RS61932B1 - Antitela na c-met i njihovi konjugati leka sa antitelom za efikasnu inhibiciju tumora - Google Patents
Antitela na c-met i njihovi konjugati leka sa antitelom za efikasnu inhibiciju tumoraInfo
- Publication number
- RS61932B1 RS61932B1 RS20210710A RSP20210710A RS61932B1 RS 61932 B1 RS61932 B1 RS 61932B1 RS 20210710 A RS20210710 A RS 20210710A RS P20210710 A RSP20210710 A RS P20210710A RS 61932 B1 RS61932 B1 RS 61932B1
- Authority
- RS
- Serbia
- Prior art keywords
- antibody
- seq
- antigen
- met
- binding fragment
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
- A61K47/6817—Toxins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6875—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin
- A61K47/6879—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin the immunoglobulin having two or more different antigen-binding sites, e.g. bispecific or multispecific immunoglobulin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
Oblast pronalaska
[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na antitela specifična za c-Met i njihove konjugate lekova koji su korisni u lečenju raka. Predmetni pronalazak dalje obezbeđuje postupak za proizvodnju inventivnog antitela ili njegovih konjugata antitelo-lek.
Stanje tehnike
[0002] Receptor faktora rasta hepatocita (HGFR), takođe poznat kao c-MET (za mezenhimalno-epitelnu tranziciju), je transmembranski protein RTK tipa I koji je prvi put identifikovan kao onkogeni TRP-MET fuzioni protein u hemijski transformisanim ćelijama humanog osteosarkoma. Ekspresija c-MET i sekrecija njegovog liganda, faktora rasta hepatocita (HGF ili faktor raspršenja, SF) mezenhimalnim ćelijama učestvuje u diferencijaciji, proliferaciji, preživljavanju, preuređivanju citoskeleta, odvajanju ćelija, rasprišivanju, pokretljivosti i invazivnosti (Birchmeier et al (2003) Nat.Rev.Mol.Cell Biol. 4, 915-925). Proteoglikan dekorin služi kao ligand za c-MET (Goldoni i sar (2009) J.Cell Biol. 185, 743-754). Na makroćelijskom nivou, c-MET ima različite funkcije kao što su npr. u embriogenezi, zarastanju rana i regeneraciji organa. Tumorigenezu karakterišu morfološke promene ćelija raka od epitelnog do mezenhimalnog fenotipa omogućavajući širenje metastatskih ćelija. Generalno, veća ekspresija c-MET se nalazi na metastatskim lezijama u poređenju sa primarnim tumorom, naglašavajući učešće c-MET u metastazama (Cipriani et al (2009) Lung Cancer 63, 169-179).
[0003] c-MET je heterodimer α -lanca- β -lanca povezan sa disulfidom, proteolitički odcepljen od jednog proteinskog prekursora. Sastoji se od velikog ekstracelularnog domena koji se sastoji od domena koji ima oblik propelera sa sedam lopatica, nazvanog SEMA, PSI domena povezanog sa pleksinima, semaforinima i integrinima, kao i od četiri IPT domena koji pokazuju homologiju sa imunoglobulinima, pleksina i transkripcionog faktora. Mesto cepanja furina između α - i β -lanca nalazi se između lopatica 4 i 5.
Bitopni transmembranski domen praćen je intracelularnim domenom tirozin kinaze. Vezivanje liganda za receptor indukuje njegovu dimerizaciju i autofosforilaciju ostataka 1230, 1235 i 1235 tirozina što dovodi do transfosforilacije tirozina 1349 i 1356, koji su mesta utovara proteina Src homologije 2 (SH2).
(Birchmeier et al (2003) Nat.Rev.Mol.Cell Biol.4, 915-925). Regrutovanje Src zatim aktivira intracelularne signalne kaskade, uključujući puteve P13K / AKT i Ras / MAPK.
[0004] HGF je heterodimer α -lanca- β -lanca vezan za disulfid koji se obrađuje iz jednog proteinskog prekursora (Lokker et al (1992) EMBO J. 11, 2503-2510). HGF α -lanac se sastoji od N-terminalnog domena praćenog sa četiri kringl domena, dok se HGF β -lanac sastoji samo od jednog homologog domena serinske proteinaze (SPH). HGF vezuje heparin proteoglikan i formira HGF-homodimere u rastvoru. Za njegovu interakciju sa c-MET predložena je dimerizacija indukovana ligandom u kompleksu 2: 2 c-MET: HGF (Niemann (2013) Biochim.Biophys.Acta 1834, 2195-2204.; Stamos et al. (2004) EMBO J. 23, 2325-2335). Postoje dva predviđena mesta vezivanja za HGF na c-MET: predloženo je da se HGF β -lanac veže sa malim afinitetom za lopatice dva i tri domena SEMA (Gherardi et al. (2003) Proc.Natl.Acad.Sci. USA 100, 12039-12044; Stamos et al. (2004) EMBO J. 23, 2325-2335), dok postoje dva predložena mesta vezivanja za visoko afinitetno vezivanje α -lanca HGF za c-MET. U prvom modelu predloženo je da IPT domeni 3 i 4 skraćenog, N-terminalnog fragmenta HGF, nazvanog NK1, imaju mesto vezivanja sa visokim afinitetom, dok je u drugom predloženom modelu vezivanje NK1 za lopatice 5 domena SEMA čine mesto vezivanja visokog afiniteta α -lanca HGF za c-MET Youles et al. (2008) J.Mol.Bio).377, 616-622).
[0005] Budući da c-MET učestvuje u tumoregenezi i metastazi, nedavno je razvijeno nekoliko antitela usmerenih na HGF i c-MET, od kojih su neka procenjena u kliničkim ispitivanjima (Prat et al. (2014) Biomedicines 2, 359- 383). HGF-neutralizijuća antitela, kao što su npr. rilotumumab i fiklatuzumab ciljaju samo ligand i stoga su neefikasni u raku sa konstitutivnom aktivacijom c-MET. Dalje, HGF se skladišti u velikoj količini kao neprerađeni proteinski prekursor u vanćelijskoj matrici tkiva što ometa efikasnost antitela na HGF. Što se tiče c-MET, antitela su razvijena na nekoliko epitopa receptora: Onartuzumab (oa 5D5, MetMAb, RO5490258) i emibetuzumab (LY2875358) su najnaprednija u kliničkom razvoju sa fazama III i II kliničkih ispitivanja, respektivno. Iako se vezujući epitop oba antitela nalazi unutar SEM A domena c-MET, monovalentni onartuzumab pretežno deluje preko HGF-kompeticije (Merchant et al. (2013) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 110, E2987-E2996) dok bivalentni emibetuzumab indukuje degradaciju receptora pored blokade vezivanja liganda (Liu et al. (2014) Clin.Cancer Res.20, 6059-6070.), Tri dodatna antitela na c-MET se trenutno ispituju u kliničkoj fazi I: dvovalentni ABT-700 (h224Gl1, ADDC-pojačani ARGX-111 (WT52-E) (Basilico et al. (2014) J.Clin.Invest 124, 3172-3186; Hultberg i sar. (2015) Cancer Res.75, 3373-3383) i bivalentno antitelo koje razgrađuje c-MET SAIT301 (Oh et al. (2012) Mol.Cells 34, 523-529.). U isto vreme dok ARGX-111 i emibetuzumab zauzimaju preklapajući epitop, tačno mesto vezivanja SAIT301 je nepoznato. Poslednji indukuje degradaciju c-MET putem LRlG-posredovanog lizozomskog puta (Lee et al. (2014) Oncogene 33, 34-43). Ovo je po svoj prilici isti način delovanja kao i za LMH 87 koji se vezuje za vrh propelera SEMA na lopaticama 3 i 4. (Greenall et al. (2012) PLoS.One.7, e34658; Prat et al. (2014) Biomedicines 2, 359-383). Međutim, SAIT301 i LMH 87 nemaju zajednički epitop. Drugo antitelo koje razgrađuje c-MET je DN30 koje se vezuje za četvrti IPT domen, indukuje razgradnju putem metaloproteaze ADAM-10 i ne takmiči se sa vezivanje liganda. (Vigna i sar. (2015) Mol, Oncol. 9, 1760-1772). Neka bivalentna antitela na c-MET sklona su pokretanju delimičnog ili potpunog agonizma koji zahteva monovalentne formate u delovima za terapijsku primenu. Neželjeni događaji antitela koje ciljaju c-MET, npr. onartuzumab, uglavnom su edemi i trombotični događaji koji su povezani sa blokadom c-MET / HGF ose koja reguliše integritet epitela i zarastanje rana.
[0006] Stoga postoji kontinuirana potreba za proširivanjem repertoara visoko afinitetnih antitela na c-MET i odgovarajućih konjuguta antitelo-lek za upotrebu u lečenju raka koji prevazilaze ograničenja antitela na c-MET dostupna u stanju tehnike.
SUŠTINA PRONALASKA
[0007] Predmetni pronalazači su neočekivano pronašli antitela na c-Met antitela ili njihove fragmente koji vezuju antitela, koji vezuju c-MET sa velikim afinitetom i mogu se koristiti za eflkasnu inhibiciju tumora koji eksprimiraju c -MET.
[0008] Predmetni pronalazak obezbeđuje antitela n c-MET ili njihove fragmente koji vezuju antigen, koji se vezuju za humani c-MET afinitetom od najmanje 10<-8>M.
[0009] Prema jednom ostvarenju, pronađena antitela ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, kao što je gore otkriveno, vezuju se za humanu c-MET varijantu N375S.
[0010] U jednom ostvarenju antitela prema pronalasku ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, kao što je gore otkriveno, vezuju se za epitop koji se nalazi u SEMA domenu humanog c-MET i inhibira signalizaciju c-MET.
[0011] Prema jednom ostvarenju, inventivna antitela ili fragmenti koji vezuje antigen, kao što je gore otkriveno, vezuje se za epitop koji se sastoji od IPT domena 1-4 humanog c-MET i inhibira signalizaciju c-MET.
[0012] U jednom ostvarenju, pronalaska antitela ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, kao što je gore otkriveno, inhibiraju vezivanje rekombinantnog humanog HGF za humani c-MET ECD u koncentraciji od 0,88xl0<-9>M ili manje za 50% u testu enzimski vezanog imunosorbenta koristeći HGF u čvrstoj fazi.
[0013] Prema jednoj realizaciji, fragmenti antitela koji vezuju antigen prema pronalasku su Fab, a F(ab')2, ili scFv.
[0014] Antitelo prema pronalasku je antitelo IgG tipa.
[0015] Antitela prema pronalasku kako su prethodno otkrivena sadrže aminokiselinske sekvence teškog i lakog lanca prema SEQ ID NO:1 i SEQ ID NO:2, ili SEQ 1D NO:3 i SEQ ID NO:4, ili SEQ ID NO: 5 i SEQ ID NO:6.
[0016] U jednom aspektu, inventivna antitela ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen su dalje spregnuti sa dijagnostičkim ili terapijskim agensom.
[0017] U jednom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje heterodimerni molekul imunoglobulina koji sadrži
(i) prvi i / ili drugi Fab ili scFv fragment koji se specifično vezuju za humani c-MET, i
(ii) region pregiba antitela, CH2 domen antitela i СН3 domen antitela koji sadrže hibridni interfejs domen interakcije protein-protein, pri čemu navedeni interfejs domen interakcije čine aminokiselinski segmenti СН3 domena prvog člana i aminokiselinski segmenti СН3 domena pomenutog drugog člana, pri čemu pomenuti interfejs domen protein-protein prvog lanca je u interakciji sa interfejsom protein-protein drugog lanca, homodimerizacijom odgovarajućih aminokiselinskih segmenata istog člana superfamilije imunoglobulina u okviru navedenih interakcije domena,
pri čemu prvi konstruisani lanac imunoglobulina ima polipeptidnu sekvencu (,,AG-SEED“):
GQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYK.TTPS
RQEPSQGTT TFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISL i drugi konstruisani lanac imunoglobulina ima polipeptidnu sekvencu ("GA-SEED"):
GQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLT
WAPVLDSDG SFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALFINHYTQKSLDR i pri čemu prvi i/ili drugi Fab ili scFv fragment obuhvataju najmanje dve aminokiselinske sekvence u skladu sa SEQ ID NO: 1, SEQ IDNO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6. SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8.
[0018] U jednom izvođenju, pronalazak heterodimernog molekula imunoglobulina je dalje spregnut sa dijagnostičkim ili terapijskim agensom.
[0019] Prema jednom izvođenju, heterodimerni molekul imunoglobulina prema pronalasku je spregnut sa citotoksinom.
[0020] U jednom izvođenju, heterodimerni molekul imunoglobulina prema pronalasku je afukozilovan.
[0021] U jednom izvođenju, inventivno antitelo ili heterdimerni molekul imunoglobulina, kao što je gore otkriveno, mogu biti za upotrebu u lečenju raka.
KRATAK OPIS CRTEŽA
[0003]
Slika 1: Epitopsko vezivanje inventivnih antitela ili heterodimernih molekula imunoglobulina
Slika 2: Rezultati ELISA istiskivanja HGF
Slika 3: Test citotoksičnosti za konjugate leka sa antitelom korišćenjem ne-kovaletno spregnutih sa citotoksinom duokarmicinom SA (DMSA). Rezultati ukazuju na citotoksične efekte koji zavise od ekspresije c-MET odgovarajućim testiranim ćelijskim linijama.
Slika 4: Test citotoksičnosti za konjugate leka sa antiteom korišćenjem nekovelantno spregnutih sa citotoksinom monometil auristatinom E (MMAE). Rezultati ukazuju na citotoksične efekte koji zavise od ekspresije c-MET odgovarajućim testiranim ćelijskim linijama Slika 5: Inhibicija signalizacije c-MET pomoću inventivnih antitela kako je procenjeno c-MET-specifičnim testom fosforilacije. Inhibicija je procenjena u koncentraciji od 167 nM antitela prema pronalasku ili heterodimernih molekula imunoglobulina, kako je naznačeno. MetMab® i emibetuzumab predstavljaju kontrole.
