[go: up one dir, main page]

RS62860B1 - Citotoksična i antimitotička jedinjenja, i postupci upotrebe istih - Google Patents

Citotoksična i antimitotička jedinjenja, i postupci upotrebe istih

Info

Publication number
RS62860B1
RS62860B1 RS20220091A RSP20220091A RS62860B1 RS 62860 B1 RS62860 B1 RS 62860B1 RS 20220091 A RS20220091 A RS 20220091A RS P20220091 A RSP20220091 A RS P20220091A RS 62860 B1 RS62860 B1 RS 62860B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
amino
c6alkyl
aryl
thio
methyl
Prior art date
Application number
RS20220091A
Other languages
English (en)
Inventor
Geoffrey C Winters
James R Rich
Graham Albert Edwin Garnett
Alexander Laurence Mandel
Tom Han Hsiao Hsieh
Elyse Marie Josee Bourque
Stuart Daniel Barnscher
Original Assignee
Zymeworks Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zymeworks Inc filed Critical Zymeworks Inc
Publication of RS62860B1 publication Critical patent/RS62860B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/05—Dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/06—Tripeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6813—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin the drug being a peptidic cytokine, e.g. an interleukin or interferon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6867—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of a blood cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon radicals, substituted by hetero atoms, attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/44—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/444—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having two doubly-bound oxygen atoms directly attached in positions 2 and 5
    • C07D207/448—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having two doubly-bound oxygen atoms directly attached in positions 2 and 5 with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to other ring carbon atoms, e.g. maleimide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0205—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)3-C(=0)-, e.g. statine or derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/02—Linear peptides containing at least one abnormal peptide link
    • H—ELECTRICITY
    • H01—ELECTRIC ELEMENTS
    • H01L—SEMICONDUCTOR DEVICES NOT COVERED BY CLASS H10
    • H01L25/00—Assemblies consisting of a plurality of semiconductor or other solid state devices
    • H01L25/16—Assemblies consisting of a plurality of semiconductor or other solid state devices the devices being of types provided for in two or more different subclasses of H10B, H10D, H10F, H10H, H10K or H10N, e.g. forming hybrid circuits
    • H01L25/162—Assemblies consisting of a plurality of semiconductor or other solid state devices the devices being of types provided for in two or more different subclasses of H10B, H10D, H10F, H10H, H10K or H10N, e.g. forming hybrid circuits the devices being mounted on two or more different substrates
    • H—ELECTRICITY
    • H01—ELECTRIC ELEMENTS
    • H01L—SEMICONDUCTOR DEVICES NOT COVERED BY CLASS H10
    • H01L25/00—Assemblies consisting of a plurality of semiconductor or other solid state devices
    • H01L25/16—Assemblies consisting of a plurality of semiconductor or other solid state devices the devices being of types provided for in two or more different subclasses of H10B, H10D, H10F, H10H, H10K or H10N, e.g. forming hybrid circuits
    • H01L25/167—Assemblies consisting of a plurality of semiconductor or other solid state devices the devices being of types provided for in two or more different subclasses of H10B, H10D, H10F, H10H, H10K or H10N, e.g. forming hybrid circuits comprising optoelectronic devices, e.g. LED, photodiodes
    • H—ELECTRICITY
    • H10—SEMICONDUCTOR DEVICES; ELECTRIC SOLID-STATE DEVICES NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • H10K—ORGANIC ELECTRIC SOLID-STATE DEVICES
    • H10K59/00—Integrated devices, or assemblies of multiple devices, comprising at least one organic light-emitting element covered by group H10K50/00
    • H10K59/10—OLED displays
    • H10K59/12—Active-matrix OLED [AMOLED] displays
    • H10K59/131—Interconnections, e.g. wiring lines or terminals
    • H—ELECTRICITY
    • H10—SEMICONDUCTOR DEVICES; ELECTRIC SOLID-STATE DEVICES NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • H10K—ORGANIC ELECTRIC SOLID-STATE DEVICES
    • H10K59/00—Integrated devices, or assemblies of multiple devices, comprising at least one organic light-emitting element covered by group H10K50/00
    • H10K59/10—OLED displays
    • H10K59/18—Tiled displays
    • H—ELECTRICITY
    • H10—SEMICONDUCTOR DEVICES; ELECTRIC SOLID-STATE DEVICES NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • H10K—ORGANIC ELECTRIC SOLID-STATE DEVICES
    • H10K71/00—Manufacture or treatment specially adapted for the organic devices covered by this subclass
    • H—ELECTRICITY
    • H10—SEMICONDUCTOR DEVICES; ELECTRIC SOLID-STATE DEVICES NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • H10K—ORGANIC ELECTRIC SOLID-STATE DEVICES
    • H10K77/00—Constructional details of devices covered by this subclass and not covered by groups H10K10/80, H10K30/80, H10K50/80 or H10K59/80
    • H10K77/10—Substrates, e.g. flexible substrates
    • H10K77/111—Flexible substrates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • H—ELECTRICITY
    • H10—SEMICONDUCTOR DEVICES; ELECTRIC SOLID-STATE DEVICES NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • H10K—ORGANIC ELECTRIC SOLID-STATE DEVICES
    • H10K59/00—Integrated devices, or assemblies of multiple devices, comprising at least one organic light-emitting element covered by group H10K50/00
    • H10K59/10—OLED displays
    • H10K59/12—Active-matrix OLED [AMOLED] displays
    • H10K59/1201—Manufacture or treatment

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Microelectronics & Electronic Packaging (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Computer Hardware Design (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Condensed Matter Physics & Semiconductors (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Power Engineering (AREA)
  • Manufacturing & Machinery (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Description

