[0458] Rastvor metil 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoat (969 mg, 1,84 mmol, 1,00 ekv.), LiOH (220 mg, 9,19 mmol, 5,00 ekv.), voda (4 mL) u metanolu (20 mL) je mešan 3 sata na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvora je prilagođena na 5 sa hlorovodonikom. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/heksan (1:1) čime je dobijeno 900 mg (95%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance braon boje. LCMS (ESI, m/z): 514,20 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoeve kiseline
[0459] Rastvor 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoeva kiselina (900 mg, 1,75 mmol, 1,00 ekv.) u hlorovodonik/dioksanu (30 mL) je mešan 3 sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN čime je dobijeno 600 mg (89%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 384,12 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 6-[4-[(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]fenil)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[0460] Rastvor 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoeva kiselina (200 mg, 0,52 mmol, 1,00 ekv.), HATU (239,4 mg, 0,63 mmol, 1,20 ekv.), DIPEA (205,11 mg, 1,59 mmol, 3,00 ekv.), Int-A4 nitril (118,44 mg, 0,63 mmol, 1,20 ekv.) u DMF (3 mL) je mešan 3 sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN čime je dobijeno naslovno jedinjenje (132,9 mg, 46%) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 554,05 [M+H]<+>,<1>HNMR (300 MHz, metanol- d4) δ 8,44 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,78 (dd, J= 9,1, 2,4 Hz, 1H), 7,40 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 7,17 - 7,00 (m, 2H), 7,00 - 6,84 (m, 2H), 4,86 (d, J= 4,1 Hz, 1H), 4,25 (dd, J= 10,3, 3,7 Hz, 1H), 4,07 (dd, J= 10,3, 6,9 Hz, 1H), 3,98 - 3,62 (m, 7H), 3,61 - 3,37 (m, 3H), 2,47 - 2,25 (m, 1H), 2,07 (dd, J= 11,4, 5,7 Hz, 1H), 1,88 - 1,84 (m, 2H).
Primer 33: 6-[3-(hidroksimetil)-4-[(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]fenil)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[0461]
Korak 1: Sinteza terc-butil 4-(5-cijanopiridin-2-il)-2-(hidroksimetil)piperazin-1-karboksilata
[0462] Rastvor terc-butil 2-(hidroksimetil)piperazin-1-karboksilat (780 mg, 3,61 mmol, 1,20 ekv.), 6-hloropiridin-3-karbonitril (520 mg, 3,75 mmol, 1,00 ekv.), DIPEA (780 mg, 6,04 mmol, 2,00 ekv.) u NMP (15 mL) je mešan 8 sati na 100°C. Dobijeni rastvor je ugašen vodom. Dobijeni rastvor je ekstraktovan sa EtOAc i organski slojevi su spojeni. Nakon toga je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela sa EtOAc/petrolej etrom (1:1) čime je dobijeno 900 mg (75%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 319,18 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-[3-(hidroksimetil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila
[0463] Rastvor terc-butil 4-(5-cijanopiridin-2-il)-2-(hidroksimetil)piperazin-1-karboksilat (900 mg, 2,83 mmol, 1,00 ekv.) u hlorovodonik/dioksanu (15 mL) je mešan 30 minuta na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom čime je dobijeno 600 mg naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 219,15 [M+H]<+>. Korak 3: Sinteza 6-[3-(hidroksimetil)-4-[(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1, 6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]fenil)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila
[0464] Rastvor 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoeva kiselina (114,9 mg, 0,30 mmol, 1,00 ekv.), HATU (136,8 mg, 0,36 mmol, 1,20 ekv.), DIPEA (116,1 mg, 0,90 mmol, 3,00 ekv.), 6-[3-(hidroksimetil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril (78,48 mg, 0,36 mmol, 1,20 ekv.) u DMF (3 mL) je mešan 3 sata na sobnoj temperaturi. Nakon kocentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon toga ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (35,2 mg, 20%) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 584,10 [M+H]<+>,<1>HNMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8,50 (s, 1H), 8,24 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,77 (dd, J = 9,1, 2,4 Hz, 1H), 7,39 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,07 - 6,86 (m, 4H), 4,87 - 4,83 (m, 2H), 4,54 (s, 2H), 4,37 - 3,89 (m, 3H), 3,72 - 3,41 (m, 3H), 3,44 (t, J = 8,9 Hz, 2H), 3,28 - 3,01 (m, 2H), 2,49 - 2,22 (m, 1H), 2,07 (dd, J = 11,2, 5,6 Hz, 1H), 2,00 - 1,69 (m, 2H).
Primer 34: 6-[2-okso-4-[(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]fenil) karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
Korak 1: Sinteza terc-butil 4-(5-cijanopiridin-2-il)-3-oksopiperazin-1-karboksilata
[0466] Rastvor terc-butil 3-oksopiperazin-1-karboksilat (2,0 g, 10,00 mmol, 1,00 ekv.), trikalijum fosfat (4,24 g, 20,00 mmol, 2,00 ekv.), CuI (95,0 mg, 0,50 mmol, 0,05 ekv.), 6-bromopiridin-3-karbonitril (1,82 g, 10,00 mmol, 1,00 ekv.), (1R,2R)-1-N,2-N-dimetilcikloheksan-1,2-diamin (142,0 mg, 1,00 mmol, 0,10 ekv.) u dioksanu (80 mL) je mešan 3 sata na 110°C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom i ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (6:1) čime je dobijeno 1,2 g (40%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance bele boje. LCMS (ESI, m/z): 303,15 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-(2-oksopiperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila
[0467] Rastvor terc-butil 4-(5-cijanopiridin-2-il)-3-oksopiperazin-1-karboksilat (200 mg, 0,66 mmol, 1,00 ekv.) u hlorovodonik/dioksanu (20 mL) je mešan 30 minuta na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom čime je dobijeno 170 mg sirove supstance naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance bele boje. LCMS (ESI, m/z): 203,10[M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 6-[2-okso-4-[(3-[[(2S)-]-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]fenil)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila
[0468] Rastvor 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoeva kiselina (300 mg, 0,78 mmol, 1,00 ekv.), HATU (296,4 mg, 0,78 mmol, 1,20 ekv.), DIPEA (251,55 mg, 1,95 mmol, 3,00 ekv.), 6-(2-oksopiperazin-1-il)piridin-3-karbonitril (131,3 mg, 0,65 mmol, 1,20 ekv.) u DMF (3 mL, 3,00 ekv.) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon toga ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (7,9 mg, 2%) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 568,20 [M+H]<+>,<1>HNMR (300 MHz, hloroform-d) δ 10,69 (s, 1H), 8,68 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,36 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 8,08 - 7,79 (m, 2H), 7,49 - 7,29 (m, 1H), 7,05 (d, J = 7,6, 1,2 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 2,1 Hz, 2H), 4,64 (dd, J = 6,0, 4,8 Hz, 1H), 4,48 (s, 2H), 4,23 (s, 2H), 4,11 (dd, J = 9,8, 4,2 Hz, 1H), 4,06 - 3,56 (m, 4H), 3,45 (dd, J = 10,9, 6,0 Hz, 1H), 2,40 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 2,19 - 2,00 (m, 1H), 1,95 - 1,72 (m, 2H).
Primer 35: 6-[4-[(4-[[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi]fenil)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i 6-[4-[(4-[[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi]fenil)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[0469]
Korak 1: Sinteza metil 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)benzoata
[0470] Rastvor 5-[1-(hidroksimetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (440 mg, 1,00 mmol, 1,00 ekv.), [Pd(allyl)Cl]2 (37 mg, 0,10 mmol, 0,10 ekv.), Rokfos (47 mg, 0,10 mmol, 0,10 ekv.), Cs2CO3 (970 mg, 2,98 mmol, 2,00 ekv.) i metil 4-bromobenzoat (430 mg, 2,00 mmol, 2,00 ekv.) u toluenu (10 mL) je mešan 5 sati na 80 °C. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 150 mL vode. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela sa EtOAc/petrolej etrom (1/4) čime je dobijeno 470 mg (82%) naslovnog jedinjenja kao ulje žute boje. LCMS (ESI, m/z): 576,21 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)benzoic
[0471] Rastvor metil 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)benzoat (470 mg, 0,82 mmol, 1,00 ekv.), voda (2 mL) i LiOH (100 mg, 4,18 mmol, 5,00 ekv.) u THF (8 mL) je mešan tokom jedne noći na 60 °C pod N2(g) atmosferom. pH vrednost rastvora je prilagođena na 5-6 sa hlorovodonikom (6 M).
[0472] Dobijeni rastvor je ekstraktovan sa 2 x 200 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni i koncentrovani pod vakuumom, čime je dobijeno 400 mg (87%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 562,19 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)benzoic
[0473] Rastvor 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)benzoeva kiselina (400 mg, 0,71 mmol, 1,00 ekv.) u hlorovodonik/dioksanu (20 mL) je mešan tokom jedne noći na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom čime je dobijeno 300 mg (98%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance crne boje. LCMS (ESI, m/z): 432,11 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 6-[4-[(4-[[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi]fenil)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril, i 6-[4-[(4-[[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi]fenil)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril.
[0474] Rastvor 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)benzoeva kiselina (350 mg, 0,81 mmol, 1,00 ekv.), Int-A4 (153 mg, 0,81 mmol, 1,00 ekv.), DIPEA (300 mg, 2,32 mmol, 3,00 ekv.) i HATU (313 mg, 0,82 mmol, 1,01 ekv.) u DMF (3 mL) je mešan sat vremena na 25 °C. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Zatim su hiralnom preparativnom HPLC dobijena (nakon arbitrarnog zadavanja stereohemije) naslovna jedinjenja, respektivno, izomer A 54,1 mg (54 %) kao čvrsta supstanca žute boje. LCMS (ESI, m/z): 602,20 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8,44 - 8,39 (m, 2H), 7,79-7,76 (dd, J = 9,1, 2,4 Hz, 1H), 7,54-7,51 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 7,43-7,37 (td, J = 5,5, 5,0, 2,0 Hz, 5H), 6,98-6,96 (m, 2H), 6,91-6,88 (m, 1H), 6,21 (s, 1H), 5,33-5,29 (d, J = 14,7 Hz, 1H), 4,67 - 4,62 (m, 1H), 4,55-4,52 (dd, J = 10,4, 3,5 Hz, 1H), 4,31-4,27 (dd, J = 10,3, 6,8 Hz, 1H), 3,79-3,50 (m, 8H) . tR = 3,517 min (CHIRALPAK IG-3, 0,46∗ 10cm; 3 um, MtBE (0,1% DEA):EtOH=70:30, 1,0 mL/min) i izomer B 48,6 mg (49 %) kao čvrsta supstanca žute boje. LCMS (ESI, m/z): 602,20 [M+H]<+>, tR = 3,515 min (CHIRALPAK IG-3, 0,46*10cm; 3 um, MtBE (0,1% DEA):EtOH=70:30, 1,0 mL/min).
Primer 36: 6-[4-[(2-[[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi]piridin-4-il)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i 6-[4-[(2-[[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi]piridin-4-il)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[0475]
Korak 1: Sinteza metil 2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4i]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-4-karboksilat
[0476] Rastvor 5-[1-(hidroksimetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (441 mg, 1,00 mmol, 1,00 ekv.), [Pd(allyl)Cl]2(36,6 mg, 0,10 mmol, 0,10 ekv.), Rokfos (46,8 mg, 0,10 mmol, 0,10 ekv.), Cs2CO3(65,2 mg, 0,20 mmol, 2,00 ekv.), metil 2-bromopiridin-4-karboksilat (430 mg, 1,99 mmol, 2,00 ekv.) u toluenu (10 mL) je mešan 3 sata na 80 °C. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (3:7) čime je dobijeno 420 mg (73%) naslovnog jedinjenja kao čvrsta supstanca žute boje. LCMS (ESI, m/z): 577,21 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1il]metoksi)piridin-4-karboksilna kiselina.
[0477] Rastvor metil 2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-4-karboksilat (420 mg, 0,73 mmol, 1,00 ekv.), LiOH (87,6 mg, 3,66 mmol, 5,00 ekv.), voda (2 ml) u metanolu (10 ml) je mešan 3 sata na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvora je prilagođena na 5 sa hlorovodonikom. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa acetat/petrolej etrom (2:1) čime je dobijeno 300 mg (73%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 563,20 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-4-karboksilna kiselina.
[0478] Rastvor 2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-4-karboksilna kiselina (300 mg, 0,52 mmol, 1,00 ekv.) u hlorovodonik/dioksanu (20 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN čime je dobijen 261 mg sirove supstance naslovnog jedinjenja kao čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 433,11 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 6-[4-[(2-[[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi]piridin-4-il)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila i 6-[4-[(2-[[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2, 3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi]piridin-4-il)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila
[0479] Rastvor 2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-4-karboksilna kiselina (261 mg, 0,60 mmol, 1,00 ekv.), HATU (277,4 mg, 0,73 mmol, 1,20 ekv.), DIPEA (309,6 mg, 2,40 mmol, 4,00 ekv.), Int-A4 (136,3 mg, 0,72 mmol, 1,20 ekv.) u DMF (3 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon toga ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC i hiralno preparativnom HPLC čime su dobijena naslovna jedinjenja. Apsolutna stereohemija je dodeljena na osnovu proteinske rendgenske kristalne strukture dobijene iz Primera 18 Izomera B što je potvrdilo (S)-apsolutnu stereohemiju i uočeno je da je potentniji enantiomer.
Primer 36
Izomer A: (11 mg, 20 %) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 603,10 [M+H]+,<1>HNMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ: 8,45 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,25 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,79 (dd, J = 9,1, 2,4 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 4,2 Hz 1H), 7,40 (d, J = 2,0 Hz, 3H), 7,02 (dd, J = 5,2, 1,3 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 6,74 (s, 1H), 6,18 (t, J = 2,1 Hz, 1H), 5,24 (d, J = 14,7 Hz, 1H), 4,84 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 4,75 - 4,71 (m, 1H), 4,70 -4,64 (m, 1H), 3,86 (s, 4H), 3,74-3,68 (m, 2H), 3,61-3,49 (m, 2H). tR = 2,208 min (CHIRALPAK IG-3, 0,46∗ 5cm; 3 um, Hex: DCM= 1:1 (0,1%DEA):EtOH=30:70, 1,0mL/min)
Primer 36 Izomer B: (10,7 mg, 10 %) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 603,10 [M+H]<+>. tR = 2,947 min(CHIRALPAK IG-3, 0,46∗ 5cm; 3 um, Hex : DCM= 1:1 (0,1%DEA):EtOH=30:70, 1,0mL/min).
Primer 37: 5-[[(2S)-1-(3-Okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi)butan-2-il]oksi]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0480]
Korak 1: 3-[(2S)-2-Hidroksibutoksi]-1-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propan-1-on
[0481] Rastvor Int-20 (1 g, 3,49 mmol, 1 ekv.), (2S)-butan-1,2-diol (1574,1 mg, 17,47 mmol, 5 ekv.) i Cs2CO3(2276,4 mg, 6,99 mmol, 2,00 ekv.) u MeCN (10 mL) je mešan 4 sata na 75 ° C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 300 mL DCM. Dobijena smeša je isprana sa 45 mL x 2 H2O i 45 mL x 2 vodenog rastvora zasićenog natrijum hlorida. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela sa DCM/EtOAc (1/1) čime je dobijeno 1,16 g (81,2%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 377,37 [M+H]<+>.
Korak 2: 2-[(4-Metoksifenil)metil]-5-[[(2S)-]-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi)butan-2-il]oksi]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0482] Rastvor 3-[(2S)-2-hidroksibutoksi]-1-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propan-1-on (0,37 g, 0,98 mmol, 1 ekv.), Cs2CO3(0,64 g, 1,96 mmol, 2 ekv.) i 5-hloro-2-[(4-metoksifenil)metil]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on (0,939 g, 1,96 mmol, 3,00 ekv.) u MeCN (6 mL) je mešan 18 sati na 80 °C. Dobijen rastvor je razblažen sa 300 mL EtOAc. Dobijena smeša je isprana sa 45 mL x 2 vode i 45 mL x 2 zasićenim natrijum hloridom, nakon čega je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela sa EtOAc/petrolej etrom (2/3) čime je dobijeno 0,28 g (32,0 %) naslovnog jedinjenja kao čvrstih supstanci bele boje. LCMS (ESI, m/z): 721,85 [M+H]<+>.
Korak 3: 5-[[(2S)-1-(3-Okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi)butan-2-il]oksi]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0483] Rastvor 2-[(4-metoksifenil)metil]-5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi)butan-2-il]oksi]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on (0,27 g, 0,410 mmol, 1 ekv.) i H2SO4(0,402 g, 4,1 mmol, 10 ekv.) u TFA (7 mL) je mešan tokom 3 dana na 25 ° C. Reakciona smeša je ohlađena sa kadom vode/leda. Dobijen rastvor je razblažen sa 300 mL DCM. Dobijena smeša je isprana sa 45 mL x 2 vode i 45 mL x 2 zasićenog vodenog rastvora natrijum hlorida, nakon čega je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana. Ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN čime je dobijeno naslovno jedinjenje (16,1 mg, 33,7%) kao čvrste supstance bele boje. LCMS (ESI, m/z): 539,25 [M+H]<+>,<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 13,22 (s, 1H), 8,74 (s, 2H), 8,28 (s, 1H), 5,01 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 3,86 - 3,75 (m, 4H), 3,76 - 3,58 (m, 3H), 3,54 -3,50 (m, 5H), 2,55 (d, J = 6,3 Hz, 2H), 1,71 - 1,58 (m, 2H), 0,91 (t, J = 7,4 Hz, 3H).
Primer 38 Izomer A: 6-[4-[(2-[[(1S)-2-[6-Okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il] metoksi] pirimidin-4-il)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i
Primer 38 Izomer B: 6-[4-[(2-[[(1R)-2-[6-Okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoks]pirimidin-4-il)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[0484]
Korak 1: Metil 2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-]-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)pirimidin-4-karboksilat
[0485] Rastvor 5-[1-(hidroksimetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (500 mg, 1,13 mmol, 1,00 ekv.), (Pd(allyl)Cl)2(53 mg, 0,10 ekv.), Rokfos (41 mg, 0,10 ekv.), Cs2CO3(1,1 mg, 3,00 ekv.), metil 2-hloropirimidin-4-karboksilat (292 mg, 1,69 mmol, 1,50 ekv.) u toluenu (10 mL) je mešan pod uslovima azota tokom noći na 85 °C. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanet na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (1/1) čime je dobijeno 420 mg (64%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 578,20 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza metil 2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)pirimidin-4-karboksilata
[0486] Rastvor metil 2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)pirimidin-4-karboksilat (420 mg, 0,73 mmol, 1,00 ekv.) u dioksan/HCl (20 mL,4 M) je mešan tokom noći na 25°C. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom čime je dobijeno 300 mg (92 %) naslovnog jedinjenja kao ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z): 448,12 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)pirimidin-4-karboksilne kiseline
[0487] Rastvor metil 2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)pirimidin-4-karboksilat (400 mg, 0,89 mmol, 1,00 ekv.), LiOH.H2O (200 mg, 4,77 mmol, 5,00 ekv.) u MeOH (10 mL) i vodi (2 mL) je mešan 2 sata na 25 °C. Dobijen rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je razblažen sa 3 mL vode, nakon čega je pH vrednost rastvora prilagođena na 2 sa hlorovodoničnom kiselinom i čvrsta supstanca je filtrirana čime je dobijeno 215 mg (55%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance roze boje. LCMS (ESI, m/z): 434,10 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 6-[4-[(2-[[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi]pirimidin-4-il)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila i 6-[4-[(2-[[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2, 3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi]pirimidin-4-il)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila
[0488] Rastvor 2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)pirimidin-4-karboksilna kiselina (100 mg, 0,23 mmol, 1,00 ekv.), HOBT (47 mg, 0,35 mmol, 1,50 ekv.), EDCI (67 mg, 0,35 mmol, 1,50 ekv.), DIPEA (90 mg, 0,70 mmol, 3,00 ekv.), Int-A4 (87 mg, 0,46 mmol, 2,00 ekv.) u DMF (3 mL) je mešan preko noći 25 °C. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon toga ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC i hiralnom preparativnom HPLC čime su dobijena naslovna jedinjenja. Apsolutna stereohemija je zadata na osnovu proteinske rentgenske kristalne strukture dobijene iz Primera 18 Izomera B što je potvrdilo (S)-apsolutnu stereohemiju i uočeno je da potentniji enantiomer.
[0489] Izomer A (6,1 mg, 23 %) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 604,20 [M+H]+, 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 12,57 (s, 1H), 8,69 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 8,51 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,89 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,48 (s, 1H), 7,38 (d, J = 9,9 Hz, 3H), 7,28 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,14 (s, 1H), 5,04 (d, J = 14,4 Hz, 1H), 4,90 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 4,71 - 4,41 (m, 2H), 3,97 - 3,55 (m, 6H), 3,40 (m, 2H). tR = 4,448 min (CHIRALPAKIC-3, 0,46∗10cm; 3um, MtBE (0,1%DEA):EtOH=80:20, 1,0mL/min) i izomer B (6,4 mg, 25 %) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 604,20 [M+H]<+>, tR = 5,550 min (CHIRALPAKIC-3, 0,46∗10cm; 3um, MtBE (0,1%DEA):EtOH=80:20, 1,0mL/min).
Primer 39: 6-[4-([3-[2-([2-[6-Okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-il]oksi)etoksi]fenil]karbonil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[0490]
Korak 1: Sinteza 5-[4-(2-hidroksietoksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0491] Rastvor 5-(4-hidroksi-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropindazin-3-on (2 g, 4,68 mmol, 1,00 ekv.), kalijum karbonat (3,2 g, 23,15 mmol, 5,00 ekv.), 2-bromoetan-1-ol (2,9 g, 23,21 mmol, 5,00 ekv.) u DMF (30 mL, 5,00 ekv.) je mešan 12 sati na 80 °C u uljanoj kadi. Reakciona smeša je razblažena sa H2O (200 mL). Dobijeni rastvor je ekstraktovan sa EtOAc (4 x 100 mL) i organski slojevi su spojeni. Nakon koncentracije, ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (1:4) čime je dobijeno 1,35 g (61 %) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 472,18 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza metil 3-[2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-il]oksi)etoksi]benzoata
[0492] Pod azotom, rastvor 5-[4-(2-hidroksietoksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (675 mg, 1,43 mmol, 1,00 ekv.), [Pd(allyl)Cl]2(67 mg, 0,10 ekv.), rokfos (52 mg, 0,10 ekv.), CS2CO3(932 mg, 2,86 mmol, 2,00 ekv.), metil 3-bromobenzoat (612 mg, 2,85 mmol, 2,00 ekv.) u toluenu (10 mL) je mešan 12 sati na 80 °C u uljanoj kadi. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (1:1) čime je dobijeno 624 mg (72%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 606,22 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza metil 4-[2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-il]oksi)etoksi]benzoata
[0493] Rastvor metil 4-[2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-il]oksi)etoksi]benzoat (624 mg, 1,03 mmol, 1,00 ekv.) u hlorovodonik/dioksanu (20 mL) je mešan 12 sati na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (1:2) čime je dobijeno 400 mg (82%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 476,22 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 4-[2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-il]oksi)etoksi]benzoeve kiseline
[0494] Rastvor metil 4-[2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-il]oksi)etoksi]benzoat (400 mg, 0,84 mmol, 1,00 ekv.), LiOH (120 mg, 5,01 mmol, 5,00 ekv.) u MeOH (5 mL) i vodi (1 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvora je prilagođena na 3 sa hlorovodonikom. Čvrste supstance su prikupljene filtracijom čime je dobijeno 260 mg (67%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance sive boje. LCMS (ESI, m/z): 462,12 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 6-[4-([3-[2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-il]oksi)etoksi]fenil]karbonil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila
[0495] Rastvor 3-[2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-il]oksi)etoksi]benzoeva kiselina (260 mg, 0,56 mmol, 1,00 ekv.), HATU (232 mg, 0,61 mmol, 1,00 ekv.), DIPEA (315 mg, 2,44 mmol, 4,00 ekv.), Int-A4 (115 mg, 0,61 mmol, 1,00 ekv.) u DMF (2 mL) je mešan 30 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN čime je dobijeno naslovno jedinjenje (89,8 mg, 25 %) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 632,22 [M+H]<+>,<1>H NMR (Metanol-d4, 400 MHz) δ: 8,43 - 8,41 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,77 - 7,74 (dd, J = 9,1, 2,3 Hz, 1H), 7,44 - 7,30 (dt, J = 25,9, 7,9 Hz, 2H), 7,14 - 6,95 (m, 5H), 6,89 - 6,86 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 5,02 - 4,98 (m, 2H), 4,92 - 4,88 (m, 2H), 4,47 - 4,43 (m, 4H), 3,91 - 3,53 (m, 8H).
Primer 40: 6-(4-[[3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]piperidin-2-il]metoksi)fenil] karbonil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[0496]
Korak 1: Sinteza 5-[2-(hidroksimetil)piperidin-1-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0497] Rastvor 5-hloro-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (2 g, 6,08 mmol, 1,00 ekv.), piperidin-2-ilmetanol (772,3 mg, 6,71 mmol, 1,10 ekv.) i TEA (1,35796 g, 13,42 mmol, 2,00 ekv.) u etanolu (40 mL) je mešan 2 sata na 60 °C, nakon čega je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom, zatim je ostatak nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (3:1) čime je dobijeno 639 mg (26%) naslovnog jedinjenja kao ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z): 408,19 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza metil 3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4il]piperidin-2-il]metoksi)benzoata
[0498] Rastvor 5-[2-(hidroksimetil)piperidin-1-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (560 mg, 1,37 mmol, 1,00 ekv.), Pd(allyl)Cl2(50,3616 mg, 0,10 ekv.), Rokfos (64,5344 mg, 0,10 ekv.), Cs2CO3(1,3457 g, 4,13 mmol, 3,00 ekv.) i metil 3-bromobenzoat (586,176 mg, 2,73 mmol, 2,00 ekv.) u toluenu (5 mL) je mešan 12 sati na 80 °C pod atmosferom azota, nakon čega je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom, a zatim je ostatak nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (1:2) čime je dobijeno 153 mg (21%) naslovnog jedinjenja kao svetlo braon čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 542,23 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]piperidin-2-il]metoksi)benzoeve kiseline
[0499] Rastvor metil 3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]piperidin-2-il]metoksi)benzoat (153 mg, 0,28 mmol, 1,00 ekv.) i LiOH (33,9 mg, 1,42 mmol, 5,00 ekv.) u metanolu (6 mL) i vodi (2 mL) je mešan 24 sata na sobnoj temperaturi, nakon čega je ostatak koncentrovan pod vakuumom, a zatim razblažen sa 3 mL vode, nakon čega je pH vrednost dobijenog rastvora prilagođena na 4 sa HCl (1M), a zatim je rastvor ostatka koncentrovan pod vakuumom čime je dobijeno 107 mg naslovnog jedinjenja kao sirove svetlo žute čvrste supstance. LCMS(ESI, m/z): 528,21 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]piperidin-2-il]metoksi)benzoeve kiseline
[0500] Rastvor 3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]piperidin-2-il]metoksi)benzoeva kiselina (125 mg, 0,24 mmol, 1,00 ekv.) u hlorovodoniku/dioksanu (5 mL, 4M) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi, nakon čega je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom čime je dobijeno 116 mg naslovnog jedinjenja kao sirovog ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z): 398,12 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 6-(4-[[3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]piperidin-2-il]metoksi)fenil] karbonil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila
[0501] Rastvor 3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]piperidin-2-il]metoksi)benzoeva kiselina (69 mg, 0,17 mmol, 1,00 ekv.), HATU (66,0 mg, 0,17 mmol, 1,00 ekv.), DIPEA (67,4 mg, 0,52 mmol, 3,00 ekv.) i Int-A4 (39,2 mg, 0,22 mmol, 1,20 ekv.) u DMF (2 mL) je mešan 4 sata na sobnoj temperaturi, nakon čega je dobijeni rastvor prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN, nakon čega je sirov proizvod dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (26,7 mg, 27,0%) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 568,25 [M+H]<+>,<1>HNMR (CD3OD-d4, 300 MHz) δ 8,43 (d, J = 2,1Hz, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,79 (dd, J = 9,0, 2,1Hz, 1H), 7,35 (t, J = 8,4Hz, 1H), 7,02 (d, J = 7,2Hz, 1H), 6,92-6,83 (m, 3H), 4,54 (t, J = 9,9Hz, 1H), 4,37 (d, J = 3,9Hz, 1H), 4,15 (dd, J = 10,2, 3,6Hz, 1H), 3,92-3,50 (m, 9H), 3,43-3,37 (m, 1H), 2,03-1,59 (m, 6H) .
Primer 41: 6-(4-[[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)fenil]karbonil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[0502]
Korak 1: Sinteza metil 3-(2-[[(terc-butoksi)karbonil]amino]etoksi)benzoata
[0503] Rastvor metil 3-hidroksibenzoat (760 mg, 5,00 mmol, 1 ekv.), terc-butil N-(2-bromoetil)karbamat (1679,1 mg, 7,49 mmol, 1,500 ekv.), K2CO3(1380,7 mg, 9,99 mmol, 2 ekv.) u DMF (5 mL) je mešan 2 sata na 80 °C. Dobijeni rastvor je ekstraktovan sa 3 x 30 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni. Dobijen rastvor je ekstraktovan sa 3 x 30 mL NaCl(akv.) i organski slojevi su spojeni i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (21/79) čime je dobijeno 1,323 g (89,68 %) naslovnog jedinjenja kao ulje bele boje. LCMS (ESI, m/z): 296,14 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 3-(2-[[(terc-butoksi)karbonil]amino]etoksi)benzoeve kiseline
[0504] Rastvor metil 3-(2-[[(terc-butoksi)karbonil]amino]etoksi)benzoat (1,223 g, 4,14 mmol, 1,00 ekv.), natrijum hidroksid (830 mg, 20,75 mmol, 5,00 ekv.) u metanolu (5 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. pH vrednost rastvora je prilagođena na 6 sa hlorovodonikom (40%). Čvrste materije su prikupljene filtracijom. To je dalo 531 mg (46%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance bele boje. LCMS (ESI, m/z): 282,13 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza terc-butil N-[2-(3-[[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]karbonil]fenoksi)etil]karbamat
[0505] Rastvor 3-(2-[[(terc-butoksi)karbonil]amino]etoksi)benzoeva kiselina (531 mg, 1,89 mmol, 1,00 ekv.), DIPEA (731 mg, 5,66 mmol, 3,00 ekv.), HATU (790 mg, 2,08 mmol, 1,10 ekv.), Int-A4 (466 mg, 2,07 mmol, 1,10 ekv.) u DMF (5 mL) je mešan 8 sati na sobnoj temperaturi. Dobijen rastvor je ekstraktovan sa 3 x 30 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni. Dobijen rastvor je ekstraktovan sa 3 x 30 mL zasićenog vodenog natrijum hlorida i organski slojevi su spojeni i osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. To je dalo 1,142 g (sirovo) naslovnog jedinjenja kao ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z): 452,22 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 6-(4-[[3-(2-aminoetoksi)fenil]karbonil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril hidrohlorida
[0506] Rastvor terc-butil N-[2-(3-[[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]karbonil]fenoksi)etil]karbamat (1,142 g) u HCl/dioksanu (5 mL) je mešan 30 minuta na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom čime je dobijeno 0,980 g naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 352,17 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 6-(4-[[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)fenil]karbonil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila
[0507] Rastvor 5-hloro-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (758 mg, 2,31 mmol, 1 ekv.), 6-(4-[[3-(2-aminoetoksi)fenil]karbonil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril dihidrohlorid (980 mg, 2,31 mmol, 1 ekv.), TEA (700 mg, 6,93 mmol, 3 ekv.) u EtOH (5 mL) je mešan 3 sata na 60 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (93/7) čime je dobijeno 615 mg (41,4 %) naslovnog jedinjenja kao ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z): 644,26 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 6-(4-[[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)fenil] karbonil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila
[0508] Rastvor 6-(4-[[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)fenil]karbonil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril (300 mg) u DCM (5 mL) i TFA (1 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 5 mL NaHCO3(akv.). Dobijen rastvor je ekstraktovan sa 3 x 30 mL DCM i organski slojevi su spojeni. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Ostatak je nakon toga dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (61,9 mg, 25,9 %) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 514,17 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ :12,50 (s, 1H), 8,53 (dd, J = 2,4, 0,6 Hz, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,91 (dd, J = 9,1, 2,4 Hz, 1H), 7,39 (dd, J = 8,4, 7,4 Hz, 1H), 7,16 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 7,07 - 6,90 (m, 4H), 4,18 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 3,81-3,57 (m, 8H),3,51(m, 2H).
Primer 42: 6-(4-[[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)fenil]karbonil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[0509]
Korak 1: Sinteza 5-(2-bromoetoksi)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on [0510] Rastvor 5-hloro-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (4 g, 12,17 mmol, 1,00 ekv.), 2-bromoetan-1-ol (1,66 g, 13,28 mmol, 1,10 ekv.) i Cs2CO3 (7,95 g, 24,32 mmol, 2,00 ekv.) u DMF (15 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi, nakon čega je ostatak rastvoren u 50 mL H2O, ekstraktovan sa 3 x 50 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni, ispran sa 1 x 50 mL slanog rastvora, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom, nakon čega je ostatak nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (35/65) čime je dobijeno 2,0 g (39 %) naslovnog jedinjenja kao ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z):417,04 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza metil 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)benzoata
[0511] Rastvor 5-(2-bromoetoksi)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropindazin-3-on (1 g, 2,40 mmol, 1,00 ekv.), metil 3-hidroksibenzoat (730 mg, 4,80 mmol, 2,00 ekv.) i Cs2CO3(1,567 g, 4,79 mmol, 2,00 ekv.) u DMF (25 mL) je mešan 3 sata na 60 °C , nakon čega je ostatak rastvoren u 60 mL H2O, ekstraktovan sa 3 x 60 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni, isprani sa 1 x 60 mL slanog rastvora, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom, nakon čega je ostatak nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (27/73) čime je dobijeno 302 mg (26 %) naslovnog jedinjenja kao ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z): 489,16 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza metil 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)benzoata
[0512] Rastvor metil 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)benzoat (330 mg, 0,68 mmol, 1,00 ekv.) u HCl/dioksanu (13 mL, 4M) je mešan sat vremena na sobnoj temperaturi, nakon čega je dobijen rastvor koncentrovan pod vakuumom čime je dobijeno 280 mg sirovog naslovnog jedinjenja kao ulje žute boje. LCMS (ESI, m/z): 359,08[M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)benzoeve kiseline
[0513] Rastvor metil 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)benzoat (300 mg, 0,84 mmol, 1,00 ekv.) i LiOH (60,3 mg, 2,52 mmol, 3,00 ekv.) u vodi (2 mL) i THF (10 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi, nakon čega je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom, a zatim je ostatak razblažen sa 10 mL H2O i pH vrednost rastvora prilagođena na 4 sa hlorovodonikom (36%), nakon čega je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom čime je dobijeno 255 mg naslovnog jedinjenja kao sirove čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 345,06 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 6-(4-[[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)fenil]karbonil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila
[0514] Rastvor 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)benzoeva kiselina (230 mg, 0,67 mmol, 1,00 ekv.), HATU (254 mg, 0,67 mmol, 1,00 ekv.), DIPEA (258 mg, 2,00 mmol, 3,00 ekv.) i Int-A4 (125 mg, 0,66 mmol, 1,00 ekv.) u DMF (8 mL) je mešan 40 minuta na sobnoj temperaturi, nakon čega je dobijeni rastvor prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon koncentracije, ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (11,8 mg 3 %) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 515,15 [M+H]<+ 1>HNMR (DMSO-d6, 400 MHz,) δ 13,56 (s, 1H), 8,51 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,32 (s, 1H), 7,91 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,40 (t, J =8,0 Hz, 1H), 7,06-7,00 (m, 3H), 6,94 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 4,78-4,76 (m, 2H), 4,36-4,34 (m, 2H), 3,77-3,69 (m, 8H).
Primer 43: 6-[4-([4-[2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-il] oksi)etoksi]fenil]karbonil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[0515]
Korak 1: Sinteza metil 4-[2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-il]oksi)etoksi]benzoata
[0516] Pod azotom, rastvor 5-[4-(2-hidroksietoksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (675 mg, 1,43 mmol, 1,00 ekv.), [Pd(allyl)Cl]2(67 mg, 0,10 ekv.), Rokfos (52 mg, 0,10 ekv.), CS2CO3(932 mg, 2,86 mmol, 2,00 ekv.), metil 4-bromobenzoat (612 mg, 2,85 mmol, 2,00 ekv.) u toluenu (10 mL) je mešan 12 sati na 80 °C u uljanoj kadi. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela sa EtOAc/petrolej etrom (1:1) čime je dobijeno 430 mg (50%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 606,22 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza metil 4-[2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-il]oksi)etoksi]benzoata
[0517] Rastvor metil 4-[2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-il]oksi)etoksi]benzoat (430 mg, 0,71 mmol, 1,00 ekv.) u hlorovodoniku/dioksanu (20 mL) je mešan 12 sati na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom čime je dobijeno 300 mg (89%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 476,14 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 4-[2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2, 3-dihidro-1H-izoindol-4-il]oksi)etoksi]benzoeva kiselina
[0518] Rastvor metil 4-[2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-il]oksi)etoksi]benzoat (300 mg, 0,63 mmol, 1,00 ekv.), LiOH (76 mg, 3,17 mmol, 5,00 ekv.) u MeOH (5 mL) i vodi (1 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvora je prilagođena na 3 sa hlorovodonikom. Čvrste materije su prikupljene filtracijom čime je dobijeno 250 mg (86%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance sive boje. LCMS (ESI, m/z): 462,12 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 6-[4-([4-[2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-il]oksi)etoksi]fenil]karbonil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila
[0519] Rastvor 4-[2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-il]oksi)etoksi]benzoeva kiselina (270 mg, 0,59 mmol, 1,00 ekv.), HATU (239 mg, 0,63 mmol, 1,00 ekv.), DIPEA (325 mg, 2,51 mmol, 4,00 ekv.), Int-A4 (118 mg, 0,63 mmol, 1,00 ekv.) u DMF (2 mL) je mešan 30 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN čime je dobijeno naslovno jedinjenje (163,6 mg 44%) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 632,22 [M+H]<+>,<1>H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 12,52 (s, 1H), 8,49 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,87 (dd, J = 9,1, 2,3 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,31 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,09 - 6,87 (m, 5H), 4,96 (s, 2H), 4,86 (s, 2H), 4,43-4,40 (d, J = 9,3 Hz, 4H), 3,73 (dr, 4H), 3,59 (dr, 4H).
Primer 44: 5-[5-fluoro-6-(piperidin-3-ilmetoksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0520]
Korak 1: Sinteza 5-(5-bromo-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0521] Rastvor 5-bromo-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol (6 g, 27,77 mmol, 1 ekv.), 5-hloro-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (10,8 g, 32,85 mmol, 1,183 ekv.), TEA (8 g, 79,06 mmol, 2,847 ekv.) u etanolu (60 mL) je mešan 2 sata na 80 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (2/8) čime je dobijeno 2,8 g (19,8 %) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance bele boje. LCMS (ESI, m/z): 510,06 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza terc-butil 3-[([6-fluoro-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il]oksi)metil]piperidin-1-karboksilata
[0522] Rastvor 5-(5-bromo-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (1 g, 1,97 mmol, 1,00 ekv.), Rokfos (92 mg, 0,20 mmol, 0,10 ekv.), [Pd(ally)Cl]2, Cs2CO3(72 mg, 0,20 mmol, 0,10 ekv.), terc-butil 3-(hidroksimetil)piperidin-1-karboksilat (844 mg, 3,92 mmol, 2,00 ekv.), Cs2CO3(1,28 g, 3,93 mmol, 2,00 ekv.) u toluenu (8 mL) je mešan 2 sata na 80 °C pod atmosferom azota. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom i ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (3/7) čime je dobijeno 920 mg (92 %) naslovnog jedinjenja kao ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z): 643,29 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 5-[5-fluoro-6-(piperidin-3-ilmetoksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0523] Rastvor terc-butil 3-[([6-fluoro-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il]oksi)metil]piperidin-1-karboksilat (910 mg, 1,42 mmol, 1 ekv.) u hlorovodoniku/dioksanu (10 mL) je mešan 3 sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon toga ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (29,4 mg, 5,04 %) kao čvrsta supstanca bele boje.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 7,98 (s, 1H), 7,28-7,23 (m, 2H), 4,90 (m, 4H), 3,90 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 3,04 (d, J = 11,9 Hz, 1H), 2,86 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 2,50 - 2,28 (m, 1H), 1,92 - 1,6 (m, 2H), 1,59 (d, J = 12,9 Hz, 1H), 1,41 (t, J = 11,8 Hz, 1H), 1,28 - 1,15 (m, 1H).
Primer 45: 5-[5-[(1-acetilpiperidin-3-il)metoksi]-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0524]
[0525] Rastvor 5-[5-fluoro-6-(piperidin-3-ilmetoksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on (120 mg, 0,29 mmol, 1 ekv.), TEA (88,3 mg, 0,87 mmol, 3,0 ekv.), Ac2O (44,6 mg, 0,44 mmol, 1,5 ekv.) u DCM (10 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon toga ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (31,2 mg, 23,6 %) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 455,42 [M+H]<+>,<1>H NMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ: 8,04 (s, 1H), 7,15 (d, J = 10,4 Hz,2H), 5,11-4,90 (m, 4H), 4,51 (d, J = 12,9 Hz, 1H), 4,11-3,87 (m, 3H), 3,26-3,21 (m, 1H), 3,04-2,78 (m, 1H), 2,12-1,82 (m, SH),1,79-1,54 (s, 3H).
Primer 46: 6-(4-[[4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] -2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)pirimidin-2-il]karbonil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[0526]
Korak 1: Sinteza metil 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)pirimidin-2-karboksilata
[0527] Rastvor 5-[1-(hidroksimetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (500 mg, 1,13 mmol, 1 ekv.), metil 4-bromopirimidin-2-karboksilat (491 mg, 2,26 mmol, 2 ekv.), Pd2(dba)3.CHCl3(117 mg, 0,11 mmol, 0,1 ekv.), ksantfos (65,5 mg, 0,11 mmol, 0,1 ekv.), Cs2CO3(738 mg, 2,26 mmol, 2 ekv.) u toluenu (5 mL) sa intertnom atmosferom azota je mešan 5 sati na 85 °C. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (69/31) čime je dobijeno 478 mg (73,1%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance bele boje. LCMS (ESI, m/z): 578,20 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 4-((2-(6-okso-5-(trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidropiridazin-4-il)izoindolin-1-il)metoksi)pirimidin-2-karboksilata
[0528] Rastvor metil 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)pirimidin-2-karboksilat (458 mg, 0,79 mmol, 1 ekv.), LiOH.H2O (166 mg, 3,97 mmol, 5 ekv.) u MeOH (5 mL) i H2O (1 mL) je mešan 6 sati na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je razblažen sa 6 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstraktovan sa 3 x 30 mL DCM i organski slojevi su spojeni i koncentrovani pod vakuumom. Time je dobijeno 167 mg (37,3%) naslovnog jedinjenja kao ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z): 564,18 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)pirimidin-2-karboksilne kiseline
[0529] Rastvor 4-((2-(6-okso-5-(trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidropiridazin-4-il)izoindolin-1-il)metoksi)pirimidin-2-karboksilat (157 mg) u HCl/dioksanu (4 mL) je mešan 7 sati na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Time je dobijen 141 mg naslovnog jedinjenja kao ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z): 434,10 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 6-(4-[[4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)pirimidin-2-il]karbonil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila
[0530] Rastvor 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)pirimidin-2-karboksilna kiselina (131 mg, 0,30 mmol, 1 ekv.), DIPEA (117,2 mg, 0,91 mmol, 3 ekv.), EDC.HCl (86,9 mg, 0,45 mmol, 1,5 ekv.), HOBT (61,3 mg, 0,45 mmol, 1,5 ekv.), Int-A4 (74,7 mg, 0,33 mmol, 1,1 ekv.) u DMF (2 mL) je mešan 5 sati na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon toga ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (8,5 mg, 4,66 %) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 604,20 [M+H]+,<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ:12,61 (s, 1H), 8,61(d, J=7Hz, 1H), 8,58 (s,1H), 8,33 (s, 1H), 7,91 (dd, J = 9,1, 2,4 Hz, 1H), 7,53 - 7,29 (m, 4H), 6,98 - 6,88 (m, 2H), 6,15 (s, 1H), 5,10 (d, J = 14,5 Hz, 1H), 4,86 (dd, J = 11,5, 4,4 Hz, 1H), 4,66 (dd, J = 11,5, 4,6 Hz, 1H), 4,55 (d, J = 14,9 Hz, 1H), 3,80 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,72 (t, J = 4,2 Hz, 2H), 3,63 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 3,29(m, 2H).
Primer 47: N-[4-[(5-cijanopiridin-2-il)oksi]cikloheksil]-2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]acetamid
[0531]
Korak 1: Sinteza terc-butil N-[4-[(5-cijanopiridin-2-il)oksi]cikloheksil]karbamata
[0532] Rastvoru terc-butil N-(4-hidroksicikloheksil)karbamat (2 g, 9,29 mmol, 1,00 ekv.) u DMF (10 mL) je na 0°C dodat natrijum hidrid (223 mg, 9,29 mmol, 2,00 ekv.). Nakon toga, dobijeni rastvor je mešan 10 minuta na sobnoj temperaturi a zatim je dodat 6-hloropiridin-3-karbonitril (1,3 g, 9,38 mmol, 1,00 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan dodatnih 8 sati na sobnoj temperaturi, nakon čega je dobijeni rastvor razblažen sa 50 mL vode i ekstraktovan sa 2 x 50 mL EtOAc. Organski slojevi su spojeni i isprani sa 1 x 50 mL slanog rastvora, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i nakon toga koncentrovani pod vakuumom. Zatim je ostatak nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (2:3) čime je dobijeno 1,7 g (58 %) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance bele boje. LCMS (ESI, m/z): 318,18 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-[(4-aminocikloheksil)oksi]piridin-3-karbonitrila
[0533] Rastvor terc-butil N-[4-[(5-cijanopiridin-2-il)oksi]cikloheksil]karbamat (700 mg, 2,21 mmol, 1,00 ekv.) u hlorovodoniku/dioksanu (5 mL, 4M) je mešan 30 minuta na sobnoj temperaturi, nakon čega je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom čime je dobijeno 100 mg naslovnog jedinjenja kao sirove čvrste supstance bele boje LCMS (ESI, m/z): 218,12 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza N-[4-[(5-cijanopiridin-2-il)oksi]cikloheksil]-2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]acetamida
[0534] Rastvor 2-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksiacetatna kiselina (72 mg, 0,22 mmol, 1,00 ekv.), EDC.HCl (86 mg, 0,55 mmol, 2,00 ekv.), DMAP (55 mg, 0,45 mmol, 2,00 ekv.) i 6-[(4-aminocikloheksil)oksi]piridin-3-karbonitril (58 mg, 0,27 mmol, 1,20 ekv.) u DMF (4 mL) je mešan 16 sati na sobnoj temperaturi. Nakon toga dobijeni rastvor je razblažen sa 20 mL H2O, ekstraktovan sa 3 x 20 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni, isprani sa 1 x 20 mL slanog rastvora i koncentrovani pod vakuumom. Nakon toga ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon koncentracije, ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (23 mg, 20 %) kao čvrsta supstanca žute boje. LCMS (ESI, m/z): 521,20 [M+H]+,<1>H NMR (CD3OD, 400MHz) δ 8,55 (dd, J = 2,4, 0,8Hz, 1H),8,27 (s, 1H), 7,97 (dd, J = 8,4, 2,4Hz, 1H), 6,88 (dd, J = 8,8, 0,8Hz, 1H), 5,13-5,06 (m, 1H), 4,79-4,71 (m, 1H), 3,97 (d, J = 8,8Hz, 2H), 3,82-3,71 (m, 3H), 3,42-3,37 (m, 2H), 2,32-2,17 (m, 3H), 2,06-1,92 (m, 3H), 1,83-1,69 (m, 2H), 1,68-1,58 (m, 2H), 1,45-1,38 (m, 2H).
Primer 48: 5-[5-fluoro-6-(pirolidin-2-ilmetoksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0535]
Korak 1: Sinteza terc-butil 2-[([6-fluoro-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il]oksi)metil]pirolidin-1-karboksilata
[0536] Pod azotom, rastvor 5-(5-bromo-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (800 mg, 1,57 mmol, 1,00 ekv.), terc-butil 2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat (952 mg, 4,73 mmol, 3,00 ekv.), [Pd(allyl)Cl]2(17 mg, 0,05 mmol, 0,03 ekv.), Rokfos (37 mg, 0,08 mmol, 0,05 ekv.), Cs2CO3(1,03 mg, 2,00 ekv.) u toluenu (4 mL) je mešan 5 sati na 90 °C u uljanoj kadi. Nakon koncentracije, ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (23:77) čime je dobijeno 800 mg (81%) naslovnog jedinjenja kao ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z): 629,27 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[5-fluoro-6-(pirolidin-2-ilmetoksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0537] Rastvor terc-butil 2-[([6-fluoro-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il]oksi)metil]pirolidin-1-karboksilat (800 mg, 1,27 mmol, 1,00 ekv.) u hlorovodoniku/dioksanu (30 mL) je mešan tokom 1 noći na 25 °C. Nakon koncentracije, sirov proizvod je prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (18,6 mg 4 %) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 399,14 [M+H]<+>,<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 12,50(s,1H), 7,93(s,1H), 7,28-7,20(m,2H), 4,90(s,4H), 3,883,85(m,2H), 3,37-3,33(m,1H), 2,83-2,78(m,2H), 1,87-1,80(m,1H), 1,73-1,66(m,2H), 1,49-1,41(m,1H).
Primer 49: 5-[5-fluoro-6-[(1-metilpirolidin-2-il)metoksi]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on; metanska kiselina
[0538]
[0539] Rastvor 5-[5-fluoro-6-(pirolidin-2-ilmetoksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on (150 mg, 0,38 mmol, 1,00 ekv.), CH2O (20 mg, 0,67 mmol, 1,80 ekv.), kalijum hidroksid (42 mg, 0,75 mmol, 2,00 ekv.), NaBH4(29 mg, 0,77 mmol, 2,00 ekv.) u metanolu (20 mL) je mešan 3 sata na 25 °C. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (41,6 mg 24 %) kao bezbojna čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 413,15 [M+H]<+>,<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz, ppm) δ: 12,50(s,1H), 7,97(s,1H), 7,22-7,28(m,2H), 4,89(s,4H), 4,04-3,91(m,2H), 2,99-2,95(m,1H), 2,67-2,62(m,1H), 2,38(s,3H), 2,23-2,19(m,1H), 2,00-1,92(s,1H), 1,73-1,66(m,2H), 1,59-1,56(m,1H).
Primer 50: 5-[5-[(1-acetilpirolidin-2-il)metoksi]-6-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0540]
[0541] Rastvor 5-[5-fluoro-6-(pirolidin-2-ilmetoksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on (100 mg, 0,25 mmol, 1,00 ekv.), TEA (51 mg, 0,50 mmol, 2,00 ekv.) i Ac2O (26 mg, 0,25 mmol, 1,00 ekv.) u DCM (3 mL) je mešan sat vremena na sobnoj temperaturi nakon čega je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom. Nakon toga ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon koncentracije, ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (20mg, 18,0 %) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 441,05 [M+H]<+ 1>HNMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ 8,02 (s, 1H), 7,17 (dd, J = 8,1, 3,0Hz, 1H), 7,10 (s, 1H), 4,87-4,97(d, J = 4,5Hz, 4H), 4,37 (d, J = 3,3Hz, 1H), 4,17 (t, J = 3,0Hz, 1H), 4,06 (d, J = 1,2Hz, 1H), 3,68-3,53 (m, 2H), 2,27- 1,92 (m, 7H).
Primer 51: 6-[4-(3-[[(2S,4S)-4-Hidroksi-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[0542]
Korak 1: 5-[(2S,4S)-4-Hidroksi-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0543] Rastvor (3S,5S)-5-(hidroksimetil)pirolidin-3-ol hidrohlorid (653 mg, 4,25 mmol, 1,00 ekv.), Int-A6 (2,1 g, 6,39 mmol, 1,50 ekv.) i TEA (1,3 g, 12,85 mmol, 3,00 ekv.) u etanolu (50 mL) je mešan sat vremena na 60 °C. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (100:0) čime je dobijeno 1,2 g (69%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance bele boje. LCMS (ESI, m/z): 410,16 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza metil 3-[[(2S,4S)-4-hidroksi-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoata
[0544] Pod azotom, rastvor 5-[(2S,4S)-4-hidroksi-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (700 mg, 1,71 mmol, 1,00 ekv.), [Pd(allyl)Cl]2(63 mg, 0,10 ekv.), Rokfos (80 mg, 0,10 ekv.), Cs2CO3(1,1 g) i metil 3-bromobenzoat (731 mg, 3,40 mmol, 2,00 ekv.) u toluenu (25 mL) je mešan 20 sati na 80 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom, i ostatak je razblažen sa 80 mL EtOAc, ispran sa 3 x 60 mL H2O, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (1:1) čime je dobijeno 390 mg (42%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance braon boje. LCMS (ESI, m/z): 544,20 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 3-[[(2S,4S)-4-hidroksi-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksiJbenzoeve kiseline
[0545] Rastvor metil 3-[[(2S,4S)-4-hidroksi-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoat (140 mg, 0,26 mmol, 1,00 ekv.) i LiOH (31 mg, 1,29 mmol, 5,00 ekv.) u metanolu (3 mL) i vodi (1 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je razblažen sa 10 mL H2O, nakon čega je pH vrednost rastvora prilagođena na 3 sa hlorovodonikom (36,5%). Čvrsta materija je prikupljena filtracijom čime je dobijeno 127 mg (93%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance bele boje. LCMS (ESI, m/z): 530,19 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 6-[4-[(3-[[(2S,4S)-4-hidroksi-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]fenil)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila
[0546] Rastvor 3-[[(2S,4S)-4-hidroksi-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoeva kiselina (120 mg, 0,30 mmol, 1,00 ekv.), HATU (87 mg, 0,23 mmol, 1,00 ekv.), DIPEA (59 mg, 0,46 mmol, 2,00 ekv.) i Int-A4 (51 mg, 0,27 mmol, 1,20 ekv.) u DMF (1 mL) je mešan sat vremena na sobnoj temperaturi. Ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN čime je dobijen 131 mg (62%) naslovnog jedinjenja kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 700,28 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 6-[4-(3-[[(2S,4S)-4-hidroksi-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila
[0547] Rastvor 6-[4-(3-[[(2S,4S)-4-hidroksi-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril (130 g, 185,77 mmol, 1,00 ekv.) u hlorovodoniku/dioksanu (5 mL, 4M) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon koncentracije, ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (18,9 mg, 18%) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 570,10 [M+H]<+>.<1>HNMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ 8,45 (d, J = 2,1Hz, 1), 8,22 (s, 1H), 7,81 (dd, J = 9,0, 2,4 Hz, 1H), 7,42 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,06 (dt, J = 8,4, 2,2 Hz, 2H), 6,97 (d, J = 1,5Hz, 1H), 6,92-6,87 (m, 1H), 4,96-4,91(m, 1H), 4,37-4,21 (m, 2H), 4,18 (dd, J = 10,2, 6,9 Hz, 1H), 3,92-3,51 (m, 10H), 2,54 (dt, J = 14,4, 7,4 Hz, 1H), 1,86 (dt, J = 12,6, 8,0 Hz, 1H).
Primer 52:6-[4-[(4-[[(2S,4R)-4-hidroksi-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il] metoksi]cikloheksil)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[0548]
Korak 1: Sinteza 1-terc-butil 2-metil (2S,4R)-4-[(terc-butildimetilsilil)oksi]pirolidin-1,2-dikarboksilata
[0549] Mešanom rastvoru 1-terc-butil 2-metil (2S,4R)-4-hidroksipirolidin-1,2-dikarboksilat (2,5 g, 10,19 mmol, 1,00 ekv.) u DCM (50 mL) su dodati imidazol (1,5 g) i TBSCl (3 g). Dobijeni rastvor je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je razblažen sa 300 mL DCM. Dobijena smeša je isprana sa 50 mL 1M hlorovodonika i 50 mL slanog rastvora. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Time je dobijeno 3,5 g (sirovo) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 360,22 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza terc-butil (2S,4R)-4-[(terc-butildimetilsilil)oksi]-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata
[0550] Mešanom rastvoru 1-terc-butil 2-metil (2S,4R)-4-[(terc-butildimetilsilil)oksi]pirolidin-1,2-dikarboksilat (3,5 g, 9,73 mmol, 1,00 ekv.) u THF (30 mL) je ukapavanjem na 0 °C dodato LiBH4(20 mL). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 10 mL metanola. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni rastvor je razblažen sa 250 mL EtOAc. Dobijena smeša je isprana sa 2 x 50 mL vode i 1 x 50 mL slanog rastvora. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela sa EtOAc/petrolej etrom (1:3). Time je dobijeno 3 g (93%) naslovnog jedinjenja kao ulja. LCMS (ESI, m/z): 332,23 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza terc-butil (2S,4R)-4-[(terc-butildimetilsilil)oksi]-2-[3-(metoksikarbonil)fenoksi-etil]pirolidin-1-karboksilata
[0551] Rastvor terc-butil (2S,4R)-4-[(terc-butildimetilsilil)oksi]-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat (2 g, 6,03 mmol, 1,00 ekv.), metil 3-bromobenzoat (2,8 g, 13,02 mmol, 2,16 ekv.), Rokfos (300 mg), Pd(allyl)Cl2(240 mg) i Cs2CO3(5 g, 15,35 mmol, 2,54 ekv.) u toluenu (30 mL) je mešan tokom noći na 90 °C pod inertnom atmosferom azota. Čvrste materije su isfiltrirane. Dobijeni rastvor je razblažen sa 250 mL EtOAc. Dobijena smeša je isprana sa 2 x 50 mL vode i 50 mL slanog rastvora. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela sa EtOAc/petrolej etrom (1:9). Time je dobijeno 1,7 g (sirovo) naslovnog jedinjenja kao ulja. LCMS (ESI, m/z): 466,26 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza metil 3-[[(2S,4R)-4-hidroksipirolidin-2-il]metoksi]benzoat hidrohlorida
[0552] Rastvor terc-butil (2S,4R)-4-[(terc-butildimetilsilil)oksi]-2-[3-(metoksikarbonil)fenoksimetil]-pirolidin-1-karboksilat (1,6 g, 3,44 mmol, 1,00 ekv.) u hlorovodoniku/dioksanu (15 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Čvrste materije su prikupljene filtracijom. Time je dobijeno 660 mg (67%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 252,12 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza metil 3-[[(2S,4R)-4-hidroksi-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)-etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoata
[0553] Rastvor metil 3-[[(2S,4R)-4-hidroksipirolidin-2-il]metoksi]benzoat hidrohlorid (660 mg, 2,29 mmol, 1,00 ekv.), Int-A6 (750 mg, 2,28 mmol, 0,99 ekv.) i TEA (3 mL) u etanolu (20 mL) je mešan sat vremena na 60 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela sa EtOAc/petrolej etrom (1:1). Time je dobijeno 550 mg (44%) naslovnog jedinjenja kao ulje. LCMS (ESI, m/z): 544,21 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoeve kiseline
[0554] Mešanom rastvoru metil 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoat (550 mg, 1,04 mmol, 1,00 ekv.) u THF (15 mL) i vodi (5 mL) je dodat LiOH (150 mg, 6,26 mmol, 6,01 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvora je prilagođena na 1 sa hlorovodonikom (1 M). Dobijeni rastvor je ekstraktovan sa 250 mL EtOAc i ispran sa 50 mL slanog rastvora. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Time je dobijeno 550 mg (sirovo) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 530,19 [M+H]<+>.
Korak 7: Sinteza 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoeve kiseline
[0555] Rastvor 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidrop-iridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]benzoeva kiselina (550 mg, 1,07 mmol, 1,00 ekv.) u hlorovodoniku/dioksanu (10 mL) je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Time je dobijeno 400 mg (sirovo) naslovnog jedinjenja kao ulja. LCMS (ESI, m/z): 400,11 [M+H]<+>.
Korak 8: Sinteza 6-[4-[(4-[[(2S,4R)-4-hidroksi-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]cikloheksil)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila
[0556] Mešanom rastvoru 4-[[(2S,4R)-4-hidroksi-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]cikloheksan-1-karboksilna kiselina (400 mg, 0,99 mmol, 1,00 ekv.) u DMF (10 mL) su dodati Int-A4 (188 mg, 1,00 mmol, 1,01 ekv.), DIPEA (1 mL) i HATU (500 mg, 1,31 mmol, 1,33 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon toga ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (88,8 mg,16%) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 570,15 [M+H]<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,46 (s, 1H), 8,49 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,87 (dd, J = 9,1, 2,4 Hz, 1H), 7,33 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,03 - 6,84 (m, 4H), 5,02 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 4,98 - 4,87 (m, 1H), 4,36 - 4,24 (m, 1H), 4,16 (dd, J = 10,4, 3,8 Hz, 1H), 4,02 (dd, J = 10,4, 5,9 Hz, 1H), 3,89 - 3,51 (m, 8H), 3,41 - 3,38 (m, 1H), 3,10 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 2,16 - 2,02 (m, 1H), 2,02 - 1,88 (m, 1H). Primer 53: 5-(5-fluoro-6-(pirolidin-3-iloksi)izoindolin-2-il)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[0557]
Korak 1: Sinteza terc-butil 3-([6-fluoro-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il]oksi)pirolidin-1-karboksilata
[0558] Rastvor 5-(5-fluoro-6-hidroksi-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (400 mg, 0,90 mmol, 1,00 ekv.), kalijum karbonat (248 mg, 1,79 mmol, 2,00 ekv.) i terc-butil 3-bromopirolidin-1-karboksilat (447,6 mg, 1,79 mmol, 1,99 ekv.) u DMF (10 mL, 2,00 ekv.) je mešan preko noći na 80 °C. Reakcija je ugašena dodavanjem 20 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstraktovan sa 3 x 10 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela sa EtOAc/petrolej etrom (1/5). Time je dobijeno 382 mg (69%) naslovnog jedinjenja kao ulje žute boje. LCMS (ESI, m/z): 615,25 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[5-fluoro-6-(pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on hidrohlorida
[0559] Rastvor terc-butil 3-([6-fluoro-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il]oksi)pirolidin-1-karboksilat (382 mg, 0,62 mmol, 1,00 ekv.) u HCl u dioksanu (4 M) (10 mL) je mešan tokom noći na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN čime je dobijeno naslovno jedinjenje (32 mg, 19%) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 385,15 [M+H]<+>,<1>H NMR (Metanold4, 300 MHz) δ: 8,04 (s, 1H), 7,15 (dd, J = 9,2, 6,3 Hz,2H), 5,05-4,99 (m, 5H),3,22 - 3,07 (m, 3H), 2,99-2,97 (m, 1H), 2,23 - 2,09 (m, 2H).
Primer 54: 5-(5-(1-acetilpirolidin-3-iloksi)-6-fluoroizoindolin-2-il)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[0560]
[0561] Rastvor 5-[5-fluoro-6-(pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on (135 mg, 0,35 mmol, 1,00 ekv.), Ac2O (43,04 mg, 0,42 mmol, 1,20 ekv.) i TEA (106,66 mg, 1,05 mmol, 3,00 ekv.) u DCM (10 mL) je mešan 8 i po sati na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN čime je dobijeno naslovno jedinjenje (63,2 mg, 42%) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 427,20 [M+H]<+>,<1>HNMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ: 8,05 (s, 1H), 7,24 - 7,13 (m, 2H), 5,10 (d, J = 14,4 Hz, 1H), 4,91 (d, J = 23,4 Hz, 4H), 3,92 - 3,65 (m, 3H), 3,68 - 3,45 (m, 1H), 2,37 - 2,23 (m, 2H), 2,10 (d, J = 12,4 Hz, 3H).
Primer 55: 5-[5-fluoro-6-[(1-metilpirolidin-3-il)oksi]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0562]
[0563] Rastvor 5-[5-fluoro-6-(pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on hidrohlorid (260 mg, 0,62 mmol, 1,00 ekv.), paraformaldehid (33,3 mg, 1,11 mmol, 1,80 ekv.) i kalijum hidroksid (69,2 mg, 1,23 mmol, 2,00 ekv.) u metanolu (10 mL) je mešan 3 sata na sobnoj temperaturi. Dobijenom rastvoru je dodat NaBH4(46,9 mg, 1,24 mmol, 2,00 ekv.). Dobijeni rastvor je mešan dodatnih 30 minuta na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Sirov proizvod je prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (20,2 mg, 8%) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 399,10 [M+H]<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,54 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,27 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 4,90 (s, 5H), 2,77 (dd, J = 10,5, 5,9 Hz, 1H), 2,65 (ddd, J = 18,8, 9,4, 3,2 Hz, 2H), 2,40 - 2,25 (m, 2H), 2,26 (s, 3H), 1,86 - 1,72 (m, 1H).
Primer 56 Izomer A: 6-(4-[[(3S,5S)-5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]piperidin-3-il]karbonil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i
Primer 56 Izomer B: 6-(4-[[(3R,5R)-5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]piperidin-3-il]karbonil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
Korak 1: Sinteza metil 5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]piridin-3-karboksilata
[0564] Rastvor 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (1 g, 2,54 mmol, 1,00 ekv.), [Pd(allyl)Cl]2(93 mg, 0,10 ekv.), Rokfos (119,2 mg, 0,10 ekv.), Cs2CO3(2,48 g, 7,61 mmol, 3,00 ekv.) i metil 5-bromopiridin-3-karboksilat (656 mg, 3,04 mmol, 1,20 ekv.) u toluenu (20 mL) je mešan 15 sati na 80 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom i ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (1:1) čime je dobijeno 350 mg (26%) naslovnog jedinjenja kao ulje braon boje. LCMS (ESI, m/z): 529,21 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza metil 5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]piperidin-3-karboksilata
[0565] Rastvor metil 5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]piridin-3-karboksilat (1 g, 1,89 mmol, 1,00 ekv.), PtO2(1 g), acetatna kiselina (4 mL) u metanolu (25 mL) je mešan 8 sati na sobnoj temperaturi pod atmosferom vodonika. Čvrste materije su isfiltrirane. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom čime je dobijen 1 g sirove materije naslovnog jedinjenja kao ulje bele boje. LCMS (ESI, m/z): 535,26 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 1-terc-butil 3-metil 5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]piperidin-1,3-dikarboksilata
[0566] Rastvor metil 5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4il]pirolidin-2-il]metoksi]piperidin-3-karboksilat (614 mg, 1,15 mmol, 1,00 ekv.), (Boc)2O (250,6 mg, 1,15 mmol, 1,00 ekv.) i 4-dimetilaminopiridin (28,06 mg, 0,23 mmol, 0,20 ekv.) u THF (20 mL) je mešan sat vremena na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (30:70) čime je dobijeno 370 mg (51%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance bele boje. LCMS (ESI, m/z): 635,31 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 1-[(terc-butoksi)karbonil]-5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]piperidin-3-karboksilne kiseline
[0567] Rastvor 1-terc-butil 3-metil 5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]piperidin-1,3-dikarboksilat (370 mg, 0,58 mmol, 1,00 ekv.), LiOH (70 mg, 2,92 mmol, 5,00 ekv.), voda (2 mL) u metanolu (10 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom čime je dobijeno 344 mg sirove supstance naslovnog jedinjenja kao čvrsta supstanca žute boje. LCMS (ESI, m/z): 621,30 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza terc-butil 3-[[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]karbonil]-5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]piperidin-1-karboksilata
[0568] Rastvor 1-[(terc-butoksi)karbonil]-5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]piperidin-3-karboksilna kiselina (286 mg, 0,46 mmol, 1,00 ekv.), HATU (262,2 mg, 0,69 mmol, 1,50 ekv.), DIPEA (178 mg, 1,38 mmol, 3,00 ekv.), Int-A4 (86,7 mg, 0,46 mmol, 1,00 ekv.) u DMF (5 mL) je mešan 3 sata na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ugašen sa H2O. Rastvor je ekstraktovan sa EtOAc (3 x 50 mL) i organski slojevi su spojeni. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (40:60) čime je dobijeno 450 mg (sirovo) naslovnog jedinjenja kao ulja braon boje. LCMS (ESI, m/z): 791,39 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 6-(4-[[(3S,5S)-5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]piperidin-3-il]karbonil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila i 6-(4-[[(3R,5R)-5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]piperidin-3-il]karbonil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila
[0569] Rastvor terc-butil 3-[[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]karbonil]-5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]piperidin-1-karboksilat (450 mg, 0,57 mmol, 1,00 ekv.) u hlorovodonik-dioksanu (15 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC i hiralnom preparativnom HPLC min (CHIRALPAKIE-3, 0,46∗10cm; 3um, MtBE (0,1% DEA):EtOH=50:50, 1,0mL/min) čime su dobijena naslovna jedinjenja kao čvrste supstance bele boje. Dodeljivanje izomera A i izomera B iz Primera 56 je proizvoljno dodeljeno sa pretpostavljenim strukturama kao što je nacrtano i dva izomera su izolovana tokom hiralne preparativne HPLC.
Primer 56 Izomer A: 7,8 mg, 2%, LCMS (ESI, m/z): 561,10 [M+H]+,<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,45 (dd, J = 2,4, 0,8 Hz, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,79 (dd, J = 9,1, 2,4 Hz, 1H), 6,91 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,58 (s, 1H), 3,90 - 3,80 (m, 2H), 3,79 - 3,49 (m, 8H), 3,47 (dd, J = 10,0, 7,1 Hz, 1H), 3,43 - 3,34 (m, 2H), 3,09 (dd, J = 12,3, 4,1 Hz, 1H), 2,93 - 2,88 (m, 2H), 2,65 - 2,62 (m, 1H), 2,30 - 2,13 (m, 3H), 2,01 (q, J = 11,3, 6,0 Hz, 1H), 1,87 - 1,73 (m, 2H), 1,73 - 1,68 (m, 1H). tR = 3,570.
Primer 56 Izomer B: 2%, LCMS (ESI, m/z): 561,10 [M+H]+, (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,45 (dd, J = 2,4, 0,7 Hz, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,79 (dd, J = 9,0, 2,3 Hz, 1H), 6,90 (dd, J = 9,1, 0,9 Hz, 1H), 4,60 (s, 1H), 3,78 (d, J = 5,7 Hz, 3H), 3,79 - 3,71 (m, 2H), 3,69 (d, J = 4,7 Hz, 5H), 3,46 (dd, J = 10,1, 7,4 Hz, 1H), 3,43 - 3,34 (m, 2H), 3,18 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 3,04 -2,74 (m, 2H), 2,63 (dd, J = 12,5, 10,1 Hz, 1H), 2,40 - 2,15 (m, 2H), 2,01 (t, J = 9,5 Hz, 2H), 1,74 (tt, J = 12,0, 7,0 Hz, 1H), 1,45 (q, J = 11,2 Hz, 1H).
Primer 57 Izomer A: 6-[4-[(1S,3S)-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]cikloheksankarbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i
Primer 57 Izomer B: 6-[4-[(1R,3R)-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]cikloheksankarbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i
Primer 57 Izomer C: 6-[4-[(1S,3R)-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]cikloheksankarbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i
Primer 57 Izomer D: 6-[4-[(1R,3S)-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin2-il]metoksi]cikloheksankarbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
Korak 1: Sinteza terc-butil (2S)-2-[3-(metoksikarbonil)fenoksimetil]pirolidin-1-karboksilata
[0570] Rastvor terc-butil (2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilat (1 g, 4,97 mmol, 1,00 ekv.), metil 3-hidroksibenzoat (1,14 g, 7,49 mmol, 1,50 ekv.), PPh3(1,97 g, 7,51 mmol, 1,50 ekv.) i DEAD (1,3 g, 7,46 mmol, 1,50 ekv.) u THF (20 mL) je mešan 16 sati na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (5:95) čime je dobijeno 960 mg (58%) naslovnog jedinjenja kao ulje bele boje. LCMS (ESI, m/z): 336,18 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza terc-butil (2S)-2-([[3-(metoksikarbonil)cikloheksil]oksi]metil)pirolidin-1-karboksilata
[0571] Rastvor terc-butil (2S)-2-[3-(metoksikarbonil)fenoksimetil]pirolidin-1-karboksilat (1 g, 2,98 mmol, 1,00 ekv.), Rh/Al2O3(2 g), acetatna kiselina (3 mL) u metanolu (20 mL) je mešan 16 sati na sobnoj temperaturi pod atmosferom vodonika. Čvrste materije su isfiltrirane. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom čime je dobijeno 1,02 g sirove materije naslovnog jedinjenja kao ulja žute boje. LCMS (ESI, m/z): 342,23 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza metil 3-[(2S)-pirolidin-2-ilmetoksi]cikloheksan-1-karboksilata
[0572] Rastvor terc-butil (2S)-2-([[3-(metoksikarbonil)cikloheksil]oksi]metil)pirolidin-1-karboksilat (1,02 g, 2,99 mmol, 1,00 ekv.) u hlorovodoniku/dioksanu (15 mL) je mešan sat vremena na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom čime je dobijeno 723 mg sirove supstance naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance bele boje. LCMS (ESI, m/z): 242,18 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza metil 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]cikloheksan-1-karboksilata
[0573] Rastvor Int-A6 (1 g, 3,04 mmol, 1,00 ekv.), metil 3-[(2S)-pirolidin-2-ilmetoksi]cikloheksan-1-karboksilat (723 mg, 3,00 mmol, 1,00 ekv.), TEA (900 mg, 8,89 mmol, 3,00 ekv.) u etanolu (15 mL) je mešan sat vremena na 80 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela sa EtOAc/petrolej etrom (1:4) čime je dobijeno 1,2 g (74%) naslovnog jedinjenja kao bezbojno ulje. LCMS (ESI, m/z): 534,26[M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]cikloheksan-1-karboksilne kiseline
[0574] Rastvor metil 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]cikloheksan-1-karboksilat (1,3 g, 2,44 mmol, 1,00 ekv.), LiOH (180 mg, 7,52 mmol, 3,09 ekv.), voda (5 mL) u metanolu (25 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom čime je dobijeno 1,2 g sirove materije naslovnog jedinjenja kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 520,24[M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 6-[4-[(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]cikloheksil)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila
[0575] Rastvor 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]cikloheksan-1-karboksilna kiselina (400 mg, 0,77 mmol, 1,10 ekv.), HATU (346 mg, 0,91 mmol, 1,30 ekv.), DIPEA (180 mg, 1,39 mmol, 2,00 ekv.), Int-A4 (132 mg, 0,70 mmol, 1,00 ekv.) u DMF (3 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ugašen sa 40 mL vode. Rastvor je ekstraktovan sa EtOAc (3 x 50 mL) i organski slojevi su spojeni. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (1:1) čime je dobijeno 500 mg (94%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance bele boje. LCMS (ESI, m/z): 690,34 [M+H]<+>.
Korak 7: Sinteza 6-[4-[(1S,3S)-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il] metoksi] cikloheksankarbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila , 6-[4-[(1R,3R)-3-[[(2S)-]-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]cikloheksankarbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila, 6-[4-[(1S,3R)-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]cikloheksankarbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila i 6-[4-[1R,3S)-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]cikloheksankarbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila.
[0576] Rastvor 6-[4-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropindazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]cikloheksankarbonil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril (500 mg, 0,72 mmol, 1 ekv.) u HCl/dioksanu (15 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC i hiralnom preparativnom HPLC (popravljeno IC, 0,46∗10cm; 5um, (Hex:DCM=1:1)(0,1%DEA):EtOH=70:30, 1,0mL/min) čime su dobijena (nakon proizvoljnog dodeljivanja stereohemije) naslovna jedinjenja kao čvrste supstance bele boje.
Primer 57 Izomer A: 28,4 mg, 7,12%, LCMS (ESI, m/z): 560,15 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8,44 (dd, J = 2,4, 0,7 Hz, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,78 (dd, J = 9,1, 2,4 Hz, 1H), 6,90 (dd, J = 9,1, 0,8 Hz, 1H), 4,59 (q, J = 7,6, 3,6 Hz, 1H), 3,81 - 3,68 (m, 10H), 3,47 - 3,35 (m, 2H), 2,72 (t, J = 11,7 Hz, 1H), 2,23 (s, 1H), 2,13 - 1,96 (m, 2H), 1,92 - 1,60 (m, 5H), 1,56 - 0,85 (m, 5H). tR = 3,718 min.
Primer 57 Izomer B: 31,2 mg, 7,69%, LCMS (ESI, m/z): 560,15 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8,45 (dd, J = 2,4, 0,8 Hz, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,78 (dd, J = 9,1, 2,4 Hz, 1H), 6,89 (dd, J = 9,1, 0,8 Hz, 1H), 4,58 (q, J = 7,4, 3,5 Hz, 1H), 3,84 - 3,66 (m, 10H), 3,47 (dd, J = 10,0, 7,2 Hz, 1H), 3,36 (s, 1H), 2,75 (t, J = 11,6 Hz, 1H), 2,27 - 2,18 (m, 1H), 2,09 - 1,92 (m, 3H), 1,88 - 1,66 (m, 4H), 1,48 - 1,24 (m, 4H), 1,08 (t, J = 11,5 Hz, 1H). tR = 4,396 min.
Primer 57 Izomer C: 6,2 mg, 1,53%, LCMS (ESI, m/z): 560,15 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8,46 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,35 (s, 1H), 7,80 (dd, J = 9,0, 2,4 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 4,75 (s, 1H), 3,91 - 3,78 (m, 7H), 3,77 -3,58 (m, 3H), 3,57 - 3,43 (m, 3H), 2,79 (t, J = 11,2 Hz, 1H), 2,28 (d, J = 10,7 Hz, 1H), 2,06 - 1,59 (m, 7H), 1,58 - 1,21 (m, 4H). tR = 3,555 min.
Primer 57 Izomer D: 4,7 mg, 1,16%, LCMS (ESI, m/z): 560,15 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8,46 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,34 (s, 1H), 7,80 (dd, J = 9,0, 2,4 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,92 (s, 1H), 3,93 - 3,65 (m, 9H), 3,64 -3,55 (m, 2H), 3,54 - 3,43 (m, 2H), 2,86 (t, J = 11,7 Hz, 1H), 2,27 (dd, J = 11,9, 6,9 Hz, 1H), 2,09 - 1,91 (m, 2H), 1,84 -1,62 (m, 7H), 1,61 - 1,43 (m, 2H). tR = 4,035 min.
Primer 58: 5-[5-fluoro-6-(piperidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
Korak 1: Sinteza terc-butil 3-(metansulfoniloksi)piperidin-1-karboksilata
[0577] Rastvor terc-butil 3-hidroksipiperidin-1-karboksilat (950 mg, 4,72 mmol, 1,00 ekv.), TEA (955 mg, 9,44 mmol, 2,00 ekv.), metansulfonil metansulfonat (1,64 g, 9,41 mmol, 2,00 ekv.) u DCM (10 mL) je mešan tokom noći na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je razblažen sa 50 mL DCM. Dobijena smeša je isprana sa 3 x 30 mL natrijum bikarbonata/H2O. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Time je dobijeno 826 mg (63%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 280,10 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza terc-butil 3-([6-fluoro-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il]oksi)piperidin-1-karboksilata
[0578] Rastvor 5-(5-fluoro-6-hidroksi-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (445 mg, 1,00 mmol, 1,00 ekv.), Cs2CO3(652 mg, 2,00 mmol, 2,00 ekv.), terc-buil 3-(metansulfoniloksi)piperidin-1-karboksilat (840 mg, 3,01 mmol, 3,00 ekv.) u DMF (10 mL) je mešan tokom 2 dana na 80 °C. Reakcija je ugašena dodavanjem 20 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstraktovan sa 3 x 10 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela sa EtOAc/petrolej etrom (1/4). Sakupljene frakcije su spojene i koncentrovane pod vakuumom. Time je dobijeno 208 mg (33%) naslovnog jedinjenja kao sirovo ulje žute boje. LCMS (ESI, m/z): 629,27 [M+H]<+>.
Korak 3: 5-[5-fluoro-6-(piperidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on [0579] Rastvor terc-butil 3-([6-fluoro-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il|oksi)piperidin-1-karboksilat (208 mg, 0,33 mmol, 1,00 ekv.) u HCl/dioksanu (4 M) (10 mL) je mešan tokom noći na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Sirov proizvod je prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (23,1 mg, 18%) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 399,20 [M+H]<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,05 (s, 1H), 7,2-7,15 (m, 2H), 5,01 (s, 4H), 4,42 (s, 1H), 3,21 (d, J = 12,7 Hz, 1H), 2,99-2,89 (m, 3H), 2,05∼1,90 (m, 2H), 1,89-1,80 (m, 1H), 1,64-1,58 (m, 1H).
Primer 59: 4-Hloro-5-(5-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0580]
[0581] Rastvor 4,5-dihloro-2,3-dihidropiridazin-3-on (211 mg, 1,28 mmol, 1,00 ekv.), 5-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol hidrohlorid (200 mg, 1,15 mmol, 1,00 ekv.) i TEA (251 mg, 2,48 mmol, 2,00 ekv.) je mešan 6 sati na 80 °C. Čvrste materije su sakupljene filtracijom, isprane sa 2 x 5 mL MeOH i 2 x 5 mL H2O čime je dobijeno 139,9 mg (41%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance bele boje. LCMS: [M+H]<+>266,05,<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 612,70 (s, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,41 (dd, J = 8,4, 5,1 Hz, 1H), 7,24 (dd, J = 9,0, 2,4 Hz, 1H), 7,21 - 7,11 (m, 1H), 5,19 (s, 2H), 5,13 (s, 2H).
Primer 60: 4-Hloro-5-(4-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[0582]
[0583] Rastvor 4,5-dihloro-2,3-dihidropiridazin-3-on (212 mg, 1,29 mmol, 1,00 ekv.), 4-fluoro-2,3-dihidro-1H-izoindol hidrohlorid (200 mg, 1,15 mmol, 1,00 ekv.) i TEA (249 mg, 2,46 mmol, 2,00 ekv.) u EtOH (4 mL) je mešan 6 sati na 80 °C. Čvrste materije su sakupljene filtracijom i isprane sa 2 x 10 mL MeOH i 2 x 10 mL H2O čime je dobijeno 121,3 mg (36%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance bele boje. LCMS: [M+H]<+>266,05,<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ12,72 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,40 (td, J = 7,9, 5,2 Hz, 1H), 7,24 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,16 (dd, J = 9,5, 8,2 Hz, 1H), 5,23 (s, 4H).
Primer 61: 6-(4-[[2-fluoro-5-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-3-il]karbonil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[0584]
Korak 1: Sinteza metil 2-fluoro-5-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-3-karboksilata
[0585] Pod azotom, rastvor 5-[1-(hidroksimetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (1 g, 2,26 mmol, 1,00 ekv.), metil 5-bromo-2-fluoropiridin-3-karboksilat (2 g, 8,55 mmol, 4,00 ekv.), [Pd(allyl)Cl]2(125 mg, 0,34 mmol, 0,15 ekv.), Rokfos (160 mg, 0,34 mmol, 0,15 ekv.), Cs2CO3(1,85 g, 5,68 mmol, 2,51 ekv.) u toluenu (20 mL) je mešan tokom noći na 80 °C u uljanoj kadi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN čime je dobijeno 300 mg (22%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance žute boje. LCMS (ESI, m/z): 595,19 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 2-fluoro-5-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-3-karboksilne kiseline
[0586] Rastvor metil 2-fluoro-5-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-3-karboksilat (300 mg, 0,50 mmol, 1,00 ekv.), LiOH (40 mg, 1,67 mmol, 1,70 ekv.) u vodi (1 mL) i metanolu (40 mL) je mešan tokom noći na 25 °C. pH vrednost rastvora je prilagođena na 5-6 hlorovodonikom (6M). Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN čime je dobijeno 290 mg (99%) naslovnog jedinjenja kao ulja crvene boje. LCMS (ESI, m/z): 581,18 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 2-fluoro-5-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-3-karboksilne kiseline
[0587] Rastvor 2-fluoro-5-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-3-karboksilna kiselina (290 mg, 0,50 mmol, 1,00 ekv.) i hlorovodonik/dioksan (10 mL) u dioksanu (2 mL) je mešan tokom noći na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom čime je dobijeno 200 mg (89%) naslovnog jedinjenja kao sirovog ulja crvene boje. LCMS (ESI, m/z): 451,10 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 6-(4-[[2-fluoro-5-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1, 6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-3-il]karbonil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila
[0588] Rastvor 2-fluoro-5-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-3-karboksilna kiselina (130 mg, 0,29 mmol, 1,00 ekv.), HATU (112 mg, 0,29 mmol, 1,02 ekv.), DIPEA (112 mg, 0,87 mmol, 3,00 ekv.) i Int-A4 (55 mg, 0,29 mmol, 1,00 ekv.) u DMF (2 mL) je mešan sat vremena na 25 °C. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN čime je dobijeno naslovno jedinjenje (20,4 mg 11%) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 621,19 [M+H]<+>, 1H NMR (Metanol-d4, 400 MHz) δ: 8,45-8,44 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,93-7,91 (dd, J = 3,1, 1,7 Hz, 1H), 7,79-7,77 (dd, J = 9,1, 2,4 Hz, 1H), 7,57 - 7,51 (m, 2H), 7,42 - 7,37 (m, 3H), 6,92-6,89 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,21 (s, 1H), 5,34-5,30 (d, J = 14,8 Hz, 1H), 4,69-4,67(d, J = 14,6 Hz, 1H), 4,59-4,56 (dd, J = 10,2, 3,6 Hz, 1H), 4,40-4,32(dd, J = 10,1, 6,3 Hz, 1H), 3,87 (dr, 4H), 3,76 - 3,73 (m, 2H), 3,47-3,44 (d, J = 5,6 Hz, 2H).
Primer 62: 2-(4-[[2-fluoro-5-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-3-il]karbonil]piperazin-1-il)pirimidin-5-karbonitril
[0589]
[0590] Rastvor 2-fluoro-5-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-3-karboksilna kiselina (130 mg, 0,29 mmol, 1,00 ekv.), DIPEA (200 mg, 1,55 mmol, 6,00 ekv.), HATU (180 mg, 0,47 mmol, 2,00 ekv.) i Int-A1 (100 mg, 0,44 mmol, 1,00 ekv.) u DMF (2 mL) je mešan sat vremena na 25°C. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN i dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (25,1 mg 14%) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 622,19 [M+H]<+>,<1>H NMR (Metanol-d4, 400 MHz) δ: 8,65 (m, 2H), 8,37 (s, 1H), 7,90-7,89(dd, J = 3,1, 1,7 Hz, 1H), 7,55 - 7,49 (m, 2H), 7,40 - 7,34 (m, 3H), 6,19 (s, 1H), 5,32-5,28 (d, J = 14,4 Hz, 1H), 4,69 - 4,53 (m, 2H), 4,37 - 4,30 (m, 1H), 4,06-4,03(t, J = 5,5 Hz, 2H), 3,95-3,92 (t, J = 5,3 Hz, 2H), 3,83-3,81 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 3,48-3,41(t, J = 5,2 Hz, 2H).
Primer 63: 3-[(5-cijanopiridin-2-il)amino]-N-[5-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-3-il]propanamid
[0591]
Korak 1: Sinteza 5-(1-[[(5-nitropiridin-3-il)oksi]metil]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0592] Pod azotom, rastvor 5-[1-(hidroksimetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (500 mg, 1,13 mmol, 1,00 ekv.), (Pd(allyl)Cl)2(41 mg), Rokfos (53 mg), Cs2CO3(1,1 g, 3,38 mmol, 2,98 ekv.) i 3-bromo-5-nitropiridin (465 mg, 2,29 mmol, 2,02 ekv.) u toluenu (10 mL) je mešan 16 sati na 80 °C. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (2:3) čime je dobijeno 500 mg (78%) naslovnog jedinjenja kao čvrsta supstanca braon boje. LCMS (ESI, m/z): 564,18[M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-(1-[[(5-aminopiridin-3-il)oksi]metil]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0593] Rastvor 5-(1-[[(5-nitropiridin-3-il)oksi]metil]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (500 mg, 0,89 mmol, 1,00 ekv.) i Fe (149 mg, 3,00 ekv.) u acetatnoj kiselini (4 mL) je mešan 4 sata na 60 °C. Čvrsta materija je isfiltrirana i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (3:1) čime je dobijeno 415 mg (88%) naslovnog jedinjenja kao svetlo žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 534,21[M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 3-[(5-cijanopiridin-2-il)amino]-N-[5-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-3-il]propanamida
[0594] Rastvor 5-(1-[[(5-aminopiridin-3-il)oksi]metil]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (300 mg, 0,56 mmol, 1,00 ekv.), EDC.HCl (325 mg, 1,70 mmol, 3,00 ekv.), 4-dimetilaminopiridin (122 mg, 3,00 ekv.) i 3-[(5-cijanopiridin-2-il)amino]propionska kiselina (215 mg, 1,12 mmol, 2,00 ekv.) u DMF (2,5 mL) je mešan 5 sati na 60 °C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 10 mL H2O, ekstraktovan sa 3 x 15 mL EtOAc, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (2:3) čime je dobijeno 100 mg (25%) naslovnog jedinjenja kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 707,27[M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 3-[(5-cijanopiridin-2-il)amino]-N-[5-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-3-il]propanamida
[0595] Rastvor 3-[(5-cijanopiridin-2-il)amino]-N-[5-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-3-il]propanamid (90 mg, 0,13 mmol, 1,00 ekv.) i TFA (0,5 mL) u DCM (2 mL) je mešan 3 sata na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom nakon čega je ostatak prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (40 mg, 54%) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 577,15[M+H]<+>.<1>HNMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ 8,40 (s, 1H), 8,32 (dd, J = 2,1, 0,8 Hz, 1H), 8,21 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,,88 (d, J =2,7Hz, 1H), 7,84 (dd, J =4,5, 2,4Hz, 1H),7,59-7,50 (m, 2H), 7,41-7,37 (m, 3H), 6,59 (d, J = 8,7, , 1H), 6,22 (s, 1H), 5,30 (d, J = 14,4 Hz, 1H), 4,67 (dd, J = 14,4, 3,0Hz, 1H),4,58 (dd, J = 10,2, 3,3Hz, 1H) 4,30 (dd, J = 10,2, 6,6 Hz, 1H), 3,75 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 2,70 (t, J = 6,3 Hz, 2H).
Primer 64 Izomer A: (R)-2-(4-(4-((2-(6-Okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il)izoindolin-1-il)metoksi)pikolinoil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karbonitril i
Primer 64 Izomer B: (S)-2-(4-(4-((2-(6-Okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il)izoindolin-1-il)metoksi)pikolinoil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karbonitril
Korak 1: Sinteza metil 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-2-karboksilata
[0596] Pod azotom, rastvor 5-[1-(hidroksimetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (500 mg, 1,13 mmol, 1,00 ekv.), [Pd(allyl)Cl]2(42 mg, 0,10 ekv.), Rokfos (53 mg, 0,10 ekv.), Cs2CO3(1,1 g, 3,38 mmol, 3,00 ekv.) i metil 4-bromopiridin-2-karboksilat (488 mg, 2,26 mmol, 2,00 ekv.) u toluenu (40 mL) je mešan 12 sati na 80 °C. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa EtOAc/petrolej etrom (3:1) čime je dobijeno 233 mg (36%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 577,20 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-2-karboksilne kiseline
[0597] Rastvor metil 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-2-karboksilat (233 mg, 0,40 mmol, 1,00 ekv.) i LiOH (48 mg, 2,00 mmol, 5,00 ekv.) u vodi (0,5 mL) i metanolu (1,5 mL) je mešan sat vremena na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvora je prilagođena na 2 hlorovodonikom (12 M) i čvrste materije su sakupljene filtracijom čime je dobijen 271 mg (sirovo) naslovnog jedinjenja kao čvrsta supstanca braon boje. LCMS (ESI, m/z):563,19[M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-2-karboksilna kiselina hidrohlorida
[0598] Rastvor 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-2-karboksilna kiselina (271 mg, 0,48 mmol, 1,00 ekv.) u hlorovodoniku/dioksanu (5 mL, 4M) je mešan sat vremena na sobnoj temperaturi, i dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom čime je dobijeno 198 mg naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z):433,10[M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza (R)-2-(4-(4-((2-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il)izoindolin-1-il)metoksi)pikolinoil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karbonitrila i (S)-2-(4-(4-((2-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il)izoindolin-1-il)metoksi)pikolinoil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karbonitrila
[0599] Rastvor 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]metoksi)piridin-2-karboksilna kiselina hidrohlorid (198 mg, 0,46 mmol, 1,00 ekv.), HATU (174,116 mg, 0,46 mmol, 1,00 ekv.), DIPEA (177,653 mg, 1,37 mmol, 3,00 ekv.) i Int-A1 (104,05 mg, 0,55 mmol, 1,20 ekv.) u DMF (2 mL) je mešan sat vremena na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN, i ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC i hiralnom preparativnom HPLC (CHIRALPAK IG-3, 0,46∗ 10cm; 3um, MtBE(0,1%DEA):EtOH=70:30, 1,0mL/min) čime su dobijena naslovna jedinjenja. Apsolutna stereohemija je dodeljena na osnovu proteinske rentgentske kristalne strukture dobijene iz Primera 18 Izomera B što je potvrdilo (S)-apsolutnu stereohemiju i uočeno je da je potentniji enantiomer.
Primer 64 Izomer A: 12,8mg, 34,0%, LCMS (ESI, m/z): 604,45 [M+H]<+>,<1>HNMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ 8,48 (s, 2H), 2,28-8,21(m, 2H), 7,39-7,30 (m, 1H), 7,28-7,19 (m, 3H), 6,99 (d, J =2,4Hz, 1H), 6,90-6,86 (b, 1H), 6,08 (s, 1H), 2,18-5,13 (m, 2H), 5,56-4,41 (m, 2H), 4,30-4,21 (m, 1H), 3,95-6,34 (m, 6H), 3,41-3,31 (m, 2H), tR =3,145 min.
Primer 64 Izomer B: 14,5mg, 38%, LCMS (ESI, m/z): 604,45 [M+H]<+>, tR =3,844 min
Primer 65: 2-[4-[(5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]piridin-3-il)karbonil]piperazin-1-il]pirimidin-5-karbonitril
Korak 1: Sinteza metil 5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]piridin-3-karboksilata
[0600] Pod azotom, rastvor 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (1,97 g, 5,01 mmol, 1,00 ekv.), Cs2CO3 (3,25 g, 9,97 mmol, 2,00 ekv.), [Pd(ally)Cl]2(183 mg, 0,10 ekv.), Rokfos (704 mg, 0,30 ekv.) i metil 5-bromopiridin-3-karboksilat (2,16 g, 10,00 mmol, 2,00 ekv.) u toluenu (40 mL) je mešan 24 sata na 80 °C. Čvrste materije su isfiltrirane, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN čime je dobijeno 1,28 g (48%) naslovnog jedinjenja kao svetlo žutog ulja. LCMS (ESI, m/z):529,20 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza metil 5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]piridin-3-karboksilata
[0601] Rastvor metil 5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]piridin-3-karboksilat (1,28 g, 2,42 mmol, 1,00 ekv.) u hlorovodoniku/dioksanu (40 mL, 4 M) je mešan 5 sati na sobnoj temperaturi i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom čime je dobijen 1 g naslovnog jedinjenja kao sirovo ulje žute boje. LCMS (ESI, m/z):399,12 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]piridin-3-karboksilne kiseline
[0602] Rastvor metil 5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]piridin-3-karboksilat (1 g, 2,26 mmol, 1,00 ekv., 90%) i LiOH (480 mg, 20,04 mmol, 8,00 ekv.) u metanolu (30 mL) i vodi (3 mL) je mešan 2 sata na 25 °C. pH vrednost rastvora je prilagođena na 4 hlorovodonikom (2 M). Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN čime je dobijeno 600 mg (69%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance sive boje. LCMS (ESI, m/z):384,10 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 2-[4-[(5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]piridin-3-il)karbonil]piperazin-1-il]pirimidin-5-karbonitrila
[0603] Rastvor 5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]piridin-3-karboksilna kiselina (100 mg, 0,26 mmol, 1,00 ekv.), HATU (99 mg, 0,26 mmol, 1,00 ekv.), DIPEA (101 mg, 0,78 mmol, 3,00 ekv.) i Int-A1 (49,2 mg, 0,26 mmol, 1,00 ekv.) u DMF (3 mL) je mešan sat vremena na sobnoj temperaturi. Ostatak je rastvoren u 10 mL H2O, ekstraktovan sa 3 x 20 mL EtOAc, organski slojevi su spojeni i isprani sa 20 mL slanog rastvora, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN. Nakon koncentracije, ostatak je dodatno prečišćen preparativnom HPLC čime je dobijeno naslovno jedinjenje (25,7 mg 18%) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 556,05 [M+H]<+>,<1>HNMR (DMSO-d6, 400 MHz,) δ 12,44 (s, 1H), 8,80 (s, 2H), 8,28 (d, J = 2,8Hz, 1H), 8,24 (d, J = 1,6Hz, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,42 (t, J = 2,4Hz, 1H), 4,82 (br, 1H), 4,23-4,14 (m, 2H), 3,95-3,80 (m, 4H), 3,78-3,61 (m, 3H), 3,54-3,39 (m, 2H), 3,30-3,24 (m, 1H), 2,25-2,19 (m, 1H), 1,99-1,90 (m, 1H), 1,89-1,69 (m, 2H).
Primer 66: 6-[4-[(4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]pirimidin-2-il)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[0604]
Korak 1: Sinteza metil 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]pirimidin-2-karboksilata
[0605] Rastvor 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (786 mg, 2,00 mmol, 1,00 ekv.), metil 4-bromopirimidin-2-karboksilat (561 mg, 2,59 mmol, 1,30 ekv.) i kalijum karbonat (1,1 g, 7,96 mmol, 4,00 ekv.) u DMF (10 mL) je mešan 16 sati na 80 °C. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN čime je dobijeno 600 mg (57%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 530,21 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]pirimidin-2-karboksilne kiseline
[0606] Rastvor metil 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]pirimidin-2-karboksilat (529 mg, 1,00 mmol, 1,00 ekv.), LiOH (96 mg, 4,01 mmol, 4,00 ekv.), voda (5 mL) u metanolu (10 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvora je prilagođena na 6 hlorovodonikom. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanešen na kolonu silika gela eluirajući sa etil DCM/metanolom (5:1) čime je dobijeno 300 mg (58%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 516,19 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 6-[4-[(4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]pirimidin-2-il)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila
[0607] Rastvor 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]pirimidin-2-karboksilna kiselina (260 mg, 0,50 mmol, 1,00 ekv.), Int-A4 (95 mg, 0,50 mmol, 1,00 ekv.), EDC.HCl (288 mg, 3,00 ekv.), 4-dimetilaminopiridin (244 mg, 2,00 mmol, 4,00 ekv.) u DMF (3 mL) je mešan 2 sata na 60 °C. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN čime je dobijeno 100 mg (29%) naslovnog jedinjenja kao čvrste supstance bele boje. LCMS (ESI, m/z): 686,29 [M+H]+.
Korak 4: Sinteza 6-[4-[(4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]pirimidin-2-il)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila
[0608] Rastvor 6-[4-[(4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]pirolidin-2-il]metoksi]pirimidin-2-il)karbonil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril (100 mg, 0,15 mmol, 1,00 ekv.) u hlorovodoniku/dioksanu (15 mL) je mešan 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon koncentracije, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluirajući sa H2O/CH3CN čime je dobijeno naslovno jedinjenje (14,2 mg, 18%) kao čvrsta supstanca bele boje. LCMS (ESI, m/z): 556,25 [M+H]+,<1>HNMR (CD3OD-d4, 300 MHz) δ 8,57 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 8,42 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,77 (dd, J = 9,1, 2,4 Hz, 1H), 6,92 ((d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,89 (d, J = 15,8 Hz, 1H), 4,76 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 4,70 - 4,52 (m, 2H), 3,95 - 3,72 (m, 7H), 3,54 - 3,32 (m, 3H), 2,39 - 2,27 (m, 1H), 2,07 - 1,93 (m, 2H), 1,92 - 1,77 (m, 1H).
Primer 67: 6-[4-[(2-fluoro-5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] fenil)karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[609]
Korak 1: Sinteza metil 2-fluoro-5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]benzoat
[0610] Rastvor 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (500 mg, 1.27 mmol, 1.00 equiv), [Pd(allyl)Cl]2(443 mg, 1.21 mmol, 1.50 equiv), Rockphos (60 mg, 0.13 mmol, 0.10 equiv), Cs2CO3(830 mg, 2.55 mmol, 2.00 equiv), metil 5-bromo-2-fluorobenzoat (443 mg, 1.90 mmol, 1.50 equiv) u toluenu (14 mL) su mešani 2h na 80 °C u uljnanom kupatilu u atmosferi azota. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu punjenu silika gelom i eluiran sa EtOAc/petrol etar (3:7) da bi se dobilo 400 mg (58%) jedinjenja iz naslova kao čvrste žute supstance. LCMS (ESI, m/z): 546.20 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza metil 2-fluoro-5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]benzoata
[0611] Rastvor metil 2-fluoro-5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]benzoata (400 mg, 0.73 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (20 mL) je mešan 14h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je uparen pod vakuumom kako bi se dobilo 320 mg sirovog jedinjenja iz naslova u obliku žutog sirovog ulja. LCMS (ESI, m/z): 416.12 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 2-fluoro-5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] benzoeve kiseline
[0612] Rastvor metil 2-fluoro-5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]benzoata (320 mg, 0.77 mmol, 1.00 equiv), LiOH.H2O (162 mg, 3.86 mmol, 5.00 equiv) u metanolu (20 mL) i vodi (5 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je uparena pod vakuumom. pH vrednost rastvora je podešena na 6 hlorovodonikom (2M). Čvrsta supstanca je skupljena filtriranjem i sušenjem u peći pod sniženim pritiskom Ovo je rezultiralo sa 240 mg (78%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 402.10 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 6-[4-[(2-fluoro-5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]fenil)karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0613] Rastvor 2-fluoro-5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]benzoeve kiseline (240 mg, 0.60 mmol, 1.00 equiv), Int-A4 (161 mg, 0.86 mmol, 1.20 equiv), DIPEA (232 mg, 1.80 mmol, 3.00 equiv), HATU (250 mg, 0.66 mmol, 1.10 equiv) u DMF (4 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Sirovi proizvod je prečišćen C18 reverzno faznom kolonom eluiranjem sa vodom ACN/voda. Ostatak je dalje prečišćen Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (64.2 mg, 19%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 572.20 [M+H]<+1>,<1>H NMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ: 8.42 (dd, J = 2.4, 0.7 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.76 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 7.13 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 7.01 (dt, J = 9.1, 3.8 Hz, 1H), 6.95 - 6.84 (m, 2H), 4.19 (dd, J = 10.2, 3.7 Hz, 1H), 4.02 (dd, J = 10.2, 6.8 Hz, 1H), 3.91 -3.90 - 3.85 (m, 4H), 3.76 - 3.69 (m, 3H), 3.50 - 3.35 (m, 3H), 2.39 - 2.29 (m, 1H), 2.10 - 2.00 (m, 1H), 1.97 - 1.75 (m, 1H), 1.90 - 1.70 (m, 2H).
Primer 68: 6-[4-[(2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]pirimidin-4-yl)karbonil]piperazin-1-yl]piridine-3-karbonitril
[0614]
Korak 1: Sinteza metil 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]pirimidin-4-karboksilat
[0615] Rastvor 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (500 mg, 1.27 mmol, 1.00 equiv), (Pd(allyl)C)2(47 mg, 0.10 equiv), Rockphos (60 mg, 0.10 equiv), Cs2CO3(829 mg, 2.54 mmol, 2.00 equiv), metil 2-hloropirimidin-4-karboksilata (547 mg, 3.17 mmol, 2.50 equiv) u toluenu (10 mL) u atmosferi azota je mešan preko noći na temperaturi od 85 °C. Rastvor je uparen pod vakuumom i ostatak je nanet na kolonu sa silika gelom odakle je eluiran sa EtOAc/petrol etar (3/7) da bi se dobilo 425 mg (63%) jedinjenja iz naslova kao žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 530.20 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza metil 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]pirimidin-4-karboksilata
[0616] Rastvor metil 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]pirimidin-4-karboksilata (425 mg, 0.80 mmol, 1.00 equiv) u dioksan/HCl (20 mL, 4 M) je mešan preko noći na 25 °C. Rastvor je koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 290 mg (91%) jedinjena iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 400.12 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]pirimidin-4-karboksilne kiseline
[0617] Rastvor metil 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]pirimidin-4-karboksilata (360 mg, 0.90 mmol, 1.00 equiv), LiOH.H2O (285 mg, 6.79 mmol, 10.00 equiv) u MeOH (10 mL) i vodi (2 mL) je mešan 2h na 25 °C. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je razblažen sa 3 mL vode i pH vrednost rastvora je podešena na 3 sa hlorovodonikom (2M). Ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo 70 mg (20%) jedinjenja iz naslova u obliku prljavo bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 386.10 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 6-[4-[(2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]pirimidin-4-yl)karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0618] Rastvor 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]pirimidin-4-karboksilne kiseline (60 mg, 0.16 mmol, 1.00 equiv), HOBt (45 mg, 0.33 mmol, 1.50 equiv), EDCI (32 mg, 0.17 mmol, 1.50 equiv), DIPEA (60 mg, 0.46 mmol, 3.00 equiv), Int-A4 (70 mg, 0.37 mmol, 2.00 equiv) u DMF (3 mL) je mešan preko noći na 25 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (16.5 mg, 19%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 556.20 [M+H]<+>,<1>H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 12.43 (s, 1H), 8.71 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 8.50 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.89 (dd, J = 9.1, 2.3 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.62 - 4.49 (m, 1H), 4.45 - 4.33 (m, 1H), 3.88 - 3.57 (m, 7H), 3.47 - 3.39 (m, 2H), 3.27 - 3.18 (m, 1H), 2.26 - 2.11 (m, 1H), 1.98 - 1.88 (m, 2H), 1.75 - 1.63 (m, 1H).
