[go: up one dir, main page]

RS56678B1 - Hemijska jedinjenja - Google Patents

Hemijska jedinjenja

Info

Publication number
RS56678B1
RS56678B1 RS20171304A RSP20171304A RS56678B1 RS 56678 B1 RS56678 B1 RS 56678B1 RS 20171304 A RS20171304 A RS 20171304A RS P20171304 A RSP20171304 A RS P20171304A RS 56678 B1 RS56678 B1 RS 56678B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
methyl
fluoro
indol
pyrido
phenyl
Prior art date
Application number
RS20171304A
Other languages
English (en)
Inventor
Nadim Akhtar
Robert Hugh Bradbury
David Buttar
Gordon Stuart Currie
Savi Christopher De
Craig Samuel Donald
Richard Albert Norman
Matthew Osborne
Alfred Arthur Rabow
Heather Marie Redfearn
Helen Elizabeth Williams
Neda Yavari
Original Assignee
Astrazeneca Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Astrazeneca Ab filed Critical Astrazeneca Ab
Publication of RS56678B1 publication Critical patent/RS56678B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C57/00—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C57/02—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms with only carbon-to-carbon double bonds as unsaturation
    • C07C57/13—Dicarboxylic acids
    • C07C57/145—Maleic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/07—Optical isomers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)

