RS20170169A1 - Poboljšana rekonstituisana kompozicija sufraktanta koja sadrži analoge sufraktanta proteina b (sp-b) i surfaktanta proteina c (sp-c) - Google Patents

Abstract

Predmetni pronalazak se odnosi na rekonstituisani pulmonalni surfaktant koji sadrži lipidni nosač, kombinaciju analoga polipeptida nativnog surfaktanta proteina SP-C sa određenim analogom polipeptida nativnog surfaktanta proteina SP-B. Pronalazak se takođe odnosi na farmaceutske formulacije od njih i na njihovu upotrebu za lečenje ili profilaksu RDS i drugih respiratornih poremećaja.

Description

SUFRAKTANTA PROTEINA B (SP-B) I SURFAKTANATA PROTEINA C (SP-C)

OBLAST TEHNIKE

Predmetni pronalazak se odnosi na rekonstituisani surfaktant pluća koji je pogodan za profilaksu i/ili lečenje respiratornog distres sindroma (RDS) i drugih respiratornih poremećaja.

POZADINA PRONALASKA

Ljudska pluća se sastoje od velikog broja malih vazdušnih kesastih mehurića, pod nazivom alveole u kojima se razmenjuju gasovi između krvi i vazdušnih prostora pluća. Kod zdravih pojedinaca, ova razmena je posredovana prisustvom kompleksa surfaktanta koji sadrži protein koji sprečava pluća od kolapsa na kraju izdisaja.

Kompleks surfaktanta pluća je sastavljen prvenstveno od lipida i sadrži manje količine raznih proteina. Nedostatak odgovarajućih nivoa ovog kompleksa rezultira u neispravnom radu pluća. Ovaj sindrom je nazvan Respiratorni Distres Sindrom (RDS) i on obično pogađa novorođenčad.

Navedeni sindrom se efikasno leči sa komercijalno dostupnim pripravcima modifikovanog prirodnog surfaktanta ekstrahovanog iz pluća životinja, kao što je prpravak prema zlatnom standardu poznat kao Curosurf.

Glavni sastojci ovih pripravaka surfaktanta su fosfolipidi i surfaktant hidrofobnih proteina B i C (SP-B i SP-C).

Zbog nedostataka pripravaka surfaktanta iz životinjskog tkiva, kao što je komplikacija procesa produkcije, i moguća virusna kontaminacija i/ili indukcija imunih reakcija, sintetski surfaktanti su dostupni u tehnici.

Navedeni sintetski surfaktanti mogu biti jednostavno smeše sintetskih jedinjenja, prvenstveno fosfolipida i drugih lipida i poznati su kao "veštački" surfaktanti; iako su korišćeni u kliničkoj praksi mnogo godina, njihova efikasnost nije uporediva sa onom modifikovanog prirodnog surfaktanta.

Veštački surfaktanti takođe sadržavajući surfaktant proteini/peptidi su trenutno u razvoju. Oni se nazivaju bilo "rekonstituisani" surfaktanti ili "bio-mimetički surfaktanti".

Međutim, prema dostupnoj literaturi, nijedan od razvijenih rekonstituisanih surfaktanata do sada nije pokazao efikasnost u smislu usklađenosti pluća uporedivoj onim surfaktantima ekstrahovanih iz životinja. Štaviše oni dovode do osiromašenja plućnog volumena vazduha i ocene alveolarne prohodnosti na kraju izdisaja, i potrebna je ventilacija sa pozitivnim krajnjim ekspiratornim pritiskom (PEEP) u cilju postizanja in vivo aktivnosti koja je uporediva sa onom koja je postignuta sa modifikovanim prirodnim surfaktantima (Johansson J et al J Appl Physiol 2003, 95, 2055-2063; Davis AJ et al Am J Respir Crit Care Med 1998; 157, 553-559).

profil modifikovanih prirodnih surfaktanata jer sadrže samo jedau proteinsku (peptidnu) komponentu.

Sa druge strane, pored dobre efikasnosti, kompozicije surfaktanata bi takođe trebalo da pokazuju nisku viskoznost da dozvoli pripremu koncentrovane suspenzije u vodenom medijumu. Mogućnost pripremanja koncentrovane suspenzije u maloj zapremini je zaista karakteristika od posebnog značaja za njihovu primenu kod vrlo niske težine novorođenčadi.

Peptid:fosfolipidni sistem je prilično kompleksna smeša čija svojstva u velikoj meri zavise od kompozicije smeše fosfolipida, kao i od specifične kombinacije fosfolipidi/peptidi.

Prisustvo još peptida će uticati na reološka svojstva kompozicije praveći sistem još komplikovanijim.

U prethodnom stanju tehnike, rekonstituisani surfaktanti sadrže SP-B i SP-C analoge koji podsećaju na humane surfaktante proteina koji su otkriveni, na primer u WO0076535, WO2008011559 and W02008044109.

Međutim, nijedna od kompozicija otkrivenih ovde nije pokazala da poseduje optimalna svojstva u smislu usaglašenosti pluća, kao i reološka svojstva, naročito viskoznost.

Prema tome, još uviek postoji potreba za rekonstituisanim pripravcima koji imaju uporedivu efikasnost onoj kod surfaktanata koji su ekstrahovani iz pluća životinaja, kao i optimalna reološka svojstava omogućavajući njihovu lako isporuku i raspodelu-distribuciju u bronhoalveolarnom delu pluća nakon primene.