Primer 69: 6-[4-[(2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] piridin-4-yl)karbonil]piperazin-1-yl] piridin-3-karbonitril
[0619]
Korak 1: Sinteza metil 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]piridin-4-karboksilat
[0620] Rastvor 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (400 mg, 1.02 mmol, 1.00 equiv), metil 2-bromopiridin-4-karboksilata (328 mg, 1.52 mmol, 1.50 equiv), Pd[(allyl)Cl]2(37.3 mg, 0.10 mmol, 0.10 equiv), Rockphos (95.5 mg, 0.20 equiv) i Cs2CO3(664 mg, 2.04 mmol, 2.00 equiv) u toluenu (15 mL) je mešan 15h na 80 °C u uljanom kupatilu. Čvrsta supstanca je profiltrirana i dobijeni rastvor je uparen pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (31/69) kako bi se dobilo 237 mg (44%) jedinjenja iz naslova u obliku čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z):529.20 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza metil 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]piridin-4-karboksilat hidrohlorida
[0621] Rastvor metil 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metoksi]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]piridin-4-karboksilata (237 mg, 0.45 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (10 mL, 4M) je mešan 2h na sobnoj tempreraturi i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 195 mg jedinjenja iz naslova u obliku žute sirove čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 399.12 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]piridin-4-karboksilne kiseline
[0622] Rastvor metil 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]piridin-4-karboksilata (175 mg, 0.44 mmol, 1.00 equiv) i LiOH (42.2 mg, 1.76 mmol, 4.00 equiv) u vodi (2.5 mL) i THF (10 mL) je mešano 2h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je razblažen sa 10 mL H2O, i pH vrednost rastvora je podešena na 4 sa hlorovodonikom (36 %). Čvrsta supstanca je prikupljena filtracijom kako bi se dobilo 138 mg (82%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z):385.10[M+H]<+>. Korak 4: Sinteza 6-[4-[(2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]piridin-4-yl)karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0623] Rastvor 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]piridin-4-karboksilna kiselina (118 mg, 0.31 mmol, 1.00 equiv), HATU (116.7 mg, 0.31 mmol, 1.00 equiv), DIPEA (118.9 mg, 0.92 mmol, 3.00 equiv) i Int-A4 (58 mg, 0.31 mmol, 1.00 equiv) u DMF (4 mL) su mešani 40 min na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je rastvoren u 20 mL H2O i ekstrahovan sa 3x20 mL EtOAc. Organski slojevi su spojeni i osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata i onda koncentrovani pod vakuumom i ostatak je očišćen pomoću Prep-HPLC kako bi se dobilo jedinjenje iza naslova (18.0 mg, 11%) u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 555.20 [M+H]<+>,<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz,) δ 12.44 (s, 1H), 8.52 (d, J = 2.0Hz, 1H), 8.20-8.16 (m, 2H), 7.92 (dd, J= 9.2, 2.4Hz, 1H), 7.02 (dd, J= 5.2, 1.2Hz, 1H), 6.96 (d, J = 8.8Hz, 1H), 6.74 (s ,1H), 4.79-4.73 (m, 1H), 4.51-4.47 (m, 1H), 4.41-4.36 (m, 1H), 3.80-3.57 (m, 7H), 3.33-3.21 (m, 3H), 2.21-2.19 (m, 1H), 1.97-1.69 (m, 3H).
Primer 70: 6-[4-[(3-[[(2S,4S)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]fenil)karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0624]
Korak 1: Sinteza [(2S,4S)-4-metilpirolidin-2-yl]metanol hidrohlorida
[0625] Rastvor tert-butil (2S,4S)-2-(hidroksimetil)-4-metilpirolidin-1-karboksilat (1 g, 4.64 mmol, 1.00 equiv) u dioksan/HCl (8 mL) je mešan 2 h na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom kako bi se dobilo 520 mg (sirovo) jedinjenja iz naslova u obliku sirovog bezbojnog ulja. LCMS (ESI, m/z): 116.10 [M-Cl]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[(2S,4S)-2-(hidroksimetil)-4-metilpirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0626] Rastvor Int-A6 (1 g, 3.04 mmol, 1.00 equiv), [(2S,4S)-4-metilpirolidin-2-yl]metanol hidrohlorida (520 mg, 3.43 mmol, 1.00 equiv) u etanolu (10 mL) i TEA (5 mL) je mešan 60 min na 60 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1/2) kako bi se dobilo 900 mg (73%) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 408.19 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza metil 3-[[(2S,4S)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]benzoata
[0627] U struji azota, rastvor 5-[(2S,4S)-2-(hidroksimetil)-4-metilpirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (900 mg, 2.21 mmol, 1.00 equiv), metil 3-bromobenzoata (946 mg, 4.40 mmol, 2.00 equiv), Pd(dba)CHCl3(228 mg, 0.10 equiv), Rockphos (104 mg, 0.10 equiv), Cs2CO3(2.16 g, 6.63 mmol, 3.00 equiv) u toluenu (50 mL) su mešani tokom noći na 80 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je nanet na kolonu sa silika gelom i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (2/3) kako bi se dobilo 700 mg (59%) jedinjenja iz nasova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 542.22 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza metil 3-[[(2S,4S)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]benzoat
[0628] Rastvor metil 3-[[(2S,4S)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]benzoata (700 mg, 1.29 mmol, 1.00 equiv) u dioksan/HCl (10 mL) je mešan 6h na 25 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije eluiranjem sa H2O/CH3CN (1/1) kako bi se dobilo 300 mg (56%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 412.14 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 3-[[(2S,4S)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]benzoeve kiseline
[0629] Rastvor metil 3-[[(2S,4S)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]benzoata (300 mg, 0.73 mmol, 1.00 equiv), LiOH (96 mg, 4.01 mmol, 5.00 equiv) u THF (10 mL) i vodi (2 mL) je mešan tokom noći na 25 °C. pH vrednost rastvora je prilagođena na 3 sa vodonikhloridom (1 M). Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 2x50 mL DCM, organski slojevi su spojeni i koncentrovani pod vakuumom kako bi se dobilo 100 mg (35%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 398.12 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 6-[4-[(3-[[(2S,4S)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]fenil)karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonilnitril
[0630] Rastvor 3-[[(2S,4S)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]benzoeve kiseline (100 mg, 0.25 mmol, 1.00 equiv), HATU (96 mg, 0.25 mmol, 1.00 equiv), DIPEA (65 mg, 0.50 mmol, 2.00 equiv), Int-A4 (47 mg, 0.25 mmol, 1.00 equiv) u DMF (2 mL) je mešan tokom noći na 25 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromataografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (56.1 mg 39%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 568.22 [M+H]<+>,<1>H NMR (Metanol-d4, 400 MHz) δ: 8.42 (dd, J = 2.3, 0.8 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.77-7.74(dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 7.40-7.36 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.04 - 7.00 (m, 2H), 6.94 - 6.87 (m, 2H), 4.24-4.21 (dd, J = 10.3, 3.5 Hz, 1H), 4.07-4.03 (dd, J = 10.3, 6.8 Hz, 1H), 3.83(dr, 4H), 3.77-3.35 (m, 2H), 3.41-3.35 (m,2H), 2.43-2.40 (m, 3H), 2.21-2.19 (m, 1H), 1.55-1.47(m, 1H), 1.14-1.22 (d, J = 6.3 Hz, 3H).
Primer 71: 6-(4-[[3-([4-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]morfolin-3-yl] metoksi)fenil] karbonil] piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitril
[0631]
Korak 1: Sinteza 5-[3-(hidroksimetil)morfolin-4-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0632] Rastvor 5-hloro-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (1000 mg, 3.04 mmol, 1 equiv), piperidin-2-ylmetanol hidrohlorida (922.4 mg, 6.08 mmol, 2 equiv), TEA (923.3 mg, 9.12 mmol, 3 equiv) u EtOH (10 mL) je mešan 4h na 60 °C. Dobijena smeša je uparena pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (80/20) kako bi se dobilo 442 mg (35.49%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 410.16 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza metil 3-([4-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]morfolin-3-yl]metoksi)benzoata
[0633] Rastvor 5-[3-(hidroksimetill)morfolin-4-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (420 mg, 1.03 mmol, 1 equiv), [Pd(allyl)Cl]2(37 mg, 0.10 mmol, 0.099 equiv), Rockphos (48.1 mg,0.10 mmol, 0.1 equiv), Cs2CO3(668.4 mg, 2.05 mmol, 2 equiv), metil 3-bromobenzoata (286.7 mg, 1.33 mmol, 1.3 equiv) u toluenu (5 mL) je mešan 6h na 80 °C u inertnoj atmosferi azota. Nakon koncentrovanja, ostatak je nanet na silika gel kolonu eluiranjem sa EtOAc/petrol etrom (43/57) kako bi se dobilo 427 mg (76.58%) jedinjenja iz naslova u obliku crvenog ulja. LCMS (ESI, m/z): 544.20 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza metil 3-([4-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]morfolin-3-yl]metoksi)benzoate hidrohlorida
[0634] Rastvor metil 3-([4-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]morfolin-3-yl]metoksi)benzoata (427 mg) u HCl/dioksanu (5 mL) je mešan 24h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je uparena pod vakuumom. Ovo je rezultiralo sa 353 mg jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 414.12 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 3-([4-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]morfolin-3-yl]metoksi)benzoeve kiseline [0635] Rastvor metil 3-([4-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]morfolin-3-yl]metoksi)benzoata (353 mg, 0.85 mmol, 1 equiv), LiOH.H2O (165.0 mg, 3.93 mmol, 4.604 equiv) u MeOH (4 mL) i H2O (1 mL) je mešan 5h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je razblažen sa 5 mL H2O, i pH vrednost rastvora je podešena na 6 sa HCl (40 %). Čvrsta supstanca je skupljena filtriracijom. Ovo je rezultiralo sa 254 mg (74.48%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 400.10 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 6-(4-[[3-([4-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]morfolin-3-yl]metoksi)fenil] karbonil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitrila
[0636] Rastvor 3-([4-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]morfolin-3-yl]metoksi)benzoeve kiseline (244 mg, 0.61 mmol, 1 equiv), DIPEA (236.9 mg, 1.83 mmol, 3 equiv), HATU (255.6 mg, 0.67 mmol, 1.1 equiv), Int-A4 (151.0 mg, 0.67 mmol, 1.1 equiv) u DMF (5 mL) je mešan 5h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanje, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (137.2mg, 39.42%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 570.20 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ : 12.72 (s, 1H), 8.53 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.91 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.04 - 6.91 (m, 2H), 6.86 (d, J = 9.6 Hz, 2H), 4.44-4.33 (t, J = 9.9 Hz, 2H), 4.11 (s, 1H), 3.93 (t, J = 13.4 Hz, 2H), 3.69 (d, J = 11.2 Hz, 7H), 3.55 (d, J = 11.2 Hz, 4H), 3.19 (d, J = 12.4 Hz, 1H).
Primer 72 Izomer A: 6-[4-[(6-[[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi]pirazin-2-yl)karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril i
Primer 72 Izomer B: 6-[4-[(6-[[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi] pirazin-2-yl)karbonil] piperazin-1-yl] piridin-3-karbonitril
[0637]
Korak 1: Sinteza metil 6-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi)pirazin-2-karboksilat
[0638] Rastvor 5-[1-(hidroksimetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (500 mg, 1.13 mmol, 1.00 equiv), [Pd(ally)Cl]2(42 mg, 0.11 mmol, 0.10 equiv), Rockphos (53 mg, 0.11 mmol, 0.10 equiv), metil 6-bromopirazin-2-karboksilat (490 mg, 2.26 mmol, 2.00 equiv), Cs2CO3(740 mg, 2.27 mmol, 2.00 equiv) u toluenu (7 mL) je mešan 5h u atmosferi azota na 80 °C. Reakciona smeša je uparena pod vakuumom i ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (4/6) kako bi se dobilo 555 mg (85%) jedinjenja iz naslova kao žuta čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 578.20 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi)pirazin-2-karboksilna kiselina
[0639] Rastvor 6-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-isoindol-1-yl]metoksi)pirazin-2-karboksilata (555 mg, 0.96 mmol, 1.00 equiv), LiOH hidrata (202 mg, 4.81 mmol, 5.00 equiv) u THF (15 mL) i voda (3 mL) su mešani 2h na sobnoj tempreraturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. pH vrednost rastvora je podešen na 6 sa hlorovodoničnom kiselinom (1 M). Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom kako bi se dobilo 468 mg (86%) jedinjenja iz naslova u obliku prljavo bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 564.18 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 6-(4-[[6-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi)pirazin-2-yl]karbonil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitril
[0640] Rastvor 6-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi)pirazin-2-karboksilne kiseline (220 mg, 0.39 mmol, 1.00 equiv), Int-A4 (88 mg, 0.39 mmol, 1.00 equiv), DIPEA (151 mg, 1.17 mmol, 3.00 equiv), HATU (223 mg, 0.59 mmol, 1.50 equiv) u DMF (3 mL) je mešan 1.5h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo 133 mg (46%) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 734.28 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 6-[4-[(6-[[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi]pirazin-2-yl)karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila i 6-[4-[(6-[[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi]pirazin-2-yl)karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril [0641] Rastvor 6-(4-[[6-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi)pirazin-2-yl]karbonil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitril u hlorovodonik/dioksanu (7 mL) je mešan 4h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prećišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (CHIRALPAK IC-3, 0.46*5cm; 3um, (Hex:DCM=1:1) (0.1%DEA) :(MeOH:EtOH=1:1)=30:70, 1.0mL/min) dajući jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance. Apsolutna stereohemija je dodeljena na osnovu kristalene strukture X-zraka proteina dobijene iz Primera 18 Izomera B koji je potvrdio (S)-absolutnu stereohemiju i utvrđeno je da je potentniji enantiomer.
Primer 72 Izomer A: 12 mg, 34%, LCMS (ESI, m/z): 604.55 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, Methanol-d4) δ: 8.48 - 8.38 (m, 3H), 8.27 (s, 1H), 7.79 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 7.44 - 7.34 (m, 3H), 6.89 (dd, J = 9.1, 0.8 Hz, 1H), 6.14 (s, 1H), 5.23 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 4.99 (dd, J = 11.6, 4.6 Hz, 1H), 4.75 - 4.61 (m, 2H), 3.89 (m, 4H), 3.76 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 3.69 (d, J = 5.3 Hz, 2H). tR = 3.172 min.
Primer 72 Izomer B: 11.5 mg, 33%, LCMS (ESI, m/z): 604.55 [M+H]<+>, tR = 4.791 min.
Primer 73: 6-[4-[(4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] piridin-2-yl)karbonil] piperazin-1-yl] piridin-3-karbonitril
[0642]
Korak 1: Sinteza metil 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]piridin-2-karboksilat
[0643] Rastvor 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (360 mg, 0.91 mmol, 1.00 equiv), [Pd(allyl)Cl]2(35.519 mg, 0.10 equiv), Rockphos (42.94164 mg, 0.09 mmol, 0.10 equiv), metil 4-bromopiridin-2-karboksilat (393.649 mg, 1.82 mmol, 2.00 equiv) i Cs2CO3(895.45 mg, 3.00 equiv) u toluenu (15 mL) je mešan 5h na 80 °C u atmosferi azota. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:3) kako bi se dobilo 210 mg (43%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 529.20[M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]piridin-2-karboksilna kiselina
[0644] Rastvor metil 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]piridin-2-karboksilata (189 mg, 0.36 mmol, 1.00 equiv) i LiOH (25.7726 mg, 1.08 mmol, 3.00 equiv) u vodi (4 mL) i THF (16 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvora je podešena na 2 sa vodonikhloridom (12 M) i čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom kako bi se dobilo 160 mg (87%) jedinjenja iz naslova u obliku čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 515.19[M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]piridin-2-karboksilne kiseline
[0645] Rastvor 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]piridin-2-karboksilne kiseline (160 mg, 0.31 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (5 mL, 4 M) je mešan 3h na sobnoj temperaturi i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 85 mg (71%) jedinjenja iz naslova u obliku čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 385.10[M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 6-[4-[(4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]piridin-2-yl)karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0646] Rastvor 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]piridin-2-karboksilne kiseline (15 mg, 0.04 mmol, 1.00 equiv), HATU (14.82 mg, 1.00 equiv), DIPEA (15.12108 mg, 3.00 equiv) i Int-A4 (8.8125 mg, 0.05 mmol, 1.20 equiv) u DMF (2 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Nakon koncentrovanja ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (12mg, 3.0%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 555.10 [M+H]<+>.<1>HNMR (Metanol-d4, 400 MHz) δ 8.44(dd, J = 8.8, 3.2Hz, , 2H), 8.22 (s, 1H), 7.79 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H), 7.156(s, 1H), 7.07 (dd, J = 5.6, 2.4 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 8.8Hz, 1H), 4.95-4.91 (m, 1H), 4.37 (dd, J = 10.4, 3.6 Hz, 1H), 4.24 (dd, J = 10.4, 6.4 Hz, 1H), 3.92-3.84 (m, 4H), 3.76-3.74(m, 3H), 3.55 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.47-3.38 (m, 1H), 2.39 (m, 1H), 2.08 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 1.99-1.78 (m, 2H).
Primer 74: 6-[4-[(6-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]pirazin-2-yl)karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0647]
Korak 1: Sinteza 6-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]pirazin-2-karboksilat
[0648] Rastvor 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (700 mg, 1.78 mmol, 1 equiv), K2CO3(740 mg, 5.35 mmol, 3.010 equiv), metil 6-bromopirazin-2-karboksilata (464 mg, 2.14 mmol, 1.202 equiv) u DMF (15 mL) je mešan 12h na 90 °C. Reakcija je zaustavljena dodavanjem 5 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x20 ml EtOAc i organski slojevi su pomešani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (25/75) da bi se dobilo 500 mg (53.07%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 530.20 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]pirazin-2-karboksilna kiselina
[0649] Rastvor metil 6-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]pirazin-2-karboksilata (500 mg, 0.94 mmol, 1 equiv), LiOH·H2O (198 mg, 4.72 mmol, 4.998 equiv) u MeOH (20 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ektrahovan sa 2x15 ml EtOAc. pH vrednost rastvora je podešena na 5 sa HCl (35 %). Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x30 mL DCM i organski slojevi su spojeni i osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata. Organski slojevi su upareni pod vakuumom kako bi se dobilo 400 mg (sirovo) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 516.18 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 6-[4-[(6-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]pirazin-2-yl)karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0650] Rastvor 6-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]pirazin-2-karboksilne kiseline (270 mg, 0.52 mmol, 1 equiv), Int-A4 (118.7 mg, 0.63 mmol, 1.204 equiv), DIPEA (202 mg, 1.56 mmol, 2.984 equiv), HATU (298 mg, 0.78 mmol, 1.497 equiv) u DMF (2 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo 300 mg (83.53%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 686.28 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 6-[4-[(6-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]pirazin-2-yl)karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonilnitrila
[0651] Rastvor 6-[4-[(6-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]pirazin-2-yl)karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (300 mg, 0.44 mmol, 1 equiv) u HCl/dioksanu (10ml) je mešan 12h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (48.0 mg, 19.75%) u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 556.51 [M+H]<+>,<1>HNMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 12.48 (s, 1H), 8.53 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.92 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.60 (dd, J = 11.4, 5.0 Hz, 1H), 4.39 (dd, J = 11.4, 4.2 Hz, 1H), 3.88-3.79 (m, 1H), 3.87-3.81 (m, 6H), 3.41-3.30 (m, 3H), 3.24 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 2.28 - 2.16 (m, 1H), 1.95 (m, 2H), 1.79-1.68 (m, 1H).
Primer 75: 6-[4-[(3-[[(2S,4R)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]fenil)karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0652]
Korak 1: Sinteza tert-butil (2S,4R)-2-(hidroksimetil)-4-metilpirolidin-1-karboksilata
[0653] U mešani rastvor (2S,4R)-1-[(tert-butoksi)karbonil]-4-metilpirolidin-2-karboksilne kiseline (1.8 g, 7.85 mmol, 1.00 equiv) u THF (20 mL), BH3·THF (10 mL) je dodat u kapima na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zaustavljena dodavanjem 10 mL metanola. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (2:3). Ovo je rezultiralo sa 1.4 g (83%) jedinjenja iz naslova u obliku čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 216.16 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza [(2S,4R)-4-metilpirolidin-2-yl]metanola
[0654] Rastvor tert-butil (2S,4R)-2-(hidroksimetil)-4-metilpirolidin-1-karboksilata (1.4 g, 6.50 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (10 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je uparena pod vakuumom. Ovo je rezultiralo sa 1 g (sirovo) jedinjenja iz naslova u obliku ulja. LCMS (ESI, m/z): 116.11 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 5-[(2S, 4R)-2-(hidroksimetil)-4-metilpirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0655] Rastvor [(2S,4R)-4-metilpirolidin-2-yl]metanol hidrohlorida (1 g, 6.59 mmol, 1.00 equiv), Int-A6 (2.1 g, 6.39 mmol, 0.97 equiv) i TEA (3 mL) u etanolu (15 mL) je mešan 1h na 60 °C. Dobijena smeša je uparena pod vakuuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu sa EtOAc/petrol etrom (1:1). Ovo je rezultiralo dobijanjem 1.5 g (56%) jedinjenja iz naslova u obliku čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 408.19 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza metil 3-[[(2S,4R)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)-etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]benzoata
[0656] Rastvor 5-[(2S,4R)-2-(hidroksimetil)-4-metilpirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetil-silil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (850 mg, 2.09 mmol, 1.00 equiv), metil 3-bromobenzoata (900 mg, 4.19 mmol, 2.01 equiv), Pd2(dba)3·CHCl3(217 mg), Rockphos (200 mg) i Cs2CO3(2 g, 6.14 mmol, 2.94 equiv) u toluenu (10 mL) je mešan preko noći na 80 °C u inertnoj atmosferi azota. Dobijeni rastvor je razblažen sa 200 mL EtOAc. Dobijena smeša je isprana sa 50 mL vode i 50 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etra (1:1). Ovo je dalo 1 g (89%) jedinjenja iz naslova u obliku ulja. LCMS (ESI, m/z): 542.23 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 3-[[(2S,4R)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]benzoeve kiseline
[0657] U mešani rastvor metil 3-[[(2S,4R)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetil-silil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]benzoata (1 g, 1.85 mmol, 1.00 equiv) u THF (15 mL) i vodi (5 mL), dodat je LiOH (250 mg, 10.44 mmol, 5.65 equiv). Dobijeni rastvor je mešan tokom noći na sobnoj temperaturi. pH rastvora je podešena na 1 sa vodonikhloridom (1 M). Dobijeni rastvor je razblažen sa 250 mL EtOAc. Dobijena smeša je isprana sa 50 mL vodenog rastvora natrijum-hlorida. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ovo je rezultiralo dobijenjem 900 mg (92%) jedinjenja iz naslova u obliku čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 528.21 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 3-[[(2S,4R)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] benzoeve kiseline
[0658] Rastvor 3-[[(2S,4R)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]benzoeve kiseline (350 mg, 0.66 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (10 mL) je mešan 6h na sobnoj tempraturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ovo je rezultiralo dobijanjem 250 mg (sirovo) jedinjenja iz naslova kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 398.13 [M+H]<+>.
Korak 7: Sinteza 6-[4-[(3-[[(2S,4R)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]fenil]karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0659] U mešani rastvor 3-[[(2S,4R)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]benzoeve kiseline (250 mg, 0.63 mmol, 1.00 equiv) u DMF (10 mL), dodati su i DIPEA (0.5 mL), Int-A4 (154 mg, 0.82 mmol, 1.30 equiv) i HATU (310 mg, 0.82 mmol, 1.30 equiv). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (48.2 mg, 13%) u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 568.30 [M+H]<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.45 (s, 1H), 8.49 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.88 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 7.33 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.99 - 6.86 (m, 4H), 4.96 - 4.86 (m, 1H), 4.12 (dd, J = 10.2, 4.0 Hz, 1H), 3.99 (dd, J = 10.3, 6.2 Hz, 1H), 3.89 - 3.52 (m, 8H), 3.41 - 3.37 (m, 1H), 2.88 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 2.45 - 2.36 (m, 1H), 1.98 - 1.89 (m, 1H), 1.88 - 1.78 (m, 1H), 0.85 (d, J = 6.9 Hz, 3H).
Primer 76: 6-[4-(2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]acetil) piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0660]
Korak 1: Sinteza tert-butil 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]acetata
[0661] U rastvor 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (10 g, 25.41 mmol, 1.00 equiv) i Cs2CO3(41 g, 125.84 mmol, 5.00 equiv) u DMF (150 mL) je dodat tert-butil 2-hloroacetat (38 g, 252.32 mmol, 10.00 equiv) i dobijeni rastvor je mešan 20h na 60°C. Čvrsta supstanca je profiltrirana i dobijeni rastvor je razblažen sa 200 mL EtOAc, ispran sa 3x200 mL vode i 2x200 mL natrijum-hlorida. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan kod vakuumom, a ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etra (18:82) kako bi se dobilo 4.5 g (35%) jedinjenja iz naslova u obliku braon ulja. LCMS (ESI, m/z): 508.24[M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]sirćetne kiseline
[0662] Rastvor tert-butil 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]acetata (1.5 g, 2.95 mmol, 1.00 equiv) i TFA (3 mL) u DCM (15 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je uparen pod vakuumom i ostatak je dalje prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo 504 mg (53%) jedinjenja iz naslova u obliku braon ulja. LCMS (ESI, m/z): 322.09[M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 6-[4-(2-[[(2S)-]-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] acetil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0663] Rastvor 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]sirćetne kiseline (115 mg, 0.36 mmol, 1.00 equiv), HATU (136 mg, 0.36 mmol, 1.00 equiv), DIPEA (92 mg, 0.71 mmol, 2.00 equiv) i Int-A4 (80 mg, 0.43 mmol, 1.20 equiv) u DMF (1 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN i Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (11mg, 6.0%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 492.15[M+H]<+>.<1>H NMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ 8.41 (d, J = 2.4, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.27 (s, 2H), 3.77-3.64 (m, 8H), 3.62-3.50 (m, 3H), 3.40-3.36 (m, 1H), 2.28 (t, J = 6.0Hz, 1H), 1.99 (d, J = 4.8Hz, 1H), 1.80-1.68 (m, 2H).
Primer 77: 6-[4-(4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] butanoil) piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0664]
Korak 1: Sinteza metil (2E)-4-[[(2S)-]-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]but-2-enoata
[0665] Rastvor 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (600 mg, 1.52 mmol, 1.00 equiv), metil (2E)-4-bromobut-2-enoata (1.358 g, 7.59 mmol, 5.00 equiv), [Pd(allyl)Cl]2(28 mg, 0.08 mmol, 0.05 equiv), Rockphos (71 mg, 0.15 mmol, 0.10 equiv) i Cs2CO3(995 mg, 3.05 mmol, 2.00 equiv) u toluenu (16 mL) je mešan 12h na 80 °C. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (2:3) kako bi se dobilo 400 mg (53%) jedinjenja iz naslova u obliku svetlo žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 492.21 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza metil 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoata
[0666] Rastvor metil (2E)-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]but-2-enoata (400 mg, 0.81 mmol, 1.00 equiv) i Pd/C (40 mg, 0.10 equiv) u metanolu (10 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi u atmosferi vodonika. Čvrsta supstanca je profiltrirana i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 380 mg (95%) jedinjenja iz naslova kao svetlo braon čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 494.23 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza metil (S)-4-((1-(6-oxo-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl)metoksi)butanoata [0667] Rastvor metil 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoata (370 mg, 0.75 mmol, 1.00 equiv) i TFA (1 mL) u DCM (5 mL) je mešan 45 min na sobnoj temperaturi i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 357 mg jedinjenja iz naslova u obliku sirove svetlo braon čvrste supstance. LCMS(ESI, m/z):364.14 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza (S)-4-((1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl)metoksi)buterna kiselina [0668] Rastvor metil 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoat (350 mg, 0.96 mmol, 1.00 equiv) i LiOH (115.70 mg, 4.83 mmol, 5.00 equiv) u vodi (2 mL) i THF (8 mL) je mešan 40 min na sobnoj temperaturi, a onda je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom. pH vrednost rastvora je podešen na 4 sa HCl (1 M). Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x10 ml EtOAc i organski sloj je spojen i koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 350 mg sirovog jedinjenja iz naslova u obliku svetlo braon čvrste supstance. LCMS(ESI, m/z):350.13 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 6-[4-(4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] butanoil) piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0669] Rastvor 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]buterne kiseline (300 mg, 0.86 mmol, 1.00 equiv), Int-A4 (177.24 mg, 0.94 mmol, 1.10 equiv), HATU (325.698 mg, 0.86 mmol, 1.00 equiv) i DIPEA (332.31 mg, 2.57 mmol, 3.00 equiv) u DMF (2 mL) je mešan 4h na 80 °C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 20 ml vode, ekstrahovan sa 3x20 ml EtOAc i organski sloj je pomešan, ispran sa 20 ml koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida i koncentrovan pod vakuumom, i ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (135 mg, 30%) kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 520.10 [M+H]<+>,<1>HNMR (CD3OD-d4, 300 MHz) δ 8.45 (d, J = 2.4Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.80 (dd, J = 9.0, 2.4Hz, 1H), 6.91 (dd, J = 9.0, 0.6 Hz, 1H), 4.67 (dt, J = 7.9, 4.0 Hz, 1H), 3.82-3.33 (m, 14H), 2.41 (td, J = 7.3, 2.4 Hz, 2H), 2.25 (dt, J = 13.3, 6.6 Hz, 1H), 2.09-1.94 (m, 1H), 1.90-1.57 (m, 4H).
Primer 78: 6-[4-(3-[[(2S,4S)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl] metoksi]propanoil)piperazin-1-yl] piridin-3-karbonitril
[0670]
Korak 1: Sinteza etil 3-[[(2S,4S)-4-metil-]-[6-okso-5-(trifluorometil)-]-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoat
[0671] Rastvor 5-[(2S,4S)-2-(hidroksimetil)-4-metilpirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (1.1 g, 2.70 mmol, 1.00 equiv), natrijum hidrid (108 mg, 4.50 mmol, 1.00 equiv), etil prop-2-enoat (2.7 g, 26.97 mmol, 10.00 equiv) u THF (25 mL) je mešan 1h na 0 °C u ledeno/slanom kupatilu. Nakon koncentrovanja, ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (3:7) kako bi se dobilo 1 g (73%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 508.24 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza etil 3-[[(2S,4S)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2- yl] metoksi]propanoata
[0672] Rastvor etil 3-[[(2S,4S)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoata (1 g, 1.97 mmol, 1.00 equiv) i hlorovodonik/dioksana (20 mL) u dioksanu (2 mL) je mešan preko noći na 25 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa voda/CH3CN (65:35) kako bi se dobilo 530 mg (71%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 378.16 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 3-[[(2S,4S)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] propanske kiseline
[0673] Rastvor etil 3-[[(2S,4S)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoata (489 mg, 1.30 mmol, 1.00 equiv), LiOH (93 mg, 3.88 mmol, 3.00 equiv), vode (25 mL) u metanol (25 mL) je mešan tokom noći na 25 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa voda/CH3CN (77:23) kako bi se dobilo 234 mg (52%) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 350.12 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 6-[4-(3-[[(2S,4S)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2- yl] metoksi]propanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0674] Rastvor 3-[[(2S,4S)-4-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanske kiseline (234 mg, 0.67 mmol, 1.00 equiv), DIPEA (173 mg, 1.34 mmol, 2.00 equiv), HATU (254 mg, 0.67 mmol, 1.00 equiv), Int-A4 (126 mg, 0.67 mmol, 1.00 equiv) u DMF (2 mL) je mešan preko noći na 25 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa voda/CH3CN dajući jedinjenje iz naslova (188.8 mg 54%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 520.22 [M+H]<+>,<1>H NMR (Metanol-d4, 400 MHz) δ: 8.44 (dd, J = 2.3, 0.8 Hz, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.79-7.76 (dd, J = 9.0, 2.3 Hz, 1H), 6.89-6.88(dd, J = 9.1, 0.9 Hz, 1H), 4.67 - 4.60 (m, 1H), 3.83 - 3.65 (m, 11H), 3.48-3.44 (m, 1H), 3.37-3.35 (m, 1H), 3.28 (m, 1H), 2.66 - 2.62 (m, 2H), 2.32-2.29(m, 1H), 2.20 - 2.03 (m,1H), 1.33-1.30 (td, J = 12.1, 9.0 Hz, 1H), 1.10-1.09 (d, J = 6.3 Hz, 3H).
Primer 79 Izomer A: 6-[4-[(2Z)-4-[[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi]but-3-enoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril i
Primer 79 Izomer B: 6-[4-[(2Z)-4-[[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi]but-3-enoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril i
Primer 79 Izomer C: 6-[4-[(2E)-4-[[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi]but-2-enoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril i
Primer 79 Izomer D: 6-[4-[(2E)-4-[[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi]but-2-enoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
Korak 1: Sinteza 2,3-dihidro-1H-izoindol-1-ylmetanol hidrohlorida
[0675] Rastvor tert-butil 1-(hidroksimetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-karboksilat (1.05 g, 4.21 mmol, 1.00 equiv) u vodonikhlorid/dioksanu (10 mL, 4 M) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 997 mg jedinjenja iz naslova kao sirova roze čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 150.08 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[1-(hidroksimetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0676] Rastvor 2,3-dihidro-1H-izoindol-1-ylmetanol hidrohlorida (997 mg, 5.37 mmol, 1.00 equiv), TEA (1.08 g, 10.67 mmol, 2.00 equiv) i Int-A6 (1.77 g, 5.38 mmol, 1.00 equiv) u etanolu (10 mL) je mešan 2h na 60 °C i koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 1.3 g (55%) jedinjenja iz naslova kao roze čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 442.17 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza metil (2E)-4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi)but-2-enoata
[0677] U struji azota, rastvor 5-[1-(hidroksimetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (1.3 g, 2.94 mmol, 1.00 equiv), metil (2E)-4-bromobut-2-enoata (2.61 g, 14.58 mmol, 5.00 equiv), Pd2(dba)3(60 mg, 0.07 mmol, 0.05 equiv), RuPhos (55 mg, 0.12 mmol, 0.10 equiv) i Cs2CO3(1.91 g, 5.86 mmol, 2.00 equiv) u toluenu (30 mL) je mešan 12h na 80 °C. Dobijeni rastvor je uparen pod vakuumom i ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:4) kako bi se dobilo 1.02 g (64%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 540.21 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza (2E)-4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi)but-2-anske kiseline
[0678] Rastvor metil (2E)-4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi)but-2-enoata (1.02 g, 1.89 mmol, 1.00 equiv) i LiOH (397 mg, 16.58 mmol, 5.00 equiv) u THF (10 mL) i vodi (2 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je razblažen sa 3 mL vode i pH vrednost rastvora je podešena na 4 sa hlorovodonikom (1 M). Dobijeni rastvor je filtriran i čvrsta supstanca je sakupljena kako bi se dobilo 832 mg (84%) jedinjenja iz naslova kao žuta čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 525.19 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza (2E)-4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi)-2-butanske kiseline
[0679] Rastvor (2E)-4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi)-2-butanske kiseline (110 mg, 0.21 mmol, 1.00 equiv) i TFA (1 mL) u DCM (5 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 100 mg jedinjenja iz naslova u obliku sirovog braon ulja. LCMS (ESI, m/z): 396.11 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 6-[4-[(2Z)-4-[[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi]but-2-enoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila, 6-[4-[(2Z)-4-[[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi]but-2-enoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila, 6-[4-[(2E)-4-[[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi]but-2-enoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila i 6-[4-[(2E)-4-[[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi]but-2-enoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0680] Rastvor (2E)-4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi)-2-butanske kiseline (500 mg, 1.27 mmol, 1.00 equiv), Int-A4 (239 mg, 1.27 mmol, 1.00 equiv), HATU (386 mg, 1.01 mmol, 0.8 equiv) i DIPEA (492 mg, 3.81mmol, 3.0 equiv) u DMF (5mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je prečišćen pomoću reverzno fazne hromatografije i eluiran sa voda/CH3CN. Nakon koncentrovanjan, ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (Chiralpak Cellulose-SB, 0.46*15cm;3um, MtBE(0.1%DEA):EtOH=80:20, 1.0mL/min) dajući jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste materije. Apsolutna stereohemija je dodeljena na osnovu kristalne strukture X-zraka proteina dobijene u Primeru 18b koji potvrđuje (S)-apsolutnu stereohemiju i primećeno je da je to potentniji enantiomer (pogledati Tablu A-1).
Primer 79 Izomer A: 4.3mg, 0.60%, LCMS (ESI, m/z): 566.10 [M+H]<+>,<1>H NMR (DMSO-d6, 300 MHz): δ12.59 (s, 1H), 8.53 (dd, J = 2.4, 0.7 Hz, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.93 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 7.51-7.29 (m, 4H), 6.94 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.17 (d, J = 6.0Hz, 1H), 6.07 (d, J = 3.6Hz, 1H), 5.13 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 4.56-4.46 (m, 2H), 4.27 (dd, J=10.8,3.0Hz,1H),3.96(dd,J=11.0,6.7Hz,1H),3.80-3.35(m,8H),2.84(dd,J=6.8,1.7Hz,2H).tR=4.876min.
Primer 79 Izomer B: 3.4mg, 0.37%, LCMS (ESI, m/z):566.10[M+H]<+>,<1>H NMR (DMSO-d6,300 MHz): δ12.58 (s, 1H), 8.53 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.92 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 7.56-7.27 (m, 4H), 6.94 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.16 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 6.06 (s, 1H), 5.13 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 4.61-4.42 (m, 2H), 4.26 (dd, J = 11.0, 3.1 Hz, 1H), 3.97 (dd, J = 11.0, 6.6 Hz, 1H), 3.74-3.33 (m, 8H), 2.83 (dd, J = 6.8, 1.7 Hz, 2H). tR = 9.413 min.
Primer 79 Izomer C: 10.3 mg, 1.44%, LCMS (ESI, m/z): 566.10[M+H]<+>,<1>H NMR(DMSO-d6, 300MHz) δ12.58 (s, 1H), 8.53 (dd, J = 2.3, 0.7 Hz, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.94 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 7.50-7.25 (m, 4H), 6.98 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.69(dt, J = 15.1, 3.9 Hz, 1H), 6.39 (d, J = 15.1 Hz, 1H), 6.06 (s, 1H), 5.12 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 4.58 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 4.19 (m, 2H), 3.92 (dd, J = 10.0, 3.4 Hz, 1H), 3.78-3.45 (m, 9H). tR = 6.804 min.
Primer 79 Izomer D: 6.3 mg, 0.88%,<1>H NMR(CD3OD, 400MHz) δ8.50-8.42 (m, 2H), 7.79 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 7.50-7.29 (m, 4H), 6.92 (dd, J = 9.1, 0.9 Hz, 1H), 6.83 (dt, J = 15.2, 3.7 Hz, 1H), 6.45 (dt, J = 15.1, 2.2 Hz, 1H), 6.07 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 5.27 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 4.65 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 4.27 (m, 1H), 4.18 (m, 1H), 4.04 (dd, J = 9.9, 3.4 Hz, 1H), 3.82-3.56 (m, 9H). tR = 8.206 min.
Primer 80 Izomer A: 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]-N-[(1r,4r)-4-[(piridin-2-yl)amino]cikloheksil]acetamid i
Primer 80 Izomer B: 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]-N-[(1s,4s)-4-[(piridin-2-yl)amino]cikloheksil]acetamid
Korak 1: Sinteza tert-butil N-[4-[(piridin-2-yl)amino]cikloheksil]karbamata
[0681] U struji azota, rastvor tert-butil N-(4-aminocikloheksil)karbamata (1 g, 4.67 mmol, 2.50 equiv), Pd2(dba)3CHCl3(196 mg, 0.10 equiv), Xantphos, Cs2CO3(2.19 g, 2.0 equiv), 2-hloropiridina (212 mg, 1.87 mmol, 1.00 equiv) u dioksanu (10 mL) je mešan 12h na 80 °C u uljanom kupatilu. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:4) kako bi se dobilo 330 mg (61%) jedinjenja iz naslova u obliku čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 292.19 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 1-N-(piridin-2-yl)cikloheksana-1,4-diamin hidrohlorida
[0682] Rastvor tert-butil N-[4-[(piridin-2-yl)amino]cikloheksil]karbamata (330 mg, 1.13 mmol, 1.00 equiv), hlorovodonik/dioksana (15 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je uparena pod vakuumom. Ovo je rezultiralo sa 220 mg (sirovo) jedinjenja iz naslova kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 192.14 [M-Cl]<+>.
Korak 3: Sinteza 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]-N-[(1r,4r)-4-[(piridin-2-yl)amino]cikloheksil]acetamida i 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]-N-[(1s,4s)-4-[(piridin-2-yl)amino]cikloheksil]acetamida
[0683] Rastvor 1-N-(piridin-2-yl)cikloheksan-1,4-diamin hidrohlorida (124 mg, 0.54 mmol, 1.00 equiv), HATU (178 mg, 0.47 mmol, 1.00 equiv), DIPEA (243 mg, 1.88 mmol, 4.00 equiv), DMF (2 mL), 2-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi sirćetne kiseline (150 mg, 0.47 mmol, 1.00 equiv) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Sirov proizvod je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hrometografije i eluiran sa voda/CH3CN dajući (nakon proizvoljno dodeljene stereohemije) jedinjenjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance.
Primer 80 Izomer A: 2.5 mg, 1%, LCMS (ESI, m/z): 495.23 [M+H]<+>,<1>HNMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 12.41 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.92 (dd, J = 5.1, 1.9 Hz, 1H), 7.31 (ddd, J = 8.7, 7.0, 2.0 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.50 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.41 (ddd, J = 7.1, 5.0, 1.0 Hz, 1H), 6.16 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 4.60 (dr, 1H), 3.86 (s, 2H), 3.79 (dr, 1H), 3.69 (dr, 1H), 3.60 - 3.50 (m, 2H), 3.28-3.10( m, 2H), 2.10 (dr, 1H), 1.89 (dr, 1H), 1.63-1.55 (m, 10H).
Primer 80 Izomer B: 4.3 mg, 2%, LCMS (ESI, m/z): 495.23 [M+H]<+>,<1>HNMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 12.42 (s, 1H), 8.12 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.91 (dd, J = 5.5, 2.0 Hz, 1H), 7.30 (ddd, J = 8.7, 7.1, 2.0 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.45 -6.35 (m, 2H), 6.31 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.61 (dr, 1H), 3.83 (d, J = 2.7 Hz, 2H), 3.58 - 3.47 (m, 5H), 3.26-3.20 (m, 1H), 2.10 (drs, 1H), 1.97-1.91 (m, 3H), 1.89-1.73 (m, 4H), 1.30-1.22 (m, 4H).
Primer 81 Izomer A: 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]-N-[(1r,4r)-4-[(piridin-2-yl)amino]cikloheksil]propanamid i
Primer 81 Izomer B: 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]-N-[(1s,4s)-4-[(piridin-2-yl)amino]cikloheksil]propanamid
Korak 1: Sinteza 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]-N-[(1r,4r)-4-[(piridin-2-yl)amino]cikloheksil]propanamida i 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]-N-[(1s,4s)-4-[(piridin-2-yl)amino]cikloheksil]propanamida
[0684] Rastvor 3-[[(2S)-1-6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanske kiseline (75 mg, 0.22 mmol, 1 equiv), DIPEA (115.6 mg, 0.89 mmol, 4.00 equiv), HATU (85.1 mg, 0.22 mmol, 1 equiv), N1-(piridin-2-yl)cikloheksan-1,4-diamin dihidrohlorid (118.2 mg, 0.45 mmol, 2.00 equiv) u DMF (2 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući (nakon proizvoljno dodeljene stereohemije) jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance.
Primer 81 Izomer A: 3.0 mg 2.42%, LCMS (ESI, m/z): 632.22 [M+H]<+>,<1>H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 12.35 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.00 (s, 1H),7.95 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.35 - 7.29 (m, 1H), 6.51 - 6.39 (m, 2H), 6.25 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.50 (dr, 1H), 3.74 - 3.52 (m, 7H), 3.20 (dr, 1H), 2.30 - 2.26 (m, 2H), 2.07 -1.91(m, 1H), 1.87 (d, J = 18.5 Hz, 1H), 1.71- 1.56 (m, 10H).
Primer 81 Izomer B: 4.9 mg 3.95%, LCMS (ESI, m/z): 632.22 [M+H]<+>,<1>H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 12.37 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.00 (s, 1H),7.95 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.34 - 7.28 (m, 1H), 6.42 - 6.38 (m, 2H), 6.27 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 4.50 (dr, 1H), 3.61 - 3.50 (m, 7H), 3.23(dr, 1H), 2.27-2.25 (m, 2H), 2.07 - 1.95 (m, 1H), 1.87 - 1.62 (m, 7H), 1.23 - 1.16 (m, 4H).
Primer 82 Izomer A: 6-[4-(1S,4r)-[(4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidro-piridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]cikloheksil)karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril i
Primer 82 Izomer B: 6-[4-(1R,4s)-[(4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]cikloheksil)-karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
Korak 1: Sinteza tert-butil (2S)-2-[4-(etoksikarbonil)fenoksimetil]pirolidin-1-karboksilat
[0685] U rastvor tert-butil (2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata (1 g, 4.97 mmol, 1.00 equiv) u THF (20 mL) su dodati etil 4-hidroksibenzoat (1.2 g, 7.22 mmol, 1.45 equiv) i PPh3(2 g, 7.63 mmol, 1.53 equiv) uz mešanje na 0 °C. Nakon ovoga je dodat DEAD (1.2 mL) u kapima. Dobijeni rastvor je mešan 5h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zaustavljena dodatkom 20 mL vode. Dobijeni rastvor je razblažen sa 250 mL EtOAc i ispran sa 50 mL NH4Cl i 50 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i uparen pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu sa EtOAc/petrol etrom (1:4). Ovo je dalo 1.5 g (86%) jedinjenja iz naslova u obliku čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 350.20 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza tert-butil (2S)-2-([[4-(etoksikarbonil)cikloheksil]okso]metil)pirolidin-1-karboksilata
[0686] Rastvor tert-butil (2S)-2-[4-(etoksikarbonil)fenoksimetil(pirolidin-1-karboksilata (1.4 g, 4.01 mmol, 1.00 equiv) i Rh/Al2O3(2 g) u etanolu (80 mL) i AcOH (4 mL) je mešan 5h na sobnoj temperaturi u struji vodonika. Čvrsta supstanca je profiltrirana. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni rastvor je razblažen sa 250 mL EtOAc. Dobijena smeša je isprana sa 2x50 mL natrijum-bikarbonata, 50 mL NH4Cl i 50 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i uparen pod vakuumom. Ovo je dalo 1.25 g (sirovo) jedinjenja iz naslova u obliku ulja. LCMS (ESI, m/z): 356.24 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza etil 4-[(2S)-pirolidin-2-ylmetoksi]cikloheksan-1-karboksilat hidrohlorida
[0687] Rastvor tert-butil (2S)-2-([[4-(etoksikarbonil)cikloheksil]okso]metil)pirolidin-1-karboksilata (1.25 g, 3.52 mmol, 1.00 equiv) u vodonikhlorid/dioksanu (15 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ovo je dalo 900 mg (sirovo) jedinjenja iz naslova u obliku ulja. LCMS (ESI, m/z): 256.19 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza etil 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metoksi]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]cikloheksan-1-karboksilata
[0688] Rastvor etil 4-[(2S)-pirolidin-2-ylmetoksi]cikloheksan-1-karboksilat hidrohlorid (900 mg, 3.08 mmol, 1.00 equiv), Int-A6 (1.15 g, 3.50 mmol, 1.13 equiv) i TEA (2 mL) u etanolu (15 mL) je mešan 1h na 60 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pd vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:3). Ovo je dalo 1.2 g (71%) jedinjenja iz naslova u obliku bezbojnog ulja. LCMS (ESI, m/z): 548.28 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)-etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]cikloheksan-1-karboksilne kiseline
[0689] U mešani rastvor etil 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]cikloheksan-1-karboksilata (550 mg, 1.00 mmol, 1.00 equiv) u THF (12 mL) i vodi (4 mL), je dodat LiOH·voda (200 mg, 8.35 mmol, 8.32 equiv) na 0 °C. Dobijni rastvor je mešan tokom noći na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvora je podešena na 1 sa hlorovodonikom (1 M). Dobijeni rastvor je razblažen sa 250 mL EtOAc. Dobijena smeša je isprana sa 50 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ovo je dalo 550 mg (sirovo) jedinjanja iz naslova u obliku čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 520.24 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]cikloheksan-1-karboksilne kiseline u obliku čvrste supstance
[0690] Rastvor 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidro-piridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]cikloheksan-1-karboksilne kiseline (550 mg, 1.06 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (10 mL) je mešan tokom noći na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa voda/CH3CN. Ovo je dalo 170 mg (41%) jedinjenja iza naslova u obliku čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 390.16 [M+H]<+>.
Korak 7: Sinteza 6-[4-(1S,4r)-[(4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]cikloheksil)karbanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila i 6-[4-(1R,4s)-[(4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)- 1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metokis]cikloheksil)karbanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0691] U mešani rastvor 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]cikloheksan-1-karboksilne kiseline (175 mg, 0.45 mmol, 1.00 equiv) u DMF (5 mL) su dodati Int-A4 (90 mg, 0.48 mmol, 1.06 equiv), DIPEA (0.5 mL) i HATU (200 mg, 0.53 mmol, 1.17 equiv). Dobijeni rastvor je mešan tokom noći na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa voda/CH3CN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući (nakon proizvoljno dodeljene stereohemije) jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance.
Primer 82 Izomer A: 70.2 mg, 28%, LCMS (ESI, m/z): 560.15 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.30 (s, 1H), 8.51 (dd, J = 2.3, 0.6 Hz, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.88 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.98 - 6.88 (m, 1H), 4.64 - 4.53 (m, 1H), 3.77 -3.42 (m, 11H), 3.31 - 3.17 (m, 2H), 2.67 - 2.54 (m, 1H), 2.16 - 2.09 (m, 1H), 1.96 - 1.87 (m, 1H), 1.83 - 1.73 (m, 1H), 1.72 - 1.49 (m, 5H), 1.48 - 1.31 (m, 4H).
Primer 82 Izomer B: 1.8 mg, 0.7%, LCMS (ESI, m/z): 560.30 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.32 (s, 1H), 8.51 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.88 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.93 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 4.61 - 4.49 (m, 1H), 3.78 -3.45 (m, 10H), 3.28 - 3.09 (m, 3H), 2.62 - 2.53 (m, 1H), 2.17 - 2.02 (m, 1H), 1.99 - 1.79 (m, 3H), 1.73 - 1.54 (m, 4H), 1.42 - 1.25 (m, 2H), 1.21 - 1.03 (m, 2H).
Primer 83: 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]-N-[4-(piridin-2-yloksi)cikloheksil]acetamid
Korak 1: Sinteza tert-butil N-[4-(piridin-2-yloksi)cikloheksil]karbamata
[0692] U struji azota, rastvor tert-butyl N-(4-hidroksicikloheksil)karbamata (1.2 g, 5.57 mmol, 1.00 equiv), piridin-2-ola (795 mg, 8.36 mmol, 1.50 equiv), PPh3(2.19 g, 8.35 mmol, 1.50 equiv) i DIAD (1.69 g, 8.36 mmol, 1.50 equiv) u THF (10 mL) je mešan 3h na 25 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (15:85) kako bi se dobilo 650 mg (40%) jedinjenja iza naslova kao bezbojne čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 293.18 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 4-(piridin-2-yloksi)cikloheksan-1-amina
[0693] Rastvor tert-butil N-[4-(piridin-2-yloksi)cikloheksil]karbamata (650 mg, 2.22 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (20 mL) je mešan 0.5h na 25 °C. Nakon koncentrovanja, pH reakcione smeše je podešena na 7-8 sa vodenim rastvoram NaHCO3. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa DCM (5x40 mL) i organski slojevi su spojeni i osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata, nakon čega su upareni pod vakuumom kako bi se dobilo 300 mg (59%) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 193.13 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]-N-[4-(piridin-2-yloksi)cikloheksil]acetamida
[0694] Rastvor 2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]sirćetne kiseline (200 mg, 0.62 mmol, 1.00 equiv), DIPEA (161 mg, 1.25 mmol, 2.00 equiv), HATU (237 mg, 0.62 mmol, 1.00 equiv), 4-(piridin-2-yloksi)cikloheksan-1-amin (142 mg, 0.62 mmol, 1.00 equiv) u DMF (2 mL) je mešan 1h na 25 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa vodom/CH3CN dajući jedinjenje iz naslova (88.5 mg 29%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 496.21 [M+H]<+>,<1>H NMR (Metanol-d4, 400 MHz) δ: 8.26 (s, 1H), 8.12 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.71-7.67 (m, 1H), 6.95-6.92 (m, 1H), 6.87-6.85(m, 1H), 5.14(s,1H),4.72 (s, 1H), 4.01 - 3.92 (m, 2H), 3.85-3.74 (dr, 1H), 3.70-3.72 (m, 2H), 3.54-3.50 (m, 1H), 3.41(m,1H),2.28 (s, 1H), 2.05-2.01(m 3H), 1.76 - 1.67 (m, 8H).
Primer 84: 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]-N-[4-(piridin-2-yloksi)cikloheksil]propanamid
[0695]
Korak 1: Sinteza 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]-N-[4-(piridin-2-yloksi)cikloheksil]propanamida
[0696] Rastvor 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanske kiseline (140 mg, 0.42 mmol, 1.00 equiv), DIPEA (108 mg, 0.84 mmol, 2.00 equiv), HATU (159 mg, 0.42 mmol, 1.00 equiv) i 4-(piridin-2-yloksi)cikloheksan-1-amin hidrohlorida (95 mg, 0.42 mmol, 1.00 equiv) u DMF (2 mL) je mešan 40min na 25 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa voda/CH3CN i prečišćen je i pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (46.3 mg 22%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 510.22 [M+H]<+>,<1>H NMR (Metanol-d4, 400 MHz) δ: 8.12 - 8.10 (m, 2H), 7.70 - 7.66 (m, 1H), 6.95 - 6.88 (m, 1H), 6.80 (dt, J = 8.5, 0.9 Hz, 1H), 5.13(s,1H),4.50(m,1H), 3.77 - 3.60 (m, 5H), 3.48-3.44 (m, 1H),3.35-3.40(m,1H), 2.39 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.23 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 2.02 (dr, 3H), 1.72 (m, 8H).
Primer 85: 3-[(5-cijanopiridin-2-yl)amino]-N-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]fenil)propanamid
[0697]
Korak 1: Sinteza 5-[(2S)-2-(3-nitrofenoksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0698] Rastvor 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (500 mg, 1.27 mmol, 1.00 equiv), [Pd(allyl)Cl]2(50 mg, 0.14 mmol, 0.10 equiv), Rockphos (120 mg, 0.26 mmol, 0.20 equiv), 1-bromo-3-nitrobenzena (310 mg, 1.53 mmol, 1.20 equiv) i Cs2CO3(830 mg, 2.55 mmol, 2.00 equiv) u toluenu (10 mL) je mešan 16h na 80 °C. Čvrsta supstanca je profiltrirana i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:1) kako bi je dobilo 364 mg (56%) jedinjenja iz naslova kao svetlo broan ulje. LCMS (ESI, m/z): 515.19[M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[(2S)-2-(3-aminofenoksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona [0699] U atmosferi vodonika, rastvor 5-[(2S)-2-(3-aminofenoksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (255 mg, 0.53 mmol, 1.00 equiv) i Pd/C (25mg) u MeOH (10 mL) je mešan 3h na sobnoj temperaturi. Čvrsta supstanca je profiltrirana i dobijeni rastvor je uparen pod vakuumom kako bi se dobilo 45 mg (24%) jedinjenja iz naslova kao braon čvrste supstance. LCMS(ESI, m/z): 485.22 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 3-[(5-cijanopiridin-2-yl)amino]-N-[3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi)fenil]propanamida
[0700] Rastvor 3-[(5-cijanopiridin-2-yl)amino]propanske kiseline (62 mg, 0.32 mmol, 1.20 equiv), EDC.HCl (104 mg, 0.67 mmol, 2.00 equiv), DMAP (66 mg, 0.54 mmol, 2.00 equiv) i 5-[(2S)-2-(3-aminofenoksimetil)pirolidin-1-yl]-4(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (131 mg, 0.27 mmol, 1.00 equiv) u DMF (5 mL) je mešan 8h na sobnoj tempretauri. Dobijeni rastvor je razblažen sa 20 ml vode, ekstrahovan sa 3x50ml EtOAc i organski slojevi su pomešani, isprani sa 50 ml vodenog rastvora natrijum-hlorida i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa voda/CH3CN kako bi se dobilo 60 mg (34%) jedinjenja iza naslova kao braon čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 658.27[M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 3-[(5-cijanopiridin-2-yl)amino]-N-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]fenil)propanamida
[0701] Rastvor 3-[(5-cijanopiridin-2-yl)amino]-N-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]fenil)propanamida (300 mg, 0.46 mmol, 1.00 equiv) i TFA (2 mL) u DCM (10 mL) je mešan 2h na sobnoj temperatiri. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa voda/CH3CN. Nakon koncentrovanja, ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (28.5mg, 12.00%) u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z):528.15[M+H]<+>,<1>H NMR (CD3OD, 300 MHz) δ 8.33 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.60 (dd, J = 9.0, 2.1 Hz, 1H), 7.28 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 8.1Hz, 1H), 6.64-6.56(m, 2H),4.89-4.82 (m, 1H), 4.19 (dd, J = 10.2, 3.9 Hz, 1H), 4.01 (dd, J = 10.2, 6.9 Hz, 1H), 3.76 (t, J = 6.3 Hz, 3H), 3.45-3.39 (m, 1H), 2.67 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.36 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 2.06 (dd, J = 10.2, 5.9 Hz, 1H), 1.92-1.79 (m, 2H).
Primer 86: N-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]fenil)prop-2-enamida
[0702]
Korak 1: Sinteza N-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]fenil)prop-2-enamida
[0703] U rastvor 5-[(2S)-2-(3-aminofenoksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (150 mg, 0.31 mmol, 1.00 equiv) i TEA (93 mg, 0.92 mmol, 2.00 equiv) u DCM (2.5 mL) je dodat prop-2-enoil hlorid (31 mg, 0.34 mmol, 1.10 equiv). Dobijeni rastvor je mešan 1h na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena dodavanjem 10 ml vode i ekstrahovano je sa 3x15 ml EtOAc. Organski sloj je spojen, ispran sa 10 ml koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa voda/CH3CN kako bi je dobio 21 mg (13%) jedinjenja iz naslova kao broan čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z):539.23[M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza N-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]fenil)prop-2-enamida
[0704] Rastvor (3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]fenil)prop-2-enamida (279 mg, 0.52 mmol, 1.00 equiv) i TFA (1 mL) u DCM (5 mL) je mešan 3h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa voda/CH3CN. Nakon koncentrovanja, ostatak je dalje prečišćen sa Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova, 11.1mg (5.01%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z):409.15 [M+H]<+>,<1>HNMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ 12.35 (s, 1H), 10.14 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.21 (d, J = 5.1Hz, 2H), 6.63 (td, J = 4.5, 2.5 Hz, 1H), 6.45 (dd, J = 17.0, 10.0 Hz, 1H), 6.27 (dd, J = 17.0, 2.1 Hz, 1H), 5.77 (dd, J = 9.9, 2.1 Hz, 1H), 4.83 (s, 1H), 4.07 (dd, J = 10.2, 4.2 Hz, 1H), 3.94 (dd, J = 10.2, 6.3 Hz, 1H), 3.62 (s, 1H), 3.28-3.20 (m, 1H), 2.23 (dd, J = 13.0, 6.9 Hz, 1H), 1.98-1.90 (m, 1H), 1.86-1.67 (m, 2H).
Primer 87: 3-[(5-cijanopiridin-2-yl)amino]-N-(5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]piridin-3-yl)propanamida
[0705]
Korak 1: Sinteza 5-[(2S)-2-[[(5-nitropiridin-3-yl)oksi]metil]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0706] Rastvor 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (1 g, 2.54 mmol, 1.00 equiv), [Pd(allyl)Cl]2(92.96 mg, 0.10 equiv), Rockphos (119.03 mg, 0.10 equiv), Cs2CO3(2.48 g, 7.61 mmol, 3.00 equiv), 3-bromo-5-nitropiridina (1.026 g, 5.05 mmol, 2.00 equiv) u toluenu (20 mL) je mešan 5h na 80 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu eluiranjem sa EtOAc/petrol etrom (1:1) kako bi se dobilo 600 mg (46%) jedinjenja iz naslova kao braon ulja. LCMS (ESI, m/z): 516.19 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[(2S)-2-[[(5-aminopiridin-3-yl)oksi]metil]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0707] Rastvor 5-[(2S)-2-[[(5-nitropiridin-3-yl)oksi]metil]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (467 mg, 0.91 mmol, 1.00 equiv), Fe (253.9 mg, 5.00 equiv) u sirćetnoj kiselini (5 mL) je mešan 15h na 70 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa voda/CH3CN kako bi se dobilo 400 mg (91%) jedinjenja iz naslova kao braon čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 486.22[M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 3-[(5-cijanopiridin-2-yl)amino]-N-(5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]piridin-3-yl)propanamida
[0708] Rastvor 5-[(2S)-2-[[(5-aminopiridin-3-yl)oksi]metil]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (364 mg, 0.75 mmol, 1.00 equiv), EDC.HCl (360.5 mg, 1.88 mmol, 2.50 equiv), 4-dimetilaminopiridina (274.87 mg, 2.25 mmol, 3.00 equiv), 3-[(5-cijanopiridin-2-yl)amino]propanske kiseline (172 mg, 0.90 mmol, 1.20 equiv) u DMF (4 mL) je mešan 3h na 60 °C. Dobijeni rastvor je ugašen sa 40 ml vode i ekstrahovan sa 4x50 mL EtOAc. Organski slojevi su spojeni. Nakon uparavanja dobijene smeše pod vakuumom, ostatak je nanet na silika gel kolonu sa MeOH/CH2Cl2(1:10) kako bi se dobilo 350 mg (71%) jedinjenja iza naslova u obliku braon čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 659.28[M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 3-[(5-cijanopiridin-2-yl)amino]-N-(5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]piridin-3-yl)propanamida
[0709] Rastvor 3-[(5-cijanopiridin-2-yl)amino]-N-(5-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]piridin-3-yl)propanamida (134 mg, 0.20 mmol, 1.00 equiv), trifluorosirćetne kiseline (1 mL) u DCM (5 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (39.1 mg, 36%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 529.25 [M+H]<+>,<1>HNMR (300 MHz, Methanol-d4) δ 8.33 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.29 (dd, J = 2.3, 1.8 Hz, 2H), 7.93 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.59 (dd, J = 8.9, 2.3 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.87(s, 1H) 4.30 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 4.11 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 3.77 (dd, J = 6.6, 7.5 Hz, 3H), 3.55 - 3.36 (m, 1H), 2.87 - 2.58 (m, 2H), 2.39 -2.31 (m, 1H), 2.11 - 2.04 (m, 1H), 2.04 - 1.67 (m, 2H).
Primer 88: (S)-6-(4-(2-(2-(1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2- yl)etoksi)acetil) piperazin-1-yl)nikotinonitril
[0710]
Korak 1: Sinteza (S)-tert-butil 2-(2-hidroksietil)pirolidin-1-karboksilata
[0711] Rastvor 2-[(2S)-1-[(tert-butoksi)karbonil]pirolidin-2-yl]sirćetne kiseline (460 mg, 2.01 mmol, 1.00 equiv), BH3/Me2S (2 mL) u THF (8 mL) je mešan 2h na 80 °C. Dobijeni rastvor je ugašen sa MeOH. Nakon koncentrovanja pod vakuumom, ostatak je nanet na silika gel kolonu eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:1) kako bi se dobilo 210 mg (49%) jedinjenje iz naslova u obliku belog ulja. LCMS (ESI, m/z): 216.15 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza (S)-2-(pirolidin-2-yl)etanol hidrohlorid
[0712] Rastvor (S)-tert-butil 2-(2-hidroksietil)pirolidin-1-karboksilata (210 mg, 1.00 mmol, 1.00 equiv) i hlorovodonik/dioksanu (5 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je uparena pod vakuumom kako bi se dobilo 150 mg sirovog jedinjenja iz naslova. LCMS (ESI, m/z): 116.10 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza (S)-5-(2-(2-hidroksietil)pirolidin-1-yl)-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridazin-3(2H)-ona
[0713] Rastvor Int-A6 (360 mg, 1.09 mmol, 1.10 equiv), (S)-2-(pirolidin-2-yl)etanol hidrohlorida (150 mg, 0.99 mmol, 1.00 equiv), TEA (1 mL) u etanolu (10 mL) je mešan 1h na 60 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je nanet na silika gel kolonu eluiranjem sa EtOAc/petrol etrom (1:1) kako bi se dobilo 250 mg (62%) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 408.20 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza (S)-6-(4-(2-(2-(1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl)etoksi)acetil)piperazin-1-yl)nikotinonitril
[0714] Rastvor (S)-5-(2-(2-hidroksietil)pirolidin-1-yl)-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridazin-3(2H)-ona (200 mg, 0.49 mmol, 1.00 equiv), 6-[4-(2-hloroacetil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (132 mg, 0.50 mmol, 1.00 equiv), natrijum hidrida (30 mg, 1.25 mmol, 1.50 equiv) u DMF (5 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ugašen sa vodom i ekstrahovan sa EtOAc (3 x 50 mL), i organski slojevi su pomešani. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:10) kako bi se dobilo 80 mg (26%) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 636.29 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza (S)-6-(4-(2-(2-(1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2- yl)etoksi)acetil) piperazin-1-yl)nikotinonitrila
[0715] Rastvor (S)-6-(4-(2-(2-(1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl)etoksi)acetil)piperazin-1-yl)nikotinonitrila (80 mg, 0.13 mmol, 1.00 equiv) u vodonikhlorid/dioksanu (10 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa voda/CH3CN dajući jedinjenje iz naslova (12.6 mg, 20%) u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 506.15 [M+H]<+>,<1>HNMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ: 8.45 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.90 (dd, J = 9.1, 0.8 Hz, 1H), 4.55- 4.48 (m, 1H), 4.30 (s, 2H), 3.85 - 3.63 (m, 11H), 3.41- 3.32 (m, 1H), 2.39 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 2.24 - 2.07 (m, 1H), 2.03- 1.95 (m, 1H), 1.87-1.73 (m, 3H).
Primer 89: 6-[4-[2-([2-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]etil]amino) acetil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0716]
Korak 1: Sinteza 5-[(2S)-2-(2-azidoetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0717] Rastvor 5-[(2S)-2-(2-hidroksietil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (1.2 g, 2.94 mmol, 1.00 equiv), DPPA (1.32 g, 4.80 mmol, 1.60 equiv), DBU (730 mg, 4.80 mmol, 1.60 equiv) u toluenu (10 mL) je mešan 3h na 60 °C. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:1) kako bi je dobio 1 g (79%) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 433.20 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[(2S)-2-(2-aminoetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0718] Rastvor 5-[(2S)-2-(2-azidoetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (864 mg, 2.00 mmol, 1.00 equiv) i Pd/C (100 mg) u metanolu (10 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi u atmosferi vodonik. Nakon filtracije čvrste supstance, dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom kako bi se dobilo 700 mg sirovog jedinjenja iz naslova u obliku belog ulja. LCMS (ESI, m/z): 407.21 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza tert-butil N-[2-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]etil]karbamata
[0719] Rastvor 5-[(2S)-2-(2-aminoetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etokis]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (406 mg, 1.00 mmol, 1.00 equiv), (Boc)2O (218 mg, 1.00 mmol, 1.00 equiv) u etanolu (5 mL) je mešan 2h na 100 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:1) kako bi se dobilo 380 mg (75%) jedinjenja iz naslova kao bela čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 507.26 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza tert-butil N-[2-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]-N-[2-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]etil]karbamata
[0720] Rastvor 6-[4-(2-hloroacetil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (158 mg, 0.6 mmol, 1.00 equiv), tert-butil N-[2-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]etil]karbamata (300 mg, 0.6 mmol, 1.00 equiv) i natrijum hidrida (72 mg, 1.8 mmol, 3.00 equiv) u THF (10 mL) je mešan 5h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:1) kako bi se dobilo 100 mg sirovog jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance.
Korak 5: Sinteza 6-[4-[(4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]pirimidin-2-yl)karbanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0721] Rastvor tert-butil N-[2-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]-N-[2-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]etil]karbamata (80 mg, 0.11 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (10 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa voda/CH3CN dajući jedinjenje iz naslova (20.9 mg, 38%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 505.23 [M+H]<+>,<1>HNMR(300 MHz, Metanol-d4) δ 8.45 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 9.0, 2.3 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.48 - 4.30(m, 1H), 3.87 - 3.63 (m, 9H), 3.56 (s, 2H), 3.48 - 3.41 (m, 1H), 2.78 - 2.63 (m, 2H), 2.39 - 2.28 (m, 1H), 2.10 - 1.98 (m, 2H), 1.89 - 1.76 (m, 3H).
Primer 90: (S)-(6-[4-(3-[[1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propil) piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril; mravlja kiselina
[0722]
Korak 1: Sinteza 6-[4-(3-hidroksipropil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0723] Rastvor 3-(piperazin-1-yl)-1-propanola (1.44 g, 9.98 mmol, 1.00 equiv), 6-hloropiridin-3-karbonitrila (1.38 g, 9.96 mmol, 1.00 equiv) i kalijum-karbonata (2 g, 14.47 mmol, 1.50 equiv) u DMF (20 mL) je mešan 1h na 80°C. Čvrsta supstanca je profiltrirana. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 2.2 g (89%) jedinjenje iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 247.16 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza tert-butil (S)-2-([3-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]propoksi]metil)pirolidin-1-karboksilata [0724] U rastvor (2S)-2-[(metansulfoniloksi)metil]pirolidin-1-karboksilata (3 g, 10.74 mmol, 1.00 equiv) i 6-[4-(3-hidroksipropil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (5.1 g, 20.71 mmol, 1.50 equiv) u DMF (150 mL) je dodat natrijum hidrid (1 g, 41.67 mmol, 2.00 equiv) u nekoliko serija, i dobijeni rastvor je mešan 6h na 70 °C. Smeša je ektrahovana sa 2x100 mL EtOAc i organski slojevi su pomešani. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom kako bi se dobio 1 g (22%) jedinjenja iz naslova kao žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 430.27 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza (S)-6-[4-(3-[[pirolidin-2-yl]metoksi]propil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0725] Rastvor tert-butil (S)-2-([3-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]propoksi]metil)pirolidin-1-karboksilata (1 g, 2.33 mmol, 1.00 equiv) u dioksan/HCl (20 mL) je mešan 1h na 25 °C. Ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom i eluiran sa voda/CH3CN. Sakupljene frakcije su pomešane i koncentrovane pod vakuumom kako bi se dobilo 600 mg (78%) jedinjenja iz naslova kao žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 330.22 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza (S)-6-[4-(3-[[1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0726] Rastvor Int-A6 (600 mg, 1.82 mmol, 1.00 equiv), (S)-6-[4-(3-[[pirolidin-2-yl]metoksi]propil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril (600 mg, 1.82 mmol, 1.00 equiv) i TEA (5 mL) u etanolu (20 mL) je mešan 1h na 50 °C. Dobijena smeša je uparena pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa voda/CH3CN kako bi se dobilo 600 mg (53%) jedinjenja iz naslova kao žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 622.31 [M+H]<+>. Korak 5: Sinteza (S)-(6-[4-(3-[[1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] propil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrilne soli mravlje kiseline
[0727] Rastvor 6-[4-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propill)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (600 mg, 0.96 mmol, 1.00 equiv) i TBAF (2.2 g, 8.41 mmol, 10.00 equiv) u dioksanu (20 mL) je mešan 3 dana na 70 °C . Nakon koncemtrovanja, ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova u obliku formijata (21.8 mg, 4%) kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 492.20 [M+H]<+>,<1>HNMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: δ: 12.35 (s, 1 H), 8.47 (d, J = 4.0 Hz, 1 H), 8.14 (s, 1 H), 8.05 (s, 1 H), 7.85 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 12.0 Hz, 1 H), 4.60-4.57 (s, 1H), 3.62-3.19 (m, 10 H), 2.34 (t, 4 H), 2.24 (t, 2 H), 2.10-2.07 (m, 1 H), 1.87-1.91 (m, 1 H), 1.55-1.67 (m,.4 H).
Primer 91: 6-(4-[2-[metil([2-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2- yl]etil]) amino]acetil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitril
[0728]
Korak 1: Sinteza 6-[4-[2-([2-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]etil]amino)acetil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0729] Rastvor 5-[(2S)-2-(2-aminoetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (260 mg, 0.64 mmol, 1.00 equiv), Cs2CO3(416 mg, 1.28 mmol, 2.00 equiv) i 6-[4-(2-bromoacetil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (196 mg, 0.63 mmol, 1.00 equiv) u MeCN (13 mL) je mešan 4h na sobnoj temperaturi. Čvrsta supstanca je profiltrirana, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa voda/CH3CN kako bi se dobilo 90 mg (22%) jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z):635.31[M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-(4-[2-[metil([2-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]etil])amino]acetil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitril
[0730] Rastvor 6-[4-[2-([2-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]etil]amino)acetil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril (90 mg, 0.14 mmol, 1.00 equiv), paraformaldehida (19 mg, 0.21 mmol, 1.50 equiv), kalijum/hidroksida (16 mg, 0.29 mmol, 2.00 equiv) i AcOH (0.1 mL) u metanolu (5 mL) je mešan 1.5h na sobnoj temperaturi. Rastvor je mešan još dodatna 3h na 60 °C, nakon čega je dodat NaBH4(10.7 mg, 0.28 mmol, 2.00 equiv), a onda je dobijeni rastvor mešan još dodatnih 30min na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ugašen sa 10 mL vode i ekstrahovan sa 3x10 mL EtOAc. Organski slojevi su pomešani, isprani sa 1x10 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida, osušeni prekon anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovani pod vakuumom kako bi se dobilo 90 mg (98%) jedinjenja iz naslova kao žutog ulja. LCMS (ESI, m/z):649.32[M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 6-(4-[2-[metil([2-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2- yl]etil]) amino]acetil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonirtil
[0731] Rastvor 6-(4-[2-[metil([2-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]etil])amino]acetil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitrila (80 mg, 0.12 mmol, 1 equiv) i TFA (1 mL) u DCM (5 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (11.4 mg, 17.83%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z):519.10 [M+H]<+>,<1>HNMR (CD3OD-d4, 300MHz,) d 8.44 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.79 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.36 (s, 1H), 3.77-3.61 (m, 10H), 3.43-3.35 (m, 2H), 2.65-2.43 (m, 2H), 2.41-2.29 (m, 4H), 2.12-1.95 (m, 2H), 1.84-1.71 (m, 3H).
Primer 92: 6-[4-[(2E)-4-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]amino]etoksi)but-2-enoil] piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0732]
Korak 1: Sinteza 5-[(2-hidroksietil)amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0733] Rastvor Int-A6 (5 g, 15.21 mmol, 1 equiv), TEA (4.6 g, 45.46 mmol, 2.989 equiv) i 2-aminoetan-1-ola (1.04 g, 17.03 mmol, 1.120 equiv) u EtOH (50 mL) je mešan 5h na 50 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (70/30) kako bi se dobilo 3.7 g (68.84%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 354.14 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza metil (2E)-4-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]amino]etoksi)but-2-enoata
[0734] Rastvor 5-[(2-hidroksietil)amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (2 g, 5.66 mmol, 1 equiv), metil (2E)-4-bromobut-2-enoata (1.106 g, 6.18 mmol, 1.092 equiv), Pd2(dba)3(0.52 g, 0.57 mmol, 0.100 equiv), Ruphos (0.53 g, 1.14 mmol, 0.201 equiv) i Cs2CO3(3.7 g, 11.36 mmol, 2.007 equiv) u toluenu (20 mL) je mešan 4h na 80 °C u atmosferi azota. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (40/60) kako bi se dobilo 130 mg (5.09%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 452.18 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza (2E)-4-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]amino]etoksi)-2-butanska kiselina
[0735] Rastvor metil (2E)-4-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]amino]etoksi)but-2-enoata (1.6 g, 3.54 mmol, 1 equiv) i LiOHvoda (0.743 g, 17.71 mmol, 5.00 equiv) u MeOH (30 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x30 ml EtOAc. pH vrednost rastvora je podešena na 6 sa HCl (35 %). Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom kako bi se dobilo 300 mg (19.35%) jedinjenje iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 438.16 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 6-[4-[(2E)-4-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]amino]etoksi)but-2-enoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0736] Rastvor (2E)-4-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]amino]etoksi)-2-butanske kiseline (300 mg, 0.69 mmol, 1 equiv), Int-A4 (168.3 mg, 0.89 mmol, 1.30 equiv), HATU (138.7 mg, 1.03 mmol, 1.50 equiv) i DIPEA (178 mg, 1.38 mmol, 2.01 equiv) u DMF (4 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatk je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa voda/CH3CN kako bi se dobilo 140 mg (33.60%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 608.26 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 6-(4-(2-(4-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)morfolin-3-yl)acetil)piperazin-1-yl)nikotinnitrila
[0737] Rastvor 6-[4-[(2E)-4-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]amino]etoksi)but-2-enoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (150 mg, 0.25 mmol, 1 equiv) u DCM (8 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno fazne hromatografijom i eluiran sa voda/CH3CN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (9.5 mg, 8.06%) kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 478.44 [M+H]<+>,<1>HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 8.53 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.90 (dd, J= 8.9, 2.5 Hz, 1H), 6.96 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 4.36 (s, 1H), 3.84 - 3.62 (m, 13H), 3.13 - 2.94 (m, 2H), 2.84 (d, J = 6.0 Hz, 1H).
Primer 93 Izomer A: 6-[4-(3-[[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi]propanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril i
Primer 93 Izomer B: 6-[4-(3-[[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi]propanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0738]
Korak 1: Sinteza tert-butil 1-(hidroksimetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-karboksilat
[0739] U mešani rastvor 2-[(tert-butoksi)karbonil]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-karboksilne kiseline (100 g, 379.81 mmol, 1.00 equiv) u THF (500 mL) na 0 °C, BH3·THF (1M, 800 mL) je dodat u kapima. Dobijeni rastvor je mešan tokom noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3na 0 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom i ekstrahova sa 2L EtOAc. Dobijena smeša je isprana sa 5x500 mL vode i 2x500 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ovo je rezultiralo sa 95 g (sirovo) jedinjenja iz naslova u obliku ulja. LCMS (ESI, m/z): 250.14 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza (2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl)metanol hidrohlorida
[0740] Rastvor tert-butil 1-(hidroksimetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-karboksilata (95 g, 381.05 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksana (800 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Čvrsta supstanca je prikupljena filtracijom. Ovo je rezultiralo sa 63 g (89%) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 150.09 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 5-[1-(hidroksimetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]-methyl]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0741] Rastvor (2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl)metanol hidrohlorida (63 g, 339.35 mmol, 1.00 equiv), Int-A6 (147 g, 80%) i TEA (104 mL) u etanol (500 mL) je mešan 2h na 60 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Dobijeni rastvor je razblažen sa 2 L EtOAc. Dobijena smeša je isprana sa 2x500 mL NH4Cl i 2x500 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida. Organski sloj je osušen preko anhindrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je rastvoren u 500 mL EtOAc i dodat kapima u 2.5 L heksana na 0 °C. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom. Ovo je rezultiralo sa 115 g (sirovo) jedinjenja iz naslova kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 442.18 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza tert-butil 3-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi)propanoata
[0742] U mešani rastvor 5-[1-(hidroksimetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (115 g, 260.46 mmol, 1.00 equiv) u MeCN (1.2 L), Cs2CO3(127 g, 389.79 mmol, 1.50 equiv) i tert-butil prop-2-enoata (67 g, 522.74 mmol, 2.01 equiv) su dodati. Dobijeni rastvor je mešan 24h na 35 °C i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je razblazen sa 2 L EtOAc i ispran sa 2x500 mL vode i 500 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran EtOAc/petrol etrom (1:3). Ovo je dalo 77 g (52%) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 570.26 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 3-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi) propanske kiseline
[0743] Rastvor tert-butil 3-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi)propanoata (76 g, 133.40 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksaneu (1 L) je mešan tokom noći na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je rastvoren u 400 mL NH3/MeOH i mešan na sobnoj tempreraturi 30min.. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ovo je rezultiralo sa 50 g (sirovo) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 384.12 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 6-[4-(3-[[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi]propanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila i 6-[4-(3-[[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi]propanoil)-piperazin-1yl]-piridin-3-karbonitrila
[0744] U mešani rastvor 3-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi)propanske kiseline (50 g, 130.44 mmol, 1.00 equiv) u DMF (1 L), dodati su Int-A4 (45 g, 172.31 mmol, 1.32 equiv), DIPEA (116 mL) i T3P (125 mL, 50% in EtOAc). Dobijeni rastvor je mešan tokom noći na 30 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno faznom hromatografijom i eluiran sa voda/CH3CN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Chiral-Prep-HPLC (CHIRALPAK IF-3, 0.46*5cm;3um, (Hex:DCM=5:1)(0.1%DEA):EtOH=50:50, 1.0ml/min) dajući jedinjenja iz naslova u obliku prljavo belih čvrstih supsatnca. Apsolutna stehiometrija je dodeljena na osnovu kristalne strukture X-zraka proteina iz Primera 18 Izomera B which koji je potvrdio (S)-apsolutni stereohemiju i primećeno je da je potentni enantiomer.
Primer 93 Izomer A: 20.5913 g, 85%, LCMS (ESI, m/z): 554.30 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 8.44 (dd, J = 2.4, 0.8 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.78 (dd, J= 9.1, 2.3 Hz, 1H), 7.43 - 7.37 (m, 1H), 7.33 (dd, J = 4.8, 3.2 Hz, 3H), 6.86 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 5.94 - 5.87 (m, 1H), 5.21 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 4.59 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 3.93 (dd, J = 10.2, 3.5 Hz, 1H), 3.82 (dt, J = 9.3, 5.9 Hz, 1H), 3.77 - 3.60 (m, 8H), 3.61 - 3.51 (m, 2H), 2.67 - 2.58 (m, 2H). Rt = 2.690 min.
Primer 93 Izomer B: 20.7982 g, 86%, LCMS (ESI, m/z): 554.30 [M+H]<+>. Rt = 3.263 min.
Primer 94 Izomer A: 6-[4-[(2R)-2-metil-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril i
Primer 94 Izomer B: 6-[4-[(2S)-2-metil-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4- yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
Korak 1: Sinteza metil 2-([[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi)metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]metil)prop-2-enoata
[0745] U rastvor 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (500 mg, 1.27 mmol, 1.00 equiv) i NBu4I (93 mg, 0.25 mmol, 0.20 equiv) u tolueni (16 mL) je dodat natrijum hidrid (91 mg, 3.79 mmol, 3.00 equiv). Nakon 30 min na sobnoj temperaturi, metil 2-(bromometil)prop-2-enoat (2.24 g, 12.51 mmol, 10.00 equiv) je dodat u kapima. Dobijeni rastvor je mešan 1.5h na 80 °C. Reakcija je ugašena sa 50 mL vode, ekstrahovano sa 2x50 mL EtOAc, organski slojevi su spojeni, isprani sa 50 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida, osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (28/72) kako bi se dobilo 549 mg (88%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS(ESI,m/z):492.21 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza metil 2-metil-3-[[(2S)-]-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoata
[0746] U struji vodonika, rastvor metil 2-([[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]metil)prop-2-enoata (549 mg, 1.12 mmol, 1.00 equiv) i Pd/C (50 mg) u metanolu (20 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Čvrsta supstanca je profiltrirana i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 300 mg (54%) jedinjenja iz naslova kao žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 494.22[M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 2-metil-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanska kiselina
[0747] Rastvor metil 2-metil-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoata (200 mg, 0.41 mmol, 1.00 equiv) i LiOH (58 mg, 2.42 mmol, 4.00 equiv) u THF (4 mL) i vodi (1 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je razblažen sa 5 mL vode, ekstrahovan sa 3x10 mL EtOAc i organski slojevi su pomešani. pH vrednost dobijenog rastvora je podešena na 4 sa hlorovodonikom i onda je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa voda/CH3CN kako bi se dobilo 236 mg jedinjenja iz naslova kao sirove žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z):480.21[M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 2-metil-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] propanske kiseline
[0748] Rastvor 2-metil-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanske kiseline (236 mg, 0.49 mmol, 1.00 equiv) i TFA (2 mL) u DCM (10 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je razblažena sa 30 mL EtOAc, ekstrahovana sa 5 mL vode i vodeni sloj je koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 200 mg jedinjenja iz naslova u obliku čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 350.12[M+H]<+>.
Korak 5: 6-[4-[(2R)-2-metil-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] propanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril i 6-[4-[(2S)-2-metil-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0749] Rastvor 2-metil-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoski]propanske kiseline (280 mg, 0.8mmol, 1.00 equiv), HATU (305mg,0.8 mmol, 1.00 equiv), DIPEA (310 mg, 2.4 mmol, 3.00 equiv) i Int-A4 (151 mg, 0.8 mmol, 1.00 equiv) u DMF (10 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je razblažen sa 10 mL vode, ekstrahovan sa 3x10 mL EtOAc i organski slojevi su pomešani, isprani sa 10 mL vodenog rastvora natrijum-hlorida, osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa voda/CH3CN. Nakon koncentrovanja, ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-HPLC dajući (nakon proizvoljnog dodeljivanja stereohemije) jedinjenja iz naslova, u obliku bele čvrste supstance.
Primer 94 Izomer A: 11.6 mg, 18.4%, LCMS (ESI, m/z): 520.30 [M+H]<+>,<1>HNMR (DMSO-d6, 400MHz,) δ 12.35 (s, 1H), 8.51 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.90 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.52 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 3.70-3.46 (m, 11H) 3.40-3.34 (m, 2H), 3.32 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 3.00 (dt, J = 13.6, 6.8 Hz, 1H), 2.11-2.02 (m, 1H), 1.86 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 1.68-1.52 (m, 2H), 0.93 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
Primer 94 Izomer B: 18 mg, 28.5%, LCMS (ESI, m/z): 520.25[M+H]<+>,<1>HNMR (DMSO-d6, 400 MHz,) δ 12.34 (s, 1H), 8.51 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.89 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.53 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.69 -3.48 (m, 11H), 3.34 -3.15 (m, 2H), 2.99 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 2.10-2.02 (m, 1H), 1.87 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 1.71-1.54 (m, 2H), 0.91 (d, J = 6.8 Hz, 3H)
Primer 95: 6-(4-((1R,3S)-3-(((S)-1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2- yl)metoksi) ciklobutan-1-karbonil)piperazin-1-yl)nikotinonitril i 6-(4-((1S,3R)-3-(((S)-1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl)metoksi)ciklobutan-1-karbonil)piperazin-1- yl)nikotinonitril
Korak 1: Tert-butil (2S)-2-([[(4-metilbenzen)sulfonil]oksi]metil)pirolidine-1-karboksilat
[0750] Rastvor tert-butil (2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata (2 g, 9.94 mmol, 1.00 equiv), TEA (2 g, 19.76 mmol, 2.00 equiv), DMAP (121 mg, 0.99 mmol, 0.10 equiv), TsCl (2.83 g, 14.8 mmol, 1.50 equiv) u DCM (20 mL) je mešan tokom noći na 25 °C. U dobijeni rastvor je dodato 20 mL zasićenog rastvora natrijum-bikarbonata i dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 20 mL DCM i organski slojevi su pomešani. Dobijeni rastvor je ispran sa 3 x 20 mL zasićenog NH4Cl, organski slojevi su pomešani, osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovani pod vakuumom kako bi se dobilo 2.9 g (82 %) jedinjenja iz nalslova u obliku žutog ulja. LCMS: 356.15[M+H]<+>.
Korak 2: Tert-butil (2S)-2-[[3-(metoksikarbonil)ciklobutoksi]metil]pirolidin-1-karboksilat
[0751] Rastvor metil 3-hidroksiciklobutan-1-karboksilata (800 mg, 6.15 mmol, 1.00 equiv), NaH (492 mg, 20.50 mmol, 2.00 equiv), tert-butil (2S)-2-([[(4-metilbenzen)sulfonil]oksi]metil)pirolidin-1-karboksilata (2.2 g, 6.19 mmol, 1.00 equiv) u THF (20 mL) je mešan tokom noći na 70 °C. Ostatak je ugašen sa 20 mL vode, ekstrahovan sa 3 x 20 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni. Dobijeni rastvor je ispran sa 3 x 20 mL zasićenog NH4Cl, organski slojevi su spojeni, osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo 250 mg (13 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: 314.19 [M+H]<+>.
Korak 3: Metil 3-[(2S)-pirolidin-2-ylmetoksi]ciklobutan-1-karboksilat hidrohlorid
[0752] Rastvor tert-butil (2S)-2-[[3-(metoksikarbonil)ciklobutoksi]metil]pirolidine-1-karboksilata (250 mg, 0.80 mmol, 1.00 equiv) u dioksan/HCl (15 mL, 4M) je mešan 1h na 25 °C. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 250 mg jedinjenja iz naslova u obliku žutog sirovog ulja. LCMS: 250.11 [M+H]<+>.
Korak 4: Metil 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl] pirolidin-2-yl]metoksi]ciklobutan-1-karboksilat
[0753] Rastvor Int-A6 (262 mg, 0.80 mmol, 1.00 equiv), TEA (242 mg, 2.39 mmol, 3.00 equiv), metil 3-[(2S)-pirolidin-2-ylmethoksi]ciklobutan-1-karboksilat hidrohlorida (250 mg, 1.00 mmol, 1.00 equiv) u EtOH (15 mL) je mešan 2h na 60 °C. Dobijeni rastvor je koncentrovan i ostatak je nanet na silika gel kolonu sa EtOAc/petrol etrom (1/4) kako bi se dobilo 320 mg (79 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: 506.22 [M+H]<+>.
Korak 5: Metil 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]ciklobutan-1-karboksilat
[0754] Rastvor metil 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]ciklobutan-1-karboksilata (320 mg, 0.63 mmol, 1.00 equiv), TFA (2 mL) u DCM (20 mL) je mešan 2h na 25°C. pH vrednost rastvora je podešena na 8 sa etanolaminom. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 20 mL DCM i organski slojevi su spojeni, osušeni preko anhidrovanog natrijum-hlorida i koncentrovani pod vakuumom kako bi se dobilo 260 mg jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: 376.16 [M+H]<+>.
Korak 6: 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]ciklobutan-1-karboksilana kiselina
[0755] Rastvor metil 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]ciklobutan-1-karboksilata (260 mg, 0.69 mmol, 1.00 equiv), LiOH·H2O (200 mg, 4.77 mmol, 5.00 equiv) u MeOH (20 mL) i vodi (4 mL) je mešan 2h na 25 °C. pH vrednost rastvora je podešena na 4 sa HCl (2M). Dobije rastvor je profiltriran i čvrsta supstanca je sakupljena kako bi se dobilo 115 mg (46%) jedinjenja iz naslova kao žuta čvrsta supstanca. LCMS: 362.12.
[M+H]<+>.
Korak 7: 6-(4-((1R,3S)-3-(((S)-1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl)metoksi)ciklobutan-1-karbonil)piperazin-1-yl)nikotinonitril i 6-(4-((1S,3R)-3-(((S)-1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl)metoksi)ciklobutan-1-karbonil)piperazin-1-yl)nikotinonitril
[0756] Rastvor 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]ciklobutan-1-karboksilne kiseline (100 mg, 0.28 mmol, 1.00 equiv), DIPEA (107 mg, 0.83 mmol, 3.00 equiv), Int-A4 (68 mg, 0.36 mmol, 1.10 equiv), HATU (116 mg, 0.31 mmol, 1.10 equiv) u DMF (8 mL) je mešan 1h na 25 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (CHIRALPAK IG-3, 3 mm, 0.46 x 10 cm column, eluiranjem sa gradijentom MtBE (0.1% DEA):EtOH (50:50), at a flow rate of 1 mL/min) dajući (nakon proizvoljnog određivanja stereohemije) jedinjenja iz naslova, po redu, kao čvrstu belu supstancu, izomer A LCMS: 532.22 [M+H]<+>;<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 8.43 (dd, J = 2.3, 0.7 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.77 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.88 (dd, J = 9.1, 0.8 Hz, 1H), 4.89 - 4.33 (m, 1H), 4.04 (p, J = 6.0 Hz, 1H), 3.79 - 3.63 (m, 7H), 3.57 (dd, J = 10.0, 3.5 Hz, 1H), 3.49 (dd, J = 6.6, 4.1 Hz, 2H), 3.44 -3.37 (m, 1H), 3.35 (s, 1H), 3.33 - 3.18 (m, 1H), 2.62 - 2.39 (m, 2H), 2.24 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 2.19 - 1.89 (m, 3H), 1.74 (tt, J = 17.3, 6.0 Hz, 2H). tR = 3.607 min i izomer B LCMS: 532.22 [M+H]<+>;<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 8.43 (dd, J = 2.3, 0.8 Hz, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.77 (dd, J = 9.1, 2.3 Hz, 1H), 6.87 (dd, J = 9.1, 0.9 Hz, 1H), 4.84 - 4.31 (m, 1H), 4.05 - 3.88 (m, 1H), 3.88 - 3.61 (m, 7H), 3.56 (dt, J = 10.7, 4.0 Hz, 3H), 3.46 - 3.34 (m, 2H), 3.06 - 2.85 (m, 1H), 2.70 -2.43 (m, 2H), 2.25 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 2.18 - 1.80 (m, 3H), 1.74 (td, J = 11.3, 7.1 Hz, 2H). tR = 5.473 min.
Primer 96: 6-[4-[(3Z)-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]but-3-enoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril i 6-[4-[(2E)-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-di-hidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]but-2-enoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0757]
Korak 1: Metil (2E)-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]but-2-enoat
[0758] Rastvor 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (600 mg, 1.52 mmol, 1.00 equiv), Cs2CO3(995 mg, 3.05 mmol, 2.00 equiv), [Pd(ally)Cl]2(28 mg, 0.05 equiv), Rockphos (71 mg, 0.10 equiv), metil (2E)-4-bromobut-2-enoata (1.36 g, 7.60 mmol, 5.00 equiv) u toluenu (16 mL) je mešan 2h na 80 ° C. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen pomoću hromatografije sa silika gel kolonom i eluiran sa EtOAc/petrol etrom kako bi se dobilo 370 mg (49 %) jedinjenja iz naslova kao žute čvrste supstance. LCMS: 492.21 [M+H]<+>.
Korak 2: (2E)-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]-2-butanska kiselina
[0759] Rastvor metil (2E)-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidro-piridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]but-2-enoata (350 mg, 0.71 mmol, 1.00 equiv), LiOH (30 mg, 1.25 mmol, 1.00 equiv) u MeOH (1.5 mL) i vodi (1.5 mL) je mešan 12h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo 200 mg jedinjenja iz naslova. LCMS: 478.19 [M+H]<+>.
Korak 3: (2E)-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]-2-butanske kiseline
[0760] Rastvor (2E)-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]-2-butanske kiseline (200 mg, 0.42 mmol, 1.00 equiv) u TFA (2 mL) i DCM (10 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo 90 mg (62 %) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS: 348.11 [M+H]<+>.
Korak 4: 6-[4-[(3Z)-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]but-3-enoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril i 6-[4-[(3E)-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]but-2-enoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0761] Rastvor (2E)-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metokis]-2-butanske kiseline (80 mg, 0.23 mmol, 1 equiv), DIPEA (119.1 mg, 0.92 mmol, 4 equiv), HATU (87.6 mg, 0.23 mmol, 1.00 equiv), Int-A4 (43.4 mg, 0.23 mmol, 1.00 equiv) u DMF (2 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN dajući jedinjenja iz naslova, redom, kao belu čvrstu supstancu, izomer A (4.2 mg, 3.5 %). LCMS: 518.20 [M+H]<+>;<1>H NMR (CD3OD, 300 MHz) δ: 8.45 (dd, J = 2.4, 0.8 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.79 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.89 (dd, J = 9.2, 0.8 Hz, 1H), 6.18 (d, J = 6.1, 1.6 Hz, 1H), 4.81 -4.72 (m, 1H), 4.57 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 4.04 (dd, J = 10.8, 3.4 Hz, 1H), 3.84 - 3.62 (m, 8H), 3.57 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 3.41 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 3.10 (dd, J = 7.2,0.6 Hz, 2H), 2.33 - 2.22 (m, 1H), 2.10 - 1.98 (m, 1H), 1.87 - 1.60 (m, 2H), 1.40 - 1.28 (m, 1H) i izomer B (604 mg, 5.4 %), LCMS: 518.20 [M+H]<+>;<1>H NMR (CD3OD, 300 MHz) δ: 8.46 (dd, J = 2.4, 0.8 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.80 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.93 (dd, J = 9.1, 0.8 Hz, 1H), 6.83 (dt, J = 15.2, 3.6 Hz, 1H), 6.47 (dt, J = 15.2, 2.1 Hz, 1H), 4.82 - 4.68 (m, 1H), 4.33 - 4.10 (m, 2H), 3.90 - 3.60 (m, 10H), 3.50 - 3.38 (m, 2H), 2.45 - 2.20 (m, 1H), 2.10 - 1.95 (m, 1H), 1.86 - 1.59 (m, 2H), 1.40 - 1.30 (m, 1H).
Primer 97: 6-[4-[4-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-3-yl]metoksi) cikloheksanankarbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0762]
Korak 1: Metil 4-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-3-yl]metoksi)benzoat
[0763] U struji azota, rastvor 5-[3-(hidroksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (300 mg, 0.76 mmol, 1.00 equiv), metil 4-bromobenzoata (242 mg, 1.13 mmol, 1.50 equiv), Pd[(allyl)Cl2]2(30 mg, 0.10 equiv), Rockphos (60 mg, 0.20 equiv) i Cs2CO3(480 mg, 2.00 equiv) u toluenu (3 mL) je mešan 1h na 80 °C, onda je dobijeni rastvor razblažen sa 50 mL EtOAc i ispran sa 3 x 40 mL H2O, nakon čega su organski slojevi pomešani i koncentrovani pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen pomoću homatografije sa silika gel kolonom i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (46/54, v/v) kako bi se dobilo 330 mg (82 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: 528.21 [M+H]<+>.
Korak 2: Metil 4-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-3-yl]metoksi)cikloheksan-1-karboksilat
[0764] U struji vodonika, rastvor metil 4-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-3-yl]metoksi)benzoata (295 mg, 0.56 mmol, 1.00 equiv) i Rh/Al2O3(600 mg, 2.00 equiv) u MeOH (10 mL) je mešan 16h na RT, onda je čvrsta supstanca profiltrirana i dobijeni rastvor je uparen pod vakuumom kako bi se dobilo 310 mg sirovog jedinjenja iz naslova kao žuto zelenog ulja. LCMS: 534.25 [M+H]<+>.
Korak 3: 4-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-3-yl]metoksi)cikloheksan-1-karboksilana kiselina
[0765] Rastvor metil 4-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-3-yl]metoksi)cikloheksan-1-karboksilata (290 mg, 0.54 mmol, 1.00 equiv) i LiOH (136 mg) u vodi (0.5 mL) i THF (2.5 mL) je mešan 16 h na 40 °C, onda je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom i ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo 145 mg (51 %) jedinjenja iz naslova kao žutog ulja. LCMS: 520.24 [M+H]<+>.
Korak 4: 4-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-3-yl]metoksi)cikloheksan-1-karboksilna kiselina
[0766] Rastvor 4-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-3-yl]metoksi)cikloheksan-1-karboksilne kiseline (145 mg, 0.28 mmol, 1.00 equiv) i TFA (0.5 mL) u DCM (2.5 mL) je mešano 2h na sobnoj temperaturi i onda je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 120 mg jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: 390.16 [M+H]<+>.
Korak 5: 6-[4-[4-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-3-yl]metoksi) cikloheksanekarbonil] piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0767] Rastvor 4-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-3-yl]metoksi)cikloheksan-1-karboksilne kiseline (120 mg, 0.31 mmol, 1.00 equiv), Int-A4 (62 mg, 0.33 mmol, 1.10 equiv), HATU (114 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv) i DIPEA (77 mg, 0.60 mmol, 2.00 equiv) u DMF (5 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi i onda je dobijeni rastvor prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (13.8 mg, 8 %). LCMS: 560.30 [M+H]<+>.<1>H NMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ 8.44 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.79 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 3.86 - 3.69 (m, 11H), 3.59 - 3.43 (m, 4H), 2.79 - 2.71 (m, 1H), 2.63 - 2.54 (m, 1H), 2.20 - 2.10 (m, 1H), 2.03 - 1.78 (m, 5H), 1.55 (t, J = 12.9 Hz, 4H).
Primer 98: 6-[4-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] propanoil) piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0768]
Korak 1: Metil 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl] pirolidin-2-yl]metoksi]propanoat
[0769] Rastvor 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (Primer 31, Korak 1; 1.97 g, 5.01 mmol, 1.00 equiv), NaH (2 g, 83.3 mmol, 10.0 equiv), metil prop-2-enoata (1.72 g, 20.0 mmol, 4.00 equiv) u THF (100 mL) je mešan tokom noći na sobnoj temperaturi. Reakcije je ugašena dodavanjem 200 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 150 mL EtOAc, organski slojevi su spojeni i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću silika gel hromatografije korišćenjem EtOAc/petrol etrom (3/1, v/v) kako bi se dobilo 700 mg (29 %) jedinjenja iz naslova kao svetlo žute čvrste supstance. LCMS: 480.21[M+H]<+>.
Korak 2: Metil 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoat
[0770] Rastvor metil 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoata (700 mg, 1.46 mmol, 1.00 equiv) u HCl/dioksanu (30 mL) je mešan tokom noći na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom kako bi se dobilo 500 mg jedinjenja iz naslova. LCMS: 350.12 [M+H]<+>.
Korak 3: 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanska kiselina
[0771] Rastvor metil 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoata (500 mg, 1.43 mmol, 1.00 equiv), LiOH (171 mg, 7.41 mmol, 5.00 equiv) u MeOH (20 mL) i vodi (5 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo 120 mg jedinjenja iz naslova. LCMS: 336.11 [M+H]<+>.
Korak 4: 6-[4-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil) piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0772] Rastvor 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanske kiseline (110 mg, 0.33 mmol, 1.00 equiv), HATU (125 mg, 0.33 mmol, 1.00 equiv), DIPEA (170 mg, 1.32 mmol, 4.00 equiv), Int-A (62 mg, 0.33 mmol, 1.00 equiv) u DMF (2 mL) je mešan 30min na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (77.7 mg 47 %) u obliku bele čvrste supstance. LCMS: 506.20 [M+H]<+>,<1>H NMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ: 8.42-8.41 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.77 - 7.73 (dd, J = 9.1, 2.3 Hz, 1H), 6.86 - 6.84 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.59 - 4.55 (dd, J = 7.8, 3.8 Hz, 1H), 3.82 - 3.61 (m, 12H), 3.45 - 3.30 (m, 2H), 2.64 - 2.59 (td, J = 5.9, 2.0 Hz, 2H), 2.22 - 2.18 (dr, 1H), 1.98 - 1.93 (p, J = 5.4, 4.7 Hz, 1H), 1.69 - 1.63 (br s, 2H).
Primer 99: N-[4-[(5-cijanopiridin-2-yl)oksi]cikloheksil]-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanamid
[0773]
Korak 1: Sinteza tert-butil N-[4-[(5-cijanopiridin-2-yl)oksi]cikloheksil]karbamat
[0774] Rastvor tert-butil N-(4-hidroksicikloheksil)karbamata (2.26 g, 10.50 mmol, 1.05 equiv), natrijum-hidrida (440 mg, 18.3 mmol, 1.10 equiv), 6-hloropiridin-3-karbonitril (1.38 g, 9.96 mmol, 1.00 equiv) u DMF (45 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ugašen sa 30 ml vode, ekstrahovan sa EtOAc (3 x 30 mL) i organski slojevi su pomešani. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i ekstrahovan sa EtOAc/petrol etrom (1:4) kako bi se dobilo 2 g (63 %) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 318.18 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-(4-aminocikloheksiloksi)nikotinonitril hidrogen hlorida
[0775] Rastvor tert-butil N-[4-[(5-cijanopiridin-2-yl)oksi]cikloheksil]karbamata (146 mg, 0.46 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (3 mL) je mešan 6min na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom kako bi se dobilo 1.2 g sirovog jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 218.13 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza N-[4-[(5-cijnopiridin-2-yl)oksilcikloheksil]-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanamida
[0776] Rastvor 6-(4-aminocikloheksiloksi)nikotinonitril hlorovodonika (52 mg, 0.24 mmol, 1.20 equiv), 3-[[(2S)- 1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanske kiseline (70 mg, 0.21 mmol, 1.00 equiv), HATU (100 mg, 0.26 mmol, 1.50 equiv), DIPEA (62 mg, 0.48 mmol, 2.00 equiv) u DMF (40 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (46.3 mg 41%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 535.30 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Hloroform-d) δ 8.53 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.95 (dd, J = 8.7, 2.4 Hz, 1H), 6.87 (dd, J = 8.7, 0.8 Hz, 1H), 5.09 - 4.91 (m, 1H), 4.69 - 4.68 (m, 1H), 3.75 - 3.60 (m, 5H), 3.49 - 3.34(m, 2H), 2.40 - 2.36 (m, 2H), 2.21 - 2.15 (m, 3H), 2.06 - 1.97(m, 3H), 1.74 - 1.57(m, 4H), 1.44 - 1.39 (m, 2H).
