RS20070185A

RS20070185A - Upotreba androgena za umanjivanje verovatnoće nastanka ili za tretman starenja kože

Info

Publication number: RS20070185A
Application number: RSP-2007/0185A
Authority: RS
Inventors: Mohamed El-Alfy; Fernand Labrie; Lamia Azzi
Original assignee: Endorecherche Inc.,
Priority date: 2004-11-01
Filing date: 2005-10-31
Publication date: 2008-09-29
Also published as: EP1807062A1; US20060178352A1; HRP20070183A2; MX2007005098A; TNSN07163A1; BRPI0517950A; JP2008517952A; GEP20094833B; MA29220B1; EA200700983A1; WO2006047859A1; KR20070073964A; EP1807062A4; AU2005301035A1; IL182844A0; NO20072642L; AP2007003982A0; ZA200703531B; CN101094676A; CA2585666A1

Abstract

Novi postupci tretmana ili umanjenja verovatnoće nastanka bolesti kože koje su rezultat deficijencije androgena povezane sa starošću, posebno atrofije kože, gubitka kolagena, gubitka elastičnih vlakana, gubitka vezivnog tkiva, ce1ulita i nastanka bora, kod podložnih toplokrvnih životinja uključujući ljude, a koji podrazumevaju primenu androgena i/ili prekursora polnog steroida. Takođe su navedeni farmaceutski sastavi za dopremanje aktivnog (ih) sastoj (a) ka koji su korisni prema predmetnom pronalasku.

Description

UPOTREBA ANDROGENA ZA UMANJIVANJE VEROVATNOĆE ILI ZA

TRETMAN STARENJA KOŽE

Oblast pronalaska

[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na postupak tretiranja ili umanjivanja verovatnoće nastanka bolesti kože koje su rezultat deficijencije androgena povezane sa starošću, koji podrazumeva primenu delotvorne količine androgena ili prekursora polnih steroida ili njihovih prekursora lekova kod podložnih toplokrvnih životinja uključujući ljude. Predmetni pronalazak posebno obuhvata primenu androgenih jedinjenja ili prekursora polnih steroida izabranih iz grupe koja se sastoji od dehidroepiandrosterona (DHEA), dehidroepiandrosteron sulfata (DHEA-S) i androst-5-en-3p,17p-diola (5-diola), androstendiona, testosterona, DHT, androstandiona i androstan-3a,17p-diola i prekurskora leka, jedinjenja koje sein vivotransformiše u bilo koje od navedenih jedinjenja. Predmetni pronalazak se takođe odnosi na topijske ili oralne farmaceutske preparate za primenu navedenog postupka.

Stanje tehnike

[0002] Obzirom da je uloga estrogena jajnika kod žena bila skoro isključivi predmet istraživanja, skrenuta je pažnja sa dramatičnog (70%) pada koncentracije DHEA u cirkulaciji koji se odvija već između 20 i 30 godina starosti, kao i od 50 do 60 godina starosti (Migeonet al,1957, JCEM, 17: 1051-1062; Vermeulen & Verdonck, 1976, JCEM, 42: 247-253; Vermeulenet al,1982, JCEM, 54: 187-191; Orentreichet al,1984, JCEM 59: 551-555; Belangeret al,1994, JCEM, 79: 1086-1090; Labrieet al,1997, Labrieet al,1997, JCEM, 82: 2396-2402). Obzorom da se DHEA u perifernim tkivima prevodi i u androgene i u estrogene, takav pad u koncentraciji DHEA i DHEA-S u serumu objašnjava zašto žene u menopauzi pate ne samo od manjka estrogena, već i od progresivnog pada koncentracije androgena koji traje već nekoliko godina.

[0003] Značajno smanjenje sinteze DHEA-S u nadbubrežnim žlezdama tokom starenja (Migeonet al,1957, JCEM, 17: 1051-1062; Vermeulen & Verdonck, 1976, JCEM, 42: 247-253; Vermeulenet al,1982, JCEM, 54: 187-191; Orentreichet al,1984, JCEM 59: 551-555; Belangeret al,1994, JCEM, 79: 1086-1090) dovodi do dramatičnog pada tkivno-specifične sinteze androgena i estrogena u perifernim ciljnim tkivima. Smatra se da je ovaj pad povezan sa bolestima koje su u vezi sa starenjem, •uključujući i rezistenciju na insulin (Colemanet al,1982, Diabetes, 31: 830-833; Schriocket al,1988, JCEM, 66: 1329-1331) i gojaznost (Nestleret al,1988, JCEM, 66: 57-61; MacEwen & Kurzman, 1988, J Nutrit, 121: S51-S55;Tchernof et al,1995, Tchernofet al,1995, Diabetes Care, 18: 292-299). Štaviše, poklonjeno je mnogo pažnje dobrobitima primene DHEA kod žena posle menopauze, posebno na kosti, lojne žlezde, vaginu i opšte zdravlje nakon oralne (Moraleset al,1994, JCEM, 78: 1360-1367; Baulieuet al,2000, Proc Natl Acad Sci USA, 87: 4279-4284), kao i nakon perkutane primene (Diamondet al,1996, J Endocrinol, 150: S43-S50; Labrieet al,1997, JCEM, 82: 3498-3505) prekursorskog steroida.

[0004] Podaci koji pokazuju prisustvo relativno visokih koncentracija androgena kod normalnih žena govore govore u prilog pretpostavci da androgeni igraju veoma važnu, ali još uvek neutvrđenu fiziološku ulogu kod žena. Zapravo, pad u koncentraciji DHEA u serumu od 44,5% koji se odvija od 20, 30 godina pa do 40, 50 godina starosti kod žena pružio bi dobro objašnjenje ranog gubitka koštanog tkiva i povišenog odnosa FSH/LH koji je uočljiv pre merljivog smanjenja sinteze steroida u jajnicima kod žena u perimenopauzi. U stvari, FSH se povećava kod žena pre menopauze čak i pre nego što se pojavi smanjenje koncentracije E2 (Grodinet al,1973, JCEM, 36: 207-214). S druge strane, objavljeno je da gubitak koštanog tkiva koji je u vezi sa starenjem počinje tokom četvrte decenije, dok su i promene u metabolizmu koštanog tkiva takođe primećene pre menopauze (Riggset al,1981, J Clin Invest, 67: 328-335; Mazesset al,1982, Clinic Orthop, 165: 239-252; Johnstonet al,1985, JCEM, 61: 905-911). U skladu sa ovim otkrićima, gustina kostiju bila je niža na svim ispitanim mestima kod žena koje su svrstane u grupu žena u perimenopauzi, u poređenju sa ženama pre menopauze (Steinberget al,1989, JCEM, 69: 533-539).

