RS51806B - Formulacije paratiroidnog hormona i njihova upotreba - Google Patents

Abstract

Farmaceutska kompozicija, naznačena time što kada se rastvori u odgovarajućem vehikulumu, uključuje PTH u koncentraciji od 1 mg/ml do 10 mg/ml, metionin u koncentraciji od 1 mg/ml do 10 mg/ml, najmanje jedan Poloxamer surfaktant u koncentraciji od 0.02 mg/ml do 1 mg/ml, i fiziološki prihvatljivo sredstvo za puferovanje koje održava pH formulacije na pH od 5 do 6.5.Prijava sadrži još 18 patentnih zahteva.

Description

POREKLO

[0001] Paratiroidni hormon (PTH) kao produkt od 84 amino kiseline luči paratiroidna žlezda sisara i kontroliše vrednosti kalcijuma u serumu svojim delovanjem na različita tkiva, uključujući kosti. Studije na ljudima sa određenim oblicima PTH su pokazale anabolički efekat na kosti, i potstakle značajan interes za njegovu upotrebu u tretmanu osteoporoze i sličnih poremećaja na kostima.

[0002] Humani PTH može da se dobije ekstrakcijom iz tkiva, sintezom peptida ili iz kvasca, bakterija ili ćelija sisara domaćina pomoću genetičkog inžinjeringa. Potpuno čist humani PTH je otkriven u U.S. patentu broj 5,208,041. Rekombinantna produkcija PTH u E. coli je otkrivena, na primer, u U.S. patentu broj 5,223,407, U.S. patentu broj 5,646,015 i U.S. patentu broj 5,629,205. Produkcija rekombinantnog humanog PTH u kvascu je otkrivena u EP-B-0383751. Sintetički humani PTH je komercijalno raspoloživ od strane Bachem Inc., Bubendorf, Svvitzerland. Isto tako, formulacije PTH su opisane, na primer, U.S. Patentu 5,496,801 i U.S. objavljenoj prijavi broj 2005/0209144 Al.

[0003] Uprkos svojoj primenljivosti, postizanje komercijalno održivih formulacija paratiroidnog hormona koje su pogodne za primenu na subjektu kome je to potrebno, se pokazalo kao veliki izazov. Zato što je PTH protein mnogo labilniji nego uobičajeni lekovi male molekule, PTH je podložan i hemijskoj i fizičkoj degradaciji. Isto tako, PTH je osetljiv na oksidaciju. Na primer, molekula PTH je osetljiva na oksidaciju na Metsi Meti 8 ostacima. Međutim, da bi se sačuvala bioaktivnost PTH, veruje se da sekvenca N-završetka molekule mora da ostane nedirnuta. Osim toga, kada se formuliše u obliku rastvora, PTH pokazuje tendenciju da formira agregate sa povećanjem koncentracije PTH.

[0004]Iako su izrađene komercijalno održive formulacije PTH, ovakve formulacije obično zahtevaju posebne uslove za rukovanje ili čuvanje, kao što je npr., na hladnom, kako bi se održala fizička i hemijska stabilnost PTH koji treba da se primeni. Ovakvi zahtevi za rukovanjem mogu da se pokažu neprijatnim i moguće je da umanje pristanak pacijenta. Pored toga, čak i kada se određeni zahtevi za rukovanjem za datu formulaciju ispune, često se dešava da formulacije PTH u obliku rastvora ispoljavaju delovanje od nekoliko dana do nedelja.

[0005]WO 2005/027978 otkriva nove derivate glukagonu sličnog peptida-l( GLP-1) i postupke za njegovu izradu i upotrebu.

EP 1 598 074 Al otkriva stabilizovane preparate koji sadrže protein.

WO 2004/007520 opisuje postupke i kompozicije za sprečavanje oksidativne degradacije proteina.

WO 2005/028516 A2 se odnosi na sistem oslobađanja leka, na bazi novih jedinjenja sa visokim afinitetom za proteine plazme.

WO 2006/017852 otkriva farmaceutske kompozicije za kontrolisano oslobađanje biološki aktivnih jedinjenja.

KRATAK SADRŽAJ PRONALASKA

[0006]Ovde su obezbeđene formulacije PTH koje mogu da se primene na životinjama ili ljudima. U jednom aspektu, ovde opisane PTH formulacije su u obliku formulacije stabilnog rastvora koji sadrži PTH, metionin, i najmanje jedan poloksamer surfaktant, i fiziološki prihvatljivo sredstvo za puferovanje. Ovde su takođe opisani postupci za izradu i upotrebu ovde opisanih PTH formulacija.

OPIS PRONALASKA

[0007]Ovde su opisane PTH formulacije koje mogu da se primene na ljudima ili životinjama. U jednom aspektu, ovde opisane PTH formulacije su formulacije rastvora koji uključuje PTH i najmanje jedan antioksidans. Alternativno, ovde opisane PTH formulacije su formulacije rastvora koji uključuje najmanje jedan ne-jonski surfaktant i, opciono, najmanje jedan antioksidans. U jednom aspektu, PTH formulacija kako je ovde opisano, je formulacija stabinog rastvora koja uključuje PTH i najmanje jedan antioksidans. U još jednom aspektu, PTH formulacija kako je ovde opisano, je formulacija stabinog rastvora koja uključuje najmanje jedan ne-jonski surfaktant i, opciono, najmanje jedan antioksidans. Ovde opisane PTH formulacije mogu takođe da uključe jedan ili više dodatnih konstituenata, kao što su, na primer, jedan ili više sredstava za puferovanje, modifikatori toničnosti ili konzervansi. Takođe su opisani postupci izrade i upotreba ovde dobijenih PTH formulacija.

[0008] Kako se ovde koristi, naziv "stabilan" se preferirano odnosi na formulacije rastvora pri čemu je čistoća PTH koji se nalazi u formulaciji veća od 90%, mereno reverzno faznom visoko efikasnom tečnom hromatografijom (RP-HPLC) i katjon promenljivom visoko efikasnom tečnom hromatografijom (CE-HPLC), nakon čuvanja formulacije 30 dana na 25° C. U jednom aspektu, čistoća PTH uključenog u ovde opisanu formulaciju PTH je 92% ili veća nakon čuvanja formulacije 30 dana na 25° C. U narednom aspektu, čistoća PTH uključenog u ovde opisanu formulaciju PTH je 95% ili veća nakon čuvanja formulacije 30 dana na 25° C. Alternativno, naziv "stabilan" se odnosi na formulaciju rastvora pri čemu je čistoća PTH uključenog u formulaciju 80% ili veća, mereno pomoću RP-HPLC i CE-HPLC, nakon čuvanja formulacije 60 dana na 25° C. U jednom aspektu, čistoća PTH uključenog u ovde opisanu PTH formulaciju je veća od 80% nakon čuvanja formulacije 60 dana na 25° C. U još jednom aspektu, čistoća PTH uključenog u ovde opisanu PTH formulaciju je veća od 85% nakon čuvanja formulacije 60 dana na 25° C.

[0009] U narednom aspektu, pokazano je da formulacije rastvora u skladu sa ovim opisom ispoljavaju poboljšanu bistrinu, vizuelni izgled i manju precipitaciju pod uslovima stresa kao što je, na primer, mućkanje. Ova poboljšanja mogu da se pokažu, na primer, merenjem pomoću turbidimetra ili UV-VIS spektroskopijom.

[0010] Ovde opisane PTH formulacije mogu da se izrade kao liofilizirana formulacija koja se rekonstituiše pre primene na subjektu kome je potrebna. Alternativno, ovde opisane PTH formulacije mogu da se izrade kao rastvori spremni za primenu. Bez obzira da lije formulacija za rekonstituciju ili izrađena kao rastvor, formulacija uključuje pogodan vehikulum. Na primer, vehikulum može da bude vehikulum na bazi vode, kao što su sterilna voda ili fiziološki rastvor.

[0011] Ovde opisane PTH formulacije sadrže PTH u medicinski efektivnoj količini, pri čemu se ovaj naziv odnosi na količine korisne ili za terapeutske svrhe ili u medicinskim dijagnozama. Određena količina paratiroidnog hormona inkorporiranog u preparatu može da se odredi na bazi tipa izabranog PTH i nameravane krajnje upotrebe preparata. U jednom aspektu, PTH sadrži peptid ili modifikovani peptid, kao što je konjugat peptida. U jednom aspektu, postojeća PTH formulacija može da uključi oblik humanog PTH sa potpunom dužinom, 84 amino kiseline, kao što se dobija rekombinantno, sintezom peptida ili ekstrakcijom. Kada se ovde koristi humani oblik PTH hormona celokupne dužine, koristi se skraćenica "hPTH(l-84)". U svrhu ovog otkrića, hPTH(l-84) ima sekvencu amino kiseline koju su objavili Kimura i sardnici, Biochem Biophvs Res Comm, 114 (2):493.

[0012]U narednom aspektu, PTH koji je uključen u ovde opisanu PTH formulaciju je homolog ili varijanta hPTH(l-84) kojaje biološki aktivna. Naziv "biološki aktivan" se odnosi na PTH molekule koje su aktivne u bioanalizama za aktivnost PTH, kao što je analiza na bazi ćelija osteosarkoma pacova za produkciju PTH stimulisane adenilat ciklaze (videti, Rodan i saradnici (1983) J. Clin. Invest. 72,1511; i Rabbanii sardnici (1988) Encrinol. 123, 2709). Navedeni homolog može, na primer, da bude peptid sa najmanje 80% identičnih sekvenci, kao što je najmanje 85% identičnih sekvenci, na primer, najmanje 90% identičnih sekvenci, kao što je najmanje 95% identičnih sekvenci, na primer najmanje 98% identičnih sekvenci, sa hPTH(l-84). Nazivi " homolog" ili "varijanta" mogu da uključe, na primer, skraćene PTH molekule kao što je PTH (1-34).

[0013]U još jednom aspektu, PTH formulacija kako je ovde opisano može da uključi oblik PTH molekule celokupne dužine koja se javlja u ne-humanim sisarima. U jednom ovakvom aspektu, PTH može da bude oblik PTH govečeta ili svinje, kako su opisali Keutmann i sardnici, Current Research on Calcium Regulating Hormones, Cooper, C.W. (ed.), 1987, Universitv of Texas Press, Austin, pp 57-63. U narednom aspektu, ovde opisani preparat PTH može da se izradi koristeći homolog ili varijantu molekule PTH ne-humanog sisara kojaje biološki aktivna.

