[go: up one dir, main page]

RS59963B1 - Inhibitor glukozilceramid sintaze - Google Patents

Inhibitor glukozilceramid sintaze

Info

Publication number
RS59963B1
RS59963B1 RS20200222A RSP20200222A RS59963B1 RS 59963 B1 RS59963 B1 RS 59963B1 RS 20200222 A RS20200222 A RS 20200222A RS P20200222 A RSP20200222 A RS P20200222A RS 59963 B1 RS59963 B1 RS 59963B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
mmol
nmr
ppm
mhz
compound
Prior art date
Application number
RS20200222A
Other languages
English (en)
Inventor
Elyse Bourque
Cassandra Celatka
Bradford Hirth
Markus Metz
Zhong Zhao
Renato Skerlj
Yibin Xiang
Katherine Jancisics
John Marshall
Seng Cheng
Ronald Scheule
Mario Cabrera-Salazar
Andrew Good
Original Assignee
Genzyme Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Genzyme Corp filed Critical Genzyme Corp
Publication of RS59963B1 publication Critical patent/RS59963B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/08—Bridged systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/439—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom the ring forming part of a bridged ring system, e.g. quinuclidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/46—8-Azabicyclo [3.2.1] octane; Derivatives thereof, e.g. atropine, cocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D453/00—Heterocyclic compounds containing quinuclidine or iso-quinuclidine ring systems, e.g. quinine alkaloids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D453/00—Heterocyclic compounds containing quinuclidine or iso-quinuclidine ring systems, e.g. quinine alkaloids
    • C07D453/02—Heterocyclic compounds containing quinuclidine or iso-quinuclidine ring systems, e.g. quinine alkaloids containing not further condensed quinuclidine ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D455/00—Heterocyclic compounds containing quinolizine ring systems, e.g. emetine alkaloids, protoberberine; Alkylenedioxy derivatives of dibenzo [a, g] quinolizines, e.g. berberine
    • C07D455/02—Heterocyclic compounds containing quinolizine ring systems, e.g. emetine alkaloids, protoberberine; Alkylenedioxy derivatives of dibenzo [a, g] quinolizines, e.g. berberine containing not further condensed quinolizine ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01022—Alpha-galactosidase (3.2.1.22)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)