Predmetni pronalazak se odnosi se taj pitanje obezbeđujući rekonstituisanu kompoziciju surfaktanta sa poboljšanim svojstvima u odnosu usklađenosti pluća i viskoznosti.

REZIME PRONALASKA

Predmetni pronalazak se odnosi na rekonstituisani surfaktant koji sadrži:

a) od 1.2 do 1.8% po težini analoga polipeptida nativnog surfaktanta proteina SP-C, koji se sastoji od sekvence predstavljene formulom IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLLGL (SEK. ID BR:1);

b) od 0.1 do 0.5% po težini analoga polipeptida nativnog surfaktanta proteina SP-B koji se sastoji od sekvence predstavljene formulom CWLCRALIKRIQALIPKGGRLLPQLVCRLVLRCS (SEK. ID BR:2); mononezasićeni i zasićeni fosfolipid u težinskom odnosu u rasponu od 45:55 do 55:45;

sve količine se izračunavaju u odnosu na ukupnu težinu rekonstituisanog surfaktanta.

Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadržavaju rekonstituisani surfaktant za koji je tražena zaštita sam ili u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih

nosača.

Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje upotrebu rekonstituisanog surfaktanta kao leka za koji je

tražena zaštita.

U daljnjem aspektu, pronalazak obezbeđuje upotrebu rekonstituisanog surfaktanta za koji je tražena

zaštita za profilaksu i/ili lečenje respiratornog distres sindroma (RDS) i drugih respiratornih poremećaja.

Pored toga, pronalazak obezbeđuje upotrebu rekonstituisanog surfaktanta za koji je tražena zaštita za proizvodnju leka za profilaksu i/ili lečenje respiratornog distres sindroma (RDS) i drugih respiratornih poremećaja.

Pronalazak takođe obezbeđuje postupak za profilaksu i/ili lečenje respiratornog distres sindroma (RDS) i drugih respiratornih poremećaja, navedeni postupak obuhvata davanje pacijentu kojem je potrebno

takvo lečenje terapijski efikasne količine rekonstituisanog surfaktanta pomenutog iznad.

U daljem izvođenju, predmetni pronalazak obezbeđuje postupak koji obuhvata davanje razblaženog rekonstituisanog surfaktanta iz predmetnog pronalaska u pluća putem tehnike ispiranja da se ukloni

štetan materijal i/ili inflamatorni eksudat, da se prošire pluća i poboljša plućna funkcija.

rekonstituisani surfaktant u obliku praha, u obliku prve jedinične doze; b) farmaceutski prihvatljiv nosač, u obliku druge jedinične doze; i c) spremnik sredstava za držanje navedenih oblika prve i druge doze.

DEFINICIJE

"Aktivnost surfaktanta" za pripremu surfaktanta je definisana kao sposobnost da se smanji površinski napon.

In vitro efikasnost egzogenih pripravaka surfaktanta se obično ispituje merenjem njegove sposobnosti snižavanju površinskog napona korišćenjem pogodnog aparata kao što je tzv. ˮWilhelmy Balanceˮ i "Captive Bubble Surfactometer".

In vivo efikasnost egzogenih pripravaka surfaktanta se obično ispituje merenjem dva parametra:

i) disajnog volumena koji je indeks usklađenosti pluća i

ii) zapremine vazduha u plućima, koji je indeks širenja vazduha u alveolama ili prohodnosti na kraju izdisaja, a samim tim i sposobnosti formiranja stabilnog filma fosfolipida u alveoli na kraju izdisaja.

"Terapijski efikasna" količina kao što se ovde koristi, se odnosi na količinu rekonstituisanog surfaktanta sposobnog sprečavanju, izbegavanju, smanjenju ili uklanjanju respiratorne bolesti ili poremećaja koji su povezani sa nedostatkom ili disfunkcijom endogenog surfaktanta.

Termin "farmaceutski prihvatljiv" ili "fiziološki podnošljiv" se odnosi na kompozicije, medijum, rastvarače, soli sposobne da se primene na ljudima bez produkcije nepoželjnih fizioloških efekata.

Termin "analog polipeptida nativnog surfaktanta proteina SP-C", označava polipeptid koji ima aminokiselinsku sekvencu u kojoj, u poređenju sa nativnim SP-C proteinom, aminokiseline nedostaju i/ili su zamenjene sa drugim amino kiselinama, tako dugo dok polipeptid u smeši sa fosfolipidima, pokazuje aktivnost plućnog surfaktanta (kao što je dokazano in vitro i in vivo testovima efikasnosti).

Termin "polipeptid analog nativnog surfaktanta proteina SP-B", označava polipeptid koji ima aminokiselinsku sekvencu u kojoj, u poređenju sa nativnom SP-B proteinom aminokiseline nedostaju i/ili su zamenjene sa drugim amino kiselinama, tako dugo dok polipeptid u smeši sa fosfolipidima, pokazuje aktivnost surfaktanta pluća (kao što je dokazano putem in vitro i in vivo testova efikasnosti).

"Rekombinantni", kada se koristi sa referencom, npr., na ćeliju, ili nukleinsku kiselinu, protein ili vektor, ukazuje na to da je ćelija, nukleinska kiselina, protein ili vektor modifikovan uvođenjem heterologne nukleinske kiseline ili proteina, ili izmenom nativne nukleinske kiseline ili proteina.

