RS63639B1

RS63639B1 - Peptidomimetik beta-ukosnice sa aktivnošću inhibitora elastaze i njegovi dozni oblici aerosola

Info

Publication number: RS63639B1
Application number: RS20220922A
Authority: RS
Inventors: Christian Ludin; Manfred Keller
Original assignee: Spexis Ag
Priority date: 2016-05-31
Filing date: 2017-05-31
Publication date: 2022-10-31
Also published as: HUE060393T2; MX2018014425A; JP7286319B6; MA45167A; CN109310613A; SG11201810137UA; JP2023017793A; MA45168A; US20200230202A1; WO2017207117A1; SMT202200405T1; EP3463280B1; EA201892819A1; KR102511284B1; MX2018014752A; PL3463280T3; EA039603B1; EP3463280A1; IL263112A; IL263112B2

Description

Opis

Oblast pronalaska

[0001] Pronalazak se odnosi na farmaceutske aerosole koji sadrže peptidomimetik β-ukosnice formule ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, koja je specifično otkrivena u WO2006/087001 A1 i koja poseduje inhibitornu aktivnost protiv humane neutrofilne elastaze. Dalje se odnosi na čvrste ili tečne farmaceutske preparate i komplete za pripremu i primenu takvih aerosola. Pronalazak se može koristiti za prevenciju, kontrolisanje ili lečenje plućnih bolesti ili stanja posredovanih od strane ili nastalih usled aktivnosti humane neutrofilne elastaze, npr. plućne bolesti, kao što su nedostatak alfa-1 antitripsina (AATD), cistična fibroza (CF), bronhiektazije koje nisu cistična fibroza (NCFB) ili hronična opstruktivna plućna bolest (COPD), ili infekcije pluća koje izazivaju plućne bolesti ili stanja, posredovane aktivnošću humane neutrofilne elastaze. Stoga, pronalazak se dalje odnosi na farmaceutski preparat ili farmaceutski aerosol koji sadrži aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupku za prevenciju, kontrolu ili lečenje plućnih bolesti ili stanja kod subjekta posredovanih ili nastalih aktivnošću humane neutrofilne elastaze.

Stanje tehnike

[0002] Humana neutrofilna elastaza (humani NE), član familije serinskih proteaza, čini važnu terapijsku metu. Pored katepsina G i proteinaze 3, blisko je uključena u modulaciju aktivnosti citokina i njihovih receptora. Naročito na mestima upale, visoka koncentracija humane NE se oslobađa iz infiltrirajućih polimorfonuklearnih ćelija u bliskoj privremenoj korelaciji sa povišenim nivoima inflamatornih citokina, što snažno ukazuje da je ova proteaza uključena u kontrolu citokinske bioaktivnosti i dostupnosti (U. Bank, S. Ansorge, J. Leukoc. Biol. 2001, 69, 177-90). Poznato je da je humani NE uglavnom odgovoran za ekstracelularnu proteolizu i doprinosi oštećenju tkiva katalizujući hidrolizu širokog mnoštva matričnih makromolekula, proteina plazme, inflamatornih medijatora i ćelijskih površinskih receptora sa važnim lokalnim i sistemskim posledicama (C. A. Oven; E. J. Campbell; J. Leukoc. Biol.1999, 65, 137-150). Stoga, inhibitori humanog NE su važni novi kandidati lekova za infektivne inflamatorne bolesti, uključujući plućne bolesti kao što su hronična opstruktivna plućna bolest (COPD), akutni respiratorni distres sindrom (ARDS), cistična fibroza (CF) i ishemijsko-reperfuziona povreda (H. Ohbayashi, Expert. Opin. Investig. Drugs 2002, 11, 965-980; B. Korkmaz, T. Moreau, F. Gauthier, Biochimie 2008, 90, 227). Otkriveni su inhibitori humanog katepsina G, elastaze, ili triptaze poput peptidomimetika βukosnice (WO 2006/087001; WO 2015/096872; WO 2015/096873). Oni mogu da zadovolje značajnu potrebu za novim terapijama koje efikasno sprečavaju ili leče i/ili ublažavaju ove bolesti ili stanja.

[0003] Putevi primene mogu biti klasifikovani u zavisnosti da li je efekat leka lokalni (topikalna primena) ili sistemski (enteralna ili parenteralna primena). Isporuka lekova u bronhije i pluća (pulmonalna isporuka lekova) je korišćena za lokalni tretman bolesti i stanja respiratornog sistema. Međutim, takođe je demonstrirana izvodljivost inhalacije kao alternativnog puta primene za lečenje sistemskih bolesti korišćenjem velike površine pluća za apsorpciju (J. S. Patton, P. R. Byron, Nat. Rev. Drug Discov.2007, 6, 67-74; M. Hohenegger, Curr. Pharm. Des.2010, 16, 2484-2492).

[0004] Posebno, lekovite supstance mogu biti isporučene do respiratornog sistema kao aerosolizovani suvi praškovi ili aerosolizovane tečnosti, pri čemu su poslednje ili rastvori ili disperzije, kao što su suspenzije lekovitih supstanci (EP 2567 691). Razvijeni su različiti uređaji za pretvaranje čvrste ili tečne kompozicije u aerosol da bi se omogućila inhalacija. Za konverziju rastvora ili suspenzija lekovitih supstanci na vodenoj bazi u inhalacione aerosole, obično se koriste nebulizatori. Posebno su korisni za bolesti koje zahtevaju visoke pulmonalne doze, npr. CF, i kod pacijenata, npr. dece, koja nisu u stanju da koordiniraju ili postignu brzine protoka neophodne za korišćenje drugih inhalacionih uređaja (M. Knoch, M. Keller, Expert Opin. Drug Del. 2005, 2, 377-390; WO 2007/091266; WO 98/19694; WO 2007/090646; i WO 2008/025560).

[0005] Inhalacija lekovitih supstanci može biti pogodna za profilaksu i/ili lečenje infekcija respiratornog trakta i/ili bolesti povezanih sa aktivnošću neutrofilne elastaze. Postoji dokaz da će infiltracija disajnih puteva od strane neutrofila dovesti do povećanja neutrofilne elastaze u ekstracelularnom delu i time izazvati štetne efekte. Na mišjem modelu izazivanja alergena neutrofilom moglo bi se pokazati da inhibicija neutrofilne elastaze pomoću sivelelstata umanjuje hiperreaktivnost i upalu disajnih puteva (H. Koga, N. Miyahara i sar., Respir. Res.2013, 14:8). Na različitom mišjem modelu, isporuka neglikozilovanog rhalfa1PI, rekombinantnog oblika inhibitora elastaze, inhibitora alfa-1-proteinaze (alfa1PI), na površinu disajnih puteva CD-1 miševa nazalnom instilacijom, otkrivena je kao visoko preventivna od povrede posredovane elastazom, čak značajno više zaštitna od isporuke alfa1PI dobijenog od glikozilovane krvi. Ovi rezultati sugerišu da bi isporuka rhalfa1PI putem aerosola mogla biti efikasna strategija za kontrolu patofiziologije zavisne od elastaze udružene sa plućnom bolešću cističnom fibrozom. Nedavno je R. Siekmeier sumirao rezultate do sada završenih kliničkih studija sa ciljem deponovanja u plućima inhaliranog alfa1PI od pacijenata sa naslednim nedostatkom alfa1PI ili cističnom fibrozom (Eur. J. Med. Res. 2010, 15 [Suppl. II], 164). Za obe terapijske oblasti većina studija ukazuje da inhalaciona primena alpha1PI može poslužiti kao moćna terapija za neutralizaciju viška inflamatornih proteina i neutrofilne elastaze. Dok poslednji efekti ne dovode automatski do poboljšanja plućne funkcije pacijenta, jasno smanjenje upale disajnih puteva nakon tretmana alfa1PI može prethoditi strukturnim promenama pluća (M. Griese, P. Latzin i sar., Eur. Respir. J.

2007, 29, 240).

[0006] Generalno, prednost isporuke lekovite supstance putem inhalacije je u tome što može omogućiti isporuku dovoljnih terapijskih doza leka direktno na primarnom mestu delovanja, npr. u slučaju respiratornih bolesti, uz smanjenje rizika od sistemske toksičnosti. Pored toga, može se izbeći suboptimalna farmakokinetika i/ili farmakodinamika povezana sa sistemskom izloženošću lekovima. Štaviše, inhalacija (kod kuće) je pogodniji način primene od intravenske injekcije (medicinsko odeljenje).

[0007] Ipak, efikasnost terapije zasnovane na isporuci inhalirane lekovite supstance uglavnom zavisi od izabranog leka, njegovog farmaceutskog sastava pogodnog za inhalaciju i uređaja koji se primenjuje. Stoga, postoji izražena potreba za unapređenim farmaceutskim preparatima, aerosolima i terapijskim kompletima koji su pogodni za prevenciju, kontrolisanje ili lečenje bolesti ili stanja koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze, poboljšavajući ishod trenutno poznatih terapija i/ili prevazilaženjem nedostataka sadašnjih poznatih terapija.

Suština pronalaska

[0008] Pronalazak obezbeđuje farmaceutski aerosol za pulmonalnu primenu koji sadrži dispergovanu tečnu fazu i kontinuiranu gasnu fazu. Cilj pronalaska je definisan priključenim patentnim zahtevima. Dispergovana tečna faza sadrži vodene kapljice koje sadrže aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so. Kapljice dispergovane faze imaju srednji aerodinamički dijametar od 1,5 μm do 5 μm sa distribucijom veličine kapljica koja ima geometrijsku standardnu devijaciju od 1,2 do 1,7. Pronalazak dalje obezbeđuje farmaceutski aerosol za pulmonalnu primenu koji sadrži dispergovanu tečnu fazu i kontinuiranu gasnu fazu, pri čemu dispergovana tečna faza sadrži vodene kapljice koje sadrže aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Tre-Ala-Ser-Ile- Pro-Pro-Gln-Liz-Tir-<D>Pro-Pro-), ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u metodi za prevenciju, kontrolisanje ili lečenje plućnih bolesti ili stanja koja su posredovana ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta.

[0009] U drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje tečne i čvrste farmaceutske preparate iz kojih se može pripremiti gornji aerosol. Tečna kompozicija sadrži aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u koncentraciji unutar opsega od 4 mg/mL do 100 mg/mL, poželjno, u opsegu od 17 mg/mL do 95 mg/mL, ili 35 mg/mL do 95 mg/mL, respektivno, i još poželjnije, u opsegu od oko 70 mg/mL do 95 mg/mL.

[0010] U još jednom aspektu, pronalazak obezbeđuje komplet koji sadrži raspršivač i tečnu ili čvrstu kompoziciju, pri čemu je nebulizator prilagođen da raspršuje tečnu kompoziciju u aerosol, kao što je gore opisano. Pronalazak dalje obezbeđuje komplet koji sadrži nebulizator i tečnu ili čvrstu kompoziciju, pri čemu je nebulizator prilagođen da aerosolizuje tečnu kompoziciju u aerosol, kao što je gore opisano, za upotrebu u metodi za prevenciju, upravljanje ili lečenje plućnih bolesti ili stanja koja su posredovana ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta.

[0011] U još jednom aspektu, pronalazak dalje otkriva postupak za pripremu i isporuku aerosola za plućnu primenu. Metoda obuhvata korak obezbeđivanja tečne farmaceutske kompozicije koja sadrži aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u koncentraciji u opsegu od oko 4 mg/mL do 100 mg/mL, poželjno, u opsegu od 17 mg/mL do 95 mg/mL, ili 35 mg/mL do 95 mg /mL, respektivno, i poželjnije, u opsegu od 70 mg/mL do 95 mg/mL, ili obezbeđivanje čvrste farmaceutske kompozicije za pripremu tečne kompozicije, pri čemu kompozicija sadrži aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i gde je čvrsta kompozicija rastvorljiva ili disperzibilna u vodenom tečnom rastvaraču, i gde tečna kompozicija sadrži koncentraciju aktivnog jedinjenja u opsegu od 4 mg/mL do 100 mg/mL, poželjno, u opsegu od 17 mg/mL do 95 mg/mL, ili 35 mg/mL do 95 mg/mL, respektivno, i poželjnije, u opsegu od 70 mg/mL do 95 mg/mL, ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli, i korak obezbeđivanja raspršivača sposobnog za aerosolizaciju pomenute tečne farmaceutske kompozicije pri srednjoj brzini isporuke od najmanje 0,8 mg aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli, u minuti, pri čemu je nebulizator dodatno prilagođen da emituje aerosol koji sadrži dispergovanu tečnu fazu koja ima srednji dijametar mase od 1,5 μm do 5 μm i poseduje distribuciju veličine kapljica sa geometrijskom standardnom devijacijom od 1,2 do 1,7. U sledećem koraku, nebulizator se koristi za aerosolizaciju tečne farmaceutske kompozicije koju konačno mogu da inhaliraju sisari, poželjnije, humani subjekti.

[0012] U još jednom aspektu, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i opciono jedan ili više farmaceutski prihvatljivih razblaživača, ekscipijenasa ili nosača, za upotrebu u postupku za prevenciju, upravljanje ili lečenje plućnih bolesti ili stanja koja su posredovana ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta.

[0013] U još jednom aspektu, pronalazak obezbeđuje komplet koji sadrži aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i dodatak u pakovanju pri čemu dodatak u pakovanju sadrži uputstva za lečenje subjekta za bolesti ili stanja pluća koja su posredovana ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze korišćenjem aktivnog jedinjenja.

Kratak opis slika

[0014]

Sl. 1 i 2 pokazuju efekte ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) primenjenog inhalacijom na modelu LPS/fMLP aktivacije neutrofila kod pacova. BAL supernatanti iz traheja uginulih pacova analizirani su na aktivnost neutrofilne elastaze. Podaci su prikazani u odnosu na kontrolni nosač. Podaci su prikazani i kao srednje vrednosti (sl. 1) i kao pojedinačne tačke podataka zajedno sa njihovom odgovarajućom srednjom vrednošću i s.e.m. vrednostima (sl.2).

Sl. 3 prikazuje krive odnosa srednje koncentracije u plazmi-vreme za pojedinačne rastuće doze (80 mg, 160 mg i 320 mg po kohorti) ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) primenjenog putem inhalacije kod pacijenata sa cističnom fibrozom. Ove krive pokazuju tipične profile slične profilima krivih nastalih od poredbenih doza aktivnog jedinjenja inhaliranih od strane zdravih subjekata.

Sl.4 prikazuje srednje koncentracije u sputumu ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) primenjenog putem inhalacije kod pacijenata sa cističnom fibrozom kao pojedinačne rastuće doze (80 mg, 160 mg i 320 mg po kohorti). Podaci su prikazani u odnosu na vreme. Poređenje koncentracija aktivnog jedinjenja u sputumu (sl.

4) i plazmi (sl. 3) pokazuje da su koncentracije aktivnog jedinjenja u sputumu približno 10<3>puta veće nego u plazmi.

Sl. 5 pokazuje efekte izazvane ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) na aktivnu neutrofilnu elastazu u sputumu pacijenata sa cističnom fibrozom, primenjenog putem inhalacije kod pacijenata sa cističnom fibrozom kao pojedinačne rastuće doze (80 mg, 160 mg i 320 mg po kohorti). Podaci su prikazani u odnosu na vreme i prikazani su kao srednje vrednosti. Pored toga, prikazani su i podaci o placebu.

[0015] Nakon primene pojedinačne doze aktivnog jedinjenja u svim doznim grupama može biti izvedena jaka inhibicija (> 90%) aktivne elastaze u sputumu tokom nekoliko sati.

Detaljan opis pronalaska

[0016] U prvom aspektu, pronalazak obezbeđuje farmaceutski aerosol za pulmonalnu primenu koji sadrži dispergovanu tečnu fazu i kontinuiranu gasnu fazu. Dispergovana tečna faza sadrži vodene kapljice koje sadrže aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr<D>Pro-Pro-), ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so. Kapljice dispergovane faze imaju srednji prečnik mase od 1,5 μm do 5 μm sa distribucijom veličine kapljica koja ima geometrijsku standardnu devijaciju od 1,2 do 1,7.