[0005] Doskora, usled poteškoća u određivanju koncentracija, izvršena su merenja samo ograničenog broja hormona nadbubrega i gonadnih steroida u cirkulaciji tokom starenja, posebno kod žena, kod kojih je uticaj androgena i estrogena iz nadbubrežnih žlezda posebno važan (Labrieet al,1991, Mol Cell Endocrinol, 78: C113-C118). Stoga je veoma interesantno da se najveći deo značajnog pada u koncentraciji DHEA, DHEA-S, androst-5-en-diol-3p,17|3-diola (5-diola), 5-diola-G, androstendiona (4-diona) kao i konjugovanih metabolita androgena, androsteron-glukuronida (ADT-G) i androstan-3a,17P-diol glukuronida (3a-diola-G) u krvi odvija u starosnom dobu od 20 do 30 i 50 do 60 godina, dok su promene koje se dešavaju nakon 60 godina starosti relativno male. Stoga je važno primetiti da je u starosnoj grupi od 50 do 60 godina, koncentracija DHEA u serumu već smanjena za 70% u odnosu na najviše vrednosti u starosnoj grupi od 20 do 30 godina (Labrieet al,1997, JCEM, 82: 2396-2402). Ovakvi podaci ukazuju da bi trebalo rano započeti terapiju zamene androgenih hormona, uzimajući u obzir značajan pad koncentracije androgena do koga dolazi relativno rano tokom procesa starenja kod žena.

[0006] Kao što je u našim ranijim studijama pokazano, dodavanje fizioloških količina egzogenog DHEA omogućava biosintezu androgena i estrogena samo u odgovarajućim ciljnim tkivima koja sadrže potrebne tkivno specifične enzime koji učestvuju u putevima biosinteze steroida. Aktivni androgeni i estrogeni, koji se na taj način sintetišu u specifičnim perifernim tkivima, ostvaruju svoje dejstvo u istim onim ćelijama u kojima su i nastali, te dolazi do jako malog prolaska aktivnih steroida u glavnu cirkulaciju. Zapravo, kao što je prethodno navedeno, najuočljivije dejstvo primene DHEA primećeno je u koncentracijama glukuronskih derivata metabolita DHT, posebno ADT-G i 3a-diola-G, u krvi. Ovi metaboliti se proizvode lokalno u perifernim intrakrinim tkivima koja sadrže odgovarajuće enzime neophodne za sintezu DHT iz prekursora sintetisanih u nadbubrežnim žlezdama, kao što su DHEA i DHEA-S (Labrieet al,1991, Mol Cell Endocrinol, 78: C113-C118; Labrieet al1996, J Endocrinol, 150: S107-S118). Ova lokalna biosinteza i dejstvo androgena u ciljnim tkivima sprečava izloženost drugih tkiva aktivnim androgenima i stoga svodi na najmanju moguću meru rizike od neželjene maskulinizacije ili drugih sporednih efekata dejstva androgena. Isti princip može da se primeni na estrogene, iako smatramo da još uvek nije dostupan pouzdan parametar ukupnog lučenja estrogena (koji bi mogao da se uporedi sa glukuronidima kod androgena).

[0007] Pokazano je da DHEA ima značajne efekte na kožu starijih osoba, od

kojih je najuočljiviji porast u lučenju sebuma (Labrieet al,1997, JCEM, 82: 3498-3505). Ovaj efekat uočen je u brojnim studijama na ženama, posebno onim koje su bile starije od 70 godina, a kod kojih je fiziološki smanjeno lučenje sebuma, te su stoga primetile poboljšanje stanja kože nakon primene DHEA. Pojačanje lučenja sebuma izazvano dejstvom DHEA koje je primećeno u našoj studiji, verovatno je uzrokovano činjenicom da lojne žlezde sadrže sve enzime biosintetskog puta steroida neophodne za katalizu prevođenja DHEA u androgen DHT, te da je ovaj androgen glavni stimulator

aktivnosti lojnih žlezda (Labrieetal,2000, Horm Res, 54: 218-219; Labrieetal,2003, • EndRev, 24: 152-182).

[0008] Osim proizvodnje sebuma, uočena su i druga blagotvorna dejstva DHEA

na kožu. Do danas je izvedena samo jedna detaljna evaluacija dermatoloških aspekata primene DHEA, u jednoj studiji u kojoj je kod muških i ženskih ispitanika starosti između 60 i 79 godina oralno primenjena doza od 50 mg DHEA, jednom dnevno, tokom godinu dana. U toj studiji (Baulieuet al,2000, Proc Natl Acad Sci USA, 97: 4279-4284) procenjivana je hidratacija kože, pigmentacija kože i debljina kože. Površinska hidratacija kože značajno je povećana u celokupnoj populaciji pacijenata kod kojih je primenjivan DHEA, što je utvrđeno pregledom nakon 12 meseci tretmana. Površinska hidratacija kože smatra se veoma korisnom za kožu, posebno kod starijih ljudi, obzirom da je kod ove populacije koža gruba, upravo zbog toga što je suva. DHEA je, takođe, doveo do značajnog smanjenja pigmentacije kože lica (žute boje kože) kod svih ispitanika. Ovo smanjenje bilo je značajnije kod žena preko 70 godina starosti koje su i bile zabrinutije zbog promena u pigmentu kože nastalih usled starenja. Druge dve komponente boje kože ostale su stabilne tokom studije (t.j. ton i crvenilo).

[0009] U US 5,843,932 opisan je postupak tretmana atrofije kože ili inhibicije

gubitka kolagena iz vezivnih tkiva primenom DHEA, DHEA-S ili jedinjenja koje sein vivoprevode u bilo koje od ova dva jedinjenja.

Kratak opis pronalaska

[0010] Cilj predmetnog pronalaska je da obezbedi delotvorne postupke tretmana bolesti kože povezanih sa nedostatkom androgena prouzrokovanim starenjem.

[0011] Još jedan cilj predmetnog pronalaska je da obezbedi delotvorne postupke tretmana bolesti kože povezanih sa nedostatkom prekursora polnih steroida prouzrokovanim starenjem.

