[go: up one dir, main page]

RS61249B1 - Antitela na c10orf54 i njihova upotreba - Google Patents

Antitela na c10orf54 i njihova upotreba

Info

Publication number
RS61249B1
RS61249B1 RS20201488A RSP20201488A RS61249B1 RS 61249 B1 RS61249 B1 RS 61249B1 RS 20201488 A RS20201488 A RS 20201488A RS P20201488 A RSP20201488 A RS P20201488A RS 61249 B1 RS61249 B1 RS 61249B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
seq
c10orf54
amino acid
antibody
acid sequence
Prior art date
Application number
RS20201488A
Other languages
English (en)
Inventor
John Lippincott
Der Horst Edward Thein Htun Van
Sun Young Kim
Leonard G Presta
Jan-Willem Theunissen
Original Assignee
Pf Medicament
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pf Medicament filed Critical Pf Medicament
Publication of RS61249B1 publication Critical patent/RS61249B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/4025—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. cromakalim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
    • A61K31/5517—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine condensed with five-membered rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. imidazobenzodiazepines, triazolam
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68035—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a pyrrolobenzodiazepine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6873—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting an immunoglobulin; the antibody being an anti-idiotypic antibody
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/74—Inducing cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/70532—B7 molecules, e.g. CD80, CD86

