RS55217B1

RS55217B1 - Kombinovani preparat koji se sastoji od egzozoma i kortikosteroida

Info

Publication number: RS55217B1
Application number: RS20160811A
Authority: RS
Inventors: Peter Wehling; Julio Reinecke
Original assignee: Orthogen Ag
Priority date: 2009-12-10
Filing date: 2010-12-10
Publication date: 2017-02-28
Also published as: KR20120107108A; CA2781576C; EP2437748B1; SI2437747T1; DE202009017772U1; ES2594766T3; CN107096031A; EP2437748A1; BR112012013888A2; RU2012128877A; US20120237525A1; AU2010340999B2; HRP20161268T1; SI2437748T1; US20130164303A2; EP2437748B8; WO2011082950A1; US10537614B2; HRP20161279T1; JP2013513582A

Description

Oblast pronalaska

[0001]Predmetni pronalazak se odnosi na farmaceutska jedinjenja za kombinovanu terapiju sa kortikosteroidom i egzozomima. Posredstvom kombinovane terapije se mogu lečiti bolesti poput artroze, artritisa i/ili degenerativne bolesti kičme, pri čemu se lečenje preferirano izvodi lokalno.

Tehnička pozadina

[0002]Artroza se u Nemačkoj opisuje kao "trošenje zglobova", koje je veće od onog koje je uobičajeno usled starosti. Nju prati gubitak hrskavice u pogođenom zglobu, što prouzrokuje bolove i pogoršanje funkcije. Njenim uzrokom se smatra prekomerno opterećenje, urođeni ili traumatski uslovljeni uzroci, poput pogrešnog položaja zglobova, ali i koštane deformacije zbog bolesti kostiju poput osteoporoze. Ona takođe može da nastane kao posledica jedne druge bolesti poput zapaljenja zglobova ili može da prati stvaranje efuzije uslovljeno preopterećenjem.

[0003]U principu svi zglobovi mogu biti napadnuti artritičnim promenama. U Nemačkoj se bolest najčešće javlja na zglobu kolena. Artroza je jedan od najčešćih razloga posete lekaru opšte prakse Oko 10% stanovništva u zapadnim zemljama pati od artroze. Ako se u to uključe artroze malih zglobova pršljena i degenerativna oboljenja međupršljenskih diskova, onda je pogođeno čak 15%-20% stanovništva. Rizik oboljevanja od artroze se povećava sa starošću. Otprilike dve trećine ljudi starijih od 65 godina je pogođeno ovim oboljenjem, međutim ne pate sve pogođene osobe i od simptoma.

[0004]Za lečenje artroze je već poznato nekoliko oblika terapije U to spadaju kako konzervativne (npr. medikamentozne) terapije, tako i hirurške intervencije, pa sve do zamene kompletnog zgloba protezom. Da bi se izbegle takve obimne i nepovratne intervencije, u principu treba preferirati učinkovito lečenje medikamentima, da bi se trenutak kompletne zamene zgloba pomerto što više u budućnost.

[0005]Međutim, brojne vrste lečenja medikamentima imaju i nedostatke. S jedne strane su razlog neželjena prateća dejstva samih medikamenata, ali i njihov učinak detimično postoji samo pod određenim uslovima.

[0006]Često korišćena aktivna medicinska supstanca za lečenje artroze i reumatoidnog artritisa je kortizon (nanosi se i lokalno) i povezani kortikosteroidi. Oni se u slučaju RA daju sistemski, a pri artrozi lokalno kao injekcija u pogođeni zglob. Međutim, pri tom se pokazalo da pozitivno dejstvo davanja kortikosteroida kako kod artroze, tako i kod reumatoidnog artritisa, popušta već posle samo jedne nedelje. To je klinički utvrđeno na osnovu ranđomizovanih ispitivanja i kliničkog iskustva. Kod RA se kontinuiranim davanjem kortizona sistemski može održavati aktivni nivo, ali je to usled pojačanja sporednih dejstava i slabljenje terapijskog efekta pri stalnom davanju vrlo

problematično.

[0007]Egzozomi su male vezikule obmotane membranom od lipida, koji se nalaze u vanćelijskom prostoru, na primer ljudskog organizma Njih stvaraju ćelije odvajanjem od membrane ćelijske plazme i sekretiraju ih. Ovi egzozomi obično sadrže i proteine, koje su preuzeli od ćelije koja ih je stvorila. Postupci za dobijanje i davanje egzozoma su na primer opisani u patentnoj prijavi WO 2006/007529 A2. Prilikom in-vitro indukcije profilaktično ili terapijskih aktivnih proteina poput na primer IL-1Ra se inkubacijom uzorka krvi u prikladnoj posudi kao što je npr špric, stvaraju egzozomi. Usled toga na primer i ortokin sadrži egzozome Stvaranje egzozoma može da se pojača dodavanje aditiva koji pospešuje stvaranje egzozoma Koncentracija egzozoma se na primer može povećati centrifugiranjem pri visokom centrifugalnom ubrzanju. Upotreba egzozoma pri lečenju reumatoidnog artritisa je već poznata

[0008]U časopisu "arznei-telegramm" 2001; Jg. 32. br. 3. str 34 se u opštem smislu diskutuje o korišćenju ortokina kod artroze, reumatoidnog artritisa i diskus hernije. Nije prikazan kortikosteroid ili kombinovana terapija sa kortikosteroidom egzozomima

[0009]Bisnco et al. (2009) Arthritis & Rheumatism 60, 380 se bavi dejstvom egzozoma iz dendritskih ćelija na različite modele bolesti na miševima Bianco et al se ne bavi egzozomima dobijenim iz uzorka krvi ntti kombinovanom terapijom sa kortikosteroidom.

[0010]U Bresnihan et al. (1998) Arthritis & Rheumatism 41, 2196 je prikazano lečenje reumatoidnog artritisa rekombinantnim humanim IL-1 Ra Jedan deo pacijenata koristio je kortikosteroid (prednisolon), pri čemu nije prikazano dejstvo takve mere Osim toga, nisu prikazani ni egzozomi

[0011]U Settas et al (2007) je prikazana reaktivacija tuberkuloze pluća kod pacijenta koji boluje od reumatoidnog artritisa, koji je lečen rekombinantnim IL-1 Ra (anakinra) On je osim toga uzimao prednisolon, pri čemu njegovo dejstvo nije prikazano. Egzozomi nisu prikazani

[0012]Još jedan lek, koji može da se koristi za lečenje artroze, je sopstveni protein tela IL-1Ra ili njegova izoforma ili njegov fragment, koji pokazuje sličnu aktivnost Antagonist interleukin-1 receptora (IL-1Ra) se vezuje na iste receptore na površini ćelije kao lnterleukin-1 (IL-1). ali tamo ne prouzrokuje signalnu kaskadu koju obično izaziva vezivanje IL-1. Vezivanjem na receptor IL-1, IL-1 Ra blokira vezivanje IL-1 i tako sprečava njegovo prosleđivanje i na taj način inflamatorno dejstvo IL-1 na ciljne ćelije.

[0013]Lečenje pacijenata sopstvenim serumom tela, u kojem je IL-1 Ra obogaćen poznato je u stanju tehnike. Tako korišćeni IL-1Ra se naziva i ortokin Rekombinantni IL-1 Ra fragment, anakinra, nasuprot tome pri lečenju artroza nije pokazao nikakvo dejstvo u poređenju sa placebo lečenjem. Anakinra je na aminokiseline 26 - 177 skraćena i na kraju L-metjonilirana izoforma humanog antagonista lnterleukin-1 receptora i ima dužinu sekvence od 153 aminokiselina. Proizvodnja se na primer vrši pomoćuEschericlva coii maticarekombinantnim metodama.