[0017] Aerosol prema pronalasku je namenjen za pulmonalnu isporuku, koja se poželjno ostvaruje putem oralne inhalacije aerosola. Kako se ovde koristi u opisu i zahtevima, pulmonalna isporuka označava isporuku aerosola do bilo kog plućnog dela ili funkcije uključujući, takozvana duboka pluća, periferna pluća, alveole, bronhije i bronhiole.

[0018] Stanja pulmonalnih ciljnih regiona u kojima je prevencija, kontrolisanje ili lečenje sisara, poželjnije, humanih subjekata, korišćenjem aerosola prema pronalasku potencijalno korisna uključuju bolesti ili stanja pluća koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze, na primer, posebno, pulmonalnih bolesti, kao što su nedostatak alfa-1 antitripsina (AATD), cistična fibroza (CF), bronhiektazije koje nisu cistična fibroza (NCFB) ili hronična opstruktivna bolest pluća (COPD), ili infekcije pluća koje izazivaju bolesti ili stanja pluća, posredovanih aktivnošću humane neutrofilne elastaze.

[0019] Kako se ovde koristi u opisu i patentnim zahtevima, aerosol je disperzija čvrste i/ili tečne faze u gasnoj fazi. Dispergovana faza, takođe nazvana diskontinualna faza, sadrži više čvrstih i/ili tečnih čestica. Oba osnovna fizička tipa aerosola, odnosno čvrste i tečne disperzije u gasnoj fazi, mogu biti korišćene kao farmaceutski aerosoli.

[0020] Prema sadašnjem pronalasku, aerosol sadrži dispergovanu tečnu fazu i kontinuiranu gasnu fazu. Takvi aerosoli se ponekad nazivaju "tečnim aerosolima" ili aerosolizovanim tečnostima. Treba napomenuti da zahtev za dispergovanom tečnom fazom ne isključuje prisustvo čvrste faze. Posebno, dispergovana tečna faza može sama po sebi predstavljati disperziju, kao što je suspenzija čvrstih čestica u tečnosti.

[0021] Kontinuirana gasna faza se bira između bilo kog gasa ili smeše gasova koja je farmaceutski prihvatljiva. Na primer, vazduh ili komprimovani vazduh kao gasna faza je najčešći u inhalacionoj terapiji korišćenjem nebulizatora kao generatora aerosola. Alternativno, mogu se koristiti drugi gasovi i smeše gasova, kao što je vazduh obogaćen kiseonikom, ili smeše azota i kiseonika. Korišćenje vazduha kao kontinuirane gasne faze je najpoželjnije.

[0022] Aktivno jedinjenje je ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koja njegova farmaceutski prihvatljiva so, koja poseduje inhibitornu aktivnost protiv humane neutrofilne elastaze. Strukturno, aktivno jedinjenje je homodetski, ciklični tridekapeptid, pri čemu OctG je (S)-2-aminodekanska kiselina i<D>Pro je D-prolin. Skraćenice (kod od 3 slova) za preostale aminokiselinske ostatke su opšte poznate. Svi aminokiselinski ostaci su u L-konfiguraciji osim jednog ostatka D-prolina.

[0023] Kako se ovde koristi u opisu i patentnim zahtevima, aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) treba shvatiti kao da uključuje odgovarajuće solvate.

[0024] Solvati kao i soli su kategorije oblika u kojima se aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) može koristiti kao aktivan sastojak u farmaceutskom preparatu.

[0025] Soli su neutralna jedinjenja sastavljena od jona, na primer katjona i anjona. Ako aktivno jedinjenje može da deluje kao kiselina, potencijalno korisne soli mogu biti obrazovane sa neorganskim katjonima, kao što su natrijum, kalijum, kalcijum, magnezijum i/ili amonijum, ili sa organskim katjonima, kao što su oni izvedeni iz arginina, lizina, glicina, i/ili etilendiamina. Ako aktivno jedinjenje (ili njegovi delovi) može da deluje kao baza, kao što je na primer ostatak Lys koji je jedan od aminokiselinskih ostataka ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), tada potencijalno korisne soli mogu biti obrazovane sa neorganskim anjonima, kao što su hlorid, bromid, jodid, fosfat (jedno- ili dvobazni), sulfat, nitrat, acetat, trifluoracetat, propionat, butirat, maleat, fumarat, metansulfonat, etansulfonat, 2-hidroksi-etilsulfonat, npropilsulfonat, izopropilsulfonat, laktat, malat i/ili citrat.

[0026] Izraz farmaceutski prihvatljiva so ili farmaceutska so se koristi za označavanje lekovite supstance ili aktivnog jedinjenja koje se može jonizovati ili koje je kombinovano sa suprotnim jonom da bi se formirao neutralni kompleks. Pretvaranje lekovite supstance ili aktivnog jedinjenja u so kroz ovaj proces može, na primer, povećati njegovu hemijsku stabilnost, učiniti kompleks lakšim za primenu i/ili omogućiti manipulaciju farmakokinetičkim profilom agensa.

[0027] U poželjnoj realizaciji pronalaska, suprotni jon aktivnog jedinjenja je acetat.

[0028] Aerosol je dalje okarakterisan po tome što kapljice dispergovane tečne faze imaju srednji dijametar mase od 1,5 μm do 5 μm sa distribucijom veličine kapljica koja ima geometrijsku standardnu devijaciju od 1,2 do 1,7. Srednji prečnik mase (MMD), kako se ovde koristi u opisu i zahtevima, je srednji prečnik mase dispergovane tečne faze izmeren laserskom difrakcijom. Poznati su i komercijalno dostupni različiti odgovarajući analitički aparati za određivanje MMD, kao što su Malvern MasterSizer X ili Malvern SprayTec. Geometrijska distribucija uključujući geometrijsku standardnu devijaciju (GSD) čestica ili kapljica tečnosti u obliku aerosola može biti određena istovremeno sa MMD. GSD opisuje kako je rasprostranjen skup brojeva čiji je preferirani prosek geometrijska sredina.

[0029] U poželjnoj realizaciji, aerosol je za plućnu isporuku i dispergovana tečna faza takvog aerosola ima MMD u opsegu od 2,0 μm do oko 4,5 μm i GSD u opsegu od 1,2 do 1,7. Još poželjnije, aerosol prema pronalasku ima MMD u opsegu od 2,5 μm do oko 3,5 μm i GSD u opsegu od 1,4 do 1,6. Svaki od ovih skupova kombinacija je posebno koristan za postizanje visoke lokalne koncentracije aktivnog jedinjenja u plućima, uključujući bronhije i bronhiole, u odnosu na količinu aktivnog jedinjenja koja je raspršena.

[0030] U drugoj poželjnoj realizaciji, aerosol je emitovan iz generatora aerosola brzinom od najmanje 0,1 mL/min. U drugoj realizaciji, (ukupna) izlazna brzina koja je brzina kojom je aerosol emitovan iz generatora aerosola je najmanje 0,150 mL/min ili najmanje 150 mg/min za one tečne aerosole čija je gustina - za praktične svrhe - blizu 1 g/mL, odnosno u opsegu od 0,95 g/mL do 1,05 g/mL. U daljim realizacijama, izlazna brzina je u opsegu od 200 mg/min do 700 mg/min, ili od 250 mg/min do 650 mg/min, respektivno.

[0031] U drugoj poželjnoj realizaciji, aerosol je emitovan iz generatora aerosola pri srednjoj brzini isporuke od najmanje 0,8 mg aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli, u minuti. (Srednja) brzina isporuke lekovite supstance ili aktivnog jedinjenja je jedna od dve diskretne metrike ili parametra koja se definišu i mere prema npr. Ph. Eur. (Evropskoj farmakopeji) 2.9.44 i/ili USP (Američkoj farmakopeji) 1601 za određivanje količine lekovite supstance ili aktivnog jedinjenja za koju se može očekivati da će je pacijent dobiti tokom perioda lečenja. U daljim realizacijama, srednja brzina isporuke aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli, u opsegu je od 3 mg do oko 25 mg u minuti ili u opsegu od 5 mg do 18 mg u minuti, respektivno.

[0032] Odgovarajući generatori aerosola, posebno raspršivači, koji su pogodni za generisanje aerosola(a) ovde opisanih u opisu i patentnim zahtevima su detaljnije razmotreni u nastavku.

[0033] U drugom aspektu, sadašnji pronalazak je usmeren na tečni farmaceutski preparat za pripremu aerosola, kao što je gore opisano, koja sadrži aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-lle-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u koncentraciji u opsegu od 4 mg/mL do 100 mg/mL.

[0034] Kao što je ovde definisano u opisu i zahtevima, tečna farmaceutska kompozicija je tečni materijal koji sadrži najmanje jedno aktivno jedinjenje i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv, farmakološki suštinski inertan ekscipijens. Treba napomenuti da izraz "tečni preparat" ne znači nužno da nije prisutan čvrst materijal. Na primer, tečna suspenzija koja predstavlja disperziju čvrstih čestica u kontinuiranoj tečnoj fazi takođe je obuhvaćena gornjim izrazom.

[0035] Poželjno, tečni preparat od koga je pripremljen aerosol je vodeni preparat; sledstveno tome, voda je dominantni tečni sastojak takvog preparata. Treba izbegavati rastvarače i ko-rastvarače osim vode. U drugom izvođenju, preparat sadrži najmanje 80 tež.% vode. U još jednom izvođenju, najmanje 90 tež.% tečnih sastojaka preparata je voda.

[0036] Ako se ne može izbeći uključivanje nevodenog rastvarača, poput etanola, glicerola, propilenglikola ili polietilenglikola, ekscipijens treba pažljivo odabrati i uzimajući u obzir njegovu fiziološku prihvatljivost i terapeutsku upotrebu preparata. U skladu sa poželjnom realizacijom, preparat je suštinski bez nevodenih rastvarača.

[0037] Koncentracija aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli, u tečnom preparatu je unutar raspona od 4 mg/mL do 100 mg/mL. Poželjno, koncentracija gornjeg aktivnog jedinjenja, ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli, u opsegu je od 17 mg/mL do 95 mg/mL, ili 35 mg/mL do 95 mg/mL, respektivno, ili poželjnije, oko 70 mg/mL do 95 mg/mL. Visoka koncentracija aktivnog jedinjenja u preparatu pogodnom za aerosolizaciju obezbeđuje za pacijenta pogodnost i komplijansu: što je takva koncentracija veća, to je manja ukupna zapremina tečnog preparata koja sadrži efikasnu dozu aktivnog jedinjenja za inhalaciju i kraće je ukupno vreme koje je neophodno za inhalaciju takve efikasne doze.

[0038] Dinamički viskozitet tečnog preparata ima uticaja na efikasnost raspršivanja i na distribuciju veličine čestica aerosola formiranog raspršivanjem. Poželjno je da dinamički viskozitet bude podešen u opsegu od 0,8 mPas do 1,7 mPas. U drugim realizacijama, dinamički viskozitet je u opsegu od 1,0 mPas do 1,7 mPas, ili u opsegu od oko 1,2 mPas do 1,6 mPas, respektivno.

[0039] Da bi se dobio aerosol koji je visoko pogodan za pulmonalnu primenu, površinski napon tečnog preparata iz pronalaska treba poželjno da bude podešen u opsegu od 25 mN/m do 80 mN/m, poželjnije, u opsegu od 30 mN/m do 70 mN/m, ili još poželjnije, u opsegu od 45 mN/m do 55 mN/m. Generalno, kvalitet aerosola i efikasnost raspršivanja mogu biti izloženi negativnom uticaju u nižim delovima gore predstavljenih realizacija; međutim, rezultati niže opisanih studija pokazuju da nema značajnih promena u performansama tečnih preparata pronalaska u gornjem pogledu.

[0040] U struci je dobro poznato da dodavanje surfaktanta vodenom tečnom preparatu može dovesti do smanjenja površinskog napona prilično značajno ispod onog kod vode ili fiziološkog puferskog rastvora. Stoga se u svakom slučaju mora naći kompromis u zavisnosti od nameravane primene.

[0041] Kako bi se dobro podnosio aerosol treba – koliko je to moguće – da poseduje fiziološku toničnost ili osmolalnost. Stoga, može biti poželjno da se ugradi osmotski aktivni ekscipijens za kontrolu osmolalnosti aerosola. Takav ekscipijens, ili ekscipijensi, ako se npr. koristi kombinacija supstanci, treba odabrati tako da se u idealnom slučaju postigne osmolalnost aerosola koja ne odstupa previše od one od fizioloških tečnosti, odnosno od 150 mOsmol/kg. Međutim, ponovo se mora naći kompromis između fizičko-hemijskih i/ili farmaceutskih potreba s jedne strane i fizioloških zahteva s druge strane. Generalno, osmolalnost do 800 mOsmol/kg može biti prihvatljiva. Posebno, poželjna je osmolalnost u opsegu od 200 mOsmol/kg do 600 mOsmol/kg. U daljim realizacijama, osmolalnost je u opsegu od 250 mOsmol/kg do 500 mOsmol/kg ili u opsegu od oko 300 mOsmol/kg do 450 mOsmol/kg, respektivno.

[0042] Jedan pristup za poboljšanje dejstva i/ili efikasnosti preparata može biti povećanje lokalnog vremena zadržavanja preparata nakon taloženja aerosola u ciljnim regionima. Na primer, produženo vreme zadržavanja deponovane kompozicije u plućima može dovesti do većeg kontinuiranog izlaganja aktivnom jedinjenju na mestu delovanja. Istovremeno, može smanjiti potrebnu učestalost primene i samim tim poboljšati pogodnost i komplijansu pacijenata.

[0043] Da bi se postiglo produženo zadržavanje aktivnog jedinjenja uopšte, mogu se primeniti različite formulacione strategije, npr. konverzija aktivnog jedinjenja koje je jako rastvorljivo u vodi u manje rastvorljiv čvrsti oblik, kao što je slabo rastvorljiva so. Kao posledica toga, jedinjenje je prisutno u aerosolu u nerastvornom obliku, na primer u obliku mikro- ili nanosuspenzije. Nakon taloženja aerosolnih kapljica, tečna faza preparata se kombinuje sa fiziološkom tečnošću, npr. mukusom, i omogućava leku da se rastvori.

[0044] Drugačija formulaciona strategija zasnovana je na činjenici da polimerni ekscipijens(i), kao što je niže opisano, mogu da utiču na oslobađanje aktivnog jedinjenja iz formulacije, i/ili na lokalno vreme zadržavanja preparata nakon taloženja na ciljnom tkivu. Stoga, takvi ekscipijensi utiču i na lokalnu bioraspoloživost aktivnog jedinjenja na mestu delovanja.

[0045] U jednoj od poželjnih realizacija, aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koja njegova farmaceutski prihvatljiva so, formulisana je sa polimernim ekscipijensom koji utiče na sporo oslobađanje i produženo lokalno zadržavanje. Potencijalno pogodni polimeri uključuju, posebno, farmaceutski prihvatljive polimere rastvorljive u vodi ili polimere koji se mogu dispergovati u vodi, kao što su metilceluloza, hidroksietilceluloza, alginat, galaktomanan, dekstran, agar, guar guma, tragakanta i njihove smeše.

[0046] Ako je jedan ili više polimernih ekscipijenasa prisutno u tečnom preparatu pronalaska, treba voditi računa o uticaju na dinamički viskozitet takve kompozicije da bi se obezbedila efikasna aerosolizacija. Dakle, dinamički viskozitet ne bi trebalo da prelazi 1,7 mPas. Generalno, treba uzeti u obzir tačan stepen polimera(a) i prisustvo drugih ekscipijenasa da bi se odredio sadržaj polimera(a) u takvoj tečnoj kompoziciji.

[0047] Poznato je da drugi ekscipijensi, odnosno kompleksirajući agensi, kao što su ciklodekstrini, dvo- ili multivalentne metalne soli, kao što su soli kalcijuma, magnezijuma ili aluminijuma, helatni agensi, kao što je etilendiaminotetrasirćetna kiselina uključujući njene soli, ili amfifilni agensi, kao što su fosfolipidi ili lecitin, mogu na sličan način produžiti oslobađanje aktivnog jedinjenja kao npr. polimerni ekscipijensi.