[0012] Još jedan cilj je da se obezbedi postupak smanjenja rizika od razvoja navedenih problema.

[0013] U jednom rešenju, predmetni pronalazak odnosi se na postupak tretmana ili smanjenja rizika od nastanka atrofije kože, koji se sastoji od primene delotvorne količine androgena ili njihovih prekursora lekova kod pacijenata kojima je takav tretman ili takvo smanjenje rizika potrebno.

[0014] U još jednom rešenju, predmetni pronalazak odnosi se na postupak tretmana ili smanjenja rizika od gubitka kolagena, koji se sastoji od primene delotvorne količine androgena ili njihovih prekursora kod pacijenata kojima je potreban takav tretman ili takvo smanjenje rizika.

[0015] U daljem rešenju, predmetni pronalazak se odnosi na postupak tretmana ili smanjenja rizika od gubitka elastičnih vlakana, koji se sastoji od primene delotvorne količine androgena ili njihovih prekursora lekova kod pacijenata kojima je potreban takav tretman ili takvo smanjenje rizika.

[0016] U još jednom rešenju, predmetni pronalazak se odnosi na postupak tretmana ili smanjenja rizika od gubitka elastičnih vlakana, koji se sastoji od primene delotvorne količine prekursora polnih steroida ili njihovih prekursora lekova kod pacijenata kojima je potreban takav tretman ili takvo smanjenje rizika.

[0017] U još jednom rešenju, predmetni pronalazak se odnosi na postupak tretmana ili smanjenja rizika od gubitka vezivnog tkiva, koji se sastoji od primene delotvorne količine androgena ili njihovih prekursora lekova kod pacijenata kojima je potreban takav tretman ili takvo smanjenje rizika.

[0018] U još jednom daljem rešenju, predmetni pronalazak se odnosi na postupak tretmana ili smanjenja rizika od nastanka celulita, koji se sastoji od primene delotvorne količine androgena ili njihovih prekursora lekova kod pacijenata kojima je potreban takav tretman ili takvo smanjenje rizika.

[0019] U još jednom rešenju, predmetni pronalazak se odnosi na postupak tretmana ili smanjenja rizika od razvijanja bora, koji se sastoji od primene delotvorne količine androgena ili njihovih prekursora lekova kod pacijenata kojima je potreban takav tretman ili takvo smanjenje rizika.

[0020] U još jednom rešenju, predmetni pronalazak odnosi se na postupak tretmana ili smanjenja rizika od razvijanja celulita, koji podrazumeva povećanje koncentracije prekursora polnih steroida odabranih iz grupe koja se sastoji od dehidroepiandrosterona (DHEA), dehidroepiandrosteron-sulfata (DHEA-S) i androst-5-en-3p,17|3-diola (5-diola), kod pojedinca ili pacijenta kome je takav tretman ili dati prekursor steroida neophodan.

[0021] U još jednom rešenju, predmetni pronalazak odnosi se na postupak tretmana ili smanjenja rizika od dobijanja bora, koji podrazumeva povećanje koncentracije prekursora polnih steroida odabranih iz grupe koja se sastoji od dehidroepiandrosterona (DHEA), dehidroepiandrosteron-sulfata (DHEA-S) i androst-5-en-3p,17p-diola (5-diola), kod pojedinca ili pacijenta kome je takav tretman ili dati prekursor steroida neophodan.

[0022] U još jednom rešenju, predmetni pronalazak odnosi se na postupak tretmana ili smanjenja rizika od gubitka elastičnih vlakana, koji podrazumeva povećanje koncentracije prekursora polnih steroida odabranih iz grupe koja se sastoji od dehidroepiandrosterona (DHEA), dehidroepiandrosteron-sulfata (DHEA-S) i androst-5-en-3p,17P-diola (5-diola), kod pojedinca ili pacijenta kome je takav tretman ili dati prekursor steroida neophodan.

[0023] U još jednom rešenju, predmetni pronalazak odnosi se na postupak

tretmana ili smanjenja rizika od razvijanja atrofije kože, koji podrazumeva primenu androstendiona, androstandiona, testosterona, dihidrotestosterona, 5a-androstan-3a,17P-diola ili jedinjenja koja se prevode u navedena jedinjenja, kod pojedinca ili pacijenta kome je takav tretman potreban.

[0024] U još jednom rešenju, predmetni pronalazak odnosi se na postupak

tretmana ili smanjenja rizika od gubitka kolagena, koji podrazumeva primenu

androstendiona, androstandiona, testosterona, dihidrotestosterona, 5a-androstan-3a,17(3-diola ili jedinjenja koja se prevode u navedena jedinjenja, kod pojedinca ili pacijenta kome je takav tretman potreban.

[0025] U još jednom rešenju, predmetni pronalazak odnosi se na postupak

tretmana ili smanjenja rizika od gubitka elastičnih vlakana, koji podrazumeva primenu androstendiona, androstandiona, testosterona, dihidrotestosterona, 5a-androstan-3a,17<p->diola ili jedinjenja koja se prevode u navedena jedinjenja, kod pojedinca ili pacijenta kome je takav tretman potreban.

[0026] U još jednom rešenju, predmetni pronalazak odnosi se na postupak

tretmana ili smanjenja rizika od gubitka vezivnog tkiva, koji podrazumeva primenu androstendiona, androstandiona, testosterona, dihidrotestosterona, 5a-androstan-3a,17p-diola ili jedinjenja koja se prevode u navedena jedinjenja, kod pojedinca ili pacijenta kome je takav tretman potreban.

[0027] U još jednom rešenju, predmetni pronalazak odnosi se na postupak

tretmana ili smanjenja rizika od razvijanja bora, koji podrazumeva primenu androstendiona, androstandiona, testosterona, dihidrotestosterona, 5a-androstan-3a,17<p->diola ili jedinjenja koja se prevode u navedena jedinjenja, kod pojedinca ili pacijenta kome je takav tretman potreban.

[0028] U još jednom rešenju, predmetni pronalazak odnosi se na postupak

tretmana ili smanjenja rizika od razvijanja celulita, koji podrazumeva primenu androstendiona, androstandiona, testosterona, dihidrotestosterona, 5<x-androstan-3a,17P-

diola ili jedinjenja koja se prevode u navedena jedinjenja, kod pojedinca ili pacijenta kome je takav tretman potreban.

