RS20060083A

RS20060083A - Trans-1-(6-hloro-3-fenilindan-1-il)-3,3-dimetilpiperazin

Info

Publication number: RS20060083A
Application number: YUP-2006/0083A
Authority: RS
Inventors: Klaus Peter Bogeso; Lars Ole Lyngso; Henrik Svane; Allan Carsten Dahl; Mark Howells; Benny Bang-Andersen; Klaus Gjervig Jensen; Tomas Mow
Original assignee: H.Lundbeck A/S.,
Priority date: 2003-08-18
Filing date: 2004-08-18
Publication date: 2008-08-07
Also published as: SG145723A1; EA200600441A1; AR045279A1; AR045278A1; TWI403505B; CN101935305A; MY149089A; TWI388550B; ATE552247T1; CN101935305B; PT1658277E; MY154535A; TW201111351A; ES2383369T3; KR20060066104A; TW200519098A; DK1658277T3; EA200600443A1; SG148183A1; IS8264A

Abstract

Jedinjenje 4- ((1 R,3S)-6-hloro-3-fenilindan-1-il)-2,2-dimetilpiperazin njegove soli, farmaceutski sastavi koji sadrže jedinjenje i soli, njihova medicinska upotreba, uključujući lečenje šizofrenije i drugih psihotičkih poremećaja.

Description

r/?y\A/S-1-(6-HLORO-3-FENILINDAN-1-IL)-3,3-DIMETILPIPERAZIN

Sadašnji pronalazak se odnosi na frans-1-(6-hloro-3-fenilindan-1-il)-3,3-dimetilpiperazin i njegove soli, posebno za medicinsku upotrebu, uključujući lečenje šizofrenije i drugih bolesti koje uključuju psihotične simptome.

STANJE TEHNIKE

Jedinjenje, koje je predmet sadašnjeg pronalaska (Jedinjenje I,trans^-{ 6-hloro-3-fenilindan-1-il)-3,3-dimetilpiperazin) ima opštu formulu (I).

Grupa jedinjenja koja se strukturalno odnose na Jedinjenje I, odnosno,transizomere 3-aril-1-(1-piperazinil)indane supstituisane na 2- i/ili 3-poziciji piperazin prestena, je opisana u EP 638 073; Bogeso et al. u J. Med. Chem., 1995, 38, 4380-4392 i Klaus P. Bogeso u "Drug Hunting, the Medicinal Chemistrv of 1-Piperazino-3-fenilindans and Related Compounds", 1998,ISBN 87- 88085- 10- 41.Ova jedinjenja su opisana kako imaju visoki afinitet prema dopamin (DA) D-ii D2receptorima i 5-HT2receptom i sugeriše se da su korisna za lečenje nekoliko bolesti centralnog nervnog sistema, uključujući šizofreniju.

Enantiomer koji korespondira sa jedinjenjem formule (I) ali se razlikuje u tome da ima metil grupu umesto vodonika na piperazinu je otkriven kod Bogeso et al. u J. Med. Che., 1995, 38, 4380-4392, videti tabelu 5, jedinjenje (-)-38. Ova publikacija zaključuje da je (-)-enantiomer jedinjenja 38 moćan D^/ D2 antagonist koji prikazuje neku Diselektivnost in vitro dok je in vivo ekvipotentan ka Dii D2antagonist. Jedinjenje je opisano kao moćan 5-HT2antagonist, koji ima visoki afinitet prema a-iadrenoceptorima.

Nijedna od gornjih referenci ne otkriva specifični enantiomerni oblik koji je gore pomenut (Jedinjenjel) ili njegovu medicinsku upotrebu. Trans izomer u obliku racemata Jedinjenja 1 je samo indirektno otkriven ka intermedijarni proizvod u sintezi jedinjenje 38 kod Bogeso et al. u J. Med. Chem., 1995, 38, 4380-4392) dok nije opisana medicinska upotreba Jedinjenja I ili njegovog korespondirajućeg racemata.

Etiologija šizofrenije nije poznata, ali dopamin hipoteza šizofrenije (Carlsson, Am. J.Psychiatry 1978,135, 164-173), formulisana ranih 1960-tih godina, obezbezbeđuje teoretsku oblast rada za razumevanje bioloških mehanizama koji označavaju ovaj poremećaj. U najjednostavnijem obliku, dopamin hipoteza tvrdi da je šizofrenija povezana sa hiperdopaminergičnim stanjem, pretstava koja je podržana činjenicom da svi današnji antipsihotični lekovi na tržištu ispoljavaju neki dopamin D2receptor antagonizam (SeemanScience and Medicine1995, 2, 28-37). Ipak, gde je generalno prihvaćeno da antagonizam dopamin D2receptora

u limbičnim regionima mozga igra ključnu ulogu u lečenju pozitivnih simptoma šizofrenije, blokada D2receptora u striatalnim regionima mozga izaziva ekstrapiramidalne simptome (EPS). Kao što je to opisano u EP 638 073 profile inhibicije mešanog dopamin D^D2receptora je primećen sa određenim takozvanim "atipičnim" antipsihotičnim jedinjenjima, posebno sa klozapinom, koja se koriste u lečenju šizofrenih pacijenata. Za centralna a-\ antagonistička dejstva se takođe sugeriše da doprinosi poboljšanim antipsihotičnim osobinama (Millanet al, JPET,2000, 292, 38-53).

Dalje, selektivni Diantagonisti se povezuju sa lečćenjem poremećaja sna i zloupotreba alkohola (D.N.Eder,Current Opinion in Investigational Drugs,20023(2):284-288). Dopamin može takođe da igra važnu ulogu u etiologiji afektivnih poremećaja (P. VVillner,Brain. Res. Rev.1983, 6, 211-224, 225-236 i 237-246;J. Med. Chem.1985, 28, 1817-1828).

U EP 638 073 je opisano kako se jedinjenja koja imaju afinitet prema 5-HT2receptorima, posebno antagonisti 5-HT2receptora, sugerišu za lečenje različitih bolesti, kao što su šizofrenija uključujući negativne simptome kod šizofreničnih pacijenata, depresija, anksioznost, poremećaji sna, napadi migrene i neuroleptično-izazvani parkinsonizam. Za antagonizam 5-HT2receptora se takođe sugeriše da smanjuje incidencu estrapiramidalnih sporednih efekata izazvanih klasičnim neurolepticima (Balsara et al.Psychopharmacology 1979, 62, 67-69).