[0014]U još jednom aspektu, PTH formulacija kako je ovde opisano može da uključi varijantu hPTH(l-84) ili varijantu PTH molekule ne-humanog sisara koja uključuje supstitucije 1 do 5 amino kiselina. Ove supstitucije mogu da deluju na promenu stabilnosti molekule nakon formulacije ili na polu-život molekule nakon primene. U odnosu na hPTH(l-84), ove supstitucije amino kiselina mogu da uključe zamenu metionin ostataka na položajima 8 ili 18 sa leucin ostatkom ili nekom drugom hidrofobnom amino kiselinom koja poboljšava stabilnost molekule u odnosu na oksidaciju. Druga supstitucija amino kiseline može da bude zamena amino kiselina na položajima 25-27 sa tripsin neosetljivim amino kiselinama, kao što je histidin, ili nekom drugom amino kiselinom koja poboljšava stabilnost molekule u odnosu na proteaze.

[0015]U jednom aspektu, PTH uključen u ovde opisanoj formujlaciji može da se nalazi u koncentraciji od 0.1 mg/ml do 10 mg/ml, kao što je, na primer, 0.3 mg/ml do 10 mg/ml, 0.3 mg/ml do 5 mg/ml, 0.3 mg/ml do 3 mg/ml, 0.3 mg/ml do 2 mg/ml, ili 0.3 mg/ml do 1 mg/ml, kao što je, na primer, od 0.4 mg/ml do 8 mg/ml. U narednom aspektu, PTH uključen u ovde opisanu formulaciju može da se nalazi u koncentraciji iznad 1 mg/ml, kao što je, na primer, 1 mg/ml do 10 mg/ml, 1 mg/ml do 5 mg/ml, 1 mg/ml do 3 mg/ml, ili 1 mg/ml do 2 mg/ml. U još jednom aspektu, PTH je uključen u koncentraciji izabranoj od 1 mg/ml do 5 mg/ml, 1 mg/ml do 3 mg/ml i 1 mg/ml do 2 mg/ml. U jednom aspektu, PTH može da bude hPTH(l-84) u koncentraciji od 0.3 mg/ml do 3 mg/ml. U narednom aspektu, PTH može da bude hPTH(l-84) u koncentraciji od 1 mg/ml do 3 mg/ml. U još jednom aspektu, PTH može da bude hPTH(l -84) u koncentraciji od 1 mg/ml do 2 mg/ml, kao što je približno 1.4 mg/ml. Ukoliko je upotrebljeni PTH analog, varijanta ili homolog hPTH(l-84), stručnjaku sa iskustvom u tehnici je jasno da mogu da se upotrebe koncentracije PTH koje daju funkcionalno ekvivalentni efekat kao hPTH(l-84) u prethodno pomenutim koncentracijama.

[0016] U jednom aspektu, PTH formulacija kako je ovde opisano uključuje najmanje jedan antioksidans. U primere antioksidanasa koji mogu da se koriste u PTH formulaciji u skladu sa ovim opisom spadaju butilhidroksitoluen (BHT), butilhidroksianizol (BHA), tokoferol (Vitamin E), propilgalat, askorbinska kiselina, natrijum bisulfit, monotioglicerol, metionin, i EDTA (natrijum, diklacijum anhidrovani). Kada je potrebno, PTH formulacija u skladu sa ovim opisom može da uključi dva ili više antioksidansa. U jednom takvom aspektu, PTH formulacija uključuje kombinaciju dva ili više antioksidansa koji su ovde opisani. U jednom aspektu PTH formulacija koja uključuje najmanje jedan antioksidans, jedan ili više antioksidansa se nalaze u koncentraiji do približno 30 mg/ml. Na primer, svaki od jednog ili više antioksidansa može da se nalazi u koncentraciji od 1 mg/ml do 10 mg/ml, 2 mg/ml do 9 mg/ml, 3 mg/ml do 8 mg/ml, 4 mg/ml do 7 mg/ml, ili 5 mg/ml do 6 mg/ml. Alternativno, svaki od jednog ili više antioksidansa može da se nalazi u koncentraciji od 10 mg/ml do 20 mg/ml, 11 mg/ml do 19 mg/ml, 12 mg/ml do 18 mg/ml, 13 mg/ml do 17 mg/ml, ili 14 mg/ml do 16 mg/ml. Čak i dalje, svaki od jednog ili više antioksidansa može da se nalazi u koncentraciji od 5 mg/ml, 1 mg/ml do 4 mg/ml, 1 mg/ml do 3 mg/ml, ili 1 mg/ml do 2 mg/ml. U jednom aspektu, metionin kao antioksidans može da se nalazi u koncentraciji do 20 mg/ml. Na primer, PTH formulacija kako je ovde opisano može da uključi meitonin kao antioksidans u koncentraciji izabranoj od do 5 mg/ml, 2 mg/ml do 16 mg/ml, 15 mg/ml do 20 mg/ml, 1

mg/ml do 4 mg/ml, 15 mg/ml do 17 mg/ml, i 2 mg/ml do 4 mg/ml, kao što je približno 2.0 mg/ml. U narednom aspektu PTH formulacije u skladu sa ovim opisom, kao antioksidans je

uzet EDTA (natrijum, dikalcijum, anhidrovani) koji može da se nalazi u koncentraciji do 1 mg/ml.

[0017]Kako je ovde definisano, metionin obuhvata ili D-metionin, ili L-metionin, ili njihovu mešavinu, preferirano L-metionin.

[0018]U narednom aspektu, PTH formulacija u skladu sa ovim opisom uključuje najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ne-jonski surfaktant. U ne-jonske surfaktante koji mogu da budu uključeni u PTH formulaciju kako je ovde opisano spadaju, na primer, a-hidro-co-hidroksipoli(oksietilen)poli(oksipropilen)poli(oksietilen) blok kopolimer (na primer, Poloxamer surfaktant), polioksietilen sorbitan estri masnih kiselina (na primer, Tween surfaktant), polioksietilen alkil etri (na primer, Brij surfaktant), polietilen glikol terc-oktilfenil etar (na primer, Triton-X surfaktant), i polivinil-alkoholni (PVA) surfaktanti. Kada je potrebno, PTH formulacija kako je ovde opisano može da uključi dva ili više ne-jonska surfaktanta. U jednom takvom aspektu, PTH formulacija uključuje dva ili više ovde opisana ne-jonska surfaktanta, pri čemu se svaki od ne-jonskih surfaktanata nalazi u koncentraciji u skladu sa niže datim uputstvom. Svaki od ovde opisanih ne-jonskih surfaktanata je komercijalno raspoloživ u jednom ili više različitih stepena.

[0019]U jednom aspektu, najmanje jedan ne-jonski surfaktant uključuje Poloxamer surfaktant. U jednom ovakvom aspektu, najmanje jedan ne-jonski surfaktant uključuje Poloxamer surfaktant u koncentraciji do 2 mg/ml. Na primer, Poloxamer surfaktant može da se nalazi u koncentraciji od 0.02 mg/ml do 2 mg/ml, 0.05 mg/ml do 0.5 mg/ml, 0.05 mg/ml do 0.75 mg/ml, 0.05 mg/ml do 0.3 mg/ ml, 0.2 mg/ml do 0.5 mg/ml, 0.3 mg/ml do 0.5 mg/ml, ili 0.3 mg/ml do 1 mg/ml, kao što je približno 0.3 mg/ml. U jednom aspektu, najmanje jedan Poloxamer surfaktant se nalazi u koncentraciji od 0.02 mg/ml do 1 mg/ml, preferirano u koncentraciji izabranoj od 0.05 mg/ml do 0.5 mg/ml, 0.05 mg/ml do 0.75 mg/ml, 0.05 mg/ml do 0.3 mg/ml, 0.2 mg/ml do 0.5 mg/ml, 0.3 mg/ml do 0.5 mg/ml, i 0.3 mg/ml do 1 mg/ml. U jednom aspektu, Poloxamer surfaktant može da bude Poloxamer 188 u koncentraciji izabranoj od, na primer, 0.05 mg/ml do 0.3 mg/ml, 0.05 mg/ml do 0.5 mg/ml, ili 0.3 mg/ml do 1 mg/ml. U narednom aspektu, Poloxamer surfaktant može da bude Poloxamer 237 u koncentraciji izabranoj od, na primer, 0.05 mg/ml do 0.3 mg/ml, 0.05 mg/ml do 0.5 mg/ml, ili 0.3 mg/ml do 1 mg/ml. U narednom aspektu, Poloxamer surfaktant može da bude Poloxamer 338 u koncentraciji izabranoj od, na primer, 0.05 mg/ml do 0.3 mg/ml, 0.05 mg/ml do 0.5 mg/ml, ili 0.3 mg/ml do 1 mg/ml. U narednom aspektu, Poloxamer surfaktant može da bude Poloxamer 407 u koncentraciji izabranoj od, na primer, 0.05 mg/ml do 0.3 mg/ml, 0.05 mg/ml do 0.5 mg/ml, ili koncentraciji od 0.3 mg/ml do 1 mg/ml. U još jednom aspektu, Poloxamer surfaktant može da bude Poloxamer 124 u koncentraciji izabranoj od, na primer, 0.05 mg/ml do 0.3 mg/ml, 0.05 mg/ml do 0.5 mg/ml, ili 0.3 mg/ml do 1 mg/ml. U još jednom aspektu, PTH formulacija u skladu sa ovim opisom može da uključi dva ili više Poloxamer surfaktanta. Kada PTH formulacija uključuje dva ili više Poloxamer surfaktanta, svaki Poloxamer surfaktant može, na primer, da bude u jednoj od prethodno datih koncentracija. Poloxameri su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom (videti, na primer, Fiedler, Lexikon der Hilfsstoffe, 5th Ed.; Vol. 2, page 1334).