[0014]Imajući u vidu stanje tehnike, stoga je postojao zadatak da se stavi na raspolaganje medikamentozno lečenje artroze, koje ima bolji učinak, a posebno ima dobar dugoročni učinak. Lečenje bi osim toga trebalo da ima dobar učinak, preferirano dugoročno dejstvo kod artritisa, a posebno reumatoidnog artritisa

Sažeti prikaz pronalaska

[0015]Na iznenađenje je sada utvrđeno da se dejstvo. a posebno dugoročno dejstvo i brzina početka delovanja kortikosteroida poput kortizona kod artroze, artritisa i degenerativnog oboljenja kičme mogu značajno odn. sinergijski poboljšati dodatnom primenom egzozoma To se posebno pokazuje kod lokalnog davanja terapijskih lekova direktno zglob koji treba da se leći. Jedno od iznenađujućih saznanja je na primer to da je korišćenje kortikosteroida u kombinaciji sa egzozomima, koji su dobijeni na primer u špricu ortokina iz uzorka krvi (npr. kortikosteroid zajedno sa ortokinom) u pogledu brzine početka delovanja kod artroze izgleda bolje od terapije koja ne sadrži aktivnu supstancu egzozome. Brz početak delovanja se može posmatrati i kada se vec delotvornoj terapiji artroze (kao npr. kortikosteroid zajedno sa anakinrom) kao dodatna aktivna supstanca dodaju egzozomi.

[0016]Primetno dobru delotvornost kombinacija kortikosteroida i egzozoma pokazuje i pri lečenju reumatoidnog artritisa, kako što se tiče brzine početka delovanja, tako i u pogledu dugoročne delotvomosti. Ovde se pokazao posebno povoljan efekat uslovljen iznenađujuće visokim stepenom delotvornosti (uslovljen različitim patofiziološkim početnim tačkama) pri posebno povoljnom profilu sporednog dejstva za pacijenta Povoljan profil sporednog dejstva ima poseban značaj, jer je hronično davanje kortikosteroida povezano sa znatnim sporednim dejstvima poput poremećaja metabolizma, osteoporoze i drugih neželjenih dejstava. Kombinacijom egzozoma i kortikosteroida poput kortizona se međutim smanjuju nepovoljna dejstva kortikosteroida (kortizona) i povećava delotvornost lečenja.

[0017]Nezavisno od indikacije se kod brojnih pacijenata moglo primetiti da kombinacija egzozoma sa kortikosteroidima ima terapijski efekat. koji prevazilazi zbir pojedinačnih terapijskih efekata obe aktivne supstance, egzozoma i kortikosteroida, a posebno kada nisu obe aktivne supstance terapijski delotvorne pri pojedinačnoj primeni.

[0018]Stoga predmetni pronalazak i prvom aspektu stavlja na raspolaganje farmaceutsko jedinjenje, koje sadrži kortikosteroid zajedno sa egzozomima u prisustvu ili odsustvu antagonista citokina i/ili faktora rasta, pri čemu se egzozomi mogu proizvesti postupkom koji obuhvata korake: obezbeđivanje uzorka krvi koji sadrži egzozome i preferirano povećanje koncentracije egzozoma.

[0019] Izraz "odsustvoantagonista citokina" u sklopu predmetnog pronalaska znači da nije prisutan nijedan antagonist citokina. To analogno važi u pogledu faktora rasta

[0020] Farmaceutsko jedinjenjeprema prvom aspektu stoga u svakom slučaju sadrži kortikosteroid i egzozome Osim toga postoji ili opcija prisustva ili opcija odsustva antagonista citokina; osim toga postoji ili opcija prisustva ili opcija odsustva faktora rasta.

[0021]Terapijski lekovi se takođe mogu davati i u dva različita farmaceutska jedinjenja istovremeno ili u vremenskom redosledu. Analogno se u drugom i trećem aspektu pronalaska stavlja na raspolaganje farmaceutsko jedinjenje koje sadrži egzozome u prisustvu ili odsustvu antagonista citokina i/ili faktora rasta za korišćenje u kombinovanoj terapiji zajedno sa kortikosteroidom, kao i farmaceutsko jedinjenje koje sadrži kortikosteroid u prisustvu ili odsustvu antagonista citokina i/ili faktora rasta za upotrebu u kombinovanoj

terapiji zajedno sa egzozomima, pri čemu se kombinovana terapija u oba slučaja odnosi na lečenje

bolesti, koja je izabrana iz grupe koju čine bolesti zglobova poput artroze, artritisa, zapaljenja zglobova i zapaljenskog gubitka hrskavice, degenerativnih oboljenja kičme, bolova zglobova i autoimunih bolesti, pri čemu se bolest razlikuje od reumatoidnog artritisa i egzozomi su dobijeni iz uzorka krvi.

[0022]Pronalazak u četvrtom aspektu stavlja na raspolaganje farmaceutsko jedinjenje, koje sadrži antagonist citokina i/ili faktor rasta za upotrebu u kombinovanoj terapiji zajedno sa kortikosteroidom i egzozomima, pri čemu se kombinovana terapija odnosi na lečenje bolesti koje su izabrane iz grupe koju čine oboljenja zglobova poput artroze, artritisa, zapaljenja zglobova i zapaljenskog gubitka hrskavice, degenerativnih oboljenja kičme, bolova zglobova i autoimunih bolesti, pri čemu se bolest razlikuje od reumatoidnog artritisa i egzozomi su dobijeni iz uzorka krvi

[0023]U petom izvođenju prema ovom pronalasku se stavlja na raspolaganje komplet, koji sadrži (i) farmaceutsko jedinjenje koje sadrži egzozome u prisustvu ili odsustvu antagonista citokina i/ili faktora rasta i (ii) farmaceutsko jedinjenje koje sadrži kortikosteroid u prisustvu i odsustvu antagonista citokina i/ili faktora rasta, pri čemu se egzozomi mogu proizvesti postupkom koji obuhvata korake: obezbeđivanje uzorka krvi koji sadrži egzozome i preferirano povećanje koncentracije egzozoma.

[0024]Osim toga se pronalazak u svom šestom izvođenju odnosi na upotrebu egzozoma u prisustvu ili odsustvu antagonista citokina i/ili faktora rasta za proizvodnju farmaceutskog jedinjenja za upotrebu u za upotrebu u kombinovanoj terapiji zajedno sa kortikosteroidom, a u sedmom izvođenju na upotrebu kortikosteroida u prisustvu ili odsustvu antagonista citokina i/ili faktora rasta za proizvodnju farmaceutskog jedinjenja za upotrebu u za upotrebu u kombinovanoj terapiji zajedno sa egzozomima, pri čemu se kombinovana terapija u oba slučaja odnosi na lečenje bolesti, koja je izabrana iz grupe koju čine bolesti zglobova poput artroze, artritisa, zapaljenja zglobova i zapaljenskog gubitka hrskavice, degenerativnih oboljenja kičme, bolova zglobova i autoimunih bolesti, pri čemu se bolest razlikuje od reumatoidnog artritisa i egzozomi su dobijeni iz uzorka krvi.

[0025]Kombinovana terapija koja je gore pomenuta u vezi sa drugim, trećim, četvrtim, šestim i sedmim izvođenjem je preferirano kombinovana terapija zajedno sa antagonistom citokina i/ili faktorom rasta, posebno u slučajevima, u kojima je u samom farmaceutskom jedinjenju odsutan antagonist citokina i/ili faktor rasta.