[0048] Tečna kompozicija prema pronalasku može dalje da sadrži farmaceutski prihvatljive ekscipijense, npr. osmotske agense, kao što su neorganske soli; ekscipijense za podešavanje i/ili puferovanje pH, kao što su organske ili neorganske soli, kiseline i baze, sredstva za povećanje zapremine i pomoćna sredstva za liofilizaciju, kao što su saharoza i laktoza, šećerne alkohole, kao što su manitol, sorbitol i ksilitol, stabilizatore i antioksidanse, kao što je vitamin E uključujući njegove derivate, likopen uključujući njegove derivate i askorbinsku kiselinu, jonske i nejonske surfaktante, kao što su fosfolipidi i polisorbati, agense za modifikaciju ukusa, dezintegranse, sredstva za bojenje, zaslađivače i/ili arome.

[0049] U jednoj od poželjnih realizacija, jedan ili više osmotskih agenasa, kao što je natrijum hlorid, su uključeni u preparat da bi se osmolalnost podesila na vrednost u poželjnom opsegu, kao što je gore navedeno. U poželjnijoj realizaciji, osmotski agens je natrijum hlorid.

[0050] Da bi se obezbedio aerosol koji se dobro podnosi, preparat prema pronalasku treba da bude podešen na euhidričnu pH vrednost. Termin "euhidrični" podrazumeva da može postojati razlika između farmaceutskih i fizioloških zahteva tako da mora da se pronađe kompromis koji, na primer, obezbeđuje da je, s jedne strane, preparat dovoljno stabilan tokom skladištenja, ali, s druge strane, i dalje se dobro podnosi. Poželjno, pH vrednost leži u blago kiselom do neutralnom regionu, tj. između 4 i 8. Generalno, odstupanja prema slabo kiselom miljeu se tolerišu bolje od alkalne promene. Posebno je poželjna kompozicija koja ima pH u opsegu od 4,5 i 7,5.

[0051] Za podešavanje pH preparata prema pronalasku i/ili puferovanje takvog preparata, mogu se koristiti fiziološki prihvatljive kiseline, baze, soli i njihove kombinacije. Pogodni ekscipijensi za snižavanje pH vrednosti i/ili kao kisele komponente puferskog sistema su jake mineralne kiseline, kao što su sumporna kiselina i hlorovodonična kiselina. Takođe se mogu koristiti neorganske i organske kiseline srednje jačine, kao što su fosforna kiselina, limunska kiselina, vinska kiselina, jantarna kiselina, fumarna kiselina, metionin, mlečna kiselina, sirćetna kiselina, glukuronska kiselina, kao i kisele soli, kao što su hidrogen fosfati sa natrijumom ili kalijumom. Pogodni ekscipijensi za podizanje pH vrednosti i/ili kao osnovne komponente puferskog sistema su mineralne baze, kao što je natrijum hidroksid, ili drugi alkalni i zemnoalkalni hidroksidi i oksidi, kao što su magnezijum hidroksid, kalcijum hidroksid ili bazične amonijumove soli, kao što su amonijum hidroksid, amonijum acetat ili bazne aminokiseline, kao što je lizin, ili karbonati, kao što su natrijum ili magnezijum karbonat, natrijum hidrogen karbonat, ili citrati, kao što je natrijum citrat.

[0052] U poželjnoj realizaciji, preparat prema pronalasku sadrži najmanje jedan ekscipijens za podešavanje pH. U poželjnijoj realizaciji, taj ekscipijens je natrijum hidroksid.

[0053] Uglavnom iz farmaceutskih razloga, može biti indikovana hemijska stabilizacija preparata prema pronalasku pomoću daljih aditiva. Najčešće reakcije razgradnje hemijski definisanog aktivnog jedinjenja u vodenim preparatima obuhvataju, posebno, reakcije hidrolize koje mogu biti ograničene primarno optimalnim podešavanjem pH, kao i reakcije oksidacije. Pošto aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) sadrži lizinski ostatak koji ima primarnu amino grupu, ova poslednja, na primer, može biti podložna oksidativnom napadu. Stoga, dodavanje antioksidansa, ili antioksidansa u kombinaciji sa sinergistom, može biti preporučljivo ili neophodno.

[0054] Antioksidansi su prirodne ili sintetičke supstance koje su sposobne da spreče ili inhibiraju oksidaciju aktivnog jedinjenja. Antioksidansi su prvenstveno pomoćna sredstva koja se oksidišu i/ili deluju kao redukcioni agensi, kao što su tokoferol acetat, likopen, redukovani glutation, katalaza, peroksid dismutaza. Dalji pogodni antioksidansi su, na primer, askorbinska kiselina, natrijum askorbat i druge soli i derivati askorbinske kiseline, npr. askorbil palmitat, fumarna kiselina i njene soli, jabučna kiselina i njene soli.

[0055] Sinergističke supstance su one koje ne deluju direktno kao reaktansi u oksidacionim procesima, ali koje se suprotstavljaju takvim procesima indirektnim mehanizmima, na primer, kompleksiranjem metalnih jona za koje je poznato da deluju katalitički u oksidacionim procesima. Etilendiamintetrasirćetna kiselina (EDTA) i njene soli i derivati, limunska kiselina i njene soli, jabučna kiselina i njene soli, su takve sinergističke supstance koje mogu delovati kao helatni agensi.

[0056] U jednoj od realizacija, preparat pronalaska sadrži najmanje jedan antioksidans. U sledećoj realizaciji, preparat sadrži i antioksidans i helirajući agens.

[0057] Kao što je gore pomenuto, preparat prema pronalasku može da sadrži ekscipijens koji utiče na ukus. Loš ukus je izuzetno neprijatan i iritantan, posebno pri inhalacionoj primeni, i može dovesti do ne-adherence, a samim tim i neuspeha terapije. Neprijatan ukus je percipiran od strane pacijenta kroz onaj deo aerosola koji se taloži u oralnom i faringealnom predelu tokom udisanja. Čak i ako se veličina čestica aerosola može optimizovati na takav način da samo mali deo preparata precipitira u gore pomenutim regionima (navedena frakcija je izgubljena za terapiju, osim ako oralna, faringealna ili nazalna sluznica nije ciljno tkivo) trenutno je teško moguće redukovati pomenutu frakciju do te mere da se više ne oseća loš ukus aktivnog jedinjenja. Stoga, poboljšanje ukusa preparata ili maskiranje ukusa aktivnog jedinjenja može biti ključno.

[0058] Da bi se poboljšao ukus preparata, može se uključiti jedan ili više potencijalno korisnih ekscipijenasa iz grupe šećera, šećernih alkohola, soli, aroma, kompleksirajućih agenasa, polimera, zaslađivača, kao što su natrijum saharin, aspartam, surfaktanti.

[0059] U poželjnoj realizaciji, preparat prema pronalasku sadrži najmanje jedan ekscipijens za modifikovanje ukusa. U poželjnijoj realizaciji, pomenuti ekscipijens za modifikovanje ukusa je natrijum saharin.

[0060] U drugoj realizaciji, preparat sadrži dalje aktivno jedinjenje, čija kombinacija sa aktivnim jedinjenjem ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) ima kombinovani ili, u idealnom slučaju, sinergistički terapeutski efekat.

[0061] U slučaju da tečna formulacija za aerosolizaciju možda nema dovoljno dugačak rok trajanja da bi poslužila kao pogodna formulacija za tržište, može biti korisno da se umesto toga obezbedi čvrst preparat. Takav čvrsti preparat generalno ima potencijal za duži rok trajanja u poređenju sa tečnom kompozicijom.

[0062] Čvrsti preparat prema pronalasku sadrži aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan ekscipijens. Uopšteno, mogu biti odabrani isti ekscipijensi, kao što je već prethodno opisano. U zavisnosti od proizvodnog procesa/metode čvrstog preparata, mogu biti korisni jedan ili više dodatnih ekscipijenasa. Ako je čvrsti preparat, na primer, pripremljen sušenjem zamrzavanjem (liofilizacijom), što je jedna od poželjnih metoda za pripremu takve čvrste kompozicije, može biti korisno da se uključi najmanje jedno sredstvo za povećanje zapremine i/ili pomoćno sredstvo za liofilizaciju, npr. šećer, kao što su saharoza, fruktoza, glukoza, trehaloza, ili šećerni alkohol, kao što su manitol, sorbitol, ksilitol, izomalt.

[0063] Čvrsti preparat je dalje okarakterisan po tome što je rastvorljiv ili disperzibilan u tečnom vodenom rastvaraču. Kao što je ovde definisano u opisu i zahtevima, izraz "rastvorljiv" znači da se čvrsta kompozicija i tečni vodeni rastvarač mogu kombinovati da bi se formirao rastvor ili koloidni rastvor, dok termin "disperzibilan" treba tumačiti tako da uključuje formiranje tečne disperzije, posebno emulzije i mikrosuspenzije. Izraz "vodeni" znači da je glavni tečni sastojak rastvarača voda. Treba izbegavati rastvarače i ko-rastvarače osim vode. U drugom izvođenju, tečni vodeni rastvarač sadrži najmanje 80 tež.% vode. U još jednom izvođenju, najmanje 90 tež.% tečnih sastojaka rastvarača je voda. Ako se inkorporiranje nevodenog rastvarača, kao što su etanol, glicerol, propilenglikol ili polietilenglikol, ne može izbeći, ekscipijens treba pažljivo odabrati i uzimajući u obzir njegovu fiziološku prihvatljivost i terapijsku upotrebu preparata. U skladu sa poželjnom realizacijom, preparat je u suštini bez nevodenih rastvarača. Ako se ne može izbeći inkorporiranje nevodenog rastvarača, kao što su etanol, glicerol, propilenglikol ili polietilenglikol, moraju se uzeti u obzir iste mere predostrožnosti, kao što je gore opisano. Prema drugom poželjnom izvođenju, vodeni rastvarač za rastvaranje ili dispergovanje čvrste kompozicije je u suštini bez nevodenih rastvarača.

[0064] Količina aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-lle-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli, u čvrstom preparatu odgovara koncentraciji u opsegu od oko 4 mg/mL do 100 mg/mL nakon rastvaranja ili disperzije u tečnom vodenom rastvaraču. Još poželjnije, količina gornjeg aktivnog jedinjenja, ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli, mora da odgovara koncentraciji u opsegu od 17 mg/mL do 95 mg/mL, ili 35 mg/mL do 95 mg /mL, respektivno, ili, još poželjnije, 70 mg/mL do 95 mg/mL, nakon rastvaranja ili disperzije u tečnom vodenom rastvaraču.

[0065] U daljoj realizaciji, suprotni jon aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-lle-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) u čvrstom preparatu je acetat.

[0066] Čvrsta kompozicija pronalaska za rekonstituciju može biti deo farmaceutskog kompleta. Takav komplet poželjno sadrži čvrstu kompoziciju u sterilnom obliku. Kako se ovde koristi u opisu i zahtevima, izrazi "sterilni" ili "sterilnost" su definisani u skladu sa uobičajenim farmaceutskim značenjem i stoga treba da budu shvaćeni kao odsustvo klica koje su sposobne za reprodukciju. Sterilnost se utvrđuje odgovarajućim testovima koji su definisani u relevantnim farmakopejama. Prema trenutnim naučnim standardima, nivo garancije sterilnosti (SAL) od 10<-6>, odnosno sigurnost manje od jedne šanse u milion da su održivi mikroorganizmi prisutni u sterilizovanom proizvodu), smatra se prihvatljivim za sterilne preparate. U praksi, stope kontaminacije mogu biti veće, a stope kontaminacije za aseptično proizvedene preparate mogu iznositi do 10<-3>. Iz praktičnih razloga, ostaje teško zahtevati sterilnost u apsolutnom smislu. Prema tome, sterilnost kompozicije pronalaska treba razumeti ovde u opisu i zahtevima na takav način da pomenuta kompozicija ispunjava zahteve relevantne farmakopeje u pogledu sterilnosti.

[0067] Čvrsta kompozicija pronalaska, može biti pripremljena obezbeđivanjem tečne kompozicije koja je slična tečnoj kompoziciji spremnoj za aerosolizaciju i naknadno sušenje, npr. liofilizacijom. Slično znači da tečna kompozicija od koje se čvrsta kompozicija priprema sušenjem možda ne sadrži sve čvrste sastojke tečne kompozicije spremne za upotrebu, na primer, u slučaju da je tečni nosač za rekonstituciju dizajniran da sadrži jedan ili više ekscipijenasa. Čak nije ni neophodno da su koncentracije sastojaka ove dve tečne kompozicije identične. Čvrsta kompozicija pronalaska može se čak pripremiti, na primer, obezbeđivanjem aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-lle-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli, i, opciono, najmanje jednog ekscipijensa, u praškastom obliku i zatim mešanjem takvog praška sa praškom koji sadrži preostale ekscipijense da bi se konačno formirala praškasta smeša.

[0068] U drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje farmaceutski komplet za pripremu i isporuku farmaceutskog aerosola za pulmonalnu primenu koji sadrži dispergovanu tečnu fazu i kontinuiranu gasnu fazu, pri čemu dispergovana tečna faza sadrži vodene kapljice koje sadrže aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ima srednji prečnik mase od 1,5 μm do 5 μm, i ima raspodelu veličine kapljica sa geometrijskom standardnom devijacijom od 1,2 do 1,7. Komplet je dalje okarakterisan time što sadrži aerosolni nebulizator i preparat koji sadrži koncentraciju aktivnog jedinjenja u opsegu od 4 mg/mL do 100 mg/mL, ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli; ili koji sadrži nebulizator i čvrsti farmaceutski preparat za pripremu tečne kompozicije, pri čemu kompozicija sadrži aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i gde je čvrsta kompozicija rastvorljiva ili disperzibilna u vodenom tečnom rastvaraču, i gde tečna kompozicija sadrži koncentraciju aktivnog jedinjenja u rasponu od 4 mg/mL do 100 mg/mL, ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0069] Nebulizatori su uređaji sposobni da raspršuju tečnosti. Poželjno, nebulizator iz kompleta pronalaska je izabran od mlaznih nebulizatora, ultrazvučnih nebulizatora, piezoelektronskih nebulizatora, nebulizatora mlaznog sudara, elektrohidrodinamičkih nebulizatora, nebulizatora kapilarne sile, nebulizatora sa perforiranom membranom i perforiranih vibracionih membranskih nebulizatora (M. Knoch, M. Keller, Expert Opin. Drug Deliv., 2005, 2, 377). Posebno su poželjni piezoelektrični, elektrohidrodinamički i/ili nebulizatori tipa perforirane membrane, npr. nebulizatori sa platforma za isporuku lekova Mystic™ (Battelle Pharma [Battelle Memorial Institute], Sjedinjene Američke Države), eFlow™ (Pari GmbH, Nemačka), Aeroneb™, Aeroneb Pro™, Aero Dose™ (Aerogen Inc, Sjedinjene Države). Ovi tipovi nebulizatora su posebno korisni ako se aerosol treba isporučiti do bronhija i/ili pluća.

[0070] Poželjno, nebulizator treba biti izabran ili prilagođen tako da bude sposoban da raspršuje tečnu kompoziciju pri brzini od najmanje 0,1 mL/min. Još poželjnije, nebulizator je sposoban za (ukupnu) izlaznu brzinu (brzinu kojom se aerosol emituje iz generatora aerosola) od najmanje 0,150 mL/min ili najmanje 150 mg/min za one tečne kompozicije gustine od kojih su - za praktične svrhe - blizu 1 g/mL, odnosno u opsegu od 0,95 g/mL do 1,05 g/mL. U daljim realizacijama, izlazna brzina nebulizatora je u opsegu od 200 mg/min do 700 mg/min, ili od 250 mg/min do 650 mg/min, respektivno.