[0020]U narednom aspektu, najmanje jedan ne-jonski surfaktant uključuje Tween surfaktant. U pogodne Tween surfaktante spadaju, na primer, Tween 20, Tween 40 i Tween 80. U jednom ovakvom aspektu, PTH formulacija uključuje Tween 20 surfaktant koji se nalazi, na primer, u koncentraciji od 0.02 mg/ml do 2 mg/ml, kao što jc 0.02 mg/ml do 0.1 mg/ml. U još jednom ovakvom aspektu, PTH formulacija uključuje Tvveen 40 surfaktant koji se nalazi, na primer, u koncentraciji od 0.02 mg/ml do 2 mg/ml, kao što je 0.02 mg/ml do 0.1 mg/ml. U još jednom ovakvom aspektu, PTH formulacija uključuje Tvveen 80 surfaktant koji se nalazi, na primer, u koncentraciji od 0.02 mg/ml do 2 mg/ml, kao stoje 0.02 mg/ml do 0.1 mg/ml. U još jednom aspektu, PTH formulacija u skladu sa ovim opisom može da uključi dva ili više Tvveen surfaktanta. Kada PTH formulacija uključuje dva ili više Tvveen surfaktanta, svaki Tvveen surfaktant može, na primer, da se nalazi u jednoj od prethodno datih koncentracija.

[0021]U narednom aspektu, najmanje jedan ne-jonski surfaktan može da bude Brij surfaktant. U odgovarajuće Brij surfaktante spadaju, na primer, Brij 35 i Brij 52. U jednom ovakvom aspektu, PTH formulacija uključuje Brij-52 surfaktant, a Brij-52 surfaktant može da se nalazi, na primer, u koncentraciji od 0.05mg/ml do 2 mg/ml ili 0.02 mg/ml do 0.1 mg/ml. U još jednom ovakvom aspektu, PTH formulacija uključuje Brij-35 surfaktant, a Brij-35 surfaktant može da se nalazi, na primer, u koncentraciji od 0.02 mg/ml do 2 mg/ml, kao što je 0.02 mg/ml do 0.5 mg/ml. U još jednom aspektu, PTH formulacija u skladu sa ovim opisom može da uključi dva ili više Brij surfaktanta. Kada PTH formulacija uključuje dva ili više Brij surfaktanta, svaki Brij surfaktant može, na primer, da se nalazi u jednoj od prethodno datih koncentracija.

[0022]U narednom aspektu, najmanje jedan ne-jonski surfaktant uključuje Triton-X surfaktant, kao što je, na primer, Triton X-100. Kada PTH formulacija uključuje Triton-X surfaktant, Triton-X surfaktant može, na primer, da se nalazi u koncentraciji od 0.05 mg/ml do 2 mg/ml, kao što je 0.1 mg/ml do 0.3 mg/ml. U jednom ovakvom aspektu, dva ili više Triton-X surfaktanta mogu da budu uključena u PTH formulaciju kako je ovde opisano, na primer da svaki od Triton-X surfaktanta bude u jednoj od prethodno datih koncentracija.

[0023] U narednom aspektu, najmanje jedan ne-jonski surfaktant uključuje PVA surfaktant, kao Stoje, na primer, PVA 4-88. Kada PTH formulacija uključuje PVA surfaktant, surfaktant može, na primer, da se nalazi u koncentraciji od 15 mg/ml. Na primer, PVA surfaktant može da se nalazi u koncentraciji od 1 mg/ml do 15 mg/ml, 1 mg/ml do 10 mg/ml, 1 mg/ml do 7 mg/ml, 1 mg/ml do 5 mg/ml, 1 mg/ml do 3 mg/ml, 1 mg/ml do 2 mg/ml, 2 mg/ml do 3 mg/ml, ili 2 mg/ml do 10 mg/ml. Alternativno, PVA surfaktant može da se nalazi u koncentraciji od 5 mg/ml do 15 mg/ml, 5 mg/ml do 10 mg/ml, 5 mg/ml do 7 mg/ml, 7mg/ml do 10 mg/ml, ili 9 mg/ml do 10 mg/ml. U jednom aspektu, PVA surfaktant može da bude PVA 4-88, na primer, u koncentraciji od 1 mg/ml do 15 mg/ml, 2mg/ml do 10 mg/ml ili 1 mg/ml do 2 mg/ml. U narednom aspektu, PVA surfaktant može da bude PVA 4-88, na primer, u koncentraciji od 5 mg/ml do 7 mg/ml. U još jednom aspektu, PVA surfaktant može da bude PVA 4-88 u koncentraciji od 5 mg/ml do 10 mg/ml. U još jednom aspektu, PTH formulacija kako je ovde opisano može da uključi dva ili više PVA surfaktanta, od kojih se svaki PVA surfaktant nalazi u jednoj od prethodno datih koncentracija.

[0024]Prema tome, u jednom aspektu, kada PTH formulacija uključuje najmanje jedan ne-jonski surfaktant kako je ovde opisano, najmanje jedan ne-jonski surfaktant je izabran od Poloxamer 407, Poloxamer 338, Poloxamer 237, Poloxamer 188, Poloxamer 124, Tvveen 20, Tvveen 40, Tvveen 80, Brij 35, Brij 52, Triton X-100, PVA 4-88, i kombinacije dva ili više od prethodno navedenih. Posebno, prethodno navedeni Poloxameri su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom (videti, na primer, Fiedler, Lexikon der Hilfsstoffe, 51 h Ed.; Vol. 2, page 1334). U narednom aspektu kada PTH formulacija uključuje najmanje jedan ne-jonski surfaktan koji je ovde uključen, najmanje jedan ne-jonski surfaktant je izabran od PVA 4-88, Brij 35, Brij 52, Triton X-100, i kombinacije dva ili više od prethodno pomenutih.

[0025]Kada PTH formulacija kako je ovde opisano uključuje najmanje jedan ne-jonski surfaktant, dodatno može da bude uključen najmanje jedan antioksidans. PTH formulacije koje uključuju najmanje jedan ne-jonski surfaktant, kako je ovde opisano, mogu dodatno da uključe, na primer, najmanje jedan antioksidans izabran od butilhidroksitoluena (BHT), butilhidroksianizola (BHA), tokoferola (Vitamin E), propilgalata, askorbinske kiseline, natrijum bisulfita, monotioglicerola, metionina i EDTA (natrijum, diklacijum, anhidrovani). Kada je potrebno, PTH formulacija koja uključuje najmanje jedan ne-jonski surfaktant može takođe da uključi dva ili više antioksidansa. U jednom ovakvom aspektu, PTH formulacija uključuje kombinaciju dva ili više antioksidansa koja su ovde opisana. U jednom aspektu, kada PTH formulacija uključuje najmanje jedan ne-jonski surfaktant i najmanje jedan antioksidans, svaki od jednog ili više antioksidansa može da se nalazi u koncentraciji do približno 30 mg/ml. Na primer, kada PTH formulacija uključuje najmanje jedan ne-jonski surfaktant i najmanje jedan antioksidans, svaki od jednog ili više antioksidansa može da bude u koncentraciji od 1 mg/ml do 10 mg/ml, 2 mg/ml do 9 mg/ml, 3 mg/ml do 8 mg/ml, 4 mg/ml do 7 mg/ml, ili 5 mg/ml do 6 mg/ml. Alternativno, kada PTH formulacija uključuje najmanje jedan ne-jonski surfaktant i najmanje jedan antioksidans, svaki od jednog ili više antioksidansa je prisutan u koncentraciji od 10 mg/ml do 20 mg/ml, 11 mg/ml do 19 mg/ml, 12 mg/ml do 18 mg/ml, 13 mg/ml do 17 mg/ml, ili 14 mg/ml do 16 mg/ml. Isto tako, u PTH formulaciji koja uključuje najmanje jedan ne-jonski surfaktant i najmanje jedan antioksidans, svaki od jednog ili više antioksidansa može da bude prisutan uu koncentraciji od 1 mg/ml do 5 mg/ml, 1 mg/ml do 4 mg/ml, 1 mg/ml do 3 mg/ml, ili 1 mg/ml do 2 mg/ml. U jednom aspektu u PTH formulaciji koja uključuje najmanje jedan ne-jonski surfaktant i najmanje jedan antioksidans, kao antioksidans može da se koristi metionin, a metionin može da bude prisutan u koncentraciji do 20 mg/ml. Na primer, PTH formulacija kako je ovde opisano može da uključi najmanje jedan ne-jonski surfaktant i metionin kao antioksidans, pri čemu je metionin uključen u koncentraciji izabranoj od do 5 mg/ml, 2 mg/ml do 16 mg/ml, 15 mg/ml do 20 mg/ml, 1 mg/ml do 4 mg/ml, 15 mg/ml do 17 mg/ml, i 2 mg/ml do 4 mg/ml. U jednom preferiranom aspektu, antioksidans je metionin u koncentraciji od 1 mg/ml do 10 mg/ml, preferiranol mg/ml do 5 mg/ml, 1 mg/ml do 4 mg/ml, 1 mg/ml do 3 mg/ml, 1 mg/ml do 2 mg/ml, 2 mg/ml do 9 mg/ml, 2 mg/ml do 4 mg/ml, 3 mg/ml do 8 mg/ml, 4 mg/ml do 7 mg/ml, ili 5 mg/ml do 6 mg/ml. Na primer, PTH formulacija može da uključi 0.5-5 mg/ml metionina i 0.1-0.6 mg/ml surfaktanta kao što je poloksamer, na primer poloksamer 188. Prema tome, jedan preferirani primer PTH formulacije uključuje približno 2 mg/ml metionina i 0.3 mg/ml poloksamera 188 i opciono uključuje jedan ili više od sledećih: natrijum hlorid, monohidratnu citratnu kiselinu i manitol. Naredni aspekt PTH formulacije uključuje najmanje jedan ne-jonski surfaktant i najmanje jedan antioksidans, upotrebljeni antioksidans može da bude EDTA (natrijum, diklacijum, anhidrovani), koji može, na primer, da bude prisutan u koncentraciji do 1 mg/ml.

