RS63687B1

RS63687B1 - Injektabilne kompozicije triterpenoidnih antifungalnih jedinjenja inkapsuliranih u lipozome

Info

Publication number: RS63687B1
Application number: RS20220981A
Authority: RS
Inventors: Rajeshwar Motheram
Original assignee: Scynexis Inc
Priority date: 2018-01-02
Filing date: 2018-12-21
Publication date: 2022-11-30
Also published as: DK3735226T3; TWI857944B; MA51514A; BR112020013448A2; HUE060400T2; NZ765771A; JP2025106349A; SMT202200427T1; IL275758B1; IL275758A; US20250082574A1; LT3735226T; JP7378401B2; PT3735226T; CN115998684A; EP4137123A1; US20200338002A1; AU2018399599B2; MD3735226T2; TW201929853A

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na kompozicije koje sadrže lipozomske vezikule koje inkapsuliraju triterpenoidna antifungalna jedinjenja izvedena iz enfumafungina. Tačnije, pronalazak se odnosi na kompozicije koje sadrže fosfolipidne dvoslojne vezikule koje inkapsuliraju triterpenoide dobijene od enfumafungina Formule (I) (ili njihove farmaceutski prihvatljive soli ili hidrate) koji su inhibitori sinteze (1,3)-β-D-glukana, koji se mogu koristi za lečenje i/ili prevenciju sistemskih gljivičnih infekcija. Kompozicije ovog pronalaska imaju dobre karakteristike lokalne podnošljivosti i dobro su pogodne za primenu injekcijom.

STANJE TEHNIKE

[0002] Gljivične infekcije predstavljaju veliki zdravstveni problem i najčešće se manifestuju kao invazivna gljivična bolest (npr., kandidemija, invazivna aspergiloza), lokalizovane gljivične infekcije (npr., empiem pleure i apsces lokalizovan u abdomenu, mozgu, plućima itd.) i mukokutane infekcije (npr. oralna, ezofagealna i vulvovaginalna kandidijaza). Tip i obim infekcije zavise od faktora virulencije gljivičnog patogena, odbrane domaćina i obuhvaćenih anatomskih oblasti.

[0003] Teške sistemske gljivične infekcije su češće kod pacijenata sa oslabljenim imunitetom, kao što su pacijenti koji primaju hemoterapiju za lečenje maligniteta, ili primaju imunomodulatorne agense za lečenje hroničnih inflamatornih stanja, ili pate od imunodeficijencije, bilo stečene ili usled genetskih poremećaja. Uprkos trenutno dostupnim antifungalnim terapijama, sistemske gljivične infekcije su povezane sa stopom mortaliteta do 50%, u zavisnosti od patogena i osnovnog stanja pacijenta.

[0004] Enfumafungin je hemiacetalni triterpenski glikozid koji se proizvodi fermentacijom Hormonema spp. povezana sa živim listovima Juniperus communis (SAD Pat. br.5,756,472; Pelaez et al., Systematic and Applied Microbiology, 23:333-343, 2000; Schwartz et al., JACS, 122:4882-4886, 2000; Schwartz, R.E., Expert Opinion on Therapeutic Patents, 11(11): 1761-1772, 2001). Enfumafungin je jedan od nekoliko triterpenskih glikozida koji imaju in vitro antifungalne aktivnosti. Način antifungalnog dejstva enfumafungina i drugih antifungalnih triterpenoidnih glikozida je inhibicija sinteze glukana u ćelijskom zidu gljivica njihovim specifičnim dejstvom na (1,3)-β-D-glukan sintazu (Onishi et al., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 44:368-377, 2000; Pelaez et al., Systematic and Applied Microbiology, 23:333-343, 2000). 1,3-β-D-glukan sintaza ostaje privlačno ciljno mesto za delovanje antifungalnih lekova jer je prisutna u mnogim patogenim gljivama i stoga pruža širok antifungalni spektar. Pored toga, pošto ne postoji pandan (1,3)-β-D-glukan sintaze kod sisara, ovde opisani derivati enfumafungina imaju malu ili nikakvu toksičnost zasnovanu na mehanizmu. Derivati triterpenoidnog jedinjenja enfumafungina koji se koriste prema ovom pronalasku pokazali su aktivnost protiv gljivičnih izolata Candida spp., uključujući one izolate koji su otporni na azole ili druge inhibitore glukan sintaze (npr., lipopeptidni agensi kao što su ehinokandini), što ukazuje da je biološko i molekularno ciljno mesto derivata enfumafungina drugačije od onih drugih inhibitora glukan sintaze.

[0005] Otkriveni su različiti derivati enfumafungina, npr., u međunarodnoj patentnoj objavi br. WO 2007/126900 i WO 2007/127012.

[0006] SCY-078 je reprezentativno jedinjenje ovde opisanih derivata enfumafungina i deluje protiv brojnih vrsta Candida i Aspergillus, uključujući sojeve otporne na lekove. SCY-078 je derivat triterpenoida supstituisan sa karboksilnom kiselinom i alkil amino etrom koji ima sledeću formulu:

Bez namere da se vežemo za teoriju: Zbog funkcionalnosti amino i karboksilne kiseline, SCY-078 je amfifilni molekul i pokazuje ponašanje poput surfaktanta uključujući formiranje micela, vezivanje za površine i proteine plazme. Wring et al., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 61: e02068-16, 2017, otkriva farmakokinetička svojstva SCY-078 nakon i.v. i oralne primene.

[0007] Intravenska primena SCY-078 je povezana sa lokalnim reakcijama na mestu injekcije (u daljem tekstu "ISR"), uključujući bol, iritaciju, upalu i flebitis, što je onemogućilo njegovu primenu preko perifernih vena. Iako osnovni mehanizam uočenih ISR nije jasno shvaćen i bez namere da bude vezan teorijom: Uočeni ISR se mogu pripisati lokalizovanoj direktnoj interakciji SCY-078 sa vaskularnim endotelom na mestu injekcije kada se SCY-078 unosi u krvotok intravenski.

[0008] Postoji potreba u tehnici da se može primeniti SCY-078 i drugi derivati enfumafungina antimikotika intravenski preko periferne vene sa manjim brojem i/ili manje izraženim ISR, i da se poboljša fleksibilnost i pogodnost za negovatelje i pacijente.

SUŠTINA PRONALASKA

[0009] Ovaj pronalazak obezbeđuje injektabilne kompozicije kao što su definisane u zahtevu 1. Kompozicije sadrže pojedinačne dvoslojne vezikule ili lipozome koji inkapsuliraju triterpenoidno jedinjenje izvedeno iz enfumafungina i hidratisano u vodenoj fazi, pogodno za intravensku primenu preko periferne vene. Vezikule mogu biti napravljene od fosfolipida i holesterola. pH vodene faze je poželjno od oko 5,0 do oko 7,0. Rastvor monosaharida i rastvor disaharida su primeri vodene faze.

[0010] Injektabilne kompozicije poželjno sadrže SCY-078 ili njegovu so kao derivat enfumafungina.

[0011] Injektabilne kompozicije mogu se primenjivati intravenski za lečenje i/ili prevenciju gljivičnih infekcija, kao što su sistemske gljivične infekcije, uključujući one izazvane vrstom Candida ili vrstom Aspergillus. Sa kompozicijama za injekcije ovog pronalaska, lokalne reakcije na mestu injekcije (uključujući bol, iritaciju, upalu i flebitis) nakon intravenske primene mogu biti smanjene u broju i/ili stepenu u poređenju sa takvim reakcijama nakon intravenske primene ne-lipozomske kompozicije koji sadrže istu aktivnu supstancu.

[0012] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje injektabilnu kompoziciju prema pronalasku za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije gljivičnih infekcija kod pacijenata intravenskom primenom kompozicije za injekcije.

[0013] Ovaj pronalazak dalje obezbeđuje postupke za pripremu kompozicija prema pronalasku.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0014] Fosfolipidi su amfifilni molekuli koji imaju hidrofilnu jonizujuću glavu ili "polarnu glavu" i hidrofobni rep koji sadrži masne kiseline dugog lanca. Kada su hidrirani, višestruki molekuli fosfolipida (izborno sa drugim molekulima kao što je holesterol) mogu da formiraju lipozome, koji su zatvorene, dvoslojne koncentrične vezikule koje hvataju vodu ili drugi vodeni medijum. Repovi masnih kiselina molekula fosfolipida čine deo unutrašnjosti dvoslojne membrane lipozoma. Polarne glave na jednoj površini membrane orijentisane su prema vodenoj unutrašnjosti lipozoma, a polarne glave na drugoj površini membrane orijentisane su prema vodenom spoljašnjem okruženju.

[0015] U zavisnosti od njihovih fizičko-hemijskih karakteristika, lekovi se mogu ugraditi u lipozom bilo u vodenoj unutrašnjosti ili u lipidnom dvosloju, pri čemu su hidrofobni molekuli prvenstveno povezani u lipidnom dvosloju i/ili hidrofilni molekuli koji su ugrađeni u (npr., rastvoreni ili dispergovani u) vodenom medijumu u unutrašnjosti lipozoma.

[0016] Lipozomi mogu biti unilamelarni, to jest, da imaju jedan dvosloj fosfolipida koji obuhvata vodeni centar, ili multilamelarni, to jest, da sadrže mnogo koncentričnih dvoslojnih vezikula ispunjenih vodom. Multilamelarne vezikule ("MLV") mogu imati široku i heterogenu distribuciju veličine i generalno nisu podložne proizvodnom postupku koji se može reprodukovati. MLV nisu poželjni za intravensku primenu zbog velike veličine čestica. Dalje, MLV je teško sterilisati filtracijom. Unilamelarni lipozomi koji su relativno mali su poželjni za injektabilne kompozicije koje se primenjuju intravenski.