[0071] Nebulizator takođe poželjno, treba izabrati ili prilagoditi tako da bude sposoban da raspršuje i emituje tečnu kompoziciju pri srednjoj brzini isporuke od najmanje 0,8 mg aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli, u minuti. (Srednja) brzina isporuke leka ili aktivnog jedinjenja je parametar za određivanje količine leka ili aktivnog jedinjenja koju pacijent može očekivati da dobije tokom perioda lečenja. U daljim realizacijama, nebulizator je izabran ili prilagođen da omogući srednju brzinu isporuke aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli, u opsegu od 3 mg u minuti do 25 mg u minuti ili u opsegu od 5 mg u minuti do 18 mg u minuti, respektivno.

[0072] U skladu sa daljom preferencom, nebulizator bi trebalo da bude izabran ili prilagođen tako da bude sposoban da raspršuje i emituje najmanje oko 70 tež.% napunjene doze aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli, dok je pomenuta frakcija inkorporirane doze sastavljena od kapljica koje imaju srednji prečnik mase ne veći od 5 μm. Frakcija dispergovane faze koja poseduje veličinu kapljica ne veću od oko 5 μm se često naziva kao respirabilna frakcija, pošto kapljice navedene veličine - za razliku od većih kapljica - imaju velike šanse da se deponuju u plućima, umesto traheje i ždrela. Još poželjnije, najmanje 80 tež.% doze napunjene u nebulizator se raspršuje u kapljice veličine ne veće od 5 μm i emituje iz uređaja. Takav uređaj se najbolje može izabrati korišćenjem, opciono prilagođenog, elektronskog nebulizatora zasnovanog na dizajnu vibrirajuće perforirane membrane, kao što je nebulizator sa platforme za isporuku lekova eFlow™ (Pari GmbH, Nemačka). Prema još poželjnijim realizacijama, najmanje 85 tež.% i 90 tež.%, respektivno, napunjene doze je raspršeno u kapljice veličine ne veće od 5 μm i ispušteno.

[0073] U drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje metodu za pripremu i isporuku aerosola za plućnu primenu, navedeni postupak obuhvata korake obezbeđivanja tečne farmaceutske kompozicije koja sadrži aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u koncentraciji u opsegu od oko 4 mg/mL do 100 mg/mL, ili obezbeđivanja čvrste farmaceutske kompozicije za pripremu tečne kompozicije, pri čemu kompozicija sadrži aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i gde je čvrsta kompozicija rastvorljiva ili disperzibilna u vodenom tečnom rastvaraču, i pri čemu tečna kompozicija sadrži koncentraciju u opsegu od 4 mg/mL do 100 mg/mL aktivnog jedinjenja, ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli, i obezbeđuje nebulizator sposoban za raspršivanje navedene tečne farmaceutske kompozicije pri srednjoj brzini isporuke od najmanje 0,8 mg aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u minuti, pri čemu je nebulizator dodatno prilagođen da emituje aerosol koji sadrži dispergovanu tečnu fazu koja poseduje srednji prečnik mase od 1,5 μm do 5 μm i raspodelu veličine kapljica koja ima geometrijsku standardnu devijacija od 1,2 do 1,7, i rukovanje nebulizatora za aerosolizaciju tečne farmaceutske kompozicije.

[0074] Kompozicija prema pronalasku, bilo da je tečna, prvobitno čvrsta ili konačno raspršena, ili farmaceutski komplet koji sadrži kompoziciju, može biti korišćen/a za prevenciju, kontrolisanje ili lečenje bolesti ili stanja pluća koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze, na primer, pulmonalne bolesti, kao što su nedostatak alfa-1 antitripsina (AATD), cistična fibroza (CF), bronhiektazije bez cistične fibroze (NCFB) ili hronična opstruktivna bolest pluća (COPD), ili infekcije pluća koje izazivaju bolesti ili stanja pluća, posredovane aktivnošću humane neutrofilne elastaze.

[0075] Kako se ovde koristi, izraz "prevencija"/"sprečavanje", npr. preventivni tretmani obuhvataju profilaktičke tretmane. U preventivnim primenama, farmaceutska kompozicija ili farmaceutski aerosol prema pronalasku se daje subjektu za koji se sumnja da ima, ili je pod rizikom od razvoja bolesti ili stanja pluća posredovanih od strane ili nastalih aktivnošću humane neutrofilne elastaze.

[0076] Kako se ovde koristi, izraz "upravljanje/kontrola" označava povećanje vremena do pojave simptoma bolesti ili stanja pluća posredovanih od strane ili nastalih aktivnošću humane neutrofilne elastaze ili znaka povezanog sa plućnim bolestima ili stanjima posredovanih pomoću ili koji su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze ili usporavanja povećanja ozbiljnosti simptoma bolesti ili stanja pluća koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze. Dalje, "kontrolisanje" kako se ovde koristi uključuje preokretanje ili inhibiciju progresije bolesti. "Inhibicija" progresije bolesti ili komplikacija bolesti kod subjekta znači sprečavanje ili smanjenje progresije bolesti i/ili komplikacija bolesti kod subjekta.

[0077] Izrazi "lečenje"/"lečiti" kako se ovde koriste uključuju: (1) odlaganje pojave kliničkih simptoma stanja, bolesti ili stanja koje se razvija kod životinje, posebno sisara i posebno čoveka, koji može biti pogođen ili predisponiran na stanje, bolest ili stanje, ali još ne doživljava ili ne ispoljava kliničke ili subkliničke simptome stanja, bolesti ili stanja; (2) inhibiranje stanja ili stanja (npr. zaustavljanje, smanjenje ili odlaganje razvoja bolesti, ili njenog recidiva u slučaju terapije održavanja, najmanje jednog njegovog kliničkog ili subkliničkog simptoma; i/ili (3) ublažavanje stanja (tj. izazivanje regresije stanja, bolesti ili stanja ili najmanje jednog od njegovih kliničkih ili subkliničkih simptoma). Korist za pacijenta koji se leči je statistički značajna ili je u najmanju ruku primetna za pacijenta ili za lekara. Međutim, biće cenjeno da kada se pacijentu daje lek za lečenje bolesti, ishod možda neće uvek biti efikasan tretman.

[0078] U terapijskim primenama, farmaceutska kompozicija se obično primenjuje kod subjekta kao što je pacijent koji već pati od bolesti ili stanja pluća koja su posredovana ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze, u količini dovoljnoj da izleči ili bar delimično zaustavi simptome bolesti ili stanja. Količine koje su efikasne za ovu upotrebu zavisiće od težine i toka bolesti, prethodne terapije, zdravstvenog statusa subjekta i odgovora na lekove, kao i od procene lekara koji leči.

[0079] U slučaju kada se stanje subjekta ne poboljša, farmaceutska kompozicija ili farmaceutski aerosol prema pronalasku mogu biti primenjivani hronično, što je, tokom produženog vremenskog perioda, uključujući i tokom celog života subjekta, u cilju poboljšanja ili na drugi način kontrolišu ili ograničavaju simptome bolesti ili stanja subjekta.

[0080] U slučaju kada se status subjekta poboljša, farmaceutska kompozicija ili farmaceutski aerosol mogu biti primenjivani kontinuirano; alternativno, doza lekova koja se primenjuje može biti privremeno smanjena ili privremeno suspendovana na određeno vreme (tj. "odmor od leka").

[0081] Kada je došlo do poboljšanja stanja pacijenta, ako je potrebno, primenjuje se doza održavanja farmaceutske kompozicije ili farmaceutskog aerosola prema pronalasku. Nakon toga, doziranje ili učestalost primene, ili oboje, opciono se smanjuju, kao funkcija simptoma, do nivoa na kome se zadržava poboljšana bolest.

[0082] Tako, u drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje farmaceutski preparat koji sadrži aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so; pri čemu OctG je (S)-2-aminodekanska kiselina;<D>Pro je D-prolin; i opciono jedan ili više farmaceutski prihvatljivih razblaživača, ekscipijenasa ili nosača, za upotrebu u postupku za prevenciju, kontrolu ili lečenje bolesti ili stanja pluća koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta, poželjno za upotrebu u postupku za lečenje bolesti ili stanja pluća posredovanih od strane ili nastalih aktivnošću humane neutrofilne elastaze kod subjekta.

[0083] Takođe je obezbeđena upotreba farmaceutske kompozicije, kako je ovde opisana, za proizvodnju leka za prevenciju, kontrolu ili lečenje bolesti ili stanja pluća posredovanih od strane ili nastalih aktivnošću humane neutrofilne elastaze kod subjekta, poželjno za proizvodnju leka za lečenje bolesti ili stanja pluća posredovanih od strane ili nastalih aktivnošću humane neutrofilne elastaze kod subjekta.

[0084] Takođe je obezbeđena upotreba farmaceutske kompozicije, kao što je ovde opisano, za prevenciju, kontrolu ili lečenje bolesti ili stanja pluća posredovanih od strane ili nastalih aktivnošću humane neutrofilne elastaze kod subjekta, poželjno za lečenje bolesti ili stanja pluća posredovanih od strane ili nastalih aktivnošću humane neutrofilne elastaze kod subjekta.

[0085] Takođe je obezbeđena metoda za prevenciju, kontrolu ili lečenje bolesti ili stanja pluća koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta, poželjno metoda za lečenje bolesti ili stanja pluća posredovanih od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta, koja obuhvata primenu farmaceutske kompozicije kod pomenutog subjekta, kako je ovde opisano, npr. primenu terapeutski efikasne količine farmaceutske kompozicije kod pomenutog subjekta, kao što je ovde opisano.

[0086] Izraz "farmaceutski prihvatljiv razblaživač, ekscipijens ili nosač" kako se ovde koristi odnosi se na nosača ili ekscipijensa ili razblaživača koji je pogodan za upotrebu kod ljudi i/ili životinja bez nepotrebnih neželjenih efekata (kao što su toksičnost, iritacija i alergijski odgovor) srazmerno sa razumnim odnosom korist/rizik. On može biti farmaceutski prihvatljiv rastvarač, agens za suspendovanje ili vehikulum, za momentalnu isporuku jedinjenja kod subjekta.

[0087] Određivanje terapeutski efikasne količine je u granicama mogućnosti stručnjaka iz ove oblasti tehnike, posebno u svetlu detaljnog otkrivanja, ovde datog. U nekim realizacijama, terapeutski efikasna količina aktivnog jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, može (i) smanjiti koncentraciju aktivne elastaze u sputumu subjekta, ii) može inhibirati aktivnost humane neutrofilne elastaze u sputumu subjekta. U različitim realizacijama, količina je dovoljna da poboljša, ublaži, smanji i/ili odloži jedan ili više simptoma bolesti ili stanja pluća posredovanih od strane ili nastalih aktivnošću humane neutrofilne elastaze kod subjekta.

[0088] Terapeutski efikasna količina može da varira u zavisnosti od subjekta, bolesti ili stanja koje se leči, težine i starosti subjekta, težine bolesti ili stanja i načina primene, što može lako biti određeno od strane prosečnog stručnjaka u ovoj oblasti tehnike.

[0089] U jednoj realizaciji, bolesti ili stanja pluća koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze su pulmonalne bolesti, kao što su nedostatak alfa-1 antitripsina (AATD), cistična fibroza (CF), bronhiektazije bez cistične fibroze (NCFB) ili hronična opstruktivna plućna bolest (COPD), ili infekcije pluća koje izazivaju bolesti ili stanja pluća, posredovane aktivnošću humane neutrofilne elastaze.

[0090] U poželjnom izvođenju, bolesti ili stanja pluća koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze su pulmonalne bolesti, pri čemu su pulmonalne bolesti bronhiektazije koja nije cistična fibroza (NCFB) ili cistična fibroza (CF).

[0091] U poželjnijoj realizaciji, bolesti ili stanja pluća koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze su pulmonalne bolesti, pri čemu je pulmonalna bolest cistična fibroza (CF).

[0092] U jednoj realizaciji, aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koja njegova farmaceutski prihvatljiva so, primenjeno/a je kod subjekta u obliku farmaceutskog aerosola za pulmonalnu primenu koji se sastoji od dispergovane tečne faze i kontinuirane gasne faze, pri čemu dispergovana tečna faza

(a) sadrži vodene kapljice koje sadrže aktivno jedinjenje

ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-);

ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so; pri čemu

OctG je (S)-2-aminodekanska kiselina;

<D>Pro je D-prolin;

(b) ima srednji dijametar mase od 1,5 μm do 5 μm; i

(c) ima raspodelu veličine kapljica sa geometrijskom standardnom devijacijom od 1,2 do 1,7.

[0093] Poželjno je da se aerosol emituje iz generatora aerosola brzinom od najmanje 0,1 mL dispergovane tečne faze u minuti.

[0094] Jednako poželjno je da se aerosol emituje iz generatora aerosola pri srednjoj brzini isporuke od najmanje 0,8 mg aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-); ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli; po minuti.

[0095] Aerosol se poželjno emituje iz generatora aerosola brzinom i srednjom brzinom isporuke kao što je iznad opisano u poželjnim realizacijama.

[0096] U jednoj realizaciji, farmaceutska kompozicija za upotrebu u postupku za prevenciju, kontrolu ili lečenje bolesti ili stanja pluća koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta, je tečna farmaceutska kompozicija za pripremu aerosola kao što je ovde opisano, gde tečna farmaceutska kompozicija sadrži aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u koncentraciji u opsegu od 4 mg/mL do 100 mg/mL, poželjno, u opsegu od 17 mg/mL do 95 mg/mL, ili 35 mg/mL do 95 mg/mL, respektivno, i poželjnije, u opsegu od 70 mg/mL do 95 mg/mL.

[0097] U drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje farmaceutski aerosol za pulmonalnu primenu koji sadrži dispergovanu tečnu fazu i kontinuiranu gasnu fazu, pri čemu dispergovana tečna faza

(a) sadrži vodene kapljice koje sadrže aktivno jedinjenje

ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-); ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so; pri čemu

OctG je (S)-2-aminodekanska kiselina;

<D>Pro je D-prolin;

(b) ima srednji dijametar mase od 1,5 μm do 5 μm; i

(c) ima raspodelu veličine kapljica sa geometrijskom standardnom devijacijom od 1,2 do 1,7, za upotrebu u metodi za prevenciju, kontrolu ili lečenje bolesti ili stanja pluća koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta.

[0098] Aerosol se poželjno emituje iz generatora aerosola brzinom i srednjom brzinom isporuke kao što je opisano u prethodnim poželjnim realizacijama.

[0099] Takođe je obezbeđena upotreba farmaceutskog aerosola, kao što je ovde opisano, za proizvodnju leka za prevenciju, kontrolu ili lečenje bolesti ili stanja pluća koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta, poželjno za proizvodnju leka za lečenje bolesti ili stanja pluća koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta.

[0100] Takođe je obezbeđena upotreba farmaceutskog aerosola, kao što je ovde opisano, za prevenciju, kontrolu ili lečenje bolesti ili stanja pluća koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta, poželjno za lečenje bolesti ili stanja pluća posredovanih ili nastalih aktivnošću humane neutrofilne elastaze kod subjekta.

[0101] Takođe je obezbeđena metoda za prevenciju, kontrolu ili lečenje bolesti ili stanja pluća koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta, poželjno metoda za lečenje bolesti ili stanja pluća posredovanih ili nastalih aktivnošću humane neutrofilne elastaze kod subjekta, koji obuhvata primenu farmaceutskog aerosola kod pomenutog subjekta, kao što je ovde opisano, npr. primenu terapeutski efikasne količine farmaceutskog aerosola kod pomenutog subjekta, kao što je ovde opisano.

[0102] U jednoj realizaciji, bolesti ili stanja pluća koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze su plućne bolesti kao što su nedostatak alfa-1 antitripsina (AATD), cistična fibroza (CF), bronhiektazije bez cistične fibroze (NCFB) ili hronična opstruktivna plućna bolest (COPD), ili infekcije pluća koje izazivaju bolesti ili stanja pluća, posredovane aktinošću humane neutrofilne elastaze.

[0103] U poželjnoj realizaciji, bolesti ili stanja pluća koja su posredovana ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze su pulmonalne bolesti, gde su pulmonalne bolesti bronhiektazije koje nisu cistična fibroza (NCFB) ili cistična fibroza (CF).