Opis
POZADINA
Oblast
[0001] Pronalazak se odnosi na biološki aktivna jedinjenja, kompozicije koje ih sadrže, i postupke upotrebe takvih biološki aktivnih jedinjenja i kompozicija za lečenje kancera i drugih bolesti.
Opis srodnog stanja tehnike
[0002] Obećavajući novi terapeutici za kancer uključuju dolastatine i sintetičke analoge dolastatina kao što su auristatini (S.A.D. patenti br. 5,635,483, 5,780,588, 6,323,315 i 6,884,869; Shnyder et al. (2007) Int. J. Oncol.31:353-360; Otani, M. et al. Jpn. J. Cancer Res.
2000, 91, 837-844; Međunarodne PCT publikacije br. WO 01/18032 A3, WO 2005/039492, WO2006/132670, i WO 2009/095447; Fennell, B. J. et al. J. Antimicrob. Chemther. 2003, 51, 833-841). Pokazano je da dolastatini i auristatini interferiraju sa dinamikom mikrotubula, stoga ometajući deobu ćelija (Woyke et al. (2001) Antimicrob. Agents Chemother. 45(12):3580-3584) i imaju antikancersku (S.A.D. pat. br. 5,663,149) i antifungalnu aktivnost (Pettit et al. (1998) Antimicrob. Agents Chemother. 42:2961-2965). Nažalost, uprkos ranom entuzijazmu, dolastatin 10 je pokazao loše rezultate kao pojedinačni agens u fazi II kliničkog ispitivanja (Shnyder (2007), supra). Određena jedinjenja iz porodice auristatina više su obećavala kao klinički kandidati sa poboljšanom efikasnošću i farmakološkim karakteristikama u odnosu na dolastatine (Pettit et al. (1995) Anti-Cancer Drug Des. 10:529-544; Pettit et al. (1998) Anti-Cancer Drug Des. 13:243-277; Shnyder (2007), supra). Opisani su različiti sintetički analozi ovog strukturnog tipa (S.A.D. pat. br.
6,569,834; S.A.D. pat. br. 6,124,431; i Pettit et al. (2011) J. Nat. Prod. 74:962-968). Osim toga, auristatin lek konjugati su opisani u WO 2013/173391 A1, WO 2013/173392 A1 i WO 2013/173393 A1.
[0003] Auristatini imaju nekoliko svojstava koja ih čine atraktivnim za farmaceutski razvoj. Prvo, ova jedinjenja su izuzetno potentna. Drugo, njihova priprema je jednostavna zbog peptidne skele. Treće, oni poseduju dobre farmakokinetičke i metaboličke profile u poređenju sa peptidima uopšte, ili posebno sa drugim klasama lekova za kancer. Konačno, peptidna struktura auristatina je slična onoj antitela, tako da kada se ova jedinjenja upotrebljavaju kao deo antitelo-lek konjugata (ADC), manja je verovatnoća da će izazvati precipitaciju ili formiranje agregata velike molekulske težine (Doronina et al (2003) Nat. Biotechnology 21(7):778-784).
[0004] Potentne citotoksične i antimitotičke kompozicije su veoma poželjne za lečenje brojnih razornih poremećaja, uključujući kancer. Iako je generisan veliki broj analoga auristatina, mnogi od njih pokazuju redukovanu potenciju koja ograničava korisnost u postupcima medicinskog lečenja. Iz prethodno navedenih razloga, iako je u ovoj oblasti postignut napredak, postoji potreba za dopunskim potentnim antimitotičkim i citotoksičnim jedinjenjima koja imaju poželjne karakteristike koje ih čine pogodnim za lečenje različitih poremećaja, uključujući kancer. Predmetna objava ispunjava ove potrebe i obezbeđuje dodatne povezane prednosti.
KRATAK SAŽETAK
[0005] Ukratko, predmetna objava je usmerena na biološki aktivna jedinjenja, kompozicije koje ih sadrže, i postupke upotrebe takvih jedinjenja i kompozicija. Obezbeđena su jedinjenja Formule I:
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<1>je odabran od: amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, aminoheterociklila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od arila, aril-C1-C6alkila, C1-C6alkila, C1-C6alkiltio, karboksila, karboksamida, C3-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, guanidino, halo, C1-C6haloalkila, heterociklila, heterociklil-C1-C6alkila, hidroksila, i tio; ili
R<1>je R<a>R<b>NCH(R<c>)-;
R<a>je odabran od: H i C1-C6alkila;
R<b>je C1-C6alkil; i
R<c>je R<d>-C(CH3)2-; i
R<d>je odabran od: H, arila, C3-C7cikloalkila, i heteroarila, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C4aciltio, C2-C4alkenila, C1-C4alkila, C1-C4alkilamino, C1-C4alkiloksi, amino, amino-C1-C4alkila, halo, C1-C4haloalkila, hidroksila, hidroksi-C1-C4alkila, i tio, pri čemu su C2-C4alkenil, C1-C4alkilamino i C1-C4alkiloksi dodatno opciono supstituisani sa jednim supstituentom odabranim od C1-C4alkilarila, hidroksila, i tio; ili
R<b>i R<c>uzeti zajedno sa atomima za koje je svaki vezan formiraju heterociklildiil;
R<2>je odabran od: C1-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C3-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, aminoarila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloacila, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila; i X je odsutan.
[0006] Ovde se takođe objavljuje postupak pravljenja ovde opisanog jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0007] U jednom primeru izvođenja, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens.
[0008] Ovde se takođe objavljuje postupak upotrebe ovde opisanog jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u terapiji. Posebno, ovde se objavljuje postupak lečenja kancera kod sisara koji sadrži primenu sisaru kome je to potrebno efikasne količine ovde opisanog jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ili farmaceutske kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens.
[0009] Ovde se takođe objavljuje postupak inhibiranja rasta tumora kod sisara koji sadrži primenu sisaru kome je to potrebno efikasne količine ovde opisanog jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ili farmaceutske kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens.
[0010] Ovde se takođe objavljuje postupak ubijanja ćelija kancera in vitro upotrebom ovde opisanog jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Ovde se takođe objavljuje postupak ubijanja ćelija kancera in vivo kod sisara, koji sadrži primenu sisaru kome je to potrebno efikasne količine ovde opisanog jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ili farmaceutske kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens.
[0011] Ovde se takođe objavljuje postupak povećanja vremena preživljavanja sisara koji ima kancer, koji sadrži primenu takvom sisaru efikasne količine ovde opisanog jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, ili farmaceutske kompozicije koja sadrži ovde opisano jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens.
[0012] Ovde se takođe objavljuje upotreba ovde opisanog jedinjenja, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji medikamenta za lečenje kancera kod sisara.
[0013] Ovde se takođe objavljuje upotreba ovde opisanog jedinjenja, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji medikamenta za inhibiranje rasta tumora kod sisara.
[0014] Ovde se takođe objavljuje upotreba ovde opisanog jedinjenja, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji medikamenta za povećanje preživljavanja sisara koji ima kancer.
[0015] U sledećem primeru izvođenja, predmetna objava obezbeđuje ovde opisano jedinjenje ili farmaceutsku kompoziciju, za upotrebu u postupku lečenja ljudskog ili životinjskog tela pomoću terapije.
[0016] U sledećem primeru izvođenja, predmetna objava obezbeđuje ovde opisano jedinjenje ili farmaceutsku kompoziciju, za upotrebu u lečenju kancera kod sisara.
[0017] U sledećem primeru izvođenja, predmetna objava obezbeđuje ovde opisano jedinjenje ili farmaceutsku kompoziciju, za upotrebu u inhibiranju rasta tumora kod sisara.
[0018] U sledećem primeru izvođenja, predmetna objava obezbeđuje ovde opisano jedinjenje ili farmaceutsku kompoziciju, za upotrebu u povećanju preživljavanja sisara koji ima kancer.
[0019] U jednom primeru izvođenja, obezbeđene su kompozicije koje sadrže biološki aktivno jedinjenje kao što je ovde opisano ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, direktno ili indirektno vezano za ciljno delujuću funkcionalnu grupu.
[0020] U jednom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompozicije Formule II: (T)-(L)-(D) II
pri čemu je (T) ciljno delujuća funkcionalna grupa, (L) je linker, i (D) je jedinjenje Formule I, Ia, Id, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. (D) je kovalentno prikačeno za (L).
[0021] U jednom primeru izvođenja, ciljno delujuća funkcionalna grupa je antitelo. U skladu sa tim, u jednom primeru izvođenja, obezbeđeni su antitelo-lek konjugati (ADC) koji sadrže ovde opisano jedinjenje, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili njegov prolek.
[0022] Ovde se takođe objavljuje postupak pravljenja kompozicije Formule II.
[0023] U sledećem primeru izvođenja, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži kompoziciju Formule II, ili njenu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens.
[0024] Ovde se takođe objavljuje postupak upotrebe kompozicije Formule II u terapiji. Posebno, predmetna objava obezbeđuje postupak lečenja kancera kod sisara koji sadrži primenu sisaru kome je to potrebno efikasne količine kompozicije Formule II ili farmaceutske kompozicije koja sadrži kompoziciju Formule II i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens.
[0025] Ovde se takođe objavljuje postupak inhibiranja rasta tumora kod sisara koji sadrži primenu sisaru kome je to potrebno efikasne količine kompozicije Formule II ili farmaceutske kompozicije koja sadrži kompoziciju Formule II i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens.
[0026] Ovde se takođe objavljuje postupak ubijanja ćelija kancera in vitro upotrebom kompozicije Formule II. U sledećem primeru izvođenja, predmetna objava obezbeđuje postupak ubijanja ćelija kancera in vivo kod sisara, koji sadrži primenu sisaru kome je to potrebno efikasne količine kompozicije Formule II ili farmaceutske kompozicije koja sadrži kompoziciju Formule II i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens.
[0027] Ovde se takođe objavljuje postupak povećanja vremena preživljavanja sisara koji ima kancer, koji sadrži primenu sisaru kome je to potrebno efikasne količine kompozicije Formule II ili farmaceutske kompozicije koja sadrži kompoziciju Formule II i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens.
[0028] Ovde se takođe objavljuje upotreba kompozicije Formule II, ili njene farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji medikamenta za lečenje kancera kod sisara.
[0029] Ovde se takođe objavljuje upotreba kompozicije Formule II, u proizvodnji medikamenta za inhibiranje rasta tumora kod sisara.
[0030] Ovde se takođe objavljuje upotreba kompozicije Formule II, u proizvodnji medikamenta za povećanje preživljavanja sisara koji ima kancer.
[0031] U sledećem primeru izvođenja, predmetna objava obezbeđuje kompoziciju Formule II ili farmaceutsku kompoziciju koja sadrži kompoziciju Formule II, za upotrebu u postupku lečenja ljudskog ili životinjskog tela pomoću terapije.
[0032] U sledećem primeru izvođenja, predmetna objava obezbeđuje kompoziciju Formule II ili farmaceutsku kompoziciju koja sadrži kompoziciju Formule II, za upotrebu u lečenju kancera kod sisara.
[0033] U sledećem primeru izvođenja, predmetna objava obezbeđuje kompoziciju Formule II ili farmaceutsku kompoziciju koja sadrži kompoziciju Formule II, za upotrebu u inhibiranju rasta tumora kod sisara.
[0034] U sledećem primeru izvođenja, predmetna objava obezbeđuje kompoziciju Formule II ili farmaceutsku kompoziciju koja sadrži kompoziciju Formule II, za upotrebu u povećanju preživljavanja sisara koji ima kancer.
[0035] Ovi i drugi aspekti objave biće očigledni nakon pozivanja na sledeći detaljan opis.
KRATAK OPIS CRTEŽA
[0036]
Slika 1 pokazuje citotoksičnost Jedinjenja 5 na Her2-pozitivnoj HCC1954 ćelijskoj liniji.
Slika 2 pokazuje citotoksičnost Jedinjenja 5 na Her2-negativnoj Jurkat ćelijskoj liniji. Slika 3 pokazuje citotoksičnost trastuzumab ADC Jedinjenja 5 na Her2-pozitivnoj NCI-N87 ćelijskoj liniji.
Slika 4 pokazuje citotoksičnost trastuzumab ADC Jedinjenja 5 na Her2-pozitivnoj HCC1954 ćelijskoj liniji.
Slika 5 pokazuje citotoksičnost trastuzumab ADC Jedinjenja 5 na Her2-negativnoj Jurkat ćelijskoj liniji.
Slika 6 pokazuje rezultate ravnotežnog testa nativnog vezivanja koji se upotrebljava za poređenje vezivanja određenih ADC za MDA-MB-231 ćelijsku liniju.
Slika 7 pokazuje efikasnost određenih ADC u NCI-N87 modelu tumora upotrebom NOD SCID gama miševa.
Slika 8 pokazuje efikasnost određenih ADC u Karpas 299 modelu tumora upotrebom C.B-17/IcrHsd-Prkdc<scid>miševa.
Slika 9 pokazuje rezultate studije tolerancije trastuzumab ADC Jedinjenja 14 kod ženki Sprag Dauli (Sprague Dawley) pacova.
Slika 10 pokazuje rezultate studije tolerancije trastuzumab ADC Jedinjenja 5 kod ženki Sprag Dauli pacova.
Slika 11 pokazuje rezultate testa zaustavljanja ćelijskog ciklusa u Jurkat ćelijama tretiranim sa Jedinjenjem 5.
DETALJAN OPIS
[0037] U sledećem opisu, određeni specifični detalji izneti su kako bi se obezbedilo temeljno razumevanje različitih primera izvođenja objave. Međutim, onaj sa iskustvom u struci razumeće da se objava može praktikovati bez ovih detalja.
Definicije
[0038] Osim ukoliko nije drugačije navedeno, sledeći termini i fraze kao što se ovde upotrebljavaju namenjeni su da imaju sledeća značenja. Kada se ovde koriste trgovačka imena, podnosioci nameravaju da nezavisno uključe formulaciju proizvoda sa trgovačkim imenom, generički lek, i aktivni(e) farmaceutski(e) sastojak(ke) proizvoda sa trgovačkim imenom.
[0039] Osim ukoliko kontekst ne zahteva drugačije, u predmetnoj specifikaciji i patentnim zahtevima, reč "sadržati" i njene varijacije, kao što su "sadrži" i "koji sadrži" treba tumačiti u otvorenom, inkluzivnom smislu, to jest kao "uključuje, ali nije ograničeno na".
[0040] Pozivanje u ovoj specifikaciji na "jedan primer izvođenja" ili "primer izvođenja" znači da je određeno svojstvo, struktura ili karakteristika opisana u vezi sa primerom izvođenja uključena u najmanje jedan primer izvođenja predmetne objave. Stoga, pojavljivanje fraza "u jednom primeru izvođenja" ili "u primeru izvođenja" na različitim mestima u ovoj specifikaciji ne mora nužno da se odnosi na isti primer izvođenja. Podrazumeva se da određena svojstva pronalaska, koja su, radi jasnoće, opisana u kontekstu odvojenih primera izvođenja, takođe mogu biti obezbeđena u kombinaciji u jednom primeru izvođenja. Nasuprot tome, različita svojstva pronalaska, koja su, radi konciznosti, opisana u kontekstu jednog primera izvođenja, takođe mogu biti obezbeđena odvojeno ili u bilo kojoj pogodnoj podkombinaciji.
Hemijske grupe
[0041] Sve kombinacije primera izvođenja koje se odnose na hemijske grupe predstavljene varijablama (npr. R<a>, R<b>, R<c>, R<d>, R<e>, R<f>, R<g>, R<h>, R<i>, R<j>, R<k>, R<m>, R<1>, R<2>, R<2a>, R<3>, R<4>, R<5>, R<6>, R<7>, R<8>, R<9>, R<4>, R<10>, R<11>, X, i Y sadržanim u generičkim hemijskim ovde opisanim formulama (npr. I, Ia, Ic, Id, If, Ig, Ii, Ij, Im, In, II, III, IV, V, VI, i VII) specifično su obuhvaćene predmetnim pronalaskom baš kao da je svaka kombinacija pojedinačno eksplicitno navedena, do te mere da takve kombinacije obuhvataju jedinjenja koja rezultuju stabilnim jedinjenjima (tj. jedinjenjima koja se mogu izolovati, okarakterisati i testirati na biološku aktivnost). Pored toga, sve podkombinacije hemijskih grupa navedenih u primerima izvođenja koji opisuju takve varijable, kao i sve podkombinacije ovde opisanih upotreba i medicinskih indikacija, takođe su specifično obuhvaćene predmetnim pronalaskom baš kao da je svaka podkombinacija hemijskih grupa i podkombinacija upotreba i medicinskih indikacija ovde pojedinačno i eksplicitno navedena. Pored toga, u slučaju da je lista supstituenata navedena za bilo koji određeni R<a>, R<b>, R<c>, R<d>, R<e>, R<f>, R<g>, R<h>, R<i>, R<j>, R<k>, R<m>, R<1>, R<2>, R<2a>, R<3>, R<4>, R<5>, R<6>, R<7>, R<8>, R<9>, R<4>, R<10>, R<11>, X, ili Y u određenom primeru izvođenja i/ili patentnom zahtevu, podrazumeva se da svaki pojedinačni supstituent može biti izbrisan iz određenog primera izvođenja i/ili patentnog zahteva i da će se smatrati da je preostala lista supstituenata unutar obima predmetne objave.
[0042] Termin "aciloksi", kao što se ovde upotrebljava, uključuje -OC(O)-alkil, pri čemu je alkil kao što je ovde definisano. Primeri aciloksi uključuju, ali nisu ograničeni na: formiloksi, acetoksi, propioniloksi, izobutiriloksi, pivaloiloksi, i slično.
[0043] Termin "aciltio", kao što se ovde upotrebljava, označava -SC(O)-alkil, pri čemu je alkil kao što je ovde definisano. Primeri aciltio uključuju, ali nisu ograničeni na: formiltio, acetiltio, propioniltio, izobutiriltio, pivaloiltio, i slično.
[0044] Termin "alkoksi", kao što se ovde upotrebljava, označava -O-alkil, pri čemu je alkil kao što je ovde definisano. Primeri alkila uključuju, ali nisu ograničeni na: metoksi, etoksi, npropoksi, izopropoksi, n-butoksi, sek-butoksi, izobutoksi, t-butoksi, pentiloksi, izopentiloksi, t-pentiloksi, neo-pentiloksi, 1-metilbutoksi, 2-metilbutoksi, n-heksiloksi, i slično.
[0045] Termin "alkoksikarbonil", kao što se ovde upotrebljava, označava -C(O)O-alkil. Primeri alkoksikarbonila uključuju, ali nisu ograničeni na: metoksikarbonil, etoksikarbonil, npropoksikarbonil, izopropoksikarbonil, n-butoksikarbonil, sek-butoksikarbonil, izobutoksikarbonil, t-butoksikarbonil, pentiloksikarbonil, izopentiloksikarbonil, tpentiloksikarbonil, neo-pentiloksikarbonil, 1-metilbutoksikarbonil, 2-metilbutoksikarbonil, nheksiloksikarbonil, i slično.
[0046] Termin "alkenildiil", kao što se ovde upotrebljava, označava ravni ili razgranati nezasićeni ugljovodonik, dvovalentni radikal koji sadrži specificiran broj atoma ugljenika, i jednu ili više ugljenik-ugljenik dvostrukih veza, npr. C2-C6alkenildiil, C2-C4alkenildiil, ili C2alkenildiil. Primeri alkenildiila uključuju, ali nisu ograničeni na: etenildiil, n-propenildiil, izopropenildiil, n-butenildiil, sek-butenildiil, izobutenildiil, t-butenildiil, pentenildiil, izopentenildiil, t-pentenildiil, neo-pentenildiil, 1-metilbutenildiil, 2-metilbutenildiil, nheksenildiil, i slično.
[0047] Termin "alkil", kao što se ovde upotrebljava, označava ravni ili razgranati zasićeni ugljovodonični radikal koji sadrži specificiran broj atoma ugljenika, npr. C1-C6alkil, C1-C4alkil, ili C2alkil. Primeri alkila uključuju, ali nisu ograničeni na: metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, sek-butil, izobutil, t-butil, pentil, izopentil, t-pentil, neo-pentil, 1-metilbutil, 2-metilbutil, n-heksil, i slično.
[0048] Termin "alkildiil", kao što se ovde upotrebljava, označava ravni ili razgranati zasićeni ugljovodonik, dvovalentni radikal koji sadrži specificiran broj atoma ugljenika, npr. C1-C6alkildiil, C1-C4alkildiil, ili C2alkildiil. Primeri alkildiila uključuju, ali nisu ograničeni na: metildiil, etildiil, n-propildiil, izopropildiil, n-butildiil, sek-butildiil, izobutildiil, t-butildiil, pentildiil, izopentildiil, t-pentildiil, neo-pentildiil, 1-metilbutildiil, 2-metilbutildiil, nheksildiil, i slično.
[0049] Termin "alkilamino", kao što se ovde upotrebljava, označava -NH-alkil, pri čemu je alkil kao što je ovde definisano. Primeri alkilamino uključuju, ali nisu ograničeni na: metilamino, etilamino, n-propilamino, izopropilamino, n-butilamino, sek-butilamino, izobutilamino, t-butilamino, pentilamino, izopentilamino, t-pentilamino, neo-pentilamino, 1-metilbutilamino, 2-metilbutilamino, n-heksilamino, i slično.
[0050] Termin "alkiltio", kao što se ovde upotrebljava, označava -S-alkil, pri čemu je alkil kao što je ovde definisano. Primeri alkiltio uključuju, ali nisu ograničeni na: metiltio, etiltio, n-propiltio, izopropiltio, n-butiltio, sek-butiltio, izobutiltio, t-butiltio, pentiltio, izopentiltio, tpentiltio, neo-pentiltio, 1-metilbutiltio, 2-metilbutiltio, n-heksiltio, i slično.
[0051] Termin "amino", kao što se ovde upotrebljava, označava -NH2.
[0052] Termin "amino-cikloalkil", kao što se ovde upotrebljava, označava cikloalkil grupu, supstituisanu sa jednim amino supstituentom, kao što su ti termini ovde definisani. Primeri
1
amino-cikloalkila uključuju, ali nisu ograničeni na: aminociklopropil, aminociklobutil, aminociklopentil, aminocikloheksil, i slično.
[0053] Termin "amino-alkil", kao što se ovde upotrebljava, označava alkil grupu, supstituisanu sa jednim amino supstituentom, kao što su ti termini ovde definisani. Primeri amino-alkila uključuju, ali nisu ograničeni na: aminometil, aminoetil, amino-n-propil, aminoizopropil, amino-n-butil, amino-sek-butil, amino-izobutil, amino-t-butil, amino-pentil, aminoizopentil, amino-t-pentil, amino-neo-pentil, amino-1-metilbutil, amino-2-metilbutil, amino-nheksil, i slično.
[0054] Termin "amino-aril", kao što se ovde upotrebljava, označava aril grupu, supstituisanu sa jednim amino supstituentom, kao što su ti termini ovde definisani. Primeri amino-arila uključuju, ali nisu ograničeni na: amino-fenil, amino-naftalenil, i slično.
[0055] Termin "amino-heterociklil", kao što se ovde upotrebljava, označava heterociklil grupu, supstituisanu sa jednim amino supstituentom, kao što su ti termini ovde definisani. Primeri amino-heterociklila uključuju, ali nisu ograničeni na: amino-pirolidinil, aminopiperidinil, i slično.
[0056] Termin "aril", kao što se ovde upotrebljava, označava radikal poreklom od 6- do 12-članog mono- ili bicikličnog sistema ugljovodoničnih prstena pri čemu je najmanje jedan prsten aromatičan. Primeri arila uključuju, ali nisu ograničeni na: fenil, naftalenil, 1,2,3,4-tetrahidro-naftalenil, 5,6,7,8-tetrahidro-naftalenil, indanil, i slično.
[0057] Termin "aril-alkil", kao što se ovde upotrebljava, označava alkil grupu, supstituisanu sa jednim aril supstituentom, kao što su ti termini ovde definisani. Primeri aril-alkila uključuju, ali nisu ograničeni na: benzil, fenetil, fenilpropil, naftalenilmetil, i slično.
[0058] Termin "arildiil", kao što se ovde upotrebljava, označava dvovalentni radikal poreklom od 6- do 12-članog mono- ili bicikličnog sistema ugljovodoničnih prstena pri čemu je najmanje jedan prsten aromatičan. Primeri arildiila uključuju fenildiil, naftalenildiil, 1,2,3,4-tetrahidro-naftalenildiil, 5,6,7,8-tetrahidro-naftalenildiil, indanildiil, i slično.
[0059] Termin "karboksamid", kao što se ovde upotrebljava, označava -C(O)NH2.
[0060] Termin "karboksil", kao što se ovde upotrebljava, označava -C(O)OH.
[0061] Termin "cijano", kao što se ovde upotrebljava, označava -CN.
[0062] Termin "cikloalkil", kao što se ovde upotrebljava, označava ciklični zasićeni ugljovodonični radikal koji sadrži specificiran broj atoma ugljenika, npr. C3-C7alkil, ili C4-C7alkildiil. Primeri cikloalkila uključuju, ali nisu ograničeni na: ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, i slično.
[0063] Termin "cikloalkil-alkil", kao što se ovde upotrebljava, označava alkil grupu, supstituisanu sa jednim cikloalkil supstituentom, kao što su ti termini ovde definisani. Primeri cikloalkil-alkila uključuju, ali nisu ograničeni na: ciklopropilmetil, ciklobutilmetil, ciklopentilmetil, cikloheksilmetil, ciklopropiletil, ciklobutiletil, ciklopentiletil, cikloheksiletil, i slično.
[0064] Termin "cikloalkildiil", kao što se ovde upotrebljava, označava dvovalentni ciklični zasićeni ugljovodonični radikal koji sadrži specificirani broj atoma ugljenika, npr. C3-C7cikloalkildiil, ili C4-C7alkildiil. Primeri cikloalkildiila uključuju, ali nisu ograničeni na: ciklopropildiil, ciklobutildiil, ciklopentildiil, cikloheksildiil, i slično.
[0065] Termin "guanidino", kao što se ovde upotrebljava, označava -NH-C(=NH)-NH2.
[0066] Termin "halo", kao što se ovde upotrebljava, označava -F, -Cl, -Br, i -I.
[0067] Termin "haloacil", kao što se ovde upotrebljava, označava -C(O)-haloalkil, pri čemu je haloalkil kao što je ovde definisano. Primeri haloacila uključuju, ali nisu ograničeni na: difluoroacetil, trifluoroacetil, 3,3,3-trifluoropropanoil, pentafluoroproponil, i slično.
[0068] Termin "haloalkoksi", kao što se ovde upotrebljava, označava -O-haloalkil, pri čemu je haloalkil kao što je ovde definisano. Primeri haloalkoksi uključuju, ali nisu ograničeni na: difluorometoksi, trifluorometoksi, 2,2,2-trifluoroetoksi, pentafluoroetoksi, i slično.
[0069] Termin "haloalkil", kao što se ovde upotrebljava, označava alkil grupu kao što je ovde definisano supstituisanu sa jednim ili više halogena. Potpuno supstituisani haloalkil može biti predstavljen formulom CnL2n+1pri čemu je L halogen. Kada je prisutno više od jednog halogena, oni mogu biti isti ili različiti i odabrani iz grupe koja se sastoji od F, Cl, Br, i I. Primeri haloalkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na: fluorometil, difluorometil, trifluorometil, hlorodifluorometil, 2,2,2-trifluoroetil, pentafluoroetil, i slično.
[0070] Termin "heteroaril", kao što se ovde upotrebljava, označava radikal poreklom od 6- do 12-članog mono- ili bicikličnog sistema prstena pri čemu je najmanje jedan atom u prstenu heteroatom i najmanje jedan prsten je aromatičan. Primeri heteroatoma uključuju, ali nisu ograničeni na: O, S, N, i slično. Primeri heteroarila uključuju, ali nisu ograničeni na: piridil, benzofuranil, pirazinil, piridazinil, pirimidinil, triazinil, kvinolinil, benzoksazolil, benzotiazolil, 1H-benzimidazolil, izokvinolinil, kvinazolinil, kvinoksalinil, pirolil, indolil, 1H-benzoimidazol-2-il, benzo[1,3]dioksol-5-il, 3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-7-il, 2,3-dihidro-benzofurn-7-il, 2,3-dihidro-indol-1-il, i slično.
[0071] Termin "heteroaril-alkil", kao što se ovde upotrebljava, označava alkil grupu, supstituisanu sa jednim heteroaril supstituentom, kao što su ti termini ovde definisani. Primeri heteroaril-alkila uključuju, ali nisu ograničeni na: piridilmetil, benzofuranilmetil, pirazinilmetil, piridazinilmetil, pirimidinilmetil, triazinilmetil, kvinolinilmetil, benzoksazolilmetil, benzotiazolilmetil, 1H-benzimidazolilmetil, izokvinolinilmetil, kvinazolinilmetil, kvinoksalinilmetil, pirolilmetil, indolilmetil, 1H-benzoimidazol-2-ilmetil, benzo[1,3]dioksol-5-ilmetil, 3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-7-ilmetil, 2,3-dihidrobenzofurn-7-ilmetil, 2,3 -dihidro-indol-1-ilmetil, i slično.
[0072] Termin "heteroarildiil", kao što se ovde upotrebljava, označava dvovalentni radikal poreklom od 6- do 12-članog mono- ili bicikličnog sistema prstena pri čemu je najmanje jedan atom u prstenu heteroatom i najmanje jedan prsten je aromatičan. Primeri heteroatoma uključuju, ali nisu ograničeni na: O, S, N, i slično. Primeri heteroarildiila uključuju, ali nisu ograničeni na: tiazolildiil, 2,4-tiazolildiil, triazolildiil, 1,2,3-triazolil-1,4-diil, piridildiil, benzofuranildiil, pirazinildiil, piridazinildiil, pirimidinildiil, triazinildiil, kvinolinildiil, benzoksazolildiil, benzotiazolildiil, 1H-benzimidazolildiil, izokvinolinildiil, kvinazolinildiil, kvinoksalinildiil, pirolildiil, indolildiil, 1H-benzoimidazol-2-ildiil, benzo[1,3]dioksol-5-ildiil, 3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-7-ildiil, 2,3-dihidro-benzofurn-7-ildiil, 2,3-dihidro-indol-1-ildiil, i slično.
[0073] Termin "heterociklil", kao što se ovde upotrebljava, označava radikal poreklom od 3-do 12-članog mono- ili bicikličnog nearomatičnog sistema prstena pri čemu je najmanje jedan atom u prstenu heteroatom. Primeri heteroatoma uključuju, ali nisu ograničeni na: O, S, N, i slično. Heterociklil supstituent može biti prikačen putem bilo kog od svojih dostupnih atoma u prstenu, na primer, ugljenika u prstenu, ili azota u prstenu. U nekim primerima izvođenja, heterociklil grupa je prsten koji sadrži 3-, 4-, 5-, 6- ili 7-članova. Primeri heterociklil grupe uključuju, ali nisu ograničeni na: aziridin-1-il, aziridin-2-il, azetidin-1-il, azetidin-2-il, azetidin-3-il, piperidin-1-il, piperidin-2-il, piperidin-3-il, piperidin-4-il, morfolin-2-il, morfolin-3-il, morfolin-4-il, piperazin-1-il, piperazin-2-il, piperazin-3-il, piperazin-4-il, pirolidin-1-il, pirolidin-2-il, pirolidin-3-il, [1,3]-dioksolan-2-il, tiomorfolin-4-il, [1,4] oksazepan-4-il, 1,1-diokso-1λ<6>-tiomorfolin-4-il, azepan-1-il, azepan-2-il, azepan-3-il, azepan-4-il, oktahidro-kvinolin-1-il, oktahidro-izokvinolin-2-il, i slično.
[0074] Termin "heterociklil-alkil", kao što se ovde upotrebljava, označava alkil grupu, supstituisanu sa jednim heterociklil supstituentom, kao što su ti termini ovde definisani. Primeri heterociklil-alkila uključuju, ali nisu ograničeni na: azetidin-3-ilmetil, piperidin-1-ilmetil, piperidin-2-ilmetil, piperidin-3-ilmetil, piperidin-4-ilmetil, morfolin-2-ilmetil, morfolin-3-ilmetil, morfolin-4-ilmetil, piperazin-1-ilmetil, piperazin-2-ilmetil, piperazin-3-ilmetil, piperazin-4-ilmetil, pirolidin-1-ilmetil, pirolidin-2-ilmetil, pirolidin-3-ilmetil, [1,3]-dioksolan-2-ilmetil, tiomorfolin-4-ilmetil, [1,4]oksazepan-4-ilmetil, 1,1-diokso-1λ<6>-
1
tiomorfolin-4-ilmetil, azepan-1-ilmetil, azepan-2-ilmetil, azepan-3-ilmetil, azepan-4-ilmetil, oktahidro-kvinolin-1-ilmetil, oktahidro-izokvinolin-2-il, i slično.
[0075] Termin "heterociklildiil", kao što se ovde upotrebljava, označava dvovalentni radikal poreklom od 3- do 12-članog mono- ili bicikličnog nearomatičnog sistema prstena pri čemu je najmanje jedan atom u prstenu heteroatom. Primeri heteroatoma uključuju, ali nisu ograničeni na: O, S, N, i slično. Heterociklildiil supstituent može biti prikačen putem bilo koja dva od svojih dostupnih atoma u prstenu, na primer, ugljenika u prstenu, ili azota u prstenu. U nekim primerima izvođenja, heterociklildiil je prsten koji sadrži 3-, 4-, 5-, 6- ili 7-članova. Primeri heterociklildiil grupe uključuju, ali nisu ograničeni na: aziridin-1-ildiil, aziridin-2-ildiil, azetidin-1-ildiil, azetidin-2-ildiil, azetidin-3-ildiil, piperidin-1-ildiil, piperidin-2-ildiil, piperidin-3-ildiil, piperidin-4-ildiil, morfolin-2-ildiil, morfolin-3-ildiil, morfolin-4-ildiil, piperazin-1-ildiil, piperazin-2-ildiil, piperazin-3-ildiil, piperazin-4-ildiil, pirolidin-1-ildiil, pirolidin-2-ildiil, pirolidin-3-ildiil, [1,3]-dioksolan-2-ildiil, tiomorfolin-4-ildiil, [1,4] oksazepan-4-ildiil, 1,1-diokso-1λ6-tiomorfolin-4-ildiil, azepan-1-ildiil, azepan-2-ildiil, azepan-3-ildiil, azepan-4-ildiil, oktahidro-kvinolin-1-ildiil, oktahidro-izokvinolin-2-ildiil, i slično.
[0076] Termin "hidroksil", kao što se ovde upotrebljava, označava -OH.
[0077] Termin "hidroksi-alkil", kao što se ovde upotrebljava, označava alkil grupu, supstituisanu sa jednim hidroksi supstituentom, kao što su ti termini ovde definisani. Primeri hidroksi-alkila uključuju, ali nisu ograničeni na: hidroksimetil, hidroksietil, hidroksi-n-propil, hidroksi-izopropil, hidroksi-n-butil, hidroksi-sek-butil, hidroksi-izobutil, hidroksi-t-butil, hidroksi-pentil, hidroksi-izopentil, hidroksi-t-pentil, hidroksi-neo-pentil, hidroksi-1-metilbutil, hidroksi-2-metilbutil, hidroksi-n-heksil, i slično.
[0078] Termin "nitro", kao što se ovde upotrebljava, označava -NO2.
[0079] Termin "okso", kao što se ovde upotrebljava, označava =O.
[0080] Termin "tio", kao što se ovde upotrebljava, označava -SH.
[0081] Termin "tio-alkil", kao što se ovde upotrebljava, označava -S-alkil, pri čemu je alkil kao što je ovde definisano. Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na: metiltio, etiltio, npropiltio, izopropiltio, n-butiltio, sek-butiltio, izobutiltio, t-butiltio, pentiltio, izopentiltio, tpentiltio, neo-pentiltio, 1-metilbutiltio, 2-metilbutiltio, n-heksiltio, i slično.
[0082] Kao što se ovde upotrebljava, "supstituisan" ukazuje da je najmanje jedan atom vodonika u hemijskoj grupi zamenjen nevodoničnim supstituentom ili grupom, a nevodonični supstituent ili grupa može biti monovalentna ili dvovalentna. Kada je supstituent ili grupa dvovalentna, onda se podrazumeva da je ova grupa dodatno supstituisana sa drugim supstituentom ili grupom. Kada je hemijska grupa ovde "supstituisana", ona može imati supstitucije do pune valance; na primer, metil grupa može biti supstituisana sa 1, 2, ili 3 supstituenta, metilen (metildiil) grupa može biti supstituisana sa 1 ili 2 supstituenta, fenil grupa može biti supstituisana sa 1, 2, 3, 4, ili 5 supstituenata, naftil grupa može biti supstituisana sa 1, 2, 3, 4, 5, 6, ili 7 supstituenata, i slično. Slično tome, "supstituisan sa jednim ili više supstituenata" označava supstituciju grupe sa jednim supstituentom do ukupnog broja supstituenata fizički omogućenih od strane grupe. Dodatno, kada je grupa supstituisana sa više od jednom grupom, one mogu biti identične ili mogu biti različite.
[0083] Jedinjenja koja su ovde opisana mogu takođe uključivati tautomerne oblike, kao što su keto-enolni tautomeri, i slično. Tautomerni oblici mogu biti u ravnoteži ili sterički zaključani u jedan oblik pomoću odgovarajuće supstitucije. Podrazumeva se da su različiti tautomerni oblici unutar obima jedinjenja iz predmetnog pronalaska.
[0084] Podrazumeva se i ceni da jedinjenja Formule I i formula koje su im srodne mogu imati jedan ili više hiralnih centara i stoga mogu postojati kao enantiomeri i/ili dijastereoizomeri. Podrazumeva se da se pronalazak širi na i obuhvata sve takve enantiomere, dijastereoizomere i njihove smeše, uključujući ali ne ograničavajući se na racemate. Podrazumeva se da su jedinjenja Formule I i formula koje se upotrebljavaju u ovoj objavi namenjena da predstavljaju sve pojedinačne enantiomere i njihove smeše, osim ukoliko nije drugačije navedeno ili pokazano.
[0085] Termin "zaštitna grupa", kao što se ovde upotrebljava, označava labilnu hemijsku funkcionalnu grupu za koju je poznato u struci da štiti reaktivne grupe uključujući bez ograničavanja, hidroksilne i amino grupe, od neželjenih reakcija tokom sintetičkih procedura. Hidroksilne i amino grupe koje su zaštićene zaštitnom grupom ovde se označavaju kao "zaštićene hidroksilne grupe" i "zaštićene amino grupe", respektivno. Zaštitne grupe se tipično upotrebljavaju selektivno i/ili ortogonalno za zaštitu mesta tokom reakcija na drugim reaktivnim mestima i onda se mogu ukloniti kako bi se nezaštićena grupa ostavila kakva jeste ili bila dostupna za dodatne reakcije. Zaštitne grupe poznate u tehnici su generalno opisane u Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons, New York (1999). Grupe se mogu selektivno inkorporisati u jedinjenja iz predmetne objave kao prekursori. Na primer, amino grupa se može staviti u ovde opisano jedinjenje kao azido grupa koja se može hemijski konvertovati u amino grupu na željenoj tački u sintezi. Generalno, grupe su zaštićene ili prisutne kao prekursori koji će biti inertni na reakcije koje modifikuju druge oblasti roditeljskog molekula za konverziju u njihove krajnje grupe u odgovarajuće vreme. Dodatno reprezentativne zaštitne grupe ili grupe prekursori su
1
razmatrane u Agrawal, et al., Protocols for Oligonucleotide Conjugates, Eds, Humana Press; New Jersey, 1994; Vol.26 pp.1 72. Primeri "hidroksilnih zaštitnih grupa" uključuju, ali nisu ograničeni na, t-butil, t-butoksimetil, metoksimetil, tetrahidropiranil, 1-etoksietil, 1-(2-hloroetoksi)etil, 2-trimetilsililetil, p-hlorofenil, 2,4-dinitrofenil, benzil, 2,6-dihlorobenzil, difenilmetil, p-nitrobenzil, trifenilmetil, trimetilsilil, trietilsilil, t-butildimetilsilil, tbutildifenilsilil (TBDPS), trifenilsilil, benzoilformat, acetat, hloroacetat, trihloroacetat, trifluoroacetat, pivaloat, benzoat, p-fenilbenzoat, 9-fluorenilmetil karbonat, mezilat i tozilat. Primeri "amino zaštitnih grupa" uključuju, ali nisu ograničeni na, karbamat-zaštitne grupe, kao što su 2-trimetilsililetoksikarbonil (Teoc), 1-metil-1-(4-bifenilil)etoksikarbonil (Bpoc), tbutoksikarbonil (BOC), aliloksikarbonil (Alloc), 9-fluorenilmetiloksikarbonil (Fmoc), i benziloksikarbonil (Cbz); amidne zaštitne grupe, kao što su formil, acetil, trihaloacetil, benzoil, i nitrofenilacetil; sulfonamid-zaštitne grupe, kao što je 2-nitrobenzensulfonil; i imin i ciklične imidne zaštitne grupe, kao što su ftalimido i ditiasukcinoil.
[0086] "Prolek", kao što se ovde upotrebljava, označava jedinjenje koje se može konvertovati pod fiziološkim uslovima ili pomoću solvolize u ovde opisano biološki aktivno jedinjenje. Stoga, termin "prolek" označava metabolički prekursor ovde opisanog jedinjenja koji je farmaceutski prihvatljiv. Prolek može biti neaktivan kada se primenjuje subjektu kome je to potrebno, ali se konvertuje in vivo u ovde opisano aktivno jedinjenje. U jednom primeru izvođenja, prolek se brzo transformiše in vivo kako bi se dobilo ovde opisano roditeljsko jedinjenje, na primer, pomoću hidrolize u krvi. U jednom primeru izvođenja, prolek može biti stabilan u plazmi ili krvi. U jednom primeru izvođenja, prolek može biti ciljni oblik ovde opisanog jedinjenja. Jedinjenje proleka često nudi prednosti solubilnosti, kompatibilnosti sa tkivom ili odloženog oslobađanja u organizmu sisara (videti, Bundgard, H., Design of Prodrugs (1985), pp.7 9, 2124 (Elsevier, Amsterdam)). Diskusija o prolekovima obezbeđena je u Higuchi, T., et al., A.C.S. Symposium Series, Vol.14, i u Bioreversible Carriers in Drug Design, Ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987.
[0087] Termin "prolek" uključuje bilo koje kovalentno vezane nosače, koji oslobađaju ovde opisano aktivno jedinjenje in vivo kada se takav prolek primenjuje na sisarskog subjekta. Konjugati, uključujući ADC, kao što se ovde objavljuje, su takvi prolekovi ovde opisanih jedinjenja. Prolekovi ovde opisanog jedinjenja mogu biti pripremljeni modifikovanjem funkcionalnih grupa prisutnih u ovde opisanom jedinjenju na takav način da se modifikacije isecaju, bilo rutinskom manipulacijom ili in vivo, do ovde opisanog roditeljskog jedinjenja. Prolekovi uključuju ovde opisana jedinjenja pri čemu je hidroksi, amino ili merkapto grupa
1
vezana za bilo koju grupu koja se, kada se prolek iz ovde opisanog jedinjenja primenjuje sisarskom subjektu, iseca da formira slobodnu hidroksi, slobodnu amino ili slobodnu merkapto grupu, respektivno. Primeri prolekova uključuju, ali nisu ograničeni na, derivate acetata, formata i benzoata funkcionalnih grupa alkohola, i amidne derivate funkcionalnih grupa amina u ovde opisanim jedinjenjima, i slično.
[0088] Predmetna objava takođe obuhvata sva ovde opisana jedinjenja koja su izotopski obeležena tako što imaju jedan ili više atoma koji su zamenjeni atomom koji ima različitu atomsku masu ili maseni broj. Primeri izotopa koji se mogu inkorporisati u objavljena jedinjenja uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, fluora, hlora, i joda, kao što su<2>H,<3>H,<11>C,<13>C,<14>C,<13>N,<15>N,<15>O,<17>O,<18>O,<31>P,<32>P,<35>S,<18>F,<36>Cl,<123>I, i<125>I, respektivno. Ova radioaktivno obeležena jedinjenja su korisna da pomognu u određivanju ili merenju efikasnosti jedinjenja, pomoću karakterizacije, na primer, mesta ili načina delovanja, ili afiniteta vezivanja za farmakološki važno mesto delovanja. Određena izotopski obeležena ovde opisana jedinjenja, na primer, ona koja inkorporišu radioaktivni izotop, korisna su u studijama distribucije leka i/ili supstrata u tkivu. Radioaktivni izotopi tricijum, tj.<3>H, i ugljenik-14, tj.<14>C, su posebno korisni za ovu svrhu s obzirom na njihovu lakoću inkorporacije i spremne načine detekcije.
[0089] Supstitucija sa težim izotopima kao što je deuterijum, tj.<2>H, može dati određene terapijske prednosti koje su rezultat veće metaboličke stabilnosti, na primer, produženi poluživot in vivo ili smanjeni zahtevi za doziranjem, i stoga može biti poželjna u nekim okolnostima.
[0090] Supstitucija sa pozitron emitujućim izotopima, kao što su<11>C,<18>F,<15>O i<13>N, može biti korisna u studijama pozitronske emisione topografije (PET) za ispitivanje zauzetosti receptora supstrata. Izotopski obeležena jedinjenja koja su ovde opisana generalno mogu biti pripremljena konvencionalnim tehnikama poznatim onima sa iskustvom u struci ili postupcima analognim onima opisanim u Pripremama i Primerima kao što je izneto u nastavku upotrebljavajući odgovarajući izotopski obeleženi reagens umesto prethodno korišćenog neobeleženog reagensa.
[0091] Predmetna objava je takođe namenjena da obuhvati in vivo metaboličke proizvode objavljenih jedinjenja. Takvi proizvodi mogu biti rezultat, na primer, oksidacije, redukcije, hidrolize, amidacije, esterifikacije, i slično primenjenog jedinjenja, prvenstveno usled enzimskih procesa. U skladu sa tim, predmetna objava uključuje jedinjenja proizvedena postupkom koji sadrži primenu jedinjenja iz ove objave sisaru tokom vremenskog perioda koji je dovoljan da se dobije njegov metabolički proizvod. Takvi proizvodi se tipično
1
identifikuju primenom radioaktivno obeleženog jedinjenja koje je ovde opisano u detektabilnoj dozi životinji, kao što je pacov, miš, zamorac, majmun, ili čovek, dajući dovoljno vremena da dođe do metabolizma, i izolovanjem njegovih proizvoda konverzije iz urina, krvi ili drugih bioloških uzoraka.
[0092] "Stabilno jedinjenje" i "stabilna struktura", kao što se ovde upotrebljava, označavaju jedinjenje koje je dovoljno robustno da preživi izolaciju do korisnog stepena čistoće iz reakcione smeše, i formulaciju u efikasan terapijski agens.
Druge definicije
[0093] Termin "antitelo" ovde se upotrebljava u najširem smislu i specifično pokriva intaktna monoklonalna antitela, poliklonalna antitela, multispecifična antitela (npr. bispecifična antitela) formirana od najmanje dva intaktna antitela, i fragmente antitela, sve dok pokazuju željenu biološku aktivnost. Termin "antitelo" označava molekul imunoglobulina pune dužine ili funkcionalno aktivan deo molekula imunoglobulina pune dužine, tj. molekul koji sadrži antigen-vezujuće mesto koje imunospecifično vezuje antigen cilja od interesa ili njegov deo. Imunoglobulin koji se ovde objavljuje može biti bilo kog tipa (npr. IgG, IgE, IgM, IgD, i IgA), klase (npr. IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 i IgA2) ili podklase molekula imunoglobulina. Imunoglobulini mogu biti poreklom od bilo koje vrste. U jednom aspektu imunoglobulin je humanog, murinskog, ili zečjeg porekla. U sledećem aspektu, antitela su poliklonalna, monoklonalna, multispecifična (npr. bispecifična), humana, humanizovana ili himerna antitela, linearna antitela, jednolančana antitela, dijatela, maksitela, minitela, Fv, Fab fragmenti, F(ab') fragmenti, F(ab')2 fragmenti, fragmenti proizvedeni pomoću Fab ekspresione biblioteke, anti-idiotipska (anti-Id) antitela, CDR, i epitop-vezujući fragmenti bilo kog od prethodno navedenih koji se imunospecifično vezuju za ciljni antigen.
[0094] Termin "monoklonalno antitelo", kao što se ovde upotrebljava, označava antitelo dobijeno iz populacije suštinski homogenih antitela, tj. pojedinačna antitela koja čine populaciju su identična osim mogućih mutacija koje se javljaju u prirodi koje mogu biti prisutne u manjim količinama. Monoklonalna antitela uključuju "himerna" antitela u kojima je deo teškog i/ili lakog lanca identičan ili homologan sa odgovarajućim sekvencama u antitelima poreklom od određene vrste ili pripadaju određenoj klasi ili podklasi antitela, dok je ostatak lanca(aca) identičan ili homologan sa odgovarajućim sekvencama u antitelima poreklom od druge vrste ili pripadaju drugoj klasi ili podklasi antitela, kao i fragmentima takvih antitela (videti, npr. S.A.D. pat. br. 4,816,567; i Morrison et al., 1984, Proc. Natl.
1
Acad. Sci. USA 81:6851-6855). Monoklonalna antitela takođe uključuju humanizovana antitela koja mogu da sadrže potpuno humani konstantni region i CDR iz ne-humanog izvora.
[0095] "Intaktno" antitelo je ono koje sadrži antigen-vezujući varijabilni region, kao i konstantni domen lakog lanca (CL) i konstantne domene teškog lanca, CH1, CH2i CH3. Konstantni domeni mogu biti konstantni domeni nativne sekvence (npr. konstantni domeni humane nativne sekvence) ili varijanta njihove amino-kiselinske sekvence.
[0096] Intaktno antitelo može imati jednu ili više "efektorskih funkcija" koje označavaju one biološke aktivnosti koje se mogu pripisati Fc regionu (Fc region nativne sekvence ili Fc region varijante amino-kiselinske sekvence) antitela. Primeri efektorskih funkcija antitela uključuju C1q vezivanje; citotoksičnost zavisnu od komplementa (CDC); vezivanje za Fc receptor; ćelijski posredovanu citotoksičnost zavisnu od antitela (ADCC); fagocitozu; smanjenje ekspresije receptora ćelijske površine (npr. receptor B ćelija; BCR), itd. U nekim primerima izvođenja, antitelu nedostaje efektorska funkcija.
[0097] "Fragmenti antitela" sadrže deo intaktnog antitela, poželjno koji sadrži njegov antigenvezujući ili varijabilni region. Primeri fragmenata antitela uključuju Fab, Fab', F(ab')2, i Fv fragmente; dijatela; linearna antitela; molekule jednolančanih antitela; maksitela; minitela; i multispecifična antitela formirana od fragmenta(ata) antitela.
[0098] "Izolovano" antitelo je ono koje je identifikovano i odvojeno i/ili izdvojeno iz komponente svog prirodnog okruženja. Kontaminirajuće komponente njegovog prirodnog okruženja su materijali koji bi ometali dijagnostičku ili terapijsku upotrebu antitela, i mogu uključivati enzime, hormone, i druge proteinske ili neproteinske rastvorene supstance. U nekim primerima izvođenja, antitelo će biti prečišćeno (1) na više od 95% po težini antitela kao što je određeno pomoću Louri (Lowry) postupka, i najpoželjnije više od 99% po težini, (2) do stepena dovoljnog da se dobije najmanje 15 ostataka N-terminusne ili interne aminokiselinske sekvence upotrebom sekvenatora sa rotirajućom čašom, ili (3) do homogenosti pomoću SDS-PAGE pod redukujućim ili neredukujućim uslovima upotrebom Komasi (Coomassie) plave ili, poželjno, srebrne boje. Izolovano antitelo uključuje antitelo in situ unutar rekombinantnih ćelija pošto najmanje jedna komponenta prirodnog okruženja antitela neće biti prisutna. Uobičajeno, međutim, izolovano antitelo biće pripremljeno pomoću najmanje jednog koraka prečišćavanja.
[0099] Antitelo "koje vezuje" antigen od interesa je ono sposobno da veže taj antigen sa dovoljnim afinitetom tako da je antitelo korisno za ciljno delovanje na ćeliju koja eksprimira antigen.
1
[0100] Polipeptid "nativne sekvence" je onaj koji ima istu amino-kiselinsku sekvencu kao polipeptid poreklom iz prirode. Takvi polipeptidi nativne sekvence mogu biti izolovani iz prirode ili se mogu proizvesti rekombinantnim ili sintetičkim načinima. Stoga, polipeptid nativne sekvence može imati amino-kiselinsku sekvencu humanog polipeptida koji se javlja u prirodi, polipeptida murina, ili polipeptida iz bilo koje druge vrste sisara.
[0101] Termin "unutarćelijski metabolit" označava jedinjenje koje je rezultat metaboličkog procesa ili reakcije unutar ćelije na ovde opisanoj kompoziciji (npr. antitelo-lek konjugat (ADC)). Metabolički proces ili reakcija može biti enzimski proces kao što je proteolitičko isecanje peptidnog linkera predmetne kompozicije, ili hidroliza funkcionalne grupe kao što je hidrazon, estar, ili amid unutar predmetne kompozicije. U kontekstu konjugata, uključujući ADC, unutarćelijski metaboliti uključuju, ali nisu ograničeni na, antitela i slobodni lek koji su odvojeni unutarćelijski, tj. posle ulaska, difuzije, unosa ili transporta u ćeliju (npr. enzimskim isecanjem ADC pomoću unutarćelijskog enzima).
[0102] U kontekstu konjugata, uključujući ADC, termini "unutarćelijski isečen" i "unutarćelijsko isecanje" označavaju metaboličke procese ili reakcije unutar ćelije na ovde opisanoj kompoziciji pri čemu je prekinuto kovalentno prikačinjanje, npr. linker (L), između funkcionalnog dela leka (D) i ciljno delujuće funkcionalne grupe (T) (npr. antitelo), što rezultuje slobodnim lekom koji disocira sa (T) unutar ćelije. U jednom primeru izvođenja, isečene funkcionalne grupe iz predmetnih kompozicija su stoga unutarćelijski metaboliti (npr. T, T-L fragment, D-L fragment, i D). U skladu sa tim, u jednom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompozicije koje su proizvodi isecanja kompozicije Formule II, čiji proizvodi isecanja uključuju kompozicije koje sadrže jedinjenja Formule I.
[0103] Termin "vanćelijsko isecanje" označava metabolički proces ili reakciju izvan ćelije na ovde opisanoj kompoziciji pri čemu je prekinuto kovalentno prikačinjanje, npr. linker (L), između funkcionalnog dela leka (D) i ciljno delujuće funkcionalne grupe (T) (npr. antitelo), što rezultuje slobodnim lekom koji disocira sa (T) izvan ćelije. U jednom primeru izvođenja, isečene funkcionalne grupe iz predmetnih kompozicija su stoga inicijalno vanćelijski metaboliti (npr. T, T-L fragment, D-L fragment, i D), koji se mogu naći unutar ćelije difuzijom i ćelijskom permeabilnošću ili transportom. U skladu sa tim, u jednom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompozicije koje su proizvodi isecanja kompozicije Formule II, čiji proizvodi isecanja uključuju kompozicije koje sadrže jedinjenja Formule I.
[0104] "Sisar" uključuje ljude i domaće životinje kao što su laboratorijske životinje i kućni ljubimci (npr. mačke, psi, svinje, goveda, ovce, koze, konji, zečevi), i životinje koje nisu domaće kao što su divlje životinje, i slično.
2
[0105] "Opciono" ili "opcionalno" znači da se naknadno opisani događaj ili okolnosti mogu ili ne moraju dogoditi, i da opis uključuje slučajeve u kojima se navedeni događaj ili okolnost događaju i slučajeve u kojima se ne događaju. Na primer, "opciono supstituisani aril" znači da aril supstituent može ali ne mora biti supstituisan i da opis uključuje i supstituisane aril supstituente i aril supstituente koji nemaju supstituciju.
[0106] "Farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens" uključuje bez ograničavanja bilo koji adjuvans, nosač, ekscipijens, glidant, agens za zaslađivanje, razblaživač, konzervans, boju/kolorant, pojačivač ukusa, surfaktant, agens za vlaženje, agens za dispergovanje, agens za suspendovanje, stabilizator, izotonični agens, rastvarač, ili emulgator koji je odobrila Uprava za hranu i lekove Sjedinjenih Država (ili druga slična regulatorna agencija druge jurisdikcije) kao prihvatljiv za upotrebu kod ljudi ili domaćih životinja.
[0107] "Farmaceutski prihvatljiva so" uključuje i kisele i bazne adicione soli.
[0108] "Farmaceutski prihvatljiva kisela adiciona so" označava one soli koje zadržavaju biološku efikasnost i svojstva slobodnih baza, koje nisu biološki ili na drugi način nepoželjne, i koje se formiraju sa neorganskim kiselinama kao što su, ali nisu ograničene na, hlorovodoničnu kiselinu, bromovodoničnu kiselinu, sumpornu kiselinu, azotnu kiselinu, fosfornu kiselinu, i slično, i organskim kiselinama kao što su, ali nisu ograničene na, sirćetnu kiselinu, 2,2-dihlorosirćetnu kiselinu, adipinsku kiselinu, alginsku kiselinu, askorbinsku kiselinu, asparaginsku kiselinu, benzensulfonsku kiselinu, benzoevu kiselinu, 4-acetamidobenzoevu kiselinu, kamfornu kiselinu, kamfor-10-sulfonsku kiselinu, kaprinsku kiselinu, kapronsku kiselinu, kaprilnu kiselinu, ugljeničnu kiselinu, cimetnu kiselinu, limunsku kiselinu, ciklamsku kiselinu, dodecilsumpornu kiselinu, etan-1,2-disulfonsku kiselinu, etansulfonsku kiselinu, 2-hidroksietansulfonsku kiselinu, mravlju kiselinu, fumarnu kiselinu, galaktarnu kiselinu, gentizinsku kiselinu, glukoheptonsku kiselinu, glukonsku kiselinu, glukuronsku kiselinu, glutaminsku kiselinu, glutarnu kiselinu, 2-okso-glutarnu kiselinu, glicerofosfornu kiselinu, glikolnu kiselinu, hipurinsku kiselinu, izobuternu kiselinu, mlečnu kiselinu, laktobionsku kiselinu, laurinsku kiselinu, maleinsku kiselinu, jabučnu kiselinu, malonsku kiselinu, mandelnu kiselinu, metansulfonsku kiselinu, galaktarinsku kiselinu, naftalen-1,5-disulfonsku kiselinu, naftalen-2-sulfonsku kiselinu, 1-hidroksi-2-naftoičnu kiselinu, nikotinsku kiselinu, oleinsku kiselinu, orotičnu kiselinu, oksalnu kiselinu, palmitinsku kiselinu, pamoinsku kiselinu, propionsku kiselinu, piroglutaminsku kiselinu, pirogrožđanu kiselinu, salicilnu kiselinu, 4-aminosalicilnu kiselinu, sebacinsku kiselinu, stearinsku kiselinu, jantarnu kiselinu, vinsku kiselinu, tiocijansku kiselinu, p-toluensulfonsku kiselinu, trifluorosirćetnu kiselinu, undecilensku kiselinu, i slično.
[0109] "Farmaceutski prihvatljiva bazna adiciona so" označava one soli koje zadržavaju biološku efikasnost i svojstva slobodnih kiselina, koje nisu biološki ili na drugi način nepoželjne. Ove soli se pripremaju dodavanjem neorganske baze ili organske baze slobodnoj kiselini. Soli poreklom od neorganskih baza uključuju, ali nisu ograničene na, natrijum, kalijum, litijum, amonijak, kalcijum, magnezijum, gvožđe, cink, bakar, mangan, aluminijum soli, i slično. Poželjne neorganske soli su amonijak, natrijum, kalijum, kalcijum, i magnezijum soli. Soli poreklom od organskih baza uključuju, ali nisu ograničene na, soli primarnih, sekundarnih i tercijarnih amina, supstituisane amine uključujući supstituisane amine koji se javljaju u prirodi, ciklične amine i bazne jonoizmenjivačke smole, kao što su amonijak, izopropilamin, trimetilamin, dietilamin, trietilamin, tripropilamin, dietanolamin, etanolamin, deanol, 2 dimetilaminoetanol, 2 dietilaminoetanol, dicikloheksilamin, lizin, arginin, histidin, kofein, prokain, hidrabamin, holin, betain, benetamin, benzatin, etilendiamin, glukozamin, metilglukamin, teobromin, trietanolamin, trometamin, purini, piperazin, piperidin, N-etilpiperidin, poliaminske smole, i slično. Posebno poželjne organske baze su izopropilamin, dietilamin, etanolamin, trimetilamin, dicikloheksilamin, holin i kofein.
[0110] Kristalizacije često proizvode solvat ovde opisanog jedinjenja. Kao što se ovde upotrebljava, termin "solvat" označava agregat koji sadrži jedan ili više molekula ovde opisanog jedinjenja sa jednim ili više molekula rastvarača. Rastvarač može biti voda, u kom slučaju solvat može biti hidrat. Alternativno, rastvarač može biti organski rastvarač. Stoga, jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu postojati kao hidrati, uključujući monohidrat, dihidrat, hemihidrat, seskvihidrat, trihidrat, tetrahidrat, i slično, kao i odgovarajući solvatni oblici. Ovde opisano jedinjenje može biti pravi solvat, dok u drugim slučajevima, ovde opisano jedinjenje može samo da zadrži slučajnu vodu ili da bude smeša vode plus nekog slučajnog rastvarača.
[0111] "Farmaceutska kompozicija" označava formulaciju ovde opisanog jedinjenja i medijuma opšte prihvaćenog u struci za isporuku biološki aktivnog jedinjenja sisarima, npr. ljudima. Takav medijum uključuje sve farmaceutski prihvatljive nosače, razblaživače ili ekscipijense za njih.
[0112] Neograničavajući primeri poremećaja koji se ovde leče uključuju benigne i maligne tumore; leukemiju i limfoidne malignitete, posebno kancer dojke, jajnika, želuca, endometrijuma, pljuvačne žlezde, pluća, bubrega, kolona, štitne žlezde, pankreasa, prostate ili mokraćne bešike; neuronske, glijalne, astrocitne, hipotalamusne i druge žlezdane, makrofagne, epitelne, stromalne i blastocelne poremećaje, autoimunske bolesti, inflamatorne bolesti, fibroze, i infektivne bolesti. Imajući u vidu karakteristike, i posebno potentnost predmetnih kompozicija, umereno veštom stručnjaku biće očigledno da ovde opisana jedinjenja mogu biti indikovana za upotrebu u lečenju bilo koje bolesti gde je poželjno ispoljavanje citotoksičnog ili citotoksičnog efekta na ciljnu ćeliju.
[0113] U jednom primeru izvođenja, ovde opisane kompozicije se upotrebljavaju za lečenje autoimunskih bolesti. Antitela imunospecifična za antigen ćelije koja je odgovorna za proizvodnju autoimunskih antitela mogu se dobiti od bilo koje organizacije (npr. univerzitetskog naučnika ili kompanije kao što je Genentech) ili se mogu proizvesti bilo kojim postupkom poznatim onom sa iskustvom u struci kao što je, npr. hemijska sinteza ili tehnike rekombinantne ekspresije. U sledećem primeru izvođenja, korisna ligand antitela koja su imunospecifična za lečenje autoimunskih bolesti uključuju, ali nisu ograničena na: AntiNuclear antitelo; anti ds DNK; anti ss DNK, anti kardiolipin antitelo IgM, IgG; anti fosfolipid antitelo IgM, IgG; anti SM antitelo; anti mitohondrijsko antitelo; tiroidno antitelo; mikrozomalno antitelo; tiroglobulin antitelo; anti SCL-70; anti-Jo; anti-UIRNP; anti-La/SSB; anti SSA; anti SSB; antitelo prema parijetalnim ćelijama; anti histoni; anti RNP; C-ANCA; P-ANCA; anti centromera; anti-fibrilarin, i anti GBM antitelo. U određenim poželjnim primerima izvođenja, antitela korisna u predmetnim postupcima, mogu da se vežu i za receptor ili za receptorski kompleks eksprimiran na aktiviranom limfocitu.
[0114] Receptor ili receptorski kompleks može da sadrži člana genske superfamilije imunoglobulina, člana superfamilije TNF receptora, integrin, receptor citokina, receptor hemokina, glavni protein histokompatibilnosti, lektin, ili protein za kontrolu komplementa. Neograničavajući primeri pogodnih članova superfamilije imunoglobulina su CD2, CD3, CD4, CD8, CD19, CD22, CD28, CD79, CD90, CD152/CTLA-4, PD-1, i ICOS.
[0115] Neograničavajući primeri pogodnih članova superfamilije TNF receptora su CD27, CD40, CD95/Fas, CD134/OX40, CD137/4-1BB, TNF-R1, TNFR-2, RANK, TACI, BCMA, osteoprotegerin, Apo2/TRAIL-R1, TRAIL-R2, TRAIL-R3, TRAIL-R4, i APO-3. Neograničavajući primeri pogodnih integrina su CD11a, CD11b, CD11c, CD18, CD29, CD41, CD49a, CD49b, CD49c, CD49d, CD49e, CD49f, CD103, i CD104. Neograničavajući primeri pogodnih lektina su lektin C-tipa, S-tipa, i I-tipa.
[0116] U jednom primeru izvođenja, ligand je antitelo koje se vezuje za aktivirani limfocit koji je povezan sa autoimunskom bolešću.
[0117] Imunološke bolesti koje karakteriše neodgovarajuća aktivacija imunskih ćelija i koje se mogu lečiti ili prevenirati ovde opisanim postupcima mogu se klasifikovati, na primer,
2
prema tipu(ovima) reakcija hipersenzitivnosti koje su u osnovi poremećaja. Ove reakcije se tipično klasifikuju u četiri tipa: anafilaktičke reakcije, citotoksične (citolitičke) reakcije, reakcije imunokompleksa, ili reakcije ćelijski-posredovanog imuniteta (CMI) (takođe se označavaju kao reakcije hipersenzitivnosti odloženog tipa (DTH). (Videti, npr. Fundamental Immunology (William E. Paul ed., Raven Press, N.Y., 3rd ed.1993)).
[0118] Specifični primeri takvih imunoloških bolesti uključuju sledeće: reumatoidni artritis, autoimunske demijelinativne bolesti (npr. multipla skleroza, alergijski encefalomijelitis), endokrinu oftalmopatiju, uveoretinitis, sistemski eritemski lupus, mijasteniju gravis, Grejvsovu (Grave's) bolest, glomerulonefritis, autoimunski hepatološki poremećaj, inflamatornu bolest creva (npr. Kronovu (Crohn's) bolest), anafilaksu, alergijsku reakciju, Sjogrenov (Sjogren's) sindrom, dijabetes melitus tipa I, primarnu bilijarnu cirozu, Vegenerovu (Wegener's) granulomatozu, fibromijalgiju, polimiozitis, dermatomiozitis, višestruku endokrinu insuficijenciju, Šmitov (Schmidt's) sindrom, autoimunski uveitis, Adisonovu (Addison's) bolest, adrenalitis, tiroiditis, Hašimotov (Hashimoto's) tiroiditis, autoimunsku bolest štitne žlezde, pernicioznu anemiju, atrofiju želuca, hronični hepatitis, lupoidni hepatitis, aterosklerozu, subakutni kožni eritemski lupus, hipoparatiroidizam, Dreslerov (Dressler's) sindrom, autoimunsku trombocitopeniju, idiopatsku trombocitopeniju purpuru, hemolitičku anemiju, pemfigus vulgaris, pemfigus, dermatitis herpetiformis, alopecia arcata, pemfigoid, sklerodermu, progresivnu sistemsku sklerozu, CREST sindrom (kalcinoza, Rejnoov (Raynaud's) fenomen, dismotilitet jednjaka, sklerodaktil), i telangiektaziju), mušku i žensku autoimunsku neplodnost, ankilozni spondolitis, ulcerozni kolitis, mešovitu bolest vezivnog tkiva, poliarteritis nedosa, sistemski nekrotizirajući vaskulitis, atopijski dermatitis, atopijski rinitis, Gudpasterov (Goodpasture's) sindrom, Čagasovu (Chagas') bolest, sarkoidozu, reumatsku groznicu, astmu, ponavljajući abortus, anti-fosfolipidni sindrom, farmerova pluća, multiformni eritem, postkardiotomski sindrom, Kušingov (Cushing's) sindrom, autoimunski hronični aktivni hepatitis, pluća ljubitelja ptica, toksičnu epidermalnu nekrolizu, Alportov (Alport's) sindrom, alveolitis, alergijski alveolitis, fibrozirajući alveolitis, intersticijalnu bolest pluća, eritema nodozum, pioderma gangrenozum, transfuzijsku reakciju, Takajasuov (Takayasu's) arteritis, reumatsku polimijalgiju, temporalni arteritis, šistosomijazu, arteritis džinovskih ćelija, askarijazu, aspergilozu, Sampterov (Sampter's) sindrom, ekcem, limfomatoidnu granulomatozu, Behčetovu (Behcet's) bolest, Kaplanov (Caplan's) sindrom, Kavasakijevu (Kawasaki's) bolest, dengu, encefalomijelitis, endokarditis, endomiokardijalnu fibrozu, endoftalmitis, eritem elevatum et diutinum, psorijazu, eritroblastozu fetalis, eozinofilni faciitis, Šulmanov (Shulman's) sindrom, Feltijev (Felty's) sindrom, filarijazu, ciklitis, hronični ciklitis, heterohronični ciklitis, Fuhov (Fuch's) ciklitis, IgA nefropatiju, Henoh-Šenlajn (Henoch-Schonlein) purpura, bolest graft protiv domaćina, odbacivanje transplanta, kardiomiopatiju, Iton-Lambertov (Eaton-Lambert) sindrom, relapsirajući polihondritis, krioglobulinemiju, Valdenstromovu (Waldenstrom's) makroglobulemiju, Evanov (Evan's) sindrom, i autoimunsko zatajenje gonada. U skladu sa tim, ovde opisani postupci obuhvataju lečenje poremećaja B limfocita (npr. sistemskog eritemskog lupusa, Gudpasterovog sindroma, reumatoidnog artritisa, i dijabetesa tipa I), Th1-limfocita (npr. reumatoidnog artritisa, multiple skleroze, psorijaze, Sjogrenovog sindroma, Hašimotovog tiroiditisa, Grejvsove bolesti, primarne bilijarne ciroze, Vegenerove granulomatoze, tuberkuloze, ili akutne bolesti graft protiv domaćina), ili Th2-limfocita (npr. atopijskog dermatitisa, sistemskog eritemskog lupusa, atopijske astme, rinokonjunktivitisa, alergijskog rinitisa, Omenovog (Omenn's) sindroma, sistemske skleroze, ili hronične bolesti graft protiv domaćina). Generalno, poremećaji koji uključuju dendritske ćelije uključuju poremećaje Th1-limfocita ili Th2-limfocita.
[0119] U određenim primerima izvođenja, imunološki poremećaj je posredovan T ćelijama, što može uključivati aktivirane T ćelije. ADC ili ADC derivati se mogu primeniti da se iscrpe takve aktivirane T ćelije.
[0120] U jednom primeru izvođenja, ovde opisane kompozicije mogu da se upotrebljavaju za lečenje fibroze. Fibroza se može javiti u mnogim tkivima u telu, tipično kao rezultat inflamacije ili oštećenja, primeri uključuju, ali nisu ograničeni na; pluća, pulmonarnu fibrozu, idiopatsku pulmonarnu fibrozu, cističnu fibrozu; jetru, cirozu; srce, endomiokardijalnu fibrozu, stari infarkt miokarda, atrijalnu fibrozu; druga, medijastinalnu fibrozu (meko tkivo medijastinuma), mijelofibrozu (kostna srž), retroperitonealnu fibrozu (meko tkivo retroperitoneuma), progresivnu masivnu fibrozu (pluća); komplikaciju pneumokonioze kopača uglja, nefrogenu sistemsku fibrozu (koža), Kronovu bolest (creva), keloid (koža), sklerodermu/sistemske skleroze (koža, pluća), artrofibrozu (kolena, ramena, drugi zglobovi), Pejronijevu (Peyronie's) bolest (penis), Dipitrenovu (Dupuytren's) kontrakturu (šake, prsti) i neke oblike adhezivnog kapsulitisa (ramena).
[0121] Kada se odnosi na infektivne bolesti, ovde opisane kompozicije mogu se upotrebljavati direktno na određene infektivne agense ili patogene, ili se mogu upotrebljavati da ispolje citostatski ili citotoksični efekat na ćeliju domaćina koja sadrži ili na drugi način obezbeđuje infektivni agens ili patogen.