DETALJAN OPIS PRONALASKA

Proizvodi pronalaska i njihova medicinska upotreba

Pronalazači su pronašli da Jedinjenje I prikazuje visoki afinitet prema dobapin D1 receptorima, dopamin D2 receptorima i alfa 1 adrenoceptorima. Šta više, za jedinjenje I je otkriveno da je antagonist na dopamin D1 i D2 receptorima, i na serotonin 5HT2a receptorima. Za farmakološke aktivnosti jedinjenja I u pogledu ovih receptora je pronađeno da su slične sa onima od gore opisanog jedinjenja koje se strukturalno razlikuje od Jedinjenja I u tome da ima metil grupu umesto vodonika na piperazinu.

Pronalazači su takođe pronašli da su nekoliko strukturalno povezanih jedinjenja, i racemati i enantiomeri, opisna u gore pomenutim referencama inhibitori CYP2D6 (Citohrom p450 2D6) dok je Jedinjenje I relativno slab inhibitor CYP2D6, takođe u poređenju sa drugim antipsihoticima kao što su Haloperidol i Risperidon. Racemat jedinjenja sadašnjeg pronalaska je takođe značajno više moćno na CYP2D6 enzimu upoređeno sa enantiomerom sadašnjeg pronalaska, odnosno, Jedinjenjem I.

CYP2D6 enzim je enzim jetre važan za metabolizam. CYP2D6 je sisarski enzim obično povezan sa metabolizmom farmaceutskih jedinjenja i inhibicija ovog enzima koji metabolizuje lek može da vodi do značajnih lek-lek interakcija, odnosno, ukoliko su data dva leka u kombinacije i ako se metabolišu od strane istih enzima, trka za metabolizam može da da podizanje do povećanih plazma koncentracija i samim tim moguće škodljive efekte (za pregled videti Lin et al,Pharmacological Rev.1997, 49, 403-449, Bertz RJ i Granneman GR.Clin Pharmacokinet.1997, 32, 210-258).

Pošto se više od 80 lekova u kliničkoj upotrebi ( i posebno psihotropični lekovi) metabolizuju od strane CYP2D6 (Bertz RJ, Granneman GR.Clin Pharmacokin1997, 32, 210-58, Rendic S, DiCarlo FJ.Drug Metab Rev1997, 29, 413-580), inhibicija ovog enzima od strane zajedno datih lekova vodi do dramatičnih povećanja u nivoima izlaganja i rezultira toksičnost kao što se to vidi sa kombinacijom dobro poznatih CYP2D6 inhibitora fluoksetina ili paroksetina u kombinaciji sa Imipraminom, Dezimipraminom ili Nortriptilinomom, rezultirajući u povećanom srčanom toksičnošću ovih triciklika (Ereshefskv L. et al.J. Clin. Psychiatry1996, 57(suppl8), 17-25, Shulman RWCan J Psychiatry,Vol 42, Supplement 1, 4S).

Činjenica da Jedinjenje I ima interakciju niskog nivoa sa enzimom jetre CYP2D6 znači da ono smanjuje potencijal leka za interakciju sa drugim lekom, odnosno, postoji moguće manja lek prema leku interakcija kada se pacijent leči sa jedinjenjem sadašnjeg pronalaska zajedno sa bilo kojim drugim lekom koji se uglavnom metabolizuje od strane CYP2D6 enzima. Ovo je značajna prednost, posebno za pacijente sa šizofrenijom koji se često leče sa drugim medikamentima da bi se kontrolisala njihova bolest.

Pronalazači su takođe pronašli da Jedinjenje I ima relativno nisko produženo dejstvo na QT-interval u elektrokardiogramu (ECG) "alfa-hloraoza anestetizovanog zeca". Lekom-izazvano QT-produženje intervala u elektrokardiogramu (ECG) i pojavljivanje fatalnih srčanih aritmija, torsade de pointes (TdP), postaje priznato kao potencijalni rizik tokom lečenja sa lekovima širokog raspona uključujući repolarizacija-odložene antiaritmike [CL. Raehl, A.K. Patel i M. LeRoy,Clin Pharm 4

(1985), 675-690], različite antihistamine [R.L. Woosley,Annu Rev Pharmacol Toxicol36 (1996), 233-252; Y.G. Yap i A.J. Camm,Clin Exp Allergy29 Suppl 1 (1999), 15-24], antipsihotike [A.H. Glassman i J.T. Bigger,Am J Psychiatry158(2001), 1774-1782] i antimikrobska sredstva [B. Darpo,Eur Heart J3 Suppl K (2001), K70-K80]. Činjenica da Jedinjenje I ima relativno niskog nivoa dejstvo na QT interval zeca znači da ovo jedinjenje ima smanjeni potencijal za uvođenje lekom-izazvanog produženja QT intervala i pojavljivanje fatalnih srčanih aritmija, torsade de pointes (TdP), kod ljudi upoređeno sa nekoliko komercijalizovanih antipsihotika.

Tako, u jednom aspektu, pronalazak se odnosi na jedinjenje formule I (Jedinjenje I) i njegove soli. So pronalaska, odnosno jedinjenje formule (I), može, n.pr., biti odabrano od fumarat ili maleat soli Jedinjenja I.

Osobine Jedinjenja I ukazuju da će biti posebno korisno kao farmaceutsko sredstvo. U skladu sa tim, sadašnji pronalazak se dalje odnosi na farmaceutski sastav Jedinjenja I pronalaska ili njegove soli. Pronalazak se takođe odnosi na medicinsku upotrebu takvih jedinjenja, soli i sastava, kao što je to za lečenje bolesti u centralnom nervnom sistemu, uključujući psihozu, posebno šizofreniju ili druge bolesti koje uključuju psihotične simptome, n.pr., šizofrenija, poremećaj šizofrenog oblika, šizoafektivni poremećaj, poremećaj priviđanja, kratki psihotični poremećaj, deljeni psihotični poremećaj kao drugi psihotički poremećaji i bolesti koji su prisutni sa psihotičnim simptomima, n.pr., manija kod bipolarnog poremećaja.