[0104] U poželjnijoj realizaciji bolesti ili stanja pluća koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze su plućne bolesti, pri čemu je plućna bolest cistična fibroza (CF).

[0105] Suprotni jon aktivnog jedinjenja farmaceutske kompozicije ili farmaceutskog aerosola za upotrebu u postupku za prevenciju, kontrolu ili lečenje bolesti ili stanja pluća posredovanih od strane ili nastalih aktivnošću humane neutrofilne elastaze kod subjekta je kao što je opisano za gornje aktivno jedinjenje i poželjno je acetat.

[0106] Farmaceutska kompozicija ili farmaceutski aerosol za upotrebu u postupku za prevenciju, kontrolu ili lečenje bolesti ili stanja pluća koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta obično se primenjuju kod subjekta oralnom inhalacijom ili intratrahealno, poželjno oralnom inhalacijom.

[0107] Režim doziranja aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli, obuhvaćen farmaceutskim preparatom ili farmaceutskim aerosolom, u metodama ovde obezbeđenim, može da varira u zavisnosti od indikacije, načina primene i težine stanja, na primer. U zavisnosti od načina primene, odgovarajuća doza se može izračunati prema telesnoj težini, površini tela ili veličini organa. Dodatni faktori koji se mogu uzeti u obzir uključuju vreme i učestalost primene, kombinacije lekova, osetljivost reakcije i toleranciju/odgovor na terapiju. Količina, npr. terapeutski efikasna količina aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, može biti obezbeđena u pojedinačnoj dozi ili višestrukim dozama da bi se postigao željeni krajnji cilj lečenja.

[0108] Učestalost doziranja će zavisiti od farmakokinetičkih parametara primenjenog aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koje farmaceutski prihvatljive soli, načina primene i određene bolesti koja se leči. Doza i učestalost doziranja mogu takođe zavisiti od farmakokinetike i farmakodinamike, kao i podataka o toksičnosti i terapijskoj efikasnosti. Na primer, farmakokinetičke i farmakodinamičke informacije o aktivnom jedinjenju ili njegovoj farmaceutski prihvatljivoj soli, mogu se prikupiti kroz pretkliničke in vitro i in vivo studije, kasnije potvrđene na ljudima tokom kliničkih ispitivanja. Stoga, za aktivno jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, korišćenu u metodama koje su ovde obezbeđene, terapeutski efikasna doza se može inicijalno proceniti iz biohemijskih i/ili testova zasnovanih na ćelijama. Zatim, doza se može formulisati u životinjskim modelima da bi se postigao željeni opseg cirkulišućih koncentracija. Kako su sprovedene humane studije, pojaviće se dalje informacije o odgovarajućim nivoima doziranja i trajanju lečenja za različite bolesti i stanja.

[0109] Toksičnost i terapeutska efikasnost aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli, može se odrediti pomoću standardnih farmaceutskih procedura na ćelijskim kulturama ili eksperimentalnim životinjama, npr. , za određivanje LD50(letalne doze za 50% populacije) i ED50(doza koja je terapeutski efikasna za 50% populacije). Odnos doze između toksičnih i terapeutskih efekata je "terapijski indeks", koji se obično izražava kao odnos LD50/ED50. Poželjna su jedinjenja koja pokazuju velike terapijske indekse, tj. toksična doza je znatno veća od efikasne doze. Podaci dobijeni iz takvih testova ćelijskih kultura i dodatnih studija na životinjama, mogu se koristiti u formulisanju raspona doza za humanu upotrebu. Doze takvih jedinjenja su poželjno unutar opsega cirkulišućih koncentracija koje uključuju ED50sa malo ili odsustvom toksičnosti.

[0110] Primerni režim lečenja podrazumeva primenu jednom dnevno, dva puta dnevno, tri puta dnevno, svaki dan, svaki drugi dan, svaki treći dan, svaki četvrti dan, svaki peti dan, svaki šesti dan, dva puta nedeljno, jednom nedeljno. Aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-lle-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koja njegova farmaceutski prihvatljiva so, se obično primenjuje u više navrata. Intervali između pojedinačnih doza mogu biti, na primer, manji od jednog dana, dana, dva dana, tri dana, četiri dana, pet dana, šest dana ili nedelje. Kombinacija prema pronalasku se može primenjivati kao kontinuirani tretman bez prekida. Kombinacija pronalaska se takođe može primenjivati u režimu u kome subjekt prima cikluse lečenja (cikluse primene) prekinute pauziranjem leka ili periodom bez lečenja.

[0111] U jednoj realizaciji, aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koja njegova farmaceutski prihvatljiva so, farmaceutskog preparata ili farmaceutskog aerosola za upotrebu u postupku za prevenciju, kontrolu ili lečenje bolesti ili stanja pluća posredovanih od strane ili nastalih aktivnošću humane neutrofilne elastaze kod subjekta je primenjeno/a subjektu u dozi između 0,1 i 10000 mg/dan.

[0112] U jednoj realizaciji, aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-lle-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koja njegova farmaceutski prihvatljiva so, farmaceutske kompozicije ili farmaceutskog aerosola za upotrebu u postupku za prevenciju, kontrolu ili lečenje bolesti ili stanja pluća koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta je primenjeno/a subjektu u dozi između 0,001 i 100 mg /kg.

[0113] U jednoj realizaciji, aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koja njegova farmaceutski prihvatljiva so, farmaceutske kompozicije ili farmaceutskog aerosola za upotrebu u postupku za prevenciju, kontrolu ili lečenje bolesti ili stanja pluća posredovanih od strane ili nastalih aktivnošću humane neutrofilne elastaze kod subjekta je primenjeno/a subjektu u dozi između 5 i 1000 mg/ dan.

[0114] U jednoj realizaciji, aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koja njegova farmaceutski prihvatljiva so, farmaceutske kompozicije ili farmaceutskog aerosola za upotrebu u postupku za prevenciju, kontrolu ili lečenje bolesti ili stanja pluća posredovanih od strane ili nastalih aktivnošću humane neutrofilne elastaze kod subjekta je primenjeno/a subjektu u dozi između 20 i 960 mg/ dan.

[0115] U jednoj realizaciji, aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koja njegova farmaceutski prihvatljiva so, farmaceutske kompozicije ili farmaceutski aerosol za upotrebu u postupku za prevenciju, kontrolu ili lečenje bolesti ili stanja pluća posredovanih od strane ili nastalih aktivnošću humane neutrofilne elastaze kod subjekta se primenjuje subjektu u dozi između oko 80 i oko 320 mg/ dan.

[0116] U jednoj realizaciji, aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koja njegova farmaceutski prihvatljiva so, farmaceutskog preparata ili farmaceutskog aerosola za upotrebu u metodi za prevenciju, kontrolu ili lečenje bolesti ili stanja pluća posredovanih od strane ili nastalih aktivnošću humane neutrofilne elastaze kod subjekta se primenjuje kod subjekta u dozi od 20, 60, 120, 240, 480 ili 960 mg/dan.

[0117] U jednoj realizaciji, aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-lle-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koja njegova farmaceutski prihvatljiva so, farmaceutske kompozicije ili farmaceutskog aerosola za upotrebu u postupku za prevenciju, kontrolu ili lečenje bolesti ili stanja pluća posredovanih od strane ili nastalih aktivnošću humane neutrofilne elastaze kod subjekta je primenjeno/a subjektu u dozi od 80, 160, ili 320 mg/dan.

[0118] U drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje komplet za pripremu i isporuku farmaceutskog aerosola za plućnu primenu koji sadrži dispergovanu tečnu fazu i kontinuiranu gasnu fazu, pri čemu dispergovana tečna faza

(a) sadrži vodene kapljice koje sadrže aktivno jedinjenje

ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-);

ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so; pri čemu

OctG je (S)-2-aminodekanska kiselina;

<D>Pro je D-prolin;

(b) ima srednji dijametar mase od 1,5 μm do 5 μm; i

(c) ima raspodelu veličine kapljica sa geometrijskom standardnom devijacijom od 1,2 do 1,7;

i gde komplet sadrži nebulizator i tečnu kompoziciju koja sadrži koncentraciju aktivnog jedinjenja u opsegu od 4 mg/mL do 100 mg/mL; ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli;

ili sadrži nebulizator i čvrstu farmaceutsku kompoziciju za pripremu tečne kompozicije, pri čemu kompozicija sadrži aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-); ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so; i gde je čvrsta kompozicija rastvorljiva ili disperzibilna u vodenom tečnom rastvaraču, i gde tečna kompozicija sadrži koncentraciju u opsegu od 4 mg/mL do 100 mg/mL aktivnog jedinjenja; ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli, za upotrebu u postupku za prevenciju, upravljanje ili lečenje bolesti ili stanja pluća koja su posredovana ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta.

[0119] Takođe je obezbeđena upotreba kompleta, kao što je ovde opisano, za proizvodnju leka za prevenciju, kontrolu ili lečenje bolesti ili stanja pluća koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta, poželjno za proizvodnju leka za lečenje bolesti ili stanja pluća koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta.

[0120] Takođe je obezbeđena upotreba kompleta, kako je ovde opisano, za prevenciju, upravljanje ili lečenje bolesti ili stanja pluća koja su posredovana od strane ili su rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta, poželjno za lečenje bolesti ili stanja pluća posredovanih ili nastalih kao rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta.

[0121] Takođe je obezbeđena metoda za prevenciju, upravljanje ili lečenje bolesti ili stanja pluća posredovanih ili nastalih kao rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta, poželjno metoda za lečenje bolesti ili stanja pluća posredovanih ili nastalih kao rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta, koja obuhvata primenu farmaceutskog aerosola iz kompleta kod pomenutog subjekta, kako je ovde opisano, npr. primenu terapeutski efikasne količine farmaceutskog aerosola iz kompleta kod pomenutog subjekta, kao što je ovde opisano.

[0122] U jednoj realizaciji, nebulizator iz kompleta za upotrebu u postupku za prevenciju, upravljanje ili lečenje bolesti ili stanja pluća posredovanih ili nastalih kao rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta je izabran iz grupe koju čine mlazni nebulizatori, ultrazvučni nebulizatori, piezo elektronski nebulizatori, mlazni kolizioni raspršivači, elektrohidrodinamički nebulizatori, nebulizatori kapilarne sile, nebulizatori sa perforiranom membranom i nebulizatori sa perforiranim vibrirajućim membranama.

[0123] U jednoj realizaciji, nebulizator iz kompleta za upotrebu u postupku za prevenciju, upravljanje ili lečenje bolesti ili stanja pluća posredovanih ili nastalih kao rezultat aktivnosti humane neutrofilne elastaze kod subjekta je prilagođen da bude sposoban za raspršivanje tečnog preparata brzinom od najmanje 0,8 mg aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-); ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli; po minuti.

[0124] U jednoj realizaciji, najmanje 70 tež.% napunjene doze aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bile koje njegove farmaceutski prihvatljive soli, sadržane u kompletu, sastoji se od kapljica srednjeg prečnika mase ne više od 5 μm.

[0125] U jednoj realizaciji, suprotni jon aktivnog jedinjenja sadržanog u kompletu je kao što je opisano za aktivno jedinjenje iznad i poželjno je acetat.

[0126] U drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje komplet koji sadrži aktivno jedinjenje

ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so; pri čemu

OctG je (S)-2-aminodekanska kiselina;

<D>Pro je D-prolin;

i dodatak u pakovanju gde dodatak u pakovanju sadrži uputstva za lečenje subjekta upotrebom aktivnog jedinjenja za bolesti ili stanja pluća koja su posredovana ili nastala aktivnošću humane neutrofilne elastaze.

[0127] U jednoj realizaciji, komplet sadrži aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so, kao aerosol za pulmonalnu primenu koji sadrži dispergovanu tečnu fazu i kontinuiranu gasnu fazu, pri čemu dispergovana tečna faza

(a) sadrži vodene kapljice koje sadrže aktivno jedinjenje

ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-); ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so;

(b) ima srednji dijametar mase od 1,5 μm do 5 μm; i

[0128] U jednoj realizaciji, najmanje 70 tež.% napunjene doze aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli, sadržane u kompletu je sastavljeno od kapljica koje poseduju srednji maseni dijametar koji nije viši od 5 μm.

[0129] U jednoj realizaciji, suprotni jon aktivnog jedinjenja sadržanog u kompletu je kao što je opisano za aktivno jedinjenje iznad i poželjno je acetat.

[0130] Sledeći primeri ilustruju sadašnji pronalazak, ali ih ne treba tumačiti kao da ograničavaju njegov obim na bilo koji način.

Primeri

Primer 1:

[0131] 248,18 g acetatne soli ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) na osnovu neto sadržaja peptida od 93,03% (videti proračun ispod) i koji odgovara 230,88 g neto peptida, rastvoreni su u 0,5% (m/m) vodenom rastvoru natrijum hlorida. pH rastvora je podešen na 5,5 sa 154 g 1 M natrijum hidroksida i na kraju je dodat 0,5% (m/m) vodeni rastvor natrijum hlorida do ukupne težine od 2957 g. Nakon sterilne filtracije kroz filtere veličine pora 2 x 0,22 μm, proizvod je upakovan staklene bočice tipa 1 Ph. Eur. sa čepovima od bromobutil gume obložene fluoropolimerom i ravnim aluminijumskim poklopcima koji se odvajaju. Jačina rastvora je bila 80 mg/mL.

[0132] Proračun neto peptidnog sadržaja lekovite supstance (aktivno jedinjenje):

Neto sadržaj peptida [%] = [(100 - nečistoća [%]/100) x (100 - sadržaj vode [%]/100) x (100 - rezidualni rastvarač [%]/100) x (100 - ostatak TFA/100) x slobodna so [%]/100] x 100 = [(100 - 0,7/100) x (100 - 2,5/100) x (100 - 0,013/ 100) x 96,1/100] x 100 = 93,03% Primer 2:

[0133] Formulacija Primera 2 je pripremljena kao što je opisano u Primeru 1 osim što je korišćen 0,6% (m/m) vodeni rastvor natrijum hlorida.

Primer 3:

[0134] 4,2 g acetatne soli ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) korigovane za čistoću od 95% rastvoreno je u 40 mL 0,6% (m/m) vodenog rastvora natrijum hlorida. pH rastvora je podešen na 5,5 sa 1 M natrijum hidroksidom i na kraju je dodat 0,6% (m/m) rastvor natrijum hlorida do ukupne zapremine od 50 mL. Nakon sterilne filtracije pod aseptičnim uslovima (laminarni protok vazduha) korišćenjem PES (polietarsulfonskog) 0,2 μm filtera za špric, formulacija je alikvotirana u sterilne bočice od 5 mL sa sterilnim teflonskim gumenim čepovima i čuvana u frižideru na 5 ± 3 °C i sobnoj temperaturi (25 ± 2 °C), respektivno. Jačina rastvora je bila 80 mg/mL. Tokom 12 nedelja posmatrana je stabilnost rastvora. Fizičko-hemijski parametri (Tabela 1) i karakteristike aerosola (Tabela 2) od aerosola pripremljenog i isporučenog elektronskim nebulizatorom eFlow<®>30 XL (Pari Pharma GmbH, Starnberg, Nemačka) određeni su na početku i na kraju perioda posmatranja. Fizičkohemijska karakterizacija i određivanje karakteristika aerosola (laserska difrakcija sa uređajem Malvern Mastersizer X, V2.15, [Malvern Instruments GmbH, Herrenberg, Nemačka]), izvršeno je od strane Pari Pharma GmbH, BU Pharma, Grafeling, Nemačka, prema metodama u skladu sa farmakopejom.

Tabela 1: Fiziohemijska svojstva formulacije iz Primera 3

[0135] Fizičko-hemijska svojstva gornje formulacije ostaju nepromenjena tokom 12 nedelja na 5 °C i 25 °C, respektivno.