[0017] Iako su lipozomi korišćeni za isporuku lekova u ciljna tkiva i za smanjenje sistemske toksičnosti, njihova korist u smanjenju ISR koji se javljaju lokalno na mestu injekcije ili infuzije nije jasno shvaćena. Dalje, pre ovog pronalaska, nije bilo poznato da li bi ugradnja triterpenoida dobijenih enfumafunginom u lipozome bila izvodljiva. Štaviše, posebno što se tiče SCY-078: Ovaj lek pokazuje visok stepen vezivanja za proteine, i nije bilo poznato da li će do oslobađanja ili curenja inkapsuliranog leka doći nakon intravenske primene SCY-078 u krvotok; efikasna lipozomalna kompozicija bi morala da ima lipozome koji ostaju netaknuti u krvotoku dovoljno vremena da se minimizira oslobađanje ili curenje inkapsuliranog leka na mestu infuzije. Sa ovim pronalaskom, kompozicija vezikula fosfolipida-holesterola koja inkapsulira triterpenoidne antifungalne lekove dobijene enfumafunginom, kao što je SCY-078 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, može se primenjivati intravenski i vezikule mogu ostati netaknute u krvotoku sve dok ih makrofag ne preuzme u organe retikuloendotelnog sistema (RES) kao što je jetra, slezina, itd. Dalje, iako se manifestacija ISR može javiti pri veoma niskim koncentracijama slobodnog (neinkapsuliranog) SCY-078, sa ovim pronalaskom ozbiljnost i učestalost ISR nakon intravenske primene SCY-078 se može ublažiti minimiziranjem dostupnosti slobodnog leka lokalno na mestu injekcije. Ovaj pronalazak obezbeđuje inkapsulaciju SCY-078 (ili njegove farmaceutski prihvatljive soli) ili drugog triterpenoidnog antigljivičnog sredstva dobijenog od enfumafungina u sistemu zasnovanom na fosfolipidu ("PL"), kao što su lipozomi, kao što je definisano u zahtevu 1, kao pristup smanjenju ISR koji su rezultat intravenske primene uz istovremeno obezbeđivanje koristi od antimikotika. Sa ovim pronalaskom, SCY-078 se može inkapsulirati u lipozome sa visokom efikasnošću da bi se minimizirao slobodni (neinkapsulirani) lek i da bi se lipozomska kompozicija učinila pogodnom za komercijalnu proizvodnju. Pored toga, fizičko-hemijske karakteristike lipozoma kao što su ovde opisane su stabilne, a to je pogodno za skladištenje kompozicije.

[0018] Ovaj pronalazak obezbeđuje injektabilnu kompoziciju koja sadrži:

vodenu fazu; i

jednu ili više unilamelarnih vezikula od kojih svaka sadrži fosfolipid i holesterol, i od kojih svaka inkapsulira jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili hidrat:

u kome:

X je O ili H, H;

R<e>je C(O)NR<f>R<g>ili 6-člana heteroaril grupa u prstenu koja sadrži 1 ili 2 atoma azota pri čemu je heteroaril grupa izborno mono-supstituisana na ugljeniku iz prstena sa fluorom ili hlorom ili na azotu iz prstena sa kiseonikom;

R<f>, R<g>, R<6>i R<7>su svaki nezavisno vodonik ili C1-C3alkil;

R<8>je C1-C4alkil, C3-C4cikloalkil ili C4-C5cikloalkil-alkil;

R<9>je metil ili etil; i

R<8>i R<9>su izborno uzeti zajedno da formiraju 6-člani zasićeni prsten koji sadrži 1 atom kiseonika,

pri čemu su jedna ili više unilamelarnih vezikula hidratisane u vodenoj fazi.

[0019] pH vodene faze je poželjno od oko 5,0 do oko 7,0. Rastvor monosaharida i rastvor disaharida su primeri vodene faze. Kompozicija za injekcije se može primeniti intravenski za lečenje i/ili prevenciju gljivičnih infekcija, kao što su sistemske gljivične infekcije, uključujući one izazvane vrstom Candida ili vrstom Aspergillus.

[0020] Pronalazak takođe obezbeđuje kompoziciju pronalaska za upotrebu u postupcima lečenja i/ili prevencije gljivične infekcije intravenskom primenom kompozicije za injekcije koja sadrži jednu ili više unilamelarnih vezikula od kojih svaka sadrži fosfolipid i holesterol, i od kojih svaka inkapsulira jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili hidrat. Dalje, pronalazak obezbeđuje upotrebu vezikula koji inkapsuliraju jedinjenje Formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili hidrat u pripremi injektabilnog leka za lečenje ili prevenciju gljivične infekcije.

[0021] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje injektabilnu kompoziciju koja sadrži:

vodenu fazu; i

jednu ili više unilamelarnih vezikula od kojih svaka sadrži fosfolipid i holesterol, i od kojih svaka inkapsulira jedinjenje formule (Ia) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili hidrat:

gde su supstituenti kao što je predviđeno Formulom (I),

pri čemu su jedna ili više unilamelarnih vezikula hidratisane u vodenoj fazi.

[0022] pH vodene faze je poželjno od oko 5,0 do oko 7,0. Rastvor monosaharida i rastvor disaharida su primeri vodene faze. Kompozicija za injekcije se može primeniti intravenski za lečenje i/ili prevenciju gljivičnih infekcija, kao što su sistemske gljivične infekcije, uključujući one izazvane vrstom Candida ili vrstom Aspergillus.

[0023] Pronalazak takođe obezbeđuje kompoziciju pronalaska za upotrebu u postupcima lečenja i/ili prevencije gljivične infekcije intravenskom primenom injektabilne kompozicije koja sadrži jednu ili više unilamelarnih vezikula od kojih svaka sadrži fosfolipid i holesterol, i od kojih svaka inkapsulira jedinjenje formule (Ia) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili hidrat. Dalje, pronalazak obezbeđuje upotrebu vezikula koji inkapsuliraju jedinjenje Formule (Ia) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili hidrat u pripremi injektabilnog leka za lečenje ili prevenciju gljivične infekcije.

[0024] U primeru izvođenja 1: X je H, H, a ostali supstituenti su kao što su dati u Formuli (I).

[0025] U primeru izvođenja 2: R<e>je ili piridil ili pirimidinil izborno mono-supstituisan na ugljeniku iz prstena sa fluorom ili hlorom ili na azotu iz prstena sa kiseonikom, a drugi supstituenti su kao što su dati u primeru izvođenja 1 ili u Formuli (I).

[0026] U primeru izvođenja 3: R<e>je 4-piridil, a ostali supstituenti su kao što su dati u primeru izvođenja 1 ili u Formuli (I).

[0027] U primeru izvođenja 4: R<e>je C(O)NH2ili C(O)NH(C1-C3alkil) i drugi supstituenti su kao što su dati u primeru izvođenja 1 ili u Formuli (I).

[0028] U primeru izvođenja 5: R<8>je C1-C4alkil i R<9>je metil; a ostali supstituenti su kao što su dati u primeru izvođenja 1, 2, 3 ili 4, ili u Formuli (I).

[0029] U primeru izvođenja 6: R<8>je t-butil, R<9>je metil; a ostali supstituenti su kao što su dati u primeru izvođenja 1, 2, 3 ili 4, ili u Formuli (I).

[0030] U primeru izvođenja 7: R<6>i R<7>su svaki nezavisno vodonik ili metil, a ostali supstituenti su kao što su dati u primeru izvođenja 1, 2, 3, 4, 5 ili 6, ili u Formuli (I).

[0031] U primeru izvođenja 1': X je H, H, a ostali supstituenti su kao što su dati u Formuli (Ia).

[0032] U primeru izvođenja 2': R<e>je ili piridil ili pirimidinil opciono mono-supstituisan na ugljeniku u prstenu sa fluorom ili hlorom ili na azotu u prstenu sa kiseonikom, a drugi supstituenti su kao što su dati u primeru izvođenja 1' ili u formuli (la).

[0033] U primeru izvođenja 3': R<e>je 4-piridil, a drugi supstituenti su kao što su dati u primeru izvođenja 1' ili u formuli (la).

[0034] U primeru izvođenja 4': R<e>je C(O)NH2ili C(O)NH(C1-C3alkil) i drugi supstituenti su kao što su dati u primeru izvođenja 1' ili u formuli (Ia).

[0035] U primeru izvođenja 5': R<8>je C1-C4alkil i R<9>je metil; a ostali supstituenti su kao što su dati u primeru izvođenja 1', 2', 3' ili 4', ili u Formuli (Ia).

[0036] U primeru izvođenja 6': R<8>je t-butil, R<9>je metil; a ostali supstituenti su kao što su dati u primeru izvođenja 1', 2', 3' ili 4', ili u Formuli (Ia).

[0037] U primeru izvođenja 7': R<6>i R<7>su svaki nezavisno vodonik ili metil, a ostali supstituenti su kao što su dati u primeru izvođenja 1', 2', 3', 4', 5' ili 6', ili u formuli (Ia).