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

Opis
OBLAST TEHNIKE
[0001] Ovaj opis se odnosi uopšteno na antitela na C10orF54, uključujući konjugate antitelolek koji sadrže antitela i metode za njihovu upotrebu.
STANJE TEHNIKE
[0002] C10orf54 je transmembranski protein tipa I sa jednim transmembranskim domenom dužine od 311 aminokiselina i obuhvata signalnu sekvencu i jedan domen sličan IgV u intracelularnom regionu. On je potencijalno član B7 familije proteina i ima približno 24% sekvencne identičnosti sa B7-H1/PD-L1 (Flajnik et al., Immunogenetic 64:571-590 (2012)). Mišji ortolog C10orf54 je poznat kao supresor aktivacije T ćelija koji sadrži V region imunoglobulina (VISTA; poznat i kao PD-L3). VISTA je kloniran iz biblioteke CD4 pozitivnih regulatornih T ćelija (Treg) (Wang et al., JEM 208(3):577-592 (2011)). VISTA se primarno eksprimira na hematopoetskim ćelijama i ekspresija VISTA je visoko regulisana na mijeloidnim ćelijama koje prezentuju antigen (APC) i na T ćelijama (Wang et al., supra).
[0003] Izgleda da VISTA ima funkcionalna dejstva koja se ne preklapaju sa ostalim članovima Ig superfamilije i može da igra ulogu u razvoju autoimuniteta i imunog nadzora u kanceru. Na primer, pokazano je da ekspresija fuzionog proteina VISTA-Ig inhibira proliferaciju T ćelija i proizvodnju citokina in vitro i prekomerna ekspresija VISTA na MCA105 tumorskim ćelijama interferira sa zaštitnim antitumorskim imunitetom domaćina (Wang et al., supra). Štaviše, administracija VISTA-specifičnog monoklonskog antitela pojačava odgovor CD4 pozitivnih T ćelija in vivo i razvoj autoimuniteta (Wang et al., supra). Pokazano je i da monoklonska antitela na C10orf54 sprečavaju akutno oboljenje ‘kalem protiv domaćina’ u miševima (Flies et al., J. Immunology 187(4):1537-1541 (2011)). Dalje, monoklonska antitela na C10orf154 su opisana u WO 2014/197849 i WO 2014/059028.
SUŠTINA PRONALASKA
[0004] Pronalazak je definisan u priključenim zahtevima i odnosi se na humanizovana monoklonska antitela ili na njihove fragmente koji vezuju antigen, usmerena protiv C10orf54.
[0005] Sažetak i detaljan tehnički opis dati niže mogu u nekim aspektima da premašuju opis samog pronalaska i mogu i da obezbede pozadinu za vezane tehničke razvoje. Treba podrazumevati da ovaj tehnički opis nije namenjen da definiše pronalazak kao takav (koji je definisan isključivo dodatim zahtevima), nego više da ga postavi u širi tehnički kontekst. U skladu s tim, podrazumevaće se da termini "aspekti" i "rešenja" odražavaju specifične detalje opisa, ali dok god se odnose na deo dodatne tehničke pozadine, nisu namenjeni da budu definisani kao deo aspekata pronalaska koji na ulaze u opseg dodatih zahteva.
[0006] Specifičnije, pronalazak se odnosi na antitelo koje obuhvata varijabilni domen teškog lanca koji sadrži sledeća tri CDR, respektivno CDR-H1 ima sekvencu SEQ ID NO: 1296, CDR-H2 ima sekvencu odabranu od SEQ ID NO: 1358, SEQ ID NO. 1556, SEQ ID NO.
1557, SEQ ID NO. 1558 i SEQ ID NO. 1559 i CDR-H3 ima sekvencu SEQ ID No. 1393; a varijabilni domen lakog lanca sadrži sledeća tri CDR, respektivno CDR-L1 ima sekvencu SEQ ID No. 1435, CDR-L2 ima sekvencu odabranu od SEQ ID NO: 1476, SEQ ID NO.
1630, SEQ ID NO. 1631, SEQ ID NO. 1632 i SEQ ID NO. 1633 i CDR-L3 ima sekvencu SEQ ID No.1499. Jedan primer takvog antitela je ovde označen kao 26A.
[0007] Ostala antitela koja se vezuju za C10orf54 proteine i označena su ovde kao 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353 ili 305A, se pominju ovde samo kao aspekti pronalaska.
[0008] Predmetni pronalazak obezbeđuje antitela koja se vezuju za C10orf54, uključujući humanizovana antitela i konjugate antitelo-lek koji sadrže antitela i metode za upotrebu antitela i konjugata antitelo-lek, uključujući i za dijagnozu i tretman kancera. Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje proteine koji se vezuju za C10orf54, uključujući vezujuće proteine, kao što su antitela, koja se vezuju za jedan ili više proteina C10orf54 ili himerne proteine. Takvi vezujući proteini, uključujući antitela, mogu da budu antagonisti (npr., da inhibiraju jedno ili više bioloških dejstava C10orf54).
[0009] U prvom aspektu, ovde su obezbeđena antitela koja se vezuju za C10orf54, uključujući polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54, o kojima se ovde kolektivno govori kao o antitelima na C10orf54. Ovde su obezbeđena i antitela na C10orf54 koja su konjugovana sa lekovima kao konjugati antitelo-lek (ADC), uključujući ADC formule A-L-CTX, gde je A antitelo, L je linker, a CTX je citotoksin. U nekim aspektima antitela na C10orf54 su humanizovana antitela koja se vezuju za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54. U određenim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži VH domen, VL domen, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL monoklonskog antitela 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A, opisanog ovde (npr., Tabele 12-33) ili njegove humanizovane varijante. U određenim aspektima, antitelo na C10orf54 može još da sadrži FR1 VH, FR2 VH, FR3 VH, FR4 VH, FR1 VL, FR2 VL, FR3 VL i/ili FR4 VL humane embrionske imunoglobulinske aminokiselinske sekvence ili njene varijante.
[0010] U određenim aspektima, antitelo sadrži manje od šest CDR-ova. U nekim aspektima, antitelo sadrži ili se sastoji od jednog, dva, tri, četiri ili pet CDR-ova izabranih iz grupe koja se sastoji od CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL. U nekim specifičnim aspektima, antitelo sadrži ili se sastoji od jednog, dva, tri, četiri ili pet CDR-ova izabranih iz grupe koja se sastoji od CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL monoklonskog antitela 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisanog ovde (npr., Tabele 12-33) ili njegove humanizovane varijante. U nekim specifičnim aspektima, antitelo još sadrži FR1 VH, FR2 VH, FR3 VH, FR4 VH, FR1 VL, FR2 VL, FR3 VL i/ili FR4 VL humane embrionske imunoglobulinske aminokiselinske sekvence ili njene varijante.
[0011] U nekim specifičnim aspektima, antitelo je humanizovano antitelo, monoklonsko antitelo, rekombinantno antitelo, fragment koji vezuje antigen ili bilo koja njihova kombinacija. U nekim konkretnim aspektima, antitelo je humanizovano monoklonsko antitelo kao što je ovde opisano (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A ovde opisano (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL) ili njegov fragment koji vezuje antigen, koje se vezuje za polipeptid C10orf54 (npr., C10orf54 koji se eksprimira na površini ćelije ili rastvorljiv C10orf54), fragment C10orf54 ili epitop C10orf54.
[0012] U drugom aspektu, ovde su obezbeđena antitela, uključujući humanizovana antitela, (i) koja kompetitivno blokiraju (npr., na način zavisan od doze) vezivanje antitela na C10orf54 obezbeđenog ovde za polipeptid C10orf54 (npr., C10orf54 koji se eksprimira na površini ćelije ili rastvorljiv C10orf54), fragment C10orf54 ili epitop C10orf54 i/ili (ii) koja se vezuju za epitop C10orf54 koji je vezan za antitelo na C10orf54 (npr., humanizovana antitela na C10orf54) obezbeđeno ovde. U drugim aspektima, antitelo kompetitivno blokira (npr., na način zavisan od doze) monoklonsko antitelo 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) ili njegovu humanizovanu varijantu u vezivanju za polipeptid C10orf54 (npr., C10orf54 koji se eksprimira na površini ćelije ili rastvorljiv C10orf54), fragment C10orf54 ili epitop C10orf54. U drugim aspektima, antitelo se vezuje za epitop C10orf54 koji je vezan (npr., prepoznat) monoklonskim antitelom 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisanim ovde (npr., Tabele 12-33) ili njegovom humanizovanom varijantom (npr. humanizovana antitela na C10orf54).
[0013] U određenim aspektima, antitela na C10orf54 (npr., humanizovana antitela na C10orf54) obezbeđena ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL) su konjugovana ili rekombinantno fuzionisana sa dijagnostičkim sredstvom, detektabilnim sredstvom ili terapijskim sredstvom. U nekim aspektima, terapijsko sredstvo je hemoterapijsko sredstvo (npr., a citotoksično sredstvo, kao što je citotoksin). U nekim aspektima, detektabilno sredstvo je radioizotop, enzim, fluorescentno jedinjenje, bioluminescentno jedinjenje ili hemiluminescentno jedinjenje. U određenim aspektima, antitela na C10orf54 obezbeđena ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL) su konjugovana sa lekovima kao konjugati antitelo-lek (ADC-ovi). U nekim aspektima, konjugat antitelo-lek (ADC) je formule A-L-CTX, gde je A antitelo, L je linker, a CTX je citotoksin.
[0014] U određenim aspektima, obezbeđeni su sastavi koji sadrže antitelo na C10orf54 (npr., humanizovana antitela na C10orf54) opisano ovde. U nekim aspektima, sastavi sadrže konjugat antitelo-lek, gde je antitelo antitelo na C10orf54 obezbeđeno ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL). Ovde su obezbeđeni farmaceutski sastavi koji sadrže anti-C10orf54 antitelo, uključujući humanizovano antitelo na C10orf54, obezbeđeno ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL).
[0015] U određenim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde se vezuje za prvu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC1 (SEQ ID NO: 1079), CC4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) i CC10 (SEQ ID NO: 1251), a ne vezuje se za drugu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC2 (SEQ ID NO: 1243), CC3 (SEQ ID NO: 1244), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248) i CC9 (SEQ ID NO: 1250).
[0016] U određenim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde se vezuje za prvu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC1 (SEQ ID NO: 1079), CC4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246) i CC8 (SEQ ID NO: 1249), a ne vezuje se za drugu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC2 (SEQ ID NO: 1243), CC3 (SEQ ID NO: 1244), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC9 (SEQ ID NO: 1250) i CC10 (SEQ ID NO: 1251). U nekim aspektima, takvo antitelo ne sadrži jednu ili više CDR sekvenci izabranih iz grupe koja se sastoji od 30, 1099, 1104, 1105, 1110, 31, 1100, 1106, 1111, 1116, 32, 1101, 1107, 1112, 45, 1102, 1108, 1113, 40, 1103, 1114, 41, 1109 i 1115.
[0017] U određenim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde se vezuje za prvu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC1 (SEQ ID NO: 1079), CC4 (SEQ ID NO: 1245) i CC5 (SEQ ID NO: 1246), a ne vezuje se za drugu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa (SEQ ID NO: 1243), CC3 (SEQ ID NO: 1244), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC8 (SEQ ID NO: 1249), CC9 (SEQ ID NO: 1250) i CC10 (SEQ ID NO: 1251). U nekim aspektima, takvo antitelo ne sadrži jednu ili više CDR sekvenci izabranih iz grupe koja se sastoji od 36, 1081, 1086, 1087, 1092, 37, 1082, 1088, 1093, 1098, 38, 1083, 1089, 1094, 45, 1084, 1090, 1095, 46, 1085, 1096, 47, 1091 i 1097.
[0018] U određenim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde se vezuje za prvu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC1 (SEQ ID NO: 1079), CC4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) i CC9 (SEQ ID NO: 1250), a ne vezuje se za drugu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC2 (SEQ ID NO: 1243), CC3 (SEQ ID NO: 1244), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC9 (SEQ ID NO: 1250) i CC10 (SEQ ID NO: 1251). U nekim aspektima, takvo antitelo ne sadrži jednu ili više CDR sekvenci izabranih iz grupe koja se sastoji od 33, 1117, 1122, 1123, 1128, 34, 1118, 1124, 1129, 1134, 35, 1119, 1125, 1130, 42, 1120, 1126, 1131, 43, 1121, 1132, 44, 1127 i 1133.
[0019] U određenim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde se vezuje za prvu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC1 (SEQ ID NO: 1079), CC3 (SEQ ID NO: 1244), CC4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) i CC9 (SEQ ID NO: 1250), a ne vezuje se za drugu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC2 (SEQ ID NO: 1243), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248) i CC10 (SEQ ID NO: 1251).
[0020] U određenim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde se vezuje za prvu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC1 (SEQ ID NO: 1079), CC4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) i CC10 (SEQ ID NO: 1251), a ne vezuje se za drugu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC2 (SEQ ID NO: 1243), CC3 (SEQ ID NO: 1244), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC9 (SEQ ID NO: 1250) i CC10 (SEQ ID NO: 1251).
[0021] U trećem aspektu, obezbeđeni su izolovani molekuli nukleinske kiseline koja kodira VH lanac, VL lanac, VH domen, VL domen, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL antitela na C10orf54 kao što je opisano ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisanog ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL), uključujući humanizovana antitela na C10orf54, koja se vezuju za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54. U određenim aspektima, molekul nukleinske kiseline kodira VH domen, VL domen, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL monoklonskog antitela 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisanog ovde (npr., Tabele 12-33) ili njegove humanizovane varijante. U određenim aspektima, molekul nukleinske kiseline dalje kodira FR1 VH, FR2 VH, FR3 VH, FR4 VH, FR1 VL, FR2 VL, FR3 VL i/ili FR4 VL humane embrionske imunoglobulinske aminokiselinske sekvence ili njene varijante. Ovde su obezbeđeni i vektori i ćelije domaćini koje sadrže molekule nukleinske kiseline koja kodira antitelo na C10orf54 (npr., humanizovana antitela na C10orf54), kao i metodi proizvodnje antitela na C10orf54 gajenjem ćelija domaćina obezbeđenih ovde u uslovima koji podstiču proizvodnju antitela na C10orf54.
[0022] U četvrtom aspektu, ovde su obezbeđena antitela na C10orf54 kao što je opisano ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL), uključujući konjugat antitelo-lek (ADC) koji sadrži antitelo na C10orf54, obezbeđeno ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL) za lečenje, sprečavanje ili olakšavanje bolesti, poremećaja ili stanja, uključujući jedan ili više simptoma bolesti, poremećaja ili stanja, koje obuhvata administraciju terapijski efektivne količine antitela na C10orf54, kao što je opisano ovde, subjektu, time lečeći, sprečavajući ili olakšavajući bolest, poremećaj ili stanje, uključujući jedan ili više simptoma bolesti, poremećaja ili stanja. U nekim aspektima, antitela na C10orf54 su humanizovana antitela koja se vezuju za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54. U jednom aspektu, bolest, poremećaj ili stanje je izazvano ili na neki drugi način povezano sa C10orf54, uključujući povezanost sa ćelijama koje eksprimiraju C10orf54 (npr., tumorske ćelije, supresorske ćelije izvedene iz mijeloida (MDSC), supresivne dendritske ćelije (supresivne DC) i/ili regulatorne T ćelije (T reg)). U određenim aspektima, bolest je kancer, kao što je leukemija, kancer bešike, kancer kože, kancer kolona, kancer dojke, kancer jetre, kancer bubrega, kancer pluća, kancer stomaka, kancer pankreasa, kancer ezofagusa ili fibrosarkom. U jednom aspektu, leukemija je akutna mijeloidna leukemija (AML). U drugim aspektima, bolest je bolest kalem protiv domaćina (GVHD). Pored toga, antitelo na C10orf54 sa aktivnošću vezivanja C10orf54 za ćelije koje eksprimiraju C10orf54, obezbeđeno ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL), na primer, kao nekonjugovano antitelo ili konjugovano antitelo (ADC), je obezbeđeno za terapijsku upotrebu opisanu gore, uključujući inhibiranje i/ili ubijanje ćelija koje eksprimiraju C10orf54 (npr., da antitumorskim dejstvom posreduju u anti-tumorskom efektu). U određenim aspektima, antitela na C10orf54, uključujući ADC koji sadrže antitela na C10orf54, obezbeđena ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) saVH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL) inhibiraju supresorsku aktivnost na T ćelijama posredovanu pomoću C10orf54 (npr., da bi dozvolili efektivan anti-tumorski imuni odgovor). U određenim aspektima, antitela na C10orf54 obezbeđena ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL) direktno ubijaju ćelije koje eksprimiraju C10orf54 (npr., tumorske ćelije koje nose C10orf54, supresorske ćelije izvedene iz mijeloida (MDSC), supresivne dendritske ćelije (supresivne DC) i/ili regulatorne T ćelije (T reg)), na primer, putem ćelijske citotoksičnosti zavisne od antitela (ADCC) i/ili citotoksičnosti zavisne od komplementa (CDC). U određenim aspektima, konjugati antitelo-lek (ADC) koji sadrže antitela na C10orf54 obezbeđena ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL) direktno ubijaju ćelije koje eksprimiraju C10orf54, uključujući vezivanjem za ćelije koje eksprimiraju C10orf54 (npr., tumorske ćelije, supresorske ćelije izvedene iz mijeloida (MDSC), supresivne dendritske ćelije (supresivne DC) i/ili regulatorne T ćelije (T reg)), na primer, omogućavajući internalizaciju citotoksičnog leka. U određenim aspektima, antitela na C10orf54 obezbeđena ovde ili konjugati antitelo-lek (ADC) koji sadrže antitela na C10orf54 obezbeđeni ovde se koriste za lečenje kancera (npr., kancera bešike, dojke, kolona, vezivnog tkiva, rektalnog, gastričnog, ezofagusnog, pluća, larinksa, bubrega, usta, jajnika ili prostate ili sarkoma, melanoma, glioma, limfoma ili leukemije) ili tumora vezanih za supresorske ćelije izvedene iz mijeloida (MDSC) (npr., karcinom kolona, mamarni karcinom, fibrosarkom, timom, karcinom pluća, karcinom renalnih ćelija, mezoteliom, gliom, limfom, sarkom, karcinom prostate, sarkom ili karcinom glave i vrata). U bilo kom od gornjih aspekata, antitelo na C10orf54 može biti humanizovano antitelo na C10orf54 obezbeđeno ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL) koje se vezuje za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54.
[0023] U petom aspektu, ovde je obezbeđeno antitelo na C10orf54 ili konjugati antitelo-lek koji sadrže antitelo na C10orf54 obezbeđeno ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL) za inhibiranje rasta ćelija i/ili ubijanje ćelija koje na površini imaju ekspresiju C10orf54, koje obuhvata dovođenje u dodir ćelija sa efektivnom količinom navedenog antitela na C10orf54 ili konjugata antitelo-lek. U jednom aspektu, ćelija je regulatorna T ćelija (npr., CD4<+>Foxp3<+>regulatorna T ćelija). U određenim aspektima, ovde su obezbeđena antitela na C10orf54, uključujući ADC koji sadrže antitela na C10orf54, obezbeđena ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL) za upotrebu u inhibiranju rasta tumora sa inflamacijom u subjektu, gde navedena upotreba obuhvata davanje efektivne količine. U drugim aspektima, ćelija je supresorska ćelija izvedena iz mijeloida (npr., CD11b<+>ili CD11b<high>supresorska ćelija izvedena iz mijeloida) ili supresivna dendritska ćelija (npr., CD11b<+>ili CD11b<high>dendritska ćelija). U drugim aspektima, ćelija je kancerska ili prekancerska ćelija. Pored toga, antitelo na C10orf54 sa aktivnošću vezivanja C10orf54 za ćelije koje eksprimiraju C10orf54 obezbeđeno ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL), na primer, kao nekonjugovano antitelo ili konjugovano antitelo (ADC) je obezbeđeno ovde, za terapijsku upotrebu opisano gore, koja uključuje inhibiranje i/ili ubijanje ćelija koje eksprimiraju C10orf54 (npr., da antitumorskim dejstvom posreduju u anti-tumorskom efektu). U određenim aspektima, antitela na C10orf54, uključujući ADC koji sadrže antitela na C10orf54, obezbeđene ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisane ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL) inhibiraju supresorsku aktivnost na T ćelijama posredovanu pomoću C10orf54 (npr., da bi dozvolili efektivan anti-tumorski imuni odgovor). U određenim aspektima, antitela na C10orf54 obezbeđena ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisana ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL) direktno ubijaju ćelije koje eksprimiraju C10orf54 (npr., tumorske ćelije koje nose C10orf54, supresorske ćelije izvedene iz mijeloida (MDSC), supresivne dendritske ćelije (supresivni DC) i /ili regulatorne T ćelije (T reg)), na primer, putem ćelijske citotoksičnosti zavisne od antitela (ADCC) i/ili citotoksičnosti zavisne od komplementa (CDC). U određenim aspektima, konjugati antitelo-lek (ADC) koji sadrže antitela na C10orf54 obezbeđena ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisane ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL) direktno ubijaju ćelije koje eksprimiraju C10orf54, što uključuje vezivanje za ćelije koje eksprimiraju C10orf54 (npr., tumorske ćelije, supresorske ćelije izvedene iz mijeloida (MDSC), supresivne dendritske ćelije (supresivni DC) i/ili regulatorne T ćelije (T reg)), na primer, omogućavajući internalizaciju citotoksičnog leka. U bilo kom od gornjih aspekata, antitelo na C10orf54 mže biti humanizovano antitelo na C10orf54 obezbeđeno ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL) koje se vezuje za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54.
[0024] U šestom aspektu, ovde je obezbeđeno antitelo na C10orf54 (npr., humanizovano antitelo na C10orf54) obezbeđeno ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL) za upotrebu u modulisanju imunog odgovora u subjektu što obuhvata davanje efektivne količine navedenog antitela subjektu. U jednom aspektu, modulisanje obuhvata povećanje aktivacije T ćelija. U drugom aspektu, modulisanje obuhvata povećanje proliferacije T ćelija. U jednom drugom aspektu, modulisanje obuhvata povećanje proizvodnje citokina.
[0025] U sedmom aspektu, ovde su obezbeđeni metodi za detekciju C10orf54 u uzorku koji obuhvataju dovođenje uzorka u dodir sa antitelom na C10orf54 (npr., humanizovanim anti-C10orf54 antitelom) obezbeđenim ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL), kao što je antitelo koje sadrži detektabilno sredstvo. U određenim aspektima, uzorak sadrži ćeliju koja eksprimira C10orf54 na svojoj površini.
[0026] U osmom aspektu, ovde je obezbeđeno antitelo na C10orf54 (npr., humanizovano anti-C10orf54 antitelo) ili konjugat antitelo-lek (ADC) koji sadrži antitelo na C10orf54 (npr., ADC formule A-L-CTX, gde je A antitelo, L je linker, a CTX je citotoksično sredstvo) obezbeđeno ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL) za upotrebu u lečenju kancera, što obuhvata davanje subjektu navedenog antitela ili ADC u terapijski efektivnoj količini, što uključuje količinu efektivnu da ubije ćeliju koja eksprimira C10orf54 (npr., tumorska ćelija, supresorska ćelija izvedena iz mijeloida (MDSC), supresivna dendritska ćelija (supresivni DC) i /ili regulatorna T ćelija (T reg)). U nekim aspektima kancer je akutna mijeloidna leukemija (AML). U bilo kom od gornjih aspekata, antitelo na C10orf54 može biti humanizovano antitelo na C10orf54 obezbeđeno ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL) koje se vezuje za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54.
[0027] U devetom aspektu, ovde su obezbeđeni metodi za ubijanje ćelija koje eksprimiraju C10orf54 (npr., tumorskih ćelija, supresorskih ćelija izvedenih iz mijeloida (MDSC), supresivnih dendritskih ćelija (supresivni DC) i /ili regulatornih T ćelija (T reg)) koji obuhvataju dovođenje u dodir ćelija koje eksprimiraju C10orf54 (npr., tumorska ćelija, supresorska ćelija izvedena iz mijeloida (MDSC), supresivna dendritska ćelija (supresivni DC) i /ili regulatorna T ćelija (T reg)) sa količinom antitela na C10orf54 ili konjugata antitelolek (ADC) koji sadrži antitelo na C10orf54 (npr., ADC formule A-L-CTX, gde je A antitelo, L je linker, a CTX je citotoksično sredstvo) obezbeđenog ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisanog ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL) efektivnom da ubije ćeliju (npr., tumorsku ćeliju, supresorsku ćeliju izvedenu iz mijeloida (MDSC), supresivnu dendritsku ćeliju (supresivni DC) i /ili regulatornu T ćeliju (T reg)). U nekim aspektima, tumorska ćelija je AML ćelija. U bilo kom od gornjih aspekata, antitelo na C10orf54 može biti humanizovano antitelo na C10orf54 obezbeđeno ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL) koje se vezuje za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54.
[0028] U desetom aspektu, ovde je obezbeđen komplet koji sadrži antitelo na C10orf54 (npr., humanizovano antitelo na C10orf54) koje se vezuje za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54 obezbeđen ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisan ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL). U nekim aspektima, kompleti sadrže konjugat antitelo-lek (ADC) gde je antitelo antitelo na C10orf54 (npr., humanizovano antitelo na C10orf54) obezbeđeno ovde (npr., 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisano ovde (npr., Tabele 12-33) sa VH domenom, VL domenom, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL).
TERMINOLOGIJA
[0029] Ako nije drukčije definisano, svi tehnički i naučni termini korišćeni ovde imaju isto značenje koje se obično podrazumeva od strane stručnjaka uobičajenog nivoa u ovoj oblasti. U slučaju da postoji mnoštvo definicija za termin ovde, prevlađuju one u ovom odeljku ako nije drukčije rečeno.
[0030] Termin "oko" ili "približno" znači unutar 20%, kao što je unutar 10% ili unutar 5% (ili 1% ili manje) od date vrednosti ili opsega.
[0031] Kao što se ovde koristi, "administrirati" ili "administracija" se odnosi na čin injektiranja ili na drugi način fizičkog dostavljanja supstance onakve kakva postoji van tela (npr., antitelo na C10orf54 obezbeđeno ovde) pacijentu, kao što je mukozno intradermalno intravenozno intramuskularno davanje i/ili bilo koji drugi metod fizičkog dostavljanja opisanog ovde ili poznatog u struci. Kad se leči bolest ili njen simptom, administracija supstance se tipično dešava posle početka bolesti ili njenih simptoma. Kad se bolest ili njeni simptomi sprečavaju, administracija supstance se tipično dešava pre početka bolesti ili njenih simptoma.
[0032] Kao što se ovde koristi, "agonist" C10orf54 se odnosi na molekul koji je u stanju da aktivira ili na drugi način poveća jednu ili više bioloških aktivnosti C10orf54, kao u ćeliji koja eksprimira C10orf54 ili u ćeliji koja eksprimira ligand C10orf54, kao što je receptor C10orf54. U nekim aspektima, agonist C10orf54 (npr., agonističko antitelo obezbeđeno ovde) može, na primer, da deluje aktiviranjem ili na drugi način povećanjem aktivacije i/ili ćelijskih signalnih puteva ćelija koje eksprimiraju C10orf54 ili receptor C10orf54, čime se povećava biološka aktivnost ćelija posredovana pomoću C10orf54 u odnosu na biološku aktivnost posredovanu pomoću C10orf54 u odsustvu agonista. U određenim aspektima, antitela obezbeđena ovde su agonistička antitela na C10orf54.
[0033] Termin "alkil”, kao što se ovde koristi, znači ugljovodonik pravog ili razgranatog lanca ili cikličan (u ovom slučaju, to bi bilo poznato i kao "cikloalkil") ugljovodonik koji sadrži od 1-10 ugljenikovih atoma. Primeri alkila uključuju, ali nisu ograničeni na, metil, etil, n-propil izo-propil, n-butil, sek-butil, terc-butil, n-pentil izopentil, neopentil, n-heksil, 3-metilheksil, 2,2-dimetilpentil, 2,3-dimetilheksil, n-heptil, n-oktil, n-nonil, i n-decil. U određenim aspektima, alkil grupe su opciono supstituisane.
[0034] Termin "C1-6alkil”, kao što se ovde koristi, znači ugljovodonik pravog ili razgranatog lanca ili cikličan (u ovom slučaju, to bi bilo poznato i kao "cikloalkil") ugljovodonik koji sadrži od 1-6 ugljenikovih atoma.
[0035] Termin "C1-3alkil”, kao što se ovde koristi, znači ugljovodonik pravog ili razgranatog lanca koji sadrži od 1-3 ugljenikovih atoma.
[0036] Termin "alkenil”, znači ugljovodonik pravog, razgranatog lanca ili cikličan (u ovom slučaju, to bi bilo poznato i kao "cikloalkil") ugljovodonik koji sadrži od 2-10 ugljenikovih atoma i koji sadrži bar jednu dvogubu vezu ugljenik-ugljenik formiranu uklanjanjem dva vodonika. U nekim aspektima, u zavisnosti od strukture, alkenil grupa je monoradikal ili
1
diradikal (npr., alkenilenska grupa). U nekim aspektima, alkenil grupe su opciono supstituisane. Primeri alkenila uključuju, ali nisu ograničeni na, etenil, 2-propenil, 2-metil-2-propenil, 3-butenil, 4-pentenil, 5-heksenil, 2-heptenil i 2-metil-1-heptenil. U određenim aspektima, alkenil grupe su opciono supstituisane.
[0037] Termin "C2-6alkenil”, kao što se ovde koristi, znači ugljovodonik pravog ili razgranatog lanca ili cikličan (u ovom slučaju, to bi bilo poznato i kao "cikloalkil") ugljovodonik koji sadrži od 2-6 ugljenikovih atoma i bar jednu dvogubu vezu ugljenikugljenik formiranu uklanjanjem dva vodonika.
[0038] Termin "alkoksi”, kao što se ovde koristi, označava alkil grupu, kako je ovde definisana, dodatu na roditeljsku grupu preko atoma kiseonika. Primeri alkoksi uključuju, ali nisu ograničeni na, metoksi, etoksi, propoksi, 2-propoksi, butoksi, terc-butoksi, pentiloksi i heksiloksi.
[0039] "Aminokiselina" (ili AA) ili aminokiselinski ostatci uključuju, ali nisu ograničeni na, 20 aminokiselina koje se javljaju u prirodi, obično označenih simbolima od tri slova i takođe uključuju 4-hidroksiprolin, hidroksilizin, dezmozin, izodezmozin, 3-metilhistidin, norvalin, beta-alanin, gama-aminobutiričnu kiselinu, homocistein, homoserin, ornitin i metionin sulfon. Aminokiselinski ostatak iz predmetne aplikacije takođe uključuje odgovarajuće N-metil aminokiseline, kao što su -N(CH3)CH2C(O)O-, -NHC(O)CH2CH2CH(NHCH3)C(O)O- itd. Aminokiseline, dipeptidi, tripeptidi, oligomeri i polipeptidi označeni sa -(AA)r- iz predmetne aplikacije mogu da uključuju odgovarajuće ne-N-alkilovane aminokiseline i peptide (kao što su ne-N-metilovane aminokiseline u peptidima), kao i smesu ne-N-alkilovanih aminokiselina i N-alkilovanih aminokiselina u peptidima.
[0040] "Konjugat antitelo-lek" ili "ADC" je antitelo koje je konjugovano sa jednim ili više citotoksina, preko jednog ili više linkera. Konjugat antitelo-lek (ADC) može biti formule A-L-CTX, gde je A antitelo, L je linker, a CTX je citotoksin.
[0041] U kontekstu polipeptida, termin "analog", kao što se ovde koristi, se odnosi na polipeptid koji ima sličnu ili identičnu funkciju kao polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili antitelo na C10orf54, ali ne sadrži nužno sličnu ili identičnu aminokiselinsku sekvencu polipeptida C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili antitelo na C10orf54 ili ima sličnu ili identičnu strukturu polipeptida C10orf54, fragmenta polipeptida C10orf54 ili antitela na C10orf54. Polipeptid koji ima sličnu aminokiselinsku sekvencu se odnosi na polipeptid koja zadovoljava bar jedno od sledećih: (a) polipeptid koji ima aminokiselinsku sekvencu koja je bar 30%, bar 35%, bar 40%, bar 45%, bar 50%, bar 55%, bar 60%, bar 65%, bar 70%, bar 75%, bar 80%, bar 85%, bar 90%, bar 95% ili bar 99% identična aminokiselinskoj sekvenci polipeptida C10orf54 (npr., SEQ ID NO:1079), fragmenta polipeptida C10orf54 ili antitela na C10orf54 opisanog ovde; (b) polipeptid kodiran nukleotidnom sekvencom koja hibridizuje pod strogim uslovima sa nukleotidnom sekvencom koja kodira polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili antitelo na C10orf54 (ili njegov VH ili VL region) opisano ovde od bar 5 aminokiselinskih ostataka, bar 10 aminokiselinskih ostataka, bar 15 aminokiselinskih ostataka, bar 20 aminokiselinskih ostataka, bar 25 aminokiselinskih ostataka, bar 40 aminokiselinskih ostataka, bar 50 aminokiselinskih ostataka, bar 60 amino ostaci, bar 70 aminokiselinskih ostataka, bar 80 aminokiselinskih ostataka, bar 90 aminokiselinskih ostataka, bar 100 aminokiselinskih ostataka, bar 125 aminokiselinskih ostataka ili bar 150 aminokiselinskih ostataka (videti, npr., Sambrook et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Maniatis et al. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY) i (c) polipeptid kodiran nukleotidnom sekvencom koja je bar 30%, bar 35%, bar 40%, bar 45%, bar 50%, bar 55%, bar 60%, bar 65%, bar 70%, bar 75%, bar 80%, bar 85%, bar 90%, bar 95% ili bar 99% identična nukleotidnoj sekvenci koja kodira polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili antiC10orf54 antitelo (ili njegov VH ili VL region) opisano ovde. Polipeptid slične strukture polipeptidu C10orf54, fragmentu polipeptida C10orf54 ili anti-C10orf54 antitelu opisanom ovde, se odnosi na polipeptid koji ima sličnu sekundarnu, tercijarnu ili kvaternarnu strukturu polipeptidu C10orf54, fragmentu C10orf54 ili antitelu na C10orf54 opisanom ovde. Struktura polipeptida se može odrediti metodima poznatim stručnjacima u ovoj oblasti, uključujući, ali bez ograničenja na, kristalografiju X-zracima, nuklearnu magnetnu rezonancu i kristalografsku elektronsku mikroskopiju.
[0042] Kao što se ovde koristi, "antagonist" ili "inhibitor" C10orf54 se odnosi na molekul koji je sposoban da inhibira ili na drugi način smanji jednu ili više bioloških aktivnosti C10orf54, kao što je u ćeliji koja eksprimira C10orf54 ili u ćeliji koja eksprimira ligand C10orf54, kao što je receptor C10orf54. U nekim aspektima, antagonist C10orf54 (npr., antagonističko antitelo obezbeđeno ovde) može, na primer, da deluje inhibiranjem ili na drugi način smanjivanjem aktivacije i/ili ćelijskih signalnih puteva ćelije koja eksprimira C10orf54 ili receptor C10orf54, time inhibirajući biološku aktivnost ćelije posredovanu pomoću C10orf54 u odnosu na biološku aktivnost posredovanu pomoću C10orf54 u odsustvu antagonista. U određenim aspektima, antitela obezbeđena ovde su antagonistička antitela na C10orf54.
[0043] Termini "antitelo" i "imunoglobulin" ili "Ig" se ovde koriste za isti pojam i namera je da uključe polipeptidni proizvod B ćelija unutar imunoglobulinske klase polipeptida koji je sposoban da se veže za specifičan molekulski antigen i sastavljen je od dva identična para polipeptidnih lanaca, gde svaki par ima jedan težak lanac (oko 50-70 kDa) i jedan lak lanac (oko 25 kDa) i svaki amino-terminalni deo svakog lanca uključuje varijabilni region od oko 100 do oko 130 ili više aminokiselina i svaki karboksi-terminalni deo svakog lanca uključuje konstantan region (videti, Borrebaeck (ed.) (1995) Antibody Engineering, Second Ed., Oxford University Press.; Kuby (1997) Immunology, Third Ed., W.H. Freeman and Company, New York). U nekim specifičnim aspektima, specifičan molekulski antigen može da bude vezan antitelom obezbeđenim ovde i uključuje ciljni polipeptid C10orf54, fragment ili epitop.
[0044] Antitela uključuju i, ali nisu ograničena na, sintetička antitela, monoklonska antitela, rekombinantno proizvedena antitela, multispecifična antitela (uključujući bispecifična antitela), humana antitela, humanizovana antitela, kamilizovana antitela, himerna antitela intratela, anti-idiotipska (anti-Id) antitela i funkcionalne fragmente bilo kojih od prethodnih, što se odnosi na deo polipeptida teškog ili lakog lanca antitela koji zadržava deo ili svu aktivnost vezivanja antitela iz kog je fragment izveden. Neograničavajući primeri funkcionalnih fragmenata uključuju jednolančane Fv (scFv) (npr., uključujući monospecifčne, bispecifične itd.), Fab fragmente, F(ab') fragmente, F(ab)2fragmente, F(ab')2fragmente, disulfide-linked Fvs (sdFv), Fd fragmente, Fv fragmente, dijatelo, trijatelo, tetratelo i minitelo. Konkretno, antitela obezbeđena ovde uključuju imunoglobulinske molekule i imunološki aktivne delove imunoglobulinskih molekula, npr., domene koji vezuju antigene ili molekule koji sadrže mesto koje se vezuje za antigen C10orf54 (npr., jedan ili više regiona koji određuju komplementarnost (CDR) antitela na C10orf54). Takvi fragmenti antitela se mogu naći opisani u, na primer, Harlow i Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York (1989); Myers (ed.), Molec. Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference, New York: VCH Publisher, Inc.; Huston et al., Cell Biophysics, 22:189-224 (1993); Plückthun and Skerra, Meth. Enzymol., 178:497-515 (1989) i u Day, E.D., Advanced Immunochemistry, Second Ed., Wiley-Liss, Inc., New York, NY (1990). Antitela obezbeđena ovde mogu da budu bilo kog tipa (npr., IgG, IgE, IgM, IgD, IgA i IgY), bilo koje klase (npr., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 i IgA2) ili bilo koje podklase (npr., IgG2a i IgG2b) imunoglobulinskog molekula. Antitela na C10orf54 obezbeđena ovde mogu da budu agonistička antitela ili antagonistička antitela.
[0045] Termini "antitela koja se specifično vezuju za C10orf54", "antitela koja se specifično vezuju za epitop C10orf54", "antitela na C10orf54" i analogni termini se takođe ovde koriste za isti pojam i odnose se na antitela koja se specifično vezuju za polipeptid C10orf54, kao što je antigen ili epitop C10orf54. Takva antitela uključuju humanizovana antitela. Antitelo koje se specifično vezuje za C10orf54 antigen može unakrsno da reaguje sa srodnim antigenima. U određenim aspektima, antitelo koje se specifično vezuje za C10orf54 antigen ne reaguje unakrsno sa drugim antigenima. Antitelo koje se specifično vezuje za C10orf54 antigen može da se identifikuje, na primer, pomoću imunoeseja, BIAcore ili drugim tehnikama poznatim stručnjacima u ovoj oblasti. Antitelo se specifično vezuje za C10orf54 antigen kad se vezuje za C10orf54 antigen sa većim afinitetom nego za bilo koji drugi unakrsno reaktivan antigen, što se određuje primenom eksperimentalnih tehnika, kao što su radioimunoeseji (RIA) i enzimski imunoeseji (ELISA). Tipično, specifična ili selektivna reakcija će dati bar dupli pozadinski signal ili šum, a tipičnije više od 10 puta veći od pozadine. Videti, npr., Paul, ed., 1989, Fundamental Immunology Second Edition, Raven Press, New York, na stranama 332-336 za diskusiju u vezi specifičnosti antitela. U određenim aspektima, antitelo "koje vezuje" antigen od interesa je ono koje se vezuje za antigen sa dovoljnim afinitetom tako da je antitelo korisno kao dijagnostičko i/ili terapijsko sredstvo u ciljanju ćelija ili tkiva koja eksprimiraju antigen, a ne reaguje unakrsno značajno sa drugim proteinima. U takvim aspektima, stepen vezivanja antitela za "neciljani" protein će biti manji od oko 10% vezivanja antitela za njegov konkretan ciljni protein, što se određuje analizom protočne citofluorimetrije (FACS) ili radioimunoprecipitacijom (RIA). Što se tiče vezivanja antitela za ciljni molekul, termin "specifično vezivanje" ili "specifično se vezuje za" ili je"specifično za" određeni ciljni polipeptid ili epitop na određenom ciljnom polipeptidu označava vezivanje koje je merljivo različito od nespecifične interakcije. Specifično vezivanje se može meriti, na primer, određivanjem vezivanja molekula u poređenju sa vezivanjem kontrolnog molekula, koji je generalno molekul slične strukture koji nema aktivnost vezivanja. Na primer, specifično vezivanje se može određivati kompeticijom sa kontrolnim molekulom koji je sličan ciljnom, na primer, višak neobeležene mete. U tom slučaju, specifično vezivanje je indikovano ako je vezivanje obeležene mete za probu kompetitivno inhibirano viškom neobeležene mete. Termin "specifično vezivanje" ili "specifično se vezuje za" ili je"specifično za" određeni ciljni polipeptid ili epitop na određenom ciljnom polipeptidu, kao što se ovde koristi, se može ispoljiti, na primer, od strane molekula koji ima Kd za metu bar oko 10<-4>M, alternativno bar oko 10<-5>M, alternativno bar oko 10<-6>M, alternativno bar oko 10<-7>M, alternativno bar oko 10<-8>M, alternativno bar oko 10<-9>M, alternativno bar oko 10<-10>M, alternativno bar oko 10<-11>M, alternativno bar oko 10<-12>M ili veće. U jednom aspektu, termin "specifično vezivanje" se odnosi na vezivanje u kom se molekul vezuje za određeni polipeptid ili epitop na određenom polipeptidu bez suštinskog vezivanja za bilo koji drugi polipeptid ili epitop polipeptida. U određenim aspektima, antitelo koje se vezuje za C10orf54 ima konstantu disocijacije (Kd) ≤ 1µM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1nM ili ≤ 0,1nM. U određenim aspektima, anti-C10orf54 antitelo se vezuje za epitop C10orf54 koji je konzervisan među C10orf54 iz različitih vrsta.
[0046] "Antitelo na C10orf54" ili "antitelo koje se vezuje za C10orf54" se odnosi na antitelo koje je sposobno da se veže za C10orf54, uključujući, na primer, antitelo, sa dovoljnim
1
afinitetom tako da je korisno kao dijagnostičko i/ili terapijsko sredstvo u ciljanju C10orf54. Takva antitela uključuju humanizovana antitela. Poželjno, stepen vezivanja anti-C10orf54 antitela za protein koji nije C10orf54 i nije u vezi sa njim je manji od oko 10% vezivanja antitela za C10orf54 što se meri, npr., analizom protočne citofluorimetrije (FACS) ili radioimunoesejem (RIA). Antitelo koje se "specifično vezuje za" ili je "specifično za" C10orf54 je definisano gore. U određenim aspektima, antitelo koje se vezuje za C10orf54 ima konstantu disocijacije (Kd) < 1 µM, < 100 nM, < 10 nM, < 1 nM ili < 0,1 nM. U određenim aspektima, antitelo na C10orf54 se vezuje za epitop C10orf54 koji je konzervisan među C10orf54 iz različitih vrsta.
[0047] "Antigen" je predodređen antigen za koji antitelo može selektivno da se veže. Ciljni antigen može biti polipeptid, ugljovodonik, nukleinska kiselina, lipid, hapten ili neko drugo prirodno ili sintetičko jedinjenje. U nekim specifičnim aspektima, ciljni antigen je polipeptid.
[0048] Termin "fragment koji vezuje antigen", "domen koji vezuje antigen", "region koji vezuje antigen” i slični termini se odnose na onaj deo antitela koji sadrži aminokiselinske ostatke koji interaguju sa antigenom i daju agensu za vezivanje specifičnost i afinitet za antigen (npr., regioni koji određuju komplementarnost (CDR)).
[0049] Termini "vezuje" ili "vezivanje", kao što se ovde koriste, se odnose na interakciju molekula da obrazuju kompleks. Interakcije mogu biti, na primer, nekovalentne interakcije uključujući vodonične veze, jonske veze, hidrofobne interakcije i/ili van der Waals interakcije. Kompleks može da uključuje i vezivanje dva ili više molekula koji se drže zajedno kovalentnim ili nekovalentnim vezama interakcijama ili silama. Jačina svih nekovalentnih interakcija jednog mesta za vezivanje antigena na antitelu i jednog epitopa ciljnog molekula, kao što je C10orf54, je afinitet antitela ili funkcionalnog fragmenta prema tom epitopu. Odnos asocijacije (k1) i disocijacije (k-1) c prema monovalentnom antigenu (k1/ k-1) je konstanta asocijacije K, koja je mera afiniteta. Vrednost K varira za različite komplekse antitela i antigena i zavisi i od k1i od k-1. Konstanta asocijacije K za antitelo obezbeđeno ovde može da se odredi primenom bilo kog metoda obezbeđenog ovde ili bilo kog drugog metoda dobro poznatog stručnjacima u ovoj oblasti. Afinitet na jednom mestu vezivanja ne odražava uvek pravu jačinu interakcije antitela i antigena. Kad složeni antigeni, koji sadrže više ponovljenih antigenih determinanti, kao što je polivalentan C10orf54, dođu u dodir sa antitelima koja sadrže više mesta vezivanja interakcija antitela sa antigenom na jednom mestu će povećati verovatnoću reakcije na drugom mestu. Jačina takvih višestrukih interakcija multivalentnog antitela i antigena se zove aviditet. Aviditet antitela može biti bolja mera njegovog kapaciteta vezivanja nego što je afinitet njegovog pojedinačnog mesta vezivanja. Na primer, visok aviditet može da kompenzuje nizak afinitet, što se ponekad nađe za pentamerna IgM antitela, koja mogu da imaju niži afinitet nego IgG, ali visok aviditet IgM, što je rezultat njegove multivalentnosti, što mu omogućava da efektivno veže antigen.
[0050] Termin "C10orf54" ili "polipeptid C10orf54" i slični termini se odnose na polipeptid ("polipeptid”, "peptid" i "protein" se ovde koriste u istom značenju) koji kodira gen humanog hromozoma 10 koji je otvoreni okvir čitanja 54 (C10orf54), koji je u struci poznat i kao B7-H5, trombocitni receptor Gi24, GI24, sekretovan protein1 indukovan stresom, SISP1 i PP2135, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:
i na srodne polipeptide, uključujući njegove SNP varijante. Pokazano je da ili je predviđeno da polipeptid C10orf54 sadrži nekoliko odvojenih regiona unutar aminokiselinske sekvence uključujući: signalnu sekvencu (ostaci 1-32; videti Zhang et al., Protein Sci. 13:2819-2824 (2004)); imunoglobulinski domen – sličan IgV (ostaci 33-162) i transmembranski region (ostaci 195-215). Zreo C10orf54 protein uključuje aminokiselinske ostatke 33-311 sekvence SEQ ID NO: 1079. Vanćelijski domen proteina C10orf54 uključuje aminokiselinske ostatke 33-194 sekvence SEQ ID NO: 1079. Srodni polipeptidi uključuju alelne varijante (npr., SNP varijante); splajsne varijante; fragmente; derivate; supstitucione, delecione i insercione varijante; fuzione polipeptide (npr., himerni proteini) i međuvrsne homologe, poželjno, koji zadržavaju aktivnost C10orf54 i/ili su dovoljni da izazovu anti-C10orf54 imuni odgovor. Kao što će stručnjaci u ovoj oblasti podrazumevati, antitelo na C10orf54 obezbeđeno ovde može da se veže za polipeptid C10orf54, polipeptidni fragment, antigen i/ili epitop, jer je epitop deo većeg antigena, koji je deo većeg polipeptidnog fragmenta, a koji je deo većeg polipeptida. C10orf54 može da postoji u nativnoj ili denaturisanoj formi. Polipeptidi C10orf54 opisani ovde mogu da se izoluju iz niza izvora, kao što su tipovi humanih tkiva ili iz nekog drugog izvora ili da se dobiju metodima rekombinacije ili sinteze. "Polipeptid C10orf54 nativne sekvence" obuhvata polipeptid koji ima istu aminokiselinsku sekvencu kao odgovarajući polipeptid C10orf54 izveden iz prirode. Takvi polipeptidi C10orf54 nativne sekvence mogu da se izoluju iz prirode ili mogu da se proizvedu metodima rekombinacije ili sinteze. Termin "polipeptid C10orf54 nativne sekvence" specifično obuhvata prirodne skraćene ili sekretovane oblike specifičnih polipeptida C10orf54 (npr., sekvenca vanćelijskog domena), oblike prirodnih varijanti (npr., alternativno splajsne forme) i prirodne alelne varijante polipeptida.
[0051] cDNK sekvenca nukleinske kiseline koja kodira polipeptid C10orf54 sadrži:
1
[0052] Ortolozi polipeptida C10orf54 su takođe dobro poznati u struci. Na primer, mišji ortolog polipeptida C10orf54 je supresor aktivacije T ćelija koji sadrži V region Ig (VISTA) (poznat i kao PD-L3, PD-1H, PD-XL, Pro1412 i UNQ730), koji deli približno 70% sekvencne identičnosti sa humanim polipeptidom. Ortolozi C10orf54 se mogu naći i u drugim organizmima uključujući šimpanze, kravu, pacova i zebrice.
[0053] "Ćelija koja eksprimira C10orf54”, "ćelija koja ima ekspresiju C10orf54" ili gramatički ekvivalent tog izraza, se odnosi na ćeliju koja eksprimira endogeni ili transfektovani C10orf54 na svojoj površini. Ćelije koje eksprimiraju C10orf54 uključuju tumorske ćelije koje nose C10orf54, regulatorne tumorske ćelije (npr., CD4<+>Foxp3<+>regulatorne T ćelije), supresorske ćelije izvedene iz mijeloida (npr., CD11b<+>ili CD11b<high>supresorske ćelije izvedene iz mijeloida) i/ili supresivne dendritske ćelije (npr., CD11b<+>ili CD11b<high>dendritske ćelije). Ćelija koja eksprimira C10orf54 proizvodi dovoljne nivoe C10orf54 na svojoj površini, tako da antitelo na C10orf54 može za njega da se veže. U nekim aspektima, takvo vezivanje može da ima terapijski efekat u odnosu na kancer. Ćelija koja "suviše eksprimira" C10orf54 je ona koja ima značajno više nivoe C10orf54 na svojoj površini u poređenju sa ćelijom iz istog tipa tkiva za koju se zna da eksprimira C10orf54. Takva suvišna ekspresija može biti izazvana amplifikacijom gena ili povećanom transkripcijom ili translacijom. Suvišna ekspresija C10orf54 se može odrediti u dijagnostičkom ili prognostičkom eseju procenjivanjem povećanih nivoa proteina C10orf54 prisutnih na površini ćelija (npr. putem imunohistohemijskog eseja; FACS analizom). Alternativno ili dodatno, mogu se meriti nivoi nukleinske kiseline koja kodira C10orf54 ili mRNK u ćeliji, npr. putem fluorescentne in situ hibridizacije (FISH; videti WO98/45479 objavljeno oktobra, 1998.), metodom Southerna, Northern analizom ili tehnikama lančane reakcije polimeraze (PCR), kao što je kvantitativni PCR u realnom vremenu (RT-PCR). Osim gornjih eseja, različiti in vivo eseji su dostupni iskusnom stručnjaku. Na primer, ćelije unutar tela pacijenta se mogu izložiti antitelu koje je opciono obeleženo detektabilnim agensom i može se proceniti vezivanje antitela za ćelije u pacijentu, npr. skeniranjem spolja na radioaktivnost ili analiziranjem biopsije uzete iz pacijenta koji je prethodno bio izložen antitelu. Tumorske ćelije koje eksprimiraju C10orf54 uključuju, ali nisu ograničene na, tumorske ćelije akutne mijeloidne leukemije (AML).
1
[0054] "Bolest posredovana pomoću C10orf54”, "poremećaj posredovan pomoću C10orf54" i "stanje posredovano pomoću C10orf54" se koriste u istom značenju i odnose se na bolest, poremećaj ili stanje koje je potpuno ili delimično izazvano ili je rezultat C10orf54. Takve bolesti, poremećaji ili stanja uključuju ona izazvana ili na drugi način povezana sa C10orf54, uključujući ili povezana sa ćelijama koje eksprimiraju C10orf54 (npr., tumorske ćelije, supresorske ćelije izvedene iz mijeloida (MDSC), supresivne dendritske ćelije (supresivni DC) i /ili regulatorne T ćelije (T reg)). U određenim aspektima, C10orf54 je aberantno (npr., visoko) eksprimiran na površini ćelije. U nekim aspektima, C10orf54 može biti aberantno regulisan na gore na određenom tipu ćelija. U nekim drugim aspektima, normalna, aberantna ili prekomerna ćelijska signalizacija je izazvana vezivanjem C10orf54 za ligand C10orf54, koji se može vezati ili na drugi način interagovati sa C10orf54.
[0055] Termini "poremećaj proliferacije ćelija" i "proliferativni poremećaj" se odnosi na poremećaje koji su povezani sa nekim stepenom abnormalne proliferacije ćelija. U jednom aspektu, poremećaj proliferacije ćelija je tumor ili kancer. "Tumor”, kao što se ovde koristi, se odnosi na svaki neoplastičan rast i proliferaciju ćelija, bilo da je maligni ili benigni i na sve pre-kancerske i kancerske ćelije i tkiva. Termini "kancer”, "kancerski”, "ćelijski proliferativni poremećaj”, "proliferativni poremećaj" i "tumor" nisu međusobno isključivi, kako je ovde navedeno. Termini "kancer" i "kancerski" se odnosi na ili opisuje fiziološko stanje u sisarima koje se tipično karakteriše neregulisanim rastom ćelija. Primeri kancera uključuju, ali nisu ograničeni na, karcinom, limfom, blastom, sarkom i leukemiju ili limfoidne malignitete. Konkretniji primeri takvih kancera uključuju kancer skvamoznih ćelija (npr. epitelni kancer skvamoznih ćelija), kancer pluća uključujući kancer pluća malih ćelija, kancer pluća ne-malih ćelija, adenokarcinom pluća i skvamozni karcinom pluća, kancer peritoneuma, hepatoćelijski kancer, gastrični ili stomačni kancer, uključujući gastrointestinalni kancer, pankreasni kancer, glioblastom, cervikalni kancer, kancer jajnika, oralni kancer, kancer jetre, kancer bešike, kancer urinarnog trakta, hepatom, kancer dojke, kancer kolona, rektalni kancer, kolorektalni kancer, endometrijski ili karcinom materice, karcinom pljuvačnih žljezda, bubrežni ili renalni kancer, kancer prostate, kancer vulve, tiroidni kancer, hepatički karcinom, analni karcinom, karcinom penisa, melanom, multipli mijelom i limfom B-ćelija, kancer mozga, kancer kože, kancer ezofagusa, kao i kancer glave i vrata i povezane metastaze.
[0056] Termin "nosač" se odnosi na razblaživač, adjuvant (npr., Freund-ov adjuvant (kompletan i nekompletan)), ekscipijent ili nosilac sa kojim se daje terapijsko sredstvo. Takvi farmaceutski nosači mogu biti sterilne tečnosti, kao što su voda i ulja, uključujući one naftnog, životinjskog, povrtnog ili sintetičkog porekla, kao što je ulje od kikirikija, ulje od soje, mineralno ulje, susamovo ulje i slično. Voda je primer nosača kad se farmaceutski sastav administrira intravenozno. Slani rastvori i vodeni rastvori dekstroze i glicerola se takođe mogu koristiti kao tečni nosači, naročito za injektabilne rastvore. Pogodni farmaceutski ekscipijenti uključuju skrob, glukozu, laktozu, saharozu, želatin, slad, pirinač, brašno, kredu, silika gel, natrijum stearat, glicerol monostearat, talk, natrijum hlorid, obrano mleko u prahu, glicerol, propilen, glikol, vodu, etanol i slično. Sastav, ako se želi, može da sadrži i minorne količine sredstava za kvašenje ili emulzifikatora ili sredstava za puferisanje pH. Ovi sastavi mogu da budu u vidu rastvora, suspenzija, emulzija, tableta, pilula, kapsula, prahova, formulacija sa odloženim otpuštanjem i slično. Oralne formulacije mogu da uključuju standardne nosače kao što su manitol, laktoza, skrob, magnezijum stearat, natrijum saharin, celuloza, magnezijum karbonat itd, farmaceutske čistoće. Primeri pogodnih farmaceutskih nosača su opisani u Remington-ovoj Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA. Takvi sastavi će sadržati profiaktički ili terapijski efektivne količine antitela, npr.,
1
u izolovanom ili prečišćenom vidu, zajedno sa pogodnom količinom nosača tako da se obezbedi forma za pravilnu administraciju pacijentu. Formulacija bi trebalo da odgovara načinu administracije.
[0057] Termin "hemijska grupa”, kao što se ovde koristi, se odnosi na dva ili više atoma vezana zajedno u jednu jedinicu i koji formiraju deo molekula.
[0058] "Hemoterapijski agens" je hemijski agens (npr., jedinjenje ili lek) koristan u lečenju kancera, bez obzira na mehanizam dejstva. Hemoterapijski agensi uključuju jedinjenja koja se koriste u ciljanoj terapiji i konvencionalnoj hemoterapiji. Primeri hemoterapijskih agenasa uključuju, ali nisu ograničeni na, agense za alkilovanje, kao što su tiotepa i CYTOXAN® ciklosfosfamid; alkil sulfonate kao što je busulfan improsulfan i piposulfan; aziridine kao što su benzodopa, karbokon, meturedopa i uredopa; etilenimin i metilamelamin uključujući altretamin, trietilenmelamin, trietilenfosforamid, trietilentiofosforamid i trimetilolomelamin; acetogenine (naročito bulatacin i bulatacinon); delta-9-tetrahidrokanabinol (dronabinol, AR1NOL®); beta-lapahon; lapahol; kolhicine; betulinsku kiselinu; kamptotecin (uključujući sintetički analog topotekan (HYCAMTIN®), CPT-11 (irinotekan, CAMPTOSAR®), acetilkamptotecin, skopolektin i 9-aminokamptotecin); briostatin; kalistatin; CC-1065 (uključujući njegove sintetičke analoge adozelesin, karzelesin i bizelesin); podofilotoksin; podofilinsku kiselinu; tenipozid; kriptoficine (naročito kriptoficin 1 i kriptoficin 8); dolastatin; duokarmicin (uključujući sintetičke analoge, KW-2189 i CB1 -TM1); eleuterobin; pankratistatin; sarkodiktin; spongistatin; azotne senfove kao što su hlorambucil, hlornafazin, holofosfamid, estramustin ifosfamid, mehloretamin, mehloretamin oksid hidrohlorid, melfalan, novembichin, fenesterin, prednimustin, trofosfamid, uracil senf; nitrozuree kao što su karmustin, hlorozotocin, fotemustin, lomustin, nimustin i ranimnustin; antibiotike kao što su enediin antibiotici (npr., kaliheamicin, pogotovo kaliheamicin gamal I i kaliheamicin omega II (videti, npr., Agnew, Chem Intl. Ed. Engl. 33:183-186 (1994)); dinemicin, uključujući dinemicin A; esperamicin; kao i neokarzinostatin hromoforu i srodne hromoprotein enediin antiobiotske hromofore), aklacinomisine, aktinomicin, autramicin, azaserin, bleomicine, kaktinomicin, karabicin, kaminomicin, karzinofilin, hromomicine, daktinomicin, daunorubicin, detorubicin, 6-diazo-5-okso-L-norleucin, ADRIAMICIN®, doksorubicin (uključujući morfolino-doksorubicin, cijanomorfolino-doksorubicin, 2-pirolinodoksorubicin i dezoksidoksorubicin), epirubicin, ezorubicin idarubicin, marcelomicin, mitomicine kao što su mitomicin C, mikofenolna kiselina, nogalamicin, olivomicini, peplomicin, potfiromicin, puromicin, kelamicin, rodorubicin, streptonigrin, streptozocin, tubercidin, ubenimeks, zinostatin, zorubicin; antimetaboliti kao što je metotreksat i 5-fluorouracil (5-FU); analoge folne kiseline kao što su denopterin, metotreksat, pteropterin, trimetreksat; analoge purina kao što su fludarabin, 6-merkaptopurin, tiamiprin, tioguanin; analoge pirimidina kao što su ancitabin, azacitidin, 6-azauridin, karmofur, citarabin, dideoksiuridin, doksifluridin, enocitabin, floksuridin; androgene kao što su kalusteron, dromostanolon propionat, epitiostanol, mepitiostan, testolakton; anti-adrenalne kao što su aminoglutetimid, mitotan, trilostan; dopunjivač folne kiseline kao što je folinska kiselina; aceglaton; aldofosfamid glikozid; aminolevulinsku kiselinu; eniluracil; amsakrin; bestrabucil; bizantren; edatraksat; defofamin; demekolcin; diazikon; elfornitin; eliptinijum acetat; epotilon; etoglucid; galijum nitrat; hidroksiureu; lentinan; lonidainin; majtanzinoide kao što su majtanzin i ansamitocini; mitoguazon; mitoksantron; mopidanmol; nitraerin; pentostatin; fenamet; pirarubicin; losoksantron; 2-etilhidrazid; prokarbazin; PSK® polisaharidni kompleks (JHS Natural Products, Eugene, Oreg.); razoksan; rizoksin; sizofuran; spirogermanijum; tenuazonsku kiselinu; triazikon 2,2',2"-trihlorotrietilamin; trihotecene (pogotovo T-2 toksin, verakurin A, roridin A i anguidin); uretan; vindesin (ELDISINE®, FILDESIN®); dakarbazin;
1
manomustin; mitobronitol; mitolaktol; pipobroman; gacitozin; arabinozid ("Ara-C"); tiotepa; taksoide, npr., TAXOL® paklitaksel (Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), ABRAXANE™ nano-formulacija paklitaksela bez kremofora inženjerisana albuminom (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, IL.) i TAXOTERE® doksetaksel (Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France); hloranbucil; gemcitabin (GEMZAR®); 6-tioguanin; merkaptopurin; metotreksat; analoge platine, kao što su cisplatina i karboplatina; vinblastin (VELBAN®); platina; etopozid (VP- 16); ifosfamid; mitoksantron; vinkristin (ONCOVIN®); oksaliplatin; leukovovin; vinorelbin (NAVELBINE®); novantron; edatreksat; daunomicin; aminopterin; ibandronat; inhibitor topoizomeraze RFS 2000; difluorometilornitin (DMFO); retinoide kao što je retinoinska kiselina; kapecitabin (XELODA®); farmaceutski prihvatljive soli, kiseline ili derivate bilo čega od navedenih; kao i kombinacije dva ili više od gornjih, kao što je CHOP, skraćenica za kombinovanu terapiju ciklofosfamida, doksorubicina, vinkristina i prednizolona i FOLFOX, skraćenica za režim lečenja oksaliplatinom (ELOXATIN™) u kombinaciji sa 5-FU i leukovovinom. Dodatni hemoterapijski agensi uključuju citotoksična sredstva korisna kao konjugati antitelo-lek, kao što su majtanzinoidi (DM1 i DM4, na primer) i auristatini (MMAE i MMAF, na primer).
[0059] U definiciju hemoterapijskih sredstava su uključeni i: (i) anti-hormonski agensi koji deluju tako da regulišu ili inhibiraju dejstvo hormona na tumore, kao što su anti-estrogeni i selektivni modulatori receptora estrogena (SERM), uključujući, na primer, tamoksifen (uključujući NOLVADEX®; tamoksifen citrat), raloksifen, droloksifen, 4-hidroksitamoksifen, trioksifen, keoksifen, LY 117018, onapriston i FARESTON® (toremifin citrat); (ii) inhibitore aromataze koji inhibiraju enzim aromatazu, koji reguliše proizvodnju estrogena u adrenalnim žljezdama, kao što su, na primer, 4(5)-imidazoli, aminoglutetimid, MEGASE® (megestrol acetat), AROMASIN® (eksemestan; Pfizer), formestan, fadrozol, RI VISor® (vorozol), FEMARA® (letrozol; Novartis) i ARIMIDEX® (anastrozol; AstraZeneca); (iii) anti-androgene kao što su flutamid, nilutamid, bikalutamid, leuprolid i goserelin; kao i troksacitabin (1,3-dioksolan analog nukleozida citozina); (iv) inhibitore protein kinaze, kao što su ME inhibitori (WO 2007/044515); (v) inhibitore lipid kinaze; (vi) antisens oligonukleotide, naročito one koji inhibiraju ekspresiju gena u signalnim putevima impliciranim u aberantnoj proliferaciji ćelija, na primer, PKC-alfa, Raf i H-Ras, kao što je oblimersen (GENASENSE®, Genta Inc.); (vii) ribozime, kao što su inhibitori ekspresije VEGF (npr., ANGIOZYME®) i inhibitori ekspresije HER2; (viii) vakcine kao što su vakcine za gensku terapiju, na primer, ALLOVECTIN®, LEUVECTIN® i VAX1D®; PROLEUKIN® rIL-2; inhibitore topoizomeraze 1, kao što su LURTOTECAN®; ABARELIX® rmRH; (ix) anti-angiogene agense, kao što je bevacizumab (AVASTIN®, Genentech);i farmaceutski prihvatljive soli, kiseline i derivate bilo kog od gornjih.
[0060] Antitela obezbeđena ovde mogu da uključuju "himerna" antitela, u kojima je deo teškog i/ili lakog lanca identičan sa ili homologan odgovarajućim sekvencama u antitelima izvedenim iz određenih vrsta ili pripadaju određenoj klasi ili podklasi antitela, dok su ostaci lanaca identični sa ili homologni odgovarajućim sekvencama u antitelima izvedenim iz određenih vrsta ili pripadaju određenoj klasi ili podklasi antitela, kao i fragmenti takvih antitela, dok god ispoljavaju željenu biološku aktivnost (videti U.S. Patent br. 4,816,567 i Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)).
[0061] Kao što se ovde koristi, termin "sastav" je namenjen da obuhvata proizvod koji sadrži specifikovane sastojke (npr., antitelo obezbeđeno ovde) u, opciono, specifikovanim količinama, kao i bilo koji proizvod koji je dobijen, direktno ili indirektno, od kombinacije specifikovanih sastojaka u, opciono, specifikovanim količinama.
1
[0062] "CDR" se odnosi na jedan od tri hipervarijabilna regiona (H1, H2 ili H3) van okvirnog regiona imunoglobulina (Ig ili antitelo) u kome je VH okvir β-ravan, ili jedan od tri hipervarijabilna regiona (L1, L2 ili L3) van okvirnog regiona imunoglobulina (Ig ili antitelo) u kome je VL okvir β-ravan. U skladu s tim, CDR su sekvence varijabilnih regiona rasute unutar sekvence okvirnog regiona. CDR regioni su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti i definisao ih je, na primer, Kabat, kao regione najveće hipervarijabilnosti u okviru varijabilnih (V) domena antitela (Kabat et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977); Kabat, Adv. Prot. Chem. 32:1-75 (1978)). Sekvence CDR regiona je i strukturno definisao Chothia kao one ostatke koji nisu deo konzervisanog okvira β-ravni i zato su u stanju da se prilagode različitim konformacijama (Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). Obe terminologije su dobro poznate u struci. Sekvence CDR regiona su definisane od strane AbM, Contact i IMGT. Sekvence CDR regiona su ilustrovane na SL. 16A i 16B. Pozicije CDR-ova unutar varijabilnog domena kanonskog antitela su određivane poređenjem brojnih struktura (Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol.273:927-948 (1997); Morea et al., Methods 20:267-279 (2000)). Zbog toga što broj ostataka unutar hipervarijabilnog regiona varira u različitim antitelima, dodatni ostaci u odnosu na kanonske pozicije se konvencionalno označavaju sa a, b, c i tako dalje, odmah pored broja ostatka u šemi brojanja kanonskog varijabilnog domena (Al-Lazikani et al., supra (1997)). Takva nomenklatura je takođe dobro poznata stručnjacima.
[0063] Termin "hipervarijabilni region", "HVR" ili "HV", kako što se ovde koristi, se odnosi na regione varijabilnog domena antitela koji su are hipervarijabilni u sekvenci i/ili formiraju strukturno definisane petlje. Uopšteno, antitela sadrže šest hipervarijabilnih regiona; tri u VH (H 1, H2, H3) i tri u VL (L1, L2, L3). Broj skica hipervarijabilnih regiona je u upotrebi i obuhvaćen je ovde. Kabatovi CDR se zasnivaju na varijabilnosti sekvenci i najčešče se koriste (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). Umesto toga, Chothia upućuje na lokaciju strukturnih petlji (Chothia and Lesk J Mol. Biol.196:901-917 (1987)). Kraj Chothiaine CDR-HI petlje, kad se primenjuje Kabatova konvencija numeracije, varira između H32 i H34 u zavisnosti od dužine petlje (to je zato što Kabatova šema numeracije stavlja insercije na H35A i H35B; ako ni 35A ni 35B nije prisutan, petlja se završava na 32; ako je samo 35A prisutan, petlja se završava na 33; ako su i 35A i 35B prisutni, petlja se završava na 34). AbM hipervarijabilni regioni predstavljaju kompromis između Kabatovih CDR i Chothia-nih strukturnih petlji i koriste se u softveru za modelovanje antitela Oxford Molecular AbM. "Kontaktni" hipervarijabilni regioni su zasnovani na analizi dostupnih složenih kristalnih struktura. Ostaci iz svakog od ovih hipervarijabilnih regiona su navedeni niže.
[0064] Nedavno, univerzalan sistem numeracije je razvijen i široko prihvaćen, ImMunoGeneTics (IMGT) Information System® (Lafranc et al., Dev. Comp. Immunol.
27(1):55-77 (2003)). IMGT je integrisan informacioni sistem specijalizovan za imunoglobuline (IG), T ćelijske receptore (TR) i glavne komplekse tkivne podudarnosti (MHC) kod ljudi i drugih kičmenjaka. Ovde, CDR se pominju u terminima i aminokiselinske sekvence i lokacije u okviru lakog ili teškog lanca. Pošto je "lokacija" CDR-ova unutar strukture varijabilnog domena imunoglobulina konzervisana među vrstama i prisutna u strukturama koje se nazivaju petlje, korišćenjem sistema numeracije koji poravnava varijabilni domen sekvence prema strukturnim odlikama, CDR i okvirni ostaci se lako identifikuju. Ova informacija se može koristiti u presađivanju i zameni CDR ostataka iz imunoglobulina jedne vrste u akceptorski okvir iz, tipično, humanog antitela. Slaganje između Kabatove numeracije i IMGT jedinstvenog sistema numeracije je takođe dobro poznato
2
stručnjaku u ovoj oblasti (npr. Lefranc et al., supra) i takođe je ilustrovano na SL.16A i 16B. Primer sistema, prikazan ovde, kombinuje Kabata i Chothia-u.
Tabela 1: Definici e CDR
[0065] Hipervarijabilni regioni mogu da sadrže "produžene hipervarijabilne regione" na sledeći način: 24-36 ili 24-34 (Ll), 46-56 ili 50-56 (L2) i 89-97 ili 89-96 (L3) u VL i 26-35 ili 26-35A (H1), 50-65 ili 49-65 (H2) i 93-102, 94-1 02 ili 95-102 (H3) in VH. Ostaci varijabilnog domena su 25 kad su numerisani prema Kabat et al., supra, za svaku od ovih definicija. Kao što se ovde koristi, termini "HVR" i "CDR" se koriste u istom značenju.
[0066] Termin "konstantni region" ili "konstantni domen" se odnosi na karboksi terminalni deo lakog i teškog lanca koji nije direktno uključen u vezivanje antitela za antigen, nego ispoljava razne efektorske funkcije, kao što je interakcija sa Fc receptorom. Termini se odnosi na deo imunoglobulinskog molekula koji ima više konzervisanih aminokiselinskih sekvenci nego drugi deo imunoglobulina, varijabilni domen, koji obuhvata mesto vezivanja antigena. Konstantan domen sadrži CH1, CH2 i CH3 domene teškog lanca i CL domen lakog lanca.
[0067] Termin "cikloalkil”, kao što se ovde koristi, označava monocikličan ili policikličan radical koji sadrži samo ugljenik i vodonik i uključuje one koji su zasićeni, delimično nezasićeni ili potpuno nezasićeni. Cikloalkil grupe uključuju grupe koje imaju 3 do 10 atoma u prstenu.
[0068] U kontekstu polipeptida, termin "derivat", kao što se ovde koristi, se odnosi na polipeptid koji sadrži aminokiselinsku sekvencu polipeptida C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili antitelo koje se vezuje za polipeptid C10orf54, koje je bilo izmenjeno uvođenjem supstitucija, delecija ili adicija aminokiselina. Termin "derivat", kao što se ovde koristi, odnosi se i na polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili antitelo koje se vezuje za polipeptid C10orf54, koje je hemijski modifikovano, npr., kovalentnim kačenjem bilo kog tipa molekula za polipeptid. Na primer, ali ne kao ograničenje, polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili antitelo na C10orf54 može biti hemijski modifikovano, npr., glikozilacijom, acetilacijom, pegilacijom, fosforilacijom, amidacijom, derivacijom pomoću poznate zaštitne/blokirajuće grupe, proteolitičkim cepanjem, vezivanjem za ćelijski ligand ili neki drugi protein itd. Derivati su modifikovani na način koji je različit od prirodnog ili početnog peptida ili polipeptida, bilo po tipu, bilo po lokaciji spojenih molekula. Derivati dalje uključuju deleciju jedne ili više hemijskih grupa koje su prirodno prisutne na peptidu ili polipeptidu. Derivat polipeptida C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili C10orf54 antitelo može biti hemijski modifikovano hemijskim modifikacijama korišćenjem tehnika poznatih stručnjaku u ovoj oblasti, uključujući, ali ne kao ograničenje, specifično hemijsko cepanje, acetilaciju, formulaciju, metaboličku sintezu tunikamicina itd. Dalje, derivat polipeptida C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili C10orf54 antitelo može da sadrži jednu ili više ne-kasičnih aminokiselina. Derivat polipeptida ima sličnu ili identičnu fukcija kao polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili C10orf54 antitelo opisano ovde.
[0069] Termin "citotoksično sredstvo" ili "citotoksin" ili "CTX", kao što se ovde koristi, se odnosi na supstancu koja inhibira ili sprečava fukciju ćelija i/ili ima citotoksičan efekat na ćelije (npr. izaziva uništenje ćelija). Termin je namenjen da uključuje sredstva za alkilovanje, antracikline, razarače citoskeleta (taksani), epotilon, inhibitor histon deacetilaze (HDAC), inhibitor topoizomeraze I, inhibitor topoizomeraze II, inhibitor kinaze, monoklonska antitela, analog nukleotida, peptidni antibiotik, agens na bazi platine, retinoide, vinka alkaloid ili njegov derivat i radioizotop. Termin je namenjen da uključuje i aktinomicin, cela trans retinoinsku kiselinu, azacitidin, azatioprin, bleomicin, bortezomib, karboplatinu, kapecitabin, cisplatinu, hlorambucil, ciklofosfamid, citarabin, daunorubicin, docetaksel, doksifluridin, doksorubicin, epirubicin, epotilon, etopozid, fluorouracil, gemcitabin, hidroksiureu, idarubicin, imatinib, irinotekan, mehloretamin, merkaptopurin, metotreksat, mitoksantron, oksaliplatin, paklitaksel, pemetreksed, tenipozid, tioguanin, topotekan, valrubicin, vinblastin, vinkristin, vindesin i vinorelbin. Termin je namenjen da uključuje i stabilizator tubulina, destabilizator tubulina, alkilator DNK, vezivno jedinjenje za mali žljeb DNK, interkalator DNK, inhibitor topoizomeraze I, inhibitor topoizomeraze II, inhibitor giraze, inhibitor sinteze proteina, inhibitor proteozoma i anti-metabolit. Termin je namenjen da uključuje i aktinomicin D, amonafid, auristatin, benzofenon, benzotiazol, kaliheamicin, kamptotecin, CC-1065 (NSC 298223), cemadotin, kolhicin, kombretastatin a4, dolastatin, doksorubicin, elinafid, emtanzin (dm1), etopozid, kf-12347 (leinamicin), majtanzinoid, metotreksat, mitoksantron, nokodazol inhibitor proteozoma 1 (psi 1), roridin a, t-2 toksin (analog trihotecena), taksol, tubulizin, Velcade® i vinkristin. Poželjni citotoksini uključuju auristatin, kaliheamicin, majtanzinoid i tubulizin. Ostali poželjni citotoksini uključuju monometilauristatin E (MMAE), monometilauristatin F (MMAF), kaliheamicin γ, mertanzin, tubulizin T3 i tubulizin T4. Još neki drugi poželjni citotoksini uključuju kaliheamicin, doksorubicin, kamptotecin, duokarmicin, DM1, DM4, majtanzinoid i tubulizin. Još neki drugi poželjni citotoksini uključuju MMAE, MMAF i pirolobenzodiazepin (PBD).
[0070] Termin "MMAF" generalno se odnosi na monometilauristatin F, čiji je hemijski naziv (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamido)-3-metoksi-5-metilheptanoil)pirolidin-2-il)-3-metoksi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanonska kiselina. Stručnjak uobičajenog nivoa u ovoj oblasti će podrazumevati da je MMAF opisan u struci i kao MeVal-Val-Dil-Dap-Phe, gde je "Dil" dolaizoleuin, a "Dap" je dolaproin.
[0071] Termin "MMAE" se uopšteno odnosi na monometilauristatin E, čiji je hemijski naziv (S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-hidroksi-1-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-il)-3-metoksi-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-N,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamid.
[0072] Termin "pirolobenzodiazepin" ili "pirolobenzodiazepini" se uopšteno odnosi na familiju pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepinskih (PBD) dimera koji su sintetički agensi razvijeni iz antramicina, koji na određenim sekvencama unakrsno povezuju lance DNK. Primeri pirolobenzodiazepina uključuju, ali nisu ograničeni na, abimicin, hikamicin, DC-81, mazetramicin, neotramicine A i B, porotramicin, protrakarcin, sibanomicin (DC-102), sibiromicin i tomamicin. Primeri pirolobenzodiazepina uključuju one opisane u US patentima br. 7,049,311, 7,741,319, 8,697,688 (videti, npr., (26) u Primeru 5) i 8,765,740; međunarodne publikacije br. WO 2011/130598 A1, WO 2012/112708 A1, WO 2013/055987 A1, WO 2013/165940 A1 i Jeffrey et al., Bioconjugate Chem. 2013, 24, 1256-1263, and Sutherland et al., Blood 2013, 122(8), 1455-1463.
[0073] Strukture T3 i T4 su obezbeđene niže:
[0074] Struktura MMAF je obezbeđena niže:
čije je hemijsko ime "(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamido)-3-metoksi-5-metilheptanoil)pirolidin-2-il)-3-metoksi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanonska kiselina". Stručnjak uobičajenog nivoa u ovoj oblasti će podrazumevati da je MMAF opisan u struci i kao MeVal-Val-Dil-Dap-Phe, gde je "Dil" dolaizoleuin, a "Dap" je dolaproin.
[0075] Struktura MMAE je obezbeđena niže:
2
čije je hemijsko ime "(S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-hidroksi-1-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoksi-2-metil-3-oksopropil)pirolidin-1-il)-3-metoksi-5-metil-1-oksoheptan-4-il)-N,3-dimetil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamid".
Stručnjak uobičajenog nivoa u ovoj oblasti će podrazumevati da je MMAE opisan u struci i kao MeVal-Val-Dil-Dap-norefedrin, gde je "Dil" dolaizoleuin, a "Dap" je dolaproin.
[0076] Strukture tri PBD-a su obezbeđene niže:
čije je hemijsko ime "(S)-11-hidroksi-7-metoksi-8-((5-(((S)-7-metoksi-2-metil-5-okso-5,11adihidro-1 H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oksi)pentil)oksi)-2-metil-1H-benzo[e]pirolo[1,2- a][1,4]diazepin-5(11aH)-on" i
čije je hemijsko ime "(S)-2-(4-aminofenil)-8-(3-(((S)-2-ciklopropil-7-metoksi-5-okso-5,11adihidro-1 H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oksi)propoksi)-7-metoksi-1 H-benzo[e]pirolo[1,2- a][1,4]diazepin-5(11a H)-on" (videti, npr., jedinjenje (26) u Primeru 5 U.S. Patent br.8,697,688) i
čije je hemijsko ime (S)-2-(4-aminofenil)-7-metoksi-8-(3-(((S)-7-metoksi-2-(4-metoksifenil)-5-okso-5,11a-dihidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oksi)propoksi)-1 H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-5(11aH)-on.
[0077] Ostala citotoksična sredstva, uključujući razne antitumorske ili antikancerske agense, su poznata u struci.
[0078] Termin "detektabilna proba”, kao što se ovde koristi, se odnosi na sastav koji obezbeđuje detektabilan signal. Termin uključuje, bez ograničenja, bilo koju fluoroforu, hromoforu, radioobeleživač, enzim, antitelo ili fragment antitela i slično, koji svojom aktivnošću obezbeđuju detektabilan signal.
[0079] Termin "dijagnostički agens" se odnosi na supstancu datu subjektu koja pomaže u dijagnozi bolesti. Takve supstance se mogu koristiti da otkriju istaknu i/ili definišu lokalizaciju procesa izazivanja bolesti. U određenim aspektima, dijagnostički agens uključuje supstancu koja je konjugovana sa antitelom obezbeđenim ovde, koja, kad se administrira subjektu ili se dovede u dodir sa uzorkom iz subjekta, pomaže u dijagnozi formiranja kancera, tumora ili bilo koje druge bolesti gde posreduje C10orf54.
[0080] Termin "detektabilan agens" se odnosi na supstancu koja se može koristiti da potvrdi postojanje ili prisustvo željenog molekula, kao što je antitelo obezbeđeno ovde, u uzorku ili subjektu. Detektabilan agens može biti supstanca koja je u stanju da se vizualizira ili supstanca koja se na drugi način može odrediti i/ili meriti (npr., kvantitacijom).
[0081] "Efektivna količina" je količina dovoljna da se postignu korisni ili željeni rezultati. Efektivna količina se može dati u jednoj ili više administracija, aplikacija ili doza. Takva dostava zavisi od broja promenljivih, uključujući vremenski period u toku kog treba primeniti jediničnu dozu, biodostupnost agensa, način administracije itd. U nekim aspektima, efektivna količina se odnosi i na količinu antitela obezbeđenog ovde dabi se postigao specifikovan rezultat (npr. inhibicija biološke aktivnosti C10orf54 u ćeliji, kao što je modulisanje aktivacije i/ili proliferacije T ćelija). U nekim aspektima, ovaj termin se odnosi na količinu terapije (npr., antitelo ili farmaceutski sastav obezbeđen ovde) koja je dovoljna da smanji i/ili ublaži jačinu i/ili trajanje date bolesti i/ili simptoma vezanih za nju. Ovaj termin obuhvata i količinu neophodnu za smanjenje ili popravljanje napretka ili progrediranja date bolesti, smanjenje ili popravljanje vraćanja, razvoja ili početka date bolesti i/ili da bi se poboljšali ili pojačali profilaktički ili terapijski efekti druge terapije (npr., terapija nego antitelo na C10orf54 obezbeđeno ovde). U nekim aspektima, efektivna količina antitela je od oko 0,1 mg/kg (mg antitela per kg težine subjekta) do oko 100 mg/kg. U određenim aspektima, efektivna količina antitela obezbeđenog ovde je oko 0,1 mg/kg, oko 0,5 mg/kg, oko 1 mg/kg, 3 mg/kg, 5 mg/kg, oko 10 mg/kg, oko 15 mg/kg, oko 20 mg/kg, oko 25 mg/kg, oko 30 mg/kg, oko 35 mg/kg, oko 40 mg/kg, oko 45 mg/kg, oko 50 mg/kg, oko 60 mg/kg, oko 70 mg/kg, oko 80 mg/kg oko 90 mg/kg ili oko 100 mg/kg (ili u tom opsegu).
[0082] Termin "elektrofilna odlazeća grupa”, kao što se ovde koristi, se odnosi na odlazeću grupu koja prima elektronski par da bi napravila kovalentnu vezu. Uopšteno, elektrofili su prijemčivi za napad komplementarnih nukleofila, uključujući redukovane tiole iz disulfidne veze antitela.
[0083] Termin "elektrofilna odlazeća grupa koja selektivno reaguje sa tiolima”, kao što se ovde koristi, se odnosi na elektrofilnu odlazeću grupu koja selektivno reaguje sa tiolima, a ne sa drugimdrugi nukleofilima. U određenim aspektima, elektrofilna odlazeća grupa koja selektivno reaguje sa tiolima reaguje selektivno sa redukovanim tiolima iz disulfidne veze antitela.
[0084] Termin "kodirati" ili njegovi gramatički ekvivalenti, kao što se koristi u vezi sa molekulom nukleinske kiseline, se odnosi na molekul nukleinske kiseline u njegovom nativnom stanju ili kad je manipulisan metodima dobro poznatim stručnjacima u ovoj oblasti
2
koji se može transkribovati da proizvede mRNK, koja se onda translira u polipeptid i/ili njegov fragment. Antisens lanac je komplement takvog molekula nukleinske kiseline i kodirajuća sekvenca se može zaključiti /izvesti iz njega.
[0085] Termin "epitop", kao što se ovde koristi, se odnosi na lokalizovan region na površini antigena, kao što je polipeptid C10orf54 ili fragment polipeptida C10orf54, koji je sposoban da bude vezan za jedan ili više regiona za vezivanje antigena u antitelu i koji ima antigensko ili imunogeno dejstvo u životinji, kao što je sisar (npr., čovek), koji je sposoban da podigne imuni odgovor. Epitop koji ima imunogeno dejstvo je deo polipeptida koji podiže odgovor antitela u životinji. Epitop koji ima antigensko dejstvo je deo polipeptida za koji se vezuje antitelo, što se određuje bilo kojim metodom dobro poznatim u struci, na primer imunoesejem. Antigenski epitopi ne moraju nužno da budu imunogeni. Epitopi se obično sastoje od hemijski aktivnih površinskih grupa molekula kao što su aminokiseline ili bočni lanci šećera i imaju specifične trodimenzionalne strukturne karakteristike, kao i specifične karakteristike naelektrisanja. Region polipeptida koji doprinosi epitopu mogu činiti susedne aminokiseline polipeptida ili epitop može da bude sastavljen od dva ili više nesusedna regiona polipeptida. Epitop može, a ne mora biti trodimenzionalna površinska odlika antigena. U određenim aspektima, epitop C10orf54 je trodimenzionalna površinska odlika polipeptida C10orf54. U nekim drugim aspektima, epitop C10orf54 je linearna odlika polipeptida C10orf54. Generalno, antigen ima nekoliko ili mnogo različitih epitopa i reaguje sa mnogo različitih antitela.
[0086] Termin "ekscipijent", kao što se ovde koristi, se odnosi na inertnu supstancu koja se obično koristi kao razblaživač, nosač, prezervativ, vezivno sredstvo ili stabilizator i uključuje, ali nije ograničen na, proteine (npr., serum albumin itd.), aminokiseline (npr., aspartinska kiselina, glutaminska kiselina, lizin, arginin, glicin, histidin itd.), masne kiseline i fosfolipidi (npr., alkil sulfonati, kaprilat itd.), surfaktanti (npr., SDS, polisorbat, nejonski surfaktant itd.), saharidi (npr., saharoza, maltoza, trehaloza itd.) i polioli (npr., manitol, sorbitol itd.). Videti i Remingtonov Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA.
[0087] U kontekstu peptida ili polipeptid, termin "fragment", kao što se ovde koristi, se odnosi na peptid ili polipeptid koji obuhvata manje od cele dužine aminokiselinske sekvence. Takav fragment može da nastane, na primer, od skraćivanja sa amino kraja, skraćivanja sa karboksi kraja i/ili interne delecije ostat(a)ka iz aminokiselinske sekvence. Fragmenti mogu, na primer, da budu rezultat alternativnog iskrajanja (splajsovanja) RNK ili in vivo aktivnosti proteaze. U određenim aspektima, fragment C10orf54s uključuje polipeptide koji sadrže aminokiselinsku sekvencu od bar 5 susednih aminokiselinskih ostataka, bar 10 susedni aminokiselina ostaci, bar 15 susedni aminokiselina ostaci, bar 20 susednih aminokiselinskih ostataka, bar 25 susednih aminokiselinskih ostataka, bar 40 susednih aminokiselinskih ostataka, bar 50 susednih aminokiselinskih ostataka, bar 60 susedni amino ostaci, bar 70 susednih aminokiselinskih ostataka, bar 80 susednih aminokiselinskih ostataka, bar 90 susednih aminokiselinskih ostataka, bar susedni 100 aminokiselina ostaci, bar 125 susednih aminokiselinskih ostataka, bar 150 susednih aminokiselinskih ostataka, bar 175 susednih aminokiselinskih ostataka, bar 200 susednih aminokiselinskih ostataka ili bar 250 susednih aminokiselinskih ostataka aminokiselinske sekvence polipeptida C10orf54 ili antitela koje se vezuje za polipeptid C10orf54. U jednom specifičnom aspektu, fragment polipeptida C10orf54 ili antitelo koje se vezuje za C10orf54 antigen zadržava bar 1, bar 2 ili bar 3 fukcije polipeptida ili antitela.
2
[0088] Termin "okvirni" ili "FR" ostaci su oni ostaci varijabilnog domena bočno od CDR-ova. FR ostaci su prisutni u, npr., himernim, humanizovanim, humanim, domenskim antitelima, dijatelima, linearnim antitelima i bispecifičnim antitelima. FR ostaci su oni ostaci varijabilnog domena koji nisu ostaci hipervarijabilnog regiona definisanog ovde.
[0089] "Funkcionalni fragment" antitela će ispoljiti bar jednu ako ne neke ili sve biološke fukcije koje odlikuju intaktno antitelo, gde fukcija obuhvata bar specifično vezivanje za ciljni antigen.
[0090] Termin "fuzioni protein", kao što se ovde koristi, se odnosi na polipeptid koji sadrži aminokiselinsku sekvencu antitela i aminokiselinsku sekvencu heterologog polipeptida ili proteina (npr., polipeptid ili protein koji normalno nisu deo antitela (npr., antitelo koje nije antitelo na C10orf54 antigen)). Termin "fuzioni", kad se koristi u vezi sa C10orf54 ili sa antitelom na C10orf54, se odnosi na spajanje peptida ili polipeptida ili fragmenta, njegove varijante i/ili derivata, sa heterologim peptidom ili polipeptidom. U određenim aspektima, fuzioni protein zadržava biološku aktivnost C10orf54 ili antitela na C10orf54. U određenim aspektima, fuzioni protein sadrži VH domen, VL domen, CDR VH (jedan, dva ili tri CDR VH) i/ili CDR VL (jedan, dva ili tri CDR VL) antitela na C10orf54, gde se fuzioni protein vezuje za epitop C10orf54.
[0091] Termin "težak lanac", kad se koristi u vezi sa antitelom, se odnosi na polipeptidni lanac od oko 50-70 kDa, gde amino-terminalni deo uključuje varijabilni region od oko 120 do 130 ili više aminokiselina, a karboksi-terminalni deo uključuje konstantni region. Konstantni region može biti jedan od pet različitih tipova, koji se označavaju sa alfa (α), delta (δ), epsilon (ε), gama (γ) i mi (µ), na osnovu aminokiselinske sekvence konstantnog regiona teškog lanca. Različiti teški lanci se razlikuju u veličini: α, δ i γ sadrže približno 450 aminokiselina, dok µ i ε sadrže približno 550 aminokiselina. Kad su kombinovani sa lakim lancem, ovi različiti tipovi teških lanaca prave pet dobro poznatih klasa antitela, IgA, IgD, IgE, IgG i IgM, respektivno, uključujući četiri podklase IgG, naime, IgG1, IgG2, IgG3 i IgG4. Težak lanac može biti humani težak lanac.
[0092] Termin "domaćin", kao što se ovde koristi, se odnosi na životinju, kao što je sisar (npr., čovek).
[0093] Termin "ćelija domaćin", kao što se ovde koristi, se odnosi na određenu ćeliju subjekta transfektovanu molekulom nukleinske kiseline i na potomstvo ili potencijalno potomstvo takve ćelije. Potomstvo takve ćelije ne mora biti identično roditeljskoj ćeliji transfektovanoj molekulom nukleinske kiseline zbog mutacija ili uticaja okoline koji se mogu desiti u sledećim generacijama ili zbog integracije molekula nukleinske kiseline u genom ćelije domaćina.
[0094] "Humanizovani" oblici ne-humanih (npr., mišjih) antitela su himerna antitela koja uključuju humane imunoglobuline (antitelo recipijent) u kojima su nativni ostaci CDR zamenjeni ostacima iz odgovarajućih CDR ne-humanih vrsta (antitelo donor) kao što je miš, pacov, zec ili ne-humani primat, koja imaju željenu specifičnost, afinitet i kapacitet. U nekim primerima, jedan ili više ostataka FR regiona humanog imunoglobulina je zamenjeno odgovarajućim ne-humanim ostacima. Štaviše, humanizovana antitela mogu da sadrže ostatke koji nisu nađeni u recipijentnom antitelu ili u donorskom antitelu. Ove modifikacije se rade da bi se još rafinirale performanse antitela. Težak ili lak lanac humanizovanog antitela može da sadrži suštinski sve od bar jednog ili više varijabilnih domena, gde svi ili suštinski svi CDR-
2
ovi odgovaraju onima iz ne-humanog imunoglobulina i svi ili suštinski svi FR-ovi su oni iz sekvence humanog imunoglobulina. U određenim aspektima, humanizovano antitelo će sadržati bar deo imunoglobulinskog konstantnog regiona (Fc), tipično onaj iz humanog imunoglobulina. Za više detalja videti, Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332:323-329 (1988); and Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2:593-596 (1992); Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285-4289 (1992); i U.S. patente br. 6,800,738 (izdat 5. okt., 2004), 6,719,971 (izdat 27. sept., 2005), 6,639,055 (izdat 28. okt., 2003), 6,407,213 (izdat 18. juna, 2002) i 6,054,297 (izdat 25. aprila, 2000).
[0095] Antitelo koje "inhibira rast ćelija koje eksprimiraju C10orf54 i/ili ih ubija" ili "inhibitorno za rast" ili "citotoksično" antitelo je ono koje dovodi do merljive inhibicije i/ili ubijanja ćelija koje eksprimiraju ili prekomerno eksprimiraju odgovarajući polipeptid C10orf54. U nekim aspektima, takva antitela mogu da inhibiraju rast i/ili ubiju ćelije koje eksprimiraju C10orf54. Takve ćelije uključuju regulatorne T ćelije (npr., CD4<+>Foxp3<+>regulatorne T ćelije), supresorske ćelije izvedene iz mijeloida (npr., CD11b<+>ili CD11b<high>supresorske ćelije izvedene iz mijeloida) i/ili supresivne dendritske ćelije (npr., CD11b<+>ili CD11 b<high>dendritske ćelije). U jednom specifičnom aspektu, antitela inhibiraju rast i/ili ubijaju kancerske ćelije, predkancerske ćelije ili ćelije koje sadrže tumor. Određena inhibitorna antitela na C10orf54 inhibiraju rast i/ili ubijaju ćelije koje eksprimiraju C10orf54 za više od 20%, kao što je od oko 20% do oko 50% ili za više od 50% (npr., od oko 50% do oko 100%) u poređenju sa odgovarajućom kontrolom, gde kontrolu tipično čine ćelije koje nisu tretirane testiranim antitelom. U jednom aspektu inhibicija rasta i/ili ubijanje može da se meri pri koncentraciji antitela od oko 0,1 do 30 g/ml ili oko 0,5 nM do 200 nM u ćelijskoj kulturi, gde se inhibicija rasta određuje 1-10 dana posle izlaganja tumorskih ćelija antitelu. Inhibicija rasta i/ili ubijanje ćelija in vivo se može određivati na razne načine, kao što je opisano niže. U kontekstu inhibiranja kancerskih ćelija ili ćelija koji sadrže tumor, antitelo inhibira rast ili ubija in vivo ako administracija antitela na C10orf54 pri oko 1 g/kg do oko 100 mg/kg telesne težine dovodi do smanjenja veličine tumora ili proliferacije tumorskih ćelija u okviru oko 5 dana do 3 meseca od prve administracije antitela, kao što je u okviru oko 5 do 30 dana.
[0096] Kao što se ovde koristi, termin "u kombinaciji", u kontekstu administracije druge terapije, se odnosi na primenu više od jedne terapije. Upotreba termina "u kombinaciji" ne ograničava redosled po kom se terapije administriraju subjektu sa infekcijom. Prva terapija može biti administrirana pre (npr., 1 minut, 45 minuta, 30 minuta, 45 minuta, 1 sat, 2 sata, 4 sata, 6 sati, 12 sati, 24 sati, 48 sati, 72 sati, 96 sati, 1 nedelja, 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelje, 5 nedelja, 6 nedelja, 8 nedelja ili 12 nedelja), paralelno ili posle (npr., 1 minut, 45 minuta, 30 minuta, 45 minuta, 1 sat, 2 sata, 4 sata, 6 sati, 12 sati, 24 sati, 48 sati, 72 sati, 96 sati, 1 nedelja, 2 nedelje, 3 nedelje, 4 nedelje, 5 nedelja, 6 nedelja, 8 nedelja ili 12 nedelja) administracije druge terapije subjektu koji je imao ima ili je podložan bolesti u kojoj posreduje C10orf54. Bilo koja dodatna terapija može biti administrirana u bilo kom rasporedu sa drugim dodatnim terapijama. U određenim aspektima, antitela mogu biti administrirana u kombinaciji sa jednom ili više terapija (npr., terapije koje nisu antitela koje se upravo administriraju da spreče, leče, upravljaju i/ili poboljšaju bolest u kojoj posreduje C10orf54. Neograničavajući primeri terapije koja može biti administrirana u kombinaciji sa antitelom uključuju analgetska sredstva, anestezijska sredstva, antibiotike ili imunomodulatorska sredstva ili bilo koje drugo sredstvo na brojano u U.S. Pharmacopoeia i/ili Physician's Desk Reference.
2