[0026]U osmom izvođenju se predmetni pronalazak odnosi na postupak proizvodnje farmaceutskog jedinjenja koji sadrži kortikosteroid i egzozome. koji sadrži sledeće korake: obezbeđivanje uzorka krvi koji sadrži egzozome, preferirano povećanje koncentracije egzozoma i mešanje sa kortikosteroidom.

[0027]Dodatni oblici izvođenja pronalaska su navedeni u detaljnom opisu u nastavku i u patentnim zahtevima.

Opis pronalaska

[0028]Pronalazak se zasniva na iznenađujućem saznanju da se lečenje oboljenja zglobova i kičme poput artroze, artritisa i degenerativnog oboljenja kičme, kao i autoimunih oboljenja poput neurodermitisa i kružnog ispadanja kose pomoću kortikosteroida može znatno poboljšati dodatnim davanjem egzozoma Stoga se pronalazak orijentiše na kombinovanu terapiju takvihoboljenja pomoću kortikosteroida zajedno sa egzozomima To može da se izvrši u prisustvu ili odsustvu antagonista citokina i/ili faktora rasta. Preferirano je odsustvo antagonista citokina i/ili faktora rasta.

[0029]Ove razne aktivne supstance pri tom mogu da se daju istovremeno - u istoj formulaciji ili u raznim formulacijama - ili i sekvencijalno. Farmaceutska jedinjenja prema ovom pronalasku, koja sadrže samo jednu od dve aktivne supstance, egzozome i kortikosteroid, kao i komplet prema ovom pronalasku, stoga mogu biti s jedne strane određena za simultano davanje, a s druge strane za sekvencijalno davanje egzozoma i kortikosteroida Istovremeno davanje je međutim preferirano, a posebno u samo jednoj formulaciji Tako se na primer dva farmaceutska jedinjenja kompleta prema ovom pronalasku pre davanja pacijentu može mešati u odgovarajućem odnosu i zatim se može davati u obliku formulacije. Kod sekvencijalnog davanja egzozoma i kortikosteroida se različite aktivne supstance preferirano daju u vremenskom periodu od jedne nedelje, preferirano u roku od 5 dana, 3 dana, jednog dana ili u roku od 12 sati,

[0030]U farmaceutskim jedinjenjima prema ovom pronalasku, koji sadrže egzozome i/ili kortikosteroid, antagonist citokina i/ili faktor rasta može biti prisutan ili odsutan Preferirano je prisustvo antagonista citokina i/ili faktora rasta. Naime, pojavljuje se jasan pozitivan efekat na delotvornost, a posebno na dugoročnu delotvornost kortikosteroida kod oboljenja zglobova i kičme, ako se dodatno daje antagonist citokina, kao što je ortokin (prirodan IL-1 Ra) i anakinra (rekombinantni IL-1 Ra), posebno kod lokalnog davanja terapijskih lekova direktno u zglob koji treba da se leći. Slična, iznenađujuće dobra delotvornost kombinacije ovih aktivnih supstanci je primećena i kod autoimunih bolesti, pri čemu posebno inflamatorno dejstvo igra ulogu. Delotvornost kombinovane terapije sa kortikosteroidima i egzozomima pri oboljenjima zglobova i kičme poput artroze, artritisa i degenerativnih oboljenja kičme, takođe se znatno poboljšava dodatnim davanjem jednog antagonista citokina. Pri lečenju rekombinantnim IL-1 Ra Anakinra iznenađujuće tek usled kombinacije sa kortikosteroidom dolazi do dejstva. Kod prirodnog IL-1 Ra ortokina se znatno poboljšanje delotvornosti može primetiti upravo kod zapaljenskih oboljenja. Moguće objašnjenje za ovu činjenicu je da antagonisti citokina imaju anabolično dejstvo i da u pogođenim zglobovima mogu da neutrališu ili čak ponište već poznato štetno katabolično dejstvo kortikosteroida. Stoga se kortikosteroidi pri lečenju na primer artroze pored antagonista citokina alternativno ili dodatno mogu kombinovati i sa anaboličkim faktorima rasta, da bi se postiglo slično dejstvo. U opštem slučaju se antagonist citokina može zameniti i faktorom rasta ili može da se kombinuje sa faktorom rasta

[0031]Farmaceutsko jedinjenje takvo da (u skladu sa četvrtim izvođenjem predmetnog pronalaska) sadrži antagonist citokina i/ili faktor rasta za upotrebu u kombinovanoj terapiji zajedno sa kortikosteroidomi egzozomima, može s jedne strane da bude određen za simultano davanje a s druge strane za sekvencijalno davanje antagonista citokina i/ili faktora rasta, egzozoma i kortikosteroida. Preferira se istovremeno davanje, posebno u samo jednoj formulaciji Tako se na primer antagonist citokina i/ili faktor rasta pre davanja pacijentu može u pogodnom odnosu pomešati sa kortikosteroidom i egzozomima i može da se zatim daje kao jedna formulacija Alternativno se pri istovremenom davanju i antagonist citokina i/ili faktor rasta, egzozomi ali i kortikosteroid može (mogu) davati odvojeno a ostali sastojci mogu da se pomešaju kao jedna formulacija. Međutim, antagonist citokina i/ili faktor rasta, egzozomi i kortikosteroid mogu da se proizvoljnim redosledom daju i sekvencijalno, ili jedna od ovih aktivnih supstanci može da se primeni u nekom trenutku različitom od druge dve supstance Pri sekvencijalnom davanju se razne aktivne supstance preferirano daju u vremenskom periodu od jedne nedelje, preferirano u roku od 5 dana. 3 dana, jednog dana, ili u roku od 12 sati

[0032]Kod drugih farmaceutskih jedinjenja prema ovom pronalasku, kao i kod kompleta prema ovom pronalasku i upotrebe prema ovom pronalasku (prvo, drugo, treće. peto. šesto i sedmo izvođenje predmetnog pronalaska) je moguće prisustvo ili odsustvo antagonista citokina u farmaceutskom jedinjenju. Preferira se prisustvo antagonista citokina Osim toga je kombinovana terapija prema ovom pronalasku preferirano kombinovana terapija zajedno sa antagonistom citokina, posebno u slučajevima, u kojima je u samom farmaceutskom jedinjenju odsutan antagonist citokina (vidi gore).

[0033]Koriščeni antagonist citokina može biti bilo koja supstanca ili mešavina supstanci, koja u telu pacijenta smanjuje ili blokira najmanje jednu, a preferirano sve biološke aktivnosti jednog ili više citokina. Antagonističko dejstvo pri tom može biti postignuto direktno preko antagonista ili indirektno, na primer aktiviranjem ili blokadom dodatnih signalnih putanja, koje sa svoje strane deluju na biološku aktivnost citokina. Preferirano se biološka aktivnost citokina blokira sprečavanjem njegove interakcije sa jednim ili više receptora. na koje on može da se veže. To se na primer može postići kompetitivnim vezivanjem antagonista na odgovarajući/e receptor/e ili vezivanjem antagonista na sam citokm Preferirano antagonist citokina blokira dejstvo citokina IL-1

