RS56556B1 - N- (5s, 6s, 9r) - 5 -amino- 6 - (2, 3 - difluorofenil) -6, 7, 8, 9 - tetrahidro - 5h - ciklohepta [b]piridin-9 -il- 4 - (2 - okso-2, 3 - dihidro - 1h- imidazo [4, 5 -b]piridin - 1 - il) piperidin - 1 - karboksilat, hemisulfatna so - Google Patents

Description

Opis pronalaska

STANJE TEHNIKE

[0001] Ovde stavljena na uvid javnosti je hemisulfatna so N-(5S,6S,9R)-5-amino-6-(2,3-difluorofenil)-6,7,8,9-tetrahidro-5H-ciklohepta[b]piridin-9-il-4-(2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazo[4,5-b]piridin-1-il)piperidin-1-karboksilata, kao i njeni kristalni oblici. Takođe ovde stavljeni na uvid javnosti su najmanje jedna farmaceutska kompozicija koja sadrži hemisulfatnu so N-(5S,6S,9R)-5-amino-6-(2,3-difluorofenil)-6,7,8,9-tetrahidro-5H-ciklohepta[b]piridin-9-il-4-(2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazo[4,5-b]piridin-1-il)piperidin-1-karboksilata i najmanje jedna metoda za korišćenje hemisulfatne soli N-(5S,6S,9R)-5-amino-6-(2,3-difluorofenil)-6,7,8,9-tetrahidro-5H-ciklohepta[b]piridin-9-il-4-(2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazo[4,5-b] piridin-1-il)piperidin-1-karboksilata u lečenju poremećaja povezanih sa CGRP, kao što su migrenozne glavobolje i astma.

[0002] Jedinjenje, N-(5S,6S,9R)-5-amino-6-(2,3-difluorofenil)-6,7,8,9-tetrahidro-5H-ciklohepta[b]piridin-9-il-4-(2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazo[4,5-b] piridin-1-il)piperidin-1-karboksilat, ima strukturu predstavljenu formulom I:

i ovde je naznačeno kao "Jedinjenje (I)". Jedinjenje (I), načini pripreme Jedinjenja (I) i metode za lečenje koje koriste Jedinjenje (I) su stavljeni na uvid javnosti u Američkoj patentnoj prijavi sa brojem objave 2011/0251223 A1. Ova referenca je dodeljena predmetnom zastupniku i ovde je inkorporirana putem reference u svojoj celosti.

[0003] Korist primene oralne formulacije, između ostalog, zavisi od stepena biološke raspoloživosti aktivne supstance i stalnosti u biološkoj raspoloživosti kod pacijenata. Na biološku raspoloživost oralno primenjenih lekova utiču različiti faktori uključujući, na primer, rastvorljivost leka u gastrointestinalnom traktu, stabilnost leka u gastrointestinalnom traktu, i absorpcija leka u gastrointestinalnom traktu. Pored toga, na ove faktore može uticati upotreba drugih lekova i/ili primena hrane, što može dovesti do varijacija u biološkoj raspoloživosti oralno primenjenog leka. Tako, brzo in vivo rastvaranje aktivne supstance se, takođe, zahteva da bi se obezbedio brzi tretman stanja kao što su migrenozne glavobolje.

[0004] Stepen rastvaranja Jedinjenja (I) zavisi od pH vodene sredine. Jedinjenje (I) ima veći stepen rastvaranja pri pH vrednostima od 1 do 5, nego pri vrednosti pH 7. Pri oralnoj primeni Jedinjenja (I), na stepen rastvaranja, stoga, i na biološku raspoloživost Jedinjenja I može uticati pH vrednost stomačnog sadržaja. Normalna pH vrednost stomaka je od 1.2 do 1.8 saglasno sa C.J. Perigard, Clinical Analysis, poglavlje 32, u Remingtonovoj knjizi: The Science and Practice of pharmacy 20-to izdanje, A.R. Gennaro, editor; 2000, Lippinocott Williams & Wilkins, Baltimore, MD. Međutim, pacijenti često uzimaju druge lekove koji mogu podići pH vrednost stomaka, uključujući antacide, inhibitore protonske pumpe i antagoniste H2-receptora kao što je famotidin, koji može da smanji stepen rastvaranja Jedinjenje (I).

[0005] Obično, u pripremi neke farmaceutske kompozicije, se traži oblik aktivnog sastojka koji ima ravnotežu željenih svojstava, kao što su, na primer, stepen rastvaranja, rastvorljivost, biološka raspoloživost i/ili stabilnost prilikom skladištenja. Na primer, traži se takav oblik aktivnog sastojka koji ima dovoljnu stabilnost, rastvorljivost i biološku raspoloživost, da se spreči izmena, dovoljno rastvorljivog i biološki raspoloživog oblika, tokom proizvodnje, pripreme i/ili skladištenja farmaceutske kompozicije, u drugi oblik koji ima neželjeni profil rastvorljivosti i/ili biološke raspoloživosti. Na primer, traži se oblik aktivnog sastojka koji je stabilan i sa niskim stepenom higroskopnosti pri određenim uslovima temperature i vlažnosti sredine.

[0006] Dodatno, može se tražiti oblik aktivnog sastojka koji omogućava proizvodnju aktivnog sastojka procesom proizvodnje koji se može prilagoditi proizvodnji širokih razmera. U takvom procesu je poželjno da je aktivni sastojak u obliku koji omogućava laku izolaciju i/ili prečišćavanje aktivnog sastojka, na primer, filtracijom, kao i laganim sušenjem.

[0007] Pored toga, pošto je važna ekonomičnost proizvodnje, poželjno je, kad god je to moguće, izbegavati upotrebu skupljih materijala, prilikom pripreme oblika.

[0008] Podnosioci prijave su našli hemisulfatnu so Jedinjenja (I) koja iznenađujuće smanjuje promene u biološkoj raspoloživosti Jedinjenja (I), obezbeđuje stalnost u biološkoj raspoloživosti među pacijentima, i/ili povećava biološku raspoloživost Jedinjenja (I) kod pacijenta. Osim toga, podnosioci prijave su takođe našli kristalni oblik hemisulfatne soli Jedinjenja (I), koji iznenađujuće smanjuje promene u biološkoj raspoloživosti Jedinjenja (I), obezbeđuje stalnost u biološkoj raspoloživosti među pacijentima, i/ili povećava biološku raspoloživost Jedinjenja (I) kod pacijenta. Hemisulfatna so Jedinjenja (I) i njen kristalni oblik, iznenađujuće obezbeđuju ravnotežu traženih osobina u farmaceutskoj kompoziciji. Predmetni pronalazak je, takođe, usmeren ka drugim važnim aspektima.

OPIS PRONALASKA

[0009] Jedan aspekt pronalaska je hemisulfatna so Jedinjenja (I):

[0010] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje kristalni oblik hemisulfatne soli Jedinjenja (I).

[0011] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadrže farmaceutski prihvatljiv nosač i/ili rastvarač; i hemisulfatnu so Jedinjenja (I).

[0012] Predmetni pronalazak, takođe, ovde daje na uvid javnosti metod lečenja bolesti ili poremećaja povezanih sa aktivnošću CGRP receptora, metod koji obuhvata primenu hemisulfatne soli Jedinjenja (I) kod pacijenta iz grupe sisara.

[0013] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje procese i međuproizvode za pravljenje hemisulfatne soli Jedinjenja (I), i/ili njenih kristalnih oblika.

[0014] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje hemisulfatnu so Jedinjenja (I) za primenu u terapiji.

[0015] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje hemisulfatnu so Jedinjenja (I) za primenu u lečenju poremećaja vezanih za CGRP među kojima su migrenozne glavobolje, neurogena vazodilatacija, neurogena inflamacija, toplotne traume, cirkulatorni šok, crvenilo vezano za menopauzu, inflamatorne bolesti respiratornog trakta kao što je astma, i hronična opstruktivna bolest pluća (HOBP).

[0016] Ove i druge karakteristike pronalaska će biti predstavljene u proširenoj formi tokom ovog izlaganja.

KRATAK OPIS CRTEŽA

[0017]

SLIKA 1. prikazuje eksperimentalne (na sobnoj temperaturi) i simulirane (sobna temperatura) PXRD šablone (CuKα λ=1.5418Å) Forme H1.5-1 u Primeru 1.

SLIKA 2. prikazuje profil diferencijalnog skeniranja kalorimetrom Forme H1.5-1 u Primeru 1.

SLIKA 3. prikazuje profil termogravimetrijskih analiza Forme H1.5-1 u Primeru 1. SLIKA 4. prikazuje charge polarized magic angle spinning - NMR spektar Forme H1.5-1 u Primeru 1.

SLIKA 5. prikazuje izotermu sorpcije vlage za Primer 1 na 25 °C. (X) adsorpcija; (■) desorpcija.

SLIKA 6. prikazuje % rastvaranja naspram vremena pri približnoj pH vrednosti 5 kod simulacije crevne tečnosti nakon obroka (FeSSIF) i pri približnoj pH vrednosti 7 kod simulacije crevne tečnosti pre obroka (FaSSIF) za Jedinjenje (I) kao sloodne baze i kao HCl soli Jedinjenja (I).

SLIKA 7. prikazuje % rastvaranja naspram vremena pri približnoj pH vrednosti 1, pri približnoj pH vrednosti 5 kod simulacije crevne tečnosti nakon obroka (FeSSIF), i pri približnoj pH vrednosti 7 kod simulacije crevne tečnosti pre obroka (FaSSIF) za Jedinjenje (I) kao slobodne baze i za hemisulfatnu so Jedinjenja (I).

SLIKA 8. prikazuje farmakokinetičke promene u plazmi Jedinjenja (I), slobodne baze, kod ljudi nakon oralne primene, sa i bez prethodne primene famotidina (40 mg) dva sata pre primene Jedinjenja (I). Jedinjenje (I) je primenjeno u dozi od 150 mg. (●) Jedinjenje (I) (nM); (◆) Jedinjenje (I) sa prethodnom primenom famotidina (nM). X-osa je vreme u minutima.

SLIKA 9. prikazuje farmakokinetičke promene u plazmi Jedinjenja (I) kod pasa nakon oralne primene Jedinjenja (I) i Primera 1. Jedinjenje (I) i Primer 1 su primenjeni oralno u dozi od 150 mg (ili ekvivalentno). (◆) Jedinjenje (I) (nM) i prethodna primena pentagastrina (6 µm/km); (■) Jedinjenje (I) i famotidin (40 mg); (▲) Primer 1 (hemisulfatna so) i famotidin (40 mg).

SLIKA 10. prikazuje eksperimentalni (na sobnoj temperaturi) PXRD šablon (CuKα λ=1.5418Å) Forme P22C Primera 1.

SLIKA 11. prikazuje eksperimentalni (na sobnoj temperaturi) PXRD šablon (CuKα λ=1.5418Å) Forme P33 Primera 1.

SLIKA 11. prikazuje eksperimentalni (na sobnoj temperaturi) PXRD šablon (CuKα λ=1.5418Å) Forme P35 Primera 1.

DETALJNI OPIS

[0018] Karakteristike i prednosti pronalaska mogu biti jasnije shvaćene od strane osoba sa prosečnim veštinama iz ove oblasti nakon čitanja sledećeg detaljnog opisa. Treba razumeti da se određene karakteristike ovog pronalaska, koje su, zbog jasnoće, opisane u prethodnom tekstu i tekstu koji sledi u kontekstu pojedinačnih rešenja, mogu takodje kombinovati radi formiranja pojedinačnog rešenja. Nasuprot tome, različite karakteristike pronalaska koje su, zbog potrebe sažimanja teksta, opisane u kontekstu pojedinačnog rešenja, mogu takođe biti kombinovane tako da formiraju svoje pod-kombinacije.

[0019] Nazivi koji su ovde upotrebljeni da se naznači određen oblik, npr, "H1.5-1", "P22C", "P33", i"P35", služe samo kao identifikatori i treba ih tumačiti u skladu sa informacijama o karakterizaciji predstavljenim u ovom tekstu i ne treba da budu ograničavajući, čime bi se isključila bilo koja druga supstanca sličnih ili identičnih fizičkih i hemijskih osobina.

[0020] Definicije koje su ovde objavljene imaju prioritet nad definicijama objavljenim u bilo kom drugom patentu, patentnoj prijavi, i/ili objavi patentne prijave koje su inkorporirane ovde putem reference.