[0029] U još jednom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje topijski

farmaceutski preparat koji sadrži androgene, zajedno sa farmaceutski prihvatljivim razblaživačima ili nosačima.

[0030] U jednom rešenju, dati prekursor je DHEA. • [0031 ] U još jednom rešenju, dati androgen je testosteron ili njegovi derivati.

[0032] U predmetnoj prijavi, pod pojmom androgen podrazumeva se jedinjenje

(ili jedan od njegovih metabolita) čija je Ki vrednost za humani androgeni receptor manja od oko 2 x 10"<8>M i čiji inhibitorni efekat na rast ćelija humanog kancera dojke ZR-75-1, posredovan androgenim receptorom, dostiže vrednost koja je polovina najveće moguće vrednosti, pri koncentraciji ispod 10 nanomola po litru, ili jedinjenje (ili jedan od njegovih metabolita) za koje se dobija pozitivan rezultat u postupku ispitivanja opisanom u US privremenoj prijavi pod naslovom "Postupak za određivanje anaboličke aktivnosti", podnesenoj 30.08.2004, pod brojem prijave 60/606,174.

[0033] Pacijent kome je potreban tretman ili smanjenje rizika od razvijanja date

bolesti je ili onaj pacijent kome je postavljena dijagnoza date bolesti ili pacijent koji je podložan razvijanju takve bolesti.

[0034] Osim ukoliko je navedeno drugačije, poželjna doza aktivnih jedinjenja

(koncentracija i načina primene) prema predmetnom pronalasku je identična i za terapeutske i za profilaktičke svrhe. Doza za svako od aktivnih jedinjenja koje je ovde opisano je ista, bez obzira na to koja se bolest leči (ili za koju se smanjuje verovatnoća nastanka).

[0035] Osim ukoliko je drugačije navedeno ili ukoliko je iz konteksta očigledno,

doze koje su ovde navedene odnose se na masu aktivnih jedinjenja bez uticaja farmaceutskih ekscipijenata, rastvarača, nosača ili drugih sastojaka, iako je poželjno da takvi dodatni sastojci budu uključeni, kao što je pokazano u primerima u ovoj prijavi.

Bilo koji dozni oblik, posebno preparati za topijsku primenu (gelovi, losioni, kreme, melemi i slični), koji je u uobičajenoj upotrebi u farmaceutskoj industriji, pogodan je za upotrebu prema predmetnom pronalasku, dok se pod terminima "ekscipijent", "razblaživač", ili "nosač" obuhvataju takvi neaktivni sastojci koji se, u struci, obično uključuju, zajedno sa aktivnim sastojcima, u date dozne oblike. Na primer, tipična krema, sredstvo za prodiranje, konzervansi ili slična sredstva mogu da budu uključeni u sastav topijskih preparata.

[0036] Svi aktivni sastojci koji se upotrebljavaju u bilo kojoj od terapija koje su ovde opisane mogu da budu formulisani u farmaceutske preparate • koji, takođe, obuhvataju jedan ili veći broj drugih aktivnih sastojaka. Alternativno, ovakvi sastojci mogu da se primenjuju odvojeno, ali u dovoljno kratkom vremenskom periodu tako da se kod pacijenta istovremeno postignu povišene koncentracije u krvi svakog od aktivnih sastojaka (ili strategija njihove primene), ili tako da pacijent na neki drugi način uživa dobrobit od svakog od aktivnih sastojaka (ili strategija njihove primene). U nekim poželjnim rešenjima predmetnog pronalaska, na primer, jedan ili veći broj aktivnih sastojaka formulišu se u jedinstven farmaceutski preparat.

Kratak opis slika

[0037]Na slici 1 prikazano je poređenje kože leđa mužjaka i ženke miša.

(A) Parafinski preseci mišje kože leđa, obojeni hematoksilinom i eozinom. a) Kod intaktnih mužjaka, svi folikuli dlaka su u telogen fazi i nalaze se u dermisu, koji je u

dodiru sa tankim slojem hipodermisa. b) Kod intaktnih ženki, svi folikuli dlaka su takođe u telogen fazi, dok je hipodermis deblji u odnosu na hipodermis mužjaka, a dermis je uži. c) Nakon GDX, folikuli dlaka kod mužjaka su u fazi kasnog anagena. d) Kod GDX ženki, svi folikuli dlaka su u anagen fazi. Epidermis (E), dermis (D), hipodermis (H),panniculus carnosus(PC) i folikuli dlaka (HF). Duž razmere je 100 um. (B) Poređenje ukupne debljine kože kod mužjaka i ženki, kao i debljine svakog sloja kože (epidermisa, dermisa, hipodermisa) kod intaktnih GDX životinja i kod GDX životinja tretiranih upotrebom DHT, E2 ili DHEA. Vrednosti su date kao srednje vrednosti ± standardna greška srednjevrednosti. * p <0,05 u odnosu na kontrolu kod GDX mužjaka; ^p < 0,01 u odnosu na kontrolu kod GDX ženki (Duncan-Kramer test višestrukih opsega).

[0038]Na slici 2 prikazana je ekspresija androgenog receptora (AR) u epidermisu kože leđa miša.Pronađeno je da se AR nalazi isključivo u jedrima, a) Kod intaktnog mužjaka, većina epidermalnih jedara je odreagovala sa obeleživačem. b) Kod intaktnih ženki, većina epidermalnih jedara je odreagovala sa obeleživačem, ali je intenzitet obeležavanja manji nego kod mužjaka. Tri nedelje nakon GDX, kod GDX mužjaka (c) kao ni kod GDX ženki (d), više nije bilo moguće otkriti reakcije sa obeleživačem. Kada su mužjaci (e) i ženke (f) GDX miševa tretirani pomoću DHT, primećena je intenzivna reakcija sa obeleživačem za AR u većini jedara epidermalnih ćelija. Kada su GDX mužjaci (g) i ženke (h) primili E2, u nekim jedrima je otkrivena slaba reakcija sa obeleživačem AR. Slično tretmanu pomoću DHT, kada su GDX mužjaci (i) i ženke (j) tretirani pomoću DHEA, primećena je intenzivna reakcija sa obeleživačem u većini jedara epidermalnih ćelija. Duž razmere je 20 um

[0039]Na slikama 3i4 prikazano je poređenje kože lica tretirane pomoću DHEA (desna strana lica) sa netretiranom kožom (leva strana lica).Trista mikrolitara (0,3 ml) emulzije koja sadrži DHEA nanošeno je na kožu čela i desne strane lica tokom 13 nedelja.