Description

Opis
POZADINA PRONALASKA
Oblast pronalaska
[0001] Predmetni pronalazak se uglavnom odnosi na oblast terapija za kancer i metaboličke bolesti. Preciznije, pronalazak se odnosi na inhibitore glukozilceramid sintaze (GCS) korisne u lečenju metaboličkih bolesti, kao što su bolesti lizosomalnog skladištenja, samostalno ili u kombinaciji sa terapijom zamene enzima i za lečenje kancera.
Rezime srodnog stanja tehnike
[0002] Glukozilceramid sintaza (GCS) je glavni enzim koji katalizuje početni korak glikozilacije u biosinteze glukozilceramidnih glikosfingolipida na bazi glukozilceramida (GSL), naime putem prenosa glukoze iz UDP-glukoze (UDP-Glc) u ceramid da bi se formirao glukozilceramid (videti Sl.1). GCS je transmembrana, integralni protein tipa III, lokalizovan u cis/srednjem Goldžijevom aparatu. Veruje se da su glikosfingolipida (GSL) sastavni deo dinamike mnogih događaja ćelijske membrane, uključujući ćelijske interakcije, signalizacije i prenos. Prikazana je sinteza GSL struktura (videti, Yamashita i dr., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999, 96(16), 9142-9147) da je od suštinskog značaja za embrionalni razvoj i diferencijaciju nekih tkiva. Ceramid igra centralnu ulogu u sfingolipidnom metabolizmu, a pokazalo se da smanjivanje GCS aktivnosti ima izražene efekte na sfingolipidni obrazac sa smanjenom ekspresijom glikosfingolipida. Sfingolipidi (SL) imaju biomodulatornu ulogu u fiziološkim i patološkim kardiovaskularnim stanjima. Konkretno, izgleda da sfingolipidi i njihovi regulisani enzimi igraju ulogu u adaptivnom odgovoru na hroničnu hipoksiju u srcu novorođenčeta (videti, El Alwanit i dr., Prostaglandins & Other Lipid Mediators 2005, 78(1-4), 249-263).
[0003] Predloženi su inhibitori GCS za lečenje raznih bolesti (videti na primer, WO2005068426). Takvo tretiranje uključuje lečenje bolesti skladištenja glikolipida (npr., Tay Sachs, Sandhoffs, nedostatak GM2 aktivatora, GM1 gangliosidoza i Fabrijeve bolesti), bolesti povezane sa nakupljanjem glikolipida (npr., Gaucherova bolest; Miglustat (Zavesca), GCS inhibitor, odobren je za terapiju kod pacijenata sa Gaucherovom bolešću tipa 1, videti, Treiber i dr., Xenobiotica 2007, 37(3), 298-314), bolesti koje izazivaju bubrežnu hipertrofiju ili hiperplaziju kao što su dijabetička nefropatija; bolesti koje izazivaju hiperglikemiju ili hiperinsulemiju; karcinomi kod kojih je sinteza glikolipida abnormalna, zarazne bolesti uzrokovane organizmima koji koriste glikolipidne ćelijske površine kao receptore, zarazne bolesti kod kojih je sinteza glukozilceramida od suštinskog značaja ili je važna, bolesti kod kojih je sinteza glukozilceramida od suštinskog značaja ili važna, bolesti u kojima se javlja prekomerna sinteza glikolipida (npr., ateroskleroza, policistična bolest bubrega i bubrežna hipertrofija), neuronski poremećaji, povrede neurona, inflamatorne bolesti ili poremećaji povezani sa regrutovanjem i aktivacijom makrofaga (npr., reumatoidni artritis, Kronova bolest, astma i sepsa) i dijabetes melitus i gojaznost (videti, WO 2006053043). Ostali GCS inhibitori predloženi su u WO 2010091164.
[0004] Konkretno, pokazano je da prekomerna ekspresija GCS uključuje višestruku rezistenciju i kvari apoptozu izazvanu ceramidom. Na primer, Turzanski i dr., (Experimental Hematology 2005, 33 (1), 62-72 pokazali su da ceramid indukuje apoptozu u ćelijama akutne mijeloidne leukemije (AML) i da P-glikoprotein (p-gp) daje otpornost na ceramidindukovanu apoptoza, sa modulacijom putanje ceramid-glukozilceramida, što daje značajan doprinos ovoj otpornosti u TF-1 ćelijama. Stoga, GCS inhibitori mogu biti korisni u lečenju proliferativnih poremećaja indukovanjem apoptoze u obolelim ćelijama.
REZIME PRONALASKA
[0005] Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje kao što je navedeno u priloženim patentnim zahtevima, kao i farmaceutski sastav koji sadrži isto, kao i njegove postupke i primenu, kao što je navedeno u priloženim patentnim zahtevima.
[0006] Predmetno obelodanjivanje se odnosi na jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom,
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili prolek, gde:
n je 1, 2 ili 3;
m je 0 ili 1;
p je 0 ili 1;
t je 0, 1 ili 2;
y je 1 ili 2;
z je 0, 1 ili 2;
E je S, O, NH, NOH, NNO2, NCN, NR, NOR ili NSO2R;
X<1>je CR<1>gde je m 1 ili N gde je m 0;
X<2>je O, -NH, -CH2-, SO2, NH-SO2;CH(C1-C6) alkil ili -NR<2>;
X<3>is O, -NH, -CH2-, CO, - CH(C1-C6) alkil, SO2NH, -CO-NH- ili -NR<3>;
X<4>je CR<4>R<5>, CH2CR<4>R<5>ili CH2-(C1-C6) alkil-CR<4>R<5>;
X<5>je direktna veza, O, S, SO2, CR<4>R<5>; (C1-C6)alkil, (C1-C6)alkiloksi, (C1-C6)alkenil, (C1-C6)alkeniloksi;
R je (C6-C12)aril, (C2-C9)heteroaril, (C1-C6)alkil, (C2-C9)heteroaril(C1-C6)alkil;
R<1>je H, CN, (C1-C6)alkilkarbonil, ili (C1-C6)alkil;
R<2>i R<3>su nezavisno -H, (C1-C6)alkil opciono supstituisani jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja se sastoji iz halogena, (C1-C6)alkila, (C6-C12)arila, (C2-C9)heteroarila, (C1-C6)alkil(C6-C12)arila, halo(C6-C12)arila, i halo(C2-C9)heteroarila ili opciono kada X<2>je -NR<2>i X<3>je -NR<3>, R<2>i R<3>mogu se uzeti zajedno sa atomima azota za koji su vezani formiraju nearomatski heterociklični prsten, opciono supstituisan jednim ili više supstituenata izabranih između halogena, (C1-C6)alkila, (C6-C12)arila, (C2-C9)heteroarila, (C1-C6)alkil(C6-C12)arila, halo(C6-C12)arila, i halo(C2-C9)heteroarila;
R<4>i R<5>su nezavisno izabrani iz H, (C1-C6)alkila, ili uzeti zajedno sa ugljenikom na koji su vezani da bi formirali spiro (C3-C10)cikloalkil prstena ili spiro (C3-C10)cikloalkoksi prstena;
R<6>je -H, halogen, -CN, (C6-C12)aril, (C6-C12)ariloksi, (C1-C6)alkiloksi; (C1-C6)alkil opciono supstituisanih sa jednim do četiri halo ili (C1-C6)alkilom;
A<1>je (C2-C6)alkinil; (C6-C12)aril, (C2-C9)heteroaril, (C2-C9)heterocikloalkil ili benzo(C2-C9)heterocikloalkil opciono supstituisani sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja se sastoji iz halo, (C1-C6)alkila opciono supstituisan sa jednim do tri halo; (C1-C6)alkenil, amino, (C1-C6)alkilamino, (C1-C6) dialkilamino, (C1-C6)alkoksi, nitro, CN, -OH, (C1-C6)alkiloksi opciono supstituisan sa jednim do tri halo; (C1-C6)alkoksikarbonil, i (C1-C6) alkilkarbonil;
A<2>je H, (C6-C12)aril, (C2-C9)heterocikloalkil ili benzo(C2-C9)heterocikloalkil opciono supstituisani sa jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja se sastoji iz halo, (C1-C6)alkila opciono supstituisan sa jednim do tri halo; (C1-C6)alkilenil, amino, (C1-C6) alkilamino, (C1-C6)dialkilamino, (C1-C6)alkoksi, O(C3-C6 cikloalkil), (C3-C6) cikloalkoksi, nitro, CN, OH, (C1-C6)alkiloksi opciono supstituisan sa jednim do tri halo; (C3-C6) cikloalkil, (C1-C6) alkoksikarbonil, (C1-C6) alkilkarbonil, (C1-C6) haloalkil;
pod uslovom da suma n t i z nije veća od 6;
pod uslovom da kada je p 0; X<2>je NH-SO2i X<3>je NH;
pod uslovom da kada je n 1; t je 0; y je 1; z je 1; X<2>je NH; E je O; X<3>je NH; A<2>je H i X<5>je direktna veza; A<1>nije nesupstituisani fenil, halofenil ili izopropenil fenil; pod uslovom da kada je n 1; t je 0; y je 1; z je 1; X<2>je O; E je O; X<3>je NH; A<1>je (C6-C12)aril i X<5>je direktna veza; A<2>je H i R<4>je H zatim R<5>nije cikloheksil; i
pod uslovom da kada je n 1; t je 0; y je 1; z je 1; X<2>je NH; E je O; X<3>je CH2; R<4>i R<5>su oba hidrogen; A<2>je H i X<5>je direktna veza; onda A<1>nije nesupstituisani fenil. Izvesni aspekti obelodanjivanja uključuju davanje prethodnog jedinjenja pacijentu kao deo kombinovane terapije koja uključuje enzimsku supstitucionu terapiju (ERT) i terapiju malim molekulima (SMT) da bi se smanjila količina i/ili inhibirala akumulacija supstrata kod pacijenta kojima je dijagnostikovana bolest lizosomalnog skladištenja.
[0007] Predmetno obelodanjivanje se dalje odnosi na jedinjenje Formule I ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili prolek, izabrano iz grupe koju čine:
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il[2-(2,4'-difluorobifenil-4-il)propan-2-il]karbamat;
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il{2-[4-(1,3-benzotiazol-6-il)fenil]propan-2-il}karbamat; 1-azabiciklo[3.2.2]non-4-il{1-[5-(4-fluorofenil)piridin-2-il]ciklopropil}karbamat; 1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il{1-[3-(4-fluorofenoksi)fenil]ciklopropil}karbamat; 1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il{1-[4-(1,3-benzotiazol-5-il)fenil]ciklopropil}karbamat; 1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il[1-(4'-fluoro-3'-metoksibifenil-4il)ciklopropil]karbamat; 1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il[3-(4'-fluorobifenil-4-il)oksetan-3-il]karbamat;
1-azabiciiklo[2.2.2]okt-3-il{1-[6-(4-fluorofenoksi)piridin-2-il]ciklopropil}karbamat; 1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il[3-(4'-fluorobifenil-4-il)pentan-3-il]karbamat;
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il{2-[2-(4-fluorofenil)-2H-imidazol-6-il]propan-2 il}karbamat;
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il{2-[2-(1H-pirol-1-il)piridin-4-il]propan-2-il}karbamat; 1-(3-etil-1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il)-3-[1-(4'-fluorobifenil-4-il)ciklopropil]urea; N-(1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il)-N'-[1-(4'-fluorobifenil-4il)ciklopropil]etandiamid; 1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il(1-{4[(4,4difluorocikloheksil)oksi]fenil}ciklopropil) karbamat;
1-(4-metil-1-azabiciklo[3.2.2]non-4-il)-3-[1-(5-fenilpiridin-2-il)ciklopropil]urea; 1-[1-(4'-fluorobifenil-4-il)ciklopropil]-1-metil-3-(3-metil-1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il)urea;
1-[1-(4'-fluorobifenil-4-il)ciklopropil]-1-metil-3-(3-metil-1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il)urea;
1-{2-[4'-(2-metoksietoksi)bifenil-4-il]propan-2-il}-3-(3-metil-1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il)urea;
2-(1-azabiciklo[3.2.2]non-4-il)-N-[1-(5-fenilpiridin-2-il)ciklopropil]acetamid;
3-(4'-fluorobifenil-4-il)-3-metil-N-(4-metil-1-azabiciklo[3.2.2]non-4-il)butanamid; N-[2-(bifenil-4-il)propan-2-il]-N'-(3-metil-1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il)sumporni diamid;
N-[2-(4'-fluorobifenil-4-il)propan-2-il]-N'-(3-metil-1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il)sumporni diamid;;
1-(3-butil-1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il)-3-{2-[1-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-il]propan-2-il}urea;
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il[4-(4-fluorofenil)-2-metilbut-3-in-2-il]karbamat;
1-(3-butil-1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il)-3-[4-(4-fluorofenil)-2-metilbut-3-in-2-il]urea; N-[1-(4'-fluorobifenil-4-il)ciklopropil]-1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-karboksamid; 1-(2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)propan-2-il)-3-(3-metil-1-azabiciklo[3.2.2]nonan-3-il)urea;
1-(2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)propan-2-il)-3-(4-metil-1-azabiciklo[4.2.2]dekan-4-il)urea;
1-(2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)propan-2-il)-3-(3-metil-1-azabicklo[4.2.2]dekan-3-il)urea; i
1-(2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)propan-2-il)-3-(5-metil-1-azabicklo[4.2.2]dekan-5-il)urea.
[0008] Predmetno obelodanjivanje se nadalje odnosi na farmaceutski sastav za lečenje bolesti ili poremećaja posredovane glukozilceramid sintazom (GCS) ili bolesti ili poremećaja u kojem je GCS umešan kod ispitanika kome je potrebno takvo tretiranje, koje uključuje davanje efikasne količine jedinjenje Formule I ispitaniku.
[0009] Predmetno obelodanjivanje se nadalje odnosi na postupak lečenja bolesti ili poremećaja posredovane glukozilceramid sintazom (GCS) ili bolesti ili poremećaja u kojem je GCS umešan kod ispitanika kome je potrebno takvo tretiranje, koje uključuje davanje efikasne količine jedinjenje Formule I ispitaniku.
[0010] Predmetno obelodanjivanje se nadalje odnosi na postupak lečenja bolesti ili poremećaja kao što je kancer.
[0011] Predmetno obelodanjivanje se nadalje odnosi na postupak lečenja bolesti ili poremećaja kao što je metabolički poremećaj.
[0012] Predmetno obelodanjivanje se nadalje odnosi na postupak lečenja bolesti ili poremećaja kao što je neuropatska bolest.
[0013] Predmetno obelodanjivanje se dalje odnosi na postupak gde je neuropatska bolest Alchajmerova bolest.
[0014] Predmetno obelodanjivanje se dalje odnosi na postupak gde je neuropatska bolest Parkinsonova bolest.
[0015] Predmetno obelodanjivanje se dalje odnosi na postupak za indukciju smanjene katalitičke aktivnosti glukozilceramid sintaze u ćeliji, in vitro, koji sadrži kontakt sa ćelijom sa efektivnom količinom jedinjenja Formule I.
[0016] Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom,
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0017] Predmetno obelodanjivanje se dalje odnosi na jedinjenje Formule I, predstavljeno sledećom strukturalnom formulom,
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili prolek.
[0018] Predmetni pronalazak se dalje odnosi na jedinjenje za upotrebu u lečenju bolesti lizosomalnog skladištenja, pri čemu je jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom,
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0019] U određenim otelotvorenima prema pronalasku, bolest skladištenja lizosoma je rezultat oštećenja na putu glikosfingolipida.
[0020] U određenim otelotvorenima prema pronalasku, bolest skladištenja lizosoma je Gaucher, Fabri, GM1-gangliosidoza, deficit GM2aktivatora, Tej-Saš ili Sendhof.
[0021] Predmetni pronalazak se dalje odnosi na jedinjenje za upotrebu u lečenju bolesti skladištenja lizosoma, pri čemu upotreba dalje obuhvata korak davanja ispitaniku terapeutski efikasne količine lizosomalnog enzima.
[0022] U određenim otelotvorenjima prema pronalasku, lizosomalni enzim je glukocerebrosidaza, alfa-galaktozidaza A, heksosaminidaza A, heksosaminidaza B ili GM1-gangliozid-β-galaktozidaza.
[0023] U određenim otelotvorenjima prema pronalasku, ispitanik ima povišene nivoe lizosomalnog supstrata pre tretiranja, a kada se jednom podvrgne tretiranju, ispitanik ima niže kombinovane količine lizosomalnog supstrata u urinu i plazmi od ispitanika koji je tretiran ili lizosomalnim enzimom ili jedinjenjem.
[0024] U određenim slučajevima obelodanjivanja, supstrat je globotriaosilceramid ili lizoglobotriaosilceramid i njihove kombinacije.
[0025] Predmetno obelodanjivanje se nadalje odnosi na postupak smanjenja aktivnosti glukozilceramid sintaze (GCS) kod ispitanika kod kog je dijagnostikovana bolest skladištenja lizosoma, uključujući davanje pacijentu efikasnog broja jedinjenja Formule I, samostalno ili kao kombinovana terapija sa enzimima.
[0026] Predmetno obelodanjivanje nadalje se odnosi na postupak za smanjenje nakupljanja materijala dobijenog GCS kod ispitanika kod kog je dijagnostikovana bolest skladištenja lizosoma, uključujući davanje pacijentu efikasne količine jedinjenja Formule I, samostalno ili kao kombinovana terapija enzimima.
[0027] Predmetno obelodanjivanje pruža postupak kombinovane terapije za lečenje ispitanika kod kojih je dijagnostikovana bolest skladištenja lizosoma, a koji se sastoji od naizmeničnog između davanja terapije enzimima i terapije malim molekulima.
[0028] Predmetno obelodanjivanje pruža postupak kombinovane terapije za lečenje ispitanika kod kojih je dijagnostikovana bolest skladištenja lizosoma, a koji se istovremeno sastoji iz primene terapije enzimima i terapije sa malim molekulima.
[0029] U različitim kombinacijama terapije obelodanjivanja, razumeće se da davanje terapije malim molekulima može da se dogodi pre, istovremeno sa ili posle primene enzimske terapije. Slično tome, davanje enzimske terapije može se dogoditi pre, istovremeno sa ili nakon davanja terapije malim molekulima.
Definicije
[0030] Kao što je ovde korišćen, termin "farmaceutski prihvatljiva so" označava ili farmaceutski prihvatljivu adicionu so kiseline ili farmaceutski prihvatljivu baznu adicionu so trenutno obelodanjenog jedinjenja koja se može primenjivati bez rezultirajućih značajnih neželjenih bioloških efekata ili bilo kakvih rezultirajućih štetnih interakcija sa bilo kojom drugom komponentom farmaceutskog sastava u kojoj se može nalaziti.
[0031] Kao što je ovde korišćen, termin "prolek" označava farmakološki derivat matičnog molekula leka kome je potrebna biotransformacija, bilo spontana ili enzimska, u organizmu da se aktivni lek oslobodi. Na primer, prolekovi su varijacije ili derivati jedinjenja Formule I koja imaju grupe koja se mogu deliti pod određenim metaboličkim uslovima, a koja se, kada se dele, postaju jedinjenja Formule I. Takvi prolekovi su tada farmaceutski aktivni in vivo, kada su podvrgnuti solvolizi u fiziološkim uslovima ili podvrgnuti enzimskoj degradaciji. Lekovi koji se ovde leče mogu se nazvati jednostruki, dvostruki, trostruki itd., Zavisno od broja koraka biotransformacije potrebnih za oslobađanje aktivnog leka u organizmu i broja funkcionalnosti prisutnih u obliku prekursora. Oblici prolekova često nude prednosti rastvorljivosti, kompatibilnosti tkiva ili odloženog oslobađanja u organizmu sisara (videti, Bundgard, Design of Prodrugs, pp.7-9, 21-24, Elsevier, Amsterdam 1985 and Silverman,
[0032] The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action, pp.352-401, Academic Press, San Diego, Calif., 1992). Prolekovi opšte poznati u struci uključuju dobro poznate derivate kiselina, kao što su, na primer, estri pripremljeni reakcijom matičnih kiselina sa pogodnim alkoholom, amidi pripremljeni reakcijom matičnog jedinjenja kiseline sa aminom, osnovne grupe reaguju da bi formirale derivat acilirane baze itd. Naravno, drugi derivati proleka mogu se kombinovati sa drugim ovde opisanim karakteristikama da bi se poboljšala bioraspoloživost. Kao takvi, stručnjaci će razumeti da se neka od trenutno objavljenih jedinjenja koja imaju slobodne amino, amido, hidroksi ili karboksilne grupe mogu pretvoriti u prolekove. Prolekovi obuhvataju jedinjenja koja imaju aminokiselinski ostatak ili polipeptidni
1
lanac od dve ili više (npr., dve, tri ili četiri) aminokiselinskih ostataka koji su kovalentno spojeni peptidnim vezama u slobodne grupe amino, hidroksi ili karboksilne kiseline trenutno objavljenih jedinjenja. Ostaci aminokiselina uključuju 20 aminokiselina koje se javljaju u prirodi, obično označene s tri slova simbola i takođe uključuju 4-hidroksiprolin, hidroksilizin, demozin, izodemozin, 3-metilhistidin, norvalin, beta-alanin, gama-aminobuternu kiselinu, citrulin homocistein, homoserin, ornitin i metionin sulfon. Prolekovi takođe obuhvataju jedinjenja koja imaju deo karbonata, karbamata, amida ili alkil estra kovalentno vezan za bilo koji od iznad navedenih supstituenata koji su ovde obelodanjeni.
[0033] Kao što je ovde korišćen, termin "(C1-C6)alkil" označava zasićeni linearni ili razgranati slobodni radikal koji se sastoji iz 1 do 6 atoma ugljenika i odgovarajući broj atoma vodonika. Primeri (C1-C6) alkilne grupe uključuju metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil itd. Naravno, druge (C1-C6) alkilne grupe biće lako očigledne onima koji veruju u stanje tehnike s obzirom na korist ovog otkrića.
[0034] Kao što je ovde korišćen, termin "(C3-C10)cikloalkil" označava nearomatski zasićeni slobodni radikal koji formira bar jedan prsten koji se sastoji iz 3 do 10 atoma ugljenika i odgovarajući broj atoma vodonika. Kao takve, (C3-C10)cikloalkilne grupe mogu biti monociklične ili multiciklične. Pojedinačni prstenovi takvih multicikličnih cikloalkilnih grupa mogu imati različite mogućnosti povezivanja, npr., fuzionirani, premošćeni, spiro, itd. pored kovalentne supstitucije veza. Primeri (C3-C10)cikloalkilne grupe uključuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, norbornanil, biciklo[3.2.1]oktanil, oktahidro-pentalenil, spiro[4.5]dekanil, ciklopropil supstituisan sa ciklobutil, ciklopentil, supstituisan sa ciklopentil ciklopropil itd. Naravno, druge (C3-C10)cikloalkilne grupe biće lako očigledne onima koji veruju u stanje tehnike s obzirom na korist ovog otkrića.
[0035] Kao što je ovde korišćen, termin "(C2-C9)heterocikloalkil" znači nearomatski slobodni radikal koji ima 3 do 10 atoma (tj., atoma u prstenu) koji formiraju najmanje jedan prsten, pri čemu je 2 do 9 atoma u prstenu ugljenik, a preostali atom (i) prstena (tj., atom hetero prstena) je izabran iz grupe koja se sastoji iz azota, sumpora i kiseonika. Kao takve, (C2-C9)heterocikloalkilne grupe mogu biti monociklične ili multiciklične. Pojedinačni prstenovi takvih multicikličnih heterocikloalkilnih grupa mogu imati različite mogućnosti povezivanja, npr., fuzionirani, premošćeni, spiro, itd. pored kovalentne supstitucije veza. Primeri (C2-C9)heterocikloalkilnih grupa uključuju pirolidinil, tetrahidrofuranil, dihidrofuranil, tetrahidropiranil, piranil, tiopiranil, aziridinil, azetidinil, oksiranil, metilendioksil, hromenil, barbituril, izoksazolidinil, 1,3-oxazolidin-3-yl, izotiazolidinil, 1,3-tiazolidin-3-il, 1,2-pirazolidin-2-il, 1,3-pirazolidin-1-il, piperidinil, tiomorfolinil, 1,2-tetrahidrotiazin-2-il, 1,3-tetrahidrotiazin-3-il, tetrahidrotiadiazinil, morfolinil, 1,2-tetrahidrodijazin-2-il, 1,3-tetrahidrodijazin-1-il, tetrahidroazepinil, piperazinil, piperizin-2-onil, piperizin-3-onil, hromanil, 2-pirolinil, 3-pirolinil, imidazolidinil, 2- imidazolidinil, 1,4-dioksanil, 8-azabiciklo[3.2.1]oktanil, 3-azabicklo[3.2.1]oktanil, 3,8-diazabiciklo[3.2.1]oktanil, 2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptanil, 2,5-diazabiciklo[2.2.2]oktanil, oktahidro-2H-pirido[1,2-a]pirazinil, 3-azabiciklo[4.1.0]heptanil, 3-azabiciklo[3.1.0]heksanil 2-azaspiro[4.4]nonanil, 7-oksa-1-aza-spiro[4.4]nonanil, 7-azabiciklo[2.2.2]heptanil, oktahidro-1H-indolil, itd.
Generalno, (C2-C9)heterocikloalkilna grupa obično je vezana za glavnu strukturu preko atoma ugljenika ili atoma azota. Naravno, druge (C2-C9)heterocikloalkilne grupe biće lako očigledne onima koji veruju u stanje tehnike s obzirom na korist ovog otkrića.
[0036] Kao što je ovde korišćen, termin "(C2-C9)heteroaril" znači aromatski slobodni radikal koji ima 5 do 10 atoma (tj., atoma u prstenu) koji formiraju najmanje jedan prsten, pri čemu je 2 do 9 atoma u prstenu ugljenik, a preostali atom (i) prstena (tj., atom hetero prstena) je izabran iz grupe koja se sastoji iz azota, sumpora i kiseonika. Kao takve, (C2-C9)heteroarilne grupe mogu biti monociklične ili multiciklične. Pojedinačni prstenovi takvih višecikličnih heteroarilnih grupa mogu imati različite mogućnosti povezivanja, npr., spojene itd. pored kovalentne supstitucije veza. Primeri (C2-C9)heteroarilnih grupa uključuju furil, tienil, tiazolil, pirazolil, izotiazolil, oksazolil, izoksazolil, pirolil, triazolil, tetrazolil, imidazolil, 1,3,5-oksadiazolil, 1,2,4-oksadiazolil, 1,2,3-oksadiazolil, 1,3,5-tiadiazolil, 1,2,3-tiadiazolil, 1,2,4-tiadiazolil, piridil, pirimidil, pirazinil, piridazinil, 1,2,4-triazinil, 1,2,3-triazinil, 1,3,5-triazinil, pirazolo[3,4-b]piridinil, kinolinil, pteridinil, purinil, 6,7-dihidro-5H-[1]piridinil, benzo[b]tiofenil, 5,6,7,8-tetrahidro-hinolin-3-il, benzoksazolil, benzotiazolil, benzotiazolil, benzizoksazolil, benzimidazolil, tianaftenil, izotianaftenil, benzofuranil, izobenzofuranil, izoindolil, indolil, indolizinil, indazolil, izohinolil, hinolil, ftalazinil, hinoksalinil, hinazolinil i benzoksazinil, itd. Generalno, (C2-C9)heteroarilna grupa obično je vezana za glavnu strukturu preko atoma ugljenika, međutim, oni koji poznaju ovo područje će shvatiti kada se određeni drugi atomi, npr., heteroatomi u prstenu, mogu povezati sa glavnom strukturom. Naravno, druge (C2-C9)heteroarilne grupe biće lako očigledne onima koji veruju u stanje tehnike s obzirom na korist ovog obelodanjivanja.
[0037] Kao što se ovde koristi, termin "(C6-C10)aril" znači fenil ili naftil..
[0038] Kao što se ovde koristi, termin "halo" znači fluorin, hlorin, bromin ili jod.
[0039] Kako se ovde koristi, termin "amino" znači slobodni radikal koji ima atom azota i 1 do 2 atoma vodonika. Kao takav, termin amino uopšteno se odnosi na primarne i sekundarne amine. U tom pogledu, kako se ovde koristi i u priloženim zahtevima, tercijarni amin je predstavljen opštom formulom RR'N-, pri čemu su R i R' ugljenični radikali koji mogu ili ne mogu biti identični. Ipak, termin "amino" ovde se uopšteno može koristiti za opis primarnog, sekundarnog ili tercijarnog amina, a oni koji poznaju ovo područje tehnike moći će lako da utvrde njegovu identifikaciju s obzirom na kontekst u kojem je ovaj termin koji se koristi u ovom obelodanjivanju.
[0040] Kao što je ovde korišćen, termin "kombinovana terapija" znači lečenje pacijenta sa dve ili više terapijskih platformi (npr., enzimska terapija i terapija malim molekulima) u rotirajućim, naizmeničnim i/ili istodobnim rasporedima lečenja. Primeri lečenja mogu uključivati, ali nisu ograničeni na:(1) enzimska terapija, zatim terapija malim molekulima; (2) terapija malim molekulima, zatim enzimska terapija; (3) enzimska terapija istovremeno sa terapijom malim molekulima i (4) i bilo kojom kombinacijom iznad navedenog.
Kombinovana terapija može da obezbedi vremensko preklapanje terapijskih platformi, prema potrebi, u zavisnosti od kliničkog toka određene bolesti skladištenja u određenom ispitaniku.
[0041] Kao što je ovde korišćen, termin "enzimska terapija" ili "ERT" znači davanje egzogeno proizvedenog prirodnog ili rekombinantnog enzima pacijentu kome je potreban. Na primer, u slučaju bolesti skladištenja lizosoma, pacijent nakuplja štetne nivoe supstrata (tj. materijala koji je uskladišten) u lizosomima zbog nedostatka ili oštećenja enzima odgovornog za metabolizam supstrata ili zbog nedostatka u enzimskog aktivatora potrebnog za pravilno funkcionisanje enzima. Enzimska terapija se daje pacijentu da smanji nivo (tj., smanjivanje) nagomilanog supstrata u zahvaćenim tkivima. Tabela 1 sadrži listu bolesti skladištenja lizosoma i identifikuje nedostatak odgovarajućeg enzima i akumulirani supstrat za svaku bolest. Enzimske terapije za lečenje bolesti skladištenja lizosoma su poznate u struci. U skladu sa kombinovanom terapijom predmetnog obelodanjivanja, lizosomalni enzimi identifikovani u Tabeli 1 mogu se koristiti za enzimsku terapiju za smanjivanje nivoa odgovarajućeg supstrata kod pacijenta kojima je dijagnostikovana odgovarajuća bolest
1
lizosomalnog skladištenja.
[0042] Kao što je ovde korišćeno, "efikasna količina" enzima ili malog molekula, kada se daju ispitaniku u kombinovanoj terapiji obelodanjivanja, količina je dovoljna da poboljša klinički tok bolesti lizosomalnog skladištenja, pri čemu se kliničko poboljšanje meri bilo kojim raznih definisanih parametara dobro poznatih iskusnom stručnjaku.
Skraćenice
[0043]
ACN se odnosi na acetonitril.
DMF se odnosi na N,N-dimetilformamid.
DMSO se odnosi na dimetilsulfoksid.
EtOAc se odnosi na etil acetat.
EtOH se odnosi na etanol.
Hunigova baza se odnosi na diizopropiletil amin ("DIPEA").
MeOH se odnosi na metanol.
NaOH se odnosi na natrijum hidroksid.
THF se odnosi na tetrahidrofuran.
TFA se odnosi na trifluorosirćetnu kiselinu.
[0044] Dodatne karakteristike i prednosti ovde obelodanjenih jedinjenja biće vidljive iz sledećeg detaljnog opisa određenih slučajeva.
KRATAK OPIS SLIKA
[0045]
SL. 1 predstavlja metabolički put potencijalne sinteze Gb3 i lizo-Gb3. Dokumentirani sintetički putevi prikazani su crnim strelicama, a nedokumentovani (potencijalni) putevi su prikazani sivim strelicama.
SL. 2A Hemijska struktura (S)-Hinuklidin-3-il (2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)propan-2-il)karbamata
SL. 2B Hemijska struktura Hinuklidin-3-il (2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-3-il)propan-2-il)karbamata
SL. 3
Koncentracija Gb3 u bubrezima (A) i srcu (B) kod 12-mesečnih Fabri miševa lečenih 300mg/kg/dan (1R,2R)-Oktanska kiselina[2-(2',3'-dihidro-benzo [1,4] dioksin-6'-il)-2-hidroksi-1-pirolidin-1-ilmetil-etil]-amid-L-so vinske kiseline ("GZ 638") ili 60 mg/kg/danu(S)-Hinuklidin-3-il (2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)propan-2-il)karbamata (S)-2-hidroksisukcinatna so ("GZ 452").
SL. 4A
Vremenska linija ispitivanja koja pokazuje Fabri miševe koji su započeli lečenje sa 60 mg/kg/danu GZ 452 počevši od 3, 8 i 12 meseci. Periodični uzorci krvi, prikupljanje urina, ploča za zagrevanje ploče i komora aktivnosti izvedeni su kako je naznačeno.
SL. 4B
Koncentracija Gb3 u urinu (A) i plazmi (B) kod Fabri miševa koji su započeli lečenje sa 60 mg/kg/dan GZ 452 od 3 ili 8 meseci. Lečenje lekovima (Rx) bilo je 2 ili 4 meseca.
SL. 5
Koncentracija Gb3 (A) i lizo-Gb3 (B) u bubrežnom tkivu 12-mesečnih Fabri miševa koji su ili netretirani (UNT) ili tretirani sa 60 mg/kg/danu GZ 452 tokom 4 meseca (SRT).
SL. 6A
Vremenska linija ispitivanja koja pokazuje Fabri miševe koji se leče alfagalaktozidazom A (1 mg/kg svaka 2 meseca) ili sa 60 mg/kg/dan GZ 452 ili kombinacijom ova dva tretiranja počevši od 3 meseca starosti. Periodični uzorci krvi, prikupljanje urina i ispitivanja sa vrućom pločicom izvedeni su kako je naznačeno. SL. 6B
Koncentracije plazme (A&C) i urina (B&D) Gb3 (A&C) i lizo-Gb3 (C&D) kod 5-mesečnih Fabri miševa lečenih alfa-galaktozidazom A (ERT), samim GZ 452 (SRT) ili kombinacijom ova dva (E+S) 2 meseca.
SL. 7
Analiza izoformnog lančanog acilnog lanca Gb3 izolovane iz Fabri mišije plazme, urina i bubrega.
SL. 8
Latencija (vreme da se odgovori) na podsticaj topline (55°C) 10-mesečnih Fabri miševa posle 7 meseci lečenja alfa-galaktozidazom A (ERT), GZ 452 (SRT) ili kombinacijom ova dva (E+S) u odnosu na neobrađene miševe (UNT) i divlje vrste miševa (WT).
SL. 9 Glukozil ceramid (GluCer) i Glukozil sfingozin (GluSph) značajno su povišene
1
u mozgu neonatalnih K14 miševa. Analiza masene spektrometrije glukozil- i galaktozilceramida pokazuje da je (A) GluCer porastao 10 puta u K14 miševa (životinjski model neonatalne Gaucherove bolesti, takođe poznat kao Gaucherova bolest tip 2) u poređenju sa WT miševima tokom prve 2 nedelje života , (B) nivoi GalCer su tokom vremena bili slični i za K14 i za WT miševe; (C) nivoi GluSph bili su ≥10 puta viši kod K14 miševa od VT miševa koji su odgovarali starosnim dobima tokom prve 2 nedelje života; Nivo GluSph u WT životinjama bio je ispod nivoa detekcije (<0.3 ng/mg). (D) Nije bilo značajnih razlika u težini mozga između K14 i WT miševa tokom prve 2 nedelje života. Tačke podataka predstavljaju srednje vrednosti i stubova grešaka SEM za N=4.
SL. 10 Sistemsko davanje hinuklidin-3-il (2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-3-il)propan-2-il)karbamata ("GZ 161") smanjuje nivo GluCer i GluSph u mozgu miša K14. K14 i VWT miševi su tretirani svakodnevno (IP) počevši od P4 sa vehikulumom ili 5 mg/kg GZ 161, a mozgovi su analizirani na GluCer i GluSph na P10. Životinje koje su tretirane GZ 161 su u to vreme bile asimptomatske. Lečenje sa GZ 161 redukovanih K14 (A) GluCer nivoa za ∼70% i (B) GluSph nivoa za ∼60%. Nivoi glikosfingolipida nakon tretiranja ostali su značajno povišeni u poređenju sa njihovim WT parnjaka iz legla i genotipovima je potvrđeno post mortem DNK analizom.
*p<0.05. N=4/grupa.
SL. 11 Sistemsko davanje GZ 161 smanjuje obojenje CD68 u mozgu K14 miševa. (Gornji paneli) Reprezentativno imunohistohemijsko CD 68 bojenje na P10 u hipokampusu, talamusu, moždanom stablu i moždanoj masi K14 miševa koji se tretiraju svakodnevno (IP), počevši od postnatalnog dana 4 (P4), sa vehikulumom ili GZ 161 i WT miševima. (Donji paneli) Količina obojenja u iznad prikazanim grupama, pokazuje da sistemsko tretiranje GZ 161 dovodi do značajnog smanjenja ćelija CD68+ u svim regionima mozga. Slična smanjenja primećena su i u drugim strukturama, poput olfaktorne lukovice i frontalnog korteksa (podaci nisu prikazani). **p<0.01. N=4/grupa
SL. 12 Sistemsko davanje GZ 161 smanjuje bojenje F4/80 u nekim regionima mozga kod K14 miševa. (Gornji paneli) Reprezentativno imunohistohemijsko CD 80 bojenje na P10 u hipokampusu, talamusu, moždanom stablu i moždanoj masi K14 miševa koji se tretiraju svakodnevno (IP), počevši od P4, sa vehikulumom ili GZ 161 i WT miševima. (Donji paneli) Količina obojenja u iznad prikazanim grupama, pokazuje da sistemsko tretiranje GZ 161 dovodi do značajnog smanjenja ćelija F4/80+ u talamusu
1
i moždanom stablu Slična smanjenja primećena su i u drugim strukturama, poput olfaktorne lukovice i frontalnog korteksa; statističke razlike primećene su u obe strukture (podaci nisu prikazani). *p<0.05. N=4/grupa
SL. 13 Sistemsko davanje GZ 161 smanjuje gliozu kod K14 miševa. (Gornji paneli) Reprezentativno imunohistohemijsko GFAP bojenje na P10 u hipokampusu, talamusu, moždanom stablu i moždanoj masi K14 miševa koji se tretiraju svakodnevno (IP), počevši od P4, sa vehikulumom ili GZ 161 i WT miševima. (Donji paneli) Količina obojenja u iznad prikazanim grupama, pokazuje da sistemsko tretiranje GZ 161 dovodi do značajnog smanjenja ćelija GFAP+ u hipokampusu i mozgu; statističke razlike primećene su u obe strukture (podaci nisu prikazani).
SL. 14 Sistemsko davanje GZ 161 povećava srednji životni vek K14 miševa. K14 miševima ubrizgavani su (IP) svakodnevno počevši od P4 vehikuluma ili GZ 161 ili im je dodeljeno kombinovano lečenje tri intracerebroventrikularne (ICV) injekcije rhGC na PI, 2, 3 zajedno sa dnevnim (IP) injekcijama GZ 161 počevši od P4. Miševi tretirani vehikulumom imali su srednji životni vek od 15 dana (N=25); GZ 161 tretirani miševi imali su srednji životni vek od 18 dana (N=12; p <0.0001 u poređenju sa onima koji su tretirani vehikulumom); miševi koji su istovremeno primenili GZ 161 i rhGC imali su srednji životni vek od 26 dana (N=13)
SL. Čini se da 15 GZ 161 prelazi krvno/placentalnu barijeru. Sistemsko davanje (20 mg/kg/dnevno u hrani) trudnih WT miševa GZ 161 smanjuje opterećenje GluCer-om u homogenatima čitavog mozga miševa pri rođenju (P0). N=7; p<0.0001)
SL. 16 Lečenje K14 miševa sa GZ 161 utero ima minimalan uticaj za preživljavanje. K14 miševi koji su tretirani svakodnevno (IP), počevši od P4, srednji životni vek vehikuluma od 14 dana (N=13). Sistemsko davanje (20 mg/kg/dan u hrani) GZ 161 trudnim miševima K14, a zatim svakodnevno sistemsko (IP) davanje GZ 161 (5 mg/kg) štenadima počev od P0 produžen vek do 19 dana (N=13), rezultat sličan sistemskom tretiranju štenaca dnevno (IP) sa GZ 161 od 5 mg/kg počevši od P4 (N=12).
SL. 17 nivoa Gb3 u bubrežnom tkivu od 12-mesečnih mužjaka i ženki Fabri miševa tretiranih sa GZ 452, GZ 161 i GZ 638. Miševi su započeli lečenje pri ∼8 meseci starosti i lečeni su 4 meseca sa:60 mg/kg/dan GZ 452, 120 mg/kg/dan GZ 452, 20 mg/kg/dan GZ 161, 300 mg/kg/dan GZ 638, plus WT i UNT kontrole.
DETALJNI OPIS
1
[0046] Ukoliko nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni pojmovi koji se ovde koriste imaju isto značenje kao što je obično poznato od strane stručnjaka u oblasti gde pripada ovo obelodanjivanje. Određeni poželjni postupci obelodanjivanja sada su opisani u kontekstu sledećih priprema i šema.
1
�
�
[0047] U reakciji 1 Preparata A, jedinjenje formule A-7 se pretvara u odgovarajuće jedinjenje formule A-1, gde je X OH, redukcijom A-7 redukcionim sredstvom, poželjno litijum aluminijum hidridom u aprotičnom rastvaraču, kao što je tetrahidrofuran. Reakcija je mešana na temperaturi između 0°C i sobne temperature tokom vremenskog perioda između oko 15 minuta do oko 2 sata, poželjno oko 30 minuta. Alternativno, jedinjenje formule A-7 se pretvara u odgovarajuće jedinjenje formule A-1, gde je X OH, redukcijom A-7 u približno 1 atmosferi vodonika u prisustvu katalizatora, poželjno oksida platine i polarnog rastvarač, takav metanol ili etanol, u periodu od 2 sata do 6 sati, poželjno 4 sata. Alternativno, jedinjenje formule A-7 se pretvara u odgovarajuće jedinjenje formule A-1, gde je X NH, reakcijom A-7 sa hidroksilamin hidrohloridom i natrijum acetatom u polarnom rastvaraču, kao što je etanol, metanol, izopropanol, po mogućnosti izopropanol. Reakciona smeša je mešana na temperaturi između 50-80°C tokom perioda od 2 sata do 7 sati, poželjno 3 sata. Zatim, jedinjenje koje je tako formirano iznad pretvara se u jedinjenje formule A-1 sa redukcionim sredstvom, poželjno metalik natrijum u polarnom protičnom rastvaraču, kao što je etanol, metanol, propanol, poželjno n-propanol. Reakcija je mešana preko noći na 50-80°C, poželjno temperatura refluksa rastvarača.
[0048] U reakciji 2 Preparata A, jedinjenje formule A-7 se pretvara u odgovarajuće jedinjenje
2
formule A-5, gde su R1, n i z kao što je iznad definisano dodavanjem rastvora R1-magnezijum bromida u etru u a rastvor A-7 u aprotičnom rastvaraču, kao što je etar, na temperaturi između oko -60°C i -90°C, poželjno oko -78°C, u vremenskom intervalu od oko 1 sata do oko 4 sata, poželjno oko 2 sata. Alternativno, jedinjenje formule A-7 može da reaguje sa Rl-litijumom da bi se dobilo jedinjenje formule A-5.
[0049] U reakciji 3 Preparata A, jedinjenje formule A-5 se pretvara u odgovarajuće jedinjenje formule A-4, gde su R1, n i z kao što je iznad definisano, tretiranjem A-5 jakom kiselinom, poželjno sumpornom kiselinom u prisustvu acetonitrila. Reakcija je mešana preko noći na sobnoj temperaturi.
[0050] U reakciji 4 Preparata A, jedinjenje formule A-4 se pretvara u odgovarajuće jedinjenje formule A-3, gde su R1, n i z kao što je iznad definisano, tretiranjem A-4 sa kiselinom, poželjno hlorovodoničnom kiselinom. Reakcija je mešana pri refluksu tokom perioda od 18 sati do 72 sata, poželjno 24 sata i na bazi pH=8 tretiranjem neorganskom bazom u vodenom rastvoru, kao što je natrijum hidroksid.
[0051] U reakciji 5 Preparata A, jedinjenje formule A-7 se pretvara u odgovarajuće jedinjenje formule A-6, gde su R1, n i z kao što je iznad definisano, tretiranjem A-7 sa trifenil fosfonijum-lididom da bi se dobilo odgovarajuće alkensko jedinjenje formule A-6. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći.
[0052] U reakciji 6 Preparata A, jedinjenje formule A-6 se pretvara u odgovarajuće jedinjenje formule A-3, gde su R1, n i z kao što je iznad definisano, smanjujući A-6 u približno 1 atmosferi vodonika u prisustvo katalizatora, poželjno paladijuma na ugljeniku i polarnog rastvarača, poput metanola, etanola ili etil acetata. Reakcija se meša na sobnoj temperaturi tokom perioda između oko 2 sata do oko 24 sata, poželjno oko 18 sati. Nakon toga, tako stvoreno jedinjenje se tretira bazom, poželjno litijum hidroksidom, u smeši rastvarača, poput tetrahidrofurana, metanola i vode, dajući jedinjenje A-3. Reakcija je mešana preko noći na sobnoj temperaturi.
[0053] U reakciji 1 Preparata B, jedinjenje formule B-2 se pretvara u odgovarajuće jedinjenje formule B-1, redukcijom B-2 redukcionim sredstvom, poželjno litijum aluminijum hidridom u aprotičnom rastvaraču, kao što je tetrahidrofuran. Reakcija je mešana na temperaturi između 0°C i sobne temperature tokom vremenskog perioda između oko 15 minuta do oko 2 sata, poželjno oko 30 minuta.
[0054] U reakciji 1 Preparata C, jedinjenje C-4 se pretvara u odgovarajuće jedinjenje formule C-3, gde je X brom ili hlorid, reakcijom C-4 sa bornom kiselinom u prisustvu katalizatora, poželjno 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)-dihlorida i kalijum karbonata. Reakcija je zagrevana u mikrotalasnoj u mešavini dimetoksietana i vode na temperaturi između oko 130°C i oko 170°C, poželjno oko 150°C, u vremenskom intervalu od oko 15 minuta do oko 1 sata, poželjno oko 30 minuta. Alternativno, reakcija se može izvesti koristeći rastvarač, takav dioksan i mešati preko noći na 100°C pod konvencionalnim zagrevanjem.
[0055] U reakciji 2 Preparata C, jedinjenje C-3 se pretvara u odgovarajuće jedinjenje formule C-1, pri čemu je f 1 do 8, a A1, X5 i A2 su kao što je iznad definisano, dodavanjem kap etil magnezijum bromida u a smeša C-3 i titanijum izopropoksida u etru. Reakcija je mešana na temperaturi između oko - 50°C i oko -90°C, poželjno oko -70°C. Dobijena reakciona smeša se ostavi da se zagreje na oko 20°C do oko 30°C, poželjno oko 25°C i ostavi se da se meša tokom dodatnog vremenskog perioda između oko 30 minuta do oko 2 sata, poželjno oko 1 sata. Zatim se smeši kap po kap dodaje smeša trifluorid dietil eterat pri temperaturi između oko 20°C i oko 30°C, poželjno oko 25°C.
[0056] U reakciji 3 Preparata C, jedinjenje C-3 se pretvara u odgovarajuće jedinjenje formule C-2, pri čemu su A1, X5 i A2 kao što je iznad definisano, prvo mešanjem suspenzije cerijum (III) hlorida u aprotičnom rastvaraču, kao što je tetrahidrofuran, na sobnoj temperaturi tokom vremenskog perioda između oko 30 minuta do oko 2 sata, poželjno oko 1 sat. Dobijeni organocerijum kompleks ostavljen je da se formira tokom perioda između oko 30 minuta do oko 2 sata, poželjno oko 1 sata, posle čega sledi dodavanje C-3 u aprotičnom rastvaraču, poput tetrahidrofurana. Rezultujuća suspenzija se hladi na temperaturu između oko -60°C i oko -90°C, poželjno oko -78°C i dodaje se organolitijumsko sredstvo, poželjno metil litijum u rastvoru etra. Rezultujuća reakciona smeša se zatim promeša na sobnu temperaturu i ostavi da se meša tokom perioda između oko 16 sati do oko 20 sati, poželjno oko 18 sati.
[0057] U reakciji 1 Preparata D, jedinjenje D-5, gde je R CO2Et ili CN i X je brom ili hlorid, pretvara se u odgovarajuće jedinjenje formule D-3, reakcijom D-5 sa alkil dihalidom, kao što je 1,2-dibromoetan. Nakon toga, tako stvoreno jedinjenje se tretira sa neorganskom bazom,
2
poput litijum hidroksida ili kalijum hidroksida, u smeši rastvarača, poput tetrahidrofurana, metanola, glikola i vode, dajući jedinjenje D-3, gde je f 1 do 8. Reakcija je mešana preko noći na temperaturi između 25°C i 130°C. Alternativno, da bi se dobilo odgovarajuće jedinjenje formule D-3, gde X je X5-A2, D-5 mora prvo da reaguje u skladu sa iznad opisanim postupkom u reakciji 1 preparata C.
[0058] U reakciji 2 Preparata D, jedinjenje D-3 se pretvara u odgovarajuće jedinjenje formule D-1 reakcijom D-3 sa bazom kao što je trietilamin i difenilfosforil azid u aprotičnom rastvaraču, kao što je toluen. Reakcija je zagrevana do temperaturnog opsega između 80°C-110°C, poželjno na 110°C tokom 15 minuta do 1 sata, poželjno 30 minuta. Tako formirano međujedinjenje se zatim tretira sa tert-butil alkoholom tokom noći na 60-110°C, poželjno 90°C. Nakon toga, tako formirani karbamat se pretvara u odgovarajuće jedinjenje formule D-1, gde je f 1 do 8, tretiranjem pod kiselim medijumom, koristeći poželjno trifluorosirćetnu kiselinu u dihlorometanu na sobnoj temperaturi u periodu od 30 minuta do 5 sati, poželjno 2 sata.
[0059] U reakciji 3 Preparata D, jedinjenje D-5, gde je R CO2Et ili CN i X je brom ili hlorid, pretvara se u odgovarajuće jedinjenje formule D-4, reakcijom D-5 sa alkil halidom, kao što je Mel. Nakon toga, tako stvoreno jedinjenje se tretira sa neorganskom bazom, poput litijum hidroksida ili kalijum hidroksida, u smeši rastvarača, poput tetrahidrofurana, metanola, glikola i vode, dajući jedinjenje D-4. Reakcija je mešana preko noći na temperaturi između 25°C i 130°C. Alternativno, da bi se dobilo odgovarajuće jedinjenje formule D-4, gde X je X5-A2, D-5 mora prvo da reaguje u skladu sa iznad opisanim postupkom u reakciji 1 preparata C.
[0060] U reakciji 4 Preparata D, jedinjenje D-4 se pretvara u odgovarajuće jedinjenje formule D-2 reakcijom D-4 sa bazom kao što je trietilamin i difenilfosforil azid u aprotičnom rastvaraču, kao što je toluen. Reakcija je zagrevana do temperaturnog opsega između 80°C-110°C, poželjno na 110°C tokom 15 minuta do 1 sata, poželjno 30 minuta. Tako formirano međujedinjenje se zatim tretira sa tert-butil alkoholom tokom noći na 60-110°C, poželjno 90°C. Nakon toga, tako formirani karbamat se pretvara u odgovarajuće jedinjenje formule D-1, tretiranjem pod kiselim medijumom, koristeći poželjno trifluorosirćetnu kiselinu u dihlorometanu na sobnoj temperaturi u periodu od 30 minuta do 5 sati, poželjno 2 sata.
2
[0061] U reakciji 1 Preparata E, jedinjenje formule E-2, gde je X bromid ili hlorid, pretvara se u odgovarajuće jedinjenje formule E-1, reakcijom E-2 sa metil magnezijum bromidom u etru, na temperaturi između oko -60°C do oko -90°C, pogodno oko -78°C tokom vremenskog perioda između oko 30 minuta do oko 3 sata, poželjno oko 2 sata. Alternativno, da bi se dobilo odgovarajuće jedinjenje formule E-1, gde X je X5-A2, E-2 mora prvo da reaguje u skladu sa iznad opisanim postupkom u reakciji 1 preparata C.
[0062] U reakciji 2 preparata E, jedinjenje formule E-1 se pretvara u odgovarajuće jedinjenje D-2 tretiranjem E-1 sa jakom kiselinom, poželjno sumpornom kiselinom, u prisustvu hloroacetonitrila. Reakcija je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Nakon toga, tako formirano jedinjenje se tretira sa tiourejom u polarnom protičnom rastvaraču, takvom etanolu tokom jedne noći, na 80°C, da bi se dobilo odgovarajuće jedinjenje formule D-2.
Alternativno, E-1 se tretira sa natrijum-azidom i trifluorosirćetnom kiselinom u aprotičnom rastvaraču, takvom dihlorometanu, u temperaturnom opsegu - 10°C do sobne temperature, poželjno 0°C. Tako formirano jedinjenje se redukuje u prisustvu trifenilfosfina u rastvoru tetrahidrofurana i vode da bi se dobilo odgovarajuće jedinjenje formule D-2. Reakcija je mešana na temperaturnom opsegu 25-80°C, poželjno na sobnoj temperaturi u periodu od 2 sata do 24 sata, poželjno 18 sati.
[0063] U reakciji 1 Šeme 1, jedinjenja formule A-1 ili A-2 se pretvaraju u odgovarajuća jedinjenja formule II, gde je f 1 do 8, ili III, dodavanjem trifosgena suspenziji C-1 ili C-2 i trietilamin u aprotičnom rastvaraču, kao što je tetrahidrofuran. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom perioda između oko 5 minuta do oko 20 minuta, poželjno oko 15 minuta, i dodata je mala količina etra. Nastala trietilamonijeva so je odfiltrirana. Odvojeno, natrijum hidrid se dodaje suspenziji A-1 ili A-2, pri čemu je X OH ili NH, u aprotičnom rastvaraču, kao što je tetrahidrofuran, na 0°C ili sobnoj temperaturi. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom vremenskog perioda između oko 5 minuta do oko 20 minuta, poželjno oko 15 minuta i izocijanatni rastvor tetrahidrofuran/eter, tako stvoren iznad, dodat je kap po kap. Alternativno, jedinjenja Formule II i III mogu da se formiraju reakcijom jedinjenja D3 ili D4 sa A-1 i A-2 u prisustvu baze takvog trietilamina i difenilfosforil azida u aprotičnom rastvaraču, takvom toluenu, kao što je opisano u postupku opisanom iznad u reakcija 4 Pripreme D.
[0064] U reakciji 1 Šeme 2, jedinjenja formule A-1, A-2 ili B-1 se pretvaraju u odgovarajuća
2
jedinjenja formule IV, V, VI i VII, pri čemu je f 1 do 8, dodavanjem trifosgena do suspenzije C-1, C-2, D-1 ili D-2 i trietilamina u aprotičnom rastvaraču, kao što je tetrahidrofuran ili toluen. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom perioda između oko 5 minuta do oko 20 minuta, poželjno oko 15 minuta, i dodata je mala količina etra. Nakon toga, A-1 ili A-2, gde je X NH, dodaje se tako dobijenom rastvoru izocijanata i reakcija se meša na temperaturnom opsegu od 25-100°C, poželjno na sobnoj temperaturi tokom perioda od oko 2 sati do 24 sata, poželjno 18 sati.
[0065] U reakciji 1 Šeme 3, jedinjenje formule A-3 se pretvara u odgovarajuća jedinjenja formule VIII, gde je f 1 do 8, i IX, reakcijom A3 sa C1, C-2, D-1 ili D -2 preko peptidnog povezivanja koristeći sredstvo za vezivanje karbodiimid, kao što je 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid i 1-hidroksibenzotriazol ili 2-(1H-7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametil uronijum heksafluorofosfat u rastvaraču, kao što je tetrahidrofuran ili dimetilformamid. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći.
[0066] Ukoliko nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni pojmovi koji se ovde koriste imaju isto značenje kao što je obično poznato od strane stručnjaka u oblasti gde pripada ovo obelodanjivanje. Određeni poželjni postupci obelodanjivanja sada su opisani u kontekstu sledećih priprema i šema.
[0067] Sve farmaceutski prihvatljive soli, prolekovi, tautomeri, hidrati i solvati jedinjenja koji su trenutno obelodanjeni takođe su u obimu ovog obelodanjivanja.
[0068] Trenutno obelodanjena jedinjenja koja su bazne prirode uglavnom su sposobna da formiraju široku paletu različitih soli sa različitim neorganskim i/ili organskim kiselinama. Iako su takve soli uopšteno farmaceutski prihvatljive za davanje životinjama i ljudima, često je u praksi poželjno izolovati neko jedinjenje iz reakcijske smeše kao farmaceutski neprihvatljivu so, a zatim ga jednostavno pretvoriti nazad u jedinjenje slobodne baze tretiranjem sa alkalnim reagensom, a zatim slobodnu bazu pretvara u farmaceutski prihvatljivu adicionu so. Kisele adicione soli baznih jedinjenja mogu se lako pripremiti korišćenjem konvencionalnih tehnika, npr., tretiranjem baznog jedinjenja sa bitno ekvivalentnom količinom izabrane mineralne ili organske kiseline u vodenom medijumu rastvarača ili u pogodnom organskom rastvaraču, kao što su na primer, metanol ili etanol. Pažljivim isparavanjem rastvarača dobije se željena čvrsta so.
2
[0069] Kiseline koje mogu da se koriste za dobijanje farmaceutski prihvatljivih kiselinskih adicionih soli baznih jedinjenja su one koje mogu da formiraju neotrovne adicione soli kiselina, tj., soli koje sadrže farmakološki prihvatljive anjone, kao što su hlorid, bromid, jodid, nitrat, sulfat ili bisulfat fosfatni ili kiselinski fosfat, acetat, laktat, citratni ili kiselinski citrat, tartarat ili bitartrat, sukcinat, maleat, fumarat, glukonat, saharat, benzoat, metansulfonat i pamoat [tj., 1,1'-metilen-bis-(2-hidroksi-3-naftoat)] soli.
[0070] Trenutno obelodanjena jedinjenja koja su kisele prirode, npr., sadrže COOH ili tetrazolni deo, uglavnom su sposobni da formiraju široku paletu različitih soli sa različitim neorganskim i/ili organskim bazama. Iako su takve soli uopšteno farmaceutski prihvatljive za davanje životinjama i ljudima, često je u praksi poželjno izolovati neko jedinjenje iz reakcijske smeše kao farmaceutski neprihvatljivu so, a zatim ga jednostavno pretvoriti nazad u jedinjenje slobodne kiseline tretiranjem sa kiselim reagensom, a zatim slobodnu kiselinu pretvara u farmaceutski prihvatljivu adicionu kiselinu. Ove bazne adicione soli mogu se lako pripremiti korišćenjem uobičajenih tehnika, npr., tretiranjem odgovarajućih kiselih jedinjenja vodenim rastvorom koji sadrži željene farmakološki prihvatljive katjone, a zatim isparavanjem dobijenog rastvora do suvoće, po mogućnosti pod sniženim pritiskom.
Alternativno, oni se takođe mogu pripremiti mešanjem nižih alkanolnih rastvora kiselih jedinjenja i željenog alkoksida alkalnog metala, a zatim isparavanjem dobijenog rastvora do suvoće na isti način kao ranije. U oba slučaja, poželjno je da se koriste stehiometrijske količine reagensa da bi se obezbedila potpunost reakcije i maksimalni prinosi željene čvrste soli.
[0071] Baze koje se mogu koristiti za dobijanje farmaceutski prihvatljivih baznih adicionih soli baznih jedinjenja su one koje mogu formirati netoksične bazne adicione soli, tj. soli koje sadrže farmakološki prihvatljive katjone, kao što su katjoni alkalnih metala (npr., kalijuma i natrijuma) katjoni zemnoalkalnih metala (npr., kalcijuma i magnezijuma), amonijum ili druge u vodi rastvorljive adicione soli amina kao što su N-metilglukamin-(meglumin), niži alkanolamonijak i druge takve baze organskih amina.
[0072] Izotopno obeležena jedinjenja su takođe u obimu ovog obelodanjivanja. Kao što je ovde korišćeno, "izotopno obeleženo jedinjenje" odnosi se na trenutno objavljeno jedinjenje, uključujući njegove farmaceutske soli i prolekove, svaki kao što je ovde opisano, u kome je
2
jedan ili više atoma zamenjeno atomom koji ima atomsku masu ili masni broj različit od atomska masa ili masni broj koji se obično nalazi u prirodi. Primeri izotopa koji se mogu ugraditi u jedinjenja koja su trenutno obelodanjena uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, fluora i hlora, kao što su<2>H,<3>H,<13>C,<14>C,<15>N,<18>O,<17>O,<31>P,<32>P,<35>S,<18>F, i<36>Cl, respektivno.
[0073] Ako se izotopno obeleže trenutno obelodanjena jedinjenja, jedinjenja mogu biti korisna u ispitivanju raspodele lekova i/ili supstrata. Tricijum (<3>H) i ugljenik-14 (<14>C) obeležena jedinjenja su naročito poželjna zbog njihove lakoće pripreme i detekcije. Dalje, supstitucija težim izotopima kao što je deuterijum (<2>H) može pružiti određene terapeutske prednosti koje rezultiraju iz veće metaboličke stabilnosti, na primer povećani in vivo poluraspad ili smanjene potrebe za doziranjem i, prema tome, može biti poželjna u nekim okolnostima. Izotopno obeležena jedinjenja koja su trenutno obelodanjena, uključujući njihove farmaceutske soli i prolekove, mogu se pripremiti na bilo koji način poznat u struci.
[0074] Stereoizomeri (npr., cis i trans izomeri) i svi optički izomeri trenutno obelodanjenog jedinjenja (npr., R i S enantiomeri), kao i racemični, dijastereomerni i druge smeše takvih izomera su u obimu predmetnog obelodanjivanja.
[0075] Jedinjenja, soli, prolekovi, hidrati i solvati koji su sada otkriveni mogu postojati u nekoliko tautomernih oblika, uključujući oblik enola i imina i oblik keto i enamina i geometrijske izomere i njihove smeše. Tautomeri postoje kao smeše tautomernih seta u rastvoru. U čvrstom obliku obično preovlađuje jedan tautomer. Iako se može opisati jedan tautomer, svi tautomeri su unutar opsega predmetnog obelodanjivanja.
[0076] Atropizomeri su takođe u obimu predmetnog obelodanjivanja. Atropizomeri se odnose na jedinjenja koja mogu biti razdvojena na rotaciono ograničene izomere.
[0077] Predmetno obelodanjivanje takođe obezbeđuje farmaceutske sastave koji sadrže najmanje jedno trenutno objavljeno jedinjenje i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač. Farmaceutski prihvatljiv nosač može biti bilo koji takav nosač poznat u stanju tehnike, uključujući one koji su opisani, na primer, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., (A. R. Gennaro edit.1985). Farmaceutski sastavi jedinjenja koja su trenutno otkrivena mogu se pripremiti uobičajenim sredstvima poznatim u struci, uključujući, na primer, mešanje bar jednog trenutno objavljenog jedinjenja sa farmaceutski prihvatljivim nosačem.
[0078] Trenutno otkriveni farmaceutski sastavi mogu se koristiti kod životinje ili čoveka. Prema tome, predstavljeno jedinjenje može biti formulisano kao farmaceutski sastav za oralnu, bukalnu, parenteralnu upotrebu (npr., intravensku, intramuskularnu ili potkožnu), topikalnu, rektalnu ili intranazalnu primenu ili u obliku pogodnom za davanje inhalacijom ili insuflacijom.
[0079] Jedinjenja koja su trenutno predstavljena mogu se takođe formulisati za neprekidno oslobađanje prema postupcima dobro poznatim onima koji imaju uobičajene veštine u ovoj oblasti. Primeri takvih formulacija mogu se naći u patentima Sjedinjenih Država 3,119,742, 3,492,397, 3,538,214, 4,060,598 i 4,173,626.
[0080] Za oralno davanje, farmaceutski sastav može imati oblik, na primer, tablete ili kapsule pripremljene uobičajenim načinom sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom, kao što je vezivno sredstvo (npr., preželatinirani kukuruzni skrob, polivinilpirolidon ili hidroksipropil metilceluloza); punilac (npr., laktoza, mikrokristalna celuloza ili kalcijum fosfat); mazivo (npr., magnezijum stearat, talk ili silika); sredstvo za raspadanje (npr., krumpirov škrob ili natrijum škrob glikolat); i/ili sredstva za vlaženje (npr., natrijum lauril sulfat). Tablete mogu biti obložene postupcima dobro poznatim u stanju tehnike. Tečni preparati za oralno davanje mogu biti u obliku, na primer, rastvora, sirupa ili suspenzije, ili se mogu koristiti kao suvi proizvod za sačinjavanje sa vodom ili drugim pogodnim vehikulumom pre upotrebe. Takvi tečni preparati mogu se pripremiti na uobičajen način sa farmaceutski prihvatljivim sredstvima, kao što je sredstvo za suspendovanje (npr., sirup sorbitola, metil celuloza ili hidrogenizovane jestive masti); emulgator (npr., lecitin ili akacija); ne-vodeni nosač (npr., bademovo ulje, uljni estri ili etilni alkohol); i/ili konzervansa (npr., metil ili propil phidroksibenzoati ili sorbinska kiselina).
[0081] Za bukalnu primenu, smeša može biti u obliku tableta ili pastila formulisanih na konvencionalan način.
[0082] Trenutno obelodanjena jedinjenja mogu se formulisati za parenteralnu primenu injekcijama, uključujući korišćenje uobičajenih tehnika kateterizacije ili infuzije. Formulacije
1
za injekcije mogu biti predstavljene u obliku jedinične doze, npr., u ampulama ili u višedoznim kontejnerima, sa dodatim konzervansom. Sastavi mogu biti u takvim oblicima kao što su suspenzije, rastvori ili emulzije u uljnom ili vodenom nosaču i mogu da sadrže sredstvo za formulisanje kao što je sredstvo za s, stabilizovanje i/ili dispergovanje koje su prepoznali stručnjaci u ovoj oblasti. Alternativno, aktivni sastojak može biti u obliku praška za rekonstituciju sa pogodnim nosačem, npr., sterilnom vodom bez pirogena, pre upotrebe.
[0083] Za lokalno davanje, trenutno obelodanjeno jedinjenje može se formulisati kao mast ili krema.
[0084] Trenutno obelodanjena jedinjenja mogu se takođe formulisati u rektalne sastave , kao što su supozitoriji ili retenzije, npr., koje sadrže uobičajene baze supozitorija kao što je kakao maslac ili drugi gliceridi.
