RS50628B - Derivati(poli)aminoacetamida epipodofilotoksina, postupak za njihovo dobijanje i njihove primene u terapeutici kao sredstva protiv kancera - Google Patents

Abstract

Jedinjenja opšte formule (I) u kojojR1 i R2 predstavljaju, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili metil radikal; R3 i A zajedno formiraju C3-C8 prsteniliR3 predstavlja radikal odabran iz grupe koja sadrži atom vodonika, C1-C4 alkil radikal i benzil radikal, a A predstavlja radikal odabran iz grupe koja sadrži atom vodonika, C1-C4 alkil radikal, benzil radikal i grupu formule (II) u kojoja varira od 2 do 5,R4 i B zajedno formiraju C3-C8 prsten iliR4 predstavlja radikal odabran iz grupe koja sadrži atom vodonika, C1-C4 alkil radikal i benzil radikal, gde R3 i R4 mogu da budu spojeni alkilenskim lancem koji sadrži 2 ili 3 atoma ugljenika, a B predstavlja radikal odabran iz grupe koja sadrži:- atom vodonika,- C1-C4 alkil radikal,- benzil radikal,- grupu formule (III)u kojoj b i c mogu da variraju, nezavisno jedan od drugog, od 2 do 5, a R5 do R7 predstavljaju, nezavisno jedan od drugog, radikal odabran iz grupe koja sadrži atom vodonika, C1-C4 alkil radikal i benzil radikal, gde R4 i R5 i/ili R5 i R6 i/ili R6 i R7 mogu da budu spojeni alkilenskim lancem koji sadrži 2 ili 3 atoma ugljenika;- i grupu formule (IV)u kojoj c može da varira od 2 do 5, a R8 i R9 predstavljaju, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili C1-C5 alkil radikal, gde R4 i R8 mogu da budu spojeni alkilenskim lancem koji sadrži 2 ili 3 atoma ugljenika, ili R8 i R9 zajedno formiraju C3-C8 prsten; ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, naročito njihove adicione soli, sa neorganskim ili organskim kiselinama. Prijava sadrži još 13 patentnih zahteva.

Description

DERIVATI(POLI)AMINOACETAMIDA

EPIPODOFILOTOKSINA, POSTUPAK

ZA NJIHOVO DOBIJANJE I NJIHOVE

PRIMENE U TERAPEUTICI KAO

SREDSTVA PROTIV KANCERA

[00011Ovaj pronalazak se odnosi na nove derivate podofilotoksina, supstituisane na poziciji 4 opciono supstituisanim (poli)aminoalkilammoacetamidnim lancem, na postupak za njihovo dobijanje i na njihovu upotrebu kao lekova, posebno kao agenasa protiv kancera.

[0002]Jedinjenja iz pronalaska čine derivati podofilotoksina, prirodnog lignana poznatog zbog svog dejstva u lečenju kancera. Drugi sintetički derivati, kao što je etopozid i tenipozid, već se koriste kao hemoterapijska sredstva u lečenju naročito plućnog kancera malih ćelija (small cell lung cancer). Ova različita jedinjenja deluju inhibiranjem katalitičke aktivnosti topoizomeraze n.

[0003] Acetamidna supstitucija na p poziciji na glavnoj osi podofilotoksina tako predstavlja spermin ili spermidin acetamid ih, uopštenije, (poU)anuno-alkilacetamidnu jedinicu.

[0004]Derivati 4'-đemetilepipodofilotoksina su poznati kao inhibitori topoizomeraze n. Pokazana su njihova citotoksična i antitumorska dejstva, naročito sa etopozidom, TOP 53 (Drugs of the Future, 1996,21,1136), GL 331 (Medicinal Research Reviews, 1997,17,367) i NK 611 (Cancer Chemother. Pharmaco!., 1996, 38, 217 i 541). Opisana su jedinjenja sa amino lancima benzilaminskog tipa, direktno vezana na 4p -poziciji podofilotoksina (J. Med. Chem., 1991, 34, 3346). Patentna prijava FR 2 810 321 opisuje podofilotoksin karbamatne ili tiokarbamatne derivate, korisne u lečenju kancera. Amidna jedinjenja na 4f5 -poziciji su takođe opisana (US 6 566 393; Acta Pharmacetica Sinica (Yaoxue Xuebao), 1993, 28, 422; ActaChem. Scand., 1993,47, 1190).

[0005]Patent EP 0 876 374 opisuje proces za demetilaciju podofilotoksina da bi se dobio 4'-demetilepipodofilotoksin, koji je sintetički intermedijer u dobijanju etopozida i tenipozida.

[0006]Međunarodna prijava WO 03/082876 opisuje analoge 4p -l"-[{2"-supstituisan benzoil}anilin] podofilotoksina koji ispoljavaju antikanceroznu aktivnost.

[0007]Potreba da postoje na raspolaganju efektivnija lečenja podstiče traganje za novim molekulima koji imaju drukčije mehanizme delovanja, koji onda mogu da ciljaju tipove tumora koji se sada slabo Ieče ili se ne leče i da nemaju probleme otpornosti. Dostupnost ovih novih proizvoda takođe omogućuje da se naprave protokoli sa paralelnim terapijama koji su efektivniji u odnosu na određene tumore.

[0008]Mnogi derivati etopozida su već opisani u prethodnim stručnim dokumentima, kao Sto je WO 2004/000859, US 5 332 811 i JP 630 23 884.

[0009]Dalje, mogu se citirati Zhang, Fu-Min et al ("Svnthesis and anticancer activitv of new derivatives of 4'-demethylepopodo-phyllotoxin") i Ma Weiyong ("Svnthesis and antitumor activity of 4-[(2S)-carbobenzyloxyaminoacyl] aniino-4-deoxy-4'-demethyle-popodophyllotoxins", Cbinese Journal of Medicinal Chemistry, vol. 5., n° 3, 1995, pp 169-175) koji takođe opisuju derivate etopozida.

[0010]Nova jedinjenja iz ovog pronalaska omogućuju da se odgovori na ovaj problem.

[0011]Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenja opšte formule (I)

u kojoj

Rii R2predstavljaju, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ih metil radikal;

R3 i A zajedno formiraju C3-C8prsten

ili

R3 predstavlja radikal odabran iz grupe koja sadrži atom vodonika, C1-C4alkil radikal i benzil radikal, a A predstavlja radikal odabran iz grupe koja sadrži atom vodonika, C1-C4alkil radikal, benzil radikal i grupu formule (H)

u kojoj

a varira od 2 do 5,

R4 i B zajedno formiraju C3-C« prsten

ili

R4 predstavlja radikal odabran iz grupe koja sadrži atom vodonika, C1-C4alkil radikal i benzil radikal, gde R3 i R4 mogu da budu spojeni alkilenskim lancem koji sadrži 2 ili 3 atoma ugljenika, a B predstavlja radikal odabran iz grupe koja sadrži:

- atom vodonika,

- C1-C4 alkil radikal,

- benzil radikal,

- grupu formule (IH)

u kojoj b i c mogu da variraju, nezavisno jedan od drugog, od 2 do 5, a R5 do R7 predstavljaju, nezavisno jedan od drugog, radikal odabran iz grupe koja sadrži atom vodonika, C1-C4alkil radikal i benzil radikal, gde R4 i R5 i/ili R5 i R6 i/ili R6 i R7 mogu da budu spojeni alkilenskim lancem koji sadrži 2 ili 3 atoma ugljenika;

- i grupu formule (IV)

u kojoj c može da varira od 2 do 5, a R8 i R9 predstavljaju, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili C1-C5alkil radikal, gde R4 i R8 mogu da budu spojeni alkilenskim lancem koji sadrži 2 ili 3 atoma ugljenika, ili R8 i R9 zajedno formiraju C3-C8prsten;

ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, naročito njihove adicione soli, sa neorganskim ili organskim kiselinama.

[0012] U kontekstu ovog pronalaska, bolje je da je C3-C8prsten alifatičan prsten, koji može da sadrži jedan ili više heteroatoma, naročito kiseonik.

[0013] Prema jednoj poželjnoj alternativnoj formi iz pronalaska, u formuli (I), R3 do R9 predstavljaju, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili C1-C4alkil radikal, poželjno atom vodonika ih metil radikal.

[0014] Jedinjenja koja su naročito poželjna u kontekstu ovog pronalaska su ona u kojima R3 predstavlja atom vodonika ili metil radikal, a A predstavlja atom vodonika, metil radikal ili grupu formule (H), u kojoj R4 predstavlja atom vodonika, metil radikal ili etil radikal, a B predstavlja radikal odabran iz grupe koju čine:

- atom vodonika,

- metil radikal,

- etil radikal,

- grupa formule (III) u kojoj R5, R6 i R7 predstavljaju atom vodonika, CrC4alkil radikal ili benzil radikal, - grupa formule (IV) u kojoj R8 i R9, koji su identični, predstavljaju atom vodonika ili metil radikal.

[0015] Poželjna jedinjenja prema ovom pronalasku su odabrana među sledećim jedinjenjima: 2-(2-dimetilammoetilamino)-N-[9-(4-M heksahidrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-5-il]acetamid

N-[9-(4-Wob:oksi-3,5-to nafto[2,3-d][l,3]đioksol-5-il]-2-(2-(m^

2~[(2-đimetilaminoetil)metilamino^ 5,5a,6,8,8a,9-heksaMo!roruro[3\4^6,7]nafto[2,3-d]tl,3]dioksol-5-il]acetam 2-dimetilamino-N-[9-(4-M&^ hck^drorurot3%4^6J]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-5-il]ac6tamid N-[9-(4-hi&oksi-3,5-dimetoksv^ ' ,4' :6,7] nafto[2,3-d] [ 1,3]dioksol-5-il]-2-(piperidin-1 -il)acetamid

2-benzilammo-N-[9-(4-M&ok5i^^ heksamdrofuro[3 ',4' :6,7]nafto[2,3-d][ 1,3]dioksol-5-il]acetamid N-[9-(4-hioVolcsi-3,5-dimetokBifem^

[3%4\-6J]nafto[2,3-d][13]diolcsol-5-U]-2-(piperazm-141)acetamid 2-(4-benzilpiperazm-l-il)-N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifeml)-8-okso-5,5a,6,8,8a, heksaMdrofuro[3\4^6J]nafto[2,3-d][l,3]dioksoI-5-il]acetarnid 2-etilamino-N-[9-(4-Mdroksi-3,5-dimetoksifeml)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksaM t3\4^6,7]natfo[23-d][13]dioksoI-5-il]acetamid