[0021] Svi brojevi koji izražavaju količine sastojaka, težinu u procentima, temperature i slično, kojima prethodi reč ″oko″ treba da se tumače kao približna vrednost, tako da male varijacije iznad i ispod pomenutog broja mogu biti upotrebljene za dobijanje suštinski istog rezultata koji bi dao i pomenuti broj. Shodno tome, sem ukoliko nije naznačeno drugačije, numerički parametri kojima prethodi reč ″oko″ su okvirna vrednost koja može da varira zavisno od željenih osobina koje treba da se dobiju. Na posletku, i ne kao namera da se ograniči primena doktrine ekvivalenata na opseg patentnih zahteva, svaki numerički parametar bi trebalo u najmanju ruku da bude predstavljen kao broj dobijenih značajnih cifara i primenom uobičajenih tehnike zaokruživanja.

[0022] Sva merenja su podložna eksperimentalnoj grešci i u duhu su pronalaska.

[0023] Hemisulfatna so Jedinjenja (I) se, nakon pripreme, izoluje i prečišćava da bi se dobila kompozicija koja sadrži količinu po masi podjednaku ili veću od 99%, poželjnije 99.5%, i još poželjnije, 99.9%, hemisulfatne soli Jedinjenja (I)) ("suštinski čista"), koja se potom koristi ili formuliše kao što je ovde opisano. Ovako "suštinski čista" hemisulfatna so Jedinjenja (I) je takođe ovde predstavljena kao deo predmetnog pronalaska.

[0024] Kao što je ovde primenjeno, "polimorfni oblici" se odnosi na kristalne oblike koji imaju istu hemijsku strukturu ali različit prostorni raspored molekula i/ili jona koji formiraju kristale.

[0025] Kao što je ovde primenjeno, "amorfni oblik" se odnosi na čvrstu formu molekula i/ili jona koji nije kristalni. Amorfna čvrsta supstanca ne prikazuje jasnu difrakciju X-zraka sa oštrim maksimumom.

[0026] Kao što je ovde primenjeno, termin "suštinski čist kristalni oblik" podrazumeva kristalni oblik hemisulfatne soli Jedinjenja (I) koji sadrži najmanje oko 90 mas% navedenog oblika, na osnovu mase hemisulfatne soli Jedinjenja (I). Pojam "najmanje oko 90 mas%," bez namere da se primena principa ekvivalencije svede na meru patentnih zahteva podrazumeva, ali nije ograničena na, na primer, oko 90, 90, oko 91,91, oko 92, 92, oko 93, 93, oko 94, 94, oko 95, 95, oko 96, 96, oko 97, 97, oko 98, 98, oko 99, 99, i oko 100 mas %, mase hemisulfatne soli Jedinjenja (I). Preostali deo hemisulfatne soli Jedinjenja (I) može da sadrži drugu(e) Formu(e) hemisulfatne soli Jedinjenja (I) uključujući amorfni oblik hemisulfatne soli Jedinjenja (I) i/ili reakcione nečistoće i/ili procesne nečistoće koje se pojavljuju, na primer, u procesu pripreme hemisulfatne soli i/ili u procesu pripreme kristalne forme.

[0027] Prisustvo reakcionih nečistoća i/ili procesnih nečistoća može se odrediti analitičkim tehnikama poznatim u struci, kao što su, na primer, hromatografija, nuklearna magnetna rezonantna spektroskopija, masena spektometrija, i/ili infracrvena spektroskopija.

[0028] Ovde primenjen, parametar "molekuli/asimetrična jedinica" se odnosi na broj molekula Jedinjenja (I) u asimetričnoj jedinici.

[0029] Ovde primenjen, parametar jedinične ćelije "molekuli/jedinična ćelija" se odnosi na broj molekula Jedinjenja (I) u jediničnoj ćeliji.

[0030] Cilj pronalaska je da obuhvati sve izotope atoma primećene u prisutnim jedinjenjima. Izotopi obuhvataju atome koji imaju isti atomski broj ali različite masene brojeve. Kao opšti primer i bez ograničenja, izotopi hidrogena uključuju deuterijum i tricijum. Izotopi ugljenika uključuju<13>C i<14>C. Izotopski-obeležena jedinjenja pronalaska se generalno mogu dobiti konvencionalnim tehnikama poznatim stručnim licima iz ove oblasti ili procesima analognim ovde opisanim, korišćenjem odgovarajućeg izotopski-obeleženog reagensa na mestu neobeleženog reagensa koji se inače koristi. Takva jedinjenja mogu imati različite potencijalne primene, na primer kao standardi i reagensi u određivanju biološke aktivnosti. U slučaju stabilnih izotopa, takva jedinjenja mogu pozitivno modifikovati biološke, farmakološke ili farmakokinetičke osobine.

[0031] Prvi aspekt pronalaska obezbeđuje hemisulfatnu so Jedinjenja (I),

Hemisulfatna so Jedinjenja (I) je kisela so Jedinjenja (I) u kojoj je odnos molekula sledeći: 0.5 molekula H2SO4na svaki molukul Jedinjenja (I), i njen naziv je: (5S,6S,9R)-5-amino-6-(2,3-difluorofenil)-6,7,8,9-tetrahidro-5H-ciklohepta[b] piridin-9-il 4-(2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazo[4,5-b]piridin-1-il)piperidin-1-karboksilat, hemisulfatna so.

[0032] U jednom tehničkom rešenju, hemisulfatna so Jedinjenja (I) je obezbeđena kao seskvihidrat, i ima odnos od 1.5 molekul vode i 0.5 molekula H2SO4na svaki molekul Jedinjenja (I).

[0033] U jednom tehničkom rešenju, hemisulfatna so Jedinjenja (I) je dobijena kao kristalna forma.

[0034] U jednom tehničkom rešenju, hemisulfatna so Jedinjenja (I) je dobijena kao kristalna forma, pri čemu kristalna forma je Forma H1.5-1. Ova kristalna forma ima odnos od 1.5 molekula vode i 0.5 molekula H2SO4na svaki molukul Jedinjenja (I).

[0035] U jednom tehničkom rešenju, Forma H1.5-1 je opisana parametrima jedinične ćelije, koji su suštinski jednaki sledećim:

Prostorna grupa: P21212

Molekuli Jedinjenje (I)/asimetrična jedinica: 1

Zapremina = 2851 Å<3>

Gustina (izračunato) = 1.423 g/cm<3>, pri čemu je merenje pomenute kristalne forme na temperaturi od oko 25 °C.

[0036] U jednom tehničkom rešenju, Forma H1.5-1 je opisana pomoću obrasca difrakcije xzraka praška (CuKα λ=1.5418Å) koji obuhvata 2θ vrednosti: 5.4±0.1, 8.6±0.1, 9.7±0.1, 12.4±0.1, 14.9±0.1, 17.6±0.1, 18.1±0.1, 20.5±0.1, 21.4±0.1, i 22.0±0.1, pri čemu je merenje kristalne forme na temperaturi od oko 25 °C.

[0037] U drugom tehničkom rečenju, Forma H1.5-1 je opisana spektrima nuklearne magnetne rezonance čvrstog stanja (ssNMR) koji u suštini odgovaraju spektrima prikazanim na SLICI 4.

[0038] Prema jednom tehničkom reženju, Forma H1.5-1 je naznačena pomoću spektara nuklearne magnetne rezonance čvrstog stanja koji obuhvataju šest ili više, poželjno sedam ili više pikova (δ (ppm) u odnosu na TMS) odabranih od : 26.6±0.1, 27.1±0.1, 28.3±0.1, 30.7±0.1, 43.1±0.1, 45.9±0.1, 47.1±0.1, 52.0±0.1, 54.2±0.1, 72.5±0.1, 117.0±0.1, 117.7±0.1, 124.2±0.1, 125.2±0.1, 128.3±0.1, 130.3±0.1, 131.4±0.1, 134.1±0.1, 140.8±0.1, 144.7±0.1, 148.7±0.1, 149.8±0.1, 151.2±0.1, 153.4±0.1, 155.1±0.1, 155.6±0.1, i 156.7±0.1.

[0039] Prema još jednom tehničkom rešenju, Forma H1.5-1 je opisana frakcionim atomskim koordinatama suštinski kao što je prikazano u Tabeli 1.

Tabela 1: Frakcione Atomske Koordinate Forme H1.5-1 Računato na 25 °C.

1

1

[0040] U jednom narednom tehničkom rešenju, Forma H1.5-1 je opisana DSC termogramom koji suštinski odgovara prikazanom na SLICI 2.

[0041] U sledećem tehničkom rešenju, Forma H1.5-1 je opisana TGA termogramom, pri čemu Forma H1.5-1 gubi na težini približno 4-5 težinskih% nakon zagrevanja na oko 200 °C.

[0042] U još jednom tehničkom rešenju, Forma H1.5-1 postiže TGA termogram suštinski isti prikazanom na SLICI 3.

[0043] U daljem tehničkom rešenju, Forma H1.5-1 je obezbeđena u znatno čistom kristalnom obliku.

[0044] U još jednom daljem tehničkom rešenju, hemisulfatna so Jedinjenja (I) sadrži najmanje oko 90 mas%, poželjnije najmanje oko 95 mas%, i najpoželjnije najmanje oko 99 mas%, Forme H1.5-1, u odnosu na težinu hemisulfatne soli.

[0045] U daljem tehničkom rešenju, suštinski čista Forma H1.5-1 ima značajno čistu homogenost faze sa manje od oko 10%, poželjno manje od oko 5%, i poželjnije manje od oko 2% ukupne površine ispod pika eksperimentalno merenog PXRD obrasca, usled pikova u simuliranom PXRD obrascu. Najidealnije, suštinski čista Forma H1.5-1 ima suštinski čistu homogenost faze sa manje od oko 1% ukupne površine ispod pika eksperimentalno merenog PXRD obrasca, usled pikova kojih nema u simuliranom PXRD obrascu.

[0046] U drugom tehničkom rešenju, hemisulfatna so Jedinjenja (I) sastoji se uglavnom od Forme H1.5-1. Kristalna forma u ovom tehničkom rešenju može sadržati najmanje oko 90 mas %, poželjno najmanje oko 95 mas %, poželjnije najmanje oko 99 mas %, u odnosu na težinu hemisulfatne soli Jedinjenja (I).

[0047] U još jednom tehničkom rešenju, farmaceutska kompozicija obuhvata hemisulfatnu so Jedinjenja u (I) Formi H1.5-1; i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač i/ili rastvarač.

[0048] U jednom tehničkom rešenju, hemisulfatna so Jedinjenja (I) je obezbeđena kao kristalna forma, pri čemu je kristalna forma P22C. Ova kristalna forma je seskvihidrat koji ima odnos od 1.5 molekula vode i 0.5 molekula H2SO4na svaki molekul Jedinjenja (I).

[0049] U jednom tehničkom rešenju, Forma P22C je naznačena pomoću dobijenog šablona difrakcije x-zraka praška, koji suštinski odgovara šablonu prikazanom na SLICI 10.

[0050] U jednom tehničkom rešenju, hemisulfatna so Jedinjenja (I) se obezbeđuje kao monohidrat, sa odnosom od jednog molekula vode i 0.5 molekula H2SO4na svaki molekul Jedinjenja (I).

[0051] U jednom tehničkom rešenju, hemisulfatna so Jedinjenja (I) se obezbeđuje kao kristalna forma, pri čemu je kristalna forma-Forma P33. Ova kristalna forma ima odnos od jednog molekula vode i 0.5 molekula H2SO4na svaki molekul Jedinjenja (I).

[0052] U jednom tehničkom rešenju, Forma P33 se opisuje pomoću dobijenog šablona difrakcije x-zraka praška, koji suštinski odgovara šablonu prikazanom na SLICI 11.

[0053] Jedinjenje (I) je pogodno kao antagonist CGRP receptora i korisno je u lečenju poremećaja vezanih za CGRP uključujući migrenozne glavobolje, neurogenu vazodilataciju, neurogenu inflamaciju, termalne povrede, cirkulatorni šok, crvenilo vezano za menopauzu, zapaljenske bolesti disajnih organa kao što su astma i hronična opstruktivna bolest pluća (HOBP).

[0054] Peptid vezan za gen za kalcitonin - CGRP je prirodni peptid od 37 aminokiselina, prvi put identifikovan 1982 (Amara, S. G. et al, Science 1982, 298, 240-244). Postoje dva oblika peptida (αCGRP i βCGRP) koji se razlikuju u jednoj i tri aminokiseline kod pacova i ljudi, retrospektivno. Ovaj peptid je široko rasprostranjen i u perifernom (PNS) i u centralnom nervnom sistemu (CNS), primarno lokalizovan u senzornim aferentnim i centralnim neuronima i pokazuje brojne biološke efekte, uključujući vazodilataciju.