Description

Opis
[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na određene nove derivate indola, ili na njihove farmaceutski-prihvatljive soli, koji poseduju anti-tumorsku aktivnost pa su prema tome potencijalno korisni u postupcima za tretman ljudskog ili životinjskog tela. Ovaj pronalazak takođe se odnosi na proces za proizvodnju pomenutih derivata indola, na farmaceutske kompozicije koje ih sadrže i na upotrebu u terapeutskim postupcima, na primer u proizvodnji medikamenata za upotrebu u prevenciji ili tretmanu raznih tipova raka kod toplo-krvnih životinja poput čoveka, uključujući upotrebu u prevenciji ili tretmanu raka.
[0002] Ovaj pronalazak takođe se odnosi na derivate indola koji su selektivni negativniregulatori estrogenskog receptora.
[0003] Estrogenski receptor alfa (ERα, ESR1, NR3A) i estrogenski receptor beta (ERβ, ESR2, NR3b) su receptori za steroidne hormone koji su članovi veće porodice jedrinih receptora. Strukturno sličan sa svim jedrinim receptorima, ER se sastoji od šest funkcionalnih domena (nazvanih A-F) (Dahlman-Wright, et al., Pharmacol. Rev., 2006, 58:773-781), a klasifikovan je kao ligand-zavisan transkripcioni faktor zbog toga šta nakon njegova spajanja sa specifičnim ligandom, ženskim polnim steroidnim hormonom 17b estradiol (E2), nastaje kompleks koji se veže na genomske sekvence, nazvane estrogenski receptorski elementi (ERE), i reaguje sa koregulatorima kako bi modulirao transkripciju ciljanih gena. ERα gen je lociran na 6q25.1, a kodira belančevinu od 595AA pri čemu su moguće multiple izoforme usled alternativnog splajsovanja i početnih mesta za translaciju. Osim domena koji veže DNA (Domen C) i domena koji veže ligand (Domen E), receptor sadrži N-terminalni (A/B) domen, domen šarke (D) koji spaja domene C i E i C-terminalno produženje (F domen). Dok su domeni C i E iz ERa i ERb veoma konzervisani (96% i 55% amino-kiselinska identičnost), konzervisanost domena A/B, D i F je slaba (ispod 30% amino-kiselinske identičnosti). Oba receptora su uključena u regulisanju i razvoju ženskog reproduktivnog trakta, a dodatno igraju uloge u centralnom nervnom sistemu, kardiovaskularnom sistemu i u metabolizmu kostiju. Genomsko delovanje ER-ova nastupa u jedru ćelije gde se pomenuti receptori ERE vežu direktno (direktno aktivisanje ili klasičan put) ili indirektno (indirektno aktivisanje ili ne-klasičan put). U odsutnosti liganda, ER-i su povezani sa belančevinama toplotnog šoka, Hsp90 i Hsp70, dok pripadajuća šaperonska mašinerija stabilizuje domen koji veže ligand (LBD) koje ga čini dostupnim samom ligandu. ER sa ligandom disocira sa belančevina toplotnog šoka koje dovodi do konformacione promene receptora koje dozvoljava dimerizaciju, vezanje DNA, interakciju sa ko-aktivatorima ili ko-represorima i modulaciju ekspresije ciljanog gena. Kod ne-klasičnog puta, AP-1 i Sp-1 su alternativne regulacione DNA sekvence koje mogu da koriste obe izoforme receptora kako bi modulirali ekspresiju gena. U ovom primeru, ER ne reaguje direktno sa DNA već preko asocijacije sa nekim transkripcionim faktorima koji su vezani na DNA, na primer, c-Jun ili c-Fos (Kushner et al., Pure Applied Chemistry 2003, 75:1757-1769). Precizan mehanizam u kojem ER deluje na gensku transkripciju je slabo shvaćen, ali se čini da je posredovan uz pomoć brojnih jedrinih faktora koje regrutira receptor koji je vezan na DNA. Regrutiranje ko-regulatora primarno je posredovano uz pomoć dve proteinske površine, AF2 i AF1, koje su locirane u E-domenu i A/B domenu. AF1 je regulisan sa faktorima rasta, a njegova aktivnost zavisi o ćelijskoj i promotorskoj okolini dok je aktivnost AF2 potpuno zavisna o vezanju liganda. Mada oba pomenuta domena mogu da deluju nezavisno, maksimalna transkripciona aktivnost ER se postiže uz pomoć sinergije preko pomenuta dva domena (Tzukerman, et al., Mol. Endocrinology, 1994, 8:21-30). Mada se ER-ovi smatraju transkripcionim faktorima, pomenuti takođe mogu da deluju preko ne-genomskih mehanizama kao šta može da se vidi preko brzih ER-efekata u tkivima nakon administriranja E2 (na vremenskoj skali) za koje se smatra da su prebrzi da bi predstavljali genomski efekat. Još uvek nije jasno da li su receptori, koji su odgovorni za brze akcije estrogena, isti oni nuklearni ER-i ili se radi o različitim steroidnim receptorima na koje je spojena G-belančevina (Warner, et al., Steroids 200671:91-95), ali je identifikovan rastući broj putova koje indukuje E2, na primer, MAPK/ERK-put i aktivisanje puta endotelijalne sintaze azotnog oksida i PI3K/Akt-puta. Osim putova koji su zavisni o ligandu, za ERα se zna da poseduje aktivnost koja je nezavisna o ligandu preko AF-1 koji je povezan sa stimuliranjem MAPK preko signaliziranja faktora rasta, na primer, faktora rasta 1 koji je sličan insulinu (IGF-1) i epidermalnog faktora rasta (EGF). Aktivnost AF-1 je zavisna o fosforilaciji Ser118, a jedan primer unakrsne-komunikacije između ER i signaliziranja faktora rasta je fosforilacija Ser 118 uz pomoć MAPK kao odgovor na faktore rasta poput IGF-1 i EGF (Kato, et al., Science, 1995, 270:1491-1494).
[0004] Veliki broj strukturno različitih jedinjenja može da se veže na ER. Neka jedinjenja, poput endogenog liganda E2, deluju kao receptorski agonisti dok druga kompetitivno inhibiraju vezanje E2 i deluju kao receptorski antagonisti. Ova jedinjenja mogu da se podele u 2 klase u zavisnosti o njihovim funkcionalnim efektima. Selektivni modulatori estrogenskih receptora (SERM), poput tamoksifenena, imaju sposobnost da deluju kao receptorski agonisti i antagonisti u zavisnosti o ćelijskom i promotorskom kontekstu kao i ciljane ER izoforme. Na primer, tamoksifen deluje kao antagonist u mlečnim žlezdama, ali kao delomični agonist u kostima, kardiovaskularnom sistemu i materici. Svi SERM se čini da deluju kao AF2 antagonisti, a svoje delimične agonističke karakteristike ostvaruju preko AF1. Druga grupa, iz koje je primer fulvestrant, je klasifikovana kao puni antagonisti koji su sposobni da blokiraju estrogensku aktivnost preko kompletne inhibicije AF1 i AF2 domena uz pomoć indukovanja jedinstvene konformacione promene u domenu koji veže ligand (LBD) nakon vezanja jedinjenja koje rezultuje potpunom ukidanjem interakcije između heliksa 12 i ostatka LBD, koje blokira regrutiranje ko-faktora (Wakeling, et al., Cancer Res., 1991, 51:3867-3873; Pike, et al., Structure, 2001, 9:145-153).
[0005] Intraćelijski nivoi ERα su negativno-regulisani u prisutnosti E2 preko puta ubikvitin/proteosom (Ub/26S). Poliubikvitilacija ERα, koji nosi ligand, je katalizovana uz pomoć najmanje tri encima; ubikvitin koji je aktivisan uz pomoć encima koji aktiviše ubikvitin E1 je konjugiran uz pomoć E2 sa ostacima lizina preko izopeptidne veze sa E3 ubikvitinskom ligazom, a poliubikvitinirani ERα je tada usmeren u proteosom radi degradacije. Mada su ER-zavisno transkripciono regulisanje i proteosom-posredovana degradacija ER povezani (Lonard, et al., Mol. Cell, 2000 5:939-948), sama transkripcija nije potrebna za ERα degradaciju, a sastavljanje kompleksa za inicijaciju transkripcijskog kompleksa je dovoljno da se cilja ERα za jedrinu proteosomalnu degradaciju. Ovaj proces E2-indukovane degradacije se varuje da je neophodan zbog svoje sposobnosti da brzo aktiviše transkripciju kao odgovor na potrebe za ćelijskom proliferacijom, diferencijacijom i metabolizmom (Stenoien, et al., Mol. Cell Biol., 2001, 21:4404-4412). Fulvestrant je takođe klasifikovan kao selektivni negativni-regulator estrogenskog receptora (SERD), podgrupa antagonista koji takođe indukuju brzu negativnuregulaciju ERα preko 26S proteosomalnog puta. Suprotno od SERM, takav tamoksifen može da poveća nivoe ERα mada je efekt na transkripciju sličan onom koji se vidi i kod SERD.
[0006] Približno 70% tumora dojke eksprimira ER i/ili progesteronske receptore koje govori o hormonskoj zavisnosti ovih tumorskih ćelija. Za druge tipove raka, poput raka jajnika i endometrijuma, se takođe smatra da su zavisni o ERα-signaliziranju. Terapije za takve pacijente mogu da inhibiraju ER-signaliziranje uz pomoć vezanja antagonističkog liganda na ER, na primer uz pomoć tamoksifena, koji se koristi za tretman ranih i naprednih ER-pozitivnih tumora dojke pre i posle menopauze; antagonizovanja i negativnog-regulisanja ERα, na primer uz pomoć fulvestranta, koji se koristi za tretman tumora dojke žena koji je napredovao unatoč terapije sa tamoksifenom ili inhibitorima aromataze; ili blokiranja sinteze estrogena, na primer uz pomoć inhibitora aromataze, koji se koriste kod tretmana ranih i naprednih ER-pozitivnih tumora dojke. Mada ove terapije imaju izuzetno pozitivan impakt u tretmanu raka dojke, značajan broj pacijenata, kod kojih tumori eksprimiraju ER, pokazuje de novo rezistenciju na postojeće ER-terapije ili razvijaju rezistenciju na pomenute terapije tokom vremena. Opisano je nekoliko odvojenih mehanizama koji objašnjavaju rezistenciju na početnu terapiju sa tamoksifenom, a uglavnom razmatraju promenu pri kojoj delovanje tamoksifena od antagonističkog postaje agonističko usled nižeg afiniteta nekih ko-faktora koji vežu kompleks tamoksifen-ERα koje nastupa zbog prekomerne ekspresije pomenutih ko-faktora ili usled formiranja sekundarnih mesta koje olakšava interakciju pomenutog kompleksa tamoksifen-ERα sa ko-faktorima koji se normalno ne vežu na pomenuti kompleks. Rezistencija može, prema time, da se pojavi kao rezultat prekomerne pojave ćelija koje eksprimiraju specifične ko-faktore koji utiču na aktivnost kompleksa tamoksifen-ERα. Takođe postoji mogućnost da drugi signalni putevi za faktore rasta direktno aktivišu ER-receptor ili ko-aktivatore koji utiču na ćelijsku proliferaciju nezavisno o signaliziranju preko liganada.
[0007] Nedavno su bile identifikovane mutacije u ESR1 za koje se veruje da mogu da budu mogući mehanizam za rezistenciju kod metastatskih tumorskih primeraka iz ER-pozitivne pacijentice i kod modela ksenografa izvedenih iz pacijenata (PDX) pri čemu frekvencije pomenutih mutacija variraju od 17-25%. Ove mutacije se nalaze predominantno, ali ne ekskluzivno, u domenu koji veže ligand koje daje mutirane funkcionalne belančevine; primeri amino-kiselinskih promena uključuju Ser463Pro, Val543Glu, Leu536Arg, Tyr537Ser, Tyr537Asn i Asp538Gly, sa promenama u amino-kiselinama 537 i 538 na koje otpada glavnina trenutno opisanih promena. Ove mutacije nisu bile prethodno detektovane kada se govori o genomima primeraka primarnih tumora dojke koji su pohranjeni u bazi Cancer Genome Atlas. Od 390 primeraka primarnih tumora dojke koji su bili pozitivni za ER-ekspresiju niti jedna mutacija nije bila detektovana u ESR1 (Cancer Genome Atlas Network, 2012 Nature 490: 61-70). Smatra se da su se mutacije u domenu za vezanje liganda pojavile kao rezistencijski odgovor na endokrine terapije sa inhibitorom aromataze jer pomenuti mutirani receptori pokazuju bazalnu transkripcionu aktivnost u odsutnosti estradiola. Kristalna struktura ER, koji je mutiran u amino-kiselinama 537 i 538, pokazuje da obe mutacije favorizuju agonističku konformaciju ER promenom pozicije heliksa 12 koje omogućava regrutiranje ka-aktivatora čime se imitira agonistički aktivisani ER divljeg tipa. Objavljeni podaci su pokazali da se endokrine terapije poput tamoksifena i fulvestranta još uvek mogu vezati na mutirani ER čime inhibiraju transkripcionu aktivnost do neke mere pri čemu je fulvestrant sposoban da razgradi Try537Ser, ali da su verovatno potrebne veće doze za potpunu inhibiciju receptora (Toy et al., Nat. Genetics 2013, 45: 1439-1445; Robinson et al., Nat. Genetics 2013, 45: 144601451; Li, S. et al. Cell Rep. 4, 1116-1130 (2013). Prema tome, moguće je da su određena jedinjenja sa formulom (I), ili neke njihove farmaceutski-prihvatljive soli, sposobna da negativno-regulišu i da antagonizuju mutirani ER mada još nije poznato da li su ESR1 mutacije povezane sa promenjenim kliničkim ishodom. Dokument WO 2005/070930 takođe opisuje jedinjenja korisna za tretman raka. Bez obzira koji je mehanizam ili kombinacija mehanizama rezistencije posredi, mnogi se i dalje oslanjaju na ER-zavisna delovanja, a odstranjivanje receptora preko SERD-mehanizma nudi najbolji način odstranjivanja ERα-receptora iz ćelija. Fulvestrant je trenutno jedini SERD koji je odobren za kliničku upotrebu, ali unatoč njegovih mehanističkih karakteristika, farmakološke karakteristike samog leka ograničavaju njegovu efikasnost zbog trenutnog ograničenja od 500 mg za mesečnu dozu koje rezultuje prometom receptora (turnover of the receptor) koji je manji od 50% upoređeno između primeraka iz pacijentica sa potpuno negativno-regulisanim receptorom koje se primećuje kod in vitro eksperimenata sa ćelijskim linijama raka dojke (Wardell, et al., Biochem. Pharm., 2011, 82:122-130). Tako, postoji potreba za novim agensima koji ciljaju ER, koji će imati potrebne farmaceutske karakteristike i SERD-mehanizam kako bi pokazali povećanu korist kod ranih, metastatskih i stečenih okvira rezistencije.
[0008] Pronađeno je da jedinjenja iz ovoga pronalaska poseduju snažnu anti-tumorsku aktivnost, koje ih čini korisnima kod inhibiranja nekontrolisane ćelijske proliferacije koja se pojavljuje kod maligne bolesti. Jedinjenja iz ovoga pronalaska obezbeđuju anti-tumorski efekt tako da, kao minimum, deluju kao SERD-agensi.
[0009] U skladu sa jednim aspektom ovoga pronalaska obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so
pri čemu:
R<1>i R<2>, svaki nezavisno, su H ili F;
R<3>je H ili metil;
ili:
a) R<4>je H, a R<5>je F; ili
b) R<4>je F, a R<5>je H.
[0010] U drugom aspektu ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa Formulom (I) kao šta je definisano iznad.
[0011] Jedinjenja sa formulom (I) imaju jedan, dva ili tri hiralna centara, a ovaj pronalazak obuhvata čiste hiralne forme ili njihove smeše u bilo kojem omeru. Sinteza optički aktivnih forma može da se provede primenom standardnih tehnika organske hemije koje su poznate stanju tehnike, na primer uz pomoć sinteze iz optički aktivnih početnih materijala ili uz pomoć rezolucije racemske forme. Slično, malopre pomenuta aktivnost može da se proceni uz pomoć standardnih laboratorijskih tehnika.
[0012] Neki određeni enantiomer ili diasteroeizomer nekog ovde opisanog jedinjenja može da bude aktivniji od drugih enantiomera ili diastereoizomera istog jedinjenja.
[0013] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, koje je pojedinačni enantiomer u enantiomernom višku (%ee) od ≥95, ≥98% ili ≥99%. Prikladno, pomenuti pojedinačni enantiomer može da bude prisutan u enantiomernom višku (%ee) od ≥99%.
[0014] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje sa Formulom (I) koje je pojedinačni enantiomer u enantiomernom višku (%ee) od ≥95, ≥98% ili ≥99% ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so, zajedno sa nekim farmaceutski-prihvatljivim razređivačem ili nosiocem. Prikladno, pomenuti pojedinačni enantiomer je prisutan u enantiomernom višku (%ee) od ≥99%.
[0015] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, koje je pojedinačni diastereoizomer u diastereomernom višku (%de) od ≥95, ≥98% ili ≥99%. Prikladno, pomenuti pojedinačni diastereoizomer je prisutan u diastereomernom višku (%de) od ≥99%.
[0016] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje sa Formulom (I) koje je pojedinačni diastereoizomer u diastereomernom višku (%de) od ≥95, ≥98% ili ≥99% ili neku njegovu farmaceutskiprihvatljivu so, zajedno sa nekim farmaceutski-prihvatljivim razređivačem ili nosiocem. Prikladno, pomenuti pojedinačni diastereoizomer je prisutan u diastereomernom višku (%de) od ≥99%.
[0017] U jednom naročitom aspektu, jedinjenje sa Formulom (I) je jedinjenje sa Formulom (IA):
[0018] U drugom aspektu, jedinjenje sa Formulom (I) je jedinjenje sa Formulom (IB):
[0019] Pozivanje na jedinjenja sa Formulom (I) treba da se razume kao referiranje na jedinjenja sa Formulom (IA) i/ili (IB) osim ako je drugačije navedeno.
[0020] Na primer, jedinjenje iz Primera 1, (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina, je primer jedinjenja sa Formulom (IA).
[0021] Njegov izomer, (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1S,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina, je primer jedinjenja sa Formulom (IB).
[0022] Oba pomenuta izomera su primeri za (E)-3-(3,5-difluoro-4-((3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilnu kiselinu, koja je primer jedinjenja sa Formulom (I).
[0023] Neka jedinjenja sa Formulom (I) mogu da dolaze kao kristali pri čemu mogu da zauzimaju više od jedne kristalne forme. Treba da se razume da ovaj pronalazak obuhvata bilo koju kristalnu ili amorfnu formu, ili njihove smeše, pri čemu pomenuta forma poseduje karakteristike koje su korisne za SERD-aktivnost, i pri čemu su stanju tehnike veoma dobro poznati načini za određivanje efikasnost neke kristalne ili amorfne forme za SERD-aktivnost primenom standardnih testova koji su opisani u daljnjem tekstu.
[0024] Opšte je poznato da kristalni materijali mogu da se analizuju primenom konvencionalnih tehnika poput analize difrakcije X-zraka na prahu (nadalje XRPD), diferencijalne skening kalorimetrije (nadalje DSC), termalne gravimetrijske analize (nadalje TGA), spektroskopije Fourier-ove transformacije infracrvene difuzne refleksije (DRIFT) (Diffuse Reflectance Infrared Fourier Transform (DRIFT) spectroscopy), spektroskopije blizu infra-crvenog (NIR), spektroskopije nuklearne magnetne rezonance rastvora i/ili čvrstog stanja. Sadržaj vode takvih kristalnih materijala može da se odredi uz pomoć analize po Karl Fischeru.
[0025] Kao primer, jedinjenje iz Primera 7 može da bude kristalno, pri čemu je jedna kristalna forma identifikovana.
[0026] Prema tome, jedan dodatan aspekt ovoga pronalaska je Forma A (E)-3-(4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline (Primer 7).
[0027] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je kristalna forma, Forma A iz Primera 7 koja ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu sa najmanje jednim specifičnim šiljkom kod oko 2-teta = 4.5°.
[0028] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je kristalna forma, Forma A iz Primera 7 koja ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu sa najmanje jednim specifičnim šiljkom kod oko 2-teta = 10.8°.
[0029] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je kristalna forma, Forma A iz Primera 7 koja ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu sa najmanje dva specifična šiljka kod oko 2-teta = 4.5 i 10.8°.
1
[0030] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je kristalna forma, Forma A iz Primera 7 koja ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu sa specifičnim šiljcima kod oko 2-teta = 4.5, 4.8, 6.1, 7.9, 9.9, 10.8, 13.4, 14.0, 14.3 i 18.5°.
[0031] U skladu sa ovim pronalaskom obezbeđena je kristalna forma, Forma A iz Primera 7 koja ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu koji je znatno podjednak sa obrascem difrakcije X-zraka na prahu koji je prikazan na Slici 1.
[0032] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je kristalna forma, Forma A iz Primera 7 koja ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu sa najmanje jednim specifičnim šiljkom kod oko 2-teta = 4.5° plus ili minus 0.2° 2-teta.
[0033] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je kristalna forma, Forma A iz Primera 7 koja ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu sa najmanje jednim specifičnim šiljkom kod oko 2-teta = 10.8° plus ili minus 0.2° 2-teta.
[0034] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je kristalna forma, Forma A iz Primera 7 koja ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu sa najmanje dva specifična šiljka kod oko 2-teta = 4.5 i 10.8° plus ili minus 0.2° 2-teta.
[0035] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je kristalna forma, Forma A iz Primera 7 koja ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu sa specifičnim šiljcima kod oko 2-teta = 4.5, 4.8, 6.1, 7.9, 9.9, 10.8, 13.4, 14.0, 14.3 i 18.5° plus ili minus 0.2° 2-teta.
[0036] Nadalje, Primer 1 takođe pokazuje kristalnost.
[0037] U skladu sa ovim pronalaskom obezbeđena je kristalna forma, Forma B, (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline koja ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu sa najmanje jednim specifičnim šiljkom kod oko 2-teta = 8.4°.
[0038] U skladu sa ovim pronalaskom obezbeđena je kristalna forma, Forma B, (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline koja ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu sa najmanje jednim specifičnim šiljkom kod oko 2-teta = 10.9°.
[0039] U skladu sa ovim pronalaskom obezbeđena je kristalna forma, Forma B, (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline koja ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu sa najmanje dva specifična šiljka kod oko 2-teta = 8.4° i 10.9°.
[0040] U skladu sa ovim pronalaskom obezbeđena je kristalna forma, Forma B, (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline koja ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu sa specifičnim šiljcima kod oko 2-teta = 8.4, 10.9, 18.3, 24.0 i 14.0°.
[0041] U skladu sa ovim pronalaskom obezbeđena je kristalna forma, Forma B, (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline koja ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu sa specifičnim šiljcima kod oko 2-teta = 8.4, 10.9, 18.3, 24.0, 14.0, 19.0, 14.4, 13.0, 15.3, 20.6°.
[0042] U skladu sa ovim pronalaskom obezbeđena je kristalna forma, Forma B, (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline koja ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu sa znatno podjednakim obrascem difrakcije X-zraka na prahu kao i obrazac koji je prikazan na Slici 2.
[0043] U skladu sa ovim pronalaskom obezbeđena je kristalna forma, Forma B, (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline koja ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu sa najmanje jednim specifičnim šiljkom kod 2-teta = 8.4° plus ili minus 0.2° 2-teta.
[0044] U skladu sa ovim pronalaskom obezbeđena je kristalna forma, Forma B, (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline koja ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu sa najmanje jednim specifičnim šiljkom kod 2-teta = 10.9° plus ili minus 0.2° 2-teta.
[0045] U skladu sa ovim pronalaskom obezbeđena je kristalna forma, Forma B, (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline koja ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu sa najmanje dva specifična šiljka kod 2-teta = 8.4° i 10.9° pri čemu pomenute vrednosti mogu da variraju plus ili minus 0.2° 2-teta.
[0046] U skladu sa ovim pronalaskom obezbeđena je kristalna forma, Forma B, (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline koja ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu sa specifičnim šiljcima kod oko 2-teta = 8.4, 10.9, 18.3, 24.0 i 14.0° pri čemu pomenute vrednosti mogu da variraju plus ili minus 0.2° 2-teta.
[0047] U skladu sa ovim pronalaskom obezbeđena je kristalna forma, Forma B, (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline koja ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu sa specifičnim šiljcima kod 2-teta = 8.4, 10.9, 18.3, 24.0, 14.0, 19.0, 14.4, 13.0, 15.3, 20.6° pri čemu pomenute vrednosti mogu da variraju plus ili minus 0.2° 2-teta.
[0048] Kada se navodi da se ovaj pronalazak odnosi na kristalnu formu Primera 1, Formu B, stepen kristaliniteta je prikladno veći od oko 60%, bolje veći od oko 80%, preferirano veći od oko 90%, a još bolje veći od oko 95%. Najbolje, stepen kristaliniteta je veći od oko 98%.
[0049] Nadalje, kada se navodi da se ovaj pronalazak odnosi na kristalnu formu Primera 1, Formu B, pomenuti materijal je preferirano znatno oslobođen od drugih kristalnih forma ili amorfnog materijala. Pojam "znatno oslobođen" se odnosi na količinu prikladno veću oko 60%, bolje prikladno veću od oko 80%, preferirano veću od oko 90%, još bolje veću od oko 95%, a najbolje veću od oko 98% za pojedinačni polimorf.
[0050] Podrazumeva se da 2-teta vrednosti obrazaca difrakcije X-zraka na prahu mogu da blago variraju u zavisnosti o korištenom aparatu ili o korištenom primerku, pa prema tome navedene vrednosti ne treba da se smatraju apsolutnima.
[0051] Poznato je da obrazac difrakcije X-zraka na prahu može da sadrži jednu ili više pogrešaka merenja u zavisnosti o uslovima merenja (poput korišćene opreme ili samog
1
aparata). Naročito, opšte je poznato da intenziteti obrasca difrakcije X-zraka na prahu mogu da fluktuiraju u zavisnosti o uslovima merenja. Prema tome, podrazumeva se da kristalne forme iz ovoga pronalaska, osim ako je drugačije navedeno, nisu ograničene na kristale koji daju obrasce difrakcije X-zraka na prahu koji su identični sa obrascima difrakcije X-zraka na prahu koji su prikazani na odgovarajućim Slikama, pa tako bilo koji kristali koji imaju obrasce difrakcije X-zraka na prahu koji su znatno podjednaki sa onima koji su prikazani na Slikama spadaju u okvire ovoga pronalaska. Stručnjak za difrakciju X-zraka na prahu je sposoban da uoči znatnu identičnost različitih obrazaca difrakcije X-zraka na prahu.
[0052] Stručnjaci za difrakciju X-zraka na prahu takođe razumeju da na relativni intenzitet šiljaka može da utiče, na primer, veličina granula od iznad 30 μm i neunitarni odnosi aspekata, koje može da utiče na analizu primeraka. Stručnjak takođe razume da pozicija refleksija može da bude pod uticajem tačne visine na kojoj se nalaze primerci u samom difraktometru i nultekalibracije difraktometra. Površina koja je planarna primerku takođe može da ima mali efekat. Tako, podaci za obrasce difrakcije ne treba da se uzimaju kao da su apsolutne vrednosti (vidi Jenkins, R & Snyder, R.L. 'Introduction to X-Ray Powder Diffractometry' John Wiley & Sons 1996; Bunn, C.W. (1948), Chemical Crystallography, Clarendon Press, London; Klug, H. P. & Alexander, L. E. (1974), X-Ray Diffraction Procedures).
[0053] Generalno, pogreška merenja koja se tiče ugla difrakcije u difraktogramu X-zraka na prahu približno se kreće u rasponu plus ili minus 0.2° 2-teta, a takav stepen merne pogreške treba da se uzme u obzir kada se razmatraju podaci difrakcije X-zraka na prahu. Nadalje, podrazumeva se da intenziteti mogu da fluktuiraju u zavisnosti o eksperimentalnim uslovima i pripremi samih primeraka (preferirana orijentacija).
[0054] Naročito, jedinjenja iz ovoga pronalaska su svi iz Primera, pri čemu svako obezbeđuje jedan dodatan nezavisan aspekt ovoga pronalaska. Štaviše, jedinjenja iz ovoga pronalaska su farmaceutski-prihvatljive soli svakog Primera, pri čemu svaka od njih predstavlja jedan dodatan nezavisan aspekt ovoga pronalaska.
[0055] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), koje može da se dobije primenom bilo kojeg od Primera koji su ovde opisani.
[0056] Dodatna karakteristika je svaki od okvira koji su ovde definisani pod uslovom da su specifični Primeri, poput Primera 1, 2, 3 itd., nezavisno isključeni.
[0057] Podrazumeva se da određena jedinjenja sa Formulom (I) sadrže asimetrično supstituisane atome ugljenika, pa prema tome mogu da postoje u, da budu izolovani kao, optički-aktivna forma ili racemat. Neka jedinjenja sa Formulom (I) mogu da budu polimorfna. Podrazumeva se da ovaj pronalazak obuhvata bilo koji racemat, optički-aktivnu formu, polimorf ili stereoizomer, ili njihove smeše, koji mogu da poseduju karakteristike korisne za SERD, pri čemu su stanju tehnike dobro poznati načini na koji se pripremaju pomenute optičkiaktivne forme (na primer, uz pomoć rezolucije racemata primenom tehnika rekristalizacije, sintezom iz optički-aktivnih početnih materijala, hiralnom sintezom, encimskom rezolucijom, biotransformacijom, ili hromatografskom separacijom uz korišćenje hiralne stacionarne faze) i kako da se odredi efikasnost preparata kao SERD primenom standardnih testova koji su opisani u daljnjem tekstu.
[0058] Podrazumeva se da određena jedinjenja sa Formulom (I), koja su definisan iznad, mogu da pokazuju fenomen tautomerizma. Podrazumeva se da ovaj pronalazak u svojoj definiciji uključuje bilo koju takvu tautomernu formu, ili njenu smešu, koja poseduje SERD aktivnost pa ga se ne treba ograničavati samo na neku određenu tautomernu formu koja se pojavljuje u korišćenim formulama ili nazivima iz Primera. Uopšteno, samo je jedna takva tautomerna forma navedena u Primerima koji slede u daljnjem tekstu ili je prisutna u bilo kojoj relevantnoj formuli koja sledi u daljnjem tekstu.
[0059] Ovaj pronalazak namerava da uključi sve izotope atoma koji se pojavljuju u navedenim jedinjenjima. Izotopi se podrazumeva da uključuju one atome koji imaju isti atomski broj, ali različiti masene brojeve. Na primer, izotopi vodonika uključuju tricijum i deuterijum. Izotopi ugljenika uključuju<13>C i<14>C. Deuterovana verzija Primera 1 je opisana u Primeru 10.
[0060] Prikladna farmaceutski-prihvatljiva so nekog jedinjenja sa Formulom (I) je, na primer, nekog alkalnog ili zemno-alkalnog metala poput so natrijuma, kalcijuma ili magnezijuma, ili amonijeva so, ili so sa nekom organskom bazom poput metilamina, dimetilamina, trimetilamina, piperidina, morfolina ili tris-(2-hidroksietil)amina. Dodatne prikladne farmaceutski-prihvatljive soli jedinjenja sa Formulom (I) mogu da budu druge metalne soli, poput soli kalijuma, cinka, ili nekog drugog takvog metalnog katjona koji je poznat stanju
1
tehnike. U jednom aspektu ovoga pronalaska, farmaceutski-prihvatljiva so nekog jedinjenja sa Formulom (I) je so sa metalnim katjonom, amonijeva so ili so sa organskom bazom.
[0061] Druga prikladna farmaceutski-prihvatljiva so jedinjenja sa Formulom (I) je, na primer, so koja nastaje u ljudskom ili životinjskom telu nakon administriranja jedinjenja sa Formulom (I).
[0062] Prikladna farmaceutski-prihvatljiva so jedinjenja sa Formulom (I) može takođe da bude, na primer, neka kisela adiciona so jedinjenja sa Formulom (I), na primer kisela adiciona so sa nekom jakom anorganskom ili organskom kiselinom poput hlorovodonične, bromovodonične, sumporne ili trifluorosirćetne kiseline. Druga potencijalno prikladna farmaceutski-prihvatljiva so jedinjenja sa Formulom (I) može takođe da se opiše ispod u Primeru 1. U drugom aspektu ovoga pronalaska, farmaceutski-prihvatljiva so jedinjenja sa Formulom (I) je neka kisela adiciona so.
[0063] Eksperimenti za formiranje soli jedinjenja sa Formulom (I) istražuju potencijal Primera 1 ((E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina) da formira kristalne soli. Isprobane su sledeće kiseline i baze: sirćetna kiselina, adipinska kiselina, benzen-sulfonska kiselina, benzojeva kiselina, cinnaminka kiselina, limunska kiselina, D,L-mlečna kiselina, etan-disulfonska kiselina, etan-sulfonska kiselina, fumarna kiselina, hlorovodonična kiselina, L-tartarna kiselina, maleinska kiselina, jabučna kiselina, malonska kiselina, metan-sulfonska kiselina, napadisilična kiselina, fosforna kiselina, saharin, ćilibarna kiselina, sumporna kiselina, toluensulfonska kiselina, kalcijum acetat, dietilamin, etanolamin, etilendiamin, hidroksietilpirolidin, magnezijum acetat, meglumin, piperazin, kalijum hidroksid, natrijum hidroksid, t-butilamin, trietanolamin, tris(hidroksimetil)aminometan (Tris) i N,N-dietiletanolamin.
[0064] Od gore-pomenutih kiselina i baza nije bilo moguće uvek dobiti čvrste soli koje mogu da se izoluju, ili nije bilo moguće da ih se dobije u kristalnoj formi u korišćenim eksperimentalnim uslovima. Preferirane soli iz Primera 1 uključuju one koje mogu da se izoluju u kristalnoj formi, na primer, so benzen-sulfonske kiseline (bezilatna so), so ćilibarne kiselina (sukcinatna so) i so maleinske kiseline (maleatna so).
1
[0065] U jednom aspektu, prikladne soli iz Primera 1 mogu da uključuju bezilat, sukcinat i maleat. U drugom aspektu, prikladna so iz Primera 1 može da bude maleatna so, koja je opisana u Primeru 11.
[0066] Podrazumeva se neka prikladna farmaceutski-prihvatljiva ko-kristalna forma jedinjenja sa Formulom (I) takođe formira jedan aspekt ovoga pronalaska. Radi izbegavanja zabune, termin ko-kristal (ili kokristal) se odnosi na multikomponentan sistem u kojem postoje molekul ili molekuli domaćini API (aktivni farmaceutski sastojak) i molekul ili molekuli gosti (ili koformer). U nekom ko-kristalu, API-molekul i gost-molekul (ili ko-former) postoje u čvrstoj formi na sobnoj temperaturi kada se nalaze u svojim čistim formama (sa ciljem da se razlikuju ko-kristalne forme solvata ili hidrata). Soli kod kojih se značajna ili kompletna izmena jona obavlja između API-molekula i gost-molekula su isključeni iz ove posebne definicije. U nekom ko-kristalu, API-molekuli i molekuli ko-formera reaguju uz pomoć hidrogenskih veza ili, moguće, i kroz druge ne-kovalentne interakcije. Farmaceutski prihvatljivi ko-formeri uključuju neutralne molekule poput nikotinamida, rezorcinola i raznih ksilenola, kao i molekuli koji mogu da se jonizuju poput oksalne kiseline, 3,5-dihidroksibenzojeve kiseline i izohinolina (količina izmene protona određuje da li je formirana so ili ko-kristal). Treba da se napomene da sam ko-kristal može da formira solvate, uključujući hidrate.
[0067] Dodatno se podrazumeva da neki prikladni farmaceutski-prihvatljivi solvat jedinjenja sa Formulom (I) takođe formira jedan aspekt ovoga pronalaska. Prikladni farmaceutskiprihvatljivi solvat je, na primer, hidrat poput hemi-hidrata, mono-hidrata, di-hidrata ili trihidrata ili neki njegov alternativni kvantitet.
[0068] Podrazumeva se da neki prikladni farmaceutski-prihvatljivi pro-lek jedinjenja sa Formulom (I) takođe formira jedan aspekt ovoga pronalaska. Prema tome, jedinjenja iz ovoga pronalaska mogu da se administriraju u formi nekog pro-leka, koji je jedinjenje koje se raspada u ljudskom ili životinjskom telu kako bi se oslobodilo jedinjenje iz ovoga pronalaska. Pro-lek može da se koristi sa ciljem da se promene fizičke karakteristike i/ili farmakokinetičke karakteristike jedinjenja iz ovoga pronalaska. Pro-lek može da se formira kada jedinjenje iz ovoga pronalaska sadrži neku prikladnu grupu ili supstituent na koji može da se veže grupa koja menja karakteristike. Primeri za pro-lekove uključuju esterske derivate, koji mogu da se pocepaju in vivo, koji mogu da se formiraju na karboksilnoj grupi iz jedinjenja sa Formulom (I).
1
[0069] Prema tome, ovaj pronalazak uključuje jedinjenja sa Formulom (I), kao šta je ovde definisano, koja su dobivena primenom organske sinteze i kada se formiraju unutar ljudskog ili životinjskog tela uz pomoć cepanja njihovog pro-druga. Prema tome, ovaj pronalazak uključuje jedinjenja sa Formulom (I) koja mogu da se proizvedu uz pomoć organske sinteze, a takođe i jedinjenja koja nastaju u ljudskom ili životinjskom telu uz pomoć metabolizma nekog prekursorskog jedinjenja, odnosno jedinjenje sa Formulom (I) može da bude sintetičkiproizvedeno jedinjenje ili metabolički-proizvedeno jedinjenje.
[0070] Prikladni farmaceutski-prihvatljivi pro-lek nekog jedinjenja sa Formulom (I) je onaj koji je, na osnovu zdrave medicinske procene, prikladan za administriranje u ljudsko ili životinjsko telo bez da uzrokuje neželjene farmakološke aktivnosti i bez da uzrokuje toksičnost.
[0071] Brojne formi pro-lekova su opisane, na primer, u sledećim dokumentima:
a) Methods in Enzymology, vol. 42, str. 309-396, urednici: K. Widder, et al.
(Academic Press, 1985);
b) Design of Pro-drugs, urednik: H. Bundgaard, (Elsevier, 1985);
c) A Textbook of Drug Design and Development, urednici: Krogsgaard-Larsen & H.
Bundgaard, poglavlje 5 "Design and Application of Pro-drugs", od H. Bundgaard str. 113-191 (1991);
d) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8, 1-38 (1992);
e) H. Bundgaard, et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, 77, 285 (1988);
f) N. Kakeya, et al., Chem. Pharm. Bull., 32, 692 (1984);
g) T. Higuchi & V. Stella, "Pro-Drugs as Novel Delivery Systems", A.C.S.
Symposium Series, volumen 14; i
h) E. Roche (urednik), "Bioreversible Carriers in Drug Design", Pergamon Press, 1987.
[0072] Prikladni farmaceutski-prihvatljivi pro-lek jedinjenja sa Formulom I koji poseduje karboksilnu grupu je, na primer, njegov ester koji može da se pocepa in vivo. Ester jedinjenja sa Formulom I, koji može da se pocepa in vivo, i koji sadrži karboksilnu grupu je, na primer, neki farmaceutski-prihvatljivi ester koji može da se pocepa u ljudskom ili životinjskom telu kako bi se dobila parentna kiselina. Prikladni farmaceutski-prihvatljivi esteri za karboksil uključuju (1-6C)alkilne estere poput metila, etila i tert-butila, (1-6C)alkoksimetil estere poput
1
metoksimetil estera, (1-6C)alkanoiloksimetil estere poput pivaloiloksimetil estera, 3-ftalidil estere, (3-8C)cikloalkilkarboniloksi-(1-6C)alkil estere poput ciklopentilkarboniloksimetila i 1-cikloheksilkarboniloksietil estera, 2-okso-1,3-dioksolenilmetil estere poput 5-metil-2-okso-1,3-dioksolen-4-ilmetil estere i (1-6C)alkoksikarboniloksi-(1-6C)alkil estere poput metoksikarboniloksimetila i 1-metoksikarboniloksietil estere.
[0073] Prikladni farmaceutski-prihvatljivi pro-lek jedinjenja sa Formulom I koji sadrži karboksilnu grupu je na primer amid, koji može da se pocepa in vivo, poput N-C1-6alkila i N,N-di-(C1-6alkil)amida poput N-metila, N-etila, N-propila, N,N-dimetila, N-etil-N-metila ili N,N-dietilamida.
[0074] In vivo efekti jedinjenja sa Formulom (I) mogu da se izvrše delomično uz pomoć jednog ili više metabolita koji nastaju u ljudskom ili životinjskom telu nakon administriranja jedinjenja sa Formulom (I). Kao šta je navedeno iznad, in vivo efekti jedinjenja sa Formulom (I) mogu takođe da se izvrše uz pomoć metabolizma prekursorskog jedinjenja (pro-lek).
[0075] Dva izomerna aktivna metabolita iz Primera 1 su identifikovana na osnovu in vitro ljudskih sistema kao šta je pokazano ispod (pri čemu su izomeri diastereomeri kao rezultat postojanja obe konfiguracije na ugljeniku koji je označen sa *), a sinteza oba izomera je prikazana u Primerima 14A i B:
[0076] Dodatno, sledeće jedinjenje se smatra da je aktivni metabolit u nekim vrstama, poput miša:
1
[0077] Takvi aktivni metaboliti formiraju dodatne i nezavisne aspekte ovoga pronalaska.
[0078] Radi izbegavanja sumnje, treba se potencirati da kada se u ovoj specifikaciji neka grupa označi sa 'definisano iznad' ili 'iznad definisano', pomenuta grupa obuhvata opis kod njenog prvog pominjanja, ali i širu definiciju i sve posebne definicije pomenute grupe.
[0079] Naročita nova jedinjenja iz ovoga pronalaska uključuju, na primer, jedinjenja sa Formulom (I), ili njihove farmaceutski-prihvatljive soli, pri čemu, osim ako je drugačije navedeno, svaki od R<1>i R<2>ima bilo koje od značenja koja su definisana iznad ili u sledećim izjavama:
U jednom aspektu R<1>je vodonik. U drugom aspektu R<1>je fluoro.
[0080] U jednom aspektu R<2>je vodonik. U drugom aspektu R<2>je fluoro.
[0081] U jednom aspektu oba R<1>i R<2>su vodonici. U drugom aspektu oba R<1>i R<2>su fluoro. U drugom aspektu R<1>je vodonik, a R<2>je fluoro.
[0082] U jednom aspektu R<3>je vodonik. U drugom aspektu R<3>je metil.
[0083] U jednom aspektu R<4>je vodonik, a R<5>je fluoro. U drugom aspektu R<5>je vodonik, a R<4>je fluoro.
[0084] Naročita jedinjenja iz ovoga pronalaska su, na primer, jedinjenja sa Formulom (I) koja su diskutovana u sklopu Primera koji su opisani u tekstu ispod.
[0085] Na primer, naročito jedinjenje iz ovoga pronalaska je jedinjenje sa Formulom (I) koje je izabrano iz grupe koja obuhvata sledeća jedinjenja:
2
(E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina;
(E)-3-(4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina;
(E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina;
(E)-3-(4-((1R,3R)-2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina;
(E)-3-(3,5-difluoro-4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina;
(E)-3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina;
(E)-3-(4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina;
(E)-3-(4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina;
(E)-3-(3-fluoro-4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina;
ili neka njihova farmaceutski-prihvatljiva so.
[0086] Dodatno posebno jedinjenje iz ovoga pronalaska je jedinjenje sa Formulom (I) koje je izabrana iz grupe koja obuhvata sledeća jedinjenja:
(E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina;
(E)-3-(4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina;
(E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina;
(E)-3-(4-((1R,3R)-2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina;
(E)-3-(3,5-difluoro-4(1R)-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina;
(E)-3-(3,5-difluoro-4(1R)-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina;
(E)-3-(4(1R)-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina;
(E)-3-(4(1R)-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido [3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina;
(E)-3-(3-fluoro-4(1R)-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina; i
(E)-3-[4-[(1R,3R)-1-deuterio-2-(2-fluoro-2-metil-propil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-1-il]-3,5-difluoro-fenil]prop-2-enoic kiselina;
ili neka njihova farmaceutski-prihvatljiva so.
[0087] Naročita farmaceutski-prihvatljiva so iz ovoga pronalaska je (1R,3R)-1-{4-[(E)-2-karboksiethenil]-2,6-difluorofenil}-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-beta-karbolin-2-ium maleat.
[0088] Drugi aspekt ovoga pronalaska obezbeđuje proces za pripremu jedinjenja sa Formulom (I), ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so. Prikladni proces je ilustrovan preko sledećih varijanata reprezentativnog procesa u kojem, osim ako je drugačije navedeno, R<1>do R<5>imaju bilo koje značenje koje je definisano iznad. Potrebni početni materijali mogu da se dobiju uz pomoć standardnih procedura organske hemije. Priprema takvih početnih materijala je opisana zajedno sa sledećim varijantama reprezentativnog procesa i u pratećim Primerima. Alternativno, potrebni početni materijali se dobijaju uz pomoć procedura koje su analogne onima koje su ilustrovane i koje spadaju u uobičajene veštine stručnjaka organske hemije.
[0089] Jedinjenja sa formulom (I) se prikladno pripremaju uz pomoć hidrolize esterskog derivata sa formulom (II), pri čemu R<6>je (1-6C) alkil, poput metila. Hidroliza se prikladno provodi u prisutnosti baze poput natrijum hidroksida u nekom prikladnom rastvaraču (poput vodenog THF i MeOH (ili neki drugi slični alkohol), ili poput vodenog alkohola, na primer vodenog izopropanola) na prikladnoj temperaturi, poželjno na sobnoj temperaturi.
[0090] Jedinjenja sa formulom (II) mogu da se pripreme primenom, na primer:
a) reagovanja jedinjenja sa formulom (III) sa jedinjenjem sa formulom (IV) u uslovima koji su poznati stanju tehnike i koji su prikladni za razne Pictet-Spenglerove reakcije (poput, prisutnosti kiseline (poput sirćetne kiseline) i u nekom prikladnom rastvaraču (na primer toluen) i na prikladnoj temperaturi (poput 80° C)); ili
b) reagovanjem jedinjenja sa formulom (V) sa jedinjenjem sa formulom (VI), pri čemu LG je izlazna grupa koja je poznata stanju tehnike poput halida ili trifluorometansulfonata (triflat), prikladno triflat, u prisutnost baze (na primer, aminske baze poput N-etil-N-izopropilpropan-2-amina) i nekog prikladnog polarnog rastvarača (poput dioksana) na prikladnoj temperaturi (poput raspona od sobne temperature pa do 90° C).
2
[0091] Jedinjenja sa formulom (III) mogu da se pripreme uz pomoć reagovanja jedinjenja sa formulom (VII) sa jedinjenjem sa formulom (VI) u uslovima koji su opisani kod reakcije jedinjenja sa formulama (V) i (VI) iznad.
[0092] Jedinjenja sa formulom (IV) mogu da se pripreme uz pomoć reagovanja jedinjenja sa formulom (VIII) sa esterom alkil akrilata (poput metil akrilata kada R<6>je metil) u uslovima koji su poznati stanju tehnike, a odnose se na Heck-ovu reakciju; to znači prisutnost aril fosfina (na primer, tri-o-tolilfosfin), paladijumskog katalizatora (poput paladijum (II) acetata) i baze (poput trietilamina) u nekom prikladna rastvaraču (poput DMA) i na prikladnoj temperaturi (na primer, 80° C).
[0093] Jedinjenja sa formulom (V) mogu da se pripreme uz pomoć reagovanja jedinjenja sa formulom (VII) sa jedinjenjem sa formulom (IV) u uslovima koji su slični onima koji su opisani kod reakcije jedinjenja sa formulama (III) i (IV) iznad.
[0094] Jedinjenja sa formulom (VI) u kojima LG je triflat mogu da se pripreme kao šta je prikazano ispod u Shemama 1 i 2. Druga jedinjenja sa formulom (VI) u kojima LG je različit od triflata mogu da se pripreme uz pomoć sličnih postupaka koji su poznati stanju tehnike.
Korak 1: Agens za floriniranje, na primer, N,N-dietil-1,1,2,3,3,3-heksafluoropropan-1-amin/DCM/ST, a tada agens za redukovanje, na primer, litijum aluminijum hidrid/THF/ST
Korak 2: Trifluorometansulfonski anhidrid/baza, na primer, 2,6-lutidin/DCM/0° C
Korak 1: Agens za redukovanje, na primer, litijum aluminijum hidrid/etar/0° C
Korak 2: Trifluorometansulfonski anhidrid/baza, na primer, 2,6-lutidin/DCM/-10° C
[0095] Jedinjenja sa formulom (I) su hiralna. Podrazumeva se da mogu da se koriste stereoselektivne reakcije sa ciljem da se dobiju željeni izomeri. Alternativno, stereohemija može da se podesi uz pomoć prikladnih sredstava, poput epimerizovanja iz cis u trans izomere uz pomoć zakiseljavanja intermedijara sa zaštićenom aminskom grupom kao šta je ilustrovano u Primeru 4 (i opisano, na primer, u J. Org. Chem. 2009, 74, 2771-2779).
[0096] U drugom aspektu ovaj pronalazak obezbeđuje proces za pripremu jedinjenja sa formulom (I) koji obuhvata hidrolizu jedinjenja sa formulom (II), prikladno u prisutnosti baze.
[0097] Podrazumeva se da su takođe moguće i druge permutacije procesnih koraka i procesnih varijanata koji su opisani iznad.
[0098] Podrazumeva se da bilo koje jedinjenje sa Formulom (I), koje je dobiveno u bilo kojem od ovde opisanih procesa, može da se konvertuje u neko drugo jedinjenje sa Formulom (I), ako je potrebno.
[0099] Kada je potrebna neka farmaceutski-prihvatljiva so jedinjenja sa Formulom (I), pomenuta može da se dobije uz pomoć, na primer, reagovanja pomenutog jedinjenja sa prikladnom bazom.
2
[0100] Kada je potreban neki farmaceutski-prihvatljivi pro-lek jedinjenja sa Formulom (I), pomenuti može da se dobije uz pomoć neke konvencionalnu proceduru. Na primer, ester jedinjenja sa Formulom (I), koji može da se pocepa in vivo, može da se dobije uz pomoć, na primer, reagovanja jedinjenja sa Formulom (I) koje sadrži karboksilnu grupu sa nekim farmaceutski-prihvatljivim alkoholom. Dodatne informacije o pro-lekovima mogu da se pronađu u ovom opisu.
[0101] Takođe se podrazumeva da, u nekim malopre pomenutim reakcijama, može da bude neophodno ili poželjno da se zaštite bilo koje senzitivne grupe u jedinjenjima. Slučajevi kada je zaštita neophodna ili poželjna, i prikladni postupci za zaštitu, su poznati stručnjacima. Konvencionalne zaštitne grupe mogu da se koriste u skladu sa standardnom praksom (radi ilustracije vidi T.W. Green, T.W. Green, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, 1991). Tako, ukoliko reaktanti uključuju grupe poput amino, karboksi ili hidroksi, može da bude poželjno da se pomenute grupe zaštite u nekim ovde pomenutim reakcijama.
[0102] Prikladna zaštitna grupa za amino ili alkilamino grupu je, na primer, acilna grupa, na primer alkanoilna grupa poput acetila, alkoksikarbonilna grupa, na primer metoksikarbonilna, etoksikarbonilna ili t-butoksikarbonilna grupa, arilmetoksikarbonilna grupa, na primer benziloksikarbonil, ili aroilna grupa, na primer benzoil. Uslovi za otklanjanje iznad pomenutih zaštitnih grupa neizbežno variraju u zavisnosti izabrane zaštitne grupe. Tako, na primer, acilna grupa poput alkanoilne ili alkoksikarbonilne grupe ili aroilne grupe može da se odstrani, na primer, uz pomoć hidrolize sa nekom prikladnom bazom poput alkalo-metalnog hidroksida, na primer litijum ili natrijum hidroksid. Alternativno, acilna grupa poput t-butoksikarbonilne grupe može da se odstrani, na primer, uz pomoć tretmana sa nekom prikladnom kiselinom kao hlorovodonične, sumporne ili fosforne kiseline ili trifluorosirćetne kiseline, arilmetoksikarbonilna grupa poput benziloksikarbonilne grupe može da se odstrani, na primer, uz pomoć hidrogenovanja preko nekog katalizatora poput paladijuma-na-ugljeniku, ili uz pomoć tretmana sa Lewis-ovom kiselinom, na primer, boron tris(trifluoroacetat). Prikladna alternativna zaštitna grupa za primarnu amino-grupu je, na primer, a ftaloilna grupa koja može da se odstrani uz pomoć tretmana sa alkilaminom, na primer, dimetilaminopropilamin, ili uz pomoć hidrazina.
2
[0103] Prikladna zaštitna grupa za hidroksi grupu je, na primer, acilna grupa, na primer alkanoilna grupa poput acetila, aroilna grupa, na primer benzoil, ili arilmetilna grupa, na primer benzil. Uslovi za otklanjanje iznad pomenutih zaštitnih grupa neizbežno variraju u zavisnosti o izboranoj zaštitnoj grupi. Tako, na primer, acilna grupa poput alkanoilne ili aroilne grupe može da bude odstranjena, na primer, uz pomoć hidrolize sa nekom prikladnom bazom poput alkalo-metalnog hidroksida, na primer litijum ili natrijum hidroksid. Alternativno, arilmetilna grupa poput benzilne grupe može da bude odstranjena, na primer, uz pomoć hidrogenovanja preko nekog katalizatora poput paladijuma-na-ugljeniku.
[0104] Prikladna zaštitna grupa za karboksi grupu je, na primer, neka grupa za esterifikovanje, na primer metilna ili etilna grupa koja može da se odstrani, na primer, uz pomoć hidrolize sa bazom poput natrijum hidroksida, ili na primer t-butilna grupa koja može da se odstrani, na primer, uz pomoć tretmana sa kiselinom, na primer neka organska kiselina poput trifluorosirćetne kiseline, ili na primer neka benzilna grupa koja može da bude odstranjena, na primer, uz pomoć hidrogenovanja preko nekog katalizatora poput paladijuma-na-ugljeniku.
[0105] Zaštitne grupe mogu da budu odstranjene u bilo kojoj prikladnoj fazi tokom sinteze primenom konvencionalnih tehnika koje su dobro poznate stanju tehnike.
[0106] Određeni intermedijari (na primer, jedinjenja sa Formulama II, III, IV, V, VI, VII i VIII, a naročito jedinjenja sa Formulom II, III i/ili V), koji su ovde definisani, su nova jedinjenja čime obezbeđuju dodatnu karakteristiku ovoga pronalaska.
Biološki ogledi
[0107] Sledeći ogledi su korišćeni za merenje efekata jedinjenja iz ovoga pronalaska.
Ogled vezanja ERα
[0108] Sposobnost jedinjenja da vežu izolovani vezni domen za alfa ligand estrogenskog receptora (ER alfa - LBD (GST)) je proverena u ogledima kompeticije uz pomoć, primene, određivanja krajnje tačke vremenski-razrešenog prenosa energije fluorescentne rezonancije (LanthaScreen™; Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer (TR-FRET) detection end-point). Kod određivanja TR-FRET krajnje tačke od LanthaScreen, prikladni fluorofor (Fluormone ES2, Oznaka produkta P2645) i rekombinantni vezni domen za alfa ligand iz humanog estrogenskog receptora (Oznaka produkta PV4543) su nabavljeni kod
2
Invitrogen-a, a korišćeni su za merenje vezanja jedinjenja. Princip ogleda je taj da se ER alfa -LBD (GST) dodaje u fluorescentni ligand kako bi se formirao kompleks receptor/fluorofor. Anti-GST antitelo označeno sa terbijumom (Oznaka produkta PV3551) se koristi da se indirektno označi receptor uz pomoć vezanja na njegov GST-privesak, a kompetitivno vezanje je detektovano testiranjem sposobnosti jedinjenja da odstrane fluorescentni ligand koje rezultuje gubitkom TR-FRET signala između kompleksa Tb-anti-GST antitelo – tragač (tracer). Ogled je proveden kako je navedeni ispod pri čemu su sva dodavanja reagenata obavljena primenom mikrofluidne radne stanice Beckman Coulter BioRAPTR FRD:
1. Akustičko dodavanje 120 nl testiranog jedinjenja u nisko-volumenske ogledne pločice sa 384 komorica.
2. Priprema 1x ER alfa -LBD/Tb-antiGST Ab u ES2 puferu za testiranje i inkubiranje tokom 20 min.
3. Dodavanje 1x fluorofora u rastvor ER alfa -LBD/Tb-antiGST Ab pre upotrebe. 4. Dodavanje 12 µl 1x smeše AR-LBD/Tb-anti-GST Ab/Fluorofor u svaku komoricu ogledne pločice.
5. Pokrivanje ogledne pločice sa ciljem da se reagensi zaštite od svetla i isparavanja, i inkubacija na sobnoj temperaturi tokom 1 h.