[0026] Sredstva za puferovanje koja su farmaceutski prihvatljiva i pogodna za održavanje formulacije na fiziološki prihvatljivom pH, mogu da se koriste u PTH formulaciji kako je ovde opisano. Naziv "fiziološki prihvatljiv" se odnosi na pH od približno 3.5 do pribliižno 7.5. U jednom aspektu, može da se upotrebi pufer koji održava pH formulacije na pH od 5 do 6.5. U narednom aspektu, može da se upotrebi ne-isparljivo sredstvo za puferovanje. "ne-isparljivo sredstvo za puferovanje" je ono koje ne isparava u toku procesa sušenja zamrzavanjem čime bi se stepen pH smanjio za više od 0.4 pH jedinica. U još jednom aspektu, može da se koristi ne-isparljivo sredstvo za puferovanje koje održava pH formulacije na pH od 5 do 6.5. U još jednom aspektu, u ovde opisanoj PTH formulaciji može da se upotrebi ne-isparljivo sredstvo za puferovanje koje održava pH kompozicije na pH od približno 5.5. U još jednom aspektu, mogu da se upotrebe dva ili više pufer sistema kako bi se održao pH PTH formulacije na željenom nivou.

[0027] Farmaceutski prihvatljivi puferi koji mogu da se koriste u ovde opisanim PTH formulacijama uključuju, na primer, acetatne, citratne, fosfatne, TRIS (trometamin), argininatne i karbonatne pufere. U jednom aspektu, koristi se citratni pufer. Kada se kao sredstvo za puferovanje koristi citratni pufer, on može, na primer, da se upotrebi u koncentraciji od 5mM do 30 mM, 5 mM do 10 mM, ili u koncentraciji od 10 mM. U jednom ovakvom aspektu, PTH formulacija kako je ovde opisano se izrađuje sa citratnim puferom u koncentraciji od 10 mM, a citratni pufer se koristi na način koji održava pH formulacije na 5.5. Takođe su pogodni drugi puferi, na primer, u sličnoj koncentraciji i/ili pH opsezima kako je prethodno opisano za citratni pufer.

[0028]Prema tome, otkrivena je farmaceutska kompozicija koja uključuje, kada je rastvorena u odgovarajućem vehikulumu, PTH u koncentraciji od 1 mg/ml do 10 mg/ml, metionin u koncentraciji od 1 mg/ml do 10 mg/ml, najmanje jedan Poloxamer surfaktant u koncentraciji od 0.02 mg/ml do 1 mg/ml, i fiziološki prihivatljivo sredstvo za puferovanje koje održava pH formulacije na pH od 5 do 6.5.

[0029]U preferiranom aspektu, kompozicija je u obliku formulacije stabilnog rastvora.

[0030]U još jednom preferiranom aspektu, farmaceutska kompozicija uključuje PTH u koncentraciji od 1.4 mg/ml, metionin u koncentraciji od 2 mg/ml, poloksamer 407 u koncentraciji od 0.3 mg/ml, i fiziološki prihvatljivo sredstvo za puferovanje koje održava pH formulacije na 5.5.

[0031]U narednom preferiranom aspektu, farmaceutska kompozicija uključuje PTH u koncentraciji od 1.4 mg/ml, metionin u koncentraciji od 2 mg/ml, poloksamer 188 u koncentraciji od 0.3 mg/ml, i fiziološki prihvatljivo sredstvo za puferovanje koje održava pH formulacije na pH od 5.5.

[0032]U još jednom preferiranom aspektu, farmaceutska kompozicija uključuje PTH u koncentraciji od 1.4 mg/ml, metionin u koncentraciji od 2 mg/ml, poloksamer 338 u koncentraciji od 0.3 mg/ml, i fiziološki prihvatljivo sredstvo za puferovanje koje održava pH formulacije na pH od 5.5.

[0033]U još jednom preferiranom aspektu, farmaceutska kompozicija uključuje PTH u koncentraciji od 1.4 mg/ml, metionin u koncentraciji od 2 mg/ml, poloksamer 338 u koncentraciji od 1.0 mg/ml, i fiziološki prihvatljivo sredstvo za puferovanje koje održava pH formulacije na pH od 5.5.

[0034]U još jednom preferiranom aspektu, farmaceutska kompozicija uključuje PTH u koncentraciji od 1.4 mg/ml, metionin u koncentraciji od 2 mg/ml, poloksamer 237 u koncentraciji od 0.3 mg/ml, i fiziološki prihvatljivo sredstvo za puferovanje koje održava pH formulacije na pH od 5.5.

[0035]U još jednom preferiranom aspektu, farmaceutska kompozicija uključuje PTH u koncentraciji od 1.4 mg/ml, metionin u koncentraciji od 2 mg/ml, poloksamer 237 u koncentraciji od 0.05 mg/ml, i fiziološki prihvatljivo sredstvo za puferovanje koje održava pH formulacije na pH od 5.5. Ovde opisana PTH formulacija može da uključi jedan ili više modifikatora toničnosti. U materijale koji mogu da se koriste kao modifikatori toničnosti spadaju, na primer, natrijum hlorid, saharoza i poliol ekscipijenti kao što su sorbitol, glicerol i manitol. U jednom aspektu, kada se PTH formulacija liofilizira za čuvanje i rekonstituciju pre primene, može da se uključi ne-isparljivi pufer kako je ovde opisano u kombinaciji sa jednim ili više modifikatora toničnosti koji su izabrani tako da se jedan ili više modifikatora toničnosti ko-liofilizira sa ne-isparljivim puferom i PTH da se formira amorfna pogača. U jednom aspektu, koristi se natrijum hlorid. Kada se kao modifikator toničnosti koristi natrijum hlorid, on može da se koristi, na primer, u koncentraciji od 1 mg/ml do 10 mg/ml, 2 mg/ml do 5 mg/ml, 3 mg/ml do 4 mg/ml, ili 3.5 mg/ml do 4 mg/ml. U jednom ovakvom aspektu, PTH formulacija kako je ovde opisano može da uključi 4.5 mg NaCI u rastvoru zapremine 1.15 ml. Kada se kao modifikator toničnosti koristi manitol, manitol može, na primer, da bude u koncentraciji od 15 mg/ml do 50 mg/ml, 20 mg/ml do 40 mg/ml, ili 25 mg/ml do 30 mg/ml. U jednom ovakvom aspektu, PTH formulacija kako je ovde opisano može da uključi 30 mg manitola u rastvoru zapremine 1.15 ml. U još jednom aspektu, kao modifikatori toničnosti su uključeni i natrijum hlorid i manitol. U ovom aspektu, natrijum hlorid i manitol mogu, na primer, da se u PTH formulaciji nalaze u koncentracijama koje su prethodno date. U narednom aspektu, koriste se ksilitol ili sorbitol. Kada se kao modifikator toničnosti koriste saharoza, ksilitol ili sorbitol, saharoza, ksilitol ili sorbitol mogu da se nalaze u koncentracijama od, na primer, 1 mg/ml do 100 mg/ml, 50 mg/ml do 500 mg/ml, ili 50 mg/ml do 300 mg/ml, kao što je 50 mg/ml do 100 mg/ml. U narednom aspektu, koristi se glicerol. Kada se kao modifikator toničnosti koristi glicerol, on može, na primer, da se nalazi u koncentraciji od 1 mg/ml do 30 mg/ml, kao što je 15 mg/ml do 30 mg/ml.

[0036]U ovde opisanim PTH formulacijama može takođe da bude uključen jedan ili više od farmaceutski prihvaltjivih konzervansa. U primere pogodnih konzervansa spadaju m-krezol, benzil alkohol, benzoatna kiselina, fenol i EDTA, kao što su izabrani od krezola, benzil alkohola i EDTA. U preferiranom aspektu, kao konzervans se koristi m-krezol. Kada se kao konzervans koristi m-krezol, on može da bude, na primer, u koncentraciji od 1 mg/ml do 5 mg/ml, 2 mg/ml do 4 mg/ml, ili 3 mg/ml do 4mg/ml. U jednom aspektu, PTH formulacija kako je ovde opisano može da uključi 3.62 mg m-krezola u rastvoru zapremine 1.15 ml. Kada se kao konzervans koristi benzil alkohol, on može da bude u koncentraciji od 8 mg/ml do 12 mg/ml ili 9 mg/ml do 11 mg/ml. U jednom aspektu, PTH formulacija kako je ovde opisano može da uključi benzil alkohol kao konzervans u koncentraciji od 10 mg/ml. Kada se kao konzervans koristi EDTA, on može da se nalazi u koncentraciji do 5 mg/ml, do 4 mg/ ml, do 3 mg/ml, do 2 mg/ml, ili do 1 mg/ml. U jednom ovakvom aspektu, PTH formulacija kako je ovde opisano može da uključi EDTA u koncentraciji od 1 mg/ml.

[0037]U ovde opisanoj PTH formulaciji može da se nalazi jedan ili više farmaceutski prihvatljivih stabilizatora. U primere pogodnih stabilizatora spadaju ksilitol, lizin, histidin i mikrokristalna celuloza. U jednom aspektu, PTH formulacija kako je ovde opisano može da uključi ksilitol u koncentraciji od 50 mg/ml do 300 mg/ml, kao što je, na primer, 100 mg/ml do 300 mg/ml. U narednom aspektu, PTH formulacija kako je ovde opisano može da uključi lizin u koncentraciji od 1 mg/ml do 10 mg/ml, kao što je, na primer, 2 mg/ml do 5 mg/ml. U narednom aspektu, PTH formulacija kako je ovde opisano može da uključi histidin u koncentraciji od 0.5 mg/ml do 5 mg/ml, kao što je, na primer, 1 mg/ml do 5 mg/ml. U narednom aspektu, PTH formulacija kako je ovde opisano može da uključi mikrokristalnu celulozu u koncentraciji od 1 mg/ml do 10 mg/ml, kao što je, na primer, 2 mg/ml do 10 mg/ml. Ukoliko PTH formulacija uključuje mikrokristalnu celulozu, formulacija može da bude u obliku disperzije ili žitke mase.

[0038]PTH formulacija u skladu sa ovim opisom može da se izradi kao rastvor spreman za primenu. Alternativno, PTH formulacija u skladu sa ovim opisom može da se rekonstituiše iz liofiliziranog produkta. Kada se PTH formulacija izrađuje rekonstitucijom liofiliziranog produkta, izrađuju se liofilizirani produkt i vehikulum za rekonstituciju i kombinuju na način kojim se dobija formulacija u obliku rastvora koji sadrži konstituente formulacije u koncentracijama koje su ovde date.