[0038] U poželjnim primerima izvođenja, ovaj pronalazak obezbeđuje injektabilnu kompoziciju koja sadrži:

vodenu fazu; i

jednu ili više unilamelarnih vezikula od kojih svaka sadrži fosfolipid i holesterol, i od kojih svaka inkapsulira jedinjenje formule (II) (ovde se pominje kao SCY-078) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili hidrat:

koje je (1S,4aR,6aS,7R,8R,10aR,10bR,12aR,14R,15R)-15-[[2-amino-2,3,3-trimetilbutil]oksi]-8-[(1R)-1,2-dimetilpropil]-14-[5-(4-piridinil)-1H-1,2,4-triazol-1-il]-1,6,6a,7,8,9,10,10a,10b,11,12,12a-dodekahidro-1,6a,8,10a-tetrametil-4H-1,4apropano-2H-fenantro[1,2-c]piran-7-karboksilna kiselina,

pri čemu su jedna ili više unilamelarnih vezikula hidratisane u vodenoj fazi.

[0039] pH vodene faze je poželjno od oko 5,0 do oko 7,0. Rastvor monosaharida i rastvor disaharida su primeri vodene faze. Kompozicija za injekcije se može primeniti intravenski za lečenje i/ili prevenciju gljivičnih infekcija, kao što su sistemske gljivične infekcije, uključujući one izazvane vrstom Candida ili vrstom Aspergillus.

[0040] Pronalazak takođe obezbeđuje kompoziciju pronalaska za upotrebu u postupcima lečenja i/ili prevencije gljivične infekcije intravenskom primenom injektabilne kompozicije koja sadrži jednu ili više unilamelarnih vezikula od kojih svaka sadrži fosfolipid i holesterol, i od kojih svaka inkapsulira jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili hidrat. Dalje, pronalazak obezbeđuje upotrebu vezikula koji inkapsuliraju jedinjenje Formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili hidrat u pripremi injektabilnog leka za lečenje ili prevenciju gljivične infekcije.

[0041] U drugim poželjnim primerima izvođenja, ovaj pronalazak obezbeđuje injektabilnu kompoziciju koja sadrži:

vodenu fazu; i

jednu ili više unilamelarnih vezikula od kojih svaka sadrži fosfolipid i holesterol, i od kojih svaka inkapsulira jedinjenje formule (IIa) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili hidrat:

koje je (1S,4aR,6aS,7R,8R,10aR,10bR,12aR,14R,15R)-15-[[(2R)-2-amino-2,3,3-trimetilbutil]oksi]-8-[(1R)-1,2-dimetilpropil]-14-[5-(4-piridinil)-1H-1,2,4-triazol-1-il]-1,6,6a,7,8,9,10,10a,10b,11,12,12a-dodekahidro-1,6a,8,10a-tetrametil-4H-1,4apropano-2H-fenantro[1,2-c]piran-7-karboksilna kiselina,

pri čemu su jedna ili više unilamelarnih vezikula hidratisane u vodenoj fazi.

[0042] pH vodene faze je poželjno od oko 5,0 do oko 7,0. Rastvor monosaharida i rastvor disaharida su primeri vodene faze. Injektabilna kompozicija se može primeniti intravenski za lečenje i/ili prevenciju gljivičnih infekcija, kao što su sistemske gljivične infekcije, uključujući one izazvane vrstom Candida ili vrstom Aspergillus.

[0043] Pronalazak takođe obezbeđuje kompoziciju pronalaska za upotrebu u postupcima lečenja i/ili prevencije gljivične infekcije intravenskom primenom injektabilne kompozicije koja sadrži jednu ili više unilamelarnih vezikula od kojih svaka sadrži fosfolipid i holesterol, i od kojih svaka inkapsulira jedinjenje formule (IIa) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili hidrat. Dalje, pronalazak obezbeđuje upotrebu vezikula koje inkapsuliraju jedinjenje formule (IIa) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili hidrat u pripremi injektabilnog leka za lečenje ili prevenciju gljivične infekcije.

[0044] U poželjnim primerima izvođnja, fosfatna so jedinjenja formule (I), (la), (II) ili (IIa) se koristi ili primenjuje kako je ovde opisano.

[0045] U poželjnim primerima izvođenja, citratna so jedinjenja formule (I), (Ia), (II) ili (IIa) se koristi ili primenjuje kako je ovde opisano.

[0046] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje injektabilnu kompoziciju kao što je definisana u zahtevu 1 koji sadrži: jednu ili više unilamelnih vezikula koje inkapsuliraju jedinjenje formule (I), (Ia), (II) ili (IIa), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili hidrat; i farmaceutski

1

prihvatljiv nosač, ađuvans ili vehikulum, za upotrebu u lečenju ili prevenciji gljivične infekcije.

[0047] U opisu jedinjenja u gore navedenim primerima izvođenja, naznačene supstitucije su uključene samo u meri u kojoj supstituenti obezbeđuju stabilna jedinjenja u skladu sa definicijom.

[0048] Jedinjenja formule (I), (Ia), (II) i (IIa), i njihove farmaceutski prihvatljive soli i/ili hidratni oblici, imaju antimikrobne (npr., antifungalne) aktivnosti protiv kvasca i drugih gljivica, uključujući jednu ili više od sledećih: Acremonium, Absidia (npr., Absidia corymbifera), Alternaria, Aspergillus (e.g., Aspergillus clavatus, Aspergillus flavus, Aspergillus fumigatus, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Aspergillus terreus, i Aspergillus versicolor), Bipolaris, Blastomyces (npr., Blastomyces dermatitidis), Blastoschizomyces (npr., Blastoschizomyces capitatus), Candida (npr., Candida albicans, Candida glabrata, Candida guilliermondii, Candida kefyr, Candida krusei, Candida lusitaniae, Candida parapsilosis, Candida pseudotropicalis, Candida stellatoidea, Candida tropicalis, Candida utilis, Candida lipolytica, Candida famata i Candida rugosa), Cladosporium (npr., Cladosporium carrionii i Cladosporium trichloides), Coccidioides (npr., Coccidioides immitis), Cryptococcus (npr., Cryptococcus neoformans), Curvularia, Cunninghamella (npr., Cunninghamella elegans), Dermatophyte, Exophiala (npr., Exophiala dermatitidis i Exophiala spinifera), Epidermophyton (npr., Epidermophyton floccosum), Fonsecaea (npr., Fonsecaea pedrosoi), Fusarium (npr., Fusarium solani), Geotrichum (npr., Geotrichum candidum i Geotrichum clavatum), Histoplasma (npr., Histoplasma capsulatum var. capsulatum), Malassezia (npr., Malasseziafurfur), Microsporum (npr., Microsporum canis i Microsporum gypseum), Mucor, Paracoccidioides (npr., Paracoccidioides brasiliensis), Penicillium (npr., Penicillium marneffei), Phialophora, Pityrosporum ovale, Pneumocystis (npr., Pneumocystis carinii), Pseudallescheria (npr., Pseudallescheria boydii), Rhizopus (npr., Rhizopus microsporus var. rhizopodiformis i Rhizopus oryzae), Saccharomyces (npr., Saccharomyces cerevisiae), Scedosporium (npr., Scedosporium apiosperum), Scopulariopsis, Sporothrix (npr., Sporothrix schenckii), Trichoderma, Trichophyton (npr., Trichophyton mentagrophytes i Trichophyton rubrum), i Trichosporon (npr., Trichosporon asahii, Trichosporon beigelii i Trichosporon cutaneum). Ova jedinjenja nisu korisna samo protiv organizama koji izazivaju sistemske humane patogene gljivične infekcije, već su korisna i protiv organizama koji izazivaju površinske gljivične infekcije kao npr. Trichoderma spp. i druge Candida spp. Jedinjenja su posebno efikasna protiv vrste Candida i vrste Aspergillus.

[0049] S obzirom na njihovu antifungalnu aktivnost, jedinjenja Formule (I), (Ia), (II) i (IIa), i njihove farmaceutski prihvatljive soli i/ili hidratni oblici, korisni su za lečenje i/ili prevenciju jednog ili više različitih površinskih, kožnih, mukokutanih, potkožnih i sistemskih gljivičnih infekcija uključujući vulve, vagine, kože, oka, kose, noktiju, oralne sluzokože, gastrointestinalnog trakta, bronhije, pluća, pleure, peritoneuma, endokarda, mozga, moždanih ovojnica, urinarnog organa, vaginalnog dela, usne duplje, bubrega, srca, spoljašnjeg slušnog kanala, kosti, nosne šupljine, paranazalne šupljine, slezine, jetre, hipodermalnog tkiva, limfnog kanala, zglobova, mišića, tetive, intersticijalne plazma ćelija u plućima, krvi i tako dalje.

[0050] Jedinjenja Formule (I), (Ia), (II) i (IIa), i njihove farmaceutski prihvatljive soli i/ili hidratni oblici, korisni su za prevenciju i lečenje jedne ili više različitih infektivnih bolesti, kao što je vulvovaginalna kandidijaza (VVC), dermatofitoza (npr., trihofitoza, infekcija lišaja ili tinea), paronihija, pitiriasis versicolor, eritrasma, intertrigo, gljivični pelenski osip, candida vulvitis, candida balanitis, otitis externa, kandidijaza (kožna i mukokutana), hronična mukokandidijaza (npr., sor i vaginalna kandidijaza), kriptokokoza, geotrihoza, trihosporoza, aspergiloza, penicilioza, fuzarioza, zigomikoza, sporotrikoza, hromomikoza, kokcidiodomikoza, histoplazmoza, blastomikoza, parakokcidioidomikoza, pseudalešerioza, micetoma, gljivični keratitis, otomikoza, pneumocistoza, gljivični apsces, gljivični pleuralni empinem i fungemija. Jedinjenja Formule (I), (Ia), (II) i (IIa), i njihove farmaceutski prihvatljive soli i/ili hidratni oblici, mogu se takođe koristiti kao profilaktička sredstva za sprečavanje sistemskih i lokalnih gljivičnih infekcija. Upotreba kao profilaktičkih sredstava može, na primer, biti odgovarajuća kao deo režima selektivne dekontaminacije creva u prevenciji infekcije kod imunokompromitovanih pacijenata (npr., pacijenti sa SIDA-om, pacijenti koji primaju terapiju protiv kancera ili pacijenti sa transplantacijom). Sprečavanje prekomernog rasta gljivica tokom lečenja antibioticima takođe može biti poželjno kod nekih sindroma bolesti ili jatrogenih stanja.