[0097] Antitelo koje "indukuje ćelijsku smrt" je ono koje izaziva vijabilnu ćeliju da postane nevijabilna. Ćelija tipa ćelija koje specifično eksprimiraju ili prekomerno eksprimiraju polipeptid C10orf54. Ćelija može biti kancerska ili normalna ćelija određenog tipa ćelija, kao što je regulatorna T ćelija. Ćelijska smrt in vitro može da se odredi u odsustvu komplementa i imunih efektorskih ćelija da bi se razlikovala ćelijska smrt indukovana citotoksičnošću koja je posredovana ćelijom i nezavisna od antitela (ADCC) od citotoksičnosti zavisne od komplementa (CDC). Prema tome, esej za ćelijsku smrt može da se izvede korišćenjem seruma deaktiviranog toplotom (npr., u odsustvu komplementa) i u odsustvu imunih efektorskih ćelija. Da bi se odredilo da li je antitelo sposobno da indukuje ćelijsku smrt, procenjuje se gubitak celovitosti membrane preuzimanjem (uptake) propidijum jodida (PI), tripan plavog (videti Moore et al. Cytotechnology 17:1-11 (1995)). U nekim aspektima, ćelija antitela koja indukuju ćelijsku smrt su ona koja indukuju preuzimanje PI u eseju sa preuzimanjem PI u ćelijama koje eksprimiraju C10orf54.
[0098] "Izolovano" antitelo je suštinski bez ćelijskog materijala ili ostalih kontaminirajućih proteina iz ćelijskog ili tkivnog izvora i/ili ostalih kontaminirajućih komponenata iz kojih je antitelo izvedeno ili je suštinski bez hemijskih prekursora ili ostalih hemikalija kad je hemijski sintetisano. Jazik "suštinski bez ćelijskog materijala" uključuje preparate antitela u kojima je antitelo odvojeno od ćelijskih komponenata ćelija iz kojih je izolovano ili rekombinantno proizvedeno. Prema tome, antitelo koje je suštinski bez ćelijskog materijala uključuje preparate antitela koji imaju manje od oko 30%, 20%, 10% ili 5% (suve težine) heterologog proteina (koji se ovde naziva i "kontaminirajući protein"). U određenim aspektima, kad je antitelo rekombinantno proizvedeno, ono je suštinski bez medijuma za kulture, npr., medijum za kulture predstavlja manje od oko 20%, 10% ili 5% zapremine proteinskog preparata. U određenim aspektima, kad je antitelo proizvedeno hemijskom sintezom, ono je suštinski bez hemijskih prekursora ili ostalih hemikalija, npr., ono je odvojeno od hemijskih prekursora ili ostalih hemikalija koje su uključene u sintezu proteina. U skladu s tim, takvi preparati antitela imaju manje od oko 30%, 20%, 10%, 5% (suve težine) hemijskih prekursora ili drugih jedinjenja koja nisu antitelo od interesa. Kontaminirajuće komponente c i, ali nisu ograničene na, materijale koji bi interferirali sa terapijskom upotrebom antitela i drugih enzime, hormone i druge proteinske ili neproteinske rastvorke. U određenim aspektima, antitelo će biti prečišćeno (1) do više od 95 težinskih % antitela, što se Lowry-jevim metodom (Lowry et al. J. Bio. Chem. 193: 265-275, 1951), kao što je 99 težinskih %, (2) do stepena dovoljnog da se dobije bar 15 ostataka sa N-terminusa ili interne aminokiselinske sekvence upotrebom sekvenatora sa čašom koja se vrti ili (3) do homogenosti pomoću SDS-PAGE u redukujućim ili neredukujućim uslovima, uz bojenje Coomassie plavim ili, poželjno, srebrom. Izolovano antitelo uključuje antitelo in situ unutar rekombinantne ćelije, jer bar jedna komponenta prirodne okoline antitela neće biti prisutna. Obično, međutim izolovano antitelo će biti dobijeno bar jednim korakom prečišćavanja. U jednom specifičnom aspektu, antitela obezbeđena ovde su izolovana ili prečišćena.
[0099] "Izolovan" molekul nukleinske kiseline je onaj koji je odvojen od drugih molekula nukleinskih kiselina koji su prisutni u prirodnom izvoru molekula nukleinske kiseline. Štaviše, "izolovan" molekul nukleinske kiseline, kao što je molekul cDNK, može biti suštinski bez drugog ćelijskog materijala ili medijuma za kulture kad se pravi rekombinantnim tehnikama ili suštinski bez hemijskih prekursora ili drugih hemikalija kad se sintetiše hemijski. U jednom specifičnom aspektu, molekuli nukleinske kiseline koji kodiraju antitelo obezbeđeno ovde su izolovani ili prečišćeni.
2
[0100] Termin "odlazeća grupa”, kao što se ovde koristi, se odnosi na bilo koju grupu koja odlazi tokom hemijske reakcije, uključujući grupu kao što je opisana ovde i uključuje, ali nije ograničena na, halogen, sulfonate (brosilat, mesilat, tosilat, triflat itd...), p-nitrobenzoat i fosfonatnu grupu, na primer.
[0101] Termin "lak lanac", kad se koristi u odnosu na antitelo, se odnosi na polipeptidni lanac od oko 25 kDa, gde amino-terminalni deo uključuje varijabilni region od oko 100 do oko 110 ili više aminokiselina i karboksi-terminalni deo uključuje konstantni region. Približna dužina lakog lanca je 211 do 217 aminokiselina. Postoje dva različita tipa, koji se nazivaju kapa (κ) i lambda (λ), na osnovu aminokiselinske sekvence konstantnih domena. Aminokiselinske sekvence lakog lanca su dobro poznate u struci. Lak lanac može biti humani lak lanac.
[0102] "Linker" (obeležen sa L ili L<1>, L<2>i L<3>) je molekul sa dva reaktivna kraja, jedan za konjugaciju sa antitelom ili sa drugim linkerom, a drugi za konjugaciju sa citotoksinom. Reaktivni kraj linkera za konjugaciju sa antitelom je tipično mesto koje je sposobno za konjugaciju sa antitelom preko tiolne grupe cisteina ili amino grupe lizina na antitelu, tako da je tipično tiol-reaktivna grupa, kao što je dvoguba veza (kao u maleimidu) ili odlazeća grupa, kao što je hloro, bromo ili jodo ili R-sulfanil grupa ili sulfonil grupa ili amin-reaktivna grupa, kao što je karboksilna grupa ili kako je ovde definisana; dok je reaktivni kraj linkera za konjugaciju sa antitelom tipično mesto koje je sposobno za konjugaciju sa citotoksinom kroz formiranje amidne veze sa baznom amino ili karboksil grupom na citotoksinu, tako da je tipično karboksilna ili bazna amino grupa. U jednom aspektu, kad se termin "linker" koristi u opisu linkera u konjugovanoj formi, jedan ili oba reaktivna kraja će biti odsutna (kao što je odlazeća grupa tiol-reaktivne grupa) ili nepotpuna (kao kad je samo karbonil od karboksilne kiseline) zbog formiranja veza između linkera i/ili citotoksina. Linkeri opisani ovde mogu biti podložni cepanju u normalnim fiziološkim i/ili unutarćelijskim uslovima ili mogu da ostanu stabilni (npr., nerazgrađeni ili nerazgradivi) u tim istim uslovima. Primeri linkera podložnih cepanju su linkeri koji sadrže dipeptidne grupe, gde peptidna veza koja spaja dva peptida ima potencijal da bude selektivno pokidana lizozomskim proteazama (npr., katepsin-B). Valincitrulin (Val-Cit) je dipeptidna grupa koja se obično koristi u linkerima podložnim cepanju.
[0103] Kao što se ovde koristi, termini "upravljati", "upravljanje" i "menadžement" se odnose na blagotvorne efekte koje subjekt izvodi iz terapije (npr., profilaktički ili terapijski agens), koji ne dovode do izlečenja od bolesti. U određenim aspektima, subjektu se daje jedna ili više terapija (npr., profilaktički ili terapijski agensi, kao što je antitelo obezbeđeno ovde) da se "upravlja" bolešću posredovanom C10orf54, jednim ili više njenih simptoma, da bi se sprečila progresija ili pogoršanje bolesti.
[0104] Termin "monoklonsko antitelo" se odnosi na antitelo dobijeno iz populacije homogenih ili suštinski homogenih antitela i svako monoklonsko antitelo će tipično prepoznati jedan jedini epitop na antigenu. U nekim specifičnim aspektima, "monoklonsko antitelo”, kao što se ovde koristi, je antitelo koje je proizveo jedan jedini hibridom ili neka druga ćelija, gde se antitelo vezuje za jedini epitop C10orf54, što se određuje, npr., pomoću ELISA ili nekog drugog eseja za vezivanje antigena ili za kompetitivno vezivanje, poznatog u struci. Termin "monoklonsko" nije ograničen na bilo koji određen metod za pravljenje antitela. Na primer, monoklonska antitela obezbeđena ovde mogu biti napravljena metod om hibridoma, kao što je opisano u Kohler et al.; Nature, 256:495 (1975) ili mogu biti izolovana iz biblioteka faga primenom tehnika. Drugi metodi za dobijanje klonskih ćelijskih linija i njima eksprimiranih monoklonskih antitela su dobro poznati u struci (videti, na primer, poglavlje 11 u: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel et al., eds., John Wiley and Sons, New York). Drugi primeri metoda pravljenja drugih monoklonskih antitela su prikazani ovde u Primerima.
[0105] Termin "nativan", kad se koristi u vezi sa biološkim materijalima, kao što su molekuli nukleinskih kiselina, polipeptidi, ćelije domaćini i slično, se odnosi na one koji su nađeni u prirodi i nije ih manipulisalo ljudsko biće.
[0106] Termin "farmaceutski prihvatljiv", kao što se ovde koristi, znači da je odobren od strane regulatorne agencije federalne ili državne vlade ili na listi U.S. farmakopeje, evropske farmakopeje ili neke druge generalno prepoznate farmakopeje za upotrebu na životinjama, a još konkretnije, na ljudima.
[0107] "Poliklonska antitela", kao što se ovde koristi, se odnosi na populaciju antitela, generisanu u imunogenom odgovoru na protein koji ima mnogo epitopa i tako uključuje niz različitih antitela usmerenih na iste i na različit epitope unutar proteina. Metodi za proizvodnju poliklonskih antitela su poznati u struci (Videti, npr., poglavlje 11 u: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel et al., eds., John Wiley and Sons, New York).
[0108] Kao što se ovde koristi, termin "polinukleotid", "nukleotid", "nukleinska kiselina", "molekul nukleinske kiseline" i drugi slični termini se ekvivalentno koriste i uključuju DNK, RNK, mRNK i slično.
[0109] "Predkancerska ćelija" se odnosi na ćeliju koja ima abnormalan izgled, kao što je razlika u veličini ili obliku u odnosu na ćelije u okružujućem tkivu ili normalne ćelije njihovog tipa ćelija, ali nije invazivna. Izgled predkancerske ćelije može da sugeriše povećan rizik od kancera. Predkancerske ćelije koje eksprimiraju C10orf54 se mogu identifikovati pomoću metoda izloženih ovde, koji mogu da uključuju analiziranje uzorka ćelija iz pacijenta.
[0110] Kao što se ovde koristi, termini "sprečiti", "sprečavanje" i "prevencija" se odnose na potpunu ili delimičnu inhibiciju razvoja, rekurencije, početka ili širenja bolesti posredovane C10orf54 i/ili simptoma vezanih za nju, koja je rezultat davanja terapije ili kombinacije terapija obezbeđenih ovde (npr., kombinacija profilaktičkih ili terapijskih agenasa, kao što je antitelo obezbeđeno ovde).
[0111] Kao što se ovde koristi, termin "profilaktički agens" se odnosi na bilo koji agens koji može potpuno ili delimično da inhibira razvoj, rekurenciju, nastanak ili širenje bolesti posredovane C10orf54 i/ili simptoma vezanih za nju u subjektu. U određenim aspektima, termin "profilaktički agens" se odnosi na antitelo na C10orf54 obezbeđeno ovde. U drugim određenim aspektima, termin "profilaktički agens" se odnosi na agens različit od antitela na C10orf54 obezbeđenog ovde. U određenim aspektima, profilaktički agens je agens za koji se zna da je koristan ili je bio ili se sada koristi da spreči bolest posredovanu C10orf54 i/ili simptome vezane za nju ili da uspori nastanak, razvoj, napredovanje i/ili jačinu bolesti posredovane C10orf54 i/ili simptoma vezanih za nju. U nekim specifičnim aspektima, profilaktički agens je humanizovano antitelo na C10orf54, kao što je humanizovano anti-C10orf54 monoklonsko antitelo.
[0112] U određenim aspektima, "profilaktički efektivan serumski titar" je serumski titar u subjektu, poželjno čoveku, koji potpuno ili delimično inhibira razvoj, rekurenciju, nastanak ili širenje bolesti posredovane C10orf54 i/ili simptoma vezanih za nju u subjektu.
1
[0113] Termin "rekombinantno antitelo" se odnosi na antitelo koje je dobijeno, eksprimirano, kreirano ili izolovano rekombinantnim sredstvima. Rekombinantna antitela mogu biti antitela eksprimirana pomoću rekombinantnog ekspresionog vektora transfektovanog u ćeliju domaćina, antitela izolovana iz rekombinantne, kombinatorijske biblioteke antitela, antitela izolovana iz životinje (npr., miš ili krava) koja je transgena i/ili transhromozomska za humane imunoglobulinske gene (videti npr., Taylor, L. D. et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295) ili antitela dobijena, eksprimirana, kreirana ili izolovana bilo kojim drugim sredstvom koje uključuje spajanje sekvenci imunoglobulinskog gena sa drugim sekvencama DNK. Takva rekombinantna antitela mogu imati varijabilne i konstantne regione izvedene iz humane embrionske imunoglobulinske sekvence (Videti Kabat, E. A. et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242). U određenim aspektima, međutim, takva rekombinantna antitela su podvrgnuta in vitro mutagenezi (ili, kad se koristi životinja koja je transgena za humanu Ig sekvencu in vivo somatskoj mutagenezi) i tako aminokiselinske sekvence VH i VL regiona rekombinantnog antitela sekvence koje iako su izvedene iz i vezane za humane embrionske sekvence VH i VL, mogu da ne postoje prirodno unutar repertoara humanog embrionskog antitela in vivo.
[0114] Termin "serumski titar", kao što se ovde koristi, se odnosi na prosečan serumski titar u populaciji od bar 10, kao što je bar 20 ili bar 40 subjekata, do oko 100, 1000 ili više.
[0115] Kao što se ovde koristi, termin "bočni efekti" obuhvata neželjene i nepovoljne efekte terapije (npr., profilaktičkog ili terapijskog agensa). Neželjeni efekti nisu nužno nepovoljni. Nepovoljan efekat terapije (npr., profilaktičkog ili terapijskog agensa) bi mogao da bude štetan ili neprijatan ili rizičan. Primeri bočnih efekata uključuju, dijareju, kašalj, gastroenteritis, šištanje, mučninu, povraćanje, anoreksiju, abdominalno grčenje, groznicu, bol, gubitak telesne težine, dehidraciju, alopeciju, dispneu, nesanicu, vrtoglavicu, mukozitis, efekte na nerve i mišiće, umor, suva usta i gubitak apetita, osipe ili oticanja na mestu administracije, simptome koji liče na grip kao što su groznica, ježenje i umor, probleme u digestivnom traktu i alergijske reakcije. Dodatni neželjeni efekti koje imaju pacijenti su brojni i poznati u struci. Mnogi su opisani u Physician's Desk Reference (67th ed., 2013).
[0116] Kao što se ovde koriste, termini "subjekt" i "pacijent" se koriste u istom značenju. Kao što se ovde koristi, u određenim aspektima, subjekt je sisar, kao što je ne-primat (npr., krave, svinje, konji, mačke, psi, pacovi itd.) ili primat (npr., majmun i čovek). U nekim specifičnim aspektima, subjekt je čovek. U jednom aspektu, subjekt je sisar (npr., čovek) koji ima bolest posredovanu C10orf54. U jednom drugom aspektu, subjekt je sisar (npr., čovek) u riziku od razvijanja bolesti posredovane C10orf54.
[0117] Kao što se ovde koristi, "suštinski sve" se odnosi na bar oko 60%, bar oko 70%, bar oko 75%, bar oko 80%, bar oko 85%, bar oko 90%, bar oko 95%, bar oko 98%, bar oko 99% ili oko 100%.
[0118] Kao što se ovde koristi, termin "terapijsko sredstvo" ili "terapijski agens" se odnosi na bilo koji agens koji se može koristiti u lečenju, sprečavanju ili ublažavanju bolesti, poremećaja ili stanja, uključujući u lečenju, sprečavanju ili ublažavanju jednog ili više simptoma bolesti, poremećaja ili stanja posredovanog C10orf54 i/ili simptoma vezanih za njih. U određenim aspektima, terapijski agens se odnosi na antitelo obezbeđeno ovde. U drugim određenim aspektima, terapijski agens se odnosi na agens različit od antitela
2
obezbeđenog ovde. U određenim aspektima, terapijski agens je agens koji je poznat kao koristan ili je bio ili se sada koristi za lečenje, sprečavanje ili ublažavanje jednog ili više simptoma bolesti, poremećaja ili stanja posredovanog C10orf54 i/ili simptoma vezanih za njih.
[0119] Kombinacija terapija (npr., upotreba terapijskih agenasa) može biti efektivnija nego aditivni efekti dve ili više pojedinačnih terapija. Na primer, sinergijski efekat kombinacije terapijskih agenasa dozvoljava upotrebu manjih doza jednog ili više agenasa i/ili ređu administraciju agenasa subjektu sa bolešću posredovanom C10orf54. Mogućnost korišćenja manjih doza terapija i/ili davanje terapija ređe smanjuje toksičnost vezanu za administraciju terapija subjektu bez smanjenja efikasnosti terapija u sprečavanju, lečenju ili ublažavanju jednog ili više simptoma bolesti posredovane C10orf54. Pored toga, sinergijski efekat može da dovede do povećane efikasnosti terapija u sprečavanju, lečenju ili ublažavanju jednog ili više simptoma bolesti posredovane C10orf54. Konačno, sinergijski efekat kombinacije terapija (npr., terapijskih agenasa) može da izbegne ili smanji nepovoljne ili neželjene bočne efekte vezane za upotrebu bilo koje pojedinačne terapije.
[0120] Termin "terapijski efektivna količina", kao što se ovde koristi, se odnosi na količinu terapijskog agensa (npr., antitela obezbeđenog ovde ili bilo kog drugog terapijskog agensa obezbeđenog ovde) koja je dovoljna da smanji i/ili ublaži jačinu i/ili trajanje date bolesti i/ili simptoma vezanih za nju. Terapijski efektivna količina terapijskog agensa može biti količina neophodna za smanjenje ili ublažavanje napredovanja ili progresije date bolesti, smanjenje ili ublažavanje rekurentnosti, razvoja ili početka date bolesti i/ili da poboljša ili pojača profilaktički ili terapijski efekat druge terapije (npr., terapije različite od administracije antitela obezbeđenog ovde).
[0121] U određenim aspektima, "terapijski efektivan serumski titar" je serumski titar u subjektu, poželjno čoveku, koji smanjuje jačinu, trajanje i/ili simptome vezane za bolest posredovanu C10orf54 u subjektu.
[0122] Kao što se ovde koristi, termin "terapija" se odnosi na bilo koji protokol, metod i/ili agens koji se može koristiti u sprečavanju, menadžmentu, tretmanu i/ili ublažavanju bolesti posredovane C10orf54. U određenim aspektima, termini "terapije" i "terapija" se odnose na biološku terapiju, podržavajuću terapiju i/ili druge terapije korisne u sprečavanju, menadžmentu, tretmanu i/ili ublažavanju bolesti posredovane C10orf54 poznate stručnjacima u ovoj oblasti kao što je medicinsko osoblje.
[0123] Termin "tiol”, kao što se ovde koristi, se odnosi na radikal -SH.
[0124] Kao što se ovde koristi, termini "tretirati”, "tretman", "lečiti" i "lečenje" se odnose na smanjenje ili ublažavanje napredovanja, jačine i/ili trajanja bolesti posredovane C10orf54, koje proizlazi iz administracije jedne ili više terapija (uključujući, ali bez ograničenja, administraciju jednog ili više terapijskih agenasa, kao što je antitelo obezbeđeno ovde). U nekim specifičnim aspektima, takvi termini se odnosi na smanjenje ili inhibiciju formiranja kancera ili tumora. U drugim specifičnim aspektima, takvi termini se odnose na smanjenje ili ublažavanje napredovanja, jačine i/ili trajanja bolesti kalem protiv domaćina. A u nekim drugim specifičnim aspektima, takvi termini se odnose na smanjenje ili ublažavanje napredovanja, jačine i/ili trajanja bolesti koja je responsivna na imunomodulaciju, gde takva modulacija proizlazi iz povećanja aktivacije T ćelija, povećanja proliferacije T ćelija ili povećanja proizvodnje citokina.
[0125] "Tubulizin" uključuje i prirodne proizvode opisane kao tubulizini, kao što su opisali Sasse et al. i drugi autori pomenuti u opisu srodne struke, a i analoge tubulizina opisane u US prijavi patenta objavljnoj pod br. US 2011/0021568 A1. Tubulizin opisani u predmetnoj prijavi su pomenuti ovde i mogu da uključuju tubulizine formula T3 i T4 i druge tubulizine u kojima je terminalni N-metilpiperidin zamenjen nesupstituisanim piperidinom, dopuštajući formiranje amidne veze sa linkerom.
[0126] Termin "varijabilni domen" ili "varijabilni region" se odnosi na deo lakog ili teškog lanca antitela koji je generalno lociran na amino-kraju lakog ili teškog lanca i ima dužinu od oko 120 do 130 aminokiselina u teškom lancu i oko 100 do 110 aminokiselina u lakom lancu i koristi se u vezivanju i specifičnosti svakog konkretnog antitela za njegov konkretan antigen. Varijabilni domeni se ekstenzivno razlikuju u sekvenci među različitim antitelima. Variabilnost u sekvenci je koncentrisana u CDR-ovima, dok se manje varijabilni delovi u varijabilnom domenu nazivaju okvirni regioni (FR). CDR-ovi lakog ili teškog lanca su primarno odgovorni za interakciju antitela sa antigenom. U nekim specifičnim aspektima, varijabilni region je humani varijabilni region.
[0127] Termin "numeracija ostataka varijabilnog domena kao u Kabatu" ili "numeracija pozicija aminokiselina kao u Kabatu" i njegove varijacije, se odnosi na sistem numeracije koji se koristi za varijabilne domene teških lanaca ili varijabilne domene lakih lanaca kompilacije antitela u Kabat et al., Sequences of Proteins of lmmunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991). Primenom ovog sistema numeracije, data linearna aminokiselinska sekvenca može da sadrži manje ili više aminokiselina što odgovara skraćivanju ili inserciji u FR ili CDR varijabilnog domena. Na primer, varijabilni domen teškog lanca može da uključuje insert od samo jedne aminokiseline (ostatak 52a prema Kabatu) iza ostatka 52 H2 i insertovane ostatke (npr. ostaci 82a, 82b i 82c itd., prema Kabatu) iza ostatka 82 u FR teškog lanca. Kabatova numeracija ostataka može se odrediti za dato antitelo poravnavanjem na regionima homologije sekvence antitela sa "standardnom" Kabatovom numerisanom sekvencom. Kabatov sistem numeracije se generalno koristi kad se odnosi na ostatak u varijabilnom domenu (približno ostaci 1-107 lakog lanca i ostaci 1-113 teškog lanca) (npr., Kabat et al., Sequence of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). "EU sistem numeracije" ili "EU indeks" se generalno koristi kad se odnosi na ostatak u konstantnom regionu teškog lanca imunoglobulina (npr., EU indeks saopšten u Kabat et al., supra). "EU indeks kao u Kabatu" se odnosi na numeraciju ostataka humanog IgG 1 EU antitela. Ako ovde nije drukčije rečeno, upućivanja na brojeve ostataka u varijabilnom domenu antitela se odnosi na broj u Kabatovom sistemu numeracije. Opisani su ostali sistemi numeracije, uključujući, na primer, AbM, Chothia, Contact i IMGT. Razni sistemi numeracije su ilustrovani na SL.16A i 16B.
[0128] Termin "varijanta", kad se koristi u vezi sa C10orf54 ili sa antitelom na C10orf54, se odnosi na peptid ili polipeptid koji sadrži jedan ili više (kao što je, na primer, oko 1 do oko 25, oko 1 do oko 20, oko 1 do oko 15, oko 1 do oko 10 ili oko 1 do oko 5) supstitucija, delecija i/ili adicija aminokiselinskih sekvenci u poređenju sa nativnom ili nemodifikovanom sekvencom. Na primer, varijanta C10orf54 može da bude rezultat jedne ili više (kao što je, na primer, oko 1 do oko 25, oko 1 do oko 20, oko 1 do oko 15, oko 1 do oko 10 ili oko 1 do oko 5) promena u aminokiselinskoj sekvenci nativnog C10orf54. Takođe kao primer, varijanta antitela na C10orf54 može da bude rezultat jedne ili više (kao što je, na primer, oko 1 do oko 25, oko 1 do oko 20, oko 1 do oko 15, oko 1 do oko 10 ili oko 1 do oko 5) promena u
4
aminokiselinskoj sekvenci nativnog ili prethodno nemodifikovanog antitela na C10orf54. Varijante se mogu javljati prirodno, kao što su alelske ili obrađene varijante, ili mogu biti konstruisane veštački. Varijante polipeptida se mogu dobijati iz odgovarajućih molekula nukleinskih kiselina koje kodiraju te varijante. U nekim specifičnim aspektima, varijanta C10orf54 ili varijanta antitela na C10orf54 bar zadržava funkcionalnu aktivnost C10orf54 ili anti-C10orf54 antitela, respektivno. U nekim specifičnim aspektima, varijanta anti-C10orf54 antitela vezuje C10orf54 i/ili je antagonistička na aktivnost C10orf54. U nekim specifičnim aspektima, varijanta anti-C10orf54 antitela vezuje C10orf54 i/ili je agonistična na aktivnost C10orf54. U određenim aspektima, varijantu kodira varijanta molekula nukleinske kiseline sa polimorfizmom jednog nukleotida (SNP) koja kodira VH ili VL region ili podregion C10orf54 ili antitela na C10orf54.
[0129] Termin "vektor" se odnosi na supstancu koja se koristi da uvede molekul nukleinske kiseline u ćeliju domaćina. Vektori primenljivi za upotrebu uključuju, na primer, ekspresione vektore, plazmide, fagne vektore, virusne vektore, epizome i veštačke hromozome, koji mogu da uključuju sekvence ili markere za selekciju, operaitvne za stabilnu integraciju u hromozom ćelije domaćina. Dodatno, vektori mogu da uključuju jedan ili više selektabilnih marker gena i odgovarajuće sekvence za kontrolu ekspresije. Selektabilni marker geni koji mogu biti uključeni, na primer, obezbeđuju otpornost na antibiotike ili toksine, dopunjavaju auksotrofne deficijencije ili obezbeđuju kritične nutrijente kojih nema u medijima za kulture. Sekvence za kontrolu ekspresije mogu da uključuju konstitutivne i inducibilne promotore, pojačivače transkripcije, terminatore transkripcije i slično, koji su dobro poznati u struci. Kad dva ili više molekula nukleinske kiseline treba zajedno da se eksprimiraju (npr. i težak i lak lanac antitela), oba molekula nukleinske kiseline se mogu insertovati, na primer, u jedan jedini ekspresioni vektor ili u odvojene ekspresione vektore. Za ekspresiju jednog vektora, kodirajuće nukleinske kiseline mogu biti operativno vezane za jednu zajedničku sekvencu za kontrolu ekspresije ili za različite sekvence za kontrolu ekspresije, kao što je jedan inducibilan promotor i jedan konstitutivni promotor. Uvođenje molekula nukleinske kiseline u ćeliju domaćina se može potvrditi metodima dobro poznatim u struci. Takvi metodi uključuju, na primer, analizu nukleinske kiseline, kao što su Northern analize ili umnožavanje iRNK lančanom reakcijom polimeraze (PCR) ili imunoblot za ekspresiju genskih proizvoda ili drugi pogodni analitički metodi za testiranje ekspresije uvedene sekvence nukleinske kiseline ili njenog odgovarajućeg genskog proizvoda. Stručnjaci u ovoj oblasti podrazumevaju da je molekul nukleinske kiseline eksprimiran u dovoljnoj količini da proizvede željeni proizvod (npr., antitelo na C10orf54 obezbeđeno ovde) i još se podrazumeva da nivoi ekspresije mogu da se optimizuju da bi se dobila dovoljna ekspresija pomoću metoda dobro poznatih u struci.
KRATAK OPIS SLIKA
[0130]
SL. 1A i 1B prikazuju nivo ekspresije proteina C10orf54 koji je identifikovan i kvantifikovan sTAg analizom u uzorcima AML i BMMC i relevantnoj kontroli.
SL. 2 prikazuje FACS analizu 23 primarna uzorka AML-BM-MNC i 3 normalna uzorka BM-MNC primenom antitela na C10orf54 76E1.
SL. 3A i 3B prikazuju humanizovane sekvence za 76E1 VH region mišjeg monoklonskog antitela. Prikazane su SEQ ID NOS: 1, 7, 8, 12-15 i 82.
SL. 4A i 4B prikazuju humanizovane sekvence za 141A VH region mišjeg monoklonskog antitela. Prikazane su SEQ ID NOS: 2, 7, 8, 16-19 i 82.
SL. 5A i 5B prikazuju humanizovane sekvence za 175A VH region mišjeg monoklonskog antitela. Prikazane su SEQ ID NOS: 3, 7, 8, 20-23 i 82.
SL. 6A i 6B prikazuju humanizovane sekvence za 76E1 VL region mišjeg monoklonskog antitela. Prikazane su SEQ ID NOS: 4, 9, 10, 24, 25 i 94.
SL. 7A i 7B prikazuju humanizovane sekvence za 141A VL region mišjeg monoklonskog antitela. Prikazane su SEQ ID NOS: 5, 10, 11, 26, 27 i 94.
SL. 8A i 8B prikazuju humanizovane sekvence za 175A VL region mišjeg monoklonskog antitela. Prikazane su SEQ ID NOS: 6, 9, 10, 28, 29 i 94.
SL. 9 prikazuje pseudo-sekvence VH i VL domena mišjeg monoklonskog antitela 76E1, 141A i 175A (SEQ ID NOS: 1143-1148). CDR-ovi su identifikovani masnim slovima (bold).
SL. 10 prikazuje da tretman antitelom na C10orf54 indukuje jaku inhibiciju rasta tumora u ustanovljenim Kasumi-3 tumorima.
SL. 11 prikazuje da tretman mišjim 175A antitelom na C10orf54 indukuje jaku inhibiciju rasta tumora u ustanovljenim Kasumi-3 tumorima.
SL. 12 prikazuje rezultate sekundarnog ADC eseja pomoću antitela na C10orf54 u eseju za vijabilnost ćelija sa C10orf54 koji eksprimira linija sarkoma.
SL. 13 i 14 prikazuju aktivnost nekonjugovanog i MMAF konjugovanog antitela na C10orf54 u eseju za vijabilnost ćelija sa C10orf54 koji eksprimiraju linije sarkoma i roditeljska linija sarkoma.
SL. 15 prikazuje rezultate tretmana nekonjugovanim i MMAF konjugovanim antitelom na C10orf54 u modelu tumora sa C10orf54 koji eksprimiraju linija sarkoma i roditeljska linija sarkoma.
SL. 16A i 16B prikazuje poravnanje sekvenci varijabilnih teških lanaca i varijabilnih lakih lanaca anti-C10orf54 mišjeg antitela označenih 76E1, 141A i 175A (SEQ ID NOS:1-6). Granice CDR su naznačene numeracijama Kabata, AbM, Chothia-e, Contact i IMGT. SL. 17A i 17B prikazuje poravnanje sekvenci varijabilnih teških lanaca i varijabilnih lakih lanaca primera humanizovanih antitela na C10orf54 označenih hu76E1, hu141A i hu175A (SEQ ID NOS: 1135-1137 za teške lance; SEQ ID NOS: 1139-1141 za lake lance) i odgovarajuće konsenzus sekvence između hu76E1 i hu175A (SEQ ID NO: 1138 za težak lanac; SEQ ID NO: 1142 za lak lanac). Ostaci označeni odmah ispod tog poravnanja ukazuju na specifične ostatke koji se mogu varirati na gornjoj "X" poziciji u konsenzus sekvenci.
SL. 18A do 18D prikazuju poravnanja VH i VL sekvenci antitela opisanih ovde paratop grupom. Prikazane su SEQ ID NOS: 1271-1280 za VH i VL. SEQ ID NOS: 1291, 1306, 1441, 1918, 1440, 1368, 1442, 1919, 1385, 1405, 1446, 1920, 1443, 1458, 1446, 1921, 1473, 1445, 1447, 1922, 1444, 1508, 1448 i 1923 za konsenzusne sekvence CDR unutar paratop su takođe prikazane.
SL. 19 prikazuje primer humanih embrionskih sekvenci za humanizaciju antitela na C10orf54 opisanih ovde.
SL. 20A i 20B prikazuju odabrane sekvence humanih VH i humanih VL za humanizaciju antitela na C10orf54 opisanih ovde. Prikazane su SEQ ID NOS: 7, 1902-1904, 1907, 1905, 1906, 1912, 1910, 11, 1909, 1913 (redosled odozgo nadole) za sekvence VH i VL.
SL. 21A prikazuje grafičko predstavljanje proteina C10orf54 i himernih proteinskih konstrukata. Obeležje "Humani" se odnosi na konstrukt CC1; "Mišji" se odnosi na konstrukt CC2; "hsIGVmmSTALK" se odnosi na konstrukt CC5; "mmIGVhsSTALK" se odnosi na konstrukt CC6; "hsABCmmC10" se odnosi na konstrukt CC7; "mmabChsC10" se odnosi na konstrukt CC8; "hsC10mmLOOP" se odnosi na konstrukt CC9 i "mmC10hsLOOP" se odnosi na konstrukt CC10, kao što je opisano u Primeru 3. Sekvencno poravnanje aminokiselinskih sekvenci iz humanog C10orf54 (ostaci 1 do 193 sekvence SEQ ID NO:1079) i mišjeg C10orf54 (ostaci 1 do 190 sekvence SEQ ID NO: 1243), uključujući konsenzus sekvencu ovih ostataka (SEQ ID NO: 1914), je takođe prikazano.
SL. 21B prikazuje filogenetsko stablo anti-C10orf54 antitela i za VH i za VL gene, uključujući kategorizaciju paratopa “bin” i klaster analizu kao što je opisano u Primeru 3. Oznaka "cela dužina, humani" se odnosi na CC1; "pacov" se odnosi na konstrukt CC3; "cela dužina, cino" se odnosi na konstrukt CC4; "hsIGVmmSTALK" se odnosi na konstrukt CC5; "hsABCmmC10" se odnosi na konstrukt CC7; "mmABChsC10" se odnosi na konstrukt CC8; "hsC10mmLOOP" se odnosi na konstrukt CC9 i "mmC10hsLOOP" se odnosi na konstrukt CC10, kao što je opisano u Primeru 3.
SL. 22A i 22B prikazuju humanizovane sekvence za VH i VL regione mišjeg monoklonskog antitela 26A, respektivno. SEQ ID NOS: 1902, 82, 1266 i 1529-1531 su prikazane na SL. 22A i SEQ ID NOS: 1910, 94 i 1532-1534 su prikazane na SL. 22B.
Humanizovan VH, označen sa h26AH1 i humanizovan VL, označen sa h26AL1, su oba konstrukti “razmena CDR” bez promena u humanom okviru. Sledeće sekvence imaju promenjene aminokiselinske ostatke. # označava supstituciju dezamidacijom: Q/S/A/D.
SL. 23A i 23B prikazuju humanizovane sekvence za VH i VL regione mišjeg monoklonskog antitela 128A, respektivno. SEQ ID NOS: 1902, 82, 1258 i 1535-1537 su prikazane na SL. 23A i SEQ ID NOS: 1907, 94, 1259 i 1538-1540 su prikazane na SL.
23B. Humanizovan VH, označen sa h128AH1 i humanizovan VL, označen sa h128AL1, su oba konstrukti "razmena CDR" bez promena u humanom okviru. Sledeće sekvence imaju promenjene aminokiselinske ostatke. # označava supstituciju dezamidacijom: Q/S/A/D.
SL. 24A i 24B prikazuju humanizovane sekvence za 124A VH i VL regione mišjeg monoklonskog antitela, respektivno. SEQ ID NOS: 1902, 82, 1281, 1541 i 1542 su prikazane na SL. 24A i SEQ ID NOS: 1911, 94, 1282, 1546 i 1547 su prikazane na SL.
24B. Humanizovan VH, označen sa h124AH1 i humanizovan VL, označen sa h124AL1, su oba konstrukti “razmena CDR” bez promena u humanom okviru. Sledeće sekvence imaju promenjene aminokiselinske ostatke. # označava supstituciju dezamidacijom: Q/S/A/D. @ označava izoaspartatske supstitucije: Q/S/A.
SL. 25A i 25B prikazuju humanizovane sekvence za VH i VL regione mišjeg monoklonskog antitela 259A, respektivno. SEQ ID NOS: 1902, 82, 1275 i 1543-1545 su prikazane na SL. 25A i SEQ ID NOS: 1905, 94, 1276, 1548 i 1549 su prikazane na SL.
25B. Humanizovan VH, označen sa h124AH1 i humanizovan VL, označen sa h124AL1, su oba konstrukti “razmena CDR” bez promena u humanom okviru. Sledeće sekvence imaju promenjene aminokiselinske ostatke. # označava supstituciju dezamidacijom: Q/S/A/D. @ označava izoaspartatske supstitucije: E/S/A.
SL. 26A i 26B prikazuju ekspresiju C10orf54 u MDSC subpopulacijama. SL. 26A prikazuje procenat C10orf54 unutar Lin-/CD11b<+>MDSC subpopulacija. SL. 26B prikazuje broj kopija C10orf54 za Lin-/CD11b<+>MDSC subpopulacije. MDSC populacije se nazivaju monocitne (CD14+/HLA-DR-), granulocitne (CD15<+>/HLA-DR-) i nezrele mijeloidne ćelije (CD15-/HLA-DR-).
SL. 27 prikazuje dijagram raspršenja ekspresije C10orf54 u podskupovima PBMC pacijenata sa NSCLC.
SL. 28 prikazuje grafike sa stubićima proliferacije T-ćelija koja je inhibirana izlaganjem C10orf54-Fc konstrukta. Prikazano je ugrađivanje<3>H-timidina.
SL. 29 prikazuje grafike sa stubićima sposobnosti antitela na C10orf54 da smanje supresiju proliferacije naivnih T-ćelija posredovanu pomoću C10orf54 i sekreciju citokina.
SL. 30A do 30C prikazuju poređenje populacija naivnih i pan T ćelija.50000 T ćelija po udubljenju je gajeno na pločama prethodno obloženih sa 5 µg/ml anti-CD3 antitela i različitim koncentracijama C10orf54-Fc. Ćelije su kostimulisane dalje različitim koncentracijama anti-CD28 antitela (anti-CD3 antitela nisu dodata u kontrolna udubljenja (0 µg/ml αCD28). Vrednosti su prosečne za RLU/udubljenje (n=4). SL. 30A prikazuje pan T ćelije, 2 dana po stimulaciji. SL. 30B prikazuje naivne T ćelije, 2 dana po stimulaciji. SL. 30C prikazuje naive T ćelije, 3 dana po stimulaciji.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0131] Ovde su obezbeđena antitela koja se vezuju za C10orf54, uključujući polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54. Takva antitela uključuju humanizovana antitela na C10orf54. Obezbeđena su i antitela (npr., humanizovana antitela na C10orf54) koja kompetitivno blokiraju vezivanje antitela na C10orf54 obezbeđenog ovde za polipeptid C10orf54. Antitela na C10orf54 (npr., humanizovana anti-C10orf54 antitela) obezbeđena ovde mogu biti konjugovana ili rekombinantno fuzionisana sa dijagnostičkim agensom, detektabilnim agensom ili terapijskim agensom (npr., konjugat antitelo-lek). Dalje, obezbeđeni su sastavi koji sadrže antitelo na C10orf54 (npr., humanizovano antitelo na C10orf54). Na primer, detektabilni agens može biti detektabilna proba.
[0132] U određenim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde se vezuje za prvu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC1 (SEQ ID NO: 1079), CC4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) i CC10 (SEQ ID NO: 1251), a ne vezuje se za drugu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC2 (SEQ ID NO: 1243), CC3 (SEQ ID NO: 1244), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248) i CC9 (SEQ ID NO: 1250).
[0133] U određenim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde se vezuje za prvu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC1 (SEQ ID NO: 1079), CC4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246) i CC8 (SEQ ID NO: 1249), a ne vezuje se za drugu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC2 (SEQ ID NO: 1243), CC3 (SEQ ID NO: 1244), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC9 (SEQ ID NO: 1250) i CC10 (SEQ ID NO: 1251). U nekim aspektima, takvo antitelo ne sadrži jednu ili više CDR sekvenci izabranih iz grupe koja se sastoji od 30, 1099, 1104, 1105, 1110, 31, 1100, 1106, 1111, 1116, 32, 1101, 1107, 1112, 45, 1102, 1108, 1113, 40, 1103, 1114, 41, 1109 i 1115.
[0134] U određenim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde se vezuje za prvu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC1 (SEQ ID NO: 1079), CC4 (SEQ ID NO: 1245) i CC5 (SEQ ID NO: 1246), a ne vezuje se za drugu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa (SEQ ID NO: 1243), CC3 (SEQ ID NO: 1244), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC8 (SEQ ID NO: 1249), CC9 (SEQ ID NO: 1250) i CC10 (SEQ ID NO: 1251). U nekim aspektima, takvo antitelo ne sadrži jednu ili više CDR sekvenci izabranih iz grupe koja se sastoji od 36, 1081, 1086, 1087, 1092, 37, 1082, 1088, 1093, 1098, 38, 1083, 1089, 1094, 45, 1084, 1090, 1095, 46, 1085, 1096, 47, 1091 i 1097.
[0135] U određenim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde se vezuje za prvu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC1 (SEQ ID NO: 1079), CC4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) i CC9 (SEQ ID NO: 1250), a ne vezuje se za drugu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC2 (SEQ ID NO: 1243), CC3 (SEQ ID NO: 1244), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC9 (SEQ ID NO: 1250) i CC10 (SEQ ID NO: 1251). U nekim aspektima, takvo antitelo ne sadrži jednu ili više CDR sekvenci izabranih iz grupe koja se sastoji od 33, 1117, 1122, 1123, 1128, 34, 1118, 1124, 1129, 1134, 35, 1119, 1125, 1130, 42, 1120, 1126, 1131, 43, 1121, 1132, 44, 1127 i 1133.
[0136] U određenim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde se vezuje za prvu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC1 (SEQ ID NO: 1079), CC3 (SEQ ID NO: 1244), CC4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) i CC9 (SEQ ID NO: 1250), a ne vezuje se za drugu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC2 (SEQ ID NO: 1243), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248) i CC10 (SEQ ID NO: 1251).
[0137] U određenim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde se vezuje za prvu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC1 (SEQ ID NO: 1079), CC4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) i CC10 (SEQ ID NO: 1251), a ne vezuje se za drugu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC2 (SEQ ID NO: 1243), CC3 (SEQ ID NO: 1244), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC9 (SEQ ID NO: 1250) i CC10 (SEQ ID NO: 1251).
[0138] Ovde su obezbeđeni i izolovani molekuli nukleinske kiseline koji kodiraju VH lanac, VL lanac, VH domen, VL domen, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL antitela na C10orf54, koja se vezuju za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54. Još su obezbeđeni vektori i ćelije domaćini koji sadrže molekule nukleinske kiseline koji kodiraju antitela na C10orf54 koja se vezuju za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54. Obezbeđeni su i metodi pravljenja antitela koja se vezuju za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54.
[0139] Obezbeđeni su metodi upotrebe antitela na C10orf54 (npr., humanizovana antitela na C10orf54). Metodi uključuju lečenje, sprečavanje ili ublažavanje bolesti, poremećaja ili stanja, uključujući jedan ili više simptoma bolesti, poremećaja ili stanja, koji obuhvataju administriranje terapijski efektivne količine antitela na C10orf54, uključujući konjugat antitelo-lek (ADC) koji sadrži antitelo na C10orf54, obezbeđeno ovde, subjektu, čime se vrši lečenje, sprečavanje ili ublažavanje bolesti, poremećaja ili stanja, uključujući jedan ili više simptoma bolesti, poremećaja ili stanja. U nekim aspektima, antitela na C10orf54 su humanizovana antitela koja se vezuju za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54. U jednom aspektu, bolest, poremećaj ili stanje je izazvano ili na drugi način povezano sa C10orf54, uključujući ćelije koje eksprimiraju C10orf54 (npr., tumorske ćelije, supresorske ćelije izvedene iz mijeloida (MDSC), supresivne dendritske ćelije (supresivni DC) i /ili regulatorne T ćelije (T reg)) ili je povezano sa njima. U određenim aspektimathe bolest je kancer, kao što je leukemija, kancer bešike, kancer kože, kancer kolona, kancer dojke, kancer jetre, kancer bubrega, kancer pluća, kancer stomaka, kancer pankreasa, kancer ezofagusa ili fibrosarkom. U jednom aspektu, leukemija is akutna mijeloidna leukemija (AML). U drugim aspektima, bolest je kalem protiv domaćina (GVHD). Dodatni metodi su obezbeđeni i uključuju upotrebu antitela na C10orf54 sa aktivnošću vezivanja C10orf54 za ćelije koje eksprimiraju C10orf54, obezbeđene ovde, na primer, kao nekonjugovanog antitela ili konjugovanog antitela (ADC), uključujući i to da inhibiraju i/ili ubijaju ćelije koje eksprimiraju C10orf54 (npr., sa anti-tumorskom aktivnošću da posreduju u anti-tumorskom efektu). U određenim aspektima, antitela na C10orf54, uključujući ADC-ove koji sadrže antitela na C10orf54, obezbeđena ovde, inhibiraju supresorsku aktivnost posredovanu C10orf54 na T ćelijama (npr., da dozvole efektivan anti-tumorski imuni odgovor). U određenim aspektima, antitela na C10orf54,obezbeđena ovde, direktno ubijaju ćelije koje eksprimiraju C10orf54 (npr., tumorske ćelije koje nose C10orf54, supresorske ćelije izvedene iz mijeloida (MDSC), supresivne dendritske ćelije (supresivni DC) i /ili regulatorne T ćelije (T reg)), na primer, putem ćelijske citotoksičnosti zavisne od antitela (ADCC) i/ili citotoksičnosti zavisne od komplementa (CDC). U određenim aspektima, konjugati antitelo-lek (ADC), koji sadrže antitela na C10orf54 obezbeđena ovde, direktno ubijaju ćelije koje eksprimiraju C10orf54 što uključuje i vezivanje za ćelije koje eksprimiraju C10orf54 (npr., tumorske ćelije, supresorske ćelije izvedene iz mijeloida (MDSC), supresivne dendritske ćelije (supresivne DC) i/ili regulatorne T ćelije (T reg)), na primer, omogućavajući internalizaciju citotoksičnog leka. U bilo kom od gornjih aspekata, antitelo na C10orf54 može da bude humanizovano antitelo na C10orf54, obezbeđeno ovde, koje se vezuje za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54. Bilo u kom od gornjih aspekata, antitelo na C10orf54 može da bude humanizovano antitelo na C10orf54, obezbeđeno ovde, koje se vezuje za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54.
[0140] Dodatni metodi upotrebe antitela na C10orf54 su obezbeđeni.
[0141] Metodi uključuju metode inhibiranja rasta ćelija i/ili ubijanja ćelija koje imaju ekspresiju C10orf54 na površini ćelija, koji obuhvataju dovođenje u dodir ćelija sa efektivnom količinom antitela na C10orf54 ili konjugata antitelo-lek, obezbeđenih ovde. U jednom aspektu, ćelija je regulatorna T ćelija (npr., CD4<+>Foxp3<+>regulatorna T ćelija). U drugim aspektima, ćelija je supresorska ćelija izvedena iz mijeloida (npr., CD11b<+>ili CD11b<high>supresorska ćelija izvedena iz mijeloida) ili supresivna dendritska ćelija (npr., CD11b<+>ili CD11b<high>dendritska ćelija). U drugim aspektima, ćelija je kancerska ili predkancerska ćelija. Dodatni metodi su obezbeđeni i uključuju upotrebu antitela na C10orf54 sa aktivnošću vezivanja C10orf54 za ćelije koje eksprimiraju C10orf54, obezbeđene ovde, na primer, kao nekonjugovanog antitela ili konjugovanog antitela (ADC) što uključuje inhibiranje i/ili ubijanje ćelija koje eksprimiraju C10orf54 (npr., sa anti-tumorskom aktivnošću da posreduju u anti-tumorskom efektu). U određenim aspektima, antitela na C10orf54, uključujući ADC koji sadrže antitela na C10orf54, obezbeđena ovde, inhibiraju supresorsku aktivnost posredovanu C10orf54 na T ćelijama (npr., da dozvole efektivan antitumorski imuni odgovor). U određenim aspektima, antitela na C10orf54, obezbeđena ovde, direktno ubijaju ćelije koje eksprimiraju C10orf54 (npr., tumorske ćelije koje nose C10orf54, supresorske ćelije izvedene iz mijeloida (MDSC), supresivne dendritske ćelije (supresivni DC) i /ili regulatorne T ćelije (T reg)), na primer, putem ćelijske citotoksičnosti zavisne od antitela (ADCC) i/ili citotoksičnosti zavisne od komplementa (CDC). U određenim aspektima, konjugati antitelo-lek (AD) koji sadrže antitela na C10orf54, obezbeđena ovde,
4
direktno ubijaju ćelije koje eksprimiraju C10orf54 što uključuje vezivanje za ćelije koje eksprimiraju C10orf54 (npr., tumorske ćelije, supresorske ćelije izvedene iz mijeloida (MDSC), supresivne dendritske ćelije (supresivne DC) i/ili regulatorne T ćelije (T reg)), na primer, omogućavajući internalizaciju citotoksičnog leka. U bilo kom od gornjih aspekata, antitelo na C10orf54 može da bude humanizovano antitelo na C10orf54, obezbeđeno ovde, koje se vezuje za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54.
[0142] Metodi uključuju metode modulisanja imunog odgovora u subjektu, koji obuhvata davanje efektivne količine antitela na C10orf54 (npr., humanizovano anti-C10orf54 antitelo), obezbeđenog ovde, subjektu. U jednom aspektu, modulisanje obuhvata povećanje aktivacije T ćelija. U jednom drugom aspektu, modulisanje obuhvata povećanje proliferacije T ćelija. U jednom drugom aspektu, modulisanje obuhvata povećanje proizvodnje citokina.
[0143] Metodi uključuju metode za detekciju C10orf54 u uzorku, koji obuhvata dovođenje u dodir uzorka sa antitelom na C10orf54 (npr., humanizovanim antitelom na C10orf54), obezbeđenim ovde, kao što je antitelo koje sadrži detektabilan agens. U određenim aspektima, uzorak sadrži ćelije koje eksprimiraju C10orf54 na svojoj površini.
[0144] Metodi uključuju metode za tretiranje kancera koji obuhvataju administriranje subjektu antitela na C10orf54 ili konjugata antitelo-lek (ADC) koji sadrži anti-C10orf54 (npr., ADC formule A-L-CTX, gde je A antitelo, L je linker, a CTX je citotoksično sredstvo) u terapijski efektivnoj količini, što uključuje količinu efektivnu da ubije ćeliju koja eksprimira C10orf54 (npr., tumorska ćelija, supresorska ćelija izvedena iz mijeloida (MDSC), supresivna dendritska ćelija (supresivne DC) i /ili regulatorna T ćelija (T reg)). U nekim aspektima, kancer je akutna mijeloidna leukemija (AML). U bilo kom od gornjih aspekata, anti-C10orf54 antitelo može da bude humanizovano antitelo na C10orf54, obezbeđeno ovde, koje se vezuje za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54.
[0145] Metodi uključuju metode za ubijanje ćelija koje eksprimiraju C10orf54 (npr., tumorske ćelije, supresorske ćelije izvedene iz mijeloida (MDSC), supresivne dendritske ćelije (supresivne DC) i /ili regulatorne T ćelije (T reg)), koji obuhvata dovođenje u dodir ćelije koja eksprimira C10orf54 (npr., tumorska ćelija, supresorska ćelija izvedena iz mijeloida (MDSC), supresivna dendritska ćelija (supresivni DC) i /ili regulatorna T ćelija (T reg)) sa količinom antitela na C10orf54 ili konjugata antitelo-lek (ADC) koji sadrže antitelo na C10orf54 (npr., ADC formule A-L-CTX, gde je A antitelo, L je linker, a CTX je citotoksično sredstvo) efektivnom da ubije ćeliju (npr., tumorsku ćeliju, supresorsku ćeliju izvedenu iz mijeloida (MDSC), supresivnu dendritsku ćeliju (supresivni DC) i /ili regulatornu T ćeliju (T reg)). U nekim aspektima, tumorska ćelija je AML ćelija. U bilo kom od gornjih aspekata, antitelo na C10orf54 može da bude humanizovano antiC10orf54 antitelo, obezbeđeno ovde, koje se vezuje za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54.
[0146] U jednom aspektu, ovde je obezbeđen komplet koji sadrži antitelo na C10orf54 (npr., humanizovano antitelo na C10orf54) koje se vezuje za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54 obezbeđen ovde. U nekim aspektima, kompleti sadrže konjugat antitelo-lek (ADC), gde je antitelo antitelo na C10orf54 (npr., humanizovano antitelo na C10orf54).
ANTITELA
[0147] U nekim aspektima, ovde su obezbeđena antitela koja se vezuju za C10orf54, uključujući polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54. U nekim aspektima, antitela na C10orf54 su humanizovana antitela koja se vezuju za C10orf54, uključujući za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54 ili epitop C10orf54.
[0148] U određenim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži VH domen, VL domen, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL mišjeg monoklonskog antitela 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A as prikazan u Tabeli 2 i SL. 3-8, 22A, 22B, 23A, 23B, 24A, 24B, 25A i 25B. U skladu s tim, u nekim aspektima, VH domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1. U nekim aspektima, VH domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:2. U nekim aspektima, VH domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:3. U nekim aspektima, VH domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1252. U nekim aspektima, VH domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1254. U nekim aspektima, VH domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1256. U nekim aspektima, VH domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1258. U nekim aspektima, VH domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1260. U nekim aspektima, VH domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1262. U nekim aspektima, VH domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1266. U nekim aspektima, VH domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1268. U nekim aspektima, VH domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1271. U nekim aspektima, VH domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1273. U nekim aspektima, VH domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1375. U nekim aspektima, VH domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1277. U nekim aspektima, VH domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1279. U nekim aspektima, VH domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1281. U nekim aspektima, VH domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1283. U nekim aspektima, VH domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1285. U nekim aspektima, VH domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1287. U nekim aspektima, VH domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1289. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:4. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:5. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:6. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1253. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1255. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1257. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1259. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1261. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1263. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1265. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1267. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1269. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1270. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1272. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1274. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1276. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1278. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1280. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1282. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1284. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1286. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1288. U nekim aspektima, VL domen obuhvata aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1290.
Tabela 2. Sekvence miš e antitela
4
4
[0149] U određenim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VH, FR2 VH, FR3 VH, FR4 VH, FR1 VL, FR2 VL, FR3 VL i/ili FR4 VL humane embrionske imunoglobulinske aminokiselinske sekvence ili njene varijante. Na primer, u nekim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VH, FR2 VH, FR3 VH i/ili FR4 VH predstavljene u humanoj embrionskoj sekvenci identifikovanoj u Tabeli 3. U skladu s tim, u nekim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VH, FR2 VH, FR3 VH i/ili FR4 VH humane embrionske IGHV1-18 (SEQ ID NO:7) i IGHJ4-01 (SEQ ID NO: 82). U nekim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VH, FR2 VH, FR3 VH i/ili FR4 VH humane embrionske IGHV3-48 (SEQ ID NO:8) i IGHJ4-01 (SEQ ID NO: 82). U nekim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VH, FR2 VH, FR3 VH i/ili FR4 VH humane embrionske IGHV1-46*01 (SEQ ID NO:1902) i IGHJ4-01 (SEQ ID NO: 82). U nekim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VH, FR2 VH, FR3 VH i/ili FR4 VH humane embrionske IGHV3-74*01 (SEQ ID NO:1903) i IGHJ4-01 (SEQ ID NO: 82). U nekim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VH, FR2 VH, FR3 VH i/ili FR4 VH humane embrionske IGHV4-61*01 (SEQ ID NO:1904) i IGHJ4-01 (SEQ ID NO: 82). U nekim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VL, FR2 VL, FR3 VL i/ili FR4 VL humane embrionske IGKV2-28 (SEQ ID NO:9) i IGKJ2-1 (SEQ ID NO:94). U nekim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VL, FR2 VL, FR3 VL i/ili FR4 VL
4
humane embrionske IGKV1-39 (SEQ ID NO:10) i IGKJ2-1 (SEQ ID NO:94). U nekim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VL, FR2 VL, FR3 VL i/ili FR4 VL humane embrionske IGKV3-20 (SEQ ID NO:10) i IGKJ2-1 (SEQ ID NO:94). U nekim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VL, FR2 VL, FR3 VL i/ili FR4 VL humane embrionske IGHV1-46*01 (SEQ ID NO:1920) i IGKJ2-1 (SEQ ID NO:94). U nekim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VL, FR2 VL, FR3 VL i/ili FR4 VL humane embrionske IGHV3-74*01 (SEQ ID NO:1903) i IGKJ2-1 (SEQ ID NO:94). U nekim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VL, FR2 VL, FR3 VL i/ili FR4 VL humane embrionske IGHV4-61*01 (SEQ ID NO:1904) i IGKJ2-1 (SEQ ID NO:94). U nekim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VL, FR2 VL, FR3 VL i/ili FR4 VL humane embrionske IGKV2-28*01 (SEQ ID NO:1905) i IGKJ2-1 (SEQ ID NO:94). U nekim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VL, FR2 VL, FR3 VL i/ili FR4 VL humane embrionske IGKV2-29*02 (SEQ ID NO:1906) i IGKJ2-1 (SEQ ID NO:94). U nekim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VL, FR2 VL, FR3 VL i/ili FR4 VL humane embrionske IGKV1-39*01 (SEQ ID NO:1907) i IGKJ2-1 (SEQ ID NO:94). U nekim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VL, FR2 VL, FR3 VL i/ili FR4 VL humane embrionske IGKV3-20*01 (SEQ ID NO:1908) i IGKJ2-1 (SEQ ID NO:94). U nekim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VL, FR2 VL, FR3 VL i/ili FR4 VL humane embrionske IGKV3D-20*01 (SEQ ID NO:1909) i IGKJ2-1 (SEQ ID NO:94). U nekim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VL, FR2 VL, FR3 VL i/ili FR4 VL humane embrionske IGKV3-11*01 (SEQ ID NO:1910) i IGKJ2-1 (SEQ ID NO:94). U nekim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VL, FR2 VL, FR3 VL i/ili FR4 VL humane embrionske IGKV2-30*1 (SEQ ID NO:1911) i IGKJ2-1 (SEQ ID NO:94). U nekim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VL, FR2 VL, FR3 VL i/ili FR4 VL humane embrionske IGKV2-30*02 (SEQ ID NO:1912) i IGKJ2-1 (SEQ ID NO:94). U nekim aspektima, antitelo na C10orf54 sadrži FR1 VL, FR2 VL, FR3 VL i/ili FR4 VL humane embrionske IGKV4-1*01 (SEQ ID NO:1913) i IGKJ2-1 (SEQ ID NO:94).
Tabela 3. Humane embrionske imuno lobulinske aminokiselinske sekvence
4
4
[0150] U određenim aspektima, antitela koja se vezuju za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrže VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu identifikovanu u Tabeli 4 ili SL. 3-8, 22A, 22B, 23A, 23B, 24A, 24B, 25A ili 25B i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu identifikovanu u Tabeli 4 ili SL.3-8, 22A, 22B, 23A, 23B, 24A, 24B, 25A ili 25B.
Tabela 4. Aminokiselinske sekvence VH i VL domena humanizovano antitela
4
1
[0151] U skladu s tim, u nekim aspektima, antitela koja se vezuju za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrže VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NOS:20, 21, 22, 23, 1529-1531, 1535-1537 ili 1541-1545 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:28, 29, 1532-1534, 1538-1540 ili 1546-1549. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:20 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:28. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji
2
ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:21 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:28. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:22 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:28. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:23 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:28. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:20 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:29. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:21 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:29. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:22 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:29. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:23 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:29.
[0152] U nekim aspektima, antitela koja se vezuju za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrže VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NOS:12, 13, 14 ili 15 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:24 ili 25. U skladu s tim, u jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:12 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:24. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:13 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:24. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:14 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:24. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:15 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:24. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:12 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:25. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:13 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:25. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:14 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:25. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:15 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:25.
[0153] U nekim aspektima, antitela koja se vezuju za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrže VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NOS:16, 17, 18 ili 19 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:26 ili 27. U skladu s tim, u jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:16 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:26. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:17 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:26. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:18 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:26. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:19 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:26. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:16 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:27. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:17 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:27. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:18 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:27. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:19 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:27.
[0154] U određenim aspektima, antitela, obezbeđena ovde, koja se vezuju za epitop C10orf54, sadrže VH region koji ima CDR1 VH, CDR2 VH i/ili CDR3 VH, koji ima aminokiselinsku sekvencu identifikovanu u Tabelama 5-11 ili Tabelama 12-33 niže i/ili VL region koji ima CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu identifikovanu u Tabelama 5-11 ili Tabelama 12-33 koje slede.
Tabela 5: Aminokiselinske sekvence izvedene iz miš e 175A antitela
4
1
2
4
Tabela 6: Aminokiselinske sekvence izvedene iz miš e antitela 76E1
1
2
4
1
2
4
1
2
4
1
11
12
1
14
1
1
Tabela 7: Aminokiselinske sekvence izvedene iz miš e antitela 141A
1
1
1
11
11
11
11
11
11
11
12
12
12
12
12
12
12
1
Tabela 8: Aminokiselinske sekvence izvedene iz miše antitela 26A
11
12
1
14
Tabela 9: Aminokiselinske sekvence izvedene iz miš e antitela 128A
1
1
1
1
1
Tabela 10: Aminokiselinske sekvence izvedene iz miš e antitela 124A
14
14
Tabela 11: Aminokiselinske sekvence izvedene iz miš e antitela 259A
14
14
14
14
14
[0155] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:36; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:37 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:38. U određenim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:46 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:47. U drugim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:6. U jednom drugom aspektu, antitelo još sadrži VL region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:28. A još drugim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:29. U nekim aspektima, antitelo sadrži (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:36; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:37 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:38 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:46 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:47. U meri u kojoj se antitelo obezbeđeno ovde "vezuje za epitop C10orf54", predviđeno je da se ta antitela vezuju i za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida ili njegov antigen.
[0156] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:36; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:50 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:38. U određenim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:46 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:47. U drugim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:6. U jednom drugom aspektu, antitelo još sadrži VL region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:28. A još u drugim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:29. U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:36; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:50 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:38 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:46 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:47.
[0157] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:36; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:99 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:38. U određenim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:46 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:47. U drugim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:6. U jednom drugom aspektu, antitelo još sadrži VL region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:28. A još u drugim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:29. U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:36; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:99 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:38 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL
1
koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:46 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:47.
[0158] U jednom drugom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži: VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:46 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:47. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VH region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:20. U jednom drugom aspektu, antitelo još sadrži VH region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:21. U drugim aspektima, antitelo još sadrži VH region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:22. U drugim aspektima, antitelo još sadrži VH region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:23.
[0159] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:30; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:31 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:32. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:40 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:41. U drugim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:24. U jednom drugom aspektu, antitelo još sadrži VL region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:25. U jednom aspektu, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:30; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:31 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:32 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:40 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:41.
[0160] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:30; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:321 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:32. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:40 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:41. U drugim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:24. U jednom drugom aspektu, antitelo još sadrži VL region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:25. U jednom aspektu, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:30; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:321 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:32 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:40 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:41.
[0161] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:30; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:835 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:32. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1)
1 1
CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:40 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:41. U drugim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:24. U jednom drugom aspektu, antitelo još sadrži VL region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:25. U jednom aspektu, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:30; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:835 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:32 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:40 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:41.
[0162] U nekim aspektima, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži: VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:40 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:41. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VH region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:12. U jednom drugom aspektu, antitelo još sadrži VH region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:13. U drugim aspektima, antitelo još sadrži VH region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:14. U drugim aspektima, antitelo još sadrži VH region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:15.
[0163] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:33; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:34 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:35. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:42; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:43 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:44. U drugim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:26. U jednom drugom aspektu, antitelo još sadrži VL region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:27. U jednom aspektu, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:33; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:34 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:35 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:42; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:43 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:44.
[0164] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:33; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:49 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:35. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:42; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:43 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:44. U drugim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:26. U jednom drugom aspektu, antitelo još sadrži VL region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:27. U jednom aspektu, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:33; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:49 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:35 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu
1 2
SEQ ID NO:42; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:43 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:44.
[0165] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:33; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1070 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:35. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:42; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:43 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:44. U drugim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:26. U jednom drugom aspektu, antitelo još sadrži VL region koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:27. U jednom aspektu, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:33; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1070 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:35 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:42; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:43 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:44.
[0166] Kao što će stručnjak u ovoj oblasti podrazumevati, granice između CDR-ova i okvirnih sekvenci za bilo koji od VH regiona i VL regiona opisanih ovde može da se odredi primenom bilo koje od dobro poznatih metoda u struci, uključujući IMGT, Kabat, Chothia, Contact, AbM ili Kabat plus Chothia (npr., "primeri", kao što je opisano ovde). U skladu s tim, bilo koje antitelo na C10orf54 koje ima jedan ili više CDR ili okvirnu sekvencu, kao što je opisano ovde, uključuje CDR ili okvirnu aminokiselinsku sekvencu što se određuje pomoću IMGT, Kabat, Chothia, Contact, AbM ili Kabat plus Chothia. Na primer, primer CDR sekvence i za VH i za VL region koji mogu biti uključeni u antitelo na C10orf54 iz pronalaska su prikazane u Tabelama 12-33 (videti i, npr., Tabele 5-11).
1
��
�
�
�
�
�
�
11
��
�
��
�
�
�
�
�
�
11
��
�
��
�
�
�
�
[0167] U određenim aspektima, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži: VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 30, 33, 36, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335 i 1717-1720; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 31, 34, 37, 849, 1082, 1088, 1092, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1118, 1124, 1129, 1134, 1161, 1336-1344, 1348-1384, 1556-1559, 1829-1847 i 1917 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 32, 35, 38, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 i 1385-1424.
[0168] U određenim aspektima, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži: VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 42, 45, 253-271, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 i 1915; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 40, 43, 46, 157, 843-846, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 i 1898-1900 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 41, 44, 47, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 i 1493-1525.
[0169] U određenim aspektima, antitelo sadrži (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 30, 33, 36, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335 i 1717-1720; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 31, 34, 37, 849, 1082, 1088, 1092, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1118, 1124, 1129, 1134, 1161, 1336-1344, 1348-1384, 1556-1559, 1829-1847 i 1917 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 32, 35, 38, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 i 1385-1424 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 42, 45, 253-271, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 i 1915; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 40, 43, 46, 157, 843-846, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 i 1898-1900 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 41, 44, 47, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 i 1493-1525. U meri u kojoj se antitelo, obezbeđeno ovde, “vezuje za epitop C10orf54”, predviđeno je da se ta antitela vezuju i za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida ili njegov antigen.
[0170] U određenim aspektima, antitelo obezbeđena ovde se vezuje za prvu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC1 (SEQ ID NO: 1079), CC4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) i CC10 (SEQ ID NO: 1251), a ne vezuje se za drugu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC2 (SEQ ID NO: 1243), CC3 (SEQ ID NO: 1244), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248) i CC9 (SEQ ID NO: 1250). U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) varijabilni (VH) region teškog lanca koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 30, 1099, 1104, 1105, 1110, 1291-1305, 1311-1315 i 1321-1325; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 37, 849, 1082, 1088, 1093, 1098, 1336-1344, 1348-1367, 1373, 1374 i 1556-1559 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 38, 1083, 1089, 1094, 1385-1404 i 1409-1412 i/ili (b) varijabilni (VL) region
1
lakog lanca koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 45, 1102, 1108, 1113, 1425-1430, 1432-1457, 1681-1684 i 1915; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 40, 157, 1103, 1114, 1473-1481, 1526-1528, 1630-1633 i 1685-1688 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 1493-1507, 1511-1516 i 1523-1525. U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1291, 1292, 1293, 1294 ili 1295; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1336, 1337, 1338, 1339 ili 1340 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1385, 1386, 1387 ili 1388 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1425, 1426, 1427 ili 1428; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1473, 1474 ili 1475 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1493, 1494 ili 1495. U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1291, 1292, 1293, 1294 ili 1295; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1341, 1342, 1338, 1343 ili 1344 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1389, 1390, 1391 ili 1392 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1425, 1426, 1427 ili 1428; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1473, 1474 ili 1475 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1496, 1497 ili 1498. U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1291, 1292, 1293, 1294 ili 1295; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1348, 1337, 1338, 1349 ili 1350 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1385, 1386, 1387 ili 1388 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1429, 1426, 1427, 1430, 1681, 1682, 1683 ili 1684; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1473, 1474, 1475, 1685, 1686, 1687 ili 1688 i (3)a CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1493, 1494 ili 1495. U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1291, 1292, 1293, 1294 ili 1295; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1348, 1337, 1338, 1349 ili 1350 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1385, 1386, 1387 ili 1388 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1429, 1426, 1427 ili 1430; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1473, 1474 ili 1475 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1493, 1494 ili 1495. U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1291, 1292, 1293, 1294 ili 1295; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1351, 1337, 1338, 1352 ili 1353 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1385, 1386, 1387 ili 1388 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1425, 1426, 1427 ili 1428; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1473, 1474 ili 1475 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1493, 1494 ili 1495. U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 30, 1099, 1104, 1105 ili 1110; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1359, 1360, 1361, 1362 ili 1363 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1397, 1398, 1399 ili 1400 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1437, 1451, 1438, 1452, 1451 1439, 1453, 1450 ili 1915; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1526, 1479, 1527, 1480, 157, 1528 ili 1481 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1523, 1502, 1524, 1503, 1525 ili 1504. U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID
1
NO: 1301, 1302, 1303, 1304 ili 1305; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1364, 1365, 1361, 1366 ili 1367 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1401, 1402, 1403 ili 1404 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1454, 1455, 1456 ili 1457; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 40, 1103 ili 1114 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1505, 1506 ili 1507. U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1311, 1312, 1313, 1314 ili 1315; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 37, 1082, 1088, 1093 ili 1098 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1409, 1410, 1411 ili 1412 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 45, 1102, 1108 ili 1113; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 40, 1103 ili 1114 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1511, 1512 ili 1513. U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1321, 1322, 1323, 1324 ili 1325; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 849, 1082, 1088, 1373 ili 1374 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 38, 1083, 1089 ili 1094 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 45, 1102, 1108 ili 1113; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 40, 1103 ili 1114 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1514, 1515 ili 1516.
[0171] U određenim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde se vezuje za prvu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC1 (SEQ ID NO: 1079), CC4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246) i CC8 (SEQ ID NO: 1249) a ne vezuje se za drugu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC2 (SEQ ID NO: 1243), CC3 (SEQ ID NO: 1244), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC9 (SEQ ID NO: 1250) i CC10 (SEQ ID NO: 1251). In some aspekted, takvi antitelo does not sadrže jedan ili više CDR sekvence izabranih iz grupe koja se sastoji od 30, 1099, 1104, 1105, 1110, 31, 1100, 1106, 1111, 1116, 32, 1101, 1107, 1112, 45, 1102, 1108, 1113, 40, 1103, 1114, 41, 1109 i 1115. U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) heavy lanac varijabilni (VH) region koji sadrže: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 30, 1099, 1110, 1104, 1105, 1296-1300, 1306-1310, 1316-1320 i 1717-1720; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 31, 37, 1082, 1088, 1092, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1354-1358, 1368-1372, 1829-1847 i 1917 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 32, 38, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1393-1396, 1405-1408, 1413, 1414 i/ili (b) light lanac varijabilni (VL) region koji sadrže: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 45, 253-271, 1102, 1108, 1113, 1431-1434, 1458-1465, 1744-1822, 1878-1896; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 40, 843-846, 1103, 1114, 1476-1478, 1482-1487, 1898-1900 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 41, 1109, 1115, 1499-1501, 1508-1513. U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1296, 1297, 1298, 1299 ili 1300; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1354, 1355, 1356, 1357 ili 1358 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1393, 1394, 1395 ili 1396 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1431, 1432, 1433 ili 1434; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1476, 1477 ili 1478 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1499, 1500 ili 1501. U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima
1 1
aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1306, 1307, 1308, 1309 ili 1310; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1368, 1369, 1370, 1371 ili 1372 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1405, 1406, 1407 ili 1408 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1458, 1459, 1460 ili 1461; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1482, 1483 ili 1484 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1508, 1509 ili 1510. U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1306, 1307, 1308, 1309 ili 1310; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1368, 1369, 1370, 1371, 1372, 1829, 1830, 1831, 1832, 1833, 1834, 1835, 1836, 1837, 1838, 1839, 1840, 1841, 1842, 1843, 1844, 1845, 1846 ili 1847 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1405, 1406, 1407 ili 1408 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1458, 1459, 1460, 1461, 1878, 1879, 1880, 1881, 1882, 1883, 1884, 1885, 1886, 1887, 1888, 1889, 1890, 1891, 1892, 1893, 1894, 1895 ili 1896; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1485, 1486, 1487, 1897, 1898, 1899 ili 1900 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1508, 1509 ili 1510. U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1316, 1317, 1318, 1319 ili 1320; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 37, 1082, 1088, 1092 ili 1098 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 38, 1083, 1089 ili 1094 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1462, 1463, 1464 ili 1465; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 40, 1103 ili 1114 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1511, 1512 ili 1513. U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1316, 1317, 1318, 1319, 1320, 1717, 1718, 1719 ili 1720; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 37, 1082, 1088, 1917 ili 1098 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1413, 1414, 1089 ili 1094 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1462, 1463, 1464, 1465, 1744, 45, 1745, 1746, 1747, 1748, 1749, 1750, 1751, 1752, 1753, 1754, 1755, 1756, 1757, 1758, 1759, 1760, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 1761, 1762, 1763, 1764, 1765, 1766, 1767, 1768, 1769, 1770, 1771, 1772, 1773, 1774, 1775, 1776, 1777, 1778, 1779, 1780, 1781, 1782, 1783, 1784, 1785, 1786, 1787, 260, 1788, 1789, 1790, 1791, 264, 268, 1792, 1793, 1794, 1795, 1796, 261, 1797, 1798, 1799, 1800, 265, 269, 1801, 1802, 1803, 1804, 1805, 262, 1806, 1807, 1808, 1809, 266, 270, 1810, 1811, 1812, 1813, 1814, 263, 1815, 1816, 1817, 1818, 267, 271, 1819, 1820, 1821 ili 1822; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 40, 1103, 1114, 843, 844, 846 ili 845 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1511, 1512 ili 1513.
[0172] U određenim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde se vezuje za prvu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC1 (SEQ ID NO: 1079), CC4 (SEQ ID NO: 1245) i CC5 (SEQ ID NO: 1246), a ne vezuje se za drugu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa (SEQ ID NO: 1243), CC3 (SEQ ID NO: 1244), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC8 (SEQ ID NO: 1249), CC9 (SEQ ID NO: 1250) i CC10 (SEQ ID NO: 1251). U nekim aspektima, takvo antitelo ne sadrži jednu ili više CDR sekvenci izabranih iz grupe koja se sastoji od 36, 1081, 1086, 1087, 1092, 37, 1082, 1088, 1093, 1098, 38, 1083, 1089, 1094, 45, 1084, 1090, 1095, 46, 1085, 1096, 47, 1091 i 1097.
[0173] U određenim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde se vezuje za prvu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC1 (SEQ ID NO: 1079), CC4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) i CC9 (SEQ ID NO: 1250), a ne
1 2
vezuje se za drugu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC2 (SEQ ID NO: 1243), CC3 (SEQ ID NO: 1244), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC9 (SEQ ID NO: 1250) i CC10 (SEQ ID NO: 1251). U nekim aspektima, takvo antitelo ne sadrži jednu ili više CDR sekvenci izabranih iz grupe koja se sastoji od 33, 1117, 1122, 1123, 1128, 34, 1118, 1124, 1129, 1134, 35, 1119, 1125, 1130, 42, 1120, 1126, 1131, 43, 1121, 1132, 44, 1127 i 1133. U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) varijabilni (VH) region teškog lanca koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 33, 1117, 1122, 1123 i 1128; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 34, 1082, 1088, 1118, 1124, 1129 i 1134 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 35, 1119, 1125, 1130, 1415 i 1416 i/ili (b) varijabilni (VL) region lakog lanca koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 42, 1120, 1126 i 1131; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 43, 1121 i 1132 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 44, 1127 i 1133. U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 33, 1117, 1122, 1123 ili 1128; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 34, 1082, 1088, 1129 ili 1134 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 35, 1415, 1125 ili 1416 i/ili (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 42, 1120, 1126 ili 1131; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 43, 1121 ili 1132 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 44, 1127 ili 1133.
[0174] U određenim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde se vezuje za prvu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC1 (SEQ ID NO: 1079), CC3 (SEQ ID NO: 1244), CC4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) i CC9 (SEQ ID NO: 1250), a ne vezuje se za drugu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC2 (SEQ ID NO: 1243), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248) i CC10 (SEQ ID NO: 1251). U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1326, 1327, 1328, 1329 ili 1330; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1375, 1376, 1377, 1378 ili 1379 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1417, 1418, 1419 ili 1420 i/ili (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1466, 1467 ili 1468; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1488, 1489 ili 1490 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1517, 1518 ili 1519.
[0175] U određenim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde se vezuje za prvu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC1 (SEQ ID NO: 1079), CC4 (SEQ ID NO: 1245), CC5 (SEQ ID NO: 1246), CC8 (SEQ ID NO: 1249) i CC10 (SEQ ID NO: 1251) a ne vezuje se za drugu grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina označenih sa CC2 (SEQ ID NO: 1243), CC3 (SEQ ID NO: 1244), CC6 (SEQ ID NO: 1247), CC7 (SEQ ID NO: 1248), CC9 (SEQ ID NO: 1250) i CC10 (SEQ ID NO: 1251). U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1331, 1332, 1333, 1334 ili 1335; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1380, 1381, 1382, 1383 ili 1384 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1421, 1422, 1423 ili 1424 i/ili (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1469, 1470, 1471 ili 1472; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1491, 1488 ili 1492 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1520, 1521 ili 1522.
1
[0176] U skladu sa aminokiselinskim sekvencama opisanim u Tabelama 12-33, u nekim aspektima, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 36, 1081, 1086, 1087, 1092, 30, 1099, 1104, 1105, 1110, 33, 1117, 1122, 1123, 1128 ili 1291-1335; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 37, 1082, 1088, 1093, 1098, 31, 1100, 1106, 1111, 1116, 34, 1118, 1124, 1129, 1134 ili 1336-1384 i/ili (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 38, 1083, 1089, 1094, 32, 1101, 1107, 1112, 35, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424. U određenim aspektima, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 45, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 42, 1120, 1126, 1131 ili 1425-1472; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 46, 1085, 1096, 40, 1103, 1114, 43, 1121 i 1132 i/ili (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 47, 1091, 1097, 41, 1109, 1115, 44, 1127, 1133 ili 1493-1525. U nekim aspektima, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 36, 1081, 1086, 1087, 1092, 30, 1099, 1104, 1105, 1110, 33, 1117, 1122, 1123, 1128 ili 1291-1335; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 37, 1082, 1088, 1093, 1098, 31, 1100, 1106, 1111, 1116, 34, 1118, 1124, 1129, 1134 ili 1336-1384 i/ili (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 38, 1083, 1089, 1094, 32, 1101, 1107, 1112, 35, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 45, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 42, 1120, 1126, 1131 ili 1425-1472; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 46, 1085, 1096, 40, 1103, 1114, 43, 1121, 1132, 1473-1492 ili 1526-1528 i/ili (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 47, 1091, 1097, 41, 1109, 1115, 44, 1127, 1133 ili 1493-1525.
[0177] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1081; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1082 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1083. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1084; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1085 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 47. U jednom aspektu, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1081; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1082 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1083 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1084; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1085 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 47.
[0178] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1086; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 37 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 38. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 46 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 47. U jednom aspektu, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1)
