RS63534B1 - Farmaceutske kombinacije koje sadrže inhibitor histon deacetilaze i inhibitor bcl-2 i postupci za njihovu upotrebu - Google Patents

Description

Opis

OSNOVA

[0001] US 2015/150871 odnosi se na kombinacije koje sadrže inhibitor HDAC i imunomodulatorni lek za lečenje limfoma kod subjekta kome je to potrebno. Juliana M. Benito et al, Cell Reports, vol. 13, no. 12, 1 December 2015, pages 2715-2727, XP055694455, US ISSN: 2211-1247, DOI: 10.1016/j.celrep.2015.12.003 odnosi se na rad pod naslovom "MLL-Rearranged Acute Limphoblastic Leukemias Activate BCL-2-Specific Antagonist ABT-199".

[0002] Inhibicija histon deacetilaze (HDAC) može izazvati zaustavljanje rasta ćelija kancera. Međutim, „pan“-HDAC inhibicija dovodi do značajnih neželjenih efekata, a alternativni profil inhibicije HDAC je poželjan.

[0003] HDAC6 je HDAC klase lib i poznato je da uklanja acetil grupe iz mnogih ćelijskih proteina, uključujući α-tubuhn i HSP90. Objavljeno je da hiperacetilacija HSP90 destabilizuje svoje ciljne proteine, uključujući ER i EGFR. Inhibitori HDAC6 su pokazali proliferativnu aktivnost protiv kancera kod različitih tipova kancera. Pokazalo se da blokiranje aktivnosti HDAC6 izaziva inhibiciju rasta ćelija kancera kroz različite mehanizme.

[0004] Uprkos brojnim opcijama lečenja pacijenata obolelih od raka, ostaje potreba za efikasnim i bezbednim terapeutskim opcijama. Konkretno, postoji potreba za efikasnim postupcima lečenja ili prevencije karcinoma, posebno onih kancera koji su rezistentni i/ili refraktivni na trenutne terapije. Ova potreba se može ispuniti upotrebom kombinovanih terapija kao što su one koje su ovde opisane.

REZIME

[0005] Ovde je data farmaceutska kombinacija koja sadrži inhibitor histon deacetilaze 6 (koji se ovde pominje kao "HDAC6") i inhibitor B-ćelijskog limfoma 2 (koji se ovde naziva "BCL

[0006] U jednom aspektu, pronalazak ovde obezbeđuje farmaceutsku kombinaciju koja sadrži:

(a) inhibitor histon deacetilaze 6 (HDAC6) formule I:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so,

u kome,

prsten B je aril ili heteroaril;

R1je aril ili heteroaril, od kojih svaki može biti izborno supstituisan sa OH, halo ili C1-6-alkil;

i

R je H ili C1-6-alkil; i

(b) inhibitor BCL-2, gde inhibitor BCL-2 je 2-((1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)oksi)-4-(4-((4'-hloro)-5,5-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-[1,1'-bifenil]-2-il)metil)piperazin-1-il)-N-((3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)fenil)sulfonil)benzamid (venetoklaks) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0007] Pronalazak je definisan patentnim zahtevima. Svaki predmet koji ne spada u obim patentnih zahteva je dat samo u informativne svrhe. Sve reference u opisu na postupke lečenja odnose se na farmaceutsku kompoziciju i lek prema ovom pronalasku za upotrebu u postupku za lečenje ljudskog ili životinjskog tela terapijom.

[0008] U različitim primerima izvođenja farmaceutske kombinacije, prsten B je aril.

[0009] U različitim primerima izvođenja farmaceutske kombinacije, R1je aril ili heteroaril, od kojih svaki može biti izborno supstituisan sa halo.

[0010] U jednom primerima izvođenja Formule I, R1je aril koji je supstituisan sa OH, halo ili C1-6-alkil.

[0011] U sledećem primeru izvođenja Formule I, R1je C5-C7aril koji je supstituisan sa OH, halo ili C1-6-alkil.

[0012] U sledećem primeru izvođenja Formule I, R1je C4-C7heteroaril koji je supstituisan sa OH, halo ili C1-6-alkil.

[0013] U sledećem primeru izvođenja Formule I, R1je fenil koji je supstituisan sa OH, halo ili C1-6-alkil.

[0014] U sledećem primeru izvođenja Formule I, R1je fenil koji je supstituisan sa halo.

[0015] U sledećem primeru izvođenja Formule I, R1je fenil koji je supstituisan sa hloro.

[0016] U sledećem primeru izvođenja Formule I, prsten B je C5-C7aril.

[0017] U sledećem primeru izvođenja Formule I, prsten B je C4-C7heteroaril.

[0018] U sledećem primeru izvođenja Formule I, prsten B je fenil.

[0019] U različitim primerima izvođenja farmaceutske kombinacije, inhibitor HDAC6 Formule I je:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0020] U različitim primerima izvođenja farmaceutske kombinacije, inhibitor HDAC6 Formule I je:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0021] Inhibitor BCL-2 je 2-((1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)oksi)-4-(4-((4'-hloro-5,5-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-[1,1'-bifenil]-2-il)metil)piperazin-1-il)-N-((3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-)) il)metil)amino)fenil)sulfonil)benzamid (venetoklaks) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0022] U različitim primerima izvođenja farmaceutske kombinacije, inhibitor HDAC6 i inhibitor BCL-2 su u istoj formulaciji. U drugim primerima izvođenja farmaceutske kombinacije, inhibitor HDAC6 i inhibitor BCL-2 su u odvojenim formulacijama.

[0023] U različitim primerima izvođenja farmaceutske kombinacije, kombinacija je za istovremenu ili sekvencijalnu primenu.

[0024] U različitim primerima izvođenja, farmaceutska kombinacija je za upotrebu u lečenju kancera kod subjekta kome je to potrebno.

[0025] U drugim različitim primerima izvođenja, farmaceutska kombinacija je za upotrebu u pripremi leka za lečenje kancera.

[0026] U različitim oblicima farmaceutske kombinacije, kancer je hematološki kancer.

[0027] U različitim primerima izvođenja farmaceutske kombinacije, kancer je akutna mijelogena leukemija (AML), hronična limfocitna leukemija (CLL), ne-Hodgkinov limfom (npr. limfom mantle ćelija), multipli mijelom ili mijelodisplastični sindrom (MDS).

[0028] U različitim primerima izvođenja farmaceutske kombinacije, kancer je refraktoran ili otporan na tretman sa najmanje jednom prethodnom terapijom.

[0029] U jednom aspektu, pronalazak ovde obezbeđuje terapeutski efikasnu količinu

(a) inhibitora histon deacetilaze 6 (HDAC6) formule I:

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli,

u kome,

prsten B je aril ili heteroaril;

R1je aril ili heteroaril, od kojih svaki može biti izborno supstituisan sa OH, halo ili C1-6-alkil;

i

R je H ili C1-6-alkil; i

(b) inhibitora BCL-2, gde inhibitor BCL-2 je 2-((1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)oksi)-4-(4-((4'-hloro)-5,5-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-[1,1'-bifenil]-2-il)metil)piperazin-1-il)-N-((3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)fenil)sulfonil)benzamid (venetoklaks) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli,

za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera kod subjekta kome je to potrebno.

[0030] U različitim primerima izvođenja upotrebe, kancer je hematološki kancer.

[0031] U različitim primerima izvođenja upotrebe, kancer je akutna mijelogena leukemija (AML), hronična limfocitna leukemija (CLL), ne-Hodgkinov limfom (npr. limfom ćelija plašta), multipli mijelom ili mijelodisplastični sindrom (MDS).

[0032] U različitim primerima izvođenja upotrebe, kancer je refraktoran ili otporan na tretman sa najmanje jednom prethodnom terapijom.

[0033] U različitim primerima izvođenja upotrebe, inhibitor HDAC6 i inhibitor BCL-2 se primenjuju približno u isto vreme. U drugim primerima izvođenja upotrebe, inhibitor HDAC6 i inhibitor BCL-2 se daju u različito vreme.

[0034] Ovde je obezbeđena farmaceutska kombinacija kao što je ovde opisana za upotrebu u postupku smanjenja rasta i vitalnosti ćelija leukemije, koji obuhvata dovođenje u kontakt ćelije sa farmaceutskom kombinacijom koja je ovde data, i pri čemu ćelija je ćelija leukemije.

[0035] Takođe je otkrivena farmaceutska kompozicija koja sadrži

(a) inhibitor histon deacetilaze 6 (HDAC6) formule I:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so,

u kome,

prsten B je aril ili heteroaril;

R1je aril ili heteroaril, od kojih svaki može biti izborno supstituisan sa OH, halo ili C1-6-alkil;

i

R je H ili C1-6-alkil; i

(b) inhibitor BCL-2.

[0036] U jednom primeru izvođenja kompozicije, farmaceutska kompozicija dalje sadrži jedan ili više ekscipijenasa.

[0037] U jednom primeru izvođenja kompozicije, prsten B je aril. U različitim primerima izvođenja, R1je aril ili heteroaril, od kojih svaki može biti izborno supstituisan sa halo.

[0038] U sledećem primeru izvođenja kompozicije, jedinjenje formule I je:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0039] U sledećem primeru izvođenja kompozicije, jedinjenje formule I je:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0040] BCL-2 inhibitor je 2-((1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)oksi)-4-(4-((4'-hloro-5,5-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-[1,1'-bifenil]-2-il)metil)piperazin-1-il)-N-((3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-)) il)metil)amino)fenil)sulfonil)benzamid (venetoklaks) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

KRATAK OPIS CRTEŽA

[0041]

Sl. 1A, 1B, i 1C pokazuju procenat vijabilnosti sledećih ćelijskih linija: MOLM-13 (Sl. 1A), Kasumi-1 (Sl. 1B), i MV-4-11 (Sl. 1C), nakon izlaganja samo jedinjenju B, samo ABT-199 (koji se ovde takođe naziva "venetoklaks") ili kombinaciji jedinjenja B i ABT-199 u naznačenim koncentracijama.

Sl. 2A i 2B pokazuju stepen apoptoze na MV-4-11 ćelijama (Sl. 2A) i ćelijama HL-60 (Sl.

2B) kao što je mereno bojenjem Aneksinom V kao funkcija primene samo jedinjenja B, samo ABT-199 (takođe nazvanog "venetoklaks") ili kombinacije jedinjenja B i ABT-199 u naznačenim koncentracijama.