N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksife [3\4^6J]nafto[23^][13]dioksol-541]-2-(propilamino)acetaniid 2-butilarmno-N-.[9-(4-Mdroksi-3,5-dimetoksiferul)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9 [3 ',4' :6,7]nafto[2,3-d][l ,3]dioksol-5-il]acetamid

2-(2-dieulammoetilammo)-N-^ heksahidrofuro[3 ',4' :6,7]nafto[2,3-d][ 1,3]dioksol-5-il]acetamid 2-(2-điehlarrunopropilammo)-N-[9^ heksahidrofuro[3 ',4' :6,7]nafto[2,3-đ][l ,3]dioksol-5-il]acetamid 2-arruno-N-[9-(4-m^oksi-3,5-dimetoksifenil)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidror^

[3'>4,:6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-5-il]acetamid

2-(2-aminoetilarriixio)-N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifenil)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahickofuro[3',4,:6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-5-iI]acetarnid

2-(3-arrinopropilamino)-N-[9-(4-hiđro^ heksahidrofuro[3 ',4' :6,7]nafto[2,3-d][ 1,3]dioksoI-5-il]acetamid

2-(4-armnobutilarmno)-N-[9-(4-m heksahidrokro[3' ,4' :6,7]natfo[2,3-d] [ 1,3]dioksol-5-il]acetamid

2-{3-[4-(3-ammopropilammo)butilarmno]propilarr^ 8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksaMdrofuro[3\4^6)7]natfo[2,3-d][l,3]dioksol-5-iy 2-{3-[4-(3-ammopropilanuno)butilarruno]propilamm 8-okso-5,5aSA8a,9-heksamdrofuro[3\^^

2-{3-[4-(3-anunopropilammo)butilarmno]propilamm 5,5a,6,8,8a>heksamdrofuro[3\4':6/^

2-(4-aminobutilammo)-N-[9-(3>4-dihidroksi-5-metoksiferul^^ heksahidrofuro[3' ,4' :6,7]nafto[2,3-d] [ 1,3]dioksol-5-il]acetamid

2-[3-(4-arrunobutilardno)propilamino]-N-[9-(4-rddroksi-3,5-dm 5,5a,6,8,8a,9-heksarjidrofuro[3\4^6J]nafto[23-d][l,3]dioksol-5-il]acetam^

2-[4-(3-aminopropilamino)butilamm^ 5,5a,6)8,8a)9-heksam^oruro[3\4^6J]natfo[2I3-d][l,3]dioksol-5-il]acetarru 2-[3-(3-arrunopropilammo)propilarm^ 5,5a,6,8,8a,9-heksarudroruro[3\4^6J]nafto[23-d][l,3]dio]£sol-5-il]acetar^

2-[4-(4-aminobuularrimo)buti^ 5,5a,6,8,8a,9-heksaWdrofu^

2-{3-[3<3-ammopropilarrđno)proptt fenil)-8-okso-5,5aA8,8a,9-heksaW^

2-{4-[4-(4-ammobutilammo)bunlammo]butilaimno}-N-[9-(4-mdroksi-3,5-dim okso-5,5aA8^a>heksahiđrofuro^4,:6J]M^

2-{4-[4-(4-ammobutilammo)butilarruno]butilairuno}-N-[9-(4-W okso-5,5a,6,83a,9-heksahidrofaro[3\4':6J]nafto[2(3-d][l,3]dioksol-5-il]acetamid 2-[4-(4-aminobutilarnino)butilamino]-N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifemI)-8-ok 5,5aA8,8a,9-heksamdrofuro[3\4^6J]na^

2-(5-aminopentilammo)-N-[9-(4-hiđroksi-3,5-dr^^ heksaM<kofuro[3\4^6 J]naft

i njihove adicione soli sa neorganskim ih organskim kiselinama.

[0016] Preciznije, poželjna jedinjenja iz pronalaska su odabrana iz grupe koju čine: 2-[(2-dimenlarmnoetilammo]-N-[9-(4-bjdroksi-3,5-dimetoksifem heksahidrofuro[3',4':6,7]nafto[2J3-d][l,3]dioksol-5-il]acetamid

2-dimetilarmno-N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifenil)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3 ',4' :6,7]nafto[2,3-d][ 1,3]dioksol-5-il]acetamid

2-(4-arnmobutilammo)-N-[9-(4-hicfroksi-3,5-dimetoksifenil)-8-okso-5,5a,6>8,^ heksahidrofuro[3 ',4' :6,7]nafto[2,3-d][ 1,3]dioksol-5-il]acetamid

2- {3-[4-(3-ammopropilamino)butilammo]propilarJiino} -N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifenil)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahio^omro[3\4':67]nafto[23-d][13]dioksol-541]acetamid 2-[3-(4-aminobutilamino)propilarnmo]-N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifeml)-8-ok^^ 5,5a,6,8,8a,9-heksaMdrofuro[3%4^6,7]nafto[2)3-d][l,3]dioksol-5-il]acetamid 2-[4-(3-aminopropilammo)butilamino]-N-[9-(4-lu'droksi-3,5-dimetoksifem'l)-8-okso-5>5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3\4':6J]nafto[23-d][l,3]diokso!-5-il]acetarnid i njihove adicione soli sa neorganskim ili organskim kiselinama.

[0017] Izomeri jedinjenja prema ovom pronalasku čine integralni deo pronalaska.

[0018] Mogu se pomenuti, bez impliciranog ograničenja, među farmaceutski prihvatljivim kiselinama, hlorovodonična, bromovodonična, sumporna, fosforna, sirćetna, trifiuorosirćetna, mlečna, piruvinska, malonska, jantarna, glutama, fumarna, vinska, maleinska, limunska, askorbinska, oksalna, metansulfonska, kamforna i sulfaminska kiselina.

[0019] Jedinjenja prema ovom pronalasku ispoljavaju osobinu rastvorljivosti u vodi preko mogućnosti formiranja neorganskih ili organskih soli sa baznim azotima na bočnom lancu. Ovo predstavlja vrlo značajnu prednost u smislu davanja, formulisanja, distribucije, farmakokinetike i biodostupnosti.

[0020] Još jedan predmet ovog pronalaska je postupak za dobijanje jedinjenja prema ovorn pronalasku, koji sadrži sledeće sukcesivne faze:

a) počinje se od podofilotoksina formule (VIII) b) ako je pogodno, dobijanje demetilacijom jedinjenja formule (V)

u kome su R\i R2kao što su đefinisani ujedinjenju formule (I); onda

c) reakcija jedinjenja formule (V) ili (VIH) sa hloroacetonitrilom u kiselom medijumu, a zatim, ako je pogodno, reakcija demetilacije, da bi se dobilo jedinjenje formule (VI)

u kome su Rji R2kao što su đefinisani ujedinjenju formule (I); zatim d) reakcija jedinjenja formule (VI) sa jedinjenjem formule (VII)

u kome su R3 i A kao što su đefinisani u jedinjenju formule (I), amini, opciono prisutni u

grupi koja je zaštićena odgovarajućom zaštitnom grupom, poželjno odabrani iz grupe koju čine benzil radikal, benziloksikarbonil (Z) radikal ili terc-butiloksikarbonil (Boe) radikal, u smesi rastvarača koja sadrži polarni aprotični rastvarač, u prisustvu Lewis-ove baze.

[0021] Atomi u podofilotoksinu, koji je prirodan proizvod, su konvencionalno numerisani po sistemu različitom od onog koji je korišcen u kontekstu ovog pronalaska za derivate podofilotoksina. Prema tome, u kontekstu ovog pronalaska, jedinjenja prema ovom pronalasku (sintetički proizvodi) će biti označavana prema sistemu datom za sledeće jedinjenje formule (I):

gde je podofilotoksin označen prema sistemu konvencionalno korišćenom, datom gore za jedinjenje formule (VHJ).

[0022] Prema jednom alternativnom obliku pronalaska, jedinjenje formule (V) je dobijeno reakcijom demetilacije na podofilotoksinu. Dakle, 4'-demetilepipodofilotoksin (Va)

(korišćena je numeracija kao za podofilotoksin formule (VIII)):

je dobijen reakcijom demetilacije na podofilotoksinu sa parom reagenasa metionin (ili dimetil sulfiđ)/metansulfonska kiselina u prisustvu trifluorosirćetne kiseline ili acetona i vode, na temperaturi između -10°C i 40°C, u skladu sa postupkom opisarum u Patentu FR 2 742 439.

[0023]Takođe je moguće je dobiti, uz višak reagensa i uz dodatno vreme reakcije, đidemetilacioni proizvod, jedinjenje formule (V) u kojoj je Ri= H i R2= Me (ili R2= H i Ri= Me) (Vb) (opisano u J. Med. Chem., 1986,29,1547) i tridemetilacioni proizvod, jedinjenje formule (V) u kojoj je Ri = R2= H (Vc), što je nov proizvod.

[0024]U fazi c), jedinjenje formule (V) je podvrgnuto Ritter-ovoj reakciji sa hloroacetonitrilom u prisustvu jake kiseline, kakva je metansulfonska kiselina ili sumporna kiselina, u skladu sa postupkom poznatim stručnjaku, analogno postupku opisanom u publikaciji Acta Chem. Scand., 1993, 47, 1190. Ova reakcija daje intermedijere formule (VI), u kojoj su Rii R2kao što su đefinisani ujedinjenju formule (I).

[0025]Tokom faze c), pre reakcije jedinjenja formule (V) sa hloroacetonitrilom, mono-, di- i tridernetilacija jedinjenja (formula (Va), (Vb) i (Vc)) može da se zaštiti na njihovim fenolnim funkcionalnim grupama pomoću benziloksikarbonil grupa, da bi se sprečila sinteza nepoželjnih nuzproizvoda. Ove zaštitne grupe se zatim mogu lako skinuti na uobičajen način hidrogenolizom u prisustvu paladijuma na uglju. Međutim, direktna reakcija jedinjenja formule (V) sa hloroacetonitrilom se može sprovesti sa jedinjenjima formula (Va), (Vb) i (Vc) sa nezaštićenom fenolnom funkcionalnom grupom.

[0026]Prema još jednom alternativnom obliku iz pronalaska, podofilotoksin (VIH) se koristi direktno kao početni materijal.

[0027]Reakcija monodemetilacije se sprovodi odmah posle Ritter-ove reakcije, tokom faze c), da bi se dobio derivat formule (VI) u kojoj je Rj= R2= Me (Via). Slično, takođe je moguće dobiti, uz višak reagensa i uz dodatno vreme reakcije, đidemetilacioni proizvod, jedinjenje formule (VI) u kojoj je Ri= H i R2= Me (ili R2= H i Ri= Me) (VIb) i tridemetilacioni proizvod, jedinjenje formule (VI) u kojoj je Ri = R2= H (Vic).