[0122] "Efikasna količina" ili "terapijski efikasna količina" označava onu količinu ovde opisanog jedinjenja koja je, kada se primenjuje sisaru, poželjno čoveku, dovoljna da utiče na
2
lečenje, kao što je definisano u nastavku, određene indikacije (npr. kancerske ili tumorske ćelije kod sisara, poželjno čoveka). Količina ovde opisanog jedinjenja koja predstavlja "terapijski efikasnu količinu" variraće u zavisnosti od jedinjenja, stanja i njegove težine, načina primene, i starosti sisara koji se leči, ali se može rutinski odrediti od strane onog sa iskustvom u struci imajući u vidu njegovo sopstveno znanje i ovu objavu.
[0123] "Lečiti" ili "lečenje" kao što se ovde upotrebljava pokriva lečenje bolesti ili stanja od interesa kod sisara, poželjno čoveka, koji ima bolest ili stanje od interesa, i uključuje:
(i) preveniranje da se bolest ili stanje javi kod sisara, posebno kada je takav sisar predisponiran za to stanje ali još nije dijagnostikovano da ga ima;
(ii) inhibiranje bolesti ili stanja, tj. zaustavljanje njegovog razvoja;
(iii) ublažavanje bolesti ili stanja, tj. izazivanje regresije bolesti ili stanja; ili
(iv) ublažavanje simptoma koji su rezultat bolesti ili stanja, tj. ublažavanje bola bez rešavanja osnovne bolesti ili stanja.
[0124] Terapijski efikasna količina jedinjenja kada se odnosi na lečenje kancera može redukovati broj ćelija kancera; redukovati veličinu tumora; inhibirati (tj. usporiti u određenoj meri i poželjno zaustaviti) infiltraciju ćelija kancera u periferne organe; inhibirati (tj. usporiti u određenoj meri i poželjno zaustaviti) tumorske metastaze; inhibirati, u određenoj meri, rast tumora; povećati vreme preživljavanja; i/ili u određenoj meri ublažiti jedan ili više simptoma povezanih sa kancerom. U meri u kojoj lek može prevenirati rast i/ili ubiti postojeće ćelije kancera, može biti citostatski i/ili citotoksičan. Jedinjenja iz predmetnog pronalaska su poželjno citotoksična. Za terapiju kancera, efikasnost se može, na primer, meriti procenom vremena do progresije bolesti (TTP) i/ili određivanjem stope odgovora (RR).
[0125] "Efikasna količina" kada se odnosi na određeni rezultat koji treba postići je količina dovoljna da se postigne željeni rezultat. Na primer, "efikasna količina" leka na koju se poziva kada se govori o ubijanju ćelija kancera, odnosi se na količinu leka dovoljnu da proizvede efekat ubijanja.
[0126] Čvrsti tumori koji se razmatraju za lečenje upotrebom predmetno objavljenih jedinjenja uključuju, ali nisu ograničeni na: sarkom, fibrosarkom, miksosarkom, liposarkom, hondrosarkom, osteogeni sarkom, hordom, angiosarkom, endoteliosarkom, limfangiosarkom, limfangioendoteliosarkom, sinoviom, mezoteliom, Juingov (Ewing's) tumor, lejomiosarkom, rabdomiosarkom, kancer kolona, kolorektalni kancer, kancer bubrega, kancer pankreasa, kancer kostiju, kancer dojke, kancer jajnika, kancer prostate, kancer jednjaka, kancer želuca
2
(npr. gastrointestinalni kancer), oralni kancer, kancer nosa, kancer grla, karcinom pločastih ćelija (npr. pluća), karcinom bazalnih ćelija, adenokarcinom (npr. pluća), karcinom znojnih žlezda, karcinom lojnih žlezda, papilarni karcinom, papilarne adenokarcinome, cistadenokarcinom, medularni karcinom, bronhogeni karcinom, karcinom bubrežnih ćelija, hepatom karcinom žučnih kanala, horiokarcinom, seminom, embrionalni karcinom, Vilmsov (Wilms') tumor, kancer grlića materice, kancer materice, kancer testisa, sitnoćelijski karcinom pluća, karcinom mokraćne bešike, kancer pluća, nesitnoćelijski karcinom pluća, epitelni karcinom, gliom, glioblastom, multiformni astrocitom, meduloblastom, kraniofaringiom, ependimom, pinealom, hemangioblastom, akustični neurom, oligodendrogliom, meningiom, kancer kože, melanom, neuroblastom, i retinoblastom. Kanceri ćelija krvi koji se razmatraju za lečenje upotrebom predmetno objavljenih jedinjenja uključuju, ali nisu ograničeni na: akutnu limfoblastnu leukemiju "ALL", akutnu limfoblastnu B-ćelijsku leukemiju, akutnu limfoblastnu T-ćelijsku leukemiju, akutnu mijeloblastnu leukemiju "AML", akutnu promijelocitnu leukemiju "APL", akutnu monoblastnu leukemiju, akutnu eritroleukemijsku leukemiju, akutnu megakarioblastnu leukemiju, akutnu mijelomonocitnu leukemiju, akutnu nelimfocitnu leukemiju, akutnu nediferenciranu leukemiju, hroničnu mijelocitnu leukemiju "CML", hroničnu limfocitnu leukemiju "CLL", leukemiju dlakastih ćelija, i multipli mijelom. Akutne i hronične leukemije koje se razmatraju za lečenje upotrebom predmetno objavljenih jedinjenja uključuju, ali nisu ograničene na: limfoblastne, mijelogene, limfocitne, i mijelocitne leukemije. Limfomi koji se razmatraju za lečenje upotrebom predmetno objavljenih jedinjenja uključuju, ali nisu ograničeni na: Hočkinovu (Hodgkin's) bolest, ne-Hočkinov (non- Hodgkin's) limfom, multipli mijelom, Valdenstromovu makroglobulinemiju, bolest teškog lanca, i policitemiju veru. Drugi kanceri koji se razmatraju za lečenje upotrebom predmetno objavljenih jedinjenja uključuju, ali nisu ograničeni na: peritonealni kancer, hepatocelularni kancer, hepatom, kancer pljuvačne, kancer vulve, štitne žlezde, kancer penisa, analni kancer, kancer glave i vrata, karcinom bubrežnih ćelija, akutni anaplastični karcinom velikih ćelija, i kožni anaplastični karcinom velikih ćelija.
[0127] Kanceri, uključujući, ali ne ograničavajući se na, tumor, metastazu, ili drugu bolest ili poremećaj okarakterisan nekontrolisanim ili neželjenim rastom ćelija, mogu se lečiti ili prevenirati primenom predmetno objavljenih jedinjenja.
[0128] U drugim primerima izvođenja, efikasna količina ovde objavljenog jedinjenja je obezbeđena za upotrebu u postupcima za lečenje ili preveniranje kancera, uključujući u kombinaciji sa dopunskim postupkom lečenja. U jednom primeru izvođenja, dopunski postupak lečenja uključuje lečenje hemioterapijskim agensom. U jednom primeru izvođenja,
2
hemioterapijski agens je onaj za koji nije utvrđeno da je lečenje kancera refraktorno. U sledećem primeru izvođenja, hemioterapijski agens je onaj za koji je utvrđeno da je lečenje kancera refraktorno. Ovde opisano jedinjenje se može primenjivati pre, posle, ili u isto vreme kao i hemioterapijski agens.
[0129] U jednom primeru izvođenja, dopunski postupak lečenja je terapija zračenjem. Ovde opisano jedinjenje se može primeniti pre, posle, ili u isto vreme kao i zračenje.
[0130] Ovde opisana jedinjenja se takođe mogu primenjivati pacijentu koji je bio podvrgnut ili će biti podvrgnut operaciji kao lečenju za kancer.
[0131] U specifičnom primeru izvođenja, ovde opisano jedinjenje se primenjuje istovremeno sa hemioterapijskim agensom ili sa terapijom zračenjem. U sledećem specifičnom primeru izvođenja, hemioterapijski agens ili terapija zračenjem primenjuju se pre ili posle primene ovde opisanog jedinjenja, u jednom aspektu najmanje sat, pet sati, 12 sati, dan, nedelju, mesec, u dodatnim aspektima nekoliko meseci (npr. do tri meseca), pre ili posle primene ovde opisanog jedinjenja.
[0132] Hemioterapijski agens se može primeniti tokom serije sesija. Može se primeniti bilo koji ili kombinacija hemioterapijskih agenasa nabrojanih ovde ili na drugi način poznatih u struci. Kada se odnosi na zračenje, može se upotrebljavati bilo koji protokol terapije zračenjem u zavisnosti od vrste kancera koji se leči. Na primer, ali ne kao ograničenje, može se primeniti rendgensko zračenje; posebno, visokoenergetski meganapon (zračenje energije veće od 1 MeV) može se upotrebljavati za duboke tumore, i elektronski snop i ortovoltažno rendgensko zračenje mogu se upotrebljavati za kancere kože. Radioizotopi koji emituju gamazrake, kao što su radioaktivni izotopi radijuma, kobalta i drugih elemenata, takođe se mogu primenjivati.
[0133] Pored toga, ovde opisano jedinjenje je obezbeđeno za upotrebu u postupcima lečenja kancera kao alternativa hemioterapiji ili terapiji zračenjem gde se hemioterapija ili terapija zračenjem pokazala ili se može pokazati previše toksičnom, npr. rezultuje neprihvatljivim ili nepodnošljivim neželjenim efektima, za subjekta koji se leči. Dodatno, ovde opisano jedinjenje je obezbeđeno za upotrebu u postupcima lečenja kancera kao alternativa operaciji gde se operacija pokazala ili se može pokazati neprihvatljivom ili nepodnošljivom za subjekta koji se leči.
[0134] Ovde opisana jedinjenja se takođe mogu upotrebljavati na in vitro ili ex vivo način, kao što je za lečenje određenih kancera, uključujući, ali ne ograničavajući se na leukemije i limfome, takav tretman uključuje autolognu transplantaciju matičnih ćelija. Ovo može uključivati proces u više koraka u kome se autologne hematopoetske matične ćelije životinje
2
sakupljaju i čiste od svih ćelija kancera, preostala populacija ćelija kostne srži životinje se zatim uništava putem primene visoke doze ovde opisanog jedinjenja sa ili bez prateće terapije visokim dozama zračenja, i graft matičnih ćelija se ponovo unosi u životinju. Zatim se obezbeđuje pomoćna nega dok se funkcija kostne srži obnavlja i životinja oporavlja.
[0135] Postupci za lečenje kancera dodatno uključuju primenu pacijentu kome je to potrebno efikasne količine ovde opisanog jedinjenja i drugog terapijskog agensa koji je antikancerski agens. Pogodni antikancerski agensi uključuju, ali nisu ograničeni na, metotreksat, taksol, L-asparaginazu, merkaptopurin, tioguanin, hidroksiureu, citarabin, ciklofosfamid, ifosfamid, nitrozouree, cisplatin, karboplatin, mitomicin, dakarbazin, prokarbizin, topotekan, azot mustarde, citoksan, etopozid, 5-fluorouracil, BCNU, irinotekan, kamptotecine, bleomicin, doksorubicin, idarubicin, daunorubicin, aktinomicin D, daktinomicin, plikamicin, mitoksantron, asparaginazu, vinblastin, vinkristin, vindezin, vinorelbin, paklitaksel, i docetaksel.
[0136] Drugi primeri hemioterapijskih agenasa uključuju agense za alkilovanje kao što su tiotepa i CYTOXAN® ciklosfosfamid; alkil sulfonate kao što su busulfan, treosulfan, improsulfan i piposulfan; aziridine kao što su benzodopa, karbokuon, meturedopa, i uredopa; etilenimine i metilamelamine uključujući altretamin, trietilenmelamin, trietilenfosforamid, trietilentiofosforamid i trimetilolomelamin; TLK 286 (TELCYTA™); acetogenine (naročito bulatacin i bulatacinon); delta-9-tetrahidrokanabinol (dronabinol, MARINOL®); betalapahon; lapahol; kolhicine; betulinsku kiselinu; kamptotecin (uključujući sintetički analog topotekan (HYCAMTIN®), CPT-11 (irinotekan, CAMPTOSAR®), acetilkamptotecin, skopolektin, i 9-aminokamptotecin); briostatin; kalistatin; CC-1065 (uključujući njegove sintetičke analoge adozelesina, karzelesina i bizelesina); podofilotoksin; podofilinsku kiselinu; tenipozide; kriptoficine (posebno kriptoficin 1 i kriptoficin 8); dolastatin; duokarmicin (uključujući sintetičke analoge, KW-2189 i CB1-TM1); eleuterobin; pankratistatin; sarkodiktiin; spongistatin; azot mustarde kao što su hlorambucil, hlornafazin, holofosfamid, estramustin, ifosfamid, mehloretamin, mehloretamin oksid hidrohlorid, melfalan, novembihin, fenesterin, prednimustin, trofosfamid, i uracil mustard; triazine kao što je dekarbazin; nitrosuree kao što su karmustin, hlorozotocin, fotemustin, lomustin, nimustin, i ranimnustin; epipodofiline, kao što su etopozid, tenipozid, topotekan, 9-aminokamptotecin, kamptotecin ili krisnatol; bisfosfonate, kao što je klodronat; antibiotike kao što su enediin antibiotici (npr. kaliheamicin, naročito kaliheamicin gama1I i kaliheamicin omegal1 (videti, npr. Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33:183-186 (1994)) i antraciklini kao što su anamicin, AD 32, alkarubicin, daunorubicin, deksrazoksan, DX-52-1, epirubicin, GPX-100, idarubicin,
2
KRN5500, menogaril, dinemicin, uključujući dinemicin A, esperamicin, neokarzinostatin hromofor, i srodne hromoprotein enediin antibiotik hromofore, aklacinomizine, aktinomicin, autramicin, azaserin, bleomicine (npr. A2 i B2), kaktinomicin, karabicin, kaminomicin, karzinofilin, hromomicine, daktinomicin, detorubicin, 6-diazo-5-okso-L-norleucin, ADRIAMYCIN® doksorubicin (uključujući morfolino-doksorubicin, cijanomorfolinodoksorubicin, 2-pirolino-doksorubicin, lipozomalni doksorubicin, i dezoksidorubicin), ezorubicin, marcelomicin, mitomicine kao što su mitomicin C, mikofenolna kiselina, nogalamicin, olivomicini, peplomicin, potfiromicin, puromicin, kuelamicin, rodorubicin, streptonigrin, streptozocin, tubercidin, ubenimeks, zinostatin, i zorubicin; fotodinamičke terapije, kao što su vertoporfin (BPD-MA), ftalocijanin, fotosenzibilizator Pc4, i demetoksihipokrelin A (2BA-2-DMHA); analoge folne kiseline kao što su denopterin, pteropterin, i trimetreksat; analoge dpurina kao što su fludarabin, 6-merkaptopurin, tiamiprin, i tioguanin; analoge pirimidina kao što su ancitabin, azacitidin, 6-azauridin, karmofur, citarabin, citozin arabinozid, didezoksiuridin, doksifluridin, enocitabin, i floksuridin; androgene kao što su kalusteron, dromostanolon propionat, epitiostanol, mepitiostan, i testolakton; anti-adrenale kao što su aminoglutetimid, mitotan, i trilostan; sredstvo za dopunu folne kiseline kao što je folinska kiselina (leukovorin); aceglaton; anti-folatne anti-neoplastične agense kao što su ALIMTA®, LY231514 pemetreksed, inhibitore dihidrofolat reduktaze kao što su metotreksat i trimetreksat; antimetabolite kao što je 5-fluorouracil (5-FU) i njegovi prolekovi kao što su UFT, S-1 i kapecitabin, floksuridin, doksifluridin i ratitreksed; i inhibitore timidilat sintaze i inhibitore glicinamid ribonukleotid formiltransferaze kao što je raltitreksed (TOMUDEX®, TDX); inhibitore dihidropirimidin dehidrogenaze kao što je eniluracil; aldofosfamid glikozid; aminolevulinsku kiselinu; amsakrin; bestrabucil; bizantren; edatraksat; defofamin; demekolcin; diazikuon; elformitin; eliptinijum acetat; epotilon; etoglucid; galijum nitrat; hidroksiureu; lentinan; lonidainin; majtanzinoide kao što su majtanzin i ansamitocini; mitoguazon; mitoksantron; mopidanmol; nitraerin; pentostatin; fenamet; pirarubicin; lozoksantron; 2-etilhidrazid; prokarbazin; PSK® polisaharidni kompleks (JHS Natural Products, Eugene, OR); razoksan; rizoksin; sizofiran; spirogermanijum; tenuazonsku kiselinu; triazikuone; 2,2',2"-trihlorotrietilamin; trihotecene (naročito T-2 toksin, verakurin A, roridin A i anguidin); uretan; vindezin (ELDISINE®, FILDESIN®); dakarbazin; manomustin; mitobronitol; mitolaktol; pipobroman; gacitozin; arabinozid ("Ara-C"); ciklofosfamid; tiotepu; taksoide i taksane, npr. TAXOL® paklitaksel (Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ), ABRAXANE™ bez kremofora, albumin-projektovanu nanočestičnu formulaciju paklitaksela (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, I11.), i TAXOTERE® doksetaksel (Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France); hloranbucil; gemcitabin (GEMZAR®); 6-tioguanin; merkaptopurin; platinu; analoge platine ili analoge na bazi platine kao što su cisplatin, oksaliplatin i karboplatin; vinblastin (VELBAN®); etopozid (VP-16); ifosfamid; mitoksantron; vinkristin (ONCOVIN®); vinka alkaloid; vinorelbin (NAVELBINE®); velkad; revlimid; talidomid; IMiD3; lovastatin; verapamil; tapsigargin; 1-metil-4-fenilpiridinijum; inhibitore ćelijskog ciklusa kao što je staurosporin; novantron; edatreksat; daunomicin; mtoksantron; aminopterin; kselodu; ibandronat; inhibitor topoizomeraze RFS 2000; difluorometilornitin (DMFO); analoge vitamina D3, kao što su EB 1089, CB 1093 i KH 1060; retinoide kao što je retinoična kiselina; farmaceutski prihvatljive soli, kiseline ili derivate bilo čega od prethodno navedenog; kao i kombinacije dva ili više od prethodno navedenih, kao što je CHOP, skraćenica za kombinovanu terapiju ciklofosfamida, doksorubicina, vinkristina, i prednizolona, i FOLFOX, skraćenica za režim lečenja oksaliplatinom (ELOXATIN™) u kombinaciji sa 5-FU i leukovorinom.
[0137] Antihormonski agensi koji deluju da regulišu ili inhibiraju delovanje hormona na tumore kao što su antiestrogeni i selektivni modulatori estrogenskih receptora (SERM), uključujući, na primer, tamoksifen (uključujući NOLVADEX® tamoksifen), raloksifen, megastrol, droloksifen, 4-hidroksitamoksifen, trioksifen, keoksifen, LY117018, onapriston, i FARESTON® toremifen; inhibitori aromataze koji inhibiraju enzim aromatazu, koja reguliše proizvodnju estrogena u nadbubrežnim žlezdama, kao što su, na primer, 4(5)-imidazoli, aminoglutetimid, MEGASE® megestrol acetat, AROMASIN® eksemestan, formestanie, fadrozol, RIVISOR® vorozol, FEMARA® letrozol, i ARIMIDEX® anastrozol; i antiandrogeni kao što su flutamid, bikalutamid, nilutamid, bikalutamid, leuprolid, i goserelin; kao i troksacitabin (1,3-dioksolan analog nukleozida citozina); antisens oligonukleotidi, posebno oni koji inhibiraju ekspresiju gena u signalnim putevima koji su uključeni u proliferaciju aberantnih ćelija, kao što su, na primer, PKC-alfa, Raf, H-Ras, i receptor epidermalnog faktora rasta (EGF-R); vakcine kao što su vakcine za gensku terapiju, na primer, ALLOVECTIN® vakcina, LEUVECTIN® vakcina, i VAXID® vakcina; PROLEUKIN® rIL-2; LURTOTECAN® inhibitor topoizomeraze 1; ABARELIX® rmRH; i farmaceutski prihvatljive soli, kiseline ili derivati bilo čega od prethodno navedenog.
Nova jedinjenja
[0138] Ovde se objavljuju jedinjenja Formule I:
1
ve farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<1>je odabran od: amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, aminoheterociklila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od arila, aril-C1-C6alkila, C1-C6alkila, C1-C6alkiltio, karboksila, karboksamida, C3-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, guanidino, halo, C1-C6haloacila, C1-C6haloalkila, heterociklila, heterociklil-C1-C6alkila, hidroksila, i tio; ili R<1>je R<a>R<b>NCH(R<c>)-;
R<a>je odabran od: H i C1-C6alkila;
R<b>je C1-C6alkil; i
R<c>je R<d>-C(CH3)2-; i
R<d>je odabran od: H, arila, C3-C7cikloalkila, i heteroarila, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C4aciltio, C2-C4alkenila, C1-C4alkila, C1-C4alkilamino, C1-C4alkiloksi, amino, amino-C1-C4alkila, halo, C1-C4haloalkila, hidroksila, hidroksi-C1-C4alkila, i tio, pri čemu su C2-C4alkenil, C1-C4alkilamino i C1-C4alkiloksi dodatno opciono supstituisani sa jednim supstituentom odabranim od C1-C4alkilarila, hidroksila, i tio; ili
R<b>i R<c>uzeti zajedno sa atomima za koje je svaki vezan formiraju heterociklildiil;
R<2>je odabran od: C2-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C4-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, aminoarila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloacila, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila; i X je -C(O)NHCH(CH2R<3>)-, ili X je odsutan; i
R<3>je odabran od: arila, heteroarila, i C3-C7cikloalkila, svaki opciono supstituisan sa jednim supstituentom odabranim od amino i hidroksila.
2
[0139] U nekim primerima izvođenja, kada je R<1>2-metil-1-(metilamino)propil, i X je -C(O)NHCH(CH2Ph)-, R<2>je drugo nego etil, izopropil, n-butil, i fenil.
[0140] Pronalazak obezbeđuje jedinjenja Formule I:
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<1>je odabran od: amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, aminoheterociklila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od arila, aril-C1-C6alkila, C1-C6alkila, C1-C6alkiltio, karboksila, karboksamida, C3-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, guanidino, halo, C1-C6haloacila, C1-C6haloalkila, heterociklila, heterociklil-C1-C6alkila, hidroksila, i tio; ili R<1>je R<a>R<b>NCH(R<c>)-;
R<a>je odabran od: H i C1-C6alkila;
R<b>je C1-C6alkil; i
R<c>je R<d>-C(CH3)2-; i
R<d>je odabran od: H, arila, C3-C7cikloalkila, i heteroarila, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C4aciltio, C2-C4alkenila, C1-C4alkila, C1-C4alkilamino, C1-C4alkiloksi, amino, amino-C1-C4alkila, halo, C1-C4haloalkila, hidroksila, hidroksi-C1-C4alkila, i tio, pri čemu su C2-C4alkenil, C1-C4alkilamino i C1-C4alkiloksi dodatno opciono supstituisani sa jednim supstituentom odabranim od C1-C4alkilarila, hidroksila, i tio; ili
R<b>i R<c>uzeti zajedno sa atomima za koje je svaki vezan formiraju heterociklildiil;
R<2>je odabran od: C1-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C3-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, aminoarila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloacila, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila; i ili je X odsutan.
[0141] Takođe su obezbeđena jedinjenja Formule I:
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<1>je odabran od: amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, aminoheterociklila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od arila, aril-C1-C6alkila, C1-C6alkila, C1-C6alkiltio, karboksila, karboksamida, C3-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, guanidino, halo, C1-C6haloacila, C1-C6haloalkila, heterociklila, heterociklil-C1-C6alkila, hidroksila, i tio; ili R<1>je R<a>R<b>NCH(R<c>)-;
R<a>je odabran od: H i C1-C6alkila;
R<b>je C1-C6alkil; i
R<c>je R<d>-C(CH3)2-; i
R<d>je odabran od: H, arila, C3-C7cikloalkila, i heteroarila, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C4aciltio, C2-C4alkenila, C1-C4alkila, C1-C4alkilamino, C1-C4alkiloksi, amino, amino-C1-C4alkila, halo, C1-C4haloalkila, hidroksila, hidroksi-C1-C4alkila, i tio, pri čemu su C2-C4alkenil, C1-C4alkilamino i C1-C4alkiloksi dodatno opciono supstituisani sa jednim supstituentom odabranim od C1-C4alkilarila, hidroksila, i tio; ili
R<b>i R<c>uzeti zajedno sa atomima za koje je svaki vezan formiraju heterociklildiil;
R<2>je odabran od: C2-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C4-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, aminoarila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloacila, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila; i
4
X je odsutan.
Varijabla R<1>
[0142] U nekim primerima izvođenja, R<1>je odabran od: amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, amino-heterociklila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od arila, aril-C1-C6alkila, C1-C6alkila, C1-C6alkiltio, karboksila, karboksamida, C3-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, guanidino, halo, C1-C6haloalkila, heterociklila, heterociklil-C1-C6alkila, hidroksila, i tio.
[0143] U nekim primerima izvođenja, R<1>je odabran od: amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, amino-heterociklila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od C1-C6alkila, i halo.
[0144] U nekim primerima izvođenja, R<1>je odabran od: 1-(dimetilamino)-2-metilpropila, 2-metil-1-(metilamino)propila, 1-aminociklopentila, 1-aminociklopropila, 4-aminofenila, 2-aminopropan-2-ila, 1-aminocikloheksila, 3-aminooksetan-3-ila, 2-(metilamino)propan-2-ila, 1-amino-2-metilpropan-2-ila, 2-metilpirolidin-2-ila, 2-amino-3-metilbutan-2-ila, 2-aminobutan-2-ila, 2-metil-1-(metilamino)propan-2-ila, 1-metilpiperidin-2-ila, 3-fluoropirolidin-3-ila, 1,2-dimetilpirolidin-2-ila, i 2-(dimetilamino)propan-2-ila.
[0145] U nekim primerima izvođenja, R<1>je odabran od: 1-(dimetilamino)-2-metilpropila, 2-metil-1-(metilamino)propila, 1-aminociklopentila, 1-aminociklopropila, 4-aminofenila, 2-aminopropan-2-ila, 1-aminocikloheksila, 3-aminooksetan-3-ila, 2-(metilamino)propan-2-ila, 1-amino-2-metilpropan-2-ila, 2-metilpirolidin-2-ila, 2-amino-3-metilbutan-2-ila, 2-aminobutan-2-ila, 2-metil-1-(metilamino)propan-2-ila, 1-metilpiperidin-2-ila, 3-fluoropirolidin-3-ila, 1,2-dimetilpirolidin-2-ila, 2-(dimetilamino)propan-2-ila, 2-metil-1-(metilamino)-2-fenilpropila, 1-izopropilpiperidin-2-ila, 2-azabiciklo[2.2.1]heptan-3-ila, i 2-metil-2-azabiciklo[2.2.1]heptan-3-ila.
[0146] U nekim primerima izvođenja, R<1>je 1-(dimetilamino)-2-metilpropil.
[0147] U nekim primerima izvođenja, R<1>je 2-metil-1-(metilamino)propil.
[0148] U nekim primerima izvođenja, R<1>je 1-aminociklopentil.
[0149] U nekim primerima izvođenja, R<1>je 1-aminociklopropil.
[0150] U nekim primerima izvođenja, R<1>je 4-aminofenil.
[0151] U nekim primerima izvođenja, R<1>je 2-aminopropan-2-il.
[0152] U nekim primerima izvođenja, R<1>je 1-aminocikloheksil.
[0153] U nekim primerima izvođenja, R<1>je 3-aminooksetan-3-il.
[0154] U nekim primerima izvođenja, R<1>je 2-(metilamino)propan-2-il.
[0155] U nekim primerima izvođenja, R<1>je 1-amino-2-metilpropan-2-il.
[0156] U nekim primerima izvođenja, R<1>je 2-metilpirolidin-2-il.
[0157] U nekim primerima izvođenja, R<1>je 2-amino-3-metilbutan-2-il.
[0158] U nekim primerima izvođenja, R<1>je 2-aminobutan-2-il.
[0159] U nekim primerima izvođenja, R<1>je 2-metil-1-(metilamino)propan-2-il.
[0160] U nekim primerima izvođenja, R<1>je 1-metilpiperidin-2-il.
[0161] U nekim primerima izvođenja, R<1>je 3-fluoropirolidin-3-il.
[0162] U nekim primerima izvođenja, R<1>je 2-metil-1-(metilamino)propil.
[0163] U nekim primerima izvođenja, R<1>je (R)-1-(dimetilamino)-2-metilpropil.
[0164] U nekim primerima izvođenja, R<1>je (R)-2-metil-1-(metilamino)propil.
[0165] U nekim primerima izvođenja, R<1>je R<a>R<b>NCH(R<c>)-.
[0166] U nekim primerima izvođenja, R<1>je 2-metil-1-(metilamino)-2-fenilpropil.
[0167] U nekim primerima izvođenja, R<1>je 1-izopropilpiperidin-2-il.
[0168] U nekim primerima izvođenja, R<1>je 2-azabiciklo[2.2.1]heptan-3-il.
[0169] U nekim primerima izvođenja, R<1>je 2-metil-2-azabiciklo[2.2.1]heptan-3-il.
Varijabla R<a>
[0170] U nekim primerima izvođenja, R<a>je odabran od: H i C1-C6alkila.
[0171] U nekim primerima izvođenja, R<b>je odabran od: H, metila, i izopropila.
[0172] U nekim primerima izvođenja, R<c>je H.
[0173] U nekim primerima izvođenja, R<d>je metil.
[0174] U nekim primerima izvođenja, R<e>je izopropil.
Varijabla R<b>
[0175] U nekim primerima izvođenja, R<b>je C1-C6alkil.
[0176] U nekim primerima izvođenja, R<b>je metil.
Varijabla R<c>
[0177] U nekim primerima izvođenja, R<c>je R<d>-C(CH3)2-.
Varijabla R<d>
[0178] U nekim primerima izvođenja, R<d>je odabran od: H, arila, C3-C7cikloalkila, i heteroarila, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C4aciltio, C2-C4alkenila, C1-C4alkila, C1-C4alkilamino, C1-C4alkiloksi, amino, amino-C1-C4alkila, halo, C1-C4haloalkila, hidroksila, hidroksi-C1-C4alkila, i tio, pri čemu su C2-C4alkenil, C1-C4alkilamino i C1-C4alkiloksi dodatno opciono supstituisani sa jednim supstituentom odabranim od C1-C4alkilarila, hidroksila, i tio.
[0179] U nekim primerima izvođenja, R<d>je odabran od: H, arila, C3-C7cikloalkila, i heteroarila, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C4aciltio, C2-C4alkenila, C1-C4alkila, C1-C4alkilamino, C1-C4alkiloksi, amino, amino-C1-C4alkila, halo, C1-C4haloalkila, hidroksila, hidroksi-C1-C4alkila, i tio, pri čemu su C2-C4alkenil, C1-C4alkilamino i C1-C4alkiloksi dodatno opciono supstituisani sa jednim supstituentom odabranim od p-tolila, hidroksila, i tio.
[0180] U nekim primerima izvođenja, R<d>je odabran od: H, arila, C3-C7cikloalkila, i heteroarila, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: (2-hidroksietil)amino, (2-merkaptoetil)amino, 2-(acetiltio)etoksi, 2-aminoetoksi, 2-hidroksietoksi, 2-merkaptoetoksi, 3-metoksi, 4-metilstiril, amino, aminometila, hloro, fluoro, hidroksila, hidroksimetila, metila, tio, trifluorometila.
[0181] U nekim primerima izvođenja, R<d>je odabran od: H, cikloheksila, 1H-indol-3-ila, fenila, i tien-2-ila, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: (2-hidroksietil)amino, (2-merkaptoetil)amino, 2-(acetiltio)etoksi, 2-aminoetoksi, 2-hidroksietoksi, 2-merkaptoetoksi, 3-metoksi, 4-metilstiril, amino, aminometila, hloro, fluoro, hidroksila, hidroksimetila, metila, tio, i trifluorometila.
[0182] U nekim primerima izvođenja, R<d>je odabran od: H, 1H-indol-3-ila, 1-metil-1H-indol-3-ila, 2-metoksifenila, 3-((2-hidroksietil)amino)fenila, 3-((2-merkaptoetil)amino)fenila, 3-(2-(acetiltio)etoksi)fenila, 3-(2-hidroksietoksi)fenila, 3-(2-merkaptoetoksi)fenila, 3-(4-metilstiril)fenila, 3-(aminometil)fenila, 3-(hidroksimetil)fenila, 3-hidroksifenila, 3,5-difluorofenila, 3,5-dimetilfenila, 3-aminofenila, 3-hlorofenila, 3-merkaptofenila, 3-metoksifenila, 3-trifluorometilfenila, 4-((2-hidroksietil)amino)fenila, 4-((2-merkaptoetil)amino)fenila, 4-(2-(acetiltio)etoksi)fenila, 4-(2-aminoetoksi)fenila, 4-(2-hidroksietoksi)fenila, 4-(2-merkaptoetoksi)fenila, 4-(aminometil)fenila, 4-(hidroksimetil)fenila, 4-aminofenila, 4-hidroksifenila, 4-merkaptofenila, 4-metoksifenila, cikloheksila, tien-2-ila, m-tolila, i fenila.
[0183] U nekim primerima izvođenja, R<d>je odabran od: H, 1H-indol-3-ila, 1-metil-1H-indol-3-ila, 2-metoksifenila, 3-((2-hidroksietil)amino)fenila, 3-((2-merkaptoetil)amino)fenila, 3-(2-hidroksietoksi)fenila, 3-(2-merkaptoetoksi)fenila, 3,5-difluorofenila, 3,5-dimetilfenila, 3-hlorofenila, 3-merkaptofenila, 3-metoksifenila, 3-trifluorometilfenila, 4-((2-hidroksietil)amino)fenila, 4-((2-merkaptoetil)amino)fenila, 4- 4-(2-hidroksietoksi)fenila, 4-(2-merkaptoetoksi)fenila, 4-merkaptofenila, 4-metoksifenila, cikloheksila, tien-2-ila, m-tolila, i fenila.
[0184] U nekim primerima izvođenja, R<d>je fenil.
[0185] U nekim primerima izvođenja, R<d>je 1H-indol-3-il.
[0186] U nekim primerima izvođenja, R<d>je 1-metil-1H-indol-3-il.
[0187] U nekim primerima izvođenja, R<d>je 2-methoksifenil.
[0188] U nekim primerima izvođenja, R<d>je 3-((2-hidroksietil)amino)fenil.
[0189] U nekim primerima izvođenja, R<d>je 3-((2-merkaptoetil)amino)fenil.
[0190] U nekim primerima izvođenja, R<d>je 3-(2-hidroksietoksi)fenil.
[0191] U nekim primerima izvođenja, R<d>je 3-(2-merkaptoetoksi)fenil.
[0192] U nekim primerima izvođenja, R<d>je 3,5-difluorofenil.
[0193] U nekim primerima izvođenja, R<d>je 3,5-dimetilfenil.
[0194] U nekim primerima izvođenja, R<d>je 3-hlorofenil.
[0195] U nekim primerima izvođenja, R<d>je 3-merkaptofenil.
[0196] U nekim primerima izvođenja, R<d>je 3-metoksifenil.
[0197] U nekim primerima izvođenja, R<d>je 3-trifluorometilfenil.
[0198] U nekim primerima izvođenja, R<d>je 4-((2-hidroksietil)amino)fenil.
[0199] U nekim primerima izvođenja, R<d>je 4-((2-merkaptoetil)amino)fenil.
[0200] U nekim primerima izvođenja, R<d>je 4- 4-(2-hidroksietoksi)fenil.
[0201] U nekim primerima izvođenja, R<d>je 4-(2-merkaptoetoksi)fenil.
[0202] U nekim primerima izvođenja, R<d>je 4-merkaptofenil.
[0203] U nekim primerima izvođenja, R<d>je 4-metoksifenil.
[0204] U nekim primerima izvođenja, R<d>je cikloheksil.
[0205] U nekim primerima izvođenja, R<d>je tien-2-il.
[0206] U nekim primerima izvođenja, R<d>je m-tolil.
Varijabla R<2>
[0207] U nekim primerima izvođenja, R<2>je odabran od: C2-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C4-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloacila, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila.
[0208] U nekim primerima izvođenja, R<2>je odabran od: C2-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C4-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: 1-aminociklopropila, 4-aminofenila, amino, aminometila, bromo, terc-butila, karboksamida, karboksila, hloro, cijano, etila, fluoro, hidroksi, izopropila, metoksi, metila, nitro, fenila, tio, tiometila, trifluorometoksi, i trifluorometila.
[0209] U nekim primerima izvođenja, R<2>je odabran od: 5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ila, benzila, cikloheksila, etila, heksan-2-ila, metila, naftalen-2-ila, piperidin-1-ila, fenila, propila, piridin-3-ila, i tien-2-ila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: 1-aminociklopropila, 4-aminofenila, amino, aminometila, bromo, terc-butila, karboksamida, karboksila, hloro, cijano, etila, fluoro, hidroksi, izopropila, metoksi, metila, nitro, fenila, tio, tiometila, trifluorometoksi, i trifluorometila.
[0210] U nekim primerima izvođenja, R<2>je odabran od: 5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ila, benzila, cikloheksila, etila, heksan-2-ila, naftalen-2-ila, piperidin-1-ila, fenila, propila, piridin-3-ila, i tien-2-ila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: 1-aminociklopropila, 4-aminofenila, amino, aminometila, bromo, terc-butila, karboksamida, karboksila, hloro, cijano, etila, fluoro, hidroksi, izopropila, metoksi, metila, nitro, fenila, tio, tiometila, trifluorometoksi, i trifluorometila.
[0211] U nekim primerima izvođenja, R<2>je odabran od: 4-aminobenzila, 4-(aminometil)benzila, 4-(aminometil)fenila, 4-aminofenila, benzila, 3-merkaptopropila, 2-merkaptoetila, 4-(merkaptometil)fenila, p-tolila, 2,4,6-trimetilfenila, 4-(trifluorometoksi)fenila, 2,4,6-triizopropilfenila, 4-terc-butilfenila, 4-hlorofenila, 3-cijanofenila, 2-nitrofenila, 4-metoksi-2-nitrofenila, 4-aminokarbonil-2-nitrofenila, 4-metoksifenila, fenila, 2-fluorobenzila, piperidin-1-ila, o-tolila, 4-bromofenila, naftalen-2-ila, 4-metoksikarbonilfenila, 2-(trifluorometil)benzila, heksan-2-ila, 2-metoksietila, ciklopentilmetila, cikloheksila, piridin-3-ilmetila, 4-karboksifenila, 3-aminofenila, piridin-3-ila, tien-2-ila, 4-hidroksifenila, 4-(1-aminociklopropil)benzila, 4-(1-aminociklopropil)fenila, 2-metilbenzila, 4-nitrobenzila, 4-hlorobenzila, fenetila, 4-bromobenzila, 4-cijanobenzila, 3nitrobenzila, 4-terc-butilbenzila, 2-nitrobenzila, 4-nitrofenetila, 2-hloro-3-metoksikarbonilfenila, 2-aminofenila, [1,1'-bifenil]-4-ila, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ila, 4-fluorobenzila, 3-(trifluorometil)benzila, 3-(trifluorometoksi)benzila, 3,4-dihlorobenzila, 2-cijanobenzila, 3-hlorobenzila, 4-amino-2-etilfenila, 4-amino-3-(trifluorometoksi)fenila, 4-amino-2,3-dimetilfenila, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ila, 4-amino-3-metilfenila, 4-amino-3-fluorofenila, 4-amino-3-etilfenila, i 4-amino-3-(trifluorometil)fenila.
[0212] U nekim primerima izvođenja, R<2>je odabran od: 4-aminobenzila, 4-(aminometil)benzila, 4-(aminometil)fenila, 4-aminofenila, benzila, 3-merkaptopropila, 2-merkaptoetila, 4-(merkaptometil)fenila, p-tolila, 2,4,6-trimetilfenila, 4-(trifluorometoksi)fenila, 2,4,6-triizopropilfenila, 4-terc-butilfenila, 4-hlorofenila, 3-cijanofenila, 2-nitrofenila, 4-metoksi-2-nitrofenila, 4-aminokarbonil-2-nitrofenila, 4-metoksifenila, fenila, 2-fluorobenzila, piperidin-1-ila, o-tolila, 4-bromofenila, naftalen-2-ila, 4-metoksikarbonilfenila, 2-(trifluorometil)benzila, heksan-2-ila, 2-metoksietila, ciklopentilmetila, cikloheksila, piridin-3-ilmetila, 4-karboksifenila, 3-aminofenila, piridin-3-ila, tien-2-ila, 4-hidroksifenila, 4-(1-aminociklopropil)benzila, 4-(1-aminociklopropil)fenila, 2-metilbenzila, 4-nitrobenzila, 4-hlorobenzila, fenetila, 4-bromobenzila, 4-cijanobenzila, 3-nitrobenzila, 4-terc-butilbenzila, 2-nitrobenzila, 4-nitrofenetila, 2-hloro-3-metoksikarbonilfenila, 2-aminofenila, [1,1'-bifenil]-4-ila, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ila, 4-fluorobenzila, 3-(trifluorometil)benzila, 3-(trifluorometoksi)benzila, 3,4-dihlorobenzila, 2-cijanobenzila, 3-hlorobenzila, 4-amino-2-etilfenila, 4-amino-3-(trifluorometoksi)fenila, 4-amino-2,3-dimetilfenila, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ila, 4-amino-3-metilfenila, 4-amino-3-fluorofenila, 4-amino-3-etilfenila, 4-amino-3-(trifluorometil)fenila, i 4-(metoksikarbonil)fenila.
[0213] U nekim primerima izvođenja, pri čemu je R<2>odabran od: arila i aril-C1-C6alkila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: amino i amino-C1-C6alkila.
[0214] U nekim primerima izvođenja, R<2>je odabran od: 4-aminobenzila, 4-(aminometil)benzila, 4-(aminometil)fenila, 4-aminofenila, i benzila.
[0215] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-aminobenzil.
[0216] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-(aminometil)benzil.
[0217] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-(aminometil)fenil.
[0218] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-aminofenil.
[0219] U nekim primerima izvođenja, R<2>je benzil.
[0220] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 3-merkaptopropil.
4
[0221] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 2-merkaptoetil.
[0222] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-(merkaptometil)fenil.
[0223] U nekim primerima izvođenja, R<2>je p-tolil.
[0224] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 2,4,6-trimetilfenil.
[0225] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-(trifluorometoksi)fenil.
[0226] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 2,4,6-triizopropilfenil.
[0227] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-terc-butilfenil.
[0228] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-hlorofenil.
[0229] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 3-cijanofenil.
[0230] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 2-nitrofenil.
[0231] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-metoksi-2-nitrofenil.
[0232] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-aminokarbonil-2-nitrofenil.
[0233] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-metoksifenil.
[0234] U nekim primerima izvođenja, R<2>je fenil.
[0235] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 2-fluorobenzil.
[0236] U nekim primerima izvođenja, R<2>je piperidin-1-il.
[0237] U nekim primerima izvođenja, R<2>je o-tolil.
[0238] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-bromofenil.
[0239] U nekim primerima izvođenja, R<2>je naftalen-2-il.
[0240] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-metoksikarbonilfenil.
[0241] U nekim primerima izvođenja, R<2>je -(trifluorometil)benzil.
[0242] U nekim primerima izvođenja, R<2>je heksan-2-il.
[0243] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 2-metoksietil.
[0244] U nekim primerima izvođenja, R<2>je ciklopentilmetil.
[0245] U nekim primerima izvođenja, R<2>je cikloheksil.
[0246] U nekim primerima izvođenja, R<2>je piridin-3-ilmetil.
[0247] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-karboksifenil.
[0248] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 3-aminofenil.
[0249] U nekim primerima izvođenja, R<2>je piridin-3-il.
[0250] U nekim primerima izvođenja, R<2>je tien-2-il.
[0251] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-hidroksifenil.
[0252] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-(1-aminociklopropil)benzil.
[0253] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-(1-aminociklopropil)fenil.
[0254] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 2-metilbenzil.
[0255] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-nitrobenzil.
[0256] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-hlorobenzil.
[0257] U nekim primerima izvođenja, R<2>je fenetil.
[0258] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-bromobenzil.
[0259] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-cijanobenzil.
[0260] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 3-nitrobenzil.
[0261] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-terc-butilbenzil.
[0262] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 2-nitrobenzil.
[0263] U nekim primerima izvođenja, R<2>je -nitrofenetil.
[0264] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 2-hloro-3-metoksikarbonilfenil.
[0265] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 2-aminofenil.
[0266] U nekim primerima izvođenja, R<2>je [1,1'-bifenil]-4-il.
[0267] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-il.
[0268] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-fluorobenzil.
[0269] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 3-(trifluorometil)benzil.
[0270] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 3-(trifluorometoksi)benzil.
[0271] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 3,4-dihlorobenzil.
[0272] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 2-cijanobenzil.
[0273] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 3-hlorobenzil.
[0274] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-amino-2-etilfenil.
[0275] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-amino-3-(trifluorometoksi)fenil.
[0276] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-amino-2,3-dimetilfenil.
[0277] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-il.
[0278] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-amino-3-metilfenil.
[0279] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-amino-3-fluorofenil.
[0280] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-amino-3-etilfenil.
[0281] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-amino-3-(trifluorometil)fenil.
[0282] U nekim primerima izvođenja, R<2>je 4-(metoksikarbonil)fenil.
Varijabla R<3>
[0283] U nekim ovde objavljenim jedinjenjima, R<3>je odabran od: arila, heteroarila, i C3-C7cikloalkila, svaki opciono supstituisan sa jednim supstituentom odabranim od amino i hidroksila.
[0284] U nekim ovde objavljenim jedinjenjima, R<3>je odabran od: 1H-indol-3-ila, 4-aminofenila, 4-hidroksifenila, 5-hidroksipiridin-2-ila, cikloheksila, i fenila.
[0285] U nekim ovde objavljenim jedinjenjima, R<3>je 1H-indol-3-il.
[0286] U nekim ovde objavljenim jedinjenjima, R<3>je 4-aminofenil.
[0287] U nekim ovde objavljenim jedinjenjima, R<3>je 4-hidroksifenil.
[0288] U nekim ovde objavljenim jedinjenjima, R<3>je 5-hidroksipiridin-2-il.
[0289] U nekim ovde objavljenim jedinjenjima, R<3>je cikloheksil.
[0290] U nekim ovde objavljenim jedinjenjima, R<3>je fenil.
Varijabla R<4>
[0291] U nekim primerima izvođenja, R<4>je odabran od: H i C1-C6alkila.
[0292] U nekim primerima izvođenja, R<4>je H.
[0293] U nekim primerima izvođenja, R<4>je C1-C6alkil.
[0294] U nekim primerima izvođenja, R<4>je metil.
Varijabla R<5>
[0295] U nekim primerima izvođenja, R<5>je odabran od: H i C1-C6alkila.
[0296] U nekim primerima izvođenja, R<5>je H.
[0297] U nekim primerima izvođenja, R<5>je C1-C6alkil.
[0298] U nekim primerima izvođenja, R<5>je metil.
Varijabla X
[0299] U nekim ovde objavljenim jedinjenjima, X je -C(O)NHCH(CH2R<3>)-.
[0300] U primerima izvođenja pronalaska, X je odsutan.
Određene kombinacije
[0301] U nekim primerima izvođenja, R<b>je C1-C6alkil; i R<c>je R<d>-C(CH3)2-.
[0302] U nekim primerima izvođenja, R<b>i R<c>uzeti zajedno sa atomima za koje je svaki vezan formiraju heterociklildiil.
4
[0303] U nekim primerima izvođenja, R<b>i R<c>uzeti zajedno sa atomima za koje je svaki vezan formiraju heterociklildiil odabran od: pirolidinildiila, piperidinildiila, i azepanildiila.
[0304] U nekim primerima izvođenja, R<b>i R<c>uzeti zajedno sa atomima za koje je svaki vezan formiraju pirolidinildiil.
[0305] U nekim primerima izvođenja, R<b>i R<c>uzeti zajedno sa atomima za koje je svaki vezan formiraju piperidinildiil.
[0306] U nekim primerima izvođenja, R<b>i R<c>uzeti zajedno sa atomima za koje je svaki vezan formiraju azepanildiil.
[0307] U nekim primerima izvođenja, R<4>i R<5>su svaki nezavisno odabrani od: H i C1-C6alkila.
[0308] U nekim primerima izvođenja, R<4>i R<5>su svaki nezavisno odabrani od: H i metila.
[0309] U nekim primerima izvođenja, R<4>i R<5>su svaki metil.
[0310] U nekim primerima izvođenja, R<4>je H i R<5>je metil.
[0311] Takođe su obezbeđena jedinjenja Formule Ia:
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<2>je odabran od: C2-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C4-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, aminoarila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila; i
R<4>i R<5>su svaki nezavisno odabrani od: H i C1-C6alkila.
[0312] Takođe se objavljuju jedinjenja Formule Ia:
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<2>je odabran od: 4-aminobenzila, 4-(aminometil)benzila, 4-(aminometil)fenila, 4-aminofenila, benzila, 3-merkaptopropila, 2-merkaptoetila, 4-(merkaptometil)fenila, ptolila, 2,4,6-trimetilfenila, 4-(trifluorometoksi)fenila, 2,4,6-triizopropilfenila, 4-tercbutilfenila, 4-hlorofenila, 3-cijanofenila, 2-nitrofenila, 4-metoksi-2-nitrofenila, 4-aminokarbonil-2-nitrofenila, 4-metoksifenila, fenila, 2-fluorobenzila, piperidin-1-ila, otolila, 4-bromofenila, naftalen-2-ila, 4-metoksikarbonilfenila, 2-(trifluorometil)benzila, heksan-2-ila, 2-metoksietila, ciklopentilmetila, cikloheksila, piridin-3-ilmetila, 4-karboksifenila, 3-aminofenila, piridin-3-ila, tien-2-ila, 4-hidroksifenila, 4-(1-aminociklopropil)benzila, 4-(1-aminociklopropil)fenila, 2-metilbenzila, 4-nitrobenzila, 4-hlorobenzila, fenetila, 4-bromobenzila, 4-cijanobenzila, 3-nitrobenzila, 4-tercbutilbenzila, 2-nitrobenzila, 4-nitrofenetila, 2-hloro-3-metoksikarbonilfenila, 2-aminofenila, [1,1'-bifenil]-4-ila, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ila, 4-fluorobenzila, 3-(trifluorometil)benzila, 3-(trifluorometoksi)benzila, 3,4-dihlorobenzila, 2-cijanobenzila, 3-hlorobenzila, 4-amino-2-etilfenila, 4-amino-3-(trifluorometoksi)fenila, 4-amino-2,3-dimetilfenila, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ila, 4-amino-3-metilfenila, 4-amino-3-fluorofenila, 4-amino-3-etilfenila, i 4-amino-3-(trifluorometil)fenila; i
R<4>i R<5>su svaki nezavisno odabrani od: H i metila.
[0313] Takođe se objavljuju jedinjenja Formule Ic:
4
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<2>je odabran od: C2-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C4-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, aminoarila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila; i
X je -C(O)NHCH(CH2R<3>)-, ili X je odsutan; i
R<3>je odabran od: arila, heteroarila, i C3-C7cikloalkila, svaki opciono supstituisan sa jednim supstituentom odabranim od amino i hidroksila; i
R<4>i R<5>su svaki nezavisno odabrani od: H i C1-C6alkila.
[0314] Takođe se objavljuju jedinjenja Formule Ic:
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<2>je odabran od: 4-aminobenzila, 4-(aminometil)benzila, 4-(aminometil)fenila, 4-aminofenila, benzila, 3-merkaptopropila, 2-merkaptoetila, 4-(merkaptometil)fenila, ptolila, 2,4,6-trimetilfenila, 4-(trifluorometoksi)fenila, 2,4,6-triizopropilfenila, 4-tercbutilfenila, 4-hlorofenila, 3-cijanofenila, 2-nitrofenila, 4-metoksi-2-nitrofenila, 4-aminokarbonil-2-nitrofenila, 4-metoksifenila, fenila, 2-fluorobenzila, piperidin-1-ila, otolila, 4-bromofenila, naftalen-2-ila, 4-metoksikarbonilfenila, 2-(trifluorometil)benzila, heksan-2-ila, 2-metoksietila, ciklopentilmetila, cikloheksila, piridin-3-ilmetila, 4-karboksifenila, 3-aminofenila, piridin-3-ila, tien-2-ila, 4-hidroksifenila, 4-(1-aminociklopropil)benzila, 4-(1-aminociklopropil)fenila, 2-metilbenzila, 4-nitrobenzila, 4-hlorobenzila, fenetila, 4-bromobenzila, 4-cijanobenzila, 3-nitrobenzila, 4-tercbutilbenzila, 2-nitrobenzila, 4-nitrofenetila, 2-hloro-3-metoksikarbonilfenila, 2-
4
aminofenila, [1,1'-bifenil]-4-ila, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ila, 4-fluorobenzila, 3-(trifluorometil)benzila, 3-(trifluorometoksi)benzila, 3,4-dihlorobenzila, 2-cijanobenzila, 3-hlorobenzila, 4-amino-2-etilfenila, 4-amino-3-(trifluorometoksi)fenila, 4-amino-2,3-dimetilfenila, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ila, 4-amino-3-metilfenila, 4-amino-3-fluorofenila, 4-amino-3-etilfenila, i 4-amino-3-(trifluorometil)fenila; i
X je -C(O)NHCH(CH2R<3>)-, ili X je odsutan; i
R<3>je odabran od: 1H-indol-3-ila, 4-aminofenila, 4-hidroksifenila, 5-hidroksipiridin-2-ila, cikloheksila, i fenila; i
R<4>i R<5>su svaki nezavisno odabrani od: H i metila.
[0315] Takođe su obezbeđena jedinjenja Formule Id:
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<2>je odabran od: C2-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C4-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, aminoarila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila; i
R<4>i R<5>su svaki nezavisno odabrani od: H i C1-C6alkila.
[0316] Takođe se objavljuju jedinjenja Formule Id:
4
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<2>je odabran od: 4-aminobenzila, 4-(aminometil)benzila, 4-(aminometil)fenila, 4-aminofenila, benzila, 3-merkaptopropila, 2-merkaptoetila, 4-(merkaptometil)fenila, ptolila, 2,4,6-trimetilfenila, 4-(trifluorometoksi)fenila, 2,4,6-triizopropilfenila, 4-tercbutilfenila, 4-hlorofenila, 3-cijanofenila, 2-nitrofenila, 4-metoksi-2-nitrofenila, 4-aminokarbonil-2-nitrofenila, 4-metoksifenila, fenila, 2-fluorobenzila, piperidin-1-ila, otolila, 4-bromofenila, naftalen-2-ila, 4-metoksikarbonilfenila, 2-(trifluorometil)benzila, heksan-2-ila, 2-metoksietila, ciklopentilmetila, cikloheksila, piridin-3-ilmetila, 4-karboksifenila, 3-aminofenila, piridin-3-ila, tien-2-ila, 4-hidroksifenila, 4-(1-aminociklopropil)benzila, 4-(1-aminociklopropil)fenila, 2-metilbenzila, 4-nitrobenzila, 4-hlorobenzila, fenetila, 4-bromobenzila, 4-cijanobenzila, 3-nitrobenzila, 4-tercbutilbenzila, 2-nitrobenzila, 4-nitrofenetila, 2-hloro-3-metoksikarbonilfenila, 2-aminofenila, [1,1'-bifenil]-4-ila, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ila, 4-fluorobenzila, 3-(trifluorometil)benzila, 3-(trifluorometoksi)benzila, 3,4-dihlorobenzila, 2-cijanobenzila, 3-hlorobenzila, 4-amino-2-etilfenila, 4-amino-3-(trifluorometoksi)fenila, 4-amino-2,3-dimetilfenila, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ila, 4-amino-3-metilfenila, 4-amino-3-fluorofenila, 4-amino-3-etilfenila, i 4-amino-3-(trifluorometil)fenila; i
R<4>i R<5>su svaki nezavisno odabrani od: H i metila.
[0317] Takođe se objavljuju jedinjenja Formule If:
4
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<2>je odabran od: C2-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C4-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, aminoarila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila; i
X je -C(O)NHCH(CH2R<3>)-, ili X je odsutan; i
R<3>je odabran od: arila, heteroarila, i C3-C7cikloalkila, svaki opciono supstituisan sa jednim supstituentom odabranim od amino i hidroksila.
[0318] Takođe se objavljuju jedinjenja Formule If:
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<2>je odabran od: 4-aminobenzila, 4-(aminometil)benzila, 4-(aminometil)fenila, 4-aminofenila; i
X je -C(O)NHCH(CH2R<3>)-, ili X je odsutan; i
R<3>je odabran od: 1H-indol-3-ila, 4-aminofenila, 4-hidroksifenila, 5-hidroksipiridin-2-ila, cikloheksila, i fenila.
[0319] Takođe su obezbeđena jedinjenja Formule Ig:
4
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<2>je odabran od: C2-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C4-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, aminoarila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila.
[0320] Takođe su obezbeđena jedinjenja Formule Ig:
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<2>je odabran od: 4-aminobenzila, 4-(aminometil)benzila, 4-(aminometil)fenila, 4-aminofenila.
[0321] Takođe se objavljuju jedinjenja Formule Ii:
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<2>je odabran od: C2-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C4-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, aminoarila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila.
X je -C(O)NHCH(CH2R<3>)-, ili X je odsutan; i
R<3>je odabran od: arila, heteroarila, i C3-C7cikloalkila, svaki opciono supstituisan sa jednim supstituentom odabranim od amino i hidroksila.
[0322] Takođe se objavljuju jedinjenja Formule Ii:
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<2>je odabran od: 4-aminobenzila, 4-(aminometil)benzila, 4-(aminometil)fenila, 4-aminofenila, benzila, 3-merkaptopropila, 2-merkaptoetila, 4-(merkaptometil)fenila, ptolila, 2,4,6-trimetilfenila, 4-(trifluorometoksi)fenila, 2,4,6-triizopropilfenila, 4-tercbutilfenila, 4-hlorofenila, 3-cijanofenila, 2-nitrofenila, 4-metoksi-2-nitrofenila, 4-aminokarbonil-2-nitrofenila, 4-metoksifenila, fenila, 2-fluorobenzila, piperidin-1-ila, otolila, 4-bromofenila, naftalen-2-ila, 4-metoksikarbonilfenila, 2-(trifluorometil)benzila,
1
heksan-2-ila, 2-metoksietila, ciklopentilmetila, cikloheksila, piridin-3-ilmetila, 4-karboksifenila, 3-aminofenila, piridin-3-ila, tien-2-ila, 4-hidroksifenila, 4-(1-aminociklopropil)benzila, 4-(1-aminociklopropil)fenila, 2-metilbenzila, 4-nitrobenzila, 4-hlorobenzila, fenetila, 4-bromobenzila, 4-cijanobenzila, 3-nitrobenzila, 4-tercbutilbenzila, 2-nitrobenzila, 4-nitrofenetila, 2-hloro-3-metoksikarbonilfenila, 2-aminofenila, [1,1'-bifenil]-4-ila, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ila, 4-fluorobenzila, 3-(trifluorometil)benzila, 3-(trifluorometoksi)benzila, 3,4-dihlorobenzila, 2-cijanobenzila, 3-hlorobenzila, 4-amino-2-etilfenila, 4-amino-3-(trifluorometoksi)fenila, 4-amino-2,3-dimetilfenila, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ila, 4-amino-3-metilfenila, 4-amino-3-fluorofenila, 4-amino-3-etilfenila, i 4-amino-3-(trifluorometil)fenila;
X je -C(O)NHCH(CH2R<3>)-, ili X je odsutan; i
R<3>je odabran od: 1H-indol-3-ila, 4-aminofenila, 4-hidroksifenila, 5-hidroksipiridin-2-ila, cikloheksila, i fenila.
[0323] Takođe su obezbeđena jedinjenja Formule Ij:
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<2>je odabran od: C2-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C4-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, aminoarila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila.
[0324] Takođe su obezbeđena jedinjenja Formule Ij:
2
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<2>je odabran od: 4-aminobenzila, 4-(aminometil)benzila, 4-(aminometil)fenila, 4-aminofenila, benzila, 3-merkaptopropila, 2-merkaptoetila, 4-(merkaptometil)fenila, ptolila, 2,4,6-trimetilfenila, 4-(trifluorometoksi)fenila, 2,4,6-triizopropilfenila, 4-tercbutilfenila, 4-hlorofenila, 3-cijanofenila, 2-nitrofenila, 4-metoksi-2-nitrofenila, 4-aminokarbonil-2-nitrofenila, 4-metoksifenila, fenila, 2-fluorobenzila, piperidin-1-ila, otolila, 4-bromofenila, naftalen-2-ila, 4-metoksikarbonilfenila, 2-(trifluorometil)benzila, heksan-2-ila, 2-metoksietila, ciklopentilmetila, cikloheksila, piridin-3-ilmetila, 4-karboksifenila, 3-aminofenila, piridin-3-ila, tien-2-ila, 4-hidroksifenila, 4-(1-aminociklopropil)benzila, 4-(1-aminociklopropil)fenila, 2-metilbenzila, 4-nitrobenzila, 4-hlorobenzila, fenetila, 4-bromobenzila, 4-cijanobenzila, 3-nitrobenzila, 4-tercbutilbenzila, 2-nitrobenzila, 4-nitrofenetila, 2-hloro-3-metoksikarbonilfenila, 2-aminofenila, [1,1'-bifenil]-4-ila, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ila, 4-fluorobenzila, 3-(trifluorometil)benzila, 3-(trifluorometoksi)benzila, 3,4-dihlorobenzila, 2-cijanobenzila, 3-hlorobenzila, 4-amino-2-etilfenila, 4-amino-3-(trifluorometoksi)fenila, 4-amino-2,3-dimetilfenila, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ila, 4-amino-3-metilfenila, 4-amino-3-fluorofenila, 4-amino-3-etilfenila, i 4-amino-3-(trifluorometil)fenila.
[0325] Takođe se objavljuju jedinjenja Formule Im:
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<1>je odabran od: amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, aminoheterociklila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od arila, aril-C1-C6alkila, C1-C6alkila, C1-C6alkiltio, karboksila, karboksamida, C3-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, guanidino, halo, C1-C6haloacila, C1-C6haloalkila, heterociklila, heterociklil-C1-C6alkila, hidroksila, i tio; ili R<1>je R<a>R<b>NCH(R<c>)-;
R<a>je odabran od: H i C1-C6alkila;
R<b>je C1-C6alkil; i
R<c>je R<d>-C(CH3)2-; i
R<d>je odabran od: H, arila, C3-C7cikloalkila, i heteroarila, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C4aciltio, C2-C4alkenila, C1-C4alkila, C1-C4alkilamino, C1-C4alkiloksi, amino, amino-C1-C4alkila, halo, C1-C4haloalkila, hidroksila, hidroksi-C1-C4alkila, i tio, pri čemu su C2-C4alkenil, C1-C4alkilamino i C1-C4alkiloksi dodatno opciono supstituisani sa jednim supstituentom odabranim od C1-C4alkilarila, hidroksila, i tio; ili
R<b>i R<c>uzeti zajedno sa atomima za koje je svaki vezan formiraju heterociklildiil;
R<2>je odabran od: C2-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C4-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, aminoarila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloacila, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila.
[0326] Takođe se objavljuju jedinjenja Formule Im:
4
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<1>je odabran od: 1-(dimetilamino)-2-metilpropila, 2-metil-1-(metilamino)propila, 1-aminociklopentila, 1-aminociklopropila, 4-aminofenila, 2-aminopropan-2-ila, 1-aminocikloheksila, 3-aminooksetan-3-ila, 2-(metilamino)propan-2-ila, 1-amino-2-metilpropan-2-ila, 2-metilpirolidin-2-ila, 2-amino-3-metilbutan-2-ila, 2-aminobutan-2-ila, 2-metil-1-(metilamino)propan-2-ila, 1-metilpiperidin-2-ila, 3-fluoropirolidin-3-ila, 1,2-dimetilpirolidin-2-ila, i 2-(dimetilamino)propan-2-ila; i
R<2>je odabran od: 4-aminobenzila, 4-(aminometil)benzila, 4-(aminometil)fenila, 4-aminofenila, benzila, 3-merkaptopropila, 2-merkaptoetila, 4-(merkaptometil)fenila, ptolila, 2,4,6-trimetilfenila, 4-(trifluorometoksi)fenila, 2,4,6-triizopropilfenila, 4-tercbutilfenila, 4-hlorofenila, 3-cijanofenila, 2-nitrofenila, 4-metoksi-2-nitrofenila, 4-aminokarbonil-2-nitrofenila, 4-metoksifenila, fenila, 2-fluorobenzila, piperidin-1-ila, otolila, 4-bromofenila, naftalen-2-ila, 4-metoksikarbonilfenila, 2-(trifluorometil)benzila, heksan-2-ila, 2-metoksietila, ciklopentilmetila, cikloheksila, piridin-3-ilmetila, 4-karboksifenila, 3-aminofenila, piridin-3-ila, tien-2-ila, 4-hidroksifenila, 4-(1-aminociklopropil)benzila, 4-(1-aminociklopropil)fenila, 2-metilbenzila, 4-nitrobenzila, 4-hlorobenzila, fenetila, 4-bromobenzila, 4-cijanobenzila, 3-nitrobenzila, 4-tercbutilbenzila, 2-nitrobenzila, 4-nitrofenetila, 2-hloro-3-metoksikarbonilfenila, 2-aminofenila, [1,1'-bifenil]-4-ila, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ila, 4-fluorobenzila, 3-(trifluorometil)benzila, 3-(trifluorometoksi)benzila, 3,4-dihlorobenzila, 2-cijanobenzila, 3-hlorobenzila, 4-amino-2-etilfenila, 4-amino-3-(trifluorometoksi)fenila, 4-amino-2,3-dimetilfenila, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ila, 4-amino-3-metilfenila, 4-amino-3-fluorofenila, 4-amino-3-etilfenila, i 4-amino-3-(trifluorometil)fenila.
[0327] Takođe se objavljuju jedinjenja Formule Im:
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<1>je odabran od: amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, aminoheterociklila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od arila, aril-C1-C6alkila, C1-C6alkila, C1-C6alkiltio, karboksila, karboksamida, C3-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, guanidino, halo, C1-C6haloacila, C1-C6haloalkila, heterociklila, heterociklil-C1-C6alkila, hidroksila, i tio; ili R<1>je R<a>R<b>NCH(R<c>)-;
R<a>je odabran od: H i C1-C6alkila;
R<b>je C1-C6alkil; i
R<c>je R<d>-C(CH3)2-; i
R<d>je odabran od: H, arila, C3-C7cikloalkila, i heteroarila, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C4aciltio, C2-C4alkenila, C1-C4alkila, C1-C4alkilamino, C1-C4alkiloksi, amino, amino-C1-C4alkila, halo, C1-C4haloalkila, hidroksila, hidroksi-C1-C4alkila, i tio, pri čemu su C2-C4alkenil, C1-C4alkilamino i C1-C4alkiloksi dodatno opciono supstituisani sa jednim supstituentom odabranim od C1-C4alkilarila, hidroksila, i tio; ili
R<b>i R<c>uzeti zajedno sa atomima za koje je svaki vezan formiraju heterociklildiil;
R<2>je odabran od: C1-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C3-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, aminoarila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloacila, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila.
[0328] Takođe se objavljuju jedinjenja Formule Im:
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<1>je odabran od: 1-(dimetilamino)-2-metilpropila, 2-metil-1-(metilamino)propila, 1-aminociklopentila, 1-aminociklopropila, 4-aminofenila, 2-aminopropan-2-ila, 1-aminocikloheksila, 3-aminooksetan-3-ila, 2-(metilamino)propan-2-ila, 1-amino-2-metilpropan-2-ila, 2-metilpirolidin-2-ila, 2-amino-3-metilbutan-2-ila, 2-aminobutan-2-ila, 2-metil-1-(metilamino)propan-2-ila, 1-metilpiperidin-2-ila, 3-fluoropirolidin-3-ila, 1,2-dimetilpirolidin-2-ila, 2-(dimetilamino)propan-2-ila, 2-metil-1-(metilamino)-2-fenilpropila, 1-izopropilpiperidin-2-ila, 2-azabiciklo[2.2.1]heptan-3-ila, i 2-metil-2-azabiciklo[2.2.1]heptan-3-ila; i
R<2>je odabran od: 4-aminobenzila, 4-(aminometil)benzila, 4-(aminometil)fenila, 4-aminofenila, benzila, 3-merkaptopropila, 2-merkaptoetila, 4-(merkaptometil)fenila, ptolila, 2,4,6-trimetilfenila, 4-(trifluorometoksi)fenila, 2,4,6-triizopropilfenila, 4-tercbutilfenila, 4-hlorofenila, 3-cijanofenila, 2-nitrofenila, 4-metoksi-2-nitrofenila, 4-aminokarbonil-2-nitrofenila, 4-metoksifenila, fenila, 2-fluorobenzila, piperidin-1-ila, otolila, 4-bromofenila, naftalen-2-ila, 4-metoksikarbonilfenila, 2-(trifluorometil)benzila, heksan-2-ila, 2-metoksietila, ciklopentilmetila, cikloheksila, piridin-3-ilmetila, 4-karboksifenila, 3-aminofenila, piridin-3-ila, tien-2-ila, 4-hidroksifenila, 4-(1-aminociklopropil)benzila, 4-(1-aminociklopropil)fenila, 2-metilbenzila, 4-nitrobenzila, 4-hlorobenzila, fenetila, 4-bromobenzila, 4-cijanobenzila, 3-nitrobenzila, 4-tercbutilbenzila, 2-nitrobenzila, 4-nitrofenetila, 2-hloro-3-metoksikarbonilfenila, 2-aminofenila, [1,1'-bifenil]-4-ila, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ila, 4-fluorobenzila, 3-(trifluorometil)benzila, 3-(trifluorometoksi)benzila, 3,4-dihlorobenzila, 2-cijanobenzila, 3-hlorobenzila, 4-amino-2-etilfenila, 4-amino-3-(trifluorometoksi)fenila, 4-amino-2,3-dimetilfenila, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ila, 4-amino-3-metilfenila, 4-amino-3-fluorofenila, 4-amino-3-etilfenila, 4-amino-3-(trifluorometil)fenila, i 4-(metoksikarbonil)fenila.
[0329] Takođe se objavljuju jedinjenja Formule In:
ve farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<1>je odabran od: amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, aminoheterociklila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od arila, aril-C1-C6alkila, C1-C6alkila, C1-C6alkiltio, karboksila, karboksamida, C3-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, guanidino, halo, C1-C6haloacila, C1-C6haloalkila, heterociklila, heterociklil-C1-C6alkila, hidroksila, i tio; ili R<1>je R<a>R<b>NCH(R<c>)-;
R<a>je odabran od: H i C1-C6alkila;
R<b>je C1-C6alkil; i
R<c>je R<d>-C(CH3)2-; i
R<d>je odabran od: H, arila, C3-C7cikloalkila, i heteroarila, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C4aciltio, C2-C4alkenila, C1-C4alkila, C1-C4alkilamino, C1-C4alkiloksi, amino, amino-C1-C4alkila, halo, C1-C4haloalkila, hidroksila, hidroksi-C1-C4alkila, i tio, pri čemu su C2-C4alkenil, C1-C4alkilamino i C1-C4alkiloksi dodatno opciono supstituisani sa jednim supstituentom odabranim od C1-C4alkilarila, hidroksila, i tio; ili
R<b>i R<c>uzeti zajedno sa atomima za koje je svaki vezan formiraju heterociklildiil;
R<2>je odabran od: C2-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C4-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, aminoarila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloacila, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila; i R<3>je odabran od: arila, heteroarila, i C3-C7cikloalkila, svaki opciono supstituisan sa jednim supstituentom odabranim od amino i hidroksila;