1 4
CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1086; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 37 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 38 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 46 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 47.
[0179] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1087; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1088 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1089. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1090; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1085 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1091. U jednom aspektu, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1087; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1088 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1089 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1090; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1085 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1091.
[0180] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1092; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1093 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1094. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1095; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1096 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1097. U jednom aspektu, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1092; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1093 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1094 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1095; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1096 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1097.
[0181] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 36; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1098 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 38. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 46 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 47. U jednom aspektu, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 36; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1098 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 38 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 46 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 47.
1
[0182] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1099; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1100 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1101. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1102; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1103 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 41. U jednom aspektu, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1099; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1100 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1101 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1102; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1103 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 41.
[0183] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1104; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 31 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 32. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 40 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 41. U jednom aspektu, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1104; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 31 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 32 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 40 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 41.
[0184] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1105; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1106 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1107. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1108; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1103 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1109. U jednom aspektu, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1105; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1106 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1107 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1108; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1103 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1109.
[0185] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1110; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1111 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1112. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1113; (2) CDR2 VL koji ima
1
aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1114 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1115. U jednom aspektu, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1110; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1111 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1112 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1113; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1114 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1115.
[0186] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 30; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1116 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 32. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 40 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 41. U jednom aspektu, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 30; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1116 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 32 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 45; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 40 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 41.
[0187] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1117; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1118 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1119. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1120; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1121 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 44. U jednom aspektu, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1117; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1118 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1119 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1120; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1121 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 44.
[0188] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1122; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 34 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 35. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 42; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 43 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 44. U jednom aspektu, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1122; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 34 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 35 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku
1
sekvencu SEQ ID NO: 42; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 43 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 44.
[0189] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1123; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1124 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1125. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1126; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1121 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1127. U jednom aspektu, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1123; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1124 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1125 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1126; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1121 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1127.
[0190] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1128; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1129 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1130. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1131; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1132 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1133. U jednom aspektu, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1128; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1129 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1130 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1131; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1132 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1133.
[0191] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 33; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1134 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 35. U nekim aspektima, antitelo još sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 42; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 43 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 44. U jednom aspektu, antitelo sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 33; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1134 i (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 35 i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 42; (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 43 i (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 44.
[0192] U određenim aspektima, humanizovano antitelo na C10orf54 koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži jednu ili više konsenzus sekvenci izvedenih iz srodnih antitela, kao što je prikazano na SL.
1
17A i 17B. Kao što je opisano ovde, "konsenzusna sekvenca" se odnosi na aminokiselinske sekvence koje imaju zajedničke konzervisane aminokiseline u brojnim sekvencama i varijabilne aminokiseline koje variraju unutar date aminokiselinske sekvence. Obezbeđene CDR konsenzus sekvence uključuju CDR-ove koji odgovaraju CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i/ili CDRL3. Obezbeđene konsenzus sekvence CDR-ova antitela na C10orf54 su prikazane na SL. 17A i 17B. U skladu s tim, u nekim aspektima, humanizovano antitelo na C10orf54 sadrži VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu GYTFSX1X2WIE (SEQ ID NO: 1149), gde je X1R ili T, a X2je Y ili H; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu EILPGSGSTX1YNEKFKG (SEQ ID NO: 1150), gde je X1N ili S i/ili (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu xxxxxxxxxX1X2Y (SEQ ID NO: 1151), gde je x bilo koji aminokiselinski ostatak, X1je M ili F, a X2je G ili D. U određenim aspektima, humanizovano antitelo na C10orf54 sadrži VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO: 45); (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu KX1SNRFS (SEQ ID NO: 1152), gde je X1V ili L i/ili (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu FQGSHX1PX2T (SEQ ID NO: 1153), gde je X1V ili F, a X2je W ili Y. U određenim aspektima, humanizovano antitelo na C10orf54 sadrži: (a) VH region koji sadrži: (1) CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu GYTFSX1X2WIE (SEQ ID NO: 1149), gde je X1R ili T, a X2je Y ili H; (2) CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu EILPGSGSTX1YNEKFKG (SEQ ID NO: 1150), gde je X1N ili S i/ili (3) CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu xxxxxxxxxX1X2Y (SEQ ID NO: 1151), gde je x bilo koji aminokiselinski ostatak, X1je M ili F, a X2je G ili D i (b) VL region koji sadrži: (1) CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu RSSQSIVHSNGNTYLE (SEQ ID NO: 45); (2) CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu KX1SNRFS (SEQ ID NO: 1152), gde je X1V ili L i/ili (3) CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu FQGSHX1PX2T (SEQ ID NO: 1153), gde je X1V ili F, a X2je W ili Y.
[0193] U nekim aspektima, antitela obezbeđena ovde sadrže VH region koji sadrži ili se sastoji od VH domena. U drugim aspektima, antitela obezbeđena ovde sadrže VH region koji sadrži ili se sastoji od VH lanca. U nekim aspektima, antitela obezbeđena ovde sadrže VL region koji sadrži ili se sastoji od VL domena. U drugim aspektima, antitela obezbeđena ovde sadrže VL region koji sadrži ili se sastoji od VL lanca. U nekim aspektima, antitela obezbeđena ovde imaju kombinaciju (i) VH domena ili VH lanca i/ili (ii) VL domena ili VL lanca.
[0194] U nekim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde sadrži ili se sastoji od šest CDR, na primer, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL identifikovanih u Tabelama 5-33. U određenim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde može da sadrži manje od šest CDR. U nekim aspektima, antitelo sadrži ili se sastoji od jednog, dva, tri, četiri ili pet CDR, izabranih iz grupe koja se sastoji od CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL. U nekim specifičnim aspektima, antitelo sadrži ili se sastoji od jednog, dva, tri, četiri ili pet CDR, izabranih iz grupe koja se sastoji od CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL mišjeg monoklonskog antitela 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A opisanog ovde ili njegove humanizovane varijante, identifikovanih u Tabelama 5-33. U skladu s tim, u nekim aspektima, antitelo sadrži ili se sastoji od jednog, dva, tri, četiri ili pet CDR bilo kog od CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL identifikovanih u Tabelama 5-33.
[0195] U nekim aspektima, antitela obezbeđena ovde sadrže jedan ili više (npr. jedan, dva ili tri) CDR VH izlistanih u Tabelama 5-33. U drugim aspektima, antitela obezbeđena ovde
1
sadrže jedan ili više (npr., jedan, dva ili tri) CDR VL izlistanih u Tabelama 5-33. A još u drugim aspektima, antitela obezbeđena ovde sadrže jedan ili više (npr., jedan, dva ili tri) CDR VH izlistanih u Tabelama 5-33 i jedan ili više CDR VL izlistanih u Tabelama 5-33. U skladu s tim, u određenim aspektima, antitela sadrže CDR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu bilo koju od SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 i 1717-1720. U jednom drugom aspektu, antitela sadrže CDR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu bilo koju od SEQ ID NOS: 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 i 1917. U jednom drugom aspektu, antitela sadrže CDR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu bilo koju od SEQ ID NOS: 38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 i 1385-1424. U određenim aspektima, antitela sadrže CDR1 VH i/ili CDR2 VH i/ili CDR3 VH nezavisno odabrane od CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, kao što je prikazano u bilo kom od VH regiona prikazanih u Tabeli 5-33. U određenim aspektima, antitela sadrže CDR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu bilo koju od SEQ ID NOS: 45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 i 1915. U jednom drugom aspektu, antitela sadrže CDR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu bilo koju od SEQ ID NOS: 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 i 1898-1900. U jednom drugom aspektu, antitela sadrže CDR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu bilo koju od SEQ ID NOS: 47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 i 1493-1525. U određenim aspektima, antitela sadrže CDR1 VL i/ili CDR2 VL i/ili CDR3 VL nezavisno odabrane od CDR1 VL, CDR2 VL, CDR3 VL kao što je prikazano u bilo kom od VL regiona prikazanih u Tabelama 5-33.
[0196] Ovde su obezbeđena i antitela koja sadrže jedan ili više CDR VH i jedan ili više (npr., jedan, dva ili tri) CDR VL nabrojanih u Tabelama 5-33. Konkretno, ovde je obezbeđeno antitelo koje sadrži CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720) i CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720) i CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917) i CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915); CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917) i CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900); CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili
1
1917) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424) i CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915); CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424) i CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900); CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720), CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917) i CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720), CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917) i CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720), CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525);a CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917), CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424) i CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915), CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917), CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424) i CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900); CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917), CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720), CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915) i CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132,
1 1
1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720), CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720), CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917), CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915) i CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900); CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917), CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917), CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424), CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915) i CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900); CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424), CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424), CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720), CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917), CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424) i CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-
1 2
1335 ili 1717-1720), CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917), CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424) i CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720), CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917), CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720), CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917), CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915) i CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720), CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917), CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720), CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917), CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720), CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424), CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915) i CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720), CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424), CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117,
1
1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720), CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424), CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917), CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424), CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915) i CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900); CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917), CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424), CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917), CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424), CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720), CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917), CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424), CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915) i CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720), CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917), CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424), CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720), CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917), CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107,
1 4
1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424), CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720), CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917), CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915), CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); CDR1 VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1291-1335, 1291-1335 ili 1717-1720), CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424), CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915), CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); CDR2 VH (SEQ ID NOS:37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894, 1070-1078, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1336-1384, 1556-1559, 1829-1847 ili 1917), CDR3 VH (SEQ ID NOS:38, 32, 319, 35, 883-885, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125, 1130 ili 1385-1424), CDR1 VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1425-1472, 1681-1684, 1744-1822, 1878-1896 ili 1915), CDR2 VL (SEQ ID NOS:46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1473-1492, 1526-1528, 1630-1633, 1685-1688 ili 1898-1900) i CDR3 VL (SEQ ID NOS:47, 41, 44, 1056-1058, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127, 1133 ili 1493-1525); ili bilo koja njihova kombinacija od CDR VH (SEQ ID NOS:36, 30, 59-62, 33, 37, 101-104, 50, 114, 99, 100, 31, 65-74, 83-90, 95, 321, 322, 835-842, 34, 847-858, 49, 886-894 1070-1078, 38, 32, 319, 35, 883-885, 1081, 1086, 1087, 1092, 1099, 1104, 1105, 1110, 1117, 1122, 1123, 1128, 1082, 1088, 1093, 1098, 1100, 1106, 1111, 1116, 1118, 1124, 1129, 1134, 1083, 1089, 1094, 1101, 1107, 1112, 1119, 1125 i 1130) i CDR VL (SEQ ID NOS:45, 253-271, 42, 46, 272-275, 40, 843-846, 43, 1045-1048, 47, 41, 44, 1056-1058, 1084, 1090, 1095, 1102, 1108, 1113, 1120, 1126, 1131, 1085, 1096, 1103, 1114, 1121, 1132, 1091, 1097, 1109, 1115, 1127 i 1133) izlistanih u Tabelama 5-33.
[0197] U određenim aspektima, humanizovana antitela na C10orf54 se vezuju za polipeptid C10orf54, fragment polipeptida ili epitop, sa afinitetom uporedivim sa onim jednog ili više mišjih monoklonskih antitela označenih sa 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A. Humanizovana anti-C10orf54 antitela mogu da sadrže i jedan, dva, tri ili četiri humana ili humanizovana okvirna regiona imunoglobulinskog varijabilnog regiona teškog lanca i/ili jedan, dva, tri ili četiri humana ili humanizovana okvirna regiona imunoglobulinskog varijabilnog regiona lakog lanca. Takođe su obezbeđeni FR regioni teškog i/ili lakog lanca koji sadrže jednu ili više povratnih mutacija u kojima je humani FR ostatak zamenjen za odgovarajući ostatak prisutan u roditeljskom mišjem teškom ili lakom lancu ili za neki drugi uporediv ostatak. U nekim aspektima, aminokiselinske sekvence za CDR1, CDR2 i CDR3 teškog i lakog lanca za neka od humanizovanih anti-C10orf54 antitela mogu da uključuju i
1
jednu ili više mutacija u kojima je CDR ostatak identifikovan u Tabelama 5-33. Aminokiselinske sekvence za FR1, FR2, FR3 i FR4 teškog i lakog lanca koje se mogu koristiti za humanizovana anti-C10orf54 antitela su identifikovane u Tabelama 5-11 i na SL.
3-9, 17 i 22-25.
[0198] U određenim aspektima, humanizovano antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH region koji sadrži: (1) FR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 i 1828; (2) FR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 i 323-326; (3) FR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 i 1848-1875 i/ili (4) FR4 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:54, 320, 168054, 320, 1680. U skladu s tim, u nekim aspektima, humanizovano antitelo sadrži VH region koji uključuje FR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 i 1828. U nekim aspektima, humanizovano antitelo sadrži VH region koji uključuje FR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 i 323-326. U nekim aspektima, humanizovano antitelo sadrži VH region koji uključuje FR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 i 1848-1875. U nekim aspektima, humanizovano antitelo sadrži VH region koji uključuje FR4 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:54, 320, 168054, 320, 1680.
[0199] U određenim aspektima, humanizovano antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VL region koji sadrži: (1) FR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 i 1878; (2) FR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 i 1823-1826; (3) FR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 i 1901 i/ili (4) FR4 VL koji ima aminokiselinu sekvence SEQ ID NO:78. U skladu s tim, u nekim aspektima, humanizovano antitelo sadrži VL region koji uključuje FR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 i 1878. U nekim aspektima, humanizovano antitelo sadrži VL region koji uključuje FR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 i 1823-1826. U nekim aspektima, humanizovano antitelo sadrži VL region koji uključuje FR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 i 1901. U nekim aspektima, humanizovano antitelo sadrži VL region koji uključuje FR4 VL koji ima aminokiselinu sekvence SEQ ID NO:78.
[0200] U određenim aspektima, humanizovano antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži VH region i VL region, gde VH region još sadrži: (1) FR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 i 1828; (2) FR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu
1
izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 i 323-326; (3) FR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 i 1848-1875 i/ili (4) FR4 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:54, 320, 168054, 320, 1680 i gde VL region još sadrži: (1) FR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 i 1878; (2) FR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 i 1823-1826; (3) FR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 i 1901 i/ili (4) FR4 VL koji ima aminokiselina of SEQ ID NO:78.
[0201] Ovde su obezbeđena i antitela koja sadrže jedan ili više (npr., jedan, dva, tri ili četiri) FR VH i jedan ili više FR VL, izlistane u Tabelama 5-11. Konkretno, ovde je obezbeđeno i antitelo koje sadrži FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828) i FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 18781037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-18261044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 19011068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326) i FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 18781037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-18261044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 19011068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875) i FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326) i FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili
1
1823-1826); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901);a FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326) i FR4 VL (SEQ ID NO:78);a FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875) i FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031 - 1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067
1
ili 1823-1826); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 168054, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875) i FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680) i FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58,
1
895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680) i FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680) i FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-
2
251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-
2 1
113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4
2 2
VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-
2
1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680) i FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-
2 4
1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-
2
1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-
2
833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-
2
1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID
2
NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326),
2
FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715,
21
1716, 1827 ili 1828), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 15601614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR1 VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 1550-1555, 1649-1652, 1715, 1716, 1827 ili 1828), FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); FR2 VH (SEQ ID NOS:52, 106, 56, 122-124, 63, 64 ili 323-326), FR3 VH (SEQ ID NOS:53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882, 903-1030, 1560-1614, 1653-1679, 1721-1742 ili 1848-1875), FR4 VH (SEQ ID NO:54, 320, 1680), FR1 VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 1615-1629, 1743, 1877 ili 1878), FR2 VL (SEQ ID NOS:76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067 ili 1823-1826), FR3 VL (SEQ ID NOS:77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069, 1689-1714 ili 1901) i FR4 VL (SEQ ID NO:78); ili bilo koja njihova kombinacija FR VH (SEQ ID NOS:51, 105, 55, 115-121, 39, 58, 895-902, 52, 106, 56, 122-124, 63, 64, 323-326, 53, 107-113, 57, 125-251, 96-98, 292-318, 327-833, 53, 859-882 903-1030, 54, 320, 1680) i FR VL (SEQ ID NOS:75, 252, 79, 277-283, 91, 1031-1037, 1059-1061, 76, 80, 284, 92, 1038-1044, 1062-1067, 77, 276, 81, 285-291, 93, 1049-1055, 1068, 1069 ili 78) izlistanih u Tabelama 5-11.
[0202] U određenim aspektima, humanizovano antitelo koje se vezuje za A grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina opisanih ovde sadrži VH region koji sadrži: (1) FR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 51, 1550-1555, 105 i 1649-1652; (2) FR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 52 i 106; (3) FR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 1560-1614 i 1653-1679 i/ili (4) FR4 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 54 i 1680. U određenim aspektima, humanizovano antitelo koje se vezuje za A grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina opisanih ovde sadrži VL region koji sadrži: (1) FR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 1615-1629, 79 i 278; (2) FR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 92, 80 i 284; (3) FR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 1634-1648, 81, 1689-1714, 285, 286 i 288 i/ili (4) FR4 VL koji ima aminokiselina sekvence SEQ ID NO: 78. U određenim aspektima, humanizovano antitelo koje se vezuje za A grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina opisanih ovde sadrži VH region i VL region, gde VH region još sadrži: (1) FR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 51, 1550-1555, 105 i 1649-1652; (2) FR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 52 i 106; (3) FR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 1560-1614 i 1653-1679 i/ili (4) FR4 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 54 i 1680 i gde VL region još sadrži: (1) FR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 1615-1629, 79 i 278; (2) FR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 92, 80 i 284; (3) FR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 1634-1648, 81, 1689-1714, 285, 286 i 288 i/ili (4) FR4 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 78.
[0203] U određenim aspektima, humanizovano antitelo koje se vezuje za A grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina opisanih ovde sadrži VH region koji sadrži: (1) FR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 51, 39, 1715, 1716, 1550, 1827, 1828, 105, 55 i 115-121; (2) FR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 52, 106, 63, 64, 56, 323-326 i 122-124; (3) FR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 1560, 1561, 1721-1742, 1566, 1567, 1571, 1575, 1585, 1562, 1563, 1848-1875, 1565-1568, 1570-1572, 1574, 1575, 1577, 1578, 1581, 1582, 1584, 1585, 1587, 1591, 1593, 1594, 1597, 1602, 1603, 53, 107, 96-98, 292-318, 57 i 327-833 i/ili (4) FR4 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 54 i 320. U određenim aspektima, humanizovano antitelo koje se vezuje za A grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina opisanih ovde sadrži VL region koji sadrži: (1) FR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 1743, 75, 252,
21
1878, 1877, 79 i 277- 283; (2) FR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 1823-1826, 76, 80 i 284; (3) FR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 77, 276, 1901, 81 i 285-291 i/ili (4) FR4 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 78. U određenim aspektima, humanizovano antitelo koje se vezuje za A grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina opisanih ovde sadrži VH region i VL region, gde VH region još sadrži: (1) FR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 51, 39, 1715, 1716, 1550, 1827, 1828, 105, 55 i 115-121; (2) FR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 52, 106, 63, 64, 56, 323-326 i 122-124; (3) FR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 1560, 1561, 1721-1742, 1566, 1567, 1571, 1575, 1585, 1562, 1563, 1848-1875, 1565-1568, 1570-1572, 1574, 1575, 1577, 1578, 1581, 1582, 1584, 1585, 1587, 1591, 1593, 1594, 1597, 1602, 1603, 53, 107, 96-98, 292-318, 57 i 327-833 i/ili (4) FR4 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 54 i 320 i gde VL region još sadrži: (1) FR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 1743, 75, 252, 1878, 1877, 79 i 277- 283; (2) FR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 1823-1826, 76, 80 i 284; (3) FR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 77, 276, 1901, 81 i 285-291 i/ili (4) FR4 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 78.
[0204] U određenim aspektima, humanizovano antitelo koje se vezuje za A grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina opisanih ovde sadrži VH region koji sadrži: (1) FR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 51, 39, 105, 58, 55, 115-121 i 895-902; (2) FR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 52, 106, 56 i 122-124; (3) FR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 53, 107-113, 859-882, 57, 125-251 i 903-1030 i/ili (4) FR4 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 54. U određenim aspektima, humanizovano antitelo koje se vezuje za A grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina opisanih ovde sadrži VL region koji sadrži: (1) FR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 91, 1031-1037, 79 i 1059-1061; (2) FR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 92, 1038-1044, 80, 284 i 1062-1067; (3) FR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 93, 1049-1055, 81, 1068, 285 i 1069 i/ili (4) FR4 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 78. U određenim aspektima, humanizovano antitelo koje se vezuje za A grupu proteina C10orf54 ili himernih proteina opisanih ovde sadrži VH region i VL region, gde VH region još sadrži: (1) FR1 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 51, 39, 105, 58, 55, 115-121 i 895-902; (2) FR2 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 52, 106, 56 i 122-124; (3) FR3 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 53, 107-113, 859-882, 57, 125-251 i 903-1030 i/ili (4) FR4 VH koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 54 i gde VL region još sadrži: (1) FR1 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 91, 1031-1037, 79 i 1059-1061; (2) FR2 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 92, 1038-1044, 80, 284 i 1062-1067; (3) FR3 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NOS: 93, 1049-1055, 81, 1068, 285 i 1069 i/ili (4) FR4 VL koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 78.
[0205] U nekim aspektima, antitela obezbeđena ovde su antitela koja se vezuju za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) i uključuju antitela koja sadrže derivate VH domena, CDR VH, VL domena i CDR VL opisanih ovde, koji se vezuju za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54). Ovde su obezbeđena i antitela koja sadrže derivate mišjih monoklonskih antitela 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A, gde se antitela vezuju za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54). Standardne tehnike poznate stručnjacima u ovoj oblasti se mogu upotrebiti da se uvedu mutacije u nukleotidnu sekvencu koja kodira antitelo ili njegov fragment, obezbeđene ovde, uključujući, na primer, dirigovanu mutagenezu i mutagenezu posredovanu PCR-om što dovodi do aminokiselinskih supstitucija. U određenim aspektima, derivati uključuju manje od 25 aminokiselinskih supstitucija, manje od 20 aminokiselinskih supstitucija, manje od 15 aminokiselinskih supstitucija, manje od 10 aminokiselinskih supstitucija, manje od 5 aminokiselinskih supstitucija, manje od 4 aminokiselinske supstitucije, manje od 3 aminokiselinske supstitucije ili manje od 2 aminokiselinske supstitucije u odnosu na originalan molekul. U jednom specifičnom aspektu, derivati imaju konzervativne supstitucije aminokiselina koje su urađene na jednom ili više predviđenih neesencijalnih aminokiselinskih ostataka. "Konzervativna supstitucija aminokiselina" je ona u kojoj je aminokiselinski ostatak zamenjen aminokiselinskim ostatkom koji ima bočni lanac sa sličnim naelektrisanjem. Familije aminokiselinskih ostataka koje imaju bočne lance sa sličnim naelektrisanjem su definisane u struci. Ove familije uključuju aminokiseline sa baznim bočnim lancima (npr., lizin, arginin, histidin), kiselim bočnim lancima (npr., asparaginska kiselina, glutaminska kiselina), nenaelektrisanim polarnim bočnim lancima (npr., glicin, asparagin, glutamin, serin, treonin, tirozin, cistein), nepolarnim bočnim lancima (npr., alanin, valin, leucin izoleucin, prolin, fenilalanin, metionin, triptofan), beta-razgranatim bočnim lancima (npr., treonin, valin, izoleucin) i aromatičnim bočnim lancima (npr., tirozin, fenilalanin, triptofan, histidin). Alternativno, mutacije se mogu uvesti nasumično duž cele ili dela kodirajuće sekvence, kao što je saturacionom mutagenezom i dobijeni mutanti se mogu pregledati za biološku aktivnost da bi se identifikovali mutanti koji zadržavaju aktivnost. Posle mutageneze, kodirani protein se može eksprimirati i odrediti njegova aktivnost.
[0206] U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je bar 35%, bar 40%, bar 45%, bar 50%, bar 55%, bar 60%, bar 65%, bar 70%, bar 75%, bar 80%, bar 85%, bar 90%, bar 95% ili bar 99% identična sa aminokiselinskom sekvencom mišjeg monoklonskog antitela 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A ili njegovog fragmenta za vezivanje antigena, kao što je VH domen ili VL domen. U jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je bar 35%, bar 40%, bar 45%, bar 50%, bar 55%, bar 60%, bar 65%, bar 70%, bar 75%, bar 80%, bar 85%, bar 90%, bar 95% ili bar 99% identična sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u SEQ ID NOS:12-29. U jednom drugom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je bar 35%, bar 40%, bar 45%, bar 50%, bar 55%, bar 60%, bar 65%, bar 70%, bar 75%, bar 80%, bar 85%, bar 90%, bar 95% ili bar 99% identična sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u Tabelama 5-33. A u još jednom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži CDR VH i/ili CDR VL aminokiselinske sekvence koji je bar 35%, bar 40%, bar 45%, bar 50%, bar 55%, bar 60%,
21
bar 65%, bar 70%, bar 75%, bar 80%, bar 85%, bar 90%, bar 95% ili bar 99% identičan sa CDR VH aminokiselinskom sekvencom prikazanom u Tabelama 5-33 i/ili CDR VL aminokiselinskom sekvencom prikazanom u Tabelama 5-33.
[0207] U određenim aspektima, antitela korišćena u skladu sa metodima obezbeđenim ovde imaju visok afinitet prema polipeptidu C10orf54 ili polipeptidnom fragmentu ili njegovom epitopu. U jednom aspektu, antitela korišćena u skladu sa metodima obezbeđenim ovde imaju viši afinitet prema C10orf54 antitelu nego poznata antitela (npr., komercijalno dostupna monoklonska antitela diskutovana ovde na drugom mestu). U jednom specifičnom aspektu, antitela korišćena u skladu sa metodima obezbeđenim ovde imaju 2 do 10 (ili više) puta viši afinitet prema antigenu C10orf54 nego poznato antitelo na C10orf54, što je procenjeno tehnikama opisanim ovde ili poznatim stručnjaku u ovoj oblasti (npr., BIAcore esej). U skladu sa ovim aspektima, afinitet antitela je, u jednom aspektu, procenjen BIAcore esejem.
[0208] U jednom specifičnom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži aminokiselinsku sekvencu VH domena i/ili aminokiselinsku sekvencu VL domena, kodiranu nukleotidnom sekvencom koja hibridizuje sa (1) komplementom nukleotidne sekvence koja kodira bilo koji jedan od VH i/ili VL domena, što je prikazano u Tabelama 2 i 4-10, u strogim uslovima (npr., hibridizacija za DNK vezanu za filter u 6x natrijum hlorid/natrijum citratu (SSC) na oko 45° C, iza čega sledi jedno ili više pranja u 0,2xSSC/0,1% SDS na oko 50-65° C) u vrlo strogim uslovima (npr., hibridizacija za nukleinsku kiselinu vezanu za filter u 6xSSC na oko 45° C, iza čega sledi jedno ili više pranja u 0,1xSSC/0,2% SDS na oko 68° C) ili u drugim strogim uslovima hibridizacije koji su poznati stručnjacima u ovoj oblasti (videti, na primer, Ausubel, F.M. et al., eds., 1989, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. I, Green Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., New York na stranama 6.3.1-6.3.6 i 2.10.3).
[0209] U jednom drugom aspektu, antitelo koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) sadrži aminokiselinsku sekvencu CDR VH ili aminokiselinsku sekvencu CDR VL koju kodira nukleotidna sekvenca koja hibridizuje sa komplementom nukleotidne sekvence koja kodira bilo koji jedan od CDR VH i/ili CDR VL što je prikazano u Tabelama 2 i 4-10, u strogim uslovima (npr., hibridizacija za DNK vezanu za filter u 6X SSC na oko 45° C, iza čega sledi jedno ili više pranja u 0,2X SSC/0,1% SDS na oko 50-65° C), u vrlo strogim uslovima (npr., hibridizacija za nukleinsku kiselinu vezanu za filter u 6X SSC na oko 45° C, iza čega sledi jedno ili više pranja u 0,1X SSC/0,2% SDS na oko 68° C) ili pod drugim strogim uslovima hibridizacije koji su poznati stručnjacima u ovoj oblasti (videti, na primer, Ausubel, F.M. et al., eds., 1989, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. I, Green Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., New York na stranama 6.3.1-6.3.6 i 2.10.3)
[0210] U nekim aspektima, antitela obezbeđena ovde su hemijski modifikovana, npr., kovalentnim kačenjem bilo kog tipa molekula za antitelo. Na primer, ali ne kao ograničenje, derivati antitela uključuju antitela koja su hemijski modifikovana, npr., glikozilacijom, acetilacijom, pegilacijom, fosforilacijom, amidacijom, derivacijom poznatim zaštitnim/blokirajućim grupama, proteolitičkim cepanjem, vezivanjem za ćelijski ligand ili neki drugi protein itd. Bilo koja od brojnih hemijskih modifikacija se može vršiti poznatim tehnikama, uključujući, ali bez ograničavanja na specifično hemijsko cepanje, acetilaciju, formulaciju, metaboličku sintezu tunikamicina itd. Pored toga, antitelo može da sadrži jednu ili više neklasičnih aminokiselina.
21
[0211] Ovde su obezbeđena i antitela koja se vezuju za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54) koji sadrži okvirni region poznat stručnjacima u ovoj oblasti (npr., humani ili ne-humani fragment). Okvirni region može se, na primer, javljati u prirodi ili konsenzusni okvirni regioni. U nekim specifičnim aspektima, okvirni region antitela obezbeđenog ovde je human (videti, npr., Chothia et al., 1998, J. Mol. Biol. 278:457-479 za spisak humanih okvirnih regiona). Videti i Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest (U.S. Department of Health and Human Services, Washington, D.C.) 5th ed.
[0212] Ovde su obezbeđena i antitela koja se vezuju za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54), gde antitela sadrže aminokiselinsku sekvencu jednog ili više CDR mišjeg monoklonskog antitela 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A, uključujući i one obezbeđene u Tabelama 5-33 ili njihove humanizovane varijante (npr., CDR VH ili CDR VL iz Tabela 5-11) i humane okvirne regione sa jednom ili više aminokiselinskih supstitucija na jednom, dva, tri ili više sledećih ostataka: (a) retki okvirni ostaci koji se razlikuju između okvira mišjeg antitela (npr., okvir donorskog antitela) i okvir humanog antitela (npr., okvir akceptorskog antitela); (b) ostaci Venier-ove zone kad se razlikuju između okvira donorskog antitela i okvira akceptorskog antitela; (c) ostaci međulančanog pakovanja na dodiru VH/VL koji se razlikuju između okvira donorskog antitela i okvira akceptorskog antitela; (d) kanonski ostaci koji se razlikuju u sekvencama između okvira donorskog antitela i okvira akceptorskog antitela, naročito okvirnih regiona suštinskih za definisanje kanonske klase CDR petlji mišjeg antitela; (e) ostaci koji su susedni sa CDR; (g) ostaci koji su sposobni da interaguju sa antigenom; (h) ostaci koji su sposobni da interaguju sa CDR i (i) kontaktni ostaci između VH domena i VL domena. U određenim aspektima, antitela koja se vezuju za C10orf54 antigen, koja sadrže humane okvirne regione sa jednom ili više aminokiselinskih supstitucija na jednom, dva, tri ili više gore identifikovanih ostataka su antagonistička C10orf54 antitela. U određenim aspektima, antitela koja se vezuju za C10orf54 antigen, koja sadrže humane okvirne regione sa jednom ili više aminokiselinskih supstitucija na jednom, dva, tri ili više gore identifikovanih ostataka su agonistička C10orf54 antitela.
[0213] Antitela obezbeđena ovde uključuju, ali nisu ograničena na, sintetička antitela, monoklonska antitela, rekombinantno proizvedena antitela, multispecifična antitela (uključujući bispecifična antitela), humana antitela, humanizovana antitela, kamilizovana antitela, himerna antitela, intratela, anti-idiotipska (anti-Id) antitela i funkcionalne fragmente bilo kog od gornjih. Neograničavajući primeri funkcionalnih fragmenata uključuju jednolančane Fvs (scFv) (npr., uključujući monospecifične, bispecifične itd.), Fab fragmente, F(ab') fragmente, F(ab)2fragmente, F(ab')2fragmente, Fvs sa vezanim disulfidima (sdFv), Fd fragmente, Fv fragmente, dijatelo, trijatelo, tetratelo i minitelo.
[0214] Konkretno, antitela obezbeđena ovde uključuju molekule imunoglobulina i imunološki aktivne delove molekula imunoglobulina, npr., molekule koji sadrže mesto vezivanja antigena koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54). Molekuli imunoglobulina obezbeđeni ovde mogu biti bilo kog tipa (npr., IgG, IgE, IgM, IgD, IgA i IgY), klase (npr., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 i IgA2) ili podklase imunoglobulinskih molekula.
[0215] Varijante i derivati antitela uključuju funkcionalne fragmente antitela koji zadržavaju sposobnost da se vežu za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida
21
C10orf54, epitop C10orf54). Primeri funkcionalnih fragmenata uključuju Fab fragmente (fragment antitela koji sadrži domen za vezivanje antigena i sadrži lak lanac i deo teškog lanca vezane disulfidnim mostom); Fab' (fragment antitela koji sadrži domen za vezivanje antigena koji sadrži Fab i dodatni deo teškog lanca kroz zglobni region); F(ab')2(dva Fab' molekula spojena međulančanim disulfidnim vezama u zglobnim regionima teških lanaca; Fab' molekuli mogu biti usmereni prema istim ili različitim epitopima); bispecifičan Fab (Fab molekul koji ima dva domena za vezivanje antigena, od kojih svaki može biti usmeren prema različitom epitopu); jednolančani Fab koji sadrži varijabilni region, poznat i kao sFv, (varijabilni region koji determiniše vezivanje antigena pojedinačnog lakog i teškog lanca antitela povezanih među sobom lancem od 10-25 aminokiselina); disulfidno vezan Fv ili dsFv (varijabilni region koji determiniše vezivanje antigena pojedinačnog lakog i teškog lanca antitela povezanih među sobom disulfidnom vezom); kamilizovan VH (varijabilni region koji determiniše vezivanje antigena pojedinačnog teškog lanca antitela u kom su neke aminokiseline na interfejsu VH one nađene u teškom lancu prirodnih kamiljih antitela); bispecifičan sFv (sFv ili dsFv molekul koji ima dva domena za vezivanje antigena, od kojih svaki može biti usmeren prema različitom epitopu); dijatelo (dimerizovan sFv formiran kad se VH domen prvog sFv sastavi sa VL domenom drugog sFv i VL domen prvog sFv sastavi sa VH domenom drugog sFv; dva regiona za vezivanje antigena dijatela mogu biti usmerena prema istim ili različitim epitopima) i trijatelo (trimerizovano sFv, formirano na sličan način kao dijatelo, ali u kom su kreirana tri domena za vezivanje antigena u jednom jedinom kompleksu; tri domena za vezivanje antigena mogu biti usmerena prema istim ili različitim epitopima). Derivati antitela takođe uključuju jednu ili više CDR sekvenci mesta za kombinovanje iz antitela. CDR sekvence mogu biti spojene zajedno na "potki" (scaffold) kad su prisutne dve ili više CDR sekvenci. U određenim aspektima, antitelo sadrži jednolančani Fv ("scFv"). scFvs su fragmenti antitela koji sadrže VH i VL domene antitela, gde su ovi domeni prositni u jednom polipeptidnom lancu. Uopšteno, scFv polipeptid još sadrži polipeptidni linker između VH i VL domena koji omogućava scFv da formira željenu strukturu za vezivanje antigena. Za pregled cFvs, videti Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol.113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, str.
269-315 (1994).
[0216] Antitela obezbeđena ovde mogu biti monospecifična, bispecifična, trispecifična ili veće multispecifičnosti. Multispecifična antitela mogu biti specifična za različite epitope polipeptida C10orf54 ili mogu biti specifična i za polipeptid C10orf54 i za heterologne epitope, kao što je heterologan polipeptid ili materijal čvrste podloge. U nekim specifičnim aspektima, antitela obezbeđena ovde su monospecifična za dati epitop polipeptida C10orf54 i ne vezuju se za druge epitope.
[0217] Ovde su obezbeđeni i fuzioni proteini koji sadrže antitelo obezbeđeno ovde koje se vezuje za C10orf54 antigen i heterologan polipeptid. U nekim aspektima, heterologan polipeptid sa kojim je antitelo fuzionisano je koristan za ciljanje antitela u ćelije koje imaju C10orf54 eksprimiran na svojoj površini.
[0218] Ovde su obezbeđeni i paneli antitela koja se vezuju za C10orf54 antigen. U nekim specifičnim aspektima, paneli antitela imaju različite konstante brzine asocijacije, različite konstante brzine disocijacije, različite afinitete prema C10orf54 antigenu i/ili različite specifičnosti za C10orf54 antigen. U nekim aspektima, paneli sadrže ili se sastoje od oko 10, oko 25, oko 50, oko 75, oko 100, oko 125, oko 150, oko 175, oko 200, oko 250, oko 300, oko 350, oko 400, oko 450, oko 500, oko 550, oko 600, oko 650, oko 700, oko 750, oko 800, oko
21
850, oko 900, oko 950 ili oko 1000 antitela ili više. Paneli antitela se mogu koristiti, na primer, u pločama sa 96 ili 384 udubljenja, kao što su za eseje kao što je ELISA.
KONJUGATI ANTITELA I FUZIONI PROTEINI
[0219] U nekim aspektima, antitela obezbeđena ovde su konjugovana ili rekombinantno fuzionisana sa dijagnostičkim, detektabilnim ili terapijskim agensima ili bilo kojim drugim molekulima. Konjugovana ili rekombinantno fuzionisana antitela mogu biti korisna, npr., za praćenje ili prognoziranje početka, razvoja, napredovanja i/ili jačine bolesti posredovane C10orf54, kao deo kliničke procedure testiranja, kao što je određivanje efikasnosti određene terapije.
[0220] Takva diajgnoza i detekcija se može postići, na primer, kuplovanjem antitela sa detektabilnim supstancama uključujući, ali bez ograničenja, razne enzime kao što su, ali bez ograničenja, peroksidazu rena, alkalnu fosfatazu, beta galaktozidazu ili acetilholinesterazu; prostetičke grupe, kao što su, ali bez ograničenja, streptavidin/biotin i avidin/biotin; fluorescentne materijale, kao što su, ali bez ograničenja, umbeliferon, fluorescein, fluorescein izotiocijanat, rodamin, dihlorotriazinilamin fluorescein, dansil hlorid ili fikoeritrin; luminiscentne materijale, kao što je, ali bez ograničenja, luminol; bioluminiscentne materijale, kao što su, ali bez ograničenja, luciferaza, luciferin i aekvorin; hemiluminiscentne materijale, kao što je, ali bez ograničenja, jedinjenje na bazi akridinijuma ili HALOTAG; radioaktivne materijale, kao što su, ali bez ograničenja, jod (<131>I,<125>I,<123>I i<121>I,), ugljenik (<14>C), sumpor (<35>S), tricijum (<3>H) indijum (<115>In,<113>In,<112>In i<111>In,), tehnicijum (<99>Tc), talijum (<201>Ti), galijum (<68>Ga,<67>Ga), paladijum (<103>Pd), molibden (<99>Mo), ksenon (<133>Xe), fluor (<18>F),<153>Sm,<177>Lu,<159>Gd,<149>Pm,<140>La,<175>Yb,<166>Ho,<90>Y,<47>SC,<186>Re,<188>Re,<142>Pr,<105>Rh,<97>Ru,<68>Ge,<57>Co,<65>Zn,<85>Sr,<32>P,<153>Gd,<169>Yb,<51>Cr,<54>Mn,<75>Se,<113>Sn i<117>Sn i metale koji emituju pozitrone, korišćenjem raznih pozitron-emisionih tomografija i neradioaktivnih paramagnetnih metalnih jona.
[0221] Ovde su obezbeđena i antitela koja su konjugovana ili rekombinantno fuzionisana sa terapijskom funkcionalnom grupom (ili više terapijskih grupa), kao i njihove upotrebe. Antitelo može biti konjugovano ili rekombinantno fuzionisano sa terapijskim grupama, kao što je citotoksin, npr., citostatički ili citocidni agensi, terapijski agens ili radioaktivan metalni jon, npr., alfa emiteri. Citotoksin ili citotoksično sredstvo uključuje bilo koji agens koji je štetan za ćelije. Terapijske grupe uključuju, ali nisu ograničene na, antimetabolite (npr., metotreksat, 6-merkaptopurin, 6-tioguanin, citarabin, 5-fluorouracil dekarbazin); sredstva za alkilovanje (npr., mehloretamin, tiotepa, hlorambucil, melfalan, karmustin (BCNU) i lomustin (CCNU), ciklofosfamid, busulfan, dibromomanitol, streptozotocin, mitomicin C i cisdihlorodiamin platina (II) (DDP) i cisplatina); antracikline (npr., daunorubicin (ranije daunomicin) i doksorubicin); antibiotike (npr., d aktinomicin (ranije aktinomicin), bleomicin, mitramicin i antramicin (AMC)); molekule auristatina (npr., auristatin PHE, auristatin F, monometil auristatin E, briostatin 1 i solastatin 10; videti Woyke et al., Antimicrob. Agents Chemother. 46:3802-8 (2002), Woyke et al., Antimicrob. Agents Chemother. 45:3580-4 (2001), Mohammad et al., Anticancer Drugs 12:735-40 (2001), Wall et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 266:76-80 (1999), Mohammad et al., Int. J. Oncol. 15:367-72 (1999); hormone (npr., glukokortikoide, progestine, androgene i estrogene), inhibitore enzima za popravku DNK (npr., etopozid ili topotekan), inhibitore kinaze (npr., jedinjenje ST1571 imatinib mezilat (Kantarjian et al., Clin Cancer Res. 8(7):2167-76 (2002)); citotoksična sredstva (npr., paklitaksel, citohalazin B, gramicidin D, etidijum bromid, emetin, mitomicin, etopozid, tenopozid, vinkristin, vinblastin, kolhicin, doksorubicin, daunorubicin, dihidroksi
21
antracin dion, mitoksantron, mitramicin, aktinomicin D, 1-dehidrotestosteron, glukokortikoidi, prokain, tetrakain, lidokain, propranolol i puromicin i njihovi analozi ili homolozi i ona jedinjenja opisana u U.S. patentima br. 6,245,759, 6,399,633, 6,383,790, 6,335,156, 6,271,242, 6,242,196, 6,218,410, 6,218,372, 6,057,300, 6,034,053, 5,985,877, 5,958,769, 5,925,376, 5,922,844, 5,911,995, 5,872,223, 5,863,904, 5,840,745, 5,728,868, 5,648,239, 5,587,459); inhibitore farnezil transferaze (npr., R115777, BMS-214662 i oni opisani u, na primer, U.S. patentima br: 6,458,935, 6,451,812, 6,440,974, 6,436,960, 6,432,959, 6,420,387, 6,414,145, 6,410,541, 6,410,539, 6,403,581, 6,399,615, 6,387,905, 6,372,747, 6,369,034, 6,362,188, 6,342,765, 6,342,487, 6,300,501, 6,268,363, 6,265,422, 6,248,756, 6,239,140, 6,232,338, 6,228,865, 6,228,856, 6,225,322, 6,218,406, 6,211,193, 6,187,786, 6,169,096, 6,159,984, 6,143,766, 6,133,303, 6,127,366, 6,124,465, 6,124,295, 6,103,723, 6,093,737, 6,090,948, 6,080,870, 6,077,853, 6,071,935, 6,066,738, 6,063,930, 6,054,466, 6,051,582, 6,051,574 i 6,040,305); inhibitore topoisomeraze (npr., kamptotecin; irinotekan; SN-38; topotekan; 9-aminokamptotecin; GG-211 (GI 147211); DX-8951f; IST-622; rubitekan; pirazoloakridin; XR-5000; saintopin; UCE6; UCE1022; TAN-1518A; TAN 1518B; KT6006; KT6528; ED-110; NB-506; ED-110; NB-506 i rebekamicin); bulgarein; vezivno jedinjenje za mali žljeb DNK, kao što su Hehst boja 33342 i Hehst boja 33258; nitidin; fagaronin; epiberberin; koralin; beta-lapačon; BC-4-1; bisfosfonate (npr., alendronat, cimadront, klodronat, tiludronat, etidronat ibandronat, neridronat, olpandronat, risedronat, piridronat, pamidronat, zolendronat) inhibitore HMG-CoA reduktaze, (npr., lovastatin, simvastatin, atorvastatin, pravastatin, fluvastatin, statin, cerivastatin, leskol, lupitor, rosuvastatin i atorvastatin); antisens oligonukleotide (npr., one opisane u U.S. patentima br.
6,277,832, 5,998,596, 5,885,834, 5,734,033 i 5,618,709); inhibitore adenozin dezaminaze (npr., Fludarabin fosfat i 2-hlorodezoksiadenozin); ibritumomab tiuksetan (Zevalin®); tositumomab (Bexxar®)) i njihove farmaceutski prihvatljive soli, solvate, klatrate i prolekove.
[0222] Dalje, antitela obezbeđena ovde mogu biti konjugovana ili rekombinantno fuzionisana sa terapijskom funkcionalnom grupom ili funkcionalnom grupom leka koji modifikuje dati biološki odgovor. Terapijske grupe ili grupe leka ne treba da se tumače kao ograničene na klasične hemijske terapijske agense. Na primer, funkcionalna grupa leka može biti protein, peptid ili polipeptid, koji ima željenu biološku aktivnost. Takvi proteini mogu da uključuju, na primer, toksin kao što je abrin, ricin A, pseudomonas egzotoksin, toksin kolere ili toksin difterije; protein kao što je faktor tumorske nekroze, γ-interferon, α-interferon, faktor rasta nerava, faktor rasta izveden iz krvnih pločica, tkivni aktivator plazminogena, apoptotički agensi, npr., TNF-γ, TNF-γ, AIM I (videti međunarodnu objavu br. WO 97/33899), AIM II (videti, međunarodnu objavu br. WO 97/34911), Fas ligand (Takahashi et al., 1994, J. Imunol., 6:1567-1574) i VEGF (videti, međunarodnu objavu br. WO 99/23105), antiangiogeni agensi, npr., angiostatin, endostatin ili komponenta puta koagulacije (npr., faktor); ili, modifikator biološkog odgovora, kao što su, na primer, limfokin (npr. interferon gama interleukin-1 ("IL-1") interleukin-2 ("IL-2") interleukin-5 ("IL-5") interleukin-6 ("IL-6") interleukin-7 ("IL-7") interleukin 9 ("IL-9") interleukin-10 ("IL-10") interleukin-12 ("IL-12") interleukin-15 ("IL-15") interleukin-23 ("IL-23"), faktor stimulacije granulocita i makrofaga ("GM-CSF") i faktor stimulacije kolonija granulocita ("G-CSF")) ili faktor rasta (npr., hormon rasta ("GH")) ili agensi za koagulaciju (npr., kalcijum, vitamin K, tkivni faktori, kao što su, ali bez ograničenja, Hageman faktor (faktor XII), kininogen visoke molekulske težine (HMWK), prekalikrein (PK), koagulacioni proteini-faktori II (protrombin), faktor V, XIIa, VIII, XIIIa, XI, XIa, IX, IXa, X, fosfolipid i monomer fibrina).
[0223] Ovde su obezbeđena i antitela koja su rekombinantno fuzionisana ili hemijski konjugovana (kovalentne ili nekovalentne konjugacije) sa heterolognim proteinom ili
22
polipeptidom (ili njegovim fragmentom, na primer, sa polipeptidom od oko 10, oko 20, oko 30, oko 40, oko 50, oko 60, oko 70, oko 80, oko 90 ili oko 100 aminokiselina) da bi se napravili fuzioni proteini, kao i njihove upotrebe. Konkretno, ovde su obezbeđeni i fuzioni proteini koji sadrže fragment za vezivanje antigena antitela obezbeđenih ovde (npr., Fab fragment, Fd fragment, Fv fragment, F(ab)2fragment, VH domen, CDR VH, VL domen ili CDR VL) i heterologan protein, polipeptid ili peptid. U jednom aspektu, heterologan protein, polipeptid ili peptid sa kojim je antitelo fuzionisano je koristan za ciljanje antitelom u određen tip ćelija, kao što je ćelija koja eksprimira C10orf54 ili C10orf54 receptor. Na primer, antitelo koje se vezuje za receptor na ćelijskoj površini koji eksprimira određeni tip ćelija (npr. imuna ćelija) može biti fuzionisano ili konjugovano sa modifikovanim antitelom obezbeđenim ovde.
[0224] Konjugovani ili fuzioni protein može da sadrži bilo koje antitelo obezbeđeno ovde opisano ovde i heterologan polipeptid. U jednom aspektu, konjugovan ili fuzioni protein obezbeđen ovde sadrži VH ili VL domen bilo kog jednog od mišjih monoklonskih antitela 5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 6E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A ili 305A, kao što je prikazano u Tabeli 2 i heterologan polipeptid. U jednom drugom aspektu, konjugovan ili fuzioni protein obezbeđen ovde sadrži VH domen koji ima aminokiselinsku sekvencu bilo kog jednog od VH domena prikazanog u Tabelama 5-33 i/ili VL domen koji ima aminokiselinsku sekvencu bilo kog jednog od VL domena prikazanog u Tabelama 5-33 i heterologan polipeptid. U jednom drugom aspektu, konjugovan ili fuzioni protein obezbeđen ovde sadrži jedan ili više CDR VH koji imaju aminokiselinsku sekvencu bilo kog jednog od CDR VH prikazanog u Tabelama 5-33 i heterologous polipeptid. U jednom drugom aspektu, konjugovan ili fuzioni protein sadrži jedan ili više CDR VL koji ima aminokiselinsku sekvencu bilo kog jednog od CDR VL prikazanog u Tabelama 5-33 i heterologan polipeptid. U jednom drugom aspektu, konjugovan ili fuzioni protein obezbeđen ovde sadrži bar jedan VH domen i bar jedan VL domen prikazan u Tabelama 5-33 i heterologan polipeptid. Au jednom drugom aspektu, konjugovan ili fuzioni protein obezbeđen ovde sadrži bar jedan CDR VH i bar jedan CDR VL prikazan u Tabelama 5-33 i heterologan polipeptid.
[0225] Pored toga, antitelo obezbeđeno ovde može biti konjugovano sa terapijskim funkcionalnim grupama kao što je radioaktivan metalni jon, kao što su alfa-emiteri kao što je<213>Bi ili makrociklični helatori korisni za konjugovanje radiometalnih jona, uključujući ali bez ograničenja,<131>In,<131>LU,<131>Y,<131>Ho,<131>Sm, sa polipeptidima. U određenim aspektima, makrociklični helator je 1,4,7,10-tetraazaciklododekan-N,N',N",N"'-tetrasirćetna kiselina (DOTA), koja se može spojiti sa antitelom preko molekula linkera. Takvi linker molekuli su obično poznati u struci i opisani u Denardo et al., 1998, Clin Cancer Res. 4(10):2483-90; Peterson et al., 1999, Bioconjug. Chem. 10(4):553-7 i Zimmerman et al., 1999, Nucl. Med. Biol. 26(8):943-50.
[0226] Štaviše, antitela obezbeđena ovde mogu biti fuzionisana sa marker sekvencom, kao što je peptid, da olakšaju prečišćavanje. U nekim specifičnim aspektima, marker aminokiselinska sekvenca je heksa-histidin peptid, kao što je oznaka obezbeđena u pQE vektoru (QIAGEN, Inc.), između ostalih, od kojih su mnogi komercijalno dostupni. Kao što je opisano u Gentz et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-824, na primer, heksa-histidin obezbeđuje pogodno prečišćavanje fuzionog proteina. Ostale peptidne oznake korisne za prečišćavanje uključuju, ali nisu ograničene na, hemaglutininsku ("HA") oznaku, koja odgovara epitopu izvedenom iz hemaglutininskog proteina influence (Wilson et al., 1984, Cell 37:767) i "FLAG" oznaku. Metodi za fuzionisanje ili konjugovanje terapijskih funkcionalnih grupa (uključujući polipeptide) sa antitelima su dobro poznati, videti, npr., Arnon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", u Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), str. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery", u Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), str.623-53 (Marcel Dekker, Inc.1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", u Monoclonal Antibodies 84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), str.475-506 (1985); "Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy", u Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), str.303-16 (Academic Press 1985), Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58; U.S. patente br.
5,336,603, 5,622,929, 5,359,046, 5,349,053, 5,447,851, 5,723,125, 5,783,181, 5,908,626, 5,844,095, i 5,112,946; EP 307,434; EP 367,166; EP 394,827; PCT objave WO 91/06570, WO 96/04388, WO 96/22024, WO 97/34631 i WO 99/04813; Ashkenazi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 10535-10539, 1991; Traunecker et al., Nature, 331:84-86, 1988; Zheng et al., J. Immunol., 154:5590-5600, 1995; Vil et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:11337-11341, 1992.
[0227] Fuzioni proteini mogu biti generisani, na primer, tehnikama mešanja (shuffling) gena, mešanja motiva, mešanja egzona i/ili mešanja kodona (kolektivno zvanih "mešanje (shuffling) DNK"). Mešanje DNK se može primeniti da bi se promenile aktivnosti antitela obezbeđenih ovde (npr., antitela sa većim afinitetima i manjim brzinama disocijacije). Videti, uopšteno, U.S. patentima br. 5,605,793, 5,811,238, 5,830,721, 5,834,252 i 5,837,458; Patten et al., 1997, Curr. Opinion Biotechnol.8:724-33; Harayama, 1998, Trends Biotechnol.16(2):76-82; Hansson et al., 1999, J. Mol. Biol.287:265-76; and Lorenzo and Blasco, 1998, Biotechniques 24(2):308- 313. Antitela ili kodirana antitela, se mogu menjati podvrgavanjem nasumičnoj mutagenezi sa DNK-polimerazom sklonom greškama pomoću PCR, nasumičnoj inserciji nukleotida ili drugim metodima pre rekombinacije. Polinukleotid koji kodira antitelo obezbeđeno ovde se može rekombinovati sa jednom ili više komponenata, motiva, odeljaka, delova, domena, fragmenata itd. jednog ili više heterolognih molekula.
[0228] Antitelo obezbeđeno ovde može takođe biti konjugovano sa drugim antitelom da se formira heterokonjugat antitela kao što je opisano u U.S. patentu br.4,676,980.
[0229] Terapijska funkcionalna grupa ili lek konjugovan ili rekombinantno fuzionisan sa antitelom obezbeđenim ovde koje se vezuje za C10orf54 antigen treba da se izabere tako da postigne željene profilaktičke ili terapijske efekte. U određenim aspektima, antitelo je modifikovano antitelo. Kliničar ili neki drugi medicinski radnik bi trebalo da razmotri sledeće prilikom odlučivanja koju terapijsku funkcionalnu grupu ili lek da konjuguje ili rekombinantno fuzioniše sa antitelom obezbeđenim ovde: prirodu bolesti, jačinu bolesti i stanje subjekta.
[0230] Antitela obezbeđena ovde mogu i da se zakače na čvrste podloge, koje su naročito korisne u imunoesejima ili prečišćavanju ciljnog antigena. Takve čvrste podloge uključuju, ali nisu ograničene na, staklo, celulozu, poliakrilamid, najlon, polistiren, polivinil hlorid ili polipropilen.
KONJUGAT ANTITELO-LEK (ADC)
[0231] U nekim aspektima, ovde su obezbeđeni konjugati antitelo-lek, uključujući konjugate antitelo-lek sledećih formula (Ia) i (Ib):
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli;
gde je:
A je antitelo ili fragment antitela;
dva prikazana cisteinska ostatka su iz otvorene cistein-cistein disulfidne veze u A; svaki od X i X' je nezavisno O, S, NH ili NR<1>, gde je R<1>C1-6alkil;
Waje =N-, =CH-, =CHCH2-, =C(R<2>)- ili =CHCH(R<2>)-; Wb-NH-, -N(R<1>)-, -CH2-, -CH2-NH-, -CH2-N(R<1>)-, -CH2CH2-, -CH(R<2>)- ili -CH2CH(R<2>)-; gde su R<1>i R<2>nezavisno C1-6alkil;
CTX je citotoksin;
R je bilo koja hemijska grupa; ili je R odsutan;
svaki od L<1>, L<2>i L<3>je nezavisno linker izabran iz grupe koja se sastoji od -O-, -C(O)-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NH-, -NCH3-, -(CH2)q-, -NH(CH2)2NH-, -OC(O)-, -CO2-,-NHCH2CH2C(O)-, -C(O)NHCH2CH2NH-, -NHCH2C(O)-, -NHC(O)-, -C(O)NH-, -NCH3C(O)-, -C(O)NCH3-, -(CH2CH2O)p, -(CH2CH2O)pCH2CH2-, -CH2CH2-(CH2CH2O)p-, -OCH(CH2O-)2, -(AA)r-, ciklopentanil, cikloheksanil, nesupstituisanog fenilenila i fenilenila supstituisanog 1-nim ili 2 supstituenta izabrana iz grupe koja se
22
sastoji od halo, CF3-, CF3O-, CH3O-, -C(O)OH, -C(O)OC1-3alkil, -C(O)CH3, -CN, -NH-, -NH2, -O-, -OH,-NHCH3, -N(CH3)2i C1-3alkil;
svaki od a, b i c je nezavisno ceo broj 0, 1, 2 ili 3, uz uslov da je bar jedan od a, b ili c 1; svaki od k i k' is je nezavisno ceo broj 0 ili 1;
svaki p je nezavisno ceo broj od 1 do 14;
svaki q je nezavisno ceo broj od 1 do 12;
svaki AA je nezavisno aminokiselina;
svaki r je od 1 do 12;
m je ceo broj od 1 do 4;
n je ceo broj od 1 do 4 i
veza predstavlja jednogubu ili dvogubu vezu.
[0232] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Ib), R je izabran iz grupe koja se sastoji od W, (L<1>)a, (L<2>)b, (L<3>)c, Z, W-(L<1>)a-(L<2>)b-(L<3>)c, (L<1>)a-(L<2>)b-(L<3>)c-Z i W-(L<1>)a-(L<2>)b-(L<3>)c-Z, kako je ovde definisano. U određenim aspektima, R je izabran iz grupe koja se sastoji od W, (L<1>)a, (L<2>)b, (L<3>)ci W-(L<1>)a-(L<2>)b-(L<3>)c. U određenim aspektima, R je izabran iz grupe koja se sastoji od Z, (L<1>)a-(L<2>)b-(L<3>)c-Z i W-(L<1>)a-(L<2>)b-(L<3>)c-Z.
[0233] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Ia) ili (Ib), n je ceo broj 2 (npr., dve međulančane disulfidne veze težak lanac-lak lanac). U određenim aspektima, n je ceo broj 3 (npr., dve međulančane disulfidne veze težak lanac-lak lanac i jedna zglobna međulančana disulfidna veza težak lanac-težak lanac). U određenim aspektima, n je ceo broj 4 (npr., dve međulančane disulfidne veze težak lanac-lak lanac i dve zglobne međulančane disulfidne veze težak lanac-težak lanac).
[0234] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Ib), R je detektabilna proba. U određenim aspektima, R je fluorofora, hromofora, radioobeleživač, enzim, ligand, antitelo ili fragment antitela. U određenim aspektima, R je ligand (npr., ligand specifičan za receptor na tumorskoj ćeliji, kao što je specifičan membranski antigen prostate, ili na virusno inficiranoj ćeliji, kao što je ćelija inficirana HIV-om).
[0235] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Ib), R je vezan za ostatak linkerskog molekula preko amidne, N-(C1-6alkil)amidne, karbamatne, N-(C1-6alkil)karbamatne, aminske, N-(C1-6alkil)aminske, etarske, tioetarske, ureine, N-(C1-6alkil)ureine ili N,N-di(C1-6alkil)ureine veze.
[0236] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Ia) ili (Ib), svaki L<1>, L<2>i L<3>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -NHC(O)-, -C(O)NH-,-(CH2CH2O)p, -(CH2CH2O)pCH2CH2-, -CH2CH2-(CH2CH2O)p-, -OCH(CH2O-)2,-(AA)r-, nesupstituisanog fenilenila i fenilenila supstituisanog 1-nim ili 2 supstituenta izabrana iz grupe koja se sastoji od halo, CF3-, CF3O-, CH3O-, -C(O)OH, -C(O)OC1-3alkil, -C(O)CH3, -CN, -NH-, -NH2, -O-, -OH, -NHCH3, -N(CH3)2i C1-3alkil; gde su a, b i c svaki nezavisno 0 ili 1 i svaki p i r je nezavisno 1, 2 ili 3. U određenim aspektima, jedan ili više L<1>, L<2>i L<3>je -(AA)r-, gde je -(AA)r- ValCit (npr., prva aminokiselina je valin, druga aminokiselina je citrulin, a r je 1). U određenim aspektima, jedan ili više L<1>, L<2>i L<3>je -(AA)r-, gde je -(AA)r- ValAla (npr., prva aminokiselina je valin, druga aminokiselina je alanin i r je 1). U određenim aspektima, jedan ili više L<1>, L<2>i L<3>je fenilenil supstituisan -C(O)OH i -NH2grupom. U određenim aspektima, jedan ili više L<1>, L<2>i L<3>je fenilenil supstituisan -C(O)O- i -NH- grupom. U određenim aspektima, jedan ili više L<1>, L<2>i L<3>je fenilenil supstituisan -OC(O)- i -NH- grupom. U određenim aspektima, jedan ili više L<1>, L<2>i L<3>je fenilenil supstituisan sa -O- i -NH-. U određenim aspektima, jedan ili više L<1>, L<2>i L<3>je para aminobenzil (PAB), koji je opciono supstituisan sa -C(O)O-, -OC(O)- ili -O-. U određenim aspektima, L<1>je -(CH2)q-, L<2>je odsutan, L<3>je odsutan, a CTX je vezan za (L<1>)a-(L<2>)b-(L<3>)cpreko amidne veze. U određenim aspektima, L<1>je -(CH2)q-, L<2>je -(OCH2CH2)p-, L<3>je odsutan, a CTX je vezan za (L<1>)a-(L<2>)b-(L<3>)cpreko amidne veze. U određenim aspektima, L<1>je -(CH2CH2O)p-, L<2>je -(CH2)q-, L<3>je odsutan, a CTX je vezan za (L<1>)a-(L<2>)b-(L<3>)cpreko amidne veze. U određenim aspektima, svaki L<1>je nezavisno izabranih iz grupe koja se sastoji od -(CH2CH2O)pCH2CH2- i -CH2CH2-(CH2CH2O)p-, L<2>je odsutan, L<3>je odsutan, a CTX je vezan za (L<1>)a-(L<2>)b-(L<3>)cpreko amidne veze. U određenim aspektima, svaki L<1>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -(CH2)q-, -(CH2CH2O)p,-(CH2CH2O)pCH2CH2-, -CH2CH2-(CH2CH2O)p- i -C(O)-, L<2>je Val-Cit, L<3>je PAB, a CTX je vezan za (L<1>)a-(L<2>)b-(L<3>)cpreko amidne veze. U određenim aspektima, svaki L<1>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -(CH2)q-, -(CH2CH2O)p, -(CH2CH2O)pCH2CH2-, -CH2CH2-(CH2CH2O)p- i -C(O)-, L<2>je Val-Cit, L<3>je PAB, a CTX je vezan za (L<1>)a-(L<2>)b-(L<3>)cpreko amidne veze. U određenim aspektima, svaki L<1>je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od -(CH2)q-, -(CH2CH2O)p, -(CH2CH2O)pCH2CH2-, -CH2CH2-(CH2CH2O)p- i -C(O)-, L<2>je Val-Ala, L<3>je PAB, a CTX je vezan za (L1)a-(L<2>)b-(L<3>)cpreko amidne veze.
[0237] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Ia) ili (Ib), CTX je izabran iz grupe koja se sastoji od stabilizatora tubulina, destabilizatora tubulina, alkilatora DNK, vezivnog jedinjenja za mali žljeb DNK, interkalatora DNK, inhibitora topoizomeraze I, inhibitora topoizomeraze II, inhibitora giraze, inhibitora sinteze proteina, inhibitora proteozoma i anti-metabolita.
[0238] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Ia) ili (Ib), CTX je hemoterapijski agens. Stručnjaci uobičajenog nivoa u ovoj oblasti će biti svesni odgovarajućih hemoterapijskih agenasa kao što su dati, na primer u Chu, E., DeVite, V. T., 2012, Physicians' Cancer Chemotherapy Drug Manual 2012 (Jones & Bartlett Learning Oncology) i sličnim dokumentima.
[0239] U određenim aspektima, CTX može biti bilo koji hemoterapijski agens odobren od strane FDA. U određenim aspektima, CTX može biti bilo koji dostupan hemoterapijski agens odobren od strane FDA za lečenje kancera.
[0240] U određenim aspektima, CTX je izabran iz grupe koja se sastoji od agenasa za alkilovanje, antraciklina, razarača citoskeleta (taksani), epotilona, inhibitora histon deacetilaze (HDAC) inhibitora topoizomeraze I, inhibitora topoizomeraze II, inhibitor kinaze, monoklonskog antitela, analoga nukleotida, peptidnog antibiotika, agenasa na bazi platine, retinoida, vinka alkaloida ili njihovih derivata i radioizotopa.
[0241] U određenim aspektima, CTX je izabran iz grupe koju čine aktinomicin, cela trans retinoinska kiselina, azacitidin, azatioprin, bleomicin, bortezomib, karboplatinu, kapecitabin, cisplatinu, hlorambucil, ciklofosfamid, citarabin, daunorubicin, docetaksel, doksifluridin, doksorubicin, epirubicin, epotilon, etopozid, fluorouracil, gemcitabin, hidroksiurea, idarubicin, imatinib, irinotekan, mehloretamin, merkaptopurin, metotreksat, mitoksantron,
22
oksaliplatina, paklitaksel, pemetreksed, tenipozid, tioguanin, topotekan, valrubicin, vinblastin, vinkristin, vindesin i vinorelbin.
[0242] U određenim aspektima, c stabilizatora tubulina, destabilizatora tubulina, alkilatora DNK, vezivnog jedinjenja za mali žljeb DNK, interkalatora DNK, inhibitora topoizomeraze I, inhibitora topoizomeraze II, inhibitora giraze, inhibitora sinteze proteina, inhibitora proteozoma i anti-metabolita.
[0243] U određenim aspektima, CTX je izabran iz grupe koja se sastoji od aktinomicina D, amonafida, auristatina, benzofenona, benzotiazola, kaliheamicina, kamptotecina, CC-1065 (NSC 298223), cemadotina, kolhicina, kombretastatina A4, dolastatina, doksorubicina, elinafida, emtanzina (DM1), etopozid, KF-12347 (leinamicin), majtanzinoida, metotreksata, mitoksantrona, nokodazol, inhibitora proteozoma 1 (PSI 1), roridina A, t-2 toksina (analog trihotecena), taksola, tubulizina, Velcade® i vinkristina. U određenim aspektima, CTX je auristatin, kaliheamicin, majtanzinoid ili tubulizin.
[0244] U određenim aspektima, citotoksin je pirolobenzodiazepin (PBD), kaliheamicin, doksorubicin, kamptotecin, duokarmicin, DM1, DM4, majtanzinoid ili tubulizin. U određenim aspektima, CTX je auristatin, PDB, kaliheamicin, doksorubicin, kamptotecin, duokarmicin, DM1, DM4, majtanzinoid ili tubulizin. U određenim aspektima, CTX je auristatin, kao što je monometilauristatin F (MMAF) i monometilauristatin E (MMAE). U određenim aspektima, citotoksin je PBD.
[0245] U određenim aspektima, CTX je MMAE, MMAF, PDB, kaliheamicin γ, mertanzin ili tubulizin T2.
[0246] U određenim aspektima, CTX je MMAE ili MMAF, čije su strukture obezbeđene niže:
22
[0247] U određenim aspektima, CTX je PDB izabran iz grupe koja se sastoji od:.
[0248] U određenim aspektima, CTX je tubulizin T2.
[0249] U određenim aspektima, CTX je tubulizin T3 ili tubulizin T4, čije su strukture obezbeđene niže:
[0250] U nekim aspektima, ovde su obezbeđeni konjugati antitelo-lek, uključujući konjugat antitelo-lek sledeće formule (Ic):
22
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so,
gde je:
A je antitelo na C10orf54, opciono humanizovano antitelo na C10orf54;
dva prikazana cisteinska ostatka su iz otvorene cistein-cistein disulfidne veze u A;
L je razgradiv ili nerazgradiv linker;
CTX je citotoksin vezan za L amidnom vezom, karbamatnom vezom, disulfidnom vezom, etarskom vezom, tioetarskom vezom ili estarskom vezom;
veza predstavlja jednogubu ili dvogubu vezu i
n je ceo broj od 1 do 4.
[0251] U nekim aspektima, ovde su obezbeđeni konjugati antitelo-lek, uključujući konjugat antitelo-lek sledeće formule (Ic1):
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so,
gde je:
A je antitelo na C10orf54, opciono humanizovano antitelo na C10orf54;
dva prikazana cisteinska ostatka su iz otvorene cistein-cistein disulfidne veze u A;
L je razgradiv ili nerazgradiv linker;
22
CTX je citotoksin vezan za L amidnom vezom, karbamatnom vezom, disulfidnom vezom, etarskom vezom, tioetarskom vezom ili estarskom vezom i
n je ceo broj od 1 do 4.
[0252] U nekim aspektima, obezbeđena ovde are konjugati antitelo-lek, uključujući konjugat antitelo-lek sledeće formule (Ic2):
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so,
gde je:
A je antitelo na C10orf54, opciono humanizovano antitelo na C10orf54;
dva prikazana cisteinska ostatka su iz otvorene cistein-cistein disulfidne veze u A;
L je razgradiv ili nerazgradiv linker;
CTX je citotoksin vezan za L amidnom vezom, karbamatnom vezom, disulfidnom vezom, etarskom vezom, tioetarskom vezom ili estarskom vezom i
n je ceo broj od 1 do 4.
[0253] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Ic), (Ic1) ili (Ic2), otvorena cistein-cistein disulfidna veza u A je međulančana disulfidna veza. U određenim aspektima, gde je otvorena cistein-cistein disulfidna veza u A međulančana disulfidna veza, n je 4. (npr., dve međulančane disulfidne veze težak lanac-lak lanac i dve zglobne međulančane disulfidne veze težak lanac-težak lanac). U određenim aspektima, gde je otvorena cistein-cistein disulfidna veza u A međulančana disulfidna veza, n je ceo broj 3 (npr., dve međulančane disulfidne veze težak lanac-lak lanac i jedna zglobna međulančana disulfidna veza težak lanac-težak lanac). U određenim aspektima, n je ceo broj 4 (npr., dve međulančane disulfidne veze težak lanac-lak lanac i dve zglobne međulančane disulfidne veze težak lanac-težak lanac). U određenim aspektima, gde je otvorena cistein-cistein disulfidna veza u A međulančana disulfidna veza, n is 2 (npr., dve međulančane disulfidne veze težak lanac-lak lanac).
[0254] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Ic), (Ic1) ili (Ic2), CTX je auristatin, pirolobenzodiazepin (PDB), kaliheamicin, doksorubicin, kamptotecin, duokarmicin, DM1, DM4, majtanzinoid ili tubulizin, gde je CTX vezan za L amidnom vezom, karbamatnom vezom, disulfidnom vezom, etarskom vezom, tioetarskom vezom ili estarskom vezom. U određenim aspektima, CTX je auristatin vezan za L amidnom vezom ili
22
karbamatnom vezom. U određenim aspektima, CTX je MMAF vezan za L amidnom vezom. U određenim aspektima, CTX je MMAE vezan za L karbamatnom vezom. U određenim aspektima, CTX je PBD vezan za L amidnom vezom ili karbamatnom vezom.
[0255] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Ic), (Ic1) ili (Ic2), L je nerazgradiv linker.
[0256] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Ic), (Ic1) ili (Ic2), L je:
-(CH2)mC(O)-,
-(CH2CH2O)p(CH2CH2)C(O)-,
ili
- (CH2CH2)(OCH2CH2)pC(O)-;
gde je m ceo broj od 5 do 11, a p je ceo broj od 1 do 3.
[0257] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Ic), (Ic1) ili (Ic2), L je razgradiv linker.
[0258] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Ic), (Ic1) ili (Ic2), L je:
- (CH2)mC(O)-Val-Ala -PAB-C(O)-,
-(CH2)mC(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-,
-(CH2CH2O)p(CH2CH2)C(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-,
-(CH2CH2O)p(CH2CH2)C(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-,
- (CH2CH2)(OCH2CH2)pC(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-,
ili
-(CH2CH2)(OCH2CH2)pC(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-;
gde je m ceo broj od 5 do 11, a p je ceo broj od 1 do 3 i
gde PAB ima sledeću strukturu:
[0259] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Ic), (Ic1) ili (Ic2), CTX is auristatin. U određenim aspektima, CTX je MMAF. U određenim aspektima CTX je MMAE. U određenim aspektima, CTX je PDB.
2
[0260] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Ic), (Ic1) ili (Ic2), n is 2, 3 ili 4.
[0261] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Ic), (Ic1) ili (Ic2), CTX je MMAF, a L je -(CH2)5C(O)-. U određenim aspektima, CTX je MMAE, a L je -(CH2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)-. U određenim aspektima, CTX je PBD, a L je -(CH2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- ili -(CH2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.
[0262] U određenim aspektima, konjugat antitelo-lek je sledeće formule:
[0263] U određenim aspektima, konjugat antitelo-lek je sledeće formule:
[0264] U određenim aspektima, konjugat antitelo-lek je sledeće formule:
2 1
[0265] U određenim aspektima, konjugat antitelo-lek je sledeće formule:
[0266] U određenim aspektima, konjugat antitelo-lek ima jednu od sledećih formula:
i
2 2
[0267] U određenim aspektima, konjugat antitelo-lek ima jednu od sledećih formula:
2
[0268] U nekim aspektima, ovde je obezbeđen konjugat antitelo-lek sledeće formule (Id):
gde je:
L je razgradiv ili nerazgradiv linker;
CTX je citotoksin vezan za L amidnom vezom, karbamatnom vezom, disulfidnom vezom, etarskom vezom, tioetarskom vezom ili estarskom vezom i
Sxje atom sumpora iz prvog cisteinskog ostatka, a Syje atom sumpora iz drugog cisteinskog ostatka, gde su prvi cisteinski ostatak i drugi cisteinski ostatak iz različitih lanaca i/ili iz istog lanca višelančanog antitela;
veza predstavlja jednogubu ili dvogubu vezu i
n je ceo broj od 1 do 4.
[0269] U nekim aspektima, ovde je obezbeđen konjugat antitelo-lek sledeće formule (Id1):
gde je:
L je razgradiv ili nerazgradiv linker;
CTX je citotoksin vezan za L amidnom vezom, karbamatnom vezom, disulfidnom vezom, etarskom vezom, tioetarskom vezom ili estarskom vezom i
Sxje atom sumpora iz prvog cisteinskog ostatka, a Syje atom sumpora iz drugog cisteinskog ostatka, gde su prvi cisteinski ostatak i drugi cisteinski ostatak iz različitih lanaca i/ili iz istog lanca višelančanog antitela; i
2 4
n je ceo broj od 1 do 4.
[0270] U nekim aspektima, ovde je obezbeđen konjugat antitelo-lek sledeće formule (Id2):
gde je:
L je razgradiv ili nerazgradiv linker;
CTX je citotoksin vezan za L amidnom vezom, karbamatnom vezom, disulfidnom vezom, etarskom vezom, tioetarskom vezom ili estarskom vezom i
Sxje atom sumpora iz prvog cisteinskog ostatka, a Syje atom sumpora iz drugog cisteinskog ostatka, gde su prvi cisteinski ostatak i drugi cisteinski ostatak iz različitih lanaca i/ili iz istog lanca višelančanog antitela;
veza predstavlja jednogubu ili dvogubu vezu; i
n je ceo broj od 1 do 4.
[0271] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id), (Id1) ili (Id2), CTX je auristatin, pirolobenzodiazepin (PDB), kaliheamicin, doksorubicin, kamptotecin, duokarmicin, DM1, DM4, majtanzinoid ili tubulizin, gde je CTX vezan za L amidnom vezom, karbamatnom vezom, disulfidnom vezom, etarskom vezom, tioetarskom vezom ili estarskom vezom. U određenim aspektima, CTX je auristatin vezan za L amidnom vezom ili karbamatnom vezom. U određenim aspektima, CTX je MMAF vezan za L amidnom vezom. U određenim aspektima, CTX je MMAE vezan za L karbamatnom vezom. U određenim aspektima, CTX je PBD vezan za L amidnom vezom ili karbamatnom vezom.
[0272] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id), (Id1) ili (Id2), višelančano antitelo sadrži dva teška lanca i dva laka lanca.
[0273] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id), (Id1) ili (Id2), prvi cisteinski ostatak je iz prvog teškog lanca, a drugi cisteinski ostatak je iz drugog teškog lanca višelančanog antitela.
[0274] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id), (Id1) ili (Id2), prvi cisteinski ostatak je iz teškog lanca, a drugi cisteinski ostatak je iz lakog lanca višelančanog antitela.
2
[0275] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id), (Id1) ili (Id2), prvi i drugi cisteinski ostatak su iz istog teškog lanca višelančanog antitela.
[0276] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id), (Id1) ili (Id2), višelančano antitelo je antitelo na C10orf54, opciono humanizovano antitelo na C10orf54.
[0277] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id), (Id1) ili (Id2), prvi cisteinski ostatak je iz teškog lanca, a drugi cisteinski ostatak je iz lakog lanca višelančanog antitela.
[0278] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id), (Id1) ili (Id2), prvi i drugi cisteinski ostatak su iz istog teškog lanca višelančanog antitela.
[0279] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id), konjugat antitelo-lek je sledeće formule:
gde je svaki težak lanac višelančanog antitela označen slovom H, a svaki lak lanac višelančanog antitela je označen slovom L, a veza predstavlja jednogubu ili dvogubu vezu.
[0280] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id), konjugat antitelo-lek je sledeće formule:
2
gde je svaki težak lanac višelančanog antitela označen slovom H, a svaki lak lanac višelančanog antitela je označen slovom L, a veza predstavlja jednogubu ili dvogubu vezu.
[0281] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id1), konjugat antitelo-lek je sledeće formule:
gde je svaki težak lanac višelančanog antitela označen slovom H, a svaki lak lanac višelančanog antitela je označen slovom L.
[0282] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id1), konjugat antitelo-lek je sledeće formule:
2
gde je svaki težak lanac višelančanog antitela označen slovom H, a svaki lak lanac višelančanog antitela je označen slovom L.
[0283] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id2), konjugat antitelo-lek je sledeće formule:
gde je svaki težak lanac višelančanog antitela označen slovom H, a svaki lak lanac višelančanog antitela je označen slovom L.
[0284] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id2), konjugat antitelo-lek je sledeće formule:
2
gde je svaki težak lanac višelančanog antitela označen slovom H, a svaki lak lanac višelančanog antitela je označen slovom L.
[0285] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id), (Id1) ili (Id2), višelančano antitelo sadrži mutacije na jednom ili više cisteina u zglobnim regionima dva teška lanca. U određenim aspektima, jedan ili više cisteinskih ostataka je mutirano u strukturno srodne aminokiseline. U određenim aspektima, jedan ili više cisteinskih ostataka je mutirano u alanine.
[0286] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id), gde višelančano antitelo sadrži mutacije na jednom ili više cisteina u zglobnim regionima dva teška lanca, konjugat antitelo-lek je sledeće formule:
gde je svaki težak lanac višelančanog antitela označen slovom H, a svaki lak lanac višelančanog antitela je označen slovom L, a veza predstavlja jednogubu ili dvogubu vezu. Za aspekte konjugata antitelo-lek formule (Id) prikazane gore, ADC ima DAR = 3 (tri leka po antitelu). Kao što je opisano ovde, takvi ADC se mogu dobijati, kao što je opisano ovde, mutiranjem jednog ili više zglobnih cisteinskih ostataka humanih IgG1 (npr.,1 zglobni cistein), IgG2 (npr., 3 zglobna cisteina), IgG3 (npr.,10 zglobnih cisteina) ili IgG4 (npr.,1 zglobni cistein).
2
[0287] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id), gde višelančano antitelo sadrži mutacije na jednom ili više cisteina u zglobnim regionima dva teška lanca, konjugat antitelo-lek je sledeće formule:
gde je svaki težak lanac višelančanog antitela označen slovom H, a svaki lak lanac višelančanog antitela je označen slovom L, a veza predstavlja jednogubu ili dvogubu vezu. Za aspekte konjugata antitelo-lek formule (Id) prikazane gore, ADC ima DAR = 2 (dva leka po antitelu). Kao što je opisano ovde, takvi ADC se mogu dobijati mutiranjem jednog ili više zglobnih cisteinskih ostataka humanih IgG1 (npr., 2 zglobna cisteina), IgG2 (npr., 4 zglobna cisteina), IgG3 (npr.,11 zglobnih cisteina) ili IgG4 (npr., 2 zglobna cisteina). U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id), L je nerazgradiv linker.
[0288] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id1), gde višelančano antitelo sadrži mutacije u jednom ili više cisteina u zglobnim regionima dva teška lanca, konjugat antitelo-lek je sledeće formule:
gde je svaki težak lanac višelančanog antitela označen slovom H, a svaki lak lanac višelančanog antitela je označen slovom L. Za aspekte konjugata antitelo-lek formule (Id1) prikazanog gore, ADC ima DAR = 3 (tri leka po antitelu). Kao što je opisano ovde, takvi ADC mogu da se dobijaju mutiranjem jednog ili više zglobnih cisteinskih ostataka humanih
24