Dodatno tome, 5-HT2antagonistička aktivnost jedinjenja pronalaska sugeriše da jedinjenje ili njegova so može da ima relativno mali rizik od ekstrapiramidalnih sporednih efekata.

Sadašnji pronalazak se takođe odnosi na upotrebu Jedinjenja I pronalaska, ili njegove soli za lečenje bolesti odabranih od grupe koja sadrži poremećaje anksioznosti, afektivne poremećaje uključujući depresiju, poremećaje sna, migrenu, neuroleptikom-izazvani parkinsonizam, zloupotrebu kokaina, zloupotrebu nikotina, zloupotrebu alkohola i druge poremećaje zloupotrebe.

U pretpostavljenoj realizaciji, sadašnji pronalazak se odnosi na postupak lečenja poremećaja šizofrenog oblika, šizoafektivnog poremećaja, poremećaja priviđanja, kratkog psihotičnog poremećaja, deljenog psihotičnog poremećaja ili manije u bipolarnom poremećaju, koji se sastoji od davanja terapeutski efektivne količine Jedinjenja I pronalaska ili njegove soli.

Dalja realizacija pronalaska se odnosi na postupak lečenja pozitivnih simptoma šizofrenije koji se sastoji od davanja terapeutski efektivne količine Jedinjenja I ili njegove soli.

Sledeća realizacija pronalaska se odnosi na postupak lečenja negativnih simptoma šizofrenije koji se sastoji od davanja terapeutski efektivne količine Jedinjenja I ili njegove soli.

Dalja realizacija pronalaska se odnosi na postupak lečenja depresivnih simptoma kod šizofrenije koji se sastoji od davanja terapeutski efektivne količine Jedinjenja I ili njegove soli.

Dalji aspekt pronalaska se odnosi na postupak lečenja manije i/ili . održavanje bipolarnog poremećaja koji se sastoji od davanja terapeutski efektivne količine Jedinjenja I ili njegove soli.

Dalji aspekt pronalaska se odnosi na postupak lečenja neuroleptikom-izazvanog parkinsonizma koji se sastoji od davanja terapeutski efektivne količine Jedinjenja I ili njegove soli.

Pronalazak se dalje odnosi na postupak lečenja zloupotrebe supstance, n.pr., zloupotreba nikotina, alkohola ili kokaina, koji se sastoji od davanja terapeutski efektivne količine Jedinjenja I ili njegove soli.

U širokom aspektu, sadašnji pronalazak se odnosi na črans-1-(6-hloro-3-fenilindan-1-il)-3,3-dimetilpiperazin ili njegovu so za upotrebu kao medikament.

U skladu sa tim, sadašnji pronalazak se takođe odnosi na postupak lečenja bolesti odabrane od grupe koja sadrži bolest koja uključuje psihotične simptome, šizofreniju (n.pr., jedan ili više pozitivnih simptoma, negativnih simptoma i depresivnih simptoma šizofrenije), poremećaj šizofrenog oblika, poremećaj priviđanja, kratki psihotični poremećaj, deljeni psihotični poremećaj, i manija u bipolarnom poremećaju, poremećaje anksioznosti, afetkivne poremećaje uključujući depresiju, poremećaje sna, migrene, neuroleptikom-izazvani parkinsonizam, i poremećaje zloupotrebe, n.pr., zloupotreba kokaina, zloupotreba nikotina, ili zloupotreba alkohola, koji se sastoji od davanja terapeutski efektivne količine jedinjenjafra/?s-1-(6-hloro-3-fenilindan-1-il)-3,3-dimetilpiperazin ili njegove soli.

Kako se to ovde koristi pojam 7rans-1-(6-hloro-3-fenilindan-1-il)-3,3-dimetilpiperazin", odnosno, bez bilo koje specifične indikacije enantiomernog oblika (n.pr., upotrebom (+) i (-), ili upotrebom R/S-konvencije, čime se ima namera da se pozove na bilo koji enantiomerni oblika ovog jedinjenja, odnosno, bilo kog od dva enantiomera ili smeše dva, n.pr., racemske smeše). Ipak, u ovom kontekstu pretpostavljeno je da je sadržaj enantiomera koji korespondira sa onim od Jedinjenja I bar 5'%, odnosno, abr kao racemska smeša, ali pretpostavljeno je Jedinjenje I u enantiomernom višku.

U sadašnjem kontekstu za farmaceutske upotrebe podrazumeva se da kada se specifikuje enantiomerni oblik kao što je to učinjeno u formuli (I) za Jedinjenje I, onda je jedinjenje relatiovno stereohemijski čisto, pretpostavljeno enantiomerni višak od bar 70%, i poželjnije bar 80% (80% enantiomerni višak znači da je donost I sa njegovim enatniomerom 90:10 u smeši koja je u pitanju) bar 90%, bar 96%, ili pretpostavljeno bar 98%. U pretpostavljenoj realizaciji, diastereomerni višak Jedinjenja I je bar 90%

(90% diastereomerni čistoća znači da je odnos Jedinjenja I premac/s-1-((1S,3S)6-hloro-3-fenilindan-1-il)-3,3-dimetilpiperazin 95:5), bar 95%, bar 97%, ili bar 98%.

Dalji aspekt pronalaska se odnosi na postupak lečenja kako je on ovde opisan, pri čemu je pacijent tretiran sa Jedinjenjem I ili njegovom soli takođe tretiran sa bar jednim drugim medikamentom. Određena relavantna realizacija s ovim u vezi, je lečenje sa drugim medikamentima koji se metabolizuju od strane CYP2D6.

U odgovarajućoj realizaciji, drugi medikament je antipsihotik. U skladu sa tim, jedna realizacija se odnosi na upotrebu jedinjenja, soli ili farmaceutskog sastava pronalaska za lečenje pacijenta koji pati od šizofrenije ili drugih psihoza koji se takođe leči sa drugim medikamentom(ima), n.pr., gde je drugi medikament antipsihotik.

U sledećoj realizaciji, pronalazak se odnosi na upotrebu jedinjenja ili soli pronalaska za lečenje pacijenta koji pati od šizofrenije ili drugih psihoza koji zloupotrebljava supstance, n.pr., alkohol ili narkotike.