[0028] Poželjno je da se reakcija u fazi d) sprovodi na sobnoj temperaturi u polarnom aprotičnom rastvaraču, kao što je smesa acetonitrila i DMF, u prisustvu baze, kao što je trietilamin i kalijum jodida. Kalij um jodid omogućava da se supstituiše hlor prisutan u jedinjenju formule (VI) jodom, zbog bolje reaktivnosti.

[0029]U formuli (VIII), kao primeri odgovarajućih zaštitnih grupa za amino funkcionalne grupe, mogu se posebno spomenuti terc-butiloksikarbonil (BOC) i benziloksikarbonil (Z) grupa. Zaštita arninske funkcionalne grupe omogućava da se izbegne sinteza nepoželjnih nuzproizvoda, na taj način što postoji samo jedno reaktivno mesto tokom reakcije kuplovanja.

[0030]Jedinjenja formule (VII) se mogu dobiti u skladu sa skupom selektivnih zaštita zaštitnim grupama za amine, na primer BOC ili Z, kao što su one navedene u Protective Groups in Organic Svnthesis (Theodora W. Greene, 2nd Ed,, John Wiley and Sons, 1991) ili u Svnthesis, 2002, 15, 2195; Buli. Chem. Soc. Jpn., 1998, 71, 699; Tet. Lett, 1998, 39, 439; Tet. Lett., 2001,42,2709; OPPI, 1994,26, 599; Svnthesis, 1994, 37; J. Org. Chem., 1998, 63, 9723; Tet. Lett., 1994, 35, 2057 i 2061. Ove publikacije opisuju dobijanje različitih arnina sa korišćenim zaštitaim grupama. Stručnjak može da radi po analogiji.

[0031]Ako je pogodno, završna faza postupka prema ovom pronalasku se sastoji od skidanja zaštite sa arninske funkcionalne grupe zaštićene odgovarajućom grupom.

[0032]Jedinjenja iz ovog pronalaska imaju hiralne centre kao rezultat prirodnog porekla podofilotoksina. U jedinjenju formule (V), atomi vodonika na 5-, 5a-, 8a- i 9-pozicijama imaju sledeće pozicije: H5 a, H5a a, H8a P, H9 p. U jedinjenju formule (VI), poželjna konfiguracija asimetričnih ugljenika je sledeća: 5S, 5aS, 8aS, 9R.

[0033]Ovaj pronalazak se takođe odnosi na intermedijemo jedinjenje formule (V) u kojoj Ri, R2i R3predstavljaju atom vodonika.

[0034] Još jedan predmet ovog pronalaska su, kao lekovi, jedinjenja formule (I) prema ovom pronalasku.

[0035] Jedinjenja iz ovog pronalaska imaju strukturu epipodofilotoksina supstituisanog na poziciji 4 acetamidnom grupom, koja i sama može po želji biti supstituisana aminima ili poliaminima.

[0036]Opisana su jedinjenja koja imaju poliaminski lanac nakalemljen na interkalacionu jedinicu DNK akridinskog tipa (J. Org. Chem., 2000, 65, 5590; J. Med. Chem., 2002, 45, 5098) ili alkilacionu jedinicu, kao što je hloroambucil (J. Chem. Soc. Chem. Commun., 1992, 298).

[0037]Jedinjenja iz ovog pronalaska, koja su kvalitativno i kvantitativno različita od ostalih poznatih jedinjenja protiv kancera, uključujući etopozid, imaju osobinu da su agensi koji imaju DNK kao metu i uspevaju daje oštete.

[0038]Ćelija normalno reaguje, suočena sa oštećenjem DNK, tako što pokreće sisteme za popravku (repair) koji zatim osiguravaju da ona ostane intaktna. Pomoću jedinjenja iz pronalaska, ovaj proces popravke nije mnogo efektivan i ćelija se zatim razvija ka apoptozi. Ovaj fenomen kidanja DNK se vidi i meri fluorescencijom u kometa testu (videti niže).

[0039]Jedinjenja iz ovog pronalaska imaju citotoksične osobinein vitroi antitumorske osobinein vivou nekoliko mišjih modela.

[0040]Jedinjenja iz ovog pronalaska ispoljavaju izvanredno i začuđujuće antitumorsko dejstvo, zato što imaju mogućnost da izazovu značajnu i čak potpunu regresiju tumora bez izazivanja bočnih efekata, pošto pređe u čvrst oblik gubitkom težine. Ovo uliva nadu pacijentu o efektivnoj aktivnosti prema nečvrstim i čvrstim tumorima, kakvi su melanomi, kolorektalni kanceri, kanceri pluća, prostate, bešike, dojke, materice, stomaka, pankreasa ili jetre, kanceri jajnika, leukemije, posebno limfomi i mijelomi, ENT kanceri i kanceri mozga.

[0041]Poseban predmet ovog pronalaska je farmaceutska kompozicija, Čija je odlika da sadrži bar jedno jedinjenje formule (I) i ekscipijent pogodan za davanje oralnim ili parenteralnim putem.

[0042]Farmaceutske kompozicije prema ovom pronalasku, koje sadrže bar jedno jedinjenje formule (I) i ekscipijent pogodan za oralno ili parenteralno davanje, mogu da se daju sami ili u kombinaciji sa drugim agensima protiv kancera. Mogu da se prave na način pogodan za takva davanja jednom ili više puta na dan, u vidu injekcije, ili u vidu kapsula, uključujući kapsule od tvrdog želatina, ili tableta, u dozi od 0,5 to 300 mg/m<2>putem injekcije i od 1 do 100 mg/m<2>oralnim putem.

[0043]Konačno, ovaj pronalazak se odnosi na upotrebu jedinjenja formule (I) prema ovom pronalasku u dobijanju leka namenjenog za antikancerozno lečenje nečvrstih tumora i čvrstih tumora, kakvi su melanomi, kolorektalni kanceri, kanceri pluća, prostate, bešike, dojke, materice, stomaka, pankreasa ili jetre, kanceri jajnika, leukemije, posebno limfomi i mijelomi, ENT kanceri i kanceri mozga

(0044]Prema jednom poželjnom alternativnom obliku pronalaska, lek sadrži:

a) jedinjenje formule (I) i

b) agens protiv kancera,

kao kombinaciju proizvoda za upotrebu koja je simultana, odvojena ili produžena u vremenu

u lečenju kancera i/ili tumora.

]0045]Konkretno, antikancerozni agens je odabran iz grupe koju čine derivati platine, taksani, vinke i 5-FU.

[0046]U kontekstu ovog pronalaska, lek je takođe namenjen za lečenje tumora koji su rezistentni na uobičajene terapije.

[0047] Sledeći primeri omogućuju ilustrovanje pronalaska i nisu ograničavajući. U protonskom NMR spektru iz sledećih primera, numeracija korišćena za obeležavanje protona je ona u upotrebi i prikazana je na strukturi podofilotoksina formule (VIII). Nasuprot tome, numeracija korišćena za obeležavanje sintetisanih proizvoda je ona koja je korišćena i definisana za jedinjenje formule (I).

Primer1:Dobijanje jedinjenja:

[0048]

<*>5-(3,4-dihidroksi-5-metoksifenil)-9-hidroksi-5,8,8a,9-tetrahidro-5aH-

furo[3',4':6,7]Bafto[23-d][l^]dioksol-6-oni

<*>9-hidroksi-5-(3,4,5-trihidroksifenU)-5,8,8a,9-tetrahidro-5aH-furo[3',4,:6,7I

nafto[2,3-d]{l,3]dioksol-6-on

10 g (24 mmola) podofilotoksina je rastvoreno u 60 ml trifluorosirćetne kiseline. 5,4 ml (72 mmola) đimetil sulfida i 47 ml (72 mmola) metansulfonske kiseline je sukcesivno dodato. Mešanje je vršeno 9 sati, ponovo je dodato 5,4 ml (72 mmola) dimetil sulfida i mešanje je nastavljeno 9 sati. Međijum je brzo stavljen na led (600 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3 x 300 ml). Organske faze su oprane vođom, a zatim rastvorom NaHC03do neutralnosti. Posle sušenja na natrijum sulfatu, filtriranja i uparavanja, dobijeno je 6,3 g sirovog proizvoda demetilacije. Fleš hromatografija na silika gelu (eluiranje: CH2Cl2/aceton 9/1) omogućava da se izoluje 550 mg 5-(4-WđVoksi-3,5-dimetoksifeml)-9-to^ furo[3',4':6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-6-ona, odnosno, 4'-demetilepipodofilotoksina formule (Va). Takođe je izolovano 1,10 g 5-(3,4-diMđroksi-5-metoksifenil)-9-hidroksi-5,8,8a,9-tetramdro-5a//-furo[3',4':6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-6-ona (analizom: C2OH,8080,15H2O; izračunato: C% 61,74, H% 4,74; nađeno: C% 61,67, H% 4,68), a onda 1,9 g 9-bidroksi-5-(3,4,5-trMdroksifeml)-5^ dioksol-6-ona. Ovo drugo jedinjenje ima protonski NMR spektar sa sledećim karakteristikama: IH NMR ( d^-DMSO) 5 8,65 (m, 2H), 7,95 (m, IH), 6,71 (s, IH, H5), 6,47 (s, IH, H8), 5,98 (d, 2H, J = 2 Hz, OCH20), 5,93 (s, 2H, H2-, H6>), 4,68 (d, IH, J = 3,2 Hz, H,), 4,34 (t, IH, J = 8 Hz, HUa), 4,29 (d, IH, J = 5,2 Hz, H,), 4,16 (dd, IH, J = 8 Hz, J' = 10 Hz, HUb), 3,17 (dd, IH, J = 5,2 Hz i J' = 14 Hz, H2), 2,76 (m, 1H, H3).

Primer 2: Dobijanje benzil estra karbonske kiseline 2-benziloksikarboniloksi-5-(9-hidroksi-6-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksoI -5-il)-3-metoksifenil estra

[0049] 2,65 ml (18,5 mmola) benzil hloroformata je uvedeno, na 0°C u azotu, uz mešanje, u rastvor 2,4 g (6,2 mmola) 5-(3,4-dilu^oksi-5-metoIcsifeniI)-9-hiclroksi-5,8,8a,9-terrarudro-5aH-furo[3',4':6,7]naflo[2,3-d][l,3]dioksol-6-ona, dobijenog kao u Primeru 1, u 1/1 smesi CH2CI2i THF u prisustvu 4,3 ml (30 mmola) trietilamina. Reakcija je nastavljena 1 sat, zatim je medij um sipan na vodu i organske faze su odvojene taloženjem, osušene na natrijum sulfatu i uparene. Dobijeno dikarbonatno jedinjenje je iskristalisano iz izopropil etra (3,1 g, prinos 76%). TLC Si02(CH2Cl2/MeOH 95/5) Rf = 0,6; IH NMR (d6-DMSO) 5 7,36 (m, 10H, Ar), 5,22 (s, 2H, benzil CH2), 5,17 (s, 2H, benzil CH2).