[0051] Jedinjenja Formule (I), (Ia), (II) i (IIa), i njihove farmaceutski prihvatljive soli i/ili hidratni oblici, mogu se dobiti prema postupcima sinteze otkrivenim u SAD Patentu br.

8,188,085.

[0052] Kako se ovde koristi, termin "alkil" se odnosi na bilo koju alkil grupu linearnog ili razgranatog lanca koja ima broj atoma ugljenika u određenom opsegu. Tako, na primer, „C1-6alkil" (ili "C1-C6alkil") se odnosi na sve heksil alkil i pentil alkil izomere kao i na n-, izo-, sek- i t-butil, n- i izopropil, etil i metil. Kao još jedan primer, "C1-4alkil" se odnosi na n-, izo-, sek- i t-butil, n- i izopropil, etil i metil.

[0053] Termin "cikloalkil" se odnosi na bilo koji ciklični prsten alkana koji ima broj atoma ugljenika u određenom opsegu. Tako, na primer, „C3-4cikloalkil" (ili "C3-C4cikloalkil") se odnosi na ciklopropil i ciklobutil.

[0054] Termin "cikloalkil-alkil" (ili ekvivalentno "alkil-cikloalkil") kako se ovde koristi odnosi se na sistem koji uključuje alkil deo kao što je gore opisano i takođe uključuje cikloalkil deo kao što je gore opisano. Vezivanje za "cikloalkil-alkil" (ili "alkil-cikloalkil") može biti preko cikloalkil ili alkil dela. Navedeni broj atoma ugljenika u "cikloalkil-alkil" sistemima se odnosi na ukupan broj atoma ugljenika i u alkil i u cikloalkil delu. Primeri C4-C5cikloalkil-alkil obuhvata, ali nije ograničen na, metilciklopropil, dimetilciklopropil, metilciklobutil, etilciklopropil, ciklopropilmetil, ciklopropiletil i ciklobutilmetil.

[0055] Termin "halogen" (ili "halo") odnosi se na fluor, hlor, brom i jod (alternativno nazvani fluoro, hloro, brom i jod).

[0056] Termin "ili" kako se ovde koristi označava alternative koje se mogu kombinovati, gde je to prikladno.

[0057] Osim ako nije izričito navedeno suprotno, svi opsezi koji su ovde navedeni su inkluzivni. Na primer, heterociklični prsten opisan kao da sadrži od "1 do 4 heteroatoma" znači da prsten može da sadrži 1, 2, 3 ili 4 heteroatoma. Takođe treba razumeti da bilo koji opseg koji je ovde citiran uključuje u svom opsegu sve podopsege unutar tog opsega. Tako, na primer, heterociklični prsten opisan kao da sadrži od "1 do 4 heteroatoma" treba da uključi kao svoje aspekte heterociklične prstenove koji sadrže 2 do 4 heteroatoma, 3 ili 4 heteroatoma, 1 do 3 heteroatoma, 2 ili 3 heteroatoma, 1 ili 2 heteroatoma, 1 heteroatom, 2 heteroatoma, i tako dalje.

[0058] Bilo koji od različitih cikloalkil i heterocikličnih/heteroaril prstenova i sistema prstenova definisanih ovde može biti vezan za ostatak jedinjenja na bilo kom atomu u prstenu (tj. bilo koji atom ugljenika ili bilo koji heteroatom) pod uslovom da se dobije stabilno jedinjenje. Pogodni 5- ili 6-člani heteroaromatični prstenovi uključuju, ali nisu ograničeni na, piridil, pirazinil, pirimidinil, piridazinil i triazolil.

[0059] „Stabilno“ jedinjenje je jedinjenje koje se može pripremiti i izolovati i čija struktura i svojstva ostaju ili mogu biti uzrokovani da ostanu suštinski nepromenjeni tokom vremenskog perioda koji je dovoljan da omogući upotrebu jedinjenja u svrhe opisane ovde (npr. terapeutsku ili profilaktičku primenu na subjekta). Pozivanje na jedinjenje takođe uključuje stabilne komplekse jedinjenja kao što je stabilan hidrat.

[0060] Kao rezultat izbora supstituenata i uzoraka supstituenata, određena jedinjenja Formule (I), (Ia), (II) i (IIa) mogu imati asimetrične centre i mogu se pojaviti kao smeše stereoizomera

1

ili kao pojedinačni dijastereomeri ili enantiomeri. Osim ako nije drugačije naznačeno, svi izomerni oblici ovih jedinjenja (i njihove farmaceutski prihvatljive soli i/ili hidratni oblici), bilo da su izolovani ili u smešama, su u okviru ovog pronalaska. Takođe su uključeni u obim ovog pronalaska su tautomerni oblici jedinjenja kao što je prikazano (i njihove farmaceutski prihvatljive soli i/ili hidratni oblici).

[0061] Kada se bilo koja promenljiva javlja više puta u bilo kom sastojku ili u formuli (I), (Ia), (II) ili (IIa), njena definicija za svaku pojavu je nezavisna od njene definicije u svakom drugom pojavljivanju. Takođe, kombinacije supstituenata i/ili promenljivih su dozvoljene samo ako takve kombinacije daju stabilna jedinjenja.

[0062] Termin "supstituisan" uključuje mono- i poli-supstituciju imenovanim supstituentom u meri u kojoj je takva pojedinačna i višestruka supstitucija (uključujući višestruku supstituciju na istom mestu) hemijski dozvoljena. Osim ako nije izričito navedeno suprotno, zamena imenovanim supstituentom je dozvoljena na bilo kom atomu u prstenu (npr., aril, cikloalkil, heteroaril ili heterociklil) pod uslovom da je takva supstitucija prstena hemijski dozvoljena i rezultira stabilnim jedinjenjem.

[0063] Veza završena talasastom linijom se ovde koristi da označi tačku vezivanja supstituentske grupe ili delimične strukture. Ova upotreba je ilustrovana sledećim primerom:

[0064] Jedinjenja formule (I), (Ia), (II) i (IIa), i njihove farmaceutski prihvatljive soli i/ili hidratni oblici, takođe su korisni u pripremi i izvođenju testova skrininga za antifungalna jedinjenja. Na primer, jedinjenja su korisna za izolovanje mutanata, koji su odlični alati za skrining za identifikaciju daljih antifungalnih jedinjenja.

[0065] Jedinjenja formule (I), (Ia), (II) i (IIa) mogu se primenjivati u obliku "farmaceutski prihvatljivih soli" ili hidrata prema potrebi. Druge soli mogu, međutim, biti korisne u pripremi jedinjenja ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli. Na primer, kada jedinjenja sadrže baznu aminsku grupu, mogu se pogodno izolovati kao soli trifluorosirćetne kiseline (npr., nakon HPLC prečišćavanja). Konverzija soli trifluorosirćetne kiseline u druge soli, uključujući farmaceutski prihvatljive soli, može se postići brojnim standardnim postupcima poznatim u tehnici. Na primer, odgovarajuća jonoizmenjivačka smola se može upotrebiti da se dobije željena so. Alternativno, konverzija soli trifluorosirćetne kiseline u osnovni slobodni amin može se postići standardnim metodama poznatim u tehnici (npr., neutralizacija sa odgovarajućom neorganskom bazom kao što je NaHCO3). Druge željene soli amina se zatim mogu pripremiti na uobičajeni način reakcijom slobodne baze sa odgovarajućom organskom ili neorganskom kiselinom. Reprezentativne farmaceutski prihvatljive kvaternarne amonijumove soli uključuju sledeće: hidrohlorid, sulfat, fosfat, karbonat, acetat, tartrat, citrat, malat, sukcinat, laktat, stearat, fumarat, hipurat, maleat, glukonat, askorbat, adipat, gluceptat, glutamat, glukuronat, propionat, benzoat, mezilat, tozilat, oleat, laktobionat, laurilsulfat, besilat, kaprilat, izetionat, gentisat, malonat, napsilat, edisilat, pamoat, ksinafoat, napadisilat, hidrobromid, nitrat, oksalat, cinamat, mandelat, undecilenat i kamsilat. Mnoga od jedinjenja Formule (I), (Ia), (II) i (IIa) nose kiseli deo karboksilne kiseline, u kom slučaju njihove pogodne farmaceutski prihvatljive soli mogu uključivati soli alkalnih metala, npr., natrijumove ili kalijumove soli; soli zemnoalkalnih metala, npr. soli kalcijuma ili magnezijuma; i soli formirane sa pogodnim organskim ligandima, npr., kvaternarne amonijum soli.

[0066] Takođe je opisana, ali ne čini deo pronalaska za koji se traži, upotreba prolekova Formule (I), (Ia), (II) i (IIa). Generalno, takvi prolekovi će biti funkcionalni derivati jedinjenja, koji se in vivo lako pretvaraju u potrebno jedinjenje. Prema tome, u postupcima lečenja prema ovom pronalasku, termin "primena" će obuhvatiti lečenje različitih stanja opisanih sa jedinjenjem koje je posebno otkriveno ili sa jedinjenjem koje se konvertuje u navedeno jedinjenje in vivo nakon primene na pacijenta. Konvencionalni postupci za izbor i pripremu odgovarajućih derivata prolekova opisani su, na primer, u "Design of Prodrugs“, ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985, koji je ovde uključen referencom u celini. Metaboliti jedinjenja Formule (I), (Ia), (II) i (IIa) uključuju aktivne vrste proizvedene uvođenjem jedinjenja u biološki milje.