Primer 100: 6-[(3R)-3-metil-4-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril i 6-[(3S)-3-metil-4-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0777]
Korak 1: Sinteza tert-butil 4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-karboksilata
[0778] Rastvor tert-butil piperazin-1-karboksilata (1 g, 5.37 mmol, 1.00 equiv), 6-hloropiridin-3-karbonitrila (690 mg, 4.98 mmol, 1.00 equiv), kalijum-karbonata (1.4 g, 10.13 mmol, 2.00 equiv), NMP (20 mL) je mešan 1h na 80 °C. Dobijeni rastvor je ugašen sa 100 ml vode, ekstrahovano sa 2x100 mL EtOAc, organski slojevi su pomešani i koncentrovani pod vakuumom kako bi se dobilo 1.2 g (78 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 303.15 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-(piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitril hidrohlorida
[0779] Rastvor tert-butil 4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-karboksilata (1.2 g, 4.16 mmol, 1.00 equiv), dioksan/HCl (10 mL). Dobijeni rastvor je mešan 30 min na 25 °C. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom kako bi se dobilo 800 mg (86 %) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 203.22 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 6-[(3R)-3-metil-4-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila i 6-[(3S)-3-metil-4-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0780] Rastvor 3-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi propanske kiseline (100 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv), 6-(3-metilpiperazin-1-yl)piridin-3-karbonitril hidrohlorida (60 mg, 0.25 mmol, 1.00 equiv), HATU (110 mg, 0.29 mmol, 1.00 equiv), DIPEA (1 mL), DMF (2 mL). Dobijeni rastvor je mešan 2h na 25 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC dajući (nakon proizvoljnog određivanja stereohemije) jedinjenja iz naslova, redom, kao bele čvrste supstance, izomer A (6.0 mg, 15 %). LCMS (ESI, m/z): 520.30 [M+H]<+>,<1>HNMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 12.07(s, 1 H), 8.42(d, J = 2.4 Hz, 1 H), 7.93(s, 1 H), 7.81(d, J = 4.0 Hz, 1 H), 6.86 (d, J = 11.6 Hz, 1 H), 4.60-4.30 (m, 2 H), 4.25-4.18(m, 2 H), 4.01-3.80(br, 1 H), 3.72-3.58(m, 2 H),3.50-3.10(m, 7H), 2.62-3.32(m, 2H), 2.15-2.01(br, 1H), 1.98-1.82(br, 1H), 1.68-1.73(m, 2 H), 1.12-1.23(d, J = 8.8 Hz, 3 H). tR = 1.238 min (CHIRALPAK IG, 20*250mm,5 um, Hex(0.1%DEA):EtOH=80:20, 1.0mL/min) i izomer B (4.7 mg, 12 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 520.30 [M+H]<+>, tR = 1.233 min (CHIRAL Cellulose-SB, 0.46*15cm;5um, Hex(0.1%DEA):EtOH=80:20, 1.0mL/min).<1>HTME-NMR (DMSO-d6, 353k , 400 MHz) δ: 12.07(s, 1 H), 8.42(d, J = 2.4 Hz, 1 H), 7.93(s, 1 H), 7.81(d, J = 4.0 Hz, 1 H), 6.86 (d, J = 11.6 Hz, 1 H), 4.60-4.30 (m, 2 H), 4.25-4.18(m, 2 H), 4.01-3.80(br, 1 H), 3.72-3.58(m, 2 H),3.50-3.10(m, 7H), 2.62-3.32(m, 2H), 2.15-2.01(br, 1 H), 1.98-1.82(br, 1 H), 1.68-1.73(m, 2 H), 1.12-1.23(d, J = 8.8 Hz, 3 H).
Primer 101: 6-[5-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)-2,5-diazabiciklo[2.2.2]oktan-2-yl]piridin-3-karbonitril
[0781]
Korak 1: Sinteza tert-butil 5-(5-cijanopiridin-2-yl)-2,5-diazabiciklo[2.2.2]oktan-2-karboksilata
[0782] Rastvor tert-butil 2,5-diazabiciklo[2.2.2]oktan-2-karboksilata (1 g, 4.71 mmol, 1.00 equiv), kalijum-karbonata (1.3 g, 9.41 mmol, 2.00 equiv), 6-hloropiridin-3-karbonitrila (651 mg, 4.70 mmol, 1.00 equiv) u DMF (10 mL) je mešan 2h na 80 °C u uljanom kupatilu. Nakon koncentrovanja, ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:3) kako bi se dobilo 940 mg (63 %) jedinjenje iz naslova kao čvrste supstanca. LCMS (ESI, m/z): 315.17 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-[2,5-diazabiciklo[2.2.2]oktan-2-yl]piridin-3-karbonitril hidrohlorid
[0783] Rastvor tert-butil 5-(5-cijanopiridin-2-yl)-2,5-diazabiciklo[2.2.2]oktan-2-karboksilat (300 mg, 0.95 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (5 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo 180 mg (75 %) jedinjenja iz naslova kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 215.12 [M-Cl]<+>.
Korak 3: Sinteza 6-[5-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)-2,5-diazabiciklo[2.2.2]oktan-2-yl]piridin-3-karbonitrila
[0784] Rastvor 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanske kiseline (100 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv), HATU (114 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv), DIPEA (155 mg, 1.20 mmol, 4.00 equiv), 6-2,5-diazabiciklo[2.2.2]oktan-2-ylpiridin-3-karbonitril hidrohlorida (86 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv) u DMF (2 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN i dodatno prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (42.7 mg 27 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 532.22 [M+H]<+>,<1>H NMR (Metanol-d4, 400 MHz) δ: 8.39 - 8.38 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.11 - 8.07 (m, 1H), 7.75 - 7.71 (dt, J = 9.0, 2.1 Hz, 1H), 6.55-6.65 (dr, 1H), 5.05 (dr, 1H), 4.56 - 4.49 (dr, 2H), 3.79 - 3.36 (m, 10H), 2.64 - 2.56 (m, 1H), 2.51 - 2.47 (m, 1H), 2.17 (dr, 1H), 2.03 - 1.88 (m, 5H), 1.69 - 1.67 (d, J = 5.9 Hz, 2H).
Primer 102: 6-[3-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-yl]piridin-3-karbonitril
[0785]
Korak 1: Sinteza tert-butil 8-(5-cijanopiridin-2-yl)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-karboksilata
[0786] Rastvor tert-butil 3,8-diazabicyiklo[3.2.1]oktan-3-karboksilata (1 g, 4.71 mmol, 1.00 equiv), kalijum-karbonata (1.3 g, 9.41 mmol, 2.00 equiv), 5-hloropiridin-2-karbonitrila (651 mg, 4.67 mmol, 1.00 equiv) u DMF (10 mL) je mešan 2h na 80°C u uljanom kupatilu. Čvrsta supstanca je profiltrirana. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x20 mL etra i organski slojevi su spojeni. Nakon koncentrovanja, ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:2) kako bi se dobio 1 g (68 %) jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 315.17 [M+H]<+>. Korak 2: Sinteza 6-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-ylpiridin-3-karbonitril hidrohlorida
[0787] Rastvor tert-butil 8-(5-cijanopiridin-2-yl)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-3-karboksilata (300 mg, 0.95 mmol, 1.00 equiv) u dioksan/HCl (10 mL) je mešan 1h na sobnoj teperaturi. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom kako bi se dobilo 170 mg (83 %) jedinjenja iz naslova kao žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 215.12 [M-Cl]<+>.
Korak 3: Sinteza 6-[3-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)-3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktan-8-yl]piridin-3-karbonitrila
[0788] Rastvor 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanske kiseline (100 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv), HATU (114 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv), DIPEA (155 mg, 1.20 mmol, 4.00 equiv), 6-3,8-diazabiciklo[3.2.1]octan-8-ylpiridin-3-karbonitril hidrohlorida (86 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv) u DMF (2 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Nakon koncetrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN i dodatno prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (85.4 mg 54 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 532.22 [M+H]<+>,<1>H NMR (Metanol-d4, 400 MHz) δ: 8.42 (dd, J = 2.4, 0.8 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 7.75 (dd, J = 9.0, 2.3 Hz, 1H), 6.84 (dd, J = 9.0, 0.8 Hz, 1H),4.85 (m,1H) 4.71 (dr, 2H), 4.55 (dr, 1H), 4.27-4.23 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 3.75 - 3.69 (m, 5H), 3.44 - 3.41 (m, 2H), 2.91-2.86 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 2.60 - 2.55 (m, 2H), 2.03-2.01 (dr, 1H), 1.96 - 1.82 (m, 3H), 1.75 - 1.68 (m, 4H).
Primer 103: 6-[2-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-yl]piridin-3-karbonitril
[0789]
Korak 1: Sinteza tert-butil 8-(5-cijanopiridin-2-yl)-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-2-karboksilata
[0790] Rastvor tert-butil 2,8-diazaspiro[4.5]dekan-2-karboksilata (300 mg, 1.25 mmol, 1.00 equiv), 6-hloropiridin-3-karbonitrila (345 mg, 2.49 mmol, 2.00 equiv) i kalijum-karbonata (345 mg, 2.50 mmol, 2.00 equiv) u NMP (10 mL) je mešan 1h na 80 °C, onda je dobijeni rastvor razblažen sa 45 mL vode, ekstrahovan sa 2x20 mL EtOAc, nakon čega su organski slojevi spojeni i koncentrovani pod vakuumom kako bi se dobilo 650 mg (sirovo) jedinjenja iz naslova kao braon čvrste supstance . LCMS (ESI, m/z): 343.21 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-[2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-yl]piridin-3-karbonitril
[0791] Rastvor tert-butil 8-(5-cijanopiridin-2-yl)-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-2-karboksilata (640 mg, 1.87 mmol, 1.00 equiv) i TFA (1 mL) u DCM (5 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi i onda je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 1 g (sirovo) jedinjenja iz naslova u obliku braon ulja. LCMS (ESI, m/z): 243.16 [M+H<]+>. Korak 3: Sinteza 6-[2-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-yl]piridin-3-karbonitrila
[0792] Rastvor 6-[2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-yl]piridin-3-karbonitrila (109 mg, 0.45 mmol, 1.50 equiv), 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanske kiseline (100 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv), HATU (114 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv) and DIPEA (77 mg, 0.60 mmol, 2.00 equiv) u DMF (2 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi i onda je dobijeni rastvor prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Nakon koncentrovanja, ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (97 mg, 58%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 560.30 [M+H]<+>,<1>HNMR (Metanol-d4, 300MHz) δ 8.44 (d, J = 1.8Hz, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.79 (dd, J = 9.0, 2.4Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.7Hz, 1H), 3.86-3.69 (m, 11H), 3.59-3.43 (m, 4H), 2.79-2.71 (m, 1H), 2.63-2.54 (m, 1H), 2.20-2.10 (m, 1H), 2.03-1.78 (m, 5H), 1.55 (t, J = 12.9 Hz, 4H).
Primer 104: 6-[8-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] propanoil)-2,8-diazaspiro[4.5] dekan-2-yl]piridin-3-karbonitril
[0793]
Korak 1: Sinteza tert-butil 2-(5-cijanopiridin-2-yl)-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-karoksilata
[0794] Rastvor tert-butil 2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-karboksilata (300 mg, 1.25 mmol, 1.00 equiv), K2CO3(345 mg, 2.50 mmol, 2.00 equiv) i 6-bromopiridin-3-karbonitrila (465 mg, 2.54 mmol, 2.00 equiv) u NMP (20 mL) je mešan 2h na 80 °C u uljanom kupatilu, onda je dobijeni rastvor razbležen sa 200 mL H2O, ekstrahovan sa 3x50 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni, pomešani sa 1x50 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida, osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovani pod vakuumom kako bi se dobilo 220 mg (51 %) jedinjenja iz naslova kao braon čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 343.21[M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-[2,8-diazaspiro[4.5]dekan-2-yl]piridin-3-karbonitrila
[0795] Rastvor tert-butil 2-(5-cijanopiridin-2-yl)-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-8-karboksilata (200 mg, 0.58 mmol, 1.00 equiv) i TFA (1.5 mL) u DCM (7mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi i onda je dobijeni rastvor koncntrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 155 mg (57.5 %) jedinjenja iz naslova kao braon čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 243.16 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 6-[8-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)-2,8-diazaspiro[4.5]dekan-2-yl]piridin-3-karbonitrila
[0796] Rastvor 3-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi propanske kiseline (100 mg, 0.30 mmol, 1.20 equiv), HATU (100 mg, 0.26 mmol, 1.00 equiv), DIPEA (67 mg, 0.52 mmol, 2.00 equiv) i 6-[2,8-diazaspiro[4.5]dekan-2-yl]piridin-3-karbonitrila (51 mg, 0.21 mmol, 1.00 equiv) u DMF (15 mL) je mešan 40 min na sobnoj temperaturi, onda je dobijeni rastvor razblažen sa 50 mL H2O, ekstrahovan sa 3x50 mL EtOAc i organski slokevi u pomešani, isprani sa 1x50 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida i koncentrovani pod vakuumom, a onda je ostatak prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (45.6 mg,45.6 %) u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 560.15 [M+H]<+>,<1>HNMR (CD3OD, 300 MHz) δ 8.38 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.74 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.61 (s, 1H), 3.82-3.36 (m, 14H), 2.61(d, J = 4.8Hz, 2H), 2.25-2.21 (m, 1H), 2.05-1.97 (m,3H), 1.76-1.57 (m,6H).
Primer 105: 6-[2-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl]piridin-3-karbonitril
[0797]
Korak 1: Sinteza tert-butil 7-(5-cijanopiridin-2-yl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-karboksilata
[0798] Rastvor tert-butil 2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-karboksilata (300 mg, 1.33 mmol, 1.00 equiv), 6-hloropiridin-3-karbonitrila (495 mg, 3.57 mmol, 2.00 equiv) i K2CO3(375 mg, 2.71 mmol, 2.00 equiv) u NMP (20 mL) je mešan 2h na 80°C, onda je dobijeni rastvor razblažen sa 200 mL H2O, ekstrahovan sa 3x50 mL EtOAc, organski slojevi su spojeni, isprani sa 1x50 mL vodenog rastvora natrijum-hlorida, osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovani pod vakuumom kako bi se dobilo 336 mg (77 %) jedinjenja iz naslova kao braon čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 329.19[M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-[2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl]piridin-3-karbonitrila
[0799] Rastvor tert-butil 7-(5-cijanopiridin-2-yl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-karboksilata (316 mg, 0.96 mmol, 1 equiv) i TFA (1.5 mL) u DCM (7 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi i onda je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 198 mg (90.14%) jedinjenja iz naslova kao svetlo braon čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 229.14 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 6-[2-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl]piridin-3-karbonitrila
[0800] Rastvor 3-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi propanske kiseline (100 mg, 0.30 mmol, 1.20 equiv), HATU (100 mg, 0.26 mmol, 1.00 equiv), DIPEA (66 mg, 0.51 mmol, 2.00 equiv) i 6-[2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl]piridin-3-karbonitrila (58 mg, 0.25 mmol, 1.00 equiv) u DMF (15 mL) je mešan 40 min na sobnoj temperaturi, onda je dobijeni rastvor razblažen sa 20 ml H2O, ekstrahovan sa 3x20 ml EtOAc, organski slojevi su pomešani, isprani sa 1x20 ml koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida i koncentrovani pod vakuumom, a onda je ostatak prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz (73.5 mg, 53.0 %)kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 546.15 [M+H]<+>,<1>HNMR (CD3OD, 300 MHz) δ 8.40 (d, J = 2.4, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.74 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.61 (s, 1H), 3.92(s, 2H), 3.80-3.61 (m, 10H), 3.43 (dd, J = 10.1, 7.7 Hz, 2H), 2.34 (t, J = 6.0Hz, 2H), 2.23 (t, J= 5.4Hz, 1H), 2.05-1.97 (m, 1H), 1.87-1.65 (m, 6H).
Primer 106: (S)-6-(4-(3-((1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl)metoksi)propanoil)-1,4-diazepan-1-yl)nikotinonitril
[0801]
Korak 1: Sinteza tert-butil 4-(5-cijanopiridin-2-yl)-1,4-diazepan-1-karboksilata
[0802] Rastvor tert-butil 1,4-diazepan-1-karboksilata (1.5 g, 7.49 mmol, 1.00 equiv), 6-hloropiridin-3-karbonitrila (1.174 g, 8.47 mmol, 1.05 equiv), kalijum-karbonata (3.353 g, 24.26 mmol, 3.00 equiv) u NMP (20 mL) je mešan 1.5h na 80 °C. Dobojeni rastvor je ugašen sa 30 ml H2O, ekstrahovan EtOAc (3 x 30 mL) i organski slojevi su pomešani. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:1) kako bi se dobilo 2 g (88 %) jedinjenja iz nalsova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 303.17 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-(1,4-diazepan-1-yl)piridin-3-karbonitrila
[0803] Rastvor tert-butil 4-(5-cijanopiridin-2-yl)-1,4-diazepan-1-karboksilata (1 g, 3.31 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (20 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo 225 mg (34 %) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 203.12 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza (S)-6(4-(3-((1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl)metoksi)propanoil)-1,4-diazepan-1-yl)nikotinonitrila
[0804] Rastvor 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanke kiseline (100 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv), 6-(1,4-diazepan-1-yl)piridin-3-karbonitrila (72.72 mg, 0.36 mmol, 1.20 equiv), HATU (171 mg, 0.45 mmol, 1.50 equiv), DIPEA (116.1 mg, 0.90 mmol, 3.00 equiv) u DMF (3 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC i eluiran sa H2O/CH3CN dajući jedinjenje iz naslova (139 mg, 90 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 520.15 [M+H]<+>,<1>HNMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ:8.41 (t, J = 3.2Hz, 1H), 8.11 (dd, J = 7.1 Hz,5.9 Hz, 1H), 7.74 - 7.71 (m, 1H), 6.79 (dd, J = 2.4 Hz, 2.7 Hz, 1H), 4.87 (s, 1H), 3.95 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 3.89 - 3.63 (m, 9H), 3.62- 3.50 (m, 2H), 3.49 - 3.37 (m, 2H), 2.55- 2.54 (m, 2H), 2.05 (s, 1H),1.94 - 1.91 (m, 3H), 1.89 -1.68 (m, 2H).
Primer 107: 6-[[1-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] propanoil)azetidin-3-yl]amino]piridin-3-karbonitril
[0805]
Korak 1: Sinteza tert-butil 3-[(5-cijanopiridin-2-yl)amino]azetidin-1-karboksilata
[0806] Rastvor tert-butil 3-aminoazetidin-1-karboksilata (1 g, 5.81 mmol, 1.00 equiv), kalijum-karbonata (1.6 g, 11.58 mmol, 2.00 equiv) i 5-hloropiridin-2-karbonitrila (801 mg, 5.74 mmol, 1.00 equiv) u DMF (10 mL) je mešan 2h na 80 °C. Dpbijena smša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1/1) ) kako bi se dobilo 300 mg (19 %) jedinjenja iz naslova u obliku bezbojnog ulja. LCMS (ESI, m/z): 275.32 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-[(azetidin-3-yl)amino]piridin-3-karbonitril hidrohlorida
[0807] Rastvor tert-butil 3-[(5-cijanopiridin-2-yl)amino]azetidin-1-karboksilata (264 mg, 0.96 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (10 mL) je mešan 2h na 25°C. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom kako bi se dobilo 170 mg (sirovo) jedinjenja iz naslova kao žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 175.20 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 6-[[1-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] propanoil)azetidin-3-yl]amino]piridin-3-karbonitrila
[0808] Rastvor 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanske kiseline (100 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv), HATU (114 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv), DIPEA (155 mg, 1.20 mmol, 4.00 equiv) i 6-[(azetidin-3-yl)amino]piridin-3-karbonitril hidrohlorida (74 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv) u DMF (2 mL) je mešan 1h na 25 °C. Sirovi produkt je prečišćen pomoću Flash-Prep dajući jedinjenje iz naslova (94.7 mg, 65%) kao belu čvrstu supstacu. LCMS (ESI, m/z): 492.20 [M+H]<+>,<1>H-NMR (CD3OD, 400MHz) δ: 8.36 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.65 (dd, J = 8.8, 2.3 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.66 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.47 (dt, J = 16.5, 8.5 Hz, 1H), 4.29 (dt, J = 17.8, 8.5 Hz, 1H), 4.00 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 3.83 (dd, J = 10.2, 5.1 Hz, 1H), 3.76 - 3.55 (m, 2H), 3.48 - 3.33 (m, 1H), 2.33 (dd, J = 14.9, 8.1 Hz, 1H), 2.45 - 2.20 (m, 3H), 2.00 - 1.91 (m, 1H), 1.81 - 1.68 (m,2H).
Primer 108: 6-[6-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)-2,6-diazaspiro[3.3]heptan-2-yl]piridin-3-karbonitril
[0809]
Korak 1: Sinteza tert-butil 6-(5-cijanopiridin-2-yl)-2,6-diazaspiro[3.3]heptan-2-karboksilat
[0810] Rastvor tert-butil 2,6-diazaspiro[3.3]heptan-2-karboksilata (500 mg, 2.52 mmol, 1.00 equiv), kalijumkarbonata (1.05 mg, 0.01 mmol, 3.00 equiv), 6-hloropiridin-3-karbonitrila (383.3 mg, 2.77 mmol, 1.10 equiv) u DMF (10 mL) je mešan 2h na 100°C. Dobijeni rastvor je ugašen sa 50 ml vode. Onda je rastvor ekstrahovan sa (3x50 mL) EtOAc i organski slojevi su spojeni. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/heksanom (50:50) kako bi se dobilo 360 mg (48 %) jedinjenja iz nalsova kao žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 301.17 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-[2,6-diazaspiro[3.3]heptan-2-yl]piridin-3-karbonitrila
[0811] Rastvor tert-butil 6-(5-cijanopiridin-2-yl)-2,6-diazaspiro[3.3]heptan-2-karboksilata (300 mg, 1.00 mmol, 1.00 equiv), TFA (2 mL) u DCM (10 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom kako bi se dobilo 180 mg sirovog jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 201.12 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 6-[6-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)-2,6-diazaspiro[3.3]heptan-2-yl]piridin-3-karbonitril
[0812] Rastvor 6-[2,6-diazaspiro[3.3]heptan-2-yl]piridin-3-karbonitrila (100 mg, 0.50 mmol, 1.00 equiv), HATU (136 mg, 0.36 mmol, 1.20 equiv), DIPEA (115 mg, 0.89 mmol, 3.00 equiv), 3-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pyrrolidin-2-yl]metoksi propanska kiselina (72 mg, 0.21 mmol, 1.20 equiv) u DMF (3 mL) je mešana 2h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je ostatak dalje prečišćen sa Prep-HPLC dajući jedinjenje iz nalsova (42.7 mg, 17 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 518.10 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.37 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.74 (dd, J = 8.8, 2.2 Hz, 1H), 6.48 (dd, J = 8.9, 0.8 Hz, 1H), 4.61 (q, J = 7.8, 3.3 Hz, 1H), 4.41 4.21 (m, 6H), 4.17 (s, 2H), 3.86 - 3.54 (m, 4H), 3.49 - 3.33 (m, 1H), 3.33 - 3.31 (m, 1H), 2.33 - 2.22 (m, 3H), 2.02 -1.98 (m, 1H), 1.77-1.65 (m, 2H).
Primer 109: 6-[2-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] propanoil)-2,6-diazaspiro[3.4]oktan-6-yl]piridin-3-karbonitril
[0813]
Korak 1: Sinteza tert-butil 6-(5-cijanopiridin-2-yl)-2,6-diazaspiro[3.4]oktan-2-karboksilata
[0814] Rastvor tert-butil 2,6-diazaspiro[3.4]oktan-2-karboksilata (300 mg, 1.41 mmol, 1.00 equiv), 6-hloropiridin-3-karbonitrila (390 mg, 2.81 mmol, 2.00 equiv) i K2CO3(390 mg, 2.82 mmol, 2.00 equiv) u NMP (10 mL) je mešan 4h na 80 °C, onda je dobijeni rastvor razblažen sa 200 mL H2O, ekstrahovan sa 3x50 mL EtOAc, organski slojevi su spojeni, isprani sa 1x50 mL vodenog rastvora natrijum-hlorida, osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom, a onda je ostatak nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (40/60) kako bi se dobilo 380 mg (86 %) jedinjenja iz nalsova kao žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z):315.17 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-[2,6-diazaspiro[3.4]oktan-6-yl]piridin-3-karbonitrila
[0815] Rastvor tert-butil 6-(5-cijanopiridin-2-yl)-2,6-diazaspiro[3.4]oktan-2-karboksilata (360 mg, 1.15 mmol, 1.00 equiv) i TFA (4 mL) u DCM (20 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi i onda je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 730 mg jedinjenja iz naslova kao žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 215.12 [M+H]<+>. Korak 3: Sinteza 6-[2-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)-2,6-diazaspiro[3.4]oktan-6-yl]piridin-3-karbonitrila
[0816] Rastvor 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanske kiseline (100 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv), HATU (113 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv), DIPEA (116 mg, 0.90 mmol, 3.00 equiv) i 6-2,6-diazaspiro[3.4]oktan-6-ylpiridin-3-karbonitrila (96 mg, 0.45 mmol, 1.50 equiv) u DMF (8 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi, onda je dobijeni rastvor rastvoren sa 30 mL H2O, ekstrahovan sa 3x30 mL EtOAc, organski slojevi su spojeni, isprani sa 2x30 mL vodenim rastvorom natrijum-hlorida, osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom, a onda je statak prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (22.6 mg, 14 %) kao belu čvrstu supstance. LCMS (ESI, m/z): 532.10 [M+H]<+>,<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12.36 (s, 1H), 8.47 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.84 (dd, J = 9.0, 2.3 Hz, 1H), 6.56 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 4.53 (s, 1H), 4.06 (dd, J = 8.4, 3.8 Hz, 1H), 3.99 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 3.82-3.77 (m, 2H), 3.68-3.49 (m, 8H), 3.38-3.36(m,1H), 3.24-3.19 (m, 1H), 2.27-2.07 (m, 5H), 1.89 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 1.65 (dd, J = 17.2, 5.9 Hz, 2H).
Primer 110: 6-[4-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] propanoil)-oktahidropirolo [3,2-b] pirol-1-yl] piridin-3-karbonitril
[0817]
Korak 1: Sinteza tert-butil 4-(5-cijanopiridin-2-yl)-oktahidropirolo[3,2-b]pirol-1-karboksilata
[0818] Rastvor tert-butil oktahidropirolo[3,2-b]pirol-1-karboksilata (200 mg, 0.94 mmol, 1.00 equiv), 6-hloropiridin-3-karbonitrila (260 mg, 1.88 mmol, 2.00 equiv) i K2CO3(260 mg, 1.88 mmol, 2.00 equiv) u NMP (10 mL) je mešan 2h na 80°C, onda je dobijeni rastvor razblažen sa 200 mL H2O, ekstrahovan sa 3x50 mL EtOAc organski slojevi su spojeni, isprani sa 1x50 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida, osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom, a onda je ostatak nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (2:3) kako bi se dobilo 284 mg (96 %) jedinjenja iz naslova u obliku svetlo žuto ulja. LCMS (ESI, m/z): 315.18[M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-[oktahidropirolo[3,2-b]pirol-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0819] Rastvor tert-butil 4-(5-cijanopiridin-2-yl)-oktahidropirolo[3,2-b]pirol-1-karboksilata (238 mg, 0.76 mmol, 1.00 equiv) i TFA (1 mL) u DCM (5 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi i onda je dobijeni rastvor uparen pod vakuumom kako bi se dobilo 150 mg jedinjenja iz naslova u obliku žutog sirovog ulja. LCMS (ESI, m/z): 215.13 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 6-[4-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)-oktahidropirolo[3,2-b]pirol-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0820] Rastvor 3-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi propanske kiseline (100 mg, 0.30 mmol, 1.50 equiv), HATU (113 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv), DIPEA (77 mg, 0.60 mmol, 2.00 equiv) i 6-[oktahidropirolo[3,2-b]pirol-1-yl]piridin-3-karbonitrila (100 mg, 0.47 mmol, 1.00 equiv) u DMF (10 mL) je mešan 40 min na sobnoj temperaturi, onda je dobijeni rastvor razblažen sa 20 ml H2O, ekstrahovan sa 3x20 ml EtOAc, organski slojevi su pomešani, isprani sa 1x20 ml koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida i koncntrovani pod vakuumom, a onda je ostatak prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (46.7 mg, 19.0 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z):532.10 [M+H]<+>,<1>HNMR (CD3OD, 300 MHz) δ 8.43 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.15 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.78 (dt, J = 8.9, 2.5 Hz, 1H), 6.67 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.70-4.62 (m, 3H), 3.78 -3.36 (m, 10H), 2.59 (t, J = 2.1 Hz, 2H), 2.40-1.97 (m, 6H), 1.82-1.69 (m, 2H).
Primer 111: 6-[7-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)-2,7-diazaspiro[4.4]nonan-2-yl]piridin-3-karbonitril
[0821]
Korak 1: Sinteza tert-butil 7-(5-cijanopiridin-2-yl)-2,7-diazaspiro[4.4]nonan-2-karboksilata
[0822] Rastvor 6-hloropiridin-3-karbonitrila (610 mg, 4.40 mmol, 1.00 equiv), kalijum-karbonata (1.2 g, 8.68 mmol, 3.00 equiv), tert-butil 2,7-diazaspiro[4.4]nonane-2-karboksilata (1 g, 4.42 mmol, 1.00 equiv) u DMF (30 mL) je mešan 2h na 80 °C. Dobijenir astvor je ugašen sa 30 ml vode. Onda je ektrahova sa EtOAc (3 x 30 mL) i organski slojevi su pomešani. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:4) kako bi se dobilo 1.2g (83.1 %) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 329.20 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-[2,7-diazaspiro[4.4]nonan-2yl]piridin-3-karbonitrila
[0823] Rastvor tert-butil 7-(5-cijanopiridin-2-yl)-2,7-diazaspiro[4.4]nonan-2-karboksilata (118 mg, 0.36 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (5 mL) je mešan 20 min na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom kako bi se dobilo 100 mg sirovog jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 229.14 [M+H]<+>. Korak 3: Sinteza 6-[7-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)-2,7-diazaspiro[4.4]nonan-2-yl]piridin-3-karbonitrila
[0824] Rastvor 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanske kiseline (100 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv), HATU (148 mg, 0.39 mmol, 1.30 equiv), DIEA (77.4 mg, 0.60 mmol, 2.00 equiv), 6-[2,7-diazaspiro[4.4]nonan-2-yl]piridin-3-karbonitrila (82 mg, 0.36 mmol, 1.20 equiv) u DMF (5 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN dajući jedinjenje iz naslova (75.1 mg, 46 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 546.20 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Chloroform-d) δ 8.39 (s, 1H), 8.13 (dd, J = 2.4, 0.8 Hz, 1H), 7.73 (dd, J = 8.7, 2.4 Hz, 1H), 6.59 (dd, J = 8.7, 0.8 Hz, 1H), 4.71 - 4.45(m, 1H), 3.93 - 3.74 (m, 1H), 3.74 - 3.61(m, 6H), 3.57 - 3.49(m, 4H), 3.48 - 3.39(m, 3H), 2.53 - 2.50(m, 2H), 2.26 - 2.14 (m, 1H), 2.11 - 1.92(m, 5H), 1.83 - 1.53(m, 2H).
Primer 112: 6-((1S,4S)-5-(3-(((S)-1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl)metoksi)propanoil)-2,5-diaza-biciklo[2.2.1]heptan-2-yl)nikotinonitril i 6-((1R,4R)-5-(3-(((S)-1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl)metoki)propanoil)-2,5-diazabicyclo[2.2.1]heptan-2-yl)nikotinonitril
[0825]
Korak 1: Sinteza tert-butil 5-(5-cijanopiridin-2-yl)-2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-karboksilata
[0826] Rastvor tert-butil 2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-karboksilata (600 mg, 3.03 mmol, 1.00 equiv), 6-hloropiridin-3-karbonitrila (460 mg, 3.32 mmol, 1.10 equiv), kalijum-karbonata (1.254 g, 17.16 mmol, 3.00 equiv) u DMF (10 mL) je mešan 1.5h na 80 °C. Dobijeni rastvor je ugašen sa 40 ml vode. Rastvor je estrahovan sa EtOAc (3 x 40 mL) i organski slojevi su spojeni. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/heksanom (1:1) kako bi se dobilo 770 mg (85%) jedinjenja iz naslova kao žuta čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 301.16 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-[2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-yl]piridin-3-karbonitrila
[0827] Rastvor tert-butil 5-(5-cijanopiridin-2-yl)-2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-karboksilata (740 mg, 2.46 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (15 mL) je mešan 0.5h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom kako bi se dobilo 480 mg sirovog jedinjenja iz naslova u obliku svetlo žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 201.11 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 6-((1S,4S)-5-(3-(((S)-1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl)metoksi)propanoil)-2,5-diaza-biciklo[2.2.1]heptan-2-yl)nikotinonitrila i 6-((1R,4R)-5-(3-(((S)-1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl)metoksi)propanoil)-2,5-diaza-bicklo[2.2.1]heptan-2-yl)nikotinonitrila
[0828] Rastvor 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanske kiseline (100 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv), 6-[2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-yl]piridin-3-karbonitrila (72 mg, 0.36 mmol, 1.20 equiv), HATU (171 mg, 0.45 mmol, 1.50 equiv), DIEA (116.1 mg, 0.90 mmol, 3.00 equiv) u DMF (3 mL) je mešan 1.5h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC dajući (nakon proizvoljnog utvrđivanja stereohemije) jedinjenja iz naslova, redom, kao bele čvrste supstance, izomer A (11.4 mg, 20%) LCMS (ESI, m/z): 518.15 [M+H]<+>,<1>HNMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ: 8.39 (s, 1H), 8.07 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.61 (s, 1H), 5.07 - 4.95 (m, 2H), 4.80 (s, 1H), 4.69 - 4.42 (m, 1H), 3.95 - 3.30 (m, 9H), 2.69 (d, J = 15 Hz, 1H), 2.41 (s, 1H), 2.33 - 2.06 (m, 4H),1.97 (d, J = 10.0 Hz, 2H). tR = 5.199 min (CHIRAL Cellulose- SB,0.46∗ 10cm;3um, Hex(20mMNH3):EtOH=60:40, 1.0mL/min) i izomer B (19 mg, 20 %) LCMS (ESI, m/z): 518.15 [M+H]<+>, tR = 6.858 min ((CHIRAL Cellulose-SB, 0.46*10cm; 3um, Hex(20mMNH3):EtOH=60:40, 1.0mL/min).
Primer 113: (S)-6-[5-(3-[[1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)-oktahidropirolo[3,4-c]pirol-2-yl]piridin-3-karbonitril
[0829]
Korak 1: Sinteza tert-butil 5-(5-cijanopiridin-2-yl)-oktahidropirolo[3,4-c]pirol-2-karboksilata
[0830] Rastvor tert-butil oktahidropirolo[3,4-c]pirol-2-karboksilata (1 g, 4.71 mmol, 1.00 equiv), 6-hloropiridin-3-karbonitrila (650 mg, 4.69 mmol, 1.00 equiv), kalijum-karbonata (1.3 g, 9.41 mmol, 2.00 equiv), NMP (20 mL). Dobijeni rastvor je mešan 1h na 80 °C. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 100 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni i upareni pod vakumom kako bi se dobilo 1.1 g (74 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 315.25 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-[oktahidropirolo[3,4-c]pirol-2-yl]piridin-3-karbonitril hlorovodonika
[0831] Rastvor tert-butil 5-(5-cijanopiridin-2-yl)-oktahidropirolo[3,4-c]pirol-2-karboksilata (860 mg, 2.74 mmol, 1.00 equiv), dioksan/HCl (10 mL). Dobijeni rastvor je mešan 1h na 25 °C. Čvrsta supstanca je profiltrirana. Dobijena smeša je uparena pod vakuumom kako bi se dobilo 500 mg (85 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 215.22 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza (S)-6-[5-(3-[[1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)-oktahidropirolo[3,4-c]pirol-2-yl]piridin-3-karbonitrila
[0832] Rastvor (S)-3-[[1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanske kiseline (170 mg, 0.51 mmol, 1.00 equiv), 6-[oktahidropirolo[3,4-c]pirol-2-yl]pridine-3-karbonitril hlorovodonika (200 mg, 0.93 mmol, 1.00 equiv), HATU (190 mg, 0.50 mmol, 1.00 equiv), DIEA (1 mL), DMF (4 mL). Dobijeni rastvor je mešan 1h na 25 °C. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću Flash-Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (49.3 mg, 18 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 510.15 [M+H]<+>,<1>HNMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 12.35(s, 1 H), 8.47(s, 1 H), 8.00(d, J = 4.0 Hz, 1 H), 7.82(d, J = 8.8 Hz, 1 H), 6.54(d, J = 5.2 Hz, 1 H), 4.49-4.51(m, 1 H), 4.01-3.46(m, 12 H), 3.26-3.20(m, 2 H), 3.11-2.90(m, 2 H), 2.46-2.38(m, 2 H), 2.10-2.03(m, 1 H), 1.92-1.88(m, 1 H), 1.65-1.78(m, 2 H). tR = 2.648 min (XBridge Prep OBD C18 Column 30*150mm Sum Water(NH4HCO3):CH3CN=70:30, 1.0mL/min).
Primer 114: N-[1-(5-cijanopiridin-2-yl)piperidin-3-yl]-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanamid
[0833]
Korak 1: Sinteza tert-butil N-[1-(5-cijanopiridin-2-yl)piperidin-4yl]karbamata
[0834] Rastvor 6-hloropiridin-3-karbonitrila (690 mg, 4.98 mmol, 1.00 equiv), kalijum-karbonata (1.38 g, 9.98 mmol, 2.00 equiv), tert-butil N-(piperidin-4-yl)karbamata (1 g, 4.99 mmol, 1.00 equiv) in DMF (20 mL) je mešan 1h na 80 °C. Dobijeni rastvor je ugašen sa 30 ml vode. Onda je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 30 mL) i organski slojevi su spojeni. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (2:3) kako bi se dobilo 1.5 g (99 %) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 303.18 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-(3-aminopiperidin-1-yl)piridin-3-karbonitrila
[0835] Rastvor tert-butil N-[1-(5-cijanopiridin-2-yl)piperidin-3-yl]karbamata (118 mg, 0.39 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (10 mL) je mešan 30min na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom kako bi se dobilo 79 mg sirovog jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 203.13 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza N-[1-(5-cijanopiridin-2-yl)piperidin-3-yl]-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanamida
[0836] Rastvor 3-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi propanske kiseline (100 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv), HATU (147 mg, 0.39 mmol, 1.30 equiv), DIEA (155 mg, 1.20 mmol, 4.00 equiv), 6-(3-aminopiperidin-1-yl)piridin-3-karbonitrila (79 mg, 0.39 mmol, 1.30 equiv) u DMF (10 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je ostatak dalje prečišćen sa Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (72.2 mg ,47%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 520.15 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.36 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.69 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.86 - 6.83 (m, 1H), 4.61 - 4.48(m, 1H), 4.23 - 4.05 (m, 2H), 3.85 - 3.57 (m, 5H), 3.46 - 3.39 (m, 2H), 3.29 - 3.12 (m, 1H), 3.11 - 3.02(m, 1H), 2.37 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.29 - 2.10(m, 1H), 2.05 - 1.92 (m, 2H), 1.90 -1.85(m, 1H), 1.78 - 1.68 (m, 2H),1.62 - 1.56(m, 2H).
Primer 115: N-[1-(5-cijanopiridin-2-yl)piperidin-4-yl]-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanamid
[0837]
Korak 1: Sinteza tert-butil N-[1-(5-cijanopiridin-2-yl)piperidin-4yl]karbamata
[0838] Rastvor 6-hloropiridin-3-karbonitrila (1 g, 7.22 mmol, 1.00 equiv), kalijum-karbonata (2 g, 14.47 mmol, 2.00 equiv), tert-butil N-(piperidin-4-yl)karbamatae (1.45 g, 7.24 mmol, 1.00 equiv) u DMF (20 mL) je mešan 1.5h na 80 °C. Dobijeni rastvor je ugašen sa 30 ml vode. Rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 30 mL) i organski slojevi su pomešani. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i uparen pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (2:3) kako bi se dobilo 1.7 g (78 %) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 303.18[M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-(4-aminopiperidin-1-yl)piridin-3-karbonitrila
[0839] Rastvor tert-butil N-[1-(5-cijanopiridin-2-yl)piperidin-4-yl]karbamata (118 mg, 0.39 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (10 mL) je mešan 30min na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je uparena pod vakuumom kako bi se dobilo 79 mg sirovog jedinjenja iz naslova kao bele čvrste suptance. LCMS (ESI, m/z):203.13[M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza N-[1-(5-cijanopiridin-2-yl)piperidin-4-yl]-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanamida
[0840] Rastvor 6-(4-aminopiperidin-1-yl)piridin-3-karbonitrila (79 mg, 0.39 mmol, 1.00 equiv), HATU (148 mg,0.39 mmol, 1.30 equiv), DIEA (155 mg, 1.20 mmol, 2.00 equiv), 3-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi propanske kiseline (100 mg, 0.30 mmol, 1.30 equiv) u DMF (10 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (74.2 mg, 37 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 520.30 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.39 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.72 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.88 (dd, J = 9.2, 0.8 Hz, 1H), 4.58 - 4.50 (m, 1H), 4.45 - 4.35 (m, 2H), 4.01 - 3.88 (m, 1H), 3.75 - 3.60 (m, 4H), 3.47 - 3.34 (m, 2H), 3.12 (t, J = 11.7 Hz, 2H), 2.38 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.26 - 2.15 (m, 1H), 2.05 -1.92 (m, 3H), 1.80 - 1.60 (m, 2H), 1.46 - 1.30 (m, 2H).
Primer 116: 6-[[1-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] propanoil)piperidin-4-yl]amino]piridine-3-karbonitril
[0841]
Korak 1: Sinteza tert-butil 4-[(5-cijanopiridin-2-yl)amino]piperidin-1-karboksilata
[0842] Rastvor 6-hloropiridin-3-karbonitrila (760 mg, 5.49 mmol, 1.00 equiv), kalijum-karbonata (1.52 g, 11.0 mmol, 2.00 equiv), tert-butil 4-aminopiperidin-1-karboksilata (1.1 g, 5.49 mmol, 1.00 equiv) u DMF (20 mL) je mešan 1.5h na 80 °C. Dobijeni rastvor je ugašen sa 50 ml vode. Rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 50 mL) i organski slojevi su spojeni. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovak pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (2:3) kako bi se dobilo 460 mg (28%) jedinjenja iz naslova kao žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 303.18 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-[(piperidin-4-yl)amino]piridin-3-karbonitrila
[0843] Rastvor tert-butil 4-[(5-cijanopiridin-2-yl)amino]piperidin-1-karboksilata (118 mg, 0.39 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (10 mL) je mešan 30min na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom kako bi se dobilo 79 mg sirovog jedinjenja iz naaslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 203.13 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 6-[[1-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] propanoil)piperidin-4-yl]amino]piridin-3-karbonitrila
[0844] Rastvor 6-[(piperidin-4-yl)amino]piridin-3-karbonitrila (79 mg, 0.39 mmol, 1.30 equiv), HATU (148 mg, 0.39 mmol, 1.30 equiv), DIEA (155 mg, 1.20 mmol, 2.00 equiv), 3-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi propanske kiseline (100 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv) u DMF (2 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatogarfije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (43.9 mg ,28%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 520.15 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.33 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.60 (dd, J = 8.9, 2.3 Hz, 1H), 6.56 (dd, J = 8.9, 0.8 Hz, 1H), 4.63 - 4.52 (m, 1H), 4.42 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 4.18 - 4.02 (m, 1H), 3.98 - 3.86 (m, 1H), 3.81 - 3.60 (m, 4H), 3.49 - 3.38 (m, 2H), 3.22 (t, J = 12.3 Hz, 1H), 2.88 (q, J = 12.1, 11.6 Hz, 1H), 2.72 - 2.48 (m, 2H), 2.24 - 2.12 (m, 1H), 2.10 - 2.03 (m, 1H), 2.02 - 1.98 (m, 2H), 1.82 - 1.64 (m, 2H), 1.50 - 1.42 (m, 2H).
Primer 117: N-[1-(5-cijanopiridin-2-yl)pirolidin-3-yl]-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanamid
[0845]
Korak 1: Sinteza tert-butil N-[1-(5-cijanopiridin-2-yl)pirolidin-3-yl]karbamata
[0846] Rastvor tert-butil N-(pirolidin-3-yl)karbamata (1 g, 5.37 mmol, 1.00 equiv), kalijum-karbonata (1.5 g, 10.85 mmol, 2.00 equiv), 6-hloropiridin-3-karbonitrila (742 mg, 5.36 mmol, 1.00 equiv) u DMF (10 mL) je mešan 1h na 80°C. Dobijenni rastvor je ugašen sa 40 ml vode. Rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 40 mL) i organski slojevi su spojeni. Rastvor je osušen prekon anhidrovanog natrijum-sulfata i uparen pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/heksanom (4:1) kako bi se dobilo 1.37 g (88 %) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 289.17 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-(3-aminopirolidin-1-yl)piridin-3-karbonitrila
[0847] Rastvor tert-butil N-[[1-(5-cijanopiridin-2-yl)pirolidin-3-yl]metil]karbamata (112 mg, 0.37 mmol, 1 equiv) u HCl/dioksani (10 mL) je mešan 40 min na sobnoj temperaturi. Rastvor je uparen pod vakuumom kako bi se odbilo 73 mg sirovog jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 189.11 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza N-[1-(5-cijanopiridin-2-yl)pirolidin-3-yl]-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanamida
[0848] Rastvor 3-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi propanske kiseline (100 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv), HATU (148 mg, 0.39 mmol, 1.30 equiv), DIEA (155 mg, 1.20 mmol, 4.00 equiv), 6-(3-aminopirolidin-1-yl)piridin-3-karbonitrila (73 mg, 0.39 mmol, 1.30 equiv) u DMF (3 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN dajući jedinjenje iz naslova (59.6 mg ,40 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 506.15 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.39 (s, 1H), 8.12(s, 1H), 7.73 (dd, J = 8.9, 2.3 Hz, 1H), 6.58 (dd, J = 8.9, 0.8 Hz, 1H), 4.59 - 4.42 (m, 2H), 3.92 - 3.59 (m,7H), 3.6 - 3.32 (m, 3H), 2.39 (t, J = 6.3 Hz,2H), 2.27 - 2.12 (m, 2H), 2.10 - 1.92 (m, 2H), 1.72 - 1.58 (m, 2H).
Primer 118: 6-[4-(3,3-dimetil-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoil)piperazin-1-yl] piridin-3-karbonitril
[0849]
Korak 1: Sinteza 6-[4-(4-hidroksi-3,3-dimetilbutanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0850] Rastvor Int-A4 (1.56 g, 5.97 mmol, 1.00 equiv), 4,4-dimetiloksolan-2-ona (2.05 g, 18.0 mmol, 3.00 equiv) i Al(CH3)3(12 mL, 2.00 equiv) u toluenu (5 mL) je mešan tokom noći na 70 °C. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (50 mL). Dobijena smeša je isprana sa 2x15 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa DCM/metanolom (1/1) kako bi se dobilo 1.17 g (65 %) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 303.37 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza tert-butil (2S)-2-([4-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-2,2-dimetil-4-oksobutoksi]metil) pirolidin-1-karboksilata
[0851] Rastvor 6-[4-(4-hidroksi-3,3-dimetilbutanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (970 mg, 3.21 mmol, 1.00 equiv), natrijum-hidrida (140 mg, 5.83 mmol, 1.10 equiv) i tert-butil (2S)-2-[(metanesulfoniloksi)metil]pirolidin-1-karboksilata (896 mg, 3.21 mmol, 1.00 equiv) u DMF (15 mL) je mešan 3 dana na 50 °C. Reakciona smeša je razblažena sa H2O (200 mL). Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x150 mL EtOAc, organski slojevi su pomešani i upareni pod vakuumom. Ostatak je nanet na silicka gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (4/6) kako bi se dobilo 125 mg (8 %) jedinjenja iz naslova u obliku braon ulja. LCMS (ESI, m/z): 486.62 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 6-[4-(3,3-dimetil-4-[[(2S)-pirolidin-2-yl]metoksi]butanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila [0852] Rastvor tert-butil (2S)-2-([4-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-2,2-dimetil-4-oksobutoksi]metil)pirolidin-1-karboksilata (125 mg, 0.26 mmol, 1.00 equiv) i rastvor hlorovodonik/dioksana (5 mL) u dioksanu (5 mL) je mešan 0.5h na 25 °C. Dobijena smeša je uparena pod vakuumom kako bi se dobilo 99 mg (100%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 386.50 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 6-[4-(3,3-dimetil-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0853] Rastvor 6-[4-(3,3-dimetil-4-[[(2S)-pirolidin-2-yl]metoksi]butanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (99 mg, 0.26 mmol, 1.00 equiv), Int-A6 (85 mg, 0.26 mmol, 1.00 equiv) i TEA (78 mg, 0.77 mmol, 3.00 equiv) u EtOH (2 mL) je mešan 1h na 60 °C. Dobijena smeša je uparena pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu sa petrol etar/EtOAc (1/19) kako bi se dobilo 118 mg (68 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 678.83 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 6-[4-(3,3-dimetil-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0854] Rastvor 6-[4-(3,3-dimetil-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril (118 mg, 0.17 mmol, 1.00 equiv) u TFA/DCM (12 mL) je mešan 1h na 25 °C. pH vrednost rastvora je podešena na 8-9 sa NH2CH2CH2OH. Dobijena smeša je isprana sa 2x100 mL H2O. Smeša je osušena preko anhidrovanog natrijum-sulfata. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN dajući jedinjenje iz naslova 60.3 mg (63 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 548.57 [M+H]<+>,<1>H-NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 8.45 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.79-7.77 (m, 1H), 6.90-6.88 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.71-4.69 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 3.75-3.62 (m, 10H), 3.43 - 3.33 (m,3H),3.23-3.21(m,1H), 2.34 (s, 2H), 2.29 - 2.20 (m, 1H), 2.15 - 2.03 (m, 1H), 1.81 - 1.73 (m, 2H), 0.97 (d, J = 17.2 Hz, 6H).
Primer 119: 6-[4-(4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]but-2-inoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0855]
Korak 1: Sinteza tert-butil (2S)-2-[(prop-2-yn-1-yloksi)metil]pirolidin-1-karboksilata
[0856] U rastvor tert-butil (2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata (5 g, 24.84 mmol, 1.00 equiv) u THF (100 mL) je dodat natrijum-hidrid (2 g, 83.33 mmol, 2.00 equiv) u nekoliko serija na 0 °C tokom 15 min. U ovaj rastvor je dodat 3-bromoprop-1-in (8.8 g, 73.97 mmol, 3.00 equiv) u kapima uz mešanje na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena dodatkom 50 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x100 mL EtOAc, organski slojevi su pomešani i osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata. Nakon koncentrovanja, ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:15) kako bi se dobilo 5.3 g (89 %) jedinjenja iz naslova u obliku svetlo žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 240.15 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 2-[(prop-2-yn-1-yloksi)metil]pirolidina
[0857] Rastvor tert-butil 2-[(prop-2-yn-1-yloksi)metil]pirolidin-1-karboksilata (2.5 g, 10.45 mmol, 1.00 equiv) u vodonikhlorid/dioksanu (30 mL) je mešan 30min na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je uparena pod vakuumom kako bi se dobilo 2 g sirovog jedinjenja iz naslova kao žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 140.10 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 5-[(2S)-2-[(prop-2-yn-1-yloksi)metil]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0858] Rastvor (2S)-2-[(prop-2-yn-1-yloksi)metil]pirolidin hidrohlorida (2 g, 11.39 mmol, 1.00 equiv), TEA (3.4 g, 33.60 mmol, 3.00 equiv), Int-A6 (4.48 g, 13.63 mmol, 1.20 equiv) u etanolu (40 mL) je mešan 1h na 60 °C u uljanom kupatilu. Dobijena smeša je uparena pod vakuumom. Ostatak je nanet na na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (5:95) kako bi se dobilo 3 g (61%) jedinjenja iz naslova u obliku crvenog ulja. LCMS (ESI, m/z): 432.19 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]-2-butanske kiseline
[0859] U rastvor 5-[(2S)-2-[(prop-2-yn-1-yloksi)metil]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (2 g, 4.63 mmol, 1.00 equiv) u THF (100 mL) je dodat n-BuLi (2.24 mL, 1.20 equiv) u kapima uz mešanje na -70 °C. Smeša je mešana 20min na -70 °C. U ovu smešu je dodat CO2(2 g, 10.00 equiv) u nekoliko serija na -70°C. Dobijeni rastvor je mešan 20min na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvore je podešena na 6 sa hlorovodonikom (2 M). Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x100 mL DCM, organski slojevi su spojeni, osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata i upareni pod vakuumom. Sirovi produkt je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne kolone i eluiran sa ACN/vodom kako bi se dobilo 1.4 g (64 %) jedinjenja iz naslova kao prljavo bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 476.18 [M+H]<+>.
Korak 5 : Sinteza 6-[4-(4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]but-2-anoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0860] Rastvor Int-A4 (600 mg, 2.67 mmol, 1.00 equiv), 4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]-2-butanske kiseline (340 mg, 0.71 mmol, 1.20 equiv), DIEA (488 mg, 3.78 mmol, 3.00 equiv), HATU (720 mg, 1.89 mmol, 1.50 equiv) u DMF (5 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne kolone i eluiran sa ACN/H2O kako bi se dobilo 750 mg (43 %) jedinjenja iz naslova kao prljavo bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 646.27 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 6-[4-(4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]but-2-anoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0861] Rastvor 6-[4-(4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]but-2-anoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (200 mg, 0.31 mmol, 1.00 equiv), TFA (2 mL) u DCM (20 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvora je podešena na 8 sa etanolaminom. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x100 mL DCM, organski slojevi su pomešani i osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata. Nakon koncentrovanje, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne kolone i eluiran sa ACN/vodom dajući jedinjenje iz naslova (73.1 mg, 46 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 516.19 [M+H]<+>,<1>HNMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 12.41 (s, 1H), 8.56 - 8.51 (m, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.92 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.62 (s, 1H), 4.43 (s, 2H), 3.80 - 3.65 (m, 6H), 3.70-3.48 (m, 5H), 3.31 - 3.23(m,1H), 2.18 - 2.11 (m, 1H), 1.98 - 1.91 (m, 1H), 1.82 - 1.64 (m,2H).
Primer 120: 6-[4-[3-(3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]amino]propoksi) propanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0862]
Korak 1: Sinteza 5-[3-[2-(benziloksi)etoksi]azetidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0863] U rastvor 5-(3-hidroksiazetidin-1-yl)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (300 mg, 0.82 mmol, 1.00 equiv) u DMF (20 mL), dodat je natrijum-hidrid (20 mg, 0.83 mmol, 2.00 equiv) na 0°C, onda je dobijeni rastvor mešan 5min, nakon toga je ukapan [(bromoetoksi)metil]benzen (331 mg, 1.65 mmol, 2.00 equiv) i dobijeni rastvor je mešan dodatno 3h na 0°C. Nakon toga je dobijeni rastvor ugašen sa 50mL H2O, ekstrahovan sa 3x50 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni, isprani sa 1 x 50 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida i koncentrovani pod vakuumom. Onda je ostatak nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (3:7) kako bi se dobilo 295 mg (72 %) jedinjenja iz naslova u obliku svetlo žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 500.21[M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[3-(2-hidroksietooksi)azetidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0864] U struji vodonika, rastvor 5-[3-[2-(benziloksi)etil]azetidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridin-3-ona (265 mg, 0.55 mmol, 1.00 equiv) i paladijum na ugljeniku (13.5 mg, 0.05 equiv) u metanolu (20 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi, onda je čvrsta supstanca profiltrirana i dobijeni rastvor je uparen pod vakuumom kako bi se dobilo 221 mg (98 %) jedinjenja iz naslova u obliku belog ulja. LCMS (ESI, m/z): 410.17M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza tert-butil 3-[2-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4yl]azetidin-3-yl]oksi)etoksi]propanoata
[0865] U rastvor 5-[3-(2-hidroksietoksi)ciklobutil]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (180 mg, 0.65 mmol, 1.00 equiv) u THF (6 mL), dodat je natrijum-hidrid (21 mg, 0.88 mmol, 2.00 equiv), i dobijeni rastvor je mešan 20min na sobnoj temperaturi. Onda je dodat tert-butil prop-2-enoat (112 mg, 0.87 mmol, 2.00 equiv) u kapima, rastvor je mešan 1h na sobnoj temperaturi, nakon čega je ugašen sa 15 mL vode, ekstrahovan sa 15 mL EtOAc, organski slojevi su spojeni, isprani sa 1x15 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida, osušeni preko anhidrovanog natrijumsulfata i koncentrovani pod vakuumom, a onda je ostatak nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:3) kako bi se dobilo 80 mg (23 %) jedinjenja iz naslova u obliku svetlo braon ulja. LCMS (ESI, m/z): 538.25[M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 3-(2-(1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)azetidin-3-yloksi)etoksi)propanska kiselina
[0866] Rastvor tert-butil 3-[2-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]azetidin-3-yl]oksi)etoksi]propanoata (180 mg, 0.34 mmol, 1.00 equiv) i TFA (2 mL) u DCM (10 mL) je mešan 40min na sobnoj temperaturi, nakon čega je dobijeni rastvor uparen pod vakuumom kako bi se dobilo 50 mg (28 %) jedinjenja iz naslova u obliku svetlo žutog ulja. LCMS (ESI, m/z):352.11 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 6-(4-[3-[2-([l-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-3-yl]oksi)etoksi] propanoil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitrila
[0867] Rastvor 3-[2-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-3-yl]oksi)etoksi]propanske kiseline (50 mg, 0.14 mmol, 1 equiv), DIEA (35.4 mg, 0.27 mmol, 2.00 equiv), HATU (52.0 mg, 0.14 mmol, 1.00 equiv) i Int-A4 (30.9 mg, 0.16 mmol, 1.20 equiv) u DMF (20 mL) je mešan 40min na sobnoj temperaturi. Onda je dobijeni rastvor razblažen sa 20 ml H2O, ekstrahovan sa 3x20 ml EtOAc i organski slojevi su spojeni, isprani sa 1x20 ml koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (37.0 mg, 50.48%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z):522.05 [M+H]<+>,<1>HNMR (CD3OD, 300 MHz) δ 8.41 (d, J =1.8 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 7.44 (s, 1H), 6.87 (dd, J = 9.0, 0.9 Hz, 1H), 4.57 -4.40 (m, 3H),4.21-4.17 (m, 2H), 3.90-3.73 (m, 10H), 3.64 (s, 4H), 2.75 (t, J = 6.1 Hz, 2H).
Primer 121: 6-(4-((1R,3R)-3-((1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-3-yl)metoksi) ciklobutankarbonil)piperazin-1-yl)nikotinonitril i 6-(4-((1S,3S)-3-((1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-3-yl)metoksi)ciklobutankarbonil)piperazin-1-yl)nikotinonitril
[0868]
Korak 1: Sinteza (pirolidin-3-yl)metanol hidrohlorida
[0869] Rastvor tert-butil 3-(hidrookimetil)pirolidin-1-karboksilata (2.10 g, 10.44 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodoniku/dioksanu (10 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Rastvarač je uparen pod vakuumom kako bi se dobilo 1.3 g sirovog jedinjenja iz naslova kao sirove bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 102.09 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[3-(hidroksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0870] Rastvor (pirolidin-3-yl)metanol hidrohlorida (900 mg, 6.54 mmol, 1.00 equiv), Int-A6 (1.64 g, 4.99 mmol, 1.00 equiv), TEA (2 g, 19.76 mmol, 5.00 equiv) u etanol (20 mL) je mešan 4h na 80°C. Rastvarač je uparen pod vakumom i ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:1) kako bi se odbilo 1.1 g (43 %) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 394.18 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza[1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-3-yl]metil-4-metilbenzena-1-sulfonata
[0871] Rastvor 5-[3-(hidroksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (780 mg, 1.98 mmol, 1.00 equiv), 4-metilbenzen-1-sulfonil hlorida (570 mg, 2.99 mmol, 1.50 equiv), TEA (606 mg, 5.99 mmol, 3.00 equiv), 4-dimetilaminopiridina (50 mg, 0.41 mmol, 0.20 equiv) u DCM (15 mL) je mešan 8h na sobnoj temperaturi. Rastvarač je uparen pod vakuumom i ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:1) kako bi se dobilo 500 mg (46 %) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 548.19 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza metil 3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-3-yl]metoksi)ciklobutan-1-karboksilata
[0872] Rastvor [1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-3-yl]metil-4-metilbenzen-1-sulfonata (1.09 g, 1.99 mmol, 1.00 equiv), metil 3-hidroksiciklobutan-1-karboksilata (390 mg, 3.00 mmol, 1.50 equiv), natrijum-hidrida (160 mg, 6.67 mmol, 2.00 equiv) u DMF (10 mL) je mešan 6h na 80°C. Dobijeni rastvor je ugašen sa 60 ml H2O, onda je ekstrahovan sa EtOAc (3 3 60 mL) i organski slojevi su pomešani. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:2) kako bi se dobilo 200 mg (20%) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 506.23 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1.6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-3-yl]metoksi)ciklobutan-1-karboksilna kiselina
[0873] Rastvor metil 3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-3-yl]metoksi)ciklobutan-1-karboksilata (200 mg, 0.40 mmol, 1.00 equiv), LiOH (48 mg, 2.00 mmol, 5.00 equiv), vode (1 mL) u MeOH (5 ml) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvora je podešena na 5 sa vodonikhloridom. Nakon koncentrovanja, ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (2:1) kako bi se dobilo 130 mg (67%) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 492.22 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 6-(4-[3-[(2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]amino]-2-feniletoksi] propanoil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitrila i 6-(4-[3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]amino]-2-feniletoksi]propanoil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitrila
[0874] Rastvor 3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-3-yl]metoksi)ciklobutan-1-karboksilne kiseline (117 mg, 0.24 mmol, 1.00 equiv), HATU (117 mg, 0.31 mmol, 1.30 equiv), DIEA (61.5 mg, 0.48 mmol, 2.00 equiv), Int-A4 (5 mL, 1.00 equiv) u DMF (2 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo 100 mg (63%) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 662.31 [M+H]<+>.
Korak 7: Sinteza 6-(4-((1r,3r)-3-((1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-3-yl)metoksi) ciklobutankarbonil)piperazin-1-yl)nikotinonitrila i 6-(4-((1s,3s)-3-((1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-3-yl)metoksi)ciklobutankarbonil)piperazin-1-yl)nikotinonitrila
[0875] Rastvor 6-[4-[3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-3-yl]metoksi)ciklobutankarbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (100 mg, 0.15 mmol, 1.00 equiv), TFA (1 mL) u DCM (5 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući (nakon proizvoljne procene stereohemije) jedinjenja iz naslova, redom, izomer A (12.9 mg, 16 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 532.30 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.44 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.89 (dd, J = 9.1, 0.8 Hz, 1H), 4.01 - 3.97 (m, 1H), 3.80 - 3.69 (m, 9H), 3.68 - 3.60 (m, 2H), 3.59 - 3.40 (m, 3H), 3.09 - 2.92 (m, 1H), 2.54 (q, J = 8.4, 7.6 Hz, 3H), 2.23 - 2.02 (m, 3H), 1.84 - 1.79 (m, 1H) i izomer B (4.1 mg, 5 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 532.30 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.44 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 9.1, 2.3 Hz, 1H), 6.89 (dd, J = 9.1, 0.9 Hz, 1H), 4.15 - 3.93 (m, 1H), 3.82 - 3.67 (m, 9H), 3.66 -3.60 (m, 2H), 3.59 - 3.40 (m, 2H), 3.39 -3.31 (m, 2H), 2.55 - 2.50 (m, 3H), 2.26 - 2.11 (m, 3H), 1.92 - 1.75 (m, 1H).
Primer 122: 6-[4-(3-[[(2S,4S)-4-metoksi-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0876]
Korak 1: Sinteza 1-tert-butil 2-metil (2S,4S)-4-metoksipirolidin-1,2-dikarboksilata
[0877] Rastvor 1-tert-butil 2-metil (2S,4S)-4-hidroksipirolidin-1,2-dikarboksilata (5 g, 20.39 mmol, 1.00 equiv), natrijum-hidrida (1.63 g, 40.75 mmol, 2.00 equiv), jodometana (5.7 g, 40.16 mmol, 2.00 equiv) u THF (50 mL) je mešan 12h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zaustavljena dodavanjem 50 mL zasićenog vodenog rastvora amonijumhlorida. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x70 mL EtOAc, organski slojevi su spojeni i koncentrovani pod vakuumom. Onda je ostatak nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (3/7) kako bi se dobilo 2.48 mg (47 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 246.13 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza tert-butil (2S,4S)-2-(hidroksimetil)-4-metoksipirolidin-1-karboskilata
[0878] Rastvor (2S,4S)-1-[(tert-butooski)karbonil]-4-metoksipirolidin-2-karboksilne kiseline (1.1 g, 4.48 mmol, 1.00 equiv), B2H6/THF (10 mL) u THF (20 mL) je mešan 48h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je razblažen sa 20mL vode i ekstrahovan sa 3 x 30ml EtOAc. Organski slojevi su spojeni i osušeni preko Na2SO4. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom kako bi se dobilo 1.1g (sirovo) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 232.15[M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza [(2S,4S)-4-metoksipirolidin-2-yl]metanol hidrohlorida
[0879] Rastvor tert-butil (2S,4S)-2-(hidroksimetil)-4-metoksipirolidin-1-karboksilata (1.1 g, 4.76 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (10 mL) je mešan 30min na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom kako bi se dobilo 818 mg jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 132.09[M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 5-[(2S,4S)-2-(hidroksimetil)-4-metoksipirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0880] Rastvor [(2S,4S)-4-metoksipirolidin-2-yl]metanol hidrohlorida (818 mg, 4.88 mmol, 1.00 equiv), Int- A6 (805 mg, 2.45 mmol, 0.50 equiv), TEA (959 mg, 9.48 mmol, 2.00 equiv) u EtOH (10mL) je mešan 1h na 80°C. Reakciona smeša je uparna pod vakuumom i ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1/1) kako bi se dobilo 460 mg (18 %) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 424.18 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza metil 3-[[(2S,4S)-4-metoksi-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoata
[0881] Rastvor 5-[(2S,4S)-2-(hidroksimetil)-4-metoksipirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (440 mg, 1.04 mmol, 1.00 equiv), natrijum-hidrida (42 mg, 1.05 mmol, 1.00 equiv), metil prop-2-enoata (895 mg, 10.40 mmol, 10.00 equiv) u THF (10 mL) je mešan 12h na sobnoj temperaturi. Onda je reakcija ugašena dodatkom vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x30mL EtOAc, organski slojevi su spojeni i upareni pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (4/6) kako bi se dobilo 80 mg (15 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 510.22 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 3-[[(2S,4S)-4-metoksi-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanska kiselina
[0882] Rastvor metil 3-[[(2S,4S)-4-metoksi-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoata (80 mg, 0.16 mmol, 1.00 equiv), LiOH.H2O (33 mg, 0.79 mmol, 5.00 equiv) u metanol (3 mL) i vodi (1 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvore je podešena na 6 sa hlorovodonikom (1 M) i čvrsta supstanca je skupljena filtracijom kako bi se dobilo 70 mg (90 %) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 496.20 [M+H]<+>.
Korak 7: Sinteza 6-[4-(3-[[(2S,4S)-4-metoksi-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0883] Rastvor 3-[[(2S,4S)-4-metoksi-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanska kiselina (70 mg, 0.14 mmol, 1.00 equiv), HATU (80.6 mg, 0.21 mmol, 1.50 equiv), DIEA (54.7 mg, 0.42 mmol, 3.00 equiv), Int-A4 (31.7 mg, 0.14 mmol, 1.00 equiv) u DMF (3 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo 45mg (48%) jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 666.30 [M+H]<+>.
Korak 8: Sinteza 6-[4-(3-[[(2S,4S)-4-metoksi-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0884] Rastvor 6-[4-(3-[[(2S,4S)-4-metoksi-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril (40 mg, 0.06 mmol, 1.00 equiv) u DCM (3 mL) i TFA (0.3 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (15.6 mg, 48 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 536.52 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.40 (s, 1H), 8.51 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.89 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.60 (s, 1H), 3.90 (p, J = 7.3 Hz, 1H), 3.90-3.63 (m, 6H), 3.61 - 3.51 (m, 5H), 3.51 - 3.43 (m, 3H), 3.47 -3.34 (m, 3H), 2.55 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 2.31 (dt, J = 12.4, 7.4 Hz, 1H), 1.62 (dt, J = 12.5, 7.5 Hz, 1H).
Primer 123: 6-[4-[(3R)-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril i 6-[4-[(3S)-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0885]
Korak 1: Sinteza metil 3-(metansulfoniloksi)butanoata
[0886] Rastvor metil 3-hidroksibutanoata (980 mg, 8.30 mmol, 1.00 equiv), TEA (1.68 g, 16.60 mmol, 2.00 equiv), metansulfonil metansulfonata (2.17 g, 12.46 mmol, 1.50 equiv) u DCM (10 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x30 mL DCM i organski slojevi su spojeni, a onda je dobijena smeša isprana sa 3x20 mL zasičenog vodenog rastvora amonijum-hlorida i osušen preko Na2SO4. Reakciona smeša je uparena pod vakuumom kako bi se dobilo 1.51 g (93 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 197.04 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 3-[[(2S)-1-[(tert-butooki)karbonil]pirolidin-2-yl]metoksi]butanske kiseline
[0887] Rastvor metil 3-(metanesulfoniloksi)butanoata (1.51 g, 7.70 mmol, 1.00 equiv), natrijum-hidrida (616 mg, 15.40 mmol, 2.00 equiv), tert-butil (2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata (1.54 g, 7.65 mmol, 1.00 equiv) u THF (15 mL) je mešan 12h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zaustavljena dodatkom 20 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 4x30 mL EtOAc i vodeni slojevi su spojeni. pH vrednost vodenih slojeva je podešena na 6 sa hlorovodonikom (1 M). Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 5x20 mL DCM, organski lsojevi su spojeni i koncentrovani pod vakuumom kako bi se dobilo 220 mg (9 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 288.17 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza metil 3-[[(2S)-pirolidin-2-yl]metoksi]butanoat hidrohlorida
[0888] Rastvor 3-[[(2S)-1-[(tert-butoki)karbonil]pirolidin-2-yl]metoksi]butanske kiseline (220 mg, 0.73 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (10 mL) je mešan 30min na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom kako bi se odbilo 200 mg (sirovo) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 188.17 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanske kiseline
[0889] Rastvor 3-[[(2S)-pirolidin-2-yl]metoksi] hidrohlorida butanske kiseline (200 mg, 0.89 mmol, 1.00 equiv), Int- A6 (147 mg, 0.45 mmol, 0.50 equiv), TEA (181 mg, 1.79 mmol, 2.00 equiv) u EtOH (10 mL) je mešan 2h na 80 °C. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom i ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa DCM/metanol (9/1) kako bi se dobilo 190 mg (44 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 480.21 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanske kiseline
[0890] Rastvor 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanske kiseline u DCM (3 mL) i TFA (0.3 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo 45 mg (88 %) jedinjenja iz naslova koa bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 350.12 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 6-[4-[(3R)-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl] metoksi] butanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila i 6-[4-[(3S)-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0891] Rastvor 3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanske kiseline (45 mg, 0.13 mmol, 1.00 equiv), HATU (73.5 mg, 0.19 mmol, 1.50 equiv), DIEA (50 mg, 0.39 mmol, 3.00 equiv), Int-A4 (28.8 mg, 0.13 mmol, 1.00 equiv) u DMF (3 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući (nakon proizvoljnog dodeljivanja stereohemije) jedinjenja iz naslova, redom, izomer A (14.4 mg, 22 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 520.52 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.34 (s, 1H), 8.51 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.93 - 7.82 (m, 1H), 6.93 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.47 (m, 1H), 3.82 (q, J = 6.1 Hz, 1H), 3.69-3.51 (m, 10H), 3.59-3.48 (m, 1H), 3.21 - 3.16 (m, 1H), 2.59 (dd, J = 15.5, 6.7 Hz, 1H), 2.29 (dd, J = 15.5, 5.7 Hz, 1H), 2.07 (m, 1H), 1.87(s, 1H), 1.64 (m, 2H), 1.09 (d, J = 6.1 Hz, 3H) i izomer B (9 mg, 13 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 520.55[M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.34 (s, 1H), 8.51 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.93 - 7.82 (m, 1H), 6.93 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.47 (m, 1H), 3.82 (q, J = 6.1 Hz, 1H), 3.69-3.51 (m, 10H), 3.59-3.48 (m, 1H), 3.21 - 3.16 (m, 1H), 2.59 (dd, J = 15.5, 6.7 Hz, 1H), 2.29 (dd, J = 15.5, 5.7 Hz, 1H), 2.07 (m, 1H), 1.87(s, 1H), 1.64 (m, 2H), 1.09 (d, J = 6.1 Hz, 3H).
Primer 124: 6-(4-[2-[2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-yl]metoksi)etoski]acetil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitrila
[0892]
Korak 1: Sinteza 6-[4-(2-[2-[(tert-butildimetilsilil)oksi]etoksi]acetil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0893] Rastvoru 2-[(tert-butildimetilsilil)oksi]etan-1-ol (1111 mg, 6.30 mmol, 1 equiv) u DMF (10 mL) je dodat NaH (302.4 mg, 12.60 mmol, 2 equiv) u nekoliko serija na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan 15min na 0 °C. Onda je dodat 6-[4-(2-hloroacetil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril (2001 mg, 7.56 mmol, 1.2 equiv). Dobijeni rastvor je mešan dodatna 4h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zaustavljena dodatkom 10 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x30 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni. Dobijeni rastvor je isparan sa 3x30 mL NaCl (aq), organski slojevi su spojeni I upareni pod vakuumom. Ostatka je nanet na silika gel kolonu eluiranjem sa EtOAc/petrol etrom (95/5) kako bi se dobilo 751 mg (29.5 %) jedinjenja iz naslova kao bezbojnog ulja. LCMS (ESI, m/z): 405.22 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-[4-[2-(2-hidroksietoksi)acetil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0894] Rastvor 6-[4-(2-[2-[(tert-butildimetilsilil)oski]etoksi]acetil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril (650 mg, 1.61 mmol, 1 equiv), TBAF (504.1 mg, 1.93 mmol, 1.2 equiv) u THF (10 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Reakcija je onda zaustavljena dodatkom 10 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x30 ml DCM, organski slojevi su pomešani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa DCM/metanolom (95/5) kako bi se dobilo 222 mg (47.6 %) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 291.14 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 6-(4-[2-[2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-yl]metoksi)etoksi]acetil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitrila
[0895] Rastvoru 6-[4-[2-(2-hidroksietoksi)acetil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (100.6 mg, 0.35 mmol, 1.2 equiv) u THF (5 mL) je dodat NaH (13.9 mg, 0.58 mmol, 2 equiv) na 0 °C . Dobijeni rastvor je mešan 15min na 0 °C. Onda je dodat [2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-yl]metil metansulfonat (150 mg, 0.29 mmol, 1 equiv). Dobijeni rastvor je dodatno mešan 2h na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena dodavanjem 10 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x30 mL EtOAc, organski slojevi su spojeni i osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa DCM/metanolom (99/1) kako bi se dobilo 33 mg (16 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 714.30 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 6-(4-[2-[2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-4-yl]metoksi)etoksi]acetil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitrila
[0896] Rastvor 6-(4-[2-[2-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihdro-1H-izoindol-4-yl]metoksi)etoksi]acetil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitril (33 mg, 0.05 mmol, 1equiv) u DCM (5 mL) i TFA (0.5 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (5.1 mg, 18.9 %)kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 584.22 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ :12.49 (s, 1H), 8.47 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.85 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 7.27 (q, J = 4.7 Hz, 3H), 6.85 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.99 (s, 2H), 4.93 (s, 2H), 4.53 (s, 2H), 4.19 (s, 2H), 3.61 (d, J= 4.2 Hz, 8H), 3.49 (m, 4H).
Primer 125: 6-[4-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]azetidin-1-karbonil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0897]
Korak 1: Sinteza 4-nitrofenil 4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-karboksilata
[0898] Rastvor Int-A4 (1 g, 5.31 mmol, 1 equiv), DIEA (1.38 g, 10.68 mmol, 2.01 equiv), 4-nitrofenil hloroformata (1.07 g, 5.31 mmol, 1.00 equiv) u DCM (20 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je uparena pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (70/30) kako bi se dobilo 1.7 g (90 %) jedinjenja iz naslova kao žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 354.33 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-[4-(3-hidroksiazetidin-1-karbonil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0899] Rastvor 4-nitrofenil 4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazine-1-karboksilata (1.7 g, 4.81 mmol, 1 equiv), DIEA (1.25 g, 9.67 mmol, 2.01 equiv), azetidin-3-ol hidrohlorida (1.05 g, 9.58 mmol, 1.99 equiv) u 1-butanolu (20 mL) je mešan 16h na 120 °C. Dobijena smeša je uparena pod vakuumom. Ostatak je rastvoren u 30 mL DCM. Organski sloj je ispran sa 20 ml zasićenog vodenog rastvora natrijum-karbonata. Organski slojevi su spojeni, osušeni preko anhidrovanog natrijumsulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa DCM/metanolom (5/95) kako bi se dobilo 600 mg (43 %) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 288.32 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza tert-butil(2S)-2-[([1-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-karbonil]azetidin-3-yl]oksi)metil]pirolidin-1-karboksilata
[0900] Rastvor 6-[4-(3-hidroksiazetidin-1-karbonil)piperazin-1-yl]piridin-3-ckarbonitrila (600 mg, 2.09 mmol, 1.00 equiv), NaH (250 mg, 10.42 mmol, 4.99 equiv), tert-butil (2S)-2-[(metansulfoniloksi)metil]pirolidin-1-karboksilata (583 mg, 2.09 mmol, 1 equiv) u THF (30 mL) je mešan 3 dana na 80 °C. Reakcija je onda zaustavljena dodatkom 30 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x30 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni i osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata. Organski sloj je uparen pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiranm sa EtOAc/petrol etrom (90/10) kako bi se dobilo 250 mg (25 %) jedinjenja iz naslova kao žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 471.56 [M+H]<+>
Korak 4: Sinteza 6-[4-(3-[[(2S)-pirolidin-2-yl]metoksi]azetidin-1-karbonil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0901] Rastvor tert-butil (2S)-2-[([1-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-karbonil]azetidin-3-yl]oksi)metil]pirolidin-1-karboksilata (150 mg, 0.32 mmol, 1 equiv), TFA (0.3 mL) u DCM (5 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom kako bi se dobilo 130 mg (sirovo) jedinjenja iz naslova kao žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 371.45 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 6-[4-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]azetidin-1-karbonil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0902] Rastvor 6-[4-(3-[[(2S)-pirolidin-2-yl]metoksi]azetidin-1-karbonil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (120 mg, 0.32 mmol, 1 equiv), TEA (98 mg, 0.97 mmol, 2.99 equiv), Int-A6 (127.3 mg, 0.39 mmol, 1.20 equiv) u EtOH (20 mL) je mešan 16h na 70 °C. Dobijena smeša je uparena pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu eluiranjem sa EtOAc kako bi se dobilo 120 mg (56 %) jedinjenja iz naslova kao žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 663.78 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 6-[4-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]azetidin-1-karbonil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0903] Rastvor 6-[4-(3-[[(2S)-1-[6-oko-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]azetidin-1-karbonil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (120 mg, 0.18 mmol, 1 equiv), TFA (0.8 mL) in DCM (8 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromataografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (35.0 mg, 36.3 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 532.52 [M+H]<+>,<1>HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 12.36 (s, 1H), 8.50 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.92 - 7.82 (m, 1H), 6.91 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.25 (s, 1H), 4.05 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 3.64 - 3.44 (m, 10H), 3.32 - 3.15 (m, 4H), 2.36 - 2.11 (m, 1H), 1.91 (s, 1H), 1.67 (m, 2H).
Primer 126: 4-(5-cijanopiridin-2-yl)-N-(2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]etil)piperazin-1-karboksamid
[0904]
Korak 1: Sinteza 5-[(2S)-2-[(2-hidroksietoksi)metil]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0905] Rastvor [(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metil metansulfonata (900 mg, 1.91 mmol, 1.00 equiv) i Cs2CO3(1.868 g, 5.73 mmol, 3.00 equiv) u etan-1,2-diolu (20 mL) je mešan 6h na 80 °C. Reakcija je zaustavljena dodatkom 150 ml vode i ekstrahovana sa 300 mL EtOAc, organski slojevi su pomešani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1/1) kako bi se dobilo 400 mg (48 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 438.53 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[(2S)-2-[(2-azidoethoksi)metil]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropridazin-3-ona
[0906] Rastvor 5-[(2S)-2-[(2-hidroksietoksi)metil]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (400 mg, 0.91 mmol, 1.00 equiv), DBU (278 mg, 1.83 mmol, 3.00 equiv) i DPPA (502 mg, 1.82 mmol, 2.00 equiv) u toluenu (5 mL) je mešan 5h na 80 °C. Nakon dodavanje 300 mL EtOAc u dobijeni rastvor, dobijena smeša je isprana sa 2x100 mL natrijum-karbonata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (3/7) kako bi se dobilo 320 mg (76 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 463.54 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 5-[(2S)-2-[(2-aminoetoksi)metil]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0907] Rastvor 5-[(2S)-2-[(2-azidoethoksi)metil]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (320 mg, 0.69 mmol, 1.00 equiv) i paladijum na ugljeniku (80 mg) u metanolu (20 mL) je mešan 5h na 60 ° C u atmosferi ugljenika. Čvrsta supstanca je profiltrirana. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom kako bi se dobilo 260 mg (86 %) jedinjenja iz naslova kao zelene čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 437.54 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 4-nitrofenil 4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-karboksilata
[0908] Rastvor Int-A4 (1 g, 3.83 mmol, 1.00 equiv), TEA (1.36 g, 13.44 mmol, 3.50 equiv) i 4-nitrofenil hloroformata (773 mg, 3.84 mmol, 1.00 equiv) u DCM (50 mL) je mešan 1h na 25 ° C. Onda je dodato 5 mL EA. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom kako bi se dobio 1 g (74%) jedinjenja iz naslova u obliku svetlo žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 354.33 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 4-(5-cijanopiridin-2-yl)-N-(2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]etil)piperazin-1-karboksamida
[0909] Rastvor 5-[(2S)-2-[(2-aminoetoksi)metil]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (250 mg, 0.57 mmol, 1.00 equiv), kalijum-karbonata (237 mg, 1.71 mmol, 3.00 equiv) i 4-nitrofenil 4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-karboksilata (364 mg, 1.03 mmol, 1.80 equiv) u DMF (4 mL) je mešan 5h na 80 ° C. Dobijena smeša je razblažena sa H2O (200 mL). Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc 3x150 mL, a onda su organski slojevi spojeni i upareni pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc kako bi se dobilo 322 mg (86%) jedinjenja iz naslova kao bezbojno ulje. LCMS (ESI, m/z): 651.77 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 4-(5-cijanopiridin-2-yl)-N-(2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]etil)piperazin-1-karboksamid
[0910] Rastvor 4-(5-cijanopiridin-2-yl)-N-(2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]etil)piperazin-1-karboksamida (300 mg, 0.46 mmol, 1.00 equiv) i TFA/DCM (12 mL) u DCM (10 mL) je mešan 1h na 25 ° C. pH vrednost ratvora je podešena na 8 sa NH3/CH3OH. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN dajući jedinjenje iz naslova 88.2 mg (37 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 521.2 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 8.43-8.42 (d, J = 1.6, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.79-7.75 (m,1H), 7.21 - 6.86 (m, 1H), 4.62-4.59(d, 1H), 3.79 -3.71 (m, 4H), 3.66-3.64 (m,2H), 3.60 - 3.42 (m, 8H), 3.43 - 3.26 (m, 2H), 2.26-2.23 (t, J= 6.4 Hz, 1H), 2.01-1.99 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 1.74-1.70 (m, 2H).
Primer 127: 4-(5-cijanopiridin-2-yl)-N-(2-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]etil(piperazin-1-karboksamid
[0911]
Korak 1: Sinteza 4-bromo-5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-yl]-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0912] Rastvor Int-A8 (5.6 g, 14.58 mmol, 1.00 equiv), TEA (2.95 g, 29.15 mmol, 2.00 equiv) i [(2S)-pirolidin-2-yl]metanola (1.47 g, 14.53 mmol, 1.00 equiv) u etanolu (200 mL) je mešan 1h na 80 °C. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc 3x50 mL. Onda su organski slojevi spojeni i koncentrovani pod vakuumom kako bi se dobilo 5 g (85 %) jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 405.37 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-yl]-3-okso-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-4-karbonitrila
[0913] Rastvor 4-bromo-5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-yl]-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidro-piridazin-3-ona (2 g, 4.95 mmol, 1.00 equiv) i CuCN (1.3 g, 3.00 equiv) u NMP (10 mL) je mešan 2h na 120 °C. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x30 mL etra i organski slojevi su pomešani. Ostatak je nanet na silika gel kolonu sa EtOAc/petrol etrom (1/0) kako bi se dobilo 680 mg (39 %) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 351.49 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 3-[[2-(5-cijano-6-okso-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl)-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metoksi]propanoata
[0914] Rastvor 5-[1-(hidroksimetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-yl]-3-okso-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-4-karbonitrila (360 mg, 0.90 mmol, 1.00 equiv), Cs2CO3(368 mg, 1.13 mmol, 1.10 equiv) i tert-butil prop-2-enoata (659 mg, 5.14 mmol, 5.00 equiv) u CH3CN (20 mL) je mešan 2 dana na 40 ° C. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1/2) kako bi se dobilo 130 mg (27 %) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 479.66 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 3-[[(2S)-1-(5-cijano-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl]metoksi]propanske kiseline [0915] Rastvor tert-butil 3-[[(2S)-1-(5-cijano-6-okso-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl]metoksi]propanoata (130 mg, 0.27 mmol, 1.00 equiv) u vodonikhlorid/dioksanu (20 mL) je mešan 1h na 25 ° C. Sirovi produkt je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hrometografije i eluiran sa H2O/CH3CN (1/1) kako bi se dobilo 70 mg (88 %) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 293.29 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 5-[(2S)-2-([3-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-3-oksopropoksi]metil)pirolidin-1-yl]-3-okso-2,3-dihidropiridazin-4-karbonitrila
[0916] Rastvor 3-[[(2S)-1-(5-cijano-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl]metoksi]propanske kiseline (60 mg, 0.21 mmol, 1.00 equiv), HATU (80 mg, 0.21 mmol, 1.00 equiv), DIEA (108 mg, 0.84 mmol, 4.00 equiv) i Int-A4 (55 mg, 0.21 mmol, 1.00 equiv) u DMF (2 mL) je mešan 1h na 25 ° C. Sirovi produkt je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN dajući jedinjenje iz naslova 18.7 mg (20 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 463.19 [M+H]<+>,<1>H NMR (Metanol-d4, 400 MHz) δ: 8.42 (dd, J= 2.4, 0.8 Hz, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.76 (dd, J= 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.86 (dd, J = 9.1, 0.8 Hz, 1H), 4.70 (dr, 1H), 4.03 (dr, 1H), 3.78-3.58 (dd, J= 6.3, 4.9 Hz, 13H), 2.67-2.63 (t, J= 5.8 Hz, 2H), 2.17 - 1.95 (m, 4H).
Primer 128: 6-[4-[(3R)-metil-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril i 6-[4-[(3S)-metil-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoil]-piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0917]
Korak 1: Sinteza metil (2E)-4-bromo-3-metilbut-2-enoata
[0918] Rastvor metil 3-metilbut-2-enoata (5 g, 43.80 mmol, 1.00 equiv), NBS (8.5 g, 47.76 mmol, 1.09 equiv) i BPO (1.1 g, 4.29 mmol, 0.10 equiv) u CCl4(200 mL) je mešan tokom noći na 80 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:10). Ovo je rezultiralo sa 6 g (71 %) jedinjenja iz naslova u obliku ulja. GCMS (m/z): 190.
Korak 2: Sinteza (2E)-3-metil-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]but-2-enoata
[0919] Rastvor 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (1.6 g, 4.07 mmol, 1.00 equiv), metil (2E)-4-bromo-3-metilbut-2-enoata (870 mg, 4.51 mmol, 1.11 equiv), Rockphos (574 mg), Cs2CO3(2.7 g, 8.29 mmol, 2.04 equiv) i Pd2(dba)3·CHCl3(870 mg) u dioksanu (30 mL) je mešan 20h na 100 °C u inertnoj atmosferi azota. Dobijeni rastvor je razblažen sa 200 mL EtOAc. Dobijena smeša je isprana sa 2x50 mL vode i 1x50 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:2). Ovo je rezultiralo sa 1.3 g (sirovo) jedinjenja iz naslova u obliku ulja. LCMS (ESI, m/z): 506.23 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 3-metil-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoata
[0920] Rastvor metil (2E)-3-metil-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]but-2-enoata (1.3 g, 2.57 mmol, 1.00 equiv) i paladijum na ugljeniku (200 mg) u DCM (30 mL) i metanolu (30 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi u inertnoj atmosfero vodonika. Čvrsta supstanca je profiltrirana. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:2). Ovo je rezultiralo sa 1 g (sirovo) jedinjenja iz naslova kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 508.24 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 3-metil-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanske kiseline
[0921] U mešani rastvor metil 3-metil-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoata (330 mg, 0.65 mmol, 1.00 equiv) u THF (6 mL) i vodi (2 mL), dodat je LiOH·H2O (100 mg, 2.38 mmol, 3.67 equiv). Dobijeni rastvor je mešan 5h na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvora je podešena na 1 sa hlorovodonikom (1 M M). Dobijeni rastvor je razblažen sa 200 mL EtOAc. Dobijena smeša je isprana sa 2x50 mL vodenog rastvora natrijum-hlorida. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i uparen pod vakuumom. Ovo je rezultiralo sa 300 mg (sirovo) jedinjenja iz naslova u obliku ulja. LCMS (ESI, m/z): 494.23 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 3-metil-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] butanska kiselina
[0922] Rastvor 3-metil-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanske kiseline (300 mg, 0.61 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (10 mL) je mešan tokom noći na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ovo je rezultiralo sa 200 mg (sirovo) jedinjenja iz naslova kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 364.15 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 6-[4-[(3R)-metil-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila i 6-[4-[(3S)-metil-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0923] U mešani rastvor 3-metil-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanske kiseline (200 mg, 0.55 mmol, 1.00 equiv) u DMF (10 mL), Int-A4 (125 mg, 0.66 mmol, 1.21 equiv), DIPEA (0.5 mL), dodat je i HATU (280 mg, 0.74 mmol, 1.34 equiv). Dobijeni rastvor je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC dajući (posle proizvoljnog dodeljivanja stereohemije) jedinjenja iz naslova, redom, izomer A (47.7 mg, 73 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 534.35 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 8.45 (dd, J= 2.3, 0.8 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.78 (dd, J= 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.90 (dd, J= 9.1, 0.8 Hz, 1H), 4.73 - 4.63 (m, 1H), 3.78 - 3.62 (m, 8H), 3.59 - 3.53 (m, 2H), 3.43 -3.35 (m, 4H), 2.45 (q, J= 8.8 Hz, 1H), 2.29 - 2.13 (m, 3H), 2.07 - 1.97 (m, 1H), 1.83 - 1.61 (m, 2H), 0.95 (d, J = 6.4 Hz, 3H). Rt = 4.919 min (CHIRALPAK IG-3, 0.46∗10cm; 3um, MtBE(0.1%DEA):MeOH = 90:10, 1.0 ml/min) i izomer B (41.3 mg, 64 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 534.15 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 8.45 (dd, J= 2.3, 0.8 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.78 (dd, J= 9.1, 2.3 Hz, 1H), 6.89 (dd, J= 9.1, 0.8 Hz, 1H), 4.68 (qd, J= 7.9, 2.7 Hz, 1H), 3.79 - 3.65 (m, 8H), 3.64 - 3.57 (m, 2H), 3.46 (dd, J= 9.1, 4.2 Hz, 1H), 3.43 - 3.34 (m, 2H), 3.25 (dd, J= 9.2, 6.0 Hz, 1H), 2.47 (q, J= 9.0 Hz, 1H), 2.29 - 2.14 (m, 3H), 2.06 - 1.98 (m, 1H), 1.83 - 1.62 (m, 2H), 0.90 (d, J = 6.3 Hz, 3H). Rt = 6.472 min (CHIRALPAK IG-3, 0.46* 10cm; 3um, MtBE(0.1%DEA):MeOH = 90:10, 1.0 ml/min).
Primer 129: 6-[4-[(3R)-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi] pirolidin-1-karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila i 6-[4-[(3S)-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]pirolidine-1-karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0924]
Korak 1: Sinteza 4-nitrofenil 4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-karboksilata
[0925] Rastvoru Int-A4 (500 mg, 2.23 mmol, 1.00 equiv) i TEA (676 mg, 6.68 mmol, 3.00 equiv) u DCM (10 mL) je dotat 4-nitrofenil hloroformat (450 mg, 2.23 mmol, 1.00 equiv), nakon čega je dobijeni rastvor mešan 1h na sobnoj temperaturi, razblažen sa 10 mL vode, ekstrahovan sa 2x10 mL DCM. Organski slojevi su spojeni, isprani sa 1x10 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida, osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata i upareni pod vakuumom, nakon čega je ostatak nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom kako bi se dobilo 520 mg (66 %) jedinjenja iz naslova kao žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 354.11 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-[4-(3-hidroksipirolidin-1-karbonil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0926] Rastvor pirolidin-3-ol hidrohlorida (175 mg, 1.42 mmol, 1.00 equiv), 4-nitrofenil 4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-karboksilata (500 mg, 1.42 mmol, 1.00 equiv) i kalijum-karbonata (390 mg, 2.82 mmol, 2.00 equiv) u DMF (5 mL) je mešan 2h na 80°C, a onda je dobijeni rastvor razblažen sa 15 mL vode, ekstrahovan sa 3x15 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni, isprani sa 1x15 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida, osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Nakon toga je ostatak nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom kako bi se dobilo 280 mg (66 %) jedinjenja iz naslova kao žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 302.15 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza tert-butil (2S)-2-[([1-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-karbonil]pirolidin-3-yl]oksi)metil]pirolidin-1-karboksilata
[0927] Rastvoru 6-[4-(3-hidroksipirolidin-1-karbanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (400 mg, 1.33 mmol, 1.00 equiv) u DMF (8 mL) je dodat natrijum-hidrid (159 mg, 6.62 mmol, 3.00 equiv) i onda je dobijeni rastvor mešan 15min na sobnoj temperaturi, nakon čega mu je dodat tert-butil (2S)-2-[(metansulfoniloksi)metil]pirolidin-1-karboksilat (556 mg, 1.99 mmol, 1.50 equiv) i dobijeni rastvor je mešan 12h na 80°C u uljanom kupatilu. Onda je dobijeni rastvor ugašen dodatkom 15 mL vode, ekstrahovan sa 3x15 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni, isprani sa 1x15 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida, osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata, koncentrovani pod vakuumom i onda je ostatak nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc kako bi se dobilo 85 mg (13%) jedinjenja iz naslova kao svetlo žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 485.28 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 6-[4-(3-[[(2S)-pirolidin-2-yl]metoksi]pirolidin-1-karbonil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0928] Rastvor tert-butil (2S)-2-[([1-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-karbonil]pirolidin-3-yl]oksi)metil]pirolidin-1-karboksilata (85 mg, 0.18 mmol, 1.00 equiv) i TFA (0.2 mL) in DCM (1.0 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 56 mg jedinjenja iz naslova kao sirovog žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 385.23 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 6-[4-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yripirolidin-2-yl]metoksi]pirolidin-1-karbonil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0929] Rastvor Int-A6 (47.7 mg, 0.15 mmol, 1.00 equiv), 6-[4-(3-[[(2S)-pirolidin-2-yl]metoksi]pirolidin-1-karbonil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (50 mg, 0.13 mmol, 1.00 equiv) i TEA (51.7 mg, 0.51 mmol, 3.00 equiv) u etanolu (5 mL) je mešan 1h na 60°C i onda je dobijeni rastvor koncenrovan pod vakuumom i ostatak nanet na silika gel kolonu i eluiran sa DCM/metanolom (15:1) kako bi se dobilo 89 mg (91%) jedinjenje iz naslova kao svetlo žuta čvrste supstanca. LCMS (ESI, m/z):677.31 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 6-[4-[(3R)-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl] metoksi]pirolidin-l-karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila i 6-[4-[(3S)-3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]pirolidin-1-karbonil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0930] Rastvor 6-[4-(3-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]pirolidin-1-karbonil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (85 mg, 0.13 mmol, 1 equiv) i TFA (1mL) in DCM (5 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi i onda je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom i ostatak prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući (nakon proizvoljnog dodeljivanja stereohemije), jedinjenja iz naslova, redom, izomer A (14.1 mg, 20.5 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 547.15 [M+H]<+>,<1>HNMR (Metanol-d4, 300 MHz): δ 8.43 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.67- 4.61 (m, 1H), 4.07 (s, 1H), 3.80-3.65 (m, 6H), 3.57-3.35 (m, 7H), 3.33-3.26 (m, 3H), 2.27 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 2.03-1.82 (m, 3H), 1.81-1.56 (m, 2H); tR = 3.580 min (CHIRALPAK AS-3, 0.46*100mm; 3um, EtOH(0.1%DEA), 4.0mL/min) i izomer B (9.7 mg, 14.1 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 547.15 [M+H]<+>,<1>HNMR (Metanol-d4, 300 MHz) :δ 8.43 (d, J = 2.4, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.65-4.61 (m, 1H), 4.09 (s, 1H), 3.81-3.66 (m, 6H), 3.57 (dd, J= 12.0, 4.2 Hz, 1H), 3.47- 3.34 (m, 6H), 3.31-3.24 (m, 3H), 2.26 (dt, J = 13.8, 6.7 Hz, 1H), 2.06-1.97 (m, 2H), 1.93-1.55 (m, 3H). tR = 2.821 min (CHIRALPAK IA, 0.46∗55cm;5um, EtOH(0.1%DEA), 4.0mL/min).
Primer 130: 6-[4-[3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]piperidin-2-yl]metoksi) propanoil] piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0931]
Korak 1: Sinteza 4-bromo-5-[2-(hidrooksimetil)piperidin-1-yl]-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0932] Rastvor (piperidin-2-yl)metanola (2 g, 17.3 mmol, 1.00 equiv), DIEA (9 g, 69.6 mmol, 4.00 equiv), Int-A8 (6.6 g, 17.2 mmol, 1.00 equiv) u IPA (30 mL) je mešan 12h na 100 °C. Rastvarač je uparen pod vakuumom i ostatak je nanet na silika gel kolonu eluiranjem sa EtOAc/petrol etrom (1:2) kako bi se dobilo 4.17 g (58 %) jedinjenja iz naslova kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 418.12 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza metil 3-[[1-(5-bromo-6-okso-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl)piperidin-2-yl]metoksi]propanoata
[0933] Rastvor 4-bromo-5-[2-(hidroksimetil)piperidin-1-yl]-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (830 mg, 2.00 mmol, 1.00 equiv), Cs2CO3(1300 mg, 4 mmol, 2.00 equiv), metil prop-2-enoata (720 mg, 8.00 mmol, 4.00 equiv) u DMF (15 mL) je mešan 16h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ugašen sa 60ml H2O, a onda je rastvor ekstrahovan sa EtOAc (3 x 60 mL) i organski slojevi su spojeni. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijumsulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (20:80) kako bi se dobilo 800 mg (95 %) jedinjenja iz naslova kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 504.16 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza metil 3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]piperidin-2-yl]metoksi)propanoata
[0934] Rastvor metil 3-[[1-(5-bromo-6-okso-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]methi]-1,6-dihidropiridazin-4-yl)piperidin-2-yl]metoksi]propanoata (750 mg, 1.49 mmol, 1.00 equiv), CuI (30 mg, 0.16 mmol, 0.10 equiv), etil 2,2-difluoro-2-sulfoacetata (1.5 g, 7.28 mmol, 5.00 equiv) u DMF (10 mL) je mešan 5h na 80°C. Dobijeni rastvor je ugašen sa 30 ml H2O, onda je rastvor ekstrahovan sa EtOAc (3 x 30 mL) i organski slojevi su spojeni. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (30:70) kako bi se dobilo 750 mg (80 %) jedinjenja iz naslova kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 494.23 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]piperidin-2-yl]metoksi)propanske kiseline
[0935] Rastvor metil 3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]piperidin-2-yl]metoksi)propanoata (750 mg, 1.52 mmol, 1.00 equiv), vode (2 mL), LiOH (180 mg, 7.52 mmol, 5.00 equiv) u THF (10 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo 500 mg (66 %) jedinjenja iz naslova kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 480.23 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 6-[4-[3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]piperidin-2-yl]metoksi)propanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0936] Rastvor 3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]piperidin-2-yl]metoksi)propanske kiseline (500 mg, 1.04 mmol, 1.00 equiv), HATU (520 mg, 1.37 mmol, 1.30 equiv), DIEA (270 mg, 2.09 mmol, 2.00 equiv), Int-A4 (200 mg, 1.06 mmol, 1.00 equiv) u DMF (3 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ugašen sa 20 ml H2O, onda je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 30 mL) i organski slojevi su spojeni. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:1) kako bi se dobilo 550 mg (81 %) jedinjenja iz naslova kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 650.31 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 6-[4-[3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]piperidin-2-yl]metoksi) propanoil] piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0937] Rastvor 6-[4-[3-([1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilyl)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]piperidin-2-yl]metoksi)propanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (550 mg, 0.85 mmol, 1.00 equiv), TFA (2 mL) u DCM (10 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (57.0 mg, 13.1 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 520.30 [M+H]<+>,<1>HNMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 12.53 (s, 1H), 8.51 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 7.92 - 7.87 (m, 2H), 6.93 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 3.96 (s, 1H), 3.79 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 3.66 - 3.42 (m, 12H), 3.24 - 3.20 (m, 1H), 2.49 - 2.43 (m, 2H), 1.84 - 1.73 (m, 3H), 1.71 - 1.52 (m, 3H).
Primer 131: 6-(4-(3-((1-(5-bromo-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-yl)piperidin-2-yl)metoksi)propanoil)piperazin-1-yl)nikotinonitril
[0938]
Korak 1: 3-((1-(5-bromo-6-okso-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)piperidin-2-yl)metoksi) propanska kiselina
[0939] Rastvor metil 3-((1-(5-bromo-6-okso-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)piperidin-2-yl)metoksi)propanoata (503 mg, 1.00mmol, 1.00 equiv), vode (2 mL), LiOH (120 mg, 5.00 mmol, 5.00 equiv) u THF (10 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo 395 mg (81 %) jedinjenja iz naslova kao čvrste supastance. LCMS (ESI, m/z): 490.14 [M+H]<+>.
Korak 2: 6-(4-(3-((1-(5-bromo-6-okso-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)piperidin-2-yl) metoksi)propanoil)piperazin-1-yl)nikotinonitril
[0940] Rastvor 3-((1-(5-bromo-6-okso-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)piperidin-2-yl)metoksi)propanska kiselina (395 mg, 0.80 mmol, 1.00 equiv), HATU (365 mg, 0.96 mmol, 1.20 equiv), DIEA (230 mg, 1.60 mmol, 2.00 equiv), Int-A4 (150 mg, 0.80 mmol, 1.00 equiv) u DMF (3 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ugašen sa 20 ml H2O, onda je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 30 mL) i organski slojevi su pomešani. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:1) kako bi se dobilo 417 mg (79 %) jedinjenja iz naslova kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 660.24 [M+H]<+>.
Korak 3: 6-(4-(3-((1-(5-bromo-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-yl)piperidin-2-yl)metoksi)propanoil)piperazin-1-yl) nikotinonitril
[0941] Rastvor 6-(4-(3-((1-(5-bromo-6-okso-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)piperidin-2-yl)metoksi)propanoil)piperazin-1-yl)nikotinonitrila (417 mg, 0.63 mmol, 1.00 equiv), TFA (2 mL) u DCM (10 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (32.5 mg, 30.1%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 532.25 [M+H]<+>,<1>HNMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 12.68 (s, 1H), 8.51 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 7.89 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 6.93 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.15 (s, 1H), 3.83 (t, J= 2.1 Hz, 1H), 3.68 -3.66 (m, 4H), 3.65 -3.40 (m, 8H), 3.26 - 3.20 (m, 1H), 2.49 - 2.43 (m, 2H), 1.84 -1.52 (m, 6H).