[0055] Nakon oslobađanja iz ćelije, CGRP se vezuje za specifične G protein-vezane receptore na ćelijskoj površini i ispoljava svoju biološku aktivnost uglavnom aktivacijom intracelularne adenilat ciklaze (Poyner, D. R. et al, Br J Pharmacol 1992, 105, 441-7; Van Valen, F. et al, Neurosci Lett 1990, 119, 195-8.). Dve klase CGRP receptora su predložene, CGRP1 i CGRP2, na osnovu antagonističkih osobina peptidnog fragmenta CGRP(8-37) i sposobnosti linearnih analoga CGRP-a da aktiviraju CGRP2 receptore (Juaneda, C. et al. TiPS 2000, 21, 432-438). Ipak, nije poznata molekulska struktura CGRP2 receptora (Brain, S. D. et al, TiPS 2002, 23, 51-53). CGRP1 receptor ima tri komponente (i) sedmodelni

1

transmembranski kalcitoninski receptoru sličan receptor (CRLR) ; (ii) pojedinačni transmembranski protein tipa 1, koji modifikuje aktivnost receptora (RAMP1); i (iii) intraćelijski receptorni komponentni protein (RCP) (Evans B. N. et al., J Biol Chem. 2000, 275, 31438-43). RAMP1 je neophodan za transport CRLR do plazma membrane i za vezivanje liganada za CGRP-receptor (McLatchie, L. M. et al, Nature 1998, 393, 333-339). RCP je neophodan za signalnu transdukciju (Evans B. N. et al., J Biol Chem. 2000, 275, 31438-43). Kod različitih vrsta, postoje razlike u vezivanju malih molekula antagonista za CGRP-receptor, sa većim antagonističkim afinitetom prema humanim receptorima nego prema receptorima drugih vrsta (Brain, S. D. et al, TiPS 2002, 23, 51-53). Sekvenca amino kiselina u RAMP1 određuje selektivnost vrsta, naročito, aminokiselinski ostatak Trp74 je odgovoran za fenotip humanog receptora (Mallee et al. J Biol Chem 2002, 277, 14294-8).

[0056] Inhibitori CGRP-a na nivou receptora, mogu biti korisni u patofiziološkim stanjima, u kojima je primećena prekomerna CGRP receptorna aktivacija. Neki od njih su neurogena vazodilatacija, neurogena inflamacija, migrena, klaster glavobolja i druge glavobolje, termalna povreda, cirkulatorni šok, menopauzalno crvenilo, i astma. Aktivacija CGRP receptora učestvuje u patogenezi migrenozne glavobolje (Edvinsson L. CNS Drugs 2001;15(10):745-53; Williamson, D. J. Microsc. Res. Tech.2001, 53, 167-178.; Grant, A. D. Brit. J. Pharmacol. 2002, 135, 356-362.). Tokom migrene su povišeni nivoi serumskog CGRP-a (Goadsby PJ, et al. Ann Neurol 1990;28:183-7) i tretman animigrenicima vraća CGRP nivoe na normalne vrednosti uz ublažavanje glavobolje (Gallai V. et al. Cephalalgia 1995;15: 384-90). Osobe koje pate od migrena imaju povišene bazalne CGRP nivoe (Ashina M, et al., Pain 2000, 86(1-2):133-8.2000). Intravenska CGRP infuzija izaziva dugotrajnu glavobolju kod osoba koje pate od migrena (Lassen LH, et al. Cephalalgia 2002 Feb;22(1):54-61). Prekliničke studije kod pasa i pacova potvrđuju da sistemska CGRP blokada pomoću peptidnog antagonista CGRP(8-37) ne menja sistemsku hemodinamiku u mirovanju niti regionalni protok krvi (Shen, Y-T. et al, J Pharmacol Exp Ther 2001, 298, 551-8). Stoga, antagonisti CGRP-receptora daju mogućnost za novi način lečenja migrene, kojim se izbegavaju kardiovaskularne posledice aktivne vazokonstrikcije, koja se javlja primenom neselektivnih 5-HT1B/1D agonista, 'triptana' (npr., sumatriptan).

[0057] CGRP antagonisti su pokazali efikasnost u kliničkim ispitivanjima kod ljudi. Videti Davis CD, Xu C. Curr Top Med Chem. 2008 8(16):1468-79; Benemei S, Nicoletti P, Capone JG, Geppetti P. Curr Opin Pharmacol. 2009 9(1):9-14. Epub 2009 Jan 20; Ho TW, Ferrari

1

MD, Dodick DW, Galet V, Kost J, Fan X, Leibensperger H, Froman S, Assaid C, Lines C, Koppen H, Winner PK. Lancet. 2008 372:2115. Epub 2008 Nov 25; Ho TW, Mannix LK, Fan X, Assaid C, Furtek C, Jones CJ, Lines CR, Rapoport AM; Neurology 2008 70:1304. Epub 2007 Oct 3.

Farmaceutske kompozicije i metode lečenja

[0058] Hemisulfatna so Jedinjenja (I) inhibira CGRP receptor. Kao takva, hemisulfatna so Jedinjenja (I) je korisna u lečenju stanja i poremećaja povezanih sa neprirodnim nivoima CGRP-a ili u slučajevima gde promena nivoa CGRP-a može imati terapeutski značaj.

[0059] U skladu sa tim, drugi aspekt pronalaska je farmaceutska kompozicija koja obuhvata hemisulfatnu so of Jedinjenja (I) sa farmaceutski prihvatljivim katalizatorom, nosačem ili razblaživačem.

[0060] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja obuhvata hemisulfatnu so Jedinjenja (I) seskvihidrat sa farmaceutski prihvatljivim katalizatorom, nosačem ili razblaživačem.

[0061] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja obuhvata kristalni oblik hemisulfatne soli Jedinjenja (I) sa farmaceutski prihvatljivim katalizatorom, nosačem ili rastvaračem.

[0062] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja obuhvata kristalni oblik hemisulfatne soli Jedinjenja (I) seskvidrata sa farmaceutski prihvatljivim katalizatorom, nosačem ili razblaživačem.

[0063] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja obuhvata Formu H1.5-1 hemisulfatne soli Jedinjenja (I) sa farmaceutski prihvatljivim katalizatorom, nosačem ili rastvaračem.

[0064] Jedinjenja su generalno data kao farmaceutske kompozicije koje su sačinjene od terapijski efikasne količine hemisulfatne soli Jedinjenja (I) i farmaceutski prihvatljivog nosača, i mogu sadržati konvencionalne pomoćne supstance. Terapojski efikasna količina je količina koja obezbeđuje značajni boljitak za pacijenta i određuje je stručno lice. Farmaceutski prihvatljivi nosači su konvencionalno poznati nosači, koji imaju prihvatljiv bezbednosni profil. Kompozicije obuhvataju sve uobičajeno poznate čvrste i tečne forme uključujući kapsule, tablete, lozenge i praškove, kao i tečne suspenzije, sirupe, eliksire i rastvore. Čvrste kompozicije mogu biti formirane kao formulacije sa vremenskim ili

1

produženim oslobađanjem. Kompozicije se pripremaju upotrebom uobičajenih tehnika formulacije i konvencionalnih pomoćnih supstanci (kao što su vezujući agensi i surfaktanti) i nosača (kao što su voda i alkoholi).

[0065] Čvrste kompozicije su uobičajeno formulisane u doznim jedinicama koje obezbeđuju od oko 1 do oko 1000 mg aktivne supstance po dozi. Neki primeri čvrstih doznih jedinica su 0.1 mg, 1 mg, 10 mg, 100 mg, 500 mg, i 1000 mg. Tečne kompozicije su generalno u opsegu doznih jedinica od 1-100 mg/mL. Neki primeri tečnih doznih jedinica su 0.1 mg/mL, 1 mg/mL, 10 mg/mL, 25 mg/mL, 50 mg/mL, i 100 mg/mL.

[0066] U jednom tehničkom rešenju, jedna oralna dozna forma obezbeđuje 70 to 750 mg Jedinjenja (I) kao hemisulfatna soli Jedinjenja (I). U ovom tehničkom rešenju su uključene oralne dozne forme koje sadrže 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 500 mg, i 750 mg Jedinjenja (I) kao hemisulfatne soli Jedinjenja (I).

[0067] U jednom tehničkom rešenju, jedna oralna dozna forma obezbeđuje 70 do 750 mg Jedinjenja (I) kao Forme H1.5-1 hemisulfatne soli Jedinjenja (I). U ovom tehničkom rešenju su uključene oralne dozne forme koje sadrže 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 500 mg, i 750 mg Jedinjenja (I) kao Forme H1.5-1 hemisulfatne soli Jedinjenja (I).

[0068] U jednom tehničkom rešenju, hemisulfatna so Jedinjenja (I) se primenjuje jednom dnevno. Odgovarajuće doze sadrže 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 500 mg, i 750 mg Jedinjenja (I) koje je u Formi H1.5-1 hemisulfatne soli Jedinjenja (I).

[0069] U jednom tehničkom rešenju, hemisulfatna so Jedinjenja (I) se primenjuje dva puta na dan. Odgovarajuće doze sadrže 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 500 mg, i 750 mg Jedinjenja (I) koje je u Formi H1.5-1 hemisulfatne soli Jedinjenja (I).

[0070] Pronalazak obuhvata sve konvencionalne modele primene uključujući oralnu, parenteralnu, intranazalnu, sublingvalnu i transdermalnu metodu. Obično, dnevna doza bi bila 0.01-100 mg/kg telesne težine dnevno. Generalno, potrebno je više jedinjenja oralno, a manje parentalno. Ipak, specifični dozni režim treba da odredi lekar donoseći medicinski opravdanu odluku.

[0071] Inhibitori CGRP-a, na nivou receptora, mogu biti korisni u patofiziološkim stanjima u kojima je primećena povećana aktivnost CGRP receptora. Neka od ovih stanja su neurogena vazodilatacija, neurogena inflamacija, migrena, klaster glavobolja i druge glavobolje,

1

toplotne traume, cirkulatorni šok, crvenilo vezano za menopauzu i astma. Aktivacija CGRP receptora učestvuje u patogenezi migrenozne glavobolje (Edvinsson L. CNS Drugs 2001, 15(10),745-53; Williamson, D. J. Microsc. Res. Tech. 2001, 53, 167-178.; Grant, A. D. Brit. J. Pharmacol. 2002, 135, 356-362.). Nivoi CGRP-a u serumu su povišeni tokom migrene (Goadsby P. J. et al. Ann. Neurol. 1990, 28, 183-7) i primena antimigrenika vraća CGRP na normalne vrednosti uz ublažavanje glavobolje (Gallai V. et al. Cephalalgia 1995, 15, 384-90). Kod osoba koje pate od migrene se pojavljuju povišene bazalne vrednosti CGRP-a u poređenju sa kontrolnom grupom (Ashina M. et al., Pain 2000, 86(1-2), 133-8). Intravenozna CGRP infuzija izaziva dugotrajnu glavobolju kod osoba sa migrenom (Lassen L.H. et al. Cephalalgia. 2002, 22(1), 54-61). Preklinička ispitivanja na psima i pacovima pokazuju da sistemska CGRP blokada peptidnim antagonistom CGRP(8-37) ne menja sistemsku hemodinamiku u mirovanju niti regionalni protok krvi (Shen, Y-T. et al. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2001, 298, 551-8). Stoga, antagonisti CGRP-receptora daju mogućnost za novi način lečenja migrene, kojim se izbegavaju kardiovaskularne posledice aktivne vazokonstrikcije, koja se javlja primenom neselektivnih 5-HT1B/1D agonista, 'triptana' (npr., sumatriptan).

[0072] Drugi aspekt pronalaska je metoda inhibicije CGRP receptora koja obuhvata kontakt CGRP receptora sa hemisulfatnom soli Jedinjenja (I).

[0073] Jedan aspekt pronalaska je metoda inhibicije CGRP receptora putem kontakta CGRP receptora sa hemisulfatnom soli Jedinjenja (I) seskvihidratom.

[0074] Jedan aspekt obezbeđuje metodu inhibicije CGRP receptora putem kontakta CGRP receptora sa kristalnom hemisulfatnom soli Jedinjenja (I) seskvihidratom.

[0075] Jedan aspekt obezbeđuje metod inhibicije CGRP receptora putem kontakta CGRP receptora sa Formom H1.5-1 hemisulfatne soli Jedinjenja (I).

[0076] Sledeći aspekt pronalaska je metod za lečenje stanja povezanih sa abnormalnim nivoima CGRP-a koji obuhvata primenu terapijski efikasne količine hemisulfatne soli Jedinjenja (I) kod pacijenta.

[0077] Sledeći aspekt pronalaska je primena hemisulfatne soli Jedinjenja (I) u proizvodnji leka za lečenje stanja koja su u vezi sa abnormalnim nivoima CGRP-a.