[0085] Za intranazalno davanje ili davanje inhalacijom, trenutno obelodanjena jedinjenja mogu se pogodno isporučiti u obliku rastvora ili suspenzije iz kontejnera za raspršivanje pumpe koji pacijent istiskuje ili pumpa ili kao aerosolni sprej iz kontejnera pod pritiskom ili nebulizatora, upotrebom pogodnog potisnog sredstva, npr. dihlorodifluorometana, trihlorofluorometana, dihlortetrafluoroetana, ugljen-dioksida ili drugog pogodnog gasa. U slučaju aerosola pod pritiskom dozirna jedinica može se odrediti obezbeđivanjem ventila za doziranje dozirane količine. Kontejner pod pritiskom ili nebulizator može sadržati rastvor ili suspenziju trenutno obelodanjenog jedinjenja. Kapsule i ulošci (napravljeni, na primer, od želatina) za upotrebu u inhalatoru ili insuflatoru, mogu se formulisati tako da sadrže mešavinu praška trenutno predstavljenog jedinjenja i pogodnu prašnu bazu, kao što je laktoza ili skrob.
[0086] Predložena doza trenutno objavljenog jedinjenja za oralnu, parenteralnu ili bukalnu primenu prosečnom odraslom čoveku za lečenje ili prevenciju bolesnog stanja povezanog sa TPO je oko 0.1 mg do oko 2000 mg. U određenim slučajevima, predložena doza je od oko 0.1 mg do oko 200 mg aktivnog sastojka po jedinici doze. Bez obzira na količinu predložene doze, primena jedinjenja može da se dogodi, na primer, 1 do 4 puta dnevno.
[0087] Formulacije aerosola za lečenje ili sprečavanje iznad pomenutih stanja kod prosečnog odraslog čoveka su ponajpre raspoređene tako da svaka odmerena doza ili "pućkanje"
2
aerosola sadrži oko 20 mg do oko 10.000 mg, poželjno, oko 20 mg do oko 1000 mg trenutno obelodanjenog jedinjenja. Ukupna dnevna doza aerosola biće u opsegu od oko 100 mg do oko 100 mg. U određenim slučajevima, ukupna dnevna doza sa aerosolom generalno će biti u opsegu od oko 100 mg do oko 10 mg. Davanje može biti nekoliko puta dnevno, na primer 2, 3, 4 ili 8 puta, dajući na primer 1, 2 ili 3 doze svaki put.
[0088] Formulacije kombinacije aerosola za lečenje ili prevenciju iznad navedenih stanja kod prosečnog odraslog čoveka su ponajpre raspoređene tako da svaka odmerena doza ili "pućkanje" aerosola sadrži od oko 0.01 mg do oko 1000 mg kombinacije koja sadrži trenutno obelodanjeno jedinjenje. U određenim slučajevima, svaka odmerena doza ili "pućkanje" aerosola sadrži oko 0.01 mg do oko 100 mg kombinacije koja sadrži trenutno objavljeno jedinjenje. U određenim slučajevima, svaka odmerena doza ili "pućkanje" aerosola sadrži oko 1 mg do oko 10 mg kombinacije koja sadrži trenutno objavljeno jedinjenje. Davanje može biti nekoliko puta dnevno, na primer 2, 3, 4 ili 8 puta, dajući na primer 1, 2 ili 3 doze svaki put.
[0089] Farmaceutski sastavi i postupci lečenja ili prevencije koji sadrže davanje prolekova najmanje jednog trenutno objavljenog jedinjenja takođe su u obimu predmetnog obelodanjivanja.
Test glukozilceramid sintaze
[0090] Enzimski test koji koristi mikrozome kao izvor aktivnosti glukozilceramid sintaze. Fluorescentni ceramidni supstrat dostavlja se enzimu vezanom na membranu kao kompleks sa albuminom. Posle reakcije, ceramid i glukozilceramid su razdvojeni i kvantifikovani HPLC reverzne faze sa detekcijom fluorescencije.
Procedura
Priprema mikrozoma iz ćelija melanoma A375:
[0091] Suspenzija ćelije je ultrazvučna na ledu da bi se završila liza ćelije, nakon čega je usledilo centrifugiranje, centrifugiranjem, na 10.000 g tokom 10 minuta. na 4°C Supernatant je očišćen ponovo centrifugiranjem na 100000 g tokom 1 sata na 4°C u peletima, ponovo suspendovan u puferu za liziranje, alikvotiran i čuvan na -80°C.
Test glukozilceramid sintaze
[0092] Supstrat i mikrozom se kombinuju u razmeri 1:1, dobro se izmešaju na tanjiru koji služi za mućkanje, zapečate ploču i inkubiraju 1 sat na sobnoj temperaturi u mraku
[0093] Prekidač sa rastvorom za zaustavljanje u reakcijsku ploču i prenesen analitički tanjir;
RP- HPLC Analiza
[0094]
kolona:MercuryMS™ (Phenomenex) zamenjivo punjenje (Luna C8, 3 □m, 20 x 4 mm)
sistem:Agilent 1100 sa Agilent 1200 serijski fluorescentni detektor
mobilna faza:1% mravlje kiseline u 81% metanola, 19% vode, protok 0.5 ml/min, izokratski protok, 4 minuta
uzorak razblaživača:0.1 mM C8ceramid (adsorpcioni blokator) u 50% izopropanola, 50% vode (v/v)
detekcija fluorescencije:□ex= 470 nm, □em= 530 nm
pod ovim uslovima, NBD C6GluCer je imao vreme zadržavanja oko 1.7 min, a NBD C6Cer je radio oko 2.1 min; vrhovi su jasno bili odvojeni od osnovne linije i automatski ih je integrisao HPLC softver
% konverzije supstrata u proizvod korišćeno je kao očitanje za ispitivanje inhibitorom kako bi se izbegla varijabilnost usled greške razblaženja ili isparavanja uzorka
[0095] Sva primerena jedinjenja imala su IC50vrednost manju od 5µM u Reporter testu. EKSPERIMENTALNI DEO
Opšta procedura A:Karbamat/urea formacija sa trifosgenom
[0096] Do suspenzije aminskog hidrohlorida (1 ekvivalent) i trietilamina (3-4 ekvivalenta) u THF (koncentracija ∼ 0.2M) na sobnoj temperaturi je dodat trifosgenom (0.35 ekvivalent). Reakciona smeša je mešana tokom 10 minuta i dodata je mala količina etra (1-2 mL).
Trietilamonijum so je odfiltrirana da bi se dobio bistri rastvor izocijanata u THF/etru.
[0097] U rastvor alkohola (1.5 ekvivalenta) u THF (koncentracija) ∼ 0.2M) na sobnoj temperaturi je dodat NaH [60%, ulje] (1.5 ekvivalenta). Reakciona smeša je mešana tokom
4
15 minuta, a gornji rastvor (izocijanat u THF/etru) je dodat u kapima.
[0098] U standardnoj obradi, reakcija je ugašena slanim rastvorom. Rastvor je ekstrahovan sa EtOAc i organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Sirovi materijal je prečišćen na kombinovanju (SiO2uložak, CHC13i 2N NH3u MeOH) da bi se dobio odgovarajući karbamat.
[0099] Alternativno:Do suspenzije aminskog hidrohlorida A (1 ekvivalent) i trietilamina (3-4 ekvivalenta) u THF (koncentracija ∼ 0.2M) na sobnoj temperaturi je dodat trifosgen (0.35 ekvivalent). Reakciona smeša je mešana tokom 10 minuta i dodata je mala količina etra (1-2 mL). Trietilamonijum so je odfiltrirana da bi se dobio bistri rastvor izocijanata u THF/etru.
[0100] U rastvor amina B (1 ekvivalent) u THF (koncentracija) ∼ 1.0M) na sobnoj temperaturi dodaje gornji rastvor u vidu kapi (izocijanat u THF/eteru). Reakcija je mešana tokom 18 h i koncentrovana. Sirovi materijal je prečišćen na kombinovanju (SiO2uložak, CHC13i 2N NH3u MeOH) da bi se dobila odgovarajuća urea.
Opšta procedura B:Alkilacija sa organocerijumom
[0101] Suspenzija CeCl3(4 ekvivalenta) u THF (koncentracija ∼ 0.2M) je mešana na sobnoj temperaturi jedan sat. Suspenzija je ohlađena do -78°C i dodaje se kap po kap MeLi/Eter [1.6M] (4 ekvivalenta). Organocerijum kompleks je ostavljen da se formira tokom 1 h, a kap po kap je dodat rastvor nitrila (1 ekvivalent) u THF (koncentracija 2.0M). Reakciona smeša je zagrevana do sobne temperature i mešana 18 h. Rastvor je ohlađen do 0°C i ugašen vodom (∼ 1 mL) nakon čega sledi dodavanje 50% vodenog rastvora amonijum hidroksida (∼ 3 mL) sve dok se nije formirao talog i slegao na dno bočice. Smeša je filtrirana kroz jastučić od celita i koncentrovana. Sirovi materijal je tretiran rastvorom HCl/dioksana [4.0M].
Međujedinjenje arilpropan-2-amin hidrohlorid je trituriran u etru i korišćen je kao što jeste za sledeći korak. Alternativno, neobrađeni bazni amin je prečišćen na kombinovanju (SiO2uložak, CHC13i 2N NH3u MeOH) da bi se dobio odgovarajući arilpropilamin.
Opšta procedura C:Formacija uree sa karbonil diimidazolom (CDI)
[0102] Rastvor amina A (1 ekvivalent) i CDI (1.3 ekvivalent) in THF (koncentracija ∼ 0.15M) mešan je do refluksa 1 h. Dodaje se rastvor amina B (1.3 ekvivalent) u THF i reakciona smeša se meša dodatnih 1.5 h. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i razblažena sa etrom. Željeno jedinjenje se istaloži i odfiltrira. Sirovi materijal je prečišćen kombinovano (osnovni uložak Al2O3, CHCl3i MeOH) ili (SiO2uložak, CHC13i 2N NH3u MeOH) da bi se dobila odgovarajuća urea.
Opšta procedura D:Urea formacija sa trifosgenom
[0103] Do suspenzije amina A (1 ekvivalent) i trietilamina (4 ekvivalenta) u THF (koncentracija ∼ 0.15M) na sobnoj temperaturi je dodat trifosgen (0.35 ekvivalent).
Reakciona smeša je mešana tokom 15 minuta i dodat je amin B (1.1 ekvivalent). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h, a zatim je razblažena sa EtOAc.
Organski sloj je ispran vodenim NaOH [1.0 M], osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Sirovi materijal je prečišćen na kombinovanju (SiO2uložak, CHC13i 2N NH3u MeOH) da bi se dobila odgovarajuća urea.
Opšta procedura E:Suzuki spajanje
[0104] Rastvor aril halogenida (1 ekvivalent) u smeši DME/vode [4:1] (koncentracija∼ 0.2M) dodata je boronska kiselina (2 ekvivalenta), paladijum katalizator (0.1 - 0.25 ekvivalenta) i natrijum karbonat (2 ekvivalenta). Reakciona smeša je zagrevana u mikrotalasnoj 25 minuta na 150°C. Nakon filtriranja kroz celitni čep i koncentriranja, sirovi produkt je prečišćen na kombinovanom (SiO2uložak, CHC13i 2N NH3u MeOH) da bi se dobio odgovarajući adukt za spajanje.
[0105] Alternativno:Rastvor aril halogenida (1 ekvivalent) u smeši toluena/vode [20:1] (koncentracija ∼ 0.2 M) dodata je boronska kiselina (1.3-2.5 ekvivalenta), paladijum katalizator (0.05-0.15 ekvivalenta), tricikloheksilfosfin (0.15-0.45 ekvivalenta) i kalijum fosfat (5 ekvivalenta). Reakciona smeša je zagrevana u mikrotalasnoj 25 minuta na 150°C. Nakon filtriranja kroz celitni čep i koncentriranja, sirovi produkt je prečišćen na kombinovanom (SiO2uložak, CHC13i 2N NH3u MeOH) da bi se dobio odgovarajući adukt za spajanje.
Opšta procedura F:Hidrogenacija
[0106] U rastvor supstrata u metanolu, etanolu ili EtOAc (koncentracija ∼ 0.2M) dodat je paladijum katalizator (20% w/w supstrata). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi ispod 1 atm H2do završetka. Reakcija je filtrirana kroz celitni čep, a zatim dva ispiranja sa hloroformom. Sirovi proizvod je koncentrovan i prečišćen na kombinovani udar (SiO2uložak, CHC13i 2N NH3u MeOH) da bi se dobio hidrogenizovani proizvod. Alternativno, krajnji materijal je prečišćen taloženjem ili rekristalizacijom.
Opšta procedura G:Ciklopropanacija
[0107] Mešavini arilnitrila (1 ekvivalent) i Ti (Oi-Pr)4(1.7 ekvivalenta) uz mešanje na -70 °C, dodavan je u vidu kapi EtMgBr [3.0 M u etru] (1.1 ekvivalenta). Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do 25 °C i mešana je tokom jednog sata. U gornju smešu je u vidu kapi dodat BF3·Et2O (3 ekvivalenta) na 25 °C. Posle dodavanja, smeša je mešana još 2 sata, a potom je ugašena vodenom HCl [2M]. Dobijeni rastvor je zatim načinjen baznim dodavanjem vodene NaOH [2M]. Organski materijal je ekstrahovan sa etil etrom. Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi materijal je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (eluiranje sa naftnim etrom/EtOAc:10/1 do 1/1) da bi se dobio odgovarajući 1-aril-ciklopropanamin.
Opšta procedura H:Spajanje preko in-situ Curtius preuređivanja
[0108] Smeša kiseline (1 ekvivalent), trietilamina (2.5 ekvivalenta), DPPA (1.0 ekvivalenta) u toluenu (koncentracija ∼ 0.3M) je refluksovan 30 minuta. Smeša je ohlađena do sobne temperature i dodat je alkohol (1 ekvivalent). Nakon dodavanja, smeša je zagrevana na 90 °C tokom 18 h. Reakcija je ohlađena do sobne temperature, razblažena sa EtOAc i isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata. Organska faza je osušena preko Na2SO4, koncentrovana i prečišćena pre-TLC (EtOAc/MeOH 5:1, koja sadrži 1% TEA) da bi se dobio odgovarajući karbamat.
Opšta procedura I:Amidna formacija koristeći EDCI
[0109] Rastvoru amina (1 ekvivalent) u DMF ili THF (koncentracija ∼ 0.3M) dodat je EDCI (1.2-2.5 ekvivalenta), HOBT (1.2-2.5 ekvivalenta), DIPEA (1.2-2.5 ekvivalenta) i trietilamin (nekoliko kapi). Reakciona smeša je mešana i dodata je kiselina (1.2 ekvivalenta). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h, a zatim koncentrovana. Ostatak je razblažen u EtOAc i ispran sa slanim rastvorom. Organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan. Sirovi materijal je prečišćen prep-HPLCMS ili kombinovala blic (SiO2kartridž, CHCl3i 2N NH3u MeOH).
Pripremanje A
Međujedinjenje 1
2-(3-bromofenil)propan-2-amin hidrohlorid
[0110] Rastvoru metil 3-bromobenzoata (15.0 g, 69.8 mmol) u THF-u (140 mL) na -78 °C dodaje se u vidu kapi rastvor MeMgBr/dietil etra [3.0M] (58 mL). Reakciona smeša je zagrevana do sobne temperature i mešana 2 h. Rastvor je sipao u vodeni zasićeni rastvor amonijum-hlorida i organski materijal je ekstrahovan sa EtOAc. Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobio odgovarajući alkohol (14.9 g) koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja.
[0111] Rastvoru 2-(3-bromofenil)propan-2-ola (17.2 g, 79.8 mmol) u hloroacetonitrilu (160 mL) dodata je sirćetna kiselina (14 mL). Reakciona smeša je ohlađena do 0°C u vidu kapi je dodat H2SO4(14 mL). Reakciona smeša je zagrevana do sobne temperature i mešana 18 h. Zatim je reakcija sipana u led i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je ispran vodenim rastvorom NaOH [1.0M] i slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4i koncentrovan da bi se dobio odgovarajući hloroacetamid (21.4 g) koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja.
[0112] Rastvoru N-(2-(3-bromofenil)propan-2-il)-2-hloroacetamida (20.3 g) u etanolu (120 mL) dodata je sirćetna kiselina (20 mL). Reakciona smeša je mešana u trajanju od 18 h. Rastvor je ohlađen do sobne temperature i talog je filtriran na celitnom jastučiću. Filtrat je koncentrovan i ostatak je rastvoren u EtOAc. Organski sloj je tretiran vodenim rastvorom NaOH [1.0M], osušen preko Na2SO4i koncentrovan. Sirovi materijal je tretiran rastvorom HCl/dioksana [4M]. Međujedinjenje 2-3-bromofenil)propan-2-amin hidrohlorid je trituriran u etru i korišćen kao za sledeći korak (7.50 g, 43%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.69 (q, J = 1.8 Hz, 1H), 7.55 (ddd, J = 1.0, 1.8, 7.9 Hz, 1H), 7.49 (ddd, J = 1.0, 2.0, 8.0 Hz, 1H), 7.38 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 1.71 (s, 6H) ppm.
Pripremanje B
Međujedinjenje 2
2-(5-bromo-2-fluorofenil)propan-2-amin hidrohlorid
[0113] Rastvoru 5-bromo-2-fluorobenzojeve kiseline (4.85 g, 22.8 mmol) u metanolu (45 mL) je dodat H2SO4(4.5 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h, a rastvor je koncentrovan. Ostatak je tretiran vodenim rastvorom NaOH [10% w/v] i organski materijal je ekstrahovan sa CHC13. Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobio odgovarajući ester (4.69 g, 91%) koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja.
[0114] Ester međujedinjenje (4.69 g, 20.1 mmol) je pretvoreno u međujedinjenje 2 koristeći isti postupak naveden u primeru međujedinjenja 1, dajući odgovarajuću amonijum so (3.94 g, 67% ukupnog prinosa) u obliku bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.67 -7.57 (m, 2H), 7.21 (dd, J = 8.7, 12.3 Hz, 1H), 1.77 (s, 6H) ppm.
Međujedinjenje 3
2-(3-bromo-4-fluorofenil)propan-2-amin hidrohlorid
[0115] 5-bromo-2-fluorobenzojeva kiselina je transformisana u međujedinjenje 3 koristeći isti postupak naveden u primeru međujedinjenja 2 da bi se dobila odgovarajuća amonijumova so (2.79 g, 49% ukupnog prinosa) kao bela čvrsta supstanca.
Međujedinjenje 4
2-(3-bromo-2-fluorofenil)propan-2-amin
[0116] 3-bromo-2-fluorobenzojeva kiselina je transformisana u međujedinjenje 4 koristeći isti postupak naveden u primeru međujedinjenja 2 da bi se dobio odgovarajući amin kao bledo žuto ulje.
Međujedinjenje 5
2-(4-bromofenil)propan-2-amin hidrohlorid
[0117] Upotrebom opšteg postupka B, bromobenzonitril (2.00 g, 11.0 mmol) je pretvoren u odgovarajući 2-(4-bromfenil)propan-2-amin, koji je dobijen kao smeđe ulje (1.20 g, 51%). Pripremanje C
Međujedinjenje 6
1,4-Diazabiciklo [3.2.2] nonan
[0118] U mešani rastvor 1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-3-on (1.0 g, 7.2 mmol) u 1,4-dioksanu (7.2 ml) na sobnoj temperaturi je dodat litijum-aluminijum hidrid [2.0M/THF ] (4.1 mL, 8.2 mmol). Reakciona smeša je zatim zagrevana na refluksu tokom 6 sati pre hlađenja do sobne temperature. Reakcija je ugašena postepenim dodavanjem 200 ul H2O, 200 uL 15% vodenog NaOH i 600 uL H2O. Smeša je filtrirana kroz Celite koji je potom ispran sa EtOAc.
Kombinovani filtrat je koncentrovan u vakuumu da bi se dobio proizvod (0.82 g, 90%) koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.28-3.25 (m, 1H), 2.99-2.95 (m, 8H), 1.86-1.80 (m, 3H), 1.69-1.64 (m, 2H) ppm.
Pripremanje D
Međujedinjenje 7
2-Metilhinuklidin-3-ol
[0119] Rastvor kalijum karbonata (11.4 g, 82.8 mmol) i hinuklidin hidrata (5.00 g, 20.4 mmol) je rastvoren u H2O (15.6 mL). Kada se potpuno rastopi, dodat je dihlorometan (20.4 mL) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Organska faza je odvojena i vodena faza je ekstrahovana sa hloroformom (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Proizvod je korišćen bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) 2.79 (s, 1H), 5.19 (s, 1H), 3.14-3.06 (m, 2H), 2.99-2.91 (m, 2H), 2.57-2.55 (m, 1H), 1.98-1.93 (m, 4H) ppm.
[0120] 2-metilenhinuklidin-3-on (3.50 g) u etanolu (30 ml) je smanjen preko 10% Pd/C (50 tež.%) u atmosferi H2. Kada je TLC ocenjen potpuno pomoću TLC (∼3 dana), katalizator se odfiltrira i filterski kolač se ispere sa etil acetatom. Rastvarač je uklonjen u vakuumu da bi se dobio željeni proizvod (2.80 g, 80%) i korišćeno bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz , CDCl3) 3.37-3.31 (m, 1H), 3.21-3.13 (m, 2H), 3.09-3.00 (m, 1H), 2.97-2.89 (m, 1H), 2.46-2.43 (m, 1H), 2.05-1.91 (m, 4H), 1.34 (d, J = 7.6 Hz, 3H) ppm.
[0121] U 2-metilhinuklidin-3-on (0.50 g, 3.60 mmol) u 1,4-dioksanu (18 ml) na sobnoj temperaturi je dodat litijum-aluminijum hidrid [1.0M/THF] (4.1, 4.1 mmol). Reakciona
4
smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 15 minuta. Reakcija je ugašena postepenim dodavanjem 116 ul H2O, 116 uL 15% vodenog NaOH i 348 uL H2O. Smeša je filtrirana kroz Celite koji je potom ispran sa EtOAc. Rastvarač je uklonjen u vakuumu da bi se dobio proizvod (0.48 g, 95%) koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja kao 2:1 smeša dijastereomera.
Pripremanje E
Međujedinjenje 8
1-azabiciklo [3.2.2] nonan-4-ol
[0122] U 1-azabiciklo[3.2.2]nonan-4-on (0.20 g, 1.4 mmol) u 1,4-dioksanu (2.8 ml) na 0°C dodat je litijum-aluminijum hidrid [1.0M/THF] (1.7 mL, 1.7 mmol). Reakciona smeša je održavana pri 0 °C u trajanju od 15 minuta. Reakcija je ugašena postepenim dodavanjem 46 ul H2O, 46 uL 15% vodenog NaOH i 138 uL H2O. Smeša je filtrirana kroz Celite koji je potom ispran sa EtOAc. Rastvarač je uklonjen in vacuo da bi se dobio proizvod (0.19 g, 96%) koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.90-3.86 (m, 1H), 3.09-3.03 (m, 1H), 2.96-2.91 (dd, J = 9.2, 6.8 Hz, 1H), 2.86-2.75 (m, 3H), 2.71-2.64 (m, 1H), 2.34-2.27 (bs s, 1H), 1.98-1.86 (m, 3H), 1.71-1.59 (m, 3H), 1.51-1.35 (m, 1H) ppm.
Pripremanje F
Međujedinjenje 9
1-Azabiciklo[2.2.1]heptan-3-ol
[0123] Mešavini natrijum-metoksida (2.00 g, 37.9 mmol) u metanolu (9 mL) na 0°C dodat je glicin metil ester hidrohlorid (4.76 g, 37.9 mmol) i dimetil itakonat (5.00 g, 31.6 mmol.) Reakcija je zagrevana na refluksu tokom 16 sati pre hlađenja do sobne temperature. Čvrsta supstanca je filtrirana i isprana dihlorometanom. Filtrat je koncentrovan, a ostatak razblažen sa 5N HCl (50 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan dihlorometanom (4 x 50mL), osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Proizvod je korišćen bez daljeg prečišćavanja.
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.04 (dd, J = 82.0, 17.6 Hz), 3.74-3.64 (m, 8H), 3.32-3.24 (m, 1H), 2.77-2.63 (m, 2H) ppm.
[0124] Metil 1-(2-metoksi-2-oksoetil)-5-oksopirolidin-3-karboksilatu (3.40 g, 16.0 mmol) u THF (20 mL) na 0°C dodat je boran-THF [1.0M/THF] (32.0 mL, 32.0 mmol). Reakcija je mešana na refluksu tokom 1 sata, a zatim je ohlađena do sobne temperature gde je ostavljeno da se meša dodatnih 12 sati. Reakcija je ugašena dodatkom zasićenog rastvora kalijum karbonata (5.52 g u 20 ml H2O) i zagrevana uz refluks tokom dodatnih 1 sat pre hlađenja do sobne temperature. Rastvarač je uklonjen u vakuumu, a ostatak je kiseo dodavanjem 5N HCl (25 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa dihlorometanom (2 x 30 mL). PH vodenog sloja je zatim načinjen baznim dodatkom čvrstog kalijum karbonata. Vodeni sloj je dalje ekstrahovan sa dihlorometanom (5 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Proizvod je korišćen bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.66 (s, 3H), 3.63 (s, 3H), 3.29 (ABq, 2H, J = 24.0, 16.8 Hz), 3.06-3.02 (m, 2H), 2.87-2.81 (m, 1H), 2.71-2.65 (m, 1H), 2.56-2.50 (m, 1H), 2.09-2.04 (m, 2H) ppm.
[0125] U refluksovani rastvor kalijuma terc-butoksida (2.46 g, 22.0 mmol) u toluenu (32 mL) dodat je u vidu kapi rastvor metil 1-(2-metoksi-2-oksoetil)pirolidin-3-karboksilata (2.00 g, 10.0 mmol) u toluenu (10 mL) tokom jednog sata. Reakcija je ostavljena da se meša i dodatnih 3 sata na refluksu pre prvog hlađenja do sobne temperature, a zatim ohlađena do -10 °C. Zatim je uz mešanje dodata sirćetna kiselina (1.3 mL). Sloj toluena je ekstrahovan sa 5N HCl (4 x 50mL). Kombinovani vodeni slojevi su zagrevani na 110 °C tokom 8 sati. Reakcija je zatim ohlađena do sobne temperature i zapremina smanjena za polovinu in vacuo. pH vrednost reakcione smeše je zasnovana dodatkom čvrstog kalijum karbonata. Vodeni sloj je ekstrahovan dihlorometanom (5 x 50 ml), a kombinovani organski slojevi su koncentrovani in vacuo. Sirovom proizvodu je dodat etil etar. Čvrsta supstanca je profiltrirana dajući željeni proizvod (0.30 g, 27%) koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.05-2.96 (m, 3H), 2.76 (s, 2H), 2.72-2.66 (m, 2H), 2.09-2.01 (m, 1H), 1.78-1.71 (m, 1H) ppm.
[0126] 1-azabiciklo[2.2.1]heptan-3-on (0.30 g, 2.7 mmol) u etanolu (2-3 mL) je redukovan preko PtO2(50 tež.%) u atmosferi H2. Posle 4 sata mešanja, katalizator je filtriran, a filter kolač ispran etanolom. Etanol je uklonjen u vakuumu da bi se dobio željeni proizvod (0.29 g, 95%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.36-4.35 (m, 1H), 3.10-3.05 (m, 1H), 2.95-2.88 (m, 1H), 2.72-2.66 (m, 1H), 2.63-2.57 (m, 2H), 2.48-2.44 (dd, J = 10.0, 3.2 Hz, 1H), 2.11-2.05 (m, 2H), 1.51-1.44 (m, 1H) ppm.
Pripremanje G
Međujedinjenje 10
(R)-3-metilhinaldin-3-amin i (S)-3-metilhinaldin-3-amin
[0127] U dobro mešani rastvor MeLi [3.0M/dietil etra] (67.0 mL, 201 mmol) u bezvodnom dietil etru (150 mL) na -78 °C je dodavan, kap po kap, rastvor hinuklidin-3-on (12.5 g, 100 mmol) u dietil etru (100 mL). Dobijeni rastvor je održavan na -78 °C tokom 1 sata, a zatim na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Voda (60 mL) je dodavana u kapima na 0 °C i smeša je koncentrovana u vakuumu da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen neutralnom hromatografijom na koloni aluminijum-oksida (0-20% MeOH u CHC13) da bi se dobio 3-metilhinuklidin-3-ol (10.0 g, 71%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. Za mešanje acetonitrila (250 mL) na 0 °C polako je dodata koncentrovana sumporna kiselina (100 mL). Dobijeni rastvor je dodat u kapima smeši 3-metilhinuklidin-3-ola (9.10 g, 64.5 mmol) u acetonitrilu (250 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 60 sati, zatim je ohlađena ledenoj kupki i načinjena baznim pomoću vodenog rastvora natrijum hidroksida do pH 10. Smeša je ekstrahovana sa 5:1 (v/v) CHCl3/i-PrOH. Organski sloj je koncentrovan da bi se dobio ostatak koji je razblažen sa 2N vod. HCl i isprati sa 5:1 (v/v) CHCl3/i-PrOH. Preostali vodeni sloj je zatim načinjen baznim sa 2N NaOH i ekstrahovan sa 5:1 (v/v) CHCl3/i-PrOH. Kombinovani organski slojevi su isprani vodom, osušeni (Na2SO4) i koncentrovani da bi se dobilo 9.5 g (82%) željenog jedinjenja u obliku svetlo žutog ulja. Dva enantiomera gornjeg međujedinjenja su odvojeni jedan od drugog korišćenjem hiralne kolone na sistemu nadkritične fluidne hromatografije (HFC).
[0128] Rastvor gornjeg hiralnog acetamidnog međujedinjenja (9.50 g, 52.0 mmol) u konc. HCl (100 mL) je refluksovan tokom 3 dana, ohlađen ledenom kupelji i neutralizovan vodenim rastvorom natrijum hidroksida do pH 1. Smeša je ispran sa 5:1 (v/v) CHCl3/i-PrOH. Vodeni sloj je zatim načinjen baznim sa 2N NaOH i ekstrahovan sa 5:1 (v/v) CHCl3/i-PrOH. Kombinovani ekstrakti su isprani vodom, osušeni (Na2SO4) i koncentrovani da bi se dobilo 5.00 g (69%) željenog hiralnog jedinjenja u obliku svetlo žute polučvrste supstance.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 2.72-2.39 (m, 6H), 2.01-1.96 (m, 1H), 1.67-1.61 (m, 1H), 1.43-1.36 (m, 2H), 1.23-1.17 (m, 1H), 1.09 (s, 3H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ 65.3, 48.3, 46.6, 46.4, 34.2, 30.0, 24.8, 22.8 ppm. Čistoća:> 99% (GC-MS); Vreme zadržavanja 6.63 min; (M) 140.1.
4
Pripremanje H
Međujedinjenje 11
2-(3-(4-fluorofenil)izotiazol-5-il)propan-2-amin
[0129] U mešanu suspenziju 4-fluorobenzamida (70.00 g, 503.1 mmol) u toluenu (900 mL) dodat je hlorokarbonil sulfenil hlorid (83.0 mL, 1.00 mol). Smeša je zagrevana preko noći na 60°C i koncentrovana. Dobijena žutosmeđa supstanca triturirana je metilen hloridom (200 mL), sakupljena filtriranjem usisavanjem i isprana dodatnim metilen hloridom (4 x 70 mL). Sirovi proizvod impregniran je na silicijum dioksidu (100 g) i hromatografiran u velikom levka za filtriranje suvom napunjenom silika gelom koristeći gradijent heksan/etil acetat. Proizvod 5-(4-fluorofenil)-1,3,4-oksiatiazol-2-on je dobijen kao sivo čvrsta supstanca (55.98 g, 56%).
[0130] U mešani rastvor 5-(4-fluorofenil)-1,3,4-oksiatiazol-2-on (42.80 g, 217.1 mmol) u odihlorobenzen (600 mL) dodat je etil propiolat (66.0 mL, 651 mmol). Smeša je zagrevana preko noći na 135 °C i koncentrovana. Preostalo ulje je prečišćeno fleš hromatografijom korišćenjem gradijenta heksana/etil acetata da bi se dobio etil 3-(4-fluorofenil)izotiazol-5-karboksilat kao bledo zlatna čvrsta supstanca (17.35 g, 32%). Više polaran, etil 3-(4-fluorofenil)izotiazol-4-karboksilat izomer (dobijen u ∼57/43 odnosu prema željenom proizvodu) je odbačen.
[0131] U mešani i ohlađeni (0 °C) rastvor etil 3-(4-fluorofenil)izotiazol-5-karboksilata (38.50 g, 153.2 mmol) u THF (400 ml) dodat je rastvor metilmagnezijum bromida u dietil etru (3.0 M, 128 mL, 384 mmol), u vidu kapi tokom 20 minuta. Posle još sat i po na 0 °C, reakcija je ugašena laganim dodavanjem etil acetata (20 mL) i koncentrovana. Ostatak je rastvoren u vodenom NH4C1 (400 mL) i ekstrahovan etil acetatom (2 x 150 mL). Kombinovani ekstrakti su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Dobijeni jantarni sirup je prečišćen fleš hromatografijom korišćenjem gradijenta heksana/etil acetata da bi se dobio 2-(3-(4-fluorofenil)izotiazol-5-il)propan-2-ol kao mekana, zlatna čvrsta supstanca (29.02 g, 80% ).
[0132] 2-(3-(4-Fluorofenil)izotiazol-5-il)propan-2-ol (29.00 g, 122.2 mmol) uzet je u tionil hloridu (75 mL). Smeša je kratko ohlađena (ledena kupka) i mešana. Nakon 4 sata reakcija je koncentrovana i ostatak je podeljen između etil acetata (200 mL) i vodenog NaHCO3(300 mL). Organski sloj je kombinovan sa bakterijskim ekstraktom vodenog sloja (etil acetat, 1 x 100 mL), osušen (Na2SO4) i koncentrovan da bi se dobila smeša proizvoda 5-(2-hloropropan-2-il)-3-(4-fluorfenil)izotiazola i nusprodukt eliminacije 3- (4-fluorofenil)-5-(prop-1-en-2-il)izotiazola (∼63/39 odnos) kao ulje tamnog ćilibara (29.37 g). Ovaj materijal je korišćen bez prečišćavanja u sledećoj reakciji.
[0133] U mešani rastvor proizvoda iz prethodnog koraka u DMSO (80 ml) je dodat natrijum azid (14.89 g, 229.0 mmol). Smeša je zagrevana na 50 C preko noći, razblažena etil acetatom (250 ml) i isprana vodom (6 x 400 ml). Organski sloj je osušen (Na2SO4) i koncentrovan da bi se dobila smeša 5- (2-azidopropan-2-il)-3-(4-fluorofenil)izotiazola i 3-(4-fluorofenil)-5-(prop-1-en-2-il)izotiazola (∼56/44 odnos) kao ulje tamnog ćilibara (29.10 g). Ovaj materijal je korišćen bez prečišćavanja u sledećoj reakciji.
[0134] Proizvod prethodnog koraka je kombinovan sa 10% paladijuma na ugljeniku (50% vode; 7.50 g) i rastvoreno u metanolu (350 mL). Mešana suspenzija je tri puta stavljena između vakuuma i azota u ciklusima. Posle dodatne evakuacije, reakcija se ponovo napuni gasom vodonika (balonski rezervoar) i meša preko noći. Reakcija je filtrirana kroz celit. Filtrat je kombinovan sa metanolnim ispiranjem celita i koncentrovan. Dobijeno tamno ulje boje ćilibara prečišćeno je fleš hromatografijom koristeći gradijent metilen hlorid/metanol kako bi se dobio 2-(3-(4-fluorofenil)izotiazol-5-il)propan-2-amin kao viskozno, ćilibar ulje (14.23 g, 49% u 3 koraka).
[0135] Nekoliko pristupa se koristi ili se koristi za lečenje LSD, od kojih se većina fokusira na enzimsku terapiju samo za upotrebu u lečenju bolesti. Brojne odobrene terapije enzimima su komercijalno dostupne za lečenje LSD (npr., Myozyme® za Pompovu bolest, Aldurazyme® za mukopolisaharidozu I, Cerezyme® za Gaucherovu bolest i Fabrazime® za Fabrijevu bolest). Pored toga, pronalazači su identifikovali brojne male molekule samo za upotrebu u upravljanju LSD-ovima. Ovde opisani terapeutski postupci pružaju mogućnosti lečenja za lekara koji se suočava sa lečenjem različitih bolesti skladištenja lizosoma, kao što je detaljno opisano u daljem tekstu.
[0136] U određenim aspektima, jedinjenja iz predmetnog obelodanjivanja mogu se koristiti za lečenje metaboličke bolesti, poput bolesti skladištenja lizosoma (LSD), samostalno ili kao
4
kombinovana enzimska terapija. U drugim aspektima, jedinjenja predmetnog obelodanjivanja mogu se koristiti za inhibiranje ili smanjenje aktivnosti GCS kod ispitanika sa dijagnostikovanom metaboličkom bolešću, kao što je LSD, samostalno ili kao kombinovana terapija sa enzimskom supstitucionom terapijom. U drugim aspektima, jedinjenja iz predmetnog obelodanjivanja mogu se koristiti za smanjenje i/ili inhibiciju nakupljanja skladištenog materijala (npr., lizosomalnog supstrata) kod ispitanika sa dijagnozom metaboličke bolesti, kao što je LSD. U određenim slučajevima iznad navedenih aspekata, LSD je Gaucher (tip 1, tip 2 ili tip 3), Fabri, GM1-gangliosidoza ili GM2-gangliosidoze (npr., nedostatak aktivatora GM2, Tej-Saš i Sendhof). Tabela 1 navodi brojne LSD-ove i identifikuje odgovarajući nedostatak enzima koji se mogu koristiti kao ERT u prethodnim aspektima obelodanjivanjima.
[0137] U drugim scenarijima, možda će biti potrebno da se SMT pruži pacijentu čije stanje zahteva smanjenje supstrata u mozgu i stoga se ne može lečiti sistemskom primenom ERT. Iako direktna intracerebroventrikularna ili intratekalna davanja mogu smanjiti nivo supstrata u mozgu, sistemsko davanje ERT nije moguća za LSD-ove sa centralnim nervnim sistemom (CNS) zbog nemogućnosti prelaska krvne moždane barijere (BBB) i SMT može biti korisna u pacijenti koji imaju zaostale enzimske aktivnosti u CNS.
[0138] U skladu sa predmetnim obelodanjivanjem, SMT se daje pacijentu da leči kancer i/ili metaboličku bolest, kao što je bolest skladištenja lizosoma. SMT može da sadrži jedan ili više malih molekula. SMT obelodanjivanje uključuje davanje jedinjenja predmetnog obelodanjivanja pacijentu. U posebnim slučajevima, jedinjenje je (S)-hinuklidin-3-il (2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)propan-2-il)karbamat (jedinjenje prema pronalasku) ili hinuklidin-3-il (2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-3-il)propan-2-il)karbamata (jedinjenje prema obelodanjivanju) ili kombinacije istih.
[0139] (S)-Hinuklidin-3-il (2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)propan-2-il)karbamat (jedinjenje prema pronalasku) i Hinuklidin-3-il (2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-3-il)propan-2-il)karbamat (jedinjenje prema pronalasku) može se koristiti za lečenje gotovo bilo koje bolesti skladištenja lizosoma koja je posledica oštećenja na putu glikosfingolipida (npr., Gaucher (tj., tip 1, tip 2 tip 3), Fabri, GM1-gangliosidoza, GM2-gangliosidoza (npr., GM2 Nedostatak aktivatora, Tej-Saš i Sendhof)). U posebno pogodnom primeru obelodanjivanja, (S)-hinuklidin-3-il (2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)propan-2-il)karbamat ili njegova farmaceutski
4
prihvatljiva so ili prolek koristi se za inhibiranje i/ili smanjenje nakupljanja Gb3 i/ili lizo-Gb3 kod pacijenta sa Fabrijevom bolešću, bilo samostalno, ili kao kombinovana terapija sa enzimskom terapijom (videti primere). U poželjnom primeru, enzimska terapija uključuje davanje alfa-galaktozidaze A pacijentu sa Fabrijevom bolešću. Zaista, primeri niže pokazuju da GCS inhibitor obelodanjivanja efikasno smanjuje skladištenje Gb3 i lizo-Gb3 u mišjem modelu Fabrijeve bolesti, podržavajući tako njegovu upotrebu kao održiv pristup za lečenje Fabrijeve bolesti. Nadalje, podaci in vivo kombinovane terapije dati u Primerima snažno ukazuju na to da kombinovani terapijski pristup može biti i aditivan i komplementaran.
[0140] (S)-Hinuklidin-3-il (2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)propan-2-il)karbamat (jedinjenje prema pronalasku) i Hinuklidin-3-il (2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-3-il)propan-2-il)karbamat (jedinjenje prema pronalasku) mogu se koristiti za smanjenje nivoa GluCer i GluSph u mozgu ispitanika sa dijagnozom neuropatske Gaucherove bolesti, samostalno ili u kombinaciji sa ERT (npr., davanje glukocerebrosidaze).
[0141] Režim doziranja za komponentu terapije sa malim molekulima kombinovane terapije predmetnog obelodanjivanja uglavnom određuje vešt kliničar i očekuje se da se značajno razlikuju u zavisnosti od konkretne bolesti skladištenja koja se leči i od kliničkog statusa određenog pogođenog pojedinca. Opšti principi za određivanje režima doziranja za dati SMT iz obelodanjivanja za lečenje bilo koje bolesti skladištenja su dobro poznati iskusnom stručnjaku. Smernice za režim doziranja mogu se dobiti iz bilo koje od mnogih dobro poznatih referenci u ovoj oblasti na ovu temu. Dalje smernice dostupne su, između ostalog, iz pregleda konkretnih citiranih referenci. U određenim slučajevima, takve doze mogu biti u opsegu od oko 0.5 mg/kg do oko 300 mg/kg, poželjno od oko 5 mg/kg do oko 60 mg/kg (npr., 5 mg/kg, 10 mg/kg, 15, mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 40 mg/kg, 45 mg/kg, 50 mg/kg, 55 mg/kg i 60 mg/kg) intraperitonealnim, oralnim ili ekvivalentnim davanjem jednom do pet puta dnevno. Takve doze mogu biti u opsegu od oko 5 mg/kg do oko 5 g/kg, poželjno od oko 10 mg/kg do oko 1 g/kg oralnim, intraperitonealnim ili ekvivalentnim davanjem od jednom do pet puta dnevno. U jednom slučaju, doze se kreću od oko 10 mg/dan do oko 10 mg/dan do oko 500 mg/dan (npr., 10 mg/dan, 20 mg/dan, 30 mg/dan, 40 mg/dan, 50 mg/dan, 60 mg/dan, 70 mg/dan, 80 mg/dan, 90 mg/dan, 100 mg/dan, 110 mg/dan, 120 mg/dan, 130 mg/dan, 140 mg/dan, 150 mg/dan, 160 mg/dan, 170 mg/dan, 180 mg/dan, 190 mg/dan, 200 mg/dan, 210 mg/dan, 220 mg/dan, 230 mg/dan, 240 mg/dan, 250 mg/dan, 260 mg/dan, 270 mg/dan, 280 mg/dan, 290 mg/dan, 300 mg/dan). Naročito
4
poželjni raspon oralnih doza je od oko 50 mg do oko 100 mg, pri čemu se doza daje dva puta dnevno. Poseban raspon oralnih doza za jedinjenje prema ovom obelodanjivanju je od oko 5 mg/kg/dan do oko 600 mg/kg/dan. U određenom rasponu oralne doze za jedinjenje predmetnog obelodanjivanja je otprilike 1 mg/kg/dan do oko 120 mg/kg/dan, npr., 1 mg/kg/dan , 5 mg/kg/dan, 10 mg/kg/dan, 15 mg/kg/dan, 20 mg/kg/dan, 25 mg/kg/dan, 30 mg/kg/dan, 35 mg/kg/dan, 40 mg/kg/dan , 45 mg/kg/dan , 50 mg/kg/dan , 55 mg/kg/dan ili 60 mg/kg/dan, 65 mg/kg/dan, 70 mg/kg/dan, 75 mg/kg/dan, 80 mg/kg/dan, 85 mg/kg/dan, 90 mg/kg/dan, 95 mg/kg/dan, 100 mg/kg/dan, 105 mg/kg/dan, 110 mg/kg/dan , 115 mg/kg/dan ili 120 mg/kg/dan.
[0142] U određenim slučajevima, obelodanjivanje se odnosi na kombinovane terapije SMT korišćenjem jedinjenja iz obelodanjivanja i ERT terapije za lečenje bolesti skladištenja lizosoma. Delimična lista poznatih bolesti skladištenja lizosoma koja se mogu lečiti u skladu sa obelodanjivanjem je data u Tabeli 1, uključujući uobičajeno ime bolesti, materijal koji se čuva i odgovarajući nedostatak enzima (prilagođeno u Tabeli 38-4 Kolodny i dr., 1998, Id.).
TABELA 1
4
4
[0143] Bilo koja metoda poznata iskusnom stručnjaku može se upotrebiti za nadgledanje stanja bolesti i efikasnosti kombinovane terapije predmetnog obelodanjivanja. Klinički monitori statusa bolesti mogu uključivati, ali nisu ograničeni na volumen organa (npr., jetru, slezinu), hemoglobin, broj eritrocita, hematokrit, trombocitopeniju, kaheksiju (gubljenje) i nivo hitinaze u plazmi (npr., hitotriosidaza). Poznato je da su hitotriosidaza, enzim porodice hitinaze, proizvedeni od strane makrofaga u visokim nivoima kod osoba sa lizosomalnim bolestima skladištenja (videti Guo i dr., 1995, J. Inherit. Metab. Dis.18, 717-722; den Tandt i dr., 1996, J. Inherit. Metab. Dis.19, 344-350; Dodelson de Kremer i dr., 1997, Medicina (Buenos Aires) 57, 677-684; Czartoryska i dr., 2000, Clin. Biochem.33, 147-149;
Czartoryska i dr., 1998, Clin. Biochem.31, 417-420; Mistry i dr., 1997, Baillieres Clin.
Haematol. 10, 817-838; Young i dr., 1997, J. Inherit. Metab. Dis. 20, 595-602; Hollak i dr., 1994, J. Clin. Invest.93, 1288-1292). Hitotriosidaza se poželjno meri zajedno sa enzimom za pretvaranje angiotenzina i ne tartrat kiselinom fosfatazom radi praćenja odgovora na lečenje Gaucherovih pacijenata.
[0144] Postupci i formulacije za primenu kombinovanih terapija predmetnog obelodanjivanja uključuju sve postupke i formulacije dobro poznate u struci (videti, npr., Remington's Pharmaceutical Sciences, 1980. i naredne godine, 16. izd. i sledeća izdanja, urednik A. Oslo, Easton Pa.; Controlled Drug Delivery, 1987, 2nd rev., Joseph R. Robinson & Vincent H. L. Lee, eds., Marcel Dekker, ISBN:0824775880; Encyclopedia of Controlled Drug Delivery, 1999, Edith Mathiowitz, John Wiley & Sons, ISBN:0471148288; pat. SAD.. br.6,066,626 i
1
ovde citirane reference; videti takođe, citirane reference u delovima ispod).
[0145] Prema ovom obelodanjivanju, sledeći opšti pristupi su dati za kombinovanu terapiju u lečenju bolesti skladištenja lizosoma. Svaki opšti pristup uključuje kombinovanje terapije enzimima sa terapijom malim molekulima na način koji je u skladu sa optimizacijom kliničke koristi, dok se minimiziraju nedostaci povezani sa upotrebom svake terapije pojedinačno.
[0146] U jednom slučaju obelodanjivanja, davana je enzimska terapija (samostalno ili u kombinaciji sa terapijom sa malim molekulima) da bi se započelo tretiranje (tj., da bi se dekompozicionirao ispitanik), a terapija malim molekulima primenjivala se nakon faze dekompozicije radi postizanja i održavaju stabilan, dugoročni terapeutski efekat bez potrebe za čestim intravenskim injekcijama ERT. Na primer, zamena enzima može se primenjivati intravenski (npr., tokom jednog ili dva sata) jednom, nedeljno, jednom svake dve nedelje ili jednom u dva meseca, tokom nekoliko nedelja ili meseci, ili duže (npr., do uključeni indikatorski organ poput slezine ili jetre pokazuje smanjenje veličine). Štaviše, ERT faza početnog tretiranja uklanjanja obima se može izvesti sama ili u kombinaciji sa terapijom sa malim molekulima. Terapeutska komponenta sa malim molekulima je naročito poželjna tamo gde je mali molekul kompatibilan sa oralnom primenom, što omogućava dalje olakšanje od čestih intravenskih intervencija.
[0147] Naizmenično korišćenje ERT-a i SMT-a ili dopunjavanje SMT-a ERT-om po potrebi pruža strategiju za istovremeno korišćenje prednosti i rešavanje slabosti povezanih sa svakom terapijom ako se koristi sam. Prednost ERT-a, bilo da se koristi za dekompoziciju i/ili za dugoročniju negu, je mnogo šire kliničko iskustvo koje je dostupno za informisanje o odlukama lekara. Štaviše, ispitanik se može efektivno titrirati ERT-om tokom faze dekompozicije pomoću, na primer, nadgledanja biohemijskih metabolita u urinu ili drugim uzorcima tela, ili merenjem zapremine pogođenih organa. Nedostatak ERT-a je, međutim, učestalost potrebne aplikacije, koja obično uključuje intravensku injekciju nedeljno ili dvonedeljno zbog konstantnog ponovnog nakupljanja supstrata. Upotreba terapije sa malim molekulima za smanjenje količine ili inhibicije nakupljanja supstrata kod pacijenta može zauzvrat da smanji učestalost davanja ERT-a. Na primer, režim doziranja dvonedeljne zamene enzimima može se ponuditi „ERT odmor“ (npr., korišćenjem SMT) tako da česte injekcije enzima nisu potrebne terapije. Dalje, lečenje bolesti skladištenja lizosoma kombinovanom terapijom može pružiti komplementarne terapijske pristupe. Zapravo, kao što
2
je pokazano u primerima niže, kombinovana terapija SMT i ERT može pružiti značajna poboljšanja u odnosu na bilo koju terapijsku platformu. Ovi podaci sugerišu da kombinovana terapija korišćenjem SMT-a i ERT-a može biti i aditivna i komplementarna. U jednom slučaju, ERT se može koristiti kao dekompresijska strategija (tj., za započinjanje lečenja), praćena ili istovremeno dopunjena SMT korišćenjem jedinjenja predmetnog obelodanjivanja. U drugom slučaju, pacijenta se najpre leči SMT korišćenjem jedinjenja iz predmetnog obelodanjivanja, a zatim ili istovremeno nadopunjenog ERT-om. U drugim slučajevima, SMT se koristi za inhibiranje ili smanjenje daljeg nakupljanja supstrata (ili ponovnog nakupljanja supstrata ako se koristi nakon deblokiranja sa ERT-om) kod pacijenta sa bolešću skladištenja lizosoma, i po želji da se dobije ERT po potrebi da se smanji bilo koji dalji supstrat akumulacija. U jednom slučaju, ovo obelodanjivanje pruža postupak kombinovane terapije za lečenje ispitanika za koje je dijagnostikovano da ima bolest skladištenja lizosoma, a koji se sastoji od naizmeničnog između davanja terapije enzimima i terapije malim molekulima. U jednom slučaju, ovo obelodanjivanje pruža postupak kombinovane terapije za lečenje ispitanika za koje je dijagnostikovano da ima bolest skladištenja lizosoma, a koji se istovremeno sastoji iz primene terapije enzimima i terapije sa malim molekulima. U različitim kombinacijama terapije obelodanjivanja, razumeće se da davanje terapije malim molekulima može da se dogodi pre, istovremeno sa ili posle primene enzimske terapije. Slično tome, davanje enzimske terapije može se dogoditi pre, istovremeno sa ili nakon davanja terapije malim molekulima.
[0148] U bilo kojem od slučajeva otkrivanja, bolest skladištenja lizosoma je izabrana iz grupe koju čine Gaucher (tipovi 1, 2 i 3), Niemann-Pick, Farber, GM1-gangliosidoza, GM2-gangliosidoza (npr., GM2 nedostatak aktivatora, Tej-Saš i Sendhof), Krabbe, Hurler-Scheie (MPS I), Hunter (MPS II), Sanfilipo (MPS III) Tip A, Sanfilipo (MPS III) Tip B, Sanfilipo (MPS III) Tip C, Sanfilipo (MPS III) Tip D, Marquio (MPS IV) Tip A, Marquio (MPS IV) Tip B, Maroteaux-Lamy (MPS VI), Sly (MPS VII), mukozulfatidoza, sijalidoze, mukolipidoza II, mukolipidoza III, mukolipidoza IV, Fabri, Schindler, Pompe, bolest skladištenja sijalinske kiseline, fukozidoza, manosidoza, aspartilglukozaminurija, Wolman i neuronske ceroidne lipofuksinoze.
[0149] Dalje, ERT obezbeđuje efikasnu količinu bar jednog od sledećih enzima; glukocerebrosidaza, sfingomijelinaza, ceramidaza, GM1-gangliozida-beta-galaktozidaza, heksosaminidaza A, heksosaminidaza B, beta-galaktocerebrosidaza, alfa-L-iduronidaza, iduronat sulfataza, heparan-N-sulfataza, N-acetil-alfa-glukozaminidaza, acetil CoA:alfaglukozaminid acetil-transferaza, N-acetil-alfa-glukozamin-6-sulfataza, galaktozamin-6-sulfataza, beta-galaktozidaza, galaktozamin-4-sulfataza (arilsulfataza B), beta-glukuronidaza, arilsulfataza A, arilsulfataza C, alfa-neuraminidaza, N-acetil-glukozamin-1-fosfat-transferaza, alfa-galaktozidaza A, alfa-N-acetilgalaktosaminidaza, alfa-glukozidaza, alfa-fukozidaza, alfamanosidaza, aspartilglukozamin amidaza, kisela lipaza, palmitoil-protein tioesteraza (CLN-1), PPT1, TPP1, CLN3, CLN5, CLN6, CLN8, NPC1 ili NPC2.
[0150] U skladu sa obelodanjivanjem, SMT i/ili ERT stvaraju smanjenje u najmanje jednom od sledećih skladištenih materijala; glukocerebrozid, sfingomijelin, ceramid, GM1-gangliozid, GM2-gangliozid, globozid, galaktosilceramid, dermatan sulfat, heparan sulfat, keratan sulfat, sulfatidi, mukopolisaharidi, sijaliloligosaharidi, glikolipidi, globotriaozilkeramid, , O-povezani glikopeptidi, glikogen, slobodna salicilna kiselina, fukoglikolipidi, fukoziloligosaharidi, manozil-oligosaharidi, aspartilglukozamin, holesterol estri, trigliceridi, zrnaste osmofilne naslage - sapozini A i D, ATP podjedinica sintaze c, NPC1 ili NPC2.
[0151] U nekim otelotvorenjima pronalaska, terapija sa malim molekulima obuhvata davanje ispitaniku efektivne količine (S)-Hinuklidin-3-il (2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)propan-2-il)karbamata (videti Sliku 2A). U određenim slučajevima obelodanjivanja, terapija malim molekulima obuhvata davanje ispitaniku efikasne količine hinuklidin-3-il (2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-3-il)propan-2-il)karbamata (videti Sliku 2B). Terapija sa malim molekulima može uključivati davanje ispitaniku jednog ili više jedinjenja. U određenim slučajevima, bar jedno od jedinjenja je jedinjenje prema predmetnom obelodanjivanju.
[0152] Enzimska terapija može izazvati neželjene imunološke reakcije. Shodno tome, imunosupresivna sredstva mogu se koristiti zajedno sa komponentom enzimske terapije kombinovane terapije predmetnog obelodanjivanja. Takva sredstva se takođe mogu koristiti sa komponentom terapije sa malim molekulima, ali je potreba za intervencijom ovde manje verovatna. Bilo koje imunosupresivno sredstvo poznato stručnjaku može da se koristi zajedno sa kombinovanom terapijom predmetnog obelodanjivanja. Takva imunosupresivna sredstva uključuju, ali nisu ograničena na ciklosporin, FK506, rapamicin, CTLA4-Ig i anti-TNF agense kao što je etanercept (videti npr. Moder, 2000, Ann. Allergy Asthma Immunol.84, 280-284; Nevins, 2000, Curr. Opin. Pediatr.12, 146-150; Kurlberg i dr., 2000, Scand. J. Immunol. 51, 224-230; Ideguchi i dr., 2000, Neuroscience 95, 217-226; Potteri dr., 1999,
4
Ann. N.Y. Acad. Sci.875, 159-174; Slavik i dr., 1999, Immunol. Res. 19, 1-24; Gaziev i dr., 1999, Bone Marrow Transplant. 25, 689-696; Henry, 1999, Clin. Transplant. 13, 209-220; Gummert i dr., 1999, J. Am. Soc. Nephrol.10, 1366-1380; Qi i dr., 2000, Transplantation 69, 1275-1283). Antitelo anti-IL2 receptora (.alfa.-podjedinica) daclizumab (npr., Zenapax™), koje se pokazalo efikasnim kod pacijenata sa transplantacijom, takođe se može koristiti kao imunosupresivno sredstvo (videti npr., Wiseman i dr., 1999, Drugs 58, 1029-1042;
Beniaminovitz i dr., 2000, N. Engl J. Med.342, 613-619; Ponticelli i dr., 1999, Drugs R. D.
1, 55-60; Berard i dr., 1999, Pharmacotherapy 19, 1127-1137; Eckhoff i dr., 2000, Transplantation 69, 1867-1872; Ekberg i dr., 2000, Transpl. Int.13, 151-159). Dodatna imunosupresivna sredstva uključuju ali nisu ograničena na anti-CD2 (Branco i dr., 1999, Transplantation 68, 1588-1596; Przepiorka i dr., 1998, Blood 92, 4066-4071), anti-CD4 (Marinova-Mutafchieva i dr., 2000, Arthritis Rheum. 43, 638-644; Fishwild i dr., 1999, Clin. Immunol. 92, 138-152), i anti-CD40 ligand (Hong i dr., 2000, Semin. Nephrol.20, 108-125; Chirmule i dr., 2000, J. Virol.74, 3345-3352; Ito i dr., 2000, J. Immunol. 164, 1230-1235).
[0153] Bilo koja kombinacija imunosupresiva, poznata iskusnom stručnjaku, može se koristiti zajedno sa kombinovanom terapijom predmetnog obelodanjivanja. Jedna kombinacija imunosupresiva sa određenom upotrebom je takrolimus (FK506) plus sirolimus (rapamicin) plus daklizumab (antitelo za anti-IL2 receptor .alfa.-podjedinica). Ova kombinacija je dokazano efikasna kao alternativa steroidima i ciklosporinu, a posebno kada je ciljana na jetru. Štaviše, nedavno je pokazano da ova kombinacija omogućava uspešnu transplantaciju ćelija na pankreasu. Videti Denise Grady, The New York Times, Saturdan, May 27, 2000, stranice A1 i A11. Videti takođe A. M. Shapiro i dr., Jul.27, 2000, "Islet Transplantation In Seven Patients With Type 1 Diabetes Mellitus Using A Glucocorticoid-Free Immunosuppressive Regimen", N. Engl. J. Med.343, 230-238; Ryan i dr., 2001, Diabetes 50, 710-719. Plazmaforeza bilo kojim postupkom poznatim u stanju tehnike može se takođe koristiti za uklanjanje ili iscrpljivanje antitela koja se mogu razviti naspram različitih komponenti kombinovane terapije.
[0154] Pokazatelji imunog statusa upotrebe sa obelodanjivanjem uključuju, ali nisu ograničeni na antitela i bilo koji od citokina poznatih iskusnim stručnjacima, npr.
Interleukine, CSFs i interferone (videti generalno, Leonard i dr., 2000, J. Allergy Clin.
Immunol. 105, 877-888; Oberholzer i dr., 2000, Crit. Care Med.28 (4 Suppl.), N3-N12; Rubinstein i dr., 1998, Cytokine Growth Factor Rev.9, 175-181). Na primer, antitela koja su posebno imunoreaktivna sa enzimskom terapijom mogu se nadgledati da bi se odredio imuni status ispitanika. Među dve poznate desetak interleukina, posebno poželjni pokazatelji imunog statusa su IL-1.alfa., IL-2, IL-4, IL-8 i IL-10. Među faktorima koji stimulišu koloniju (CSF), naročito poželjni pokazatelji imunog statusa su G-CSF, GM-CSF i M-CSF. Među interferonima, poželjni su jedan ili više alfa, beta ili gama interferona kao indikatora imunog statusa.
[0155] U sledećim odeljcima obelodanjene su različite komponente koje se mogu koristiti za osam specifičnih bolesti lizosomalnog skladištenja (tj., Gaucher (uključujući tipove 1, 2 i 3), Fabry, Niemann-Pick B, Hunter, Marquio, Maroteaux-Lamy, Pompe i Hurler-Scheie). U sledećim odeljcima obezbeđeno je dalje omogućavanje obelodanjivanja zamene enzimske terapije i komponenti terapije malim molekulima kombinovane terapije ovog obelodanjivanja.
Gaucher
[0156] Kao što je iznad navedeno, Gaucherova bolest je uzrokovana nedostatkom enzima glukocerebrosidaza (beta-D-glukozil-N-acilsfingozin glukohidrolaza, EC 3.2.1.45) i nakupljanjem glukocerebrozid (glukozilceramida). Za komponentu supstitucione enzimske terapije kombinovane terapije ovog obelodanjivanja za lečenje Gaucherove bolesti dostupno je više referenci koje pružaju zadovoljavajuće režime doziranja i druge korisne informacije koje se odnose na lečenje (videti Morales, 1996, Gaucher's Disease:A Review, The Annals of Pharmacotherapy 30, 381-388; Rosenthal i dr., 1995, Enzyme Replacement Therapy for Gaucher Disease:Skeletal Responses do Macrophage-targeted Glucocerebrosidase, Pediatrics 96, 629-637; Barton i dr., 1991, Replacement Therapy for Inherited Enzyme Deficiency--Macrophage-targeted Glucocerebrosidase for Gaucher's Disease, New England Journal of Medicine 324, 1464-1470; Grabowski i dr., 1995, Enzyme Therapy in Type 1 Gaucher Disease:Comparative Efficacy of Mannose-terminated Glucocerebrosidase from Natural and Recombinant Sources, Annals of Internal Medicine 122, 33-39; Pastores i dr., 1993, Enzyme Therapy in Gaucher Disease Type 1:Dosage Efficacy and Adverse Effects in 33 Patients treated for 6 to 24 Months, Blood 82, 408-416); i Weinreb i dr., Am. J. Med.;113(2):112-9 (2002).
[0157] U jednom slučaju, obezbeđen je režim doziranja ERT od 2.5 jedinice po kilogramu (U/kg) tri puta nedeljno do 60 U/kg jednom svake dve nedelje, gde se enzim daje intravenskom infuzijom tokom 1-2 sata. Jedinica glukocerebrosidaze je definisana kao količina enzima koji katalizuje hidrolizu jednog mikromola para-nitrofenil-p-D-glukopiranozida sintetičkog supstrata u minuti na 37 °C. U drugom slučaju, obezbeđen je režim doziranja od 1 U/kg tri puta nedeljno do 120 U/kg jednom svake dve nedelje. U još jednom slučaju, obezbeđen je režim doziranja od 0.25 U/kg dnevno ili tri puta nedeljno do 600 U/kg jednom u dve do šest nedelja.
[0158] Od 1991. godine algluceraza (Ceredase®) je dostupna od kompanije Genzyme Corporation. Algluceraza je placentno izvedeni modifikovani oblik glukocerebrosidaze.
Godine 1994. imigluceraza (Cerezime®) je takođe postala dostupna od korporacije Genzyme. Imigluceraza je modifikovani oblik glukocerebrosidaze dobijene ekspresijom rekombinantne DNK u sistemu ćelija sisarskih kultura (ćelije jajnika kineskog hrčka). Imigluceraza je monomerni glikoprotein od 497 aminokiselina koji sadrži četiri mesta vezana za N glikozilacije. Imigluceraza ima prednosti teorijski neograničenog unosa i smanjenu mogućnost bioloških kontaminanata u odnosu na placentalno dobijenu aglucerazu. Ovi enzimi su modifikovani na njihovim mestima glikozilacije da bi razotkrili ostatke manoze, manevar koji poboljšava lizosomsko ciljanje putem manozo-6-fosfatnog receptora.
Imigluceraza se razlikuje od placentne glukocerebrosidaze jednom aminokiselinom na položaju 495 gde je histidin supstituisan za arginin. Za nekoliko režima doziranja ovih proizvoda poznato je da su efikasni (videti Morales, 1996, Id .; Rosenthal i dr., 1995, Id.; Barton i dr., 1991, Id.; Grabowski i dr., 1995, Id.; Pastores i dr., 1993, Id.). Na primer, režim doziranja od 60 U/kg jednom svake dve nedelje je od kliničke koristi kod ispitanika sa umerenom do teškom bolešću. Iznad citirane reference i ulošci za pakovanje ovih proizvoda treba da se raspitaju od strane stručnjaka za dodatne režime doziranja i informacije o davanju. Videti takođe patent SAD. br.5,236,838 i 5,549,892 dodeljeno Genzyme Corporation.
[0159] Kao što je iznad pomenuto, Gaucherova bolest rezultat je nedostatka lizosomalnog enzima glukocerebrosidaze (GC). U najčešćem fenotipu Gaucherove bolesti (tip 1), patologija je ograničena na retikuloendotelni i skeletni sistem i ne postoje neuropatski simptomi. Videti Barranger, Glukozilceramid lipidoza: Gaucherova bolest. U:The Metabolic Basis of Inherited Disease. New York:McGraw-Hill. pp.3635-3668 (2001). Kod neuropatske Gaucherove bolesti (nGD), podeljene na Gaucherovu bolest tipa 2 i 3, nedostatak glukocerebrosidaze (GC) izaziva glukozilceramid (GluCer; GL-1) i glukozilsfingozin (GluSph) nakupljaju se u mozgu, što dovodi do neuroloških oštećenja. Gaucherovu bolest tipa 2 karakteriše rani početak, brzi napredak, opsežna patologija u unutrašnjosti i centralnom nervnom sistemu i smrt obično do druge godine života. Gaucherova bolest tipa 3, poznata i kao subakutni nGD, je fenotip međujedinjenja sa različitom starošću početka i različitim stepenom ozbiljnosti i stepena progresije. Goker-Alpan i dr., The Journal of Pediatrics 143:273-276 (2003). Nedavni razvoj je proizveo model miša K14 lnl/Lnl tipa 2 Gaucherove bolesti (u daljem tekstu:„K14 miš“); ovaj model miša rekapitulira ljudsku bolest pokazujući ataksiju, napade, spastičnost i smanjeni srednji životni vek od samo 14 dana. Enquist i dr., PNAS 104:17483-17488 (2007).
[0160] Kao i kod pacijenata sa nGD, nekoliko mišjih modela bolesti ima povišen nivo GluCer i GluSph u mozgu zbog nedostatka GC aktivnosti. Liu i dr., PNAS 95:2503-2508 (1998) i Nilsson, J. Neurochem 39:709-718 (1982). Miševi "K14" prikazuju neuropatski fenotip koji deli mnoge patološke karakteristike sa Gaucherovom bolešću tipa 2, kao što su neurodegeneracija, astroglioza, proliferacija mikroglija i povećani nivoi GluCer i GluSph u specifičnim regionima mozga. Enquist i dr. (2007).
[0161] Kliničko upravljanje pacijentima pogođenim nGD-om predstavlja izazov za lečenje lekara kako zbog težine bolesti tipa 2, tako i zbog nemogućnosti trenutnih terapija da pređu krvnu moždanu barijeru (BBB). Trenutno lečenje ne-nGD-a zavisi od intravenske isporuke rekombinantne humane glukocerebrosidaze (Imiglucerase; Cerezyme™) da zameni nedostajući enzim ili primenu inhibitora glukozilceramid sintaze za atenuaciju proizvodnje supstrata (GL-1). Međutim, ovi lekovi ne prelaze krvno-moždanu barijeru i ne očekuje se da će pružiti terapijsku korist za nGD pacijente. Trenutni inhibitori male molekule glukozilceramid sintaze u klinici verovatno neće rešiti neuropatske fenotipe nGD-a. Procena jedinjenja ovog otkrića, Hinuklidin-3-il (2-(4'-fluoro-[l, l'-bifenil]-3-il)propan-2-il)karbamata (u daljem tekstu, "Gz161" ), u modelu miša K14 tipa 2 Gaucherove bolesti pokazao je da zaista može da smanji GluCer i GluSph u mozgu (videti primere 122-125). Takođe je smanjila neuropatologiju mozga i produžila životni vek ovog modela. Štaviše, kombinovani pristup koji koristi i zamenu enzima i smanjenje supstrata malih molekula može predstavljati vrhunsku terapiju za Gaucherovu bolest tipa 2.
Fabri
[0162] Kao što je prethodno napomenuto, Fabrijeva bolest je uzrokovana nedostatkom lizosomalnog enzima alfa-galaktozidaza A. Enzimska oštećenja dovode do sistemskog taloženja glikosfingolipida koji imaju terminalne alfa-galaktozil grupe, pretežno globotriaosilceramida (GL3 ili Gb3) i, u manjoj meri, galabiosilceramid i glikosfingolipidi krvne grupe B.