Slika 6: Kratak pregled osobina antitela. Približne KD antitela prema pronalasku na humani c-MET ECD (oa CS06: 3 х 10<-10>M, oa B10v5: 4.17x10<-10>M, B10v5 IgG1: 1,88x 10<-10>M, CS06 IgG1: 1.34xl0<-10>M). Inventivni biparatopski bispecifični heterodimerni molekul imunoglobulina koji sadrži Fab fragmente CS06 i B10v5 (”bp CS06xB10v5": 1.96х10<-11>М).
Slika 7: SEQ ID NO: 1
Slika 8: SEQ 1D NO: 2
Slika 9: SEQ ID NO: 3
Slika 10: SEQ ID NO: 4
Slika 11: SEQ ID NO: 5
Slika 12: SEQ ID NO: 6
Slika 13: SEQ ID NO: 7
Slika 14: SEQ ID NO: 8
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0024] I pored toga što je predmetni pronalazak detaljno opisan u nastavku, treba razumeti da ovaj pronalazak nije ograničen na ovde opisane posebne metodologije, protokole i reagense, jer oni mogu da variraju, Takođe treba razumeti da je ovde korišćena terminologija namenjena samo opisivanju određenih izvođenja, i nije namenjena ograničavanju obima predmetnog pronalaska koji će biti ograničen samo priloženim zahtevima. Ukoliko nije drugačije definisano, svi ovde korišćeni tehnički i naučni izrazi imaju ista značenja kao što ih obično shvata prosečan stručnjak u ovoj oblasti.
[0025] U nastavku će biti opisani elementi predmetnog pronalaska. Ovi elementi su navedeni sa određenim izvođenjima, međutim, treba razumeti da se oni mogu kombinovati na bilo koji način i u bilo kom broju da bi se stvorila dodatna izvođenja. Različito opisani primeri i poželjna izvođenja ne bi trebalo tumačiti tako da ograničavaju predmetni pronalazak samo na eksplicitno opisana izvođenja. Ovaj opis treba razumeti tkao da podržava i obuhvata realizacije koja kombinuju eksplicitno opisana izvođenja sa bilo kojim brojem otkrivenih i / ili poželjnih elemenata. Dalje, bilo koje permutacije i kombinacije svih opisanih elemenata u ovoj prijavi treba smatrati otkrivenim u opisu ove prijave, osim ako kontekst ne ukazuje drugačije.
[0026] U celoj ovoj specifikaciji i zahtevima koji slede, osim ako kontekst ne zahteva drugačije, pojam ,,sadrži“ i varijacije kao što su ,,obuhvata“ i „koji uključuje“, podrazumevaće se uključivanje navedenog člana, celog broja ili koraka, ali ne i izuzimanje bilo kog drugog člana koji nije naveden, celog broja ili koraka. Izraz "sastoji se od" je posebna realizacija izraza "sadrži", pri čemu je isključen bilo koji drugi član koji nije naveden, ceo broj ili korak. U kontekstu ovog pronalaska, termin "sadrži" obuhvata termin "sastoji se od".
[0027] Predlozi dati u opisu „jedan“ i ,,neki“ i „dati“ (na engleskom jeziku "a" i "an" i "the") i slične reference korišćene u kontekstu opisivanja pronalaska (posebno u kontekstu patentnih zahteva) treba tumačiti tako da pokrivaju i jedninu i množinu, osim ako ovde drugačije naznačeno ili kontekst to jasno osporava. Navođenje opsega vrednosti ovde je samo namenjeno da služi kao kratak metod pojedinačnog pozivanja na svaku zasebnu vrednost koja spada u opseg. Izuzev ako ovde nije drugačije naznačeno, svaka pojedinačna vrednost je uključena u specifikaciju kao da je ovde pojedinačno navedena. Nijednu terminologija u specifikaciji ne treba tumačiti za naznaku bilo kog elementa za koji nije tažena zaštita da je suštinski važna za primenu pronalaska
[0028] Nekoliko dokumenata je citirano u tekstu ove specifikacije. Svaki od ovde citiranih dokumenata (uključujući sve patente, prijave patenata, naučne publikacije, specifikacije proizvođača, uputstva itd.), bilo supra ili infra, ovime je u celosti uključen referencom. Ovde izneto ne treba tumačiti kao priznanje da pronalazak nema pravo na raniji datum ove objave na osnovu prethodnog pronalaska,
[0029] Opisani cilj rešen je predmetnim pronalaskom, tačnije predmetom priloženih zahteva.
[0030] Pronalazači su neočekivano otkrili da se antitelo na c-Met predmetnog pronalaska ili njegov fragment koji se vezuje za antigen veže c-MET sa velikim afinitetom može da se koristi za efikasnu inhibiciju tumora koji eksprimiraju c-MET.
[0031] Opisani ciljevi rešeni su prema prvom izvođenju pronalaskom antitela na c-MET ili njihovih fragmenata koji vezuju antigen, koji se vezuju za humani e-MET afinitetom od najmanje 10<-8>M. Na primer, antitela c-MET ili njihovi fragmenti koji se vezuju za antigen predmetnog pronalaska, vezuju se za c-MET afinitetom od najmanje 10<-8>M, npr. najmanje sa 1х10<-9>M, 2xl0<-9>M, 3xl0<-9>, 4x-10<-9>M, 5xl0<-9>M, 6xl0<-9>M, 7xl0<-9>M, 8xl0<-9>M, 9х10<-9>М ili sa afinitetom od najmanje oko 10<-8>M do oko 10<-10>М. Kako se koristi za pronalazak antitela na c-MET predmetnog pronalaska, termin "antitelo" odnosi se na molekule imunoglobulina i imunološki aktivne delove molekula imunoglobulina, tj. molekule koji sadrže mesto vezivanja antigena koji imunospecifično vezuje antigen. Izraz se takođe odnosi na antitela koja se sastoje od dva teška lanca imunoglobulina i dva laka lanca imunoglobulina, ili na primer na monoklonsko antitelo, himerno antitelo, CDR-kalemljeno antitelo, humanizovano antitelo. Izraz "fragment koji vezuje antigen (antigen-vezujući fragment)", kako se koristi u ovom pronalasku, odnosi se na Fab, Fab', F(ab')10.5, Fv, Fv povezan sa disulfidom, scFv, antitelo sa jednim domenom (dAb), dijatelo, multispecifično antitelo, dvostruko specifično antitelo, bispecifično antitelo, njegov funkcionalno aktivni fragment koji vezuje epitop i pojedinačne lance (npr. Fluston et al., Proc. Natl. Acad, Sci. U.S.A., 85, 5879-5883 (1988) i Bird et al., Science 242, 423-426 (1988), koji su ovde uključeni kao referenca). (Videti, generalno, Hood et al„ Immunology, Benjamin, N.Y., 2ND ed, (1984), Harlow and Lane, Antibodies. A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory (1988) i Hunkapiller and Hood, Nature, 323, 15-16 (1986), koji su ovde uključeni referencom). c-MET, kako se ovde koristi, odnosi se na MET proto-onkogen, receptor-tirozin-kinazu (UniProtKB baza podataka antri P08581), koji se takođe može nazivati receptorom faktora rasta hepatocita.
[0032] Izraz fragment Fab se odnosi na fragment antitela koji se vezuje za antigen antitela prema pronalasku koji može npr. da bude dobijen tretmanom papaina na imunoglobulin tipa IgG, pri čemu nastaju dva fragmenta Fab i domen Fc. Funkcionalni aspekti i metode za dobijanje fragmenata Fab opisani su npr. u „Applications and Engineering of Monoclonal Antibodies" by D.J. King, CRC Press. 1998, chapter 2.4.1; Zaho et al. Protein Expression and Purification 67 (2009) 182-189; S.M. Andrew, J.A. Titus, Fragmentation of immunoglobulin G, Curr. Protoc. Cell Biol. (2003) Unit 16.14 (Chapter 16). Heterodimerni bispecifični molekul imunoglobulina predmetnog pronalaska može npr. takođe sadrže prvi scFv fragment koji se specifično vezuje za EGFR. Termin "scFv", kako se koristi u ovom pronalasku, odnosi se na molekul koji sadrži promenljivi domen teškog lanca antitela (ili region; VH) i varijabilni domen (ili region; VL) lakog lanca antitela, povezan linkerom, i nema konstantne domene, na primer scFv fragment prema pronalasku može npr. da obuhvati molekule za vezivanje koji se sastoje od jednog promenljivog domena (VL) lakog lanca ili njegovog dela, i jednog promenljivog domena (VH) teškog lanca ili njegovog dela, pri čemu je svaki promenljivi domen (ili njegov deo) izveden iz istih ili različitih antitela. scFv molekuli poželjno sadrže linker umetnut između VH domena i VL domena, koji može npr. da obuhvati peptidnu sekvencu koja se sastoji od aminokiselina glicina i serina. Na primer, peptidna sekvenca može da sadrži aminokiselinsku sekvencu (Gly4Ser)n, pri čemu je n ceo broj od 1-6, npr. n može da bude 1, 2, 3, 4, 5 ili 6, poželjno n = 4. scFv molekuli i postupci za njihovo dobijanje poznati su u tehnici i opisani su, na primer, u U.S. Pat. br. 5,892,019, Ho et al. 1989. Gene 77:51; Bird et al. 1988 Science 242:423; Pantoliano et al.
1991. Biochemistry 30:10117; Milenic et al.1991. Cancer Research 51:6363; Takkinen et al. 1991. Protein Engineering 4:837.
[0033] Prema jednom izvođenju, antitelo pronalaska ili njegov fragment koji vezuje antitelo, kao što je gore otkriveno, vezuje se za npr. mišji ili humani humani c-MET, poželjno za humani c-MET koji ima aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 11, ili humani c-MET, koji obuhvata c-MET pune dužine i c-MET čiji je signalni peptid uklonjen, npr sa odcepljenim aminokiselinama 1-24, uključujući c-MET varijantu N375S. Na primer, antitelo pronalaska ili fragment koji se vezuje za antigen, kao što je gore otkriveno, specifično se vezuje za c-MET varijantu N375S (rs33917957), ali može npr. takođe da se vezuje za varijante c-MET kao što su one otkrivene u Nat Genet. 1997 May;16(l):68-73, e.g. c-MET R970C (MET<R970C>), c-MET T992I (МЕТ<T9921>), МЕТ<M1149Т>, MET<V1206L>, MET<V1238I>, MET<D1246N>, MET<Y1248C>, MET<L213V>,MET<D1246H>, MET<Y1248H>, МЕТ<М1268Т>, MET<A320V>, MET<N375S>sa otcepljenim signalnim amino peptidima ( npr. amino kiseline I -24 od UniProtKB P08581).
[0034] U jednom izvođenju, antitela prema pronalasku kao što je prethodno otkriveno, ili njegov fragment koji se vezuje za antigen, vezuje se za epitop koji se nalazi u domenu SEMA humanog с-МЕТ i inhibira signalizaciju с-МЕТ. Na primer, antitelo prema pronalasku ili njegov fragment koji vezuje antigen može da se veže za epitop koji se sastoji od aminokiselina 52-496 zrelog humanog с-МЕТ (UniProtKB Р0858I), npr. za linearni ili konformacioni epitop koji sadrži aminokiseline 52 - 496 , ili npr. u aminokiselinama 27- 515 humanog c-MET čime se inhibira signalizacija c-MET. Termin "epitop”, kako se koristi u predmetnom pronalasku, obuhvata kako linearni epitop za koji u slučaju linearnog epitopa antitelo prepoznaje uzastopne aminokiseline, tako i konformacioni epitop za koji antitela prepoznaju aminokiseline u meri u kojoj usvajaju odgovarajuću konfiguraciju ili konformaciju unutar zrelog i pravilno presavijenog proteina. Konformacioni epitopi su određeni i sa trodimenzionalnom strukturom proteina, kao što je npr. humani с-МЕТ, i njegovom primarnoin aminokiselinskom sekvencom. Epitop obično uključuje najmanje 3, i češće, najmanje 5 ili 8, 10 aminokiselina, npr. epitop može da sadrži 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 aminokiselina. Tipično, epitop takođe ima dužinu manju od 20 ostataka (npr. aminokiselina ili nukleotida), kao što je manje od 15 ostataka ili manje od 12 ostataka.
[0035] Antitelo pronalaska može npr. da se veže za epitop koji se nalazi u SEMA domenu sa afinitetom od najmanje 10<-8>M, npr. sa najmanje 1х10<-9>M, 2xl0<-9>M, 3х10<-9>, 4x-10<-9>M, 5xl0<-9>M, 6x10<-9>M, 7xl0<-9>M, 8X10<-9>M, 9X10<-9>M.
[0036] Prema jednom izvođenju, antitela prema pronalasku ili njegov fragment koji vezuje antigen, kao što je gore otkriveno, vezuje se za epitop koji se nalazi u domenima imunoglobulin-pleksin-transkripcije (IPT) 1-4 humanog с-МЕТ i inhibira signalizaciju c-MET. Na primer, IPT domeni humanog c-Met (UniProtKB P08581) sadrže aminokiseline 562-655 (IPT domen 1), 656-739 (IPT domen 2), 741-842 (IPT domen 3) i aminokiseline 856-952 (IPT domen 4). Antitelo prema pronalasku može npr. da se veže za epitop obuhvaćen domenom 1, IPT domenom 2, IPT domenom 3 ili IPT domenom 4 sa afinitetom kako je gore otkriveno, npr. sa afinitetom od najmanje 10<-8>M, npr. sa najmanje 1x10<-9>M, 2xl0<-9>M, 3х10<-9>, 4x-10<-9>M, 5xl0<-9>M, 6xl0<-9>M, 7xl0<-9>M, 8xl0<-9>M, 9х10<-9>М. U jednom aspektu, antitelo prema pronalasku ili njegov fragment koji vezuje antigen, vezuje se za IPT domen 1 i inhibira signalizaciju c-Met. Antitelo prema pronalasku ili njegov fragment koji vezuje antigen, kao što je gore otkriveno, može npr. takođe da veže više
1
od jednog IPT domena ako je epitop konformacioni epitop. Na primer, antitelo prema pronalasku ili njegov fragment koji vezuje antigen može da se veže i za epitop koji se nalazi u IPT domenima 1 i 2, ili 2 i 3, ili 3 i 4, ili 1 i 4, ili 1 i 3, ili 2 i 4, ili npr. u IPT domenima 1, 2, 3 i 4.