[0034]Antagonist citokina na primer može da bude protein, peptid, nukleinska kiselina, lipid ili organsko jedinjenje. Antagonist citokina takođe može da se sastoji od smeše dva ili više antagonista citokina, kao što su ovde opisani Antagonist citokina u posebnom slučaju može biti prirodan peptid ili protein, ali i rekombinacijom proizveden peptid ili protein. Osim toga. antagonist citokina može biti ili sadržati antitelo ili fragment antitela koji vezuje antigen, a posebno antitelo ili fragment antitela, koji može da vezuje odgovarajući citokin ili receptor citokina Primeri pogodnih antagonista citokina su antagonisti interleukina, posebno antagonisti IL-1 poput IL- 1Ra, antagonisti faktora nekroze tumora (TNF), a posebno antagonista TNF-o. poput anti-TNF-u antitela. antagonista interferona i antagonista hemokina Posebno preferiran je naravno prirodni ili rekombinantni IL-1 Ra protein, preferirano humani IL-1 Ra IL-1 Ra preferirano obuhvata ili se preferirano sastoji od aminokiselinske sekvence jedne izoforme ili homologa humanog IL-1 Ra u skladu sa SEQ ID BR.: 1 2, 3, 4 ili 5, jedne izoforme konjskog IL-1 Ra u skladu sa SEQ ID BR.: 6 ili 7, ili jedne izoforme psećeg IL-1 Ra u skladu sa SEQ ID BR 8

[0035]Osim toga, prema pronalasku mogu da se koriste fragmenti ili derivati IL-1 Ra kao antagonist citokina, sve dok oni mogu da obavljaju istu funkciju, to jest smanjenje ili blokiranje jedne ili više bioloških funkcija IL-1. Fragmenti IL-1 Ra preferirano obuhvataju najmanje 20, ali još više preferirano 40, 60, 80 i li najmanje 100 aminokiselina prirodne IL-1 Ra sekvence. Preferirano su fragmenti sekretirani fragmenti IL-1 Ra koji postoje u prirodi U jednom obliku izvođenja IL-1 Ra obuhvata aminokiseline 26 do 177 humanog IL-1 Ra, preferirano aminokiseline 26 do 177 sekvence u skladu sa SEQ ID BR: 1. Derivati IL-1 Ra su preferirano homologni sa prirodnim IL-1 Ra i preferirano poseduju homologiju ili identičnost u odnosu na prirodni IL-1 Ra od najmanje 60%. više preferirano je najmanje 70%, 75%, 80%, 85%. 90%. 95% i najviše preferirano je najmanje 98% u opsegu od najmanje 20 povezanih aminokiselina, preferirano najmanje 40. 60, 80 ili najmanje 100 povezanih aminokiselina, najviše preferirano po celoj dužini IL-1 Ra. Posebno preferirani su IL-1 Ra koji se može izolovati iz prirodnih bioloških uzoraka poput krvi koji se naziva i ortokin, kao i fragment IL-1 Ra sa aminokisehnama 26 do 177 humanog IL-1 Ra. koji se naziva i anakinra. Dobijanje ortokina je između ostalog opisano u patentnim prijavama VVO 00/46249 A1 i WO 03/080122 A1. Anakinra, kao i dodatni antagonisti IL-1, koji mogu da se koriste u ovom pronalasku, između ostalog su opisani u ovoj patentnoj prijavi EP 0 343 684 A1.

[0036]Pri dobijanju IL-1 Ra iz prirodnih bioloških uzoraka poput krvi, kao npr kod ortokina. dobijeni rastvor IL-1Ra-preferirano sadrži i faktore rasta Stoga antagonist citokina prema ovom pronalasku može da postoji i u kombinaciji sa jednim ili više faktora rasta ili može da se zameni sa jednim ili više faktora rasta. Faktor rasta prema ovom pronalasku preferirano ima anaboličko dejstvo Primeri pogodnih faktora rasta su TGF-|S, IGF, BMP, HGF i VEGF Takođe obuhvaćeni su analozi, derivati i fragmenti ovih faktora rasta, sve dok imaju željeno dejstvo, tj posebno dejstvo kao faktor rasta

[0037]Kortikosteroid korišćen prema ovom pronalasku može bilo koji prirodni, kao i sintetički proizvedeni kortikosteroid. Posebno to može biti glukokortikoid, mineralni kortikoid ili androgen. pri čemu se preferirano koriste glukokortikoidi. Takođe može da se koristi smeša dva ili više kortikosteroida kao što je ovde opisano. Primeri glukokortikoida su kortizon, hidrokortizon. prednison, prednisolon, kloprednol, deflazakort, fluokortin, triamcinolon, deksametazon metilprednisolon. flupred nisolon, klokortolon, klobetazon alklometazon. flumetazon, fluopredniden fluorandrenolon, betametazon, beklometazon. fluokortolon, mometazon, flutikazon, halometazon, fluocinolon, diflorazon, desoksimetazon, fluocmonid, amcinonid, halcinonid, diflukortolon, klobetazol i parametazon. Primeri mineralnih kortikoida su aldosteron dezoksikortikosteron i fludrokortizon, a primeri androgena su dehidroepiandrosteron (DHEA) i estrogeni, Kortikosteroid može da se primeni kao slobodno jedinjenje ili u obliku soli. estara ili prolekova U preferiranim oblicima izvođenja je korišćeni kortikosteroid triamcinolon, kortizon, hidrokortizon, prednisolon ili prednison.

[0038]Egzozomi u farmaceutskim jedinjenjima prema ovom pronalasku koja sadrže egzozome odn. u kompletu prema ovom pronalasku mogu da se proizvedu postupkom koji obuhvata korake: obezbeđivanje uzorka krvi koji sadrži egzozome i preferirano povećanje koncentracije egzozoma. Povećanje koncentracije se preferirano vrši u koraku centnfugiranja sa najmanje 100 000 g, jer su tako visoka centrifugalna ubrzanja posebno pogodna za koncentrisanje egzozoma. Ova korak se preferirano sprovodi najmanje 30 min. u posebnom slučaju najmanje 60 min, jer je povećanje koncentracije u tom slučaju posebno učinkovito.

[0039]Korak stavljanja na raspolaganje uzorka krvi koji sadrži egzozome, preferirano obuhvata korake.

obezbeđivanje uzorka krvi uzetog od pacijenta, opciono dodavanje aditiva koji pospešuje stvaranje egzozoma i inkubiranje uzorka krvi u posudi pogodnoj za proizvodnju egzozoma. Inkubiranje dovodi do stvaranja kondicioniranog sastava krvi. Posude pogodne za proizvodnju egzozoma su na primer špricevi, cevčice kao na primer vakuumske cevčice. mikrotiter ploče i vreće za transfuziju. Površina za kontaktiranje uzorka krvi kod posuda pogodnih za proizvodnju egzozoma

preferirano obuhvata staklo, plastiku (npr. polistirol, polivinilhlorid, polietilen ih polipropilen). korund ili kvare i preferirano se sastoji od jednog od ovih materijala Preferirano se za proizvodnju egzozoma u ove posude dodaju aditivi koji povećavaju površinu od stakla, plastike, korunda ili kvarca, kao što su kuglice, gelovi, vuna, brašno, granulati ili čestice. Aditivi koji pospešuje stvaranje egzozoma je preferirano IL-1 Ra. Aditiv koji pospešuje stvaranje egzozoma se preferirano koristi u količini od 1 do 20 mg po ml pune krvi.

[0040]Kod farmaceutskih jedinjenja prema ovom pronalasku za upotrebu u kombinovanoj terapiji zajedno sa egzozomima važi da su egzozomi dobijeni iz uzorka krvi. Egzozomi su u odnosu na pacijenta koji treba da se leči preferirano autologni ili alogeni U pogledu dobijanja egzozoma se upućuje na upravo urađena izvođenja za proizvodnju egzozoma. Preferirano se gore opisani korak centrifugiranja sa najmanje 100 000 g (preferirano najmanje 30 min. u posebnom slučaju najmanje 60 min) sprovodi pri lečenju bolesti kod kojih povećana koncentracija egzozoma ima smisla, preferirano eventualno pri lečenju reumatoidnog artritisa Posebno preferirano se takav korak centrifugiranja sprovodi sasvim uopšteno u slučaju da kombinovana terapija uključuje egzozome, koji se dobijaju iz uzorka krvi pacijenta.