IgG1 (npr.,1 zglobni cistein), IgG2 (npr., 3 zglobna cisteina), IgG3 (npr., 10 zglobnih cisteina) ili IgG4 (npr.,1 zglobni cistein).
[0289] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id1), gde višelančano antitelo sadrži mutacije u jednom ili više cisteina u zglobnim regionima dva teška lanca, konjugat antitelo-lek je sledeće formule:
gde je svaki težak lanac višelančanog antitela označen slovom H, a svaki lak lanac višelančanog antitela je označen slovom L. Za aspekte konjugata antitelo-lek formule (Id1) prikazanog gore, ADC ima DAR = 2 (dva leka po antitelu). Kao što je opisano ovde, takvi ADC mogu da se dobijaju mutiranjem jednog ili više zglobnih cisteinskih ostataka humanih IgG1 (npr., 2 zglobna cisteina), IgG2 (npr., 4 zglobna cisteina), IgG3 (npr.,11 zglobnih cisteina) ili IgG4 (npr., 2 zglobna cisteina). U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id1), L je nerazgradiv linker.
[0290] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id2), gde višelančano antitelo sadrži mutacije u jednom ili više cisteina u zglobnim regionima dva teška lanca, konjugat antitelo-lek je sledeće formule:
gde je svaki težak lanac višelančanog antitela označen slovom H, a svaki lak lanac višelančanog antitela je označen slovom L. Za aspekte konjugata antitelo-lek formule (Id2) prikazanog gore, ADC ima DAR = 3 (tri leka po antitelu). Kao što je opisano ovde, takvi ADC mogu da se dobijaju mutiranjem jednog ili više zglobnih cisteinskih ostataka humanih npr.,1 zglobni cistein), IgG2 (npr., 3 zglobna cisteina), IgG3 (npr., 10 zglobnih cisteina) ili IgG4 (npr.,1 zglobni cistein.
[0291] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id2), gde višelančano antitelo sadrži mutacije u jednom ili više cisteina u zglobnim regionima dva teška lanca, konjugat antitelo-lek je sledeće formule:
gde je svaki težak lanac višelančanog antitela označen slovom H, a svaki lak lanac višelančanog antitela je označen slovom L. Za aspekte konjugata antitelo-lek formule (Id2) prikazanog gore, ADC ima DAR = 2 (dva leka po antitelu). Kao što je opisano ovde, takvi ADC mogu da se dobijaju mutiranjem jednog ili više zglobnih cisteinskih ostataka humanih IgG1 (npr., 2 zglobna cisteina), IgG2 (npr., 4 zglobna cisteina), IgG3 (npr.,11 zglobnih cisteina) ili IgG4 (npr., 2 zglobna cisteina). U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id2), L je nerazgradiv linker.
[0292] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id), (Id1) ili (Id2), L je:
-(CH2)mC(O)-,
-(CH2CH2O)p(CH2CH2)C(O)-,
ili
- (CH2CH2)(OCH2CH2)pC(O)-;
gde je m ceo broj od 5 do 11, a p je ceo broj od 1 do 3.
[0293] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id), (Id1) ili (Id2), L je razgradiv linker.
[0294] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id), (Id1) ili (Id2), L je:
- (CH2)mC(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-,
-(CH2)mC(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-,
-(CH2CH2O)p(CH2CH2)C(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-, -(CH2CH2O)p(CH2CH2)C(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-, -(CH2CH2)(OCH2CH2)pC(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-, ili
-(CH2CH2)(OCH2CH2)pC(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-;
gde je m ceo broj od 5 do 11, a p je ceo broj od 1 do 3 i
gde PAB ima sledeću strukturu:
[0295] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id), (Id1) ili (Id2), CTX je MMAF. U određenim aspektima, CTX je MMAE. U određenim aspektima, CTX je PDB.
[0296] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id), (Id1) ili (Id2), n je 2, 3 ili 4.
[0297] U određenim aspektima konjugata antitelo-lek formule (Id), (Id1) ili (Id2), CTX je MMAF, a L je -(CH2)5C(O)-. U određenim aspektima, CTX je MMAE, a L je -(CH2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)-. U određenim aspektima, CTX je PBD, a L je -(CH2)5C(O)-Val-Ala-, -(CH2)5C(O)-Val-Cit-, -(CH2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- ili -(CH2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.
METODI ZA PRAVLJENJE ADC
[0298] Metodi za pravljenje ADC uključuju korišćenje konjugata linker-citotoksin i zglobne mutante antitela.
[0299] Opcioni DAR (odnos lekovi-antitelo) je poželjan za ADC, uključujući, na primer, DAR od 2, 3 ili 4. Na primer, sledeće šeme ilustruju opšte šeme za dobijanje homogenih ADC sa DAR = 2, 3 ili 4, kao što je ovde opisano, koja se mogu napraviti metodima opisanim ovde.
[0300] Na primer, za ADC sa IgG1 antitelima, jedan ili oba zglobna cisteina mogu biti mutirana u neku drugu aminokiselinu (npr., alanin) da bi se dobili ADC sa DAR od 3 ili 2, respektivno.
[0301] Na primer, za ADC sa IgG2 antitelima, dva, tri ili četiri od zglobnih cisteina može biti mutirano u neku drugu aminokiselinu (npr., alanin) da bi se dobili ADC sa DAR od 4, 3 ili 2, respektivno.
24
[0302] Na primer, za ADC sa IgG3 antitelima, devet, deset ili jedanaest od zglobnih cisteina može biti mutirano u neku drugu aminokiselinu (npr., alanin) da bi se dobili ADC sa DAR od 4, 3 ili 2, respektivno.
[0303] Kao jedan drugi primer, za ADC sa IgG4 antitelima, jedan ili oba zglobna cisteina mogu biti mutirana u neku drugu aminokiselinu (npr., alanin) da bi se dobili ADC sa DAR od 3 ili 2, respektivno.
Ilustrativne opšte šeme za dobijanje ADC sa DAR = 2 ili 3:
A. Dobijanje zglobnih mutanata
[0304]
B. Konjugacija
[0305]
[0306] Zglobni regioni teških lanaca humanih IgG1 i IgG4 sadrže dva cisteinska ostatka, dok zglobni region teških lanaca humanih IgG3 sadrži jedanaest cisteinskih ostataka, a zglobni region teških lanaca humanih IgG4 sadrži četiri cisteinska ostatka (videti Tabelu A).
[0307] Aminokiselinska sekvenca zglobnog regiona i N kraj CH2 domena su poravnati prema aminokiselinama 216 do 238 humanih IgG1 (Eu numeracija; prilagođeno iz Burton DR (1985) Immunoglobulin G: functional sites. Mol Immunol 22: 161-206)
[0308] IgG zglobni mutanti su generisani mutiranjem jednog ili oba cisteina u zglobnom regionu u strukturno srodne aminokiseline, na primer, alanine. Zglobni ostaci su numerisani korišćenjem Eu numeracije za humane IgG1 (Burton DR (1985) Immunoglobulin G: functional sites. Mol Immunol 22: 161-206). Tabele B-E obezbeđuju slaganje između IMGT jedinstvene numeracije za C-DOMEN, IMGT numeracije egzona, Eu i Kabat numeracije za humane IgG1 (Tabela B), IgG2 (Tabela C), IgG3 (Tabela D) i IgG4 (Tabela E).
24
Tabela B: humani IG1
Tabela C: humani IG2
24
�� Tabela E: humani I G4
Reference:
[0309]
[1] Edelman, G.M. et al., Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78-85 (1969). PMID: 5257969
[2] Kabat, E.A. et al., Sekvence of proteins of imunological interest. 5th Edition - US Department of Health i Human Services, NIH publikacija n° 91-3242, pp 662,680,689 (1991).
KONJUGATI LINKER-CITOTOKSIN
[0310] U jednom drugom aspektu, ovde su, za upotrebu sa antitelima opisanim ovde, obezbeđeni konjugati linker-citotoksin sledećih formula (IIa), (IIb) (IIc):
24
ili njihov enantiomer, dijasteriomer ili smese;
gde je:
L razgradiv ili nerazgradiv linker, a
CTX je citotoksin vezan za L amidnom vezom ili karbamatnom vezom.
[0311] U određenim aspektima konjugata linker-citotoksin formule (IIa), (IIb) ili (IIc), L je nerazgradiv linker.
[0312] U određenim aspektima konjugata linker-citotoksin formule (IIa), (IIb) ili (IIc), L je:
-(CH2)mC(O)-,
-(CH2CH2O)p(CH2CH2)C(O)-,
ili
- (CH2CH2) (OCH2CH2)pC(O)-;
gde je m ceo broj od 5 do 11, a p je ceo broj od 1 do 3.
24
[0313] U određenim aspektima konjugata linker-citotoksin formule (IIa), (IIb) ili (IIc), L je razgradiv linker.
[0314] U određenim aspektima konjugata linker-citotoksin formule (IIa), (IIb) ili (IIc), L je:
- (CH2)mC(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-,
-(CH2)mC(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-,
-(CH2CH2O)p(CH2CH2)C(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-,
-(CH2CH2O)p(CH2CH2)C(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-,
-(CH2CH2)(OCH2CH2)pC(O)-Val-Ala-PAB-C(O)-,
ili
-(CH2CH2)(OCH2CH2)pC(O)-Val-Cit-PAB-C(O)-;
gde je m ceo broj od 5 do 11, a p je ceo broj od 1 do 3 i
gde PAB ima sledeću strukturu:
[0315] U određenim aspektima konjugata linker-citotoksin formule (IIa), (IIb) ili (IIc), CTX je auristatin. U određenim aspektima, CTX je MMAF. U određenim aspektima CTX je MMAE. U određenim aspektima, CTX je PBD. U određenim aspektima, CTX je kaliheamicin, doksorubicin, kamptotecin, duokarmicin, DM1, DM4, majtanzinoid ili tubulizin.
[0316] U određenim aspektima konjugata linker-citotoksin formule (IIa), (IIb) ili (IIc), gde je CTX MMAE, L je razgradiv linker.
[0317] U određenim aspektima konjugata linker-citotoksin formule (IIa), (IIb) ili (IIc), gde je CTX MMAE, L je -(CH2)mC(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- ili -(CH2)mC(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-, gde je m ceo broj od 5 do 11.
[0318] U određenim aspektima konjugata linker-citotoksin formule (IIa), (IIb) ili (IIc), gde je CTX MMAE, L je -(CH2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- ili -(CH2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.
[0319] U određenim aspektima konjugata linker-citotoksin formule (IIa), (IIb) ili (IIc), gde je CTX PBD, L je razgradiv linker.
[0320] U određenim aspektima konjugata linker-citotoksin formule (IIa), (IIb) ili (IIc), gde je CTX PBD, L je -(CH2)mC(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- ili -(CH2)mC(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-, gde je m ceo broj od 5 do 11.
2
[0321] U određenim aspektima konjugata linker-citotoksin formule (IIa), (IIb) ili (IIc), gde je CTX PBD, L je -(CH2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- ili -(CH2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.
[0322] U određenim aspektima, konjugat linker-citotoksin ima sledeću strukturu:
[0323] U određenim aspektima, konjugat linker-citotoksin ima sledeću strukturu:
[0324] U određenim aspektima, konjugat linker-citotoksin ima sledeću strukturu:
[0325] U određenim aspektima, konjugat linker-citotoksin ima sledeću strukturu:
2 1
[0326] U određenim aspektima, konjugat linker-citotoksin ima sledeću strukturu:
[0327] U određenim aspektima, konjugat linker-citotoksin ima sledeću strukturu:
[0328] U određenim aspektima, konjugat linker-citotoksin ima jednu od sledećih struktura:
2 2
[0329] U određenim aspektima, konjugat linker-citotoksin ima jednu od sledećih struktura:
[0330] U određenim aspektima, konjugat linker-citotoksin ima jednu od sledećih struktura:
2
FARMACEUTSKI SASTAVI
[0331] Terapijske formulacije koje sadrže jedno ili više antitela obezbeđenih ovde mogu se praviti za skladištenje mešanjem antitela, koje ima željeni stepen čistoće, sa opcionim fiziološki prihvatljivim nosačima, ekscipijentima ili stabilizatorima (Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA) u vidu liofilizovanih formulacija ili vodenih rastvora. Prihvatljivi nosači, ekscipijenti ili stabilizatori su netoksični za recipijente u upotrebljenim dozama i koncentracijama i uključuju pufere kao što su fosfat, citrat i druge organske kiseline; antioksidanse uključujući askorbinsku kiselinu i metionin; prezervative (kao što su oktadecildimetilbenzil amonijum hlorid; heksametonijum hlorid; benzalkonijum hlorid, benzetonijum hlorid; fenol, butil ili benzil alkohol; alkil parabene kao što je metil ili propil paraben; katehol; rezorcinol; cikloheksanol; 3-pentanol i m-krezol); polipeptide niske molekulske težine (manje od oko 10 ostataka); proteine, kao što je serum albumin, želatin ili imunoglobulini; hidrofilne polimere kao što je polivinilpirolidon; aminokiseline kao što je glicin, glutamin, asparagin, histidin, arginin ili lizin; monosaharide, disaharide i druge ugljovodonike uključujući glukozu, manozu ili dekstrine; agense za heliranje kao što je EDTA; šećere kao što je saharoza, manitol, trehaloza ili sorbitol; kontrajone koji formiraju so, kao što je natrijum; metalne komplekse (npr., Zn-protein kompleksi) i/ili nejonske surfaktante kao što je TWEEN™, PLURONICS™ ili polietilen glikol (PEG).
[0332] Antitela obezbeđena ovde mogu biti, na primer, formulisana i u lipozomima. Lipozomi koji sadrže molekul od interesa se dobijaju metodima poznatim u struci, kao što je opisano u
2 4
Epstein et al. (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688; Hwang et al. (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030 i U.S. patentima br. 4,485,045 i 4,544,545. Lipozomi sa povećanim vremenom cirkulacije su opisani u U.S. patentu br.5,013,556.
[0333] Naročito korisni imunolipozomi se mogu praviti metodom reverzno-faznog uparavanja sa lipidnim sastavom koji sadrži fosfatidilholin, holesterol i PEG-derivatizovan fosfatidiletanolamin (PEG-PE). Lipozomi se istisnu kroz filtere definisane veličine pora da bi dali lipozome željenog dijametra. Fab' fragmenti antitela obezbeđenog ovde se mogu konjugovati sa lipozomima kao što je opisano u Martin et al. (1982) J. Biol. Chem. 257:286-288 reakcijom disulfidne razmene. Hemoterapijski agens (kao što je doksorubicin) se opciono sadrži unutar lipozoma; videti Gabizon et al., (1989) J. National Cancer Inst. 81(19):1484.
[0334] Formulacije, kao što su one opisane ovde, mogu da sadrže i više od jednog aktivnog jedinjenja kao što je neophodnoza konkretnu indikaciju koja se tretira. U određenim aspektima, formulacije sadrže antitelo obezbeđeno ovde i jedno ili više aktivnih jedinjenja sa komplementarnim dejstvima, koja ne deluju nepovoljno jedno na drugo. Takvi molekuli su pogodno prisutni u kombinaciji u količinama koje su efektivne za planiranu svrhu. Na primer, antitelo obezbeđeno ovde se može kombinovati sa jednim ili više drugih terapijskih agenasa. Takva kombinovana terapija se može administrirati pacijentu serijski ili simultano ili jedna za drugom.
[0335] Antitelo obezbeđeno ovde se može i zatvoriti u mikrokapsulu napravljenu, na primer, tehnikama koacervacije ili polimerizacijom na granici faza, na primer, hidroksimetilceluloze ili želatinska mikrokapsula i poli-(metilmetacilatna) mikrokapsula, respektivno, u koloidnim sistemima za dostavu leka (na primer, lipozomi, albuminske mikrosfere, mikroemulzije, nanočestice i nanokapsule) ili u makroemulzijama. Takve tehnike su opisane u Remingtonovim Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA.
[0336] Formulacije za upotrebu u in vivo administraciji mogu biti sterilne. Ovo se lako postiže filtracijom kroz, npr., sterilne filtracione membrane.
[0337] Mogu se praviti i preparati sa odloženim otpuštanjem. Pogodni primeri preparata sa odloženim otpuštanjem uključuju polupropustljive matrice od čvrstih hidrofobnih polimera koji sadrže polipeptid, gde su matrice u formi oblikovanih artikala, npr., filmova ili mikrokapsula. Primeri matrica sa odloženim otpuštanjem uključuju poliestre, hidrogelove (na primer, poli(2-hidroksietil-metakrilat) ili poli(vinilalkohol)), polilaktide (U.S. patent br.
3,773,919), kopolimere L-glutaminske kiseline i etil-L-glutamat, nerazgradiv etilen-vinil acetat, razgradive kopolimere mlečne kiseline i glikolne kiseline, kao što su LUPRON DEPOT™ (injektabilne mikrosfere sastavljene od kopolimera mlečne i glikolne kiseline i leuprolid acetata) i poli-D-(-)-3-hidroksibutirična kiselina. Dok polimeri,kao što su etilen-vinil acetat i mlečna kiselina-glikolna kiselina, omogućuju oslobađanje molekula tokom više od 100 dana, određeni hidrogelovi oslobađaju proteine u kraćim vremenskim periodima. Kad enkapsulirana antitela ostanu u telu dugo vreme, ona mogu da se denaturišu ili agregiraju kao rezultat izlaganja vlazi na 37°C, što dovodi do gubitka biološke aktivnosti i mogućih promena u imunogenosti. Mogu se posavetovati racionalne strategije za stabilizaciju u zavisnosti od uključujenog mehanizma. Na primer, ako se otkrije da je mehanizam agregiranja formiranje međumolekulskih S--S veza preko tio-disulfidne razmene, stabilizacija se može postići modifikovanjem sulfhidrilnih ostataka, liofilizovanjem iz kiselih rastvora, uz kontrolu sadržaja vlage, korišćenje odgovarajućih aditiva i razvijanjem specifičnih sastava od polimernog matriksa.
2
[0338] U nekim aspektima, farmaceutski sastavi obezbeđeni ovde sadrže terapijski efektivne količine jednog ili više antitela obezbeđenih ovde i opciono jedan ili više dodatnih profilaktičkih ili terapijskih agenasa u farmaceutski prihvatljivom nosaču. Takvi farmaceutski sastavi su korisni u prevenciji, tretmanu ili ublažavanju jednog ili više simptoma bolesti posredovane C10orf54.
[0339] Farmaceutski nosači pogodni za administraciju jedinjenja obezbeđenih ovde uključuju bilo koje takve nosače poznate stručnjacima u ovoj oblasti da su pogodni za konkretan način administracije.
[0340] Pored toga, antitela obezbeđena ovde se mogu formulisati kao jedini farmaceutski aktivan sastojak u sastavu ili se mogu kombinovati sa drugim aktivnim sastojcima (kao što je jedan ili više drugih profilaktičkih ili terapijskih agenasa).
[0341] Sastavi mogu da sadrže jedno ili više antitela obezbeđenih ovde. U jednom aspektu, antitela se formulišu u pogodne farmaceutske preparate, kao što su rastvori, suspenzije, tablete, disperzivne tablete, pilule, kapsule, prahovi, formulacije sa odloženim otpuštanjem ili eliksiri, za oralnu administraciju ili u sterilnim rastvorima ili suspenzijama za parenteralnu administraciju, kao i preparati sa transdermalnim flasterima i inhalatori sa suvim prahovima. U jednom aspektu, antitela opisana gore su formulisana u farmaceutske sastave pomoću tehnika i procedura dobro poznatih u struci (videti, npr., Ansel (1985) Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 4th Ed., p.126).
[0342] U određenim aspektima sastava, efektivne koncentracije jednog ili više antitela ili njihovih derivata su pomešane sa pogodnim farmaceutskim nosačem. U nekim specifičnim aspektima, koncentracije jedinjenja u sastavima su efektivne za dostavljanje količine, po administraciji, koja leči, sprečava ili ublažava bolest posredovanu C10orf54 ili njene simptome.
[0343] U jednom aspektu, sastavi su formulisani za administraciju pojedinačne doze. Da bi se formulisao sastav, težinski deo jedinjenja se rastvori, suspenduje, disperguje ili na drugi način pomeša u izabranom nosaču u efektivnoj koncentraciji tako da se tretirano stanje olakša, spreči ili se ublaži jedan ili više simptoma.
[0344] U nekim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde je uključeno u farmaceutski prihvatljiv nosač u efektivnoj količini dovoljnoj da ispolji terapijski koristan efekat u odsustvu neželjenih bočnih efekata na tretiranog pacijenta. Terapijski efektivna koncentracija se može odrediti empirijski testiranjem jedinjenja u in vitro i in vivo sistemima korišćenjem rutinskih metoda, a zatim ekstrapolacijom odatle doza za ljude.
[0345] Koncentracija antitela u farmaceutskom sastavu će zavisiti od, npr., fizičkohemijskih karakteristika, rasporeda doza i administrirane količine antitela, kao i od drugih faktora poznatih stručnjacima u ovoj oblasti.
[0346] U jednom aspektu, terapijski efektivna doza proizvodi serumsku koncentraciju antitela od oko 0,1 ng/ml do oko 50-100 µg/ml. Farmaceutski sastavi, u jednom drugom aspektu, obezbeđuju dozu od oko 0,001 mg do oko 2000 mg antitela po kilogramu telesne težine na dan. Farmaceutski oblici jediničnih doza se mogu praviti da obezbede od oko 0,01 mg, 0,1 mg
2
ili 1 mg do oko 500 mg, 1000 mg ili 2000 mg, a u jednom aspektu, od oko 10 mg do oko 500 mg antitela i/ili kombinacije drugih opcionih bitnihsastojaka po formi jedinične doze.
[0347] Antitelo se može administrirati odjednom ili se može podeliti u broj manjih doza koje se administriraju u određenim vremenskim intervalima. Podrazumeva se da su precizno doziranje i trajanje tretmana fukcija bolesti koja se tretira i može se odrediti empirijski primenom poznatih protokola za testiranje ili ekstrapolacijom iz podataka in vivo ili in vitro testova. Treba napomenuti da koncentracije i vrednosti doza mogu da variraju i sa ozbiljnošću stanja koje treba ublažiti. Dalje se podrazumeva da za bilo kog konkretnog subjekta specifični režimi doza mogu da se prilagode tokom vremena u skladu sa individualnom potrebom i profesionalnom procenom osobe koja administrira ili nadgleda administraciju sastava i da su opsezi koncentracije dati gore samo primeri i bez namere da ograniče opseg ili upotrebu zahtevanih sastava.
[0348] Po mešanju ili dodavanju antitela, dobijena smesa može biti rastvor, suspenzija, emulzija ili slično. Forma dobijene smese zavisi od niza faktora, uključujući planiran način administracije i rastvorljivost jedinjenja u izabranom nosaču ili nosiocu. Efektivna koncentracija je dovoljna za ublažavanje simptoma tretirane bolesti, poremećaja ili stanja i može se odrediti empirijski.
[0349] U nekim aspektima, farmaceutski sastavi su obezbeđeni za administraciju ljudima i životinjama u formama jediničnih doza, kao što su tableta, kapsula, pilule, prahovi, granule, sterilni parenteralni rastvori ili suspenzije i oralni rastvori ili suspenzije i uljno-vodene emulzije koje sadrže odgovarajuće količine jedinjenja ili njihovih farmaceutski prihvatljivih derivata. Antitelo je, u jednom aspektu, formulisano i administrirano u formama jediničnih doza ili formama višestrukih doza. Forme "jediničnih doza", kao što se ovde koristi, se odnose na fizički diskretne jedinice pogodne za humane i životinjske subjekte i pakovane pojedinačno, kao što je poznato u struci. Svaka jedinična doza sadrži prethodno određenu količinu antitela, dovoljnu da proizvede željeni terapijski efekat, udruženu sa potrebnim farmaceutskim nosačem, vehicle ili razblaživačem. Primeri formi jedinične doze uključuju ampule i špriceve i pojedinačno pakovane tablete ili kapsule. Oblici jedinične doze se mogu davati u svojim frakcijama ili umnošcima. Forma "višestruke doze" je množina identičnih formi jedinične doze pakovanih u jednom kontejneru da bi se dale u odvojenoj formi jedinične doze. Primeri formi višestruke doze uključuju fiole, bočice tableta ili kapsula ili boce pajntova ili galona. Stoga, forma višestruke doze je umnožak jediničnih doza koje nisu razdvojene u pakovanju.
[0350] U nekim specifičnim aspektima, jedno ili više antitela na C10orf54 obezbeđenih ovde je u tečnoj farmaceutskoj formulaciji. Tečni farmaceutski administrabilni sastavi mogu, na primer, da se pripremaju rastvaranjem, dispergovanjem ili na drugi način mešanjem aktivnog jedinjenja kao što je definisano gore i opcionih farmaceutskih adjuvanata u nosaču, kao što je, na primer, voda, slani rastvor, vodena dekstroza, glicerol, glikoli, etanol i slično, da bi se napravio rastvor ili suspenzija. Ako se želi, farmaceutski sastav za administraciju može da sadrži i manje količine netoksičnih pomoćnih supstanci, kao što su sredstva za kvašenje, emulzifikatori, sredstva za povećanje rastvorljivosti, pH puferi i slično, na primer, acetat, natrijum citrat, derivati ciklodekstrina, sorbitan monolaurat, trietanolamin natrijum acetat, trietanolamin oleat i druga takva sredstva.
2
[0351] Aktuelni metodi pravljenja takvih oblika doza su poznati ili su očigledni stručnjacima u ovoj oblasti; na primer, videti Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA.
[0352] Mogu se napraviti oblici doza ili sastavi koji sadrže antitelo u opsegu od 0,005% do 100% sa ravnotežom napravljenom od netoksičnog nosača. Metodi za pripremanje ovih sastava su poznati stručnjacima u ovoj oblasti.
[0353] Oralni farmaceutski oblici doza su ili čvrsti ili u gelu ili tečni. Čvrsti oblici doza uključuju tablete, kapsule, granule i nerazmerene prahove. Tipovi oralnih tableta uključuju komprimovane, pastile za žvakanje i tablete koje mogu biti enterično obložene, obložene šećerom ili obložene filmom. Kapsule mogu biti tvrde ili meke želatinske kapsule, dok granule i prahovi mogu biti obezbeđeni u nešumećem ili šumećem vidu u kombinaciji sa drugim sastojcima poznatim stručnjacima u ovoj oblasti.
[0354] U određenim aspektima, formulacije su čvrsti oblici doza. U određenim aspektima, formulacije su kapsule ili tablete. Tablete, pilule, kapsule, pastile i slično mogu da sadrže jedan ili više sledećih sastojaka ili jedinjenja slične prirode: vezivno sredstvo; lubrikant; razblaživač; sredstvo za kliženje; dezintegrator; sredstva za bojenje; zaslađivači; dodaci ukusa; sredstvo za kvašenje; emetičku prevlaku i film prevlaku. Primeri vezivnih sredstava uključuju mikrokristalnu celulozu, gumi tragakant, rastvor glukoze, akacija biljni lepak, rastvor želatina, melasa, polvinilpirolidin, povidon, krospovidoni, saharoza i skrobna pasta. Lubrikanti uključuju talk, skrob, magnezijum ili kalcijum stearat, likopodijum i stearinsku kiselinu. Razblaživači uključuju, na primer, laktozu, saharozu, skrob, kaolin, so, manitol i dikalcijum fosfat. Glidanti uključuju, ali nisu ograničeni na, koloidni silicijum dioksid. Dezintegratori uključuju kroskarmelozu natrijum, natrijum skrob glikolat, algininsku kiselinu, kukuruzni skrob, krompirni skrob, bentonit, metilcelulozu, agar i karboksimetilcelulozu. Sredstva za bojenje uključuju, na primer, bilo koju od odobrenih sertifikovanih FD i C boja rastvorljivih u vodi, njihove smese i FD i C boje nerastvorljive u vodi, suspendovane na hidratisanoj glinici. Zaslađivači uključuju saharozu, laktozu, manitol i veštačke zaslađivače kao što je saharin i bilo koji broj sprejem osušenih ukusa. Dodaci ukusa uključuju prirodne ukuse ekstrahovane iz biljaka kao što je voće i sintetičke mešavine jedinjenja koje prizvode prijatan ukus, kao što su, ali nisu ograničeni na, pepermint i metil salicilat. Sredstva za kvašenje uključuju propilen glikol monostearat, sorbitan monooleat, dietilen glikol monolaurat i polioksietilen laural etar. Emetičke prevlake uključuju masne kiseline, masti, voskove, šelak, amonijačni šelak i celulozu acetat ftalate. Film-prevlake uključuju hidroksietilcelulozu, natrijum karboksimetilcelulozu, polietilen glikol 4000 i celulozu acetat ftalat.
[0355] Antitela obezbeđena ovde mogu biti obezbeđena u sastavu koji ih štiti od kisele sredine stomaka. Na primer, sastav može biti formulisan u enteričkoj oblozi koja zadržava svoj integritet u stomaku i oslobađa aktivno jedinjenje u creva. Sastav može biti formulisan i u kombinaciji sa antacidom ili nekim drugim takvim sastojkom.
[0356] Kad je oblik jedinične doze kapsula, ona može da sadrži, pored materijala gornjeg tipa, tečni nosač kao što je neisparljivo ulje. Pored toga, oblici jedinične doze mogu da sadrže razne druge materijale koji modifikuju fizički oblik jedinične doze, na primer, obloge od šećera i druga enterička sredstva. Jedinjenja mogu da se daju i kao komponenta eliksira, suspenzije, sirupa, topljiva tableta, kapsule koje se otvaraju, žvakaće gume ili slično. Sirup
2
može da sadrži, pored aktivnih jedinjenja, saharozu kao zaslađivač i određene konzervanse, boje i ukuse.
[0357] Antitelo može da se pomeša i sa drugim aktivnim materijalima koji ne ometaju željeno dejstvo ili sa materijalima koji dopunjavaju željeno dejstvo, kao što su anticidi, blokeri H2 i diuretici. Aktivni sastojak je antitelo ili njegov farmaceutski prihvatljiv derivat kao što je opisano ovde. Više koncentracije, do oko 98 težinskih % aktivnog sastojka mogu biti uključene.
[0358] U svim aspektima, formulacije kao tablete i kapsule mogu biti obložene kao što je poznato stručnjacima u ovoj oblasti, da bi se modifikovalo ili održalo rastvaranje aktivnog sastojka. Tako, na primer, one mogu biti obložene konvencionalnim enterički svarljivim prevlakama, kao što su fenilsalicilat, voskovi i celuloza acetat pftalat.
[0359] U nekim specifičnim aspektima, formulacije su tečni oblici doza. Tečni oralni oblici doza uključuju vodene rastvore, emulzije, suspenzije, rastvore i/ili suspenzije rekonstituisane iz nešumećih granula i šumećih preparata rekonstituisanih iz šumećih granula. Vodeni rastvori uključuju, na primer, eliksire i sirupe. Emulzije su ili ulje u vodi ili voda u ulju.
[0360] Eliksiri su providni, zaslađeni, hidroalkoholni preparati. Farmaceutski prihvatljivi nosači koji se koriste u eliksirima uključuju rastvarače. Sirupi su koncentrovani vodeni rastvori šećera, na primer, saharoze i mogu da sadrže konzervans. Emulzija je dvofazan sistem u kom je jedna tečnost dispergovana u vidu malih globula u drugoj tečnosti. Farmaceutiski prihvatljivi nosači koji se koriste u emulzijama su nevodene tečnosti, emulzifikatori i konzervans. Suspenzije koriste farmaceutski prihvatljiva sredstva za suspendovanje i konzervanse. Farmaceutiski prihvatljive supstance koje se koriste u nešumećim granulama, koje će se rekonstituisati u tečnu oralnu formu doze, uključuju razblaživače, zaslađivače i sredstva za kvašenje. Farmaceutiski prihvatljive supstance koje se koriste u šumećim granulama, koje će se rekonstituisati u tečnu oralnu formu doze, uključuju organske kiseline i izvor ugljen dioksida. Sredstva za bojenje i ukus se koriste u svim gornjim vidovima doza.
[0361] Rastvarači uključuju glicerin, sorbitol, etil alkohol i sirup. Primeri konzervanasa uključuju glicerin, metil i propilparaben, benzojevu kiselinu, natrijum benzoat i alkohol. Primeri nevodenih tečnosti korišćenih u emulzijama uključuju mineralno ulje i ulje od semena pamuka. Primeri emulzifikatora uključuju želatin, akaciju, tragakant, bentonit i surfaktante kao što je polioksietilen sorbitan monooleat. Sredstva za suspendovanje uključuju natrijum karboksimetilcelulozu, pektin, tragakant, veegum i akaciju. Zaslađivači uključuju saharozu, sirupe, glicerin i veštačke zaslađivače kao što je saharin. Sredstva za kvašenje uključuju propilen glikol monostearat, sorbitan monooleat, dietilen glikol monolaurat i polioksietilen lauril etar. Organske kiseline uključuju limunsku i vinsku kiselinu. Izvori ugljenk dioksida uključuju natrijum bikarbonat i natrijum karbonat. Sredstva za bojenje uključuju bilo koju od odobrenih sertifikovanih FD i C boja rastvorljivih u vodi, njihove smese. Sredstva za ukus uključuju prirodne ukuse ekstrahovane iz biljaka kao što je voće i sintetičke mešavine jedinjenja koje prizvode prijatan ukus.
[0362] Za čvrste forme doze, rastvor ili suspenzija u, na primer, propilen karbonatu, biljnim uljima ili trigliceridima je u jednom aspektu, inkapsulirana u želatinskoj kapsuli. Takvi rastvori i njihovo dobijanje i inkapsulacija, su opisani u U.S. patentima br. 4,328,245; 4,409,239 i 4,410,545. Za tečne forme doze, rastvor, npr., na primer u polietilen glikolu, može
2
da bude razblažen dovoljnom količinom farmaceutski prihvatljivog tečnog nosača, npr., vode, da bi se lako merio za administraciju.
[0363] Alternativno, tečne ili polučvrste oralne formulacije se mogu dobijati rastvaranjem ili dispergovanjem aktivnog jedinjenja ili soli u biljnim uljima, glikolima, trigliceridima, propilen glikol estrima (npr., propilen karbonat) i drugim takvim nosačima i ovi rastvori ili suspenzije se inkapsuliraju u tvrde ili meke omotače želatinskih kapsula. Druge korisne formulacije uključuju one date u U.S. patentima br. RE28,819 i 4,358,603. Ukratko, takve formulacije uključuju, ali nisu ograničene na, one koje sadrže jedinjenja obezbeđena ovde, dialkilovan mono- ili polialkilen glikol, uključujući, ali ne ograničavajući se na, 1,2-dimetoksimetan, diglim, triglim, tetraglim, polietilen glikol-350-dimetil etar, polietilen glikol-550-dimetil etar, polietilen glikol-750-dimetil etar, gde se 350, 550 i 750 odnose na približnu prosečnu molekulsku težinu polietilen glikola i jedan ili više antioksidanasa, kao što su butilovan hidroksitoluen (BHT), butilovan hidroksianizol (BHA), propil galat, vitamin E, hidrokinon, hidroksikumarini, etanolamin, lecitin, cefalin, askorbinska kiselina, jabučna kiselina, sorbitol, fosforna kiselina, tiodipropionska kiselina i njeni estri i ditiokarbamati.
[0364] Druge formulacije uključuju, ali nisu ograničene na, vodene alkoholne rastvore uključujući farmaceutski prihvatljiv acetal. Alkoholi koji se koriste u ovim formulacijama su bilo koji farmaceutski prihvatljivi rastvarači mešljivi sa vodom koji imaju jednu ili više hidroksil grupa, uključujući, ali ne ograničavajući se na, propilen glikol i etanol. Acetali uključuju, ali nisu ograničeni na, di(niži alkil) acetale nižih alkil aldehida, kao što je acetaldehid dietil acetal.
[0365] Parenteralna administracija u jednom aspektu, okarakterisana injektiranjem, subkutano, intramuskularno ili intravenozno, je takođe predviđena ovde. Injekcije se mogu praviti u konvencionalnim formama, kao tečni rastvori ili suspenzije, čvrste forme pogodne za rastvor ili suspenziju u tečnosti pre injektiranja ili kao emulzije. Injekcije, rastvori i emulzije takođe sadrže jedan ili više ekscipijenata. Pogodni ekscipijenti su, na primer, voda, slani rastvor, dekstroza, glicerol ili etanol. Pored toga, ako se želi, farmaceutski sastavi za administraciju mogu da sadrže i manje količine netoksičnih pomoćnih supstanci kao što su sredstva za kvašenje ili emulzifikatori, puferi pH, stabilizatori, pojačivači rastvorljivosti i drugi takvi agensi, kao što su, na primer, natrijum acetat, sorbitan monolaurat, trietanolamin oleat i ciklodekstrini.
[0366] Implantacija sistema sa sporim ili odloženim otpuštanjem, takvih gde se održava konstantan nivo doze (videti, npr., U.S. patent br. 3,710,795) je takođe predviđena ovde. Ukratko, jedinjenje obezbeđeno ovde je dispergovano u čvrstom unutrašnjem matriksu, npr., polimetilmetakrilatu, polibutilmetakrilatu, plastificiranom ili neplastificiranom polivinilhloridu, plastificiranom najlonu, plastificiranom polietilentereftalatu, prirodnoj gumi, poliizoprenu, poliizobutilenu, polibutadienu, polietilenu, kopolimerima etilen-vinilacetat, silikonskim gumama, polidimetilsiloksanu, kopolimerima silikona i karbonata, hidrofilnim polimerima, kao što su hidrogelovi estara akrilne i metakrilne kiseline, kolagen, unakrsno vezan polivinilalkohol i unakrsno vezan delimično hidrolizovan polivinil acetat, koji je okružen spoljnom polimernom membranom od, npr., polietilena, polipropilena, kopolimera etilen/propilen, kopolimera etilen/etil akrilat, kopolimera etilen/vinilacetat, silikonskih guma, polidimetil siloksana, neoprenske gume, hlorisanog polietilena, polivinilhlorida, vinilhloridnog kopolimera sa vinil acetatom, viniliden hloridom, etilenom i propilenom, jonomera polietilen tereftalata, butil gume, pihlorohidrin guma, kopolimera etilen/vinil alkohol, terpolimera etilen/vinil acetat/vinil alkohol i kopolimera etilen/viniloksietanol, koji je
2
nerastvorljiv u telesnim tečnostima. Antitelo difunduje kroz spoljnu polimernu membranu u koraku sa kontrolom brzine otpuštanja. Količina antitela koja se sadrži u takvim parenteralnim sastavima jako zavisi od njihove specifične prirode, kao i od aktivnosti jedinjenja i potreba subjekta.
[0367] Preparati za parenteralnu administraciju uključuju sterilne rastvore spremne za injektiranje, sterilne suve rastvorljive proizvode, kao što su liofilizovani prahovi, spremni za kombinovanje sa rastvaračem pred samu upotrebu, uključujući hipodermne tablete, sterilne suspenzije spremne za injektiranje, sterilne suve nerastvorljive proizvode spremne za kombinovanje sa nosačem pred samu upotrebu i sterilne emulzije. Rastvori mogu biti ili vodeni ili nevodeni.
[0368] Ako se administriraju intravenozno, pogodni nosači uključuju fiziološki slani rastvor ili slani rastvor puferisan fosfatom (PBS) i rastvore koji sadrže sredstva za zgušnjavanje i rastvaranje, kao što je glukoza, polietilen glikol i polipropilen glikol i njihove smese.
[0369] Farmaceutiski prihvatljivi nosači koji se koriste u parenteralnim preparatima uključuju vodene nosače, nevodene nosače, antimikrobijalne agense, izotonične agense, pufere, antioksidanse, lokalne anestetike, agense za suspendovanje i dispergovanje, emulzifikatore, sekvestratore ili agense za heliranje i druge farmaceutski prihvatljive supstance.
[0370] Primeri vodenih nosača uključuju injekciju natrijum hlorida, Ringerovu injekciju, izotoničnu dekstroznu injekciju, sterilnu vodenu injekciju, dekstrozu i laktatnu Ringerovu injekciju. Nevodeni parenteralni nosači uključuju fiksirana ulja biljnog porekla, ulje od semena pamuka, kukuruzno ulje, susamovo ulje i ulje od kikirikija. Antimikrobijalni agensi u bakteriostatskim ili fungistatskim koncentracijama se mogu dodati u parenteralne preparate, pakovane u kontejnere za višestruke doze, koji uključuju fenole ili krezole, živina jedinjenja, benzil alkohol, hlorobutanol, estre metil i propil p-hidroksibenzojeve kiseline, timerosal, benzalkonijum hlorid i benzetonijum hlorid. Izotonični agensi uključuju natrijum hlorid i dekstrozu. Puferi uključuju fosfat i citrat. Antioksidansi uključuju natrijum bisulfat. Lokalni anestetici uključuju prokain hidrohlorid. Agensi za suspendovanje i dispergovanje uključuju natrijum karboksimetilcelulozu, hidroksipropil metilcelulozu i polivinilpirolidon. Emulzifikatori uključuju polisorbat 80 (TWEEN® 80). Sekvestrator ili agens za heliranje metalnih jona uključuje EDTA. Farmaceutski nosači uključuju i etil alkohol, polietilen glikol i propilen glikol za nosače mešljive sa vodom i natrijum hidroksid, hlorovodoničnu kiselinu, limunsku kiselinu ili mlečnu kiselinu za podešavanje pH.
[0371] Koncentracija farmaceutski aktivnog jedinjenja se podešava tako da injekcija obezbeđuje efektivnu količinu koja proizvodi željeni farmakološki efekat. Tačna doza zavisi od starosti, težini i stanja pacijenta ili životinje, kao što je poznato u struci.
[0372] Jedinična doza parenteralnih preparata može da se pakuje u ampulu, fiolu ili špric sa iglom. Svi preparati za parenteralnu administraciju mogu biti sterilni, kao što je poznato i kao što se praktikuje u struci.
[0373] Iustrativno, intravenska ili intraarterijska infuzija sterilnog vodenog rastvora koji sadrži aktivno jedinjenje je efektivan način administracije. Drugi aspekt je sterilan vodeni ili uljni rastvor ili suspenzija, koja sadrži aktivan materijal injektiran kao što je neophodno da proizvede željeni farmakološki efekat.
2 1
[0374] Injekcije su dizajnirane za lokalnu i sistemsku administraciju. U jednom aspektu, terapijski efektivna doza je formulisana da sadrži koncentraciju od bar oko 0,1 tež. % pa do oko 90 tež. % ili više. U određenim aspektima, više od 1 tež. % aktivnog jedinjenja za tretirano tkivo.
[0375] Antitelo može biti suspendovano u mikronizovanoj ili drugoj pogodnoj formi. Oblik dobijene smese zavisi od broja faktora, uključujući predviđen način administracije i rastvorljivost jedinjenja u izabranom nosaču ili nosiocu. Efektivna koncentracija je dovoljna za ublažavanje simptoma stanja i može se empirijski odrediti.
[0376] U drugim aspektima, farmaceutske formulacije su liofilizovani prahovi, koji se mogu rekonstituisati za administraciju kao rastvori, emulzije i druge smese. Oni se mogu rekonstituisati i formulisati i kao čvrsti ili gelovi.
[0377] Liofilizovan prah se dobija rastvaranjem antitela obezbeđenog ovde ili njegovog farmaceutski prihvatljivog derivata u pogodnom rastvaraču. U nekim aspektima, liofilizovan prah je sterilan. Rastvarač može da sadrži ekscipijent koji popravlja stabilnost ili drugu farmakološku komponentu praha ili rekonstituisanog rastvora, dobijenog iz praha. Ekscipijenti koji se mogu koristiti uključuju, ali nisu ograničeni na, dekstrozu, sorbitol, fruktozu, kukuruzni sirup, ksilitol, glicerin, glukozu, saharozu ili druge pogodne agense. Rastvarač može da sadrži i pufer, kao što je citrat, natrijum ili kalijum fosfat ili drugi takav pufer poznat stručnjacima u ovoj oblasti, za, u jednom aspektu, oko neutralan pH. Sledeća sterilna filtracija rastvora praćena liofilizacijom u standardnim uslovima, poznatim stručnjacima u ovoj oblasti, obezbeđuje željenu formulaciju. U jednom aspektu, dobijeni rastvor će biti podeljen po porcijama u fiole za liofilizaciju. Svaka fiola će sadržati jednu dozu ili višee doza jedinjenja. Liofilizovan prah se može čuvati u odgovarajućim uslovima, kao što je na oko 4 °C do sobne temperature.
[0378] Rekonstitucija ovog liofilizovanog praha sa vodom za injekcije obezbeđuje formulaciju za upotrebu u parenteralnoj administraciji. Za rekonstituciju, liofilizovan prah se dodaje u sterilnu vodu ili u drugi pogodan nosač. Precizna količina zavisi od izabranog jedinjenja. Takva količina se može empirijski odrediti.
[0379] Topičke smese se dobijaju kao što je opisano za lokalnu i sistemsku administraciju. Dobijene smese mogu biti rastvor, suspenzija, emulzije ili slično i mogu biti formulisane kao kreme, gelovi, pomade, emulzije, rastvori, eliksiri, losioni, suspenzije, tinkture, paste, pene, aerosoli, irigacije, sprejevi, supozitorije, zavoji, dermalni flasteri ili bilo koje druge formulacije pogodne za topičku administraciju.
[0380] Antitela obezbeđena ovde mogu biti formulisana kao aerosoli za topičku primenu, kao što je inhalacijom (videti, npr., U.S. patente br.4,044,126, 4,414,209 i 4,364,923, koji opisuju aerosole za dostavu steroida korisnih za lečenje inflamatornih bolesti, naročito astme). Ove formulacije za administraciju u respiratorni trakt mogu biti u vidu aerosola ili rastvora za nebulizator ili kao mikrofini prah za udisanje, sam ili u kombinaciji sa inertnim nosačem kao što je laktoza. U takvim slučajevima, čestice formulacije će, u jednom aspektu, imati diametar manji od 50 mikrona, u jednom aspektu, manji od 10 mikrona.
[0381] Jedinjenja se mogu formulisati za lokalnu ili topičku primenu, kao što je za topičku primenu na kožu i mukozne membrane, kao što je u oko u vidu gelova, krema i losiona i za primenu u oko ili za intracističnu ili intraspinalnu primenu. Topička administracija je
2 2
zamišljena za transdermalnu dostavu, a i za administraciju u oči ili mukozu ili za inhalaciju terapije. Nazalni rastvori aktivnog jedinjenja samog ili u kombinaciji sa drugim farmaceutski prihvatljivim ekscipijentima se takođe može administrirati.
[0382] Ovi rastvori, naročito oni namenjeni za oftalmičku upotrebu, mogu se formulisati kao 0,01% - 10% izotonični rastvori, pH oko 5-7, sa odgovarajućim solima.
[0383] Drugi putevi administracije, kao što su transdermalni flasteri, uključujući jontoforetske i elektroforetske uređaje i rektalnu administraciju, su ovde takođe predviđeni.
[0384] Transdermalni flasteri, uključujući jontoforetske i elektroforetske uređaje, su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti. Na primer, takvi flasteri su opisani u U.S. patentima br.
6,267,983, 6,261,595, 6,256,533, 6,167,301, 6,024,975, 6,010715, 5,985,317, 5,983,134, 5,948,433 i 5,860,957.
[0385] Na primer, farmaceutski oblici doza za rektalnu administraciju su rektalne supozitorije, kapsule i tablete za sistemski efekat. Rektalne supozitorije, kao što se ovde koristi, označava čvrsta tela za insertovanje u rektum koja se tope ili omekšavaju na telesnoj temperaturi, oslobađajući jedan ili više farmakološki ili terapijski aktivnih sastojaka. Farmaceutiski prihvatljive supstance koje se koriste u rektalnim supozitorijama su baze ili nosači i agensi za podizanje tačke topljenja. Primeri osnova uključuju kakao puter (teobroma ulje), glicerinželatin, vosak (polioksietilen glikol) i odgovarajuće smese mono-, di- i triglicerida masnih kiselina. Mogu se koristiti kombinacije različitih osnova. Agensi za podizanje tačke topljenja supozitorije uključuju spermaceti i vosak. Rektalne supozitorije se mogu dobijati bilo metodom kompresije, bilo kalupima. Težina rektalne supozitorije u jednom aspektu, je oko 2 do 3 gm.
[0386] Tablete i kapsule za rektalnu administraciju se mogu proizvoditi primenom iste farmaceutski prihvatljive supstance i istim metodima kao za formulacije za oralnu administraciju.
[0387] Antitela i drugi sastavi obezbeđeni ovde takođe se mogu formulisati da budu ciljani na određeno tkivo, receptor ili drugu oblast u telu subjekta koji se tretira. Bilo koji takvi metodi za ciljanje su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti. Svi takvi metodi za ciljanje su zamišljeni ovde za upotrebu u sastavima za neposrednu upotrebu. Za neograničavajuće primere metoda sa ciljanjem, videti, npr., U.S. patente br. 6,316,652, 6,274,552, 6,271,359, 6,253,872, 6,139,865, 6,131,570, 6,120,751, 6,071,495, 6,060,082, 6,048,736, 6,039,975, 6,004,534, 5,985,307, 5,972,366, 5,900,252, 5,840,674, 5,759,542 i 5,709,874.
[0388] U jednom aspektu, lipozomske suspenzije, uključujući tkivno usmerene lipozome, kao što su lipozomi usmereni na tumor, mogu takođe biti pogodne kao farmaceutski prihvatljivi nosači. Oni se mogu dobijati u skladu sa metodima poznatim stručnjacima u ovoj oblasti. Na primer, lipozomske formulacije se mogu dobijati kao što je opisano u U.S. patentu br.
4,522,811. Ukratko, lipozomi, kao što su multilamelarne vezikule (MLV) mogu se formirati sušenjem fosfatidil holina iz jajeta i fosfatidil serina iz mozga (molarni odnos 7:3) na unutrašnjosti balona. Rastvor jedinjenja obezbeđenih ovde u fosfatno puferisanom slanom rastvoru bez dvovalentnih katjona (PBS) se dodaje i balon se mućka dok se lipidni film ne disperguje. Dobijene vezikule se operu da bi se odstranilo neinkapsulirano jedinjenje, staložene centrifugiranjem, a zatim ponovo suspenduju u PBS.
2
METODI ADMINISTRACIJE I DOZIRANJE
[0389] Ovde su obezbeđeni i sastavi koji sadrže jedno ili više antitela obezbeđenih ovde za upotrebu u sprečavanju, lečenju ili ublažavanju jednog ili više simptoma bolesti, kao što je bolest posredovana C10orf54.
[0390] U određenim aspektima, ovde su obezbeđeni i sastavi koji sadrže jedno ili više antitela obezbeđenih ovde za upotrebu u upravljanju, sprečavanju ili lečenju bolesti posredovane C10orf54 i/ili ublažavanju jednog ili više simptoma bolesti posredovane C10orf54. Primeri bolesti posredovane C10orf54s uključuju poremećaj proliferacije ćelija, kancer, tumor i bolest kalem protiv domaćina (GVHD) ili njihove simptome.
[0391] U određenim aspektima, ovde su obezbeđeni sastavi koji sadrže jedno ili više antitela obezbeđenih ovde za upotrebu u sprečavanju, lečenju ili ublažavanju jednog ili više simptoma bolesti posredovane C10orf54, kao što je poremećaj proliferacije ćelija. Poremećaj proliferacije ćelija može da uključuje stvaranje kancera ili tumora ili njihove simptome. U određenim aspektima, poremećaj proliferacije ćelija je povdezan sa povećanom ekspresijom i/ili aktivnošću C10orf54. Na primer, u određenim aspektima, poremećaj proliferacije ćelija je povdezan sa povećanom ekspresijom C10orf54 na površini kancerskih ćelija. Primeri poremećaja proliferacije ćelija koji se leči, sprečava ili čiji se simptomi ublažavaju pomoću antitela obezbeđenih ovde uključuju, ali nisu ograničeni na, kancer bešike, dojke, kolona, vezivnog tkiva, rektalnog, gastričnog, ezofagusnog, pluća, larinksa, bubrega, usta, jajnika ili prostate ili sarkome, melanome, gliome, limfome ili leukemije ili metastaze bilo kog od ovih kancera. Primeri poremećaja proliferacije ćelija uključuju, ali nisu ograničeni na, leukemiju, bilo akutnu bilo hroničnu, fibrosarkom i kancer bešike.
[0392] Leukemije su kanceri tkiva u sastavu krvi koji se odlikuju poremećenom proliferacijom i razvojem leukocita i njihovih prekursora u krvi i bkostnoj srži. Leukemije se tipično klasifikuju bilo kao hronične (koje sporo napreduju) bilo kao akutne (koje brzo napreduju). Leukemije se mogu dalje klasifikovati na osnovu tipa krvnih ćelija koje su pogođene. Na primer, leukemija limfoidnih ćelija uključuje limfoidnu leukemiju, limfocitnu leukemiju ili limfoblastnu leukemiju, a leukemija mijeloidnih ćelija uključuju mijeloidnu leukemiju, mijelogenu leukemiju, mijeloblastnu leukemiju ili granulocitnu leukemiju. Četiri glavna tipa leukemija koji se mogu lečiti, sprečiti ili čiji se simptomi mogu ublažiti metodima obezbeđenim ovde uključuju akutnu limfoblastnu leukemiju (ALL), hroničnu limfocitnu leukemiju (CLL), akutnu mijelogenu leukemiju (AML) i hroničnu mijeloblastnu leukemiju (CML).
[0393] U jednom aspektu, ovde su obezbeđeni metodi za sprečavanje ili lečenje bolesti opisani ovde, davanjem subjektu terapijski efektivne količine, antitela na C10orf54 opisana ovde ili njihovog sastava. U određenim aspektima, metod za lečenje bolesti sadrži administriranje subjektu terapijski efektivne količine farmaceutske formulacije koja sadrži antitelo na C10orf54 i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijent. Metod obezbeđen ovde može opciono da uključuje i bar jedan dodatni terapijski agens, kao što su oni obezbeđeni ovde, bilo kao odvojen tretman, bilo konjugovan ili rekombinantno fuzionisan sa antitelom na C10orf54 obezbeđenim ovde.
[0394] U jednom aspektu, antitelo na C10orf54 obezbeđeno ovde može se koristiti za ciljanje C10orf54 koji eksprimiraju ćelije kancera, dovođenjem u dodir antitela sa C10orf54 da bi se formirao kompleks antitelo-antigen takav da konjugovan ili rekombinantno fuzionisan agens
2 4
opisan ovde dopre do unutrašnjosti ćelije. U jednom aspektu, vezano antitelo se internalizuje u kancersku ćeliju koja eksprimira C10orf54.
[0395] U određenim aspektima, ovde su obezbeđeni sastavi koji sadrže jedno ili više antitela obezbeđenih ovde za upotrebu u sprečavanju, lečenju ili ublažavanju jednog ili više simptoma bolesti posredovane C10orf54, kao što je GVHD ili njegov simptom. GVHD se generalno javlja posle alogenih ili sparenih nesrodnih transplanta kostne srži (BMT).
[0396] U nekim aspektima, GVHD je akutni GVHD. Simptomi akutnog GVHD mogu da se dese brzo i mogu da budu blagi ili jaki. U određenim primerima, akutni GVHD se razvije u okviru oko tri meseca posle transplanta, kao, na primer, kad se krvna zrnca oporave posle transplanta. U određenim primerima, akutni GVHD pogađa kožu, gastrointestinalni (GI) trakt i/ili jetru. Na primer, kod nekih pacijenata, akutni kožni GVHD počinje osipom, na primer, na dlanovima pacijentovih šaka, tabanima stopala ili ramenima. Međutim, osip može da se raširi i može da svrbi i boli i/ili da pravi plikove i da se ljušti. Akutni GVHD jetre može da pogodi normalne fukcije jetre, na primer, enzime jetre i može da izazove žuticu. Akutni GVHD jetre može da izazove i da pacijentov abdomen otekne i da boli ako se jetra uveća. Konačno, simptomi akutnog GVHD creva (ili GVHD digestivnog sistema) mogu da uključe dijareju, mukus ili krv u stolici, grčeve ili bol u abdomenu, probleme s varenjem, mučninu i/ili gubitak appetita. Drugi opšti simptomi akutnog GVHD mogu da uključuju anemiju, malo povišenu temperaturu i/ili veću sklonost ka infekcijama. Bilo koja kombinacija ovih simptoma akutnog GVHD može da se spreči, leči i/ili ublaži primenom sastava i metoda obezbeđenih ovde.
[0397] U drugim aspektima, GVHD je hronični GVHD. Hronični GVHD može da se pojavi od oko tri meseca do oko godinu dana ili duže posle transplanta. Hronični GVHD can be mild ili severe i generally uključuje simptoms slični to those of akutni GVHD. Hronični GVHD može da pogodi kožu i digestivni sistem, uključujući jetru, ali može da uključi i druge organe i imuni sistem (npr., da čini pacijenta sklonijim infekcijama) i/ili vezivna tkiva. Simptomi hroničnog GVHD kože uključuju osip, suvu kožu, zategnutu kožu, svrab na koži, tamnjenje kože, zadebljavanje kože i/ili može da pogodi kosu (npr., gubitak kose, seđenje) ili nokte (npr., tvrdi ili krti nokti). Hronični GVHD creva može da pogodi digestivni sistem, usta, ezofagus, stomačnu mukozu i/ili crevnu mukozu i simptomi mogu da uključuju dijareju, suva usta ili ranice u ustima, bolno gutanje, slabu apsorpciju nutrijenata u stomaku, nadimanje, grčeve u stomaku. Hronični GVHD jetre može da izazove oštećenja i ožiljke na jetri (ciroza). Hronični GVHD očiju može da pogodi suzne žljezde, izazivajući suvoću očiju, pečenje i bol ili teškoću da se toleriše jako svetlo. Hronični GVHD pluća može da izazove kratak dah, šištanje, uporan kašalj i/ili povećanu sklonost infekcijama grudi. Hronični GVHD pogađa tetive (npr. inflamacija) koje povezuju mišiće za kosti izazivajući teškoću pri ispravljanju ili savijanju ruku i nogu. Bilo koja kombinacija ovih simptoma hroničnog GVHD može da se spreči, leči i/ili ublaži primenom sastava i metoda obezbeđenih ovde.
[0398] U određenim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde može može da se koristi u, na primer, in vitro, ex vivo i in vivo terapijskim metodima. U nekim aspektima, ovde su obezbeđeni metodi za inhibiranje rasta ili proliferacije ćelija, bilo in vivo, bilo in vitro, gde metod sadrži dovođenje u dodir ćelije sa efektivnom količinom sastava ili antitela na C10orf54 obezbeđenih ovde. U nekim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde može da se koristi u metodu za indukovanje ćelijske smrti. Metod može da obuhvata dovođenje u dodir ćelije sa efektivnom količinom sastava ili antitela na C10orf54 obezbeđenih ovde. Metodi mogu da se rade u uslovima koji dozvoljavaju vezivanje antitela za polipeptid C10orf54, polipeptidni fragment ili epitop, kao što je, ali nije ograničen na, slučaj kad je polipeptid
2
C10orf54 eksprimiran na površini ćelije. Za inhibiranje rasta ćelija ili proliferacije ćelija, inhibicija može da uključuje smanjenje rasta ili proliferacije ćelija za bar 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ili 100% i može da uključuje ćelijsku smrt. U određenim aspektima, ćelija je kancerska ćelija ili predkancerska ćelija. U određenim aspektima, ćelija je ćelija kancera bešike, dojke, kolona, vezivnog tkiva, rektalnog, gastričnog, ezofagusnog, pluća, larinksa, bubrega, usta, jajnika ili prostate ili ćelija sarkoma, melanoma, glioma, limfoma ili leukemije. U određenim aspektima, ćelija je imuna ćelija koja eksprimira polipeptid C10orf54, kao što je, ali nije ograničen na, regulatorna T ćelija (tj. supresorska T ćelija).
[0399] Antitelo na C10orf54 se može administrirati čoveku u terapijske ili profilaktičke svrhe. Štaviše, antitelo na C10orf54 se može administrirati ne-humanom sisaru koji eksprimira C10orf54 sa kojim antitelo unakrsno reaguje (npr., primat, svinja, pacov ili miš) u veterinarske svrhe ili kao životinjski model humane bolesti. U vezi sa poslednjim, takvi životinjski modeli mogu biti korisni za procenu terapijske ili profilaktičke efikasnosti antitela ili imunokonjugata obezbeđenih ovde (npr., testiranje doza i vremena administracije).
[0400] U određenim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde može da se koristi u metodu modulisanja imunog odgovora u subjektu. Takvi metodi mogu da uključuju administriranje efektivne količine sastava, koji sadrže antitelo obezbeđeno ovde, subjektu. U nekim aspektima, modulisanje može da uključuje (a) povećanje aktivacije T ćelija; (b) povećanje proliferacije T ćelija i/ili (c) povećanje proizvodnje citokina. Metodi za testiranje modulacije imunog odgovora su dobro poznati stručnjaku u ovoj oblasti i podrazumeva se da bi iskusan stručnjak bio sposoban da spremno sprovede takve testove.
[0401] U jednom specifičnom aspektu, sastav za upotrebu u upravljanju, sprečavanju, lečenju i/ili ublažavanju jednog ili više simptoma bolesti posredovane C10orf54 sadrži antitelo kao što je opisano ovde. U jednom drugom specifičnom aspektu, sastav za upotrebu u u upravljanju, sprečavanju, lečenju i/ili ublažavanju jednog ili više simptoma bolesti posredovane C10orf54 sadrži fragment za vezivanje antigena, fuzioni protein ili funkcionalni fragment antitela kao što je opisano ovde.
[0402] U jednom drugom aspektu, sastav za upotrebu u upravljanju, sprečavanju, lečenju i/ili ublažavanju jednog ili više simptoma bolesti posredovane C10orf54 sadrži jedno ili više antitela opisanih ovde.
[0403] Kao što je diskutovano detaljnije na drugom mestu ovde, sastav obezbeđen ovde može da se koristi bilo sam, bilo u kombinaciji sa drugim jedinjenjima ili sastavima. Štaviše, antitela mogu dalje da se rekombinantno fuzionišu sa heterolognim polipeptidom na N- ili C-terminusu ili da se hemijski konjuguju (uključujući kovalentne i nekovalentne konjugacije) sa polipeptidima ili drugim sastavima. Na primer, antitela obezbeđena ovde se mogu rekombinantno fuzionisati ili konjugovati sa molekulima korisnim kao obeleživači u testovima za detekciju i efektorskim molekulima kao što su heterologni polipeptidi, lekovi, radionukleotidi ili toksini. Videti, npr., PCT publikacije WO 92/08495; WO 91/14438; WO 89/12624; U.S. patent br.5,314,995 i EP 396,387.
[0404] Antitela obezbeđena ovde mogu se koristiti, na primer, da prečiste, detektuju i ciljaju C10orf54 antigene i u in vitro i u in vivo dijagnostičkim i terapijskim metodima. Na primer, modifikovana antitela se koriste u imunoesejima za kvalitativno i kvantitativno merenje nivoa
2
C10orf54 u biološkim uzorcima. Videti, npr., Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed.1988).
[0405] Ovde su obezbeđeni i metodi upravljanja, sprečavanja, lečenja i/ili ublažavanja jednog ili više simptoma bolesti posredovane C10orf54 administriranjem subjektu efektivne količine antitela ili farmaceutskog sastava koji sadrži antitelo obezbeđeno ovde. U jednom aspektu, antitelo je suštinski prečišćeno (npr., suštinski oslobođeno od supstanci koje ograničavaju njegov efekat ili proizvode neželjene bočne efekte). U nekim specifičnim aspektima, antitelo je humanizovano monoklonsko antitelo. Subjekt kome je administrirana terapija može biti sisar kao što je ne-primat (npr., krave, svinje, konji, mačke, psi, pacovi itd.) ili primat (npr., majmun, kao što je majmun monkey ili i čovek itd.). U jednom specifičnom aspektu, subjekt je čovek. U jednom drugom aspektu, subjekt čovek sa bolešću posredovanom C10orf54.
[0406] Razni sistemi dostave su poznati i mogu se koristiti da se administrira profilaktički ili terapijski agens (npr., antitelo obezbeđeno ovde), uključujući, ali ne ograničavajući se na, inkapsulaciju u lipozome, mikročestice, mikrokapsule, rekombinantne ćelije sposobne da eksprimiraju antitelo, endocitozu posredovanu receptorima (videti, npr., Wu i Wu, J. Biol. Chem. 262:4429-4432 (1987)), konstrukciju nukleinske kiseline kao deo retrovirusnog ili drugog vektora itd. Metodi administriranje profilaktičkog ili terapijskog agensa (npr., antitelo obezbeđeno ovde) ili farmaceutskog sastava uključuju, ali nisu ograničeni na, parenteralnu administraciju (npr. intradermalnu, intramuskularnu, intraperitonealnu, intravensku i subkutanu), epiduralnu i mukoznu (npr. intranazalni i oralni putevi). U jednom specifičnom aspektu, profilaktički ili terapijski agens (npr., antitelo obezbeđeno ovde) ili farmaceutski sastav je administriran intranazalno, intramuskularno, intravenski ili subkutano. Profilaktički ili terapijski agensi ili sastavi mogu biti administrirani bilo kojim pogodnim putem, na primer, infuzijom ili bolus injekcijom, apsorpcijom kroz epitelno ili mukokutano tkivo (npr., oralna mukoza, intranazalna mukoza, rektalna i intestinalna mukoza itd.) i mogu biti administrirani zajedno sa drugim biološki aktivnim agensima. Administracija može biti sistemska ili lokalna. Pored toga, pulmonalna administracija se takođe može koristiti, npr., primenom inhalatora ili nebulizatora i formulacije sa agensima za aerosolizaciju. Videti, npr., U.S. patente br.
6,019,968, 5,985,320, 5,985,309, 5,934,272, 5,874,064, 5,855,913, 5,290,540 i 4,880,078 i PCT Publikacija Nos. WO 92/19244, WO 97/32572, WO 97/44013, WO 98/31346 i WO 99/66903.
[0407] U jednom specifičnom aspektu, može biti poželjno da se administrira profilaktički ili terapijski agens ili farmaceutski sastav obezbeđen ovde lokalno u oblast kojoj je potreban tretman. To se može postići, na primer i bez ograničenja, lokalnom infuzijom, topičkom administracijom (npr., intranazalnim sprejem), injekcijom ili putem implanta, gde je implant od poroznog, neporoznog ili želatinoznog materijala, uključujući membrane, kao što su elastične membrane ili vlakna. U određenim aspektima, prilikom administriranja antitela obezbeđenog ovde, mora se voditi računa da se koriste materijali koji ne apsorbuju antitelo.
[0408] U jednom drugom aspektu, terapijski agens ili sastav obezbeđen ovde se može dostaviti u vezikuli, naročito u lipozomu (videti Langer, 1990, Science 249:1527-1533; Treat et al., u Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, str.353- 365 (1989); Lopez-Berestein ibid., str.317-327; videti uopšteno ibid.).
[0409] U jednom drugom aspektu, terapijski agens ili sastav obezbeđen ovde se može dostaviti u sistemu sa kontrolisanim oslobađanjem ili zadržanim oslobađanjem. U jednom
2
aspektu, može se koristiti pumpa da bi se postiglo kontrolisano ili zadržano oslobađanje (videti Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:20; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574). U jednom drugom aspektu, mogu se koristiti polimerni materijali da bi se postiglo kontrolisano ili zadržano oslobađanje terapijskog agensa (npr., antitela obezbeđenog ovde) ili sastava obezbeđenog ovde (videti npr., Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Ranger and Peppas, 1983, J., Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61; see also Levy et al., 1985, Science 228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71:105); U.S. patent br. 5,679,377; U.S. patent br. 5,916,597; U.S. patent br. 5,912,015; U.S. patent br.
5,989,463; U.S. patent br. 5,128,326; PCT objavu br. WO 99/15154 i PCT objavu br. WO 99/20253. Primeri polimera koji se koriste u formulacijama sa zadržanim oslobađanjem uključuju, ali nisu ograničeni na, poli(2-hidroksi etil metakrilat), poli(metil metakrilat), poli(akrilna kiselina), poli(etilen-ko-vinil acetat), poli(metakrilna kiselina), poliglikolide (PLG), polianhidride, poli(N-vinil pirolidon), poli(vinil alkohol), poliakrilamid, poli(etilen glikol), polilaktide (PLA), poli(laktid-ko-glikolide) (PLGA) i poliortoestre. U jednom specifičnom aspektu, polimer koji se koristi u formulacijama sa zadržanim oslobađanjem je inertan, oslobođen od perljivih nečistoća, stabilan u skaldištenju, sterilan i biorazgradiv. A u još jednom drugom aspektu, sistem sa kontrolisanim ili zadržanim oslobađanjem se može postaviti u blizinu terapijske mete, npr., u nazalne prolaze ili pluća, čime je potrebna samo frakcija sistemske doze (videti, npr., Goodson u Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984)). Sistemi sa kontrolisanim oslobađanjem su diskutovani u pregledu Langera (1990, Science 249:1527-1533). Može se koristiti bilo koja tehnika poznata stručnjaku u ovoj oblasti da se proizvedu formulacije sa zadržanim oslobađanjem koje sadrže jedno ili više antitela obezbeđenih ovde. Videti, npr., U.S. patent br. 4,526,938, PCT objavu WO 91/05548, PCT objavu WO 96/20698, Ning et al., 1996, "Intratumoral Radioimmunotherapy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel", Radiotherapy & Oncology 39:179- 189, Song et al., 1995, "Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions", PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50:372-397, Cleek et al., 1997, "Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application", Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater.
24:853-854, i Lam et al., 1997, "Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery", Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater.24:759-760.
[0410] U jednom specifičnom aspektu, gde je sastav, obezbeđen ovde, nukleinska kiselina koja kodira profilaktički ili terapijski agens (npr., antitelo obezbeđeno ovde), nukleinska kiselina može biti administrirana in vivo da dovede do ekspresije svog terapijskog agensa, tako što će biti konstruisana kao deo odgovarajućeg ekspresionog vektora za nukleinske kiseline i data da postane unutarćelijska, npr., korišćenjem retrovirusnog vektora (videti U.S. patent br.4,980,286) ili direktnim injektiranjem ili primenom bombardovanja mikročesticama (npr., genska puška; Biolistic, Dupont) ili oblaganjem lipidima ili receptorima sa ćelijske površine ili agensima za transfektovanje ili administriranjem gde je ona vezana za protein sličan homeoboks peptidu, za koji se zna da ulazi u jedro (videti, npr., Joliot et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:1864-1868) itd. Alternativno, da bi se eksprimirala, nukleinska kiselina se može uvesti u ćelije i ugraditi u DNK domaćina homolognom rekombinacijom.
[0411] U jednom specifičnom aspektu, sastav sadrži jedno, dva ili više antitela obezbeđenih ovde. U jednom drugom aspektu, sastav sadrži jedno, dva ili više antitela obezbeđenih ovde i profilaktički ili terapijski agens koji nije antitelo obezbeđeno ovde. U određenim aspektima,
2
agensi su poznati kao korisni ili su bili ili se trenutno koriste za sprečavanju, lečenju ili ublažavanju jednog ili više simptoma bolesti posredovane C10orf54. Pored profilaktičkih ili terapijskih agenasa, sastavi obezbeđeni ovde mogu da sadrže i nosač.
[0412] Sastavi obezbeđeni ovde uključuju sastave leka na veliko, korisne u proizvodnji farmaceutskih sastava (npr., sastavi koji su pogodni za administraciju subjektu ili pacijentu) koji se mogu koristiti u pravljenju oblika jediničnih doza. U jednom specifičnom aspektu, sastav obezbeđen ovde je farmaceutski sastav. Takvi sastavi sadrže profilaktički ili terapijski efektivnu količinu jednog ili više profilaktičkih ili terapijskih agenasa (npr., antitelo obezbeđeno ovde ili drugi profilaktički ili terapijski agens) i farmaceutski prihvatljiv nosač. U određenim aspektima, farmaceutski sastavi su formulisani tako da budu pogodni za put administracije subjektu.
[0413] U jednom specifičnom aspektu, sastav je formulisan u skladu sa rutinskim procedurama kao farmaceutski sastav prilagođen za intravensku administraciju ljudskim bićima. Tipično, sastavi za intravensku administraciju su rastvori u sterilnom izotoničnom vodenom puferu. Kad je neophodno, sastav može da uključuje i agense koji povećavaju rastvorljivost i lokalni anestetik, kao što je lignokain za ublažavanje bola na mestu injekcije. Takvi sastavi, međutim, mogu biti administrirani i drugim putem osim intravenskog.
[0414] Uopšteno, sastojci sastava obezbeđenih ovde se isporučuju bilo odvojeno, bilo pomešani zajedno u oblik jedinične doze, na primer, kao suv liofilizovan prah ili koncentrat bez vode u hermetički zatvorenom kontejneru kao što je ampula ili kesica sa naznačenom količinom aktivnog agensa. Kad sastav treba da bude administriran infuzijom, može se raspršiti u boci za infuziju koja sadrži vodu ili slani rastvor farmaceutskog stepena sterilnsoti. Kad se sastav administrira injekcijom, ampula sterilne vode ili slanog rastvora za injekciju može biti obezbeđena tako da sastojci mogu da se pomešaju pred administraciju.
[0415] U određenim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde se pakuje u hermetički zatvoren kontejner kao što je ampula ili kesica sa naznačenom količinom antitela. U jednom aspektu, antitelo se isporučuje kao suv sterilisan liofilizovan prah ili koncentrat bez vode u hermetički zatvorenom kontejneru i može se rekonstituisati, npr., u vodi ili slanom rastvoru do odgovarajuće koncentracije za administraciju subjektu. U određenim aspektima, antitelo se isporučuje kao suv sterilisan liofilizovan prah u hermetički zatvorenom kontejneru u jediničnoj dozi od bar 0,1 mg, bar 0,5 mg, bar 1 mg, bar 2 mg ili bar 3 mg, kao što je bar 5 mg, bar 10 mg, bar 15 mg, bar 25 mg, bar 30 mg, bar 35 mg, bar 45 mg, bar 50 mg, bar 60 mg, bar 75 mg, bar 80 mg, bar 85 mg, bar 90 mg, bar 95 mg ili bar 100 mg. Liofilizovano antitelo se može čuvati između 2 i 8° C u svom originalnom kontejneru i antitelo se može administrirati u okviru 12 sati, kao što je u okviru 6 sati, u okviru 5 sati, u okviru 3 sata ili u okviru 1 sata posle rekonstitucije. U jednom alternativnom aspektu, antitelo se isporučuje u tečnom vidu u hermetički zatvorenom kontejneru sa naznačenom količinom i koncentracijom antitela. U određenim aspektima, tečni vid antitela se isporučuje u tečnom vidu u hermetički zatvorenom kontejneru, bar 0,1 mg/ml, bar 0,5 mg/ml ili bar 1 mg/ml, kao što je bar 5 mg/ml, bar 10 mg/ml, bar 15 mg/ml, bar 25 mg/ml, bar 30 mg/ml, bar 40 mg/ml, bar 50 mg/ml, bar 60 mg/ml, bar 70 mg/ml, bar 80 mg/ml, bar 90 mg/ml ili bar 100 mg/ml.
[0416] Sastavi obezbeđeni ovde mogu biti formulisani kao neutralni ili u vidu soli. Farmaceutiski prihvatljive soli uključuju ome formirane sa anjonima, kao što su one izvedene iz hlorovodonične, fosforne, sirćetne, oksalne, vinske kiseline itd. i one formirane sa
2
katjonima, kao što su one izvedene iz natrijuma, kalijuma, amonijuma, kalcijuma, feri hidroksida, izopropilamina, trietilamina, 2-etilamino etanola, histidina, prokaina itd.
[0417] Količina terapijskog agensa (npr., antitela obezbeđenog ovde) ili sastava obezbeđenog ovde koja će biti efektivna u sprečavanju, lečenju ili ublažavanju jednog ili više simptoma bolesti posredovane C10orf54, se može odrediti standardnim kliničkim tehnikama.
[0418] U skladu s tim, doza antitela ili sastava koja daje serumski titar od oko 0,1 µg/ml do oko 450 µg/ml i u nekim aspektima bar 0,1 µg/ml, bar 0,2 µg/ml, bar 0,4 µg/ml, bar 0,5 µg/ml, bar 0,6 µg/ml, bar 0,8 µg/ml, bar 1 µg/ml, bar 1,5 µg/ml, kao što je bar 2 µg/ml, bar 5 µg/ml, bar 10 µg/ml, bar 15 µg/ml, bar 20 µg/ml, bar 25 µg/ml, bar 30 µg/ml, bar 35 µg/ml, bar 40 µg/ml, bar 50 µg/ml, bar 75 µg/ml, bar 100 µg/ml, bar 125 µg/ml, bar 150 µg/ml, bar 200 µg/ml, bar 250 µg/ml, bar 300 µg/ml, bar 350 µg/ml, bar 400 µg/ml ili bar 450 µg/ml se može administrirati čoveku za sprečavanje, lečenje ili ublažavanje jednog ili više simptoma bolesti posredovane C10orf54. Pored toga, in vitro eseji mogu opciono da se koriste da pomognu da se identifikuju optimalni opsezi doza. Precizna doza koja će se koristiti u formulaciji će zavisiti i od puta administracije i ozbiljnosti bolesti posredovane C10orf54 i treba da se odluči u skladu sa procenom lekara i okolnosti svakog pacijenta.
[0419] Efektivne doze se mogu ekstrapolisati iz krivih doza-odgovor, izvedenih iz sistema za testiranje in vitro ili na životinjskom modelu.
[0420] Za antitela obezbeđena ovde, doza administrirana pacijentu može da bude, u određenim aspektima, 0,1 mg/kg do 100 mg/kg pacijentove telesne težine. U nekim aspektima, doza administrirana pacijentu je oko 1 mg/kg d oko 75 mg/kg pacijentove telesne težine. U određenim aspektima, doza administrirana pacijentu je između 1 mg/kg i 20 mg/kg pacijentove telesne težine, kao što je 1 mg/kg do 5 mg/kg pacijentove telesne težine. Uopšteno, humana antitela imaju duži poluživot unutar čovekovog tela nego antitela iz drugih vrsta zbog imunog odgovora na strane polipeptide. Prema tome, niže doze humanih antitela i manje česta administracija je često moguća. Dalje, doza i frekvenca administracije antitela obezbeđenih ovde se mogu smanjiti povećavanjem usvajanja i prodiranja antitela u tkiva modifikacijama, kao što je, na primer, lipidacija.
[0421] U jednom aspektu, približno 100 mg/kg ili manje, približno 75 mg/kg ili manje, približno 50 mg/kg ili manje, približno 25 mg/kg ili manje, približno 10 mg/kg ili manje, približno 5 mg/kg ili manje, približno 1 mg/kg ili manje, približno 0,5 mg/kg ili manje ili približno 0,1 mg/kg ili manje antitela obezbeđenih ovde je administrirano 5 puta, 4 puta, 3 puta, 2 puta ili 1 put da se spreči, leči i/ili ublaži jedan ili više simptoma bolesti posredovane C10orf54. U nekim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde je administrirano oko 1-12 puta, gde doze mogu biti administrirane po potrebi, npr., nedeljno, u dve nedelje, mesečno, u dva meseca, u tri meseca itd., kao što odredi lekar. U nekim aspektima, niže doze (npr., 1-15 mg/kg) se mogu administrirati češće (npr., 3-6 puta). U drugim aspektima, veće doze (npr., 25-100 mg/kg) se mogu administrirati ređe (npr., 1-3 puta). Međutim, kao što će stručnjacima u ovoj oblasti biti jasno, druge količine i rasporedi doza se lako mogu odrediti unutar opsega ove prijave.
[0422] U jednom specifičnom aspektu, približno 100 mg/kg, približno 75 mg/kg ili manje, približno 50 mg/kg ili manje, približno 25 mg/kg ili manje, približno 10 mg/kg ili manje, približno 5 mg/kg ili manje, približno 1 mg/kg ili manje, približno 0,5 mg/kg ili manje, približno 0,1 mg/kg ili manje antitela obezbeđenih ovde u formulaciji sa odloženim
2
oslobađanjem se administrira subjektu, kao što je čovek, da se spreči, leči i/ili ublaži jedan ili više simptoma bolesti posredovane C10orf54. U jednom drugom specifičnom aspektu, približno 100 mg/kg, približno 75 mg/kg ili manje, približno 50 mg/kg ili manje, približno 25 mg/kg ili manje, približno 10 mg/kg ili manje, približno 5 mg/kg ili manje, približno 1 mg/kg ili manje, približno 0,5 mg/kg ili manje ili približno 0,1 mg/kg ili manje bolus antitela obezbeđenih ovde, ne u formulaciji sa odloženim oslobađanjem, se administrira subjektu, kao što je kao što je čovek, da se spreči, leči i/ili ublaži jedan ili više simptoma bolesti posredovane C10orf54 i posle određenog perioda vremena, približno 100 mg/kg, približno 75 mg/kg ili manje, približno 50 mg/kg ili manje, približno 25 mg/kg ili manje, približno 10 mg/kg ili manje, približno 5 mg/kg ili manje, približno 1 mg/kg ili manje, približno 0,5 mg/kg ili manje ili približno 5 mg/kg ili manje antitela obezbeđenih ovde u formulaciji sa odloženim oslobađanjem se administrira subjektu (npr. intranazalno ili intramuskularno) jedan, dva, tri ili četiri puta. U skladu sa ovim aspektom, određeni perioda vremena može biti 1 do 5 dana, nedelja, dve nedelje ili mesec.
[0423] U nekim aspektima, jedna doza antitela obezbeđenog ovde se administrira pacijentu da se spreči, leči i/ili ublaži jedan ili više simptoma bolesti posredovane C10orf54 dva, tri, četiri, pet, šest, sedam, osam, devet, deset ili jedanaest, dvanaest puta, trinaest, četrnaest, petnaest, šesnaest, sedamnaest, osamnaest, devetnaest, dvadeset, dvadeset jedan, dvadeset dva, dvadeset tri, dvadeset četiri, dvadeset pet ili dvadeset šest puta u intervalima od dve nedelje (npr., oko 14 dana) tokom godinu dana, gde je doza izabrana iz grupe koja se sastoji od oko 0,1 mg/kg, oko 0,5 mg/kg, oko 1 mg/kg, oko 5 mg/kg, oko 10 mg/kg, oko 15 mg/kg, oko 20 mg/kg, oko 25 mg/kg, oko 30 mg/kg, oko 35 mg/kg, oko 40 mg/kg, oko 45 mg/kg, oko 50 mg/kg, oko 55 mg/kg, oko 60 mg/kg, oko 65 mg/kg, oko 70 mg/kg, oko 75 mg/kg, oko 80 mg/kg, oko 85 mg/kg, oko 90 mg/kg, oko 95 mg/kg, oko 100 mg/kg ili njihovih kombinacija (npr., sve mesečne doze mogu, a ne moraju da budu identične).
[0424] U jednom drugom aspektu, jedna doza antitela obezbeđenog ovde se administrira pacijentu da se spreči, leči i/ili ublaži jedan ili više simptoma bolesti posredovane C10orf54 dva, tri, četiri, pet, šest, sedam, osam, devet, deset ili jedanaest, dvanaest puta u oko mesečnim intervalima (npr., oko 30 dana) tokom godinu dana, gde je doza izabrana iz grupe koja se sastoji od oko 0,1 mg/kg, oko 0,5 mg/kg, oko 1 mg/kg, oko 5 mg/kg, oko 10 mg/kg, oko 15 mg/kg, oko 20 mg/kg, oko 25 mg/kg, oko 30 mg/kg, oko 35 mg/kg, oko 40 mg/kg, oko 45 mg/kg, oko 50 mg/kg, oko 55 mg/kg, oko 60 mg/kg, oko 65 mg/kg, oko 70 mg/kg, oko 75 mg/kg, oko 80 mg/kg, oko 85 mg/kg, oko 90 mg/kg, oko 95 mg/kg, oko 100 mg/kg ili njihovih kombinacija (npr., sve mesečne doze mogu, a ne moraju da budu identične).
[0425] U jednom aspektu, jedna doza antitela obezbeđenog ovde se administrira pacijentu da se spreči, leči i/ili ublaži jedan simptom bolesti posredovane C10orf54 dva, tri, četiri, pet, šest puta u oko dvomesečnim intervalima (npr., oko 60 dana) tokom godinu dana, gde je doza izabrana iz grupe koja se sastoji od oko 0,1 mg/kg, oko 0,5 mg/kg, oko 1 mg/kg, oko 5 mg/kg, oko 10 mg/kg, oko 15 mg/kg, oko 20 mg/kg, oko 25 mg/kg, oko 30 mg/kg, oko 35 mg/kg, oko 40 mg/kg, oko 45 mg/kg, oko 50 mg/kg, oko 55 mg/kg, oko 60 mg/kg, oko 65 mg/kg, oko 70 mg/kg, oko 75 mg/kg, oko 80 mg/kg, oko 85 mg/kg, oko 90 mg/kg, oko 95 mg/kg, oko 100 mg/kg ili njihovih kombinacija (npr., sve mesečne doze mogu, a ne moraju da budu identične).
[0426] U nekim aspektima, jedna doza antitela obezbeđenog ovde se administrira pacijentu da se spreči, leči i/ili ublaži jedan ili više simptoma bolesti posredovane C10orf54 dva, tri ili četiri puta u oko tromesečnim intervalima (npr., oko 120 dana) tokom godinu dana, gde je
2 1
doza izabrana iz grupe koja se sastoji od oko 0,1 mg/kg, oko 0,5 mg/kg, oko 1 mg/kg, oko 5 mg/kg, oko 10 mg/kg, oko 15 mg/kg, oko 20 mg/kg, oko 25 mg/kg, oko 30 mg/kg, oko 35 mg/kg, oko 40 mg/kg, oko 45 mg/kg, oko 50 mg/kg, oko 55 mg/kg, oko 60 mg/kg, oko 65 mg/kg, oko 70 mg/kg, oko 75 mg/kg, oko 80 mg/kg, oko 85 mg/kg, oko 90 mg/kg, oko 95 mg/kg, oko 100 mg/kg ili njihovih kombinacija (npr., sve tromesečne doze mogu, a ne moraju da budu identične).
[0427] U određenim aspektima, put administracije za dozu antitela obezbeđenog ovde pacijentu je intranazalni, intramuskularni, intravenozni ili njihova kombinacija, ali drugi putevi opisani ovde su takođe prihvatljivi. Svaka doza može, ali ne mora da se administrira identičnim putem administracije. U nekim aspektima, antitelo obezbeđeno ovde može biti administrirano preko više puteva administracije simultano ili sukcesivno drugim dozama istog ili različitog antitela obezbeđenog ovde.
[0428] U određenim aspektima, antitela obezbeđena ovde se daju subjektu profilaktički ili terapijski. Antitela se mogu davati subjektu profilaktički ili terapijski da se spreči, umanji ili ublaži bolest posredovana C10orf54 ili njeni simptomi.
DIJAGNOSTIČKA UPOTREBA ANTITELA
[0429] Obeležena antitela obezbeđena ovde i njihovi derivati i analozi, koji se vezuju za C10orf54 antigen, mogu se koristiti u dijagnostičke svrhe da se detektuje, dijagnostikuje ili prati bolest posredovana C10orf54. Ovde su obezbeđeni i metodi za detekciju bolesti posredovane C10orf54 koji obuhvataju: (a) testiranje ekspresije C10orf54 antigena u uzorku ćelija ili tkiva subjekta korišćenjem jednog ili više antitela. obezbeđenih ovde, koja se vezuju za C10orf54 antigen i (b) poređenje nivoa C10orf54 antigena sa kontrolnim nivoom, npr., nivoima u uzorcima normalnog tkiva (npr., iz pacijenta koji nema bolest posredovanu C10orf54 ili iz istog pacijenta pre početka bolesti), gde je povećanje testiranog nivoa C10orf54 antigena u poređenju sa kontrolnim nivoom C10orf54 antigena indikativno za bolest posredovanu C10orf54.
[0430] Ovde je obezbeđen i dijagnostički esej za dijagnostikovanje bolesti posredovane C10orf54 koji obuhvata: (a) testiranje nivoa C10orf54 antigena u uzorku ćelija ili tkiva osobe korišćenjem jednog ili više antitela obezbeđenih ovde koja se vezuju za C10orf54 antigen i (b) poređenje nivoa C10orf54 antigena sa kontrolnim nivoom, npr., nivoima u uzorcima normalnog tkiva, gde je povećanje testiranog nivoa C10orf54 antigena u poređenju sa kontrolnim nivoom C10orf54 antigena indikativno za bolest posredovanu C10orf54. Definitivnija dijagnoza bolesti posredovane C10orf54 može da omogući zdravstvenim radnicima da primene preventivne mere ili agresivniji tretman ranije, čime se sprečava razvoj ili dalje napredovanje bolesti posredovane C10orf54.
[0431] Antitela obezbeđena ovde mogu se koristiti za testiranje nivoa C10orf54 antigena u biološkom uzorku korišćenjem klasičnih imunohistoloških metoda kao što je opisano ovde ili kao što je poznato stručnjacima u ovoj oblasti (npr., videti Jalkanen et al., 1985, J. Cell. Biol.
101:976-985; i Jalkanen et al., 1987, J. Cell. Biol. 105:3087-3096). Drugi metodi na bazi antitela korisni za detektovanje genske ekspresije proteina uključuju imunoeseje, kao što je enzimski imunoesej (ELISA) i radioimunoesej (RIA). Pogodni obeleživači za testiranje antitela su poznati u struci i uključuju enzimske obeleživače, kao što je oksidaza glukoze; radioizotope, kao što je jod (<125>I,<121>I), ugljenik (<14>C), sumpor (<35>S), tricijum (<3>H) indijum
2 2
C<21>In) i tehnicijum (<99>Tc); luminiscentne obeleživače, kao što je luminol i fluorescentne obeleživače, kao što su fluorescein i rodamin i biotin.
[0432] Jedan aspekt obezbeđen ovde je detekcija i dijagnoza bolesti posredovane C10orf54 u čoveku. U jednom aspektu, dijagnoza obuhvata: a) administriranje (na primer, parenteralno, subkutano ili intraperitonealno) subjektu efektivne količine obeleženog antitela koje se vezuje za C10orf54 antigen; b) čekanje vremenskog intervala posle administriranja da se dozvoli obeleženom antitelu da se preferencijalno koncentruje na mestima u subjektu gde je C10orf54 antigen eksprimiran (i da se nevezan obeležen molekul vrati na osnovni nivo); c) određivanje osnovnog nivoa i d) detektovanje obeleženog antitela u subjektu, tako da detekcija obeleženog antitela iznad osnovnog nivoa indikuje da subjekt ima bolest posredovanu C10orf54. Osnovni nivo se može odrediti različitim metodima uključujući poređenje količine detektovanog obeleženog molekula sa prethodno određenom standardnom vrednošću za konkretan sistem.
[0433] Podrazumevaće se u struci da će veličina subjekta i imidžing sistem koji se koristi odrediti količinu imidžing grupe potrebnu da proizvede dijagnostičke slike. U slučaju radioizotopske grupe za humanog subjekta, količina injektirane radioaktivnosti će normalno biti u opsegu od oko 5 do 20 millikirija<99>Tc. Obeleženo antitelo će se onda preferencijalno akumulirati na lokaciji ćelija koje sadrže specifičan protein. In vivo imidžing tumora je opisan u S.W. Burchiel et al., "Immunopharmacokinetics of Radiolabeled Antibodies and Their Fragments". (Poglavlje 13 u Tumor Imaging: The Radiochemical Detection of Cancer, S.W. Burchiel and B.A. Rhodes, eds., Masson Publishing Inc. (1982).
[0434] U zavisnosti od nekoliko promenljivih, uključujući tip obeleživača koji se koristi i način administracije, vremenski interval posle administracije za dozvoljavanje obeleženom antitelu da se preferencijalno koncentruje na mestima u subjektu i za nevezano obeleženo antitelo da se vrati na osnovni nivo je 6 do 48 sati ili 6 do 24 sata ili 6 do 12 sati. U jednom drugom aspektu, vremenski interval posle administracije je 5 do 20 dana ili 5 do 10 dana.
[0435] U jednom aspektu, praćenje bolesti posredovane C10orf54 se vrši ponavljanjem metoda za dijagnostikovanje bolesti posredovane C10orf54, na primer, jedan mesec posle početne dijagnoze, šest meseci posle početne dijagnoze, jednu godinu posle početne dijagnoze itd.
[0436] Prisustvo obeleženog molekula može da se detektuje u subjektu pomoću metoda poznatih u struci za in vivo skeniranje. Ovi metodi zavise od tipa obeleživača koji se koristi. Iskusni stručnjaci će biti u stanju da odrede odgovarajući metod za detektovanje konkretnog obeleživača. Metodi i uređaji koji se mogu koristiti dijagnostičkim metodima obezbeđenim ovde uključuju, ali nisu ograničeni na, kompjutersku tomografiju (CT), sken celog tela, kao što je pozitronska emisiona tomografija (PET), snimanje magnetnom rezonancom (MRI) i sonografija.
[0437] U jednom specifičnom aspektu, molekul je obeležen radioizotopom i detektuje se u pacijentu primenom hirurškog instrumenta responsivnog na radijaciju (Thurston et al., U.S. patent br. 5,441,050). U jednom drugom aspektu, molekul je obeležen fluorescentnim jedinjenjem i detektuje se u pacijentu pomoću instrumenta za skeniranje responsivnog na fluorescenciju. U jednom drugom aspektu, molekul je obeležen pozitron emitujućim metalom i detektovan je u pacijentu pozitronskom emisionom tomografijom. A u još jednom drugom
2
aspektu, molekul je obeležen paramagnetnim obeleživačem i detektuje se u pacijentu magnetnom rezonancom (MRI).
METODI PROIZVODNJE ANTITELA
[0438] Antitela, obezbeđena ovde koja se vezuju za antigen, se mogu proizvoditi bilo kojim metodom poznatim u struci za sintezu antitela, naročito hemijskom sintezom ili tehnikama rekombinantne ekspresije. Praksa pronalazaka primenjuje, osim ako je naznačeno drukčije, konvencionalne tehnike u molekularnoj biologiji, mikrobiologiji, genetičkoj analizi, rekombinantnoj DNK, organskoj hemiji, biohemiji, PCR, sintezi i modifikaciji oligonukleotida, hibridizaciji nukleinskih kiselina i srodnim oblastima unutar struke. Ove tehnike su opisane u ovde citiranim referencama i potpuno su objašnjene u literaturi. Videti, npr., Maniatis et al. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook et al. (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 i godišnja ažuriranja); Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 i godišnja ažuriranja) Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Birren et al. (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press.
[0439] Poliklonska antitela koja se vezuju za antigen se mogu proizvoditi po različitim procedurama, dobro poznatim u struci. Na primer, humani antigen se može administrirati u različite životinje domaćine uključujući, ali ne ograničavajući se na, zečeve, miševe, pacove itd. da bi se indukovala proizvodnja seruma koji sadrže poliklonska antitela specifična za humani antigen. Mogu se koristiti različiti adjuvanti da bi se pojačao imunološki odgovor, u zavisnosti od vrste domaćina i uključuju, ali nisu ograničeni na, Freund-ov (kompletan i nekompletan), mineralni gelovi kao što je aluminijum hidroksid, površinski aktivne supstance kao što je lizolecitin, pluronski polioli, polianjoni, peptidi, uljne emulzije, hemocijanini iz školjke, dinitrofenol i potencijalno korisni humani adjuvanti kao što su BCG (bacil Calmette-Guerin) i Corynebacterium parvum. Takvi adjuvanti su takođe dobro poznati u struci.
[0440] Monoklonska antitela se mogu dobijati primenom niza tehnika poznatih u struci, uključujući upotrebu hibridoma, rekombinantne tehnologije i tehnologije ispoljavanja na fazima ili njihove kombinacije. Na primer, monoklonska antitela se mogu proizvoditi primenom hibridomskih tehnika uključujući one poznate u struci i opisane, na primer, u Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563 681 (Elsevier, N.Y., 1981). Termin "monoklonsko antitelo", kao što se ovde koristi, nije ograničen na antitela prizvedena hibridomskom tehnologijom. Drugi primeri metoda proizvodnje monoklonskih antitela su diskutovana ovde na drugom mestu, kao što je npr., upotreba KM miša™. Dodatni primeri metoda proizvodnje monoklonskih antitela su obezbeđeni u Primerima ovde.
[0441] Metodi proizvodnje i pregleda specifičnih antitela hibridomskom tehnologijom su rutinski i dobro poznati u struci. Ukratko, miševi se mogu imunizovati C10orf54 antigenom i jednom kad je imuni odgovor detektovan, npr., antitela specifična za C10orf54 antigen su detektovana u mišjem serumu, uzima se mišja slezina i izoluju se splenociti. Splenociti se
2 4
zatim fuzionišu dobro poznatim tehnikama sa bilo kojim pogodnim ćelijama mijeloma, na primer, ćelijama iz ćelijske linije SP20 dostupne iz ATCC. Hibridomi se biraju i kloniraju pomoću ograničenog razblaženja.
[0442] Pored toga, tehnika RIMMS (repetitivna imunizacija na više mesta) se može koristiti za imunizaciju životinja (Kilptrack et al., 1997 Hybridoma 16:381-9). Klonovi hibridoma se zatim testiraju metodima poznatim u struci za ćelije koje sekretuju antitela sposobna da vežu dati polipeptid. Ascitna tečnost, koja generalno sadrži visoke nivoe antitela, se može generisati imunizovanjem miševa sa pozitivnim klonovima hibridoma.
[0443] U skladu s tim, ovde su obezbeđeni i metodi pravljenja antitela gajenjem ćelija hibridoma koje sekretuju modifikovano antitelo obezbeđeno ovde gde je, u određenim aspektima, hibridom generisan fuzionisanjem splenocita izolovanih iz miša imunizovanog C10orf54 antigenom sa ćelijama mijeloma, a zatim pretraživanjem hibridoma dobijenih fuzijom na klonove hibridoma koji sekretuju antitelo sposobno da se veže za C10orf54 antigen.
[0444] Fragmenti antitela koji prepoznaju specifične C10orf54 antigene mogu biti generisani bilo kojom tehnikom poznatom stručnjacima u ovoj oblasti. Na primer, Fab i F(ab')2fragmenti obezbeđeni ovde mogu se proizvoditi proteolitičkim cepanjem molekula imunoglobulina, primenom enzima kao što je papain (da bi se proizveli Fab fragmenti) ili pepsin (da bi se proizveli F(ab')2fragmenti). F(ab')2fragmenti sadrže varijabilni region, konstantni region lakog lanca i CH1 domen teškog lanca. Dalje, antitela obezbeđena ovde mogu biti generisana i primenom raznih metoda ispoljavanja na fagu poznatih u struci.
[0445] Na primer, antitela se mogu generisati i korišćenjem različitih metoda ispoljavanja na fagu. U metodima ispoljavanja na fagu, funkcionalni domeni antitela su izloženi na površini čestica faga koje nose polinukleotidne sekvence koje ih kodiraju. Konkretno, sekvence DNK koje kodiraju VH i VL domene se amplifikuju iz biblioteka životinjskih cDNK (npr., biblioteke humane ili mišje cDNK pogođenih tkiva). DNK koje kodiraju VH i VL domene se rekombinuju zajedno sa scFv linkerom pomoću PCR i kloniraju u fagemidni vektor. Vektor je elektroporiran u E. coli i E. coli je inficiran helper fagom. Fag korišćen u ovim metodima tipično filamentozan fag uključujući fd i M13, a VH i VL domeni su obično rekombinantno fuzionisani bilo sa genom III, bilo sa genom VIII faga. Fag koji eksprimira domen za vezivanje antigena koji se vezuje za konkretan antigen se može izabrati ili identifikovati pomoću antigena, npr., korišćenjem obeleženog antigena ili antigena vezanog ili fiksiranog za čvrstu površinu ili kuglicu. Primeri metoda ispoljavanja na fagu koji mogu da se koriste za pravljenje antitela obezbeđenih ovde uključuju one opisane u Brinkman et al., 1995, J. Immunol. Methods 182:41-50; Ames et al., 1995, J. Immunol. Methods 184:177-186; Kettleborough et al., 1994, Eur. J. Immunol. 24:952-958; Persic et al., 1997, Gene 187:9-18; Burton et al., 1994, Advances in Immunology 57:191-280; PCT prijavi br. PCT/GB91/O1 134; međunarodnim objavama br. WO 90/02809, WO 91/10737, WO 92/01047, WO 92/18619, WO 93/1 1236, WO 95/15982, WO 95/20401, i WO97/13844; i U.S. patentima br.
5,698,426, 5,223,409, 5,403,484, 5,580,717, 5,427,908, 5,750,753, 5,821,047, 5,571,698, 5,427,908, 5,516,637, 5,780,225, 5,658,727, 5,733,743 i 5,969,108.
[0446] Kao što je opisano u gornjim referencama, posle izbora faga, regioni iz faga koji kodiraju antitelo se mogu izolovati i koristiti za pravljenje celih antitela, uključujući humana antitela ili bilo koji drugi željeni fragment koji vezuje antigen i eksprimirati u bilo kom željenom domaćinu, uključujući sisarske ćelije, ćelije insekata, biljne ćelije, ćelije kvasca i
2
bakterija, npr., kao što je opisano niže. Tehnike za rekombinantnu proizvodnju Fab, Fab' i F(ab')2fragmenata se mogu koristiti i pomoću metoda poznatih u struci kao što su oni opisani u PCT objavi br. WO 92/22324; Mullinax et al., 1992, BioTechniques 12(6):864-869; Sawai et al., 1995, AJRI 34:26-34 i Better et al., 1988, Science 240:1041-1043.