Kao što se ovde koristi, termin "oko" primenjen na pokazivanu vrednost, označava varijabilnost od ± 1%.

Fosfolipidi su lipidi u kojima je jedna masna kiselina zamenjena sa fosfatnom grupom i jednostavnim organskim molekulom. Najčešća klasa fosfolipida koji se mogu naći u pripravcima surfaktanta su: fosfatidilholini (PC), fosfatidiletanolamin (PE) fosfatidilglicerol (PG), fosfatidilinozitol (PI), i fosfatidilserin (PS).

Glicerol ostaci iz fosfolipida su uglavnom esterifikovani sa dugim lancem masnih kiselina, koje zauzvrat mogu biti zasićene (npr., miristinska, palmitinska i stearinska kiselina), mononezasićene (npr., oleinska kiselina) ili polinezasićene (npr., linolna i arahidonska kiselina).

Konkretno, vrste uzete u obzir u primeni su:

, , ,

zasićeni derivat, i 1-palmitoil-2-oleil-sn-glicero-3-fosfoglicerol, takođe poznat kao palmitoil-oleilfosfatidilglicerol (POPG), koji je mononezasićeni derivat.

"Polipeptid", "peptid" i "protein" su ovde korišćeni naizmenično i odnose se na polimer aminokiselinskih ostataka. _

Sekvence aminokiselina su prikazane prema kodu jednog slova sa aminokiselinom koja nosi slobodnu amino grupu na levom kraju (amino terminus) i amino kiselinom koja nosi slobodnu karboksilnu grupu na desnom kraju (karboksi terminus).

Svi aminokiselinski ostaci su identifikovani ovde u prirodnoj

L-konfiguraciju i sekvence identifikovane ovde su prikazane prema standardnim skraćenicama za aminokiselinske ostatke. Za izbegavanje sumnje, derivat amino kiseline L-nor-leucin je ovde označen kao nLeu i

L-ornitin je skraćeno kao Om.

SLIKE

Slika 1 pokazuje rezultate u pogledu disajnih volumena (ml/kg) kao funkcija vremena/pritisak rekonstituisanog surfaktanta pronalaska (N3) naspram Curosurf<®>i netretiranih životinja (n = broj životinja).

Slika 2 prikazuje rezultate u smislu zapremine vazduha pluća (ml/kg) rekonstituisanog surfaktanta predmetnog pronalaska (N3) naspram Curosurf<®>i netretiranih životinja (n = broj životinja).

DETALJAN OPIS PRONALASKA

Eksperimentalni multi-faktor dizajn je izgrađen da istraži kako viskoznost utiče putem relativnih iznosa fosfolipida i analoga SP-B i SP-C u kompozicijama surfaktanta generički otkrivenim u WO 2008044109, kao i kako navedene komponente utiču jedne sa drugima u rekonstituisanim surfaktantima.

Nađeno je da količina analoga SP-B ima značajan efekat na viskoznost kompozicije surfaktanta, a time i da sadržaj analoga SP-B treba održavati što je moguće niže kompatibilno u skladu sa terapijskom efikasnošću, u cilju smanjenja viskoznosti rekonstituisanog surfaktanta na prihvatljivo niskim nivoima.

WO 2008044109 se odnosi na upotrebu DPPC:POPG odnosa poželjno jednakim ili većim od 7:3, u prisustvu analoga SP-B.

WO 2008044109 ne govori o viskoznost takavih kompozicija surfaktanta. Sada je pronađeno da kada je iznos analoga SP-B u surfaktantu minimiziran, visok odnos između dezaturisanih fosfolipida kao DPPC i nezasićenih fosfolipida, kao što su POPG dovodi do neprihvatljivo visoke viskoznosti odgovarajuće kompozicije. Međutim, ovaj problem je prevaziđen pripremanjem) niskih surfaktanata SP- B u kojima je smanjen odnos nezasićenih fosfolipida prema zasićenim fosfolipidima ispod odnosa opisanog u prethodnom stanju tehnike, poželjno oko 1:1, i pokazano je da ove kompozicije surfaktanta imaju iznenađujuće nisku viskoznost, što ih čini korisnim za sve kliničke primene.

U jednom izvođenju predmetni pronalazak se odnosi na rekonstituisani surfaktant koji sadrži:

a) od 1.2 do 1.8% po težini analoga polipeptida nativnog surfaktanta proteina SP-C, koji se sastoji od sekvence predstavljene formulom IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLLGL (SEK. ID BR:1);

b) od 0.1 do 0.5% po težini analoga polipeptida nativnog surfaktanta proteina SP-B, koji se sastoji od sekvence predstavljene formulom CWLCRALIKRIQALIPKGGRLLPQLVCRLVLRCS (SEK. ID BR:2); mononezasićeni i zasićeni fosfolipid u težinskom odnosu u rasponu od 45:55 do 55:45;

sve količine se izračunavaju u odnosu na ukupnu težinu rekonstituisanog surfaktanta.

između 1.4 i 1.6%, i još poželjnije oko 1.5% po težini od ukupne težine rekonstituisanog surfaktanta. U rekonstituisanom surfaktantu predmetnog pronalaska komponenta analoga proteina SP-B poželjno čini između 0.2 and 0.4%, i još poželjnije oko 0.2% po težini od ukupne težine rekonstituisanog surfaktanta. Rekonstituisani surfaktant predmetnog pronalaska može povoljno obuhvatiti zasićene fosfolipide, kao što su dipalmitoilfosfatidilholin (DPPC) i dipalmitoilfosfatidilglicerol (DPPG), i mononezasićene fosfolipide kao što su palmitoiloleoilfosfatidilholin (POPC) i palmitoiloleoilfosfatidilglicerol (POPG).