Jedinjenje, so ili sastav pronalaska može biti dat na bilo koji pogodan način,n. pr.,oralno, usno, podjezično ili parenteralno, i jedinjenje ili so mogu biti prezentirani u bilo kom pogodnom obliku za takvo davanje,n. pr.,u obliku tableta, kapsula, pudera, sirupa ili rastvora ili disperzija za ubrizgavanje. U jednoj realizaciji, jedinjenje ili so pronalaska se daje u obliku čvrstog farmaceutskog entiteta, pogodno kao tableta ili kapsula. Postupci za pripremanje čvrstih farmaceutskih preparata su dobro poznati u nauci. Tablete tako mogu biti pripremljene mešanjem aktivnog sastojka sa običnim adjuvantima, puniocima ili razređivačima i potom kompresijom smeše u konvencionalnoj mašini za pravljenje tableta. Primeri adjuvanata, punioca i razređivača se sastoje od kukuruznog škroba, laktoze, talka, magnezijum stearata, želatina, laktoze, guma, i slično. Bilo koji drugi adjuvant ili aditiv za davanje boje, arome, zaštitu, itd., može takođe biti upotrebljen pod uslovom da je kompatibilan sa aktivnim sastojcima.

Rastvori za ubrizgavanja mogu biti pripremljeni rastvaranje soli pronalaska i mogućih aditiva u deo rastvarača za ubrizgavanje, pretpostavljeno sterilnu vodu, podešavajući rastvor do željene zapremine, sterilisanjem rastvora i punjenjem u odgovarajuće ampule ili posude. Bilo koji odgovarajući aditiv koji se konvencionalno upotrebljava u nauci može biti dodat, kao što su sredstva za davanje toničnosti, zaštitna sredstva, antioksidanti, rastvarajuća sredstva itd.

Dnevna doza gornjeg jedinjenja formule (I), izračunata kao slobodna baza, je pogodno između 1,0 i 160 mg/dan, pogodnije između 1 i 100 mg,n. pr.,pretpostavljeno između 2 i 55 mg.

Pojam "lečenje" kako se ovde koristi u vazi sa bolešću ili poremećajima uključuje takođe prevenciju kako to već može biti slučaj.

Način pripremanja

Jedinjenje formule (I) u racemskom obliku može, n.pr., biti pripremljeno analogno postupcima naznačenim u EP 638 073, i Bogeso et al. J. Med. Chem., 1995, 38, strana 4380-4392 praćeno optičkim razdvajanjem racemskog jedinjenja kristalizacijom diastereomernih soli i time dobijanjem enantiomera formule (I).

Sadašnji pronalazači su razvili put sinteze u kome se enantiomer formule (I) dobija putem sintetičke sekvence počevši od enantiomerno čistog V, odnosno, jedinjenja Va ((fS,3S)-6-hloro-3-fenilindan-1-ol, videti dole). Tako, u ovom postupku, intermedijarni proizvod formule V se razdvaja,n. pr.hiralnom hromatografijom ili enzimski, da se dobije enantiomer formule Va. Ovaj novi put sinteze da se dobije jedinjenje formule (I) je efikasnije nego gore pomenuta kristalizacija diastereomernih soli konačnog rpoizvoda I, n.pr., razdvajanje intermedijarnog proizvoda umesto konačnog proizvoda daje mnogo efikasniju sintezu, pošto se samo željeni enantiomer upotrebljava u potonjim koracima, dajući,n. pr.,više prinose zapremina i manju potrošnju reagenasa.

U skladu sa tim, enantiomer formule (I) može biti dobijen postupkom koji uključuje sledeće korake:

Benzil cijanid reaguje sa 2,5-dihlorobenzonitrilom u prisustvu baze, pogodnog kalijum terc-butoksida (t-BuOK) u odgovarajućem rastvaraču kao što je dimetil etar (DME), a dalja reakcija sa metil hloro acetatom

(MCA) vodi do spontanog zatvaranja prstena i jednu u obliku suda formiranje jedinjenja formule (II).

Jedinjenje formule (II) se onda podvrgava kiseloj hidrolizi da se formira jedinjenje formule (III), pogodno zagrevanjem u smeši sirćetne kiseline, sumporne kiseline i vode, i potom dekarboksilovanjem zagrevanjem jedinjenja formule (III) u pogodnom rastvaraču, kao što je toluen sa trietil aminom ili N-metil pirolidn-2-on (NMP), da se formira jedinjenje formule

(IV).

Jedinjenje formule (IV) se onda redukuje, pogodno sa natrijumborhidridom (NaBH4) u rastvaraču kao što je alkohol,n. pr.,etanol ili /'zo-propanol, i pretpostavljeno na temperaturi u rasponu od -30°C do +30°C,n. pr,ispod 30°C, ispod 20°C, ispod 10°C, ili pretpostavljeno ispod 5°C, da se formira jedinjenje formule (V) sac/skonfiguracijom:

Jedinjenje formule (V) se razdvaja da se postigne željeni enantiomer (formula Va), odnosno, takođe sac/skonfiguracijom ((7S,3S)-6-hloro-3-fenilindan-1-ol):

Razdvajanje (V) do (Va) može,n. pr.,biti obavljeno upotrebom hiralne hromatografije, pretpostavljeno tečne hromatografije, pogodno na hiralnoj koloni silikagela obloženom sa hiralnim polimerom,n. pr.,modifikovanom amilozom, pretpostavljeno amiloza tris-(3,5-dimetilfenilkarbamat) obložena na silikagelu. Pogodni rastvarač se upotrebljava za hiralnu tečnu hromatografiju, kao što su,n. pr.,alkohol, nitril, etar, ili alkan, ili njihove smeše, pogodni etanol, metanol, izo-propanol, acetonitril, ili metil terc-butil etar ili njihove smeše, pretpostavljeno metanol ili acetonitril. Hiralna tečna hromatografija može biti skalirana upotrebom pogodnih tehnologija,n. pr.,simuliranje tehnologije pokretnog sloja (SMB).