DETALJAN OPIS

[0042] Ovde je data farmaceutska kombinacija koja sadrži inhibitor histon deacetilaze (HDAC) i inhibitor BCL-2. Konkretno, ovde je obezbeđena farmaceutska kombinacija koja sadrži:

(a) inhibitor histon deacetilaze 6 (HDAC6) formule I:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so,

u kome,

prsten B je aril ili heteroaril;

R1je aril ili heteroaril, od kojih svaki može biti izborno supstituisan sa OH, halo ili C1-6-alkil;

i

R je H ili C1-6-alkil; i

(b) BCL-2 inhibitor, pri čemu inhibitor BCL-2 je 2-((1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)oksi)-4-(4-((4'-hloro)-5,5-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-[1,1'-bifenil]-2-il)metil)piperazin-1-il)-N-((3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)fenil)sulfonil)benzamid (venetoklaks) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0043] Određeni termini koji se ovde koriste su opisani u nastavku. Jedinjenja ovog pronalaska su opisana korišćenjem standardne nomenklature. Osim ako nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni termini korišćeni ovde imaju isto značenje koje obično razume stručnjak u oblasti kojoj ovaj pronalazak pripada.

[0044] Termin "alkil" se odnosi na zasićene ugljovodonične ostatke ravnog ili razgranatog lanca koji sadrže, u određenim primerima izvođenja, između jedan i šest, odnosno jedan i osam atoma ugljenika. Primeri C1-6-alkil ostataka uključuju metil, etil, propil, izopropil, nbutil, terc-butil, neopentil, n-heksil ostatke; i primeri C1-8-alkil ostataka uključuju metil, etil, propil, izopropil, n-butil, terc-butil, neopentil, n-heksil, heptil i oktil ostatke. Broj atoma ugljenika u alkil supstituentu može se označiti prefiksom gde je x minimalni, a y maksimalni broj atoma ugljenika u supstituentu.

[0045] Kako se ovde koristi, termin "halo" ili "halogen" sam ili kao deo drugog supstituenta označava, osim ako nije drugačije navedeno, atom fluora, hlora, broma ili joda, poželjno, fluor, hlor ili brom, poželjnije, hlor.

[0046] Termin "aril" se odnosi na mono- ili poli-ciklični karbociklični sistem prstenova koji ima jedan ili više aromatičnih prstenova, kondenzovanih ili nekondenzovanih, uključujući fenil, naftil, tetrahidronaftil, indanil, idenil i slično. U nekim primerima izvođenja, aril grupe imaju 6 atoma ugljenika. U nekim primerima izvođenja, aril grupe imaju od šest do deset atoma ugljenika. U nekim primerima izvođenja, aril grupe imaju od šest do šesnaest atoma ugljenika. U jednom primeru izvođenja, C5-C7aril grupe su ovde date.

[0047] Termin "heteroaril" se odnosi na mono- ili policiklični (npr., bi-, ili triciklični ili više) fuzionisani ili nefuzionisani ostatak ili sistem prstena koji ima najmanje jedan aromatični prsten, gde je jedan ili više atoma koji formiraju prsten su heteroatomi kao što su kiseonik, sumpor ili azot. U nekim primerima izvođenja, heteroaril grupa ima od oko jedan do šest atoma ugljenika, a u daljim primerima izvođenja od jednog do petnaest atoma ugljenika. U nekim primerima izvođenja, heteroaril grupa sadrži pet do šesnaest atoma u prstenu od kojih je jedan atom u prstenu izabran od kiseonika, sumpora i azota; nula, jedan, dva ili tri atoma u prstenu su dodatni heteroatomi nezavisno izabrani od kiseonika, sumpora i azota; a preostali atomi u prstenu su ugljenik. Heteroaril uključuje piridinil, pirazinil, pirimidinil, pirolil, pirazolil, imidazolil, tiazolil, oksazolil, izooksazolil, tiazolil, tiadiazolil, oksadiazolil, tiofenil, furanil, furanil, indolinoksolinozoil, indolilnoksilazoil, indolinoksazolil, izooksazolil, tiazolil. U jednom primeru izvođenja, C4-C7heteroaril grupe su ovde date.

[0048] Termin "kombinacija", "terapeutska kombinacija" ili "farmaceutska kombinacija" kako se ovde koristi odnosi se ili na fiksnu kombinaciju u jednom obliku jedinične doze, ili na nefiksnu kombinaciju, ili na komplet delova za kombinovanu primenu gde dva ili više terapeutska sredstva se mogu davati nezavisno, u isto vreme ili odvojeno u vremenskim intervalima, posebno kada ovi vremenski intervali dozvoljavaju da partneri u kombinaciji pokažu kooperativni, npr., sinergistički efekat.

[0049] Termin "kombinovana terapija" se odnosi na primenu dva ili više terapeutskih sredstava za lečenje terapeutskog stanja ili poremećaja opisanog u ovom otkriću. Takva primena obuhvata istovremenu primenu ovih terapeutskih sredstava na suštinski istovremen način, kao što je u jednoj formulaciji koja ima fiksni odnos aktivnih sastojaka ili u odvojenim formulacijama (npr. kapsule i/ili intravenske formulacije) za svaki aktivni sastojak. Pored toga, takva primena takođe obuhvata upotrebu svakog tipa terapeutskog sredstva na sekvencijalni ili odvojen način, bilo u približno isto vreme ili u različito vreme. Bez obzira da li se aktivni sastojci daju kao pojedinačna formulacija ili u odvojenim formulacijama, lekovi se daju istom pacijentu kao deo istog toka terapije. U svakom slučaju, režim lečenja će obezbediti korisne efekte u lečenju stanja ili poremećaja opisanih ovde.

[0050] Kako se ovde koristi, termin "farmaceutski prihvatljiva so" odnosi se na derivate otkrivenih jedinjenja u kojima je matično jedinjenje modifikovano konvertovanjem postojeće kiseline ili baze u njen oblik soli. Primeri farmaceutski prihvatljivih soli uključuju soli mineralnih ili organskih kiselina baznih ostataka kao što su amini; alkalije ili organske soli kiselih ostataka kao što su karboksilne kiseline; i slično. Farmaceutski prihvatljive soli ovog pronalaska uključuju konvencionalne netoksične soli matičnog jedinjenja formirane, na primer, od netoksičnih neorganskih ili organskih kiselina. Farmaceutski prihvatljive soli ovog pronalaska mogu se sintetisati iz matičnog jedinjenja koje sadrži bazni ili kiseli ostatak konvencionalnim hemijskim postupcima. Generalno, takve soli se mogu dobiti reakcijom slobodnih kiselinskih ili baznih oblika ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze ili kiseline u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u smeši ova dva; generalno, poželjni su nevodeni medijumi kao što su etar, etil acetat, etanol, izopropanol ili acetonitril. Liste pogodnih soli nalaze se u Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418 i Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977). Osim ako nije drugačije naznačeno, ili jasno naznačeno u tekstu, upućivanje na terapeutska sredstva korisna u farmaceutskoj kombinaciji datoj ovde uključuje i slobodnu bazu jedinjenja i sve farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja.

[0051] Termin "farmaceutski prihvatljiv" kako se ovde koristi odnosi se na ona jedinjenja, materijale, kompozicije i/ili oblike doziranja, koji su, u okviru racionalne medicinske procene, pogodni za kontakt sa tkivima toplokrvne životinje, npr. sisara ili čoveka, bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora i drugih komplikacija problema srazmernih razumnom odnosu koristi/rizik.

[0052] Termini "fiksna kombinacija", "fiksna doza" i "pojedinačna formulacija" kako se ovde koriste odnose se na jedan nosač ili vehikulum ili dozni oblik formulisan da isporuči količinu koja je zajedno terapeutski efikasna za lečenje kancera, oba terapeutska sredstva na pacijenta. Jedan vehikulum je dizajniran da isporuči količinu svakog od sredstava, zajedno sa bilo kojim farmaceutski prihvatljivim nosačima ili ekscipijensima. U nekim primerima izvođenja, nosač je tableta, kapsula, pilula ili flaster. U drugim primerima izvođenja, vehikulum je rastvor ili suspenzija.

1

[0053] Termin "nefiksna kombinacija", "komplet delova" i "odvojene formulacije" znači da se aktivni sastojci, tj. inhibitor HDAC6 i inhibitor BCL-2, primenjuju na pacijenta kao odvojeni entiteti ili istovremeno, istovremeno ili uzastopno bez posebnih vremenskih ograničenja, pri čemu takva primena obezbeđuje terapeutski efikasne nivoe dva jedinjenja u telu subjekta kome je to potrebno. Ovo poslednje važi i za koktel terapiju, na primer, primenu tri ili više aktivnih sastojaka.

[0054] "Oralni dozni oblik" uključuje jedinični oblik doze koji je propisan ili namenjen za oralnu primenu. U jednom primeru izvođenja farmaceutskih kombinacija datih ovde, inhibitor HDAC6 (npr. jedinjenja A ili B) se primenjuje kao oralni dozni oblik.

[0055] Termin "lečenje" ili "tretman" kako se ovde koristi obuhvata tretman kojim se olakšava, smanjuje ili ublažava najmanje jedan simptom kod subjekta ili utiče na odlaganje napredovanja bolesti. Na primer, lečenje može biti smanjenje jednog ili više simptoma poremećaja ili potpuno iskorenjivanje poremećaja, kao što je kancer.

[0056] Termin "sprečiti", "sprečavati" ili "prevencija" kako se ovde koristi obuhvata prevenciju najmanje jednog simptoma povezanog sa uzrokovanog stanjem, bolešću ili poremećajem koji se sprečava.

[0057] Termin "farmaceutski efikasna količina", "terapeutski efikasna količina" ili "klinički efikasna količina" kombinacije terapeutskih sredstava je količina dovoljna da obezbedi vidljivo ili klinički značajno poboljšanje u odnosu na osnovne klinički vidljive znakove i simptome poremećaja koji se leče kombinacijom.

[0058] Termin "zajednički terapeutski aktivan" ili "zajednički terapeutski efekat" kako se ovde koristi znači da se terapeutska sredstva mogu davati odvojeno (na hronološki postepeni način, posebno na način specifičan za sekvencu) u takvim vremenskim intervalima koje preferiraju, kod toplokrvnih životinja, posebno ljudi, koje treba lečiti, i dalje pokazuju (poželjno sinergijsku) interakciju (zajednički terapeutski efekat). Da li je to slučaj, može se, između ostalog, utvrditi praćenjem nivoa jedinjenja u krvi, pokazujući da su oba jedinjenja prisutna u krvi čoveka koji se leči barem tokom određenih vremenskih intervala.