[0447] Za generisanje celih antitela, PCR prajmeri, uključujući nukleotidne sekvence VH ili VL, restrikciono mesto i bočnu sekvencu da zaštiti restrikciono mesto, mogu se koristiti za umnožavanje sekvenci VH ili VL u scFv klonovima. Primenom tehnika za kloniranje poznatih stručnjacima u ovoj oblasti, domeni VH, umnoženi PCR-om, se mogu klonirati u vektore koji eksprimiraju konstantan region VH, npr., humani gama 4 konstantan region, a domeni VL, umnoženi PCR-om, se mogu klonirati u vektore koji eksprimiraju konstantan region VL, npr., humani kapa ili lambda konstantan region. Domeni VH i VL se mogu klonirati i u jedan vektor koji eksprimira neophodne konstantne regione. Vektori konverzije teškog lanca i vektori konverzije lakog lanca se zatim kotransfektuju u ćelijske linije da se generišu stabilne ili tranzijentne ćelijske linije koje eksprimiraju celu dužinu antitela, npr., IgG, pomoću tehnika poznatih stručnjacima u ovoj oblasti.
[0448] Za neke upotrebe, uključujući in vivo upotrebu antitela u ljudima i in vitro testove detekcije, mogu se koristiti humana ili himerna antitela. Potpuno humana antitela su naročito poželjna za terapijski tretman humanih subjekata. Humana antitela se mogu napraviti nizom metoda poznatih u struci, uključujući metode ispoljavanja na fagu opisane gore, uz korišćenje biblioteke antitela izvedenih iz humanih imunoglobulinskih sekvenci. Videti i U.S. patent br.
4,444,887 i 4,716,111 i međunarodne objave br. WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735 i WO 91/10741.
[0449] U nekim specifičnim aspektima, proizvedena su humana antitela. Humana antitela i/ili potpuno humana antitela se mogu proizvoditi bilo kojim metodom poznatim u struci, uključujući Primere obezbeđene ovde. Na primer, transgeni miševi koji su nesposobni da eksprimiraju funkcionalne endogene imunoglobuline, ali koji mogu da eksprimiraju gene za humani imunoglobulin. Na primer, kompleksi gena za humani težak i lak lanac imunoglobulina mogu se uvesti nasumično ili homolognom rekombinacijom u mišje embrionske matične ćelije. Alternativno, humani varijabilni region, konstantni region i region diverziteta se mogu uvesti u mišje embrionske matične ćelije kao dodatak na gene za humani težak i lak lanac. Mišji geni za humani težak i lak lanac imunoglobulina mogu se učiniti nefunkcionalnim odvojeno ili simultano uvođenjem lokusa humanog imunoglobulina homolognom rekombinacijom. Konkretno, homozigotna delecija regiona JHsprečava proizvodnju endogenog antitela. Modifikovane embrionske matične ćelije su umnožene i mikroinjektirane u blastociste da bi se proizveli himerni miševi. Himerni miševi se zatim kote da bi proizveli homozigotno potomstvo koje eksprimira humana antitela. Transgeni miševi se imunizuju na normalan način sa odabranim antigenom, npr., celim ili delom polipeptida. Monoklonska antitela usmerena na antigen se mogu dobiti iz imunizovanih transgenih miševa primenom konvencionalne hibridomske tehnologije. Transgeni humanog imunoglobulina koje nose transgeni miševi se preuređuju tokom diferencijacije B ćelija, a zatim podležu promeni klase i somatskoj mutaciji. Tako, primenom takve tehnike je moguće praviti terapijski korisne IgG, IgA, IgM i IgE antitela. Za pregled ove tehnologije za proizvodnju humanih antitela, videti Lonberg i Huszar (1995, Int. Rev. Immunol. 13:65-93). Za detaljnu diskusiju ove tehnologije za proizvodnju humanih antitela i humanih monoklonskih antitela i protokola za proizvodnju takvih antitela, videti, npr., PCT objave br. WO 98/24893, WO 96/34096 i WO 96/33735 i U.S. patente br. 5,413,923, 5,625,126, 5,633,425, 5,569,825, 5,661,016, 5,545,806, 5,814,318 i 5,939,598. Drugi metodi su dati detaljno u Primerima ovde. Pored
2
toga, kompanije kao što su Abgenix, Inc. (Freemont, CA) i Genpharm (San Jose, CA) se mogu angažovati da obezbeđuju humana antitela usmerena na izabrani antigen korišćenjem tehnologije slične onoj opisanoj gore.
[0450] Himerno antitelo je molekul u kom su različiti delovi antitela izvedeni iz različitih imunoglobulinskih molekula. Metodi za proizvodnju himernih antitela su poznati u struci. Videti, npr., Morrison, 1985, Science 229:1202; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214; Gillies et al., 1989, J. Immunol. Methods 125:191-202 i U.S. patente br. 5,807,715, 4,816,567, 4,816,397 i 6,331,415.
[0451] Humanizovano antitelo je antitelo ili njegova varijanta ili fragment koji je sposoban da se veže za prethodno određen antigen i koji sadrži okvirni region koji suštinski ima aminokiselinsku sekvencu humanog imunoglobulina i CDR koji suštinski ima aminokiselinsku sekvencu ne-humanog imunoglobulina. Humanizovano antitelo sadrži suštinski bar jedan, a tipično dva cela varijabilna domena (Fab, Fab', F(ab')2, Fabc, Fv) u kojima celi ili suštinski celi CDR regioni odgovaraju onima ne-humanog imunoglobulina (npr., donorsko antitelo) i celi ili suštinski celi okvirni regioni su oni humane imunoglobulinske konsenzus sekvence. U određenim aspektima, humanizovano antitelo sadrži i bar deo konstantnog regiona imunoglobulina (Fc), tipično humanog imunoglobulina. Obično će antitelo sadržati i lak lanac i bar varijabilni domen teškog lanca. Antitelo može da uključuje i CH1, zglobni, CH2, CH3 i CH4 region teškog lanca. Humanizovano antitelo može da se izabere iz bilo koje klase imunoglobulina, uključujući IgM, IgG, IgD, IgA i IgE i bilo kog izotipa, uključujući IgG1, IgG2, IgG3 i IgG4. Obično, konstantan domen je konstantan domen koji fiksira komplement kada se želi da humanizovano antitelo ispoljava citotoksičnu aktivnost, a klasa je tipično IgG1. Gde takva citotoksična aktivnost nije poželjna, konstantan domen može biti klase IgG2. Primeri VL i VH konstantnih domena koji se mogu koristiti u određenim aspektima uključuju, ali nisu ograničeni na, C-kapa i C-gama-1 (nG1m), opisane u Johnson et al. (1997) J. Infect. Dis. 176, 1215-1224 i one opisane u U.S. patentu br.
5,824,307. Humanizovano antitelo može da sadrži sekvence iz više od jedne klase ili izotipa i izbor konkretnih konstantnih domena da bi se optimizovale željene efektorske fukcije je u okviru uopbičajene veštine u struci. Okvirni i CDR regioni humanizovanog antitela ne treba precizno da odgovaraju roditeljskim sekvencama, npr., donorski CDR ili konsenzusni okvirni region može biti mutagenizovan supstitucijom, insercijom ili delecijom bar jednog ostatka tako da CDR ili okvirni ostatak na tom mestu ne odgovara ni konsenzusnom ni uvezenom antitelu. Takve mutacije, međutim, neće biti obimne. Obično, bar 75% ostataka humanizovanog antitela će odgovarati onima iz roditeljskih FR i CDR sekvenci, češće 90% ili više od 95%. Humanizovana antitela se mogu proizvoditi primenom niza tehnika poznatih u struci, uključujući, ali ne ograničavajući se na, kalemljenje CDR (CDR grafting) (Evropski patent br. EP 239,400; Međunarodna objava br. WO 91/09967 i U.S. patenti br. 5,225,539, 5,530,101 i 5,585,089), glaziranje (veneering ili resurfacing) (Evropski patenti br. EP 592,106 i EP 519,596; Padlan, 1991, Molecular Immunology 28(4/5):489-498; Studnicka et al., 1994, Protein Engineering 7(6):805-814 i Roguska et al., 1994, PNAS 91:969-973), mešanje lanaca (chain shuffling) (U.S. patent br. 5,565,332) i tehnike opisane u, npr., U.S. patentu br.
6,407,213, U.S. patentu br. 5,766,886, WO 9317105, Tan et al., J. Immunol. 169:1119 25 (2002), Caldas et al., Protein Eng. 13(5):353-60 (2000), Morea et al., Methods 20(3):26779 (2000), Baca et al., J. Biol. Chem. 272(16):10678-84 (1997), Roguska et al., Protein Eng.
9(10):895 904 (1996), Couto et al., Cancer Res. 55 (23 Supp):5973s- 5977s (1995), Couto et al., Cancer Res. 55(8):1717-22 (1995), Sandhu JS, Gene 150(2):409-10 (1994) i Pedersen et al., J. Mol. Biol. 235(3):959-73 (1994). Videti i U.S. patentnu objavu br. US 2005/0042664 A1 (Feb. 24, 2005). Često, okvirni ostaci u okvirnim regionima će biti supstituisani
2
odgovarajućim ostatakom iz CDR donorskog antitela da promene (npr. poboljšaju) vezivanje antigena. Ove okvir nesupstitucije se identifikuju metodima dobro poznatim u struci, npr., modelovanjem interakcija CDR i okvirnih ostataka da bi se identifikovali okvirni ostaci važni za vezivanje antigena i poređenjem sekvenci da bi se identifikovali neobični okvirni ostaci na određenim pozicijama. (Videti, npr., Queen et al., U.S. patent br. 5,585,089 i Reichmann et al., 1988, Nature 332:323).
[0452] Antitela sa jednim domenom, na primer, antitela kojima nedostaju laki lanci, se mogu proizvoditi metodima dobro poznatim u struci. Videti Riechmann et al., 1999, J. Immunol.
231:25-38; Nuttall et al., 2000, Curr. Pharm. Biotechnol. 1(3):253-263; Muylderman, 2001, J. Biotechnol. 74(4):277302; U.S. patent br.6,005,079 i međunarodne objave br. WO 94/04678, WO 94/25591 i WO 01/44301.
[0453] Dalje, antitela koja se vezuju za C10orf54 antigen se mogu, sa svoje strane, koristiti da generišu antiidiotipska antitela koja "mimikriraju" antigen tehnikama dobro poznatim stručnjacima u ovoj oblasti. (Videti, npr., Greenspan & Bona, 1989, FASEB J.7(5):437-444 i Nissinoff, 1991, J. Immunol.147(8):2429-2438).
POLINUKLEOTIDI KOJI KODIRAJU ANTITELO
[0454] Ovde su obezbeđeni i polinukleotidi koji sadrže nukleotidnu sekvencu koja kodira antitelo obezbeđeno ovde koje se vezuje za C10orf54 (npr., polipeptid C10orf54, fragment polipeptida C10orf54, epitop C10orf54). Ovde su obezbeđeni i polinukleotidi koji hibridizuju u uslovima hibridizacije visoke strogosti, srednje ili manje strogosti, npr., kao što je definisano gore, sa polinukleotidima koji kodiraju antitelo ili modifikovano antitelo obezbeđeno ovde.
[0455] U određenim aspektima, molekuli nukleinske kiseline obezbeđeni ovde sadrže ili se sastoje od sekvence nukleinske kiseline koja kodira aminokiselinsku sekvencu VH i/ili VL opisanu ovde ili bilo koju njenu kombinaciju (npr., kao što je nukleotidna sekvenca koja kodira antitelo obezbeđeno ovde, kao što je celo antitelo, težak i/ili lak lanac antitela ili jednolančano antitelo obezbeđeno ovde).
REKOMBINANTNA EKSPRESIJA ANTITELA
[0456] Rekombinantna ekspresija antitela obezbeđenog ovde (npr., celo antitelo, težak i/ili lak lanac antitela ili jednolančano antitelo obezbeđeno ovde), koje se vezuje za C10orf54 antigen zahteva konstrukciju ekspresionog vektora koji sadrži polinukleotid koji kodira antitelo. Jednom kad je polinukleotid koji kodira molekul antitela, težak ili lak lanac antitela ili njegov fragment (kao što je onaj koji sadrži varijabilni domen teškog i/ili lakog lanca) dobijen, vektor za proizvodnju molekula antitela može se napraviti tehnologijom rekombinantne DNK tehnikama dobro poznatim u struci. Prema tome, metodi za dobijanje proteina eksprimiranjem polinukleotida koji sadrži nukleotidnu sekvencu koja kodira antitelo su opisani ovde. Metodi koji su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti mogu se koristiti za konstruisanje ekspresionih vektora koji sadrže sekvence koje kodiraju antitelo i odgovarajuće transkripcione i translacione kontrolne signale. Ovi metodi uključuju, na primer, tehnike in vitro rekombinantne DNK, tehnike sinteze i in vivo genske rekombinacije. Prema tome, ovde su obezbeđeni i replikabilni vektori koji sadrže nukleotidnu sekvencu koja kodira molekul antitela obezbeđenog ovde, težak ili lak lanac antitela, varijabilni domen teškog ili lakog lanca antitela ili njegov fragment ili CDR teškog ili lakog lanca, operativno vezan za promotor.
2
Takvi vektor mogu da uključuju nukleotidnu sekvencu koja kodira konstantni region molekula antitela (videti, npr., međunarodne objave br. WO 86/05807 i WO 89/01036 i U.S. patent br. 5,122,464) i varijabilni domen antitela se može klonirati u takav vektor za ekspresiju celog teškog, celog lakog lanca ili i celog teškog i celog lakog lanca.
[0457] Ekspresioni vektor se prebaci u ćeliju domaćina konvencionalnim tehnikama i transfektovane ćelije se zatim gaje konvencionalnim tehnikama da bi se proizvelo antitelo obezbeđeno ovde. Prema tome, ovde su obezbeđene i ćelije domaćini koje sadrže polinukleotid koji kodira antitelo obezbeđeno ovde ili njegove fragmente ili njegov težak ili lak lanac ili njihov fragment ili jednolančano antitelo obezbeđeno ovde, operativno vezan za heterologni promotor. U određenim aspektima, za ekspresiju dvolančanih antitela, vektori koji kodiraju i težak i lak lanac mogu koeksprimirati u ćeliji domaćinu ceo imunoglobulinski molekul, kao što je detaljno prikazano u tekstu koji sledi.
[0458] Spektar sistema ekspresionih vektora u domaćinu se može koristiti da eksprimira antitela obezbeđena ovde (videti, npr., U.S. patent br. 5,807,715). Takvi sistemi ekspresije u domaćinu predstavljaju mosioce pomoću kojih se kodirajuća sekvenca od interesa može proizvoditi, a zatim prečistiti, ali predstavljaju i ćelije koje mogu, kad se transformišu ili transfektuju odgovarajućim sekvencama koje kodiraju nukleotide, da eksprimiraju in situ antitelo obezbeđeno ovde. Ove uključuju, ali nisu ograničene na, mikroorganizme kao što su bakterije (npr., E. coli i B. subtilis), transformisane ekspresionim vektorima sa rekombinantnom DNK bakteriofaga, plazmidnim ili kozmidnim DNK koje sadrže kodirajuću sekvencu antitela; kvasac (npr., Saccharomyces Pichia) transformisan rekombinantnim ekspresionim vektorima kvasca koji sadrže kodirajuću sekvencu antitela; ćelijske sisteme insekata inficirane rekombinantnim virusnim ekspresionim vektorima (npr., bakulovirus) koji sadrže kodirajuću sekvencu antitela; ćelijske sisteme biljaka inficirane rekombinantnim virusnim ekspresionim vektorima (npr., mozaični virus karfiola, CaMV; mozaični virus duvana, TMV) ili transformisane rekombinantnim plazmidnim ekspresionim vektorima (npr., Ti plasmid) koji sadrže kodirajuću sekvencu antitela; ili sisarske ćelijske sisteme (npr., COS, CHO, BHK, 293, NS0 i 3T3 ćelije) koji nose rekombinantne ekspresione konstrukte koji sadrže promotore izvedene iz genoma sisarskih ćelija (npr., metalotionein promotor) ili iz sisarskih virusa (npr., kasni promotor adenovirusa; 7,5K promotor virusa vakcinije). U određenim aspektima, bakterijske ćelije kao što je Escherichia coli ili eukariotske ćelije, naročito za ekspresiju celog molekula rekombinantnog antitela, se koriste za ekspresiju molekula rekombinantnog antitela. Na primer, sisarske ćelije, kao što su jajne ćelije kineskog hrčka (CHO), u konjunkciji sa vektorom kao što je glavni intermedijerni rani element promotora gena iz humanog citomegalovirusa je efektivni sistem ekspresije za antitela (Foecking et al., 1986, Gene 45:101 i Cockett et al., 1990, Bio/Technology 8:2). U nekim specifičnim aspektima, antitela obezbeđena ovde se proizvode u CHO ćelijama. U jednom specifičnom aspektu, ekspresija nukleotidne sekvence koja kodira antitela obezbeđena ovde koja se vezuju za C10orf54 antigen je regulisana konstitutivnim promotorom, inducibilnim promotorom ili tkivno specifičnim promotorom.
[0459] U bakterijskim sistemima, mogu se povoljno izabrati raznoliki ekspresioni vektori u zavisnosti od namenjene upotrebe za molekul antitela koji se eksprimira. Na primer, kad treba napraviti veliku količinu takvih antitela, za pravljenje farmaceutskih sastava molekula antitela, vektori koji upravljaju ekspresijom visokih nivoa proizvoda fuzionih proteina koji se lako prečišćavaju mogu biti poželjni. Takvi vektori uključuju, ali nisu ograničeni na, ekspresioni vektor iz E. coli, pUR278 (Ruther et al., 1983, EMBO 12:1791), u kom kodirajuća sekvenca antitela može biti ligirana pojedinačno u vektor u okviru sa kodirajućim
2
regionom lac Z tako da se proizvodi fuzioni protein; pIN vektori (Inouye & Inouye, 1985, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109; Van Heeke & Schuster, 1989, J. Biol. Chem. 24:5503-5509) i slično. pGEX vektori se takođe mogu koristiti za ekspresiju stranih polipeptida u vidu fuzionih proteina sa glutation 5-transferazom (GST). Uopšteno, takvi fuzioni proteini su rastvorljivi i mogu se lako prečistit iz liziranih ćelija adsorpcijom i vezivanjem za matriks od glutation agaroznih kuglica, posle čega se eluira u prisustvu slobodnog glutationa. pGEX vektori su dizajnirani da uključuju mesta cepanja proteazom trombina ili faktora Xa tako da se kloniran ciljani genski proizvod može osloboditi GST.
[0460] U sistemu insekata, virus nuklearne polihedroze Autographa californica (AcNPV) se koristi kao vektor za ekspresiju stranih gena. Virus raste u ćelijama Spodoptera frugiperda. Kodirajuća sekvenca antitela može se klonirati pojedinačno u neesencijalne regione (na primer, gen za polihedrin) virusa i staviti pod kontrolu AcNPV promotora (na primer, polihedrinski promotor).
[0461] U sisarskim ćelijama domaćinima, može se koristiti mnoštvo ekspresionih sistema na bazi virusa. U slučajevima gde se adenovirus koristi kao ekspresioni vektor, kodirajuća sekvenca antitela od interesa može se ligirati sa kompleksom adenovirusa za kontrolu transkripcije/translacije, npr., kasni promotor i tripartitna čeona sekvenca. Ovaj himerni gen može onda da se ubaci u genom adenovirusa in vitro ili in vivo rekombinacijom. Insercija u neesencijalni region virusnog genoma (npr., region El ili E3) će dovesti do rekombinantnog virusa koji je vijabilan i sposoban da eksprimira molekul antitela u inficiranim domaćinima (npr., videti Logan & Shenk, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8 1:355-359). Specifični signali za početak takođe mogu biti potrebni za efikasnu translaciju ubačene kodirajuće sekvence antitela. Ovi signali uključuju ATG inicijacioni kodon i susedne sekvence. Štaviše, inicijacioni kodon mora da bude u fazi sa okvirom čitanja željene kodirajuće sekvence da bi se osigurala translacija celog inserta. Ovi egzogeni signali za kontrolu translacije i inicijacioni kodoni mogu biti iz raznih izvora, i prirodnih i sintetičkih. Efikasnost ekspresije se može pojačati inkluzijom odgovarajućih elemenata stimulacije transkripcije, terminatora transkripcije itd. (videti, npr., Bittner et al., 1987, Methods in Enzymol.153:51-544).
[0462] Pored toga, može se izabrati soj ćelije domaćina koji moduliše ekspresiju insertovanih sekvenci ili modifikuje i obrađuje genski proizvod na specifičan željeni način. Takve modifikacije (npr., glikozilacija) i obrada (npr., cepanje) proteinskih proizvoda mogu biti važne za fukciju proteina. Različite ćelije domaćini imaju karakteristične i specifične mehanizme za post-translacionu obradu i modifikaciju proteina i genske proizvode. Odgovarajuće ćelijske linije ili sistemi domaćina mogu se izabrati tako da se osigura pravilna modifikacija i obrada stranog proteina koji je eksprimiran. U ovu svrhu, mogu se koristiti eukariotske ćelije domaćini koje poseduju ćelijsku mašineriju za pravilnu obradu primarnog transkripta, kao i glikozilacija i fosforilacija genskog proizvoda. Takve sisarske ćelije domaćini uključuju, ali nisu ograničene na, CHO, VERY, BHK, Hela, COS, MDCK, 293, 3T3, W138, BT483, Hs578T, HTB2, BT2O i T47D, NSO (mišja ćelijska linija mijeloma koja endogeno ne proizvodi nikakve lance imunoglobulina), CRL7O3O i HsS78Bst ćelije. U nekim specifičnim aspektima, potpuno humana, monoklonska antitela na C10orf54 obezbeđena ovde su proizvedena u sisarskim ćelijama, kao što su CHO ćelije.
[0463] Za dugoročnu proizvodnju sa visokim prinosom rekombinantnih proteina, stabilna ekspresija je korisna, ali nije obavezna. Na primer, mogu se konstruisati ćelijske linije koje stabilno eksprimiraju molekul antitela. Radije nego da se koriste ekspresioni vektori koji sadrže virusni start replikacije, ćelije domaćini se mogu transformisati pomoću DNK
2
kontrolisanom odgovarajućim elementima za kontrolu ekspresije (npr., promotor, enhanser, sekvence, transkripcioni terminatori, mesta za poliadenilaciju itd.) i selektabilni marker. Posle ubacivanja strane DNK, inženjerisane ćelije se mogu ostaviti da rastu 1-2 dana u obogaćenim medijumima, a zatim prebaciti u selektivne medijume. Selektabilni marker u rekombinantnom plazmidu pruža otpor selekciji i dozvoljava ćelijama da stabilno integrišu plazmid u njihove hromozome i da rastu da formiraju fokuse koji zatim mogu da se kloniraju i prošire u ćelijske linije. Ovaj metod može povoljno da se koristi da se konstruišu ćelijske linije koje eksprimiramolekul antitela. Takve inženjerisane ćelijske linije mogu biti naročito korisne u pretraživanju i proceni sastava koji direktno ili indirektno interaguju sa molekulom antitela.
[0464] Mogu se koristiti brojni selekcioni sistemi, uključujući, ali ne ograničavajući se na, gene za timidin kinazu herpes simpleks virusa (Wigler et al., 1977, Cell 11:223), hipoksantinguanin fosforiboziltransferazu (Szybalska & Szybalski, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48:202) i adenin fosforiboziltransferazu (Lowy et al., 1980, Ćelija 22:8-17) u tk-, hgprt- ili aprt-ćelijama, respektivno. Takođe, antimetabolitni otpor se može koristiti kao baza za selekciju za sledeće gene: dhfr, koji pruža otpor metotreksatu (Wigler et al., 1980, Natl. Acad. Sci. USA 77:357; O'Hare et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:1527); gpt, koji pruža otpor mikofenolnoj kiselini (Mulligan & Berg, 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2072); neo, koji pruža otpor aminoglikozidu G-418 (Wu i Wu, 1991, Biotherapy 3:87-95; Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596; Mulligan, 1993, Science 260:926-932 i Morgan i Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62:191-217; May, 1993, TIB TECH 11(5):l55-2 15) i hygro, koji pruža otpor higromicinu (Santerre et al., 1984, Gene 30:147). Metodi obično poznati u struci tehnologije rekombinantne DNK mogu se rutinski primenjivati na željeni rekombinantan klon i takvi metodi su opisani, na primer, u Ausubel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993); Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990) i u poglavljima 12 i 13, Dracopoli et al. (eds.), Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994); Colberre-Garapin et al., 1981, J. Mol. Biol.150:1.
[0465] Nivoi ekspresije molekula antitela se mogu povećati amplifikacijom vektora (za pregled, videti Bebbington i Hentschel, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning Vol. 3 (Academic Press, New York, 1987)). Kad se marker u vektorskom sistemu koji eksprimira antitelo može amplifikovati, Povećanje nivoa inhibitora prisutnog u kulturi ćelija domaćina će povećati Broj kopija marker gena. Pošto je amplifikovani region povezan sa genom antitela, proizvodnja antitela će takođe porasti (Crouse et al., 1983, Mol. Cell. Biol.3:257).
[0466] Ćelija domaćin može biti kotransfektovana pomoću dva ekspresiona vektora obezbeđena ovde, gde prvi vektor kodira polipeptid izveden iz teškog lanca, a drugi vektor kodira polipeptid izveden iz lakog lanca. Dva vektora mogu da sadrže identične selektabilne markere koji omogućavaju jednaku ekspresiju polipeptida teškog i lakog lanca. Alternativno, može da se koristi jedan vektor koji kodira i sposoban je da eksprimira polipeptide i teškog i lakog lanca. U takvim situacijama, lak lanac bi trebalo postaviti pre teškog lanca da bi se izbegao višak toksičnog slobodnog teškog lanca (Proudfoot, 1986, Nature 322:52 i Kohler, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:2197-2199). Kodirajuće sekvence za težak i lak lanac mogu da sadrže cDNK ili genomsku DNK.
[0467] Jednom kad je antitelo proizvedeno rekombinantnom ekspresijom, ono može da se prečisti bilo kojim metodom poznatim u struci za prečišćavanje molekula imunoglobulina, na primer, hromatografijom (npr. jonoizmenjivačkom, afinitetnom, naročito sa afinitetom za
2 1
specifičan antigen posle Protein A i ekskluzione hromatografije), centrifugiranjem, diferencijalnom rastvorljivošću ili bilo kojom drugom standardnom tehnikom za prečišćavanje proteina. Dalje, antitela obezbeđena ovde mogu biti fuzionisana sa heterolognim polipeptidnim sekvencama opisanim ovde ili na drugi način poznatim u struci, da bi se olakšalo prečišćavanje.
KOMPLETI
[0468] Ovde je obezbeđeno i farmaceutsko pakovanje ili komplet koji sadrži jedan ili više kontejnera napunjenih jednim ili sa više sastojaka farmaceutskih sastava obezbeđenih ovde, kao što je jedno ili više antitela obezbeđenih ovde. Opciono uz takve kontejnere može biti dodato obaveštenje u formi koju propisuje državna agencija koja reguliše proizvodnju, upotrebu ili prodaju farmaceutskih ili bioloških proizvoda, gde to obaveštenje odražava odobrenje od strane agencije za proizvodnju, upotrebu ili prodaju za administraciju ljudima. U nekim aspektima, komplet sadrži umetak. Termin "umetak" se odnosi na uputstvo koje je obično uključeno u komercijalna pakovanja terapijskih proizvoda, koje sadrži informacije o indikacijama, upotrebi, doziranju, administraciji, kontraindikacijama i/ili upozorenjima u vezi sa upotrebom takvih terapijskih proizvoda, kao i instrukcijama za upotrebu.
[0469] Ovde su obezbeđeni i kompleti koji se mogu koristiti u gornjim metodima. U jednom aspektu, komplet sadrži antitelo obezbeđeno ovde, kao što je izolovano antitelo, u jednom ili više kontejnera. U jednom specifičnom aspektu, kompleti obezbeđeni ovde sadrže suštinski izolovan C10orf54 antigen kao kontrolu. U određenim aspektima, kompleti obezbeđeni ovde još sadrže kontrolno antitelo koje ne reaguje sa C10orf54 antigenom. U jednom drugom specifičnom aspektu, kompleti obezbeđeni ovde sadrže sredstvo za detektovanje vezivanja modifikovanog antitela za C10orf54 antigen (npr., antitelo može biti konjugovano sa detektabilnim supstratom kao što je fluorescentno jedinjenje, enzimski supstrat, radioaktivno jedinjenje ili luminiscentno jedinjenje, ili drugo antitelo, koje prepoznaje prvo antitelo, može biti konjugovano sa detektabilnim supstratom). U nekim specifičnim aspektima, komplet može da uključi rekombinantno proizveden ili hemijski sintetisan C10orf54 antigen. C10orf54 antigen, obezbeđen u kompletu, može takođe da bude zakačen za čvrstu podlogu. U specifičnijem aspektu, sredstvo za detektovanje iz gore opisanog kompleta uključuje čvrstu podlogu za koju je C10orf54 antigen zakačen. Takav komplet može takođe da uključi nezakačeno reporterom obeleženo antihumano antitelo. U ovom aspektu, vezivanje antitela za C10orf54 antigen se može detektovati vezivanjem antitela obeleženog reporterom.
PRIMERI
PRIMER 1 - IDENTIFIKACIJA C10ORF54 NA POVRŠINI TUMORSKIH ĆELIJA AKUTNE MIJELOGENE LEUKEMIJE (AML)
[0470] Ukupno 14 svežih jednojedarnih ćelija kostne srži (BMMC) iz pacijenata sa AML je dobijeno od All Cell, a dodatnih 16 zamrznutih uzoraka od pacijenata su od Fred Hutchinson Cancer Research Center (FHCRC). Kao kontrola, analizirano je 16 svežih uzoraka BMMC od zdravih donora. Da bi se pratio kvalitet pojedinačnih uzoraka AML, rađeno je bojenje blasta AML hematoksilinom i eozinom ili je praćena ekspresija markera AML primenom protočne citometrije/FACS analize. Rukovanje uzorcima je optimizovano tako da se maksimalno održi vijabilnost ćelija tokom izolovanja uzorka. Određena su optimalna vremena obeležavanja uzoraka AML koja dozvoljavaju efikasno obeležavanje bez kompromitovanja ćelijskog integriteta.
2 2
[0471] Profilisanje obeleženih površinskih antigena (sTAg) je korišćeno da se identifikuje i kvantitativno profiliše repertoar površinskih proteina na ćelijama u uzorcima. Vanćelijski domeni proteina povezanih sa ćelijskim membranama intaktnih primarnih tumorskih ćelija AML su hemijski obeleženi, a zatim hromatografski obogaćeni za obeležene proteine upotrebom afinitetne smole u čvrstoj fazi. Eluirani proteini su čuvani na -80°C pre analize masenom spektrometrijom, kao što je opisano niže.
[0472] Proteini obogaćeni sTAg metodom su identifikovani i kvantifikovani primenom direktne tečne hromatografije visoke rezolucije u kombinaciji sa masenom spektrometrijom (MS). Hibridni ThermoFisher LTQ-ORBITRAP VELOS maseni spektrometar, koji kombinuje osetljivost linearne jonske klopke sa visokom rezolucijom i masenom tačnošću koje omogućava revolucionaran orbitrap maseni analizator (Olsen et al., Mol. Cell Proteomics 8:2759-2769, 2009), kuplovan sa aparatom za nano-tečnu hromatografiju je korišćen za direktnu proteomiku “odozdo nagore” (bottoms-up) da bi se odredili identiteti i kvantitativna zastupljenost proteina u obogaćenim površinskim frakcijama AML ćelija (Yates et al., Annu. Rev. Biomed. Eng. 11:49-79, 2009). Proizvodi digestije tripsinom iz obogaćenih površinskih proteina su odvojeni pomoću hidrofobnosti putem onlajn nano-tečne hromatografije kao peptidne mase i obrasci fragmentacije su zabeleženi dinamički masenim spektrometrom. Da bi se odredili identiteti peptida i proteina, sirovi MS podaci su obrađeni pomoću SEQUEST algoritma izvršenog na Sorcerer 2 platformi sa brzim procesorom (Lundgren et al., Curr. Protoc. Bioinformatics, poglavlje 13: jedinica 13.3, 2009), da bi se odredili parovi sa najboljim fitom između eksperimentalnih obrazaca fragmentacije i onih određenih in-silico iz humanog proteoma. Dobijeni parovi su statistički validirani pomoću PEPTIDEPROPHET (Keller et al., Anal. Chem. 74:5383-5392, 2002) i PROTEINPROPHET (Nesvizhskii et al., Anal. Chem. 75: 4646-4658, 2003) algoritama kao implementirani u softver SCAFFOLD Software (Proteome Software) da bi se obezbedili najniži mogući lažni stepeni otkrića (FDR) i time uvršćavanje samo robustno identifikovanih proteina u skup (pool) kandidata.
[0473] Relativni kvantitativni nivoi identifikovanih proteina u sTAg uzorcima su određeni metodom spektralnog brojanja (pregled u Neilson et al., Proteomics 11:535-553, 2011). Spektralno brojanje se zasniva na empirijskoj demonstraciji da broj pridruženih (pozitivno identifikovanih) spektara pridruženih peptidima iz svakog proteina jako korelira sa relativnom količinom tog proteina u originalnoj smesi (Liu et al., Anal. Chem. 76:4193-4201, 2004). Spektralna brojanja identifikovanih peptida su dobijena SCAFFOLD Software programom koji prikazuje, sortira i filtrira rezultate iz podataka masene spektrometrije pretraženih SEQUEST-om. Sirovi spektralni brojevi su transformisani u vrednosti procentnog faktora normalizovane spektralne količine (%NSAF) (Zybailov et al., J. Proteome Res. 5:2339-2347, 2006) da bi se izračunale razlike u dužini proteina i varijabilnost u ukupnoj koncentraciji proteina. Izabrana monoklonska antitela su korišćena za validaciju proteomičkih merenja primenom kvantitativne FACS analize kao nezavisne, spoljne konfirmatorne mere proteomičkog profilisanja površinske ekspresije primarnih tumorskih ćelija na bazi sTAg masene spektrometrije (videti, npr., Primer 2).
[0474] Primenom sTAg analize, C10orf54 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1080 je identifikovan kao prisutan na površini AML tumorskih ćelija. Kao što je prikazano na SL. 1A, sTAg metod je identifikovao C10orf54 u 7 od 30 uzoraka primarne AML sa medijanom %NSAF od 0,06. Nasuprot tome, C10orf54 nije detektovan ni u jednom od 16 uzoraka BMMC iz zdravih donora. AML reper, CD33, je identifikovan u 11 od 30 uzoraka AML sa medijanom %NSAF od 0,07 i četiri od 16 normalnih uzoraka BMMC sa
2
medijanom %NSAF od 0,05. SL.1B, prikazuje podskup sTAg uzoraka prikazanih na SL. 1A. Na osnovu ove analize, izgleda da je C10orf54 uporedivo eksprimiran sa CD33 u uzorcima uzetim iz pacijenata sa AML i da je eksprimiran u značajnom delu pacijenata sa AML u odnosu na relevantne normalne kontrole.
PRIMER 2 - EKSPRESIJA C10ORF54
A. Ekspresija u AML
[0475] Studije sa protočnom citometrijom su sprovođene sa 23 primarna i 3 normalna uzorka BM-MNC dobijena kao što je opisano u Primeru 1, uz upotrebu antitela na C10orf54 da bi se analizirao ekspresioni profil C10orf54 u AML. Antitela su obeležena fluorohromom AF647 ili AF488. Ćelije su brojane i korišćeno je 500000 ćelija po bojenju, ponovo suspendovane u FACS puferu: RPMI, 4% HIFBS, 0,02%NaN3. Antitela su inkubirana 15 minuta, na sobnoj temperaturi u mraku, a zatim analizirana na instrumentu MACSQuant (Miltenyl Biotec, Auburn, CA). Analiza podataka je izvedena pomoću softvera FLOWJO (TreeStar, Ashland, OR). Rezultati FACS analize korišćenjem antitela na C10orf5476E1 su prikazani na SL.2.
B. Ekspresija u normalnim tkivima u poređenju sa onom u tumorskim
[0476] Studije sa tkivnim mikronizom (TMA) su sprovođene da bi se odredila ekspresija proteina za C10orf54 u nizu humanih normalnih i tumorskih tkiva.
[0477] Korišćen je spektar tkiva fiksiranih formalinom utisnutih u vosak, uključujući TMA dobijenih od US Biomax (Rockville, MD) i Protein Biotechnologies (Ramona, CA). Ćelije sarkoma fiksirane formalinom, u vosku, transfektovane C10orf54, roditeljske ćelije sarkoma i ćelije humane placente su korišćene kao pozitivne i negativne kontrole. Antitelo na C10orf54 (Novus Biologicals (Littleton CO80120) Cat#NBP1-88967 C10orf54/B7-H5/PD-1H) je korišćen u razblaženju od 1:150 u citratnom puferu pH6,0 za nalaženje antigena.
[0478] Imunohistohemijsko bojenje je vršeno pomoću Dako Autostainer (Dako North America, Carpenteria, CA93013) na sobnoj temperaturi, uz pranje PBS-om između svih koraka.
[0479] Ekspresija C10orf54 u normalnom tkivu je primarno ograničena na imune ćelije u tkivima koja su procenjena kao najnormalnija. Krvni sudovi pozitivni na C10orf54 su posmatrani u tkivu CNS, mada se pri većem uvećanju pojavila ekspresija C10orf54 i na perivaskularnim ćelijama (pericitima) i imunim ćelijama. Trofoblasti u placenti su bili jako pozitivni na C10orf54. Jedino epitelno tkivo gde je uočena pozitivna ekspresija C10orf54 je bilo u reaktivnim krajnicima. Međutim, ova pozitivna ekspresija može biti usled velikog broja pozitivnih limfocita koji prolazi kroz epitel. Negativna tkiva uključuju bubrežne glomerule, tubule i kanale, hepatocite i sinusoide jetre, plućne alveole i bronhije, pankreasna ostrvca i acinuse, srčani mišić, prostatne žljezde, jajnike, kripte kolona, stomačne žljezde i epitel, kožne žljezde i epitel, timus, uterus, adrenalne žljezde, skeletne mišiće, neurone CNS, epitel bešike i velike krvne sudove.
[0480] Tako, u sažetku, TMA studije normalnog tkiva su pokazale najjače pozitivno bojenje za placentne trofoblaste, sa pozitivnim imunim ćelijama u tankom crevu (lamina propria), slezini, krajniku, uretri i plućima.
2 4
[0481] TMA studije tumorskog tkiva su neočekivano pokazale prisustvo ćelija pozitivnih na C10orf54 u više od 99% tumora koji imaju inflamaciju. Ovi rezultati su sumirani u Tabeli 34.
Tabela 34
N/A* - nije primenjivo, jer nema inflamacije
** Uzorak kancera pluća malih ćelija je imao inflamaciju koja je bila negativna na C10orf54. Tako da je u sažetku, ekspresija C10orf54 u tumorskom tkivu bila lokalizovana unutar inflamatornih imunih ćelija u mnogim tipovima tumora.
C. Ekspresija u supresorskim ćelijama izvedenim iz mijeloida (MDSC)
[0482] Studije sa protočnom citometrijom su vođene kao što je opisano niže, da bi se odredili nivoi ekspresije C10orf54 u MDSC subpopulaciji (CD11b<+>leukociti) prečišćenih humanih perifernih krvnih mononuklearnih ćelija (PBMC) iz zdravih donora. Ekspresija je procenjena i kvantifikovana uz upotrebu obeleženog monoklonskog antitela 76E1 u sledećim populacijama MDSC: monocitne (CD11b<+>/CD14<+>/HLA-DR-), granulocitne (CD11b<+>/CD15<+>/HLA-DR-) i nezrele mijeloidne ćelije (CD11b<+>/CD15-7HLA-DR-). Uzorci PBMC korišćeni u ovim eksperimentima su dobijeni od ALLCELLS (Emeryville, CA).
[0483] Klon antitela 76E1 je obeležen pomoću Alexa Fluor 647. Uzorci PBMC su pripremljeni i obeleženi pomoću LIVE/DEAD Yellow (LDY).100 µl (1E6 ćelija) je dodato u sledeće: FcR blokirajući reagens, humani; markeri linija; CD11b-PE; CD14-APC-Cy7; CD15-PerCP-Cy5.5; HLA-DR-PE-Cy7 i 1 µg obeleženog 76E1-AF647 antitela. Posle inkubacije od 30 minuta na 4°C u mraku, uzorci su oprani i analizirani.
2
[0484] Medijana intenziteta fluorescencije (MFI) je izračunata za svaki uzorak na MACSQuant analizatoru. Da bi se odredio broj kopija C10orf54, korišćen je komplet Quantum Simply Cellular anti-Mouse IgG (Bangs Laboratories, 815B).
[0485] Procenti 76E1-AF-647<+>ćelija nađenih u okviru tri subpopulacije MDSC su sumirani na SL. 26A. Slično, brojevi kopija C10orf54 za svaku subpopulaciju MDSC su sumirani na SL. 26B.
[0486] Primenom gornje analize, bilo je moguće identifikovati i Lin-/CD11b<+>leukocite i subpopulacije MDSC, što je pokazalo da monocitna populacija MDSC ispoljava najviši nivo ekspresije C10orf54 u zdravim uzorcima PBMC.
D. Ekspresija u CD4<+>/CD25<+>T-ćelijama
[0487] Studije sa protočnom citometrijom su vođene kao što je opisano gore da bi se odredili nivoi ekspresije C10orf54 u naivnim CD4<+>/CD25<+>T-ćelijama, nađenim u humanim PBMC. Kao što je opisano fore, ekspresija je procenjena i kvantifikovana uz upotrebu obeleženog monoklonskog antitela 76E1. CD4<+>/CD25<+>T-ćelije su izolovane upotrebom kompleta za izolaciju humanih CD4+/CD25+ regulatornih T ćelija (Miltenyi-Biotec, 130-091-301). Alikvoti iz svakog stupnja separacije (PBMC, CD4+ T-ćelije, CD4+/CD25+ T-ćelije) su analizirani na ekspresiju C10orf54. MFI vrednosti su kvantifikovane pomoću kompleta Quantum Simply Cellular anti-Mouse IgG (Bangs Laboratories, 815B). Humani uzorci PBMC su dobijeni od ALLCELLS da bi se ocenila ova metodologija.
[0488] Gornja analiza je pokazala da je C10orf54 bio minimalno eksprimiran u CD4<+>/CD25<+>T-ćelijama.
E. Ekspresija u humanom melanomu
[0489] Studije sa imunohistohemijskim (IHC) bojenjem i duplim imunofluorescentnim (IF) bojenjem su sprovođene kao što je opisano niže da bi se odredila ekspresija C10orf54 u uzorcima humanog melanomskog tumora i da bi se procenio veliki broj podtipova ćelija (makrofazi, mijeloidne ćelije, T-ćelije i tumorske ćelije).
[0490] Procenjivana su tri različita melanoma: dva melanoma mekog tkiva kože (M113044 i OD41239) i jedan metastatski melanom u limfnom čvoru (WD-12972). Jedan uzorak melanoma mekog tkiva (OD41239) je bio >90% tumora, dok su drugi melanom mekog tkiva i metastatski melanom u limfnom čvoru (LN) imali veliki inflamatorni odgovor sa manje prisutnih tumorskih ćelija.
[0491] Antitela korišćena u ovoj studiji su izneta u Tabeli 35 niže. Gp100, koji se preferencijalno eksprimira u velikim količinama u ćelijama melanoma, je takođe obojen u svakom tkivu melanoma pomoću IHC, da bi se odredila količina tumorskih ćelija u uzorcima tkiva i stepen C10orf54 pozitivnih tumorskih ćelija.
Tabela 35
2
[0492] Za duplo IF bojenje, zamrznuti kriostatski isečci od 8µm su fiksirani u ≈71% etanolu etanolu i 25% acetonu 5 minuta. Koktel primarnih antitela (2 različite vrste, razblažene u Dako razblaživaču cat#S3022; razblažene prema Tabeli 35) je dodat u uzorke i inkubiran 1 sat. Sekundarna antitela su zatim dodata u odnosu 1:200 i inkubirana 30 min. Pokrovna stakla sa Prolong Gold DAPI (ThermoFisher cat#36935) su dodata i ostavljena su da se konzerviraju preko noći. Uspravni fluorescentni mikroskop Olympus BX52 je korišćen za analizu uzoraka.
[0493] Za IHC bojenje gp100 antitelom, zamrznuti kriostatski isečci od 8µm su fiksirani u ≈71% etanolu i 25% acetonu 5 minuta. Endogena peroksidaza je blokirana inkubacijom sa Bloxall-om (Vector cat#SP-6000)) od 5 minuta. Uzorci su dalje blokirani primenom kompleta Avidin and Biotin blocking kit (BioLegend cat#SIG-31126), po 10 min. svaki, i Protein Block-om (Dako cat#0909) 30 min. Primarno gp100 antitelo (abcam cat# ab137062; u razmeri 1:100) je dodato i inkubirano je 1 sat. Sekundarno antitelo biotin anti-zečje (Vector cat#BA1000) je dodato u razmeri 1:200 i inkubirano je 30 min. Bojenje streptavidin-HRP-om je izvedeno pomoću kompleta VECTASTAIN Elite ABC (Vector Laboratories cat#PK6100) 30 min. Bojenje DAB-om (Sigma cat#D4418) i kontrabojenje Mayers-ovim hematoksilinom (EMS cat#26043-05) su takođe urađeni.
[0494] Slede sumirani rezultati gornjih eksperimenata:
● Gp100: Skoro sve tumorske ćelije u sva tri uzorka tkiva melanoma su bili negativni na C10orf54.
● CD3: M113044: Veliki broj T-ćelija je bio vrlo slabo pozitivan na C10orf54. -30% ćelije je bilo C10orf54 pozitivno /CD3 negativno. OD41239: Vrlo malo prisutnih T-ćelija i skoro sve CD3 pozitivne ćelije su bile C10orf54 negativne. WD-12972: Veliki broj T-ćelija prisutan. Mnogo je takođe bilo slabo C10orf54 pozitivno. T-ćelije unutar tumora su uglavnom bile C10orf54 negativne i bilo je mnogo C10orf54 pozitivnih ćelija koje su bile CD3 negativne kroz celo tumorsko tkivo.
2
● CD68: M113044: Većina CD68 pozitivnih ćelija je bilo C10orf54 negativno. OD41239: Podskup CD68 pozitivnih ćelija je bio i C10orf54 pozitivan. WD-12972: CD68 pozitivne ćelije su pretežno C10orf54 negativne, mada je bilo nekih CD68 negativnih/C10orf54 pozitivnih ćelija.
● CD11b: Skoro sve CD11b pozitivne ćelije su bile i C10orf54 pozitivne. Međutim, bile su C10orf54 pozitivne ćelije koje su bile CD11b negativne u sva tri melanomska tumora.
● PD-L1: PD-L1 pozitivne ćelije su bile i pretežno C10orf54 pozitivne u sva tri tumora.
Ponovo, bile su C10orf54 pozitivne ćelije koje su bile PD-L1 negativne u sva tri melanoma.
[0495] U sumi, skoro sve gp100 pozitivne tumorske ćelije melanoma su bile C10orf54 negativne u sva tri uzorka melanoma. Bila je velika varijabilnost u količini infiltrata inflamatornih ćelija unutar 3 različita uzorka tkiva melanoma. Međutim, skoro sve CD11b i PD-L1 pozitivnne ćelije u ovim melanomima su bile C10orf54 pozitivne i većina CD3 pozitivnih T-ćelija je bila ili C10orf54 negativna ili vrlo slabo C10orf54 pozitivna.
F. Ekspresija u karcinomu pluća ne-malih ćelija (NSCLC)
[0496] Studije sa protočnom citometrijom su vođene kao što je opisano niže da bi se odredili nivoi ekspresije C10orf54 u PBMC iz pacijenata sa NSCLC. Ekspresija je procenjena i kvantifikovana korišćenjem obeleženog monoklonskog antitela 26A za procenu subpopulacija CD11b, CD33, CD14 i CD15. Primer uzoraka PBMC iz zdravih pacijenata i klinički dijagnostikovanog pacijenta sa NSCLC koji su korišćeni u ovim studijama su dobijeni od ALLCELLS (Emeryville, CA).
[0497] Klon antitela 26A je obeležen Alexa fluorom 647. Pripremljeni su uzorci PBMC.100 µl (1E6 ćelija) je dodato u sledeće: FcR blokirajući reagens, humani; markeri linija; CD11b-PE; CD14-APC-Cy7; CD15-PerCP-Cy5.5; HLA-DR-PE-Cy7 i 1 µg obeleženog 26a-AF647 antitela. Posle inkubacije od 30 minuta na 4°C u mraku, uzorci su oprani, ponovo suspendovani u DAPI radnom rastvoru i analizirani.
[0498] Medijana intenziteta fluorescencije (MFI) je izračunata za svaki uzorak na MACSQuant analizatoru. Da bi se odredili brojevi kopija C10orf54, korišćen je komplet Quantum Simply Cellular anti-Mouse IgG (Bangs Laboratories, 815B).
[0499] Ekspresija C10orf54 je bila povišena u subpopulacijama PBMC iz uzorka NSCLC u poređenju sa zdravim uzorkom, kao što je pokazano na SL. 27. Ovi rezultati su sumirani u Tabeli 36, koja prikazuje brojeve kopija C10orf54 za ekspresiju unutar podskupova ćelija.
Tabela 36
2
[0500] Pored toga, studije sa tkivnim mikronizom (TMA) su sprovođene da bi se odredila ekspresija proteina za C10orf54 u NSCLC.
[0501] Korišćen je spektar tkiva fiksiranih formalinom, utisnutih u vosak, uključujući TMA dobijenih od US Biomax (Rockville, MD). Ćelije sarkoma fiksirane formalinom, u vosku, transfektovane C10orf54 i roditeljske ćelije sarkoma su korišćene kao pozitivne i negativne kontrole. Antitelo na C10orf54 (Novus Biologicals (Littleton CO80120) Cat#NBP1-88967 C10orf54/B7-H5/PD-1H) je korišćen u razblaženju od 1:150 u citratnom puferu pH6,0 za nalaženje antigena.
[0502] Imunohistohemijsko bojenje je rađeno pomoću Dako Autostainer-a (Dako North America, Carpenteria, CA93013), na sobnoj temperaturi, uz pranje PBS-om između svih koraka. TMA tumora pluća koji ima sve tipove NSCLC tumora je otkrio da su svi tipovi NSCLC imali pozitivnu ekspresiju C10orf54. Međutim, brojevi uzoraka u ovom TMA su bili relativno mali, osim karcinoma skvamoznih ćelija (SCC), koji je pokazao obrazac jake ekspresije C10orf54.
[0503] Podtip SCC je dalje procenjen u četiri dodatna TMA. Dva TMA su imala dodatne podatke o preživljavanju. Međutim, nije uočena korelacija kad su ovi podaci nacrtani na grafiku u odnosu na procente C10orf54 pozitivnih ćelija. Jedan TMA je obezbedio i podatke o ekspresiji EGFR, ali nije uočena korelacija kad su ovi podaci nacrtani na grafiku u odnosu na procente C10orf54 pozitivnih ćelija. U ovom TMA, možda je broj uzoraka bio suviše mali da bi se odredila prava korelacija. Procenjeni su i zbirni podaci za sva četiri data TMA SCC. Uzorci su razdvojeni prema stepenu inflamacije prisutnom u testiranim jezgrima. Kad nije viđena inflamacija, nisu bile detektovane C10orf54 pozitivne ćelije. Međutim, neočekivano u uzorcima sa bilo blagom, bilo izraženom inflamacijom, većina ovih uzoraka je imala infiltrirane C10orf54 pozitivne ćelije. Na primer, u jednom TMA SCC, 17% nije prikazalo inflamaciju, 28% je prikazalo blagu inflamaciju i 55% je prikazalo umerenu-izraženu inflamaciju. Od 28% koje je pokazalo blagu inflamaciju, 85% je bilo C10orf54 pozitivno i od 55% koje je pokazalo umerenu-izraženu inflamaciju, 92% je bilo C10orf54 pozitivno.
[0504] Dakle, gornje analize ukazuju na populaciju sa povišenim C10orf54 unutar svakog podskupa u odnosu na zdravog donora. Slično, brojevi kopija C10orf54 su viši u uzorcima iz pacijenta sa NSCLC u odnosu na zdravog donora. Štaviše, NSCLC sa inflamacijom je jako korelisao sa ekspresijom C10orf54.
PRIMER 3 - PRAVLJENJE MONOKLONSKIH ANTITELA NA C10ORF54
[0505] Antitela na C10orf54 su generisana primenom iTAb platforme. U ovom sistemu, mišja tumorska ćelijska linija je transdukovana da stabilno eksprimira humani protein, a zatim implantirana subkutano u singene miševe. Miševi su tretirani anti-CD8 antitelom da bi se uklonio ćelijski posredovan put odbijanja, dok humoralni imuni odgovor ostaje intaktan. Posle ove imunizacije, splenociti su pokupljeni i fuzionisani sa imortalizovanom partnerskom ćelijom da bi generisali hibridome. Antitela iz ovih hibridoma su pretražena u višestrukim esejima dizajniranim da identifikuju raznovrsni panel antitela sa dobrim osobinama vezivanja. Izabrana antitela se zatim proizvode za in vivo testiranje na sledeći način.
[0506] Mišje ćelijske linije sarkoma koje eksprimiraju C10orf54 su dobijene virusnom infekcijom ćelijskih linija sarkoma. C10orf54 gen, amplifikovan PCR-om, je kloniran u virusni ekspresioni vektor mišje matične ćelije sa genom za otpornost prema neomicinu i
2
sekvenciran da se potvrdi identitet. Za pripremanje čestica virusa, HEK 293t ćelije sa retrovirusnim proteinima za pakovanje su transfektovane, u prisustvu transfektivnog reagensa FUGENE HD (Roche), retrovirusnim ekspresionim vektorom koji sadrži C10orf54. Čestice virusa, sakupljene iz supernatanta mediuma za kulturu 48 sati posle transfekcije, su korišćene za inficiranje ćelija sarkoma. Posle selekcije G418, stabilni transfektanti su pulovani, a zatim klonirani ograničavajućim razblaženjem. Klonovi su zatim uzeti i rašireni u prisustvu antibiotika. Klonovi sa najvišim nivoom ekspresije C10orf54, što je izmereno protočnom citometrijom, su umnoženi i stavljeni u banku. Ove ćelijske linije su zatim korišćene da imunizuju singene miševe za proizvodnju antitela i esejima za vezivanje za selekciju antitela na sledeći način.
[0507] Za imunizaciju, mišja ćelijska linija sarkoma, koja eksprimira C10orf54, je implantirana subkutano u 129s6/SvEv miševe, koji su singeni sa linijom sarkoma. Miševi su stimulisani ćelijskom linijom tri dana pre skupljanja slezine. Splenociti su izolovani kao pojedinačne ćelije i fuzionisani sa SP2-MIL6 ćelijama uz pomoć PEG1500. Dobijeni hibridomi su postavljeni na ploče sa 384 ležišta i ostavljeni da rastu deset dana.
[0508] Antitela na C10orf54 su prvo izabrana pomoću enzimskog imunoeseja (ELISA) da bi se detektovalo vezivanje za C10orf54. Za ovaj esej, ćelije sarkoma koje eksprimiraju C10orf54 su stavljene na ploče sa 384 ležišta jedan dan pre eseja. Ćelije su zatim tretirane supernatantima hibridoma. Posle inkubacije i pranja, prisustvo vezanog antitela je detektovano pomoću kozjeg antitela na mišji IgG konjugovanog sa peroksidazom (Jackson ImmunResearch Laboratories), a zatim hemiluminiscentnim supstratom (ThermoScientific SuperSignal ELISA Pico Substrate). Hibridomi identifikovani kao pozitivni u inicijalnoj pretrazi su prebačeni u ploče sa 96 ležišta. Posle rasta, supernatanti su testirani u sličnom eseju da bi se potvrdilo.
[0509] Izotip antitela je identifikovan ELISA-om uz upotrebu izotipski specifičnog kozjeg antitela na mišji Fc. Za ovaj esej, ćelije koje eksprimiraju C10orf54 su stavljene na ploče sa 384 ležišta jedan dan pre eseja. Ćelije su zatim tretirane supernatantima hibridoma. Posle inkubacije i pranja, ćelije su inkubirane sa kozjim antitelom konjugovanim sa peroksidazom specifičnim za mišji IgG1 ili IgG2a (Jackson ImmunResearch Laboratories), a zatim hemiluminiscentnim supstratom (ThermoScientific SuperSignal ELISA Pico Substrate).
[0510] Koncentracija antitela u supernatantima nađenih da su pozitivna na vezivanje za ćelije koje eksprimiraju C10orf54 je merena ELISA-om. Supernatanti su testirani u četiri razblaženja. Za svako antitelo, razblaženje koje je dalo vrednost unutar linearnog opsega standardne krive je korišćeno za izračunavanje koncentracije antitela u supernatantu. Koncentracija antitela u supernatantima se kretala od >1µg/ml do <500 µg/ml, sa približno 300 supernatanata >10µg/ml. Dvadeset dva monoklonska antitela su izabrana zbog svog vezivanja za C10orf54 i further analiziran in vitro i in vivo as opisano ovde.
[0511] Sekvence za dvadeset dva izabrana monoklonska antitela (5B, 46A, 97A, 128A, 146C, 208A, 215A, 26A, 164A, 230A, 76E1, 53A, 259A, 33A, 39A, 124A, 175A, 321D, 141A, 51A, 353A, 305A) su prikazane niže.
[0512] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 5B su prikazane niže:
5B varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
2
5B varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
[0513] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 46A su prikazane niže:
46A varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
46A varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
2 1
[0514] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 97A su prikazane niže:
97A varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
97A varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
[0515] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 128A su prikazane niže:
2 2
128A varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
128A varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
[0516] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 146C su prikazane niže:
146C varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
2
146C varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
[0517] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 208A su prikazane niže:
208A varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
208A varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
2 4
[0518] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 215A su prikazane niže:
215A varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
215A varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
[0519] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 26A su prikazane niže:
26A varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
2
26A varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
[0520] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 164A su prikazane niže:
164A varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
164A varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
2
164A varijabilni region lakog lanca br.2 sa signalnom sekvencom
[0521] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 230A su prikazane niže:
230A varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
230A varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
2
[0522] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 76E1 su prikazane niže:
76E1 varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
76E1 varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
[0523] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 53A su prikazane niže:
53A varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
2
53A varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
[0524] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 259A su prikazane niže:
259A varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
259A varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
2
[0525] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 33A su prikazane niže:
33A varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
33A varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
[0526] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 39A su prikazane niže:
39A varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
39A varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
[0527] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 124A su prikazane niže:
124A varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
1
124A varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
[0528] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 175A su prikazane niže:
175A varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
175A varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
2
[0529] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 321D su prikazane niže:
321D varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
321D varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
[0530] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 141A su prikazane niže:
141A varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
141A varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
[0531] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 51A su prikazane niže:
51A varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
4
51A varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
[0532] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 353A su prikazane niže:
353A varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
353A varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
[0533] Sekvence nukleinske kiseline i aminokiselinske sekvence za varijabilni region teškog lanca i lakog lanca antitela 305A su prikazane niže:
305A varijabilni region teškog lanca sa signalnom sekvencom
305A varijabilni region lakog lanca sa signalnom sekvencom
[0534] CDR sekvence za dvadeset dva izabrana monoklonska antitela su obezbeđene u Tabelama 12-33 i korišćene za dobijanje humanizovanih antitela na C10orf54.
PRIMER 4 – SORTIRANJE (BINNING) I MAPIRANJE EPITOPA ANTI-C100RF54 ANTITELA
[0535] Diverzitet paratopa 22 antitela na humane VH i VK u C10orf54 procenjivan je analiziranjem sekvenci varijabilnih regiona. Sprovedena je pretraga IMGT/V-Quest-om (IMGT®, the international ImMunoGeneTics information system® http://www.imgt.org (osnivač i direktor: Marie-Paule Lefranc, Montpellier, France)) svake nukleotidne sekvence i sekvenca embrionskog gena sa najvišim stepenom identičnosti sa traženom sekvencom je tabelirana (Tabela 37). Antitela sa istim VH i VK embrionskih genskih sekvenci su stavljena u istu grupu paratopa (Tabela 37).
Tabela 37
[0536] Da bi se istražio diverzitet paratopa anti-humanih C10orf54 antitela, 293 T ćelije su transfektovane jednim od 10 različitih konstrukata sa ekspresijom C10orf54 koji koeksprimiraju fluorescentni marker. Proteini C10orf54 i himerni proteini koje kodiraju korišćeni konstrukti su prikazani u Tabeli 38. Dva dana posle transfekcije, ćelije su skinute sa ploče za kulturu tkiva, obojene pomoću 2 □g/ml antitela na humani C10orf54, oprane, obojene anti-mišjim IgG-Fc Alexa Fluor 647 poliklonskim antitelom, oprane i obojene bojom za vijabilnost 4',6-diamidino-2-fenilindol, dihidrohloridom. Posle prikupljanja 10000 živih događaja na protočnom citometru, žive ćelije, obeležene fluorescentnim markerom, su analizirane na stepen bojenja antitelom na humani C10orf54. Kad je promena medijane intenziteta fluorescencije u odnosu na izotip-kontrolno antitelo bila bar 20 puta, smatrano je da antitelo boji ekspresiju C10orf54 konstrukta u pitanju.
[0537] Rezultati ovih eksperimenata sortiranja i opis konstrukt “binova” (grupacija) su prikazani u Tabeli 39.
Tabela 38
[0538] Aminokiselinske sekvence za proteine C10orf54 i himerne proteine koje kodiraju ekspresioni konstrukti su prikazani niže.
[0539] Aminokiselinska sekvenca za humani C10orf54 protein koji kodira ekspresioni konstrukt CC1 je prikazana niže:
[0540] Aminokiselinska sekvenca za mišji C10orf54 protein koji kodira ekspresioni konstrukt CC2 je prikazana niže:
[0541] Aminokiselinska sekvenca za pacovski C10orf54 protein koji kodira ekspresioni konstrukt CC3 je prikazana niže:
[0542] Aminokiselinska sekvenca za cinomolgusov C10orf54 protein koji kodira ekspresioni konstrukt CC4 je prikazana niže:
[0543] Aminokiselinska sekvenca za himerni protein koji kodira ekspresioni konstrukt CC5 je prikazana niže
[0544] Aminokiselinska sekvenca za himerni protein koji kodira ekspresioni konstrukt CC6 je prikazana niže
[0545] Aminokiselinska sekvenca za himerni protein koji kodira ekspresioni konstrukt CC7 je prikazana niže
[0546] Aminokiselinska sekvenca za himerni protein koji kodira ekspresioni konstrukt CC8 je prikazana niže
[0547] Aminokiselinska sekvenca za himerni protein koji kodira ekspresioni konstrukt CC9 je prikazana niže
[0548] Aminokiselinska sekvenca za himerni protein koji kodira ekspresioni konstrukt CC10 je prikazana niže
Tabela 39
1
[0549] Rezultati ovih eksperimenata demonstriraju da se antitela na C10orf54, kao što su opisana ovde, vezuju za različite epitope humanog C10orf54, uključujući aa33-169, aa84-169, aa115-169 i aa84-115.
PRIMER 5 - DOBIJANJE HUMANIZOVANIH ANTITELA
[0550] Mišja antitela, dobijena kao što je opisano u Primeru 3, su izabrana za sekvenciranje. Izabrana monoklonska antitela označena 76E1, 141A i 175A su humanizovana pomoću dva metoda, kao što sledi. Rezultati humanizacije su prikazani na SL.3-8.
[0551] U prvom metodu humanizacije, većina aminokiselina u svakom regionu koji određuje komplementarnost (CDR), kao što su prethodno identifikovane, u sekvenci varijabilnog teškog (VH) i varijabilnog lakog (VL) domena, je pretvorena u alanin. Dobijena sekvenca za VH i za VL, kao što je prikazana na SL.9, je korišćena kao ulaz u identifikacioni algoritam za humanu podgrupu na vebsajtu Dr. Andrew C. R. Martin www.bioinf.org.uk/abs/; ovaj metod je izveden iz Deret, S. et al SUBIM: a Program for Analysing the Kabat Database and Determining the Variability Subgroup of a new Immunoglobulin Sequence Comput Appl Biosci 11:435-439 (1995). VH antitela 76E1, 141A i 175A su najbliži VH humane podgrupe I, VL 76E1 i VL 175A su najbliži VL kapa humane podgrupe II i VL 141A je najbliži VL kapa humane podgrupe III. Za svaku sekvencu VH i VL mišjih 76E1, 141A i 175A, po jedna embrionska akceptorska sekvenca humanog VH ili VL je izabrana iz odgovarajućih embrionskih sekvenci humane podgrupe i svih sekvenci humanih spojnih regiona
11
kompiliranih u IMGT® the international ImunoGeneTics information sistem® www.imgt.org (osnivač i direktor: Marie-Paule Lefranc, Montpellier, France).
[0552] U drugom metodu humanizacije (Carter et al., Proc Natl Acad Sci USA 89:4285-4289 (1992)), humani embrionski VH podgrupe III je korišćen kao akceptor za mišje sekvence VH iz VH 76E1, VH 141A i VH 175A; humani VL kapa podgrupe I je korišćen kao akceptor za VL 76E1, VL 141A i VL 175A.
[0553] Alteracija humanih embrionskih okvirnih pozicija (npr., ostaci u VH i VL koji nisu iz CDR) u odgovarajuću roditeljsku mišju sekvencu 76E1, 141A ili 175A mogla bi da bude potrebna da optimizuje vezivanje humanizovanog antitela. Potencijalne promene za svaku humanizovanu sekvencu su označene na SL. 3-8. Potencijalne promene u CDR sekvencama humanizovanih antitela u cilju smanjenja komplikacija usled dezamidacije asparagina izloženih rastvaraču, oksidacije metionina izloženih rastvaraču i formiranja izoaspartinske kiseline su takođe označene na SL.3-8.
[0554] Napravljeni su kompjutersko grafički modeli mišjih VH i VL domena 76E1, 141A i 175A da pomognu u selekciji CDR-ova i ostataka okvirnih regiona koji bi mogli da zahtevaju promenu. Swiss-PdB Viewer program je korišćen (Guex, N i Peitsch, MC SWISS-MODEL i the Swiss-PdB Viewer: An environment for comparative protein modeling. Electrophoresis 18:2714-2723 (1997) Expasy vebsajt. Kristalne strukture antitela su uzete sa vebsajta Protein Data Bank (Berman, HM; Westbrook, J; Feng, Z; Gilliland, G; Bhat, TN; Weissig, H; Shindyalov, IN; Bourne PE, The Protein Data Bank Nucleic Acids Research 28:235-242 (2000). Sekvence humanizovanih VH i VL domena 76E1, 141A i 175A su prikazane na SL.
3-8.
[0555] Napravljena su dodatna humanizovana antitela na C10orf54 koja sadrže VH domen, VL domen, CDR1 VH, CDR2 VH, CDR3 VH, CDR1 VL, CDR2 VL i/ili CDR3 VL, kao što je prikazano u Tabelama 12-33. Na primer, izabrana mišja monoklonska antitela označena sa 26A, 128A, 124A i 259A su humanizovana sledećim metodom, čiji su rezultati prikazani na SL. 22A, 22B, 23A, 23B, 24A, 24B, 25A i 25B. CDR sekvence i VH/VL sekvence za antitela označene sa 26A, 128A, 124A i 259A su prikazane u Tabelama 19, 15, 27 i 24, respektivno.
[0556] Sekvence VH i VL svakog mišjeg monoklonskog antitela su korišćene kao ulaz u program IgBLAST na vebsajtu NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/; Ye, J. et al. Nucleic Acids Research 41:W34-W40 (2013)). IgBLAST uzima mišje sekvence VH ili VL i poredi ih sa bibliotekom poznatih humanih embrionskih sekvenci. Baze podataka koje su korišćene su IMGT humani geni za VH (F+ORF, 273 embrionske sekvence) i IMGT humani geni za VLkapa (F+ORF, 74 embrionske sekvence). IgBLAST je dao 10 vrhunskih humanih embrionskih sekvenci prema oceni.
[0557] Za sva četiri VH 26A, 128A, 124A i 259A, humani embrionski IGHV1-46 (alel 1) je izabran kao akceptorska sekvenca, a spojni region (J gen) humanog teškog lanca IGHJ4 (alel 1) je odabran od sekvenci humanog spojnog regiona kompiliranih na IMGT® the international ImunoGeneTics information system® www.imgt.org (videti SL.22A, 23A, 24A i 25A).
[0558] Za 26A VL, humani embrionski IGKV43-11 (alel 1) je izabran kao akceptorska sekvenca, a spojni region (J gen) humanog lakog lanca IGKJ2 (alel 1) je odabran od sekvenci
12
humanog spojnog regiona kompiliranih na IMGT® the international ImunoGeneTics information sistem® www.imgt.org (videti SL.22B).
[0559] Za 128A VL, humani embrionski IGKV1-39 (alel 1) je izabran kao akceptorska sekvenca, a humani lak lanac IGKJ2 (alel 1) kao spojni region (J gen) (videti SL.23B).
[0560] Za 124A VL, humani embrionski IGKV2-30 (alel 1) je izabran kao akceptorska sekvenca, a humani lak lanac IGKJ2 (alel 1) kao spojni region (J gen) (videti SL.24B).
[0561] Za 259A VL, humani embrionski IGKV2-28 (alel 1) je izabran kao akceptorska sekvenca, a humani lak lanac IGKJ2 (alel 1) kao spojni region (J gen) (videti SL.25B).
PRIMER 6 - ANTITUMORSKA AKTIVNOST
[0562] Testirana je antitumorska aktivnost anti-C10orf54 antitela u životinjskom modelu tumora. Za ove studije, ćelijska linija Kasumi-3 (akutna mijeloidna leukemija) je dobijena od ATCC (CRL-2725) i gajena prema protokolima snabdevača. Životinje su dobijene od Taconic (Hudson, NY). Studije su rađene sa antitelima na C10orf54 u životinjskom modelu tumora.
[0563] U ovim eksperimentima, 4-6 nedelja stare imunodeficijentne ženke miševa NOD-SCID su korišćene za Kasumi-3 model tumora. Miševima je subkutano u desni bok injektirano 1,2x10<6>vijabilnih ćelija (Kasumi-3) u smesi PBS (bez magnezijuma ili kalcijuma) i BD Matrigela (BD Biosciences) u razmeri 1:1. Ukupna injektirana zapremina po mišu je bila 200µl, od čega je 50% Matrigel (BD Biosciences). Kad je tumor dostigao veličinu između 65-200mm<3>, miševi su randomizirani. Antitela su administrirana nedeljno u konc. od 15mg/kg četiri nedelje, telesna težina i tumori su mereni jedanput i dvaput nedeljno, respektivno. Zapremina tumora je izračunata kao što je opisano (van der Horst et al., 2009, Neoplasia 11(4):355-364). Eksperimenti su vršeni na grupama od bar 8 životinja po eksperimentalnoj tački.
[0564] Statistička značajnost između tretirane i kontrolne grupe je izračunata pomoću softverskog paketa Graphpad Prism i primenom studentovog dvostranog t-testa. P vrednost manja od 0,05 je smatrana značajnom. Rezultati tri primera eksperimenta su prikazani u Tabeli 40. Za Eksperiment 1, zapremine tumora na početku tretmana su bile 114,7 mm<3>(96. dan). Za Eksperiment 2, zapremine tumora na početku tretmana su bile 114,5 mm<3>(103. dan). Za Eksperiment 3, zapremine tumora na početku tretmana su bile 133 mm<3>(34. dan).
TABELA 40
1
[0565] Kao što je prikazano na SL.10 (videti i Tabelu 40, Eksperiment 1), tretman antitelom na C10orf54 je indukovao jaku inhibiciju rasta tumora u uspostavljenim Kasumi-3 tumorima. Nijedan od tretmana antitelima nije imao značajan efekat na telesnu težinu, što ukazuje na to da tretman antitelom nije bio toksičan. Kao što je prikazano na SL. 11 (videti i Tabelu 40, Eksperiment 3), tretman antitelom 175A opet indukuje jaku inhibiciju rasta tumora u uspostavljenim Kasumi-3 tumorima.
PRIMER 7 – DOBIJANJE I UPOTREBA KONJUGATA ANTITELO-LEK
[0566] Konjugati antitelo-lek (ADC) su dobijeni i korišćeni u sekundarnim esejima sa ADC i direktnim esejima sa ADC sa antitelima na C10orf54, kao što je ilustrovano u sledećem primeru generičke šeme A, gde je maleimidna grupa zakačena preko linkera (L) za citotoksin (CTX):
14
[0567] Na primer, prema šemi A gore, L može biti jedno od sledećih:
(i) -(CH2)5-C(O)-; (ii) -(CH2)5-C(O)-valin-citrulin; (iii) -(CH2)5-C(O)-valin-alanin; (iv)-(CH2)5-C(O)-valin-citrulin-fenilenil, gde je fenilenil supstituisan sa 2 supstituenta izabrana iz grupe koja se sastoji od -C(O)OH i -NH2; (v) -(CH2)5-C(O)-valin-alanin-fenilenil, gde je fenilenil supstituisan sa 2 supstituenta izabrana iz grupe koja se sastoji od -C(O)OH i -NH2; (vi) -(CH2CH2)-(CH2CH2O)4-C(O)-valin-citrulin-fenilenil, gde je fenilenil supstituisan sa 2 supstituenta izabrana iz grupe koja se sastoji od -C(O)OH i -NH2; ili (vii) -(CH2CH2)-(CH2CH2O)4-C(O)-valin-alanin-fenilenil, gde je fenilenil supstituisan sa 2 supstituenta izabrana iz grupe koja se sastoji od -C(O)OH i -NH2.
1
[0568] Na primer, prema šemi A gore, L može biti jedno od sledećih: (i) kaproil ("c"); (ii) kaproil-valin-citrulin ("cValCit"); (iii) kaproil-valin-alanin ("cValAla"); (iv) kaproil-valincitrulin-para aminobenzil ("cValCit-PAB"); (v) kaproil-valin-alanin-para aminobenzil ("cValAla-PAB"); (vi) (dPEG)4-valin-citrulin-para aminobenzil ("dPEG4-ValCit-PAB"); ili (vii) (dPEG)4-valin-alanin-para aminobenzil ("dPEG4-ValAla-PAB").
[0569] Na primer, kad se konjugat antitelo-lek dobija korišćenjem maleimidne grupe ("m"), spojene preko linkera sa citotoksinom, CTX, kao što je ilustrovano na šemi A gore, konjugat antitelo-lek može da sadrži jedno od sledećih: (i) maleimidokaproil ("mc"); (ii) maleimidokaproil-valin-citrulin ("mcValCit"); (iii) maleimidokaproil-valin-alanin ("mcValAla"); (iv) maleimidokaproil-valin-citrulin-para aminobenzil ("mcValCit-PAB"); (v) maleimidokaproil-valin-alanin-para aminobenzil ("mcValAla-PAB"); (vi) maleimidokaproil-(dPEG)4-valin-citrulin-para aminobenzil ("m-dPEG4-ValCit-PAB"); ili (vii) maleimidokaproil-(dPEG)4-valin-alanin-para aminobenzil ("m-dPEG4-ValAla-PAB").
[0570] Kao što je ilustrovano u sledećim šemama B-F, konjugat antitelo-lek iz šeme A gore se može praviti korišćenjem maleimidokaproil-monometilauristatina F ("mc-MMAF"), maleimidokaproil-valin-citrulin-para aminobenzil-monometilauristatina F ("mcValCit-PAB-MMAF"), maleimidokaproil-valin-citrulin-para aminobenzil-monometilauristatina E ("mcValCit-PAB-MMAE"), maleimidokaproil-(dPEG)4-valin-citrulin-para aminobenzila-CC1065 ("m-dPEG4-ValCit-PAB-CC1065") ili maleimidokaproil-valin-alaninpirolobenzodiazepina ("mcValAla-PBD").
[0571] Primeri konjugata antitelo-lek se dobijaju korišćenjem maleimidokaproilmonometilauristatina F (mc-MMAF), kao što je ilustrovano na sledećoj šemi B, gde je maleimidna grupa spojena preko linkera (L = kaproil grupa) sa citotoksinom (CTX = MMAF):
1
[0572] Primeri konjugata antitelo-lek se dobijaju i korišćenjem maleimidokaproil-valincitrulin-para aminobenzil-monometilauristatina F (mcValCit-PAB-MMAF), kao što je ilustrovano na sledećoj šemi C, gde je maleimidna grupa spojena preko linkera (L = kaproilvalin-citrulin-para aminobenzil) sa citotoksinom (CTX = MMAF):
1
[0573] Primeri konjugata antitelo-lek se dobijaju i korišćenjem maleimidokaproil-valincitrulin-para aminobenzil-monometilauristatina E (mcValCit-PAB-MMAE), kao što je ilustrovano na sledećoj šemi D, gde je maleimidna grupa spojena preko linkera (L = kaproilvalin-citrulin-para aminobenzil) sa citotoksinom (CTX = MMAE):
1
[0574] Primeri konjugata antitelo-lek se dobijaju i korišćenjem maleimidokaproil-(dPEG)4-valin-citrulin-para aminobenzila-CC1065 (m-dPEG4-ValCit-PAB-CC1065), kao što je ilustrovano na sledećoj šemi E, gde je maleimidna grupa spojena preko linkera (L = (dPEG)4-valin-citrulin-para aminobenzil) sa citotoksinom (CTX = CC1065):
1
[0575] Na šemi E, struktura ciklofosfamida CC1065 je prikazana u donjem levom uglu šeme, gde strelica pokazuje tačku spoja (npr., preko slobodne amino grupe na molekulu CC1065) sa karbonil grupom iz para aminobenzoatne grupe linkera.
[0576] Primeri konjugata antitelo-lek se dobijaju i korišćenjem maleimidokaproil-valinalanin-pirolobenzodiazepina (mc-ValAla-PDB), kao što je ilustrovano na sledećoj šemi F, gde je maleimidna grupa spojena preko linkera (L = kaproil-valin-alanin) sa citotoksinom (CTX = PDB):
2
[0577] ADC iz primera šema B-F su napravljeni na sledeći način. U sterilnoj ependorf epruveti od 1,7ml, 20 mg antitela u koncentraciji od 20 mg/ml u fosfatno puferisanom slanom rastvoru (PBS), pH 7,4 (Gibco, bez Mg i Ca), je reagovalo sa 1mM dietilen triamin pentasirćetnom kiselinom (DTPA) kao sredstvom za heliranje. Zatim je 2,75 ekv. tris(2-karboksietil)fosfin hidrohloridnog rastvora (TCEP HCl) (Sigma ampule koncentracije 0,5M) ili 50 µL 100 mM ditiotreitola (DTT) dodato za prosečan odnos lek-antitelo (DAR) od 4 leka po antiteli i inkubirano je na 37°C 1 sat, sa ciljem da manje od 10% od ukupnog antitela bude u neobeleženom ili golom antitelu.
21
[0578] Kolorimetrijski esej sa ditiobisnitro-benzoatom (DTNB; Ellman-ov reagens) je korišćen za procenu slobodnih tiola dostupnih za konjugaciju (Ellman et al., Biochemical Pharmacology Pharmacology 7:88-95 (1961)). Redukovan rastvor antitela je hlađen u ledenom kupatilu na ∼ 0°C 15 minuta. Zatim je konjugat linker-citotoksin dodat u redukovan rastvor antitela na sledeći način: (i) za šemu B, dodato je 60 µL mc-MMAF iz 10mM matičnog rastvora u DMSO (9,74 mg u 1,074 ml DMSO za 10 mM); (ii) za šemu C, dodato je 60 µL mcValCit-PAB-MMAF iz 10mM matičnog rastvora u DMSO (9,4 mg u 707 µL DMSO za 10 mM); (iii) za šemu D, dodato je 60 µL mcValCit-PAB-MMAE iz 10mM matičnog rastvora u DMSO (3,24 mg u 247 µL DMSO za 10 mM); (iv) za šemu E, dodato je 60 µL mc-dPEG4-ValCit-PAB-CC1065 iz 10mM matičnog rastvora u DMSO (3,8 mg u 258 µL DMSO za 10 mM) i (v) za šemu F, dodato je 60 µL mc-ValAla-PBD iz 10mM matičnog rastvora u DMSO. Jednom kad je konjugat linker-citotoksin dodat u redukovan rastvor antitela, rastvor je inkubiran na rotirajućoj platformi u frižideru na 4°C preko noći (ili alternativno, na 37°C 2 sata) da bi se proizveo ADC. DTNB esej je ponovljen da demonstrira da nisu ostali slobodni tioli (bistar znači da nema slobodnih tiola, a žut ukazuje na zaostale slobodne tiole i nepotpunu konjugaciju sa lekom). Koncentracija ADC je dobijena putem NanoDrop spektrofotometra. Sirov ADC je prečišćen ili pomoću PD-10 SEC separacije ili SEC hromatografijom na Superdex 200 koloni eluiranoj odgovarajućim radnim puferom ili puferom konačne formulacije. Prečišćen ADC je čuvan na 4°C.
[0579] Hromatografija hidrofobnih interakcija (HIC) HPLC metod je korišćen da bi se odredili prosečne šarže leka u ADC putem HPLC. Na Agilent 1200 HPLC sistemu sa binarnom pumpom, spojenim sa Agilent 6130b masenim spektrometrom sa elektrosprejem, na Tosoh NPR butil-C4 kolona (2,1mm x 75mm) je puštena sa binarnim gradijentom na 0,8ml/min sa diodnim nizom za detekciju UV-vis na 220nm, 254nm i 280nm. Mobilna faza A je bila 1,5M natrijum sulfat u 1x PBS, mobilna faza B je bila 1xPBS sa 25% izopropanolom koji je prošao 10-12 zapremina kolone, po 0-100% linearnom gradijentu, sa 5 minuta početnog uravnotežavanja i 5 minuta 100% ispiranja mobilne faze B na kraju svakog turnusa HPLC. Neobeleženo ili golo antitelo, eluirano prvo u linearnom gradijentu sa pikovima koji predstavljaju povećanje prosečnih šarži leka po redu hidrofobičnosti koja korelira sa povećanjem opterećenosti antitela unosom leka. Retenciona vremena golog antitela su potvrđena puštanjem standardne injekcije od 20□L iz matičnog rastvora antitela koncentracije 1mg/ml. Koeluiranje golog antitela i ADC je definitivno potvrdilo relativne količine svakog od njih.
[0580] SL.12 prkazuje rezultate eseja sa sekundarnim ADC korišćenjem antitela na C10orf54 u eseju za vijabilnost ćelija uz korišćenje linije sarkoma koja eksprimira C10orf54. Anti-C10orf54 antitela su inkubirana, u razmeri 2:1, sa sekundarnim kozjim-antimišjim antitelom konjugovanim sa MMAF. Ćelije su stavljene na ploče sa 1000 ćelija/ležište i inkubirane u prisustvu antitela 72 sata. Ćelije sarkoma koje eksprimiraju C10orf54 su ubijene antitelima na C10orf54, što je testirano na način zavisan od koncentracije.
[0581] SL. 13-14 prikazuju aktivnost nekonjugovanih i antitela na C10orf54 direktno konjugovanih sa MMAE u eseju za vijabilnost ćelija uz korišćenje linije sarkoma koja eksprimira C10orf54. Za ove eseje, ćelije se mogu staviti na ploče sa različitim brojem po ležištu i inkubiraju se tokom različitih vremena u prisustvu ili odsustvu anti-C10orf54 antitela i ADC. Na primer, za eseje prikazane na SL. 13, ćelije su stavljene po 1000 ćelija/ ležište i inkubirane su u prisustvu antitela 72 sata. U ovim esejima na bazi ćelija in vitro, sa MMAF konjugovana antitela na C10orf54 su ubila ćelije sarkoma na način zavisan od koncentracije.
22
[0582] SL. 15 prikazuje rezultate treamana antitelima na C10orf54 i ADC (npr., nekonjugovana i konjugovana sa MMAF antitela na C10orf54) u životinjskom modelu tumora (npr., ksenograft) sa roditeljskim linijama sarkoma i onim koje eksprimiraju C10orf54.
PRIMER 8 – DOBIJANJE I UPOTREBA DODATNIH KONJUGATA ANTITELO-LEK
[0583] Dodatni konjugati antitelo-lek formule (Ia) ili (Ib) iz predmetnog pronalaska se mogu dobijati kao što je ilustrovano formulom (Ia) na sledećoj šemi G i formulom (Ib) na sledećoj šemi H za:
2
[0584] Dodatni konjugati antitelo-lek iz predmetnog pronalaska se mogu dobijati, gde su konjugati antitelo-lek prema formuli (Ic1):
24
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so,
gde je:
A antitelo, gde je ono antitelo na C10orf54, opciono humanizovano antitelo na C10orf54; dva prikazana cisteinska ostatka su iz otvorene cistein-cistein disulfidne veze u A;
L je razgradiv ili nerazgradiv linker;
CTX je citotoksin vezan za L amidnom vezom, karbamatnom vezom, disulfidnom vezom, etarskom vezom, tioetarskom vezom ili estarskom vezom; i
n je ceo broj od 1 do 4.
[0585] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic1) se dobijaju kad je CTX monometilauristatin F (MMAF), L je -(CH2)5C(O)-, a n je 4.
[0586] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic1) se dobijaju kad konjugat antitelo-lek ima sledeću formulu:
gde je A antitelo na C10orf54, opciono humanizovano antitelo na C10orf54, a n je 4.
[0587] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic1) su oni gde je CTX monometilauristatin E (MMAE), L je -(CH2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- ili -(CH2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-, a n je 4.
[0588] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic1) su oni koji imaju sledeću formulu:
2
gde je A antitelo na C10orf54, opciono humanizovano antitelo na C10orf54, a n je 4.
[0589] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic1) su oni gde je CTX pirolobenzodiazepin (PDB), L je -(CH2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- ili -(CH2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-, a n je 4.
[0590] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic1) su oni koji imaju jednu od sledećih formula:
; i
2
[0591] Konjugati antitelo-lek formule (Ic1) se dobijaju korišćenjem konjugata linkercitotoksini sledeće formule (IIa):
ili njihov enantiomer, dijasteriomer ili smesa;
gde je:
L je razgradiv ili nerazgradiv linker i
CTX je citotoksin vezan za L amidnom vezom, karbamatnom vezom, disulfidnom vezom, etarskom vezom, tioetarskom vezom ili estarskom vezom.
[0592] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic1) su dobijeni sa anti-C10orf54 antitelima (npr., humanizovana antitela na C10orf54) korišćenjem konjugata linker-citotoksin formule (IIa), gde je CTX MMAF, a L je -(CH2)5C(O)-.
[0593] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic1) su dobijeni sa anti-C10orf54 antitelima (npr., humanizovana antitela na C10orf54) korišćenjem konjugata linker-citotoksin koji ima sledeću strukturu:
2
[0594] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic1) su dobijeni sa anti-C16orf54 antitelima (npr., humanizovana antitela na C10orf54) korišćenjem konjugata linker-citotoksin formule (IIa), gde je CTX MMAE, a L je -(CH2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- ili -(CH2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.
[0595] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic1) su dobijeni sa antitelima na C10orf54 (npr., humanizovana antitela na C10orf54) korišćenjem konjugata linker-citotoksin koji ima sledeću strukturu:
[0596] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic1) su dobijeni sa anti-16orf54 antitelima (npr., humanizovana antitela na C10orf54) korišćenjem konjugata linker-citotoksin formule (IIa), gde je CTX PDB, a L je -(CH2)5C(O)-Val-Ala-, -(CH2)5C(O)-Val-Cit-,-(CH2)SC(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- ili -(CH2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.
[0597] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic1) su dobijeni sa antitelima na C10orf54 (npr., humanizovana antitela na C10orf54) korišćenjem konjugata linker-citotoksin koji ima jednu od sledećih struktura:
i
2
[0598] Dodatni konjugati antitelo-lek iz predmetnog pronalaska mogu se dobijati, gde su konjugati antitelo-lek prema formuli (Ic2):
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so,
gde je:
A antitelo, gde je ono antitelo na C10orf54, po želji humanizovano antitelo na C10orf54; dva prikazana cisteinska ostatka su iz otvorene cistein-cistein disulfidne veze u A;
L je razgradiv ili nerazgradiv linker;
CTX je citotoksin vezan za L amidnom vezom, karbamatnom vezom, disulfidnom vezom, etarskom vezom, tioetarskom vezom ili estarskom vezom; i
n je ceo broj od 1 do 4.
[0599] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic2) se dobijaju gde je CTX monometilauristatin F (MMAF), L je -(CH2)5C(O)-, a n je 4.
[0600] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic2) se dobijaju gde konjugat antitelo-lek ima sledeću formulu:
2
gde je A antitelo na C10orf54, po želji, humanizovano antitelo na C10orf54, a n je 4.
[0601] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic2) su oni gde je CTX monometilauristatin E (MMAE), L je -(CH2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)-, ili -(CH2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O), a n je 4.
[0602] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic2) su oni koji imaju sledeću formulu:
gde je A antitelo na C10orf54, po želji, humanizovano antitelo na C10orf54, a n je 4.
[0603] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic2) su oni gde je CTX pirolobenzodiazepin (PDB), L je -(CH2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)-, ili -(CH2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-, a n je 4.
[0604] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic2) su oni koji imaju jednu od sledećih formula:
[0605] Konjugati antitelo-lek formule (Ic2) se dobijaju korišćenjem konjugata linkercitotoksina jedne od sledećih formula (IIb) i (IIc):
i
1
njihov enantiomer, dijasteriomer ili smesa;
gde je:
L razgradiv ili nerazgradiv linker i
CTX je citotoksin vezan za L amidnom vezom, karbamatnom vezom, disulfidnom vezom, etarskom vezom, tioetarskom vezom ili estarskom vezom.
[0606] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic2) se dobijaju sa anti-C10orf54 antitelima (npr., humanizovana antitela na C10orf54) korišćenjem konjugata linker-citotoksin formule (IIb) ili (IIc), gde je CTX MMAF, a L je -(CH2)5C(O)-.
[0607] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic2) se dobijaju sa antitelima na C10orf54 (npr., humanizovana antitela na C10orf54) korišćenjem konjugata linker-citotoksin koji ima jednu od sledećih struktura:
i
2
[0608] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic2) se dobijaju sa anti-16orf54 antitelima (npr., humanizovana antitela na C10orf54) korišćenjem konjugata linker-citotoksin formule (IIb) ili (IIc), gde je CTX MMAE, a L je -(CH2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- ili -(CH2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.
[0609] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic2) se dobijaju sa antitelima na C10orf54 (npr., humanizovana antitela na C10orf54) korišćenjem konjugata linker-citotoksin koji ima jednu od sledećih struktura:
[0610] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic2) se dobijaju sa anti-16orf54 antitelima (npr., humanizovana antitela na C10orf54) korišćenjem konjugat linker-citotoksin formule (IIb) ili (IIc), gde je CTX PDB, a L je -(CH2)5C(O)-Val-Ala-, -(CH2)5C(O)-Val-Cit-, -(CH2)5C(O)-Val-Ala-PAB-O-C(O)- ili (CH2)5C(O)-Val-Cit-PAB-O-C(O)-.
[0611] Na primer, konjugati antitelo-lek formule (Ic2) se dobijaju sa antitelima na C10orf54 (npr., humanizovana antitela na C10orf54) korišćenjem konjugata linker-citotoksin koji ima jednu od sledećih struktura:
4
[0612] Konjugati antitelo-lek, kao što je opisano u ovom primeru i ovde, se dobijaju kad je jedna ili više međulančanih disulfidnih veza antitela (npr., četiri međulančane disulfidne veze kao što je nacrtano u primerima šema F i G gore) konjugovano. Konjugati antitelo-lek, gde je jedna ili više međulančanih disulfidnih veza antitela konjugovano, kao što je opisano ovde, imaju poželjan odnos antitelo: lek četiri.
[0613] Eksperimenti za ćelijsku vijabilnost su vršeni korišćenjem humanih ćelijskih linija AML, kao što su OCI/AML3, PL21 i P31/FUJ. Za primarne eseje za ADC, mijeloidne ćelijske linije su rutinski pasažirane u RPMI ili MEM medijumu (LifeTech) obogaćenom 10-20% fetalnim telećim serumom (LifeTech). Za esej toksičnnosti, ćelije su stavljene na ploče sa 384 ležišta (Greiner), 3000 ćelija po ležištu u 50 µL medijuma.
[0614] Za primarne eseje sa ADC, antitela na C10orf54 konjugovana sa DBM(C6)MMAF su serijski razblažena od 100-300 nM u RPMI i dodata u odgovarajuća ležišta u duplikatu korišćenjem iPipette tečnog upravljača (Apricot Designs). Ploče sa ćelijama su zatim inkubirane tri dana, a zatim lizirane u reagensu za Cell-Titer Glo esej (Promega).
[0615] Za primarne eseje sa ADC, luminiscencija je kvantifikovana na Synergy HT čitaču ploča (BioTek) i prikazana grafički. IC50 su izračunati fitovanjem na sigmoidni fit sa četiri parametra (GraphPad). Rezultati primera primarnih eseja sa ADC uz korišćenje tri mijeloidne ćelijske linije su prikazani kao IC50 (nM) vrednosti u Tabeli 41. Na primer, ADC predstavljeni u Tabeli 41 su napravljeni konjugiranjem humanizovane varijante antitela sa linker-toksinom DBM-(C6)-MMAF, kao što je opisano u ovom Primeru 8. Rezultati indikuju da su obe ćelijske linije OCI/AML3 i P31/FUJ senzitivne na anti-C10orf54 ADC, dok je ćelijska linija PL21 manje senzitivna.
Tabela 41
[0616] Aspekti predmetnog pronalaska opisani gore su namenjeni da budu samo primeri i stručnjaci u ovoj oblasti će shvatiti ili će biti u stanju da se uvere, korišćenjem ne više od rutinske eksperimentacije, u brojne ekvivalente specifičnih procedura opisanih ovde. Smatra se da su svi takvi ekvivalenti u okviru opsega predmetnog pronalaska i pokriveni su sledećim zahtevima. Štaviše, kao što se koristi u ovoj specifikaciji i zahtevima, oblici jednine uključuju i oblike množine, osima ako sadržaj jasno ne diktira drukčije. Tako, na primer, referenca na "antitelo" uključuje smesu dva ili više takvih antitela i slično. Pored toga, stručnjaci uobičajenog nivoa će shvatiti da operativne sekvence moraju da budu date po nekom specifičnom redu u svrhu objašnjenja i zahtevanja, ali predmetni pronalazak ima u vidu razne promene izvan takvog specifičnog reda.
PRIMER 9 - FUNKCIONALNI ESEJI
[0617] Da bi se identifikovali optimalni uslovi gajenja i aktivacije naivnih T-ćelije do stepena da se ta aktivacija može obrnuti u suprotnom smeru administracijom antitela na C10orf54, vršeni su sledeći eksperimenti. Kad su identifikovani optimalni uslovi, oni se mogu koristiti u daljem skriningu antitela na C10orf54, kao što su oni opisani ovde. Određene su optimalne koncentracije anti-CD3 antitela, anti-CD28 antitela, C10orf54-Fc i T-ćelija.
[0618] ĆelijaTiter-Glo, luminescentni esej za vijabilnost ćelija, je korišćen da bi se odredila vijabilnost T-ćelija gajenih u različitim uslovima. Aktivacija T-ćelija je postignuta prethodnim oblaganjem ploča anti-CD3 antitelima, a zatim kostimulacijom anti-CD28 antitelima u rastvoru. Početni uslovi su zasnovani na podacima prikazanim u Wang et al., Biofunctions of three new B7 family members, https://www.mdsistems.com (Dec.10, 2015).
[0619] Izgleda da je koncentracija T-ćelija važna za stimulaciju T-ćelija koja zavisi od anti-CD3 i anti-CD28. Samo najveća količina koja je testirana, 50000 ćelija po ležištu ploče sa 384 ležišta, je demonstrirala takvu zavisnost i korišćena je za sve dalje korake. Minimalna koncentracija anti-CD3 antitela, pri kojoj je postignuta aktivacija blizu maksimalnog nivoa, je bila 5 µg/ml. Pri definisanoj koncentraciji anti-CD3 antitela, primećen je uticaj C10orf54-Fc, zavisan od koncentracije, na proliferaciju T-ćelija. Sa jačom aktivacijom postignutom magnetnim kuglicama CD2/CD3/CD28, efekat nije primećen.
[0620] Pokazano je da je minimalna koncentracija anti-CD28 antitela, pri kojoj je postignuta proliferacija T-ćelija blizu maksimalnog nivoa, oko 3-4 µg/ml. Uticaj C10orf54-Fc, zavisan od koncentracije, na proliferaciju T-ćelija je primećen unutar celog testiranog opsega anti-CD28 antitela. Tako je tačka sa 3,2 µg/ml izabrana za dalje korake.
[0621] Pan T-ćelije su se ponašale slično kao naivne T-ćelije. Međutim, naivne T-ćelije su bile ostljivije na inhibiciju pomoću C10orf54-Fc nego pan T-ćelije (SL.30A-30C).
[0622] U sumi, na osnovu gornje analize, optimizirani uslovi za gajenje i aktivaciju naivnih T-ćelija su 5 µg/ml anti-CD3 antitela i 3,2 µg/ml anti-CD28 antitela. Umeren nivo aktivacije je omogućio da se ta aktivacija obrne administracijom C10orf54-Fc, čineći ovaj esej korisnim za procenu antitela na C10orf54.
[0623] Dodatni in vitro eseji su vođeni kao što je opisano niže da bi se odredilo da li anti-C10orf54 antitela povećavaju stimulaciju T-ćelija.
[0624] Anti-C10orf54 antitela opisana ovde su imobilisana na ploči u različitim koncentracijama. Naivne T-ćelije su stimulisane dodatkom rastvorljivih anti-CD28 antitela u koncentraciji od 5 µg/ml i dovođenjem u dodir naivnih T-ćelija sa imobilisanim anti-CD3 antitelima u koncentraciji od 3,2 µg/ml na istoj ploči gde su i antitela na C10orf54. Povećanje stimulacije T-ćelija je praćeno preko sekrecije IL-2, sekrecije IFN-γ i ugrađivanja<3>H-timidina (indikator proliferacije ćelija).
[0625] Efekti anti-C10orf54 antitela na stimulaciju T-ćelija su sumirani u Tabeli 42 niže.
Tabela 42
[0626] I još in vitro eseja je rađeno, kao što je opisano niže, da bi se odredilo da li anti-C10orf54 antitela indukuju proliferaciju T-ćelija.
[0627] Konstrukt C10orf54-Fc, kao što je opisan gore, je imobilisan na ploči u različitim koncentracijama. Kao pozitivna kontrola, konstrukt IgG-Fc je takođe imobilisan na odvojenoj ploči. Naivne T-ćelije su stimulisane dodatkom rastvorljivih anti-CD28 antitela u koncentraciji od 5 µg/ml i dovođenjem u dodir naivnih T-ćelija sa imobilisanim anti-CD3 antitelima u koncentraciji od 3,2 µg/ml na istoj ploči gde je ili konstrukt C10orf54-Fc ili kontrola IgG-Fc. Pored toga, dodata su rastvorljiva antitela na C10orf54 (26A ili 175A opisani ovde) da bi se dalje povećala stimulacija T-ćelija. Povećanje stimulacije T-ćelija je praćeno preko sekrecije IL-2, sekrecije IFN-γ i ugrađivanja<3>H-timidina (indikator proliferacije ćelija).
[0628] Antitelo na C10orf54 26A je smanjilo C10orf54-posredovanu supresiju proliferacije naivnih T-ćelija, kao i sekreciju IL-2 i IFN-γ. Ovi rezultati su prikazani na SL.29.
[0629] I još in vitro eseja je rađeno, kao što je opisano niže, da bi se odredilo da li C10orf54 inhibira stimulaciju T-ćelija u naivnim T-ćelijama, CD4+ T-ćelijama i CD8+ T-ćelijama.
[0630] Konstrukt C10orf54-Fc, kao što je opisan gore, je imobilisan na ploči u različitim koncentracijama. Kao pozitivna kontrola, konstrukt IgG-Fc je takođe imobilisan na odvojenoj ploči. T-ćelije su stimulisane dodatkom rastvorljivih anti-CD28 antitela u koncentraciji od 5 µg/ml i dovođenjem u dodir T-ćelija sa imobilisanim anti-CD3 antitelima u koncentraciji od 3,2 µg/ml na istoj ploči gde je ili konstrukt C10orf54-Fc ili kontrola IgG-Fc. Inhibicija stimulacije T-ćelija je praćena preko sekrecije IL-2, sekrecije IFN-γ i ugrađivanja<3>H-timidina (indikator proliferacije ćelija).
[0631] Imobilisan konstrukt C10orf54-Fc u koncentraciji od 10 µg/ml je inhibirao naivne T-ćelije stimulisane anti-CD3/anti-CD28, a i inhibirao je CD4+ ili CD8+ T-ćelije, što je mereno ugrađivanjem<3>H-timidina. Ovi rezultati su prikazani na SL.28. U dodatnim esejima, antitela na C10orf54, kao što je 26A, su dodata u esej da bi se smanjila C10orf54-posredovana supresija naivnih T-ćelija, CD4<+>T-ćelija ili CD8<+>T-ćelija.