[0067] Termin "primena" i njegove varijante (npr., "primenjivanje" jedinjenja) znači obezbeđivanje jedinjenja subjektu kome je potrebno lečenje. Kada je jedinjenje Formule (I), (Ia), (II) i (IIa) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njegov hidrat obezbeđeno u kombinaciji sa drugim aktivnim sredstvom (npr., druga antifungalna i/ili antibakterijska sredstva korisna za lečenje gljivičnih i/ili bakterijskih infekcija), podrazumeva se da „primena“ i njene varijante uključuju istovremeno i uzastopno obezbeđivanje jedinjenja (ili njegove soli, ili hidrata) i drugog aktivnog sredstva.

[0068] Kako se ovde koristi, termin "kompozicija" treba da obuhvati proizvod koji sadrži

1

navedene sastojke, kao i svaki proizvod koji je rezultat, direktno ili indirektno, kombinovanjem navedenih sastojaka.

[0069] Pod "farmaceutski prihvatljivim" se podrazumeva da sastojci farmaceutske kompozicije moraju da budu kompatibilni jedan sa drugim i da ne budu štetni za svog primaoca.

[0070] Termin "subjekat" (alternativno naveden ovde kao "pacijent") kako se ovde koristi odnosi se na životinju, poželjno sisara, najpoželjnije čoveka, koji je bio predmet lečenja, posmatranja ili eksperimenta.

[0071] Termin "efikasna količina" kako se ovde koristi označava količinu aktivnog sastojka ili farmaceutskog sredstva koja izaziva biološki ili medicinski odgovor u tkivu, sistemu, životinji ili čoveku koji traži istraživač, veterinar, lekar ili drugi kliničar. U jednom primeru izvođenja, "efikasna količina" može biti terapeutski efikasna količina koja ublažava simptome bolesti ili stanja koje se leči. U sledećem primeru izvođenja, "efikasna količina" može biti profilaktički efikasna količina za profilaksu simptoma bolesti ili stanja koje se sprečava ili za smanjenje verovatnoće pojave. Termin se takođe može odnositi na efikasnu inhibicionu količinu derivata enfumafungina dovoljnu da inhibira (1,3)-β-D-glukan sintazu i na taj način izazove traženi odgovor.

[0072] Reference na „lečiti“, „lečenje“, „tretman“ i njihove varijante se generalno odnose na tretman koji, nakon što se primeni, dovodi do nestajanja ili poboljšanja jednog ili više znakova ili simptoma povezanih sa gljivičnom infekcijom, ili rezultira iskorenjivanjem gljivica odgovornih za infekciju, ili bilo kojom kombinacijom ovih ishoda.

[0073] U svrhu prevencije ili lečenja gljivične infekcije, jedinjenje formule (I), (Ia), (II) ili (IIa) (izborno u obliku soli ili hidrata) može se primenjivati na uobičajene dostupne načine za upotrebu u kombinaciji sa farmaceutskim proizvodima.

[0074] U svrhu prevencije ili lečenja gljivičnih infekcija koje se javljaju u uslovima ili anatomskim oblastima koje imaju kiseli pH, jedinjenje formule (I), (Ia), (II) ili (IIa) (izborno u obliku soli ili hidrata) se može primeniti samo kao pojedinačno terapeutsko sredstvo ili sa jednim ili više drugih antifungalnih sredstava (uzastopno ili istovremeno) kao kombinacija terapeutskih sredstava.

[0075] U svrhu prevencije ili lečenja gljivične infekcije, jedinjenje formule (I), (Ia), (II) ili (IIa) (izborno u obliku soli ili hidrata) se može primeniti sa farmaceutskim nosačem izabran na osnovu izabranog puta primene i standardne farmaceutske prakse.

[0076] Dalji opis postupaka pogodnih za upotrebu u pripremi farmaceutskih kompozicija i sastojaka pogodnih za upotrebu u navedenim kompozicijama dat je u Remington's

1

Pharmaceutical Sciences, 20th edition, edited by A. R. Gennaro, Mack Publishing Co., 2000.

[0077] Jedinjenja formule (I), (Ia), (II) i (IIa), i njihove farmaceutski prihvatljive soli i/ili hidratni oblici, mogu se primenjivati, npr., intravenski, u rasponu doza od, na primer, 0,001 do 1000 mg/kg telesne težine sisara (npr., čoveka) dnevno u jednoj dozi ili u podeljenim dozama. Primer opsega doze je 0,01 do 500 mg/kg telesne težine dnevno intravenski u jednoj dozi ili u podeljenim dozama. Drugi primer opsega doziranja je 0,1 do 50 mg/kg telesne težine dnevno intravenski u jednoj ili podeljenim dozama. Specifični nivo doze i učestalost doziranja za svakog određenog pacijenta mogu varirati i zavisiće od niza faktora, uključujući aktivnost specifičnog jedinjenja koja se koristi, metaboličku stabilnost i dužinu delovanja tog jedinjenja, starost, telesnu težinu, opšte zdravlje, pol, ishranu, način i vreme primene, brzinu izlučivanja, kombinaciju lekova, ozbiljnost određenog stanja i domaćina koji je podvrgnut terapiji.

[0078] Antifungalna aktivnost jedinjenja može se demonstrirati različitim testovima poznatim u tehnici, na primer, njihovom minimalnom inhibitornom koncentracijom (MIC) protiv kvasaca i minimalnom efikasnom koncentracijom (MEC) protiv filamentoznih plesni i dermatofita u testu mikrorazblaženja bujona, ili in vivo procenom anti-Candida i anti-Aspergillus aktivnosti na modelima miša ili zeca. Jedinjenja Formule (I) data u Primerima za SAD Patent br. 8,188,085 generalno je utvrđeno da inhibiraju rast Candida spp. u opsegu od <0,03-32 µg/mL ili da daju MEC protiv Aspergillus fumigatus u opsegu od <0,03-32 µg/mL.

[0079] Pojedinačne dvoslojne vezikule ili lipozomi koji inkapsuliraju triterpenoidna antifungalna jedinjenja dobijena od enfumafungina prema ovom pronalasku poželjno imaju prosečnu veličinu čestica (prečnik vezikule) od oko 150 nm ili manje, poželjnije oko 100 nm ili manje ili oko 70 do oko 80 nm. Vezikule se hidratišu u odgovarajućoj vodenoj fazi, kao što je voda koja sadrži monosaharid ili disaharid. Svaka vodena faza niske jonske snage je pogodna za hidrataciju vezikula. Vodena faza je poželjno izotonična. pH vodene faze treba da bude između oko 4,0 do oko 8,0, a poželjno od oko 5,0 do oko 7,0.

[0080] Postupci za proizvodnju pojedinačnih dvoslojnih vezikula ili lipozoma uključuju postupke koji obezbeđuju dovoljnu energiju i silu smicanja (npr., ultrazvučna obrada, homogenizacija pod visokim pritiskom, mikrofluidno mešanje, itd.) da bi se formirale unilamelarne vezikule. Pojedinačne dvoslojne vezikule koje su ovde opisane mogu se dobiti ultrazvučnom obradom, mikrofluidnim mešanjem i/ili homogenizacijom hidratisanih suspenzija koje sadrže antifungalni lek (tj. jedinjenje formule (I), (Ia), (II) ili (IIa) ili farmaceutski prihvatljiva so ili njen hidrat) dobijen od enfumafunginoma, fosfolipid i holesterol. U poželjnim primerima izvođenja, SCY-078 (ili njegova farmaceutski prihvatljiva

1

so ili hidrat), fosfolipidi („PL“) i holesterol („CHOL“) su suspendovani u vodenoj fazi koja ima pH od oko 5,0 do oko 7,0 u molarnom odnosu SCY-078 : PL : CHOL od 1 : 7 : 2,5 i podvrgnuti ultrazvučnoj obradi, mikrofluidnom mešanju, homogenizaciji i/ili drugom postupku koji bi rezultirao formiranjem pojedinačnih dvoslojnih vezikula koji sadrže fosfolipid i holesterol, koji inkapsuliraju SCY-078 (ili njegovu so ili hidrat) unutar vezikula. Citratna so SCY-078 je poželjan lek koji se inkapsulira u pojedinačne dvoslojne vezikule opisane ovde.

[0081] Jedna vrsta fosfolipida se može koristiti za formiranje pojedinačnih dvoslojnih vezikula kao što je ovde opisano, ili dve ili više različitih vrsta fosfolipida mogu da se koriste u kombinaciji da bi se formirale pojedinačne dvoslojne vezikule. Fosfolipidi pogodni za upotrebu u formiranju pojedinačnih dvoslojnih vezikula koji su ovde opisani uključuju, ali nisu ograničeni na sintetički dobijene ili prirodne: fosfatidilholin („PC“), fosfatidnu kiselinu („PA“), fosfatidilserin („PS“), fosfatidiletanolamin („PE“) i fosfatidilglicerol ("PG").

[0082] Fosfolipidi koji se koriste u formiranju pojedinačnih dvoslojnih vezikula koji su ovde opisani su poželjno PC i PG koji se koriste u kombinaciji.