6. Pobuđivanje kod 337 nm i merenje emisije fluorescentnog signala iz svake komorice kod 490 nm i 520 nm primenom BMG PheraSTAR.
Jedinjenja su dozirana direktno iz mikropločica u kojima su jedinjenja bila serijski razblažena (4 komorice su sadržavale jedinjenje u finalnim koncentracijama od 10 mM, 0.1 mM, 1 µM i 10 nM), u oglednu mikropločicu uz pomoć Labcyte Echo 550. Echo 550 je aparat za rukovanje sa tečnostima koji koristi akustičnu tehnologiju kako bi se provodili direktni prenosi rastvora jedinjenja u DMSO (mikropločica-u-mikropločicu), a sistem može da se programira da prenosi višestruke male (nL) volumene jedinjenja iz različitih komorica na pločici kako bi se pripremili željeni serijski razblaženi rastvori jedinjenja koji su tada nadopunjeni kako bi se normalizovala DMSO koncentracija duž raspona razblaživanja. Ukupno 120 nL jedinjenja plus DMSO je dodano u svaku komoricu, a jedinjenja su testirana u formatu koji je obuhvatao raspon od 12 koncentracionih tačaka sa finalnom koncentracijom jedinjenja u rasponu od 100, 29.17, 10.42, 2.083, 1, 0.292, 0.104, 0.02083, 0.01, 0.002917, 0.001042, 0.0001 µM. Podaci za odgovor TR-FRET koji su dobiveni za svako jedinjenje su eksportovani u prikladni softverski paket (poput Origin ili Genedata) kako bi se provela analiza podešavanje krive. Kompetitivno vezanje ER
2
je predstavljeno uz pomoć IC50vrednosti. Ovo je određeno uz pomoć izračuna koncentracije jedinjenja koja je potrebna da se redukuje 50% vezanja tragač-jedinjenja na ER alfa-LBD.
Ogled negativne regulacije MCF-7 ER
[0109] Sposobnost jedinjenja da negativno-regulišu estrogeni receptor (ER) je procenjena primenom ogleda imuno-fluorescencije na bazi ćelija uz korišćenje humane ćelijske linije MCF-7 duktalnog karcinoma dojke. MCF-7 ćelije su revitalizovane direktno iz krio-bočice (približ. 5 x 10<6>ćelija) u medijumu za testiranje (Dulbecco-ov modifikovani Eagle-ov medijum bez fenol-crveno (DMEM) (Sigma D5921) koji je sadržavao 2 mM L-glutamina i 5% (v/v) fetalni teleći serum tretiran sa smešom karkoal/dekstran. Ćelije su jednom propuštene kroz špric uz korišćenje sterilne široke igle, 18G x 1.5 inča (1.2 x 40 mm), a gustina ćelija je izmerena uz pomoć Coulter Counter (Beckman). Ćelije su dodatno razređene u medijumu za testiranje do gustine od 3.75 x 10<4>ćelija po ml pa je dodano po 40 µl po komorici crne pločice za kulturu tkiva sa prozirnim dnom sa 384 komorica (Costar, Br. 3712) uz pomoć Thermo Scientific Matrix WellMate ili Thermo Multidrop. Nakon kultiviranja ćelija, pločice su inkubirane preko noći na 37° C uz 5% CO2(Liconic carousel incubator). Podaci testa su generisani uz pomoć LabCyte Echo® model 555 compound reformatter koji je deo automatizovane radne stanice (Integrisana Echo 2 workcell). Korišćeni su stok-rastvori testiranih jedinjenja (10 mM) kako bi se pripremila pločica za doziranje jedinjenja koja su uzimana iz 384-komorica (Labcyte P-05525-CV1). 40 µl iz svakog 10 mM stok-rastvora jedinjenja je dodano u prvi kvadrant komorica, a tada su pripremljena serijska razređenja (1:100) u DMSO-u uz pomoć jedinice za rukovanje sa tečnostima Hydra II (MATRIX UK) koje daje 40 µl razblaženog jedinjenja u komoricama kvadranta 2 (0.1 mM), 3 (1 µM) i 4 (0.01 µM). 40 µl DMSO-a je dodano u komorice iz reda P iz pločice sa izvorom kako bi se omogućilo DMSO-normalizovanje duž doznog raspona. Kako bi se dozirale kontrolne komorice, 40 µl DMSO-a je dodano u red O1, a 40 µl iz 100 µM Faslodex<®>u DMSO-u je dodano u red O3 iz pločice sa izvorom jedinjenja. Echo koristi akustičnu tehnologiju za direktni prenos (mikropločica-u-mikropločicu) rastvora DMSO-jedinjenja u ogledne pločice. Sistem može da se programira da prenosi male volumene, od 2.5 nL, u višestrukim povećanjima između mikropločica pri čemu se pripremaju serijska rezređenja jedinjenja u oglednoj pločici koja je tada nadopunjena kako bi se normalizovala DMSO-koncentracija duž raspona razređenja. Jedinjenja su dodavana u pločice sa ćelijama, pri čemu je pločica sa izvorima jedinjenja bila pripremljena kao šta je opisano iznad, koje proizvodi 12pt duplikat doznog raspona od 3 µM do 3 pM sa razređenjima od 3-puta i jednim finalnim razređenjem od 10-puta uz pomoć
2
integrisane Echo 2 workcell. Kontrolne komorice sa maksimalnim signalom su dozirane sa DMSO kako bi se dobila finalna koncentracija od 0.3%, a kontrolne komorice sa minimalnim signalom su dozirane sa Faslodex<®>kako bi se dobila finalna koncentracija od 100 nM. Pločice su dodatno inkubirane tokom 18-22 h na 37° C uz 5% CO2, a tada su fiksirane uz pomoć dodavanja 20 µl 11.1% (v/v) rastvora formaldehida (u slanom rastvoru puferovanom sa fosfatom (PBS)) koje daje finalnu koncentraciju formaldehida od 3.7% (v/v). Ćelije su fiksirane na sobnoj temperaturi tokom 20 min pre no su isprane dva puta sa 250 µl PBS/Proclin (PBS sa Biocide-konzervansom) uz pomoć ispirača pločica BioTek platewasher, a tada je u sve komorice dodano 40 µl PBS/Proclin nakon čega su pločice uskladištene na 4° C. Malopre opisani postupak fiksiranja je priveden u Integrated Echo 2 workcell. Imuno-bojanje je provedeno uz pomoć automatizovane AutoElisa workcell. PBS/Proclin je odstranjen iz svih komorica, a ćelije su permeabilizovane sa 40 µl PBS koji je sadržavao 0.5% Tween™ 20 (v/v) tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Pločice su isprane tri puta u 250 µl PBS/0.05% (v/v) Tween 20 uz Proclin (PBST sa Biocide-konzervansom), a tada je dodano 20 µl zečjeg monoklonskog antitela protiv ERα (SP1) (Thermofisher), 1:1000 u PBS/Tween™/3% (w/v) kravlji albumin iz seruma. Pločice su inkubirane preko noći na 4° C (Liconic carousel incubator), a tada su isprane tri puta u 250 µl PBS/0.05% (v/v) Tween™ 20 uz Proclin (PBST). Pločice su tada inkubirane, sa 20 µl/komorici kozjeg anti-zečjeg IgG AlexaFluor 594 ili kozjeg anti-zečjeg AlexaFluor 488 antitela (Molecular Probes) uz Hoechst (1:5000 u PBS/Tween™/3% (w/v) kravlji albumin iz seruma) tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Pločice su tada isprane tri puta u 250 µl PBS/0.05% (v/v) Tween™ 20 uz Proclin (PBST sa Biocide-konzervansom). 20 µl PBS je dodano u svaku komoricu, a pločice su pokrivene sa crnim poklopcem za pločice i uskladištene na 4° C pre no su očitane. Pločice su očitane na aparatu Cellomics Arrayscan mereći fluorescenciju kod 594 nm (vremenske tačke tokom 24 h) ili 488 nm (vremenske tačke tokom 5 h) sa ciljem da se izmeri nivo ERα-receptora u svakoj komorici. Srednji ukupni intenzitet je normalizovan prema broju ćelija koje daje ukupni intenzitet po ćeliji. Podaci su eksportovani u prikladni softverski paket (poput Origin) kako bi se provela analiza podešavanja kriva. Negativna-regulacija ERα-receptora je prikazana preko IC50vrednosti, a uz pomoć izračuna je određena koncentracija jedinjenja koja je potrebna za 50% redukovanje prosečnog maksimalnog signala ukupnog intenziteta.
[0110] Mada farmakološke karakteristike jedinjenja sa Formulom (I) variraju u zavisnosti o strukturnoj promeni kao šta je očekivano, generalno aktivnost koju poseduju jedinjenja sa Formulom (I) može da se demonstrira kod sledećih koncentracija ili doza iz jednog ili više od malopre opisanih testova.
[0111] Sledeći podaci su generisani za Primere (podaci ispod mogu da rezultuju iz pojedinačnog eksperimenta ili mogu da predstavljaju višestruko ponavljane eksperimente):
Tabela A
MCF-7 in vivo studija ksenotransplantacije sa Primerom 1 kao pojedinačni agens, ali i u kombinaciji sa inhibitorom mTOR.
[0112] MCF7 ćelije (5 x 10<6>ćelije suspendovane u 100 µl RPMI ćelijskog medijuma) su implantirane potkožno u desni bok imuno-kompromitovanih (SCID) miševa jedan dan nakon šta je svakom mišu hirurški implantiran estrogenski pelet, 0.5 mg/21 dan (Innovative Research, USA). Tumori su mereni dva puta sedmično, a promene tumorskog volumena i inhibicija rasta su određene uz pomoć bilateralnog merenja sa Vernier-šestarom (dužina x širina), pri čemu je dužina određena kao najduži dijametar duž tumora, a širina odgovarajuća okomita ravnina. Tumorski volumen je izračunat uz pomoć formule (dužina x širina) x√ (dužina x širina) x π/6). Tumori su mereni 13 dana nakon implantacije ćelija kako bi se omogućila randomizacija miševa po test-grupama. Tretman sa jedinjenjima je počeo jedan dan nakon toga (tj. 14 dana nakon implantacije ćelija).
Inhibitor mTOR AZD2014 je doziran u razne grupe miševa u dozi od 15 mg/kg jednom dnevno svaki dan oralno (p.o.) u volumenu od 0.1 ml na 10 g. Primer 1 je doziran u koncentraciji od 5 mg/kg jednom dnevno oralno u dozi od 0.1 ml/10 g. Jedna grupa životinja je dozirana samo sa
1
prenosnikom p.o. radi kontrole. Devet miševa po grupi je korišćeno za aktivne agense kod kontrolne grupe.
[0113] Podaci koji su dobiveni u ovoj studiju su prikazani na Slici 10.
Efekt kombinovanja jedinjenja sa Formulom (I) sa inhibitorom PI3Kα/δ može da se studira na sličan način kao i kombinacija sa inhibitorom mTOR.
Studija efikasnosti uz pomoć ksenotransplantacije HCC1428 uz dugotrajno lišavanje estrogena (HCC1428 LTED)
[0114] Nakon prikladnog perioda kultiviranja ćelija, HCC1428 LTED ćelije (1 x 10<6>) su implantirane potkožno u desni bok ženki imuno-kompromitovanih NSG miševa (Jackson Labs, USA) kojima su bili odstranjeni jajnici. Tumori su mereni dva puta sedmično, a promene u tumorskom volumenu i inhibiciji rasta su određene bilateralnim merenjem sa Vernier-šestarom (dužina x širina) pri čemu je kao dužina uzet najduži dijametar duž tumora, a kao širina odgovarajuće okomita ravnina. Tumorski volumen je izračunat uz pomoć formule (dužina x širina) x √ (dužina x širina) x (π/6). Tumori su mereni jednom sedmično nakon implantacije ćelija sve do dosezanja prosečne veličine od 150 mm<3>kod koje tačke su miševi raspoređeni u randomizovane test-grupe, pri čemu je svaka grupa sadržavala 10 miševa. Tretman sa jedinjenjima je počeo jedan dan nakon toga (dan 62 tokom studije), a merenja tumora jednom sedmično su nastavljena. Primer 1 je doziran sa 25 mg/kg jednom dnevno svaki dan oralno (p.o.) sa volumenom od 0.1 ml na 10 g. Druga grupa životinja je dozirana samo sa prenosnikom p.o. radi kontrole.
Nakon 28 dana doziranja, kontrolni tumori su narasli prosečno do 220 mm<3>(koristeći vrednosti geometrijske sredine) dok su se tumori iz miševa tretirani sa Primerom 1 smanjili do veličine od 46 mm<3>koje odgovara 121% inhibiciji tumorskog rasta (P<0.001 uz pomoć nesparenog ttesta).
[0115] Sa ciljem da se izmere nivoi belančevine estrogenskog receptora u ksenotransplantiranim tumorima, primerci tumora si sakupljeni 24 h nakon tretmana sa finalnom dozom prenosnika ili primera 1 pa su brzo smrznuti u tečnom azotu. Za ekstrakciju belančevine, tumorski fragmenti su dodani u 700 µl pufera Cell Extraction buffer (FNN0011; Invitrogen) uz dodavanje inhibitora Sigma-fosfataze (Br.2 (P5726) i 3 (P0044), razređenje: 1 u 100) i inhibitora proteaze Roche Complete (11836145001; 1 tableta na 50 ml), 1 mM ditiotreitol (DTT) u tubama za primerke od 2 ml na običnom ledu. Homogenizovanje primeraka
2
je provedeno uz pomoć Mixermill (nivo 27/s) uz 3 x 2 minutnim ciklusima homogenizovanja. Primerci su kratko centrifugovani sa ciljem da se potpuno homogenizuje tumorsko tkivo. Homogenat je sonifikovan tokom 10 s, a tada je oboren centrifgovanjem na najvećoj brzini (13000 rpm) tokom 15 min. izmereni su nivoi belančevine u supernatantu, a približ. 45 µg belančevine je razdvojeno u 15 komorica sa Bi-Tris Gels (4-12% gela) uz primenu standardnih postupaka. Nakon separacije belančevina i prenosa na nitrocelulozni filter, dodani su estrogenski receptor 68kDa, antitelo ThermoFisher SP1 #9101S (razređenje: 1:400 u mleko/PBS/T) pa su inkubirane preko noći na 4° C. Filter je ispran (3 x 5min) u ∼20 ml TBS/T 0.05%, a sekundarno anti-zečje detekciono antitelo je razređeno 1:2000 u 5% Marvel puferu u TBS/T i inkubirano tokom 1 h na ST. Signal je detektovan uz pomoć hemiluminescentnog supstrata SuperSignal West Dura extended Duration pa je kvantifikovan uz pomoć softvera Syngene. Nivoi belančevine vinkulin su izmereni kao kontrola za popunjavanje primenom V931 Sigma u razređenju 1:10,000 u Marvel puferu i anti-mišjeg detekcionog antitela. Rezultati na Slikama 11 i 12 pokazuju 60% porast nivoa ER koji je primećen nakon tretmana sa Primerom 1 u odnosu na kontrolu sa prenosnikom.
[0116] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje sa Formulom (I), ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so, kao šta je definisano iznad zajedno sa nekim farmaceutski-prihvatljivim razređivačem ili nosiocem.
[0117] Prikladni farmaceutski-prihvatljivi ekscipijenti za tabletarnu formulaciju uključuju, na primer, inertne razređivače, agense za granuliranje i raspadanje, agense za vezanje, lubrikante, konzervanse i anti-oksidanse. Dodatni prikladni farmaceutski-prihvatljivi ekscipijent može da bude neki agens za heliranje. Tabletarne formulacije mogu da budu prekrivene ili ne sa ciljem da se modifikuje njihov raspad i naknadna apsorpcija aktivnog sastojka u gastrointestinalnom traktu, ili sa ciljem da se poboljša njihova stabilnost i/ili pojava, u oba slučaja, uz pomoć konvencionalnih agenasa za prekrivanje i procedura koje su takođe poznate stanju tehnike.
[0118] Kompozicije za oralnu upotrebu mogu, alternativno, da dolaze u formi kapsula od čvrstog želatina u kojima je aktivni sastojak pomešan sa inertnim čvrstim razređivačem, ili u formi kapsula od mekog želatina u kojima je aktivni sastojak pomešan sa vodom ili uljem.
[0119] Vodene suspenzije generalno sadrže aktivni sastojak u formi finog praha zajedno sa jednim ili više agenasa za suspendovanje, dispergovanje ili vlaženje. Vodene suspenzije mogu takođe da sadrže jedan ili više konzervanasa, anti-oksidanasa, koloranata, agenasa za ukus, i/ili zaslađivaća.
[0120] Uljane suspenzije mogu da se formulišu uz pomoć suspendovanja aktivnog sastojka u nekom biljnom ulju ili u nekom mineralnom ulju. Uljane suspenzije mogu takođe da sadrže i neki agens za uguščivanje. Zaslađivaći poput onih koji su pomenuti iznad, i agensi za ukus mogu da se dodaju sa ciljem da se obezbedi ukusni oralni preparat. Ove kompozicije mogu da budu konzervisane uz pomoć dodavanja anti-oksidansa.
[0121] Poželjni prahovi i granule koji su prikladni za pripremu vodene suspenzije uz pomoć dodavanja vode generalno sadrže aktivni sastojak zajedno sa nekim agensom za dispergovanje ili vlaženje, agensom za suspendovanje i jednim ili više konzervanasa. Dodatni ekscipijenti poput zaslađivaća, agenasa za ukus i boju, takođe mogu da budu prisutni.
[0122] Farmaceutske kompozicije iz ovoga pronalaska mogu takođe da dolaze u formi emulzija ulje-u-vodi. Uljana faza može da bude neko biljno ulje ili neko mineralno ulje ili neka smeša pomenutih. Emulzije mogu takođe da sadrže zaslađivaće, agense za ukus i konzervanse.
[0123] Sirupi i eliksiri mogu da se formulišu uz pomoć zaslađivaća, a mogu takođe da sadrže neki demulcent, konzervans, agens za ukus i/ili boju.
[0124] Farmaceutske kompozicije mogu takođe da dolaze u formi neke sterilne vodene ili uljane suspenzije za injektiranje, koja može da bude formulisana u skladu sa poznatim procedurama koje koriste jedan ili više odgovarajućih agenasa za dispergovanje ili vlaženje i agenasa za suspendovanje, koji su već bili pomenuti iznad. Sterilni preparat za injektiranje može takođe da bude i neki sterilni rastvor za injektiranje ili suspenzija u nekom ne-toksičnom parenteralno-prihvatljivom razređivaču ili rastvaraču.
[0125] Kompozicije za administriranje uz pomoć inhalacije mogu da dolaze u formi nekog konvencionalnog aerosola pod pritiskom koji izbacuje aktivni sastojak u formi aerosola koji sadrži fino smrvljenu čvrstu materiju ili tečne kapljice. Mogu da se koriste konvencionalni aerosol-propelanti poput isparljivih fluoriranih ugljovodonika ili ugljovodonika, a naprava za
4
aerosol je prikladno uređena da ispušta tačno određenu količinu aktivnog sastojka. Inhaleri za suvi prah takođe su prikladni.
[0126] Za dodatne informacije o formulaciji, čitatelj može da pogleda Poglavlje 25.2 u 5. volumenu Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch, predsednik uredništva), Pergamon Press 1990.
[0127] U jednom aspektu ovoga pronalaska, iznad opisana farmaceutska kompozicija sadrži jedinjenje iz Primera 1 [(E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina], ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so. Prikladno, jedinjenje iz Primera 1 je prisutno kao polimorf koji je ovde opisan kao kristalna Forma B.
[0128] Proces za sintezu (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline je prikazan u Primeru 1, a preporučljivo je da ga se provodi u tami i u atmosferi azota kako bi se izbeglo formiranje produkta degradacije.
[0129] Produkt degradacije o kojem je reč, a koji je (R,E)-3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-2-ium-1-il)fenil)akrilat, ima sledeću strukturu:
i smatra se da može da se formira iz Primera 1 [(E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina] uz pomoć auto-oksidacije na vazduhu preko mehanizma slobodnog lanca radikala. Radi izbegavanja zabuna, ovaj produkt degradacije se smatra da nema neku značajnu SERD-aktivnost.
[0130] Ovo jedinjenje takođe može da se nazove (E)-3-[3,5-difluoro-4-[(3R)-2-(2-fluoro-2-metil-propil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-2-ium-1-il]fenil]prop-2-enoat, a postupak njegove sinteze je prikazan u Primeru 13.
[0131] Stručnjak prepoznaje da je kontrola formiranja produkata degradacije važna za bezbednu proizvodnju i skladištenje farmaceutika. Takođe, stručnjak zna da određena jedinjenja mogu da se degradiraju usled skladištenja, čak i nakon formulisanja u farmaceutsku kompoziciju, i da takva degradacija ponekad može da se kontroliše uz pomoć upotrebe odgovarajućih ekscipijenata u farmaceutskoj kompoziciji i/ili uz pomoć odgovarajućeg pakovanja finalnog produkta. Stručnjak zna da finalna formulacija, koja je razvijena za komercijalnu upotrebu, treba da se optimizuje na brojne karakteristike, uključujući hemijsku stabilnost, ali takođe uključujući, na primer, fizičku stabilnost i karakteristike rastvaranja. Prema tome, razvijanju se takve formulacije koje balansiraju mnoge različite faktore.
[0132] Prikladno, kompozicije (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline, ili neke njene farmaceutski-prihvatljive soli, uključuju jedinjenje koje deluje kao anti-oksidans.
[0133] Anti-oksidansi koji su prikladni za upotrebu u farmaceutskim kompozicijama su poznati stanju tehnike, i uključuju, na primer, aceton natrijum bisulfit; alfa lipoinsku kiselinu; alfa tokoferol; askorbinsku kiselinu; askorbil palmitat; butilovani hidroksianizol; butilovani hidroksitoluen; razne karotene; limunsku kiselinu monohidrat; dodecil galat; eritorbinsku kiselinu; fumarnu kiselinu; glutation; histidin; hipofosfornu kiselinu; laktobionsku kiselinu; lipoinsku kiselinu; jabučnu kiselinu; melatonin; metionin; d-manozu; monotioglicerol; oktil galat; kalijum metabisulfit; propionsku kiselinu; propil galat; natrijum askorbat; natrijum bisulfit; natrijum formaldehid sulfoksilat; natrijum metabisulfit; natrijum sulfit; natrijum tiosulfat; kalaj (II) hlorid; sulfur dioksid; timol; tokoferol; razne tokotrienole; ubihinol; urinsku kiselinu; vitamin E; i vitamin E polietilen glikol sukcinat. Takva jedinjenja mogu da uspostave svoj efekt anti-oksidansa uz pomoć brojnih mehanizama, a jedan ili više od ovih mehanizama može da bude efektivniji od drugih kod nekog naročitog jedinjenja. Neki anti-oksidansi, poput BHA, deluju kao strvinari slobodnih radikala. Drugi anti-oksidansi, poput natrijum metabisulfita i askorbinske kiseline, se lako oksidiraju pa mogu da budu oksidirani umesto aktivnog sastojka.
[0134] Na primer, kada je u mehanizmu oksidacije uključeno formiranje peroksida indukovano metalom, upotreba agensa za heliranje, poput na primer EDTA (etilendiamintetrasirćetna kiselina), može da bude korisno da se odstrane bilo kakvi metalni kontaminanti čime se indirektno postiže efekt stabilizovanja. Drugi metal-helatni agensi su poznati stanju tehnike i uključuju, na primer, betadeks sulfobutil etar natrijum; kalcijum acetat; limunsku kiselinu monohidrat; razne ciklodekstrine; dinatrijum edetat; etilendiamintetrasirćetnu kiselinu; fumarnu kiselinu; galaktozu; glutaminsku kiselinu; histidin; hidroksipropil betadeks; jabučnu kiselinu; pentetinsku kiselinu; fitohelatin; poli(metil vinil etar/maleinski anhidrid); kalijum citrat; natrijum citrat dihidrat; natrijum fosfat, dibazni; natrijum fosfat, monobazni; tartarnu kiselinu; i trehalozu.
[0135] Na primer, propil galat, natrijum metabisulfit, askorbinska kiselina i butilovani hidroksianizol su uključeni u navedenim formulacijama iz Primera 1. EDTA je takođe uključena. Primer takve formulacije je obezbeđen kao Primer 12. Od njih, kompozicije koje sadrže natrijum metabisulfit su manje stabilne od onih koje ne sadrže anti-oksidans, nakon četiri sedmice skladištenja u brojnim različitim uslovima topline i vlage. Kompozicije koje sadrže askorbinsku kiselinu se čine najstabilnijima nakon 4 sedmica skladištenja u brojnim uslovima topline i vlage (kao šta je određeno uz pomoć analize tečnom hromatografijom, na primer UHPLC).
[0136] Dodatni prikladni aditivi za formulacije koji sadrže jedinjenje iz Primera 1, podrazumevaju korišćenje ekscipijenata sa niskim sadržajem metala, ekscipijenata sa niskim sadržajem peroksida, ekscipijenata poput manitola koji su strvinari slobodnih radikala, a istovremeno i fileri. Proces proizvodnje takve formulacije može takođe da poboljša stabilnost. Na primer, kod nekih aktivnih sastojaka, obezbeđivanje bliskog mešanja aktivnog sastojka sa ekscipijentima koji potiču stabilnost može da bude važno za obezbeđivanje maksimalne stabilizacije. Blisko mešanje može da bude pod uticajem, na primer, brzine mešanja, veličine čestica i samog procesa vlažnog ili suvog mešanja/granulovanja. Aktivan sastojak može da se granulira uz pomoć nekog antioksidansa, a tada može da se pomeša sa drugim ekscipijentima. Antioksidansi mogu takođe da se dodaju u bilo koji preliv sa površine farmaceutske kompozicije.
[0137] U jednom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilnu kiselinu ili neku njenu farmaceutski-prihvatljivu so, zajedno sa najmanje jednim farmaceutski-prihvatljivim razređivačem ili nosiocem.
[0138] U jednom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilnu kiselinu ili neku njenu farmaceutski-prihvatljivu so, a takođe sadrži i neki anti-oksidans. Prikladno, askorbinska kiselina može da se koristi kao antioksidans.
[0139] U jednom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilnu kiselinu ili neku njenu farmaceutski-prihvatljivu so, a takođe sadrži i agens za heliranje metala. Prikladno, EDTA može da se koristi kao agens za heliranje metala.
[0140] U drugom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilnu kiselinu ili neku njenu farmaceutski-prihvatljivu so, neki anti-oksidans i opciono dodatno sadrži agens za heliranje metala.
[0141] U drugom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilnu kiselinu ili neku njenu farmaceutski-prihvatljivu so, zajedno sa najmanje jednim farmaceutski-prihvatljivim razređivačem ili nosiocem, pri čemu pomenuta kompozicija sadrži manje od 5% w/w (R,E)-3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-2-ium-1-il)fenil)akrilata.
[0142] U drugom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilnu kiselinu ili neku njenu farmaceutski-prihvatljivu so, zajedno sa najmanje jednim farmaceutski-prihvatljivim razređivačem ili nosiocem, pri čemu pomenuta kompozicija sadrži manje od 2% w/w (R,E)-3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-2-ium-1-il)fenil)akrilata.
[0143] U drugom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilnu kiselinu ili neku njenu farmaceutski-prihvatljivu so, zajedno sa najmanje jednim farmaceutski-prihvatljivim razređivačem ili nosiocem, pri čemu pomenuta kompozicija sadrži manje od 1% w/w (R,E)-3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-2-ium-1-il)fenil)akrilata.
[0144] U drugom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilnu kiselinu ili neku njenu farmaceutski-prihvatljivu so, zajedno sa najmanje jednim farmaceutski-prihvatljivim razređivačem ili nosiocem, pri čemu pomenuta kompozicija sadrži manje od 0.5% w/w (R,E)-3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-2-ium-1-il)fenil)akrilata.
[0145] U drugom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilnu kiselinu ili neku njenu farmaceutski-prihvatljivu so, zajedno sa najmanje jednim farmaceutski-prihvatljivim razređivačem ili nosiocem, pri čemu pomenuta kompozicija sadrži manje od 0.1% w/w (R,E)-3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-2-ium-1-il)fenil)akrilata.
[0146] U drugom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilnu kiselinu ili neku njenu farmaceutski-prihvatljivu so, zajedno sa najmanje jednim farmaceutski-prihvatljivim razređivačem ili nosiocem, pri čemu pomenuta kompozicija sadrži manje od 0.05% w/w (R,E)-3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-2-ium-1-il)fenil)akrilata.
[0147] U iznad pomenutim aspektima, u kojima je kompozicija opisana kao da sadrži manje od 5% w/w, 2%w/w, 1%w/w, 0.5% w/w, 0.1%w/w ili 0.05% w/w (R,E)-3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-2-ium-1-il)fenil)akrilata, stručnjak prepoznaje da se govori o procentu težine u odnosu na težinu (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline koja je prisutna u kompoziciji.
[0148] Produkt degradacije, (R,E)-3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-2-ium-1-il)fenil)akrilat, može prema tome da se koristi kao referentan marker ili referentan standard za analitičke tehnike poput HPLC-a uz pomoć kojih se prati stabilnost jedinjenja iz Primera 1 ili farmaceutskih kompozicija koje ga sadrže.
[0149] Količina aktivnog sastojka koja se kombinuje sa jednim ili više ekscipijenata kako bi se proizvela pojedinačna dozna forma neizbežno varira u zavisnosti o tretiranom domaćinu i naročitoj ruti za administriranje. Na primer, oralno administriranje ljudima generalno zahteva, na primer, od 1 mg do 2 g aktivnog agensa (bolje od 100 mg do 2 g, na primer od 250 mg do 1.8 g, poput od 500 mg do 1.8 g, a naročito od 500 mg do 1.5 g, prikladno od 500 mg do 1 g) koji treba da se administrira formulisan sa nekom odgovarajućom i prikladnom količinom ekscipijenata koja može da varira od oko 3 do oko 98 težinskih procenata u odnosu na ukupnu kompoziciju. Podrazumeva se da su, ako je potrebna veća doza, potrebne multiple dozne forme, na primer dve ili više tableta ili kapsula, sa dozom aktivnog sastojka koja je prikladno podeljena između njih. Tipično, pojedinačne dozne forme sadrže oko 10 mg do 0.5 g jedinjenja iz ovoga pronalaska, mada neka pojedinačna dozna forma može da sadrži količinu do 1 g. Prikladno, pojedinačna čvrsta dozna forma može da sadrži između 1 i 300 mg aktivnog sastojka.
[0150] Veličina doze za terapeutske ili profilaktičke upotrebe (svrhe) jedinjenja iz ovoga pronalaska prirodno varira u skladu sa prirodom i ozbiljnosti bolesnog stanja, dobi i polu životinje ili pacijenta i rute za administriranje, u skladu sa poznatim principima medicine.
[0151] Za korišćenje jedinjenja iz ovoga pronalaska za terapeutske ili profilaktičke svrhe, pomenuta se generalno administriraju u dnevnoj dozi u rasponu od, na primer, 1 mg/kg do 100 mg/kg telesne težine, koja može da se da u podeljenim dozama ako je potrebno. Generalno, niže doze se administriraju kada se koristi neka parenteralna ruta. Tako, na primer, za intravenozno administriranje generalno se koristi doza u rasponu od, na primer, 1 mg/kg do 25 mg/kg telesne težine. Slično, za administriranje uz pomoć inhalacije se koristi doza u rasponu od, na primer, 1 mg/kg do 25 mg/kg telesne težine. Oralno administriranje je međutim preferirano, naročito u formi tablete.
4
[0152] U jednom aspektu ovoga pronalaska, jedinjenja iz ovoga pronalaska ili njihove farmaceutski-prihvatljive soli se administriraju kao tablete koje sadrže 10 mg do 100 mg jedinjenja sa Formulom (I) (ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so), pri čemu je potrebno administriranje jedne ili više tableta kako bi se ostvarila željena doza.
[0153] Kao šta je navedeno iznad, poznato je da signaliziranje preko ERα uzrokuje tumorogenezu uz pomoć jednog ili više efekata koji posreduju proliferaciji tumorskih i drugih ćelija, posreduju angiogenim događajima i posreduju pokretljivost, migraciju i invazivnost tumorskih ćelija. Mi smo pronašli da jedinjenja iz ovoga pronalaska poseduju snažnu antitumorsku aktivnost za koju se veruje da se ostvaruje uz pomoć antagonizma i negativneregulacije ERα koji je uključen u koracima prenosa signala koje dovodi do proliferacije i preživljenja tumorskih ćelija i invazivnosti i migratorne sposobnosti tumorskih ćelija u metastazi.
[0154] U skladu sa tim, jedinjenja iz ovoga pronalaska imaju potencijal da postanu antitumorski agensi, naročito kao selektivni inhibitori proliferacije, preživljenja, pokretljivosti, širenja i invazivnosti tumorskih ćelija sisara koje inhibira rast i preživljenje tumora i sprečava metastatski tumorski rast. Naročito, jedinjenja iz ovoga pronalaska imaju potencijal da postanu anti-proliferativni i anti-invazivni agensi kod sprečavanja i/ili tretmana bolesti čvrstih tumora. Naročito, jedinjenja iz ovoga pronalaska mogu da se koriste za prevenciju ili tretman pomenutih tumora koji su osetljivi na inhibiciju ERα i koji su uključeni u koracima prenosa signala koji dovode do proliferaciju i preživljenje tumorskih ćelija i daju migratornu sposobnost i invazivnost tumorskih ćelija koje metastaziraju. Dalje, jedinjenja iz ovoga pronalaska mogu da budu korisna za prevenciju ili tretman onih tumora na koje može da se utiče, potpuno ili delomično, poticanjem antagonizma i negativne-regulacije ERα, tj. pomenuta jedinjenja mogu da se koriste za uspostavu efekta koji inhibira ERα kod toplo-krvnih životinja koje trebaju takav tretman.
[0155] U skladu sa jednim dodatnim aspektom, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje sa Formulom (I), ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so, kao šta je definisano iznad za upotrebu kao medikament kod toplo-krvnih životinja poput čoveka.
[0156] U skladu sa jednim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano iznad za upotrebu sa ciljem uspostave anti-proliferativnog efekta kod toplo-krvnih životinja poput čoveka.
[0157] U skladu sa jednim drugim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano iznad za upotrebu kod toplo-krvnih životinja poput čoveka kao anti-invazivni agens sa ciljem sprečavanja i/ili tretmana neke bolesti čvrstog tumora.
[0158] U skladu sa jednom dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano iznad za uspostavu anti-proliferativnog efekta kod toplo-krvnih životinja poput čoveka.
[0159] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je upotreba jedinjenja sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano iznad za proizvodnju leka za upotrebu sa ciljem uspostave anti-proliferativnog efekta kod toplo-krvnih životinja poput čoveka.
[0160] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je upotreba jedinjenja sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano iznad za proizvodnju leka za upotrebu kod toplo-krvnih životinja poput čoveka u svojstvu anti-invazivnog agensa sa ciljem sprečavanja i/ili tretmana nekog čvrstog tumora.
[0161] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano iznad za upotrebu u prevenciji ili tretmanu raka kod toplo krvnih životinja poput čoveka.
[0162] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je upotreba jedinjenja sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano iznad za proizvodnju medikamenta koji se koristi za prevenciju ili tretman raka kod toplo krvnih životinja poput čoveka.
[0163] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano iznad za upotrebu sa ciljem prevencije il tretmana čvrstog tumora kod toplo krvnih životinja poput čoveka.
[0164] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je upotreba jedinjenja sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano iznad za proizvodnju leka za prevenciju ili tretman čvrstog tumora kod toplo krvnih životinja poput čoveka.
[0165] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neke njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano iznad za prevenciju ili tretman onih tumora koji su osetljivi na inhibiciju ER koji su uključeni u koracima prenosa signala koji dovode do proliferaciju, preživljenje, invazivnost i migratornu sposobnost tumorskih ćelija.
[0166] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je upotreba jedinjenja sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano iznad za proizvodnju leka za prevenciju ili tretman onih tumora koji su osetljivi na inhibiciju ER koji su uključeni u koracima prenosa signala koji dovode do proliferacije, preživljenje, invazivnost i migratorne sposobnosti tumorskih ćelija.
[0167] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano iznad za uspostavu efekta inhibicije ERα.
[0168] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je upotreba jedinjenja sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano iznad za proizvodnju medikamenta za uspostavu efekta inhibicije ERα.
[0169] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano iznad za uspostavu selektivnog efekta inhibicije ERα.
4
[0170] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je upotreba jedinjenja sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano iznad u proizvodnji medikamenta za uspostavu selektivnog efekta inhibicije ERα.
[0171] Ovde su opisana jedinjenja koja mogu da se vežu na domen ERα koji veže ligand i koja selektivno degradiraju estrogenski receptor. U biohemijskim ogledima i ogledima na bazi ćelija, jedinjenja iz ovoga pronalaska su se pokazala potentnim u vezanju estrogenskog receptora i smanjivanju ćelijskih nivoa ERα pa prema tome mogu da budu korisna u tretmanu bolesti i stanja koja su osetljiva na estrogen (uključujući bolesti koje su razvile rezistenciju na endokrine terapije), tj. mogu da se upotrebljavaju u tretmanu raka dojke i ginekoloških tumora (uključujući tumora tela i vrata materice i tumora jajnika) i tumora koji eksprimiraju ERα mutirane belančevine, koje mogu da sadrže de novo mutacije ili mogu da se pojave kao rezultat tretmana sa ranijom endokrinom terapijom poput inhibitora aromataze.
[0172] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano iznad za upotrebu u tretmanu raka dojke ili ginekoloških tumora.
[0173] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano iznad za upotrebu u tretmanu raka dojke, raka tela i vrata materice i raka jajnika.
[0174] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano iznad za upotrebu u tretmanu raka dojke.
[0175] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano iznad za upotrebu u tretmanu raka dojke, pri čemu je pomenuti rak razvio rezistenciju na jednu ili više drugih endokrinih terapija.
[0176] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je upotreba jedinjenja sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano iznad u proizvodnji medikamenta za tretman raka dojke ili ginekoloških tumora.
[0177] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je upotreba jedinjenja sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano iznad u proizvodnji medikamenta za tretman raka dojke, raka tela i vrata materice i raka jajnika.
[0178] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je upotreba jedinjenja sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano iznad u proizvodnji leka za tretman raka dojke.
[0179] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je upotreba jedinjenja sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano iznad u proizvodnji medikamenta za tretman raka dojke, pri čemu je pomenuti rak razvio rezistenciju na jednu ili više drugih endokrinih terapija.
[0180] U jednoj karakteristici ovoga pronalaska, rak koji treba da se tretira je rak dojke. U daljnjem aspektu ove karakteristike, rak dojke je estrogen receptor ve (ER+ve). U jednoj izvedbi ovoga aspekta, jedinjenje sa Formulom (I) se dozira u kombinaciji sa nekim drugim antitumorskim agensom, poput nekog anti-hormonskog agensa kao šta je ovde definisano.
[0181] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I), ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta je definisano iznad za upotrebu u tretmanu ER+ve raka dojke.
[0182] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je upotreba jedinjenja sa Formulom (I), ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli, kao šta je definisano iznad u proizvodnji medikamenta za tretman ER+ve raka dojke.
[0183] Kao šta je navedeno iznad, in vivo efekti jedinjenja sa Formulom (I) mogu da se izvrše delomično sa jednim ili više metabolita koji nastaju u ljudskom ili životinjskom telu nakon administriranja jedinjenja sa Formulom (I).
4
[0184] U svim primenama navedenim iznad, prikladno jedinjenje sa formulom (I) je ono iz Primera 1, ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so. U jednom aspektu, Primer 1 dolazi u kristalnoj formi B kao šta je opisani iznad.
[0185] Ovde definisan anti-tumorski tretman može da se primeni kao pojedinačna terapija ili može da uključuje, osim jedinjenja iz ovoga pronalaska, konvencionalni hirurški zahvat ili radioterapiju ili hemoterapiju. Pomenuta hemoterapija može da uključuje jednu ili više od sledećih kategorija anti-tumorskih agenasa:
(i) druge antiproliferativne/antineoplastične lekove i njihove kombinacije, kao šta se koriste u medicinskoj onkologiji, poput agenasa za alkilovanje (na primer cis-platina, oksaliplatina, karboplatina, ciklofosfamid, azotni iperit, melfalan, hlorambucil, busulfan, temozolamid i razne nitrozouree); antimetabolita (na primer gemcitabin i razne antifolate poput fluoropirimidina kao 5-fluorouracil i tegafur, raltitreksed, metotreksat, citozin arabinozid, i hidroksiurea); antitumorskih antibiotika (na primer antraciklini poput adriamicina, bleomicina, doksorubicina, daunomicina, epirubicina, idarubicina, mitomicina-C, daktinomicina i mitramicina); antimitotičkih agenasa (na primer vinka alkaloidi kao vinkristin, vinblastin, vindezin i vinorelbin i taksoida kao taksol i taksoter i inhibitore polokinaze); i inhibitora topoizomeraze (na primer epipodofilotoksini kao etopozid i tenipozid, amsakrin, topotekan i kamptotecin);
(ii) antihormonalne agense poput antiestrogena (na primer tamoksifen, fulvestrant, toremifen, raloksifen, droloksifen i jodoksifen), progestogena (na primer megestrol acetat), inhibitora aromataze (na primer kao anastrozol, letrozol, vorazol i eksemestan);
(iii) inhibitori funkcije faktora rasta i njihovih nizvodnih signalnih puteva: uključeni su Ab-modulatori bilo kojeg faktora rasta ili meta receptora faktora rasta (pregledno prikazao kod autora Stern et al. Critical Reviews in Oncology/Haematology, 2005, 54, str.11-29);
takođe su uključeni i inhibitori sličnih meta sa malim molekulom, na primer inhibitori kinaze – primeri uključuju anti-erbB2 antitelo trastuzumab [Herceptin™], anti-EGFR antitelo panitumumab, anti-EGFR antitelo cetuksimab [Erbituks, C225] i inhibitori tirozin kinaze uključujući inhibitore porodicu erbB-receptora, poput porodice receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR/erbB1), inhibitori tirozin kinaze poput gefitiniba ili erlotiniba, inhibitori
4
erbB2 tirozin kinaze poput lapatiniba, i mešani erb1/2 inhibitori poput afataniba; slične strategije su dostupne i za druge klase faktora rasta i njihovih receptora, na primer inhibitori porodice faktora rasta hepatocita ili njihovih receptora uključujući c-met i ron; inhibitori insulina i porodice insulinskog faktora rasta ili njihovih receptora (IGFR, IR), inhibitori porodice faktora rasta izvedenih iz krvnih pločica ili njihovih receptora (PDGFR), i inhibitori signaliziranja koje je posredovano sa drugim receptorskim tirozin kinazama poput c-kita, AnLK, i CSF-1R;
takođe su uključeni modulatori koji ciljaju signalne belančevine iz signalnog puta PI3-kinaze, na primer, inhibitori raznih izoforma PI3-kinaze poput PI3K-α/β/γ i ser/thr kinaza kao AKT, mTOR (poput AZD2014), PDK, SGK, PI4K ili PIP5K; takođe su uključeni i inhibitori serin/treonin kinaza koje nisu navedene iznad, na primer raf-inhibitori poput vemurafeniba, MEK-inhibitori poput selumetiniba (AZD6244), Abl-inhibitori poput imatiniba ili nilotiniba, Btkinhibitori poput ibrutiniba, Syk-inhibitori poput fostamatiniba, inhibitori aurora kinaze (na primer AZD1152), inhibitori drugih ser/thr kinaza poput raznih JAK, STAT i IRAK4, i inhibitori ciklin-zavisne kinaze poput palbocikliba;
(iv) modulatori signalnih puteva DNA-oštećenja, na primer PARP-inhibitori (na primer, Olaparib), ATR-inhibitori ili ATM-inhibitori);
(v) modulatori apoptoze i puteva ćelijske smrti poput Bcl porodice modulatora (na primer, ABT-263/Navitoklaks, ABT-199);
(vi) antiangiogeni agensi poput onih koji inhibiraju efekte vaskularnog endotelijalnog faktora rasta, [na primer, antitelo protiv vaskularnog endotelijalnog faktora rasta bevacizumab (Avastin™) i na primer, inhibitor VEGF-receptorske tirozin kinaze poput sorafeniba, aksitiniba, pazopaniba, sunitiniba i vandetaniba (i jedinjenja koja deluju uz pomoć drugih mehanizama (na primer, linomid, inhibitori funkcije integrina αvβ3 i angiostatina)];
(vii) agesni za vaskularno oštećivanje, poput kombretastatina A4;
(viii) anti-invazivni agensi, na primer inhibitori porodice c-Src kinaze poput dazasiniba (J. Med. Chem., 2004, 47, 6658-6661) i bosutiniba (SKI-606), i inhibitori metaloproteinaze kao marimastat, inhibitori funkcije receptora urokinaznog plasminogenog aktivatora ili antitela protiv heparanaze];
(ix) imunoterapijski pristupi, uključujući na primer ex vivo i in vivo pristupi sa ciljem povećavanja imunogenosti tumorskih ćelija pacijenta, poput transfekcije sa
4
citokinima poput interleukina 2, interleukina 4 ili faktora stimuliranja kolonije granulocit-makrofag, pristupi sa ciljem smanjivanja anergije T-ćelija, pristupi koji koriste transfektovane imuno-ćelije poput citokin-transfektovanih dendrocita, pristupi koji koriste citokin-transfektovane tumorske linije i pristupi koji koriste anti-idiotipska antitela. Specifični primeri uključuju monoklonska antitela koja ciljaju PD-1 (na primer, BMS-936558) ili CTLA4 (na primer, ipilimumab i tremelimumab);
(x) terapije na bazi antisens-tehnilogije ili RNAi-tehnologije, na primer oni koji su usmereni protiv navedenih meta;
(xi) pristupi genske terapije, uključujući na primer pristupe koji menjaju aberantne gene poput aberantnog p53 ili aberantnog BRCA1 ili BRCA2, GDEPT (genusmerena encimska pro-lek terapija) pristupi poput onih koji koriste citozin deaminazu, timidin kinazu ili bakterijsku nitroreduktazu i pristupi sa ciljem povećavanja tolerancije pacijenta na hemoterapiju ili radioterapiju poput genske terapije rezistencije na više lekova.
[0186] U skladu sa ovim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je kombinacija koja je prikladna za upotrebu u tretmanu raka koja obuhvata jedinjenja iz ovoga pronalaska kao šta su ovde definisana ili neku njihovu farmaceutski prihvatljivu so i neki drugi anti-tumorski agens, a naročito bilo koji od anti-tumorskih agenasa koji su navedeni pod tačkama (i) - (xi) iznad. Naročito, anti-tumorski agens naveden u tačkama (i) - (xi) iznad je standard za brigu o nekom specifičnom raku; stručnjak razume značenje fraze "standardna briga". U jednom aspektu, jedinjenje iz ovoga pronalaska je ono iz Primera 1, ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so.
[0187] Prema tome, u jednom dodatnom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena su jedinjenja iz ovoga pronalaska ili njihove farmaceutski prihvatljive soli u kombinaciji sa nekim drugim anti-tumorskim agensom, a naročito anti-tumorskim agensom koji je izabran iz onih koji su navedeni u tačkama (i) - (xi) iznad.
[0188] U jednom drugom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđen je Primer 1 [(E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina] ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so u kombinaciji
4
sa nekim drugim anti-tumorskim agensom, a naročito nekim anti-tumorskim agensom koji je izabran iz onih koji su navedeni u tačkama (i) - (xi) iznad.
[0189] U jednom drugom aspektu ovoga pronalazak, obezbeđena su jedinjenja iz ovoga pronalaska ili neka njihova farmaceutski prihvatljiva so u kombinacija sa nekim drugim antitumorskim agensom, a naročito nekim anti-tumorskom agensom koji je izabran iz tačke (i) iznad.
[0190] U jednom drugom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje iz ovoga pronalaska, kao šta je definisano iznad, ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so i bilo koji od anti-tumorskih agenasa iz tačke (i) iznad.
[0191] U jednom daljnjem aspektu ovoga pronalaska, obezbeđen je Primer 1 ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so u kombinaciji sa bilo kojim anti-tumorskom agensom iz tačke (i) iznad.
[0192] U jednom daljnjem aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je kombinacija koja se upotrebljava kod tretmana raka i koja sadrži jedinjenja iz ovoga pronalaska kao šta je definisano iznad ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so i neki taksoid, poput na primer taksola ili taksotera, prikladno taksoter. Na primer, prikladno jedinjenje iz ovoga pronalaska u kombinaciji sa nekim taksoidom, poput na primer taksola ili taksotera, prikladno taksoter, je Primer 1, ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so.
[0193] U jednom dodatnom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena su jedinjenja iz ovoga pronalaska ili njihove farmaceutski prihvatljive soli u kombinaciji sa drugim anti-tumorskim agensima, a naročito anti-tumorski agens koji je izabran iz onih koji su navedeni u tački (ii) iznad.
[0194] U jednom dodatnom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je kombinacija koja se upotrebljava u tretmanu raka i koja sadrži jedinjenja iz ovoga pronalaska kao šta je definisano iznad ili njihove farmaceutski prihvatljive soli i bilo koji od malopre pomenutih agenasa navedenih u tački (ii) iznad, na primer bilo koji od anti-estrogena navedenih u tački (ii) iznad, ili na primer neki inhibitor aromataze naveden u tački (ii) iznad.
4
[0195] U jednom dodatnom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je kombinacija koja se upotrebljava u tretmanu raka i koja sadrži Primer 1 ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so i bilo koji od malopre pomenutih agenasa navedenih pod tačkom (ii) iznad, na primer bilo koji od anti-estrogena navedenih u tački (ii) iznad, ili na primer neki inhibitor aromataze iz tačke (ii) iznad.
[0196] U jednom dodatnom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je kombinacija koja se upotrebljava u tretmanu raka i koja sadrži Primer 1 ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so i neki inhibitor mTOR-a, poput AZD2014 (vidi na primer dokument WO2008/023161).
[0197] U jednom dodatnom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je kombinacija koja se koristi u tretmanu raka i koja sadrži Primer 1, ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so i PI3Kα,-inhibitor, poput onih inhibitora PI3K α,δ koji su opisani u našoj ko-pridruženoj PCT aplikaciji PCT/GB2014/050163. Jedan primer prikladnog inhibitora PI3K α/δ je Primer 3 iz dokumenta PCT/GB2014/050163, koji je jedinjenje 1-(4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-il)-3-hidroksipropan-1-on, ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so. Proces za pripremu Primera 3 iz dokumenta PCT/GB2014/050163 je naveden u Referentnom Primeru 1 iz ovog teksta.
[0198] U jednom dodatnom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je kombinacija koja se upotrebljava u tretmanu raka i koja sadrži Primer 1 ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so i palbociklib.
[0199] U jednom aspektu malopre pomenute kombinacije jedinjenja sa formulom (I) ili neke farmaceutski prihvatljive soli, naročito Primer 1 ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so, sa nekim anti-tumorskim agensom iz tačke (ii) iznad, ili nekim inhibitorom mTOR-a (poput AZD2014), ili inhibitorom PI3K-α (poput onih inhibitora PI3K α/δ koji su opisani u našoj kopridruženoj PCT aplikaciji PCT/GB2014/050163, naročito tamošnji Primer 3) ili palbociklibom, je prikladna za upotrebu u tretmanu raka dojke ili ginekoloških tumora, poput raka dojke, raka tela i vrata materice i raka jajnika, naročito rak dojke, poput ER+ve raka dojke.
[0200] U ovom tekstu, kada se koristi termin "kombinacija" podrazumeva se da se ovo odnosi na simultano, odvojeno ili sekvencijalno administriranje. U jednom aspektu ovoga pronalaska "kombinacija" se odnosi na simultano administriranje. U drugom aspektu ovoga pronalaska "kombinacija" se odnosi na odvojeno administriranje. U jednom dodatnom aspektu ovoga pronalaska "kombinacija" se odnosi na sekvencijalno administriranje. Kada je administriranje sekvencijalno ili odvojeno, dnevno administriranje druge komponente ne treba da bude takvo koje dovodi do gubitka korisnog efekta same kombinacije. Kada se kombinacija sastoji od dve ili više komponente tada se administrira odvojeno ili sekvencijalno, pri čemu se podrazumeva da dozni režim pojedine komponente može da se razlikuje od režima drugih komponenata i može da bude nezavisan o drugim komponentama. Prikladno, jedinjenja iz ovoga pronalaska se doziraju jednom dnevno.
[0201] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje sa Formulom (I) ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so u kombinaciji sa nekim anti-tumorskim agensom koji je izabran iz onih koji su navedeni u tačkama (i) - (xi) iznad, zajedno sa nekim farmaceutski prihvatljivim razređivačem ili nosiocem.
[0202] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži Primer 1 [(E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina] ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so u kombinaciji sa nekim anti-tumorskim agensom koji je izbran iz onih koji su navedeni u tačkama (i) - (xi) iznad, zajedno sa nekim farmaceutski prihvatljivim razređivačem ili nosiocem.
[0203] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje sa Formulom (I) ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so u kombinaciji sa bilo kojim od antihormonskih agenasa navedenih u tački (ii) iznad, na primer bilo koji od anti-estrogena navedenih u tački (ii) iznad, ili na primer sa nekim inhibitorom aromataze navedenim u tački (ii) iznad zajedno sa nekim farmaceutski prihvatljivim razređivačem ili nosiocem.
1
[0204] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži Primer 1 ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so i bilo koji od antihormonskih agenasa navedenih u tački (ii) iznad, na primer bilo kojim od anti-estrogena navedenih u tački (ii) iznad, ili na primer sa nekim inhibitorom aromataze koji je naveden u tački (ii) iznad; zajedno sa nekim farmaceutski prihvatljivim razređivačem ili nosiocem.
[0205] U jednom dodatnom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži Primer 1 ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so i neki inhibitor mTOR-a, poput AZD2014 (vidi na primer dokument WO2008/023161); zajedno sa nekim farmaceutski prihvatljivim razređivačem ili nosiocem.
[0206] U jednom dodatnom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži Primer 1, ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so i neki PI3Kαinhibitor, poput onih inhibitora PI3K α/δ koji su opisni u našoj ko-pridruženoj PCT aplikaciji PCT/GB2014/050163, zajedno sa nekim farmaceutski prihvatljivim razređivačem ili nosiocem. Jedan primer prikladnog inhibitora PI3K α/δ je Primer 3 iz dokumenta PCT/GB2014/050163, kao šta je opisano iznad.
[0207] U jednom dodatnom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži Primer 1 ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so i palbociklib zajedno sa nekim farmaceutski prihvatljivim razređivačem ili nosiocem.