[0078] Sledeći aspekt pronalaska je metod lečenja migrene ili glavobolje.

[0079] Sledeći aspekt pronalaska se odnosi na metod lečenja inflamacije (naročito neurogene inflamacije), bola, toplotne traume, cirkulatornog šoka, dijabetesa, Reynaud-ovog sindroma,

1

periferne arterijske insuficijencije, subarahnoidalnog/ kranijalnog krvarenja, rasta tumora, crvenila povezanog sa menopauzom i drugih stanja, čiji tretman može biti ostvaren antagonizmom CGRP receptora, primenom farmaceutskih kompozicija koje sadrže hemisulfatnu so Jedinjenja (I) kao što je ovde definisano.

[0080] Sledeći aspekt pronalaska se odnosi na metode izabrane iz grupe koja se sastoji od (a) imune regulacije u GIT sluzokoži (b) zaštitnog efekta protiv srčane anafilaktičke traume (c) stimulacije ili prevencije interleukin-1b(IL-1b)-stimulisane resorpcije kostiju (d) modulacije ekspresije NK1 receptora u spinalnim neuronima i (e) inflamatornih bolesti disajnih puteva i hronične opstruktivne bolesti pluća uključujući astmu. Videti (a) Kalcitoninski receptor sličan receptoru je prisutan na Gastrointestinalnim Imunim Ćelijama. Hagner, Stefanie; Knauer, Jens; Haberberger, Rainer; Goeke, Burkhard; Voigt, Karlheinz; McGregor, Gerard Patrick. Institute of Physiology, Philipps University, Marburg, Nemačka. Digestion (2002), 66(4), 197-203; (b) Zaštitni efekti evodiamina, posredstvom delovanja na kalcitonin gen-zavisni peptid, na srčanu anafilaksu kod zamorčića. Rang, Wei-Qing; Du, Yan-Hua; Hu, Chang-Ping; Ye, Feng; Tan, Gui-Shan; Deng, Han-Wu; Li, Yuan-Jian. School of Pharmaceutical Sciences, Department of Pharmacology, Central South University, Xiang-Ya Road 88, Changsha, Hunan, Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology (2003), 367(3), 306-311; (c) Eksperimentalna studija o efektu kalcitonin gen-zavisnog peptida na resorpciju kostiju posredovanu interleukinom-1. Lian, Kai; Du, Jingyuan; Rao, Zhenyu; Luo, Huaican. Department of Orthopedics, Xiehe Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan, Peop. Republika Kina. Journal of Tongji Medical University (2001), 21(4), 304-307, (d) Kalcetonin gen zavisni peptid reguliše ispoljavanje receptora za interleukin 1 na spinalnim neuronima pacova. Seybold VS, McCarson KE, Mermelstein PG, Groth RD, Abrahams LG. J. Neurosci.2003 23 (5): 1816-1824. Department of Neuroscience, University of Minnesota, Minneapolis, Minnesota 55455, i Department of Pharmacology, Toxicology, and Therapeutics, University of Kansas Medical Center, Kansas City, Kanzas 66160 (e) Slabljenje antigen-indukovane respiratorne hiperosetljivosti kod miševa sa nedostatkom CGRP-a. Aoki-Nagase, Tomoko; Nagase, Takahide; Oh-Hashi, Yoshio; Shindo, Takayuki; Kurihara, Yukiko; Yamaguchi, Yasuhiro; Yamamoto, Hiroshi; Tomita, Tetsuji; Ohga, Eijiro; Nagai, Ryozo; Kurihara, Hiroki; Ouchi, Yasuyoshi. Department of Geriatric Medicine, Graduate School of Medicine, University of Tokyo, Tokyo, Japan. American Journal of Physiology (2002), 283(5,Pt. 1), L963-L970; (f) CGRP

2

kao inflamatorni medijator. Springer, Jochen; Geppetti, Pierangelo; Fischer, Axel; Groneberg, David A. Charite Campus-Virchow, Department of Pediatric Pneumology and Immunology, Division of Allergy Research, Humboldt-University Berlin, Berlin, Germany. Pulmonary Pharmacology & Therapeutics (2003), 16(3), 121-130; i (g) Farmakološki ciljevi za inhibiciju neurogene inflamacije. Helyes, Zsuzsanna; Pinter, Erika; Nemeth, Jozsef; Szolcsanyi, Janos. Department of Pharmacology and Pharmacotherapy, Faculty of Medicine, University of Pecs, Pecs, Hung. Current Medicinal Chemistry: AntiInflammatory & Anti-Allergy Agents (2003), 2(2), 191-218.

[0081] Sledeći aspekt ovog pronalaska se odnosi na upotrebu hemisulfatne soli Jedinjenja (I) u kombinaciji sa jednim ili više agenasa selektovanih iz grupe koja se sastoji od COX-2 inhibitora, NSAIDS, aspirina, acetaminofena, triptana, ergotamina i kofeina u tretmanu migrene.

[0082] "Migrenu," "glavobolju," i slične termine potrebno je shvatiti kao što ih shvataju lekari. Migrena obuhvata sve vrste migrena uključujući uobičajenu, klasičnu, klaster, fulguratnu, hemiplegičnu, oftalmoplegičnu i oftomalmičnu.

[0083] Pod "terapijski efikasnom količinom" se podrazumeva količina koja je, kada se upotrebi sama ili u kombinaciji sa dodatnim terapijskim agensom, efikasna u prevenciji, supresiji i/ili poboljšanju bolesti i/ili stanja i/ili progresije bolesti i/ili stanja.

[0084] "Pacijent" je osoba koja može imati koristi od lečenja koje je odredio lekar.

PRIMERI

[0085] Pronalazak je, dalje, definisan u sledećim Primerima. Treba uzeti u obzir da su Primeri ovde dati samo kao vid ilustracije. Iz prethodne diskusije i navedenih Primera, stručno lice može utvrditi osnovne karakteristike pronalaska, i ostajući u njihovom duhu i obimu, može vršiti razne promene i modifikacije da bi prilagodio pronalazak različitim primenama i stanjima. Kao posledica toga, pronalazak nije ograničen ilustrovanim primerima koji su predstavljeni u daljem tekstu, već je definisan patentnim zahtevima koji su ovde priloženi.

SKRAĆENICE

[0086]

DMSO dimetilsulfoksid

EDTA etilenediamintetraacetatna sirćetna kiselina

Eq ekvivalent(i)

ESI elektrosprej jonizaciona masena spektroskopija

G gram(i)

H sat(i)

L litar(ri)

LCMS tečna hromatografska masena spektrometrija

M molarna masa

Mg milligram(i)

Min minut(i)

mL mililitar(ri)

mmol milimol(i)

MS masena spektrometrija

N normalno

NaHMDS natrijum bis(trimetilsilil)amid

NCS N-hlorosukcinimid

NMR nuklearna magnetna rezonantna spektroskopija

RT retenciono vreme

ssNMR nuklearna magnetna rezonanca čvrstog stanja

TBAF tetrabutilamonijum fluorid

TFA trifluoroacetatna kiselina

THF tetrahidrofuran

TIPSO triizopropilsililoksi

TMS tetrametilsilan

µL mikrolitar(ri)

° C stepen Celzijusa

[0087] Spektri protonske magnetne rezonance (<1>H NMR) su beleženi na aparatu Bruker AC 300 ili AC 500. Svi spektri su određeni u naznačenim rastvaračima i hemijski pomaci, su beleženi u δ jedinicama ispod internog standarda tetrametilsilana (TMS) i konstante interprotonskog vezivanja su beležene u Hercima (Hz). Šabloni razdvajanja su označeni na sledeći način: s, singlet; d, dublet; t, triplet; q, qvartet; m, multiplet; br, široki pik. Maseni spektri niske rezolucije (MS) i dobijeni-uočljivi molekularni jon (MH<+>) ili (M-H)<+>je bio određen na Mikromasenoj platformi. Analize elemenata su predstavljene kao procenat težine. Proizvodi su bili prečišćeni preparativnom HPLC korišćenjem kolone YMC S5 ODS (30 x 100 mm) pri brzini protoka od 40.0 mL/min i gradijent vremenom od 8.0 min. počevši sa kompozicijom rastvarača od 40% metanol-60% voda-0.1% TFA i završivši sa kompozicijom rastvarača od 95% metanol-5% voda-0.1% TFA. Proizvodi su bili analizirani pomoću HPLC instrumenta, koji koristi XTERA kolonu (3.0 x 50 mm S7) sa početnim rastvaračem A (10% metanol - 90% voda - 0.1% trifluoroacetatna kiselina (TFA)) i sledećim rastvaračem B (10% voda - 90% metanol - 0.1 % TFA) tokom gradijent vremena od 2 min. Brzina protoka je 5 mL/min i vreme retencije (Rf) proizvoda je mereno pri talasnoj dužini od 220 nm.

INTERMEDIJER 1

(6 S, 9R)-6-(2, 3 -Difluorofenil)-9-hidroksi-6, 7, 8, 9-tetrahidro-5 H-ciklohepta[b]piridin-5-on

[0088]

[0089] U bočici okruglog dna, zapremine 250ml, je rastvoren (9R)-6-(2,3-difluorofenil)-9-(triizopropilsililoksi)-6,7,8,9-tetrahidro-SH-ciklohepta[b]piridin-5-on (0.218 g, 0.49 mmol) u tetrahidrofuranu (5 mL) pri čemu je dobijen bezbojan rastvor. Nakon hlađenja na - 15 °C (ledeno-metanol kupatilo) ispod azota, dodat je TBAF (0.490 mL, 0.490 mmol) i dobijeni svetlo žuti rastvor je mešan na -15 °C tokom 1h. Proces je zaustavljen rastvorom natrijum bikarbonata i proizvod je razblažen etil acetatom. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan pomoću etil acetata. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni i koncentrovani pri čemu je dobijeno žuto-mrko ulje. Brza kolonska hromatografija (25g silika gel-kolona) sa 100% etil-acetat/heksana je dalo željeni proizvod (112mg, 62%).

2

<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ ppm 8.53 (dd, J=4.91, 1.64 Hz, 1 H) 7.85 (dd, J=7.68, 1.64 Hz, 1 H) 7.34 (dd, J=7.68, 4.91 Hz, 1 H) 7.00-7.16 (m, 3 H) 5.32 (s, 1 H) 4.94-5.04 (m, 1 H) 4.48 (dd, J=11.83, 3.02 Hz, 1 H) 2.14-2.48 (m, 4 H); 19F NMR (376 MHz, HLOROFORM-d) δ ppm -138.24--138.07 (m, 1 F) -140.70--140.50 (m, 1 F).

INTERMEDIJER 2

(5S,6S,9R)-6-(2,3-difluorofenil)-9-(triizopropilsililoksi)-6,7,8,9-tetrahidro-5H-ciklohepta[b]piridin-5-ol.

[0090]

[0091] Litijum borohidrid (0.982 g, 45.1 mmol) je dodat ciklopentil metil etarskom (30 mL) rastvoru (6S,9R)-6-(2,3-difluorofenil)-9-(triizopropilsililoksi)-6,7,8,9-tetrahidro-5H-ciklohepta[b]piridin-5-ona (5.0224 g, 11.27 mmol) na temperaturi od 0 °C pod N2. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 2 sata i potom još dodatnih 4 sata na sobnoj temperaturi. Reakcija je prekinuta dodatkom metanola. Reakciona smeša je mešana tokom pola sata. Rastvarač je uglavnom bio uklonjen vakuumom i sirov materijal je stavljen u etil-acetat, koji je ispran vodom tri puta. Brzom kolonskom hromatografijom pomoću etil acetata u heksanu od 0 do 10% je dobijen željeni proizvod (3.28g, 65%).