[0039]Kada je PTH formulacija liofilizirana pre rekonstitucije, liofilizirani prašak može da se izradi liofilizacijom sterilnog, vodenog rastvora PTH. Kao što je uobičajeno u tehnici formulacije, proces liofilizacije obično zahteva cikličan temperaturni proces koji se pažljivo kontroliše kako bi se obezbedili ujednačeni i skoro potpuno završeni produkti sušenja, na primer, da se dobije prašak koji ne sadrži više od približno 2% vode u odnosu na težinu. Protokoli liofilizacije pogodne za izradu liofiliziranog praška koji je spreman za rekonstituciju su opisani, na primer, u U.S. Patentu broj 5,496,801 i U.S. publikovanoj patentnoj prijavi broj 2005/0209144 Al, čiji su sadržaji ovde inkorporirani kao reference. Kada je liofilizirani prašak formiran, prašak može da se rekonstituiše u odgovarajućem vehikulumu kao što je sterilna voda, koristeći standardne postupke. Ukoliko se traži, vehikulum koji se koristi za rekonstituciju liofiliziranog praška može da uključi jedan ili više ovde opisanih konstituenata formulacije. To jest, kada se PTH formulacija kako je ovde opisano izrađuje rekonstitucijom liofilizirane PTH kompozicije, jedan ili više konstituenata formulacije može da bude izostavljeno iz liofilizirane PTH kompozicije ali da se nalaze u vodenom vehikulumu koji se koristi za rekonstituciju i formiranje PTH formulacije koja se primenjuje. U jednom preferiranom aspektu, farmaceutska kompozicija može da bude pogodna za primenu injekcijom.

[0040]Ovde opisane PTH formulacije mogu da se koriste u terapeutske svrhe, a posebno za tretman osteoporoze. Terapija osteoporoze zahteva primenu rekonstituisanog preparata putem injekcije, kao što je subkutana injekcija, u jediničnoj dozi koja odgovara prepisanom režimu tretmana. U preferiranom režimu tretmana, učestalost doziranja PTH je odjedanput nedeljno do tri puta dnevno, kao što je jedanput dnevno, dva puta dnevno ili tri puta dnevno.

[0041]U jednom terapeutskom aspektu, PTH formulacija kako je ovde opisano se koristi u postupku za lečenje osteoporoze kod ljudi, a postupak uključuje primenu pojedinačne injekcije PTH formulacije u količini koja obezbeđuje dozu od 25 ug PTH do 150 ug PTH. U narednom aspektu, postupak za lečenje osteoporoze kod ljudi uključuje primenu pojedinačne injekcije ovde opisane PTH formulacije u količini koja obezbeđuje dozu od 25 pg PTH do 100 ug PTH. U još jednom aspektu, postupak za lečenje osteoporoze kod ljudi uključuje primenu pojedinačne injekcije ovde opisane PTH formulacije u količini koja obezbeđuje dozu od 25 ug PTH do 75 ug PTH. U narednom aspektu, postupak za lečenje osteoporoze kod ljudi uključuje primenu pojedinačne injekcije ovde opisane PTH formulacije u količini koja obezbeđuje dozu od 50 ug PTH do 75 ug PTH. U jednom preferiranom aspektu, doza je približno 100 ug PTH. Ukoliko je PTH koji se koristi za lečenje osteoporoze analog, varijanta ili homolog hPTH(l-84), stručnjaku sa iskustvom u tehnici je jasno da mogu takođe da se koriste PTH doze koje daju funkcionalno ekvivalentni efekat sa hPTH(l-84) u prethodno pomenutim dozama.

[0042]Pored terapeutske upotrebe, date PTH formulacije mogu da se formulišu i primene kao pomoć u medicinskim dijagnozama, a posebno kao pomoć u postavljanju dijagnoza hipoparatiroidizma i pseudohipoparatiroidizma kod hipokalcemičnih pacijenata. Izuzev za dozu PTH, kompozicija PTH preparata će ostati kako je ovde opisana za terapeutsku upotrebu. Intravenozno data, pojedinačna doza hPTH(l-84) ili PTH bioekvivalenta kojaje jednaka sa aktivnoću 200 Internacionalnih jedinica PTH, je odgovarajuća za dijagnostičke svrhe. Dijagnoza se nakon toga postavlja određivanjem efekta primenjenog PTH na vrednosti cAMP u urinu, gde porast cAMP ukazuje na stanje hipoparatiroidizma, pre nego njegovog pseudooblika.

[0043]U skladu sa tim, u jednom aspektu, farmaceutska kompozicija se

primenjuje injekcijom.

[0044]Naredni aspekti su:

1. Farmaceutska kompozicija koja uključuje PTH i najmanje jedan ne-jonski surfaktant.

2. Kompozicija u skladu sa aspektom 1, pri čemu je ne-jonski surfaktant izabran od Poloxamer surfaktanta, PVA surfaktanta, Tween surfaktanta, Brij surfaktanta i Triton-X surfaktanta. 3. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih aspekata, pri čemu je ne-jonski surfaktant Poloxamer surfaktant. 4. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih aspekata, pri čemu je ne-jonski surfaktant izabran od Poloxamer 407, Poloxamer 338, Poloxamer 237, Poloxamer 188, i Poloxamer 124. 5. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih aspekata, pri čemu je ne-jonski surfaktant Poloxamer surfaktant u koncentraciji od do 2 mg/ml. 6. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih aspekata, pri čemu je ne-jonski surfaktant Poloxamer surfaktant u koncentraciji izabranoj od 0.02 mg/ml do 1 mg/ml, 0.05 mg/ml do 0.5 mg/ml, 0.05 mg/ml do 0.75 mg/ml, 0.05 mg/ml do 0.3 mg/ ml, 0.2 mg/ml do 0.5 mg/ml, 0.3 mg/ml do 0.5 mg/ml, i 0.3 mg/ml do 1 mg/ml. 7. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih aspekata, pri čemu ne-jonski surfaktant uključuje kombinaciju dva ili više Poloxamer surfaktanta izabranih od Poloxamer 407, Poloxamer 338, Poloxamer 237; Poloxamer 188, i Poloxamer 124. 8. Kompozicija u skladu sa aspektom 7, pri čemu je svaki od dva ili više Poloxamer surfaktanata prisutan u koncentraciji izabranoj od 0.02 mg/ml do 1 mg/ml, 0.05 mg/ml do 0.5 mg/ml, 0.05 mg/ml do 0.75 mg/ml, 0.05 mg/ml do 0.3 mg/ml, 0.2 mg/ml do 0.5 mg/ml, 0.3 mg/ml do 0.5 mg/ml, i 0.3 mg/ml do 1 mg/ml. 9. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih aspekata, pri čemu je ne-jonski surfaktant PVA surfaktant.

10. Kompozicija u skladu sa aspektom 9, pri čemu je PVA surfaktant PVA 4-88.

11. Kompozicija u skladu sa aspektom 9 ili aspektom 10, pri čemu je PVA surfaktant prisutan u koncentraciji izabranoj od 1 mg/ml do 15 mg/ml, 1 mg/ml do 10 mg/ml, 1 mg/ml do 7 mg/ml, 1 mg/ml do 5 mg/ml, 1 mg/ml do 3 mg/ml, 1 mg/ml do 2 mg/ml, 2 mg/ml do 3 mg/ml, 2 mg/ml do 10 mg/ml, 5 mg/ml do 15 mg/ml, 5 mg/ml do 10 mg/ml, 5 mg/ml do 7 mg/ml, 7mg/ml do 10 mg/ml, i 9 mg/ml do 10 mg/ml. 12. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih aspekata, pri čemu je ne-jonski surfaktant Tvveen surfaktant. 13. Kompozicija u skladu sa aspektom 12, pri čemu je Tvveen surfaktant izabran od Tvveen 20, Tvveen 40 i Tvveen 80. 14. Kompozicija u skladu sa aspektom 12 ili aspektoml3, pri čemu je Tvveen surfaktant prisutan u koncentraciji izabranoj od 0.02 mg/ml do 2 mg/ml i 0.02 mg/ml do 0.1 mg/ml. 15. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih aspekata, pri čemu je ne-jonski surfaktant Brij surfaktant. 16. Kompozicija u skladu sa aspektom 15, pri čemu je Brij surfaktant izabran od Brij 35 i Brij 52. 17. Kompozicija u skladu sa aspektom 15 ili aspektomlć, pri čemu je navedeni Brij surfaktant prisutan u koncentraciji izabranoj od 0.05mg/ml do 2 mg/ml i 0.02 mg/ml do 0.1 mg/ml. 18. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih aspekata, pri čemu je ne-jonski surfaktant Triton-X surfaktant. 19. Kompozicija u skladu sa aspektom 18, pri čemu je Triton surfaktant Triton X-100 prisutan u koncentraciji izabranoj od 0.05 mg/ml do 2 mg/ml i 0.1 mg/ml do 0.3 mg/ml. 20. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih aspekata, pri čemu kompozicija dalje uključuje najmanje jedan antioksidans. 21. Kompozicija u skladu sa aspektom 20, pri čemu kompozicija uključuje antioksidans izabran od butilhidroksitoluena (BHT), butilhidroksianizola (BHA), tokopherola (Vitamin E), propilgalata, askorbinske kiseline, natrijum bisulfita, monotioglicerola, metionina i EDTA (natrijum, diklacijum, anhidrovani). 22. Kompozicija u skladu sa aspektom 20 ili aspektom 21, pri čemu je antioksidans prisutan u koncentraciji izabranoj od 1 mg/ml, 1 mg/ml do 10 mg/ml, 1 mg/ml do 5 mg/ml, 1 mg/ml do 4 mg/ml, 1 mg/ml do 3 mg/ml, 1 mg/ml do 2 mg/ml, 2 mg/ml do 9 mg/ml, 3 mg/ml do 8 mg/ml, 4 mg/ml do 7 mg/ml, ili 5 mg/ml do 6 mg/ml, 10 mg/ml do 20 mg/ml, 11 mg/ml do 19 mg/ml, 12 mg/ml do 18 mg/ml, 13 mg/ml do 17 mg/ml, i 14 mg/ml do 16 mg/ml. 23. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih aspekata 20-22, pri čemu je antioksidans metionin. 24. Kompozicija u skladu sa aspektom 23, pri čemu je metionin prisutan u koncentraciji do

20 mg/ml.