Alternativno, jedinjenje formule (V) se razdvaja da se postigne Jedinjenje Va enzimskim razdvajanjem. Pronađeno je da enantiomerno čisto Jedinjenje Va, ili njegovi acilovani derivati, mogu biti pripremljeni enzimskim enantio-selektivnim aciliranjem hidroksil grupe u racemskom Jedinjenju V da se dobije Jedinjenje Va ili njegov acilovani derivat sa visokom optičkom čistoćom. Alternativno, enantiomerno čisto Jedinjenje Va može takođe biti dobijeno postupkom koji se sastoji od konvertovanja racemskog Jedinjenja V u korespondirajući estar derivat, odnosno estar grupu na hidroksil poziciji praćeno sa enzimskim enantio-selektivnim deaciliranjem. O upotreba enzimskog enantio-selektivnog deaciliranja je već izvešteno za druga jedinjenja.

U skladu sa tim, razdvajanje Jedinjenja V do Jedinjenja Va može biti obavljeno selektivnim enzimskim aciliranjem. Selektivno enzimsko aciliranje znači da je enzimsko aciliranje pretpostavljeno efektivno za konverziju jednog odc/s-enantiomera jedinjenja formule Va u korespondirajući acetilovani derivat Vb ostavljajući drugi c/s-enantiomer Jedinjenja V, n.pr., jedinjenje Va, kao nekonvertovano u reakcionoj smeši kako je to označenu u sledećem:

pri čemu je R,n. pr.,acetat, propionat, butirat, valerat, heksanoat, benzoat,

laurat, izobutirat, 2-metilbutirat, 3-metilbutirat, pivalat, 2-metilvalerat, 3-metilvalerat, ili 4-metilvalerat. Pogodni ireverzibilniacildavaocisu,n. pr,vinil-estri, 2-propenil-estri ili 2,2,2-trihalid-etil-estri. Alternativno, drugi enantiomer je acetilovan (odnosno acetilovani Va je proizvod, koji nije prikazan), i alkohol Va može potom biti dobijen izolovanjem acetilovanom Va i potonjim uklanjanjem estar grupe.

Alternativno, razdvajanje Jedinjenja V do Jedinjenja Va može biti obavljeno selektivnim enzimskim deaciliranjem. Selektivno enzimatsko deaciliranje znači da je enzimsko deaciliranje pretpostavljeno efektivno za konverziju jednog od estara jedinjenja formule V (Vc), ostavljajući drugicis-enantiomer estara jedinjenja formule V (Vd) kao nekonvertovano u reakcionoj smeši.

Pogodni estri (Vc) jedinjenja formule (V) su estri kao što su acetat, propionat, butirat, valerat, heksanoat, benzoat, laurat, izobutirat, 2-metilbutirat, 3-metilbutirat, pivalat, 2-metilvalerat, 3-metilvalerat, 4-metilvalerat,

pri čemu je R<1>,n. pr.,acetat, propionat, butirat, valerat, heksanoat, benzoat, laurat, izobutirat, 2-metilbutirat, 3-metilbutirat, pivalat, 2-metilvalerat, 3-metilvalerat, ili 4-metilvalerat. Alternativno estar Va se ostavlja nekonvertovan u reakcionoj smeši (odnosno acetilovani Va je proizvod, koji nije prikazan) i alkohol Va se može potom dobiti izolovanjem acetilovanog Va i potonjim uklanjanjem estar grupe standardnim postupkom.

Tako enantio-selektivno enzimskoaciliranjeznači da je enzimsko aciliranje pretpostavljeno efektivno za konverziju jednog od enantiomera jedinjenje formule (V) pretpostavljeno ostavljajući drugi enantiomer jedinjenja formule (V) nekonvertovan u reakcionoj smeši. Enantio-selektivno enzimskodeaciliranjeznači da je enzimsko deaciliranje pretpostavljeno efektivno za konverziju jednog od enantiomera jedinjenja formule (Vc), pretpostavljeno ostavljajući drugi enantiomer jedinjenja formule (Vc) nekonvertovan u reakcionoj smeši.

Tako se jedna realizacija odnosi na postupak pripremanja (S, S)- ili (R, R)-enantiomera jedinjenja formule V (odnosno sac/skonfiguracijom) koji se sastoji od: a) podvrgavanja racemskog Jedinjenja V enantio-selektivnom enzimskom aciliranju upotrebom sredstva za acilovanje, ili b) podvrgavanja recemskog Jedinjenja Va enantio-selektivnom enzimskom deaciliranju da se formira smeša deacilovanog Jedinjenja Va.

Dobijen smeše enzimskim razdvajanjem mogu da ne budu u potpunosti čiste,n. pr.,mogu da sadrže manju količinu drugog enantiomera kao dodatak većoj količini željenog enantiomera (Va). Dobijeni sastav smeše nakon aciliranja ili deaciliranja prema pronalasku zavisi, n.pr., od specifične hidrolaze koja se upotrebljava i uslova pod kojim se reakcija obavlja. Karakteristika enzimskog aciliranja/deaciliranja prema pronalasku je da se značajno veći deo jednog enantimera konvertuje u odnosu na drugi. Enantio-selektivnoaciliranjeprema pronalasku tako rezultira u smeši koja sadrži pretpostavljeno jedinjenje formule (Vb) u (R, R)-obliku i jedinjenje formule (Va) u (S, S)-obliku, ili može rezultirati u smeši koja sadrži pretpostavljeno jedinjenje formule (Vb) u (S, S)-obliku i jedinjenje formule (Va) u (R, R)-obliku. Na isti način, enantio-selektivno enzimskodeaciliranjemože rezultirati u smeši koja sadrži pretpostavljeno jedinjenje formule (Vd) u (S, S)-obliku i jedinjenje formule (Va) u (R, R)-obliku, ili može razultirati u smeši koja pretpostavljeno sadrži jedinjenje formule (Vd) u (R, R)-obliku i jedinjenje formule (Va) u (S, S)-obliku. Optička čistoća Va dobijena postupkom optičkog razdvajanja sadašnjeg pronalaska je uobičajeno bar 90% e.v., pretpostavljeno bar 95% e.v., poželjnije bar 97% e.v., i najpoželjnije bar 98% e.v. Ipak, prihvatljive su i niže vrednosti optičke čistoće.