[0208] U jednom aspektu, malopre pomenute farmaceutske kompozicije sa jedinjenjem sa Formulom (I) ili sa nekom njegovom farmaceutski prihvatljivom soli, naročito Primer 1 ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so, sa nekim anti-tumorskom agensom navedenim u tački (ii) iznad, ili sa inhibitorom mTOR-a (poput AZD2014), ili inhibitorom PI3K-α (poput onih inhibitora PI3K α/δ koji su opisani u našoj ko-pridruženoj PCT aplikaciji PCT/GB2014/050163, naročito tamošnji Primer 3) ili sa palbociklibom, je prikladna za upotrebu u tretmanu raka dojke ili ginekoloških tumora, poput raka dojke, raka tela i vrata materice i raka jajnika, naročito rak dojke, poput ER+ve raka dojke.
[0209] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje sa Formulom (I) ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu
2
so u kombinaciji sa nekim anti-tumorskim agensom koji je izabran iz tačaka (i) - (xi) iznad, zajedno sa nekim farmaceutski prihvatljivim razređivačem ili nosiocem za upotrebu u tretmanu raka.
[0210] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje sa Formulom (I) ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so u kombinaciji sa bilo kojim od antihormonskih agenasa navedenih u tački (ii) iznad, na primer bilo koji anti-estrogen od onih koji su navedeni u tački (ii) iznad, ili na primer sa nekim inhibitorom aromataze navedenim u tački (ii) iznad zajedno sa nekim farmaceutski prihvatljivim razređivačem ili nosiocem za upotrebu u tretmanu raka.
[0211] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži Primer 1 ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so u kombinaciji sa nekim anti-tumorskim agensom koji je izabran od onih koji su navedeni u tačkama (i) - (xi) iznad, zajedno sa nekim farmaceutski prihvatljivim razređivačem ili nosiocem za upotrebu u tretmanu raka.
[0212] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži Primer 1 ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so i bilo koji od antihormonskih agenasa navedenih u tački (ii) iznad, na primer bilo koji od anti-estrogena navedenih u tački (ii) iznad, ili na primer sa inhibitorom aromataze navedenim u tački (ii) iznad; zajedno sa nekim farmaceutski prihvatljivim razređivačem ili nosiocem za upotrebu u tretmanu raka.
[0213] U jednom dodatnom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži Primer 1 ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so i neki inhibitor mTOR-a, poput AZD2014 (vidi na primer dokument WO2008/023161); zajedno sa nekim farmaceutski prihvatljivim razređivačem ili nosiocem za upotrebu u tretmanu raka.
[0214] U jednom dodatnom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži Primer 1, ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so i neki PI3Kαinhibitor, poput onih inhibitora PI3K α/δ koji su opisani u našoj ko-pridruženoj PCT aplikaciji PCT/GB2014/050163, zajedno sa nekim farmaceutski prihvatljivim razređivačem ili nosiocem za upotrebu u tretmanu raka. Jedan primer prikladnog inhibitora PI3K α/δ je Primer 3 iz dokumenta PCT/GB2014/050163, kao šta je opisano iznad.
[0215] U jednom dodatnom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži Primer 1 ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so i palbociklib zajedno sa nekim farmaceutski prihvatljivim razređivačem ili nosiocem za upotrebu u tretmanu raka.
[0216] U jednom aspektu malopre pomenute farmaceutske kompozicije sa jedinjenjem sa Formulom (I) ili nekom njegovom farmaceutski prihvatljivom soli, naročito Primer 1 ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so, sa nekim anti-tumorskim agensom koji je naveden u tački (ii) iznad, ili nekim inhibitorom mTOR-a (poput AZD2014), ili inhibitorom PI3K-α (poput onih inhibitora PI3K α/δ koji su opisani u ko-pridruženoj PCT aplikaciji PCT/GB2014/050163, naročito tamošnji Primer 3) ili sa palbociklibom, je prikladna za upotrebu u tretmanu raka dojke ili ginekoloških tumora, poput raka dojke, raka tela i vrata materice i raka jajnika, naročito rak dojke, poput ER+ve raka dojke.
[0217] U skladu sa jednom dodatnom karakteristikom ovoga pronalaska, obezbeđena je upotreba jedinjenja sa Formulom (I) ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli u kombinaciji sa nekim anti-tumorskim agensom koji je izabran od onih koji su navedeni u tačkama (i) - (xi) iznad, u proizvodnji medikamenta koji je namenjen upotrebi u tretmanu raka kod toplo-krvnih životinja, poput čoveka.
[0218] U skladu sa jednom dodatnom karakteristikom ovoga pronalaska, obezbeđena je upotreba Primera 1 ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli u kombinaciji sa nekim antitumorskim agensom koji je izabran od onih koji su navedeni u tačkama (i) - (xi) iznad, u proizvodnji medikamenta koji je namenjen za upotrebu u tretmanu raka kod toplo-krvnih životinja, poput čoveka.
[0219] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je upotreba jedinjenja sa Formulom (I) ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli u kombinaciji sa bilo kojim od antihormonskih agenasa navedenih u tački (ii) iznad, na primer bilo koji od antiestrogena navedenih u tački (ii) iznad, ili na primer neki inhibitor aromataze naveden u tački
4
(ii) iznad u proizvodnji medikamenta koji je namenjen da se upotrebljava u tretmanu raka kod toplo-krvnih životinja, poput čoveka.
[0220] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je upotreba Primera 1 ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli u kombinaciji sa bilo kojim od antihormonskih agenasa navedenih u tački (ii) iznad, na primer bilo koji od anti-estrogena navedenih u tački (ii) iznad, ili na primer neki inhibitor aromataze naveden u tački (ii) iznad; u proizvodnji medikamenta namenjen za upotrebu u tretmanu raka kod toplo-krvnih životinja, poput čoveka.
[0221] U jednom dodatnom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je upotreba Primera 1 ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli u kombinaciji sa inhibitorom mTOR-a, poput AZD2014 (vidi na primer dokument WO2008/023161), u proizvodnji medikamenta koji je namenjen za upotrebu u tretmanu raka kod toplo-krvnih životinja, poput čoveka.
[0222] U jednom dodatnom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je upotreba Primera 1, ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli u kombinaciji sa PI3Kα-inhibitorom, poput onih inhibitora PI3K α/δ koji su opisani u našoj pridruženoj PCT aplikaciji PCT/GB2014/050163, u proizvodnji medikamenta namenjenog za upotrebu u tretmanu raka kod toplo-krvnih životinja, poput čoveka. Jedan primer za prikladni inhibitor PI3K α/δ je Primer 3 iz dokumenta PCT/GB2014/050163, kao šta je opisano iznad.
[0223] U jednom dodatnom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je upotreba Primera 1 ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli u kombinaciji sa palbociklibom u proizvodnji medikamenta koji je namenjen za tretman raka kod toplo-krvnih životinja, poput čoveka.
[0224] U jednom aspektu, malopre pomenute upotrebe jedinjenja sa Formulom (I) ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli, naročito Primer 1 ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so, u kombinacija sa nekim anti-tumorskim agensom koji je naveden u tački (ii) iznad, ili sa nekim inhibitorom mTOR-a (poput AZD2014), ili inhibitorom PI3K-α (poput onih inhibitora PI3K α/δ koji su opisani u našoj pridruženoj PCT aplikaciji PCT/GB2014/050163, naročito tamošnji Primer 3) ili sa palbociklibom, su prikladne za primenu u proizvodnji medikamenta za tretman raka dojke ili ginekoloških tumora, poput raka dojke, raka tela i vrata materice, raka jajnika, naročito rak dojke, poput ER+ve raka dojke.
[0225] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđen je komplet hemikalija koji sadrži jedinjenje sa Formulom (I) ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so u kombinaciji sa nekim anti-tumorskim agensom koji je izabran iz onih koji su navedeni u tačkama (i) - (xi) iznad.
[0226] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđen je komplet hemikalija koji sadrži jedinjenje sa Formulom (I) ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so u kombinaciji sa nekim anti-tumorskim agensom koji je izabran iz onih koji su navedeni u tački (i) ili (ii) iznad.
[0227] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđen je komplet hemikalija koji sadrži:
a) jedinjenje sa Formulom (I) ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so u prvoj unitarnoj doznoj formi;
b) anti-tumorski agens koji je izabran od onih koji su navedeni u tačkama (i) - (xi) iznad u drugoj unitarnoj doznoj formi; i
c) kontejner za skladištenje pomenute prve i druge dozne forme.
[0228] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđen je komplet hemikalija koji sadrži:
a) jedinjenje sa Formulom (I) ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so u prvoj unitarnoj doznoj formi;
b) anti-tumorski agens koji je izabran od onih koji su navedeni u tačkama (i) - (ii) iznad u drugoj unitarnoj doznoj formi; i
c) kontejner koji sadrži pomenutu prvu i drugu doznu formu.
[0229] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđen je komplet hemikalija koji sadrži Primer 1 ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so u kombinaciji sa nekim anti-tumorskim agensom koji je izabran od onih koji su navedeni u tačkama (i) - (xi) iznad.
[0230] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđen je komplet hemikalija koji sadrži Primer 1 ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so u kombinaciji sa nekim anti-tumorskim agensom koji je izabran od onih koji su navedeni u tačkama (i) ili (ii) iznad.
[0231] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđen je komplet hemikalija koji sadrži:
a) Primer 1 ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so u prvoj unitarnoj doznoj formi;
b) anti-tumorski agens koji je izabran od onih koji su navedeni u tačkama (i) - (xi) iznad u drugoj unitarnoj doznoj formi; i
c) kontejner koji sadrži pomenutu prvu i drugu doznu formu.
[0232] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđen je komplet hemikalija koji sadrži:
a) Primer 1 ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so u prvoj unitarnoj doznoj formi;
b) anti-tumorski agens koji je izabran od onih koji su navedeni u tačkama (i) - (ii) iznad u drugoj unitarnoj doznoj formi; i
c) kontejner koji sadrži pomenutu prvu i drugu doznu formu.
[0233] U skladu sa jednim dodatnim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđen je komplet hemikalija koji sadrži:
a) Primer 1 ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so u prvoj unitarnoj doznoj formi;
b) anti-tumorski agens izabran iz grupe koja obuhvata AZD2014, PI3Kα-inhibitor (poput onih inhibitora PI3K α/δ koji su opisani u našoj pridruženoj PCT aplikaciji PCT/GB2014/050163) i palbociklib u drugoj unitarnoj doznoj formi; i
c) kontejner koji sadrži pomenutu prvu i drugu doznu formu.
[0234] U svim iznad pomenutim postupcima, upotrebama i drugim aspektima, kada se koristi jedinjenje iz Primera 1, prikladno se koristi kristalna Forma B.
[0235] Kombinovana terapija koja je opisana iznad može da se doda na vrh standardne nege koja se provodi u skladu sa njenim predviđenim i prepisanim rasporedom.
[0236] Mada su jedinjenja sa Formulom (I) primarno važna kao terapeutski agensi za tretman toplo-krvnih životinja (uključujući čoveka), pomenuta su takođe korisne kada god je potrebno da se inhibira ER-α. Tako, pomenuta su korisna kao farmakološki standardi za upotrebu u razvoju novih bioloških testova i kod potrage za novim farmakološkim agensima.
Personalizovana zdravstvena zaštita
[0237] Drugi aspekt ovoga pronalaska se bazira na identifikovanju veze između status gena koji kodira ERα i potencijalne podložnosti tretmanu sa jedinjenjem sa Formulom (I). Naročito, status gena ERα može da pokazuje da je manje verovatno da pacijent odgovori na postojeću hormonsku terapiju (poput inhibitora aromataze), delomično zato šta se smatra da se ERαmutacije pojavljuju kao mehanizam rezistencije na postojeće tretmane. SERD, naročito SERD koji može da se administrira oralno u potencijalno većim dozama bez nepotrebnih problema, mogu se pokazati korisnima kod tretmana pacijenata koji imaju mutacije u ERα koje su rezistentne na druge terapije. Ovo, prema tome, obezbeđuje mogućnosti, postupke i sredstva za izbor pacijenata za tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I), naročito pacijenata sa rakom. Ovaj pronalazak se odnosi na sredstva i postupke za izbor pacijenata (uključujući personalizovanu medicinu). Izbor se bazira na tome da li tumorske ćelije koje treba da se tretiraju sadrže ERα gen divljeg-tipa ili mutirani ERα gen. Status gena ERα može, prema tome, da se koristi kao biomarker koji pokazuje da bi izbor tretmana sa SERD mogao biti koristan. Radi izbegavanja zabuna, smatra se da su jedinjenja sa formulom (I), kao šta su ovde opisana, slično aktivna protiv gena divljeg-tipa i mutiranih gena ERα, barem protiv onih mutacija u genu ERα koje su identifikovane do datuma podnošenja ove aplikacije.
[0238] Postoji jasna potreba za biomarkerima koji bi pomogli kod izbora pacijenata čiji tumori mogu da odgovore na tretman sa SERD, poput jedinjenja sa Formulom (I). Biomarkeri za izbor pacijenata koji identifikuju pacijente koji će pre da odgovore na neki agens u odnosu na neki drugi su idealni kod postupaka za tretman raka, zbog toga šta otklanjaju nepotrebne tretmane pacijenata sa tumorima koji ne odgovaraju na potencijalne nus-pojave takvih agenasa.
[0239] Biomarker može da se opiše kao "karakteristika koja može da se objektivno izmeri i proceni kao indikator normalnog bioloških procesa, patoloških procesa, ili farmakoloških odgovora na terapeutsku intervenciju". Biomarker je bilo koji indikator koji može da se identifikuje i izmeri i koji je povezan sa nekim posebnim stanjem ili bolesti kada postoji korelacija između prisutnosti ili nivoa biomarkera i nekog aspekta pomenutog stanja ili bolesti (uključujući prisutnost, nivo ili promena nivoa, tip, fazu, podložnost stanju ili bolesti, ili odgovor na neki lek koji se koristi za tretman pomenutog stanja ili bolesti). Korelacija može da bude kvalitativna, kvantitativna, ili oboje istovremeno. Tipično, biomarker je jedinjenje, fragment jedinjenja ili grupa jedinjenja. Takva jedinjenja mogu da budu bilo koja jedinjenja koja se nalaze ili se proizvode u organizmu, uključujući belančevine (i peptide), nukleinske kiseline i druga jedinjenja.
[0240] Biomarkeri obezbeđuju mogućnost predviđanja, pa zbog toga mogu da se koriste kako bi se previdjela ili detektovala prisutnost, nivo, tip ili faza nekih naročitih stanja ili bolesti (uključujući prisutnost ili nivo određenih mikroorganizama ili toksina), sklonost (uključujući genetičku sklonost) naročitim stanjima ili bolestima, ili odgovor na naročite tretmane (uključujući tretmane sa lekovima). Smatra se da će biomarkeri da igraju važnu ulogu, čija će snaga rasti, u budućim razvojem i pronalaženjem lekova, upravo zbog poboljšanja efikasnosti istraživačkih i razvojnih programa. Biomarkeri mogu da se koriste kao dijagnostički agensi, monitori napredovanja bolesti, monitori samog tretmana i predikatori kliničkog ishoda. Na primer, brojni projekti istraživanja biomarkera ciljaju da identifikuju markere specifičnih tipova tumora i specifičnih kardiovaskularnih i imunoloških bolesti. Veruje se da će razvoj novih validiranih biomarkera da dovede do značajnih redukcija troškova zdravstvene zaštite i razvoja lekova, a i do značajnih poboljšanja tretmana širokog raspona bolesti i stanja.
[0241] Sa ciljem da se optimalno dizajniraju klinička ispitivanja i da se dobije čim više informacija iz njih, potreban je biomarker. Ovaj marker treba da bude meriv u surogatu i u tumorskim tkivima. Idealno, ovi markeri takođe korelišu sa efikasnosti pa mogu da se uspešno koriste za selekciju pacijenata.
[0242] Tako, tehnički problem koji prati ovaj aspekt ovoga pronalaska je identifikacija sredstava za stratifikaciju pacijenata za tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I). Pomenuti tehnički problem se rešava uz pomoć obezbeđenih potraživanja koji su opisani u zahtevima i/ili u ovom opisu.
[0243] Veruje se da su tumori koji sadrže divlji-tip ERα podložni tretmanu sa jedinjenjem sa Formulom (I), na primer kao tretman prve-linije. Tumori mogu takođe da odgovore na tretman sa jedinjenjem sa formulom (I) tokom naknadne terapije druge-linije ili treće-linije, a ovo može da bude korisno naročito kada tumori imaju mutirani ERα pa mogu da budu rezistentni na postojeće terapije poput raznih AI. Veća doza jedinjenja sa Formulom (I) može da bude potrebna kod rezistentnih tumora u odnosu na tumore divljeg-tipa.
[0244] Ovaj pronalazak obezbeđuje postupak za određivanje osetljivosti ćelija na jedinjenje sa Formulom (I). Ovaj postupak podrazumeva određivanje statusa gena ERα u pomenutim ćelijama. Ćelija je definisana kao osetljiva na jedinjenje sa Formulom (I) ako pomenuto inhibira porast broja ćelija u okviru nekog ogleda ćelijskog rasta (ili preko inhibicije ćelijske proliferacije i/ili preko povećane ćelijske smrti). Postupci iz ovoga pronalaska su korisni za predviđanje koje ćelije će verovatno da odgovore na jedinjenje sa Formulom (I) tako da im se inhibira rast.
[0245] Primerak "reprezentativan za tumor" može da bude pravi izolovani tumorski primerak, ili može da bude primerak koji je bio dodatno procesiran, na primer primerak nukleinske kiseline koja je amplifikovana uz pomoć PCR iz tumorskog primerka.
Definicije
[0246] U delu Personalizovana zdravstvena zaštita:
"Alel" se odnosi na naročitu formu nekog genetičkog lokusa, koja se razlikuje od ostalih forma zbog svoje posebne nukleotidne ili amino-kiselinske sekvence.
"Reakcije amplifikacije" su reakcije na nukleinskoj kiselini koje rezultuju specifičnim amplifikovanjem ciljanih nukleinskih kiselina naspram nekih drugih ne-ciljanih nukleinskih kiselina. Lančana reakcija polimerazom (PCR) je dobro poznata reakcije amplifikovanja.
"Rak" se ovde koristi sa ciljem da se označi neoplastični rast koji se pojavljuje nakon ćelijske transformacije u neoplastični fenotip. Takva ćelijska transformacija često uključuje genetičku mutaciju.
"Gen" je segment DNA koji sadrži sve informacije za regulisanu biosintezu RNA-produkta, uključujući promotor, eksone, introne, i druge elemente koji mogu da budu locirani u 5'- ili 3'-bočnim regionima (ne u delovima gena koji se transkribiraju) i koji kontrolišu ekspresiju.
"Status gena" se odnosi na to da li je neki gen divlji-tip ili ne (tj. mutant).
"Oznaka" se odnosi na kompoziciju koja može da proizvede detektabilni signal koji ukazuje na prisutnost ciljanog polinukleotida u oglednom primerku. Prikladni oznake uključuju radioizotope, nukleotidne hromofore, encime, supstrate, fluorescentne molekule, hemiluminiscentne ostatke, magnetne čestice, bioluminiscentne ostatke i slično. Kao takva, oznaka je bilo koja kompozicija koja može da se detektuje spektroskopskim, fotohemijskim, biohemijskim, imunohemijskim, električnim, optičkim ili hemijskim sredstvima.
"Ne-sinonimna varijacija" se odnosi na varijaciju (varijanta) sekvence nekog gena ili preklapanje sa sekvencom nekog gena koja rezultuje u proizvodnju različite (promenjene) polipeptidne sekvence. Ove varijacije mogu, ali ne moraju, da utiču na funkciju belančevine i uključuju missense-varijante (koje rezultuju u supstituciju jedne amino-kiseline sa drugom), nonsense-varijante (koje rezultuju pojavom skraćenog polipeptida zbog pojave preuranjenog stop-kodona) i insercija/delecija-varijante.
"Sinonimna varijacija" se odnosi na varijaciju (varijanta) u kodirajućoj sekvenci nekog gena koja ne utiče na sekvencu kodiranog polipeptida. Ove varijacije mogu da utiču na funkciju belančevine indirektno (na primer uz pomoć menjanja ekspresije gena), ali, ako nema dokaza za suprotno, generalno se smatraju neškodljivima.
"Nukleinska kiselina" se odnosi na jedno-lančane ili dvo-lančane DNA i RNA molekule uključujući prirodne nukleinske kiseline iz okoline i/ili modifikovane, veštačke nukleinske kiseline koje imaju modifikovanu okosnicu ili baze, kao šta je već poznato stanju tehnike.
"Prajmer" se odnosi na oligonukleotidnu sekvencu jedno-lančane DNA koja je sposobna da deluje kao početna tačka za inicijaciju sinteze produkta koji nastaje produženjem prajmera koji je komplementaran lancu nukleinske kiseline koji se kopira. Dužina i sekvenca samog prajmera treba da budu takve da omogućavaju započinjanje sinteze produkata ekstenzije. Tipičan prajmer sadrži najmanje oko 7 nukleotida u dužini sekvence koja je znatno komplementarna ciljanoj sekvenci, ali su ponekad potrebni duži prajmeri. Uobičajeno prajmeri sadrže oko 15-26 nukleotida, ali duži i kraći prajmeri se takođe upotrebljavaju.
"Polimorfno mesto" je pozicija u lokusu za koju se u populaciji mogu pronaći najmanje dve alternativne sekvence.
"Polimorfizam" se odnosi na varijacije sekvence koje se primećuju u nekoj jedinci na polimorfnom mestu. Polimorfizam uključuje nukleotidne supstitucije, insercije, delecije i mikrosatelite i može, ali ne mora, da rezultuje u detektabilnim razlikama u genskoj ekspresiji ili funkciji belančevine. U nedostatku dokaza za uticaj na ekspresiju ili funkciju belančevine, uobičajeni polimorfizmi, uključujući ne-sinonimne varijacije, se generalno smatraju da su uključeni u definiciju za sekvencu divljeg-tipa gena. Katalog ljudskih polimorfizama i pripadajućih anotacija, uključujući validaciju, primećene frekvencije, i povezanost sa bolestima, se uređuje na NCBI (dbSNP: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/). Čitatelj primećuje da termin "polimorfizam", kada se koristi u kontekstu genskih sekvenca, ne treba da se zameni sa terminom "polimorfizam" koji se koristi u kontekstu čvrstih forma jedinjenja,
1
odnosno kada se govori o kristalnoj ili amorfnoj prirodi jedinjenja. Stručnjak će razumeti namenjeno značenje prema njegovom kontekstu.
"Proba" se odnosi na jedno-lančane oligonukleotide sa specifičnom sekvencom koji mogu da prepoznaju sekvencu koja je potpuno komplementarna, a dio je ciljane sekvence alela koji treba da se detektuje.
"Odgovor" je definisan sa merenjima koji su u skladu sa kriterijumima evaluacije odgovora kod čvrstih tumora (Response Evaluation Criteria in Solid Tumours – RECIST) koje uključuje klasifikaciju pacijenata u dve glavne grupe: oni pacijenti koji pokazuju delomičan odgovor ili stabilnu bolest i oni koji pokazuju znakove progresivne bolesti.
"Strogi uslovi hibridizacije" se odnosi na preko-noćnu inkubaciju na 42° C u rastvoru koji sadrži 50% formamida, 5x SSC (750 mM NaCI, 75 mM trinatrijum citrat), 50 mM natrijum fosfat (pH 7.6), 5x Denhardt-ov rastvor, 10% dekstran sulfat, i 20 pg/ml denaturisanu, pocepanu DNA iz sperme lososa, nakon ispiranja na filteru u 0.1x SSC na oko 65° C.
"Preživljenje" obuhvata ukupno preživljenje pacijenata i preživljenje bez progresije.
"Ukupni preživljenje" (OS) je definisano kao vreme od inicijacije administriranja leka do smrti iz bilo kojeg razloga. "Preživljenje bez progresije" (PFS) je definisano kao vreme od inicijacije administriranja leka do prve pojave progresivne bolesti ili smrti iz bilo kojeg razloga.
[0247] U skladu sa jednim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđen je postupak za izbor pacijenta za tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I), pri čemu pomenuti postupak obuhvata pribavljanje primerka iz pacijenta koji sadrži tumorske ćelije; određivanje da li je gen ERα iz primerka koji sadrži pacijentove tumorske ćelije divlji-tip ili je mutant; i izbor pacijenta za tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I) na bazi kriterija iz prethodne tačke.
[0248] Pomenuti postupak može da uključuje ili isključuje korak izolacije primerka sa nekog pacijenta. Tako, u skladu sa jednim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđen je postupak za selekciju pacijenta za tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I), pri čemu pomenuti postupak podrazumeva određivanje da li je gen ERα u primerku koji sadrži tumorske ćelije, i koji je bio izolovan iz pacijenta, divljeg-tipa ili je mutant; i izbor pacijenta za tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I) na bazi prethodnog koraka.
[0249] U jednoj izvedbi, pomenuti pacijent je izabran za tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I) ako DNA tumorske ćelije sadrži mutirani gen ERα. U drugim izvedbama, pacijent čija DNA
2
iz tumorske ćelije sadrži divlji-tip gena ERα gene je izabran za tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I).
[0250] Za potrebe ovoga pronalaska, status gena divljeg-tipa treba da ukazuje na normalnu ili odgovarajuću ekspresiju pomenutog gena i na normalnu funkciju kodirane belančevine. Suprotno, status mutanta treba da ukazuje na ekspresiju belančevine čija je funkcija promenjena koje odgovara poznatim ulogama mutiranih gena ERα kod raka (kao šta je opisano ovde). Brojne genetičke ili epigenetičke promene, uključujući, ali bez ograničenja, mutaciju, amplifikaciju, deleciju, genski rearanžman, ili promene u metilacijskom profilu, mogu da rezultuju u mutirani status. Međutim, ako takve promene svejedno rezultuju u odgovarajuću ekspresiju normalne belančevine, ili funkcionalno ekvivalentne varijante, tada se status gena smatra divljim-tipom. Primeri za varijacije koje tipično neće da rezultuju u status funkcionalno mutiranog gena uključuju sinonimne kodirajuće varijacije i uobičajene polimorfizme (sinonimno ili ne-sinonimno). Kao šta je navedeno ispod, status gena može da se proceni primenom nekog funkcionalnog ogleda, ili može da bude se odredi iz prirode detektovanih devijacija u odnosu na referentnu sekvencu.
[0251] U nekim izvedbama status divljeg-tipa ili mutanta gena ERα gene se određuje uz pomoć prisutnosti ili odsutnosti ne-sinonimnih varijacija nukleinske kiseline u genima. Primećene nesinonimne varijacije koje odgovaraju poznatim uobičajenim polimorfizmima, koji ne proizvode poznate funkcionalne efekte, ne doprinose mutiranom statusu gena.
[0252] Druge varijacije u genu ERα koje ukazuju na mutirani status uključuju varijacije na mestu spajanja koje smanjuju prepoznavanje prelaza intron/ekson tokom procesiranja premRNA u mRNA. Ovo može da rezultuje u preskakanje eksona ili od ugradnje normalne intronske sekvence u splajsovanu mRNA (zadržavanje introna ili korišćenje kriptičnih mesta splajsovanja). Ovo može, sa svoje strane, da rezultuje u proizvodnju aberantne belančevine koja sadrži insercije i/ili delecije kada se uporedi sa normalnom belančevinom. Tako, u drugim izvedbama, gen ima status mutanta ako se radi o varijanti koja menja sekvencu mesta splajsovanja na spoju intron/ekson.
[0253] Šta se tiče ESR1, dostupne su referentne sekvence za sam gen (GenBank pristupni broj: NG_008493), mRNA (GenBank pristupni broj: NM_000125), i belančevinu (GenBank pristupni broj: NP_000116 ili Swiss-Prot pristupni broj: P03372). Stručnjak može da odredi status gena ESR1, tj. da li je neki određeni ESR1 gen divljeg-tipa ili mutant, na bazi uporedbe DNA sekvence ili proteinske sekvence sa onom od divljeg-tipa.
[0254] Podrazumeva se da su genske i mRNA sekvence, koje su opisane za gen ERα, reprezentativne sekvence. Kod normalnih individua postoje dve kopije svakog gena, majčina i očeva, koje će najverovatnije sadržavati određene razlike u sekvenci, a unutar same populacije će postojati brojne alelne varijante genske sekvence. Druge sekvence koje se smatraju divljimtipovima uključuju one koje poseduju jednu ili više sinonimnih promena u sekvenci nukleinske kiseline (pri čemu pomenute promene ne menjaju sekvencu kodirane belančevine), nesinonimni uobičajeni polimorfizmi (na primer, polimorfizmi u germinativnoj liniji) koji menjaju sekvencu belančevine, ali ne utiču na njenu funkciju, i promene intronskih mesta koje se ne odnose na sekvencu mesta splajsovanja.
[0255] Postoje brojne tehnike poznate stručnjacima uz pomoć kojih može da se odredi status gena ERα. Pomenuti status gena može da se odredi uz pomoć određivanja sekvence nukleinske kiseline. Ovo može da se obavi primenom sekvenciranja gena pune dužine ili analizom specifičnih mesta u samom genu, na primer uobičajena mutirana mesta.
Primerci
[0256] Primerak iz pacijenta koji treba da se testira sa ciljem provere statusa gena može da bude bilo koji primerak tumorskog tkiva ili takav koji sadrži tumorske ćelije i koji je uzet ili može da se uzme iz nekog pojedinca. Primerak za testiranje je prikladno primerak krvi, bris iz usne šupljine, biopsija, ili neka druga telesna tečnost ili tkivo koje može da se uzme od neke individue. Naročiti primerci uključuju: tumorske ćelije koje cirkulišu, DNA koja cirkuliše u plazmi ili serumu, ćelije koje su izolovane iz ascitne tečnosti iz pacijenata sa rakom jajnika, plućnog ispljuvka kod pacijenata sa tumorima pluća, aspirat uzet tankom iglom iz pacijentice sa rakom dojke, urin, periferna krv, sastrugane ćelije, koren kose, primerak kože ili bukalni primerak.
[0257] Podrazumeva se da primerak za testiranje takođe može da bude sekvenca nukleinske kiseline koja odgovara sekvenci u testiranom primerku, odnosno ceo ili deo regiona nukleinske kiseline iz primerka prvo treba da bude amplifikovan uz pomoć bilo koje prikladne tehnike, na primer, lančana reakcija polimerazom (PCR), pre same analize. Pomenuta nukleinska kiselina može da bude genomska DNA ili frakcionirana ili cela ćelijska RNA. U naročitim izvedbama,
4
RNA je ukupna ćelijska RNA, a koristi se direktno kao kalup za označavanje prvog lanca cDNA uz pomoć nasumičnih prajmera ili poli-A prajmera. Pomenuta nukleinska kiselina ili belančevina u primerku koji se testira mogu da budu ekstrahovani iz primerka u skladu sa standardnim tehnologijama (vidi Green & Sambrook, ur., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (2012, 4. izdanje, vol. 1-3, ISBN 9781936113422), Hladnim Spring Harbor Laboratory Press, Hladnim Spring Harbor, N.Y.).
[0258] Dijagnostički postupci iz ovoga pronalaska mogu da se provedu uz korišćenje primeraka koji je uzet ranije iz neke individue ili pacijenta. Takvi primerci mogu da budu spremljeni uz pomoć smrzavanja ili mogu da budu fiksirani i uklopljeni u smeši formalinparafin ili u nekom drugom medijumu. Alternativno, može da se uzme i koristi sveži tumorski primerak koji sadrži ćelije.
[0259] Postupci iz ovoga pronalaska mogu da se primene uz pomoć ćelija iz bilo kojeg tumora. Prikladni tumori za tretman sa jedinjenjem sa Formulom (I) su opisani iznad.
Postupci za detektovanje nukleinskih kiselina
[0260] Detektovanje mutiranih nukleinskih kiselina gena ERα može da se provede, u kontekstu ovoga pronalaska, sa ciljem da se izabere tretman sa lekom. Budući da se mutacije u pomenutim genima javljaju na nivou DNA, postupci iz ovoga pronalaska mogu da se baziraju na detektovanju mutacija ili varijacija u genomskoj DNA, kao i u samim transkriptima i belančevinama. Može da bude poželjno da se mutacije u genomskoj DNA potvrde uz pomoć analize transkripata i/ili polipeptida, sa ciljem da se potvrdi da se otkrivena mutacija stvarno eksprimira u subjektu.
[0261] Stručnjaku je poznato da postoji veliki broj analitičkih procedura koje mogu da se koriste za detektovanje prisutnosti ili odsustva nukleotidnih varijanata na jednoj ili više pozicija u genu. Generalno, detektovanje alelnih varijacija zahteva primenu tehnike diskriminacije mutacija, opciono neka reakcija amplifikovanja (poput onakve koja se bazira na lančanoj reakciji polimerazom) i opciono sistem za generisanje signala. Postoje brojne tehnike za detektovanje mutacija koje su poznate stanju tehnike i koje mogu da se koriste zajedno sa nekim sistemom za generisanje signala, za kojeg postoje brojni dostupni primeri u stanju tehnike. Mnogi postupci za detektovanje alelne varijacije su pregledno opisani od autora Nollau et al., Clin. Chem., 1997, 43, 1114-1120; Anderson SM. Expert Rev Mol Diagn., 2011, 11, 635-642; Meyerson M. et al., Nat Rev Genet., 2010, 11, 685-696; i u standardnim udžbenicima, na primer "Laboratory Protocols for Mutation Detection", ur. U. Landegren, Oxford University Press, 1996 i "PCR", 2. izdanje od autora Newton & Graham, BIOS Scientific Publishers Limited, 1997.
[0262] Kao šta je pokazano iznad, određivanje prisutnosti ili odsutnosti neke naročite varijante ili mnoštva varijanti u genu ERα iz nekog pacijenta sa rakom može da se provede na brojne načine. Takvi testovi uobičajeno koriste DNA ili RNA koje su dobivene iz bioloških primeraka, na primer, tkivne biopsije, urin, stolica, ispljuvak, krv, ćelije, tkivni primerci, aspirati iz dojke ili neki drugi ćelijski materijali, a mogu da se provedu primenom brojnih postupaka uključujući, ali bez ograničenja, PCR, hibridizaciju sa alel-specifičnim probama, encimsko detektovanje mutacija, hemijsko cepanje pogrešno-sparenih baza, masena spektrometrija ili DNA sekvenciranje, uključujući mini-sekvenciranje.
[0263] Prikladne tehnike za detektovanje mutacija uključuju amplification refractory mutation system (ARMS™), amplification refractory mutation system linear extension (ALEX™), competitive oligonucleotide priming system (COPS), Taqman, Molecular Beacons, polimorfizam dužine restrikcijskih fragmenata (RFLP), i PCR na bazi restrikcionog mesta i prenos fluorescencijske rezonantne energije (FRET).
[0264] U posebnim izvedbama, korišćeni postupak koji podrazumeva određivanje nukleotida u nekom genu biomarkeru je izabran iz: alel-specifičnog amplifikovanja (alel specifičan PCR) – poput amplification refractory mutation system (ARMS), sekvenciranja, ogleda diskriminacije alela, hibridizacije, polimorfizma dužine restrikcijskih fragmenata (RFLP) ili ogleda ligacije oligonukleotida (OLA).
[0265] U posebnim izvedbama, hibridizacija sa alelno-specifičnim probama može da se provede uz pomoć: (1) alel-specifičnih oligonukleotida vezanih na čvrstu fazu (na primer, staklo, silikon, najlonske membrane) sa označenim primerkom u rastvoru, na primer kao u mnogim DNA-čip aplikacijama; ili, (2) vezanog primerka (često klonirana DNA ili PCR-om amplifikovana DNA) i označenih oligonukleotida u rastvoru (alel-specifičnih ili kratkih kako bi bilo moguće provesti sekvenciranje uz pomoć hibridizacije). Dijagnostički testovi mogu da uključuju ceo panel varijanti, često na čvrstoj podlozi, koje omogućava simultano određivanje više od jedne varijante. Takve probe za hibridizaciju su dobro poznate stanju tehnike (vidi, na primer, Green & Sambrook, ur., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (2012, 4. izdanje, vol. 1-3, ISBN 9781936113422), Hladnim Spring Harbor Laboratory Press, Hladnim Spring Harbor, N.Y.), a mogu da povežu dva ili više mesta koja sadrže varijante.
[0266] Tako, u jednoj izvedbi, detektovanje prisutnosti ili odsutnosti najmanje jedne mutacije obuhvata kontaktiranje nukleinske kiseline gena ERα koja sadrži neko mesto sa pretpostavljenom mutacijom sa najmanje jednom probom od nukleinske kiseline. Ova proba preferirano hibridizuje sa sekvencom nukleinske kiseline uključujući i mesta varijante pri čemu sadrži odgovarajuće komplementarne nukleotidne baze na mestu varijante u uslovima selektivne hibridizacije. Hibridizacija može da se detektuje uz pomoć oznake koja je detektabilna uz korišćenje oznaka koje su poznate stanju tehnike. Takve oznake uključuju, ali bez ograničenja, radioaktivne, fluorescentne, encimske oznake i boje.
[0267] U drugoj izvedbi, detektovanje prisutnosti ili odsutnosti najmanje jedne mutacije obuhvata kontaktiranje nukleinske kiseline gena ERα koja sadrži mesto sa pretpostavljenom mutacijom sa najmanje jednim prajmerom od nukleinske kiseline. Ovaj prajmer preferencijalno hibridizuje sa sekvencom nukleinske kiseline uključujući i mesto varijante i sadrži komplementarne nukleotidne baze na mestu varijante u uslovima selektivne hibridizacije.
[0268] Oligonukleotidi koji se koriste kao prajmeri za specifično amplifikovanje mogu da nose nukleotidnu bazu koja je komplementarna sa bazom mutacije od interesa u centru samog molekula (tako, amplifikovanje zavisi o diferencijalnoj hibridizaciji; vidi, na primer, Gibbs, et al., 1989. Nucl. Acids Res., 17, 2437-248) ili na ekstremnom 3'-terminusu jednog od prajmera pri čemu, u odgovarajućim uslovima, pogrešno-sparena baza može da spreči, ili redukuje ekstenziju polimeraze (vidi, na primer, Prossner, 1993, Tibtech, 11238).
[0269] U još jednoj izvedbi, detektovanje prisutnosti ili odsutnosti najmanje jedne mutacije obuhvata sekvenciranje najmanje jedne sekvence nukleinske kiseline i uporedbu dobivene sekvence sa poznatom sekvencom nukleinske kiseline divljeg-tipa.
[0270] Alternativno, prisutnost ili odsutnost najmanje jedne mutacije obuhvata određivanje uz pomoć masene spektrometrije najmanje jedne sekvence nukleinske kiseline.
[0271] U jednoj izvedbi, detektovanje prisutnosti ili odsutnosti najmanje jedne varijante u nukleinskoj kiselini podrazumeva provedbu lančane reakcije polimerazom (PCR). Ciljana sekvenca nukleinske kiseline koja sadrži hipotetsku varijantu je amplifikovana, nakon čega je određena nukleotidna sekvenca amplifikovane nukleinske kiseline. Određivanje nukleotidne sekvence amplifikovane nukleinske kiseline podrazumeva sekvenciranje najmanje jednog segmenta nukleinske kiseline. Alternativno, amplifikovani produkti mogu da se analizuju primenom bilo kojeg postupka koji može da razdvoji amplifikovane produkte u skladu sa njihovom veličinom, uključujući automatsku i ručnu gel-elektroforezu, i slično.
[0272] Mutacije u genomskoj nukleinskoj kiselini se detektuju uz pomoć tehnika na bazi pomaka u mobilnosti fragmenata amplifikovane nukleinske kiseline. Na primer, autori Chen et al., Anal Biochem 1996, 239, 61-9, opisuju detektovanje mutacija pojedinačnih baza uz pomoć ogleda kompetetivnog pomaka mobilnosti. Štaviše, ogledi na bazi tehnike autora Marcelino et al., BioTechniques 1999, 26, 1134-1148 su komercijalno dostupni.
[0273] U jednom naročitom primeru, kapilarna analiza heterodupleska može da se koristi za detektovanje prisutnosti mutacija na bazi pomaka mobilnosti dupleksa nukleinskih kiselina u kapilarnom sistemu kao rezultat prisutnosti pogrešno-sparenih baza.
[0274] Generisanje nukleinskih kiselina za analizu iz primeraka generalno zahteva amplifikovanje nukleinske kiseline. Mnogi postupci za amplifikovanje se oslanjaju na encimsku lančanu reakciju (poput lančane reakcije polimerazom, lančane reakcije ligazom, ili samostalne replikacije sekvence (self-sustained sequence replication)) ili na replikaciji svih delova vektora u kojeg je pomenuta bila klonirana. Preferirano, amplifikovanje u skladu sa pronalaskom je eksponencijalno amplifikovanje, jer se provodi uz pomoć prajmera primenom lančane reakcije polimerazom.
[0275] U literaturi su opisani mnogi postupci za amplifikovanje mete i signala; na primer, pregled pomenutih postupaka od autora Landegren, U., et al., Science, 1988 242, 229-237 i Lewis, R., Genetic Engineering News 1990, 10, 54-55. Ovi postupci amplifikovanja mogu da se primenjuju u postupcima iz ovoga pronalaska, i uključuju lančanu reakciju polimerazom (PCR), in situ PCR, reakcije amplifikovanja ligazom (LAR), hibridizacija ligazom, replikazu iz Qβ-bakteriofaga, sistem amplifikacije na bazi transkripcije (TAS), genomsko amplifikovanje uz sekvenciranje transkripta (GAWTS), amplifikovanje na bazi sekvence nukleinske kiseline (NASBA) i in situ hibridizacija. Prikladni primeri za upotrebu u brojnim tehnikama amplifikovanja mogu da se pripreme u skladu sa postupcima koji su poznati stanju tehnike.
[0276] Lančana reakcija polimerazom (PCR) predstavlja postupak amplifikovanja nukleinske kiseline koji je opisan inter alia u U.S. Pat. Br. 4,683,195 i 4,683,202. PCR obuhvata seriju ponavljajućih ciklusa reakcije produženja prajmera generisanih DNA-polimerazom. Ciljna DNA je denaturisana grejanjem, a tada su hibridizovana dva oligonukleotida, koji omeđuju ciljnu sekvencu na suprotnim lancima DNA koja se amplifikuje. Ovi oligonukleotidi postaju prajmeri koje koristi DNA-polimeraza. DNA se kopira produženjem prajmera sa ciljem da se proizvede druga kopija oba lanca. Ponavljanjem ciklusa denaturacije uz pomoć topline, hibridizacije prajmera i njihovog produženja, ciljna DNA može da se amplifikuje milion puta ili više u oko dva do četiri časa. PCR je alat molekularne biologije, koji treba da se koristi zajedno sa tehnikama detektovanja kako bi se odredili rezultati amplifikovanja. Prednost PCR-a je ta šta povećava osetljivost amplifikovanjem količine ciljne DNA za 1 milion do 1 milijardu puta tokom približno 4 h. PCR može da se koristi za amplifikovanje bilo koje poznate nukleinske kiseline u dijagnostičkom kontekstu (Mok et al., Gynaecologic Oncology, 1994, 52: 247-252).
[0277] Tehnika alel-specifičnog amplifikovanja poput Amplification Refractory Mutation System (ARMS™) (Newton et al., Nucleic Acids Res., 1989, 17, 2503-2516) takođe može da se koristi za detektovanje mutacija pojedinačnih baza. U odgovarajućim uslovima PCR-amplifikovanja jedna pogrešno-sparena baza locirana na 3'-kraju prajmera je dovoljna za preferencijalnu amplifikaciju perfektno sparenog alela (Newton et al., 1989, supra), koje omogućava diskriminaciju blisko srodnih vrsta. Osniva sistema za amplifikovanje koji koristi prajmere opisane iznad je ta šta pomenuti oligonukleotidi sa pogrešno-sparenim 3'-ostatkom neće da funkcionišu kao prajemri za PCR reakciju u odgovarajućim uslovima. Ovaj sistem amplifikovanja omogućava genotipiziranje samo uz pomoć provere reakcionih smeša nakon elektroforeze na gelu od agaroze.
[0278] Analiza amplifikovanih produkata može da se provede primenom bilo kojeg postupka koji je sposoban da amplifikuje produkte u skladu sa njihovom veličinom, uključujući automatsku i ručnu gel-elektroforezu, masenu spektrometriju, i slično.
[0279] Postupci za izolovanje nukleinske kiseline, amplifikovanje i analizu su rutina za stručnjake, a primeri za protokole mogu da se pronađu, na primer, kod autora Green & Sambrook, ur., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (2012, 4. izdanje, vol. 1-3, ISBN 9781936113422), Hladnim Spring Harbor Laboratory Press, Hladnim Spring Harbor, N.Y.) Naročito koristan izvor protokola za postupke korišćene u PCR-amplifikovanju je „PCR“ (Basics: From Background to Bench)“ od autora M. J. McPherson, S. G. Mailer, R. Beynon, C. Howe, Springer Verlag; 1. izdanje (15. oktobar 2000.), ISBN: 0387916008.
[0280] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje komplete hemikalija za predviđanje i dijagnostiku koji sadrže degenerirane prajmere za amplifikovanje ciljne nukleinske kiseline gena ERα i instrukcije koje obuhvataju protokol za amplifikovanje i analizu rezultata. Ovaj komplet hemikalija može alternativno takođe da sadrži pufere, encime, i kontejnere za provođenje pomenutog amplifikovanja i analizu amplifikovanih produkata. Ovaj komplet hemikalija može takođe da bude komponenta pretrage, ili dijagnostički komplet hemikalija koji obuhvata alate poput DNA mikročipova, ili neku drugu potporu. Preferirano, ovaj komplet hemikalija takođe obuhvata jedan ili više kontrolnih kalupa, poput nukleinskih kiselina izolovanih iz primerka normalnog tkiva, i/ili serija primeraka koji predstavljaju različite varijante u referentnim genima.
[0281] U jednoj izvedbi, pomenuti komplet hemikalija sadrži dva ili više para prajmera, od kojih je svaki sposoban da amplifikuje različiti region referentnog (ERα) gena (svaki region je mesto potencijalne varijante) pri čemu obezbeđuje komplet hemikalija za analizu ekspresije nekoliko genskih varijacija u nekom biološkom primerku kroz jednu reakciju ili u nekoliko paralelnih reakcija.
[0282] Prajmeri u pomenutom kompletu hemikalija mogu da budu označeni, na primer fluorescentno označeni, kako bi omogućili detektovanje amplifikovanih produkata i konsekventnu analizu varijanata nukleinske kiseline. Pomenuti komplet hemikalija može takođe da omogućava otkrivanje više od jedne varijante tokom analize. Kombinovani komplet hemikalija će, prema tome, da sadrži prajmere koji su sposobni da amplifikuju različite segmente nekog referentnog gena. Pomenuti prajmeri mogu da budu označeni različito, na primer primenom različitih fluorescentnih oznaka, sa ciljem da se razlikuje između varijanata.
[0283] Kao šta se ovde koristi, termini "efektivno" i "efektivnost" uključuju farmakološku efektivnost i fiziološku bezbednost. Farmakološka efektivnost se odnosi na sposobnost tretmana da dovede do nekog željenog biološkog efekta kod pacijenta. Fiziološka bezbednost se odnosi na nivo toksičnosti, ili na druge štetne fiziološke efekte na nivou ćelija, organa i/ili organizama (često se naziva nus-pojavama) koji su rezultat administriranja samog tretmana. "Manje efektivno" označava da tretman dovodi do terapeutski značajno nižeg nivoa farmakološke efektivnosti i/ili terapeutski većeg nivoa štetnih fizioloških efekata.
[0284] U skladu sa jednim drugim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđena je upotreba jedinjenja sa Formulom (I) ili neke njegove farmaceutski-prihvatljive soli sa ciljem tretmana raka kod nekog pacijenta čije su tumorske ćelije identifikovane kao takve da sadrže mutirani ERα gen. U jednoj izvedbi, jedinjenje sa Formulom (I) je Primer 1.
[0285] U skladu sa jednim drugim aspektom ovoga pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje sa Formulom (I) ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so za tretman raznih tipova raka čije su tumorske ćelije identifikovane kao takve koje sadrže mutirani gen ERα. U jednoj izvedbi, jedinjenje sa Formulom (I) je Primer 1.
[0286] U dodatnim izvedbama, ovaj pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja obuhvata jedinjenje sa Formulom (I) za upotrebu u prevenciji i tretmanu raka čije su tumorske ćelije identifikovane kao da sadrže mutirani gen ERα. U jednoj izvedbi, jedinjenje sa Formulom (I) je Primer 1.
[0287] U svim aspektima iznad, determinirane/identifikovane mutirane forme ERα su pozicije koje se nalaze unutar gena.
[0288] U svim aspektima iznad, kod korišćenja tumora poput raka dojke, na primer, naročite određene/identifikovane mutirane forme ERα su one na pozicijama Ser463Pro, Val543Glu, Leu536Arg, Tyr537Ser, Tyr537Asn i Asp538Gly.
Kratki opis Slika
[0289]
Slika 1 prikazuje obrazac difrakcije X-zraka na prahu Primera 7, Forma A
Slika 2 prikazuje obrazac difrakcije X-zraka na prahu Primera 1, Forma B
1
Slika 3 prikazuje DSC-termogram Primera 1, Forma B
Slika 4 prikazuje obrazac difrakcije X-zraka na prahu Primera 1, Forma A
Slika 5 prikazuje TGA-termogram Primera 1, Forma A
Slika 6 prikazuje obrazac difrakcije X-zraka na prahu Primera 1, Forma C
Slika 7 prikazuje TGA-termogram Primera 1, Forma C
Slika 8 prikazuje obrazac difrakcije X-zraka na prahu Primera 11
Slika 9 prikazuje DSC-trag Primera 11.
Slika 10 prikazuje rezultate studije sa ksenotransplantacijom MCF-7 sa Primerom 1 i AZD2014.
Slike 11 i 12 prikazuju rezultate studiju efikasnosti uz pomoć ksenotransplantacije HCC1428 uz dugotrajno lišavanje estrogena (LTED) sa Primerom 1.
Primeri
[0290] Ovaj pronalazak će sada da bude ilustrovan u sledećim Primerima u kojima, generalno:
(i) operacije se provode na ambijentalnoj temperaturi, tj. u rasponu od 17 do 25° C i u atmosferi inertnog gasa poput azota osim ako je drugačije navedeno;
(ii) isparavanja se provode primenom rotacionog isparavanja ili korišćenjem opreme Genevac ili evaporatora Biotage v10 in vacuo, a procedure dorade se provode nakon odstranjivanja zaostalih čvrstih materija uz pomoć filtracije; (iii) prečišćavanja uz pomoć fleš-hromatografije se provode na automatizovanom sistemu Teledyne Isco CombiFlash<®>Rf ili Teledyne Isco CombiFlash<®>Companion<®>uz korišćenje pre-pakovanih kolona RediSep Rf Gold™ Silica (20-40 µm, sferične čestice), punjenja GraceResolv™ (silika: Davisil<®>) ili punjenja Silicycle (40-63 µm).
(iv) preparativna hromatografija je provođena na instrumentu Gilson prep HPLC uz UV-sakupljanje;
(v) hiralna preparativna hromatografija je provođena na instrumentu Gilson uz UV-sakupljanje (233 injektor/kolektor frakcija, 333 & 334 pumpe, 155 UV-detektor) ili na instrumentu Varian Prep Star (2 x SD1 pumpe, 325 UV-detektor, 701 kolektor frakcija) gde pumpa radi uz injekciju Gilson 305;
(vi) prinosi, kada su navedeni, ne prikazuju nužno maksimalnu količinu koja može da se dobije;
(vii) generalno, strukture i krajnji-produkti sa Formulom I su potvrđeni primenom spektroskopije nuklearne magnetne rezonance (NMR); vrednosti NMR-
2
hemijskih pomaka su izmereni na delta-skali [spektari protonske magnetne rezonance su određeni uz pomoć aparata Bruker Avance 500 (500 MHz) ili Bruker Avance 400 (400 MHz)]; merenja su izvedena na ambijentalnoj temperaturi osim ako je drugačije navedeno; sledeće skraćenice se koriste: s, singlet; d, dublet; t, triplet; q, kvartet; m, multiplet; dd, dublet dubleta; ddd, dublet dubleta od dubleta; dt, dublet tripleta; bs, široki signal
(viii) generalno, krajni-produkti sa Formulom I su takođe karakterizovani uz pomoć masene spektroskopije nakon tečne hromatografije (LCMS ili UPLC); UPLC je proveden primenom aparata Waters UPLC na kojem je bio postavljen maseni spektrometar Waters SQ (temperatura kolone 40, UV = 220-300 nm, Mas. spek. = ESI sa pozitivno/negativnim isključivanjem) uz stopu protoka od 1 ml/min uz korišćenje sistema rastvarača od 97% A 3% B do 3% A do 97% B tokom 1.50 min (ukupno vreme propuštanja uz uravnoteženje nazad prema početnim uslovima itd. 1.70 min), pri čemu A = 0.1% mravlja kiselina u vodi (za kiseli pokušaj) ili 0.1% amonijaka u vodi (za bazni pokušaj) B = acetonitril. Kod kisele analize, korišćena kolona je bila Waters Acquity HSS T31.8 µm 2.1 x 50 mm, a kod bazne analize korišćena kolona je bila Waters Acquity BEH 1.7 µm 2.1 x 50 mm; LCMS je proveden primenom aparata Waters Alliance HT (2795) na kojeg je bio postavljen maseni spektrometar Waters ZQ ESCi na koloni Phenomenex Gemini-NX (50 x 2.1 mm, 5 µm) kod stope protoka od 1.1 ml/min 95% A do 95% B tokom 4 min uz zadržavanje od 0.5 min. Modifikator je održavan konstantnim tj.5% C (50:50 acetonitril:voda 0.1% mravlja kiselina) ili D (50:50 acetonitril:voda 0.1% amonijum hidroksid (0.88 SG) u zavisnosti o tome da li se radi o kiselom ili baznom postupku.
(ix) prečišćavanje uz pomoć jonske izmene je generalno privedeno na punjenju SCX-2 (Biotage, silika funkcionalizovana sa propilsulfonskom kiselinom. Proizvedena uz pomoć trifunkcionalnog silana. Bez kapiranja na krajevima). (x) čistoća intermedijara je procenjena primenom tanko-slojne hromatografije, masenom spektometrijom, HPLC (tečna hromatografija visoke performanse) i/ili NMR analizom;
(xi) za XRPD-analizu Primera 7, primerci su postavljeni na silikonskim vaflama (pozadina nula) pa su analizirani uz pomoć difraktometra PANalytical CubiX Pro (1 = 1.5418 Å). Primerci su oboreni centrifugom kako bi se poboljšala statistika brojanja. Podaci su sakupljeni refleksivnom geometrijom u teta – 2 teta konfiguraciji tokom raspona skeniranja od 2° do 40° 2-teta uz izlaganje od 25 s po povećanju od 0.025067°. X-zrake su generisane uz pomoć fokusne tube sa dugom tankom bakrenom žicom koja je radila na 45 kV i 40 mA. Stručnjaci će primetiti da relativni intenziteti šiljaka mogu da budu pod uticajem, na primer, zrnaca veličine iznad 30 µm i ne-unitarnih omera aspekta koje može da utiče na analizu primeraka. Stručnjak takođe prepoznaje da pozicije refleksija mogu da budu pod uticajem tačne visine na kojoj leži sam primerak u difraktometru i nultoj-kalibraciji samog difraktometra. Površina koja je planarna primerku takođe može da uspostavi mali efekat. Prema tome, prikazani podaci za difrakcijske obrasce ne treba da se uzimaju kao da su apsolutne vrednosti; (xii) kod XRPD-analize Primera 1, difraktogram X-zraka na prahu je određen tako da je primerak postavljen na kristalnu vaflu od panalitičkog pojedinačnog silikonskog kristala (SSC) pri čemu je sam primerak bio raspoređen u tanak-sloj uz pomoć mikroskopskog stakalca. Primerak je staložen uz pomoć 30 revolucija po min (kako bi se poboljšala statistika brojanja) pa je ozračen sa X-zrakama koje su generisane uz pomoć fokusne tube sa dugom tankom bakrenom žicom koja je radila na 45 kV i 40 mA na talasnoj dužini od 1.5418 angstrema. Snop sa X-zrakama je prolazio kroz 0.04 radijan Sollerov prorez, a tada je automatski varijabilan divergencijski prorez podešen na 20 mm i konačno na masku za snop od 20 mm. Reflektovano zračenje je usmereno kroz prorez koji sprečava raspršivanje od 20 mm i 0.04 radijan Sollerov prorez. Ovaj primerak je bio izložen tokom 1.905 s uz povećanja od 0.0025067° 2-teta (kontinuirani modus skeniranja) kroz raspon od 2° do 40° 2-teta u teta-teta modusu. Vreme snimanja je iznosilo 3 min i 36 s. Instrument je bio opremljen sa detektorom X-Celerator. Kontrolni podaci i sakupljanje podataka je provedeno uz pomoć radne stanice Dell Pentium 4HT koja je radila sa softverom X'Pert Industry.