Primer 3: Dobijanje benzil estra karbonske kiseline 2,3-bis(benziloksikarboniloksi)-5-(9-hidroksi-6-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro [3',4':6,7]nafto[2^-d][l^]dioksoI-5-il)fenil estra

[0050] Istom reakcijom kao u Primeru 2, ali korišćenjem 5-(3,4,5-triWdroksifenil)-9-hidroksi-5,8,8a,9-tetrahidro-5aH-furo[3',4':6,7]natfo[2,3-d][l,3]dioksol-6-ona umesto 5-(3,4-diluaroksi-S-metoksifenilJ^-hickoksi-S.S.Sa^^etramdro-SaH-furotS'^ [2,3-d][l,3]dioksol-6-ona, dobijen je trikarbonatni derivat sa prinosom od 96%. TLC Si02

(CH2Cl2/MeOH 95/5) Rf= 0,5; IH NMR (d6-DMSO) 5 7,38 (m, 10H, Ar), 7,31 (m, 5H, Ar), 5,21 (s, 4H, benzil CH2), 5,17 (s, 2H, benzil CH2).

Primer 4: Dobijanje 2-hloro-N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifenil)-8-okso-5^a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3',4':6,7Jnafto[2,3-d[l,3]dioksoI-5-il]acetamida

[0051] Ovo jedinjenje se može dobiti na dva različita načina. a) 30 g 4'-demetilepipodofilotoksina formule (Va) je dodato u 47,4 ml hloroacetonitrila, a zatim je, uz mešanje, dodato 3 kapi koncentrovane sumporne kiseline. Mešanje je nastavljeno na sobnoj temperaturi 3 sata. 300 ml izopropanola je zatim dodato uz mešanje. Dobijen precipitat je odfiltriran i opran pomoću 200 ml izopropanola. Precipitat je ispran vodom do neutralnog pH, a zatim etil etrom. Posle sušenja pod vakuumom, dobijeno je 34,2 g (prinos 96%) belog taloga. Tačka topljenja: 240°C; IH NMR (d6-DMSO) 6 8,65 (d, IH, J = 7 Hz, NH), 8,26 (s, IH, 4'-OH), 6,78 (s, IH, H5), 6,54 (s, IH, Hg), 6,24 (s, 2H, Hr, Hfi-), 5,99 (d, 2H, J = 11,3 Hz, OCH20), 5,17(dd, IH, J = 4,56 i 7 Hz, H,), 4,51 (d, IH, J = 5,2 Hz, H,), 4,29(t, IH, J = 8 Hz, H,u), 4,10 (s, 2H, CH2Cl), 3,78 (dd, IH, J = 8 Hz i 10 Hz, H„b), 3,63 (s, 6H, 2 OCH3), 3,15 (dd, IH, J = 5,2 i 14 Hz, H2), 3,97 (m, IH, H3).

b) 0,2 ml koncentrovane sumporne kiseline je dodato u 1 g podofilotoksina mešanog u suspenziji u 2 ml hloroacetonitrila na sobnoj temperaturi. Rastvor postaje homogen. Mešanje

je nastavljeno na sobnoj temperaturi 2 h, a zatim je reakcioni medijum sipan na led i ekstrahovan etil acetatom. Posle odvajanja taloženjem, sušenja na natrijum sulfatu i filtriranja, dobijeno je 840 mg svetio braon kristala, koji odgovaraju 2-hloro-N-[9-(3,4,5-trimetoksifeml)-8-okso-5,55a,6,8,8a,9-heksaliidrofuro [3',4'.6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-5-il]acetamidu. Tačka topljenja = 145°C. TLC Si02(CH2Cl2/MeOH95/5,Rf = 0,5); IH NMR (d6-DMSO) 5 4,1 (s, 2H, CH2C1).

Ovo jedinjenje je demetilovano prema uslovima iz Primera 1 da bi se dobilo isto jedinjenje kao gore u Primeru 4a), sa prinosom od 20% posle uobičajene hromatografije.

Primer 5: Dobijanje 2-hloro-N-l9-(3,4-dihidroksi-5-metoksifenil)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuroP'^'zejTlnaftoPjS-dlfl^Jdioksol-S-ilJacetamida

[0052] Po istoj proceduri kao u Primeru 4a), ali sa 5-(3,4-dihidroksi-5-metoksifenil)-9-hidroksi-5,8,8a,9-tetraWdro-5aH-furo[3',4':6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-6-onom dobijenim kao u Primeru 1, izolovan je bež talog posle fleš hromatografije na Si02(eluiranje: CH2Cl2/MeOH 98/2) sa prinosom od 28%. MS-ESI (m/z): 462,1 (MH+), 479,1 (MNH4+).

Primer6:Dobijanje benzil estra karbonske kiseline 2-benziIoksikarboniIoksi-5-I9-(2-

hloroacedlamino)-6-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3',4':6,7]natfo[2,3-d][l^]dioksol-5-il]-3-metoksifenil estra

[0053JPo istoj proceduri kao u Primeru 4a), ali korišćenjem benzil estra karbonske kiseline 2-benziloksikarboriiloksi-5-(9-hidroksi-6-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksam^ofuro-[3',4':6,7Jnafto[2,3-d][l,3]đioksol-5-il)-3-metoksifenil estra dobijenog u Primeru 2, benzil estar karbonske kiseline 2-benziloksikarbomloksi-5-[9-(2-hloroacetilamino)-6-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3\4^6,7]natfo[2,3-d][l,3]dioksol-5-il]-3-metoksifeml estra je izolovan sa prinosom od 83% u vidu bele pene. TLC Si02(CH2Cl2/MeOH 95/5, Rf = 0,63); IH NMR (d6-DMSO) 8 4,11 (s, 2H, CH2C1).

Primer7:Dobijanje 2-b.Ioro-N-[8-okso-9-(3,4,5-trib.idroksifenil)-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3',4':6,7]naftoI2^-d][l,3]dioksol-5-iI]acetamida

[0054]Po istoj proceduri kao u Primeru 4a), ali sa 5-(3,4,5-tribidroksifenil)-9-rjidroksi-5,8,8a,9-teteaWdro-5aH-furo[3',4':6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-6-onom dobijenim u Primeru 1, bež pena je izolovana posle fleš hromatografije na Si02(eluiranje: CH2Cl2/MeOH 95/5) sa prinosom od 20%. MS-ESI( m/ z) :448,0 (MH+), 465,0 (MNH4+).

Primer 8: Dobijanje benzil estra karbonske kiseline 2,3-bis(benziloksikarboniloksi)-5-[9-(2-hIoroacetilamino)-6-okso-5,5a,6,8,8a,9-beksahidrofuro[3<>>,4':6,7]nafto[2,3-

dl[l^Jdioksol-5-il]fen« estra

[0055]Po istoj proceduri kao u Primeru 4a), ali upotrebom benzil estra karbonske kiseline 2,3-bis(benziloksikarboniloksi)-5-(9-hidroksi-6-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro [3',4':6,7]nafto[2,3-đ][l,3]dioksol-5-il]fenil estra dobijenog u Primeru 3, izolovan je benzil estar karbonske kiseline 2,3-bis(benziloksikarboniloksi)-5-[9-(2-hloroacetilamino)-6-okso-5J5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d][l,3] dioksol-5-il]fenil estar.

Pobijanje krajnjih jedinjenja

Primer9:Dobijanje 2-(2-dimetilaminoetilamino)-N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifeniI)-8-

okso-5,5a,6,8,8a>9-heksahidrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-dl[l,3] dioksol-5-iIJacetamida

[0056] 0,75 ml (5,2 mmola) trietilamina, a zatim na vrh špatule kalijum jodida Kl je dodato u 1 g (2,1 mmol) jedinjenja iz Primera 4 koje je rastvoreno u 30 ml acetonitrila i 3 ml DMF. Rastvor 0,6 ml (5,2 mmola) N,N-dimetil-l,2-etanediamina u 10 ml acetonitrila je zatim dodato uz mešanje na sobnoj temperaturi. Mešanje je nastavljeno 2 dana, zatim je reakcioni medijum uparen i ostatak je pokupljen vodom (100 ml) i ekstrahovan pomoću CH2CI2(3 puta po 25 ml); posle odvajanja taloženjem, organska faza je osušena na natrijum sulfatu, profiltrirana i uparena. Ostatak je prećišćen fleš hromatografijom na Chromagel-u 60 AC silica (mreža 35-70) (eluent: C^CU/MeOH/NKtOH 90/9/1). Dobijeno je 400 mg bele pene (prinos 36%). Dihidrohlorid je precipitiran iz acetona dodatkom rastvora izopropanola zasićenog hlorovodoničnom kiselinom. Taćka topljenja = 230°C; IH NMR baza (d6-DMSO)5 8,26(m, IH, OH), 8,20 (d, IH, J = 8,3 Hz, NH amid), 6,76 (s, IH, H5), 6,53 (s, IH, Hg), 6,24 (s, 2H, H2^-), 5,99 (d, J = 11,56 Hz, OCH20), 5,20 (dd, IH, J = 8,3 i 4,7 Hz, K»), 4,50 (d, IH, J = 5,2 Hz, Hi), 4,28 (t, IH, J = 8 Hz, H!!a), 3,73 (dd, IH, J = 10,8 i 8 Hz, HUb), 3,63 (s, 6H, 2 OMe), 3,37 (m, IH, NH), 3,19 (s, 2H, CH2CO), 2,94 (m, IH, Hi), 2,50 (m, 4H, 2 CH2), 2,08 (s, 6H, 2 CH3); MS-ESI( m/ z) :528,2 (MH+).

Sledeća jedinjenja su dobijena istom reakcijom, ali sa odgovarajućim početnim materijalima: Primer 10: Dobijanje N-[9-(4-hidroksi-3^-dimetoksifenil)-8-okso-5^a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3%4':6,7]nafto[2,3-d][l^]dioksol-5-Q]-2-(2-morfoUn-4-il)etilamino)acetamida

[0057] Ovo jedinjenje je dobijeno iz jedinjenja iz Primera 4 i 2-(morfolin-4-il)etanamina.

Dihidrohlorid; taćka topljenja = 212°C; MS-ESI( m/ z) :570,2 (MH+).