Tabela 2: Karakteristike aerosola formulacije iz Primera 3, određene u triplikatu

[0136] Tokom čuvanje od 12 nedelja na 5 °C i 25 °C, respektivno, nema značajnih (P = 95%, n = 3) promena u prečniku medijane mase, uočene su geometrijska standardna devijacija i respirabilna frakcija (< 5 μm). Samo je ukupna izlazna brzina uzorka na 5 °C bila blago smanjena.

Primer 4:

[0137] 1,05 g acetatne soli ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) korigovane za čistoću od 95% je rastvoreno u 0,9% (m/m) vodenom rastvoru natrijum hlorida da bi se dobila ukupna zapremina od 10 mL. Jačina rastvora je bila 100 mg/mL. Fizičko-hemijski parametri (Tabela 3) i karakteristike aerosola (Tabela 4) aerosola pripremljenog i isporučenog elektronskim nebulizatorom eFlow<®>30 XL su propisani od strane Pari Pharma GmbH, BU Pharma, Grafeling, Nemačka, kao što je gore objašnjeno.

Tabela 3: Fiziohemijska svojstva formulacije iz Primera 4

Tabela 4: Karakteristike aerosola formulacije iz Primera 4, određene u triplikatu

Primer 5:

[0138] 1,05 g acetatne soli ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) korigovane za čistoću od 95% rastvoreno je u 0,9% (m/m) vodenom rastvoru natrijum hlorida da se dobije ukupna zapremina od 10 mL. Zatim je dodato 0,02% (m/m) polisorbata 80. Jačina rastvora je bila 100 mg/mL. Fizičko-hemijski parametri (Tabela 5) i karakteristike aerosola (Tabela 6) aerosola pripremljenog i isporučenog elektronskim nebulizatorom eFlow<®>30 XL su utvrđeni od strane Pari Pharma GmbH, BU Pharma, Grafeling, Nemačka, kao što je iznad objašnjeno.

Tabela 5: Fiziohemijska svojstva formulacije iz Primera 5

Tabela 6: Karakteristike aerosola formulacije iz Primera 5, određene u triplikatu

Primer 6a - e:

[0139] 5,4 g acetatne soli ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) na osnovu neto sadržaja peptida od 93,03% (videti proračun iznad) i koji odgovara 5,023 g neto peptida, rastvoreni su u 0,5% (m/m) vodenom rastvoru natrijum hlorida. pH rastvora je podešen na 5,5 sa 1 M natrijum hidroksidom i na kraju je dodat 0,5% (m/m) rastvor natrijum hlorida do ukupne zapremine od 71,8 mL. Jačina rastvora je bila 70 mg/mL (Primer 6a).

[0140] Razblaženi rastvori sa jačinama od 35 mg/mL (Primer 6b), 17,4 mg/mL (Primer 6c), 8,8 mg/mL (Primer 6d) i 4,3 mg/mL (Primer 6e) pripremljeni su sa placebom (0,5% [m/m] vodeni rastvor natrijum hlorida) prema tabeli 7.

Tabela 7: Šema pripreme razblaženih rastvora iz Primera 6b, 6c, 6d i 6e

Primer 6f:

[0141] Formulacija iz Primera 6f je pripremljena prema postupku opisanom u Primeru 1. Jačina rastvora je bila 80 mg/mL.

Određivanje brzina isporuka (srednje vrednosti) i ukupno isporučenih doza iz

Primera 6a, 6c, 6e i 6f

[0142] Određivanje brzina isporuka i ukupno isporučenih doza je izvršeno od strane Intertek Melbourn Scientific (Melburn, UK) u triplikatu za formulacije od 70 mg/mL (Primer 6a), 17,4 mg/mL (Primer 6c) i 4,3 mg/mL (Primer 6e) i u kvintiplikatu za formulaciju od 80 mg/mL (Primer 6f) korišćenjem uređaja Pari eFlow<®>XL 30 (Pari Pharma, Starnberg, Nemačka) i odgovarajuće metode usaglašene sa farmakopejom za navedeno određivanje formulacija koje sadrže acetatnu so ciklo(- OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-lle-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-).

[0143] Rezultati (srednje vrednosti) su sumirani u tabeli 8.

Tabela 8: Brzine isporuke i ukupno isporučenih doza iz primera 6a, 6c, 6e i 6f

Određivanje aerodinamičke raspodele veličine čestica (APSD) iz

Primera 6a, 6c, 6e i 6f

[0144] Određivanje APSD-a je izvedeno od strane Intertek Melbourn Scientific (Melburn, UK) u triplikatu za formulacije od 70 mg/mL (Primer 6a), 17,4 mg/mL (Primer 6c) i 4,3 mg/mL (Primer 6e), i u kvintiplikatu za Formulacija od 80 mg/mL (Primer 6f) korišćenjem Next Generation Impactor (NGI), uređaja Pari eFlow<®>XL 30 (Pari Pharma, Starnberg, Nemačka) i odgovarajuće metode usaglašene sa farmakopejom za APSD formulacija koje sadrže acetatnu so ciklo (-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-).

[0145] Rezultati (srednje vrednosti) su sumirani u tabeli 9.

Tabela 9: Određivanje aerodinamičke raspodele veličine čestica (APSD) iz primera 6a, 6c, 6e i 6f

[0146] Iz gore navedenih rezultata, nisu primećene značajne promene u performansama rastvora različite jačine u prikazanom opsegu, osim efekta smanjene koncentracije na ukupne vrednosti leka.

GLP-usaglašena 28-dnevna studija inhalacione toksičnosti kod pacova

[0147] U 28-dnevnoj studiji inhalacione toksičnosti na pacovima u skladu sa GLP-om, koju je sprovela Charles River Laboratories Preclinical Services, Tranent, Edinburg, UK, formulacija opisana u Primeru 2 i njena razblaženja, kao i vehikulum su primenjeni korišćenjem uređaja Pari eFlow<®>XL 30 nebulizatora (Pari Pharma, Starnberg, Nemačka) u trajanju od 100 minuta dnevno tokom 28 dana, nakon čega je usledio period oporavka od 2 nedelje. Pacovi su tretirani sa nosačem (0,6% [m/m] vodenog rastvora natrijum hlorida podešenog na pH 5,5 sa 1 M HCl farmaceutskog kvaliteta) ili aerosolima koji sadrže 0,15, 0,73 i 1,63 mg/L ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-), što odgovara ukupnoj srednjoj grupi koja je postigla doze leka od 0, 11, 53 i 119 mg/kg/dan, respektivno. Deset životinja je korišćeno za glavnu studiju toksičnosti, a 5 dodatnih životinja za fazu oporavka. Procenjeni parametri su uključivali kliničke znake, telesnu težinu, konzumaciju hrane, oftalmološki pregled, kliničku patologiju, grube nalaze obdukcije, težinu organa i histopatološke preglede. Blago redukovano povećanje telesne težine primećeno je kod muškaraca pri dozi od 119 mg/kg/dan u poređenju sa kontrolnom grupom sa nosačem. Ovo je bilo povezano sa smanjenjem konzumiranja hrane kod tretiranih životinja. Došlo je do dobrog oporavka u povećanju telesne težine tokom perioda oporavka između 28. i 42. dana. Nije bilo kliničkih znakova ili oftalmoloških nalaza.

[0148] Nije bilo nalaza u kliničkoj patologiji (hematologija, koagulacija, kliničko-hemijska i analiza urina) koji se smatraju toksikološki relevantnim. Nije bilo promena u težini organa ili grubih nalaza u vezi sa lečenjem nakon terapije lekom. Histopatologija larinksa je pokazala fokalnu minimalnu skvamoznu metaplaziju bez ćelijske atipije displazije u svim grupama. Ove promene su rešene tokom perioda oporavka i smatrale su se kao, prilagodljiv odgovor koji nije neželjeni na blagu iritaciju. Histopatologija pluća otkrila je minimalnu do umerenu multifokalnu akumulaciju alveolarnih makrofaga u svim grupama. Ovo blago povećanje akumulacije makrofaga smatralo se nespecifičnim odgovorom na inhalaciju visokih koncentracija materijala koji premašuju kapacitet klirensa pluća. U zaključku, nivo bez uočenih štetnih efekata (NOAEL) bio je 119 mg/kg/dan pošto se promene u povećanju telesne težine i unosu hrane i histopatološki nalazi u larinksu smatraju onima koje nisu neželjene.

GLP-usaglašena 28-dnevna studija inhalacione toksičnosti kod majmuna

[0149] U 28-dnevnoj studiji inhalacione toksičnosti u skladu sa GLP-om kod majmuna cinomolgus, koju je sprovela Charles River Laboratories Preclinical Services, Tranent, Edinburg, UK, formulacija opisana u primeru 2 i njena razblaženja, kao i vehikulum su primenjeni korišćenjem uređaja Pari eFlow<®>XL 30 nebulizatora (Pari Pharma, Starnberg, Nemačka) sa maskom za oro-nazalnu inhalaciju u trajanju od 60 minuta dnevno tokom 28 dana, nakon čega je usledio period oporavka od 2 nedelje. Majmuni su tretirani vehikulumom (0,6% [m/m] vodenog rastvora natrijum hlorida podešenog na pH 5,5 sa 1 M HCl farmaceutskog kvaliteta) ili aerosolizovanom acetatnom soli ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) koja odgovara procenjenim srednjim postignutim dozama leka od 0, 11,2, 30,1 i 112 mg/kg/dan, respektivno. Ukupno je korišćeno pet mužjaka i pet ženki za svaku dozu studije toksičnosti uključujući oporavak. Procenjeni parametri su uključivali kliničke znake, telesnu težinu, elektrokardiologiju, oftalmološki pregled, kliničku patologiju, toksikokinetičke parametre u plazmi, grube obdukcione nalaze, težinu organa i histopatološke preglede. Nije bilo promena telesne težine, kliničkih znakova, oftalmoloških ili elektrokardiografskih nalaza ili promena urinarnih parametara koje se mogu pripisati lečenju lekom. U hematološkoj i kliničkoj patologiji uočene su neke manje, toksikološki beznačajne promene. Nijedan od ovih nalaza se nije smatrao toksikološki važnim, pošto je veličina odgovora bila mala, a većina nalaza je bila ograničena na jedan pol i/ili je pokazala regresiju kada su oba pola bila pogođena. Grubi nalazi su uključivali povećanu težinu pluća kod mužjaka pri 112 mg/kg/dan, i jednu životinju sa mrljastim izgledom pluća i uvećanim traheobronhijalnim limfnim čvorom. Histopatološki nalazi su primećeni pri svim nivoima doze leka, uključujući povećan broj alveolarnih makrofaga, perivaskularnih/peribronhiolarnih infiltrata i granularne eozinofilne naslage u plućima i limfoidnu hiperplaziju u traheobronhijalnim limfnim čvorovima, što je pokazalo potpuni oporavak. Ovi nalazi su pokazali potpunu reverzibilnost tokom oporavka, a smatralo se da su posledica udisanja materijala koji premašuje normalni kapacitet plućnog klirensa, posebno pri 112 mg/kg/dan. U zaključku, NOAEL u ovoj studiji bio je 112 mg/kg/dan, pošto su se sve gore razmatrane promene smatrale onima koje nisu neželjene.

Prva studija kod čoveka na zdravim subjektima za ispitivanje bezbednosti i podnošljivosti oralno inhaliranih pojedinačnih doza formulacije acetatne soli ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-)

[0150] U ovoj randomizovanoj, dvostruko slepoj, placebo kontrolisanoj, paralelnoj grupi (po nivou doze) studiji dozne eskalacije inhaliranih pojedinačnih doza kod 48 zdravih ispitanika u šest doznih grupa od kojih je svaka po osam subjekata, sprovedenoj od strane Inamed GmbH, Gauting, Nemačka, kontrolisana oralna inhalacija formulacije opisane u Primeru 1 i njena razblaženja, kao i placeba (0,5% [m/m] vodeni rastvor natrijum hlorida podešen na pH 5,5 sa 1 M HCl farmaceutske čistoće) je započeta preko Pari eFlow<®>XL 30 uređaja nebulizatora (Pari Pharma GmbH, Starnberg, Nemačka). Dozni nivoi i odgovarajuće koncentracije ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-lIe-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) (aktivnog jedinjenja) su sumirane u tabeli 10.

Tabela 10

[0151] Zapremina placebo rastvora nebulizatora je odgovarala onoj od aktivnog jedinjenja pri određenom nivou doze. Trajanje inhalacije je zavisilo od ukupne zapremine rastvora nebulizatora i kretalo se u rasponu od nekoliko minuta do otprilike jednog sata. Neželjeni događaji su prikazani u tabeli i sažeti prema trenutnoj verziji Medicinskog rečnika za regulatorne aktivnosti.

Rezultati bezbednosti i podnošljivosti

[0152] Tokom studije nije bilo letalnih ishoda, niti ozbiljnih neželjenih događaja (AE) i drugih značajnih AE. Ukupno, 27 neželjenih događaja, od toga 24 neželjena događaja nastala usled lečenja (TEAE) su zabeležena kod 13 ispitanika (27,1%). Svi ovi subjekti su bili na aktivnom jedinjenju. Nisu prijavljeni AE za subjekte koji su inhalirali rastvor placeba. Što se tiče broja neželjenih događaja, kao i njihovog intenziteta i uzročne veze sa ispitivanim lekom, veći ukupan broj neželjenih događaja i srodnih AE je prijavljen iz grupe koja je inhalirala najveću dozu aktivnog jedinjenja (960 mg; dozna grupa 6) u poređenju sa drugim nivoima doze. Većina prijavljenih neželjenih događaja i simptoma odnosila se na respiratorni sistem, kao što su „kašalj“, „iritacija respiratornog trakta“, povećana proizvodnja sluzi ili prolazno smanjenje u prinudnoj izdisajnoj zapremini u prvoj sekundi (FEV1). Veća pojava respiratornih simptoma i respiratornih neželjenih događaja, posebno u grupama koje inhaliraju veće doze aktivnog jedinjenja, možda je povezana sa dugim trajanjem inhalacije. Ovi neželjeni događaji možda nisu nužno povezani sa formulacijom iz Primera 1 i njenim razblaženjima, ali mogu biti proceduralni neželjeni događaji. Što se tiče lokalne podnošljivosti, bilo je tri neželjena događaja povezana sa inhalacijom („kašalj“). Ukupnu podnošljivost većina ispitanika (97,9%) ocenila je kao „veoma dobra” ili „dobra”. Tokom čitave studije, većina kliničkih laboratorijskih vrednosti ostala je unutar odgovarajućih referentnih opsega. Većina pojedinačnih rezultata fizičkog pregleda, merenja vitalnih znakova, snimanja elektrokardiograma (EKG) i rezultata plućne funkcije je bila unutar opšteprihvaćenih kliničkih referentnih opsega. Nije uočljiv vremenski zavisan uticaj aktivnog jedinjenja na merene bezbednosne parametre. Nije bilo relevantne razlike između različitih doznih grupa.

[0153] Gore predstavljeni rezultati studije prve-kod-čoveka pokazuju da su formulacija iz Primera 1 i njena razblaženja veoma pogodna za aerosolizaciju u širokom opsegu koncentracija i primenljiva za inhalaciju kod ljudi čak i pri visokim koncentracijama (80 mg/mL).

Efekat inhalacione primene acetatne soli ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) na in vivo modelu aktivacije neutrofila kod pacova

[0154] Svrha ove studije (sprovedene od strane Envigo CRS Limited, Alconbury, Huntingdon, Ujedinjeno Kraljevstvo) bila je da se proceni efekat acetatne soli ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) primenjene inhalacijom na LPS/fMLP modelu neutrofilne aktivacije kod pacova.

Priprema formulacija

[0155] Formulacija za grupu 1 ispitivanih životinja (nosač) bila je 0,5% (m/v) fiziološki rastvor podešen na pH od 5,5 sa 1 M HCl i filtriran kroz filter od 0,2 μm.

[0156] Formulacije za ispitivane životinjske grupe 2-4 su pripremljene na sledeći način:

Izmerena je odgovarajuća količina acetatne soli ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) i dodata je odgovarajuća količina 0,5% (m/v ) fiziološkog rastvora, pH 5,5 da bi se dobila formulisana koncentracija od 83,28 mg/mL.