[0059] Termin "subjekat" ili "pacijent" kako se ovde koristi ima za cilj da uključi životinje, koje su sposobne da pate od ili da obole od kancera ili bilo kog poremećaja koji uključuje, direktno ili indirektno, kancer. Primeri subjekata uključuju sisare, npr. ljude, majmune, čovekolike majmune, pse, krave, konje, svinje, ovce, koze, mačke, miševe, zečeve, pacove i transgene životinje koje nisu ljudi. U jednom primeru izvođenja, subjekt je čovek, na primer, čovek koji pati od kancera, pod rizikom je da pati ili je potencijalno sposoban da pati od kancera.

[0060] Kako se ovde koristi, izraz „rezistentni/otporni“ ili „refraktorni“ na terapeutsko sredstvo kada se odnosi na pacijenta sa kancerom znači da kancer ima urođenu ili postignutu otpornost na efekte terapeutskog sredstva kao rezultat kontakta sa terapeutskim agensom. Alternativno rečeno, kancer je otporan na uobičajeni standard nege povezan sa određenim terapeutskim agensom.

[0061] Izrazi "sadrži" i "uključujući" se ovde koriste u svom otvorenom i neograničavajućem smislu osim ako nije drugačije naznačeno.

[0062] Termini "a" i "an" i "the" i slične reference u kontekstu opisa pronalaska (posebno u kontekstu sledećih zahteva) treba da se tumače tako da pokrivaju i jedninu i množinu, osim ako je drugačije naznačeno ovde ili je jasno u suprotnosti sa kontekstom. Kada se oblik množine koristi za jedinjenja, soli i slično, ovo se takođe podrazumeva da znači jedno jedinjenje, so ili slično.

[0063] Termini "oko" ili "približno" uglavnom razumeju osobe koje poznaju relevantnu predmetnu oblast, ali u određenim okolnostima mogu značiti unutar 20%, unutar 10% ili unutar 5% date vrednosti ili opsega. Alternativno, posebno u biološkim sistemima, izraz "oko" znači u okviru približno log (tj. reda veličine) ili u okviru faktora dva date vrednosti.

[0064] Termin "sinergistički efekat" kako se ovde koristi, odnosi se na dejstvo dva sredstva kao što je, na primer, jedinjenje formule I ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i inhibitor BCL-2 (npr. venetoklaks), da proizvede efekat, na primer, usporavanje simptomatske progresije kancera ili njegovih simptoma, što je veće od jednostavnog dodavanja efekata svakog leka koji se primenjuje sam. Sinergistički efekat se može izračunati, na primer, korišćenjem odgovarajućih metoda kao što je Sigmoid-Emax jednačina (Holford, N. H. G. and Scheiner, L. B., Clin. Pharmacokinet. 6: 429-453 (1981)), jednačina Loeve aditivnosti (Loewe S., and Muischnek H. Arch. Exp. Pathol Pharmacol.114: 313-326 (1926)) i jednačina srednjeg efekta (Chou, T. C. And Talalay, P., Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55 (1984)). Svaka gore pomenuta jednačina može da se primeni na eksperimentalne podatke da bi se napravio odgovarajući grafikon koji bi pomogao u proceni efekata kombinacije lekova. Odgovarajući grafikoni povezani sa jednačinama pomenutim iznad su kriva koncentracija-efekat, kriva izolograma i kriva kombinovanog indeksa, respektivno. Farmaceutske kombinacije koje su ovde date, pokazuju sinergističke efekte u vezi sa rastom ćelija i održivošću u vezi sa ćelijskim linijama leukemije (videti, npr. Primere 3 i 4). U nekim primerima izvođenja, ovde date farmaceutske kombinacije su date u količinama koje rezultiraju sinergističkim efektima. U nekim primerima izvođenja, ovde date farmaceutske kombinacije su date u količinama koje rezultiraju većim od aditivnih efekata.

[0065] Izraz "histon deacetilaza" ili "HDAC" odnosi se na enzime koji uklanjaju acetil grupe iz lizinskih ostataka u histonima jezgra, što dovodi do formiranja kondenzovanog i transkripciono utišanog hromatina. Trenutno je poznato 18 histonskih deacetilaza, koje su klasifikovane u četiri grupe. HDAC klase I, koji uključuju HDAC1, HDAC2, HDAC3 i HDAC8, povezani su sa genom RPD3 kvasca. HDAC klase II, koji uključuju HDAC4, HDAC5, HDAC6, HDAC7, HDAC9 i HDAC10, povezani su sa genom Hda1 kvasca. HDAC klase III, koji su takođe poznati kao sirtuini, povezani su sa genom Sir2 i uključuju SIRT1-7. HDAC klase IV, koji sadrže samo HDAC11, imaju karakteristike HDAC klase I i II. Termin "HDAC" se odnosi na bilo koju ili više od 18 poznatih histonskih deacetilaza, osim ako nije drugačije naznačeno.

[0066] Termin "inhibitor histon deacetilaze" (inhibitori HDAC, HDACi, HDI) kako se ovde koristi odnosi se na jedinjenje koje selektivno ciljno deluje na, smanjuje ili inhibira najmanje jednu aktivnost histon deacetilaze.

Inhibitori histon deacetilaze

[0067] Ovde su obezbeđene farmaceutske kombinacije koje sadrže inhibitor histon deacetilaze 6 (HDAC6) Formule I (takođe se ovde pominje kao "jedinjenja Formule I"):

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so,

u kome,

prsten B je aril ili heteroaril;

R1je aril ili heteroaril, od kojih svaki može biti izborno supstituisan sa OH, halo ili C1-6-alkil;

i

R je H ili C1-6-alkil.

1

[0068] U jednom primeru izvođenja jedinjenja formule I, prsten B je aril. U različitim primerima izvođenja, R1je aril ili heteroaril, od kojih svaki može biti izborno supstituisan sa halo.

[0069] U jednom primeru izvođenja Formule I, R1je aril koji je supstituisan sa OH, halo ili C1-6-alkil.

[0070] U sledećem primeru izvođenja Formule I, R1je C5-C7aril koji je supstituisan sa OH, halo ili C1-6-alkil.

[0071] U sledećem primeru izvođenja Formule I, R1je C4-C7heteroaril koji je supstituisan sa OH, halo ili C1-6-alkil.

[0072] U sledećem primeru izvođenja Formule I, R1je fenil koji je supstituisan sa OH, halo ili C1-6-alkil.

[0073] U sledećem primeru izvođenja Formule I, R1je fenil koji je supstituisan sa halo.

[0074] U sledećem primeru izvođenja Formule I, R1je fenil koji je supstituisan sa hloro.

[0075] U sledećem primeru izvođenja Formule I, prsten B je C5-C7aril.

[0076] U sledećem primeru izvođenja Formule I, prsten B je C4-C7heteroaril.

[0077] U sledećem primeru izvođenja Formule I, prsten B je fenil.

[0078] U specifičnom primeru izvođenja, jedinjenje formule I je Jedinjenje A, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili Jedinjenje B, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kao što je prikazano u Tabeli 1:

Tabela 1.

[0079] Radi pogodnosti, grupa inhibitora histon deacetilaze 6 Formule I i njene soli se zajednički nazivaju jedinjenja Formule I, što znači da će se pozivanje na jedinjenja Formule I odnositi na bilo koje od jedinjenja ili njihove farmaceutski prihvatljive soli alternativno.

[0080] Jedinjenja formule I (npr. jedinjenja A i B) su poznati inhibitori HDAC6 i opisana su u PCT objavi br. WO2011/091213. Jedinjenja A i B se trenutno istražuju u fazi 1b kliničkog razvoja za lečenje multiplog mijeloma.

[0081] Priprema jedinjenja A i B je takođe opisana ovde kao Primer 1. Poželjno, jedinjenja A i B su u obliku slobodne baze.

[0082] Poželjno je da su soli jedinjenja formule I farmaceutski prihvatljive soli; pogodni protivjoni koji formiraju farmaceutski prihvatljive soli su poznati u ovoj oblasti.

Inhibitori BCL-2

[0083] Termin " inhibitor BCL-2" kako se ovde koristi, odnosi se na jedinjenje koje selektivno ciljno deluje na, smanjuje ili inhibira najmanje jednu aktivnost BCL-2. Familija proteina B-ćelijskog limfoma 2 (Bcl-2) su ključni regulatori mitohondrijalnog (koji se takođe naziva "intrinzičnim") puta apoptoze. Vidi, Danial, N. N. i Korsmeyer, S. J. Cell (2004) 116, 205-219. Pogrešna regulacija BCL-2 je uključena u širok spektar kancera, posebno hematoloških kancera kao što su folikularni limfom, difuzni krupnoćelijski limfom i hronična limfocitna leukemija. Adams, J. M. i Cory, S. Science (1998) 281, 1322-1326.

[0084] Primeri inhibitora BCL-2 uključuju, npr., 4-[4-[[2-(4-hlorofenil)-5,5-dimetil-1-cikloheksen-1-il]metil]-1-piperazinil]-N-[[4-[[(1R)-3-(4-morfolinil)-1-[(feniltio)metil]propil]amino]-3-[(trifluorometil)sulfonil]fenil] sulfonil]benzamid (navitoklaks ili ABT-263); tetrokarcin A; antimicin; gosipol (npr. (-)-gosipol sirćetna kiselina); obatoklaks (GX15-070); etil 2-amino-6-bromo-4-(1-cijano-2-etoksi-2-oksoetil)-4H-hromen-3-karboksilat (HA 14-1); oblimersen; Bak BH3 peptid; 4-[4-[(4'-hloro[1,1'-bifenil]-2-il)metil]-1-piperazinil]-N-[[4-[[(1R)-3-(dimetilamino)-1-[(feniltio)metil]propil]amino]-3-nitrofenil]sulfonil]-benzamid (ABT-737); 2-((1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)oksi)-4-(4-((4'-hloro-5,5-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro)-[1,1'-bifenil]-2-il)metil)piperazin-1-il)-N-((3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)fenil)sulfonil)benzamid (venetoklaks); i S55746 (BCL201).

[0085] Venetoklaks se može koristiti u farmaceutskim kombinacijama datim ovde.

[0086] Strukture određenih inhibitora BCL-2 su prikazane u tabeli 2:

1

Tabela 2.