Poželjni zasićeni fosfolipid za upotrebu u skladu sa predmetnim pronalaskom je DPPC, dok je poželjni mononezasićeni fosfolipid POPG.

Povoljno, kombinovana težina fosfolipida čini najmanje 90%, povoljno najmanje 95%, poželjno najmanje 97.7%, poželjnije 98,3% od ukupne težine rekonstituisanog surfaktanta.

U jednom izvođenju predmetni pronalazak se odnosi na rekonstituisani surfaktant koji sadrži:

a) oko 1.5% po težini analoga polipeptida nativnog surfaktanta proteina SP-C koji se sastoji od sekvence predstavljene formulom IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLLGL (SEK. ID BR:1);

b) oko 0.2% po težini analoga polipeptida nativnog surfaktanta proteina SP-B koji se sastoji od sekvence predstavljene formulom CWLCRALIKRIQALIPKGGRLLPQLVCRLVLRCS (SEK. ID BR:2);

c) 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfoholin (DPPC) i 1-palmitoil-2-oleil-sn-glicero-3-fosfoglicerol (POPG) u težinskom odnosu od oko 50:50;

sve količine se izračunavaju u odnosu na ukupnu težinu rekonstituisanog surfaktanta.

U jednom specifičnom izvođenju predmetni pronalazak se odnosi na rekonstituisanu kompoziciju surfaktanta koja obuhvata:

a) oko 1.5% po težini analoga polipeptida nativnog surfaktanta proteina SP-C koji se sastoji od sekvence predstavljene formulom IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLLGL (SEK. ID BR:1);

b) oko 0.2% po težini polipeptidanog analoga nativnog surfaktanta proteina SP-B koji se sastoji od sekvence predstavljene formulom CWLCRALIKRIQALIPKGGRLLPQLVCRLVLRCS (SEK ID BR:2);

c) oko 49.15% po težini 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfoholina (DPPC); i

d) oko 49.15% po težini 1-palmitoil-2-oleil-sn-glicero-3-fosfoglicerola (POPG);

sve količine se izračunavaju u odnosu na ukupnu težinu rekonstituisanog surfaktanta.

U poželjnom izvođenjui, polipeptid SEK. ID BR:2 može biti u obliku disulfid povezanog molekula, pri čemu su intramolekularne disulfidne veze između dva cisteinska ostatkana na pozicijama 1- i 33- i/ili između dva cisteinska ostatka na 4- i 27- pozicijama.

Polipeptid od SEK. ID BR:1 je naveden u WO 2008044109 (ovde uključen u svojoj celini putem reference) kao SP-C33(Leu), dok polipeptid SEK. ID BR:2 je naveden u WO 2008044109 kao Mini-B(Leu), i njegov disulfidni povezani oblik kao ox Mini-B(Leu).

U još poželjnijem izvođenju, rekonstituisani surfaktant predmetnog pronalska se u osnovi sastoji od komponenti a), b), c), i opciono d) u količinama za koje je tražena zaštita.

uključuju, na primer, soli hlorovodonične kiseline, sirćetne kiseline i trifluorosirćetne kiseline.

Poželjno su oba polipeptida prisutna u kompoziciji u obliku acetata.

Takođe POPG može biti povoljno prisutan u obliku farmaceutski prihvatljivih soli, na primer kao natrijumova so (POPG Na).

Polipeptidi od SEK. ID BR:1 i SEK. ID BR:2 mogu biti pripremljeni prema sintetičkim postupcima ili rekombinantnim tehnikama dobro poznatim stručnjaku sa ovog područja tehnike.

Odličan rezime mnogih dostupnih tehnika može se naći u J.M. Steward and J.D. Young, "Solid Phase Peptide Synthesis", W.H. Freeman Co., San Francisco, 1969, and J. Meienhofer, "Hormonal Proteins and Peptides", Vol.2, p. 46, Academic Press (New York), 1983 for solid phase peptide synthesis, and E. Schroder and K. Kubke, "The Peptides", Vol. 1, Academic Press (New York), 1965 za klasičnu sintezu rastvora.

Polipeptidi mogu biti poželjno pripremljeni korišćenjem čvrste faze sintetičke tehnike koju su prvobitno opisali Merrifield, in J. Am. Chem. Soc. 85: 2149-2154 (1963). Druge tehnike sinteze polipeptida mogu se naći, na primer, u M. Bodanszky et al., Peptide Synthesis, John Wiley & Sons, 2d Ed., (1976) kao i na drugim referentnim radovima koji su poznati stručnjacima sa ovog područja tehnike.

Odgovarajuće zaštitne grupe za upotrebu u takvoj sintezi će se naći u iznad navedenim tekstovima, kao i u J.F.W. McOmie, Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press, New York, NY (1973).