25. Kompozicija u skladu sa aspektom 23, pri čemu je metionin prisutan u koncentraciji izabranoj od 5 mg/ml, 1 mg/ml do 4 mg/ml, 2 mg/ml do 4 mg/ml, 2 mg/ml do 16 mg/ml, 15 mg/ml do 20 mg/ml, i 15 mg/ml do 17 mg/ml, 26. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih aspekata, pri čemu je PTH izabran od hPTH(l-84) i ne-humane PTH molekule sisara, kao i biološki aktivnih varijanti i homologa hPTH(l-84) i ne-humanih PTH molekula sisara. 27. Kompozicija u skladu sa aspektom 26, pri čemu kompozicija uključuje biološki aktivni homolog hPTH(l-84) koji ima identičnu sekvencu sa hPTH(l-84) od najmanje 85%. 28. Kompozicija u skladu sa aspektom 27, pri čemu biološki aktivni homolog ima identičnu sekvencu sa hPTH(l-84) od najmanje 95%. 29. Kompozicija u skladu sa aspektom 27, pri čemu biološki aktivni homolog ima identičnu sekvencu sa hPTH(l-84) od najmanje 98%. 30. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih aspekata, pri čemu je PTH prisutan u koncentraciji izabranoj od 0.3 mg/ml do 10 mg/ml, 0.3 mg/ml do 5 mg/ml, 0.3 mg/ml do 3 mg/ml, 0.3 mg/ml do 2 mg/ml, 0.3 mg/ml do 1 mg/ml, i 0.4 mg/ml do 8 mg/ml. 31. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od aspekata 1-29, pri čemu je PTH prisutan u koncentraciji izabranoj od 1 mg/ml do 10 mg/ml, 1 mg/ml do 5 mg/ml, 1 mg/ml do 3 mg/ml, i

1 mg/ml do 2 mg/ml.

32. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od aspekata 26-29, pri čemu je PTH prisutan u koncentraciji izabranoj od 0.3 mg/ml do 3 mg/ml, 1 mg/ml do 3 mg/ml, i 1 mg/ml do 2 mg/ml. 33. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih aspekata, pri čemu navedena kompozicija dalje uključuje farmaceutski prihivatljiv rastvarač. 34. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih aspekata, koja dalje uključuje fiziološki prihvatljivo sredstvo za puferovanje. 35. Kompozicija u skladu sa aspektom 34, pri čemu je fiziološki prihvatljivo sredstvo za puferovanje izabrano od acetatnih, citratnih, fosfatnih, TRIS (Trometamin), argininatnih i karbonatnih pufera. 36. Kompozicija u skladu sa aspektom 34 ili aspektom 35, pri čemu je fiziološki prihvatljivo sredstvo za puferovanje ne-isparljivo sredstvo za puferovanje. 37. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih aspekata, koja dalje uključuje najmanje jedan modifikator toničnosti. 38. Kompozicija u skladu sa aspektom 37, pri čemu je najmanje jedan modifikator toničnosti izabran od natrijum hlorida, saharoze i poliol ekscipijenta. 39. Kompozicija u skladu sa aspektom 38, pri čemu je poliol ekscipijent izabran od sorbitola, glicerola i manitola. 40. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od aspekata 37-39, pri čemu je najmanje jedan modifikator toničnosti ko-liofiliziran sa ne-isparljivim sredstvom za puferovanje. 41. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od aspekata 37-40, pri čemu najmanje jedan modifikator toničnosti uključuje natrijum hlorid u koncentraciji izabranoj od 1 mg/ml do 10 mg/ml, 2 mg/ml do 5 mg/ml, 3 mg/ml do 4 mg/ml, i 3.5 mg/ml do 4 mg/ml. 42. Kompozicija u skladu sa aspektom 37, pri čemu najmanje jedan modifikator toničnosti uključuje manitol u koncentraciji izabranoj od 15mg/ml do 50 mg/ml, 20 mg/ml do 40 mg/ml, i 25mg/ml do 30 mg/ml. 43. Kompozicija u skladu sa aspektom 37, pri čemu je najmanje jedan modifikator toničnosti izabran od saharoze i sorbitola i prisutan u koncentraciji izabranoj od 1 mg/ml do 100 mg/ml,

50 mg/ml do 500 mg/ml, 50 mg/ml do 300 mg/ml, i 50 mg/ml do 100 mg/ml.

44. Kompozicija u skladu sa aspektom 37, pri čemu najmanje jedan modifikator toničnosti uključuje glicerol u koncentraciji izabranoj od 1 mg/ml do 30 mg/ml i 15 mg/ml do 30 mg/ml. 45. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od aspekata 37-40, pri čemu modifikator toničnosti uključuje natrijum hlorid i manitol, natrijum hlorid je prisutan u koncentraciji izabranoj od 1 mg/ml do 10 mg/ml, 2 mg/ml do 5 mg/ml, 3 mg/ml do 4 mg/ml, i 3.5 mg/ml do 4 mg/ml, a manitol je prisutan u koncentraciji izabranoj od 15mg/ml do 50 mg/ml, 20 mg/ml do 40 mg/ml, i 25mg/ml do 30 mg/ml. 46. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih aspekata, koja dalje uključuje najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv konzervans. 47. Kompozicija u skladu sa aspektom 45, pri čemu je najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv konzervans izabran od krezola, benzil alkohola i EDTA. 48. Kompozicija u skladu sa aspektom 46, pri čemu najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv konzervans uključuje m-krezol. 49. Kompozicija iz aspekta 47, pri čemu je m-krezol prisutan u koncentraciji izabranoj od 1 mg/ml do 5 mg/ml, 2 mg/ml do 4 mg/ml, i 3 mg/ml do 4mg/ml. 50. Kompozicija u skladu sa aspektom 46, pri čemu najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv konzervans uključuje benzil alkohol. 51. Kompozicija iz aspekta 49, pri čemu je benzil alkohol prisutan u koncentraciji izabranoj od 8 mg/ml do 12 mg/ml i 9 mg/ml do 11 mg/ml. 52. Kompozicija u skladu sa aspektom 46, pri čemu je najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv konzervans uključuje EDTA u koncentraciji izabranoj od 5 mg/ml, do 4 mg/ ml, do

3 mg/ml, do 2 mg/ml, i do 1 mg/ml.

53. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih aspekata, koja dalje uključuje najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv stabilizator. 54. Kompozicija u skladu sa aspektom 52, pri čemu je najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv stabilizator izabran od ksilitola, lizina, histidina i mikrokristalne celuloze. 55. Kompozicija u skladu sa aspektom 53, pri čemu najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv stabilizator uključuje ksilitol u koncentraciji izabranoj od 50 mg/ml do 300 mg/ml i 100 mg/ml do 300 mg/ml. 56. Kompozicija u skladu sa aspektom 53, pri čemu najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv stabilizator uključuje lizin u koncentraciji izabranoj od 1 mg/ml do 10 mg/ml i 2 mg/ml do 5 mg/ml. 57. Kompozicija u skladu sa aspektom 53, pri čemu najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv stabilizator uključuje histidin u koncentraciji izabranoj od 0.5 mg/ml do 5 mg/ml i 1 mg/ml do

5 mg/ml.

58. Kompozicija u skladu sa aspektom 53, pri čemu najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv stabilizator uključuje mikrokristalnu celulozu u koncentraciji izabranoj od 1 mg/ml do 15 mg/ml i 2 mg/ml do 10 mg/ml. 59. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih aspekata, pri čemu je navedena kompozicija liofilizirana. 60. Postupak za izradu farmaceutske kompozicije, koji uključuje faze rekonstitucije kompozicije u skladu sa aspektom 58, u rastvor sa farmaceutski prihvatljivim vehikulumom.

61. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od aspekata 1-58 za upotrebu kao medikamenta.

62. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od aspekata 1-58 za upotrebu kao medikamenta za tretman ili prevenciju osteoporoze.

[0045]U narednom tekstu, ovaj pronalazak je ilustrovan slikama i primerima koji nemaju za cilj da ograniče okvir ovog pronalaska.

LEGENDE SLIKA

[0046]

Slika 1: Turbidimetrijska merenja nakon čuvanja na 5°C.

Slika 2: RP-HPLC rezultati koji pokazuju % glavnog pika PTH kada se čuva na 5°C. Slika 3: CE-HPLC rezultati koji pokazuju % glavnog pika PTH kada se čuva na 5°C. U toku analize korišćena je stara kolona kojaje dovela do lošeg razdvajanja pikova na hromatogramu. Ovo je verovatno razlog zašto su rezultati veći nakon 24 meseca u poređenju sa rezultatima nakon 18 meseci.

PRIMERI

[0047]hPTH(l-84) korišćen u studijama formulacije je dobijen i ekstrahovan iz soja Escherichia coli poznatim postupcima (videti, na primer, U.S. patentu broj 5,223,407, U.S. patentu broj 5,646,015 i U.S. patentu broj 5,629,205). Ukratko, gen humanog paratiroidnog hormona na plazmidu pJT42 se spaja sa proteinom A (ompA) sekrecionog signala DNK spoljašnje membrane E. coli, Na plazmidu je takođe prisutan i plazmid laktoza represor gena (laclq). Translacija ompA-rhPTH mRNK i dalji procesi sa endogenom peptidazom dovode do produkcije zrelog humanog paratiroidnog hormona sa 84 amino kiseline koji se sakuplja iz podloge za bakterijske kulture.

[0048]Nakon rekombinantne ekspresije se vrši prečišćavanje hPTH(l-84) da se dobije preparat u osnovi čist od zagađenja. Proces prečišćavanja, koji uključuje postupke poznate u tehnici (videti, na primer, U.S. patent broj 5,208,041), uključuje razdvajanje ćelija, filtaciju, ultrafiltraciju, hromatografiju izmenom jona, hromatografiju hidrofobne interakcije, preparativnu RP-HPLC, i još jednu hromatografiju izmene jona a nakon toga destilaciju da se dobije glavnica tečnosti.