pod uslovom da kada je R<1>2-metil-1-(metilamino)propil, i R<3>je fenil, R<2>je drugo nego etil, izopropil, n-butil, i fenil.
[0330] Takođe se objavljuju jedinjenja Formule In:
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<1>je odabran od: 1-(dimetilamino)-2-metilpropila, 2-metil-1-(metilamino)propila, 1-aminociklopentila, 1-aminociklopropila, 4-aminofenila, 2-aminopropan-2-ila, 1-aminocikloheksila, 3-aminooksetan-3-ila, 2-(metilamino)propan-2-ila, 1-amino-2-metilpropan-2-ila, 2-metilpirolidin-2-ila, 2-amino-3-metilbutan-2-ila, 2-aminobutan-2-ila, 2-metil-1-(metilamino)propan-2-ila, 1-metilpiperidin-2-ila, 3-fluoropirolidin-3-ila, 1,2-dimetilpirolidin-2-ila, i 2-(dimetilamino)propan-2-ila; i
R<2>je odabran od: 4-aminobenzila, 4-(aminometil)benzila, 4-(aminometil)fenila, 4-aminofenila, benzila, 3-merkaptopropila, 2-merkaptoetila, 4-(merkaptometil)fenila, ptolila, 2,4,6-trimetilfenila, 4-(trifluorometoksi)fenila, 2,4,6-triizopropilfenila, 4-tercbutilfenila, 4-hlorofenila, 3-cijanofenila, 2-nitrofenila, 4-metoksi-2-nitrofenila, 4-aminokarbonil-2-nitrofenila, 4-metoksifenila, fenila, 2-fluorobenzila, piperidin-1-ila, otolila, 4-bromofenila, naftalen-2-ila, 4-metoksikarbonilfenila, 2-(trifluorometil)benzila, heksan-2-ila, 2-metoksietila, ciklopentilmetila, cikloheksila, piridin-3-ilmetila, 4-karboksifenila, 3-aminofenila, piridin-3-ila, tien-2-ila, 4-hidroksifenila, 4-(1-aminociklopropil)benzila, 4-(1-aminociklopropil)fenila, 2-metilbenzila, 4-nitrobenzila, 4-hlorobenzila, fenetila, 4-bromobenzila, 4-cijanobenzila, 3-nitrobenzila, 4-tercbutilbenzila, 2-nitrobenzila, 4-nitrofenetila, 2-hloro-3-metoksikarbonilfenila, 2-aminofenila, [1,1'-bifenil]-4-ila, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ila, 4-fluorobenzila, 3-(trifluorometil)benzila, 3-(trifluorometoksi)benzila, 3,4-dihlorobenzila, 2-cijanobenzila, 3-hlorobenzila, 4-amino-2-etilfenila, 4-amino-3-(trifluorometoksi)fenila, 4-amino-2,3dimetilfenila, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ila, 4-amino-3-metilfenila, 4-amino-3-fluorofenila, 4-amino-3-etilfenila, i 4-amino-3-(trifluorometil)fenila; i
R<3>je odabran od: 1H-indol-3-ila, 4-aminofenila, 4-hidroksifenila, 5-hidroksipiridin-2-ila, cikloheksila, i fenila;
pod uslovom da kada je R<1>2-metil-1-(metilamino)propil, i R<3>je fenil, R<2>je drugo nego etil, izopropil, n-butil, i fenil.
[0331] Takođe se objavljuju jedinjenja Formule In:
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<1>je odabran od: 1-(dimetilamino)-2-metilpropila, 2-metil-1-(metilamino)propila, 1-aminociklopentila, 1-aminociklopropila, 4-aminofenila, 2-aminopropan-2-ila, 1-aminocikloheksila, 3-aminooksetan-3-ila, 2-(metilamino)propan-2-ila, 1-amino-2-metilpropan-2-ila, 2-metilpirolidin-2-ila, 2-amino-3-metilbutan-2-ila, 2-aminobutan-2-ila, 2-metil-1-(metilamino)propan-2-ila, 1-metilpiperidin-2-ila, 3-fluoropirolidin-3-ila, 1,2-dimetilpirolidin-2-ila, 2-(dimetilamino)propan-2-ila, 2-metil-1-(metilamino)-2-fenilpropila, 1-izopropilpiperidin-2-ila, 2-azabiciklo[2.2.1]heptan-3-ila, i 2-metil-2-azabiciklo[2.2.1]heptan-3-ila; i
R<2>je odabran od: 4-aminobenzila, 4-(aminometil)benzila, 4-(aminometil)fenila, 4-aminofenila, benzila, 3-merkaptopropila, 2-merkaptoetila, 4-(merkaptometil)fenila, ptolila, 2,4,6-trimetilfenila, 4-(trifluorometoksi)fenila, 2,4,6-triizopropilfenila, 4-tercbutilfenila, 4-hlorofenila, 3-cijanofenila, 2-nitrofenila, 4-metoksi-2-nitrofenila, 4-aminokarbonil-2-nitrofenila, 4-metoksifenila, fenila, 2-fluorobenzila, piperidin-1-ila, otolila, 4-bromofenila, naftalen-2-ila, 4-metoksikarbonilfenila, 2-(trifluorometil)benzila, heksan-2-ila, 2-metoksietila, ciklopentilmetila, cikloheksila, piridin-3-ilmetila, 4-karboksifenila, 3-aminofenila, piridin-3-ila, tien-2-ila, 4-hidroksifenila, 4-(1aminociklopropil)benzila, 4-(1-aminociklopropil)fenila, 2-metilbenzila, 4-nitrobenzila, 4-hlorobenzila, fenetila, 4-bromobenzila, 4-cijanobenzila, 3-nitrobenzila, 4-tercbutilbenzila, 2-nitrobenzila, 4-nitrofenetila, 2-hloro-3-metoksikarbonilfenila, 2-aminofenila, [1,1'-bifenil]-4-ila, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ila, 4-fluorobenzila, 3-(trifluorometil)benzila, 3-(trifluorometoksi)benzila, 3,4-dihlorobenzila, 2-cijanobenzila, 3-hlorobenzila, 4-amino-2-etilfenila, 4-amino-3-(trifluorometoksi)fenila, 4-amino-2,3-dimetilfenila, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ila, 4-amino-3-metilfenila, 4-amino-3-fluorofenila, 4-amino-3-etilfenila, 4-amino-3-(trifluorometil)fenila, i 4-(metoksikarbonil)fenila; i
R<3>je odabran od: 1H-indol-3-ila, 4-aminofenila, 4-hidroksifenila, 5-hidroksipiridin-2-ila, cikloheksila, i fenila;
pod uslovom da kada je R<1>2-metil-1-(metilamino)propil, i R<3>je fenil, R<2>je drugo nego etil, izopropil, n-butil, i fenil.
[0332] Takođe se objavljuju jedinjenja Formule VI:
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<6>je odabran od: amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, aminoheterociklila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od arila, aril-C1-C6alkila, C1-C6alkila, C1-C6alkiltio, karboksila, karboksamida, C3-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, guanidino, halo, C1-C6haloacila, C1-C6haloalkila, heterociklila, heterociklil-C1-C6alkila, hidroksila, i tio; ili R<6>je R<e>R<f>NCH(R<g>)-;
R<e>je odabran od: H i C1-C6alkila;
R<f>je C1-C6alkil; i
R<g>je R<h>-C(CH3)2-; i
1
R<h>je odabran od: H, arila, C3-C7cikloalkila, i heteroarila, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C4aciltio, C2-C4alkenila, C1-C4alkila, C1-C4alkilamino, C1-C4alkiloksi, amino, amino-C1-C4alkila, halo, C1-C4haloalkila, hidroksila, hidroksi-C1-C4alkila, i tio, pri čemu su C2-C4alkenil, C1-C4alkilamino i C1-C4alkiloksi dodatno opciono supstituisani sa jednim supstituentom odabranim od C1-C4alkilarila, hidroksila, i tio; ili
R<e>i R<f>uzeti zajedno sa atomima za koje je svaki vezan formiraju heterociklildiil;
R<7>je C2-C4alkil opciono supstituisan sa C1-C6alkiltio;
R<8>je C2-C4alkil opciono supstituisan sa C1-C6alkiltio;
R<9>je odabran od: H i C1-C3alkila;
R<10>je odabran od: C1-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C3-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jedan ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, aminoarila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloacila, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila;
Y je -C(O)NHCH(CH2R<11>)-, ili Y je odsutan; i
R<11>je odabran od: arila, heteroarila, i C3-C7cikloalkila, svaki opciono supstituisan sa jednim supstituentom odabranim od amino i hidroksila.
[0333] Takođe se objavljuju jedinjenja Formule VI:
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<6>je odabran od: 1-(dimetilamino)-2-metilpropila, 2-metil-1-(metilamino)propila, 1-aminociklopentila, 1-aminociklopropila, 4-aminofenila, 2-aminopropan-2-ila, 1-aminocikloheksila, 3-aminooksetan-3-ila, 2-(metilamino)propan-2-ila, 1-amino-2-metilpropan-2-ila, 2-metilpirolidin-2-ila, 2-amino-3-metilbutan-2-ila, 2-aminobutan-2-
2
ila, 2-metil-1-(metilamino)propan-2-ila, 1-metilpiperidin-2-ila, 3-fluoropirolidin-3-ila, 1,2-dimetilpirolidin-2-ila, 2-(dimetilamino)propan-2-ila, 2-metil-1-(metilamino)-2-fenilpropila, 1-izopropilpiperidin-2-ila, 2-azabiciklo[2.2.1]heptan-3-ila, i 2-metil-2-azabiciklo[2.2.1]heptan-3-ila;
R<7>je odabran od: izopropila, izobutila, sek-butila, terc-butila, i 2-(metiltio)etila;
R<8>je odabran od: izopropila, izobutila, sek-butila, i 2-(metiltio)etila;
R<9>je odabran od: metila, etila, i n-propila;
R<10>je odabran od: 4-aminobenzila, 4-(aminometil)benzila, 4-(aminometil)fenila, 4-aminofenila, benzila, 3-merkaptopropila, 2-merkaptoetila, 4-(merkaptometil)fenila, ptolila, 2,4,6-trimetilfenila, 4-(trifluorometoksi)fenila, 2,4,6-triizopropilfenila, 4-tercbutilfenila, 4-hlorofenila, 3-cijanofenila, 2-nitrofenila, 4-metoksi-2-nitrofenila, 4-aminokarbonil-2-nitrofenila, 4-metoksifenila, fenila, 2-fluorobenzila, piperidin-1-ila, otolila, 4-bromofenila, naftalen-2-ila, 4-metoksikarbonilfenila, 2-(trifluorometil)benzila, heksan-2-ila, 2-metoksietila, ciklopentilmetila, cikloheksila, piridin-3-ilmetila, 4-karboksifenila, 3-aminofenila, piridin-3-ila, tien-2-ila, 4-hidroksifenila, 4-(1-aminociklopropil)benzila, 4-(1-aminociklopropil)fenila, 2-metilbenzila, 4-nitrobenzila, 4-hlorobenzila, fenetila, 4-bromobenzila, 4-cijanobenzila, 3-nitrobenzila, 4-tercbutilbenzila, 2-nitrobenzila, 4-nitrofenetila, 2-hloro-3-metoksikarbonilfenila, 2-aminofenila, [1,1'-bifenil]-4-ila, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ila, 4-fluorobenzila, 3-(trifluorometil)benzila, 3-(trifluorometoksi)benzila, 3,4-dihlorobenzila, 2-cijanobenzila, 3-hlorobenzila, 4-amino-2-etilfenila, 4-amino-3-(trifluorometoksi)fenila, 4-amino-2,3-dimetilfenila, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ila, 4-amino-3-metilfenila, 4-amino-3-fluorofenila, 4-amino-3-etilfenila, 4-amino-3-(trifluorometil)fenila, i 4-(metoksikarbonil)fenila;
Y je -C(O)NHCH(CH2R<11>)-, ili Y je odsutan; i
R<11>je odabran od: 1H-indol-3-ila, 4-aminofenila, 4-hidroksifenila, 5-hidroksipiridin-2-ila, cikloheksila, i fenila.
[0334] Takođe se objavljuju jedinjenja Formule VII:
ve farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<6>je odabran od: amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, aminoheterociklila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od arila, aril-C1-C6alkila, C1-C6alkila, C1-C6alkiltio, karboksila, karboksamida, C3-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, guanidino, halo, C1-C6haloacila, C1-C6haloalkila, heterociklila, heterociklil-C1-C6alkila, hidroksila, i tio; ili R<6>je R<e>R<f>NCH(R<g>)-;
R<e>je odabran od: H i C1-C6alkila;
R<f>je C1-C6alkil; i
R<g>je R<h>-C(CH3)2-; i
R<h>je odabran od: H, arila, C3-C7cikloalkila, i heteroarila, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C4aciltio, C2-C4alkenila, C1-C4alkila, C1-C4alkilamino, C1-C4alkiloksi, amino, amino-C1-C4alkila, halo, C1-C4haloalkila, hidroksila, hidroksi-C1-C4alkila, i tio, pri čemu su C2-C4alkenil, C1-C4alkilamino i C1-C4alkiloksi dodatno opciono supstituisani sa jednim supstituentom odabranim od C1-C4alkilarila, hidroksila, i tio; ili
R<e>i R<f>uzeti zajedno sa atomima za koje je svaki vezan formiraju heterociklildiil;
R<7>je C2-C4alkil opciono supstituisan sa C1-C6alkiltio;
R<8>je C2-C4alkil opciono supstituisan sa C1-C6alkiltio;
R<9>je odabran od: H i C1-C3alkila;
R<10>je odabran od: C1-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C3-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, aminoarila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloacila, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila;
4
Y je -C(O)NHCH(CH2R<11>)-, ili Y je odsutan; i
R<11>je odabran od: arila, heteroarila, i C3-C7cikloalkila, svaki opciono supstituisan sa jednim supstituentom odabranim od amino i hidroksila.
[0335] Takođe se objavljuju jedinjenja Formule VII:
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
R<6>je odabran od: 1-(dimetilamino)-2-metilpropila, 2-metil-1-(metilamino)propila, 1-aminociklopentila, 1-aminociklopropila, 4-aminofenila, 2-aminopropan-2-ila, 1-aminocikloheksila, 3-aminooksetan-3-ila, 2-(metilamino)propan-2-ila, 1-amino-2-metilpropan-2-ila, 2-metilpirolidin-2-ila, 2-amino-3-metilbutan-2-ila, 2-aminobutan-2-ila, 2-metil-1-(metilamino)propan-2-ila, 1-metilpiperidin-2-ila, 3-fluoropirolidin-3-ila, 1,2-dimetilpirolidin-2-ila, 2-(dimetilamino)propan-2-ila, 2-metil-1-(metilamino)-2-fenilpropila, 1-izopropilpiperidin-2-ila, 2-azabiciklo[2.2.1]heptan-3-ila, i 2-metil-2-azabiciklo[2.2.1]heptan-3-ila;
R<7>je odabran od: izopropila, izobutila, sek-butila, terc-butila, i 2-(metiltio)etila;
R<8>je odabran od: izopropila, izobutila, sek-butila, i 2-(metiltio)etila;
R<9>je odabran od: metila, etila, i n-propila;
R<10>je odabran od: 4-aminobenzila, 4-(aminometil)benzila, 4-(aminometil)fenila, 4-aminofenila, benzila, 3-merkaptopropila, 2-merkaptoetila, 4-(merkaptometil)fenila, ptolila, 2,4,6-trimetilfenila, 4-(trifluorometoksi)fenila, 2,4,6-triizopropilfenila, 4-tercbutilfenila, 4-hlorofenila, 3-cijanofenila, 2-nitrofenila, 4-metoksi-2-nitrofenila, 4-aminokarbonil-2-nitrofenila, 4-metoksifenila, fenila, 2-fluorobenzila, piperidin-1-ila, otolila, 4-bromofenila, naftalen-2-ila, 4-metoksikarbonilfenila, 2-(trifluorometil)benzila, heksan-2-ila, 2-metoksietila, ciklopentilmetila, cikloheksila, piridin-3-ilmetila, 4-karboksifenila, 3-aminofenila, piridin-3-ila, tien-2-ila, 4-hidroksifenila, 4-(1aminociklopropil)benzila, 4-(1-aminociklopropil)fenila, 2-metilbenzila, 4-nitrobenzila, 4-hlorobenzila, fenetila, 4-bromobenzila, 4-cijanobenzila, 3-nitrobenzila, 4-tercbutilbenzila, 2-nitrobenzila, 4-nitrofenetila, 2-hloro-3-metoksikarbonilfenila, 2-aminofenila, [1,1'-bifenil]-4-ila, 4'-amino-[1,1'-bifenil]-4-ila, 4-fluorobenzila, 3-(trifluorometil)benzila, 3-(trifluorometoksi)benzila, 3,4-dihlorobenzila, 2-cijanobenzila, 3-hlorobenzila, 4-amino-2-etilfenila, 4-amino-3-(trifluorometoksi)fenila, 4-amino-2,3-dimetilfenila, 4-amino-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ila, 4-amino-3-metilfenila, 4-amino-3-fluorofenila, 4-amino-3-etilfenila, 4-amino-3-(trifluorometil)fenila, i 4-(metoksikarbonil)fenila;
Y je -C(O)NHCH(CH2R<11>)-, ili Y je odsutan; i
R<11>je odabran od: 1H-indol-3-ila, 4-aminofenila, 4-hidroksifenila, 5-hidroksipiridin-2-ila, cikloheksila, i fenila.
[0336] Predmetna objava uključuje svaku kombinaciju jednog ili više jedinjenja odabranih iz sledeće grupe pokazane u Tabeli A.
[0337] Predmetna objava uključuje svaku kombinaciju jednog ili više jedinjenja odabranih iz sledeće grupe pokazane u Tabeli B.
[0338] Predmetna objava uključuje svaku kombinaciju jednog ili više jedinjenja odabranih iz sledeće grupe pokazane u Tabeli C.
Tabela A
Tabela B
1
2
4 Tabela C
[0339] Pored toga, pojedinačna jedinjenja i hemijski rodovi iz predmetnog pronalaska, na primer ona jedinjenja koja se nalaze u Tabeli A, Tabeli B, i Tabeli C, uključujući njihove dijastereoizomere i enantiomere, obuhvataju sve farmaceutski prihvatljive soli. Jedinjenja Formule I mogu biti pripremljena u skladu sa relevantnim procedurama iz publikovane literature koje upotrebljava onaj sa iskustvom u struci. Primeri reagenasa i procedura za ove reakcije pojavljuju se u daljem tekstu u radnim Primerima. Ovde se takođe objavljuje postupak za pravljenje ovde opisanog jedinjenja.
Konjugati koji sadrže nova jedinjenja
[0340] Ovde opisana jedinjenja mogu da se upotrebljavaju za formiranje konjugata, na primer antitelo-lek konjugata (ADC). U skladu sa tim, u jednom primeru izvođenja predmetne objave, obezbeđene su konjugatne kompozicije Formule II:
(T)-(L)-(D) II
pri čemu je (T) ciljno delujuća funkcionalna grupa, (L) je opcioni linker, i (D) je jedinjenje Formule I. U jednom primeru izvođenja, (T) je antitelo. U skladu sa tim, u jednom primeru izvođenja, antitelo-lek konjugati (ADC) sadrže jedinjenja (D) Formule I.
[0341] Kao što će podrazumevati umereno vešt stručnjak, na raspolaganju je širok spektar načina za kovalentno povezivanje (T)-(L)-(D). Bilo koji poznati postupak može se upotrebljavati za povezivanje komponenti konjugata. Bilo koja poznata tehnologija povezivanja može se upotrebljavati za povezivanje (T) sa (D). Dodatno, (T), (L), i (D) mogu se modifikovati na bilo koji pogodan način, kao što prepoznaje umereno vešt stručnjak, kako bi se olakšalo formiranje konjugata.
Ciljno delujuća funkcionalna grupa (T)
[0342] Ciljno delujuća funkcionalna grupa (T) predmetnih kompozicija uključuje unutar svog obima bilo koju jedinicu (T) koja se vezuje ili reaktivno asocira ili kompleksira sa receptorom, antigenom ili drugom receptivnom funkcionalnom grupom asociranom sa datom populacijom ciljnih ćelija. (T) je molekul koji se vezuje za, kompleksira sa, ili reaguje sa funkcionalnom grupom populacije ćelija za koju se želi da bude ciljana. U jednom aspektu, (T) deluje tako da isporučuje lek (D) određenoj ciljnoj populaciji ćelija sa kojom (T) reaguje. Takve (T) uključuju, ali nisu ograničene na, proteine velike molekulske težine kao što su, na primer, antitela pune dužine, fragmente antitela, proteine manje molekulske težine, polipeptide ili peptide, lektine, glikoproteine, nepeptide, vitamine, molekule za transport nutrijenata (kao što je, ali ne ograničavajući se na transferin), ili bilo koji drugi molekul ili supstancu koja se vezuje za ćeliju.
[0343] (T) može da formira vezu sa jedinicom linkera (L) ili lekom (D). (T) može da formira vezu za (L) jedinicom putem heteroatoma (T). Heteroatomi koji mogu biti prisutni na (T) uključuju sumpor (u jednom primeru izvođenja, iz sulfhidrilne grupe (T)), kiseonik (u jednom primeru izvođenja, iz karbonilne, karboksilne ili hidroksilne grupe (T)) i azot (u jednom primeru izvođenja, iz primarne ili sekundarne amino grupe (T)). Ovi heteroatomi mogu biti prisutni na (T) u prirodnom stanju (T), na primer antitelu koje se javlja u prirodi, ili mogu biti introdukovani u (T) putem hemijske modifikacije.
[0344] U jednom primeru izvođenja, (T) ima sulfhidrilnu grupu i (T) se vezuje za (L) putem atoma sumpora sulfhidrilne grupe. U sledećem primeru izvođenja, (T) ima jedan ili više ostataka lizina koji se mogu hemijski modifikovati kako bi se introdukovala jedna ili više sulfhidrilnih grupa. (T) se vezuje za (L) jedinicu putem sulfhidrilne grupe. Reagensi koji se mogu upotrebljavati za modifikovanje lizina uključuju, ali nisu ograničeni na, N-sukcinimidil S-acetiltioacetat (SATA) i 2-iminotiolan hidrohlorid (Trautov (Traut's) reagens).
[0345] U sledećem primeru izvođenja, (L) može imati jednu ili više ugljenohidratnih grupa koje se mogu hemijski modifikovati da imaju jednu ili više sulfhidrilnih grupa. (T) se vezuje za (L) putem atoma sumpora sulfhidrilne grupe. U još jednom primeru izvođenja, (T) može imati jednu ili više ugljenohidratnih grupa koje se mogu oksidovati kako bi se obezbedila aldehidna (-CHO) grupa (videti, npr. Laguzza et al., 1989, J. Med. Chem. 32(3):548-55).
Odgovarajući aldehid može da formira vezu sa reaktivnim mestom na delu (L). Reaktivna mesta koja mogu da reaguju sa karbonilnom grupom na (T) uključuju, ali nisu ograničena na, hidrazin i hidroksilamin. Drugi protokoli za modifikovanje proteina za prikačinjanje ili asocijaciju (D) opisani su u Coligan et al., Current Protocols in Protein Science, vol. 2, John Wiley & Sons (2002).
[0346] (T) može uključivati, na primer, protein, polipeptid, ili peptid uključuje, ali nije ograničeno na, transferin, epidermalne faktore rasta ("EGF"), bombezin, gastrin, gastrinoslobađajući peptid, faktor rasta poreklom iz krvnih pločica, IL-2, IL-6, transformišući faktor rasta ("TGF"), kao što su TGF-α ili TGF-β, vaccinia faktor rasta ("VGF"), insulin i insulinu slične faktore rasta I i II, lektine i apoprotein iz lipoproteina niske gustine.
[0347] (T) takođe može uključivati antitelo, kao što su poliklonalna antitela ili monoklonalna antitela. Antitelo može biti usmereno na određenu antigenu determinantu, uključujući na primer, antigen ćelije kancera, virusni antigen, mikrobni antigen, protein, peptid, ugljeni hidrat, hemikaliju, nukleinsku kiselinu, ili njihove fragmente. Postupci proizvodnje poliklonalnih antitela su poznati u struci. Monoklonalno antitelo (mAb) na antigen od interesa može se pripremiti upotrebom bilo koje tehnike poznate u struci. Ovo uključuje, ali nije ograničeno na, tehniku hibridoma koju su prvobitno opisali Koler (Kohler) i Milštajn (Milstein) (1975, Nature 256, 495-497), tehniku hibridoma humanih B ćelija (Kozbor et al., 1983, Immunology Today 4:72), i tehniku EBV-hibridoma (Cole et al., 1985, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96). Postupak odabranih limfocitnih antitela (SLAM) (Babcook, JS, et al., A novel strategy for generating monoclonal antibodies from single, isolated lymphocytes producing antibodies of defined specificities. Proc Natl Acad Sci U S A, 1996. 93 (15): p. 7843-8.) i (McLean GR, Olsen OA, Watt IN, Rathanaswami P, Leslie KB, Babcook JS, Schrader JW. Recognition of human cytomegalovirus by human primary immunoglobulins identifies an innate foundation to an adaptive immune response. J Immunol. 2005 Apr 15;174(8):4768-78. Takva antitela mogu biti bilo koje klase imunoglobulina uključujući IgG, IgM, IgE, IgA, i IgD i bilo koje njihove podklase. Hibridomi koji proizvode mAb za upotrebu u ovom pronalasku mogu se kultivisati in vitro ili in vivo.
[0348] Monoklonalno antitelo može biti, na primer, humano monoklonalno antitelo, humanizovano monoklonalno antitelo, fragment antitela, ili himerno antitelo (npr. humanomišje antitelo). Humana monoklonalna antitela mogu se napraviti bilo kojom od brojnih tehnika poznatih u struci (npr. Teng et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:7308-7312; Kozbor et al., 1983, Immunology Today 4:72-79 i Olsson et al., 1982, Meth. Enzymol. 92:316). Takođe videti, Huse et al., 1989, Science 246:1275-1281 i McLean et al. J Immunol.
2005, Apr 15;174(8):4768-78.
[0349] Antitelo takođe može biti bispecifično antitelo. Postupci za pravljenje bispecifičnih antitela su poznati u struci. Tradicionalna proizvodnja bispecifičnih antitela pune dužine zasniva se na koekspresiji dva para teški lanac-laki lanac imunoglobulina, gde dva lanca imaju različite specifičnosti (videti, npr. Milstein et al., 1983, Nature 305:537-539; Međunarodna publikacija br. WO 93/08829, Traunecker et al., 1991, EMBO J.10:3655-3659.
[0350] U skladu sa drugačijim pristupom, varijabilni domeni antitela sa željenim specifičnostima vezivanja (antitelo-antigen mesta kombinovanja) fuzionisani su za sekvence konstantnog domena imunoglobulina. Fuzija je poželjno sa konstantnim domenom teškog lanca imunoglobulina, koji sadrži najmanje deo zglobnog, CH2i CH3regiona. Poželjno je imati prvi konstantni region teškog lanca (CH1) koji sadrži mesto neophodno za vezivanje lakog lanca, prisutno u najmanje jednoj od fuzija. Nukleinske kiseline sa sekvencama koje kodiraju fuzije teškog lanca imunoglobulina i, ukoliko se želi, lakog lanca imunoglobulina, inseriraju se u odvojene ekspresione vektore, i kotransfektuju u odgovarajući organizam domaćin. Ovo obezbeđuje fleksibilnost u prilagođavanju međusobnih proporcija tri polipeptidna fragmenta u primerima izvođenja kada nejednaki odnosi tri polipeptidna lanca upotrebljena u konstrukciji obezbeđuju optimalne prinose. Međutim, moguće je inserirati kodirajuće sekvence za dva ili sva tri polipeptidna lanca u jedan ekspresioni vektor kada ekspresija najmanje dva polipeptidna lanca u jednakim odnosima rezultuje visokim prinosima ili kada ti odnosi nisu od posebnog značaja.
[0351] Na primer, bispecifična antitela mogu imati hibridni teški lanac imunoglobulina sa prvom specifičnošću vezivanja u jednom kraku, i hibridni par težak lanac-laki lanac imunoglobulina (obezbeđujući drugu specifičnost vezivanja) u drugom kraku. Ova asimetrična struktura olakšava odvajanje željenog bispecifičnog jedinjenja od neželjenih kombinacija lanaca imunoglobulina, pošto prisustvo lakog lanca imunoglobulina u samo jednoj polovini bispecifičnog molekula obezbeđuje lak način odvajanja (Međunarodna publikacija br. WO 94/04690).
[0352] Za dodatne detalje o generisanju bispecifičnih antitela videti, na primer, Suresh et al., 1986, Methods in Enzymology 121:210; Rodrigues et al., 1993, J. Immunology 151:6954-6961; Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167; Carter et al., 1995, J. Hematotherapy 4:463-470; Merchant et al., 1998, Nature Biotechnology 16:677-681. Upotrebom takvih tehnika, bispecifična antitela mogu se pripremiti za upotrebu u lečenju ili prevenciji bolesti kao što je ovde definisano.
[0353] Bifunkcionalna antitela su takođe opisana u Evropskoj patentnoj publikaciji br. EPA 0 105 360. Kao što je objavljeno u ovoj referenci, hibridna ili bifunkcionalna antitela mogu nastati bilo biološki, tj. tehnikama fuzije ćelija, ili hemijski, naročito sa agensima za umrežavanje ili reagensima za formiranje disulfidnog mosta, i mogu sadržati cela antitela ili njihove fragmente. Postupci za dobijanje takvih hibridnih antitela objavljeni su, na primer, u Međunarodnoj publikaciji WO 83/03679, i Evropskoj patentnoj publikaciji br. EPA 0 217 577.
[0354] Antitelo takođe može biti funkcionalno aktivan fragment, derivat ili analog antitela koji se imunospecifično vezuje za ciljni antigen (npr. antigen kancera, virusni antigen, mikrobni antigen, ili druga antitela vezana za ćelije ili matriks). U tom smislu, "funkcionalno aktivan" znači da fragment, derivat ili analog može da prepozna isti antigen koji prepoznaje antitelo iz kojeg je fragment, derivat ili analog nastao. Specifično, u jednom primeru primera izvođenja, antigenost idiotipa molekula imunoglobulina može biti poboljšana delecijom regiona okvira i CDR sekvenci koje su C-terminusne za CDR sekvencu koja specifično prepoznaje antigen. Kako bi se odredilo koje CDR sekvence vezuju antigen, sintetički peptidi koji sadrže CDR sekvence mogu se upotrebljavati u testovima vezivanja sa antigenom pomoću bilo kog postupka testiranja vezivanja poznatog u struci (npr. BIA core test) (videti, npr. Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, Md.; Kabat et al., 1980, J. Immunology 125(3):961-969).
[0355] Druga korisna antitela uključuju fragmente antitela kao što su, ali bez ograničavanja na, F(ab')2fragmente, Fab fragmente, Fab', Fv fragmente i dimere teškog i lakog lanca antitela, ili bilo koji njihov minimalni fragment kao što su Fv ili jednolančana antitela (SCA) (npr. kao što je opisano u S.A.D. pat. br. 4,946,778; Bird, 1988, Science 242:423-42; Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; i Ward et al., 1989, Nature 334:544-54).
[0356] Takođe se mogu upotrebljavati rekombinantna antitela, kao što su himerna i humanizovana monoklonalna antitela, koja sadrže i humane i ne-humane delove, koja se mogu napraviti upotrebom standardnih tehnika rekombinantne DNK. (Videti, npr. S.A.D. pat. br. 4,816,567; i S.A.D. pat. br. 4,816,397.) Humanizovana antitela su molekuli antitela iz nehumanih vrsta koja imaju jedan ili više regiona koji određuju komplementarnost (CDR) iz nehumanih vrsta i region okvira od humanog molekula imunoglobulina. (Videti, npr. S.A.D. pat. br. 5,585,089.) Himerna i humanizovana monoklonalna antitela mogu se proizvesti tehnikama rekombinantne DNK poznatim u struci, na primer upotrebom postupaka opisanih u Međunarodnoj publikaciji br. WO 87/02671; Evropskoj patentnoj publikaciji br. 0184 187; Evropskoj patentnoj publikaciji br.0 171 496; Evropskoj patentnoj publikaciji br.0 173 494; Međunarodnoj publikaciji br. WO 86/01533; S.A.D. pat. br. 4,816,567; Evropskoj patentnoj publikaciji br. 012 023; Berter et al., 1988, Science 240:1041-1043; Liu et al., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:3439-3443; Liu et al., 1987, J. Immunol. 139:3521-3526; Sun et al., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:214-218; Nishimura et al., 1987, Cancer. Res. 47:999-1005; Wood et al., 1985, Nature 314:446-449; Shaw et al., 1988, J. Natl. Cancer Inst.
80:1553-1559; Morrison, 1985, Science 229:1202-1207; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214; S.A.D. pat. br. 5,225,539; Jones et al., 1986, Nature 321:552-525; Verhoeyan et al., 1988, Science 239:1534; i Beidler et al., 1988, J. Immunol. 141:4053-4060.
[0357] Mogu se upotrebljavati potpuno humana antitela. Humana antitela se mogu pripremiti, na primer, upotrebom transgenih miševa koji nisu u stanju da eksprimiraju gene endogenog teškog i lakog lanca imunoglobulina, ali koji mogu da eksprimiraju gene humanog teškog i lakog lanca. Transgeni miševi su imunizovani na normalan način sa odabranim antigenom, npr. celim ili delom polipeptida. Monoklonalna antitela usmerena prema antigenu mogu se dobiti upotrebom konvencionalne tehnologije hibridoma. Transgeni humanog imunoglobulina koje nose transgeni miševi rearanžiraju se tokom diferencijacije B ćelija, i zatim prolaze kroz promenu klase i somatsku mutaciju. Stoga, upotrebom takve tehnike, moguće je proizvesti terapijski korisna IgG, IgA, IgM i IgE antitela. Za pregled ove tehnologije za proizvodnju humanih antitela, videti Lonberg i Husar (Huszar) (1995, Int. Rev. Immunol. 13:65-93). Za detaljnu diskusiju o ovoj tehnologiji za proizvodnju humanih antitela i humanih monoklonalnih antitela i protokolima za proizvodnju takvih antitela videti, npr. S.A.D. patentne br.5,625,126; 5,633,425; 5,569,825; 5,661,016; i 5,545,806.
[0358] Humana antitela koja prepoznaju odabrani epitop takođe se mogu generisati upotrebom tehnike koja se naziva "vođena selekcija". U ovom pristupu, odabrano ne-humano monoklonalno antitelo, npr. mišje antitelo, upotrebljava se za vođenje selekcije potpuno humanog antitela koje prepoznaje isti epitop. (Videti, npr. Jespers et al., 1994, Biotechnology 12:899-903.) Humana antitela se takođe mogu proizvesti upotrebom različitih tehnika poznatih u struci, uključujući biblioteke fag displeja (videti, npr. Hoogenboom and Winter, 1991, J. Mol. Biol. 227:381; Marks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222:581; Quan i Carter, 2002, "The rise of monoclonal antibodies as therapeutics," u Anti-IgE and Allergic Disease, Jardieu, P. M. and Fick Jr., R. B, eds., Marcel Dekker, New York, N.Y., Chapter 20, pp.427-469).
[0359] U drugim primerima izvođenja, antitelo je fuzioni protein antitela, ili njegov funkcionalno aktivan fragment. Na primer, antitelo se može fuzionisati putem kovalentne
1
veze (npr. peptidne veze) bilo na N-terminusu ili na C-terminusu sa amino-kiselinskom sekvencom drugog proteina (ili njenim delom, kao što je najmanje 10, 20 ili 50 aminokiselinska dela proteina) koji nije antitelo.
[0360] Antitela takođe uključuju analoge i derivate koji su bilo modifikovani, tj. kovalentnim prikačinjanjem bilo kog tipa molekula sve dok takvo kovalentno prikačinjanje dozvoljava antitelu da zadrži svoju imunospecifičnost vezivanja za antigen. Na primer, ali ne kao ograničenje, derivati i analozi antitela uključuju one koji su dodatno modifikovani, npr. glikozilacijom, acetilacijom, pegilacijom, fosforilacijom, amidacijom, derivatizacijom poznatim zaštitnim/blokirajućim grupama, proteolitičkim isecanjem, povezivanjem na ćelijsku jedinicu antitela ili drugi protein, itd. Bilo koja od brojnih hemijskih modifikacija može se izvesti poznatim tehnikama, uključujući, ali ne ograničavajući se na specifično hemijsko isecanje, acetilaciju, formilaciju, metaboličku sintezu u prisustvu tunikamicina, itd. Pored toga, analog ili derivat može da sadrži jednu ili više neprirodnih amino-kiselina.
[0361] Antitela mogu imati modifikacije (npr. supstitucije, delecije ili adicije) aminokiselinskih ostataka koji interaguju sa Fc receptorima. Posebno, antitela uključuju antitela koja imaju modifikacije amino-kiselinskih ostataka identifikovane kao uključene u interakciju između anti-Fc domena i FcRn receptora (videti, npr. Međunarodnu publikaciju br. WO 97/34631). Antitela imunospecifična za ciljni antigen mogu se dobiti komercijalno ili iz drugog izvora ili proizvesti bilo kojim postupkom poznatim onima sa iskustvom u struci kao što je, npr. hemijska sinteza ili tehnike rekombinantne ekspresije. Nukleotidna sekvenca koja kodira antitela imunospecifična za antigen ćelije kancera može se dobiti, npr. iz GenBank baze podataka ili slične baze podataka, literaturnih publikacija, ili rutinskim kloniranjem i sekvenciranjem.
[0362] Primeri antitela dostupnih za lečenje kancera uključuju, ali nisu ograničeni na, humanizovano anti HER2 monoklonalno antitelo, HERCEPTIN® (trastuzumab; Genentech); RITUXAN® (rituksimab; Genentech) koji je himerno anti CD20 monoklonalno antitelo za lečenje pacijenata sa ne-Hočkinovim limfomom; OvaRex (AltaRex Corporation, MA) koje je murinsko antitelo za lečenje kancera jajnika; Panorex (Glaxo Wellcome, NC) koji je murinsko IgG2a antitelo za lečenje kolorektalnog kancera; Cetuximab Erbitux (Imclone Systems Inc., NY) koji je anti-EGFR IgG himerno antitelo za lečenje kancera pozitivnih na epidermalni faktor rasta, kao što je kancer glave i vrata; Vitaxin (MedImmune, Inc., MD) koji je humanizovano antitelo za lečenje sarkoma; Campath I/H (Leukosite, MA) koji je humanizovano IgG1 antitelo za lečenje hronične limfocitne leukemije (CLL); Smart MI95 (Protein Design Labs, Inc., CA) koji je humanizovano anti-CD33 IgG antitelo za lečenje
2
akutne mijeloidne leukemije (AML); LimphoCide (Immunomedics, Inc., NJ) koji je humanizovano anti-CD22 IgG antitelo za lečenje ne-Hočkinovog limfoma; Smart ID10 (Protein Design Labs, Inc., CA) koji je humanizovano anti-HLA-DR antitelo za lečenje ne-Hočkinovog limfoma; Oncolym (Techniclone, Inc., CA) koji je radioaktivno obeleženo murinsko anti-HLA-Dr10 antitelo za lečenje ne-Hočkinovog limfoma; Allomune (BioTransplant, CA) koji je humanizovano anti-CD2 mAb za lečenje Hočkinove bolesti ili ne-Hočkinovog limfoma; Avastin (Genentech, Inc., CA) koji je anti-VEGF humanizovano antitelo za lečenje kancera pluća i kolorektalnog kancera; Epratuzamab (Immunomedics, Inc., NJ i Amgen, CA) koji je anti-CD22 antitelo za lečenje ne-Hočkinovog limfoma; i CEAcide (Immunomedics, NJ) koji je humanizovano anti-CEA antitelo za lečenje kolorektalnog kancera.
[0363] Druga antitela korisna u lečenju kancera uključuju, ali nisu ograničena na, antitela prema sledećim antigenima (primeri kancera su navedeni u zagradama): CA125 (jajnici), CA15-3 (karcinomi), CA19-9 (karcinomi), L6 (karcinomi), Lewis Y (karcinomi), Lewis X (karcinomi), alfa fetoprotein (karcinomi), CA 242 (kolorektalni), placentalna alkalna fosfataza (karcinomi), membranski antigen specifičan za prostatu (prostata), kisela fosfataza prostate (prostata), epidermalni faktor rasta (karcinomi), MAGE-1 (karcinomi), MAGE-2 (karcinomi), MAGE-3 (karcinomi), MAGE-4 (karcinomi), antitransferin receptor (karcinomi), p97 (melanom), MUC1-KLH (kancer dojke), CEA (kolorektalni), gp100 (melanom), MART1 (melanom), antigen specifičan za prostatu (PSA) (prostata), IL-2 receptor (T-ćelijska leukemija i limfomi), CD20 (ne-Hočkinov limfom), CD52 (leukemija), CD33 (leukemija), CD22 (limfom), humani horionski gonadotropin (karcinom), CD38 (multipli mijelom), CD40 (limfom), mucin (karcinomi), P21 (karcinomi), MPG (melanom), i Neu onkogeni proizvod (karcinomi). Neka specifična, korisna antitela uključuju, ali nisu ograničena na, BR96 mAb (Trail et al., 1993, Science 261:212-215), BR64 (Trail et al., 1997, Cancer Research 57:100-105), mAbs prema CD40 antigenu, kao što je S2C6 mAb (Francisco et al., 2000, Cancer Res.
60:3225-3231) i njegove himerne i humanizovane varijante, mAb prema cD33 antigenu; mAb prema EphA2 antigenu; mAb prema CD70 antigenu, kao što su 1F6 mAb i 2F2 mAb i njihove himerne i humanizovane varijante, i mAb prema CD30 antigenu, kao što je AC10 (Bowen et al., 1993, J. Immunol. 151:5896-5906; Wahl et al., 2002, Cancer Res. 62(13):3736-42) i njihove himerne i humanizovane varijante. Mnoga druga internalizujuća antitela koja se vezuju za antigene asocirane sa tumorom mogu se upotrebljavati i pregledno su prikazana (videti, npr. Franke et al., 2000, Cancer Biother. Radiopharm. 15:459 76; Murray, 2000, Semin. Oncol. 27:64 70; Breitling et al., Recombinant Antibodies, John Wiley, and Sons, New York, 1998).
[0364] Antitelo takođe može biti antitelo koje se vezuje za antigen koji je prisutan na ciljnoj ćeliji ili populaciji ciljnih ćelija. Na primer, transmembranski polipeptidi i drugi markeri mogu biti specifično eksprimirani na površini jednog ili više određenih tipova ciljnih ćelija (npr. kancerska ćelija) u poređenju sa jednom ili više normalnih (npr. nekancerske ćelije). Često su takvi markeri u većoj količini eksprimirani na površini ciljnih ćelija, ili pokazuju veću imunogenost, u poređenju sa onima na površini normalnih ćelija. Identifikacija takvih antigen polipeptida na ćelijskoj površini dovela je do mogućnosti da se specifično ciljaju ćelije za uništavanje putem terapija zasnovanih na antitelima. Stoga, u nekim primerima izvođenja, antitela uključuju, ali nisu ograničena na, antitela prema antigenima asociranim sa tumorom (TAA). Takvi antigeni asocirani sa tumorom su poznati u struci, i mogu se pripremiti za upotrebu u generisanju antitela upotrebom postupaka i informacija koje su dobro poznate u struci.
[0365] Takođe videti EP2552957, WO/2012/116453, WO/2012/032080. Takođe videti Zybody™, http://www.zyngenia.com/science-technology/technology-approach.asp. Takođe videti tehnologiju antitela samo sa humanim teškim lancem, http://www.crescendobiologics.com/. Takođe videti WO2010001251, platforma humanih antitela zasnovanih na kvascu http://www.adimab.com/platform-overview, mAbLogix™ platforma http://www.dna.com/OurApproach/ComplementaryTechnologies/AntibodyDiscovery, platforma za monoklonalno otkrivanje http://www.igenica.com/science.php, WO2009/157771, EP2560993, WO2013004842, WO2012166560.
[0366] Pored antitela, ciljno delujuća funkcionalna grupa (T) iz predmetnih kompozicija uključuje unutar svog obima bilo koju jedinicu (T) koja se vezuje ili reaktivno asocira ili kompleksira sa receptorom, antigenom ili drugom receptivnom funkcionalnom grupom asociranom sa datom populacijom ciljnih ćelija. (T) je molekul koji se vezuje za, kompleksira sa, ili reaguje sa funkcionalnom grupom populacije ćelija za koju se želi da bude ciljana. Na primer, uključeni unutar (T) su ligandi za receptore ćelijske površine poreklom od različitih izvora, uključujući one poreklom od humanih ćelija, ligande poreklom od bakterija, i ligande poreklom od patogena. U struci je poznat širok spektar odgovarajućih ciljno delujućih funkcionalnih grupa. Na primer, videti WO2013117705.
4
Linker funkcionalna grupa (L)
[0367] Predmetne kompozicije opciono dodatno uključuju linker funkcionalnu grupu (L). (L) je bifunkcionalno jedinjenje koje se može upotrebljavati da poveže (D) i (T) za formiranje konjugatne kompozicije, T-L-D. Takvi konjugati omogućavaju selektivnu isporuku lekova ciljnim ćelijama (npr. tumorskim ćelijama). (L) uključuju dvovalentni supstituent kao što je alkildiil, arildiil, heteroarildiil, funkcionalne grupe kao što su: -(CR2)nO(CR2)n-, ponavljajuće jedinice alkiloksi (npr. polietilenoksi, PEG, polimetilenoksi) i alkilamino (npr. polietilenamino, Jeffamine™); i dikiseli estar i amide uključujući sukcinat, sukcinamid, diglikolat, malonat, i kaproamid.
[0368] Predmetne kompozicije se mogu pripremiti upotrebom (L) jedinice koja ima reaktivno mesto za vezivanje za (D) i (T). U nekim primerima izvođenja, (L) ima reaktivno mesto koje ima elektrofilnu grupu koja je reaktivna sa nukleofilnom grupom prisutnom na (T). Korisne nukleofilne grupe na (T) uključuju ali nisu ograničene na sulfhidrilne, hidroksilne i amino grupe. Heteroatom nukleofilne grupe (T) je reaktivan sa elektrofilnom grupom na (L) i formira kovalentnu vezu sa (L). Korisne elektrofilne grupe uključuju, ali nisu ograničene na maleimidne i haloacetamidne grupe. Nukleofilna grupa na (T) obezbeđuje pogodno mesto za prikačinjanje za (L).
[0369] U sledećem primeru izvođenja, (L) ima reaktivno mesto koje ima nukleofilnu grupu koja je reaktivna sa elektrofilnom grupom prisutnom na (T). Korisne elektrofilne grupe na (T) uključuju, ali nisu ograničene na, aldehidne i ketonske karbonilne grupe. Heteroatom nukleofilne grupe (L) može da reaguje sa elektrofilnom grupom na (T) i formira kovalentnu vezu sa (T). Korisne nukleofilne grupe na (L) uključuju, ali nisu ograničene na, hidrazid, oksim, amino, hidrazin, tiosemikarbazon, hidrazin karboksilat, i arilhidrazid. Elektrofilna grupa na (T) obezbeđuje pogodno mesto za prikačinjanje za (L).
[0370] Funkcionalne grupe karboksilne kiseline i funkcionalne grupe hloroformata su takođe korisna reaktivna mesta za (L) pošto mogu da reaguju sa amino grupama (D) kako bi formirale amidnu vezu. Takođe korisna kao reaktivno mesto je karbonatna funkcionalna grupa na (L), kao što je, ali bez ograničavanja na, p-nitrofenil karbonat, koji može da reaguje sa amino grupom (D) kako bi formirao karbamatnu vezu.
[0371] Podrazumeva se da se u trenutnom pronalasku mogu upotrebljavati bilo koje linker funkcionalne grupe o kojima se podučava u stanju tehnike, a posebno one o kojima se podučava za upotrebu u kontekstu isporuke leka. Bez ograničavanja obima prethodne izjave, u jednom primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u WO 2012/113847. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S. 8,288,352. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S. 5,028,697. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S. 5,006,652. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S. 5,094,849. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S. 5,053,394. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S.5,122,368. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S. 5,387,578. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S. 5,547,667. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S. 5,622,929. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S.
5,708,146. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S. 6,468,522. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S. 6,103,236. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S. 6,638,509. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S. 6,214,345. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S. 6,759,509. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u WO 2007/103288. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u WO 2008/083312. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u WO 2003/068144. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u WO 2004/016801. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u WO 2009/134976. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u WO 2009/134952. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u WO 2009/134977. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u WO 2002/08180. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u WO 2004/043493. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u WO 2007/018431. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u WO 2003/026577. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u WO 2005/077090. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u WO 2005/082023. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u WO 2007/011968. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u WO 2007/038658. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u WO 2007/059404. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u WO 2006/110476. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u WO 2005/112919. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u WO 2008/103693. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S. 6,756,037. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S. 7,087,229. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S.
7,122,189. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S. 7,332,164. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S. 5,556,623. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S. 5,643,573. U sledećem primeru izvođenja, (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u U.S.5,665,358.
[0372] U poželjnom primeru izvođenja (L) sadrži linker funkcionalnu grupu objavljenu u S.A.D. privremenoj prijavi 61/921,242, koja je podneta 27. decembra 2013. U skladu sa tim, obezbeđene su konjugatne kompozicije Formule III:
(T)-(L<1>)-(D<1>) III
pri čemu je (T) ciljno delujuća funkcionalna grupa sposobna da veže ciljnu ćeliju, pri čemu (D<1>) ima sledeću strukturu (IV):
pri čemu:
R<1>je odabran od: amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, amino-heterociklila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od arila, aril-C1-C6alkila, C1-C6alkila, C1-C6alkiltio, karboksila, karboksamida, C3-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, guanidino, halo, C1-C6haloalkila, heterociklila, heterociklil-C1-C6alkila, hidroksila, i tio; ili
R<1>je R<a>R<b>NCH(R<c>)-;
R<a>je odabran od: H i C1-C6alkila;
R<b>je C1-C6alkil; i
R<c>je R<d>-C(CH3)2-; i
R<d>je odabran od: H, arila, C3-C7cikloalkila, i heteroarila, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C4aciltio, C2-C4alkenila, C1-C4alkila, C1-C4alkilamino, C1-C4alkiloksi, amino, amino-C1-C4alkila, halo, C1-C4haloalkila, hidroksila, hidroksi-C1-C4alkila, i tio, pri čemu su C2-C4alkenil, C1-C4alkilamino i C1-C4alkiloksi dodatno opciono supstituisani sa jednim supstituentom odabranim od C1-C4alkilarila, hidroksila, i tio; ili R<b>i R<c>uzeti zajedno sa atomima za koje je svaki vezan formiraju heterociklildiil;
X je odsutan;
R<2a>je odabran od: C2-C6alkildiila, arildiila, C4-C7cikloalkildiila, heteroarildiila, i heterociklildiila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila;
i pri čemu (L<1>)-(T) ima sledeću strukturu (V)
(AA)1-(AA)n-(L<2>)-(T) V
pri čemu -NH- grupa vezana za R<2a>u Formuli IV formira peptidnu vezu (JPB) sa (AA)1u Formuli V, pri čemu je JPB enzimski iseciv, pri čemu je svaki AA nezavisno aminokiselina, pri čemu je n ceo broj od 0 do 25, pri čemu je (L<2>) opciono preostali deo linkera (L<1>), pri čemu je (T) ciljno delujuća funkcionalna grupa, i pri čemu (AA)1-(AA)n, uzeto zajedno sadrži amino-kiselinsku sekvencu sposobnu da olakša enizmsko isecanje JPB.
[0373] Mogu se takođe upotrebljavati linkeri (L) koji sadrže samooslobađajuću komponentu. Na primer, videti S.A.D. pat. br. 6,214,345. Primer samooslobađajuće komponente je paminobenzilkarbamoil (PABC).
[0374] U pronalasku se mogu upotrebljavati komercijalno dostupni linkeri. Na primer, mogu se upotrebljavati komercijalno dostupan iseciv linker sulfosukcinimidil 6-[3'(2-piridilditio)-propionamido] heksanoat (sulfo-LC-SPDP: Thermo Pierce Cat# 21650) i neiseciv linker sukcinimidil 4-[N-maleimidometil]cikloheksan-1-karboksilat (SMCC: Thermo Pierce Cat# 22360), kao što je ovde demonstrirano.
[0375] Takođe videti, WO2012171020, WO2010138719, opseg komercijalno dostupnih linkera, na primer, sa Concortis http://www.concortis.com/home. Takođe videti Kim et al., Bioconjugate Chemistry, 21 (8): 1513-1519 AUG 2010. Takođe videti EP2326349. Takođe videti klik hemijske linkere bez bakra, Angew. Chem. Int. Ed., 2010, 49, p. 9422-9425, ChemBioChem, 2011, 12, p.1309-1312, http://www.synaffix.com/technology/.
Lek funkcionalna grupa (D)
[0376] (D) je jedinjenje Formule I kao što je ovde opisano. Umereno vešt stručnjak prepoznaće da ovde opisana jedinjenja mogu biti na odgovarajući način modifikovana kako bi se olakšala reakcija konjugacije sa (L), ili ukoliko (L) nije prisutan, sa (T), i formiranje konjugata (T)-(L)-(D) ili (T)-(D). Može se upotrebljavati bilo koja tačka prikačinjanja na (D). U jednom primeru izvođenja, C-terminus (D) formira tačku prikačinjanja u (T)-(L)-(D) konjugatu. U sledećem primeru izvođenja, N-terminus (D) formira tačku prikačinjanja u (T)-(L)-(D) konjugatu. U sledećem primeru izvođenja, bočni lanac (D) formira tačku prikačinjanja u (T)-(L)-(D) konjugatu.
Primena
[0377] Za svrhe primene, jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu se primenjivati kao sirova hemikalija ili se mogu formulisati kao farmaceutske kompozicije. Farmaceutske kompozicije iz predmetnog pronalaska sadrže ovde opisano jedinjenje i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens. Ovde opisano jedinjenje je prisutno u kompoziciji u količini koja je efikasna za lečenje određene bolesti ili stanja od interesa, npr. u količini dovoljnoj za lečenje kancera ili rasta tumorskih ćelija, i poželjno sa prihvatljivom toksičnošću za pacijenta. Aktivnost ovde opisanih jedinjenja može odrediti onaj sa iskustvom u struci, na primer, kao što je opisano u primerima u nastavku. Odgovarajuće koncentracije i doze može lako da odredi onaj sa iskustvom u struci.
[0378] Primena ovde opisanih jedinjenja, ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli, u čistom obliku ili u odgovarajućoj farmaceutskoj kompoziciji, može se sprovesti putem bilo kog od prihvaćenih načina primene agenasa koji služe za slične svrhe. Farmaceutske kompozicije iz objave mogu se pripremiti kombinovanjem ovde opisanog jedinjenja sa odgovarajućim farmaceutski prihvatljivim nosačem, razblaživačem ili ekscipijensom, i mogu se formulisati u preparate u čvrstim, polučvrstim, tečnim ili gasovitim oblicima, kao što su tablete, kapsule, praškovi, granule, masti, rastvori, supozitorije, injekcije, inhalanti, gelovi, mikrosfere, i aerosoli. Tipični putevi primene takvih farmaceutskih kompozicija uključuju, bez ograničavanja, oralni, topikalni, transdermalni, inhalacioni, parenteralni, sublingvalni, bukalni, rektalni, vaginalni, i intranazalni. Termin parenteralno, kao što se ovde upotrebljava, uključuje subkutane injekcije, intravenske, intramuskularne, intrasternalne injekcije ili tehnike infuzije. Farmaceutske kompozicije iz objave formulisane su tako da omogućavaju da aktivni sastojci sadržani u njima budu biodostupni nakon primene kompozicije pacijentu. Kompozicije koje će se primeniti subjektu ili pacijentu imaju oblik jedne ili više doznih jedinica, gde na primer, tableta može biti jedna dozna jedinica, i kontejner ovde opisanog jedinjenja u obliku aerosola može da sadrži mnoštvo doznih jedinica. Stvarni postupci pripreme takvih doznih oblika su poznati, ili će biti očigledni, onima sa iskustvom u struci; na primer, videti Remington: The Science and Practice of Pharmacy (22nd ed.) eds. Loyd V. Allen, Jr., et al., Pharmaceutical Press, 2012. Kompozicija koja će se primeniti će, u bilo kom slučaju, sadržati terapijski efikasnu količinu ovde opisanog jedinjenja, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, za lečenje bolesti ili stanja od interesa u skladu sa učenjima iz ove objave.
[0379] Ovde opisana farmaceutska kompozicija može biti u čvrstom ili tečnom obliku. U jednom aspektu, nosač(i) su čestice, tako da su kompozicije, na primer, u obliku tableta ili praška. Nosač(i) mogu biti tečni, pri čemu su kompozicije, na primer, oralni sirup, injektabilna tečnost ili aerosol, koji je koristan u, na primer, inhalatornoj primeni.
[0380] Kada su namenjene za oralnu primenu, farmaceutske kompozicije iz predmetne objave su tipično bilo u čvrstom ili u tečnom obliku, gde su polučvrsti, polutečni oblici, kao i oblici suspenzije i gela uključeni u oblike koji se ovde smatraju bilo čvrstim ili tečnim.
[0381] Kao čvrsta kompozicija za oralnu primenu, farmaceutske kompozicije mogu biti formulisane u obliku praška, granule, komprimovane tablete, pilule, kapsule, žvakaće gume, vafla ili slično. Takva čvrsta kompozicija tipično će sadržati jedan ili više inertnih razblaživača ili jestivih nosača. Pored toga, može biti prisutno jedno ili više od sledećeg: veziva kao što su karboksimetilceluloza, etil celuloza, mikrokristalna celuloza, tragakant guma ili želatin; ekscipijensi kao što su skrob, laktoza ili dekstrini, agensi za dezintegraciju kao što su alginska kiselina, natrijum alginat, Primogel, kukuruzni skrob, i slično; lubrikanti kao što su magnezijum stearat ili Sterotex; glidanti kao što je koloidni silicijum dioksid; agensi za zaslađivanje kao što su saharoza ili saharin; agensi za aromatizovanje kao što je pepermint, metil salicilat ili aroma pomorandže; i agens za kolorisanje.
[0382] Kada je farmaceutska kompozicija u obliku kapsule, na primer, želatinozne kapsule, ona može da sadrži, pored materijala prethodnog tipa, tečni nosač kao što je polietilen glikol ili ulje.
[0383] Ovde opisane farmaceutske kompozicije mogu biti u obliku tečnosti, na primer, eliksir, sirup, rastvor, emulzija ili suspenzija. Tečnost može biti za oralnu primenu ili za primenu pomoću injekcije, kao dva primera. Kada su namenjene za oralnu primenu, ovde opisane farmaceutske kompozicije tipično sadrže, pored predmetnih jedinjenja, jedan ili više od agenasa za zaslađivanje, konzervanasa, boja/koloranata i pojačivača ukusa. U kompoziciju namenjenu za primenu pomoću injekcije, može biti uključen jedan ili više od surfaktanta, konzervansa, agensa za vlaženje, agensa za disperziju, agensa za suspendovanje, pufera, stabilizatora i izotoničnog agensa.
[0384] Ovde opisane tečne farmaceutske kompozicije, bilo da su rastvori, suspenzije ili drugi slični oblici, mogu uključivati jedan ili više od sledećih adjuvanasa: sterilne razblaživače kao što je voda za injekcije, fiziološki rastvor, poželjno fiziološki rastvor, Ringerov (Ringer's) rastvor, izotonični natrijum hlorid, fiksna ulja kao što su sintetički mono ili digliceridi koji mogu poslužiti kao rastvarač ili medijum za suspendovanje, polietilen glikoli, glicerin, propilen glikol ili drugi rastvarači; antibakterijske agense kao što su benzil alkohol ili metil paraben; antioksidanse kao što su askorbinska kiselina ili natrijum bisulfit; helatne agense kao što je etilendiamintetrasirćetna kiselina; pufere kao što su acetati, citrati ili fosfati i agense za podešavanje toničnosti kao što su natrijum hlorid ili dekstroza. Parenteralni preparati mogu se zatvoriti u ampule, špriceve za jednokratnu upotrebu ili staklene ili plastične bočice sa više doza. Poželjni adjuvans je fiziološki rastvor. Injektabilna farmaceutska kompozicija je poželjno sterilna.
[0385] Ovde opisana tečna farmaceutska kompozicija namenjena bilo za parenteralnu ili oralnu primenu treba da sadrži količinu ovde opisanog jedinjenja tako da se dobije odgovarajuća doza.
1
[0386] Ovde opisane farmaceutske kompozicije mogu biti namenjene za topikalnu primenu, u kom slučaju nosač može prikladno da sadrži bazu rastvora, emulzije, masti ili gela. Baza, na primer, može da sadrži jedno ili više od sledećeg: vazelin, lanolin, polietilen glikole, pčelinji vosak, mineralno ulje, razblaživače kao što su voda i alkohol, i emulgatore i stabilizatore. Agensi za zgušnjavanje mogu biti prisutni u farmaceutskoj kompoziciji za topikalnu primenu. Ukoliko je namenjena za transdermalnu primenu, kompozicija može uključivati transdermalni flaster ili uređaj za jontoforezu.
[0387] Ovde opisane farmaceutske kompozicije mogu biti namenjene za rektalnu primenu, u obliku, na primer, supozitorije, koja će se istopiti u rektumu i osloboditi lek. Kompozicije za rektalnu primenu mogu sadržati uljastu bazu kao pogodan neiritirajući ekscipijens. Takve baze uključuju, bez ograničavanja, lanolin, kakao puter i polietilen glikol.
[0388] Ovde opisane farmaceutske kompozicije mogu uključivati različite materijale, koji modifikuju fizički oblik čvrste ili tečne dozne jedinice. Na primer, kompozicija može uključivati materijale koji formiraju omotač oko aktivnih sastojaka. Materijali koji formiraju omotač su tipično inertni, i mogu biti odabrani od, na primer, šećera, šelaka, i drugih enteričkih agenasa za oblaganje. Alternativno, aktivni sastojci mogu biti zatvoreni u želatinoznu kapsulu.
[0389] Ovde opisane farmaceutske kompozicije mogu biti pripremljene u doznim jedinicama koje se mogu primeniti kao aerosol. Termin aerosol se upotrebljava za označavanje raznih sistema u opsegu od onih koloidne prirode do sistema koji se sastoje od pakovanja pod pritiskom. Isporuka može biti pomoću tečnog ili komprimovanog gasa ili odgovarajućim pumpnim sistemom koji dozira aktivne sastojke. Aerosoli ovde opisanih jedinjenja mogu biti isporučeni u jednofaznim, dvofaznim, ili trofaznim sistemima kako bi se isporučio aktivni sastojak(ci). Isporuka aerosola uključuje neophodan kontejner, aktivatore, ventile, podkontejnere, i slično, koji zajedno mogu činiti komplet. Onaj sa iskustvom u struci, bez nepotrebnog eksperimentisanja, može odrediti poželjne aerosole.
[0390] Ovde opisane farmaceutske kompozicije mogu biti pripremljene metodologijom dobro poznatom u farmaceutskoj struci. Na primer, farmaceutska kompozicija namenjena za primenu injekcijom može se pripremiti kombinovanjem ovde opisanog jedinjenja sa sterilnom, destilovanom vodom tako da se formira rastvor. Može se dodati surfaktant kako bi se olakšalo formiranje homogenog rastvora ili suspenzije. Surfaktanti su jedinjenja koja nekovalentno interaguju sa ovde opisanim jedinjenjem kako bi se olakšalo rastvaranje ili homogena suspenzija jedinjenja u vodenom sistemu za isporuku.
2
[0391] Ovde opisana jedinjenja, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, primenjuju se u terapijski efikasnoj količini, koja će varirati u zavisnosti od niza faktora uključujući aktivnost specifičnog jedinjenja koje se koristi; metaboličku stabilnost i dužinu delovanja jedinjenja; starost, telesnu težinu, opšte zdravlje, pol, i ishranu pacijenta; način i vreme primene; stopu izlučivanja; kombinaciju lekova; težinu određenog poremećaja ili stanja; i terapije kojoj je subjekt podvrgnut.
[0392] Ovde opisana jedinjenja, ili njihovi farmaceutski prihvatljivi derivati, takođe mogu da se primenjuju istovremeno sa, pre, ili posle primene jednog ili više drugih terapijskih agenasa. Takva kombinovana terapija uključuje primenu jedne formulacije farmaceutske doze koja sadrži ovde opisano jedinjenje i jedan ili više dopunskih aktivnih agenasa, kao i primenu ovde opisanog jedinjenja i svakog aktivnog agensa u sopstvenoj odvojenoj formulaciji farmaceutske doze. Na primer, ovde opisano jedinjenje i drugi aktivni agens mogu se primeniti pacijentu zajedno u jednoj kompoziciji za oralno doziranje kao što je tableta ili kapsula, ili se svaki agens primenjuje u odvojenim formulacijama za oralno doziranje. Kada se upotrebljavaju odvojene formulacije za doziranje, ovde opisana jedinjenja i jedan ili više dopunskih aktivnih agenasa mogu se primeniti suštinski u isto vreme, tj. istovremeno, ili u odvojenim vremenima, tj. uzastopno; podrazumeva se da kombinovana terapija uključuje sve ove režime.
[0393] Sledeći primeri ilustruju različite postupke pravljenja ovde opisanih jedinjenja, tj. jedinjenja Formule I i srodnih formula. Podrazumeva se da onaj sa iskustvom u struci može da napravi ova jedinjenja sličnim postupcima ili kombinovanjem drugih postupaka poznatih onom sa iskustvom u struci. Takođe se podrazumeva da bi onaj sa iskustvom u struci mogao da napravi, na sličan način kao što je opisano u nastavku, druga jedinjenja Formule I koja nisu specifično ilustrovana u nastavku upotrebom odgovarajućih početnih komponenti i modifikovanjem parametara sinteze po potrebi. Generalno, početne komponente mogu se dobiti iz izvora kao što su Sigma Aldrich, Lancaster Synthesis, Inc., Maybridge, Matrix Scientific, TCI, i Fluorochem USA, itd. ili sintetisati u skladu sa izvorima poznatim onima sa iskustvom u struci (videti, na primer, Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5th edition (Wiley, December 2000)) ili pripremiti kao što je ovde opisano.
[0394] Sledeći primeri su obezbeđeni u svrhu ilustracije, ne ograničavanja. Neki primeri su sintetički intermedijeri ili referentni primeri (npr. Primer 1.21, Primer 1.24, Primer 1.25, itd.).
PRIMERI
Primer 1: Opšte sintetičke procedure.
[0395]
4
Primer 1.1: Opšta procedura 1 - Instalacija trifluoroacetamida.
[0396] U mešanu suspenziju amina u 1,4-dioksanu dodat je trifluorosirćetni anhidrid (1,1 ekvivalenta). Reakciona smeša je prešla iz suspenzije u rastvor i ponovo u suspenziju. Napredak reakcije je praćen pomoću TLC i/ili HPLC-MS radi završetka. Kada je početni materijal u potpunosti potrošen, reakcija je razblažena sa heksanima ili dietil etrom, filtrirana na Bihnerovom (Buchner) levku i rezultujuće čvrste supstance su osušene pod redukovanim pritiskom da daju čist trifluoracetamid.
Primer 1.2: Opšta procedura 2.
Postupak A: DCC/DMAP posredovano formiranje N-acil sulfonamida.
[0397] U mešani rastvor kiseline u dihlorometanu dodat je rastvor sulfonamida (1,3 ekvivalenta, u dihlorometanu, N,N-dimetilformamidu, ili njihovoj smeši, po potrebi). Dodat je dicikloheksilkarbodiimid (1,2 ekvivalenta) i zatim N,N-dimetilaminopiridin (1,2 ekvivalenta). Tok reakcije je praćen pomoću HPLC-MS (tipično 16 h) i višak nusproizvoda mogao je da precipitira dodavanjem dietil etra. Čvrste supstance su uklonjene filtracijom i isprane sa 1:1 dietil etar/dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi su koncentrovani, i ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu ili opciono prep-HPLC da da željeni N-acil sulfonamid.
Postupak B: DCC ili EDCI/DMAP posredovano formiranje N-acil sulfonamida.
[0398] U mešani rastvor kiseline u dihlorometanu, etil acetatu ili njihovoj smeši dodat je rastvor sulfonamida (1,3 ekvivalenta, u dihlorometanu, etil acetatu ili N,N-dimetilformamidu, ili njihovoj smeši, po potrebi). Dodat je dicikloheksilkarbodiimid ili EDCI (1,2 ekvivalenta) i zatim N,N-dimetilaminopiridin (1,2 ekvivalenta). Tok reakcije je praćen pomoću HPLC-MS (tipično 16 h) i višak nusproizvoda mogao je da precipitira dodavanjem dietil etra. Čvrste supstance su uklonjene filtracijom i isprane sa 1:1 dietil etar/dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi su koncentrovani, i ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu ili opciono prep-HPLC da da željeni N-acil sulfonamid.
Primer 1.3: Opšta procedura 3 Alternativa - AcBt posredovano formiranje N-acil sulfonamida Ova procedura je prilagođena iz one opisane u ARKIVOC 2004 (xii), 14-22.
Primer 1.4: Opšta procedura 4 - Saponifikacija trifluoroacetamida.
[0399] U rastvor konstrukta koji sadrži trifluoroacetamid u 1,4-dioksanu ili metanolu dodat je litijum hidroksid (10 ekvivalenata) i voda (10% zapr./zapr.). Reakcija je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi ili opciono zagrejana do 50° C. Tok reakcije je praćen pomoću HPLC-MS. Po završetku, isparljive supstance su uklonjene pod redukovanim pritiskom, pH vodenog sloja je podešen ukoliko je potrebno i ispran sukcesivno sa dihlorometanom ili etil acetatom. Organske faze su pulirane, osušene preko MgSO4, filtrirane i koncentrovane. Reakcioni proizvod je bilo korišćen "kao što jeste" ili je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu po potrebi.
Primer 1.4.1: Opšta procedura 4.1 – Saponifikacija amida/estra.
[0400] U rastvor konstrukta koji sadrži amid/estar u 1,4-dioksanu ili metanolu dodat je litijum hidroksid (10 ekvivalenata) i voda (10% zapr./zapr.). Reakcija je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi ili opciono zagrejana do 50° C. Tok reakcije je praćen pomoću HPLC-MS. Po završetku, isparljive supstance su uklonjene pod redukovanim pritiskom, pH vodenog sloja je podešen ukoliko je potrebno i ispran sukcesivno sa dihlorometanom ili etil acetatom. Organske faze su pulirane, osušene preko MgSO4, filtrirane i koncentrovane. Reakcioni proizvod je bilo korišćen "kao što jeste" ili prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu po potrebi.
Primer 1.5: Opšta procedura 5 - DIC/Cu(II) posredovano formiranje peptidne veze.