Prema pronalasku, enantio-selektivno enzimskoaciliranjese obavlja pod uslovima koji suštinski sprečavaju hidrolizu. Hidroliza, koja je obrnuta reakcija od reakcije aciliranja, se obavlja u vodi ukoliko je prisutna u reakcionom sistemu. Tako se enantio-selektivno enzimsko aciliranje pretpostavljeno obavlja u organskom rastvaraču bez vode ili skoro anhidrovanom organskom rastvaraču (enzimi normalno zahtevaju prisustvo nešto vode da bi bili aktivni). Pogodni rastvarači uključuju ugljovodonike kao što su heksan, heptan, benzen i toluen; etre kao što su dietil etar, diizopropil eata, tetrahidrofuran, 1,4-dioksan, terc-butil metil etar i dimetoksietan; ketone kao što su aceton, dietil keton, butanon, i metil etil keton; estre kao što su metilacetat, etilacetat, etilbutirat, vinilbutirat i etilbenzoat; halogenovane ugljovodonike kao što su metilenhlorid, hloroform i 1,1,1-trihloroetan; sekundarne i tercijarne alkohole kao što je terc-butanol; rastvarače koji sadrže azot kao što su dimetilformamid, acetoamid, formamid, acetonitril i propionitril; i aprotonske polarne rastvarače kao što su dimetilsulfoksid, N-metilpirolidin-2-on i heksametilfosfor triamid. Pretpostavljeno organski rastvarači za enzimsko aciliranje su organski rastvarači kao što su toluen, heksan, heptanb, dioksan i tetrahidrofuran (THF).

Pogodni ireverzibilniacildavaocisu,n. pr.,acildavaoci kao što su vinil-estri, 2-propenil-estri ili 2,2,2-trihalid-etil-estri.

Enantio-selektivno enzimskodeaciliranjese pretpostavljeno obavlja u vodi ili smeši vode i organskog rastvarača, pogodno u prisustvu pufera. Pogodni organski rastvarači,n. pr.,su rastvarači mešljivi sa vodom kao što su alkoholi, acetonitril, dimetil formamid (DMF), dimetil sulfoksid (DMSO), 1,4-dioksan, DME i diglim.

Pronađeno je da se enzimsko acilovanje prema pronalasku može obaviti upotrebom Novozym 435 (Candida Antractica lipaza B, od Novozymes A/S, Fluka Cat.-No. 73940). Generalno, enzimsko aciliranje ili deaciliranje prema pronalasku se pretpostavljeno obavlja upotrebom lipaze, esteraze, acilaze ili proteaze. Enzimi korisni prema pronalasku su takiv enzimi koji su sposobni da obave R-selektivno aciliranje ili S-selektivno aciliranje hidroksi grupe u racemskom jedinjenju formule (V) ili takvi enzimi koji su sposobni da obave R-selektivno deaciliranje ili S-selektivno deaciliranje acil grupe u racemskom jedinjenju formule (Vc). Posebno su imobilisani oblici enzima, uključujući Ukršteno-Povezani Enzim Kristal (CLEC), korisni prema pronalasku. Pretpostavljena realizacija se odnosi na upotrebu lipaze za obavljanje enzimskog razdvajanja Jedinjenja V. Najpoželjnija lipaza je Candida Antarctica lipaza (Fluka Cat.-No. 62299); Pseudomonas cepacia lipaza (Fluka Cat.-No. 62309); Novozvm CALB L (Candida Antarctica lipaza B)(Novozymes A/S); Novozym 435 (Candida Antarctica lipaza B)(Novozymes A/S); ili Lipozim TL IM (Thermomyces lanuginosus lipaza)(Novozymes A/S), pretpostavljeno u imobilisanom obliku.

Alkohol grupa c/'s-alkohola formule (Va) se konvertuje u odgovarajuću preostalu grupu, kao što je,n. pr.,halogen,n. pr.Cl ili Br, pretpostavljeno Cl, ili sulfonat,n. pr.,mezilat ili tozilat, pogodnom reakcijom sa agensom, kao stoje tionilhlorid, mezilhlorid ili tozilhlorid, u inertnom rastvaraču,n. pr.,etru, pogodno tetrahidrofuran u. Rezultirajuće jedinjenje ima formulu (VI), gde je LG odlazeća grupa:

U pretpostavljenoj realizaciji LG je Cl, odnosno, cis-hlroid formule (Via):

Jedinjenje VI, n.pr., sa LG kao hloro, onda reaguje sa 2,2-dimetilpiperazinom u pogodnom rastvaraču,n. pr.,ketonu kao što je,n. pr.,metil izobutil keton ili metil etil keton, pretpostavljeno metil izobutil keton u prisustvu baze, kao što je,n. pr.,kalijumkarbonat, da se dobije Jedinjenje I.

Dalje, piperazin deo molekula može biti uveden reagovanjem Jedinjenja VI sa donjim jedinjenjem (VII), gde je PG zaštitna grupa kao što su, ali ne i ograničene na,n. pr.,fenilmetoksikarbonil (često se naziva Cbz ili Z), terc-butiloksikarbonil (često se naziva BOC), etoksikarbonil, ili benzil, pri čemu se dobija donje jedinjenje formule (VIII). Jedinjenje VIII se potom deprotektuje do Jedinjenja I.

Tokom sinteze nekic/sdiasteromeri Jedinjenja I( n. pr.,1-((7S,3S)-6-hloro-3-fenilindan-1-il)-3,3-dimetilpiperazin) se formira kao nečistoća u konačnom proizvodu. Ova nečistoća nastaju uglavnom zbog formiranja nekog odtransoblika (VI)( n. pr.,(7S,3ft)-3,5-dihloro-1-fenilindan kada je LG Cl) u koraku gde se formira Jedinjenje VI. Prema tome, nečistoća može biti minimizovana kristalizacijom željenogc/soblika Jedinjenja VI, iz smešetransic/s(VI); u slučaju gde je LG Cl u Jedinjenju VI ovo može biti urađeno mešanjem smeše sa odgovarajućim rastvaračem,n. pr.,alkanom, kao što je heptan, pri čemu željenic/soblik VI taloga i neželjenogtransoblika Jedinjenja VI ide u rastvor. Željenic/soblik Jedinjenja VI( n. pr,kada je LG Cl) se izoluje filtriranjem, opere sa rastvaračem koji je u pitanju i osuši.