[0163] Dostupno je nekoliko ispitivanja za praćenje napredovanja bolesti i za određivanje kada će se prebaciti iz jednog načina lečenja u drugi. U jednom slučaju, može se koristiti test za određivanje specifične aktivnosti alfa-galaktozidaze A u uzorku tkiva. U drugom slučaju, može se koristiti test za određivanje akumulacije Gb3. U drugom slučaju, lekar može testirati taloženje glikosfingolipidnih supstrata u telesnim tečnostima i lizosomima vaskularnog endotelnog, peritelijskog i ćelija glatkih mišića krvnih sudova. Ostale kliničke manifestacije koje mogu biti korisni pokazatelji za lečenje bolesti uključuju proteinuriju ili druge znakove oštećenja bubrega, kao što su crvene ćelije ili lipidne globule u urinu, i povišenu stopu sedimentacije eritrocita. Takođe se može pratiti anemija, smanjena koncentracija gvožđa u serumu, visoka koncentracija beta-tromboglobulina i povišeni broj retikulocita ili agregacija trombocita. Zaista, može se koristiti bilo koji pristup za praćenje napredovanja bolesti koji je vešt stručnom osoblju (videti uopšteno Desnick RJ i dr., 1995, .alfa.-galaktosidaza A deficijencija: Fabrijeva bolest, U: The Metabolic i Molecular Bases of Inherited Disease, Scriver i dr., eds., McGraw-Hill, N.Y., 7.sup.th ed., stranice 2741-2784). Poželjni surogat marker je bol za nadgledanje Fabrijeve bolesti. Ostali poželjni postupci uključuju merenje ukupnog zazornog enzima i/ili supstrata iz uzorka telesne tečnosti ili biopsije. Poželjni režim doziranja za enzimsku terapiju kod Fabrijeve bolesti je 1-10 mg/kg i.v. svaki drugi dan. Režim doziranja od 0.1 do 100 mg/kg i.v. u frekvenciji od svakog drugog dana do jednom nedeljno ili svake dve nedelje.
Niemann-Pick B
[0164] Kao što je ranije napomenuto, bolest Niemann-Pick B prouzrokovana je smanjenom aktivnošću sfingomijelinaze enzima lizosomalnog enzima i nakupljanjem membranskog lipida, pre svega sfingomijelina. Efektivna doza nadomesne kiseline sfingomijelinaza koja se isporučuje može se kretati od oko 0.01 mg/kg do oko 10 mg/kg telesne težine, u frekvenciji od svakog drugog dana do nedelje, jednom u dve sedmice ili jednom u dva meseca. U drugim slučajevima, efikasna doza može biti u opsegu od oko 0.03 mg/kg do oko 1 mg/kg; od oko 0.03 mg/kg do oko 0.1 mg/kg; i/ili od oko 0.3 mg/kg do oko 0.6 mg/kg. U posebnom slučaju, pacijent daje kiselinu sfingomijelinaza u eskalirajućem režimu doziranja u sledećim uzastopnim dozama:0.1 mg/kg; 0.3 mg/kg; 0.6 mg/kg; i 1.0 mg/kg, pri čemu se svaka doza kiseline sfingomijelinaza daje najmanje dva puta, a svaka doza se daje u intervalima od dve nedelje, i gde se pacijent nadgleda zbog toksičnih nuspojava pre nego što je dozu povisio na sledeći nivo (videti patentu prijavu SAD br.2011/0052559.
Hurler-Scheie (MPS I)
[0165] Hurler, Scheie i Hurler-Scheie bolest, takođe poznata kao MPS I, uzrokovana su inaktivacijom alfa-iduronidaze i akumulacijom dermatan sulfata i heparan sulfata. Dostupno je nekoliko testova za praćenje napredovanja bolesti MPS I. Na primer, aktivnost enzima alfa-iduronidaze može se nadgledati u uzorcima tkiva biopsije ili uzgajati ćelije dobijene iz periferne krvi. Pored toga, pogodna mera napredovanja bolesti kod MPS I i drugih mukopolisaharidoza je izlučivanje urina glikozaminoglikanima dermatan sulfatom i heparan sulfatom (videti Neufeld i dr., 1995, Id.). U posebnom slučaju, enzim alfa-iduronidaza daje se jednom nedeljno u obliku intravenske infuzije u dozi od 0.58 mg/kg telesne težine.
Hunter (MPS II)
[0166] Hanterova bolest (poznata kao MPS II) uzrokovana je inaktivacijom iduronat sulfataze i akumulacijom dermatan sulfata i heparan sulfata. Hanterova bolest klinički se javlja u teškim i blagim oblicima. Preferira se režim doziranja terapijskog enzima od 1.5 mg/kg svake dve nedelje do 50 mg/kg svake nedelje.
Morquio (MPS IV)
[0167] Morquiov sindrom (poznat kao MPS IV) rezultat je nakupljanja keratan sulfata zbog inaktivacije bilo kojeg od dva enzima. U MPS IVA inaktivirani enzim je galaktozamin-6-sulfataza, a u MPS IVB inaktivirani enzim je beta-galaktozidaza. Preferira se režim doziranja terapijskog enzima od 1.5 mg/kg svake dve nedelje do 50 mg/kg svake nedelje.
Maroteaux-Lamy (MPS VI)
[0168] Maroteaux-Lamy sindrom (poznat kao MPS VI) nastaje inaktivacijom alaktosamin-4-sulfataze (arilsulfataza B) i akumulacijom dermatan sulfata.
Režim doziranja od 1.5 mg/kg svake dve nedelje do 50 mg/kg svake nedelje je poželjni opseg efikasnog terapeutskog enzima koji obezbeđuje ERT. Optimalno, upotrebljena doza je manja ili jednaka 10 mg/kg nedeljno. Poželjni surogat marker za progresiju MPS VI je nivo roteoglikana.
Pompe
[0169] Pompeova bolest prouzrokovana je inaktivacijom enzima kiseline alfa-glukozidaza i nakupljanjem glikogena. Kiseli gen alfa-glukozidaze nalazi se na humanom hromozomu 17 i označen je sa GAA. H. G. Hers je prvi predložio koncept urođene lizosomalne bolesti na osnovu njegovih studija o ovoj bolesti, koje je nazvao bolešću skladištenja glikogena tipa II (GSD II) i koja se sada naziva i nedostatak kisele maltoze (AMD) (videti Hers, 1965, Gastroenterology 48, 625). U posebnom slučaju, GAA se daje svake dve nedelje kao intravenska infuzija u dozi od 20 mg/kg telesne težine.
[0170] Na raspolaganju je nekoliko testova za praćenje napredovanja Pompeove bolesti. Može se koristiti bilo koji test koji je poznat stručnom osoblju. Na primer, može se analizirati intra-lizosomsko nagomilavanje glikogenskih granula, posebno u miokardu, jetri i skeletnim mišićnim vlaknima dobijenim biopsijom. Aktivnost enzima alfa-glukozidaze može se nadgledati i u uzorcima biopsije ili kultivisanih ćelija dobijenih iz periferne krvi. Povišenje serumske kreatin kinaze (CK) u serumu može se nadgledati kao pokazatelj napredovanja bolesti. Serumski CK može biti povišen i do deset puta kod infantilnih bolesnika i obično je povišen u manjem stepenu kod odraslih. Videti Hirschhorn R, 1995, Glycogen Storage Disease Type II:Nedostatak kisele alfa-glukozidaze (kisele maltaze), u:The Metabolic i Molecular Bases of Inherited Disease, Scriver i dr., eds., McGraw-Hill, N.Y., 7.sup.th ed., stranice 2443-2464.
Enzimska terapija
[0171] Sledeći delovi pružaju specifično obelodanjivanje i dostupne su alternativne primere za komponentu enzimske zamene kombinovane terapije ovog obelodanjivanja. Generalno, stručni lekar obično određuje režim doziranja za komponentu supstitucione enzimske terapije kombinovane terapije ovog obelodanjivanja. Nekoliko primera režima doziranja za lečenje Gaucherove bolesti glukocerebrosidazom je dato iznad. Opšti principi za određivanje režima doziranja za bilo koju komponentu ERT-a kombinovane terapije obelodanjivanja za lečenje bilo kog LSD-a biće jasni veštaku iz javno dostupnih informacija, kao što je, na primer, pregled specifičnih referenci citirana u odeljcima za svaki određeni LSD. ERT se pacijentu može dati intravenskom infuzijom. Intracerebroventrikularna i/ili intratekalna infuzija mogu se koristiti (npr., pored intravenske infuzije) za primenu ERT pacijentu kome je dijagnostikovana bolest lizosomalnog skladištenja i ima CNS manifestacije.
1
[0172] Bilo koja metoda poznata u struci može se upotrebiti za proizvodnju enzima koji će se koristiti u komponenti supstitucione enzimske kombinovane terapije prema obelodanjivanju. Mnogi takvi postupci su poznati i uključuju, ali nisu ograničene na tehnologiju genske aktivacije koju je razvio Shire plc (videti patent SAD br. br.5,968,502 i 5,272,071).
Terapija malim molekulima
[0173] Sledeći odeljak takođe iznosi specifična otkrića i dostupne alternativne slučajeve za komponentu terapije malim molekulima kombinovane terapije predmetnog obelodanjivanja. Režim doziranja za komponentu terapije sa malim molekulima kombinovane terapije predmetnog obelodanjivanja uglavnom određuje vešt kliničar i očekuje se da se značajno razlikuju u zavisnosti od konkretne bolesti skladištenja koja se leči i od kliničkog statusa određenog pogođenog pojedinca. Opšti principi za određivanje režima doziranja za dati SMT komponente bilo koje kombinovane terapije iz obelodanjivanja za lečenje bilo koje bolesti skladištenja su dobro poznati iskusnom stručnjaku. Smernice za režim doziranja mogu se dobiti iz bilo koje od mnogih dobro poznatih referenci u ovoj oblasti na ovu temu. Dalje smernice dostupne su, između ostalog, iz pregleda konkretnih citiranih referenci.
[0174] (S)-Hinuklidin-3-il (2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)propan-2-il)karbamat (jedinjenje prema pronalasku) i Hinuklidin-3-il (2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-3-il)propan-2-il)karbamat (jedinjenje prema pronalasku) mogu se koristiti u kombinovanoj terapiji predmetnog obelodanjivanja za lečenje gotovo bilo koje bolesti skladištenja lizosoma koja je posledica lezije na putu glikosfingolipida (npr., Gaucher, Fabri, GM1-gangliosidoza i GM2-gangliosidoze (npr., GM2 aktivator deficijencije, Tej-Saš i Sendhof)). Slično tome, aminoglikozidi (npr., gentamicin, G418) mogu se koristiti u kombinovanoj terapiji obelodanjivanja za bilo koju jedinku skladištenja koja ima prevremenu mutaciju stop-kodona (tj., mutaciju gluposti). Ovakve mutacije su naročito rasprostranjene u Hurlerovom sindromu. Komponenta terapije sa malim molekulima kombinovane terapije ovog otkrića je posebno poželjna tamo gde postoji manifestacija centralnog nervnog sistema u bolesti skladištenja koja se leči (npr. Sendhof, Tej-Saš, Niemann-Pick Tip A i Gaucher tipovi 2 i 3 ), jer mali molekuli uglavnom mogu lako da pređu krvno-moždanu barijeru u poređenju sa drugim terapijama.
[0175] Poželjne doze supstratnih inhibitora koji se koriste u kombinovanoj terapiji obelodanjivanja lako određuje stručnjak. U određenim slučajevima, takve doze mogu biti u
2
opsegu od oko 0.5 mg/kg do oko 300 mg/kg, poželjno od oko 5 mg/kg do oko 60 mg/kg (npr., 5 mg/kg, 10 mg/kg, 15, mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 40 mg/kg, 45 mg/kg, 50 mg/kg, 55 mg/kg i 60 mg/kg) intraperitonealnim, oralnim ili ekvivalentnim davanjem jednom do pet puta dnevno. Takve doze mogu biti u opsegu od oko 5 mg/kg do oko 5 g/kg, poželjno od oko 10 mg/kg do oko 1 g/kg oralnim, intraperitonealnim ili ekvivalentnim davanjem od jednom do pet puta dnevno. U jednom slučaju, doze se kreću od oko 10 mg/dan do oko 10 mg/dan do oko 500 mg/dan (npr., 10 mg/dan, 20 mg/dan, 30 mg/dan, 40 mg/dan, 50 mg/dan, 60 mg/dan, 70 mg/dan, 80 mg/dan, 90 mg/dan, 100 mg/dan, 110 mg/dan, 120 mg/dan, 130 mg/dan, 140 mg/dan, 150 mg/dan, 160 mg/dan, 170 mg/dan, 180 mg/dan, 190 mg/dan, 200 mg/dan, 210 mg/dan, 220 mg/dan, 230 mg/dan, 240 mg/dan, 250 mg/dan, 260 mg/dan, 270 mg/dan, 280 mg/dan, 290 mg/dan, 300 mg/dan). Naročito poželjni raspon oralnih doza je od oko 50 mg do oko 100 mg, pri čemu se doza daje dva puta dnevno. Poseban raspon oralnih doza za jedinjenje prema ovom obelodanjivanju je od oko 5 mg/kg/dan do oko 600 mg/kg/dan. U određenom rasponu oralne doze za jedinjenje ovog otkrića je otprilike 1 mg/kg/dan do oko 100 mg/kg/dan, npr., 1 mg/kg/dan , 5 mg/kg/dan, 10 mg/kg/dan, 15 mg/kg/dan, 20 mg/kg/dan, 25 mg/kg/dan, 30 mg/kg/dan, 35 mg/kg/dan, 40 mg/kg/dan , 45 mg/kg/dan , 50 mg/kg/dan , 55 mg/kg/dan ili 60 mg/kg/dan, 65 mg/kg/dan, 70 mg/kg/dan, 75 mg/kg/dan, 80 mg/kg/dan, 85 mg/kg/dan, 90 mg/kg/dan, 95 mg/kg/dan ili 100 mg/kg/dan.
[0176] Rotirajuća kombinacija terapijskih platformi (tj., zamena enzima i terapija malim molekulima) je poželjna. Međutim, ispitanici se takođe mogu lečiti preklapajući oba pristupa prema potrebi, a što odredi kvalifikovani lekar. Primeri lečenja mogu uključivati, ali nisu ograničeni na:(1) SMT praćeno sa ERT; (2) ERT praćeno sa SMT; i (3) ERT i SMT obezbeđeno otprilike u isto vreme. Kao što je prethodno napomenuto, vremenski preklapanje terapijskih platformi se takođe može izvesti po potrebi, u zavisnosti od kliničkog toka određene bolesti skladištenja u određenom ispitaniku.
[0177] Intervali lečenja za različite kombinovane terapije mogu se uvelike razlikovati i općenito mogu biti različiti kod različitih bolesti skladištenja i kod različitih pojedinaca, zavisno od toga kako se agresivno akumuliraju skladišni proizvodi. Na primer, nagomilavanje proizvoda Fabri za skladištenje može biti sporo u poređenju s naglim nakupljanjem proizvoda u Pompeu. Titraciju određene bolesti u određenoj jedinici vrši vešt stručnjak nadgledanjem kliničkih znakova napredovanja bolesti i uspeha lečenja.
[0178] Različite makromolekule koje se nakupljaju u bolestima skladištenja lizosoma nisu ravnomerno raspoređene, već se umesto toga smeštaju na određenim preferiranim anatomskim mestima za svaku bolest. Međutim, enzim koji se isporučuje sa egzogenom uglavnom se preuzima od ćelija retikuloendotelnog sistema i sortira se u lizosomalni deo gde deluje na hidrolizu nagomilanog supstrata. Štaviše, ćelijski unos terapeutskog enzima može se povećati određenim manevrima da bi se povećalo lizosomsko ciljanje (videti npr. patent SAD br.5,549,892 od Friedman i dr., dodeljenog kompaniji Genzyme Corporation, koja opisuje rekombinantnu glukocerebrosidazu koja je poboljšala farmakokinetiku zahvaljujući prepravljenim bočnim lancima oligosaharida prepoznatim po receptorima manozne ćelijske površine koji su endocitozirani i transportovani u lizosome).
[0179] Neki modaliteti lečenja ciljaju neke pogođene organe bolje nego drugi. Na primer, Fabri, ako ERT ne dostigne bubreg dovoljno dobro za zadovoljavajući klinički ishod, SMT se može koristiti za smanjenje nivoa supstrata u bubregu. Kao što je pokazano u Primerima 112 i Sl.6B, SMT je efikasno smanjio nivo Gb3 (tj., supstrat nakupljan kod Fabri pacijenata) u urinu Fabrijevog mišjeg modela u većoj meri od ERT. Smatra se da su bubrezi glavni izvor urina Gb3. Sa druge strane, slika 6B pokazuje da ERT efikasno smanjuje nivo Gb3 u plazmi u većoj meri nego SMT. Ovi rezultati pokazuju da kombinirana terapija ERT-a i SMT-a pruža komplementarnu terapijsku strategiju koja koristi prednosti i rešava slabosti povezane sa svakom terapijom koja se koristi sama. SMT je u stanju da pređe na BBB, pružajući moćan pristup, u kombinaciji sa ERT-om, za lečenje LSD koji imaju manifestacije CNS-a, kao što su Niemann Pick Tip A i Neuropatska Gaucherova bolest (nGD). Pored toga, smanjenje supstrata pomoću SMT-a u kombinaciji sa nadomeštanjem enzima rešava problem skladištenja u odvojenim i različitim tačkama intervencije što može poboljšati klinički ishod.
[0180] Razumeće se da upućivanje na istovremeno ili istodobno davanje dve ili više terapija ne zahteva njihovo primenu u isto vreme, već samo da deluju u ispitaniku istovremeno.
[0181] U daljem tekstu, primeri 75, 111-114 i 127 reprezentativni su za pronalazak. Primeri 1-74, 76-110 i 115-126 su referentni primeri.
Primer 1
hinuklidin-3-il 1-fenilciklobutilkarbamat
4
[0182] Upotrebom opšteg postupka A, 1-fenilciklobutanamin hidrohlorid (100 mg, 0.540 mmol) i hinuklidin-3-ol (103 mg, 0.810 mmol) dao je hinuklidin-3-il 1-fenilciklobutilkarbamata (76 mg, 47%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.43 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.34 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.23 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 5.75 -5.25 (m, 1H), 4.60 (br s, 1H), 3.25-2.22 (m, 9H), 2.16 - 2.03 (m, 1H), 2.02- 0.94 (m, 6H), 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 1H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 158.1, 128.5, 126.9, 125.6, 71.4, 59.4, 55.7, 47.5, 46.6, 34.0, 31.8, 29.9, 25.5, 24.7, 22.9, 19.7, 15.3, 14.4 ppm.
Čistoća:>99.9% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.62 min; (M+1) 331.
Primer 2
hinuklidin-3-il 2-(benzo[d][1,3]dioksol-5-il)propan-2-ilkarbamat
[0183] Korišćenjem opšte procedure B, benzo[d][1,3]dioksol-5-karbonitril (1.00 g, 6.81 mmol) je konvertovan u 2-(benzo[d][1,3]dioksol-5-il)propan-2-amin hidrohlorid (692 mg, 47%).
[0184] Koristeći opštu proceduru A, gornje međujedinjenje amonijum-hlorida (150 mg, 0.695 mmol) i hinuklidin-3-ol dao je hinuklidin-3-il 2-(benzo[d][1,3]dioksol-5-il)propan-2 ilkarbamata (125 mg, 54%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.91 (dd, J = 1.9 Hz, 1H), 6.87 (dd, J = 1.9, 8.2 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.93 (s, 2H), 5.12 (s, 1H), 4.69-4.66 (m, 1H), 3.26-2.11 (m, 7H), 2.03-1.07 (m, 4H), 1.63 (s, 6H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 156.7, 147.9, 118.0, 108.1, 106.1, 101.2, 71.2, 55.9, 55.3, 47.6, 46.7, 29.9, 29.7, 25.6, 24.8, 19.8 ppm. Čistoća:97.5% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.65 min; (M+1) 333.
Primer 3
hinuklidin-3-il 2-(nafthalen-1-il)propan-2-ilkarbamat
[0185] Upotrebom opšteg postupka A, 2-(naftalen-1-il)propan-2-amin hidrohlorid (100 mg, 0.450 mmol) i hinuklidin-3-ol dao je hinuklidin-3-il 2-(naftalen-1-il)propan-2-ilkarbamata (115 mg, 59%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.79-8.46 (m, 1H), 7.99-7.72 (m, 2H), 7.69-7.36 (m, 4H), 5.86 -5.37 (m, 1H), 4.72 -4.34 (m, 1H), 3.25-2.20 (m, 6H), 2.16-0.41 (m, 5H), 1.93 (s, 6H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 154.6, 135.2, 130.7, 129.7, 128.8, 125.9, 125.3, 123.9, 72.2, 71.1, 56.5, 55.7, 47.6, 46.6, 31.8, 31.2, 25.5, 24.8, 22.9, 19.7, 14.4 ppm. Čistoća:100% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.80 min; (M+1) 339.
Pripremanje I
Primer 4
(R)-hinuklidin-3-il 2-(3-(prop-1-en-2-il)fenil)propan-2-ilkarbamat
[0186] Rastvoru (R)-hinuklidin-3-ola (194 mg, 1.52 mmol) u THF-u (5 ml) na sobnoj temperaturi je dodat NaH [60%, ulje] (64 mg, 1.6 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 15 minuta i 1-(2-izocijanatopropan-2-il)-3-(prop-1-en-2-il)benzen (302 uL, 1.53 mmol) je dodat u kapima. Reakcija je mešana tokom 30 minuta i ugašena slanim rastvorom. Rastvor je ekstrahovan sa EtOAc i organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan. Sirovi materijal je prečišćen na kombinovanoj smeši (SiO2uložak, CHC13i 2N NH3u MeOH) da bi se dobio odgovarajući karbamat (475 mg, 95%) u obliku bistrog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.49 (s, 1H), 7.31 (br s, 3H), 5.33 (s, 1H), 5.17 (s, 1H), 5.08 (s, 1H), 4.77 - 4.61 (m, 1H), 3.33 - 2.27 (m, 5H), 2.14 (s, 3H), 2.25-0.75 (m, 6H), 1.68 (br s, 6H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 154.7, 147.2, 143.7, 141.6, 128.5, 124.2, 122.1, 112.8, 70.9, 55.7, 55.5, 47.5, 46.6, 32.2, 31.5, 29.9, 29.6, 25.5, 24.6, 22.9, 22.2, 19.6 ppm. Čistoća:100% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.84 min; (M+1) 329.2. Anal. Izračunato za C20H28N2O2·0.06 (CHCl3):C, 71.59; H, 8.40; N, 8.58. Pronađeno:C, 71.51; H, 9.05; N, 8.60.
Pripremanje J
Primer 5
hinuklidin-3-il 2-(3-izopropoksifenil)propan-2-ilkarbamat
[0187] Rastvor 3-cijanofenola (1.00 g, 8.39 mmol), 2-jodopropana (839 uL, 8.39 mmol) i cezijum karbonata (2.73 g, 8.39 mmol) u 1:1 CH2Cl2/CH3CN (16 mL) je mešan na refluksu tokom 18 h Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i filtrirana kroz Celite. Filtrat je koncentrovan, a sirovi materijal je prečišćen na kombinovanoj smeši (SiO2uložak, CH2Cl2) da bi se dobio odgovarajući eter (763 mg, 57%) kao bela čvrsta supstanca.
[0188] Upotrebom opšte procedure B, 3-izopropoksibenzonitril (763 mg, 4.24 mmol) je pretvoren u odgovarajući 2-(3-izopropoksifenil)propan-2-amin (362 mg, 45%) kao bistro ulje.
[0189] Upotrebom opšte procedure A, gornji amin (100 mg, 0.520 mmol) i hinuklidin-3-ol daju hinuklidin-3-il 2-(3-izopropoksifenil)propan-2-ilkarbamate (110 mg, 61%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.17 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.89 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.38 - 5.13 (m, 1H), 4.58 (br s, 1H), 4.49 (hept, J = 6.1 Hz, 1H), 3.31-2.04 (m, 6H), 2.00-0.79 (m, 5H) 1.60 (br s, 6H), 1.28 (d, J = 6.1 Hz, 6H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 158.1, 129.5, 117.2, 113.6, 71.1, 69.9, 55.8, 55.4, 47.6, 46.6, 29.4, 25.6, 24.8, 22.3, 19.7 ppm. Čistoća:>99.9% UPLCMS (210 nm);
Vreme zadržavanja 0.83 min; (M+1) 347.
Primer 6
hinuklidin-3-il 2-(3-bromo-2-fluorofenil)propan-2-ilkarbamat
[0190] Upotrebom opšteg postupka A, 2-(3-bromo-2-fluorofenil)propan-2-amin (1.0 g, 4.3 mmol) i hinuklidin-3-ol daju hinuklidin-3-il 2-(3-bromo-2-fluorofenil)propan-2-ilkarbamata (957 mg, 58%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45 (ddd, J = 1.6, 6.3, 7.9 Hz, 1H), 7.31 (td, J = 1.6, 7.7 Hz, 1H), 6.99 (td, J = 1.0, 8.0 Hz, 1H), 5.31-5.15 (br s, 1H), 4.59 (br s, 1H), 3.25-2.19 (m, 6H), 2.06-0.81 (m, 5H), 1.73 (s, 3H), 1.71 (s, 3H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 158.1, 155.6, 132.5, 127.1, 127.0, 124.8, 124.8, 110.6, 110.4, 71.5, 55.7, 54.2, 47.5, 46.7, 29.9, 28.4, 25.5, 24.8, 19.7 ppm. Čistoća:>99.9% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.79 min; (M+1) 385.
Primer 7
(+/-) hinuklidin-3-il (1R,2S)-2-fenilciklopropilkarbamat
[0191] Upotrebom opšteg postupka A, (+/-)((1S,2R)-2-izocianatociklopropil)benzen (117 uL, 0.780 mmol) i hinuklidin-3-ol dao je (+/-)hinuklidin-3-il (1R,2S)-2-fenilciklopropilkarbamata (63 mg, 28%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.30-7.05 (m, 5H), 5.43 (br s, 1H), 4.77 (br s, 1H), 3.23 (dd, J = 9.0, 14.0 Hz, 1H), 2.97-2.65 (m, 6H), 2.15-1.12 (m, 8H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 157.1, 140.7, 140.2, 128.5, 126.8, 126.3, 71.5, 55.7, 47.5, 46.6, 32.7, 25.6, 25.2, 24.5, 19.5, 16.2 ppm. Čistoća:>99.9% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.67 min; (M+1) 287.
Primer 8
hinuklidin-3-il 1-fenilcikloheksilkarbamat
[0192] Upotrebom opšteg postupka A, 1-fenilcikloheksanamin (36 mg, 0.21 mmol) i hinuklidin-3-ol daju hinuklidin-3-il 1-fenilcikloheksilkarbamata (40 mg, 58%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.41 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.32 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.21 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 5.19-4.98 (br s, 1H), 4.70-4.56 (s, 1H), 3.34-0.83 (m, 21H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 158.4, 128.3, 126.5, 124.9, 57.2, 46.3, 36.1, 25.4, 24.2, 22.0, 19.2, 15.2 ppm. Čistoća:>99.9% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.84 min; (M+1) 329.
Pripremanje K
Primer 9
(R)-1-(2-(3-(prop-1-en-2-il)fenil)propan-2-il)-3-(hinuklidin-3-il)urea
[0193] Rastvoru (R)-hinuklidin-3-amin dihidrohlorida (120 mg, 0.603 mmol) i 1-(2-izocijanatopropan-2-il)-3-(prop-1-en-2-il)benzen (119 mg, 0.597 mmol) u THF (3 mL) dodat je trietilamin (168 uL, 1.21 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h, a potom je ugašena rastvorom soli. Smeša je ekstrahovana sa CHC13i organski sloj je osušen (Na2SO4) i koncentrovan. Sirovi materijal je prečišćen na kombinovanoj smeši (SiO2uložak, CHC13i 2N NH3u MeOH) da bi se dobila odgovarajuća urea (163 mg, 50%) u obliku bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.62 (t, J = 1.6 Hz, 1H), 7.44 (dt, J = 1.9, 7.0 Hz, 1H), 7.41 - 7.33 (m, 2H), 5.35 (br s, 1H), 5.11 (p, J = 1.4 Hz, 1H), 4.84 (s, 1H), 4.21 (d,J= 7.5 Hz, 1H), 3.70-3.61 (m, 1H), 3.13 (ddd, J = 2.3, 9.3, 14.2 Hz, 1H), 2.71 -2.54 (m, 3H), 2.30-2.22 (m, 1H), 2.15 (dd, J = 0.8, 1.4, 3H), 2.05-1.96 (m, 1H), 1.65 (s, 3H), 1.64 (s, 3H), 1.65-1.60 (m, 1H) 1.54-1.45 (m, 2H), 1.22-1.12 (m, 1H), 0.95-0.80 (m, 1H) ppm.<13>C NMR (400 MHz, CDCl3) δ 157.4, 148.5, 143.8, 141.3, 128.4, 124.4, 123.8, 122.2, 112.6, 55.2, 53.4, 46.2, 46.1, 44.5, 30.5, 30.4, 25.0, 22.2, 17.7, 8.9 ppm. Čistoća:97.5% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.83 min; (M+1) 328.
Primer 10
1-(2-(nafthalen-2-il)propan-2-il)-3-(hinuklidin-3-il)urea
[0194] Upotrebom opšteg postupka B, naftalen-2-karbonitril (1.00 g, 6.53 mmol) je pretvoren u odgovarajući 2-(naftalen-2-il)propan-2-amin (294 mg, 25%) kao bistro ulje.
[0195] Upotrebom opšte procedure C, hinuklidin-3-amin (102 mg, 0.808 mmol), CDI (131 mg, 0.808 mmol) i 2-(naftalen-2-il)propan-2-amin (150 mg, 0.819 mmol) dao je 1 -(2-(naftalen-2-il)propan-2-il)-3- (hinuklidin-3-il)urea (132 mg, 49%) kao bela čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.94-7.78 (m, 4H), 7.69 (dd, J = 2.0, 8.7 Hz, 1H), 7.53-7.46 (m, 2H), 4.84 (s, 1H), 4.23 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.68-3.54 (m, 1H), 3.07 (ddd, J = 2.3, 9.3, 14.1 Hz, 1H), 2.61-2.51 (m, 2H), 2.42-2.32 (m, 1H), 1.95-1.83 (m, 2H), 1.75 (s, 3H), 1.74 (s, 3H), 1.58-1.54 (m, 1H), 1.46-1.40 (m, 2H), 1.03-0.91 (m, 1H), 0.72-0.60 (m, 1H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 157.5, 143.7, 133.4, 132.8, 129.3, 128.1, 127.8, 126.9, 126.7, 124.4, 124.0, 57.0, 55.0, 47.1, 47.1, 46.6, 30.5, 30.3, 26.0, 25.9, 20.0 ppm. Čistoća:>99.9% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.71 min; (M+1) 338.
Primer 11
1-(2-metil-2-(m-tolil)propil)-3-(3-metilhinuklidin-3-il)urea
[0196] Korišćenjem opšteg postupka D, 2-metil-2-(m-tolil)propan-1-amin hidrohlorid (100 mg, 0.501 mmol), trietilamin (279 uL, 2.00 mmol), trifosgen (47 mg, 0.18 mmol) i 3-metilhinuklidin-3-amin 2,2,2-trifluoroacetat (140 mg, 0.550 mmol) dao je 1-(2-metil-2-(mtolil) propil)-3-(3-metilhinuklidin-3-il)urea (41 mg, 25%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.23 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.18-7.12 (m, 2H), 7.04 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.12 (s, 1H), 4.08 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 3.39-3.22 (m, 2H), 2.81-2.62 (m, 6H), 2.34 (s, 3H), 1.98-1.89 (m, 1H), 1.80-1.63 (m, 2H), 1.51-1.23 (m, J = 26.9 Hz, 2H), 1.37 (s, 3H), 1.30 (s, 6H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 157.9, 147.1, 138.2, 128.6, 127.1, 127.1, 123.3, 64.0, 52.2, 52.1, 46.9, 46.7, 39.2, 31.2, 27.1, 26.8, 25.4, 23.5, 22.7, 21.9. Čistoća:>99.9% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.79 min; (M+1) 330.
Primer 12
1-(2-(3-metoksifenil)propan-2-il)-3-(hinuklidin-3-il)urea
[0197] Upotrebom opšte procedure C, hinuklidin-3-amin (380 mg, 3.01 mmol), CDI (489 mg, 3.01 mmol) i 2-(3-metoksifenil)propan-2-amin (506 mg, 3.07 mmol) dao je 1 -(2-(3-metoksifenil)propan-2-il)-3-(hinuklidin-3-il)urea (560 mg, 59%) kao bela čvrsta supstanca.
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.35-7.29 (m, 1H), 7.14-7.07 (m, 2H), 6.87-6.81 (ddd, 1H), 4.76 (s, 1H), 4.19 (d, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.70-3.62 (m, 1H), 3.19-3.10 (m, 1H), 2.74-2.59 (m, 3H), 2.37-2.26 (m, 1H), 2.07-1.98 (dd, 1H), 1.80 (br s, 1H), 1.69-1.63 (m, 1H), 1.63 (s, 3H), 1.62 (s, 3H), 1.58-1.44 (m, 2H), 1.28-1.14 (m, 1H), 1.02-0.90 (m, 1H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 160.0, 157.5, 148.4, 129.9, 117.7, 112.0, 111.9, 56.7, 55.3, 54.6, 47.2, 46.8, 46.4, 30.1, 25.8, 20.0 ppm. Čistoća:>99.4% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 1.73 min; (M+1) 318.
Primer 13
hinuklidin-3-il 2-(3-metoksifenil)propan-2-ilkarbamat
[0198] Upotrebom opšteg postupka A, 1-(3-metoksifenil)propan-2-amin (327 mg, 1.98 mmol) i hinuklidin-3-ol daju hinuklidin-3-il 2-(3-metoksifenil)propan-2-ilkarbamat (370 mg, 59%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.30-7.20 (m, 1H), 7.03-6.97 (m, 1H), 6.97-6.93(m, 1H), 6.80-6.74 (dd, 1H), 5.18-5.00 (br s, 1H), 4.67-4.57 (m, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.30-2.12 (br m, 7H), 2.02-1.00 (m, 10H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 159.7, 154.5, 149.0, 129.3, 117.2, 111.4, 111.0, 70.9, 55.7, 55.1, 47.4, 46.5, 29.4, 25.4, 24.6, 19.6 ppm. Čistoća:>99.9% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 1.85 min; (M+1) 319.
Primer 14
hinuklidin-3-il 2-(3-metoksifenil)propan-2-ilkarbamat
[0199] Upotrebom opšteg postupka A, 1-(4-metoksifenil)propan-2-amin hidrohlorid (316 mg, 1.57 mmol) i hinuklidin-3-ol daju hinuklidin-3-il 2-(3-metoksifenil)propan-2-ilkarbamat (370 mg, 59%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.33 (d, 2H), 6.86 (d, 2H), 5.15-5.01(br s, 1H), 4.66-4.57 (m, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.33-2.12 (m, 7H), 2.10-0.96 (m, 10H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 158.1, 154.5, 139.2, 125.8, 113.5, 70.7, 55.7, 55.2, 54.6, 47.2, 46.3, 31.2, 29.4, 25.3, 24.5, 19.4 ppm. Čistoća:>94.1% UPLCMS (210 nm);
Vreme zadržavanja 1.81 min; (M+1) 319.
Primer 15
hinuklidin-3-il 2-(4-terc-butilfenil)propan-2-ilkarbamat
[0200] Korišćenjem opšteg postupka A, 1-(4-terc-butilfenil)propan-2-amin (348 mg, 1.82 mmol) i hinuklidin-3-ol daju hinuklidin-3-il 2-(4-terc-butilpbenil)propan-2-ilkarbamata (427 mg, 68%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.34 (s, 4H), 5.09 (br s, 1H), 4.69-4.52 (m, 1H), 3.47-2.05 (m, 7H), 3.33-2.12 (m, 7H), 2.00-0.80 (m, 20H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 156.2, 149.4, 144.5, 125.3, 124.5, 70.9, 55.8, 55.1, 47.5, 46.6, 34.4, 31.4, 29.8, 29.3, 25.5, 24.6, 19.6 ppm. Čistoća:>98.2% UPLCMS (210 nm);
Vreme zadržavanja 2.29 min; (M+1) 345.
Primer 16
hinuklidin-3-il 2-(4-izopropilfenil)propan-2-ilkarbamat
[0201] Upotrebom opšteg postupka A, 1-(4-izopropilfenil)propan-2-amin (158 mg, 0.891 mmol) i hinuklidin-3-ol daju hinuklidin-3-il 2-(4-izopropilfenil)propan-2-ilkarbamat (205 mg, 70%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.33 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 7.19 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 5.09 (s, 1H) 4.69-4.51 (br s, 1H) 3.30-1.30 (m, 17 H), 1.24(s, 3H), 1.22 (s, 3H), 1.06-0.77 (m, 1H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 156.2, 147.1, 144.4, 126.4, 124.7, 70.9, 55.7, 55.0, 47.4, 46.5, 33.6, 29.8, 29.4, 25.4, 24.6, 24.0, 19.5 ppm.
Čistoća:>98.3% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 2.19 min; (M+1) 331.
Primer 17
hinuklidin-3-il 2-(4-etilfenil)propan-2-ilkarbamat
[0202] Upotrebom opšteg postupka A, 1-(4-etilfenil)propan-2-amin (230 mg, 1.41 mmol) i hinuklidin-3-ol daju hinuklidin-3-il 2-(4-etilfenil)propan-2-ilkarbamat (248 mg, 56%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.33 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 7.19 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 5.09 (s, 1H) 4.69-4.51 (br s, 1H) 3.34-0.73 (m, 22 H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 154.5, 144.3, 142.4, 127.8, 124.7, 71.0, 55.6, 55.1, 47.4, 46.5, 29.6, 28.3, 25.4, 24.6, 19.5, 15.8, 15.4 ppm. Čistoća:>99.5% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 2.07 min; (M+1) 317.
Primer 18
hinuklidin-3-il 2-o-tolilpropan-2-ilkarbamat
1
[0203] Upotrebom opšteg postupka A, 2-o-tolylpropan-2-amin (230 mg, 1.52 mmol) i hinuklidin-3-ol daju hinuklidin-3-il 2-o-tolylpropan-2-ilkarbamat (200 mg, 44%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) (rotameri) δ 7.33 (s, br, 1H), 7.15-7.10 (m, 3H), 5.35-5.20 (m, 1H), 4.60 (br s, 1H), 3.20-2.60 (m, 5H), 2.5 (s, 3H), 2.15 (br s, 1H), 1.80-1.30 (m, 10 H).<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) (rotameri) δ 154.2, 144.5, 140.2, 133.0, 127.1, 126.2, 126.1, 72.2, 71, 56.0, 46.6, 46.7, 31.0, 29.0, 26.0, 24.7, 22.3, 19.7. Čistoća:>95 % UPLCMS (210 nm); (M+1) 303.
Primer 19
hinuklidin-3-il 2-(2-metoksifenil)propan-2-ilkarbamat
[0204] Upotrebom opšteg postupka A, 2-(2-metoksifenil)propan-2-amin (150 mg, 0.908 mmol) i hinuklidin-3-ol daju hinuklidin-3-il 2-(2-metoksifenil)propan-2-ilkarbamat (60 mg, 21%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) (rotameri) δ 7.3 (m, 1H), 7.2 (m, 1H), 6.9 (m, 2H), 5.4 (s, br, 1H), 4.6 (m, 1H), 3.8 (s, 1H), 3.1 (m, 1H), 2.4-2.8 (m, 5H), 1.9 (s, 1H), 1.3-1.7 (m, 10H).<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) (rotameri) δ 157, 155, 140, 134, 129, 127, 121, 111, 70, 56, 55, 48, 47, 29, 26, 25, 20. Čistoća:> 99 % UPLCMS (210 nm); (M+1) 319.
Pripremanje L
Primer 20
1-(3-cijanohinuklidin-3-il)-3-(2-(3-(prop-1-en-2-il)fenil)propan-2-il)urea
[0205] 3-amino-3-cijanohinuklidin je pripremljen kao što je opisano u literaturi (Fernandez, M. A.; Gonzalez, G.; Martinez, M.; Galvez, E. Anales de la Real Academia de Farmacia 1988, 54, 502).
[0206] Rastvoru 3-amino-3-cijanohinuklidina (100 mg, 0.661 mmol) u CH2Cl2(5 mL) dodaje se, u vidu kapi, 3-izoprenil-□,□-dimetilbenzil izocijanat (0.13 mL, 0.66 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 sati, koncentrovana i podvrgnuta fleš hromatografiji preko silika gela (19:1 CH2Cl2/7M NH3(CH3OH)). Naslovni proizvod je dobijen kao bela čvrsta supstanca (155 mg, 67%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.52 (s, 1H), 7.35-7.25 (m, 3H), 5.34 (s, 1H), 5.05 (s, 1H), 2.60-3.41 (m, 6H), 2.25- 2.32 (m, 1H),
2
2.13 (s, 3H), 1.42-2.10 (m, 4H), 1.64 (s, 6H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CD3OD) δ 157.0, 147.9, 144.0, 141.4, 128.1, 124.0, 123.4, 121.9, 121.7, 111.5, 61.0, 55.1, 50.4, 30.9, 23.3, 22.5, 21.019.0 ppm. Čistoća:>99.9% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.82 min; (M+1) 353.
Pripremanje M
Primer 21
1-[(3S)-1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il]-3-{2-[3-(prop-1-en-2-il)fenil]propan-2-il}urea
[0207] Suspenziji od (S)-(-)-3-amino-hinkulidin dihidrohlorida (120 mg, 0.603 mmol) i trietilamina (168 uL, 1.21 mmol) u THF (2 mL) dodat je 3-izopropenil-□,□-dimetilbenzilizocijanat (121 mg, 0.601 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 18 sati, a zatim isprana zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3. Organska faza je osušena preko Na2SO4i koncentrovana. Sirovi materijal je prečišćen na kombinovanoj smeši (SiO2uložak, CHC13i 2N NH3u MeOH) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (29 mg, 47%) u obliku bele čvrste supstance.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.51 (dt, J = 2.5, 1.2 Hz, 1H), 7.41-7.14 (m, 3H), 5.32 (dd, J = 1.6, 0.8 Hz, 1H), 5.06 (s, 1H), 3.74-3.60 (m, 1H), 3.31-3.29 (m, 2H), 3.19 (ddd, J = 13.7, 9.5, 1.6 Hz, 1H), 2.88-2.50 (m, 4H), 2.37 (ddd, J = 14.0, 4.9, 2.2 Hz, 1H), 2.14 (ddd, J = 2.3, 1.8, 1.0 Hz, 3H), 1.81-1.63 (m, 4H), 1.62 (d, J = 6.2 Hz, 6H), 1.55-1.38 (m, 1H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CD3OD) δ 158.4, 148.4, 144.0, 141.3, 128.0, 124.1, 123.3, 121.9, 111.4, 55.7, 54.7, 46.7, 46.4, 46.0, 29.6, 29.4, 28.4, 26.1, 25.1, 21.0, 19.4 ppm.
Čistoća:>96% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.81 min; (M+1) 329.5.
Pripremanje N
Primer 22
1-(1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il)-3-{2-[3-(propan-2-il)fenil]propan-2-il}urea
[0208] Rastvoru 3-amino-hinuklidina (150 mg, 1.19 mmol) u THF-u (5 ml) je dodat 3-izopropenil-□,□-dimetilbenzilizocijanat. Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta, zatim koncentrovan na silika gelu i prečišćen na kombinovanom ulošku (SiO2uložak, CHC13i 2N NH3u MeOH) da bi se dobila siva čvrsta supstanca (299 mg, 77%).
[0209] Koristeći opštu proceduru F, gornja izoprenil urea (150 mg, 1.19 mmol) i paladijum hidroksid (30 mg, 20 tež.% na ugljeniku) daju 1-(1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il)-3-{2-[3-(propan-2-il)fenil]propan-2-il}urea (116 mg, 77%) kao sivkasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.38-7.28 (m, 3H), 7.16 (dt, J = 6.9, 1.6 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.26 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 3.70-3.58 (m, 1H), 3.11 (ddd, J = 14.1,9.4,2.3 Hz, 1H), 2.90 (hept, J = 6.9 Hz, 1H), 2.71-2.52 (m, 4H), 2.31-2.19 (m, 1H), 1.98 (dd, J = 14.2, 2.9 Hz, 1H), 1.61 (d, J = 2.0 Hz, 6H), 1.52-1.43 (m, 2H), 1.23 (d, J = 6.9 Hz, 6H), 1.19-1.09 (m, 1H), 0.92-0.79 (m, 1H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 157.6, 150.1, 146.1, 129.2, 125.8, 124.1, 123.3, 57.1, 54.9, 47.4, 47.0, 46.6, 34.5, 30.7, 30.5, 26.1, 26.0, 24.3, 24.2, 20.3 ppm. Čistoća:94% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.87 min; (M+1) 329.3.
Primer 23
1-(1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il)-3-[1-(nafthalen-1-il)etil]urea
[0210] 3-Aminokvinkuliden dihidrohlorid (150 mg, 0.753 mmol) je pomešan sa THF (3 ml) i trietilaminom (152 mg, 1.50 mmol) pre dodavanja 1-(1-naftil)etilizocijanata (149 mg, 0.752 mmol). Smeša je mešana 48 h na sobnoj temperaturi. Reakcioni rastvor je koncentrovan i prečišćen na kombinovanoj smeši (SiO2uložak, CHC13i 2N NH3u MeOH) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (46 mg, 19%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.20-8.05 (m, 1H), 7.85 (dd, J = 7.9, 1.5 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.59 - 7.34 (m, 4H), 5.55 (hept, 1H), 5.35 - 5.19 (m, 1H), 4.84 (dd, 1H), 3.70 - 3.53 (m, 1H), 3.09 (ddd, 1H), 2.74 - 2.28 (m, 4H), 2.17 (ddd, J = 1.8,4.5, 14.1 Hz, 1H), 1.75 - 1.62 (m, 1H), 1.55 (dd, J = 1.8, 6.8 Hz, 3H), 1.52 - 1.06 (m, 4H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 157.7, 140.0, 134.1, 130.9, 129.2, 128.3, 126.8, 126.7, 126.7, 126.0, 125.6, 123.2, 123.1, 122.8, 122.7, 56.9, 56.7, 47.4, 47.3, 46.7, 46.4, 26.1, 25.9, 22.7, 22.6, 20.1, 20.0 ppm. Čistoća:97% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.68 min; (M+1) 324.2
Primer 24
1-(1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il)-3-[2-(3-bromofenil)propan-2-il] urea
[0211] Korišćenjem opšte procedure C, hinuklidin-3-amin (100 mg, 0.792 mmol), CDI (128 mg, 0.789 mmol) i 2-(3-bromofenil)propan-2-amin (170 mg, 0.791 mmol) dali su jedinjenje iz naslova kao belu čvrstu supstancu (166 mg, 75%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.50 (s, 1H), 7.30 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.15 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 5.54 (d, J = 22.7 Hz, 1H), 5.16 (d, J =
4
29.7 Hz, 1H), 3.60 (s, 1H), 3.14 (ddd, J = 13.3, 9.4, 1.6 Hz, 1H), 2.61 (d, J = 52.6 Hz, 4H), 2.18 (dd, J = 14.1, 2.8 Hz, 1H), 1.66 (d, J = 3.0 Hz, 2H), 1.51 (d, J = 7.6 Hz, 6H), 1.28 (s, 3H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 157.1, 150.4, 130.3, 130.0, 128.6, 124.0, 123.0, 57.0, 54.6, 47.6, 47.2, 46.8, 30.5, 30.3, 26.3, 26.2, 20.2 ppm. Čistoća:100% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.66 min; (M+1) 367.8.
Primer 25
1-(1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il)-3-[2-(bifenil-3-il)propan-2-il] urea
[0212] Upotrebom opšteg postupka E, 1-(1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il)-3-[2-(3-bromofenil)propan-2-il]urea (111 mg, 0.301 mmol), fenilboronska kiselina (78.8 mg, 0.606 mmol) i tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) dali su jedinjenje iz naslova u obliku sivo-bele čvrste supstance (21 mg, 11%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.74 (s, 1H), 7.52-7.40 (m, 8H), 4.89 (s, 1H), 4.28 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 3.75-3.59 (m, 1H), 3.15 (ddd, J = 1.9, 9.3, 13.9 Hz, 1H), 2.46 (m, 4H), 2.05 (dd, J = 3.5, 14.0 Hz, 1H), 1.68 (d, J = 4.7 Hz, 6H), 1.66-0.76 (m, 5H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 157.4, 146.9, 142.5, 141.1, 129.7, 129.1, 127.8, 127.4, 126.7, 124.8, 124.7, 57.1, 55.1, 30.7, 30.1, 26.1, 26.0, 20.2 ppm. Čistoća:100% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.78 min; (M+1) 364.0.
Primer 26
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il {2-[3-(propan-2-il)fenil]propan-2-il}karbamat
[0213] Upotrebom opšte procedure F, 1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il {2-[3-(prop-1-en-2-il)fenil]propan-2-il}karbamata (48.8 mg, 0.146 mmol ) i paladijum hidroksid (30 mg, 20 tež.% na ugljeniku) dao je jedinjenje iz naslova kao sivkastu čvrstu supstancu (16 mg, 33%).
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.24 (d, J = 5.1Hz, 3H), 7.10 (d, 1H), 5.12 (s, 1H), 4.63 (s, 1H), 3.54-2.96 (m, 1H), 2.89 (s, 1H), 2.68 (s, 5H), 2.17-1.75 (m, 2H), 1.67 (s, 6H), 1.62-1.30 (m, 2H), 1.24 (d, J = 6.9 Hz, 6H), 1.15-0.85 (m, 1H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 149.1, 128.5, 124.9, 123.1, 122.5, 55.8, 55.6, 46.6, 34.5, 25.6, 24.6, 24.3, 19.7 ppm.
Čistoća:94% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.89 min; (M+1) 331.1.
Primer 27
1-azabiciko[2.2.2]okt-3-il [2-(3-bromofenilpropan-2-il]karbamat
[0214] Upotrebom opšteg postupka A, 2-(3-bromofenil)propan-2-amin hidrohlorid (2.00 g, 7.89 mmol) i hinuklidin-3-ol su dali jedinjenje iz naslova kao belu čvrstu supstancu (2.23 g, 76%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.54 (s, 1H), 7.41-7.30 (m, 2H), 7.19 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 5.11 (s, 1H), 4.68-4.54 (m, 1H), 3.51-2.11 (m, 6H), 2.04-1.68 (m, 2H), 1.63 (d, J = 10.2 Hz, 6H), 1.51-0.67 (m, 3H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 156.0, 154.7, 150.6, 149.7, 130.2, 130.0, 128.4, 123.7, 72.5, 71.6, 71.5, 55.8, 55.1, 47.6, 46.7, 31.2, 29.9, 29.8, 29.5, 25.6, 24.8, 19.7 ppm. Čistoća:100% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.69 min;
(M+1) 368.8.
Primer 28
1-azabiciko[2.2.2]okt-3-il[2-(3-ciklropilfenil)propan-2-il]karbamat
[0215] Korišćenjem opšteg postupka E, 11-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il[2-(3-bromofenil)propan-2-il]karbamat (44.3 mg, 0.121 mmol), ciklopropil boronska kiselina (14 mg, 0.16 mmol) i paladijum (II) acetat je dao jedinjenje iz naslova u obliku sivo-bele čvrste supstance (21 mg, 11%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.54 (s, 1H), 7.41-7.30 (m, 2H), 7.19 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 5.11 (s, 1H), 4.68-4.54 (m, 1H), 3.51-2.11 (m, 6H), 2.04-1.68 (m, 2H), 1.63 (d, J = 10.2 Hz, 6H), 1.36 (d, J = 9.5 Hz, 3H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 147.2, 144.2, 128.6, 128.4, 125.0, 123.7, 122.8, 122.1, 110.0, 72.2, 71.4, 55.9, 55.4, 47.7, 47.3, 46.7, 33.1, 31.6, 30.0, 29.6, 25.6, 24.8, 19.8, 19.3, 15.8, 9.5 ppm. Čistoća:91% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.75 min; (M+1) 329.0.
Primer 29
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il[2-(bifenil-3-il)propan-2-il]karbamat
[0216] Korišćenjem opšteg postupka E, 1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il[2-(3-bromofenil)propan-2-il]karbamat (600 mg, 1.63 mmol), fenilboronska kiselina (398 mg, 3.27 mmol) i paladijum (II) acetat je dao jedinjenje iz naslova u obliku beličaste čvrste supstance (379 mg, 64%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.61 (s, 1H), 7.56 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.50-7.38 (m, 4H), 7.34 (m, 2H), 5.16 (s, 1H), 4.63 (s, 1H), 3.39-2.09 (m, 6H), 1.72 (s, 6H), 2.02-0.73 (m, 5H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 154.8, 147.8, 141.6, 129.0, 129.0, 128.6, 127.5, 125.8, 125.0, 124.0, 71.6, 71.3, 55.9, 55.5, 47.6, 46.8, 31.5, 30.2, 30.0, 29.5, 25.6, 24.8, 19.8 ppm.
Čistoća:99% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.84 min; (M+1) 365.0. Anal.
Izračunato za C23H28N2O2·0.29(CHCl3):C, 70.02; H, 7.14; N, 7.01. Pronađeno:C, 70.02; H, 7.37; N, 6.84.
Primer 30
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il{2-[3-(2-metilpropil)fenil]propan-2-il}karbamat
[0217] Korišćenjem opšteg postupka E, 1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il[2-(3-bromofenil)propan-2-il]karbamata (75 mg, 0.20 mmol), 2-metilpropil boronske kiseline (28.1 mg, 0.276 mmol) i paladijum (II) acetat daju jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (50 mg, 71%).
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.21 (d, J = 4.9 Hz, 2H), 7.16 (s, 1H), 7.00 (s, 1H), 5.17 (s, 1H), 4.60 (s, 1H), 3.35-2.10 (m, 6H), 2.45 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 1.82 (dt, J = 6.8, 13.5 Hz, 1H), 2.03-0.94 (m, 5H), 1.65 (s, 6H), 0.89 (d, J = 6.6 Hz, 6H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 172.6, 172.1, 170.8, 170.2, 160.1, 160.0, 157.8, 157.7, 140.4, 139.8, 130.5, 130.4, 130.0, 129.8, 129.5, 129.3, 127.9, 127.7, 120.8, 120.7, 120.3, 113.9, 113.6, 113.2, 113.0, 110.5, 110.4, 66.6, 66.5, 56.8, 56.3, 55.4, 55.4, 54.0, 53.7, 51.1, 46.6, 43.8, 43.7, 42.0, 38.4, 37.8, 37.7, 33.8, 33.2, 27.4, 27.0, 25.7, 25.5, 20.9, 20.9 ppm. Čistoća:90% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.89 min; (M+1) 345.
Primer 31
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il[2-(5-bromo-2-fluorofenil)propan-2-il]karbamat
[0218] Upotrebom opšteg postupka A, 2-(5-bromo-2-fluorofenil)propan-2-amin hidrohlorid (100 mg, 0.372 mmol) i hinuklidin-3-ol su dali jedinjenje iz naslova kao belu čvrstu supstancu (90.3 mg, 98%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45 (dd, J = 2.3, 7.3 Hz, 1H), 7.31 (ddd, J = 2.5, 4.2, 8.6 Hz, 1H), 6.88 (dd, J = 8.6, 11.9 Hz, 1H), 5.38 (s, 1H), 4.82-4.33 (m, 1H), 3.28-2.28 (m, 6H), 1.68 (d, J = 9.0 Hz, 6H), 1.98-1.27 (m, 5H) ppm.<13>C NMR (100MHz, CDCl3) δ 161.1, 158.6, 131.7, 131.6, 131.0, 131.0, 118.6.118.3, 116.8, 55.8, 54.0, 47.6, 46.7, 28.5, 25.6, 24.8, 19.7 ppm. Čistoća:100% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.81 min; (M+1) 386.7. Anal. Izračunato za C17H22BrFN2O2·0.37(CHCl3):C, 52.20; H, 5.66; N, 7.14. Pronađeno:C, 52.21; H, 5.57; N, 7.13.
Primer 32
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il [2-(4'-fluorobifenil-3-il)propan-2-il]karbamat
[0219] Korišćenjem opšteg postupka E, 1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il[2-(3-bromofenil)propan2-il]karbamata (600 mg, 1.63 mmol), 4-fluorofenil boronske kiseline (457 mg, 3.27 mmol) i paladijum (II) acetat daju jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (373 mg, 60%).
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.56 (s, 1H), 7.52 (dd, J = 5.4, 8.4 Hz, 2H), 7.42-7.38 (m, 3H), 7.12 (m, 2H), 5.18 (s, 1H), 4.62 (s, 1H), 2.66 (m, 6H), 1.72 (s, 6H), 2.01-0.83 (m, 5H) ppm.
<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 125.0, 124.0, 123.8, 116.0, 116.0, 71.3, 55.9, 55.5, 47.6, 46.7, 29.6, 25.6, 24.8, 19.8 ppm. Čistoća:98.0% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.95 min; (M+1) 382.9. Anal. Izračunato za C23H27FN2O2·0.37(CHCl3):C, 65.86; H, 6.47; N, 6.57. Pronađeno:C, 65.85; H, 6.69; N, 6.49.
Primer 33
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il [2-(4-fluorobifenil-3-il)propan-2-il]karbamat
[0220] Korišćenjem opšteg postupka E, 1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il[2-(5-bromo-2-fluorofenil)propan-2-il]karbamat (990 mg, 2.57 mmol), fenilboronska kiselina (209 mg, 1.71 mmol) i paladijum (II) acetat je dao jedinjenje iz naslova u obliku beličaste čvrste supstance (257 mg, 26%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.58-7.49 (m, 3H), 7.44-7.38 (m, 3H), 7.35-7.29 (m, 1H), 7.08 (dd, J = 8.4, 12.1 Hz, 1H), 5.30 (s, 1H), 4.75-4.42 (m, 1H), 2.89 (d, J = 10.2 Hz, 6H), 1.81-1.66 (m, 6H), 2.04-1.18 (m, 5H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 161.7, 159.3, 140.7, 137.3, 137.3, 131.7, 131.7, 131.0, 129.0, 127.5, 127.3, 126.7, 117.1, 116.9, 71.4, 55.8, 54.3, 47.6, 46.7, 28.6, 25.6, 24.8, 19.8 ppm. Čistoća:92.0% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.95 min; (M+1) 382.9. Anal. Izračunato za C23H27FN2O2·0.4(CHCl3):C, 65.39; H, 6.43; N, 6.52. Pronađeno:C, 65.39; H, 6.51; N, 6.42.
Primer 34
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il{2-[2-fluoro-5-(2-metilpropil)fenil]propan-2-il}karbamat
[0221] Korišćenjem opšteg postupka E, 1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il[2-(5-bromo-2-fluorofenil)propan-2-il]karbamat (120 mg, 0.312 mmol), 2-metilpropilboronska kiselina (79.4 mg, 0.779 mmol) i paladijum (II) acetat je dao jedinjenje iz naslova u obliku beličaste čvrste supstance (37 mg, 33%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.08 (dd, J = 2.0, 8.2 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 6.93-6.85 (m, 1H), 5.23 (s, 1H), 4.72-4.52 (m, 1H), 3.20-2.47 (m, 6H), 2.41 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 1.89-1.76 (m, 1H), 2.02-1.26 (m, 5H), 1.70 (d, J = 7.6 Hz, 6H), 0.88 (d, J = 6.6 Hz, 6H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 160.4, 158.0, 137.1, 137.1, 129.2, 129.1, 128.1, 116.2, 116.0, 71.2, 55.8, 54.2, 47.6, 46.7, 45.1, 30.5, 29.9, 28.6, 27.0, 25.6, 24.8, 22.5, 19.8, 19.5 ppm. Čistoća:95.0% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 1.02 min; (M+1) 363.
Primer 35
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il [2-(5-ciklopropil-2-fluorofenil)propan-2-il]karbamat
[0222] Korišćenjem opšteg postupka E, 1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il[2-(5-bromo-2-fluorofenil)propan-2-il]karbamat (750 mg, 0.649 mmol), ciklopropilboronska kiselina (139 mg, 1.62 mmol) i paladijum (II) acetat je dao jedinjenje iz naslova u obliku beličaste čvrste supstance (727 mg, 86%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.08 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 6.97-6.78 (m, 2H), 5.19 (s, 1H), 4.65-4.57 (m, 1H), 2.66 (s, 6H), 1.85 (tt, J = 5.1, 8.4 Hz, 1H), 2.00-1.17 (m, 5H), 1.71 (d, J = 8.7 Hz, 6H), 0.92 (ddd, J = 4.6, 6.3, 8.4 Hz, 2H), 0.62 (dt, J = 4.7, 6.4 Hz, 2H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 160.2, 157.8, 139.2, 139.2, 125.6, 125.5, 125.4, 116.5, 116.3, 71.3, 55.8, 54.2, 47.6, 46.7, 29.9, 29.6, 28.6, 25.6, 24.8, 19.6, 15.2, 9.1 ppm. Čistoća:100% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.87 min; (M+1) 347.2. Anal. Izračunato za C20H27FN2O2·0.07(CHCl3):C, 68.00; H, 7.70; N, 7.90. Pronađeno:C, 67.99; H, 7.86; N, 7.81.
Primer 36
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il[2-(3-bromo-4-fluorofenil)propan-2-il]karbamat
[0223] Upotrebom opšteg postupka A, 2-(3-bromo-4-fluorofenil)propan-2-amin hidrohlorid (1.00 g, 3.72 mmol) i hinuklidin-3-ol su dali jedinjenje iz naslova kao belu čvrstu supstancu (434 mg, 30%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.57 (s, 1H), 7.38-7.25 (m, 1H), 7.06 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 5.62 (s, 1H), 4.86-4.32 (m, 1H), 3.33-2.12 (m, 6H), 1.73 (t, J = 7.2 Hz, 5H), 1.61 (d, J = 9.6 Hz, 6H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 159.1, 156.7, 154.6, 130.4, 125.8, 125.7, 116.4, 116.2, 109.1, 108.9, 71.3, 55.7, 54.7, 47.4, 46.5, 29.9, 29.6, 25.5, 24.6, 22.9, 19.6 ppm. Čistoća:100% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.79 min; (M+1) 387.8. Anal. Izračunato za C17H22BrFN2O2·0.27(CHCl3):C, 49.68; H, 5.38; N, 6.71. Pronađeno:C, 49.67; H, 5.39; N, 6.74.
Primer 37
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il [2-(6-fluorobifenil-3-il)propan-2-il]karbamat
[0224] Korišćenjem opšteg postupka E, 1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il[2-(3-bromo-4-fluorofenil)propan-2-il]karbamat (750 mg, 1.95 mmol), fenil boronska mg, 4.87 mmol) i paladijum (II) acetat je dao jedinjenje iz naslova u obliku beličaste čvrste supstance (195 mg, 29%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.49 (s, 2H), 7.46-7.38 (m, 3H), 7.35 (dd, J= 4.3, 11.7 Hz, 2H), 7.08 (dd, J = 8.6, 10.1 Hz, 1H), 5.10 (s, 1H), 4.60 (s, 1H), 3.33-2.10 (m, 6H), 1.67 (d, J = 7.9 Hz, 6H), 1.67 (m, 5H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 159.9, 157.4, 136.2, 129.3, 129.0, 128.7, 127.9, 127.6, 125.7, 125.6, 71.0, 66.1, 55.7, 55.1, 47.5, 46.6, 29.9, 29.6, 25.5, 24.5, 19.5, 15.5 ppm. Čistoća:98% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.95 min; (M+1) 382.9. Anal. Izračunato za C23H27FN2O2·0.29(CHCl3):C, 67.08; H, 6.60; N, 6.72. Pronađeno:C, 67.09; H, 6.95; N, 6.37.
Primer 38
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il{2-[4-fluoro-3-(2-metilpropil)fenil]propan-2-il}karbamat
[0225] Korišćenjem opšteg postupka E, 1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il[2-(3-bromo-4-fluorofenil)propan-2-il]karbamat (125 mg, 0.324 mmol), 2-metilpropilboronska kiselina (66 mg, 0.65 mmol) i paladijum (II) acetat je dao jedinjenje iz naslova u obliku beličaste čvrste supstance (27 mg, 23%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.23-7.11 (m, 2H), 7.04-6.82 (m, 1H), 5.11 (s, 1H), 4.59 (s, 1H), 3.32-2.12 (m, 6H), 2.48 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 1.86 (d, J = 6.7, Hz, 1H), 2.05-0.96 (m, 5H), 1.62 (d, J = 5.8 Hz, 6H), 0.90 (d, J = 6.6 Hz, 6H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 161.4, 159.0, 154.7, 142.5, 128.3, 124.0, 115.1, 114.9, 71.2, 66.1, 55.8, 55.0, 47.6, 46.7, 38.7, 29.9, 29.6, 25.6, 24.8, 22.6, 19.7, ppm. Čistoća:85% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 1.0 min; (M+1) 362.9.
Primer 39
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il[2-(4',6-difluorobifenil-3-il)propan-2-il]karbamat
[0226] Korišćenjem opšteg postupka E, 1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il[2-(3-bromo-4-fluorofenil)propan-2-il]karbamat (125 mg, 0.324 mmol), 4-fluoroboronska kiselina (64 mg, 0.46 mmol) i paladijum (II) acetat je dao jedinjenje iz naslova u obliku beličaste čvrste supstance (76 mg, 56%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.48 (t, 2H), 7.44-7.29 (m, 2H), 7.21-7.00 (m, 3H), 5.27 (s, 1H), 4.68-4.55 (m, 1H), 3.29-2.10 (m, 6H), 1.67 (d, J = 9.4 Hz, 6H), 2.01-0.69 (m, 5H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 163.9, 161.4, 159.8, 157.3, 154.8, 143.5, 132.2, 130.9, 127.9, 127.8, 127.4, 125.9, 125.8, 116.2, 116.0, 115.7, 115.5, 71.4, 66.1, 55.9, 47.6, 46.7, 30.0, 39.7, 25.6, 24.8, 19.8 ppm. Čistoća:98% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.96 min; (M+1) 400.9.
Primer 40
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il{2-[4-fluoro-3-(pirimidin-5-il)fenil]propan-2-il}karbamat
[0227] Korišćenjem opšteg postupka E, 1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il [2-(3-bromo-4-fluorofenil)propan-2-il]karbamata (150 mg, 0.389 mmol), pirimidin-5-boronična kiselina (75.9 mg, 0.613 mmol) i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) dali su jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (49 mg, 31%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.22 (s, 1H), 8.92 (s, 2H), 7.55-7.41 (m, 2H), 7.19 (dd, J = 8.7, 9.9 Hz, 1H), 5.37 (s, 1H), 4.72-4.49 (m, 1H), 3.34-2.04 (m, 6H), 2.04-0.98 (m, 5H), 1.66 (t, J = 10.9 Hz, 6H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 159.9, 157.9, 157.4, 156.6, 154.7, 130.2, 127.85, 127.77, 126.9, 122.0, 121.8, 116.7, 116.5, 116.2, 71.6, 55.9, 54.9, 47.6, 46.7, 30.3, 29.6, 25.6, 24.8, 19.8 ppm.
Čistoća:93% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.63 min; (M+1) 384.9
Primer 41
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il{2-[4-fluoro-3-(piridin-3-il)fenil]propan-2-il}karbamat
[0228] Korišćenjem opšteg postupka E, 1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il [2-(3-bromo-4-fluorofenil)propan-2-il]karbamata (110 mg, 0.286 mmol), pirimidin-3-boronična kiselina (53 mg, 0.43 mmol) i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) dali su jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (42 mg, 39%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.78 (s, 1H), 8.62 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.46 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.38 (dd, J = 4.9, 7.9 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 8.7, 9.9 Hz, 1H), 5.32 (s, 1H), 4.69-4.57 (m, 1H), 2.68 (s, 6H), 1.70 (d, J = 11.3 Hz, 6H), 2.08-0.94 (m, 5H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 160.0, 157.5, 149.9, 149.0, 136.6, 132.1, 127.3, 126.8, 126.7, 125.5, 125.3, 123.5, 116.4, 116.2, 71.5, 55.9, 55.0, 47.6, 46.7, 30.1, 29.66, 25.6, 24.8, 19.7 ppm. Čistoća:100% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.54 min; (M+1) 367.8.
Primer 42
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il{2-[4-fluoro-3-(furan-3-il)fenil]propan-2-il}karbamat
[0229] Korišćenjem opšteg postupka E, 1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il [2-(3-bromo-4-
1
fluorofenil)propan-2-il]karbamata (110 mg, 0.296 mmol), furan-3-boronična kiselina (47.9 mg, 0.428 mmol) i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) dali su jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (47 mg, 44%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.88 (ddd, J = 0.9, 1.5, 2.5 Hz, 1H), 7.53 (dd, J = 2.5, 7.1 Hz, 1H), 7.50 (t, J = 1.7 Hz, 1H), 7.31-7.23 (m, 1H), 7.08 (dd, J = 8.6, 10.6 Hz, 1H), 6.76 (dt, J = 0.8, 1.7 Hz, 1H), 5.22 (s, 1H), 4.62 (s, 1H), 3.40-2.11 (m, 6H), 2.02-0.87 (m, 5H), 1.59 (dd, J = 11.6, 70.3 Hz, 6H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 160.0, 157.5, 150.2, 143.9, 127.44, 127.36, 127.0, 126.1, 123.8, 116.6, 116.4, 71.5, 55.9, 55.0, 47.6, 46.7, 30.1, 29.9, 25.6, 24.8, 19.8 ppm. Čistoća:96% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.85 min; (M+1) 372.9.
Primer 43
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il{2-[4-fluoro-3-(piridin-4-il)fenil]propan-2-il}karbamat
[0230] Korišćenjem opšteg postupka E, 1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il [2-(3-bromo-4-fluorofenil)propan-2-il]karbamata (130 mg, 0.291 mmol), pirimidin-4-boronična kiselina (54 mg, 0.43 mmol) i tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) dali su jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (46 mg, 41%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.68 (dd, J = 1.6,4.5 Hz, 2H), 7.61-7.39 (m, 4H), 7.15 (dd, J = 8.6, 10.2 Hz, 1H), 5.31 (s, 1H), 4.69-4.57 (m, 1H), 3.40-2.07 (m, 6H), 1.69 (d, J = 10.8 Hz, 6H), 2.06-0.74 (m, 5H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 160.0, 157.6, 143.3, 141.6, 141.5, 126.7, 126.6, 124.9, 124.8, 120.1, 119.9, 116.1, 115.9, 115.4, 115.1, 109.2,71.4, 55.9, 55.0, 47.6, 46.7, 29.9, 25.6, 24.8, 19.8 ppm.
Čistoća:97% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.82 min; (M+1) 384.6.
Primer 44
1-(1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il)-3-(2-fenilpropan-2-il)urea
[0231] Korišćenjem opšte procedure C, hinuklidin-3-amin (102 mg, 0.6 mmol), CDI (131 mg, 0.789 mmol) i kumilamin (95 mg, 0.70 mmol) dali su jedinjenje iz naslova kao belu čvrstu supstancu (21 mg, 10%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.61-7.47 (m, 2H), 7.44-7.37 (m, 2H), 7.34-7.28 (m, 1H), 4.86 (s, 1H), 4.20 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 3.71-3.60 (m, 1H), 3.14 (ddd, J = 2.3, 9.4, 14.2 Hz, 1H), 2.79-1.89 (m, 6H), 1.64 (d, J = 3.3 Hz, 6H), 1.58-1.10 (m, 5H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 157.4, 146.2, 129.3, 127.8, 125.8, 57.1, 54.9, 47.7, 47.1, 46.7, 30.6, 30.5, 26.0, 20.3 ppm. Čistoća:79% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.61 min; (M+1) 288.2.
