RS56665B1 - Supstituisani imidazopiridazini - Google Patents

Description

Opis

[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na supstituisana jedinjenja imidazopiridazina kao što je ovde opisano i definisano, postupke za pripremu pomenutih jedinjenja, farmaceutske sastave i kombinacije koje sadrže pomenuta jedinjenja, upotrebu navedenih jedinjenja za proizvodnju farmaceutskih sastava za lečenje ili profilaksu bolesti, kao i na jedinjenja međuproizvode korisna za pripremu pomenutih jedinjenja.

STANJE TEHNIKE

[0002] Predmetni pronalazak se odnosi na hemijska jedinjenja koja inhibiraju Mps-1 (monopolarna vretenasta 1) kinazu (takođe poznata kao trezin-treonin-kinaza, TTK). Mps-1 je dvojna specifičnost Ser/Thr kinaze koja ima ključnu ulogu u aktiviranju mitotske kontrolne tačke (takođe poznata kao vretenasta kontrolna tačke, kontrolna tačka za montiranje vretena), čime se pruža odgovarajuća segregacija hromozoma tokom mitoze [Abrieu A et al., Cell, 2001, 106, 83-93]. Svaka ćelija za podelu mora osigurati jednako odvajanje repliciranih hromozoma u dve ćerke ćelije. Nakon ulaska u mitozu, hromozomi se pričvršćuju na svojim kinetohorama za mikrotubule aparata vretena. Mitotički kontrolni punkt je nadzorni mehanizam koji je aktivan sve dok su prisutne nepričvršćene kinetohore i sprečava mitotske ćelije da ulaze u anafazu i na taj način dovršavaju deljenje ćelija sa neprilagođenim hromozomima [Suijkerbuijk SJ and Kops GJ, Biochemica et Biophysica Acta, 2008, 1786, 24-31; Musacchio A and Salmon ED, Nat Rev Mol Cell Biol., 2007, 8, 379-93]. Kada se sve kinetohore spajaju u ispravnan amfitelik, tj. bipolaran, sa mitotskim vretenom, kontrolna tačka je zadovoljna i ćelija ulazi u anafazu i nastavlja kroz mitozu. Mitotska kontrolna tačka sastoji se od složene mreže većeg broja esencijalnih proteina, uključujući i članove MAD (nedostatak mitotskog zaustavljanja, MAD 1-3) i Bub (okuliranje koji ne inhibira benzimidazol, Bub 1-3) familija, motorni protein CENP-E , Mps-1 kinaza, kao i druge komponente, od kojih su mnoge preterano eksprimirane u proliferirajućim ćelijama (npr. ćelijama karcinoma) i tkivima [Yuan B et al., Clinical Cancer Research, 2006, 12, 405-10].

Suštinska uloga aktivnosti Mps-1 kinaze u signalizaciji mitotskih kontrolnih tačaka pokazala se od strane shRNA-utišavanja, hemije genetike, kao i hemijskih inhibitora Mps-1 kinaze [Jelluma N et al., PLos ONE, 2008, 3, e2415; Jones MH et al., Current Biology, 2005, 15, 160-65; Dorer RK et al., Current Biology, 2005, 15, 1070-76; Schmidt M et al., EMBO Reports, 2005, 6, 866-72].

Postoji dovoljno dokaza koji povezuju smanjenu, ali nepotpunu mitotsku kontrolnu tačku sa aneuploidijom i tumourigenezom [Weaver BA and Cleveland DW, Cancer Research, 2007, 67, 10103-5; King RW, Biochimica et Biophysica Acta, 2008, 1786, 4-14]. Za razliku od toga, prepoznata je potpuna inhibiciju mitotske kontrolne tačke, što rezultuje ozbiljnom megregegacijom hromozoma i indukcijom apoptoze u tumorskim ćelijama[Kops GJ et al., Nature Reviews Cancer, 2005, 5, 773-85; Schmidt M and Medema RH, Cell Cycle, 2006, 5, 159-63; Schmidt M and Bastians H, Drug Resistance Updates, 2007, 10, 162-81]. Zbog toga mitotsko prekidanje kontrolnih tačaka putem farmakološke inhibicije Mps-1 kinaze ili drugih komponenti mitozne kontrolne tačke predstavlja novi pristup za lečenje proliferativnih poremećaja uključujući čvrste tumore kao što su karcinomi i sarkomi i leukemije i limfoidne malignosti ili drugi poremećaji povezani sa nekontrolisanom ćelijskom proliferacijom.

[0003] Ustanovljeni anti-mitotički lekovi kao što su vinka alkaloidi, taksani ili epotiloni aktiviraju SAC indukujući mitotičku zaustavljanje bilo stabilizacijom ili destabilizacijom dinamike mikrotubula. Ovo zaustavljanje sprečava odvajanje sestrinskih hromatida kako bi se formirale dve ćerke ćelije. Produženo zaustavljanje u mitozi prisiljava ćeliju ili u miotički izlaz bez citokineze ili u miotičku katastrofu koja dovodi do smrti ćelije.

Nasuprot tome, inhibitori Mps-1 indukuju inaktivaciju SAC koja ubrzava progresiju ćelija kroz mitozu, što dovodi do teške hromozomske nepravilne segregacije i na kraju u smrti ćelije.

[0004] Ovi nalazi sugerišu da bi Mps-1 inhibitori trebalo da budu terapeutske vrednosti za lečenje proliferativnih poremećaja povezanih sa poboljšanim nekontrolisanim proliferativnim ćelijskim procesima kao što su, na primer, kancer, upala, artritis, virusne bolesti, neurodegenerativne bolesti kao što je Alchajmerova bolest, kardiovaskularne bolesti ili gljivične bolesti kod toplokrvne životinje kao što je čovek.

[0005] Prema tome, inhibitori Mps-1 predstavljaju vredna jedinjenja koja bi trebalo da komplementiraju terapeutske opcije bilo kao pojedinačni agensi ili u kombinaciji sa drugim lekovima.

[0006] Različita jedinjenja su otkrivena u stanju tehnike koja pokazuju inhibitorni efekat na Mps-1 kinazu. VO2010/124826A1 opisuje supstituisana imidazokinoksalin jedinjenja kao inhibitore Mps-1 kinaze. VO2011/026579A1 opisuje supstituisane aminokinoksinone kao Mps-1 inhibitore. VO2011/063908A1, VO2011/064328A1 kao i VO2011/063907 A1 opisuju derivate triazolopiridina kao inhibitore Mps-1 kinaze.

[0007] Derivati imidazopiridazina otkriveni su za lečenje ili profilaksu različitih oboljenja:

WO 2007/038314 A2 se odnosi na spojena heterociklična jedinjenja korisna kao modulatore kinaze, uključujući MK2 modulaciju. Posebno, WO 2007/038314 A2 se odnosi na imidazo [1,2-b]piridazine.

SAD patentna prijava US 2008/0045536 A1 slično se odnosi na fuzionisana heterociklična jedinjenja korisna kao modulatori kinaze, uključujući MK2 modulaciju. Posebno se odnosi na imidazo [1,2-b] piridazine.

WO 2010/042699 A1 se odnosi na fuzionisana heterociklična jedinjenja korisna kao modulatori kinaze, posebno modulacija CK2. Posebno WO 2010/042699 A1 se odnosi na imidazo [1,2-b] piridazine koji su supstituisani sa nitrilnom grupom na poziciji 3.

WO 2007/025090 A2 se odnosi na heterociklična jedinjenja korisna kao inhibitori MEK kinaze. Posebno WO 2007/025090 A2 povezuje, inter alia, imidazo [1,2-b] piridazine.

WO 1998/08847 A1 se odnosi na heterociklična jedinjenja korisna kao faktor koji sprovodi kortikotropin (hormon) CRF (CRH) antagonista. Posebno, WO 1998/08847 A1 se odnosi, inter alia, na imidazo [1,2-b] piridazine.

WO 2011/013729A1 opisuje spojene derivate imidazola kao Mps-1 inhibitore. Među otkrivenim spojenim derivatima imidazola postoje i imidazo [1,2-b] piridazini.

WO 2012/032031A1 je inter alia vezan za imidazo [1,2-b] piridazine kao Mps-1 inhibitore.

[0008] Međutim, gore opisano stanje tehnike ne opisuje specifično jedinjenja imidazopiridazina formule (A), (B) ili (C) ili njihove stereoizomere, tautomere, N-okside, hidrate, solvate , ili so ili mešavinu njih, kao što je ovde opisano i definisano, i kako se u daljem tekstu tumače „jedinjenja predmetnog pronalaska“, ili njihova farmakološka aktivnost i stabilnost.

[0009] Sada je pronađeno i ovo predstavlja osnovu predmetnog pronalaska, da navedena jedinjenja iz predmetnog pronalaska imaju iznenađujuća i povoljna svojstva.

[0010] Posebno, za navedena jedinjenja iz predmetnog pronalaska iznenađujuće je utvrdjeno da efikasno inhibiraju Mps-1 kinazu i stoga se mogu koristiti za lečenje ili profilaksu bolesti nekontrolisanog rasta ćelija, proliferacije i/ili preživljavanja, neodgovarajućih ćelijskih imunih odgovora , ili neodgovarajućih ćelijskih upalnih reakcija ili bolesti koje su praćene nekontrolisanim rastom ćelija, proliferacijom i/ili preživljavanjem, neodgovarajućim ćelijskim imunim odgovorima ili neodgovarajućim ćelijskim upalnim odgovorima, naročito kod kojih su nekontrolisan rast ćelija, proliferacija i/ili preživljavanje, neodgovarajući ćelijski imuni odgovori ili neodgovarajući ćelijski upalni odgovori posredovani od strane Mps-1 kinaze, kao što su, na primer, hemotološki tumori, čvrsti tumori i/ili metastaze od njih, npr. leukemije i mijelodisplastični sindrom, maligni limfom, tumor glave i vrata, uključujući tumore mozga i metastaze u mozgu, tumore toraksa uključujući tumore malih i ne-malih ćelija pluća, gastrointestinalni tumori, endokrini tumori, tumori jajnika i drugi ginekološki tumori, urološki tumori uključujući bubrežne, tumor bešike i prostate, tumora kože i sarkoma i/ili njihove metastaze.

[0011] Jedinjenja iz predmetnog pronalaska iznenađujuće pokazuju superiorni ukupni profil u odnosu na Mps-1 aktivnost u funkcionalnom testu (ispitivanje kontrolne tačke vretena), antiproliferativnu aktivnost (test proliferacije sa HeLa ćelijama), metaboličku stabilnost (in vitro metabolička stabilnost kod hepatocita pacova) i potencijal interakcije lekova (inhibicija jetrenog enzima CYP3A4), kako će biti prikazano u daljem tekstu.

SAŽETAK PRONALASKA

[0012] predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje (B) ili njegov N-oksid, hidrat, solvat ili so. Osim toga, pronalazak je usmeren na predmet koji se odnosi na jedinjenje (B) kao što je definisano u patentnim zahtevima, kao i na međuproizvod jedinjenja (B1), (B2), (B3) i (B5) kao što je definisano u patentnim zahtevima.

[0013] Pored toga, predmetno obelodanjenje obuhvata jedinjenja formule (A), (B) i (C):

ili njegov stereoizomer, tautomer, N-oksid, hidrat, solvat ili so ili njihove smeše.

[0014] Jedinjenja iz predmetnog pronalaska karakterišu: aktivnost u kontrolnom tačku skupa vretena <1.0 nM, aktivnost u testu proliferacije sa heLa ćelijama <25 nM, metabolička stabilnost in vitro u hepatocitima pacova Fmak ≥ 39% i inhibicija jetre enzim CYP3A4 ≥ 5 mM.

[0015] Predmetno obelodanjenje se odnosi i na postupke pripreme pomenutih jedinjenja, farmaceutskih sastava i kombinacija koje sadrže pomenuta jedinjenja, za upotrebu navedenih jedinjenja za proizvodnju farmaceutski sastavi za tretman ili profilaksu bolesti, kao i za međuproizvod jedinjenja korisna za pripremu pomenutih jedinjenja.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0016] Izrazi pomenuti u ovom tekstu imaju poželjno sledeće beleženje:

Izraz „atom halogena“ ili „halo-“ treba shvatiti kao atom fluora, hlora, broma ili joda.

[0017] Izraz se podrazumeva kao poželjno beleženje linearne ili razgranate, zasićene, monovalentne ugljovodonične grupe koja ima 1, 2, 3, 4, 5 ili 6 atoma ugljenika, npr. metil, etil, propil, butil, pentil, heksil, izo-propil, izo-butil, sek-butil, terc-butil, izo-pentil, 2-metilbutil, 1-metilbutil, 1-etilpropil, 1,2-dimetilpropil , neo-pentil, 1,1-dimetilpropil, 4-metilpentil, 3-metilpentil, 2-metilpentil, 1-metilpentil, 2-etilbutil, 1-etilbutil, 3,3-dimetilbutil, 2,2-dimetilbutil, 1,1 -dimetilbutil, 2,3-dimetilbutil, 1,3-dimetilbutil ili 1,2-dimetilbutil grupa, ili njen izomer. Posebno, pomenuta grupa ima 1, 2, 3 ili 4 atoma ugljenika („C1-C4-alkil“), npr. metil, etil, propil, butil, izo-propil, izo-butil, sek-butil, terc-butil grupa, konkretno 1, 2 ili 3 atoma ugljenika („C1-C3-alkil“), npr. metil, etil, n-propil- ili izo-propil grupa.

[0018] Izraz „C1-C6“ kako se koristi u celom ovom tekstu, npr. u kontekstu definicije „C1-C6-alkila“, treba shvatiti kao alkil grupu koja ima konačan broj atoma ugljenika od 1 do 6, tj.1, 2, 3, 4, 5 ili 6 atoma ugljenika. Dalje treba razumeti da se navedeni pojam "C1-C6" tumači kao bilo koji pod-opseg koji se sastoji u njemu, npr. C1-C6, C2-C5, C3-C4, C1-C2, C1-C3, C1-C4, C1-C5, C1-C6; posebno C1-C2, C1-C3, C1-C4, C1-C5, C1-C6; a naročito C1-C4.

[0019] Izraz „supstituisan“ znači da se jedan ili više vodonika na određenom atomu zamenjuje selekcijom iz neobeležene grupe, pod uslovom da se normalna valentnost određenog atoma u postojećim okolnostima ne prekorači i da supstitucija rezultuje stabilnim jedinjenjem. Kombinacije supstituenata i/ili varijabli su dozvoljene samo ako takve kombinacije rezultuju stabilnim jedinjenjima.

[0020] Izraz „opciono supstituisan“ označava opcionu supstituciju sa navedenim grupama, radikalima ili delovima.

[0021] Kao što je ovde korišćeno, izraz „izlazna grupa“ odnosi se na atom ili grupu atoma koji se pomeraju u hemijskoj reakciji kao stabilne vrste uzimajući sa sobom elektrone vezivanja. Poželjno, izlazna grupa je odabrana iz grupe koju čine: halo, posebno hloro, bromo ili jodo, metansulfoniloksi, p-toluensulfoniloksi, trifluorometansulfoniloksi, nonafluorobutansulfoniloksi, (4-bromo-benzen) sulfoniloksi, (4-nitro-benzen) (2-nitrobenzen)-sulfoniloksi, (4-izopropil-benzen)sulfoniloksi, (2,4,6-tri-izopropil-benzen) -sulfoniloksi, (2,4,6-trimetil-benzen)-terbutil-benzen)sulfoniloksi, benzensulfoniloksi i (4-metoksi-benzen) sulfoniloksi.

[0022] Kada se ovde u množini koristi oblik reči jedinjenja, soli, polimorfa, hidrata, solvata i slično, podrazumeva se i oblik jednine jedinjenja, soli, polimorfa, izomera, hidrata, solvata ili slično.

[0023] Pod „stabilnim jedinjenjem“ ili „stabilnom strukturom“ podrazumeva se jedinjenje koje je dovoljno robusno da preživi izolaciju do korisnog stepena čistoće iz reakcione smeše i formulaciju u efikasan terapeutski agens. U skladu sa prvim aspektom, predmetno obelodanjenje je usmereno na jedinjenje Formule (A), (B) ili (C):

[0024] U jednom otelotvorenju pomenutog aspekta, obelodanjenje se odnosi na jedinjenje Formule (A), (B) ili (C) u obliku njegovog tautomera, N-oksida, hidrata, solvata ili soli ili njihove mešavine.

[0025] Predmetno obelodanjenje obuhvata sve moguće stereoizomere jedinjenja iz predmetnog pronalaska kao pojedinačne stereoizomere ili kao bilo koju smešu navedenih stereoizomera u bilo kojoj razmeri. Izolovanje jednog stereoizomera, npr. jedinstvenog enantiomera ili jedinstvenog dijastereomera, jedinjenja iz predmetnog pronalaska može se postići bilo kojim odgovarajućim postupkom u struci, kao što je hromatografija, posebno hiralna hromatografija, na primer.

[0026] Predmetni pronalazak obuhvata sve moguće tautomere jedinjenja iz predmetnog pronalaska kao pojedinačne tautomere, ili kao bilo koju smešu pomenutih tautomera, u bilo kom odnosu.

[0027] Pronalazak takođe uključuje sve odgovarajuće izotopske varijacije jedinjenja iz predmetnog pronalaska. Izotopska varijacija jedinjenja iz predmetnog pronalaska je definisana kao ona u kojoj je bar jedan atom zamenjen atomom koji ima isti atomski broj, ali atomsku masu koja se razlikuje od atomske mase koja se obično ili pretežno nalazi u prirodi. Primeri izotopa koji se mogu inkorporirati u jedinjenje pronalaska obuhvataju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, sumpora, fluora, hlora, broma i joda, kao što su<2>H (deuterijum),<3>H (tricijum),<11>C<13>C,<14>C,<15>N,<17>O,<18>O,<32>P,<33>P,<33>S,<34>S,<35>S,<36>S,<18>F,<36>Cl,<82>Br,<123>I,<124>I,<129>I i<131>I, respektivno. Određene izotopske varijacije jedinjenja prema pronalasku, na primer, one u kojima je ugrađen jedan ili više radioaktivnih izotop kao što su<3>H ili<14>C, su korisne u studijama distribucije tkiva leka i/ili supstrata. Tritirajući i ugljenik-14, tj.,<14>C, izotopi su naročito poželjni zbog lakoće pripreme i detektibilnosti. Dalje, supstitucija sa izotopima kao što je deuterijum može da obezbedi određene terapeutske prednosti koje proizlaze iz veće metaboličke stabilnosti, na primer, povećan poluživota in vivo ili smanjeni zahtevi doze i stoga mogu biti poželjni u nekim okolnostima. Izotopske varijacije jedinjenja prema pronalasku mogu se generalno pripremiti konvencionalnim postupcima poznatim od strane stručnjaka u oblasti, kao što su ilustrativni postupci ili preparati opisani u primerima u nastavku koristeći odgovarajuće izotopske varijacije odgovarajućih reagensa.

[0028] Dalje, jedinjenja iz predmetnog pronalaska i obelodanjenja, respektivno, mogu postojati kao N-oksidi, koji su definisani po tome da se najmanje jedan azot jedinjenja iz predmetnog pronalaska oksidira. Predmetni pronalazak obuhvata sve takve moguće N-okside jedinjenja (B). Dalje, predmetni pronalazak uključuje sve moguće kristalne oblike ili polimorfe jedinjenja iz predmetnog pronalaska, bilo kao pojedinačni polimorfi, ili kao mešavina više od jednog polimorfa, u bilo kom odnosu.