1

[0087] Inhibitor BCL-2 je venetoklaks (koji se takođe naziva "ABT-199"), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0088] Venetoklaks je odobrila FDA za lečenje pacijenata sa hroničnom limfocitnom leukemijom (CLL) sa delecijom 17p, što je otkriveno testom koji je odobrila FDA, a koji su primili najmanje jednu prethodnu terapiju (pogledajte, na primer, oznaku FDA za VENCLEXTA<™>

http://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda docs/label/2016/208573s000lbl.pdf).

[0089] Podaci dati ovde pokazuju da kombinovana terapija koja je ovde data (npr. inhibitori HDAC6 i inhibitor BCL-2) sinergistički smanjuje održivost određenih ćelijskih linija kancera (videti, npr., Primer 3). Dalje, kombinovana terapija koja je ovde data sinergistički povećava apoptozu određenih ćelijskih linija kancera (videti, npr., Primer 4).

[0090] Jedinjenja formule I ili inhibitor BCL-2, ili oba, mogu se primenjivati u slobodnom obliku ili u obliku farmaceutski prihvatljive soli.

[0091] Ovde je takođe obezbeđeno komercijalno pakovanje koje sadrži, kao terapeutska sredstva, kombinaciju koja je ovde data, zajedno sa uputstvima za istovremenu, odvojenu ili sekvencijalnu primenu za upotrebu u odlaganju progresije ili lečenju kancera.

Upotrebe za lečenje

[0092] Ovde je obezbeđena terapeutski efikasna količina ovde date farmaceutske kombinacije, tj. farmaceutska kombinacija koja sadrži:

(a) inhibitor histon deacetilaze 6 (HDAC6) formule I:

1

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so,

u kome,

prsten B je aril ili heteroaril;

R1je aril ili heteroaril, od kojih svaki može biti izborno supstituisan sa OH, halo ili C1-6alkil;

i

R je H ili C1-6-alkil; i

(b) inhibitor BCL-2, pri čemu inhibitor BCL-2 je 2-((1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)oksi)-4-(4-((4'-hloro)-5,5-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-[1,1'-bifenil]-2-il)metil)piperazin-1-il)-N-((3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)fenil)sulfonil)benzamid (venetoklaks) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so,

za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera kod subjekta kome je to potrebno.

[0093] U specifičnoj varijanti upotrebe, inhibitor HDAC6 je jedinjenje B, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0094] Primene koje su ovde date mogu se koristiti i za solidne tumore i za tečne tumore. Dalje, u zavisnosti od tipa tumora i određene kombinacije koja se koristi, može se postići smanjenje zapremine tumora. Kombinacija koja je ovde otkrivena je takođe pogodna da spreči metastatsko širenje tumora i rast ili razvoj mikrometastaza. Kombinacija koja je ovde otkrivena je pogodna za lečenje pacijenata sa lošom prognozom.

[0095] U različitim primerima izvođenja upotrebe, kancer je hematološki kancer. Hematološki kanceri uključuju leukemije, limfome i mijelome.

[0096] U različitim primerima izvođenja upotrebe, kancer je akutna mijelogena leukemija (AML), hronična limfocitna leukemija (CLL), ne-Hodgkinov limfom, multipli mijelom ili mijelodisplastični sindrom (MDS). U dodatnom primeru izvođenja, kancer je limfom mantle ćelija (MCL). U dodatnom primeru izvođenja, kancer je B-ćelijski limfom.

1

[0097] U različitim primerima izvođenja upotrebe, kancer je refraktoran ili otporan na tretman najmanje jednom prethodnom terapijom.

[0098] Ovde je otkriven postupak za lečenje kancera kod subjekta kome je to potrebno, koji sadrži primenu na subjekta terapeutski efikasne količine inhibitora HDAC formule I, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i terapeutski efikasne količine inhibitora BCL-2. Ovde je otkriven postupak za lečenje kancera kod subjekta kome je to potrebno, koji sadrži primenu na subjekta terapeutski efikasne količine jedinjenja A, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i terapeutski efikasne količine inhibitora BCL-2.

[0099] Ovde je otkriven postupak za lečenje hematološkog karcinoma kod subjekta kome je to potrebno, koji sadrži primenu na subjekta terapeutski efikasne količine inhibitora HDAC formule I, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i terapeutski efikasne količine BCL- 2, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Ovde je otkriven postupak za lečenje hematološkog karcinoma kod subjekta kome je to potrebno, koji sadrži primenu na subjekta terapeutski efikasne količine jedinjenja A, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i terapeutski efikasne količine inhibitora BCL-2, ili njegova farmaceutski prihvatljive soli.

[0100] Ovde je otkriven postupak za lečenje leukemije kod subjekta kome je to potrebno, koji sadrži primenu na subjekta terapeutski efikasne količine inhibitora HDAC formule I, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i terapeutski efikasne količine inhibitora BCL-2, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Ovde je otkriven postupak za lečenje leukemije kod subjekta kome je to potrebno, koji sadrži primenu na subjekta terapeutski efikasne količine jedinjenja A, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i terapeutski efikasne količine inhibitora BCL-2, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.

[0101] Otkriven je postupak za lečenje kancera kod subjekta kome je to potrebno, koji sadrži primenu na subjekta terapeutski efikasne količine jedinjenja A, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i terapeutski efikasne količine venetoklaksa, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Ovaj primer izvođenja pokazuje sinergiju tako da se subterapeutske količine jedinjenja A ili venetoklaksa mogu koristiti u postupku.

[0102] Otkriven je postupak za lečenje hematološkog kancera kod subjekta kome je to potrebno, koji sadrži primenu na subjekta terapeutski efikasne količine jedinjenja A, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i terapeutski efikasne količine venetoklaksa, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0103] Otkriven je postupak za lečenje leukemije kod subjekta kome je to potrebno, koji sadrži primenu na subjekta terapeutski efikasne količine jedinjenja A, ili njegove farmaceutski

1

prihvatljive soli, i terapeutski efikasne količine venetoklaksa, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0104] Ovde je otkriven postupak za lečenje hematološkog karcinoma kod subjekta kome je to potrebno, koji sadrži primenu na subjekta terapeutski efikasne količine jedinjenja B, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i terapeutski efikasne količine inhibitora BCL-2, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0105] Ovde je otkriven postupak za lečenje leukemije kod subjekta kome je to potrebno, koji sadrži primenu na subjekta terapeutski efikasne količine jedinjenja B, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i terapeutski efikasne količine inhibitora BCL-2, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0106] Otkriven je postupak za lečenje kancera kod subjekta kome je to potrebno, koji sadrži primenu na subjekta terapeutski efikasne količine jedinjenja B, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i terapeutski efikasne količine venetoklaksa, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Ovaj primer izvođenja pokazuje sinergiju tako da se subterapeutske količine jedinjenja B ili venetoklaksa mogu koristiti u postupku.

[0107] Otkriven je postupak za lečenje hematološkog kancera kod subjekta kome je to potrebno, koji sadrži primenu na subjekta terapeutski efikasne količine jedinjenja B, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i terapeutski efikasne količine venetoklaksa, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0108] Otkriven je postupak za lečenje leukemije kod subjekta kome je to potrebno, koji sadrži primenu na subjekta terapeutski efikasne količine jedinjenja B, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, i terapeutski efikasne količine venetoklaksa, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0109] Subjekt koji se ovde razmatra je tipično čovek. Međutim, subjekt može biti bilo koji sisar za koji je poželjan tretman. Prema tome, ovde opisane upotrebe mogu se primeniti i na humane i na veterinarske primene.

Farmaceutske kombinacije i kompozicije

[0110] Ovde je data farmaceutska kombinacija koja sadrži inhibitor histon deacetilaze (HDAC) i inhibitor BCL-2.

[0111] U jednom aspektu, ovde je obezbeđena farmaceutska kombinacija koja sadrži:

(a) inhibitor histon deacetilaze 6 (HDAC6) formule I:

2

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so,

u kome,

prsten B je aril ili heteroaril;

R1je aril ili heteroaril, od kojih svaki može biti izborno supstituisan sa OH, halo ili C1-6-alkil;

i

R je H ili C1-6-alkil; i

(b) inhibitor BCL-2, pri čemu inhibitor BCL-2 je 2-((1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)oksi)-4-(4-((4'-hloro)-5,5-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-[1,1'-bifenil]-2-il)metil)piperazin-1-il)-N-((3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)fenil)sulfonil)benzamid (venetoklaks), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0112] U različitim primerima izvođenja farmaceutske kombinacije, prsten B je aril.

[0113] U različitim primerima izvođenja farmaceutske kombinacije, R1je aril ili heteroaril, od kojih svaki može biti izborno supstituisan sa halo.

[0114] U različitim primerima izvođenja farmaceutske kombinacije, jedinjenje Formule I je Jedinjenje A, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. U sledećem primeru izvođenja, jedinjenje Formule I je Jedinjenje B, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0115] Inhibitor BCL-2 je 2-((1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)oksi)-4-(4-((4'-hloro-5,5-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-[1,1'-bifenil]-2-il)metil)piperazin-1-il)-N-((3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-)) il)metil)amino)fenil)sulfonil)benzamid (venetoklaks) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0116] U specifičnom primeru izvođenja farmaceutske kombinacije, inhibitor HDAC6 je Jedinjenje B, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0117] U različitim primerima izvođenja farmaceutske kombinacije, inhibitor HDAC6 i inhibitor BCL-2 su u istoj formulaciji. U ostalim primerima izvođenja farmaceutske kombinacije, inhibitor HDAC6 i inhibitor BCL-2 su u odvojenim formulacijama.

[0118] U različitim primerima izvođenja farmaceutske kombinacije, kombinacija je za istovremenu ili sekvencijalnu primenu.

[0119] U različitim primerima izvođenja, farmaceutska kombinacija je za upotrebu u lečenju kancera kod subjekta kome je to potrebno.

[0120] U jednom primeru izvođenja, kombinacija pronalaska se koristi za lečenje ili prevenciju kancera koje sadrži primenu na subjekta kombinovane terapije, koja sadrži efikasnu količinu inhibitora HDAC6 (tj. jedinjenja formule I) i efikasnu količinu inhibitora BCL-2. Poželjno, ova jedinjenja se daju u terapeutski efikasnim dozama koje, kada se kombinuju, daju koristan efekat. Primena može da obuhvata odvojenu primenu svake komponente, bilo istovremeno, ili uzastopno.

[0121] U različitim primerima izvođenja, farmaceutska kombinacija je za upotrebu u pripremi leka za lečenje ili prevenciju kancera. U dodatnom primeru izvođenja, farmaceutska kombinacija je za upotrebu u pripremi leka za lečenje kancera.