2
Pripremanje O
Primer 45
3-cijano-1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il {2-[3-(prop-1-en-2-il)fenil]propan-2-il}karbamat
[0232] Rastvoru 3-hidroksi-hinuklidin-3-karbonitrila (38 mg, 0.25 mmol) u acetonitril/dioksanu (3 mL) na sobnoj temperaturi je dodat trietilamin (7.0 uL, 0.05 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 15 minuta i 1-(2-izocijanatopropan-2-il)-3-(prop-1-en-2-il)benzen (49.0 uL, 0.248 mmol) je dodat u kapima. Reakcija je mešana tokom 18 h na 65 °C i koncentrovana. Sirovi materijal je prečišćen na kombinovanoj smeši (SiO2uložak, CHC13i 2N NH3 u MeOH) da bi se dobio odgovarajući karbamat u obliku bistrog ulja (57 mg, 65%).
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.42-7.20 (s, 5H), 6.61(s, 1H), 5.11 (s, 1H), 3.29 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.09 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 2.93 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 2.79-2.68 (m, 2H), 2.13 (s, 6H) 2.05-2.00 (m, 2H), 1.91 (s, 3H), 1.87 (s, 2H), 1.50-1.37 (m, 2H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 135.4, 128.7, 125.2, 124.5, 124.0, 122.0, 112.9, 61.2, 47.0, 46.2, 32.4, 31.8, 29.9, 29.4, 29.2, 26.6, 25.7, 23.7, 22.8, 22.2, 19.2 ppm. Čistoća:>99% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.81 min; (M+1) 354.
Pripremanje P
Primer 46
N-(2-(3-(prop-1-en-2-il)fenil)propan-2-il)-1,4-diazabiciko[3.2.2]nonan-4-karboksamid
[0233] U rastvor 1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonana (350 mg, 2.77 mmol) i 1-(2-izocijanatopropan-2-il)-3-(prop-1-en-2-il)benzena (1.09 mL, 5.55 mmol) u hloroformu (2 mL) je dodato 3-4 komada molekularnih sita. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h, a zatim koncentrovana. Sirovi materijal je prečišćen na kombinovanoj smeši (SiO2uložak, CHC13i 2N NH3 u MeOH) da se dobije odgovarajuća urea kao sasvim bela čvrsta supstanca (650 mg, 36%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.48 (s, 1H), 7.31-7.26 (m, 3H), 5.34(s, 1H), 5.07 (s, 1H), 4.73 (br s, 1H), 4.03 (BR s, 1H), 3.64 (m, 2H), 3.14-3.03 (m, 6H), 2.15 (s, 3H) 2.06 (m, 2H), 1.72 (m, 8H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 155.7, 148.3, 143.8, 141.3, 128.5, 124.1, 123.9, 122.0, 112.5, 57.8, 55.8, 48.1, 46.4 (2x), 41.2, 30.2 (2x), 27.3 (2x), 22.1 ppm. Čistoća:>98% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.71 min; (M+1) 328
Primer 47
bifenil-2-il 1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-karboksilat
[0234] Bifenil-2-il karbonohloridat (83.0 mg, 0.358 mmol) je tretiran sa 1,4-diazabiciklo [3.2.2] nonanom (113 mg, 0.896 mmol) koristeći isti postupak naveden u primeru 46, da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (17 mg, 15%). Čistoća:>99% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.75 min; (M+1) 323.
Primer 48
N-{2-[3-(propan-2-il)fenil]propan-2-i|}-1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-karboksamid
[0235] Upotrebom opšte procedure F, N-(2-(3-(prop-l-en-2-il)fenil)propan-2-il)-1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-karboksamid (100 mg, 0.305 mmol) i paladijum (20 mg, 20 tež.% na ugljeniku) dali su jedinjenje iz naslova kao sivkastu čvrstu supstancu (60 mg, 57%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.28-7.21 (m, 3H), 7.11 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.71 (s, 1H), 4.02 (s, 1H), 3.66 (t, J = 8.0 Hz, 2H) 3.15 (m, 7H), 2.06 (br s, 2H), 1.77 (s, 7H) 1.26 (d, J = 4.0 Hz, 6H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 155.8, 148.9, 148.5, 128.5.1, 124.7, 123.1, 122.4, 57.8, 56.0, 48.1, 46.4, 41.2, 34.5, 32.2, 30.4, 30.0, 29.9, 27.3, 24.3, 22.9 ppm. Čistoća:>91% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.74 min; (M+1) 330.
Pripremanje Q
Primer 49
(+/-)-(3S,4S)-1-azabiciklo[2.2.1]heptan-3-il-2-(3-(prop-1-en-2-il)fenil)propan-2-ilkarbamat
[0236] Rastvoru (+/-)-(3S,4S)-l-azabiciklo[2.2.1]heptan-3-ola (294 mg, 2.6 mmol) u THF (5 ml) dodata je NaH [60 %, ulje] (107 mg, 2.67 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 15 minuta i 1-(2-izocijanatopropan-2-il)-3-(prop-1-en-2-il)benzen (344 uL, 1.73 mmol) je dodat u kapima. Reakcija je mešana tokom 30 minuta i ugašena slanim rastvorom. Rastvor je ekstrahovan sa EtOAc i organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan. Sirovi materijal je prečišćen na kombinovanoj smeši (SiO2uložak, CHC13i 2N NH3 u MeOH) da bi
4
se dobio odgovarajući karbamat u obliku bistrog ulja (140 mg, 26%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.26-7.20 (m, 3H), 7.11 (m, 1H), 5.18 (s, 1H), 5.19 (br s, 1H), 5.01 (s, 1H), 4.81 (br s, 1H), 2.99 (br s, 1H), 2.82(br s, 1H), 2.70 (br s, 1H), 2.53 (br s, 2H), 2.33 (br s, 1H), 2.02 (s, 3H), 1.76 (br s, 1H) 1.61 (br s, 6H), 1.52 (br s, 1H), 1.37 (br s, 1H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 147.1, 143.7, 141.5, 128.5, 124.1, 122.1, 112.7, 75.6, 60.6, 59.4, 55.4, 54.3, 53.9, 41.5, 29.9, 29.8, 29.4, 22.2, 21.6 ppm. Čistoća:>98% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.83 min; (M+1) 315
Primer 50
(+/-)-(3S,4S)-1-azabiciklo[2.2.1]hept-3-il{2-[3-(propan-2-il)fenil]propan-2-il}karbamat
[0237] Upotrebom opšteg postupka F, (+/-)-(3S,4S)-1-azabiciklo[2.2.1]heptan-3-il 2-(3-(prop-1-en-2-il)fenil)propan- 2-ilkarbamat (110 mg, 0.350 mmol) i paladijum (20 mg, 20 tež.% na ugljeniku) dali su jedinjenje iz naslova u obliku sivo-bele čvrste supstance (36 mg, 46%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.25-7.19 (m, 3H), 7.11 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.19 (s, 1H), 4.91 (s, 1H), 3.44 (t, J = 4.0 Hz, 2H) 3.19 (br s, 1H), 3.02 (br s, 1H), 2.89 (m, 2H), 2.69 (br s, 1H), 2.39 (br s, 1H), 1.91 (br s, 1H), 1.66 (br s, 7H) 1.26 (d, J = 4.0 Hz, 6H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 128.5 (2x), 124.8, 123.1 (2x), 122.4(2x), 77.4, 60.6, 59.4, 55.5, 41.5, 34.5, 29.9, 29.9, 29.5, 24.3 (2x), 21.6 ppm. Čistoća:>95% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.88 min; (M+1) 317.
Primer 51
N-[2-(3-bromo-4-fluorofenil)propan-2-il]-1,4-diazabiciko[3.2.2]nonan-4-karboksamid
[0238] Upotrebom opšteg postupka A, 2-(3-bromo-4-fluorofenil)propan-2-amin hidrohlorid (1.00 g, 3.72 mmol) i hinuklidin2-ol su dali jedinjenje iz naslova kao belu čvrstu supstancu (265 mg, 18%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.54-7.52 (m, 1H), 7.31-7.25 (m, 1H), 7.04 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 4.71(s, 1H), 3.99 (br s, 1H), 3.59 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 3.13-2.95 (m, 6H), 2.04-1.97 (m, 2H) 1.77-1.67 (m, 2H), 1.65 (s, 6H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 158.9, 156.4, 155.4, 145.9, 130.2, 125.6, 116.2, 57.8, 54.9, 48.3, 46.6, 46.6, 41.6, 30.5, 30.5, 27.6, 27.6 ppm. Čistoća:>99% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.73 min; (M+1) 384.
Primer 52
N-[2-(6-fluorobifenil-3-il)propan-2-il]-1,4-diazabiciko[3.2.2]nonan-4-karboksamid
[0239] Koristeći opštu proceduru E, N-[2-(3-bromo-4-fluorofenil)propan-2-il]-1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-karboksamid (100 mg, 0.261 mmol), fenilboronske boronska kiselina (79 mg, 0.65 mmol) i paladijum (II) acetat su dali jedinjenje iz naslova u obliku sivobele čvrste supstance (66 mg, 66%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.54 (m, 2H), 7.44-7.40 (m, 5H), 7.08(m, 1H), 4.78(br s, 1H), 4.00 (br s, 1H), 3.60 (m, 2H), 3.11-2.92 (m, 6H), 2.00 (m, 2H) 1.67(m, 7H), 1.26 (s, 1H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 159.6, 155.6, 144.6, 136.5, 129.3, 128.6, 128.5, 127.8, 127.5, 125.7, 125.6, 116.1, 115.9, 57.9, 55.3, 48.2, 46.4, 46.4, 41.6, 30.6, 30.5, 29.9, 27.6 ppm. Čistoća:>99% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.88 min; (M+1) 382.
Primer 53
N-[2-(4',6-difluorobifenil-3-il)propan-2-il]-1,4-diazabiciko[3.2.2]nonan-4-karboksamid
[0240] Koristeći opštu proceduru E, N-[2-(3-bromo-4-fluorofenil)propan-2-il]-1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-karboksamid (100 mg, 0.261 mmol), 4-fluorofenil boronska kiselina (91 mg, 0.65 mmol) i paladijum (II) acetat su dali jedinjenje iz naslova u obliku sivobele čvrste supstance (64 mg, 62%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.48 (m, 2H), 7.37-7.30 (m, 2H), 7.10-7.03 (m, 3H), 4.77 (s, 1H), 3.99 (br s, 1H), 3.58 (m, 2H), 3.10-2.90 (m, 6H), 1.98 (m, 2H) 1.71 (m, 8H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 163.7, 161.3, 159.5, 157.1, 155.6, 144.6, 131.0, 130.9, 127.4, 127.2, 125.7, 116.1, 115.6, 57.9, 55.2, 48.2, 46.4, 46.4, 41.5, 30.6, 30.6, 27.6, 27.6 ppm. Čistoća:>99% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.90 min; (M+1) 400.
Primer 54
N-[2-(naftalen-1-il)propan-2-il]-1,4-diazabiciko[3.2.2]nonan-4-karboksamid
[0241] Upotrebom opšteg postupka A, 2-(naftalen-l-il)propan-2-amin hidrohlorid (227 mg, 1.23 mmol) i 1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan dao je jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (206 mg, 50%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.63-8.60 (m, 1H), 7.90-7.87 (m, 1H), 7.78 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), ), 7.47-7.42 (m, 3H), 4.86 (s, 1H), 3.94 (br s, 1H), 3.61 (m, 2H), 3.11-2.88 (m, 7H), 2.01-1.91 (m, 7H), 1.68-1.62 (m, 2H) ppm.
<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 176.2, 155.5, 142.6, 135.3, 130.6, 129.9, 128.8, 126.3, 125.4, 125.2, 123.9, 57.3, 57.1, 47.7, 45.8, 45.8, 40.7, 29.4, 29.4, 26.9, 26.9 ppm. Čistoća:>99% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.72 min; (M+1) 338.
Primer 55
N-(2-(5-bromo-2-fluorofenil)propan-2-il)-1,4-diazabiciko[3.2.2]nonan-4-karboksamid
[0242] Upotrebom opšteg postupka A, 2-(5-bromo-2-fluorofenil)propan-2-amin hidrohlorid (100 mg, 0.372 mmol) i hinuklidin2-ol su dali jedinjenje iz naslova kao belu čvrstu supstancu (70 mg, 49%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.48 (m, 1H), 7.28 (m, 1H), 6.86 (m, 1H), 4.85 (s, 1H), 3.98 (br s, 1H), 3.56 (m, 2H), 3.14-2.91 (m, 7H), 1.99 (m, 2H) 1.71 (m, 7H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 161.1, 158.6, 155.7, 131.3, 113.1, 118.3, 118.057.8, 54.0, 48.1, 46.4, 46.4, 41.5, 29.1, 29.1, 27.5, 27.5 ppm. Čistoća:>99% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.73 min; (M+1) 384.
Primer 56
N-[2-(4-fluorobifenil-3-il)propan-2-il]-1,4-diazabiciko[3.2.2]nonan-4-karboksamid
[0243] Koristeći opštu proceduru E, N-(2-(5-bromo-2-fluorofenil)propan-2-il)-1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-karboksamid (100 mg, 0.261 mmol), fenil boronska kiselina (30 mg, 0.25 mmol) i paladijum (II) acetat su dali jedinjenje iz naslova u obliku sivo-bele čvrste supstance (27 mg, 39%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.56-7.51 (m, 3H), 7.41-7.37 (m, 3H), 7.32-7.30 (m, 1H), 7.03 (m, 1H),4.90 (s, 1H), 4.00 (br s, 1H), 3.59 (m, 2H), 3.11-2.92 (m, 6H), 2.04-1.98 (m, 2H) 1.78 (s, 6H), 1.73-1.67 (m, 2H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 161.8, 159.4, 155.9, 140.9, 137.2, 134.6, 128.9, 127.4, 127.3, 127.2, 127.1, 127.0, 116.9, 57.9, 54.4,48.1, 46.5, 46.5, 41.4, 29.9, 29.3, 27.5, 27.5 ppm. Čistoća:>99% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.90 min; (M+1) 400.
Primer 57
N-(2-(3-izopropoksifenil)propan-2-il)-1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-karboksamid
[0244] Upotrebom opšteg postupka A, 2-(3-izopropoksifenil)propan-2-amin hidrohlorid (60 mg, 0.31 mmol) i 1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan dao je jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (70 mg, 57%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.17 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.92-6.87 (m, 2H), 6.69 (d, J = 8.0 Hz, 1H) 4.66 (br s, 1H), 4.48 (m, 1H), 3.94 (br s, 1H) 3.56 (m, 2H), 3.08-2.90 (m, 5H), 1.96 (m, 2H) 1.69-1.60 (m, 7H), 1.27 (d, J = 8.0 Hz, 6H), 1.17 (br s, 2H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 158.0, 155.7, 150.3, 129.4, 117.1, 113.4, 113.1, 77.5, 69.8, 55.7, 48.2, 46.4,46.4, 46.3, 41.5, 30.3, 30.0, 29.9, 27.6, 22.3 ppm. Čistoća:>99% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.75 min; (M+1) 346.
Primer 58
N-(bifenil-3-il)-1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-karboksamid
[0245] Upotrebom opšte procedure A, bifenil-3-amin (100 mg, 0.592 mmol) i 1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan dao je jedinjenje iz naslova kao sivkastu čvrstu supstancu (93 mg, 49%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.60 (m, 1H), 7.56-53 (m, 2H), 7.39-7.21 (m, 6H), 6.67 (br s, 1H), 4.85 (s, 1H), 4.16 (br s, 1H), 3.66- 3.61 (m, 2H), 3.07-2.86 (m, 6H), 1.97 (m, 2H) 1.68 (m, 2H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 154.7, 142.0, 141.1, 139.9, 129.3, 128.8.
128.8, 127.5, 127.3, 127.3, 122.0, 119.4, 119.2, 57.5, 48.4, 46.3, 46.3, 42.1, 27.5, 27.5 ppm. Čistoća:>96% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.75 min; (M+1) 333.
Primer 59
N-{2-[2-fluoro-5-(2-metilpropil)fenil]propan-2-il}-1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-karboksamid
[0246] Upotrebom opšteg postupka E, N-(2-(5-bromo-2-fluorofenil)propan-2-il)-l, 4-diazabiciklo[3.2.2] nonan-4-karboksamid (100 mg, 0.261 mmol), sa izopropil boronskom kiselinom (66 mg, 0.65 mmol) i paladijum (II) acetatom je dao jedinjenje iz naslova u obliku sivo-bele čvrste supstance (27 mg, 39% ).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.93-6.81 (m, 2H), 4.85 (s, 1H), 3.96 (br s, 1H), 3.65 (q, J = 8.0 Hz, 1H), 3.55 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 3.09-2.90 (m, 5H), 2.40 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 2.01-1.92 (m, 2H) 1.81-1.61 (m, 8H), 1.22-1.17 (m, 2H), 0.87 (d, J = 8.0 Hz, 6H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 160.5, 158.0, 155.9, 137.0, 133.6, 128.8, 116.0, 57.9, 54.3, 48.1, 46.4 (2x), 45.2, 41.4, 30.5, 29.9, 29.2, 29.2, 27.5, 22.6, 22.6 ppm. Čistoća:>99% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.94 min; (M+1) 362.
Primer 60
N-(bifenil-2-il)-1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-karboksamid
[0247] Korišćenjem opšteg postupka A, 1-izocijanatobifenil (50 mg, 0.26 mmol) i 1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan je dao jedinjenje iz naslova kao belu čvrstu supstancu (55 mg, 65%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.15 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45-7.31 (m, 6H), 7.16 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.04 (t,J= 8.0 Hz, 1H), 6.47 (br s, 1H), 3.63 (br s, 1H), 3.57 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 3.00-2.80 (m, 6H), 1.68 (m, 2H) 1.43 (m, 2H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 154.2, 138.9, 136.6, 131.7, 129.7, 129.5, 129.5, 129.3, 129.3, 128.7, 128.1, 122.6, 120.5, 57.6, 48.5, 46.2, 46.2, 41.6, 29.9, 27.3 ppm. Čistoća:>99% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.64 min; (M+1) 322.
Primer 61
N-(naftalen-1-il)-1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan-4-karboksamid
[0248] Korišćenjem opšteg postupka A, 1-izocijanonaftalen (208 mg, 1.23 mmol) i 1,4-diazabiciklo[3.2.2]nonan je dao jedinjenje iz naslova kao belu čvrstu supstancu (150 mg, 48%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.80-7.72 (m, 2H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44-7.35 (m, 3H), 6.65 (br s, 1H), 4.18 (br s, 1H), 3.64 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 3.09-2.91 (m, 6H), 2.08-1.93 (m, 2H) 1.74-1.66 (m, 2H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 155.3, 134.4, 134.3, 128.9, 128.2, 126.2, 126.1, 126.0, 125.1, 121.2, 121.0, 57.6, 48.7, 46.4, 46.4, 42.2, 27.6, 27.6 ppm. Čistoća:>99% UPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.53 min; (M+1) 296.
Primer 62
(S)-hinuklidin-3-il 2-(bifenil-4-il)propan-2-ilkarbamat
[0249] Upotrebom opšte procedure B, bromobenzonitril (2.00 g, 11.0 mmol) je pretvoren u odgovarajući 2-(4-bromfenil)propan-2-amin (1.20 g, 51%) kao smeđe ulje.
[0250] Korišćenjem opšteg postupka A, 2-(4-bromofenil)propan-2-amin (1.0 g, 4.7 mmol) i (S)-hinuklidin-3-ol daje (S)-hinuklidin-3-il 2-(4-bromofenil)propan-2-ilkarbamata (1.0 g, 58%) kao smeđe ulje.
[0251] Koristeći opštu proceduru E, gornji bromid (200 mg, 0.540 mmol), fenilboronska kiselina (133 mg, 1.10 mmol) i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2dali su jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (70 mg, 35%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.60-7.53 (m, 4H), 7.47 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.42 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.33 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 5.26 (br s, 1H), 4.64 (m, 1H), 3.33-3.15 (m, 1H), 3.10-2.45 (m, 5H), 2.40-1.80 (m, 2H), 1.78-1.58 (m, 7H), 1.55-1.33 (m, 2H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 154.5, 146.1, 140.8, 139.5, 128.7, 127.2, 127.1, 127.1, 125.2, 70.9, 55.5, 55.1, 47.4, 46.4, 31.1, 29.5, 25.3, 24.5, 19.5 ppm. Čistoća:100 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.56 min; (M+1) 365.
Primer 63
hinuklidin-3-il 2-(4-(pirimidin-5-il)fenil)propan-2-ilkarbamat
[0252] Korišćenjem opšteg postupka E, hinuklidin-3-il 2-(4-bromofenil)propan-2-ilkarbamata (200 mg, 0.540 mmol), pirimidin-5-ilboronska kiselina (136 mg, 1.12 mmol) i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2je dao jedinjenje iz naslova kao belu čvrstu supstancu (80 mg, 40%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.17 (s, 1H), 8.92 (s, 2H), 7.58-7.51 (m, 4H), 5.34 (s, 1H), 4.61 (m, 1H), 3.20-3.10 (m, 1H), 2.92-2.41 (m, 5H), 2.00-1.76 (m, 2H), 1.72-1.53 (m, 7H), 1.52-1.32 (m, 2H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 157.4, 154.8, 154.5, 148.2, 134.0, 132.5, 127.0, 126.0, 71.2, 55.6, 55.0, 47.4, 46.3, 29.7, 29.4, 25.4, 24.5, 19.5 ppm. Čistoća:> 96 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.34 min; (M+1) 366.
Primer 64
hinuklidin-3-il 1-(bifenil-4-il)ciklopropilkarbamat
[0253] Upotrebom opšteg procedure G, bromobenzonitril (3.00 g, 16.5 mmol) je pretvoren u odgovarajući 1-(4-bromfenil)ciklopropanamin (1.80 g, 51%) u obliku žute čvrste supstance.
[0254] Upotrebom opšte procedure A, 1-(4-bromofenil)ciklopropanamin (1.0 g, 4.7 mmol) i hinuklidin-3-ol daju hinuklidin-3-il 1-(4-bromofenil)ciklopropil-karbamat (1.3 g, 75%) kao belu polu-čvrstu supstancu.
[0255] Koristeći opštu proceduru E, gornji karbamat (400 mg, 1.12 mmol), fenilboronska kiselina (267 mg, 2.22 mmol) i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2daju jedinjenje iz naslova kao viskozno ulje (100 mg, 25%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.47 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.43 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.33 (t, J= 7.5 Hz, 2H), 7.26-7.15 (m, 3H), 5.93 (br s, 0.6H), 5.89 (br s, 0.4H), 4.67 (m, 1H), 3.20-3.06 (m, 1H), 2.88-2.42 (m, 5H), 1.98-1.08 (m, 9H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 155.0, 141.0, 139.7, 138.2, 127.7, 126.1, 126.0, 124.8, 124.1, 70.0, 54.5, 46.3, 45.4, 34.1, 24.3, 23.2, 18.3, 17.0 ppm. Čistoća:100 % LCMC (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.52 min; (M+1) 363.
Pripremanje R
Primer 65
hinuklidin-3-il 1-(4-(piridin-2-il)fenil)ciklopropilkarbamat
[0256] Rastvoru hinuklidin-3-il 1-(4-bromofenil)ciklopropilkarbamata (870 mg, 2.43 mmol) u 30 ml 1,4-dioksana dodat je bis(pinakolato)diboron (1.81 g, 7.22 mmol), CH3COOK (2.10 g, 21.4 mmol), i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2(97 mg, 0.12 mmol). Smeša je mešana na 80 °C 18 h. Rastvarač je isparen i ostatak je ekstrahovan sa EtOAc. Ekstrakti su koncentrovani i prečišćeni kolonskom hromatografijom na silika gelu (eluiranje sa EtOAc/metanol od 20/1 do 10/1, koji sadrži 1% TEA) da bi se dobio hinuklidin-3-il 1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)ciklopropilkarbamat (260 mg, 33%) kao smeđa polučvrsta supstanca.
[0257] Koristeći opštu proceduru E, gornji boronat (260 mg, 0.632 mmol), 2-bromopiridin (149 mg, 0.941 mmol) i Pd2(dba)3(32.0 mg, 0.036 mmol) dali su jedinjenje iz naslova kao belo polu-čvrsto jedinjenje (70 mg, 31%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.58 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 7.66-7.57 (m, 2H), 7.23-7.15 (m, 2H), 7.11 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 6.16 (br s, 0.6H), 5.97 (br s, 0.4H), 4.63 (m, 1H), 3.17-3.02 (m, 1H), 2.90-2.38 (m, 5H), 1.90-1.10 (m, 9H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 156.1, 155.2, 148.6, 143.0, 136.3, 135.7, 125.9, 124.5, 120.9, 119.4, 70.3, 54.6, 46.3, 45.4, 34.1, 24.4, 23.5, 18.5, 17.3 ppm.
Čistoća:100 % LCMS (214 nm & 254 nm); vreme zadržavanja 1.18 (M+H) 364.
Primer 66
hinuklidin-3-il 1-(4-(pirimidin-5-il)fenil)ciklopropilkarbamat
[0258] Koristeći opštu proceduru E, gornji hinuklidin-3-il 1-(4-bromofenil)ciklopropilkarbamat (400 mg, 1.10 mmol), pirimidin-5-ilboronska kiselina (204 mg, 1.64 mmol) i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2su dali jedinjenje iz naslova kao viskozno ulje (110 mg, 28%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ (s, 1H),
1
(s, 2H), 7.44 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.33-7.25 (m, 2H), 6.02 (br s, 0.7H), 6.02 (br s, 0.3H), 4.65 (m, 1H), 3.20-3.05 (m, 1H), 2.86-2.40 (m, 5H), 1.98-1.12 (m, 9H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 156.3, 155.1, 153.7, 143.3, 132.9, 131.1, 126.0, 125.3, 70.5, 54.7, 46.4, 45.4, 34.1, 24.4, 23.5, 18.5, 17.5 ppm. Čistoća:100 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.29 min; (M+1) 365.
Primer 67
(S)-hinuklidin-3-il 1-(4'-fluorobifenil-4-il)ciklopropilkarbamat
[0259] Upotrebom opšte procedure E, (S)-hinuklidin-3-il 1-(4-bromofenil)ciklopropilkarbamat, 4-F-fenilboronska kiselina i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2su dali jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (45%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.06-7.83 (d, 1H), 7.69-7.66 (m, 2H), 7.59-7.55 (m, 2H), 7.29-7.22 (m, 4H), 4.56-4.54 (m, 1H), 3.13-2.32 (m, 6H), 1.91-1.19 (m, 9H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ 163.2, 161.2, 156.4, 143.7, 136.9, 128.9, 128.8, 126.8, 125.6, 116.2, 116.0, 70.7, 55.8,47.4, 46.4, 34.8, 25.7, 24.6, 19.6, 18.7, 18.6 ppm. Čistoća:> 97 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.96 min; (M+1) 381.2.
Primer 68
1-azabiciklo [3.2.2] nonan-4-il 1-(4'-fluorobifenil-4-il) ciklopropilkarbamat
[0260] Upotrebom opšte procedure E, 1-azabiciklo[3.2.2]nonan-4-il 1-(4-bromofenil)-ciklopropilkarbamat, 4-F-fenilboronska kiselina i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2su dali jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (27%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.52-7.48 (m, 4H), 7.33-7.28 (m, 2H), 7.14-7.11 (t, J = 8.5 Hz, 2H), 5.47-5.33 (d, 1H), 4.93-4.89 (m, 1H), 3.15-2.75 (m, 6H), 2.10-0.88 (m, 11H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 163.4, 161.4, 155.7, 142.1, 138.3, 136.9, 128.5, 128.5, 127.0, 125.9, 125.4, 115.7, 115.5, 78.8, 51.7, 48.3, 44.9, 35.2, 33.7, 30.6, 29.7, 24.8, 22.2, 18.1 ppm. Čistoća:> 99 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.56 min; (M+1) 395.2.
Primer 69
(S)-hinuklidin-3-il 1-(4-(5-fluoropiridin-2-il)fenil)ciklopropilkarbamat
[0261] Upotrebom opšte procedure E, (S)-hinuklidin-3-il(1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-
2
dioksa-borolan-2-il)fenil)ciklopropil)karbamat, 2-bromo-5-fluoropiridin i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2dali su jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (34%).
<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.51-8.52 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.87-7.85 (d, J = 10.5 Hz, 2H), 7.69-7.67 (m, 1H), 7.47-7.42 (m, 1H), 7.32-7.27 (m, 2H), 5.79- 5.66 (d, 1H), 4.73-4.71 (t, J = 5.0 Hz ,1H), 3.22-3.19 (m, 1H), 2.87-2.61 (m, 5H), 2.01-1.22 (m, 9H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 160.8, 157.4, 156.1, 153.5, 144.4, 137.8, 136.3, 126.7, 125.7, 124.9, 123.6, 121.1, 71.6, 55.7, 47.4, 46.5, 35.3, 29.7, 25.4, 24.8, 19.4 ,18.2 ppm. Čistoća:> 99 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.41 min; (M+1) 382.2.
Pripremanje S
Primer 70
(S)-1-(1-(4'-fluorobifenil-4-il)ciklopropil)-3-(3-metilhinuklidin-3-il)urea
[0262] U flašicu sa okruglim dnom sa tri vrata i opremljenom sa dva levka za izjednačavanje pritiska i gumenom cevi koja je povezana sa meračem protoka gasa, suspenzija 1-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-4-il)ciklopropanamin (1.50 g, 7.07 mmol) u mešavini 20 ml vode i 1 ml konc. HCl je mešana 10 minuta. Dodaje se toluen (10 mL) i rastvor se održava pod jakim mešanjem i hladi do 0 °C. Rastvor trifosgena (3.10 g, 10.6 mmol) u 20 ml toluena i 40 ml zasićenog vodenog NaHCO3dodavan je u vidu kapi tokom 1 sata. Reakciona smeša je mešana tokom dodatnih 30 minuta. Mešanje je zaustavljeno i gornji sloj toluena je zatim odvojen, osušen (Na2SO4) i koncentrovan da bi se dobio odgovarajući izocijanat koji se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
[0263] Rastvoru gornjeg izocijanata (134 mg, 0.571 mmol) u 15 ml toluena dodat je (S)-3-metilhinuklidin-3-amin (80 mg, 0.57 mmol). Dobijena smeša je zagrevana do refluksa preko noći, ohlađena do sobne temperature i koncentrovana u vakuumu da bi se dobio ostatak, koji je prečišćen kombinovanom blic hromatografijom reverzne faze(0-20% MeCN u vodi) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (73 mg, 33%).<1>H NMR (500 MHz CDCl3) δ 7.52-7.48 (m, 4H), 7.27-7.25 (d, J = 10.0 Hz, 2H), 7.13-7.09 (m, 2H), 5.39 (s, 1H), 4.78 (s, 1H), 2.95-2.71 (m, 5H), 2.65-2.64 (m, 1H), 1.94-1.93 (m, 1H), 1.69-1.68 (m, 1H), 1.46-1.38 (m, 5H), 1.36-1.33 (m, 4H), 1.26-1.23 (m, 1H) ppm.<13>C NMR (125 MHz CDCl3) δ 163.5, 161.5, 157.5, 141.5, 138.5, 136.6, 136.6, 128.5, 128.4, 127.2, 124.7, 115.8, 115.6, 63.8, 52.3, 46.6, 46.3, 34.9, 31.0, 25.0, 23.2, 22.5, 20.2, 20.0 ppm. Čistoća:> 99 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.51 min; (M+H<+>) 394.2.
Primer 71
(S)-1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il [1-(2',4'-difluorobifenil-4-il)ciklopropil]karbamat
[0264] Korišćenjem opšteg postupka E, (S)-hinuklidin-3-il 1-(4-bromofenil)ciklopropilkarbamat (0.446 g, 1.22 mmol), 2,4-difluorofenil boronske kiseline (0.386 g, 2.44 mmol) i Pd(OAc)2(0.015 g, 0.067 mmol) dao je jedinjenje iz naslova u obliku žutosmeđe čvrste supstance (0.111 g, 23%).<1>H NMR (CDCl3) 7.43 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 2H), 7.40-7.33 (m, 1H), 7.31 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 6.99-6.81 (m, 2H), 5.54 (d, J = 48.0 Hz, 1H), 4.82-4.65 (m, 1H), 3.30-3.07 (m, 1H), 2.98-2.44 (m, 5H), 1.97 (d, J = 32.7 Hz, 1H), 1.83 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 1.64 (s, 1H), 1.52 (s, 1H), 1.39 (s, 1H), 1.31 (d, J = 6.8 Hz, 4H) ppm.<13>C NMR veći rotamer (CDCl3) δ 162.2 (dd, J = 12.8, 249.1 Hz), 159.8 (dd, J = 11.8, 251.0 Hz), 156.9, 156.0, 142.6, 133.1, 131.3 (m), 128.9, 125.6, 124.9, 111.5 (dd, J = 3.9, 21.2 Hz) 104.4 (dd, J = 25.2, 29.4 Hz), 72.1, 71.6, 55.7, 47.4, 46.5, 35.7, 35.3, 25.5, 24.6, 24.4, 19.5, 18.1 ppm. Čistoća:LCMS > 99.3 % (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 0.90 min; (M+1) 399.0
Primer 72
1-azabiciklo[2.2.2]okt-3-il[1-(4'-metoksibifenil-4-il)ciklopropil]karbamat
[0265] Korišćenjem opšteg postupka E, hinuklidin-3-il 1-(4-bromofenil)ciklopropilkarbamat (0.485 g, 1.33 mmol), 4-metoksifenil borna kiselina (0.404 g, 2.66 mmol) i Pd(OAc)2(0.016 g, 0.071 mmol) dali su jedinjenje iz naslova kao sivu čvrstu supstancu (0.337 mg, 65%).<1>H NMR (CDCl3) δ 7.48 (dd, J = 8.6, 5.5 Hz, 4H), 7.29 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.58 (d, J = 48.7 Hz, 1H), 4.83-4.63 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.20 (dd, J = 24.0, 15.5 Hz, 1H), 2.97-2.42 (m, 5H), 1.97 (d, J = 30.9 Hz, 1H), 1.81 (s, 1H), 1.75-1.33 (m, 3H), 1.28 (d, J = 6.8 Hz, 4H) ppm.<13>C NMR veći rotamer (CDCl3) δ 159.1, 156.0, 141.4, 139.0, 133.4, 128.0, 126.7, 125.9, 114.2, 71.5, 55.7, 55.3, 47.4, 46.5, 35.3, 25.5, 24.6, 19.6, 17.8 ppm. Čistoća:LCMS >97.1 % (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 0.88 min; (M+1) 393.4. Pripremanje T
Primer 73
4
hinuklidin-3-il 2-(5-(4-fluorofenil)tiofen-3-il)propan-2-ilkarbamat
[0266] U mešani i ohlađeni (0 °C) rastvor etil 5-bromotiofen-3-karboksilata (13.30 g, 56.57 mmol) u THF (100 ml) dodat je rastvor metilmagnezijum bromida u dietil etru [3.0 M] (55.0 mL, 165 mmol), u vidu kapi tokom 20 minuta. Nakon 2 sata, reakcioni rastvor je koncentrovan. Ostatak je rastvoren u vodenom NH4C1 (200 mL) i ekstrahovan etil acetatom (2 x 100 mL). Kombinovani ekstrakti su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Dobijeno ulje boje ćilibara je prečišćeno fleš hromatografijom, koristeći gradijent heksan/etil acetat, da bi se dobio 2-(5-bromotiofen-3-il)propan-2-ol kao bledo ulje boje ćilibara (8.05 g, 64%).
[0267] U mešani rastvor 2-(5-bromotiofen-3-il)propan-2-ola (8.03 g, 36.3 mmol) u metilen hloridu (80 ml) dodat je natrijum azid (7.08 g, 109 mmol), a zatim trifluorosirćetna kiselina (8.0 mL; u vidu kapi tokom 5-6 minuta). Suspenzija za zgušnjavanje je mešana 1.5 sat pre razblaživanja vodom (350 ml) i ekstrahovanja etil acetatom (1 x 200 ml). Organski sloj je ispran vodenim rastvorom NaHCO3(1 x 250 mL), osušen (Na2SO4) i koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod azida. U mešani rastvor ovog materijala u THF (160 ml) dodata je voda (11 ml), a zatim trifenilfosfin (23.8 g, 90.7 mmol). Reakcija je mešana 2 dana pre koncentrovanja. Dobijeni ostatak je rastvoren u etil acetatu (250 mL) i ekstrahovan sa 1 N vodenom HCl (4 x 75 mL). Kombinovani ekstrakti su zaluženi koncentrovanim NH4OH i ekstrahovani etil acetatom (2 x 100 mL). Ti ekstrakti su zauzvrat osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Dobijeno ulje boje ćilibara je prečišćeno fleš hromatografijom koristeći gradijent metilen hlorid/metanol/amonijak da bi se dobila smeša 2-(5-bromotiofen-3-il)propan-2-amina i trifenilfosfin oksida (∼70/30 odnos) kao viskozno ulje boje ćilibara (1.32 g, 17%).
[0268] U mešani rastvor 3-hinuklidinola (3.00 g, 23.6 mmol) u THF (100 ml) dodat je 4-nitrofenil hloroformat (5.94 g, 29.5). Posle 4 sata mešanja, talog je filtriran, ispran THF i osušen na vazduhu u kućnom vakuumu. Filterski kolač je rastvoren u etil acetatu (150 ml) i ispran vodenim NaHCO3(1 x 150 ml) i vodom (2 x 150 ml). Organski sloj je osušen (Na2SO4) i koncentrovan da bi se dobio sirovi 4-nitrofenil-hinuklidin-3-il karbonatni proizvod, koji je korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja.
[0269] U mešani rastvor 2-(5-bromotiofen-3-il)propan-2-amina (0.366 g, 1.66 mmol) u THF (10 ml) dodat je 4-nitrofenil hinuklidin-3-il karbonat (0.571 g, 1.95 mmol) i nekoliko granula 4-(dimetilamino)piridina. Smeša je bila refluksovana preko noći, koncentrovana i podeljena između etil acetata (50 mL) i vodenog NaHCO3(50 mL). Organski sloj je ponovo ispran sa vodenim rastvorom NaHCO3(1 x 50 mL), osušen (Na2SO4) i koncentrovan. Dobijena prljava žuta guma je prečišćena fleš hromatografijom, koristeći gradijent hloroform/metanol/amonijak, dajući hinuklidin-3-il (l-(5-bromotiofen-3-il)ciklopropil)karbamat kao sivo čvrstu supstancu (0.305 g, 49%).
[0270] Korišćenjem opšteg postupka E, hinuklidin-3-il (1-(5-bromotiofen-3-il)ciklopropil)karbamat (0.227 g, 0.742 mmol), 4-fluorofenil boronska kiselina (0.208 g, 1.49 mmol), tricikloheksilfosfin (0.021 g, 0.075 mmol), kalijum fosfat (0.866, 4.08 mmol) i paladijum acetat (8.0 mg, 36 □mol) dali su jedinjenje iz naslova u obliku sive čvrste supstance (0.142 g, 49%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.60-7.45 (m, 2H), 7.24-7.19 (m, 1H), 7.10-6.97 (m, 3H), 5.23 (br s, 1H), 4.72-4.61 (m, 1H), 3.30-3.04 (m, 1H), 3.03-2.25 (m, 5H), 2.09-1.02 (m, 11H) ppm.<13>C NMR (400 MHz, CDCl3) δ 162.3 (d, J = 247.1 Hz), 154.5, 149.8, 143.6, 130.7, 127.4 (d, J = 8.1 Hz), 121.8, 118.9, 115.8 (d, J = 21.6 Hz), 70.8, 55.5, 53.4, 47.3, 46.4, 29.0, 25.4, 24.4, 19.4 ppm. Čistoća:95.8 % UPLCMS (210 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 0.90 min; (M+1) 389.
Pripremanje U
Primer 74
(S)-hinuklidin-3-il 2-(3-(4-fluorofenil)izotiazol-5-il)propan-2-ilkarbamat
[0271] U mešani rastvor 2-(3-(4-fluorofenil)izotiazol-5-il)propan-2-amina (1.21 g, 5.12 mmol) u toluenu dodat je rastvor fosgena u toluenu [∼1.9 M] (10.8 mL, 20.5 mmol).
Reakcija je zagrevana na refluksu tokom dva sata, a zatim koncentrovana. Ostatak je evaporisan zajedno sa toluenom (2 x 15 mL) da bi se dobilo sirovo međujedinjenje izocijanata kao zlatno ulje. Ovaj materijal je pretočen u toluen (10 mL) i tretiran (S)-3-hinuklidinolom (0.749 g, 5.89 mmol). Reakcija je zagrevana na refluksu tokom dva sata, a zatim koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom korišćenjem gradijenta hloroform/metanol/amonijak da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (0.971 g, 49%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.09-8.00 (m, 2H), 7.87 (br s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.35-7.25 (m, 2H), 4.54-4.45 (m, 1H), 3.14-2.92 (m, 1H), 2.87-2.17 (m, 5H), 1.98-0.98 (m, 11H) ppm.<13>C NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 180.1, 165.6, 162.6 (d, J = 246.4Hz), 154.7, 131.2 (d, J = 3.0 Hz), 128.7 (d, J = 8.4 Hz), 118.2, 115.7 (d, J = 21.8 Hz), 70.6, 55.3, 52.8, 46.9, 45.9, 29.9, 25.2, 24.2, 19.2 ppm. Čistoća:100 % UPLCMS (210 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 0.82 min; (M+1) 390.
Pripremanje V
Primer 75
(S)-hinuklidin-3-il 2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)propan-2-ilkarbamat
[0272] U mešani rastvor 4-fluorotiobenzamida (8.94 g, 57.6 mmol) u etanolu (70 ml) dodat je etil 4-hloroacetoacetat (7.8 ml, 58 mmol). Reakcija je zagrevana na refluksu tokom 4 sata, tretirana dodatnom alikvotom etil 4-hloroacetoacetata (1.0 mL, 7.4 mmol) i refluksovana dodatnih 3.5 sata. Reakcija je zatim koncentrovana i ostatak je podeljen između etil acetata (200 mL) i vodenog NaHCO3(200 mL). Organski sloj je kombinovan sa ekstraktom vodenog sloja (etil acetat, 1 x 75 mL), osušen (Na2SO4) i koncentrovan. Dobijeno ulje boje ćilibara je prečišćeno fleš hromatografijom korišćenjem gradijenta heksana/etil acetata, da bi se dobio etil 2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)acetat u obliku niske topljenja, gotovo bezbojne čvrste supstance (13.58 g, 89%).
[0273] U mešani rastvor etil 2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)acetata (6.28 g, 23.7 mmol) u DMF (50 mL) je dodat natrijum hidrid [60% disperzija u mineralnom ulju] (2.84 g, 71.0 mmol). Penasta smeša je mešana tokom 15 minuta pre hlađenja u ledenoj kupki i dodavanjem jodometana (4.4 mL, 71 mmol). Reakcija je mešana preko noći, što je omogućilo da se kupka za hlađenje polako zagreje do sobne temperature. Reakcija je zatim koncentrovana i ostatak je podeljen između etil acetata (200 mL) i vodenog NaHCO3(200 mL). Organski sloj je ispran sa drugom porcijom vode (1 x 200 ml), osušen (Na2SO4) i koncentrovan. Dobijeno ulje boje ćilibara je prečišćeno fleš hromatografijom koristeći gradijent heksan/etil acetat, da bi se dobio etil 2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)-2-metilpropanoat kao bezbojno ulje (4.57 g, 66%).
[0274] U mešani rastvor etil 2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)-2-metilpropanoata (4.56 g, 15.5 mmol) dodato je 1:1:1 THF/etanol/voda (45 ml) litijum hidroksid monohidrat (2.93 g, 69.8 mmol). Reakcija je mešana preko noći, koncentrovana i ponovo rastvorena u vodi (175 mL). Rastvor je ispran etrom (1 x 100 mL), zakišeljen dodatkom 1.0 N HCl (80 mL) i ekstrahovan etil acetatom (2 x 70 mL). Kombinovani ekstrakti su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani da bi se dobila 2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)-2-metilpropanska kiselina kao bela čvrsta supstanca (4.04 g, 98%). Ovaj materijal je korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja.
[0275] Za a mešanje i hlađenje (0 °C) rastvora 2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)-2-metilpropanojeve kiseline (4.02 g, 15.2 mmol) u THF (100 mL) dodat je trietilamin (4.2 mL, 30 mmol), a zatim sa izobutil hloroformatom (3.0 mL, 23 mmol). Reakcija je mešana hladno tokom još 1 sat pre dodavanja rastvora natrijum-azida (1.98 g, 30.5 mmol) u vodi (20 ml). Reakcija je mešana preko noći, što je omogućilo da se kupka za hlađenje polako zagreje do sobne temperature. Smeša je zatim razblažena vodom (100 ml) i ekstrahovana etil acetatom (2 x 60 ml). Kombinovani ekstrakti su isprani vodenim rastvorom NaHCO3(1 x 150 mL) i fiziološkim rastvorom (1 x 100 mL), osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Posle evaporisanja zajedno sa toluenom (2 x 50 ml), dobijena bela čvrsta supstanca je stavljena u toluen (100 ml) i podvrgnuta refluksu tokom 4 sata. Zatim je dodat (S)-3-hinuklidin (3.87 g, 30.4 mmol) i refluks je nastavljen tokom preko noći. Reakcija je koncentrovana i ostatak je podeljen između etil acetata (100 mL) i vodenog NaHCO3(150 mL). Organski sloj je ispran vodom (1 x 150 ml), osušen (Na2SO4) i koncentrovan. Dobijena sivkasta čvrsta supstanca je prečišćena fleš hromatografijom koristeći gradijent hloroform/metanol/amonijak da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (4.34 g, 73%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.96-7.88 (m, 2H), 7.16-7.04 (m, 3H), 5.55 (br s, 1H), 4.69-4.62 (m, 1H), 3.24-3.11 (m, 1H), 3.00-2.50 (m, 5H), 2.01-1.26 (m, 11H) ppm.<13>C NMR (400 MHz, CDCl3) δ 166.4, 165.1, 163.8 (d, J = 250.3 Hz), 162.9, 155.0, 130.1 (d, J = 3.3 Hz), 128.4 (d, J = 8.5 Hz), 115.9 (d, J = 22.3 Hz), 112.5, 71.2, 55.7, 54.2, 47.5, 46.5, 28.0, 25.5, 24.7, 19.6 ppm. Čistoća:100 % UPLCMS (210 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 0.83 min; (M+1) 390.
Pripremanje W
Primer 76
(S)-hinuklidin-3-il 2-(4-(4-fluorofenil)tiazol-2-il)propan-2-ilkarbamat
[0276] U mešani rastvor etil 3-amino-3-tioksopropanoata (20.00 g, 135.9 mmol) u etanolu (120 ml) dodat je 2-bromo-4'-fluoroacetofenon (29.49 g, 135.9 mmol). Smeša je stavljena pod refluks tokom 1 sata, koncentrovana i podeljena između etil acetata (300 mL) i vodenog NaHCO3(400 mL). Organski sloj je kombinovan sa ekstraktom vodenog sloja (etil acetat, 1 x 100 mL), osušen (Na2SO4) i koncentrovan. Dobijena svetlo smeđa čvrsta supstanca je prečišćena fleš hromatografijom korišćenjem gradijenta heksana/etil acetata da bi se dobio etil 2-(4-(4-fluorofenil)tiazol-2-il)acetat kao sivkasta čvrsta supstanca (29.92 g, 83%).
[0277] U mešani i ohlađeni (-78 °C) rastvor etil 2-(4-(4-fluorofenil)tiazol-2-il)acetata (10.00 g, 37.69 mmol) u THF (250 ml) dodat je rastvor kalijuma t-butoksid u THF [1.0 M] (136 mL, 136 mmol), kap po kap tokom 15 minuta, a zatim 18-kruna-6 (1.6 mL, 7.5 mmol). Posle dodatnih 30 minuta na -78 °C dodat je jodometan (8.5 ml), u vidu kapi tokom 5 minuta.
Reakcija je mešana hladno tokom dodatna 2 sata pre izlivanja u vodu (450 mL) i ekstrahovanje sa etil acetatom (2 x 150 mL). Kombinovani ekstrakti su isprani fiziološkim rastvorom (1 x 200 mL), osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Dobijeno smeđe ulje je prečišćeno fleš hromatografijom koristeći gradijent heksan/etil acetat da bi se dobio etil 2-(4-(4-fluorofenil) tiazol-2-il)-2-metilpropanoat kao bledo ulje boje ćilibara (8.64 g, 78%).
[0278] U mešani rastvor etil 2-(4-(4-fluorofenil)tiazol-2-il)-2-metilpropanoata (0.900 g, 3.07 mmol) u 1:1:1 doda se THF/etanol/voda (15 ml) litijum hidroksid monohidrat (0.451 g, 10.7 mmol). Posle mešanja preko noći, reakcija je koncentrovana i ponovo rastvorena u vodi (80 mL). Rastvor je ispran etrom (1 x 50 ml), zakišeljen je sa dodatkom 1 N HCl (15 ml) i ekstrahovan etil acetatom (2 x 50 ml). Kombinovani ekstrakti su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani da bi se dobila 2-(4-(4-fluorofenil)tiazol-2-il)-2-metilpropanska kiselina kao bledo zlatna čvrsta supstanca (0.808 g, 99%).
[0279] Za mešanje i hlađenje (0 °C) rastvora 2-(4-(4-fluorofenil)tiazol-2-il)-2-metilpropanojeve kiseline (0.784 g, 2.96 mmol) u THF (25 mL) dodat je trietilamin (0.82 mL, 5.9 mmol), a zatim sa izobutil hloroformatom (0.58 mL, 4.4 mmol). Reakcija je mešana hladno tokom još 1 sat pre dodavanja rastvora natrijum-azida (0.385 g, 5.92 mmol) u vodi (7 ml). Reakcija je mešana preko noći, što je omogućilo da se kupka za hlađenje polako zagreje do sobne temperature. Smeša je zatim razblažena vodom (100 ml) i ekstrahovana etil acetatom (2 x 60 ml). Kombinovani ekstrakti su isprani vodenim rastvorom NaHCO3(1 x 150 mL) i fiziološkim rastvorom (1 x 100 mL), osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Posle evaporisanja zajedno sa toluenom (2 x 30 ml), dobijena siva bela čvrsta supstanca je stavljena u toluen (25 ml) i podvrgnuta refluksu tokom 4 sata. Zatim je dodat (S)-3-hinuklidin (0.753 g, 5.92 mmol) i refluks je nastavljen tokom 3 sata. Reakcija je koncentrovana i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom koristeći gradijent hloroform/metanol/amonijak da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (0.793 g, 69%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.90-7.81 (m, 2H), 7.32 (s, 1H), 7.14-7.05 (m, 2H), 5.76 (br s, 1H), 4.72-4.65 (m, 1H), 3.26-3.10 (m, 1H), 3.03-2.37 (m, 5H), 2.05-1.23 (m, 11H)ppm.<13>C NMR (400 MHz, CDCl3) δ 177.6, 162.6 (d, J = 248.4 Hz), 154.8, 153.6, 130.8 (d, J = 3.2 Hz), 128.1 (d, J = 8.1 Hz), 115.9 (d, J = 21.7 Hz), 112.2, 71.6, 55.7, 47.4, 46.5, 29.1, 25.4, 24.7, 19.6 ppm.
Čistoća:100 % UPLCMS (210 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 0.82 min; (M+1) 390. Primer 77
hinuklidin-3-il 1-(4-(benziloksi)fenil)ciklopropilkarbamat
[0280] Smeša 4-cijanofenola (5.0 g, 42 mmol), benzilbromida (8.6 g, 50 mmol), kalijum karbonata (11.6 g, 84.0 mmol) u DMF (40 mL) je mešana na 100 °C tokom 3 sata. Talog je filtriran, a filtrat je razblažen sa EtOAc i ispran vodom. Organski sloj je osušen (Na2SO4) i koncentrovan. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa petrolej etrom/EtOAc od 20/1 do 5/1) da bi se dobio 4-(benziloksi)benzonitril u obliku bele čvrste materije (8.1 g, 92%).
[0281] Upotrebom opšte procedure G, 4-(benziloksi)benzonitril (6.00 g, 28.7 mmol) je pretvoren u odgovarajući 1 (4-(benziloksi)fenil)ciklopropanamin u obliku žute čvrste supstance (1.8 g, 26%).
[0282] Upotrebom opšte procedure A, 1-(4-(benziloksi)fenil)ciklopropanamin (600 mg, 2.51 mmol) i hinuklidin-3-ol su dali jedinjenje iz naslova kao viskozno ulje (170 mg, 17%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.34 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 7.30 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 7.25 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.50 (br s, 0.6H), 5.40 (br s, 0.4H), 4.96 (s, 2H), 4.64 (m, 1H), 3.20-3.15 (m, 1H), 2.88-2.50 (m, 5H), 1.95-1.05 (m, 9H) ppm.<13>C NMR(125 MHz, CDCl3) δ 156.6, 154.8, 136.0, 134.2, 127.6, 126.9, 126.4, 125.4, 113.7, 70.0, 69.0, 54.5, 46.3, 45.4, 34.2, 24.3, 23.3, 18.3, 15.8 ppm. Čistoća:> 90 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.57 min; (M+1) 393.
Primer 78
hinuklidin-3-il bifenil-3-ilmetilkarbamat
[0283] U mešani i ohlađeni (0 °C) rastvor trifosgena (0.80 g, 2.7 mmol) u THF (20 ml)
1
dodata je, u vidu kapi, smeša (3-bromofenil)metanamina (1.0 g, 5.4 mmol) i trietilamin (1.08 g, 10.7 mmol) u THF (30 ml) tokom 2 sata. Po završetku dodavanja, smeša je refluksovana tokom 1 sata, a zatim je ohlađena do sobne temperature. Dodat je hinuklidin-3-ol (1.40 g, 10.7 mmol) i smeša je refluksovana tokom 18 h. Rastvarač je uklonjen u vakuumu, a ostatak je rastvoren u EtOAc, ispran vodom, osušen preko Na2SO4i koncentrovan. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa EtOAc/metanol = 10/1) da bi se dobio hinuklidin-3-il 3-bromobenzilkarbamata kao bezbojna tečnost (0.68 g, 37%).
[0284] Korišćenjem opšteg postupka E, hinuklidin-3-il 3-bromobenzilkarbamata (237 mg, 0.700 mmol), fenilboronske kiseline (171 mg, 1.4 mmol) i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2dao je jedinjenje iz naslova kao viskozna polučvrsta supstanca (110 mg, 47 %).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.57 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.50 (m, 2H), 7.62-7.38 (m, 3H), 7.35 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.32-5.17 (m, 1H), 7.78 (m, 1H), 4.42 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.26 (m, 1H), 2.95-2.65 (m, 5H), 2.05 (m, 1H), 1.84 (m, 1H), 1.70 (m, 1H), 1.58 (m, 1H), 1.42 (m, 1H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 155.2, 140.7, 139.8, 138.0, 128.1, 127.8, 126.4, 126.1, 125.5, 125.4, 125.3, 70.1, 54.4, 46.2, 45.3, 44.1, 24.3, 23.1, 18.2 ppm. Čistoća:> 98 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.44 min; (M+1) 337.
Primer 79
hinuklidin-3-il 3-(pirimidin-5-il)benzilkarbamat
[0285] Korišćenjem opšteg postupka E, hinuklidin-3-il 3-bromobenzilkarbamata (203 mg, 0.600 mmol), pirimidin-5-ilboronske kiseline (149 mg, 1.2 mmol) i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2dao je jedinjenje iz naslova kao viskozna polučvrsta supstanca (110 mg, 54%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.20 (s, 1H), 8.94 (s, 2H), 7.51 (m, 3H), 7.40 (m, 1H), 5.62 (m, 1H), 4.81 (m, 1H), 4.50-4.40 (m, 2H), 3.30 (m, 1H), 2.97-2.65 (m, 5H), 2.12 (m, 1H), 1.92-1.82 (m, 1H), 1.79-1.69 (m, 1H), 1.65-1.56 (m, 1H), 1.50-1.42 (m, 1H)ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 157.6, 156.2, 154.9, 140.1, 134.7, 134.1, 129.8, 128.2, 126.2, 70.9, 55.2, 47.2, 46.2, 44.8, 25.2, 23.8, 19.0 ppm. Čistoća:> 95 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.22 min; (M+1) 339.
Primer 80
hinuklidin-3-il 3-(benziloksi)benzilkarbamat
1 1
[0286] Smeša 2-(3-hidroksifenil)sirćetne kiseline (0.6 g, 3.95 mmol), benzil bromida (0.710 g, 4.14 mmol), kalijum hidroksida (0.550 g, 9.87 mmol), KI (13 mg, 0.079 mmol) u THF (20 mL) refluksuje tokom 18 h. Rastvarač je uklonjen i ostatak rastvoren u 50 ml vode i ekstrahovan etrom. Vodeni sloj je zakiseljen vodenom otopinom 1N HCl i formirani beli talog je filtriran, dajući 2-(3-(benziloksi)fenil)sirćetnu kiselinu u obliku sive čvrste supstance (0.87 g, 91%).
[0287] Korišćenjem opšteg postupka H, 2-(3-(benziloksi)fenil)sirćetna kiselina (242 mg, 1.00 mmol) i hinuklidin-3-ol su dali jedinjenje iz naslova kao viskozna polučvrsta supstanca (200 mg, 55%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.42 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.32 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.88 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 5.30 (m, 1H), 5.05 (s, 2H), 4.75 (m, 1H), 4.32 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.23 (m, 1H), 2.93-2.60 (m, 5H), 2.08-1.96 (m, 1H), 1.88-1.75 (m, 1H), 1.72-1.62 (m, 1H), 1.60-1.50 (m, 1H), 1.42-1.34 (m, 1H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 159.1, 156.3, 140.2, 136.8, 129.7, 128.6, 128.0, 127.5, 120.0, 114.1, 113.6, 71.3, 70.0, 55.5, 47.3, 46.4, 45.0, 25.4, 24.3, 19.3 ppm. Čistoća:> 95 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.51 min; (M+1) 367
Primer 81
hinuklidin-3-il 4-fenoksibenzilkarbamat
[0288] Upotrebom opšte procedure H, 2-(3-fenoksifenil)sirćetna kiselina (228 mg, 1.00 mmol) i hinuklidin-3-ol su dali jedinjenje iz naslova kao viskoznu polu-čvrstu supstancu (70 mg, 20%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.29-7.18 (m, 3H), 7.03 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.96-6.90 (m, 3H), 6.86 (s, 1H), 6.82 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.40-5.15 (m, 1H), 4.70 (m, 1H), 4.25 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.18 (m, 1H), 2.90-2.60 (m, 5H), 2.03-1.92 (m, 1H), 1.82-1.74 (m, 1H), 1.68-1.60 (m, 1H), 1.57-1.45 (m, 1H), 1.40-1.32 (m, 1H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 156.6, 155.9, 155.1, 139.6, 129.0, 128.8, 122.4, 121.1, 118.0, 116.7, 69.7, 54.1, 46.1, 45.2, 43.7, 24.2, 22.7, 18.0 ppm. Čistoća:100 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.50 min; (M+1) 353.
Primer 82
hinuklidin-3-il 3-izopropoksibenzilkarbamat
[0289] Smeša koja sadrži 2-(3-hidroksifenil)sirćetnu kiselinu (0.800 g, 5.26 mmol), 2-
1 2
bromopropan (0.971 g, 7.89 mmol), kalijum hidroksid (0.740 g, 13.2 mmol), KI (18 mg, 0.11 mmol) u 20 mL EtOH je refluksovan tokom 18 sati. Rastvarač je uklonjen i ostatak rastvoren u 50 ml vode i ekstrahovan etrom. Vodeni sloj je zakiseljen vodenom 1N HCl i ekstrahovan sa EtOAc. Organski slojevi su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani da bi se dobio ostatak koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu (naftni etar/EtOAc 4:1) da bi se dobila 2-(3-(benziloksi)fenil)sirćetna kiselina kao bela čvrsta supstanca (0.45 g, 44%).
[0290] Upotrebom opšte procedure H, 2-(3-izopropoksifenil)sirćetna kiselina (291 mg, 1.50 mmol) i hinuklidin-3-ol su dali jedinjenje iz naslova kao viskoznu polu-čvrstu supstancu (120 mg, 25%).<1>H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.23 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.86-6.77 (m, 3H), 5.16-5.00 (m, 1H), 4.78 (m, 1H), 4.55 (m, 1H), 4.32 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 3.26 (m, 1H), 2.95-2.70 (m, 5H), 2.10-2.05 (m, 1H), 1.90-1.80 (m, 1H), 1.75-1.65 (m, 1H), 1.63-1.53 (m, 1H), 1.47-1.37 (m, 1H), 1.33 (d, J = 5.5 Hz, 6H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 158.1, 156.2, 140.1, 129.7, 119.6, 115.2, 114.6, 71.0, 69.8, 55.3, 47.2, 46.3, 45.0, 25.3,
24.1, 22.0, 19.2 ppm. Čistoća:> 90 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.42 min; (M+1) 319.
Primer 83
hinuklidin-3-il 3-izobutoksibenzilkarbamat
[0291] Smeša koja sadrži 2-(3-hidroksifenil)sirćetnu kiselinu (1.0 g, 6.6 mmol), 1-bromo-2-metilpropan (1.08 g, 7.91 mmol), kalijum hidroksid (0.920 g, 16.4 mmol), KI (22 mg, 0.13 mmol) u EtOH (20 mL) je pod refluksom u toku 18 h. Rastvarač je uklonjen i ostatak rastvoren u 50 ml vode i ekstrahovan etrom. Vodeni sloj je zakiseljen vodenom 1N HCl i ekstrahovan sa EtOAc. Organski slojevi su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani da bi se dobio ostatak koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu (naftni etar/EtOAc 4:1) da bi se dobila 2-(3-(benziloksi)fenil)sirćetna kiselina kao bela čvrsta supstanca (0.42 g, 31%).
[0292] Upotrebom opšte procedure H, 2-(3-izobutoksifenil)sirćetna kiselina (208 mg, 1.00 mmol) i hinuklidin-3-ol su dali jedinjenje iz naslova kao viskoznu polu-čvrstu supstancu (130 mg, 39%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.23 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.86-6.76 (m, 3H), 5.35-5.10 (m, 1H), 4.77 (m, 1H), 4.31 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 3.69 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 3.26 (m, 1H), 2.95-2.70 (m, 5H), 2.10-2.00 (m, 2H), 1.88-1.80 (m, 1H), 1.75-1.63 (m, 1H), 1.62-1.52 (m, 1H), 1.45-1.36 (m, 1H), 1.01 (d, J = 6.5 Hz, 6H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 159.6,
1
156.1, 139.9, 129.7, 119.6, 113.9, 113.4, 74.4, 70.9, 55.3, 47.2, 46.3, 45.1, 28.3, 25.3, 23.9, 19.3, 19.1 ppm. Čistoća:> 95 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.50 min; (M+1) 333.
Primer 84
hinuklidin-3-il 3-(ciklopropilmetoksi)benzilkarbamat
[0293] Smeša koja sadrži 2-(3-hidroksifenil)sirćetnu kiselinu (1.0 g, 6.6 mmol), (bromometil)ciklopropan (0.97 g, 7.2 mmol), kalijum hidroksid (0.920 g, 16.4 mmol), KI (22 mg, 0.13 mmol) u EtOH (20 mL) refluksuje 18 h. Rastvarač je uklonjen in vacuo i ostatak rastvoren u 50 ml vode i ekstrahovan etrom. Vodeni sloj je zakiseljen vodenom 1N HCl i ekstrahovan sa EtOAc. Organski slojevi su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani da bi se dobio ostatak koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu (naftni etar/EtOAc 4:1) da bi se dobila 2-(3-(ciklopropilmetoksi)fenil)sirćetna kiselina kao bela čvrsta supstanca (0.80 g, 59%).
[0294] Korišćenjem opšteg postupka H, 2-(3-(ciklopropilmetoksi)fenil)sirćetna kiselina (300 mg, 1.50 mmol) i hinuklidin-3-ol su dali jedinjenje iz naslova kao viskozno ulje (90 mg, 19%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.24 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.88-6.78 (m, 3H), 5.13-4.95 (m, 1H), 4.74 (m, 1H), 4.33 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.79 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 3.23 (m, 1H), 2.93-2.63 (m, 5H), 2.04-1.98 (m, 1H), 1.85-1.76 (m, 1H), 1.72-1.60 (m, 1H), 1.58-1.50 (m, 1H), 1.41-1.22 (m, 2H), 0.68-0.62 (m, 2H), 0.37-0.32 (m, 2H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 158.2, 155.5, 139.3, 128.6, 118.6, 112.8, 112.3, 71.7, 70.4, 54.5, 46.2, 45.3, 43.9, 24.4, 23.5, 18.5, 9.3, 2.2 ppm. Čistoća:> 95 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.44 min; (M+1) 331.
Pripremanje X
Primer 85
N-(2-(bifenil-4-il)propan-2-il)-2-(hinuklidin-3-il)acetamid
[0295] Rastvor 2-(hinuklidin-3-il)sirćetne kiseline hidrohlorid (0.97 g, 4.7 mmol) u DMF (30 mL) je dodat HATU (1.79 g, 4.72 mmol), 2-(4-bromofenil)propan-2-amin (1.0 g, 4.7 mmol) i trietilamin (3.9 mL, 28 mmol). Dobijena smeša je mešana na 60 °C 16 h. Smeša je
1 4
koncentrovana u vakuumu, razblažena sa EtOAc i isprana fiziološkim rastvorom. Organski sloj je osušen preko Na2SO4i isparen da bi se dobio sirovi proizvod, koji je prečišćen kolonskom hromatografijom na silikagelu (EtOAc/metanol 50/1 do 3/1) da bi se dobio N-(2-(4-bromofenil)propan-2-il)-2-(hinuklidin-3-il)acetamid u obliku žute čvrste supstance (1.3 g, 76%).
[0296] Upotrebom opšte procedure E, N-(2-(4-bromofenil)propan-2-il)-2-(hinuklidin-3-il)acetamida (200 mg, 0.550 mmol), fenilboronske kiseline (134 mg, 1.00 mmol) i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2je dao jedinjenje iz naslova kao viskozno smeđe ulje (58 mg, 32%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.58-7.50 (m, 4H), 7.44-7.37 (m, 4H), 7.31 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 6.50 (s, 1H), 3.16 (m, 1H), 3.02 (m, 1H), 2.92-2.78 (m, 3H), 2.60 (m, 1H), 2.40-2.20 (m, 3H), 1.47-1.90 (m, 11H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 170.5, 146.1, 140.7, 139.2, 128.8, 127.2, 127.0125.2, 55.6, 53.1, 46.8, 46.2, 40.3, 31.7, 29.3, 29.2, 26.0, 24.4, 19.7 ppm.
Čistoća:100 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.55 min; (M+1) 363.
Primer 86
hinuklidin-3-il bifenil-3-ilkarbamat
[0297] Rastvoru hinuklidin-3-ola (635 mg, 5.00 mmol) u THF (15 ml) je dodat NaH [60% disperzija u mineralnom ulju] (260 mg, 6.50 mmol) na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana tokom 15 minuta i dodat je 3-bromfenil izocijanat (990 mg, 5.00 mmol) uz mešanje.
Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h, ugašena slanim rastvorom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiranje sa EtOAc/metanol 3:1) da bi se dobio hinuklidin-3-il 3-bromfenilkarbamata kao bela čvrsta supstanca (0.70 g, 43%).
[0298] Koristeći opštu proceduru E, gornje međujedinjenje karbamata (130 mg, 0.402 mmol), fenilboronska kiselina (72 mg, 0.6 mmol) i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2dali su jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (75 mg, 58%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.67 (br s, 1H), 7.59 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.43 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.41-7.28 (m, 4H), 6.77 (br s, 1H), 4.85 (m, 1H), 3.30 (m, 1H), 2.98-2.75 (m, 5H), 2.12 (m, 1H),1.93-1.68 (m, 2H), 1.64-1.55 (m, 1H), 1.47-1.40 (m, 1H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 153.3, 142.3, 140.7, 138.3, 129.5, 128.8, 127.5, 127.2, 122.3, 117.4, 72.1, 55.4, 47.4, 46.5, 30.9, 25.4, 24.5, 19.5 ppm.
1
Čistoća:100 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.53 min; (M+1) 323.
Primer 87
hinuklidin-3-il 2'-metoksibifenil-3-ilkarbamat
[0299] Koristeći opštu proceduru E, hinuklidin-3-il 2-bromofenilkarbamata, 2 metoksifenilboronska kiselina i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2dali su jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (75 mg, 58%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.49 (br s, 1H), 7.41 (br s, 1H), 7.37-7.28 (m, 3H), 7.23 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.04-6.94 (m, 3H), 4.83 (m, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.29 (m, 1H), 2.97-2.70 (m, 5H), 2.10 (m, 1 H), 1.91-1.82 (m, 1H), 1.74-1.65 (m, 1H), 1.62-1.53 (m, 1H), 1.46-1.37 (m, 1H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 156.4, 153.4, 139.4, 137.6, 130.9, 130.2, 128.8, 128.6, 124.8, 120.8, 119.9, 117.3, 111.2, 72.0, 55.6, 55.4, 47.4, 46.5, 25.4, 24.5, 19.5 ppm. Čistoća:> 95 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.52 min; (M+1) 353.
Primer 88
hinuklidin-3-il 2'-etilbifenil-3-ilkarbamat
[0300] Koristeći opštu proceduru E, hinuklidin-3-il 2-bromofenilkarbamata, 2-etilfenilboronska kiselina i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2dali su jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (110 mg, 78%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.42-7.28 (m, 5H), 7.25-7.16 (m, 2H), 7.03-7.00 (m, 1H), 6.88 (br s, 1H), 4.83 (m, 1H), 3.27 (m, 1H), 2.98-2.70 (m, 5H), 2.61 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 2.08 (m, 1H), 1.92-1.80 (m, 1H), 1.75-1.65 (m, 1H), 1.63-1.55 (m, 1H), 1.46-1.37 (m, 1H), 1.10 (t, J = 7.6 Hz, 3H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 152.1, 141.7, 140.4, 139.9, 136.4, 128.6, 127.5, 127.4, 126.4, 124.3, 123.2, 118.4, 115.9, 71.0, 54.3, 46.2, 45.3, 25.0, 24.2, 23.4, 18.3, 14.5 ppm. Čistoća:100 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.61 min; (M+1) 351.