Ovaj cis oblik Jedinjenja I može takođe biti uklonjen taloženjem odgovarajuće soli jedinjenje formule Jedinjenja I,n. pr.,soli organske kiseline, kao što je organska dvobazna kiselina, pogodno fumarat so ili maleat so jedinjenja formule (I), opciono praćeno sa jednom ili više re-kristalizacija.

Pronalazak se u daljim aspektima takođe odnosi na intermedijarne proizvode kako su ovde opisani za sintezu jedinjenja formule (I), odnosno posebno intermedijarnih proizvoda Va i VI, uključujući Jedinjenje Via. U ovom kontekstu se razume da kada se specifikuje stereoizomerni oblik, onda je stereoizomer glavni konstituent jedinjenja. Posebno, kada se specifikuje enantiomerni oblik, onda jedinjenje ima enantiomerni višak enantiomera koji je u pitanju.

U skladu sa tim, jedna realizacija pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (Va), pretpostavaljeno koje ima enantiomerni višak od bar 60%

(60% enantiomerni višak znači da je odnos Va sa njegovim enantiomerom 80:20 u smeši koja je u pitanju), bar 70%, bar 80%, bar 85%, bar 90%, bar 96%, pretpostavljeno bar 98%. Dalje, diastereomerni višak jedinjenja je pretpostavljeno 70% (70% diastereomernog viška znači, da je odnos Jedinjenja Va prema (1R,3S)-6-hloro-3-fenilindan-1-olu jedna 85:15 u smeši koja je u pitanju), bar 80%, bar 85%, bar 90%, ili bar 95%. Jedna realizacija se odnosi na suštinski čisto Jedinjenje Va.

Dalja realizacija pronalaska se odnosi na jedinjenje formule (VI), pretpostavljeno koje ima enantiomerni višak od bar 60%, bar 70%, bar 80%, bar 85%, bar 90%, bar 96%, pretpostavljeno bar 98%,

gde je LG potencijalna odlazeća grupa, pretpostavljeno obavljena od grupe koja sadrži halogen,n. pr.,hlorid, ili sulfonat. Jedna realizacija se odnosi na diastereomernu čistoću Jedinjenja VI; odnosno jedinjenje koje ima diastereomerni višak od pretpostavljeno bar 10% (10% diastereomerni višak znači da je odnos Jedinjenje VI prematransdiastereoizomeru( n. pr.,(1S,3R)-3,5-dihloro-1-fenilindan kada LG=CI) 55:45 u smeši koja je u pitanju), bar 25% ili bar 50%. Jedna realizacija se odnosi na suštinski čisto Jedinjenje VI. U skladu sa tim, pronalazak se takođe odnosi na jedinjenje koje ima sledeću formulu (Via),

koja pretpostavljeno ima enantiomerni višak od bar 60%, bar 70%, bar 80%, bar 85%, bar 90%, bar 96%, pretpostavljeno bar 98%. Jedna realizacija se odnosi na diastereomernu čistoću jedinjenje, odnosno jedinjenje koje ima diastereomerni višak od pretpostavljeno 10% (10% diastereomerni višak znači da je odnos Jedinjenje VI prematrans

diastereoizomeru{ n. pr.,(1S,3R)-3,5-dihloro-1-fenilindan kada LG=CI) 55:45 u smeši koja je u pitanju), bar 25% ili bar 50%. Jedna realizacija se odnosi na suštinski čisto Jedinjenje VI gde je LG Cl.

Kao što je u gornjem tekstu naznačeno pronalazak se u posebno interesantnoj realizaciji odnosi na:

- Jedinjenje I ili njegovu so,

- farmaceutske sastave kako su ovde opisani koji sadrže Jedinjenje I ili njegovu so, - medicinsku upotrebu kako je ovde opisana za Jedinjenje I ili njegovu so,

gde Jedinjenje I ima enantiomerni višak od bar 60% (60% enantiomerni višak znači da je odnos Jedinjenja I prema njegovom enantiomeru 80:20 u smeši koja je u pitanju), bar 70%, bar 80%, bar 85%, bar 90%, bar 96%, pretpostavljeno bar 98%.

Jedna realizacija se odnosi na Jedinjenje I ili njegovu so i na upotrebe kako je ovde opisano, pri čemu Jedinjenje I ima diastereomerni višak od bar 10% (10% diastereomerni višak znači da je odnos Jedinjenje I premacis-( 1S, 3S)diastereoizomeru 55:45 u smeši koja je u pitanju), bar 50%, bar 70%, bar 80%, bar 90%, bar 95%, bar 97%, pretpostavljeno bar 98%.

Jedna realizacija se odnosi na suštinski čisto Jedinjenje I ili njegovu so; takođe za medicinsku upotrebu kako je to ovde opisano.

Dalji aspekt se odnosi na Jedinjenje I ili njegovu so, posebno fumarat ili maleat so, koja se može dobiti, posebno dobiti, postupkom pronalaska kako je ovde opisan; takođe za medicinsku upotrebu kako je ovde opisana.

Pronalazak će biti ilustrovan u sledećim ne-ograničavajućim primerima.

PRIMERI

FARMAKOLOGIJA

Ogledi vezivanja

Za sve oglede: Rezultati su izraženi kako su procenat inhibicije kontrole specifičnog vezivanja i IC50vrednosti (koncentracija koja izaziva pola-maksimalne inhibicije kontrole specifičnog vezivanja) određeni analizom ne-linearne regresije upotrebom Hill-ove jednačine uklapanja krive. Konstante inhibicije (Kj) se izračunavaju iz Cheng Prusoff jednačine (Kj= IC50/(1+(L/KD)), gde je L jednako koncentracija radioaktivnog liganda u ogledu) i KD je jednako afinitetu radioaktivnog liganda prema receptoru.