[0041]Gore data objašnjenja u vezi sa proizvodnjom egzozoma važe analogno za postupak prema ovom pronalasku za proizvodnju farmaceutskog jedinjenja koje sadrži kortikosteroid i egzozome i koji obuhvata korake: obezbeđivanje uzorka krvi koji sadrži egzozome, preferirano povećanje koncentracije egzozoma i mešanje sa kortikosteroidom Mešanje može da se vrši prema proizvoljnoj metodi poznatoj stručnjacima.

[0042]U (eventualno preferiranim) oblicima izvođenja su farmaceutska jedinjenja prema ovom pronalasku odn komplet prema ovom pronalasku predviđeni za upotrebu pri lečenju oboljenja zglobova poput artroze, artritisa, zapaljenja zglobova i zapaljenskog gubitka hrskavice, degenerativnih oboljenja kičme, bolova u zglobovima i autoimuiunih oboljenja Artroza koja se leči je možda nastala usled preopterećenja, može da ima urođene ili traumatske uzroke ili mogu biti posledica nekog drugog oboljenja kao što je zapaljenje Atroza koja treba da se leči je preferirano aktivirana artroza ili inflamatorna artroza. Farmaceutska jedinjenja prema ovom pronalasku mogu da se koriste za lečenje artroza i artritisa na svakom zglobu, kao što je na primer koleno, kuk, skočni zglob, rameni zglob, pršljenski zglob, zglobovi na prstima, lakat, zglobovi na nožnim prstima, vilični zglob i ručni zglob. Artritis koji treba da se leči može biti artritis uslovljen infekcijom poput bakterijskog artritisa ili artritis koji nije uslovljen infekcijom poput eventualno reumatoidnog artritisa ili psorijatičnog artritisa ili artritisa usled gihta. Alternativno farmaceutsko jedinjenje prema ovom pronalasku i/ili komplet prema ovom pronalasku mogu takođe biti predviđeni za upotrebu pri lečenju jedne od bolesti koja se razlikuje od navedenih bolesti (recimo, reumatoidni artritis). Degenerativno oboljenje kičme koje treba da se leči može na primer biti diskus hernija Autoimuna oboljenja između ostalog obuhvataju autoimuna oboljenja zglobova kao što je na primer Morbus Bechterew, eventualno reumatoidni artritis i sistemski lupus eritematodes, kao i druga autoimuna oboljenja kao što su posebno neurodermitis i alopecia areata (kružno ispadanje kose)

[0043]Farmaceutska jedinjenja prema ovom pronalasku odn komplet prema ovom pronalasku su preferirano pogodni za lokalno davanje. Ona su preferirano predviđena za lokalno davanje Stoga su u preferiranim oblicima izvođenja predviđeni za ubrizgavanje, a posebno za ubrizgavanje u deo tela koji treba da se leči, a posebno u pogođeni zglob, u pogođeni koren nerva ili u pogođeni međupršijenski disk, ili u njihovo lokalno okruženje Farmaceutsko jedinjenje je tako posebno predviđeno za intraartikularno i/ili periradikularno ubrizgavanje Alternativno, farmaceutska jedinjenja prema ovom pronalasku mogu biti formulisana za topikalno davanje posebno kao krema ili gel, ili za sistemsko davanje, a posebno oralno davanje u obliku tableta, kapsula ili pastila. Oblik davanja zavisi između ostalog od bolesti koja treba da se leči. Kod lokalne artroze ili degenerativnog oboljenja kičme je stoga preferirano lokalno davanje farmaceutskih jedinjenja prema ovom pronalasku U preferiranim oblicima izvođenja su farmaceutska jedinjenja prema ovom pronalasku odn. komplet prema ovom pronalasku isključivo predviđena ili pogodna za davanje koje se razlikuje od sistemskog davanja.

[0044]Farmaceutska jedinjenja prema ovom pronalasku su pogodna za različite načine davanja i formulisana su na način poznat stručnjacima. Tako postoji farmaceutsko jedinjenje pogodno za ubrizgavanje preferirano kao rastvor ili disperzija ili i u suvom obliku npr kao prah ili lipofilizat, koji se pre ubrizgavanja mora rastvoriti u pogodnom rastvaraču kao što je voda Farmaceutska jedinjenja prema ovom pronalasku sadrže egzozome i/ili kortikosteroid u terapijski delotvornim količinama. Kortikosteroid preferirano postoji u koncentraciji od 1 do 80 mg/dozi, još više preferirano u količini od 5 do 40 mg/dozi u farmaceutskim jedinjenjima koja sadrže kortikosteroid Eventualno postojeći antagonist citokina je preferirano prisutan u koncentraciji od 0,5 do 150 mg/dozi u farmaceutskim jedinjenjima koja sadrže antagonist citokina. ali može da postoji i u znatno manjoj koncentraciji kao što je na primer 1 mg/dozi ili više, na primer između 1 i 1000 mg/dozi. Ove male koncentracije doze mogu da se posebno koriste kod kombinacije sa faktorima rasta i/ili kod prirodnih IL-1Ra-preparata kao na primer kod jedinjenja poput ortokina. Veće koncentracije doza su na primer preferirane kod rekombinantno proizvedenih antagonista citokina poput anakinre Farmaceutska jedinjenja prema ovom pronalasku osim toga mogu da sadrže jednu ili više nosećih supstanci i/ili jedan ili više ekscipijenata.

[0045]Farmaceutska jedinjenja prema ovom pronalasku mogu da budu predviđena i za lečenje pacijenata, koji su već podvrgnuti nekom drugom lečenju relevantne bolesti, tj na primer artroze, artritisa, i/ili degenerativnog oboljenja kičme, posebno ako je taj drugi način lečenja nije bio uspešan ili ako su se simptomi bolesti uprkos uspešnog lečenja na početku, makar delimično vratili. U preferiranim oblicima izvođenja, ovaj drugi način lečenja je terapija sa egzozomima, ali bez kortikosteroida, ili terapija sa kortikosteroidom. posebno kortikosteroidom kao što je prethodno opisan, ali bez egzozoma.

[0046]Pacijenti u smislu ovog pronalaska mogu biti ljudi, ali i životinje, koji pate od neke ovde opisane bolesti. Usled toga farmaceutska jedinjenja prema ovom pronalasku mogu biti pogodna za lečenje ljudi i/ili životinja, kao na primer pasa, mačaka, konja, goveda, svinja, koza kamila i slično.

Kratak opis slika

[0047]

Na si. 1A do si. 1C su prikazani snimci stopala pacijenta sa neurodermitisom, čiji slučaj je u nastavku opisan kao slučaj IX (primer 4)

Na si. 1A su prikazane dermatološke promene na oba stopala neposredno pre početka lečenja egzozomima i triamcinolonom.

Na si, 1B je prikazano stanje jednu nedelju posle lečenja za desno stopalo. Na si. 1C je prikazano stanje jednu nedelju posle lečenja za levo stopalo

Primeri

[0048]U nastavku su opisane studije raznih slučajeva pacijenata sa progresivnom artrozom Oni su lečeni kombinovanom terapijom sa antagonistom citokina (npr rekombinantni IL-1 Ra ili IL-1 Ra dobijen iz autolognih uzoraka) i kortikosteroidom

Terapija sa ortokinom i kortizonom kod artroze

[0049]

Broj pacijenata: N = 129

prosečan vremenski period naknadnog predmeta: 3 meseca

prosečno smanjenje bola: 71% (tj. redukcija bola od 100% pre početka lečenja na 29% posle lečenja) primetno brz početak delovanja

1.Lokalno davanje anakinre i kortizonai egzozoma

[0050]Slučaj l: T.. 56 godina, žena

Dijagnoza:Kliničko-radiološki postoji medijalna i retropatelarna gonartroza li, IV stepena. Eksterno je već bila planirana ukupna zamena levog kolena:Terapija:3 Injekcije egzozoma kombinovano sa 3nakmrom i 10 mg triamcinolona u levo koleno (2x nedeljno) uz izbegavanje operacije kolena

Rezultat:U trenutku 3. injekcije 100% poboljšanje u pogledu bola, znatno poboljšanje funkcije. Operacija je otkazana, pacijentkinja ni 5 meseci posle završetka terapije nije imala bolove.