Primer 89
hinuklidin-3-il3'-metoksibifenil-3-ilkarbamat
[0301] Koristeći opštu proceduru E, hinuklidin-3-il 2-bromofenilkarbamata, 3-metoksifenilboronska kiselina i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2dali su jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (100 mg, 71%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.63 (br s, 1H), 7.40-
1
7.27 (m, 4H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.11 (m, 1H), 7.07 (br s, 1H), 6.89 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H), 4.85 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.30 (m, 1H), 2.99-2.70 (m, 5H), 2.12 (m, 1H), 1.92-1.84 (m, 1H), 1.75-1.68 (m, 1H), 1.62-1.55 (m, 1H), 1.48-1.40 (m, 1H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 159.9, 153.4, 142.3, 142.1, 138.4, 129.8, 129.4, 122.3, 119.7, 117.7, 112.9, 112.8, 72.0, 55.4, 55.3, 47.4, 46.5, 25.4, 24.5, 19.5 ppm. Čistoća:> 97 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.52 min; (M+1) 353
Primer 90
hinuklidin-3-il 3'-etilbifenil-3-ilkarbamat
[0302] Rastvoru 1-bromo-3-etilbenzena (370 mg, 2.00 mmol) u 5 mL 1,4-dioksana, dodat je bis(pinakolato)diboron (609 mg, 2.40 mmol), CH3COOK (589 mg, 6.02 mmol) i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2(75 mg, 0.09 mmol). Smeša je mešana na 80 °C 5 h. Smeša je ohlađena, razblažena vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani ekstrakti su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani da bi se dobio sirovi bor (410 mg, > 100%), koji je korišćen bez prečišćavanja u sledećem koraku.
[0303] Koristeći opštu proceduru E, hinuklidin-3-il 2-bromofenilkarbamata, 3-etilfenilboronska kiselina i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2dali su jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (78 mg, 56%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.64 (br s, 1H), 7.43-7.27 (m, 6H), 7.24 (br s, 1H), 7.18 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.85 (m, 1H), 3.30 (m, 1H), 2.99-2.73 (m, 5H), 2.70 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 2.12 (m, 1H), 1.92-1.84 (m, 1H), 1.75-1.67 (m, 1H), 1.62-1.55 (m, 1H), 1.48-1.38 (m, 1H), 1.27 (t, J = 7.5 Hz, 3H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 153.5, 144.8, 142.4, 140.8, 138.4, 129.4, 128.8, 127.1, 126.8, 124.6, 122.3, 117.4, 72.1, 55.4, 47.4, 46.5, 29.0, 25.4, 24.5, 19.5, 15.7 ppm. Čistoća:> 98 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.66 min; (M+1) 351.
Primer 91
hinuklidin-3-il bifenil-2-ilkarbamat
[0304] Rastvoru hinuklidin-3-ola (382 mg, 3.00 mmol) u THF (15 ml) je dodat NaH [60% disperzija u mineralnom ulju] (156 mg, 3.90 mmol) na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana tokom 15 minuta i dodat je 2-bromfenil izocijanat (594 mg, 3.00 mmol) uz mešanje.
Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h, ugašena slanim rastvorom i
1
ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (EtOAc/metanol 3:1) da bi se dobio proizvod hinuklidin-3-il 2-bromofenilkarbamata kao viskozno ulje (0.80 g, 82%).
[0305] Korišćenjem opšteg postupka E, hinuklidin-3-il 2-bromofenilkarbamat (130 mg, 0.400 mmol), fenilboronske kiseline (96 mg, 0.8 mmol) i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2dao je jedinjenje iz naslova kao belu čvrstu supstancu (112 mg, 87%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.07 (br s, 1H), 7.55-7.33 (m, 6H), 7.25-7.21 (dd, J = 7.6 & 1.6 Hz, 1H), 7.43 (td, J = 8.0, 1.2 Hz, 1H), 6.65 (br s, 1H), 4.78 (m, 1H), 3.24 (m, 1H), 2.90-2.68 (m, 5H), 2.04 (m, 1H),1.80-1.62 (m, 2H), 1.61-1.50 (m, 1H), 1.41-1.30 (m, 1H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 151.2, 135.9, 132.5, 129.5, 128.0, 127.0, 126.9, 126.2, 125.7, 121.4, 117.9, 69.9, 53.1, 45.1, 44.3, 23.1, 22.3, 17.2 ppm. Čistoća:100 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.47 min; (M+1) 323.
Primer 92
hinuklidin-3-il2'-metoksibifenil-2-ilkarbamat
[0306] Koristeći opštu proceduru E, hinuklidin-3-il 2-bromofenilkarbamata, 2-metoksifenilboronska kiselina i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2dali su jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (102 mg, 72%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.95 (br s, 1H), 7.42 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.37 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.15 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.09 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.72 (br s, 1H), 4.76 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.23 (m, 1H), 2.90-2.64 (m, 5H), 1.98-2.08 (m, 1H), 1.81-1.63 (m, 2H), 1.60-1.50 (m, 1H), 1.42-1.30 (m, 1H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 156.2, 153.8, 135.6, 132.1, 130.9, 129.7, 128.3, 127.1, 123.8, 121.5, 111.3, 71.8, 55.7, 55.5, 47.3, 46.5, 25.3, 24.5, 19.4 ppm.
Čistoća:100 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.48 min; (M+1) 353.
Primer 93
hinuklidin-3-il 2'-etilbifenil-2-ilkarbamat
[0307] Koristeći opštu proceduru E, hinuklidin-3-il 2-bromofenilkarbamata, 2-etilfenilboronska kiselina i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2dali su jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (71 mg, 51%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.11 (br s, 1H), 7.43-7.34 (m,
1
3H), 7.33-7.28 (m, 1H), 7.18-7.08 (m, 3H), 6.24 (br s, 1H), 4.75 (m, 1H), 3.23 (m, 1H), 2.85-2.65 (m, 5H), 2.40 (m, 2H), 2.02 (m, 1H), 1.73-1.62 (m, 2H), 1.61-1.50 (m, 1H), 1.40-1.30 (m, 1H), 1.05 (m, 3H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 153.3, 142.9, 136.4, 135.3, 130.6, 130.3, 130.1, 129.0, 128.7, 128.4, 126.4, 123.0, 119.1, 72.1, 55.2, 47.3, 46.4, 26.0, 25.3, 24.5, 19.3, 15.2 ppm. Čistoća:> 98 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.55 min; (M+1) 351.
Primer 94
hinuklidin-3-il 3'-metoksibifenil-2-ilkarbamat
[0308] Koristeći opštu proceduru E, hinuklidin-3-il 2-bromofenilkarbamata, 3-metoksifenilboronska kiselina i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2dali su jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (120 mg, 85%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.08 (br s, 1H), 7.40 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.36 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.23 (dd, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H), 7.13 (td, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H), 6.96 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 2H), 6.91 (t, J = 1.5 Hz, 1H), 6.73 (br s, 1H), 4.79 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.24 (m, 1H), 2.90-2.70 (m, 5H), 2.05 (m, 1H), 1.80-1.70 (m, 2H), 1.62-1.52 (m, 1H), 1.41-1.32 (m, 1H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 160.1, 153.4, 139.5, 134.7, 131.5, 130.1, 130.1, 128.5, 123.5, 121.4, 119.9, 114.7, 113.6, 72.1, 55.3, 55.3, 47.3, 46.5, 25.3, 24.5, 19.4 ppm. Čistoća:> 98 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.48 min; (M+1) 353
Primer 95
hinuklidin-3-il 3'-etilbifenil-2-ilkarbamat
[0309] Koristeći opštu proceduru E, hinuklidin-3-il 2-bromofenilkarbamata, 3-etilfenilboronska kiselina i [PdCl2(pddf)]CH2Cl2dali su jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (120 mg, 86%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.09 (br s, 1H), 7.41 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.36 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.26-7.18 (m, 4H), 7.14 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.71 (br s, 1H), 4.79 (m, 1H), 3.25 (m, 1H), 2.90-2.65 (m, 7H), 2.05 (m, 1H), 1.80-1.64 (m, 2H), 1.62-1.52 (m, 1H), 1.40-1.32 (m, 1H), 1.28 (t, J = 7.5 Hz, 3H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 153.4, 145.2, 138.1, 134.7, 131.8, 130.2, 129.1, 128.8, 128.4, 127.5, 126.6, 123.5, 120.1, 72.0, 55.3, 47.3, 46.4, 28.9, 25.3, 24.5, 19.4, 15.7 ppm. Čistoća:> 95 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.55 min; (M+1) 351.
Pripremanje Y
1
Primer 96
hinuklidin-3-il 2-izopropoksifenilkarbamat
[0310] Smeši 3-aminofenola (1.50 g, 13.8 mmol), izopropanol (3.3 g, 55 mmol) i trifenilfosfina (14.4 g, 54.9 mmol) u THF (15 ml) dodaje se u vidu kapi dietilazodikarboksilat (9.60 g, 55.0 mmol) u periodu od 30 minuta. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h i koncentrovana. Ostatak je razblažen vodom, zakiseljen sa vodenom 2N HCl i ekstrahovan etrom. Vodena faza je zalužena vodenom 2N NaOH i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (naftni etar/EtOAc 10:1 do 5:1) da bi se dobio 3-izopropoksibenzenamin u obliku žutog ulja (1.3 g, 64%).
[0311] Korišćenjem opšteg postupka A, 3-izopropoksibenzenamin (300 mg, 2.00 mmol) i hinuklidin-3-ol daju jedinjenje iz naslova kao viskozno ulje (130 mg, 22%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.20 (br s, 1H), 7.09 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 7.05 (br s, 1H), 6.77 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.51 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.75 (m, 1H), 4.46 (m, 1H), 3.26-3.18 (m, 1H), 2.92-2.65 (m, 5H), 2.04 (m, 1H), 1.80 (m, 1H), 1.63 (m, 1H), 1.52 (m, 1H), 1.35 (m, 1H), 1.28 (d, J = 5.5 Hz, 6H) ppm.<13>C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 157.5, 152.2, 138.2, 128.7, 110.1, 109.6, 105.1, 70.7, 68.9, 54.3, 46.3, 45.4, 28.7, 24.3, 23.3, 21.0, 18.3 ppm. Čistoća:> 90 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.43 min; (M+1) 305.
Primer 97
hinuklidin-3-il 2-izobutoksifenilkarbamat
[0312] Smeši 3-aminofenola (500 mg, 4.60 mmol), 2-metilpropan-1-ol (1.40 g, 18.9 mmol) i trifenilfosfina (4.80 g, 16.2 mmol) u THF (10 ml) dodaje se u vidu kapi dietilazodikarboksilat (3.20 g, 18.3 mmol) u periodu od 30 minuta. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 3 h. Rastvarač je isparen i ostatak je razblažen vodom, zakiseljen sa vodenom 2N HCl i ekstrahovan etrom. Vodena faza je zalužena vodenom 2N NaOH i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (naftni etar/EtOAc 15:1) da bi se dobio 3-izobutoksibenzenamin u obliku žutog ulja (330 mg, 45%).
11
[0313] Korišćenjem opšteg postupka A, 3-izobutoksibenzenamin (330 mg, 2.00 mmol) i hinuklidin-3-ol daju jedinjenje iz naslova kao viskozno ulje (140 mg, 22%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.17 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.15 (br s, 1H), 6.81 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.80 (br s, 1H), 6.61 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.83 (m, 1H), 3.71 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 3.34-3.21 (m, 1H), 2.97-2.72 (m, 5H), 2.12-2.04 (m, 2H), 1.90-1.84 (m, 1H), 1.75-1.67 (m, 1H), 1.55-1.63 (m, 1H), 1.46-1.38 (m, 1H), 1.01 (d, J = 6.5 Hz, 6H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 159.9, 153.4, 139.3, 129.6, 110.6, 109.7, 105.0, 74.4, 72.0, 55.4, 47.3, 46.5, 28.3, 25.4, 24.5, 19.5, 19.3 ppm. Čistoća:100 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.56 min; (M+1) 319.
Primer 98
hinuklidin-3-il 2-(ciklopropilmetoksi)fenilkarbamat
[0314] Smeši 3-aminofenola (300 mg, 2.70 mmol), ciklopropilmetanol (793 mg, 11.0 mmol) i trifenilfosfina (2.90 g, 11.0 mmol) u THF (6 ml) dodaje se u vidu kapi dietilazodikarboksilat (1.90 g, 11.0 mmol) u periodu od 30 minuta. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 3 h. Rastvarač je isparen i ostatak je razblažen vodom, zakiseljen sa vodenom 2N HCl i ekstrahovan etrom. Vodena faza je zalužena vodenom 2N NaOH i ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (naftni etar/EtOAc 15:1) da bi se dobio 3-(ciklopropilmetoksi)benzenamin u obliku smeđeg ulja (260 mg, 58%).
[0315] Upotrebom opšte procedure A, 3-(ciklopropilmetoksi)benzenamin (260 mg, 1.60 mmol) i hinuklidin-3-ol dao je jedinjenje iz naslova kao viskozno ulje (80 mg, 16%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.72 (br s, 1H), 7.14 (br s, 1H), 7.13 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.57 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H), 4.85 (m, 1H), 3.75 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 3.35-3.26 (m, 1H), 3.05-2.78 (m, 5H), 2.18-2.12 (m, 1H), 1.97-1.86 (m, 1H), 1.80-1.67 (m, 1H), 1.66-1.55 (m, 1H), 1.52-1.42 (m, 1H), 1.26-1.15 (m, 1H), 0.61-0.55 (m, 2H), 0.31-0.26 (m, 2H) ppm.<13>C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 158.6, 152.1, 138.3, 128.6, 109.9, 108.9, 104.0, 71.7, 69.7, 53.8, 46.0, 45.2, 28.7, 24.1, 22.4, 17.8, 9.2, 2.2 ppm. Čistoća:100 % LCMS (214 nm & 254 nm); Vreme zadržavanja 1.46 min; (M+1) 317.
Primer 99
1-benzil-3-(hinuklidin-3-il)imidazolidin-2-on
[0316] U mešani rastvor hinuklidin-3-amin hidrohlorida (324 mg, 0.199 mmol) u DMF (30 ml) dodat je trietilamin (3 kapi), a zatim pažljivo (izocijanatometil)benzen (275 mg, 2.10 mmol). Dobijena smeša je mešana na 25 °C 18 h. Posle odvajanja HPLC, dobijena je 1-benzil-3-(hinuklidin-3-il)urea (283 mg, 55%).
[0317] Rastvoru 1-benzil-3-(hinuklidin-3-il)uree (260 mg, 1.00 mmol) u DMF (30 ml) je dodat NaH [60% disperzija u mineralnom ulju] (96 mg, 2.4 mmol) sa hlađenje ledenom kupkom. Dobijena smeša je mešana tokom 2 sata pre nego što je pažljivo dodat BrCH2CH2Br (0.75 g, 4.0 mmol). Reakcija je mešana dodatnih 18 h na oko 25 °C. Posle razdvajanja HPLC, vodeni sloj je liofilizovan i prečišćen pre-TLC (CHCl3do 5% MeOH u CHCl3do 5%2N NH3(MeOH) in CHCl3) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (81 mg, 28%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.09 (dd, J = 15.2, 8.4 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.30-6.85 (m, 1H), 8.0 (s, 1H), 4.17-4.29 (m, 1H), 3.66-3.75 (m, 6H), 3.47 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.19-3.27 (m, 1H), 2.34-1.26 (m, 1H), 2.22 (d, J = 2.4 Hz, 6H), 1.92 (d, J = 6.6 Hz, 6H) ppm.<13>C NMR (400 MHz, CDCl3) δ 158.9, 141.1, 140.4, 128.7, 127.4, 127.3, 113.6, 63.6, 57.1, 56.0, 45.6, 43.9, 25.2, 23.0, 18.8 ppm. Čistoća:93.8% HPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 1.84 min; (M+1) 286.
Primer 100
N-(1aza-biciko[2.2.2]okt-3-il)-4-p-tolil-butiramid
[0318] Upotrebom opšte procedure I, 1-aza-biciklo[2.2.2]okt-3-ilamin (200 mg, 1.00 mmol) i -p-tolil-butirična kiselina (220 mg, 1.2 mmol) daju N-(1-aza- biciklo[2.2.2] okt-3-il)-4-ptolil-butiramid (114 mg, 40%) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.06 (s, 4H), 4.19 (m, 1H), 3.66-3.73 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.29-3.33 (m, 4H), 2.91 (dd, J = 8.0, J = 3.6 Hz, 1H), 2.59 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.28 (s, 3H), 2.24 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.15-2.16 (m, 1H), 2.02-2.14 (m, 1H), 1.92-2.01 (m, 2H), 1.81-1.91 (m, 3H) ppm.<13>C NMR (400 MHz, CDCl3) δ 175.1, 138.6, 135.1, 128.8, 128.2, 52.7, 47.4, 47.3, 44.5, 34.8, 27.3, 24.3, 21.6, 19.8, 17.1 ppm. Čistoća:99.7% HPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 1.76 min; (M+1) 287.
Primer 101
N-(1-aza-biciklo[2.2.2]okt-3-il)-4-(4-metoksi-fenil)-butiramid
[0319] Koristeći opštu proceduru I, 1-aza-biciklo[2.2.2]okt-3-ilamin (200 mg, 1.00 mmol) i 4-(4-metoksi-fenil)-buterna kiselina dali su jedinjenje iz naslova kao belu čvrstu supstancu (85 mg, 28%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.08 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.81 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.18 (br s, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.68 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.24-3.33 (m, 4H), 2.98-3.03 (m, 1H), 2.57 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.24 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.03-2.16 (m, 2H), 2.02 (br s, 2H), 1.85-1.91 (m, 3H) ppm.<13>C NMR (400 MHz, CD3OD) δ 175.2, 158.3, 133.6, 129.2, 113.6, 54.5, 52.6, 47.2, 46.4, 44.5, 34.9, 34.2, 27.5, 24.4, 21.5, 17.1 ppm. Čistoća:96.4% HPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 1.76 min; (M+1) 303.
Primer 102
Bifenil-3-karboksilna kiselina (1-aza-biciklo[2.2.2]okt-3-il)-amid
[0320] Upotrebom opšte procedure I, 1-aza-biciklo[2.2.2]okt-3-ilamin (200 mg, 1.00 mmol) i bifenil-3-karboksilna kiselina dali su jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (211 mg, 68%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.86 (s, 1H), 7.59 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.28 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.19 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.11 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 4.21 (br s, 1H), 3.56(t, J = 11.6 Hz, 1H), 3.11-3.22 (m, 1H), 3.05-3.10 (m, 4H), 2.10 (q, J = 3.2 Hz, 1H), 1.95 (br s, 1H), 1.79-1.83 (m, 2H), 1.59-1.20 (m, 1H) ppm.<13>C NMR (400 MHz, CD3OD) δ 169.6, 141.6, 140.2, 134.5, 130.3, 129.0, 127.7, 126.9, 126.3, 125.9, 51.9, 46.4, 46.0, 45.6, 24.6, 21.6, 17.3 ppm. Čistoća:99.8% HPLCMS (210 nm);
Vreme zadržavanja 1.60 min; (M+1) 307.
Primer 103
N-(1-aza-biciko[2.2.2]okt-3-il)-2-bifenil-4-il-acetamid
[0321] Upotrebom opšte procedure I, 1-aza-biciklo[2.2.2]okt-3-ilamin (200 mg, 1.00 mmol) i bifenil-4-il-sirćetna kiselina dali su jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (140 mg, 44%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.56 (t, J = 8.0 Hz, 4H), 7.29-7.41 (m, 5H), 4.19 (br s, 1H), 3.70 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 3.58 (s, 2H), 3.24-3.31 (m, 5H), 3.12-3.19 (m, 1H), 2.16-2.17 (m, 2H), 1.95-1.98 (m, 2H), 1.82 (br s, 1H) ppm.<13>C NMR (400 MHz, CD3OD) δ 173.1, 140.8, 140.0, 134.7, 129.4, 128.7, 126.9, 52.3, 46.4, 45.9, 44.3, 41.9, 24.4, 21.5, 17.1 ppm. Čistoća:93.9% HPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 2.87 min; (M+1) 321.
11
Pripremanje Z
Primer 104
2-(hinuklidin-3-il)-N-(1-p-tolilciklopropil)acetamid
[0322] Rastvoru metil 2-(dimetoksifosforil)acetata (2.70 g, 14.8 mmol) u THF (200 ml) na 0 °C dodat je NaH [60% disperzija u mineralnom ulju] (600 mg, 15.0 mmol). Posle 1 h mešanja, dodat je hinuklidin-3-on (2.00 g, 12.4 mmol) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Reakcija je ugašena sa 50 ml vode na 0 °C i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom da bi se dobio sirovi metil 2-(hinuklidin-3-iliden)acetat, koji je korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja (1.2 g, 70%).
[0323] Smeša metil 2-(hinuklidin-3-ilidena)acetata (70 mg, 0.38 mmol) i Pd/C (100 mg, 20% w/w) u EtOH (10 ml) je mešana pod H2(20 psi) na sobna temperatura 18 h. Reakcioni rastvor je filtriran kroz Celite i filtrat je koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobio sirovi metil 2-(hinuklidin-3-il)acetat (60 mg, 85%), koji je korišćen sa prečišćavanjem u sledećem koraku.
[0324] Smeša metil 2-(hinuklidin-3-il)acetata (1.1 g, 6.0 mmol) i 50 ml konc. HCl [12M] je mešan na 70°C tokom 18 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom da bi se dobila sirova 2-(hinuklidin-3-il)sirćetna kiselina, koja je korišćena bez prečišćavanja u sledećem koraku (900 mg, 86%).
[0325] Korišćenjem opšteg postupka, 2-(hinuklidin-3-il)sirćetna kiselina (169 mg, 1.00 mmol) i 1-p-tolilciklopropanamin (149 mg, 1.10 mmol) dali su jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (60 mg, 18% ).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.86 (s, 1H), 6.96-7.07 (m, 4H), 3.22-3.37 (m, 2H), 2.85-3.05 (m, 4H), 2.39-2.45 (m, 2H), 2.21 (s, 3H), 1.45-1.92 (m, 5H), 1.07-1.23 (m, 5H) ppm.<13>C NMR (400 MHz, CDCl3) δ 171.6, 139.8, 136.1, 129.2, 125.6, 52.1, 50.9, 46.5, 46.0, 39.2, 34.9, 30.8, 24.5, 21.1, 18.7, 17.6 ppm. Čistoća:96.2% HPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 1.21 min; (M+1) 299.
Primer 105
N-(2-(3-metoksifenil)propan-2-il)-2-(hinuklidin-3-il)acetamid
[0326] Korišćenjem opšteg postupka I, 2-(hinuklidin-3-il)sirćetna kiselina (169 mg, 1.00 mmol) i 2-(3-metoksifenil)propan-2-amin (182 mg, 1.10 mmol) dala je jedinjenje iz naslova kao belo čvrsta supstanca (126 mg, 40%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.39 (s, 1H), 7.20 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.71 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.31-3.42 (m, 2H), 3.00-3.19 (m, 4H), 2.47-2.60 (m, 2H), 2.27 (dd, J = 14.0, 6.0 Hz, 1H), 1.83-2.06 (m, 4H), 1.64-1.74 (m, 1H), 1.61 (d, J = 12.4 Hz, 6H) ppm.<13>C NMR (400 MHz, CDCl3) δ 170.0, 159.7, 149.3, 129.5, 117.5, 111.8, 111.0, 55.9, 55.4, 52.0, 50.6, 46.6, 46.0, 39.7, 30.9, 29.7, 29.1, 24.3, 18.8 ppm. Čistoća:93.7% HPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 0.76 min; (M+1) 317.
Primer 106
2-(1-aza-biciklo[2.2.2]okt-3-il)-N-[1-(3-izopropil-fenil)-1-metil-etil]-acetamid
[0327] Rastvoru 1-(1-izocijanato-1-metil-etil)-3-izopropenil-benzena (10 g, 50 mmol) u t-BuOH (1000 mL) je dodat KOH (40.0 g, 71.6 mmol). Smeša je mešana u trajanju od 3 h. Dobijena smeša je ohlađena do sobne temperature, koncentrovana i rastvorena u CH2Cl2. Čvrsti ostatak je filtriran i organski sloj je podešen na pH <7 upotrebom konc. HCl.
Amonijum so je ekstrahovana vodom. Vodeni sloj je napravljen osnovnim korišćenjem vodenog rastvora NaOH [5% w/w, 200 ml], a slobodni amin je zatim ekstrahovan sa CH2Cl2. Organski slojevi su kombinovani, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 1-(3-izopropenil-fenil)-1-metil-etilamin (3.3 g, 63%).
[0328] Rastvor gornjeg jedinjenja (8.5 g, 48 mmol) i PtO2 (1.8 g, 8.0 mmol) u EtOH (600 mL) je mešan na sobnoj temperaturi pod 1 atm H2tokom 18 h. Reakcija je filtrirana kroz Celite i koncentrovana pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 1-(3-izopropil-fenil)-1-metil-etilamin (5.0 g, 58%).
[0329] Upotrebom opšteg postupka I (1-aza-biciklo[2.2.2]okt-3-il)-sirćetna kiselina (200 mg, 1.20 mmol) i 1-(3-izopropil-fenil)-1-metil-etilamin daje jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (42 mg, 10%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.15-1.20 (m, 3H), 7.05 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.41-3.45 (m, 1H), 3.26 (s, 2H), 3.15-3.22 (m, 2H), 2.71-2.82 (m, 2H), 2.41-2.47 (m, 3H), 2.05-2.12 (m, 1H), 1.79-1.90 (m, 4H), 1.61 (d, J = 8.0 Hz, 6H), 1.21 (d, J= 6.4 Hz,
11
6H) ppm.<13>C NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 171.1, 148.7, 147.3, 128.1, 123.9, 122.8, 122.2, 55.6, 52.1, 46.5, 45.9, 38.8, 34.5, 30.7, 28.9, 28.5, 23.8, 23.4, 18.0 ppm. Čistoća:96.8% HPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 1.93 min; (M+1) 329.
Primer 107
2-(1-aza-biciklo[2.2.2]okt-3-il)-N-[2-(2-metoksi-fenil)-etil]-acetamid
[0330] Upotrebom opšteg postupka I, (1-aza-biciklo[2.2.2]okt-3-il)-sirćetna kiselina (200 mg, 1.20 mmol) i 2-(2-metoksi-fenil)-etilamin dao je jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (60 mg, 15%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.17 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.84 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.35-3.45 (m, 3H), 3.21-3.31 (m, 3H), 2.76-2.83 (m, 3H), 2.29-2.45 (m, 3H), 1.82-2.01 (m, 3H), 1.72-1.81 (m, 2H) ppm.<13>C NMR (400 MHz, CD3OD) δ 172.0, 158.0, 130.4, 127.8, 127.2, 120.2, 110.4, 54.6, 52.0, 46.4, 45.9, 39.1, 38.3, 30.7, 30.2, 23.8, 17.9 ppm. Čistoća:92.4% HPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 1.59 min; (M+1) 303.
Primer 108
1-(1-aza-biciklo[2.2.2]okt-3-il)-3-[1-(3-izopropil-fenil)-ciklopropil]-urea
[0331] Smeša 3-izopropil-benzojeve kiseline (5.00 g, 30.4 mmol) u SOCl2(50 ml) je mešana na 100 °C tokom 2 sata. Reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobio 3-izopropilbenzoil hlorid (5.00 g, 91%).
[0332] U rastvor gornjeg kiselinskog hlorida (5.00 g, 27.0 mmol) u CH2Cl2(20 ml) na -70 ° C je dodavan, u vidu kapi, rastvor NH3/CH2Cl2(200 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h, a zatim koncentrovana da bi se dobio 3-izopropil-benzamid (4.2 g, 93%).
[0333] Rastvor gornjeg amida (4.20 g, 25.7 mmol) u POC13(36.0 g, 236 mmol) je mešan na 80 °C tokom 18 h. Rastvor je koncentrovan i ostatak je sipan u vodu (100 mL). Smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su kombinovani, isprani fiziološkim rastvorom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani da bi se dobio 3-izopropil-benzonitril (3.00 g, 80%).
[0334] Upotrebom opšte procedure G, 3-izopropil-benzonitril (3.00 g, 20.6 mmol) je
11
pretvoren u odgovarajući 1-(3-izopropil-fenil)-ciklopropanamin (0.80 g, 22%).
[0335] Koristeći opštu proceduru C, gornji amin (300 mg, 1.71 mmol), hinuklidin-3-amin (215 mg, 1.71 mmol) i CDI (290 mg, 2.05 mmol) dali su jedinjenje iz naslova kao belu čvrstu supstancu (88 mg, 46 %).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.18 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 7.01 (dd, J = 19.2, 7.6 Hz, 2H), 3.74-3.77 (m, 1H), 3.18-3.24 (m, 1H), 2.71-2.87 (m, 5H), 2.42-2.47 (m, 1H), 1.63-1.82 (m, 4H), 1.45 (br s, 1H), 1.21-1.26 (m, 10H) ppm.<13>C NMR (400 MHz, CD3OD) δ 193.0, 168.7, 160.1, 128.2, 122.7, 121.9, 55.3, 46.8, 46.1, 34.1, 25.9, 25.0, 23.5, 19.6, 18.2 ppm. Čistoća:92.4% HPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 2.53 min; (M+1) 328.
Primer 109
2-(1-aza-biciklo[2.2.2]okt-3-il)-N-[1-(3-izopropil-fenil)-ciklopropil]-acetamid
[0336] Upotrebom opšte procedure I, 1-(3-izopropil-fenil)-ciklopropilamin (278 mg, 1.58 mmol) i (1-aza-biciklo[2.2.2]okt-3-il)-sirćetna kiselina (267 mg, 1.58 mmol) ) dao je jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (70 mg, 14%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.16 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.97 (dd, J = 19.2, 7.6 Hz, 2H), 3.16-3.23 (m, 1H), 2:79-2.97 (m, 5H), 2.51-2.58 (m, 1H), 2.23-2.41 (m, 3H), 1.83-1.92 (m, 1H), 1.68-1.81 (m, 3H), 1.54-1.62 (m, 1H), 1.15-1.25 (m, 10H) ppm.<13>C NMR (400 MHz, CD3OD) δ 173.6, 148.5, 142.4, 127.8, 123.6, 123.1, 122.0, 73.0, 53.1, 46.6, 45.9, 39.3, 34.1, 32.3, 28.1, 26.4, 24.4, 19.7, 16.8 ppm. Čistoća:96.9% HPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 2.55 min; (M+1) 327.
Primer 110
[1-(3-izopropil-fenil)-ciklopropil]-karbaminska kiselina 1-aza-biciklo[2.2.2]okt-3-il ester
[0337] Upotrebom opšteg postupka A, 1-(3-izopropil-fenil)-ciklopropilamin (278 mg, 1.58 mmol) i hinuklidin-3-ol dali su jedinjenje iz naslova u obliku bele čvrste supstance (75 mg, 22%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.17 (m, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.97-7.08 (m, 2H), 4.72-4.79 (m, 1H), 3.36-3.42 (m, 1H), 2.79-3.08 (m, 5H), 1.93-2.17 (m, 2H), 1.81-1.90 (m, 1H), 1.67-1.78 (m, 2H), 1.31-1.54 (m, 1H), 1.13-1.28 (m, 10H)ppm.<13>C NMR (400 MHz, CD3OD) δ 157.1, 148.4, 143.1, 128.1, 123.9, 123.0, 122.4, 69.2, 54.4, 46.7, 45.7, 34.7, 34.3, 24.9, 23.3, 22.0, 18.0, 17.3 ppm. Čistoća:99.2% HPLCMS (210 nm); Vreme zadržavanja 1.83
11
min; (M+1) 329.
Primer 111
Ispitivanja efikasnosti in vivo terapije malim molekulima korišćenjem (S)-Hinuklidin-3-il (2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)propan-2-il)karbamata (S)-2-hidroksisukcinatne soli na Fabri modelu miša
[0338] Ovde su opisani in vivo eksperimenti pomoću GCS inhibitora u Fabri modelu miša i pokazuju da je terapija redukcije supstrata (SRT) podjednako efikasna u smanjenju nivoa i Gb3 i lizo-Gb3 u plazmi, bubrezima i urinu Fabri miševa. Ispitivanje je osmišljeno da proceni da li inhibicija supstrata (tj. „terapija redukcije supstrata“) korišćenjem jedinjenja tipa otkrivanja može da smanji akumulaciju globotriaosilceramida (Gb3) i lizoglobotriaosilceramida (lizo-Gb3). Nedavno je predloženo da mokraćni lizo-Gb3 može predstavljati pouzdan biomarker kliničkog značaja za Fabrijevu bolest (Aerts i dr., PNAS USA 105:2812-2817 (2008); i Auray-Blais i dr., Clin Chim Acta 411:1906-1914 (2010)). Metaboličko poreklo lizo-Gb3 nije poznato i može se pretpostaviti da se može dobiti bilo putem deacilacije Gb3 ili anaboličkom sintezom iz glukozilsfingozina.
[0339] Na Slici 2, crne strelice označavaju demonstrirane puteve, sive strelice su nedokumentovane putanje. Poznato je da ERT upotrebom α-galaktozidaze A razgrađuje i Gb3 i lizo-Gb3. Shodno tome, SRT koji koristi GCS inhibitor bio bi najefikasniji za ograničavanje akumulacije lizo-Gb3 ako lizo-Gb3 nastaje prevashodno deacilacijom Gb3, staze zavisne od GCS. Ova iskustva pokazuju da SRT korišćenjem GCS inhibitora u mišjem modelu Fabrijeve bolesti smanjuje i Gb3 i lizo-Gb3, podržavajući tako upotrebu jedinjenja iz obelodanjivanja kao održivih terapijskih opcija za Fabrijeve pacijente.
[0340] U sledećim eksperimentima, miševi su dozirani sa GCS inhibitorima pri bilo ∼60 mg/kg/dan (S)-Hinuklidin-3-il (2-(2-(4-fluorofenil)tiazol-4-il)propan-2-il)karbamat (S)-2-hidroksisukcinat so (u daljem tekstu "GZ 452") ili ∼300 mg/kg/dan (1R,2R)-Oktanoične kiseline [2-(2',3'-dihidro-benzo [1,4] dioksin-6'-il)-2-hidroksi-1-pirolidin-1-ilmetil-etil]-amid-L-so vinske kiseline (u daljem tekstu "GZ 638") kao komponenta peletirane prehrambene ishrane, pod uslovom da je ad libitum. Lipidna analiza je izvršena pomoću ESI/MS kao što je opisano u Marshall i dr., PLoS ONE 5:e15033 (2010). Kao što je detaljnije prikazano u daljem tekstu, lečenje je počelo kada su miševi bili u dobi od 3, 8 ili 12 meseci kako bi se
11
testirala efikasnost u različitim težinama bolesti. Krv i urin su se uzimali mesečno, a periodično prikupljanje tkiva pružalo je materijale za procenu efikasnosti terapije (nivo Gb3 i lizo-Gb3). Prethodne studije su pokazale da inhibitori glukozilceramid sintaze ranije generacije (klase slične P4) mogu odložiti brzinu akumulacije Gb3, međutim, kao što je dole rečeno, lečenje Genz-452 ne može samo da spreči ili odloži dalje nagomilavanje, već i da smanji smanjenje apsolutne vrednosti nivoima i Gb3 i lizo-Gb3 u ispitivanim tkivima (jetra, srce, urin, plazma). Kao što je diskutovano u daljem tekstu, na efikasnost SMT uticala je starost miševa na početku lečenja. Generalno, što je stariji miš, veći su nivoi Gb3 uskladištenog i samim tim je potreban duži period lečenja kako bi se uticalo na sličnu terapijsku korist (videti Sliku 4). Eksperimenti i rezultati opisani su u daljem tekstu.
GCS inhibitor smanjuje nivo Gb3 u tkivu visceralnog tkiva Fabri miša
[0341] U ovom eksperimentu, Fabri miševi su tretirani sa GCS inhibitorima u svojoj ishrani tokom 4 meseca počevši od 8. meseca starosti. Prethodno smo izvestili da je eliglustat tartrat (GZ 638) pri 300 mg/kg/dan (SRT GZ 638) efikasan u inhibiciji daljeg nakupljanja tkiva Gb3 (što ovde pokazuju neznatne promene Gb3 u odnosu na početne nivoe UNT (početak)). Kao što je prikazano na Slici 3, takođe je procenjen snažniji GCS inhibitor, GZ 452 (pri 60 mg/kg/dan) (SRT-Gz452) i ne samo da sprečava dalje nagomilavanje, već i značajno smanjuje uskladišteni Gb3 u odnosu na početni nivoi (UNT (start)). Prikazani su i dobri nivoi divljih vrsta (WT). Ovi rezultati pokazuju da je GZ 638 moćan GCS inhibitor i efikasno smanjuje nivo Gb3 u visceralnim tkivima Fabri miša.
SRT smanjuje urin i plazmu Gb3 kod mlađih i starijih Fabri miševa
[0342] U ovom eksperimentu, Fabri miševi su tretirani sa GZ 452 u svojoj ishrani (Rx:) tokom 2 ili 4 meseca počevši od starosti 3 ili 8 meseci (Starost:), kako je naznačeno na Sl.4A i 4B. Nivoi Gb3 u urinu mlađih i starijih miševa podjednako su reagovali na tretiranje sa SRT, postižući ∼90% smanjenje sa 2 meseca lečenja. Nivoi Gb3 u plazmi slabije su reagovali na lečenje, a stariji miševi zahtevali su dvostruko vreme lečenja mlađih miševa (4 naspram 2 meseca) da bi se postigao ∼50% smanjenje. Ovi rezultati pokazuju da GZ 638 efikasno smanjuje nivo Gb3 u urinu i plazmi kod mlađih i starijih Fabri miševa.
SRT smanjuje i Gb3 i Liso-Gb3 u bubrezima Fabri miša
[0343] U ovom eksperimentu, Fabri miševi su tretirani Genz-452 u svojoj ishrani tokom 4 meseca, počevši od 8. meseca starosti. Kao što je prikazano na slici 5, bubrežno tkivo je
11
analizirano na (A) Gb3 i (B) lizo-Gb3 od neobrađenih miševa Fabri (UNT), GZ 452 tretiranih Fabri miševa (SRT) i kontrolnih miševa divljih vrsta (WT). SRT je rezultirao sličnim značajnim relativnim smanjenjem nivoa (60-70%) i za Gb3 i za lizo-Gb3. Ovi rezultati pokazuju da GZ 638 efikasno smanjuje nivo Gb3 i Liso-Gb3 u bubrežnim tkivima Fabri miševa.
Primer 112
Ispitivanje efikasnosti kombinovane terapije in vivo na Fabri modelu miša korišćenjem GZ 452 i alfa-galaktozidaze A
[0344] Fabri miševi korišćeni su za testiranje in vivo efikasnosti kombinovanja enzimske terapije sa malo molekularnom terapijom u formatu istovremenog lečenja. Ispitivanje je osmišljena kako bi se procenilo da li inhibicija supstrata (tj. „supstrat redukciona terapija“) korišćenjem jedinjenja GZ 452 može da smanji ponovnu akumulaciju materijala za skladištenje Gb3 i lizo-Gb3. Protokol ispitivanja zahtevao je tri različite grupe lečenja tri meseca starog mužjaka Fabri (Sl.6)A). Prva grupa je primila intravenske injekcije enzima alfa-galaktozidaze A (ERT) u 1 mg/kg za smanjenje nivoa Gb3 i ponavljala se svaka 2 meseca. Druga grupa je primila iste injekcije enzima kao i grupa 1, ali su takođe dozirane sa GZ 452 na ∼60 mg/kg/dan kao komponentu peletirane ishrane. Treća grupa primila je samo dnevnu dozu GZ 452 u svojoj ishrani. Četvrta grupa nije primila tretiranje koje bi služilo kao kontrola vozila, a peta grupa divljih životinja je davala „normalne“ vrednosti Gb3 i lizo-Gb3. Mesečni zbir urina i krvi i tromesečna sakupljanja tkiva pružaju materijale za procenu relativne efikasnosti terapija (Sl.6A).
[0345] Nakon 2 meseca (miševi su bili 5 meseci stari), plazma (Sl.6B, paneli A i C) i urin (Sl. 6B, paneli B & D) su analizirani na Gb3 (Sl.6B, paneli A i B) i lizo-Gb3 (Sl.6B, paneli C i D). U plazmi su ERT i SRT smanjili nivo Gb3 (panel A) i lizo-Gb3 (panel C), a kombinovanje ERT i SRT rezultiralo je značajnim poboljšanjima u odnosu na bilo koju samostalnu terapiju. Urin nivoa Gb3 nije uticao na ERT, ali je značajno smanjen SRT (panel B). Urin lizo-Gb3 je smanjen na sličan način kod svih tretiranja (panel D), što sugeriše da mokraća Gb3 i lizo-Gb3 mogu da potiču iz različitih izvora. Rezultati ovih ispitivanja pokazuju da je SMT bio efikasan u smanjenju Gb3 u bubrezima i urinu. ERT je bio efikasniji od SMT u smanjenju Gb3 u plazmi, međutim najefikasnija terapija je izvedena iz kombinacije dve terapije. Terapija SMT sama ili u kombinaciji sa ERT takođe je mogla da
12
utiče (smanjuje akumulaciju) lizo-Gb3.
Primer 113
[0346] Gb3 Acil lanac profil izoforme. Relativno obilje amil-povezanih acilnih grupa različitih dužina ugljeničnog lanca određeno je za Gb3 iz plazme, urina i bubrega Fabri miševa. Kao što je prikazano na slici 7, glavni izoformi plazme su C16:0 i C24:1. Profili mokraće i bubrega izoformni su gotovo identični, sa C24:0 i C22:0 su pretežne dužine lanca. Ovi podaci su u skladu sa urinom Gb3 koji dolazi pretežno iz bubrega - verovatno putem izlivanja epidermalnog egzosola. Usklađivanje ovih rezultata sa rezultatima na slici 6, gde ERT smanjuje plazmu i lizo-Gb3 u urinu, ali ne i urin Gb3, sugeriše da je lizo-Gb3 u urinu izveden iz filtrata plazme. Ovo razlikovanje izvora za urin Gb3 i lizo-Gb3, ako važi i za pacijente, može objasniti zašto se smatra da je lizo-Gb3 tačniji prediktor težine bolesti i efikasnosti lečenja od urina Gb3.
Primer 114
SRT ali ne i ERT značajno odlaže gubitak termičkog nociceptivnog odgovora
[0347] Tromesečni Fabri miševi tretirani su s GZ 452 u svojoj prehrani (SRT), egal jednom svaka 2 meseca (ERT), ili kombinacijom dva tretiranja (E+S), kako je iznad opisano. Nakon 6 meseci kombinovane terapije, vreme termičkog nociceptivnog odgovora (latencija) procenjeno je postavljanjem miševa na ploču na 55°C i beleženje vremena reakcije (tj., karakteristično trzanje zadnjih šapa). Kao što je prikazano na slici 8, nakon 7 meseci lečenja (miševi stari 10 meseci), grupa koja je bila lečena ERT-om nije se značajno razlikovala od nelečene grupe (UNT). SRT i kombinovane grupe tretirane su znatno kraćim vremenima reakcije na toplotni podražaj. Ovi rezultati pokazuju da je SRT (ali ne i ERT) odložio gubitak termičkog nociceptivnog odgovora, surogata za perifernu neuropatiju često viđenu kod Fabri pacijenata.
Primer 115
nGD model miša za in vivo ispitivanja SMT pomoću Gz161
[0348] K14 lnl/lnl (skraćeno K14) miševi su dobijeni sa Univerziteta Lund (Enquist i dr. (2007)) i uzgajaju se prema protokolu koji je odobrio Institucionalni odbor za brigu i upotrebu životinja. Psići dobijeni iz matiranja heterozigota su ošišani i genotipizovani u roku od jednog dana od rođenja (Pl). DNK je ekstrahovana korišćenjem pufera za lizu od 5 mM EDTA, 0.2% SDS, 200 mM NaCl, 100 mM Tris pH 8.0 sa dodatkom 0.25 mg/ml proteinaze K (Invitrogen, Carlsbad, Kalifornija), istaložena sa 100% izopropanolom i ponovo rastvorena u 1X Tris EDTA pufer. DNK je zatim korišćena za lančanu reakciju polimeraze (PCR) da bi se odredilo prisustvo GC gena pod K14 keratinskim promotorom (CRE) (Enquist i dr.
(2007)). Za određivanje poremećaja na mestu neomicinske rezistencije gena mišje glukocerebrosidaze (NEO) koristili smo tri primera: GC WT Fwd 5'-TGTTCCCCAACACAATGCTCTTT-3'; Rev 5'-TCTGTGACTCTGATGCCACCTTG-3' i Neo Rev 5'-AAGACAGAATAAAACGCACGG GTG-3' kao što je prethodno opisano u Cabrera-Salazar i dr., Experimental Neurology 225:436-444 (2010).
[0349] Novorođeni miševi svakodnevno su primili intraperitonealne injekcije od 5 mg/kg hinuklidin-3-il (2-(4'-fluoro-[1,1'-bifenil]-3-il)propan-2-il)karbamata (u daljem tekstu "GZ 161") u zapremini od 10 µl/gram telesne težine počevši od postnatalnog dana 4. Miševi K14 i parnjaci iz istog legla divljih vrsta humano su žrtvovani 10 postnatalnog dana (pre simptomatsko) i 14. dana (humana krajnja tačka) radi procene nivoa glikosfingolipida (GSL). Miševi su primili 150 mg/kg doze pentobarbitala (Euthasol, Virbac Inc, Forth Vorth, TX) i bili su transkardijalno perfuzirani sa hladnim 0.9% rastvorom NaCl. Mozak je seciran i podeljen; jedna hemisfera je korišćena za GSL analizu, a druga je fiksirana u 4% paraformaldehidu 96 sati i obrađena za histologiju.
[0350] Da bi se utvrdilo da li se mogu ostvariti daljnje koristi prenatalnim izlaganjem GZ 161, pod skupova trudnica K14 koje su primale GZ 161 u hrani koristeći formulaciju izračunatu da obezbedi 20 mg/kg/dan tokom poslednjih 5-7 dana gestacije. Žene koje su primale GZ 161 prebačene su na standardnu ishranu nakon porođaja, a štenad je primao svakodnevne IP injekcije GZ 161 u dozi od 5 mg/kg (10 µl po gramu telesne težine) počevši od P1. Skup WT štenaca rođenih od ženki koje su primile lek ili standardnu formulu žrtvovane su odmah nakon rođenja da bi se utvrdilo da li utero izloženost GZ 161 može smanjiti nivo GSL u mozgu.
Primer 116
Količina glikosfingolipida
[0351] Kvantitativna analiza sfingolipida izvedena je tečnom hromatografijom i tandemskom masenom spektrometrijom (LC/MS/MS) kao što je prethodno opisano u Merrill i dr., Methods 36:207-224 (2005). Ukratko, 10 µl homogenata tkiva mozga (težina tkiva/voda:100 mg/ml) ekstrahovano je sa 1.00 ml smeše organskog rastvarača (97% acetonitrila, 2% metanola i 1% sirćetne kiseline, v/v) i vortekse snažno tokom 10 minuta. Ekstrahovani sfingolipidi (GluCer i GluSph) direktno su razdvojeni hidrofilnom tečnom hromatografijom (Atlantis HILIC kolona, Waters Corp.) i analizirani trostrukom četvorougaonom tandem masenom spektrometrijom (API 4000, Applied Biosystems/MDS SCIEX) i upoređeni sa sfingolipidnim standardima (Matreya, LLC; Pleasant Gap, PA)
Primer 117
Reformacija rekombinantne humane glukocerebrosidaze
[0352] Rekombinantna humana glukocerebrosidaza (rhGC) je reformulisana kao što je prethodno opisano u Cabrera-Salazar i dr. (2010). Ukratko, rhGC je vezan korišćenjem katjon-razmene (CM Sepharose) i humani serumski albumin (HSA) je dodat u eluat kao stabilizator. Formulacija za ICV davanje bila je 2 mg/ml rhGC u 10 mM natrijum-fosfatnom puferu sa pH 7.2 koji sadrži 135 mM natrijum hlorida, 5 mg/ml HSA i 0.01% polisorbata 80.
Primer 118
Intracerebroventrikularne injekcije
[0353] Životinjski model neuropatske Gaucherove bolesti (nGD) identifikovan kao K14 bio je krioanesteziran i primio je 2 µl bilateralne intracerebroventrikularne (ICV) injekcije bilo rhGC, u dozi od 2 mg/ml, ili nosač kao što je prethodno opisano. (Cabrera-Salazar i dr.
(2010)) Ubrizgane štence nadgledane su radi oporavka i vraćene majci nakon postupka. Primer 119
Histopatologija
[0354] Posle potvrđivanja genotipa, životinje su humano žrtvovane u dobi od 10 dana. U ovom uzrastu, K14 miševi su asimptomatski. Miševi su primili intraperitonealnu injekciju od 150 mg/kg natrijum pentobarbitala ((Euthasol, Virbac Inc, Forth Worth, TX) i bili perfuzirani intrakardijalnom infuzijom ohlađenog 0.9% natrijum hlorida. Mozgovi su uklonjeni i stavljeni u 4% paraformaldehid tokom 72 sata. Tkivo je prebačeno u PBS i ugrađeno u
12
parafin. Sagitalni preseci debljine 5 µm su isečeni i obojeni kao što je opisano u daljem tekstu. Glioza i prisustvo ćelija roda makrofaga procenjivano je obojenjem glijalnim fibrilarnim kiselinama i ekspresijom markerima pan-makrofaga CD68 i F4/80 korišćenjem Leica Bond Mak imunostainer sistema (Leica Microsystems, Wetzlar, Nemačka).
[0355] GFAP bojenje: Parafinski odeljci su smešteni na montažnim toboganima i obrađeni korišćenjem Bond Polymer Refine IHC sistema (Leica Microsystems, Wetlzar, Nemačka) blokirani 10 minuta u bloku proteina bez seruma (Dako systemi, Glostrup, Danska), inkubirani 30 minuta u 1:1500 razblaživanje primarnih anti-GFAP antitela u razređivaču antitela Dako (Dako, Glostrup, Danska) i obojeno pomoću kompleta za detekciju Bond Polymer Refine (Leica Microsystems, Wetzlar, Germany).
[0356] F4/80 bojenje: Parafinski odeljci su stavljeni na montažne slajdove i obrađeni korišćenjem Bond Polymer Refine IHC sistema (Leica Microsystems, Wetlzar, Nemačka), inkubirani su tokom 30 minuta u razblaženju antitela 1:2500 F4/80 antitela pacova (eBioscience, San Diego, CA) ili pacov IgG2a (eBioscience, San Diego, CA) kao kontrola izotipa. Slajdovi su zatim inkubirani sa 1:250 razblaživanjem zečjeg anti-pacova sekundarnog antitela (Vektorske laboratorije, Burlingame, CA) i obojeni pomoću kompleta za detekciju Bond Polymer Refine (Leica Microsystems, Wetzlar, Nemačka).
[0357] CD 68 bojenje: Parafinski odeljci su stavljeni na montažne slajdove i obrađeni korišćenjem Bond Polymer Refine IHC sistema (Leica Microsystems, Wetlzar, Nemačka), inkubirani su tokom 30 minuta u razređivanju 1:2500 pacov anti-mišjeg CD68 klona FA-11 pacova (AbD Serotec, Oksford, Ujedinjeno Kraljevstvo) ili izotipska kontrola IgG2a pacova (AbD Serotec, Oksford, Velika Britanija). Slajdovi su zatim inkubirani sa 1:250 razblaživanjem zečjeg anti-pacova sekundarnog antitela (Vektorske laboratorije, Burlingame, CA) i obojeni pomoću kompleta za detekciju Bond Polymer Refine (Leica Microsystems, Wetzlar, Nemačka).
[0358] Za svaku tehniku bojenja digitalne slike sa ekspozicijom podeljene su iz sličnih područja mozga svake eksperimentalne grupe korišćenjem Aperio ScanScope XT sistema (Aperio Technologies, Vista, CA). Obojeni slajdovi su digitalizovani u visokoj rezoluciji, a šest područja interesa su istaknuta na svakom slajdu i histomorfometrijom su nezavisno analizirane. Pozitivno obojeno područje i jezgra određeni su, a kvantitativni podaci su analizirani jednosmernom analizom varijancije, praćenim Tukijevim višestrukim uporednim testom korišćenjem Graph Pad Prism V 4.0 (GraphPad Software, San Diego, CA). Razlike između grupnih sredstava sa p <0.05 su smatrane značajnim.
Primer 119
Preživljavanje
[0359] Miševi K14 svakodnevno su primali intraperitonealne injekcije GZ 161 u dozi od 5 mg/kg telesne težine kako je iznad opisano. Zasebna kohorta životinja takođe je primila ICV injekcije GC u postnatalnom danu 1, 2 i 3 nakon čega su usledile svakodnevne IP injekcije GZ 161. Životinje koje su dostigle zrelost za odvikavanje primile su GZ 161 u specijalnoj kravici koja je bila dizajnirana da obezbedi dozu od 60 mg/kg dnevno. Sve životinje svakodnevno su praćene zbog razvoja neuroloških komplikacija. Miševi su žrtvovani kada su dostigli humanu krajnju tačku (nemogućnost da se desi u roku od 10 sekundi nakon što su smešteni da bočno leže) ubrizgavanjem 150 mg/kg natrijum pentobarbitala (Euthasol, Virbac Inc, Forth Worth, TX). Ova vremenska tačka je zabeležena kao kraj života i analizirana pomoću Kaplan-Mejerovih grafičkih podataka.
Primer 120
Statistička analiza
[0360] Prikazane vrednosti odgovaraju sredstvima, a stubovi grešaka predstavljaju standardnu grešku srednje vrednosti. Poređenja između grupa analizirana su jednosmernom analizom varijance nakon čega je praćen Tukijev višestruki uporedni test. Poređenje redukcije supstrata utero je analizirano neparnim t testom sa Welchovom korekcijom. Krive preživljavanja Kaplan-Mejera analizirane su korišćenjem testa log-opsega ekvivalentnog Mantel-Haenszel-ovom testu. Sve statističke analize izvršene su koristeći GraphPad Prism v4.0 (GraphPad Software, San Diego, CA). Razlike između grupnih sredstava sa p <0.05 su smatrane značajnim.
Primer 121
Akumulacija supstrata u mozgu K14 miša
[0361] Pre nego što smo procenili efekte lekova na moždane lipide, uporedili smo vremenski
12
zavisne promene nivoa GluCer, GalCer i GluSph u mišjem K14 mozgu i one mišjeg divljeg tipa (WT). Sl.9, paneli A i B pokazuju da je u VT mišjem mozgu preovlađujući GL-1 izomer u prvim danima života bio GluCer; do postnatalnog dana 14. (P14) prevladavajući izomer bio je GalCer. Ovi rezultati su u skladu sa rezultatima ispitivanjima o mozgu pacova, koja je otkrila da se GluCer sintetiše sa većom brzinom tokom prve nedelje života, a praćena je pojačanom sintezom GalCer počevši od P8 (Brenkert i dr., Brain Research 36:183-193 (1972)). Sl.9, panel A takođe pokazuje da je kod K14 miševa GluCer povišen 10 puta u odnosu na WT miševe i da je ovo povećanje održano tokom prve 2 nedelje života dok miševi nisu umrli oko P14.
[0362] U dogovoru sa prethodnim mišjim modelima neuropatske Gaucherove bolesti (Liu i dr., PNAS 95:2503-2508 (1998)), Sl.9, panel C pokazuje da je pri rođenju lizoglikofingolipid GluSph povišen > 20 puta u mozgu modela K14 miša u odnosu na WT miševe. Ovo povećanje je održano tokom prve 2 nedelje života i bilo je još veće kod životinja koje su žrtvovane u krajnjoj fazi (Sl.9, panel C). Kod WT smeđih k14 miševa, nivo GluSph bio je ispod praga detekcije (0.3 ng/mg tkiva). Slika 9, panel D pokazuje da ovi povišeni glikosfingolipidi i lizoglikosfingolipidi u miševima K14 nisu imali uticaja na težinu mozga (u odnosu na WT miševe). S obzirom na poznatu toksičnost GluSph, terapijske strategije usmerene na smanjenje nakupljanja ovih supstrata u mišjem mozgu K14 mogu se očekivati da će imati uticaja na patološke karakteristike bolesti i životni vek životinja.
Primer 122
Intraperitonealno davanje GZ 161 smanjuje nivo GluCer i GluSph u mozgu K14 miševa
[0363] Slika 10 pokazuje da je u poređenju sa K14 miševima tretiranim nosačem u humanoj krajnjoj tački (starosti 14-15 dana), dnevna intraperitonealno (IP) davanje GZ 161 smanjila nivo mozga i GluCer i GluSph za > 60%. Miševi K14 tretirani GZ 161 su u ovom trenutku bili asimptomatski. Iako je davanje GZ 161 značajno smanjilo nivoe ovih glikosfingolipida, Sl. 10 pokazuje da su oni ipak povišen nekoliko puta u odnosu na miševe divljeg tipa koji se podudaraju sa godinama; GluSph nije detektovan u uzorcima analiziranim od WT ili heterozigotima parnjaka iz istog legla. Smanjenje moždanih glikosfingolipida kao posledica sistemskog davanja lekova snažno ukazuje na to da je GZ 161 sposoban da pređe krvnu barijeru u mozgu i inhibira ciljni enzim, GCS.
12
Primer 123
Intraperitonealno davanje Gz 161 smanjuje mikroglija/makrofag obojenje u mozgu K14 miševa
[0364] Ćelije mijeloidne loze mogu se detektovati u mišjem mozgu koristeći antitela na antigene kao što su F4/80 i CD68. F4/80 je transmembranski glikoprotein koji se nalazi u razgranatim (miroljubivim) mikroglijama i makrofagovima, dok je CD68 lizosomalni protein eksprimiran na relativno visokim nivoima u makrofagama i aktiviranim (reaktivnim) mikroglijama, a na nižim nivoima u razmnoženoj mikrogliji. Pojačano bojenje F4/80 i CD68 u mozgu može se pojaviti regrutovanjem monocita ili proliferacijom mikroglija, i normalan je odgovor na povrede i inflamacije. Sl.11 pokazuje kvalitativno i kvantitativno da je u poređenju sa miševima divljeg tipa u dobi od 10 dana (P10), mišji mozak K14 povećao broj CD68+ ćelija na više lokacija (hipokampus, talamus, moždano stablo, mozak). Najveća koncentracija CD68 ćelija primećena je u talamusu i mozgu, dve lokacije koje takođe pokazuju patologiju kod Gaucherovih bolesnika tipa 2. (Conradi i dr., Acta Neuropathologica 65:99-109(1984); Conradi i dr., Acta Neuropathologica 82:152-157 (1991); i Wong i dr., Molecular Genetics and Metabolism 82:192-207 (2004)). Sl.11 takođe pokazuje da sistemska primena GZ 161 smanjuje broj CD68+ ćelija na svim tim lokacijama; lečenjem je takođe smanjen broj CD68+ ćelija u olfaktornoj loptici i prednjem korteksu (podaci nisu prikazani). U skladu sa CD68 histopatologijom, Sl.12 pokazuje pojačano obojenje F4/80 u odnosu na WT životinje kod M14 tretiranih nosačem na P10. Svakodnevne IP injekcije GZ 161 smanjile su broj F4/80+ ćelija u talamusu i mozgu, ali imale su marginalne efekte u ostalim regionima mozga. Uzeto zajedno sa podacima CD68, ovi rezultati sugeriraju da sistemsko tretiranje miša K14 pomoću GZ 161 rezultira smanjenim brojem makrofaga/mikroglija u više regiona mozga.
Primer 124
Intraperitonealno davanje GZ 161 smanjuje gliozu u nekoliko oblasti mozga K14 miševa
[0365] Astrociti mogu biti podvrgnuti hipertrofiji ili razmnožavati se kao odgovor na inflamaciju i oštećenje neurona ili smrt, proces poznat kao astroglioza. Glijalni fibrilarni kiseli protein (GFAP) je protein srednjeg vlakna koji se snažno eksprimira u aktiviranim
12
(reaktivnim) astrocitima, pa se stoga može koristiti za praćenje astroglioze. Sl.13 pokazuje da je na P10 GFAP bojenje povišeno u poređenju sa nivoom WT u nekoliko moždanih regija (hipokampus, talamus, mozak, mozak) miša K14, što ukazuje na prisustvo reaktivnih astrocita. Sl.13 takođe pokazuje da je sistemsko tretiranje K14 miševa GZ 161 dovelo do smanjenog obojenja GFAP-a u hipokampusu i moždini na P10; takođe je smanjeno obojenje u jonskoj kori i prednjem korteksu (podaci nisu prikazani). Prema tome, ovi rezultati GFAP-a u skladu su sa gore navedenim makrofagovim/mikroglijalnim podacima koji pokazuju da M14 K14 verovatno ima tekući inflamatorni proces koji se može donekle ublažiti sistemskom primenom GZ 161.
Primer 125
Intraperitonealno davanje GZ 161 povećava preživljavanje K14 miševa
[0366] S obzirom na pozitivne efekte lečenja GZ 161 na glikosfingolipide u mozgu i histopatologiju, pitali smo da li se ovi efekti prevode u povećani opstanak miša K14. Slika 14 pokazuje da K14 miševi tretirani nosačem imaju srednji životni vek od 15 dana, u skladu sa našim prethodnim nalazima u ovom modelu miša (Cabrera-Salazar i dr. (2010)). Sistemsko (IP) tretiranje K14 miševa s GZ 161 rezultiralo je produženim srednjim životnim vekom na 18 dana (p <0.0001), što je u skladu s prednostima molekularnih i ćelijskih efekata leka u mozgu, prikazanih iznad.
[0367] U prethodnim eksperimentima kod miša K14 pokazalo se da bi novorođenčad (P1-P3) intracerebroventrikularna injekcija GC mogla da produži srednji opstanak još i dalje, naime, do 23 dana (Cabrera-Salazar i dr. (2010)). Zato što i GC i GZ 161 mogu da smanje nivo istog glikosfingolipida, naime GluCer (GC degradacijom GluCer; GZ 161 inhibiranjem njegove sinteze) takođe smo pitali da li bi kombinacija Gz161 i intracerebroventrikularno (ICV) davanje GC pružila korist za preživljavanje bolju od one koja je dobijena bilo od pojedinačnog sredstva. Slika 14 pokazuje da kombinacija ICV GC (na P1,2,3) i dnevnog IP Gz161 dovodi do prosečnog preživljavanja od 26 dana, značajno većeg od GZ 161 samog ili ICV GC (p=0.0007). Stoga se čini da je sistemska primena GZ 161 aditivna za ICV GC i pruža dodatnu korist za preživljavanje.
Primer 126
Prenatalno davanje GZ 161 ne uspeva da poveća opstanak K14 miševa
12
[0368] Pošto je utvrđeno da je nivo GluSph u mišjem K14 povišen najmanje 10 puta više od normalnog u odnosu na P1 i dokumentovano je da je GluSph povišen u mozgu miševa i ljudi koji su pogođeni nGD čak prenatalno (Orvisky i dr., Pediatric Research 48:233-237 (2000)), ispitano je da li se prednost preživljavanja može dobiti tretiranjem K14 miševa sa GZ 161 utero. Sl.15 pokazuje da je tretiranje WT mišjih brana sa GZ 161 dovelo do ∼petostrukog smanjenja nivoa GluCer u mozgu novorođenog miša (P0), što sugeriše da GZ 161 može preći krvnu/placentalnu barijeru. Međutim, davanje brane K14 GZ 161 i zatim tretiranje rezultirajućih štenaca IP sa GZ 161 nije uspelo da produži opstanak iznad preživljavanja miševa kojima je sistemski GZ 161 postnatalno sam (18 dana) (Sl.14 i 16). Ovi podaci su, dakle, u skladu sa rezultatima opisanim na Slici 14 i impliciraju da iako GZ 161 može uticati na smanjenje glikosfingolipida i neuropatologije, trenutni režim lečenja nije dovoljan za spašavanje CNS. Ovi rezultati su u skladu sa našim prethodnim rezultatima na ovom modelu koristeći intracerebroventrikularne injekcije rekombinantne humane glukocerebrosidaze (Cabrera-Salazar i dr. (2010)), i zajedno sugerišu da će biti potrebno snažnije i kontinuirano iscrpljivanje glikosfingolipida kao što je GluCer da bi se dodatno poboljšao preživljavanje.
[0369] Ovi podaci pokazuju i kvalitativno i kvantitativno da sistemsko (IP) davanje GZ 161 neonatalnim K14 miševima značajno smanjuje opterećenje supstrata, poboljšava patološke karakteristike bolesti i povećava srednji životni vek. U kombinaciji sa ICV-rhGC-om, sistemska primena GZ 161 rezultirala je dodatnim povećanjem životnog veka, što ukazuje da bi takva kombinacija mogla biti efikasnija od bilo koje monoterapije same kod pacijenata sa nGD-om. S obzirom na implikacije ovih studija da GZ 161 očigledno može preći BBB i inhibirati njegov ciljani enzim, glukozilceramid sintazu, opravdano je pretpostaviti da se ovaj molekul takođe može koristiti za lečenje drugih LSD koji su rezultat nakupljanja supstrata nizvodno od GluCer.
[0370] Važno je napomenuti da se u trenutnim ispitivanjima GZ 161 primenjivao na K14 miševima u vremenskom okviru u kojem su se GluCer i GluSph proizvodili u mišjem mozgu u razvoju na relativno visokim nivoima u poređenju sa WT miševima (Slika 9); Brenkert i dr., 1972). Dnevno IP tretiranje GZ 161 uspešno je smanjilo, ali nije normalizovalo nivo GluCer i GluSph u mozgu K14 (Slika 10). Postoji nekoliko dokaza koji ukazuju na to da GluSph i drugi lizosfingolipidi kao što je galaktozil sfingozin mogu doprineti patologiji CNS-a pokretanjem proizvodnje medijatora zapaljenja Giri i dr., Journal of lipid research 47:1478-
12
1492 (2006) i Gräler i dr., Molecular i Cell Biology of Lipids 1582:168-174 (2002).
Sposobnost GZ 161 da smanjuje nivo GluSph i istovremeno dovodi do smanjenog obojenja makrofaga/mikroglija i astrocita (Sl.11-13) je u skladu sa ovom hipotezom. Zato što GluSph takođe ima poznata neurotoksična svojstva (Schueler i dr., Neurobiology of Disease 14:595-601 (2003); Orvisky i dr., Molecular Genetics and Metabolism 76:262-270 (2002); Sun i dr., Hum Mol Genet 19:1088-1097 (2010); i Pelled i dr., Journal of Inherited Metabolic Disease 23:175-184 (2000)), nemogućnost lečenja GZ 161 da normalizuje nivo GluSph je konzistentna sa GluSphom kao potencijalnim doprinosom ranoj smrti koja je viđena u ovom modelu.
[0371] Uzeto zajedno, predklinički rezultati u modelu miša K14 prikazani ovde ukazuju da primena GZ 161 može ublažiti napredovanje bolesti i neurološke simptome kod pacijenata tipa 2 i Goucherove bolesti tipa 3. Međutim, teško je predvideti potencijalne koristi takvog terapijskog pristupa kod simptomatskog bolesnika tipa 2 jer je poznato da njihovi mozgovi sadrže veoma visok nivo GluSph koji potiče iz prenatalnog života. Goker-Alpan i dr., The Journal of Pediatrics 143:273-276 (2003). Gaucherova bolest tipa 3 može biti podložnija lečenju, jer su nivoi GluSph u mozgu niži (Nilsson, J Neurochem 39:709-718 (1982), napredovanje bolesti je sporije uprkos tome što je deo fenotipskog kontinuuma (Goker-Alpan i dr. (2003)), au nekim slučajevima pacijenti se mogu identifikovati mutacijskom analizom pre pojave neuropatskog fenotipa (Ida i dr., Human Genetics 105:120-126 (1999)). Na osnovu trenutnih rezultata, čini se da će biti potreban rani, agresivni pristup za lečenje ovih pacijenata. Mali inhibitori molekula glukozilceramid sintaze mogu predstavljati jednu celinu sveobuhvatnog pristupa.
Primer 127
SMT mužjaka i ženki Fabri miševi tretirani sa GZ 452, GZ 161 i GZ 638.
[0372] Fabri miševi su započeli lečenje pri ∼8 meseci starosti i lečeni su 4 meseca sa:60 mg/kg/dan GZ 452 (Fab 452@ 60mkd), 120 mg/kg/dan GZ 452 (Fab 452 @120mkd), 20 mg/kg/dan GZ 161 (Fab 161 @20mkd), 300 mg/kg/dan GZ 638 (Fab 638 @300 mkd). Tkivo bubrega kod mužjaka i ženki Fabri od 12 meseci starijih testova testirano je na nivo Gb3. Kao što je prikazano na SL.17, GZ 161 i GZ 452 značajno su smanjile količinu Gb3 prisutnog u bubrežnom tkivu u odnosu na netretirane kontrole (Fab UNT 12mo). GZ 161 i GZ 638 su jedinjenja iz ovog obelodanjivanja.
1