[0037] Prema jednom izvođenju, antitela prema pronalasku ili njegov fragmenta koji vezuje antigen, kao što je gore otkriveno, inhibira vezivanje rekombinantnog humanog HGF rekombinanta za ekstracelularni domen (ECD) humanog c-MET pri koncentraciji od 0,9x10<-9>M ili manjoj, npr. od oko 0,1х10<-9>М ili manjoj, 0,2x10<-9>M ili manjoj, 0,3xl0<-9>M ili manjoj, 0,5x10<-9>M ili manjoj, 0,75xl0<-9>M ili manjoj, za 50% u testu enzimski vezanog imunosorbenta (ELISA) korišćenjem HGF u čvrstoj fazi. Na primer, inhibicija vezanja HGF pomoću antitela prema pronalasku ili fragmenta koji vezuje antigen, kao što je gore otkriveno za humani c-MET ECD, može da bude procenjena korišćenjem bioslojne interferometrije čiji su principi opisani u Analytical Biochemistry 361 (2007) 1-6. Na primer, mogu se koristiti različite komercijalno dostupne tehnologije, kao što su Biacore, 2000, 3000, T100, Flexchip, S51, and A100 or dotLab (Axela Biosensors), MultiSPRinter (Toyobo), Proteomic Processor (Lumera), SPRi-Plex (GenOptics), BIND (SRU Biosystems), Epic (Corning), ProteOn XPR (Bio-Rad) od kojih svaki može da se koristi u skladu sa uputstvima proizvođača. U jednom primeru može da se upotrebi Octet Red96 platforma (ForteBio) opremljena softverom Octet Data Acquisition and Analysis. Merenja mogu da se izvode npr. na 30 ° C uz pomoć orbitalne mešalice od 1000 o / min sa senzorom u zapremini od 200 pl u crnim mikropločama sa 96 ležišta u skladu sa uputstvima proizvođača. Na primer, ELISA MaxiSorp®ploče mogu biti obložene sa oko 1 do oko 1,5 pmol rekombinantnog HGF preko noći na 4<0>C zatim sledi blokiranje Maxisorb® ploča sa 1 -5% BSA (npr.1%, 2%, 3%, 4%, 5% BSA) BSA u PBS-T. Biotinilisani c-MET ECD u koncentraciji od oko 0.1 pmol do oko 2 pmol, npr. od oko 0,125pmol, 0,15pmol, 0,175 pmol, 0,2 pmol, 0,25 pmol, 0,3 pmol, 0,4 pmol, 0,5 pmol, 0,6 pmol.0,7 pmol, 0,8 pmol, 0,9 pmol, 1,0 pmol do oko 1,25 pmol, 1,5 pmol, 1,75 pmol, 2 pmol, mogu potom npr. da se inkubiraju sa serijskim razblaženjima antitela prema pronalasku ili njihovim fragmentima koji vezuju antigen u koncentraciji od oko 0,2 nM do oko 200 nM, npr. od oko 0,2 nM, 0,3 nM, 0,4 nM, 0,5 nM, 0,6 nM, 0,7 nM, 0,8 nM, 0,9 nM, 1,0 nM, 1,25 nM, 1,5 nM, 2 nM, 2,5 nM, 3 nM, 3,5 nM, 4 nM, 5 nМ, 6nM, 7nM, 8nM, 9 nМ, 10 nM do oko 15 mM, 17,5 nM, 20 nM, 25 nM, 30 nM, 32,5nM, 35 nM, 40 nM, 42,5 nM, 45 nM, 47,5 nM, 50 nM, 55 nM, 60 nM, 65 nM, 70 nM, 75 nM, 80 nM, 85 nM, 90 nМ, 95 nM, 100 nM, 125 nM 150 nM, 175 nM, 200 nМ, ili npr. od oko 15 nM, 17,5 nM, 20 nM, 25 nM, 30 nM, 32,5 nM, 35 nM, 40 nM, 42,5 nM, 45 nM, 47.5 nM, 50 nM do oko 55 nM, 60 nM, 65 nM, 70 nM.75 nМ, 80 nM, 85 nM, 90 nM, 95 nM, 100 nM, 125 nM 150 nМ, 175 nM, 200 nM, ili npr. od oko 55 nM, 60 nM, 65 nM, 70 nM, 75 nM, 80 nM, 85 nM, 90 nM, 95 nM, 100 nM do oko 125 nM 150 nM, 175 nM, 200 nM. Vezivanje biotinilisanog с-МЕТ ECD na imobilizovani HGF može zatim, npr. da bude vizuelizovano pomoću HRP-konjugovanog streptavidina u razblaženju od oko 1: 100 do oko 1: 10000. npr.
1: 250, 1: 500, 1: 1000, 1: 1500, 1: 2000, 1: 2500, 1: 3000, 1: 4000, 1: 4500, 1: 5000, 1: 7500, 1: 8000, 1: 9000, nakon čega sledi npr. dodavanje rastvora supstrata Ultra TMB ELISA i sumporne kiseline. Rezultujuća apsorbancija c-MET ECD vezivanja za HGF bez dodavanja antitela na c-MET prema pronalasku ili njihovih fragmenata koji vezuju antigen može se definisati kao 100% vezivanje HGF. Na primer, kontrole mogu da obuhvate SEED izotip kontrolna antitela na lizozim kokošjeg jajeta (HEL) u koncentraciji od oko 0,2 nM do oko 200 nM, npr. 0,25 nM, 5 nM, 10 nM, 50 nM, 75 nM, 100 nM, 125 nM, 150 nM, 175 nM. Podaci mogu da budu iscrtani kao % vezivanja HGF prema logaritmu koncentracije antitela pronalaska ili njihovih fragmenata koji vežu antigen. Na primer, rekombinantni HGF korišćen u gornjim testovima može da se dobije iz komercijalnih izvora, ili npr. mogu se proizvesti u ćelijama insekata kako je opisano u Biotechnol. Prog.
2000, 16, 146-151. C-MET ECD fragment koji može npr. da se koristi u ELISA testu, kao što je gore otkriveno, sadrži aminokiseline 24-963 humanog c-MET, ili npr. aminokiseline 52-952 humanog c-MET (npr. c-MET kojem nedostaje signalni peptid i transmembranski domen, ili npr. komercijalno dostupan c-MET ECD-Fc protein).
[0038] U jednom izvođenju fragment antitela koji vezuje antigen prema pronalasku kao što je gore otkriveno su npr. Fab fragment, ili F(ab')2fragment, ili scFv fragment koji imaju ista svojstva vezivanja kao antitela prema pronalasku kao što je gore otkriveno. Izraz "fragment koji vezuje antigen (antigen-vezujući fragment)", kako se koristi u predmetnom pronalasku, takođe može da odnosi na Fd fragment koji se sastoji od VH i CH1 domena, ili Fv fragment koji se sastoji od VL i VH domena jednog kraka antitela, ili dAb fragment (videti npr. Ward et al (1989) Nature 341544-46), koji sadrži VH domen, ili npr. izolovani hipervarijabilni region (CDR) lakog i teškog lanca sadržan u bilo kojoj od SEQ ID NO: 1 - SEQ ID NO: 8 antitela prema pronalasku. Termin "scFv", kako se koristi u ovom pronalasku, odnosi se na molekul koji sadrži varijabilni domen (ili region; VH) teškog lanca antitela i varijabilni domen (ili region; VL) lakog lanca antitela, povezani linkerom, i koji nema konstantne domene, na primer scFv fragment prema pronalasku može npr. da obuhvati molekule za vezivanje koji se sastoje od jednog promenljivog domena (VL) lakog lanca ili njegovog dela, i jednog promenljivog domena (VH) teškog lanca ili njegovog dela, pri čemu je svaki promenljivi domen (ili njegov deo) izveden iz istih ili različitih antitela. scFv molekuli poželjno sadrže linker umetnut između VH domena i VL domena, koji može npr. da obuhvati peptidnu sekvencu koja se sastoji od aminokiselina glicina i serina. Na primer, peptidna sekvenca može da sadrži aminokiselinsku sekvencu (Gly4Ser)n, pri čemu je n ceo broj od 1-6, npr. n može da bude 1, 2, 3, 4, 5 ili 6, poželjno n = 4. scFv molekuli i postupci za njihovo dobijanje poznati su u tehnici i opisani su, na primer, u U.S. Pat. No. 5,892,019, Ho et al. 1989. Gene 77:51; Bird et al. 1988 Science 242:423; Pantoliano et al. 1991. Biochemistry 30:10117; Milenic et al. 1991. Cancer Research 51:6363; Takkinen et al.1991. Protein Engineering 4:837. Izraz "di-scFv", kako se koristi za fragmente koji vezuju antigen prema pronalasku odnosi se na dva scFv fragmenta koja su međusobno povezana (spregnuta) preko linkera, npr. kao što je otkriveno u Cancer Research 54, 6176-618,. December 1, 1994, or Chem Commun (Camb).2007 Feb 21;(7):695-7. Fragmenti antitela prema pronalasku koji vezuju antigen mogu npr. takođe da uključuju i dijatela, pri čemu se pojam "dijatela" odnosi na male fragmente antitela sa dva mesta za vezivanje antigena, koji fragmenti sadrže promenljivi domen (VH) teškog lanca povezan sa promenljivim domenom (VL) lakog lanca u istom polipeptidnom lancu (VH-VL). Korišćenjem linkera koji je suviše kratak da bi se omogućilo uparivanje između dva domena u istom lancu, domeni su prisiljeni da se uparuju sa komplementarnim domenima drugog lanca i stvore dva mesta za vezivanje antigena (videti npr. EP 0 404097 B1; WO 93/11161, and Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)). Na pritner, fragmenti koji vezuju antigen prema pronalasku mogu se dobiti digestijom sa peptidazama kao što su pepsin ili papain: Pepsin će devesti do proteolitičkog cepanja ispod disulfidnih veza i nastaće fragmenti F(ab')2 antitela, dok će proteolitičko cepanje papainoin, koje raskida iznad disulfidnih veza, rezultiraće u dva Fab fragmenta. Shodno tome, F(ab')2 fragment je dimer Fab-a koji je sam po sebi laki lanac povezan disulfidnom vezom sa VH-CH1. F(ab')2 može da se redukuje pod blagim uslovima da bi se prekinula disulfidna veza u zoni pregiba, pretvarajući tako dimer F(ab)'2 u Fab' monomer. Gore navedeni fragmenti antitela su definisani u smislu digestije intaktnog antitela sa pepsinom i papainom, međutim, takvi fragmenti mogu da se sintetišu de novo bilo hemijski bilo primenom metodologije rekombinantne DNK.
[0039] Antitelo prema pronalasku je antitelo IgG tipa. Izraz "antitelo IgG tipa", koji se koristi za antitelo prema pronalasku, odnosi se na antitela klase IgG, koja kod Ijudi uključuju četiri podklase (IgGl, IgG2, IgG3 i lgG4) (Alberts, B. et al., Chapter 23: The Immune System, In Molecular Biology of the Cell, 3d Edition, Garland Publishing, Inc., New York, N. Y.). Antitelo prema pronalasku može prema tome da bude antitelo IgGl, IgG2, IgG3 ili lgG4 tipa, poželjno antitelo prema pronalasku je antitelo IgGl tipa. Antitelo IgGl tipa prema pronalasku može, na primer, dalje da obuhvati mutacije u svom Fc regionu, kao što su one otkrivene u Duncan et al., Nature 332:563 (1988), Sondermann et al., Nature 406:267 (2000); Wines et al., J. Immunol. 164:5313 (2000); Canfield and Morrison, J. Ехр. Med. 173:1483 (1991); Tao et al., J. Ехр. Med.178:661 (1993), npr. aminokiseline na EU indeksnim položajima 330 i 331, ili npr. supstitucije na EU indeksnim položajima 234, 235 i 237 radi redukcije efektorskih funkcija koje posreduje Fc smanjenjem vezivanja FcyRI, FcgRlla, ili Fcglll i/ili komplementa Clq.
[0040] Prema jednom izvođenju, antitelo prema pronalasku ili njegov fragment koji vezuje antigen sadrži najmanje jednu od aminokiselinskih sekvenci prema SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, ili SEQ ID NO: 8. Na primer, laki lanci antitela prema pronalasku ili njegov fragment koji veže antigen mogu da sadrže najmanje jedan od amino kiselinske sekvence prema ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, ili SEQ ID NO: 7 i težak lanac može sadržati najmanje jednu od aminokiselinskih sekvenci prema SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, or SEQ ID NO: 6, ili SEQ ID NO: 8.