Na primer, oba polipeptida mogu biti pripremljena kao što je opisano u W02008044109.

Efikasne doze rekonstituisanog surfaktanta predmetnog pronalaska za lečenje bolesti, kao što je RDS, kao što je opisano ovde, variraju od mnogo različitih faktora, uključujući tip bolesti, način primene, težinu i fiziološko stanje pacijenta, i da li je lečenje profilaktičko ili terapijsko.

Uopšteno, doza se sastoji od 0.01 mg do 10 g po kg telesne težine, poželjno od 0.1 do 1 g po kg telesne težine i učestalost primene može varirati zavisno od toga da li je lečenje profilaktičko ili terapijsko. Obično se doza od oko 50 mg/kg, 100 mg/kg ili 200 mg/kg primenjuje u jednoj dozi. Za upotrebu kod novorođenčadi, jedna ili dve primene su uglavnom dovoljne.

Iako potrebe mogu varirati, u zavisnosti od ozbiljnosti respiratorne bolesti i/ili drugih varijabli, određivanje optimalnih raspona za efikasne doze je u okviru veštine stručnjaka sa područja tehnike. Predmetni pronalazak se takođe odnosi na farmaceutske formulacije koje sadrže rekonstituisani surfaktant predmetnog pronalaska.

Navedene formulacije se daju prvenstveno u obliku rastvora, disperzije, suspenzije ili suvog praha. Poželjno navedene kompozicije sadrže rekonstituisani surfaktant rastvoren ili suspendovan u pogodnom fiziološki tolerantnom rastvaraču ili resuspenziji nosača, kao što su voda ili fiziološki slani vodeni rastvor (0.9% w/v NaCl).

Formulacije predmetnog pronalaska mogu sadržavati vodene rastvore, poželjno sterilne, koji mogu takođe sadržavati agense za puferovanje pH, razblaživače i druge pogodne aditive.

Formulacije mogu biti predstavljene u posudama sa jediničnom dozom ili sa višestrukom dozom, na primer u hermetički zatvorenim ampulama i bočicama, i mogu biti čuvane u zamrznutim ili zamrznutosuvm o zovanm usovma za eva u samo o a a s er nog e nog nosa a neposre no pre upotrebe.

Poželjno rekonstituisani surfaktant predmetnog pronalaska se nabavlja kao sterilna suspenzija u puferisanom fiziološkom slanom vodenom rastvoru u staklenim bočicama za jednokratnu upotrebu.

Farmaceutske formulacije mogu biti pripremljene prema uobičajenim tehnikama koje su dobro poznate u farmaceutskoj industriji. Takve tehnike uključuju korak mešanja polipeptida i fosfolipida u prisustvu organskog rastvarača. Rastvarač je zatim uklonjen dijalizom ili isparavanjem pod azotom i/ili izloženošću do vakuma ili drugim pogodnim tehnikama dobro poznatim stručnjaku sa ovog područja tehnike, kao što je liofilizacija.

Povoljno, količina preostalog rastvarača može biti manja od 0.1%, poželjno manja od 0.05%, poželjnije manja od 0.003%, još poželjnije manja od 0.001% težine.

Dobijeni prah je zatim uniformno i blisko doveden u vezu sa tečnim nosačima ili fino usitnjenim čvrstim nosačima ili oboje.

Smeša polipeptida i fosfolipida može biti sterilisana pre uklanjanja rastvarača, na primer sterilnom filtracijom. U drugim određenim izvođenjima, rekonstituisana kompozicuja surfaktanta je terminalno sterilisana u skladu sa postupcima koji su dobro poznati u tehnici.

Primena rekonstituisanog surfaktanta pronalaska se sprovodi na način poznat stručnjaku u ovom području tehnike, npr., intratrahealnim ubacivanjem (infuzijom ili kroz zalogaj ili kroz kateter), putem primene sprejom, ili nebulizacijom.

Kao što je otkriveno ovde, predmetni pronalazak razmatra upotrebu obe, koncentrovane i razblažene formulacije surfaktanta, u zavisnosti od konkretne upotrebe, kao što je opisano ovde dalje. Koncentrovane kompozicije se obično koriste za "zalogaj" tip primene, dok su kompozicije razblaženog surfaktanta obično koriste za "irigacioni" tip primene.

Povoljno viskoznost navedene formulacije je manja od 20 cP, poželjno manja od 15 cP, nakon utvrđivanja sa zajedničkim viskozimetrom dostupnim na tržištu, prema postpcima dobro poznatim u tehnici.

Povoljno, za tip primene "zalogajem", koncentracija rekonstituisanog surfaktanta u odnosu težine po ml rastvora ili suspenzije (nakon dodatka tečnog nosača) je u rasponu od oko 0.1 do oko 100 mg/ml, poželjno između 5 i 80 mg/ml.

U poželjnom izvođenju predmetnog pronalaska, kada je rekonstituisani surfaktant primenjen intratrahealnim ubacivanjem kao suspenzija u fiziološkom slanom rastvoru (0.9% w/v natrijum hlorida u vodi) koncentracija je od oko 80 mg/ml.