[0029] Jedinjenja iz predmetnog pronalaska i obelodanjenja, respektivno, mogu postojati kao hidrat ili kao solvat,

gde jedinjenja iz predmetnog pronalaska sadrže polarne rastvarače, posebno vodu, metanol ili etanol, na primer kao strukturni element kristalne rešetke jedinjenja. Količina polarnih rastvarača, posebno vode, može postojati u stehiometrijskom ili ne-stehiometrijskom odnosu. U slučaju stehiometrijskih solvata, npr. moguće su hidratni, hemi-, (semi-), mono-, seskui-, di-, tri-, tetra-, penta- itd. solvati ili hidrati. predmetni pronalazak obuhvata sve takve hidrate ili solvate jedinjenja (B). predmetno obelodanjenje se odnosi i na korisne forme jedinjenja kako je ovde obelodanjeno, kao što su metaboliti, hidrati, solvati, prolekovi, soli, posebno farmaceutski prihvatljive soli, in vivo hidrolizabilni estri i ko-precipitati. Izraz „farmaceutski prihvatljiva so“ odnosi se na relativno netoksičnu, neorgansku ili organsku kiselinsku adicionu so jedinjenja iz predmetnog pronalaska. Na primer, pogledati S. M. Berge, et al. "Pharmaceutical Salts," J. Pharm. Sci.1977, 66, 1-19.

[0030] Pogodna farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja predmetnog obelodanjenja i jedinjenja (B) prema predmetnom pronalasku može biti, na primer, so kiselinska adiciona jedinjenja predmetnog pronalaska koja ima atom azota u lancu ili u prstenu, na primer, koji je dovoljno bazičan, kao što je kiselinska adiciona so sa neorganskom kiselinom, kao što su hlorovodonična, bromovodonična, hidridoidna, sumporna, bisulfurna, fosforna ili azotna kiselina, na primer, ili sa organskom kiselinom, kao što je mravlja, sirćetna, acetosirćetna, piruvina, trifluorosirćetna, propinska, butinska, heksanska, heptanska, undekanojska, laurinska, benzojeva, salicilinska, 2-(4-hidroksibenzoil)-benzojeva, kamforna, cimetna, ciklopentanepropionska, diglukonična, 3- hidroksi-2-naftoična, nikotinska, pamoična, pektinska, persulfurna, 3-fenilpropionska, pikrična, pivalična, 2-hidroksietansulfonatska, itakonska, sulfamska, trifluorometansulfonska, dodecilsulfurna, etansulfonska, benzensulfonska, para-toluensulfonska, metansulfonska, 2-naftalensulfonska, naftalinedisulfonska, kamforsulfonska, limunska, vinska, stearinska, mlečna, oksalna, malonska, sukcinska, malična, adipična, alginska, maleinska, fumarna, D-glukonska, mandelna, askorbinska, glukoheptanična, glicerofosforna, asparaginska, sulfosalicilna, hemisulfurna ili tiocijanska kiselina, na primer.

[0031] Dalje, još jedna pogodna farmaceutski prihvatljiva so ovde objavljenog jedinjenja, koja je dovoljno kiselina, je so alkalnog metala, na primer natrijumova ili kalijumova so, so zemnoalkalnog metala, na primer kalcijum ili magnezijumova so, amonijum so ili so sa organskom bazom koja daje fiziološki prihvatljiv katjon, na primer so sa N-metilglukaminom, dimetil-glukaminom, etil-glukaminom, lizinom, dicikloheksilaminom, 1,6-heksadiaminom, etanolaminom, glukozaminom, sarkozinom, serinol, tris-hidroksi-metilaminometaom, aminopropandiolom, sovak-baza, 1-amino-2,3,4-butantriol. Osim toga, osnovne grupe koje sadrže azot mogu biti kvaternizovane sa sredstvima kao što su niži alkil halidi kao što su metil, etil, propil i butilhloridi, bromidi i jodidi; dialkil sulfatima kao što su dimetil, dietil i dibutil sulfat; i diamilm sulfatima, halogenidima sa dugim lancem, kao što su decil, lauril, miristil i strearil hloridi, bromidi i jodidi, aralkil halidima kao što su benzil i fenetil bromidi i drugi.

[0032] Stručnjaci u ovoj oblasti dalje će prepoznati da kisele adicione soli predmetnih jedinjenja mogu biti pripremljene reakcijom jedinjenja sa odgovarajućom neorganskom ili organskom kiselinom putem bilo kog broja poznatih postupaka. Alternativno, soli alkalnih i zemnoalkalnih metala kiselih jedinjenja iz pronalaska su pripremljene reakcijom jedinjenja pronalaska sa odgovarajućom bazom pomoću različitih poznatih postupaka.

[0033] Predmetni pronalazak obuhvata sve moguće soli jedinjenja (B) prema predmetnom pronalasku kao pojedinačne soli, ili kao bilo koja smeša navedenih soli, u bilo kom odnosu.

[0034] Kako se ovde koristi, izraz „in vivo hidrolizabilni estar“ podrazumeva in vivo hidrolizabilni estar jedinjenja iz predmetnog pronalaska koji sadrži karboksi ili hidroksi grupu, na primer, farmaceutski prihvatljiv estar koji se hidrolizira u ljudsko ili životinjsko telo za proizvodnju matične kiseline ili alkohola. Pogodni farmaceutski prihvatljivi estri za karboksi uključuju na primer alkil, cikloalkil i opciono supstituisani fenilalkil, naročito benzil estri, C1-C6alkoksimetil estri, npr. metoksimetil, C1-C6alkanoiloksimetil estri, npr. pivaloiloksimetil, ftalidil estri, C3-C8cikloalkoksi-karbonitoksi-C1-C6alkil estri, npr.1-cikloheksilkarboniloksietil; 1,3-dioksolen-2-onilmetil estri, npr.5-metil-1,3-dioksolen-2-onilmetil; i C1-C6-alkoksikarboniloksietil estri, npr.1-metoksikarboniloksietil, i mogu se formirati u bilo kojoj karboksi grupi u jedinjenjima iz predmetnog pronalaska.

In vivo hidrolizabilni estar jedinjenja iz predmetnog obelodanjenja koji sadrži hidroksi grupu uključuje neorganske estre kao što su estri fosfata i [alfa]-aciloksialkil etri i srodna jedinjenja koja kao rezultat in vivo hidrolize razgradnje estra daju roditelju hidroksi grupu. Primeri [alfa]-aciloksialkil etara uključuju acetoksimetoksi i 2,2-dimetilpropioniloksimetoksi. Izbor grupa koje formiraju in vivo hidrolizabilnih estere za hidroksi uključuje alkanoil, benzoil, fenilacetil i supstituisani benzoil i fenilacetil, alkoksikarbonil (što daje alkil karbonatne estre), dialkilkarbamoil i N- (dialkilaminoetil) -N-alkilkarbamoil (dajući karbamat), dialkilaminoacetil i karboksiacetil. Predmetno obelodanjenje obuhvata sve takve estre.

[0035] Za jedinjenja iz predmetnog pronalaska i obelodanjenja je, prema tome, iznenađujuće otkriveno da efikasno inhibiraju Mps-1-kinazu i stoga se mogu koristiti za lečenje ili profilaksu bolesti nekontrolisanog rasta, proliferacije i/ili preživljavanja ćelija, neodgovarajućih ćelijskih imuno odgovora ili neodgovarajućih ćelijskih upalnih odgovora ili bolesti koji su praćeni nekontrolisanim rastom, proliferacijom i/ili preživljavanjem ćelija, neodgovarajućim ćelijskim imuno odgovorima ili neodgovarajućim ćelijskim upalnim1 odgovorima, posebno kod kojih su nekontrolisan rast ćelija, proliferacija i/ili preživljavanje neodgovarajući ćelijski imuni odgovori ili neodgovarajući ćelijski upalni odgovori posredovani od strane Mps-1 kinaze, kao što su, na primer, hemotološki tumori, čvrsti tumori i/ili metastaze od njih, npr. leukemije i mijelodisplastični sindrom, maligni limfomi, tumori glave i vrata, uključujući tumore mozga i metastaze u mozgu, tumori toraksa uključujući tumore malih i ne-malih ćelija pluća, gastrointestinalni tumore, endokrini tumore, tumori jajnika i drugi ginekološki tumori, urološki tumore uključujući bubrežne, tumor bešike i prostate, tumora kože i sarkoma i/ili njihove metastaze.

[0036] Zbog toga se očekuje da će jedinjenja formula (A), (B) i (C) supra,biti korisna kao terapeutski agensi.

[0037] Shodno tome, u drugom otelotvorenju, predmetno obelodanjenje se odnosi na jedinjenje formule (A), (B) ili (C), supra, ili njegov stereoizomer, tautomer, N-oksid, hidrat, solvat , ili so, posebno njegova farmaceutski prihvatljiva so ili njihova mešavina, za upotrebu u lečenju ili profilaksu bolesti.

[0038] U još jednom otelotvorenju, , predmetno obelodanjenje pruža postupak lečenja poremećaja koji su povezani sa poboljšanim nekontrolisanim proliferativnim ćelijskim procesima kod pacijenata koji je potreban takvim tretmanom, koji obuhvata davanje pacijentu efikasne količine jedinjenja formule (A), ( B) ili (C), supra.

[0039] Izraz „lečenje“ ili „lečenje“ kako je navedeno u ovom dokumentu se koristi konvencionalno, npr. vođenje ili briga o pacijentu u cilju suzbijanja, ublažavanja, smanjenja, ublažavanja, poboljšanja stanja bolesti ili poremećaja , kao što je karcinom.

[0040] Izraz „pacijent“ uključuje organizme koji su sposobni da pate od ćelijskog proliferativnog poremećaja ili koji bi na drugi način mogli imati koristi od primene jedinjenja iz predmetnog pronalaska, kao što su ljudske i ne-ljudske životinje. Poželjni ljudi uključuju ljude koji pate od ili su pod rizikom od proliferativnog poremećaja ćelije ili pridruženog stanja, kako je ovde opisano. Izraz „ne-ljudske životinje“ uključuje kičmenjake, npr. sisare, kao što su primati bez čoveka, ovca, krava, pas, mačka i glodari, npr. miševi i ne-sisare, kao što su ptice, vodozemci, gmizavci itd.

[0041] Termini „poremećaj ćelijskog proliferacije“ ili „poremećaj povezan sa povećanim nekontrolisanim proliferativnim ćelijskim procesima“ uključuju poremećaje koji uključuju neželjenu ili nekontrolisanu proliferaciju ćelija. Jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu se koristiti za sprečavanje, inhibiranje, blokiranje, smanjenje, smanjenje, kontrolu itd. proliferacija ćelija i/ili deljenje ćelija i/ili stvaranje apoptoze. Ovaj postupak obuhvata davanje pacijentu kom je to potrebno, uključujući sisara, uključujući i čoveka, količinu jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, izomera, polimorfa, metabolita, hidrata ili solvata koja je efikasna za lečenje ili sprečavanje poremećaja.

[0042] U drugom otelotvorenju, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (B) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u lečenju ili profilaksi bolesti, pri čemu je navedena bolest nekontrolisanog ćelijskog rasta, proliferacije i/ili preživljavanja, neodgovarajući ćelijski imuni odgovor ili neodgovarajući ćelijski upalni odgovor, naročito kod koje je nekontrolisan rast, proliferacija i/ili preživljavanje ćelija, neodgovarajući ćelijski imuni odgovor ili neodgovarajući ćelijski upalni odgovor posredovan mitogenom aktiviranom protein kinazom (MEK-ERK), i naročito kod kojih je bolest nekontrolisanog rasta, proliferacije i/ili preživljavanja ćelija, neodgovarajući ćelijski imuni odgovor ili neodgovarajući ćelijski upalni odgovor hemotološki tumor, čvrsti tumor i/ili njegova metastaza, npr. leukemija i mijelodisplastični sindrom, maligni limfom, tumor glave i vrata, uključujući tumore mozga i metastaze u mozgu, tumori toraksa uključujući tumore malih i ne-malih ćelija pluća, gastrointestinalne tumore, endokrine tumore, tumore jajnika i druge ginekološke tumore, urološke tumore uključujući bubrežne, tumore bešike i prostate, tumore kože i sarkoma i/ili njihove metastaze.

[0043] Jedinjenja formule (A), (B) i (C), supra, mogu se primenjivati kao jedini farmaceutski agens ili u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutskih agenasa tamo gde kombinacija ne izaziva neprihvatljive štetne efekte. Ova kombinovana terapija obuhvata davanje jedinstvene farmaceutske dozne formulacije koja sadrži jedinjenje formule (A), (B) ili (C) i jedan ili više dodatnih terapeutskih agenasa, kao i davanje jedinjenja formule (A), ( B) ili (C) i svakog dodatnog terapeutskog agensa u svojoj odvojenoj farmaceutskoj doznoj formulaciji. Na primer, jedinjenje formule (A), (B) ili (C) i terapeutski agens mogu se davati pacijentu zajedno u jednom oralnom doznom sastavu kao što je tableta ili kapsula, ili se svako sredstvo može davati u odvojenim doznim formulacijama.

[0044] Kada se koriste odvojene dozne formulacije, jedinjenje formule (A), (B) ili (C) i jedan ili više dodatnih terapeutskih agenasa može se primenjivati u suštini istovremeno ili u odvojenim vremenskim periodima (npr. sekvencijalno).

[0045] U drugom aspektu, obelodanjenje daje farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje opšte formule (A), (B) ili (C) ili njegov stereoizomer, tautomer, N-oksid, hidrat, solvat ili so, naročito njegovu farmaceutski prihvatljiva so ili njihovu smešu, i farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač.

Poželjno, farmaceutska kombinacija sadrži:

• jedno ili više jedinjenja opšte formule (A), (B) ili (C) ili njegov stereoizomer, tautomer, N-oksid, hidrat, solvat ili so, naročito njegovu farmaceutski prihvatljiva so ili njihovu smešu; i

• jedan ili više agens izabran iz grupe koju čine: taksan, kao što su Docetaksel, Paclitakel ili Taksol; epotilon, kao što su Iksabepilon, Patupilon ili Sagopilon;

Mitoksantron; Predinislol; Deksametazon; Estramustin; Vinblastin; Vincristin;

Dokorubicin; Adriamicin; Idarubicin; Daunorubicin; Bleomicin; Etoposid;

Ciklofosfamid; Ifosfamid; Prokarbazin; Melfalan; 5-fluorouracil; Kapekitabin;

Fludarabin; Citarabin; 2-hloro-2'-deoksiadenozin; Tioguanin; anti-androgen, kao što su Flutamid, Kiproteron acetat ili Bikalutamid; Bortezomib; derivat platine, kao što su Cisplatin ili Karboplatin; Hlorambucil; Metotreksat; i Rituksimab.

[0046] U još jednom aspektu, obelodanjenje daje postupak za pripremu farmaceutski sastavi. Postupak uključuje korak kombinovanja najmanje jednog jedinjenja formule (A), (B) ili (C) kao što je prethodno definisano sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim nosačem, i dovođenje dobijene kombinacije u odgovarajući oblik primene.

[0047] U još jednom aspektu, obelodanjenje pruža upotrebu jedinjenja formule (A), (B) ili (C) kao što je prethodno definisano za proizvodnju farmaceutski sastavi za lečenje ili prevenciju poremećaja ćelijske proliferacije. U određenim aspektima, poremećaj ćelijske proliferacije je kancer.

[0048] Aktivna komponenta formule (A), (B) ili (C) može delovati sistemski i/ili lokalno. Za ovu svrhu se može primeniti na odgovarajući način, na primer oralno, parenteralno, pulmonalno, nasalno, sublingvalno, lingalno, bukalno, rektalno, transdermalno, konjuktivno, otično, ili kao implant ili stent.

[0049] Kada se jedinjenja predmetnog pronalaska primenjuju na ljude i životinje kao farmaceutici, mogu se davati per se ili kao farmaceutski sastav koji sadrži, na primer, 0,1 do 99,5% (poželjnije, od 0,5 do 90%) aktivnog sastojka u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačem.

Bez obzira na odabran način administracije, jedinjenja iz predmetnog pronalaska, koja se mogu koristiti u pogodnom hidratiranom obliku i/ili farmaceutski sastavi iz predmetnog pronalaska, se formulišu u farmaceutski prihvatljive dozne oblike konvencionalnim postupcima poznatim stručnjacima u oblasti.

[0050] Stvarni nivoi doze i vremenski tok primene aktivnih sastojaka u farmaceutskim sastavima iz predmetnog pronalaska može varirati tako da se dobije količina aktivnog sastojka koja je efikasan da postigne željeni terapeutski odgovor za određenog pacijenta, sastav, i način primene, bez toksičnosti za pacijenta.

[0051] U skladu sa drugim aspektom, predmetni pronalazak obuhvata postupke pripreme jedinjenja (B) predmetnog pronalaska, kako je definisano u priloženim patentnim zahtevima. U skladu sa prvim otelotvorenjem, predmetno obelodanjenje takođe se odnosi na postupak pripreme jedinjenja formule (A), (B) ili (C), supra, gde navedeni postupak obuhvata korak omogućavanja međuproizvod jedinjenja opšte formule (A1), (B1) ili (C1):

gde Z' predstavlja grupu izabranu od: -C(=O)OH i -C(=O)O-(C1-C6-alkil); da reaguje sa jedinjenjem formule Ib :

tako dajući, nakon opcionog uklanjanja zaštite, jedinjenje formule (A), (B) ili (C).

[0052] U skladu sa drugim otelotvorenjem, predmetno obelodanjenje takođe se odnosi na postupak pripreme jedinjenja formule (A), (B) ili (C), supra, gde navedeni postupak obuhvata korak omogućavanja međuproizvod jedinjenja formule (A2), (B2) ili (C2):

gde je Q<2>odlazeća grupa, poželjno Q<2>je atom halogena;

da reaguje sa jedinjenjem opšte formule IIa :

gde je Y supstituent koji je premešten u reakciji uparivanja, kao što je grupa boronske kiseline, ili ester grupe boronske kiseline, na primer;

tako dajući, nakon opcionog uklanjanja zaštite, jedinjenje formule (A), (B) ili (C).

[0053] U skladu sa drugim otelotvorenjem, predmetno obelodanjenje takođe se odnosi na postupak pripreme jedinjenja formule (A), (B) ili (C), supra, gde navedeni postupak obuhvata korak omogućavanja međuproizvod jedinjenja formule (A3), (B3) ili (C3):

gde je Q<1>odlazeća grupa, na primer atom halogena;

da reaguje sa jedinjenjem opšte formule (A4), (B4) ili (C4):

tako dajući, nakon opcionog uklanjanja zaštite, jedinjenje opšte formule (A), (B) ili (C):

[0054] U skladu sa drugim otelotvorenjem, predmetno obelodanjenje takođe se odnosi na postupak pripreme jedinjenja formule (A), (B) ili (C), supra, gde navedeni postupak obuhvata korak omogućavanja međuproizvod jedinjenja formule (A5), (B5) ili (C5):

gde je Q<3>opciono zaštićena NH2-grupa;

da reaguje sa jedinjenjem opšte formule (A6), (B6) ili (C6) :

tako dajući, nakon redukcije imina, i nakon opcionog uklanjanja zaštite, jedinjenje formule (A), (B) il

[0055] U skladu sa drugim otelotvorenjem, predmetno obelodanjenje odnosi se na postupak pripreme jedinjenja formule (A), (B) ili (C), gde navedeni postupak obuhvata korak omogućavanja međuproizvod jedinjenja formule (A7), (B7) ili (C7):

gde je R<3>' odlazeća grupa ;

da reaguje sa jedinjenjem formule (A8), (B8) ili (C8):

gde je Y supstituent koji je premešten u reakciji uparivanja, kao što je atom vodonika, ili grupa boronske kiseline, ili grupa boronskog estra, na primer;

tako dajući jedinjenje formule (A), (B) ili (C):

[0056] U skladu sa daljim aspektom, predmetno obelodanjenje obuhvata međuproizvod jedinjenja koja su korisna u pripremi jedinjenja predmetnog pronalaska formule (A), (B) ili (C), posebno u postupku opisanom u nastavku.

[0057] Posebno, predmetno obelodanjenje obuhvata međuproizvod jedinjenja formule (A1), (B1) i (C1):

gde Z' predstavlja grupu izabranu od: -C(=O)OH i -C(=O)O-(C1-C6-alkil).

[0058] U skladu sa još jednim aspektom, predmetno obelodanjenje obuhvata međuproizvod jedinjenja formule (A2), (B2) ili (C2):

gde je Q<2>odlazeća grupa, poželjno Q<2>je atom halogena.