[0401] U mešani rastvor karboksilne kiseline u minimalnoj količini od 30% N,N-dimetilformamida u dihlorometanu dodati su 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid (0,95 ekviv.), 1-hidroksi-7-azabenzotriazol (1,0 ekviv.), amin (0,33 ekviv.) i anhidrovani bakar (II) hlorid (1,0 ekviv.) uzastopno sa kratkom pauzom između svakog dopunskog reagensa. Mešanje je nastavljeno na sobnoj temperaturi i napredak reakcije je praćen pomoću HPLC-MS. Po završetku, isparljive supstance su uklonjene pod redukovanim pritiskom i rezidualni materijal je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu ili HPLC na reverznim fazama da bi se isporučio željeni amid adekvatne čistoće.
Primer 1.6: Opšta procedura 6 - HATU posredovano formiranje peptidne veze.
[0402] U mešani rastvor karboksilne kiseline u minimalnoj količini dihlorometana ili N,N-dimetilformamida ili njihovoj smeši, na 0 °C dodat je HATU (1,05-1,2 ekvivalenta) i bilo N,N-diizopropilamin (2-4 ekvivalenta) ili 2,4,6-kolidin (2-4 ekvivalenta). Mešanje je nastavljeno tokom kratkog indukcionog perioda (5-20 minuta) u kom vremenu je reakcija napunjena rastvorom amina u dihlorometanu. Reakciji je omogućeno da se zagreje do sobne temperature i praćeno je napredovanje pomoću HPLC-MS. Po završetku, isparljive supstance su uklonjene pod redukovanim pritiskom i rezidualni materijal je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu ili HPLC na reverznim fazama da bi se isporučio amid adekvatne čistoće.
Primer 1.7: Opšta procedura 7 - Uklanjanje Fmoc grupe.
[0403] Fmoc-zaštićeni peptidni konstrukt je rastvoren u 20% piperidina u N,N-dimetilformamidu. Tok reakcije je praćen pomoću HPLC-MS. Kada je završena, sve isparljive supstance su uklonjene pod redukovanim pritiskom da bi se dobio ostatak koji je bilo prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu ili upotrebljen direktno u sledećem koraku.
Primer 1.8: Opšta procedura 8 - N-acilacija amina upotrebom NHS-aktiviranih estara.
[0404] U rastvor amina u minimalnoj količini N,N-dimetilformamida dodat je odgovarajući estar koji sadrži N-hidroksisukcinimid (1,5 ekvivalenata) i opciono diizopropilamin (2-4 ekvivalenta). Napredak reakcije je praćen pomoću HPLC-MS (tipično ∼16 h) u kom trenutku su sve isparljive supstance uklonjene pod redukovanim pritiskom. Ostatak je zatim prečišćen bilo pomoću hromatografije na silika gelu ili HPLC na reverznim fazama da da željeni amidni proizvod.
Primer 1.9: Opšta procedura 9 - Uklanjanje Boc grupe.
[0405] U rastvor Boc-zaštićenog konstrukta u dihlorometanu dodato je 10% zapr./zapr. trifluorosirćetne kiseline. Tok reakcije je praćen pomoću HPLC-MS. Po završetku, sve isparljive supstance su uklonjene pod redukovanim pritiskom. Rezidualni materijal je prečišćen bilo pomoću HPLC na reverznim fazama, hromatografije na silika gelu ili precipitacije iz smeše hladnog metanola/dihlorometana/dietil etra.
Primer 1.9.1: Opšta procedura 9.1 - Uklanjanje Boc grupe i t-Bu estra.
[0406] U rastvor Boc-zaštićenog amina ili t-Bu estra u dihlorometanu dodato je 10-20% zapr./zapr. trifluorosirćetne kiseline. Tok reakcije je praćen pomoću HPLC-MS. Po završetku, sve isparljive supstance su uklonjene pod redukovanim pritiskom. Rezidualni materijal je prečišćen bilo pomoću HPLC na reverznim fazama, hromatografije na silika gelu ili precipitacije iz smeše hladnog metanola/dihlorometana/dietil etra.
Primer 1.10: Fmoc-Val-Cit-OH: (S)-2-((S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)-5-ureidopentanska kiselina, Fmoc-Valin-Citrulin-OH, Fmoc-VC-OH.
[0407]
[0408] Naslovno jedinjenje je pripremljeno u skladu sa Dubowchik et al., Bioconjugate Chem., 2002, 13, 855-869.
[0409]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,56 (s, 1H), 8,21 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,76 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 7,49 - 7,39 (m, 3H), 7,38 - 7,23 (m, 2H), 5,96 (t, J = 5,9 Hz, 1H), 5,40 (s, 2H), 4,34 - 4,09 (m, 4H), 3,93 (dd, J = 9,1, 7,1 Hz, 1H), 3,39 (q, J = 7,0 Hz, 3H), 2,96 (q, J = 6,5 Hz, 2H), 1,97 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 1,86 - 1,63 (m, 1H), 1,57 (dtd, J = 13,9, 9,0, 5,4 Hz, 1H), 1,41 (dhept, J = 13,2, 6,9 Hz, 2H), 0,88 (dd, J = 13,3, 6,7 Hz, 6H). C26H32N4O6izrač. m/z 497,23, pronađeno [M+H]<+>497,19.
Primer 1.11: (S)-2-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-5-ureidopentanska kiselina, Boc-valin-citrulin-OH, Boc-VC-OH.
1
[0411] Naslovno jedinjenje je sintetisano u skladu sa US2010/0233190 A1 sa odgovarajućim spektroskopskim podacima.
Primer 1.12: MC-NHS: 2,5-dioksopirolidin-1-il 6-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)heksanoat.
[0412]
[0413] U mešani rastvor 6-aminokaproinske kiseline (10,0 g, 76,2 mmol, 1,0 ekv.) u sirćetnoj kiselini (75 ml), dodat je maleinski anhidrid (7,85 g, 80,0 mmol, 1,05 ekv.). Čvrstim supstancama je trebalo nekoliko minuta da se rastvore, i zatim posle oko 5 min, bele čvrste supstance su počele da se pojavljuju. Posle sat vremena, suspenzija se zgusnula do belog kolača. Ovaj materijal je prenet u levak sa poroznim staklenim filterom i ispran sa toluenom i osušen in vacuo uz zagrevanje kako bi se uklonili svi tragovi sirćetne kiseline.
[0414] Intermedijerni prah je stavljen u toluen (250 ml), dodat je trietilamin (21,3 ml, 152 mmol, 2,0 ekv.), i smeša je zagrejana do refluksa sa Din-Stark (Dean-Stark) zamkom. Posle 5 h refluksa, smeša je ohlađena i bistri toluenski sloj je dekantovan od ostatka lepljivog ostatka u flasku. Toluen je uklonjen in vacuo da bi se dobila trietilamin so 6-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)heksanoata. So je ponovo rastvorena u toluenu, i dodata je mala količina sirćetne kiseline, i zatim je koncentrovana. Zatim je smeša stavljena u 50% zasićeni natrijum bikarbonat, i dodat je 1 M HCl da se pH podesi na 3, formirajući mlečni precipitat. Ovo je ekstrahovano tri puta sa EtOAc, kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum
1 1
sulfata, filtrirani, i koncentrovani in vacuo da bi se dobio čist 6-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)heksanoat (3,08 g, 19%).
[0415] U mešani rastvor 6-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)heksanoata (3,08 g, 14,6 mmol, 1,0 ekv.) i N-hidroksisukcinimida (1,76 g, 15,3 mmol, 1,05 ekv.) u EtOAc (30 ml) na 0 °C, dodat je dicikloheksilkarbodiimid (3,16 g, 15,3 mmol, 1,05 ekv.). Reakciji je zatim omogućeno da se zagreje do sobne temperature. Posle 20 h, reakcija je filtrirana i isprana sa EtOAc i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije da bi se dobilo naslovno jedinjenje (2,16 g, 48%) kao bistro ulje koje se polako solidifikovalo u voštanu belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 6,71 (s, 2H), 3,56 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,86 (s, 4H), 2,63 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,80 (p, J = 7,4 Hz, 2H), 1,73 - 1,57 (m, 2H), 1,50 - 1,35 (m, 2H). m/z izrač. za C14H16N2O6= 308,10. Pronađeno [M+H]<+>= 309,13. Rf= 0,28 (50% EtOAc/Hex).
Primer 1.13: MT-OH: 3-(2-(2-(2-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)etoksi)etoksi)etoksi)propanska kiselina.
[0416]
[0417] Naslovno jedinjenje je pripremljeno u skladu sa Warnecke, A., Kratz, F. Bioconjugate Chemistry 2003, 14, 377-387.
[0418]<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 6,74 (s, 2H), 3,87 - 3,72 (m, 4H), 3,72 - 3,62 (m, 10H), 2,73 - 2,64 (m, 2H). m/z izrač. za C13H29NO<7>= 301,12. Pronađeno [M+H]<+>= 302,14.
Primer 1.14: MT-NHS: 2,5-dioksopirolidin-1-il 3-(2-(2-(2-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)etoksi)etoksi)etoksi)propanoat.
[0419]
1 2
[0420] MT-OH (2,6 g, 8,6 mmol, 1,0 ekv.) je tretiran sa dicikloheksilkarbodiimidom (1,87 g, 9,06 mmol, 1,05 ekv.), i N-hidroksisukcinimidom (1,04 g, 6,06 mmol, 1,05 ekv.) u 30 ml 5:1 EtOAc/dioksan na sobnoj temperaturi. Posle 36 h, smeša je filtrirana, isprana sa EtOAc, i ostatak je prečišćen pomoću fleš hromatografije da bi se dobilo naslovno jedinjenje (309 mg, 9,0%) kao bistro ulje zajedno sa početnim materijalom (1,31 g, 50% izdvojeno).
[0421]<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 6,72 (s, 2H), 3,87 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,74 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 3,70 - 3,58 (m, 10H), 2,93 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,86 (s, 4H), 1,32 - 1,19 (m, 2H). m/z izrač. za C17H22N2O9= 398,13. Pronađeno [M+H]<+>= 399,15, [M+Na]<+>= 421,14. Rf= 0,59 (10% (5% AcOH/MeOH)/10% Hex/CH2Cl2).
Primer 1.15: MT-VC-OH: (14R,17R)-1-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-14-izopropil-12,15-diokso-17-(3-ureidopropil)-3,6,9-trioksa-13,16-diazaoktadekan-18-oična kiselina.
[0422]
Postupak A
[0423] U rastvor (R)-2-((R)-2-(terc-butoksikarbonilamino)-3-metilbutanamido)-5-ureidopentanske kiseline (Boc-VC-OH, 0,600 g, 1,602 mmol) u dihlorometanu (2,5 ml) dodata je trifluorosirćetna kiselina (2,5 ml). Tok reakcije je praćen pomoću HPLC za potrošnju početnog materijala i zatim je koncentrovana pod redukovanim pritiskom, resuspendovana u toluenu, koncentrovana pod redukovanim pritiskom i ostavljena pod visokim vakuumom tokom 4 sata. Deo proizvoda (H-VC-OH. TFA, 0,5 g, 1,287 mmol) je suspendovan u 1,4-dioksanu (0,5 ml) i MT-NHS (0,512 g, 1,287 mmol) je dodat u jednom
1
obroku, praćeno di-izopropiletilaminom (0,90 ml, 4 ekviv.) i reakciji je omogućeno da se meša preko noći. Reakcija je koncentrovana do suve i rezultujuće ulje je rastvoreno u metanolu pre nego što je prečišćeno pomoću preparativne HPLC. Liofilizacija željenih frakcija dala je naslovno jedinjenje kao beli prah (0,351 g).
Postupak B
[0424] Naslovno jedinjenje je pripremljeno u skladu sa procedurom iznetom u WO 2015095953 A1.
Primer 1.16: (S)-2-amino-3-fenil-N-(4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenilsulfonil)propanamid (Jedinjenje 1).
[0425]
[0426] Pripremljeno od Boc-fenilalanina i 2,2,2-trifluoro-N-(4-sulfamoilfenil)acetamida u skladu sa Opštim procedurama 2 i 9.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,42 (s, 1H), 7,84 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,73 - 7,64 (m, 1H), 7,69 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,24 - 7,14 (m, 3H), 7,13 - 7,06 (m, 2H), 3,65 - 3,60 (m, 1H), 3,06 (dd, J = 14,2, 5,1 Hz, 1H), 2,91 (dd, J = 14,1, 7,1 Hz, 1H). C17H16F3N3O4S izrač. m/z = 415,08 pronađeno [M+H]<+>= 416,5.
Primer 1.17: (S)-2-amino-3-fenil-N-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)benzil)sulfonil)propanamid (Jedinjenje 2).
[0427]
1 4
[0428] Pripremljeno od Boc-fenilalanina i 2,2,2-trifluoro-N-(4-sulfamoilfenil)acetamida (Primer 1.39) u skladu sa Opštim procedurama 3 i 9.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,76 -7,71 (m, 2H), 7,58 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,36 - 7,21 (m, 8H), 4,34 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 4,30 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 3,62 (dd, J = 8,2, 4,6 Hz, 1H), 3,21 - 3,09 (m, 1H), 2,89 (dd, J = 14,3, 8,3 Hz, 1H). C18H18F3N3O4S izrač. m/z = 429,10 pronađeno [M+H]<+>= 430,7.
Primer 1.18: terc-butil (S)-1-(((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-(4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenilsulfonamido)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-ilkarbamat (Jedinjenje 3).
[0429]
[0430] Naslovno jedinjenje je sintetisano od komercijalno dostupnog Boc-Val-Dip-Dap-OH (0,08 g) i 2,2,2-trifluoro-N-(4-sulfamoilfenil)acetamida upotrebom Opšte procedure 2. C37H58F3N5O10S izrač. m/z = 821,39 pronađeno [M+H]<+>= 823,04.
Primer 1.19: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-(4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenilsulfonamido)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 4).
[0431]
1
[0432] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Jedinjenja 3 i N,N-dimetil valina upotrebom Opštih procedura 9 i 6. C39H63F3N6O9S izrač. m/z = 848,43 pronađeno [M+H]<+>850,11.
Primer 1.20: (S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(4-aminofenilsulfonamido)-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-il)-3-metoksi-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 5).
[0433]
[0434] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Jedinjenja 4 upotrebom Opšte procedure 4. C37H64N6O8S izrač. m/z = 752,45 pronađeno [M+H]<+>754,16.
Primer 1.21: terc-butil (S)-1-(((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)metilsulfonamido)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-ilkarbamat (Jedinjenje 6).
[0435]
[0436] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od komercijalno dostupnog Boc-Val-Dil-Dap-OH preko Opšte procedure 2. C38H60F3N5O10S izrač. m/z = 835,40 pronađeno [M+H]<+>= 836,7.
Primer 1.22: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)metilsulfonamido)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 7).
1
[0438] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Jedinjenja 6 prateći Opštu proceduru 6. C40H65F3N6O9S izrač. m/z = 862,45 pronađeno [M+H]<+>= 863,2.
Primer 1.23: (S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-aminofenil)metilsulfonamido)-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-il)-3-metoksi-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 8).
[0439]
[0440] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Jedinjenja 7 prateći Opštu proceduru 4. C38H66N6O8S izrač. m/z = 766,47 pronađeno [M-C7H8O2S+H]<+>= 599,0 (Fragmentacija kvinon metida i gubitak 4-aminobenzilsulfonata).
Primer 1.24: terc-butil (S)-1-(((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((S)-1-okso-3-fenil-1-(4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenilsulfonamido)propan-2-ilamino)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-ilkarbamat (Jedinjenje 9).
[0441]
1
[0442] Naslovno jedinjenje je sintetisano od komercijalno dostupnog Boc-Val-Dip-Dap-OH (0,07 g) i Jedinjenja 1 upotrebom Opšte procedure 6. C46H67F3N6O11S izrač. m/z = 968,45 pronađeno [M+Na]<+>= 992,1.
Primer 1.25: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((S)-1-okso-3-fenil-1-(4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenilsulfonamido)propan-2-ilamino)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 10).
[0443]
[0444] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Jedinjenja 9 (110 mg) i N,N-dimetil valina upotrebom Opštih procedura 9 i 6. C48H72F3N7O10S izrač. m/z = 995,50 pronađeno [M+H]<+>997,3.
Primer 1.26: (S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((S)-1-(4-aminofenilsulfonamido)-1)-okso-3-fenilpropan-2-ilamino)-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-il)-3-metoksi-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 11).
[0445]
1
[0446] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Jedinjenja 10 (100 mg) upotrebom Opšte procedure 4. C46H73N7O9S izrač. m/z = 899,52 pronađeno [M+H]<+>901,3.
Primer 1.27: terc-butil (S)-1-(((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((S)-1-okso-3-fenil-1-(4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenilmetilsulfonamido)propan-2-ilamino)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-ilkarbamat (Jedinjenje 12).
[0447]
[0448] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od komercijalno dostupnog Boc-Val-Dil-Dap-OH i Jedinjenja 2 prateći Opštu proceduru 6. C47H69F3N6O11S izrač. m/z = 982,47 pronađeno [M+Na]<+>= 1006,2.
Primer 1.28: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((S)-1-okso-3-fenil-1-(4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenilmetilsulfonamido)propan-2-ilamino)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 13).
[0449]
1
[0450] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Jedinjenja 12 i dimetilvalina prateći Opštu proceduru 6. C49H74F3N7O10S izrač. m/z =1009,52 pronađeno [M+H]<+>= 1011,0.
Primer 1.29: (S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((S)-1-(4-aminofenilmetilsulfonamido)-1-okso-3-fenilpropan-2-ilamino)-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-il)-3-metoksi-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 14).
[0451]
[0452] Jedinjenje je pripremljeno od Jedinjenja 13 prateći Opštu proceduru 4. C47H75N7O9S izrač. m/z = 913,53 pronađeno [M-C7H8O2S+Na]<+>= 768,1 (Fragmentacija kvinon metida i gubitak 4-aminobenzilsulfonata).
Primer 1.30: Opšta procedura 10 - Hidrogenacija.
[0453] U rastvor uzorka koji se redukuje bilo u metanolu, etanolu, sirćetnoj kiselini, etil acetatu, njihovoj smeši ili drugom pogodnom rastvaraču dodat je magnetni mešač. Flask koji sadrži mešani rastvor opremljen je dvosmernim adapterom za liniju gasa i evakuisan pod redukovanim pritiskom i napunjen azotom. Ovaj postupak je ponovljen 3 puta. Dodato je 10% Pd/C bilo kao čvrste supstance ili kaše, tipično sa 10 mol% paladijuma u odnosu na reaktant. Posuda je ponovo evakuisana pod redukovanim pritiskom i napunjena balonom koji sadrži vodonik. Reakcija je praćena radi završetka pomoću HPLC-MS i po završetku je filtrirana
11
kroz jastuče celita na levku za filtraciju. Filtrat je koncentrovan pod redukovanim pritiskom i upotrebljen kakav jeste ili prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu ili preparativne HPLC hromatografije.
Primer 1.31: perfluorofenil 3-(2-(2-(2-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)etoksi)etoksi)etoksi)propanoat.
[0454] U mešani rastvor 3-(2-(2-(2-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)etoksi)etoksi)etoksi)propanske kiseline, (Primer 1.13) (2,28 g, 7,57 mmol) u dihlorometanu (100 ml) dodati su 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid hidrohlorid (1,59 g, 1,1 ekv.) i pentafluorofenol (1,53 g, 1,1 ekv.). Reakciji je omogućeno da se meša preko noći, kada je HPLC-MS pokazala da nema preostalog početnog materijala (Rt = 5,30 min, 490,4 m/z, puni gradijent). Sirova reakciona smeša je razblažena zasićenim natrijum bikarbonatom (-20 ml) i smeša je prebačena u levak za odvajanje. Organska faza je isprana slanim rastvorom (-50 ml), osušena preko MgSO4, filtrirana i koncentrovana da da blago žuto ulje. Ulje je rastvoreno u minimalnoj količini dihlorometana i stavljeno na kolonu od 100 g silika gela radi prečišćavanja (Isolera, 10-100% EtOAc u heksanima preko 12 zapremina kolone). Frakcije koje sadrže željeni materijal su pulirane i koncentrovane pod redukovanim pritiskom da daju bezbojno ulje (3,32 g, 94%).
Primer 1.32: (3R,4S,5S)-terc-butil 4-((S)-2-(benziloksikarbonilamino)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoksi-5-metilheptanoat, Cbz-Val-Dil-OtBu.
[0455]
[0456] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od komercijalno dobijenih Cbz-Val-OH i H-Dil-OtBu • HCl prateći Opštu proceduru 6.
[0457]<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7,40 - 7,30 (m, 5H), 5,54 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 5,12 (s, 2H), 4,73 (s, 1H), 4,54 (dd, J = 9,2, 5,6 Hz, 1H), 3,91 (s, 1H), 3,37 (s, 3H), 2,98 (s, 3H), 2,47 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 2,33 (dd, J = 15,6, 9,1 Hz, 1H), 2,07 - 1,96 (m, 1H), 1,84 1,60 (m, 1H), 1,48 (s, 9H), 1,45 - 1,32 (m, 2H), 1,04 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,98 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,94 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,86 (t, J = 7,4 Hz, 3H). C27H44N2O6izrač. m/z = 492,32 pronađeno [M+H]<+>= 515,8 [M+Na]<+>. Rf= 0,78 (50% EtOAc/Hex).
Primer 1.33: (3R,4S,5S)-4-((S)-2-(((benziloksi)karbonil)amino)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoksi-5-metilheptanska kiselina, Cbz-Val-Dil-OH.
[0458]
[0459] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Cbz-Val-Dil-OtBu (Primer 1.32) upotrebom Opšte procedure 9. C23H36N2O6izrač. m/z = 436,26 pronađeno [M+Na]<+>459,81. 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 7,47 - 7,22 (m, 5H), 5,21 - 4,99 (m, 2H), 4,83 - 4,54 (m, 1H), 4,39 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,96 (s, 1H), 3,43 - 3,33 (s, 3H), 3,07 (s, 3H), 2,63 (dd, J = 15,9, 2,9 Hz, 1H), 2,38 (dd, J = 15,8, 9,3 Hz, 1H), 2,15 - 1,95 (m, 1H), 1,83 (s, 1H), 1,52 - 1,30 (m, 1H), 1,07 - 0,91 (m, 9H), 0,85 (t, J = 7,4 Hz, 3H).
Primer 1.34: (3R,4S,5S)-terc-butil 4-((S)-2-amino-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoksi-5-metilheptanoat, H-Val-Dil-OtBu.
[0460]
[0461] Naslovno jedinjenje je generisano od Cbz-Val-Dil-OtBu (438 mg, 0,889 mmol) u skladu sa Opštom procedurom 10, da bi se dobio željeni proizvod (288 mg, 90%) kao prozirnig film.<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 4,76 (s, 1H), 3,92 (s, 1H), 3,50 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 3,38 (s, 3H), 2,92 (s, 3H), 2,48 (dd, J = 15,7, 3,1 Hz, 1H), 2,35 (dd, J = 15,6, 8,8 Hz, 1H), 1,93 (dq, J = 10,9, 6,5 Hz, 1H), 1,82 - 1,60 (m, 1H), 1,51 - 1,46 (m, 11H), 1,05 - 0,85 (m, 12H). C19H38N2O4izrač. m/z = 358,28 pronađeno [M+Na]<+>= 381,8.
Primer 1.35: (3R,4S,5S)-terc-butil 4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoksi-5-metilheptanoat, Dov-Val-Dil-OtBu.
[0462]
[0463] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od H-Val-Dil-OtBu i N,N-dimetilvalina prateći Opštu proceduru 6.
[0464]<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 7,09 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,79 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 4,00 - 3,81 (m, 1H), 3,75 (s, 1H), 3,37 (s, 3H), 3,26 (s, 1H), 3,00 (s, 3H), 2,74 (s, 6H), 2,49 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 2,38 - 2,20 (m, 2H), 2,13 - 2,05 (m, 1H), 1,81 - 1,62 (m, 1H), 1,51 - 1,43 (m, 10H), 1,33 (s, 1H), 1,18 - 0,89 (m, 15H), 0,83 (t, J = 7,2 Hz, 3H). C26H51N3O5izrač. m/z = 485,38 pronađeno [M+Na]<+>= 508,9. Rf= 0,36 (5% MeOH/CH2Cl2).
Primer 1.36: (3R,4S,5S)-terc-butil 4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoksi-5-metilheptanska kiselina, Dov-Val-Dil-OH.
[0465]
[0466] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Dov-Val-Dil-OtBu prateći Opštu proceduru 9.
[0467]<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 4,98 (t, J = 10,0 Hz, 1H), 4,65 (dd, J = 9,3, 3,1 Hz, 1H), 4,08 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 3,61 - 3,53 (m, 1H), 3,39 (s, 3H), 3,24 (s, 3H), 3,13 (s, 3H), 2,93 (s, 3H), 2,77 (dd, J = 17,0, 9,8 Hz, 1H), 2,66 (dd, J = 17,3, 1,9 Hz, 1H), 2,31 - 2,26 (m, 1H), 2,07 (dt, J = 10,8, 5,5 Hz, 1H), 1,97 - 1,85 (m, 1H), 1,29 - 1,24 (m, 1H), 1,13 (d, J =
11
6,7 Hz, 3H), 1,08 - 1,01 (m, 6H), 1,01 - 0,95 (m, 6H), 0,90 - 0,81 (m, 1H), 0,77 (t, J = 6,9 Hz, 3H) C22H43N3O5izrač. m/z = 429,32. pronađeno [M+H]<+>= 430,8.
Primer 1.37: terc-butil (5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sek-butil)-1-(9H-fluoren-9-il)-5,8-diizopropil-12-metoksi-4,10-dimetil-3,6,9-triokso-2-oksa-4,7,10-triazatetradekan-14-oat, Fmoc-(Me)Val-Val-Dil-OtBu.
[0468]
[0469] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Fmoc-(Me)-(L)-Valin-OH i H-Val-Dil-OtBu u skladu sa Opštom procedurom 6. C40H59N3O7izrač. m/z = 693,44 pronađeno [M+H]<+>694,98.
Primer 1.38: (5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sek-butil)-1-(9H-fluoren-9-il)-5,8-diizopropil-12-metoksi-4,10-dimetil-3,6,9-triokso-2-oksa-4,7,10-triazatetradekan-14-oična kiselina, Fmoc-(Me)Val-Val-Dil-OH.
[0470]
[0471] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Fmoc-(Me)Val-Val-Dil-OtBu upotrebom Opšte procedure 9. C36H51N3O7izrač. m/z = 637,37 pronađeno [M+H]<+>638,91.
Primer 1.39: 2,2,2-trifluoro-N-(4-sulfamoilfenil)acetamid.
[0472]
[0473] U mešanu suspenziju sulfanilamida (1,72 g, 10 mmol) u dioksanu (20 ml) dodat je trifluorosirćetni anhidrid (1,69 ml, 1,2 ekviv.). Čvrste supstance su se polako rastvorile da bi se kreirao uniforman rastvor i posle kratkog perioda vremena formiran je novi skup čvrstih supstanci. Reakcija je razblažena dietil etrom (100 ml) i rezultujuća suspenzija je filtrirana na Bihnerovom levku. Čvrste supstance su sakupljene i osušene pod redukovanim pritiskom da bi se dobilo naslovno jedinjenje adekvatne čistoće za dalju upotrebu (2,60 g, 97%).
Primer 1.40: (2R,3R)-3-metoksi-2-metil-3-((S)-pirolidin-2-il)-N-(4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenilsulfonil)propanamid.
[0474]
[0475] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od komercijalno dobijenih Boc-Dap-OH i 2,2,2-trifluoro-N-(4-sulfamoilfenil)acetamida prateći Opšte procedure 2 i 9.
[0476]<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,06 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,92 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 3,69 (dd, J = 6,6, 3,0 Hz, 1H), 3,48 (s, 3H), 3,51 - 3,39 (m, 1H), 3,33 - 3,14 (m, 2H), 2,64 (p, J = 7,0 Hz, 1H), 2,06 - 1,68 (m, 4H), 1,19 (d, J = 7,1 Hz, 3H). C17H22F3N3O5S izrač. m/z = 437,12 pronađeno [M+H]<+>= 438,6.
Primer 1.41: Benzil ((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-il)karbamat.
[0477]
11
[0478] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Cbz-Val-Dil-OH i proizvoda iz Primera 1.40 u skladu sa Opštom procedurom 2. C40H56F3N5O10S izrač. m/z = 855,37 pronađeno [M+H]<+>857,07.
Primer 1.42: (S)-2-amino-N-((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamid.
[0479]
[0480] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.41 u skladu sa Opštom procedurom 10. C32H50F3N5O8S izrač. m/z = 721,33 pronađeno [M+H]<+>722,70.
Primer 1.43: terc-butil (3R,4S,5S)-4-((S)-2-((R)-1-izopropilpiperidin-2-karboksamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoksi-5-metilheptanoat.
[0481]
[0482] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od (R)-1-izopropilpiperidin-2-karboksilne kiseline i H-Val-Dil-OtBu u skladu sa Opštom procedurom 6. C28H53N3O5izrač. m/z = 511,40 pronađeno [M+H]<+>512,77.
11
Primer 1.44: (3R,4S,5S)-4-((S)-2-((R)-1-izopropilpiperidin-2-karboksamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoksi-5-metilheptanska kiselina.
[0483]
[0484] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od terc-butil proizvoda iz Primera 1.43 u skladu sa Opštom procedurom 9. C24H45N3O5izrač. m/z = 455,34 pronađeno [M+H]<+>456,70.
Primer 1.45: (R)-1-izopropil-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-il)piperidin-2-karboksamid (Jedinjenje 15).
[0485]
[0486] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.40 i proizvoda iz Primera 1.44 u skladu sa Opštom procedurom 6. C41H65F3N6O9S izrač. m/z = 874,45 pronađeno [M+H]<+>876,0.
Primer 1.46: (R)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-aminofenil))sulfonamido)-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-il)-3-metoksi-5-metil-1-oksoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-il)-1-izopropilpiperidin-2-karboksamid (Jedinjenje 16).
[0487]
11
[0488] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Jedinjenja 15 u skladu sa Opštom procedurom 4. C39H66N6O8S izrač. m/z = 778,47 pronađeno [M+H]<+>780,06.
Primer 1.47: terc-butil (1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi)-2-metil-3-okso-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-il)amino)-2-metil-1-oksopropan-2-il)karbamat.
[0489]
[0490] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.42 i komercijalno dobijene α-(Boc-amino)izobuterne kiseline u skladu sa Opštom procedurom 6. C41H65F3N6O11S izrač. m/z = 906,44 pronađeno [M+H]<+>907,80.
Primer 1.48: terc-butil (1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-aminofenil)sulfonamido)-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-il)-3-metoksi-5-metil-1-oksoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-il)amino)-2-metil-1-oksopropan-2-il)karbamat.
[0491]
11
[0492] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.47 u skladu sa Opštom procedurom 4. C39H66N6O10S izrač. m/z = 810,46 pronađeno [M+H]<+>811,84.
Primer 1.49: (S)-2-(2-amino-2-metilpropanamido)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-aminofenil)sulfonamido)-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-il)-3-metoksi-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 17).
[0493]
[0494] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.48 u skladu sa Opštom procedurom 9. C34H58N6O8S izrač. m/z = 710,40 pronađeno [M+H]<+>711,77.
Primer 1.50 terc-butil (6S,9S,12S,13R)-12-((S)-sek-butil)-9-izopropil-13-metoksi-2,2,5,11-tetrametil-4,7,10-triokso-6-(2-fenilpropan-2-il)-3-oksa-5,8,11-triazapentadekan-15-oat.
[0495]
[0496] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od (S)-2-((terc-butoksikarbonil)(metil)amino)-3-metil-3-fenilbutanske kiseline (pripremljene u skladu sa WO 2015095953 A1) i H-Val-Dil-
11
OtBu upotrebom Opšte procedure 6. C36H61N3O7izrač. m/z = 647,45 pronađeno [M+H]<+>649,12.
Primer 1.51: (3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)-3-fenilbutanamido)butanamido)-3-metoksi-5-metilheptanska kiselina.
[0497]
[0498] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.50 u skladu sa Opštom procedurom 9. C27H45N3O5izrač. m/z = 491,34 pronađeno [M+H]<+>492,73.
Primer 1.52: terc-butil (1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi)-2-metil-3-okso-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-il)amino)-2-metil-1-oksopropan-2-il)karbamat (Jedinjenje 18).
[0499]
[0500] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.51 i proizvoda iz Primera 1.42 u skladu sa Opštom procedurom 6. C44H65F3N6O9S izrač. m/z = 910,45 pronađeno [M+H]<+>911,91.
Primer 1.53 (S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-aminofenil)sulfonamido)-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-il)-3-metoksi-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-N,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)-3-fenilbutanamido)butanamid (Jedinjenje 19).
12
[0502] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.52 upotrebom Opšte procedure 4. C42H66N6O8S izrač. m/z = 814,47 pronađeno [M+H]<+>816,08.
Primer 1.54: terc-butil ((S)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R))-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-il)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-il)(metil)karbamat.
[0503]
[0504] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.42 i komercijalno dobijenog Boc-(Me)-(L)-Valin-OH upotrebom Opšte procedure 6. C43H69F3N6O11S izrač. m/z = 934,47 pronađeno [M+H]<+>935,87.
Primer 1.55: terc-butil ((S)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-aminofenil)sulfonamido)-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-il)-3-metoksi-5-metil-1-oksoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-il)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-il)(metil)karbamat.
[0505]
[0506] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.54 upotrebom Opšte procedure 4. C41H70N6O10S izrač. m/z = 838,49 pronađeno [M+H]<+>839,85.
Primer 1.56: (S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-aminofenil)sulfonamido)-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-il)-3-metoksi-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-N,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamid (Jedinjenje 20).
[0507]
[0508] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.54 upotrebom Opšte procedure 9. C36H62N6O8S izrač. m/z = 738,43 pronađeno [M+H]<+>739,84.
Primer 1.57: 2,2,2-trifluoro-N-(4-(sulfamoilmetil)fenil)acetamid.
[0509]
[0510] Naslovno jedinjenje je pripremljeno u skladu sa WO 2015095953 A1.
Primer 1.58: 2,2,2-trifluoro-N-(4-sulfamoilbenzil)acetamid.
[0511]
[0512] Naslovno jedinjenje je pripremljeno u skladu sa WO 2015095953 A1.
Primer 1.59: terc-butil (S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)sulfonamido)propil)pirolidin-1-karboksilat.
[0513]
[0514] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od komercijalno dobijenih Boc-dolaprolin-OH i 2,2,2-trifluoro-N-(4-sulfamoilbenzil)acetamida upotrebom Opšte procedure 2. C23H32F3N3O7S izrač. m/z = 551,19 pronađeno [M+Na]<+>574,92.
Primer 1.60: (2R,3R)-3-metoksi-2-metil-3-((S)-pirolidin-2-il)-N-((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)sulfonil)propanamid.
[0515]
[0516] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.59 upotrebom Opšte procedure 9. C18H24F3N3O5S izrač. m/z = 451,14 pronađeno [M+H]<+>452,71.
Primer 1.61: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)sulfonamido)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 21).
12
[0518] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Dov-Val-Dil-OH (Primer 1.36) i proizvoda iz Primera 1.60 upotrebom Opšte procedure 6. C40H65F3N6O9S izrač. m/z = 862,45 pronađeno [M+H]<+>863,80.
Primer 1.62: (S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-(aminometil)fenil)sulfonamido)-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-il)-3-metoksi-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 22).
[0519]
[0520] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Jedinjenja 51 u skladu sa Opštom procedurom 4. C38H66N6O8S izrač. m/z = 766,47 pronađeno [M+H]<+>767,85.
Primer 1.63: terc-butil (S)-(1-okso-3-fenil-1-((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)sulfonamido)propan-2-il)karbamat (Jedinjenje 63).
[0521]
[0522] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Boc-(L)-Phe-OH i 2,2,2-trifluoro-N-(4-sulfamoilbenzil)acetamida (Primer 1.58) upotrebom Opšte procedure 2. C23H26F3N3O6S izrač. m/z = 529,15 pronađeno [M+Na]<+>552,52.
Primer 1.64: (S)-2-amino-3-fenil-N-((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)sulfonil)propanamid.
[0523]
[0524] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.63 upotrebom Opšte procedure 9. C18H18F3N3O4S izrač. m/z = 429,10 pronađeno [M+H]<+>430,51.<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,05 - 7,98 (m, 2H), 7,56 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,33 - 7,22 (m, 3H), 7,09 (d, J = 6,7 Hz, 2H), 4,59 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 4,06 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 3,15 (dd, J = 14,1, 6,3 Hz, 1H), 3,03 (dd, J = 14,2, 7,4 Hz, 1H).
Primer 1.65: terc-butil (S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-(((S)-1-okso-3-fenil-1-((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)sulfonamido)propan-2-il)amino)propil)pirolidin-1-karboksilat.
[0525]
12
[0526] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od komercijalno dostupnog Boc-dolaprolin-OH i proizvoda iz Primera 1.64 u skladu sa Opštom procedurom 6. C32H41F3N4O8S izrač. m/z = 698,26 pronađeno [M+Na]<+>721,62.
Primer 1.66: (2R,3R)-3-metoksi-2-metil-N-((S)-1-okso-3-fenil-1-((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)sulfonamido)propan-2-il)-3-((S)-pirolidin-2-il)propanamid.
[0527]
[0528] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.65 upotrebom Opšte procedure 9. C27H33F3N4O6S izrač. m/z = 598,21 pronađeno [M+H]<+>599,62.
Primer 1.67: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-(((S)-1-okso-3-fenil-1-((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)sulfonamido)propan-2-il)amino)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 23).
[0529]
12
[0530] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Dov-Val-Dil-OH (Primer 1.36) i proizvoda iz Primera 1.66 u skladu sa Opštom procedurom 6. C49H74F3N7O10S izrač. m/z = 1009,52 pronađeno [M+H]<+>1011,04.
Primer 1.68: (S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-(aminometil)fenil)sulfonamido)-1-okso-3-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-il)-3-metoksi-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 24).
[0531]
[0532] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.67 u skladu sa Opštom procedurom 4. C47H75N7O9S izrač. m/z = 913,53 pronađeno [M+H]<+>915,09.
Primer 1.69: 2,2,2-trifluoro-N-(4-(sulfamoilmetil)benzil)acetamid.
[0533]
[0534] Naslovno jedinjenje je pripremljeno u skladu sa WO 2015095953 A1.
Primer 1.70: terc-butil (S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-(((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)metil)sulfonamido)propil)pirolidin-1-karboksilat.
[0535]
12
[0536] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od komercijalno dobijenih Boc-dolaprolin-OH i 2,2,2-trifluoro-N-(4-(sulfamoilmetil)benzil)acetamida (Primer 1.69) upotrebom Opšte procedure 2. C24H34F3N3O7S izrač. m/z = 565,21 pronađeno [M+Na]<+>588,75.
Primer 1.71: (2R,3R)-3-metoksi-2-metil-3-((S)-pirolidin-2-il)-N-((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)benzil)sulfonil)propanamid.
[0537]
[0538] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.69 u skladu sa Opštom procedurom 9. C19H26F3N3O5S izrač. m/z = 465,15 pronađeno [M+H]<+>466,77.
Primer 1.72: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-(((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)metil)sulfonamido)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 25).
[0539]
12
[0540] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.36 i proizvoda iz Primera 1.71 skladu sa Opštom procedurom 6. C41H67F3N6O9S izrač. m/z = 876,46 pronađeno [M+H]<+>878,22.
Primer 1.73: (S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((4-(aminometil)fenil)metil)sulfonamido)-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-il)-3-metoksi-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 26).
[0541]
[0542] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.72 skladu sa Opštom procedurom 4. C39H68N6O8S izrač. m/z = 780,48 pronađeno [M+H]<+>782,20.
Primer 1.74: terc-butil (S)-(1-okso-3-fenil-1-(((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)metil)sulfonamido)propan-2-il) karbamat.
[0543]
[0544] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Boc-(L)-Phe-OH i 2,2,2-trifluoro-N-(4-(sulfamoilmetil)benzil)acetamida (Primer 1.69) u skladu sa Opštom procedurom 2. C24H28F3N3O6S izrač. m/z = 543,17 pronađeno [M+Na]<+>566,78.
12
Primer 1.75: (S)-2-amino-3-fenil-N-((4-((2,2,2 trifluoroacetamido)metil)benzil)sulfonil)propanamid.
[0545]
[0546] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.74 upotrebom Opšte procedure 9. C19H20F3N3O4S izrač. m/z = 443,11 pronađeno [M+H]<+>444,55.<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 7,46 - 7,27 (m, 9H), 4,51 (s, 2H), 4,46 (s, 2H), 3,84 (dd, J = 9,3, 4,3 Hz, 1H), 3,29 (dd, 1H), 2,95 (dd, J = 14,5, 9,4 Hz, 1H).
Primer 1.76: (S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-(((S)-1-okso-3-fenil-1-(((4) -((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)metil)sulfonamido)propan-2-il)amin)propil)pirolidin-1-karboksilat.
[0547]
[0548] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od komercijalno dostupnog Boc-dolaprolin-OH i proizvoda iz Primera 1.75 u skladu sa Opštom procedurom 6. C33H43F3N4O8S izrač. m/z = 712,28 pronađeno [M+Na]<+>735,65.
Primer 1.77: (2R,3R)-3-metoksi-2-metil-N-((S)-1-okso-3-fenil-1-(((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)metil)sulfonamido)propan-2-il)-3-((S)-pirolidin-2-il)propanamid.
[0549]
1
[0550] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.76 upotrebom Opšte procedure 9. C28H35F3N4O6S izrač. m/z = 612,22 pronađeno [M+H]<+>613,58.
Primer 1.78: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-(((S)-1-okso-3-fenil-1-(((4-((2,2,2-trifluoroacetamido)metil)fenil)metil)sulfonamido)propan-2-il)amino)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 27).
[0551]
[0552] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Dov-Val-Dil-OH (Primer 1.36) i proizvoda iz Primera 1.77 upotrebom Opštih procedura 9 i 6. C50H76F3N7O10S izrač. m/z = 1023,53 pronađeno [M+H]<+>1024,94.
Primer 1.79: (S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-(((4-(aminometil)fenil)metil)sulfonamido)-1-okso-3-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-il)-3-metoksi-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 28).
[0553]
1 1
[0554] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.78 upotrebom Opšte procedure 4. C48H77N7O9S izrač. m/z = 927,55 pronađeno [M+H]<+>928,92.
Primer 1.80: 2,2,2-trifluoro-N-(1-(4-sulfamoilfenil)ciklopropil)acetamid.
[0555]
[0556] Naslovno jedinjenje je pripremljeno u skladu sa WO 2015095953 A1.
Primer 1.81: (2R,3R)-3-metoksi-2-metil-3-((S)-pirolidin-2-il)-N-(4-(1-(2,2,2-trifluoroacetamido)ciklopropil)fenilsulfonil)propanamid.
[0557]
[0558] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od komercijalno dobijenih Boc-Dap-OH i 2,2,2-trifluoro-N-(1-(4-sulfamoilfenil)ciklopropil)acetamida (Primer 1.80) prateći Opšte procedure 2 i 9.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d<6>) δ 12,19 (s, 1H), 10,32 (s, 1H), 7,86 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,31 (s, 1H), 3,58 (dd, J = 5,7, 3,7 Hz, 1H), 3,28 (s, 3H), 3,11 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,59 (dq, J = 13,0, 6,5 Hz, 1H), 1,90 - 1,68 (m, 3H), 1,63 - 1,56 (m, 1H), 1,44 -1,35 (m, 4H), 1,04 (d, J = 7,0 Hz, 3H). C20H26F3N3O5S izrač. m/z = 477,15 pronađeno [M+H]<+>= 478,6.
Primer 1.82: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-(4-(1-(2,2,2-trifluoroacetamido)ciklopropil)fenilsulfonamido)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 29).
1 2
[0560] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Dov-Val-Dil-OH (Primer 1.36) i proizvoda iz Primera 1.81 u skladu sa Opštom procedurom 6. C42H67F3N6O9S izrač. m/z = 888,46 pronađeno [M+H]<+>= 889,3.
Primer 1.83: (S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(4-(1-aminociklopropil)fenilsulfonamido)-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-il)-3-metoksi-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 30).
[0561]
[0562] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.82 u skladu sa Opštom procedurom 4. C40H68N6O8S izrač. m/z = 792,48 pronađeno [M+Na]<+>= 815,9.
Primer 1.84: (S)-2-amino-3-fenil-N-(4-(1-(2,2,2-trifluoroacetamido)ciklopropil)fenilsulfonil)propanamid.
[0563]
1
[0564] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Boc-Phe-OH i 2,2,2-trifluoro-N-(1-(4-sulfamoilfenil)ciklopropil)acetamida (Primer 1.80) prateći Opšte procedure 2 i 9.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,30 (s, 1H), 7,87 (b, 3H), 7,79 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,25 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,23 - 7,16 (m, 3H), 7,08 (dd, J = 6,6, 2,9 Hz, 2H), 3,78 (s, 1H), 3,06 (dd, J = 14,2, 5,3 Hz, 1H), 2,93 (dd, J = 14,1, 7,2 Hz, 1H), 1,36 (dd, J = 6,6, 3,0 Hz, 4H). C20H20F3N3O4S izrač. m/z = 455,11 pronađeno [M+H]<+>= 456,6.
Primer 1.85: terc-butil (S)-1-(((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((S)-1-okso-3-fenil-1-(4-(1-(2,2,2-trifluoroacetamido)ciklopropil)fenilsulfonamido)propan-2-ilamino)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-ilkarbamat.
[0565]
[0566] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od komercijalno dobijenog Boc-Val-Dil-Dap-OH i proizvoda iz Primera 1.84 prateći Opštu proceduru 2. C49H71F3N6O11S izrač. m/z =1008,49 pronađeno [M+Na]<+>= 1031,9.
Primer 1.86: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((S)-1-okso-3-fenil-1-(4-(1-(2,2,2-trifluoroacetamido)ciklopropil)fenilsulfonamido)propan-2-ilamino)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 31).
1 4
[0568] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.85 i N,N-dimetilvalina prateći Opšte procedure 9 i 6. C51H76F3N7O10S izrač. m/z =1035,53 pronađeno [M+H]<+>= 1036,5.
Primer 1.87: (S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((S)-1-(4-(1-aminociklopropil)fenilsulfonamido)-1-okso-3-fenilpropan-2-ilamino)-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-il)-3-metoksi-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 32).
[0569]
[0570] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.86 u skladu sa Opštom procedurom 4. C49H77N7O9S izrač. m/z = 939,55 pronađeno [M+H]<+>= 940,5.
Primer 1.88: terc-butil (S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((fenilmetil)sulfonamido)propil)pirolidin-1-karboksilat.
[0571]
1
[0572] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od komercijalno dobijenog Boc-dolaprolin-OH i benzilsulfonamida upotrebom Opšte procedure 2. C21H32N2O6S izrač. m/z = 440,20 pronađeno [M+H]<+>463,71.
Primer 1.89: (2R,3R)-N-(benzilsulfonil)-3-metoksi-2-metil-3-((S)-pirolidin-2-il)propanamid.
[0573]
[0574] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.88 upotrebom Opšte procedure 9. C16H24N2O4S izrač. m/z = 340,15 pronađeno [M+H]<+>341,75.
Primer 1.90: (9H-fluoren-9-il)metil((S)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2)-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((fenilmetil)sulfonamido)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-il)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-il)(metil)karbamat.
[0575]
1
[0576] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.89 i proizvoda iz Primera 1.38 u skladu sa Opštom procedurom 6. C52H73N5O10S izrač. m/z = 959,51 pronađeno [M+H]<+>961,15.
Primer 1.91: (S)-N-((3R,4S,5S)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((fenilmetil)sulfonamido)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-N,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamid (Jedinjenje 33).
[0577]
[0578] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.90 u skladu sa Opštom procedurom 7. C37H63N5O8S izrač. m/z = 737,44 pronađeno [M+H]<+>739,07.
Primer 1.92: terc-butil (S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-3-((4-(metoksikarbonil)fenil)sulfonamido)-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-karboksilat.
[0579]
[0580] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od metil 4-sulfamoilbenzoata i Boc-Dap-OH u skladu sa Opštom procedurom 2. C22H32N2O8S izrač. m/z = 484,19 pronađeno [M+Na]<+>= 507,6.
1
Primer 1.93: metil 4-(N-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoksi-5-metilheptanoil)pirolidin-2-il)-3-metoksi-2-metilpropanoil)sulfamoil)benzoat (Jedinjenje 34).
[0581]
[0582] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.92 i Dov-Val-Dil-OH (Primer 1.36) u skladu sa Opštim procedurama 9 i 6. C22H32N2O8S izrač. m/z = 795,45. pronađeno [M+Na]<+>= 818,8.
Primer 1.94: (S,E)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-N,3,3-trimetilbutanamido)-2,5-dimetilheks-2-enoična kiselina (Jedinjenje 83).
[0583]
[0584] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od etil (S,E)-4-((S)-2-((tercbutoksikarbonil)amino)-N,3,3-trimetilbutanamido)-2,5-dimetilheks-2-enoata u skladu sa Opštom procedurom 4. C20H36N2O5izrač. m/z = 384,26 pronađeno [M+H]<+>= 407,71.<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 6,80 (dd, J = 9,6, 1,8 Hz, 1H), 5,29 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 5,16 (t, J = 10,0 Hz, 1H), 4,46 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 3,03 (s, 3H), 1,95 (d, J = 1,5 Hz, 3H), 1,44 (s, 9H), 0,99 (s, 9H), 0,92 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 0,88 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Primer 1.95: metil (2R,3R)-3-metoksi-2-metil-3-((S)-pirolidin-2-il)propanoat.
[0585]
1
[0586] U mešani rastvor Boc-Dap-OH (0,635 g, 2,21 mmol) u dihlorometanu/metanolu (95:5, zapr./zapr., 10 ml) dodat je TMS-diazometan (2 M u heksanima, 1,35 ml, 1,2 ekv.) . Reakcija je praćena i u vreme kada je efervescencija prestala, HPLC-MS analiza je pokazala potpunu konverziju u estar. Preostali TMS-diazometan je ugašen dodavanjem sirćetne kiseline i posle nestanka sve žute boje, reakcija je koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Ostatak je rastvoren u dihlorometanu i Boc-zaštitna grupa je uklonjena u skladu sa Opštom procedurom 9.1. Materijal je korišćen "kao što jeste" bez dodatnog prečišćavanja. C10H19NO3izrač. m/z = 201,14 pronađeno [M+H]<+>= 202,56.<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 3,88 (dd, J = 6,0, 3,6 Hz, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,73 - 3,62 (m, 1H), 3,52 (s, 3H), 3,32 - 3,26 (m, 2H), 2,88 - 2,74 (m, 1H), 2,15 - 1,87 (m, 4H), 1,29 (d, J = 7,2 Hz, 3H).
Primer 1.96: metil (2R,3R)-3-((S)-1-((S,E)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-N,3,3-trimetilbutanamido)-2,5-dimetilheks-2-enoil)pirolidin-2-il)-3-metoksi-2-metilpropanoat.
[0587]
[0588] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.94 i proizvoda iz Primera 1.95 u skladu sa Opštom procedurom 6. C30H53N3O7izrač. m/z = 567,39 pronađeno [M+Na]<+>= 590,85.<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 5,53 (dd, J = 9,0, 1,8 Hz, 1H), 5,18 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 5,02 (dd, J = 10,6, 8,8 Hz, 1H), 4,37 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 4,11 -4,01 (m, 1H), 3,92 (dd, J = 8,2, 2,8 Hz, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,51 - 3,42 (m, 1H), 3,39 (s, 3H), 3,34 - 3,23 (m, 1H), 2,89 (s, 3H), 2,54 - 2,43 (m, 1H), 1,86 (s, 3H), 1,95 - 1,77 (m, 3H), 1,70 - 1,52 (m, 1H), 1,36 (s, 9H), 1,21 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 0,92 (s, 9H), 0,88 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,78 (d, J = 6,6 Hz, 3H).
1
Primer 1.97: (2R,3R)-3-((S)-1-((S,E)-4-((S)-2-((terc-butoksikarbonil)amino)-N,3,3-trimetilbutanamido)-2,5-dimetilheks-2-enoil)pirolidin-2-il)-3-metoksi-2-metilpropanska kiselina.
[0589]
[0590] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.96 u skladu sa Opštom procedurom 4.1. C29H51N3O7izrač. m/z = 553,37 pronađeno [M+Na]<+>= 576,81.<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 5,64 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,37 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 5,05 (s, 1H), 4,42 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 4,23 - 4,17 (m, 1H), 4,02 (dd, J = 8,8, 2,5 Hz, 1H), 3,53 - 3,46 (m, 1H), 3,45 (s, 3H), 3,39 - 3,27 (m, 1H), 2,93 (s, 3H), 2,51 - 2,36 (m, 1H), 2,08 - 1,77 (m, 4H), 1,90 (s, 3H), 1,73 - 1,60 (m, 1H), 1,40 (s, 9H), 1,25 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 0,95 (s, 9H), 0,91 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 0,82 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Primer 1.98: terc-butil ((S)-1-(((S,E)-6-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)propil)pirolidin-1-il)-2,5-dimetil-6-oksoheks-4-en-3-il)(metil)amino)-3,3-dimetil-1-oksobutan-2-il)karbamat.
[0591]
[0592] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.97 i proizvoda iz Primera 1.39 u skladu sa Opštom procedurom 2. C37H56F3N5O9S izrač. m/z = 803,38 pronađeno [M+Na]<+>= 826,69.<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 9,66 (s, 1H), 8,03 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,82 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 5,62 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 5,54 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 5,10 - 4,98 (m, 1H), 4,45 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 4,01 (dd, J = 7,2, 2,4 Hz, 1H), 3,94 - 3,83 (m, 1H),
14
3,48 - 3,43 (m, 1H), 3,41 (s, 3H), 3,35 - 3,22 (m, 1H), 2,95 (s, 3H), 2,66 - 2,55 (m, 1H), 1,87 (s, 3H), 1,91 - 1,75 (m, 2H), 1,67 - 1,53 (m, 2H), 1,41 (s, 9H), 1,14 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 0,96 (s, 9H), 0,89 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 0,82 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Primer 1.99: (S)-2-amino-N-((S,E)-6-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)propil)pirolidin-1-il)-2,5-dimetil-6-oksoheks-4-en-3-il)-N,3,3-trimetilbutanamid.
[0593]
[0594] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.98 u skladu sa Opštom procedurom 9.1. C32H48F3N5O7S izrač. m/z = 703,32 pronađeno [M+H]<+>= 704,68.<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,06 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,90 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 5,71 (dd, J = 9,5, 1,9 Hz, 1H), 5,10 - 5,00 (m, 2H), 4,30 (s, 1H), 3,85 (dd, J = 8,1, 2,7 Hz, 1H), 3,79 - 3,71 (m, 1H), 3,55 - 3,48 (m, 1H), 3,36 (s, 3H), 3,40 - 3,28 (m, 1H), 3,00 (s, 3H), 2,52 - 2,39 (m, 1H), 2,09 - 1,96 (m, 1H), 1,91 (s, 3H), 1,95 - 1,83 (m, 1H), 1,79 - 1,69 (m, 1H), 1,69 - 1,51 (m, 1H), 1,14 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,10 (s, 9H), 0,97 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 0,93 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Primer 1.100: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((S,E)-6-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)propil)pirolidin-1-il)-2,5-dimetil-6-oksoheks-4-en-3-il)-N,3,3-trimetilbutanamid (Jedinjenje 35).
[0595]
[0596] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.99 i N,N-dimetilvalina u skladu sa Opštom procedurom 6. C39H61F3N6O8S izrač. m/z = 830,42 pronađeno [M+H]<+>= 831,75.
Primer 1.101: (S)-N-((S,E)-6-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-aminofenil)sulfonamido)-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-il)-2,5-dimetil-6-oksoheks-4-en-3-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3,3-trimetilbutanamid (Jedinjenje 36).
[0597]
[0598] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.100 u skladu sa Opštom procedurom 4.1. C37H62N6O7S izrač. m/z = 734,44 pronađeno [M+H]<+>= 735,72.
Primer 1.102: (S)-1-izopropil-N-((S)-1-(((S,E)-6-((S)-2-((1R,2R)-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)propil)pirolidin-1-il)-2,5-dimetil-6-oksoheks-4-en-3-il)(metil)amino)-3,3-dimetil-1-oksobutan-2-il)piperidin-2-karboksamid (Jedinjenje 37).
[0599]
[0600] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.99 i (R)-1-izopropilpiperidin-2-karboksilne kiseline u skladu sa Opštom procedurom 6. C41H63F3N6O8S izrač. m/z = 856,44 pronađeno [M+H]<+>= 857,80.
Primer 1.103 (S)-N-((S)-1-(((S,E)-6-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-aminofenil)sulfonamido)-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-il)-2,5-dimetil-6-oksoheks-4-en-3-il)(metil)amino)-3,3-dimetil-1-oksobutan-2-il)-1-izopropilpiperidin-2-karboksamid (Jedinjenje 38).
[0601]
[0602] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.102 u skladu sa Opštom procedurom 4.1. C39H64N6O7S izrač. m/z = 760,46 pronađeno [M+H]<+>= 761,77.
Primer 1.104: (S,E)-3-(1-(terc-butoksikarbonil)pirolidin-2-il)-2-metilakrilna kiselina.
[0603]
[0604] Naslovno jedinjenje je sintetisano od terc-butil (S,E)-2-(3-etoksi-2-metil-3-oksoprop-1-en-1-il)pirolidin-1-karboksilata (pripremljen u skladu sa J. Org Chem., 2003, 68 (16), pp 6459-6462) u skladu sa Opštom procedurom 4.1. C13H21NO4izrač. m/z = 255,15 pronađeno [M-Boc+H]<+>= 156,5, [M-Boc+MeCN]<+>= 197,5.
Primer 1.105: terc-butil (S,E)-2-(2-metil-3-okso-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)prop-1-en-1- il)pirolidin-1-karboksilat.
[0605]
14
[0606] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.104 i proizvoda iz Primera 1.39 u skladu sa Opštom procedurom 2. C21H26F3N3O6S izrač. m/z = 505,15 pronađeno [M-Boc+H]<+>= 406,5, [M+Na]<+>= 528,5.
Primer 1.106: (S,E)-2-metil-3-(pirolidin-2-il)-N-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonil)akrilamid.
[0607]
[0608] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.105 u skladu sa Opštom procedurom 9.1. C16H18F3N3O4S izrač. m/z = 405,10, pronađeno [M+H]<+>= 406,5.
Primer 1.107: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoksi-5-metil-1-((S)-2-((E)-2-metil-3-okso-3-((4-(2,2,2-trifluoroacetamido)fenil)sulfonamido)prop-1-en-1-il)pirolidin-1-il)-1-oksoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamid (Jedinjenje 39).
[0609]
[0610] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 1.106 i proizvoda iz Primera 1.36 u skladu sa Opštom procedurom 6. C38H59F3N6O8S izrač. m/z = 816,41, pronađeno [M+H]<+>= 817,7.
Primer 2: Sinteze lek-linker konjugata iz predmetnog pronalaska.
[0611]
[0612] Šema 1 ilustruje poseban primer izvođenja opšte šeme za sintezu D-L kompleksa. U dodatnim primerima izvođenja pronalaska, zaštitna grupa (PG1) uklanja se sa Toksina (ili leka) pre dodavanja amino kiselina (npr. AA1-AA2). U određenim primerima izvođenja pronalaska, Sidro uključuje funkcionalnu grupu koja može da formira kovalentnu vezu sa Ciljem. U drugim primerima izvođenja pronalaska, Sidro sadrži Rastezač (Stretcher).
Primer 2.1: (S)-N-(4-(N-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S))-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoksi-5-metilheptanoil)pirolidin-2-il)-3-metoksi-2-metilpropanoil)sulfamoil)fenil)-2-((S)-1-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-14-izopropil-12-okso-3,6,9-trioksa-13-azapentadekan-15-amido)-5-ureidopentanamid.
[0613]
14
[0614] Naslovno jedinjenje je sintetisano upotrebom Opšte procedure 5 od MT-VC-OH i Jedinjenja 5 i prečišćeno pomoću preparativne HPLC hromatografije. C61H101N11O17S izrač. m/z = 1291,71 pronađeno [M+H]<+>1292,89.
Primer 2.2: (S)-N-(4-((N-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoksi-5-metilheptanoil)pirolidin-2-il)-3-metoksi-2-metilpropanoil)sulfamoil)metil)fenil)-2-((S)-1-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-14-izopropil-12-okso-3,6,9-trioksa-13-azapentadekan-15-amido)-5-ureidopentanamid.
[0615]
[0616] Naslovno jedinjenje je sintetisano upotrebom Opšte procedure 5 od MT-VC-OH i Jedinjenja 8 i prečišćeno pomoću preparativne HPLC hromatografije. C61H101N11O17S izrač. m/z = 1305,73 pronađeno [M+H]<+>= 1306,9.
Primer 2.3: (S)-N-(4-(N-(((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoksi-5-metilheptanoil)pirolidin-2-il)-3-metoksi-2-metilpropanoil)-L-fenilalanil)sulfamoil)fenil)-2-((S)-1-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-14-izopropil-12-okso-3,6,9-trioksa-13-azapentadekan-15-amido)-5-ureidopentanamid.
[0617]
14
[0618] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od MT-VC-OH i Jedinjenja 11 u skladu sa Opštom procedurom 5. C70H110N12O18S izrač. m/z = 1438,8 amu; pronađeno [M+H]<+>= 1440,2, [(M+2H)/2]<2+>= 720,5.
Primer 2.4: (S)-N-(4-((N-(((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoksi-5-metilheptanoil)pirolidin-2-il)-3-metoksi-2-metilpropanoil)-L-fenilalanil)sulfamoil)metil)fenil)-2-((S)-1-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-14-izopropil-12-okso-3,6,9-trioksa-13-azapentadekan-15-amido)-5-ureidopentanamid.
[0619]
[0620] Pripremljeno od Jedinjenja 14 i MT-VC-OH u skladu sa Opštom procedurom 5 i prečišćeno pomoću preparativne HPLC. C71H112N12O18S izrač. m/z = 1452,80 amu; pronađeno [M+H]<+>= 1453,7.
Primer 2.5: (S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-(3-(2-(2-(2-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)etoksi)etoksi)etoksi)propanamido)fenil)sulfonamido)-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-il)-3-metoksi-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamid.
[0621] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Jedinjenja 5 i MT-OH upotrebom Opšte procedure 6. C50H81N7O14S izrač. m/z 1035,56 = pronađeno [M+H]<+>1037,97.
14
Primer 2.6: (S)-N-(1-(4-(N-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoksi-5-metilheptanoil)pirolidin-2-il)-3-metoksi-2-metilpropanoil)sulfamoil)fenil)ciklopropil)-2-((S)-1-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-14-izopropil-12-okso-3,6,9-trioksa-13-azapentadekan-15-amido)-5-ureidopentanamid.
[0622]
[0623] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Jedinjenja 30, Boc-VC-OH i MT-NHS prateći Opštu proceduru 8. C64H105N11O17S izrač. m/z = 1331,74 pronađeno [M+H]<+>= 1332,8.
Primer 2.7: terc-butil ((S)-1-(((S)-1-((1-(4-(N-(((2R,3R))-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoksi-5-metilheptanoil)pirolidin-2-il)-3-metoksi-2-metilpropanoil)-L-fenilalanil)sulfamoil)fenil)ciklopropil)amino)-1-okso-5-ureidopentan-2-il)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-il)karbamat.
[0624]
[0625] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Jedinjenja 32 i Boc-VC-OH prateći Opštu proceduru 5. C65H105N11O14S izrač. m/z = 1295,76 pronađeno [M+H]<+>= 1297,2.
14
Primer 2.8: (S)-N-(1-(4-(N-(((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S))-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoksi-5-metilheptanoil)pirolidin-2-il)-3-metoksi-2-metilpropanoil)-L-fenilalanil)sulfamoil)fenil)ciklopropil)-2-((S)-1-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-14-izopropil-12-okso-3,6,9-trioksa-13-azapentadekan-15-amido)-5-ureidopentanamid.
[0626]
[0627] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od proizvoda iz Primera 2.7 i MT-NHS prateći Opšte procedure 9 i 8. C73H114N12O18S izrač. m/z = 1478,81 pronađeno [M+H]<+>= 1479,7.
Primer 2.9: 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)heksanamido)-3-metilbutanamido)-5-ureidopentanamido)benzil ((S)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5R)-3-metoksi-1-((S)-2-((1R,2R))-1-metoksi-2-metil-3-okso-3-((fenilmetil)sulfonamido)propil)pirolidin-1-il)-5-metil-1-oksoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-il)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-il)(metil)karbamat.
[0628]
[0629] Naslovno jedinjenje je pripremljeno od Jedinjenja 33 i komercijalno dobijenog MC-VC-PABC-OPnp. C66H101N11O16S izrač. m/z = 1335,71 pronađeno [M+H]<+>1337,28.
14
[0630] Oni sa iskustvom u struci razumeju da je moguće izvršiti hemijske konverzije pokazane na prethodnim šemama sa modifikacijama jednog ili više parametara. Kao primeri, alternativni nenukleofilni rastvarači mogu biti pogodni za hemiju, kao što su THF, DMF, toluen itd. Reakcione temperature mogu varirati. Alternativni reagensi mogu biti pogodni da deluju kao agensi za dehidrataciju ili aktivaciju kiseline koji se normalno upotrebljavaju u reakcijama formiranja amida, kao što su pentafluorofenil estri, NHS estri, EDAC, HBTU, HOBT itd.
Primer 3: Citotoksičnost jedinjenja Formule I u Jurkat i HCC1954 ćelijskim linijama.
[0631] Jedinjenja su testirana na Jurkat i HCC1954 ćelijskim linijama kako bi se procenila njihova citotoksičnost. Jedinjenja su titrirana 1:3 počevši od različitih koncentracija (30 nM do 1000 nM). Kontrolni citotoksin HTI-286 (videti, npr. U.S.7,579,323) je takođe titriran 1:3 počevši od koncentracije od 30 nM. Ploče su inkubirane tokom 3 dana. Vijabilnost ćelija je kvantifikovana upotrebom 30 µl/bunariću 1× CellTiter-Glo reagensa. Kontrolni citotoksin je uspešno ubio Jurkate pri očekivanoj koncentraciji.
[0632] Svaka ćelijska linija je uzgajana u svom respektivnom medijumu za rast do dana zasejavanja. Ćelije su uklonjene iz svojih posuda za kulturu i rezultujuća ćelijska suspenzija je prebrojana upotrebom ViCell. Ćelije su zatim razblažene u svom medijumu za rast do 25000/ml tako da je 100 µl/bunariću = 2500 ćelija/bunariću. Svaka ćelijska linija je zasejana u unutrašnjih 60 bunarića TC ploča sa crnim zidovima sa 96 bunarića, spoljni bunarići su napunjeni vodom. HCC1954 su zasejane dan pre postavljanja testa. Citotoksini su razblaženi kao što je opisano u nastavku 5× doza-odgovor svakog jedinjenja je pripremljena upotrebom RPMI 10% FBS u ploči sa dubokim bunarićima sa 96 bunarića. Ova "glavna" ploča za razblaživanje je upotrebljena za svaku ćelijsku liniju.25 µl 5× doza odgovora je spajkovano u svaku ćelijsku liniju u triplikatu. Ploče su vraćene u inkubator i inkubirane su tokom 3 noći. Posle 3 noći, vijabilnost ćelija je kvantifikovana upotrebom 30 µl/bunariću 1× CellTiter-glo reagensa. Posle najmanje 10 minuta inkubacije, luminescencija je merena upotrebom SpectraMax (500 ms integracija). Rezultati su pokazani u Tabeli 2 i na Slikama 1 i 2.
Tabela 2
1
Primer 3.1: Procena ćelijske citotoksičnosti jedinjenja Formule I u Jurkat, HCC1954, NCI-N87, BxPC-3, SK-OV-3, i JIMT-1 ćelijskim linijama.
[0633] Jedinjenja su testirana na jednoj ili više od ćelijske linije humane T-ćelijske leukemije Jurkat (ATCC: TIB-152); ćelijske linije humanog kancera dojke HCC1954 (ATCC: CRL-2338) i JIMT-1 (DSMZ: ACC 589); ćelijske linije humanog pankreasa BxPC-3 (ATCC: CRL.1687), ćelijske linije humanog adenokarcinoma jajnika SK-OV-3 (ATCC: HTB-77) i ćelijske linije humanog karcinoma želuca NCI-N87 (ATCC: CRL.5822); kako bi se procenila njihova citotoksičnost.