1
[0041] Antitelo prema pronalasku sadrži lake i teške lance koji sadrže aminokiselinske sekvence prema SEQ ID NO: 1 i SEQ ID NO: 2, ili SEQ ID NO: 3 i SEQ ID NO: 4, ili SEQ ID NO: 5 i SEQ ID NO: 6, ili SEQ ID NO: 7 i SEQ ID NO:8. Laki i teški lanci antitela prema pronalasku, kao što je gore otkriveno, mogu npr. takođe da sadrže kinetičke varijante koje se sastoje od jedne ili više, npr. jedne, dve, tri ili više sledećih mutacija u njihovim odgovarajućim aminokiselinskim sekvencama u skladu sa EU indeksom (EU numeracija): Na primer, laki i teški lanci antitela ili njihovi fragmenti koji vezuju antigen, kao što je gore otkriveno sadrže kinetičke mutacije, koje mogu npr. izmeniti brzinu disocijacije antitela prema pronalasku nakon vezivanja za c-MET. Na primer, sekvenca lakog lanca prema SEQ ID NO: I može da sadrži jednu ili više, npr. jednu, dve, tri, četiri, pet, šest, sedam, osam, devet, deset, jedanaest ili sve sledeće mutacije : V3A, Т11V, T14S, R18S, R43Q, L45P, E74D, T85N, S86T, A90T, T92S, GIOOA, pri čemu je numerisanje izvršeno prema IMGT numeraciji. Sekvenca teškog lanca prema SEQ ID NO: 2 može da sadrži mutaciju Q6E prema IMGT numeraciji, npr. sekvenca lakog lanca prema SEQ ID NO: 3 može da obuhvati jednu ili više, npr. jednu, dve, tri, četiri ili sve mutacije (u IMGT numeraciji): Q1S, L2Y, S7P, K44Q, 15IV, V71I, ili npr. sekvenca teškog lanca prema SEQ ID NO: 4 može da obuhvati jednu ili više, npr. jedna, dve, tri, četiri, pet, šest ili sve mutacije(u IGMT numeraciji) Q5V, A19V, М1151, M115L, М115V, М115А, М115F ili npr. sekvenca lakog lanca prema SEQ ID NO: 5 može da obuhvati jednu ili više, npr. jedna, dve, tri, četiri, pet, šest, sedam, osam ili sve mutacije (u IMGT numeraciji) EIS, P2Y, E17Q, T20R, P22T, R45K, L51V, T85N, S93R, F103Y, ili npr. sekvenca teškog lanca prema SEQ ID NO: 8 može sadržati jednu ili više, npr. jedna, dve, tri, četiri, pet, šest ili sve mutacije (u IMGT numeraciji) Q3R, Y37N, N661, Q110S, D111.1 Y, Y11.2D, S126Y. Sekvence lakog i teškog lanca, kao što je gore otkriveno, mogu npr. obe da sadrže jednu ili više prethodno navedenih mutacija, ili npr. samo sekvence teškog ili lakog lanca, kako je prethodno navedeno, obuhvaćene antitelom prema pronalasku ili njegovim fragmentom koji vezuje antigen, mogu da sadrže jednu ili više, ili sve gore navedene mutacije. Shodno tome, antitelo prema pronalasku ili njegov fragment koji vezuje antigen kao što je prethodno navedeno, može da sadrži sekvence lakog i teškog lanca koje sadrže jednu ili više (npr. jednu, dve, tri ili četiri) prethodno navedenih mutacija.
[0042] U jednom primeru antitelo prema pronalasku je antitelo IgG tipa i sadrži laki i teški lanac koji sadrži aminokiselinske sekvence prema SEQ ID NO: 7 i SEQ ID NO: 8 (CS06), ili SEQ ID NO: 5 i SEQ ID NO: 6 (B10v5) kako je gore navedeno i vezuje se za humani c-MET sa afinitetom od najmanje 10<-9>M, npr. 3x10<-10>, 4x-10<-10>M, 5x10<-10>M, 6xl0<-l0>M. 7x10<-10>M, 8x10<-10>M, 9xl0<-10>M. U jednom primeru, heterodimemog molekul imunoglobulina prema pronalasku je bi-paratopni bispecifični heterodimemi molekul imunoglobulina, koji sadrži prvi Fab ili scFv fragmen t koji obuhvata SEQ ID NO: 7 i SEQID NO: 8 i drugi Fab ili scFv fragment koji sadrži SEQ 1D NO: 5 i SEQ ID NO: 6, pri čemu prvi Fab ili scFv fragment može da se spoji sa AG-SEED-om, a drugi Fab ili scFv fragment može da se spoji sa GA-SEED- om, ili npr. pri čemu prvi Fab ili scFv fragment može da se spoji sa GA-SEED-om, a drugi Fab ili scFv može da se spoji sa AG-SEED-om. Termin "SEED" kako se koristi za, ili u kontekstu heterodimernog molekula prema pronalasku, odnosi se na Сн3 domene heterodimere proizvedene razmenom fragmenata (SEED), kako je otkriveno u WO 2007/110205 A2, Protein Engineering, Design & Selection vol.23 no.4 pp.
195-202, 2010. Ovi heterodimerni molekuli su derivati humanih IgG i IgA СНЗ domena i stvaraju komplementarne humane SEED Сн3 heterodimere koji se sastoje od naizmeničnih segmenata humanih IgA i IgG Сн3 sekvenci. Dobijeni par SEED Сн3 domena se preferencijalno povezuje da bi formirao heterodimere u odnosu 1: 1 kada se eksprimira u ćelijama sisara da bi se formirala „SEED tela“(Sb). Izraz "GA-SEED" ovde ukazuje na to da SEED molekul počinje sa sekvencom IgG, praćenom sekvencom IgA, dok se "AG-SEED" odnosi na činjenicu da molekul SEED počinje sekvencom izvedenom iz IgA, praćenom sekvencom izvedenom iz IgG. Na primer, bi-paratopni bispecifični heterodimemi molekul imunoglobulina vezuje se za humani c-MET sa afinitetom od najmanje 1х10<-9>М, npr. sa najmanje 2x10<-11>, 3х-10<-11>M, 4x10<-11>M, 5xl0<-11>M, 6х10<-11>М, 7х10<-11>М, 8х10<-11>М, 9х10<-11>М).
[0043] Prema jednom izvođenju, antitela prema pronalasku ili njegov fragmenta koji vezuje antigen, kao što je gore navedeno, dalje je povezan sa dijagnostičkim ili terapeutskim agensom. Izraz dijagnostički agens koji se koristi za antitela pronalaska ili njegov fragment koji vezuje antigen odnosi se na entitet koji može da se koristi za detekciju antitela prema pronalasku iii njegovog fragmenta koji veže antigen, posebno vezan za c-MET, poželjno za humani c-MET i / ili c-MET varijante kako su gore navedene. Na primer, dijagnostički agens može da bude radioaktivni izotop, fluorescentna sonda, fluorofora, hemoluminescentni agensi, enzimi, supstrati enzima, kofaktori enzima, inhibitori enzima, boje, joni metala ili biotin ili streptavidin, koji omogućavaju detekciju antitela prema pronalasku ili njegovog fragment koji vezuje antigen vezan za c-MET. Izraz "spojen/spregnut", koji se koristi za antitela prema pronalasku ili njegov fragment koji vezuje antigen, odnosi se na činjenicu da boja, radioizotop, fluorescentne sonde, fluorofora, hemoluminescentni agens, enzimi, supstrati enzima, kofaktori enzima, inhibitori enzima, boje, joni metala, biotin ili streptavidin mogu npr. da budu nekovalentno vezani ili spojeni preko jonskih ili hidrofobnih interakcija ili kovalentno vezani za antitelo pronalaska ili njegovog fragment koji vezuje antigen. Na primer, spajanje oznaka koje se mogu detektovani kako je prethodno navedeno, kao što su fluorescentne sonde, boje ili enzimi, sa antitelom prema pronalasku ili njegovim fragmentom koji vezuje antigen, kao što je prethodno dato, može da se izvede prema postupcima poznatim u tehnici, kao što su oni otkriveni u Methods Cell Biol. 2001;63:185-204; MethodsMol Biol.2010;588:43-8; Curr Protoc Mol Biol.2001 Мау; Chapter 11 :Unit 11.1.
[0044] Primeri za oznaku koja se može detektovati prema pronalasku, a koja može da se spregne sa antitelima prema pronalasku ili njegovim fragmentom koji vezuje antigen uključuju alkalnu fosfatazu, peroksidazu rena, beta-galaktozidazu, Tobacco Etch Virus Nuklearna inkluziona a endopeptidaza ("TEV
1
proteaza"). Fluorofore koji mogu npr. da se spregnu sa antitelom pronalaska ili njegovog fragmenta koji vezuje antigen, kao što je gore otkriveno, mogu da budu jedna od 1,8-ANS, 4-metilumbeliferon, 7-amino-4-metilkumarin, 7-hidroksi-4-metilkumarin, Akridin, Alexa Fluor 350 ™, Alexa Fluor 405 ™, AMCA. АМСА-Х. ATTO Rho6G, ATTO Rho11, ATTO Rhol2, ATTO Rhol3, ATTO Rhol4, ATTO RholOl, Pacific Blue, Alexa Fluor 430™, Alexa Fluor 480™, Alexa Fluor 488™, BODIPY 492/515, Alexa Fiuor 532™, Alexa Fluor 546™, Alexa Fluor 555™, Alexa Fluor 594™, BODIPV 505/515, Cy2, cyQUANT GR, FITC, Fluo-3, Fluo-4, GFP (EGFP), mHoneydew, Oregon Green™ 488, Oregon Green™ 514, EYFP, DsRed, DsRed2, dTomato, Cy3.5, Phycoerythrin (PE), Rhodamine Red, mTangerine, mStrawberry, mOrange, mBanana, Tetrametilrodamin (TRITC), R-Fikoerithrin, ROX, DvLight 594, Calcium Crimson, Alexa Fluor 594™, Alexa Fluor 610™, Texas Red, mCherry. mKate, Alexa Fluor 660™, Alexa Fluor 680™ alofikocijanin, DRAQ-5, karboksinaftofluorescein, C7. DyLight 750, Cellvue N1R780, DM-NERF, Eozin, Eritrozin, Fluorescein, FAM, Hidroksikumarin, IRDyes (IRD40, IRD 700, IRD 800), JOE, Lissamine rodamin B, Marina Blue, Metoksi kumarin, Nafto fluorescein, PiMPO, 5-karboksi-4 ', 5'-dihlor-2', 7'-dimetoksi fluorescein, 5- karboksi-2', 4', 5', 7'-tetrahlorfluorescein, 5-karboksifluorescein, 5-karboksirodamin, 6-karboksirodamin, 6-karboksitetrametil amino, Cascade Blue, Cy2, Су3, Cy5, 6-FAM, danzil hlorid, НЕХ, 6-JOE, NBD (7-nitrobenz-2-oksa-I, 3-diazol), Oregon Green 488, Oregon Green 500, Oregon Green 514, Pacific Blue, ftalna kiselina, tereftalna kiselina, izoftalna kiselina, krezil brza ljubičica, krezil plava ljubičica, briljantna krezil plava, para-aminobenzoeva kiselina, eritrozin, ftalocijanin, azometini, cijanini, ksantini, sukcinilfluoresceini, kriptati retkih zemnih metala, europijum trisbipiridin diamin, europijum kriptat, diamin, dicijanini ili La Jolla plava boja. Flurofore koje mogu npr. da se spregnu sa antitelom pronalaska ili fragmenta koji vezuje antigen, kao što je gore otkriveno, takođe mogu da sadrže kvantne tačke. Termin kvantna tačka, kako se koristi u ovom pronalasku, odnosi se na jedan sferni nanokristal poluprovodničkog materijala gde je radijus nanokristala manji ili jednak veličini ekscitona Borovog radijusa za taj poluprovodnički materijal (vrednost ekscitona Borovog radijusa može da se izračuna na osnovu podataka koji se nalaze u priručnicima koji sadrže informacije o svojstvima poluprovodnika. poput CRC Handbook of Chemistry and Physics, 83rd ed., Lide. David R. (Editor), CRC Press, Boca Raton, Fla. (2002)). Kvantne tačke su poznate u tehnici, kao što su opisane u referencama, kao što su We!ler, Angew. Chem. Int. Ed. Engl.32: 41-53 (1993), Alivisatos, J. Phys. Chem.100: 13226-13239 (1996), and Alivisatos, Science 271: 933-937 (1996). Kvantne tačke mogu npr. biti od oko 1 nm do oko 1000 nm prečnika, npr. 10 nm, 20 nm, 30 nm, 40 nm, 50 nm, 60 nm, 70 nm, 80 nm, 90 nm, 100 nm, 150 nm, 200 nm, 250 nm, 300 nm, 350 nm, 400 nm, 450 nm, ili 500 nm, poželjno najmanje oko 2 nm do oko 50 nm, još poželjnije QD su prečnika najmanje oko 2 nm do oko 20 nm (na primer oko 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ili 20 nm). QD karakterišu njihova u osnovi uniformna veličina nanometara. često pokazujući približno 10% do 15% polidisperzije ili opsega veličine. QD je sposoban da
1
emituje elektromagnetno zračenje nakon ekscitacije (tj. QD je fotoluminescentni) i uključuje ,jezgro“ jednog ili više prvih poluprovodničkih materijala, a može biti okružen ,,omotačem“ drugog poluprovodničkog materijala. QD jezgro okruženo poluprovodničkim omotačem naziva se QD Jezgro /omotač“. Materijal oko "omotača" će poželjno imati energiju zabranjene zone koja je veća od energije zabranjene zone materijala jezgra i može da bude izabran tako da ima atomski razmak blizak onome u "jezgru" supstrata. Jezgro i / ili omotač mogu da budu poluprovodnički materijal, uključujući, ali bez ograničenja, one iz grupe II-VI (ZnS, ZnSe, ZnTe, US, CdSe, CdTe, HgS, HgSe, HgTe, MgS, MgSe, MgTe, CaS, CaSe, CaTe, SrS, SrSe, SrTe, BaS, BaSe, BaTe i slično) i III-V (GaN, GaP, GaAs, GaSb, InN, InP, InAs, lnSb i slično) i IV (Ge, Si i slični) materijali, PbS, PbSe i njihova legura ili njihove smeše. Poželjni materijali za omotače uključuju ZnS. Kvantne tačke mogu npr. da budu povezane sa antitelom pronalaska ili njegovim fragmentom koji vezuje antigen bilo kojim postupkom poznatim u tehnici, kao što su postupci otkriveni u Nanotechnology. 2011 Dec 9;22(49):494006; Colloids and Surfaces B: Biointerfaces 84 (2011) 360-368.
[0045] U jednoj realizaciji, antitelo pronalaska ili njegov fragment koji vezuje antigen može npr. da bude spregnut (povezan) sa radioizotopom kao što su<47>Ca,<14>С,<l37>Cs,<l57>Cr,<57>Co,<60>Co,<67>Cu,<67>Ga,<123>I,<125>I,<l29>I,<l3!>I,<32>P,<75>Se,<85>Sr,<35>S,<20l>Th, ili<3>H, poželjno su ugrađeni radioizotopi u dodatni molekul, kao što je npr helator. Tipični helatori koji mogu npr. da se upotrebe kao dodatni molekul kovalentno vezan za supstrat pronalaska koji sadrži amino donore su DPTA, EDTA (etilendiamin-tetrasirćetna kiselina), EGTA (etilenglikol-O, O'-bis (2-aminoetil) - N, N, N', N'-tetrasirćetna kiselina, NTA (nitrilotrisirćetna kiselina), HEDTA (N- (2-hidroksietil) -etilendiamin-N, N', N'-trisirćetna kiselina), DTPA (2- [bis [2- [bis ( karboksimetil) amino] -etil] amino] sirćetna kiselina) ili DOTA (1,4,7,10-tetraazaciklo-dodekan-l,4,7,10-tetrasirćetna kiselina).