[0157] pH konačnog rastvora je podešen na 5,5 sa 1 M NaOH.

[0158] Odgovarajuća količina od 83,28 mg/mL acetatne soli ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) je dodata u odgovarajuću količinu nosača da bi se proizvela formulacija od 15,62 mg/mL.

[0159] Finalno, odgovarajuća količina od 15,62 mg/mL acetatne soli ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) je dodata odgovarajućoj količini nosača za proizvodnju formulacije od 5,21 mg/mL. Tri rastvora formulacije (83,28 mg/mL, 15,62 mg/mL, 5,21 mg/mL) su zatim filtrirana kroz filter od 0,2 μm.

[0160] Formulacije su pripremljene 1 dan pre doziranja i čuvane na 2-8 °C na tamnom do dana upotrebe kada su izvađene iz frižidera i držane na sobnoj temperaturi (≤ 25 °C) i lagano mućkane najmanje 1 h pre doziranja.

[0161] Tabela 11 sumira koncentracije pripremljenih formulacija za grupe ispitivanih životinja 1-4 uzimajući u obzir da odnos acetatne soli/slobodne baze ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) je 1,041. Stoga, ove formulacije odgovaraju formulaciji opisanoj u Primeru 1 i njenim razblaženjima.

Tabela 11

Procedura za kohortu inhalacionog tretmana

[0162] Životinje su izazivane sa aerosolizovanim LPS (lipopolisaharid, 1 mg/mL) tokom 30 min. Približno 3 h nakon završetka LPS izazova, životinjama je primenjen ili vehikulum ili formulacije, kao što je gore opisano, od acetatne soli ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) inhalacijom (Grupe 1-4) u periodu od 30 minuta korišćenjem elektronskog nebulizatora eFlow<®>30 XL (Pari Pharma GmbH, Starnberg, Nemačka; izlaganje samo njuškom). Svim životinjama je doziran fMLP (N-formil-Met-Leu-Phe, 5 mg/kg) približno 4 h nakon završetka LPS izazova intratrahealnim putem pod prolaznom gasovitom anestezijom u zapremini doze od 1 mL/kg. Približno 2 h nakon primene fMLP, životinje su zaustavljene i izvršeno je bronhoalveolarno ispiranje (BAL) da bi se procenio infiltrat inflamatornih ćelija i aktivnost neutrofilne elastaze. Procedura za kohortu tretmana inhalacijom je sažeta u tabeli 12.

[0163] Sve životinje su zaustavljene za bronhoalveolarno ispiranje otprilike 6 h nakon LPS izlaganju.

Isporučena doza (μg/kg) = C (μg/L) x RMV (L/min) x D (min)

TM (kg)

gde je C = koncentracija u udahnutom vazduhu

RMV = Respiratorni minutni volumen, izračunat iz formule

RMV (L/min) = 0,608 x TM (kg)<0852>(Ref.1)

D = Trajanje izlaganja u min

TM = Telesna masa

Ref.1: D.J. Alexander, C.J. Collins, D.W. Coombs i sar., Preporuka radne grupe Udruženja inhalacionih toksikologa (AIT) za izračunavanje standardne isporučene doze i izražavanje u ne-kliničkim toksikološkim studijama inhalacije aerosola sa farmaceutskim proizvodima; Inhal.Tox., 2008, 20, 1179-1189.

[0164] Doze fMLP-a i vremenske tačke su izabrane na osnovu objavljenih podataka (videti npr. S. Yasui, A. Nagai, K. Aoshiba i sar., Eur. Respir. J., 1995, 8, 1293; T. Yang, J. Zhang, K. Sun i sar., Inflamm. Res.2012, 61, 563; R. Corteling, D. Wyss, A. Trifilieff, BMC Pharmacology, 2002, 2, 1) i iskustva u Envigo CRS Limited. Odabir doze leka je zasnovan na prethodnoj intratrahealnoj studiji od strane Envigo CRS Limited. U ovoj prethodnoj studiji, utvrđeno je da su intratrahealne doze od 0,03 do 3 mg/kg leka efikasne na ovom životinjskom modelu.

[0165] Nisu primećeni klinički znaci u vezi sa ispitivanim proizvodom između perioda doziranja i završetka studije. Dve životinje iz grupe 1 (nosač) uginule su neposredno nakon primene fMLP-a usled duboke anestezije.

Bronhoalveolarno ispiranje (BAL)

[0166] Nakon potvrde uginuća, izolovan je dušnik životinje, ubačena je trahealna kanila i pričvršćena na mestu, a disajni put je ispran sa 3 mL fiziološkog rastvora puferovanog fosfatom (PBS). Ispiranje je ponovljeno dva puta i ukupno su korišćene tri serije od 3 mL PBS-a. Prvi alikvot ispiranja koji sadrži ćelije je smešten u epruvetu za centrifugiranje od 15 mL na vlažnom ledu (epruveta A). BAL tečnost prikupljena iz druga dva ispiranja stavljena je u drugu epruvetu (epruveta B). Epruvete A i B su stavljene na vlažnom ledu do centrifugiranja. Centrifugiranje je izvedeno na 800 x g tokom 10 min na ca.4°C i sakupljen je supernatant. Sve do analize neutrofilne elastaze supernatant je čuvan na oko.80 °C.

Aktivnost neutrofilne elastaze

[0167] Dva alikvota BAL supernatanta su analizirana na aktivnost neutrofilne elastaze na sledeći način: 120 μL BAL supernatanta iz alikvota 1 je prebačeno na ploču sa 96 bazenčića (Corning #3650). Paralelno, pripremljen je opseg razblaženja od 1,6 do 0,025 mU/bazenčiću komercijalne humane neutrofilne elastaze (hNE, Serva #20927.01). 120 μL od svakog hNE razblaženja je preneto u duplikatu na ploču sa 96 bazenčića. Da bi se pokrenula enzimska reakcija, 80 μL fluorescentnog peptidnog supstrata (MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC) u konačnoj koncentraciji od 500 μΜ je dodato u svaki bazenčić i ploča je odmah postavljena u victor2v fluorescentni čitač prethodno zagrejan na 37 °C. Fluorescencija (λeksc. 485 nm, λem.535 nm) je zabeležena tokom 2 h na 37 °C. Početna brzina enzima (RFU/min) svih uzoraka je izračunata i konvertovana u mU/mL hNE ekvivalenta, korišćenjem jednačine linearne regresije dobijene iz grafikona (RFU/min u odnosu na mU/mL razblaženja hNE) standardnog opsega humane neutrofilne elastaze. Test je ponovljen korišćenjem BAL supernatanta iz alikvota 2. Zabeleženi podaci o neutrofilnoj elastazi su srednja vrednost aktivnosti neutrofilne elastaze iz oba alikvota. Aktivnost neutrofilne elastaze u BAL tečnosti je prikazana u tabeli 13 i sl. 1 i 2.

Tabela 13

[0168] Lek ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) primenjen u dozama od 0,3, 3 i 30 mg/kg putem inhalacije 3 h posle izazivanja LPS-om i 1 h pre izazivanja fMLP-om značajno inhibira aktivnost neutrofilne elastaze u BAL tečnosti sakupljenoj 6 h posle LPS izazivanja.

Faza-Ib studije za ispitivanje bezbednosti, podnošljivosti i farmakokinetike oralno inhaliranih pojedinačnih doza acetatne soli ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) kod pacijenata sa cističnom fibrozom

[0169] U ovoj randomizovanoj, dvostruko slepoj, placebo-kontrolisanoj studiji dozne eskalacije sa paralelnim grupama (po nivou doze), ispitana je bezbednost i podnošljivost pojedinačnih rastućih doza (SAD) acetatne soli ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) primenjene inhalacijom kod pacijenata sa cističnom fibrozom (CF). Pored toga, procenjena je farmakokinetika leka nakon pojedinačne rastuće doze u plazmi i sputumu, kao i njegov farmakodinamički efekat na aktivnost neutrofilne elastaze u sputumu.

Tretman

[0170] U ovoj studiji, sprovedenoj od strane Inamed GmbH, Gauting, Nemačka, uključeno je 24 ispitanika sa cističnom fibrozom, koji su ispunili sve kriterijume za uključivanje i kod kojih nije bio prisutan kriterijum isključenja, koji su dobili randomizovani tretman. Oni su grupisani u 3 dozne grupe od po 8 ispitanika. 6 subjekata je primilo formulaciju opisanu u Primeru 1 i njena razblaženja, a 2 subjekta su primila placebo (0,5% [m/m] vodeni rastvor natrijum hlorida podešen na pH 5,5 sa 1 M HCl farmaceutskog kvaliteta). Oralna inhalacija gornje formulacije kao i placebo izvršena je preko uređaja nebulizatora Pari eFlow<®>XL 30 (Pari Pharma GmbH, Starnberg, Nemačka). Nivoi doze i odgovarajuće koncentracije ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) (aktivnog jedinjenja) su sumirane u tabeli 14.

Tabela 14

[0171] Zapremina placebo rastvora nebulizatora odgovara onoj od aktivnog jedinjenja pri određenom nivou doze. Procenjeno je da je trajanje inhalacije između 7 i 20 minuta. Neželjeni događaji su prikazani u tabeli i sumirani prema trenutnoj verziji Medicinskog rečnika za regulatorne aktivnosti.

Rezultati bezbednosti i podnošljivosti

[0172] Tokom studije nije bilo letalnih ishoda, niti ozbiljnih neželjenih događaja (AE) i drugih značajnih AE. Nije bilo lokalnih neželjenih događaja vezanih za inhalaciju. Nijedan od 24 ispitanika nije rano prekinuo studiju zbog AE.

[0173] Ukupno je zabeleženo 6 neželjenih događaja, od kojih su svi neželjeni događaji izazvani tretmanom (TEAE), kod 6 ispitanika. Najčešći prijavljeni termini bili su „vrtoglavica“ i „glavobolja“ sa po 2 događaja. Za svih 6 TEAE se smatralo da nisu povezani sa aktivnim jedinjenjem. Nijedan od TEAE nije ocenjen kao težak. Trajanje AE je bilo prolazno. Svih 6 AE je rešeno bez nastavaka. Što se tiče broja neželjenih događaja, kao i njihovog intenziteta i uzročne veze sa ispitivanim lekom, nije postala očigledna razlika između nivoa doza. Tokom čitave studije, većina kliničkih laboratorijskih vrednosti, kao i rezultata EKG-a i vitalnih znakova ostala je unutar odgovarajućih referentnih opsega. Svi odstupajući nalazi nisu bili klinički relevantni i u dobrom su skladu sa obimom odstupanja koji se obično uočava u studijama sa pacijentima sa CF. Većina rezultata testova plućne funkcije bila je onakva kakva se očekivala kod pacijenata sa CF.

Farmakokinetičke procene

[0174] Procenjeni su sledeći farmakokinetički parametri za ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) (aktivno jedinjenje):

Plazma:

AUC0-∞, AUC0-∞/D, Cmax, Cmax/D aktivnog jedinjenja u plazmi kao primarne varijable i tmax, t1/2, λz, AUC0-tposlednjeaktivnog jedinjenja u plazmi kao sekundarne varijable.

Sputum:

Izračunate su koncentracije aktivnog jedinjenja u sputumu i određeni Cmaxi AUC0-tposlednje.

Uzorkovanje i obrada uzoraka za uzorke plazme

[0175] Uzorci krvi za određivanje koncentracije aktivnog jedinjenja u plazmi su uzeti u sledećim vremenskim tačkama:

Prvog dana pre doze, 10 min i 0,5 h, 1 h, 2 h, 3 h, 4 h, 6 h, 8 h, 12 h, 15 h i 2. dana 24 h nakon doze (nakon početka inhalacije).

[0176] Uzorci su sakupljeni u zatvorenim epruvetama za uzorkovanje plazme K3-EDTA (Monovette<®>Sarstedt, Nemačka). Prihvaćeni vremenski interval za postupke rukovanja uzorkom za svaki pojedinačni uzorak studije, tj. vreme između uzimanja uzorka i centrifugiranja uzorka ne sme da prelazi 60 minuta, a vreme između kraja centrifugiranja i zamrzavanja uzorka takođe ne sme da prelazi 60 minuta.

[0177] Uzorci su centrifugirani na približno 4 °C (± 2 °C) na 2200 x g tokom 15 min. Dobijeni supernatant plazme je zatim prebačen u 2 polipropilenske epruvete (prvi alikvot od najmanje 1 mL i rezervni) i zamrznut u uspravnom položaju ispod 20 °C. Uzorci su čuvani u zamrzivaču pod kontinuiranom temperaturnom kontrolom ispod 20 °C od dana nakon uzimanja uzoraka do otpreme (suvi led sa termo-zapisivačkim uređajem) na bioanalitičko mesto (Pharmacelsus GmbH, Saarbrucken, Nemačka).

Uzimanje i obrada uzoraka za uzorke sputuma

[0178] Spontani uzorci sputuma za procenu PK prikupljeni su tokom sledećih vremenskih intervala/perioda: Pre prvog dana (-1) što je pre moguće po dolasku subjekta na mesto ispitivanja (prazna PK), 1. dana u periodu između 1 h i 3 h nakon početka inhalacije, i ujutru 2. dana, otprilike 24 h nakon početka inhalacije. Štaviše, prikupljeno je bilo kakvo spontano iskašljavanje sputuma između 0-1 h nakon početka inhalacije.

[0179] Spontani uzorci sputuma su sakupljeni u polistirenske Petrijeve posude i odmah stavljeni na led. Svi koraci obrade morali su se izvoditi sa hladnim reagensima i na ledu kad god je to bilo moguće. Čepovi su odvojeni od pljuvačke, ali ovo drugo nije odbačeno. Ako je uzorak sputuma uzet i za PK i za aktivnost neutrofilne elastaze u analizi sputuma, čep je podeljen na 2 približno jednaka dela. Jedan deo je obrađen za PK analizu, drugi za procenu aktivnosti neutrofilne elastaze u sputumu.

[0180] Za PK obradu, rezultujući čep je podeljen na približno 2 jednaka dela. Oni su prebačeni u 2 transfer epruvete za PK evaluaciju (SP1) i PK rezervnu kopiju (SP3). Do 1,0 mL pljuvačke je prebačeno u drugu transfer epruvetu za PK evaluaciju (SP2). Preostala pljuvačka u Petrijevoj posudi je odbačena. Određena je težina uzoraka sputuma (SP1 SP3) i svi uzorci su odmah stavljeni na suvi led radi zamrzavanja. Nakon zamrzavanja, uzorci su čuvani u uspravnom položaju na -80 ± 10 °C. Uzorci sputuma i pljuvačke za procenu PK (SP1 SP2) su otpremljeni u Pharmacelsus GmbH na suvom ledu. Rezervni uzorci sputuma (SP3) su čuvani na -80 ± 10 °C u Inamed GmbH, Gauting, Nemačka.

Bioanalitičke metode

[0181] Za analizu aktivnog jedinjenja u plazmi, korišćena je validirana i visoko osetljiva metoda tečne hromatografije-masene spektrometrije (LC-MS/MS).

[0182] Za analizu aktivnog jedinjenja u sputumu trebalo bi da se koristi validirana ili, tamo gde nije dostupna, metoda tandemske masene spektrometrije (LC-MS/MS) visoko osetljive tečne hromatografije „prikladne za namenu“.

[0183] Bioanalitičke procedure su sprovedene u skladu sa važećim propisima dobre laboratorijske prakse (GLP), Američke uprave za hranu i lekove (FDA) i EMA zahtevima za validaciju bioanalitičkih testova i navedeni su u primenljivim SOP-ima uključujući propise za rutinske analize i opšte propise za analizu.

Izvedeni farmakokinetički parametri

[0184] Farmakokinetički parametri koji su gore pomenuti su izračunati na osnovu stvarnih vremena uzorkovanja krvi i sputuma korišćenjem ne-klasifikacionih procedura.

Krive koncentracija-vreme u plazmi i izvedeni farmakokinetički parametri ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-)

[0185] Krive srednje koncentracije u plazmi-vreme aktivnog jedinjenja su prikazane na slici 3.