[0122] Farmaceutska kombinacija koja je ovde data može takođe inhibirati rast i solidnih i tečnih tumora. Dalje, u zavisnosti od tipa tumora i određene kombinacije koja se koristi, može se postići smanjenje zapremine tumora. Kombinacija koja je ovde otkrivena je takođe pogodna da spreči metastatsko širenje tumora i rast ili razvoj mikrometastaza. Kombinacija koja je ovde otkrivena je pogodna za lečenje pacijenata sa lošom prognozom.

[0123] U ostalim različitim primerima izvođenja, farmaceutska kombinacija je za upotrebu u pripremi leka za lečenje kancera.

[0124] U različitim primerima izvođenja farmaceutske kombinacije, kancer je hematološki kancer. Hematološki kanceri uključuju leukemije, limfome i mijelome.

[0125] U različitim primerima izvođenja farmaceutske kombinacije, kancer je akutna mijelogena leukemija (AML), hronična limfocitna leukemija (CLL), ne-Hodgkinov limfom, multipli mijelom ili mijelodisplastični sindrom (MDS). U dodatnom primeru izvođenja, kancer je limfom mantle ćelija (MCL). U dodatnom primeru izvođenja, kancer je B-ćelijski limfom.

[0126] U različitim primerima izvođenja farmaceutske kombinacije, kancer je refraktoran ili otporan na tretman sa najmanje jednom prethodnom terapijom.

[0127] Ovde su obezbeđene farmaceutske kompozicije koje sadrže inhibitor histon deacetilaze (HDAC) i inhibitor BCL-2.

[0128] Kako se ovde koristi, termin "farmaceutska kompozicija" je ovde definisan da se odnosi na smešu ili rastvor koji sadrži terapeutsko sredstvo(a) koji će se primeniti na subjekta, na primer, sisara ili čoveka, u cilju prevencije ili lečenja određene bolesti ili stanja koje utiče na sisara.

[0129] Ovde je obezbeđena farmaceutska kompozicija koji sadrži:

(a) inhibitor histon deacetilaze 6 (HDAC6) formule I:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so,

u kome,

prsten B je aril ili heteroaril;

R1je aril ili heteroaril, od kojih svaki može biti izborno supstituisan sa OH, halo ili C1-6-alkil;

i

R je H ili C1-6-alkil; i

(b) inhibitor BCL-2 gde inhibitor BCL-2 je 2-((1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)oksi)-4-(4-((4'-hloro-5,5-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-[1,1'-bifenil]-2-il)metil)piperazin-1-il)-N-((3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)fenil)sulfonil)benzamid (venetoklaks) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0130] U jednom primeru izvođenja kompozicije, prsten B je aril. U različitim primerima izvođenja, R1je aril ili heteroaril, od kojih svaki može biti izborno supstituisan sa halo.

[0131] U drugom primeru izvođenja kompozicije, jedinjenje Formule I je Jedinjenje A, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. U drugom primeru izvođenja kompozicije, jedinjenje Formule I je Jedinjenje B, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0132] Inhibitor BCL-2 je 2-((1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)oksi)-4-(4-((4'-hloro-5,5-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-[1,1'-bifenil]-2-il)metil)piperazin-1-il)-N-((3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-

2

4-))il)metil)amino)fenil)sulfonil)benzamid (venetoklaks)) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0133] U specifičnom primeru izvođenja kompozicije, jedinjenje formule I je Jedinjenje A, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0134] U specifičnom primeru izvođenja kompozicije, jedinjenje Formule I je Jedinjenje B, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0135] U jednom primeru izvođenja kompozicije, farmaceutska kompozicija dalje sadrži jedan ili više ekscipijenasa. Kako se ovde koristi, termin "farmaceutski prihvatljiv ekscipijens" ili "farmaceutski prihvatljiv nosač" uključuje sve rastvarače, disperzione medijume, obloge, surfaktante, antioksidante, konzervanse (npr., antibakterijska sredstva, antifungalna sredstva), izotonična sredstva, sredstva za odlaganje apsorpcije, soli, konzervanse, lekove, stabilizatore lekova, vezujuća sredstva, ekscipijense, sredstva za raspadanje, lubrikante, zaslađivače, sredstva za poboljšanje ukusa, boje i slično i njihove kombinacije, kao što bi bilo poznato stručnjacima u ovoj oblasti (videti, na primer, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289-1329). Osim u meri u kojoj bilo koji konvencionalni nosač nije kompatibilan sa aktivnim sastojkom, razmatra se njegova upotreba u terapeutskim ili farmaceutskim kompozicijama.

[0136] Farmaceutska kompozicija može da sadrži, od oko 0,1% do oko 99,9%, poželjno od oko 1% do oko 60%, terapeutskog sredstva (sredstava).

[0137] Pogodne farmaceutske kompozicije za kombinovanu terapiju za enteralnu ili parenteralnu primenu su, na primer, one u jediničnim doznim oblicima, kao što su šećerom obložene tablete, tablete, kapsule ili supozitorije, ili ampule. Ako nije drugačije naznačeno, one se pripremaju na način poznat sam po sebi, na primer pomoću različitih konvencionalnih mešanja, usitnjavanja, direktne kompresije, granulacije, oblaganja šećerom, rastvaranja, procesa liofilizacije, granulacije rastopa ili tehnika proizvodnje koje su jasne stručnjacima iz date oblasti tehnike. Podrazumeva se da jedinični sadržaj kombinovanog partnera sadržan u pojedinačnoj dozi svakog doznog oblika ne mora sam po sebi da čini efikasnu količinu pošto se neophodna efikasna količina može postići primenom većeg broja doznih jedinica.

Primena/doza

[0138] Upotreba za lečenje kancera u skladu sa ovde datim otkrićem može da sadrži (i) primenu inhibitora HDAC6 (a) u slobodnom ili farmaceutski prihvatljivom obliku soli i (ii) primenu inhibitora BCL-2 (b) u slobodnom ili farmaceutski prihvatljivom obliku soli istovremeno ili uzastopno, u bilo kom redosledu, u zajednički terapijski efikasnim količinama, poželjno u sinergistički efikasnim količinama, npr. u dnevnim ili isprekidanim dozama. Pojedinačni kombinovani partneri farmaceutske kombinacije dati ovde mogu se primenjivati odvojeno u različito vreme tokom terapije ili istovremeno u podeljenim ili pojedinačnim kombinovanim oblicima. Upotrebu koja je ovde data, stoga, treba shvatiti kao obuhvatanje svih takvih režima istovremenog ili naizmeničnog tretmana i termin "primena" treba tumačiti u skladu sa tim.

[0139] Na primer, u jednom primeru izvođenja upotrebe, prvo se primenjuje inhibitor HDAC6, a zatim inhibitor BCL-2. U sledećem primeru izvođenja upotrebe, prvo se primenjuje inhibitor BCL-2, a zatim inhibitor HDAC6.

[0140] Jedinjenja Formule I mogu da se daju oralno u količini od oko 10 mg do oko 1000 mg (uključujući, na primer, oko 10 mg do oko 500 mg) dnevno u jednoj ili višestrukim dozama. Prema tome, u jednom primeru izvođenja upotrebe za lečenje koje je ovde dato, jedinjenje formule I se primenjuje u dozi od oko 10 mg, 20 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 110 mg, 120 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 170 mg, 180 mg, 190 mg, 200 mg, 210 mg, 220 mg, 230 mg, 240 mg, 250 mg, 260 mg, 270 mg, 280 mg, 290 mg, 300 mg, 310 mg, 320 mg, 330 mg, 340 mg, 350 mg, 360 mg, 370 mg, 380 mg, 390 mg, 400 mg, 410 mg, 420 mg, 430 mg, 440 mg, 450 mg, 460 mg, 470 mg, 480 mg, 490 mg, ili 500 mg dnevno. U dodatnom primeru izvođenja, jedinjenje Formule I se primenjuje u dozi od oko 20 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 110 mg, 120 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 170 mg, 180 mg, 190 mg, ili 200 mg dnevno. U jednom primeru izvođenja farmaceutske kombinacije, jedinjenje A je u količini od 600 mg do 3000 mg (npr. oko 600, oko 800, oko 1000, oko 1200, oko 1400, oko 1600, oko 1800, oko 2000 mg). U dodatnom primeru izvođenja farmaceutske kombinacije, jedinjenje A je u količini od 600 mg do 2000 mg. U poželjnom primeru izvođenja farmaceutske kombinacije, jedinjenje A je u količini od 180 mg do 480 mg.

[0141] U sledećem primeru izvođenja farmaceutske kombinacije, jedinjenje A je u količini od 5 mg do 600 mg (npr. oko 5, oko 25, oko 50, oko 100, oko 200, oko 300, oko 400, oko 500, oko 600 mg). U sledećem primeru izvođenja farmaceutske kombinacije, jedinjenje A je 10 mg do 200 mg.

[0142] U jednom primeru izvođenja farmaceutske kombinacije, jedinjenje B je u količini od 600 mg do 3000 mg (npr. oko 600, oko 800, oko 1000, oko 1200, oko 1400, oko 1600, oko 1800, oko 2000 mg). U dodatnom primeru izvođenja farmaceutske kombinacije, jedinjenje B

2

je u količini od 600 mg do 2000 mg. U poželjnom primeru izvođenja farmaceutske kombinacije, jedinjenje B je u količini od 180 mg do 480 mg.

[0143] U sledećem primeru izvođenja farmaceutske kombinacije, jedinjenje B je u količini od 5 mg do 600 mg (npr. oko 5, oko 25, oko 50, oko 100, oko 200, oko 300, oko 400, oko 500, oko 600 mg). U sledećem primeru izvođenja farmaceutske kombinacije, jedinjenje B je 10 mg do 200 mg.