[0059] U skladu sa daljim aspektom, predmetno obelodanjenje obuhvata međuproizvod jedinjenja formule (A3), (B3) ili (C3):

gde je Q<1>odlazeća grupa, na primer atom halogena.

[0060] U skladu sa daljim aspektom, predmetno obelodanjenje obuhvata međuproizvod jedinjenja formule (A5), (B5) ili (C5):

gde je Q<3>opciono zaštićena NH2-grupa.

[0061] U skladu sa daljim aspektom, predmetno obelodanjenje obuhvata međuproizvod jedinjenja opšte formule (A7), (B7) ili (C7):

gde R<3>' odlazeća grupa.

[0062] U skladu sa daljim aspektom, predmetno obelodanjenje se odnosi na primenu jedinjenja formule (A1), (A2), (A3), (A4), (A5), (A6), (A7) ili (A8), supra, za pripremu jedinjenja formule (A), supra.

[0063] U skladu sa daljim aspektom, predmetno obelodanjenje se odnosi na primenu jedinjenja formule (B1), (B2), (B3), (B4), (B5), (B6), (B7) ili (B8), supra, za pripremu jedinjenja formule (B), supra.

[0064] U skladu sa daljim aspektom, predmetno obelodanjenje se odnosi na primenu jedinjenja formule (C1), (C2), (C3), (C4), (C5), (C6), (C7) ili (C8), supra, za pripremu jedinjenja formule (C), supra.

EKSPERIMENTALNI DEO

Uopšteno

[0065] Naredna tabla je spisak skraćenica koji se koriste u narednom paragrafu, i u delu sa Primerima.

Sinteza jedinjenja (B) predmetnog pronalaska i jedinjenja obelodanjenja

[0066] Jedinjenja formule (A), (B) ili (C) mogu da se sintetišu kako je prikazano na Šemi, gde A predstavlja

[0067]

R<3>predstavlja

R<3>' predstavlja odlazeću grupu;

R<5>predstavlja

Q<1>predstavlja odlazeću grupu ili opciono zaštićenu NH2-grupu; i

Q<2>predstavlja odlazeću grupu;

gde * označava mesto vezivanja navedenih grupa sa ostatkom molekula.

[0068] Primeri tipičnih odlazećih grupa uključuju ali nisu ograničeni na atome halogena poput atoma hlorina, bromina ili jodina, ili grupa selected from: metanesulfoniloksi, ptoluenesulfoniloksi, trifluorometanesulfoniloksi, nonafluorobutanesulfoniloksi, (4-bromobenzene)sulfoniloksi, (4-nitro-benzene)sulfoniloksi, (2-nitro-benzene)-sulfoniloksi, (4-izopropil-benzene)sulfoniloksi, (2,4,6-tri-izopropil-benzene)-sulfoniloksi, (2,4,6-trimetilbenzene)sulfoniloksi, (4-tertbutil-benzene)sulfoniloksi, benzenesulfoniloksi, i (4-metoksibenzene)sulfoniloksi.

[0069] Šema prikazuje puteve koji omogućavaju varijacije za R<3>, R<3'>, R<5>, Q<1>, Q<2>i A tokom sinteze. Funkcionalni delovi u R<3>, R<3>', R<5>, Q<1>, Q<2>i A mogu da se konvertuju u svakoj odgovarajućoj fazi sinteze.

[0070] Jedinjenja formule X mogu biti komercijalno dostupna ili mogu da se sintetišu prema postupcima poznatim stručnjacima u oblasti, na primer primenjujući procedure opisane u WO2007/38314A2.

[0071] Odlazeća grupa Q<2>može da se uvede u jedinjenja opšte formule X, VI ili III putem procedura poznatih stručnjacima u oblasti kako bi se dobila jedinjenja opšte formule IX, V ili II. Kao primer, halogeni mogu da se uvedu koristeći reagense halogenacije poput N-jodosukcinimid (NIS), N-bromosukcinimid (NBS), ili N-hlorosukcinimid (NCS), u intertni rastvarač poput N,N-dimetilformamida ili 1-metilpirolidin-2-ona, na primer, na temperaturama u rasponu od sobne temperature do tačke ključanja rastvarača, na primer.

[0072] Jedinjenja opšte formule I, IV ili VIII se mogu dobiti od jedinjenja opšte formule II, V ili IX putem reakcije spajanja između reagensa formule Y-A, u kojoj je A definisan supra i Y predstavlja pogodnu funkcionalnu grupu pomoću koja grupa A može da se prenese na K grupu koja sadrži atom ugljenika jedinjenja formule II, V ili IX. Primeri pogodnih funkcionalnih grupa za Y u A-Y uključuju borne kiseline A-B(OH)2ili estri bornih kiselina A-B(OC1-C6-alkil)2. Reakcije spajanja se izvode u prisustvu odgovarajućih katalizatora, kao što su na primer katalizatori na bazi paladijuma, na primer, paladijum (II) acetat, tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (0), bis(trifenilfosfin)-paladijum (II) hlorid ili (1,1,-bis (difenilfosfino)ferocen)-dihloropaladijum (II) i opciono pogodnih aditiva kao što su, na primer, fosfini poput, na primer, P(oTol)3ili trifenilfosfina i opciono sa pogodnom bazom kao što su, na primer, kalijum karbonat, natrijum 2-metilpropan-2-olat, tetrabutilamonijum fluorid ili tribazni kalijum fosfat u pogodnom rastvaraču, kao što je, na primer, tetrahidrofuran.

Primeri takvih reakcija vezivanja mogu se naći u udžbeniku pod nazivom „Metal-Catalyzed Cross-Coupling Reactions“. Armin de Meijere (Editor), Francois Diederich (Editor) September 2004, Wiley Interscience ISBN: 978-3-527-30518-6.

[0073] Jedinjenja opšte formule I, II, III ili VII mogu da se dobiju od jedinjenja opšte formule IV, V, VI ili VIII putem reakcije spajanja koristeći reagens formule Y-R<3>gde je R<3>definisan supra i predstavlja odgovarajuću funkcionalnu grupu kojom grupa R<3>može da se premesti do R<3'>koji nosi atom ugljenika jedinjenja formule IV, V, VI ili VIII. Primeri odgovarajućih funkcionalnih grupa i za primenu u reakcijama spajanja su dati supra za pripremu jedinjenja opšte formule I, IV ili VIII od jedinjenja opšte formule II, V ili IX.

[0074] Y u Y-R<3>može da predstavlja kiseli vodonik koji može da se ukloni odgovarajućim bazama, na primer natrijum hidridom, u odgovarajućem rastvaraču, kao što je DMSO ili tetrahidrofuran na temperaturama u rasponu od rt do tačke ključanja. Rezultujući nucleofilu, fenolati, mogu da se koriste da zamene R<3'>u jedinjenjima opšte formule IV, V, VI ili VIII kako bi dodali fenol etere kako bi se dobila jedinjenja opšte formule I, II, III ili VII.

[0075] Jedinjenja opšte formule I, II, III ili VII koja sadrže fenoletere takođe mogu da se dobiju Ulman-tipom reakcija spajanja u prisustvu odgovarajućih katalizatora, kao što su, na primer, katalizatori na bazi bakra poput bakar(II)diacetata u prisustvu odgovarajuće baze, poput na primer, cezijum karbonata počevši od jedinjenja opšte formule IV, V, VI ili VIII gde R<3'>predstavlja odlazeću grupu kao što je, na primer, atom jodina, bromina ili hlorina. Opciono, odgovarajući ligandi poput N,N-dimetilglicina ili fenil hidrogen pirolidin-2-ilfosfonata mogu se dodati.

[0076] U slučaju da Q<1>predstavlja odlazeću grupu, uvođenje R<5>-CH2-grupe može se postići nukleofilnom supstitucijom Q<1>u jedinjenju formule VII, VIII, IX ili X tj. reakcijom sa odgovarajućim aminima R<5>-CH2-NH2u prisustvu odgovarajuće baze, kao što je, na primer DIPEA u odgovarajućem rastvaraču kao što je N,N-dimetilformamid ili 1-metilpirolidin-2-on, na temperaturama u rasponu od sobne temperature do tačke ključanja rastvarača kako bi se dobili amini opšte formule I, IV, V ili VI.

[0077] U slučaju da Q<1>predstavlja odlazeću grupu, uvođenje R<5>-CH2-grupe takođe se može postići u reakciji spajanja gde je Q<1>u jedinjenja formule VII, VIII, IX ili X reagovan sa odgovarajućim aminima R<5>-CH2-NH2opciono u prisustvu odgovarajućeg katalizatora, kao što je Pd2dba3i BINAP na primer, i opciono sa odgovarajućom bazom, kao što je, na primer, natrijum tert-butilat u odgovarajućem rastvaraču, kao što je, na primer, N,N-dimetilformamid ili 1-metilpirolidin-2-on kako bi se dobili amini opšte formule I, IV, V ili VI.

[0078] U slučaju da Q<1>predstavlja opciono zaštićenu NH2-grupu uvođenje R<5>-CH2-grupe, nakon uklanjanja zaštite NH2-grupa, može se postići reduktivnom reakcijom aminacije koristeći aldehid formule O=CHR<5>, odgovarajući redukujući agens, na primer natrijum tris(acetato-kapaO)(hidrido)borat ili natrijum cijanoborohidrid u odgovarajućem rastvaraču poput, na primer, sirćetne kiseline na temperaturama reakcije u rasponu od sobne temperature do tačke ključanja rastvarača.

[0079] Ostaci u jedinjenjima formule I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX ili X mogu se opciono modifikovati. Na primer, tioetri se mogu oksidovati pomoću oksidacionih reagensa kao što su 3-hlorobenzenkarboperoksična kiselina, okson ili dimetildiokiran u inertnim rastvaračima, kao što su dihlorometan ili aceton. U zavisnosti od stehiometrijskog odnosa oksidacionog reagensa na prethodno pomenutim jedinjenja dobijaće se sulfoksidi ili sulfoni ili njihove smeše.

Jedinjenja i međuproizvodi proizvedeni prema postupcima pronalaska i obelodanjenja, respektivno, mogu zahtevati pročišćavanje. pročišćavanje organskih jedinjenja je dobro poznato stručnjaku i može se naći nekoliko načina pročišćavanja istog jedinjenja. U nekim slučajevima, ne mora biti neophodno pročišćavanje. U nekim slučajevima, jedinjenja mogu biti pročišćena kristalizacijom. U nekim slučajevima nečistoće mogu biti uklonjene mešanjem pomoću odgovarajućeg rastvarača. U nekim slučajevima, jedinjenja se mogu pročišćavati hromatografijom, posebno fleš hromatografijom, koristeći, na primer, prethodno zapakovane patrone silika gela, npr. od Separtisa kao što su Isolute<®>Flash silika gel ili Isolute<®>Flash NH2 silika gel u kombinaciji sa odgovarajućim hromatografskim sistemom kao što je Flashmaster II (Separtis) ili Isolera system (Biotage) i eluenti kao što su, na primer, gradijenti heksana/EtOAc ili DCM/metanol. U nekim slučajevima, jedinjenja se mogu pročišćavati preparativnim HPLC-om koristeći, na primer, autopročišćavač Waters opremljen detektorom diode i/ili on-line masenim spektrometrom elektrosprej jonizacije u kombinaciji sa odgovarajućom prethodno upakovanom kolonom reverzne faze i eluentima kao što su, na primer, gradijenti vode i acetonitrila koji mogu sadržati aditive kao što su trifluorosirćetna kiselina, mravlja kiselina ili vodeni amonijak.

[0080] Primeri i primeri međuproizvoda na sledećim stranama koji nisu obuhvaćene patentnim zahtevima treba shvatiti kao referentne primere.

Primer 1

N-ciklopropil-4-{6-(3-fluoro-4-metoksifenoksi)-8-[(oksetan-3-ilmetil)amino]imidazo[1,2-b]piridazin-3-il}-2-metilbenzamid

[0081]

[0082] Rastvor 128 mg (900 µmol) 3-fluoro-4-metoksifenol u 2 mL dimetilsulfoksida tretiran je sa 36 mg (900 µmol) natrijum hidrida i mešan na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Zatim 68 mg (150 µmol) 4-{6-bromo-8-[(oksetan-3-ilmetil)amino]imidazo[1,2-b]piridazin-3-il}-N-ciklopropil-2-metilbenzamida, koji je pripremljen prema međuproizvod primeru 1a, je dodato i smeša je zagrejana tokom 1 sata na 130°C i preko noći na 120°C kako bi se dobilo nakon HPLC pročišćavanja 17 mg (20%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (DMSO-d6): δ= 0,43-0,50 (2H), 0,59-0,68 (2H), 2,11 (3H), 2,77 (1H), 3,35 (1H), 3,61 (2H), 3,83 (3H), 4,34 (2H), 4,63 (2H), 6,09 (1H), 7,02-7,09 (1H), 7,13-7,25 (2H), 7,30 (1H), 7,61-7,68 (1H), 7,77 (1H), 7,83 (1H), 7,91 (1H), 8,22 (1H)ppm.

Međuproizvod Primer 1a

4-{6-bromo-8-[(oksetan-3-ilmetil)amino]imidazo[1,2-b]piridazin-3-il}-N-ciklopropil-2-metilbenzamid

[0083]

[0084] Suspenziji 3000 mg (6677 µmol) 4-[6-bromo-8-(metilsulfonil)imidazo[1,2-b]piridazin-3-il]-N-ciklopropil-2-metilbenzamida, koji je pripremljen prema međuproizvod primeru 1b u 150 mL tF dodati su 873 mg (1002 µmol) 1-(oksetan-3-il)metanamina i 2589 mg (2003 µmol) DIPEA i smeša je zagrejana tokom 72 sata na 60°C. Nakon daljeg dodavanja 100 mg 1-(oksetan-3-il)metanamina i zagrevanja tokom 8 sati na 60°C, rastvarač je uklonjen u vakuumu i ostatak je uzet u etil acetatu i opran sa vodom. Formiran talog je filtriran kako bi se dobilo 0,99 g (33%) jedinjenja iz naslova. Preostala vodena faza je ponovo ekstrakovana sa DCM, i kombinovane organske faze su isparene. Ostatak je zdrobljen sa tF na 75°C kako bi se dobilo još 1,65 g (53%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (DMSO-d6): δ= 0,46-0,53 (2H), 0,61-0,69 (2H), 2,35 (3H), 2,75-2,85 (1H), 3,25 (1H), 3,54-3,69 (2H), 4,31 (2H), 4,62 (2H), 6,45 (1H), 7,36 (1H), 7,84 (1H), 7,90 (1H), 7,94 (1H), 8,12 (1H), 8,30 (1H) ppm.

Međuproizvod Primer 1b

4-[6-bromo-8-(metilsulfonil)imidazo[1,2-b]piridazin-3-il]-N-ciklopropil-2-metilbenzamid

[0085]

[0086] Rastvoru 12,5 g (28,75 mmol) 4-[6-bromo-8-(metilsulfanil)imidazo[1,2-b]piridazin-3-il]-N-ciklopropil-2-metilbenzamida, koji je pripremljen prema međuproizvod primeru 1c u 400 mL DMF dodati su 53,03 g (86,26 mmol) kalijum vodonik sulfat (hidroperoksisulfonil)oksidanid (5:1:1:2) i smeša je mešana preko noći na rt kako bi se dobilo, nakon vodene obrade, 8,6 g (60%) jedinjenja iz naslova (nečistoća je 4-[6-bromo-8-(metilsulfinil)imidazo[1,2-b]piridazin-3-il]-N-ciklopropil-2-metilbenzamid)UPLC-MS: RT = 0,98 min; m/z (ES+) 450,3 [MH+]; potrebno MW = 449,3.

Međuproizvod Primer 1c

4-[6-bromo-8-(metilsulfanil)imidazo[1,2-b]piridazin-3-il]-N-ciklopropil-2-metilbenzamid

[0087]

[0088] Smeša koja sadrži 55,69 g (150 mmol) 6-bromo-3-jodo-8-(metilsulfanil)imidazo[1,2-b]piridazina koji je pripremljen prema međuproizvod primeru 1d, 68 g (225 mmol) N-ciklopropil-2-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzamida, koji je pripremljen prema međuproizvod primeru 1 g, 11 g (15 mmol) (1,1,-bis(difenilfosfino)ferocen)-dihloropaladijum (II), 450 mL vodenog 1M kalijum karbonat rastvora i 632 mL tetrahidrofurana je mešana na 60°C tokom 12 sata kako bi se dobilo, nakon vodene obrade, 130 g sirovog proizvoda. Ostatak je zdrobljen sa DCM kako bi se dobilo 15,15 g (24%) jedinjenja iz naslova. Filtrat je pročišćen hromatografijom kako bi se dobilo još 2,65g (3%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (DMSO-d6): δ= 0,47-0,54 (2H), 0,62-0,71 (2H), 2,36 (3H), 2,63 (3H), 2,77-2,85 (1H), 7,17 (1H), 7,40 (1H), 7,85 (1H), 7,90 (1H), 8,12 (1H), 8,31 (1H) ppm.

Međuproizvod Primer 1d

6-bromo-3-jodo-8-(metilsulfanil)imidazo[1,2-b]piridazin

[0089]

[0090] Rastvoru 174 g (432 mmol) 6,8-dibromo-3-jodoimidazo[1,2-b]piridazin koji je pripremljen prema međuproizvod primeru 1e u 3,8 L dioksana dodati su 30,28 g (432 mmol) natrijum metanetiolat i smeša je mešana na 60°C tokom 5 dana. Daljih 25 g natrijum metanetiolata je dodato i smeša je mešana na 80°C tokom 2 sata. Nakon hlađenja, rastvor je sipan u 4 L vode i vodena faza je ekstrakovana sa etil acetatom. Organska faza je oprana sa vodom, osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i isparena kako bi se dobilo 102 g (64%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (DMSO-d6): δ= 6,79 (1H), 7,67 (1H)ppm.

Međuproizvod Primer 1e

6,8-dibromo-3-jodoimidazo[1,2-b]piridazin

[0091]

[0092] Smeši koja sadrži 156 g (563 mmol) 6,8-dibromoimidazo[1,2-b]piridazina koji je pripremljen prema međuproizvod primeru 1f, 190 g (1637 mmol) N-jodosukcinimida i 1,3 L hloroforma dodati su 5,5 mL HCl koncentraciji i suspenzija je zagrejana na 70°C preko noći. Talog je filtriran i zdrobljen sa diizopropileterom kako bi se dobilo 119 g (52%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (DMSO-d6): δ= 7,92 (1H), 8,00 (1H) ppm.

Međuproizvod Primer 1f

6,8-dibromoimidazo[1,2-b]piridazin

[0093]

[0094] Smeša koja sadrži 235 g (931 mmol) 4,6-dibromopiridazin-3-amina koji je pripremljen prema međuproizvod primeru 1 g, 421 mL (2792 mmol) 2-bromo-1,1-dietoksietana, 2,93 L vode i 227 mL tF je zagrejana na 125°C tokom 4 sata i na rt preko noći. Rastvor je neutralizovan dodavanjem čvrstog NaHCO3, talog je filtriran, opran sa vodom i osušen kako bi se dobilo 156 g (80%) jedinjenja iz naslova kao braonkasta čvrsta materija.

<1>H-NMR (DMSO-d6): δ= 7,81 (1H), 8,40 (1H) ppm.

Međuproizvod Primer 1g

6,8-dibromoimidazo[1,2-b]piridazin

[0095]

[0096] Smeši koja sadrži 285 g (1638 mmol) 6-bromopiridazin-3-amina koji je pripremljen prema međuproizvod primeru 1h, 275 g (3276 mmol) NaHCO3i 2815 mL MeOH je kapanjem dodato 85 mL (1638 mmol) bromina na rt i mešana je na rt preko noći. Nakon daljeg dodavanja 34 mL (655 mmol) bromina i 55 g (655 mmol) NaHCO3, smeša je mešana preko noći ponovo. Rastvarač je redukovan do oko 1000 mL i smeša je sipana u 5 L vode. Talog je filtriran, opran sa vodom i osušen kako bi se dobilo 411 g (99%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (CDCl3): δ= 6,14 (1H), 9,92 (2H) ppm.