2. Lokalno davanje anakinre i kortizona i ortokina

[0051]Slučaj II: L, 57 godina, muškarac

Dijagnoza:Jako bolovi u ramenu li već 6 meseci (VAS 8) otada znatno poremećen san. Pacijent je u poslednjih 6 meseci jedva mogao da spava, što je dovelo do narušavanja opšteg kvaliteta života. Brojne injekcije kortizona u levo rame nisu dovele do uspeha. Bila je zakazana operacija levog ramena, Ovde je trebalo pokušati izbeći operaciju. Radiološki i klinički znakovi delimičnog prekida manžete rotatora i subakromijalna teskoba sa kompletnom ukočenošću ramena levo;

Tegobe u levoj ruci sa slabljenjem snage šake i leve podlaktice. 4 stepena

Terapija:Injekcije su date u levo rame dorsalno i lateralno Preko šprica je u levo rame dato 2 ml ortokina sa 10 mg anakinre i 10 mg triamcinolona. Terapija je sprovedena 4 uzastopna danaRezultat:Već 2. dana lečenja je pacijent prijavio izuzetno poboljšanje u pogledu bola sa smanjenjem bola od 90%. VAS je opao sa 8 na 1 rame je bilo slobodno i normalno pokretljivo Pacijent je prvi put posle 6 meseci bio u stanju da spava celu noć. Na taj način se opšte stanje pacijenta znatno poboljšalo. Nastavak terapije do 4 dana lečenja U nastavku se pokazalo neizmenjeno jasno poboljšanje kao 2. dana lečenja, prilikom naknadne kontrole 6 meseci posle lečenja je nalaz bio nepromenjeno pozitivan Operacija je otkazana, pokretljivost je bila dobra, pacijent ponovo bez problema može da podiže kofere i knjige iznad visine ramena

r00521 Slučaj III: F.,45 godina, žena

Dijagnoza:Kompletna ukočenost desnog ramena već oko 8 meseci. Sve dosadašnje terapije su bile bez uspeha, bila je planirana operacija Pacijentkinja je želela da ponovo pokuša konzervativno lečenje. Spavanje noću već nekoliko nedelja više nije bilo moguće. U levom ramenu početak bolova, ali glavni nalaz je u desnom ramenu, tamo je VAS jednak 9 sa teškim akutnim napadima jačine do 10, usled toga je opšte stanje znatno oslabljeno

Terapija:Lečenje desnog ramena pomoću kombinacije od 2 ml ortokina koji se primenjuje zajedno sa drugim špricom sa kombinacijom 150 mg anakinre i 5 mg triamcinolona u toku 6 uzastopnih dana

Rezultat:Od 5. dana 85% poboljšanje u pogledu bola Spavanje u toku noći je bilo moguće od 2. tretmana, što je dovelo do znatnog poboljšanja opšteg stanja. VAS je na kraju lečenja iznosio 1. Naknadna kontrola 8 meseci posle kraja lečenja pokazala je nepromenjeno dobar rezultat;

operacija je otkazana

3. Egzozomi inkubirani sa IL-1 Ra i triamcinolonom/prednisolonom

Slučaj IV: S . 25 godina, muškarac

[0053]

Dijagnoza:Težak juvenilni reumatoidni artritis već oko 15 godina.

Lečenje sa 25 mg enbrela 2 x nedeljno, 10 mg metotreksata. 5 mg dekortina i naproksena 2x1 na dan. Masivan sinovitis i bolovi u oba butna zgloba i oba ramena Abdukcija oba ramena pre lečenja 60 stepeni. Laboratorijska CRP vrednost: 5,35 (do 0.5 mg je normalno); leukocitoza.Terapija:Uzeta je krv radi pravljenja egzozoma u špricu od 6 ml (ortokinski špric). Posle 24 h inkubacije pri 37 stepeni, pri čemu je pri punjenju šprica krvlju prethodno u špric stavljeno 1 mg anankinre (IL-1 Ra) i 2 mg pređnisolona. Posle različitih koraka centrifugiranja (do 100 000 g) je smeša zatim data pacijentkinji u butne zglobove i ramena

Rezultat:Znatno spadanje otoka zglobova koje je počelo posle 3 dana. Klinička i laboratorijsko-hemijska kontrola posle 9 dana: Poboljšanje od 80% u pogledu bola. butni zglob normalan, nema otoka. CRP vrednost je sada na 1,93. Poboljšanje i u drugim pogođenim zglobovima, u koje nije vršena lokalna injekcija. Opšti kvalitet života je znatno poboljšan Prilikom kontrole posle 3 meseca se pokazala nepromenjeno stabilna situacija VAS je pre lečenja iznosio 9, od prve nedelje posle ubrizgavanja VAS 3. Pacijent je vrlo zadovoljan, može da nastavi da radi,

4.Injekcijasaegzozomimaidodatnim triamcinolonom pri ubrizgavanjuSlučaj V: M , 64 godine, žena

[0054]Težak terapijski rezistentan reumatioidni artritis uprkos osnovnoj terapiji sa

prednisolonom od 15 mg na dan, lantarelom od 20 mg nedeljno, humirom na svake 2 nedelje Radiosinovioorteza u ručne zglobove pokazala je samo minimalan efekat intraartikularne injekcije u dozama između 10 mg do 40 mg triamcinolona pokazale su samo vrlo slab (20% poboljšanje u pogledu bola posle jedne nedelje) efekat kako na bol tako i na parametre zapaljenja. Prilikom razgovora u svrhu terapije egzozoma CRP je bio 120 mg/l uprkos gore opisane osnovne terapije, vrlo jaki bolovi u šakama i oba ramena. Ubrizgavanje egzozoma (posle inkubacije sa IL-1 Ra) i dodavanje mešanjem 20 mg ukupne količine triamcinolona u MCP2-5 obostrano i oba ramena Posle toga klinički jako poboljšanje (80% smanjenje bola posle 1 nedelje) sa početkom posle 2 dana, koje traje 3 meseca CRP kontrola posle 3 meseca je pokazala CRP vrednost od 42,6 mg/l. osnovna terapija je nepromenjena, tako da uzrok dejstva treba tražiti u kombinaciji egzozoma sa triamcinolonom. Veće doze samog triamcinolona kao što je gore opisano, nisu pokazale uporedivo dejstvo

Slučaj VI: M., 25 godina, muškarac

[0055]Poznat psorijatični artritis; osnovna terapija 5 mg pređnisolona i 10 mg MTX; glavni problem pod osnovnom terapijom su još uvek vidljivi otoci levog kolena sa sinovitisom i otok od