[0144] U jednom primeru izvođenja kombinovane terapije koja je ovde data, venetoklaks se primenjuje oralno. U dodatnom primeru izvođenja, dnevna doza venetoklaksa je između oko 10 i oko 500 mg dnevno (uključujući npr. oko 10 mg do oko 400 mg, oko 10 mg do oko 300 mg, ili oko 10 mg do oko 200 mg) na dan u jednoj ili više doza. U drugim primerima izvođenja kombinovana terapija data ovde, inhibitor BCL-2 (venetoklaks) se primenjuje u dozi od oko 10 mg, 20 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 110 mg, 120 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 170 mg, 180 mg, 190 mg, 200 mg, 210 mg, 220 mg, 230 mg, 240 mg, 250 mg 260 mg, 270 mg, 280 mg, 290 mg, 300 mg, 310 mg, 320 mg, 330 mg, 340 mg, 350 mg, 360 mg, 370 mg, 380 mg, 390 mg, 400 mg, 410 mg, 420 mg, 430 mg, 440 mg, 450 mg, 460 mg, 470 mg, 480 mg, 490 mg ili 500 mg dnevno. U dodatnom primeru izvođenja, inhibitor BCL-2 se primenjuje u dozi od oko 10 mg, 20 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 110 mg, 120 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 170 mg, 180 mg ili 200 mg dnevno. U jednom primeru izvođenja farmaceutske kombinacije, odnos jedinjenja formule I prema inhibitoru BCL-2 je u opsegu od 700:1 - 1:40. U sledećem primeru izvođenja, odnos jedinjenja Formule I prema inhibitoru BCL-2 je u opsegu od 2:1 do 1:2, na primer, 2:1, 1:1 ili 1:2; 170:1 do 150:1, na primer, 170:1, 160:1 ili 150:1; 3:1 do 1:1, na primer, 3:1, 2:1 ili 1:1; 4:1 do 1:1, na primer, 4:1, 3:1, 2:1 ili 1:1; ili 30:1 do 10:1, na primer, 30:1, 20:1 ili 10:1.

[0145] U sledećem primeru izvođenja farmaceutske kombinacije, odnos jedinjenja A prema inhibitoru BCL-2 je u opsegu od 700:1 - 1:40. U sledećem primeru izvođenja, odnos jedinjenja A prema inhibitoru BCL-2 je u opsegu od 2:1 do 1:2, na primer, 2:1, 1:1 ili 1:2; 170:1 do 150:1, na primer, 170:1, 160:1 ili 150:1; 3:1 do 1:1, na primer, 3:1, 2:1 ili 1:1; 4:1 do 1:1, na primer, 4:1, 3:1, 2:1 ili 1:1; ili 30:1 do 10:1, na primer, 30:1, 20:1 ili 10:1.

[0146] U sledećem primeru izvođenja farmaceutske kombinacije, odnos jedinjenja B prema inhibitoru BCL-2 je u opsegu od 700:1 - 1:40. U sledećem primeru izvođenja, odnos jedinjenja B prema inhibitoru BCL-2 je u opsegu od 2:1 do 1:2, na primer, 2:1, 1:1 ili 1:2; 170:1 do 150:1, na primer, 170:1, 160:1 ili 150:1; 3:1 do 1:1, na primer, 3:1, 2:1 ili 1:1; ili 30:1 do 10:1, na primer, 30:1, 20:1 ili 10:1.

2

[0147] U sledećem primeru izvođenja farmaceutske kombinacije, odnos jedinjenja A prema venetoklaksu je u opsegu od 700:1 - 1:40. U sledećem primeru izvođenja, odnos jedinjenja A prema venetoklaksu je u opsegu od 2:1 do 1:2, na primer, 2:1, 1:1 ili 1:2; 170:1 do 150:1, na primer, 170:1, 160:1 ili 150:1; 3:1 do 1:1, na primer, 3:1, 2:1 ili 1:1; ili 30:1 do 10:1, na primer, 30:1, 20:1 ili 10:1.

[0148] U sledećem primeru izvođenja farmaceutske kombinacije, odnos jedinjenja B prema venetoklaksu je u opsegu od 700:1 - 1:40. U sledećem primeru izvođenja, odnos jedinjenja B prema venetoklaksu je u opsegu od 2:1 do 1:2, na primer, 2:1, 1:1 ili 1:2; 170:1 do 150:1, na primer, 170:1, 160:1 ili 150:1; 3:1 do 1:1, na primer, 3:1, 2:1 ili 1:1; ili 30:1 do 10:1, na primer, 30:1, 20:1 ili 10:1.

[0149] Utvrđenim modelima ispitivanja može se pokazati da farmaceutska kombinacija kao što je ovde data dovodi do korisnih efekata opisanih ranije. Stručnjak iz date oblasti tehnike je potpuno osposobljen da izabere relevantan model testiranja kako bi dokazao takve korisne efekte. Farmakološka aktivnost ovde datih farmaceutskih kombinacija može se, na primer, pokazati u kliničkoj studiji ili na životinjskom modelu.

[0150] U jednom primeru izvođenja, farmaceutska kombinacija ili kompozicija, ili obe, ovde obezbeđeni, pokazuju sinergistički efekat.

[0151] U sledećem primeru izvođenja, ovde je obezbeđena sinergistička kombinacija za primenu na subjekta koja sadrži kombinaciju pronalaska, gde opseg doze svake komponente odgovara sinergističkim opsezima predloženim u odgovarajućem modelu tumora ili kliničkoj studiji.

[0152] U određivanju sinergističke interakcije između jedne ili više komponenti, optimalni opseg za efekat i apsolutni opseg doze svake komponente za efekat mogu se definitivno izmeriti primenom komponenti u različitim rasponima tež./tež. odnosa i doza na pacijente kojima je potreban tretman. Za ljude, složenost i cena izvođenja kliničkih studija na pacijentima mogu učiniti nepraktičnim korišćenje ovog oblika testiranja kao primarnog modela za sinergiju. Međutim, posmatranje sinergije u određenim eksperimentima može da predvidi efekat kod drugih vrsta, a postoje i životinjski modeli koji se mogu koristiti za dalje kvantitativno određivanje sinergističkog efekta. Rezultati takvih studija se takođe mogu koristiti za predviđanje opsega efektivnog odnosa doza i apsolutnih doza i koncentracija u plazmi.

[0153] U sledećem primeru izvođenja, ovde je obezbeđena sinergistička kombinacija za primenu na subjekta koja sadrži kombinaciju pronalaska, gde opseg doze svake komponente

2

odgovara sinergističkim opsezima predloženim u odgovarajućem modelu tumora ili kliničkoj studiji.

[0154] Efikasna doza svakog od kombinacionih partnera upotrebljenih u kombinaciji pronalaska može da varira u zavisnosti od određenog jedinjenja ili farmaceutske kompozicije koja se koristi, načina primene, stanja koje se leči i težine stanja koje se leči. Prema tome, režim doziranja kombinacije prema pronalasku je odabran u skladu sa različitim faktorima uključujući način primene i funkciju bubrega i jetre pacijenta.

[0155] Optimalni odnosi, pojedinačne i kombinovane doze i koncentracije partnera kombinacije (npr., jedinjenje formule I i inhibitor BCL-2) kombinacije koja je ovde data koja daje efikasnost bez toksičnosti zasnivaju se na kinetici dostupnosti terapeutskih sredstava do ciljnih mesta, a određuju se korišćenjem postupaka poznatih stručnjacima u ovoj oblasti.

[0156] Efikasna doza svakog od partnera u kombinaciji može zahtevati češću primenu jednog od jedinjenja u poređenju sa drugim jedinjenjem(ima) u kombinaciji. Stoga, da bi se omogućilo odgovarajuće doziranje, upakovani farmaceutski proizvodi mogu sadržati jedan ili više doznih oblika koji sadrže kombinaciju jedinjenja, i jedan ili više doznih oblika koji sadrže jedno od jedinjenja, ali ne i drugo jedinjenje kombinacije.

[0157] Kada se kombinacioni partneri, koji se koriste u kombinaciji pronalaska, primenjuju u obliku koji se prodaje kao pojedinačni lekovi, njihova doza i način primene mogu biti u skladu sa informacijama datim na uputstvu za pakovanje odgovarajućeg leka koji se prodaje, ako nije drugačije pomenuto ovde.

[0158] Optimalna doza svakog kombinovanog partnera za lečenje kancera može se odrediti empirijski za svake individue korišćenjem poznatih postupaka i zavisiće od niza faktora, uključujući: stepen napredovanja bolesti; starost, telesnu težinu, opšte zdravlje, pol i ishranu pojedinca; vreme i način primene; i druge lekove koje individua uzima. Optimalne doze se mogu utvrditi korišćenjem rutinskog testiranja i postupaka koji su dobro poznati u tehnici.

[0159] Količina svakog kombinacionog partnera koji se može kombinovati sa materijalima nosača za proizvodnju jednog oblika doze će varirati u zavisnosti od pojedinca koji se leči i posebnog načina primene. U nekim primerima izvođenja, jedinični dozni oblici koji sadrže kombinaciju sredstava kao što je ovde opisana će sadržati količine svakog sredstva kombinacije koje se tipično primenjuju kada se sredstva primenjuju pojedinačno.

[0160] Učestalost doziranja može da varira u zavisnosti od korišćenog jedinjenja i određenog stanja koje treba lečiti ili sprečiti. Pacijenti se generalno mogu pratiti u pogledu terapeutske efikasnosti korišćenjem testova koji su pogodni za stanje koje se leči ili sprečava, a koji će biti poznati stručnjacima sa uobičajenim iskustvom u tehnici. U različitim primerima izvođenja

2

farmaceutske kombinacije, inhibitor HDAC6 i inhibitor BCL-2 su u istoj formulaciji. Alternativno, inhibitor HDAC6 i inhibitor BCL-2 su u odvojenim formulacijama.

[0161] U različitim primerima izvođenja farmaceutske kombinacije, kombinacija je za istovremenu ili sekvencijalnu primenu.

[0162] Osim ako nije drugačije definisano, svim tehničkim i naučnim terminima korišćenim ovde se pridaje značenje koje je uobičajeno poznato stručnjaku u ovoj oblasti.

PRIMERI

[0163] Sledeći Primeri ilustruju pronalazak opisan gore; oni, međutim, nemaju za cilj da na bilo koji način ograniče obim pronalaska. Korisni efekti farmaceutske kombinacije iz ovog pronalaska se takođe mogu odrediti drugim modelima testiranja koji su kao takvi poznati stručnjacima iz odgovarajuće oblasti.

Primer 1: Sinteza 2-(difenilamino)-N-(7-(hidroksiamino)-7-oksoheptil)pirimidin-5-karboksamida (jedinjenje A) i 2-((2-hlorofenil)(fenil)amino)-N-(7-(hidroksiamino)-7-oksoheptil)pirimidin-5-karboksamida (Jedinjenje B)

I. Sinteza 2-(difenilamino)-N-(7-(hidroksiamino)-7-oksoheptil)pirimidin-5-karboksamida (jedinjenje A):

[0164]

[0165] Sinteza intermedijera 2: Smeša anilina (3,7 g, 40 mmol), jedinjenja 1 (7,5 g, 40 mmol) i K2CO3(11 g, 80 mmol) u DMF (100 ml) je degazirana i mešana na 120°C pod N2 preko

2

noći. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i razblažena sa EtOAc (200 ml), zatim isprana zasićenim fiziološkim rastvorom (200 ml × 3). Organski slojevi su odvojeni i osušeni preko Na2SO4, isparavani do sušenja i prečišćeni hromatografijom na silika gelu (petroleum etri/EtOAc = 10/1) da bi se dobio željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca (6,2 g, 64 %).