Primer 11: Dobijanje 2-[(2-dimetUaminoetil)metiIamino]-N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifenil)-8-okso-53a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3%4,:6,7]nafto[2,3-d3[l,3] dioksoI-5-iljacetamida

[0058] Ovo jedinjenje je dobijeno iz jedinjenja iz Primera 4 i N,N,N-trimetil-l,2-etandiamida.

Dihidrohlorid: T. t. = 238°C

Primer 12: Dobijanje 2-dimetilamino-N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifeniI)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d] [l,3]dioksol-5-il]acetamida

[0059] Ovo jedinjenje je dobijeno iz jedinjenja iz Primera 4 i dimetilamina.

Hidrohlorid: T. t. (°C) >260°C;

Analizom: CasHa^Og HC1; izračunato: C% 57,64, H% 5,61, N% 5,38; nađeno: C% 57,47, H% 5,47, N% 5,26.

Primer 13: Dobijanje N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifenfl>8-okso-5^a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3%4\-6,7Jnafto[23-d][l,3]dioksol-5-il]-2-(piperidm-l-il)acetamida

[0060] Ovo jedinjenje je dobijeno iz jedinjenja iz Primera 4 i piperidina. Hidrohlorid: tačka topljenja = 269-270°C; analizom: C28H32N2O8HC1; izračunato: C% 59,95, H% 5,93, N% 4,99; nađeno: C% 59,57, H% 6,25, N% 4,96.

Primer 14: Dobijanje 2-benziIamioo-N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifeniI)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heluahidrofuro[3S4^6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksoI-5-ilIacetamida

[0061] Ovo jedinjenje je dobijeno iz jedinjenja iz Primera 4 i benzilamina. Hidrohlorid: tačka topljenja = 225°C

Primer 15: Dobijanje N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifenil)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3',4':6,7]nafto[2^-d][l,3]dioksol-5-il]-2-(piperazin-l-U)acetamida

[0062] Ovo jedinjenje je dobijeno iz jedinjenja iz Primera 4 i piperazina. Dihidrohlorid: tačka topljenja = 237-8°C

Primer 16: Dobijanje 2-(4-benzilpiperazin-l-U)-N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifenil>8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidroifiro[3',4':6,7]nafto[2^-d][l,3] diokso)-5-il]acetamida

[0063] Ovo jedinjenje je dobijeno iz jedmjenja iz Primera 4 i N-benzilpiperazina. Dihidrohlorid: tačka topljenja = 205°C

Primer 17: Dobijanje 2-etUamino-N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifenil)-8-okso-5^a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d][13]dioksol-5-il]acetamida

[0064] Ovo jedinjenje je dobijeno iz jedinjenja iz Primera 4 i etilamina.

Primer 18: Dobijanje N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifenil)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-5-il]-2-(propilamino)acetamida

[0065] Ovo jedinjenje je dobijeno iz jedinjenja iz Primera 4 i propilamina.

Primer 19: Dobijanje 2-butilamino-N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifenil)-8-okso-5,5af6,8,8a,9-heksahidrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-5-iI]acetamida

[0066] Ovo jedinjenje je dobijeno iz jedinjenja iz Primera 4 i butilamina.

Primer 20: Dobijanje 2-(2-đietiIarninoetilamino)-N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetok^ okso-SjSa^ASa^-heksahidrofurolS'^'rfijTlnaftoP^-dKM] dioksol-5-ilJacetamida

[0067] Ovo jedinjenje je dobijeno iz jedinjenja iz Primera 4 i N,N-dietil-l,2-etandiamina.

Primer 21: Dobijanje 2-(2-dietilaminopropilamino)-N-[9-(4-hidroksi-3,S-dimetoksifenil)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d][l,3] dioksol-5-iI]acetamida

[0068] Ovo jedinjenje je dobijeno iz jedinjenja iz Primera 4 i N,N-dieal-l,3-propanđiamina.

Primer 22: Dobijanje 2-amino-N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifenil)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofaroP'^'.'ć^JnaftoP^-dlfl^Jdioksol-S-ilJacetamida

[0069] Ovo jedinjenje je dobijeno u 2 faze iz jedinjenja dobijenog u Primeru 4. U prvoj fazi, jedinjenje iz Primera 4 je obrađeno prema postupku iz Primera 9, sa benzilaminom umesto N,N-dimetil-l,2-etandiamina. Dobijen je odgovarajući benzilamino intermedijer, odnosno, jedinjenje iz Primera 1.4 (TLC Si02CHjCVMeOH 95/5: Rf = 0,34). U drugoj fazi, ovaj intermedijer je debenzilovan: 830 mg ovog intermedijera je stavljeno, uz intenzivno mešanje, u smesu MeOH (30 ml) i THF (20 ml) sa 100 mg 10% paladijuma na uglju u atmosferi vodonika 8 sati. Katalizator je zatim profiltriran i filtrat je uparen. Eluiranje na silika koloni (CH2Cl2/MeOH/NrLtOH-90/9/l) daje 300 mg debenzilovanog jedinjenja, iskristalisanog iz AcOEt (pr. 43%). Hidrohlorid je formiran u acetonu dodatkom izopropanolnog rastvora HC1. Tačka topljenja = 236°C; MSAPCI( m/ z)457,1 (MH+).

Primer 23: Dobijanje 2-(2-aminoetilaniino)-N-[9-(4-hidroksi-3^-dimetoksifenU)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-5-il] acetamida

[0070] Ovo jedinjenje je dobijeno u 2 faze iz jedinjenja dobijenog u Primeru 4. U prvoj fazi, jedinjenje iz Primera 4 je obrađeno prema postupku iz Primera 9, sa benzil 2-aminoetilkarbamatom (Svnthesis, 2002, 15, 2195, Buli. Chem. Soc. Jpn., 1998, 71, 699) umesto N,N-dimetil-l,2-etandiamina. Dobijen je intermedijer koji ima zaštitnu N-benziloksikarbonil grupu, čiji je hidrohlorid formiran u acetonu u prisustvu izopropanol HC1 rastvora. Tačka topljenja = 178°C. MS-APCI( m/ z)634,3 (MH+). U drugoj fazi, ovaj intermedijer je obrađen, kao u Primeru 22, uz pomoć paladijuma na uglju i vodonika. Dobijen je dihidrohlorid sa prinosom od 89%. Tačka topljenja = 236°C. Analizom: C^H^NsOs 2HC1; izračunato: C% 52,46, H% 5,46, N% 7,34; nađeno: C% 52,78, H% 5,46, N% 7,14.

Primer24: Dobijanje2-(3-aminopropUamino)-N-[9-(4-hidroksi-3,5-dirnetoksifeniI)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksabidrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d][l,3] dioksol-5-iI]acetamida

[0071] Intermedijer koji ima zaštitnu N-benziloksikarbonil grupu je dobijen istim nizom reakcija kao u Primeru 22, ali korištenjem odgovarajućih početnih materijala; hidrohlorid intermedijera je formiran u acetonu i etil etru u prisustvu izopropanol HC1 rastvora Tačka topljenja = 132°C. MS-APCI(m/z)648,1 (MH+). Debenzilacija po istom postupku kao u Primeru 22 obezbeđuje dihidrohlorid. Tačka topljenja = 219°C. MS-APCI( m/ z)514,3

(MH+).

Primer 25:Dobijanje 2^4-ainmobutilaniato)-N-[9-(4-Mđroks^okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofnro[3',4' :6,7]iiafto[2,3-d] [l,3]dioksoI-5-iI] acetamida

[0072] Intermedijer koji ima zaštitnu N-benziloksikarbonil grupu je dobijen istim nizom reakcija kao u Primeru 22, ali korišćenjem benzil 4-aminobutilkarbamata, dobijenog prema Tet. Lett., 2001, 42,2709; intermedijer kristališe u baznom stanju iz etil etra. Tačka topljenja = 95-96°C. MS-APCI( m/ z)662,4 (MH+). Debenzilacija zatim obezbeđuje dihidrohlorid. Tačka topljenja = 201°C. MS-ESI( m/ z)528,2 (MH+). Hidratisan oblik je nagrađen sa 3H20. Tačka topljenja = 223°C. Analizom: C27H33N3O82HC1; izračunato: C% 54,01, H% 5,87, N% 7,00; nađeno C% 53,64, H% 5,63, N% 6,85.

Primer 26:Dobijanje 2-{3-[4-(3-anMopropilamko)-butttamokso-9-(3,4,5-trimetoksifenil)-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3',4':6,7]nafto[2r3-

d] [l,3]dioksol-5-il]acetamida

[0073] Ovo jedinjenje je dobijeno istim postupkom kao u Primeru 22, ali sa intermedijerom 2-moro-N-[9-(3,4,5-trimetoksifeml)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofljro [3\4*:6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-5-il]acetamidom, dobijenom u Primeru 4b), i sa benzil {4-[(3-ammopropiljberiziloksikarbomlarmno^ karbamatom (Tet. Lett., 1998, 39,439), u vidu bezbojnog ulja.

TLC Si02(CH2Cl2/MeOH/NH40H 95/4,5/0,5) Rf = 0,46; MS-ESI( m/ z)1058,5 (M+). Debenzilacija po istom postupku kao u Primeru 20 obezbeđuje tetrahidrohlorid. Tačka topljenja = 209°C. MS-ESI( m/ z)656,3 (MH+).

Primer 27: Dobijanje 2-{H4-(3-anunopropil-amino)bntfl^^

hidrotai-3,5-dimetoksifeniI^^ :6,7] nafto[2,3-

dJIl^Jdioksol-5-iIjacetamida

[0074]Ovo jedinjenje je dobijeno u 2 faze po postupku iz Primera 22, iz jedinjenja dobijenog prema Primeru 4, sa benzil {4-[(3-amkoporf4I)-rjerizto butil}(3-benzilolcstfartxmilamm^ (Tet. Lett., 1998, 39, 439). Dobijen je odgovarajući benzil (3-benziloksikaiboriIammopix^ hiatoksi-3,5-dimetoksifeiuT^^ d]dioksol-5-ilkaAamott]metU}-an^ intermedijer (TLC Si02CH2Cl2/MeOH/NH40H95/4,5/0,5);Rf = 0,27. U drugoj fazi, debenzilacija zatim obezbeđuje tetrahidrohlorid. Tačka topljenja = 267°C. MS-ESI( m/ z)642,2 (MH+). Analizom: C33H47N5O84HC1; izračunato: C% 5032, H% 6,53, N% 8,89; nađeno: C% 50,264, H% 6,57, N% 8,66.