Claims (15)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje predstavljeno sledećom strukturnom formulom,
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, za upotrebu pri lečenju bolesti skladištenja lizosoma.
  3. 3. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 2, gde bolest skladištenja lizosoma potiče od oštećenja na putu glikosfingolipida.
  4. 4. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 3, gde je bolest skladištenja lizosoma izabrana iz grupe koju čine Gaucher, Fabri, GM1-gangliosidoza, nedostatak GM2 Aktivatora, Tej-Saš i Sendhof.
  5. 5. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 4, gde je bolest skladištenja lizosoma Fabri.
  6. 6. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 4, gde je bolest skladištenja lizosoma Gaucher tip 2 ili tip 3.
  7. 7. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 2 do 6, pri čemu navedena upotreba dalje uključuje korak davanja ispitaniku terapeutski efikasne količine lizosomalnog enzima.
  8. 8. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 7, gde je lizosomalni enzim izabran iz grupe koja se sastoji iz glukocerebrosidaze, alfa-galaktozidaze A, heksosaminidaze A, heksosaminidaze B i GM1-gangliozid-β-galaktozidaze.
  9. 9. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 8, gde je lizosomalni enzim alfagalaktozidaza A.
  10. 10. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 8, gde je lizosomalni enzim glukocerebrosidaza.
  11. 11. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 7, pri čemu pre tretiranja ispitanik ima povišen nivo lizosomalnog supstrata.
  12. 12. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde se koristi pri lečenju bolesti ili poremećaja posredovanog glukozilceramid sintazom (GCS) ili bolesti ili poremećaja u kojima je uključen GCS, pri čemu je navedena bolest ili poremećaj kancer ili metabolički poremećaj.
  13. 13. Postupak za indukciju smanjene katalitičke aktivnosti glukozilceramid sintaze u ćeliji, in vitro, koji sadrži dovođenje ćelije u kontakt sa efektivnom količinom jedinjenja prema patentnom zahtevu 1.
  14. 14. Farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 i bar jedan farmaceutski prihvatljiv nosač.
  15. 15. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, za upotrebu u terapiji.
RS20200222A 2011-03-18 2012-03-16 Inhibitor glukozilceramid sintaze RS59963B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161454034P 2011-03-18 2011-03-18
US201261590711P 2012-01-25 2012-01-25
PCT/US2012/029417 WO2012129084A2 (en) 2011-03-18 2012-03-16 Glucosylceramide synthase inhibitors
EP12760259.7A EP2685986B1 (en) 2011-03-18 2012-03-16 Glucosylceramide synthase inhibitor