(xiii) Diferencijalna skening kalorimetrija: analitički instrument: TA Instruments Q1000 DSC. Tipično manje od 5 mg materijala u standardnoj aluminijumskoj posudi je grejano tokom temperaturnog raspona od 25° C do 300° C uz konstantnu stopu grejanja od 10° C po minuti. Azot je korišćen kao gas za pročišćavanje – rata protoka je bila 50 ml po min.
(xiv) Analitički instrument za termogravimetrijsku analizu: TA Instruments Q5000 TGA. Tipično manje od 10 mg materijala u posudi od platine volumena 100 µl
4
je grejano kroz temperaturi raspon od 30° C do 150° C uz konstantnu ratu grejanja od 10° C po min.
(xv) sledeće skraćenice su korišćene:
vod. vodeno
CDCl3deutero-hloroform
Konc. koncentrovano
DCM dihlorometan
DMA N,N-dimetilacetamid
DMSO dimetil sulfoksid
DSC diferencijalna skening kalorimetrija
EtOH etanol
EtOAc etil acetat
IPA/iPrOH izopropil alkohol
MeCN acetonitril
MTBE metiltertbutil etar
st/ST sobna temperatura
zas. zasićeno
ras. rastvor
THF tetrahidrofuran
TFA trifluorosirćetna kiselina
TGA termogravimetrijska analiza
Primer 1: (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina
[0291]
[0292] Sledeći procesi treba da se provode u atmosferi azota bez svetla jer može da se pojavi produkt svetlosne degradacije [(R,E)-3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-2-ium-1-il)fenil)akrilat].
[0293] (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (350 g, 766.69 mmol) je nabijen u fiksiranu posudu od 5 L. U posudu je dodan izopropil alkohol (2.80 L). Natrijum hidroksid (5M, 460 ml, 2.30 mol) je dodan u jednoj porciji, a smeša je mešana na 21° C tokom 16 h. Taman rastvor je propušten kroz filter sa ciljem da se odstrane čestice. Filtrat je vraćen u reaktorsku posudu. Filter i posuda za skupljanje filtrata su isprane sa izopropanolom (700 ml), a ispiranja su dodana u reaktorsku posudu. Reakciona smeša je mešana pa je dodana voda (1.75 L). Koncentrovana hlorovodonična kiselina (37% w/w, 165 ml, 1.92 mol) je nabijena u posudu. Dodano je još hlorovodonične kiseline (21.5 ml) u posudu sa ciljem da se pH podesi između 4.0 i 4.5. Rastvor je grejan do 50° C. Voda (1.92 L) je dodavana u posudu tokom 1 h uz održavanje interne temperature između 50-53° C. Temperatura plašta je podignuta do 70° C kako bi se temperatura reaktora održavala u pomenutom rasponu tokom dodavanja. Unutar perioda od 10 min dodavanja vode, smeša se staložila sama pa je počela da kristalizuje. Smeša je grejana na 50-52° C tokom 1.5 h (plašt je imao temperaturu od 58° C). Nastala žuta suspenzija je ohlađena do 5° C (temperatura plašta) tokom 6 h. Gusta smeša je držana na 5° C (temperatura plašta) tokom 11 h. Nastala žuta čvrsta materija je izolovana filtracijom. Kolač je oblikovan sa spatulom kako bi se sprečilo njegovo pucanje. Posuda je isprana sa vodom (1.05 L). Ispiranja su korišćena sa ciljem da se ispere kolač. Kolač je izvučen suv na vazduhu, a tada je osušen in vacuo do konstantne težine tokom 4 dana (temperature pećnice = 30° C). (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina je tako izolovana u formi žute kristalne čvrste materije, "Forma B" (319.45 g, 94%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO, 27° C) 1.05 (3H, d), 1.08 - 1.28 (6H, m), 2.35 (1H, dd), 2.58 (1H, dd), 2.8 - 2.97 (2H, m), 3.47 - 3.57 (1H, m), 5.22 (1H, s), 6.67 (1H, d), 6.91 - 7.06 (2H, m), 7.19 (1H, d), 7.41 (1H, d), 7.46 (2H, d), 7.54 (1H, d), 10.58 (1H, s), 12.62 (1H, s).
[0294] Alternativan postupak za sintezu Primera 1, koji rezultuje formiranjem kristalne Forme B, je proveden kako sledi:
Sledeći procesi treba da se provode u atmosferi azota bez svetla kako bi se sprečilo formiranje produkta svetlosne degradacije (kao šta je opisano iznad). (E)-metil 3-(3,5difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (50.0 g; 109.53 mmol) je mešan u izopropilnom alkoholu (450 ml). Natrijum hidroksid (68.34 g, 65.72 ml, 328.58 mmol) je dodan u jednoj porciji, a smeša je mešana na 20° C tokom 16 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom (250 ml), pH je podešen do pH=4 uz pomoć konc. hlorovodonične kiseline (27.28 ml, 317.63 mmol), a smeša je grejana do 50° C. Dodano je još vode (225 ml) tokom 30 min, uz održavanje temperature iznad 45° C. Tokom dodavanja, materijal počinje da kristalizuje. Smeša je ohlađena sa 50° C na 5° C tokom 5 h, a tada je suspenzija držana na 0° C tokom dodatnih 11 h. Žuta čvrsta materija je izolovana filtracijom. Filterski kolač je ispran sa vodom (100 ml), osušen na filteru tokom dodatnih 20 min, a tada je osušen u vakuum-pećnici tokom 16 h do konstantne težine (30° C, uz curenje vazduha) koje daje jedinjenje iz naslova (46.52 g) u formi kristalne čvrste materije (Forma B).
<1>H NMR (500 MHz, DMSO, 27° C) 1.02 - 1.09 (3H, m), 1.17 (6H, dd), 2.37 (1H, dd), 2.59 (1H, dd), 2.8 - 2.98 (2H, m), 3.47 - 3.58 (1H, m), 5.24 (1H, s), 6.68 (1H, d), 6.9 -7.06 (2H, m), 7.20 (1H, d), 7.38 - 7.51 (3H, m), 7.55 (1H, d), 10.59 (1H, s), 12.60 (1H, br). Kristalna forma B može takođe da bude izolovana iz smeše etanol/voda i etanol/MTBE.
[0295] U jednom drugom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđena je kristalna forma B Primera 1, koja je izolovana iz smeše izopropanol/voda.
[0296] U jednom drugom aspektu ovoga pronalaska, obezbeđen je proces za izolaciju kristalne forme B Primera 1 koji podrazumeva hidrolizu (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata u izopropilnom alkoholu i bazi, nakon čega sledi zakiseljavanje i izolovanje kristalnog produkta iz vodenog izopropanola.
[0297] Primer 1, Forma B se karakterizuje time šta ima barem jednu od sledećih 2θ vrednosti izmerenih primenom CuKα-zračenja: 8.4 i 10.9. Primer 1, Forma B je karakterizuje time šta ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu koji se znatno podudara sa onim na Slici 2. Deset šiljaka difrakcije X-zraka na prahu je prikazano u Tabeli A:
Tabela A
[0298] DSC-analiza Primera 1, Forma B, pokazuje da se radi o visoko-topivoj čvrstoj materiji sa endotermom koja pokazuje da početak topljenja počinje na 188.6° C (Slika 3). Primer 1 ukazuje na postojanje degradacije tokom topljenja koje može da dovede do varijacija u početku topljenja, tako da vrednost od 188.6° C ne treba da se smatra apsolutnom.
[0299] Dve solvatizovane forme Primera 1 su takođe promatrane.
[0300] Forma A je metil tercijarni butil etar mono-solvat. Obrazac difrakcije X-zraka na prahu je prikazan na Slici 4. TGA pokazuje povezani gubitak težine od 14.7% w/w između 55-150° C (Slika 5). Teoretski gubitak za mono metil tercijarni butil etar solvat je izračunat na 16.6%.
[0301] Forma C je aceton mono-solvat, a njen obrazac difrakcije X-zraka je prikazan na Slici 6. TGA prikazuje povezani gubitak težine od 10.0% w/w 50-150° C %. (Slika 7). Teoretski gubitak za mono-aceton solvat je izračunat na 11.0%.
[0302] (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat, koji je korišćen kao početni materijal, je pripremljen kao sledi:
Priprema 2-fluoro-2-metilpropil trifluorometansulfonata
[0303]
[0304] U atmosferi azota, 2-fluoro-2-metil-propan-1-ol (1000 g, 10.86 mol) je nabijen u posudu od 20 L. U posudu je dodan DCM (8.5 L). Smeša je mešana i ohlađena do 1° C. U smešu je dodan 2,6-lutidin (1395 g, 13.02 mol). Rastvor trifluorometansulfonskog anhidrida (3220 g; 11.41 mol) u DCM (1 L) je dodavan tokom 1 h uz održavanje temperature reakcione smeše ispod 5° C (temperatura plašta je snižena do -20° C tokom dodavanja). Posuda za dodavanje i linije su isprane sa DCM (0.5 L), a ispiranja su dodana u posudu u jednoj porciji. Smeša je mešana na 0° C tokom 1 h koje daje crveni rastvor.
[0305] Rastvor koncentrovane hlorovodonične kiseline (1.23 L, 37% w/w, 16.3 mol) je dodan u vodu (7L). Razblaženi rastvor hlorovodonične kiseline je dodan u crveni rastvor, a mešana smeša je ugrejana do 25° C. Slojevi su ostavljeni da se razdvoje, a gornji vodeni sloj je odstranjen. Organski sloj je ispran sa vodom (2 x 5 L). Organski rastvor je koncentrovan pod smanjenim pritiskom koje daje crveno ulje. Ovo crveno ulje je prečišćeno destilacijom uz korišćenje isparivača u tankom filmu (4.5 mbar, temperatura plašta je bila 50° C, temperatura kondenzatora je bila 4° C) koje daje 2-fluoro-2-metilpropil trifluorometansulfonat (1.69 kg, 69%) u formi bledo-crvenog ulja.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 27° C) δ 1.40 (6H, d), 4.79 (2H, d).
Priprema (R)-N-(1-(1H-indol-3-il)propan-2-il)-2-fluoro-2-metilpropan-1-amina [0306]
[0307] (2R)-1-(1H-Indol-3-il)propan-2-amin (3.81 kg, 21.21 mol) je dodan u staklom obloženu posudu od 100 L u atmosferi azota. Dodan je 1,4-dioksan (23 L), a mešalica je uključena. U mešanu suspenziju je dodan diizopropiletilamin (5.55 L; 31.82 mol), a tada i (2fluoro-2-metil-propil)trifluorometansulfonat (5.55 kg, 23.77 mol). U posudu je dodan 1,4-dioksan (4 L), a smeša je grejana do 75° C. Grejanje je nastavljeno tokom 24 h pre hlađenja smeše do 25° C. U posudu je dodana voda (30.5 L), a tada i toluen (30.5 L). Nakon 40 min mešalica je isključena, a slojevi su ostavljeni da se razdvoje. Vodeni sloj je odstranjen, a u organski rastvor je dodana voda (30.5 L). Smeša je mešana tokom 15 min pre no je ostavljena da joj se slojevi razdvoje. Vodeni sloj je odstranjen iz posude. Organski rastvor je koncentrovan uz pomoć vakumske destilacije (temperatura plašta: 65° C; pritisak: 110 mbar) do tačke kada je približno 27 L destilata odstranjeno. Preostao rastvor u posudi je ohlađen koje daje (R)-N-(1-(1H-indol-3-il)propan-2-il)-2-fluoro-2-metilpropan-1-amin u formi rastvora u toluenu (33% w/w) (15.4 Kg, 97%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO, 27° C) 0.98 (3H, d), 1.26 (3H, d), 1.30 (3H, d), 2.57 - 2.75 (3H, m), 2.81 (1H, dd), 2.84 - 2.92 (1H, m), 6.97 (1H, t), 7.06 (1H, t), 7.11 - 7.22 (1H, multiplet je prikriven sa signalima toluena), 7.34 (1H, d), 7.52 (1H, d), 10.80 (1H, s).
Priprema natrijum {2,6-difluoro-4-[(1E)-3-metoksi-3-oksoprop-1-en-1-il]fenil}(hidroksi)metansulfonata
[0308]
[0309] 2,6-difluoro-4-bromobenzaldehid (1000 g, 4.39 mol) i 1,1-bi(di-tertbutilfosfino)ferocen paladijum dihlorid (57.2 g; 87.76 mmol) su nabijeni u posudu od 20 L. Dodan je tetra-n-butilamonijum hlorid (122 g, 438.97 mmol), a tada i dimetilacetamid (5 L). Posuda je prečišćena sa mlazom gasovitog azota. U posudu je dodan diizopropiletilamin (1.5 L, 8.78 mol), a tada i metil akrilat (0.435 L, 4.82 mol). Smeša je mešana i grejana do 60° C. Smeša je držana na toj temperaturi tokom 20 h. Dodan je etil acetat (10 L), a grejanje je obustavljeno. U posudu je dodana voda (5 L). Mešana smeša je ohlađena do 25° C, a mešanje je nastavljeno tokom 10 min. Mešanje je zaustavljeno, a slojevi su ostavljeni da se razdvoje. Vodeni sloj je odstranjen i odbačen. Organski sloj je ispran uzastopno sa hlorovodoničnom kiselinom (2.2 M, 6 L) i vodom (5 L). Fosforni lovac SPM32 (1050 g, 1050 mol) je dodan u posudu, a smeša je mešana tokom 3 dana na 25° C. Čvrsti materijal je odstranjen uz pomoć filtracije. Kolač je ispran sa etanolom (5 L), a spojeni filtrati su koncentrovani pod smanjenim pritiskom koje daje čvrstu materiju. Ova čvrsta materija je rastvorena u etanolu (9 L), a rastvor je mešan u posudi od 20 L. Rastvor je grejan do 50° C. Rastvor natrijum bisulfita (460 g, 4.42 mol) u vodi (2.5 L) je dodavan tokom 30 min. Nastala je gusta smeša koja je mešana tokom 4 h na 50° C. Ova gusta smeša je ohlađena do 20° C tokom 2 h. Čvrsta materija je izolovana uz pomoć filtracije, a posuda i filter-kolač su isprani sa MTBE (2 x 3 L). Nastala čvrsta materija je osušena in vacuo koje daje natrijum {2,6-difluoro-4-[(1E)-3-metoksi-3-oksoprop-1-en-1-il]fenil}(hidroksi)metansulfonat (1035 g, 71%) u formi blistavo-smeđe čvrste materije.<1>H NMR (500 MHz, DMSO, 27° C) δ 3.73 (3H, s), 5.32 (1H, d), 5.94 (1H, d), 6.76 (1H, d), 7.40 (2H, d), 7.60 (1H, d).
Priprema (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-formilfenil)akrilata
[0310]
[0311] U atmosferi azota, natrijum {2,6-difluoro-4-[(1E)-3-metoksi-3-oksoprop-1-en-1-il]fenil}(hidroksi)metansulfonat (1.211 kg, 3.52 mol) je dodan u posudu od 100 L nakon čega je dodan kalijum karbonat (0.974 kg, 7.05 mol). Dodana je voda (9.1 L) pa je uključena mešalica. Dodan je etil acetat (9.1 L). Smeša je mešana na 25° C tokom 5 h. Mešalica je zaustavljena, a smeša je ostavljena da stoji tokom 14 h na 25° C. Niža vodena faza je odstranjena i odbačena. Gornja organska faza je koncentrovana pod smanjenim pritiskom koje daje bledo-smeđu čvrstu materiju. Ova čvrsta materija je osušena in vacuo koje daje (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-formilfenil)akrilat u formi smeđe čvrste materije (608 g, 76%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO, 27° C) δ 3.77 (3H, s), 6.94 (1H, d), 7.66 (1H, d), 7.71 (2H, d), 10.20 (1H, s).
1
Priprema (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata
[0312]
[0313] U atmosferi azota, (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-formilfenil)akrilat (0.606 kg, 2.65 mol) i (R)-N-(1-(1H-indol-3-il)propan-2-il)-2-fluoro-2-metilpropan-1-amin (33% w/w rastvor u toluenu, 2.0 kg, 2.65 mol) su nabijeni u posudu od 20 L nakon čega je dodan toluen (4.22 L). U posudu je dodana sirćetna kiselina (304 ml, 5.31 mol). Smeša je mešana i grejana do 80° C. Ova smeša je mešana na 80° C preko noći pre no je ohlađena do 20° C. U smešu je dodan rastvor kalijum karbonata (0.916 kg, 6.63 mol) u vodi (3.3 L). Smeša je mešana tokom 10 min pre no je mešalica isključena, a slojevi su ostavljeni da se razdvoje. Vodeni sloj je odstranjen i odbačen. U reaktor je dodana voda (3.3 L). Smeša je mešana tokom 10 min, a tada je ostavljena da stoji tokom 10 min. Niža vodena faza je odstranjen, a organski sloj je ostavljeni da stoji na sobnoj temperaturi preko noći. Serija je grejana do 80° C. U vrući rastvor je dodavan heptan (4.61 L) tokom 35 min. Mešana smeša je držana na približno 80° C tokom 1 h. Smeša je ohlađena do 30° C tokom 2 h tokom kojeg vremena je produkt kristalizovao. Gusta smeša je mešana na 30° C tokom 2.5 h. Čvrsta materija je izolovana uz pomoć filtracije. Zidovi reaktorske posude su isprani sa heptanom, a ispiranja su korišćena za ispiranje filter-kolača. Čvrsta materija je osušena in vacuo koje daje (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat u formi roze čvrste materije (0.763 kg, 61%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 27° C) δ 1.06 (3H, d), 1.13 (3H, d), 1.21 (3H, d), 2.35 (1H, dd), 2.58 (1H, dd), 2.8 - 2.98 (2H, m), 3.44 - 3.61 (1H, m), 3.74 (3H, s), 5.24 (1H, s), 6.80 (1H, d), 6.9 - 7.05 (2H, m), 7.19 (1H, d), 7.41 (1H, d), 7.50 (2H, d), 7.63 (1H, d), 10.58 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 457.
2
Alternativna priprema Primera 1: (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina [0314]
[0315] 7.5 M natrijum hidroksid (32.9 ml, 247.10 mmol) je dodan u rastvor (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata (11.28 g, 24.71 mmol) u THF (143 ml) i metanolu (71.4 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. pH tečnosti je podešen do ∼6.5 uz pomoć dodavanja 2 N rastvora HCl, a rastvor je ekstrahovan sa dietil etrom (3 x 150 ml). Spojene organske materije su osušene preko Na2SO4i koncentrovane. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u gradijentu elucije od 0 do 20% metanol u DCM koje daje žutu čvrstu materiju. Pokušaj mrvljenja sa smešom aceton/heptan je propao zbog veće rastvorljivosti od očekivane. Rastvarači su odstranjeni koje daje žutu čvrstu materiju koja je smrvljena u izoheksanu (50 ml) uz nekoliko kapi dietil etra, nastala čvrsta materija je odstranjena filtriranjem pa je osušena koje daje sirovi produkt (11.14 g) u formi žutog praha. Čvrsta materija je rastvorena u etanolu (100 ml), pod azotom u tami. Rastvor je tada isparen pod pritiskom od 5 mBar uz pomoć vakuum-pumpe na 62° C u tami. Ova procedura je ponovljena dva puta, a nastala žuta staklasta materija je sakupljena uz pomoć spatule i pretvorena u fini prah pa je opet obrađena pod pritiskom od 5 mBar uz pomoć vakuum-pumpe na 62° C tokom 60 min koje daje žuti prah. Ovaj prah je tada ostavljen u vakuum-pećnici preko P2O5na 62° C pod pritiskom od 300 mBar preko noći koje daje jedinjenje iz naslova (9.77 g, 89%) u formi bledo-žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 27° C) δ 1.07 - 1.16 (3H, m), 1.18 - 1.29 (6H, m), 2.39 (1H, dd), 2.62 (1H, dd), 2.92 (2H, dd), 3.56 (1H, d), 5.26 (1H, s), 6.70 (1H, d), 7.02 (2H, dd), 7.22 (1H, d), 7.47 (3H, dd), 7.58 (1H, d), 10.60 (1H, s), 12.60 (1H, s). m/z: ES+ (ElectroSpray+) [M+H]+ 443.
[0316] (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat, koji je korišćen kao početni materijal, je pripremljen kako sledi:
Priprema 2-fluoro-2-metilpropan-1-ol
[0317]
[0318] Litijum aluminijum hidrid (3.37 g, 88.56 mmol) je dodan, deo po deo tokom 15 min, u ohlađeni rastvor etil 2-fluoro-2-metilpropanoata (9.9 g, 73.80 mmol) u dietil etru (184 ml) na 0° C. Reakciona smeša je mešana tokom 1 h, a tada su uzastopno dodani voda (3.3 ml), 15% rastvor NaOH (3.3 ml) i voda (6.7 ml). Suspenzija je mešana tokom 15 min, tada je odstranjena filtriranjem, a čvrste materije su isprane sa dietil etrom. Filtrat je isparen koje daje 2-fluoro-2-metilpropan-1-ol (5.90 g, 87%) u formi bezbojnog ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 27°C) δ 1.37 (6H, d), 3.56 (2H, d), OH nije primećen.
Alternativna priprema 2-fluoro-2-metilpropil trifluorometansulfonata
[0319]
[0320] Trifluorometansulfonski anhidrid (12.06 ml, 71.24 mmol), a nakon toga i 2,6-lutidin (11.42 ml, 81.42 mmol) su dodani u rastvor 2-fluoro-2-metilpropan-1-ol (6.25 g, 67.85 mmol) u DCM (146 ml) na -10° C. Reakciona smeša je mešana tokom 1 h, a tada je isprana sa 2 N HCl (2 x 100 ml) i sa zasićenim rastvorom NaHCO3(2 x 100 ml). Organska faza je tada osušena preko Na2SO4pa je koncentrovana koje daje 2-fluoro-2-metilpropil trifluorometansulfonat (12.89 g, 85%) u formi crvenog ulja.
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 27° C) δ 1.46 (6H, d), 4.41 (2H, d).
Ovaj intermedijar može da bude prečišćen uz pomoć vakumske destilacije. Analiza uz pomoć DSC je pokazala da je materijal posedovao potencijal da se sam greje. Zbog bezbednosti, tokom destilacije je preferiran isparivač u tankom filmu (ili nešto slično).
4
Alternativna priprema (R)-N-(1-(1H-indol-3-il)propan-2-il)-2-fluoro-2-metilpropan-1-amina
[0321]
[0322] 2-fluoro-2-metilpropil trifluorometansulfonat (8.04 g, 35.87 mmol) je dodan u rastvor (R)-1-(1H-indol-3-il)propan-2-amina (5.00 g, 28.70 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (7.44 ml, 43.04 mmol) u dioksanu (50 ml). Reakciona smeša je grejana do 90° C tokom 3 h. Nakon hlađenja do sobne temperature, reakciona smeša je razređena sa EtOAc (200 ml) pa je isprana sa zasičen. rastvorom NaHCO3(2 x 100 ml). Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (150 ml), a tada su spojene organske materije osušene preko MgSO4pa su koncentrovane. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u gradijentu elucije od 100% EtOAc. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (R)-N-(1-(1H-indol-3-il)propan-2-il)-2-fluoro-2-metilpropan-1-amin (6.49 g, 91%) u formi smeđeg ulja.
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 27° C) δ 1.14 (3H, d), 1.31 (3H, d), 1.37 (3H, d), 1.94 (1H, s), 2.63 - 2.87 (3H, m), 2.92 (1H, dd), 3.07 (1H, h), 7.07 (1H, d), 7.08 - 7.15 (1H, m), 7.16 - 7.24 (1H, m), 7.37 (1H, d), 7.62 (1H, d), 8.04 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 249
Alternativna priprema (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-formilfenil)akrilata
[0323]
[0324] 4-bromo-2,6-difluorobenzaldehid (9.99 g, 45.20 mmol) i metil akrilat (6.14 ml, 67.81 mmol) su rastvoreni u detaljno degaziranoj DMA (100 ml) pa su dodani tri-o-tolilfosfin (1.376 g, 4.52 mmol), paladijum(II) acetat (0.507 g, 2.26 mmol) i trietilamin (12.60 ml, 90.41 mmol). Reakciona smeša je mešana i grejana do 80° C tokom 6 h. Reakciona smeša je ohlađena, filtrirana kroz sloj celita pa je isprana sa metanolom (50 ml). Sirovi produkt je pre-apsorbovan u siliku pa je prečišćen hromatografijom uz usisavanje uz eluciju sa 0-10% smešom dietil etar/dihlorometan. Frakcije koje sadrže željeni produkt su isparene i smrvljene sa dietil etrom (50 ml) koje daje žutu čvrstu materiju koja je smrvljena sa vodom (50 ml) pa je osušena u visokom vakuumu na 50° C koje daje (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-formilfenil)akrilat (8.85 g, 87%) u formi žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 27°C) δ 3.75 (3H, s), 6.93 (1H, d), 7.52 - 7.81 (3H, m), 10.18 (1H, s). Maseni jon nije primećen u LCMS.
Alternativna priprema (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata
[0325]
[0326] (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-formilfenil)akrilat (6.58 g, 29.09 mmol) je dodan u suspenziju (R)-N-(1-(1H-indol-3-il)propan-2-il)-2-fluoro-2-metilpropan-1-amina (6.02 g, 24.24 mmol) u toluenu (51.1 ml) i sirćetnoj kiselini (2.78 ml, 48.48 mmol). Reakciona smeša je grejana do 80° C tokom 5 h. Reakciona smeša je prečišćena uz pomoć hromatografije jonske izmene uz korišćenje kolone SCX-2. Željeni produkt je eluiran iz kolone uz pomoć smeše 7 M NH3/metanol, a čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje smeđu čvrstu materiju. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u gradijentu elucije od 0 do 30% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje jedinjenje iz naslova (7.52 g, 68.0%) u formi žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 100° C) δ 1.10 (3H, d), 1.12 - 1.31 (6H, m), 2.28 - 2.72 (2H, m), 2.84 - 3.09 (2H, m), 3.52-3.69 (1H, m), 3.76 (3H, s), 5.30 (1H, s), 6.64 (1H, d), 6.9 - 7.11 (2H, m), 7.21 (1H, d), 7.32 (2H, d), 7.42 (1H, d), 7.58 (1H, d), 10.14 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 457
Primer 2: (E)-3-(4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina
[0327]
[0328] 7.5 M rastvor natrijum hidroksida (0.983 ml, 7.37 mmol) je dodan u rastvor (E)-metil 3-(4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata (310 mg, 0.74 mmol) u metanolu (5 ml). Smeša je mešana na 20° C tokom 2 h. Reakciona smeša je prečišćena uz pomoć hromatografije jonske izmene na koloni SCX-2. Frakcije koje sadrže željeni produkt su eluirane iz kolone uz pomoć smeše 7 M NH3/metanol, a čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje žutu čvrstu materiju. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć preparativne HPLC (kolona SunFire od Waters-a, silika: 5 µ, dijametar: 50 mm, dužina: 100 mm) u opadajuće-polarnim smešama vode (koja je sadržavala 0.1% mravlju kiselinu) i MeCN koji su poslužili kao eluenti. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće, a tada su nabijene u kolonu SCX-2 i eluirane sa 7 N amonijakom u metanolu koje daje jedinjenje iz naslova (63.0 mg, 21.02%) u formi žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30° C) δ 1.06 (3H, d), 1.30 (3H, d), 1.47 (3H, d), 2.53 - 2.64 (2H, m), 2.79 (2H, s), 3.10 (1H, d), 5.08 (1H, s), 6.47 (1H, d), 6.98 (1H, t), 7.06 (1H, t), 7.19 - 7.37 (3H, m), 7.44 (1H, d), 7.56 (1H, d), 7.63 (2H, d), 10.81 (1H, s), 12.30 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 407.
[0329] (E)-metil 3-(4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat, koji je korišćen kao početni materijal, je pripremljen kako sledi:
Priprema (E)-metil 3-(4-formilfenil)akrilata
[0330]
[0331] 4-bromobenzaldehid (30 g, 162.15 mmol) i metil akrilat (20.94 g, 243.22 mmol) su rastvoreni u detaljno degaziranoj DMA (300 ml), a sve je tretirano sa tri-o-tolilfosfinom (4.94 g, 16.21 mmol), paladijum(II) acetatom (1.820 g, 8.11 mmol) i trietilaminom (45.2 ml, 324.29 mmol) pa je grejano do 110° C tokom 16 h. Reakcija je završila nakon tog vremena. Reakciona smeša je izlivena u vodu (4 L), a nastao precipitat je filtriran i osušen. Čvrsta materija je prečišćena hromatografijom na silika-gelu uz eluciju sa 100% heptanom do 30% EtOAc u heptanu. Relevantne frakcije su spojene i isparene do suvoće koje daje žutu čvrstu materiju koja je smrvljena sa heptanom, filtrirana i isprana sa hladnim heptanom. Čvrsta materija je osušena koje daje (E)-metil 3-(4-formilfenil)akrilat (25.6 g, 83%) u formi žutog kristalnog produkta.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30° C) δ 3.75 (3H, s), 6.79 (1H, d), 7.72 (1H, d), 7.93 (4H, s), 10.03 (1H, s). Maseni jon nije primećen u LCMS.
Priprema (E)-metil 3-(4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata
[0332]
[0333] (R)-N-(1-(1H-indol-3-il)propan-2-il)-2-fluoro-2-metilpropan-1-amin (dobiven kao šta je opisano u Primeru 1, priprema početnih materijala) (450 mg, 1.81 mmol) i (E)-metil 3-(4-formilfenil)akrilat (345 mg, 1.81 mmol) su rastvoreni u toluenu (15 ml), a tada su dodani sirćetna kiselina (5 ml) i molekularna sita. Reakciona smeša je mešana na 110° C tokom 16 h pod azotom, a tada je ohlađena do sobne temperature. Sirovi produkt je prečišćen hromatografijom jonske izmene na koloni SCX-2. Željeni produkt je eluiran iz kolone uz pomoć smeše 7 M NH3/metanol, a čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje sirovi produkt. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u gradijentu elucije od 0 do 30% EtOAc u heptan. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (E)-metil 3-(4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (317 mg, 41.6%) u formi žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30° C) δ 1.09 (3H, d), 1.30 (3H, d), 1.47 (3H, d), 2.48 - 2.78 (4H, m), 3.30 (1H, m), 3.79 (3H, s), 5.09 (1H, s), 6.40 (1H, d), 7.12 (1H, td), 7.17 (1H, td), 7.29 (1H, d), 7.34 (2H, d), 7.43 (2H, d), 7.54 (1H, d), 7.66 (2H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 421.
Primer 3: (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina
[0334]
[0335] 2 M natrijum hidroksid (3.0 ml, 6.00 mmol) je dodan u rastvor (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata (275 mg, 0.60 mmol) u smeši THF (1.5 ml)/metanol (1.5 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Dodani su EtOAc (15 ml) i voda (15 ml), a tada je pH tečnosti podešen do ∼7 uz pomoć dodavanja 2 N HCl. Slojevi su razdvojeni, a tečnost je ekstrahovana sa EtOAc (15 ml). Spojene organske materije su osušene preko Na2SO4pa su koncentrovane. Sirovi produkt je prečišćen iz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u gradijentu elucije od 0 do 10% metanola u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje jedinjenje iz naslova (250 mg, 94%) u formi bledo-žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30° C) δ 0.77 (3H, d), 1.06 (3H, d), 1.93 (1H, m), 2.18 (1H, dd), 2.58 (1H, dd), 2.65 (1H, dd), 2.84 (1H, dd), 3.35 (1H, dd), 4.32 (1H, d), 4.44 (1H, d), 5.16 (1H, s), 6.67 (1H, d), 6.93 - 7.04 (2H, m), 7.21 (1H, d), 7.42 (1H, d), 7.46 (2H, m), 7.54 (1H, d), 10.57 (1H, s), 12.51 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 443.
[0336] (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat, koji je korišćen kao početni materijal, je pripremljen kako sledi:
Priprema (S)-3-fluoro-2-metilpropan-1-ol
[0337]
[0338] N,N-dietil-1,1,2,3,3,3-heksafluoropropan-1-amin (18.25 ml, 100.57 mmol) je dodan kap po kap u rastvor (R)-metil 3-hidroksi-2-metilpropanoata (9.25 ml, 83.81 mmol) u DCM (77 ml) (reakcija se ugrejala do ∼40° C). Reakciona smeša je mešana tokom 1 h na ambijentalnoj temperaturi, a tada je ugrejana do temperature refluksa tokom 4 h pre hlađenja do sobne temperature preko noći. Reakciona smeša je izlivena u led, a slojevi su se razdvojili. Tečnost je ekstrahovana sa DCM (2 x 150 ml), a tada su spojene organske materije osušene i pažljivo koncentrovane. Talog je rastvoren u THF (200 ml) pa je ohlađen u ledenoj-banji. Dodan je litijum aluminijum hidrid (6.45 g, 167.61 mmol), u porcijama tokom 15 min. Reakciona smeša je mešana na 0° C tokom 1 h, a tada je ugrejana do sobne temperature tokom 1 h. Nakon hlađenja u ledenoj-banji, reakcija je ugašena uz pomoć dodavanja vode (7 ml), nakon toga 15% NaOH (7 ml), a nakon toga vode (21 ml). MgSO4je dodavan do pojave granularne čvrste materije. Ova čvrsta materija je filtrirana kroz celit, a talog je ispran sa dietil etrom (50 ml). Filtrat je ispran sa 2 N HCl (2 x 100 ml), a organska faza je osušena preko Na2SO4i koncentrovana. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silikagelu u gradijentu elucije od 0 do 10% EtOAc u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-3-fluoro-2-metilpropan-1-ol (6.42 g, 83%) u formi ulja boje slame.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30° C) δ 0.97 (3H, dd), 1.96 - 2.14 (1H, m), 3.64 (2H, d), 4.3 - 4.42 (1H, m), 4.42 - 4.54 (1H, m), OH nije primećen.
Priprema (S)-3-fluoro-2-metilpropil trifluorometansulfonata
[0339]
[0340] U mešani rastvor (S)-3-fluoro-2-metilpropan-1-ol (7.9 g, 85.77 mmol) u DCM (140 ml) na 0° C je dodan trifluorometansulfonski anhidrid (17.31 ml, 102.92 mmol), kap po kap, a tada je usledilo dodavanje 2,6-dimetilpiridina (11.95 ml, 102.92 mmol) takođe kap po kap. Reakciona smeša je mešana na 0° C tokom 45 min pa na sobnoj temperaturi tokom 30 min. Reakciona smeša je razređena sa DCM (60 ml) pa je uzastopno isprana sa 1 M HCl (3 x 100 ml), zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (100 ml) i zasićenom slanicom (50 ml). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen do približne suvoće. Rastvor je filtriran kroz pločicu od silike pa je ispran sa DCM (50 ml) i isparen koje daje (S)-3-fluoro-2-metilpropil trifluorometansulfonat (14.38 g, 74.8%) u formi smeđeg ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 27° C) δ 1.09 (3H, dd), 2.24 - 2.44 (1H, m), 4.30 (0.5H, dd), 4.37 - 4.46 (1H, m), 4.52 (2.5H, tt).
Priprema (S)-N-((R)-1-(1H-indol-3-il)propan-2-il)-3-fluoro-2-metilpropan-1-amina [0341]
[0342] (S)-3-fluoro-2-metilpropil trifluorometansulfonat (666 mg, 2.97 mmol) je dodan u rastvor (R)-1-(1H-indol-3-il)propan-2-amina (470 mg, 2.7 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (0.700 ml, 4.05 mmol) u 1,4-dioksanu (6.05 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je razređena sa EtOAc (20 ml) i isprana sa vodom (20 ml). Tečnost je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 20 ml), a tada su spojene organske materije osušene (MgSO4) i koncentrovane. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć flešhromatografije na silika-gelu u gradijentu elucije od 0 do 10% metanola u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (S)-N-((R)-1-(1H-indol-3-il)propan-2-il)-3-fluoro-2-metilpropan-1-amin (590 mg, 88%) u formi smeđeg ulja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30° C)
1
δ 0.86 (3H, dd), 1.20 (3H, d), 1.94 - 2.11 (1H, m), 2.64-2.74 (2H, m), 2.85-2.98 (2H, m), 3.05 - 3.15 (1H, m), 4.13 - 4.39 (2H, m), 7.09 (1H, d), 7.12 (2H, ddd), 7.20 (1H, ddd), 7.33 - 7.41 (1H, m), 7.56 - 7.65 (1H, m), 8.10 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 249
Priprema (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata
[0343]
[0344] Sirćetna kiselina (2.0 ml) je dodana u rastvor (S)-N-((R)-1-(1H-indol-3-il)propan-2-il)-3-fluoro-2-metilpropan-1-amina (273 mg, 1.10 mmol) i (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-formilfenil)akrilata (dobiven kao šta je opisano u Primeru 1, priprema početnih materijala) (226 mg, 1 mmol) u toluenu (8.0 ml). Reakciona smeša je ugrejana do 95° C tokom 2.5 h. Isparljivi delovi su odstranjeni u vakuumu, a tada je talog propušten kroz kolonu SCX-2. Kolona je tada eluirana sa smešom 7 M NH3/metanol kako bi se oslobodio produkt. Filtrat je koncentrovan, a sirovi produkt je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u gradijentu elucije od 0 do 10% metanola u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (282 mg, 61.8%) u formi bledo-žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30° C) δ 0.82 (3H, d), 1.12 (3H, d), 1.81 - 1.99 (1H, m), 2.24 (1H, ddd), 2.64 (1H, ddd), 2.71 (1H, dd), 2.93 - 3.01 (1H, ddd), 3.42 (1H, dq), 3.81 (3H, s), 4.25 - 4.39 (1H, m), 4.38 - 4.53 (1H, m), 5.20 (1H, s), 6.39 (1H, d), 6.99 (2H, m), 7.06 - 7.16 (2H, m), 7.21 -7.25 (1H, m), 7.52 (3H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 457.
2
Primer 4: (E)-3-(4-((1R,3R)-2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina
[0345]
[0346] 7.5 M rastvor natrijum hidroksida (0.904 ml, 6.78 mmol) je dodan u rastvor (E)-metil 3-(4-((1R,3R)-2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata (285 mg, 0.68 mmol) u metanolu (3 ml). Smeša je mešana na 20° C tokom 2 h. Reakciona smeša je prečišćena uz pomoć hromatografije jonske izmene uz korišćenje kolone SCX-2. Frakcije koje sadrže željeni produkt su eluirane iz kolone uz pomoć smeše 7 M NH3/metanol, a čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje žutu čvrstu materiju. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć preparativne LCMS (kolona: Phenomenex Gemini-NX axia Prep C18 OBD, silika: 5 µ, dijametar: 50 mm, dužina: 100 mm) uz pomoć opadajućepolarnih smeša vode (koje sadrže 1% NH3) i MeCN kao eluenti. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje jedinjenje iz naslova (80 mg, 29.0%) u formi žute čvrste materije.<1>H NMR (500 MHz, DMSO, 33° C) δ 0.87 (3H, d), 1.04 (3H, d), 1.91 - 2.27 (2H, m), 2.50 (1H, p), 2.57 - 2.75 (2H, m), 3.13 (1H, s), 4.51 (2H, dd), 4.86 (1H, s), 6.47 (1H, d), 6.92 - 6.99 (1H, m), 7 - 7.09 (1H, m), 7.15 - 7.35 (3H, m), 7.35 - 7.5 (2H, m), 7.57 (2H, d), 10.64 (1H, d), CO2H nije primećen. m/z: ES+ [M+H]+ 407.
[0347] (E)-metil 3-(4-((1R,3R)-2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat, koji je korišćen kao početni materijal, je pripremljen kako sledi:
Priprema (E)-metil 3-(4-((1S,3R)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata
[0348]
[0349] (E)-metil 3-(4-formilfenil)akrilat (dobiven kao šta je opisano u Primeru 2, priprema početnih materijala) (18.56 g, 97.57 mmol) je dodan u mešani rastvor (R)-1-(1H-indol-3-il)propan-2-amina (17 g, 97.57 mmol) u sirćetnoj kiselini (250 ml) na 23° C pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 80° C tokom 2 h. Reakciona smeša je isparena do suvoće pa je ponovo rastvorena u DCM (500 ml) nakon čega je uzastopno isprana sa zasićenim NaHCO3(300 ml x 2), 2 M NaOH (vod.) (300 ml), vodom (300 ml), i zasićenom slanicom (300 ml). Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i isparen koje daje sirovi produkt. Ovaj sirovi produkt je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u gradijentu elucije od 1 do 7% metanola u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (E)-metil 3-(4-((1S,3R)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (25.1 g, 74.3%) u formi bež pene. Produkt je uglavnom cis-izomer, koji sadrži oko 12% trans-izomera koji se nije mogao odvojiti.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30° C) δ 1.25 (3H, d), 2.37 - 2.48 (1H, m), 2.74 (1H, d), 3.12 (1H, s), 3.73 (3H, s), 5.18 (1H, s), 6.64 (1H, d), 6.97 (2H, dd), 7.19 (1H, d), 7.36 - 7.46 (3H, m), 7.64 - 7.75 (3H, m), 10.19 (1H, s), NH nije primećen. m/z: ES+ [M+H]+ 347.
Priprema (E)-metil 3-(4-((1S,3R)-2-allil-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata
[0350]
4
[0351] (E)-metil 3-(4-((1S,3R)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (35 g, 101.03 mmol), 3-bromoprop-1-en (9.62 ml, 111.14 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (19.36 ml, 111.14 mmol) su suspendovani u acetonitrilu (160 ml), azot je proveden (mehurići) kroz suspenziju tokom 5 min, a tada je smeša začepljena u tubu za mikrotalasnu peć. Reakciona smeša je grejana do 140° C tokom 3.5 h u mikrotalasnom reaktoru pa je ohlađena do sobne temperature.
Reakciona smeša je isparena do suvoće pa je ponovo rastvorena u DCM (100 ml) nakon čega je uzastopno isprana sa 1 M limunskom kiselinom (100 ml), vodom (100 ml), i zasićenom slanicom (100 ml). Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i isparen koje daje sirovi produkt. Ovaj sirovi produkt je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u gradijentu elucije od 0 do 20% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje smešu (E)-metil 3-(4-((1R,3R)-2-allil-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat : (E)-metil 3-(4-((1S,3R)-2-allil-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (10.00 g, 25.6%) u omeru 50:50 u formi bledo-žute čvrste materije. m/z: ES+ [M+H]+ 387.
Priprema (E)-metil 3-(4-((1R,3R)-2-allil-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata
[0352]
[0353] Trifluorosirćetna kiselina (5.59 ml, 75.29 mmol) je dodana u (E)-metil 3-(4-((1S,3R)-2-allil-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (9.7 g, 25.10 mmol) u DCM (100 ml) na 20° C pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 20° C tokom 3 dana. Reakciona smeša je pažljivo razređena sa zasićenim rastvorom NaHCO3(250 ml), a DCM-sloj je uzastopno ispran sa vodom (250 ml) i zasićenom slanicom (250 ml). Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i isparen koje daje sirovi produkt. Ovaj sirovi produkt je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u gradijentu elucije od 10 do 20% EtOAc u heptanu. Frakcije su isparene do suvoće koje daje smešu (E)-metil 3-(4-((1R,3R)-2-allil-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat : (E)-metil 3-(4-((1S,3R)-2-allil-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (7.99 g, 82%) u omeru 65:35 u formi bledo-žute čvrste materije. m/z: ES+ [M+H]+ 387
Priprema (E)-metil 3-(4-((1R,3R)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata
[0354]
[0355] 7 odvojenih serija smeše (E)-metil 3-(4-((1R,3R)-2-allil-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat : (E)-metil 3-(4-((1S,3R)-2-allil-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (2.00 g, 5.17 mmol) u omeru 65:35 su reagovane kako sledi.
(E)-metil 3-(4-((1R,3R)-2-allil-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (2.00 g, 5.17 mmol) i hlorotris(trifenilfosfin)rodijum(I) (Wilkinson-ov katalizator) (2.346 g, 2.54 mmol) su suspendovani u acetonitrilu (12 ml) i vodi (2.4 ml), a azot je u formi mehurića proveden kroz smešu tokom 5 min pre no je pomenuta začepljena u tubu za mikrotalasnu peć. Reakciona smeša je grejana do 100° C tokom 60 min u mikrotalasnom reaktoru pa je ohlađena do sobne temperature. Reakcione smeše su spojene i isparene do suvoće pa su ponovo rastvorene u DCM (200 ml) nakon čega je dodan zasićeni rastvor NaHCO3(200 ml). Organski sloj je ispran uzastopno sa vodom (200 ml) i zasićenom slanicom (200 ml) pre no je osušen preko MgSO4, filtriran i isparen koje daje sirovi produkt. Ovaj sirovi produkt je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u gradijentu elucije od 0 do 5% metanola u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (E)-metil 3-(4-((1R,3R)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (7.02 g, 55.9%) u formi bledo-žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30° C) δ 1.14 (3H, d), 2.27 - 2.4 (1H, m), 2.81 (1H, dd), 2.94 - 3.05 (1H, m), 3.72 (3H, s), 5.19 (1H, s), 6.60 (1H, d), 6.94 - 7 (1H, m), 7.01 - 7.09 (1H, m), 7.26 (3H, d), 7.43 (1H, d), 7.59 - 7.68 (3H, m), 10.70 (1H, s), NH nije primećen. m/z: ES+ [M+H]+ 347
Priprema (E)-metil 3-(4-((1R,3R)-2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata
[0356]
[0357] (S)-3-fluoro-2-metilpropil trifluorometansulfonat (dobiven kao šta je opisano u Primeru 3, priprema početni materijala) (291 mg, 1.30 mmol) je dodan u rastvor (E)-metil 3-(4-((1R,3R)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata (300 mg, 0.87 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0.226 ml, 1.30 mmol) u 1,4-dioksanu (5 ml). Smeša je mešana na 90° C tokom 1 h, a tada je isparena do suvoće nakon čega je talog podeljen između DCM (30 ml) i vode (30 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (30 ml), a ekstrakti su spojeni sa organskim slojem. Spojeni ekstrakti su filtrirani kroz hartiju za razdvajanje faza pa su ispareni. Talog je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u rastvaraču za eluciju, 15% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (E)-metil 3-(4-((1R,3R)-2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (314 mg, 86%) u formi prljavo bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30° C) δ 0.87 (3H, d), 1.06 (3H, d), 1.9 - 2.28 (2H, m), 2.55 - 2.8 (3H, m), 2.97 - 3.21 (1H, m), 3.72 (3H, s), 4.31 - 4.69 (2H, m), 4.88 (1H, s), 6.60 (1H, dd), 6.98 (1H, t), 7.04 (1H, t), 7.17 -7.35 (3H, m), 7.44 (1H, d), 7.55 - 7.76 (3H, m), 10.65 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 421.
Primer 5: (E)-3-(3,5-difluoro-4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina (izomer 1)*
[0358]
[0359] Natrijum hidroksid (184 mg, 4.61 mmol) je dodan u (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (izomer 1) (217 mg, 0.46 mmol) u smeši THF (1 ml)/metanol (1 ml). Nastao rastvor je mešan na 20° C tokom 16 h. Reakciona smeša je razređena sa vodom (10 ml), a pH je podešen do vrednosti 7 uz pomoć dodavanja 2 N HCl. Rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 20 ml). Spojene organske materije su osušene preko Na2SO4pa su koncentrovane. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u gradijentu elucije od 0 do 50% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene koje daje sirovi materijal. Ovaj sirovi produkt je smrvljen u smeši dietil etar/izoheksan koje daje jedinjenje iz naslova (53.0 mg, 25.2%) u formi žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 27° C) δ 0.54 (3H, d), 1.06 (3H, s), 1.34 (3H, s), 2.14 (1H, dd), 2.66 (1H, d), 2.83 (1H, d), 3.03 (1H, dd), 4.21 (1H, t), 4.33 (1H, t), 5.12 (1H, s), 6.73 (1H, d), 7.01 (2H, dtd), 7.14 - 7.28 (1H, m), 7.43 (1H, d), 7.54 (2H, s), 7.59 (1H, d), 10.50 (1H, s), 12.61 (1H, s), CO2H nije primećen. m/z: ES+ [M+H]+ 457
* Zaključeno je da je stereohemija (R) u nedefinisanom centru analogijom sa drugim primerima, tj. jedinjenja za koje se zaključeno je da je: (E)-3-(3,5-difluoro-4-(1R)-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina
[0360] 3-(3,5-difluoro-4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (izomer 1), korišćen kao početni materijal, je pripremljen kako sledi:
Priprema (E)-metil 3-(4-(3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)-3,5-difluorofenil)akrilata
[0362] 1-(1H-indol-3-il)-2-metilpropan-2-amin (807 mg, 4.29 mmol) i (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-formilfenil)akrilat (dobiven kao šta je opisano u Primeru 1, priprema početnih materijala) (970 mg, 4.29 mmol) su spojeni u sirćetnoj kiselini (15 ml), a smeša je grejana do 80° C tokom 2 h. Reakciona smeša je prečišćena uz pomoć hromatografije jonske izmene na koloni SCX-2. Željeni produkt je eluiran iz kolone uz pomoć 2 M NH3u metanolu, a frakcije koje sadrže produkt su isparene do suvoće koje daje (E)-metil 3-(4-(3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)-3,5-difluorofenil)akrilat (1610 mg, 95%) u formi žute pene.<1>H NMR (500 MHz, DMSO, 20° C) δ 1.15 (3H, s), 1.27 (3H, s), 2.23 (1H, s), 2.61 (2H, s), 3.75 (3H, s), 5.46 (1H, s), 6.84 (1H, d), 6.97 (2H, dtd), 7.18 (1H, d), 7.39 (1H, d), 7.58 (2H, s), 7.67 (1H, d), 10.60 (1H, s). m/z: ES- [M-H]- 395.
Priprema (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata (izomer 1)
[0363]
[0364] (S)-3-fluoro-2-metilpropil trifluorometansulfonat (dobiven kao šta je opisano u Primeru 3, priprema početnih materijala) (0.339 g, 1.51 mmol) je dodan u rastvor (E)-metil 3-(4-(3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)-3,5-difluorofenil)akrilata (0.3 g, 0.76 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (0.458 ml, 2.65 mmol) u 1,4-dioksanu (2 ml). Mešanje je nastavljeno tokom 24 h, a tada su isparljivi delovi odstranjeni u vakuumu nakon čega je sirovi produkt prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u gradijentu elucije od 0 do 25% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (0.202 g, 36%) u formi bele čvrste materije. Materijal je spojen sa drugom serijom (0.36 g) pa je prečišćen uz pomoć preparativne HPLC (kolona: Chiralpak IA, silika: 20 µm, dijametar: 20 mm, dužina: 250 mm), Heptan:IPA 70:30 kod 80 ml/min (4 injekcije). Frakcije koje sadrže željena jedinjenja su isparene koje daje (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (izomer 1, prvo-eluiran, 217 mg) i (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (izomer 2, drugo-eluiran, 165 mg). Analiza je provedena na koloni Chiralpak IA, silika: 5 µm, dijametar: 4.6 mm, dužina: 50 mm, Heptan:IPA 70:30 kod 2 ml/min.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30° C) δ 0.50 (3H, d), 1.02 (3H, s), 1.30 (3H, s), 2.11 (1H, dd), 2.62 (2H, d), 2.80 (1H, d), 2.99 (1H, dd), 3.74 (3H, s), 4.09 - 4.23 (1H, m), 4.29 (1H, d), 5.09 (1H, s), 6.81 (1H, d), 6.97 (2H, dt), 7.16 (1H, d), 7.39 (1H, d), 7.53 (2H, d), 7.64 (1H, d), 10.44 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 471.
Primer 6: (E)-3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina (izomer 1)*
[0365]
[0366] 2 M natrijum hidroksid (1.6 ml, 3.20 mmol) je dodan u rastvor (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata (izomer 1) (148 mg, 0.31 mmol) u smeši THF (0.8 ml)/metanol (0.8 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Dodani su EtOAc (15 ml) i voda (15 ml), a pH tečnosti je podešen do vrednosti ∼7 uz pomoć dodavanja 2 N HCl. Slojevi su razdvojeni, a tečnost je ekstrahovana sa EtOAc (15 ml). Spojene organske materije su osušene preko Na2SO4i koncentrovane. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na
1
silika-gelu u gradijentu elucije od 25 do 100% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje jedinjenje iz naslova (izomer 1) (124 mg, 86%) u formi bledo-žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30° C) δ 1.03 (3H, d), 1.08 (3H, s), 1.16 (3H, d), 1.35 (3H, s), 2.56 (1H, dd), 2.66 (1H, d), 3.02 (1H, d), 3.17 (1H, dd), 5.24 (1H, s), 6.39 (1H, d), 7.00 (2H, d), 7.05 - 7.16 (2H, m), 7.20 (1H, dd), 7.28 (1H, s), 7.49 (1H, dd), 7.61 (1H, d), CO2H nije primećen. m/z: ES+ [M+H]+ 457.
* Zaključeno je da stereohemija je (R) na nedefinisanom centru analogijom sa drugim primerima.
(E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (izomer 1), korišćen kao početni materijal, je pripremljen kako sledi:
Priprema (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata (izomer 1)
[0367]
[0368] 2-fluoro-2-metilpropil trifluorometansulfonat (dobiven kao šta je opisano u Primeru 1, priprema početnih materijala) (679 mg, 3.03 mmol) je dodan u rastvor (E)-metil 3-(4-(3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)-3,5-difluorofenil)akrilata (dobiven kao šta je opisano u Primeru 5, priprema početnih materijala) (600 mg, 1.51 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (0.915 ml, 5.30 mmol) u 1,4-dioksanu (2.5 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je tada grejana do 105° C tokom 88 h. Isparljivi delovi su odstranjeni u vakuumu, a sirovi produkt je prečišćen uz pomoć flešhromatografije na silika-gelu u gradijentu elucije od 0 do 50% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (430 mg, 60.4%) u formi bele čvrste materije. Racemski produkt je prečišćen uz pomoć preparativne HPLC (kolona:
1 1
Chiralpak AD, silika: 20 µm, dijametar: 50 mm, dužina: 250 mm), Heptan:Etanol, 90:10, 90 ml/min. Frakcije koje sadrže željena jedinjenja su isparena do suvoće koje daje (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (izomer 1, prvo-eluiran, 149 mg, 34.6%) i (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (izomer 2, drugo-eluiran, 143 mg, 33.3%) u formi čvrstih materija krem boje.
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30° C) δ 1.01 (3H, d), 1.08 (3H, s), 1.15 (3H, d), 1.34 (3H, s), 2.55 (1H, dd), 2.66 (1H, d), 2.98 - 3.06 (1H, m), 3.17 (1H, dd), 3.80 (3H, s), 5.23 (1H, s), 6.38 (1H, d), 6.97 (2H, d), 7.07 - 7.12 (2H, m), 7.17 - 7.22 (1H, m), 7.32 (1H, s), 7.46 - 7.5 (1H, m), 7.52 (1H, d). m/z ES- [M-H]- 469.
Primer 7: (E)-3-(4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina (izomer 1)*
[0369]
[0370] 2 M rastvor natrijum hidroksida (20.42 ml, 40.85 mmol) je dodan u rastvor (E)-metil 3-(4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata (izomer 1) (3.55 g, 8.17 mmol) u metanolu (100 ml), THF (100 ml) i vodi (75 ml). Smeša je grejana na 40° C tokom 16 h. Smeša je razređena sa vodom (100 ml) i koncentrovana tako da su organski rastvarači odstranjeni. Nastao vodeni rastvor je zakiseljen do pH = 6 uz pomoć 2 M HCl. Nastala vodena suspenzija je ekstrahovana sa DCM (500 ml) (uz dodavanje slanice kako bi se razdvojila emulzija koja se formirala), filtrirana kroz hartiju koja odvaja faze, osušena preko MgSO4pa je filtrirana kroz celit i isparena koje daje ∼3.5 g bledo-žute čvrste materije. Sirovi produkt je tretiran sa smešom dietil etar/DCM (1:1, 150 ml) pa je sonifikovan. Fina suspenzija, koja se formirala, je propuštena kroz pločicu od silike (∼100 g), a silika je eluirana uz pomoć dietil etra (∼2 L). Frakcije koje sadrže produkt su spojene, isparene i osušene u vakuumu na 50° C koje daje jedinjenje iz naslova (2.305 g, 64.5%) u formi
1 2
bež čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30° C) δ 0.52 (3H, d), 1.03 (3H, s), 1.05 -1.16 (1H, m), 1.23 (3H, s), 2.21 (1H, dd), 2.65 (1H, d), 2.84 (1H, d), 2.89 (1H, dd), 4.19 (1H, ddd), 4.31 (1H, ddd), 4.66 (1H, s), 6.50 (1H, d), 6.93 (1H, ddd), 6.98 (1H, ddd), 7.18 (1H, d), 7.38 (2H, d), 7.40 (1H, d), 7.58 (1H, d), 7.63 (2H, d), 10.18 (1H, s), 12.30 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 421.
* Zaključeno je da stereohemija je (R) na nedefinisanom centru analogijom sa ostalim primerima.
Produkt (9.0 g, 21.40 mmol) je pretvoren u gustu pastu uz pomoć acetonitrila (150 ml) pod azotom tokom tretmana od 1 h u zatvorenoj boci sa okruglim dnom od 250 ml. Smeša je mešana preko vikenda na sobnoj temperaturi, a tada je filtrirana i isprana sa hladnim acetonitrilom (60 ml) koje daje belu čvrstu materiju koja je osušena u visokom vakuumu na 40° C tokom 5 h koje daje kristalnu formu A jedinjenja iz naslova (7.81 g, 87%).
XRPD-trag Kristalne forme A uključuje sledeće šiljke, a prikazan je na Slici 1.
[0371] (E)-metil 3-(4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (izomer 1), korišćen kao početni materijal, je pripremljen na sledeći način:
Priprema (E)-metil 3-(4-(3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata (racemat)
[0372]
1
[0373] (E)-metil 3-(4-formilfenil)akrilat (41.8 g, 219.62 mmol) (dobiven kao šta je opisano u Primeru 2, priprema početnih materijala) je dodan u jednoj porciji u 1-(1H-indol-3-il)-2-metilpropan-2-amin (43.8 g, 219.62 mmol) u sirćetnoj kiselini (314 ml) pod azotom. Nastao rastvor je mešan na 80° C tokom 5 h. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo. Dodan je toluen (200 ml), a talog je isparen do suvoće. Azeotropni tretman je ponovljen još dva puta koje daje smeđu čvrstu materiju. Pomenuta je mešana u smeši EtOAc/heptan (1:1, 500 ml) tokom 30 min pre filtriranja i ispiranja sa smešom EtOAc/heptan, 1:1. Jedinjenje je osušeno na vazduhu koje daje belu čvrstu materiju. Sirovi materijal je suspendovan u 2-metil tetrahidrofuranu (750 ml) pa mu je dodavan zasićeni rastvor natrijum bikarbonata tokom 10 min uz mešanje (oslobađa se gas), smeša je mešana do tačke kada rastvoreni materijal i vodena faza ostaju bazni. Faze su razdvojene, a organska faza je isprana sa slanicom, osušena preko MgSO4, filtrirana i koncentrovana in vacuo koje daje bledo-žutu penu (∼78 g). Materijal je rastvoren u dietil etru (200 ml), koncentrovan do suvoće (ponovljeno dva puta). Nakon drugog dodavanja pojavljuje se prava čvrsta materija. Pomenuta je mešana u dietil etru pa je isparena do suvoće koje daje (E)-metil 3-(4-(3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (racemat) (73.6 g, 89%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30° C) δ 1.26 (3H, s), 1.35 (3H, s), 1.42 (1H, br s), 2.69 - 2.82 (2H, m), 3.80 (3H, s), 5.12 (1H, s), 6.41 (1H, d), 7.06 - 7.16 (2H, m), 7.21 (1H, dd), 7.37 (2H, d), 7.46 - 7.54 (4H, m), 7.67 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 361.