[0166] Sinteza intermedijera 3: Smeša jedinjenja 2 (6,2 g, 25 mmol), jodobenzena (6,12 g, 30 mmol), CuI (955 mg, 5,0 mmol), Cs2CO3(16.3 g, 50 mmol) u TEOS (200 ml) je degazirana i pročišćena azotom. Dobijena smeša je mešana na 140°C tokom 14 sati. Posle hlađenja do sobne temperature, ostatak je razblažen sa EtOAc (200 ml). Dodat je 95% EtOH (200 ml) i NH4F-H2O na silika gelu [50 g, prethodno pripremljen dodatkom NH4F (100 g) u vodi (1500 ml) u silika gel (500 g, 100-200 „mesh“)], i dobijena smeša je držana na sobnoj temperaturi 2 sata. Očvrsli materijali su filtrirani i isprani sa EtOAc. Filtrat je isparavan do sušenja, a ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (petroleum etri/EtOAc = 10/1) da bi se dobila žuta čvrsta supstanca (3 g, 38%).

[0167] Sinteza intermedijera 4: 2N NaOH (200 ml) je dodat u rastvor jedinjenja 3 (3,0 g, 9,4 mmol) u EtOH (200 ml). Smeša je mešana na 60ºC 30 min. Posle uparavanja rastvarača, rastvor je neutralizovan sa 2N HCl da bi se dobio beli talog. Suspenzija je ekstrahovana sa EtOAc (2 × 200 ml), a organski slojevi su odvojeni, isprani vodom (2 × 100 ml), fiziološkim rastvorom (2 × 100 ml) i osušeni preko Na2SO4. Uklanjanjem rastvarača dobija se braon čvrsta supstanca (2,5 g, 92 %).

[0168] Sinteza intermedijera 6: Smeša jedinjenja 4 (2,5 g, 8,58 mmol), jedinjenja 5 (2,52 g, 12,87 mmol), HATU (3,91 g, 10,30 mmol) i DIPEA (4,43 g, 34,32 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Nakon što je reakciona smeša filtrirana, filtrat je isparavan do sušenja, a ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (petroleum etri/EtOAc = 2/1) da bi se dobila braon čvrsta supstanca (2 g, 54 %).

[0169] Sinteza 2-(difenilamino)-N-(7-(hidroksiamino)-7-oksoheptil)pirimidin-5-karboksamida: Smeša jedinjenja 6 (2.0 g, 4.6 mmol), natrijum hidroksida (2N, 20 mL) u MeOH (50 ml) i DCM (25 ml) je mešana na 0°C tokom 10 min. Hidroksilamin (50%) (10 ml) je ohlađen na 0°C i dodat u smešu. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 20 min. Posle uklanjanja rastvarača, smeša je neutralisana sa 1M HCl da bi se dobio beli talog. Sirovi proizvod je filtriran i prečišćen pomoću pre-HPLC da bi se dobila bela čvrsta supstanca (950 mg, 48%).

II. Sintetički put 1: 2-((2-hlorofenil)(fenil)amino)-N-(7-(hidroksiamino)-7-oksoheptil)pirimidin-5-karboksamid (jedinjenje B)

[0170]

[0171] Sinteza intermedijera 2: Smeša anilina (3,7 g, 40 mmol), etil 2-hloropirimidin-5-karboksilata 1 (7,5 g, 40 mmol), K2CO3(11 g, 80 mmol) u DMF (100 ml) je degazirana i mešana na 120°C pod N2 preko noći. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i razblažena sa EtOAc (200 ml), zatim isprana zasićenim fiziološkim rastvorom (200 ml × 3). Organski sloj je odvojen i osušen preko Na2SO4, isparavan do sušenja i prečišćen hromatografijom na silika gelu (petroleum etri/EtOAc = 10/1) da bi se dobio željeni proizvod kao bela čvrsta supstanca (6,2 g, 64 %).

[0172] Sinteza intermedijera 3: Smeša jedinjenja 2 (69,2 g, 1 ekv.), 1-hloro-2-jodobenzena (135,7 g, 2 ekv.), Li2CO3(42.04 g, 2 ekviv.), K2CO3(39.32 g, 1 ekviv.), Cu (1 ekv.45 µm) u DMSO (690 ml) je degazirana i prečišćena azotom. Dobijena smeša je mešana na 140°C tokom 36 časova. Obrada reakcije daje jedinjenje 3 sa prinosom od 93%.

[0173] Sinteza intermedijera 4: 2N NaOH (200 ml) je dodat u rastvor jedinjenja 3 (3,0 g, 9,4 mmol) u EtOH (200 ml). Smeša je mešana na 60°C tokom 30 min. Posle isparavanja rastvarača, rastvor je neutralizovan sa 2N HCl da bi se dobio beli talog. Suspenzija je ekstrahovana sa EtOAc (2 × 200 ml), a organski sloj je odvojen, ispran vodom (2 × 100 ml), fiziološkim rastvorom (2 × 100 ml) i osušen preko Na2SO4. Uklanjanje rastvarača daje braon čvrstu supstancu (2,5 g, 92 %).

[0174] Sinteza intermedijera 5: Korišćen je postupak analogan sintezi intermedijera 6 u delu I ovog Primera.

[0175] Sinteza 2-((2-hlorofenil)(fenil)amino)-N-(7-(hidroksiamino)-7-oksoheptil)pirimidin-5-karboksamida: Korišćen je postupak analogan Sintezi 2-(difenilamino)-N-(7-(hidroksiamino)-7-oksoheptil)pirimidin-5-karboksamida u delu I ovog Primera.

1

III. Sintetički put 2: 2-((2-hlorofenil)(fenil)amino)-N-(7-(hidroksiamino)-7-oksoheptil)pirimidin-5-karboksamid (jedinjenje B)

[0176]

[0177] Korak (1): Sinteza jedinjenja 11: Etil 2-hloropirimidin-5-karboksilat (7,0 kg), etanol (60 kg), 2-hloroanilin (9,5 kg, 2 ekv.) i sirćetna kiselina (3,7 kg, 1,6 ekv.) su stavljeni u reaktor u inertnoj atmosferi. Smeša je zagrejana do refluksa. Posle najmanje 5 sati reakcija je uzorkovana za HPLC analizu (metoda TM-113.1016). Kada je analiza pokazala da je reakcija završena, smeša je ohlađena do 70 ± 5°C i dodat je N,N-diizopropiletilamin (DIPEA). Reakcija je zatim ohlađena do 20 ± 5°C i smeša je mešana dodatnih 2-6 sati. Dobijeni talog je filtriran i ispran etanolom (2 × 6 kg) i heptanom (24 kg). Kolač se suši pod sniženim pritiskom na 50 ± 5ºC do konstantne težine da bi se dobilo 8,4 kg jedinjenja 11 (81% prinosa i 99,9% čistoće.

[0178] Korak (2): Sinteza jedinjenja 3: Bakar u prahu (0,68 kg, 1 ekv, <75 mikrona), kalijum karbonat (4,3 kg, 1,7 ekv.) i dimetil sulfoksid (DMSO, 12,3 kg) su dodati u reaktor (posuda A). Dobijeni rastvor je zagrejan na 120 ± 5°C. U posebnom reaktoru (posuda B), rastvor jedinjenja 11 (2,9 kg) i jodobenzena (4,3 kg, 2 ekv.) u DMSO (5,6 kg) je zagrejan na 40 ± 5°C. Smeša je zatim prebačena u posudu A tokom 2-3 sata. Reakciona smeša je zagrevana na 120 ± 5°C tokom 8-24 sata, sve dok HPLC analiza (metoda TM-113.942) nije utvrdila da je preostalo ≤ 1% jedinjenja 11.

[0179] Korak (3): Sinteza jedinjenja 4: Smeša iz Koraka (2) je ohlađena na 90-100°C i dodata je prečišćena voda (59 kg). Reakciona smeša je mešana na 90-100°C tokom 2-8 časa dok HPLC nije pokazala da je preostalo ≤1% jedinjenja 3. Reaktor je ohlađen na 25°C. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit, zatim 0,2 mikronski filter, i filtrat je sakupljen. Filtrat je ekstrahovan metil t-butil etrom dva puta (2 × 12,8 kg). Vodeni sloj je ohlađen do 0-5ºC, zatim

2

zakišeljen sa 6N hlorovodoničnom kiselinom (HCl) do pH 2-3 uz održavanje temperature <25ºC. Reakcija je zatim ohlađena do 5-15°C. Talog je filtriran i ispran hladnom vodom. Kolač je osušen na 45-55°C pod sniženim pritiskom do konstantne težine da bi se dobilo 2,2 kg (65% prinos) jedinjenja 4 sa 90,3% AUC čistoće.

[0180] Korak (4): Sinteza jedinjenja 5: Dihlorometan (40,3 kg), DMF (33 g, 0,04 ekv.) i jedinjenje 4 (2,3 kg) su stavljeni u reakcioni balon. Rastvor je filtriran kroz filter od 0,2 µm i vraćen u balon. Oksalil hlorid (0,9 kg, 1 ekv.) je dodat preko levka za dodavanje tokom 30-120 minuta na < 30ºC. Šarža je zatim mešana na < 30°C dok se završetak reakcije (jedinjenje 4 ≤3 %) nije potvrdio HPLC (metoda TM-113.946. Zatim, rastvor dihlorometana je koncentrovan i rezidualni oksalil hlorid je uklonjen pod sniženim pritiskom na < 40°C. Kada je HPLC analiza pokazala da je ostalo < 0,10% oksalil hlorida, koncentrat je rastvoren u svežem dihlorometanu (24 kg) i prenet nazad u reakcioni sud (posuda A).