Primer 132: N-[3-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-3-oksopropil]-2-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]acetamid
[0942]
Korak 1: Sinteza tert-butil N-[3-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-3-oksopropil]karbamata
[0943] Rastvor Int-A4 (500 mg, 2.23 mmol, 1.00 equiv), DIEA (863 mg, 6.68 mmol, 3.00 equiv), HATU (1.27 g, 3.34 mmol, 1.50 equiv), 3-{[(tert-butoksi)karbonil]amino}propanske kiseline (422 mg, 2.23 mmol, 1.00 equiv) u DMF (5 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo 620 mg (78%) jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 360.20 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-[4-(3-aminopropanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril hidrohlorid
[0944] Rastvor tert-butil N-[3-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-3-oksopropil]karbamata (610 mg, 1.70 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (5 mL, 1.00 equiv) je mešan 30min na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 260 mg (52 %) jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 260.14[M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 2-[(2S)-pirolidin-2-yl] hidrohlorida sirćetne kiseline
[0945] Rastvor 2-[(2S)-1-[(tert-butoksi)karbonil]pirolidin-2-yl]sirćetna kiselina (200 mg, 0.87 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (5 mL) je mešan 30min na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovna pod vakuumom kako bi se dobilo 160 mg (sirovo) jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 130.08 [M+H]<+>. Korak 4: Sinteza 2-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4yl] pirolidin-2-yl]sirćetne kiseline
[0946] Rastvor 2-(pirolidin-2-yl) hidrohlorida sirćetne kiseline (160 mg, 0.97 mmol, 1.00 equiv), Int-A6 (319 mg, 0.97 mmol, 1.00 equiv), TEA (195 mg, 1.93 mmol, 2.00 equiv) u etanolu (5 mL) je mešan 2h na 80 °C. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom, ostatak je nanet na silika gel kolonu eluiranjem sa DCM/metanolom (9/1) kako bi se dobilo 320 mg (79 %) jedinjenje iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 422.16 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 2-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2yl]sirćetne kiseline [0947] Rastvor 2-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]sirćetne kiseline (310 mg, 0.74 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (5 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo 80 mg (37%) jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 292.08 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza N-[3-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-3-oksopropil]-2-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]acetamida
[0948] Rastvor 2-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]sirćetne kiseline (60 mg, 0.21 mmol, 1.00 equiv), DIEA (80 mg, 0.62 mmol, 3.00 equiv), HOBT (42 mg, 0.31 mmol, 1.50 equiv), EDCI (59.4 mg, 0.31 mmol, 1.50 equiv), 6-[4-(3-aminopropanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril hidrohlorida (122 mg, 0.41 mmol, 2.00 equiv) in DMF (2 mL) je mešan 12h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući amid jedinjenja iz naslova (30.2 mg, 28 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 533.52 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.45 (s, 1H), 8.51 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.07 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.89 (dd, J = 9.1, 2.3 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.52 (t, J = 6.7 Hz, 1H), 3.72-3.66 (m, 4H), 3.58 - 3.49 (m, 5H), 3.27 -3.20 (m, 3H), 2.51 - 2.41 (m, 3H), 2.26 (dd, J= 13.9, 7.9 Hz, 1H), 2.17 - 2.09 (m, 1H), 1.89 (s, 1H), 1.79 - 1.65 (m, 2H).
Primer 133: 6-[4-(3-[[(2S,4S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-4-(trifluorometil)pirolidin-2-yl] metoksi] propanoil)piperazin-1-yl] piridin-3-karbonitril
[0949]
Korak 1: Sinteza tert-butil (2S,4S)-2-(hidroksimetil)-4-(trifluorometil)pirolidin-1-karboksilata
[0950] U struji azota, rastvor (2S,4S)-1-[(tert-butoksi)karbonil]-4-(trifluorometil)pirolidin-2-karboksilne kiseline (1.5 g, 5.30 mmol, 1.00 equiv) i BH3THF(7 mL, 4.00 equiv, 1M) u THF (20 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi, a onda je reakcija ugašena dodavanjem 20 mL vode, ekstrahovano je sa 4x20 mL EtOAc i organski spojevi su spojeni, isprani sa 1x20 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida, osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovani pod vakuumom kako bi se dobilo 1.35 g jedinjenja iz naslova kao sirovog žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 270.12 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza [(2S, 4S)-4-(trifluorometil)pirolidin-2-yl]metanol hidrohlorida
[0951] Rastvor tert-butil (2S,4S)-2-(hidroksimetil)-4-(trifluorometil)pirolidine-1-karboksilata (1.35 g, 5.01 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (15 mL, 4M) je mešan 1.5h na sobnoj temperaturi, a onda je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 1.2 g jedinjenja iz naslova kao žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 170.07 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 5-[(2S,4S)-2-(hidroksimetil)-4-(trifluorometil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0952] Rastvor [(2S,4S)-4-(trifluorometil)pirolidin-2-yl]metanol hidrohlorida (1.1 g, 5.35 mmol, 1.00 equiv), TEA (1.08 g, 10.67 mmol, 2.00 equiv) i Int-A6 (1.76 g, 5.35 mmol, 1.00 equiv) u etanolu (15 mL) je mešan 1h na 60°C, a onda je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1;3) kako bi se dobilo 1.3 g (53 %) jedinjenja iz naslova kao svetlo braon čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 462.16 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza metil 3-[[(2S,4S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-4-(trifluorometil)pirolidin-2-yl]metoksi]propanoata
[0953] Rastvor 5-[(2S,4S)-2-(hidroksimetil)-4-(trifluorometil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (600 mg, 1.30 mmol, 1.00 equiv), Cs2CO3(1.27 g, 3.90 mmol, 3.00 equiv) i metil prop-2-anoata (559 mg, 6.49 mmol, 5.00 equiv) u MeCN (15 mL) je mešan 3h na sobnoj temperaturi, a onda je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanet na silika gel kolonu eluiranjem sa EtOAc/petrol etrom (1:3) kako bi se dobilo 374 mg (53%) jedinjenja iz naslova u obliku svetlo žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 548.19 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza metil 3-[[(2S,4S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-4-(trifluorometil)pirolidin-2-yl]metoksi]propanoata
[0954] Rastvor metil 3-[[(2S,4S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]4-(trifluorometil)pirolidin-2-yl]metoksi]propanoata (374 mg, 0.68 mmol, 1.00 equiv) i TFA (1 mL) in DCM (5 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi, a onda je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 250 mg jedinjenja iz naslova u obliku svetlo žutog sirovog ulja. LCMS (ESI, m/z): 418.11 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 3-[[(2S,4S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-4-(trifluorometil)pirolidin-2- yl] metoksi]propanska kiselina
[0955] Rastvor metil 3-[[(2S,4S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-4-(trifluorometil)pirolidin-2-yl]metoksi]propanoata (250 mg, 0.60 mmol, 1.00 equiv) i LiOH (76 mg, 3.17 mmol, 3.00 equiv) u THF (10 mL) i vodi (2 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi, a onda je dobijeni rastvor razblažen sa 3 mL vode, ekstrahovan sa 2x5 mL EtOAc i vodeni slojevi su spojeni, pH vrednost vodenih slojeva podešena na 4 sa hlorovodonikom (1 M), a onda ekstrahovani sa 2x5 mL EtOAc. Onda su organski slojevi spojeni, osušeni preko anhidrovanoh natrijum-sulfata i koncentrovani pod vakuumom kako bi se dobilo 180 mg jedinjenja iz naslova u obliku svetlo žutog sirovog ulja. LCMS (ESI, m/z): 404.10 [M+H]<+>.
Korak 7: Sinteza 6-[4-(3-[[(2S,4S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-4-(trifluorometil)pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0956] Rastvor 3-[[(2S,4S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-4-(trifluorometil)pirolidin-2-yl]metoksi]propanske kiseline (170 mg, 0.42 mmol, 1 equiv), DIEA (163.4 mg, 1.26 mmol, 3.00 equiv), HATU (160.3 mg, 0.42 mmol, 1.00 equiv) i Int-A4 (87.3 mg, 0.46 mmol, 1.10 equiv) u DMF (10 mL) je mešan 40min na sobnoj temperaturi, a onda je dobijeni rastvor ekstrahovan sa 3x50 ml EtOAc, ispran sa 3x50 ml koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida i organski slojevi su spojeni, osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Onda je ostatak prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (25.1 mg, 10.38%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 574.05 [M+H]<+>.<1>HNMR: (CD3OD, 400MHz): δ 8.42 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.77 (dd, J = 9.2, 2.4Hz, 1H), 6.86 (d, J = 8.8Hz, 1H), 4.74 (dt, J = 11.0, 5.5 Hz, 1H), 3.79-3.61 (m, 12H), 3.53-3.47 (m, 2H), 3.08 (d, J = 7.6Hz, 1H), 2.64 (dd, J = 11.6, 5.2Hz, 2H), 2.43-2.40 (m, 1H), 1.92 (td, J = 12.2, 8.3 Hz, 1H).
Primer 134: (S)-3-(4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl)-N-((1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl)metil)propanamid
[0957]
Korak 1: Sinteza etil 3-(4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl)propanoata
[0958] Rastvor etil prop-2-enoata (600 mg, 5.99 mmol, 1.20 equiv), Int-A4 (940 mg, 4.99 mmol, 1.00 equiv) u etanolu (10 mL) je mešan 5.5h na 80 °C. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 1.29 g sirovog jedinjenja iz naslova u obliku belog ulja. LCMS (ESI, m/z): 289.16 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 3-(4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl)propanske kiseline
[0959] Rastvor etil 3-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]propanoata (1.56 g, 5.41 mmol, 1.00 equiv), LiOH (648 mg, 27.06 mmol, 5.00 equiv), vode (3 mL) u metanolu (15 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvora je podešena na 5 sa hlorovodonikom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu eluiranjem sa DCM/metanolom (10:1) kako bi se dobilo 687 mg (49 %) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 261.13 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 5-[(2S)-2-(azidometil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0960] Rastvor 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (1 g, 2.54 mmol, 1.00 equiv), DPPA (1.4 g, 5.09 mmol, 2.00 equiv), DBU (772.6 mg, 5.07 mmol, 2.00 equiv) u toluenu (15 mL) je mešan 6h na 100 °C. Nakon koncentrovanja pod vakuumom, ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:1) kako bi se dobilo 1 g (94 %) jedinjenje iz nalsova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 419.18 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 5-[(2S)-2-(aminometil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0961] Rastvor 5-[(2S)-2-(azidometil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (1 g, 2.39 mmol, 1.00 equiv), paladijum na ugljeniku (200 mg) u metanolu (15 mL) je mešana 0.5h na sobnoj temperaturi u H2 atmosferi. Čvrsta supstanca je profiltrirana. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 864 mg sirovog jedinjenja iz naslova kao crnog ulja. LCMS (ESI, m/z): 393.19 [M+H]<+>. Korak 5: Sinteza (S)-3-(4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl)-N-((1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil) etoksi)metil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl)metil)propanamida
[0962] Sinteza 3-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]propanske kiseline (220.22 mg, 0.85 mmol, 1.10 equiv), 5-[(2S)-2-(aminometil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (300 mg, 0.76 mmol, 1.00 equiv), HATU (441 mg, 1.16 mmol, 1.50 equiv), DIEA (298 mg, 2.31 mmol, 3.00 equiv) u DMF (3 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo 224 mg (46 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 635.30 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza (S)-3-(4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl)-N-((1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl)metil)propanamida
[0963] Rastvor 3-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-N-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metil]propanamida (202 mg, 0.32 mmol, 1.00 equiv), TFA (2 mL) u DCM (10 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću Prep- HPLC i eluiran sa H2O/CH3CN dajući jedinjenje iz naslova (105 mg, 65 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 505.10 [M+H]<+>,<1>HNMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ:8.41 (dd, J= 2.4, 0.7 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.74 (dd, J= 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.87 (dd, J= 9.2, 0.9 Hz, 1H), 4.46 (t, J= 5.3 Hz,1H), 3.73 (t, J= 5.2 Hz, 5H), 3.48 (dd, J= 13.8, 4.7 Hz, 1H), 3.38 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 2.69 - 2.67 (m, 2H), 2.58 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.44 (t, J= 7.0 Hz, 2H), 2.35 - 2.26 (m, 1H), 2.02 (s, 1H), 1.89 - 1.69 (m, 2H).
Primer 135: 6-[4-[3-([[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metil]amino) propanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0964]
Korak 1: Sinteza 6-[4-[3-([[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metil]amino)propanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0965] Rastvor 5-[(2S)-2-(aminometil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilyil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (470 mg, 1.20 mmol, 1.00 equiv), DIEA (14.45 mg, 0.11 mmol, 0.10 equiv), 6-[4-(prop-2-enoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (257.5 mg, 1.06 mmol, 0.95 equiv) i i-propanolu (10 mL) je mešan 20h na 100°C. Nakon koncentrovanja, ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:1) kako bi se dobilo 410 mg (54 %) jedinjenje iz naslova u obliku braon ulja. LCMS (ESI, m/z): 635.31[M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-[4-[3-([[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metil] amino) propanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0966] Rastvor 6-[4-[3-([[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metil]amino)propanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (400 mg, 0.63 mmol, 1.00 equiv), TFA (3 mL) u DCM (15 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN dajući jedinjenje iz naslova (46 mg, 14 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 505.10 [M+H]<+>,<1>HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.36 (s, 1H), 8.52 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.89 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.34 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 3.86 - 3.60 (m, 4H), 3.56 - 3.50 (m, 5H), 3.20 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 2.88 - 2.53 (m, 4H), 2.49 - 2.43 (m, 2H), 2.13 (s, 1H), 1.90 (s, 1H), 1.67-1.60 (m, 2H).
Primer 136: (S)-6-(4-(3-(metil((1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl)metil) amino)propanoil)piperazin-1-yl)nikotinonitril
[0967]
Korak 1: Sinteza (S)-tert-butil 2-((3-(4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oksopropilamino)metil)pirolidin-1-karboksilata
[0968] Rastvor 6-(4-akriloylpiperazin-1-yl)nikotinonitrila (500 mg, 2.07 mmol, 1.00 equiv), DIEA (26.7 mg, 0.21 mmol, 0.10 equiv), (S)-tert-butil 2-(aminometil)pirolidin-1-karbokasilata (454.5 mg, 2.27 mmol, 1.10 equiv) u i-PrOH (10ml) je mešan 15h na 100 °C . Nakon koncentrovanja, ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:1) kako bi se dobilo 700 mg (76.7 %) jedinjenje iz naslova kao belo ulje. LCMS (ESI, m/z): 443.28 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza (S)-tert-butil 2-(((3-(4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oksopropil)(metil)amino)metil) pirolidin-1-karboksilata
[0969] Rastvor (S)-tert-butil 2-((3-(4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oksopropilamino)metil)pirolidin-1-karboksilata (511 mg, 1.15 mmol, 1.00 equiv), (HCHO)n (312 mg, 3.00 equiv), sirćetne kiseline (0.5 mL), NaBH3CN (218.6 mg, 3.48 mmol, 3.00 equiv) u metanolu (20 mL) je mešan 20h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentorvanja, ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (40:60) kako bi se dobilo 500 mg (95 %) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 457.29[M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza (S)-6 (4-(3-(metil(pirolidin-2-ylmetil)amino)propanoil)piperazin-1-yl)nikotinonitrila
[0970] Rastvor (S)-tert-butil 2-(((3-(4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl)-3-oksopropil)(metil)amino)metil)pirolidin-1-karboksilata (500 mg, 1.10 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (20 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom kako bi se dobilo 400 mg sirovog jedinjenja iz naslova kao braon čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 357.24 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza (S)-6-(4-(3-(metil((1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl)metil)amino)propanoil)piperazin-1-yl)nikotinonitrila
[0971] Rastvor (S)-6-(4-(3-(metil(pirolidin-2-ylmetil)amino)propanoil)piperazin-1-yl)nikotinonitrila (400 mg, 1.12 mmol, 1.00 equiv), TEA (339.4 mg, 3.35 mmol, 3.00 equiv), Int-A6 (479 mg, 1.46 mmol, 1.30 equiv) u etanolu (20 mL) je mešan 3h na 70 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (80:20) kako bi se dobilo 980 mg sirovog jedinjenja iz naslova kao žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 649.33 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza (S)-6-(4-(3-(metil((1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl)pirolidin-2-yl)metil) amino)propanoil)piperazin-1-yl)nikotinonitrila
[0972] Rastvor (S)-6-(4-(3-(metil((1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidro-piridazin-4-yl)pirolidin-2-yl)metil)amino)propanoil)piperazin-1-yl)nikotinonitrila (900 mg, 1.39 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (20 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je ostatak dalje prečišćen pomoću PrepHPLC dajući jedinjenje iz naslova (38 mg, 5 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 519.10 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Hloroform-d) δ 10.81 (s, 1H), 8.44 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.67 (dd, J = 9.0, 2.3 Hz, 1H), 6.64 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.33 (q, J = 7.5 Hz, 1H), 3.75 (d, J = 10.3 Hz, 4H), 3.69 (d, J = 5.5 Hz, 3H), 3.58 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 3.47 - 3.26 (m, 1H), 2.88 - 2.83 (m, 1H), 2.77 - 2.70 (m, 1H), 2.62 - 2.38 (m, 4H), 2.31 (s, 4H), 2.15 - 1.87 (m, 1H), 1.76 - 1.67(m, 1H), 1.66 - 1.61 (m, 1H).
Primer 137: 6-[4-(3-[[(7S)-6-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-7-yl]metoksi]propanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril i 6-14-(3-[[(7R)-6-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-7-yl]metoksi]propanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril [0973]
Korak 1: Sinteza 2-[[(2-hloropiridin-3-yl)metil]amino]acetata
[0974] Rastvor metil 2-aminoacetat hidrohlorida (39.89 g, 317.71 mmol, 1.50 equiv), 2-hloropiridin-3-karbaldehida (30 g, 211.93 mmol, 1.00 equiv) i TEA (42.9 g, 423.95 mmol, 2.00 equiv) u metanolu (200 mL) je mešan 12h na sobnoj temperaturi i onda je dodat NaBH4(16.17 g, 427.44 mmol, 2.00 equiv), nakon čega je dobijeni rastvor mešan još dodatnih 40 min na sobnoj temperaturi. Onda je dobijeni rastvor ugašen sa dodatkom 250 mL vode, ekstrahovan sa 2x300 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni, isprani sa 1x300 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida, osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovani pod vakuumom, nakon čega je ostatak nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (3:2) kako bi se dobilo 26.1 g (57 %) jeidnjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 215.05 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza metil 2-[[(tert-butoksi)karbonil][(2-hloropiridin-3-yl)metil]amino]acetata
[0975] Rastvor metil 2-[[(2-hloropiridin-3-yl)metil]amino]acetata (26.6 g, 123.9 mmol, 1.00 equiv) i TEA (37.6 g, 371.6 mmol, 3.00 equiv) u DCM (200 mL) je mešan 10min na sobnoj temperaturi, a onda je dodat (Boc)2O (40.6 g, 186 mmol, 1.50 equiv) i dobijeni rastvor je mešan još 1.5 h na sobnoj temperaturi. Nakon toga dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:6) kako bi se dobilo 26.8 g (69 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 315.05 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 6-tert-butil 7-metil 5H, 6H, 7H-pirolo[3,4-b]piridin-6,7-dikarboksilata
[0976] U struji azota, rastvor metil 2-[[(tert-butoksi)karbonil][(2-hloropiridin-3-yl)metil]amino]acetata (4 g, 12.71 mmol, 1.00 equiv), Pd(PPh3)4(1.47 g, 1.27 mmol, 0.10 equiv), K3PO4(8.1 g, 3.00 equiv) i PhOH (358 mg, 0.30 equiv) u DMF (75 mL) je mešan 2.5h na 90°C. Onda je dobijeni rastvor razblažen sa 100 mL EA, ispran sa 3x80 mL H2O, osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata, koncentrovan pod vakuumom i onda je ostatak nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:3) kako bi se dobilo 620 mg (18%) jedinjenja iz naslova kao svetlo žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 279.13 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza tert-butil 7-(hidroksimetil)-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-karboksilat
[0977] Rastvor 6-tert-butil 7-metil 5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6,7-dikarboksilata (1.46 g, 5.25 mmol, 1.00 equiv) i LAH (597 mg, 17.6 mmol, 3.00 equiv) u THF (60 mL) je mešan 0.5 h na sobnoj temperaturi i onda je dobijeni rastvor ugašen dodatkom 2 mL vode i 2 mL 20% vodenog rastvora NaOH. Nakon toga je smeša osušena preko anhidrovanog natrijum-sulfata i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (7:3) kako bi se dobilo 210 mg (16 %) jedinjenja iz naslova u obliku narandžaste čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 251.13 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza [5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-7-yl]metanol hidrohlorida
[0978] Rastvor tert-butil 7-(hidroksimetil)-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-karboksilata (210 mg, 0.84 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (10 mL, 4M) je mešan 1h na sobnoj temperaturi i onda je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 156 mg (sirovo) jedinjenja iz naslova kao braon čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 151.08 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 5-[7-(hidroksimetil)-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0979] Rastvor [5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-7-yl]metanol hidrohlorida (500 mg, 3.33 mmol, 1.00 equiv), Int-A6 (1.08 g, 3.28 mmol, 1.00 equiv) i TEA (1 g, 9.88 mmol, 3.00 equiv) u etanol (25 mL) je mešan 1h na 60 °C i onda je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanet na silika gel kolonu eluiranjem sa EtOAc/petrol etrom (8:2) kako bi se dobilo 464 mg (31 %) jedinjenja iz naslova kao braon čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 443.16 [M+H]<+>.
Korak 7: Sinteza metil 3-([6-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-5H,6H7H-pirolo[3,4-b]piridin-7-yl]metoksi)propanoata
[0980] Rastvor 5-[7-(hidroksimetil)-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-6-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (270 mg, 0.61 mmol, 1.00 equiv), Cs2CO3(595 mg, 1.83 mmol, 3.00 equiv) i metil prop-2-enoata (157 mg, 1.82 mmol, 3.00 equiv) u MeCN (12 mL) je mešan 18h na sobnoj temperaturi, i onda je dobijeni rastvor razblažen sa 20 mL EtOAc, ispran sa 3x15 mL H2O, organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovani pod vakuumom, nakon čega je ostatak nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (67:33) kako bi se dobilo 114 mg (35 %) jedinjenje iz naslova kao bezbojna čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 529.20 [M+H]<+>.
Korak 8: Sinteza 3-([6-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-7-yl]metoksi)propanske kiseline
[0981] Rastvor metil 3-([6-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-7-yl]metoksi)propanoata (540 mg, 1.02 mmol, 1.00 equiv) i LiOH.H2O (214 mg, 5.10 mmol, 5.00 equiv) u metanolu (5 mL) i vodi (1 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi i onda je pH vrednost rastvora podešena na 5 sa hlorovodonikom (12 M) i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 420 mg jedinjenje iz naslova u obliku braon sirove čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 515.19 [M+H]<+>.
Korak 9: Sinteza 3-([6-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-7- yl] metoksi)propanska kiselina
[0982] Rastvor 3-([6-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-SH,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-7-yl]metoksi)propanske kiseline (460 mg, 0.89 mmol, 1.00 equiv) i TFA (5 mL) u DCM (20 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi i onda je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 344 mg jedinjenje iz naslova u obliku braon sirove ulja. LCMS (ESI, m/z): 385.10 [M+H]<+>.
Korak 10: Sinteza 6-[4-(3-[[(7S)-6-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-7-yl]metoksi]propanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila i 6-[4-(3-[[(7R)-6-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-7-yl]metoksi]propanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0983] Rastvor 3-([6-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-5H,6H,7H-pirolo[3,4-b]piridin-7-yl]metoksi)propanske kiseline (344 mg, 0.90 mmol, 1.00 equiv), HATU (339 mg, 0.89 mmol, 1.00 equiv), DIEA (576 mg, 4.46 mmol, 5.00 equiv) i Int-A4 (232 mg, 0.89 mmol, 1.00 equiv) u DMF(4 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi, a onda je ostatak prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatogarfije i eluiran sa H2O/CH3CN. Nakon koncentrovanja, ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC dajući jedinjenja iz naslova. Apsolutna stereohemija je određena na osnovu kristalne strukture X-zraka proteina datog u Primeru 18 Izomer B kojem je potvrđena (S)-absolutena stereohemija i primećen je kao potentniji enantiomer.
[0984] Izomer A (39.8 mg, 30 %) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 555.10 [M+H]<+>,<1>HNMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ 8.50 (d, J = 3.9Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.82-7.76 (m, 2H), 7.38(dd, J = 8.4, 5.1 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 8.7Hz, 1H). 5.78 (t, J = 3.0Hz, 1H), 5.28 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 4.70 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 4.1.0 (dd, J = 10.2, 2.7 Hz, 1H), 3.87-3.54 (m, 11H), 2.61 (dd, J = 10.5, 5.4Hz, 2H). tR = 4.838 min (CHIRALPAK IC-3, 0.46*10cm;3um, MtBE(0.1%DEA):EtOH=70:30, 1.0mL/min) i izomer B (38.1 mg, 29 %) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z):555.10 [M+H]<+>, tR = 5.930 min (CHIRALPAK IC-3, 0.46*10cm;3um, MtBE(0.1%DEA):EtOH=70:30, 1.0mL/min).
Primer 138: 3-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-N-metil-N-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metil]propanamid
[0985]
Korak 1: Sinteza 5-[(2S)-2-[(metilamino)metil]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0986] Rastvor 5-[(2S)-2-(aminometil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (570 mg, 1.45 mmol, 1.00 equiv), kalijum-hidroksida (15 mg, 0.27 mmol, 0.20 equiv), CH2O (47 mg, 1.57 mmol, 1.20 equiv), NaBH4(100 mg, 2.64 mmol, 2.00 equiv) u metanolu (20 mL) je mešan 4h na 50 °C u uljanom kupatilu. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 2x200 mL DCM, organski slojevi su spojeni i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa DCM/metanolom (96:4) kako bi se dobilo 380 mg (64 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 407.20 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 3-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-N-metil-N-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metil]propanamida
[0987] Rastvor 3-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]propanske kiseline (248 mg, 0.95 mmol, 1.00 equiv), DIEA (368 mg, 2.85 mmol, 3.00 equiv), HATU (365 mg, 0.96 mmol, 1.02 equiv), 5-[(2S)-2-[(metilamino)metil]pirolidin-1- yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (386 mg, 0.95 mmol, 1.00 equiv) u DMF (3 mL) je mešan 1h na 25 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN (15:85) kako bi se dobilo 300 mg jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 649.32 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 3-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-N-metil-N-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metil]propanamida
[0988] Rastvor 3-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-N-metil-N-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metil]propanamida (300 mg, 0.46 mmol, 1.00 equiv), rastvor TFA/DCM (12 mL) u DCM (10 mL) je mešan 1h na 25 °C. pH vrednost rastvora je podešena na 8 sa NH2CH2CH2OH. Sirovi proizvod (150 mg) je prečišćen pomoću Flash-Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (97.9 mg 41 %) kao belu čvrstu supatancu. LCMS (ESI, m/z): 519.24 [M+H]<+>,<1>H NMR (Metanol-d4, 400 MHz) δ: 8.41 (d, J =2.0Hz, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.75-7.73 (m, 1H), 6.87-6.85 (m, 1H),4.63-4.60 (m, 1H), 3.74-3.72 (m, 6H), 3.40-3.37 (m, 1H), 3.31-3.29 (m, 1H), 3.14 (s, 3H), 2.74-2.70 (m, 2H), 2.68 - 2.53 (m, 6H), 2.32-2.27 (m, 1H), 2.06-2.05 (m, 1H), 1.85-1.76 (m, 2H).
Primer 139: 6-[4-(3-[[(2S)-4-(metoksimetil)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril
[0989]
Korak 1: Sinteza 1-tert-butil 2-metil (2S)-4-(hidroksimetil)pirolidin-1,2-dikarboksilata
[0990] Rastvor 1-tert-butil 2-metil (2S)-4-metilidenepirolidin-1,2-dikarboksilata (5 g, 20.72 mmol, 1.00 equiv), BH3SMe2(3.47 g, 2.20 equiv), natrijum-hidroksida (1.05 g, 26.25 mmol, 1.25 equiv), vode (20 mL), H2O2(2.14 g, 3.00 equiv) u THF (100 mL) je mešan 5h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ugašen sa H2O. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 5x20 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:1) kako bi se dobilo 2.5 g (47 %) jedinjenje iz naslova kao crvena čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 260.15 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza (2S)-1-[(tert-butoksi)karbonil]-4-(metoksimetil)pirolidin-2-karboksilne kiseline
[0991] Rastvor 1-tert-butil 2-metil (2S)-4-(hidroksimetil)pirolidin-1,2-dikarboksilata (1.5 g, 5.78 mmol, 1.00 equiv), natrijum-hidrida (461.6 g, 19.23 mol, 2.00 equiv), MeI (4.1 g, 5.00 equiv) u THF (25 mL) je mešan 3h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ugašen sa H2O, ekstrahovan sa 5x20 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa DCM/metanolom (15:85) kako bi se dobilo 1.1 g (73 %) jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 260.15[M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza tert-butil (2S)-2-(hidroksimetil)-4-(metoksimetil)pirolidin-1-karboksilata
[0992] Rastvor diborana (1.37 g, 15.94 mmol, 1.00 equiv), (2S)-1-[(tert-butoksi)karbonil]-4-(metoksimetil)pirolidin-2-karboksilne kiseline (15 mL) je mešan 3h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ugašen sa H2O. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x20 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom kako bi se dobilo 1.3 g (33 %) jedinjenje iz naslova kao braon ulje. LCMS (ESI, m/z):246.17[M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza [(2S)-4-(metoksimetil)pirolidin-2-yl]metanola
[0993] Rastvor tert-butil (2S)-2-(hidroksimetil)-4-(metoksimetil)pirolidin-1-karboksilata (1.3 g, 5.30 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik-1,4dioksanu (15 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom kako bi se dobio 1 g (sirovo) jedinjenje iz naslova kao braon ulje. LCMS (ESI, m/z):146.12 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)-4-(metoksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[0994] Rastvor [(2S)-4-(metoksimetil)pirolidin-2-yl]metanola (760 mg, 5.23 mmol, 1.00 equiv), TEA (1.69 g, 16.70 mmol, 3.00 equiv), Int-A6 (1.72 g, 5.23 mmol, 1.00 equiv) u etanolu (15 mL) je mešan 2h na 60°C. Dobijeni rastvor je ugašen sa H2O . Rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 50 mL) i organski slojevi su spojeni. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:1) kako bi se dobilo 375 mg (16 %) jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 438.21 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza tert-butil 3-[[(2S)-4-(metoksimetil)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoata
[0995] Rastvor Cs2CO3(312.5 mg, 0.96 mmol, 1.50 equiv), 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)-4-(metoksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[2-(trimetilsilil)etoksi]metil-2,3-dihidropiridazin-3-ona (280 mg, 0.64 mmol, 1.00 equiv), tert-butil prop-2-enoata (410 mg, 3.20 mmol, 5.00 equiv) u MeCN (15 mL) je mešan 20h na 40°C. Dobijena smša je koncentrovana pod vakuumom i ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:1) kako bi se dobilo 152 mg (42 %) jedinjenje iz naslova kao braon ulje. LCMS (ESI, m/z): 566.29 [M+H]<+>.
Korak 7: Sinteza 3-[[(2S)-4-(metoksimetil)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanske kiseline
[0996] Rastvor tert-butil 3-[[(2S)-4-(metoksimetil)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoata (140 mg, 0.25 mmol, 1.00 equiv), TFA (2 mL) u DCM (10 mL) je mešano 1h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je uparena pod vakuumom i ostatak je nanet na silika gel kolonu eluiranjem sa DCM/metanolom (10:1) kako bi se dobilo 90 mg (96%) jedinjenje iz naslova kao braon ulje. LCMS (ESI, m/z): 380.15 [M+H]<+>.
Korak 8: Sinteza 6-[4-(3-[[(2S)-4-(metoksimetil)-1-[6-oxo-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanoil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[0997] Rastvor 3-[[(2S)-4-(metoskimetil)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]propanske kiseline (78 mg, 0.21 mmol, 1.00 equiv), EDC/HCl (99 mg, 2.50 equiv), 4-dimetilaminopiridina (50.3 mg, 0.41 mmol, 2.00 equiv), Int-A4 (46.4 mg, 0.25 mmol, 1.20 equiv) u DMF (3 mL) je mešan 2h na 60 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je dalje ostatak prečišćen sa Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (6.1 mg, 5%) kao čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 550.20 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.45 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.66 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.87 - 3.60 (m, 11H), 3.54 - 3.40 (m, 3H), 3.36 (s, 3H), 3.27 (s, 1H), 3.25 - 3.08 (m, 1H), 2.64-2.62 (m, 2H), 2.58 - 1.39 (m, 3H).
Primer 140: 6-(4-[3-[(1R)-1-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2- yl]etoksi] propanoil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitril i 6-(4-[3-[(1S)-1-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]etoksi]propanoil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitril
[0998]
Korak 1: Sinteza (2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-karboksilne kiseline
[0999] Rastvor Int-A6 (3.28 g, 9.98 mmol, 1 equiv), (2S)-pirolidin-2-karboksilne kiseline (1.15 g, 9.99 mmol, 1.00 equiv), TEA (2.02 g, 19.96 mmol, 2.00 equiv) u MeCN (20 mL) je mešan 3h na 60°C. Čvrsta supstance je profiltrirana nakon što je dobijeni rastvor ohlađen do sobne temperature. Dobijena smeša je koncentrovana. Ovo je rezultiralo sa 3.91 g (96.19%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 408.15 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza (2S)-N-metoksi-N-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-karboksamida
[1000] Rastvor (2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-karboksilne kiseline (3.91 g, 9.60 mmol, 1 equiv), SOCl2(1.4 mL, 11.70 mmol, 2 equiv) u DCM (20 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Onda je dobijeni rastvor koncetrovan i rastvoren u DCM (30 mL) i dodati su mu metoksi(metil)amin hidrohlorid (1.9 g, 19.19 mmol, 2 equiv) i TEA (2.9 g, 28.79 mmol, 3 equiv). Dobijenom rastvoru je dozvoljeno da izreaguje mešanjem dodatnih 1h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je isprana sa 2 x10 H2O. Onda su organski slojevi spojeni i koncentrovani. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1/2). Ovo je rezultiralo sa 2.02 g (46.7 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 451.19 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 5-[(2S)-2-acetilpirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]methyl]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[1001] Rastvor (2S)-N-metoksi-N-metil-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-karboksamida (2.02 g, 4.48 mmol, 1 equiv) u THF (30 mL) se održava u inertnoj atmosferi azota. Onda se ovom rastvoru doda rastvor bromo(metil)magnezijuma (4.5 mL, 37.60 mmol, 3.00 equiv) u THF (mL). Dobijeni rastvor se meša 4h na sobnoj temperaturi. Reakcija je onda ugašena dodatkom 50 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrhovan sa 3x50 ml EtOAc i organski slojevi su koncentrovani. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1/2). Ovo je rezultiralo sa 1.434 g (78.88%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 406.17 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 5-[(2S)-2-(1-hidroksietil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etokis]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[1002] Rastvor 5-[(2S)-2-acetilpirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-onea (1.434 g, 3.54 mmol, 1 equiv), CaCl2(784 mg, 7.06 mmol, 2.00 equiv), NaBH4(268 mg, 7.08 mmol, 2.00 equiv) u THF (20 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Čvrsta supstanca je profiltrirana. Dobijena smeša je koncentrovana. Ostatak je nanet na silika gel kolonu eluiranjem sa EtOAc/petrol etrom (2/3). Ovo je rezultiralo sa 1.02 g (70.8 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 408.19 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza tert-butil 3-[1-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]etoksi]propanoata
[1003] Rastvor 5-[(2S)-2-(1-hidroksietil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (600 mg, 1.47 mmol, 1 equiv), tert-butil prop-2-enoata (941.7 mg, 7.35 mmol, 4.99 equiv), Cs2CO3(479.7 mg, 1.47 mmol, 1.00 equiv) u MeCN (10 mL) je mešan 5h na 80 °C. Čvrsta supstanca je profiltrirana. Dobijena smeša je koncentrovana. Ostatak je nanet na silika gel kolonu sa EtOAc/petrol etrom (1/4). Ovo je rezultiralo sa 190 mg (24.1%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 536.27 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 3-[1-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]etoksi]propanske kiseline
[1004] Rastvor tert-butil 3-[1-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]etoksi]propanoata (180 mg, 0.34 mmol, 1 equiv) u DCM (3 mL) i TFA (0.5 mL). Dobijeni rastvor je mešan 3h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana, dobijeni rastvor je rastvoren u 5 mL NH3(g) u MeOH i dopuštena je reakcija, mešanjem dodatnih 1h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je ponovo koncentrovana. Ovo je rezultiralo sa 117 mg (99.7%) jedinjenja iz naslova kao žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 350.12 [M+H]<+>.
Korak 7: Sinteza 6-(4-[3-[(1R)-1-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2- yl]etoksi] propanoil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitrila i 6-(4-[3-[(1S)-1-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]etoksi]propanoil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitrila
[1005] Rastvor 3-[1-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]etoksi]propanske kiseline (117 mg, 0.33 mmol, 1 equiv), Int-A4 (66.2 mg, 0.35 mmol, 1.05 equiv), HATU (127.4 mg, 0.33 mmol, 1 equiv), DIEA (129.9 mg, 1.01 mmol, 3.00 equiv) je stavljen u DMF (10mL) i mešan tokom noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je zaustavljena dodatkom 10 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x10 ml koncentrovanog EtOAc. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1/2). Onda je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC dajući (nakon proizvoljno dodeljene stereohemije) jedinjenja iz naslova, redom, izomer A (15.3 mg, 8.79 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z):520.10 [M+H]<+>,<1>HNMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ 8.44 (dd, J = 2.3, 0.8 Hz, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.88 (dd, J = 9.1, 0.8 Hz, 1H), 4.36 (q, J= 7.9 Hz, 1H), 3.90 (dt, J= 9.1, 6.1 Hz, 1H), 3.78~3.63 (m, 7H), 3.67 - 3.48 (m, 3H), 3.37 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 2.49 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.21 (dt, J = 13.3, 6.6 Hz, 1H), 1.98 (q, J = 5.1, 4.7 Hz, 1H), 1.81 - 1.52 (m, 2H), 1.20 (d, J = 6.1 Hz, 3H). tR = 3.117 min (CHIRALPAK ID-3, 0.46*10cm;3um, MtBE(0.1%DEA):EtOH=70:30, 1.0mL/min) i izomer B (4.6 mg, 2.64 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 520.10 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.44 (dd, J = 2.4, 0.8 Hz, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 9.1, 2.3 Hz, 1H), 6.88 (dd, J = 9.1, 0.9 Hz, 1H), 4.52 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.91 - 3.60 (m, 12H), 3.42 (s, 2H), 2.65 (td, J = 6.0, 2.4 Hz, 2H), 2.23 - 2.07 (m, 1H), 2.09 - 1.82 (m, 2H), 1.70 (dt, J = 14.3, 7.4 Hz, 1H), 1.16 (d,J = 6.3 Hz, 3H).tR = 3.770 min (CHIRALPAK ID-3, 0.46*10cm;3um MtBE(0.1%DEA):EtOH=70:30, 1.0mL/min).
Primer 141: 6-(4- [2-[(2S,5S)-5-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]oksolan-2-yl]acetil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitril, 6-(4-[2-[(2R,SS)-5-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]oksolan-2-yl]acetil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitril, 6-(4-[2-[(2S,SR)- 5-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl] oksolan-2-yl]acetil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitril i 6-(4-[2-[(2R,5R)-5-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2yl]oksolan-2-yl]acetil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitril
[1006]
Korak 1: Sinteza tert-butil (2S)-2-(1-hidroksipent-4-en-1-yl)pirolidin-1-karboksilata
[1007] U inertnoj atmosferi azota, rastvoru tert-butil (2S)-2-formilpirolidin-1-karboksilata (10 g, 50.19 mmol, 1.00 equiv) u THF (50 mL) je dodat bromo(but-3-en-1-yl)magnezijum u THF (120 mL) (1M, 1.20 equiv) na -10 °C, zatim je dobijeni rastvor mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Dobijena smaša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa DCM kako bi se dobilo 7 g (55%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 256.18[M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza tert-butil (2S)-2-[(4E)-1-hidroksi-6-oksoheks-4-en-1-yl]pirolidin-1-karboksilata
[1008] Rastvor tert-butil (2S)-2-(1-hidroksipent-4-en-1-yl)pirolidin-1-karboksilata (5.1 g, 19.97 mmol, 1.00 equiv), Grubbs katalizator druge generacijet (0.85 g, 0.05 equiv), (2E)-but-2-enal (7 g, 99.87 mmol, 5.00 equiv) u DCM (30 mL) je mešan tokom noći na 50°C u uljanom kupatilu. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom i ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa DCM. Ovo je rezultiralo sa 2.85 g (50%) jedinjenja iz naslova u obliku svetlo žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 284.18 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza tert-butil (2S)-2-[5-(2-oksoetil)oksolan-2-yl]pirolidin-1-karboksilat
[1009] Rastvor tert-butil (2S)-2-[(4E)-1-hidroksi-6-oksoheks-4-en-1-yl]pirolidin-1-karboksilata (2.83 g, 9.99 mmol, 1.00 equiv), natrijum-hidrida (40 mg, 1.67 mmol, 0.10 equiv) u THF (30 mL) je mešan tokom noći na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 2.83 g (sirovo) jedinjenja iz naslova u obliku svetlo žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 284.18 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 2-[5-[(2S)-1-[(tert-butoksi)karbonil]pirolidin-2-yl]oksolan-2-yl]sirćetne kiseline
[1010] Rastvor tert-butil (2S)-2-[5-(2-oksoetil)oksolan-2-yl]pirolidin-1-karboksilat (2.83 g, 9.99 mmol, 1.00 equiv), AgNO3(7.2 g, 4.00 equiv), natrijum-hidroksid (1.6 g, 40.00 mmol, 4.00 equiv) u metanolu (20 mL) i vodi (40 mL) je mešan 2 dana na sobnoj temperaturi. Čvrsta supstanca je profiltrirana. pH vrednost rastvora je podešena na 4 sa vodenim hlorovodonikom (2M). Dobijena smeša je uparena pod vakuumom. Dobijena smeša je ekstrahovana sa 100 mL x 3 DCM i organski slojevi su spojeni. Ovo je rezultiralo sa 0.75 g (25 %) jedinjenja iz naslova kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 300.17 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza tert-butil (2S)-2-(5-[2-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl)pirolidin-1-karboksilata
[1011] Rastvor 2-[5-[(2S)-1-[(tert-butoksi)karbonil]pirolidin-2-yl]oksolan-2-yl]sirćetne kiseline (300 mg, 1.00 mmol, 1.00 equiv), DIEA (645 mg, 4.99 mmol, 5.00 equiv), HATU (260 mg, 0.68 mmol, 2.00 equiv), Int-A4 (450 mg, 2.00 mmol, 2.00 equiv) u DMF (10 mL) je mešan tokom noći na sobnoj temperaturi. Reakcija je zaustavljena dodatkom 100 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x50 mL EtOAc, organski slojevi su spojeni i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa DCM kako bi se dobilo 200 mg (43 %) jedinjenja iz naslova u obliku svetlo žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 470.27 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 6-[4-(2-[5-[(2S)-pirolidin-2-yl]oksolan-2-yl]acetil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril hidrohlorida
[1012] Rastvor tert-butil (2S)-2-(5-[2-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl)pirolidin-1-karboksilat (1.1 g, 2.34 mmol, 1.00 equiv) u vodonikhlorid/dioksanu (20 mL) je mešan tokom noći na 25°C. Dobijena smešaje koncentrovana pod vakuumom kako bi se dobilo 0.9 g (95 %) jedinjenja iz naslova kao žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 370.22 [M-Cl]<+>.
Korak 7: Sinteza 6-[4-(2-[5-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]oksolan-2-yl]acetil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[1013] Rastvor 6-[4-(2-[5-[(2S)-pirolidin-2-yl]oksolan-2-yl]acetil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril hidrohlorida (900 mg, 2.22 mmol, 1.00 equiv), TEA (670 mg, 6.62 mmol, 3.00 equiv), Int-A6 (880 mg, 2.68 mmol, 1.20 equiv) u etanolu (20 mL) je mešan 2h na 80°C uljanom kupatilu. Dobijena smeša je uparena pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu eluiranjem sa DCM kako bi se dobilo 650 mg (44%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 662.30 [M+H]<+>.
Korak 8: Sinteza 6-(4-[2-[(2S,5S)-5-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]oksoan-2-yl]acetil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitrila, 6-(4-[2-[(2R,5S)-5-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]oksolan-2-yl]acetil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitrila, 6-(4-[2-[(2S,5R)-5-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-ylloksolan-2-yl]acetil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitrila i 6-(4-[2-[(2R,5R)-5-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]oksolan-2-yl]aceil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitrila
[1014] Rastvor 6-[4-(2-[5-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]oksolan-2-yl]acetil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (650 mg, 0.98 mmol, 1.00 equiv) u DCM (5 mL) i TFA (5 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral- Prep-HPLC dajući jedinjenja iz naslova. Absolutna stereohemija Izomera B je određena na osnovu kristalne strukture X-zraka proteina dobijenih iz Primera 141 Izomer B, što je potvrdilo apsolutnu stereohemiju potentnijeg enantiomera. Absolutna stereohemija preostalih diastereoizomera A, C i D je proizvoljno određena.
[1015] Izomer A (29.2 mg, 19%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 532.30 [M+H]<+>, HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.24 (s, 1H), 8.49 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.87 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.46 (q, J = 7.8 Hz, 1H), 4.35 - 4.23 (m, 1H), 3.82 (q, J = 7.4 Hz, 1H), 3.70 - 3.62 (m, 3H), 3.52 (d, J = 10.2 Hz, 4H), 3.23 - 3.14 (m, 1H), 2.66 (dd, J = 14.8, 6.5 Hz, 1H), 2.40 (dd, J = 14.8, 6.2 Hz, 1H), 2.19 - 2.01 (m, 1H), 2.02 (m, 2H), 1.90 - 1.81 (m, 1H), 1.71 - 1.40 (m, 4H). tR = 6.92 min CHIRALPAK ID-3, 0.46*10cm;3um, MtBE(0.1%DEA):EtOH=80:20, 1.0mL/min).
[1016] Izomer B (26.9 mg, 18 %) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 532.30 [M+H]<+>, HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ12.29 (s, 1H), 8.51 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.89 (dd, J = 9.1, 2.3 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.48 (q, J = 7.6 Hz, 1H), 4.19 (p, J = 6.3 Hz, 1H), 3.72 (dd, J = 13.0, 6.0 Hz, 5H), 3.54 (d, J = 6.3 Hz, 7H), 3.25 - 3.15 (m, 1H), 2.70 (dd, J = 15.4, 6.1 Hz, 1H), 2.51 - 2.43 (m, 1H), 2.13 - 1.95 (m, 2H), 1.90 (tt, J = 9.4, 4.6 Hz, 2H), 1.71 - 1.47 (m, 4H).. tR = 3.95 min CHIRALPAK ID-3, 0.46∗10cm;3um, MtBE(0.1%DEA):EtOH=80:20, 1.0mL/min), izomer C (0.6 mg) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 532.30 [M+H]<+>, HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ12.29 (s, 1H), 8.51 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.89 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.48 (q, J= 7.5 Hz, 1H), 4.19 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 3.72 (d, J = 9.6 Hz, 3H), 3.65 (s, 2H), 3.54 (s,5H), 3.19 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 2.75 - 2.67 (m, 1H), 2.55 (m, 1H), 2.08 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 2.01 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 1.89 (dd, J = 13.1, 5.4 Hz, 2H), 1.64 (s, 3H), 1.64 - 1.50 (m, 1H). tR = 8.23 min CHIRALPAK ID-3, 0.46*10cm;3um, MtBE(0.1%DEA):EtOH=80:20, 1.0mL/min) i izomer D (1.6 mg) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 532.30 [M+H]<+>, HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ12.37 (s, 1H), 8.52 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.89 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.71 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.20 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.01 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 3.64 -3.46 (m, 9H), 3.24 (s, 1H), 2.42 (dd, J = 15.5, 6.7 Hz, 1H), 2.26 (dd, J = 15.5, 6.1 Hz, 1H), 2.06 - 1.86 (m, 4H), 1.63-1.44 (m, 4H). tR = 4.27 min CHIRALPAK ID-3, 0.46*10cm;3um, MtBE(0.1%DEA):EtOH=80:20, 1.0mL/min).
Primer 142: 5-[(4aR,7aR)-1-acetil-oktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-6-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[1017]
Korak 1: Sinteza tert-butil (4aR,7aR)-6-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-oktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-1-karboksilata
[1018] Rastvor tert-butil (4aR,7aR)-oktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-1-karboksilata (500 mg, 2.21 mmol, 1 equiv), Cs2CO3(1439.6 mg, 4.42 mmol, 2.0 equiv) i Int-A6 (1086.3 mg, 3.31 mmol, 1.50 equiv) u MeCN (30 mL) je mešan 2h na 60°C, a onda je dobijeni rastvor razblažen sa 50 ml H2O, ekstrahovan sa 3x50 ml EtOAc, organski sloj je ispran sa 1x50 ml koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida, osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Nakon toga je ostatak nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (16/84) kako bi se dobilo (85.96 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z):518.25 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[(4aR,7aR)-oktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-6-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona [1019] Rastvor tert-butil (4aR,7aR)-6-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidro-piridazin-4-yl]-oktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-1-karboksilata (500 mg, 0.96mmol, 1.00 equiv) i TFA (2 mL) u DCM (10 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi i onda je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 200mg jedinjenja iz naslova kao sirove bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 289.12[M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 5-[(4aR,7aR)-1-acetil-oktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-6-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[1020] Rastvor 5-[(4aR,7aR)-oktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-6-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (190 mg, 0.66 mmol, 1 equiv), Ac2O (134.6 mg, 1.32 mmol, 2.00 equiv) i TEA (200.1 mg, 1.98 mmol, 3.0 equiv) u DCM (30 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Nakon toga je dobijeni rastvor razblažen sa 30 mL DCM, ispran sa 3 x30 ml H2O, organski sloj je spojen, ispran sa 1x30 ml koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida, osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Onda je ostatak prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (86.4 mg, 39.69 %) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 331.20 [M+H]<+>,<1>HNMR (DMSO-d6, 300 MHz,) δ 7.87 (s, 1H), 4.84-4.71 (m, 1H), 3.84 (d, J= 5.4 Hz, 2H), 3.64 (d, J= 9.9 Hz, 2H), 3.53-3.20 (m, 2H), 2.28-2.19 (m, 1H), 2.03 (s, 3H), 1.78 -1.35 (m, 4H).
Primer 143: 5-[(4aS,7aS)-1-acetil-oktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-6-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1021]
Korak 1: Sinteza tert-butil (4aS,7aS)-6-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-oktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-1-karboksilata
[1022] Rastvor tert-butil (4aS,7aS)-oktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-1-karboksilata (500 mg, 2.21 mmol, 1 equiv), Int-A6 (726.4 mg, 2.21 mmol, 1.00 equiv) i TEA (670.7 mg, 6.63 mmol, 3.00 equiv) u EtOH (10 mL) je mešan 2h na 60°C i onda je dobijeni rastvor uparen pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:5) kako bi se dobilo 678 mg (59.17%) jedinjenje iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 519.26[M+H]<+>. Korak 2: Sinteza 5-[(4aS,7aS)-oktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-6-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona [1023] Rastvor tert-butil (4aS,7aS)-6-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-oktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-1-karboksilata (300 mg, 0.58 mmol, 1 equiv) u HCl/dioksanu (9 mL, 4M) je mešan 2h na sobnoj temperaturi i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 190 mg (63.33%) jedinjenje iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 289.12 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 5-[(4aS,7aS)-1-acetil-oktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-6-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[1024] Rastvor 5-[(4aS,7aS)-oktahidro-1H-pirolo[3,4-b]piridin-6-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (729 mg, 2.53 mmol, 1 equiv), Ac2O (516.3 mg, 5.06 mmol, 2.0 equiv) i TEA (767.7 mg, 7.59 mmol, 3.00 equiv) u DCM (10 mL, 0.12 mmol) je mešan 1.5h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je koncentrovna pod vakuumom i ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Nakon koncentrovanja, ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (41.9mg, 5.02%) as a white solid. LCMS (ESI, m/z):331.15 [M+H]<+>,<1>HNMR (DMSO-d6,300 MHz) δ 7.80 (s, 1H), 4.84-4.71 (m, 1H), 3.82 -3.20 (m, 6H), 2.32-2.19 (m, 1H), 2.03 (s, 3H), 1.76 -1.27 (m, 4H).
Primer 144: 6-[4-[2-([2-[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]etil]amino)acetil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril i 6-[4-[2-([2-[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]etil]amino)acetil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril [1025]
Korak 1: Sinteza 5-[1-(2-aminoetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[1026] Rastvor 5-[1-(2-azidoetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (370 mg, 0.77 mmol, 1 equiv) , PPh3(242.3 mg, 0.92 mmol, 1.2 equiv) u THF (15 mL) i H2O (5 mL) je mešan 1h na 60° C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa DCM/metanolom (94/6) kako bi se dobilo 217 mg (62.00%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 455.20 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 6-[4-(2-hloroacetil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[1027] U rastvor Int-A4 (1100 mg, 4.90 mmol, 1 equiv), TEA (1486.2 mg, 14.69 mmol, 3 equiv) u DCM (10 mL) je dodat na 0° C 2-hloroacetil hlorid (663.5 mg, 5.87 mmol, 1.2 equiv). Dobijeni rastvor je mešan 1h na 0° C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanetn na slika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (56/44) kako bi se dobilo 752 mg (58.03%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 265.08[M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 6-(4-[2-[(2-[2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]etil)amino]acetil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitrila
[1028] Rastvor 5-[1-(2-aminoetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (200 mg, 0.44 mmol, 1 equiv), TEA (89.0 mg, 0.88 mmol, 2 equiv), 6-[4-(2-hloroacetil)piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila (116.5 mg, 0.44 mmol, 1 equiv) u EtOH (10 mL) je mešan 25h na 80 ° C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu eluiranjem sa DCM/metanol om(97/3). Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatogarfije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo 96 mg (31.95%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 683.30 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 6-[4-[2-([2-[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]etil]amino)acetyl]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila i 6-[4-[2-([2-[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]etil]amino)acetil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[1029] Rastvor 6-(4-[2-[(2-[2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]etil)amino]acetil]piperazin-1-yl)piridin-3-karbonitrila (80 mg, 0.12 mmol, 1 equiv) u DCM (1 mL) i TFA (0.05 mL) je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Reakcija je prekinuta dodatkom 5 mL zasićenog vodenog rastvora natrijum-bikarbonata. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 30 ml DCM i organski slojevi su spojeni. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC and Chiral-Prep-HPLC dajući (nakon proizvoljno određene stereohemije) jedinjenja iz naslova, redom, izomer A: (10.2 mg, 15.76%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 553.22 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 8.52 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.89 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 7.45 -7.27 (m, 4H), 6.94 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 5.88 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 5.06 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 4.51 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 3.73 - 3.62 (m, 8H), 3.53 (d, J = 15.1 Hz, 2H), 2.47 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 1.99 (d, J = 14.4 Hz, 2H). tR = 3.565 min (Chiralpak IG-3, 2∗25cm, 5um, MtBE(0.1%TEA):MeOH=70:30, 1.0mL/min) i izomer B: (10.0 mg, 15.45%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 553.22 [M+H]<+>, tR = 4.753 min (Chiralpak IG-3, 2∗25cm, 5um, MtBE(0.1%TEA):MeOH=70:30, 1.0mL/min).
Primer 145: 6-[4-[(3R)-3-amino-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril; mravlja kiselina i 6-[4-[(3S)-3-amino-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril; mravlja kiselina
[1030]
Korak 1: Sinteza metil (2E)-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]methyl]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]but-2-enoata
[1031] U atmosferi N2 (g), rastvor 5-[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (2.0 g, 5.08 mmol, 1.00 equiv), Pd[(allyl)Cl]2(93.0 mg, 0.25 mmol, 0.05 equiv), Rockphos (239 mg, 0.51 mmol, 0.10 equiv), Cs2CO3(2.0 g, 6.14 mmol, 1.30 equiv), metil (2E)-4-bromobut- 2-enoata (4.6 mg, 0.03 mmol, 5.00 equiv) u toluenu (5 mL) je mešan okom noći na 80°C u uljanom kupatilu. Nakon koncentrovanja, ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (27:73) kako bi se dobilo 800 mg (32%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 492.21 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 3-(benzilamino)-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoata
[1032] Rastvor metil (2E)-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]but-2-enoata (650 mg, 1.32 mmol, 1.00 equiv), 1-fenilmetanamina (700 mg, 6.53 mmol, 5.00 equiv) u n-BuOH (15 mL) je mešan 3h na 100 °C u uljanom kupatilu. Nakon koncentrovanja, ostataka je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (61:39) kako bi se dobilo 630 mg (80%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 599.28 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza metil 3-[[(tert-butoksi)karbonil]amino]-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil) etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoata
[1033] U struji H2, rastvor metil 3-(benzilamino)-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoata (600 mg, 1.00 mmol, 1.00 equiv), paladijum na ugljeniku (200 mg), (Boc)2O (700 mg, 3.21 mmol, 3.00 equiv) u metanolu (30 mL) je mešan tokom noći na 25 °C. Čvrsta supstanca je profiltrirana. Nakon koncentrovanja, ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (30:70) kako bi se dobilo 200 mg (33%) jedinjenja iz naslova u obliku svetlo žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 609.29 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 3-[[(tert-butoksi)karbonil]amino]-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanska kiselina
[1034] Rastvor metil 3-[[(tert-butoksi)karbonil]amino]-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoata (190 mg, 0.31 mmol, 1.00 equiv), Li- OH.H2O (26 mg, 0.62 mmol, 2.00 equiv) u metanolu (1 mL) i vodi (1 mL) je mešan 6h na 25°C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom kako bi se dobilo 180 mg (97%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 595.27 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza tert-butil N-[4-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-4-okso-1-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butan-2-yl]karbamata
[1035] Rastvor 3-[[(tert-butoksi)karbonil]amino]-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihydropyridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanske kiseline (180 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv), DIEA (40 mg, 0.31 mmol, 1.00 equiv), HATU (115 mg, 0.30 mmol, 1.00 equiv), Int-A4 (59 mg, 0.31 mmol, 1.00 equiv) u DMF (4 mL) je mešana tokom noći na 25 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (98:2) kako bi se dobilo 200 mg (86%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 766.37 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza 6-[4-[(3R)-3-amino-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila; mravlje kiseline i 6-[4-[(3S)-3-amino-4-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril; mravlje kiseline
[1036] Rastvor tert-butil N-[4-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-4-okso-1-[[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]metoksi]butan-2-yl]karbamata (200 mg, 0.26 mmol, 1.00 equiv) i rastvor TFA/DCM (12 mL) u DCM (10 mL) su mešani 1h na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Onda je pH vrednost podešena na 8 sa NH2CH2CH2OH. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN i Chiral-Prep-HPLC dajući (nakon proizvoljno određene stereohemije) jedinjenja iz naslova, redom, izomer A (10.5 mg 16%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 535.35 [M+H]<+>,<1>HNMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ: 8.55 (s, 1H), 8.47 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.81(dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.70 (dr, 1H), 3.81-3.74 (m, 10H), 3.69 - 3.61 (m, 1H), 3.59 - 3.40 (m, 4H), 2.68-2.67 (m, 1H), 2.58-2.55 (m, 1H), 2.30-2.28 (m, 1H), 2.04-2.02(m, 1H), 1.84-1.72 (m, 2H). tR = 4.088 min (CHIRALPAK ID-3, 0.46∗10cm;3um, MtBE(0.1%DEA):EtOH=70:30, 1.0mL/min) i izomer B (20.9 mg 32%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 535.30 [M+H]<+>,<1>HNMR (Metanol-d4,300 MHz) 68.53(s, 1H),8.46(d, J=1.8Hz,1H), 8.18 (s, 1H), 7.82-7.78 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.93-6.90 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.66 (dr, 1H), 3.84 - 3.60 (m, 11H), 3.58-3.40(m, 3H),3.45-3.38(m,1H), 2.85-2.79 (m, 1H), 2.69-2.61 (m, 1H),2.30-2.28 (m, 1H), 2.04-2.02 (m, 1H), 1.84-1.72 (m, 2H). tR = 6.124 min (CHIRALPAK ID-3, 0.46*10cm;3um, MtBE(0.1%DEA):EtOH=70:30, 1.0mL/min).
Primer 146: 6-[4-[3-([[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metil]amino)propanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitril i 6-[4-[3-([[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metil]amino)propanoil] piperazin-1-yl]piridin- 3-karbonitril
[1037]
Korak 1: Sinteza 5-[1-(azidometil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[1038] U mešani rastvor 5-[1-(hidroksimetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (900 mg, 2.04 mmol, 1.00 equiv) u toluenu (15 mL) su dodati DBU (0.8 mL) i DPPA (1 mL). Dobijeni rastvor je mešan 10h na 80 °C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 200 mL EtOAc. Dobijena smeša je isprana sa 1x50 mL NH4Cl i 1350 mL NaHCO3. Dobijena smeša je isprana sa 1x50 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida. Organski sloj je osušen prekon anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:4). Ovo je rezultiralo sa 700 mg (sirovo) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 467.18 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[1-(aminometil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[1039] Rastvor 5-[1-(azidometil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (700 mg, 1.50 mmol, 1.00 equiv) i paladijuma na ugljeniku (100 mg) u EtOAc (50 mL) je mešan 3h na sobnoj temperaturi u struji vodonika. Čvrsta supstanca je profiltrirana. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ovo je rezultiralo sa 500 mg (sirovo) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 441.19 [M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza tert-butil 3-[([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metil)amino]propanoata
[1040] Rastvor 5-[1-(aminometil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (500 mg, 1.13 mmol, 1.00 equiv) i tert-butil prop-2-enoata (0.5 mL) u etanolu (10 mL) je mešan tokom noći na 100 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu sa EtOAc/petrol etrom (1:1). Ovo je rezultiralo sa 200 mg (31%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 569.28 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 3-[([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metil) amino]propanska kiselina
[1041] Rastvor tert-butil 3-[([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metil)amino]propanoata (110 mg, 0.19 mmol, 1.00 equiv) u hlorovodonik/dioksanu (10 mL) je mešan tokom noći na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ovo je rezultiralo sa 90 mg (sirovo) jedinjenja iz naslova kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 383.13 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 3-[[(tert-butoksi)karbonil]([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metil)amino]propanske kiseline
[1042] U mešani rastvor 3-[([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metil)amino]propanske kiseline (90 mg, 0.24 mmol, 1.00 equiv) u THF (5 mL) i vodi (5 mL) dodati su natrijumbikarbonat (50 mg, 0.60 mmol, 2.53 equiv) i Boc2O (50 mg, 0.23 mmol, 0.97 equiv). Dobijeni rastvor je mešan tokom noći na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvora je podešena na 2 sa hlorovodonikom (1 M). Dobijeni rastvor je razblažen sa 100 mL EtOAc. Dobijena smeša je isprana sa 1320 mL vode i 1320 mL koncentrovanog vodenog rastvora natrijum-hlorida. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ovo je rezultiralo sa 100 mg (sirovo) jedinjenje iz naslova kao čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 483.18 [M+H]<+>.
Korak 6: Sinteza tert-butil N-[3-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-3-oksopropil]-N-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metil)karbamata
[1043] U mešani rastvor 3-[[(tert-butoksi)karbonil]([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metil)amino]propanske kiseline (100 mg, 0.21 mmol, 1.00 equiv) u DMF (5 mL), Int-A4 (39 mg, 0.21 mmol, 1.0 equiv) su dodati DIPEA (0.3 mL) i HATU (79 mg, 0.21 mmol, 1.0 equiv). Dobijeni rastvor je mešan 2h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Ovo je rezultiralo sa 70 mg (52%) jedinjenje iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 653.28 [M+H]<+>.
Korak 7: Sinteza 6-[4-[3-([[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]-metil]amino)propanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila i 6-[4-[3-([[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metil]amino)propanoil]piperazin-1-yl]piridin-3-karbonitrila
[1044] U mešani rastvor tert-butil N-[3-[4-(5-cijanopiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-3-oksopropil]-N-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-yl]metil)karbamata (70 mg, 0.11 mmol, 1.00 equiv) u DCM (5 mL) je dodat TFA (1.5 mL). Dobijeni rastvor je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC dajući (nakon proizvoljno određene stereohemije) jedinjenja iz naslova, redom, izomer A (3.1 mg, 25%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 553.30 [M+H]<+>.<1>HNMR (Metanold4,400 MHz) δ 8.44 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.77 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 7.43 (dd, J = 6.3, 3.4 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 3.0 Hz, 3H), 6.87 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 5.79 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 5.23 (d, J= 14.7 Hz, 1H), 4.60 (d, J = 15.1 Hz, 1H), 3.80 - 3.57 (m, 8H), 3.15 (dd, J = 13.0, 4.8 Hz, 1H), 2.99 (dd, J = 13.0, 5.8 Hz, 1H), 2.94 - 2.83 (m, 2H), 2.55 (t, J = 6.4 Hz, 2H). Rt = 2.778 min (CHIRELPAK IF-3, 0.46∗10cm; 3um, MtBE(0.1%DEA):EtOH=70:30, 1.0mL/min) i izomer B (4.1 mg, 33%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 553.30 [M+H]<+>. Rt = 3.698 min (CHIRELPAK IF-3, 0.46∗10cm; 3um, MtBE(0.1%DEA):EtOH=70:30, 1.0mL/min).
Primer 147: 5-[(2S)-2-[(2S,5S)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on, 5-[(2S)-2-[(2S,5R)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on, 5-[(2S)- 2-[(2R,5S)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometl)-2,3-dihidropiridazin-3-on i 5-[(2S)-2-[(2R,5R)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[1045]
Korak 1: Sinteza 5-[(2S)-2-(5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[1046] Rastvor 2-[5-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]oksolan-2-yl]sirćetne kiseline (400 mg, 0.81 mmol, 1 equiv), Int-A3 (161 mg, 0.81 mmol, 1.00 equiv), HATU (370.7 mg, 0.97 mmol, 1.20 equiv), DIEA (211.4 mg, 1.64 mmol, 2.01 equiv) u DMF (4 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne fromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo 450 mg (82.27%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 672.26[M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[(2S)-2-[(2S,5S)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl]pirolidin- 1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona, 5-[(2S)-2-[(2S,5R)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona, 5-[(2S)-2-[(2R,5S)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona i 5-[(2S)-2-[(2R,5R)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[1047] Rastvor 5-[(2S)-2-(5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (450 mg, 0.67 mmol, 1 equiv), TFA (1 mL) u DCM (10 mL) je mešan 4h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Onda je ostatak dodatno prečišćen sa Prep-HPLC i Chiral-Prep- HPLC dajući (nakon proizvoljno određene stereohemije) jedinjenja iz naslova, redom, izomer A (14.4 mg, 3.97%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 542.95 [M+H]<+>,<1>HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 12.23 (s, 1H), 8.46 (s, 2H), 8.13 -8.03 (m, 1H), 4.66 (s, 1H), 4.32 - 3.91 (m, 2H), 3.78 - 3.35 (m, 9H), 3.28 - 3.18 (m, 1H), 2.72 - 2.60 (m, 1H), 2.41 -2.38 (m, 1H), 2.16 - 1.85 (m, 4H), 1.72 - 1.37 (m, 4H). tR = 3.467 min (CHIRALPAK IG-3, 0.46∗10cm;3um, MtBE(0.1%DEA):MeOH=80:20, 1.0mL/min), izomer B (71.1 mg, 19.60%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 542.95 [M+H]<+>,<1>HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 12.23 (s, 1H), 8.44 (s, 2H), 8.05 (s, 1H), 4.50 - 4.39 (m, 1H), 4.35 - 4.25 (m, 1H), 3.83 (q, J = 7.5 Hz, 1H), 3.78 - 3.66 (m, 2H), 3.63 - 3.40 (m, 7H) , 3.20 (m, 1H), 2.67 (dd, J = 14.7, 6.6 Hz, 1H), 2.40 (dd, J = 14.7, 6.1 Hz, 1H),2.22 - 1.97 (m, 3H), 1.93 - 1.80 (m, 1H), 1.72 - 1.44 (m, 4H). tR = 4.847 min (CHIRALPAK IG-3, 0.46∗10cm;3um, MtBE(0.1%DEA):MeOH=80:20, 1.0mL/min), izomer C (6.8 mg, 1.87%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 542.95 [M+H]<+>,<1>HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 12.23 (s, 1H), 8.44 (s, 2H), 8.05 (s, 1H), 4.46 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.30 (s, 1H), 3.88 - 3.63 (m, 3H), 3.62 - 3.41 (m, 7H),3.24 - 3.13 (m, 1H), 2.67 (dd, J = 14.7, 6.6 Hz, 1H), 2.40 (dd, J = 14.7, 6.3 Hz, 1H), 2.23 - 1.97 (m, 3H), 1.93 - 1.80 (m, 1H),1.71 - 1.47 (m, 4H). tR = 5.783 min (CHIRALPAK IG- 3, 0.46∗10cm;3um, MtBE(0.1%DEA):MeOH=80:20, 1.0mL/min) i izomer D (23.5mg, 6.48%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 542.95 [M+H]<+>,<1>HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 12.28 (s, 1H), 8.46 (s, 2H), 8.16 (s, 1H), 4.48 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.20 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 3.77 - 3.66 (m, 5H), 3.61 - 3.45 (m, 5H), 3.26 - 3.14 (m, 1H), 2.71 (dd, J = 15.4, 6.1 Hz, 1H), 2.49 - 2.43 (m, 1H), 2.13 - 1.96 (m, 2H), 1.93 - 1.80 (m, 2H), 1.72 - 1.50 (m, 4H).tR = 6.854min (CHIRALPAKIG- 3, 0.46∗10cm;3um, MtBE(0.1%DEA):MeOH=80:20, 1.0mL/min).
Primer 148: 5-[(2S)-2-[(2S,5S)-5-[2-[4-(5-hloropiridin-2-yl)piperazin-4-(5-hloropiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on, 5-[(2S)-2-[(2R,5S)-5-[2-[4-(5-hloropiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on, 5-[(2S)-2-[(2R,5R)-5-[2-[4-(5-hloropiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on i 5-[(2S)-2-[(2S,5R)-5-[2-[4-(5-hloropiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1048]
Korak 1: Sinteza 2-[5-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]oksolan-2-yl]sirćetne kiseline
[1049] Rastvor 2-[5-[(2S)-pirolidin-2-yl]oksolan-2-yl]sirćetne kiseline (980 mg, 4.92 mmol, 1.00 equiv), TEA (900 mg, 8.89 mmol, 3.00 equiv) i Int-A6 (600 mg, 1.82 mmol, 1.00 equiv) u metanolu (20 mL) je mešan 3h na 60°C. Onda je dobijeni rastvor uporen pod vakuumom, a ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/ CH3CN kako bi se dobilo 1.0 g (41%) jeidnjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 492.21 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 5-[(2S)-2-(5-[2-[4-(5-hloropiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[1050] Rastvor 2-[5-[(2S)-1-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]pirolidin-2-yl]oksolan-2-yl]sirćetne kiseline (400 mg, 0.81 mmol, 1.00 equiv), HATU (310 mg, 0.82 mmol, 1.00 equiv), DIEA (421 mg, 3.26 mmol, 4.00 equiv) i Int-A5 (219 mg, 0.81 mmol, 1.00 equiv) u DMF (6 mL) je mešan 1h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je razblažen sa 10 mL EtOAc, ispran sa 338 mL H2O, organski slojevi su spojeni, osušeni preko anhidrovanog natrijum-sulfata u koncentrovani pod vakuumom, a onda je ostatak prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran H2O/CH3CN kako bi se dobilo 450 mg (82%) jedinjenja iz naslova kao svetlo braon čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 671.27[M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 5-[(2S)-2-[(2S,5S)-5-[2-[4-(5-hloropiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona i 5-[(2S)-2-[(2R,5S)-5-[2-[4-(5-hloropiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona i 5-[(2S)-2-[(2R,5R)-5-[2-[4-(5-hloropiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona i 5-[(2S)-2-[(2S,5R)-5-[2-[4-(5-hloropiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[1051] Rastvor 5-[(2S)-2-(5-[2-[4-(5-hloropiridin-2-yl)piperazin-1-yl]-2-oksoetil]oksolan-2-yl)pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (450 mg, 0.67 mmol, 1.00 equiv) i TFA (1 mL) u DCM (5 mL) je mešan 1.5h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom i C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. Nakon koncentrovanja, ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC dajući (nakon priozvojlno određene stereohemije) jedinjenja iz naslova, redom, izomer A (7.7 mg 2.10%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z):541.10[M+H]<+>,<1>HNMR (Metanol-d4,400 MHz) δ 8.21 (s, 1H), 8.08 (d, J = 2.4Hz, 1H), 7.56 (dd, J =10.4, 2.8 Hz, 1H), 6.83 (dd, J = 8.8, 0.8 Hz, 1H), 4.73 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 4.34-4.31 (m, 1H), 4.12 (dd, J = 8.6, 4.5 Hz, 1H), 3.81-3.52 (m, 9H), 3.39 (dd, J = 11.0, 5.9 Hz, 1H), 2.73 (dd, J = 14.2, 7.9 Hz, 1H), 2.57 (dd, J = 14.2, 4.4 Hz, 1H), 2.26-2.13(m, 3H), 2.05-1.94 (m, 1H), 1.82-1.64 (m, 4H). tR = 4.786min (CHIRALPAK IG-3, 0.46*10cm; 3um, MtBE(0.3%IPAmine): EtOH =80:20, 1.0mL/min), izomer B (4.8 mg 1.32%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 541.10 [M+H]<+>.<1>HNMR (Metanol- d4,400 MHz) δ 8.20 (s, 1H), 8.06 (d, J = 2.7Hz, 1H), 7.55 (dd, J = 9.2, 2.8Hz, 1H), 6.82 (dd, J = 9.2, 0.7 Hz, 1H), 4.78 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 4.34-4.31 (m, 1H), 4.12 (dd, J = 8.6, 4.5 Hz, 1H), 3.81-3.36 (m, 10H), 2.48 (dd, J = 15.6, 7.6 Hz, 1H), 2.39 (dd, J = 15.2, 4.8 Hz, 1H), 2.27-2.20 (m, 1H), 2.10-2.03 (m, 1H), 2.00-1.91 (m, 2H), 1.81-1.63 (m, 3H), 1.59-1.46 (m, 1H). tR =5.588 min (CHIRALPAK IG-3, 0.46∗10cm; 3um, MtBE(0.1%DEA): EtOH = 80:20, 1.0mL/min), izomer C (67.1mg 18.5%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 541.10 [M+H]<+>.<1>HNMR (Metanol-d<4>, 400 MHz) δ 8.13 (s, 1H), 8.06(d, J = 2.4Hz, 1H), 7.55 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.44-4.33 (m, 2H), 4.00-3.92 (m, 1H), 3.71-3.35(m, 10H), 2.81 (dd, J = 14.0, 8.0 Hz, 1H), 2.53 (dd, J = 14.0, 4.4 Hz, 1H), 2.25-2.16 (m, 3H), 1.98-1.91 (m, 1H), 1.82-1.58 (m, 4H). tR =2.182 min (Repaired IA-3, 0.46∗10cm; 5um, (Hex:DCM=3:1)(10mmol NH3): MeOH=70:30, 1.0mL/min) i izomer D (25.1mg 6.90%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 541.10 [M+H]<+>,<1>HNMR (Metanol-d4, 400 MHz) δ 8.27 (s, 1H), 8.09 (d, J = 2.4,1H), 7.57 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 6.84 (d, J = 8.8, 1H), 4.51-4.44 (m, 1H), 4.36-4.25 (m, 1H), 3.82-3.32 (m, 11H), 2.88 (dd, J = 14.8, 7.2 Hz, 1H), 2.59 (dd, J = 14.8, 5.2 Hz, 1H), 2.28-1.94 (m, 4H), 1.82-1.59 (m, 4H). tR =2.755 min (Repaired IA-3, 0.46∗10cm; 5um, (Hex:DCM=3:1)(10mmol NH3): MeOHOH = 70:30, 1.0mL/min).
Primer 149: 5-[(2S)-2-[(2S,5S)-5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-yl]piperazin-1-yl]etil)oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on, 5-[(2S)-2-[(2S,5R)-5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-yl]piperazin-1-yl]etil)oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on, 5-[(2S)-2-[(2R,5S)-5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-yl]piperazin-1-yl]etil)oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on i 5-[(2S)-2-[(2R,5R)-5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-yl]piperazin-1-yl] etil)oksolan-2-yl] pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1052]
Korak 1: Sinteza tert-butil (2S)-2-[5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-yllpiperazin-1-yl]etil)oksolan-2-yl]pirolidin-1-karboksilata
[1053] Rastvor 2-[5-[(2S)-1-[(tert-butoksi)karbonil]pirolidin-2-yl]oksolan-2-yl]sirćetne kiseline (1.1 g, 3.67 mmol, 1.00 equiv), DEIA (1.42 g, 3.00 equiv), Int-A2 (1.12 g, 3.67 mmol, 1.10 equiv), HATU (1.54 g, 4.05 mmol, 1.10 equiv) i DMF (15 mL) je mešan 1h na 25 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo 1.08 g (57%) jedinjenje iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 514.26 [M+H]<+>.
Korak 2: Sinteza 2-[5-[(2S)-pirolidin-2-yl]oksolan-2-yl]-1-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-yl]piperazin-1-yl]etan-1-on hidrohlorida
[1054] Rastvor tert-butil (2S)-2-[5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-yl]piperazin-1-yl]etil)oksolan-2-yl]pirolidine-1-karboksilata (1.08 g, 2.10 mmol, 1.00 equiv) u dioksan/HCl (50 mL, 4 M) je mešan 2h na 25 °C. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 900 mg (95%) jedinjenje iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 414.20[M+H]<+>.
Korak 3: Sinteza 5-[(2S)-2-[5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-yl]piperazin-1-yl]etil)oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[1055] Rastvor 2-[5-[(2S)-pirolidin-2-yl]oksolan-2-yl]-1-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-yl]piperazin-1-yl]etan-1-on hidrohlorida (870 mg, 1.93 mmol, 1.00 equiv), TEA (637 mg, 6.30 mmol, 3.00 equiv), Int-A6 (920 mg, 2.80 mmol, 1.00 equiv) u EtOH (20 mL) je mešan 2h na 60 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom (3/2) kako bi se dobilo 1.23 g (90%) jedinjenje iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 706.29 [M+H]<+>.
Korak 4: Sinteza 5-[(2S)-2-[(2S,5S)-5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-yl]piperazin-1-yl]etil)oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona, 5-[(2S)-2-[(2S,5R)-5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-yl]piperazin-1-yl]etil)oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona, 5-[(2S)-2-[(2R,5S)-5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-yl]piperazin-1-yl]etil)oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona i 5-[(2S)-2-[(2R,5R)-5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-yl]piperazin- 1-yl]etil)oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[1056] Rastvor 5-[(2S)-2-[5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-yl]piperazin-1-yl]etil)oksolan-2-yl]pirolidin-1-yl]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (1 g, 1.42 mmol, 1.00 equiv), TFA (4 mL) u DCM (20 mL) je mešan 2h na 25°C. pH vrednost rastvora je podešena na 8 sa etanolaminom. Rastvarač je uparen pod vakuumom i ostatak je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN. A onda je ostatak dalje prečišćen pomoću Chiral-Prep-HPLC dajući (nakon proizvoljno dodeljene stereohemije) jedinjenja iz naslova, redom, izomer A (381.1 mg, 46.70%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 576.21 [M+H]<+>,<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 10.80(s, 1H), 8.71 (s, 2H), 8.05 (s, 1H), 4.45 (q, J = 8.0 Hz, 1H), 4.30 (p, J = 6.4 Hz, 1H), 3.95 - 3.77 (m, 3H), 3.72 - 3.43 (m, 7H), 3.22 - 3.13 (m, 1H), 2.68 (dd, J = 14.7, 6.8 Hz, 1H), 2.40 (dd, J = 14.7, 6.0 Hz, 1H), 2.20 - 2.11 (m, 1H), 2.04 (t, J = 10.2 Hz, 2H), 1.86 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 1.71 - 1.62 (m, 4H)..tR = 4.347 min (CHIRALPAK ID-3, 0.46∗ 10cm;3um, MtBE (0.1%DEA):EtOH=80:20, 1.0mL/min, izomer B (9.5 mg, 1.16%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 576.21 [M+H]<+>,<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 12.34 (s, 1H), 8.73 (d, J = 0.9 Hz, 2H), 8.10 (s, 1H), 4.65 (s, 1H), 4.17 (s, 1H), 4.09 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 3.90 - 3.71 (m, 4H), 3.52 (d, J = 31.6 Hz, 5H), 3.23 (s, 1H), 2.66 (dd, J = 15.0, 6.8 Hz, 1H), 2.43 (dd, J = 14.9, 5.8 Hz, 1H), 2.04 (d, J = 14.8 Hz, 3H), 1.89 (s, 1H), 1.63 - 1.54 (m, 4H). tR =3.343 min (CHIRALPAK ID-3, 0.46∗ 10cm;3um, MtBE (0.1%DEA):EtOH=80:20, 1.0mL/min, izomer C (75.2 mg, 9.21%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 576.21 [M+H]<+>,<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 12.30 (s, 1H), 8.74 (d, J = 0.9 Hz, 2H), 8.16 (s, 1H), 4.48 (q, J = 7.6 Hz, 1H), 4.20 (p, J = 6.3 Hz, 1H), 3.86 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.80 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 3.72 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 3.54 (q, J = 6.1, 5.7 Hz, 5H), 3.20 (dd, J = 10.5, 6.6 Hz, 1H), 2.72 (dd, J = 15.4, 6.2 Hz, 1H), 2.50 - 2.42 (m, 1H), 2.11 - 1.97 (m, 2H), 1.90 (ddt, J = 17.2, 10.5, 4.7 Hz, 2H), 1.63-1.54(m,4H).1.60(ddt,J=34.2,13.3,6.5Hz,4H). tR=8.697min(CHIRALPAKID-3,0.46 ∗ 10cm; 3um, MtBE (0.1%DEA):EtOH=80:20, 1.0mL/min i izomer D (11.2 mg, 1.37%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 576.21 [M+H]<+>,<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 12.25 (s, 1H), 8.71 (d, J = 0.9 Hz, 2H), 8.05 (s, 1H), 4.46 (q, J = 8.0 Hz, 1H), 4.30 (q, J = 6.6 Hz, 1H), 3.91 - 3.77 (m, 3H), 3.70 - 3.39 (m, 7H), 3.18 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 2.68 (dd, J = 14.7, 6.8 Hz, 1H), 2.40 (dd, J = 14.6, 6.0 Hz, 1H), 2.15 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 2.04 (dd, J = 12.4, 7.7 Hz, 2H), 1.86 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 1.71 - 1.62 (m, 4H). tR = 5.195 min (CHIRALPAK ID-3, 0.46∗ 10cm;3um, MtBE (0.1%DEA):EtOH=80:20, 1.0mL/min.
Primer 150: 5-[5-(piperidin-4-yl-oksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1057]
Korak 1: 5-(5-hidroksi-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-yl)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1058] Rastvor Int-A6 (2.8 g, 8.52 mmol, 1.00 equiv), 2,3-dihidro-1H-izoindol-5-ol hidrobromida (4.27 g, 19.76 mmol, 1.00 equiv) i TEA (10 mL) u etanolu (40 mL) je mešan 1h na 60 °C. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 2 x 100 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo 4.5 g jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]+ 428.23.
Korak 2: tert-butil 4-([2-[6-oxkso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-yl]oksi)piperidin-1-karboksilat
[1059] Rastvor 5-(5-hidroksi-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-yl)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (4.5 g, 10.53 mmol, 1.00 equiv), tert-butil 4-jodopiperidin-1-karboksilata (20 g, 64.28 mmol, 8.00 equiv), kalijum-karbonata (15 g, 108.53 mmol, 10.00 equiv) i DMF (50 mL) je mešan 2 dana na 80 °C. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 2 x 200 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu i eluiran sa EtOAc/petrol etrom kako bi se odbilo jedinjenje iz naslova (2 g, 31%) u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]+ 611.15.
Korak 3: 5-[5-(piperidin-4-yloksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-yl]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on [1060] Rastvor tert-butil 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-yl]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-yl]oki)piperidin-1-karboksilata (150 mg, 0.25 mmol, 1.00 equiv) u HCl/dioksanu (5 mL) je mešan tokom noći na 45 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i sirovi proizvod je prečišćen pomoću C18 reverzno fazne hromatografije i eluiran sa H2O/CH3CN kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca. LCMS: 381.28 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 8.05 (s, 1H), 7.27 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.02 - 6.91 (m, 2H), 5.00 (d, J = 10.6 Hz, 4H), 4.61 - 4.48 (m, 1H), 3.21 - 3.10 (m, 2H), 2.89 - 2.78 (m, 2H), 2.11 - 2.08 (m, 2H), 1.82 - 1.69 (m, 2H).
[1061] Dalji primeri jedinjenja pronalaska dobijeni ovde opisanim metodama su dati u Tabli E1.
Primer 499: 6-[4-[2-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)acetil]piperazin-1-il]piridin- 3-karbonitril
[1062]
Korak 1: 5-[(2-Hidroksietil)amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1063] Rastvor Int-A6 (10 g, 30,4 mmol, 1 ekviv.), TEA (9,2 g, 90,9 mmol, 2,989 ekviv.), 2-aminoetan-1-ol (2,1 g, 34,38 mmol, 1,130 ekviv.) EtOH (100 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i sirovi ostatak je prečišć en silika gel kolonom eluiranjem sa EtOAc/petrol etrom (60/40) da bi se dobilo 8,7 g (81%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>354,14.
Korak 2: Etil 2-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)acetat
[1064] Rastvor 5-[(2-hidroksietil)amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (3 g, 8,49 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(8,3 g, 25,47 mmol, 3,00 ekviv.), etil 2-bromoacetat (4,2 g, 25,15 mmol, 2,96 ekviv.) u DMFu (30 mL) je mešan na sobnoj temperaturi 12 h. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 20 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 30 mL EtOAc i organski slojevi su kombinovani i osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata. Organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom i prečišć en hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa EtOAc/petrol etrom (20/80) da bi se dobio 1 g (27%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>440,18.
Korak 3: 2-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi) sirć etna kiselina
[1065] Rastvor etil 2-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)acetata (1 g, 2.28 mmol, 1 ekv.), LiOH·F2O (286 mg, 6.82 mmol, 3.00 ekviv.) u MeOH (20 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 30 mL etil acetata. pH rastvora je podešen na 6 sa HCl (35%) i čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom da bi se dobilo 160 mg (17%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>412,14.
Korak 4: 2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etil 4-(5-cijanopiridin -2-il)piperazin-1-karboksilat
[1066] Rastvor 2-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)sirć etne kiseline (160 mg, 0,40 mmol, 1 ekviv.), DIPEA (100,8 mg, 0,78 mmol, 1,94 ekviv.), EDCI (111,7 mg, 0,58 mmol, 1,45 ekviv.), HOBT (78,6 mg, 4,4 mmol 0,45 ekviv.) Int-A4 (95,4 mg, 0,51 mmol, 1,26 ekviv.) u DMF (4 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncetrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 70 mg (30,6%) jedinjenja iz naslova u vidu bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>582,24.
Korak 5: 6-[4-[2-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)acetil]piperazin-1-il]piridin- 3-karbonitril
[1067] Rastvor 2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etil 4-( 5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-karboksilata (70 mg, 0.12 mmol, 1 ekviv.), TFA (0.25 mL) u DCM (5 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncetrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/CH3CN, a zatim je ostatak dalje prečišć en Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>452,40.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 12.46 (s, 1H), 8.52 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 10.3 Hz, 2H), 7.16 (s, 1H), 6.95 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.29 (m, 2H), 3.73 - 3.54 (m, 10H), 3.47 (m, 2H).
Primer 500: 6-[4-[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] amino] etoksi)propanoil] piperazin-1-il] piridin- 3-karbonitril
[1068]
[1069] Rastvor Int-A12 (1000 mg, 3,39 mmol, 1 ekviv.), DIPEA (1313,4 mg, 10,16 mmol, 3 ekviv.), EDCI (974,0 mg, 5,08 mmol, 1,5 ekviv.), HOBT ((686.6 mg, 5.08 mmol, 1.5 ekviv.), Int-A4 (837.2 mg, 3.73 mmol, 1.1 ekviv.) u DMFu (5 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/CH3CN i ostatak je dalje prečišć en Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (64,7 mg, 4,1%). LCMS: [M+H]<+>466,17.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ :12.41 (s, 1H), 8.49 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.90 - 7.86 (m, 2H), 6.96 - 6.83 (m, 2H), 3.65 (m, 6H), 3.53 (d, J = 9.6 Hz, 8H), 2.57 (t, J = 6.4 Hz, 2H).
Primer 501: 6-[4-[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)propanoil]piperazin1-il]piridin-3- karbonitril
[1070]
[1071] Rastvor Int-A11 (67 mg, 0,23 mmol, 1 ekv.), DIPEA (87,7 mg, 0,68 mmol, 3,00 ekviv.), EDCI (65,0 mg, 0,34 mmol, 1,5 ekviv.), HOBT (45. mmol, 1,5 ekviv.), Int-A4 (55,9 mg, 0,25 mmol, 1,1 ekviv.) u DMFu (3 mL) je mešan 3 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/CH3CN i dalje prečišć en pomo ć u Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (16,5 mg, 15,6%). LCMS: [M+H]<+>467,16.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 13.30 (s, 1H), 8.50 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.88 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.57 - 4.48 (m, 2H), 3.77 - 3.51 (m, 12H), 2.61 (t, J = 6.5 Hz, 2H).
Primer 502: 6-(4-[3-[(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etil)amino]propanoil]piperazin-1-il )piridin-3-karbonitril
[1072]
Korak 1: 6-(4-[3-[(2-Hidroksietil)amino]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1073] Rastvor Int-A25 (400 mg, 1.65 mmol, 1 ekviv.) i 2-aminoetan-1-ol (5 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 10 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 20 mL EtOAc i organski slojevi su kombinovani i osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata. Organski slojevi su koncentrovani pod vakuumom. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 270 mg (53,9%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>304,17.
Korak 2: 5-terc-butil N-[3-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropil]-N-(2-hidroksietil)karbamat
[1074] Rastvor 6-(4-[3-[(2-hidroksietil)amino]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila (270 mg, 0,89 mmol, 1 ekv.), TEA (269,1 mg , 2,66 mmol, 2,99 ekviv.), i (Boc)2O (233,1 mg, 1,07 mmol, 1,2 ekviv.) u DCMu (15 mL) je mešan 3 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 20 mL vode. Organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 350 mg (97%) naslovnog jedinjenja u vidu žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>304,22.
Korak 3: terc-butil N-[3-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropil]-N-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil) )-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etil)karbamat
[1075] Rastvor terc-butil N-[3-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropil]-N-(2-hidroksietil)karbamata (404 mg, 1,00 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(975 mg, 2,99 mmol, 2,99 ekviv.), Int-A6 (360,8 mg, 1,10 mmol, 1,10 ekviv.) u DMFu (20 mL) je mešan 3 dana na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 20 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc i organski slojevi su kombinovani i osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata. Organski slojevi su koncentrovani pod vakuumom, a ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa DCM/MeOH da bi se dobilo 550 mg (79%) jedinjenja iz naslova u vidu bezbojnog ulja. LCMS: [M+H]<+>696,31.
Korak 4: 6-(4-[3-[(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etil)amino]propanoil]piperazin-1-il ) piridin-3-karbonitril
[1076] Rastvor terc-butil N-[3-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropil]-N-(2-[[6-okso-5] -(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etil)karbamat (500 mg, 0,72 mmol, 1 ekv.) i TFA (0,5 mL, 6,73 mmol, 9,37 ekviv.) u DCM (10 mL) je mešano 2 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN, a zatim daljim prečišć avanjem pomoć u Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (39,3 mg, 12%) u vidu bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>466,43;<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 12.48 (s,1H), 8.50 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.90 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.77 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 3.74 - 3.60 (m, 6H), 3.55 (m, 6H), 3.44 (m, 2H), 2.70 (t, J = 6.7 Hz, 2H).
Primer 503: 5-[(2-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]etil)amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1077]
[1078] Rastvor Int-A12 (200 mg, 0,68 mmol, 1 ekviv.), Int-A3 (201 mg, 0,74 mmol, 1,09 ekviv.), HATU (283,4 mg, 0,75 mmol, 1,1 ekviv.), DIPEA (262.7 mg 2,03 mmol, 3 ekviv.) u DMFu (10 mL) je mešano 1 h na 25 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN, prać eno daljim prečiš ć avanjem pomo ć u Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (82,4 mg, 26%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>476,13.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.40 (s, 1H), 8.44 (s, 2H), 7.87 (s, 1H), 6.86 (s, 1H), 3.70 (dt, J = 22.7, 5.8 Hz, 6H), 3.53 (dd, J = 10.6, 4.4 Hz, 8H), 2.59 (t, J = 6.4 Hz, 2H).
[1079] Sledeć i primeri u Tabeli E2 su od odgovaraju ć ih intermedijera pripremljeni na sličan način u skladu sa metodom opisanom za Primer 503.
Tabela E2
Primer 507: 6-[4-(3-[2-[(5-hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino]etoksi]propanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1080]
[1081] Rastvor Int-A10 (100 mg, 0,38 mmol, 1,00 ekviv.), DMF (1 mL), DIPEA (148 mg, 1,15 mmol, 3,00 ekviv.), HATU (147 mg, 0,39 mmol, 1,01 ekviv.) i Int-A4 (72 mg, 0,38 mmol, 1,00 ekviv.) je mešan 1 h na 25 °C. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gela koloni eluiranjem sa DCM/MeOH (92:8, v:v). Rastvor je koncentrovan pod vakuumom i čvrste materije su sakupljene filtracijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (84,5 mg, 51%) u vidu bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>432,15.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.54 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.89 - 7.85 (m, 2H), 6.94-6.92 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.49 (s, 1H), 3.69-3.66 (m, 6H), 3.55 - 3.50 (m, 8H), 2.61-2.58 (t, J = 6.4 Hz, 2H).
[1082] Sledeć i primeri u Tabeli E3 su na sličan način pripremljeni od Int-A10 i odgovaraju ć ih intermedijara, respektivno, Int-A2 i Int-A18 prema metodi opisanoj za Primer 507.
Tabela E3
Primer 510: 6-[4-[3-(2-[metil[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)propanoil] piperazin-1-il]piridin -3-karbonitril
[1083]
Korak 1: 5-[(2-Hidroksietil)(metil)amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin3-on [1084] Rastvor Int-A6 (2,0 g, 6,08 mmol, 1 ekv.), TEA (1,2 g, 12,2 mmol, 2 ekviv.), 2-(metilamino)etan-1-ol (456,9 mg, 6,08 mmol, 1 ekviv.) u EtOH (10 mL) je mešana 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu, eluiran sa EtOAc/petrol etrom (50/50, v/v) da bi se dobilo 1600 mg (72%) jedinjenja iz naslova u vidu žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>368,15.
Korak 2: Metil 3-(2-[metil[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi) propanoat
[1085] Rastvor 5-[(2-hidroksietil)(metil)amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona ( 1,6 g, 4,35 mmol, 1,00 ekviv.), metil prop-2-enoat (750 mg, 8,71 mmol, 2,00 ekviv.), Cs2CO3(2,8 g, 8,59 mmol, 2,00 ekv.) u ACN (100 mL za 1 ekv.) je mešan 14 sati na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je nanet na silika gel kolonu, eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:4) da bi se dobilo 600 mg (30%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>454,19.
Korak 3: Metil 3-(2-[metil[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)propanoat
[1086] Rastvor metil 3-(2-[metil[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)propanoata (660 mg, 1.46 mmol, 1 ekviv.) u DCM (5 mL) i TFA (0.5 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 5 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x30 mL DCM i organski slojevi su kombinovani i osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 489 mg jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>324,11.
Korak 4: 3-(2-[metil[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)propanska kiselina
[1087] Rastvor metil 3-(2-[metil[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)propanoata (489 mg, 1,51 mmol, 1 ekv.) , LiOH·H2O(317,4 mg, 7,56 mmol, 5,00 ekviv.) u MeOH (5 mL) i H2O (1 mL) su mešani 3 h na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvora je podešena na 7 sa HCl (2M). Nakon koncentrovanja, ostatak je
prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 469 mg jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>310,09.
Korak 5: 6-[4-[3-(2-[metil[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)propanoil]piperazin-1-il]piridin -3-karbonitril
[1088] Rastvor 3-(2-[metil[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)propanske kiseline (469 mg, 1,52 mmol, 1 ekv.), Int-A4 (340,8 mg, 1,52 mmol, 1 ekviv), HOBT (307,4 mg, 2,27 mmol, 1,5 ekviv.), EDCI (436,1 mg, 2,27 mmol, 1,5 ekviv.) i DIPEA (588.0 mg, 4.55 mmol, 3 ekviv.) u DMFu (2 mL) je mešana 2 h na 30 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN i dalje prečišć en pomo ć u Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (80,6 mg, 11%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS:
[M+H]<+>480,19.<1>H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 12.43 (s, 1H), 8.50 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.94 - 7.87 (m, 2H), 6.92 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 3.61 (ddd, J = 29.4, 20.2, 14.0 Hz, 14H), 3.02 (s, 3H), 2.56 (d, J= 6.3 Hz, 2H).
Primer 511: 6-[4-(6-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4 -il]amino]heksanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1089]
Korak 1: terc-butil N-[6-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]-6-oksoheksil]karbamat
[1090] Rastvor 6-[[(terc-butoksi)karbonil]amino]heksanske kiseline (1 g, 4,32 mmol, 1,00 ekviv.), HATU (1,6 g, 4,21 mmol, 1,00 ekviv.), DIPEA (2,2 g, 17,02 mmol, 4,00 ekviv.), Int-A4 (814 mg, 4.32 mmol, 1,00 ekviv.) u DMFu (5 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x30 mL dietil etra i organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 1,5 g (86%) jedinjenja iz naslova u vidu bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>402,24.
Korak 2: 6-[4-(6-Aminoheksanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1091] Rastvor terc-butil N-[6-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]-6-oksoheksil]karbamata (1,5 g, 3,74 mmol, 1,00 ekviv.) u HCl /dioksan (20 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio 1 g (89%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>302,19.
Korak 3: 6-[4-(6-[[6-okso-5-(trifluorometil)-]-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]heksanoil )piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1092] Rastvor 6-[4-(6-aminoheksanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila (500 mg, 1,66 mmol, 1,00 ekviv.), TEA (335 mg, 3,31 mmol, 2,00 ekviv.), i Int-A6 (544 mg, 1,65 mmol, 1,00 ekviv.) u EtOH (10 mL) je mešan 2 h na 60 °C. Nakon koncetrovanja, ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa EtOAc/petroleterom (1/1) da bi dobilo 252 mg (26%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>594,28.
Korak 4: 6-[4-(6-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]heksanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1093] Rastvor 6-[4-(6-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il] amino]heksanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril (252 mg, 0,42 mmol, 1,00 ekviv.) i TFA (3 mL) u DCM (12 mL) su mešani 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (94,4 mg, 48%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>464,19.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8.42 (dd, J= 2.4, 0.8 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.86 (dd, J = 9.1, 0.9 Hz, 1H), 3.79 (dd, J= 6.5, 3.8 Hz, 2H), 3.74 - 3.62 (m, 6H), 3.42 (t, J= 7.1 Hz, 2H), 2.47 (t, J= 7.4 Hz, 2H), 1.76 - 1.59 (m, 4H), 1.44 (qd, J= 9.9, 9.1, 5.7 Hz, 2H).
Primer 512: 6-[4-(6-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]heksanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1094]
Korak 1: 6-[4-(6-Hidroksiheksanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1095] Rastvor 6-hidroksiheksanske kiseline (500 mg, 3,78 mmol, 1,00 ekviv.), HATU (1,43 g, 3,76 mmol, 1,00 ekviv.), DIPEA (1,46 g, 11,30 mmol, 3,00 ekviv.) i Int-A4 (1.06 g, 5.63 mmol, 1,50 ekviv.) u DMFu (10 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je razblažen sa 30 mL H2O i ekstrahovan sa 3x30 mL EtOAc. Organski sloj je kombinovan, ispran sa 1 3 20 mL slanog rastvora, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišć en na koloni silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroletrom (7/3, v/v) da bi se dobilo 1,06 g (93%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>303,17.
Korak 2: 6-[4-(6-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]heksanoil ) piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1096] Rastvor 6-[4-(6-hidroksiheksanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila (600 mg, 1,98 mmol, 1,00 ekviv.), Cs2CO3(1,29 g, 3,96 mmol, 2,00 ekviv.) i Int-A6 (651 mg, 1.98 mmol, 1.00 ekviv.) u ACN (10 mL) je mešan 15h na 40 °C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 20 mL H2O, ekstrahovan sa 3x20 mL EtOAc i organski sloj je kombinovan, ispran sa 1x20 mL rastvora soli i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa EtOAc/petroletrom (7/3, v/v) da bi se dobilo 240 mg (20%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS:
[M+H]<+>595,26.
Korak 3: 6-[4-(6-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]heksanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril [1097] Rastvor 6-[4-(6-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi] heksanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril (370 mg, 0,62 mmol, 1,00 ekviv.) i TFA (2 mL) u DCM (10 mL) su mešani 2 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (68,5 mg, 24%) u vidu bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>465.00.<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.44 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.79 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 6.90 (dd, J = 9.0, 0.6 Hz, 1H), 4.44 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.83-3.68 (m, 8H), 2.53 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 1.93 (dt, J = 13.7, 6.4 Hz, 2H), 1.77 -1.67 (m, 2H), 1.62 - 1.51 (m, 2H).
Primer 513 Izomer A: (S)-6-(4-(3-(2-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-ilamino)propoksi)propanoil)piperazin-1-il )nikotinonitril i
Primer 513 Izomer B: (R)-6-(4-(3-(2-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-ilamino)propoksi)propanoil)piperazin- 1-il)nikotinonitril
[1098]
Primer 513 Izomer A Primer 513 Izomer B
Korak 1: metil 3-(2-[[(terc-butoksi)karbonil]amino]propoksi)propanoat
[1099] Rastvor terc-butil N-(1-hidroksipropan-2-il)karbamata (3,15 g, 18,0 mmol, 1,00 ekviv.), Na (100 mg) i metil prop-2-enoata (1,7 g, 20,0 mmol, 1,10 ekviv.) u THFu (40 mL) je mešano 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa DCM/petroletrom (1:10) da bi se dobilo 1,5 g (32%) jedinjenja iz naslova kao belo ulje. LCMS: [M+H]<+>262,16.
Korak 2: Metil 3-(2-aminopropoksi)propanoat hidrohlorid
[1100] Rastvor metil 3-(2-[[(terc-butoksi)karbonil]amino]propoksi)propanoata (1,38 g, 5,28 mmol, 1,00 ekviv.) u HCl/dioksanu (10 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 1 g (95%) naslovnog jedinjenja kao belo ulje. LCMS: [M+H]<+>162,15
Korak 3: Metil 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi)propanoat
[1101] Rastvor metil 3-(2-aminopropoksi)propanoat hidrohlorida (1 g, 5,06 mmol, 1,00 ekviv.), TEA (2 mL) i Int-A6 (1,64 g, 4,99 mmol, 1,00 ekviv.) u EtOH ( 10 mL) je mešano 2 h na 60 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa EtOAc/petroletrom (1:5) da bi se dobio 1 g (44%) jedinjenja iz naslova u obliku belog ulja. LCMS: [M+H]<+>454,19.
Korak 4: 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi)propanska kiselina
[1102] Rastvor etil 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] propoksi)propanoat (400 mg, 0,86 mmol, 1,00 ekviv.), voda (5 mL) i LiOH (103 mg, 4,30 mmol, 5,00 ekviv.) u MeOH (15 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 460 mg jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>440,18.
Korak 5: 6-[4-[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il] amino]propoksi)propanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1103] Rastvor 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi)propanoična kiselina (460 mg, 1,05 mmol, 1,00 ekviv.), HATU (520 mg, 1,37 mmol, 1,30 ekviv.), DIPEA (271 mg, 2,10 mmol, 2,00 ekviv.) i Int-A4 (197 mg, 1.05 mmol, 1.00 ekviv.) u DMF (15 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroletrom (1:1) da bi se dobilo 350 mg (55%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>610,28.