[0046] U jednom aspektu, antitelo prema pronalasku ili njegov fragment koji vezuje antigen mogu da se spregnu sa terapijskim sredstvom. Izraz "terapeutsko sredstvo (agens)" prema pronalasku, npr. kao što se koristi za antitelo prema pronalasku ili njegov fragment koji vezuje antigen, odnosi se na svako jedinjenje korisno u terapeutske svrhe. Na primer, terapeutsko sredstvo ili jedinjenje pronalaska može biti bilo koje jedinjenje koje se daje pacijentu za lečenje maligniteta, kao što je npr. rak. Primeri za rak uključuju, ali se ne ograničavaju na, nesitnoćelijski rak pluća (NSCLC), mezoteliom, neresektabilni mezoteliom, rak dojke, adrenokarcinom želuca ili GEJ, rak želuca, timom, rak jajnika, adenoidni cistični karcinom, metastatski adenoidni cistični karcinom, rak mokraćne bešike, svetloćelijski rak bubrega, karcinom skvamoznih ćelija glave / vrata, karcinom skvamoznih ćelija pluća, maligni melanom. rak jajnika, rak pankreasa, rak prostate, rak bubrežnih ćelija, sitnoćelijski rak pluća (SCLC) ili trostruko negativan rak dojke, Iimfoproliferativni poremećaji, akutna limfoblastična leukemija (ALL), akutna mijelocitna leukemija (AML), hronična
1
limfocitna leukemija (CLL), hronična mijelocitna leukemija (CML), difuzni limfom veiikih B-ćeiija (DLBCL), EBV-pozitivni DLBCL, primarni medijastinalni limfom veiikih B-ćelija, limfom velikih B-ćeiija bogat T-ćeiijama / histiocitima, folikularni limfom, Hodgkinov limfom (HL), mantle ćelijski limfom (MCL), multipli mijelom (MM), protein leukemije-l mieloidnih ćelija (Mcl- 1), mijelodisplastični sindrom (MDS), ne-Hodgkinov limfom (NHL) ili mali iimfocitni limfom (SLL), karcinom Merkelovih ćelija (MCC) ili skvamozni rak glave i vrata (SHNC).
[0047] Terapeutska sredstva uključuju, ali nisu ograničena na, hidrofilna i hidrofobna jedinjenja. Shodno tome, terapeutski agensi mogu npr. da obuhvate molekule slične lekovima, proteine, peptide, antitela, fragmente antitela, aptamere i male molekule, Proteinski terapeutski agensi uključuju npr. peptide, enzime, strukturne proteine, receptore i druge ćelijske proteine ili protein u cirkulaciji, kao i njihove fragmente i derivate, čija aberantna ekspresija dovodi do jednog ili više poremećaja. Na primer, terapeutska sredstva prema pronalasku takođe uključuju, kao jednu specifičnu realizaciju, hemoterapeutska sredstva (agense), citostatska ili citotoksična sredstva. Na primer, citostatički agensi koji mogu biti povezatti sa antiteiom pronalaska ili njegovog fragmenta koji vezuje antigen su jedno od sredstava za alkiliranje, antimetaboliti, antibiotici, mitotski inhibitori, hormoni ili antagonisti hormona. Sredstva za alkilovanje rnogu npr. da obuhvate Busulfan (Myleran), Karboplatin (Paraplatin), hlorambucil, cisplatin, Ciklofosfamid (Cytoxan), Dacarbazine (DTIC-Dome), Estramustin fosfat, Ifosfamid, Mehloretamin (Nitrogen Mustard), Melfalan (Fenvlalanine Mustard), Prokarbazin, Tiotepa, Uracil Mustard, antimetaboliti mogu da npr. da obuhvate Kladribin, Citarabin (Cytozine Arabinoside), Floksuridin (FUDR, 5-Fluorodeoxyuridine), Fludarabin, 5-Fluorouracil (5FU), Gemcitabin, Hidroksiurea, 6-Merkaptopurin (6MP), Metotreksat (Amethopterin), 6-Tioguanine, Pentostatin, Pibobrontan, Tegafur, Trimetreksat, Glukuronat, antibiotici mogu npr uključuju Aclarubicin, Bleomicin, Dactinomicin (Actinomycin D), Daunorubicin, Dokorubicin (Adriamycin), Epirubicin, Idarubicin, Mitomicin C, Mitokantron, Plicamicin (Mithramycin), ili mitotički inhibitori mogu npr. uključuju etopozid (VP-16, VePesid), tenipozid (VM-26, Vumon), vinblastin, vinkristin, vindesin, hormone ili antagoniste hormona koji mogu npr. da se koriste uključujući Buserelin, kombinovan konjski estrogen (premarin), kortizon, hlortriansen (Tace), deksametazon (Decadron), dietilstilbestrol (DES), etinil estradiol (Estinyl), fluoksimesteron (Halotestin), flutamid, Goserelin acetat (Zoladex), Hidroksiprogesteron Caproat (Delalutin), Leuprolid, Medroksiprogesteron Acetat (Provera), Megestrol Acetat (Megace), Prednizon, Tamoksifen (Nolvadex), Testolakton (Teslac), Testosteron. Citostatična ili antineoplastična jedinjenja kao što su ona koja su prethodno opisana, poznata su stanju tehnike i mogu npr. da se nađu u D. S. Fischer & T. M. Knobf (1989), The cancer chemotherapy handbook (3rd ed.). Chicago: Year Book Medical and Association of Community Cancer Centers (Spring, 1992), Compendia-based drug bulletin, Rockville, MD. Dijagnostičko ili terapijsko sredstvo kao što je gore otkriveno, npr. oznaka koja se može detektovati kako je gore opisano, ili terapeutsko sredstvo kao što je gore otkriveno, može npr. da bude
1
povezano sa najmanje jednim lakim lancem antitela prema pronalasku ili sa bar jednim teškim lancem antitela prema pronalasku. Na primer, dijagnostičko ili terapijsko sredstvo, kao što je gore otkriveno, može da bude vezano za jedan laki lanac, ili za svaki od lakih lanaca antitela prema pronalasku, ili npr. na jedan teški lanac ili svaki od teških lanaca antitela prema pronalasku, njegovog fragmenta koji vezuje antigen.
[0048] U jednom aspektu, dijagnostičko ili terapeutsko sredstvo može biti kovalentno vezano za antitelo pronalaska ili njegov fragment koji vezuje antigen, npr. selektivnom hemijskom modifikacijom ostataka cisteina ili histidina u antitelu prema pronalasku ili njegovom fragmentu koji veže antigen. Na primer, disulfidi pregibnog regiona antitela prema pronalasku mogu se selektivno redukovati kako bi slobodni sulfhidrili bili dostupni za ciljano obeležavanje. Na primer, specifična za lokaciju redukcija sa merkaptoetilaminom (MEA) može se izvršiti kako je opisano u J J. Biolg. Chemistry Vol. 275, No. 39, lssue of September 29, pp. 30445-30450, 2000. Na primer, MEA (Pierce) može da se rastvori u 0,1 M natrijum fosfatu, pH 6,0, 5 mM DTPA u koncentraciji od 50 mM. i zatim doda rastvoru u 10-strukom višku iznad koncentracije antitela prema pronalasku (npr. 300 μМ). Tada može da se omogući nastavak redukcije na sobnoj temperaturi, npr. 60 min. Nakon redukcije, rastvor antitela prema pronalasku može da se propusti kroz kolonu Bio-Spin 30 koja se može prethodno ekvilibrisati u 0,1 M TMAP, pH 8,2, 25 μМ DTPA tokom 2 min pri 150 х g. Spajanje terapijskog ili dijagnostičkog agensa, kao što je gore otkriveno, može se zatim izvršiti u reakciji redukcije koristeći merkaptoetilamin u npr. 0,1 M tetrametilamonijum fosfatu, pH 8,5 bez dietilentriamin pentasirćetne kiseline na sobnoj temperaturiu trajanju oko 20 minuta. Antitelo prema pronalasku može npr. da bude prisutno u 10 -strukom višku u odnosu na terapijsko ili dijagnostičko sredstvo kao što je gore otkriveno, npr. antitelo pronalaska može da bude prisutno u koncentraciji od oko 200 μM. Neizreagovani reagensi mogu npr. da se uklone centrifugiranjem koristeći kolone Bio-Spin 30 prethodno ekvilibrisane sa 0,1 M amonijum acetatom, pH 6,5, tokom 2 minuta na 150 х g, pri čemu se centrifugiranje može ponavljati dok se ne uklone svi materijali male molekulske težine. Altemativno, specifična konjugacija na mestu kako je opisano u Methods Mol Biol.
2013; 1045: 189-203 korišćenjem tiol-reaktivnih linkera se može primeniti za spajanje dijagnostičkog ili terapijskog sredstva kao što je gore otkriveno sa antitela prema pronalasku i / ili njegovih fragmenata koji vezuju antigen, kao što je gore otkriveno. U jednom aspektu, dijagnostički ili terapijski agensi kao što je gore otkriveno mogu npr. da se spregnu sa antitelom pronalaska ili njegovim fragmentom koji vezuje antigen korišćenjem enzimski posredovane biokonjugacije. Na primer, sprezanje biokonjugacijom posredstvom sortaza A (srtA) ili transglutaminaza (TGase) mogu se koristiti za sprezanje dijagnostičkog ili terapeutskog agensa sa antitelom prema pronalasku ili njegovim fragmentom koji vezuje antigen (videti npr. Biomolecules 2013, 3, 870-888; WO2012059882 Al, WO2014145441 Al). SEEDtela mogu npr. takođe da se modifikuju na analogan način koristeći gore otkrivene tehnike.
1
[0049] Prema jednoj realizaciji, heterodimerni molekul imunoglobulina sadrži prvi i / ili drugi Fab ili scFv fragment koji se specifično vezuje za humani c-MET, kao što je prethodno otkriveno, i pregibni region antitela, domen antiteia Сн2 i domen antitela Сн3 koji sadrže hibridni domen interfejsa interakcije proteinprotein, pri čemu svaki od navedenih domena interfejsa interakcije čine aminokiselinski segmenti СН3 domena prvog člana i aminokiselinski segmenti СН3 domena pomenutog drugog člana, pri čemu je navedeni domen interfejsa protein-protein prvog lanca u interakciji sa interfejsom protein-protein drugog lanca homodimerizacijom odgovarajućih aminokiselinskih segmenata istog člana superporodice imunoglobulina u pomenutim domenima interakcije, pri čemu prvi inženjeringom dobijen lanac ili član imunoglobulina sadrži polipeptidnu sekvencu ("AG-SEED"):
GQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEP SQGTT TFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISL i drugi inženjeringom proizvedeni imunoglobulinski lanac ili član sadrže polipeptidnu sekvencu ("GA-SEED"):
GQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVL DSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNHYTQKSLDR pri čemu prvi i/ili dugi fragment Fab ili scFv sadrže barem dve aminokiselinske sekvence prema SEQ ID NO: I, SEQ IDNO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ 1D NO: 6. SEQ ID NO: 7, ili SEQ ID NO: 8.