[0083] Pogodni PC obuhvataju, ali nisu ograničeni na: sintetički dobijen dipalmitoil fosfatidilholin („DPPC“), distearoil fosfatidilholin („DSPC“), dilauroil fosfatidilholin („DLPC“) i dimiristoil fosfatidilholin („DMPC“) i PC iz prirodnih izvora kao što su PC jajeta i PC soje.

[0084] Pogodni PG uključuju, ali nisu ograničeni na: sintetički izveden dipalmitoil fosfatidilglicerol („DPPG“), distearoil fosfatidilglicerol („DSPG“), dilauroil fosfatidilglicerol („DLPG“) i dimiristoil fosfatidilglicerol („DMPG“) i PG iz prirodnih izvora kao što je PG jajeta.

[0085] Poželjno, sadržaj fosfolipida u vezikulima koji inkapsuliraju derivate enfumafungina prema ovom pronalasku je 50 do 80 molskih procenata.

[0086] Holesterol stabilizuje lipidni dvosloj i može sprečiti curenje inkapsuliranog leka, ali višak holesterola može negativno uticati na efikasnost inkapsulacije. Poželjno, sadržaj holesterola u vezikulama koji inkapsuliraju derivate enfumafungina prema ovom pronalasku je 10 do 30 molskih procenata.

[0087] Poželjno, sadržaj leka u vezikulama koji inkapsuliraju derivate enfumafungina prema ovom pronalasku je 5 do 12 molskih procenata.

[0088] Pojedinačne dvoslojne vezikule koje inkapsuliraju triterpenoidno antigljivično jedinjenje izvedeno iz enfumafungina su hidratisane u vodenoj fazi. Poželjno, vodena faza sadrži jedan ili više monosaharida (kao što su glukoza, fruktoza i galaktoza) i/ili jedan ili više

1

disaharida (kao što su saharoza, trehaloza i laktoza), koji čine kompozicije za injekcije (pojedinačne dvoslojne vezikule koje inkapsuliraju lek, hidratisane u vodenoj fazi) izotoničnim i mogu poboljšati stabilnost dvosloja. Kada se monosaharid(i) koristi u vodenoj fazi, poželjno je da su prisutni u količini od oko 4 do 6% (tež./zapr.) u odnosu na kompoziciju za injektiranje (vezikule koje inkapsuliraju lek, hidratisan u vodenoj fazi). Kada se disaharidi koriste u vodenoj fazi, poželjno je da su prisutni u količini od oko 8 do 10% (tež./zapr.) u odnosu na injektabilnu kompoziciju (vezikule koje inaksuliraju lek, hidratisane u vodenoj fazi).

[0089] Poželjno, koncentracija inkapsuliranog leka izražena kao mg po mL injektabilne kompozicije (pojedinačne dvoslojne vezikule koje inkapsuliraju lek, hidratisane u vodenoj fazi) je 0,01 - 50 mg/mL, a poželjnije 0,1 - 5 mg/mL.

[0090] Da bi se pripremila lipidna disperzija koja sadrži antigljivično sredstvo izvedeno iz enfumafungina, fosfolipidi i holesterol se rastvaraju u organskom rastvaraču kao što je C1-C5alkohol (poželjno metanol ili etanol), a prethodni rastvor je dodat u rastvor antifungalne supstance izvedene iz enfumafungina u organskom rastvaraču kao što je etanol. Alternativno, antifungalno sredstvo se može dodati direktno u rastvor fosfolipida i holesterola. U pogodnom reakcionom sudu kao što je balon sa okruglim dnom, rastvarač je isparavan (izborno pod vakuumom) da bi se dobila lipidna disperzija koja sadrži antifungalno sredstvo. Rastvarač se može ukloniti drugim postupcima, kao što je korišćenjem uređaja za sušenje raspršivanjem. Prednost je da je lipidna disperzija koja se sastoji od antifungalnog sredstva izvedenog iz enfumafungina stabilna i omogućava skladištenje i pogodnost u tome što lipidna disperzija može da se hidratiše u bilo koje željeno vreme i sprovede kroz drugu obradu da bi se formirali lipozomi.

[0091] Lipidna disperzija koja sadrži antifungalno sredstvo se hidratiše u vodenom rastvoru koji poželjno sadrži monosaharid ili disaharid da bi se dobila hidratisana suspenzija. Hidratisana suspenzija se meša pomoću miksera sa visokim smicanjem (npr., na oko 10000 obrtaja/min) i rezultujuće multilamelarne vezikule se podvrgavaju homogenizaciji pod visokim pritiskom (npr., na oko 10000 do oko 30000 psi, i na temperaturi obrade u opsegu od, npr., oko 25°C do oko 70°C) da bi se formirale pojedinačne dvoslojne (unilamelarne) vezikule. Pojedinačne svoslojne vezikule se mogu sterilisati, na primer, propuštanjem kroz filter od 0,45 µm i 0,22 µm i/ili sterilizacijom vlažnom toplotom. Filtrirana suspenzija pojedinačnih dvoslojnih vezikula može se zamrznuti i dehidrsatisati pod visokim vakuumom (liofilizovana) za dugotrajno skladištenje. Injektabilne kompozicije spremne za upotrebu se dobijaju dodavanjem sterilne vode u liofilizovani prah i mešanjem.

1

[0092] Količina antifungalnog sredstva inkapsuliranog u vezikule pripremljene prema ovde opisanim postupcima može se odrediti korišćenjem, na primer, testa tečne hromatografije visokog pritiska (HPLC). Veličina vezikula se može odrediti korišćenjem, na primer, postupaka rasejavanja svetlosti kao što je dinamičko rasejavanje svetlosti (DLS).

[0093] Pojedinačne dvoslojne vezikule koje inkapsuliraju antifungalno sredstvo izvedeno iz enfumafungina primenjene su na životinjske modele, uključujući pacove i zečeve, da bi se procenila lokalna podnošljivost (ISRs) nakon intravenske primene. Sprovedena je klinička i histopatološka procena tkiva na mestu infuzije da bi se procenila lokalna podnošljivost. Stabilnost vezikula u uslovima koji simuliraju infuziju vezikula u krvotok je takođe određena da bi se demonstrirala korist od ovde opisanih injektabilnih kompozicija.

PRIMERI

[0094] Sledeći primeri služe samo da ilustruju pronalazak i njegovo izvođenje. Primere ne treba tumačiti kao ograničenja obima pronalaska.

PRIPREMA LIPOZOMA ZA INKAPSULIRANJE SCY-078

Primeri od A do I

[0095] Za primere A do I: smeša fosfolipida koja sadrži DSPC i DSPG; holesterol; i derivat enfumafungina SCY-078 u različitim molarnim odnosima kao što je prikazano u tabeli 1 rastvoreni su u rastvaraču (etanol na 70°C) i podvrgnuti mikrofluidnom mešanju (NanoAssemblr<™>) sa vodom u zapreminskom odnosu 1:3 rastvarač: voda na 65°C pri brzini protoka od 10 mL/min da bi se formirale pojedinačne dvoslojne vezikule ili lipozomi napunjene sa SCY-078 (-inkapsulirane). Rastvarač i slobodni (neikapsulirani) lek u suspenziji lipozoma uklonjeni su filtracijom tangencijalnog protoka ("TFF").

Primeri od J do P

[0096] Primeri J i K su pripremljeni postupkom hidratacije tankog filma. Navedene količine: fosfolipidne smeše koja sadrži DSPC i DSPG; holesterol; i SCY-078 kao što je prikazano u tabeli 2 rastvorene su u etanolu na 70°C. U tikvici sa okruglim dnom kao pogodnom reakcionom sudu, rastvarač je uklonjen isparavanjem pod vakuumom da bi se dobio film

2

disperzije lipida koji sadrži antifungalno sredstvo.

[0097] Za primere L do P, rastvarač je uklonjen sušenjem putem raspršivanja. Navedene količine: fosfolipidne smeše koja sadrži DSPC i DSPG; holesterol; i SCY-078 kao što je prikazano u tabeli 2 rastvorene su u etanolu na 70°C i pomešane da bi se formirala uniformna koloidna disperzija. Disperzija je raspršena kao fina magla brzinom od 20 mL/min kroz mlaznicu od 0,7 mm pri pritisku atomizacije od oko 70 psi i osušena na oko 50°C. Prašak osušen raspršivanjem je sakupljen i osušen do konstantne težine pod vakuumom.

[0098] Za primere od J do P, lipidna disperzija koja sadrži antifungalno sredstvo dobijena ili isparavanjem tankog filma ili sušenjem raspršivanjem je hidratizovana u vodenom rastvoru koji sadrži 7,5% (tež./zapr.) saharoze. Hidratisana suspenzija je mešana pomoću miksera sa visokim smicanjem na 10000 obrtaja u minuti oko 5 minuta i rezultujuće multilamelarne vezikule su podvrgnute homogenizaciji pod visokim pritiskom (Microfluidics<®>) pri pritisku u opsegu od oko 10000 do oko 30000 psi i korišćenjem temperature obrade u opsegu od oko 25°C do oko 70°C da bi se formirale pojedinačne dvoslojne vezikule.

[0099] Lipozomi pripremljeni u Primerima M, O i P podvrgnuti su sterilizaciji filtriranjem kroz filter od 0,45 µm i 0,22 µm. Lipozomi u Primeru M su liofilizovani. Lipozomi u primeru N su sterilisani vlažnom toplotom na 121°C tokom 12 minuta.

KARAKTERIZACIJA LIPOZOMA KOJI IMAJU INKAPSULIRAJUĆI SCY-078

[0100] Formulacije sa različitim molarnim odnosima DSPC : holesterol : DSPG : SCY-078, kao što je prikazano u Tabeli 1 i Tabeli 2, procenjene su u pogledu formiranja pojedinačnih dvoslojnih vezikula, raspodele veličine čestica, površinskog naelektrisanja i količine inkapsuliranog SCY-078.