[0634] Ukratko, ćelije su dobijene iz komercijalnih izvora i kultivisane kao što je opisano u priloženom listu proizvoda. Ćelije su uklonjene iz svojih posuda za kulturu i rezultujuća ćelijska suspenzija je prebrojana upotrebom ViCell (Beckman Coulter), zatim zasejana pri 25.000 ćelija/ml (2.500 ćelija/bunariću) u Costar 3904 ploče sa crnim zidovima i ravnim dnom sa 96 bunarića (ćelije su zasejane u unutrašnjih 60 bunarića TC ploča sa 96 bunarića, i bunarići na spoljašnjoj ivici su napunjeni vodom). Adherentne ćelijske linije su inkubirane tokom jedne noći na 37 °C/5% CO2atmosferi kako bi se omogućilo ćelijama da se prikače za površinu mikrotitarske ploče, dok su ćelije u suspenziji (Jurkat) zasejane neposredno pre upotrebe. Citotoksini su rastvoreni i serijski razblaženi u dimetil sulfoksidu i zatim su rastvori dodavani u kompletan medijum za rast u pet puta većoj od željene maksimalne krajnje koncentracije. Citotoksini su zatim titrirani u medijumu za rast, normalno 1:3, u osam koraka. Kontrola bez prisutnog test artikla (samo medijum za rast) je uključena na svaku mikrotitarsku ploču u šestoplikatu. Pripremljene titracije toksina dodate su (25 µl/bunariću) u triplikatu svakoj ćelijskoj liniji koja je testirana. Ćelije i titracije su inkubirane na 37 °C/5%
1 1
CO2tokom tri noći (Jurkat) i pet noći (sve ostale ćelijske linije). Posle inkubacije, vijabilnost ćelija je merena upotrebom CellTiter-Glo® dodavanjem 30 µl pripremljenog CellTiter-Glo® reagensa u svaki testni bunarić. Smeše su inkubirane tokom najmanje dvadeset minuta u mraku pre merenja emitovane luminescencije upotrebom luminometra za mikroploču (vreme integracije 500 ms). Sakupljene relativne jedinice luminescencije (RLU) su konvertovane u % citotoksičnosti upotrebom prethodno pomenute kontrole samo sa medijumom za rast (% citotoksičnosti = 1 - [RLU bunarića/prosečna RLU kontrole samo sa medijumom] × 100%). Podaci (% citotoksičnosti naspram koncentracije ADC (log10(nM))) su prikazani u grafičkom formatu i fitovani na krive upotrebom postupaka nelinearne regresije (nagib sa četiri parametra promenljive) upotrebom GraphPad Prism softvera v.5.02 kako bi se dobile procene EC50. Kontroni citotoksin, normalno HTI-286 (videti, npr. US 7,579,323) je uspešno ubio sve ćelijske linije pri očekivanoj koncentraciji.
[0635] Rezultati su pokazani u Tabeli 2.1.
Tabela 2.1
1 2
Primer 4: Biološki testovi.
[0636] Ćelijske linije: Ćelijska linija humane T-ćelijske leukemije Jurkat (ATCC: TIB-152); HCC1954 (ATCC: CRL. 2338); ćelijske linije humanog pankreasa: AsPC-1 (ATCC: CRL-1682), BxPC-3 (ATCC: CRL.1687), HPAF-II (ATCC: CRL.1997), MiaPaCa2 (ATCC: CRL.1420), PANC-1 (ATCC: CRL.1469), Capan-1 (ATCC: HTB-79), Capan-2 (ATCC: HTB-80) i ćelijska linija humanog karcinoma želuca NCI-N87 (ATCC: CRL. 5822); AML-193 (ATCC: CRL.9589), CCRF-CEM (ATCC: CCL-119), DU145 (ATCC: HTB-81), PC-3 (ATCC: CRL.1435), A-431 (ATCC: CRL.1555), HT-29 (ATCC: HTB-38), A-172 (ATCC: CRL.1620), NCI-H358 (ATCC: CRL.5807), A549 (ATCC: CCL-185), Colo-205 (ATCC: CCL-222), MDA-MB-231 (ATCC: HTB-26), OVCAR-3 (ATCC: HTB-161), OV-90 (ATCC: CRL.11732), OE19 (Sigma: 96071721), RT112/84 (Sigma: 85061106).
[0637] Na dan pre dodavanja jedinjenja, HCC1954 AsPC-1, BxPC-3, HPAF-II, MiaPaCa2, PANC-1, Capan-1, Capan-2 i NCI-N87 ćelije su dodate u mikrotitarske ploče tretirane za
1
kulturu tkiva sa neprozirnim zidovima sa 96 bunarića upotrebom kompletnog medijuma za rast pri gustini od 2500 ćelija/100 mikrolitara (µl) medijuma. Ove ćelije adherentnih ćelijskih linija su inkubirane tokom jedne noći na 37 °C/5% CO2kako bi se omogućilo ćelijama da se prikače za površinu mikrotitarske ploče. Na dan kada su dodata jedinjenja, Jurkat ćelije su dodate u odvojene mikrotitarske ploče sa 96 bunarića pri 2500 ćelija/100 µl upotrebom istog medijuma za rast kao za HCC1954. Jedinjenja su prvo serijski razblažena upotrebom dimetil sulfoksida, i zatim su pripremljena razblaženja dodata u kompletan medijum za rast u pet puta većoj od krajnje koncentracije. Jedinjenja su zatim titrirana 1:3, u osam koraka. Kontrola bez jedinjenja (samo medijum za rast) je uključena na svaku mikrotitarsku ploču u šestoplikatu. Pripremljene titracije jedinjenja dodate su (25 µl/bunariću) u triplikatu. Ćelije i titracije jedinjenja su inkubirane na 37 °C/5% CO2tokom tri noći. Posle inkubacije, vijabilnost ćelija je merena upotrebom CellTiter-Glo® reagensa dodavanjem 30 µl pripremljenog CellTiter-Glo® u svaki testni bunarić. Test je inkubiran tokom najmanje dvadeset minuta u mraku pre merenja emitovane luminescencije upotrebom luminometra za mikroploču (vreme integracije 500 ms). Sakupljene relativne jedinice luminescencije (RLU) su konvertovane u % citotoksičnosti upotrebom prethodno pomenute kontrole samo sa medijumom za rast (% citotoksičnosti = 1 - [RLU bunarića/prosečna RLU kontrole samo sa medijumom]).
[0638] GraphPad Prism® je upotrebljen za generisanje EC50vrednosti upotrebom fitovanja troparametarske nelinearne regresione krive.
Primer 5: Primeri antitelo-lek konjugata.
1. Primeri linkera
[0639] Kao što prepoznaje umereno vešt stručnjak, određeni linker koji se upotrebljava za formiranje konjugata zavisiće od reaktivne grupe reaktantnog jedinjenja koje se upotrebljava za formiranje veze. Kao primer, i unutar obima predmetnog pronalaska, jedinjenja koja imaju tiol funkcionalnu grupu mogu se upotrebljavati za formiranje konjugata. U nekim od predmetnih primera, komercijalno dostupan isecivi linker sulfosukcinimidil 6-[3'(2-piridilditio)-propionamido] heksanoat (sulfo-LC-SPDP: Thermo Pierce Cat# 21650) i neisecivi linker sukcinimidil 4-[N-maleimidometil]cikloheksan-1-karboksilat (SMCC: Thermo Pierce Cat# 22360) se koriste za reakcije antitelo-lek konjugacije. Procedura kuplovanja se izvodi u dva glavna koraka: 1) inkorporacija linkera na antitelo putem reakcije sa primarnim amino grupama antitela (lizinski ostaci) i N-hidroksisukcinimid (NHS) estar
1 4
funkcionalnom grupom linkera; i 2) reakcija inkorporisane maleimidne grupe (SMCC) ili 2-piridilditio grupe (LC-SPDP) sa jedinjenjima koja sadrže tiol.
2. Aktivacija antitela sa isecivim (LC-SPDP) ili neisecivim (SMCC) linkerima
[0640] Antitelo (Herceptin®) je razblaženo u bilo kalijum fosfatu pH 8 (sulfo-LC-SPDP) ili D-PBS (Invitrogen) pH 7,4 (SMCC) do 5 mg/ml. U razblaženo antitelo dodat je sveže rastvoreni linker, upotrebom ultra čiste vode za sulfo-LC-SPDP ili anhidrovanog N,N-dimetilacetamida (DMA) za SMCC. 10-14-struki molarni viškovi SMCC:antitelu ili sulfo-LC-SPDP:antitelu rezultuju inkorporacijom 5-7 linkera/antitelu. Reakcija "aktivacije" linkerantitelo je inkubirana na 28 °C tokom 2 sata. Nakon inkubacije, neizreagovani linker je uklonjen iz svakog uzorka antitela upotrebom 40 kda Zeba™ kolona za ekskluzionu hromatografiju/desalinaciju (Thermo Pierce Cat# 87771, ili 87772 u zavisnosti od razmere). Tokom istog koraka hromatografije pufer je zamenjen u pripremi za sledeću reakciju: bilo fosfatni pufer/EDTA pH 6,5 (LC-SPDP), ili citratni pufer/EDTA pH 5 (SMCC). Prečišćeni preparati su zatim testirani na sadržaj ukupnog proteina nasuprot standardnoj krivi antitela upotrebom BCA testa prilagođenog mikroploči (Thermo Pierce Cat# 23225). Kako bi se procenio stepen inkorporacije linkera, izvedena je reakcija male razmere sa viškom (∼10 puta u poređenju sa koncentracijom proteina) cisteina. Nakon inkubacije od 10 minuta, neizreagovani cistein je detektovan upotrebom 5,5-ditio-bis-(2-nitrobenzoeve kiseline) (Elmanov (Ellman's) reagens, Thermo Pierce Cat# 22582). Pomoću interpolacije koncentracije iz standardne krive cisteina, koncentracija linkera je određena oduzimanjem ustanovljene vrednosti od poznate koncentracije upotrebljenog cisteina.
3. Reakcija jedinjenja koja sadrže tiol sa linkerom aktiviranim antitelom
[0641] U drugom koraku reakcije kuplovanja, aktivirano antitelo korišćeno je tako što se preparat prvo razblaži do 2 mg/ml upotrebom bilo fosfatnog pufera/EDTA pH 6,5 (LC-SPDP), ili citratnog pufera/EDTA pH 5 (SMCC). Pre upotrebe, jedinjenja N-acil sulfonamida koja sadrže tiol su redukovana upotrebom TCEP-agaroza perli kako bi se osiguralo da je tiol grupa dostupna da reaguje sa inkorporisanim linkerima. Ukratko, jedinjenja su razblažena do 5 mM upotrebom fosfatnog pufera/EDTA pH 6,5. U slučajevima kada je solubilnost u vodi problem, dodaje se mala zapremina od 37% HCl (1:300) i to je dovoljno da se jedinjenja solubilizuju na 5 mM. TCEP-agaroza perle (Thermo Pierce Cat# 77712) su ekvilibrisane sa
1
fosfatnim puferom/EDTA/10% DMA pre upotrebe. Razblaženja jedinjenja su rotirana sa TCEP-agaroza perlama najmanje 0,5 sati ili do 3 sata. Redukovana jedinjenja su sakupljena centrifugiranjem preko filtera koji isključuje TCEP-agarozu. Stepen redukcije i koncentracija tiola je merena upotrebom Elmanovog reagensa (u poređenju sa standardnom krivom cisteina). Redukovana jedinjenja koja sadrže tiol su zatim dodata u uzorke aktiviranih antitela u molarnom višku od ∼2-struko u poređenju sa prethodno određenim koncentracijama linkera. Kako bi se pratila efektivnost reakcije kuplovanja, pripremljena je kontrola konjugacije "preko noći" razblaživanjem svakog jedinjenja u fosfatnom puferu/EDTA pH 6,5 ili citratnom puferu/EDTA pH 5 pri istom faktoru razblaženja koji je upotrebljen u reakciji konjugacije. Preostali štokovi jedinjenja su zamrznuti na -80 °C. Reakcije i kontrole preko noći su inkubirane na sobnoj temperaturi preko noći. Sledećeg jutra zamrznuti štokovi jedinjenja su odmrznuti i pripremljena je druga kontrola za svako jedinjenje baš kao kontrola "preko noći" - ovo je "sveža" kontrola. Mala zapremina svake reakcije konjugacije je upoređena sa kontrolom preko noći i svežom kontrolom jedinjenja upotrebom Elmanovog reagensa. Jedinjenje koje nije reagovalo prečišćeno je od ADC upotrebom 40 kda Zeba™ kolona za ekskluziju/desalinaciju; tokom istog koraka pufer je zamenjen sa D-PBS pH 7,4 (Invitrogen). Prečišćeni ADC su zatim analizirani na: sadržaj ukupnih proteina (BCA test, Pierce microBCA protokol), relativni afinitet za vezivanje antigena (ravnotežno nativno vezivanje), i selektivno citotoksično ubijanje HER2-pozitivnih ćelija (HCC1954) u poređenju sa HER2-negativnim ćelijama (Jurkat).
4. Test citotoksičnosti
[0642] Na dan pre dodavanja test artikala, HCC1954 ćelije su dodate u mikrotitarske ploče tretirane za kulturu tkiva sa neprozirnim zidovima sa 96 bunarića upotrebom kompletnog medijuma za rast pri gustini od 2500 ćelija/100 µl medijuma. HCC1954 ćelije su inkubirane tokom jedne noći na 37 °C/5% CO2kako bi se omogućilo ćelijama da se prikače za površinu mikrotitarske ploče. Na dan kada su dodati test artikli, Jurkat ćelije su dodate u odvojene mikrotitarske ploče sa 96 bunarića pri 2500 ćelija/100 µl upotrebom istog medijuma za rast kao za HCC1954. Kako bi se uporedilo ubijanje ADC sa onim dobijenim od slobodnih jedinjenja, jedinjenja N-acil sulfonamida su prvo serijski razblažena upotrebom dimetil sulfoksida ili DMA, i zatim su pripremljena razblaženja dodata u kompletan medijum za rast u pet puta većoj od krajnje koncentracije. Jedinjenja su zatim titrirana 1:3, u osam koraka. Kako bi se testirali ADC, oni su razblaženi direktno u medijumu za rast u pet puta većoj od
1
krajnje koncentracije. ADC su zatim titrirani 1:3, u osam koraka. Kontrola bez prisutnog test artikla (samo medijum za rast) je uključena na svaku mikrotitarsku ploču u šestoplikatu. Pripremljene titracije jedinjenja/ADC dodate su (25 µl/bunariću) u triplikatu i u HCC1954 ćelije i u Jurkat ćelije. Ćelije i titracije su inkubirane na 37 °C/5% CO2tokom tri noći. Posle inkubacije, vijabilnost ćelija je merena upotrebom CellTiter-Glo® reagensa dodavanjem 30 µl pripremljenog CellTiter-Glo® u svaki testni bunarić. Test je inkubiran tokom najmanje dvadeset minuta u mraku pre merenja emitovane luminescencije upotrebom luminometra za mikroploču (vreme integracije 500 ms). Sakupljene relativne jedinice luminescencije (RLU) su konvertovane u % citotoksičnosti upotrebom prethodno pomenute kontrole samo sa medijumom za rast (% citotoksičnosti = 1 - [RLU bunarića/prosečna RLU kontrole samo sa medijumom]).
5. Analiza antitelo-lek konjugata (ADC) pomoću EsiToF masene spektrometrije.
[0643] Instrument maseni spektrometar (MS) za vreme leta elektrosprej jonizacije (electrospray ionization time of flight - EsiToF) (QStar XL Hybrid quadrupole-TOF LC/MSMS; AB Sciex) upotrebljen je za određivanje molekulske težine ADC i za procenu odnosa lek-prema-antitelu (DAR). EsiToF MS instrument je opremljen elektrosprej jonizacionim turbo izvorom spreja. Akvizicija podataka je izvršena u režimu pozitivnih jona, i ukupna struja jona uzorka dobijena je u opsegu mase od 2.000 m/z do 4.000 m/z upotrebom Analyst QS 1.1 softvera. Jonski izvor je radio sa naponom igle za raspršivanje jona od 5,2 KV, nebulizacijom (gas 1) pri 25 (arbitrarne jedinice), gasnom zavesom od 30 (arbitrarne jedinice), potencijalom za deklasterovanje od 150 V i na temperaturi od 150 °C. Rastvori test uzoraka ADC su uneti pri 5 µl/min u jonski izvor direktnom infuzijom putem fuzionisane silicijum dioksid kapilare uz pomoć šprica i špric pumpe. Tipično DAR je u opsegu od 0 do 4.
6. Priprema ADC uzoraka za Esi-ToF MS analizu
[0644] Svi ADC uzorci su deglikozilovani upotrebom EndoS(IgGZERO)™ endoglikozidaze i pufer je zamenjen vodom pre EsiToF-MS analize. Ukratko, originalni ADC uzorak je propušten kroz 100 K MWCO Amicon koncentrator za izmenu pufera u natrijum-fosfatnom puferu. Uzorak sa izmenjenim puferom je zatim tretiran sa IgGZERO™ (1 jedinica/1 µg antitela) u natrijum fosfatnom puferu za isecanje, koji sadrži 150 mM NaCl, i inkubiran tokom 30 minuta na 37 °C. Rezultujućem deglikozilovanom ADC ponovo je pufer zamenjen
1
vodom upotrebom 100 K MWCO Amicon koncentratora, i razblažen je sa 0,1% mravljom kiselinom u acetonitrilu/vodi (50/50 zapr./zapr.%) do koncentracije od 3,0 µg/µl pre analize.
Primer 6: Primeri antitelo-lek konjugata
1. Priprema antitelo-lek konjugata od MCvcPABC-toksini, opšti postupci
[0645] U rastvor antitela (1-10 mg/ml) u 25 mM natrijum boratu, 25 mM natrijum hloridu, 1 mM DTPA (pH 8,0) dodat je TCEP iz sveže pripremljenog štoka (1-10 mM) u istom puferu (2,0-3,0 molarnih ekvivalenata). Rastvor je temeljno promešan i inkubiran na 37 °C tokom 2 h pre hlađenja na ledu. U nekim slučajevima rastvor redukovanog antitela dodatno je razblažen bilo sa ledeno hladnim fosfatom puferisanim fiziološkim rastvorom koji sadrži 1 mM DTPA (krajnja koncentracija proteina 2,0 mg/ml) ili ledeno hladnim 25 mM natrijum boratom, 25 mM natrijum hloridom, 1 mM DTPA (ph 8,0), kako bi se dobio rastvor sa krajnjom koncentracijom proteina između 1 i 4 mg/ml. U rastvor redukovanog proteina skladištenog na ledu dodat je maleimidni funkcionalizovani toksin (10-12 molarnih ekvivalenata) iz 10 mM DMSO štok rastvora. Reakcija konjugacije je odmah temeljno promešana inverzijom, i konjugaciji je omogućeno da se odvija na ledu tokom perioda od približno 1 sata pre prečišćavanja propuštanjem preko Zeba™ kolone za desalinaciju (40 KDa MWCO; Peirce) prethodno ekvilibrisane sa fosfatom puferisanim fiziološkim rastvorom ili 10 mM natrijum citratom, 150 mM natrijum hloridom, pH 5,5. Eluat je puliran, sterilisan filterom (Steriflip®, Millipore), i skladišten na 4 °C. Prečišćeni ADC analizirani su na sadržaj ukupnih proteina (test bicinhonske kiseline, Pierce microBCA protokol, kataloški #23225). ADC proizvod je karakterisan pod redukujućim i neredukujućim uslovima pomoću PAGE, HPLC-HIC, SEC, i RP-UPLC-MS. Prosečni DAR i distribucija leka izvedeni su iz interpretacije HIC i LC-MS podataka u odnosu na PAGE pod neredukujućim uslovima. Procene prosečnog DAR su normalno u opsegu od 3,5-4,5. Relativni afinitet ADC za vezivanje antigena (ravnotežno nativno vezivanje) izveden je kao što je opisano (prethodno/u nastavku). Selektivna citotoksičnost antitelo lek konjugata je procenjena testiranjem za ubijanje i antigen pozitivnih i antigen negativnih ćelijskih linija.
2. Test selektivne in vitro citotoksičnosti antigen-pozitivnih ćelija pomoću antitelo lek konjugata
1
[0646] Selektivno ubijanje antigen pozitivne ćelijske linije (uključujući ćelijske linije HCC1954, NCI-N87, HPAF-II i BxPC-3) a ne antigen negativnih Jurkat ćelija demonstrirano je za svaki pripremljeni konjugat. Ukratko, ćelije su dobijene iz ATCC i kultivisane kao što je opisano u priloženom listu proizvoda. Ćelije su zasejane pri 25.000 ćelija/ml (2.500 ćelija/bunariću) u Costar 3904 ploče sa crnim zidovima i ravnim dnom sa 96 bunarića. Ćelije adherentnih ćelijskih linija su inkubirane tokom jedne noći na 37 °C/5% CO2atmosferi kako bi se omogućilo ćelijama da se prikače za površinu mikrotitarske ploče, dok su ćelije u suspenziji (Jurkat) zasejane neposredno pre upotrebe. ADC su razblaženi direktno u odgovarajućem medijumu za rast ćelija u pet puta većoj od željene krajnje koncentracije. Ovi ADC su zatim titrirani, normalno 1:3, u osam koraka. Kontrola bez prisutnog test artikla (samo medijum za rast) je uključena na svaku mikrotitarsku ploču u šestoplikatu. Pripremljene titracije ADC dodate su (25 µl/bunariću) u triplikatu svakoj testiranoj ćelijskoj liniji. Ćelije i titracije su inkubirane na 37 °C/5% CO2tokom tri noći (Jurkat) i pet noći (sve ostale ćelijske linije). Posle inkubacije, vitalnost ćelija je merena upotrebom CellTiter-Glo® reagensa dodavanjem 30 µl pripremljenog CellTiter-Glo® u svaki testni bunarić. Smeše su inkubirane tokom najmanje dvadeset minuta u mraku pre merenja emitovane luminescencije upotrebom luminometra za mikroploču (vreme integracije 500 ms). Sakupljene relativne jedinice luminescencije (RLU) su konvertovane u % citotoksičnosti upotrebom prethodno pomenute kontrole samo sa medijumom za rast (% citotoksičnosti = 1 - [RLU bunarića/prosečna RLU kontrole samo sa medijumom]). Podaci (% citotoksičnosti naspram koncentracije ADC (log10(nM))) su prikazani u grafičkom formatu i analizirani postupcima nelinearne regresije upotrebom GraphPad Prism softvera v. 5.02 kako bi se dobile procene EC50.
3. Procena odnosa leka prema antitelu (DAR)
[0647] Prosečan stepen konjugacije toksin-linkera za antitelo procenjen je hromatografijom hidrofobne interakcije i tečnom hromatografijom visokih performansi-masenom spektrometrijom. Ove tehnike su opisane u Antibody Drug Conjugates, Methods in Molecular Biology vol. 1045, 2013. pp 275-284. L. Ducry, Ed., i Asish B. Chakraborty, Scott J. Berger and John C. Gebler, Characterization of an IgG1 Monoclonal Antibody and related Substructures by LC/ESI-TOF/MS: Application note, Waters Corporation. March 2007.
720002107EN. Tipično, DAR je u opsegu od 0 do 4.
1
Postupak 1. Hromatografija hidrofobne interakcije
[0648] Antitelo lek konjugati su podvrgnuti hromatografiji hidrofobne interakcije (HIC) na TSKgel® Butil-NPR koloni (Tosoh Bioscience; 4,6 mm × 35 mm i.d.; veličina čestica 2,5 µm) spojenoj sa Agilent HPLC serije 1100. Uzorci su injektirani (5 µl) pri ili iznad 4 mg/ml. Tamo gde je potrebno, ADC su koncentrovani pre injektiranja upotrebom PALL Nanosep Omega centrifugalnih uređaja za koncentrovanje (deo # OD010C34). Koristilo se eluiranje linearnim gradijentom počevši od 95% mobilne faze A/5% mobilne faze B, prelazeći na 5% mobilne faze A/95% mobilne faze B tokom perioda od 12 minuta (mobilna faza A: 1,5 M amonijum sulfat 25 mM natrijum fosfat na pH 6,95 i mobilna faza B: 25% izopropanol, 75% 25 mM natrijum fosfat pri pH 6,95). Injekcija nemodifikovanog antitela obezbedila je način za identifikovanje pika sa DAR = 0. Antitela su detektovana na osnovu apsorbance na 280 nm.
Postupak 2. Tečna hromatografija ultra performansi-masena spektrometrija za procenu DAR
[0649] Tandemska tečna hromatografija ultra performansi na reverznim fazama ESI-QToF-masena spektrometrija (UPLC-ESI-QToF-MS) upotrebljena je za karakterizaciju antitelo lek konjugata u pogledu stepena konjugacije leka nakon redukcije sa ditiotreitolom. Karakterizacija je izvedena upotrebom Acquity-UPLC® (H-klasa) bio kuplovanog za Quattro-Premier™ QToF maseni spektrometar sa elektrosprej izvorom jona (WATERS Corporation). UPLC analiza redukovanog ADC uzorka je izvedena na 70 °C sa PolymerX™ 5u PR-1 100A, 50 × 2,0 mm kolonom (Phenomenex, Inc.) i sa mobilnom fazom sačinjenom od rastvarača A: acetonitril/voda/trifluorosirćetna kiselina/mravlja kiselina (10/90/0,1/0,1, zapr./zapr.%), i rastvarača B: acetonitril/mravlja kiselina (100/0,1, zapr./zapr.). Komponente redukovanog ADC uzorka su eluirane linearnim gradijentom počevši od rastvarač A/rastvarač B (80/20 zapr./zapr. i stope protoka od 0,3 ml/min do rastvarač A/rastvarač B (40/60, zapr./zapr.) tokom 25 min, i zatim do rastvarač A/rastvarač B (10/90, zapr./zapr.%) tokom 2 min pre vraćanja ravnoteže u inicijalne uslove. Ukupno vreme rada bilo je 30 min. Podaci ukupne struje jona ESI-ToF MS (TIC) prikupljeni su u opsegu od 500-4.500 m/z upotrebom MassLynx™ softvera za prikupljanje podataka (Waters Corporation). Podaci o masi komponente uzorka prikupljeni su u V-modu pozitivnih jona, i ESI izvor radi na temperaturi izvora: 150 °C, temperaturi desolvatacije: 350 °C, gas za desolvataciju: 800 l/h, napon konusa uzorka: 60 V, kapilarni napon: 3,0 kV, gas za desolvataciju: azot, i kolizioni gas: argon.
1
Sumirani TIC maseni spektar za svaki pik je dekonvolucionisan Maximum Entropy™ 1 (Max-Ent1) algoritmom kako bi se generisali podaci o neutralnoj masi komponente pika.
4. Priprema redukovanih ADC uzoraka za UPLC/ESI-ToF MS analizu
[0650] Redukcija disulfidnih veza u antitelu iz ADC (∼ 1 µg/µl rastvor) kako bi se generisali laki i teški lanci izvedena je upotrebom 20 mM DTT na 60 °C tokom 20 min. Za UPLC/ESI-ToF-MS analizu korišćena je zapremina injekcije od 5-10 µl redukovanog ADC uzorka.
Primer 6.1 Primeri antitelo-lek konjugata
1. Priprema antitelo-lek konjugata od maleimidnih funkcionalizovanih lek-linkera, opšti postupci
[0651] U rastvor antitela (1-10 mg/ml) u fosfatom puferisanom fiziološkom rastvoru (pH 7,4) dodat je TCEP iz sveže pripremljenog štoka (1-10 mM) u istom puferu (2,0-3,0 molarnih ekvivalenata). Rastvor je temeljno promešan i inkubiran na 37 °C tokom 2 h pre hlađenja na ledu. U nekim slučajevima, rastvor redukovanog antitela dodatno je razblažen sa ledeno hladnim fosfatom puferisanim fiziološkim rastvorom koji sadrži 1 mM DTPA kako bi se dobio rastvor sa krajnjom koncentracijom proteina između 1 i 5 mg/ml. U rastvor redukovanog proteina skladištenog na ledu dodat je maleimidni funkcionalizovani lek-linker (8-10 molarnih ekvivalenata) iz 10-20 mM DMSO štok rastvora. Reakcija konjugacije je odmah temeljno promešana inverzijom, i konjugaciji je omogućeno da se odvija na ledu tokom perioda od približno 1 sata pre prečišćavanja propuštanjem preko Zeba™ Spin kolone za desalinaciju (40 KDa MWCO; Peirce) prethodno ekvilibrisane sa fosfatom puferisanim fiziološkim rastvorom. Eluat je puliran, sterilisan filterom (Steriflip®, Millipore), i skladišten na 4 °C. Prečišćeni ADC analizirani su na sadržaj ukupnih proteina (test bicinhonske kiseline, Pierce microBCA protokol, kataloški #23225). ADC proizvod je karakterisan pod redukujućim i neredukujućim uslovima pomoću PAGE, HPLC-HIC, SEC, i RP-UPLC-MS. Prosečni DAR i distribucija leka izvedeni su iz interpretacije HIC i LC-MS podataka u odnosu na PAGE pod neredukujućim uslovima. Procene prosečnog DAR su normalno bile u opsegu od 3,5-4,2. Relativni afinitet ADC za vezivanje antigena (ravnotežno nativno vezivanje) izveden je kao što je opisano (u nastavku). Selektivna citotoksičnost antitelo leka
1 1
konjugata je procenjena testiranjem za ubijanje i antigen pozitivnih i antigen negativnih ćelijskih linija u testu ćelijske citotoksičnosti.
2. Test selektivne in vitro citotoksičnosti antitelo lek konjugata na antigen-pozitivnim ćelijama
[0652] Antitelo lek konjugati su testirani za citotoksičnost na kultivisanim ćelijskim linijama uključujući ćelijsku liniju humane T-ćelijske leukemije Jurkat (ATCC: TIB-152); ćelijske linije humanog kancera dojke HCC1954 (ATCC: CRL-2338) i JIMT-1 (DSMZ: ACC 589), ćelijsku liniju humanog adenokarcinoma jajnika SK-OV-3 (ATCC: HTB-77); ćelijsku liniju humanog karcinoma želuca NCI-N87 (ATCC: CRL-5822); ćelijsku liniju humanog ne-Hočkinovog limfoma Karpas299 (Zbirke kultura Agencije za zaštitu zdravlja: 06072604); i ćelijsku liniju humanog Burkitovog limfoma Ramos (ATCC: CRL-1596). Selektivno ubijanje antigen pozitivne ćelijske linije (uključujući ćelijske linije HCC1954, NCI-N87, SK-OV-3, i JIMT-1 za konjugate zasnovane na trastuzumabu; Ramos ćelijske linije za konjugate zasnovane na rituksimabu; Karpas 299 za konjugate zasnovane na brentuksimabu (cAC-10)) a ne jedne ili više antigen negativnih ćelijskih linija (Jurkat, Karpas299 i Ramos za konjugate zasnovane na trastuzumabu; NCI-N87 za konjugate zasnovane na brentuksimabu (cAC-10) i konjugate zasnovane na rituksimabu) demonstrirano je za svaki pripremljeni konjugat. Ukratko, ćelije su dobijene iz komercijalnih izvora i kultivisane kao što je opisano u priloženom listu proizvoda. Ćelije su zasejane pri 25.000 ćelija/ml (2.500 ćelija/bunariću) u Costar 3904 ploče sa crnim zidovima i ravnim dnom sa 96 bunarića. Adherentne ćelijske linije su inkubirane tokom jedne noći na 37 °C/5% CO2atmosferi kako bi se omogućilo ćelijama da se prikače za površinu mikrotitarske ploče, dok su ćelije u suspenziji (Jurkat) zasejane neposredno pre upotrebe. ADC su razblaženi direktno u odgovarajućem medijumu za rast ćelija u pet puta većoj od željene krajnje maksimalne koncentracije. Ovi ADC su zatim titrirani, normalno 1:3, u osam koraka. Kontrola bez prisutnog test artikla (samo medijum za rast) je uključena na svaku mikrotitarsku ploču u šestoplikatu. Pripremljene titracije ADC dodate su (25 µl/bunariću) u triplikatu svakoj testiranoj ćelijskoj liniji. Ćelije i titracije su inkubirane na 37 °C/5% CO2tokom tri noći (Jurkat) i pet noći (sve ostale ćelijske linije). Posle inkubacije, vijabilnost ćelija je merena upotrebom CellTiter-Glo® dodavanjem 30 µl pripremljenog CellTiter-Glo® reagensa u svaki testni bunarić. Smeše su inkubirane tokom najmanje dvadeset minuta u mraku pre merenja emitovane luminescencije upotrebom luminometra za mikroploču (vreme integracije 500 ms). Sakupljene relativne jedinice
1 2
luminescencije (RLU) su konvertovane u % citotoksičnosti upotrebom prethodno pomenute kontrole samo sa medijumom za rast (% citotoksičnosti = 1 - [RLU bunarića/prosečna RLU kontrole samo sa medijumom]). Podaci (% citotoksičnosti naspram koncentracije ADC (log10(nM))) su prikazani u grafičkom formatu i fitovani na krive upotrebom postupaka nelinearne regresije (nagib sa četiri parametra promenljive) upotrebom GraphPad Prism softvera v.5.02 kako bi se dobile procene EC50.
3. Procena odnosa leka prema antitelu (DAR)
[0653] Prosečan stepen konjugacije toksin-linkera za antitelo procenjen je hromatografijom hidrofobne interakcije i tečnom hromatografijom visokih performansi-masenom spektrometrijom. Ove tehnike su opisane u Antibody Drug Conjugates, Methods in Molecular Biology vol. 1045, 2013. pp 275-284. L. Ducry, Ed., i Asish B. Chakraborty, Scott J. Berger and John C. Gebler, Characterization of an IgG1 Monoclonal Antibody and related Substructures by LC/ESI-TOF/MS: Application note, Waters Corporation. March 2007.
720002107EN.
Postupak 1. Hromatografija hidrofobne interakcije
[0654] Antitelo lek konjugati su podvrgnuti hromatografiji hidrofobne interakcije (HIC) na TSKgel® Butil-NPR koloni (Tosoh Bioscience; 4,6 mm × 35 mm i.d.; veličina čestica 2,5 µm) spojenoj sa Agilent HPLC serije 1100. Uzorci su injektirani (5 µl) pri ili iznad 4 mg/ml. Koristilo se eluiranje linearnim gradijentom počevši od 95% mobilne faze A/5% mobilne faze B, prelazeći na 5% mobilne faze A/95% mobilne faze B tokom perioda od 12 minuta (mobilna faza A: 1,5 M amonijum sulfat 25 mM natrijum fosfat na pH 6,95 i mobilna faza B: 25% izopropanol, 75% 25 mM natrijum fosfat pri pH 6,95). Alternativni gradijenti koji upotrebljavaju iste komponente mobilne faze ponudile su poboljšanu rezoluciju nekih konjugata. Injekcija nemodifikovanog antitela obezbedila je način za identifikovanje pika sa DAR = 0. Antitela su detektovana na osnovu apsorbance na 280 nm.
Postupak 2. Tečna hromatografija ultra performansi-masena spektrometrija za procenu DAR
[0655] Tandemska tečna hromatografija ultra performansi na reverznim fazama ESI-QToF-masena spektrometrija (UPLC-ESI-QToF-MS) upotrebljena je za karakterizaciju antitelo lek
1
konjugata u pogledu stepena konjugacije leka nakon redukcije sa ditiotreitolom. Karakterizacija je izvedena upotrebom Acquity-UPLC® (H-klasa) bio kuplovanog za Quattro-Premier™ QToF maseni spektrometar sa elektrosprej izvorom jona (WATERS Corporation). UPLC analiza redukovanog ADC uzorka je izvedena na 70 °C sa PolymerX™ 5u PR-1 100A, 50 × 2,0 mm kolonom (Phenomenex, Inc.) i sa mobilnom fazom sačinjenom od rastvarača A: acetonitril/voda/trifluorosirćetna kiselina/mravlja kiselina (10/90/0,1/0,1, zapr./zapr.%), i rastvarača B: acetonitril/mravlja kiselina (100/0,1, zapr./zapr.). Komponente redukovanog ADC uzorka su eluirane linearnim gradijentom počevši od rastvarač A/rastvarač B (80/20 zapr./zapr. i stope protoka od 0,3 ml/min do rastvarač A/rastvarač B (40/60, zapr./zapr.) tokom 25 min, i zatim do rastvarač A/rastvarač B (10/90, zapr./zapr.%) tokom 2 min pre vraćanja ravnoteže u inicijalne uslove. Ukupno vreme rada bilo je 30 min. Podaci ukupne struje jona ESI-ToF MS (TIC) prikupljeni su u opsegu od 500-4.500 m/z upotrebom MassLynx™ softvera za prikupljanje podataka (Waters Corporation). Podaci o masi komponente uzorka prikupljeni su u V-modu pozitivnih jona, i ESI izvor radi na temperaturi izvora: 150 °C, temperaturi desolvatacije: 350 °C, gas za desolvataciju: 800 l/h, napon konusa uzorka: 60 V, kapilarni napon: 3,0 kV, gas za desolvataciju: azot, i kolizioni gas: argon. Sumirani TIC maseni spektar za svaki pik je dekonvolucionisan Maximum Entropy™ 1 (Max-Ent1) algoritmom kako bi se generisali podaci o neutralnoj masi komponente pika.
4. Priprema redukovanih ADC uzoraka za UPLC/ESI-ToF MS analizu
[0656] Redukcija disulfidnih veza u antitelu iz ADC (∼ 1 µg/µl rastvor) kako bi se generisali laki i teški lanci izvedena je upotrebom 20 mM DTT na 60 °C tokom 20 min. Za UPLC/ESI-ToF-MS analizu korišćena je zapremina injekcije od 5-10 µl redukovanog ADC uzorka.
5. Određivanje relativnog afiniteta ADC za antigen upotrebom testa ravnotežnog nativnog vezivanja
[0657] Vezivanje antitela i njihovih konjugata rangirano je upotrebom testa ravnotežnog nativnog vezivanja. Eksperiment je izveden kako bi se uporedilo vezivanje trastuzumaba i antitelo lek konjugata na bazi trastuzumaba za MDA-MB-231 ćelijsku liniju (ATCC: HTB-26). MDA-MB-231 ćelije su kultivisane kao što je opisano u listu proizvoda koju je obezbedio dobavljač. Ćelije (∼ 60% konfluentne) su jednom isprane sa PBS i uklonjene iz flaska za kulturu upotrebom pufera za ćelijsku disocijaciju (Sigma 5914), zatim
1 4
resuspendovane u medijumu ćelijske kulture i premeštene u ploču sa V-dnom sa 96 bunarčića (Sartstedt 82.1583.001; 50000 ćelija po bunariću) pre peletiranja ćelija (400 × g, 3 min) i odbacivanja supernatanta. Antitela i antitelo lek konjugati su titrirani u ledeno hladnom medijumu za kulturu ćelija, 1:3 od 60 µg/ml početne koncentracije. Ove titracije (20 µl) su upotrebljene za resuspendovanje ćelijskih peleta i zatim inkubirane sa ćelijama preko noći kako bi se postigla ravnoteža. Nevezano antitelo je isprano pomoću dva peletiranja i resuspendovanja ćelija u FACS puferu (200 µl; PBS pH 7,4 koji sadrži 1% FBS), zatim peletiranjem i resuspendovanjem u istom puferu (200 µl) koji sadrži 2 µg/ml Gt anti-Human IgG-Fc-Alexa647 (Jackson Immuno Cat# 109-605-098) i 2,5 µg/ml 7-aktinomicina D (Sigma Cat# A9400) i inkubiranjem na ledu tokom 30 min. Ćelije su isprane kao što je prethodno navedeno, resuspendovane u 50 µl FACS pufera i analizirane pomoću protočne citometrije (BD Accuri) i isključujući 7-AAD pozitivne događaje. GraphPad Prism je korišćen za fitovanje kriva podacima upotrebom analize nelinearne regresije sa 4 parametra i promenljivim nagibom. Podaci iz reprezentativnog eksperimenta rangiranja relativnog afiniteta pokazani su na Slici 6.
Primer 7: Antitelo lek konjugati Jedinjenja Formule I.
[0658] Upotrebom postupaka sličnih onim opisanim u Primerima 5 i 6, pripremljen je sledeći trastuzumab ADC, pri čemu je n = 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, ili 8. Prosečno n je bilo ~ 4.
[0659] Citotoksičnost T-MTvc-Jedinjenja 5 na Her2-pozitivnim NCI-N87 i HCC1954 ćelijskim linijama i na Her2-negativnoj Jurkat ćelijskoj liniji pokazana je u Tabeli 3 i na Slikama 3-5.
1
Tabela 3
Primer 7.1: Antitelo lek konjugati Jedinjenja Formule I.
[0660] Upotrebom postupaka sličnih onim opisanim u Primeru 6.1, pripremljeni su sledeći antitelo lek konjugati od trastuzumaba (Herceptin, Roche), rituksimaba (Rituxan, Roche) i brentuksimaba (cAC-10) pri čemu je prosečan n približno 4.
T-MTvc-Jedinjenje 11
1
T-MTvc-Jedinjenje 32
1
[0661] Citotoksičnosti antitelo lek konjugata iz Primera 7 su testirane i na antigen pozitivnoj i na antigen negativnoj ćelijskoj liniji. Rezultati su pokazani u Tabeli 3.1.
1
Tabela 3.1
1 Primer 8: Studija efikasnosti toksina kod miševa koji imaju PC-3 tumor
[0662] Test artikli su primenjeni IV. Doziranje je blizu maksimalno tolerisane doze. Jedna injekcija test artikla primenjena je svakih sedam dana sa četiri ponavljanja/injekcije ili jedna injekcija svakih sedam dana sa tri ponavljanja/injekcije. Vehikulum: 6,3% trehaloza, 0,05% Tween® 20, 20 mM citratni pufer, pH 5,0, 4 °C.
1. Pregled procedure
[0663] Ženke atimičnih golih miševa, kupljene od Harlan Laboratories starosti od 7-8 nedelja, inokulisane su subkutano u leđa sa 5 × 10<6>PC-3 tumorskih ćelija na eksperimentalni dan 0. Tumori su mereni svakog ponedeljka, srede, i petka. Kada su tumori dostigli veličinu od 150-200 mm<3>, životinje su raspoređene u jednu od 4 grupe tretmana uravnotežujući prosečnu veličinu tumora po grupama. Životinje su tretirane sa njihovim respektivnim jedinjenjem, i merenje tumora je nastavljeno svakog ponedeljka, srede, i petka.
2. PC-3 ćelije: priprema ćelija - kultura tkiva
[0664] PC-3 ćelijska linija humanog adenokarcinoma prostate dobijena je od ATCC (Cat # CRL-1435). Ćelije su pokrenute iz zamrznute bočice laboratorijskog štoka koji je zamrznut iz originalne ATCC bočice, testiran na mikoplazmu negativno i čuvan u laboratorijskim rezervoarima sa tečnim azotom. Ćelijske kulture sa pasažima #3 do #10 i konfluentnošću od 80-90% sakupljene su za in vivo studije. Ćelije su uzgajane u Hamovom (Ham's) F12 medijumu sa dodatkom 2 mM L-glutamina i 10% FBS na 37 °C/5% CO2okruženju. Ćelije se subkultivisane jednom nedeljno sa odnosom podele 1:3 do 1:6 i umnožene. Medijum je obnavljan jednom nedeljno.
3. Priprema ćelija - sakupljanje za implantaciju
[0665] Ćelije su jednom kratko isprane sa 2 ml svežeg rastvora tripsin/EDTA (0,25% tripsin sa EDTA 4Na), i zatim je aspiriran višak tripsin/EDTA. Zatim je dodato 1,5 ml tripsin/EDTA, i flask je postavljen horizontalno kako bi se osiguralo da su ćelije pokrivene sa tripsin/EDTA. Ćelije su zatim inkubirane na 37 °C tokom nekoliko minuta. Ćelije su posmatrane pod invertnim mikroskopom kako bi se osiguralo da je ćelijski sloj raspršen, zatim je dodat svež
1
medijum, i uzet je uzorak od 50 µl ćelijske suspenzije i pomešan sa tripan plavom (1:1) i ćelije su prebrojane i procenjena je vijabilnost ćelija upotrebom Cellometer® Auto T4. Ćelije su centrifugirane na 1000 rpm tokom 7 minuta i supernatant je aspiriran. Ćelije su zatim resuspendovane u medijumu za rast do odgovarajuće koncentracije za inokulaciju. Zapremina injekcije je 100 µl po životinji.
4. Implantacija tumorskih ćelija - SC leđa
[0666] Na dan 0, 5,0 × 10<6>tumorskih ćelija implantirano je subkutano u leđa miševa u zapremini od 100 µl upotrebom igle veličine 27/28 pod anestezijom izofluranom.
5. Smeštaj životinja
[0667] Životinje su bile smeštene u ventilisanim kavezima, 2 do 5 životinja po kavezu, u 12-časovnom svetlo/mrak ciklusu. Životinje su dobijale sterilnu hranu i vodu ad libitum i smeštaj i upotreba životinja vršena je u skladu sa smernicama kanadskog Saveta za brigu o životinjama. Sa životinjama se rukovalo aseptično, i podloga u kavezima je menjana jednom na svakih 10-14 dana.
6. Sakupljanje podataka (veličina tumora)
[0668] Miševi su praćeni svakog ponedeljka, srede, i petka radi razvoja tumora. Dimenzije ustanovljenih tumora merene su kaliperom. Zapremine tumora su izračunate u skladu sa jednačinom [L × W<2>] ÷ 2 pri čemu je dužina (L) duža osa tumora. Životinjama je takođe merena težina u vreme merenja tumora. Tumorima je omogućeno da rastu do maksimalno 800 mm<3>.
7. Postupci analize: krive rasta zapremina tumora X eksperimentalni dan
[0669] Zapremine tumora svake grupe tokom dana tretmana prikazane su u grafičkom formatu. Krive rasta su granične za svaku grupu u vremenskoj tački kada prva životinja dostigne eksperimentalnu krajnju tačku veličine tumora (800 mm<3>), ili poslednjeg dana studije. Bilo koja životinja koja je povučena iz studije pre granične krive rasta grupe u potpunosti je uklonjena iz studije.
1 1
8. Isključivanja životinja
[0670] Bilo koja životinja sa ulcerativnim tumorima, za koje je potrebna eutanazija životinje, sa zapreminom tumora od 700 mm<3>ili manjom, uklonjena je iz studije i ne doprinosi analizi podataka (osim za dane do recidiva ukoliko je krajnja zapremina tumora >2,0 struko veća nego na dan tretmana).
Primer 9: Pronalaženje opsega efikasne doze antitelo lek konjugata u NCI-N87 modelu tumora upotrebom NOD SCID gama miševa
[0671] Test artikli su primenjeni IV, samo jedan tretman. Testirane doze su 3, 7, i 12 mg/kg. Vehikulum: 20 mM natrijum citrat, 6,3% trehaloza, 0,02% Tween® 20, pH 5, 4 °C.
1. Pregled procedure
[0672] Sedamdeset šest (76) ženki NOD/SCID gama miševa (NSG), kupljenih od The Jackson Laboratory (JAX® Mice) starosti od 7-8 nedelja, inokulisano je subkutano u donji deo leđa sa 5 × 10<6>NCI-N87 tumorskih ćelija u matrigelu na eksperimentalni dan 0. Tumori su mereni svakog ponedeljka, srede, i petka. Kada su tumori dostigli veličinu od 150-200 mm<3>, životinje su raspoređene u jednu od 10 grupa tretmana uravnotežujući prosečnu veličinu tumora po grupama. Životinje su tretirane sa njihovim respektivnim jedinjenjem, i merenje tumora je nastavljeno svakog ponedeljka, srede, i petka.
2. Priprema ćelija - kultura tkiva: NCI-N87 ćelije
[0673] NCI-N87 ćelije humanog karcinoma želuca poreklom su iz metastaze u jetri dobro diferenciranog karcinoma želuca uzete pre citotoksične terapije. Tumor je pasažiran kao ksenograft kod atimičnih golih miševa tokom tri pasaža pre nego što je uspostavljena ćelijska linija. NCI-N87 ćelije su dobijene od ATCC (Cat # CRL-5822) i testirane su kao negativne na RADIL na mikoplazmu i mišje patogene.
[0674] Ćelije su pokrenute iz zamrznute bočice laboratorijskog štoka koji je zamrznut iz originalne ATCC bočice i čuvan u laboratorijskim rezervoarima sa tečnim azotom. Ćelijske kulture sa pasažima #3 do #10 i konfluentnošću od 80-90% sakupljene su za in vivo studije.
1 2
NCI-N87 ćelije su uzgajane u RPMI 1640 medijumu sa 1,0 mM L-glutaminom i 10% FBS pri 37 °C/5% CO2okruženju. Ćelije su subkultivisane jednom ili dva puta nedeljno sa odnosom podele 1:3 ili 1:4 i umnožene. Medijum je obnavljan jednom nedeljno. Ćelije su zamrznute sa 5% DMSO.
3. Priprema ćelija - sakupljanje za implantaciju
[0675] Ćelije su jednom kratko isprane sa Henkovim (Hank's) balansiranim rastvorom soli bez Ca, Mg. Dodat je svež rastvor tripsin/EDTA (0,25% tripsin sa EDTA 4Na), i flask je položen horizontalno kako bi se osiguralo da su ćelije pokrivene sa tripsin/EDTA, i zatim je aspiriran višak tripsin/EDTA. Ćelije su inkubirane na 37 °C tokom nekoliko minuta. Ćelije su posmatrane pod invertnim mikroskopom dok se sloj ćelija nije raspršio, i zatim je dodat svež medijum. Zatim je sakupljeno 50 µl ćelijske suspenzije i pomešano sa tripan plavom (1:1), i ćelije su prebrojane i procenjena je vijabilnost na hemocitometru. Vijabilnost treba da bude ≥90%. Ćelije su centrifugirane na 125 RCF (1.000 rpm) tokom 7 minuta i supernatant je aspiriran. Ćelije su resuspendovane u hladnom medijumu za rast do 2 puta veće od željene krajnje koncentracije (100 × 10<6>/ml). Suspenzija je pomešana (na ledu) sa matrigelom (1:1). Rezultujuće ćelijske suspenzije (50 × 10<6>ćelija/ml) su upotrebljene za isporuku 5 × 10<6>ćelija u zapremini injekcije od 100 µl po životinji. Sva oprema koja dolazi u kontakt sa matrigelom (igle, špricevi, vrhovi pipete) ohlađena je pre injekcije.
4. Implantacija tumorskih ćelija - SC (NCI-N87)
[0676] Pre inokulacije, površina, približno 2 × 2 cm, je obrijana u regionu donjeg dela leđa svakog miša i očišćena alkoholom. Na dan 0, 5,0 × 10<6>tumorskih ćelija implantirano je subkutano u leđa miševa u zapremini od 100 µl upotrebom igle veličine 27/28 pod anestezijom izofluranom.
5. Smeštaj životinja
[0677] Životinje su smeštene u ventilisanim kavezima, 2 do 5 životinja po kavezu, u 12-časovnom svetlo/mrak ciklusu. Životinje su dobijale sterilnu hranu i vodu ad libitum i smeštaj i upotreba životinja vršena je u skladu sa smernicama kanadskog Saveta za brigu o
1
životinjama. Sa životinjama se rukovalo aseptično, i podloga u kavezima je menjana jednom na svakih 10-14 dana.
6. Sakupljanje podataka (veličina tumora)
[0678] Miševi su praćeni svakog ponedeljka, srede, i petka radi razvoja tumora. Dimenzije ustanovljenih tumora merene su kaliperom. Zapremine tumora su izračunate u skladu sa jednačinom [L × W<2>] ÷ 2 pri čemu je dužina (L) duža osa tumora. Životinjama je takođe merena težina u vreme merenja tumora. Tumorima je omogućeno da rastu do maksimalno 800 mm<3>.
7. Postupci analize: krive rasta zapremina tumora X eksperimentalni dan
[0679] Zapremine tumora svake grupe tokom dana tretmana prikazane su u grafičkom formatu. Krive rasta su granične za svaku grupu u vremenskoj tački kada prva životinja dostigne eksperimentalnu krajnju tačku veličine tumora (800 mm<3>), ili poslednjeg dana studije. Bilo koja životinja koja je povučena iz studije pre granične krive rasta grupe u potpunosti je uklonjena iz studije.
8. Isključivanja životinja
[0680] Bilo koja životinja sa ulcerativnim tumorima, za koje je potrebna eutanazija životinje, sa zapreminom tumora od 700 mm<3>ili manjom, uklonjena je iz studije i ne doprinosi analizi podataka (osim za dane do recidiva ukoliko je krajnja zapremina tumora >2,0 struko veća nego na dan tretmana).
Primer 10: Poređenje efikasnosti antitelo lek konjugata u NCI-N87 modelu tumora upotrebom NOD SCID gama miševa.
[0681] Test artikli su primenjeni IV, sa jednom primenom od 3 mg/kg. Vehikulum: 20 mM natrijum citrat, 6,3% trehaloza, 0,02% Tween® 20, pH 5.
1 4
. Pregled procedure
[0682] Dvadeset četiri (24) ženke NOD/SCID gama miševa (NSG), kupljene od The Jackson Laboratory (JAX® Mice) starosti od 7-8 nedelja, inokulisane su subkutano u donjem delu leđa sa 5 × 10<6>NCI-N87 tumorskih ćelija u matrigelu na eksperimentalni dan 0. Tumori su mereni svakog ponedeljka, srede, i petka. Kada su tumori dostigli veličinu od 150-200 mm<3>, životinje su raspoređene u jednu od 3 grupe tretmana uravnotežujući prosečnu veličinu tumora po grupama. Životinje su tretirane sa njihovim respektivnim jedinjenjem, i merenje tumora je nastavljeno svakog ponedeljka, srede, i petka.
2. Priprema ćelija - kultura tkiva: NCI-N87 ćelije
[0683] NCI-N87 ćelije humanog karcinoma želuca poreklom su iz metastaze u jetri dobro diferenciranog karcinoma želuca uzete pre citotoksične terapije. Tumor je pasažiran kao ksenograft kod atimičnih golih miševa tokom tri pasaža pre nego što je uspostavljena ćelijska linija. NCI-N87 ćelije su dobijene od ATCC (Cat # CRL-5822) i testirane su kao negativne na RADIL na mikoplazmu i mišje patogene.
[0684] Ćelije su pokrenute iz zamrznute bočice laboratorijskog štoka koji je zamrznut iz originalne ATCC bočice i čuvan u laboratorijskim rezervoarima sa tečnim azotom. Ćelijske kulture sa pasažima #3 do #10 i konfluentnošću od 80-90% sakupljene su za in vivo studije. NCI-N87 ćelije su uzgajane u RPMI 1640 medijumu sa 1,0 mM L-glutaminom i 10% FBS pri 37 °C/5% CO2okruženju. Ćelije su subkultivisane jednom ili dva puta nedeljno sa odnosom podele 1:3 ili 1:4 i umnožene. Medijum je obnavljan jednom nedeljno. Ćelije su zamrznute sa 5% DMSO.
3. Priprema ćelija - sakupljanje za implantaciju
[0685] Ćelije su jednom kratko isprane sa Henkovim balansiranim rastvorom soli bez Ca, Mg. Dodat je svež rastvor tripsin/EDTA (0,25% tripsin sa EDTA 4Na), i flask je položen horizontalno kako bi se osiguralo da su ćelije pokrivene sa tripsin/EDTA, i zatim je aspiriran višak tripsin/EDTA. Ćelije su inkubirane na 37 °C tokom nekoliko minuta. Ćelije su posmatrane pod invertnim mikroskopom dok se sloj ćelija nije raspršio, i zatim je dodat svež medijum. Zatim je sakupljeno 50 µl ćelijske suspenzije i pomešano sa tripan plavom (1:1), i ćelije su prebrojane i procenjena je vijabilnost na hemocitometru. Vijabilnost treba da bude ≥90%. Ćelije su centrifugirane na 125 RCF (1.000 rpm) tokom 7 minuta i supernatant je aspiriran. Ćelije su resuspendovane u hladnom medijumu za rast do 2 puta veće od željene
1
krajnje koncentracije (100 × 10<6>/ml). Suspenzija je pomešana (na ledu) sa matrigelom (1:1). Rezultujuće ćelijske suspenzije (50 × 10<6>ćelija/ml) su upotrebljene za isporuku 5 × 10<6>ćelija u zapremini injekcije od 100 µl po životinji. Sva oprema koja dolazi u kontakt sa matrigelom (igle, špricevi, vrhovi pipete) ohlađena je pre injekcije.
4. Implantacija tumorskih ćelija - subkutano (NCI-N87)
[0686] Pre inokulacije, površina, približno 2 × 2 cm, je obrijana u regionu donjeg dela leđa svakog miša i očišćena alkoholom. Na dan 0, 5,0 × 10<6>tumorskih ćelija implantirano je subkutano u leđa miševa u zapremini od 100 µl upotrebom igle veličine 27/28 pod anestezijom izofluranom.
5. Smeštaj životinja
[0687] Životinje su smeštene u ventilisanim kavezima, 2 do 5 životinja po kavezu, u 12-časovnom svetlo/mrak ciklusu. Životinje su dobijale sterilnu hranu i vodu ad libitum i smeštaj i upotreba životinja vršena je u skladu sa smernicama kanadskog Saveta za brigu o životinjama. Sa životinjama se rukovalo aseptično, i podloga u kavezima je menjana jednom na svakih 10-14 dana.
6. Sakupljanje podataka (veličina tumora)
[0688] Miševi su praćeni svakog ponedeljka, srede, i petka radi razvoja tumora. Dimenzije ustanovljenih tumora merene su kaliperom. Zapremine tumora su izračunate u skladu sa jednačinom [L × W<2>] ÷ 2 pri čemu je dužina (L) duža osa tumora. Životinjama je takođe merena težina u vreme merenja tumora. Tumorima je omogućeno da rastu do maksimalno 800 mm<3>.
7. Postupci analize: krive rasta zapremina tumora X eksperimentalni dan
[0689] Zapremine tumora svake grupe tokom dana tretmana prikazane su u grafičkom formatu. Krive rasta su granične za svaku grupu u vremenskoj tački kada prva životinja dostigne eksperimentalnu krajnju tačku veličine tumora (800 mm<3>), ili poslednjeg dana
1
studije. Bilo koja životinja koja je povučena iz studije pre granične krive rasta grupe u potpunosti je uklonjena iz studije.
8. Isključivanja životinja
[0690] Bilo koja životinja sa ulcerativnim tumorima, za koje je potrebna eutanazija životinje, sa zapreminom tumora od 700 mm<3>ili manjom, uklonjena je iz studije i ne doprinosi analizi podataka (osim za dane do recidiva ukoliko je krajnja zapremina tumora >2,0 struko veća nego na dan tretmana).
Primer 10.1: Poređenje efikasnosti antitelo lek konjugata u NCI-N87 modelu tumora upotrebom NOD SCID gama miševa.
[0691] Test artikli su primenjeni IV, samo jedan tretman, 5 mg/kg. Vehikulum: fosfatom puferisani fiziološki rastvor bez kalcijuma ili magnezijuma, pH 7,4.
1. Pregled procedure
[0692] Ženke NOD/SCID gama miševa (NSG), kupljene od The Jackson Laboratory (JAX® Mice) starosti od 7-8 nedelja, inokulisane su subkutano u donjem delu leđa sa 5 × 10<6>NCI-N87 tumorskih ćelija u matrigelu na eksperimentalni dan 0. Tumori su mereni svakog ponedeljka, srede, i petka. Kada su tumori dostigli veličinu od 150-200 mm<3>, životinje su raspoređene u jednu od 10 grupa tretmana uravnotežujući prosečnu veličinu tumora po grupama. Životinje su tretirane sa njihovim respektivnim jedinjenjem, i merenje tumora je nastavljeno svakog ponedeljka, srede, i petka.
2. Priprema ćelija - kultura tkiva: NCI-N87 ćelije
[0693] NCI-N87 ćelije humanog karcinoma želuca poreklom su iz metastaze u jetri dobro diferenciranog karcinoma želuca uzete pre citotoksične terapije. Tumor je pasažiran kao ksenograft kod atimičnih golih miševa tokom tri pasaža pre nego što je uspostavljena ćelijska linija. NCI-N87 ćelije su dobijene od ATCC (Cat # CRL-5822) i testirane su kao negativne na RADIL na mikoplazmu i mišje patogene.
1
[0694] Ćelije su pokrenute iz zamrznute bočice laboratorijskog štoka koji je zamrznut iz originalne ATCC bočice i čuvan u laboratorijskim rezervoarima sa tečnim azotom. Ćelijske kulture sa pasažima #3 do #10 i konfluentnošću od 80-90% sakupljene su za in vivo studije. NCI-N87 ćelije su uzgajane u RPMI 1640 medijumu sa 1,0 mM L-glutaminom i 10% FBS pri 37 °C/5% CO2okruženju. Ćelije su subkultivisane jednom ili dva puta nedeljno sa odnosom podele 1:3 ili 1:4 i umnožene. Medijum je obnavljan jednom nedeljno. Ćelije su zamrznute sa 5% DMSO.
3. Priprema ćelija - sakupljanje za implantaciju
[0695] Ćelije su jednom kratko isprane sa Henkovim balansiranim rastvorom soli bez Ca, Mg. Dodat je svež rastvor tripsin/EDTA (0,25% tripsin sa EDTA 4Na), i flask je položen horizontalno kako bi se osiguralo da su ćelije pokrivene sa tripsin/EDTA, i zatim je aspiriran višak tripsin/EDTA. Ćelije su inkubirane na 37 °C tokom nekoliko minuta. Ćelije su posmatrane pod invertnim mikroskopom dok se sloj ćelija nije raspršio, i zatim je dodat svež medijum. Zatim je sakupljeno 50 µl ćelijske suspenzije i pomešano sa tripan plavom (1:1), i ćelije su prebrojane i procenjena je vijabilnost na hemocitometru. Vijabilnost je bila ≥90%. Ćelije su centrifugirane na 125 RCF (1.000 rpm) tokom 7 minuta i supernatant je aspiriran. Ćelije su resuspendovane u hladnom medijumu za rast do 2 puta veće od željene krajnje koncentracije (100 × 10<6>/ml). Suspenzija je pomešana (na ledu) sa matrigelom (1:1). Rezultujuće ćelijske suspenzije (50 × 10<6>ćelija/ml) su upotrebljene za isporuku 5 × 10<6>ćelija u zapremini injekcije od 100 µl po životinji. Sva oprema koja dolazi u kontakt sa matrigelom (igle, špricevi, vrhovi pipete) ohlađena je pre injekcije.
4. Implantacija tumorskih ćelija - SC (NCI-N87)
[0696] Pre inokulacije, površina, približno 2 × 2 cm, je obrijana u regionu donjeg dela leđa svakog miša i očišćena alkoholom. Na dan 0, 5,0 × 10<6>tumorskih ćelija implantirano je subkutano u leđa miševa u zapremini od 100 µl upotrebom igle veličine 27/28 pod anestezijom izofluranom.
1
5. Smeštaj životinja
[0697] Životinje su smeštene u ventilisanim kavezima, 2 do 5 životinja po kavezu, u 12-časovnom svetlo/mrak ciklusu. Životinje su dobijale sterilnu hranu i vodu ad libitum i smeštaj i upotreba životinja vršena je u skladu sa smernicama kanadskog Saveta za brigu o životinjama. Sa životinjama se rukovalo aseptično, i podloga u kavezima je menjana jednom na svakih 10-14 dana.
6. Sakupljanje podataka (veličina tumora)
[0698] Miševi su praćeni svakog ponedeljka, srede, i petka radi razvoja tumora. Dimenzije ustanovljenih tumora merene su kaliperom. Zapremine tumora su izračunate u skladu sa jednačinom [L × W<2>] ÷ 2 pri čemu je dužina (L) duža osa tumora. Životinjama je takođe merena težina u vreme merenja tumora. Tumorima je omogućeno da rastu do maksimalno 800 mm<3>.
7. Postupci analize: krive rasta zapremina tumora X eksperimentalni dan
[0699] Zapremine tumora određenih grupa tretmana tokom dana tretmana prikazane su u grafičkom formatu na Slici 7. Krive rasta su granične za svaku grupu u vremenskoj tački kada prva životinja dostigne eksperimentalnu krajnju tačku veličine tumora (800 mm<3>), ili poslednjeg dana studije. Bilo koja životinja koja je povučena iz studije pre granične krive rasta grupe u potpunosti je uklonjena iz studije.
8. Isključivanja životinja
[0700] Bilo koja životinja sa ulcerativnim tumorima, za koje je potrebna eutanazija životinje, sa zapreminom tumora od 700 mm<3>ili manjom, uklonjena je iz studije i ne doprinosi analizi podataka (osim za dane do recidiva ukoliko je krajnja zapremina tumora >2,0 struko veća nego na dan tretmana).
Primer 11: Poređenje efikasnosti antitelo lek konjugata u Karpas 299 modelu tumora upotrebom C.B-17/IcrHsd-Prkdc<scid>miševa.
1
[0701] Test artikli su primenjeni IV, sa četiri primene od 1 mg/kg na dan 21, dan 25, dan 29, i dan 33. Vehikulum: fosfatom puferisani fiziološki rastvor bez kalcijuma ili magnezijuma, pH 7,4.
1. Pregled procedure
[0702] Ženke C.B-17/IcrHsd-Prkdcscid (CB.17-SCID) miševa kupljene od Harlana inokulisane su sa 1 milion Karpas 299 tumorskom ćelijskom linijom koja eksprimira CD30 subkutano u donjem delu leđa. Miševi su praćeni svakog ponedeljka, srede, i petka radi razvoja tumora. Dimenzije ustanovljenih tumora merene su kaliperom. Zapremine tumora su izračunate u skladu sa jednačinom [L × W<2>] ÷ 2 pri čemu je dužina duža osa tumora. Miševima je takođe merena težina u vreme merenja tumora. Miševi su nasumično raspoređeni na dan 21 na osnovu zapremine tumora kada je srednja vrednost zapremine tumora bila 141,32 mm<3>. Miševi po grupi su redukovani na 6 u vreme nasumičnog raspoređivanja. Po rasporedu trebalo je da miševi prime četiri odvojene intravenske bolus primene na dan 21, dan 25, dan 29 i dan 33 njihovog respektivnog jedinjenja, i tumori su mereni svakog ponedeljka, srede, i petka.
1. Priprema ćelija - kultura tkiva: Karpas 299
[0703] Karpas 299 ćelijska linija humanog T ćelijskog limfoma ustanovljena iz periferne krvi 25-godišnjeg muškarca sa T ćelijskim ne-Hočkinovim limfomom 1986. godine; sada klasifikovan kao CD30+ anaplastični limfom velikih ćelija (ALCL); ćelije nose NPM-ALK fuzioni gen. Karpas 299 ćelije su dobijene iz zbirki kultura Agencije za zaštitu zdravlja (Cat# 06072604 i testirane su kao negativne na mikoplazmu).
[0704] Ćelije su pokrenute iz zamrznute bočice laboratorijskog štoka. Ćelijske kulture sa pasažima 3 do 10 i gustinom održavanom između 5 × 10<5>i 2 × 10<6>ćelija/ml sakupljene su za in vivo studije. Ćelije su uzgajane kao suspenzija u RPMI 1640 2 mM glutamina 20% fetalnog goveđeg seruma na 37 °C u 5% CO2okruženju. Ćelije su subkultivisane dva puta nedeljno sa odnosom podele 1:3 i umnožene.
2. Priprema ćelija - sakupljanje za implantaciju
1
[0705] Ćelije su centrifugirane i jednom isprane sa Henkovim balansiranim rastvorom soli bez Ca, Mg. Zatim je sakupljeno 50 µl ćelijske suspenzije i pomešano sa tripan plavom (1:1) i ćelije su prebrojane i procenjena je vijabilnost na Cellometer Auto4. Vijabilnost je bila ≥ 90%. Ćelije su centrifugirane na 200 g tokom 7 minuta i supernatant je aspiriran. Ćelije su resuspendovane u medijumu za rast za sc inokulaciju. Rezultujuća ćelijska suspenzija je upotrebljena za isporuku 1 × 10<6>ćelija subkutano u zapremini od 50 µl.
3. Implantacija tumorskih ćelija - subkutano (Karpas 299)
[0706] Pre inokulacije, površina, približno 2 × 2 cm, je obrijana u regionu donjeg dela leđa svakog miša i očišćena alkoholom. Na dan 0, 1 × 10<6>ćelija implantirano je subkutano u leđa miševa u zapremini od 50 µl upotrebom igle veličine 27/28 pod anestezijom izofluranom.
4. Smeštaj životinja
[0707] Životinje su bile smeštene u ventilisanim kavezima, 3 do 4 životinje po kavezu, u 12-časovnom svetlo/mrak ciklusu. Životinje su dobijale sterilnu hranu i vodu ad libitum i smeštaj i upotreba životinja vršena je u skladu sa smernicama kanadskog Saveta za brigu o životinjama. Sa životinjama se rukovalo aseptično, i podloga u kavezima je menjana jednom na svakih 10-14 dana.
5. Sakupljanje podataka (veličina tumora)
[0708] Miševi su praćeni radi razvoja tumora svakog radnog dana počevši od 11 dana nakon inokulacije. Dimenzije ustanovljenih tumora merene su kaliperom. Zapremine tumora su izračunate u skladu sa jednačinom [L × W<2>] ÷ 2 pri čemu je dužina (mm) duža osa tumora. Životinjama je takođe merena težina u vreme merenja tumora (samo ponedeljkom, sredom, i petkom). Kada su tretmani primenjeni, tumori su mereni tri puta nedeljno ponedeljkom, sredom, i petkom. Tumorima je omogućeno da rastu do maksimalno 800 mm<3>.
6. Postupci analize: krive rasta zapremina tumora X eksperimentalni dan
[0709] Zapremine tumora svake grupe tokom dana tretmana prikazane su u grafičkom formatu na Slici 8. Krive rasta su granične za svaku grupu u vremenskoj tački kada prva
1 1
životinja dostigne eksperimentalnu krajnju tačku veličine tumora (800 mm<3>), ili poslednjeg dana studije. Bilo koja životinja koja je povučena iz studije pre granične krive rasta grupe u potpunosti je uklonjena iz studije.
7. Isključivanja životinja
[0710] Bilo koja životinja sa ulcerativnim tumorima, za koje je potrebna eutanazija životinje, sa zapreminom tumora od 700 mm<3>ili manjom, uklonjena je iz studije i ne doprinosi analizi podataka (osim za dane do recidiva ukoliko je krajnja zapremina tumora >2,0 struko veća nego na dan tretmana).
Primer 12: Tolerancija na antitelo lek konjugate kod ženki Sprag Dauli pacova
[0711] Test artikli su primenjeni IV, sa jednom primenom na dan 0. Formulacija test artikla: fosfatom puferisani fiziološki rastvor bez kalcijuma ili magnezijuma, pH 7,4.
1. Pregled procedure
[0712] Četrdeset tri ženke Sprag Dauli (soj 001) pacova kupljene su od Charles River Labs i omogućen im je period aklimatizacije od 5 dana pre početka studije. Test artikli su primenjeni IV na dan 0. Telesna težina životinja i klinička zapažanja su uzeti pre injekcije na dan injektiranja, dnevno tokom najmanje tri dana posle primene, tri puta nedeljno posle toga do krajnje tačke studije (poželjno svakog ponedeljka, srede, i petka), i neposredno pre eutanazije. Na dan 22 životinje su eutanazirane pomoću CO2i obavljena je nekropsija. Sva neobična zapažanja su fotografisana.
2. Smeštaj životinja
[0713] Životinje su bile smeštene u ventilisanim kavezima, 2-3 po kavezu, u 12-časovnom svetlo/mrak ciklusu. Životinje su dobijale hranu i vodu ad libitum i smeštaj i upotreba životinja vršena je u skladu sa smernicama kanadskog Saveta za brigu o životinjama. Podloga u kavezima je menjana jednom nedeljno. Pre početka tretmana bio je obavezan period aklimatizacije od najmanje 5 dana. Tokom perioda aklimatizacije urađen je detaljan fizički pregled i određivanje telesne težine. Za studiju su upotrebljene samo zdrave životinje. Sve
1 2
životinje su identifikovane pomoću tetovaže na repu. Kavezi su obeleženi pojedinačnim karticama sa informacijama o broju protokola, broju sobe, direktoru studije, telefonu direktora studije, vrsti i soju, polu, težini, datumu prijema i dobavljaču.
3. Primena test artikla
[0714] Životinjama je pojedinačno određena težina i primenjene su im potrebne zapremine test artikla kako bi se primenila prepisana doza.
4. Intravenska primena
[0715] Pacovima su primenjeni rastvori pomoću bolus intravenske (IV) injekcije. Rastvori za doziranje su primenjeni pomoću intravenskog bolusa upotrebom <23G igle putem bočne repne vene. Zapremina doze od 7 ml/kg prilagođena je individualnoj telesnoj težini uzetoj jedan dan pre dana injekcije. Tretirani pacovi su vraćeni u svoje matične kaveze i posmatrani dok nije primećena hemostaza.
5. Zapažanja o životinjama i sakupljanje podataka
[0716] Praćenje efekata akutne toksičnosti olakšano je upotrebom "Zapisnika kliničkog posmatranja nakon injekcije" za procenu morbiditeta i pomoći u određivanju humanih krajnjih tačaka do 24 sata posle primene. Na kraju radnog dana na dan primene (∼ 6 sati nakon doziranja), ukoliko su životinje pokazale kliničke simptome na nivou na kom se ne mogu ostaviti preko noći bez posmatranja, ili su eutanazirane i smatralo se da su dostigle krajnju tačku toksičnosti, ili su redovno praćene dok nije procenjeno da je bezbedno da se ostave preko noći.
[0717] Kada su prošla 24 sata nakon primene, životinje su praćene na hroničnu toksičnost upotrebom "Zapisnika kliničkog posmatranja praćenja tolerancije". Životinje su praćene sa sledećom učestalošću/rasporedom: pre injekcije na dan injekcije, dnevno tokom najmanje tri dana posle primene, tri puta nedeljno nakon toga do krajnje tačke studije (poželjno svakog ponedeljka, srede, i petka), i neposredno pre eutanazije. Životinje su češće praćene ukoliko su pokazivale značajne znake morbiditeta. Sve životinje koje su dostigle humanu krajnju tačku su eutanazirane i obavljene su nekropsije kako bi se identifikovale bilo kakve grube abnormalnosti u jetri, slezini, bubrezima, plućima, srcu, gastrointestinalnom traktu i bešici.
1
[0718] Rezultati studije tolerancije pokazani su na Slikama 9 i 10.
[0719] Ovi podaci demonstriraju da se skraćena jedinjenja Formule I, pri čemu je X odsutan, bolje tolerišu od njihovih parnjaka pune dužine, pri čemu je X -C(O)NHCH(CH2R<3>)-.
Primer 13. Test zaustavljanja ćelijskog ciklusa
[0720] Jurkat ćelije (ATCC), kultivisane u medijumu RMPI-1640 sa dodatkom 10% FBS, dobijene su u logaritamskom rastu. Zasejano je 1 milion ćelija/ml u ploču sa 12 bunarića tretiranu za kulturu tkiva u zapremini od 950 µl. Ćelije su tretirane sa Jedinjenjem 5 u 50 µl medijuma za rast tako da je krajnja koncentracija Jedinjenja 5 bila 50 nM, kontrolnim ćelijama je dato samo 50 µl medijuma za rast. Ćelije su inkubirane tokom 24 h na 37 °C, 5% CO2u vlažnom inkubatoru. Posle inkubacije, ćelije su temeljno resuspendovane i prebačene u FACS tube od 5 ml, i uskladištene na ledu. Izvršena su dva ispiranja centrifugiranjem ćelija u centrifugi sa zamašnom glavom na 450 × g tokom 4 min, resuspendovanjem u 1 ml ledeno hladnog PBS. Ćelije su fiksirane dodavanjem 3 ml ledeno hladnog 100% etanola na kap po kap način uz vorteksovanje, i odmah uskladištene na 4 °C tokom 1 h. Tokom inkubacije od 1 h, pripremljen je sledeći rastvor za bojenje u ledeno hladnom PBS: 10 µg/ml propidijum jodid, 10 U/ml RNAza If, i 0,05% Triton X-100. Posle 1 h fiksacione inkubacije, etanol je uklonjen centrifugiranjem ćelija kao što je prethodno opisano, i ispiranjem dva puta u 1 ml ledeno hladnog PBS. Ćelije su resuspendovane u 500 µl prethodno pomenutog rastvora za bojenje, i inkubirane na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Događaji su dobijeni na BD C6 HTFC citometru, uklanjajući ostatke i dublete gejtovanjem. Histogrami su generisani upotrebom FCS Express. prikazujući u grafičkom formatu # događaja u odnosu na fluorescenciju u FL-3.
[0721] Reprezentativni podaci iz ovog testa pokazani su na Slici 11. Histogrami DNK sadržaja pokazuju većinu netretiranih ćelija u G0/G1 fazi sa izraženim pomeranjem ka G2/M fazi ćelijskog ciklusa posle tretmana sa Jedinjenjem 5.
1 4