Zbog toga, poželjno izvođenje predmetnog pronalaska se odnosi na farmaceutsku formulaciju u obliku vodene suspenzije u fiziološkom rastvoru koja sadrži oko 80 mg/ml rekonstituisanog surfaktanta sastavljenog od

a) oko 1.5% po težini analoga polipeptida nativnog surfaktanta proteina SP-C koji se sastoji od sekvence predstavljene formulom IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILILILGALLLGL (SEK. ID BR:1);

b) oko 0.2% po težini analoga polipeptida nativnog surfaktanta proteina SP-B koji se sastoji od sekvence predstavljene formulom CWLCRALIKRIQALIPKGGRLLPQLVCRLVLRCS (SEK. ID BR:2);

c) oko 49.15% po težini 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfoholina (DPPC); i

izračunavaju u odnosu na ukupnu težinu rekonstituisanog surfaktanta.

Tipično viskoznost navedene formulacije je oko 9 ± 3 cP na 25°C i 8 ± 3 cP na 37°C, što se određuje pomoću običnog rotacionog viskozimetra dostupnog na tržištu.

Kada se koristi za primenu ispiranjem, koncentracija tipičnog surfaktanta je od oko 0.1 do 20 mg/ml, i poželjnije oko 0.5 do 10 mg/ml (u odnosu mg surfaktanta po ml rastvora ili suspenzije).

Budući da to zavisi od koncentracije, viskoznost razblaženih formulacija bi trebala biti čak i niža.

Kada se koriste kao farmaceutsko lečenje, formulacije koje sadrže rekonstituisani surfaktant predmetnog pronalaska mogu biti primenjene bilo same ili opciono u kombinaciji sa drugim jedinjenjima ili kompozicijama koje se koriste u lečenju respiratornih bolesti ili poremećaja. Na primer, ako je subjekt koji se leči za respiratorni poremećaj uzrokovan bakterijskom infekcijom, onda rekonstituisani surfaktant predmetnog pronalaska može biti primenjen u konjugaciji sa drugim jedinjenjem koje se koristi za lečenje bakterijske infekcije, kao što je antibiotik.

Inače, u određenim slučajevima, na primer, za prevenciju komplikacija, kao što su bronhopulmonalna displazija, rekonstituisani surfaktant predmetnog pronalaska može biti primenjen u konjugaciji sa kortikosteroidima, kao što su budesonid i beklometazon dipropionat.

U određenim izvođenjima, rekonstituisani surfaktant predmetnog pronalaska i resuspenzioni nosač mogu biti odvojeno upakovani istovremeno u pogodnu posudu za sredstva. Takovo odvojeno pakovanje komponenata u odgovarajućoj posudi za sredstva je takođe opisano kao komplet.

Zbog toga, ovaj pronalazak se takođe odnosi na komplet, koji obuhvata: a) rekonstituisani surfaktant predmetnog pronalaska u obliku praha, u obliku prve jedinične doze; b) farmaceutski prihvatljiv nosač, u obliku druge jedinične doze; i c) posudu za sredstva za držanje navedenog oblika prve i druge doze. Poželjno farmaceutski prihvatljiv nosač je fiziološki slani vodeni rastvor, poželjnije sterilan.

Kao što je opisano ovde, razni postupci za davanje rekonstituisanog surfaktanta i njegovih formulacija predmetnog pronalaska su dostupni i dobro su poznate stručnjaku sa ovog područja tehnike.

U zavisnosti od tipa bolesti, npr. novorođenčadi ili odrasle osobe sa respiratornim distres sindromom, različite metode lečenja mogu biti odgovarajuće.

Obično se surfaktant primenjivan endotrahijalnim ubacivanjem na pacijentima (npr., prevremeno rođenom dojenčadi) drži pod kontinuiranom ili isprekidanom ventilacijom pozitivnog pritiska (IPPV). Alternativno, surfaktant se može primeniti pomoću tankog katetera smeštenog u dušnik i disanje pacijenta je podržano kroz specijalno dizajnirane nazalne uređaje kao što su maske, kraci ili cevi prema metodologiji poznatoj kao nazalni Kontinuirani Pozitivni Pritisak Disajnog Puta (nCPAP).

Drugi pristup bi bio moguć samo sa surfaktantom koji ima nisku viskoznost, jer bi visoka viskoznost prolaz surfaktanta kroz tanki kateter učinila mnogo težim.

U slučajevima u kojima pacijent pati od stanja respiratornog distresa povezanog sa upalom pluća, plućnom infekcijom i plućnom kontuzijom, mogu se preporučiti određeni načini lečenja. U jednom takvom terapijskom postupku, ispiranje pacijentovih pluća sa kompozicijom surfaktanta predmetnog pronalaska je izveden kao jedan ili više tretmana.

, , , inhibira razvoj simptoma ili stanja povezanih sa respiratornom bolešću.

Naročito je korisno za profilaksu i/ili lečenje sindroma respiratornog distres sindroma (RDS) kod prevremeno rođene dece ili drugih bolesti povezanih sa nedostatkom surfaktanta ili disfunkcijom, uključujući akutne plućne ozlede (ALI), RDS kod odraslih (ARDS), sindrom aspiracije mekonijuma (MAS) i bronhopulmonarnu displaziju (BPD).

Takođe može biti korisno za profilaksu i/ili lečenje drugih respiratornih poremećaja kao što je hronična opstruktivna bolest pluća (COPD), astma, respiratorna infekcija (npr., pneumonija, pneumocistits carinii, cistična fibroza i respiratorni sincitijalni virus), kao i za lečenje zapaljenja srednjeg uha (lepljivo uho). Sledeći primer ilustruje predmetni pronalazak u više detalja.