[0101] Nakon formiranja vezikula ili lipozoma, slobodni (neinkapsulirani) SCY-078 je uklonjen TFF-om (Primeri A do I). Tamo gde TFF nije korišćen u postupku proizvodnje, svaki neinkapsulirani SCY-078 je odvojen od inkapsuliranog SCY-078 dijalizom korišćenjem membrane od 20000 Daltona praga molekulske težine (MWCO) celuloznog estra.

[0102] SCY-078 inkapsuliran u lipozomima je odvojen od bilo kog neinkapsuliranog SCY-078 ekskluzionom hromatografijom koristeći Sephadex<®>G-25 kolonu. Količina SCY-078 inkapsuliranog u lipozomima određena je korišćenjem HPLC testa. SCY-078 je odvojen na C18 koloni i detektovan ultraljubičastom (UV) spektroskopijom na 210 nm. Veličina čestica vezikula je određena pomoću DLS (Zetasizer Nano, Malvern Instruments). Površinsko naelektrisanje (zeta potencijal) određen je laserskom dopler mikro-elektroforezom u elektroforetskoj ćeliji za jednokratnu upotrebu.

[0103] Kao što je prikazano u tabelama 1 i 2, nađeno je da nekoliko formulacija sa specifičnim molarnim odnosima DSPC : holesterol: DSPG : SCY-078 formiraju pojedinačne dvoslojne lipozomske vezikule ili lipozome sa efikasnošću zarobljavanja većom od 95%. Iznenađujuće je otkriveno da u suštini nijedan slobodan (neinkapsulirani) lek nije mogao biti otkriven iako postupak uklanjanja bilo kog neinkapsuliranog leka nije bio deo postupka proizvodnje (Primeri J do O). Takođe je bilo iznenađujuće da su vezikule ostale stabilne nakon sterilizacije vlažnom toplotom, bez promene u veličini vezikula i sa >95% SCY-078 zadržanim unutar vezikula (Primer N).

Tabela 1. Kompozicije lipozoma pripremljene mikrofluidnim mešanjem u

NanoAssemblr<™>

PROCENA FIZIKOHEMIJSKE STABILNOSTI RASPRŠIVANJEM OSUŠENE LIPIDNE DISPERZIJE KOJA SADRŽI SCY-078

[0104] Stabilnost intermedijera osušenog raspršivanjem (lipidna disperzija koja sadrži SCY-078) je procenjena na ambijentalnim (25°C / 60% RH) i ubrzanim (40°C / 75% RH) uslovima skladištenja. Kao što je prikazano u Tabeli 3, raspršivanjem osušen intermedijer bio je stabilan u odnosu na analizu SCY-078 i na formiranje proizvoda razgradnje, bez značajnih promena ili trendova uočenih do 3 meseca kada se čuva pod ambijentalnim (25°C / 60% RH) i ubrzanim (40°C / 75% RH) uslovima skladištenja. Ovi rezultati pokazuju da se intermedijer osušen raspršivanjem može lako skladištiti, npr., u ambijentalnim uslovima pre hidratacije i druge obrade za formiranje lipozoma, što je komercijalno poželjan atribut.

Tabela 3. Procena stabilnosti raspršivanjem osušene disperzije SCY-078

2

PROCENA FIZIKOHEMIJSKE STABILNOSTI LIPOZOMA KOJI INKAPSULIRAJU SCY-078

[0105] Procenjena je stabilnost suspenzije lipozoma koja inkapsulira SCY-078 spremne za razblaživanje u uslovima hlađenja (2°C do 8°C). Kao što je prikazano u tabeli 4, nije bilo promene u testu SCY-078 i prosečnoj veličini čestica. Pored toga, nije bilo curenja inkapsuliranog leka pri skladištenju, što pokazuje snažnu povezanost SCY-078 sa lipidnim dvoslojem lipozoma. Ovi rezultati pokazuju stabilnost i potencijal za dugoročnu stabilnost pogodnu za različite komercijalne primene za lipozomske kompozicije opisane ovde.

Tabela 4. Procena stabilnosti injekcije lipozoma SCY-078 (koncentracija od 4 mg/mL)

PROCENA FIZIOLOŠKE STABILNOSTI LIPOZOMA KOJI INKAPSULIRAJU SCY-078

[0106] Stabilnost vezikula ili lipozoma koji inkapsuliraju SCY-078 je procenjena inkubacijom lipozoma u svežem 50% goveđem serumu tokom 24 sata na 37°C. Frakcije lipozoma su odvojene od komponenti seruma ekskluzionom hromatografijom pomoću Sephadex<®>G-25 kolone. Sakupljene frakcije lipozoma i seruma su analizirane na sadržaj SCY-078 pomoću HPLC. Rezultati prikazani u Tabeli 5 pokazuju da iako SCY-078 nije detektovan u frakcijama proteina u serumu, u suštini sav nominalni sadržaj SCY-078 je dobijen iz frakcija lipozoma. Uzimajući u obzir visok stepen vezivanja proteina od strane SCY-078, ovi rezultati su iznenađujuće pokazali da je SCY-078 ostao inkapsuliran u intaktnim lipozomima pod uslovima koji simuliraju intravensku primenu u krvotok.

PROCENA LOKALNE PODNOŠLJIVOSTI LIPOZOMA KOJI INKAPSULIRAJU SCY-078 KOD ŽIVOTINJA

Studija lokalne podnošljivosti intravenske infuzije kod pacova Sprague Dawley

[0107] U 14-dnevnoj studiji intravenske infuzije na pacovima, životinjama je preko infuzije dat SCY-078 inkapsuliran u lipozome (10 ili 40 mg/kg/dan), ili SCY-078 u rastvoru (10 ili 40 mg/kg/dan), ili kontrola u obliku fiziološkog rastvora. Životinje su infuzirane preko stalnih katetera koji su hirurški implantirani u šuplju venu; kao takva, procena odgovora na mestu infuzije je naglasila histološka zapažanja vaskularne inflamacije. Sve u svemu, incidenca i ozbiljnost vaskularne inflamacije su se povećale za SCY-078 primenjen kao rastvor, u poređenju sa vaskularnom inflamacijom kod životinja tretiranih fiziološkim rastvorom; međutim, vaskularna inflamacija nije primećena kod životinja kojima je davan SCY-078 inkapsuliran u lipozomu (Tabela 6).

Studija lokalne intravenske iritacije kod novozelandskih belih zečeva

[0108] Ova studija je procenila lokalnu iritaciju kontrolnog fiziološkog rastvora, 40 mg/kg/dozi SCY-078 u rastvoru i SCY-078 inkapsuliranog u lipozomu (10 ili 40 mg/kg) pod dozom dva puta dnevno (razmak od 6 sati ±15 minuta). Doze su primenjivane putem jednočasovne intravenske infuzije brzinom od 20 mL/sat preko stalnog katetera novozelandskim belim zečevima pet uzastopnih dana.

[0109] Dva puta dnevno intravenska infuzija SCY-078 primenjena kao formulacija rastvora u

2

dozi od 40 mg/kg/dozi tokom perioda od 1 sata je rezultirala neželjenim lokalnim reakcijama na mestu infuzije i okolini, manifestovanim kao veoma blagi/blagi do jaki eritem i edem, što je dovelo do neplanirane eutanazije svih životinja u ovoj grupi nakon samo jednog dana doziranja. Nasuprot tome, životinje koje su dva puta dnevno primale intravensku infuziju SCY-078 inkapsuliranog u lipozomu u dozi od 10 i 40 mg/kg bile su u stanju da završe planirano 5-dnevno doziranje i formula se dobro podnosila.

[0110] Rezultati za studije lokalne podnošljivosti na životinjama pokazali su da se SCY-078 inkapsuliran u lipozomima bolje podnosi nego SCY-078 u rastvoru u pogledu vaskularne upale i ISR na mestu infuzije i da može biti pogodan za intravensku primenu preko periferne vene.

Tabela 5. Stabilnost lipozoma koji inkapsuliraju SCY-078 nakon inkubacije u fetalnom goveđem serumu na 37°C