Primer 1

[0049]Izradi se referentna PTH formulacija. Referentna formulacija ne uključuje ne-jonski surfaktant ili antioksidans. Referentna formulacija se izrađuje rekonstitucijom liofilizirane PTH kompozicije u sterilnom vodenom vehikulumu. Liofilizirana PTH kompozicija sadrži 1.61 mg hPTH(l-84), 4.5 mg natrijum hlorida, 30 mg manitola i 1.26 mg monohidratne citratne kiseline. Sterilni vodeni vehikulum sadrži sterilnu vodu izrađenu za injekcije i 3.15 mg/ml m-krezola. Liofilizirana PTH kompozicija se rekonstituiše u 1.15 ml sterilnog vodenog vehikuluma da se dobije PTH formulacija koja ima pH od 5.5 i sadrži 1.4 mg/ml hPTH(l-84).

[0050]Ova referentna formulacija se čuva 60 dana na 25° C, a stabilnost hPTH(l -84) koji se nalazi u referentnoj formulaciji se ispituje pomoću RP-HPLC i CE-HPLC. Rezultati dobijeni RP-HPLC analizom su dati u Tabeli 1. Rezultati dobijeni CE-HPLC analizom su dati u Tabeli 2.

Primer 2

[0051]Izrade se formulacije koje sadrže ne-jonski surfaktant. Ove formulacije se izrađuju u skladu sa Primerom 1, izuzev što se ne-jonski surfaktant nalazi u sterilnom vodenom vehikulumu koji se koristi za rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije. Formulacije izrađene u skladu sa ovim primerom imaju pH od 5.5.

[0052]Izrađene su dve različite formulacije koje sadrže Poloxamer 188. Prva sadrži Poloxamer 188 u sterilnom vodenom vehikulumu u koncentraciji od 1.0 mg/ml. Druga sadrži Poloxamer 188 u sterilnom vodenom vehikulumu u koncentraciji od 0.3 mg/ml.

[0053]Takođe su izrađene dve različite formulacije koje sadrže Poloxamer 407. Prva sadrži Poloxamer 407 u sterilnom vodenom vehikulumu u koncentraciji od 1.0 mg/ml. Druga sadrži Poloxamer 407 u sterilnom vodenom vehikulumu u koncentraciji od 0.3 mg/ml.

[0054]Formulacije koje sadrže Poloxamer 188 i Poloxatner 407 se čuvaju 60 dana na 25° C, a stabilnost hPTH(l-84) koji je prisutan u svakoj formulaciji se ispituje pomoću RP-HPLC i CE-HPLC. Rezultati RP-HPLC analize su dali u Tabeli 3. Rezultati CE-HPLC analize su dati u Tabeli 4. Kako može da se vidi iz Tabele 3 i Tabele 4, i Poloxamer 188 i Poloxamer 407 imaju stabilizirajući efekat na hPTH(l-84) koji se nalazi u formulacijama.

Primer 3

[0055]Izradi se formulacija koja sadrži Poloxamer 188 i metionin. Formulacija se izrađuje u skladu sa Primerom 1, izuzev što se 0.3 mg/ml Poloxamera 188 i 2 mg/ml metionina nalazi u sterilnom vodenom vehikulumu koji se koristi za rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije. Formulacija izrađena u skladu sa ovim primerom ima pH od 5.5.

[0056]Formulacija koja sadrži Poloxamer 188 i metionin se čuva 60 dana na 25° C, a stabilnost hPTH(l-84) koji se nalazi u ovoj formulaciji se ispituje pomoću RP-HPLC i CE-HPLC. Rezultati ovih analiza su dati u Tabeli 5 i Tabeli 6. Kao što može da se vidi u referentnim tabelama, kombinacija Poloxamera 188 i metionina koji se nalaze u PTH formulaciji ima stabilizirajući efekat na hPTH(l-84).

Primer 4

[0057] Izrade se dve formulacije koje sadrže Poloxamer 407 i metionin. Ove formulacije se izrade u skladu sa Primerom 1, izuzev što se Poloxamer 407 i metionin nalaze u sterilnom vodenom vehikulumu koji se koristi za rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije. Prva formulacija se izrađuje sa 0.3 mg/ml Poloxamera 407 i 2 mg/ml metionina u sterilnom vodenom vehikulumu koji se koristi za rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije. Druga formulacija se izrađuje sa 0.3 mg/ml Poloxamera 407 i 6 mg/ml metionina u u sterilnom vodenom vehikulumu koji se koristi za rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije. Formulacije izrađene u skladu sa ovim primerom imaju pH od 5.5.

[0058]Formulacije koje sadrže Poloxamer 407 i metionin se čuvaju 60 dana na 25° C, a stabilnost hPTH(l-84) koji se nalazi u svakoj formulaciji se ispituje pomoću RP-HPLC i CE-HPLC. Rezultati ovih analiza su dati u Tabeli 7 i Tabeli 8. Kao što može da se vidi u referentnim tabelama, kombinacija Poloxamera 407 i metionina koji se nalaze u PTH formulacijama ima stabilizirajući efekat na hPTH(l-84).

Primer 5

[0059]Izrade se dve formulacije koje sadrže Poloxamer237 i metionin. Ove formulacije se izrade u skladu sa Primerom 1, izuzev što se Poloxamer 237 i metionin nalaze u sterilnom vodenom vehikulumu koji se koristi za rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije. Prva formulacija se izrađuje sa 0.3 mg/ml Poloxamera 237 i 2 mg/ml metionina u sterilnom vodenom vehikulumu koji se koristi za rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije. Druga formulacija se izrađuje sa 0.05 mg/ml Poloxamera 237 i 2 mg/ml metionina u u sterilnom vodenom vehikulumu koji se koristi za rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije. Formulacije izrađene u skladu sa ovim primerom imaju pH od 5.5.

[0060]Formulacije koje sadrže Poloxamer 237 i metionin se čuvaju 60 dana na 25° C, a stabilnost hPTH(l-84) koji se nalazi u svakoj formulaciji se ispituje pomoću RP-HPLC i CE-HPLC. Rezultati ovih analiza su dati u Tabeli 9 i Tabeli 10. Kao što može da se vidi u referentnim tabelama, kombinacija Poloxamera 237 i metionina koji se nalaze u PTH formulacijama ima stabilizirajući efekat na hPTH(l-84).

Primer 6

[0061]Izrade se dve formulacije koje sadrže Poloxamer 338 i metionin. Ove formulacije se izrade u skladu sa Primerom 1, izuzev što se Poloxamer 338 i metionin nalaze u sterilnom vodenom vehikulumu koji se koristi za rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije. Prva formulacija se izrađuje sa 0.3 mg/ml Poloxamera 338 i 2 mg/ml metionina u sterilnom vodenom vehikulumu koji se koristi za rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije. Druga formulacija se izrađuje sa 1 mg/ml Poloxamera 338 i 2 mg/ml metionina u sterilnom vodenom vehikulumu koji se koristi za rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije. Formulacije izrađene u skladu sa ovim primerom imaju pH od 5.5.

[0062]Formulacije koje sadrže Poloxamer 338 i metionin se čuvaju 60 dana na 25° C, a stabilnost hPTH(l-84) koji se nalazi u svakoj formulaciji se ispituje pomoću RP-HPLC i CE-HPLC. Rezultati ovih analiza su dati u Tabeli 11 i Tabeli 12. Kao što može da se vidi u referentnim tabelama, kombinacija Poloxamera 338 i metionina koji se nalaze u PTH formulacijama ima stabilizirajući efekat na hPTH(l-84).

Primer 7

[0063]Izrade se dve formulacije koje sadrže PVA 4-88 i metionin. Ove formulacije se izrade u skladu sa Primerom 1, izuzev što se PVA 4-88 i metionin nalaze u sterilnom vodenom vehikulumu koji se koristi za rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije. Prva formulacija se izrađuje sa 10 mg/ml PVA 4-88 i 2 mg/ml metionina u sterilnom vodenom vehikulumu koji se koristi za rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije. Druga formulacija se izrađuje sa 7 mg/ml PVA 4-88 i 2 mg/ml metionina u sterilnom vodenom vehikulumu koji se koristi za rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije. Formulacije izrađene u skladu sa ovim primerom imaju pH od 5.5.

[0064]Formulacije koje sadrže PVA 4-88 i metionin se čuvaju 60 dana na 25° C, a stabilnost hPTH(l-84) koji se nalazi u svakoj formulaciji se ispituje pomoću RP-HPLC i CE-HPLC. Rezultati ovih analiza su dati u Tabeli 13 i Tabeli 14. Kao što može da se vidi u referentnim tabelama, kombinacija PVA 4-88 i metionina koji se nalaze u PTH formulacijama ima stabilizirajući efekat na hPTH(l-84).

Primer 8

[0065]Izrade se formulacije koje sadrže različite Poloxamer surfaktante i metionin. Ove formulacije se izrade u skladu sa Primerom 1, izuzev što se ili Poloxamer 407, Poloxamer 237, Poloxamer 338 ili Poloxamer 188 i metionin nalaze u sterilnom vodenom vehikulumu koji se koristi za rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije. Prva formulacija se izrađuje sa 0.3 mg/ml Poloxamer surfaktanta i 2 mg/ml metionina u sterilnom vodenom vehikulumu koji se koristi za rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije. Formulacije izrađene u skladu sa ovim primerom imaju pH od 5.5.

[0066] Formulacije koje sadrže Poloxamer surfaktant i metionin se čuvaju 60 dana na 25° C, a stabilnost hPTH(l-84) koji se nalazi u svakoj formulaciji se ispituje pomoću RP-HPLC (Tabela 15) i CE-HPLC (Tabela 16). Kao što može da se vidi u referentnim tabelama, kombinacija Poloxamer surfaktanta i metionina koji se nalaze u PTH formulacijama ima stabilizirajući efekat na hPTH(l-84), nezavisno od tipa Poloxamera koji je dodat.

[0067]Iznenađujuće je da čak i ako su molekularne težine različitih poloksamera veoma različite (u rasponu od 7835 do 15050 g/mol; PoIoxamer 237 < Poloxamer 188 < Poloxamer 407 < Poloxamer 338; videti Tabelu 17) a koncentracije dodatih poloksamera su iste (0.3 mg/ml), različite formulacije ipak imaju isti hemijski stabilizirajući efekat na PTH.