Claims (13)

PATENTNI ZAHTEVI
1. Humanizovano monoklonsko antitelo, ili njegov fragment za vezivanje antigena, koje sadrži 6 CDR-ova antitela, gde navedeno antitelo sadrži:
- varijabilni domen teškog lanca koji sadrži sledeća tri CDR, respektivno, CDR-H1 koji ima sekvencu SEQ ID NO: 1296, CDR-H2 koji ima sekvencu odabranu od SEQ ID NO: 1358, SEQ ID NO.1556, SEQ ID NO.1557, SEQ ID NO.1558 i SEQ ID NO. 1559 i CDR-H3 koji ima sekvencu SEQ ID No.1393; i
- varijabilni domen lakog lanca koji sadrži sledeća tri CDR, respektivno, CDR-L1 koji ima sekvencu SEQ ID No.1435, CDR-L2 koji ima sekvencu odabranu od SEQ ID NO: 1476, SEQ ID NO.1630, SEQ ID NO.1631, SEQ ID NO.1632 i SEQ ID NO.
1633 i CDR-L3 koji ima sekvencu SEQ ID No.1499.
2. Antitelo iz zahteva 1, gde je antitelo Fab Fragment, F(ab')2fragment, jednolančani Fv (sFv), dijatelo, trijatelo ili minitelo.
3. Konjugat antitelo-lek koji sadrži antitelo iz bilo kog od zahteva 1 ili 2, konjugovano sa citotoksičnim sredstvom.
4. Polinukleotid koji sadrži nukleotidnu sekvencu koja kodira antitelo iz bilo kog od zahteva 1 ili 2.
5. Ekspresioni vektor koji sadrži polinukleotid iz zahteva 4.
6. Ćelija domaćin koja sadrži ekspresioni vektor iz zahteva 5.
7. Metod proizvodnje antitela ili njegovog fragmenta za vezivanje antigena, iz bilo kog od zahteva 1 ili 2, gde navedeni metod sadrže korak gajenja ćelije domaćina iz zahteva 6 pod uslovima koji dovode do proizvodnje antitela.
8. Farmaceutski sastav koji sadrži antitelo iz bilo kog od zahteva 1 ili 2, ili konjugat antitelolek iz zahteva 3 i farmaceutski prihvatljiv razblaživač, nosač ili ekscipijent.
9. Farmaceutski sastav iz zahteva 8 za upotrebu u lečenju ili sprečavanju kancera.
10. Farmaceutski sastav za upotrebu iz zahteva 9, gde je kancer leukemija, poželjno akutna mijeloidna leukemija (AML), kancer bešike, kancer kože, kancer kolona, kancer dojke, kancer jetre, kancer bubrega, kancer pluća, kancer stomaka, kancer pankreasa, kancer ezofagusa ili fibrosarkom.
11. Metod detekcije C10orf54 u uzorku, koji obuhvata dovođenje u dodir uzorka sa antitelom iz bilo kog od zahteva 1 ili 2.
12. Komplet koji sadrži antitelo iz bilo kog od zahteva 1 ili 2.
13. Komplet iz zahteva 12, gde je navedeno antitelo konjugovano sa detektabilnim
supstratom.
RS20201488A 2014-12-11 2015-12-11 Antitela na c10orf54 i njihova upotreba RS61249B1 (sr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462090880P 2014-12-11 2014-12-11
EP18150243.6A EP3333191B1 (en) 2014-12-11 2015-12-11 Anti-c10orf54 antibodies and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS61249B1 true RS61249B1 (sr) 2021-01-29