Claims (26)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje Formule I:
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što: R<1>je odabran od: amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, amino-heterociklila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od arila, aril-C1-C6alkila, C1-C6alkila, C1-C6alkiltio, karboksila, karboksamida, C3-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, guanidino, halo, C1-C6haloalkila, heterociklila, heterociklil-C1-C6alkila, hidroksila, i tio; ili R<1>je R<a>R<b>NCH(R<c>)-; R<a>je odabran od: H i C1-C6alkila; R<b>je C1-C6alkil; i R<c>je R<d>-C(CH3)2-; i R<d>je odabran od: H, arila, C3-C7cikloalkila, i heteroarila, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C4aciltio, C2-C4 alkenila, C1-C4alkila, C1-C4alkilamino, C1-C4alkiloksi, amino, amino-C1-C4alkila, halo, C1-C4haloalkila, hidroksila, hidroksi-C1-C4alkila, i tio, pri čemu su C2-C4alkenil, C1-C4alkilamino i C1-C4alkiloksi dodatno opciono supstituisani sa jednim supstituentom odabranim od C1-C4alkilarila, hidroksila, i tio; ili R<b>i R<c>uzeti zajedno sa atomima za koje je svaki vezan formiraju heterociklildiil; R<2>je odabran od: C1-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C3-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloacila, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila; i X je odsutan.
  2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što je R<1>odabran od: amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, amino-heterociklila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od C1-C6alkila i halo.
  3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što je R<1>R<a>R<b>NCH(R<c>)-.
  4. 4. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, naznačeno time što je R<2>odabran od: C2-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C4-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloacila, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila.
  5. 5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje ima Formulu Ia:
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što: R<2>je odabran od: C1-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C3-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila; i 1 R<4>i R<5>su svaki nezavisno odabrani od: H i C1-C6alkila.
  6. 6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje ima Formulu Id:
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što: R<2>je odabran od: C1-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C3-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila; i R<4>i R<5>su svaki nezavisno odabrani od: H i C1-C6alkila.
  7. 7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 5 ili 6, naznačeno time što: R<2>je odabran od: C2-C6alkila, arila, aril-C1-C6alkila, C4-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, heteroarila, heteroaril-C1-C6alkila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila.
  8. 8. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 5 do 7, naznačeno time što su R<4>i R<5>svaki C1-C6alkil.
  9. 9. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 5 do 7, naznačeno time što su R<4>i R<5>svaki metil.
  10. 10. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 5 do 7, naznačeno time što je R<4>H, i R<5>je C1-C6alkil. 1
  11. 11. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 5 do 7, naznačeno time što je R<4>H, i R<5>je metil.
  12. 12. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 11, naznačeno time što je R<2>odabran od: arila, aril-C1-C6alkila, heteroarila i heteroaril-C1-C6alkila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, aminoarila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloacila, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila.
  13. 13. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 11, naznačeno time što je R<2>odabran od: arila i aril-C1-C6alkila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: amino, amino-C1-C6alkila i amino-C3-C7cikloalkila.
  14. 14. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 11, naznačeno time što je R<2>odabran od: 4-aminobenzila, 4-(aminometil)benzila, 4-(aminometil)fenila, 4-aminofenila i benzila.
  15. 15. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 odabrano od sledećih, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
    1
    1
    1
  16. 16. Jedinjenje odabrano od sledećih, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so:
    1 1
    12
  17. 17. Kompozicija Formule II: (T)-(L)-(D) II naznačena time što je (T) ciljno delujuća funkcionalna grupa sposobna da veže ciljnu ćeliju, (L) je linker, i (D) je jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 15. 18. Kompozicija prema patentnom zahtevu 17, naznačena time što (L)-(D) ima jednu od sledećih struktura:
  18. 1
  19. 19. Kompozicija Formule III: (T)-(L<1>)-(D<1>) III naznačena time što: 1 4 (T) je ciljno delujuća funkcionalna grupa sposobna da veže ciljnu ćeliju; (D<1>) je jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje ima strukturu (IV):
    pri čemu: R<1>je odabran od: amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, amino-heterociklila, i heterociklila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od arila, aril-C1-C6alkila, C1-C6alkila, C1-C6alkiltio, karboksila, karboksamida, C3-C7cikloalkila, C3-C7cikloalkil-C1-C6alkila, guanidino, halo, C1-C6haloalkila, heterociklila, heterociklil-C1-C6alkila, hidroksila, i tio; ili R<1>je R<a>R<b>NCH(R<c>)-; R<a>je odabran od: H i C1-C6alkila; R<b>je C1-C6alkil; i R<c>je R<d>-C(CH3)2-; i R<d>je odabran od: H, arila, C3-C7cikloalkila, i heteroarila, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C4aciltio, C2-C4alkenila, C1-C4alkila, C1-C4alkilamino, C1-C4alkiloksi, amino, amino-C1-C4alkila, halo, C1-C4haloalkila, hidroksila, hidroksi-C1-C4alkila, i tio, pri čemu su C2-C4alkenil, C1-C4alkilamino i C1-C4alkiloksi dodatno opciono supstituisani sa jednim supstituentom odabranim od C1-C4alkilarila, hidroksila, i tio; ili R<b>i R<c>uzeti zajedno sa atomima za koje je svaki vezan formiraju heterociklildiil; X je odsutan; 1 R<2a>je odabran od: C2-C6alkildiila, arildiila, C4-C7cikloalkildiila, heteroarildiila, i heterociklildiila, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata odabranih od: C1-C6alkoksi, C1-C6alkoksikarbonila, C1-C6alkila, C1-C6alkilamino, amino, amino-C1-C6alkila, amino-arila, amino-C3-C7cikloalkila, arila, karboksamida, karboksila, cijano, C1-C6haloalkila, C1-C6haloalkoksi, halo, hidroksila, nitro, tio, i tio-C1-C6alkila; i (L<1>)-(T) ima strukturu (V): (AA)1-(AA)n-(L<2>)-(T) V pri čemu: -NH- grupa vezana za R<2a>u Formuli IV formira enzimski isecivu peptidnu vezu (JPB) sa (AA)1u Formuli V; svaki AA je nezavisno amino-kiselina; n je ceo broj od 0 do 25, i (L<2>) opciono preostali deo linkera (L<1>), i pri čemu (AA)1-(AA)n, uzeto zajedno sadrži amino-kiselinsku sekvencu sposobnu da olakša enizmsko isecanje JPB.
  20. 20. Kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 17 do 19, naznačena time što je (T) monoklonalno antitelo ili fragment antitela.
  21. 21. Kompozicija prema patentnom zahtevu 20, naznačena time što je antitelo ili fragment antitela bispecifično antitelo ili fragment antitela.
  22. 22. Kompozicija prema patentnom zahtevu 20 ili 21, naznačena time što antitelo ili fragment antitela specifično vezuje antigen kancerske ćelije.
  23. 23. Kompozicija prema patentnom zahtevu 22, naznačena time što je antigen kancerske ćelije HER2.
  24. 24. Farmaceutska kompozicija naznačena time što sadrži jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 16 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili kompoziciju prema bilo kom od patentnih zahteva 17 do 23, i farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens.
  25. 25. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 16, ili kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 17 do 23, za upotrebu u terapiji. 1
  26. 26. Jedinjenje ili kompozicija za upotrebu u skladu sa patentnim zahtevom 25, naznačeno time što je terapija lečenje kancera. 1
RS20220091A 2014-09-17 2015-09-17 Citotoksična i antimitotička jedinjenja, i postupci upotrebe istih RS62860B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462051883P 2014-09-17 2014-09-17
EP15842388.9A EP3194421B1 (en) 2014-09-17 2015-09-17 Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same
PCT/CA2015/050910 WO2016041082A1 (en) 2014-09-17 2015-09-17 Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS62860B1 true RS62860B1 (sr) 2022-02-28