Primer 9

[0068)Izrade se formulacije koje sadrže različite Poloxamer surfaktante i metionin. Ove formulacije se izrade u skladu sa Primerom 1, izuzev što se ili Poloxamer 407, Poloxamer 237 ili Poloxamer 338 i metionin nalaze u sterilnom vodenom vehikulumu koji se koristi za rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije. Formulacija se izrađuje sa 0.3 mg/ml Poloxamer surfaktanta i 2 mg/ml metionina u sterilnom vodenom vehikulumu koji se koristi za

rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije. Formulacije izrađene u skladu sa ovim primerom imaju pH od 5.5.

[0069] Formulacije koje sadrže Poloxamer surfaktant i metionin se čuvaju 147 sati na 25° C, a fizička stabilnost hPTH(l-84) koji se nalazi u svakoj formulaciji se ispituje vizuelnim određivanjem nakon mućkanja (Tabela 18). Rezultati pokazuju da formulacija koja sadrži Poloxamer 237 najviše poboljšava fizičku stabilnost PTH , dok formulacija sa Poloxamerom 407 ima najmanji stabilizirajući efekat. Iznenađujuće je daje fizički stabilizirajući efekat za PTH veći za formulaciju koja sadrži Poloxamer 338 u poređenju sa Poloxamerom 407, čak i ako imaju sličnu molekulsku težinu.

Primer 10

[0070]Izrade se formulacije koje sadrže cistein ili metionin. Ove formulacije se izrade u

skladu sa Primerom 1, izuzev što se dve formulacije koje sadrže cistein i dve formulacije koje sadrže metionin u sterilnom vodenom vehikulumu koriste za rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije. Formulacije se izrađuju sa ili 2 mg/ml ili 16 mg(ml cisteina ili sa 2 mg/ml ili 8 ml/ml metionina u sterilnom vodenom vehikulumu koji se koristi za rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije.

[0071] Formulacije koje sadrže cistein ili metionin se čuvaju 11 dana na 25° C, a hemijska stabilnost hPTH(l-84) koji se nalazi u svakoj formulaciji se ispituje pomoću RP-HPLC (Tabela 19). U poređenju sa referencom, samo metionin ispoljava efekat hemijske stabilizacije PTH.

Primer 11

[0072]Izrađene su formulacije u skladu sa formulacijama kako je navedeno u niže datoj Tabeli 20. Ove formulacije se izrađuju u skladu sa Primerom 1, izuzev što se Poloxamer 407 i metionin nalaze u sterilnom vodenom vehikulumu koji se koristi za rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije. Formulacija se izrađuje uključivanjem 0.3 mg/ml Poloxamera 407 i 2 mg/ml metionina u sterilni vodeni vehikulum koji se koristi za rekonstituciju liofilizirane PTH kompozicije. Formulacije izrađene u skladu sa ovim primerom imaju ili pH 5.5, ili pH 4.

[0073] Formulacije se čuvaju 2 godine na 5° C, a fizička stabilnost hPTH(l-84) koji se nalazi u svakoj formulaciji se određuje vizuelnim pregledom i turbidimetrijskim merenjima, dok se hemijska stabilnost određuje pomoću RP-HPLC i CE-HPLC. Slika 1 pokazuje turbidimetrijska merenja dobijena nakon čuvanja 2 godine na 5°C. Rezultati dati na slici 1 pokazuju da su sve formulacije u okviru specifikacija u toku 2 godine čuvanja. Isto tako, rezultati pokazuju daje turbidimetrijski odgovor aproksimativno isti za sve četiri probne formulacije, što ukazuje da fizička stabilnost PTH nije poboljšana izmenom formulacije i/i li pH.

[0074] Vizuelni zaključci dobijeni nakon čuvanja 2 godine na 5°C su određivani na 5°C i nisu uočene razlike između formulacija. Kao i kod turbidimetrijskih merenja, ovi rezultati takođe ukazuju da fizička stabilnost nije poboljšana kada se menjaju formulacija i/ili pH.

[0075]Slike 2 i 3 pokazuju rezultate dobijene za RP-HPLC i CE-HPLC nakon 2 godine čuvanja na 5°C. Na slikama 2 i 3 rezultati dobijeni pomoću HPLC generalno pokazuju daje najveći % glavnog pika za PTH uočen za formulaciju sa metioninom i Poloxamerom 407 na pH5.5.

[0076]Nakon 2 godine čuvanja na 5°C, RP-HPLC rezultati pokazuju da su % glavnog pika PTH za formulaciju sa metioninom i Poloxamerom 407, pH 5.5 u odnosu na referencu 97.2% i 88.3%, tim redom. Za CE-HPLC rezultate nakon 18 meseci čuvanja dve formulacije su 95. 5% i 94. 6%, tim redom. Ovi rezultati ukazuju daje poboljšanje hemijske stabilnosti PTH značajno sa RP-HPLC postupkom, dok je malo poboljšanje uočeno sa CE-HPLC postupkom. Zbog dodavanja metionina, takođe je očekivano da poboljšanje bude mnogo više izraženo u RP-HPLC rezultatima.

[0077]RP-HPLC rezultati takođe pokazuju daje formulacija koja sadrži metionin i Poloxamer 407 na pH 5.5 unutar specifikacija nakon 2 godine čuvanja (% glavnog pika za PTH > 95%). Po CE-HPLC rezultatima formulacija je unutar specifikacija nakon 18 meseci čuvanja (% glavnog pika PTH > 95%).

[0078]Iz turbidimetrijskih merenja i vizuelnih određivanja može da se zaključi da fizička stabilnost PTH nije poboljšana dodavanjem metionina i Poloxamera 407 i/ili promenom pH.

Međutim, u pogledu hemijske stabilnosti PTH, može da se zaključi daje značajno poboljšana kada se doda 2mg/ml metionina i 0.3mg/ml Poloxamera 407 i održavanjem pH na 5.5. Pored toga, može da se zaključi daje tečna formulacija koja uključuje 2mg/ml metionina i 0.3mg/ml Poloxamera 407 na pH 5.5 stabilna i u okviru specifikacija (% glavnog pika PTH > 95%) u toku najmanje 18 meseci na 5°C.

REFERENCE

[0079]

US 5,208,041

US 5,223,407

US 5,646,015

US 5,629,205 EP-B-0383751 US 5,496,801

US 2005/0209144 A1

WO 2005/027978

EP 1 598 074 A1

WO 2004/007520 A2

WO 2005/028516 A2

WO 2006/017852 A2

Claims (19)

1. Farmaceutska kompozicija, naznačena time što kada se rastvori u odgovarajućem vehikulumu, uključuje PTH u koncentraciji od 1 mg/ml do 10 mg/ml, metionin u koncentraciji od 1 mg/ml do 10 mg/ml, najmanje jedan Poloxamer surfaktant u koncentraciji od 0.02 mg/ml do 1 mg/ml, i fiziološki prihvatljivo sredstvo za puferovanje koje održava pH formulacije na pH od 5 do 6.5.

2. Kompozicija u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačena time što je kompozicija u obliku formulacije stabilnog rastvora.

3. Kompozicija u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili 2, naznačena time što je najmanje jedan Poloxamer surfaktant izabran od Poloxamera 188, Poloxamera 407, Poloxamera 237, Poloxamera 338 i Poloxamera 124.

4. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što je PTH izabran od hPTH(l-84) i molekule PTH ne-humanih sisara, kao i biološki aktivnih varijanti i homologa hPTH(l-84) i molekule PTH ne-humanih sisara.

5. Kompozicija u skladu sa patentnim zahtevom 4, naznačena time što kompozicija uključuje biološki aktivni homolog hPTH(l-84) koji ima sekvencu identičnu sa hPTH(l-84) od najmanje 85%, preferirano pri čemu biološki aktivan homolog ima identičnu sekvencu sa hPTH(l-84) od najmanje 95%, još poželjnije kada biološki aktivni homolog ima identičnu sekvencu sa hPTH(l-84) od najmanje 98%.

6. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 5, naznačena time što uključuje PTH u koncentraciji od 1.4 mg/ml, metionin u koncentraciji od 2 mg/ml, poloksamer u koncentraciji od 0.3 mg/ml i fiziološki prihvatljivo sredstvo za puferovanje koje održava pH formulacije na pH od 5.5.

7. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što kompozicija dalje uključuje faramaceutski prihvatljiv rastvarač.

8. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što je fiziološki prihvatljivo sredstvo za puferovanje izabrano od citratnih, acetatnih, fosfatnih, TRIS (Trometamin), argininatnih i karbonatnih pufera.

9. Kompozicija u skladu sa patentnim zahtevom 8, naznačena time što je fiziološki prihvatljivo sredstvo za puferovanje ne-isparljivo sredstvo za puferovanje.

10. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što dalje uključuje najmanje jedan modifikator toničnosti, pri čemu je preferirano najmanje jedan modifikator toničnosti izabran od natrijum hlorida, saharoze i poliol ekscipijenta.

11. Kompozicija u skladu sa patentnim zahtevom 10, naznačena time što je poliol ekscipijent izabran od sorbitola, glicerola i manitola.

12. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 10 do 11, naznačena time što je najmanje jedan modifikator toničnosti ko-liofiliziran sa ne-isparljivim sredstvom za puferovanje.

13. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što dalje uključuje najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv konzervans, pri čemu je preferirano najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv konzervans izabran od krezola, benzil alkohola i EDTA.

14. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što dalje uključuje najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv stabilizator, pri čemu je preferirano najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv stabilizator izabran od ksilitola, lizina, histidina i mikrokristalne celuloze.

15. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što je navedena kompozicija pogodna za primenu putem injekcije.

16. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što je kompozicija liofilizirana.

17. Postupak za izradu farmaceutske kompozicije, naznačen time što uključuje faze rekonstitucije kompozicije u skladu sa patentnim zahtevom 16 u rastvor, sa farmaceutski prihvatljivim nosačem.

18. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 16, naznačena time što je za upotrebu kao medikament.

19. Kompozicija u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 16, naznačena time što je za upotrebu kao medikament za tretman ili prevenciju osteoporoze.