Korak 6: (S)-6-(4-(3-(2-(6-okso-S-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-ilamino)propoksi)propanoil)plperazin-1-il)nikotinonitril i (R)-6-(4-(3-(2-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-ilamino)propoksi)propanoil)piperazin-1-il)nikotinonitril
[1104] Rastvor 6-[4-[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4 -il]amino]propoksi)propanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril (350 mg, 0,57 mmol, 1,00 ekviv.), TFA (1 mL) u DCM (5 mL) je mešan 0,5 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišć en Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (CHIRALPAK IG-3, 3 µm, 0,4 6x 10 cm kolona, eluiranjem sa gradijentom MtBE (0,1% DEA):EtOH=70:30, pri brzini protoka od 1 mL/min) da bi se dobila jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. Apsolutna konfiguracija je dodeljena na osnovu rendgenske strukturne analize proteina dobijene iz Primera 513A, koja je potvrdila (S)-apsolutnu stereohemiju jačeg enantiomera.
Primer 513 Izomer A: 10,9 mg, 8%, LCMS: [M+H]<+>480.15.<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.43 (dd, J= 2.4, 0.8 Hz, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.77 (dd, J= 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.86 (dd, J= 9.1, 0.8 Hz, 1H), 4.21 - 4.12 (m, 1H), 3.91 - 3.79 (m, 4H), 3.78 - 3.60 (m, 7H), 3.56 - 3.51 (m, 1H), 2.70 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 1.27 (d, J= 6.6 Hz, 3H). tR = 2.492 min.
Primer 514 Izomer A: 6-(4-[3-[(2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]-2-feniletoksi]propanoil ]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i
Primer 514 Izomer B: 6-(4-[3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]-2-feniletoksi]propanoil ]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
Primer 514 Izomer A Primer 514 Izomer B
Korak 1: metil 3-(2-[[(terc-butoksi)karbonil]amino]-2-feniletoksi)propanoat
[1105] Rastvor terc-butil N-(2-hidroksi-1-feniletil)karbamata (1 g, 4,21 mmol, 1,00 ekviv.), metil prop-2-enoata (1,8 g, 20,91 mmol, 5,00 ekv.) i Cs2CO3(2,7 g, 8,29 mmol, 2,00 ekviv.) u ACN (20 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Čvrsta supstanca je filtrirana i dobijeni rastvor je razblažen sa 150 mL H2O, i ekstrahovan sa 3x50 mL EtOAc. Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 1,3 g (95%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>324,7.
Korak 2: 3-(2-[[(Tert-butoksi)karbonil]amino]-2-feniletoksi)propanska kiselina
[1106] Rastvor metil 3-(2-[[(terc-butoksi)karbonil]amino]-2-feniletoksi)propanoata (324 mg, 1,00 mmol, 1,00 ekviv.) i LiOH (84 mg, 3,51 mmol, 2,00 ekv. ) u THF (5 mL) i vodi (0,5 mL) je mešana 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a zatim je ostatak razblažen sa 20 mL H2O, i ekstrahovan sa 3x20 mL EtOAc. Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 300 mg (97%) jedinjenja iz naslova u vidu žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>310,16.
Korak 3: terc-butil N-(2-[3-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]-1-feniletil)karbamat
[1107] Rastvor 3-(2-[[(terc-butoksi)karbonil]amino]-2-feniletoksi)propanske kiseline (300 mg, 0,97 mmol, 1,00 ekviv.), HATU (366 mg, 0,96 mmol, 1,00 ekv. ), Int-A4 (180 mg, 0.96 mmol, 1.00 ekviv.) i DIPEA (249 mg, 1.93 mmol, 2.00 ekviv.) u DMFu (3 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je razblažen sa 60 mL EtOAc i ispran sa 3x20 mL H2O. Organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 560 mg jedinjenja iz naslova u obliku žutog sirovog ulja. LCMS: [M+H]<+>480,25.
Korak 4: 6-[4-[3-(2-Amino-2-feniletoksi)propanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1108] Rastvor terc-butil N-(2-[3-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]-1-feniletil)karbamata (560 mg, 1,17 mmol, 1,00 ekviv.) i TFA (1 mL) u DCM (5 mL) je mešano 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 380 mg (86%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog sirovog ulja. LCMS:
[M+H]<+>380,20.
Korak 5: 6-[4-[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il] amino]-2-feniletoksi)propanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1109] Rastvor 6-[4-[3-(2-amino-2-feniletoksi)propanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila (380 mg, 1,00 mmol, 1,00 ekviv.), Int-A6 (329 mg, 1,00 mmol, 1,00 ekviv.) i Cs2CO3(652 mg, 2,00 mmol, 2,00 ekv.) u ACN (20 mL) je mešan 1 h na 80 °C. Čvrste materije su filtrirane i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa EtOAc/petroletrom da bi se dobilo 120 mg (18%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>672,29.
Korak 6: 6-(4-[3-[(2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]-2-feniletoksi]propanoil]piperazini1 -il)piridin-3-karbonitril i 6-(4-[3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]- 2-feniletoksi]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1110] Rastvor 6-[4-[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4 -il]amino]-2-feniletoksi)propanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril (100 mg, 0,15 mmol, 1,00 ekviv.) i TFA (0,5 mL) u DCMu (2,5 mL) su mešani 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/CH3CN.
[1111] Zatim je ostatak dalje prečišć en pomo ć u Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (CHIRAL Cellulose-SB, 3 µm, 0,46 x 15 cm kolona, eluiranjem sa gradijentom MtBE (0,1% DEA):EtOH=50: 50, pri brzini protoka od 1 mL/min) da bi se dobilo jedinjenja iz naslova, respektivno, u obliku bele čvrste materije. Apsolutna konfiguracija je dodeljena analogno Primeru 513A, na osnovu PARP7 potencije potentnijeg enantiomera i analogno rendgenskom snimku Primera 513A.
Primer 514 Izomer A 10.7 mg, 35%, LCMS: [M+H]<+>542.25.<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.44 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 7.79 (dd, J= 9.0, 2.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.45-7.32 (m, 5H), 6.87 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 5.08 - 5.06 (m, 1H), 3.91 - 3.72 (m, 12H), 2.75 (t, J = 5.4 Hz, 2H). tR = 2.982 min.
Primer 514 Izomer B 10.0 mg, 36%, LCMS: [M+H]<+>542.25. tR = 3.850 min.
Primer 515 Izomer A: 6-(4-[3-[(2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]-2-feniletoksi] propanoil] piperazin-1- il)piridin-3-karbonitril i
Primer 515 Izomer B: 6-(4-[3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]-2-feniletoksi ] propanoil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
Primer 515 Izomer A Primer 515 Izomer B
Korak 1: Metil 3-(2-[[(terc-butoksi)karbonil]amino]-3-fenilpropoksi)propanoat
[1112] Rastvor terc-butil N-(1-hidroksi-3-fenilpropan-2-il)karbamata (2,51 g, 9,99 mmol, 1,00 ekviv.), NaH (600 mg, 25,0 mmol, 1,10 ekviv.) i metila 3-bromopropanoat (1.8 g, 10.8 mmol, 1.10 ekviv.) u THF (30 mL) je mešan 3 h na ST. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrolej etrom (1:5) da bi se dobilo 1,2 g (36%) jedinjenja iz naslova u vidu bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>338.20.
Korak 2: 3-(2-[[(Tert-butoksi)karbonil]amo]-3-fenilpropoksi)propanska kiselina
[1113] Rastvor metil 3-(2-[[(terc-butoksi)karbonil]amino]-3-fenilpropoksi)propanoata (1,2 g, 3,56 mmol, 1,00 ekviv.), LiOH (420 mg, 17,54 mmol, 5,00 ekviv.), voda (2 mL) u MeOH (20 mL) je mešano 12 h na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvora je podešena na 5 sa HCl (36%). Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (3 x30 mL) i organski slojevi su kombinovani. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 1 g jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]+ 324,20.
Korak 3: 3-(2-amino-3-fenilpropoksi)propanoična kiselina hidrohlorid
[1114] Rastvor 3-(2-[[(terc-butoksi)karbonil]amino]-3-fenilpropoksi)propanske kiseline (1 g, 3,09 mmol, 1,00 ekviv.) u HCl/dioksanu (10 mL) je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 800 mg jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>324,20.
Korak 4: 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]-3-fenilpropoksi )propanoična kiselina
[1115] Rastvor hidrohlorida 3-(2-amino-3-fenilpropoksi)propanoične kiseline (800 mg, 3,08 mmol, 1,00 ekviv.), TEA (2 mL) i Int-A6 (1 g, 3,04 mmol, 1,00 ekviv. ) u EtOH (10 mL) je mešana 3 h na 60 °C. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa EtOAc/petroleterom (1:1) da bi se dobio 1 g (63%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]+ 516,20.
Korak 5: 6-[4-[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il] amino]-3-fenilpropoksi)propanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1116] Rastvor 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]- 3-fenilpropoksi)propanoična kiselina (1,29 g, 2,50 mmol, 1,00 ekviv.), HATU (1,43 g, 3,76 mmol, 1,50 ekviv.), DIPEA (0,8 mL) i Int-A4 (470 mg, 2,50 mmol) 2,50 mmol DMF (3 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 430 mg (25%) jedinjenja iz naslova u vidu belog ulja. LCMS: [M+H]<+>686,31.
[1117] Rastvor 6-[4-[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4 -il]amino]-2-feniletoksi)propanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril (180 mg, 0,27 mmol, 1,00 ekviv.) i TFA (2 mL) u DCMu (12 mL) su mešani 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišć en Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (CHIRALPAK IC-3, 3 µm, 0,46 x 10 cm kolona, eluiranjem sa gradijentom MtBE (0,1% DEA):EtOH=50:50, pri brzini protoka od 1 mL/min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance. Apsolutna konfiguracija je dodeljena analogno Primeru 513A, na osnovu PARP7 potencije potentnijeg enantiomera i analogno rendgenskom snimku Primera 513A..
Primer 515 Izomer A: 10.0 mg, 6%, LCMS: [M+H]<+>556.10.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ 8.43 (s, 1H), 7.77 (dd, J= 9.1, 2.3 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.31 - 7.21 (m, 5H), 6.86 (dd, J= 9.1, 0.8 Hz, 1H), 4.30 (s, 1H), 3.86 - 3.79 (m, 4H), 3.77 - 3.57 (m, 8H), 3.02 - 2.96 (m, 1H), 2.90 - 2.83 (m, 1H), 2.73 (t, J= 5.9 Hz, 2H). tR = 2.227 min.
Primer 515 Izomer B: 16.6 mg, 9%, LCMS: [M+H]<+>: 556.10. tR = 4.973 min.
Primer 516: 6-(4-[3-[metil(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etil)amino]propanoil]piperazin-1-il)piridin -3-karbonitril
Korak 1: 6-(4-[3-[(2-Hidroksietil)(metil)amino]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1118] Rastvor Int-A25 (2,3 g, 9,5 mmol, 1 ekviv) i 2-(metilamino)etan-1-ol (1,4 g, 18,6 mmol, 1,96 ekviv.) u EtOH (20 mL) je mešan 2 sata na 60°C. °C. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa DCM/MeOH (9/1) da bi se dobilo 1,4 g jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS:
[M+H]<+>318,19.
Korak 2: 6-(4-[3-[metil(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4- il] oksi]etil)amino]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1119] Rastvor 6-(4-[3-[(2-hidroksietil)(metil)amino]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila (1,4 g, 4,4 mmol, 1 ekv.), Cs2CO3(2,86 g, 8,8 mmol, 1,99 ekviv.), i Int-A6 (1,7 g, 5,2 mmol, 1,2 ekviv.) u DMFu (20 mL) je mešan 2 dana na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 20 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x30 mL EtOAc i organski slojevi su kombinovani i osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata. Organski slojevi su koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni razblaživanjem sa DCM/MeOH (4/1) da bi se dobilo 640 mg (24%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>610,27.
Korak 3: 6-(4-[3-[metil(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etil)amino]propanoil]piperazin-1 -il)piridin-3-karbonitril
[1120] Rastvor 6-(4-[3-[metil(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazina -4-il]oksi]etil)amino]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril (250 mg, 0,41 mmol, 1 ekv.) i TFA (1 mL) u DCMu (10 mL) je mešan 1 sat na sobnoj temperaturi. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN prać eno daljim prečiš ć avanjem pomo ć u Prep-TLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (11,0 mg, 5,6%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>480,1.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.28 (s, 1H), 8.51 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.89 (dd, J= 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.94 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 4.46 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.75 - 3.52 (m, 8H), 2.78 - 2.61 (m, 4H), 2.51 - 2.43 (m, 2H), 2.25 (s, 3H).
Primer 517: 6-(4-(2-(3-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-iloksi)propoksi)acetil)piperazin-1-il)nikotinonitril
[1121]
Korak 1: 6-[4-(2-bromoacetil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1122] Rastvor 2-bromacetil bromida (1 g, 4,95 mmol, 1,00 ekviv.), Int-A4 (945 mg, 5,02 mmol, 1,00 ekviv.), i TEA (1,275 g, 12,60 mmol, 2,50 ekviv.) u DCM (15 mL) je mešan 0,5 h na sobnoj temperaturi. Čvrste materije su filtrirane i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 1,5 g jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>309,03.
Korak 2: 6-[4-[2-(3-Hidroksipropoksi) acetil]piper azin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1123] Rastvor propan-1,3-diola (108,57 mg, 1,43 mmol, 2,00 ekviv.), 6-[4-(2-bromacetil)piperazin-1-il]piridin3-karbonitrila (220 mg, 0,71 mmol, 1,00 ekviv.), i Cs2CO3(692,3 mg, 2,12 mmol, 3,00 ekviv.) u DMF (10 mL) je mešan 3 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncetrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 81 mg (37%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS: [M+H]+ 305,15.
Korak 3: 6-[4-[2-(3-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il] oksi]propoksi)acetil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1124] Rastvor 6-[4-[2-(3-hidroksipropoksi)acetil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila (76 mg, 0,25 mmol, 1,00 ekviv.), Int-A6 (98,4 mg, 0,30 mmol, 1,20 ekviv.) i Cs2CO3(243,8 mg, 0,75 mmol, 3,00 ekviv.) u DMF (5 mL) je mešan 2,5 h na 80 °C. Čvrste materije su filtrirane i dobijeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (3x30 mL) i organski slojevi su kombinovani. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu, eluiran sa EtOAc/heksanom (1:2) da bi se dobilo 40 mg (27%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>597,24.
Korak 4: 6-(4-(2-(3-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-iloksi)propoksi)acetil)piperazin-1-il)nikotinonitril
[1125] Rastvor 6-[4-[2-(3-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4 -il]oksi]propoksi)acetil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila (55 mg, 0,09 mmol, 1,00 ekviv.) i TFA (1 mL) u DCMu (5 mL) su mešani 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncetrovanja, ostatak je prečišć en Prep-HPLC eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (8,4 mg, 20%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>467,05.<1>H NMR (300 MHz, Methanol-d4) δ 8.44 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.77 (dd, J = 9.2, 6.3 Hz, 1H), 6.87 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 4.55 (t, J= 6.3 Hz, 2H), 4.30 (s, 2H), 3.72 - 3.78 (m, 8H), 3.70 - 3.61 (m, 2H), 2.10 - 2.18 (m, 2H).
Primer 518 Izomer A: (R)-6-(4-(3-(3-metoksi-2-((6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino)propoksi) propanoil)piperazin-1-il)nikotinonitril i
Primer 518 Izomer B: (S)-6-(4-(3-(3-metoksi-2-((6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino)propoksi) propanoil)piperazin-1-il)nikotinonitril
Primer 518 Izomer A Primer 518 Izomer B
Korak 1: 3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propanska kiselina
[1126] Rastvor Int-A6 (3 g, 9,12 mmol, 1,00 ekviv.), 2-amino-3-metoksipropan-1-ol (1,2 g, 11,41 mmol, 1,00 ekviv.) i TEA (6 mL) u EtOH (20 mL) je mešan 1 h na 50 °C. Rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa DCM/MeOH (3/1) da bi se dobilo 2,8 g (75%) jedinjenja iz naslova kao crvena čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>412,25.
Korak 2: 5-[(1-Hidroksi-3-metoksipropan-2-il)amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3- on
[1127] Rastvor 3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin4-il]amino]propanske kiseline (3 g, 7,29 mmol, 1,00 ekviv.) u B2H6·THF (35 mL, 5,00 ekviv.) je mešana 2 h na 50 °C. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 20 mL MeOH. Rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa EtOAc/petroleterom (3/2) da bi se dobilo 800 mg (28%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>398,35.
Korak 3: Metil 3-(3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino ]propoksi)propanoat
[1128] Rastvor 5-[(1-hidroksi-3-metoksipropan-2-il)amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazina -3-on (600 mg, 1,51 mmol, 1,00 ekviv.), metil prop-2-enoat (600 mg, 7,0 mmol, 5,0 ekviv.) i Cs2CO3(900 mg, 2,8 mmol, 2,00 ekviv.) u ACN (20 mL) je mešan preko noć i na 35 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa EtOAc/petroletrom da bi se dobilo 150 mg (21%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>484,15.
Korak 4: Metil 3-(3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi)propanoat
[1129] Rastvor metil-3-(3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi)propanoata (150 mg 0,31 mmol, 1,00 ekviv.) u dioksan/HCl (4M, 4 mL) je mešan 4 h na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 120 mg jedinjenja iz naslova kao bezbojno ulje. LCMS: [M+H]<+>354,20.
Korak 5: 3-(3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi)propanska kiselina
[1130] Rastvor metil 3-(3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi)propanoat (120 mg, 0,34 mmol, 1,00 ekviv.) i LiOH (100 mg, 4,18 mmol, 10,0 ekviv.) u MeOH (5 mL) i vodi (2 mL) je mešan preko noć i na 25°C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečiš ć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 50 mg (43%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>340,20.
Korak 6: (R)-6-(4-(3-(3-metoksi-2-((6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino)propoksi)propanoil) piperazin-1-il)nikotinonitril i (S)-6-(4-(3-(3-metoksi-2-((6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4il)amino)propoksi )propanoil)piperazin-1-il)nikotinonitril
[1131] Rastvor 3-(3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi)propanske kiseline (50 mg, 0,15 mmol, 1,00 ekviv.), Int-A4 (35 mg, 0,16 mmol, 1,00 ekviv.), HATU (56 mg, 0,15 mmol, 1,00 ekviv.) i DIPEA (1 mL) u DMFu (3 mL) je mešan 1 h na 25° C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN i dalje prečišć en pomo ć u Prep-HPLC. Enantiomeri su razdvojeni hiralnom Prep-HPLC (CHIRAL Cellulose-SB, 5 µm, 0,46 x 15 cm kolona, eluiranjem sa gradijentom heksan(0,1% DEA):EtOH=50:50, pri brzini protoka od 1 mL/ min) da bi se dobilo jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. Apsolutna konfiguracija je dodeljena analogno Primeru 513A, na osnovu PARP7 potencije potentnijeg enantiomera i analogno rendgenskom snimku Primera 513A.
Primer 518 Izomer A: 3.5 mg, 23%, LCMS: [M+H]<+>510.15.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.49 (s, 1 H), 8.04 (d, J= 2.4 Hz, 1 H), 7.93 (s, 1 H), 7.90 - 7.87 (dd, J= 8.80, 2.20 Hz, 1H), 6.92 (d, J= 9.2 Hz, 1 H), 6.23 - 6.22 (dd, J= 8.80, 4.80 Hz, 1H), 4.27 (s, 1 H), 3.69 - 3.53 (m, 14 H), 3.27 (s, 3 H), 2.60 - 2.57 (m, 2 H). tR = 1.080 min.
Primer 518 Izomer B: 4.3 mg, 29%, LCMS: [M+H]<+>510.15, tR = 1.073 min
Primer 519: 6-[4-[3-(2-metil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] amino] propoksi)propanoil] piperazin-1- il] piridin-3-karbonitril
Korak 1: 3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propanska kiselina
[1132] Rastvor terc-butil N-(1-hidroksi-2-metilpropan-2-il)karbamata (3,78 g, 20,0 mmol, 1,00 ekviv.) u HCl/dioksanu (40 mL) je mešan 1 h na 25°C. °C. Čvrste materije su sakupljene filtracijom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2,2 g, 68%) u vidu bele čvrste supstance. LCMS: [M-Cl]<+>90,08.
Korak 2: 5-[(1-hidroksi-2-metilpropan-2-il)amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1133] Rastvor Int-A6 (1 g, 3,04 mmol, 1,00 ekviv.), 2-amino-2-metilpropan-1-ol dihidrohlorida (1,4 g, 8,64 mmol, 3,00 ekviv.) i TEA (924 mg, 9,13 mmol, 3,00 ekviv.) u DMFu (4 mL) je mešan 30 min na 60 °C. Rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa EtOAc/petroleterom (3:7) da bi se dobilo 700 mg (60%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>382,17. Korak 3: Metil 3-(2-metil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amo ] propoksi)propanoat
[1134] Rastvor 5-[(1-hidroksi-2-metilpropan-2-il)amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazina -3-on (537 mg, 1,41 mmol, 1,00 ekviv.), metil prop-2-enoat (1,2 g, 13,9 mmol, 10,0 ekviv.) i Cs2CO3(917 mg, 2,81 mmol, 2,00 ekv.) u ACN (10) je mešan 4 h na sobnoj temperaturi. Rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom i prečišć en hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa EtOAc/petroletrom (24:76) da bi se dobilo 320 mg (49%) jedinjenja iz naslova kao bezbojno ulje. LCMS: [M+H]<+>468,21.
Korak 4: Metil 3-(2-metil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi)propanoat [1135] Rastvor metil 3-( 2-metil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi)propanoat (300 mg 0,64 mmol, 1,00 ekviv.) i TFA/DCM (12 mL) u DCM (10 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 200 mg (92%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>338,12.
Korak 5: 3-(2-metil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi)propanska kiselina [1136] Rastvor metil 3-(2-metil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi)propanoata (220 mg, 0,65 mmol, 1,00 ekviv.) i LiOH·H2O(42 mg, 1,00 mmol, 1,50 ekviv.) u MeOH/H2O (4 mL) je mešan preko noć i na sobnoj temperaturi. pH rastvora je podešen na 6 sa HCl i dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 200 mg (95%) jedinjenja iz naslova u vidu žutog ulja koje je direktno korišć eno u slede ć em koraku. LCMS:
[M+H]<+>324,11.
Korak 6: 6-[4-[3-(2-metil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi)propanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1137] Rastvor 3-(2-metil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi)propanske kiseline (200 mg, 0,62 mmol, 1,00 ekviv.), DIPEA (239 mg, 1,85 mmol, 3,00 ekviv.), HATU (237 mg, 0,62 mmol, 1,01 ekv.) i Int-A4 (116 mg, 0,62 mmol, 1,00 ekviv.) u DMFu (2 mL) je mešan tokom 15 min na sobnoj temperaturi, nakon čega je usledilo dodavanje tri kapi etanolamina. Ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 143,4 mg (47%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS:
[M+H]<+>494,25.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.43 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.78 - 7.75 (m, 1H), 6.88 - 6.85(d, J = 9.2 Hz, 1H), 3.89 - 3.86 (m, 2H), 3.83 - 3.82 (m, 2H), 3.74 - 3.72 (m, 6H), 3.51 (s, 2H), 2.78 - 2.75 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 1.48 (s, 6H).
Primer 520: 4-hloro-5-[2-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il] piperazin-1-il] propoksi)etoksi]-2,3-dihidropiridazin -3-on
[1138]
Korak 1: 4-hloro-5-[2-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi)etoksi]-2,3-dihidropiridazin -3-on
[1139] Rastvor Int-A9 (132,05 mg, 0,50 mmol, 1,00 ekviv.), HATU (229,9 mg, 0,60 mmol, 1,20 ekviv.), DIPEA (195,05 mg, 1,51 mmol, 3,00 ekviv.) i Int-A2 ((140.4 mg, 0.60 mmol, 1.20 ekviv.) u DMFu (3 mL) je mešano 2 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncetrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN i ostatak je dalje prečišć en Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>477,05.1H NMR (300 MHz, Hlorofrom-d4) δ 8.53 (s, 2H), 7.92 (s, 1H), 4.45 (t, J= 4.4 Hz, 2H), 3.95 - 3.76 (m, 8H), 3.82 - 3.45 (m, 4H), 2.69 (t, J= 6.3 Hz, 2H).
[1140] Sledeć i primeri u Tabeli E4 su na sličan način pripremljeni od Int-A9 i odgovaraju ć ih intermedijera u skladu sa metodom opisanom za Primer 520.
Tabela E4
Primer 524: 6-(4-[2-[(3-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propil)amino]acetil]piperazin-1-il )piridin-3-karbonitril
[1141]
Korak 1: 6-(4-[2-[(3-Hidroksipropil)amino]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1142] Rastvor 6-[4-(2-hloroacetil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila (1,5 g, 5,67 mmol, 1 ekv.), TEA (1,14 g, 11,27 mmol, 1,99 ekviv.), i 3-aminopropan-1-ol (0,424 g, 5,64 mmol, 1,00 ekviv.) u EtOH (20 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i prečišć ena hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa DCM/MeOH (95/5) da bi se dobilo 1,7 g (99%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>304,17.
Korak 2: terc-butil N-[2-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]-N-(3-hidroksipropil)karbamat
[1143] Rastvor 6-(4-[2-[(3-hidroksipropil)amino]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila (1,7 g, 5,60 mmol, 1 ekv.), TEA (1,1 g, 10,87 mmol) , 1,94 ekviv.), i (Boc)20 (1,5 g, 6,87 mmol, 1,23 ekviv.) u THF (20 mL) je mešan 16 h na ST. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni sa DCM/MeOH (98/2) da bi se dobilo 800 mg (35%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>404,22.
Korak 3: terc-butil N-[2-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]-N-(3-[[6-okso-5-(trifluorometil) )-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propil)karbamat
[1144] Rastvor terc-butil N-[2-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]-N-(3-hidroksipropil)karbamata (800 mg, 1,98 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(1,3 g, 3,99 mmol, 2,01 ekviv.) i Int-A6 (977 mg, 2,97 mmol, 1,50 ekviv.) u ACN (20 mL) je mešan 16 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i prečišć ena hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa EtOAc/petroletrom (7/3) da bi se dobilo 280 mg (20%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>696,31.
Korak 4: 6-(4-[2-[(3-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propil)amino]acetil]piperazin-1-il ) piridin3-karbonitril
[1145] Rastvor terc-butil N-[2-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]-N-(3-[[6-okso-5-] (trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propil)karbamata (280 mg, 0,40 mmol, 1 ekv.) i TFA (1 mL) u DCM (10 mL) je mešana 2 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN, a zatim daljim prečišć avanjem pomo ć u Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (31,7 mg, 17%). LCMS: [M+H]<+>466,2.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.51 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.89 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.94 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 4.45 (t, J= 6.1 Hz, 2H), 3.68 (d, J= 5.8 Hz, 4H), 3.42 (s, 4H), 3.32 (s, 2H), 2.65 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 1.87 (q, J= 6.4 Hz, 2H).
Primer 525: 6-[4-[4-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)butanoil]piperazin-1-il]piridin- 3-karbonitril
[1146]
Korak 1: 5-(2-hidroksietoksi)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksiJmetil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1147] Rastvor Int-A6 (5 g, 15,21 mmol, 1 ekv.), TEA (3,07 g, 0,03 mmol) i etan-1,2-diola (945 mg, 15,23 mmol, 1,00 ekviv.) u ACN (50 mL, 1,22 mmol, 0,08 ekviv.) je mešano 5 h na 40 °C. Čvrste materije su filtrirane i dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i prečišć ena reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 600 mg (11%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>355,15.
Korak 2: Metil (2E)-4-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin4-il]oksi]etoksi )but-2-enoat
[1148] Rastvor 5-(2-hidroksietoksi)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (510 mg, 1,44 mmol, 1 ekv. ), metil (2E)-4-bromobut-2-enoat (1288,0 mg, 7,20 mmol, 5,00 ekviv.), RockPhos (101,2 mg, 0,22 mmol, 0,15 ekviv.), Cs2CO3(937,7 mg, 2,80 mmol) i Pd2(alil)2Cl2(26,3 mg, 0,07 mmol, 0,05 ekviv.) u toluenu (12 mL) je mešan 4 h na 80 °C. Čvrste materije su filtrirane i dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gelkoloni eluiranjem sa EtOAc/petroleterom (1:2) da bi se dobilo 200 mg (31%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>453,00.
Korak 3: Metil 4-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)butanoat
[1149] Rastvor metil (2E)-4-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)but-2-enoat (200 mg, 0,44 mmol, 1 ekv.) i Pd/C (20 mg, 0,19 mmol, 0,43 ekviv.) u MeOH (10 mL) u atmosferi gasovitog vodonika je mešan za 1 h na sobnoj temperaturi. Čvrste materije su filtrirane i dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 160 mg (80%) jedinjenja iz naslova kao svetlo žuta čvrsta supstance. LCMS: [M+H]<+>455,15.
Korak 4: Metil 4-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)butanoat
[1150] Rastvor metil 4-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi] etoksi)butanoat (200 mg, 0,44 mmol, 1,00 ekviv.) i trifluorosirć etna kiselina (1 mL) u DCMu (5 mL) su mešani 40 minuta na sobnoj temperaturi, a zatim je rezultujuć a smeša koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 170 mg jedinjenja kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>325,05.
Korak 5: 4-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)butanska kiselina
[1151] U rastvor metil 4-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)butanoata (178 mg, 0,55 mmol, 1,00 ekv.) u THFu (5 mL) je dodat LiOH (69 mg, 2.88 mmol, 3.00 ekviv.) u vodi (1 mL). Dobijeni rastvor je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Dodata je HCl (1M) da bi se pH podesio na 4, a rezultujuć a smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 114,0 mg (67%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS:
[M+H]<+>311,00.
Korak 6: 6-[4-[4-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)butanoilpiperazin-1-ilpiridin-3-karbonitril
[1152] Rastvor 4-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)butanske kiseline (70 mg, 0,23 mmol, 1 ekv.), HOBT (45,7 mg, 0,34 mmol, 1,50 ekviv.), EDCI (64,9 mg, 0,34 mmol, 1,50 ekviv.) i DIPEA (58,3 mg, 0,45 mmol, 2,00 ekviv.) u DMF (5 mL) i Int-A4 (51.0 mg, 0.27 mmol, 1.20 ekviv.) je mešan 20 min na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je mešan još 3 h na 60°C. Reakcija je zatim razblažena dodavanjem 10 mL vode, ekstrahovana sa 2 x 10 mL EtOAc, isprana sa 1 x 10 mL slanog rastvora i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 33,2 mg (31%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]+ 481,05.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ 8.46 (dd, J= 2.4, 0.8 Hz, 1H), 8.26 (d, J= 0.9 Hz, 1H), 7.79 (dd, J= 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.89 (dd, J= 9.1, 0.8 Hz, 1H), 4.59 - 4.56 (m, 2H), 3.82 - 3.79 (m, 4H), 3.77 - 3.60 (m, 6H), 3.58 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 2.50 (dd, J =8.1, 6.9 Hz, 2H), 1.97 - 1.82 (m, 2H).
Primer 526: 6- [4- [3-(2- [metil [6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)propil]piperazin-1-il]piridin -3-karbonitril
[1153]
Korak 1: 6-[4-(3-Hidroksipropil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1154] Rastvor 3-(piperazin-1-il)propan-1-ola (1 g, 6,93 mmol, 1,00 ekviv.), DIPEA (1,79 g, 13,85 mmol, 2,00 ekviv.) i 6-hloropiridin-3- karbonitril (958 mg, 6,91 mmol, 1,00 ekviv.) u NMPu (5 mL) je mešan 1 h na 80 °C. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 30 mL DC i organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod vakuumom. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 1,43 g (84%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>247,20.
Korak 2: 3-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]propil metansulfonat
[1155] Rastvor 6-[4-(3-hidroksipropil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila (1,1 g, 4,47 mmol, 1,00 ekviv.), TEA (904 mg, 8,93 mmol, 2,00 ekviv.), i metansulfonil metansulfonat (1.17 g, 6.72 mmol, 1.50 ekviv.) u DCM (15 mL) je mešan 3 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na silika gel kolonu sa DCM/metanolom (93:7) da bi se dobilo 1,02 g (70%) jedinjenja iz naslova kao žuta čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>324,25.
Korak 3: terc-butil N-(2-[3-[4-(5-cijanopiridin-2il)piperazin-1-il]propoksi]etil)-N-metilkarbamat
[1156] U rastvor terc-butil N-(2-hidroksietil)-N-metilkarbamata (2.18 g, 12.44 mmol, 2.00 ekviv.) u THFu (10 mL) dodat je natrijum hidrid (250 mg, 6.25 mmol, 2. ekviv.) u nekoliko serija na 0 °C. Smeša je mešana 10 min, a zatim je dodat 3-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]propil metansulfonat (1,02 g, 3,14 mmol, 1,00 ekviv.). Dobijeni rastvor je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 15 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 30 mL EtOAc i organski slojevi su kombinovani. Nakon koncentrovanja, ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroleterom (7:3) da bi se dobilo 1,6 g jedinjenja iz naslova u vidu žutog ulja. LCMS:
[M+H]<+>404,25.
Korak 4: 6-(4-[3-[2-(metilamino)etoksi]propil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril hidrohlorid
[1157] Rastvor terc-butil N-(2-[3-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]propoksi]etil)-N-metilkarbamata (500 mg, 1,24 mmol, 1,00 ekviv.) u HCl/dioksanu (5 mL) je mešan 30 min na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 500 mg jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>304,25.
Korak 5: 6-[4-[3-(2-[Metil[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il ] amino]etoksi)propil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1158] Rastvor 6-(4-[3-[2-(metilamino)etoksi]propil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril hidrohlorida (400 mg, 1,18 mmol, 1 ekv.), TEA (238,2 mg, 2,35 mmol, 2 ekviv.), i Int-A6 (387,0 mg, 1,18 mmol, 1 ekv.) u EtOH (10 mL) je mešan 5 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i prečišć ena hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa DCM/MeOH (93/7) da bi se dobilo 500 mg (71%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>596,29.
Korak 6: 6-[4-[3-(2-[metil[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)propil]piperazin-1-il]piridin -3-karbonitril
[1159] Rastvor 6-[4-[3-(2-[metil[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il ] amino]etoksi)propil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril (490 mg, 0,82 mmol, 1 ekv.) u DCM (10 mL) i TFA (1 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 10 mL vode i dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 30 mL DCM i organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN i dalje prečišć en pomo ć u Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (71,7 mg, 19%). LCMS: [M+H]+ 466,21.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.48 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.85 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 3.60 (m, 8H), 3.41 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.05 (d, J = 2.5 Hz, 3H), 2.37 (t, J = 5.1 Hz, 4H), 2.26 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.62 (s, 2H).
Primer 527 Izomer A: 6-(4-[3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]-2-(piridin4-il)etoksi] propanoil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i
Primer 527 Izomer B: 6-(4-[3-[(2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]-2-(piridin4-il)etoksi] propanoil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1160]
Primer 527 Izomer A Primer 527 Izomer B
Korak 1: 5-[[2-hidroksi-1-(piridin-4-il)etil]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin -3-on
[1161] Rastvor 2-amino-2-(piridin-4-il)etan-1-ola (1 g, 7,24 mmol, 1,00 ekviv.), TEA (2,93 g, 28,96 mmol, 4,00 ekviv.), Int-A6 (2,85 g, 8,67 mmol, 1,20 ekviv.) u EtOH (21 mL) je mešan 1 h na 60 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa EtOAc/petroleterom (2/1) da bi se dobio 1 g (32%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>431,17.
Korak 2: Metil 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]-2(piridin-4-il)etoksi)propanoat
[1162] Rastvor 5-[[2-hidroksi-1-(piridin-4-il)etil]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2, 3-dihidropiridazin-3-on (730 mg, 1,70 mmol, 1,00 ekviv.), metil prop-2-enoat (1,46 g, 16,96 mmol, 10,00 ekviv.) i Cs2CO3(1,1 g, 3,38 mmol, 2 ekviv.) u DMFu (15 mL) je mešan 6 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je ugašen sa 50 mL vode i ekstrahovan sa EtOAc (3 x 50 mL), a zatim su organski slojevi kombinovani. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni sa EtOAc/petroletrom (1:2) da bi se dobilo 400 mg (46%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>517,21.
Korak 3: Metil 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]-2-(piridin-4-il)etoksi)propanoat
[1163] Rastvor metil 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] -2-(piridin-4-il)etoksi)propanoata (370 mg, 0.72 mmol, 1.00 ekviv.) u DCM/TFA (18 mL) je mešan 0.5 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 278 mg jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>387,13.
Korak 4: Metil 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]-2-(piridin-4-il)etoksi)propanska kiselina
[1164] Rastvor metil 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]-2-(piridin-4-il) etoksi)propanoata ( 278 mg, 0,72 mmol, 1,00 ekviv.), LiOH (52 mg, 2,17 mmol, 3,00 ekviv.) i vode (4,5 mL) u MeOH (4,5 mL) je mešan 6 h na sobnoj temperaturi. pH rastvora je podešen na 5 sa HCl. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 260 mg jedinjenja iz naslova kao sirovo žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>373,11.
Korak 5: 6-(4-[3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]-2-(piridin-4-il)etoksi]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i 6-(4-[3-[(2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin -4-il]amino]-2-(piridin-4-il)etoksi]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1165] Rastvor 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]-2-(piridin-4-il)etoksi)propanske kiseline (260 mg, 0,70 mmol, 1,00 ekviv.), HATU (319 mg, 0,84 mmol, 1,20 ekviv.), DIPEA (0,5 mL, 2,00 ekviv.) i Int-A4 (130 mg, 0,69 mmol, 1,00 ekviv.) u DMFu (15ml) je mešan tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN, a zatim dalje prečišć avanje Prep-HPLC. Enantiomeri su razdvojeni pomoć u Chiral-Prep-HPLC (Repaired Chiral IA, 5 µm, 0,46 3 × 10 cm kolona, eluiranjem sa gradijentom MtBE (1% DEA): EtOH = 70:30, pri brzini protoka od 1 mL/ min) da bi se dobila jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. Apsolutna konfiguracija je dodeljena analogno Primeru 513A, na osnovu PARP7 potencije potentnijeg enantiomera i analogno rendgenskom snimku Primera 513A.
Primer 527 Izomer A: 31.2 mg, 8%, LCMS: [M+H]<+>543.21.<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.56 (d, J= 3.3 Hz, 2H), 8.44 (dd, J= 2.4, 0.7 Hz, 1H), 7.78 (dd, J= 9.1, 2.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.47 (dd, J = 4.8, 1.5 Hz ,1H), 6.86 (dd, J= 9.1, 0.8 Hz, 1H), 5.20 (m, 1H), 4.00 - 3.73 (m, 6H), 3.71 - 3.64 (m, 6H), 2.77 - 2.66 (m, 2H). tR = 2.156 min.
Primer 527 Izomer B: 27.3 mg, 8%, LCMS: [M+H]<+>543.21. tR = 6.396 min.
Primer 528 Izomer A: (S)-6-(4-(3-(3-metoksi-2-((6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino) propoksi) propanoil)piperazin-1-il)nikotinonitril i
Primer 528 Izomer B: (R)-6-(4-(3-(3-metoksi-2-((6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-) dihidropiridazin-4-il)amino) propoksi)propanoil)piperazin-1-il)nikotinonitril
Primer 528 Izomer A Primer 528 Izomer B
Korak 1: terc-butil 3-(2-[[(terc-butoksi)karbonil]amino]etoksi)butanoat
[1166] Rastvor terc-butil N-(2-hidroksietil)karbamata (3,2 g, 19,85 mmol, 1,00 ekviv.), Cs2CO3(1,5 g, 4,60 mmol, 2,00 ekv.), (Z)-terc-butilbut-2-enoat (28 g, 196.9 mmol, 10.00 ekviv.) u ACN (20 mL) je mešan tokom noć i na 25°C. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i prečišć ena hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa EtOAc/petroletrom (1:4) da bi se dobilo 420 mg (7%) jedinjenja iz naslova u vidu bezbojnog ulja. LCMS: [M+H]<+>304,39.
Korak 2: 3-(2-Aminoetoksi)butanska kiselina
[1167] Rastvor terc-butil 3-(2-[[(terc-butoksi)karbonil]amino]etoksi)butanoata (420 mg, 1,38 mmol, 1,00 ekviv.), rastvor HCl/dioksana (15 mL) u dioksanu (15 mL) je mešan preko noć i na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 200 mg (98%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>148,18.
Korak 3: 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)butanska kiselina
[1168] Rastvor Int-A6 (400 mg, 1,22 mmol, 1,00 ekviv.), TEA (369 mg, 3,65 mmol, 3,00 ekviv.), EtOH (12 mL) i 3-(2-aminoetoksi)butanske kiseline (180 mg, 1,22 mmol, 1,00 ekviv.) u EtOH (12 mL) je mešan 40 min na 60 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 500 mg (94%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>440,18.
Korak 4: 6-[4-[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il] amino]etoksi)butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1169] Rastvor 3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il] amino] etoksi)butanska kiseline (500 mg, 1,14 mmol, 1,00 ekviv.), HATU (430 mg, 1,13 mmol, 1,01 ekviv.), DIPEA (294 mg, 2,27 mmol, 2,00 ekviv.), Int-A4 (200 mg, 1.06 mmol 1,00 ekviv.) u DMF (3 mL) je mešan 30 min na 25 °C. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 300 mg (43%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>610,20.
Korak 5: (S)-6-[4-[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i (R)-6-[4-[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi)butanoil ] piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1170] Rastvor 6-[4-[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il] amino]etoksi)butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril (300 mg, 0,49 mmol, 1,00 ekviv.), a rastvor TFA/DCM (12 mL) u DCM (10 mL) je mešan 30 min na 25 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/CH3CN. Ostatak je dalje prečišć en Prep-HPLC i ChiralPrep-HPLC (Chiralpak IA, 5 µm, 2 x 25 cm kolona, eluiranjem sa gradijentom heksan(0,1% DEA): EtOH = 50:50, pri brzini protoka od 1 mL/min) da bi se dobila (nakon proizvoljnog dodeljivanja stereoizomera) naslovna jedinjenja u obliku belih čvrste supstanci.
Primer 528 Izomer A: 61.7 mg, 32%, LCMS: [M+H]<+>480.15.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.41 (s, 1 H), 8.51 (d, J= 2.3 Hz, 1 H), 7.89 - 7.86 (dd, J= 2.0, 8.8 Hz, 2 H), 6.94 - 6.92 (d, J = 9.1 Hz, 1 H), 6.83 - 6.82 (s, 1 H), 3.92 - 3.84 (m, 1 H), 3.69 - 3.51 (m, 12 H), 2.67 - 2.60 (dd, J = 15.7, 7.2 Hz, 1 H), 2.39 - 2.35 (dd, J = 15.7, 5.1 Hz, 1 H), 1.12 (d, J = 6.1 Hz, 3H). tR = 1.03.
Primer 528 Izomer B: 57.9 mg, 30%, LCMS: [M+H]<+>480.15. tR = 1.04 min.
Primer 529: 6-[4-[3-(3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] amino] propoksi)propanoil] piperazin-1-il] piridin -3-karbonitril
Korak 1: terc-butil 4-(hidroksimetil)-2,2-dimetil-1,3-oksazolidin-3-karboksilat
[1171] Rastvor 3-terc-butil 4-metil 2,2-dimetil-1,3-oksazolidin-3,4-dikarboksilata (5 g, 19,28 mmol, 1,00 ekviv.) i CaCl2(4,28 g, 2,00 ekv.) u THF (100 mL) i MeOH (20 mL), a zatim je dodat NaBH4(1,46 g, 38,59 mmol, 2,00 ekviv.) i mešan je 4 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je mešan još 30 min na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena dodavanjem 20 mL vode, ekstrahovana sa 3 x 100 mL EtOAc, osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 4,3 g (96%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]+ 232,15.
Korak 2: terc-butil 4-[(3-metoksi-3-oksopropoksi)metil]-2,2-dimetil-1,3-oksazolidin-3-karboksilat
[1172] U rastvor terc-butil 4-(hidroksimetil)-2,2-dimetil-1,3-oksazolidin-3-karboksilata (1 g, 4,32 mmol, 1,00 ekv.) i Cs2CO3(2,81 g, 8,62 mmol, 2,00 ekviv.) u ACN (25 mL) je u kapima dodat metil prop-2-enoat (1,88 g, 21,84 mmol, 5,00 ekviv.). Reakciona smeša je mešana 20 min na sobnoj temperaturi i dobijeni rastvor je mešan još 3 h na sobnoj temperaturi. Čvrste materije su filtrirane i ostatak je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 1,1 g (80%) naslovnog jedinjenja u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>318,18.
Korak 3: Metil 3-((2,2-dimetiloksazolidin-4-il)metoksi)propanoat
[1173] Rastvor terc-butil 4-[(3-metoksi-3-oksopropoksi)metil]-2,2-dimetil-1,3-oksazolidin-3-karboksilata (1 g, 3,12 mmol, 1,00 ekviv.) u HCl/dioksan (10 mL, 4M) je mešan 40 min na sobnoj temperaturi, a ostatak je zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 920 mg jedinjenja iz naslova u obliku smeđeg ulja. LCMS: [M+H]<+>218,18.
Korak 4: Metil 3-(3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino ]propoksi)propanoat
[1174] Rastvor metil 3-[(2,2-dimetil-1,3-oksazolidin-4-il)metoksi]propanoata (1,29 g, 5,94 mmol, 1,00 ekviv.), DIPEA (1,01 g, 7,81 mmol, 2,00 ekviv.) i Int-A6 (860 mg, 2.62 mmol, 1.00 ekviv.) u IPA (10 mL) je mešan 1 h na 60 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa EtOAc/petroleterom (2:3) da bi se dobilo 570 mg (20%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>470,10.
Korak 5: Metil 3-(3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi)propanoat [1175] Rastvor metil 3-(3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidro-piridazin-4-il]amino]propoksi)propanoat (550 mg , 1,17 mmol, 1,00 ekviv.) i TFA (2 mL) u DCM (10 mL) je mešano 40 min na sobnoj temperaturi, a zatim koncentrovano pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 500 mg jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>340,00.
Korak 6: 3-(3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi)propanska kiselina [1176] Rastvor metil 3-(3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi) propanoat (550 mg, 1,62 mmol, 1,00 ekviv.) i LiOH·H2O (203 mg , 4,84 mmol, 3,00 ekviv.) u vodi (3 mL) i THF (15 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi, a zatim razblaženo sa 5 mL vode, ekstrahovano sa 10 mL EtOAc i vodeni slojevi su kombinovani. Vodeni slojevi su podešeni na pH 4 i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 300 mg (57%, koji sadrži nešto litijum hlorida) sirovog jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>326,09. Korak 7: 6-[4-[3-(3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi)propanoil]piperazin1-il] piridin-3-karbonitril
[1177] Rastvor 3-(3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi)propanske kiseline (105 mg, 0,32 mmol, 1 ekviv.), HOBT (65,4 mg, 0,48 mmol, 1,5 ekviv.), EDCI (92,8 mg, 0,48 mmol, 1,5 ekviv.), DIPEA (83,4 mg, 0,65 mmol, 2,0 ekviv.) i Int-A4 (72.9 mg, 0.39 mmol, 1,20 ekviv.) u DMF (10 mL) je mešano 3 h na sobnoj temperaturi, nakon čega je usledilo ispiranje sa 1 x 20 mL H2O i ekstrakcija sa 3 x 20 mL EtOAc. Organski sloj je kombinovan, ispran sa 1 x 20 mL slanog rastvora i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 11,3 mg (7%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>496,10. LCMS: [M+H]<+>496.10.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.32 - 12.89 (br, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.94 - 7.84 (m, 2H), 6.94 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 6.25 (dd, J= 8.8, 4.5 Hz, 1H), 5.08 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.06 (s, 1H), 3.73 - 3.62 (m, 6H), 3.55 - 3.50 (m, 8H), 2.64 - 2.51 (t, J= 6.4 Hz, 2H).
Primer 530 Izomer A: 6-(4-[3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] oksi] propoksi] propanoil] piperazin- 1-il)piridin-3-karbonitril i
Primer 530 Izomer B: 6-(4-[3-[(2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4- il] oksi] propoksi] propanoil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i
Primer 530 Izomer C: 6-[4-(3-[[(2S)-1-[[6-Okso-5-( trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] oksi] propan-2-il] oksi] propanoil)piperazin-1-il] piridin-3-karbonitril i
Primer 530 Izomer D: 6-[4-(3- [[(2R)-1-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] oksi] propan-2-il] oksi] propanoil)piperazin-1-il] piridin- 3-karbonitril
Primer 530 Izomer C Primer 530 Izomer D
Korak 1: Smeša 6-[4-[3-(2-hidroksipropoksi)propanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila i 6-(4-(3-(1-hidroksipropan-2-iloksi)propanoila) )piperazin-1-il)nikotinonitril
[1178] Rastvor propan-1,2-diola (1,9 g, 25,0 mmol, 5,00 ekviv.), Cs2CO3(3,25 g, 10,0 mmol, 2,00 ekviv.) i IntA-25 ( 1.21 g, 4.99 mmol, 1.00 ekviv.) u ACN (25ml) je mešan 5 h na 60 °C. Nakon koncentrovanja,pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 1,25 g (76%) smeše jedinjenja iz naslova u vidu belih ulja. LCMS: [M+H]<+>319,18.
Korak 2: Smeša 6-[4-[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4- il] opoksi)propanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i 6-(4-(3-(16-okso-5-(trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil) etoksi)metil) -1,6-dihidropiridazin-4-iloksi)propan-2-iloksi)propanoil)piperazin-1-il)nikotinonitril
[1179] Rastvor smeše 6-[4-[3-(2-hidroksipropoksi)propanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila i 6-(4-(3-(1-(6-)) okso-5-(trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidropiridazin-4-iloksi)propan-2-iloksi)propanoil) plperazin-1-il)nlkotinonitril (1,25 g, 3,93 mmol, 1,00 ekviv.), Cs2CO3(1,9 g, 5,83 mmol, 1,50 ekviv.) i Int-A6 (1,55 g, 4,71 mmol, 1,20 ekviv.) u DMF (20 mL) je mešan na 86 °C. Čvrste materije su filtrirane i dobijeni rastvor je ugašen vodom (30 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (3x30 mL) i organski slojevi su kombinovani. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni sa EtOAc/petroletrom (1:1) da bi se dobilo 1,2 g (50%) smeše jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]+ 611,26.
Korak 3: Sinteza 6-(4-[3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi]propanoil]piperazin- 1-il)piridin-3-karbonitril, 6-(4-[3-[(2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi ]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril, 6-[4-(3-[[(2S)-1-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4 - il]oksi]propan-2-il]oksi]propanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i 6-[4-(3-[[(2R)-1-[[6-okso-5] -(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propan-2-il]oksi]propanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1180] Rastvor 6-[4-[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi)propanoil]piperazin 1-il]piridin-3-karbonitril i 6-(4-(3)-(1-(6-okso-5-(trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-l,6-dihidropiridazin-4-iloksi)propan-2-iloksi)propanoil)piperazin-1-il)nikotinonitril smeše (260 mg, 0.54 mmol, 1.00 ekviv.) u TFA/DCM (30 mL) je mešana 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišć en pomo ć u Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC da bi se odvojili izomeri A i B (CHIRALPAK IF-3, 3 µm, 0,46x5 cm kolona, eluiranjem sa gradijentom heksana (0,1% DEA):DCM = 50:50, pri brzini protoka od 1 mL/min) i izomeri C i D (CHIRALPAK IC-3, 3 µm, 0,46 x 5 cm kolona, eluiranje sa heksan:DCM (3:1) (0,1% DEA):EtOH = 50:50, pri brzini protoka od 1 mL/min) da bi se dobila jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. Apsolutna konfiguracija dva enantiomera izomera A i B dodeljena je analogno Primeru 513A, na osnovu PARP7 potencije potentnijeg enantiomera i analogno rendgenskom snimku Primera 513A. Stereohemija izomera C i D je proizvoljno dodeljena. Položaj metil grupe je potvrđen<1>H-NMR.
Primer 530 Izomer A: 54,3 mg, 21%, LCMS: [M+H]<+>481,15.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8,41 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,75 (dd, J = 9,1, 2,3 Hz, 1H), 6,83 (dd, J = 9,1, 0,8 Hz, 1H), 5,14-5,08 (m, IH), 3,85-3,54 (m, 12H), 2,63 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 1,34 (d, J = 6,3 Hz, 3H). tR = 1,453 min.
Primer 530 Izomer B: 59,7 mg, 23%, LCMS: [M+H]<+>481,10, tR = 2,988 min.
Primer 530 Izomer C: 18,2 mg, 7%, LCMS: [M+H]<+>481,10.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8,41 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,74 (dd, J = 9,1, 2,4 Hz, 1H), 6,83 (dd, J= 9,1, 0,8 Hz, 1H), 4,41 - 4,32 (m, 2H), 3,93 - 3,85 (m, 2H), 3,84 - 3,76 (m, 3H), 3,75 - 3,65 (m, 6H), 2,65 (t, J).6,0 Hz, 2H), 1,24 (d, J= 6,4 Hz, 3H). tR = 2,331 min.
Primer 530 Izomer D: 38,2 mg, 15%, LCMS: [M+H]<+>481,15. tR = 2,810 min.
Primer 531: 6-[4-(3-[[(3R,4S)-4-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]oksolan-3-il ]oksi] propanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
Korak 1: 6-(4-(3-((3R,4S)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-3-iloksi)propanoil)piperazin-1-il)nikotinonitril
[1181] Rastvor (3S,4R)-tetrahidrofurana -3,4-diol (1 g, 9,61 mmol, 1 ekv.), Cs2CO3(6,3 g, 19,2 mmol, 2 ekv.), 6-[4-(prop-2-enoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril (2,3 g, 9,6 mmol, 1 ekv.) u ACN (20 mL) je mešan 5 h na 60 °C. Rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa DCM/MeOH (99/1) da bi se dobilo 100 mg (3%) jedinjenja iz naslova u obliku belog ulja. LCMS: [M+H]<+>347,16.
Korak 2: 6(4-(3-((3R,4S)-4-(6-okso-5-(trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidropiridazin)- 4-iloksi)-tetrahidrofiuran-3-iloksi)propanoil)piperazin-1-il)nikotinonitril
[1182] Rastvor 6-(4-(3-((3R,4S)-4-hidroksi-tetrahidrofuran-3-iloksi)propanoil)piperazin-1-il)nikotinonitril (100 mg, 0,28 mmol, 1 ekv.), Cs2CO3(188 mg, 0,56 mmol, 2 ekv.), Int-A6 (475 mg, 0,14 mmol, 5 ekv.) u ACN (20 mL) je mešan 1 dan na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa DCM/MeOH (95/5) da bi se dobilo 50 mg (28%) jedinjenja iz naslova u obliku belog ulja. LCMS: [M+H]<+>639,25.
Korak 3: 6-[4-(3-[[(3R,4S)-4-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]oksolan-3-il ] oksi]propanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1183] Rastvor 6-(4-(3-((3R,4S)-4-(6-okso-5-(trifluorometil1)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidro piridazin-4-iloksi)-tetrahidrofuran-3-iloksi)propanoil)piperazin-1-il)nikotinonitril (50 mg, 0,078 mmol, 1 ekv.) , TFA (1 mL, 13,5 mmol, 43,0 ekviv.) u DCM (10 mL) je mešana 1 h na sobnoj temperaturi. Rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskomo i ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/CH3CN. Zatim je ostatak dalje prečišć en pomo ć u Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (16,6 mg, 43%) u vidu bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>509,2.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,52 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,29 (s, 1H), 7,89 (dd, J= 9,1, 2,3 Hz, 1H), 6,94 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 5,50 (s, 1H), 4,35 (k, J = 6,1 Hz, 1H), 4,03 (dd, J = 10,8, 4,7 Hz, 1H), 3,98 - 3,82 (m, 2H), 3,69 - 3,52 (m, 7H), 3,50-3,48 (m, 4H), 2,46 (m, 2H).
Primer 532 Izomer A: 6-(4-[3-[(2S)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi] propoksi] propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i
Primer 532 Izomer B: 6-(4-[3-[(2R)-3-Metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)- 1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi] propoksi]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1184]
Primer 532 Izomer A Primer 532 Izomer B
Korak 1: 6-[4-[3-(2-Hidroksi-3-metoksipropoksi)propanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1185] Rastvor Int-A25 (1,3 g, 5,37 mmol, 1,00) ekviv.), Cs2CO3(3,49 g, 10,71 mmol, 2,00 ekviv.) i 3-metoksipropan-1,2-diol (2,28 g, 21,48 mmol, 4,00 ekviv.) u ACN (30 mL) je mešan 5 h na 70°C. Rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni sa hloroformom/MeOH (1:10) da bi se dobilo 1,41 g (75%) jedinjenja iz naslova kao belo ulje. LCMS: [M+H]<+>349,00.
Korak 2: 6-[4-[3-(3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin- 4-il]opoksi)propanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1186] Rastvor 6-[4-[3-(2-hidroksi-3-metoksipropoksi)propanoil]piperazin-1-il] piridin-3-karbonitril (1,29 g, 3,70 mmol, 1,00 ekviv.), Cs2CO3(1,8 g, 5,52 mmol, 1,50 ekviv.) i Int-A6 (1,46 g, 4,44 mmol, 1,20 ekv.) u ACN (30 ml) je mešan tokom 8 h na 80 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je nanet na kolonu silika gela sa EtOAc/petroletrom (1:1) da bi se dobilo 1,58 g (67%) jedinjenja iz naslova u obliku smeđeg ulja. LCMS: [M+H]<+>641,00.
Korak 6: 6-(4-[3-[(2S)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi]propanoil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i 6-(4-[3-[(2R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4 -il]oksi]propoksi]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1187] Rastvor 6-[4-[3-(3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi) propanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril (1,56 g, 3,06 mmol, 1 ekv.), TFA (6 mL) u DCM (30 mL) je mešan 40 min na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je dalje prečišć en pomo ć u Prep-HPLC i ChiralPrep-HPLC (CHIRALPAK ID-3, 3 µm, 0,46 x 10 cm kolona, eluiranje sa MTBE (0,1% DEA):EtOH=70:30, npri brzini protoka od 1 mL/min) daju ć i jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. Apsolutna konfiguracija je dodeljena analogno Primeru 513A, na osnovu PARP7 potencije potentnijeg enantiomera i analogno rendgenskom snimku Primera 513A.
Primer 532 Izomer A: 21,7 mg, LCMS: [M+H]<+>511,05.
[1188]<1>H NMR (300 MHz, hloroform-d4) δ 11,22 (s, 1H), 8,44 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,68 (dd, J = 9,0, 2,4 Hz). , 1H), 6,64 (d, J= 9,0 Hz, 1H), 4,89 - 4,82 (m, 1H), 3,94 - 3,90 (m, 1H), 3,89 - 3,71 (m, 7H), 3,71 - 3,64 (m, 2H), 3,89 - 3,64 (m, 2H), 6,64 (d, J= 9,0 Hz, 1H), ), 3,64-3,55 (m, 4H), 3,39 (s, 3H), 2,69-2,51 (m, 2H). tR = 1,935 min
Primer 532 Izomer B: 40,5 mg, LCMS [M+H]<+>511,05. tR = 2,359 min.
Primer 533: 5-(2-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]etoksi)-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1189]
[1190] Rastvor Int-A11 (50 mg, 0,17 mmol, 1 ekviv.), DIPEA (65,5 mg, 0,51 mmol, 3 ekviv.), HOBT (34,2 mg, 0,25 mmol, 1,5 ekviv.), EDCI (48,25 mg, mmol, 1.5 ekviv.), i Int-A3 (43.7 mg, 0.19 mmol, 1.1 ekviv.) u DMF (1.5 mL) je mešan 4 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/CH3CN i ostatak je dalje prečišć en Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (21 mg, 26%). LCMS [M+H]<+>477,12.1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,45 (s, 2H), 8,25 (s, 1H), 4,53 (s, 2H), 3,74 - 3,69 (m, 8H), 3,54 (d, J= 5,6 Hz, 4H), 2,61 (t, J = 6,5 Hz, 2H).
[1191] Sledeć i primeri u Tabeli E5 su pripremljeni na sličan način prema metodi opisanoj za Primer 533.
Tabela E5
Primer 537 Izomer A: 6-[4-(3-[[(1S,2S)-1-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1 ,6-dihidropiridazin-4-il]amino]-2,3-dihidro-1H-inden-2-il]oksi]propanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i
Primer 537 Izomer B: 6-[ 4-(3-[[(1R,2R)-1-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il ]amino]-2,3-dihidro-1H-inden-2-il]oksi]propanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1192]
Primer 537 Izomer A Primer 537 Izomer B
Korak 1: 5-[(2-hidroksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2, 3-dihidropiridazin-3-on
[1193] Rastvor Int-A6 (2,00 ekviv.), 1-amino-2,3-dihidro-1H-inden-2-ol (226 mg, 1,51 mmol, 1,00 ekviv.) i TEA (308 mg, 3,04 mmol, 2,00 ekviv.) u etanolu (12 mL) je mešan 1 h na 60 °C. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a zatim je ostatak nanet na silika gel kolonu eluiranjem sa EtOAc/petroleterom (35:65) da bi se dobilo 356 mg (53%) jedinjenja iz naslova kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS [M+H]<+>.
Korak 2: Metil 3-[(1-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]-2 ,3-dihidro-1H-inden-2-il)oksi]propanoat
[1194] Rastvor 5-[(2-hidroksi-2,3-dihidro-1H-inden-1-il)amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil] -2,3-dihidropiridazin-3-on (340 mg, 0,77 mmol, 1,00 ekviv.), Cs2CO3(752 mg, 2,31 mmol, 3,00 ekviv.) i metil prop-2-enoat (200 mg, 2,32 mmol, 3,00 ekviv.) u ACN (10 mL) je mešan 3 dana na sobnoj temperaturi, a zatim je dobijeni rastvor razblažen sa 80 mL EtOAc, ispran sa 3X50 mL H2O i organski slojevi su kombinovani i osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa EtOAc/petroletrom (35:65) da bi se dobilo 152 mg (37%) jedinjenja iz naslova u obliku smeđeg ulja. LCMS [M+H]<+>528,21.
Korak 3: Metil 3-[(1-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]-2,3-dihidro-1H-inden-2-il)oksi ] propanoat TFA so
[1195] Rastvor metil 3-[(1-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4 -il]amino]-2,3-dihidro-1H-inden-2-il)oksi]propanoat (147 mg, 0,28 mmol, 1,00 ekviv.) i TFA (1 mL) u DCM (4 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi, a zatim je dobijena smeša koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 115 mg (83%) jedinjenja iz naslova u vidu svetlo braon ulja. LCMS [M+H]<+>398,12.
Korak 4: 3-[(1-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]-2,3-dihidro-1H-inden-2-il)oksi] propanoična kiselina
[1196] Rastvor metil 3-[(1-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]-2,3-dihidro-1H-inden-2-il)oksi]propanoat TFA soli (115 mg, 0,29 mmol, 1,00 ekviv.) i LiOH·H2O (122 mg, 10,00 ekviv.) u MeOH (2,5 mL) i vodi (0,5 mL) su mešani 1 h na 30 °C, a zatim je pH vrednost rastvora podešena na 4 sa HCl (36,5%), a zatim je rezultujuć a smeša koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 110 mg (99%, sirov proizvod, pomešan sa LiCl) jedinjenja iz naslova kao svetlo žutog čvrsta supstanca. LCMS [M+H]<+>384,11.
Korak 5: 6-[4-(3-[[(1S,2S)-1-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6 -dihidropiridazin-4-il]amino]-2,3-dihidro-1H-inden-2-il]oksi]propanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i 6-[4-(3-[[ (1R,2R)-1-[[6-okso5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]-2,3-dihidro -1H-inden-2-il]oksi]propanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1197] Rastvor 3-[(1-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]-2,3-dihidro-1H-inden-2-il)oksi] propanske kiseline (110 mg, 0,29 mmol, 1,00 ekviv.), HATU (87 mg, 0,23 mmol, 0,80 ekv. ), DIPEA (74 mg, 0,57 mmol, 2,00 ekviv.) i Int-A4 (53,7 mg, 0,29 mmol, 1,00 ekviv.) u DMF (2,5 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi, a zatim je ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/CH3CN, a zatim je ostatak dalje prečišć en pomo ć u Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (CHIRAL Repaired IC, 5 µm, 0,46 x 10 cm kolona, eluiranje sa MTBE (0,1% DEA):EtOH=70:30, pri brzini protoka od 1 mL/min) dajuć i jedinjenja iz naslova. Apsolutna stereohemija je dodeljena analogno Primeru 513A, na osnovu PARP7 potencije snažnijeg enantiomera i analogno rendgenskom snimku Primera 513A.
Primer 537 Izomer A: 5,9 mg, 19%, LCMS [M+H]<+>554,15.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8,40 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 7,76 (dd, J= 9,1, 2,4 Hz, 1H), 7,28 (d, J= 7,2 Hz, 1H) , 7,16 - 7,13 (m, 2H), 7,09 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 6,77 (d, J= 8,7 Hz, 1H), 5,46 (d, J= 4,5 Hz, 1H), 4,85 (d, J= 6,9 Hz, 1H), 4,47-4,42 (m, 1H), 3,94-3,91 (m, 1H), 3,84-3,67 (m, 4H), 3,53-3,44 (m, 3H), 3,29-3,09 (m, 1H), 3,53-3,44 (m, 3H), 3,29-3,09 (m, 1H), 3,84-3,67 (m, 4H), 3,53-3,44 (m, 1H), 3,29-3,09 (m, 1H).3H), 2,81-2,73 (m, IH), 2,60-2,49 (m, IH). tR = 2,583 min.
Primer 537 Izomer B: 4,9 mg, 16%, LCMS [M+H]<+>554,15. tR = 3,468 min.
Primer 538 Izomer A: 6-[4-[(3R)-3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)butanoil]piperazin- 1-il]piridin-3-karbonitril i
Primer 538 Izomer B: 6-[4-[(3S)-3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
Primer 537 Izomer A Primer 537 Izomer B
Korak 1: 6-[4-[(2E)-But-2-enoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1198] Rastvor (2E)-but-2-enoil (2E)-but-2-enoat (1,05 g, 6,81 mmol, 1,30 ekviv.), TEA (1,5 g, 15,0 mmol, 3,00 ekviv.) i Int-A4 (1 g, 5,31 mmol, 1,00 ekviv.) u DCM (20 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa EtOAc/petroletrom (1:1) da bi se dobilo 1,28 g (94%) jedinjenja iz naslova u vidu bele čvrste supstance. LCMS [M+H]<+>257,00.
Korak 2: 6-[4-[3-(2-Hidroksietoksi)butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1199] Rastvor 6-[4-[(2E)-but-2-enoila]plperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila (1,3 g, 4,93 mmol, 1,00 ekviv.), Cs2CO3(3,2 g, 9,82 mmol, 2,00 ekviv.) i etan-1,2-diol (1,5 g, 24,2 mmol, 5,00 ekviv.) u ACN (30 mL) je mešano 2 dana na 75 °C. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa hloroform/MeOH (1:10) da bi se dobilo 1,01 g (64%) naslovnog jedinjenja u vidu bele čvrste supstance. LCMS [M+H]<+>319.
Korak 3: 6-[4-[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1 ,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1200] Rastvor 6-[4-[3-(2-hidroksietoksi)butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila (818 mg, 2,57 mmol, 1,00 ekviv.), Cs2CO3(1 g, 3,07 mmol) , 1,20 ekviv.), i Int-A6 (2,5 g, 7,60 mmol, 3,00 ekviv.) u DMF (20 mL) je mešan 5 h na 80 °C. Dobijeni rastvor je ugašen sa 50 mL vode i ekstrahovan sa EtOAc (3 x 50 mL) i organski slojevi su kombinovani. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa EtOAc/petroleterom (1:1) da bi se dobilo 280 mg (18%) jedinjenja iz naslova u obliku smeđeg ulja. LCMS [M+H]<+>611.
Korak 4: 6-[4-[(3R)-3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi ]etoksi)butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i 6-[4-[(3S)-3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin- 4-il]oksi]etoksi)butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1201] Rastvor 6-[4-[3-(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]etoksi)butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril (250 mg, 0,52 mmol, 1,00 ekviv.), TFA (3 mL) u DCM (15 mL) je mešan 30 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišć en pomo ć u Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (CHIRAL PAK IG-3, 3 µm, 0,46 x 5 cm kolona, eluiranjem sa heksan (0,1% DEA):DCM=3:1, pri brzini protoka od 1 mL/min) dajuć i (posle proizvoljnog dodeljivanja stereohemije) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance.
Primer 538 Izomer A: 14,0 mg, 6%, LCMS [M+H]<+>481,30.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8,42 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,76 (dd, J = 9,1, 2,4 Hz, 1H), 6,84 (d, J = 9,1, 1H), 4,53 (t, J = 4,2 Hz, 2H), 4,09 - 3,87 (m, 2H), 3,83 - 3,56 (m, 9H), 2,77 (dd, J = 15,1, 8,1 Hz, 1H), 2,45 (dd, J = ).15,0, 4,4 Hz, IH), 1,31 - 1,14 (m, 3H). tR = 2,027 min.
Primer 538 Izomer B: 24,5 mg, 5%, LCMS [M+H]<+>481,25, tR = 2,848 min.
Primer 539 Izomer A: (S)-5-(1-(3-(4-(5-hloropiridin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)propan-2-iloksi)-4-( trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i
Primer 539 Izomer B: (S)-5-(2-(3-(4-(5-hloropiridin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi )propoksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i
Primer 539 Izomer C: (R)-5-(2-(3-(4-(5-hloropiridin-2-il)piperazin-1) -il)-3-oksopropoksi)propoksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i
Primer 539 Izomer D: (R)-5-(1-(3-(4-(5-Hloropiridin- 2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)propan-2-iloksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
Primer 539 Izomer C Primer 539 Izomer D
Korak 1: 1-[4-(5-hloropiridin-2-il)piperazin-1-il]-3-(2-hidroksipropoksi)propan-1-on i 1-(4-(5-hloropiridin-2-il) ) piperazin-1-il)-3-(1-hidroksipropan-2-iloksi)propan-1-on
[1202] Rastvor propan-1,2-diola (1,9 g, 25,3 mmol, 5,00 ekviv.), Cs2CO3 ( 3,32 g, 10,2 mmol, 2,00 ekviv.) i IntA22 (1,3 g, 5,1 mmol, 1,00 ekviv.) u ACN (40 mL) je mešano 6 h na 75 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 800 mg (48%) smeše jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS [M+H]<+>328,14.
Korak 2: 5-[(1-[3-[4-(5-hloropiridin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]propan-2-il)oksi]-4-(trifluorometil)- 2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on i 5-(2-(3-(4-(5-hloropiridin-2-il)piperazin-1-il) -3-oksopropoksi)propoksi)-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridazin-3(2H)-on
[1203] Rastvor 1-[4-(5-hloropirimidina -2-il)piperazin-1-il]-3-(2-hidroksipropoksi)propan-1-on i 1-(4-(5-hloropiridin-2-il)piperazin-1-il)-3-(1 Smeša -hidroksipropan-2-iloksi)propan-1-ona (800 mg, 2,43 mmol, 1 ekv.), Cs2CO3 (2,38 g, 7,32 mmol, 3 ekviv.) i Int-A6 (2,38 g, 7,32 mmol, 3,00 ekv.) u DMF (30 mL) je mešano 6 h na 80 °C. Čvrste materije su filtrirane i dobijeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (3 X 60 mL) i organski slojevi su kombinovani. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroletrom (1:1) da bi se dobilo 1 g (66%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS [M+H]<+>620,23.
Korak 3: (S)-5-(1-(3-(4-(5-hloropiridin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)propan-2-iloksi)-4-(trifluorometil) piridazin3(2H)-on i (S)-5-(2-(3-(4-(5-hloropiridin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)propoksi)-4-(trifluorometil) piridazin3(2H)-on i (R)-5-(2-(3-(4-(5-hloropiridin-2il)piperazin-1il)-3-oksopropoksi)propoksi)-4-(trifluorometil)piridazin3(2H) -on i (R)-5-(1-(3-(4-(5-hloropiridin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)propan-2-iloksi)-4-(trifluorometil) piridazin-3(2H)-on
[1204] Rastvor smeše 5-[(1-[3-[4-(5-hloropiridin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]propana-2-il)oksi]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on i 5-(2-[3-[4-( 5-hloropiridin-2-il)piperazin-1il]-3-oksopropoksi]propoksi)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on(750,0 mg, 1,21 mmol, 1,00 ekviv.) i TFA (4 mL) u DCM (20 mL) je mešana 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovamka, ostatak je prečišćen reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN, a ostatak je dalje prečišć en pomo ć u Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (CHIRALPAK ID-3, 3 µm, 0,46 3 × 10 cm kolona, eluiranjem sa MtBE (3% iPrNH2):MeOH=80:20, pri brzini protoka od 1 mL/min) da se dobije izomer A i D i pomoć u Prep-HPLC i ChiralPrep HPLC (CHIRALPAK IG-3, 3 mm, 0,46 x 10 cm kolonu, eluiranjem sa MtBE (3% iPrNH2):MeOH=80:20, pri brzini protoka od 1,0 mL/min) da bi se dobili izomer B i C. Apsolutna konfiguracija Primera 539 Izomera A i D je dodeljena analogno Primeru 513A, zasnovano na PARP7 potenciji potentnijeg enantiomera i po analogiji sa rendgenskim snimkom Primera 513A. Apsolutna konfiguracija enantiomera izomera B i C je proizvoljno dodeljena.
Primer 539 Izomer A: 57,4 mg, 29%, LCMS [M+H]<+>490,20.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8,21 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,53 (dd, J = 9,1, 2,7 Hz, 1H), 6,79 (d, J = 9,1 Hz, 1H) , 5,13-5,06 (m, 1H), 3,85-3,78 (m, 1H), 3,75-3,54 (m, 7H), 3,51-3,48 (m, 4H), 2,62 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1 (d, J= 6,3 Hz, 3H). tR = 2,064 min
Primer 539 Izomer B: LCMS [M+H]<+>490,20,<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8,18 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,53 (dd, J = 9. , 2.7 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.40-4.31 (m, 2H), 3.93-3.79 (m, 3H), 3.78-3.65 (m, 4H), 3.56-3. m, 4H), 2,65 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1,24 (d, J = 6,4 Hz, 3H). tR = 2.485 min.
Primer 539 Izomer C: 28,2 mg, 14%, LCMS [M+H]<+>490,20, tR = 3,126 min.
Primer 539 Izomer D: 26,7 mg, 14%, LCMS [M+H]<+>490,20, tR = 3,919 min.
Primer 540: 6-(4-[3-[(1-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]-2,3-dihidro-1H-inden-2-il)oksi] propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1205]
Korak 1: 6-(4-[3-[(1-hidroksi-2,3-dihidro-1H-inden-2-il)oksi]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1206] A rastvor 2,3-dihidro-1H-inden-1,2-diola (900 mg, 5,99 mmol, 3,00 ekviv.), Int-A25 (500 mg, 2,06 mmol, 1,00 ekviv.) i Cs2CO3(4000 mg, 12,28 mmol, 6,00 ekviv.) u ACN (20 mL) je mešano 2 h na 35 °C, a zatim je čvrsta supstanca filtrirana i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a zatim je ostatak prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 620 mg (77%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS [M+H]<+>393,19.
Korak 2: 6-(4-[3-[(1-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il ]oksi]-2,3-dihidro-1H-inden-2-il)oksi]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1207] Rastvor 6-(4-[3-[(1) -hidroksi-2,3-dihidro-1H-inden-2-il)oksi]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril (150 mg, 0,38 mmol, 1 ekv.), Cs2CO3(249,1 mg, 0,76 mmol, 2 ekviv.) i Int-A6 (188,5 mg, 0,57 mmol, 1,5 ekviv.) u ACN (2 mL) je mešan 1 h na 60°C, a zatim su čvrste supstance filtrirane i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 180 mg (69%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS [M+H]<+>685,27.
Korak 3: 6-(4-[3-[(]-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]-2,3-dihidro-1H-inden- 2-il)oksi]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1208] Rastvor 6-(4-[3-[(1-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1) -[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]-2,3-dihidro-1H-inden-2-il)oksi]propanoil]piperazin-1-il) piridin-3-karbonitril (80 mg, 0,16 mmol, 1 ekviv) i TFA (0,5 mL) u DCM (2 mL) su mešani 30 minuta na sobnoj temperaturi, a zatim je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom, a zatim je ostatak prečišćen reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN. Zatim je ostatak dalje prečišć en pomo ć u Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3,7 mg, 6%) u obliku bele čvrste supstance. LCMS [M+H]<+>555,15.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8,43 (d, J= 1,8 Hz, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,78 (dd, J= 9,0, 2,4 Hz, 1H), 7,46 (d, J= 6,9 Hz, 1H), 7,32-7,26 (m, 3H), 6,83 (dd, J= 9,1, 0,9 Hz, 1H), 5,63 (k, J= 5,3 Hz, 1H), 5,16 (d, J= 4,8 Hz, 1H), 4,08 - 3,88 (m, 2H), 3,78 - 3,59 (m, 8H), 3,36 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 3,28 (dd, J = 16,3, 4,9 Hz, 1H), 2,70 - 2,70 (m, 2H).
Primer 541: 6-(4-[3-[(1S,2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]ciklobutoksi]propanoil]piperazin- 1-il)piridin-3-karbonitril
[1209]
Korak 1: 5-[[(2S)-2-hidroksiciklobutil]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1210] Rastvor Int-A6 (1,3 g, 3,95 mmol, 1 ekv.), (1R,2S)-2-aminociklobutan-1-ol hidrohlorid (0,5 g, 4,05 mmol, 1,02 ekviv. ), TEA (0,8 g, 7,91 mmol, 2,00 ekviv.) u EtOH (20 mL) je mešan 1 sat na 60 °C. Dobijena smeša je koncentrisana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroletrom (1/4) da bi se dobilo 900 mg (60%) jedinjenja iz naslova u vidu žutog ulja. LCMS [M+H]<+>380,15.
Korak 2: Metil 3-[(1S,2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il ] amino]ciklobutoksi]propanoat
[1211] Rastvor 5-[[(2S)-2-hidroksiciklobutil]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3 -dihidropiridazin-3-on (900 mg, 2,37 mmol, 1 ekv.), Cs2CO3(1500 mg, 4,60 mmol, 1,94 ekviv.), metil prop-2-enoat (412 mg, 4,79 mmol, 2,02 ekviv.) u ACN (20ml) je mešano 6 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroletrom (1/4) da bi se dobilo 750 mg (68%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS [M+H]<+>466,19.
Korak 3: Metil 3-[(1S,2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]ciklobutoksi]propanoat [1212] Rastvor metil 3 -[(1S,2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidro piridazin-4-il]amino]ciklobutoksi] propanoat (750 mg, 1.61 mmol, 1 ekviv.), TFA (1 mL) u DCM (10 mL) je mešan 16 h na sobnoj temperaturi.. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 770 mg sirovog jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS [M+H]<+>336,11.
Korak 4: Sinteza 3-[(1S,2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]ciklobutoksi]propanoične kiseline
[1213] Rastvor metil 3-[(1S,2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]ciklobutoksi] propanoat (770 mg, 2,30 mmol, 1 ekv.), LiOH·H2O (290 mg, 6.91 mmol, 3.01 ekviv.) u MeOH (10 mL) je mešan 3 h na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvora je podešena na 4 sa HCl (1 mol/L). Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/CH3CN, da bi se dobilo 340 mg (46%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS [M+H]<+>322,09. Korak 5: 6-(4-[3-[(1S,2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]ciklobutoksi]propanoil]piperazin1- il)piridin-3-karbonitril
[1214] Rastvor 3-[(1S,2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]ciklobutoksi] propanoična kiselina (300 mg, 0,93 mmol, 1 ekv.), HATU (389,5 mg, 1,02 mmol, 1,10 ekviv.), Int-A4 (193,7 mg, 1,03 mmol, 1,10 ekviv.), DIPEA (242,3 mg, 8,7 mg, 1 ekviv.), u DMF (5 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/CH3CN, a zatim je ostatak dalje prečišć en pomo ć u Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (154,5 mg, 34%) u vidu bele čvrste supstance. LCMS [M+H]<+>492,2.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,60 (s, 1H), 8,52 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,89 (dd, J = 9,1, 2,4 Hz, 1H), 7,66 (s, 1H) , 6,95 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 6,66 - 6,57 (m, 1H), 4,37 - 4,34 (m, 1H), 4,33 - 4,20 (m, 1H), 3,77 - 3,55 (m, 10H), (t, J= 6,3 Hz, 2H), 2,21-2,06 (m, 2H), 2,10-1,93 (m, IH), 1,80 (m, 1H).
Primer 542: 6-(4-[3-[3-(dimetilamino)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi] propanoil]piperazin- 1-il)piridin-3-karbonitril
[1215]
Korak 1: terc-butil 3-[3-(dimetilamino)-2-hidroksipropoksi]propanoat
[1216] Rastvor 3-(dimetilamino)propan-1,2-diola (2,38 g, 19,97 mmol, 1 ekv.), terc. -butil prop-2-enoat (2,6 g, 0,02 mmol, 1 ekv.) i Cs2CO3 (9,8 g, 30,08 mmol, 1,51 ekviv.) u ACN (30 mL) je mešan 3 h na ST. Čvrste materije su filtrirane i dobijena smeša je koncentrovana da bi se dobilo 400 mg (8%) jedinjenja iz naslova u obliku ulja. LCMS [M+H]<+>248,18.
Korak 2: 3-[3-(dimetilamino)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il] oksi]propoksi]propanoat
[1217] Rastvor terc-butil 3-[3-(dimetilamino)-2-hidroksipropoksi]propanoata (400 mg, 1,62 mmol, 1 ekv.), IntA6 (531,7 mg, 1,62 mmol, 1,00 e.) , Cs2CO3(790,4 mg, 2,43 mmol, 1,5 ekviv.) u DMF (5 mL) je mešan 3 h na 100 °C. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 20 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x10 mL EtOA i ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni sa EtOAc/petroletrom (2/3) da bi se dobilo 116 mg (13%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS [M+H]<+>540,30.
Korak 3: 3-[3-(dimetilamino)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi]propanska kiselina
[1218] Rastvor tert- butil 3-[3-(dimetilamino)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi] propoksi]propanoat (116 mg, 0,21 mmol, 1 ekviv.), 2,2,2-trifluoroacetaldehid (1 mL) u DCM (4 mL) je mešan 4 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana da bi se dobilo 72 mg (95%) jedinjenja iz naslova u obliku čvrste supstance. LCMS [M+H]<+>354,05.
Korak 4: 6-(4-[3-[3-(dimetilamino)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi]propanoil]piperazin- 1-il)piridin-3-karbonitril
[1219] Rastvor 3-[3-(dimetilamino)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi] propoksi] propanoične kiseline (72 mg, 0,20 mmol, 1 ekv.), Int-A4 (38,4 mg, 0,20 mmol, 1,00 ekviv.), HATU (77,5 mg, 0,20 mmol, 1 ekv.), DIPEA (79,0 mg, 0,61 mmol 3 ekviv.) u DMF (3 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim ugašena dodavanjem 10 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 5 mL EtOA. Organski slojevi su kombinovani i koncentrovani. Ostatak je nanet na kolonu silika gela sa DCM/MeOH (6/1) i sirovi proizvod je dalje prečišć en pomo ć u Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (7,1 mg, 7%) u vidu bele čvrste supstance. LCMS [M+H]<+>524,10.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8,43 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,78 (dd, J = 9,1, 2,4 Hz, 1H), 6,87 (d, J= 9,2 Hz, 1H) , 5,16 (d, J= 7,4 Hz, 1H), 3,88-3,79 (m, 1H), 3,83-3,58 (m, 12H), 2,79-2,60 (m, 3H), 2,57 (dd, J= 13,8, 3,8) , IH), 2,41 (s, IH), 2,30 (s, 6H).
Primer 543 Izomer A: (S)-5-(1-(3-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)propan-2-iloksi)-4-( trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i
Primer 543 Izomer B: (S)-5-(2-(3-(4-(5-hloropirimidin-2-il)plperazin-1-il)-3-oksopropoksi)propoksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i
Primer 543 Izomer C: (R)-5-(2-(3-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1)-il)-3-oksopropoksi)propoksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i
Primer 543 Izomer D: (R)-5-(1-(3-(4-(5-hloropirimidin- 2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)propan-2-iloksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
Primer 543 Izomer C Primer 543 Izomer D
Korak 2: 1-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-(2-hidroksipropoksi)propan-1-on i 1-(4-(5-hloropirimidin-2-il) ) piperazin-1il)-3-(1-hidroksipropan-2-iloksi)propan-1-on
[1220] Rastvor Int-A23 (1,5 g, 5,94 mmol, 1 ekv.), Cs2CO3(3,9 g, 11,87 mmol, 2 ekviv.), i propan-1,2-diol (2,3 g, 30,21 mmol, 5,09 ekviv.) u ACN (40 mL) je mešan 4 h na 75 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 1,4 g (72%) smeše jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance. LCMS [M+H]<+>329,12.
Korak 3: 5-[(1-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]propan-2-il)oksi]-4-(trifluorometil)- 2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on i 5-(2-(3-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il) -3-oksopropoksi)propoksi)-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridazin-3(2H)-on
[1221] Rastvor smeše 1-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-(2-hidroksipropoksi)propan-1-ona i 1-(4-(5) -hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-(1-hidroksipropan-2-iloksi)propan-1-on (1,4 g, 4,26 mmol, 1 ekv.), Cs2CO3(4,2 g, 12,77 mmol, 3 ekviv.), i Int-A6 (4,2 g, 12,77 mmol, 3,00 ekviv.) u DMF (30 mL) je mešan 4 h na 80 °C. Čvrste materije su filtrirane i dobijeni rastvor je ugašen sa 50 mL vode i ekstrahovan sa EtOAc (3 x 30 mL). Organski slojevi su kombinovani i rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroletrom (1:1) da bi se dobilo 1,07 g (40%) smeše jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS [M+H]<+>621,22.
Korak 4: Smeša (S)-5-(1-(3-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)propan-2-iloksi)-4-( trifluorometil)piridazin-3(2H)-on, (S)-5-(2-(3-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)propoksi)-4 -(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on, (R)-5-(2-(3-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)propoksi) -4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i (R)-5-(1-(3-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi) propan-2-iloksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1222] Rastvor smeše 5-(2-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazina -1-il]-3-oksopropoksi]propoksi)-4-(trifluoro metil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on i 5-[(1-[ 3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]propan-2-il)oksi]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi ]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (1 g, 1.60 mmol, 1.00 ekviv.), TFA (4 mL) u DCM (20 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišć en pomo ć u PrepHPLC i Chiral-Prep-HPLC (CHIRALPAK ID-3, 3 µm, 0,46 x 10 cm kolona, eluiranjem sa MtBE (0,01M NH3):MeOH=80:20, pri brzini protoka od 1 mL /min) da bi se dobila jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. Stereohemija izomera A i izomera D dodeljena je analogno Primeru 513A, na osnovu PARP7 potencije potentnijeg enantiomera i analogno rendgenskom snimku Primera 513A.
[1223] Apsolutna konfiguracija za izomere B i C je proizvoljno dodeljena. (Položaj metil grupe je potvrđen<1>H-NMR).
Primer 543 Izomer A: 102,8 mg, 26%, LCMS [M+H]<+>491,1<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8,31 (s, 2H), 8,21 (s, 1H), 5,11 (t, J= 6,7 Hz, 1H), 3,88-3,53 (m, 12H), 2,63 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 1,34 (d, J = 6,3 Hz, 3H), tR = 2,283 min.
Primer 543 Izomer B: 95,9 mg, 24%, LCMS [M+H]<+>491,1.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8,30 (s, 2H), 8,19 (s, 1H), 4,43 - 4,29 (m, 2H), 3,93 - 3,86 (m, 2H), 3,86 - 3,74 (m, m ), 3,93-3,86 (m, 4H), 2,65 (t, J= 6,0 Hz, 2H), 1,24 (d, J= 6,4 Hz, 3H). tR = 2,890 min.
Primer 543 Izomer C: 87,6 mg, 21%, LCMS [M+H]<+>491,1, tR = 3,584 min.
Primer 543 Izomer D: 91,8 mg, 23%, LCMS [M+H]<+>491,1, tR = 6,313 min.
Primer 544 Izomer A: (S)-5-(1-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propan-2-iloksi) -4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i
Primer 544 Izomer B: (R)-5-(1-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il) )piperazin-1-il)propoksi)propan-2-iloksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i
Primer 544 Izomer C: (S)-5-(2-(3-Okso-3) -(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propoksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i
Primer 544 Izomer D: (R)- 5-(2-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propoksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)- on
Primer 544 Izomer C Primer 544 Izomer D
Korak 1: Smeša 3-(2-hidroksipropoksi)-1-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propan-1-ona i 3-(1-hidroksipropan-2 -iloksi)-1-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propan-1-on
[1224] Rastvor Int-A21 (1 g, 3,49 mmol, 1,00 ekv.), propan-1,2-diol (1,33 g, 17,48 mmol, 5,00 ekviv.) i Cs2CO3(2,3 g, 7,06 mmol, 2,00 ekviv.) u ACN (30 mL) je mešan 8 h na 75 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 930 mg (73%) smeše jedinjenja iz naslova u vidu bele čvrste supstance. LCMS [M+H]<+>363,17.
Korak 2: Smeša 5-(1-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazina -1-il)propoksi)propan-2-iloksi)-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridazin-3(2H)-on i 5-(2-(3-) okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propoksi)-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridazin -3(2H)-on
[1225] Rastvor smeše 3-(2-hidroksipropoksi)-1-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propan1-ona i 3-(1-hidroksipropana -2-iloksi)-1-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propan-1-on (1,3 g, 3,59 mmol, 1,00 ekviv.), Int-A6 ( 1,4 g, 4,26 mmol, 1,20 ekviv.) i Cs2CO3(3,5 g, 10,74 mmol, 3,00 ekviv.) u DMF (15 mL) je mešano 6 h na 80 °C. Čvrste materije su filtrirane i dobijeni rastvor je ugašen vodom (50 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (3 x 60 mL) i organski slojevi su kombinovani. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/heksanom (1:1) da bi se dobilo 1,6 g (68%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS [M+H]<+>655,25.
Korak 3: (S)-5-(1-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propan-2-iloksi)-4 -(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on, (R)-5-(1-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il) propoksi)propan-2-iloksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on, (S)-5-(2-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin- 2-il)piperazin-1-il)propoksi)propoksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i (R)-5-(2-(3-okso-3-(4-(5)) -(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propoksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1226] Rastvor 5-(1-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propan-2-iloksi)-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridazin-3(2H)-on i 5-(2-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin2-il) ) piperazin-1-il)propoksi)propoksi)-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridazin-3(2H)-on (1,54 g, 2,35 mmol, 1 ekv.) i TFA (2 mL) u DCM (10 mL) je mešana 0,5 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišć en pomo ć u PrepHPLC i Chiral-Prep-HPLC (Luk Amilose-1, 3 µm, 4,6 x 100 mm kolona, eluiranjem sa EtOH (0,1% DEA), pri brzini protoka od 4 mL/min). Apsolutna konfiguracija izomera A i B dodeljena je analogno Primeru 513A, na osnovu PARP7 potencije potentnijeg enantiomera i analogno rendgenskom snimku Primera 513A. Apsolutna konfiguracija za izomer C i izomer D je proizvoljno dodeljena. (Položaj metil grupe je potvrđen<1>HNMR). Izomeri A-D su izolovani kao bele čvrste materije.
Primer 544 Izomer A: 102,5 mg, 8%, LCMS [M+H]<+>525,25.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8,61 (s, 2H), 8,23 (s, 1H), 5,16 - 5,09 (m, IH), 3,99 - 3,78 (m, 4H), 3,81 - 3,68 (m, m ), 3,67 (m, IH), 3,65 - 3,56 (m, 6H), 2,71 - 2,61 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 1,37 (d, J = 6,3 Hz, 3H). tR = 1,369 min.,
Primer 544 Izomer B: 56,3 mg, 5%, LCMS [M+H]<+>525,20, tR = 1,636 min.
Primer 544 Izomer C: 39 mg, 3%, LCMS [M+H]<+>525,25,<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8,60 (s, 2H), 8,22 (s, 1H), 4,47 - 4,32 (m , 2H), 4,00-3,75 (m, 7H), 3,70-3,68 (m, 4H), 2,68 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1,27 (d, J = 6,4 Hz, 3H). tR = 2,835 min.
Primer 544 Izomer D: 27,2 mg, 2%, LCMS [M+H]<+>525,25, tR = 2,039 min.
Primer 545 Izomer A: 5-[[(2S,5S)-5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]etil)oksolan2-il ] metoksi]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on i
Primer 545 Izomer B: 5-[[(2S,5R)-5-(2-okso-2-[4-[5- (trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]etil)oksolan2-il]metoksi]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on i
Primer 545 Izomer C: 5-[[( 2R,5R)-5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]etil)oksolan2-il]metoksi]-4-(trifluorometil)- 2,3-dihidropiridazin-3-on i
Primer 545 Izomer D: 5-[[(2R,5S)-5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin -1-il]etil)oksolan2-il]metoksi]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
Primer 545 Izomer C Primer 545 Izomer D
Korak 1: 5-[[5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]etil)oksolan-2-il]metoksi]-4- (trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1227] Rastvor Int-A17 (700 mg, 1,87 mmol, 1 ekv.), Int-A6 (1849,2 mg, 5,62 mmol, 3,00 ekviv.) i Cs2CO3(1,8 g, 5,62 mmol, 3 ekviv.) u ACN (10 mL) je mešana 2 h na 80 °C. Čvrste materije su filtrirane i dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišć en hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa EtOAc/petroleterom (99/1) da bi se dobilo 788 mg (63%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS [M+H]<+>666,10.
Korak 2: 5-[[(2S,5S)-5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-ilJetil)oksolan-2-il]metoksi ]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on, 5-[[(2S,5R)-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il ]piperazin-1-il]etil)oksolan-2-il]metoksi]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on, 5-[[(2R,5R)-5-(2-okso -2-[4-[5-(trifluorometil)piridin2-il]piperazin-1-il]etil)oksolan-2-il]metoksi]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on i 5 -[[(2R,5S)-5-(2-okso2-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]etil)oksolan-2-il]metoksi]-4- (trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1228] Rastvor 5-[[5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]etil)oksolan-2-il]metoksi]- 4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (888 mg, 1,33 mmol, 1 ekv.) i TFA (2 mL) u DCM (10 mL) ) je mešan 3 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN.. Ostatak je zatim dalje prečišć en pomo ć u Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (CHIRALPAK IA-3, 3 µm, 0,46 x 5 cm kolona, eluiranje sa heksan:DCM (5:1)/(0,1%TEA):EtOH= 85:15, pri brzini protoka od 1 mL/min) daju ć i (posle proizvoljnog dodeljivanja stereohemije) jedinjenja iz naslova.
Primer 545 Izomer A: 18,4 mg, 3%, LCMS [M+H]<+>536,30.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8,37 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,25 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 7,75 (dd, J = 9,1, 2,5 Hz, 1H), 6,88 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 4,56 (dd, J = 10,7, 3,2 Hz, 1H), 4,47 -4,23 (m, 3H), 3,72 (tdd, J = 17,5, 13,2, 8,4 Hz, 8H), 2,78 (dd, J = 15,0, 7,7 Hz, 1H), 2,58 (dd, J = 14,9, 4,9 Hz, 1H), 2,27 - 1,90 (m, 2H), 1,98 - 1,88 (m, 1H), 1,86 - 1,86 - m, 1H). tR = 2,571 min.
Primer 545 Izomer B: 17,2 mg, 2%, LCMS [M+H]<+>536,30.<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8,38 (dt, J = 2,7, 0,9 Hz, 1H), 8,23 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,76 (dd, J = 9,0, 2,5 Hz, 1H) , 6,90 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 4,54 - 4,31 (m, 4H), 3,86 - 3,66 (m, 8H), 3,71 - 3,57 (m, 2H), 2,83 (dd, J = 14,5, 7,8) , 1H), 2,59 (dd, J = 14,5, 4,8 Hz, 1H), 2,33 - 2,12 (m, 2H), 2,01 -1,65 (m, 2H), tR = 3,197 min.
Primer 545 Izomer C: 16,7 mg 2%, LCMS [M+H]<+>536,30,<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8,37 (dt, J = 2,8, 0,9 Hz, 1H), 8,25 (d, J =). 0,8 Hz, 1H), 7,80 - 7,70 (m, 1H), 6,88 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 4,56 (dd, J = 10,7, 3,2 Hz, 1H), 4,47 -4,23 (m, 3H), 3,72 (tdd, J = 17,5, 13,2, 8,4 Hz, 8H), 2,78 (dd, J = 14,9, 7,7 Hz, 1H), 2,58 (dd, J = 14,9, 4,9 Hz, 1H), 2,27 (m, 2).2H), 2,02-1,89 (m, IH).1,83-1,64 (m, IH), tR = 5,305 min.
Primer 545 Izomer D: 18,4 mg, 3%, LCMS [M+H]<+>536,30,<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8,38 (dt, J = 2,7, 1,0 Hz, 1H), 8,22 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,76 (dd, J = 9,1, 2,6 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 4,54 - 4,31 (m, 4H), 3,86 - 3,63 (m, 8H) , 2,83 (dd, J = 14,6, 7,7 Hz, 1H), 2,59 (dd, J = 14,5, 4,8 Hz, 1H), 2,33 - 2,17 (m, 2H), 2,01 - 1,65 (m, 2H), tR8 = tR min.
Primer 546 Izomer A: 5-([[(2S,5S)-5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]etil)oksolan- 2-il]metil]amino)-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on i
Primer 546 Izomer B: 5-([[(2R,5R)-5-(2-okso-2-) [4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]etil)oksolan-2-il]metil]amino)-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on i
Primer 546 Izomer C: 5-([[(2S,5R)-5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]etil)oksolan- 2-il]metil]amino)-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on i
Primer 546 Izomer D: 5-([[(2R,5S)-5-(2-okso-2-) [4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]etil)oksolan-2-il]metil]amino)-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
Primer 546 Izomer C Primer 546 Izomer D
Korak 1: 2-[5-(azidometil)oksolan-2-il]-1-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]etan-1-on.
[1229] Rastvor Int-A17 (1 g, 2,68 mmol, 1 ekv.), DPPA (3,7 g, 13,44 mmol, 5,02 ekviv.) i DBU (1,2 g, 8,03 mmol, 3 ekviv.) je mešan 2 dana na 80 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišć en hromatografijom na koloni silika gela sa EtOAc/petroletrom (2/3) da bi se dobilo 500 mg (47%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS [M+H]<+>399,17.
Korak 2: 2-[5-(Aminometil)oksolan-2-il]-1-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]etan-1-on
[1230] Rastvor 2-[5-(azidometil)oksolan-2-il]-1-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]etan-1-ona ( 550 mg, 1,38 mmol, 1 ekviv.), Pd/C (100 mg, 0,94 mmol, 0,68 ekv.) u MeOH je mešano 2 h na sobnoj temperaturi u atmosferi H2(g). Čvrste materije su filtrirane i dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 360 mg (70%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS [M+H]<+>373,19.
Korak 3: -5-([[-5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]etil)oksolan-2-il]metil] amino)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1231] Rastvor Int-A6 (317,8 mg, 0,97 mmol, 1,00 ekv.), 2-[5-(aminometil)oksolan-2-il]-1-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]etan-1-on (360 mg, 0,97 mmol, 1 ekviv.), TEA (195,6 mg, 1,93 mmol, 2 ekviv.) u EtOH (10 mL) je mešan 2 h na 50 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je nanet na kolonu silika gela sa DCM/MeOH (9/1) da bi se dobilo 520 mg (81%) jedinjenja iz naslova u vidu žutog ulja. LCMS [M+H]<+>665,26.
Korak 4: 5-([[(2S, 5S)-5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]etil)oksolan-2- il]metil]amino)-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on, 5-([[(2R,5R)-5-(2-okso-2-[4-[5-( trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]etil)oksolan-2-il]metil]amino)-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on, 5-([[(2S) , 5R)-5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]etil)oksolan-2-il]metil]amino)-4-( trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on i 5-([[(2R, 5S)-5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin- 1-il]etil)oksolan-2-il]metil]amino)-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1232] Rastvor 5-([[5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]etil)oksolan-2-il]metila ]amino)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (520 mg, 0,78 mmol, 1 ekv.) i 2,2,2 -trifluoroacetaldehid (2 mL, 0,02 mmol, 0,03 ekviv.) u DCM (8 mL) je mešan 5 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišć en reverzno faznom hromatografijom na C18 koloni eluiranjem sa H2O/ACN. Zatim je ostatak dalje prečišć en pomo ć u Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (CHIRALPAK IE-3, 3 µm, 0,46 x 10 cm kolona, eluiranjem sa (Hek:DCM=5:1)(0,1%DEA):EtOH= 50:50, pri brzini protoka od 1 mL/min) dajuć i (posle proizvoljnog dodeljivanja stereohemije) jedinjenja iz naslova.
Primer 546 Izomer A: 16,4 mg, 4%, LCMS [M+H]<+>535,10,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,41 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), 7,94 (s, 1H ), 7,83 (dd, J = 9,0, 2,6 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 4,17 (k, J = 6,3 Hz, 1H), 4,08 - 3,90 (m, 1H), 3,76 - 3,35 (m, 10H), 2,62 (dd, J = 15,3, 6,4 Hz, 1H), 2,45 - 2,35 (m, 1H), 2,05 - 1,89 (m, 2H), 1,70 (dk, J = 14,1, 6. , IH), 1,62 - 1,47 (m, 1 H). tR = 2,294 min.
Primer 546 Izomer B: 27,2 mg, 7%, LCMS [M+H]<+>535,10,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,38 (s, 1H), 8,42 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,82 (dd, J = 9,1, 2,6 Hz, 1H), 6,94 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 4,27 (k, J = 6,4 Hz, 1H), 4,18 - 4,10 (m , 1H), 3,85 - 3,45 (m, 10H), 2,69 (dd, J = 15,1, 6,5 Hz, 1H), 2,50 - 2,39 (m, 1H), 2,09 (dd, J = 11,2, 6,6 Hz, 1H), 2,09 (dd, J = 11,2, 6,6 Hz, 1H), 1H), 3,85 - 3,45 (m, 10H), 2,18-1,90 (m, 2H), 1,78-1,60 (m, 2H). tR = 2,793 min.
Primer 546 Izomer C: 40,6 mg, 10%, LCMS [M+H]<+>535,10,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,39 (s, 1H), 8,42 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,82 (dd, J = 9,2, 2,6 Hz, 1H), 6,94 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 4,25 (k, J = 6,3 Hz, 1H), 4,18 - 4,10 (m , 1H), 3,80 - 3,40 (m, 10H), 2,69 (dd, J = 15,2, 6,5 Hz, 1H), 2,49 - 2,39 (m, 1H), 2,08 - 1,90 (m, 2H), 1,80 - 1. , 2H). tR = 3,208 min.
Primer 546 Izomer D: 11,1 mg, 3%, LCMS [M+H]<+>535,10,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,41 (s, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,94 (s, 1H ), 7,83 (dd, J = 9,1, 2,6 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 4,18 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 4,08 - 3,90 (m, 1H), 3,69 - 3,36 (m, 10H), 2,62 (dd, J = 15,4, 6,4 Hz, 1H), 2,41 (dd, J = 15,4, 6,3 Hz, 1H), 2,11 - 1,85 (m, 2H), 1,69 (s, 1H), 2,11 - 1,85 (m, 1H), 1,69 (s, 1H). ), 1,59-1,47 (m, IH). tR = 4,088 min
Primer 547: 4-bromo-5-(2-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]etoksi)-2,3-dihidropiridazin -3-on
Korak 1: 4-bromo-5-(2-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]etoksi)-2,3-dihidro-piridazin-3-on [1233] Rastvor Int-A14 (150 mg, 0,49 mmol, 1 ekviv.), HOBT (99.0 mg, 0.73 mmol, 1.5 ekviv.), EDCI (140.5 mg, 0.73 mmol, 1.5 ekviv.), DIPEA (18.4 mg, 18.19 mg) mmol, 3 ekviv.) i Int-A3 (97.0 mg, 0.49 mmol, 1.00 ekviv.) u DMF-u (7 mL, 0.10 mmol, 0.20 ekviv.) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi, a zatim je dobijeni rastvor prečišćen C18 reverznofaznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN i dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (13.3 mg, 6%). LCMS [M+H]<+>489,10 [M+H],<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.16 (s, 1H), 8.43 (s, 2H), 8.07 (s, 1H), 4.47 - 4.50 (m, 2H), 3.75 - 3.66 (m, 8H), 3.60 - 3.52 (m, 4H), 2.64 (t, J = 6.5 Hz, 2H).
[1234] Sljedeći primer u Tabeli E6 je na sličan način pripremljen od Int-A14 i odgovarajućeg intermedijera Int-A2 prema metodi opisanoj za Primer 547.
Tabela E6
Primer 549: 5-(2-[3-[4-(5-Hloropirimidin)-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]etoksi)-4-metil-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1235]
Korak 1: 5-(2-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]etoksi)-4-metil-2,3-dihidro-piridazin-3-on
[1236] Rastvor Int-A15 (300 mg, 1.24 mmol, 1 ekviv.), Int-A3 (370.0 mg, 1.36 mmol, 1.1 ekviv.), DIPEA (480.2 mg, 3.72 mmol, 3 ekviv.) i HATU (518.0 mg, 1.36 mmol, 1.1 ekviv.) u DMF-u (8 mL za 2 ekviv.) je mešan 2h ns 25 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN, a ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (76.3 mg, 15%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [M+H]<+>423.15,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.78 (s, 1H), 8.44 (s, 2H), 8.01 (s, 1H), 4.36 - 4.27 (m, 2H), 3.80 -3.63 (m, 8H), 3.54 (d, J = 5.8 Hz, 4H), 2.63 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 1.85 (s, 3H).