INTERMEDIJER 3

(5R,6S,9R)-5-hloro-6-(2,3-difluorofenil)-9-(triizopropilsililoksi)-6,7,8,9-tetrahidro-5H-ciklohepta[b]piridin

[0092]

[0093] U bočici okruglog dna, zapremine 250ml, koja je osušena u rerni, je suspendovan NCS (0.751 g, 5.62 mmol) u tetrahidrofuranu (15 mL). Trifenilfosfin (1.475 g, 5.62 mmol) je dodat. Nakon mešanja pod azotom tokom 5min, (5S,6S,9R)-6-(2,3-difluorofenil)-9-(triizopropilsililoksi)-6,7,8,9-tetrahidro-5H-ciklohepta[b]piridin-5-ol (1.007 g, 2.250 mmol) je dodat u jednoj porciji sivoj suspenziji. Dobijena suspenzija crvenkaste boje je mešana na sobnoj temperaturi. Čvrsta supstanca se postepeno rastvorila i dobijen je rastvor žuto-mrke boje. Nakon 5h, LCMS je pokazala kompletnu konverziju. Tetrahidrofuran je uklonjen vakuumom i preostalo crveno ulje je direktno prečišćeno pomoću ISCO (240g silika-gel kolona) sa sve do 60% etil-acetat/heksana. Čistim etil-acetatom je eluirana nepolarna komponenta i proizvod je bio eluiran 10% metanolom (sa 2.0M NH4OH) u metilen hloridu. Proizvodne frakcije su kombinovane i ponovo prečišćene pomoću FCC sa sve do 50% etil acetat/heksana čime je obezbeđen željeni proizvod u vidu bezbojnog ulja (869mg, 83%). MS(ESI)[M+H<+>] = 466.22;<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM) δ ppm 8.55 (d, J=3.53 Hz, 1 H) 7.63 (br. s., 1 H) 7.20 (dd, J=7.68, 4.91 Hz, 1 H) 7.01-7.15 (m, 1 H) 6.90-7.01 (m, 1 H) 6.66-6.90 (m, 1 H) 5.55-5.85 (m, 1 H) 5.40-5.56 (m, 1 H) 3.96-4.33 (m, 1 H) 2.33 (br. s., 3 H) 2.09-2.20 (m, 1 H) 1.14-1.23 (m, 3 H) 1.04-1.14 (m, 9 H) 1.01 (d, J=7.30 Hz, 9 H).

INTERMEDIJER 4

(5S,6S,9R)-5-azido-6-(2,3-difluorofenil)-9-(triizopropilsililoksi)-6,7,8,9-tetrahidro-5H-ciklohepta[b]piridine

[0094]

[0095] U bočici okruglog dna, zapremine 100ml, je rastvoren (5R,6S,9R)-5-hloro-6-(2,3-difluorofenil)-9-(triizopropilsililoksi)-6,7,8,9-tetrahidro-5H-ciklohepta[b]piridin (566 mg, 1.214 mmol) u dimetilformamidu (5 mL), pri čemu se dobija bezbojni rastvor. Natrijum-azid (474 mg, 7.29 mmol) je dodat i smeša se meša na sobnoj temperaturi u prisustvu azota u toku 2.5h. LCMS je prikazala samo delimičnu reakciju. Smeša je zagrevana na 50 °C tokom noći. Nakon 15h, LCMS je prikazala kompletnu konverziju sa malom količinom eliminacionog

2

proizvoda. Smeša je razblažena vodom i etil-acetatom. Slojevi su se razdvojili. Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen i koncentrovan pri čemu je dobijeno bezbojno ulje. Sirov proizvod je prenešen u sledeću reakciju bez daljeg prečišćavanja i karakterizacije. Prečišćavanjem manjih razmera, dobijen je analitički uzorak: MS(ESI)[M+H<+>] = 473.27;<1>H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 8.52-8.63 (m, 1 H) 7.75 (d, J=7.81 Hz, 1 H) 7.23-7.36 (m, 1 H) 6.95-7.17 (m, 2 H) 6.89 (br. s., 1 H) 5.28 (d, J=4.03 Hz, 1 H) 4.90 (d, J=9.07 Hz, 1 H) 3.79 (t, J=9.44 Hz, 1 H) 1.86-2.23 (m, 4 H) 1.16-1.30 (m, 3 H) 0.98-1.15 (m, 18 H); 19F NMR (376 MHz, HLOROFORM) δ ppm -137.68--137.36 (m, 1 F) -141.78--141.54 (m, 1 F).

INTERMEDIJER 5

(5S,6S,9R)-5-azido-6-(2,3-difluorofenil)-6,7,8,9-tetrahidro-5H-ciklohepta[b]piridin-9-ol

[0096]

[0097] U bočici okruglog dna, zapremine 100ml, je rastvoren (5S,6S,9R)-5-azido-6-(2,3-difluorofenil)-9-(triizopropilsililoksi)-6,7,8,9-tetrahidro-5H-ciklohepta[b]piridin (0.732 g, 1.549 mmol) (sirov) u tetrahidrofuranu (8 mL) pri čemu je dobijen bezbojni rastvor. TBAF (1.859 mL, 1.859 mmol) je dodat i dobijen žuti rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 1.5h. LCMS je pokazala kompletnu konverziju. Tetrahidrofuran je uklonjen i ostatak je razblažen vodom i etil-acetatom. Slojevi su se razdvojili. Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen i koncentrovan pri čemu je dobijeno svetlo žuto ulje. Prečišćavanjem pomoću FCC sa sve do 60% etil-acetat/heksana je dobijen željeni proizvod (sirova težina: 480mg) kao bezbojno ulje. Prečišćavanjem manjih razmera je dobijen analitički uzorak: MS(ESI)[M+H<+>] = 317.22;<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ ppm 8.51 (dd, J=4.91, 1.38 Hz, 1 H) 7.99 (d, J=7.30 Hz, 1 H) 7.35 (dd, J=7.81, 5.04 Hz, 1 H) 7.06-7.20 (m, 2 H) 6.94-7.05 (m, 1 H) 5.91 (br. s., 1 H) 5.03 (d, J=10.32 Hz, 1 H) 4.92 (dd, J=11.21, 2.39 Hz, 1 H) 2.84-3.02 (m, 1 H) 2.37-2.49 (m, 1 H) 2.25-2.36 (m, 1 H) 2.07-2.17 (m, J=14.38, 4.94, 3.05, 3.05 Hz, 1 H) 1.40-1.64 (m, 1 H);<13>C NMR (101 MHz, HLOROFORM-d) δ ppm

2

158.48 (s, 1 C) 152.19-149.87 (dd, J=13.10 i 221Hz, 1 C) 149.72-147.42 (dd, J=13.87 i 219 Hz, 1 C) 146.16 (s, 3 C) 133.67 (s, 2 C) 133.23 (s, 1 C) 132.66 (d, J=10.79 Hz, 1 C) 124.43 (dd, J=6.94, 3.85 Hz, 2 C) 123.84 (br. s., 1 C) 122.89 (s, 2 C) 115.98 (d, J=17.73 Hz, 2 C) 70.94 (s, 3 C) 65.67 (s, 1 C) 45.43 (br. s., 1 C) 35.71 (s, 3 C) 33.45 (s, 2 C); 19F NMR (376 MHz, HLOROFORM) δ ppm -137.55-137.20 (m, 1 F) -142.28--141.89 (m, 1 F).

INTERMEDIJER 6

(5S,6S,9R)-5-azido-6-(2,3-difluorofenil)-6,7,8,9-tetrahidro-5H-ciklohepta[b]piridin-9-il 4-(2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazo[4,5-b]piridin-1-il)piperidin-1-karboksilat

[0098]

[0099] U bočici okruglog dna, zapremine 100ml, su rastvoreni (5S,6S,9R)-5-azido-6-(2,3-difluorofenil)-6,7,8,9-tetrahidro-5H-ciklohepta[b]piridin-9-ol (0.490 g, 1.549 mmol) (azeotropirani sa suvim benzenom) i 4-nitrofenil 4-(2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazo[4,5-b]piridin-1-il)piperidin-1-karboksilat (0.713 g, 1.859 mmol) u dimetilformamidu (8 mL) čime je dobijena svetlo žuta suspenzija ispod azota. Nakon hlađenja do -15 °C (ledenometanol kupatilo), NaHMDS (4.18 mL, 4.18 mmol) je dodat u kapima. Dobijen rastor žutomrke boje je mešan u prisustvu azota pri temperaturi od -10 °C do 0 °C tokom 2h i na sobnoj temperaturi tokom 2h. LCMS je pokazala kompletnu konverziju. Reakcija je zaustavljena pomoću rastvora natrijum bikarbonata. Smeša je razblažena etil-acetatom. Slojevi su se razdvojili i vodeni rastvor je ekstrahovan etil-acetatom. Kombinovani organski slojevi su isprani vodom, slanim rastorom, osušeni natrijum sulfatom i koncentrovani čime je dobijeno ulje tamno-žute boje. Prečišćavanjem pomoću FCC sa sve do 8% metanol/metilen hloridom je dobijen željeni proizvod (glavni pik, 632mg, 73% for 3 steps) kao svetlo-žuta pena. MS(ESI)[M+H<+>] = 561.27;<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM) δ ppm 11.50 (br. s., 1 H) 8.58 (d, J=3.78 Hz, 1 H) 8.11 (d, J=5.04 Hz, 1 H) 7.91 (d, J=7.30 Hz, 1 H) 7.33 (br. s., 2 H) 7.07-7.19 (m, 2 H) 6.92-7.06 (m, 2 H) 6.10 (d, J=9.32 Hz, 1 H) 5.23 (d, J=10.07 Hz, 1 H)

2

4.26-4.84 (m, 3 H) 2.46-3.34 (m, 4 H) 2.20-2.43 (m, 3 H) 2.01-2.13 (m, 1 H) 1.94 (d, J=12.34 Hz, 3 H); 19F NMR (376 MHz, HLOROFORM-d) δ ppm -137.30--137.01 (m, 1 F) -142.32-142.03 (m, 1 F).

JEDINJENJE (I)

(5S,6S,9R)-5-amino-6-(2,3-difluorofenil)-6,7,8,9-tetrahidro-5H-ciklohepta[b]piridin-9-il 4-(2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazo[4,5-b]piridin-1-il)piperidin-1-karboksilat

[0100]

[0101] U bočici okruglog dna, zapremine 100ml, je rastvoren (5S,6S,9R)-5-azido-6-(2,3-difluorofenil)-6,7,8,9-tetrahidro-5H-ciklohepta[b]piridin-9-il 4-(2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazo[4,5-b]piridin-1-il)piperidin-1-karboksilat (620 mg, 1.106 mmol) (Intermedijer 6) u tetrahidrofuranu (5 mL) pri čemu je dobijen bezbojan rastvor. Trimetilfosfin (3.32 mL, 3.32 mmol, 1.0 M u toluenu) je dodat. Smeša je mešana pri sobnoj temperaturi. Nakon 2h, LCMS je pokazala odsustvo polaznog materijala. Dodata je voda (0.080 mL, 4.42 mmol) i smeša je mešana još tokom sledećih 3h. LCMS je pokazala kompletnu konverziju u željeni proizvod. Isparljive komponente su uklonjene vakuumom i ostatak je direktno prečišćen pomoću FCC sa sve do 10% metanola u metilen-hloridu čime je dobijen proizvod (510mg, 85%) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI)[M+H<+>] = 535.23;<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ ppm 10.39 (br. s., 1 H) 8.52 (d, J=3.78 Hz, 1 H) 8.09 (d, J=5.04 Hz, 2 H) 7.46 (br. s., 1 H) 7.26-7.38 (m, 1 H) 7.06-7.20 (m, 3 H) 6.94-7.05 (m, 1 H) 6.06-6.23 (m, 1 H) 4.31-4.78 (m, 4 H) 4.05 (spt, J=6.13 Hz, 1 H) 2.57-3.25 (m, 3 H) 2.17-2.38 (m, 3 H) 1.42-2.04 (m, 6 H); 19F NMR (376 MHz, CHLOROFORMd) δ ppm -136.90 (br. s., 1 F) -142.48-142.21 (m, 1 F). Visokopropusni Skrining soli za uočavanje Kristalnih Soli Jedinjenja (I)

2

[0102] Visokopropusna kristalizacija je ovde upotrebljena u svrhu praćenja formiranja kristalnih soli Jedinjenja (I). Skriningom se ispituju tip kiseline, nivo kiseline (equivalenti), i/ili tip rastvarača za kristalizaciju. Svaka ploča je imala 96 udubljenja (8 redova od po 12 kolona po ploči).

[0103] Rastvor se priprema rastvaranjem 400 mg Jedinjenja (I) u smeši od 36 ml THF i 4 mL H2O. Rastvor (12.5 mL) je prebačen u 24 bočice. Svakoj bočici je dodat 0.25 M EtOH koncentrovani rastvor sledećih kiselina:

[0104] Sadržaj iz svake bočice je prebačen u 12 kristalizacionih udubljenja i u njima isparen do suvog ostatka. Nakon isparavanja, svako udubljenje je dopunjeno sa 100 µl rastvarača, korišćenjem automatskog instrumenta za rukovanje tečnostima. Testirani su sledeći rastvarači za kristalizaciju: metil izobutil keton (MIBK), etil acetat, toluen, THF, acetonitril, aceton, izopropanol, etanol, metanol, 1,2-dihloroetilen, izopropanol/voda (50:50), i voda. U sledećem

2

koraku, ploče su zapečaćene pomoću Teflon membrana i podvrgnute temperaturnim cikličnim promenama. Ploče su čuvane na temperaturi od 50 °C tokom 10 sati i posle toga je omogućeno da se ohlade na sobnu temperaturu tokom perioda od 14 sati. Nakon ciklusa zagrevanja/hlađenja, sadržaji iz udubljenja su opisani pomoću birefrakcionog prikaza. Dobijene količine kristala su dalje opisane putem PXRD analiza.