Međuproizvod Primer 1h

6-bromopiridazin-3-amin

[0097]

[0098] Rastvor 250 g (1,05 mol) 3,6-dibromopiridazin u 1,2 L 25% vodenog amonijaka je zagrejan do 100°C na 11,7 bar preko noći u autoklavu. Nakon hlađenja, talog je filtriran, opran sa vodom i osušen kako bi se dobilo 137 g (75%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (DMSO-d6): δ= 6,58 (1H), 6,69 (2H), 7,41 (1H) ppm.

Međuproizvod Primer 1i

N-ciklopropil-2-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzamid [0099]

[0100] Rastvoru 260g (1,02 mol) 4-bromo-N-ciklopropil-2-metilbenzamida koji je pripremljen prema međuproizvod primeru 1j u 2L dioksana na 23°C dodati su 390g bis-(pinacolato)-diborona, 19,5g 2-dicikloheksilfosfino-2',4',6'-triizopropilbifenila, 150g kalijum acetata i 9,37 g tris-(dibenzilidenaceton)-dipaladijuma(0) i smeša je refulksovana tokom 6 sati. Nakon hlađenja do 23°C, voda i etil acetat su dodati i smeša je mešana tokom 15 min. Organska faza je oprana sa vodom, osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i isparena. Ostatak je pročišćen hromatografijom kako bi se dobilo 308g (56%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 0,59 (2H), 0,85 (2H), 1,33 (6H), 2,41 (3H), 2,87 (1H), 5,94 (1H), 7,28 (1H), 7,60 (1H), 7,63 (1H) ppm.

Međuproizvod Primer 1j

4-Bromo-N-ciklopropil-2-metilbenzamid

[0101]

[0102] Mešanom rastvoru 300g (1,4 mol) 4-bromo-2-metilbenzojeve kiseline u 8,4L dihlorometana na 23°C dodati su 79,6g ciklopropanamin i 320,9g EDC. Nakon mešanja preko noći, rastvor je opran sa vodom i vodena faza je ekstrakovana sa dihlorometanom. Kombinovane organske faze su osušene preko natrijum sulfata, filtrirane i isparene. Preostala čvrsta materija je zdrobljena sa diizopropil eterom, filtrirana, oprana i osušena u vakuumu kako bi se dobilo 260g (73%) jedinjenja iz naslova.

Primer 2

N-ciklopropil-4-{6-(2,3-difluoro-4-metoksifenoksi)-8-[(3,3,3-trifluoropropil)amino]imidazo[1,2-b]piridazin-3-il}-2-metilbenzamid

[0103]

[0104] Rastvor 31,9 g (199 mmol) 2,3-difluoro-4-metoksifenola u 450 mL dimetilsulfoksida tretiran je sa 7,96 g (199 mmol) natrijum hidrida i mešan na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Zatim 16 g (33,2 mmol) 4-{6-bromo-8-[(3,3,3-trifluoropropil)amino]imidazo[1,2-b]piridazin-3-il}-N-ciklopropil-2-metilbenzamida, koji je pripremljen prema međuproizvod primeru 2a, je dodato i smeša je zagrejana preko noći na 130°C. Nakon hlađenja, 300 mL etil acetata je dodato i organska faza je oprana sa vodom. Nakon isparavanja organske faze, ostatak je zdrobljen sa 200 mL EtOH kako bi se dobilo 12,05 g (65%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (DMSO-d6): δ= 0,47-0,53 (2H), 0,62-0,70 (2H), 2,11 (3H), 2,72 (2H), 2,80 (1H), 3,64 (2H), 3,92 (3H), 6,22 (1H), 7,12 (1H), 7,18 (1H), 7,27 (1H), 7,63 (1H), 7,72 (1H), 7,75-7,81 (1H), 7,97 (1H), 8,24 (1H) ppm.

Međuproizvod Primer 2a

4-{6-Bromo-8-[(3,3,3-trifluoropropil)amino]imidazo[1,2-b]piridazin-3-il}-N-ciklopropil-2-metilbenzamid

[0105]

[0106] Smeša koja sadrži 127 g (292 mmol) 6-bromo-3-jodo-N-(3,3,3-trifluoropropil)imidazo[1,2-b]piridazin-8-amina koji je pripremljen prema međuproizvod primeru 2b, 95,93 g (438 mmol) [4-(ciklopropilkarbamoil)-3-metilfenil]boronske kiseline koja je pripremljena prema međuproizvod primeru 2c, 23,8 g (29 mmol) (1,1,-bis(difenilfosfino)ferocen)-dihloropaladijuma (II), 438 mL vodenog 1M kalijum karbonat rastvora i 973 mL tetrahidrofurana je mešan na 80°C tokom 8 sati i daljih 6 dana na 60°C. Etil acetat je dodat razdvojenoj organskoj fazi i smeša je oprana sa vodom. Nakon filtriranja preko ALLOX, organska faza je isparena i ostatak je zdrobljen sa 200 mL EtOH kako bi se dobilo 71,2 g (51%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (DMSO-d6): δ= 0,48-0,58 (2H), 0,63-0,73 (2H), 2,38 (3H), 2,68 (2H), 2,83 (1H), 3,61 (2H), 6,49 (1H), 7,40 (1H), 7,87 (1H), 7,93 (1H), 7,96-8,04 (2H), 8,32 (1H) ppm.

Međuproizvod Primer 2b

6-Bromo-3-jodo-N-(3,3,3-trifluoropropil)imidazo[1,2-b]piridazin-8-amin

[0107]

[0108] Rastvoru 119 g 295 mmol) 6,8-dibromo-3-jodoimidazo[1,2-b]piridazin koji je pripremljen prema međuproizvod primeru 1e u 800 mL tF dodati su 66,8 g (590,8 mmol) 3,3,3-trifluoropropan-1-amin i smeša je mešana na 80°c tokom 2 sata i na 50°C preko noći. Rastvor je isparen, 600 mL etil acetata je dodati i smeša je oprana sa vodom. Organska faza je osušena i isparena kako bi se dobilo 127 g (99%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (DMSO-d6): δ= 2,63 (2H), 3,55 (2H), 6,43 (1H), 7,59 (1H), 7,89-7,98 (1H) ppm.

Međuproizvod Primer 2c

[4-(ciklopropilkarbamoil)-3-metilfenil]boronska kiselina

[0109]

[0110] Rastvoru N-ciklopropil-2-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)benzamida (20,2 g, 67,13 mol) koji je pripremljen prema međuproizvod primeru 1i u acetonu (300 mL) na rt su dodati natrijum perjodat (43,1 g, 201,40 mol) i amonijum acetat (134,26 mol, 134 mL 1M vodeni rastvor) i smeša je mešana tokom 3 sata. Više vode je dodato (120 mL), i smeša je mešana na 40°C tokom još 2 sata. Nakon dodavanja 4 N HCl (32 mL), organska faza je uklonjena u vakuumu i ostatak je ekstrakovan sa etil actatom.

Organska faza je oprana sa zasićenim rastvorom natrijum hlorida, filtrirana kroz Whatman filter i isparena. Ostatak je ponovo rastvoren u toluenu i isparen (dva puta) kako bi se dobilo 14,59 g (94,3 %) [4-(ciklopropilkarbamoil)-3-metilfenil]boronske kiseline:<1>H-NMR (300 MHz, d6-DMSO): δ =8,21 (1H), 8,04 (2H), 7,56 (2H), 7,17 (1H), 2,77 (1H), 2,25 (3H), 0,62 (2H), 0,47 (2H) ppm.

Primer 3

N-ciklopropil-4-[6-(2,3-difluoro-4-metoksifenoksi)-8-[(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)amino]imidazo[1,2-b]piridazin-3-il}-2-metilbenzamid

[0111]

[0112] Rastvoru 52 mg (0,1 mmol) N-ciklopropil-4-[6-(2,3-difluoro-4-metoksifenoksi)-8-(metilsulfonil)imidazo[1,2-b]piridazin-3-il]-2-metilbenzamida koji je pripremljen prema međuproizvod primeru 3a u NMP (2 mL) na rt dodati su 1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)metanamin (35 mg, 0,3 mmol) i DIPEA (0,3 mmol, 51 µL) i smeša je mešana na 110°C tokom 72 sata kako bi se dobilo nakon HPLC pročišćavanja 26,9 mg (47%) jedinjenja iz naslova

<1>H-NMR (DMSO-d6): δ= 0,43-0,50 (2H), 0,58-0,69 (2H), 1,22 (2H), 1,62 (2H), 1,86-2,02 (1H), 2,04-2,11 (3H), 2,77 (1H), 3,19-3,30 (4H), 3,82 (2H), 3,89 (3H), 6,16 (1H), 7,03-7,13 (1H), 7,15 (1H), 7,20-7,30 (1H), 7,57-7,63 (1H), 7,69 (1H), 7,80 (1H), 7,93 (1H), 8,24 (1H) ppm.

Međuproizvod Primer 3a

N-ciklopropil-4-[6-(2,3-difluoro-4-metoksifenoksi)-8-(metilsulfonil)imidazo[1,2-b]piridazin-3-il]-2-metilbenzamid

[0113]

[0114] 986 mg (1986 µmol) N-ciklopropil-4-[6-(2,3-difluoro-4-metoksifenoksi)-8-(metilsulfanil)imidazo[1,2-b]piridazin-3-il]-2-metilbenzamida koji je pripremljen prema međuproizvod primeru 3b je transformisano u analog međuproizvod primera 1b kako bi se dobilo nakon obrade 1040 mg (99%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (DMSO-d6): δ= 0,44-0,51 (2H), 0,61-0,69 (2H), 2,11 (3H), 2,73-2,84 (1H), 3,66 (3H), 3,91 (3H), 7,13-7,21 (1H), 7,23 (1H), 7,33-7,42 (1H), 7,64-7,70 (3H), 8,30 (1H), 8,40 (1H) ppm.

Međuproizvod Primer 3b

N-ciklopropil-4-[6-(2,3-difluoro-4-metoksifenoksi)-8-(metilsulfanil)imidazo[1,2-b]piridazin-3-il]-2-metilbenzamid

[0115]

[0116] 3,1 g (7428 µmol) 4-[6-bromo-8-(metilsulfanil)imidazo[1,2-b]piridazin-3-il]-N-ciklopropil-2-metilbenzamida koji je pripremljen prema međuproizvod primeru 1b je transformisano u analog primera 2 koristeći 2,3-difluoro-4-metoksifenol kako bi se dobilo nakon obrade i pročišćavanja 1010 mg (27%) jedinjenja iz naslova.

<1>H-NMR (DMSO-d6): δ= 0,44-0,50 (2H), 0,59-0,70 (2H), 2,09 (3H), 2,67 (3H), 2,73-2,83 (1H), 3,90 (3H), 7,06 (1H), 7,14 (1H), 7,19 (1H), 7,31 (1H), 7,58-7,65 (1H), 7,67 (1H), 8,09 (1H), 8,26 (1H)ppm.

[0117] Set jedinjenja datih u Tabeli 1 iznenađujuće pokazuje superiorni ukupni profil u odnosu na aktivnost vezanu za Mps u funkcionalnom testu (ispitivanje kontrolne tačke vretena), antiproliferativnu aktivnost (test proliferacije sa HeLa ćelijama), metaboličku stabilnost (in vitro metabolička stabilnost kod hepatocita pacova) i potencijal interakcije lekova (inhibicija enzima jetre CYP3A4). Da bi se dalje procenio nepovratan potencijal inhibicije CYP3A4, određen je odnos particije jedinjenja, što ukazuje na to koliko obrta supstrata može učiniti enzim pre inaktivacije.

[0118] Kriterijumi za izbor su bili aktivnost u ispitivanju kontrolne tačke vretena <1,0 nM, aktivnost u testu proliferacije sa heLa ćelijama <25 nM, metabolička stabilnost in vitro kod hepatocita pacova Fmax ≥ 39% i inhibicija jetrenog enzima CYP3A4 ≥ 5 mM i odnos particije ≥ 10.

[0119] U Tabeli 1 ref. je referentno jedinjenje opisano u primeru 80 VO2012/032031A1: (N-ciklopropil-4-{6-(3-fluorofenoksi)-8-[(3,3,3-trifluoropropil)amino]imidazo[1,2-b]piridazin-3-il}-2-metilbenzamid). Jedinjenje Ref. je strukturno vrlo slično jedinjenjima predmetnog pronalaska, posebno jedinjenju formule (B). Uprkos strukturalnoj sličnosti, jedinjenja iz predmetnog pronalaska pokazuju superiorni ukupni profil. Izučavanjem VO2012/032031A1, stručnjak iz oblasti ne može da izvede superioran profil jedinjenja iz predmetnog pronalaska.

Tabela 1

Farmaceutski sastavi jedinjenja pronalaska

[0120] predmetni pronalazak se takođe odnosi na farmaceutski sastavi koje sadrže jedinjenje (B) prema predmetnom pronalasku. Ovi sastavi mogu se koristiti za postizanje željenog farmakološkog efekta primenom na pacijenta kom je to potrebno. Pacijent, za potrebe predmetnog pronalaska, je sisar, uključujući čoveka, kome je neophodno lečenje navedenog stanja ili oboljenja. Stoga, predmetni pronalazak obuhvata farmaceutski sastavi koji se sastoji od farmaceutski prihvatljivog nosača i farmaceutski efektivne količine jedinjenja, ili njegove soli, predmetnog pronalaska. Farmaceutski prihvatljiv nosač je poželjno nosač koji je relativno netoksičan i neškodljiv za pacijenta u koncentracijama u skladu sa efektivnom aktivnosti aktivnog sastojka, tako da se bilo koje nuspojava koje se mogu pripisati nosaču ne utiču negativno na korisne efekte aktivnog sastojka. Farmaceutski efikasna količina jedinjenja je poželjno ta količina koja daje rezultat ili ima uticaj na određeno stanje koje se tretira. Jedinjenja prema prikazanom pronalasku mogu biti davana sa farmaceutski prihvatljivim nosačima koji su dobro poznati u struci korišćenjem bilo efektivnih konvencionalnih oblika jedinične doze, uključujući neposredne, spore i vremenski odložene pripreme oslobađanja, oralno, parenteralno, lokalno, nazalno, oftalmički, optički, sublingvalno, rektalno, vaginalno i slično.

[0121] Za oralnu primenu, jedinjenje može biti formulisano u čvrste ili tečne preparate kao što su kapsule, pilule, tablete, pastile, lozenge, torke, praškovi, rastvori, suspenzije ili emulzije, i mogu se pripremiti prema postupcima poznatim u struci za proizvodnju farmaceutskih sastava. Čvrsti jedinični dozni oblici mogu biti kapsula koja može biti obična tvrdog ili meka-obložena želatinskog tipa koja sadrži, na primer, surfaktante, maziva i inertne punioce kao što su laktoza, saharoza, kalcijum fosfat i kukuruzni skrob.

[0122] U sledećoj varijanti, jedinjenje predmetnog pronalaska može biti tabletirano sa konvencionalnim bazama tableta kao što su laktoza, saharoza i kukuruzni skrob u kombinaciji sa vezivnim sredstvima: kao što su akacija, kukuruzni skrob ili želatin, agensima za dezintegraciju namenjenim da pomogne razbijanju i oslobađanju tablete nakon primene kao šti su krompirov skrob, alginska kiselina, kukuruzni skrob i guar guma, tragakant guma, akacija, maziva sa ciljem poboljšanja protoka granulacije tablete i za sprečavanje adhezije materijala tablete za površinu obloga tablete, na primer talk, stearinska kiselina ili magnezijum, kalcijum ili cink stearat, boje, agensi za bojenje i agensi za ukus: kao što su pepermint, ulje zimzelenih biljaka ili aroma višnje, namenjena za pojačanje estetskog kvalitete tableta i kako bi bile prihvatljivije za pacijenta. Pogodni ekscipijenti za upotrebu u oralnim tečnim doznim oblicima uključuju dikalcijum fosfat i razblaživače: kao što su voda i alkoholi, na primer etanol, benzil alkohol i polietilen alkoholi, sa ili bez dodavanja jednog farmaceutski prihvatljivog sutfakanta, agensa za suspendovanje ili emulgatora. Razni drugi materijali mogu biti prisutni kao premazi ili na drugi način modifikovati fizički oblik jedinice za doziranje. Na primer, tablete, pilule ili kapsule mogu biti obložene šalakom, šećerom ili sa oba.

Disperzivni praškovi i granule su pogodni za pripremu vodene suspenzije. Oni pružaju aktivni sastojak u smeši sa agensom za disperzovanje ili vlaženje, agensom za suspendovanje i jednim ili više konzervanasom. Primeri pogodnih agenasa za disperzovanje ili vlaženje i agenasa za suspendovanje su već pomenuti. Moguće su prisutne i dodatne pomoćne supstance, na primer, gore opisani agensi za zaslađivanje, aromu i agensi za bojenje.

farmaceutski sastavi predmetnog pronalaska mogu takođe biti u obliku ulje-u-vodi emulzija. Masna faza može biti biljno ulje kao što je tečni parafin ili mešavina biljnih ulja. Pogodni emulgatori mogu biti (1) prirodnih guma: poput gume akacije i gume tragakanta, (2) prirodni fosfatidi: poput soje i lekitin, (3) estri ili delimični estri izvedeni iz masnih kiselina i anhidrida heksitola, na primer, sorbitan monooleata, (4) proizvodi kondenzacije parcijalnih estara sa navedenim etilen oksidom, na primer, sorbitan monooleat polioksietilen. Emulzije mogu takođe sadržati agense za zaslađivanje i ukuse.

Uljane suspenzije mogu biti formulisane suspendovanjem aktivnog sastojka u biljnom ulju: kao, na primer, ulje kikirikija, maslinovo ulje, susamovo ulje ili kokosovo ulje, ili u mineralnom ulju, tečni parafin: kao takve. Uljane suspenzije mogu sadržati agens za zgušnjavanje: kao, na primer, pčelinji vosak, tvrdi parafin ili cetil alkohol. Suspenzija može sadržati jedan ili više prisutnih konzervansa, na primer, etil ili n-propil p-hidroksibenzoat; jedan ili više agens za bojenje; jednu ili više aroma; i jedan ili više zaslađivač kao što su saharoza ili saharin.

Sirupi i eliksiri mogu biti formulisani sa zaslađivačima: kao što je na primer, glicerol, propilen glikol, sorbitol ili saharoza. Takve formulacije mogu takođe sadržati melem, i konzervans, metil i propil: kao parabena i arome i boje.

[0123] Jedinjenje predmetnog pronalaska može se takođe primenjivati parenteralno, to jest, subkutano, intravenozno, intraokularno, intrasinovijalno, intramuskularno ili interperitonealno, kao doze za injektiranje jedinjenja u poželjno prihvatljivom fiziološkom razblaživaču sa farmaceutskim nosačem koji može biti ili gliceroln ketale kao što je 2,2-dimetil-2-metil-2-metil-2-pirolidon, 1,1-dioksolan-4-metanol, etri kao što su poli etilen glikol) 400, ulje, masne kiseline, estar masne kiseline ili glicerid masne kiseline, ili acetilisani glicerid masnih kiselina, sa ili bez dodavanja farmaceutski prihvatljivog surfaktanta: poput sapuna ili deterdženta suspendovanje agensa kao što su pektin, karbomera, metilceluloza, hidroksipropilmetilceluloza ili karboksimetilceluloza ili emulgator i drugi farmaceutski dodaci. Ilustracija ulja koja se mogu koristiti u parenteralnim formulacijama predmetnog pronalaska su ona naftnog, životinjskog, biljnog ili sintetičkog porekla, na primer kikiriki ulje, sojino ulje, susamovo ulje, ulje pamučnih, kukuruzno ulje, maslinovo ulje, vazelin i mineralno ulje. Pogodne masne kiseline uključuju oleinsku kiselinu, stearnu kiselinu, izostearinsku kiselinu i miristatnu kiselinu. Pogodni estri masnih kiselina su, na primer, etil oleat i izopropil miristat. Pogodni sapuni uključuju masne kiseline alkalnih metala, amonijuma, i trietanolamin soli i odgovarajući deterdženti uključuju katjonske deterdžente, na primer dimetil dialkil amonijum halide, alkil puridinijumskih halogenide, i alkilamin acetate; anjonske deterdžente, na primer, alkil, aril, i olefin sulfonate, alkil, olefin, etar i monogliceridne sulfate, i sulfosukcinate; nejonske deterdžente, na primer, masne amin okside, alkanolamide masnih kiselina i poli(oksietilen-oksipropilene) ili kopolimere etilen oksida ili propilen oksida; i amfoterne deterdžente, na primer, alkil-beta-aminopropionate i 2-alkilimidazoline kvartarne amonijumove soli, kao i smeše.