Detaljan opis pronalaska

[0040] Predmetni pronalazak pokazuje daje glavno dejstvo androgena uočeno u pogledu debljine dermisa. Zapravo, poznato je da su kolagen i elastična vlakna glavni sastojci dermisa koji obezbeđuju potporu za otpornost kože, a smatra se da bi mogli imati i ulogu u nastanku bora. Nakon tretmana pomoću DHT i DHEA kod GDX ženki primećen je porast debljine dermisa (slika 1) dok je, u svim drugim uslovima u eksperimentu, dermis bio deblji kod mužjaka, što verovatno objašnjava izostanak efekata androgena kod mužjaka tokom perioda tretmana od 3 nedelje. Izražene razlike među polovima primećuju se i u hipodermisu intaktnih životinja, čime se obezbeđuju dalje sličnosti sa kožom ljudi (Hattoriet al,1993), te što navodi na zaključak da bi DHEA i androgeni mogli da budu blagotvorni u smanjenju rizika ili u tretmanu celulita.

[0041] Na modelu miša, prema predmetnom pronalasku jasno su utvrđene morfološke razlike između mužjaka i ženki u različitim slojevima kože kod miša, kao i u adneksima kože. Štaviše, identifikovana je specifična i diferencijalna uloga androgena i estrogena na različitim mestima, te su pronađeni dokazi za dejstvo DHEA, posredovano androgenima, u dermisu, a estrogena u epidermisu.

[0042] Poželjno je da je aktivni sastojak za topijsku primenu zastupljen u procentu od 0,05% do 20%, prema masi u odnosu na ukupnu masu farmaceutskog preparata, još poželjnije je da taj opseg koncetracija bude između 0,1% i 10% za DHEA ili 5-diol i od 0,1% do 3% za androgene. Alternativno, aktivni sastojak može da se primeni u obliku transdermalnog flastera čija je struktura poznata u struci, na primer, čija je struktura slična onim opisanim u E. P. Patentu br. 0279982.

[0043] Kada se priprema u obliku melema, losiona, gela ili kreme, ili u nekom sličnom obliku, aktivnom sastojku dodaje se odgovarajući nosač koji je kompatibilan sa ljudskom kožom ili mukozom. Odgovarajući nosači su poznati struci i obuhvataju, ali nisu ograničeni na, Klucel HF i Glaksal bazu. Neki su komercijalno dostupni, npr. Glaksal baza dostupna preko Glaxal Canada Limited Companv. Drugi pogodni vehikulumi mogu da se nađu u Koller & Buri, S. T. P. Pharma 3 (2), 115 - 124, 1987. Poželjno je da nosač bude tako izabran da se aktivni sastojak(ci) rastvara(ju) u njemu na sobnoj temperaturi u koncentraciji u kojoj se koristi dati aktivni sastojak. Nosač treba da bude dovoljno viskozan da zadrži steroid u ograničenoj oblasti kože ili mukoze na koju je preparat primenjen, bez curenja ili isparavanja, tokom dovoljno dugog vremenskog perioda koji omogućava prodor prekursora ili androgena kroz lokalizovanu oblast na koži koji je dovoljan da dovede do željenog kliničkog efekta. Nosač je obično smeša nekoliko komponenti, npr. farmaceutski prihvatljivih rastvarača i sredstva za zgušnjavanje. Smeša organskih i neorganskih rastvarača može da pomogne hidrofilnu i lipofilnu rastvorljivost, npr. smeša vode i alkohola, kao što je etanol ili propilen glikol.

[0044] Poželjni prekursori polnih steroida su dehidroepiandrosteron (DHEA)

(dostupan preko Diosvnth Inc., Čikago, Ilinoj, SAD), 5-androsten-3p,17p-diol (dostupan preko Steraloids, Vilton, Nju Hempšir, SAD).

[0045] Još jedan poželjan prekursor polnih steroida je 4-androsten-3,17-dion, dostupan preko Sigma-Aldrich Canada Ltd, Oukvil, Ontario, Kanada.

[0046] Jedan poželjan androgen, prema predmetnom pronalasku, je Stanolon (5a-androstan-17p-ol-3-on, DHT), dostupan preko Sigma-Aldrich Canada Ltd, Oukvil, Ontario, Kanada.

[0047] Još jedan poželjan androgen je AndroGel, gel koji sadrži 1% testosterona u alkoholu, vodu, karbopol 980 NF, izopropil miristat i 0,1M natrijum hidroksid, koji je dostupan preko Solvav Pharma, Markam, Ontario, Kanada.

[0048] Jedan poželjan androgen sa sistemskim dejstvom je Androderm, flaster koji sadrži 12,2 ili 24,3 mg testosterona, dostupan preko Laboratoires Paladin Ine, Montreal, Kvebek, Kanada.

[0049] Drugi estri testosterona (testosteron undekanoat, dostupan preko Organon Canada Ltd, Skarsbro, Ontario, Kanada, pod imenom andriol, testosteron enantat, dostupan preko Theramed Corporation, Misisoga, Ontario, Kanada, pod imenom Delatestril, testosteron cipionat dostupan preko Pfizer Canada, Kirland, Kanada pod imenom Depo-testosteron (cipionat) ili preko Sabex, 2002 Inc., Bučervil, Kvebek, Kanada pod imenom USP injekcije testosteron cipionata) i derivati [npr. nandrolon (19-nor testosteron) i estri (nandrolon dekanoat dostupan preko Organo Canada Ltd, Skarsbro, Ontario, Kanada pod imenom deka-durabolin)], metiltestosteron dostupan preko Sigma-Aldrich Canada Ltd, Oukvil, Ontario, Kanada, takođe su poželjni.

[0050] Takođe je poželjno da androgen bude 5a-androstan-3a,17P-diol i 5a-androstan-3,17-dion, oba dostupna preko Sigma-Aldrich Canada Ltd, Oukvil, Ontario, Kanada.

[0051] Poželjno je daje prekursor polnog steroida ili androgen pripremljen u obliku alkogolnog gela koji sadrži od 1,0 do 10 % kaprilnog - kaprinskog triglicerida (Neobee M-5); 10 do 20 % heksilen glikola; 2,0 do 10% dietilenglikol monometil etra (Transutol); 2,0 do 10 % Ciklometikona (Dow Corning 345); 1,0 do 2 % benzil alkohola i 1,0 do 5,0 % hidroksipropilceluloze (Klucel HF).