PRIMERI

Primer 1 - Uticaj komponenti na viskoznost

Konstruisan je multi-faktor eksperimentalnog dizajna za procenu uticaja komponenti na formulaciju u smislu viskoznosti. Testirani su različiti procenti polipeptida SP-C33 (leu) i ox-Mini-B (leu), kao i različiti odnosi DPPC i POPG.

Sve dobijene smeše su resuspendovane u fiziološkom slanom vodenom rastvoru (0.9% w/v) u koncentraciji od 80 mg/ml.

Viskoznost je utvrđena na 25°C i 37°C korišćenjem tzv. "VISCO STAR Plus (Fungilab)" viskozimetra primenjujući brzinu rotacije od 100 r.p.m.

Radi poređenja, tzv. "Curosurf<®">pokazuje viskoznost koja je između 6 i 10 mPas (1 mPas = 1 centipois).

Rezultati su prikazani u Tabeli 1.

Rezultati pokazuju da je kod niskih koncentracija ox-Mini-B(leu) i u prisustvu niskog odnosa između DPPC i POPG (kolona N3 u Tabeli 1) viskoznost smeše vrlo niska. Ovi rezultati pokazuju da se smanjenjem količine SP-B analoga u surfaktantu i istovremenim smanjenjem koncentracije zasićenog fosfolipida u odnosu na nezasićeni fosfolipid kompozicija može dobiti sa viskoznošću koja je dovoljno niska da se koristi za sve aplikacije surfaktanta, uključujući upotrebu u koncentrovanom obliku.

Primer 2 - Karakterizacija rekonsruisanog surrffaktanata N3

Smeša DPPC:POPG Na u odnosu 1:1, SPC-33 (Ieu) i ox Mini-B (Ieu) u procentu količina zabeleženih za kompoziciju N3 u Tabeli 1 iz Primera 1 je rastvorena u hloroform/etanol 98 :2 (v/v).

Rastvarač je evaporisan, i dobijeni prah je naknadno hidratisan u 0.9% w/v vodenom rastvoru Nad, uz mešanje, da se dobije koncentracija surfaktanta od 80 mg/ml.

Viskoznost navedene formulacije potvrđuje da je vrlo niska, npr., oko 9 cP na 25°C i oko 7 cP na 37°C. Štaviše, ona se ne menja posle 6 meseci čuvanja na 5°C.

Formulacija se takođe pojavljuje hemijski stabilna posle šest meseci čuvanja i ukupna količina lizoforma fosfolipida detektovana pomoću HPLC je manja od 1% po težini.

Primeir 3 - In vivo aktivnost rekonstruisanog surfaktanata N3

Rekonstituisani surfaktant iz Primera 2 je ispitan kod prevremeno rođenih kunića, dobijenih histerektomijom u gestacionoj starosti od 27 dana. Eksperimenti su izvedeni bez primene pozitivnog i ekspiratornog pritiska (PEEP).

Životinje koje su primale Curosurf<®>služe kao pozitivna kontrola i netretirani mladunci u istom leglu kao negativna kontrola.

Svi pripravci surfaktanta se primenjuju u koncentraciji od 80 mg/ml i u standardnoj dozi od 2.5 ml/kg.

Nezrela novorođenčad kunića su ventilirana paralelno sa standardiziovanom sekvencom pikova insuflacionih pritisaka. Da bi otvorili pluća, pritisak je prvo postavljen na 35 cmH2O tokom 1 min. Nakon ovog manevarskog regrutovanja, pritisak je snižen na 25 cmH2O tokom 15 minuta i dalje do 20 i 15 cm H2O.

Konačno, pritisak je podignut ponovo na 25 cmH2O tokom 5 min, nakon čega su pluća ventilirana dodatnih 5 minuta sa azotom i zatim isečena za merenje zapremine gasa.

Oba, disajni volumen i plućni volumen vazduha, izraženi kao ml/kg, su mereni i dobijeni rezultati zabeleženi kao vrednosti medijane su na Slikama 1 i 2, redom.

Na slici 1 se može videti da životinje tretirane sa rekonstituisanim surfaktantom iz predmetnog pronalaska pokazuju poboljšanje disajnog volumena nešto bolje nego što se postiže nakon primene Curosurfa<®>. Ovaj rezultat sugeriše da rekonstituisani veštački surfaktant predmetnog pronalaska može obezbediti bolju kliničku efikasnost u odnosu na tekući zlatni standard u oblasti.

Što se tiče plućnog volumena vazduha, Slika 2 pokazuje da je rekonstituisani surfaktant predmetnog pronalaska u mogućnosti povećanja vrednosti koja je uporediva sa onom od rekonstituisanog surfaktanta testiranih u Primeru 3, od WO 2008044109 koji sadrži veći odnos između DPPC i POPG (68:31).

Štaviše, veličina plućnog volumena vazduha od rekonstituisanog surfaktanta predmetnog pronalaska se pojavljuje robusna i ponovljiva.