[0124] Parenteralni sastavi predmetnog pronalaska obično sadrže od oko 0,5% do oko 25% težine aktivnih sastojaka u rastvoru. Konzervansi i puferi takođe mogu biti iskorišćeni. U cilju otklanjanja ili minimiziranja iritacije na mestu injekcije, takvi sastavi mogu da sadrže nejonski surfaktant koji ima hidrofil-lipofil ravnotežu (HLB) poželjno od oko 12 do 17. Količina surfaktanta u formulaciji poželjno varira od oko 5% do oko 15% težine. Surfakant može biti pojedinačna komponenta koja ima gore navedeni HLB ili može biti mešavina dve ili više komponenata koje imaju željeni HLB.

[0125] Ilustrativni surfakanti se koriste u parenteralnim formulacijama su klasa estara polietilen sorbitan masnih kiselina, na primer, sorbitan monooleat i adukti etilen oksida velike molekulske težine sa hidrofobnim bazom, formirani kondenzacijom propilen oksida sa propilen glikolom.

[0126] Farmaceutski sastavi mogu biti u obliku sterilnih injekcionih vodenih suspenzija. Takve suspenzije mogu biti formulisane prema poznatim postupcima uz upotrebu pogodnih agenasa za disperzovanje ili vlaženje i suspendovanje: kao što su, na primer, natrijum karboksimetilceluloza, metilceluloza, hidroksipropilmetil-celuloza, natrijum alginat, polivinilpirolidon, tragakant guma i guma akacije; agensi za disperzovanje ili vlaženje koji mogu biti prirodni fosfatid: kao što je lecitin, proizvod kondenzacije alkilen oksida sa masnom kiselinom, na primer, polioksietilen stearat, proizvod kondenzacije etilen oksida sa alifatičnim alkoholom dugog lanca, na primer, heptadeka-etileneokicetanol, proizvod kondenzacije etilen oksida sa delimičnim estrom izvedenim od masne kiseline i heksitola: kao što je polioksietilen sorbitol monooleat, ili kondenzacioni proizvod etilen oksida sa parcijalnim estrom izvedenim iz masne kiseline i heksitol anhidrida, na primer polioksietilen sorbitan monooleat.

[0127] Sterilna injekciona priprema da može predstavljati sterilni injekcioni rastvor ili suspenziju u ne-toksičnom parenteralno prihvatljivom rastvaraču ili rastvoru. Razblaživači i rastvarači koji se mogu upotrebiti su, na primer, voda, Ringerov rastvor, izotonični natrijumhlorid i izotonični rastvori glukoze. Pored toga, sterilna fiksna ulja se konvencionalno koriste kao rastvarači ili suspendujući medijumi. U tu svrhu može se upotrebiti svako blago, fiksno ulje, uključujući sintetičke mono- ili digliceride. Osim toga, masne kiseline kao što je oleinska kiselina mogu se koristiti za pripremu injekcija.

[0128] Sastav pronalaska se takođe može davati u obliku supozitorijama za rektalnu primenu leka. Ti sastavi mogu biti pripremljen mešanjem leka sa odgovarajućim ne-iritacionim ekscipijentom koji je čvrst na uobičajenim temperaturama, ali tečan na temperaturi rektuma i da će se stoga topiti u rektumu da oslobodi lek. Takvi materijali su, na primer, kakao puter i polietilen glikol.

[0129] Druga formulacija upotrebljena u postupcima iz predmetnog pronalaska koristi transdermalne uređaje za isporuku („flastere“). Takvi transdermalni flasteri mogu se koristiti za pružanje kontinuirane ili diskontinuirane infuzije jedinjenja predmetnog pronalaska u kontrolisanim količinama. Izrada i upotreba transdermalnih flastera za davanje farmaceutskih agenasa su dobro poznate u struci (pogledati, na primer, U US Patent No.5,023,252, izdat 11. juna 1991. godine, uključen ovde referencom). Takvi flasteri mogu biti konstruisani za kontinuiranu, pulsatilnu ili na zahtev isporuku farmaceutskih sredstava.

[0130] Kontrolisano oslobađanje za parenteralnu primenu obuhvata lipozomalne formulacije, formulacije polimernih mikrosfera i polimerne gel formulacije poznate u struci.

[0131] Može biti poželjno uvesti farmaceutski sastav pacijentu putem mehaničkog uređaja za isporuku. Izrada i upotreba mehaničkih uređaja za isporuku za isporuku farmaceutskih agenasa dobro je poznata u struci. Direktne tehnike za, na primer, davanje leka direktno u mozak obično uključuju postavljanje katetera za isporuku leka u sistem komore pacijenta kako bi se zaobišla krvno-moždana barijera. Jedan takav implantabilni sistem isporuke, korišćen za transport agensa do specifičnih anatomskih regiona tela je opisan u US Patent No.

5,011,472, izdat 30. aprila 1991..

[0132] Sastavi pronalaska takođe sadrže druge konvencionalne farmaceutski prihvatljive sastojke jedinjenja, uopšteno nazvane nosioci ili razređivači, po potrebi ili željni. Mogu se koristiti konvencionalne procedure za pripremu takvih sastava u odgovarajućim doznim oblicima. Takvi sastojci i postupci obuhvataju one opisane u sledećim referencama, od kojih je svaka inkorporirana referencom: Powell, M.F. et al., „Compendium of Excipients for Parenteral Formulations“ PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 1998, 52(5), 238-311 ; Strickley, R.G „Parenteral Formulations of Small Molecule Therapeutics Marketed in the United States (1999)-Part-1“ PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 1999, 53(6), 324-349 ; i Nema, S. et al., „Excipients and Their Use in Injectable Products“ PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 1997, 51(4), 166-171.

[0133] Često korišćeni farmaceutski sastojci koji mogu da se koriste kao odgovarajući da formulišu sastav tokom njegovog namenjenog puta primene uključju:

agense za acidizaciju (primeri uključuju ali nisu ograničeni na sirćetnu kiselinu, limunsku kiselinu, fumarnu kiselinu, hlorovodoničnu kiselinu, azotnu kiselinu);

agense za alkalinizaciju (primeri uključuju ali nisu ograničeni na rastvor amonijaka, amonijum karbonat, dietanolamin, monoetanolamin, kalijum hidroksid, natrijum borat, natrijum karbonat, natrijum hidroksid, trietanolamin, trolamin);

adsorbente (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na celulozu u prahu i aktivni ugalj);

aerosolna goriva (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na ugljen-dioksid, CCl2F2, F2ClC-CClF2i CClF3)

agense za pomeranje vazduha (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na azot i argon);

antimikotične konzervanse (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na benzojevu kiselinu, butilparaben, etilparaben, metilparaben, propilparaben, natrijum benzoat); antimikrobne konzervanse (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na benzalkonijum hlorid, benzetonijum hlorid, benzil alkohol, cetilpiridinijum hlorid, hlorobutanol, fenol, feniletil alkohol, fenilmerkurni nitrat i timerosal);

antioksidanse (primeri uključuju ali nisu ograničeni na askorbinsku kiselinu, askorbil palmitat, butilovani hidroksianizol, butilovani hidroksitoluen, hipofosfornu kiselinu, monotioglicerol, propil galat, natrijum askorbat, natrijum bisulfit, natrijum formaldehid sulfoksilat, natrijum metabisulfit);

materijale za vezivanje (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na blok-polimere, prirodni i sintetički kaučuk, poliakrilati, poliuretani, silikoni, polisiloksani i stirenbutadienski kopolimeri);

puferne agense (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na kalijum metafosfat, dipalijum fosfat, natrijum acetat, natrijum citrat bezvodni i natrijum citrat dihidrat) agense za nošenje (primeri uključuju ali nisu ograničeni na sirup akacije, aromatični sirup, aromatični eliksir, sirup od višnje, sirup od kakaa, sirup od narandže, sirup, ulje od kukuruza, mineralno ulje, kikiriki ulje, sezamovo ulje, bakteriostatska natrijum hloridna injekcija i bakteriostatska voda za injekcije)

kelirajuće agense (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na edetat dinatrijum i edetsku kiselinu)

boje (primeri uključuju ali nisu ograničeni na FD&C Red No.3, FD&C Red No.20, FD&C Yellow No.6, FD&C Blue No.2, D&C Green No.5, D&C Orange No.5, D&C Red No.8, karamel i rđa crvena);

agensi za razbistrivanje (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na bentonit);

emulgatore (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na akacijere, cetomakrogol, cetil alkohol, gliceril monostearat, lecitin, sorbitan monooleat, polioksietilen 50 monostearat);

enkapsulacione agense (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na želatin i acetat ftalat celuloze)

flavourante (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na anisno ulje, ulje cimeta, kakao, mentol, ulje narandže, ulje poprakovanja i vanilin);

humektante (primeri uključuju ali nisu ograničeni na glicerol, propilen glikol i sorbitol);

levigirajuće agense (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na mineralno ulje i glicerin);

ulja (primeri uključuju ali nisu ograničeni na ulje arahisa, mineralno ulje, maslinovo ulje, kikiriki ulje, susamovo ulje i biljno ulje);

baze masti (primeri uključuju ali nisu ograničeni na lanolin, hidrofilnu mast, mast polietilen glikola, petrolatum, hidrofilni petrolatum, belu mast, žutu mast i mast roze vode);

poboljšivače penetracije (transdermalna isporuka) (primeri uključuju ali nisu ograničeni na monohidroksi ili polihidroksil alkohole, mono- ili polivalentne alkohole, zasićene ili nezasićene masne alkohole, zasićene ili nezasićene masne estre, zasićene ili nezasićene dikarboksilne kiseline, eterična ulja, fosfatidilne derivate, cefalin, terpeni, amidi, etri, ketoni i uree)

plastifikatore (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na dietil ftalat i glicerol);

rastvarače (primeri uključuju ali nisu ograničeni na etanol, kukuruzno ulje, ulje od pamuka, glicerol, izopropanol, mineralno ulje, oleinska kiselina, ulje kikirikija, pročišćenu vodu, vodu za injektiranje, sterilnu vodu za injektiranje i sterilnu vodu za navodnjavanje);

agense za ojačavanje (primeri uključuju ali nisu ograničeni na cetil alkohol, vosak cetil estara, mikrokristalni vosak, parafin, stearil alkohol, beli vosak i žuti vosak); supozitorne baze (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na kakao puter i polietilen glikole (smeše));

surfaktante (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, benzalkonijum hlorid, nonoksinol 10, oksoksinol 9, polisorbat 80, natrijum lauril sulfat i sorbitan monopalmitat);

agense za suspendovanje (primeri uključuju ali nisu ograničeni na agar, bentonit, karbomere, natrijum karboksimetilceluloze, hidroksietil celuloza, hidroksipropil celuloza, hidroksipropil metilceluloza, kaolin, metilceluloza, tragakant i veegum); zaslađivači (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na aspartam, dekstrozo, glicerol, manitol, propilenglikol, natrijum saharin, sorbitol i saharozu);

tablete protiv adherenata (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na magnezijum stearat i talk);

veziva za tablete (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, akaciju, alginsku kiselinu, natrijum karboksimetilceluloze, složeni šećer, etilcelulozu, želatin, tečnu glukozu, metilcelulozu, neukršten polivinil pirolidon i preželatinizovani skrob);

razblaživače tableta i kapsula (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na dibazni kalcijum fosfat, kaolin, laktoza, manitol, mikrokristalnu celulozu, celulozu u prahu, precipitovani kalcijum karbonat, natrijum karbonat, natrijum fosfat, sorbitol i skrob); agense za premazivanje tableta (primeri uključuju ali nisu ograničeni na tečnost glukoze, hidroksietil celuloze, hidroksipropil celuloze, hidroksipropil metilceluloze, metilceluloze, etilceluloze, acetat ftalata celuloze i šelak);

ekscipijente za direktnu kompresiju tableta (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na dibazni kalcijum-fosfat);

dezintegrante tableta (primeri uključuju ali nisu ograničeni na alginsku kiselinu, kalcijum karboksimetilcelulozu, mikrokristalnu celulozu, polakrilin kalijum, ukršten polivinilpirolidon, natrijum alginat, natrijum skrobni glikolat i skrob);

tabletne glidante (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na koloidni silicijum, kukuruzni skrob i talk);

tabletne lubrikante (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na kalcijum stearat, magnezijum stearat, mineralno ulje, stearinsku kiselinu i stearat cinka);

tabletne/kapsulne opakvante (primeri uključuju ali nisu ograničeni na titanijum dioksid);

agense za poliranje tableta (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na karnuba vosak i beli vosak);

agense za zgušnjavanje (primeri uključuju ali nisu ograničeni na vosak, cetil alkohol i parafin);

agense za toničnost (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na dekstrozo i natrijum hlorid);

agense za povećanje viskoznosti (primeri uključuju ali nisu ograničeni na alginsku kiselinu, bentonit, karbomere, natrijum karboksimetilceluloze, metilcelulozu, polivinil pirolidon, natrijum alginat i tragakant); i

agense za vlaženje (primeri uključuju, ali nisu ograničeni na heptadecaetilen oksicetanol, lecitin, sorbitol monooleat, polioksietilen sorbitol monooleat i polioksietilen stearat).

[0134] Farmaceutski sastavi prema predmetnom pronalasku mogu se ilustrovati na sledeći način:

Sterilni IV rastvor: 5 mg/ml rastvor željenog jedinjenja iz predmetnog pronalaska može se napraviti pomoću sterilne, injektibilne vode, a pH je prilagođen ako je potrebno. Rastvor se razblaži za primenu do 1 - 2 mg/mL sa sterilnom 5% dekstrozo i primenjuje se kao IV infuzija tokom oko 60 minuta.

[0135] Liofilizovani prah za IV primenu: Sterilni preparat se može pripremiti sa (i) 100 -1000 mg željenog jedinjenja iz predmetnog pronalaska kao liofilizovanog praha, (ii) 32 - 327 mg/ml natrijum citrata i (iii ) 300-3000 mg Dekstran 40. Formulacija se rekonstituiše sterilnim fiziološkim rastvorom ili dekstrozom sa injekcijom od 5% do koncentracije od 10 do 20 mg/mL, koji se dodatno razblaži sa fiziološkim rastvorom ili dekstrozom 5% do 0,2 do 0,4 mg/mL, i primenjuje se ili IV bolus ili IV infuzijom tokom 15 - 60 minuta.

[0136] Intramuskularna suspenzija: Sledeći rastvor ili suspenzija mogu se pripremiti za intramuskularnu injekciju:

50 mg/mL željenog, nerastvorljivog u vodi jedinjenja iz predmetnog pronalaska 5 mg/mL natrijum karboksimetilceluloze

4 mg/mL TWEEN 80

9 mg/mL natrijum hlorida

9 mg/mL benzil alkohola

[0137] Kapsule tvrde ljuske: Veliki broj jediničnih kapsula se pripremi ispunjavanjem standardnih dvokomponentnih tvrdih galantinskih kapsula sa po 100 mg aktivnog sastojka u prahu, 150 mg laktoze, 50 mg celuloze i 6 mg magnezijum stearata.

[0138] Kapsule mekog želatina: Smeša aktivnog sastojka u digestabilnom ulju, kao što je sojino ulje, ulje od pamučnog semena ili maslinovo ulje, se pripremi i ubrizgava pomoću pumpe sa pozitivnim izduvavanjem u rastopljeni želatin, kako bi se formirale meke želatinske kapsule koje sadrže 100 mg aktivnog sastojka. Kapsule se operu i osuše. Aktivni sastojak se može rastvoriti u smeši polietilen glikola, glicerina i sorbitola, kako bi se pripremila mešavina lekova koji se ne može mešati sa vodom.

[0139] Tablete: Veliki broj tableta je pripremljen konvencionalnim procedurama, tako da je dozna jedinica 100 mg aktivnog sastojka, 0,2 mg koloidnog silicijum dioksida, 5 mg magnezijum stearata, 275 mg mikrokristalne celuloze, 11 mg skroba i 98,8 mg laktoze.

Odgovarajući vodeni i ne-vodeni premazi mogu se primeniti da bi se povećao ukus, poboljšala elegancija i stabilnost ili apsorpcija kašnjenja.

[0140] Tablete/kapsule za trenutno otpuštanje: To su čvrsti oralni dozni oblici napravljeni konvencionalnim i novijim procesima. Ove jedinice se uzimaju oralno bez vode za trenutno rastvaranje i isporuku leka. Aktivni sastojak se meša u tečnosti koja sadrži sastojke kao što su šećer, želatin, pektin i zaslađivači. Ove tečnosti se učvršćuju u čvrste tablete ili kaplete suvim zamrzavanjem i ekstrakcijom čvrstog stanja. Jedinjenja za lekove mogu biti kompresovana viskoelastičnim i termoelastičnim šećerima i polimerima ili šumećim komponentama za proizvodnju poroznih matrica namenjenih za hitno otpuštanje, bez potrebe za vodom.

Kombinacione terapije

[0141] Jedinjenje (B) predmetnog pronalaska može se primenjivati kao jedinstveni farmaceutski agens ili u kombinaciji sa jednim ili više drugih farmaceutskih agenasa tamo gde kombinacija ne izaziva neprihvatljive štetne efekte. Predmetni pronalazak se odnosi i na takve kombinacije. Na primer, jedinjenja predmetnog pronalaska mogu se kombinovati sa poznatim anti-hiperproliferativnim ili drugim indikatorskim agensima i slično, kao i sa dodacima i njihovim kombinacijama. Ostali indikatorski agensi uključuju, ali nisu ograničeni na, anti-angiogene agense, mitotske inhibitore, sredstva za alkilaciju, anti-metabolite, DNK interkalirajuće antibiotike, inhibitore faktora rasta, inhibitore ćelijskog ciklusa, inhibitore enzima, inhibitore toposizomeraze, modifikatori biološkog odgovora ili anti-hormoni.