[1237] Sledeći primjeri u Tabeli E7 su pripremljeni na sličan način iz Int-A15 i odgovarajućih intermedijara prema metodi opisanoj za Primer 549.
Tabela E7
Primer 552: 5-(2-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-) il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]etoksi)-3-okso-2, 3-dihidropiridazin-4-karbonitril
[1238]
Korak 1: 5-(2-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]etoksi)-3-okso-2,3-dihidro-piridazin-4-karbonitril
[1239] Rastvor Int-A16 (150 mg, 0.59 mmol, 1 ekviv.), EDCI (124.8 mg, 0.65 mmol, 1.10 ekviv), HOBT (88 mg, 0.65 mmol, 1.10 ekviv) i Int-A3 (130 mg, 0.65 mmol, 1.10 ekviv) u DMF (15 mL) je mešan 1.5 h na ST. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN, a ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC da bi se dobilo (34.8 mg, 14%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [M+H]<+>433.85,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.52 (s, 1H), 8.45 (s, 2H), 8.30 (s, 1H), 4.65 - 4.57 (m, 2H), 3.81 - 3.64 (m, 8H), 3.34 (s, 4H), 2.63 (t, J = 6.4 Hz, 2H).
[1240] Sledeći Primer u Tabeli E8 je na sličan način pripremljen od Int-A16 i odgovarajućeg intermedijera, Int-A2, prema metodi opisanoj za Primer 552.
Tabela E8
Primer 554: 5-(2-[3-[4-(5) -Cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]etoksi)-3-okso-2,3-dihidropiridazin-4-karbonitril
[1241]
Korak 1: 5-(2-[3-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]etoksi)-3-okso-2-[[2-(trimetil-silil) etoksi]metil]- 2,3-dihidropiridazin-4-karbonitril
[1242] Rastvor Int-A19 (130 mg, 0.21 mmol, 1 ekviv) i CuCN (40 mg, 0.45 mmol, 2.09 ekviv) u NMP (10 mL) je mešan 1 dan na 120 °C. Reakcija je zatim ugašena dodatkom 20 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc, a organski slojevi su kombinovani i osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 50 mg (42%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS [M+H]<+>554.25.
Korak 2: -5-(2-[3-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]etoksi)-3-okso-2,3-dihidro-piridazin-4-karbonitril
[1243] Rastvor 5-(2-[3-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]etoksi)-3-okso-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-4-karbonitril (50 mg, 0,09 mmol, 1 ekviv.) u HCl/dioksanu (2 mL) je mešan 24 h na ST. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN, nakon čega je sledilo dalje prečišćavanje pomoću Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (3.4 mg, 9%) u obliku bele čvrste supstance. LCMS [M+H]<+>424.3,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.50 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.87 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 9.2 Hz, 1H),4.59 (d, J = 4.9 Hz, 2H), 3.80 - 3.68 (m, 8H), 3.56 (s, 4H), 2.62 (t, J = 6.4 Hz, 2H).
Primer 555: 6-[4-(3-[2-[(5-bromo-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi]etoksi] propanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1244]
[1245] Rastvor Int-A19 (170 mg, 0.28 mmol, 1 ekviv.) i TFA (0.7 mL) u DCM (7 mL) je mešan 3 h na sobnoj temperaturi. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom a ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN, a zatim je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (38.5 mg, 29%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [M+H]<+>477.31,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.65 (s, 1H), 8.47 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.85 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.44 (dd, J = 5.2, 3.4 Hz, 2H), 3.77 - 3.57 (m, 8H), 3.35-3.30 (m, 4H), 2.60 (t, J = 6.5 Hz, 2H).
Primer 556: 5-[[(2R)-1-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]propan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1246]
Korak 1: 5-[[(2R)-1-Hidroksipropan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2- (trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1247] Rastvor Int-A6 (1 g, 3.04 mmol, 1.00 ekviv.), (2R)-2-aminopropan-1-ol (229 mg, 3.05 mmol, 1.00 ekviv.) i TEA (616 mg, 6.09 mmol, 2.00 ekviv.) u EtOH (20 mL) je mešan 1 h na 60 °C. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroletrom (1:1) da bi se dobilo 1.03 g (92%) jedinjenja iz naslova kao svetlo smeđe ulje. LCMS [M+H]<+>368.15.
Korak 2: Metil 3-[(2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidro-piridazin-4-il]amino]propoksi]propanoat
[1248] Rastvor 5-[[(2R)-1-hidroksipropan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2 ,3-dihidropiridazin-3-ona (1 g, 2.72 mmol, 1.00 ekviv.), metil prop-2-enoata (1.17 g, 0.01 mmol, 5.00 ekviv.) i Cs2CO3(2.65 g, 8.13 mmol, 3.0 ekviv.) u ACN (3.0 ekviv.) 25 mL) je mešan 3 h na ST. Čvrste supstance su filtrirane i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroletrom (3:7) da bi se dobilo 604 mg (49%) jedinjenja iz naslova kao svetlo smeđe boje. ulje . LCMS [M+H]<+>454.53.
Korak 3: Metil 3-[(2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi] propanoat
[1249] Rastvor metil 3-[(2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-11,6-dihidro-piridazin-4-il]amino]propoksi]propanoata (600 mg, 1.32 mmol, 1.00 ekviv.) i TFA (1.5 mL) u DCM (6 mL) je mešan 1 h na ST. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je rastvoren u NH3(g) u MeOH (2 mL, 7M) i mešan 15 minuta na ST. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 400 mg (94%) jedinjenja iz naslova kao svetlo smeđe ulje. LCMS [M+H]<+>324.11.
Korak 4: 3-[(2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il amino propoksi propanoična kiselina
[1250] Rastvor metil 3-[(2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi] propanoat (400 mg, 1.24 mmol, 1 ekviv.) i LiOH (148.2 mg, 6.19 mmol, 5.00) ekviv.) u MeOH (5 mL) i H2O (1 mL) je mešan 4 h na sobnoj temperaturi, a zatim je pH vrednost rastvora podešena na 4 sa HCl (1 M). Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom da bi se dobilo 115 mg (30%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS [M+H]<+>310.10.
Korak 5: 5-[[(2R)-1-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]propan-2-il]amino]-4- (trifluorometil)-2, 3-dihidropiridazin-3-on
[1251] Rastvor 3-[(2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi]propanske kiseline (115 mg, 0.37 mmol, 1 ekviv.), Int-A3 (73.9 mg, 0.37 mmol, 1.00 ekviv.), HATU (141.4 mg, 0.37 mmol, 1.00 ekviv.) i DIPEA (96.1 mg, 0.24 mmol, 0.74 ekviv.) (4 mL) je mešan 40 min na sobnoj temperaturi, a zatim je dobijeni rastvor razblažen sa 20 mL H2O, ekstrahovan sa 3 x 20 mL EtOAc i organski sloj je spojen, ispran sa 1 x 20 mL slanog rastvora i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca. LCMS [M+H]<+>490.05,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.32 (s, 1H), 8.46 (d, J = 5.7Hz, 2H), 7.91 (s, 1H), 6.29 (dd, J = 8.4, 4.2 Hz, 1H), 4.19 – 4.10 (m, 1H), 3.74 -3.62 (m, 6H), 3.53 – 3.48 (m, 6H), 2.59 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 1.15 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
Primer 557: 5-[[(2R)-1-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]-3-metoksi-propan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1252]
Korak 1: (2R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2- (trimetilsilil)etoksiJmetil]-1,6-dihidro-piridazin-4-il]amino]propanoična kiselina
[1253] Rastvor hidrohlorida (2R)-2-amino-3-metoksipropanske kiseline (310 mg, 1.99 mmol, 1.00 ekviv.), TEA (500 mg, 4.94 mmol, 2.00 ekviv.) i Int-A6 (800 mg, 2.43 mmol, 1.20 ekviv.) u EtOH (5 mL) je mešan 1 h na 60 °C, a zatim je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom da se dobije 1.2 g sirovog jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS [M+H]<+>412.15.
Korak 2: 5-[[(2S)-1-Hidroksi-3-metoksipropan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-2, 3-dihidropiridazin-3-on
[1254] Rastvor (2R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidro-piridazin-4-il]amino]propanoične kiseline (1.2 g, 2.92 mmol, 1.00 ekviv.) u BH3-THF (1M, 20 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi, a zatim je dobijeni rastvor ugašen dodatkom 100 mL vode, ekstrahovan sa 3 x 100 mL EtOAc i organski slojevi su spojeni i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je zatim prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 840 mg (72%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS [M+H]<+>398.17.
Korak 3: Metil 3-[(2R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1, 6-dihidropiridazin-4-il)amino)propoksi) propanoat
[1255] Rastvor 5-[[(2S)-1-hidroksi-3-metoksipropan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (800 mg, 2.01 mmol, 1.00 ekviv.), Cs2CO3(1967.4 mg, 6.04 mmol, 3 ekviv.) i metil prop-2-enoat (1732,8 mg, 20,13 mmol, 10 ekviv.) u ACN (10 mL) je mešana 2 h na sobnoj temperaturi, a zatim su čvrste supstance filtrirane. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroletrom da bi se dobilo 420 mg (43%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS [M+H]<+>484.20.
Korak 4: Metil 3-[(2R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] propoksi Jpropanoat
[1256] Rastvor metil 3-[(2R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-( trimetilsilil)etoksi]metil]-11,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi]propanoata (400 mg, 0.83 mmol, 1 ekviv.) i TFA (1 mL) u DCM (5 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi, a zatim je rezultujući rastvor koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 500 mg jedinjenja iz naslova u obliku žutog sirovog ulja. LCMS [M+H]<+>354.12.
Korak 5: Metil 3-[(2R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi Jpropanoat
[1257] Rastvor metil 3-[(2R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] propoksi]propanoata (500 mg, 1.42 mmol, 1 ekviv.) i LiOH (67.8 mg, 2.83 mmol, 2.00 ekviv.) u MeOH (10 mL) i H2O (2 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi, a zatim je pH rezultujućeg rastvora podešen na 5 sa TFA i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 230 mg (48%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS [M+H]<+>340.11.
Korak 6: 5-[[(2R)-1-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]-3-metoksipropan-2-il] amino] -4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1258] Rastvor 3-[(2R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6 -dihidropiridazin-4-il]amino] propoksi]propanoične kiseline (200 mg, 0.59 mmol, 1 ekviv.), DIPEA (152.4 mg, 1.18 mmol, 2 ekviv.), HATU (224.1 mg, 0.59 mmol, 1 ekviv.) i A3 (117.1 mg, 0.59 mmol, 1 ekviv.) u DMF (2 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi, a zatim je dobijeni rastvor prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (84.2 mg, 27%) u obliku bele čvrste supstance. LCMS [M+H]<+>520.10,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.33 (s, 2H), 7.97 (s, 1H), 4.21 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 3.86 – 3.51 ( m, 14H), 3.38 (s, 3H), 2.70 (t, J = 6.0 Hz, 2H).
Primer 558: 5-[[(2S)-1-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]-3-metoksi-propan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1259]
Korak 1: (2R)-2-Amino-3-metoksipropan-1-ol
[1260] Rastvor (2S)-2-amino -3-metoksi propanoična kiselina (2 g, 16.79 mmol, 1 ekviv.) u BH3·THF (20 mL, 1M) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi nakon čega je reakcija ugašena sa MeOH (20 mL). Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 2.2 g jedinjenja iz naslova u obliku bezbojnog sirovog ulja. LCMS [M+H]<+>106.08.
Korak 2: 5-[[(2R)-1-Hidroksi-3-metoksipropan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) etoksi] metil]-2,3-dihidropiridazin-3 -on
[1261] Rastvor (2R)-2-amino-3-metoksipropan-1-ola (500 mg, 4.76 mmol, 1 ekviv.), TEA (962.5 mg, 9.51 mmol, 2.0 ekviv.) i Int-A6 ( 1560 mg, 4.74 mmol, 1.00 ekviv.) u EtOH (10 mL) je mešan 1 h na 60 °C. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a zatim je ostatak prečišćen hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroletrom (1/1) da bi se dobilo 850 mg (45%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS [M+H]<+>398.17. Korak 3: Metil 3-[(2S)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi]propanoat
[1262] Rastvor 5-[[(2R)-1-hidroksi-3-metoksipropan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2- [[2-(trimetilsilil) etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (800 mg, 2.01 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(1967.4 mg, 6.04 mmol, 3 ekviv.) i metil prop-2-enoata (1732.8 mg, 20.13 mmol, 10 ekviv.) u ACN (10 mL) je mešan 2 h na ST. Čvrste supstance su filtrirane i dobijeni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je koloni silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom da bi se dobilo 620 mg (64%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS [M+H]<+>484.20.
Korak 4: Metil 3-[(2S)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] propoksi]propanoat [1263] Rastvor metil 3-[(2S)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1, 6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi]propanoata (600 mg, 1.24 mmol, 1 ekviv.) i TFA (1 mL) u DCM (5 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi, a zatim je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom da se dobije 650 mg jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS [M+H]<+>354.12.
Korak 5: 3-[(2S)-3-Metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi] propanoična kiselina
[1264] Rastvor metil 3-[(2S)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] propoksi]propanoata (600 mg, 1.70 mmol, 1 ekviv. ) i LiOH (406.7 mg, 16.98 mmol, 10 ekviv.) u MeOH (10 mL) i H2O (2 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi, a zatim je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom i ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 260 mg (45%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS [M+H]<+>340.11.
Korak 6: 5-[[(2S)-1-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]-3-metoksipropan-2-il] amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1265] Rastvor 3-[(2S)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] propoksi]propanoične kiseline (250 mg, 0.74 mmol, 1 ekviv.), HATU (280.2 mg, 0.74 mmol, 1.0 ekviv.), DIPEA (190.5 mg, 1.47 mmol, 2). Int-A3 (146.4 mg, 0.74 mmol, 1 ekviv.) u DMF (2 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi, a zatim je dobijeni rastvor prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (121 mg, 32%) u obliku bele čvrste supstance. LCMS [M+H]<+>520.05.<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.33 (s, 2H), 7.96 (s, 1H), 4.21 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 3.84-3.55 (m, 14H), 3.38 (s, 3H), 2.72 (t, J = 6.0 Hz, 2H).
Primer 559: 5-[[(2S)-1-metoksi-3-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il] propoksi)propan-2 -il]amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1266]
[1267] Rastvor 3-[(2S)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] propoksi]propanoične kiseline (Primer 558, Korak 5; 100 mg, 0.29 mmol, 1 ekviv.), HATU (112.1 mg, 0.29 mmol, 1.0 ekviv.), Int-A2 (68.4 mg, 0.29 mmol, 1 ekviv.) i DIPEA (76.2 mg, 0.59 mmol, 2.0 ekviv.) u DMF-u (2 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN a zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (56.7 mg, 35%) u obliku bele čvrste supstance. LCMS [M+H]<+>554.30.<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.61 (d, J = 0.9 Hz, 2H), 7.98 (s, 1H), 4.23 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 3.98 - 3.60 (m, 12H), 3.59 - 3.52 (m, 2H) 3.39 (s, 3H), 2.71 (t, J = 5.9 Hz, 2H).
Primer 560 Izomer A: 5-[(2S)-2-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]-3-metoksipropoksi]-4-(trifluorometil )-2,3-dihidropiridazin-3-on i
Primer 560 Izomer B: 5-[(2R)-2-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3- oksopropoksi]-3-metoksipropoksi]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on i
Primer 560 Izomer C: 5-[[(2S)-1-[3-[4-(5-hloropirimidin- 2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]-3-metoksipropan-2-il]oksi]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on i
Primer Izomer D: 5-[[(2R)-1-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il) piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]-3-metoksi-propan-2-il]oksi]-4-(trifluorometil) -2,3-dihidropiridazin-3-on
Primer 560 Primer 560
Izomer C Izomer D
Korak 1: Mešavina 1-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-(2-hidroksi-3-metoksipropoksi)propan-1-on i 1-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-((1-hidroksi-3-metoksipropan-2-il)oksi)propan-1-on
[1268] Rastvor Int-A23 (1 g, 3.96 mmol, 1 ekviv.), 3-metoksipropan-1,2-diol (5.0 g, 0.05 mmol, 12 ekviv.) i Cs2CO3(2.6 g, 0.01 mmol, 2.0 ekviv.) u ACN (30 mL) je mešan 15 h na 70 °C , a zatim su čvrste materije filtrirane i rezultujući rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 800 mg (56%) smeše jedinjenja iz naslova u obliku belog ulja. LCMS: [M+H]<+>Korak 2: Smeša 5-((1-(3-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)-3-metoksipropan-2-il) oksi)-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridazin-3(2H)-ona i 5-(2-(3-(4-(5-hloro-pirimidin-2-il)piperazin-1)-il)-3-oksopropoksi)-3-metoksipropoksi)-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil) etoksi)metil)piridazin-3(6H)-ona
[1269] Smeša 1-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-(2-hidroksi-3-metoksipropoksi)propan-1-ona i 1-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-((1-hidroksi-3-metoksipropan-2-il)oksi)propan-1-ona (0.72 g, 2.01 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(0.98 g, 3.01 mmol, 1.50 ekviv.) i Int-A6 (2.4 g, 7.30 mmol, 3.64 ekviv.) u ACN (15 mL) je mešana 4 h na 80 °C, a zatim su čvrste materije filtrirane i dobijeni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petrol etrom da bi se dobilo 420 mg (32%) smeše jedinjenja iz naslova u vidu žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>651.15.
Korak 3: Izomer A: 5-[(2S)-2-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]-3-metoksi-propoksi]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on i
Izomer B: 5-[(2R)-2-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi ]-3-metoksipropoksi]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on i
Izomer C: 5-[[(2S)-1-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il) )piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]-3-metoksipropan-2-il]oksi]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on i
Izomer D: 5-[[(2R) -1-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]-3-metoksipropan-2-il]oksi]-4-(trifluorometil)-2, 3-dihidropiridazin-3-on
[1270] Smeša 5-((1-(3-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)-3-metoksipropan-2-il) oksi)-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridazin-3(2H)-ona i 5-(2-(3-(4-(5-hloropirimidin -2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)-3-metoksipropoksi)-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi) metil)piridazin-3(6H)-ona (400 mg, 0.61 mmol, 1 ekviv.) i TFA (2 mL) u DCM (10 mL) je mešana 1 h na sobnoj temperaturi, a zatim je rezultujuća smeša koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN, a zatim je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC. Apsolutna stereohemija iz Primera 560 Izomer A i Primera 560 Izomer B je dodeljena na osnovu rendgenske kristalne strukture proteina dobijene iz Primera 513A, što je potvrdila (S)-apsolutna stereohemija potentnog enantiomera. Stereohemija iz Primera 560 Izomera C i D je arbitrarno dodeljena. (Položaj metil grupe je potvrđen pomoću<1>H-NMR).
[1271] Primer 560 Izomeri A i B: Chiral-Prep-HPLC (kolona CHIRALPAK IE-3, 3 µm, 0.46 x 10 cm, eluiranjem sa gradijentom MtBE(0.1%DEA):EtOH=90:10, pri brzini protoka od 1 mL/min) da bi se dobila jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance.
Primer 560 Izomer A:
[1272]
LCMS: [M+H]<+>521,05,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.23 (s, 1H), 8.45 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 8.27 (s, 1H), 5.18 (dd, J = 6.3, 3.0 Hz, 1H), 3.74 - 3.50 (m, 14H), 3.31 (s, 3H), 2.57 (t, J = 6.4 Hz, 2H). tR=3.682 min.
Primer 560 Izomer B:
[1273] LCMS: [M+H]<+>521.05,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.23 (s, 1H), 8.46 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 8.28 (s, 1H), 5.18 (dd, J = 6.6, 3.5 Hz, 1H), 3.74 - 3.49 (m, 14H), 3.31 (s, 3H), 2.56 (t, J = 6.5 Hz, 2H). tR = 8.735 min.
[1274] Primer 560 Izomeri C i D: Chiral-Prep-HPLC (kolona CHIRALPAK IG-3, 3 µm, 0.46 x 10 cm, eluiranjem sa gradijentom MtBE(0.1%DEA):EtOH=70:30, pri brzini protoka od 1 mL/min) da bi se dobila jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance.
Primer 560 Izomer C:
[1275] LCMS: [M+H]<+>521.05,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.31 (s, 1H), 8.46 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 8.24 (s, 1H), 4.52 (dd, J = 10.7, 3.7 Hz, 1H), 4.42 (dd, J = 10.7, 5.6 Hz, 1H), 3.81 - 3.65 (m, 11H), 3.45 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.31 (s, 3H), 2.58 (t, J = 6.6 Hz, 2H). tR = 2.653 min.
Primer 560 Izomer D:
[1276] LCMS: [M+H]<+>521.05,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.31 (s, 1H), 8.47 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 8.25 (s, 1H), 4.53 (dd, J = 10.7, 3.7 Hz, 1H), 4.46 - 4.32 (m, 1H), 3.83 - 3.63 (m, 7H), 3.53 -3.46 (m, 4H), 3.45 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 3.30 (s, 3H), 2.59 (t, J = 6.7 Hz, 2H). tR = 3.471 min.
Primer 561: 5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi) propan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1277]
[1278] Rastvor Int-A13 (150 mg, 0.485 mmol, 1 ekviv.), HATU (184 mg, 0.484 mmol, 1 ekviv.), DIPEA (0.32 mL, 2 mmol, 4 ekviv.) i Int-A2 (148 mg, 0.487 mmol, 1 ekviv.) u DMF-u (2 mL) je mešan 0.5 h na 25 °C. Rezultujućoj smeši je dodat etanolamin (0.5 mL) i reakciona smeša je mešana 0.5 h na 25 °C. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (50.7 mg, 20%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>524.20,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 12.45 (s, 1H), 8.73 (s, 2H), 7.92 (s, 1H), 6.28 (dd, J =8.5,4.2 Hz, 1H), 4.13 - 4.18 (m, 1H), 3.90 - 3.75 (m, 4H), 3.63 -3.73 (m, 2H), 3.60 - 3.45 (m, 6H), 2.60 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 1.16 (d, J = 6.1 Hz, 3H).
Primer 561 je takođe pripremljen u skladu sa procedurom opisanom u nastavku.
Korak 1: 1-(4-(5-trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on
[1279] Rastvor Int-A2 (300 g, 1.1 mol, 1 ekviv.), prop-2-enoil prop-2-enoat (156 g, 1.24 mol, 1.1 ekviv.) i TEA (375 g, 3.71 mol, 3.3 ekviv.) u DCM (2.5 L) je mešan 30 min na -40 °C. 2 L DCM je dodato u nastali rastvor nakon što je reakcija završena i dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 2 x 1 L vode. Organski sloj je koncentrovan a ostatak je unesen na kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (1/4). Sakupljene frakcije su sastavljene i koncentrovane da se dobije 200 g (62.6%) jedinjenja iz naslova kao bela čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>287.23.
Korak 2: (S)-terc-butil 1-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propan-2-ilkarbamat
[1280] Rastvor terc-butil N-[(2S)-1-hidroksipropan-2-il]karbamata (244 g, 1.39 mol, 2 ekviv.), 1-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (200 g, 699 mmol, 1 ekviv.) i Cs2CO3(273 g, 838 mmol, 1.2 ekviv.) u CH3CN (1.4 L) je mešan 24 h na 25 °C. Čvrste supstance su filtrirane i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (1/3) da bi se dobilo 257 g (80%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>462.27.
Korak 3: (S)-3-(2-Aminopropoksi)-1-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propan-1-on
[1281] Rastvor 1-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (257 g, 557 mmol, 1 ekviv.) i dioksan/HCl (4 mol/L, 1 L ) je mešan 2 h na 25 °C. pH vrednost reakcione smeše je podešena na 7 dodatkom NaOH (vodenog). Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 167 g (83.0%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS:
[M+H]<+>362.34.
Korak 4: (S)-2-(4-metoksibenzil)-5-(1-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il) propoksi) propan-2-ilamino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1282] Rastvor (S)-3-(2-aminopropoksi)-1-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propan-1-ona (167 g, 462 mmol, 1 ekviv.), Int-A2O (161 g, 505 mmol, 1.1 ekviv.) i TEA (210 g, 2.08 mol, 4.5 ekviv.) u CH3CN (1.2 L) je mešan 6 h na 25 °C. Čvrste supstance su filtrirane i filtrat je kombinovan i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela sa EtOAc/petroletrom (1/1) da bi se dobilo 230 g (77.3%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>644.41.
Korak 5: 5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi)propan-2-il] amino ]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1283] Rastvor (S)-2-(4-metoksibenzil)-5-(1-(3-okso-3-(4-) (5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propan-2-ilamino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on (230 g, 358 mmol, 1 ekviv.) i TfOH (115 mL) u TFA (1.0 L) je mešan 2 h na 25 °C. Reakcija je zatim ugašena dodatkom 4.0 L vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 2 x 1 L EtOAc. pH vrednost organskih slojeva je podešena na 8 vodenim rastvorom K2CO3. Organski sloj je kombinovan i koncentrovan. Ostatak je unesen u kolonu silika gela sa EtOAc/petroletrom (4/1). Frakcije su kombinovane i koncentrovane, a zatim dalje ispiranje sa EtOAc da bi se dobilo 114 g (61.2%) jedinjenja iz naslova u obliku bele kristalne čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>524.25 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.45 (s, 1 H), 8.73 (s, 2 H), 7.91 (s, 1 H), 6.29 - 6.26 (m, 1 H), 4.12 - 4.19 (m, 1 H), 3.81 - 3.85 (m, 4 H), 3.73 - 3.79 (m, 2H), 3.54 - 3.69 (m, 6 H), 2.60 (t, J = 9.2 Hz, 2H), 1.16 (d, J = 12.4 Hz, 3 H).
Karakterizacija kristalnog 5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il] propoksi)propan-2-il]amino ]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona (Forma A).
[1284] Čvrsti proizvod iz koraka 5 je potvrđen kao kristalna čvrsta supstanca prema XRPD analizi. XRPD difraktogram kristalnog 5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi) propan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-ona ("Jedinjenje 561 Forma A" ili "Forma A") je prikazano na Slici 8, a podaci o pikovima su dati u Tabeli X1.
Tabela X1. Podaci o XRPD pikovima za Formu A.
[1285] Forma A pokazuje DSC termogram koji ima endotermni pik na temperaturi od oko 174 °C. Forma A pokazuje gubitak težine od oko 0.5% kada se zagreje na 150 °C. Slika 9 prikazuje DSC termogram i TGA termogram Jedinjenja 561 Forme A. Slika 10 prikazuje DVS izotermu Jedinjenja 561 Forma A. Podaci sugerišu da Forma A može biti anhidrovani kristalni oblik.
[1286] Sledeć i primeri u Tabeli E9 su pripremljeni na sličan način prema metodi opisanoj za Primer 561.
Tabela E9
Primer 565 Izomer A: 5-[[(2S,5S)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil] oksolan-2-il]metoksi]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on i
Primer 565 Izomer B: 5-[[(2R,5R)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil] oksolan-2-il]metoksi]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on i
Primer 565 Izomer C: 5-[[(2S,5R)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil] oksolan-2-il]metoksi ]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on i Primer 565 Izomer D: 5-[[(2R,5S)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]oksolan-2-il]metoksi]-4-(tri-fluorometil)-2,3- dihidropiridazin-3-on
Primer 565 Primer 565
Izomer C Izomer D
Korak 1: 2-[5-[(Benziloksi)metil]oksolan-2-il]-1-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]etan-1-on
[1287] Rastvor 2-[5-[(benziloksi)metil]oksolan-2-il]sićetne kiseline (2 g, 7.99 mmol, 1 ekviv.), HATU (3949.7 mg, 10.39 mmol, 1.3 ekviv.), DIPEA (4130.9 mg, 31.96 mmol, 4 ekviv.) i Int-A3 (1587.3 mg, 7.99 mmol, 1 ekviv.) u DMF-u (25 mL) je mešan 1.5 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 2.6 g (76%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>431.18.
Korak 2: 1-[4-(5-Hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-[5-(hidroksimetil)oksolan-2-il]etan-1-on
[1288] Rastvor 2-[5 -[(benziloksi)metil]oksolan-2-il]-1-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]etan-1-on (2.17 g, 5 mmol, 1 ekviv.), TMSI (5 g, 25 mmol, 5.00 ekviv.) u DCM (20 mL) je mešan preko noći na 40 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 1.6 g (94%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>341.14.
Korak 3: Metil-5-[(5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]oksolan-2-il)metoksi]-4-(tri-fluorometil )-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1289] Rastvor 1-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il ]-2-[5-(hidroksimetil)oksolan-2-il]etan-1-ona (800 mg, 2.35 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(2294.4 mg, 7.04 mmol, 3 ekviv.), Int-A6 (1543.6 mg, 4.69 mmol, 2.00 ekviv.) u DMF (20 mL) je mešan 3 h na 80 °C. Čvrste supstance su filtrirane i dobijeni rastvor je ugašen vodom (50 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (3 x 60 mL), a organski slojevi su kombinovani. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela sa EtOAc/petroletrom (1:1) da bi se dobilo 600 mg (40%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>633.22.
Korak 4: 5-[[(2S,5S)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]oksolan-2-il]metoksi]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on, 5-[[(2R,5R)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]oksolan-2-il]metoksi]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on, 5-[[(2S,5R)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2oksoetilJoksolan-2-il]metoksi]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidro-piridazin-3-on i 5-[[(2R,5S)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]oksolan-2-il] metoksi] -4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1290] Rastvor 5-[(5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]oksolan-2-il)metoksi]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (600 mg, 0.95 mmol, 1 ekviv.) i TFA (4 mL) u DCM (20 mL) je mešan 1 h na ST. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (kolona CHIRALPAK IA-3, 3 µm, 0.46 x 5 cm, eluiranjem sa gradijentom MtBE (10 mM NH3):IPA=85:15, pri brzini protoka od 1 mL/min) da se dobiju (nakon arbitrarno dodeljene apsolutne stereohemije) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance.
Primer 565 Izomer A: 46.5 mg, 10%, LCMS: [M+H]<+>503.20,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.29 (s, 2H), 8.22 (s, 1H), 4.54 (dd, J = 10.7, 3.1 Hz, 1H), 4.41 - 4.24 (m, 3H), 3.90 - 3.74 (m, 2H), 3.73 - 3.58 (m, 4H), 3.56 - 3.53 (m, 2H), 2.76 (dd, J = 14.8, 7.8 Hz, 1H), 2.55 (dd, J = 14.8, 4.8 Hz, 1H), 2.15 - 2.06 (m, 2H), 1.96 - 1.92 (m, 1H), 1.80 - 1.68 (m, 1H). tR = 1.725 min.
Primer 565 Izomer B: 46.3 mg, 10%, LCMS: [M+H]<+>503.20,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.29 (s, 2H), 8.20 (s, 1H), 4.46 - 4.33 (m, 4H), 3.90 - 3.56 (m, 8H), 2.80 (dd, J = 14.8, 7.8 Hz, 1H), 2.55 (dd, J = 14.8, 4.8 Hz, 1H), 2.24 - 2.18 (m, 2H), 1.89 - 1.76 (m, 1H), 1.73 - 1.72 (m, 1H). tR = 2.396 min.
Primer 565 Izomer C: 34,5 mg 7%, LCMS: [M+H]<+>503.20,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.29 (s, 2H), 8.20 (s, 1H), 4.46 - 4.33 (m, 4H), 3.90 - 3.54 (m, 8H), 2.80 (dd, J = 14.8, 7.8 Hz, 1H), 2.55 (dd, J = 14.8, 4.8 Hz, 1H), 2.24 - 2.17 (m, 2H), 1.89 - 1.76 (m, 1H), 1.73 - 1.72 (m, 1H). tR = 3.189 min.
Primer 565 Izomer D: 35.2 mg 7%, LCMS: [M+H]<+>503.20,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.29 (s, 2H), 8.22 (s, 1H), 4.54 (dd, J = 10.7, 3.1 Hz, 1H), 4.41 - 4.24 (m, 3H), 3.90 - 3.74 (m, 2H), 3.73 - 3.58 (m, 4H), 3.56 - 3.55 (m, 2H), 2.76 (dd, J = 14.8, 7.8 Hz, 1H), 2.55 (dd, J = 14.8, 4.8 Hz, 1H), 2.17 - 2.06 (m, 2H), 1.96 - 1.92 (m, 1H), 1.80 - 1.68 (m, 1H). tR = 3.805 min.
Primer 566 Izomer A: 4-Hloro-5-[[(2S,5S)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]oksolan-2 -il]metoksi]-2,3-dihidropiridazin-3-on i
Primer 566 Izomer B: 4-Hloro-5-[[(2R,5R)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]oksolan-2 -il]metoksi]-2,3-dihidropiridazin-3-on
Primer 566 Izomer C: 4-Hloro-5-[[(2S,5R)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]oksolan-2-il]metoksi]-2,3-dihidropiridazin-3-on i
Primer 566 Izomer D: 4-Hloro-5-[[(2R,5S)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]oksolan-2 -il]metoksi]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1291] Rastvor 1-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-[5-(hidroksimetil)oksolan-2-il]etan-1-ona (840 mg, 2.46 mmol, 1 ekviv.), NaH (118.3 mg, 4.93 mmol, 2 ekviv.) i Int-A7 (2183.0 mg, 7.39 mmol, 3.00 ekviv.) u ACN (20 mL) je mešano 1.5 h na sobnoj temperaturi. Rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom a ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroletrom (1:1) da bi se dobilo 850 mg (58%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>599.20.
Korak 2: 4-hloro-5-[[(2S,5S)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil joksolan-2-il] metoksi]-2,3-dihidropiridazin-3-on, 4-hloro-5-[[(2S,5R)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]- 2-oksoetil]oksolan-2-il]metoksi]-2,3-dihidropiridazin-3-on, 4-hloro-5-[[(2R,5R)-5-[2-[4-(5-hloro-pirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetilJoksolan-2-il]metoksi]-2,3-dihidropiridazin-3-on i 4-hloro-5-[[(2R,5S)-5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]oksolan-2-il]metoksi]-2,3-dihidro-piridazin-3-on.
[1292] Rastvor 4-hloro-5-[(5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]oksolan-2-il)metoksi] -2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (800 mg, 1.33 mmol, 1 ekviv.) i TFA (4 mL) u DCM (20 mL) je mešan 1 h na ST. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (kolona CHIRALPAK IA-3, 3 µm, 0.46 x 15 cm, eluiranjem sa gradijentom MtBE (0.3% izopropilamin):IPA=75:25, sa brzinom protoka od 1 mL/min) dajući (nakon arbitrarno dodeljene apsolutne stereohemije) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance.
Primer 566 Izomer A: 49.1 mg, 8%, LCMS: [M+H]<+>469.10,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.28 (s, 2H), 8.15 (s, 1H), 4.51 - 4.47 (m, 1H), 4.35 - 4.28 (m, 3H), 3.86 - 3.62 (m, 6H), 3.58 - 3.51 (m, 2H), 2.79 (dd, J = 14.7, 7.9 Hz, 1H), 2.56 (dd, J = 14.7, 4.7 Hz, 1H), 2.18 - 2.11 (m, 2H), 2.00 - 1.98 (m, 1H), 1.96 - 1.95 (m, 1H); tR = 2.184 min.
Primer 566 Izomer B: 66.9 mg, 11%, LCMS: [M+H]<+>469.15,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 88.28 (s, 2H), 8.14 (s, 1H), 4.43 - 4.31 (m, 4H), 3.94 - 3.60 (m, 5H), 3.58 - 3.51 (m, 3H), 2.79 (dd, J = 14.7, 7.9 Hz, 1H), 2.56 (dd, J = 14.7, 4.7 Hz, 1H), 2.24 - 2.17 (m, 2H), 1.89 - 1.85 (m, 1H), 1.77 - 1.74 (m, 1H). tR = 3.458 min
Primer 566 Izomer C: 47,7 mg, 8%, LCMS: [M+H]<+>469,10,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.28 (s, 2H), 8.15 (s, 1H), 4.51 - 4.47 (m, 1H), 4.35 - 4.28 (m, 3H), 3.86 - 3.62 (m, 6H), 3.58 - 3.51 (m, 2H), 2.79 (dd, J= 14.7, 7.9 Hz, 1H), 2.56 (dd, J= 14.7, 4.7 Hz, 1H), 2.18 - 2.11 (m, 2H), 2.00 - 1.98 (m, 1H), 1.96 - 1.95 (m, 1H). tR = 4.325 min Primer 566 Izomer D: 37.0 mg, 6%, LCMS: [M+H]<+>469.10,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.31 (s, 2H), 8.14 (s, 1H), 4.44 - 4.31 (m, 4H), 3.94 - 3.85 (m, 2H), 3.79 - 3.52 (m, 6H), 2.79 (dd, J = 14.7, 7.9 Hz, 1H), 2.56 (dd, J = 14.7, 4.7 Hz, 1H), 2.26 - 2.20 (m, 2H), 1.89 - 1.85 (m, 1H), 1.77 - 1.74 (m, 1H). tR = 5.695 min.
Primer 567 Izomer A: 5-((((2S,SR)-5-(2-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-2-oksoetil) tetrahidrofuran-2-il) metil)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i
Primer 567 Izomer B: 5-((((2R,5S)-5-(2-(4-(5-hloropirimidin-2-)) il)piperazin-1-il)-2-oksoetil) tetrahidrofuran-2-il)metil) amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on,
Primer 567 Izomer C: 5-(((2S , 5S)-5-(2-(4-(5-Hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-2-oksoetil) tetrahidrofuran-2-il)metil)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3 (2H)-on i
Primer 567 Izomer D: 5-((((2R, SR)-5-(2-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-2-oksoetil) tetrahidrofuran-2-il)metil)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3 (2H)-on
Korak 1: (5-[2-[4-(5-Hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]oksolan-2-il)metil metansulfonat
[1293] Rastvor 1-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-[5-(hidroksimetil)oksolan-2-il]etan-1-ona (1 g, 2.93 mmol, 1 ekv. ), TEA (890.7 mg, 8.80 mmol, 3 ekviv.) i metansulfonil metansulfonata (766.7 mg, 4.40 mmol, 1.5 ekviv.) u DCM (20 mL) je mešan 1 h na 25 °C. Rezultujućem rastvoru je dodato 20 mL vodenog NaHCO3, a dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 20 mL DCM i organski slojevi su kombinovani. Dobijeni rastvor je ispran sa 20 mL NH4Cl(aq), a organski slojevi su kombinovani i sušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 1.1 g (90%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>419.11.
Korak 2: 2-[5-(Azidometil)oksolan-2-il]-1-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]etan-1-on
[1294] Rastvor (5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]oksolan-2-il)metil metansulfonat (1.1 g, 2.63 mmol, 1 ekviv.) i NaN3(0.2 g, 3.15 mmol, 1.2 ekviv.) u DMF (20 mL) je mešano 4 h na 90 °C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 30 mL vode i ekstrahovan sa 3 x 20 mL EtOAc. Organski slojevi su kombinovani i dobijeni rastvor je ispran sa 3 x 20 mL zasićenog natrijum hlorida, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan da se dobije 600 mg (62%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>366.14.
Korak 3: 2-[5-(Aminometil)oksolan-2-il]-1-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]etan-1-on
[1295] Rastvor 2-[5-(azidometil)oksolan-2-il]-1-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]etan-1-on (500 mg, 1.37 mmol, 1 ekviv.) i trifenilfosfin (537.7 mg, 2.05 mmol, 1.5 ekviv.) u THF (20 mL) i H2O (5 mL) je mešan 5 h na 60 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 450 mg (97%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>340.15.
Korak 4: -5-[[(5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]oksolan-2-il)metil]amino]-4- (tri-fluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2, 3-dihidropiridazin-3-on
[1296] Rastvor 2-[5-(aminometil)oksolan-2-il]-1-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]etana- 1-on (300 mg, 0.88 mmol, 1 ekviv.), Int-A6 (348.3 mg, 1.06 mmol, 1.2 ekviv.) i TEA (268.0 mg, 2.65 mmol, 3 ekviv.) u EtOH (20 mL2) je mešan 2h na 60 °C. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom a ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (1/1) da bi se dobilo 480 mg (86%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>632.23.
Korak 5: 5-((((2S,5R)-5-(2-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-2-oksoetil)tetrahidrofuran-2-il)metil) amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on, 5-((((2R,SS)-5-(2-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il) )-2-oksoetil)tetrahidrofuran-2-il)metil)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on, 5-((((2S, SS)-5-(2-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-2-oksoetil)tetrahidrofuran-2-il)metil)amino)-4-(trifluorometil) piridazin-3(2H)-on i 5-((((2R,5R)-5-(2-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-2-oksoetil)tetra-hidro-furan-2-il) )metil)amino)-4-(trifluorometil) piridazin-3(2H)-on
[1297] Rastvor 5-[[(5-[2-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1 -il]-2-oksoetil]oksolan-2-il)metil]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (470 mg, 0.74 mmol, 1 ekviv.) i TFA (2 mL) u DCM (10 mL) je mešan 2 h na 25 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC dajući (nakon arbitrarno dodeljene stereohemije), jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance.
[1298] Chiral-Prep-HPLC prečišćavanje izomera A i D pomoću Repaired IA, 5 µm, kolone 0.46 x 10 cm, eluiranjem sa gradijentom (Heksan/DCM=3:1)(0,1%DEA):EtOH=95 :5, pri brzini protoka od 1 mL/min). Chiral Prep-HPLC prečišćavanje izomera B i C pomoću kolone CHIRALPAK IG-3, 3 µm, 0.46 x 10 cm, eluiranjem sa gradijentom (Heksan/DCM=1:1)(0.1%DEA):MeOH=50:50, pri brzini protoka od 1 mL/min).
Primer 567 Izomer A: 41.6 mg, 11%, LCMS: [M+H]<+>502.15,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.39 (s, 1H), 8.43 (s, 2H), 7.91 (s, 1H), 6.92 (s, 1H), 4.21 - 4.10 (m, 1H), 3.97 (s, 1H), 3.77 - 3.61 (m, 4H), 3.61 - 3.33 (m, 6H), 2.58 (dd, J = 15.4, 6.4 Hz, 1H), 2.37 (dd, J = 15.4, 6.4 Hz, 1H), 2.09 - 1.83 (m, 2H), 1.68 (s, 1H), 1.52 (d, J = 10.5 Hz, 1H). tR = 4.364 min
Primer 567 Izomer B: (42.3 mg, 11.34%), LCMS: [M+H]<+>: 502.15,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.35 (s, 1H), 8.41 (s, 2H), 7.88 (s, 1H), 6.91 (s, 1H), 4.23 (s, 1H), 4.08 (s, 1H), 3.71 (m, 10H), 2.64 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 2.45 (d, 1H), 2.03 (d, J = 29.9 Hz, 2H), 1.56 (s, 2H). tR = 1.333 min.
Primer 567 Izomer C: 42,2 mg, 11%, LCMS: [M+H]<+>502,15,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.35 (s, 1H), 8.41 (s, 2H), 7.88 (s, 1H), 6.99 - 6.81 (m, 1H), 4.25 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 4.08 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 3.78 - 3.38 (m, 10H), 2.66 (dd, J = 15.0, 6.6 Hz, 1H), 2.42 (dd, J = 14.9, 6.2 Hz, 1H), 2.12 - 1.91 (m, 2H), 1.68 - 1.47 (m, 2H). tR = 1.719 min.
Primer 567 Izomer D: 31.8 mg, 9%, LCMS: [M+H]<+>502.15,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.39 (s, 1H), 8.43 (s, 2H), 7.91 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 4.15 (q, J = 6.5 Hz, 1H), 3.97 (s, 1H), 3.77 - 3.61 (m, 4H), 3.61 - 3.33 (m, 6H), 2.58 (dd, J = 15.4, 6.5 Hz, 1H), 2.37 (dd, J = 15.3, 6.3 Hz, 1H), 2.07 - 1.80 (m, 2H), 1.65 (dd, J = 12.7, 6.2 Hz, 1H), 1.58 - 1.42 (m, 1H). tR = 6.678 min.
Primer 568 Izomeri AD
[1299] Koristeći isti redosled reakcija kako je opisano za Primer 567, ali polazeći od 2-(5-(hidroksimetil) tetrahidrofuran-2-il)-1-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etan-1-ona, pripremljena su jedinjenja iz naslova.
Primer 569: 6-(4-[3-[(2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi] butanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1300]
Korak 1: 6-(4-[3-[(2R)-2-Hidroksipropoksi]butanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1301] Rastvor 6-[4-[(2E)-but -2-enoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila (2.5 g, 9.75 mmol, 1.00 ekviv.), Cs2CO3(6.49 g, 19.92 mmol, 2.00 ekviv.), (2R)-propan-1,2-diola (3.7 g, 48.62 mmol, 5.00 ekviv.) u ACN (30 mL) je mešan 24 h na 75 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 1.3 g (40%) jedinjenja iz naslova u obliku smeđeg ulja. LCMS: [M+H]<+>333.00.
Korak 2: 6-(4-[3-[(2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidro-piridazin- 4-il]oksi]propoksi]butanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1302] Rastvor 6-(4-[3-[(2R)-2-hidroksipropoksi]butanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril (350 mg, 1.05 mmol, 1 ekviv.), Int-A6 (1.0 g, 3.16 mmol, 3 ekviv.), a Cs2CO3(686.1 mg, 2.11 mmol, 2 ekviv.) u CAN (15 mL) je mešan 6 h na 70 °C. Dobijena smeša je koncentrovana i ostatak je unesen u kolonu silika gela sa EtOAc/petroletrom (1:1) da bi se dobilo 70 mg (11%) jedinjenja iz naslova u obliku smeđeg ulja. LCMS: [M+H]<+>625.00.
Korak 6: 6-(4-[3-[(2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi]butanoil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril.
[1303] Rastvor 6-(4-[3-[(2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidro-piridazin-4-il]oksi]propoksi]butanoil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila (200 mg, 0.32 mmol, 1 ekviv.) i TFA (2 ml) u DCM (10 mL) je mešan 0.5 h na ST. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (18.6 mg, 12%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: [M+H]<+>495.10,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.43 (s, 1H), 8.23 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.77 (dd, J = 9.1, 2.2 Hz, 1H), 6.85 (dd, J = 9.1, 2.6 Hz, 1H), 5.11 - 5.01 (m, 1H), 4.08 - 3.89 (m, 1H), 3.89 - 3.47 (m, 10H), 2.83 -2.53 (m, 1H), 2.52 - 2.30 (m, 1H), 1.36 (dd, J = 6.3, 1.4 Hz, 3H), 1.33 - 1.07 (m, 3H).
Primer 570 Izomer A: (S)-5-(1-metoksi-3-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il) propoksi) propan- 2-iloksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
Primer 570 Izomer B: (R)-5-(1-Metoksi-3-(3-okso-3-(4-(5-(5)) trifluorometil)pirimidin-2-il) piperazin-1-il)propoksi)propan-2-iloksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1304]
Primer 570 Primer 570
Izomer A Izomer B
Korak 1: 3-(2-Hidroksi-3-metoksipropoksi)-1-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propan-1-on
[1305] Rastvor Int-A21 (1.4 g, 4.89 mmol, 1.00 ekviv.), 3-metoksipropan-1,2-diola (2.6 g, 24.50 mmol, 5.00 ekviv.) i Cs2CO3(3.18 g, 9.76 mmol, 2 ekviv.) u ACN (30 mL) je mešan 5 h na 80 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 1.45 g (76%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>393.17.
Korak 2: 5-(1-metoksi-3-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propan-2-iloksi)-4 -(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridazin-3(2H)-on
[1306] Rastvor 3-(2-hidroksi-3-metoksipropoksi)-1-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il] propan-1-ona (1.3 g, 3.31 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(2.2 g, 6.75 mmol, 2.04 ekviv.), i Int-A6 (6.5 g, 19.78 mmol, 5.97 ekviv.) u ACN (20 mL) je mešan 1.3 h na 80 °C. Čvrste supstance su filtrirane i dobijeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 30 mL) i organski slojevi su kombinovani. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/heksanom (1:1) da bi se dobilo 1.3 g (57%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>685.25.
Korak 3: (S)-5-(1-metoksi-3-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi) propan-2-iloksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i (R)-5-(1-metoksi-3-(3-okso-3-(4-(5-(trifluoro-metil)pirimidin-2-il)piperazin)-1-il)propoksi)propan-2-iloksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1307] Rastvor 5-[[1-metoksi-3-(3-okso-3)-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi) propan-2-il]oksi]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil ]-2,3-dihidropindazin-3-ona (1.3 g, 1.90 mmol, 1 ekviv.) i TFA (4 mL, 49.37 mmol, 26.00 ekviv.) u DMF-u (20 mL) su mešani 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (kolona CHIRALPAK ID-3, 3 µm, 0.46 x 5 cm), eluiranjem sa gradijentom MtBE (10 mM NH3):EtOH=90:10, pri brzini protoka od 1 mL/min) dajući jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. Apsolutna stereohemija je dodeljena na osnovu rendgenske kristalne strukture proteina dobijene iz Primera 513A, koja je potvrdila (S)-apsolutnu stereohemiju potentnijeg enantiomera.
Primer 570 Izomer A: LCMS: [M+H]<+>555.30,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.61 (s, 2H), 8.25 (s, 1H), 5.13 - 5.11 (m,1H), 3.96 - 3.91 (m, 4H), 3.90 - 3.61 (m, 10H), 3.37 (s, 3H), 2.69 (t, J = 6.0 Hz, 2H). tR = 1.439 min.
Primer 570 Izomer B: LCMS: [M+H]<+>555.30.
Primer 571 Izomer A: 6-[4-[(3R)-3-[(2R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidro-piridazin-4-il] oksi]propoksi]butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i
Primer 571 Izomer B: 6-[4-[(3S)-3-[(2S)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidro-piridazin-4-il] oksi]propoksi] butanoil] piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i
Primer 571 Izomer C: 6-[4-[(3R)-3-[(2R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidro-piridazin-4-il] oksi]propoksi] butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i
Primer 571 Izomer D: 6-[4-[(3R)-3-[(2S)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidro-piridazin-4-il]oksi]propoksi]butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
Primer 571 Primer 571
Izomer C Izomer D
Korak 1: 6-[4-[3-(2-hidroksi-3-metoksipropoksi) butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1308] Rastvor 6-[4-[(2E)-but-2-enoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila (1.5 g, 5.85 mmol, 1.00 ekviv.), 3-metoksipropan-1,2-diola (3.1 g, 29.21 mmol, 5.00 ekviv.) i Cs2CO3(3.8 g, 11.66 mmol, 2.00 ekviv.) u ACN (20 mL) su mešani 2 dana na 70 °C. Čvrste materije su filtrirane i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišć en C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 668 mg (31%) jedinjenja iz naslova kao svetlo braon ulje. LCMS: [M+H]+ 363.20.
Korak 2: 6-[4-[3-(3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidro-piridazin- 4-il]oksi]propoksi)butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1309] Rastvor 6-[4-[3-(2-hidroksi-3-metoksipropoksi)butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila (630 mg, 1.74 mmol, 1.00 ekviv.), Int-A6 (3.4 g, 10.34 mmol, 6.00 ekviv.) i Cs2CO3(1.69 g, 5.19 mmol, ekviv.) u ACN je mešan 2 h na 80 °C. Čvrste supstance su filtrirane i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroletrom (85:15) da bi se dobilo 170 mg (15%) jedinjenja iz naslova kao svetlo smeđe ulje. LCMS: [M+H]<+>655.28.
Korak 3: 6-[4-[(3R)-3-[(2R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi] propoksi] butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i 6-[4-[(3R)-3-[(2S)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(tri-fluorometil) -1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi]butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i 6-[4-[(3S)-3-[(2R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi] butanoil] piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i 6-[4-[(3S) )-3-[(2S)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1, 6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi]butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1310] Rastvor 6-[4-[3-(3-metoksi-2-[[6-]okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi)butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila (110 mg, 0.17 mmol, 1.00 ekviv.) i TFA (1.25 mL) u DCM (5 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi, a zatim je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je rastvoren u NH3(gas)/MeOH (2 mL, 7 M) i mešan 30 min na sobnoj temperaturi, a zatim je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (kolona Repaired IA, 5 µm, 0.46 x 10 cm, eluiranje sa gradijentom MtBE (10 mmol NH3): MeOH = 90:10, pri brzini protoka od 1 mL/min) da se dobiju jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. Apsolutna stereohemija je arbitrarno dodeljena naslovnim jedinjenjima.
Primer 571 Izomer A: 2.1 mg, 4%, LCMS: [M+H]<+>525.30,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.43 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.79 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.12 - 5.03 (m, 1H), 4.03 - 3.93 (m, 1H), 3.87 - 3.55 (m, 12H), 3.36 (s, 3H), 2.76 (dd, J=15.3, 7.8 Hz, 1H), 2.45 (dd, J = 15.3 Hz, 4.2Hz, 1H), 1.26 (d, J = 6.3 Hz, 3H). tR = 4.653 min
Primer 571 Izomer B: 1.6 mg, 3%, LCMS: [M+H]<+>525.30,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.43 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.79 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.09 -5.07 (m, 1H), 4.00 - 3.96 (m, 1H), 3.87 - 3.55 (m, 12H), 3.36 (s, 3H), 2.76 (dd, J = 15.3, 5.1 Hz, 1H), 2.45 (dd, J = 15.3, 4.5 Hz, 1H), 1.26 (d, J = 6.3 Hz, 3H). tR = 5.481 min
Primer 571 Izomer C: 6.0 mg, 12%, LCMS: [M+H]<+>525.30,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.44 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.79 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 5.14-5.07 (m, 1H), 4.04 - 3.97 (m, 1H), 3.78 - 3.60 (m, 12H), 3.37 (s, 3H), 2.77 (dd, J = 15.3, 8.4 Hz, 1H), 2.46 (dd, J = 15.3, 4.2 Hz, 1H), 1.21 (d, J = 6.3 Hz, 3H). tR = 7.604 min
Primer 571 Izomer D: 5.3 mg, 11%), LCMS: [M+H]<+>525.30,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.44 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.79 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.11 - 5.09 (m, 1H), 4.04 - 3.97 (m, 1H), 3.81 - 3.56 (m, 12H), 3.37 (s, 3H), 2.77 (dd, J = 15.3, 9.1 Hz, 1H), 2.46 (dd, J = 15.3, 4.2 Hz, 1H), 1.21 (d, J = 6.3 Hz, 3H). tR = 9.953 min
Primer 572 Izomer A: 6-[4-(3-[[(1S,2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] oksi] ciklopentil]oksi]propanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i
Primer 572 Izomer B: 6-[4-(3-[[(1R,2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] oksi] ciklopentil]oksi]propanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
Korak 1: 5-[(2 -Hidroksiciklopentil)oksi]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidro-piridazin-3-on
[1311] Rastvor Int-A6 (2.4 g), ciklopentan-1,2-diola (1.5 g, 1 ekviv.) i Cs2CO3(2.4 g) u ACN (20 mL) je mešan 6 h na 25 °C. Čvrste supstance su filtrirane i rastvor je kombinovan i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela sa EtOAc/petroletrom (1/3) da bi se dobilo 500 mg (9%) jedinjenja iz naslova u obliku čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>395.18.
Korak 2: Metil 3-[(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]ciklopentil)oksi]propanoat
[1312] Rastvor 5-[(2-hidroksiciklopentil)oksi]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropindazin-3-ona (500 mg, 1.27 mmol, 1 ekviv.), metil prop-2-enoata (2.5 mL) i Cs2CO3(300 mg, 0.92 mmol, 0.73 ekviv.) u ACN (20 mL) je mešan 6 h na 25 °C. Rastvor je kombinovan i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela sa EtOAc/petroletrom (1/2) da bi se dobilo 200 mg (33%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>481.27.
Korak 3: Metil 3-[(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]ciklopentil)oksi] propanoat
[1313] Rastvor metil 3-[( 2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1, 6-dihidro-piridazin-4-il]oksi]ciklopentil)oksi]propanoata (200 mg, 0.42 mmol, 1 ekviv.) u DCM (5 mL) i TFA (1 mL) je mešan 1 h na 25 °C. Rezultujuća smeša je koncentrovana da se dobije 150 mg jedinjenja iz naslova u obliku bezbojnog ulja. LCMS: [M+H]<+>351.37.
Korak 4: 3-[(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]ciklopentil)oksi]propanoična kiselina
[1314] Rastvor metil 3-[(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]ciklopentil)oksi] propanoata (150 mg, 0.43 mmol, 1 ekviv.) i LiOH·H2O (60 mg, 1.43) mmol, 3.34 ekviv.) u MeOH (5 mL) i H2O (5 mL) je mešan 4 h na 25 °C. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 100 mg (69%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>337.35.
Korak 5: 6-[4-(3-[[(1S, 2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]ciklopentil]oksi] propanoil) piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i 6-[4-(3-[[(1R,2R)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]ciklopentil] oksi]propanoil)piperazin-1-il ]piridin-3-karbonitril.
[1315] Rastvor 3-[(2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]ciklopentil)oksi]propanske kiseline (100 mg, 0.30 mmol, 1 ekviv.), Int-A4 (60 mg, 0.32 mmol, 1.07 ekviv.), HATU (115 mg, 0.30 mmol, 1.02 ekviv.) i DIPEA (0.3 mL) u DMF-u (4 mL) je mešan 1 h na 25 °C . Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (kolona CHIRALPAK IF, 5 µm, 2 x 25 cm, eluiranjem sa gradijentom heksana (0.1% DEA):EtOH=50:50, pri brzini protoka od 1 mL/min) dajući (nakon proizvoljno dodeljene stereohemije) jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance.
Primer 572 Izomer A: 46.7 mg, 29%, LCMS: [M+H]<+>507.35,<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.33(s, 1 H), 8.50(d, J = 4.0 Hz, 1 H), 8.26 (s, 1 H), 7.90 - 7.86 (dd, J = 4.0, 12.0 Hz 1 H), 6.93 (d, J = 5.6 Hz, 1 H), 5.14 - 5.12 (m, 1 H), 3.98 -3.96 (m, 1 H), 3.90 - 3.48(m, 10 H), 2.66 -2.60 (m, 2 H), 2.16 - 2.08 (m, 1 H), 1.98 - 1.92 (m, 1 H), 1.72 - 1.55 (m, 4H). tR = 2.982 min.
Primer 572 Izomer B: 41.9 mg, 26%, LCMS: [M+H]<+>507.35, tR = 3.054 min.
Primer 573 Izomer A: 6-[4-(3-[[(2S)-1-Hidroksi-3-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] oksi]propan -2-il]oksi]propanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i
Primer 573 Izomer B: 6-(4-[3-[(2R)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidro-piridazin-4-il]oksi]propoksi]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i
Primer 573 Izomer C: 6-(4-[3-[(2S)-3-Hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidro-piridazin-4-il]oksi]propoksi]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i
Primer 573 Izomer D: 6-[4-(3-[[(2R)-1-Hidroksi-3-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidro-piridazin-4-il]oksi]propan-2-il]oksi]propanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
Primer 573 Primer 573
Izomer C Izomer D
Korak 1: Smeša 6-(4-[3-[3-(benziloksi)-2-hidroksipropoksi]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila i 6-(4-(3-((1-(benziloksi)-3-hidroksipropan-2-il)oksi)propanoil)piperazin-1-il)nikotinonitrila
[1316] Rastvor 6-[4-(prop-2-enoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila (1 g, 41.13 mmol, 1 ekviv.), 3-(benziloksi) propan-1,2-diols (1.5 g, 8.23 mmol, 1.99 ekviv.) i Cs2CO3(4.0 g, 12.28 mmol, 2.97 ekviv.) u ACN (10 mL) je mešan 2 h na 80 °C. Čvrste supstance su filtrirane i dobijeni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (1:4) da bi se dobilo 687 mg (39%) smeše jedinjenja iz naslova kao svetlo žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>425.21.
Korak 2: Smeša 6-(4-[3-[3-(benziloksi)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1, 6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi]propanoil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila i 6-(4-(3-((1-(benziloksi)-3-((6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-3,6-dihidropiridazin-4-il) oksi)propan-2-il)oksi)propanoil) piperazin-1-il) nikotinonitrila
[1317] Rastvor Int-A6 (482 mg, 1.47 mmol, 1 ekviv.), 684.5 mg (1.61 mmol, 1.1 ekviv.) i smeša 6-(4-[3-[3-(benziloksi)-2-hidroksipropoksi]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila i 6-(4-(3-((1)-(benzyl-oksi)-3-hidroksipropan-2-il)oksi)propanoil) piperazin-1-il)nikotinonitrila i Cs2CO3(955.3 mg, 2.93 mmol, 2.00 ekviv.) u ACN (30 mL) su mešani 1 h na 60°C. °C. Čvrste supstance su filtrirane i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (1:7) da bi se dobilo 434 mg (41%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>717.30 [M+H]<+>
Korak 3: Smeša 6-[4-(3-[[(2S)-1-hidroksi-3-[[6-okso-5-(trifluorometil))-1,6-dihidropiridazin-4-il] oksi]propan-2-il]oksi]propanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril, 6-(4-[3-[(2R)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbo-nitril, 6-(4-[3-[(2S)-3-hidroksi-2-[[6-okso]-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi] propoksi] propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i 6-[4-(3-[[(2R)-1-hidroksi-3-[[6-okso-5-(tri-fluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propan-2-il]oksi]propanoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril .
[1318] U rastvor smeše 6-(4-[3-[3-(benziloksi)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil) etoksi] metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila i 6-(4-(3-((1-(benziloksi)-3-((66-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-3,6-dihidropiridazin-4-il)oksi) propan-2-il)oksi)propanoil)piperazin-1-il )nikotinonitrila (434 mg, 0.61 mmol, 1 ekviv.) u DCM (4 mL) je dodat BCl3(70.8 mg, 0.61 mmol, 1.00 ekviv.) u kapima na 0 °C i dobijeni rastvor je mešan 1 h na 0 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom, a ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (kolona CHIRALCEL OJ-3, 3 µm, 0.46 x 50 cm, eluiranje sa gradijentom EtOH (0.1% DEA), pri brzini protoka od 1 mL/ min) da se dobiju jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. Apsolutna stereohemija za izomere A i B je dodeljena analogno Primeru 513A, na osnovu PARP7 potencije jačeg enantiomera i analogno rendgenskom snimku Primera 513A. Stereohemija Primera 573 Izomera C i D je arbitrarno dodeljena. (Položaj metil grupe je potvrđen pomoću<1>H-NMR).
Primer 573 Izomer A: 5.1 mg, 2%, LCMS: [M+H]<+>497.10,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.28 (s, 1H), 8.50 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 7.90 (dd, J = 9.3, 2.4 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.27 (d, J = 4.8 Hz,1H), 4.39 - 4.35 (m, 1H), 3.91 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 3.69 - 3.65 (m, 6H), 3.57 - 3.55 (m, 5H), 3.44 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 2.62 (t, J = 6.3 Hz, 2H). tR = 2.06 min.
Primer 573 Isomer B: 20.2 mg, 7%, LCMS: [M+H]<+>497.10,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.30 (s, 1H), 8.51 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.90 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 9.3Hz, 1H), 4.82 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.50 (dd, J = 10.6, 3.6 Hz, 2H), 3.81 - 3.74 (m, 2H), 3.70 - 3.62 (m, 5H), 3.59 - 3.47 (m, 6H), 2.58 (t, J = 6.4 Hz, 2H), tR = 1.19 min.
Primer 573 Izomer C: 28,0 mg, 9%, LCMS: [M+H]<+>497,25,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.24 (br, 1H), 8.50 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.30 - 8.24 (m, 1H), 7.88 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.26 - 4.81 (br, 1H), 4.81 - 4.35 (m, 2H), 3.91 - 3.71 (m, 7H), 3.69 - 3.55 (m, 5H), 3.49 - 3.42 (m, 1H), 2.61 (dt, J = 11.9, 6.2 Hz, 2H). tR = 2.11 min.
Primer 573 Izomer D: 38.8 mg, 13%, LCMS: [M+H]<+>497.25,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.26 (s, 1H), 8.51 (d, J = 2.1, 1H), 8.27 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 7.90 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 9.0Hz, 1H), 5.27 (d, J = 5.1Hz, 1H), 4.39 - 4.31 (m, 2H), 3.93 (dt, J = 9.9, 4.8 Hz, 1H), 3.71 - 3.63 (m, 6H), 3.57 - 3.55 (m, 4H), 3.44 (d, J = 5,7Hz, 2H), 2.64 (t, J = 6.3 Hz, 2H). tR = 2.14 min.
Primer 574 Izomer A: 5-(((2S,5S)-5-(2-Okso-2-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etil)-tetrahidrofuran- 2-il)metoksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i
Primer 574 Izomer B: 5-(((2R,5R)-5-(2-Okso-2-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etil)-tetrahidrofuran-2-il)metoksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i
Primer 574 Izomer C: 5-(((2S,5R)-5-(2-okso-2-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il) etil)-tetrahidrofuran-2-il)metoksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i
Primer 574 Izomer D: 5-(((2R,5S)-5-(2-okso-2-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il) etil)-tetrahidrofuran-2-il)metoksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
Primer 574 Primer 574
Izomer C Izomer D
Korak 1: 2-[5-[(benziloksi)metil]oksolan-2-il]-1-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]etan-1-on
[1319] Rastvor 2-[5-[(benziloksi)metil]oksolan-2-il]sirć etne kiseline (2 g, 7.19 mmol, 1 ekviv.), HATU (3.344 g, 8.8 mmol, 1.22 ekviv.), DIPEA (5.3 mL, 32 mmol, 4.46 ekviv.) i Int-A2 (2.39 g, 8 mmol) u DMF (20 mL) je mešan 1 h na 25 °C. Reakcija je ugašena dodavanjem 150 mL vode. Dobijena smeša je isprana sa 2x150 mL DCM i 2x15 mL zasić enog vodenog rastvora natrijum hlorida. Smeša je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela (80 g) sa EtOAc/petroletrom (9/11) da bi se dobilo 2.45 g (62.34%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 465.20 [M+H]<+>
Korak 2: 2-[5-(Hidroksimetil)oksolan-2-il]-1-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]etan-1-on
[1320] Rastvor 2-[5-[(benziloksi)metil]oksolan-2-il]-1-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il] etan-1-ona (2.43 g, 5 mmol, 1 ekviv., 85%), Pd/C (0.6 g) u CH3OH (40 mL) je mešan 2 dana na 50 °C u atmosferi H2(g). Čvrste materije su filtrirane. Dobijena smeša je koncentrovana da bi se dobilo 1.73 g (64%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 375.36 [M+H]<+>
Korak 3: 5-[[5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1 -il]etil)oksolan-2-il]metoksi]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1321] Rastvor 2-[5-(hidroksimetil)oksolan-2-il]-1-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]etan-1-ona (800 mg, 2.1 mmol, 1 ekviv.), Int-A6 (3.444 g, 10.5 mmol, 5 ekviv.) i Cs2CO3(2.086 g, 6.3 mmol, 3 ekviv.) u ACN (10 mL) je mešan 5 h na 60 °C. Čvrste supstance su filtrirane i isprane sa 15 mL x 2 EtOAc, organski slojevi su kombinovani i koncentrovani. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN (1/1) da bi se dobilo 0.88 g (69.49%) 5-[[5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]etil)oksolan-2-il]metoksi]-4-(trifluoro-metil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona kao bela čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 667.25 [M+H]<+>
Korak 4: 5-(((2S, 5S)-5-(2-okso-2-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2) -il)piperazin-1-il)etil)-tetrahidro-furan-2-il)metoksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on, 5-(((2R,5R)-5-(2-)okso-2-(4-(5-(trifluorometil) pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etil)-tetrahidrofuran-2-il)metoksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on, 5-(((2S,5R)-5-(2-okso-2-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etil)-tetrahidro-furan-2-il) metoksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i 5-(((2R,S)-5-(2-okso-2-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etil)-tetrahidrofuran-2-il)metoksi)-4-(trifluorometil) piridazin-3(2H)-on.
[1322] Rastvor 5-[[5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]etil)oksolan-2-il] metoksi]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (0.86 g, 1.291 mmol) i TFA (2 mL) u DCM (8 mL) je mešan 1 h na 25 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN. Zatim je dijastereomerna smeša prečišćena Chiral-Prep-HPLC (CHIRALPAK IA-3, 0.46*5cm; 3um, MtBE (10mMNH3):EtOH=80:20, 1,0mL/min) dajući (nakon arbitrarno dodeljene stereohemije) naslova jedinjenja kao bele čvrste materije.
Primer 574 Izomer A: 17.3 mg, 10%, LCMS: 537.05 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.33 (s, 1H), 8.72 (s, 2H), 8.27 (s, 1H), 4.48 - 4.56 (m, 1H), 4.36 - 4.40 (m, 1H), 4.19 - 4.25 (m, 1H), 4.18 - 4.11 (m, 1H), 3.83 - 3.89 (m, 4H), 3.65 - 3.44 (m, 4H), 2.68 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 2.44 (t, J = 6 Hz, 1H), 2.04 - 2.10 (m, 2H), 1.84-1.71 (m, 1H), 1.55 - 1.63 (m, 1H).tR = 1.56 min.
Primer 574 Izomer B: 19.1 mg, 11%, LCMS (ESI, m/z): 537.05 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.29 (s, 1H), 8.73 (s, 2H), 8.25 (s, 1H), 4.47 - 4.34 (m, 2H), 4.25 - 4.31 (m, 2H), 3.95 - 3.68 (m, 3H), 3.65 - 3.45 (m, 4H), 2.73 (dd, J = 15.1, 6.6 Hz, 1H), 2.52 - 2.43 (m, 1H), 2.18 - 2.00 (m, 1H), 1.68 - 1.77 (m, 1H), 1.54 - 1.64 (m, 1H). tR = 2.06 min.
Primer 574 Izomer C: 15.6 mg, 9%, LCMS (ESI, m/z): 537.05 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.30 (s, 1H), 8.73 (s, 2H), 8.25 (s, 1H), 4.47 - 4.34 (m, 2H), 4.25 - 4.31 (m, 2H), 3.94 - 3.78 (m, 4H), 3.81 - 3.68 (m, 4H), 2.73 (dd, J= 15.1, 6.6 Hz, 1H), 2.52 - 2.43 (m, 1H), 2.16 - 2.00 (m, 2H), 1.68 - 1.77 (m, 1H), 1.66 - 1.54 (m, 1H). tR = 3.79 min.
Primer 574 Izomer D: 19.1 mg, 11%, LCMS (ESI, m/z): 537.05 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.33 (s, 1H), 8.72 (s, 2H), 8.27 (s, 1H), 4.38 (dd, J = 10.6, 5.2 Hz, 1H), 4.17 - 4.25 (m, 1H), 4.12 - 4.17 (m, 1H), 3.91 - 3.67 (m, 4H), 3.66 - 3.45 (m, 4H), 2.66 - 2.74 (m, 1H), 2.44 (dd, J = 15.2, 6.1 Hz, 1H), 2.13 - 1.92 (m, 2H), 1.82 - 1.73 (m, 1H), 1.55 - 1.63 (m, 1H). tR = 4.41 min.
Primer 575 Izomer A: 4-Hloro-5-(((2S,5S)-5-(2-okso-2-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il) piperazin-1-il)etil )-tetrahidrofuran-2-il)metoksi)piridazin-3(2H)-on i
Primer 575 Izomer B: 4-Hloro-5-(((2R,5R)-5-(2-okso-2-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il) piperazin-1-il)etil )-tetrahidrofuran-2-il)metoksi)piridazin-3(2H)-on i
Primer 575 Izomer C: 4-Hloro-5-(((2S,5R)-5-(2-okso-2-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il) piperazin-1-il)etil )-tetrahidrofuran-2-il)metoksi)piridazin-3(2H)-on i
Primer 575 Izomer D: 4-Hloro-5-(((27?,55)-5-(2-okso-2-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il) piperazin-1-il) etil)-tetrahidrofuran-2-il)metoksi)piridazin-3(2H)-on
Izomer C Izomer D
Korak 1: 4-hloro-5-((5-(2-okso-2-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etil)-tetrahidrofuran-2-il) metoksi)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridazin-3(2H)-on
[1323] Rastvor 2-[5-(hidroksimetil)oksolan-2-il]-1-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il] etana-1-ona (900 mg, 2.40 mmol, 1 ekv.), NaH (115.4 mg, 4.81 mmol, 2 ekviv.), Int-A7 (2.1 g, 7.11 mmol, 2.96 ekviv.) u ACN (15 mL) je mešan 1 h na 60 °C. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/heksan etrom (2:1) da bi se dobilo 920 mg (60.44%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 633 [M+H]<+>
Korak 2: 4-hloro-5-(((2S,5S)-5-(2-okso-2-(4-(5-(trifluorometil)))pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etil)-tetra-hidrofuran-2-il)metoksi)piridazin-3(2H)-on, 4-hloro-5-(((2R,5R)-5-(2-okso-2-(4-(5-(trifluorometil) pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etil)-tetrahidrofuran-2-il)metoksi)piridazin-3(2H)-on, 4-hloro-5-(((2S,5R)-5-(2-okso-2-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etil)-tetrahidrofuran-2-il)metoksi) piridazin-3(2H)-on i 4-hloro-5-(((2R,5S)-5-(2-okso-2-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)etil)-tetra-hidrofuran-2-il)metoksi)piridazin-3(2H)-on
[1324] Rastvor 4-hloro-5-[[5-(2-okso-2-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]etil)oksolan- 2-il]metoksi]-2[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (570 mg, 0.90 mmol, 1 ekviv.), TFA (4 mL) u DCM (20 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN. Zatim je ostatak prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (CHIRALPAK IA-3,0.46*5cm;3um, (Hex:DCM=3:1) (0.1%DEA):EtOH=50:50, 1.0 mL/min) da se (nakon arbitrarnog dodeljene stereohemije) dobiju jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance.
Primer 575 Izomer A: 14.8 mg, 3.27%, LCMS (ESI, m/z): 503.30 [M+H]<+>,<1>HNMR (metanol-d4, 300 MHz) δ: 8.58 (d, J= 0.8 Hz, 2H), 8.18 (s, 1H), 4.55 - 4.51 (m, 1H), 4.39 - 4.33 (m, 3H), 4.09 - 3.91 (m, 2H), 3.86 - 3.74 (m, 4H), 3.61 - 3.56 (m, 2H), 2.82 (dd, J = 14.7, 8.0 Hz, 1H), 2.59 (dd, J = 14.7, 4.6 Hz, 1H), 2.28 - 2.08 (m, 2H), 2.11 -1.92 (m, 1H), 1.90 - 1.75 (m, 1H). tR = 2.199 min.
Primer 575 Izomer B: 11.4 mg, 2.52%, LCMS (ESI, m/z): 503.10 [M+H]<+>,<1>HNMR (metanol-d4, 300 MHz) δ: 8.60 (d, J = 0.9 Hz, 2H), 8.16 (s, 1H), 4.52 - 4.28 (m, 4H), 4.19 - 3.91 (m, 2H),, 3.96 - 3.73 (m, 4H), 3.71 - 3.51 (m, 2H), 2.84 (dd, J = 14.4, 7.9 Hz, 1H), 2.59 (dd, J = 14.4, 4.5 Hz, 1H), 2.36 - 2.13 (m, 2H), 2.01 - 1.80 (m, 1H), 1.83 -1.68 (m, 1H). tR = 4.243 min.
Primer 575 Izomer C: 31.9 mg, 7.05%, LCMS (ESI, m/z): 503.10 [M+H]<+>,<1>HNMR (metanol-d4, 300 MHz) δ: 8.58 (d, J = 0.8 Hz, 2H), 8.18 (s, 1H), 4.58 - 4.47 (m, 1H), 4.39 - 4.33 (m, 3H), 4.09 - 3.91 (m, 2H), 3.86 - 3.74 (m, 4H), 3.61 - 3.56 (m, 2H), 2.82 (dd, J = 14.7, 8.0 Hz, 1H), 2.59 (dd, J = 14.7, 4.6 Hz, 1H), 2.28 - 2.05 (m, 2H), 2.10 - 1.92 (m, 1H), 1.90 – 1.75 (m, 1H). tR = 5.652 min.
Primer 575 Izomer D: 13,5 mg, 2,98%, LCMS (ESI, m/z): 503,10 [M+H]<+>, 1HNMR (metanol-d4, 300 MHz) δ: 8.60 (d, J = 0.9 Hz, 2H), 8.16 (s, 1H), 4.52 - 4.28 (m, 4H), 4.19 - 3.91 (m, 2H),, 3.96 - 3.73 (m, 4H), 3.71 - 3.51 (m, 2H), 2.84 (dd, J = 14.4, 7.9 Hz, 1H), 2.59 (dd, J = 14.4, 4.5 Hz, 1H), 2.36 - 2.13 (m, 2H), 2.01 - 1.80 (m, 1H), 1.83 -1.68 (m, 1H). tR = 8.327 min.
Primer 576 Izomer A: 6-[4-[(3R)-3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] oksi]propoksi] butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i
Primer 576 Izomer B: 6-[4-[(3S)-3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)- 1, 6-dihidropiridazin-4-il] oksi]propoksi]butanoil] piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
Izomer A Izomer B
Korak 1: (E)-6-[4-[But-2-enoil]piperazin-1-il] piridin-3-karbonitril
[1325] Rastvor (2E)-but-2-enoil (E)-but-2-enoata (1.05 g, 6.81 mmol, 1.30 ekviv.), TEA (1.515 g), Int-A4 (1 g, 5.31 mmol, 1.00 ekviv.) u DCM (20 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela sa EtOAc/petroletrom (1/1) da bi se dobilo 1.28 g (94%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 257.33 [M+H]<+>
Korak 2: (S)-6-(4-[3-[2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[ 2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1326] Rastvor (E)-6-[ 4-[but-2-enoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril (3 g, 11.70 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(7.6 g) u (S)-propan-1,2-diolu (10 mL) je mešan 3 dana na 80 °C. Čvrste materije su filtrirane. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 800 mg (20.56%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 333.27[M+H]<+>
Korak 3: (S)-6-(4-[3-[2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[ 2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-1,6-dihidro-piridazin-4-il]oksi]propoksi]butanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1327] Rastvor (S)-6-( 4-[3-[2-hidroksipropoksi]butanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril (800 mg, 2.41 mmol, 1 ekviv.), Int-A6 (8 g, 24.33 mmol, 10,11 ekviv.), Cs2CO3( 1.6 g, 4.91 mmol, 2.04 ekviv.) u ACN (40 mL) je mešano 5 h na 70 °C. Čvrste materije su filtrirane. Rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroletrom da bi se dobilo 300 mg (19,95%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS (ESI, m/z): 625.34[M+H]<+>
Korak 4: 6-[4-[(3R)-3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi] butanoil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril i 6-[4-[(3S)-3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi] butanoil]piperazin-1 il]piridin-3-karbonitril
[1328] Rastvor (S)-6-(4-[3-[2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidro-piridazin-4il]oksi]propoksi]butanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila (300 mg, 0.48 mmol, 1 ekviv.) u TFA (1 mL) i DCM (5 mL) je mešan 1 h na 25 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN. Zatim je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (CHIRALPAK IE, 2*25cm, 5um; Hex(0.1%DEA):EtOH=50:50, 1.0mL/min) da se dobiju jedinjenja iz naslova kao bele čvrste materije.
Primer 576 Izomer A: 13.8 mg, 5.81%, LCMS (ESI, m/z): 495.15 [M+H]<+>,<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 13.19 (s, 1 H), 8.50 (d, J = 4.0 Hz, 1 H), 8.26 (s, 1 H), 7.90 - 7.86 (dd, J = 2.0, 12.4 Hz, 1 H), 6.92 (d, J = 12.0 Hz, 1 H), 5.11-5.10 (m, 1 H), 3.89 - 3.83 (m, 1 H), 3.69 - 3.48 (m, 10 H), 2.66 - 2.64(m, 1 H), 2.35 - 2.28(m, 1 H), 1.25 (d, J = 12.4 Hz, 3 H), 1.12(d, J = 12.4 Hz, 3 H). tR = 1.486 min.
Primer 576 Izomer B: 12.3 mg, 5.18%, LCMS (ESI, m/z): 495.15 [M+H]<+>, tR = 2.479 min.
Primer 577 Izomer A: 4-hloro-5-[[(2S)-1-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-okso-propoksi]propan-2-il]oksi]-2,3-dihidropiridazin-3-on i
Primer 577 Izomer B: 4-hloro-5-[(2S)-2-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-okso-propoksi] propoksi]-2,3-dihidropiridazin-3-on
Korak 1: (S)-1-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-(2-hidroksipropoksi)propan-1-on i (S)-1-(4 -(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-(1-hidroksipropan-2-iloksi)propan-1-on
[1329] Rastvor 1-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (1.2 g, 4.75 mmol, 1 ekviv.), (2S)-propan-1,2-diol (1806.8 mg, 23.74 mmol, 5 ekviv.) , Cs2CO3(3094.5 mg, 9.50 mmol, 2 ekviv.) u CH3CN (20 mL) je mešan 2 dana na 75 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 650 mg (41.63%) smeše jedinjenja iz naslova u obliku smeđeg ulja. LCMS (ESI, m/z): 329.00 [M+H]<+>
Korak 2: Smeša (S)-4-hloro-5-(1-(3-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)propan-2-il-oksi)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridazin-3(2H)-ona i (S)-4-hloro-5-(2-(3-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin- 1-il)-3-oksopropoksi)propoksi)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridazin-3(2H)-ona
[1330] Rastvor smeše (S)-1-(4-(5) -hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-(2-hidroksipropoksi)propan-1-ona i (S)-1-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-(1-hidroksipropan-2-iloksi)propan-1-ona (630 mg, 1.92 mmol, 1 ekviv.), Int-A7 (1.7 g, 5.76 mmol, 3.01 ekviv.), Cs2CO3(1.2 g, 3.83 ekviv.) mmol, 2 ekviv.) u ACN (15 mL) je mešan 2 dana na 80 °C. Ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (1:1) da bi se dobilo 480 mg (42.64%) jedinjenja iz naslova u obliku smeđeg ulja. LCMS (ESI, m/z): 588.00 [M+H]<+>
Korak 3: Smeša 4-hloro-5-[[(2S)-1-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il) piperazin-1-il]-3-oksopropoksi] propan-2-il]oksi]-2,3-dihidropiridazin-3-ona i 4-hloro-5-[(2S)-2-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi] propoksi]-2,3-dihidropiridazin-3-ona
[1331] Smeša (S)-4-hloro-5-(1-(3-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)propan-2-il-oksi)-2-((2-(trimetilsilil) etoksi)metil) piridazin-3(2H)-ona i (S)-4-hloro-5-(2-( 3-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)propoksi)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridazin-3(2H)-ona (470 mg, 0.80 mmol, 1 ekviv.), TFA (2 mL) i DCM (10 mL) je mešana 0.5 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC da se dobiju jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance.
Primer 577 Izomer A: 54.2 mg, 14.82%, LCMS (ESI, m/z): 457.15 [M+H]<+>,<1>HNMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.32 (d, J = 2.7 Hz, 2H), 8.16 (s, 1H), 5.02 (qd, J= 6.5, 3.3 Hz, 1H), 3.93 - 3.69 (m, 6H), 3.74 - 3.53 (m, 6H), 2.66 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 1.37 (s, 3H).
Primer 577 Izomer B: 30.1 mg, 8.23%, LCMS (ESI, m/z): 457.15 [M+H]<+>,<1>HNMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.32 (d, J= 1.5 Hz, 2H), 8.15 (s, 1H), 4.46 - 4.22 (m, 2H), 4.02 - 3.86 (m, 2H), 3.91 - 3.74 (m, 5H), 3.66 (dt, J= 7.3, 3.3 Hz, 4H), 2.68 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 1.28 (dd, J = 76.8, 6.0 Hz, 3H).
Primer 578 Izomer A: (S)-4-Hloro-5-(1-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il) propoksi) propan- 2-iloksi)piridazin-3(2H)-on i
Primer 578 Izomer B: (S)-4-Hloro-5-(2-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propoksi)piridazin-3(2H) )-on
Korak 1: (S)-3-(2-hidroksipropoksi)-1-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propan-1-on i (S) -3-(1-hidroksipropan-2-iloksi)-1-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propan-1-on
[1332] Rastvor 1-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (1.2 g, 4.19 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(2.7 g, 8.29 mmol, 1.98 ekviv.), (2S)-propan-1,2-diol (1.6 g, 21.03 mmol, 5.02 ekviv.) u ACN (20 mL) je mešan 9 h na 75 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 1.1 g (71.42%) smeše jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 363.16 [M+H]<+>
Korak 2: Smeša (S)-4-hloro-5-(1-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il) propoksi) propan-2-iloksi)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridazin-3(2H)-ona i (S)-4-hloro-5-(2-(3-okso-3-(4-(5-)) (trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propoksi)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil) piridazin-3(2H)-ona
[1333] Rastvor mešavine (S)-3-(2-hidroksipropoksi)-1-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propan-1-ona i (S)-3-(1- hidroksipropan-2-iloksi)-1-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propan-1-ona (700 mg, 1.93 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(1255.7 mg, 3.86 mmol, 2 ekviv.), Int-A7 (1711.0 mg, 5.80 mmol, 3 ekviv.) u ACN (15 mL) je mešan 28 h na 80 °C. Čvrste materije su filtrirane, dobijeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 60 mL) i organski slojevi su kombinovani. Rastvor je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/heksanom (2:1) da bi se dobilo 670 mg (55.84%) smeše jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 621.22 [M+H]<+>
Korak 3: Smeša (S)-4-hloro-5-(1-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)) pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi) propan-2-iloksi)piridazin-3(2H)-ona i (S)-4-hloro-5-(2-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il) piperazin-1-il)propoksi)propoksi)piridazin-3(2H)-ona
[1334] Rastvor mešavine (S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi) propan-2-il]oksi]-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona i (S)-4-hloro-5-(2-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propoksi)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil) piridazin-3(2H)-ona (480 mg, 0.77 mmol, 1 ekviv.), TFA (2 mL) u DCM (10 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN. Zatim je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (CHIRALPAK IA-3, 0.46∗10cm; 5um, MtBE(10mMNH3):EtOH=80:20, 1.0mL/min) da se dobiju jedinjenja iz naslova kao bela čvrste materije.
Primer 578 Izomer A: 84.6 mg, 22.30%, LCMS (ESI, m/z): 491.20[M+H]<+>,<1>HNMR (metanol-d4, 300 MHz) δ: 8.60 (d, J = 0.9 Hz, 2H), 8.16 (s, 1H), 5.08-5.00 (m, 1H), 3.94 - 3.91 (m, 4H), 3.89 - 3.82 (m, 2H), 3.80 - 3.62 (m, 6), 2.67 (t, J= 5.9 Hz, 2H), 1.38 (d, J= 6.3 Hz, 3H). tR = 2.125 min.
Primer 578 Izomer B: 51.5 mg, 13.58%, LCMS (ESI, m/z): 491.05 [M+H]<+>,<1>H NMR (metanol-d4, 300 MHz) δ: 8.60 (d, J= 0.8 Hz, 2H), 8.15 (s, 1H), 4.41 - 4.29 (m, 2H), 3.98 - 3.80 (m, 7H), 3.70 - 3.67 (m, 4H), 2.69 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 1.28 ( d, J= 6.4 Hz, 3H). tR = 3.775 min.
Primer 579: 2-(4-[3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi] propanoil]piperazin-1- il)pirimidin-5-karbonitril
Korak 1: 2-[4-(Prop-2-enoil)piperazin-1-il]pirimidin-5-karbonitril
[1335] Rastvor Int-A1 (6.4 g, 33.82 mmol, 1 ekviv.), prop-2-enoil prop-2-enoata (5.1 g, 40.44 mmol, 1.20 ekviv.) i TEA (6.8 g, 67.20 mmol, 1.99 ekviv.) u DCM (40 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (7:3) da bi se dobilo 3.6 g (43.75%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 244.12 [M+H]<+>.
Korak 2: 2-(4-[3-[(2S)-2-hidroksipropoksi]propanoil]piperazin-1-il)pirimidin-5-karbonitril
[1336] Rastvor 2-[4-(prop-2-enoil)piperazin-1-il]pirimidin-5-karbonitrila (1 g, 4.11 mmol, 1 ekviv.), (2S)-propan-1,2-diola (0.3 g, 3.94 mmol, 0.96 ekviv.) i Cs2CO3(2.7 g, 8.29 mmol, 2.02 ekviv.) u ACN (10 mL) je mešan 1 h na 80 °C u uljanom kupatilu. Čvrste supstance su filtrirane i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (3:2) da bi se dobilo 594 mg (45.25%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 320,16 [M+H]<+>.
Korak 3: (S)-2-(4-(3-(2-((6-okso-5-(trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1), 6-dihidropiridazin-4-il)oksi)propoksi)propanoil)piperazin-1-il)pirimidin-5-karbonitril
[1337] Rastvor metil 2-(4-[3-[(2S)-2-hidroksipropoksi]propanoil]piperazin-1-il)pirimidin-5-karbonitrila (674 mg, 2.11 mmol, 1 ekviv.), Int-A6 (1.4 g, 4.22 mmol, 2.00 ekviv.) i Cs2CO3(2.1 g, 6.33 mmol, 3.00 mmol) (10 mL). Dobijeni rastvor je mešan 1 h na 60 °C u uljanom kupatilu, zatim je čvrsta supstanca filtrirana i rezultujući rastvor je koncentrovan pod vakuumom, zatim je ostatak nanesen na kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (3:1) da se dobije 144 mg (11.15%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 612.25 [M+H]<+>.
Korak 4: 2-(4-[3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1, 6-dihidropiridazin-4-il]oksi]propoksi]propanoil] piperazin-1-il)pirimidin-5-karbonitril
[1338] Rastvor 2-(4-[3-[(2S)-2-[[6-] okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidro-piridazin-4-il]oksi]propoksi]propanoil]piperazin-1-il)pirimidin-5-karbonitrila (144 mg, 0.24 mmol, 1 ekviv.) i TFA (2 mL) u DCM (10 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (27.9 mg, 24.62%) u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 482.05 [M+H]<+>,<1>H NMR (CD3OD-d4, 300 MHz) δ 8.63 (s, 2H), 8.23 (s, 1H), 5.18-5.08 (m, 1H), 3.95 - 3.90 (m, 4H), 3.87 - 3.80 (m, 1H), 3.78 -3.70 (m, 1H), 3.69 - 3.56 (m, 6H), 2.66 (t, J= 5.9 Hz, 2H), 1.36 (d, J= 6.3 Hz, 3H).
Primer 580 Izomer A: 6-(4-[2-[(2S,5S)-5-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] oksi] metil)oksolan -2-il] acetil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i
Primer 580 Izomer B: 6-(4-[2-[(2R,SR)-5-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] oksi] metil)oksolan -2-il] acetil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i
Primer 580 Izomer C: 6-(4-[2-[(2R,5S)-5-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] oksi] metil)oksolan -2-il] acetil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i
Primer 580 Izomer D: 6-(4-[2-[(2S,SR)-5-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] oksi]metil)oksolan-2-il]acetil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
Korak 1: 1-(benziloksi)heks-5-en-2-ol
[1339] U rastvor bromo(prop-2-en-1-il) magnezijuma (27.4 mL, 1.50 ekviv.) u THF (20 mL) je u kapima pod azotom dodat 2-[(benziloksi)metil]oksiran (3 g, 18.27 mmol), 1.00 ekviv.) na -40 °C, a zatim je dobijeni rastvor mešan 1 h na -40 °C. Dobijeni rastvor je ugašen sa 100 mL vodenog rastvora NH4Cl i ekstrahovan sa 3 x 100 mL EtOAc. Organski slojevi su kombinovani, isprani sa 1x100 mL slanog rastvora, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom, a zatim je ostatak nanesen na kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petrol etrom (1:5) da bi se dobilo 2.16 g (57%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS (ESI, m/z): 207.13 [M+H]<+>.
Korak 2: Metil (2Z)-7-(benziloksi)-6-hidroksihept-2-enoat
[1340] Rastvor 1-(benziloksi)heks-5-en-2-ola (2 g, 9.70 mmol , 1.00 ekviv.), metil prop-2-enoata (4.17 g, 48.44 mmol, 5.00 ekviv.) i Grabsov katalizator 2. generacije (82 mg, 0.01 ekviv.) u DCM (25 mL) je mešan 4 h na 40 °C pod azotom. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 1.4 g (55%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 265.14 [M+H]<+>.
Korak 3: Metil 2-[5-[(benziloksi)metil]oksolan-2-il]acetat
[1341] Rastvor metil (2Z)-7-(benziloksi)-6-hidroksihept-2-enoata (46 g, 1 ekviv.) i NaH (0.7 g, 0.1 ekviv.) u THF (200 mL) je mešan 12 h na 25 °C. Dobijeni rastvor je ugašen sa 200 mL vode, ekstrahovan sa 3 x 200 mL DCM, a organski slojevi su kombinovani i isprani sa 1x100 mL slanog rastvora, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom da se dobije 46 g naslovnog jedinjenja kao smeđe ulje. LCMS (ESI, m/z): 265.14 [M+H]<+>
Korak 4: 2-[5-[(benziloksi)metil]oksolan-2-il]sićetna kiselina
[1342] Rastvor metil 2-[5-[(benziloksi)metil]oksolan-2-il]acetata (46 g, 174.03 mmol, 1 ekviv.) i LiOH.H2O (14.6 mg, 0.35 mmol, 2 ekviv.) u THF (200 mL) i H2O (200 mL) je mešan 2 h na 25 °C. Dobijeni rastvor je ispran sa 1 x 200 ml DCM, vodeni slojevi su kombinovani i pH vrednost vodenog sloja je podešena na 4 sa HCl (1 M). Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 1x200 mL EtOH, a organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 40 g (91.83%) jedinjenja iz naslova kao svetlo žuto ulje. LCMS (ESI, m/z): 251.12 [M+H]<+>.
Korak 5: Sinteza 6-[4-(2-[5-[(benziloksi)metil]oksolan-2-il]acetil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila
[1343] Rastvor 2-[ 5-[(benziloksi)metil]oksolan-2-il]sićetne kiseline (1 g, 4.00 mmol, 1.00 ekviv.), Int-A4 (752 mg, 4.00 mmol, 1.00 ekviv.), HATU (1.52 g, 4.00 mmol, 1.00 ekviv.) i DIPEA (1.55 g, 11.99 mmol, 3.00 ekviv.) u DMF-u (10 mL) je mešan 1 h na ST. Dobijeni rastvor je razblažen sa 50 mL EtOAc i ispran sa 3x40 mL H2O. Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom, a ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (6:4) da bi se dobilo 1.28 g (76%) jedinjenja iz naslova kao smeđe ulje. LCMS (ESI, m/z): 421.22 [M+H]<+>.
Korak 6: 6-(4-[2-[-5-(Hidroksimetil)oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1344] U rastvor 6-[4-( 2-[5-[(benziloksi)metil]oksolan-2-il]acetil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril (1.28 g, 3.04 mmol, 1.00 ekviv.) u DCM (120 mL) je dodat BCl3/DCM (9.1 mL, 1M) u kapima, a zatim je dobijeni rastvor mešan 20 min na 0 °C. Rastvor je ugašen sa 10 mL MeOH i koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 600 mg (60%) jedinjenja iz naslova u obliku svetlo žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 331.17 [M+H]<+>.
Korak 7: 6-(4-[2-[5-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il ] oksi]metil)oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1345] Rastvor 6-(4-[2-[5-(hidroksimetil)oksolan-2-il] acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila (160 mg, 1.00 ekviv.), Int-A6 (480 mg, 3.00 ekviv.) i Cs2CO3(480 mg, 3.00 ekviv.) u ACN (8 mL) je mešan 1 h na 80 °C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 30 mL EtOAc, ispran sa 2 x 20 ml H2O i 20 ml slanog rastvora. Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom, a zatim je ostatak nanesen na kolonu silika gela i eluiran sa EtOAc da bi se dobilo 120 mg jedinjenja iz naslova u obliku smeđe čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 623.25 [M+H]<+>
Korak 8: 6-(4-[2-[(2S,5S)-5-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1 ,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]metil)oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i 6-(4-[2-[(2R,5R)-5-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidro-piridazin-4-il]oksi]metil)oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i 6-(4-[2-[(2R,5S)-5-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]metil)oksolan-2-il]acetil]piperazin- 1-il)piridin-3-karbonitril i 6-(4-[2-[(2S,5R)-5-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1, 6-dihidropiridazin-4-il]oksi]metil) oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1346] Rastvor 6-(4-[2-[5-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidro-piridazin-4-il]oksi]metil)oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila (730 mg, 1.17 mmol, 1 ekviv.) i TFA (1.25 mL) u DCM (5 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je rastvoren u NH3(gas)/MeOH (2 mL, 7 M) i mešan 20 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiran sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (CHIRALAPK ID-3, 0.46∗10 cm; 3um, MtBE(0.2%IPAmin):EtOH=70:30, 1.0mL/min) da se (nakon arbitrarnog dodeljene stereohemije) dobije jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca.
Primer 580 Izomer A: 69 mg, 16.43%, LCMS (ESI, m/z): 493.10 [M+H]<+>,<1>H NMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ 8.41 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.77 (dd, J= 9.0, 2.1 Hz, 1H), 6.85 (dd, J= 9.0, 0.6 Hz, 1H), 4.57 (dd, J= 10.5, 3.0 Hz, 1H), 4.394.25 (m, 3H), 3.80-3.62 (m, 8H), 2.81 (dd, J = 15.0, 7.8 Hz, 1H), 2.61 (dd, J = 15.0, 4.8 Hz, 1H), 2.17-2.10 (m, 2H), 1.94-1.89 (m, 1H), 1.81-1.66 (m, 1H). tR = 2.526 min.
Primer 580 Izomer B: 45.4 mg, 10.81%, LCMS (ESI, m/z): 493.10 [M+H]<+>,<1>H NMR 8.43 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 6.88 (dd, J = 9.0, 0.6 Hz, 1H), 4.48-4.37 (m, 4H), 3.81-3.62 (m, 8H), 2.86 (dd, J = 14.4, 7.8 Hz, 1H), 2.61 (dd, J = 14.7, 4.8 Hz, 1H), 2.30-2.19 (m, 2H), 1.94-1.82 (m, 1H), 1.81-1.69 (m, 1H). tR = 4.043 min.
Primer 580 Izomer C: 49 mg, 11.67%, LCMS (ESI, m/z): 493.10 [M+H]<+>,<1>H NMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ 8.41 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.77 (dd, J = 9.0, 2.1 Hz, 1H), 6.85 (dd, J= 9.3, 0.8 Hz, 1H), 4.58 (dd, J= 10.8, 3.0 Hz, 1H), 4.43-4.26 (m, 3H), 3.80-3.62 (m, 8H), 2.81 (dd, J= 15.0, 7.8 Hz, 1H), 2.61 (dd, J= 15.0, 4.8 Hz, 1H), 2.17-2.08 (m, 2H), 1.98-1.94 (m, 1H), 1.77-1.73 (m, 1H). tR = 3.168 min.
Primer 580 Izomer D: 55.5 mg, 13.21%, (ESI, m/z): 493.10 [M+H]<+>,<1>H NMR (Metanol-d4, 300 MHz) δ 8.43 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.79 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 6.88 (d, J =9.3, 0.8 Hz, 1H), 4.48-4.38 (m, 4H), 3.85-3.62 (m, 8H), 2.86 (dd, J = 14.7, 7.8 Hz, 1H), 2.61 (dd, J = 14.7, 4.8 Hz, 1H), 2.24-2.19 (m, 2H), 1.95-1.85 (m, 1H), 1.78-1.69 (m, 1H). tR = 4.930 min.
Primer 581 Izomer A: 6-(4-[2-[(2R,5S)-5-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] amino] metil)oksolan -2-il] acetil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i
Primer 581 Izomer B: 6-(4-[2-[(2S,5S)-5-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] amino]metil)oksolan -2-il] acetil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i
Primer 581 Izomer C: 6-(4-[2-[(2R,5R)-5-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] amino]metil)oksolan -2-il] acetil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i
Primer 581 Izomer D: 6-(4-[2-[(2S,5R)-5-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] amino]metil)oksolan -2-il] acetil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
Izomer C Izomer D
Korak 1: (5-[2-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]oksolan-2-il)metil metansulfonat
[1347] Rastvor 6-(4-[2-[5-(hidroksimetil)oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila (1.5 g, 4.54 mmol, 1 ekv.), TEA (0.9 g, 8.89 mmol, 1.96 ekviv.), Ms2O (0.95 g) u DCM (20 mL) je mešan 5 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je razblažen sa 20 mL vode i ekstrahovan sa 3x20 mL DCM. Organski slojevi su kombinovani i osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 2.3 g (sirovog) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 409.15 [M+H]<+>
Korak 2: 6-(4-[2-[5-(Azidometil)oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3 -karbonitril
[1348] Rastvor (5-[2-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]oksolan-2-il)metil metansulfonata (1.85 g, 4.53 mmol, 1 ekviv.), NaN3(442 mg, 6.80 mmol, 1.50 ekviv.) u DMF-u (20 mL) je mešan 2 h na 90 °C. Reakcija je zatim ugašena dodatkom 20 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3x30 mL EtOAc, i organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 1.8 g (sirovog) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 356.18 [M+H]<+>
Korak 3: 6-(4-[2-[5-(Aminometil)oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3 -karbonitril
[1349] Rastvor 6-(4-[2-[5-(azidometil)oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila (1.6 g, 4.50 mmol, 1 ekviv.), trifenilfosfina (1.4 g, 5.34 mmol, 1.19 ekviv.) u THF (20 mL) i H2O (5 mL) je mešan 3 h na 80 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 1.1 g (74.18%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS (ESI, m/z): 330.19 [M+H]<+>
Korak 4: 6-(4-[2-[-5-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-) (trimetilsilil)etoksi]metil]-1, 6-dihidropiridazin-4-ilamino]metil)oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1350] Rastvor 6-(4-[2-[5-(aminometil)oksolana -2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila (400 mg, 1.21 mmol, 1 ekviv.), TEA (242.4 mg, 2.40 mmol, 1.97 ekviv.) i Int-A6 (434 mg, 1.32) mmol, 1.09 ekviv.) u EtOH (20 mL) je mešan 2 h na 80 °C. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (1/1) da bi se dobilo 800 mg jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 622.27 [M+H]<+>
Korak 5: 6-(4-[2-[(2R,5S)-5-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]metil)oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril, 6-(4-[2-[(2S,5S)-5-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-di-hidropiridazin-4-il]amino]metil)oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril,6-(4-[2-[(2R,5R)-5-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]metil)oksolan-2-il]acetil] piperazin-1-il) piridin-3-karbonitril i 6-(4-[2-[(2S,5R)-5-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidro-piridazin-4-il]amino] metil)oksolan-2-il]acetil]piperazin- 1-il)piridin-3-karbonitril
[1351] Rastvor 6-(4-[2-[5-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidro-piridazin-4-il]amino]metil)oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril (800 mg, 1,29 mmol, 1 ekviv.), TFA (1 mL) u DCM (10 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN. Zatim je ostatak dalje pročišćen Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (Repaired IC, 0.46*10 cm; 3um, (Hex:DCM=1:1) (0.1%DEA):EtOH=50:50, 1.0mL/ min) da se (nakon arbitrarno dodeljene stereohemije) dobiju jedinjenja iz naslova kao bele čvrste supstance.
Primer 581 Izomer A: 27.4 mg, 4.33%, LCMS (ESI, m/z): 491.47 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 12.35 (s, 1H), 8.48 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 7.91 - 7.80 (m, 2H), 6.92 - 6.89 (m, 2H), 4.24 (q, J= 6.4 Hz, 1H), 4.08 (t, J= 5.9 Hz, 1H), 3.69 - 3.32 (m, 10H), 2.87-2.65 (m, 1H), 2.51- 2.42 (m, 1H), 2.02 (m, 2H), 1.69 - 1.45 (m, 2H). tR = 3.364 min.
Primer 581 Izomer B: 24.7 mg, 3.91%, LCMS (ESI, m/z): 491.47 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 12.35 (s, 1H), 8.49 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.94 - 7.81 (m, 2H), 6.90 (d, J = 9.1 Hz, 2H), 4.17 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 4.02 - 3.92 (m, 1H), 3.69 - 3.36 (m, 10H), 2.59 (dd, J = 15.4, 6.6 Hz, 1H), 2.38 (dd, J = 15.4, 6.2 Hz, 1H), 2.00 - 1.80 (m, 2H), 1.66 (dt, J = 12.3, 5.5 Hz, 1H), 1.50 (s, 1H). tR = 4.177 min.
Primer 581 Izomer C: 33.6 mg, 5.31%, LCMS (ESI, m/z): 491.47 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 12.42 (s, 1H), 8.52 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.97 - 7.85 (m, 2H), 6.93 (d, J = 9.1 Hz, 2H), 4.19 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 4.00 (s, 1H), 3.67 - 3.34 (m, 10H), 2.62 (dd, J = 15.5, 6.5 Hz, 1H), 2.41 (dd, J = 15.3, 6.1 Hz, 1H), 2.01 - 1.90 (m, 2H), 1.71 (s,1H), 1.53 (s, 1H). tR = 7.477 min.
Primer 581 Izomer D: 39.6 mg, 6.26%, LCMS (ESI, m/z): 491.47 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 12.39 (s, 1H), 8.51 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.95 - 7.83 (m, 2H), 6.93 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 4.26 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 4.16 - 4.07 (m, 1H), 3.67 -3.34 (m, 10H), 2.69 (dd, J = 15.1, 6.5 Hz, 1H), 2.45 (dd, J = 15.0, 6.3 Hz, 1H), 2.11 -2.00 (m, 2H), 1.65-1.54 (m, 2H). tR = 10.970 min.