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS59963B1 true RS59963B1 (sr) 2020-03-31

Family

ID=46879977

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20250761A RS67073B1 (sr) 2011-03-18 2012-03-16 Inhibitori glukozilceramid sintaze
RS20200222A RS59963B1 (sr) 2011-03-18 2012-03-16 Inhibitor glukozilceramid sintaze

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20250761A RS67073B1 (sr) 2011-03-18 2012-03-16 Inhibitori glukozilceramid sintaze

Country Status (38)

Country Link
US (5) US9139580B2 (sr)
EP (3) EP2685986B1 (sr)
JP (2) JP6117708B2 (sr)
KR (1) KR101987736B1 (sr)
CN (2) CN107080747B (sr)
AR (1) AR085425A1 (sr)
AU (2) AU2012231275A1 (sr)
BR (2) BR112013023774B1 (sr)
CA (1) CA2830540C (sr)
CL (1) CL2013002688A1 (sr)
CO (1) CO6801749A2 (sr)
CR (1) CR20190034A (sr)
DK (2) DK3673906T3 (sr)
DO (1) DOP2013000209A (sr)
EC (1) ECSP13012978A (sr)
ES (2) ES3037907T3 (sr)
FI (1) FI3673906T3 (sr)
GT (1) GT201300215A (sr)
HR (2) HRP20250907T1 (sr)
HU (2) HUE047888T2 (sr)
IL (1) IL228514B (sr)
LT (2) LT3673906T (sr)
MA (1) MA35023B1 (sr)
MX (3) MX365245B (sr)
MY (1) MY173998A (sr)
NI (1) NI201300083A (sr)
PE (1) PE20140412A1 (sr)
PH (1) PH12013501944A1 (sr)
PL (2) PL3673906T3 (sr)
PT (2) PT3673906T (sr)
RS (2) RS67073B1 (sr)
RU (2) RU2645675C2 (sr)
SI (2) SI3673906T1 (sr)
TW (2) TWI546301B (sr)
UA (1) UA118248C2 (sr)
UY (1) UY33958A (sr)
WO (1) WO2012129084A2 (sr)
ZA (1) ZA201307016B (sr)

Families Citing this family (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA118248C2 (uk) * 2011-03-18 2018-12-26 Джензім Корпорейшн Інгібітори глюкозилцерамідсинтази
AU2019222801B2 (en) * 2012-09-11 2021-02-18 Genzyme Corporation Glucosylceramide synthase inhibitors
JOP20130273B1 (ar) * 2012-09-11 2021-08-17 Genzyme Corp مثبطات انزيم (سينثاز) غلوكوسيل سيراميد
JO3713B1 (ar) * 2013-03-15 2021-01-31 Genzyme Corp أشكال ملح (s)-كوينوكليدين-3-يل(2-(2-(4-فلوروفينيل)ثيازول-4-يل)بروبان-2-يل)كارباميت
KR20150130386A (ko) 2013-03-15 2015-11-23 젠자임 코포레이션 글루코실세라마이드 신타아제 저해제의 제조 방법
CN104418851A (zh) * 2013-09-02 2015-03-18 上海龙翔生物医药开发有限公司 奎宁环衍生物的制备方法及纯化方法
CN117679415A (zh) * 2013-12-11 2024-03-12 建新公司 葡糖神经酰胺合酶抑制剂
RU2016152499A (ru) * 2014-05-30 2018-07-04 Драг Дискавери Ресеч Сентэ Новые соединения в качестве противотуберкулезных препаратов
EP3253734B1 (en) 2015-02-02 2020-12-23 The Regents of The University of Michigan Glucosylceramide synthase inhibitors and therapeutic methods using the same
TW201642855A (zh) * 2015-03-10 2016-12-16 健臻公司 用於治療蛋白質病變之方法
CN108290894A (zh) * 2015-07-01 2018-07-17 西北大学 被取代的4-甲基-吡咯并[1,2-a]嘧啶-8-甲酰胺类化合物及其调节葡糖脑苷脂酶活性的用途
WO2017004405A1 (en) * 2015-07-01 2017-01-05 Northwestern University Substituted quinazoline compounds and uses thereof for modulating glucocerebrosidase activity
AR107483A1 (es) 2016-01-29 2018-05-02 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Conjugado de enzimas terapéuticas
JP6940515B2 (ja) * 2016-03-25 2021-09-29 ジェンザイム・コーポレーション タンパク質症のバイオマーカーおよびその使用
EP3318277A1 (en) 2016-11-04 2018-05-09 Institut du Cerveau et de la Moelle Epiniere-ICM Inhibitors of glucosylceramide synthase for the treatment of motor neuron diseases
CA3043709A1 (en) 2016-11-14 2018-05-17 Berg Llc Methods for treating parkinson's disease
CA3047700A1 (en) 2016-12-28 2018-07-05 Minoryx Therapeutics S.L. Isoquinoline compounds, methods for their preparation, and therapeutic uses thereof in conditions associated with the alteration of the activity of beta galactosidase
WO2018122775A1 (en) 2016-12-29 2018-07-05 Minoryx Therapeutics S.L. Heteroaryl compounds and their use
CN108341822B (zh) * 2017-01-23 2021-04-16 广州市恒诺康医药科技有限公司 Fxr受体调节剂及其制备方法和应用
WO2019099294A1 (en) * 2017-11-14 2019-05-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel substituted biaryl compounds as indoleamine 2,3-dioxygenase (ido) inhibitors
EP3728265A1 (en) 2017-12-21 2020-10-28 BIAL - BioTech Investments, Inc. Crystalline substituted cyclohexyl pyrazolo[1,5-a]pyrimidinyl carboxamide compound and therapeutic uses thereof
US11459325B2 (en) 2018-01-31 2022-10-04 Takeda Pharmaceutical Company Limited Heterocyclic compound
US10519157B2 (en) * 2018-02-09 2019-12-31 X-Cutag Therapeutics, Inc. Deuterated compounds for treating Fabry, Gaucher, Parkinson's and related diseases and conditions, and compositions and methods thereof
KR102233530B1 (ko) * 2018-11-22 2021-03-31 (주)프로스테믹스 엑소좀 및 이의 다양한 용도
KR102342902B1 (ko) * 2018-11-22 2021-12-24 (주)프로스테믹스 엑소좀 및 이의 다양한 용도
KR102342901B1 (ko) * 2018-11-22 2021-12-24 (주)프로스테믹스 엑소좀 및 이의 다양한 용도
SG11202107844UA (en) * 2019-02-04 2021-08-30 Genzyme Corp Methods for treating symptoms and disorders associated with lysosomal storage diseases
PL3920912T3 (pl) 2019-02-04 2025-11-12 Genzyme Corporation Leczenie ciliopatii przy użyciu inhibitorów syntazy glukozyloceramidowej (gcs)
WO2020193746A1 (en) 2019-03-28 2020-10-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for predicting the survival of patients suffering from melanoma
US20220274982A1 (en) * 2019-07-29 2022-09-01 Takeda Pharmaceutical Company Limited Heterocyclic compound
JP7698320B2 (ja) 2019-10-23 2025-06-25 ザ・リージェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・ミシガン グルコシルセラミドシンターゼ阻害剤およびそれを使用する治療方法
US20230002379A1 (en) * 2019-11-15 2023-01-05 Yuhan Corporation Novel derivatives having 2,3-dihydro-1h-indene or 2,3-dihydrobenzofuran moiety or pharmaceutically acceptable salt thereof and pharmaceutical compositions comprising the same
JP7636409B2 (ja) * 2019-11-15 2025-02-26 ユーハン・コーポレイション １，２，３，４－テトラヒドロナフタレン基を有する新規な誘導体またはその薬学的に許容可能な塩及びこれらを含む医薬組成物
WO2021105908A1 (en) 2019-11-25 2021-06-03 Gain Therapeutics Sa Heteroaryl compounds and therapeutic uses thereof in conditions associated with the alteration of the activity of beta-glucocerebrosidase
US20230058312A1 (en) 2019-11-25 2023-02-23 Gain Therapeutics Sa Aryl and heteroaryl compounds, and therapeutic uses thereof in conditions associated with the alteration of the activity of galactocerebrosidase
JP2023512281A (ja) 2020-02-03 2023-03-24 ゲイン セラピューティクス エスアー Ｍｐｓ１を処置するための併用療法
CN115427038A (zh) 2020-02-03 2022-12-02 建新公司 治疗与溶酶体贮积病相关的神经系统症状的方法
WO2021214771A1 (en) 2020-04-23 2021-10-28 The Israel Institute of Biological Research (IIBR) Glucosylceramide synthase inhibitors for prevention and treatment of viral diseases
EP4142878B1 (en) 2020-04-28 2024-06-26 The Regents of The University of Michigan Pyridine inhibitors of glucosylceramide synthase and therapeutic methods using the same
AU2021311131A1 (en) 2020-07-24 2023-03-23 Genzyme Corporation Pharmaceutical compositions comprising venglustat
IL300096A (en) * 2020-07-30 2023-03-01 Genzyme Corp Methods for reducing the concentration of glycosphingolipids in the brain tissue and methods for treating neurodegenerative diseases associated with it
CA3216293A1 (en) * 2021-05-11 2022-11-17 Dong-Hoon Kim Novel compounds having inhibitory activity against glucosylceramide synthase or pharmaceutically acceptable salt thereof, processes for preparing the same, and pharmaceutical compositions comprising the sam
WO2023042177A1 (en) 2021-09-20 2023-03-23 Gt Gain Therapeutics Sa Enantiomers of 5-((7-chloroisoquinolin-1-yl)amino)-n-(6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-2-yl)picolinamide
WO2023239892A1 (en) * 2022-06-10 2023-12-14 Arkuda Therapeutics Compounds for modulation of cd68 and uses thereof
CA3268132A1 (en) * 2022-10-24 2024-05-02 Yuhan Corporation NEW DIMETHYL-2,3-DIHYDRO-1H-INDENE DERIVATIVE SALT AND ITS PREPARATION PROCESSES
AU2023368362A1 (en) * 2022-10-24 2025-03-20 Green Cross Corporation Improved processes for preparing dimethyl-2,3-dihydro-1h-indene derivatives
IL321165A (en) 2022-12-01 2025-07-01 Genzyme Corp Vanglustat in combination with a strong or moderate CYP3A4 inhibitor
AU2023418678A1 (en) 2022-12-30 2025-07-17 Gt Gain Therapeutics Sa Method of treating tauopathies
WO2025094117A1 (en) 2023-11-02 2025-05-08 Gt Gain Therapeutics Sa Substituted indolyl compounds, compositions thereof, and therapeutic uses thereof
KR20250117295A (ko) * 2024-01-26 2025-08-04 주식회사유한양행 고셔병의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물
WO2025215582A1 (en) 2024-04-11 2025-10-16 Gt Gain Therapeutics Sa Substituted pyrazolopyridine and pyrazolopyrimidine compounds and their use
WO2025219952A1 (en) 2024-04-19 2025-10-23 Genzyme Corporation Venglustat for use in methods for reducing disease related biomarker levels in patients with ganglioside storage disorders
WO2025219951A1 (en) 2024-04-19 2025-10-23 Genzyme Corporation Venglustat for use in methods for reducing disease related biomarker levels in patients with ganglioside storage disorders
CN118496159B (zh) * 2024-07-18 2024-09-24 广州医科大学附属市八医院 一种化合物在制备具有预防和/或治疗肝纤维化作用的药物中的应用

Family Cites Families (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BE640616A (sr) 1962-12-19
US3492397A (en) 1967-04-07 1970-01-27 Warner Lambert Pharmaceutical Sustained release dosage in the pellet form and process thereof
US4060598A (en) 1967-06-28 1977-11-29 Boehringer Mannheim G.M.B.H. Tablets coated with aqueous resin dispersions
US3538214A (en) 1969-04-22 1970-11-03 Merck & Co Inc Controlled release medicinal tablets
US4173626A (en) 1978-12-11 1979-11-06 Merck & Co., Inc. Sustained release indomethacin
BR8707474A (pt) * 1986-10-03 1988-09-13 Micro Motion Inc Medidor de velocidade de fluxo de massa de coriolis de densidade insensivel
IE63474B1 (en) 1987-12-24 1995-04-19 Wyeth John & Brother Ltd Heterocyclic compounds
US5549892A (en) 1988-12-23 1996-08-27 Genzyme Corporation Enhanced in vivo uptake of glucocerebrosidase
US5236838A (en) 1988-12-23 1993-08-17 Genzyme Corporation Enzymatically active recombinant glucocerebrosidase
IT1228293B (it) * 1989-02-06 1991-06-07 Angeli Inst Spa Benzoderivati di composti eterociclici contenenti azoto.
US5272071A (en) 1989-12-22 1993-12-21 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Method for the modification of the expression characteristics of an endogenous gene of a given cell line
US5968502A (en) 1991-11-05 1999-10-19 Transkaryotic Therapies, Inc. Protein production and protein delivery
KR970701174A (ko) * 1994-02-10 1997-03-17 오노다 마사요시 신규한 카바메이트 유도체 및 이의 의약 조성물(Novel carbamate derivative and medicinal composition containing the same)
JPH08198751A (ja) * 1995-01-19 1996-08-06 Yamanouchi Pharmaceut Co Ltd カルバメート誘導体
WO1997017348A1 (en) * 1995-11-08 1997-05-15 American Home Products Corporation 1-azabicycloheptane derivatives and their pharmaceutical use
EP2147681A1 (en) 1997-10-29 2010-01-27 Genzyme Corporation Compositions and methods for treating lysosomal storage disease
US6953855B2 (en) * 1998-12-11 2005-10-11 Targacept, Inc. 3-substituted-2(arylalkyl)-1-azabicycloalkanes and methods of use thereof
FR2791678B1 (fr) * 1999-03-30 2001-05-04 Synthelabo Derives de 1,4-diazabicyclo [3.2.2] nonane-4-carboxylates et -carboxamides, leur preparation et leur application en therapeutique
GB0010955D0 (en) * 2000-05-05 2000-06-28 Novartis Ag Organic compounds
AU2002228015B2 (en) * 2000-12-22 2007-08-23 Almirall, S.A. Quinuclidine carbamate derivatives and their use as M3 antagonists
EP1231212B1 (en) * 2001-02-06 2006-12-20 Pfizer Products Inc. Pharmaceutical compositions for the treatment of disorders of the CNS and other disorders
JP2003267977A (ja) * 2002-03-14 2003-09-25 Yamanouchi Pharmaceut Co Ltd キヌクリジン誘導体
ES2203327B1 (es) * 2002-06-21 2005-06-16 Almirall Prodesfarma, S.A. Nuevos carbamatos de quinuclidina y composiciones farmaceuticas que los contienen.
CA2492404C (en) * 2002-07-17 2012-02-07 Oxford Glycosciences (Uk) Ltd Piperidinetriol derivatives as inhibitors of glycosylceramide synthase
JPWO2004011430A1 (ja) 2002-07-25 2005-11-24 アステラス製薬株式会社 ナトリウムチャネル阻害剤
SE0202598D0 (sv) * 2002-09-02 2002-09-02 Astrazeneca Ab Alpha-7 Nicotinic receptor agonists and statins in combination
CN102657651A (zh) * 2002-12-06 2012-09-12 范因斯坦医学研究院 用α 7受体结合胆碱能激动剂抑制炎症
GB0400812D0 (en) 2004-01-14 2004-02-18 Celltech R&D Ltd Novel compounds
JP2007186422A (ja) 2004-01-28 2007-07-26 Astellas Pharma Inc アリールスルフィド誘導体
AU2005258274A1 (en) * 2004-06-23 2006-01-05 The Feinstein For Medical Research Method of treating ileus by pharmacological activation of cholinergic receptors
US8003617B2 (en) 2004-11-10 2011-08-23 Genzyme Corporation Methods of treating diabetes mellitus
US20090318491A1 (en) * 2006-01-27 2009-12-24 Yale Univeristy Cytisine and Acetylcholine Analogs and Methods of Treating Mood Disorders
US7840109B2 (en) * 2006-08-14 2010-11-23 Adc Telecommunications, Inc. Factory spliced cable assembly
GB2466912B (en) * 2007-11-29 2012-01-04 Hospital For Sick Children Compositions and methods for treating lysosomal disorders
JP2011507910A (ja) * 2007-12-21 2011-03-10 ユニバーシティー オブ ロチェスター 真核生物の寿命を変更するための方法
JP2011529500A (ja) * 2008-07-28 2011-12-08 ジェンザイム コーポレーション 虚脱性糸球体症および他の糸球体疾患の処置のためのグルコシルセラミドシンターゼ阻害
WO2010015816A2 (en) * 2008-08-06 2010-02-11 Summit Corporation Plc Treatment of lysosomal storage disorders and other proteostatic diseases
EP2154136A1 (en) * 2008-08-08 2010-02-17 CHIESI FARMACEUTICI S.p.A. Quinuclidine carbonate derivatives and medicinal compositions thereof
WO2010091164A1 (en) * 2009-02-06 2010-08-12 Exelixis, Inc. Inhibitors of glucosylceramide synthase
WO2010091104A1 (en) * 2009-02-06 2010-08-12 Exelixis, Inc. Glucosylceramide synthase inhibitors
US20100242354A1 (en) * 2009-06-09 2010-09-30 Sundrop Fuels, Inc. Systems and methods for reactor chemistry and control
PL2470199T3 (pl) 2009-08-28 2019-11-29 Icahn School Med Mount Sinai Enzymatyczna terapia zastępcza ze zwiększaniem dawki do leczenia niedoboru kwaśnej sfingomielinazy
UA118248C2 (uk) * 2011-03-18 2018-12-26 Джензім Корпорейшн Інгібітори глюкозилцерамідсинтази

Also Published As

Publication number Publication date
WO2012129084A3 (en) 2014-04-24
MX368340B (es) 2019-09-30
US9139580B2 (en) 2015-09-22
UA118248C2 (uk) 2018-12-26
KR101987736B1 (ko) 2019-06-11
US20140371460A1 (en) 2014-12-18
PT3673906T (pt) 2025-07-29
WO2012129084A2 (en) 2012-09-27
DK2685986T3 (da) 2020-03-02
AR085425A1 (es) 2013-10-02
RU2013146550A (ru) 2015-04-27
HRP20250907T1 (hr) 2025-09-26
FI3673906T3 (fi) 2025-08-14
DOP2013000209A (es) 2014-04-15
KR20140092239A (ko) 2014-07-23
CN103917094B (zh) 2016-11-09
CA2830540A1 (en) 2012-09-27
AU2012231275A1 (en) 2013-10-17
IL228514A0 (en) 2013-12-31
UY33958A (es) 2012-10-31
GT201300215A (es) 2015-02-09
PE20140412A1 (es) 2014-04-01
TWI634119B (zh) 2018-09-01
BR112013023774B1 (pt) 2022-01-11
CL2013002688A1 (es) 2014-03-07
ES3037907T3 (en) 2025-10-08
DK3673906T3 (da) 2025-08-18
EP3673906B1 (en) 2025-05-14
HRP20200226T1 (hr) 2020-05-29
AU2016244305A1 (en) 2016-11-03
HUE047888T2 (hu) 2020-05-28
EP2685986A4 (en) 2015-03-04
RS67073B1 (sr) 2025-08-29
CO6801749A2 (es) 2013-11-29
JP6117708B2 (ja) 2017-04-19
US20160207933A1 (en) 2016-07-21
US20210261557A1 (en) 2021-08-26
PH12013501944A1 (en) 2013-10-14
NI201300083A (es) 2014-02-28
NZ615857A (en) 2016-08-26
PL2685986T3 (pl) 2020-07-27
MX2019008428A (es) 2019-10-30
JP2017141255A (ja) 2017-08-17
CA2830540C (en) 2021-04-27
JP2014517808A (ja) 2014-07-24
TWI546301B (zh) 2016-08-21
MX2013010710A (es) 2013-10-17
EP4559918A3 (en) 2025-11-19
ZA201307016B (en) 2014-05-28
JP6420860B2 (ja) 2018-11-07
SI2685986T1 (sl) 2020-03-31
CN107080747A (zh) 2017-08-22
BR122019017719B1 (pt) 2022-08-23
US20200048266A1 (en) 2020-02-13
US9126993B2 (en) 2015-09-08
TW201300383A (zh) 2013-01-01
PL3673906T3 (pl) 2025-09-22
CN107080747B (zh) 2021-02-26
ECSP13012978A (es) 2015-04-30
MA35023B1 (fr) 2014-04-03
RU2018104472A3 (sr) 2021-04-30
AU2016244305B2 (en) 2018-05-24
CN103917094A (zh) 2014-07-09
CR20190034A (es) 2019-05-20
RU2645675C2 (ru) 2018-02-27
EP3673906A1 (en) 2020-07-01
HUE072576T2 (hu) 2025-11-28
ES2774293T3 (es) 2020-07-20
EP2685986A2 (en) 2014-01-22
US20140255381A1 (en) 2014-09-11
EP2685986B1 (en) 2019-11-27
EP4559918A2 (en) 2025-05-28
IL228514B (en) 2019-09-26
MY173998A (en) 2020-03-03
LT3673906T (lt) 2025-08-11
BR112013023774A2 (pt) 2016-12-06
PT2685986T (pt) 2020-03-05
SI3673906T1 (sl) 2025-09-30
MX365245B (es) 2019-05-28
TW201716404A (zh) 2017-05-16
LT2685986T (lt) 2020-03-10
RU2018104472A (ru) 2019-02-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20210261557A1 (en) Glucosylceramide synthase inhibitors
US12060349B2 (en) Glucosylceramide synthase inhibitors
HK40033123B (en) Glucosylceramide synthase inhibitors
HK40033123A (en) Glucosylceramide synthase inhibitors
SG193532A1 (en) Glucosylceramide synthase inhibitors
OA16599A (en) Glucosylceramide synthase inhibitors.
NZ615857B2 (en) Glucosylceramide synthase inhibitors