Claims (9)

PATENTNI ZAHTEVI

1. Kompozicija rekonstituisanog surfaktanta koja obuhvata:

a) od 1.2 do 1.8% po težini analoga polipeptida nativnog surfaktanta proteina SP-C koji se sastoji od sekvence predstavljene formulom

IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLLGL (SEK. ID BR:1);

b) od 0.1 to 0.5% po težini analoga polipeptida nativnog surfaktanta proteina SP-B koji se sastoji od sekvence predstavljene formulom CWLCRALIKRIQALIPKGGRLLPQLVCRLVLRCS (SEK. ID BR:2);

c) mononezasićeni i zasićen fosfolipid u težinskom odnosu u rasponu od 45:55 do 55:45 pri čemu je navedeni mononezasićeni fosfolipid izabran iz grupe koja se sastoji od palmitoiloleoilfosfatidilholina (POPC) i palmitoiloleoilfosfatidilglicerola (POPG) i pri čemu je navedeni zasićeni fosfolipid izabran iz grupe koja se sastoji od dipalmitoilfosfatidilholina (DPPC) i dipalmitoilfosfatidilglicerola (DPPG);

sve količine se izračunavaju u odnosu na ukupnu težinu rekonstituisanog surfaktanta.

2. Rekonstituisani surfaktant prema patentnom zahtevu 1 koji obuhvata:

a) oko 1.5% po težini analoga polipeptida nativnog surfaktanta proteina SP-C koji se sastoji od sekvence predstavljene formulom

IPSSPVH LKRLKLLLLLLLLILLLILGALLLGL (SEK. ID BR:1);

b) oko 0.2% po težini analoga polipeptida nativnog surfaktanta proteina SP-B koji se sastoji od sekvence predstavljene formulom CWLCRALIKRIQALIPKGGRLLPQLVCRLVLRCS (SEK. ID BR:2);

c) 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfoholin (DPPC) i

1-palmitoil-2-oleil-sn-glicero-3-fosfoglicerol (POPG) u težinskom odnosu od oko 50:50; sve količine se izračunavaju u odnosu na ukupnu težinu rekonstituisanog surfaktanta.

3. Rekonstituisani surfaktant prema patentnom zahtevu 2 koji obuhvata:

a) oko 1.5% po težini analoga polipeptida nativnog surfaktanta proteina SP-C koji se sastoji od sekvence predstavljene formulom

IPSSPVH LKRLKLLLLLLLLILLLILGALLLGL (SEK. ID BR:1);

b) oko 0.2% po težini analoga polipeptida nativnog surfaktanta SP-B koji se sastoji od sekvence predstavljene formulom

CWLCRALIKRIQALIPKGGRLLPQLVCRLVLRCS (SEK. ID BR:2);

c) oko 49.15% po težini 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfoholina (DPPC); i

d) oko 49.15% po težini l-palmitoil-2-oleil-sn-glicero-3-fosfoglicerola (POPG);

sve količine se izračunavaju u odnosu na ukupnu težinu rekonstituisanog surfaktanta.

4. Rekonstituisani surfaktant prema bilo kom od zahteva 1 do 3, pri čemu je polipeptid od SEK. ID BR:2 u obliku disulfid vezanog molekula sa intramolekularnom disulfidnom vezom između dva cisteinska ostatka na pozicijama 1- i 33- i/ili između dva cisteinska ostatka na pozicijama 4- i 27-.

5. Rekonstituisani surfaktant prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu je POPG u obliku farmaceutski prihvatljive soli.

6. Rekonstituisani surfaktant prema patentnom zahtevu 5, pri čemu je so natrijumova so.

1. Rekonstituisani surfaktant prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu je svaki od navedenih polipeptida prisutan u obliku farmaceutski prihvatljive soli.

2. Rekonstituisani surfaktant prema patentnom zahtevu 7, pri čemu je so acetatna so.

3. Farmaceutska formulacija koja sadrži rekonstituisani surfaktant prema bilo kom od patentnih zaheva 1 do 8, navedena formulacija je u obliku rastvora, disperzije, suspenzije ili suvog praha, opciono u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača.

4. Farmaceutska formulacija prema patentnom zahtevu 9, pri čemu je navedena formulacija u obliku vodene suspenzije.

5. Farmaceutska formulacija prema patentnom zahtevu 10, pri čemu je rekonstituisani surfaktant sadržan u koncentraciji između 0.1 i 160 mg/ml u vodenoj suspenziji.

6. Komplet, koji sadrži;

a) rekonstituisani surfaktant prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8, u obliku praha u obliku prve jedinične doze;

b) farmaceutski prihvatljiv nosač u obliku druge jedinične doze; i

c) sredstvo za odlaganje znači za držanje navedenog prvog i drugog oblika doziranja.

7. Rekonstituisani surfaktant prema bilo kom od patentnih zahteva 1 to 8, za upotrebu kao leka.

8. Rekonstituisani surfaktant prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8, za upotrebu za lečenje ili profilaksu respiratornog distres sindroma (RDS) kod prevreneno rođenih beba, ili za lečenje ili profilaksu drugih bolesti povezanih sa nedostatkom surfaktanta ili disfunkcijom.

9. Rekonstituisani surfaktant za upotrebu prema patentnom zahtevu 14, pri čemu bolest uključuje RDS kod odraslih (ARDS), sindrom aspiracije mekonijuma (MAS) i bronhopulmonalnu displaziju (BPD).