2 cm u poređenju sa drugom stranom Dodatni otoci u području ručnih zglobova uprkos

sprovedene osnovne terapije. Intraartikularne kortizonske injekcije u koleno i ručne zglobove u dozama između 20-40 mg pokazale su samo vrlo slab efekat u trajanju od nekoliko dana sa smanjenjem bola između 10-30%. Razgovor zbog terapije egzozomima. CRP neposredno pre ubrizgavanja bio je 5,6 mg/l. Posle dobijanja egzozoma je sledila aplikacija egzozoma (proizvedeno posle inkubacije IL-1 Ra kao što je opisano) u levo koleno (egzozomi + triamcinolon 10 mg) i u MCP 2+3obostrano (egzozomi sa po 2 mg triamcinolona po zglobu) Tok lečenja bez komplikacija, posle nekoliko dana znatno smanjenje bola od 90%. CRP posle 3 meseca 3 0 mg/l; otok na kolenu je posle 1 nedelje kompletno nestao, nema razlike između dva kolena; 5 mg pređnisolona je u sklopu osnovne terapije moglo da se kompletno skine, jer je efekat intraartikularne injekcije egzozoma i triamcinolona bio trajan

Slučaj VII: R.. 32 godine, muškarac

[0056]Kompletna alopecija je poznata već godinama, svi pokušaji terapiranja uklj sistemske i

lokalne aplikacije kortizona u visokim sistemskim i lokalnim dozama (10-80 mg pređnisolona) bez dejstva: razgovor u svrhu lečenja egzozomima. proizvodnja egzozoma gore opisanom tehnikom, jednokratna intramuskularna injekcija egzozoma zajedno sa 10 mg triamcinolona Kontrole tokova su bez negativnih nalaza, posle 3 meseca dokaz rasta kose na oko polovini površini koja je pre oboljenja bila pokrivena kosom

Slučaj VIII: H., 47 godina, muškarac:

[0057]Gonartroza re sa defektima hrskavice artroskopski verifikovan stepen 2-4 prema

Outerbridge-u. Pacijent želi pomeranje potrebe za operacijom i veštačkim zglobom. Anamnestički, injekcija triamcinolona u dozama od 10-40 mg intraartikularno nije predstavljalo nikakvo dejstvo. Injekcije 1 ml egzozoma proizvedenog tehnikom kao što je opisano posle inkubacije sa IL-1 Ra. Intraartikularna jednokratna injekcija 2 ml egzozoma, posle 4 nedelje pacijent je nezadovoljan kliničkim efektom u pogledu bola i funkcije. Zatim je doneta odluka o intraartikularnoj injekciji u desno koleno kombinovano sa 10 mg triamcinolona Tok bez komplikacija. Posle 1 nedelje 95%-no poboljšanje u pogledu bola, funkcija ponovo kompletno uspostavljena, Pacijent posle nekoliko godina može da ponovo učestvuje u teniskom meču

Slučaj IX: J., 27 godina, muškarac:

[0058]Težak, dermatološki osiguran neurodermitis sa jakim promenama. pre svega u području

šaka i stopala. Sve poznate dermatološke terapije nisu pokazale trajno poboljšanje, posebno je primećen samo kratkotrajan efekat od 1 nedelje posle lokalne aplikacije kortikosteroida i sistemske aplikacije pređnisolona i triamcinolona mtramuskularno u dozama od 80 mg Proizvodnja egzozoma opisanom tehnikom, aplikacija intramuskularno posle 3 nedelje nije bilo zadovoljavajućeg efekta na promene na koži i bolest Zatim pokušaj intramuskularne aplikacije 2 ml egzozoma u kombinaciji sa 20 mg triamcinolona U roku od 2 nedelje znatno poboljšanje,

koje bez promena traje i posle 6 meseci. Posle toga malo pogoršanje, ali i dalje poboljšanje u poređenju sa prethodnim nalazom. Na si 1A su opisane dermatološke promene na oba stopala neposredno pre lečenja, na si 1B i si. 1C jednu nedelju posle lečenja za desno odn. levo stopalo.

Slučaj X, B.. 69 J.. žena

[0059] Težak Behterevljev artritis sa iridociklitisom na levom oku Pacijentkinja kao osnovnu

terapiju dobija prednisolon i MTX u naizmeničnim dozama. CRP 20,3 mg/l; levi butni zglob ima jasan otok sa + 2 cm u odnosu na drugu stranu; levi MCP i krajnji zglob 1 Levi prst je vidno otekao i boli, desno rame je oteklo, boli, abdukcija za 30 stepeni u odnosu na normalno stanje je smanjena. Sledila je injekcija egzozoma poznatom tehnikom u pogođene zglobove bez smanjenja bola i smanjenja CRP-a, zatim injekcija triamcinolona sa ukupnom dozom od 40 mg u sve pogođene zglobove, blago poboljšanje od 20% u trajanju od 1 nedelje Posle 4 nedelje injekcija egzozoma i triamcinolona u ukupnoj dozi od 20 mg, a zatim na ramenu poboljšanje od 80%, na prstu poboljšanje od 50% sa spadanjem otoka sa 8,2 cm kod levog obima palca na MCP zglobu na 6,6 cm. Kod skočnog zgloba još nema jasnog efekta CRP se u roku od 1 nedelje smanjio sa 20,3 mg/l na 2.9 mg/l.

PROTOKOL SEKVENCI

[0060]

Claims

1. Farmaceutsko jedinjenje koje sadrži kortikosteroid zajedno sa egzozomima u prisustvu ili odsustvu antagonista citokina i/ili faktora rasta pri čemu se egzozomi mogu proizvesti postupkom koji obuhvata korake: obezbeđivanje uzorka krvi koji sadrži egzozome i preferirano povećanje koncentracije egzozoma

2. Farmaceutsko jedinjenje koje sadrži egzozome zajedno sa egzozomima u prisustvu ili odsustvu antagonista citokina i/ili faktora rasta za upotrebu u kombinovanoj terapiji zajedno sa kortikosteroidom pri lečenju bolesti, koja se bira iz grupe koja se sastoji od oboljenja zglobova poput artroze, artritisa, zapaljenja zglobova i zapaljenskog gubitka hrskavice, degenerativnih oboljenja kičme, bolova u zglobovima i autoimunih oboljenja, pri čemu se ta bolest razlikuje od reumatoidnog artritisa i egzozomi se mogu proizvesti postupkom koji obuhvata korake: obezbeđivanje uzorka krvi koji sadrži egzozome i preferirano povećanje koncentracije egzozoma.

3. Farmaceutsko jedinjenje, koje sadrži kortikosteroid u prisustvu ili odsustvu antagonista citokina i/ili faktora rasta za upotrebu u kombinovanoj terapiji zajedno sa egzozomima pri lečenju bolesti, koja se bira iz grupe koja se sastoji od oboljenja zglobova poput artroze, artritisa, zapaljenja zglobova i zapaljenskog gubitka hrskavice, degenerativnih oboljenja kičme, bolova u zglobovima i autoimunih oboljenja, pri čemu se ta bolest razlikuje od reumatoidnog artritisa i egzozomi su dobijeni iz uzorka krvi.

4. Farmaceutsko jedinjenje, koje sadrži antagonist citokina i/ili faktor rasta za upotrebu u kombinovanoj terapiji zajedno sa kortikosteroidom i egzozomima pri lečenju bolesti, koja se bira iz grupe koja se sastoji od oboljenja zglobova poput artroze, artritisa, zapaljenja zglobova i zapaljenskog gubitka hrskavice, degenerativnih oboljenja kičme, bolova u zglobovima i autoimunih oboljenja, pri čemu se ta bolest razlikuje od reumatoidnog artritisa i egzozomi su dobijeni iz uzorka krvi.