[0105] Formiranje kristalne soli Jedinjenja (I) nije primećeno u prisustvu sirćetne kiseline, benzoeve kiseline, benzensullfonatne kiseline, L-laktatne kiseline, maleinske kiseline, L-malične kiseline, fosforne kiseline i sukcinatne kiseline. Formiranje kristalne soli Jedinjenja (I) je primećeno u prisustvu limunske kiseline, fumarne kiseline, hlorovodonične kiseline, matansulfonatne kiseline, sumporne kiseline, D-tartarne kiseline i L-tartarne kiseline, u najmanje jednom rastvaraču. Karakteristike kristalnih soli Jedinjenja (I) su opisane u daljem postupku.

[0106] Rezultati testiranja soli i opis kristalne soli su prikazani u Tabeli 3.

Tabela 3

1

PRIMER 1

(5S,6S,9R)-5-Amino-6-(2,3-difluorofenil)-6,7,8,9-tetrahidro-5H-ciklohepta[b]piridin-9-il 4-(2-okso-2,3-dihidro-1H-imidazo[4,5-b]piridin-1-il) piperidin-1-karboksilat, Hemisulfatna So

Priprema iz rastvora Etanol/Voda

[0107] Jedinjenje (I) (1 g) je rastvoreno u 17 mL smeše etanola i vode (3:1) na 70 °C (Rastvor A). Odvojeno, 52 µL 96% H2SO4(0.5 ekviv.) je rastvoreno u 8 mL smeše etanola i vode (3:1) na sobnoj temperaturi (Rastvor B). Zatim, 30 mg klica kristala je dodato Rastvoru A. Rastvor B je dodavan Rastvoru A sa klicama kristala tokom perioda od 2 sata pomoću špric pumpe. Dobijeni mulj je mešan na 70 °C tokom 1 sata i ohlađen na 20 °C u periodu od 90 min. Mulj je dozvoljeno mešati tokom noći na sobnoj temperaturi. Mulj je filtriran. Mokra pogača je isprana sa 8 mL rastvora EtOH:voda (3:1), i sušena na 30 °C u vakuum pećnici tokom noći čime je obezbeđeno 1.01 g (88.4 mol %) Primera 1 kao čvrstog kristala. GADDS je potvrdio da je kristalna čvrsta supstanca imala Formu H-1.5.

Priprema iz rastvora Tetrahidrofuran/Voda

[0108] Jedinjenje (I) (1 g) je rastvoreno u 10 mL THF i vode (4:1) na 50 °C (Rastvor A). Zasebno, 52 µL 96% H2SO4(0.5 ekviv.) je rastvoreno u 10 mL THF na sobnoj temperaturi (Rastvor B). Zatim, 0.5 mL Rastvora B je dodato Rastvoru A, praćeno dodatkom 20 mg klica kristala. Rastvor se promenio u tanak mulj. Preostala količina Rastvora B je dodavana mulju tokom perioda od 2 sata pomoću špric pumpe. Mulj je mešan na 50 °C tokom 1 sata i potom se hladio tokom 1 sata do temperature od 20 °C. Mulj je mešan na sobnoj temperaturi tokom noći. Mulj je filtriran. Mokra pogača je isprana sa 8 mL THF:voda=3:1, i sušena na 30 °C u vakuum pećnici tokom noći čime je obezbeđeno 1.06 g (92.8 mole %) Primera 1 kao čvrste kristalne supstance. GADDS je potvrdio da je kristalna čvrsta supstanca imala Formu H-1.5.

Studija Stabilnosti

[0109] Stabilnost čvrstog stanja Primera 1 je testirana izlaganjem uzoraka različitim uslovima temperature i relativne vlažnosti tokom perioda od 1, 2, i 4 nedelje. Procenati potencije (% pot.) i procenti totalnih nečistoća (% total neč.) su prikazani u Tabeli 4. Rezultati ukazuju da je kristalna Forma H1.5-1 hemisulfatne soli Jedinjenja (I) stabilna pri testiranim uslovima

2

skladištenja, obzirom da nije uočeno značajno povećanje nivoa totalnih nečistoća i/ili nije došlo do smanjenja potencije posle četiri nedelje skladištenja.

Tabela 4

[0110] Izoterma sorpcije vlage za Primer 1 je prikazana na SLICI 5. Primer 1, sorpcijom vlage, dobija na težini 0.8 tež % i 2.8 tež % pri vrednostima relativne vlažnosti između 25% i 75% kao i između 5% i 95%, retrospektivno. Ovi rezultati ukazuju na to da je hemisulfatna so Jedinjenja (I) nisko ili ne-higroskopna pod testiranim uslovima.

Forma H1.5-1

[0111] Tabela 5 prikazuje karakteristične pozicije PXRD difrakcionog pika (29±0.1 stepeni) mereno na oko 25°C za Primer1, na osnovu visoko kvalitetnog šablona prikupljenog difraktometrom (CuKα) sa obrtnom kapilarom sa 2θ kalibrisanom prema NIST odgovarajućem standardu.

Tabela 5

[0112] Tabela 6 prikazuje karakteristične pozicije pika, NMR čvrstog stanja, δ (ppm) za Primer 1, u odnosu na TMS.

Tabela 6

Ostale Kristalne Forme Primera 1

[0113] Forma P22C: priprema se zagrevanjem Forme H1.5-1 na 60 °C tokom 2 sata ili na 75 °C tokom 5 minuta. Studije aktivnosti vode između Forme H1.5-1 i Forme P22C su pokazale da je Forma H1.5-1 stabilnija na > 23% relativne vlažnosti.

4

[0114] Forma P33: Form H1.5-1 se konvertuje u Formu P33 između 50 °C i 75 °C u temperaturno varijabilnom PXRD eksperimentu. Isto je uočeno posle zagrevanja Forme H1.5-1 na 105 °C tokom 5 minuta, ili natapanjem suvog praška Forme H1.5-1 u suvom EtOH ili IPAc. Analiza elemenata ukazuje da je Forma P33 hemisulfat monohidrat. NMR čvrstog stanja ukazuje da je Forma P33 u jednoj fazi. Studije aktivnosti vode između Forme H1.5-1 i Forme P33 pokazale su da je Forma H1.5-1 stabilnija na > 23% relativne vlažnosti.

[0115] Forma P35: Dobijena iz mulja Forme H1.5-1 u suvom MeOH ispod molekularnih sita (7% RH). Konvertuje se u Formu P33 pri sušenju na 60 °C.

Stabilnost u vodenom mulju

[0116] Vodeni mulj Primera 1 je pripremljen i čuvan na sobnoj temperaturi. Nakon dva dana, nije uočena značajna hemijska degradacija; i nije uočena promena u PXRD šablonu, što ukazuje da je kristalna Forma H1.5-1 stabilna u vodenom mulju.

[0117] Nisu primećene značajne promene u termogravimetrijskom prikazu ni u prikazu diferencijalne skening kalorimetrije kao ni u PXRD.

[0118] Hemisulfatna so Jedinjenja (I) je upoređena sa drugim solima Jedinjenja (I) i zaključeno je da u velikoj prednosti u odnosu na njih. Hemisulfatna so Jedinjenja (I) ima iznenađujuću prednost jer obezbeđuje so koja je fizički i hemijski stabilna u poređenju sa drugim solima Jedinjenja (I). Pored toga, hemisulfatna so ima iznenađujuću prednost jer je obezbeđena u stabilnoj kristalnoj formi, Formi H1.5-1. Na primer, hemisulfatna so Jedinjenja (I) je reproducibilno pripremljena kao kristalna forma, ima nisku higroskopnost, i ne menja lako kristalnu formu ili hidrataciono stanje kao odgovor na promene relativne vlažnosti i/ili temperature. Nasuprot njoj, so citratne kiseline, so fumarne kiseline, so hlorovodonične kiseline, so metansulfonatne kiseline, so fosforne kiseline i so L-tartaratne kiseline su higroskopne pri ambijentalnoj temperaturi i uslovima relativne vlažnosti, što rezultira promenama u težini, promenama u hidratacionom stanju i/ili promenama faze. Formiranje kristalnih soli nije primećeno za Jedinjenje (I) u prisustvu acetatne kiseline, benzoeve kiseline, benzensulfonatne kiseline, L-laktatne kiseline, maleinske kiseline, L-malične kiseline i sukcinatne kiseline u visokopropusnom skriningu soli. Pored toga, priprema hemisulfatne soli nije zahtevala primenu skupog materijala kao što je D-tartaratna kiselina. Biološke Metode

In vitro farmakologija

[0119] Kultura Tkiva. SK-N-MC ćelije su porasle na 37°C u 5% CO2u vidu monosloja u medijumu, koji se sastoji od MEM sa Earle-ovim solima i L-glutaminom (Invitrogen) uz dodatak 10% fetalnog goveđeg seruma (Invitrogen).

[0120] Priprema Membrane. Sirove membrane su pripremljene od ćelija SK-N-MC, koje eksprimiraju CGRP receptore. Ćelije su isprane dva puta pomoću fiziološkog rastvora sa fosfatnim puferom (155 mM NaCl, 3.3 mM Na2HPO4, 1.1 mM KHPO4, pH 7.4), i inkubirane tokom 5-10 min. na 4 °C u hipotoničnom puferu za lizu, koji se sastoji od 10 mM Tris (pH 7.4) i 5 mM EDTA. Ćelije su prebačene sa ploča u polipropilenske cevčice (16 x 100 mm) i homogenizovane korišćenjem politrona. Homogenati su centrifugirani na 32,000 x g tokom 30 min. Talozi su resuspendovane u hladnom hipotoničnom puferu za lizu sa 0.1% proteaza (poreklom od sisara) inhibitornim koktelom (Sigma) i testirane da bi se odredila proteinska koncentracija. SK-N-MC homogenat je uzorkovan i skladišten na -80 °C.

[0121] Testiranje Radioliganskog Vezivanja. Jedinjenje (I) je rastvoreno i iskorišćeno u pripremi serije razblaženih rastvora, pomoću 100% DMSO. Uzorci serije razblaženih rastvora jedinjenja su dalje razblaženi 25 puta u puferu za testiranje (50 mM Tris-Cl pH 7.5, 5 mM MgCl2, 0.005% Triton X-100) i prebačeni (zapremina 50 µl) na 96-okomornu test ploču.

[<121>I]-CORP (GE Healthcare or Perkin-Elmer) je razblažen do 72 pM u puferu za testiranje i zapremina od 50 µl je dodata u svaku komoru. SK-N-MC membrane su odmrznute, razblažene u puferu za testiranje sa svežim 0.1% proteaza (poreklom od sisara) inhibitor koktelom (Sigma), i re-homogenizovane. SK-N-MC homogenat (7 µg/komori) je dodat u zapremini od 100 µl. Ploče za testiranje su onda inkubirane na sobnoj temperaturi 2 h. Testiranja su zaustavljena dodavanjem viška hladnog pufera za ispiranje (50 mM Tris-Cl pH 7.5, 0.1% BSA) i potom je odmah izvršena filtraciija preko filtera sa staklenim vlaknima (Whatman GF/B) prethodno natopljenim pomoću 0.5% PEI. Nespecifične veze su određene sa 1 µM beta-CGRP (Bachem). Radioaktivnost proteinske veze je određena korišćenjem gama ili scintilacionog brojača. Dobijeni podaci su analizirani korišćenjem jednačine kompetitivnog vezivanja sa četiri parametra (XLfit v2.0) i IC50je definisan kao koncentracija Jedinjenja (I) koja je potrebna da se izmesti 50% radioligandnih veza. Konačna test koncentracija [<125>I]-CORP-a je bila 18 pM. Srednja Kdza [<125>I]-CORP je 25.4 pM. Jedinjenje (I) je evaluirano u najmanje dva odvojena eksperimenta. U ovoj studiji, vrednost IC50Humanog CGRP Receptora Jedinjenja (I) je 0.04 nM.

In Vivo Farmakokinetičke Studije

[0122] Jedna in vivo studija je vođena tako što su upoređivane farmakokinetike slobodne baze Jedinjenja (I) kod ljudi koji su prethodno primenili 40 mg famotidina kod ljudi koji nisu prethodno uzimali famotidin.