1 4
Priprema (E)-metil 3-(4-(3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata (izomer 1)
[0374]
[0375] (E)-metil 3-(4-(3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (racemat) (65 g) je prečišćen kroz sedam injekcija kako sledi.
[0376] Racemski materijal je prečišćen uz pomoć preparativne HPLC (kolona: Chiralpak OD, silika: 20 µm, dijametar: 100 mm, dužina: 250 mm), Heptan:IPA, 50:50. Frakcije koje sadrže željena jedinjenja su isparena do suvoće koje daje (E)-metil 3-(4-(3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (izomer 1, prvo-eluiran, 30.3 g, 93%) i (E)-metil 3-(4-(3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (izomer 2, drugo-eluiran, 28.2 g, 86%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30° C) δ 1.27 (3H, s), 1.36 (3H, s), 2.69 - 2.82 (2H, m), 3.80 (3H, s), 5.14 (1H, s), 6.43 (1H, d), 7.12 (2H, pd), 7.2 - 7.24 (1H, m), 7.39 (3H, d), 7.51 (3H, d), 7.68 (1H, d), NH nije primećen. m/z: ES+ [M+H]+ 361.
Priprema (E)-metil 3-(4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata (izomer 1)
[0377]
[0378] (S)-3-fluoro-2-metilpropil trifluorometansulfonat (dobiven kao šta je opisano u Primeru 3, priprema početnih materijala) (5.32 g, 21.36 mmol) je dodan u rastvor (E)-metil 3-
1
(4-(3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata (izomer 1) (3.5 g, 9.71 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (6.34 ml, 36.41 mmol) u 1,4-dioksanu (17.5 ml). Smeša je mešana na 22° C tokom 3 dana. Smeša je isparena, a talog je podeljen između DCM (150 ml) i vode (150 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (50 ml), a ekstrakti su spojeni sa organskim slojem. Spojeni ekstrakti su filtrirani kroz hartiju za razdvajanje faza pa su ispareni. Talog je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u rastvaraču za eluciju, 15% EtOAc u heptanu. Frakcije koje sadrže značajne količine produkta započinju formirati kristale; tube su uzdrmane kako bi se potaknulo daljnje kristalizovanje. Kristali su sakupljeni uz pomoć filtracije i isprani sa malim količinama 15% EtOAc u heptanu koje daje (E)-metil 3-(4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (izomer 1) (2.91 g, 69.0%) u formi bele kristalne čvrste materije. Likvori od kristalizovanja i druge frakcije koje sadrže produkt su spojene i isparene. Talog je ponovo kristalizovan iz smeše EtOAc/heptan koje daje više 3-(4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata (izomer 1) u formi bele kristalne čvrste materije (635 mg, 15.1%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30° C) δ 0.53 (3H, d), 0.95 - 1.07 (1H, m), 1.09 (3H, s), 1.32 (3H, s), 2.16 (1H, dd), 2.66 (1H, d), 2.94 (1H, d), 2.97 (1H, d), 3.80 (3H, s), 4.14 (1H, ddd), 4.31 (1H, ddd), 4.59 (1H, s), 6.42 (1H, d), 7.05 - 7.11 (2H, m), 7.13 (1H, s), 7.17 (1H, dd), 7.35 (2H, d), 7.45 (2H, d), 7.50 (1H, dd), 7.67 (1H, d). m/z: ES+ [M+H]+ 435.
Primer 8: (E)-3-(4-(2-(2-fluoro-2-metilnronil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-piridor3,4-blindol-1-il)fenil)akrilna kiselina (izomer 1)*
[0379]
[0380] 2 M rastvor natrijum hidroksida (0.782 ml, 1.56 mmol) je dodan u rastvor (E)-metil 3-(4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata (izomer 1) (68 mg, 0.16 mmol) u metanolu (5 ml), THF (5.00 ml) i vodi (5.00 ml), a smeša je mešana tokom 40 h na 22° C. Smeša je koncentrovana do tačke kada je sav
1
organski rastvarač odstranjen pa je zakiseljena do pH = 6 uz pomoć 2 M HCl. Dodan je koncentrovani vodeni amonijak (2 kapi), a nakon toga i metanol (∼2 ml) koje daje bledo-žuti rastvor. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć preparativne HPLC (kolona: Waters XBridge Prep C18 OBD, silika: 5 µ, dijametar: 50 mm, dužina: 100 mm) uz korišćenje opadajućepolarnih smeša vode (koje sadrže 1% NH3) i MeCN koji su poslužili kao eluenti. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje jedinjenje iz naslova (izomer 1) (50.0 mg, 76%) u formi žute čvrste materije.<1>H NMR (500 MHz, DMSO, 30° C) δ 0.93 (3H, s), 1.19 (3H, d), 1.23 (3H, s), 1.51 (3H, d), 2.56 - 2.64 (2H, m), 2.75 (1H, d), 3.04 (1H, dd), 5.06 (1H, s), 6.40 (1H, d), 7.03 (1H, ddd), 7.09 - 7.15 (2H, m), 7.35 (1H, dd), 7.44 - 7.51 (5H, m), 10.87 (1H, s), CO2H nije primećen. m/z: ES+ [M+H]+ 421.
* Zaključeno je da je stereohemija nedefinisanog centra (R) analogijom sa drugim primerima. (E)-metil 3-(4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (izomer 1), korišćen kao početni materijal, je pripremljen kako sledi:
Priprema (E)-metil 3-(4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata (izomer 1)
[0381]
[0382] 2-fluoro-2-metilpropil trifluorometansulfonat (dobiven kao šta je opisano u Primeru 1, priprema početnih materijala) (389 mg, 1.73 mmol) je dodan u rastvor (E)-metil 3-(4-(3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata (racemat) (dobiven kao šta je opisano u Primeru 7, priprema početnih materijala) (250 mg, 0.69 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0.453 ml, 2.60 mmol) u 1,4-dioksanu (1.25 ml). Smeša je mešana na 95° C tokom 64 h, a tada je podeljen između DCM (30 ml) i vode (30 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (20 ml), a ekstrakti su spojeni sa organskim slojem. Spojeni ekstrakti su odstranjeni filtriranjem kroz hartiju za razdvajanje faza pa su ispareni. Talog je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gela u rastvaraču za eluciju, 15% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (E)-metil 3-(4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-
1
2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (racemat) (178 mg, 59.1%) u formi bež čvrste materije. Racemski produkt je prečišćen uz pomoć preparativne HPLC (kolona: Chiralpak AD, silika: 20 µm, dijametar: 50 mm, dužina: 250 mm), Heptan:Etanol, 80:20. Frakcije koje sadrže željena jedinjenja su isparena do suvoće koje daje (E)-metil 3-(4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (izomer 1, prvo-eluiran, 70 mg) i (E)-metil 3-(4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (izomer 2, drugo-eluiran, 66 mg).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30° C) δ 1.00 (3H, s), 1.13 (3H, d), 1.20 (3H, s), 1.44 (3H, d), 2.57 -2.78 (3H, m), 2.93 (1H, dd), 3.80 (3H, s), 5.05 (1H, s), 6.41 (1H, d), 7.13 (1H, ddd), 7.18 (1H, ddd), 7.32 (1H, d), 7.43 (2H, d), 7.51 (2H, d), 7.54 (1H, d), 7.64 (1H, s), 7.67 (1H, d).m/z: ES+ [M+H]+ 435.
Primer 9: (E)-3-(3-fluoro-4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina (izomer 1)*
[0383]
[0384] 2 M natrijum hidroksid (3.31 ml, 6.63 mmol) je dodan u rastvor (E)-metil 3-(3-fluoro-4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata (600 mg, 1.33 mmol) (smeša diastereoizomera) u metanolu (5 ml), i THF (20 ml), a smeša je mešana na ambijentalnoj temperaturi tokom 4 h. Smeša je koncentrovana tako da je sav organski rastvarač odstranjen, razređena sa vodom (50 ml), zakiseljena sa razblaženom HCl do pH 6 pa je ekstrahovana sa etil acetatom (2 x 50 ml). Ekstrakti su spojeni i ispareni pod smanjenim pritiskom. Talog je prečišćen uz pomoć preparativne HPLC (kolona: Chiralpak IA, silika: 20 µm, dijametar: 20 mm, dužina: 250 mm), Heptan:IPA, 90:10, 0.2% sirćetna kiselina kod 80 ml/min. Frakcije koje sadrže željena jedinjenja su spojena i analizirana pri čemu se dobiju (E)-3-(3-fluoro-4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina (izomer 1, prvo-eluiran, 130 mg,
1
22.36%) i (E)-3-(3-fluoro-4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina (izomer 2, drugo-eluiran, 30.0 mg, 5.16%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO, 30° C) δ 0.49 (3H, d), 1.03 (3H, s), 1.14 - 1.21 (1H, m), 1.28 (3H, s), 2.17 (1H, dd), 2.59 - 2.71 (1H, m), 2.8 - 2.99 (2H, m), 4.09 - 4.34 (2H, m), 4.99 (1H, s), 6.59 (1H, d), 6.86 - 7.07 (2H, m), 7.1 - 7.19 (1H, m), 7.18 - 7.29 (1H, m), 7.36 - 7.49 (2H, m), 7.49 - 7.66 (2H, m), 10.31 (1H, s), CO2H nije primećen. m/z: ES+ [M+H]+ 439.
* Zaključeno je da je stereohemija na nedefinisanom centru (R) analogno drugim primerima. (E)-metil 3-(3-fluoro-4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (smeša of diastereomera), koji je korišćen kao početni materijal, je pripremljen kao šta sledi:
Priprema (E)-metil 3-(3-fluoro-4-formilfenil)akrilata
[0385]
[0386] 4-bromo-2-fluorobenzaldehid (20.88 g, 102.87 mmol) i metil akrilat (13.98 ml, 154.30 mmol) su rastvoreni u detaljno degaziranoj DMA (150 ml) pa su dodani tri-o-tolilfosfin (3.13 g, 10.29 mmol), paladijum(II) acetat (1.155 g, 5.14 mmol) i trietilamin (28.7 ml, 205.74 mmol). Reakciona smeša je mešana i grejana do 100° C tokom 16 h. Dodano je još tri-o-tolilfosfina (3.13 g, 10.29 mmol) i paladijum(II) acetata (1.155 g, 5.14 mmol), a reakciona smeša je grejana do 110° C tokom dodatna 2 h. Dodana je voda (1 L), a reakciona smeša je ekstrahovana sa DCM (2 x 500 ml). Spojene organske materije su osušene (MgSO4), filtrirane i isparene koje daje smeđu čvrstu materiju. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silikagelu u gradijentu elucije od 0 do 25% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (E)-metil 3-(3-fluoro-4-formilfenil)akrilat (15.20 g, 71.0%) u formi žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30° C) δ 3.83 (3H, s), 6.53 (1H, d), 7.31 (1H, dd), 7.41 (1H, d), 7.65 (1H, d), 7.79 - 8 (1H, m), 10.25 - 10.41 (1H, m). Maseni jon nije primećen u LCMS.
Priprema (E)-metil 3-(4-(3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)-3-fluorofenil)akrilata (racemat)
1
[0388] 1-(1H-indol-3-il)-2-metilpropan-2-amin (1 g, 5.31 mmol) i (E)-metil 3-(3-fluoro-4-formilfenil)akrilat (1.106 g, 5.31 mmol) u sirćetnoj kiselini (15 ml) su mešani na 80° C tokom 2 h pod azotom. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć hromatografije jonske izmene na koloni SCX-2. Željeni produkt je eluiran iz kolone uz korišćenje smeše 7 M NH3/metanol, a čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (E)-metil 3-(4-(3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)-3-fluorofenil)akrilat (racemat) (2.000 g, 99%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30° C) δ 1.14 (3H, s), 1.27 (3H, s), 2.52 - 2.74 (2H, m), 3.74 (3H, s), 5.12 (1H, s), 6.69 (1H, d), 6.86 - 7.05 (2H, m), 7.20 (1H, d), 7.25 - 7.33 (2H, m), 7.39 (1H, d), 7.73 (1H, d), 7.85 (1H, t), 10.29 (1H, s), NH nije primećen. m/z: ES+ [M+H]+ 379.
Priprema (E)-metil 3-(3-fluoro-4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata (smeša diastereomera)
[0389]
[0390] (S)-3-fluoro-2-metilpropil trifluorometansulfonat (dobiven kao šta je opisano u Primeru 3, priprema početnih materijala) (1.259 g, 5.62 mmol) je dodan u rastvor (E)-metil 3-(4-(3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)-3-fluorofenil)akrilata (racemat) (850 mg, 2.25 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (1.467 ml, 8.42 mmol) u 1,4-dioksanu (5 ml). Smeša je grejana na 60° C tokom 4 h, a tada je mešana na ambijentalnoj temperaturi tokom 12 h. Smeša je podeljena između etil acetata (25 ml) i vode (25 ml). Vodeni
11
sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (2 x 25 ml), a ekstrakti su spojeni sa organskim slojem. Spojeni ekstrakti su ispareni u vakuumu. Talog je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u rastvaraču za eluciju, 10% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (E)-metil 3-(3-fluoro-4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (smeša diastereoizomera) (600 mg, 59.0%). m/z: ES+ [M+H]+ 453.
Primer 10: (E)-3-[4-[(1R,3R)-1-deuterio-2-(2-fluoro-2-metil-propil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-1-il]-3,5-difluoro-fenil]prop-2-enoična kiselina
[0391]
[0392] Metil (E)-3-[4-[(1R,3R)-1-deuterio-2-(2-fluoro-2-metil-propil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-1-il]-3,5-difluoro-fenil]prop-2-enoat (4.70 g, 10.27 mmol) je rastvoren u iPrOH (42.8 ml) pa je dodan 5 M rastvor natrijum hidroksida (6.16 ml, 30.82 mmol) u jednoj porciji, a reakciona smeša je tada mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Dodana je voda (100 ml), a pH je doveden do ∼5 uz pomoć dodavanja 2 N HCl. Rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (x2), a spojene organske materije su osušene (MgSO4) i koncentrovane in vacuo. Talog je propušten kroz pločicu od silike uz eluiranje najpre sa DCM, a tada sa 5% MeOH u DCM. Frakcije koje sadrže produkt su isparene koje daje žutu čvrstu materiju (∼4.2 g). Talog (4.2 g) je rastvoren u EtOH (20 ml) pa je ugrejan do 35° C. Dodana je voda (30 ml), polako tokom ∼40 min. Smeša je tada mešana tokom 30 min, pa je polako ohlađena do sobne temperature. Dodano je još vode (30 ml), a reakciona smeša je tada ohlađena do 0° C. Smeša je filtrirana, a čvrste materije su isprane sa vodom pre no su osušene u vakuumu na 35° C preko noći koje daje (E)-3-[4-[(1R,3R)-1-deuterio-2-(2-fluoro-2-metil-propil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-1-il]-3,5-difluoro-fenil]prop-2-enoičnu kiselinu (3.34 g, 73.3%) u formi bledo-žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30° C) 1.12 (3H, d), 1.19 (3H, d), 1.26 (3H, d), 2.43 (1H, dd), 2.63 (1H, dd), 2.87 (1H, dd), 3.07 (1H, dd), 3.65 (1H, q), 6.41 (1H, d), 7.02 (2H, d), 7.06 - 7.16 (2H, m), 7.19 - 7.25 (1H, m), 7.41 (1H, s), 7.48 - 7.57 (1H, m), 7.63 (1H, d), CO2H nije primećen. m/z: ES+ [M+H]+ 444.
[0393] Ovo jedinjenje alternativno može da se označi kao (E)-3-[4-[(1R,3R)-1-deuterio-2-(2-fluoro-2-metil-propil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-1-il]-3,5-difluorofenil]akrilna kiselina.
Priprema (4-bromo-2,6-difluoro-fenil)-dideuterio-metanola
[0394]
[0395] Litijum borodeuterid (0.497 g, 17.25 mmol) je dodan deo po deo u rastvor metil 4-bromo-2,6-difluorobenzoata (2.89 g, 11.5 mmol) u THF (46.0 ml). Reakciona smeša je grejana do 50° C tokom 2 h. Nakon hlađenja pažljivo je dodana 2 N HCl (30ml). Slojevi su razdvojeni, a tečnost je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 50 ml). Spojene organske materije su isprane sa slanicom, osušene (MgSO4) i koncentrovane koje daje (4-bromo-2,6-difluoro-fenil)-dideuterio-metanol (2.250 g, 87%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30° C) 1.96 (1H, s), 7.07 - 7.13 (2H, m).
Priprema 4-bromo-2,6-difluoro-1-deuterobenzaldehida
[0396]
[0397] Dess-Martin-ov reagens (4.98 g, 11.73 mmol) je dodan u (4-bromo-2,6-difluoro-fenil)-dideuterio-metanol (2.20 g, 9.78 mmol) u DCM (39.1 ml) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana tokom 1 h, a tada je ugašena uz pomoć dodavanja (50ml) zas. NaHCO3koji sadrži 10% natrijum tiosulfat. Slojevi su razdvojeni, a vodena faza je ekstrahovana sa DCM (2 x 50 ml). Organske materije su osušene (MgSO4) i koncentrovane, sirovi produkt je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u gradijentu elucije od 0 do 25% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje 4-bromo-2,6-difluoro-1-deuterobenzaldehid (2.040 g, 94%) u formi bele čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30° C) 7.18 - 7.25 (2H, m). Maseni jon nije primećen.
Priprema metil (E)-3-(4-deuteriokarbonil-3,5-difluoro-fenil)prop-2-enoata
[0398]
[0399] 4-bromo-2,6-difluoro-1-deuterobenzaldehid (3.33 g, 15.0 mmol), trietilamin (4.18 ml, 30.00 mmol), paladijum (II) acetat (0.168 g, 0.75 mmol) i tritolilfosfin (0.457 g, 1.50 mmol) su rastvoreni u DMF (36.6 ml), koji je degaziran. Dodan je metil akrilat (2.026 ml, 22.50 mmol), a reakciona smeša je grejana do 80° C tokom 4 h. Nakon hlađenja, smeša je dodana u vodu (150 ml) pa je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 150 ml). Spojene organske materije su isprane sa 2 N HCl (100 ml), slanicom (100 ml) pa su osušene (MgSO4) i koncentrovane. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u gradijentu elucije od 0 do 40% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje metil (E)-3-(4-deuteriokarbonil-3,5-difluorofenil)prop-2-enoat (2.93 g, 86%) u formi žute čvrste materije.1H NMR (400 MHz, CDC13, 30° C) 3.83 (3H, d), 6.51 (1H, d), 7.12 (2H, m), 7.57 (1H, d). m/z (ES+), [M+H]+ = 228.
11
(R)-N-(1-(1H-indol-3-il)propan-2-il)-2-fluoro-2-metilpropan-1-amin
[0400]
[0401] (2R)-1-(1H-indol-3-il)propan-2-amin (3.81 kg, 21.21 mol) je dodan u staklom obloženu posudu od 100 L u atmosferi azota. Dodan je 1,4-dioksan (23 L), a mešalica je uključena. U mešanu suspenziju je dodan diizopropiletilamin (5.55 L; 31.82 mol), a nakon toga i (2-fluoro-2-metil-propil)trifluorometansulfonat (5.55 kg, 23.77 mol). U posudu je dodan 1,4-dioksan (4 L), a smeša je grejana do 75° C. Grejanje je nastavljeno tokom 24 h pre hlađenja smeše do 25° C. U posudu je dodana voda (30.5 L), a nakon toga i toluen (30.5 L). Nakon 40 min, mešalica je isključena, a slojevi su ostavljeni da se razdvoje. Vodeni sloj je odstranjen, a u organski rastvor je dodana voda (30.5 L). Smeša je mešana tokom 15 min pre no je dozvoljeno slojevima da se razdvoje. Vodeni sloj je odstranjen iz posude. Organski rastvor je koncentrovan uz pomoć vakuum-destilacije (temperatura plašta: 65° C, pritisak: 110 mbar) do tačke kada je približno 27 L destilata odstranjeno. Preostao rastvor u posudi je ohlađen koje daje (R)-N-(1-(1H-indol-3-il)propan-2-il)-2-fluoro-2-metilpropan-1-amin u formi rastvora u toluenu (33% w/w) (15.4 kg, 97%). 1H NMR (500 MHz, DMSO, 27° C) 0.98 (3H, d), 1.26 (3H, d), 1.30 (3H, d), 2.57 - 2.75 (3H, m), 2.81 (1H, dd), 2.84 - 2.92 (1H, m), 6.97 (1H, t), 7.06 (1H, t), 7.11 - 7.22 (1H, multiplet je prikriven sa signalima od toluena), 7.34 (1H, d), 7.52 (1H, d), 10.80 (1H, s).
Priprema metil (E)-3-[4-[(1R,3R)-1-deuterio-2-(2-fluoro-2-metil-propil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-1-il]-3,5-difluoro-fenil]prop-2-enoata
[0402]
[0403] (R)-N-(1-(1H-indol-3-il)propan-2-il)-2-fluoro-2-metilpropan-1-amin [33% w/w u toluenu] (11.26 g, 14.97 mmol) i (E)-3-(4-deuteriokarbonil-3,5-difluoro-fenil)prop-2-enoat (3.40 g, 14.97 mmol) su grejani u smeši toluen (55.6 ml)/sirćetna kiselina (4.28 ml, 74.83 mmol) na 80° C tokom 5 h. Nakon hlađenja, isparljivi delovi su odstranjeni u vakuumu. Talog je rastvoren u DCM (200 ml) pa je ispran sa zas. rastvorom NaHCO3(200 ml). Vodena faza je ekstrahovana sa DCM (100 ml), spojene organske materije su isprane sa slanicom, osušene i koncentrovane in vacuo. Sirovi materijal je nabijen u kolonu SCX-2 uz eluciju sa metanolom kako bi se odstranio ne-reagovani aldehid. Kolona je tada eluirana sa smešom 7 M NH3-MeOH kako bi se oslobodio produkt. Bazni filtrat je isparen, a sirovi produkt je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u gradijentu elucije od 0 do 40% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje metil (E)-3-[4-[(1R,3R)-1-deuterio-2-(2-fluoro-2-metil-propil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-1-il]-3,5-difluoro-fenil]prop-2-enoat (4.70 g, 68.6%) u formi bledo-žute čvrste materije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30° C) 1.11 (3H, d), 1.19 (3H, d), 1.25 (3H, d), 2.42 (1H, dd), 2.62 (1H, dd), 2.87 (1H, dd), 3.07 (1H, dd), 3.65 (1H, q), 3.81 (3H, s), 6.39 (1H, d), 6.99 (2H, d), 7.06 - 7.17 (2H, m), 7.23 (1H, dd), 7.45 (1H, s), 7.49 - 7.6 (2H, m). m/z: ES+ [M+H]+ 458.
Primer 11: Priprema (1R,3R)-1-{4-[(E)-2-karboksiethenil]-2,6-difluorofenil}-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-beta-karbolin-2-ium maleata [0404]
[0405] Rastvor maleinske kiseline (1.31 g, 11.29 mmol) u acetonu (15 ml) je mešan pod azotom. U rastvor maleinske kiseline je dodan rastvor (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline (Primer 1) (5.00 g, 11.3 mmol) u acetonu (25 ml) koje daje žuti rastvor. Reakciona posuda je pokrivena sa folijom radi zaštite od svetla pa je prečišćena sa mlazom gasovitog azota preko noći sve do isparavanja rastvarača. Dobivena je čvrsta materija koja je osušena in vacuo tokom 2 h koje daje jedinjenje iz naslova u formi krem čvrste materije (6.23 g, 98%).<1>H
11
NMR (500 MHz, DMSO, 27° C) 0.95 - 1.34 (9H, m), 2.24 - 2.45 (1H, m), 2.54 - 2.66 (1H, m), 2.8 - 2.99 (2H, m), 3.52 (1H, s), 5.22 (1H, s), 6.26 (2H, s), 6.67 (1H, d), 6.89 - 7.07 (2H, m), 7.19 (1H, d), 7.39 - 7.51 (3H, m), 7.55 (1H, d), 10.59 (1H, s). XRPD-trag ove maleatne soli je prikazan na Slici 8, a DSC-trag je prikazan na Slici 9.
Primer 12
[0406] Kompozicije iz Primera 1 su proizvedene na skali od 75 g primenom procesa vlažne granulacije. Aktivni sastojak, manitol, mikrokristalna celuloza i natrijum skrob glikolat su izvagani u kvantitetima koji su navedeni ispod u tabeli pa su prebačeni u mikser-granulator Diosna P1-6 pa su izmešani (uz seckanje) na 600 rpm tokom 6 min. Kod Kompozicije A, mešanje je nastavljeno uz dodavanje 30 mL vode u dva alikvota kod stope od približno 1 mL po sekundi, uz pauziranje mešanja između alikvota, dok je kod Kompozicije B dodan rastvor pripremljen uz mešanje potrebnih količina EDTA i askorbinske kiseline sa 20 mL vode na 50° C tokom 20 min (zaštićeno od svetla) primenom analognog procesa, pri čemu je drugi alikvot u ovom slučaju sadržavao približno 10 mL likvora za ispiranje. Vlažno mešanje je nastavljeno ukupno 1.5 min. Vlažne granule su propuštene kroz sito od 1.5 mm, a tada su osušene u vakuumu na 50-60° C do sadržaja vlage od <2%w/w. Nastale granule su samlevene uz pomoć zaslona od 1 mm pa su pomešane sa lubrikantom tokom 5 min na 32 rpm uz korišćenje blendera Turbula. Tablete koje sadrže 10 mg aktivnog sastojka se formiraju uz pomoć kompresovanja pomenutih granula do nominalne kompresovane težine od 100 mg uz pomoć prese Riva Mini koja je bila opremljena sa normalnom konkavnim alatom od 6 mm.
11
[0407] Stabilnost Kompozicija A i B u odnosu na formiranje degradanta (pri čemu "degradant" je (R,E)-3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-2-ium-1-il)fenil)akrilat) je evaluirana na tabletama koje su pakovane u indukcijskim začepljenim bocama HDPE od 75cc ili su izložene atmosferi u petri-evim pločama, spremljene u tamu, u uslovima kontrolisane temperature i vlage kao šta je navedeno ispod. Vidljivo je da je Kompozicija B, koja sadrži agens ua heliranje i anti-oksidans, otpornija na hemijsku degradaciju od Kompozicije A koja je standardna tabletarna formulacija.
Stabilnost izabranih kompozicija uzimajući u obzir formiranje degradanta (%)
Primer 13: (E)-3-[3,5-difluoro-4-[(3R)-2-(2-fluoro-2-metil-propil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-2-ium-1-il]fenil]prop-2-enoat
[0408]
[0409] (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina (200 mg, 0.45 mmol) je dodana u rastvor cerijum amonijum nitrata (248 mg, 0.45 mmol) u smeši acetonitril (6 ml)/voda (1.500 ml) na
11
sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana tokom 2 h, pa je dodano još cerijum amonijum nitrata (248 mg, 0.45 mmol). Rastvor je mešan na 25° C tokom 15 min. Reakciona smeša je zakiseljena sa 2 M HCl (3 ml) pa je ekstrahovana sa DCM (2 x 10 ml). Organske materije su tada koncentrovane in vacuo, a sirovi produkt je prečišćen uz pomoć preparativne HPLC (kolona: Waters SunFire, silika: 5 µ, dijametar: 50 mm, dužina: 100 mm) uz pomoć opadajućepolarnih smeša vode (koje sadrže 0.1% mravlju kiselinu) i MeCN koji su poslužili kao eluenti. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (R,E)-3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-2-ium-1-il)fenil)akrilat (35.0 mg, 17.58%) u formi narandžastog stakla. 1H NMR (500 MHz, DMSO, 30° C) 1.27 (3H, d), 1.43 - 1.55 (6H, m), 3.51 (1H, d), 3.72 (1H, dd), 3.96 (1H, dd), 4.18 - 4.32 (1H, m), 4.67 (1H, s), 6.59 (1H, s), 7.09 - 7.3 (2H, m), 7.42 (1H, t), 7.52 - 7.73 (3H, m), 7.78 (1H, d), NH nije primećen. HRMS (ESI): [M+H]<+>, pronađeno: 441.17831, C23H24F2N2O2, očekivano: 441.17844.
Priprema (E)-3-[3,5-difluoro-4-[2-(2-fluoro-2-metil-propil)-3-metil-9H-pirido[3,4-b]indol-2-ium-1-il]fenil]prop-2-enoata
[0410]
[0411] (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina (0.500 g, 1.13 mmol) je rastvorena u DMSO (10 mL) pa je grejana do 120° C na vazduhu i na svetlu tokom 16 h. Reakciona smeša je tada grejana do 180° C tokom 2.5 h. Reakciona smeša je ohlađena i prečišćena uz pomoć preparativne HPLC (kolona: Waters XBridge Prep C18 OBD, silika: 5 µ, dijametar: 50 mm, dužina: 100 mm) uz primenu opadajuće-polarnih smeša vode (koje sadrže 1% NH3) i MeCN koji su poslužili kao eluenti. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće koje daje (E)-3-[3,5-difluoro-4-[2-(2-fluoro-2-metil-propil)-3-metil-9H-pirido[3,4-b]indol-2-ium-1-il]fenil]prop-2-enoat (0.047 g, 9.40%) u formi narandžaste čvrste materije. 1H NMR (400 MHz, DMSO, 27° C) 1.27 (3H, s), 1.33 (3H, d), 3.09 (3H, s), 4.59 - 4.8 (1H, m), 5.14 - 5.37
11
(1H, m), 6.54 (1H, d), 7.19 (1H, d), 7.39 (1H, t), 7.63 (2H, d), 7.74 (1H, t), 7.91 (1H, d), 8.45 (1H, d), 8.88 (1H, s), 10.79 (1H, s). m/z: ES+ [M+H]+ 439.
Primer 14A: Priprema (E)-3-[3,5-difluoro-4-[(1R,3R)-2-(2-fluoro-3-hidroksi-2-metilpropil)-3-metil-1,3,4,9-tetrahikapirido[3,4-b]indol-1-il]fenil]prop-2-enoične kiseline (Izomer 1)
[0412]
[0413] 2 M natrijum hidroksid (1.27 mL, 2.54 mmol) je dodan u rastvor (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-3-hidroksi-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata – Izomer 1 (120 mg, 0.25 mmol) u smeši THF (0.635 mL)/metanol (0.635 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, a tada je razređena sa EtOAc i vodom. Tečnosti je podešen pH do vrernosti 6 uz dodavanje 2 M HCl, a slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc, a spojene organske materije su osušene (MgSO4) i koncentrovane in vacuo. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć flešhromatografije na silika-gelu u gradijentu elucije od 0 do 10% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-3-hidroksi-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilnu kiselinu – Izomer 1 (85 mg, 72.9%) u formi bež čvrste materije. 1H NMR (400 MHz, DMSO, 27° C) 0.97 (3H, d), 1.05 (3H, d), 2.32 - 2.4 (1H, m), 2.44 - 2.54 (1H, m), 2.73 - 2.93 (3H, m), 3 - 3.14 (2H, m), 3.32 - 3.49 (2H, m), 4.73 (1H, s), 5.14 (1H, s), 6.58 (1H, d), 6.82 - 6.96 (2H, m), 7.10 (1H, d), 7.33 (1H, d), 7.36 (1H, d), 7.45 (1H, d), 10.49 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 459.
11
Primer 14B: Priprema (E)-3-[3,5-difluoro-4-[(1R,3R)-2-(2-fluoro-3-hidroksi-2-metilpropil)-3-metil-1,3,4,9-tetrahikapirido[3,4-b]indol-1-il]fenil]prop-2-enoične kiseline (Izomer 2)
[0414]
[0415] 2 M natrijum hidroksid (1.27 mL, 2.54 mmol) je dodan u rastvor (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-3-hidroksi-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilata – Izomer 2 (110 mg, 0.23 mmol) u smeši THF (0.529 mL)/metanol (0.529 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, a tada je razređena sa EtOAc i vodom. Tečnosti je podešen pH do vrednosti 6 uz pomoć dodavanja 2 M HCl, a slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc, a spojene organske materije su osušene (MgSO4) i koncentrovane in vacuo. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u gradijent elucije od 0 do 10% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-3-hidroksi-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilnu kiselinu – Izomer 2 (81 mg, 76%) u formi bež čvrste materije. 1H NMR (400 MHz, DMSO, 27° C) 1.02 (2H, s), 1.05 (3H, d), 1.23 (1H, s), 1.90 (3H, s), 2.28 - 2.46 (1H, m), 2.53 - 2.7 (1H, m), 2.86 -3.03 (2H, m), 3.56 (1H, d), 4.83 (1H, s), 5.17 (1H, s), 6.66 (1H, d), 6.86 - 7.08 (2H, m), 7.17 (1H, d), 7.40 (1H, d), 7.44 (2H, d), 7.53 (1H, d), 10.54 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 459.
[0416] (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-3-hidroksi-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (Izomeri 1 i 2), korišćeni kao početni materijali, si pripremljeni kako sledi:
2-fluoro-2-metilpropan-1,3-diol
12
[0418] LiAlH4(0.741 g, 19.25 mmol) je dodan deo po deo u ohlađeni rastvor dietil 2-fluoro-2-metilmalonata (1.345 g, 7.00 mmol) u THF (35.0 ml). Reakciona smeša je ostavljena da se ugreje do sobne temperature tokom 1 h. Nakon hlađenja do 0° C, reakciona smeša je ugašena uz pomoć dodavanja vode (0.75 mL), 15% NaOH (0.75 mL), pa opet vode (1.5 mL). Suspenzija je mešana tokom 30 min, filtrirana, a čvrste materije su isprane sa THF. Filtrat je isparen koje daje 2-fluoro-2-metilpropan-1,3-diol (0.745 g, 98%) u formi bezbojnog ulja. 1H NMR (400 MHz, CDCl3, 27° C) 1.34 (3H, d), 2.12 - 2.27 (2H, m), 3.75 (4H, d).
3-(((R)-1-(1H-indol-3-il)propan-2-il)amino)-2-fluoro-2-metilpropan-1-ol
[0419]
[0420] Trifluorometansulfonski anhidrid (1.151 ml, 6.80 mmol) je dodan u rastvor 2-fluoro-2-metilpropan-1,3-diola (0.70 g, 6.47 mmol) u DCM (17.85 ml) na 0° C, a tada je dodan i 2,6-lutidin (0.908 ml, 7.77 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se ugreje do sobne temperature tokom 30 min pa je isprana sa 2 M HCl. Organska faza je propuštena kroz punjenje za razdvajanje faza pa je koncentrovana in vacuo. Talog je rastvoren u dioksanu (12 mL), dodani su (R)-1-(1H-indol-3-il)propan-2-amin (1.128 g, 6.47 mmol) i DIPEA (1.678 ml, 9.71 mmol), a reakciona smeša je grejana do 90° C tokom 2 h. Nakon hlađenja, reakciona smeša je razređena sa DCM pa je isprana sa vodom. Tečnost je ekstrahovana sa DCM, a organske materije su koncentrovane in vacuo. Sirovi produkt je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u gradijentu elucije od 0 do 10% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje 3-(((R)-1-(1H-indol-3-il)propan-2-il)amino)-2-fluoro-2-metilpropan-1-ol (0.815 g, 47.6%) u formi smeđe gume. m/z (ES+), [M+H]+ = 265.
(E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-3-hidroksi-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (Izomeri 1 i 2)
[0422] (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-formilfenil)akrilat (565 mg, 2.50 mmol) je dodan u suspenziju 3-(((R)-1-(1H-indol-3-il)propan-2-il)amino)-2-fluoro-2-metilpropan-1-ol (661 mg, 2.50 mmol) u smeši toluen (11.3 ml)/sirćetna kiselina (1.25 ml). Reakciona smeša je grejana do 90° C tokom 5 h. Nakon hlađenja, isparljivi delovi su odstranjeni u vakuumu, talog je propušten kroz kolonu SCX-2 uz eluciju sa metanolom kako bi se odstranio aldehid koji nije reagovao. Kolona je tada eluirana sa smešom NH3/MeOH koje oslobađa produkte. Bazni filtrat je isparen, sirovi produkt je prečišćeno uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u gradijentu elucije od 0 do 50% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-3-hidroksi-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (Izomer 1 – 122 mg, 10.3%) u formi žute čvrste materije i (E)-metil 3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-3-hidroksi-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilat (Izomer 2 – 129 mg, 11% u formi žuto-narandžaste čvrste materije. Izomer 1 – 1H NMR (400 MHz, CDCl3, 27° C) 1.10 (3H, d), 1.14 (3H, d), 2.54 (1H, dd), 2.62 - 2.73 (1H, m), 3.06 - 3.3 (2H, m), 3.40 (1H, dd), 3.56 (1H, t), 3.80 (3H, s), 3.87 - 4.08 (1H, m), 4.27 (1H, s), 5.16 (1H, s), 6.37 (1H, d), 7.01 (2H, d), 7.07 - 7.15 (2H, m), 7.14 - 7.24 (1H, m), 7.42 - 7.56 (2H, m), 7.71 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 473. Izomer 2 – 1H NMR (400 MHz, CDCl3, 27°C) 1.15 (3H, d), 1.20 (3H, d), 2.65 (1H, dd), 2.79 (1H, t), 2.93 - 3.09 (2H, m), 3.57 (1H, dt), 3.70 (1H, dd), 3.78 (3H, s), 4.2 - 4.67 (1H, m), 5.42 (1H, s), 6.32 (1H, d), 6.94 (2H, d), 7.06 - 7.15 (2H, m), 7.19 - 7.27 (2H, m), 7.42 (1H, s), 7.51 (1H, dd), 8.02 (1H, s). m/z (ES+), [M+H]+ = 473.
Referentni Primer 1: 1-(4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-il)-3-hidroksipropan-1-on
[0423]
[0424] Piridin 4-metilbenzensulfonat (11.62 g, 46.24 mmol) je dodan u suspenziju 1-(4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloksi)propan-1-on (128 g, 231.19 mmol) u metanolu (1 L) pod azotom. Smeša je mešana na 60° C tokom 1.5 h. Smeša je bila rastvorljiva nakon 5 min. Smeša je držana na 50° C preko noći tokom kojeg vremena se formirao precipitat. Čvrsti materijal je izolovan uz pomoć filtracije pa je ispran sa vodom i acetonitrilom. Ovaj materijal je još uvek sadržavao male količine nečistoće iz prethodne faze pa je zahtevao dodatno prečišćavanje. Materijal je rastvoren u dihlorometanu pa je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silikagelu (0% metanol/DCM do 10% metanol/DCM). Željeni produkt, 1-(4-(5-(5-amino-6-(5-tertbutil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-il)-3-hidroksipropan-1-on (Referentni Primer 1) (92 g, 85%), je tako izolovan u formi krem čvrste materije (Forma A):<1>H NMR spektar: (DMSO-d6) 1.4 - 1.51 (12H, m), 1.51 - 1.78 (2H, m), 1.89 - 2.05 (2H, m), 2.72 - 2.86 (1H, m), 2.91- 3.05 (1H, m), 3.12 - 3.24 (1H, m), 3.64 (2H, q), 3.83 - 4.01 (1H, m), 4.29 - 4.41 (1H, m), 4.47 (1H, t), 4.58 (2H, q), 8.26 (2H, s), 8.85 (1H, s); Maseni spektar [M+H]<+>= 470.
[0425] 1-(4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloksi)propan-1-on je pripremljen kako sledi:
1,8-diazabiciklo[5.4.0]undek-7-en (76 mL, 511.14 mmol) je dodan u suspenziju tertbutil 4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-karboksilata (150 g, 319.46 mmol) u smeši 2-metil/THF (1.2 L). Dodan je jodoetan (46 mL, 575.03 mmol), a smeša je mešana tokom 16 h na 35° C. Dodano je još jodoetana (46 mL, 575.03 mmol) i 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undek-7-en (76 mL, 511.14 mmol), a mešanje je nastavljeno tokom 24 h na 35° C. Smeša je izlivena u vodu, a nerastvorljivi materijal je izolovan uz pomoć filtracije, ispran sa vodom i MTBE pa
12
je osušen in vacuo koje daje tert-butil 4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-karboksilat (116 g, 73.0%) u formi žute čvrste materije. Filtrat je ekstrahovan sa DCM, organski rastvor je osušen uz pomoć magnezijum sulfata, filtriran, i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Talog je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na koloni od silike u gradijentu elucije (30% MTBE/heptan do 100% MTBE). Druga žetva željenog produkta (12 g, 24.12 mmol, 7.55%) je tako izolovana u formi žute čvrste materije koja je kasnije spojena sa prvom žetvom:<1>H NMR spektar: (DMSO-d6) 1.41 (9H, s), 1.44 (9H, s), 1.48 (3H, t), 1.52 -1.69 (2H, m), 1.87 - 2.04 (2H, m), 2.79 - 3.03 (3H, m), 3.86 - 4.03 (2H, m), 4.59 (2H, q), 7.89 (2H, s), 8.85 (1H, s); Maseni spektar [M+H]<+>= 498.
[0426] Suspenzija tert-butil 4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-karboksilata (3009.5 g, 6.05 mol) u DCM (9 L) je ohlađena do 5-10° C u atmosferi N2. U suspenziju je dodana TFA (9 L), deo po deo, uz održavanje temperature <30° C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Smeša je koncentrovana, nastao talog je rastvoren u vodi (30 L) pa je polako dodan u 35% vodeni rastvor amonijaka (12 L) na 0-5° C. Suspenzija je mešana tokom 30 min, a produkt je odstranjena filtriranjem i ispran sa vodom (2 x 6 L). Produkt je osušen na 50° C in vacuo tokom 2 dana koje daje 3-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)-5-(1-etil-3-(piperidin-4-il)-1H-1,2,4-triazol-5-il)pirazin-2-amin (2496 g):<1>H NMR spektar: (DMSO-d6) 1.4 - 1.52 (12H, m), 1.57 -1.73 (2H, m), 1.83 - 1.93 (2H, m), 2.57 - 2.7 (2H, m), 2.71 - 2.84 (1H, m), 2.96 - 3.09 (2H, m), 4.58 (2H, q), 8.06 (2H, s), 8.84 (1H, s); Maseni spektar [M+H]<+>= 398.
[0427] U rastvor 3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloksi)propionske kiseline (HATU, 48.80 g 0.2774 mol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (86.96 mL, 0.4993 mol) u THF (552 mL) je dodan O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (115.73 g, 0.3051 mol), deo po deo na ST pod azotom. Nastala smeša je mešana tokom 20 min, a tada je dodan 3-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)-5-(1-etil-3-(piperidin-4-il)-1H-1,2,4-triazol-5-il)pirazin-2-amin (122.5 g (110.25 g, aktivno), 0.2774 mol), deo po deo tokom 1 h. Nakon 3.5 h, smeša je koncentrovana, a talog je pretvoren u gustu pastu uz pomoć MeCN (275 mL) tokom 15 min na sobnoj temperaturi. Produkt je odstranjen filtriranjem, ispran sa MeCN (3 x 110 mL) i osušen preko noći na 50° C in vacuo. Ovo daje 1-(4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloksi)propan-1-on (131.9 g, 96%).<1>H NMR spektar: (DMSO-d6) 1.29 - 1.48 (16H, m), 1.48 - 1.75 (4H, m), 1.83 - 1.99 (2H, m), 2.48 - 2.68 (2H, m), 2.68 - 2.79 (1H, m), 2.87 -2.99 (1H, m), 3.07 - 3.19 (1H, m), 3.32 - 3.42 (1H, m), 3.47 - 3.6 (1H, m), 3.64 - 3.75 (1H, m), 3.75 - 3.84 (1H, m), 3.84 - 3.95 (1H, m), 4.24 - 4.39 (1H, m), 4.47 - 4.6 (3H, m), 7.84 (2H, s), 8.79 (1H, s): Maseni spektar [M+Na]<+>= 577.
Alternativa priprema Referentnog Primera 1
[0428] U suspenziju 1-(4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-il)-3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloksi)propan-1-on (131.9 g, 0.2382 mol) u metanolu (1045 mL) je dodan piridinijum p-toluensulfonat (11.97 g, 47.7 mmol) u atmosferi N2. Reakciona smeša je mešana na 60° C tokom 5.5 h, a tada na 50° C preko noći. Reakciona smeša je ohlađena do 0° C, a čvrsta materija je odstranjena filtriranjem. Produkt je pretvoren u gustu pastu uz pomoć vode (250 mL) tokom 20 min na sobnoj temperaturi, odstranjen filtriranjem, ispran sa vodom (3 x 40 mL) i osušen na 50° C in vacuo. Ovo daje 1-(4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-il)-3-hidroksipropan-1-on (21.4 g) u Formi A (vidi ispod).
[0429] Likvori metanola su koncentrovani, a nastala čvrsta materija je pretvorena u gustu pastu uz pomoć vode (0.6 L) tokom 20 min na sobnoj temperaturi. Čvrsta materija je izolovana uz pomoć filtracije pa je isprana sa vodom (3 x 100 mL). Filter-kolač je pretvoren u gustu pastu po drugi puta uz pomoć vode (0.5 L) tokom dodatnih 20 min. Produkt je izolovan uz pomoć filtracije, ispran sa vodom (100 mL) i osušen na 50° C in vacuo. Ovo daje 81.9 g 1-(4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-il)-3-hidroksipropan-1-on (81.9 g) u Formi A.
[0430] Obe žetve su spojene (103.3 g), posejane sa Formom B (16.68 g) i pretvorene u guste paste uz pomoć MeCN (826 mL) na sobnoj temperaturi preko noći. Ovo daje 117.4 g 1-(4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-il)-3-hidroksipropan-1-on u formi bledo-žute čvrste materije (117.4 g) u Formi B (vidi ispod). Ovaj materijal je dodatno prečišćen uz pomoć pretvaranja u gustu pastu u heptanu (7.5 rel. vol.) tokom 1 h. Smeša je filtrirana, osušena na filteru, pa na 50° C u vakuumpećnici preko noći koje daje 1-(4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-il)-3-hidroksipropan-1-on (102.5 g) kao Forma B.
12
[0431] Forma B takođe može da se pripremi pretvaranjem Forma A u gustu pastu uz pomoć MeCN bez prethodnog sejanja.
[0432] Forme A ili B takođe mogu da se konvertuju u Formu C kako sledi:
Suspenzija 1-(4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-il)-3-hidroksipropan-1-on (na primer, Forma B pripremljena uz pomoć procesa koji je opisan iznad) u IPA (12 vol.) je grejana na temperaturi refluksa do rastvaranja čvrste materije. Rastvor je odstranjen vrućim filtriranjem, a tada je ohlađen do sobne temperature. Ovo daje 1-(4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1-etil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-il)-3-hidroksipropan-1-on u formi bledo-žute čvrste materije (99.3 g, 97%) kao Forma C.
[0433] Forma C takođe može da se konvertuje u Formu B kako sledi:
U boci sa prirubnicom (flanšna boca) od 10 L, Forma C (377.8 ; porcija 1) u MIBK (7900 mL) je grejana do 110-115° C koje daje rastvor. Ovaj rastvor je ostavljen da se ohladi do 97-103° C pa je odmah poliran filtriranjem u posudu od 50 L koja sadrži seme Forme B (0.8 g) u acetonitrilu (8220 mL) uz mešanje na -15° C. Tokom dodavanja, temperatura u posudi od 50 L je održavana između -15-25° C uz pomoć plašta za hlađenje. Dodane su tri dodatne porcije jedinjenja rastvorenog u MIBK primenom sličnog postupka. U nastalu gustu smešu je dodano seme Forme B (0.8 g), a smeša je tada mešana na 10-20° C preko noći. Procesna analiza je potvrdila željenu formu (Forma B) bez vidljive Forme C ili amorfne materije. Smeša je filtrirana i isprana sa acetonitrilom (3340 mL). Čvrsta materija je osušena u pećnici tokom 2 dana (čvrsta materija je razbijena u prah i smešu malih grumena veličine od ∼1 mm do ∼3-4 mm) do konstantne težine. Prinos =1532.8 g (93.5%)
3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloksi)propionska kiselina je pripremljena kako sledi:
[0434] U mešani rastvor metanola (2.4 L) i koncentrovane sumporne kiseline (44.4 mL, 32.61 mmol) na 0° C pod azotom je dodan, kap po kap, beta-propiolakton (175 mL, 2.78 mol). Ovaj rastvor je ostavljen da se meša na sobnoj temperaturi tokom 2 dana. Reakciona smeša je ohlađena do 10° C pre dodavanja, deo po deo, natrijum bikarbonata (145 g, 1.72 mol), nastala suspenzija je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi tokom 75 min. Ovaj rastvor je filtriran, filter-kolač je ispran sa metanolom (800 mL). Filtrat je isparen do ulja koje je ponovo rastvoreno u dihlorometanu (1.2 L) pa je mešano tokom 60 min pre ponovnog filtriranja. Ovaj
12
rastvor je filtriran pre isparavanja koje daje metil 3-hidroksipropanoat (219 g, 76%) u formi ulja.<1>H NMR spektar: (CDCl3) 2.50 (2H, t), 3.63 (3H, s), 3.78 (2H, t).
[0435] Piridinijum p-toluensulfonat (7.65 g, 30.45 mmol) je dodan u bistar rastvor metil 3-hidroksipropanoata (63.4 g, 609.00 mmol) i 3,4-dihidro-2H-pirana (78 mL, 852.60 mmol) u dihlorometanu (650 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom koje daje zamućeni rastvor. Pomenuti je ostavljen da se meša na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je isprana sa vodom (250 mL) i slanicom (250 mL) pre sušenja (MgSO4) i isparavanja do ulja. Ovaj sirovi produkt je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije na silika-gelu u gradijentu elucije od 15 do 30% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće koje daje metil 3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloksi)propanoat (67.7 g, 59.0%) u formi bezbojnog ulja:<1>H NMR spektar: (CDCl3) 1.47 (4H, dddd), 1.55 - 1.84 (2H, m), 2.55 (2H, t), 3.33 - 3.53 (1H, m), 3.53 - 3.7 (4H, m), 3.78 (1H, ddd), 3.93 (1H, dt), 4.42 - 4.72 (1H, m); Maseni spektar [MH]<+>= 189.
Natrijum hidroksid (2M, 349 mL, 697.58 mmol) je dodan u rastvor metil 3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloksi)propanoata (67.68 g, 359.58 mmol) u THF (680 mL) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. THF je odstranjen in vacuo, vodeni sloj je tada ispran sa etil acetatom (260 mL), pre hlađenja do 0° C pa je pažljivo zakiseljen do pH = 5 uz pomoć dodavanja hlorovodonične kiseline (2 M). Produkt je ekstrahovan sa etil acetatom (3 x 250 mL) pre sušenja (MgSO4) i isparavanja koje daje 3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloksi)propionsku kiselinu (57.0 g, 91%) u formi bistrog ulja. Ovaj materijal je rastvoren u etil acetatu (750 mL), a tada je ispran sa vodom (3 x 250 mL) i slanicom (250 mL) sa ciljem da se odstrani preostala sirćetna kiselina. Organski rastvor je osušen (MgSO4) i isparen koje daje 3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloksi)propionsku kiselinu (45.67 g, 72.9%) u formi bezbojnog ulja:<1>H NMR spektar:<1>H NMR (CDCl3) 1.43 - 1.67 (4H, m), 1.65 - 1.95 (2H, m), 2.68 (2H, t), 3.48 - 3.58 (1H, m), 3.73 (1H, dt), 3.88 (1H, ddd), 4.02 (1H, dt), 4.59 - 4.7 (1H, m); Maseni spektar [M-H]<->= 173.
[0436] tert-butil 4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-karboksilat je pripremljen kako sledi:
Hidrazin hidrat (23.59 mL, 480.75 mmol) je dodan, kap po kap, u mešanu smešu metil 3-amino-6-bromopirazin-2-karboksilata (100 g, 418.04 mmol) u EtOH (2 L). Smeša je grejana na 50° C pod azotom. Nastala gusta suspenzija je mešana na 50° C tokom 16 s. Dodano je još hidrazina (2.5 mL), u jednoj porciji, a suspenzija je mešana na 50° C tokom dodatnih 24 h. Etanol (500 mL) je nabijen u gustu reakcionu smešu, a smeša je
12
ostavljena sa se ohladi do sobne temperature. Nastala suspenzija je filtrirana, a čvrsta materija je isprana sa etanolom (1 L) i osušena in vacuo koje daje 3-amino-6-bromopirazin-2-karbohidrazid (98 g; kvantitativno) u formi krem čvrste materije:<1>H NMR spektar; (DMSO-d6) 4.52 (2H, s), 7.59 (2H, s), 8.30 (1H, s), 9.74 (1H, s); Maseni spektar [M+H]<+>= 232.
[0437] Pivalinksi anhidrid (165 mL, 815.38 mmol) je dodan u mešanu smešu 3-amino-6-bromopirazin-2-karbohidrazida (172 g, 741.26 mmol) u acetonitrilu (1.8 L), a smeša je grejana na 80° C tokom 1 h. Reakciona smeša je ostavljena da se meša tokom 16 h. Željena žuta čvrsta materija je izolovana uz pomoć filtracije. Filtrat je podeljen između EtOAc (2 L) i vodenog natrijum bikarbonata (2 L). Organski sloj je ispran sa zasićenom slanicom pa je osušen preko MgSO4. Rastvor je filtriran i koncentrovan koje daje narandžastu lepljivu čvrstu materiju koja je smrvljena sa MTBE (250 mL). Nerastvorljiva žuta čvrsta materija je izolovana uz pomoć filtracije, a ovaj materijal se pokazao identičnim prvoj čvrstoj materiji. Spojene čvrste materije su osušene u vakuum-pećnici na 50° C tokom 3 dana koje daje 3-amino-6-bromo-N'-pivaloilpirazin-2-karbohidrazid (224 g, 96%) u formi žute čvrste materije:<1>H NMR spektar: (DMSO-d6) 1.17 (9H, s), 7.62 (2H, s), 8.37 (1H, s), 9.42 - 9.56 (1H, m), 10.09 - 10.23 (1H, m); Maseni spektar [M+H]<+>= 318.
[0438] U 3-amino-6-bromo-N'-pivaloilpirazin-2-karbohidrazid (2301 g, 7.28 mol) u MeCN (10.8 L) su dodani DIPEA (3.044 L, 17.48 mol) i p- toluensulfonil hlorid (1665 g, 8.73 mol), deo po deo (∼280 g x 6) na 50° C tokom perioda od 30 min. Reakciona temperatura je održavana između 65-70° C uz pomoć kontrolisanja stope dodavanja. Nakon završetka dodavanja, reakciona smeša je mešana na 70° C tokom 1 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature pa je ugašena sa 5% NaHCO3(vodeni, 24.2 L). Nastala suspenzija je mešana tokom 30 min, a tada je filtrirana. Produkt je ispran sa vodom (14.8 L), izvučen na suvo i osušen na 50° C tokom 16 h. Produkt je rastvoren u DCM (12 L), a faze su razdvojene. Organska faza je nabijena na pločicu od silike (6 kg), a produkt je eluiran sa smešom 20% EtOAc/DCM (8 x 10 L). Koncentrovanje produkta koji sadrži frakcije daje 1987 g (prinos: 92%) sa čistoćom od 99.8% uz pomoć HPLC 5-bromo-3-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-amina (36 g, 17%):<1>H NMR spektar: (DMSO-d6) 1.43 (9H, s), 7.70 (2H, s), 8.39 (1H, s); Maseni spektar [M+H]<+>= 298.
12
[0439] Mlaz gasovitog azota je propušten kroz rastvor 5-bromo-3-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-amina (89.35 g, 239.75 mmol) u DMA (1.2 L) tokom 20 min. Dicikloheksil(2',4',6'-triizopropilbifenil-2-il)fosfin (11.43 g, 23.98 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) (5.49 g, 5.99 mmol), cink (1.568 g, 23.98 mmol) i dicijanocink (16.89 g, 143.85 mmol) su dodani uzastopno u mešanu smešu. Smeša je grejana na 100° C i mešana tokom 1 h. Smeša je ohlađena i podeljena između DCM (3 L) i vode (1 L). Crna smeša je filtrirana kroz celit, a organski sloj je razdvojen. Rastvor je ispran sa vodom, a tada i sa slanicom. Rastvor je osušen uz pomoć magnezijum sulfata i koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Talog je smrvljen sa MTBE i izolovan uz pomoć filtracije uz ispiranje sa MTBE. Filter-kolač je osušen in vacuo koje daje 5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-karbonitril (55.7 g, 95%) u formi bledo-narandžaste čvrste materije:<1>H NMR spektar: (DMSO-d6) 1.46 (9H, s), 6.02 (1H, s), 8.38 (2H, s); Maseni spektar [M-H]<->= 242.
[0440] Hidrazin hidrat (82 mL, 1.69 mol) je dodan u 5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-karbonitril (55 g, 225.18 mmol) u IPA (200 mL), a smeša je grejana na 50° C pod azotom tokom 16 h. Smeša je ohlađena u ledenoj banji. Nastao precipitat je sakupljen uz pomoć filtracije, ispran sa IPA i dietil etrom pa je osušen do konstantne težine koje daje (Z)-5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-karbohidrazonamid (49.2 g, 79%) u formi žute čvrste materije:<1>H NMR spektar: (DMSO-d6) 1.45 (9H, s), 5.26 (2H, s), 5.58 (2H, s), 7.56 (2H, s), 8.75 (1H, s); Maseni spektar [M+H]<+>= 277.
[0441] O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (74.3 g, 195.44 mmol) je dodan u rastvor N-Boc-izonipekotinske kiseline (41.1 g, 179.15 mmol) i 4-metilmorfolina (35.9 mL, 325.74 mmol) u DMA (800 mL). Smeša je mešana tokom 10 min, a tada je u rastvor dodan (Z)-5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-karbohidrazonamid (45 g, 162.87 mmol) u jednoj porciji (primećena je egzoterma od 22° C do 27° C). Nakon nekoliko minuta, produkt je kristalizovao iz reakcione smeše. Reakciona smeša je odstranjena iz posude pa je filtrirana kroz sinter. U isprani produkt je dodano još DMA po zidovima posude (150 mL), a smeša je izlivena u filter-kolač. U posudu je dodan izopropanol (600 mL), a ostatak produkta u posudi je suspendovan u ovom rastvaraču uz snažno mešanje. Suspenzija izopropanola je korišćena da se ispere filter-kolač jednom kada je DMA odstranjena isisavanjem. Filter-kolač je isisan do suvoće, a tada je ispran sa MTBE i još jednom isisan do suvoće. Filter-kolač je osušen in vacuo koje daje (Z)-tert-butil 4-(2-(amino(5-amino-6-(5-tertbutil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-il)metilen)hidrazinkarbonil)piperidin-1-karboksilat (76
12
g, 95%) u formi žute čvrste materije:<1>H NMR spektar: (DMSO-d6) 1.40 (9H, s), 1.46 (9H, s), 1.63 - 1.9 (2H, m), 2.33 - 2.6 (2H, m, prikriven sa signalom od DMSO), 2.63 - 3.03 (2H, m), 3.18 - 3.48 (4H, m, prikriven sa signalom od vode), 3.88 - 4.11 (2H, m), 6.43 (2H, s), 7.76 (2H, br), 8.84 (0.5H, s), 8.87 (0.5H, s), 9.85 (1H, s); Maseni spektar [M+H]<+>= 488
U jednoj alternativnoj pripremi, N-Boc-izonipekotinska kiselina može da se pripremi in situ kako sledi: izonipekotinska kiselina (858 g, 3.74 mol) je rastvorena u DMA (25.3 L) pa je dodan 4-metilmorfolin (393 mL, 3.74 mol). Mešana je tokom 5 min pa je dodan izobutil hloroformat (489 mL, 3.74 mol). Reakciona smeša je mešana na 25° C tokom 2 h pa je ohlađena do 15° C pre dodavanja (Z)-5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-karbohidrazonamida (940 g, 3.4 mol), deo po deo tokom 10 min. Reakciona smeša je mešana tokom 1-2 h na 15° C. Dodana je voda (20.5 L), deo po deo tokom 1 h pa je mešana još tokom 1 h pre no je filtrirana. Filter-kolač je tada ispran sa vodom (4 x 4 L) pa je izvučen na suvo, na filter hartiju, pre no je osušen u vakuum-pećnici na 50° C do suvoće koje daje željeni produkt.
[0442] Sirćetna kiselina (200 mL) je dodana u dioksan (500 mL) u fiksiranoj posudi sa dva plašta od 3 L, a rastvor je grejan do 70° C pod azotom. (Z)-tert-butil 4-(2-(amino(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-il)metilen)hidrazinkarbonil)-piperidin-1-karboksilat (74.5 g, 152.80 mmol) je dodan deo po deo u toplu smešu. Nakon 10 min, temperatura je povećana do 100° C (blagi refluks). Reakciona smeša je mešana na 100° C tokom 1.5 h (suspenzija), a tada je držana na 80° C preko noći (rastvor se formira nakon stajanja preko noći). Nastao rastvor je koncentrovan pod smanjenim pritiskom, a tada je razređen sa toluenom, isparen do suvoće, rastvoren u toluenu i ponovo koncentrovan. Rezidualno ulje je pomešano sa nešto etil acetata i koncentrovano do suvoće. Čvrsta materija je kristalizovala iz rastvora pa je kasnije smrvljena sa MTBE (200 mL) i izolovana filtracijom. Filter-kolač je ispran sa vodom i MTBE koje daje tert-butil 4-(5-(5-amino-6-(5-tert-butil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirazin-2-il)-1H-1,2,4-triazol-3-il)piperidin-1-karboksilat (50 g, 70%) u formi sive čvrste materije. Filtrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom koje daje žutu čvrstu materiju. Ovaj materijal je smrvljen sa MTBE i filtriran. Filter-kolač je ispran sa etil acetatom pa sa MTBE koje daje žetvu u formi bledo-žute čvrste materije (4.93 g, 7%). Ovaj materijal je identičan sa prvom žetvom:<1>H NMR spektar: (DMSO-d6) 1.17 (9H, s), 1.22 (9H, s), 1.29 - 1.47 (2H, m), 1.67 - 1.78 (2H, m), 2.57 - 2.87 (3H, m), 3.57 - 3.92 (2H, m), 7.56 (2H, br), 8.56 (1H, s), 13.47 (2H, br s); Maseni spektar [M+H]+ = 470.
1