Family

ID=55454112

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20220091A RS62860B1 (sr) 2014-09-17 2015-09-17 Citotoksična i antimitotička jedinjenja, i postupci upotrebe istih

Country Status (21)

Country Link
US (5) US9879086B2 (sr)
EP (2) EP3194421B1 (sr)
JP (2) JP6875273B2 (sr)
KR (2) KR102609034B1 (sr)
CN (2) CN107001415B (sr)
AU (2) AU2015318556C1 (sr)
BR (1) BR112017005126B1 (sr)
CA (1) CA2960899C (sr)
CY (1) CY1124933T1 (sr)
DK (1) DK3194421T3 (sr)
ES (1) ES2905569T3 (sr)
HR (1) HRP20220123T1 (sr)
HU (1) HUE057768T2 (sr)
IL (3) IL287645B2 (sr)
MX (1) MX386008B (sr)
PL (1) PL3194421T3 (sr)
PT (1) PT3194421T (sr)
RS (1) RS62860B1 (sr)
RU (1) RU2723651C2 (sr)
SG (1) SG11201702143PA (sr)
WO (1) WO2016041082A1 (sr)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102178606B1 (ko) 2013-03-15 2020-11-13 자임워크스 인코포레이티드 세포독성 및 유사분열-억제 화합물, 및 이를 사용하는 방법
BR112016015105A8 (pt) 2013-12-27 2018-04-24 Var2 Pharmaceuticals Aps conjugados var2csa-droga
RU2729194C2 (ru) 2013-12-27 2020-08-05 Займворкс Инк. Сульфонамидсодержащие связывающие системы для лекарственных конъюгатов
RU2723651C2 (ru) 2014-09-17 2020-06-17 Займворкс Инк. Цитотоксические и антимитотические соединения и способы их применения
US10517958B2 (en) 2016-10-04 2019-12-31 Zymeworks Inc. Compositions and methods for the treatment of platinum-drug resistant cancer
BR112020013679A2 (pt) 2018-01-04 2020-12-01 Iconic Therapeutics, Inc. anticorpos de fator antitecidual, conjugados anticorpo-fármaco e métodos relacionados
HRP20231280T1 (hr) 2018-03-13 2024-02-02 Zymeworks Bc Inc. Anti-her2 biparatopski antitijelo-konjugati lijeka i načini uporabe
PE20221004A1 (es) * 2019-07-03 2022-06-15 Iconic Therapeutics Inc Conjugados de anticuerpos y farmacos anti-factor tisular y metodos relacionados
CA3081503A1 (en) 2019-12-06 2021-06-06 Zymeworks Inc. Methods of using a bispecific antigen-binding construct targeting her2 in combination with cdk4/6 inhibitors for the treatment of breast cancer
CN112285361B (zh) * 2020-09-27 2023-12-05 中国人民解放军空军军医大学 排除抗-cd38单克隆抗体药物对抗人球蛋白检测干扰的试剂
WO2024061305A1 (zh) 2022-09-22 2024-03-28 上海美雅珂生物技术有限责任公司 Gpc3抗体药物偶联物及其应用

Family Cites Families (140)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2036891B (en) 1978-12-05 1983-05-05 Windsor Smith C Change speed gear
CA1213229A (en) 1982-04-12 1986-10-28 Gary S. David Antibodies having dual specificities, their preparation and uses therefor
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
JPS6147500A (ja) 1984-08-15 1986-03-07 Res Dev Corp Of Japan キメラモノクロ−ナル抗体及びその製造法
EP0173494A3 (en) 1984-08-27 1987-11-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Chimeric receptors by dna splicing and expression
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
JPS61134325A (ja) 1984-12-04 1986-06-21 Teijin Ltd ハイブリツド抗体遺伝子の発現方法
CA1282069C (en) 1985-09-12 1991-03-26 Damon L. Meyer Antibody complexes of hapten-modified diagnostic or therapeutic agents
JPS63501765A (ja) 1985-11-01 1988-07-21 インタ−ナショナル、ジェネティック、エンジニアリング　インコ−ポレ−テッド 抗体遺伝子のモジュ−ル組立体、それにより産生された抗体及び用途
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5053394A (en) 1988-09-21 1991-10-01 American Cyanamid Company Targeted forms of methyltrithio antitumor agents
IL89220A (en) 1988-02-11 1994-02-27 Bristol Myers Squibb Co Anthracycline immunoconjugates, their production and pharmaceutical compositions containing them
US5094849A (en) 1988-08-08 1992-03-10 Eli Lilly And Company Cytotoxic antibody conjugates of hydrazide derivatized vinca analogs via simple organic linkers
US5028697A (en) 1988-08-08 1991-07-02 Eli Lilly And Company Cytotoxic antibody conjugates of hydrazide derivatized methotrexate analogs via simple organic linkers
US5006652A (en) 1988-08-08 1991-04-09 Eli Lilly And Company Intermediates for antibody-vinca drug conjugates
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5137877B1 (en) 1990-05-14 1996-01-30 Bristol Myers Squibb Co Bifunctional linking compounds conjugates and methods for their production
GB9017024D0 (en) 1990-08-03 1990-09-19 Erba Carlo Spa New linker for bioactive agents
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
AU8507191A (en) 1990-08-29 1992-03-30 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
JPH08500017A (ja) 1992-08-17 1996-01-09 ジェネンテク，インコーポレイテッド 二特異的免疫アドヘジン
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US6569834B1 (en) 1992-12-03 2003-05-27 George R. Pettit Elucidation and synthesis of antineoplastic tetrapeptide w-aminoalkyl-amides
SG67935A1 (en) 1992-12-16 1999-10-19 Basf Ag Novel peptides the preparation and use thereof
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US5556623A (en) 1993-03-30 1996-09-17 Eli Lilly And Company Antibody-drug conjugates
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US5767237A (en) 1993-10-01 1998-06-16 Teikoku Hormone Mfg. Co., Ltd. Peptide derivatives
US5599902A (en) 1994-11-10 1997-02-04 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Cancer inhibitory peptides
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
GB9508195D0 (en) 1995-04-20 1995-06-07 Univ British Columbia Novel biologically active compounds and compositions,their use and derivation
ATE381948T1 (de) 1995-05-10 2008-01-15 Kyowa Hakko Kogyo Kk Cytotoxinkonjugate umfassend dipeptide
JP4046354B2 (ja) 1996-03-18 2008-02-13 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム 増大した半減期を有する免疫グロブリン様ドメイン
US6759509B1 (en) 1996-11-05 2004-07-06 Bristol-Myers Squibb Company Branched peptide linkers
CA2225325A1 (en) 1997-12-19 1999-06-19 The University Of British Columbia Hemiasterlin analogs
US8097648B2 (en) 1998-06-17 2012-01-17 Eisai R&D Management Co., Ltd. Methods and compositions for use in treating cancer
CN1343219A (zh) 1999-01-28 2002-04-03 中外制药株式会社 取代的苯乙基胺衍生物
US6468522B1 (en) 1999-07-22 2002-10-22 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Controlled release of thioamide moiety-containing therapeutic agents
US6323315B1 (en) 1999-09-10 2001-11-27 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin peptides
US6756037B2 (en) 2000-03-31 2004-06-29 Enzon, Inc. Polymer conjugates of biologically active agents and extension moieties for facilitating conjugation of biologically active agents to polymeric terminal groups
TWI245034B (en) 2000-07-24 2005-12-11 Matsushita Electric Industrial Co Ltd Capacitor
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
WO2003026577A2 (en) 2001-09-24 2003-04-03 Seattle Genetics, Inc. P-amidobenzylethers in drug delivery agents
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
AU2003224644A1 (en) 2002-02-27 2003-09-09 The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Healtan Conjugates of ligand, linker and cytotoxic agent and related compositions and methods of use
US7064211B2 (en) 2002-03-22 2006-06-20 Eisai Co., Ltd. Hemiasterlin derivatives and uses thereof
EP1490054A2 (en) 2002-03-22 2004-12-29 Eisai Co., Ltd Hemiasterlin derivatives and uses thereof in the treatment of cancer
EP1560574A4 (en) 2002-04-23 2010-01-13 Univ Ohio State ANTI-LEISHMANIA-DINITROANILINSULFONAMIDE WITH EFFECT AGAINST PARASITIC TUBULIN
ITMI20021391A1 (it) 2002-06-25 2003-12-29 Nicox Sa Nitroderivati di inibitori della cicloossigenasi-2
WO2004032828A2 (en) 2002-07-31 2004-04-22 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
SI2357006T1 (sl) 2002-07-31 2016-01-29 Seattle Genetics, Inc. Konjugati zdravil in njihova uporaba za zdravljenje raka, avtoimunske bolezni ali infekcijske bolezni
US7087229B2 (en) 2003-05-30 2006-08-08 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
US7122189B2 (en) 2002-08-13 2006-10-17 Enzon, Inc. Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
ES2361739T3 (es) 2002-08-16 2011-06-21 Immunogen, Inc. Reticulantes con elevada reactividad y solubilidad y su uso en la preparación de conjugados para el suministro dirigido de fármacos de molécula pequeña.
WO2004026293A2 (en) 2002-09-20 2004-04-01 Wyeth Holdings Corporation Hemiasterlin derivatives for treating resistant tumors
RU2005111753A (ru) 2002-09-20 2005-11-20 Уайт Холдингз Корпорейшн (Us) Способ получения промежуточных соединений, используемых в синтезе ингибиторов тубулина
AU2003282624A1 (en) 2002-11-14 2004-06-03 Syntarga B.V. Prodrugs built as multiple self-elimination-release spacers
AU2003295808A1 (en) 2002-11-21 2004-06-18 Wyeth Hemiasterlin affinity probes and their uses
US7332164B2 (en) 2003-03-21 2008-02-19 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Heterobifunctional polymeric bioconjugates
US7390910B2 (en) 2003-08-08 2008-06-24 Wyeth Compounds for treating tumors
US7576206B2 (en) 2003-08-14 2009-08-18 Cephalon, Inc. Proteasome inhibitors and methods of using the same
WO2005026169A1 (en) 2003-09-15 2005-03-24 The University Of British Columbia Ceratamines a and b, and analogues, syntheses and pharmaceutical compositions thereof
ATE459364T1 (de) 2003-10-22 2010-03-15 Univ Johns Hopkins Verbesserte bakteriolyse-kombinationstherapie für die behandlung von tumoren
BR122018071808B8 (pt) 2003-11-06 2020-06-30 Seattle Genetics Inc conjugado
US7078562B2 (en) 2004-01-19 2006-07-18 Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. Adamantane derivatives and resin compositions using the same as raw material
US20050175619A1 (en) 2004-02-05 2005-08-11 Robert Duffy Methods of producing antibody conjugates
AU2005216251B2 (en) * 2004-02-23 2011-03-10 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
MXPA06013413A (es) 2004-05-19 2007-01-23 Medarex Inc Enlazadores quimicos y conjugados de los mismos.
CN101039701A (zh) 2004-08-26 2007-09-19 尼古拉斯皮拉马尔印度有限公司 含有生物可裂解二硫化物连接物的前药和共药
EP2266622A3 (en) 2004-08-26 2012-06-20 Piramal Life Sciences Limited Prodrugs containing novel bio-cleavable linkers
EP1817336B1 (en) 2004-11-12 2019-01-09 Seattle Genetics, Inc. Auristatins having an aminobenzoic acid unit at the n terminus
EP1817341A2 (en) * 2004-11-29 2007-08-15 Seattle Genetics, Inc. Engineered antibodies and immunoconjugates
CA2589773A1 (en) * 2004-12-22 2006-06-29 Astrazeneca Ab Pyridine carboxamide derivatives for use as anticancer agents
US7714016B2 (en) 2005-04-08 2010-05-11 Medarex, Inc. Cytotoxic compounds and conjugates with cleavable substrates
US8871720B2 (en) 2005-07-07 2014-10-28 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine carboxy modifications at the C-terminus
ES2585357T3 (es) * 2005-07-07 2016-10-05 Seattle Genetics, Inc. Compuestos de monometilvalina que tienen modificaciones de la cadena lateral de fenilalanina en el extremo C
SI3248613T1 (sl) 2005-07-18 2022-04-29 Seagen Inc. Konjugati beta-glukuronidni linker-zdravilo
US8158590B2 (en) 2005-08-05 2012-04-17 Syntarga B.V. Triazole-containing releasable linkers, conjugates thereof, and methods of preparation
ES2416136T3 (es) 2005-09-26 2013-07-30 Medarex, Inc. Conjugados de anticuerpo-fármaco y su uso
WO2007059404A2 (en) 2005-11-10 2007-05-24 Medarex, Inc. Duocarmycin derivatives as novel cytotoxic compounds and conjugates
WO2007103288A2 (en) 2006-03-02 2007-09-13 Seattle Genetics, Inc. Engineered antibody drug conjugates
US8367065B2 (en) 2006-09-15 2013-02-05 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Targeted polymeric prodrugs containing multifunctional linkers
TWI412367B (zh) 2006-12-28 2013-10-21 Medarex Llc 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
CN101616911A (zh) 2007-02-21 2009-12-30 梅达莱克斯公司 具有单个氨基酸的化学连接物及其偶联物
AU2008309589B2 (en) 2007-10-10 2012-07-05 Novartis Ag Spiropyrrolidines and their use against HCV and HIV infection
WO2009059309A2 (en) 2007-11-01 2009-05-07 Panacea Pharmaceuticals, Inc. Furin-cleavable peptide linkers for drug-ligand conjugates
CN101932598B (zh) 2008-01-30 2016-12-21 皮里斯股份公司 具有对人c-met受体酪氨酸激酶的亲和性的泪脂质运载蛋白的突变蛋白及其获得方法
CA2718942A1 (en) 2008-03-18 2009-09-24 Seattle Genetics, Inc. Auristatin drug linker conjugates
MX2010011808A (es) 2008-04-30 2011-03-04 Immunogen Inc Conjugados potentes y enlazadores hidrofilicos.
CN104524590B (zh) 2008-04-30 2019-06-21 伊缪诺金公司 交联剂和它们的用途
ES2445193T3 (es) 2008-06-27 2014-02-28 Merus B.V. Mamíferos no humanos productores de anticuerpos
GB2461546B (en) 2008-07-02 2010-07-07 Argen X Bv Antigen binding polypeptides
CN102099058B (zh) 2008-07-21 2014-10-22 宝力泰锐克斯有限公司 用于缀合生物分子的新试剂和方法
EP2898900B1 (en) 2008-09-19 2017-11-15 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of ziconotide
EP2865387B1 (en) 2008-11-21 2019-06-12 Københavns Universitet (University Of Copenhagen) Priming of an immune response
US20110182850A1 (en) 2009-04-10 2011-07-28 Trixi Brandl Organic compounds and their uses
CA2762877A1 (en) 2009-05-28 2010-12-02 Mersana Therapeutics, Inc. Polyal drug conjugates comprising variable rate-releasing linkers
US8394922B2 (en) 2009-08-03 2013-03-12 Medarex, Inc. Antiproliferative compounds, conjugates thereof, methods therefor, and uses thereof
SG10201404925TA (en) 2009-08-28 2014-10-30 Arena Pharm Inc Cannabinoid receptor modulators
PL2481725T3 (pl) 2009-09-25 2015-08-31 Astellas Pharma Inc Podstawiony związek amidowy
JP2013523098A (ja) 2010-03-29 2013-06-17 ザイムワークス，インコーポレイテッド 強化又は抑制されたエフェクター機能を有する抗体
US9150663B2 (en) 2010-04-20 2015-10-06 Genmab A/S Heterodimeric antibody Fc-containing proteins and methods for production thereof
US8722629B2 (en) 2010-06-10 2014-05-13 Seattle Genetics, Inc. Auristatin derivatives and use thereof
WO2012032080A1 (en) 2010-09-07 2012-03-15 F-Star Biotechnologische Forschungs- Und Entwicklungsges.M.B.H Stabilised human fc
PH12012500542A1 (en) 2010-09-24 2012-11-12 Astellas Pharma Inc Substituted amide compound
JP5559439B2 (ja) 2011-02-25 2014-07-23 ロンザ リミテッド タンパク質薬剤接合体のための分枝リンカー
JP6101638B2 (ja) 2011-03-03 2017-03-22 ザイムワークス，インコーポレイテッド 多価ヘテロマルチマー足場設計及び構築物
EP2686337B1 (en) 2011-03-16 2016-11-02 Council of Scientific & Industrial Research Oligopeptides and process for preparation thereof
AU2012236511B2 (en) 2011-03-30 2016-04-28 Arizona Board Of Regents, For And On Behalf Of, Arizona State University Auristatin tyramine phosphate salts and auristatin aminoquinoline derivatives and prodrugs thereof
CA2833477A1 (en) 2011-04-21 2012-10-26 Seattle Genetics, Inc. Novel binder-drug conjugates (adcs) and their use
KR102356286B1 (ko) 2011-05-27 2022-02-08 암브룩스, 인코포레이티드 비-천연 아미노산 연결된 돌라스타틴 유도체를 함유하는 조성물, 이를 수반하는 방법, 및 용도
EP2717916B1 (en) 2011-06-10 2017-03-08 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
UA117901C2 (uk) 2011-07-06 2018-10-25 Ґенмаб Б.В. Спосіб посилення ефекторної функції вихідного поліпептиду, його варіанти та їх застосування
US20130190248A1 (en) 2011-07-26 2013-07-25 Agensys, Inc. Substituted peptide analogs
WO2013068874A1 (en) 2011-11-11 2013-05-16 Pfizer Inc. Antibody-drug conjugates
EP2780039B9 (en) * 2011-11-17 2018-04-18 Pfizer Inc Cytotoxic peptides and antibody drug conjugates thereof
BR112014018630A2 (pt) 2012-02-09 2017-07-04 Var2 Pharmaceuticals Aps alvejamento de glicanos de sulfato de condroitina
CN104662000B (zh) * 2012-05-15 2018-08-17 索伦托医疗有限公司 药物偶联物及其偶联方法和用途
WO2013185117A1 (en) 2012-06-07 2013-12-12 Ambrx, Inc. Prostate-specific membrane antigen antibody drug conjugates
US9599265B2 (en) * 2012-06-15 2017-03-21 Stephen B. Maguire Multiple plate quick disconnect sandwich fitting
US10208123B2 (en) 2012-06-19 2019-02-19 Ambrx, Inc. Anti-CD70 antibody drug conjugates
JP6280546B2 (ja) 2012-06-26 2018-02-14 デル マー ファーマシューティカルズ ジアンヒドロガラクチトール、ジアセチルジアンヒドロガラクチトール、ジブロモズルシトール、又はこれらの類似体若しくは誘導体を用いた、遺伝子多型又はａｈｉ１の調節不全若しくは変異を有する患者におけるチロシンキナーゼインヒビター抵抗性悪性腫瘍を処置するための方法
WO2014080251A1 (en) 2012-11-24 2014-05-30 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to cell binding molecules
TWI716339B (zh) 2012-12-21 2021-01-21 荷蘭商台醫（有限合夥）公司 親水性自消耗連接子及彼等之共軛物
KR102178606B1 (ko) 2013-03-15 2020-11-13 자임워크스 인코포레이티드 세포독성 및 유사분열-억제 화합물, 및 이를 사용하는 방법
US20150108767A1 (en) * 2013-09-17 2015-04-23 Halliburton Energy Services, Inc. Constant velocity device for downhole power generation
WO2015057876A1 (en) 2013-10-15 2015-04-23 Sorrento Therapeutics Inc. Drug-conjugates with a targeting molecule and two different drugs
JP6636925B2 (ja) 2013-12-17 2020-01-29 ノバルティス アーゲー 細胞障害性ペプチドおよびその抱合体
BR112016015105A8 (pt) * 2013-12-27 2018-04-24 Var2 Pharmaceuticals Aps conjugados var2csa-droga
RU2729194C2 (ru) * 2013-12-27 2020-08-05 Займворкс Инк. Сульфонамидсодержащие связывающие системы для лекарственных конъюгатов
RU2723651C2 (ru) 2014-09-17 2020-06-17 Займворкс Инк. Цитотоксические и антимитотические соединения и способы их применения
CA2975383C (en) 2015-01-28 2023-09-12 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody drug conjugates comprising dolastatin derivatives
US10975112B2 (en) 2015-06-16 2021-04-13 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Linkers for conjugation of cell-binding molecules

Also Published As

Publication number Publication date
IL287645B2 (en) 2024-04-01
HRP20220123T1 (hr) 2022-04-15
DK3194421T3 (da) 2022-02-14
JP2017533886A (ja) 2017-11-16
IL287645B1 (en) 2023-12-01
US11591405B2 (en) 2023-02-28
EP3194421A4 (en) 2018-06-06
PT3194421T (pt) 2022-02-07
BR112017005126B1 (pt) 2023-10-24
BR112017005126A2 (pt) 2018-08-07
CA2960899C (en) 2021-08-17
US20200207865A2 (en) 2020-07-02
US20230317700A1 (en) 2023-10-05
AU2015318556B2 (en) 2020-06-18
KR102494557B1 (ko) 2023-02-02
RU2723651C2 (ru) 2020-06-17
EP4029873A1 (en) 2022-07-20
RU2017110069A3 (sr) 2019-03-12
ES2905569T3 (es) 2022-04-11
CN107001415A (zh) 2017-08-01
IL275942B (en) 2021-12-01
IL275942A (en) 2020-08-31
US10414822B2 (en) 2019-09-17
EP3194421A1 (en) 2017-07-26
US20180208667A1 (en) 2018-07-26
WO2016041082A1 (en) 2016-03-24
RU2017110069A (ru) 2018-10-17
AU2015318556C1 (en) 2021-01-07
KR102609034B1 (ko) 2023-12-01
KR20170069227A (ko) 2017-06-20
CN107001415B (zh) 2021-06-18
CN113416229B (zh) 2024-12-13
US10450378B2 (en) 2019-10-22
SG11201702143PA (en) 2017-04-27
AU2020230264A1 (en) 2020-10-01
MX2017003476A (es) 2017-08-02
US9879086B2 (en) 2018-01-30
US20190345254A1 (en) 2019-11-14
MX386008B (es) 2025-03-18
IL251167A0 (en) 2017-04-30
CA2960899A1 (en) 2016-03-24
PL3194421T3 (pl) 2022-02-28
JP7204083B2 (ja) 2023-01-16
JP6875273B2 (ja) 2021-05-19
US12152083B2 (en) 2024-11-26
KR20230020018A (ko) 2023-02-09
JP2021121590A (ja) 2021-08-26
CY1124933T1 (el) 2023-01-05
CN113416229A (zh) 2021-09-21
AU2020230264C1 (en) 2022-09-22
US20170247408A1 (en) 2017-08-31
US20160075735A1 (en) 2016-03-17
AU2015318556A1 (en) 2017-04-06
AU2020230264B2 (en) 2022-05-19
EP3194421B1 (en) 2021-11-03
IL287645A (en) 2021-12-01
HUE057768T2 (hu) 2022-06-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12152083B2 (en) Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same
US12303544B2 (en) Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same
JP6908656B2 (ja) 薬物結合体のためのスルホンアミド含有連結系
HK40077461A (en) Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same
HK1240597B (en) Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same
HK1240251A1 (en) Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same