Primer 582 Izomer A: 6-(4-[2-[(2S,SS)-5-[[(5-Hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi]metil] oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i
Primer 582 Izomer B: 6-(4-[2-[(2R,5R)-5-[[(5-Hloro-6-okso-)1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi] metil] oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il) piridin-3-karbonitril i
Primer 582 Izomer C: 6-(4-[2-[( 2R,SS)-5-[[(5-Hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi]metil] oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3- karbonitril i
Primer 582 Izomer D: 6-(4-[2-[(2S,5R)-5-[[(5-Hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi]metil] oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
Korak 1: 6-[4-[2-(5-[[(5-hloro-6-okso-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il) oksi] metil]oksolan-2-il)acetil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1352] Rastvor Int-A7 (1.3 g, 4.5 mmol, 3 ekviv.), 6-(4-[2-[5-(hidroksimetil)oksolan-2-il]acetil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila (500 mg, 1.5 mmol, 1 ekviv.), NaH (121 mg, 3.0 mmol, 2 ekviv., 60%) u ACN (10 mL) je mešan 1 h na 40 °C. Dobijena smeša je koncentrovana a ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (1:1) da bi se dobilo 420 mg (47.10%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 589.24 [M+H]<+>
Korak 2: 6-(4-[2-[(2S,5S)-5-[[(5-hloro-6-okso-1,6)-dihidropiridazin-4-il)oksi]metilJoksolan-2-il] acetil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril, 6-(4-[2-[(2R,5R)-5-[[(55)-hloro-6-okso-1,6-dihidro-piridazin-4-il)oksi]metil]oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril, 6-(4-[2-[(2R,5S)-5-[[(5-hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi]metil]oksolan-2-il]acetil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i 6-(4-[2-[(2S, 5R)-5-[[(5-hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il) oksi]metil]oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il) piridin-3-karbonitril
[1353] Rastvor 6-[4-[2-(5-[[(5-hloro-6-okso)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il) oksi]metil]oksolan-2-il)acetil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila (410 mg, 0.70 mmol, 1 ekviv.) i TFA (2 mL) u DCM (10 mL) je mešan 0.5 h na ST. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN. Zatim je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-HPLC dajući (nakon arbitrarno dodeljene stereohemije) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance.
Primer 582 Izomer A: 12.6 mg, 3.95%, LCMS (ESI, m/z): 459.30 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.40 (d, J= 0.8 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.75 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.82 (dd, J = 9.1, 0.9 Hz, 1H), 4.57 - 4.47 (m, 1H), 4.44 - 4.27 (m, 3H), 3.86 - 3.59 (m, 8H), 2.80 (dd, J= 14.8, 7.8 Hz, 1H), 2.59 (dd, J= 14.7, 4.7 Hz, 1H), 2.17 - 2.07 (m, 2H), 2.02 - 1.92 (m, 1H), 1.90 - 1.75 (m, 1H). tR = 3.894 min.
Primer 582 Izomer B: 3.0 mg, 4.07%, LCMS (ESI, m/z): 459.30 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.40 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.75 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.57 - 4.47 (m, 1H), 4.44 - 4.27 (m, 3H), 3.86 - 3.59 (m, 8H), 2.80 (dd, J = 14.8, 7.8 Hz, 1H), 2.59 (dd, J= 14.8, 4.7 Hz, 1H), 2.20 - 2.09 (m, 2H), 2.08-2.03 (m, 1H), 1.90 - 1.75 (m, 1H). tR = 4.613 min.
Primer 582 Izomer C: 24.4 mg, 7.64%, LCMS (ESI, m/z): 459.30 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.43 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.77 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 9.1Hz, 1H), 4.50 - 4.28 (m, 4H), 3.94 - 3.55 (m, 8H), 2.83 (dd, J = 14.4, 7.9 Hz, 1H), 2.58 (dd, J = 14.4, 4.6 Hz, 1H), 2.35 - 2.13 (m, 2H), 2.01-1.92 (m, 1H), 1.90 - 1.75 (m, 1H). tR = 8.158 min.
Primer 582 Izomer D: 18.5 mg, 5.79%, LCMS (ESI, m/z): 459.30 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.43 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.77 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.82 (dd, J = 9.1, 0.9 Hz, 1H), 4.45 - 4.28 (m, 4H), 3.94 - 3.55 (m, 8H), 2.83 (dd, J = 14.4, 7.9 Hz, 1H), 2.58 (dd, J = 14.4, 4.6 Hz, 1H), 2.27 - 2.13 (m, 2H), 2.01 - 1.76 (m, 2H). tR = 5.253 min.
Primer 583 Izomer A: 6-(4-[2-[(2S,6S)-6-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] oksi]metil)oksan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i
Primer 583 Izomer B: 6-(4-[2-[(2R, 6R)-6-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] oksi]metil)oksan-2-il] acetil] piperazin-1-il)piridin-3- karbonitril
Izomer A Izomer B
Korak 1: 1-(Benziloksi)hept-6-en-2-ol
[1354] U rastvor CuI (234 mg, 1.23 mmol, 0.10 ekviv.) u THF (40 mL) je dodat brom(but-3-en-1-il) magnezijum (18.3 mL, 114.68 mmol, 1.5 ekviv.) na -40 °C, i dobijeni rastvor je mešan 10 minuta na -40 °C. Ukapan je 2-[(benziloksi)metil] oksiran (2 g, 12.18 mmol, 1 ekviv.), a zatim je dobijeni rastvor mešan još 1.5 h na ovoj temperaturi. Reakcija je ugašena dodatkom 50 mL NH4Cl, ekstrahovana sa 3 x 50 mL EtOAc, isprana sa 1 x 50 mL slanog rastvora, osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (1:5) da bi se dobilo 1.17 g (43.60%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS (ESI, m/z): 221.10 [M+H]<+>
Korak 2: Metil (2Z)-8-(benziloksi)-7-hidroksiokt-2-enoat
[1355] Rastvor 1-(benziloksi)hept- 6-en-2-ol (1.6 g, 7.26 mmol, 1 ekviv.), metil prop-2-enoat (3.12 g, 0.04 mmol) i Grabsov katalizator 2. generacije (61.7 mg, 0.07 mmol, 0.01 ekviv.) u DCM (32 mL) je mešan 12 h na 50 °C u uljanom kupatilu. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom a ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (1:3) da bi se dobilo 1.57 g (77.67%) jedinjenja iz naslova kao svetlo smeđe ulje. LCMS (ESI, m/z): 279.05 [M+H]<+>
Korak 3: Metil 2-[6-[(benziloksi)metil]oksan-2-il]acetat
[1356] U rastvor metil (2Z)- 8-(benziloksi)-7-hidroksiokt-2-enoata (1.4 g, 5.03 mmol, 1 ekviv.) u THF (10 mL) je dodat NaH (241 mg, 10.04 mmol, 2.00 ekviv.) u nekoliko serija. Dobijeni rastvor je mešan 6 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim ugašena dodatkom 20 mL vode, ekstrahovana sa 3x30 ml EtOAc, isprana sa 20 ml slane vode, osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (1:3) da bi se dobilo 560 mg (40.0%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 279.05 [M+H]<+>
Korak 4: 2-[6-[(benziloksi)metil]oksan-2-il]sićetna kiselina
[1357] Rastvor metil 2-[6-[(benziloksi)metil]oksan-2-il]acetata (510 mg, 1.83 mmol, 1 ekviv.) i NaOH (220 mg, 5.50 mmol, 3.00 ekviv.) u H2O (2 mL) u THF (10 mL) je mešan 4 h na sobnoj temperaturi. Dodata je 1 M HCl da se pH podesi na 4, i rastvor je ekstrahovan sa 3x5 ml etil acetata. Organski deo je osušen preko bezvodnog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ovo je rezultiralo sa 410 mg (84.66%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 265.10 [M+H]<+>
Korak 5: 6-[4-(2-[6-[(henziloksi)metil]oksan-2-il]acetil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1358] Rastvor 2-[6-[(benziloksi)metil]oksan-2-il]sirćetne kiseline (400 mg, 1.51 mmol, 1 ekviv.), HATU (575 mg, 1.51 mmol, 1.00) ekviv.), DIPEA (587 mg, 4.54 mmol, 3.00 ekviv.) i Int-A4 u DMF-u (5 mL) je mešan 40 min na sobnoj temperaturi. Zatim je dobijeni rastvor razblažen sa 15 mL vode, ekstrahovan sa 3x15 mL EtOAc, ispran sa 1x15 mL slanog rastvora, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa DCM/MeOH (10:1) da bi se dobilo 490 mg (71.53%) jedinjenja iz naslova kao svetlosmeđa čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 435.15 [M+H]<+>
Korak 6: 6-(4-[2-[6-(Hidroksimetil)oksan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1359] U rastvor 6-[4-(2-[6-[(benziloksi)metil]oksan-2-il]acetil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila (2,1 g, 4.83 mmol, 1 ekviv.) u DCM (200 mL) na 0 °C u kapima je dodat BCl3(7.2 mL, 1.5 ekviv.). Dobijeni rastvor je mešan 2 h na 0 °C u kupatilu voda/led. Reakcija je ugašena dodatkom 100 mL MeOH, a pH vrednost rastvora je podešena na 4 sa HCl (1 M) i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 680 mg (40.85%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 345.10 [M+H]<+>
Korak 7: 6-(4-[2-[6-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil) etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]metil) oksan-2-il] acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1360] Rastvor 6-(4-[2-[6-(hidroksimetil)oksan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila (680 mg, 1.97 mmol, 1 ekv.), Cs2CO3(1.93 g, 0.01 mmol) i Int-A6 (1.94 g, 0.01 mmol) u ACN (20 mL) je mešan 3 h na 70°C u uljanom kupatilu. Čvrste materije su filtrirane a ostatak je nanet na kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (1:4) da bi se dobilo 860 mg sirovog proizvoda. Sirovi proizvod je prečišć en C18 reverznofaznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 720 mg (57.27%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 637.25 [M+H]<+>
Korak 8: 6-(4-[2-[(2S, 6S)-6-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]metil)oksan-2 -il]acetil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i 6-(4-[2-[(2R, 6R)-6-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] oksi]metil)oksan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1361] Rastvor 6-(4-[2-[6-([[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidro-piridazin-4-il]oksi]metil)oksan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila (720 mg, 1.13 mmol, 1 ekviv.) i TFA (6 mL, 0.05) mmol, 0.05 ekviv.) u DCM (30 mL) je mešan 1 h na ST. Dobijena smeša je koncentrovana i sirovi proizvod je prečišć en C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN. Sirovi proizvod je dalje prečišć en pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (CHIRALCEL OJ-3,4.6*50mm,3um; MeOH(0.1% DEA), 2.0ml/min) dajuć i (nakon arbitrarno dodeljene stereohemije) naslovna jedinjenja kao bele čvrste materije.
Primer 583 Izomer A: 80.3 mg, 43.8%, LCMS (ESI, m/z): 507.30 [M+H]<+>,<1>H NMR (CD3OD-d4, 300 MHz) δ: 8.38 (dd, J = 2.4, 0.8 Hz, 1H), 8.17 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.73 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.78 (dd, J= 9.1, 0.8 Hz, 1H), 4.46 -4.31 (m, 2H), 3.90 - 3.75 (m, 6H), 3.65-3.57 (m,4H), 2.76 (dd, J= 14.5, 8.7 Hz, 1H), 2.45 (dd, J= 14.4, 3.8 Hz, 1H), 1.96 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 1.78 - 1.60 (m, 3H), 1.56 - 1.28 (m, 2H). tR = 2.027 min.
Primer 583 Izomer B: 78,1 mg, 42.6%, LCMS (ESI, m/z): 507.30 [M+H]<+>,<1>H NMR (CD3OD-d4, 300 MHz) δ 8.38 (dd, J = 2.4, 0.8 Hz, 1H), 8.17 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.73 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.78 (dd, J= 9.1, 0.8 Hz, 1H), 4.46 -4.32 (m, 2H), 3.90 - 3.74 (m, 6H), 3.65 -3.56 (m, 4H), 2.76 (dd, J = 14.5, 8.7 Hz, 1H), 2.45 (dd, J = 14.4, 3.8 Hz, 1H), 1.97 (d, J =13.3 Hz, 1H), 1.78 - 1.60 (m, 3H), 1.56 - 1.28 (m, 2H). tR = 2.408 min.
Primer 584: 5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]propoksi) propan-2-il]oksi]-4 -(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
Korak 1: 1-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on
[1362] Rastvor Int-A18 (1 g, 4.32 mmol, 1 ekviv.), prop-2-enoil prop-2-enoata (600 mg, 4.76 mmol, 1.10 ekviv.) i TEA (1.3 g, 12.85 mmol, 2.97 ekviv.) u DCM (50 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom a ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (1:1) da bi se dobilo 750 mg (60.79%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 286.11 [M+H]<+>
Korak 2: 3-[(2S)-2-Hidroksipropoksi]-1-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]propan-1-on
[1363] Rastvor 1-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (750 mg, 1.0 ekviv.), (2S)-propan-1,2-diola (600 mg , 3.0 ekviv.) i Cs2CO3(2.5 g, 3.0 ekviv.) u ACN (50 mL) je mešan 18 h na 80 °C. Čvrsta supstanca je filtrirana, a dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (2:98), a ostatak je dalje prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 276 mg jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 362.16 [M+H]<+>
Korak 3: 5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il ]piperazin-1-il]propoksi)propan-2-il]oksi]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2, 3-dihidropiridazin-3-on
[1364] Rastvor 3-[(2S)-2-hidroksipropoksi]-1-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]propan- 1-ona (225 mg, 0.62 mmol, 1 ekviv.), Int-A6 (1.2 g, 3.65 mmol, 5.86 ekviv.) i Cs2CO3(506 mg, 1.55 mmol, 2.49 ekviv.) u ACN (8 mL) je mešan na 80 °C. Čvrsta supstanca je filtrirana i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (88:12) da bi se dobilo 70 mg (17.20%) jedinjenja iz naslova kao smeđa čvrsta supstanca. LCMS (ESI, m/z): 654.25 [M+H]<+>
Korak 4: 5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il ]piperazin-1-il]propoksi)propan-2-il] oksi]-4-(trifluorometil)-2, 3-dihidropiridazin-3-on
[1365] Rastvor 5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]propoksi)propan-2-il] oksi]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (125 mg, 0.19 mmol, 1 ekviv.) i TFA (2 mL) u DCM (5 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi, zatim je rezultujući rastvor koncentrovan pod vakuumom a ostatak je prečišćen pre-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (11.8 mg, 11.79%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 524.10 [M+H]<+>.<1>H NMR (metanol-d4, 300 MHz) δ 8.38 (dt, J = 2.1, 1.0 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.18-5.08 (m, 1H), 3.87-3.58 (m, 12H), 2.67 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.37 (d, J = 6.3 Hz, 3H).
Primer 585: 5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi)butan-2-il]amino]- 4 -(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1366]
Korak 1: 5-[[(2S)-1-Hidroksibutan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1367] Rastvor (2S)-2-aminobutan-1-ola (534 mg, 5.99 mmol, 1 ekviv.), TEA (1212.4 mg, 11.98 mmol, 2 ekviv.) i Int-A6 (1969.7 mg, 5.99 mmol, 1.0 ekviv.) u EtOH (20 mL) je mešan 1 h na 60 °C. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom a ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (4/6) da bi se dobilo 1.1 g (48.13%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS (ESI, m/z): 382.17 [M+H]<+>
Korak 2: Metil 3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil) etoksi]metil]-1, 6-dihidro-piridazin-4-il]amino] butoksiJpropanoat
[1368] Rastvor 5-[[(2S)-1-hidroksibutan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) )etoksi]metil]-2,3-dihidropindazin-3-ona (1.0 g, 2.62 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(2562.3 mg, 7.86 mmol, 3 ekviv.) i metil prop-2-enoata (2256.8 mg, 26.8 mg , 10 ekviv.) u ACN (20 mL) je mešan 6 h na sobnoj temperaturi. Čvrsta supstanca je filtrirana, a rezultirajući rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 450 mg (36.71%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS (ESI, m/z): 468.21 [M+H]<+>.
Korak 3: Metil 3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]butoksi]propanoat
[1369] Rastvor metil 3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]butoksi]propanoata (450 mg, 0.96 mmol, 1 ekviv.) i TFA (0.6 mL) u DCM (3 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Rezultujuća smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 340 mg jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 338.13 [M+H]<+>.
Korak 4: 3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]butoksi]propanoična kiselina
[1370] Rastvor metil 3-[ (2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]butoksi] propanoat (340 mg, 1.01 mmol, 1 ekviv.) i LiOH (241.4 mg, 10.08) mmol, 10 ekviv.) u MeOH (10 mL) i H2O (2 mL) je mešan 2 h na ST. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 220 mg (67.51 %) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 324.11 [M+H]<+>.
Korak 5: 5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi)butan-2-il] amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1371] Rastvor 3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] amino] butoksi] propanoične kiseline (200 mg, 0.62 mmol, 1 ekviv.), HATU (235.2 mg, 0.62 mmol, 1 ekviv.), DIPEA (159.9 mg, 1.24 mmol, 2 ekviv.) i Int.-A7 (143 mg, 0.62 mmol, 1 ekviv.) u DMF-u (5 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperature, a dobijeni rastvor je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (43.2 mg, 13%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 538.30 [M+H]<+>,<1>H NMR (metanol-d4, 300 MHz) δ: 8.61 (d, J = 0.9 Hz, 2H), 7.96 (s, 1H), 4.01- 3.91 (m, 5H), 3.86 – 3.52 (m, 8H), 2.72 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.75 – 1.55 (m, 2H), 1.01 (t, J= 7.5 Hz, 3H).
[1372] Sljedeći primjeri u Tabeli E10 su pripremljeni na sličan način od 3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]butoksi]propanoične kiseline i odgovarajućih među-produkata kao što je opisano za Primer 585.
Tabela E10
Primer 589: 6-(4-[3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]butoksi] propanoil]piperazin-1- il)piridin-3-karbonitril
[1373]
Korak 1: 6-(4-[3-[(2S)-2-hidroksibutoksi]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1374] Rastvor ( 2S)-butan-1,2-diol (1080 mg, 3 ekviv.), Cs2CO3(2600 mg, 2 ekviv.) i 6-[4-(prop-2-enoil)piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila (968 mg, 1 ekviv.) u ACN (10 mL) je mešan 6 h na 60 °C. Čvrste materije su filtrirane a dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 400 mg (30.12%) jedinjenja iz naslova u obliku bezbojnog ulja. LCMS (ESI, m/z): 333.19 [M+H]<+>
Korak 2: 6-(4-[3-[(2S)-2-([1-[(4-Metoksifenil)metil]-6-okso -5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi)butoksi] propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1375] Rastvor 6-(4-[3-[(2S)-2-hidroksibutoksi]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril (400 mg, 1.20 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(784.2 mg, 2.41 mmol, 2 ekviv.) i Int-A20 mg (57) 1.81 mmol, 1.5 ekviv.) u ACN (10 mL, 0.24 mmol, 0.20 ekviv.) je mešan 6 h na 80 °C. Čvrste materije su filtrirane i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom da bi se dobilo 320 mg (43.27%) jedinjenja iz naslova kao crveno ulje. LCMS (ESI, m/z): 625.27 [M+H]<+>.
Korak 3: 6-(4-[3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]butoksi]propanoil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1376] Rastvor 6-(4-[3-[(2S)-2-([1-[(4-metoksifenil)metil]-6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidro-piridazin-4-il]oksi)butoksi]propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitrila (300 mg, 0.49 mmol, 1 ekviv.) i H2SO4(95.7 mg, 0.98 mmol, 2 ekviv.) u TFA (5 mL, 0.04 mmol, 0.09 ekviv.) je mešan 6 h na ST. Dobijeni rastvor je ugašen ledom/vodom (5 mL) i ekstrahovan sa EtOAc (5 mL), a organski sloj je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN, a zatim je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (58.1 mg, 24. 07%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 495.15 [M+H]<+>,<1>H NMR (metanold4, 300 MHz) δ 8.43 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.79 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.03-4.96 (m, 1H), 3.89-3.59 (m, 12H), 2.63 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 1.79 (td, J= 8.3, 7.8, 5.9 Hz, 2H), 1.04 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
Primer 590: 2-(4-(3-(2-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-iloksi)etoksi)propanoil) piperazin-1-il)pirimidin-5-karbonitril
[1377]
Korak 1: 2-(4-(3-(2-(6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-iloksi)etoksi)propanoil) piperazin-1-il)pirimidin-5-karbonitril
[1378] Rastvor Int-A11 (310 mg, 1.05 mmol, 1.00 ekviv.), HOBt (212.0 mg, 1.57 mmol, 1.5 ekviv.), EDCI (300.7 mg, 1.57 mmol, 1.5 ekviv.), Int-A1 (197.9 mg, 1.05 mmol, 1 ekviv.) u DMF (5 mL) je mešan 4.5 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 22.4 mg (4.58%) jedinjenja iz naslova (22.4 mg, 4.58%) u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 468.15 [M+H]<+>,<1>H NMR (Metanold4, 300 MHz) δ: 8.63 (s, 2H), 8.22 (s, 1H), 4.56 (t, J= 1.8 Hz, 2H), 3.97 - 3.91 (m, 4H), 3.86 -3.82 (m,4H), 3.70 - 3.69 (m, 4H), 2.72 (t, J= 6.0 Hz, 2H).
Primer 591 Izomer A: 5-[[(2S)-1-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]butan-2-il]oksi]- 4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on i
Primer 591 Izomer B: 5-[(2S)-2-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il ]-3-oksopropoksi] butoksi]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1379]
Korak 1: 1-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-[(2S)-2-hidroksibutoksi]propan-1-on i (S)-1-(4-(5- hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-(1-hidroksibutan-2-iloksi)propan-1-on
[1380] Rastvor (2S)-butan-1,2-diola (1426.5 mg, 15.83 mmol, 4 ekviv.), Cs2CO3(2578.7 mg, 7.91 mmol, 2.00 ekviv.), 1-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (1 g, 3.96 mmol, 1 ekviv.) u ACN (20 mL) je mešan 5 h na 75 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 820 mg (60.44%) smeše jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 343.15 [M+H]<+>
Korak 2: 5-[[(2S)-1-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]butan-2-il]oksi]-2-[(4-metoksifenil) metil]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on i (S)-5-(2-(3-(4-(5-hloropirimidin-2-il) piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)butoksi)-2-(4 -metoksibenzil)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1381] Rastvor smeše 1-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-[( 2S)-2-hidroksibutoksi]propan-1-ona i (S)-1-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-(1-hidroksibutan-2-iloksi)propan-1-ona (290 mg, 0.85 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(551.2 mg, 1.69 mmol, 2 ekviv.) i Int-A20 (808.7 mg, 2.54 mmol, 3.00 ekviv.) u DMF-u (20 mL) je mešan 6 h na 80 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 400 mg (75.65%) smeše jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 625.21 [M+H]<+>
Korak 3: 5-[[(2S)-1-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]butan-2-il]oksi]-2-[(4 -metoksifenil) metil]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on i 5-[(2S)-2-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il) piperazin-1- il]-3-oksopropoksi] butoksi]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1382] Rastvor 5-[[(2S)-1-[3-[4-(5- hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]butan-2-il]oksi]-2-[(4-metoksifenil)metil]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3 -ona i (S)-5-(2-(3-(4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)butoksi)-2-(4-metoksibenzil)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-ona (336 mg, 0.53 mmol, 1 ekviv.) i H2SO4(525.0 mg, 5.35 mmol, 10 ekviv.) u TFA (10 mL) je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC dajući jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance.
Primer 591 Izomer A: 34.7 mg, 32.10%, LCMS (ESI, m/z): 505.25 [M+H]<+>,<1>HNMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.31 (s, 2H), 8.22 (s, 1H), 4.96 - 4.92 (m, 1H), 3.84 - 3.66 (m, 7H), 3.64 - 3.53(m, 5H), 2.61 (t, J= 5.9 Hz, 2H), 1.72 (p, J= 6.9 Hz, 2H), 1.00 (t, J= 7.4 Hz, 3H) i Primer 591 Izomer B: 24.4 mg, 22.57%, LCMS (ESI, m/z): 505.25 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.31 (s, 2H), 8.21 (s, 1H), 4.47 - 4.36 (m, 2H), 3.89 - 3.76 (m, 6H), 3.68 - 3.54 (m, 5H), 2.66 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 1.64 (p, J= 1.3 Hz, 2H), 0.98 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
Primer 592: 2-(4-[3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]butoksi] propanoil]piperazin-1- il)pirimidin-5-karbonitril
[1383]
Korak 1: 2-(4-[3-[(2S)-2-Hidroksibutoksi]propanoil]piperazin-1-il)pirimidin-5-karbonitril
[1384] Rastvor 2-[4-(prop-2-enoil)piperazin-1-il]pirimidin-5-karbonitrila (1.5 g, 6.17 mmol, 1 ekviv.), (2S)-butan-1,2-diola (2.8 g, 31.07 mmol, 5.04 ekviv.) i Cs2CO3(4.0 g, 12.28 mmol, 1.99 ekviv.) u ACN (16 mL) je mešan 1 h na 80 °C u uljanom kupatilu. Čvrste supstance su filtrirane i dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom, a ostatak je unesen u kolonu silika gela i eluiran sa EtOAc/petroletrom (3:2) da bi se dobilo 1.25 g (60.81%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. . LCMS (ESI, m/z): 334.18 [M+H]<+>.
Korak 2: 2-(4-[3-[(2S)-2-([1-[(4-metoksifenil)metil]-6-okso-5-(trifluorometil)-1, 6-dihidropiridazin-4-il] oksi)butoksi] propanoil]piperazin-1-il)pirimidin-5-karbonitril
[1385] Rastvor 2-(4-[3-[(2S)-2-hidroksibutoksi]propanoil] piperazin-1-il)pirimidin-5-karbonitrila (684 mg, 2.05 mmol, 1 ekviv.), Int-A20 (980.7 mg, 3.08 mmol, 1.50 ekviv.) i Cs2CO3(1336.9 mg, 4.10 mmol 2.00 mL ekviv.) u ACN (17.5 mL) je mešan 6 h na 80 °C u uljanom kupatilu. Čvrste supstance su filtrirane, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 1.04 g (82.34%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance LCMS (ESI, m /z): 616.25 [M+H]<+>.
Korak 3: 2-(4-[3-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi]butoksi]propanoil] piperazin-1-il) pirimidin-5-karbonitril
[1386] Rastvor 2-(4-[3-[(2S)-2-([1-[(4-metoksifenil)metil]-6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidro-piridazin-4-il]oksi)butoksi]propanoil]piperazin-1-il)pirimidin-5-karbonitril (1.04 g, 1.69 mmol, 1 ekviv.) i H2SO4(1.7 g, 16.89 mmol, 10 ekviv.) u TFA (16 mL) je mešan 1 h na ST. Relutivni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (25.2 mg, 3.01%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 496.10 [M+H]<+>,<1>H NMR (CD3OD-d4, 300 MHz,) δ 8.64 (s, 2H), 8.24 (d, J= 0.9 Hz, 1H), 4.98 (d, J= 6.5 Hz, 1H), 3.94 - 3.88 (m, 4H), 3.84 - 3.68 (m, 8H), 2.63 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 1.77 - 1.67 (m, 2H), 1.02 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
Primer 593: 5-[[(2S)-1-[3-[4-(5-hloropiridin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]-3-metoksipropan-2-il] amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1387]
[1388] Rastvor 3-[(2S)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] propoksi]propanoične kiseline (180 mg, 0.53 mmol, 1 ekviv.), HATU (242.1 mg, 0.64 mmol, 1.2 ekviv.), DIPEA (205.7 mg, 1.59 mmol, 3 ekviv.) i Int-A5 (125.8 mg, 0.64 mmol, 1.2 ekviv.) u DMF (3 mL) je mešan 1 h na ST. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN dajući jedinjenje iz naslova (28.2 mg, 10.24%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 519.25 [M+H]<+>,<1>HNMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.09 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.56 (dd, J= 9.1, 2.7 Hz, 1H), 6.85 (d, J= 9 Hz, 1H), 4.35 – 4.13 (m, 1H), 3.94 – 3.74 (m, 2H), 3.76 – 3.61 (m, 6H), 3.61 – 3.51 (m, 6H), 3.39 (s, 3H), 2.70 (t, J= 6.0 Hz, 2H).
Primer 594: 5-[[(2S)-1-metoksi-3-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il] propoksi)propan-2 -il]amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1389]
5-[[(2S)-1-metoksi-3-(3-okso-3-[4-[5]-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il]propoksi)propan-2-il] amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1390] Rastvor 3-[(2S)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] propoksi]propanoične kiseline (180 mg, 0.53 mmol, 1 ekviv.), HATU (242.1 mg, 0.64 mmol, 1.2 ekviv.), DIPEA (205.7 mg, 1.59 mmol, 3 ekviv.), Int-A4 (147.2 mg, 0.64 mmol, 1.20 ekviv.) u DMF-u (3 mL) je mešan na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN dajući jedinjenje iz naslova kao belu čvrstu supstancu (45.5 mg, 15.52%). LCMS (ESI, m/z): 553.30 [M+H]<+>.<1>H NMR (metanol-d4, 300 MHz) δ 7.95 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.75 (dd, J= 9.1, 2.5 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.22 - 4.18 (m, 1H), 3.92 - 3.58 (m, 12H), 3.56 - 3.47 (m, 2H), 3.32 (s, 3H), 2.71 (dd, J= 6.0, 6.3 Hz, 2H).
Primer 595: 6-(4-[3-[(2S)-3-metil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] butoksi] propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1391]
Korak 1: 5-[[(2S)-1-Hidroksi-3-metilbutan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1392] Rastvor Int-A6 (1 g, 3.04 mmol, 1 ekviv.), TEA (613.8 mg, 6.07 mmol, 1.99 ekviv.) i (2S)-2-amino-3-metilbutan-1-ol (347.7 mg, 3.37 mmol, 1.11 ekviv.) u EtOH (30 mL) je mešan 15.5 h na ST. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela i eluiran sa EtOAc/petroletrom (1/4) da bi se dobilo 600 mg (49.88%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS (ESI, m/z): 396.19 [M+H]<+>
Korak 2: Metil 3-[(2S)-3-metil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1[[2- (trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]butoksi]propanoat
[1393] Rastvor 5-[[(2S)-1-hidroksi-3-metilbutan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) etoksi] metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (1.2 g, 3.03 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(1.97 g, 2 mmol) i metil prop-2-enoat (395.4 mg, 4.59 mmol, 1.51 ekviv.) u ACN (20 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela sa EtOAc/petroletrom (3/17) da bi se dobilo 470 mg (32.17%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS (ESI, m/z): 482.22 [M+H]<+>
Korak 3: Metil 3-[(2S)-3-metil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-ilJaminoJbutoksiJ propanoat
[1394] Rastvor metil 3-[(2S)-3-metil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]- 1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]butoksi]propanoata (470 mg, 0.98 mmol, 1 ekviv.), TFA (1 mL) u DCM (10 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Rezultujuća smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 400 mg jedinjenja iz naslova u obliku žutog sirovog ulja. LCMS (ESI, m/z): 352.14 [M+H]<+>
Korak 4: 3-[(2S)-3-metil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]butoksi] propanoična kiselina
[1395] Rastvor metil 3-[(2S)-3-metil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] butoksi]propanoata (400 mg, 1.14 mmol, 1 ekviv.) i LiOH·H2O (143 mg, 3.41 mmol, 2.99 ekviv.) u MeOH (10 mL) je mešan 6 h na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvora je podešena na 4 sa HCl (1 M). Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 130 mg (33.85%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS (ESI, m/z): 338.12 [M+H]<+>
Korak 5: 6-(4-[3-[(2S)-3-metil-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]butoksi] propanoil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1396] Rastvor 3-[(2S)-3-metil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] butoksi] propanoične kiseline (100 mg, 0.30 mmol, 1 ekviv.), HATU (123.9 mg, 0.33 mmol, 1.10 ekviv.), DIPEA (77 mg, 0.60 mmol, 2.01 ekviv.), Int-A4 (62 mg, 0.33 mmol, 1.11 ekviv.) u DMF (4 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN. Zatim je ostatak dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (106.5 mg, 70.78%) u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 508.2 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 12.39 (s, 1H), 8.48 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.85 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 6.89 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 6.08 (m,1H), 3.84 (s, 1H), 3.65 - 3.52 (m, 12H), 2.55 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.85 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 0.87 (dd, J = 8.8, 6.7 Hz, 6H).
Primer 596: 6-(4-[3-[(2R,3R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] amino] butoksi] propanoil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1397]
Korak 1: (2R,3R)-2-amino-3-metoksibutan-1-ol
[1398] Rastvor (2S,3R)-2-amino-3-metoksibutanske kiseline (1 g, 7.51 mmol, 1 ekviv.), diboran vodonika (15.0 mL, 1 mol/L, 2 ekviv.) u THF (15 mL) je mešan 12 h na ST. Reakcija je ugašena dodatkom 15 mL metanola. Dobijena smeša je razblažena sa 15 mL vode i isprana sa 2 x 30 mL DCM. Organski slojevi su kombinovani i sušeni preko Na2SO4. Rezultujuća smeša je koncentrovana kako bi se dobilo 2.2 g (sirovog) jedinjenja iz naslova u obliku bezbojnog ulja. LCMS (ESI, m/z): 120.09 [M+H]<+>
Korak 2: 5-[[(2R,3R)-1-Hidroksi-3-metoksibutan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)- 2-[[2-(trimetilsilil) etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1399] Rastvor (2R,3R)-2-amino-3-metoksibutan-1-ola (2.18 g, 18.29 mmol, 1 ekvivalent), Int-A6 (2.46 g, 7.48 mmol, 0.41 ekviv) i TEA (3.7 g, 36.56 mmol, 2.00 ekviv.) u EtOH (10 mL, 1.00 ekviv.) je mešan 1 h na 80 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela i eluiran sa EtOAc/petroletrom (3/7) da bi se dobilo 1.63 g (21.6%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS (ESI, m/z): 412.18 [M+H]<+>
Korak 3: Metil 3-[(2R,3R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[ [2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]butoksi]propanoat
[1400] Rastvor 5-[[(2R,3R)-1-hidroksi-3-metoksibutan- 2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (1.62 g, 3.94 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(2.6) g, 7.87 mmol, 2.00 ekviv.) i metil prop-2-enoat (1.7 g, 19.68 mmol, 5.00 ekviv.) u ACN (10 mL) je mešano 1 h na ST. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (3/7) da bi se dobilo 870 mg (44.4%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS (ESI, m/z): 498.22 [M+H]<+>
Korak 4: Metil 3-[(2R,3R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-ilJaminoJ-butoksiJpropanoat
[1401] Rastvor metil 3-[(2R,3R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] butoksi]propanoata (850 mg, 1.71 mmol, 1 ekviv.) u DCM (10 mL) i TFA (1 mL) je mešan 1 h na ST. pH vrednost rastvora je etanolaminom podešena na 8. Dobijeni rastvor je razblažen sa 20 mL vode i ekstrahovan sa 4 x 20 mL DCM. Organski slojevi su kombinovani i sušeni preko Na2SO4. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 640 mg jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 368.14 [M+H]<+>
Korak 5: 3-[(2R, 3R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1, 6-dihidropiridazin-4-il]amino]butoksi] propanoična kiselina
[1402] Rastvor metil 3-[(2R,3R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] amino]butoksi] propanoat (620 mg, 1,69 mmol, 1 ekviv.) i LiOH.H2O (354.2 mg, 8.44 mmol, 5.00 ekviv.) u MeOH (15 mL) i vodi (5 mL, 277.54 mmol, 164.43 ekviv.) je mešan 1 h na ST. Nakon koncentrovanja, pH vrednost rastvora je podešena na 5 pomoću HCl (1 M). Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 5 x 25 mL DCM. Organski slojevi su kombinovani i osušeni preko Na2SO4. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 500 mg (84%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 354.12 [M+H]<+>
Korak 6: 6-(4-[3-[(2R,3R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] butoksi] propanoil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1403] Rastvor 3-[(2R,3R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] butoksi]propanoična kiselina (200 mg, 0.57 mmol, 1 ekviv.), DIPEA (219.5 mg, 1.70 mmol, 3.0 ekviv.), Int-A4 (127.2 mg, 0.57 mmol, 1.00 ekviv.) i HATU (322.9 mg, 0.85 mmol, 1.5 ekviv.) u DMF-u (4 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (58.4 mg, 19.7%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 524.51 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ: 8.44 (dd, J= 2.4, 0.8 Hz, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.77 (dd, J= 9.1, 2.3 Hz, 1H), 6.87 (dd, J= 9.1, 0.8 Hz, 1H), 3.99 (s, 1H), 3.87 - 3.54 (m, 13H), 3.37 (s, 3H), 2.68 (t, J= 5.9 Hz, 2H), 1.20 (d, J = 6.2 Hz, 3H).
Primer 597: 6-(4-[3-[(2S)-2-[(5-Hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino]propoksi]propanoil] piperazin-1-il) piridin-3-karbonitril
[1404]
Korak 1: 4-Hloro-5-[[(2S)-1-hidroksipropan-2-il]amino]-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2, 3-dihidro-piridazin-3-on
[1405] Rastvor Int-A7 (3 g, 10.16 mmol, 1 ekviv.), TEA (3.1 g, 30.48 mmol, 3 ekviv.) i (2S)-2-aminopropan-1-ola (2.3 g, 30.48 mmol, 3 ekviv.) u EtOH (30 mL) je mešan 16 h na 80 °C. Nakon koncentrovanja, ostatak je unesen u kolonu silika gela i eluiran sa EtOAc/petroletrom (1:1) da bi se dobilo 2 g (58.95%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS (ESI, m/z): 334.13 [M+H]<+>
Korak 2: (S)-etil 3-(2-(5-hloro-6-okso-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidropiridazin-4-ilamino) propoksi) propanoat
[1406] Rastvor 4-hloro-5-[[(2S)-1-hidroksipropan-2-il]amino]-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropindazin-3-ona (2 g, 5.99 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(3.9 g, 11.98 mmol, 2 ekviv.) i etil prop-2-enoata (6.0 g, 59.90 mmol, 10 ekviv.) u ACN (30 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Čvrste materije su filtrirane. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 2.3 g (88.47%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 434.18 [M+H]<+>
Korak 3: (S)-etil 3-(2-(5-hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-ilamino)propoksi) propanoat
[1407] Rastvor (S)-etil 3-(2-(5-hloro-6-okso-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidropiridazin-4-ilamino)propoksi)propanoata (5.3 g, 12.2.1 mmol, 1 ekviv.) i TFA (6 mL, 80.78 mmol, 6.61 ekviv.) u DCM (30 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 3.34 g sirovog jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 304.10 [M+H]<+>
Korak 4: 3-[(2S)-2-[(5-Hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino] propoksi]propanoična kiselina
[1408] Rastvor (S)-etil 3-(2-(5-hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-ilamino)propoksi)propanoata (5.2 g, 17.12 mmol, 1 ekviv.), LiOH (3.6 g, 85.60 mmol, 5 ekviv.), H2O (10 mL) i MeOH (30 mL) je mešan 4 h na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvora je podešena na 5 sa HCl (1 M). Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 2.14 g (45.34%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 276.07 [M+H]<+>
Korak 5: 6-(4-[3-[(2S)-2-[(5-Hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino]propoksi]propanoil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1409] Rastvor 3-[(2S)-2-[(5-hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino]propoksi]propanoične kiseline (209 mg, 0.76 mmol, 1 ekviv.), DIEA (285 mg, 2.27 mmol, 3 ekviv.), HATU (275 mg, 0.76 mmol, 1 ekviv.), Int-A4 (135 mg, 0.76 mmol, 1 ekviv.) u DMF (1 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Dodat je 2-aminoetan-1-ol (0.2 mL) i mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN dajući jedinjenje iz naslova (121.1 mg 35.45%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 446.15 [M+H]<+>,<1>H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 8.51 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.90 - 7.86 (m, 2H), 6.92 (dd, J = 9.2, 0.8 Hz, 1H), 6.01 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.10 - 4.01 (m, 1H), 3.72 - 3.62 (m, 6H), 3.56 - 3.54 (ddd, J= 12.9, 7.1, 4.1 Hz, 4H), 3.47 - 3.39 (m, 2H), 2.63 - 2.49 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 1.15 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
Primer 598: 4-hloro-5-[[(2S)-1-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]propan-2-il]amino ]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1410]
[1411] Rastvor 3-[(2S)-2-[(5-hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino]propoksi]propanoične kiseline (198 mg, 0.72 mmol, 1 ekviv.), DIEA (491 mg, 3.80 mmol, 5 ekviv.), HATU (275 mg, 0.72 mmol, 1 ekviv.) u DMF (0.5 mL) i Int-A3 (199 mg, 1.00 mmol, 1 ekviv.) u DMF (0.5 mL) je mešan 0.5 h na sobnoj temperaturi. Ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN dajući jedinjenje iz naslova (171.8 mg 52.32%) u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 456.05 [M+H]<+>,<1>H NMR (DMSO-d6, 300 MHz) δ: 12.48 (s, 1H), 8.44 (s, 2H), 7.87 (s, 1H), 6.02 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 4.09 - 4.00 (dt, J = 15.3, 6.5 Hz, 1H), 3.70 - 3.61 (m, 6H), 3.53 - 3.45 (m, 6H), 2.59 - 2.51 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 1.16 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
Primer 599: (S)-4-Hloro-5-(1-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi) propan-2-ilamino)piridazin-3(2H)-on
[1412]
[1413] Rastvor 3-[(2S)-2-[(5-hloro-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino]propoksi]propanoične kiseline (200 mg, 0.73 mmol, 1 ekviv.), HATU (413.8 mg, 1.09 mmol, 1.5 ekviv.), DIEA (281.3 mg, 2.18 mmol, 3 ekviv.), Int-A2 (202.1,1 mmol, 0.87 mmol, 1.2 ekviv.) u DMF (3 mL) je mešan 1 h na ST. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (174.6 mg, 49.13%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 490.25 [M+H]<+>,<1>HNMR (Methanold4, 300 MHz) δ: 8.60 (d, J = 0.9 Hz, 2H), 7.92 (s, 1H), 4.09 (q, J= 7.0, 4.2 Hz, 1H), 3.98 - 3.87 (m, 4H), 3.85 - 3.73 (m, 2H), 3.70 - 3.61 (m, 5H), 3.52 (dd, J = 9.7, 7.5 Hz, 1H), 2.69 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 1.27 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
Primer 600: 6-(4-[3-[(2S)-2-[(5-bromo-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino]propoksi]propanoil] piperazin-1-il) piridin-3-karbonitril
[1414]
Korak 1: 4-bromo-5-[[(2S)-1-hidroksipropan-2-il]amino]-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2, 3-dihidro-piridazin-3-on
[1415] Rastvor Int-A8 (6 g, 15.62 mmol, 1 ekviv.), (2S)-2-aminopropan-1-ola (3519.5 mg, 46.86 mmol, 3.00 ekviv.) i TEA (4741.5 mg, 46.86 mmol, 3 ekviv.) u EtOH (50 mL) je mešan 4 h na 80 °C. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (1:1) da bi se dobilo 4.2 g (71.07%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 378.08 [M+H]<+>
Korak 2: terc-butil 3-[(2S)-2-[(5-bromo-6-okso-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino]propoksiJpropanoat
[1416] Rastvor 4-bromo-5-[[(2S)-1-hidroksipropan-2-il]amino]-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (4.1 g, 10.84 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(7061.7 mg, 21.67 mmol, 2 ekviv.) i terc-butil prop-2-enoata (13889.6 mg, 108.37 mmol, 10 ekviv.) u ACN (80 mL) je mešan 1.5 h na 40 °C. Čvrste materije su filtrirane i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN da bi se dobilo 4.2 g (76.4%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS (ESI, m/z): 506.17 [M+H]<+>
Korak 3: 3-[(2S)-2-[(5-bromo-6-okso-1, 6-dihidropiridazin-4-il)amino]propoksi]propanoična kiselina
[1417] Rastvor terc-butil 3-[(2S)-2-[(5-bromo-6-okso-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidro-piridazin-4-il)amino]propoksi]propanoata (2.7 g, 5.33 mmol, 1 ekviv.) i TFA (6 mL) u DCM (30 mL) je mešan 4 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 2 g jedinjenja iz naslova u obliku sirove žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 320.02 [M+H]<+>
Korak 4: 6-(4-[3-[(2S)-2-[(5-bromo-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino]propoksi] propanoil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1418] Rastvor 3-[(2S)-2-[(5-bromo-6-okso-1,6- dihidropiridazin-4-il)amino]propoksi]propanoična kiselina (200 mg, 0.62 mmol, 1 ekviv.), HOBT (126.6 mg, 0.94 mmol, 1.5 ekviv.), EDCI (179.6 mg, 0.94 mmol, 1.5 ekviv.), DIPEA (242.2 mg, 1.87 mmol, 3.0 ekviv.) i Int-A4 (117.6 mg, 0.62 mmol, 1.00 ekviv.) u DMF-u (4 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN. Nakon koncentrovanja, ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (36.1 mg, 11.78%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 492.10 [M+H]<+>,<1>HNMR (DMSO-d6, 300MHz) δ 12.50 (s, 1H), 8.51 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.90 (dd, J= 9.0, 2.4 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 6.93 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 5.77 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.10-4.01 (m, 1H), 3.73-3.44 (m, 12H), 2.60 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.16 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
Primer 601: 4-bromo-5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il] propoksi)propan-2-il]amino]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1419]
[1420] Rastvor 3-[(2S)-2-[(5-bromo-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino]propoksi]propanske kiseline kiselina (200 mg, 0.62 mmol, 1 ekviv.), HOBT (126.6 mg, 0.94 mmol, 1.5 ekviv.), EDCI (179.6 mg, 0.94 mmol, 1.5 ekviv.), DIPEA (242.2 mg, 1.87 mmol, 3.0 ekviv.) Int-A2 (144.4 mg, 0.62 mmol, 1.00 ekviv.) u DMF (4 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN. Nakon koncentrovanja, ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (14.9 mg, 4.46%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 536.10 [M+H]<+>,<1>H NMR (DMSO-d6, 300MHz) δ 12.50 (s, 1H), 8.73 (d, J= 0.6 Hz, 2H), 7.79 (s, 1H), 5.76 (d, J= 9.3 Hz, 1H), 4.12 - 4.01 (m, 1H), 3.87 - 3.47 (m, 12H), 2.60 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 1.16 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
Primer 602: 4-bromo-5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il] propoksi)propan-2-il]amino]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1421]
[1422] Rastvor 3-[(2S)-2-[(5-bromo-6-okso-1,6-dihidropiridazin-4-il) amino]propoksi]propanoična kiselina (200 mg, 0.62 mmol, 1 ekviv.), HOB\T (126.6 mg, 0.94 mmol, 1.5 ekviv.), EDCI (179.6 mg, 0.94 mmol, 1.5 ekviv.), DIPEA (241.8 mmol) , 3.0 ekviv.) i Int-A3 (124.1 mg, 0.62 mmol, 1.00 ekviv.) u DMF-u (4 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (15.3 mg, 4.89%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 500.05 [M+H]<+>, 1HNMR (DMSO-d6, 300MHz) δ 12.48 (s, 1H), 8.45 (s, 2H), 7.78 (s, 1H), 5.75 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.10-4.01 (m, 1H), 3.71 - 3.47 (m, 12H), 2.60 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 1.17 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
Primer 603: 5-[[(2S)-1-Hidroksi-3-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il] propoksi)propan-2 -il]amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1423]
Korak 1: terc-butil (4R)-4-(hidroksimetil)-2,2-dimetil-1,3- oksazolidin-3-karboksilat
[1424] Rastvor 3-terc-butil 4-metil (4S)-2,2-dimetil-1,3-oksazolidin-3,4-dikarboksilata (10 g, 38.565 mmol, 1.00 ekviv.), NaBH4(2.92 g, 77.130 mmol, 2.00 ekviv.), MeOH (30 mL) i CaCl2(12.84 g, 115.695 mmol, 3.00 ekviv.) u THF (150 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena dodatkom 30 mL vode, ekstrahovana sa 3 x 100 mL EtOAc, osušena iznad bezvodnog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom da se dobije 9.38 g jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja LCMS (ESI, m/z): 232.15 [M+H]<+>.
Korak 2: terc-butil (4R)-4-[(3-metoksi-3-oksopropoksi)metil]-2,2-dimetil-1,3-oksazolidin-3-karboksilat
[1425] Rastvor terc-butil(4R)-4-(hidroksimetil)-2-metil-1,3-oksazolidin-3-karboksilata (9.38 g, 43.17 mmol, 1.00 ekviv.), Cs2CO3(28.1 g, 86.24 mmol, 2.00 ekviv.) i metil prop-2-enoata (18.6 g, 216.05 mmol, 5.00 ekviv.) u ACN (80 mL) je mešan 3 h na sobnoj temperaturi. Čvrste materije su filtrirane a ostatak je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 9.92 g jedinjenja iz naslova kao sirovo žuto ulje LCMS (ESI, m/z): 318.18 [M+H]<+>
Korak 3: Metil 3-[[(4R)-2,2-dimetil-1,3-oksazolidin-4-il]metoksi]propanoat
[1426] Rastvor terc-butil (4R)-4-[(3-metoksi-3-oksopropoksi)metil]-2,2-dimetil-1,3-oksazolidin-3-karboksilat (9.92 g, 31.26 mmol, 1.00 ekviv.) u HCl/dioksanu (100 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Rezultujuća smeša je koncentrovana da se dobije 9.6 g jedinjenja iz naslova u obliku sirovog žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 218.14 [M+H]<+>. Korak 4: Metil 3-[(2S)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4 -il]amino]propoksi]propanoat
[1427] Rastvor metil 3-[[(4R)-2,2-dimetil-1,3-oksazolidin-4-il]metoksi]propanoata (9.6 g, 44.19 mmol, 1.00 ekviv.), DIPEA (11421.4 mg, 88.37 mmol, 2.00 ekviv.), Int-A6 (14527.8 mg, 44.19 mmol, 1.00 ekviv.) u IPA (80 mL) je mešan 1 h na 60 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom, a ostatak je unesen u kolonu silika gela i eluiran sa EtOAc/petroletrom (2:3) da bi se dobilo 5.5 g (26.51%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS (ESI, m/z): LCMS (ESI, m/z): 470.10 [M+H]<+>.
Korak 5: Metil 3-[(2S)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] propoksiJ-propanoat [1428] Rastvor metil 3-[(2S)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi]propanoata (5.5 g, 11.71 mmol, 1.00 ekviv.) i TFA (5 mL) u DCM (25 mL) je mešan 40 minuta na ST. Rezultujuća smeša je koncentrovana da se dobije 570 mg (14.34%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 340.00 [M+H]<+>.
Korak 6: Metil 3-[(2S)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] propoksi]propanoična kiselina
[1429] Rastvor metil 3-[(2S)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] propoksi] propanoata (570 mg, 1.68 mmol, 1.00 ekviv), LiOH (120.70 mg, 5.04 mmol, 3.00 ekviv.), i H2O (3 mL) u THF (15 mL) je mešan 3 h na ST. Smeša je razblažena sa 5 mL vode i ekstrahovana sa 10 mL EtOAc. Vodeni slojevi su kombinovani, pH je podešen na 4 sa HCl (1M) i koncentrovani pod vakuumom da bi se dobilo 380 mg (69.54%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 326.09 [M+H]<+>.
Korak 7: 5-[[(2S)-1-hidroksi-3-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi) propan-2 -il]amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1430] Rastvor 3-(3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi) propanoične kiseline (100 mg, 0.31 mmol, 1 ekviv.), DIPEA (80 mg, 0.62 mmol, 2.00 ekviv.), EDCl (89.8 mg, 0.47 mmol, 1.50 ekviv.), HOBt (62.8 mg, 0.47 mmol, 1.50 ekviv.) i Int-A2 (69.4 mg, 0.37 mmol, 1.20 ekviv.) u DMF (3 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (28.1 mg, 16.94%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 540.30 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.61 (d, J = 0.8 Hz, 2H), 7.98 (s, 1H), 4.09 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 3.99-3.92 (m, 4H), 3.84 (dd, J= 5.2, 3 Hz, 2H), 3.79 - 3.62 (m, 8H), 2.72 (d, J = 5.9 Hz, 2H).
Primer 604: 5-[[(2S)-1-Hidroksi-3-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)piridin-2-il]piperazin-1-il] propoksi)propan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1431]
[1432] Rastvor 3-(3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi) propanoične kiseline (100 mg, 0.31 mmol, 1 ekviv.), DIEA (80 mg, 0.62 mmol, 2.00 ekviv.), EDCl (89.8 mg, 0.47 mmol, 1.50 ekviv.), HOBt (62.8 mg, 0.47 mmol, 1.50 ekviv.) i Int-A18 (69.4 mg, 0.37 mmol, 1.20 ekviv.) u DMF (3m ekviv.) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (27.9 mg, 16.85%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 539.30 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.38 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.77 (dd, J= 9.0, 2.6 Hz, 1H), 6.91 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 4.14 - 4.04 (m, 1H), 3.89 - 3.78 (m, 2H), 3.78 - 3.63 (m, 12H), 2.71 (d, J= 6.0 Hz, 2H).
Primer 605: (S)-6-[4-[3-[2-Ciklopropil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] amino]etoksi] propanoil]piperazin-1-il]nikotinonitril
[1433]
Korak 1: 5-[[(1S)-1-ciklopropil-2-hidroksietil]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1434] Rastvor (2S)-2-amino-2-ciklopropiletan-1-ol hidrohlorida (1 g, 7.27 mmol, 1 ekviv.), Int-A6 (2.45 g, 7.45 mmol, 1.03 ekviv.) i TEA (1.7 mL) u EtOH (15 mL) je mešan preko noći na 60 °C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 200 mL EtOAc i ispran sa 50 mL NH4Cl i 50 mL slane vode. Organski sloj je osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je unesen u kolonu silika gela sa EtOAc/petroletrom (1:2) da bi se dobilo 2.2 g (76.94%) jedinjenja iz naslova u obliku čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 394.18 [M+H]<+>.
Korak 2: Etil 3-[(2S)-2-ciklopropil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)-etoksi]metil]-1, 6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi]propanoat
[1435] Rastvor 5-[[(1S)-1-ciklopropil-2-hidroksietil]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) etoksi] metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (2.1 g, 5.34 mmol, 1 ekviv.), etil prop-2-enoata (0.8 mL) i Cs2CO3(2 g, 6.14 mmol, 1.15 ekviv.) u ACN (15 mL) je mešan preko noći na 35 °C. Čvrste materije su filtrirane. Dobijena smeša je koncentrovana. Ostatak je unesen u kolonu silika gela sa EtOAc/petroletrom (1:1). Ovo je rezultiralo sa 580 mg (sirovog) jedinjenja iz naslova u obliku čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 494.23 [M+H]<+>
Korak 3: Etil 3-[(2S)-2-ciklopropil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin -4-il]amino]etoksi] propanoat
[1436] Rastvor etil 3-[(2S)-2-ciklopropil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1, 6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi]propanoata (550 mg, 1.11 mmol, 1 ekviv.) u HCl/dioksanu (20 mL) je mešan preko noći na ST. Dobijena smeša je koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću Prep-HPLC da bi se dobilo 300 mg (74.10%) jedinjenja iz naslova u obliku čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 364.15 [M+H]<+>.
Korak 4: 3-[(2S)-2-Ciklopropil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi] propanoična kiselina
[1437] U mešani rastvor etil 3-[(2S)-2-ciklopropil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi]propanoata (300 mg, 0.83 mmol, 1 ekviv.) u THF (9 mL) i H2O (3 mL), dodat je LiOH·H2O (140 mg, 3.5 mmol, 4.21 ekviv.). Dobijeni rastvor je mešan 5 h na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvora je podešena na 1 sa HCl (1 M). Rezultujuća smeša je koncentrovana da bi se dobilo 260 mg (sirovog) jedinjenja iz naslova u obliku čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 336.12 [M+H]<+>.
Korak 5: (S)-6-[4-[3-[2Ciklopropil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]etoksi] propanoil] piperazin-1-il]nikotinonitril
[1438] U promešani rastvor 3-[(2S)-2-ciklopropil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] etoksi]propanoična kiselina (130 mg, 0.39 mmol, 1.00 ekviv.) u DMF (10 mL) i Int-A4 (80 mg, 0.43 mmol, 1.09 ekviv.), DIPEA (0.5 mL) i HATU (180 mmol, 0.47 ekviv.) 1.2 ekvivalent). Dobijeni rastvor je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (75.9 mg, 39%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 506.25 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.40 (s, 1H), 8.51 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 7.97 - 7.81 (m, 2H), 6.92 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.50 - 6.37 (m, 1H), 3.74 - 3.49 (m, 13H), 2.57 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.12 - 1.00 (m, 1H), 0.53 -0.39 (m, 2H), 0.37 - 0.27 (m, 2H).
Primer 606: (S)-5-[(1-Ciklopropil-2-[3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il] propoksi]-etil] amino]-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1439]
[1440] U mešani rastvor 3-[(2S)-2-ciklopropil-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] amino]etoksi]propanoične kiseline (130 mg, 0.39 mmol, 1.00 ekviv.) u DMF-u (10 mL) i Int-A2 (80 mg, 0.43 mmol, 1.09 ekviv.) su dodati DIPEA (0.5 mL) i HATU (180 mg, 0.47 mmol, 1.2 ekviv.). Dobijeni rastvor je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (79.3 mg, 37%) u obliku bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 550.25 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.40 (s, 1H), 8.73 (s, 2H), 7.88 (s, 1H), 6.51 - 6.38 (m, 1H), 3.94 - 3.44 (m, 13H), 2.58 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 1.15 - 1.01 (m, 1H), 0.55 - 0.40 (m, 2H), 0.38 -0.25 (m, 2H).
Primer 607: 5-[[(2R,3R)-3-metoksi-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il] piperazin-1-il] propoksi)butan -2-il]amino] -4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1441]
Korak 1: (2R,3R)-2-amino-3-metoksibutan-1-ol
[1442] Rastvor (2S,3R)-2-amino-3-metoksibutanske kiseline (1 g, 7.51 mmol, 1 ekviv.), diborana (15.0 mL, 1 M, 2 ekviv.) u THF (15 mL) je mešan 12 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena dodatkom 15 mL metanola. Dobijena smeša je koncentrovana, razblažena sa 15 mL vode i isprana sa 2x30 mL DCM. Organski slojevi su kombinovani i osušeni preko Na2SO4. Rezultujuća smeša je koncentrovana kako bi se dobilo 2.2 g (sirovog) jedinjenja iz naslova u obliku bezbojnog ulja. LCMS (ESI, m/z): 120.09 [M+H]<+>
Korak 2: 5-[[(2R,3R)-1-hidroksi-3-metoksibutan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1443] Rastvor (2R,3R)-2-amino-3-metoksibutan-1-ola (2.18 g, 18.29 mmol, 1 ekviv.), Int-A6 (2.46 g, 7.48 mmol, 0.41 ekviv.) i TEA (3.7 g, 36.56 mmol, 2.00 ekviv.) u etanolu (10 mL, 1.00 ekviv.) je mešan 1 h na 80° C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (3/7) da bi se dobilo 1.63 g (21.6%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS (ESI, m/z): 412.18[M+H]<+>
Korak 3: Metil 3-[(2R,3R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]butoksi]propanoat
[1444] Rastvor 5-[[(2R,3R)-1-hidroksi-3-metoksibutan- 2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (1.62 g, 3.94 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(2.6) g, 7.87 mmol, 2.00 ekviv.), metil prop-2-enoat (1.7 g, 19.68 mmol, 5.00 ekviv.) u ACN (10 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (3/7) da bi se dobilo 870 mg (44.4%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS (ESI, m/z): 498.22 [M+H]<+>
Korak 4: Metil 3-[(2R,3R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-ilJaminoJ butoksiJpropanoat
[1445] Rastvor metil 3-[(2R,3R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]butoksi]propanoata (850 mg, 1.71 mmol, 1 ekviv.) u DCM (10 mL) i TFA (1 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. pH vrednost rastvora je etanolaminom podešena na 8. Dobijeni rastvor je razblažen sa 20 mL vode i ekstrahovan sa 4 x 20 mL DCM. Organski slojevi su kombinovani i sušeni preko Na2SO4. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 640 mg jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 368.14 [M+H]<+>
Korak 5: 3-[(2R,3R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]butoksi] propanoična kiselina
[1446] Rastvor metil 3-[(2R,3R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] amino]butoksi]propanoata (620 mg, 1.69 mmol, 1 ekviv.), LiOH.H2O (354.2 mg, 8.44 mmol, 5.00 ekviv.) u metanolu (15 mL) i vodi (5ml 277.54, mmol, 164.43 ekviv.) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja, pH vrednost rastvora je podešena na 5 pomoću HCl (1 M). Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 5x25 mL DCM. Organski slojevi su kombinovani i osušeni preko Na2SO4. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 500 mg (84%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 354.12 [M+H]<+>
Korak 6: 5-[[(2R,3R)-3-metoksi-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi) butan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2, 3-dihidropiridazin-3-on
[1447] Rastvor 3-[(2R,3R)-3-metoksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] butoksi]propanoične kiseline (100 mg, 0.28 mmol, 1 ekviv.), DIPEA (109.7 mg, 0.85 mmol, 3 ekviv.), Int-A2 (76.0 mg, 0.28 mmol, 1 ekviv.), HATU (161.4 mg, 0.42 mmol, 1.5 ekviv.) u DMF (3 mL) je mešan 1 h na ST. Dobijeni rastvor je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/ACN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (44.5 mg, 27.70%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 568.47 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.49 (s, 1H), 8.74 (d, J = 0.9 Hz, 2H), 7.91 (s, 1H), 6.01 (dd, J = 9.3, 4.8 Hz, 1H), 4.07 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 3.83 (dt, J = 19.5, 5.5 Hz, 4H), 3.70 (tt, J = 9.3, 4.8 Hz, 2H), 3.54 (ddt, J = 12.8, 6.3, 3.6 Hz, 7H), 3.27 (s, 3H), 2.60 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.11 (d, J = 6.3 Hz, 3H).
Primer 608: 4-bromo-5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il] propoksi)propan-2 -il]oksi]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1448]
Korak 1: 1-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]prop-2-en- 1-on
[1449] Rastvor Int-A2 (5 g), prop-2-enoil prop-2-enoata (3 g) i TEA (6.7 g) u DCM (80 mL) je mešan 1 h na ST. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom, a zatim je ostatak nanesen na kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (38:62) da bi se dobilo 4.2 g jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>287.10.
Korak 2: 3-[(2S)-2-(benziloksi)propoksi]-1-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propan-1-on
[1450] A rastvor 1-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (Int-A21; 1 g, 3.49 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(3.4 g, 10.44 mmol, 2.99 ekviv.) i (2S)-2-(benziloksi)propan-1-ola (1.74 g, 0.01 mmol) u ACN (50 mL) je mešan 36 h na 80 °C. Čvrste supstance su filtrirane, a zatim je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (1:1) da bi se dobilo 480 mg (30%) jedinjenja iz naslova kao smeđe ulje LCMS: [M+H]<+>453.20.
Korak 3: 3-[(2S)-2-Hidroksipropoksi]-1-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propan-1-on
[1451] Rastvor 3-[(2S)-2-(benziloksi)propoksi]-1-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il] propan-1-ona (460 mg, 1.02 mmol, 1 ekviv.) u DCM (10 mL) je mešan 10 min na 0 °C. Zatim je dodat BCl3 u DCM (3 mL, 3.0 ekviv.) i dobijeni rastvor je mešan još 3 h na 0 °C. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom i prečišćen pomoću Flash-Prep-HPLC pod sledećim uslovima (Intel Flash-1): Kolona, C18 silika gel; mobilna faza, ACN:H2O=5:95 sa porastom na ACN:H2O=47:53 u roku od 25 min; Detektor, UV 254 nm. Koncentrovanjem pod sniženim pritiskom je dobijeno jedinjenje iz naslova, 190 mg (52%) u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>363.16.
Korak 4: 4-bromo-5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi) propan-2 -il]oksi]-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1452] Rastvor 3-[(2S)-2-hidroksipropoksi]-1-[ 4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propan-1-ona (170 mg, 0.47 mmol, 1 ekviv.), ACN (8 mL, 152.20 mmol, 324.41 ekviv.), Cs2O3(458 mg, 1.41 mmol, 3.00 ekviv.) i Int-A8 (538 mg, 1.40 mmol, 2.99 ekviv.) je mešano 10 h na 80 °C. Čvrste materije su filtrirane, a zatim je ostatak nanesen na kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (2:3) da bi se dobilo 150 mg (48%) jedinjenja iz naslova u obliku smeđeg ulja. LCMS: [M+H]<+>665.17[M+H]<+>, 667.17[M+H]<+>.
Korak 5: 4-bromo-5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi) propan-2 -il]oksi]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1453] Rastvor 4-bromo-5-[[(2S)-1-(3-okso-3-]4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il] propoksi)propan-2-il]oksi]-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (120 mg, 0.18 mmol, 1 ekviv.), DCM (3 mL) i TFA (0.6 mL, 8.08 mmol, 44.80 ekviv.) je mešan 1.5 h na ST. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom i prečišćena pomoću Flash-Prep-HPLC. Sirovi proizvod je dalje prečišćen pomoću Chiral-Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (10.8 mg, 11%) u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>535.10, 537.10.<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.58 (s, 2H), 8.05 (s, 1H), 5.02 (td, J= 6.6, 3.2 Hz, 1H), 3.89 (q, J= 5.6, 5.2 Hz, 4H), 3.83 - 3.70 (m, 1H), 3.74 - 3.57 (m, 7H), 2.65 (t, J= 5.9 Hz, 2H), 1.36 (d, J = 6.3 Hz, 3H).
Primer 609: 4-bromo-5-[[(2S)-1-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi] propan-2-il]oksi]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1454]
Korak 1: 3-[(2S)-2-(benziloksi)propoksi]-1-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1- il]propan-1-on
[1455] Rastvor 1-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]but-3-en-1-ona (1 g, 3.75 mmol, 1 ekviv), (2S)-2-(benziloksi) propan-1-ola (1.2 g, 7.50 mmol, 2.0 ekviv.) i Cs2CO3(2.4 g, 7.50 mmol, 2.0 ekviv.) u ACN (10 mL) je mešan 16 h na 80 °C. Čvrste materije su filtrirane a rezultujuća smeša je koncentrovana. Ostatak je unesen u kolonu silika gela sa EtOAc/petroletrom (2:3) da bi se dobilo 894 mg (57%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>419.20.
Korak 2: 1-[4-(5-Hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-[(2S)-2-hidroksipropoksi]propan-1-on
[1456] U rastvor 3-[ (2S)-2-(benziloksi)propoksi]-1-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]propan-1-on (874 mg, 2.09 mmol, 1 ekviv.) u DCM ( 3 mL) je dodat BCl3(10 mL) na 0 °C. Dobijeni rastvor je mešan 1 h na 0 °C i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 1.04 g (53%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>329.15.
Korak 3: 4-bromo-5-[[(2S)-1-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]propan-2-il] oksi]-2 -[[2-(trimetilsilil) etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1457] Rastvor 1-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3 -[(2S)-2-hidroksipropoksi]propan-1-ona (406 mg, 1.23 mmol, 1 ekviv.), Int-A8 (948.7 mg, 2.47 mmol, 2.0 ekviv.) i Cs2CO3(804.6 mg, 2.47 mmol, 2.47 mmol) ekviv.) u ACN (10 mL) je mešan 8 h na 60 °C. Rezultujuća čvrsta supstanca je filtrirana i rezultujuća smeša je koncentrovana. Ostatak je unesen u kolonu silika gela sa EtOAc/petroletrom (1:1) da bi se dobilo 260 mg (33%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>631.14, 633.14.
Korak 4: 4-bromo-5-[[(2S)-1-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3-oksopropoksi]propan-2-il] oksi]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1458] Rastvor 4-bromo-5-[[(2S)-1-[3-[4-(5-hloropirimidin-2-il)piperazin-1-il]-3 -oksopropoksi]propan-2-il]oksi]-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (260 mg, 0.41 mmol, 1 ekviv.), DCM (10 L ) i TFA (2 mL) je mešan 1 h na ST. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, a ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (39.9 mg, 19%) u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>500.95, 502.95.<1>H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ 8.32 (s, 2H), 8.06 (s, 1H), 5.03 (td, J= 6.6, 3.3 Hz, 1H), 3.93 - 3.57 (m, 12H), 2.66 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 1.38 (d, J= 6.3 Hz, 3H).
Primer 610: 5-[[(2R,3R)-3-Hidroksi-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il] propoksi)butan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1459]
Korak 1: (2S, 3R)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]butanska kiselina
[1460] Rastvor (2S,3R)-2-amino-3-hidroksibutanske kiseline (1190 mg, 9.99 mmol, 1 ekviv.), TEA (2021.8 mg, 19.98 mmol, 2 ekviv.) i Int-A6 (3284.6 mg, 9.99 mmol, 1 ekviv.) u EtOH (20 mL) je mešan 1 h na ST. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, sirovi materijal je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 900 mg (22%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>411.45.
Korak 2: 5-[[(2R,3R)-1,3-Dihidroksibutan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1461] Rastvor (2S,3R)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]butanske kiseline (900 mg, 2.19 mmol, 1 ekviv.) u BH3-THF (10 mL) je mešan 2 h na 0 °C. Reakcija je zatim ugašena dodatkom 100 mL voda/led i rezultujući rastvor je ekstrahovan sa 3 x 100 mL EtOAc. Organski slojevi su koncentrovani, a zatim je dobijeni rastvor prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 776 mg (89%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>397.47.
Korak 3: Metil 3-[(2R,3R)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin - 4-il]amino]butoksi]propanoat
[1462] Rastvor 5-[[(2R,3R)-1,3-dihidroksibutan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2 -(trimetilsilil) etoksi] metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (776 mg, 1.95 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(1272.2 mg, 3.90 mmol, 2.0 ekviv.), metil prop-6.2-enoata (336.2 mg, 3.90 mmol, 2.0 ekviv.) i ACN (10 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Čvrste supstance su filtrirane i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Dobijeni rastvor je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 450 mg (48%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS:
[M+H]<+>483.55.
Korak 4: Metil 3-[(2R,3R)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] butoksi]propanoat
[1463] Rastvor metil 3-[(2R,3R)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-1,6-dihidropiridazin- 4-il]amino]butoksi]propanoata (450 mg, 0.93 mmol, 1 ekviv.) i TFA (1 mL) u DCM (5 mL) su mešani 1 h na ST. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 650 mg jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>353.29.
Korak 5: 3-[(2R,3R)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]butoksi] propanska kiselina
[1464] Rastvor metil 3-[(2R,3R)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] butoksi]propanoata (650 mg, 1.84 mmol, 1 ekviv.), LiOH (220.3 mg, 9.20 mmol, 5.0 ekviv.) u H2O (1 mL):MeOH (5 mL) je mešan 1 h na ST. pH vrednost rastvora je podešena na 2 sa HCl (1 M), a zatim je dobijeni rastvor prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 120 mg (19%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>339.27.
Korak 6: 5-[[(2R,3R)-3-Hidroksi-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il] propoksi) butan -2-il]amino]- 4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1465] Rastvor 3-[(2R,3R)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] butoksi]propanoične kiseline (120 mg, 0.35 mmol, 1 ekviv.), HATU (134.5 mg, 0.35 mmol, 1.0 ekviv.), Int-A2 (82.1 mg, 0.35 mmol, 1 ekviv.), i DIPEA (91.4 mg, 0.71 mmol, 2.0 ekviv.) u DMF (2 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi, a zatim je rezultujući rastvor prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (56.7 mg, 29%) u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>554.25.<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.62 (s, 2H), 7.96 (s, 1H), 4.08 - 3.80 (m, 6H), 3.85 - 3.80 (m, 2H), 3.79 - 3.55 (m, 6H), 2.70 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 1.21 (d, J = 6.3 Hz, 3H).
Primer 611: 5-[[(2R,3S)-3-Hidroksi-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il] propoksi)butan -2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1466]
Korak 1: (2S, 3S)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]butanska kiselina
[1467] Rastvor (2S,3S)-2-amino-3-hidroksibutanske kiseline (2.38 g, 0.02 mmol, 1 ekviv.), TEA (4.0 g, 0.04 mmol, 2 ekviv.), Int-A6 (6.6 g, 0.02) mmol, 1 ekviv.) u EtOH (50 mL) je mešan 1 h na ST. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, sirovi ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 2.1 g (26%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>411.45.
Korak 2: 5-[[(2R,3S)-1,3-Dihidroksibutan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1468] Rastvor (2S,3S)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]butanske kiseline (2 g, 4.86 mmol, 1 ekviv.) u BH3-THF (50 mL) je mešan 2 h na 0 °C. Reakcija je zatim ugašena dodatkom 100 mL voda/led i rezultujući rastvor je ekstrahovan sa 3 x 100 mL EtOAc. Organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom, a zatim je dobijeni rastvor prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 1.5 g (78%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>397.47.
Korak 3: Metil 3-[(2R,3S)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin - 4-il]amino]butoksi]propanoat
[1469] Rastvor 5-[[(2R,3S)-1,3-dihidroksibutan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2-[[2 -(trimetilsilil)etoksi] metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (1500 mg, 3.774 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(2459.20 mg, 7.548 mmol, 2.0 ekviv.) i metil prop-47-2-enoata (487.34 mg, 5.661 mmol, 1.5 ekviv.) u MeCN (50 mL) je mešan 1 h na ST. Čvrste supstance su filtrirane i dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio sirovi proizvod koji je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 720 mg (39%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS:
[M+H]<+>483.55.
Korak 4: Metil 3-[(2R,3S)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-ilJaminoJ butoksiJpropanoat
[1470] Rastvor metil 3-[(2R,3S)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]butoksi]propanoata (720 mg, 1.489 mmol, 1 ekviv.) i TFA (1 mL) u DCM (5 mL) su mešani 1 h na ST. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 1 g jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>353.29.
Korak 5: 3-[(2R,3S)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]butoksi] propanoična kiselina
[1471] Rastvor metil 3-[(2R, 3S)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il] amino]butoksi] propanoata (1000 mg, 2.830 mmol, 1 ekviv.) i LiOH ( 338.92 mg, 14.152 mmol, 5 ekviv.) u H2O (1 mL)/MeOH (5 mL) je mešan 1 h na ST. pH vrednost rastvora je podešena na 2 sa HCl (1M), a zatim je sirovi proizvod prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 190 mg (20%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>339.27.
Korak 6: 5-[[(2R,3S)-3-Hidroksi-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi) butan -2-il]amino]- 4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1472] Rastvor 3-[(2R,3S)-3-hidroksi-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino] butoksi]propanoične kiseline (120 mg, 0.35 mmol, 1 ekviv.), HATU (134.5 mg, 0.35 mmol, 1.0 ekviv.), Int-A2 (82.1 mg, 0.35 mmol, 1 ekviv.), i DIPEA (91.4 mg, 0.71 mmol, 2.0 ekviv.) u DMF (2 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi, a zatim je sirovi proizvod prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC dajući jedinjenje iz naslova (32 mg, 16%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: [M+H]<+>554.25.<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.61 (s, 2H), 7.99 (s, 1H), 4.08 - 3.91 (m, 6H), 3.97 - 3.79 (m, 3H), 3.79 - 3.59 (m, 5H), 2.69 (t, J = 5.9 Hz, 2H),1.24 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
Primer 612 Izomer A: 6-(4-[2-[(2R,5S)-5-[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidro-piridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbo-nitril i
Primer 612 Izomer B: 6-(4-[2-[(2R,5S)-5-[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i
Primer 612 Izomer C: 6-(4-[2-[(2R,5R)-5-[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidro-piridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbo-nitril i
Primer 612 Izomer D: 6-(4-[2-[(2S,5S)-5-[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]oksolan-2-il] acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
Primer 612 Primer 612
Izomer C Izomer D
Korak 1: terc-butil 1-(hidroksimetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-karboksilat
[1473] Rastvor 2-[(terc-butoksi(karbonil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-karboksilne kiseline (3.6 g, 13.67 mmol, 1 ekv.) i B2H6/THF (27 mL) u THF (40 mL) je mešan 12 h na ST. Dobijeni rastvor je ugašen dodatkom 30 mL rastvora NH4Cl i ekstrahovan sa 2 x 50 mL EtOAc. Organski slojevi su kombinovani i osušeni preko Na2SO4. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 3.9 g jedinjenja iz naslova u obliku smeđe čvrste supstance. LCMS:
[M+H]<+>250.14.
Korak 2: terc-butil 1-formil-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-karboksilat
[1474] Rastvor terc-butil 1-(hidroksimetil)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2- karboksilata (3.9 g, 15.64 mmol, 1 ekviv.) i Dess-Martin (10.1 g, 23.81 mmol, 1.52 ekviv.) u DCM (40 mL) je mešan 12 h na sobnoj temperaturi. Reakcija je ugašena dodatkom 40 mL Na2SO3/H2O. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 50 mL DCM i organski slojevi su kombinovani, i isprani sa 2 x 50 mL NaHCO3. Organski slojevi su kombinovani i sušeni preko Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiranjem sa EtOAc/petroletrom (1/9) da bi se dobilo 830 mg (21%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>248.12.
Korak 3: terc-butil 1-(1-hidroksipent-4-en-1-il)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-karboksilat
[1475] Rastvor terc-butil 1-formil-2, 3-dihidro-1H-izoindol-2-karboksilata (830 mg, 3.36 mmol, 1 ekviv.), bromo (but-3-en-1-il)magnezijum (5.0 mL, 5.00 mmol, 1.49 ekviv.) u THF (20 mL) je mešan 1 h u atmosferi azota na ST. Dobijeni rastvor je ugašen dodatkom 20 mL vode i ekstrahovan sa 3 x 30 mL EtOAc. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 945 mg (93%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>304.18.
Korak 4: terc-butil1-[(4Z)-1-hidroksi-6-metoksi-6-oksoheks-4-en-1-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-karboksilat
[1476] Rastvor terc-butil 1-(1-hidroksipent-4-en-1-il)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-karboksilata (945 mg, 3.11 mmol, 1 ekviv.), metil prop-2-enoata (1340.7 mg, 15.57 mmol, 5.00 ekviv.) i Grabsov katalizator 2. generacije (26.4 mg, 0.03 mmol, 0.01 ekviv.) u DCM-u (25 mL) je mešan 1.5 h u atmosferi azota na 45 °C. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom a ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (1/9) da bi se dobilo 930 mg (83%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>362.19.
Korak 5: terc-butil 1-[5-(2-metoksi-2-oksoetil)oksolan-2-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-karboksilat
[1477] Rastvor terc-butil 1 -[(4Z)-1-hidroksi-6-metoksi-6-oksoheks-4-en-1-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-karboksilata (930 mg, 2.57 mmol, 1 ekviv.) i natrijum hidrida (185.2 mg, 7.72 mmol, 3.00 ekviv.) u THF (20 mL) je mešan na sobnoj temperaturi 12 sati. Reakcija je zatim ugašena dodatkom vode i rezultujući rastvor je ekstrahovan sa 4 x 50 mL EtOAc i organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (15/85) da bi se dobilo 630 mg (68%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>362.19.
Korak 6: 2-(5-[2-[(Terc-butoksi)karbonil]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]oksolan-2-il)sićetna kiselina
[1478] Rastvor terc-butil 1-[5-(2-metoksi-2-oksoetil)oksolan-2-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-karboksilata (610 mg, 1.69 mmol, 1 ekviv.) i LiOH·H2O (354.1 mg, 8.44 mmol, 5.00 ekviv.) u MeOH (15 mL) i vodi (5 mL) je mešan 2 h na ST. Dobijena smeša je koncentrovana i pH rastvora je podešen na 6 sa HCl (1M), a zatim ekstrahovana sa 5 x 30 mL DCM. Organski slojevi su kombinovani i osušeni preko Na2SO4. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 520 mg (89%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>348.17.
Korak 7: terc-butil 1-(5-[2-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]oksolan-2-il)-2,3-dihidro- 1H-izoindol-2-karboksilat
[1479] Rastvor 2-(5-[2-[(terc-butoksi)karbonil]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]oksolan-2-il) sićetne kiseline (500 mg, 1.44 mmol, 1 ekviv.), DIPEA (558.0 mg, 4.32 mmol, 3.00 ekviv.), Int-A4 (323.4 mg, 1.44 mmol, 1 ekviv.), HATU (820.9 mg, 2.16 ekviv.) u DMF (5 mL) je mešan 1 h na ST. Ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 670 mg (90%) jedinjenja iz naslova u obliku prljavo-bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>518.27.
Korak 8: 6-(4-[2-[5-(2,-3-dihidro-1H-izoindol-1-il)oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril hidrohlorid
[1480] Rastvor terc-butil 1-(5-[2-[4-(5-cijanopiridin-2-il)piperazin-1-il]-2-oksoetil]oksolan-2-il)-2,3-dihidro-1Hizoindol-2-karboksilata (620 mg, 1.20 mmol, 1 ekviv.) u HCl/dioksanu (10 mL) je mešan 30 minuta na ST. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobilo 520 mg (96%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS:
[M+H]<+>418.22.
Korak 9: 6-[4-[2-(5-[2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4- il]-2, 3-dihidro-1H-izoindol-1-il]oksolan-2-il)acetil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitril
[1481] Rastvor 6-(4-[2-[5-(2),3-dihidro-1H-izoindol-1-il)oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril hidrohlorida (520 mg, 1.15 mmol, 1 ekviv.), Int-A6 (376.6 mg , 1.15 mmol, 1 ekviv.) i TEA (231.8 mg, 2.29 mmol, 2 ekviv.) u EtOH (20 mL) je mešan 1 h na 80 °C. Reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom a ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (6/4) da bi se dobilo 730 mg (90%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>710.30.
Korak 10: 6-(4-[2-[(2R,5S)-5-[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2 ,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril, 6-(4-[2-[(2R,5S)-5-[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]oksolan-2-il]acetil] piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril, 6-(4-[2-[(2R,5R)-5-[(1S)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidro-piridazin-4-il]-2,3- dihidro-1H-izoindol-1-il]oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril i 6-(4-[2-[(2S,5S)-5-[(1R)-2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]oksolan-2-il]acetil]piperazin-1-il)piridin-3-karbonitril
[1482] Rastvor 6-[4-[2-(5-[2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidro-piridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-1-il]oksolan-2-il)acetil]piperazin-1-il]piridin-3-karbonitrila (710 mg, 1.00 mmol, 1 ekv.) u TFA (2 mL ) i DCM (10 mL) je mešan 1.5 h na ST. Nakon koncentrovaja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral-Prep-HPLC (kolona Chiralpak Cellulose-SB, 3 µm, 0.46 x 15 cm, eluiranjem sa gradijentom MtBE (0,1% DEA):EtOH=80:20, pri brzini protoka od 1 mL/min) dajući jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance i sa arbitrarno dodeljenom stereohemijom.
Primer 612 Izomer A: LCMS: [M+H]<+>580.57,<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.48 (s, 1H), 8.52 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.89 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 7.44 - 7.36 (m, 2H), 7.36 - 7.30 (m, 2H), 6.93 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 5.91 - 5.89 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 5.05 - 5.02 (m, 1H), 4.45 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 4.17 (p, J = 6.4 Hz, 1H), 3.99 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 3.69 - 3.68 (m, 4H), 3.63 - 3.53 (m, 4H), 2.69 (dd, J = 15.3, 6.0 Hz, 1H), 2.43 (dd, J = 15.4, 6.8 Hz, 1H), 2.10 - 1.94 (m, 1H), 1.88 (dq, J = 13.8, 7.0, 6.6 Hz, 1H), 1.71 (dq, J = 15.5, 7.8 Hz, 1H), 1.56 - 1.43 (m, 1H). tR = 4.821 min
Primer 612 Izomer B: LCMS: [M+H]<+>580.57 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.45 (s, 1H), 8.50 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.87 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 7.43 - 7.33 (m, 2H), 7.32 - 7.22 (m, 2H), 6.89 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 5.90 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.01 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 4.43 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 4.25 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.13 (q, J = 6.7 Hz, 1H), 3.65 - 3.62 (m, 2H), 3.34 - 3.28 (m, 6H), 2.72 - 2.62 (m, 1H), 2.41 (dd, J = 14.9, 5.7 Hz, 1H), 2.07 - 2.05 (m, 1H), 1.98 (s, 1H), 1.76 (p, J = 8.8 Hz, 1H), 1.56 - 1.43 (m, 1H). tR = 6.334 min.
Chiral-Prep-HPLC prečišćavanje sa kolonom ((R,R)-Whelk, 3.5 µm, 0.46 x 15 cm, eluiranje sa gradijentom MtBE(0.1%DEA):EtOH=90:10, pri brzini protoka od 1 mL/min) dalo je izomer C i izomer D kao arbitrarno dodeljenu stereohemiju.
Primer 612 Izomer C: 12.48 (s, 1H), 8.51 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.89 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 7.44 -7.36 (m, 2H), 7.36 - 7.28 (m, 2H), 6.93 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 5.04 (d, J= 14.7 Hz, 1H), 4.45 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 4.17 (p, J = 6.5 Hz, 1H), 3.99 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 3.69 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 3.63 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 3.53 (t, J = 5.3 Hz, 4H), 2.69 (dd, J = 15.4, 6.0 Hz, 1H), 2.43 (dd, J = 15.5, 6.9 Hz, 1H), 2.10 - 1.94 (m, 1H), 1.88 (dq, J = 13.6, 6.6 Hz, 1H), 1.71 (dq, J = 15.7, 7.7 Hz, 1H), 1.56 - 1.43 (m, 1H). tR = 2.826 min.
Primer Izomer D: LCMS: [M+H]<+>580.57,<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.48 (s, 1H), 8.51 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.89 (dd, J = 9.1, 2.4 Hz, 1H), 7.44 - 7.36 (m, 2H), 7.36 - 7.28 (m, 2H), 6.93 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 5.04 (d, J= 14.7 Hz, 1H), 4.45 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 4.17 (p, J = 6.5 Hz, 1H), 3.99 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 3.69 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 3.63 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 3.53 (t, J = 5.3 Hz, 4H), 2.69 (dd, J = 15.4, 6.0 Hz, 1H), 2.43 (dd, J = 15.5, 6.9 Hz, 1H), 2.10 - 1.94 (m, 1H), 1.88 (dq, J = 13.6, 6.6 Hz, 1H), 1.71 (dq, J = 15.7, 7.7 Hz, 1H), 1.56 - 1.43 (m, 1H). tR = 3.640 min.
Primer 613: (S)-5-((1-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirazin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propau-2-il)amino)- 4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
Korak 1: terc-butil 4-(5-(trifluorometil)pirazin-2-il)piperazin-1-karboksilat
[1483] Rastvor 2-hloro-5-(trifluorometil)pirazina (1.5 g, 8.22 mmol, 1 ekviv.), K2CO3(2.27 g, 16.4 mmol, 2 ekviv.) i terc-butil piperazin-1-karboksilata (1.53 g, 8.22 mmol, 1 ekviv.) u NMP (15 mL) je mešan 1 h na 80 °C nakon čega je dodato 50 mL vode. Dobijene čvrste supstance su sakupljene filtracijom da bi se dobilo 2.5 g (91.5%) jedinjenja iz naslova. LCMS: [M+H]<+>332.
Korak 2: 2-(Piperazin-1-il)-5-(trifluorometil)pirazin
[1484] Rastvor terc-butil 4-[5-(trifluorometil)pirazin-2- il]piperazin-1-karboksilata (2.5 g, 7.52 mmol, 1 ekviv.) u HCl (gas) i 1,4-dioksanu (20 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Čvrste supstance su sakupljene filtracijom da bi se dobilo 1 g (57.3%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>232.
Korak 3: (S)-5-((1-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirazin-2-il)piperazin-1-il) ) )propoksi)propan-2-il) amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1485] Rastvor Int-A13 (151.4 mg, 0.490 mmol, 1.4 ekviv.), DIPEA (180.8 mg, 1.40 mmol, 4 ekviv.), HATU (172.9 mg, 0.455 mmol, 1.3 ekviv.) i 2-(piperazin-1-il)-5-(trifluorometil)pirazina (81.2 mg, 0.350 mmol, 1 ekviv) u DMF-u (2 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću Prep-HPLC (kolona YMC-Actus Triart C18, 5 µm, 30 x 250 cm, eluiranje sa gradijentom vode 10 mmol/L NH4HCO3u ACN) da se dobije 73.9 mg (40.4%) jedinjenja iz naslova kao bela čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>524.24.<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.43 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 4.18 (q, J = 6.2 Hz, 1H), 3.82 - 3.76 (m, 10H), 3.64 (dd, J = 9.7, 3.9 Hz, 1H), 3.52 (dd, J = 9.7, 6.8 Hz, 1H), 2.71 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 1.27 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
Primer 614 Izomer A: 5-((2-Hidroksi-1-(tetrahidrofuran-3-il)etil)amino)-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridazin-3(2H)-on
Primer 614 Izomer B: 5-(((R)-2-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il) propoksi)-1-(( R)-tetrahidrofuran-3-il)etil)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i
Primer 614 Izomer C: 5-(((S)-2-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il) propoksi)-1-(( R)-tetrahidrofuran-3-il)etil)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i
Primer 614 Izomer D: 5-(((R)-2-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il) propoksi)-1-(( S)-tetrahidrofuran-3-il)etil)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1486] Rastvor 2-amino-2-(tetrahidrofuran-3-il)etan-1-ola (2 g, 15.25 mmol, 1 ekviv.), Int-A6 (5.0 g, 15.25 mmol, 1.0 ekviv.) i TEA (3.1 g, 30.5 mmol, 2.0 ekviv.) u EtOH (20 mL) je mešan 1 h na 60 °C. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je pročišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa EtOAc/petroletrom da bi se dobilo 2.5 g jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>424.18.
Korak 2: Metil 3-(2-((6-okso-5-(trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1, 6-dihidropiridazin-4-il) amino)-2-(tetrahidrofuran-3-il)etoksi)propanoat
[1487] Rastvor 5-((2-hidroksi-1-(tetrahidrofuran-3-il)etil)amino)-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil) etoksi)metil)piridazin-3(2H)-ona (1.3 g, 3.07 mmol, 1 ekviv.), Cs2CO3(2.0 g, 6.14 mmol, 2.0 ekviv.) i metil akrilata (0.5 g, 6.14 mmol, 2.0 ekviv.) u CH3CN (10 mL) je mešan 3 h na sobnoj temperaturi. Čvrsta supstanca je filtrirana i nastali filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi ostatak je prečišćen kolonskom reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa voda/CH3CN da bi se dobilo 128 mg jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS:
[M+H]<+>510.22.
Korak 3: 3-(2-((6-okso-5-(trifluorometil)-1, 6-dihidropiridazin-4-il)amino)-2-(tetrahidrofuran-3-il)etoksi) propanoična kiselina
[1488] Rastvor metil 3-(2-((6-okso-5-(trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidro-piridazin-4-il)amino)-2-(tetrahidrofuran-3-il)etoksi)propanoata (128 mg, 0.25 mmol, 1 ekviv.) i TFA ( 1 mL) u DCM (5 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi, nakon čega je usledilo koncentrovanje pod sniženim pritiskom da se dobije metil 3-(2-((6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4- il)amino)-2-(tetrahidrofuran-3-il)etoksi)propanoat (68 mg, 0.18 mmol, 1 ekviv.), kojem je dodat LiOH (21.5 mg, 0.90 mmol, 5.0 ekviv.) i voda (0.4 mL) u MeOH (2 mL). Dobijena smeša je mešana 4 h na sobnoj temperaturi, koncentrovana pod sniženim pritiskom, a pH vrednost rastvora je podešena na 5 sa HCl (1 mol/mL). Sirovi proizvod je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom na koloni eluiranjem sa voda/CH3CN da bi se dobilo 40 mg jedinjenja iz naslova u obliku ulja. LCMS: [M+H]<+>366.12.
Korak 4: 5-(((S)-2-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)-1-((S) –tetra-hidrofuran-3-il)etil)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i
5-(((R)-2-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)-1-((R)-tetrahidrofuran- 3-il)etil)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i
5-(((S)-2-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)-1-((R)-tetrahidrofuran- 3-il)etil)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i
5-(((R)-2-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)-1-((S)-tetrahidrofuran- 3-il)etil)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1489] Rastvor 3-(2-((6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino)-2-(tetrahidrofuran-3- il) etoksi)propanoične kiseline (40 mg, 0.109 mmol, 1 ekv.), DIPEA (28.3 mg, 0.219 mmol, 2.0 ekviv.), HATU (41.63 mg, 0.109 mmol, 1.0 ekviv.) i Int-A2 (30.51 mg, 0.131 mmol, 1.2 ekviv.) u DMF-u (2 mL) je mešan 40 minuta na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je razblažen sa 5 mL vode, ekstrahovan sa 3 x 10 mL EtOAc, a organski slojevi su kombinovani. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, sirovi proizvod je pročišćen hromatografijom na C18 koloni reverzne faze eluiranjem sa voda/CH3CN. Racemsko jedinjenje je zatim odvojeno Chiral-Prep-HPLC (kolona CHIRALPAK IC, 5 µm, 2 x 25 cm, eluiranjem sa gradijentom heksana:DCM (3:1) u 10 mM NH3/EtOH mobilne faze pri brzini protoka od 20 mL/min). Stereohemija za četiri enantiomera je arbitrarno dodeljena.
Primer 614 Izomer A - C: LCMS: [M+H]<+>580.10
Primer 614 Izomer D: 5-(((R)-2-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il) propoksi)-1-((S)-tetrahidrofuran- 3-il)etil)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on LCMS: [M+H]<+>580.10,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.65 - 8.58 (d, J = 0.9 Hz, 2H), 7.99 (s, 1H), 3.99 - 3.86 (m, 6H), 3.88 - 3.54 (m, 11H), 2.70 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 2.58 (m, 1H), 2.09 (m, 1H), 1.79 - 1.68 (m, 1H).
Primer 615: (S)-5-((1-((3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propil)amino)propan-2-il)oksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1490]
Korak 1: (S)-3-((2-Hidroksipropil)amino)-1-(4-(5-(trifluorometil) pirimidin-2-il]piperazin-1-il)propan-1-on
[1491] Rastvor (S)-1-aminopropan-2-ola (1 g, 13.3 mmol, 1 ekviv.) i Int-A21 (3.81 g, 13.3 mmol, 1 ekviv.) u MeOH (50 mL) je mešan 4 h na 60 °C. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 3.2 g (69.2%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>362.17.
Korak 2: terc-butil (S)-(2-hidroksipropil)(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il) propil)karbamat
[1492] Rastvor (S)-3-((2-hidroksipropil)amino)-1-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il) propan-1-ona (3.2 g, 8.855 mmol, 1 ekviv.), di-terc-butil dikarbonata (1.93 g, 8.86 mmol, 1 ekviv.) i TEA (1.79 g, 17.7 mmol, 2.0 ekviv.) u DCM-u (50 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 4.1 g jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>462.22.
Korak 3: Terc-butil (S)-(2-((1-(4-metoksibenzil)-6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi) propil)(3-okso-3-( 4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propil)karbamat
[1493] Rastvor terc-butil (S)-(2-hidroksipropil)(3-okso-3-(4)-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propil) karbamata (4 g, 8.7 mmol, 1 ekviv.), Int-A20 (2.76 g, 8.7 mmol, 1.0 ekviv.) i terc-BuONa (1.25 g, 13.0 mmol, 1.5 ekviv.) u DCM (100 mL) je mešan 1 h na 0 °C. Dobijeni rastvor je razblažen sa 200 mL vode, ekstrahovan sa 3 x 100 mL EtOAc, a organski sloj je kombinovan i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 4 g (62.1%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>744.29.
Korak 4: (S)-5-((1-((3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propil)amino)propan-2-il)oksi )-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1494] Rastvor terc-butil (S)-(2-((1-(4-metoksienzil)-6-okso-5-(trifluorometil))-1,6-dihidropiridazin-4-il) oksi)propil)(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propil)karbamat (500 mg, 0.6.72 mmol, 1 ekviv.) i H2SO4(1 mL) u TFA (5 mL) je mešan 2 h na 0 °C, a dobijeni rastvor je ugašen sa 20 mL ledene vode, ekstrahovan sa 3 x 20 mL EtOAc, i organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 33.7 mg (9.58%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>524.20.<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.61 (d, J = 0.9 Hz, 2H), 8.06 (s, 1H), 4.11-3.74 (m, 6H), 3.64 (dq, J = 5.8, 3.2, 2.7 Hz, 5H), 3.49 (dd, J = 14.5, 3.9 Hz, 1H), 3.41-3.27 (m, 1H), 2.80 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.16 (d, J = 6.2 Hz, 3H).
Primer 616: (S)-5-((1-(Metil(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propil)amino) propan-2-il)oksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1495]
Korak 1: (S)-2-(4-Metoksibenzil)-5-((1-(metil(3-okso-) 3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propil) amino)propan-2-il)oksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1496] Rastvor (S)-2-(4-metoksibenzil)-5-((1-((3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propil)amino)propan-2-il)oksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-ona (500 mg, 0.777 mmol, 1 ekviv.), polioksimetilena (93.23 mg, 3.108 mmol, 4 ekviv.) i natrijum cijanoborhidrida (96.33 mg, 1.554 mmol, 2 ekviv.) u MeOH (5 mL) je mešan 2 h na 60 °C, a zatim je rezultujući rastvor koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC eluiranjem sa H2O/MeOH da bi se dobilo 350 mg (68.5%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>658.25.
Korak 2: (S)-5-((1-(Metil(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propil)amino) propan-2-il)oksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1497] Rastvor (S)-2-(4-metoksibenzil)-5-((1-(metil(3-okso-)3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il) piperazin-1-il)propil)amino)propan-2-il)oksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-ona (300 mg, 0.456 mmol, 1 ekviv.) i H2SO4(1 mL) u TFA (5 mL) je mešan 2 h na 0 °C, a zatim je dobijeni rastvor koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću Prep-HPLC eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo (68.9 mg, 28.1%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>538.25.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.14 (s, 1H), 8.72 (d, J = 0.9 Hz, 2H), 8.28 (s, 1H), 5.11 (s, 1H), 3.81 (d, J = 19.2 Hz, 4H), 3.51 (t, J = 5.4 Hz, 4H), 2.67- 2.49 (m, 4H), 2.39 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 2.19 (m, 3H), 1.25 (d, J = 6.1 Hz, 3H).
Primer 617 Izomer A: 5-(((S)-1-((R)-2-Amino-4-okso-4-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il) piperazin-1-il)butoksi)propan-2-il)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i
Primer 617 Izomer B: 5-(((S)-1-((S)-2-Amino- 4-okso-4-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il) piperazin-1-il)butoksi)propan-2-il)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1498]
Primer 617 Primer 617
Izomer A Izomer B
Korak 1: (S)-5-((1-Hidroksipropan-2-il)amino)-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil) piridazin-3(2H )-on
[1499] Rastvor Int-A6 (8 g, 24 mmol, 1 ekviv.), TEA (2.463 g, 24 mmol, 1 ekviv.) i (S)-2-aminopropan-1-ola (1.829 g, 24 mmol, 1 ekviv.) u EtOH (60 mL) je mešan 1 h na 60 °C. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom i ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (1/1) da bi se dobilo 5.39 g (58.5%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>367.44.
Korak 2: Etil (S,E)-4-(2-(6-okso-5-(trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidropiridazin-4-ilamino) propoksi)but-2-enoat
[1500] Rastvor (S)-5-(1-hidroksipropan-2-ilamino)-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil) piridazin-3(2H)-ona (1.7 g, 4.63 mmol, 1 ekviv.), Pd2(alil)2Cl2(85 mg, 0.23 mmol, 0.05 ekviv.), diizopropil(2',4',6'-triizopropil-3-metoksi-6-metilbifenil-2-il)fosfina (217 mg, 0.46 mmol, 0.10 ekviv.), Cs2CO3(4.5 g, 13.81 mmol, 2.99 ekviv.) i etil (E)-4-bromobut-2-enoata (2.7 g, 13.99 mmol, 3.02 ekviv.) u toluene (30 mL) je mešana 15 h na 80 °C i održavana u inertnoj atmosferi azota. Čvrste supstance su filtrirane i rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom, a ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (30:70) da bi se dobilo 1.13 g (50.9%) jedinjenja iz naslova u obliku smeđeg ulja. LCMS: [M+H]<+>368.17.
Korak 3: Etil 3-(benzilamino)-4-((S)-2-(6-okso-5-(trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidropiridazin-4-ilamino )propoksi)butanoat
[1501] Rastvor etil (S,E)-4-(2-((6-okso-5-(trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1, 6-dihidro-piridazin-4-il)amino)propoksi)but-2-enoata (1.11 g, 2.315 mmol, 1 ekviv.) i fenilmetanamina (1.24 g, 0.012 mmol, 5 ekviv.) u butan-1-olu (30 mL) je mešan 4 h na 100 °C. Rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (61:39) da bi se dobilo 725 mg (53.4%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>587.30.
Korak 4: Etil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)-4-((S)-2-((6-okso-5-(6-okso-5-( trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi) metil)-1, 6-dihidropiridazin-4-il)amino)propoksi)butanoat
[1502] Rastvor etil 3-(benzilamino)-4-((S)-2-(6-okso-5-(trifluorometil)-1-(( 2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidropiridazin-4-ilamino)propoksi)butanoata (594 mg, 1.012 mmol, 1 ekviv.), Pd/C (76.13 mg, 0.202 mmol, 0.20 ekviv.), H2 (gas), i (Boc)2O (662.86 mg, 3.037 mmol, 3 ekviv.) u MeOH (30 mL) je mešan 20 h na ST. Čvrste supstance su filtrirane i rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (30:70) da bi se dobilo 594 mg (98.3%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS:
[M+H]<+>597.31.
Korak 5: 3-((Terc-butoksikarbonil)amino)-4-((S)-2-((6-okso-5-(trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi) metil)-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino)propoksi)butanoična kiselina
[1503] Rastvor etil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)-4-((S)-2-((6-okso-5-(trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino)propoksi)butanoata (550 mg, 0.922 mmol, 1 ekviv.), LiOH (44.15 mg, 1.843 mmol, 2 ekviv.), i H2O (3 mL) u THF (15 mL) je mešan 6 h na ST. pH vrednost rastvora je podešena na 7 sa HCl (10 mmol/L). Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 170 mg (32.4%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>569.27.
Korak 6: Terc-butil (4-okso-1-((S)-2-((6-okso-5-(trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1), 6-dihidropiridazin-4-il)amino)propoksi)-4-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)butan-2-il) karbamat
[1504] Rastvor 3-[[(terc-butoksi)karbonil]amino]-4-[(2S)-2-[[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil) etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]amino]propoksi]butanske kiseline (150 mg, 0.264 mmol, 1 ekviv.), Int-A18 (73.5 mg, 0.317 mmol, 1.20 ekviv.), HATU (120.4 mg, 0.317 ekviv.) i DIPEA (102.3 mg, 0.791 mmol, 3 ekviv.) u DMF (3 mL) je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 158 mg (76.5%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>783.36.
Korak 7: 5-(((S)-1-((R)-2-Amino-4-okso-4-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)butoksi) propan-2-il)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i 5-(((S)-1-((S)-2-Amino-4-okso-4-(4-( 5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)butoksi)propan-2-il)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1505] Rastvor terc-butil(4-okso-1-((S)-2-((6-okso-5-(trifluorometil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-l,6-dihidropiridazin-4-il)amino)propoksi)-4-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)butan-2-il) karbamata (148 mg, 0.189 mmol, 1 ekviv.) i TFA (2 mL) u DCM (10 mL) je mešan 1 h na ST. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN. Ostatak je dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC i Chiral Prep-HPLC (kolona CHIRALPAK ID-3, 3 µm, 0.46 x 5 cm, eluiranje sa gradijentom MtBE (0.1%DEA):EtOH=70:30, pri brzini protoka od 1 mL/min) dajući jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance i sa arbitrarno dodeljenom stereohemijom.
Primer 617 Izomer A: (6.4 mg, 6.1%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>553.22,<1>H NMR (300 MHz, Metanold4) δ 8.62 (s, 2H), 8.04 (s, 1H), 4.24 (s, 1H), 4.03 - 3.89 (m, 4H), 3.75 - 3.57 (m, 5H), 3.57 - 3.37 (m, 4H), 2.62 (dd, J = 16.1, 4.2 Hz, 1H), 2.44 (dd, J= 16.4, 8.1 Hz, 1H), 1.31 (d, J = 6.6 Hz, 3H). tR = 1.245 min.
Primer 617 Izomer B: (7.0 mg, 6.7%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>553.22, tR = 1.639 min.
Primer 618: (S)-5-((1-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propan-2-il)tio)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1506]
Korak 1: (R)-3-(2-(benziloksi)propoksi)-1-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propan-1-on
[1507] Rastvor (R)-2-(benziloksi)propan-1-ola (1.66 g, 10 mmol, 2 ekviv.), Int-A21 (1.43 g, 5 mmol, 1 ekviv.) i NaH (20 mg, 0.1 mmol, 0.1 ekviv.) u 1-metoksi-2-(2-metoksietoksi)etanu (2.5 mL) je mešan 24 h na ST. Reakcija je ugašena sa H2O (30 mL) i dobijeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 50 mL) i organski slojevi su kombinovani. Rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa EtOAc/petroletrom (45:65) da bi se dobilo 2.1 g jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>453.22.