[0052] Takođe je poželjno da je prekursor polnog steroida ili androgen pripremljen u obliku kreme koja sadrži od 2,0 do 4,0 % laurilmetikon kopoliola, 5,0 do 7,0 % ciklometikona, 2,0 do 4,0 % mineralnog ulja, 6,0 do 8,0 % cetaril izononoata, 0,5 do 1,5 % Eumuglina B2, 0,01 do 0,1 % butilovanog hidroksitoluena, 49,0 do 60,0% propilen glikola, 10 do 20 % vode, 0,5 do 1,5 % magnezijum sulfata, 4,0 do 6,0 % etanola i 0,1 do 3,0 % prekursora polnog steroida ili androgena.

[0053] Takođe je poželjno da je prekursor polnog steroida ili androgen pripremljen u obliku kreme koja sadrži 0,1 do 10 % prekursora polnog steroida ili androgena, 10 do 25 % voska za emulzifikaciju, 5 do 20 % lakog mineralnog ulja, 0,5 do 2,0 % benzil alkohola, 20 do 40 % etanola (95% etanola) i 20 do 40 % vode.

[0054] Takođe je poželjno da je prekursor polnog steroida ili androgen pripremljen u obliku kreme koja sadrži 0,1 do 10 % prekursora polnog steroida ili androgena, 2 do 10 % cetil alkohola, 5 do 10 % voska cetil estara, 0,25 do 0,5 % feniletil alkohola, 5 do 10 % belog voska, 20 do 40 % vode, 20 do 40 % glicerola, 2,0 do 10,0 % mineralnog ulja, 1,0 do 5,0 % natrijum lauril sulfata, 3,0 do 6,0 % gliceril monostearata, 3,0 do 6,0 propil glikol monostearata, kao i 1 do 5,0 % metil stearata.

[0055] Takođe je poželjno da je prekursor polnog steroida ili androgen pripremljen tako daje pogodan za oralnu primenu, kao kapsula koja sadrži 10 do 50 mg derivata androgena ili prekursora polnog steroida.

[0056] Nosač takođe može da obuhvata različite aditive koji su u uobičajenoj upotrebi u kremama i losionima i dobro su poznati u kozmetičkoj i medicinskoj struci. Na primer, mogu da budu prisutni mirisi, antioksidanti, parfemi, sredstva za geliranje, sredstva za zgušnjavanje kao što je karboksimetilceluloza, surfaktanti, stabilizatori, emolienti, boje, kao i druga slična sredstva.

[0057] Poželjno je da klinički lekar koji vodi slučaj prati, posebno na početku tretmana, opšti odgovor pojedinačnog pacijenta i koncentracije DHEA ili androgena, a posebno da prati opšti odgovor pacijenta na tretman i da podešava doze prema potrebi, kod onih pacijenata kod kojih je atipičan metabolizam ili reakcija na tretman.

[0058] Tipična doza za topijsku primenu prekursora polnog steroida ili androgena je 5 mg do 200 mg aktivnog sastojka na dan, na 50 kg telesne mase, a poželjno je da to bude 20 do 60 mg na dan.

Ukoliko se odabere oralna primena, trebalo bi primeniti 10 do 100 mg aktivnog sastojka, jednom dnevno, na 50 kg telesne mase.

Primeri delorvornosti predmetnog pronalaska

Primer 1

Materijali i postupci

Životinje i tretmani

[0059] Pedeset šest odraslih mužjaka i ženki C57BL6 miševa, starih 13 do 15 nedelja, dobijeno je iz Harlan laboratorije (Indijana, SAD). Miševi su podeljeni u četiri grupe od po 7 životnija slučajnom raspodelom, na sledeći način: (1) kontrolna grupa sa intaktnim životinjama; (2) kontrolna grupa sa GDX životinjama; (3) GDX + DHT (0,1 mg/mišu); (4) GDX + DHEA (6,25 mg/mišu). Prvog dana ispitivaja, izvršena je bilaterlana GDX, kao što je opisano (Castro, 1974 i Fleischman, 1981) kod svih životinja, sem kod onih u prvoj grupi kod kojih je izvršena lažna operacija. Od drugog dana nakon GDX i tokom naredne tri nedelje, dnevno je primenjivan DHEA, oralno, u obliku suspenzije u 4 % metilcelulozi i 5 % etanolu, kod životinja u odgovarajućim grupama. Životinjama u kontrolnim grupama sa intaktnim životinjama i GDX životinjama, davan je samo vehikulum, tokom istog vremenskog perioda. Šest časova nakon poslednjeg tretmana, sve životinje su žrtvovane.

[0060] Oralne doze DHEA odabrane su prema prethodno objavljenim studijama (Labrieet al.,1996; Labrieet al,2003b). Na ovaj način, odabrane fiziološke doze u potpunosti su preokrenute atrofiju organa osetljivih na hormone izazvanu GDX, te su dovele do toga daje masa organa bila slična onim pronađenim u intaktnim životinjama. Obzirom da je poznato da je DHT slabo aktivan kada se primenjuje oralnim putem, on je primenjivan putem potkožnih injekcija. Kako bi se odredila doza DHT, prvo je izvršena preliminarna studija opsega doza (pogledati dodatni materijal dostupan preko interneta, internet tabela SI).

Obrada tkiva

[0061] Nakon brijanja duge dlake, koža leđa je isečena, poravnata, te bez

odlaganja potopljena u 10 % puferisani formalin. Uzorak je utisnut u parafinski blok, iz

koga su isečci od po 4 um isečeni, te rutinski obojeni. Drugi deo kože korišćen je u tehnici celovite postavke, kao stoje opisano (Badertscher JA, 1940, Stain Technol, 15: 29 - 30).

Analiza debljine kože

[0062] Pod svetlosnim mikroskopom izvršena su merenja pomoću IMAGE-PRO

PLUS (Media Cvbernetics, SAD). Sa svakog sloja kože svake od životinja zabeleženo je po 25 očitavanja. Debljina epidermisa merena je odstratum basaledostratum granulosum(izuzimajućistratum corneum),dok je debljina dermisa računata kao razdaljina između epidermisa i hipodermisa. Konačno, debljina hipodermisa merena je kao razdaljina od dermisado panniculus carnosus.