[0123] Jedinjenje (I) u humanoj EDTA plazmi je analizirano korišćenjem tečno-tečne ekstrakcije sa uHPLC-MS/MS detekcijom na Triple Quad 5500 masenom spektrometru Metod koristi stabilno izotopski obeleženo [<13>C2, D4]-Jedinjenje (I) kao interni standard. Nakod dodavanja 50 µL, 100 ng/mL [<13>C2, D4]-Jedinjenja (I) u smešu MeOH:voda (20/80) i dodavanja 50 µL 1M NH4Oac, koji sadrži 4% puferovani rastvor acetatne kiseline u 0.100 ml svakog uzorka ispitivanja, uzorka kontrole kvaliteta (QC) i kalibracionog standarda, uzorci su ekstrahovani pomoću 600 µL metil tert-butil etra (MTBE) mešanjem u toku 15 min. 450 µL organskog sloja je uklonjeno i upareno do suvog ostatka. Ostatak je rekonstituisan u 200 µL rekonstitucionog rastvora (30% acetonitrila u 10 mM NH4OAc sa 0.01% acetatne kiseline). Svi koraci transfera tečnosti su izvršeni korišćenjem aparata Perkin Elmer JANUS Mini®, izuzev dodatka internog standardnog rastvora. 10 µL ekstrahovanog uzorka je injektirano u uHPLC-MS/MS sistem. uHPLC se izvodi na LEAP 4X Ultra uHPLC sistemu sa LEAP HTC PAL autosemplerom. Mobilna faza A sadrži 10 mM NH4OAc i 0.01% acetatnu kiselinu u ACN/voda (10:90), i mobilna faza B sadrži 10 mM NH4OAc i 0.01 % acetatnu kiselinu in ACN/voda (90:10). Hromatografsko razdvajanje je postignuto na Acquity® uHPLC BEH C18 koloni (1.7 µm, 2.1 x 50 mm) izokratnom eluacijom u trajanju od 0 - 1.5 min, sačinjenom od 28% Mobilne Faze B za analizu Jedinjenja (I), potom gradijent eluacijom koja se sastoji od linearnog povećanja od 28% B do 100% B u toku 0.1 min, potom njegovim održavanjem na 100% B tokom 1.1 min radi ispiranja kolone. Gradijent se tada vraća na 28% B tokom 0.1 min, i održava je na 28% tokom 0.9 min sa totalnim vremenom trajanja od 3.7 min. Brzina protoka je 0.6 mL/min i temperatura kolone je održavana na 60 °C. Detekcija je postignuta korišćenjem AB Sciex Triple Quad 5500 masenog spektrometra u pozitivnoj ESI sa turbo jon sprej jonizacijom i korišćenjem multiplog reakcionog monitoring modela (MRM). MRM prelazi su m/z 535→256 za Jedinjenje (I) i m/z 541→256 za [<13>C2, D4]-Jedinjenje (I). Prikupljanje i kvantifikacija podataka je obavljena korišćenjem AB Sciex Analyst® 1.5.1 softvera. Standardna kriva, koja se kretala od 0.500 - 500 ng/ml za Jedinjenje (I), je uklopljena u 1/x2 model težinske linearne regresije. Tokom analiza uzoraka, 4 nivoa analitičke kvalitativne kontrole uzoraka, predstavljajući niske, geometrijski srednje, srednje i visoke koncentracije Jedinjenja (I) pripremljenih u humanoj EDTA, su analizirana u 4 replikata pri svakom koncentracionom nivou za svaki analitički korak. Rezultati dobijeni iz ovih QC uzoraka su korišćeni za prihvatanje ili odbijanje analitičkih koraka koji sadrže uzorke ispitivanja na osnovu kriterijuma prihvatanja, ustanovljenih prethodno za analize Jedinjenja (I) u humanoj EDTA plazmi.

[0124] Rezultat ovih studija su prikazani u Tabeli 7 i na SLICI 8. Značajna redukcija u AUC i Cmax Jedinjenja (I) je primećena kod ljudi koji su prethodno tretirali sa 40 mg famotidina u odnosu na ljude koji nisu prethodno tretirani famotidinom.

Tabela 7

[0125] In vivo studija je sprovedena na psima koji su prethodno tretirani famotidinom ili pentagastrinom, pri čemu su upoređivane farmakokinetike slobodne baze Jedinjenja (I) i hemisulfatne soli Jedinjenja (I).

[0126] Kapsule su pripremane tako da sadrže 150 mg ili Jedinjenja (I) kao slobodne baze ili hemisulfatne soli Jedinjenja (I):

1. Kapsule Jedinjenja (I) kao slobodne baze: 50 mas % Jedinjenja (I), 42 mas % mikrokristalne celuloze, 3 mas % natrijum kroskarmelose, 4 mas. % Klucel EXF hidroksipropilceluloze, 0.5 mas % magnezijum stearata, 0.5 mas % koloidnog silikon dioxida 2. Kapsule hemisulfatne soli Jedinjenja (I): 57% Primera 1 (hemisulfatna so Jedinjenja(I), u kristalnoj formi HI.5-1), 40% microkristalne celuloze, 3% Natrijum kroskarmeloze.

[0127] Četiri muška psa (10 kg) su tretirana u skladu sa sledeća tri protokola za tretiranje:

Tretman 1: prethodni tretman pentagastrinom (6 µg/kg, IP) nekoliko sati pre oralne primene kapsule Jedinjenja (I) kao slobodne baze.

Tretman 2: prethodna oralna primena 40 mg famotidina, tri sata pre oralne primene kapsule Jedinjenja (I) kao slobodne baze.

Tretman 3: prethodna oralna primena 40 mg famotidina, tri sata pre oralne primene kapsule Jedinjenja (I) kao hemisulfatne soli.

[0128] Uzorci krvi su prikupljani nakon 0, 0.5, 1, 2, 4, 8, i 24 sata od primene kapsula Jedinjenja (I) kao slobodne baze ili Jedinjenja (I) hemisulfatne soli i skladišteni su u EDTA cevčicama. Jedinjenje (I) u psećoj EDTA plazmi je analizirano korišćenjem tečno-tečne ekstrakcije i u HPLC-MS/MS detekcije na Quad 5500 masenom spektometru. Uzorak od 0.050 mL pseće EDTA plazme je korišćen za test. Metod koristi stabilan obeleženi izotop [<13>C2, D4]-Jedinjenje (I) kao interni standard. Nakod dodatka 50 µL 200 ng/mL [<13>C2, D4]-Jedinjenja (I) u smešu MeOH:voda (20/80) i 50 µL 1M NH4OAc koji sadrži 4% puferovanog rastvora acetatne kiseline, u 0.050 mL svakog uzorka za ispitivanje, quality control (QC) uzorka, i kalibracionog standarda, uzorci su ekstrahovani sa 600 µL metil tert-butil etrom (MTBE) mešanjem tokom 15 min. 450 µL organskog sloja je uklonjenoi upareno do suvog ostatka. Ostatak je rekonstituisan u 300 µL rekonstitucionog rastvora (30% acetonitril u 10 mM NH4OAc sa 0.01% acetatne kiseline). Svi koraci transfera tečnosti su izvedeni pomoću instrumenta Perkin Elmer JANUS Mini, sem dodavanja rastvora internog standarda. 5 µL ekstrahovanog uzorka je injektirano u uHPLC-MS/MS sistem. Metoda uHPLC se sprovodi na LEAP 4X Ultra uHPLC sistemu sa LEAP HTC PAL autosemplerom. Mobilna faza A je sadržala 10 mM NH4OAc i 0.01 % acetatnu kiselinu u smeši ACN/voda (10:90), i mobilna faza B je sadržala 10 mM NH4OAc i 0.01% acetatnu kiselinu u smeši ACN/voda (90:10). Hromatografsko razdvajanje je postignuto na Acquity® uHPLC BEH C18 koloni (1.7 µm, 2.1 x 50 mm) sa jednokratnim eluiranjem od 0-1,5min sa 28% Mobilnom Fazom B za analize Jedinjenja (I), potom sa gradijent eluiranjem, koji se sastoji od linearnog povećanja od 28% B do 100% B u 0.1 min, zatim održavanjem na 100% B tokom 1.1 min da bi se isprala kolona. Gradijent se potom vraća na 8% B u toku 0.1 min, i održava na 28% tokom 0.9 min sa totalnim vremenom protoka od 3.7 min. Brzina protoka je bila 0.6 mL/min i temperatura kolone je održavana na 60°C. Detekcija je postignuta korišćenjem AB Sciex Triple Quad 5500 masenog spektrometra u pozitivnoj ESI sa turbo jon sprej jonizacijom i korišćenjem modela multiplog reakcionog monitoringa (MRM). MRM tranzicije su bile m/z 535→256 za Jedinjenje (I) i mlz 541→256 za [<13>C2, D4]-Jedinjenje (I). Prikupljanje i kvantifikacija podataka je obavljena korišćenjem AB Sciex Analyst® 1.5.1 softvera. Standardna kriva, koja se kretala od 3,00 do 3000 ng/ml za Jedinjenje (I), je uklopljena u 1/x2 model težinske linearne regresije. Tokom analiza uzoraka, 4 nivoa analitičke kvalitativne kontrole uzoraka, predstavljajući niske, geometrijski srednje, srednje i visoke koncentracije Jedinjenja (I) pripremljenih u psećoj EDTA, su analizirana u 4 replikata pri svakom koncentracionom nivou za svaki analitički korak. Rezultati dobijeni iz ovih QC uzoraka su korišćeni za prihvatanje ili odbijanje analitičkih koraka koji sadrže uzorke ispitivanja na osnovu kriterijuma prihvatanja, ustanovljenih prethodno za analize Jedinjenja (I) u psećoj EDTA plazmi.

[0129] Rezultati ove studije su prikazani u Tabeli 8 i na SLICI 9. Značajna redukcija u AUC i Cmax je primećena kod pasa koji su prethodno tretirani famotidinom (visoka stomačna pH) nakon tretmana slobodnom bazom Jedinjenja (I) u poređenju sa psima koji su prethodno tretirani pentagastrinom (niska stomačna pH). Doziranje Primera 1, hemisulfatnog seskvihidrata soli Jedinjenja (I), kod prethodno tretiranih pasa famotidinom, je pokazalo mnogo manju redukciju u AUC i Cmax. U ovoj specifičnoj studiji, hemisulfatna so Jedinjenja(I) obezbedila je Cmaxvrednost od 2596 ng/mL, AUC0-24hrod 12473 ng·h/mL, i 34.73 % biološke raspoloživosti kada se primeni nakon prethodnog tretmana famotidinom. Nasuprot tome, u sličnom testu, Jedinjenje (I) kao slobodna baza obezbeđuje Cmaxvrednost od 245 ng/mL, AUC0-24hrod 1762 ng·h/mL, i 4.54 % biološke raspoloživosti kada se primeni nakon prethodnog tretmana famotidinom.

Tabela 8

4

[0130] Hemisulfatna so Jedinjenja (I) je upoređivana sa Jedinjenje (I) slobodnom bazom i uočeno je da je posebno pogodna. Hemisulfatna so Jedinjenja (I) ima značajnu prednost redukcije promena biološke raspoloživosti Jedinjenja (I) i/ili povećanja biološke raspoloživosti Jedinjenja (I) kod pacijenta. Na osnovu ovih in vitro i in vivo podataka, očekuje se da će hemisulfat obezbediti značajnu prednost u stalnosti biološke raspoloživosti među pacijentima, naspram slobodne forme. Kao ilustracija, hemisulfatni oblik obezbeđuje iznenađujuće povećanje biološke raspoloživosti u populaciji pacijenata koji su primenili lekove koji mogu da povećaju Ph vrednost želudačne kiseline, kao što su antacidi, inhibitori protonske pumpe ili antagonisti H2-receptora.

Podaci Jednog Kristala (LVL)

[0131] Podaci su prikupljani na Bruker-Nonius CAD4 serijskom difraktometru. Podaci jedinične ćelije su dobijeni kroz analize najmanjih-kvadrata za eksperimentalna podešavanja difraktometra od 25 visokougaonih refleksija. Intenziteti su mereni korišćenjem Cu Kα radijacije (λ = 1.5418 Å) na konstantnoj temperaturi sa θ-2θ varijabilnom tehnikom skeniranja i korigovani su samo za Lorentz-polarizacione faktore. Vrednosti prirodnog jonizujućeg zračenja su prikupljeni na krajevima skena za pola vremena trajanja skeniranja. Alternativno, podaci jednog kristala su prikupljani na Bruker-Nonius Kappa CCD 2000 sistemu korišćenjem Cu Kα radiacije (λ = 1.5418 Å). Obeležavanje i obrada izmerenih podataka intenziteta su bili obavljeni HKL2000 softverskim paketom (Otwinowski, Z & Minor, W. (1997) in Macromolecular Crystallography, eds. Carter, W.C. Jr. & Sweet, R.M. (Academic, NY), Vol.276, str.307-326) u Collect program paketu. (Collect Data collection i processing user interface: Collect: Data collection software, R. Hooft, Nonius B.V., 1998).