Korak 2: (R)-3-(2-Hidroksipropoksi)-1-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propan-1-on
[1508] Rastvor BCl3u DCM (1M, 8. 2 mL) i (R)-3-(2-(benziloksi)propoksi)-1-(4-(5-(trifluorometil) pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propan-1-on (1.23 g , 2.718 mmol, 1 ekviv.) u DCM-u (10 mL, 157.300 mmol, 57.87 ekviv.) je mešano 3 h na -10 °C. Reakcija je ugašena sa MeOH (20 mL). Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 370 mg (37.6%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>363.18.
Korak 3: (S)-2-(4-Metoksibenzil)-5-((1-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il) propoksi)propan-2-il)tio)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1509] Rastvor (R)-3-(2-hidroksipropoksi)-1-(4-(5-( trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propan-1-ona (225 mg, 0.621 mmol, 1 ekviv.), Int-A29 (294 mg, 0.929 mmol, 1.50 ekviv.), dibenzil (E)-diazen -1, 2-dikarboksilata (1.07 g, 4.647 mmol, 20%) i trifenilfosfina (244 mg, 0.930 mmol, 1.50 ekviv.) u THF (1 mL) i toluenu (5 mL) je mešan 12 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 300 mg (73.1%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>661.22.
Korak 4: (S)-5-((1-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propan-2-il)tio)-4-(trifluorometil) piridazin-3(2H)-on
[1510] Rastvor (S)-2-(4-Metoksibenzil)-5-((1-(3-okso-3-(4-(4)) 5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propan-2-il)tio)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-ona (530 mg, 0.802 mmol, 1 ekviv), i TfOH (1 mL) u TFA (10 mL) je mešan 1 h na 0 °C. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 30 mL), a organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN, a zatim dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC (kolona YMC-Actus Triart C18) upotrebom vode/MeCN da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (24.7 mg, 5.7%) u obliku bele ;vrste supstance. LCMS: [M+H]<+>541.16,<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ 8.60 (s, 2H), 8.16 (s, 1H), 4.12 - 4.06 (m, 1H), 4.03 - 3.91 (m, 4H), 3.88 - 3.62 (m, 7H), 3.57 - 3.51 (m, 1H), 2.70 - 2.66 (m, 2H), 1.41 (d, J = 6.9 Hz, 3H).
Primer 619 Izomer A: 5-(((S)-1-(3-((S)-2-metil-4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)propan-2-il)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i
Primer 619 Izomer B: 5-(((S)-1-(3-((R)-2-metil-4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)propan-2) -il)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i
[1511]
Primer 619 Primer 619
Izomer A Izomer B
Korak 1: terc-butil 2-metil 4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-karboksilat
[1512] Rastvor terc-butil 2-metilpiperazin-1-karboksilata (1.5 g, 7.49 mmol, 1 ekviv.), 2-hloro- 5-(trifluorometil) pirimidina (1.37 g, 7.50 mmol, 1.00 ekviv.) i K2CO3(2.07 g, 15.0 mmol, 2.00 ekviv.) u NMP (20 mL) je mešan 16 h na 85 °C. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, nakon čega je usledilo dodavanje vode. Rezultujuća čvrsta supstanca je istaložena i sakupljena filtracijom, a zatim isprana vodom i osušena pod vakuumom da bi se dobilo 2.5 g jedinjenja iz naslova kao svetlo žuta čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>347.
Korak 2: 2-(3-metilpiperazin-1-il)-5-(trifluorometil)pirimidin
[1513] Rastvor terc-butil 2-metil-4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-karboksilata (3.34 g, 1 ekviv.) i HCl u 1,4-dioksanu (30 mL) je mešan 1 h na ST. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 687 mg (31.8%) jedinjenja iz naslova u obliku narandžaste čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>247.
Korak 3: 5-(((S)-1-(3-((S)-2-metil-4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin) -1-il)-3-oksopropoksi) propan-2 il)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i 5-((S)-1-(3-((R)- 2-metil-4-(5-(trifluorometil) pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)propan-2-il)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1514] Rastvor Int-A13 (200.4 mg, 0.648 mmol, 1 ekviv.), 2-(3-metilpiperazin-1-il)-5-(trifluorometil)pirimidina (280 mg, 1.14 mmol, 1.20 ekviv.), DIPEA (250 mg, 1.944 mmol, 3.00 ekviv.) i HATU (295 mg, 1.001 mmol) 1.20 ekviv.) u DMF je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN, nakon čega je usledilo prečišćavanje hiralnom hromatografijom (kolona CHIRALPAK IA-3, 5 µm, 2 x 25 cm, eluiranjem sa gradijentom heksana (0.1%) DEA):EtOH gradijent, pri brzini protoka od 20 mL/min) dajući jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance i sa arbitrarno dodeljenom stereohemijom.
Primer 619 Izomer A: 29.4 mg, 8,4%; LCMS: [M+H]<+>538.29,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.45 (s, 1H), 8.70 (d, J = 0.9 Hz, 2H), 7.90 (s, 1H), 6.27 (s, 1H), 4.8 - 4.5 (m, 3H), 4.4 - 4.1 (m, 2H), 3.9 - 3.8 (m, 1H), 3.80 - 3.6 (m, 2H), 3.35 (s, 2 H), 3.36 - 3.00 (d, J = 5.7 Hz, 2 H), 2.9 - 2.7 (m, 1H), 2.8 - 2.6 (m, 2H), 1.2 (s, 3H), 1.1 - 0.97 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
Primer 619 Izomer B: 26.7 mg ,7.7%; LCMS: [M+H]<+>538.29,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.45 (s, 1H), 8.70 (d, J = 0.9 Hz, 2H), 7.90 (s, 1H), 6.27 (s, 1H), 4.80 - 4.50 (m, 3H), 4.50 - 4.00 (m, 2 H), 3.9 - 3.8 (m, 1H), 3.80 - 3.60 (m, 2 H), 3.55 (s, 2H), 3.30 - 3.10 (m, 2H), 3.10 - 2.90 (m, 1H), 2.80 - 2.60 (m, J = 6.4 Hz, 2H), 1.20 (s, 3H), 1.1 -0.97 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
Primer 620: (S)-4-(trifluorometil)-5-((1-(2-((4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)sulfonil)etoksi) propan- 2-il)amino)piridazin-3(2H)-on
[1515]
Korak 1: (S)-5-((1-Hidroksipropan-2)-il)amino)-2-(4-metoksibenzil)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1516] Rastvor Int-A20 (300 mg, 0.94 mmol, 1 ekviv.), (S)-2-aminopropan-1-ol (77.8 mg, 1.04 mmol, 1.10 ekviv.) i TEA (286 mg, 2.82 mmol, 3.00 ekviv.) u EtOH (5 mL) je mešan 2 h na 60°C. °C. Dobijeni rastvor je razblažen vodom i ekstrahovan sa EtOAc. Organski slojevi su kombinovsni, osušeni iznad bezvodnog magnezijum sulfata i filtrirani. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 350 mg jedinjenja iz naslova u obliku sirovog bezbojnog ulja. LCMS: [M+H]<+>358.13.
Korak 2: (S)-2-(4-metoksibenzil)-4-(trifluorometil)-5-((1-(2-((4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il) piperazin-1-il)sulfonil) etoksi)propan-2-il)amino)piridazin-3(2H)-on
[1517] Rastvor (S)-5-((1-hidroksipropan-2-il)amino)-2-(4-metoksibenzil)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on (200 mg, 0.56 mmol, 1 ekviv.), Int-A26 (180.4 mg, 0.56 mmol, 1.00 ekviv.) i Cs2CO3(359.3 mg, 1.10 mmol, 1.97 ekviv.) u MeCN (4 mL) je mešan 16 h na sobnoj temperaturi. Čvrste supstance su filtrirane i dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak koji je eluiran na koloni silika gela sa EtOAc/petroletrom (1:1) da bi se dobilo 120 mg (31.6%) jedinjenja iz naslova kao svetlo žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>680.20.
Korak 3: (S)-4-(trifluorometil)-5-((1-(2-((4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)sulfonil)etoksi) propan-2-il)amino)piridazin-3(2H)-on
[1518] Soludon (S)-2-(4-metoksibenzil)-4-(trifluorometil)-5-((1-(2-((44)) -(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)sulfonil)etoksi)propan-2-il)amino)piridazin-3(2H)-on (110 mg, 0.162 mmol, 1 ekviv.) i TfOH (0.4 mL) u TFA (4 mL) je mešan 1 h na ST. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 19.1 mg (21.1%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>560.14.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.46 (s, 1H), 8.74 (s, 2H), 7.90 (s, 1H), 6.27 (dd, J = 8.6, 4.2 Hz, 1H), 4.14 (s, 1H), 3.92 (t, J = 5.1 Hz, 4H), 3.78 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.53 (m, 2H), 3.35 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 3.25 (t, J = 5.1 Hz, 4H), 1.13 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
Primer 621 Izomer A: (S)-5-((1-((3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il) propil)tio) propan- 2-il)oksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i Primer 621 Izomer B: (R)-5-((1-((3-okso-3-(4-(5-)) (trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propil)tio)propan-2-il)oksi)-4-(tri-fluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1519]
Primer 621 Primer 621
Izomer A Izomer B
Korak 1: Metil 3-((2-oksopropil)tio)propanoat
[1520] Rastvor 3-merkaptopropanoata (2 g, 16.6 mmol, 1 ekviv.), 1-bromopropan-2-ona (2.28 g, 16.6 mmol, 1.00 ekviv.), i TEA (2.53 g, 25.0 mmol, 1.5 ekviv.) u DCM (20 mL) je mešan 30 min na sobnoj temperaturi. Reakcija je zatim ugašena dodatkom 50 mL vode i dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 50 mL DCM, organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova 2.9 g (98.9). %) kao bezbojno ulje.
Korak 2: Metil 3-((2-hidroksipropil)tio)propanoat
[1521] Rastvor metil 3-((2-oksopropil)tio)propanoata (2.9 g, 16.5 mmol, 1 ekviv.) i NaBH4(934 mg, 24.7) mmol, 1.5 ekviv.) u MeOH (50 mL) je mešan 30 min na ST. Reakcija je zatim ugašena dodatkom 50 mL vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 50 mL EtOAc, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2.67 g, 91.0%) kao bezbojno ulje.
Korak 3: Metil 3-((2-((1-(4-metoksibenzil)-6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi) propil)tio) propanoat
[1522] Rastvor Int-A20 (804.5 mg, 2.53 mmol, 0.9 ekviv.), metil 3-((2-hidroksipropil)tio)propanoata (500 mg, 2.805 mmol, 1.0 ekviv.) i metalnog natrijuma (168.3 mg, 4.21 ekviv.) 1.5 ekviv.) u THF (5 mL) je mešan 6 h na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je izlivena u 20 mL HCl (1 M) i dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 50 mL EtOAc, kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela sa EtOAc/petroletrom (1:1) da bi se dobilo 850 mg jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>461.31.
Korak 4: 3-((2-((1-(4-metoksibenzil)-6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi)propil)tio) propanska kiselina
[1523] Rastvor metil 3-((2-((1-(4-metoksibenzil)-6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il)oksi) propil)tio)propanoata (850 mg, 1.85 mmol, 1 ekviv.), litijum hidroksida (309 mg, 7.36 mmol, 3.99 ekviv.) i H2O (4 mL) u THF (12 mL) je mešan 2 h na ST. Reakciona smeša je razblažena sa H2O i ekstrahovana sa DCM. pH vrednost vodenog sloja je podešena na 5 sa HCl, nakon čega je usledila ekstrakcija sa 3 x 30 mL EtOAc. Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 150 mg (18.2%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>447.11.
Korak 5: 2-(4-metoksibenzil)-5-((1-((3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propil) tio) propan-2-il)oksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1524] Rastvor 3-[[2-([1-[(4-metoksifenil)metil]-6-okso -5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]oksi) propil] sulfanil]propanoična kiselina (200 mg, 0.448 mmol, 1.0 ekviv.), Int-A2 (114.4 mg, 0.492 mmol, 1.1 ekviv.), DIPEA (202.5 mg, 1.57 mmol, 3.5 ekviv.) i HATU (204.5 mg, 0.538 mmol, 1.2 ekviv.) u DMF-u (3 mL) je mešan 2 h na ST. Reakcija je zatim ugašena dodatkom 30 mL vode i rezultirajući rastvor je ekstrahovan sa 3 x 30 mL EtOAc, organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je eluiran na koloni silika gela sa EtOAc/petroletrom (2:1) da bi se dobilo 230 mg jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>661.20.
Korak 6: (S)-5-((1-((3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propil)tio)propan-2-il) oksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on i (R)-5-((1-((3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il) piperazin-1-il)propil)tio)propan-2-il)oksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1525] Rastvor 2-(4-metoksibenzil)-5-((1-((3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il) propil)tio)propan-2-il)oksi)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on (210 mg, 0.318 mmol, 1.0 ekviv.) i TfOH (381.6 mg, 2.54 mmol, 8.00 ekviv.) u TFA (3 mL) je mešan 30 minuta na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Reakciona smeša je zatim ugašena dodatkom 20 mL NH3(7 M u MeOH). Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN i zatim odvojen hiralnom HPLC (kolona CHIRALPAK IC, 5 µm, 2 x 25 cm, eluiranjem sa gradijentom heksana (0.1% mravlje kiseline): EtOH gradijent, pri brzini protoka od 20 mL/min) dajući jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. Apsolutna stereohemija je dodeljena na osnovu rendgena kristalne strukture proteina dobijene iz Primera 513A, koja je potvrdila (S)-apsolutnu stereohemiju potentnijieg enantiomera.
Primer 621 Izomer A: 8.6 mg, 10.0%, LCMS: [M+H]<+>541.14,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.29 (s, 1H), 8.74 (d, J = 0.9 Hz, 2H), 8.34 (s, 1H), 5.14 (q, J = 6.0 Hz, 1H), 3.83 (dd, J = 17.2, 5.7 Hz, 4H), 3.57 (dd, J = 6.6, 4.0 Hz, 4H), 2.95 - 2.62 (m, 6H), 1.38 (d, J = 6.0 Hz, 3H).
Primer 621 Izomer B: 8.9 mg, 10.4%, LCMS: [M+H]<+>541.14,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.29 (s, 1H), 8.74 (d, J = 0.9 Hz, 2H), 8.34 (s, 1H), 5.14 (q, J = 6.0 Hz, 1H), 3.83 (dd, J = 17.5, 5.7 Hz, 4H), 3.57 (dd, J = 6.6, 3.9 Hz, 4H), 3.04 - 2.60 (m, 6H), 1.38 (d, J = 6.0 Hz, 3H).
Primer 622: (S)-5-((1-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)tiazol-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propan-2-il) amino)- 4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
Korak 1: (S)-2-(4-metoksibenzil)-5-((1-(3-okso-3-(4-(5-(5))trifluorometil)tiazol-2-il)piperazin-1-il) propoksi)propan-2-il)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1526] Rastvor (S)-3- (2-((1-(4-metoksibenzil)-6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino) propoksi)propanoične kiseline (200 mg, 0.466 mmol, 1 ekviv.), Int-A27 (140 mg, 0.590 mmol, 1.27 ekviv.), DIPEA (181 mg, 1.400 mmol, 3.01 ekviv.) i HATU (266 mg, 0.700 mmol, 1.50 ekviv.) u DMF je mešan 1 h na sobnoj temperaturi. Sirovi proizvod je prečišćen reverzno faznom hromatografijom na koloni da bi se dobilo 256 mg (84.7%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>648.20.
Korak 2: (S)-5-((1-(3-okso-3-(4-(5-(trifluorometil)tiazol-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propan-2-il)amino )-4-(trifluorometil) piridazin-3(2H)-on
[1527] Rastvor (S)-2-(4-metoksibenzil)-5-((1-(3-okso-3-(4-(4)) 5-(trifluorometil)tiazol-2-il)piperazin-1-il) propoksi)propan-2-il)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-ona (240 mg, 0.370 mmol, 1 ekv. ), i TfOH (0.3 mL) u TFA (3 mL) je mešan 1 h na ST. Reakcija je zatim ugašena dodatkom vode i pH vrednost rastvora je podešena na 8 sa NaHCO3(aq). Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 30 mL DCM osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen reverzno faznom hromatografijom i daljim prečišćavanjem pomoću Prep-HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (48.5 mg, 24.8%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>529.14.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.44 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.72 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 6.25 (dd, J = 4.2,3.9 Hz, 1H), 4.16 - 4.08 (m, 1H), 3.69 - 3.66 (m, 2H), 3.66 - 3.57 (m, 4H), 3.56 - 3.45 (m, 6H), 2.57 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 1.12 (d, J = 6.0 Hz, 3H).
Primer 623: (S)-5-((1-(3-(4-(5-(terc-butil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)propan-2-il) amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1528]
Korak 1: 2-(Terc-butil)malonaldehid
[1529] Rastvor 2-(terc-butil)malononitrila (3.66 g, 30.0 mmol, 1 ekv. ) i diizobutilaluminijum hidrida (60 mL, 90 mmol, 1.5 M) u toluenu (70 mL) je mešan 1 h na -60 °C. Dobijeni rastvor je mešan još 3 h na ST. Reakcija je zatim ugašena dodatkom 1M HCl i pH vrednost rastvora je podešena na 5 sa HCl. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc i organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 2 g (52.1%) jedinjenja iz naslova u obliku belog ulja. LCMS: [M+H]<+>129.10.
Korak 2: 5-(Terc-butil)pirimidin-2(1H)-on
[1530] Rastvor uree (1,124.5 mg, 18.7 mmol, 1.2 ekviv.) i HCl (4 mL, 47 mmol, 3 ekviv.) u EtOH (40 mL) je mešan 10 min na sobnoj temperaturi, a zatim je dodat 2-(terc-butil)malonaldehid (2 g, 15.6 mmol, 1 ekviv.). Reakciona smeša je mešana 16 h na 75 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 3.5 g jedinjenja iz naslova u obliku sirove bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>153.11.
Korak 3: 5-(Terc-butil)-2-hloropirimidin
[1531] Rastvor 5-(terc-butil)pirimidin-2(1H)-ona (3.5 g, 23.0 mmol, 1 ekviv.) i fosforil trihlorida (40 mL) je mešan 5 h na 160 °C. Rezultujuća smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, ugašena dodatkom vode, a pH vrednost rastvora je podešena na 8 sa vodenim NaOH (1M). Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa DCM i organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 2 g (51.0%) jedinjenja iz naslova u obliku tamno smeđe čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>171.08.
Korak 4: Terc-butil 4-(5-(terc-butil)pirimidin-2-il)piperazin-1-karboksilat
[1532] Rastvor 5-(terc-butil)-2-hloropirimidina (2 g, 11.7 mmol, 1 ekviv.), terc-butil piperazin-1-karboksilata (4366.0 mg, 23.4 mmol, 2 ekviv.) i K2CO3 (4049.6 mg, 29.3 mmol, 2.5 ekviv.) u NMP (30 mL) je mešan na 80 °C. C. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc i organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela sa EtOAc/petroletrom (1:10) da bi se dobilo 1.1 g (29.3%) jedinjenja iz naslova u obliku čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>321.24.
Korak 5: 5-(Terc-butil)-2-(piperazin-1-il)pirimidin
[1533] Rastvor terc-butil 4-(5-(terc-butil)pirimidin-2-il)piperazin-1-karboksilata (1.1 g, 3.43 mmol, 1 ekviv.) u HCl (gas) u 1,4-dioksanu (20 mL) je mešan 1 h na ST. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, a ostatak je rastvoren u 10 mL vode. pH vrednost rastvora je podešena na 7 sa vodenim rastvorom NaOH (1 mol/L). Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 170 mg (22.5%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>221.19. Korak 6: (S)-5-((1-(3-(4-(5-(Terc-butil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)propan-2-il) amino)-2-(4-metoksibenzil)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1534] Rastvor 5-(terc-butil)-2-(piperazin-1-il)pirimidina (80 mg, 0.363 mmol, 1 ekviv.), (S)-3-(2-((1-(4-metoksibenzil)6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il)amino)propoksi)propanoične kiseline (187.10 mg, 0.436 mmol, 1.2 ekviv.), HATU (165.68 mg, 0.436 mmol, 1.2 ekviv.) i DIPEA (140.79 mg, 1.089 mmol, 3 ekviv.) u DMF (4 ml) je mešan 1h na ST. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc i organski slojevi su kombinovani. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 210 mg (91.6%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS: [M+H]<+>632.33.
Korak 7: (S)-5-((1-(3-(4-(5-(Terc-butil)pirimidin-2 il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)propan-2-il)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1535] Rastvor (S)-5-((1-(3-(4-(5-(terc-butil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-3-oksopropoksi)propan-2-il) amino)-2-(4-metoksibenzil)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-ona (200 mg, 0.317 mmol, 1 ekviv.) i TfOH (1 mL) u TFA (10 mL) je mešan 1 h na ST. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 30 mL) i organski slojevi su kombinovani. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN, a zatim je sirovi proizvod dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC (kolona YMC-Actus Triart C18, 5 µm, 20 x 250 mm, eluiranje sa gradijentom voda (10 mmol/L NH4HCO3)/ACN, pri brzini protoka od 60 mL/min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (73.5 mg, 45.4%). LCMS: [M+H]<+>512.27,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.46 (s, 1H), 8.43 (s, 2H), 7.91 (s, 1H), 6.28 (dd, J = 8.6, 4.3 Hz, 1H), 4.14 (s, 1H), 3.68 - 3.64 (m, 6H), 3.49 - 3.47 (m, 6H), 2.60 - 2.56 (m, 2H), 1.26 (s, 9H), 1.14 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
Primer 624: (S)-5-((1-Metoksi-3-(2-((4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2)-il)piperazin-1-il)sulfonil) etoksi)propan-2-il)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1536]
Korak 1: (R)-5-((1)-Hidroksi-3-metoksipropan-2-il)amino)-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi) metil)piridazin-3(2H)-on
[1537] Rastvor (R)-2-amino-3-metoksipropan-1-ol hidrohlorida (300.0 mg, 2.12 mmol, 1.00 ekviv.), Int-A6 (696.6 mg, 2.12 mmol, 1.00 ekviv.) i TEA (643.2 mg, 6.36 mmol, 3 ekviv.) u EtOH (10..0 mL) je mešan 1 h na 60 °C. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 460 mg (54.6%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS [M+H]<+>398.18.
Korak 2: (S)-5-((1-metoksi-3-(2-((4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)sulfonil)etoksi) propan-2-il)amino)-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi) metil)piridazin-3(2H)-on
[1538] Rastvor Cs2CO3(288.6 mg, 0.886 mmol, 0.80 ekviv.), (R)-5-((1-hidroksi-3-metoksipropan-2-il) amino)-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridazin-3(2H)-ona (440.0 mg, 1.107 mmol, 1.00 ekviv.) i Int-A26 (356.8 mg, 1.107 mmol, 1.00 ekviv.) u CH3CN (10.00 mL) je mešan 5 h na sobnoj temperaturi. Čvrsta supstanca je filtrirana i filtrat koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak koji je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 450 mg (56.5%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS [M+H]<+>720.26.
Korak 3: (S)-5-((1-metoksi-3-(2-((4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)sulfonil)etoksi) propan-2- il)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1539] Rastvor (S)-5-((1-metoksi-3-(2-((4-(5-(trifluorometil)))pirimidin-2-il)piperazin-1-il)sulfonil) etoksi)propan-2-il)amino)-4-(trifluorometil)-2-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)piridazin-3(2H)-ona (430.0 mg, 0.597 mmol, 1.00 ekviv.) i TFA (2.0 mL) u DCM (10.0 mL) je mešan 1 h na ST. Rezultujuća smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i pH vrednost rastvora je podešena na 7 pomoću vodenog rastvora NaOH (1 mol/L). Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN i dalje prečišćen pomoću Prep-HPLC (kolona Xselect CSH F-Phenyl OBD, 5 µm, 19 x 150 mm, eluiranje sa gradijentom vode (10 mmol/L NH4HCO3)/ACN, pri brzini protoka od 25 mL/min) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (193.8 mg, 55.0%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [M+H]<+>590.17,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.50 (s, 1H), 8.74 (s, 2H), 7.92 (s, 1H), 6.24 (dd, J = 8.9, 4.4 Hz, 1H), 4.28 (dd, J = 3.6, 3.0 Hz, 1H), 3.93-3.90 (m, 4H), 3.80-3.76 (m, 2H), 3.59 (d, J = 5.7, 2H), 3.44 (dd, J =6.3, 5.4 Hz, 2H), 3.40 - 3.34 (m, 5H).3.27 - 3.26 (m, 4H).
Primer 625: (S)-4-(trifluorometil)-5-((1-(2-((4-(5-(trifluorometil)tiazol-2-il)piperazin-1-il)sulfonil) etoksi)propan-2-il)oksi)piridazin-3(2H)-on
[1540]
Korak 1: (S)-2-(4-((2-(2-)) (Benziloksi)propoksi)etil)sulfonil)piperazin-1-il)-5-(trifluorometil)tiazol
[1541] Rastvor Int A-28 (1.10 g, 3.36 mmol, 1.00 ekviv.), (S)-2-(benziloksi)propan-1-ola (0.56 g, 3.36 mmol, 1.00 ekviv.) i Cs2CO3(2.19 g, 6.72 mmol, 2.00 ekviv.) u CH3CN (10,0 mL) je mešan 2 h na sobnoj temperaturi. Čvrste supstance su filtrirane i dobijeni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom, a rezultujući ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela sa EtOAc/petroletrom (27/73) da bi se dobilo 1.5 g (85.0%) jedinjenja iz naslova u obliku žutog ulja. LCMS [M+H]<+>494.13.
Korak 2: (S)-1-(2-((4-(5-(trifluorometil)tiazol-2-il)piperazin-1-il)sulfonil)etoksi)propan-2-ol
[1542] Rastvor (S)- 2-(4-((2-(2-(benziloksi)propoksi)etil)sulfonil)piperazin-1-il)-5-(trifluorometil)tiazola (300.0 mg, 0.405 mmol, 1.00 ekviv.) i BCl3(0.50 mL, 1 M, 1.00 ekviv.) u DCM (5.00 mL) je mešan 1 h na 0 °C u kupki voda/led. pH vrednost rastvora je podešena na 7 pomoću NaOH/H2O, a zatim je dobijeni rastvor ekstrahovan sa 3 x 20 mL DCM. Organski sloj je kombinovan i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 200 mg (97.9%) jedinjenja iz naslova u obliku žute čvrste supstance. LCMS [M+H]<+>404.08.
Korak 3: (S)-2-(4-metoksibenzil)-4-(trifluorometil)-5-((1-(2-((4-(5-(trifluorometil)tiazol-2-il)piperazin-1-il)sulfonil) etoksi)propan-2-il)oksi)piridazin-3(2H)-on
[1543] Rastvor (S)-1-(2-((4-(5-(trifluorometil)tiazol-2-il)piperazin-1-il)sulfonil)etoksi)propan-2-ola (140.0 mg, 0.347 mmol, 1.00 ekviv.), Int-A20 (110.6 mg, 0.347 mmol, 1.00 ekviv.) i t-BuONa (6.67 mg, 9 mmol, 0.20 ekviv.) u DCM (5.0 mL) je mešan 4 h na 0 °C u kupki voda/led. Reakcija je zatim ugašena dodatkom vode i dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 30 mL EtOAC. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 80 mg (31.3%) jedinjenja iz naslova. LCMS [M+H]<+>686.15.
Korak: 4: (S)-4-(trifluorometil)-5-((1-(2-((4-(5-(trifluorometil)tiazol-2-il)piperazin-1-il)sulfonil)etoksi) propan-2-il)oksi)piridazin-3(2H)-on
[1544] Rastvor (S)-2-(4-metoksibenzil)-4-(trifluorometil)-5-((1-(2-((4-(5))-(trifluorometil)tiazol-2-il) piperazin-1-il)sulfonil)etoksi)propan-2-il)oksi)piridazin-3(2H)-ona (75.0 mg, 0.109 mmol, 1.00 ekviv.) i H2SO4(0.75 mL) u TfOH (5.0 mL) je mešan 30 minuta na 0 °C u kupki voda/led. Reakciona smeša je zatim ugašena dodatkom vode i pH vrednost rastvora je podešena na 8 pomoću NaOH/H2O. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 3 x 30 mL EtOAc. Nakon koncentrovanja, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 27.2 mg (41.8%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS [M+H]<+>566.00.<1>H NMR (300 MHz, Metanold4) δ 8.21 (s, 1H), 7.58 (q, J = 1.4 Hz, 1H), 5.11 (td, J = 6.8, 2.9 Hz, 1H), 3.96 - 3.77 (m, 2H), 3.76 - 3.57 (m, 6H), 3.39 (dd, J = 6.3, 4.0 Hz, 4H), 3.32 - 3.21 (m, 2H), 1.34 (d, J = 6.3 Hz, 3H).
Primer 626: 5-(((2S)-1-(2-Hidroksi-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi) propan-2-il)amino)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1545]
Korak 1: Terc-butil((2S)-1-(oksiran-2-ilmetoksi)propan-2-il)karbamat
[1546] Rastvor 2-(hlorometil)oksirana (0.52 g, 10.8 mmol, 1.00 ekviv.), terc-butil (S)-(1-hidroksipropan-2-il) karbamata (1g, 0.011 mmol, 1.00 ekviv.) i NaH (274 mg, 13.0 mmol, 1.2 ekviv.) u DMF-u (5.00 mL) je mešan 1 h na 0 °C u kupatilu voda/led. Reakcija je ugašena dodatkom vode i rezultujući rastvor je ekstrahovan sa 3 x 30 mL EtOAc, a organski slojevi su kombinovani i osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 900 mg (70%) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS [M+H]<+>232.25.
Korak 2: Terc-butil ((2S)-1-(2-hidroksi-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi) propan-2-il)karbamat
[1547] Rastvor terc-butil ((2S)-1-(oksiran-2-ilmetoksi)propan-2-il)karbamata (860 mg, 3.70 mmol, 1.00 ekviv.), Int-A3 (860 mg, 3.70 mmol), 1.00 ekviv.), i DIPEA (1.99 g, 0.432 mmol, 5 ekviv.) u EtOH (10.0 mL) je mešan 1 h na 60 °C u uljanom kupatilu. Dobijeni rastvor je unesen u kolonu silika gela i eluiran sa EtOAc/petroletrom (50:50) da bi se dobilo 300 mg jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS [M+H]<+>364.24.
Korak 3: 1-((S)-2-Aminopropoksi)-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propan-2-ol
[1548] Rastvor terc-butil ((2S)-1-(2-hidroksi-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il) propoksi)propan-2-il)karbamata (300.0 mg, 0.647 mmol, 1.00 ekviv.) i HCl (gas) u 1,4-dioksanu (2.00 mL) je mešan 30 minuta na ST. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 200 mg (90%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS [M+H]<+>364.19.
Korak 4: 5-(((2S)-1-(2 hidroksi-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2 il)piperazin-1-il)propoksi)propan-2-il) amino)- 2-(4-metoksibenzil)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-on
[1549] Rastvor 1-((S)-2-aminopropoksi)-3-(4-(5-(trifluorometil) pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propan-2-ola (256 mg, 0.70 mmol, 1.5 ekviv.), Int-A20 (150 mg, 0.47 mmol, 1.00 ekviv.), TEA (95 mg, 0.94 mmol, 2 ekviv.) i EtOH (5 mL) je mešan 1 h na 40 °C. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom reakcione smeše, ostatak je unesen u kolonu silika gela i eluiran sa EtOAc/petroletrom (95/5) da bi se dobilo 200 mg (65.8%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS [M+H]<+>646.25.
Korak 5: 5-(((2S)-1-(2-Hidroksi-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)piperazin-1-il)propoksi)propan-2-il)amino)-4-(trifluorometil) piridazin-3(2H)-on
[1550] Rastvor 5-(((2S)-1-(2-hidroksi-3-(4-(5-(trifluorometil)pirimidin-2)-il)piperazin-1-il)propoksi) propan-2-il)amino)-2-(4-metoksibenzil)-4-(trifluorometil)piridazin-3(2H)-ona (190.0 mg, 0.294 mmol, 1.00 ekv.) i H2SO4(0.50 mL) u TfOH (5.00 mL) je mešan 1 h na -10 °C. Reakciona smeša je ugašena dodatkom vode i ekstrahovana sa 3 x 20 mL EtOAc. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (29.3 mg, 19%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS [M+H]<+>526.25.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.44 (s, 1H), 8.68 (s, 2H), 7.93 (s, 1H), 6.30 (s, 1H), 4.60 (s, 1H), 4.17 (s, 1H), 3.77 (m, 6H), 3.5-3.26 (m, 4H), 2.42 (m, 3H), 2.29 (m, 2H), 1.15 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
[1551] Dalji primeri jedinjenja iz pronalaska pripremljenih ovde opisanim metodama su date u Tabeli E11.
Tabela E11
Primer A. Enzimski test za inhibiciju PARP7
[1552] Pomak Probe A, biotinilovane probe koja se vezuje za TIPARP aktivno mesto, je meren pomoću testa Fluorescentno rezonantnog transfera energije sa vremenskim razlučivanjem (TR-FRET). 20 nL krive doza odgovor za svako testirano jedinjenje je ukapano u crne polistirenske proksi-ploče sa 384 otvora (Perkin Elmer) pomoću Mosquito (TTP Labtech). Reakcije su izvedene u zapremini od 8 µL dodavanjem 6 µL TIP ARP i Probe A u pufer za ispitivanje (20 mM HEPES pH = 8, 100 mM NaCl, 0.1% goveđeg serumskog albumina, 2 mM DTT i 0.002% Tween20), inkubiranjem sa testiranim jedinjenjem tokom 30 minuta na 25 °C, zatim dodavanjem 2 µL ULight-anti 6xHis i LANCE Eu-W1024 obeleženog streptavidina (Perkin Elmer). Finalne koncentracije ULight-anti 6xHis i LANCE Eu-W1024 obeleženog streptavidina su bile 4 nM i 0.25 nM, respektivno. Reakcije su inkubirane dodatnih 30 minuta na 25 ° C, a zatim očitane na Envision čitaču ploča opremljenom LANCE/DELFIA gornjim ogledalom (Perkin Elmer) korišćenjm pobude od 320 nm i emisije od 615 nm i 665 nM sa kašnjenjem od 90 µs. Odnos emisije 665/615 nm je izračunat za svaki otvor da bi se odredila količina kompleksa TIPARP i Probe A u svakom otvoru. Otvori kontrola koji sadrže negativnu kontrolu od 0.25% DMSO vehikuluma ili pozitivnu kontrolu od 100 µM Primera 190 su korišć eni za izračunavanje % inhibicije kako je opisano u nastavku:
gde TRFjedinjje TR-FRET odnos iz otvora tretiranog jedinjenjem, TRFminje TR-FRET odnos iz otvora za pozitivnu kontrolu tretiranog Primerom 190, a TRFmaxje TR-FRET odnos iz otvora za negativnu kontrolu tretiranog sa DMSO. Vrednosti % inhibicije su ucrtane kao funkcija koncentracije jedinjenja i primenjeno je sledeć e fitovanje 4 parametra da bi se izvele vrednosti IC50:
gde gornja i donja doza normalno mogu da variraju, ali mogu biti fiksirani na 100 ili 0 repektivno u 3-parametarskom fitovanju. Hill koeficijent normalno može da varira, ali takođe može biti fiksiran u 1 u 3-parametarskom fitovanju. Y je % inhibicije, a X je koncentracija jedinjenja.
Sinteza Probe A
[1553]
Korak 1: 5-(5-Hidroksi-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) etoksi] metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1554] Rastvor 5-hloro-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (2.8 g, 8.52 mmol, 1.00 ekviv.), 2,3-dihidro-1H-izoindol-5-ol hidrobromida (4.27 g, 19.76 mmol, 1.00 ekviv.) i TEA u (10 mLE) etanolu (40 mL) je mešan 1 h na 60 °C. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 2 x 100 mL etil acetata i organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 4.5 g jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>428.23.
Korak 2: terc-butil 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2, 3-dihidro-1H-izoindol-5-il]oksi)piperidin-1-karboksilat
[1555] Rastvor 5-(5-hidroksi-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il)-4-( trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi] metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on (4.5 g, 10.53 mmol, 1.00 ekviv.), terc-butil 4-jodopiperidin-1-karboksilata (20 g, 64.28 mmol, 8.00 ekviv.), kalijum karbonata (15 g, 108.53 mmol, 10.00 ekviv.) i DMF (50 mL) su mešani 2 dana na 80 °C. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa 2 x 200 mL etil acetata i organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela eluiran sa etil acetat/petroletrom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2 g, 31%) kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>611.15.
Korak 3: 5-[5-(Piperidin-4-iloksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil) etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-on
[1556] Rastvor terc-butil 4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidro-piridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il]oksi)piperidin-1-karboksilat (2 g, 3.27 mmol, 1.00 ekviv.), dioksan/HCl (5 mL), i dioksan (45 mL) je mešan 6 h na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je unesen u kolonu silika gela i eluiran sa etil acetat/petroletrom da bi se dobio 1 g jedinjenja iz naslova kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>511.28.
Korak 4: Terc-butil 2-[4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidro-piridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il]oksi)piperidin-1-il]acetat
[1557] Rastvor 5-[5-(piperidin-4-iloksi)-2,3-dihidro-1H-izoindol-2-il]-4-(trifluorometil)-2-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-2,3-dihidropiridazin-3-ona (1 g, 1.96 mmol, 1.00 ekviv.), terc-butil 2-hloro-acetata (450 mg, 2.99 mmol, 3.00 ekviv.), DIPEA (5 mL) i dihlorometana (10 mL) je mešan preko noći na 25 °C. Ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (540 mg, 44%) kao žuto ulje. LCMS: [M+H]<+>625.20.
Korak 5: 2-[4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il]oksi) piperidin-1-il]hidrohlorid
[1558] Rastvor terc-butil 2-[4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1-[[2-(trimetilsilil)etoksi]metil]-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il]oksi)piperidin-1-il]acetata (540 mg, 0.86 mmol, 1.00 ekviv.) i dioksan/HCl (8 mL) je mešan preko noći na 25 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo 200 mg (53%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>439.31.
Korak 6: terc-butil N-(6-[5-[(3aS,4S,6aR)-2-okso-heksahidro-1H-tieno[3,4-d]imidazolidin-4-il] pentanamido]heksil)karbamat
[1559] Rastvor 5-[(3aS,4S, 6aR)-2-okso-heksahidro-1H-tieno[3,4-d]imidazolidin-4-il]pentanske kiseline (reagens je kupljen od Beijing Dragon Rui Trading Company, 976 mg, 3.99 mmol, 1.00 ekviv.), DIPEA ( 1.5.5 g, 11.99 mmol, 3.00 ekviv.), HATU (1.82 g, 4.79 mmol, 1.20 ekviv.), terc-butil N-(6-aminoheksil) karbamat (864 mg, 3.99 mmol, 1.00 ekviv.) u DMF (15 ekviv.) je mešan preko noći na 250C. Reakcija je zatim ugašena dodatkom 50 mL vode. Čvrste materije su sakupljene filtracijom da bi se dobilo 1.5 g (85%) jedinjenja iz naslova u obliku bele čvrste supstance. LCMS: [M+H]<+>443.26.
Korak 7: 5-[(3aS,4S,6aR)-2-Okso-heksahidro-1H-tieno[3,4-d]imidazolidin-4-il]-N-((6-aminoheksil) pentanamid hidrohlorid
[1560] Rastvor terc-butil N-(6-[5-[(3aS,4S,6aR)-2-okso-heksahidro-1H-tieno[3,4-d]imidazolidin-4-il] pentanamido]heksil)karbamata (800 mg, 1.81 mmol, 1.00 ekviv.) u hlorovodonik/dioksanu (20 mL) je mešan preko noći na 25°C. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 600 mg (88%) jedinjenja iz naslova kao sivo sirovo ulje. LCMS: [M+H]<+>343.21.
Korak 8: 5-[(3aS,4S,6aR)-2-okso-heksahidro-1H-tieno[3,4-d]imidazolidin-4-il]-N-(6-[2-[4-([ 2-[6-okso-5-(trifluorometil) -1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5-il]oksi)piperidin-1-il]acetamido] heksil) pentanamid
[1561] Rastvor 2-[4-([2-[6-okso-5-(trifluorometil)-1,6-dihidropiridazin-4-il]-2,3-dihidro-1H-izoindol-5- il]oksi)piperidin-1-il]hidrohlorida (175 mg, 0.40 mmol, 1.00 ekviv.), DIPEA (258 mg, 2.00 mmol, 5.00 ekviv.), HATU (228 mg, 0.60 mmol, 1.50 ekviv.), 5[(3aS,4S,6aR)-2-okso-heksahidro-1H-tieno[3,4-d]imidazolidin-4-il]-N-(6-aminoheksil)pentanamid hidrohlorida (228 mg, 0.60 mmol, 1.50 ekviv.) u DMF (3 mL) je mešan 4 h na 25°C. Sirovi proizvod je prečišćen C18 reverzno faznom hromatografijom eluiranjem sa H2O/CH3CN da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (118.3 mg, 39%). LCMS: [M+H]<+>763.35.
<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ: 12.52 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.81 - 7.68 (m, 2H), 7.26 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.00 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 6.91 (dd, J= 8.4, 2.3 Hz, 1H), 6.45 - 6.39 (m, 1H), 6.36 (s, 1H), 4.91 (d, J= 6.1 Hz, 4H), 4.45 (m, 1H), 4.26 (m, 1H), 4.17 - 4.08 (m, 1H), 3.14 - 2.96 (m, 5H), 2.91 (s, 2H), 2.82 (dd, J= 12.4, 5.1 Hz, 1H), 2.73 - 2.63 (m, 2H), 2.58 (d, J= 12.4 Hz, 1H), 2.33 (ddd, J= 11.8, 9.4, 3.1 Hz, 2H), 2.11 - 1.90 (m, 4H), 1.76 - 1.54 (m, 3H), 1.57 - 1.20 (m, 13H).
[1562] Podaci o IC50za jedinjenja iz primera su dati u donjoj Tabeli A-1 ("+" je <0.1 µM; "++" je ≥ 0.1 µM < 1 µM; a "++ " je ≥ 1 µM).
Tabela A-1. IC50Podaci za Primere Jedinjenja
nastavak
nastavak
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
(nastavak)
Primer B: Amplifikacija PARP7 kod različitih tipova karcinoma
[1563] Slika 1 ilustruje da se amplifikacija PARP7 javlja kod raka sa najvećom učestalošću u plućima, jednjaku, jajnicima, grliću materice i glavi i vratu (gornji aerodigestivni trakt). Slika 1A prikazuje amplifikaciju PARP7 u uzorcima primarnih tumora TCGA. Ovde su rezultati u celini ili delimično zasnovani na javno dostupnim podacima koje je generisala TCGA Research Network: https://www.cancer.gov/tcga. Program Atlas genoma raka je prikupio, okarakterisao i analizirao uzorke raka od preko 11.000 primarnih karcinoma i upario normalne uzorke koji obuhvataju 33 tipa raka. PARP7 gen je lociran na hromozomu 3 (3q25) u regionu koji je često pojačan kod karcinoma skvamozne histologije (Gao et al. 2013, Cerami et al. 2012). Vidi takođe: Gao et al., Integrative analysis of complex cancer genomics and clinical profiles using the cBioPortal. Sci. Signal.6, pl1 (2013); and Cerami et al., The cBio Cancer Genomics Portal: An Open Platform for Exploring Multidimensional Cancer Genomics Data. Cancer Discov 2, 401-4 (2012).
[1564] Slika 1B prikazuje povećanja broja kopija PARP7 koja odgovaraju povećanim nivoima ekspresije PARP7 mRNA u uzorcima TCGA skvamoznog tumora pluća. Uzorci pacijenata su uključivali 198 uzoraka sa diploidom, 234 amplifikacija >1 i 92 amplifikacija >2.
Primer C: Inhibicija rasta ćelija raka pomoću tretmana PARP7 inhibitorima
[1565] Slika 2 ilustruje dozno-zavisno smanjenje rasta NCI-H1373 ćelija raka pluća. Tabela A-2 i Tabela A-3 (ispod) predstavljaju koncentraciju koja uzrokuje 50% inhibiciju rasta (GI50) u panelu ćelijskih linija raka sa Jedinjenjem 18B i Jedinjenjem 561. Ć elije su postavljene u ploče sa 384 otvora pri prethodno određenoj gustini u medijumu koji sadrži fetalni goveđi serum. Ć elije su tretirane jedinjenjem ili vehikulumom (DMSO) 24 sata kasnije, a ploča od nultog dana je uzeta za analizu. Ploče sa testiranim jedinjenjem su inkubirane kontinuirano 72 sata (Tabela A-2) ili 144 sata (Tabela A-3) rast ć elija je procenjen koriš ć enjem luminiscentnog testa viabilnosti ć elija (CellTiter-Glo, Promega). GI50je određen korekcijom broja ć elija u nultom trenutku (vreme tretmana) i grafičkim prikazom podataka kao procentualnog rasta u odnosu nać elije tretirane nosačem.
Podaci o GI50za Jedinjenje primer su dati u Tabeli A-2 („+“ je <0.1 µM; „++“ je ≥ 0.1 µM i < 1 µM; a „+++“ je ≥ 1 µM).
Tabela A-2: Inhibicija Rasta kod Različitih Ćelijskih Linija raka
Tabela A-3: Inhibicija rasta u različitim ć elijskim linijama raka sa jedinjenjem 561.
Primer D: Indukcija nivoa beta interferona tretmanom inhibitorima PARP7
[1566] Slika 3 ilustruje indukciju nivoa interferona beta (IFN-β) inhibitorima PARP7 u CT26 mišjim ćelijama raka debelog creva i RAW264.7 mišjim makrofagima u prisustvu od STING agonista, DMXAA. CT26 ćelije su postavljene na ploču sa 96 otvora i ostavljene da prijanjaju preko noći. Ćelije su istovremeno tretirane titracijom doze inhibitora PARP7 i 50 mg/mL DMXAA tokom 24 sata, a supernatanti su sakupljeni i odmah obrađeni pomoću ELISA testa (Invivogen, luex-mifnb) prema uputstvima iz kompleta. Granica detekcije analize je definisana 2x najnižom koncentracijom standardne krive (LOD = 16 pg/mL). Koncentracije IFN-β interpolirane iz standardne krive i analiza nelinearne regresije je izvedena korišćenjem 4-parametarskog fitovanja (promenljivi nagib) u GraphPad Prism.
Primer E: Indukcija STAT1 fosforilacije tretmanom inhibitorima PARP7
[1567] Slika 4 ilustruje indukciju STAT1 fosforilacije inhibitorom PARP7 u CT26 ćelijama raka debelog creva miša i RAW264.7 mišjim makrofagima. CT26 ćelije su postavljene u posude sa 6 otvora i ostavljene da prijanjaju preko noći. Ćelije su tretirane inhibitorom PARP7 (5 µM gornje doze, 1:3 serijsko razblaženje) ili interferonom-beta (10 ng/mL) 24 sata pre žetve struganjem na led u RIPA puferu za lizu (Millipore, 20-188) sa HALT inhibitorom proteaze i fosfataze (Thermo, 78444). Lizati (30 µg) su podvrgnuti western imunoblotingu pomoću primarnih antitela razblaženih 1:1000 (Cell Signaling Technologies, 9167, 9172 i 5174). Nakon ispiranja s TBST, blotovi su inkubirani sekundarnim antitelima (Licor, 926-32211) razblaženi na 1:15,000 u puferu za blokiranje i naknadno skenirani pomoću Licor Odyssey CLx Imager-a.
Primer F: Proliferacija CT26 ćelija u prisustvu PARP7 inhibitora
[1568] Slika 5 ilustruje da PARP7 inhibitori ne inhibiraju proliferaciju u CT26 ćelijama in vitro. CT26 ćelije su postavljene na ploču sa 384 otvora i ostavljene da prijanjaju nekoliko sati pre tretiranja jedinjenjem 18B. Ćelije su inkubirane sa jedinjenjem 4 dana pre obrade sa CellTiter-Glo reagensom (Promega). Luminescencija je izmerena sa Perkin Elmer Envision i procenat inhibicije je izračunat korišćenjem prosečne vrednosti nosača (DMSO) kao 0% inhibicije. Nelinearna regresiona analiza je izvedena korišćenjem 4 parametarskog (promenjivi nagib) fitovanja u GraphPad Prism.
Primer G: Inhibicija rasta tumora tretmanom sa PARP7 inhibitorima
[1569] Slika 6 ilustruje da inhibitori PARP7 značajno smanjuju rast tumora u singenim mišjim modelima (A) CT26 i (B) 4T1. Za CT26 studiju BALB/c miševi su inokulirani subkutano na desnom boku sa CT26 ćelijama za razvoj tumora. Četiri dana nakon inokulacije tumora, 36 miševa sa veličinom tumora u rasponu od 40-55 mm<3>(prosečna veličina tumora 47 mm<3>) je odabrano i raspoređeno u 3 grupe koristeći stratifikovanu randomizaciju sa 12 miševa u svakoj grupi na osnovu volumena tumora. Tretmani su započeti od sledećeg dana nakon randomizacije (dan randomizacije je definisan kao dan 0) i tretirani su nosačem (0.5% metilceluloze 0.2% Tween 80), jedinjenjem 98 (500 mg/kg SC QD*21 dan), jedinjenjem 93A (100 mg/kg S.C. BID∗21 dan). Veličina tumora je merena tri puta nedeljno tokom tretmana. Celokupna studija je prekinuta na dan 21.
[1570] Za 4T1 studiju ženke BALB/c miševa su inokulirane ortotopski u masni jastučić dojke sa 4T1-luc2-1A4 ćelijama za razvoj tumora. Osam dana nakon inokulacije tumora, 45 miševa sa veličinom tumora u rasponu od 63-88 mm<3>(prosečna veličina tumora 67 mm<3>) je odabrano i raspoređeno u 3 grupe koristeći stratifikovanu randomizaciju sa 15 miševa u svakoj grupi na osnovu volumena tumora. Tretmani su započeti od sledećeg dana nakon randomizacije (dan randomizacije je definisan kao D0) i tretirani su nosačem (0.5% metilceluloza 0.2% Tween 80), jedinjenjem 98 (500 mg/kg SC QD*21 dan), jedinjenjem 93A (100 mg/kg S.C. BID*21 dan). Veličina tumora je merena tri puta nedeljno tokom tretmana. Cela studija je prekinuta na D20.
[1571] Prikazani su srednji volumen tumora i SEM za obe studije. Statistička značajnost, izračunata korišćenjem dvostranih neuparenih t-testova u kojima svaka tretirana grupa upoređena sa vehikulum kontrolnom grupom je označena zvezdicom. Statistika je obavljena na grupama sa manje od 20% gubitka životinja (D21 za CT26, D17 za 4T1).
Primer H: Inhibicija rasta tumora oralnim doziranjem inhibitora PARP7
[1572] Uticaj Jedinjenja 561 na rast tumora je proučavan na humanom NCI-H1373 ksenograftu raka pluća i mišjem CT26 singenom modelu raka debelog creva.
[1573] Za NCI-H1373 studiju, SCID miševi su inokulirani supkutano u desni bok sa NCI-H1373 ćelijama za razvoj tumora. Nakon 5 dana rasta tumora, miševi sa tumorima od 89-148 mm<3>su randomizirani u tretmanske grupe sa srednjim volumenom tumora od 121 mm<3>. Tretmani su započeti sledećeg dana nakon randomizacije (dan randomizacije je definisan kao dan 0) i tretirani su vehikulumom (50% Labrasol) ili Jedinjenjem 561 (62.5, 125, 250 i 500 mg/kg) jednom dnevno tokom 28 dana oralnom gavažom. Zapremine tumora su određivane ručnim meračem svaka 2-3 dana. Prikazani su srednji volumen tumora i SEM. QD: jednom dnevno; PO: per oralna administracija. Statistička značajnost je izračunata korištenjem dvosmerne ANOVA praćene Bonferroni post-testovima u kojima su tretirane grupe upoređene sa vehikulum kontrolom (**** P < 0.0001). Slika 7A ilustruje da primena Jedinjenja 561 inhibitora PARP7 jednom dnevno značajno smanjuje rast tumora kod humanog NCI-H1373 ksenografta raka pluća. U mišjem modelu NCI-H1373 humanih ćelija raka pluća, Jedinjenje 561 u dozama od 62.5 do 500 mg/kg administrirano jednom dnevno tokom 28 dana je izazvao potpunu regresiju tumora na svim nivoima doze.
[1574] Za CT26 studiju, BALB/c miševi su inokulirani supkutano u desni bok sa CT26 ćelijama za razvoj tumora. Nakon 5 dana ćelijske inokulacije, miševi sa tumorima od 36-79 mm<3>su randomizovani u tretmanske grupe sa srednjim volumenom tumora od 54 mm<3>. Tretmani su započeti sledećeg dana nakon randomizacije (dan randomizacije je definisan kao dan 0) i tretirani su vehikulumom (25 ili 50% Labrasol) ili Jedinjenjem 561 BID (2 puta dnevno svakih 12 sati) u dozama u rasponu od 125-500 mg/kg ili QD (jednom dnevno) u dozi od 500 mg/kg tokom 21 dana oralnom gavažom ili iglom supkutano. Zapremine tumora određivane su ručnim meračem svaka 2-3 dana. Prikazani su srednji volumen tumora i SEM. BID: dva puta dnevno; PO: per oralna administracija; QD: jednom dnevno; SC: per supkutana administracija. Prve dve doze za vehikulum i Jedinjenje 561500 mg/kg u QD grupama su date supkutanom injekcijom. Statistička analiza za inhibiciju rasta tumora (TGI) je izvedena kada je najmanje 8 od 10 miševa ostalo u vehikulum grupi (Dan 16). Statistička značajnost je izračunata pomoću dvosmerne ANOVA analize praćene Bonferroni posttestovima u kojima su tretirane grupe upoređene sa vehikulum kontrolom (**** P < 0.0001). Slika 7B ilustruje da administracija jednom ili dva puta dnevno inhibitora PARP7 Jedinjenje 561 značajno smanjuje rast tumora u mišjem singenom modelu raka debelog creva CT26.

Claims (39)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule I:
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: X je Cl, Br, CH3, CF3, CN, OCH3, etil, ciklopropil, SCH3ili izopropil; A je grupa koja ima formulu (A-1):
    Y<1>, Y<2>i Y<3>su svaki nezavisno izabrani između O, S, NR<Y>, C(=O), C(=O)O, C(=O)NR<Y>, S(=O), S(=O)2, S(=O)NR<Y>, S(=O)2NR<Y>ili NR<Y>C(=O)NR<Y>, pri čemu je svako R<Y>nezavisno H ili C1-4alkil; L je C1-3alkilen, O, S, NR<Y>, C(=O), C(=O)O, C(=O)NR<Y>, S(=O), S(=O)NR<Y>ili NR<Y>C(=O)NR<Y>; Z je H, Cy<Z>, halo, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, CN, NO2, OR<a>, SR<a>, C(O)R<b>, C(O)NR<c>R<d>, C(O)OR<a>, OC(O)R<b>, OC(O)NR<c>R<d>, NR<c>R<d>, NR<c>C(O)R<b>, NR<c>C(O)OR<a>, NR<c>C(O)NR<c>R<d>, C(=NR<e>)R<b>, C(=NR<e>)NR<c>R<d>, NR<c>C(=NR<e>)NR<c>R<d>, NR<c>S(O)R<b>, NR<c>S(O)2R<b>, NR<c>S(O)2NR<c>R<d>, S(O)R<b>, S(O)NR<c>R<d>, S(O)2Rb i S(O)2NR<c>R<d>; pri čemu su navedeni C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil i C1-6haloalkil iz Z svaki opciono supstituisani sa 1, 2, 3, 4 ili 5 supstituenata nezavisno izabranih od Cy<Z>, halo, CN, NO2, OR<a>, SR<a>, C(O)R<b>, C(O)NR<c>R<d>, C(O)OR<a>, OC(O)R<b>, OC(O)NR<c>R<d>, C(=NR<e>)NR<c>R<d>, NR<c>C(=NR<e>)NR<c>R<d>, NR<c>R<d>, NR<c>C(O)R<b>, NR<c>C(O)OR<a>, NR<c>C(O)NR<c>R<d>, NR<c>S(O)R<b>, NR<c>S(O)2R<b>, NR<c>S(O)2NR<c>R<d>, S(O)R<b>, S(O)NR<c>R<d>, S(O)2R<b>i S(O)2NR<c>R<d>; Cy<Z>se bira između C6-10aril, C3-7cikloalkil, 5-10-točlani heteroaril, i 4-10-točlani heterocikloalkil, od kojih je svaki opciono supstituisan sa 1, 2, 3 ili 4 supstituenta nezavisno izabrana od halo, C1-6alkil, C2-6alkinil, C2-6haloalkil, CN, NO2, OR<a1>, SR<a1>, C(O)R<b1>, C(O)NR<c1>R<d1>, C(O)OR<a1>, OC(O)R<b1>, OC(O)NR<c1>R<d1>, C(=NR<e1>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(=NR<e1>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(O)R<b1>, NR<c1>C(O)OR<a1>, NR<c1>C(O)NR<c1>R<d1>, NR<c1>S(O)R<b1>, NR<c1>S(O)2R<b1>, NR<c1>S(O)2NR<c1>R<d1>, S(O)R<b1>, S(O)NR<c1>R<d1>, S(O)2R<b1>i S(O)2NR<c1>R<d1>, pri čemu su alkil, C2-6alkenil i C2-6alkinil opciono supstituisani sa 1, 2 ili 3 supstituentima nezavisno izabrana od halo, CN, NO2, CN, NO2, OR<a1>, SR<a1>, C(O)R<b1>, C(O)NR<c1>R<d1>, C(O)OR<a1>, OC(O)R<b1>, OC(O)NR<c1>R<d1>, C(=NR<e1>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(=NR<e1>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(O)R<b1>, NR<c1>C(O)OR<a1>, NR<c1>C(O)NR<c1>R<d1>, NR<c1>S(O)R<b1>, NR<c1>S(O)2R<b1>, NR<c1>S(O)2NR<c1>R<d1>, S(O)R<b1>, S(O)NR<c1>R<d1>, S(O)2R<b1>, i S(O)2NR<c1>R<d1>; Prsten D je monociklični ili policiklični sa 4-10-točlanom heterocikloalkilnom grupom koja je opciono supstituisana sa 1, 2 ili 3 grupe koja su nezavisno izabrane od halo, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, CN, NO2, OR<a2>, SR<a2>, C(O)R<b2>, C(O)NR<c2>R<d2>, C(O)OR<a2>, OC(O)R<b2>, OC(O)NR<c2>R<d2>, C(=NR<e2>)NR<c2>R<d2>, NR<c2>C(=NR<e2>)NR<c2>R<d2>, NR<c2>R<d2>, NR<c2>O)R<b2>, NR<c2>C(O)OR<a2>, NR<c2>C(O)NR<c2>R<d2>, NR<c2>S(O)R<b2>, NR<c2>S(O)2R<b2>, NR<c2>S(O)2NR<c2>R<d2>,S(O)R<b2>, S(O)NR<c2>R<d2>, S(O)2R<b2>i S(O)2NR<c2>R<d2>, pri čemu je svaki C1-6alkil, C2-6alkenil i C2-6alkinil opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 grupe nezavisno odabrane između halo, CN, NO2, OR<a2>, SR<a2>, C(O)R<b2>, C(O)NR<c2>R<d2>, C(O)OR<a2>, OC(O)R<b2>, OC(O)NR<c2>R<d2>, C(=NR<e2>)NR<c2>R<d2>, NR<c2>C(=NR<e2>)NR<c2>R<d2>, NR<c2>R<d2>, NR<c2>C(O)R<b2>, NR<c2>C(O)OR<a2>, NR<c2>C(O)N R<c2>R<d2>, NR<c2>S(O)R<b2>, NR<c2>S(O)2R<b2>, NR<c2>S(O)2NR<c2>R<d2>, S(O)R<b2>, S(O)NR<c2>R<d2>, S(O)2R<b2>, i S(O)2NR<c2>R<d2>; R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, R<5>, R<6>, R<7>, R<8>, R<9>, R<10>, R<11>i R<12>su svaki nezavisno izabrani između H, halo, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, C6-10aril, C3-7cikloalkil, 5-10-točlani heteroaril, 4-10-točlani heterocikloalkil, C6-10aril-C1-4alkil, C3-7cikloalkil-C1-4alkil, 5-10-točlani heteroaril-C1-4alkil, 4-10-točlani heterocikloalkil-C1-4alkil, CN, NO2, OR<a3>, SR<a3>, C(O)R<b3>, C(O)NR<c3>R<d3>, C(O)OR<a3>, OC(O)R<b3>, OC(O)NR<c3>R<d3>, NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(O)R<b3>, NR<c3>C(O)OR<a3>, NR<c3>C(O) NR<c3>R<d3>, C(=NR<e3>)R<b3>, C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>S(O)R<b3>, NR<c3>S(O)2R<b3>, NR<c3>S(O)2NR<c3>R<d3>, S(O)R<b3>, S(O)NR<c3>R<d3>, S(O)2R<b3>i S(O)2NR<c3>R<d3>; pri čemu je svaki navedeni C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, C6-10aril, C3-7cikloalkil, 5-10-točlani heteroaril, 4-10-točlani heterocikloalkil, C6-10aril-C1-4alkil, C3-7cikloalkil-C1-4alkil, 5-10-točlani heteroaril-C1-4alkil i 4-10-točlani heterocikloalkil-C1-4alkil iz navedenih R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, R<5>, R<6>, R<7>, R<8>, R<9>, R<10>, R<11>i R<12>, opciono supstituisan sa 1, 2, 3, 4 ili 5 supstituenata nezavisno izabranih između halo, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, CN, NO2, OR<a3>, SR<a3>, C(O)R<b3>, C(O)NR<c3>R<d3>, C(O)OR<a3>, OC(O)R<b3>, OC(O)NR<c3>R<d3>, NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(O)R<b3>, NR<c3>C(O)OR<a3>, NR<c3>C(O)NR<c3>R<d3>, C(=NR<e3>)R<b3>, C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>S(O)R<b3>, NR<c3>S(O)2R<b3>, NR<c3>S(O)2NR<c3>R<d3>, S(O)R<b3>, S(O)NR<c3>R<d3>, S(O)2R<b3>, i S(O)2NR<c3>R<d3>; ili R<1>i R<3>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani formiraju C5-10cikloalkil prsten ili 5-10-točlani heterocikloalkil prsten, svaki opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno izabrana izme đu halo, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, CN, NO2, OR<a3>, SR<a3>, C(O)R<b3>, C(O)NR<c3>R<d3>, C(O)OR<a3>, OC(O)R<b3>, OC(O)NR<c3>R<d3>, NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(O)R<b3>, NR<c3>C(O)OR<a3>, NR<c3>C(O)NR<c3>R<d3>, C(=NR<e3>)R<b3>, C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>S(O)R<b3>, NR<c3>S(O)2R<b3>, NR<c3>S(O)2NR<c3>R<d3>, S(O)R<b3>, S(O)NR<c3>R<d3>, S(O)2R<b3>, i S(O)2NR<c3>R<d3>; ili R<3>i R<5>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani formiraju C5-10cikloalkil prsten ili 5-10-točlani heterocikloalkil prsten, svaki opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno izabrana izme đu halo, C1-6alkil , C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, CN, NO2, OR<a3>, SR<a3>, C(O)R<b3>, C(O)NR<c3>R<d3>, C(O)OR<a3>, OC(O)R<b3>, OC(O)NR<c3>R<d3>, NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(O)R<b3>, NR<c3>C(O)OR<a3>, NR<c3>C(O)NR<c3>R<d3>, C(=NR<e3>)R<b3>, C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>S(O)R<b3>, NR<c3>S(O)2R<b3>, NR<c3>S(O)2NR<c3>R<d3>, S(O)R<b3>, S(O)NR<c3>R<d3>, S(O)2R<b3>i S(O)2NR<c3>R<d3>; ili R<7>i R<9>zajedno sa atomima ugljenika na koje su vezani formiraju C5-10cikloalkil prsten ili 5-10-točlani heterocikloalkil prsten, svaki opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno izabrana izme đu halo, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, CN, NO2, OR<a3>, SR<a3>, C(O)R<b3>, C(O)NR<c3>R<d3>, C(O)OR<a3>, OC(O)R<b3>, OC(O)NR<c3>R<d3>, NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(O)R<b3>, NR<c3>C(O)OR<a3>, NR<c3>C(O)NR<c3>R<d3>, C(=NR<e3>)R<b3>, C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(=NR<c3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>S(O)R<b3>, NR<c3>S(O)2R<b3>, NR<c3>S(O)2NR<c3>R<d3>, S(O)R<b3>, S(O)NR<c3>R<d3>, S(O)2R<b3>i S(O)2NR<c3>R<d3>; ili R<9>i R<11>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani formiraju C5-10cikloalkil prsten ili 5-10-točlani heterocikloalkil prsten, svaki opciono supstituisan sa 1, 2, ili 3 supstituenta nezavisno izabrana izme đu halo, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, CN, NO2, OR<a3>, SR<a3>, C(O)R<b3>, C(O)NR<c3>R<d3>, C(O)OR<a3>, OC(O)R<b3>, OC(O)NR<c3>R<d3>, NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(O)R<b3>, NR<c3>C(O)OR<a3>, NR<c3>C(O)NR<c3>R<d3>, C(=NR<e3>)R<b3>, C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>S(O)R<b3>, NR<c3>S(O)2R<b3>, NR<c3>S(O)2NR<c3>R<d3>, S(O)R<b3>, S(O)NR<c3>R<d3>, S(O)2R<b3>i S(O)2NR<c3>R<d3>; ili R<5>i R<7>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani i zajedno sa Y<2>formiraju 5-10-točlani heterocikloalkil prsten opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno izabrana izme đu halo, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, CN, NO2, OR<a3>, SR<a3>, C(O)R<b3>, C(O)NR<c3>R<d3>, C(O)OR<a3>, OC(O)R<b3>, OC(O)NR<c3>R<d3>, NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(O)R<b3>, NR<c3>C(O)OR<a3>, NR<c3>C(O)NR<c3>R<d3>, C(=NR<e3>)R<b3>, C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>S(O)R<b3>, NR<c3>S(O)2R<b3>, NR<c3>S(O)2NR<c3>R<d3>, S(O)R<b3>, S(O)NR<c3>R<d3>, S(O)2R<b3>i S(O)2NR<c3>R<d3>; ili R<1>i R<3>zajedno formiraju dvostruku vezu između atoma ugljenika za koje su vezani; ili R<3>i R<5>zajedno formiraju dvostruku vezu između atoma ugljenika za koje su vezani; ili R<7>i R<9>zajedno formiraju dvostruku vezu između atoma ugljenika za koje su vezani; ili R<9>i R<11>zajedno formiraju dvostruku vezu između atoma ugljenika za koje su vezani; ili R<9>, R<10>, R<11>i R<12>zajedno formiraju trostruku vezu između atoma ugljenika za koje su vezani; svaki R<a>, R<b>, R<c>, R<d>, R<a1>, R<b1>, R<c1>, R<d1>, R<a2>, R<b2>, R<c2>, R<d2>, R<a3>, R<b3>, R<c3>i R<d3>se nezavisno bira između H, C1-6alkil, C1-6haloalkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C6-10aril, C3-7cikloalkil, 5-10-točlani heteroaril, 4-10-točlani heterocikloalkil, C6-10aril-C1-4alkil, C3-7cikloalkil-C1-4alkil, 5-10-točlani heteroaril-C1-4alkil i 4-10-točlani heterocikloalkil-C1-4alkil, pri čemu su navedeni C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C6-10aril, C3-7cikloalkil, 5-10-člani heteroaril, 4-10-točlani heterocikloalkil, C6-10aril-C1-4alkil, C3-7cikloalkil-C1-4alkil, 5-10-člani heteroaril-C1-4-alkil i 4-10-točlani heterocikloalkil-C1-4alkil iz navedenih R<a>, R<b>, R<c>, R<d>, R<a1>, R<b1>, R<c1>, R<d1>, R<a2>, R<b2>, R<c2>, R<d2>, R<a3>, R<b3>, R<c3>i R<d3>opciono supstituisani sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno izabrana između halo, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, CN, OR<a7>, SR<a7>, C(O)R<b7>, C(O)NR<c7>R<d7>, C(O)OR<a7>, OC(O)R<b7>, OC(O)NR<c7>R<d7>, NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(O)R<b7>, NR<c7>C(O)NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(O)OR<a7>, C(=NR<e7>)NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(=NR<e7>)NR<c3>R<d7>, S(O)R<b7>, S(O)NR<c7>R<d7>, S(O)2R<b7>, NR<c7>S(O)2R<b7>, NR<c7>S(O)2NR<c7>R<d7>, i S(O)2NR<c7>R<d7>; ili R<c>i R<d>zajedno sa N atomom za koji su vezani formiraju 4-7-članu heterocikloalkil grupu opciono supstituidanu sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno izabrana od CN, halo, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-6haloalkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, CN, OR<a7>, SR<a7>, C(O)R<b7>, C(O)NR<c7>R<d7>, C(O)OR<a7>, OC(O)R<b7>, OC(O)NR<c7>R<d7>, NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(O)R<b7>, NR<c7>C(O)NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(O)OR<a7>, C(=NR<e7>)NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(=NR<e7>)NR<c3>R<d7>, S(O)R<b7>, S(O)NR<c7>R<d7>, S(O)2R<b7>, NR<c7>S(O)2R<b7>, NR<c7>S(O)2NR<c7>R<d7>, i S(O)2NR<c7>R<d7>; ili R<c1>i R<d2>zajedno sa N atomomza koji su vezani formiraju 4-7-članu heterocikloalkil grupu opciono supstituisanu sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno izabrana od CN, halo, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-6haloalkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, CN, OR<a7>, SR<a7>, C(O)R<b7>, C(O)NR<c7>R<d7>, C(O)OR<a7>, OC(O)R<b7>, OC(O)NR<c7>R<d7>, NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(O)R<b7>, NR<c7>C(O)NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(O)OR<a7>, C(=NR<e7>)NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(=NR<e7>)NR<c3>R<d7>, S(O)R<b7>, S(O)NR<c7>R<d7>, S(O)2R<b7>, NR<c7>S(O)2R<b7>, NR<c7>S(O)2NR<c7>R<d7>i S(O)2NR<c7>R<d7>; ili R<c2>i R<d2>zajedno sa N atomom za koji su vezani formiraju 4-7-članu heterocikloalkil grupu opciono supstituisanu sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno izabrana od CN, halo, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-6haloalkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, CN, OR<a7>, SR<a7>, C(O)R<b7>, C(O)NR<c7>R<d7>, C(O)OR<a7>, OC(O)R<b7>, OC(O)NR<c7>R<d7>, NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(O)R<b7>, NR<c7>C(O)NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(O)OR<a7>, C(=NR<e7>)NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(=NR<e7>)NR<c3>R<d7>, S(O)R<b7>, S(O)NR<c7>R<d7>, S(O)2R<b7>, NR<c7>S(O)2R<b7>, NR<c7>S(O)2NR<c7>R<d7>i S(O)2NR<c7>R<d7>; ili R<c3>i R<d3>zajedno sa N atomom za koji su vezani formiraju 4-7-članu heterocikloalkil grupu opciono supstituisanu sa 1, 2, ili 3 supstituenta nezavisno izabrana između CN, halo, C1-4alkil, C1-4haloalkil, C1-6haloalkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, CN, OR<a7>, SR<a7>, C(O)R<b7>, C(O) )NR<c7>R<d7>, C(O)OR<a7>, OC(O)R<b7>, OC(O)NR<c7>R<d7>, NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(O)R<b7>, NR<c7>C(O)NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(O)OR<a7>, C(=NR<e7>)NR<c7>R<d7>, NR<c7>C(=NR<e7>)NR<c3>R<d7>, S(O)R<b7>, S(O)NR<c7>R<d7>, S(O)2R<b7>, NR<c7>S(O)2R<b7>, NR<c7>S(O)2NR<c7>R<d7>i S(O)2NR<c7>R<d7>; R<a7>, R<b7>, R<c7>i R<d7>se nezavisno biraju između H, C1-6alkil, C1-6haloalkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C6-10aril, C3-7cikloalkil, 5-10-točlani heteroaril, 4-10-točlani heterocikloalkil, C6-10aril-C1-4alkil, C3-7cikloalkil-C1-4alkil, 5-10-točlani heteroaril-C1-4alkil i 4-10-točlani heterocikloalkil-C1-4alkil, pri čemu je svaki navedeni C1-6alkil, C1-6haloalkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C6-10aril, C3-7cikloalkil, 5-10-točlani heteroaril, 4-10-točlani heterocikloalkil, C6-10aril-C1-4alkil, C3-7cikloalkil-C1-4alkil, 5-10-točlani heteroaril-C1-4alkil i 4-10-točlani heterocikloalkil-C1-4alkil, opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno izabrana od OH, CN, amino, halo, C1-6alkil, C1-6alkoksi, C1-6haloalkil i C1-6haloalkoksi; svaki R<e>, R<e1>, R<e2>, R<e3>i R<e7>je nezavisno izabran između H, C1-4alkil i CN; a je 0 ili 1; m je 0 ili 1; n je 0 ili 1; p je 0 ili 1; q je 0 ili 1; r je 0 ili 1; pri čemu bilo koja gore pomenuta heteroaril ili heterocikloalkil grupa sadrži 1, 2, 3 ili 4 heteroatoma koji formiraju prsten, nezavisno izabrana između O, N i S; i pri čemu je jedan ili više C ili N atoma koji formiraju prsten bilo koje gore navedene heterocikloalkil grupe opciono supstituisan sa okso (=O) grupom.
  2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so pri čemu: a) A je grupa formule (A-1a):
    ili b) A je grupa formule (A-1b):
    ili c) A je grupa formule (A-1c) ):
    u kojoj je svako Z<1>i Z<2>nezavisno odabrano između N i CH, i u kojoj R je CN, Cl ili CF3; ili d) A je grupa koja ima formulu (A-1d):
    u kojoj je svako Z<1>i Z<2>nezavisno odabrano između N i CH, i u kojoj R je CN, Cl ili CF3.
  3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu L je NR<Y>ili O.
  4. 4. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-3, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu X je CF3, CH3, CN, Cl ili Br.
  5. 5. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-4, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: a) Y<1>je NR<Y>ili O; ili b) Y<1>je NR<Y>, O ili S; ili c) Y<1>je NR<Y>; ili d) Y<1>je O.
  6. 6. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-5, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: a) Y<2>je NR<Y>ili O; ili b) Y<2>je NR<Y>, O ili S; ili c) Y<2>je O.
  7. 7. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-6, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: a) Y<3>je C(=O); ili b) Y<3>je C(=O) ili S(=O)2.
  8. 8. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-7, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: a) R<Y>je H ili C1-4alkil; ili b) R<Y>je metil; ili c) RY je H.
  9. 9. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-8, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: a) Z je H, Cy<Z>, halo, C1-6alkil, C1-6haloalkil, CN, NO2, OR<a>, C(O)R<b>, C(O)NR<c>R<d>, C(O)OR<a>, NR<c>R<d>i NR<c>C(O)R<b>; pri čemu je svaki navedeni C1-6alkil i C1-6haloalkil iz Z opciono supstituisan sa 1, 2, 3, 4 ili 5 supstituenata nezavisno izabranih između Cy<Z>, halo, CN, NO2, OR<a>, SR<a>, C(O)R<b>, C(O)NR<c>R<d>, C(O)OR<a>, OC(O)R<b>, OC(O)NR<c>R<d>, NR<c>R<d>i NR<c>C(O)Rb; ili b) Z je Cy<Z>.
  10. 10. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-9, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: a) Cy<Z>je odabrano između 5-10-točlanog heteroarila i 4-10-točlanog heterocikloalkila, od kojih je svaki opciono supstituisan sa 1, 2, 3, ili 4 supstituenta nezavisno izabrana između halo, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, CN, NO2, OR<a1>, SR<a1>, C(O)R<b1>, C(O)NR<c1>R<d1>, C(O)OR<a1>, OC(O)R<b1>, OC(O)NR<c1>R<d1>, C(=NR<e1>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(=NR<e1>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(O)R<b1>, NR<c1>C(O)OR<a1>, NR<c1>C(O)NR<c1>R<d1>, NR<c1>S(O)R<b1>, NR<c1>S(O)2R<b1>, NR<c1>S(O)2NR<c1>R<d1>, S(O)R<b1>, S(O)NR<c1>R<d1>, S(O)2R<b1>i S(O)2NR<c1>R<d1>, pri čemu su alkil, C2-6alkenil i C2-6alkinil opciono supstituisani sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno izabrana između halo, CN, NO2, OR<a1>, SR<a1>, C(O)R<b1>, C(O)NR<c1>R<d1>, C(O)OR<a1>, OC(O)R<b1>, OC(O)NR<c1>R<d1>, C(=NR<e1>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(=NR<e1>)NR<c1>R<d1>, NR<c1>R<d1>, NR<c1>C(O)R<b1>, NR<c1>C(O)OR<a1>, NR<c1>C(O)NR<c1>R<d1>, NR<c1>S(O)R<b1>, NR<c1>S(O)2R<b1>, NR<c1>S(O)2NR<c1>R<d1>, S(O)R<b1>, S(O)NR<c1>R<d1>, S(O)2R<b1>i S(O)2NR<c1>R<d>; ili b) Cy<Z>je 5-10-točlani heteroaril, opciono supstituisan sa CN, CF3ili Cl; ili c) Cy<Z>je 5-10-točlani heteroaril, opciono supstituisan sa CN, C1-6alkil, C1-6haloalkil, halo, ili NR<c1>R<d1>, pri čemu je C1-6alkil opciono supstituisan sa CN ili NR<c1>R<d1>; ili d) Cy<Z>je piridinil ili pirimidinil, svaki opciono supstituisan sa CN, CF3ili Cl.
  11. 11. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-10, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: a) Prsten D je monociklična ili policiklična 4-10-točlana heterocikloalkil grupa opciono supstituisana sa 1, 2 ili 3 grupe nezavisno odabrane od halo, C1-6alkil, C1-6haloalkil, CN, NO2, OR<a2>, C(O)R<b2>, C(O)NR<c2>R<d2>, C(O)OR<a2>, NR<c2>R<d2>, NR<c2>C(O)R<b2>, pri čemu je C1-6alkil opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 grupe nezavisno odabrane između halo, CN, NO2, OR<a2>, C(O)R<b2>, NR<c2>R<d2>i NR<c2>C(O)R<b2>; ili b) Prsten D je monociklična 4-10-točlana heterocikloalkil grupa; ili c) Prsten D je piperazinil; ili d) Prsten D je piperazinil, dihidropiridazinil, diazepanil, pirolidinil ili heksahidropirolo[3,2-b] pirol-1(2H)-il.
  12. 12. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-11, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: a) R<1>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril, C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu je navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>; ili b) R<1>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril, 4-10-točlani heterocikloalkil, C6-10aril-C1-4alkil, 5-10-točlani heteroaril-C1-4alkil ili 4-10-točlani heterocikloalkil-C1-4alkil, pri čemu je navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril, C6-10aril-C1-4alkil, 5-10-točlani heteroaril-C1-4alkil ili 4-10-točlani heterocikloalkil-C1-4alkil, opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>; ili c) R<1>je C1-6alkil; ili d) R<1>je C1-6alkil, opciono supstituisan sa OR<a3>; ili e) R<1>je H; ili f) R<1>je metil, etil ili izopropil; ili g) R<1>je metoksimetil ili hidroksimetil; ili h) R<1>je fenil, fenilmetil ili piridinil.
  13. 13. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-12, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: a) R<2>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril, C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu je navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril, ili C6-10aril-C1-4alkil, opciono supstituisan sa ORa3 ili NR<c3>R<d3>; ili b) R<2>je OR<a3>; ili c) R<2>je H.
  14. 14. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-13 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: a) R<3>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril, C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu je navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>; ili b) R<3>je H; ili c) R<3>je metil, etil ili izopropil; ili d) R<3>je metoksimetil ili hidroksimetil; ili e) R<3>je fenil, fenilmetil ili piridinil.
  15. 15. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-14, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: a) R<4>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril, C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu je navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril, ili C6-10aril-C1-4alkil opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>; ili b) R<4>je H.
  16. 16. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-15, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: a) R<5>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril, C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu je navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>; ili b) R<5>je H; ili c) R<5>je metil, etil ili izopropil; ili d) R<5>je metoksimetil ili hidroksimetil; ili e) R<5>je fenil, fenilmetil ili piridinil.
  17. 17. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-16, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: a) R<6>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril, C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu je navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril, ili C6-10aril-C1-4alkil opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>; ili b) R<6>je H.
  18. 18. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-17, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu a) R<7>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril, C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu je navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>; ili b) R<7>je C1-6alkil; ili c) R<7>je metil.
  19. 19. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-18, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: a) R<8>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril ili C6 -10 aril-C1-4alkil, pri čemu je navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>; ili b) R<8>je H.
  20. 20. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-19, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: a) R<9>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu je navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril, ili C6-10aril-C1-4alkil opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>; ili b) R<9>je H.
  21. 21. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-20, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: a) R<10>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril, ili C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu je navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>; ili b) R<10>je H.
  22. 22. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-21, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: a) R<11>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-člani heteroaril, ili C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu je navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>; ili b) R<11>je H.
  23. 23. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-22, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: a) R<12>je H, halo, OR<a3>, C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril, ili C6-10aril-C1-4alkil, pri čemu je navedeni C1-6alkil, C6-10aril, 5-10-točlani heteroaril ili C6-10aril-C1-4alkil opciono supstituisan sa OR<a3>ili NR<c3>R<d3>; ili b) R<12>je H.
  24. 24. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-13, 15 i 17-23, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: a) R<3>i R<5>zajedno sa atomima ugljenika na koje su vezani formiraju C5-10cikloalkil prsten ili 5-10-točlani heterocikloalkil prsten, svaki opciono supstituisan sa 1, 2, ili 3 supstituenta nezavisno izabrana između halo, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, CN, NO2, OR<a3>, SR<a3>, C(O)R<b3>, C(O)NR<c3>R<d3>, C(O)OR<a3>, OC(O)R<b3>, OC(O)NR<c3>R<d3>, NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(O)R<b3>, NR<c3>C(O)OR<a3>, NR<c3>C(O)NR<c3>R<d3>, C(=NR<e3>)R<b3>, C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>S(O)R<b3>, NR<c3>S(O)2R<b3>, NR<c3>S(O)2NR<c3>R<d3>, S(O)R<b3>, S(O)NR<c3>R<d3>, S(O)2R<b3>i S(O)2NR<c3>R<d3>ili b) R<3>i R<5>zajedno sa atomima ugljenika na koje su vezani formiraju C5-10cikloalkil prsten ili 5-10-točlani heterocikloalkil prsten; ili c) R<3>i R<5>zajedno sa atomima ugljenika na koje su vezani formiraju tetrahidrofuranil prsten; ili d) R<3>i R<5>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani formiraju ciklobutil ili ciklopentil prsten.
  25. 25. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-15, 17 i 19-24, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu: a) R<5>i R<7>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani i zajedno sa Y<2>formiraju 5-10-točlani heterocikloalkil prsten opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 supstituenta nezavisno izabrana između halo, C1-6alkil, C2-6alkenil, C2-6alkinil, C1-6haloalkil, CN, NO2, OR<a3>, SR<a3>, C(O)R<b3>, C(O)NR<c3>R<d3>, C(O)OR<a3>, OC(O)R<b3>, OC(O)NR<c3>R<d3>, NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(O)R<b3>, NR<c3>C(O)OR<a3>, NR<c3>C(O)NR<c3>R<d3>, C(=NR<e3>)R<b3>, C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>C(=NR<e3>)NR<c3>R<d3>, NR<c3>S(O)R<b3>, NR<c3>S(O)2R<b3>, NR<c3>S(O)2NR<c3>R<d3>, S(O)R<b3>, S(O)NR<c3>R<d3>, S(O)2R<b3>i S(O)2NR<c3>R<d3>; ili b) R<5>i R<7>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani i zajedno sa Y<2>formiraju 5-10-točlani heterocikloalkil prsten; ili c) R<5>i R<7>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani i zajedno sa Y<2>formiraju tetrahidrofuranil prsten ili tetrahidropiranil prsten; ili d) R<5>i R<7>zajedno sa atomima ugljenika za koje su vezani i zajedno sa Y<2>formiraju tetrahidrofuranil prsten, tetrahidropiranil prsten ili pirolidinil prsten.
  26. 26. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 i 3-25, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu m je 1.
  27. 27. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 i 3-26, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu n je 0.
  28. 28. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 i 3-27, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu p je 1.
  29. 29. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 i 3-28, ili farmaceutski prihvatljivo njegova so, pri čemu q je 0.
  30. 30. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 i 3-29, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu r je 1.
  31. 31. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 i 3-30, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu a je 0.
  32. 32. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1-2 i 4-25, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koje ima: a) Formulu IIa:
    ili b) Formulu IIb:
    ili c) Formulu IIc:
    u kojoj je svako Z<1>i Z<2>nezavisno odabrano od N i CH, i u kojoj R je CN, Cl ili CF3; ili d) Formulu IId:
    u kojoj je svako Z<1>i Z<2>nezavisno odabrano između N i CH, i u kojoj R je CN, Cl ili CF3.
  33. 33. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, pri čemu jedinjenje predstavlja 5-[[(2S)-1-(3-okso-3-[4-[5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]piperazin-1-il]propoksi)propan-2-il]amino]-4-(trifluorometil)-2,3-dihidropiridazin-3-on, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.
  34. 34. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 33, pri čemu je jedinjenje kristalno.
  35. 35. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 33 ili 34, pri čemu jedinjenje ima: a) najmanje jedan karakterističan XRPD pik izabran između oko 5.8, oko 10.8, oko 11.9 i oko 17.2 stepeni 2-θ; ili b) najmanje jedan karakterističan XRPD pik izabran između oko 5.8, oko 10.8, oko 11.9, oko 13.3, oko 13.5, oko 15.5 i oko 17.2 stepeni 2-θ; ili c) XRPD difraktogram sa karakterističnim pikovima kao što je u suštini prikazano na Slici 8.
  36. 36. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 33-35, pri čemu jedinjenje ima: a) DSC termogram naznačen time da ima endotermni pik na temperaturi od oko 174 °C; ili b) DSC termogram u suštini kao što je prikazano na Slici 9.
  37. 37. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 do 36, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosa č.
  38. 38. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 do 36, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u postupku lečenja raka kod pacijenta kojem je lečenje potrebno, koji postupak obuhvata administriranje navedenom pacijentu terapeutski efikasne koli čine jedinjenja, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
  39. 39. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu prema patentnom zahtevu 38, pri čemu je navedeni rak rak dojke, rak centralnog nervnog sistema, rak endometrijuma, rak bubrega, rak debelog creva, rak pluća, rak jednjaka, rak jajnika, rak gušterače, rak prostate, rak želuca, rak glave i vrata (karcinom gornjeg aerodigestivnog trakta), rak urinarnog trakta ili karcinom kolona.
RS20230450A 2018-04-30 2019-04-29 Piridazinoni kao inhibitori parp7 RS64283B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862664544P 2018-04-30 2018-04-30
PCT/US2019/029582 WO2019212937A1 (en) 2018-04-30 2019-04-29 Pyridazinones as parp7 inhibitors
EP19723272.1A EP3788040B1 (en) 2018-04-30 2019-04-29 Pyridazinones as parp7 inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS64283B1 true RS64283B1 (sr) 2023-07-31

Family

ID=66476851

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20230450A RS64283B1 (sr) 2018-04-30 2019-04-29 Piridazinoni kao inhibitori parp7

Country Status (36)

Country Link
US (6) US10550105B2 (sr)
EP (2) EP4234551A3 (sr)
JP (2) JP6942896B2 (sr)
KR (1) KR102862474B1 (sr)
CN (2) CN112424188B (sr)
AR (1) AR121419A1 (sr)
AU (2) AU2019262927B2 (sr)
BR (1) BR112020022006A2 (sr)
CA (1) CA3098585A1 (sr)
CL (1) CL2020002821A1 (sr)
CO (1) CO2020013599A2 (sr)
CR (1) CR20200518A (sr)
CY (1) CY1126132T1 (sr)
DK (1) DK3788040T3 (sr)
EA (1) EA202092590A1 (sr)
EC (1) ECSP20069404A (sr)
ES (1) ES2949538T3 (sr)
FI (1) FI3788040T3 (sr)
HR (1) HRP20230458T1 (sr)
HU (1) HUE062096T2 (sr)
IL (2) IL278116B2 (sr)
LT (1) LT3788040T (sr)
MA (1) MA52486B1 (sr)
MD (1) MD3788040T2 (sr)
MX (2) MX2020011465A (sr)
PE (1) PE20211382A1 (sr)
PH (1) PH12020551760A1 (sr)
PL (1) PL3788040T3 (sr)
PT (1) PT3788040T (sr)
RS (1) RS64283B1 (sr)
SG (1) SG11202010183XA (sr)
SI (1) SI3788040T1 (sr)
SM (1) SMT202300172T1 (sr)
TW (2) TWI877697B (sr)
WO (1) WO2019212937A1 (sr)
ZA (1) ZA202006549B (sr)

Families Citing this family (61)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11293927B2 (en) 2018-04-30 2022-04-05 Ribon Therapeutics, Inc. Screening methods for PARP modulators
HRP20230458T1 (hr) * 2018-04-30 2023-07-21 Ribon Therapeutics Inc. Piridazinoni kao inhibitori parp7
US11512090B2 (en) 2018-06-11 2022-11-29 Pipeline Therapeutics, Inc. Muscarinic acetylcholine M1 receptor antagonists
CA3108076A1 (en) 2018-09-04 2020-03-12 Pipeline Therapeutics, Inc. Muscarinic acetylcholine m1 receptor antagonists
SG11202109568TA (en) * 2019-03-20 2021-10-28 Goldfinch Bio Inc Pyridazinones and methods of use thereof
US12371421B2 (en) 2019-04-29 2025-07-29 Ribon Therapeutics, Inc. Solid forms of a PARP7 inhibitor
IL291951A (en) * 2019-10-07 2022-06-01 Pipeline Therapeutics Inc Muscarinic m1 acetylcholine receptor antagonists
US20240190844A1 (en) * 2019-10-30 2024-06-13 Ribon Therapeutics, Inc. Pyridazinones as parp7 inhibitors
CN114761086B (zh) * 2019-10-30 2025-07-22 里邦医疗公司 作为parp7抑制剂的哒嗪酮
US11752149B2 (en) 2019-12-02 2023-09-12 Pipeline Therapeutics, Inc. Muscarinic acetylcholine M1 receptor antagonists
WO2021216898A1 (en) * 2020-04-23 2021-10-28 Plexxikon Inc. Compounds and methods for cd73 modulation and indications therefor
EP4161923A4 (en) * 2020-06-09 2023-10-11 Relive Therapeutics Inc. Compounds comprising a three ring core as pd-1/pd-l1 blockers
US20230257382A1 (en) * 2020-07-03 2023-08-17 Wuhan Ll Science And Technology Development Co., Ltd. Heterocyclic compound and use thereof
WO2022111700A1 (zh) * 2020-11-27 2022-06-02 成都百裕制药股份有限公司 哒嗪酮衍生物及其在医药上的应用
JP7623826B2 (ja) * 2020-12-18 2025-01-29 株式会社 資生堂 Ｔｉｐａｒｐ産生促進剤
WO2022156708A1 (en) * 2021-01-20 2022-07-28 Jacobio Pharmaceuticals Co., Ltd. Parp7 enzyme inhibitor
EP4289845A4 (en) * 2021-02-03 2025-01-08 Shanghai Apeiron Therapeutics Company Limited Triheterocyclic compound, preparation method therefor, and application thereof
CN114907408B (zh) * 2021-02-07 2024-05-03 武汉朗来科技发展有限公司 一种杂环化合物、其中间体、其制备方法及其应用
BR112023015721A2 (pt) * 2021-02-09 2023-11-07 Jacobio Pharmaceuticals Co Ltd Derivados tricíclicos úteis como inibidores de parp7
US20220265654A1 (en) * 2021-02-16 2022-08-25 Ribon Therapeutics, Inc. Dosage regimens for parp7 inhibitors
CN115028648B (zh) * 2021-03-03 2024-08-30 武汉誉祥医药科技有限公司 三并环化合物及其药物组合物和应用
CN117425648A (zh) * 2021-03-12 2024-01-19 杭州英创医药科技有限公司 作为parp7抑制剂的化合物
TW202246274A (zh) * 2021-03-16 2022-12-01 大陸商上海翰森生物醫藥科技有限公司 含氮雜環的多環化合物及其製備方法和應用
CA3211149A1 (en) 2021-03-31 2022-10-06 Phillip Martin Cowley Pharmaceutical compound
GB202114315D0 (en) * 2021-10-06 2021-11-17 Duke Street Bio Ltd Pharmaceutical compound
CN117083274A (zh) * 2021-04-23 2023-11-17 四川海思科制药有限公司 一种并环杂环衍生物及其在医药上的应用
WO2022242750A1 (zh) * 2021-05-21 2022-11-24 成都百裕制药股份有限公司 哌嗪衍生物及其在医药上的应用
WO2022247839A1 (zh) * 2021-05-25 2022-12-01 山东轩竹医药科技有限公司 Parp7抑制剂
CN115477640A (zh) * 2021-05-31 2022-12-16 由理生物医药（上海）有限公司 作为parp7抑制剂的哒嗪酮类化合物
CN117751108A (zh) * 2021-07-21 2024-03-22 南京明德新药研发有限公司 哒嗪酮类化合物
WO2023001296A1 (zh) * 2021-07-23 2023-01-26 武汉人福创新药物研发中心有限公司 作为parp7抑制剂的哒嗪酮类化合物
CN117279907A (zh) * 2021-08-06 2023-12-22 成都百裕制药股份有限公司 吡咯烷酮衍生物及其在医药上的应用
WO2023020479A1 (zh) * 2021-08-16 2023-02-23 重庆华森制药股份有限公司 Parp7抑制剂及其应用
EP4387966A1 (en) * 2021-08-17 2024-06-26 InventisBio Co., Ltd. Pyridazinone or pyridinone compounds, preparation methods and uses thereof
WO2023076983A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Gilead Sciences, Inc. Pyridizin-3(2h)-one derivatives
CN115745971B (zh) * 2021-12-20 2024-07-30 北京华森英诺生物科技有限公司 Parp7抑制剂及其应用
CN116375688B (zh) * 2021-12-23 2025-04-11 中国药科大学 哒嗪酮类化合物及其制备方法、药物组合物和应用
CN116444497B (zh) * 2022-01-14 2025-06-24 如东凌达生物医药科技有限公司 一类哒嗪酮类化合物、制备及其应用
WO2023143236A1 (zh) * 2022-01-26 2023-08-03 中国药科大学 2h-吲唑-7-甲酰胺类化合物、制备方法、药物组合物和应用
CN116535395B (zh) * 2022-01-26 2024-07-09 中国药科大学 2h-吲唑-7-甲酰胺类化合物、制备方法、药物组合物和应用
TW202340168A (zh) 2022-01-28 2023-10-16 美商基利科學股份有限公司 Ｐａｒｐ７抑制劑
EP4338737A4 (en) * 2022-04-01 2024-11-06 Novostar Pharmaceuticals, Ltd. PARP7 INHIBITOR AND ITS USE
TW202346294A (zh) * 2022-04-21 2023-12-01 大陸商四川海思科製藥有限公司 吡嗪酮衍生物及其在醫藥上的應用
CN117586263A (zh) * 2022-08-09 2024-02-23 成都百裕制药股份有限公司 哌嗪衍生物及其在医药上的应用
KR20250044422A (ko) * 2022-08-09 2025-03-31 캉바이다 (시추안) 바이오테크놀로지 씨오. 엘티디. 종양 치료를 위한 방사선요법과 병용한 피페라진 화합물의 용도
JP2025526003A (ja) * 2022-08-09 2025-08-07 康百達（四川）生物医薬科技有限公司 ピペラジン化合物とｐｄ－１阻害剤またはｐｄ－ｌ１阻害剤との組成物、および腫瘍治療におけるその使用
CN119731176A (zh) * 2022-08-17 2025-03-28 北京加科思新药研发有限公司 化合物i或其盐的固体形式
GB202213819D0 (en) 2022-09-22 2022-11-09 Duke Street Bio Ltd Pharmaceutical compound
CN115490671B (zh) * 2022-10-21 2024-05-14 水木未来(北京)科技有限公司 Parp7抑制剂及其制备方法
JP2025536416A (ja) * 2022-11-14 2025-11-05 康百達（四川）生物医薬科技有限公司 置換ピペラジン誘導体の結晶およびその調製方法
GB202217888D0 (en) 2022-11-29 2023-01-11 Duke Street Bio Ltd Pharmaceutical compound
CN120513238A (zh) * 2023-01-06 2025-08-19 齐鲁制药有限公司 一种parp7抑制剂的制备方法
WO2024149234A1 (en) * 2023-01-10 2024-07-18 Angel Pharmaceutical Co., Ltd. Parp7 inhibitors and uses thereof
CN120917010A (zh) * 2023-01-10 2025-11-07 嘉兴和剂药业有限公司 Parp7抑制剂及其用途
CN118388414A (zh) * 2023-01-17 2024-07-26 中国药科大学 哒嗪酮类化合物及其制备方法、药物组合物和应用
WO2025036478A1 (zh) * 2023-08-17 2025-02-20 康百达（四川）生物医药科技有限公司 一种哌嗪衍生物的药物制剂、其制备方法及其用途
TW202511263A (zh) * 2023-08-29 2025-03-16 大陸商康百達（四川）生物醫藥科技有限公司 一種呱嗪衍生物的製備方法及其中間體
WO2025087383A1 (zh) * 2023-10-26 2025-05-01 深圳众格生物科技有限公司 作为parp7抑制剂的化合物
TW202519233A (zh) * 2023-11-13 2025-05-16 大陸商康百達（四川）生物醫藥科技有限公司 一種parp7抑制劑聯合用藥的藥物組合及其治療腫瘤的用途
CN117342983B (zh) * 2023-12-05 2024-02-06 康羽生命科学技术(苏州)有限公司 过乙酰化GalNAc-L96合成方法
WO2025209574A1 (zh) * 2024-04-03 2025-10-09 康百达（四川）生物医药科技有限公司 用于预防或治疗肿瘤的parp7抑制剂

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999013332A1 (en) 1997-09-05 1999-03-18 Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. Fluorescence polarization method
WO2002082082A2 (en) 2001-04-09 2002-10-17 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Fluorescence polarization assay
HU227237B1 (en) * 2001-09-27 2010-12-28 Egis Gyogyszergyar Nyilvanosan Muekoedoe Reszvenytarsasag Substituted alkylpyridazinone derivatives, process for their preparation, pharmaceutical compositions containing them
GB0301628D0 (en) 2002-09-19 2003-02-26 Aventis Pharma Inc Method for assaying compounds that decrease the activity of poly (ADP-ribose) - polymerase (PARP)
CN1976906B (zh) * 2004-06-30 2010-09-01 詹森药业有限公司 用作parp抑制剂的取代2-烷基喹唑啉酮衍生物
GB0610680D0 (en) * 2006-05-31 2006-07-12 Istituto Di Ricerche D Biolog Therapeutic compounds
JP5335675B2 (ja) 2006-07-25 2013-11-06 セファロン、インク． ピリジジノン誘導体
KR101641596B1 (ko) * 2007-11-15 2016-07-21 엠에스디 이탈리아 에스.알.엘. Ｐａｒｐ 억제제로서의 피리다지논 유도체
JP5492183B2 (ja) * 2008-03-27 2014-05-14 ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ Ｐａｒｐおよびチューブリン重合阻害剤としてのテトラヒドロフェナントリジノンおよびテトラヒドロシクロペンタキノリノン
CA2771190C (en) * 2009-08-17 2020-01-21 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Heat shock protein binding compounds, compositions, and methods for making and using same
CN103570725B (zh) * 2012-08-01 2017-03-22 中国科学院上海药物研究所 哌嗪并三唑类化合物及其制备方法和用途
JO3470B1 (ar) 2012-10-08 2020-07-05 Merck Sharp & Dohme مشتقات 5- فينوكسي-3h-بيريميدين-4-أون واستخدامها كمثبطات ناسخ عكسي ل hiv
WO2014143241A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds useful as inhibitors of atr kinase
WO2016116602A1 (en) * 2015-01-23 2016-07-28 Astrazeneca Ab Treatment of cancer
CN106749261A (zh) * 2015-11-23 2017-05-31 中国科学院上海药物研究所 一类取代三唑并哌嗪类parp抑制剂及其制备方法和用途
TWI785022B (zh) 2017-03-28 2022-12-01 美商富曼西公司 新穎噠嗪酮類除草劑
CA3075727A1 (en) * 2017-09-18 2019-03-21 Goldfinch Bio, Inc. Pyridazinones and methods of use thereof
GB201717080D0 (en) 2017-10-18 2017-11-29 Syngenta Participations Ag Chemical process
US11293927B2 (en) 2018-04-30 2022-04-05 Ribon Therapeutics, Inc. Screening methods for PARP modulators
HRP20230458T1 (hr) 2018-04-30 2023-07-21 Ribon Therapeutics Inc. Piridazinoni kao inhibitori parp7
US12371421B2 (en) 2019-04-29 2025-07-29 Ribon Therapeutics, Inc. Solid forms of a PARP7 inhibitor
US20240190844A1 (en) 2019-10-30 2024-06-13 Ribon Therapeutics, Inc. Pyridazinones as parp7 inhibitors
CN114761086B (zh) 2019-10-30 2025-07-22 里邦医疗公司 作为parp7抑制剂的哒嗪酮

Also Published As

Publication number Publication date
CN112424188B (zh) 2025-06-27
ZA202006549B (en) 2025-06-25
CN120987912A (zh) 2025-11-21
KR102862474B1 (ko) 2025-09-24
SI3788040T1 (sl) 2023-07-31
HUE062096T2 (hu) 2023-09-28
MD3788040T2 (ro) 2023-10-31
KR20210014108A (ko) 2021-02-08
CL2020002821A1 (es) 2021-02-19
MX2020011465A (es) 2020-12-07
AR121419A1 (es) 2022-06-08
CO2020013599A2 (es) 2020-12-21
WO2019212937A1 (en) 2019-11-07
CA3098585A1 (en) 2019-11-07
US20200123134A1 (en) 2020-04-23
CR20200518A (es) 2021-03-22
IL308983A (en) 2024-01-01
IL278116B2 (en) 2024-04-01
ES2949538T3 (es) 2023-09-29
HRP20230458T1 (hr) 2023-07-21
SMT202300172T1 (it) 2023-09-06
FI3788040T3 (fi) 2023-06-13
JP2021523104A (ja) 2021-09-02
ECSP20069404A (es) 2021-01-29
TW202014416A (zh) 2020-04-16
MA52486A (fr) 2021-03-10
US11566020B1 (en) 2023-01-31
US20250034120A1 (en) 2025-01-30
JP2022017221A (ja) 2022-01-25
PE20211382A1 (es) 2021-07-27
IL278116B1 (en) 2023-12-01
CY1126132T1 (el) 2023-11-15
PT3788040T (pt) 2023-07-12
MA52486B1 (fr) 2023-04-28
US20230192664A1 (en) 2023-06-22
US20210024502A1 (en) 2021-01-28
EP3788040A1 (en) 2021-03-10
TWI877697B (zh) 2025-03-21
JP6942896B2 (ja) 2021-09-29
US10550105B2 (en) 2020-02-04
EP4234551A2 (en) 2023-08-30
CN112424188A (zh) 2021-02-26
BR112020022006A2 (pt) 2021-01-26
EP3788040B1 (en) 2023-04-12
IL308983B2 (en) 2025-10-01
SG11202010183XA (en) 2020-11-27
DK3788040T3 (da) 2023-05-08
AU2019262927A1 (en) 2020-11-12
TW202344505A (zh) 2023-11-16
US11014913B2 (en) 2021-05-25
IL278116A (en) 2020-11-30
JP7518049B2 (ja) 2024-07-17
LT3788040T (lt) 2023-06-26
PH12020551760A1 (en) 2021-06-28
PL3788040T3 (pl) 2023-08-07
US10870641B2 (en) 2020-12-22
IL308983B1 (en) 2025-06-01
TWI811353B (zh) 2023-08-11
MX2023005804A (es) 2023-05-29
EA202092590A1 (ru) 2021-04-08
US20190330194A1 (en) 2019-10-31
AU2019262927B2 (en) 2023-11-02
EP4234551A3 (en) 2023-10-11
AU2024200566A1 (en) 2024-02-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7518049B2 (ja) Ｐａｒｐ７阻害剤としてのピリダジノン
JP2023553492A (ja) アザキナゾリン汎ＫＲａｓ阻害剤
KR20220109401A (ko) Parp7 억제제로서의 피리다진온
AU2018243691A1 (en) Heterocyclic compound
AU2013290054A1 (en) Imidazotriazinecarbonitriles useful as kinase inhibitors
EP4305040A1 (en) Tricyclic pyridines as cyclin-dependent kinase 7 (cdk7) inhibitors
HK40048232A (en) Pyridazinones as parp7 inhibitors
HK40048232B (en) Pyridazinones as parp7 inhibitors
WO2024220399A1 (en) Pyrazolotriazinecarbonitriles useful as kinase inhibitors