Primer 28: Dobijanje 2-{3-[4-(3-anilnopropil-amtao)batilanimo]propilammo}-N-(9-(3,4-

diWdrolm-5-metol£sifenir>8K)kso-5,5aS,6,8,8a^-heksaMdroraro[3',4':6,7] nafto[2,3-di

[U]dioksol-5-inacetamlda

[0075] Ovo jedinjenje je dobijeno u 2 faze po postupku iz Primera 22, iz jedinjenja dobijenog u Primeru 5, 2-Moro-N-[9-(3,4-đMćYoka-5-^ ruro[3\4^6,7]nafto[2,3<|[l,3^ sa benzil {4-[(3-ammopropil)

berizUoksikarbonilairiiQo]buitl}-(3-be propil)karbamatom (Tet. Lett.,

1998, 39, 439). Dobijen je benzil (3-bearriloksikaAanil-ammott [3^{[9-(3,4-dlbidioksi-5-metoksi fentt)-8-okso-S,5a,6,8,8a,9-heksaM^

[2,3-d]dioksol-5-ilkarbamoil] metU}ammo)propU]ariiino}butil)karbamat^ intermedijer. TLC Si02(CH2CI2/MCOH/ NH4OH 95/4,5/0,5); Rf = 0,15. U drugoj fazi je dodato 20 mg 10% paladijuma na uglju u rastvor od 90 mg ovog mtennedijera u 10 ml MeOH, posle

produvavanja azotom. Produvavanje je sprovedeno balonom napunjemim vodonikom i

reakcioni medijum je ostavljen u atmosferi vodonika, uz intenzivno mešanje, l sat. Posle produvavanja azotom, 0,1 ml izopropanolni HC1 rastvor (3,6 N) je dodat u medijum, katalizator je profiltriran i ispran pomoću MeOH, a zatim je filtrat uparen do suvog. Ostatak je pokupljen u 20 ml etil etra i hidrohloridni precipitat je profiltriran i potom osušen. Dobijeno je 20 mg kristala (prinos 30%).

Primer29:Dobijanje 2-{3-[4-(3-aminopropilamino)-butilamino]propilarnino}-N-[8-

okso-9-(3,4,5-trihidroksifenil)-5,5a,6,8,8a,9-lieksahidrofurol3',4':6,7]nafto[23-d] [131 dioksol-5-U)acetamida

[0076]Ovo jedinjenje je dobijeno u 2 faze po postupku iz Primera 22 iz jedinjenja dobijenog u Primeru 7, 2-hloro-N-[9-(3,43-trihidroksifenil)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahiđrofuro-[3<\>4'<:>6,7]natfo[2,3-d][l,3]dioksol-5-iI]acetamida, sa benzil {4-[(3-arninopropil)benzil oksikarbomlarmno]butil}(3-benziloksikarbonilanrinopropil)karbamatom (Tet. Lett., 1998, 39, 439). Dobijen je intermedijer benzil (3-benziloksikarbonilaminopropil) (4-{benziloksi karboml-[3-({[(8-okso-9(3,4,5-rriWdr^

[2,3-d]dioksol-5-il-karbmoil]metil}amino)propil]amino} butil)karbamat. TLC Si02(CH2Cl2/MeOH/NH40H 95/4,5/0,5); Rf = 0,15. U drugoj fazi, ovaj intermedijer je hidrogenolizovan po postupku iz Primera 28. Tetrahidrohlorid je zatim dobijen precipitacijom iz etil etra. Tačka topljenja = 115°C; MS-ESI(m/z)613,3 (MH+).

Primer30:Dobijanje 2-(4-ammobudlamino)-N-[9-(3,4-dihidroksi-5-metoksifenil)-8-

okso-S,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d][13]dioksoI-5-iI] acetamida

[0077] Intermedijer koji ima zaštitnu N-benziloksikarbonil grupu je dobijen istim nizom reakcija kao u Primeru 25, ali korišćenjem intermedijera dobijenog u Primeru 5 umesto intermedijera dobijenog u Primeru 4; TLC Si02(CH^VMeOH/hTfitOH 90/9/1); Rf = 0,26. Debenzilacija po istom postupku kao u drugoj fazi Primera 28 obezbeđuje dihidrohlorid u vidu kremastog praha. Tačka topljenja = 94°C. Ovo isto jedinjenje se takođe dobija reakcijom benzil estar karbonske kiseline 2-benziloksikarboniloksi-5-[9-(2-hloroacetilamino)-6-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksatodrofuro [3',4':6,7]natfo[2,3-d][l,3]dioksol-5-il]-3-metoksifenil estra, koji je sam dobijen u Primeru 6, prema proceduri iz Primera 25, takođe korišćenjem benzil 4-aminobutilkarbamata, iza koje je usledila hidrogenoliza.

Primer31:Dobijanje 2-[3-(4-aminobutilamino)propUamino]-N-[9-(4-bidroksi-3,5-

dimetoksifenU)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3',4':6,7Inafto[2,3-d][l,3] dioksoI-5-

il] acetamida

[0078] Ovo jedinjenje je dobijeno u 2 faze po postupku iz Primera 22 iz jedinjenja dobijenog u Primeru 4 sa benzil {4-[(3-aminopropil)benziloksikarborulamino]butil} karbamatom (Svnthesis, 1994, 37). Dobijen je odgovarajući intermedijer benzil (4-{benziloksikarbonil-[3-({[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifenil)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3 ',4' :6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-5-ilkarbamoil]menl}amino)propil] amino}butil)karbaraat. U drugoj fazi, debenzilacija po istom postupku kao u Primeru 22 obezbeđuje trihidrohlorid. Tačka topljenja = 255°C; MS-ESI (m/z) 585,2 (MH+).

Primer 32: Dobijanje 2-[4-(3-ammo<p>ro<p>Oaniino)butilaniino]-N-[9-(4-hidroksi-3,5-

dimetoksifeniI)-8-okso-5,5a,6,8,8a^-heksahidrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d][l,3I dioksol-5-

il] acetamida

[0079]Ovo jedinjenje je dobijeno u 2 faze po postupku iz Primera 22 iz jedinjenja dobijenog u Primeru 4 sa benzil {3-(4-ammobutil)benziloksikarbonilamino]propil} karbamatom (J. Org. Chem., 1998, 63, 9723). Dobijen je odgovarajući intermedijer benzil(3-benziloksikarbomlammopropil)-[4-({[9-^ heksahidrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-5-ilkarbamoil]metil} amino)butil]karbamat.

[0080]U drugoj fazi, debenzilacija po istom postupku kao u Primeru 22 obezbeđuje trihidrohlorid. Tačka topljenja = 199°C; MS-ESI(m/z)585,2 (M+); Analizom: C30H40N4O83HC1; izračunato: C% 51,92, H% 6,24, N% 8,07; nađeno: C% 52,30, H% 6,27, N% 7,88.

Primer33:Dobijanje 2-[3-(3-anunopropilamino)propilamino]-N-[9-(4-hidroksi-3,5-

dimetoksifenil)-8-okso-5^a,6,8,8a,9-heksahidrofuro{3',4':6,7]nafto[2,3-d] [l,3]dioksoI-5-U] acetamida

[0081]Ovo jedinjenje je dobijeno u 2 faze po postupku iz Primera 22 iz jedinjenja dobijenog u Primeru 4 sa benzil (3-aminopropil)(3-benziloksikarbonilaminopropil) karbamatom (Tet. Lett., 1994, 35, 2057 i 2061). Dobijen je odgovarajući intermedijer benzil (3-benzilolcsikarbomlaminopropil)-[3-({[9-(4-hidroksi-3,5-đimetoksifenil)-8-okso-5 heksaWdrofuro[3\4':6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-5-ilkarbamoil]metil}ammo)pro^ karbamat. U drugoj fazi, debenzilacija po istom postupku kao u Primeru 22 obezbeđuje trihidrohlorid MS-ESI(m/z)571,2 (M+).

Primer 34: Dobijanje 2-{3-[3-(3-aminopropil-amino)propiIamino]propUamino}-N-[9-(4-

hidroksi-3,5-dimetoksifenil)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d] [13]dioksoI-5-iIJ acetamida

[0082]Ovo jedinjenje je dobijeno u 2 faze po postupku iz Primera 22 iz jedinjenja dobijenog u Primeru 4 sa benzil (3-aminopropil){3-(T)enziloksikarbonil(3-benziloksikarboriilamino propil)amino]propiI}karbamatom, dobijenim na analogan način sa metodom u Primeru 27. U drugoj fazi, debenzilacija po istom postupku kao u Primeru 22 obezbeđuje 2-{3-[3-(3-ammopropilammo)propilammo]propilamm^ 5,5a,6,8,8a,9-heksamdrofuro[3\4^6,7^ MS-ESI( m/ z)628,1 (M+).

Primer 35: Dobijanje 2-{4-[4-{4-aniinobutilaniino)bntUamino]-butflamino}-N-[9-(4-

hidroksi-3,5-dimetoksifenil)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3',4':6,7] nafto[2,3-d]

[1,3] dioksol-5-il] acetamida

[0083]Ovo jedinjenje je dobijeno u 2 faze po postupku iz Primera 22 iz jedinjenja dobijenog u Primeru 4 sa benzil estrom (4-ammobutil){4-rbenziloksikarbonil(4-benziloksi karbornlaminobutil)amino]butil) karbaminske kiseline, dobijenim na analogan način sa metodom (Svnthesis, 1994, 37). U drugoj fazi, posle prečišćavanja hromatografijom, debenzilacija po istom postupku kao u Primeru 22 obezbeđuje 2-{4-[4-(4-ammobutilamino)butilammo]butilamino}-N-[9-(4-mdioksi-3,5-dimetoksifenil)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksaWdxofuro[3\4':6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-5-il]acetamid tetrahidrohlorid. Tačka topljenja = 263°C; MS-ESI(m/z)670,6 (M+).

Primer 36: Dobijanje 2-[4-(4-aminobutilamino)butiIamino)-N-[9-(4-hidroksi-3,5-

dimetoksifenil)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksabidrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d][13] dioksol-5-

il] acetamida

[0084]Ovo jedinjenje je dobijeno u 2 faze po postupku iz Primera 22 iz jedinjenja dobijenog u Primeru 4 sa benzil estrom (4-ammobutil)(4-benziloksikarbonilaminobutil) karbaminske kiseline, dobijenim na analogan način sa metodom (Svnthesis, 1994, 37). U drugoj fazi, posle prečišćavanja hromatografijom, debenzilacija po istom postupku kao u Primeru 22 obezbeđuje 2-[4-(4-armnobutilamino)-butilamino]-N-[9^ okso-5,5a,6,8,8a,9-heksamđjofuro[3\4':6^

hlorid. Tačka topljenja = 225°C; MS-ESI( m/ z)600,2 (M+).