Dodatni farmaceutski agens može biti 131I-chTNT, abareliks, abirateron, aclarubicin, aldesleukin, alemtuzumab, alitretinoin, altretamin, aminoglutetimid, amrubicin, amsakrin, anastrozol, arglabin, arsenik trioksid, asparaginaza azacitidin, basiliksimab, BAY 80-6946, BAY 1000394, BAY 86-9766 (RDEA 119), belotekan, bendamustin, bevacizumab, beksaroten, bicalutamid, bisantren, bleomicin, bortezomib, buserelin, busulfan, kabazitaksel, kalcijum folinat, kalcijum levofolinat, kapecitabin, karboplatin, karmofur, karmustin, katumaksomab, celekoksib, celmoleukin, cetuksimab, hlorambucil, hlormadinon, hlormetin, cisplatin, kladribin, klodronska kiselina, klofarabin, krisantaspaza ciklofosfamid, ciproteron, citarabin, dakarbazin, dactinomicin, darbepoetin alfa, dasatinib, daunorubicin, decitabin, degareliks, denileukin diftitoks, denosumab, deslorelin, dibrospidijum hlorid, docetaksel, doksifluridin, doksorubicin, doksorubicin estron, eculizumab, edrecolomab, eliptinium acetat, eltrombopag, endostatin, enocitabin, epirubicin, epitiostanol, epoetin alfa, epoetin beta, eptaplatin, eribulin, erlotinib, estradiol, estramustin, etoposid, everolimus, eksemestan, fadrozol, filgrastim, fludarabin, fluorouracil, flutamid, formestan, fotemustin, fulvestrant, galium nitrat, ganireliks, gefitinib, gemcitabin, gemtuzumab, glutoksim, goserelin, histamin dihidrohlorid, histrelin, hidroksikarbamid, Y-125 seme, ibadronska kiselina, ibritumomab tiuksetan, idarubicin, ifosfamid, imatinib, imihimod, improsulfan, interferon alfa, interferon beta, interferon gamma, ipilimumab, irinotekan, iksabepilon, lanreotid, lapatinib, lenalidomid, lenograstim, lentinan, letrozol, leuprorelin, levamizol, lisurid, lobaplatin, lomustin, lonidamin, masoprokol, medroksiprogesteron, megestrol, melfalan, mepitiostan, mercaptopurin, metotreksat, metokssalen, Metil aminolevulinat, metiltestosteron, mifamurtid, miltefosin, miriplatin, mitobronitol, mitoguazon, mitolactol, mitomicin, mitotan, mitoksantron, nedaplatin, nelarabin, nilotinib, nilutamid, nimotuzumab, nimustin, nitrakrin, ofatumumab, omeprazol, oprelvekin, oksaliplatin, p53 genska terapija, paclitaksel, palifermin, paladijum-103 seme, pamidronska kiselina, panitumumab, pazopanib, pegaspargaza PEG-epoetin beta (metoksi PEG-epoetin beta), pegfilgrastim, peginterferon alfa-2b, pemetreksed, pentazocin, pentostatin, peplomicin, perfosfamid, picibanil, pirarubicin, pleriksafor, plicamicin, poliglusam, poliestradiol fosfat, polisaharid-K, porfimer natrijum, pralatreksat, prednimustin, prokarbazin, hinagolid, raloksifen, raltitreksed, ranimustin, razoksan, regorafenib, risedronska kiselina, rituksimab, romidpsin, romiplostim, sargramostim, sipuleucel-T, sizofiran, sobuzoksan, natrijum glicididazol, sorafenib, streptozocin, sunitinib, talaporfin, tamibaroten, tamoksifen, tasonermin, teceleukin, tegafur, tegafur gimeracil oteracil, temoporfin, temozolomid, temsirolimus, teniposid, testosteron, tetrofosmin, talidomid, tiotepa, timalfasin, tioguanin, tocilizumab, topotekan, toremifen, tositumomab, trabectedin, trastuzumab, treosulfan, tretinoin, trilostan, triptorelin, trofosfamid, triptofan, ubenimeks, valrubicin, vandetanib, vapreotid, vemurafenib, vinblastin, vincristin, vindesin, vinflunin, vinorelbin, vorinostat, vorozol, itrium-90 staklene mikrosfere, zinostatin, zinostatin stimalamer, zoledronska kiselina, zorubicin.

[0142] Poželjno, dodatni farmaceutski agens je izabran iz grupe koju čine: afinitor, aldesleukin, alendronska kiselina, alfaferon, alitretinoin, alopurinol, aloprim, aloksi, altretamin, aminoglutetimid, amifostin, amrubicin, amsakrin, anastrozol, anzmet, aranesp, arglabin, arsenik trioksid, aromasin, 5-azacitidin, azatioprin, BCG ili tice BCG, bestatin, betametazon acetat, betametazon natrijum fosfat, beksaroten, bleomicin sulfat, broksuridin, bortezomib, busulfan, kalcitonin, kampat, kapecitabin, karboplatin, kasodeks, cefeson, celmoleukin, cerubidin, hlorambucil, cisplatin, kladribin, kladribin, klodronska kiselina, ciklofosfamid, citarabin, dakarbazin, dactinomicin, Daunoksom, decadron, decadron fosfat, delestrogen, denileukin diftitoks, depo-medrol, deslorelin, deksrazoksan, dietilstilbestrol, diflucan, docetaksel, doksifluridin, doksorubicin, dronabinol, DW-166HC, eligard, elitek, elence, emend, epirubicin, epoetin alfa, epogen, eptaplatin, ergamizol, estrace, estradiol, estramustine fosfat natrijum, etinil estradiol, etiol, etidronska kiselina, etopofos, etoposid, fadrozol, farston, filgrastim, finasterid, fligrastim, floksuridin, fluconazol, fludarabin, 5-fluorodeoksiuridine monofosfat, 5-fluorouracil (5-FU), fluoksimesteron, flutamid, formestan, fosteabin, fotemustin, fulvestrant, gamagard, gemcitabin, gemtuzumab, glivek, gliadel, goserelin, granisetron HCl, histrelin, hicamtin, hidrocorton, eirtro-hidroksinoniladenin, hidroksiurea, ibritumomab tiuksetan, idarubicin, ifosfamid, interferon alfa, interferon-alfa 2, interferon alfa-2A, interferon alfa-2B, interferon alfa-n1, interferon alfa-n3, interferon beta, interferon gama-1a, interleukin-2, intron A, iresa, irinotekan, kitril, lentinan sulfat, letrozol, leucovorin, leuprolid, leuprolide acetat, levamizol, levofolinska kiselina kalcijum so, levotroid, levoksil, lomustin, lonidamin, marinol, mehloretamin, mekobalamin, medroksiprogesteron acetat, megestrol acetat, melfalan, menest, 6-mercaptopurin, Mesna, metotreksat, metviks, miltefosin, minociclin, mitomicin C, mitotan, mitoksantron, Modrenal, Miocet, nedaplatin, neulasta, neumega, neupogen, nilutamid, nolvadeks, NSC-631570, OCT-43, octreotid, ondansetron HCl, orapred, oksaliplatin, paclitaksel, pediapred, pegaspargaza Pegazis, pentostatin, picibanil, pilocarpine HCl, pirarubicin, plicamicin, porfimer natrijum, prednimustin, prednizolon, prednizon, premarin, prokarbazin, procrit, raltitreksed, RDEA 119, rebif, rhenium-186 etidronat, rituksimab, roferon-A, romurtid, salagen, sandostatin, sargramostim, semustin, sizofiran, sobuzoksan, solu-medrol, sparfosna kiselina, terapija matičnim ćelijama, streptozocin, strontijum-89 hlorid, sintroid, tamoksifen, tamsulosin, tazonrmin, tastolacton, taksotere, teceleukin, temozolomid, teniposid, testosterone propionat, testred, tioguanin, tiotep, tirotropin, tiludronska kiselina, topotekan, toremifen, tositumomab, trastuzumab, treosulfan, tretinoin, treksal, trimetilmelamin, trimetreksat, triptorelin acetat, triptorelin pamoat, UFT, uridin, valrubicin, vesnarinon, vinblastin, vincristin, vindesin, vinorelbin, virulizin, zincard, zinostatin stimalamer, zofran, ABI-007, acolbifen, actimun, afinitak, aminopterin, arzoksifen, asoprisnil, atamestan, atrasentan, sorafenib (BAi 43-9006), avastin, CCI-779, CDC-501, celebreks, cetuksimab, crisnatol, ciproterone acetat, decitabin, DN-101, doksorubicin-MTC, dSLIM, dutasterid, edotecarin, eflornitin, eksatekan, fenretinid, histamin dihidrohlorid, histrelin hidrogel implant, holmijum-166 DOTMP, ibadronska kiselina, interferon gama, intron-PEG, iksabepilon, keihole limpet hemocianin, L-651582, lanreotid, lasofoksifen, libra, lonafarnib, miproksifen, minodronat, MS-209, lipozomalni MTP-PE, Mks-6, nafarelin, nemorubicin, neovastat, nolatreksed, oblimersen, onko-TCS, osidm, paclitaksel poliglutamat, pamidronat dizodijum, PN-401, QS-21, quazepam, R-1549, rALLOXifen, ranpirnaza 13-cis -retinoic kiselina, satraplatin, seocalcitol, T-138067, tarkeva, taksopreksin, timosin alfa 1, tiazofurin, tipifarnib, tirapazamin, TLK-286, toremifen, TransMID-107R, valspodar, vapreotid, vatalanib, verteporfin, vinflunin, Z-100, i zoledronska kiselina ili njihove kombinacije.

[0143] Opcioni anti-hiperproliferativni agensi koji se mogu dodati u sastav uključuju, ali se ne ograničavaju na jedinjenja koja su navedena u režimima lečenja hemoterapijom raka the 11th Edition of the Merck Index, (1996), koji je ovde inkorporiran referencom, kao što su asparaginaza bleomicin, karboplatin, karmustin, hlorambucil, cisplatin, kolaspaza ciklofosfamid, citarabin, dakarbazin, dactinomicin, daunorubicin, doksorubicin (adriamicin), epirubicin, epotilon, derivat epotilona, etoposid, 5-fluorouracil, heksametilmelamin, hidroksiurea, ifosfamid, irinotekan, leucovorin, lomustin, mehloretamin, 6-mercaptopurin, mesna, metotreksat, mitomicin C, mitoksantron, prednizolon, prednizon, prokarbazin, raloksifen, streptozocin, tamoksifen, tioguanin, topotekan, vinblastin, vincristin, i vindesin.

[0144] Ostali anti-hiperproliferativni agensi pogodni za upotrebu sa sastavom iz predmetnog pronalaska uključuju ali nisu ograničeni na ona jedinjenja koja su priznata za upotrebu u lečenju neoplastičnih bolesti u Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics (Ninth Edition), urednik Molinoff et al., objavljeno od McGraw-Hill, strane 1225-1287, (1996), koji je ovde obuhvaćen referencom referencom, kao što su aminoglutetimid, L-asparaginaza azatioprin, 5-azacitidin kladribin, busulfan, dietilstilbestrol, 2',2'-difluorodeoksicitidin, docetaksel, eritrohidroksinonil adenin, etinil estradiol, 5-fluorodeoksiuridin, 5-fluorodeoksiuridin monofosfat, fludarabin fosfat, fluoksimesteron, flutamid, hidroksiprogesteron kaproat, idarubicin, interferon, medroksiprogesteron acetat, megestrol acetat, melfalan, mitotan, paclitaksel, pentostatin, N-fosfonoacetil-L-aspartat (PALA), plicamicin, semustin, teniposid, testosteron propionat, tiotep, trimetilmelamin, uridin, i vinorelbin.

Ostali anti-hiperproliferativni agensi pogodni za upotrebu sa sastavom pronalaska uključuju, ali nisu ograničeni na druge anti-kancer agense kao što su epotilon i njegovi derivati, irinotekan, raloksifen i topotekan.

[0145] Jedinjenje (B) prema pronalasku takođe može biti primenjeno u kombinaciji sa proteinskom terapijom. Takva proteinska terapija pogodna za lečenje kancera ili drugih angiogenih poremećaja i za upotrebu sa sastavima iz predmetnog pronalaska uključuje, ali nije ograničena na interferon (npr., interferon .alfa., .beta., ili .gama.) supraagonistička monoclonska antitela, Tuebingen, TRP-1 protein vakcin, kolostrinin, anti-FAP antibodi, iH-16, gemtuzumab, infliksimab, cetuksimab, trastuzumab, denileukin diftitoks, rituksimab, timosin alfa 1, bevacizumab, mekasermin, mekasermin rinfabat, oprelvekin, natalizumab, rhMBL, MFE-CP1 ZD-2767-P, ABT-828, ErbB2-specifični imunotoksin, SGN-35, MT-103, rinfabat, AS-1402, B43-genistein, L-19 zasnovane radioimunoterapeutike, AC-9301, Ni-ESO-1 vakcin, IMC-1C11, CT-322, rhCC10, r(m)CRP, MORAb-009, aviscumin, MDX-1307, Her-2 vakcin, APC-8024, NGR-hTNF, rhH1,3, IGN-311, Endostatin, volociksimab, PRO-1762, leksatumumab, SGN-40, pertuzumab, EMD-273063, L19-IL-2 fuzioni protein, PRX-321, CNTO-328, MDX-214, tigapotid, kaT-3888, labetuzumab, alfa-čestica-emitujući radioizotopom-povezan lintuzumab, EM-1421, HiperAkutni vakcin, tucotuzumab celmoleukin, galiksimab, HPV-16-E7, Javelin – rak prostate, Javelin - melanoma, Ni-ESO-1 vakcin, EGF vakcin, CYT-004-MelQbG10, WT1 peptid, oregovomab, ofatumumab, zalutumumab, cintredekin besudotoks, WX-G250, Albuferon, aflibercept, denosumab, vakcin, CTP-37, efungumab, ili 131I-chTNT-1/B. Monoclonska antitela korisna kao proteinski terapeutici uključuju, ali nisu ograničena na muromonab-CD3, abciksimab, edrecolomab, daclizumab, gentuzumab, alemtuzumab, ibritumomab, cetuksimab, bevicizumab, efalizumab, adalimumab, omalizumab, muromomab-CD3, rituksimab, daclizumab, trastuzumab, palivizumab, basiliksimab, i infliksimab.

[0146] Jedinjenje (B) pronalaska se takođe može kombinovati sa biološkim terapeutskim agensima, kao što su antitela (npr. avastin, rituksan, erbituks, herceptin) ili rekombinantni proteini.

[0147] Jedinjenje (B) prema pronalasku takođe može biti u kombinaciji sa agensima antiangiogeneze, kao što su, na primer, avastin, aksitinib, DAST, recentin, sorafenib ili sunitinib. Moguće su i kombinacije sa inhibitorima proteazoma ili mTOR inhibitorima ili inhibitorima anti-hormona ili steroidnog metabolnog enzima. Generalno, upotreba citotoksičnih i/ili citostatičkih agenasa u kombinaciji sa jedinjenjem ili sastavom predmetnog pronalaska će služiti da:

(1) daje bolju efikasnost u smanjivanju rasta tumora ili čak eliminaciju tumora u poređenju sa primenom samo jednog agensa,

(2) pruži primenu manje količine primenjenih hemoterapeutskih sredstava,

(3) pruži hemoterapeutski tretman koji se dobro toleriše kod pacijenta sa manje štetnih farmakoloških komplikacija nego što je primećeno kod hemoterapije sa jednim agensom i određenim drugim kombinovanim terapijama,

(4) pruži tretiranje šireg spektra različitih vrsta karcinoma kod sisara, posebno ljudi, (5) pruži veću stopu odgovora kod lečenih pacijenata,

(6) pruži duže vreme preživljavanja kod lečenih pacijenata u poređenju sa standardnim tretmanima hemoterapije,

(7) pruži duže vreme za progresiju tumora, i/ili

(8) efikasnost prinosa i rezultati tolerancije su barem toliko dobri kao i oni kada se koriste sami, u poređenju sa poznatim slučajevima kada druge kombinacije agenasa protiv raka proizvode antagonističke efekte.

Postupci senzibilizacije ćelija na zračenje

[0148] U posebnom otelotvorenju predmetnog pronalaska, jedinjenje iz predmetnog pronalaska može se koristiti za senzibilizaciju ćelija na zračenja. To jest, tretman ćelija sa jedinjenjem iz predmetnog pronalaska pre terapije zračenjem ćelije čini ćeliju više podložnom oštećenjima DNK i smrti ćelije nego što bi ćelija bila u odsustvu bilo kakvog tretmana sa jedinjenjem pronalaska. U jednom aspektu, ćelija se tretira sa jedinjenjem pronalaska.

[0149] Prema tome, predmetno obelodanjenje takođe pruža postupak ubijanja ćelije, pri čemu se ćeliji daje jedno ili više jedinjenja iz predmetnog pronalaska u kombinaciji sa konvencionalnom terapijom zračenja.

[0150] Predmetno obelodanjenje takođe pruža postupak za dobijanje ćelije koja je više podložna smrti ćelije, pri čemu se ćelije tretiraju sa jednim ili više jedinjenjem iz predmetnog pronalaska pre tretmana ćelije da bi se izazvala ili indukovala smrt ćelije. U jednom aspektu, nakon što se ćelija tretira sa jednim ili više jedinjenja prema pronalasku, ćelija se tretira sa najmanje jednim jedinjenjem ili barem jednim postupkom ili njihovom kombinacijom, kako bi se oštetio DNK u cilju inhibiranja funkcije normalne ćelije ili ubijanja ćelije.

[0151] U jednom otelotvorenju, ćelija je ubijena tretiranjem ćelije sa najmanje jednim agensom za oštećenje DNK. To jest, nakon tretiranja ćelije sa jednim ili više jedinjenjem prema pronalasku da bi se ćelija senzibilisala do ćelijske smrti, ćelija se tretira sa najmanje jednim agensom za oštećenje DNK da bi se ubila ćelija. Sredstva koja oštećuju DNK korisna u predmetnom pronalasku obuhvataju, ali bez ograničenja, hemoterapeutske agense (npr., cisplatinum), jonizujuće zračenje (rendgen, ultraljubičasto zračenje), kancerogene agense i mutagene agense.

[0152] U drugom otelotvorenju, ćelija je ubijena tretiranjem ćelije sa najmanje jednim postupkom kako bi se izazvalo ili indukovalo oštećenje DNK. Takve metode uključuju, ali se ne ograničavaju samo na, aktivaciju puta signalizacije ćelija koja rezultuje oštećenjem DNK kada se put aktivira, inhibiranje signalne putanje ćelija koje dovodi do oštećenja DNK kada je put inhibiran i izaziva biohemijske promene u ćeliji, pri čemu promena rezultuje oštećenjem DNK. Putem neograničavajućeg primera, put za popravak DNK u ćeliji može biti inhibiran, čime se sprečava popravljanje oštećenja DNK i rezultuje abnormalnom akumulacijom oštećenja DNK u ćeliji.

[0153] U jednom aspektu obelodanjenja, jedinjenje obelodanjenja se daje ćeliji pre zračenja ili druge indukcije oštećenja DNK u ćeliji. U sledećem aspektu, jedinjenje obelodanjenja se daje ćeliji istovremeno sa zračenjem ili drugom indukcijom oštećenja DNK u ćeliji. U još jednom aspektu, jedinjenje obelodanjenja se daje ćeliji odmah nakon početka zračenja ili druge indukcije oštećenja DNK u ćeliji.

U drugom aspektu, ćelija je in vitro. U još jednom otelotvorenju, ćelija je in vivo.

[0154] Kao što je pomenuto supra, iznenađujuće je utvrđeno da jedinjenja ovog obelodanjenja efikasno inhibiraju Mps-1 i mogu se koristiti za lečenje ili profilaksu bolesti nekontrolisanog rasta ćelija, proliferacije i/ili preživljavanja, neodgovarajućih ćelijskih imunih odgovora ili neodgovarajuće ćelijske upalne reakcije ili bolesti koje su praćene nekontrolisanim rastom ćelija, proliferacijom i/ili preživljavanjem, neodgovarajućim ćelijskim imunim odgovorom ili neodgovarajućim ćelijskim upalnim odgovorima, naročito u kojima je nekontrolisan rast ćelija, proliferacija i/ili preživljavanje, neodgovarajući ćelijski imuni odgovori ili neodgovarajući ćelijski upalni odgovori posredovan od strane Mps-1, kao što su, na primer, hematološki tumori, čvrsti tumori i/ili metastaze od njih, npr. leukemije i mijelodisplastični sindrom, maligni limfom, tumora glave i vrata, uključujući tumore mozga i metastaze u mozgu, tumori toraksa uključujući tumore malih i ne-malih ćelija pluća, gastrointestinalne tumore, endokrine tumore, tumore jajnika i druge ginekološke tumore, urološke tumore uključujući bubrežne, tumor bešike i prostate, tumora kože i sarkoma i/ili njihove metastaze.

[0155] U skladu s drugim aspektom, prema tome, predmetno obelodanjenje obuhvata jedinjenje formule (A), (B) ili (C) ili njegov stereoizomer, tautomer, N-oksid, hidrat, solvat ili so, naročito njegove farmaceutski prihvatljive soli ili smeše istih, kao što je ovde opisano i definisano, za upotrebu u lečenju ili profilaksi bolesti, kao što je prethodno pomenuto.

[0156] Prema tome, još jedan poseban aspekt ovog obelodanjenja je upotreba jedinjenja formule (A), (B) ili (C), opisanog supra, ili njegovog stereoizomera, tautomera, N-oksida, hidrata, solvata ili soli, posebno njegove farmaceutski prihvatljiva soli ili njihove soli, za profilaksu ili lečenje bolesti.