Claims (16)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje, naznačeno time, što ima Formulu (I)
  2. u kojoj: R<1>i R<2>su svaki nezavisno H ili F; R<3>je H ili metil; i ili: a) R<4>je H, a R<5>je F; ili b) R<4>je F, a R<5>je H; ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so. 2. Jedinjenje kao šta se zahteva u zahtevu 1, ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, naznačeno time, što ima formulu (IA).
  3. 3. Jedinjenje kao šta se zahteva u zahtevu 1 ili u zahtevu 2, ili neka njegova farmaceutskiprihvatljiva so, naznačeno time, što R<3>je vodonik.
  4. 4. Jedinjenje kao šta se zahteva u bilo kojem od prethodnih zahteva, ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, naznačeno time, što R<4>je vodonik, a R<5>je fluoro.
  5. 5. Jedinjenje kao šta se zahteva u zahtevu 1 ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, naznačeno time, što je izabrano iz: (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline; (E)-3-(4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline; (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline; (E)-3-(4-((1R,3R)-2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline; (E)-3-(3,5-difluoro-4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline; (E)-3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline; (E)-3-(4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline; (E)-3-(4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline; (E)-3-(3-fluoro-4-(2-((S)-3-fluoro-2-metilpropil)-3,3-dimetil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline; i (E)-3-[4-[(1R,3R)-1-deuterio-2-(2-fluoro-2-metil-propil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-1-il]-3,5-difluoro-fenil]prop-2-enoične kiseline.
  6. 6. Jedinjenje kao šta se zahteva u zahtevu 5, naznačeno time, što je (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina, pri čemu pomenuto jedinjenje ima sledeću strukturu:
    ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so.
  7. 7. Jedinjenje kao šta se zahteva u zahtevu 6, naznačeno time, što je (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina.
  8. 8. Jedinjenje kao šta se zahteva u zahtevu 6, naznačeno time, što je maleatna so (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilne kiseline.
  9. 9. Jedinjenje kao šta se zahteva u zahtevu 7 u kristalnoj formi, naznačeno time, što ima obrazac difrakcije X-zraka na prahu (XRPD) sa najmanje dva specifična šiljka kod 2-teta = 8.4° i 10.9° pri čemu pomenute vrednosti mogu da variraju plus ili minus 0.2° 2-teta.
  10. 10. Jedinjenje kao šta se zahteva u bilo kojem od prethodnih zahteva ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, naznačeno time, što se upotrebljava kao medikament.
  11. 11. Jedinjenje kao šta se zahteva u bilo kojem od zahteva od 1 do 9 ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, naznačeno time, što se upotrebljava u prevenciji ili tretmanu raka kod toplo-krvnih životinja poput čoveka.
  12. 12. Jedinjenje za upotrebu u prevenciji ili tretmanu raka, kao šta se zahteva u zahtevu 11, naznačeno time, što je (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilna kiselina, ili neka njena farmaceutski-prihvatljiva so.
  13. 13. Jedinjenje za upotrebu u tretmanu raka, ili neka njegova farmaceutski-prihvatljiva so, kao šta se zahteva u zahtevu 11 ili zahtevu 12, naznačeno time, što pomenuti rak je rak dojke ili ginekološki rak.
  14. 14. Farmaceutska kompozicija, naznačena time, što sadrži jedinjenje sa Formulom (I) ili neku njegovu farmaceutski-prihvatljivu so, kao šta se zahteva u bilo kojem od zahteva od 1 do 9, i neki farmaceutski-prihvatljivi razređivač ili nosilac. 1
  15. 15. Farmaceutska kompozicija u skladu sa zahtevom 14 koja sadrži (E)-3-(3,5-difluoro-4-((1R,3R)-2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-pirido[3,4-b]indol-1-il)fenil)akrilnu kiselinu ili neku njezinu farmaceutski-prihvatljivu so, zajedno sa barem jednim farmaceutski-prihvatljivim razređivačem ili nosiocem, naznačena time, što pomenuta kompozicija sadrži manje od 5% w/w (R,E)-3-(3,5-difluoro-4-(2-(2-fluoro-2-metilpropil)-3-metil-4,9-dihidro-3H-pirido[3,4-b]indol-2-ium-1-il)fenil)akrilata.
  16. 16. Farmaceutska kompozicija u skladu sa zahtevom 15, naznačena time, što pomenuta kompozicija dodatno sadrži neki anti-oksidans i opciono dodatno sadrži neki metalohelatni agens.
RS20171304A 2013-05-28 2014-05-27 Hemijska jedinjenja RS56678B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361827951P 2013-05-28 2013-05-28
US201361915685P 2013-12-13 2013-12-13
PCT/GB2014/051607 WO2014191726A1 (en) 2013-05-28 2014-05-27 Chemical compounds
EP14727036.7A EP3004090B1 (en) 2013-05-28 2014-05-27 Chemical compounds