Imunohistohemija

[0063] Parafinski isečci izdvojeni su iz parafina i rehidratisani. Aktivnost

endogene peroksidaze eliminisana je prethodnom inkubacijom u 3 % H2O2u metanolu, tokom 30 min. Primenjena je tehnika regeneracije pomoću mikrotalasa, uz upotrebu citratnog pufera (Tacha & Chen, 1994), dok su nespecifična mesta vezivanja neutralisana pomoću 10 % kozjeg seruma. Isečci su potom inkubirani 60 min na sobnoj temperaturi sa MtB-5 klonom mišjeg anti-Ki-67 antitela (1 : 60) (Dako Diagnostic, CA, SAD), ili 90 min na sobnoj temperaturi sa zečjim anti-androgeni receptor antitelom (AR) (1 : 300) (N-20; Santa Cruz Biotechnologv, Inc., CA, SAD). Komplet zimovanog SP (San Francisko, CA, SAD) i Vectastain Elite ABC Komplet (Vector Laboratories, Inc. Burlingejm, CA SAD) korišćeni su za AR i Ki-67 antitela, redom. Kao hromogen

je korišćen diaminobenzidin, uz praćenje procesa pod mikroskopom. Za procenu Ki-67, izračunat je indeks obeležavanja za 400 ćelija iz svake životinje.

Statistička analiza

[0064] Podaci su izraženi kao srednje vrednosti ± standardna greška srednje vrednosti. Statistički značaj određenje prema Duncan - Kramer testu višestrukih opsega (Kramer CY, 1956, Biometrics, 12: 307 - 310).

Rezultati

[0065] Morfološko ispitivanje dorzalne kože mužjaka i ženki miševa starih 16 do 18 nedelja, pokazalo je da su razlike između polova u opštoj debljini kože, kao i u proporcijama različitih slojeva kože, jasno vidljive (slike 1A i 1B). Zapravo, glavna razlika leži u činjenici da je dermis mužjaka značajno deblji od dermisa ženke, dok su epidermis i hipodermis deblji kod ženki, što dovodi do toga da je koža ukupno 40 % deblja kod mužjaka.

Epidermis

[0066] Epidermis intaktnih ženki je približno 40 % deblji nego kod mužjaka (p

< 0,01). Tri nedelje nakon GDX, debljina epidermisa kod ženki smanjila se za 40 % (p

< 0,01) dok je, nakon tretmana pomoću DHEA uočeno povećanje od 13 % (p < 0,05).

[0067] Kao što pokazuje broj bazalnih ćelija pozitivnih na Ki-67, pronađeno je daje proliferacija ćelija izraženija kod intaktnih ženki (11,8 ± 0,7 u odnosu na 9,3 ± 0,4, p < 0,05), što ukazuje na prisustvo razlike između polova. Štaviše, tri nedelje nakon GDX, intenzitet proliferacije ćelija kod ženki se smanjio za 27 % (8,6 ± 0,7, p < 0,01), što je vrednost veoma slična onoj koja se uočava kod intaktnih mužjaka. Uočeno je daje intenzitet imunobojenja na AR nešto viši kod intaktnih mužjaka nego kod ženki (slike 2a, 2b). Tri nedelje nakon GDX, ekspresija AR u epidermalnim ćelijama mužjaka se smanjila na nivo sličan onom koji se sreće kod ženki (slike 2c, 2d). Kada su GDX životinje primile DHT ili DHEA i kod ženki i kod mužjaka uočena je značajna ekspresija AR (slike 2e, 2i, 2f, 2j).

Dermis

[0068] Kod intaktnih životinja, dermis je 190 % deblji kod mužjaka nego kod ženki (p < 0,01). Nakon GDX, debljina dermisa kod ženki povećala se za 22 % (p < 0,05) dok smanjenje debljine dermisa kod mužjaka od 7 % nije bilo statistički značajno. Samo kod GDX ženki, tretmani pomoću DHT i DHEA značajno su povećali debljinu dermisa, za 47 % (p < 0,01) i 19 % (p < 0,05), redom.

Hipodermis

[0069] Hipodermis kod intaktnih ženki bio je približno 11 puta deblji nego kod mužjaka (p < 0,01). Kao što se vidi sa slike 1B, nakon GDX, debljina hipodermisa povećala se i kod mužjaka i kod ženki miševa (p < 0,01), dok je tretman pomoću DHT, E2ili DHEA doveo do značajnog smanjenja debljine hipodermisa kod GDX životinja oba pola (p < 0,01). Ovakvi rezultati ukazuju daje tretman pomoću DHT, E2ili DHEA delotvoran u lečenju celulita.

Primer 2

Protokol ERC-202

Postavka ispitivanja

[0070] Ovo ispitivanje je sprovedeno na 15 ispitanika podeljenih postupkom slučajnog odabira, sa dvostrukom šlepom probom i placebo kontrolom. Ispitivanje je podeljeno u dve faze, period posmatranja i period tretmana od 13 nedelja.

Ispitanici i tretman

[0071] Nakon što je dobijen pismeni pristanak ispitanika, te je utvrđeno da su žene pogodne za ovu studiju, svaki ispitanik dodeljen je, slučajnim odabirom, jednoj od grupa, koje će dobiti emulziju sa 0,0 % (placebo), 0,1 %, 0,3 %, 1 % ili 2 % DHEA dva puta dnevno, ujutru i uveče.

[0072] Svakog dana, nakon doručka i nakon večere, tokom 13 nedelja, ispitanicima je podeljeno po 3,0 ml jedne od ovih 5 emulzija.

[0073] Svim ispitanicima je naloženo da nanesu ispitivanu emulziju na lice (na desnu stranu lica) i čelo, gornji deo grudnog koša, nadlanice, spoljašnju stranu ruku, spoljašnju stranu butina i nogu, dva puta dnevno (ujutru, između 06:00 i 09:30 i uveče, između 18:00 i 21:30), tokom 13 nedelja. Ispitivani tretman je prvi put nanesen u istraživačkom centru, gde su ispitanicima data uputstva o tome kako da primenjuju topijsku emulziju. Trista mikrolitara (0,3 ml) emulzije nanošeno je na čelo i lice (desna strana), 0,3 ml na svaku spoljašnju stranu ruke i nadlanicu (0,3 ml x 2), 0,3 ml na gornji deo grudnog koša, 0,6 ml po butini (0,6 ml x 2) i 0,3 ml po nozi (0,3 ml x 2), čime je ukupna doza iznosila 3,0 ml emulzije DHEA, dva puta dnevno.