Drugi poseban aspekt predmetnog obelodanjenja je stoga upotreba jedinjenja formule (A), (B) ili (C) opisanog supra, za proizvodnju farmaceutski sastavi za lečenje ili profilaksu bolesti.

[0157] Bolesti navedene u prethodna dva stava su bolesti nekontrolisanog rasta ćelija, proliferacije i/ili preživljavanja, neodgovarajućih ćelijskih imunih odgovora ili neodgovarajuće ćelijske upalne reakcije ili bolesti koje su praćene nekontrolisanim rastom ćelija, proliferacijom i/ili preživljavanjem, neodgovarajućim ćelijskim imunim odgovorom ili neodgovarajućim ćelijskim upalnim odgovorima, naročito u kojima je nekontrolisan rast ćelija, proliferacija i/ili preživljavanje, neodgovarajući ćelijski imuni odgovori ili neodgovarajući ćelijski upalni odgovori posredovan od strane Mps-1, kao što su, na primer, hematološki tumori, čvrsti tumori i/ili metastaze od njih, npr. leukemije i mijelodisplastični sindrom, maligni limfom, tumora glave i vrata, uključujući tumore mozga i metastaze u mozgu, tumori toraksa uključujući tumore malih ćelija pluća pluća, gastrointestinalne tumore, endokrine tumore, tumore jajnika i druge ginekološke tumore, urološke tumore uključujući bubrežne, tumor bešike i prostate, tumora kože i sarkoma i/ili njihove metastaze.

[0158] Izraz „neodgovarajući“ u kontekstu predmetnog pronalaska, posebno u kontekstu „neodgovarajućih ćelijskih imunih odgovora ili neodgovarajućih ćelijskih upalnih odgovora“, kako se ovde koristi, treba shvatiti kao poželjno beleženje odgovora koji je manji ili viši od normalnog, a koji je povezan sa odgovornošću ili rezultatom patologije navedenih bolesti. Poželjno, upotreba je u lečenju ili profilaksi bolesti, pri čemu su bolesti hemotološki tumori, čvrsti tumori i/ili njihove metastaze.

Postupak lečenja hiperproliferativnih poremećaja

[0159] predmetno obelodanjenje se odnosi na postupak za upotrebu jedinjenja iz predmetnog pronalaska i njihovih sastojaka, za lečenje hiperproliferativnih poremećaja sisara. Jedinjenja se mogu koristiti za inhibiranje, blokiranje, smanjenje, redukovanje itd., proliferacije ćelija i/ili deljenja ćelija i/ili stvaranje apoptoze. Ovaj postupak obuhvata davanje sisaru kom je to potrebno, uključujući i čoveka, količinu jedinjenja iz predmetnog pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, izomera, polimorfa, metabolita, hidrata, solvata ili estra; itd. koja je efikasana za lečenje poremećaja. Hiperproliferativni poremećaji uključuju, ali nisu ograničeni, npr. psorijazu, keloide i druge hiperplazije koje utiču na kožu, benignu hiperplaziju prostate (BPH), čvrste tumore, kao što su kanceri dojke, respiratornog trakta, mozga, reproduktivnih organa, digestivnog trakta, urinarnog trakta, očiju, jetre, kože, glave i vrata, štitne žlezde, paratiroide i njihove udaljene metastaze. Ovi poremećaji uključuju i limfome, sarkome i leukemije.

[0160] Primeri raka dojke uključuju, ali se ne ograničavaju na invazivni duktalni karcinom, invazivni lobularni karcinom, duktalni karcinom in situ i lobularni karcinom in situ.

[0161] Primeri kancera respiratornog trakta uključuju, ali se ne ograničavaju na karcinom malih i ne-malih ćelija pluća, kao i na bronhijalni adenom i pleuropulmonalni blastom.

[0162] Primeri moždanih tumora uključuju, ali se ne ograničavaju na moždano stablo i hipoftalnim gliomom, cerebelarni i cerebralni astrocitom, meduloblastom, ependimomom, kao i neuroektodermalni i pinealni tumor.

[0163] Tumori muških reproduktivnih organa uključuju, ali se ne ograničavaju na rak prostate i testisa. Tumori ženskih reproduktivnih organa uključuju, ali nisu ograničeni na endometrijalni, cervikalni, jajnički, vaginalni i vulvarni rak, kao i sarkom materice.

[0164] Tumori digestivnog trakta uključuju, ali se ne ograničavaju na analne, debelog creva, kolorektalne, ezofagealne, žučne režnjeve, želudačke, pankreasne, rektalne, tankog creva i kancera pljuvačnih žlezda. Tumori urinarnog trakta uključuju, ali se ne ograničavaju na tumore bešike, penile, bubrega, renalne karlice, uretera, uretralnog i ljudski papilarni bubrežni karcinom.

[0165] Kancer oka obuhvata, ali nije ograničen na intraokularni melanom i retinoblastom.

[0166] Primeri karcinoma jetre uključuju, ali se ne ograničavaju na hepatoćelijski karcinom (karcinomi jetrnih ćelija sa ili bez fibrolamelarne varijanse), holangiokarcinom (intrahepatični karcinom karcinoma žučnih kanala) i mešani hepatoćelijski holangiokarcinom.

[0167] Kanceri kože uključuju, ali nisu ograničeni na karcinom skvamoznih ćelija, Kaposijev sarkom, maligni melanom, rak kože Merkelovih ćelije i rak kože bez melanoma.

[0168] Karcinomi glave i vrata uključuju, ali se ne ograničavaju na laringealni, hipofaringealni, nazofaringealni, orofaringealni kancer, rak usne i usne šupljine i skvamozne ćelije. Limfomi uključuju, ali nisu ograničeni na limfom povezan sa AIDS-om, ne-Hodžkinov limfom, kožni T-ćelijski limfom, Burkit limfom, Hodžkinovu bolest i limfom centralnog nervnog sistema.

[0169] Sarkomi uključuju, ali se ne ograničavaju na sarkom mekog tkiva, osteosarkom, maligni fibrozni histiocitom, limfosarkom i rabdomiosarkom.

[0170] Leukemije uključuju, ali se ne ograničavaju na akutnu mijeloidnu levkemiju, akutnu limfoblastnu leukemiju, hroničnu limfocitnu leukemiju, hroničnu mijelogenu leukemiju i leukemiju dlakavih ćelija.

[0171] Ovi poremećaji su dobro obeleženi kod ljudi, ali takođe postoje i sa sličnim etiologijom kod drugih sisara, i mogu se tretirati davanjem farmaceutskih sastava iz predmetnog pronalaska.

[0172] Izraz „tretiranje“ ili „lečenje“ kako je navedeno u ovom dokumentu, konvencionalno se koristi, npr. upravljanje ili briga o pacijentu u svrhu suzbijanja, ublažavanja, smanjenja, oslobađanja, poboljšanja stanja itd. bolesti ili poremećaja, kao što je karcinom.

Postupak lečenja poremećaja kinaze

[0173] predmetno obelodanjenje takođe pruža postupke za lečenje poremećaja povezanih sa aberantnom mitogenskom aktivnošću ekstraćelijske kinaze, uključujući, ali ne ograničavajući se na moždani udar, srčanu insuficijenciju, hepatomegaliju, kardiomegaliju, dijabetes, Alchajmerovu bolest, cističnu fibrozu, simptome odbijanja ksenografa, septični šok ili astmu. Efektivne količine jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu se koristiti za tretiranje takvih poremećaja, uključujući i bolesti (npr.rRak) pomenute u prethodnom odeljku Pozadina. Bez obzira na to, takvi rakovi i druge bolesti mogu se tretirati sa jedinjenjima iz predmetnog pronalaska, bez obzira na mehanizam dejstva i/ili odnos između kinaze i poremećaja.

[0174] Fraza „aberantna aktivnost kinaze“ ili „aberantna aktivnost tirozin-kinaze“ uključuje bilo koje abnormalno eksprimiranje ili aktivnost gena koje kodira kinazu ili polipeptida koji je kodira. Primeri takve aberantne aktivnosti uključuju, ali nisu ograničeni na, prekomerno eksprimiranje gena ili polipeptida; amplifikaciju gena; mutacije koje proizvode konstitutivnoaktivnu ili hiperaktivnu aktivnost kinaze; genske mutacije, brisanja, zamenu, dodatke itd.

[0175] Predmetno obelodanjenje takođe pruža postupke inhibicije aktivnosti kinaze, posebno mitogenske ekstraćelijske kinaze, koja obuhvata davanje efikasne količine jedinjenja iz predmetnog pronalaska, uključujući soli, polimorfe, metabolite, hidrate, solvate, prolekove (npr. estri), i dijastereoizomerne forme. Aktivnost kinaze može biti inhibirana u ćelijama (na primer, in vitro) ili u ćelijama pacijenta sisara, naročito pacijenta kom je potrebno lečenje. Postupci lečenja angiogenih poremećaja

[0176] Predmetno obelodanjenje takođe pruža postupke lečenja poremećaja i bolesti povezanih sa prekomernom i/ili abnormalnom angiogenezom.

[0177] Neadekvatno i ektopično eksprimiranje angiogeneze može biti štetno za organizam. Brojni patološki uslovi su povezani sa rastom stranih krvnih sudova. To uključuje, na primer, dijabetičku retinopatiju, ishemijsku okluziju retinalnih vena i preuranjenu retinopatiju [Aiello et al. New Engl. J. Med.1994, 331, 1480 ; Peer et al. Lab. Invest. 1995, 72, 638], makularnu degeneraciju vezanu za starost [AMD ; pogledati, Lopez et al. Invest. Opththalmol. Vis. Sci.

1996, 37, 855], neovaskularni glaukom, psorijazu, retrolentalnu fibroplaziju, angiofibrom, upale, reumatoidni artritis (RA), restenozu, u-stent restenozu, vaskularnu restenozu grafta itd. Pored toga, povećano snabdevanje krvi, povezano sa kanceroznim i neoplastičnim tkivima, podstiče rast, što dovodi do bržeg širenja tumora i metastaze. Štaviše, porast novih krvnih i limfnih krvnih sudova u tumoru pruža put za beg za štetnih ćelija, podstičući metastaze i širenje kancera. Prema tome, jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu se koristiti za lečenje i/ili sprečavanje bilo kog od gore pomenutih poremećaja angiogeneze, npr. inhibicijom i/ili smanjenjem formiranja krvnih sudova; inhibiranjem, blokiranjem, smanjenjem, redukovanjem itd. proliferacije endotelnih ćelija ili drugih vrsta koje su uključene u angiogenezu, kao i uzrokovanje ćelijske smrti ili apoptoze takvih ćelija.

Doza i primena

[0178] Na osnovu standardnih laboratorijskih tehnika za koje je poznato da procenjuju jedinjenja korisna za lečenje hiperproliferativnih poremećaja i angiogenih poremećaja, standardnim testovima toksičnosti i standardnim farmakološkim testovima za određivanje tretmana uslova koji su identifikovani iznad kod sisara i poređenjem ovih rezultata sa rezultatima poznatih lekova koji se koriste za tretiranje ovih stanja, efikasna doza jedinjenja iz predmetnog pronalaska može se lako odrediti za tretman svake željene indikacije. Količina aktivnog sastojka koji se primenjuje u lečenju jednog od ovih stanja može se značajno razlikovati u skladu sa takvim razmatranjima kao što je određeno jedinjenje i jedinjenje za doziranje, način primene, period lečenja, starost i pol pacijenta koji se tretira, i prirode i obima tretiranog stanja.

[0179] Ukupna količina aktivnog sastojka koji će se primenjivati uglavnom se kreće od oko 0,001 mg/kg do oko 200 mg/kg telesne težine dnevno, a poželjno od oko 0,01 mg/kg do oko 20 mg/kg telesne težine dnevno. Klinički korisni raspored doziranja će se od jednog do tri puta dnevno dozirati od jedne do četiri nedelje. Pored toga, „odmori od lekova“ u kojima pacijent nije doziran lekom u određenom vremenskom periodu, mogu biti korisni za ukupnu ravnotežu između farmakoloških efekata i tolerancije. Jedinična doza može sadržati od oko 0,5 mg do oko 1500 mg aktivnog sastojka i može se davati jednom ili više puta dnevno ili manje od jednom dnevno. Prosečna dnevna doza za primenu injekcijom, uključujući intravenozne, intramuskularne, subkutane i parenteralne injekcije, te korištenje infuzionih tehnika, poželjno je od 0,01 do 200 mg/kg ukupne telesne težine. Prosečan dnevni rektalni dozni režim poželjno je od 0,01 do 200 mg/kg ukupne telesne težine. Prosečan dnevni režim vaginalnog doziranja poželjno je od 0,01 do 200 mg/kg ukupne telesne težine. Prosečan dnevni režim lokalnog doziranja će poželjno biti od 0,1 do 200 mg primenjeno između jednog i četiri puta dnevno. Poželjna transdermalna koncentracija će biti ona potrebna za održavanje dnevne doze od 001 do 200 mg/kg. Prosečan dnevni režim inhalacione doze će poželjno biti od 0,01 do 100 mg/kg ukupne telesne težine.

[0180] Naravno, specifični početni i kontinuirani režim doziranja za svakog pacijenta će se razlikovati u zavisnosti od prirode i težine stanja, kao što je određeno od strane dijagnostičara koji prisustvuje, aktivnosti specifičnog korišćenog jedinjenja, starosti i opšteg stanja pacijenta, vremena primene, načina primene, stope izlučivanja leka, kombinacije lekova i slično. Željeni način lečenja i broj doza jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili sastava mogu se utvrditi od strane stručnjaka u praksi korišćenjem konvencionalnih terapijskih postupaka.

[0181] Poželjno, bolesti navedenog postupka su hematološki tumori, čvrsti tumori i/ili njihove metastaze.

[0182] Jedinjenje iz predmetnog pronalaska može se posebno koristiti u terapiji i prevenciji, tj. profilaksi, rasta tumora i metastaza, posebno u čvrstim tumorima svih indikacija i stadijuma sa ili bez prethodnog tretmana rasta tumora.

[0183] Postupci ispitivanja za određeno farmakološko ili farmaceutsko svojstvo dobro su poznati stručnjacima.

[0184] Primeri eksperimenta koji su ovde opisani služe za ilustraciju predmetnog pronalaska i pronalazak nije ograničen na primere koji su dati.

Biološka analiza: Analiza proliferacije

[0185] Kultivisane tumorske ćelije (MCF7, jajne ćelije karcinoma čoveka zavisne od hormona, ATCC HTB22, NCI-H460, ljudske ne male ćelije karcinoma pluća, ATCC HTB-177, DU 145, ćelije karcinoma ljudske prostate zavisne od hormona, ATCC HTB -81, HeLa-MaTu, ćelije karcinoma ljudskog grlića materice, EPO-GmbH, Berlin, HeLa-MaTu-ADR, ćelije karcinoma ljudskog grlića materice otporne na više lekova, EPO-GmbH, Berlin, HeLa ćelije karcinoma ljudskog grlića materice, ATCC CCL-2, B16F10 mišje ćelije melanoma, ATCC CROL-6475) su stavljene na gustini od 5000 ćelija/komorica (MCF7, DU145, HeLa-MaTu-ADR), 3000 ćelija/komorica (NCI-H460, HeLa-MaTu, HeLa) ili 1000 ćelija/komorica (B16F10) u multitiarskim pločama sa 96 komorica u 200 µL njihovog odgovarajućeg medijuma rasta dopunjeno sa 10% fetalnog telećega seruma. Posle 24 sata, ćelije jedne ploče (ploče sa nultom tačkom) su obojene kristalno ljubičastom(pogledati dole), dok je medijum drugih ploča zamenjen sa svežim medijumom za kulturu (200 µL), na koji su dodane testirane supstance u različitim koncentracijama (0 µM, kao i u opsegu od 0,01-30 µM, konačna koncentracija rastvarača dimetil sulfoksida je bila 0,5%). Ćelije su inkubirane 4 dana u prisustvu tesnih supstanci. Proširenje ćelija je određeno bojenjem ćelija kristalno ljubičastim: ćelije su fiksirane dodavanjem 20 µl/merna tačka na 11% glutarnog aldehidnog rastvora na 15 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon tri ciklusa pranja fiksnih ćelija sa vodom, ploče su osušene na sobnoj temperaturi. Ćelije su obojene dodavanjem 100 µl/merna tačka 0,1% kristalnog ljubičastog rastvora (pH 3,0). Posle tri ciklusa pranja obojenih ćelije sa vodom, ploče su osušene na sobnoj temperaturi. Ova boja je rastvorena dodavanjem 100 µl/merna tačka 10% rastvora sirćetne kiseline. Izumiranje je određeno fotometrijom na talasnoj dužini od 595 nm. Promena broja ćelija, u procentima, izračunava se normalizacijom izmerenih vrednosti na vrednostima izumiranja ploče nulte tačke (= 0%) i izumiranjem neuređenih (0 mm) ćelija (= 100%). IC50 vrednosti su određene pomoću 4 parametarske postavke koristeći sopstveni softver kompanije.

Mps-1 test kinaze

[0186] Mps-1 ljudska kinaza fosforiliše biotinilovani peptid supstrat. Detekcija fosforilovanog proizvoda postiže se transkriptom energije fluorescencione rezonantne energije (TR-FRET) od Europium-obeleženog anti-fosfo-serinog/treoninskog antitela kao donatora streptavidina obeleženog sa unakrsno vezanim alofikocijaninom (SA-XLent) kao akceptorom. Jedinjenja su testirana na svoju inhibiciju aktivnosti kinaze.

Korišćena je N-terminalna GST-obeležena rekombinantna ljudska Mps-1 kinaza čovečije pune dužine (nabavljena od Invitrogen, Karslruhe, Germany, cat. no PV4071). Kao podloga za reakciju kinaze korišćen je biotinilovani peptid amino-kiselinske sekvence PWDPDDADITEILG (C-terminus u amidnom obliku, kupljen od Biosynthan GmbH, Berlin).

[0187] Za ispitivanje 50 nL 100-strukog koncentrovanog rastvora testiranog jedinjenja u DMSO-u pipetovano je u 384-komoričnu mikrotitarsku ploču sa malim zapreminama (Greiner Bio-One, Frickenhausen, Germany), 2 µl rastvora Mps-1 u puferu za testiranje [0,1 mM natrijum-orto-vanadat, 10 mM MgCl2, 2 mM DTT, 25 mM Hepes pH 7,7, 0,05% BSA, 0,001% Pluronic F-127] i smeša je inkubirana 15 minuta na 22°C da bi se omogućilo prethodno vezivanje testiranih jedinjenja na Mps-1 pre početka reakcije kinaze. Tada je reakcija kinaze počela dodavanjem 3 µl rastvora 16,7 adenozin-trifosfata (ATP, 16,7 µM = konačna koncentracija u 5 µM zapremine testa je 10 µM) i supstrat peptida (1,67 µM = konačna koncentracija u 5 µM zapremine testa je 1 µM) u puferu za analizu i dobijena smeša je inkubirana za vreme reakcije od 60 min na 22°C. Koncentracija Mps-1 u testu prilagođena je delovanju ćelije enzima i izabrana je odgovarajuća da bi test bio u linearnom rasponu, tipične koncentracije enzima bile su u opsegu od oko 1 nM (konačna koncentracija u 5 µM zapremine testa). Reakcija je zaustavljena dodatkom 3 µl rastvora reagensa za detekciju HTRF (100 mM Hepes pH 7,4, 0,1% BSA, 40 mM EDTA, 140 nM Streptavidin-XLent [# 61 GSTXLB, Fa. Cis Biointernational, Marcoule, France], 1,5 nM anti-fosfo (Ser/Thr) -Europium-antitela [#AD0180, PerkinElmer LAS, Rodgau-Jügesheim, Germany].