5. Komplet koji sadrži (i) farmaceutsko jedinjenje koje sadrži egzozome u prisustvu ili odsustvu antagonista citokina i/ili faktora rasta i (ii) farmaceutsko jedinjenje koje sadrži kortikosteroid u prisustvu ili odsustvu antagonista citokina i/ili faktora rasta, pri čemu se egzozomi mogu proizvesti postupkom koji obuhvata korake: obezbeđivanje uzorka krvi koji sadrži egzozome i preferirano povećanje koncentracije egzozoma.

6. Farmaceutsko jedinjenje za upotrebu prema jednom od zahteva 2 ili 3 ili komplet prema zahtevu 5, pri čemu je/su farmaceutsk(o/a) jedinjenj(e/a) predviđen(o/a) za simultano ili sekvencijalno davanje egzozoma i kortikosteroida.

7. Farmaceutsko jedinjenje, farmaceutsko jedinjenje za upotrebu, ili komplet prema jednom od zahteva 1 do 6, pri čemu je kortikosteroid (a) glukokortikoid kao što je na primer kortizon, hidrokortizon, prednison, prednisolon, kloprednol, deflazakort, fluokortin, triamcinolon, deksametazon, metilprednisolon, flupred nisolon. klokortolon, klobetazon, alklometazon, flumetazon fluopredniden, fluorandrenolon betametazon, beklometazon, fluokortolon, mometazon, flutikazon. halometazon, fluocinolon, diflorazon, desoksimetazon, fluocinoniđ, amcinonid, halcinonid, diflukortolon, klobetazol i parametazon; (b) mineralni kortikoid kao na primer aldosteron, dezoksikortikosteron i fludrokortizon: ili (c) androgen kao na primer dehidroepiandrosteron (DHEA) i estrogeni; ili njegova so, estar ili prolek.

8. Farmaceutsko jedinjenje, farmaceutsko jedinjenje za upotrebu, ili komplet prema jednom od zahteva 1, 3, 5, 6 ili 7, pri čemu kortikosteroid postoji u koncentraciji od 1 do 80 mg/dozi u farmaceutskom jedinjenju koje sadrži kortikosteroid

9. Farmaceutsko jedinjenje za upotrebu ili komplet prema jednom od zahteva 3,4,6,7 ili 8, pri čemu su egzozomi u odnosu na pacijenta koji treba da se leči preferirano autologni ili alogeni.

10. Farmaceutsko jedinjenje ili komplet prema jednom od zahteva 1 ili 5 do 9 za upotrebu pri lečenju bolesti, koja se bira iz grupe koja se sastoji od oboljenja zglobova poput artroze, artritisa, zapaljenja zglobova i zapaljenskog gubitka hrskavice, degenerativnih oboljenja kičme i bolova u zglobovima

11. Farmaceutsko jedinjenje ili komplet za upotrebu prema jednom od zahteva 2 do 4 ili 6 do 10, pri čemu je artroza aktivirana artroza ili inflamatoina artroza.

12. Farmaceutsko jedinjenje ili komplet za upotrebu prema jednom od zahteva 2 do 4 ili 6 do 10. prt čemu je artritis infekciono uslovljen artritis poput bakterijskog artritisa ili artritisa koji nije uslovljen infekcijom.

13. Farmaceutsko jedinjenje ili komplet za upotrebu prema jednom od zahteva 2 do 4 ili 6 do 10. pri čemu je degenerativno oboljenje kičme diskus hernija

14. Farmaceutsko jedinjenje ili komplet prema jednom od zahteva 1 ili 5 do 9 za upotrebu pri lečenju autoimunog oboljenja

15. Farmaceutsko jedinjenje ili komplet za upotrebu prema jednom od zahteva 2 do 4, 6 do 9 ili 14, pri čemu je autoimuno oboljenje neurodermitis ili alopecia areata.

16. Farmaceutsko jedinjenje, farmaceutsko jedinjenje za upotrebu, ili komplet prema jednom od zahteva 1 do 15, pri čemu je/su farmaceutsk(o/a) jedinjenj(e/a) pogodn(o/a) za lokalno davanje.

17. Farmaceutsko jedinjenje, farmaceutsko jedinjenje za upotrebu, ili komplet prema zahtevu 16, pri čemu je lokalno izabrano iz grupe koja se sastoji od injekcije u pogođeni deo tela, posebno u pogođeni zglob, u pogođeni koren nerva ili u pogođeni međupršljenski disk, ili u njihovo lokalno okruženje; intraartikularna injekcija; i topikalno davanje.

18.Farmaceutsko jedinjenje, farmaceutsko jedinjenje za upotrebu, ili komplet prema jednom od zahteva 1 do 17, pri čemu farmaceutsk{o/a) jedinjenj(e/a) sadrž{i/e) nosač i/ili ekscipijenta.

19.Farmaceutsko jedinjenje, farmaceutsko jedinjenje za upotrebu, ili komplet prema jednom od zahteva 1 do 18, pri čemu je prisutan antagonist citokina i antagonist citokina je izabran iz grupe koja se sastoji od antagonista interleukina, posebno antagonista IL-1 poput IL-1 Ra, antagonista faktora nekroze tumora (TNF). a posebno TNF-« antagonist kao što je anti-TNF-i/.-antitelo, antagonisti interferonai antagonisti hemokina

20.Farmaceutsko jedinjenje, farmaceutsko jedinjenje za upotrebu, ili komplet prema zahtevu 19, pri čemu je antagonist citokina prirodan ili rekombinantan protein IL-1 Ra, posebno ortokin ili anakinra.

21. Farmaceutsko jedinjenje, farmaceutsko jedinjenje za upotrebu, ili komplet prema jednom od zahteva 19 ili 20, pri čemu antagonist citokina postoji u koncentraciji od 0,5 do 150 mg/dozi u farmaceutskom jedinjenju koje sadrži antagonist citokina

22. Farmaceutsko jedinjenje, farmaceutsko jedinjenje za upotrebu, ili komplet prema jednom od zahteva 1 do 21, pri čemu postoji faktor rasta i faktor rasta je izabran iz grupe koja se sastoji od TGF-p. IGF, BMP, HGF i VEGF.

23. Upotreba egzozoma u prisustvu ili odsustvu antagonista citokina i/ili faktora rasta za proizvodnju farmaceutskog jedinjenja za upotrebu u kombinovanoj terapiji zajedno sa kortikosteroidom pri lečenju bolesti, koja se bira iz grupe koja se sastoji od oboljenja zglobova poput artroze, artritisa, zapaljenja zglobova i zapaljenskog gubitka hrskavice, degenerativnih oboljenja kičme, bolova u zglobovima i autoimunih oboljenja, pri čemu se ta bolest razlikuje od reumatoidnog artritisa i egzozomi se mogu proizvesti postupkom koji obuhvata korake obezbeđivanje uzorka krvi koji sadrži egzozome i preferirano povećanje koncentracije egzozoma

24.Upotreba kortikosteroida u prisustvu ili odsustvu antagonista citokina i/ili faktora rasta za proizvodnju farmaceutskog jedinjenja za upotrebu u kombinovanoj terapiji zajedno sa egzozomima pri lečenju bolesti, koja se bira iz grupe koja se sastoji od oboljenja zglobova poput artroze, artritisa, zapaljenja zglobova i zapaljenskog gubitka hrskavice, degenerativnih oboljenja kičme, bolova u zglobovima i autoimunih oboljenja, pri čemu se ta bolest razlikuje od reumatoidnog artritisa i egzozomi su dobijeni iz uzorka krvi.

25.Postupak za proizvodnju farmaceutskog jedinjenja koje sadrži kortikosteroid i egzozome, koji obuhvata korake: obezbeđivanje uzorka krvi koji sadrži egzozome, preferirano povećanje koncentracije egzozoma i mešanje sa kortikosteroidom.