[0186] Krive aktivnog jedinjenja pokazuju tipične profile i slične sa rezultatima zdravih subjekata koji su inhalirali uporedive doze aktivnog jedinjenja, njegove prve koncentracije u plazmi su rano otkrivene kod pacijenata sa CF.

[0187] Koncentracije aktivnog jedinjenja u plazmi su se povećale da bi dostigle odgovarajuće pikove (tmax, srednja vrednost) na 1,3 h u doznoj grupi 1, na 1,5 h u doznoj grupi 2 i na 2,3 h u doznoj grupi 3. Nakon toga, koncentracije aktivnog jedinjenja u plazmi su opadale sa srednjim terminalnim poluživotom od 4,1 h u doznoj grupi 1, 3,5 h u doznoj grupi 2 i 3,8 h u doznoj grupi 3. 24 sata nakon inhalacije, aktivno jedinjenje se i dalje moglo detektovati kod subjekata svih doznih grupa, sa srednjim koncentracijama u plazmi od 2,8 ng/mL u doznoj grupi 1, 4,4 ng/mL u doznoj grupi 2 i 15,2 ng/mL u doznoj grupi 3.

Koncentracija u sputumu ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-)

[0188] Srednje koncentracije aktivnog jedinjenja u sputumu su prikazane na slici 4.

[0189] Već u prvoj vremenskoj tački uzorkovanja sputuma nakon inhalacije (interval uzorkovanja 0-1h), aktivno jedinjenje je otkriveno kod većine subjekata u svim doznim grupama. Koncentracija aktivnog jedinjenja u sputumu se povećava sa dozom, sa najvišim srednjim (SD) vrednostima koncentracije od 0,6 (0,79) g/L (dozna grupa 1, interval uzorkovanja l-3h), 1,1 (1,23) g/L (dozna grupa 2, interval uzorkovanja 0-1h) i 1,8 (1,81) g/L (dozna grupa 3, interval uzorkovanja 0-1h). Aktivno jedinjenje se još uvek može otkriti u sputumu kod subjekata svih doznih grupa 24 h nakon inhalacije.

Farmakodinamičke procene

[0190] Farmakodinamički efekat rastućih pojedinačnih doza aktivnog jedinjenja je ispitan procenom aktivnosti neutrofilne elastaze (NE) u sputumu korišćenjem FRET (fluorescentne rezonantne energije prenosa) testa nakon alikvotacije PBS-om i zamrzavanja.

Uzimanje i obrada uzoraka za uzorke sputuma

[0191] Spontani uzorci sputuma za procenu aktivnosti neutrofilne elastaze (NE) prikupljeni su tokom sledećih vremenskih intervala/perioda:

Na dan skrininga, ako je moguće, za početnu procenu NE aktivnosti, na dan -1 što je pre moguće nakon dolaska subjekta na mesto ispitivanja radi početne procene NE aktivnosti, 1. dana u vremenskom periodu između 1 h i 3 h nakon početka inhalacije, i ujutru 2. dana, pribl.24 h nakon početka inhalacije.

[0192] Spontani uzorci sputuma su sakupljeni u polistirenske Petrijeve posude i odmah stavljeni na led. Svi koraci obrade morali su se izvoditi sa hladnim reagensima i na ledu kad god je to bilo moguće. Čepovi su odvojeni od pljuvačke, ali ovo drugo nije odbačeno. Ako je uzet uzorak sputuma za PK i NE aktivnost u analizi sputuma, čep je podeljen na 2 približno jednaka dela. Jedan deo je obrađen za procenu aktivnosti NE u sputumu, a drugi za PK analizu, kao što je gore opisano.

[0193] Za procenu aktivnosti NE u sputumu, prvo je određena težina uzorka sputuma i dodato je 8 mL hladnog fiziološkog rastvora puferovanog fosfatom (PBS) po gramu prečišćenog sputuma. Uzorak je mešan vorteksom 30 s na sobnoj temperaturi (15 - 24 °C). Zatim je odvojena rastvorljiva frakcija od peleta sputuma centrifugiranjem (10 min na 1000 x g i 4 °C). Supernatant je prebačen u svežu epruvetu. Preostale nerastvorljive čestice su odvojene drugim korakom centrifugiranja na 3500 x g tokom 15 minuta na 4 °C. Ako supernatant nije odmah alikvotiran, supernatant PBS/sputuma je prebačen u svežu epruvetu.

[0194] 10 alikvota od 50 μL PBS/sputuma je prebačeno u epruvete za transfer radi evaluacije. Štaviše, 4 alikvota od 50 μL PBS/sputuma su prebačeni u epruvete za transfer kao rezerva. U slučaju da je bilo ostataka, preostali volumen je odmah prebačen u epruvetu za transfer radi procene. Svaki ostatak koji prelazi 2,0 mL je odbačen.

[0195] Uzorci su odmah zamrznuti i čuvani u uspravnom položaju na -80 ± 10 °C. Uzorci PBS/sputuma su poslati u MLM Medical Labs GmbH, Menhengladbah, Nemačka, na suvom ledu. Rezervni uzorci PBS/sputuma su čuvani na -80 ± 10 °C u Inamed GmbH, Gauting, Nemačka.

Bioanalitičke metode

[0196] Aktivnost NE u sputumu je procenjena korišćenjem testa FRET elastaze prilagođenog testu opisanom u Nature Protocols, 2008, 3, 991 (B. Korkmaz, S. Attucci, M. A. Juliano i sar.) i validiranog od strane MLM Medical Labs GmbH, Menhengladbah, Nemačka.

[0197] Test se zasniva na reakciji humane neutrofilne elastaze sa supstratom 2Abz-Ala-Pro-Glu-Glu-Ile-Met-Arg-Arg-Gln-Tyr(3NO2)-OH (GeneCust Europe S.A., Ellange, Luksemburg, # P160301-SY452824). Dodavanjem rastvora supstrata započinje enzimska reakcija i elastaza prisutna u uzorcima reaguje sa dodatim supstratom. Proizvod reakcije se detektuje merenjem fluorescencije i određuje se početna brzina reakcije. Koncentracija aktivne elastaze u nepoznatim uzorcima je ponovo izračunata korišćenjem kalibracione krive izračunate iz standarda.

[0198] Pripremljen je referentni osnovni rastvor elastaze (humana neutrofilna elastaza [ELA2], Holtzel Diagnostika, Keln, Nemačka, #PN31255) sa poznatom enzimskom aktivnošću. Tačna koncentracija aktivnog enzima elastaze je određena titracijom protiv rastvora alfa 1-antitripsina (Athens Research and Technology, Athens, USA, #16-16-011609), sa definisanom koncentracijom. Referentni osnovni rastvor aktivne elastaze je podešen dodavanjem PBS-a do koncentracije od 3000 nM i alikvoti su čuvani na -80 °C.

[0199] FRET test je izveden u belim mikrotitarskim pločama sa 96 bunarčića u ukupnoj zapremini od 100 uL po bunarčiću. Pripremljena su razblaženja PBS sputuma od 1:5, 1:50 i 1:100 u reakcionom puferu elastaze (50 mM HEPES, pH 7,4, 750 mM NaCl, 0,05% [v/v] NP-40), napunjeno 5 uL po bunarčiću i dodato je 90 uL reakcionog pufera elastaze. Osnovni rastvor supstrata od 5 mM od 2Abz-Ala-Pro-Glu-Glu-Ile-Met-Arg-Arg-Gln-Tyr(3NO2)-OH u 30% (v/v) N,N-dimetilformamid/voda je pripremljen i dalje razblažen do 400 nM dodavanjem reakcionog pufera elastaze. 5 uL rastvora supstrata od 400 nM je dodato u bunarčiće i brzina reakcije Vije određena pomoću FRET na Eksc:320 nm-Emis:420 nm. Koncentracija aktivne elastaze u PBS sputumu je određena poređenjem brzina reakcije definisanih razblaženja iz referentnog osnovnog rastvora aktivne elastaze.

[0200] Analitički merni opseg ove metode bio je 115,00-2880,00 ng/mL. Koeficijenti varijacije unutar i među testovima bili su ≤17,14% i ≤8,96%, respektivno.

Aktivna neutrofilna elastaza u sputumu

[0201] Srednje koncentracije aktivne NE su prikazane na slici 5.

[0202] Rezultati koncentracije aktivne NE bili su veoma varijabilni. Kada su merene FRET testom, srednje (SD) koncentracije aktivne NE u sputumu dana -1 (prethodna doza) bile su 18823,6 (19758,72) ng/mL za nivo doze 1, 9548,7 (6222,55) ng/mL za nivo doze 2 i 10480,7 (10528,00) ng/mL za nivo doze 3. Srednja (SD) koncentracija aktivne NE za placebo subjekte pre doze bila je 46711,8 (48456,86) ng/mL.

[0203] Koncentracija aktivnog NE u sputumu se izrazito smanjila kod ispitanika nakon udisanja aktivnog jedinjenja. Srednje vrednosti (SD) koncentracije 1-3 h nakon inhalacije bile su 612,5 (1218,62) ng/mL za nivo doze 1 i 115,0 (0,00) ng/mL za nivoe doze 2 i 3. Srednja (SD) vrednost za subjekte koji su inhalirali placebo 1-3 h nakon inhalacije bila je 34370,0 (19988,11) ng/mL.

[0204] Srednje (SD) aktivne koncentracije NE u sputumu 24 h nakon inhalacije bile su 1467,7 (2154,43) ng/mL za nivo doze 1, 16849,4 (23518,56) ng/mL za nivo doze 2 i 7712,5 (11394,04) ng/mL za nivo doze 3. Srednja (SD) koncentracija aktivnog NE za 24 h za placebo subjekte bila je 19338,8 (9062,32) ng/mL.

Farmakodinamički zaključci

[0205] Srednja koncentracija aktivnog NE u sputumu pacijenata sa CF se izrazito smanjila nakon inhalacije jedne doze aktivnog jedinjenja primenjenog formulacijom opisanom u Primeru 1. U ispitivanom opsegu doza, činilo se da je stepen ovog odgovora nezavisan od primenjene doze. Iako je teško proceniti zbog velike varijabilnosti podataka, čini se da se srednja koncentracija aktivnog NE u sputumu vratila na početne nivoe 24 h nakon inhalacije aktivnog jedinjenja. Udisanje placebo

Claims

rastvora nije imalo izražen uticaj na srednju koncentraciju aktivnog NE u sputumu. Ovi klinički rezultati pokazuju da ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-) primenjen formulacijom opisanom u Primeru 1 inhibira NE u sputumu pacijenata sa CF.

PATENTNI ZAHTEVI

1. Farmaceutski aerosol za pulmonalnu primenu koji sadrži dispergovanu tečnu fazu i kontinuiranu gasnu fazu, naznačen time, da dispergovana tečna faza

(a) sadrži vodene kapljice koje sadrže aktivno jedinjenje

ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-);

ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so; gde

OctG je (S)-2-aminodekanska kiselina;

<D>Pro je D-prolin;

(b) ima srednji dijametar mase od 1,5 μm do 5 μm; i

(c) ima raspodelu veličine kapljica koja ima geometrijsku standardnu devijaciju od 1,2 do 1,7, tako izmerenu kao što je opisano u opisu.
2. Aerosol prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što je suprotni jon aktivnog jedinjenja acetat.
3. Aerosol prema patentnom zahtevu 1 ili 2 koji se ispušta iz generatora aerosola brzinom od najmanje 0,1 mL dispergovane tečne faze po minuti.
4. Aerosol prema patentnom zahtevu 1 ili 2 koji se ispušta iz generatora aerosola pri srednjoj brzini isporuke od najmanje 0,8 mg aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-); ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli; po minuti.
5. Tečni farmaceutski preparat za pripremu aerosola prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4 koji sadrži aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-); ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so; u koncentraciji unutar raspona od 4 mg/mL do 100 mg/mL.
6. Preparat prema patentnom zahtevu 5 koji ima dinamički viskozitet u opsegu od 0,8 mPas do 1,7 mPas.
7. Preparat prema patentnom zahtevu 5 ili 6 koji ima površinski napon u opsegu od 25 mN/m do 80 mN/m.
8. Preparat prema bilo kom od patentnih zahteva 5 do 7 koji sadrži najmanje jedan ekscipijens za modifikovanje ukusa.
9. Čvrsti farmaceutski preparat za pripremu tečnog preparata prema bilo kom od patentnih zahteva 5 do 8, naznačen time, da preparat sadrži aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-); ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so; i gde je čvrsti preparat rastvorljiv ili disperzibilan tečnom vodenom rastvaraču, i gde tečni preparat sadrži koncentraciju aktivnog jedinjenja unutar opsega od 4 mg/mL do 100 mg/mL; ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so; gde čvrsti farmaceutski preparat dodatno sadrži natrijum hlorid.
10. Preparat prema patentnom zahtevu 9, naznačen time što je suprotni jon aktivnog jedinjenja acetat.
11. Komplet za pripremu i isporuku farmaceutskog aerosola za plućnu primenu prema patentnom zahtevu 1, naznačen time, da komplet sadrži nebulizator i tečni preparat prema patentnom zahtevu 5; ili sadrži nebulizator i čvrsti farmaceutski preparat prema patentnom zahtevu 9.
12. Komplet prema patentnom zahtevu 11, naznačen time što je suprotni jon aktivnog jedinjenja acetat.
13. Komplet prema patentnom zahtevu 11 ili 12, naznačen time, da je nebulizator odabran iz grupe koja se sastoji od mlaznih nebulizatora, ultrazvučnih nebulizatora, piezoelektroničkih nebulizatora, nebulizatora mlaznih sudara, elektrohidrodinamičkih nebulizatora, nebulizatora sa kapilarnom silom, perforiranih membranskih nebulizatora i nebulizatora sa perforiranom vibrirajućom membranom.
14. Komplet prema bilo kom od patentnih zahteva 11 do 13, naznačen time, da je raspršivač prilagođen da može da rasprši tečni preparat brzinom od najmanje 0,8 mg aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-); ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so; po minuti.
15. Komplet prema bilo kom od patentnih zahteva 11 do 14, naznačen time što je najmanje 70 tež.

% od inkorporirane doze aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-); ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli sastavljeno od kapljica koje imaju srednji dijametar mase ne viši od 5 μm; tako izmeren kao što je opisano u opisu.
16. Metoda za pripremu aerosola pogodnog za plućnu primenu, navedena metoda uključuje korake

(a) obezbeđivanja tečnog farmaceutskog preparata koji sadrži aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-); ili bilo koju njegovu farmaceutski prihvatljivu so; u koncentraciji unutar raspona od 4 mg/mL do 100 mg/mL; (b) obezbeđivanja nebulizatora sposobnog za aerosolizaciju pomenutog tečnog farmaceutskog preparata pri srednjoj brzini isporuke od najmanje 0,8 mg aktivnog jedinjenja ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-lle-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-); ili bilo koje njegove farmaceutski prihvatljive soli; po minuti; nebulizatora koji je dalje prilagođen da emituje aerosol koji sadrži dispergovanu tečnu fazu koja ima srednji maseni dijametar od 1,5 μm do 5 μm; i koja ima raspodelu veličine kapljica koja ima geometrijsku standardnu devijaciju od 1,2 do 1,7, tako izmerenu kao što je opisano u opisu; i

(c) rukovanja nebulizatora da raspršuje tečni farmaceutski preparat.
17. Metoda prema patentnom zahtevu 16, naznačena time, da je tečni farmaceutski preparat pripremljen pomoću sledećih koraka:

(a1) obezbeđivanja čvrstog farmaceutskog preparata koji sadrži aktivno jedinjenje ciklo(-OctG-Glu-Thr-Ala-Ser-Ile-Pro-Pro-Gln-Lys-Tyr-<D>Pro-Pro-); ili njegovu

farmaceutski prihvatljivu so;

(a2) rastvaranja ili dispergovanja pomenutog čvrstog farmaceutskog preparata u tečnom vodenom rastvaraču, na taj način pripremajući tečni farmaceutski preparat u kome je

aktivno jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prisutno/a u koncentraciji

unutar opsega od 4 mg/mL do 100 mg/mL.