[0050] Na primer, heterodimerni molekul imunoglobulina inože da sadrži jedan Fab ili scFv fragment koji sadrži SEQ ID NO: 1 i SEQ ID NO: 2, ili npr. SEQ ID: 3 i SEQ ID 4, ili npr SEQ ID NO: 5 i SEQ ID NO: 6, ili e.f. SEQ ID NO: 7 i SEQ ID NO: 8 kao što su prethodno gore otkriveni. Heterodimerni molekul imunoglobulina kako je gore otkriven može npr. sadrže dva Fab, ili dva scFv, ili jedan Fab i jedan scFv, od kojih svaki može sadržati NO: 1 i SEQ ID NO: 2, ili npr. SEQ ID NO: 3 i SEQ ID NO 4, ili npr. SEQ ID NO: 5 i SEQ ID NO: 6, ili npr. SEQ ID NO: 7 i SEQ ID NO: 8. Na primer, prvi Fab može da sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 1 i SEQ 1D NO: 2, a drugi Fab možeda sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 3 i SEQ ID NO 4, ili na primer prvi Fab može da sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 5 i SEQ ID NO: 6, a drugi Fab može da sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 1 i SEQ ID NO: 2, ili npr. SEQ ID NO: 3 i SEQ ID NO: 4, npr. prvi Fab može da sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 7 i SEQ ID NO: 8, a drugi Fab može npr. da sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 1 i SEQ ID NO: 2, ili SEQ ID NO: 3 i SEQ ID NO: 4, ili npr. SEQ ID NO: 5 i SEQ ID NO: 6, ili u jednom primeru prvi Fab može da sadrži sekvence lakog i teškog lanca prema SEQ ID NO: 1 i SEQ 1D NO: 2, ili SEQ ID NO: 3 i SEQ ID NE: 4, ili npr SEQ ID D NO: 5 i SEQ ID NO: 6. a drugi Fab sadrži sekvence teškog i lakog lanca prema SEQ ID NO: 7 i SEQ ID NO: 8. U jednom primeru, heterodimerni molekul imunogiobulina prema pronalasku, kako je
2
prethodno opisano sadrži samo jedan Fab, ili scFv, npr. može da sadrži Fab-GA-SEED i AG-SEED bez Fab ili scFv, ili npr. scFv-GA-SEED i AG-SEED bez Fab ili scFv, ili npr. GA-SEED bez Fab ili scFv i Fab- AG-SEED, ili npr. GA-SEED bez Fab ili scFv i scFv-AG-SEED, pri čemu fragmenti Fab ili scFv sadrže sledeće parove lakog i teškog lanca SEQ ID NO: 1 i SEQ ID NO: 2, ili npr. SEQ ID NO: 3 i SEQ ID NO 4, ili npr. SEQ ID NO: 5 i SEQ ID NO: 6, ili npr. SEQ ID NO: 7 i SEQ ID NO: 8, koje mogu dalje da obuhvate mutacije kao što je prethodno opisano. U jednom izvođenju, fragmenti koji vezuju antigen prema pronalasku, kao što je prethodno opisano, mogu npr. dalje da budu spojeni sa GA-SEED-om ili AG-SEED- om da bi se nakon heterodimerizacije formiralo SEEDtelo (SEEDbody) koje npr. sadrži dva fragmenta prema pronalasku koja vezuju antigen, kao što je gore otkriveno. Na primer, Fab ili scFv prema pronalasku mogu se kovalentno spojiti sa GA-SEED-om, ili alternativno sa AG-SEED-om preko peptidne veze sa peptidnim linkerom kako je ovde opisano, pri čemu Fab, ili scFv sadrži sekvence lakog lanca i teškog lanaca prema pronalasku, kako je gore otkriveno, npr Fab ili scFv mogu da sadrže jednu od sledećih kombinacija lakog i teškog lanca SEQ 1D NO: 1, SEQ 1D NO: 2; SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6; ili SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8. SEEDtelo prema pronalasku može npr. da sadrži GA-SEED spojen sa anti-cMET BIO (koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NOs: 1, 2) i AG-SEED spojen sa anti-cMET klonom F06 (koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQID NOs : 3,4), ili npr. sadrže GA-SEED spojen za anticMET klonom B10v5 (koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NOs: 5,6) i AG-SEED spojen za anti-cMET klonom CS06 (koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NOs: 7, 8) ili npr. AG-SEED spojen za anti-cMET BIO (koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NOs: 1, 2) i GA-SEED spojen sa anti-cMET klonom F06 (koji sadrži aminokiselinsku sekvenca prema SEQ ID NOs: 3, 4), ili npr. sadrži AG-SEED spojen sa anti-cMET klonom B10v5 (koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQID NOs: 5,6) i GA-SEED spojen sa anti-cMET klonom CS06 (koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ IDNOs: 7, 8), pri čemu laki i teški lanci SEEDtela mogu da budu vezani za dijagnostičko ili terapijsko sredstvo kao što je gore otkriveno. Na primer, SEEDtelo prema pronalasku, može da sadrži jedan, dva, tri ili četiri laka lanea spregnuta ili povezana sa terapijskim ili dijagnostičkim agensom kao što je gore otkriveno i / ili jedan, dva, tri ili četiri teška lanca spregnuta ili povezana za terapijski ili dijagnostičkim agensom kao što je gore otkriveno. SEEDtela kao što su gore otkrivena mogu npr. prema jednom izvođenju da obuhvataju kinetičke varijante kako su gore otkrivene koje sadrže jednu ili više, npr. jednu, dve, tri ili više prethodno opisanih mutacija e-u svojim odgovarajućim aminokiselinskim sekvencama.
[0051] U jednoj realizaciji, antitela prema pronalasku, kao što je prethodno otkriveno, ili heterodimemi molekuli imunoglobulina, kao što je gore otkriveno, su spregnuti sa citotoksinom. Na primer, citotoksini povezani sa antitelom pronalaska ili heterodimernog molekula imunoglobulina, kao što je gore otkriveno, mogu npr. takođe da budu označeni kao „korisni tereti“. Citotoksini koji mogu npr. da se koriste prema pronalasku, mogu se grupisati u dve glavne klase: Prva klasa uključuje citotoksine koji remete sklop mikrotubula, a druga klasa ciljane strukture DNK citotoksina. Tipično, citotoksini će biti povezani sa antitelom prema pronalasku, njegovim fragmentom koji vezuje antigen ili sa heterodimernim molekulom imunoglobulina, kao što je gore otkriveno, pomoću linkera. Izraz "linker" ili "linker peptid" odnosi se na sintetičku ili veštačku aminokiselinsku sekvencu koja povezuje ili povezuje dva molekula, kao što su npr. dve polipeptidne sekvence koje povezuju dva polipeptidna domena ili npr. protein i citostatski lek, ili toksin. Izraz "sintetički" ili "veštački", kako se koristi u ovom pronalasku, odnosi se na sekvence aminokiselina koje se ne javljaju u prirodi. Na primer, linker koji se može kovalentno vezati za heterodimerni molekul imunoglobulina prema pronalasku ili antitelo pronalaska kako je prethodno opisano, može biti razdvojiv ili nerazdvojiv. Izraz "razdvojiv", kako se koristi u ovom pronalasku, odnosi se na linkere koji se mogu razdvojiti proteazama, kiselinama ili redukcijom disulfidnog tela (npr. posredstvom glutationa ili glutationsenzitivno). Na primer. razdvojivi linkeri mogu da sadrže valin-citrulinske linkere, hidrazonske linkere ili disulfidn linkere. Nerazdvojivi linkeri koji mogu npr. da budu kovalentno vezani za supstrat pronalaska koji sadrži donore amino sadrže maleimidokaproilni linker za MMAF (mc-MMAF), N-maleimidometilcikloheksan-l-karboksilat (MCC) ili merkapto-acetamidokaproilni linkeri. Na primer, linkeri koji su kovalentno povezani sa heterodimernim bispecifičnim molekulom imunoglobulina prema pronalasku mogu takođe da uključuju linkere kako je opisano u WO 2010/138719, iii npr. one opisane u WO 2014/093379.
[0052] Shodno tome, citotoksini koji mogu npr. da budu kovalentno vezani za linker prema pronalasku uključuju doksorubicin, kaliheamicin, auristatin, niatanzin duoarmicin i njihove analoge, α -amaitin, tubulizin i njihove analoge. Metode za kovalentno vezivanje citotoksina za linkere poznati su u tehnici i mogu npr. da se izvedu prema metodi opisanoj u Mol. Pharmaceutics 2015, 12, 1813-1835. Citotoksini mogu npr. takođe da se nekovalentno spregnu sa antitelom pronalaska koji sadrži deo humanog IgG upotrebom Fab-anti-humanih Fc fragmenata konjugovanih sa citotoksinima preko nerazdvojivih linkera. Na primer, ntogu da se koriste komercijalni preparati takvih Fab-anti-humanih Fc-citotoksin konjugata koji sadrže citotoksin a -amanitin (npr. Fab-anti-humani Fc-NC-AAMT koji proizvodi Moradec). Principi upotrebe i procene takvih konjugata lekova mogu npr. da se izvedu kako je opisano u J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci.2016 Мау 24.
[0053] Prema jednom izvođenju, heterodimerni molekul imunoglobulina, kao što je gore otkriveno, je afukozilovan. Izraz "afukozilovani", kako se koristi za heterodimerni molekul imunoglobulina prema pronalasku, odnosi se na heterodimerni molekul imunoglobulina koji su bez šećera fukoze, ili koji npr. imaju samo male količine fuzoze u svojoj strukturi N-glikana, npr. manje od 5%, 4%, 3%, 2% ili manje od 1% fukozilovanih N-glikana u bilo kom preparatu heterodimernog molekula imunoglobulina prema pronalasku, kao što je prethodno otkriveno. U jednom aspektu, antitelo pronalaska, kao što je prethodno otkriveno, može da bude afukozilovano. Tipično, N-glikan vezan za Asn<297>humanog IgGl, npr. pronalaska antiteia kao što je gore otkriveno, značajno pojačava njegovo vezivanje za FcyRIIIa i time poboljšava ćelijsku citotoksičnost(ADCC) zavisnu od antitela. Afukozilovani heterodimemi molekuli imunoglobuiina prema pronalasku, kao što je prethodno otkriveno, mogu npr. da se dobiju korišćenjem ćelijskih linija za njihovu proizvodnju koje nemaju GDP-fukoza transporter SLC35C1, kao što je opisano u Glycobiology.2012;22:897-911, poput ćelija CHO-gmt5. Alternativno, koekspresija ako je GDP-6-dezoksi-D-likso- heksuloza reduktaza opisana u Glycobiology. 2010 Dec;20( 12): 1607-18 može da se koristi za proizvodnju afukozilovanih heterodimernih molekula imunoglobulina, ili antitela pronalaska i / ili njegovih fragmenata koji vezuju antigen, kao što je prethodno opisano.
[0054] U jednom aspektu, ovo otkriće obezbeđuje izolovane polinukleotide koji kodiraju antitela pronalaska kao što je gore otkriveno i sadrže aminokiselinske sekvence prema SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, ili bilo koju od njihovih odgovarajućih kinetičkih varijanti kako je prethodno opisano. Izraz "izolovan", kako se koristi sa polinukleotidima prema pronalasku, odnosi se na polinukleotide koji su odvojeni od npr. sastojaka, ćelija i drugog, u kojima su polinukleotidi u prirodi normalno povezani, npr. izolovani polinukleotid sa najmanje 80%, 90%, 95 tež. % čistoće , tj. bez kontaminantnih sastojaka. Na primer, izolovani polinukleotidi pronalaska mogu da se odnose na molekul DNK koji je odvojen od sekvenci sa kojima je neposredno susedan (u pravcima 5 'i 3') u prirodnom genomu organizma iz kojeg je izveden. Na primer, „izolovani polinukieotid“ može da sadrži molekul DNK umetnut u vektor, kao što je plazmid, ekspresioni plazmid ili vektor virusa, ili integrisan u genomsku DNK prokariota ili eukariota. Shodno tome, ovo otkriće takođe obezbeđuje vektore ekspresije koji sadrže najmanje jedan polinukleotid pronalaska. U jednom aspektu, ovo otkriće se takođe odnosi na upotrebu pomenutih polinukleotida u proizvodnji antitela pronalaska ili heterodimernog molekula imunoglobulina, kao što je gore otkriveno. U jednom aspektu, ovo otkriće se takođe odnosi na proizvodnju antitela pronalaska ili heterodimernog molekula imunoglobulina, kao što je gore otkriveno, pomoću ekspresije u heterolognim ćelijskim linijama. Na primer, ekspresioni plazmidi koji se mogu koristiti za ekspresiju antitela pronalaska, njegovih fragmenata koji vezuju antigen ili heterodimemog molekula imunoglobuiina kao što je gore otkriveno mogu npr. da sadrže pCMV, pcDNA, p4X3, p4X4, p4X5, p4X6, pVL1392, pVL1393, pACYC177, PRS420, ili ako se koriste vektorski sistemi bazirani na virusima, npr. pBABEpuro, pWPXL, рХР -izvedeni vektori, mogu npr. da sadrže pCMV, pcDNA, p4X3, p4X4, p4X5, p4X6, pVL1392, pVL1393, pACYC177, PRS420, ili ako treba da se koriste vektorski sistemi bazirani na virusima, npr. pBABEpuro, pWPXL, рХР -izvedeni vektori.
2
[0055] U jednom aspektu, ovo otkriće obezbeđuje najmanje jednu ćeliju domaćina koja sadrži najmanje jedan polinukleotid pronalaska kao što je gore otkriveno, npr. polinukleotid iii vektor ili ekspresioni vektor koji kodira najmanje jedan od SEQ ID NO: 1, SEQID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 i njegovu upotrebu u proizvodnji antitela pronalaska ili heterodimernog molekula imunoglobulina, kao što je gore otkriveno. Na primer, ćelija domaćin za upotrebu prema pronalasku može da bude ćelija kvasca, ćelija insekata ili ćelija sisara. Na primer, ćelija domaćin pronalaska tnože da bude ćelija insekata izabrana od Sf9, Sf21, S2, Hi5, or BTI-TN-5B1-4 ćelija, ili npr. ćelija domaćin pronalaska može da bude ćelija kvasca izabrana od Saccharomyces cerevisiae, Hansenula polymorpha, Schizosaccharomyces pombe, Schwanniomyces occidentalis, Kluyveromyceslactis, Yarrowia lipolytica and Pichiapastoris, ili npr. ćelija domaćin pronalaska tnože da bude ćelija sisara izabrana od HEK293, HEK293T, HEK293E, HEK 293F, NSO, рег.С6, MCF-7, HeLa, Cos-1, Cos-7, PC-12, ЗТЗ, Vero, vero-76, РСЗ, U87, SAOS-2, LNCAP, DU145, A431, A549, B35, H1299. HUVEC, Jurkat, MDA-MB-231, MDA-MB-468, MDA-MB-435, Caco-2, CHO, CHO-K1, CHO-Bli, CHO-DG44, BHK, AGEl.HN, Namalwa, WI-38, MRC-5, HepG2, L-929, RAB-9, SIRC, RK13, 11В11. ID3, 2.4G2, A-10, B-35, C-6, F4/80, IEC-18, L2, MHICI, NRK, NRK-49F, NRK-52E, RMC, CV-1, BT, MDBK, CPAE, MDCK.l, MDCK.2. i D-17,
[0056] Prema jednoj realizaciji, heterodimerni molekul imunoglobulina, kao što je gore otkriveno, ili antitelo prema pronalasku, kao što je gore otkriveno. mogu da se koriste za proizvodnju leka za lečenje karcinoma. Na primer, antitelo molekula heterdimernog imunoglobulina iz pronalaska, povezan sa citotoksinom, kao što je gore otkriveno. može da se formuliše u farmaceutsku kompoziciju za primenu kod pacijenta obolelog od raka kome je to potrebno. Farmaceutska kompozicija prema pronalasku može npr. da sadrži heterodimerni molekul itnunoglobulina prema pronalasku koji je povezan sa citotoksinom, kao što je gore otkriveno, ili konjugat antitelo-lek, kao što je gore otkriveno (npr. antitelo pronalaska, spregnuto sa citotoksinom, kao što je gore otkriveno) u koncentraciji od oko 10mg/ml, 20mg/ml, 25mg/ml, 30mg/ml, 35mg/ml, 40mg/ml, 45mg/ml, 50mg/ml, 55mg/ml, 60mg/ml to about 70mg/ml, 75mg/ml, 80mg/ml, 90mg/ml, 100mg/ml, 112mg/ml, 125mg/ml, 150mg/ml, 175mg/ml, 200mg/ml, ili npr. od oko 10 mg/ml do oko 20mg/ml, 25mg/ml, 30mg/ml. 35mg/ml, 40mg/ml, 45mg/ml, 50mg/ml, 55mg/ml, 60mg/ml do oko 70mg/ml, 75mg/ml, 80mg/ml. 90mg/ml, 100mg/ml, 112mg/ml, 125mg/ml, 150mg/ml, 175mg/ml, 200mg/ml, ili npr. 20mg/ml, 25mg/ml, 30mg/ml, 35mg/ml, 40mg/ml, 45mg/ml, 50mg/ml, 55mg/ml, 60mg/ml do oko 70mg/ml, 75mg/ml, 80mg/ml, 90mg/ml, 100mg/ml, 112mg/ml, 125mg/ml, 150mg/ml, 175mg/ml, 200mg/ml.