[0188] Dobijena smeša je inkubirana 1 sat na 22°C kako bi se omogućilo vezivanje fosforilovanog peptida na anti-fosfo (Ser/Thr) -Europium-antitelo. Zatim je količina fosforilovanog supstrata procenjena merenjem prenosa rezonantne energije iz Europiumobeleženog anti-fosfo(Ser/Thr) antitela na Streptavidin-XLent. Zbog toga su emisije fluorescencije na 620 nm i 665 nm nakon ekscitacije na 350 nm merene u čitaču Viewlux TR-FRET (PerkinElmer LAS, Rodgau-Jügesheim, Germany). „Blanko-korigovani normalizovani odnos“ (specifično očitavanje Viewlux, slično tradicionalnom odnosu emisija na 665 nm i 622 nm, pri čemu se blanko i Eu-donorska ukrštanja oduzimaju od signala 665 nm pre nego što se izračunava koeficijent ) uzet je kao mera za količinu fosforilisanog supstrata. Podaci su normalizovani (enzimska reakcija bez inhibitora = 0% inhibicija, sve ostale komponente za analizu, ali bez enzima = 100% inhibicija). Ispitivana jedinjenja su testirana na istoj ploči sa mikrotitrom u 10 različitih koncentracija u rasponu od 20 µM do 1 nM (20 µM, 6,7 µM, 2,2 µM, 0,74 µM, 0,25 µM, 82 nM, 27 nM, 9,2 nM, 3,1 nM i 1 nM, serija razređivanja pripremljena pre ispitivanja na nivou kontejnerskih rešenja u količini od 100 strukih serijskih razblaženja 1:3) u dupliciranim vrednostima za svaku koncentraciju, a IC50vrednosti su izračunate pomoću 4 parametarskog podešavanja koristeći in-house softver.

Ispitivanje kontrolne tačke vretena

[0189] Kontrolna tačka vretena osigurava pravilnu segregaciju hromozoma tokom mitoze. Nakon ulaska u mitozu, hromozomi počinju da kondenzuju što je praćeno fosforilacijom histona H3 na serinu 10. Defosforilacija histona H3 na serin 10 započinje u anafazi i završava se u ranoj telafazi. Prema tome, fosforilacija histona H3 na serin 10 može se koristiti kao marker ćelija u mitozi. Nokodazol je sredstvo za destabilizaciju mikrotubula. Stoga, nokodazol ometa dinamiku mikrotubula i mobilizuje kontrolni punkt vretena. Ćelije se zaustavljaju u mitozi na prelazu G2/M i pokazuju fosforilovani histon H3 na serinu 10.

Inhibicija kontrolne tačke sesije vretena pomoću Mps-1 inhibitora prepisuje mitotičku blokadu u prisustvu nokodazola, i ćelije preuranjeno završavaju mitozu. Ova promena se detektuje smanjenjem ćelija fosforilacijom histona H3 na serinu 10. Ovaj pad se koristi kao marker za određivanje sposobnosti jedinjenja iz predmetnog pronalaska da indukuju mitotički proboj.

[0190] Kultivisane ćelije ljudske cervikalne tumorske ćelijske linije HeLa (ATCC CCL-2) su pokrivene na gustini od 2500 ćelija/komorica u 384-komoričnoj ploči sa mikrotitromom u 20 µl Dulbekovog medijuma (bez fenol crvene, bez natrijum piruvata, sa 1000 mg/ml glukoze, sa piroksidinom) dopunjeno sa 1% (v/v) glutamina, 1% (v/v) penicilina, 1% (v/v) streptomicina i 10% (v/v) fetalnog telećeg seruma. Posle inkubacije preko noći na 37°C, u ćelije je dodato 10 µl/komorica nokodazola u konačnoj koncentraciji od 0,1 µg/ml. Nakon 24 h inkubacije, ćelije su zaustavljene u G2/M fazi progresije ćelijskog ciklusa. Ispitivana jedinjenja koja su rastvorena u dimetil sulfoksidu (DMSO) su dodata u različitim koncentracijama (0 µM, kao i u opsegu od 0,005 µM - 10 µM, konačna koncentracija rastvarača DMSO je bila 0,5% (v/v)). Ćelije su inkubirane 4 časa na 37°C u prisustvu test jedinjenja. Nakon toga, ćelije su bile fiksirane u 4% (v/v) paraformaldehidu u fosfatom puferisanom fiziološkom rastvoru (PBS) na 4°C preko noći, zatim permeabilizovane u 0,1% (v/v) Triton X™ 100 u PBS na sobnoj temperaturi 20 minuta i blokirane u 0,5% (v/v) goveđeg serumskog albumina (BSA) u PBS na sobnoj temperaturi 15 minuta. Nakon pranja sa PBS, dodato je u ćelije 20 µl/komorica rastvora antitela (anti-fosfo-histon H3 klon 3H10, FITC, Upstate, Cat # 16-222; 1: 200 razređivanje), koje su inkubirane 2 sasta na sobnoj temperaturi. Nakon toga, ćelije su isprane sa PBS i dodatoje 20 ml/komorica HOECHST 33342 rastvora boje (5 µg/ml) u ćelije, i ćelije su inkubirane 12 min na sobnoj temperaturi u mraku. Ćelije su isprane dva puta sa PBS, zatim pokrivene sa PBS i čuvane na 4°C do analize. Slike su dobijene sa Perkin Elmer OPERA™ čitačem visokog sadržaja. Slike su analizirane pomoću softvera za analizu slike MetaXpress™ od Molecular devices koji koristi modul aplikacije Cell Cycle. U ovom testu izmerena su HOECHST 33342 obeležja i fosforilovani histon H3 na serinu 10. HOECHST 33342 obeležava DNK i koristi se za brojanje broja ćelijskog. Očišćavanje fosforilovanog Histona H3 na serinu 10 određuje broj mitotskih ćelija. Inhibicija Mps-1 smanjuje broj mitotskih ćelija u prisustvu nokodazola koji ukazuju na neodgovarajuću mitološku progresiju. Podaci sirove analize su dalje analizirani pomoću četiri parametarske logističke regresione analize da bi se odredila IC50vrednost za svako testirano jedinjenje.

Ispitivanje in vitro metaboličke stabilnosti kod hepatocita pacova (uključujući računanje in vivo klirenska krvi (CL) jetre)

[0191] Hepatociti iz Han Wistar pacova su izolovani pomoću perfuzionog postupka u 2 koraka. Posle perfuzije, jetra je pažljivo uklonjeno iz pacova: kapsula jetre je otvorena, a hepatociti su lagano istreseni u Petrijevu posudu sa ledeno hladnim WME-om. Dobijena ćelijska suspenzija se filtrira kroz sterilizovanu gazu u 50 ml soko cevi i centrifugira se na 50 × g tokom 3 min na sobnoj temperaturi. Ćelijska peleta je ponovo suspendovana u 30 ml WME i centrifugirana kroz Percoll<®>gradijent 2 puta na 100 × g. Hepatociti su oprani opet pomoću Villiamsovog medijuma E (WME) i resuspendovani u medijumu koji sadrži 5% FCS. Vijabilnost ćelija je određena isključenjem tripan plave.

[0192] Za analizu stabilnosti metabolizma, ćelije jetre su bile distribuirane u WME-u sa 5% FCS do staklenih bočica na gustinom od 1,0 × 10<6>vitalnih ćelija/ml. testirano jedinjenje je dodato u konačnu koncentraciju od 1 µM. Tokom inkubacije, suspenzije hepatocita su kontinuirano tresene i alikvote su uzete na 2, 8, 16, 30, 45 i 90 minuta, za šta su odmah dodate jednake količine hladnog metanola. Uzorci su zamrznuti na -20°C preko noći, posle naknadnog centrifugiranja 15 minuta na 3000 obrtaja u minuti, a supernatant je analiziran pomoću Agilent 1200 HPLC sistema sa LCMS/MS detekcijom.

[0193] Polu-život testiranog jedinjenja određen je iz grafika vreme-koncentracija. Od poluživota su izračunati suštinski razmaci. Zajedno sa dodatnim parametrima krvotoka jetre, količina ćelija jetre in vivo i in vitro. Izračunat je in vivo klirens krvi (CL) jetre i mamaksimalna oralna biodostupnost (Fmax). Koriste se sledeće vrednosti parametara: protok krvi jetre - 4,2 L/h/kg pacova; specifična težina jetre - 32 g/kg telesne težine pacova; ćelije jetre in vivo - 1,1 x 10<8>ćelija/g jetre, ćelije jetre in vitro - 0,5 x 10<6>/ml.

Određivanje inhibitornog potencijala na ljudskom CYP3A4

[0194] Potencijal test jedinjenja koji deluje kao kompetitivni inhibitor CYP3A4 je evaluiran u in vitro testovima, koristeći ljudske mikrosome jetre i referentni substrat midazolam. Test jedinjenje je rastvoreno u acetonitrilu. Za analizu je primenjen mikrosomski preparat ljudske jetre (HLM). Osnovni rastvor test jedinjenja je dodat u fosfatni pufer koji sadrži EDTA, NADP, glukozni 6-fosfat i glukozu 6-fosfat dehidrogenazu. Ova smeša je sekvencijalno razređena naGenesis Workstation (Tecan, Crailsheim, FRG). Posle zagrevanja, reakcija je inicirana dodavanjem smeše sonde (midazolam). Najzad, inkubacione smeše su sadržale ljudske mikrosome jetre u koncentraciji proteina od 60 µg/mL, NADPH-regeneracioni sistem (1 mM NADP, 5,0 mM glukoza 6-fosfat, glukoza 6-fosfat dehidrogenaza (1,5 U/mL), 1,0 mM EDTA, testirano jedinjenje u 6 različitih koncentracija, 2,5 5µM midazolama kao supstrat sonde i fosfatni pufer (50 mM, pH 7,4) u ukupnoj zapremini od 200 µL. Inkubacije su izvršene na Genesis Workstation (Tecan, Crailsheim, FRG) u 96-komoričnim pločama (ploča sa mikrotitrom, 96-komorična ploča) na 37°C. Osnovni rastvor podloge sonde je pripremljen u vodi (midazolam 10 mM) Ketokonazol se koristi kao pozitivna kontrola inhibitora direktnog delovanja. Referentni uzorci (supstrat, ali bez inhibitora) paralelno se inkubiraju u sekvenci i sadrže istu količinu rastvarača kao inkubacije testa.

[0195] Reakcije su zaustavljene dodavanjem 100 µL acetonitrila koji sadrži interni standard. Precipitirane proteine su uklonjene centrifugiranjem ploče sa komoricama, supernatanti su analizirani pomoću LC-MS/MS.

[0196] Metabolička aktivnost posredovana CYP3A4 u prisustvu testiranih jedinjenja izražena je kao procenat odgovarajuće referentne vrednosti. Kriva u obliku sigmoida postavljena je na podatke za izračunavanje parametra inhibicije enzima IC50 korišćenjem nelinearne regresione analize najmanjih kvadrata parcele procentualne kontrolne aktivnosti u odnosu na koncentraciju inhibitora testa. Posmatrajući manje od 50% inhibicije, podaci nisu ekstrapolirani; prema tome, IC50 je prijavljen kao veći od najveće koncentracije primenjenog testiranog jedinjenja.

Određivanje inhibicije ljudskog CYP3A4 zasnovane na mehanizmu

[0197] In vitro ispitana je inhibicija CYP3A4 zasnovana na mehanizmu (nepovratna), korišćenjem ili mikrosoma ljudske jetre (0,5 mg/ml) ili rekombinantnog CYP3A4 izoformA (50 ili 100 pmol/mL). testirano jedinjenje je inkubirano na 37°C u koncentracionom NADPH- i vremenski zavisnom okruženju. Prema tome, testirano jedinjenje je inkubirano u 4 različite koncentracije (npr.: 1, 2, 5, 10 µM) u prisustvu NADPH (1 M) i sistem regeneracije u fiziološkom rastvoru sa fosfatnim puferom (0,05 mM, pH 7,4). Najveća koncentracija testiranog jedinjenja je inkubirana bez NADPH-a i stoga služi kao NADPH-deficijentna kontrola. Pored toga, acetonitril kao kontrola nosača (negativna kontrola) i mibefradil kao pozitivna kontrola za ireverzibilnu inaktivaciju CYP3A4 takođe su uključeni korišćenjem identičnih uslova testiranja.

[0198] Svaka smeša je inkubirana sa enzimom (preininkubacija) do 50 minuta. U početku i svakih 10 minuta, alikvot ove inkubacijske smeše je uklonjen i dalje razblažen faktorom od 10 -50 (poželjno 25) u novu inkubaciju koja sadrži NADPH (1 mM) i 150 µM testosterona kao specifičan supstrat za CYP3A4 (glavna inkubacija) i dopušteno joj je da se inkubira dodatnu količinu vremena (npr.10 do 20 min) kako bi se generisao specifični metabolit izoforma za konačnu procenu enzimske aktivnosti.

[0199] Nakon toga, reakcija u glavnoj inkubaciji je zaustavljena dodavanjem acetonitrila (koji sadrži interni standard), protein je ostavljen da precipitira stavljanjem smeše u ledeno kupatilo. Posle toga, smeša je centrifugirana da peletizuje protein, a supernatante su analizirane pomoću HPLC-MS za metabolit specifičnog za izoform, npr.6-b hidroksestestosteron i preostala količina testiranog jedinjenja.

[0200] Preostala aktivnost enzima normalizovana je na inicijalnu aktivnost u vremenu od 0 minuta, a zatim prikazana u semilogaritamskom grafiku u zavisnosti od vremena preinkubacije. Paralelno je obrt supstrata iscrtan u odnosu na vreme preinkubacije. Od ovih kinetičkih parametara podataka, kao što je efikasnost ovog procesa, izražena sa odnosom particije r (broj inaktivatora molekula koji se metabolišu proteinskim molekulom inaktiviranim CYP3A4). Za opšti opis kako odrediti odnos particije pogledati R.B. Silverman Methods Enzymol 1995, 249, 240-283.

Claims (13)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (B):

   ili njegov N-oksid, hidrat, solvat ili so.
2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za primenu u lečenju ili profilaksi bolesti.
3. 3. Jedinjenje za primenu prema patentnom zahtevu 2, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde je navedena bolest nekontrolisan rast, proliferacija i/ili preživljavanje ćelija, neodgovarajući ćelijski imuni odgovor, ili neodgovarajući ćelijski upalni odgovor, posebno gde su nekontrolisan rast, proliferacija i/ili preživljavanje ćelija, neodgovarajući ćelijski imuni odgovor, ili neodgovarajući ćelijski upalni odgovor posredovani mitogen-aktiviranim putem protein kinaze (MEK-ERK), još određenije gde je bolest nekontrolisanog rasta, proliferacije i/ili preživljavanja ćelija, neodgovarajućeg ćelijskog imunog odgovora, ili neodgovarajućeg ćelijskog upalnog odgovora hematološki tumor, čvrsti tumor i/ili njihove metastaze, npr. leukemije i mijelodisplastični sindrom, maligni limfomi, tumori glave i vrata uključujući tumore mozga i metastaze na mozgu, tumori toraksa uključujući tumore malih i ne malih ćelija pluća, gastrointestinalni tumori, endokrini tumori, tumore jajnika i drugi ginekološki tumori, urološki tumori uključujući bubrežne, tumor bešike i prostate, tumora kože i sarkoma i/ili njihove metastaze.
4. 4. Farmaceutski sastav koji obuhvata jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i farmaceutski prihvatljiv rastvarač ili nosač.
5. 5. Farmaceutska kombinacija koja sadrži: - jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so; i - jedan ili više agens izabran iz grupe koju čine: taksan, kao što su Docetaksel, Paclitaksel, ili Taksol; epotilon, kao što su Iksabepilon, Patupilon, ili Sagopilon; Mitoksantron; Predinizolon; Deksametason; Estramustin; Vinblastin; Vincristin; Doksorubicin; Adriamicin; Idarubicin; Daunorubicin; Bleomicin; Etoposid; Cuklofosfamid; Ifosfamid; Prokarbazin; Melfalan; 5-Fluorouracil; Kapecitabin; Fludarabin; Citarabin; 2-Hloro-2'-deoksiadenozin; tioguanin; anti-androgen, kao što su Flutamide, Ciproteron acetat, ili Bikalutamid; Bortezomib; derivat platine, kao što su Cisplatin, ili Karboplatin; Hlorambucil; Metotreksat; i Rituksimab.
6. 6. Postupak pripreme jedinjenja prema patentnom zahtevu 1, gde navedeni postupak obuhvata korak koji omogućava međuproizvod jedinjenja formule (B1):

   gde Z' predstavlja grupu izabranu od: -C(=O)OH i -C(=O)O-(C1-C6-alkil); da reaguje sa jedinjenjem formule Ib:

   tako dajući, nakon opcionog uklanjanja zaštite, jedinjenje formule (B) kako je definisano u patentnom zahtevu 1.
7. 7. Postupak pripreme jedinjenja prema patentnom zahtevu 1, gde navedeni postupak obuhvata korak koji omogućava međuproizvod jedinjenja opšte formule (B2):

   gde je Q<2>atom halogena; da reaguje sa jedinjenjem opšte formule IIa :

   gde je Y supstituent koji je premešten u reakciji spajanja izabran od ``, ili estra grupe boronske kiseline; tako dajući, nakon opcionog uklanjanja zaštite, jedinjenje formule (B) kako je definisano u patentnom zahtevu 1.
8. 8. Postupak pripreme jedinjenja prema patentnom zahtevu 1, gde navedeni postupak obuhvata korak konverzije međuproizvod jedinjenja formule (B3):

   gde je Q<1>atom halogena; da reaguje sa jedinjenjem opšte formule (B4):

   tako dajući, nakon opcionog uklanjanja zaštite, jedinjenje opšte formule (B), kako je definisano u patentnom zahtevu 1.
9. 9. Postupak pripreme jedinjenja prema patentnom zahtevu 1, gde navedeni postupak obuhvata korak konverzije međuproizvod jedinjenja formule (B5):

   gde je Q<3>NH2-grupa; da reaguje sa jedinjenjem opšte formule

   tako dajući, nakon redukcije imina, i nakon opcionog uklanjanja zaštite, jedinjenje formule (B), kako je definisano u patentnom zahtevu 1.
10. 10. Postupak pripreme jedinjenja prema patentnom zahtevu 1, gde navedeni postupak obuhvata korak konverzije međuproizvod jedinjenja formule formula (B7):

    gde je R<3'>atom jodina, bromina ili hlorina; da reaguje sa jedinjenjem formule (

    gde je Y supstituent koji je premešten u reakciji spajanja izabran od atoma vodonika, ili grupe boronske kiseline, ili grupe boronskog estra; tako dajući jedinjenje formule (B), kako je definisano u patentnom zahtevu 1.
11. 11. Primena jedinjenja prema patentnom zahtevu 1, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, za pripremu leka za lečenje ili profilaksu bolesti.
12. 12. Primena prema patentnom zahtevu 11, gde je navedena bolest nekontrolisan rast, proliferacija i/ili preživljavanje ćelija, neodgovarajući ćelijski imuni odgovor, ili neodgovarajući ćelijski upalni odgovor, posebno gde su nekontrolisan rast, proliferacija i/ili preživljavanje ćelija, neodgovarajući ćelijski imuni odgovor, ili neodgovarajući ćelijski upalni odgovor posredovani mitogen-aktiviranim putem protein kinaze (MEK-ERK), još određenije gde je bolest nekontrolisanog rasta, proliferacije i/ili preživljavanja ćelija, neodgovarajućeg ćelijskog imunog odgovora, ili neodgovarajućeg ćelijskog upalnog odgovora hematološki tumor, čvrsti tumor i/ili njihove metastaze, npr. leukemije i mijelodisplastični sindrom, maligni limfomi, tumori glave i vrata uključujući tumore mozga i metastaze na mozgu, tumori toraksa uključujući tumore malih i ne malih ćelija pluća, gastrointestinalni tumori, endokrini tumori, tumore jajnika i drugi ginekološki tumori, urološki tumori uključujući bubrežne, tumor bešike i prostate, tumora kože i sarkoma i/ili njihove metastaze.
13. 13. Jedinjenje formule (B1), (B2), (B3), ili (B5) kako je definisano u patentni zahtevima 6, 7, 8, i 9.