Frimeri farmaceutskih preparata

[0074] U daljem tekstu, kao primer ali ne i kao ograničenje, dat je sastav nekoliko topijskih farmaceutskih preparata u kojima se koristi poželjni aktivni prekursor polnog steroida DHEA, poželjni androgeni. Koncentracija aktivnog sastojka može da se menja u širokom spektru, kao što je ovde objašnjeno. Količine i vrste drugih sastojaka koji mogu da se uključe u sastav ovih preparata dobro su poznate struci.

[0075] Predmetni pronalazak opisan je poželjnim rešenjima i primerima, ali ni na koji način nije njima ograničen. Stručnjaci u ovoj oblasti će lako prepoznati širu primenljivost i opseg predmetnog pronalaska, koji je ograničen samo ovde navedenim patentnim zahtevima.

Claims

1. Postupak za tretman ili umanjivanje verovatnoće dobijanja bolesti kože uzrokovanih deficijencijom androgena povezanom sa starenjem, naznačen time što podrazumeva primenu, kod pacijenta kome je takav tretman potreban, ili kome je potrebno umanjivanje rizika, delotvorne količine najmanje jednog jedinjenja odabranog iz grupe koja se sastoji od dihidrotestosterona (5a-androstan-17(3-ol-3-ona), androstendiona (4-androsten-3,17-diona), androstandiona (5a-androstan-3,17-diona), 5a-androstan-3a,17P-diola i njihovih prekursora lekova.

2. Postupak prema zahtevu 1 naznačen time što su ove bolesti kože odabrane iz grupe koja se sastoji od atrofije kože, gubitka kolagena, gubitka elastičnih vlakana, gubitka vezivnog tkiva, celulita i bora.

3. Postupak za tretman ili umanjivanje verovatnoće dobijanja bora i celulita ili gubitka elastičnih vlakana naznačen time što podrazumeva primenu, kod pacijenta kome je takav tretman potreban, ili kome je potrebno umanjivanje rizika, delotvorne količine najmanje jednog prekursora polnih steroida izabranog iz grupe koja se sastoji od dehidroepiandrosterona, dehidroepiandrosteron sulfata, 5-androsten-3p,17P-diola i njihovih prekursora lekova.

4. Postupak za tretman ili umanjivanje verovatnoće dobijanja bora i celulita ili gubitka elastičnih vlakana naznačen time što podrazumeva primenu, kod pacijenta kome je takav tretman potreban, ili kome je potrebno umanjivanje rizika, delotvorne količine najmanje jednog jedinjenja odabranog iz grupe koja se sastoji od androstendiona (4-androsten-3,17-diona), androstandiona (5a-androstan-3,17-diona), 5a-androstan-3a,17p-diola i njihovih prekursora lekova.

5. Postupak prema zahtevu 3, naznačen time što se prekursori polnih steroida ili njihovi prekursori lekova primenjuju topijski.

6. Postupak za tretman ili umanjivanje verovatnoće dobijanja atrofije kože, gubitka kolagena naznačen time što podrazumeva primenu, kod pacijenta kome je takav tretman potreban, ili kome je potrebno umanjivanje rizika, delotvorne količine najmanje jednog jedinjenja odabranog iz grupe koja se sastoji od dihidrotestosterona (5a-androstan-17(3-ol-3-ona), androstendiona (4-androsten-3,17-diona), androstandiona (5a-androstan-3,17-diona), 5a-androstan-3a,17p-diola i njihovih prekursora lekova.

7. Postupak prema zahtevu 3 naznačen time što se prekursori polnih steroida ili njihovi prekursori lekova primenjuju oralno.

8. Postupak prema zahtevima 1, 4 ili 6 naznačen time što se jedinjenja ili njihovi prekursori lekova primenjuju topijski.

9. Postupak prema zahtevima 1, 4 ili 6 naznačen time što se jedinjenja ili njihovi prekursori lekova primenjuju oralno.

10. Upotreba delotvorne količine jedinjenja izabranih iz grupe koja se sastoji od dihidrotestosterona (5a-androstan-17p-ol-3-ona), androstendiona (4-androsten-3,17-diona), androstandiona (5a-androstan-3,17-diona), 5a-androstan-3a,17P-diola ili njihovih prekursora lekova u proizvodnji medikamenta za tretman ili umanjenje verovatnoće dobijanja bolesti kože uzrokovanih deficijencijom androgena povezanom sa starošću.

11. Upotreba prema zahtevu 10, naznačena time što su bolesti kože odabrane iz grupe koja se sastoji od atrofije kože, gubitka kolagena, gubitka elastičnih vlakana, gubitka vezivnog tkiva, celulita i bora.

12. Delotvorna količina najmanje jednog prekursora polnih steroida izabranog iz grupe koja se sastoji od dehidroepiandrosterona, dehidroepiandrosteron sulfata, 5-androsten-3p,17P-diola i njihovih prekursora lekova, naznačena time što se koristi za tretman ili umanjenje verovatnoće dobijanja bora i celulita ili gubitka elastičnih vlakana kod pacijenta.

13. Delotvorna količina najmanje jednog jedinjenja odabranog iz grupe koja se sastoji od dihidrotestosterona (5a-androstan-17P-ol-3-ona), androstendiona (4-androsten-3,17-diona), androstandiona (5a-androstan-3,17-diona), 5a-androstan-3a,17P-diola ili njihovih prekursora lekova, naznačena time što se koristi za tretman ili umanjenje verovatnoće dobijanja bora i celulita ili gubitka elastičnih vlakana kod pacijenta.

14. Topijski preparat za upotrebu u tretmanu ili umanjenju verovatnoće dobijanja bora i celulita ili gubitka elastičnih vlakana kod pacijenta naznačen time što sadrži delotvornu količinu najmanje jednog jedinjenja odabranog iz grupe koja se sastoji od dihidrotestosterona (5a-androstan-17P-ol-3-ona), androstendiona (4-androsten-3,17-diona), androstandiona (5a-androstan-3,17-diona), 5a-androstan-3a,17|3-diola ili njihovih prekursora lekova, i farmaceutski prihvatljiv nosač.