Family

ID=56108381

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20201488A RS61249B1 (sr) 2014-12-11 2015-12-11 Antitela na c10orf54 i njihova upotreba

Country Status (27)

Country Link
US (2) US10766959B2 (sr)
EP (3) EP3229838B1 (sr)
JP (2) JP6800853B2 (sr)
KR (2) KR102693806B1 (sr)
CN (2) CN114230664B (sr)
AU (2) AU2015360282B2 (sr)
BR (1) BR112017012344B1 (sr)
CA (1) CA2970352A1 (sr)
DK (2) DK3229838T3 (sr)
ES (3) ES2836550T3 (sr)
HK (1) HK1255067A1 (sr)
HR (1) HRP20201939T1 (sr)
HU (1) HUE052771T2 (sr)
IL (1) IL252804B (sr)
LT (1) LT3333191T (sr)
MA (2) MA40671B1 (sr)
MX (1) MX385585B (sr)
NZ (1) NZ733055A (sr)
PL (2) PL3333191T3 (sr)
PT (2) PT3333191T (sr)
RS (1) RS61249B1 (sr)
RU (1) RU2714232C2 (sr)
SA (1) SA517381703B1 (sr)
SG (1) SG11201704752WA (sr)
SI (1) SI3333191T1 (sr)
TN (1) TN2017000246A1 (sr)
WO (1) WO2016094837A2 (sr)

Families Citing this family (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK3160513T3 (da) 2014-06-30 2020-04-06 Glykos Finland Oy Saccharidderivat af en toksisk payload og antistofkonjugater deraf
US11554181B2 (en) * 2014-09-05 2023-01-17 The University Of North Carolina At Charlotte Tumor specific antibody conjugates and uses therefor
AU2015360282B2 (en) * 2014-12-11 2021-04-01 Pierre Fabre Medicament Anti-C10orf54 antibodies and uses thereof
WO2018098352A2 (en) 2016-11-22 2018-05-31 Jun Oishi Targeting kras induced immune checkpoint expression
EP3568159A4 (en) 2017-01-11 2020-08-05 Bristol-Myers Squibb Company PSGL-1 ANTAGONISTS AND THEIR USES
PE20191708A1 (es) 2017-03-14 2019-11-28 Five Prime Therapeutics Inc ANTICUERPOS DE UNION A VISTA A pH ACIDO
CN109081868B (zh) * 2017-06-14 2022-06-24 中国科学院上海巴斯德研究所 靶向寨卡病毒包膜蛋白保守表位的单克隆抗体及其应用
WO2018237287A1 (en) * 2017-06-22 2018-12-27 Apexigen, Inc. Anti-vista antibodies and methods of use
US11242398B2 (en) 2017-08-01 2022-02-08 Remd Biotherapeutics, Inc. Anti-OX40 antibodies and methods of activating OX40
US20230049618A1 (en) * 2017-10-02 2023-02-16 The University Of North Carolina At Charlotte Tumor specific antibody conjugates and uses therefor
EP3699193A4 (en) * 2017-10-20 2022-01-26 Pharmabcine Inc. ANTI-VISTA ANTIBODIES AND USE THEREOF
KR20250154550A (ko) 2018-03-21 2025-10-28 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크. 산성 pH에서 VISTA에 결합하는 항체
GB201814562D0 (en) 2018-09-07 2018-10-24 Hummingbird Bioscience Pte Ltd Vista antigen-binding molecules
US20200017596A1 (en) * 2018-05-10 2020-01-16 Abvision, Inc. Monoclonal antibodies activating cd40 and uses thereof
CN112638375A (zh) 2018-06-15 2021-04-09 旗舰创业创新五公司 通过后细胞信号传导因子的调节来增加免疫活性
JP7700036B2 (ja) 2018-07-11 2025-06-30 ファイヴ プライム セラピューティクス インク 酸性ｐＨでＶＩＳＴＡと結合する抗体
MX2021000786A (es) * 2018-07-20 2021-06-15 Pf Medicament Receptor para supresor de ig del dominio v de activación de células t (vista).
CN111378039B (zh) * 2018-12-29 2021-08-24 深圳大学 治疗恶性肿瘤的抗体及其应用
EP3962493A2 (en) 2019-05-03 2022-03-09 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Methods of modulating immune activity/level of irf or sting or of treating cancer, comprising the administration of a sting modulator and/or purinergic receptor modulator or postcellular signaling factor
WO2021127217A1 (en) 2019-12-17 2021-06-24 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Combination anti-cancer therapies with inducers of iron-dependent cellular disassembly
EP4172323A1 (en) 2020-06-29 2023-05-03 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Viruses engineered to promote thanotransmission and their use in treating cancer
WO2022015754A2 (en) * 2020-07-13 2022-01-20 University Of Southern California Universal car-nk cell targeting various epitopes of hiv-1 gp160
CN112625131B (zh) * 2020-08-10 2021-08-17 北京鼎成肽源生物技术有限公司 抗人c-Met人鼠嵌合单克隆抗体及其应用
EP4247848A4 (en) * 2020-11-23 2025-10-01 Scout Bio Inc ANTIGEN-BINDING MOLECULES AND THEIR USES
KR20230165276A (ko) 2021-03-31 2023-12-05 플래그쉽 파이어니어링 이노베이션스 브이, 인크. 타노트랜스미션 폴리펩티드 및 암의 치료에서의 이의 용도
WO2022223028A1 (zh) * 2021-04-23 2022-10-27 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗BLyS抗体、其药物组合物及其用途
TW202309088A (zh) * 2021-04-30 2023-03-01 法商皮爾法伯製藥公司 新的穩定抗ｖｉｓｔａ抗體
AU2022303363A1 (en) 2021-06-29 2024-01-18 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Immune cells engineered to promote thanotransmission and uses thereof
WO2023213814A1 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Pierre Fabre Medicament New formulation of anti vista antibody
US20240174732A1 (en) 2022-10-05 2024-05-30 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Nucleic acid molecules encoding trif and additional polypeptides and their use in treating cancer
WO2024121380A1 (en) 2022-12-08 2024-06-13 Pierre Fabre Medicament Vaccinal composition and adjuvant
US20240269251A1 (en) 2023-01-09 2024-08-15 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Genetic switches and their use in treating cancer
CN119080938B (zh) * 2023-06-05 2025-06-24 东莞市朋志生物科技有限公司 抗25羟维生素d抗体、检测25羟维生素d的试剂和试剂盒
EP4560319A1 (en) 2023-11-24 2025-05-28 Pierre Fabre Medicament Immune and tumour cells expression of vista in a panel of cancer indications

Family Cites Families (229)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US3710795A (en) 1970-09-29 1973-01-16 Alza Corp Drug-delivery device with stretched, rate-controlling membrane
US4044126A (en) 1972-04-20 1977-08-23 Allen & Hanburys Limited Steroidal aerosol compositions and process for the preparation thereof
GB1429184A (en) 1972-04-20 1976-03-24 Allen & Hanburys Ltd Physically anti-inflammatory steroids for use in aerosols
USRE28819E (en) 1972-12-08 1976-05-18 Syntex (U.S.A.) Inc. Dialkylated glycol compositions and medicament preparations containing same
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
US4296847A (en) 1980-03-25 1981-10-27 General Motors Corporation Transmission shift lever backdrive and column locking mechanism
US4328245A (en) 1981-02-13 1982-05-04 Syntex (U.S.A.) Inc. Carbonate diester solutions of PGE-type compounds
US4410545A (en) 1981-02-13 1983-10-18 Syntex (U.S.A.) Inc. Carbonate diester solutions of PGE-type compounds
US4358603A (en) 1981-04-16 1982-11-09 Syntex (U.S.A.) Inc. Acetal stabilized prostaglandin compositions
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
US4409239A (en) 1982-01-21 1983-10-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Propylene glycol diester solutions of PGE-type compounds
DE3378250D1 (en) 1982-04-22 1988-11-24 Ici Plc Continuous release formulations
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5128326A (en) 1984-12-06 1992-07-07 Biomatrix, Inc. Drug delivery systems based on hyaluronans derivatives thereof and their salts and methods of producing same
CA1319120C (en) 1985-04-01 1993-06-15 John Henry Kenten Transformed myeloma cell-line and a process for the expression of a gene coding for a eukaryotic polypeptide employing same
US4980286A (en) 1985-07-05 1990-12-25 Whitehead Institute For Biomedical Research In vivo introduction and expression of foreign genetic material in epithelial cells
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2, Inc., Danville, Calif. Geänderte antikörper.
US4880078A (en) 1987-06-29 1989-11-14 Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha Exhaust muffler
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5336603A (en) 1987-10-02 1994-08-09 Genentech, Inc. CD4 adheson variants
DE68921982D1 (de) 1988-06-14 1995-05-04 Cetus Oncology Corp Kupplungsmittel und sterisch gehinderte, mit disulfid gebundene konjugate daraus.
DE768377T1 (de) 1988-09-02 1998-01-02 Dyax Corp Herstellung und Auswahl von Rekombinantproteinen mit verschiedenen Bindestellen
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
KR900005995A (ko) 1988-10-31 1990-05-07 우메모또 요시마사 변형 인터류킨-2 및 그의 제조방법
US5734033A (en) 1988-12-22 1998-03-31 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Antisense oligonucleotides inhibiting human bcl-2 gene expression
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
EP0394827A1 (en) 1989-04-26 1990-10-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Chimaeric CD4-immunoglobulin polypeptides
ZA902949B (en) 1989-05-05 1992-02-26 Res Dev Foundation A novel antibody delivery system for biological response modifiers
US5112946A (en) 1989-07-06 1992-05-12 Repligen Corporation Modified pf4 compositions and methods of use
US5413923A (en) 1989-07-25 1995-05-09 Cell Genesys, Inc. Homologous recombination for universal donor cells and chimeric mammalian hosts
AU6430190A (en) 1989-10-10 1991-05-16 Pitman-Moore, Inc. Sustained release composition for macromolecular proteins
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
WO1991006570A1 (en) 1989-10-25 1991-05-16 The University Of Melbourne HYBRID Fc RECEPTOR MOLECULES
EP0550436A1 (en) 1989-11-06 1993-07-14 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Protein microspheres and methods of using them
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5585112A (en) 1989-12-22 1996-12-17 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of preparing gas and gaseous precursor-filled microspheres
WO1991010737A1 (en) 1990-01-11 1991-07-25 Molecular Affinities Corporation Production of antibodies using gene libraries
US5780225A (en) 1990-01-12 1998-07-14 Stratagene Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules
ATE139258T1 (de) 1990-01-12 1996-06-15 Cell Genesys Inc Erzeugung xenogener antikörper
US5314995A (en) 1990-01-22 1994-05-24 Oncogen Therapeutic interleukin-2-antibody based fusion proteins
ATE158615T1 (de) 1990-03-20 1997-10-15 Univ Columbia Chimäre antikörper mit rezeptor-bindenden liganden anstelle ihrer konstanten region
IT1246382B (it) 1990-04-17 1994-11-18 Eurand Int Metodo per la cessione mirata e controllata di farmaci nell'intestino e particolarmente nel colon
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
US5349053A (en) 1990-06-01 1994-09-20 Protein Design Labs, Inc. Chimeric ligand/immunoglobulin molecules and their uses
EP0532643B1 (en) 1990-06-04 1998-12-23 3Com Corporation Method for optimizing software for any one of a plurality of variant architectures
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
AU8507191A (en) 1990-08-29 1992-03-30 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5698426A (en) 1990-09-28 1997-12-16 Ixsys, Incorporated Surface expression libraries of heteromeric receptors
US5543390A (en) 1990-11-01 1996-08-06 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University Covalent microparticle-drug conjugates for biological targeting
ATE218889T1 (de) 1990-11-09 2002-06-15 Stephen D Gillies Cytokine immunokonjugate
CA2095633C (en) 1990-12-03 2003-02-04 Lisa J. Garrard Enrichment method for variant proteins with altered binding properties
DE69123241T2 (de) 1990-12-14 1997-04-17 Cell Genesys Inc Chimärische ketten zur transduktion von rezeptorverbundenen signalwegen
WO1992018619A1 (en) 1991-04-10 1992-10-29 The Scripps Research Institute Heterodimeric receptor libraries using phagemids
ATE221379T1 (de) 1991-05-01 2002-08-15 Jackson H M Found Military Med Verfahren zur behandlung infektiöser respiratorischer erkrankungen
DE69233482T2 (de) 1991-05-17 2006-01-12 Merck & Co., Inc. Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen
US6800738B1 (en) 1991-06-14 2004-10-05 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
AU2238292A (en) 1991-06-14 1993-01-12 Xoma Corporation Microbially-produced antibody fragments and their conjugates
EP0940468A1 (en) 1991-06-14 1999-09-08 Genentech, Inc. Humanized antibody variable domain
US5844095A (en) 1991-06-27 1998-12-01 Bristol-Myers Squibb Company CTLA4 Ig fusion proteins
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
ES2341666T3 (es) 1991-12-02 2010-06-24 Medimmune Limited Produccion de autoanticuerpos de repertorios de segmentos de anticue rpos expresados en la superficie de fagos.
ATE249840T1 (de) 1991-12-13 2003-10-15 Xoma Corp Verfahren und materialien zur herstellung von modifizierten variablen antikörperdomänen und ihre therapeutische verwendung
US5824307A (en) 1991-12-23 1998-10-20 Medimmune, Inc. Human-murine chimeric antibodies against respiratory syncytial virus
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
US6271242B1 (en) 1992-02-10 2001-08-07 Bristol-Myers Squibb Co. Method for treating cancer using a tyrosine protein kinase inhibitor
GB9203459D0 (en) 1992-02-19 1992-04-08 Scotgen Ltd Antibodies with germ-line variable regions
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
US6010715A (en) 1992-04-01 2000-01-04 Bertek, Inc. Transdermal patch incorporating a polymer film incorporated with an active agent
US5447851B1 (en) 1992-04-02 1999-07-06 Univ Texas System Board Of Dna encoding a chimeric polypeptide comprising the extracellular domain of tnf receptor fused to igg vectors and host cells
US6024975A (en) 1992-04-08 2000-02-15 Americare International Diagnostics, Inc. Method of transdermally administering high molecular weight drugs with a polymer skin enhancer
DE69330523D1 (de) 1992-08-21 2001-09-06 Vrije Universiteit Brussel Bru Immunoglobuline ohne leichte ketten
US6005079A (en) 1992-08-21 1999-12-21 Vrije Universiteit Brussels Immunoglobulins devoid of light chains
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US5441050A (en) 1992-12-18 1995-08-15 Neoprobe Corporation Radiation responsive surgical instrument
US5934272A (en) 1993-01-29 1999-08-10 Aradigm Corporation Device and method of creating aerosolized mist of respiratory drug
US6274552B1 (en) 1993-03-18 2001-08-14 Cytimmune Sciences, Inc. Composition and method for delivery of biologically-active factors
US5985307A (en) 1993-04-14 1999-11-16 Emory University Device and method for non-occlusive localized drug delivery
US5523092A (en) 1993-04-14 1996-06-04 Emory University Device for local drug delivery and methods for using the same
ES2162863T3 (es) 1993-04-29 2002-01-16 Unilever Nv Produccion de anticuerpos o fragmentos (funcionalizados) de los mismos derivados de inmunoglobulinas de cadena pesada de camelidae.
US5728868A (en) 1993-07-15 1998-03-17 Cancer Research Campaign Technology Limited Prodrugs of protein tyrosine kinase inhibitors
US6004534A (en) 1993-07-23 1999-12-21 Massachusetts Institute Of Technology Targeted polymerized liposomes for improved drug delivery
EP0733070A1 (en) 1993-12-08 1996-09-25 Genzyme Corporation Process for generating specific antibodies
US5925376C1 (en) 1994-01-10 2001-03-20 Madalene C Y Heng Method for treating psoriasis using selected phosphorylase kinase inhibitor and additional compounds
US5618709A (en) 1994-01-14 1997-04-08 University Of Pennsylvania Antisense oligonucleotides specific for STK-1 and method for inhibiting expression of the STK-1 protein
EP1231268B1 (en) 1994-01-31 2005-07-27 Trustees Of Boston University Polyclonal antibody libraries
US5605793A (en) 1994-02-17 1997-02-25 Affymax Technologies N.V. Methods for in vitro recombination
US5837458A (en) 1994-02-17 1998-11-17 Maxygen, Inc. Methods and compositions for cellular and metabolic engineering
US5834252A (en) 1995-04-18 1998-11-10 Glaxo Group Limited End-complementary polymerase reaction
US5516637A (en) 1994-06-10 1996-05-14 Dade International Inc. Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage
MX9700764A (es) 1994-07-29 1997-05-31 Smithkline Beecham Plc Compuestos novedosos.
GB9415379D0 (en) 1994-07-29 1994-09-21 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
US5759542A (en) 1994-08-05 1998-06-02 New England Deaconess Hospital Corporation Compositions and methods for the delivery of drugs by platelets for the treatment of cardiovascular and other diseases
US5911995A (en) 1994-08-19 1999-06-15 Regents Of The University Of Minnesota EGF-genistein conjugates for the treatment of cancer
US5587459A (en) 1994-08-19 1996-12-24 Regents Of The University Of Minnesota Immunoconjugates comprising tyrosine kinase inhibitors
US5660854A (en) 1994-11-28 1997-08-26 Haynes; Duncan H Drug releasing surgical implant or dressing material
CA2207961A1 (en) 1995-01-05 1996-07-11 Robert J. Levy Surface-modified nanoparticles and method of making and using same
US6030613A (en) 1995-01-17 2000-02-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
DK1323346T3 (da) 1995-01-17 2006-10-30 Brigham & Womens Hospital Receptorspecifik transport af immunogener gennem epitelet
GB9501567D0 (en) 1995-01-26 1995-03-15 Pharmacia Spa Hydrosoluble 3-arylidene-2-oxindole derivatives as tyrosine kinase inhibitors
US5998596A (en) 1995-04-04 1999-12-07 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibition of protein kinase activity by aptameric action of oligonucleotides
US6019968A (en) 1995-04-14 2000-02-01 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Dispersible antibody compositions and methods for their preparation and use
US5983134A (en) 1995-04-23 1999-11-09 Electromagnetic Bracing Systems Inc. Electrophoretic cuff apparatus drug delivery system
EP0822830B1 (en) 1995-04-27 2008-04-02 Amgen Fremont Inc. Human anti-IL-8 antibodies, derived from immunized xenomice
EP0823941A4 (en) 1995-04-28 2001-09-19 Abgenix Inc HUMAN ANTIBODIES DERIVED FROM IMMUNIZED XENO MOUSES
ES2268705T3 (es) 1995-06-01 2007-03-16 Kishimoto, Tadamitsu Inhibidor del crecimiento de celulas leucemicas que contienen un derivado oligonucleotidico antisentido frente al gen del tumor de wiloms (wt1).
US6316652B1 (en) 1995-06-06 2001-11-13 Kosta Steliou Drug mitochondrial targeting agents
GB9515975D0 (en) 1995-08-04 1995-10-04 Zeneca Ltd Chemical compounds
US6167301A (en) 1995-08-29 2000-12-26 Flower; Ronald J. Iontophoretic drug delivery device having high-efficiency DC-to-DC energy conversion circuit
CA2230494A1 (en) 1995-08-31 1997-03-06 Alkermes Controlled Therapeutics Inc. Composition for sustained release of an agent
US5863904A (en) 1995-09-26 1999-01-26 The University Of Michigan Methods for treating cancers and restenosis with P21
GB9601081D0 (en) 1995-10-06 1996-03-20 Cambridge Antibody Tech Specific binding members for human transforming growth factor beta;materials and methods
US6039975A (en) 1995-10-17 2000-03-21 Hoffman-La Roche Inc. Colon targeted delivery system
US6127366A (en) 1995-11-22 2000-10-03 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
SI1162201T1 (sl) 1995-12-08 2006-08-31 Janssen Pharmaceutica Nv (Imidazol-5-il)metil-2-kinolinonski derivati kot inhibitorji farnezil protein transferaze
US5723125A (en) 1995-12-28 1998-03-03 Tanox Biosystems, Inc. Hybrid with interferon-alpha and an immunoglobulin Fc linked through a non-immunogenic peptide
US5958769A (en) 1996-01-18 1999-09-28 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods for mediating cell cycle progression
JP2978435B2 (ja) 1996-01-24 1999-11-15 チッソ株式会社 アクリロキシプロピルシランの製造方法
WO1997027852A1 (en) 1996-01-30 1997-08-07 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
AU704087B2 (en) 1996-01-30 1999-04-15 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
EP0885002B1 (en) 1996-03-04 2011-05-11 The Penn State Research Foundation Materials and methods for enhancing cellular internalization
WO1997033899A1 (en) 1996-03-14 1997-09-18 Human Genome Sciences, Inc. Apoptosis inducing molecule i
JP4046354B2 (ja) 1996-03-18 2008-02-13 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム 増大した半減期を有する免疫グロブリン様ドメイン
KR100497017B1 (ko) 1996-03-22 2005-11-29 휴먼 게놈 사이언시즈, 인코포레이티드 고사유도분자ii
US6063930A (en) 1996-04-03 2000-05-16 Merck & Co., Inc. Substituted imidazole compounds useful as farnesyl-protein transferase inhibitors
US5891889A (en) 1996-04-03 1999-04-06 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
US6080870A (en) 1996-04-03 2000-06-27 Merck & Co., Inc. Biaryl substituted imidazole compounds useful as farnesyl-protein transferase inhibitors
US5883105A (en) 1996-04-03 1999-03-16 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
US6300501B1 (en) 1996-05-22 2001-10-09 Warner-Lambert Company Histidine-(N-benzyl glycinamide) inhibitors of protein farnesyl transferase
US5855913A (en) 1997-01-16 1999-01-05 Massachusetts Instite Of Technology Particles incorporating surfactants for pulmonary drug delivery
US5874064A (en) 1996-05-24 1999-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery
US5985309A (en) 1996-05-24 1999-11-16 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
US5648239A (en) 1996-06-21 1997-07-15 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Human camp-dependent protein kinase inhibitor homolog
BR9709974A (pt) 1996-06-27 1999-08-10 Pfizer Derivados de 2-(2-oxo-etidileno)-imidazolidin-4-ona e seu uso como inibidores da transferase da proteina de farnesila
BR9711154A (pt) 1996-08-12 1999-08-17 Yoshitomi Pharmaceutical Agente farmac-utico contendo inibidor cinase rho
US5985317A (en) 1996-09-06 1999-11-16 Theratech, Inc. Pressure sensitive adhesive matrix patches for transdermal delivery of salts of pharmaceutical agents
US5945429A (en) 1996-09-13 1999-08-31 Schering Corporation Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US6030982A (en) 1996-09-13 2000-02-29 Schering Corporationm Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US6040305A (en) 1996-09-13 2000-03-21 Schering Corporation Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US5885834A (en) 1996-09-30 1999-03-23 Epstein; Paul M. Antisense oligodeoxynucleotide against phosphodiesterase
HUP0000116A3 (en) 1996-10-01 2000-08-28 Stanford Res Inst Int Taste-masked microcapsule compositions and methods of manufacture
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
US6131570A (en) 1998-06-30 2000-10-17 Aradigm Corporation Temperature controlling device for aerosol drug delivery
EP1500329B1 (en) 1996-12-03 2012-03-21 Amgen Fremont Inc. Human antibodies that specifically bind human TNF alpha
US6093737A (en) 1996-12-30 2000-07-25 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
US6013662A (en) 1996-12-30 2000-01-11 Rhone-Poulenc Rorer S.A. Farnesyl transferase inhibitors, their preparation, the pharmaceutical compositions which contain them and their use in the preparation of medicaments
US5939439A (en) 1996-12-30 1999-08-17 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
EP0954282B1 (en) 1997-01-16 2005-01-19 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
WO1998032741A1 (en) 1997-01-29 1998-07-30 Zeneca Limited Inhibitors of farnesyl protein transferase
US5860957A (en) 1997-02-07 1999-01-19 Sarcos, Inc. Multipathway electronically-controlled drug delivery system
ZA981080B (en) 1997-02-11 1998-08-12 Warner Lambert Co Bicyclic inhibitors of protein farnesyl transferase
TW591030B (en) 1997-03-10 2004-06-11 Janssen Pharmaceutica Nv Farnesyl transferase inhibiting 1,8-annelated quinolinone derivatives substituted with N- or C-linked imidazoles
US6120751A (en) 1997-03-21 2000-09-19 Imarx Pharmaceutical Corp. Charged lipids and uses for the same
US5994071A (en) 1997-04-04 1999-11-30 Albany Medical College Assessment of prostate cancer
DE69800716T2 (de) 1997-04-14 2001-09-20 Micromet Gesellschaft Fuer Biomedizinische Forschung Mbh Neues verfahren zur herstellung von anti-humanen antigenrezeptoren und deren verwendungen
US6060082A (en) 1997-04-18 2000-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes targeted to M cells and useful for oral or mucosal drug delivery
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US6051582A (en) 1997-06-17 2000-04-18 Schering Corporation Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US6159984A (en) 1997-06-17 2000-12-12 Schering Corporation Farnesyl protein transferase inhibitors
US6211193B1 (en) 1997-06-17 2001-04-03 Schering Corporation Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US6228865B1 (en) 1997-06-17 2001-05-08 Schering Corporation Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US6239140B1 (en) 1997-06-17 2001-05-29 Schering Corporation Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US6225322B1 (en) 1997-06-17 2001-05-01 Schering Corporation Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
CZ297198B6 (cs) 1997-08-15 2006-09-13 Cephalon, Inc. Prostredek k inhibování dalsího rustu rakovinového nádoru prostaty u savcu
US5948433A (en) 1997-08-21 1999-09-07 Bertek, Inc. Transdermal patch
US5989463A (en) 1997-09-24 1999-11-23 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Methods for fabricating polymer-based controlled release devices
US6103723A (en) 1997-10-17 2000-08-15 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
PT1025088E (pt) 1997-10-22 2002-01-30 Astrazeneca Ab Derivados de imidazole e sua utilizacao como inibidores de farnesil proteino transferase
JP2001520222A (ja) 1997-10-22 2001-10-30 ゼネカ・リミテッド イミダゾール誘導体およびファルネシルタンパク質トランスフェラーゼインヒビターとしてのそれらの使用
SE512663C2 (sv) 1997-10-23 2000-04-17 Biogram Ab Inkapslingsförfarande för aktiv substans i en bionedbrytbar polymer
EP0968711B9 (en) 1997-10-28 2008-05-28 Bando Chemical Industries, Ltd. Dermatological patch sheet and process for producing base sheet therefor
EP1042343B1 (en) 1997-11-03 2008-01-23 Human Genome Sciences, Inc. Vegi, an inhibitor of angiogenesis and tumor growth
US6124465A (en) 1997-11-25 2000-09-26 Rhone-Poulenc S.A. Farnesyl transferase inhibitors, their preparation, the pharmaceutical compositions which contain them and their use in the preparation of medicaments
US6268363B1 (en) 1997-11-28 2001-07-31 Lg Chemical Ltd. Imidazole derivatives having an inhibitory activity for farnesyl transferase and process for preparation thereof
US6054466A (en) 1997-12-04 2000-04-25 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
US6242196B1 (en) 1997-12-11 2001-06-05 Dana-Farber Cancer Institute Methods and pharmaceutical compositions for inhibiting tumor cell growth
US6335156B1 (en) 1997-12-18 2002-01-01 The Johns Hopkins University School Of Medicine 14-3-3σ arrests the cell cycle
US6436960B1 (en) 1998-02-02 2002-08-20 Lg Chemical Ltd. Farnesyl transferase inhibitors having a piperidine structure and process for preparation thereof
CA2322944C (en) 1998-04-27 2003-05-20 Warner-Lambert Company Functionalized alkyl and alkenyl side chain derivatives of glycinamides as farnesyl transferase inhibitors
US6048736A (en) 1998-04-29 2000-04-11 Kosak; Kenneth M. Cyclodextrin polymers for carrying and releasing drugs
AU747231B2 (en) 1998-06-24 2002-05-09 Alkermes, Inc. Large porous particles emitted from an inhaler
HRP20000904A2 (en) 1998-07-06 2001-12-31 Janssen Pharmaceutica Nv Farnesyl protein transferase inhibitors for treating arthropathies
US6034053A (en) 1998-07-13 2000-03-07 Wayne Hughes Institute EGF-isoflavone conjugates for the prevention of restenosis
DK1413582T3 (da) 1998-08-27 2006-07-17 Spirogen Ltd Dimere pyrrolobenzodiazepiner
US6372747B1 (en) 1998-12-18 2002-04-16 Schering Corporation Farnesyl protein transferase inhibitors
US6362188B1 (en) 1998-12-18 2002-03-26 Schering Corporation Farnesyl protein transferase inhibitors
FR2787327B1 (fr) 1998-12-21 2003-01-17 Aventis Pharma Sa Compositions contenant des inhibiteurs de farnesyle transferase
US6432959B1 (en) 1998-12-23 2002-08-13 Schering Corporation Inhibitors of farnesyl-protein transferase
AU779008C (en) 1999-01-11 2005-06-30 Princeton University High affinity inhibitors for target validation and uses thereof
US6399633B1 (en) 1999-02-01 2002-06-04 Aventis Pharmaceuticals Inc. Use of 4-H-1-benzopryan-4-one derivatives as inhibitors of smooth muscle cell proliferation
US6245759B1 (en) 1999-03-11 2001-06-12 Merck & Co., Inc. Tyrosine kinase inhibitors
US6271359B1 (en) 1999-04-14 2001-08-07 Musc Foundation For Research Development Tissue-specific and pathogen-specific toxic agents and ribozymes
US6143766A (en) 1999-04-16 2000-11-07 Warner-Lambert Company Benzopyranone and quinolone inhibitors of ras farnesyl transferase
US6256533B1 (en) 1999-06-09 2001-07-03 The Procter & Gamble Company Apparatus and method for using an intracutaneous microneedle array
US6458935B1 (en) 1999-06-23 2002-10-01 Merck & Co., Inc. Radiolabeled farnesyl-protein transferase inhibitors
US6403581B1 (en) 2000-01-19 2002-06-11 American Cyanamid Company Method of inhibition of farnesyl-protein transferase using substituted benz (cd) indol-2-imine and-amine derivatives
US6261595B1 (en) 2000-02-29 2001-07-17 Zars, Inc. Transdermal drug patch with attached pocket for controlled heating device
EP1485130A4 (en) * 2002-02-21 2006-11-22 Univ Duke REAGENTS AND THERAPEUTIC METHODS OF AUTOIMMUNE DISEASES
EP1660534A2 (en) 2003-08-22 2006-05-31 MedImmune, Inc. Humanization of antibodies
ES2398975T3 (es) 2004-03-01 2013-03-25 Spirogen Sàrl Derivados de 11-hidroxi-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-ona como intermedios clave para la preparación de pirrolobenzodiazepinas sustituidas en C2
SI1934174T1 (sl) 2005-10-07 2011-08-31 Exelixis Inc Inhibitorji MEK in postopki za njihovo uporabo
US8476451B2 (en) 2007-07-20 2013-07-02 The Regents Of The University Of California Tubulysin D analogues
NZ737844A (en) * 2010-03-26 2022-09-30 Dartmouth College Vista regulatory t cell mediator protein, vista binding agents and use thereof
MX368648B (es) 2010-04-15 2019-10-09 Seattle Genetics Inc Pirrolobenzodiazepinas usadas para tratar enfermedades proliferativas.
BR112012026213B1 (pt) 2010-04-15 2021-12-28 Medimmune Limited Compostos de pirrolobenzodiazepinas, conjugado das mesmas, composição farmacêutica compreendendo o conjugado e uso do mesmo para o tratamento de uma doença proliferativa
EP2675479B1 (en) 2011-02-15 2016-01-13 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives
SG11201401406YA (en) 2011-10-14 2014-05-29 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US9056910B2 (en) 2012-05-01 2015-06-16 Genentech, Inc. Anti-PMEL17 antibodies and immunoconjugates
US9890215B2 (en) * 2012-06-22 2018-02-13 King's College London Vista modulators for diagnosis and treatment of cancer
JP6368308B2 (ja) * 2012-09-07 2018-08-01 トラスティーズ・オブ・ダートマス・カレッジ 癌の診断および治療のためのｖｉｓｔａ調節剤
US20150231240A1 (en) * 2012-10-09 2015-08-20 Igenica Biotherapeutics, Inc. Anti-c16orf54 antibodies and methods of use thereof
JP6824735B2 (ja) * 2013-06-06 2021-02-03 ピエール、ファーブル、メディカマン 抗Ｃ１０ｏｒｆ５４抗体およびその使用方法
WO2016090347A1 (en) * 2014-12-05 2016-06-09 Immunext, Inc. Identification of vsig8 as the putative vista receptor and its use thereof to produce vista/vsig8 modulators
AU2015360282B2 (en) * 2014-12-11 2021-04-01 Pierre Fabre Medicament Anti-C10orf54 antibodies and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
AU2015360282B2 (en) 2021-04-01
MA47664B1 (fr) 2021-06-30
BR112017012344A2 (pt) 2018-02-27
SG11201704752WA (en) 2017-07-28
US20190177415A1 (en) 2019-06-13
US10766959B2 (en) 2020-09-08
MA40671B1 (fr) 2020-06-30
ES2934940T3 (es) 2023-02-28
EP3800202A1 (en) 2021-04-07
SI3333191T1 (sl) 2021-03-31
RU2017122014A3 (sr) 2019-06-14
EP3333191B1 (en) 2020-09-09
RU2714232C2 (ru) 2020-02-13
MX2017007585A (es) 2018-04-13
WO2016094837A3 (en) 2016-08-11
LT3333191T (lt) 2020-12-10
KR20170087500A (ko) 2017-07-28
MA47664A1 (fr) 2020-12-31
JP7095058B2 (ja) 2022-07-04
ES2834739T3 (es) 2021-06-18
CN114230664B (zh) 2025-01-03
US20200385473A1 (en) 2020-12-10
EP3229838A4 (en) 2018-06-06
MX385585B (es) 2025-03-18
DK3333191T3 (da) 2020-10-26
US11873339B2 (en) 2024-01-16
PT3800202T (pt) 2023-01-05
SA517381703B1 (ar) 2021-05-23
EP3229838A2 (en) 2017-10-18
BR112017012344B1 (pt) 2024-02-06
EP3800202B1 (en) 2022-11-09
JP2018508182A (ja) 2018-03-29
PL3800202T3 (pl) 2023-06-12
KR20240123432A (ko) 2024-08-13
MA40671A1 (fr) 2019-07-31
CN114230664A (zh) 2022-03-25
HK1255067A1 (zh) 2019-08-02
CA2970352A1 (en) 2016-06-16
PT3333191T (pt) 2020-12-15
RU2017122014A (ru) 2019-01-11
HRP20201939T1 (hr) 2021-02-05
KR102836383B1 (ko) 2025-07-18
TN2017000246A1 (en) 2018-10-19
AU2021203012A1 (en) 2021-06-10
JP6800853B2 (ja) 2020-12-16
ES2836550T3 (es) 2021-06-25
HUE052771T2 (hu) 2021-05-28
IL252804A0 (en) 2017-08-31
EP3229838B1 (en) 2020-09-09
KR102693806B1 (ko) 2024-08-09
NZ733055A (en) 2023-03-31
AU2015360282A1 (en) 2017-07-13
EP3333191A1 (en) 2018-06-13
AU2021203012B2 (en) 2023-12-14
JP2021040643A (ja) 2021-03-18
WO2016094837A2 (en) 2016-06-16
DK3229838T3 (da) 2020-10-19
PL3333191T3 (pl) 2021-05-04
IL252804B (en) 2021-03-25
CN108064167A (zh) 2018-05-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11873339B2 (en) Anti-C10orf54 antibodies and uses thereof
US10421818B2 (en) Anti-C10orf54 antibodies and uses thereof
RU2819627C1 (ru) Антитела к c10orf54 и их применения
HK40074885A (en) Anti-c10orf54 antibodies and uses thereof