Tabela 6. Vaskularna inflamacija na mestu infuzije kod Sprague Dawley pacova

2

Claims

Patentni zahtevi 1. Injektabilna kompozicija koja sadrži: vodenu fazu; i jednu ili više unilamelarnih vezikula od kojih svaka sadrži fosfolipid i holesterol, i od kojih svaka inkapsulira jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili hidrat:

u kome: X je O ili H, H; R<e>je C(O)NR<f>R<g>ili 6-člana heteroaril grupa u prstenu koja sadrži 1 ili 2 atoma azota pri čemu je heteroaril grupa izborno mono-supstituisana na ugljeniku iz prstena sa fluorom ili hlorom ili na azotu iz prstena sa kiseonikom; R<f>, R<g>, R<6>i R<7>su svaki nezavisno vodonik ili C1-C3alkil; R<8>je C1-C4alkil, C3-C4cikloalkil ili C4-C5cikloalkil-alkil; R<9>je metil ili etil; i R<8>i R<9>su izborno uzeti zajedno da formiraju 6-člani zasićeni prsten koji sadrži 1 atom kiseonika, pri čemu su jedna ili više unilamelarnih vezikula hidratisane u vodenoj fazi.
2. Injektabilna kompozicija prema zahtevu 1, naznačena time što je koncentracija inkapsuliranog jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili hidrata u injektabilnoj kompoziciji od oko 0,01 do oko 50 mg/mL. 2
3. Injektabilna kompozicija prema zahtevu 1, naznačena time što: (a) vodena faza sadrži šećer, izborno pri čemu je šećer izabran od monosaharida, disaharida i njihovih kombinacija, izborno pri čemu je šećer izabran od saharoze, trehaloze, laktoze, glukoze, fruktoze i galaktoze i njihovih kombinacija; i/ili (b) pH vodene faze je u opsegu od oko 5,0 do oko 7,0.
4. Injektabilna kompozicija prema zahtevu 1, naznačena time što jedna ili više unilamelarnih vezikula sadrže: (a) fosfatidilholin, fosfatidnu kiselinu, fosfatidilserin, fosfatidiletanolamin, fosfatidilglicerol, ili njihove kombinacije; ili (b) fosfatidilholin i fosfatidilglicerol, izborno gde: (i) fosfatidilholin je izabran od dipalmitoil fosfatidilholina, distearoil fosfatidilholina, fosfatidilholina iz jaja, fosfatidilholina soje, dilauroil fosfatidilholina i dimiristoilholina fosfatidilholina; i/ili (ii) fosfatidilglicerol je izabran od dipalmitoil fosfatidilglicerola, distearoil fosfatidilglicerola, dilauroil fosfatidilglicerola i dimiristoil fosfatidilglicerola.
5. Injektabilna kompozicija prema zahtevu 1, naznačena time što je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili hidrat prisutno u vezikulama u količini od oko 5 do oko 12 molnih procenata, fosfolipid je prisutan u vezikulama u količini od oko 50 do oko 80 molskih procenata, a holesterol je prisutan u vezikulama u količini od oko 10 do oko 30 molnih procenata.
6. Injektabilna kompozicija prema zahtevu 1, naznačena time što fosfolipid sadrži fosfatidilglicerol i fosfatidilholin, i molarni odnos: jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili hidrata, prema fosfatidilglicerolu, prema fosfatidilholinu, prema holesterolu je 1 : 2 : 5 : 2.5.
7. Injektabilna kompozicija prema zahtevu 1, naznačena time što je prosečna veličina čestica jedne ili više unilamelarnih vezikula manja od oko 150 nm, izborno manja od oko 100 nm, izborno od oko 70 do oko 80 nm.
8. Injektabilna kompozicija prema zahtevu 1, koja sadrži: vodenu fazu; i jednu ili više unilamelarnih vezikula od kojih svaka sadrži fosfolipid i holesterol, i od kojih svaka inkapsulira jedinjenje formule (II) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili hidrat:

koje je (1S,4aR,6aS,7R,8R,10aR,10bR,12aR,14R,15R)-15-[[2-amino-2,3,3-trimetilbutil]oksi]-8-[(1R)-1,2-dimetilpropil]-14-[5-(4-piridinil)-1H-1,2,4-triazol-1-il]-1,6,6a,7,8,9,10,10a,10b,11,12,12a-dodekahidro-1,6a,8,10a-tetrametil-4H-1,4apropano-2H-fenantro[1,2-c]piran-7-karboksilna kiselina, pri čemu je koncentracija inkapsuliranog jedinjenja formule (II) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili hidrata u kompoziciji za injekcije od oko 0,01 do oko 50 mg/mL, pri čemu fosfolipid sadrži fosfatidilglicerol i fosfatidilholin, pri čemu je molarni odnos: jedinjenja formule (II) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili hidrata, prema fosfatidilglicerolu, prema fosfatidilholinu, prema holesterolu, 1:2:5:2,5, pri čemu vodena faza sadrži šećer i ima pH od oko 5,0 do oko 7,0, i pri čemu su jedna ili više jednoslojnih vezikula hidratisane u vodenoj fazi.
9. Injektabilna kompozicija prema zahtevu 1, koja sadrži: vodenu fazu; i jednu ili više unilamelarnih vezikula od kojih svaka sadrži fosfolipid i holesterol, i od kojih svaka inkapsulira jedinjenje formule (IIa) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili hidrat:

koje je (1S,4aR,6aS,7R,8R,10aR,10bR,12aR,14R,15R)-15-[[(2R)-2-amino-2,3,3-trimetilbutil]oksi]-8-[(1R)-1,2-dimetilpropil]-14-[5-(4-piridinil)-1H-1,2,4-triazol-1-il]-1,6,6a,7,8,9,10,10a,10b,11,12,12a-dodekahidro-1,6a,8,10a-tetrametil-4H-1,4apropano-2H-fenantro[1,2-c]piran-7-karboksilna kiselina, pri čemu su jedna ili više unilamelarnih vezikula hidratisane u vodenoj fazi.
10. Injektabilna kompozicija prema zahtevu 9, naznačena time, što jedna ili više unilamelarnih vezikula inkapsuliraju jedinjenje formule (IIa).
11. Injektabilna kompozicija prema zahtevima 1, 8 ili 9, naznačena time što jedna ili više unilamelarnih vezikula inkapsuliraju farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja Formule (I), Formule (II) ili Formule (IIa), izborno pri čemu jedna ili više unilamelarnih vezikula inkapsuliraju citratnu so jedinjenja formule (I), formule (II) ili formule (IIa).
12. Injektabilna kompozicija prema zahtevima 1, 8 ili 9, za upotrebu u postupku lečenja gljivične infekcije kod subjekta kome je to potrebno, pri čemu postupak sadrži intravensku primenu injektabilne kompozicije, izborno pri čemu je subjekat čovek.
13. Injektabilna kompozicija za upotrebu prema zahtevu 12, naznačena time što je gljivična infekcija: (a) uzrokovana sa Candida spp; ili (b) uzrokovana sa Aspergillus spp; ili 1 (c) je kandidemija; ili (d) je invazivna aspergiloza.
14. Postupak za pripremu injektabilne kompozicije koja sadrži jednu ili više unilamelarnih vezikula od kojih svaka inkapsulira jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili hidrat

u kome: X je O ili H, H; R<e>je C(O)NR<f>R<g>ili 6-člana heteroaril grupa u prstenu koja sadrži 1 ili 2 atoma azota pri čemu je heteroaril grupa izborno mono-supstituisana na ugljeniku iz prstena sa fluorom ili hlorom ili na azotu iz prstena sa kiseonikom; R<f>, R<g>, R<6>i R<7>su svaki nezavisno vodonik ili C1-C3alkil; R<8>je C1-C4alkil, C3-C4cikloalkil ili C4-C5cikloalkil-alkil; R<9>je metil ili etil; i R<8>i R<9>su izborno uzeti zajedno da formiraju 6-člani zasićeni prsten koji sadrži 1 atom kiseonika, pri čemu postupak sadrži: a) rastvaranje fosfolipida i holesterola u alifatičnom alkoholu koji ima jedan do pet atoma ugljenika da bi se formirao prvi rastvor; b) rastvaranje jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili hidrata u prvom rastvoru da bi se formirao drugi rastvor; v) mešanje drugog rastvora; d) isparavanje rastvarača iz drugog rastvora da bi se dobila fosfolipidno-holesterolska disperzija koja sadrži jedinjenje Formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili hidrat; 2 e) hidrataciju disperzije fosfolipida-holesterola koja sadrži jedinjenje Formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili hidrat sa rastvorom šećera da bi se proizvela hidratisana suspenzija; i f) formiranje, iz hidratisane suspenzije, jedne ili više unilamelarnih vezikula od kojih svaka sadrži fosfolipid i holesterol i koje inkapsuliraju jedinjenje Formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili hidrat.
15. Postupak prema zahtevu 14, naznačen time što: (a) alifatični alkohol je izabran od metanola ili etanola; i/ili (b) rastvor šećera sadrži šećer izabran od monosaharida, disaharida i njihovih kombinacija, izborno pri čemu je šećer izabran od saharoze, trehaloze, laktoze, glukoze, fruktoze i galaktoze i njihovih kombinacija.
16. Postupak prema zahtevu 14, naznačen time što je oko 90% ili više količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili hidrata prisutnog tokom koraka (b) inkapsulirano tokom koraka (f) u jednu ili više unilamelarnih vezikula, izborno pri čemu je oko 95% ili više količine jedinjenja Formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili hidrata prisutnog tokom koraka (b) inkapsulirano tokom koraka (f) u jednu ili više unilamelarnih vezikula.
17. Postupak prema zahtevu 14, naznačen time što je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili hidrat prisutno u vezikulama u količini od oko 5 do oko 12 molskih procenata.
18. Postupak prema patentnom zahtevu 14, naznačen time što fosfolipid sadrži fosfatidilglicerol i fosfatidilholin, i gde je molarni odnos: jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili hidrata, prema fosfatidilglicerolu, prema fosfatidilholinu, prema holesterolu je 1 : 2 : 5 : 2.5.
19. Postupak prema zahtevu 14, naznačen time što: (a) tokom koraka (f), ultrazvučna obrada, mikrofluidno mešanje, homogenizacija ili njihova kombinacija se koristi za formiranje jedne ili više unilamelarnih vezikula; i/ili (b) postupak dalje sadrži sterilizaciju jedne ili više unilamelarnih vezikula proizvedenih u koraku (f); i/ili (c) postupak dalje sadrži liofilizaciju jedne ili više unilamelarnih vezikula proizvedenih u koraku (f).
20. Postupak prema zahtevu 14, naznačen time što je prosečna veličina čestica jedne ili više unilamelarnih vezikula manja od oko 150 nm, izborno manja od oko 100 nm, izborno od oko 70 do oko 80 nm. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5 4