Primer37:Dobijanje 2-{5-aminopentilamino)-N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifeniI)-8-

okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d][l,3] dioksoI-5-il]acetamida

[0085]Ovo jedinjenje je dobijeno u 2 faze po postupku iz Primera 22 iz jedinjenja dobijenog u Primeru 4 sa 5-(benziloksikarbonilamino)pentilaminom. U drugoj fazi, posle prečišćavanja hromatografijom, debenzilacija po istom postupku kao u Primeru 22 obezbeđuje 2-(5-aminopentilamino)-N-[9-(4-diMdroksi-3,5-metoksiferu furo[3\4':6J]naflo[2,3-d][l,3]Qioksol-5-il]acetamid dihidrohlorid. Tačka topljenja = 215°C; MS-ESI ( m/ z) 543,1 (M+).

FARMAKOLOŠKI REZULTATI JEDINJENJA IZ PRONALASKA

(0086]In vitroiin vivotestovi

1)Invitro aktivnost:

a) Test citotoksičnosti

[0087] Test koji se koristi za inhibiciju rasta ćelija A549 humane linije (kancera pluća koji

nije kancer malih ćelija):

A549 tumorske ćelije su zasejane na ploču sa 96 mesta u medijumu RPMI 1640 bez fenolnog crvenog (Seromed), kojem je dodat 5%-ni fetalni teleći serum (100 Pl/well, 1,25 IO<4>ćelija/ml). Posle 24 sata inkubiranja na 37°C u inkubatoru koji sadrži 5% CO2, medijum je zamenjen onim koji sadrži jedinjenje koje se testira, posle čega su ploče inkubirane dodatnih 48 sati. Preživljavanje ćelija je procenjeno merenjem luniinescencije posle oslobađanja ATP u medijum korišćenjem Uze ćelija, uz prisustvo rastvora luciferaze i luciferina u ATP-Lite-M™ kompletu, kao što proizvođač preporučuje (Packard, Rungis, France). Svaki eksperimentalan uslov je testiran bar tri puta u šest identičnih kopija. Rezultati, izraženi kao IC50(M), su dati u Tabeli I i pokazuju citotoksičnost jedinjenja.

b) Test za detektovanje prekida DNKin cellulo:

[0088] Korišćen je kometa test. Prekidi DNK su detektovani u A549 ćelijama posle

inkubiranja 1 sat sa 10 uM svakog od ispitivanih jedinjenja. Etopozid je korišćen kao pozitivna, a vinorelbin kao negativna kontrola. Prekidi su otkriveni pomoću kometa testa (Br. J. Cancer, 2000, 83,1740). Za svako jedinjenje, dvadeset pet ćelija je analizirano i srednji trag (Tail Moment, TM) je izračunat pomoću Komet softvera (Kinetic hnaging, UK). Rezultati su izraženi u odnosu na TM etopozida, uzet da je jedan i dati su u Tabeli I. Time je pokazana prednost proizvoda ovog pronalaska u odnosu na etopozid u indukovanju prekida DNK.

2)Aktivnostin vb>o;

[0089] Jedinjenja ovog pronalaska imaju rastvorljivost u vodi, koja omogućava vid davanja infuzijom, injekcijom ili oralnim putem. Prave se u formi bidrohlorida rastvorljivog u vodi, čije su vrednosti rastvorljivosti date u Tabeli U.

Eksperimentalni model tumora P388. Korišćen je model mišje leukemije P388 (Tumor Models in Cancer Research., Teicher, B.A. ed., Humana Press Inc., Totowa, NJ., pp. 23-40, 2002), koji je održavan sukcesivnim mtraperitonealnim transplantacijama u DBA/2 miševima (DB A/2JIco, Charles River), kao što je opisano u premodnim stručnim dokumentima (Classic in vivo cancer models: Three examples of mouse models used in experimental therapeutics. Current Protocols in Pharmacologv Unit 5.24 : 5.24.1-5.24.16, 2001).

Eksperiment je provođen prema protokolu koji je već opisan u premodnim stručnim dokumentima (Cancer Chemother. Pharmacol., 1998, 41, 437-447). On se sastoji od implantiranja 106 ćelija P388 leukemije po mišu u C2DF1 hibridne miševe (CD2Fl/CrlBR, Charles River, St Aubin-les-Elbeuf, France) intravenozno nultog dana. Posle nasumiČnog raspoređivanja životinja u tretmanu i kontrolnih po kavezima, ispitivana jedinjenja su data jednom injekcijom intraperitonealno dana posle transplantacije tumora, dana 1, Životinje su zatim praćene svaki dan, merena im je težina dvaput nedeljno i beležena je svaka klinička reakcija. Preživljavanje je parametar za evaluaciju antitumorske aktivnosti. Povećanje preživljavanja je definisano kao odnos T/Cpreiivyavanje(%), odnosno: medijana preživljavanja tretirane grupe/medijana preživljavanja kontrolne grupe x 100. Odnos T/Cpreživijav»nje je izračunat za svaku datu dozu i najveća dobijena vrednost predstavlja maksimalno postignuto povećanje u preživljavanju (maksimalna aktivnost), koje je definisano optimalnim odnosom T/Cpreživijavanj«. Rezultati su ilustrovani u Tabeli U, gde se vide optimalne vrednosti T/Cpreživijavmje- Rezultati pokazuju da su jedinjenja iz Primera 9, 12, 25 i 27 dovela do značajnih povećanja preživljavanja životinja sa P388 leukemijom, što se odražava optimalnim vrednostima T/Cpreživijavanjeod 129 do 157%, koje ukazuju na to daje tretman životinja ovim jedinjenjima omogućio produženje preživljavanja životinja za 29 do 57%. Konkretno, prema kriterijumima NCI (National Cancer Institute = Nacionalni institut za kancer), vrednost T/Cpreživijavanjese smatra značajnom ako je veća od bar 120% (Semin. Oncol., 1981, 8, 349-361). Relativan gubitak telesne težine životinja, vezan za optimalnu aktivnost jedinjenja, je mnogo manji od praga toksičnosti, prema kriterijumima NCI (Ann. Oncol., 1994, 5,415-422).

Eksperimentalni model tumora B16.Korišćen je model B16 melanoma (Tumor Models in Cancer Research., Teicher, B.A. ed., Humana Press Inc., Totovva, NJ., pp. 23-40, 2002), koji je održavan sukcesivnim subhitanim transplantacijama u C57BL/6 miševima (C57BL/6 NCrlBR, Charles River, St Aubin-les-Elbeuf, France), kao što je opisano gore (Classic in vivo cancer models: Three examples of mouse models used in experimental therapeutics. Current Protocols in Pharmacologv Unit 5.24 : 5.24.1-5.24.16,2001).

Eksperiment je provođen prema protokolu koji je već opisan gore. Tkivo B16 tumora je usitnjeno i homogenizovano u 0,9% sterilnom rastvoru natrijum hlorida pomoću Dounce homogenizatora, a zatim je C57BL/6 miševima subkutano inokulirano u bok 0,5 ml ovog preparata (1 g/ml) nultog dana. Posle nasumičnog raspoređivanja životinja u tretmanu i kontrolnih po kavezima, ispitivana jedinjenja su data intraperitonealno 3-ćeg, 5-og, 7-og i 10-og dana posle transplantacije tumora. Životinje su zatim praćene svaki dan, merena im je težina dvaput nedeljno i beležena je svaka klinička reakcija. Veličina tumora je merena tri puta nedeljno tokom eksperimenta. Zapremina tumora je izračunata i dejstvo jedinjenja na veličinu tumora je definisano odnosom T/Czaprcmina(%), odnosno: medijana zapremine tumora tretirane grupe/ medijana zapremine tumora kontrolne grupe x 100.

Rezultati su ilustrovani u Tabeli II, gde se vide optimalne vrednosti T/Otpremim,. Rezultati pokazuju, između ostalog, da jedinjenja iz Primera 25 i 27 dovode do značajnog usporavanja rasta tumora, što se odražava optimalnim vrednostima T/O^premi™ od 25%, odnosno, 7%. Konkretno, prema kriterijumima NCI (National Cancer Institute), vrednost T/Copram™ se smatra značajnom ako je manja od bar 42% (Cancer Res., 1991,51,4845-4852).

10090] Eksperimentalni model tumora MX-1.Korišćen je model humanog mamarnog karcinoma (Developmental Therapeutics Program, Division of Cancer Tretman, National Cancer Institute, In vivo Cancer Models 1976-1982. NUJ Publication No. 84 2635, Washington DC: United States Government Printing Office, 1984), koji je održavan sukcesivnim subkutanim transplantacijama u Swiss Nude (švajcarskim golim) rmševima (Ico: Swiss-nu/nu, Iffa Credo, L'Arbresle, France), kao što je opisano gore (Classic in vivo cancer models: Three examples of mouse models used in experimental therapeutics. Current ProtocolsinPharmacologyUnit5.24: 5.24.1-5.24.16,2001).

Eksperiment je provođen prema protokolu koji je već opisan gore (Cancer Chemother. PharmacoL, 1998, 41, 437-447). Swiss Nude miševima je subkutano u bok transplantiran fragment MX-1 tumora nultog dana. Posle nasumičnog raspoređivanja životinja u tretmanu i kontrolnih po kavezima, ispitivana jedinjenja su data intraperitonealno 7., 9., 11., 14., 16. i 18. dana posle transplantacije tumora. Životinje su zatim praćene svaki dan, merena im je težina dvaput nedeljno i beležena je svaka klinička reakcija. Veličina tumora je merena tri puta nedeljno tokom eksperimenta. Zapremina tumora je izračunata i dejstvo jedinjenja na veličinu tumora je definisano odnosom T/CzaPremina(%)>odnosno: medijana zapremine tumora tretirane grupe/medijana zapremine tumora kontrolne grupe x 100.

Rezultati su dati u Tabeli U. Jedinjenje iz Primera 25 ima odnos T/Czapremina(%) od 51 % u tretmanu pomoću 10 mg/kg, a jedinjenje iz Primera 27 ima odnos T/ Cz»p:enant (%) od 0% u tretmanu pomoću 2,5 mg/kg, čime pokazuje potpuno iskorenjivanje tumora.