[0057] Farmaceutska kompozicija prema ovom otkriću može dalje da sadrži jednu ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa. Farmaceutski prihvatljivi ekscipijensi za različite oblike doziranja dobro su poznati u tehnici i uključuju nosače, razblaživače, punila, vezivne agense, lubrikanse, sredstva za dezintegraciju, sredstva za klizenje, boje, pigmente, sredstva za maskiranje ukusa, zaslađivače, arome, plastifikatore i sve prihvatljive pomoćne supstance kao što su pojačivači apsorpcije, pojačivači penetracije, površinski aktivne supstance, ko-površinski aktivne supstance i specijalizovana ulja. Pogodni pomoćni sastojci mogu npr. da budu odabrani na osnovu oblika doziranja, predviđenog načina primene, predviđene brzine oslobađanja i pouzdanosti proizvodnje. Primeri uobičajenih vrsta ekscipijenasa uključuju različite polimere, voskove, kalcijum fosfate, šećere i slično.
[0058] U jednom aspektu, otkriće takođe obezbeđuje postupak lečenja koji uključuje davanje subjektu terapeutski efikasne količine farmaceutske kompozicije kako je gore otkriveno. Na primer, inventivni postupak lečenja može da obuhvati primenu osobi oboleloj od raka kojoj je to potrebno od oko 0,001 mg / kg do oko 50 mg / kg farmaceutske kompozicije prema pronalasku, ili od oko 0,005 mg / kg do oko 45 mg / kg ili od oko 0,01 mg / kg do oko 40 mg / kg, ili od oko 0,05 mg / kg do oko 35 mg/ kg, ili od oko 0,1 mg / kg, 0,5 mg / kg, 0,75 mg / kg, 1 mg / kg, 1,5 mg / kg, 2 mg / kg, 2,5 mg / kg, 3 mg / kg, 4 mg / kg, 5 mg / kg, 6 mg / kg 7 mg / kg, 8 mg / kg, 9 mg / kg , 10 mg / kg, 12,5 mg / kg, 15 mg / kg, 17,5 mg / kg, 20 mg / kg, 22,5 mg / kg, 25 mg / kg do oko 26 mg kg /, 27 mg / kg, 28 mg / kg, 29 mg / kg, 30 mg / kg, 32,5 mg / kg, 35 mg / kg, 37,5 mg / kg, 40 mg / kg, 42,5 mg / kg, 45 mg / kg. Kako se koristi, termin "mg / kg" odnosi se na mg farmaceutske kompozicije prema pronalasku / kg telesne težine u ovom otkriću. Na primer, farmaceutski efikasna količina farmaceutske kompozicije prema pronalasku može da se primeni osobi koja je obolela od raka. Farmaceutski efikasna količina zavisi od pojedinca, vrste raka koji se leči, telesne težine i starosti pojedinca, stepena ozbiljnosti bolesti ili načina primene, npr. i.v., ili subkutano. U jednom aspektu, ovo otkriće takođe obezbeđuje postupak lečenja pacijenta obolelog od raka antitelom prema pronalasku kao što je gore otkriveno, ili sa heterodimernim molekulom imunoglobulina prema pronalasku kako je gore otkriveno. Na primer, postupak može da obuhvati davanje pacijentu kome je to potrebno (npr. pacijentu sa rakom) farmaceutske kompozicije koja sadrži antitelo prema pronalasku u koncentraciji i doziranju kao što je gore otkriveno. Na primer, u jednom aspektu, farmaceutska kompozicija prema pronalasku može da se koristi kod pacijenata koji pate od tumora koji eksprimira visoke nivoe c-MET, ili npr. bilo koju od ovde otkrivenih varijanti c-MET. Termin "visoki nivoi", kako se koristi u metodi lečenja prema pronalasku odnosi se na nivoe ekspresije c-MET koji su najmanje 2x, 5x, 10x, 15x, 20x, 25x, 50x viši nego u kontrolnom tkivu (npr. tkivo dobijeno od zdravih pojedinaca, ili npr. ćelijska linija koja ne eksprimira c-MET kako je procenjeno qPCR. Vestern blot-om, imunohistohemija). Na primer, ekspresija c-Met u tumoru pacijenta može da se odredi u tumorskom tkivu koje se može dobiti iglenom aspiracijom ili hirurškom biopsijom pomoću imunohistohemije ili cirkulišuća tumorska DNK (ctDNA) u krvi pacijenta može da se koristi za procenu amplifikacija c-MET koje su korelaciji sa visokom ekspresijom c-Met, kao npr. opisano
2
u Mol Cancer Res. 2016 Jun;14(6):539-47. Dobijanje uzorka tumorskog tkiva ili uzorka krvi od osoba obolelih od raka nije deo ovog pronalaska.
[0059] U jednom aspektu, antitela pronalaska, njihovi fragmenti koji vezuju antigen ili SEEDtela, kao što je gore otkriveno, mogu se npr. koristiti u dijagnostičke svrhe za otkrivanje ekspresije c-MET u uzorku. Izraz "uzorak", kako se koristi u ovom otkriću, odnosi se na uzorke tkiva dobijene ili izvedene iz tumorskog tkiva ili kontrolnog tkiva od zdravog donora, npr. čoveka koji nije oboleo od raka. Uzorak takođe može da bude izveden iz nehumanih primata ili može da vodi poreklo od sisara, kao što je miš ili pacov. Termin uzorak takođe može da se odnosi na pojedinačne ili individualizovane ćelije dobijene iz uzorka tkiva npr. biopsijom pomoću igle, pri čemu uzimanje uzorka od čoveka nije deo ovog pronalaska. Uzorak može da se sastoji od ne-fiksnih, živih ćelija ili može da se sastoji od fiksnog tkiva ili ćelija, kao što su tkivo ili ćelije fiksirane na formalin i parafin. Termin uzorak prema pronalasku može , na primer, takođe da se odnosi na ćelije iz ćelijskih linija karcinoma, kao što su K.P-4, U87MG, A549, NCI-H441, MKN-45, ili EBC-1 i slično, koje se npr. mogu dobiti od ATCC. Detekcija ekspresije c-MET u uzorku uključuje kontakt uzorka sa antitelima pronalaska, njihovim fragmentima koji vezuju antigen ili SEEDtelima kako je prethodno otkriveno pod uslovima koji omogućavaju specifično vezivanje za c-MET i naknadnu detekciju antitela prema pronalasku ili njegovog fragmenta koji veže antigen, ili SEEDtela pronalaska, kao što je gore otkriveno, poželjno detekcijom spregnute oznake koja se može detektovati, kao što je gore otkriveno.
PRIMERI
[0060] Sledeći primeri su namenjeni da dalje ilustruju pronalazak.
Primer 1: ELISA kompeticija u HGF - zameni antitelima pronalaska.
[0061] Kompeticija rekombinantnog humanog HGF sa antitelima pronalaska koja se vezuju za rekombinantni humani c-MET ECD detektovana je ELISA testom koristeći HGF u čvrstoj fazi. Za ovo je 1,25 pmol HGF imobilisano na MakiSorp® pločama sa 96 ležišta preko noći na 4<0>C. Nakon blokiranja ploča sa 2% BSA u PBS-T, na ploče je dodato 1,13 pmol biotinilovanog c-MET ECD pre-inkubirano sa serijskim razblaženjima antitela (0,2-200 nM). Vezivanje je otkriveno upotrebom HRP-konjugovanog streptavidina, praćeno dodavanjem rastvoru supstrata Ultra TMB ELISA u jednom koraku i sumpornu kiselinu. Rezultujuća apsorbancija za c-MET ECD vezivanje za HGF bez dodavanja antitela usmerenog na anti-c-MET definisana je kao 100% HGF vezivanje. Anti-HEL SEED je korišćeno kao kontrolno antitelo nepovezanog izotipa. Podaci su dati kao % vezivanja HGF prema logaritmu koncentracije antitela i fitovani na sigmoidnu krivu doza-odgovor sa promenljivim nagibom (4PL) koristeći GraphPad Prism 5®.
Primer 2: Test fosforilacije receptora - inhibicija signalizacije c -MET
2
[0062] Da bi se procenio efekat vezivanja antitela pronalaska i heterodimernog molekula imunoglobulina pronalaska za c-MET-posredovani signalni nivoi fosforilacije, c-MET su određeni pomoću c-MET registrovanja elektrohemiluminescencijom (ECL) ELISA (MSD test). Svi reagensi su dobijeni iz kompanije Meso Scale Discovery i pripremljeni u skladu sa uputstvima proizvođača, Ukratko, ćelije su postavljene u ploče 96 ležišta sa kulturama tkiva sa (Sigma-Aldrich) jedan dan pre tretmana, serum podvrgnut starvaciji i tretiran serijski razblaženim antitelima (0 - 167 nM u medijumu za starvaciju) tokom 1 sata na 37<0>C, 5% СО2. Nakon stimulacije bilo sa 100 ng / ml HGF (R&D sistemi) tokom 5 minuta na 37<0>C, ćelije su lizirane ledeno hladnim puferom za lizu dopunjenim inhibitorima proteaze i fosfataze (Calbiochem). Ploče sa 96 ležišta sa visokim vezivanjem, uključujući elektrode (Meso Scale Discovery), obložene su antitelom za vezivanje celokupnog antitela (Abcam) na c-MET (Cell Signaling Technologies), nakon čega je sledilo blokiranje sa 3% Blok A u PBS, dopunjenog sa 0,05% Tween®20. Posle inkubacije sa ćelijskim lizatima, detekcija je izvršena anti-fosfo c-MET (Cell Signaling Technologies), antitelima na fosfo-tirozin (R&D sistemi) i supstancama za otkrivanje koje preporučuje dobavljač. Merenja su izvršena pomoću SECTOR® Imager 6000 (Meso Scale Discovery). Za kvantifikaciju nivoa fosfo-AKT, korišćen je komplet Phospho(Ser473)/Total AKT Assay Whole Cell Lyate Kit (Meso Scale Discovery). Krive odgovora na dozu su iscrtane kao logaritam koncentracije antitela u odnosu na ECL signal. Vrednosti IC50izračunate su pomoću 3PL modela fitovanja koristeći GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, Inc.), videti npr. podatke date na slici 5.
Primer 3: Epitopsko spajanje c-MET poveznica pomoću bio-slojne interferometrije (BLI)
[0063] Izvršen je eksperiment vezivanja epitopa sa c-MET antitelima koja su korišćena u bispecifičnim antitelima i poređena sa referentnim antitelima iz literature (MetMAb, Emibetuzumab, h224G11). Eksperimenti sa biosenzorima koji koriste interferometriju bio-sloja izvedeni su na Octet Red platformi (Forte Bio) opremljenoj anti-humanim Fc (AHC) vrhovima biosenzora (Forte Bio). Svi podaci su prikupljeni na 30<0>C u kinetičkom puferu (PBS pH 7,4, 0,1% BSA, 0,02% Tween-20. Humani c-MET ECD-His (HGFR, ekstracelularni domen receptora faktora rasta hepatocita) proizveden je i prečišćen u matičnoj laboratoriji. Vrhovi biosenzora uravnoteženi su 30 sekundi u PBS. Zatim je 25 nM za bivalentnih IgG i 50 nM za monovalentna jednokraka antitela u PBS imobilisano na vrhovima biosenzora u trajanju od 200 sekundi kao primamo antitelo. Vrhovi su ugašeni sa 400 nM ne- srodnog kontrolnog antitela (na lizozim iz kokošjeg jajeta, anti-HEL SEME, razblaženo u PBS) kako bi se smanjilo naknadno vezivanje sekundarnih antitela za vrhove biosenzora. Nakon sakupljanja podataka za osnovnu liniju u kinetičkom puferu tokom 60 sekundi, humani c-MET-ECD je izložen imobilisanim primamim antitelima tokom 600 sek. Posle toga su analizirane interakcije sekundarnih antitela na c-MET sa c-MET-ECD vezanim za imobilisana primarna antitela u trajanju od 600 sek. Analiza vezivanja sekundarnog antitela je analizirana
2
vizualno razlikovanjem simultanog vezivanja okarakterisanog većom brzinom vezivanja [nM] u poređenju sa nesrodnom kontroiom izotipa (anti-HEL SEED).
Primer 4: Analize citotoksičnosti
[0064] Da bi se odredila citotoksičnost konjugata leka sa antitelom prema pronalasku, koji su nekovalentni konjugati citotoksina, prema Fc delu antitela prema pronalasku preko anti-humanih konjugata Fc-Fab toksina (MORADEC, kataloški broj AH205-AM).