[0181] Druga posuda (posuda B) je napunjena metil 7-aminoheptanoat hidrohloridom (jedinjenje A1, 1,5 kg, 1,09 ekv.), sa DIPEA (2,5 kg, 2,7 ekv.), 4 (dimetilamino)piridinom (DMAP, 42 g, 0,05 ekv.) i sa DCM (47,6 kg). Smeša je ohlađena do 0-10°C i rastvor kiselog hlorida u posudi A je prebačen u posudu B uz održavanje temperature na 5°C do 10°C. Reakcija je mešana na 5-10°C tokom 3 do 24 sata, kada je HPLC analiza pokazala završetak reakcije (metod TM-113.946, jedinjenje 4:55%). Smeša je zatim ekstrahovana sa 1M rastvorom HCl (20 kg), prečišćenom vodom (20 kg), 7% natrijum bikarbonatom (20 kg), prečišćenom vodom (20 kg) i 25% rastvorom natrijum hlorida (20 kg). Dihlorometan je zatim pod vakuumom destilovan na < 40ºC i više puta isteran sa izopropil alkoholom. Kada je analiza pokazala da je ostalo <1 mol% DCM, smeša je postepeno hlađena na 0-5°C i mešana na 0-5°C najmanje 2 sata. Dobijeni precipitat je sakupljen filtracijom i ispran hladnim izopropil alkoholom (6,4 kg). Kolač je usisan na filteru 4-24 sata, a zatim je dalje osušen na 45-55°C pod sniženim pritiskom do konstantne težine. 2,2 kg (77% prinos) je izolovano metodom čistoće 95,9% AUC i 99,9 tež.%.

[0182] Korak (5): Sinteza jedinjenja (B): Hidroksilamin hidrohlorid (3,3 kg, 10 ekv.) i metanol (9,6 kg) su stavljeni u reaktor. Dobijeni rastvor je ohlađen do 0-5°C i 25% natrijum metoksid (11,2 kg, 11 ekv.) je polako sipan, održavajući temperaturu na 0-10°C. Kada je dodavanje završeno, reakcija je mešana na 20°C tokom 1-3 sata i filtrirana, a kolač na filteru je ispran metanolom (2 × 2,1 kg). Filtrat (slobodna baza hidroksilamina) je vraćen u reaktor i ohlađen na 0±5°C. Dodato je jedinjenje 5 (2,2 kg). Reakcija je mešana dok se reakcija ne završi (metod TM-113.964, jedinjenje 5 ≤ 2%). Smeša je filtrirana i u filtrat su dodati voda (28 kg) i etil acetat (8,9 kg). pH je podešen na 8-9 korišćenjem 6N HCl, a zatim je mešan do 3 sata pre filtriranja. Filterski kolač je ispran hladnom vodom (25,7 kg), zatim osušen pod sniženim pritiskom do konstantne težine. Utvrđeno je da je sirovo čvrsto jedinjenje (B) Forma IV/ obrazac D.

[0183] Sirova čvrsta supstanca (1,87 kg) je suspendovana u izopropil alkoholu (IPA, 27,1 kg). Suspenzija je zagrejana do 75±5°C da bi se rastvorila čvrsta supstanca. Rastvor je zasejan kristalima jedinjenja (B) (forma I/obrazac A) i ostavljen je da se ohladi do sobne temperature. Dobijeni talog je mešan 1-2 sata pre filtriranja. Filterski kolač je ispran sa IPA (2 × 9,5 kg), zatim osušen na 45-55°C do konstantne težine pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 1,86 kg kristalno bele čvrste supstance (B) sa 85% prinosa i 99,5% čistoće (AUC %, HPLC postupak iz tabele 3).

Tabela 3: HPLC postupak

4

Primer 2: HDAC enzimski test

[0184] Jedinjenje B je prvo testirano razblaživanjem jedinjenja u DMSO do 50 puta konačne koncentracije i napravljena je serija razblaženja od deset tačaka tri puta. Jedinjenje je razblaženo u puferu za ispitivanje (50 mM HEPES, pH 7,4, 100 mM KCl, 0,001% Tween-20, 0,05% BSA, 20 µM TCEP) da bi se 6 puta povećala njihova konačna koncentracija. HDAC enzimi (kupljeni od BPS Biosciences; San Diego, CA) su razblaženi do 1,5 puta njihove konačne koncentracije u puferu za ispitivanje. Tripeptidni supstrat i tripsin u konačnoj koncentraciji od 0,05 µM su razblaženi u puferu za ispitivanje 6 puta u odnosu na njihovu konačnu koncentraciju. Konačne koncentracije enzima korišćene u ovim testovima bile su 3,3 ng/ml (HDAC1), 0,2 ng/ml (HDAC2), 0,08 ng/ml (HDAC3) i 2 ng/ml (HDAC6). Konačne korišćene koncentracije supstrata bile su 16 µM (HDAC1), 10 µM (HDAC2), 17 µM (HDAC3) i 14 µM (HDAC6). Pet µl jedinjenja i 20 µl enzima dodato je u bunarčiće crne, neprozirne ploče sa 384 bunarčića u sve kopije. Enzim i jedinjenje su zajedno inkubirani na sobnoj temperaturi 10 minuta. Pet µl supstrata je dodato u svaki bunarčić, ploča je mućkana 60 sekundi i stavljena u Victor 2 čitač mikrotitarskih ploča. Razvoj fluorescencije je praćen 60 min i izračunata je linearna brzina reakcije. IC50je određen korišćenjem Graph Pad Prism pomoću aproksimacije krive sa četiri parametra. Vidi tabelu 1 za IC50u vezi sa jedinjenjima A i B.

Primer 3. Jedinjenje B u kombinaciji sa ABT-199 sinergistički smanjuje vijabilnost AML ćelijskih linija.

[0185] Jedinjenje B sinergiše sa ABT-199 da bi se smanjila vijabilnost AML ćelijskih linija (Slike 1A-1C). Ćelije MOLM-13, Kasumi-1 i MV-4-11 su tretirane u četiri kopije na pločama sa 384 bunarčića tokom 72 sata sa jedinjenjem B i ABT-199 u konstantnom odnosu, izabranom da odražava približno IC50: IC50. Kombinacioni indeks (CI) je izračunat korišćenjem softvera Calcusin. Vrednosti CI pri procenjenom smanjenju vitalnosti od 50% su izračunate u vezi sa svakom ćelijskom linijom: MOLM-13: CI = 0,745; Kasumi-1: CI = 0,442; MV-4-11: CI = 0,779. CI < 1 ukazuje na sinergizam. Dakle, kombinacija jedinjenja B i ABT-199 sinergistički je smanjila održivost sve tri testirane AML ćelijske linije.

Primer 4. Jedinjenje B u kombinaciji sa ABT-199 (Venetoklaks) indukuje sinergističku apoptozu.

[0186] Kombinacija jedinjenja B sa ABT-199 dodatno je povećala apoptozu u poređenju sa tretmanom pojedinačnih sredstava u ćelijama AML (Slike 2A-2B). Ćelije MV-4-11 i HL-60 su tretirane samo jedinjenjem B, samim ABT-199 (venetoklaksom) i kombinacijom jedinjenja B sa venetoklaksom u naznačenim dozama tokom 48 sati. Apoptoza je procenjena merenjem ćelija pozitivnih na Aneksin V korišćenjem FACS. Tretman kombinacijom jedinjenja B sa ABT-199 rezultirao je sinergističkim povećanjem apoptotičkih ćelija u poređenju sa tretmanom sa bilo kojim pojedinačnim agensom.

Claims (13)

1. Patentni zahtevi 1. Farmaceutska kombinacija koja sadrži: (a) inhibitor histon deacetilaze 6 (HDAC6) formule I:

   ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u kome, prsten B je aril ili heteroaril; R1je aril ili heteroaril, od kojih svaki može biti izborno supstituisan sa OH, halo ili C1-6-alkil; i R je H ili C1-6-alkil; i (b) inhibitor BCL-2, gde inhibitor BCL-2 je 2-((1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)oksi)-4-(4-((4'-hloro)-5,5-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-[1,1'-bifenil]-2-il)metil)piperazin-1-il)-N-((3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)fenil)sulfonil)benzamid (venetoklaks) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
2. 2. Farmaceutska kombinacija prema zahtevu 1, naznačena time što: (a) jedinjenje formule I je:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; ili gde: (b) jedinjenje formule I je:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
3. 3. Farmaceutska kombinacija prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, naznačena time što inhibitor HDAC6 i inhibitor BCL-2 su: (a) u istoj formulaciji; ili (b) u odvojenim formulacijama.
4. 4. Farmaceutska kombinacija prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, naznačena time što je kombinacija za istovremenu ili sekvencijalnu primenu.
5. 5. Farmaceutska kombinacija prema zahtevu 1 ili zahtevu 2 za upotrebu u lečenju kancera kod subjekta kome je to potrebno.
6. 6. Farmaceutska kombinacija za upotrebu prema zahtevu 5, naznačena time što, kancer je hematološki kancer.
7. 7. Farmaceutska kombinacija za upotrebu prema zahtevu 5, naznačena time što, kancer je refraktoran ili otporan na tretman sa najmanje jednom prethodnom terapijom.
8. 8. Terapeutski efikasna količina (a) inhibitora histon deacetilaze 6 (HDAC6) formule I:

   ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u kome, prsten B je aril ili heteroaril; R1je aril ili heteroaril, od kojih svaki može biti izborno supstituisan sa OH, halo ili C1-6-alkil; i R je H ili C1-6-alkil; i (b) inhibitora BCL-2, gde inhibitor BCL-2 je 2-((1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)oksi)-4-(4-((4'-hloro)-5,5-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-[1,1'-bifenil]-2-il)metil)piperazin-1-il)-N-((3-nitro-4-(((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)amino)fenil)sulfonil)benzamid (venetoklaks) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera kod subjekta kome je to potrebno.
9. 9. Terapeutski efikasna količina za upotrebu prema zahtevu 8, naznačena time što: (a) jedinjenje formule I je:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; ili gde: (b) jedinjenje formule I je:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
10. 10. Terapeutski efikasna količina za upotrebu prema zahtevu 8 ili zahtevu 9, naznačena time što, kancer je hematološki kancer.
11. 11. Terapeutski efikasna količina za upotrebu prema bilo kom od zahteva 8 do 10, naznačena time što, kancer je refraktoran ili otporan na tretman sa najmanje jednom prethodnom terapijom.
12. 12. Terapeutski efikasna količina za upotrebu prema bilo kom od zahteva 8 do 10, naznačena time što se inhibitor HDAC6 i inhibitor BCL-2 primenjuju: (a) približno u isto vreme; ili (b) u različito vreme.
13. 13. Farmaceutska kombinacija prema bilo kom od zahteva 1-4 za upotrebu u postupku za smanjenje rasta i vijabilnosti ćelije, naznačena time što postupak sadrži dovođenje u kontakt ćelije sa farmaceutskom kombinacijom, i pri čemu, ćelija je ćelija leukemije.