Claims (14)

1. Jedinjenja opšte formule( I) u kojoj Rii R2predstavljaju, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili metil radikal; R3 i A zajedno formiraju C3-C8prsten ili R3 predstavlja radikal odabran iz grupe koja sadrži atom vodonika, C1-C4alkil radikal i benzil radikal a A predstavlja radikal odabran iz grupe koja sadrži atom vodonika, C1-C4alkil radikal, benzil radikal i grupu formule (II) u kojoj a varira od 2 do 5, R4 i B zajedno formiraju C3-C8prsten ili R4 predstavlja radikal odabran iz grupe koja sadrži atom vodonika, C1-C4alkil radikal i benzil radikal, gde R3 i R4 mogu da budu spojeni alkilenskim lancem koji sadrži 2 ili 3 atoma ugljenika, a B predstavlja radikal odabran iz grupe koja sadrži: - atom vodonika, - C1-C4alkil radikal, -benzil radikal, - grupu formule (IH) u kojoj b i c mogu da variraju, nezavisno jedan od drugog, od 2 do 5, a R5 do R7 predstavljaju, nezavisno jedan od drugog, radikal odabran iz grupe koja sadrži atom vodonika, C1-C4alkil radikal i benzil radikal, gde R4 i R5 i/ili R5 i R6 i/ili R6 i R7 mogu da budu spojeni alkilenskim lancem koji sadrži 2 ili 3 atoma ugljenika; - i grupu formule (IV) u kojoj c može da varira od 2 do 5, a R8 i R9 predstavljaju, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili C1-C5alkil radikal, gde R4 i R8 mogu da budu spojeni alkilenskim lancem koji sadrži 2 ili 3 atoma ugljenika, ili R8 i R9 zajedno formiraju C3-C8prsten; ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, naročito njihove adicione soli, sa neorganskim ili organskim kiselinama.

2. Jedinjenja prema zahtevu 1, naznačena time, što R3 do R9 predstavljaju, nezavisno jedan od drugog, atom vodonika ili C1-C4alkil radikal, poželjno atom vodonika ili metil radikal.

3. Jedinjenja prema zahtevu 1 ili 2, naznačena time, što R3 predstavlja atom vodonika ili metil radikal, a A predstavlja atom vodonika, metil radikal ili grupu formule (U) u kojoj R4 predstavlja atom vodonika, metil radikal ili etil radikal, a B predstavlja radikal odabran iz grupe koju čine: atom vodonika, metil radikal, etil radikal, grupa formule (III) u kojoj R5, R6 i R7 predstavljaju atom vodonika, C1-C4alkil radikal ili benzil radikal, grupa formule (IV) u kojoj R8 i R9, koji su identični, predstavljaju atom vodonika ili metil radikal.

4. Jedinjenja prema zahtevu 1, naznačena time, što su odabrana među sledećim jedinjenjima: 2-(2-mmetilanunoeulammo)-N49-(4-m(koksi-3,5-dimetoksifeml)-8-okso-5,5a,6,8 heksahidrofuro[3 ',4' :6,7]natfo[2,3-d][ 1,3]dioksol-5-il]acetamid N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifeml)-8^kso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d][<l>,3]dioksol-5-il]-2-(2-(morfolin-4-il)etilamino)acetamid 2-[(2-dimetilammoeuU)metilammo]-N-[9-(4-Mdroksi-3,5-dimetoksifenil)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksaWdrofuro[3%4^6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-5-il]acetamid 2-dimetilamino-N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifenil)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3',4':6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-5-il]acetamid N-[9<4-hiđroksi-3,5-dimetoksifeml)-8-okso-5,5a,6^ d][l,3]dioksol-5-il]-2-(piperidin-l-il)acetamid 2-benzilarruno-N-[9-(4-hidro^ heksahidrofiffo[3%4^6,7]n^ N-[9-(4-Wcfroksi-3,5-dimetoksifeml)-8-okso-5)5a>6,8,8a,9-heksaW d][ 1,3]dioksol-5-il]-2-(piperazin-1 -il)acetamid 2-(4-benziIpiperazm4-il)-N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifenil)-8^ heksahidrofuro[3 ',4' :6,7]natfo[2,3-d][ 1,3]dioksol-5-il]acetamiđ 2-eularnmo-N-[9-(4-rđdroksi-3,^ heksarudrofuro[3S4^6J]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-541]acetar^ N-[9-(4-m^oksi-3,5-dimetoksifeml)-8-okso-5)5a,6,8,8a,9-heksaru d][13]dioksol-5-il]-2-(pro<p>ilarruno)acetamid 2-butilarruno-N-[9-(4-rddroksi-3,5-dimetoksiferal)-8-oks heksam^kro[3\4':6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksoI-5-il]acetamid 2-(2-dietilammoehlarm^o)-N-[9-(4-mdroksi-3,5-dim heksahidroraro[3%4^6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-5-il]acetamid 2-(2-dienlarmnopropiIammo)-N^^ heksarudrofuro[3' ,4' :6,7]natfo[2,3-d][ 1,3 Jdioksol-5-il]acetamid 2-ammo-N-[9-(4-rudroksi-3,5-duiietoksiferdl)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksafudrofu^o[3^4^■6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-5-il]acetarrud 2-(2-aminoeu^arnmo)-N-[9-(4-mdro^ heksamdroforo[3\4^6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-541]acetarru 2-(3-ammopropilamino)-N-[9-(4-hicto^ heksahiđrofiux>[3%4^6J]naM 2-(4-aminobutilarmno)-N-[9-(4-maroksi-3,5-dimetoksifenil)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9^ heksaWdrofuro[3',4' :6,7]nafto[2,3-d][ 1,3]dioksol-5-il]acetamid 2-{3-[4-(3-aminopropilamino)buti^ diraetoksifenil)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3 ',4':6,7]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-5-il]acetamid 2-{3-[4-(3-aminopropilamino)buitlamino]propilamino}-N-[9-(3,4-đirudroksi-5-metoksife^ 8-okso-5,5aS,6,8a,9-heksahidromro[3\4^6J]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-5-n]acetamid 2-{3-[4-(3-aminopropilarnino)butilammo]propilammo}-N 5,5aJ6,8,8a>9-heksaJii(kofuro[3\4,:6J]nafix>[2,3-d3[l,3]d^^ 2-(4-aminobuulammo)-N-[9-(3,4-d^ heksahidrofuro[3 ',4' :6,7]nafto[2,3-d][ Uj&oksol-S-iljacetamid 2-[3-(4-aininobutilammo)propilammo>^ 5,5a,6)8,8a,9-heksaWdrofuro[3\4^6JJnafto[2,3-d][l,3]dioksol-5-in 2-[4-(3-arrunopropilarruno)bunlaramo]-N-5,5a,6,8,8a)9-heksaMdrofuro[3\4\-6J]nafto[2,3-d][l,3]dioksol-5-il]acet^ 2-[3-(3-ammopropilammo)propilarmno]-N-[9-(4-rddroksi-3,5-dm 5,5a,6,8,8a,9-heksahioxofuro[3\4^6J]nafto[23-d][l)3]dioksol-5-il]acetam 2-[4-(4-ammobutilammo)buularrm^^ 5,5a,6,8,8a,9-heksarudro&ro[3\4^6,7]nafto[2,3-d]tl,3]ojoksol-5-il]ace^ 2-{3-[3-(3-aminopropilamino)propilammo]propU^ dimetoksifemI)-8-okso-5,5a,6A il]acetamid 2-{4-[4-(4-artunobutilamko)buulammo]butiIamino}^ okso-5,5a,6,83a,9-heksamdroniro[3,,4':6,7]nafto[2>3-d][ 13]dioksol-5-il]acetamid 2-{4-[4-(4-aminobunlamino)butilamino]butilammo}-N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksi okso-5,5a,6>8,8a,9-heksahidrofuro[3\4':6J]nafto[2,3-d][13]^okso]-5-il]aceta™ 2-[4-(4-armnobutiIaraino)butilammo]-N-[9-(4-mdrolcsi-3,5-dimetoksifem 5,5a,6,8,8a,9-heksam^rofuro[3\4^67]natfo[2,3-d][l,3]diolcsol-5-il]acetamid 2-(5-aminopentilamino)-N-[9-(4-hidroksi-3,5-dimetoksifenil)-8-okso-5,5a,6,8,8a,9-heksahidrofuro[3 ',4' :6,7]nafto[2,3-d] [ 1,3]dioksol-5-il]acetamid i njihove adicione soli sa neorganskim ili organskim kiselinama.

5. Postupak za dobijanje jedinjenja prema bilo kom od prethodnih zahteva, naznačen time, što sadrži sledeće sukcesivne korake: a) početak od podofilotoksina formule (VIII) b) ako je pogodno, dobijanje demetilacijom jedinjenja formule (V) u kome su Rji R2kao što su đefinisani ujedinjenju formule (I); zatim c) reakcija jedinjenja formule (V) ili (VET) sa hloroacetonitrilom u kiselom medijumu, a zatim, ako je pogodno, reakcija demetilacije, da bi se dobilo jedinjenje formule (VI) u kome su Rii R2kao što su đefinisani ujedinjenju formule (I); zatim d) reakcija jedinjenja formule (VI) sa jedinjenjem formule (VIT) u kome su R3 i A kao što su đefinisani u jedinjenju formule (I), amini, opciono prisutni u grupi koja je zaštićena odgovarajućom zaštitnom grupom, u smesi rastvarača koja sadrži polarni aprotični rastvarač, u prisustvu Lewis-ove baze.

6. Postupak prema zahtevu 5,naznačen time, štoje, kad se reakcija odvija na sobnoj temperaturi, polarni aprotični rastvarač korišćen u koraku d) acetonitril i dimetilformamid (DMF).

7. Postupak prema zahtevu 5 ili 6,naznačen time, štoje baza korišćena u koraku d) trietilamin.

8. Intermedijerno jedinjenje formule (V) prema zahtevu 5, u kojem Rii R2predstavljaju atom vodonika.

9. Kao lekovi, jedinjenja formule (I) prema bilo kom od zahteva 1 do 4.

10. Farmaceutska kompozicija,naznačenatime, što sadrži bar jedno jedinjenje formule (I) prema bilo kom od zahteva 1 do 4 i ekscipijent pogodan za davanje oralnim ili parenteralnim putem.

11. Upotreba jedinjenja formule (I) prema bilo kom od zahteva 1 do 4, za dobijanje leka namenjenog za antikancerozni tretman ne-čvrstih tumora i čvrstih tumora, kao što su melanomi, kolorektalni kanceri, kanceri pluća, prostate, određeni limfomi i mijelomi, ENT kanceri i kanceri mozga.

12. Upotreba prema zahtevu 11, naznačena time, što lek sadrži: a) jedinjenje formule (I) i b) antikancerozni agens, kao kombinovane proizvode za upotrebu koja je simultana, odvojena ili produžena u vremenu u tretmanu kancera i/ili tumora.

13. Upotreba prema zahtevu 12,naznačena time, štoje antikancerozni agens odabran iz grupe koju čine platinski derivati, taksani, vinke i 5-FU.

14.Upotreba prema zahtevu 12 ili 13,naznačena time, štoje lek namenjen za tretman tumora koji su rezistentni na konvencionalne terapije.