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS56678B1 true RS56678B1 (sr) 2018-03-30

Family

ID=50841880

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20171304A RS56678B1 (sr) 2013-05-28 2014-05-27 Hemijska jedinjenja

Country Status (35)

Country Link
US (4) US9155727B2 (sr)
EP (2) EP3360875A1 (sr)
JP (1) JP6286031B2 (sr)
KR (1) KR20160013198A (sr)
CN (1) CN105229004B (sr)
AP (1) AP2015008858A0 (sr)
AU (1) AU2014272856B2 (sr)
BR (1) BR112015029455A8 (sr)
CA (1) CA2911859A1 (sr)
CL (1) CL2015003491A1 (sr)
CR (1) CR20150629A (sr)
CY (1) CY1120474T1 (sr)
DK (1) DK3004090T3 (sr)
DO (1) DOP2015000274A (sr)
ES (1) ES2654161T3 (sr)
HR (1) HRP20171961T1 (sr)
HU (1) HUE035738T2 (sr)
IL (1) IL242559B (sr)
LT (1) LT3004090T (sr)
ME (1) ME02892B (sr)
MX (1) MX361538B (sr)
NI (1) NI201500167A (sr)
PE (1) PE20160874A1 (sr)
PH (1) PH12015502615B1 (sr)
PL (1) PL3004090T3 (sr)
PT (1) PT3004090T (sr)
RS (1) RS56678B1 (sr)
RU (1) RU2664109C2 (sr)
SG (1) SG11201509393VA (sr)
SI (1) SI3004090T1 (sr)
SM (1) SMT201700589T1 (sr)
TN (1) TN2015000516A1 (sr)
TW (1) TWI653235B (sr)
UY (1) UY35590A (sr)
WO (1) WO2014191726A1 (sr)

Families Citing this family (94)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106957282B (zh) 2011-12-21 2019-08-30 诺维拉治疗公司 B型肝炎抗病毒剂
AR092270A1 (es) 2012-08-28 2015-04-08 Janssen R&D Ireland Sulfamoilarilamidas y su uso como medicamentos para el tratamiento de la hepatitis b
ES2628953T3 (es) 2013-02-28 2017-08-04 Janssen Sciences Ireland Uc Sulfamoilarilamidas y el uso de las mismas como medicamentos para el tratamiento de la hepatitis B
MX353412B (es) 2013-04-03 2018-01-10 Janssen Sciences Ireland Uc Derivados de n-fenil-carboxamida y su uso como medicamentos para el tratamiento de la hepatitis b.
JP6441315B2 (ja) 2013-05-17 2018-12-19 ヤンセン・サイエンシズ・アイルランド・ユーシー スルファモイルチオフェンアミド誘導体およびｂ型肝炎を治療するための医薬品としてのその使用
JO3603B1 (ar) 2013-05-17 2020-07-05 Janssen Sciences Ireland Uc مشتقات سلفامويل بيرولاميد واستخدامها كادوية لمعالجة التهاب الكبد نوع بي
PL3024819T3 (pl) 2013-07-25 2018-08-31 Janssen Sciences Ireland Uc Pochodne piroloamidowe podstawione glioksamidem i ich zastosowanie jako leków do leczenia wirusowego zapalenia wątroby typu B
SG11201602748XA (en) 2013-10-23 2016-05-30 Janssen Sciences Ireland Uc Carboxamide derivatives and the use thereof as medicaments for the treatment of hepatitis b
US9169212B2 (en) 2014-01-16 2015-10-27 Novira Therapeutics, Inc. Azepane derivatives and methods of treating hepatitis B infections
US10392349B2 (en) 2014-01-16 2019-08-27 Novira Therapeutics, Inc. Azepane derivatives and methods of treating hepatitis B infections
KR20160128305A (ko) 2014-02-05 2016-11-07 노비라 테라퓨틱스, 인코포레이티드 Hbv 감염의 치료를 위한 병용 요법
ES2705401T3 (es) 2014-02-06 2019-03-25 Janssen Sciences Ireland Uc Derivados de sulfamoilpirrolamida y su uso como medicamentos para el tratamiento de la Hepatitis B
CN107108611B (zh) 2014-12-18 2020-09-25 豪夫迈·罗氏有限公司 四氢-吡啶并[3,4-b]吲哚雌激素受体调节剂及其用途
WO2016146591A1 (en) * 2015-03-16 2016-09-22 Astrazeneca Ab Combination treatment
EP3271019A1 (en) 2015-03-19 2018-01-24 Novira Therapeutics Inc. Azocane and azonane derivatives and methods of treating hepatitis b infections
RU2730508C2 (ru) * 2015-06-16 2020-08-24 Цзянсу Хэнжуй Медицин Ко., Лтд. Производное пиперидина, способ его получения и его фармацевтическое применение
US10875876B2 (en) 2015-07-02 2020-12-29 Janssen Sciences Ireland Uc Cyclized sulfamoylarylamide derivatives and the use thereof as medicaments for the treatment of hepatitis B
CN108350062B (zh) 2015-08-06 2022-10-14 达纳-法伯癌症研究所股份有限公司 靶向蛋白降解以减弱过继性t细胞疗法相关的不良炎症反应
JP6845231B2 (ja) 2015-09-29 2021-03-17 ノヴィラ・セラピューティクス・インコーポレイテッド Ｂ型肝炎抗ウイルス薬の結晶形態
DK3355884T3 (da) 2015-10-01 2021-08-02 Olema Pharmaceuticals Inc Tetrahydro-1h-pyrido[3,4-b]indol-antiøstrogenlægemidler
JP6592197B2 (ja) * 2015-11-12 2019-10-16 浙江海正薬業股▲ふん▼有限公司Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｈｉｓｕｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＣＯ．，ＬＴＤ． アクリル酸誘導体、製造方法、および医薬としてのその使用
WO2017100715A1 (en) 2015-12-09 2017-06-15 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Benzothiophene-based selective estrogen receptor downregulator compounds
CN107428721B (zh) 2015-12-22 2020-07-28 江苏恒瑞医药股份有限公司 苯并哌啶类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
JP6905539B2 (ja) * 2016-02-05 2021-07-21 インベンティスバイオ リミテッド ライアビリティ カンパニー 選択的エストロゲン受容体分解剤およびその使用
RU2738646C2 (ru) * 2016-04-01 2020-12-15 РЕКЬЮРИУМ АйПи ХОЛДИНГС, ЛЛС Модуляторы эстрогеновых рецепторов
KR20180129943A (ko) 2016-04-15 2018-12-05 노비라 테라퓨틱스, 인코포레이티드 캡시드 조립 억제제를 포함하는 배합물 및 방법
TW201803870A (zh) 2016-04-20 2018-02-01 阿斯特捷利康公司 化學化合物
DK3449017T3 (da) 2016-04-29 2022-03-14 Univ Texas Målrettet måling af transkriptionel aktivitet vedrørende hormonreceptorer
WO2017197904A2 (zh) * 2016-05-08 2017-11-23 上海诚妙医药科技有限公司 帕布昔利布的新晶型及其制备方法及其用途
CN109641874A (zh) 2016-05-10 2019-04-16 C4医药公司 用于靶蛋白降解的c3-碳连接的戊二酰亚胺降解决定子体
WO2017197055A1 (en) 2016-05-10 2017-11-16 C4 Therapeutics, Inc. Heterocyclic degronimers for target protein degradation
CN109790143A (zh) 2016-05-10 2019-05-21 C4医药公司 用于靶蛋白降解的胺连接的c3-戊二酰亚胺降解决定子体
EP3454862B1 (en) 2016-05-10 2024-09-11 C4 Therapeutics, Inc. Spirocyclic degronimers for target protein degradation
JP2019521983A (ja) 2016-06-16 2019-08-08 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト テトラヒドロ−ピリド［３，４−ｂ］インドールエストロゲン受容体モジュレーター及びその使用
JP7018026B2 (ja) * 2016-06-16 2022-02-09 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト ヘテロアリールエストロゲン受容体モジュレーター及びその使用
WO2018001232A1 (zh) * 2016-06-29 2018-01-04 浙江海正药业股份有限公司 丙烯酸类衍生物及其制备方法和其在医药上的用途
WO2018005860A1 (en) 2016-07-01 2018-01-04 G1 Therapeutics, Inc. Pyrimidine-based antiproliferative agents
TW201815789A (zh) 2016-07-25 2018-05-01 瑞典商阿斯特捷利康公司 化合物
CN107814798B (zh) * 2016-09-14 2020-11-03 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 3-取代丙烯酸类化合物及其制备方法和用途
EP3522933B1 (en) 2016-10-05 2021-12-15 F. Hoffmann-La Roche AG Methods for preparing antibody drug conjugates
TWI735681B (zh) 2016-10-24 2021-08-11 瑞典商阿斯特捷利康公司 化合物
WO2018081168A2 (en) 2016-10-24 2018-05-03 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Benzothiophene-based selective mixed estrogen receptor downregulators
CA3048057A1 (en) 2017-01-06 2018-07-12 G1 Therapeutics, Inc. Combination therapy for the treatment of cancer
WO2018130123A1 (zh) * 2017-01-11 2018-07-19 南京圣和药业股份有限公司 作为选择性雌激素受体下调剂的五环类化合物及其应用
WO2018130124A1 (zh) * 2017-01-11 2018-07-19 南京圣和药业股份有限公司 作为选择性雌激素受体下调剂的三环类化合物及其应用
PL3494116T3 (pl) * 2017-01-30 2020-04-30 Astrazeneca Ab Modulatory receptora estrogenowego
WO2018148440A1 (en) 2017-02-08 2018-08-16 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Regulating chimeric antigen receptors
CA3052810A1 (en) 2017-02-10 2018-08-16 G1 Therapeutics, Inc. Benzothiophene estrogen receptor modulators
CN108864080B (zh) * 2017-05-09 2021-10-15 南京圣和药业股份有限公司 作为选择性雌激素受体下调剂的四环类化合物及其应用
CN110769822A (zh) 2017-06-20 2020-02-07 C4医药公司 用于蛋白降解的n/o-连接的降解决定子和降解决定子体
WO2018233591A1 (zh) * 2017-06-20 2018-12-27 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种苯并哌啶类衍生物的盐、其晶型及盐、其晶型的制备方法
MX392531B (es) 2017-06-29 2025-03-24 G1 Therapeutics Inc Formas morficas de g1t38 y metodos de preparacion de las mismas.
KR20200086278A (ko) 2017-10-18 2020-07-16 노파르티스 아게 선택적 단백질 분해를 위한 조성물 및 방법
EA038160B1 (ru) * 2017-11-30 2021-07-15 Астразенека Аб Модуляторы рецептора эстрогена
CN109867659A (zh) * 2017-12-04 2019-06-11 江苏恒瑞医药股份有限公司 苯并哌啶类衍生物的制备方法
US10519152B2 (en) * 2017-12-21 2019-12-31 Astrazeneca Ab Compounds and their use in treating cancer
US11731927B2 (en) * 2018-02-23 2023-08-22 Center For Intelligent Research In Crystal Engineering, S.L. Cocrystals of ubiquinol and compositions comprising them
EP3765011A1 (en) 2018-03-14 2021-01-20 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Capsid assembly modulator dosing regimen
MX2020012066A (es) 2018-05-14 2021-04-28 Nuvation Bio Inc Compuestos anticancerígenos dirigidos a los receptores hormonales nucleares.
TW202016084A (zh) * 2018-05-30 2020-05-01 大陸商迪哲（江蘇）醫藥有限公司 選擇性雌激素受體下調劑和其用途
AU2019290545B2 (en) 2018-06-21 2022-04-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Solid forms of 3-((1R,3R)-1-(2,6-difluoro-4-((1-(3-fluoropropyl)azetidin-3-yl)amino)phenyl)-3-methyl-1,3,4,9-tetrahydro-2H-pyrido[3,4-b]indol-2-yl)-2,2-difluoropropan-1-ol and processes for preparing fused tricyclic compounds comprising a substituted phenyl or pyridinyl moiety, including methods of their use
BR112020025591A2 (pt) 2018-07-03 2021-03-23 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois ativadores da resposta da proteína não dobrada
CN120698985A (zh) 2018-12-20 2025-09-26 C4医药公司 靶向蛋白降解
EP3902545B1 (en) * 2018-12-24 2025-11-12 InventisBio Co., Ltd. Novel salts of selective estrogen receptor degraders
MA55020A (fr) 2019-02-22 2021-12-29 Janssen Sciences Ireland Unlimited Co Dérivés d'amide utiles dans le traitement d'une infection par le virus de l'hépatite b ou de maladies induites par le virus de l'hépatite b
WO2020219742A1 (en) 2019-04-24 2020-10-29 Novartis Ag Compositions and methods for selective protein degradation
AR119732A1 (es) 2019-05-06 2022-01-05 Janssen Sciences Ireland Unlimited Co Derivados de amida útiles en el tratamiento de la infección por vhb o de enfermedades inducidas por vhb
MX2021013774A (es) * 2019-05-14 2021-12-10 Nuvation Bio Inc Compuestos anticancerigenos dirigidos a los receptores hormonales nucleares.
KR20220034129A (ko) 2019-07-07 2022-03-17 올레마 파마슈티컬스 인코포레이티드 에스트로겐 수용체 길항제 요법
AU2020326691A1 (en) 2019-08-06 2022-03-03 Recurium Ip Holdings, Llc Estrogen receptor modulators for treating mutants
CA3159749A1 (en) * 2019-11-04 2021-05-14 Recurium Ip Holdings, Llc Salts and forms of an estrogen receptor modulator
TW202131930A (zh) 2019-11-13 2021-09-01 美商諾維雪碧歐公司 抗癌核荷爾蒙受體標靶化合物
CN114901277B (zh) 2019-12-20 2024-05-17 C4医药公司 用于egfr降解的异吲哚啉酮和吲唑化合物
KR20220125272A (ko) 2020-01-10 2022-09-14 지앙수 헨그루이 파마슈티컬스 컴퍼니 리미티드 트리사이클릭 테트라하이드로이소퀴놀린 유도체, 이를 제조하기 위한 방법 및 의료분야에서 이의 용도
MX2022010952A (es) 2020-03-05 2022-10-07 C4 Therapeutics Inc Compuestos para la degradacion dirigida de brd9.
CA3169679A1 (en) 2020-03-06 2021-09-10 Olema Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating estrogen receptor-associated diseases
MX2022013391A (es) 2020-04-24 2022-11-30 Astrazeneca Ab Pauta posologica para el tratamiento del cancer.
PH12022552755A1 (en) 2020-04-24 2024-03-25 Astrazeneca Ab Pharmaceutical formulations
WO2021253380A1 (en) * 2020-06-19 2021-12-23 InventisBio Co., Ltd. Oral formulations and uses thereof
WO2022029799A1 (en) * 2020-08-05 2022-02-10 Aizant Drug Research Solutions Private Limited Solid dosage forms of palbociclib
WO2022032026A1 (en) 2020-08-05 2022-02-10 C4 Therapeutics, Inc. Compounds for targeted degradation of ret
WO2022109395A2 (en) 2020-11-23 2022-05-27 Sanofi Panel of er regulated genes for use in monitoring endocrine therapy in breast cancer
EP4267578A4 (en) 2020-12-23 2024-11-20 Recurium IP Holdings, LLC ESTROGEN RECEPTOR MODULATORS
IL306010A (en) 2021-03-23 2023-11-01 Nuvation Bio Inc Anticancer compounds against the nuclear hormone receptor
AU2022269568A1 (en) 2021-05-03 2023-11-16 Nuvation Bio Inc. Anti-cancer nuclear hormone receptor-targeting compounds
AU2022290851A1 (en) 2021-06-08 2023-11-23 C4 Therapeutics, Inc. Therapeutics for the degradation of mutant braf
US20250049768A1 (en) * 2021-07-08 2025-02-13 Olema Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating estrogen receptor-associated diseases
WO2023280309A1 (zh) 2021-07-09 2023-01-12 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种三环四氢异喹啉类衍生物的盐型
WO2023221123A1 (en) * 2022-05-20 2023-11-23 Olema Pharmaceuticals, Inc. Crystalline forms of an estrogen receptor antagonist
CN119998285A (zh) 2022-08-03 2025-05-13 百时美施贵宝公司 用于调控ret蛋白的化合物
CN120569388A (zh) 2022-11-04 2025-08-29 百时美施贵宝公司 Ret-ldd蛋白降解剂
CN120530116A (zh) 2022-11-04 2025-08-22 百时美施贵宝公司 Ret-ldd蛋白抑制剂
WO2024242504A1 (ko) * 2023-05-25 2024-11-28 주식회사 삼양홀딩스 팔보시클립의 경구용 조성물
WO2025006753A2 (en) 2023-06-30 2025-01-02 Merck Patent Gmbh Heterobifunctional compounds for the degradation of kras protein

Family Cites Families (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
JP2000509373A (ja) 1996-04-19 2000-07-25 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ ホスホチロシン認識ユニットを有する分子のモジュレーター
FR2778404B1 (fr) * 1998-05-06 2000-06-30 Hoechst Marion Roussel Inc Derives du dihydro ou tetrahydronaphtalene, et les compositions pharmaceutiques les renfermant
GB9814414D0 (en) 1998-07-03 1998-09-02 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
EE200100556A (et) 1999-04-28 2003-02-17 Aventis Pharma Deutschland Gmbh Diarüülhappe derivaat, seda sisaldav farmatseutiline kompositsioon ja ühendi kasutamine ravimite valmistamiseks
FR2796644B1 (fr) * 1999-07-23 2001-09-07 Adir Nouveaux derives de beta-carboline, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
JP5000828B2 (ja) * 2000-03-15 2012-08-15 サノフィ−アベンティス・ドイチュラント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング ＩｋＢキナーゼ阻害活性を有する置換ベーターカルボリン
US6720331B2 (en) 2001-04-03 2004-04-13 National Sun Yat-Sen University 1-substituted 1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline and 3,4-dihydro-β-carboline and analogs as antitumor agents
WO2003059346A1 (en) 2002-01-18 2003-07-24 The Genetics Company Inc. Beta-secretase inhibitors
EP1496905B1 (en) 2002-04-22 2008-08-13 Johns Hopkins University School of Medicine Modulators of hedgehog signaling pathways, compositions and uses related thereto
TWI329111B (en) 2002-05-24 2010-08-21 X Ceptor Therapeutics Inc Azepinoindole and pyridoindole derivatives as pharmaceutical agents
US20050004164A1 (en) 2003-04-30 2005-01-06 Caggiano Thomas J. 2-Cyanopropanoic acid amide and ester derivatives and methods of their use
EP1637521B1 (en) 2003-06-23 2013-06-19 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Novel tricyclic heterocycle compound
BRPI0413013A (pt) * 2003-07-28 2006-10-03 Smithkline Beecham Corp composto, seus sais, solvatos, e derivados farmaceuticamente funcionais, composição farmacêutica, uso de um composto, e, métodos para o tratamento ou profilaxia de condições ou distúrbios, e de doenças
DE10335725A1 (de) 2003-08-05 2005-03-03 Bayer Cropscience Gmbh Safener auf Basis aromatisch-aliphatischer Carbonsäuredarivate
US7855295B2 (en) * 2004-01-23 2010-12-21 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Tetrahydrocarboline compounds as anticancer agents
AU2005229356B2 (en) * 2004-03-11 2011-06-09 Idorsia Pharmaceuticals Ltd Tetrahydropyridoindole derivatives
US8076352B2 (en) 2004-03-15 2011-12-13 Ptc Therapeutics, Inc. Administration of carboline derivatives useful in the treatment of cancer and other diseases
GB0422057D0 (en) 2004-10-05 2004-11-03 Astrazeneca Ab Novel compounds
EP1805159A1 (en) 2004-10-28 2007-07-11 The Institutes for Pharmaceutical Discovery, LLC Substituted carboxylic acids
WO2006055625A2 (en) 2004-11-18 2006-05-26 The Institutes For Pharmaceutical Discovery, Llc Heterocyclylbiphenyl derivates as protein tyrosine phosphatase inhibitors
CA2596015A1 (en) 2005-02-14 2006-08-24 Sampath K. Anandan Fused heterocyclic compounds useful as inhibitors of histone deacetylase
WO2006101434A1 (en) * 2005-03-22 2006-09-28 Astrazeneca Ab NOVEL TETRAHYDRO-1H-PYRIDO [4,3-b] INDOLE DERIVATIVES AS CB1’ RECEPTOR LIGANDS
US20070032385A1 (en) 2005-06-20 2007-02-08 Dunetz Joshua R Sustainable chemical processes
AU2007249827A1 (en) 2006-05-09 2007-11-22 Colorado State University Research Foundation Methods for treating blood disorders
KR101438245B1 (ko) 2006-08-23 2014-09-04 쿠도스 파마슈티칼스 리미티드 Ｍｔｏｒ 억제제로서의 2-메틸모르폴린 피리도-, 피라조- 및 피리미도-피리미딘 유도체
US8293803B2 (en) 2006-08-29 2012-10-23 Reinnervate Limited Retinoid compounds and their use
US20100249234A1 (en) 2007-04-10 2010-09-30 Uwm Research Foundation, Inc. Methods of reducing virulence in bacteria
WO2008124838A1 (en) 2007-04-10 2008-10-16 University Of Maryland, Baltimore Compounds that inhibit human dna ligases and methods of treating cancer
WO2008127714A1 (en) 2007-04-13 2008-10-23 Ptc Therapeutics, Inc. Administration of carboline derivatives useful in the treatment of cancer and other diseases
JP2010533712A (ja) 2007-07-19 2010-10-28 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション 抗糖尿病化合物としてのベータカルボリン誘導体
CA2728301A1 (en) * 2008-07-03 2010-01-07 Osteogenex Inc. Vinpocetine and eburnamonine derivatives for promoting bone growth
TW201028414A (en) 2009-01-16 2010-08-01 Merck Sharp & Dohme Oxadiazole beta carboline derivatives as antidiabetic compounds
US20120135089A1 (en) 2009-03-17 2012-05-31 Stockwell Brent R E3 ligase inhibitors
WO2010138706A1 (en) 2009-05-27 2010-12-02 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating breast cancer
CN102480957A (zh) * 2009-05-27 2012-05-30 Ptc医疗公司 治疗癌症及非肿瘤病症的方法
US9434747B2 (en) 2011-02-18 2016-09-06 Medivation Technologies, Inc. Methods of treating diabetes
WO2013022740A2 (en) 2011-08-05 2013-02-14 Corning Incorporated Gpr35 ligands and the uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
HK1222859A1 (en) 2017-07-14
CN105229004A (zh) 2016-01-06
AU2014272856B2 (en) 2017-08-17
PE20160874A1 (es) 2016-09-04
AP2015008858A0 (en) 2015-11-30
MX2015016428A (es) 2016-03-03
TWI653235B (zh) 2019-03-11
RU2664109C2 (ru) 2018-08-15
CL2015003491A1 (es) 2016-06-03
UY35590A (es) 2014-11-28
HUE035738T2 (en) 2018-05-28
US10130617B2 (en) 2018-11-20
CR20150629A (es) 2016-04-05
CA2911859A1 (en) 2014-12-04
TN2015000516A1 (en) 2017-04-06
US9155727B2 (en) 2015-10-13
EP3004090A1 (en) 2016-04-13
WO2014191726A1 (en) 2014-12-04
JP6286031B2 (ja) 2018-02-28
MX361538B (es) 2018-12-10
DOP2015000274A (es) 2015-12-31
TW201536779A (zh) 2015-10-01
US20160136140A1 (en) 2016-05-19
US20170326115A1 (en) 2017-11-16
DK3004090T3 (en) 2018-01-08
RU2015151502A (ru) 2017-07-04
NI201500167A (es) 2018-10-18
CN105229004B (zh) 2017-05-03
PT3004090T (pt) 2017-12-22
US20190038607A1 (en) 2019-02-07
EP3004090B1 (en) 2017-10-25
KR20160013198A (ko) 2016-02-03
US9616050B2 (en) 2017-04-11
ES2654161T3 (es) 2018-02-12
ME02892B (me) 2018-04-20
BR112015029455A8 (pt) 2020-03-17
BR112015029455A2 (pt) 2017-07-25
PH12015502615A1 (en) 2016-02-29
AU2014272856A1 (en) 2015-11-26
SMT201700589T1 (it) 2018-03-08
SG11201509393VA (en) 2015-12-30
IL242559B (en) 2018-11-29
PL3004090T3 (pl) 2018-02-28
RU2015151502A3 (sr) 2018-03-23
SI3004090T1 (en) 2018-01-31
HRP20171961T1 (hr) 2018-02-09
EP3360875A1 (en) 2018-08-15
US20140357661A1 (en) 2014-12-04
PH12015502615B1 (en) 2016-02-29
CY1120474T1 (el) 2019-07-10
LT3004090T (lt) 2018-01-10
JP2016522835A (ja) 2016-08-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10130617B2 (en) Chemical compounds
US10149839B2 (en) Chemical compounds
EP2948447B1 (en) Chemical compounds
AU2018211495B2 (en) Estrogen receptor modulators
WO2017182495A1 (en) Indazole derivatives that down-regulate the estrogen receptor and possess anti-cancer activity
HK1222859B (en) Chemical compounds
HK40007252A (en) Estrogen receptor modulators
HK40007252B (en) Estrogen receptor modulators
HK1214592B (en) Chemical compounds