Alternativno, podaci jednog kristala su prikupljani na Bruker-AXS APEX2 CCD sistemu korišćenjem Cu Kα radiacije (λ = 1.5418 Å). Obeležavanje i obrada izmerenih podataka intenziteta su bili obavljeni APEX2 softverskim paketom/programskim paketom (APEX2 Data collection i processing user interface: APEX2 User Manual, v1.27; BRUKER AXS, Inc., Madison, WI).

[0132] Kad je naznačeno, kristali su hlađeni u hladnoj struji Oxford crio sistema (Oxford Cryosystems Cryostream cooler: J. Cosier i A.M. Glazer, J. Appl. Cryst., 1986, 19, 105) tokom prikupljanja podataka.

[0133] Strukture su rešene direktnim metodama i poboljšane na osnovu uočenih refleksija korišćenjem ili SDP softverkog paketa (SDP, Struktura Determination Package, Enraf-Nonius, Bohemia NY) sa minornim lokalnim modifikacijama ili kristalografskih paketa MAXUS (maXus solution and refinement software suite: S. Mackay, C.J. Gilmore, C. Edwards, M. Tremayne, N. Stewart, K. Shankli. maXus: a computer program for the solution and refinement of crystal structures from diffraction data) ili SHELXTL (Sheldrick, GM.

1997, SHELXTL. Structure Determination Programs. Version 5.10 or greater, Bruker AXS, Madison, Wisconsin)..

[0134] Dobijeni atomski parametri (koordinate i temperaturni faktori) su prečišćeni kroz metod najmanjih kvadrata. Funkcija minimizirana u prečišćavanju je bila ∑W(|FO| - |FC|)<2.>R je predstavljena kao ∑ ||FO| - |FC||/∑- |FO| dok je RW= [∑W( |FO| - |FC|<2>/∑W|FO|<2>]<1/2>gde je w odgovarajuća masena funkcija zasnovana na greškama u posmatranim intenzitetima. Diferencijalne mape su ispitivane u svim fazama prečišćavanja. Vodonici su uvedeni u idealne pozicije sa izotropnim temperaturnim faktorima, ali ni jedan od vodoničnih parametara nije varirao.

Podaci Jednog Kristala (WFD)

[0135] Bruker SMART 2K CCD difraktometar opremljen grafit-monohromatskom Cu Kα radijacijom, (λ = 1.54056 Å) je korišćen za prikupljanje difrakcionih podataka na sobnoj temperaturi. Celokupni set podataka je prikupljan korišćenjem ω sken načina preko 2θ dometa sa razdaljinom između kristala i detektora od 4.98 cm. Empirijska korekcija absorpcije je koristila SADABS rutinu povezanu sa difraktometrom (Bruker AXS. 1998, SMART i SAINTPLUS. Area Detector Control i Integration Software, Bruker AXS, Madison, Wisconsin, USA). Konačni parametri jedinične ćelije su određeni korišćenjem celokupnog seta podataka.

[0136] Sve strukture su rešene direktnim metodom i prečišćene metodama potpunih najmanjih kvadrata, korišćenjem SHELXTL softverskog paketa (Sheldrick, GM. 1997, SHELXTL. Programi Određivanja strukture. Version 5.10, Bruker AXS, Madison, Wisconsin, SAD.). Funkcija minimizirana tokom prečišćavanja je bila Σw(|Fo| - |Fc|)<2>. R je definisan kao ∑ ||Fo| - |Fc||/∑ |Fo| dok je Rw= [∑w(|Fo| - |Fc|)<2>/∑w|Fo|<2>]<1/2>, gde je w odgovarajuća masena funkcija zasnovana na greškama u zabeleženim intenzitetima. Diferencijalne Fourier-ove mape su ispitivane na svim stupnjevima prečišćavanja. Svi nevodonični atomi su prečišćeni sa parametrima anizotropnih termalnih promena. Atomi vodonika povezani vodoničnim vezama su lokalizovani u konačnim diferencijalnim Fourierovim mapama, dok su pozicije ostalih vodoničnih atoma izračunavane iz idealizovane geometrije sa standardnom vezom dužina i uglova. Dodeljeni su im izotropni temperaturni faktori i uključeni su u proračune faktora strukture sa fiksnim parametrima.

PXRD (Philips)

[0137] Oko 200 mg je stavljeno u Philips analizator difrakcije X-zraka praha (PXRD). Uzorak je prenet u Philips MPD jedinicu (45 KV, 40 mA, Cu Kα). Podaci su sakupljani na sobnoj temperaturi u 2 do 322-teta opsegu (kontinuiran način skeniranja, brzina skeniranja 0.03 stepeni/sec., auto divergencija i prorezi bez rasipanja, dobijanje proreza: 0.2 mm, okretanje uzorka : ON)

PXRD (GADDS-NB)

[0138] Podaci difrakcije X-zraka praška (PXRD) su dobijeni korišćenjem Bruker C2 GADDS. Radijacija je bila Cu Kα (40 KV, 40mA). Uzorak-detektor razdaljina je bila 15 cm. Praškasti uzorci su stavljeni u staklene kapilare dijametra 1mm ili manje, koje su zapečaćene; kapilare su se rotirale tokom prikupljanja podataka. Podaci su prikupljani za 3≤29≤5° sa vremenom izlaganja uzorka od najmanje 1000 sekundi. Dobijeni dvodimenzionalni difrakcioni lukovi su integrisani tako da formiraju tradicionalni jednodimenzionalni PXRD šablon sa veličinom koraka od 0.02 stepena 2θ u opsegu od 3 do 35 stepeni 2θ.

DSC (otvoreni sud)

[0139] Eksperimenti diferencijalne skening kalorimetrije (DSC) su izvedeni na Q2000, Q1000 ili 2920 modelima TA Instrumenata™. Uzorak (oko 2-6 mg) je odmeren u aluminijumsku posudu i tačno zabeležen na hiljaditi deo miligrama, potom premešten u DSC. Instrument je očišćen azotnim gasom pri 50mL/min. Podaci su prikupljani između sobne

4

temperature i 300°C pri brzini zagrevanja od 10°C/min. Stvorena je šema sa endotermnim pikovima usmerenim na dole.

TGA (otvoreni sud)

[0140] Eksperimenti termalnih gravimetrijskih analiza (TGA) su izvedeni na Q500 ili 2950 modelima TA Instrumenata™. Uzorak (oko 10-30 mg) je stavljen u prethodno tariran sud od platine. Težina uzorka je tačno izmerena i zabeležena putem instrumenta na hiljaditi deo miligrama. Kotao je očišćen azotnim gasom pri 100mL/min. Podaci su prikupljani između sobne temperature i 300°C pri brzini zagrevanja od 10°C/min.

Nuklearna Magnetna Rezonanca Čvrstog Stanja (SSNMR)

[0141] Sva merenja NMR čvrstog stanja C-13 su sprovedena pomoću Bruker AV-400, 400 MHz NMR spektrometra. Spektri visoke rezolucije su dobijeni korišćenjem visoko naponskog razdvajanja protona i TPPM pulsne sekvence i ramp amplitude kros-polarizacije (RAMP-CP) sa magičnim uglom okretanja (MAS) od približno 12 kHz (A.E. Bennett et al, J. Chem. Phys.,1995, 103, 6951), (G. Metz, X. Wu i S.O. Smith, J. Magn. Reson. A,.1994, 110, 219-227). Za svaki eksperiment je korišćeno približno 70 mg uzorka, zapakovanog u rotor od cirkonijuma, oblika kanistera. Hemijska pomeranja (δ) su se odnosila na spoljni adamantan sa visoko frekventnom rezonancom postavljenom na 38.56 ppm (W.L. Earl i D.L. VierHart, J. Magn. Reson., 1982, 48, 35-54).

VTI (sušenje)

[0142] Izoterme sorpcije vlage su prikupljane pomoću intrumenta VTI SGA-100 Symmetric Vapor Analyzer, korišćenjem približno 10 mg uzorka. Uzorak je sušen na 60°C tokom 10 minuta, dok nije postignuta brzina gubitka od 0.0005 tež %/min. Uzorak je testiran pri 25 °C i 3 ili 4, 5, 15, 25, 35, 45, 50, 65, 75, 85, i 95% RH. Izjednačavanje za svaku RH je ostvareno kad je postignuta brzina od 0.0003 tež%/min za 35 minuta ili maksimalno 600 minuta.

[0143] Stručnim licima iz ove oblasti će biti evidentno da objava pronalaska nije ograničena na prethodno ilustrovane primere i da on može biti prikazan u drugim specifičnim oblicima, ne odstupajući od svojih glavnih osobina. Stoga je poželjno da primeri budu shvaćeni, u svakom pogledu, kao ilustrativni, a ne kao ograničavajući, da reference budu formirane u odnosu na priložene patentne zahteve, pre nego na prethodne primere, i da sve promene patentnih zahteva, koje proizilaze iz značenja i stepena ekvivalencije, stoga, budu njima obuhvaćene.

Claims (10)

1. Patentni zahtevi 1. Hemisulfatna so jedinjenja (I):
2. 2. Hemisulfatna so jedinjenja (I) prema patentnom zahtevu 1, gde je navedena so jedinjenja (I) kristalna.
3. 3. Hemisulfatna so jedinjenja (I) prema patentnom zahtevu 1, gde navedena so jedinjenja (I) je seskvihidrat.
4. 4. Hemisulfatna so jedinjenja (I) prema patentnom zahtevu 3, gde je navedena so kristalni oblik H1.5-1 okarakterisan sledećim: Parametri jedinične ćelije su jednaki sledećem:

   Prostorna grupa: P21212 Molekuli jedinjenja (I)/asimetrična jedinica: 1 Zapremina = 2851 Å<3> 4 Gustina (izračunato) = 1.423 g/cm<3>, gde je merenje navedenog kristalnog oblika na temperaturi od oko 25°C.
5. 5. Hemisulfatna so jedinjenja (I) prema patentnom zahtevu 4, gde navedeni oblik H1.5-1 je okarakterisan jednim ili više od sledećeg: a) šablon difrakcije x-zraka praškaste supstance (CuKα λ=1.5418Å) koji sadrži 2θ vrednosti: 5.4±0.1, 8.6±0.1, 9.7±0.1, 12.4±0.1, 14.9±0.1,17.6±0.1, 18.1±0.1, 20.5±0.1, 21.4±0.1, i 22.0±0.1, gde je merenje kristalnog oblika na temperaturi od oko 25°C; i/ili b) spektri nuklearne rezonance u čvrstom stanju koji sadrže šest ili više pikova (δ (ppm) u odnosu na TMS) koji su odabrani od: 26.6±0.1, 27.1±0.1, 28.3±0.1, 30.7±0.1, 43,1±0.1, 45.9±0.1, 47.1±0.1, 52.0±0.1, 54.2±0.1, 72.5±0.1, 117.0±0.1, 117.7±0.1, 124.2±0.1, 125.2±0.1, 128.3±0.1, 130.3±0.1, 131.4±0.1, 134.1±0.1, 140.8±0.1, 144.7±0.1, 148.7±0.1, 149.8±0.1, 151.2±0.1, 153.4±0.1, 155,1±0.1, 155.6±0.1 i 156.7±0.1.
6. 6. Farmaceutska kompozicija koja sadrži nevedenu hemisulfatnu so jedinjenja (I) prema patentnom zahtevu 1; i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.
7. 7. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 6, gde je navedena hemisulfatna so jedinjenja (I) seskvihidrat.
8. 8. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 7, gde je navedena hemisulfatna so jedinjenja (I) kristalni oblik H1.5-1 okarakterisan sledećim: Parametri jedinične ćelije su jednaki sledećem:

   Prostorna grupa: P21212 Molekuli jedinjenja (I)/asimetrična jedinica: 1 4 Zapremina = 2851 Å<3> Gustina (računato) = 1.423 g/cm<3>, gde je merenje navedenog kristalnog oblika na temperaturi od oko 25 °C.
9. 9. Hemisulfatna so jedinjenja (I) prema bilo kom patentnom zahtevu 1 do 5 se koristi kao lek.
10. 10. Hemisulfatna so jedinjenja (I) prema bilo kom patentnom zahtevu 1 do 5 se koristi u lečenju poremećaja koji je povezan sa CGRP, gde je navedeni poremećaj migrenozna glavobolja, neurogena vazodilatacija, neurogena inflamacija, termalna povreda, cirkulatorni šok, crvenilo vezano za menopauzu, inflamatorne respiratorne bolesti ili hronična opstruktivna bolest pluća (HBOP). 4