[0065] Vijabilnost ćelija je kvantifikovana korišćenjem testa CellTiter-Glo® (Promega) i izvedena je u skladu sa uputstvima proizvođača. Ukratko, ćelije su odvojene i zasejane na unutrašnje zidove ležišta neprozirne ploče sa 96 ležišta tretiranih kulturom belog tkiva. Broj ćelija za zasejavanje kretao se od 8.000 do 15.000 vijabilnih ćelija po ležištu, u zavisnosti od ćelijske linije u medijumu specifičnom za ćelijske linije od 80 pl. Ćelijama je ostavljeno da se vežu najmanje 3 sata u vlažnoj komori na 37<0>C, 5% СО2pre tretmana ADC (u rasponu od 50 do 0,01 nM konačna) u duplikatima u medijumu specifičnom za ćelijske linije. Posle 72 sata, otkrivena je vijabilnost ćelija dodavanjem 100 μl po ležištu CellTiter-Glo® reagensa sa naknadnim mešanjem na mućkalici za ploče tokom 2 min pri 350 ° / min i 10 min inkubacije u mraku na sobnoj temperaturi. Luminescencija je merena na čitaču ploča Synergy 4 (poglavlja 3.9 i 3.10) sa vremenom očitavanja od 0,5 sekundi po ležištu (osetljivost: 170). Oduzeta je pozadinska luminiscencija u ležištima sa samo medijumom i reagensom CellTiter-Glo®. Podaci su prikazani u procentima netretirane ćelijske održivosti vs logaritma koncentracije antitela i fitovani sa 3PL modelom pomoću GraphPad Prism 5 (poglavlje 3.10). Za izračunavanje srednje vrednosti IC50korišćeni su podaci iz najmanje tri nezavisna eksperimenta sa duplikatima
2
�
�
�
�
Claims (14)
1. Antitelo na c-Met ili njegov fragment koji vezuje antigen, naznačeno time, što antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen vezuje se za humani c-MET sa afinitetom od najmanje 10<-8>M, pri čemu antitelo je antitelo IgG tipa i pri čemu antitelo obuhvata aminokiselinske sekvence teškog i lakog lanca prema SEQ ID NO:1 i SEQ ID NO: 2, ili SEQ 1D NO: 3 i SEQ ID NO: 4, ili SEQ ID NO: 5 i SEQ ID NO: 6, ili SEQ ID NO: 7 i SEQ IDNO: 8.
2. Antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen prema zahtevu 1, naznačeno time, što se antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen vezuje za humanu c-MET varijantu N375S.
3. Antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, naznačeno time, što se antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen veže za epitop koji se nalazi u domenu SEMA humanog c-MET i inhibira signalizaciju c-MET.
4. Antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen prema bilo kom od zahteva 1-3, naznačeno time, što se antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen vezuje za epitop koji se nalazi u IPT domenima 1-4 humanog c-MET i inhibira signalizaciju c-MET .
5. Antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen prema zahtevu 3 ili zahtevu 4, naznačeno time, što antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen inhibira vezivanje rekombinantnog humanog HGF za humani c-MET ECD pri koncentraciji od 0,9x10'<9>M ili manje za 50% u testu enzimski vezanog imunosorbenta koristeći HGF u čvrstoj fazi.
6. Antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen prema bilo kom od zahteva 1-5, naznačeno time, što antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen je Fab.
7. Antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen prema bilo kom od zahteva 1-5, naznačeno time, što antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen je F(ab')2.
8. Antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen prema bilo kom od zahteva 1-5, naznačen time, što antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen je scFv.
9. Antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen prema bilo kom od zahteva 1-8, naznačen time, što je antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen dalje spregnuto sa dijagnostičkm ili terapijskim sredstvom.
10. Heterodimerni molekul imunoglobulina koji obuhvata
(i) prvi i drugi Fab ili scFv fragment koji se specifično vezuju za humani c-MET, i
(ii) region pregiba antitela, domen CH2 antitela i domen СН3 antitela koji obuhvataju interfejs domena interakcije hibridnog protein-proteina, pri čemu navedeni interfejs domena interakcije čine aminokiselinski segmenti domena СНЗ prvog člana i aminokiselinski segmenti domena СНЗ pomenutog drugog člana, pri čemu pomenuti domen protein-protein interfejsa prvog lanca deluje u interakciji sa interfejsom protein-protein drugog lanca homodimerizacijom odgovarajućih aminokiselinskih segmenata istog člana superfamilije imunoglobulina u okviru navedenih domena interakcije,
naznačen time, što prvi konstruisani lanac imunoglobulina ima polipeptidnu sekvencu ("AG-SEED"); GQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTP SRQEPSQGTT TFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISL i drugi konstruisani lanac imunoglobulina ima peptidnu ("GA-SEED"):
GQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLT WAPVLDSDG SFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNHYTQKSLDR i pri čemu prvi i / ili drugi fragment Fab ili scFv obuhvata najmanje dve aminokiselinske sekvence prema SEQ ID NO: 1, SEQ IDNO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8.
11. Heterodimerni molekul imunoglobulina prema zahtevu 10, naznačen time, što je heterodimerni molekul imunoglobulina dalje spregnut sa dijagnostičkim ili terapijskim sredstvom.
12. Antitelo prema zahtevu 9. ili heterodimerni molekul imunoglobulina prema zahtevu 11, naznačen time, što terapeutsko sredstvo je citotoksin
13. Heterodimerni molekul imunoglobulina prema zahtevu 12, naznačen time, što heterodimerni molekul imunoglobulina je afukozilovan.
14. Antitelo prema zahtevu 12 ili heterodimerni molekul imunoglobulina prema zahtevu 12 ili zahtevu 13 za upotrebu u lečenju raka.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP16188857 | 2016-09-14 | ||
| EP17769025.2A EP3512882B1 (en) | 2016-09-14 | 2017-09-14 | Anti-c-met antibodies and antibody drug conjugates thereof for efficient tumor inhibition |
| PCT/EP2017/073106 WO2018050733A1 (en) | 2016-09-14 | 2017-09-14 | Anti-c-met antibodies and antibody drug conjugates thereof for efficient tumor inhibition |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RS61932B1 true RS61932B1 (sr) | 2021-07-30 |
Family
ID=56936324
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RS20210710A RS61932B1 (sr) | 2016-09-14 | 2017-09-14 | Antitela na c-met i njihovi konjugati leka sa antitelom za efikasnu inhibiciju tumora |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20190248907A1 (sr) |
| EP (1) | EP3512882B1 (sr) |
| JP (1) | JP2020500835A (sr) |
| CN (1) | CN109937211A (sr) |
| AU (1) | AU2017327658A1 (sr) |
| CA (1) | CA3036596A1 (sr) |
| DK (1) | DK3512882T3 (sr) |
| ES (1) | ES2876151T3 (sr) |
| HR (1) | HRP20210744T1 (sr) |
| HU (1) | HUE054571T2 (sr) |
| IL (1) | IL265362B2 (sr) |
| LT (1) | LT3512882T (sr) |
| PL (1) | PL3512882T3 (sr) |
| PT (1) | PT3512882T (sr) |
| RS (1) | RS61932B1 (sr) |
| SI (1) | SI3512882T1 (sr) |
| WO (1) | WO2018050733A1 (sr) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI782930B (zh) | 2016-11-16 | 2022-11-11 | 美商再生元醫藥公司 | 抗ｍｅｔ抗體，結合ｍｅｔ之雙特異性抗原結合分子及其使用方法 |
| SG11202009308WA (en) * | 2018-03-28 | 2020-10-29 | Mitsubishi Tanabe Pharma Corp | DRUG CONJUGATES OF cMET MONOCLONAL BINDING AGENTS, AND USES THEREOF |
| US11459391B2 (en) | 2019-02-26 | 2022-10-04 | Janssen Biotech, Inc. | Combination therapies and patient stratification with bispecific anti-EGFR/c-Met antibodies |
| JOP20210304A1 (ar) | 2019-05-14 | 2023-01-30 | Janssen Biotech Inc | علاجات مركبة باستخدام الأجسام المضادة ثنائية النوعية المضادة لمستقبل عامل نمو البشرة (EGFR)/ مستقبل عامل نمو خلايا الكبد (c-Met) ومثبطات كيناز التيروسين الخاصة بمستقبل عامل نمو البشرة (EGFR) من الجيل الثالث |
| KR20220063185A (ko) | 2019-09-16 | 2022-05-17 | 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 면역-pet 영상화를 위한 방사성 표지된 met 결합 단백질 |
| JOP20220184A1 (ar) | 2020-02-12 | 2023-01-30 | Janssen Biotech Inc | علاج مصابي السرطان ممن لديهم طفرات تخطي c-Met إكسون14 |
| CN111848797B (zh) * | 2020-07-20 | 2021-02-09 | 北京鼎成肽源生物技术有限公司 | 一种靶向c-Met的单链抗体、嵌合抗原受体、重组载体、CAR-T细胞及应用 |
| MX2023011929A (es) * | 2021-04-08 | 2023-10-23 | Byondis Bv | Anticuerpos anti-c-met y conjugados de anticuerpo-farmaco. |
| MA71625A (fr) | 2022-07-30 | 2025-05-30 | Pinetree Therapeutics, Inc. | Compositions pour la dégradation lysosomale ciblée et leurs procédés d'utilisation |
| WO2024131949A1 (zh) * | 2022-12-23 | 2024-06-27 | 苏州宜联生物医药有限公司 | Anti-cMet抗体、抗体药物偶联物及其制备方法和用途 |
| WO2025036910A1 (en) * | 2023-08-15 | 2025-02-20 | Merck Patent Gmbh | Novel c-met binders and uses thereof |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5892019A (en) | 1987-07-15 | 1999-04-06 | The United States Of America, As Represented By The Department Of Health And Human Services | Production of a single-gene-encoded immunoglobulin |
| DE3920358A1 (de) | 1989-06-22 | 1991-01-17 | Behringwerke Ag | Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung |
| AU3178993A (en) | 1991-11-25 | 1993-06-28 | Enzon, Inc. | Multivalent antigen-binding proteins |
| WO2007110205A2 (en) * | 2006-03-24 | 2007-10-04 | Merck Patent Gmbh | Engineered heterodimeric protein domains |
| WO2008113013A2 (en) * | 2007-03-15 | 2008-09-18 | University Of Chicago | C-met mutations and uses thereof |
| US8524214B2 (en) | 2009-05-28 | 2013-09-03 | Mersana Therapeutics, Inc. | Polyal drug conjugates comprising variable rate-releasing linkers |
| CA2813411C (en) | 2010-11-05 | 2016-08-02 | Rinat Neuroscience Corporation | Engineered polypeptide conjugates and methods for making thereof using transglutaminase |
| US10226535B2 (en) | 2012-12-10 | 2019-03-12 | Mersana Therapeutics, Inc. | Auristatin compounds and conjugates thereof |
| US9631218B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-04-25 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Sortase-mediated protein purification and ligation |
| US11235063B2 (en) * | 2015-11-03 | 2022-02-01 | Merck Patent Gmbh | Bi-specific antibodies for enhanced tumor selectivity and inhibition and uses thereof |
-
2017
- 2017-09-14 US US16/333,436 patent/US20190248907A1/en not_active Abandoned
- 2017-09-14 SI SI201730794T patent/SI3512882T1/sl unknown
- 2017-09-14 CN CN201780070335.2A patent/CN109937211A/zh active Pending
- 2017-09-14 RS RS20210710A patent/RS61932B1/sr unknown
- 2017-09-14 AU AU2017327658A patent/AU2017327658A1/en not_active Abandoned
- 2017-09-14 HU HUE17769025A patent/HUE054571T2/hu unknown
- 2017-09-14 CA CA3036596A patent/CA3036596A1/en active Pending
- 2017-09-14 HR HRP20210744TT patent/HRP20210744T1/hr unknown
- 2017-09-14 DK DK17769025.2T patent/DK3512882T3/da active
- 2017-09-14 WO PCT/EP2017/073106 patent/WO2018050733A1/en not_active Ceased
- 2017-09-14 LT LTEP17769025.2T patent/LT3512882T/lt unknown
- 2017-09-14 PT PT177690252T patent/PT3512882T/pt unknown
- 2017-09-14 EP EP17769025.2A patent/EP3512882B1/en active Active
- 2017-09-14 ES ES17769025T patent/ES2876151T3/es active Active
- 2017-09-14 JP JP2019514225A patent/JP2020500835A/ja not_active Ceased
- 2017-09-14 PL PL17769025T patent/PL3512882T3/pl unknown
- 2017-09-14 IL IL265362A patent/IL265362B2/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HRP20210744T1 (hr) | 2021-06-25 |
| EP3512882B1 (en) | 2021-03-10 |
| AU2017327658A1 (en) | 2019-05-02 |
| SI3512882T1 (sl) | 2021-08-31 |
| CA3036596A1 (en) | 2018-03-22 |
| CN109937211A (zh) | 2019-06-25 |
| ES2876151T3 (es) | 2021-11-12 |
| PT3512882T (pt) | 2021-06-14 |
| WO2018050733A1 (en) | 2018-03-22 |
| JP2020500835A (ja) | 2020-01-16 |
| PL3512882T3 (pl) | 2022-01-10 |
| DK3512882T3 (da) | 2021-05-31 |
| IL265362B2 (en) | 2024-05-01 |
| HUE054571T2 (hu) | 2021-09-28 |
| EP3512882A1 (en) | 2019-07-24 |
| US20190248907A1 (en) | 2019-08-15 |
| IL265362B1 (en) | 2024-01-01 |
| IL265362A (en) | 2019-05-30 |
| LT3512882T (lt) | 2021-06-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP3512882B1 (en) | Anti-c-met antibodies and antibody drug conjugates thereof for efficient tumor inhibition | |
| JP7257422B2 (ja) | 抗ｍｕｃ１抗体－薬物コンジュゲート | |
| JP2022141715A (ja) | グリコシル化ｐｄ－ｌ１に特異的な二重機能抗体およびその使用方法 | |
| KR102417312B1 (ko) | 항-her2 항체-약물 접합체 | |
| US20220111064A1 (en) | Bi-specific antibodies for enhanced tumor selectivity and inhibition and uses thereof | |
| US12157775B2 (en) | Methods of using bispecific antigen-binding constructs targeting HER2 | |
| US20240199738A1 (en) | Monoclonal antibodies and conjugates against prostaglandin f2 receptor inhibitor and uses thereof | |
| CN109963872B (zh) | 诊断抗pd-l1抗体及其用途 | |
| JP2022501444A (ja) | 抗体動態を測定するための組成物および方法 | |
| US20200297862A1 (en) | Methods of using bispecific antigen-binding constructs targeting her2 | |
| CN118317795A (zh) | 用在治疗化疗耐药性癌症的方法中的抗体-药物偶联物 | |
| CN117999101A (zh) | 靶向EGFR的Fc抗原结合片段-药物缀合物 | |
| KR20190126103A (ko) | 아벨루맙을 포함하는 조성물 | |
| CN117222435A (zh) | HER2靶向Fc抗原结合片段-药物缀合物 |