Podtipovi Alfa- 1- Adrenoceptora

Ćelijske linije jajnika kineskog hrčka (CHO) koje ekspresuju pacovski alfa1di ćelije brubrega mladog hrčka (BHK) koje ekspresuju volovski alfa1ase generišu upotrebom standardnih tehnika stabilne transfekcije. Pacov-1 ćelijska linija koja ekspresuje hrčkov alfa1breceptor se dobija od Universitv of Utah, Salt Lake City, UT. Ćelijske linije koje ekspresiju odgovarajuće (alfa1a, alfaib, alfa1d) receptore se sakupe i homogenizuju na ledeno hladnom 50 mM Tris pH 7,7 upotrebom Ultra-Turrax homogenizatora i ili se skladišti na -80°C ili se čuva na ledu sve do upotrebe. [<3>H]Prazosin (0,3-0,5 nM) se upotrebljava kao radioaktivni ligand koji ocenjuje afinitet podtipova alfa!receptora. Ukupno vezivanje se utvrđuje upotrebom oglednog pufera i ne-specifično vezivanje se definiše u prisustvu 1jj.M

VVB-4101 za sve podtipove alfal receptora. Alikvoti se inkubiraju 20 minuta na 25°C. U svim ogledima vezana i slobodna radioaktivnost se odvaja vakuum filtriranjem na GF/B filterima prethodno tretiranim sa polietilenaminom (PEI) i računa u scintilacionom brojaču.

Alfa- 1 Adrenoceptori ( Inhibiciia vezivanja [ 3HlPrazosina za pacovske alfa-1- receptore)

Ovim postupkom, inhibicija putem lekova sa vezanim [<3>H]Prazosinom (0,5 nM) za alfa-1-receptore u membranama mozga pacova se utvrđujein vitro.Postupak je modifikovan u odnosu na Hvttel et al.J. Neurochem.1985, 44, 1615-1622.

DA D1 receptori:

Afiniteti prema humanim D1 receptorima se utvrđuju u Cerep laboratoriji pod ugovorom upotrebom referentnog ogleda iz kataloga broj 803-1 h. Upotrebojavaju se membrane sa CHO ćelija koje ekspresuju humane rekombinantne D1 receptore. 0,3 nM [<3>H]-SCH23390 se upotrebljava kao radioaktivni ligand i jedinjenja se testiraju u serijskom razblaživanju istovremeno sa referentnim jedinjenjem SCH23390 da bi se ocenila pogodnost ogleda. Alikvoti se inkubiraju na 22°C tokom 60 minuta i vezana radioaktivnost se meri sa tečnim scintilacionim brojačem.

Specifično kontrolno vezivanje za D1 receptore se definiše kao razlika između ukupnog vezivanja koje je utvrđeno bez pristunog jedinjenja i ne-specifičnog vezivanja koje je utvrđeno u prisustvu 1 ^iM SCH 23390.

DA D2 receptori:

CHO ćelije koje ekspresuju otprilike 800 fmol/mg humanih rekombinantnih D2 receptora se generišu standardnim tehnikama stabilne trasfekcije. Membrane se pokupe upotrebom standardnih protokola i afiniteti se mere dodavanjem serijskog razblaživanja jedinjenja preparatu membrane u smeši 50 mM Tris-HCI, 120 mM NaCI, 4 mM MgCI2. 0,1 nM<3>[H]-Spiperona se upotrebljava kao radioaktivni ligand koji se ocenjuje afinitet za humani D2 receptor. Ukupno vezivanje se utvrđuje u prisustvu pufera i ne-specifično vezivanje se utvrđuje u prisustvu 10|iM haloperidola. Smeša se inkubira 30 minuta na 37°C, ohladi kratko na ledu. Vezana i slobodna radioaktivnost se odvaja vakuum filtriranjem na GF/C filterima prethodno tretiranim sa 0,1% polietileneim-om (PEI) i filteri se računaju u scintilacionom brojaču.

Ogledi efikasnosti

DA D1 receptori:

Sposobnost jedinjenja da inhibira D1 receptorom posredovano cAMP formiranja u GHO ćelijskoj liniji generisanoj u-kući stabilno ekspresujući humani rekombinantni D1 receptor se meri na sledeći način. Ćelije se poseju na pločama sa 96 bazenčića pri koncentraciji od 11000 ćelija/bazenčić 3 dana pre eksperimenta. Na dan eksperimenta ćelije se operu jedanput sa prethodno zagrejanim G puferom (1 mM MgCL2, 0,9 mM CaCL2, 1 mM IBMX u PBS) i ogled se inicira dodavanjem 100 (aL smeše 30 nM A68930 i testiranog jedinjenja razblaženog u G puferu. Ćelije se inkubiraju 20 minuta na 37°C i reakcija se zaustavlja dodavanjem 100 (iL S pufera (0,1 M HCI i 0,1 mM CaCI2) i ploče se postave na 4°C 1 sat. 68 (iL N pufera (0,15 M NaOH i 60 mM NaAc) se dodaje i ploče se mućkaju 10 minuta. 60 \ xL reakcije se transferiše u cAMP Flash Plates (DuPont NEN) koje sadrže 40 uL 60 mM NaAc pH 6,2 i dodaje se 100 |iL IC mix (50 mM NaAc pH 6,2, 0,1% NaAzid, 12 mM CaCI2, 1% BSA i 0,15 jiCi/mL<125>l-cAMP). Nakon 18-časovne inkubacije na 4 °C ploče se operu jedanput i računaju u VVallac Tril_ux brojaču.

DA D2 receptori:

Sposobnost jedinjenja da inhibiraju D2 receptorom posredovanu inhibiciju cAMP formiranja u CHO ćelijama izmenjenim infekcijom sa humanim D2 receptorom se meri na sledeći način. Ćelije se poseju na pločama sa 96 bazenčića pri koncentraciji od 8000 ćelija/bazenčić 3 dana pre eksperimenta. Na dan eksperimenta ćelije se operu jedanput sa prethodno zagrejanim G puferom (1 mM MgCL2, 0,9 mM CaCL2, 1 mM IBMX u PBS) i ogled se inicira dodavanjem 100 \ iL smeše 1fiM hinpirola, 10^M forskolina i testiranog jedinjenja u G puferu. Ćelije se inkubiraju 20 minuta na 37°C i reakcija se zaustavlja dodavanjem 100 fil_ S pufera (0,1 M HCI i 0,1 mM CaCI2) i ploče se postave na 4°C 1 sat. 68 ?L N pufera (0,15 M NaOH i 60 mM NaAc) se dodaje i ploče se mućkaju 10 minuta. 60 (iL reakcije se transferiše u cAMP Flash Plates (DuPont NEN) koje sadrže 40 |iL 60 mM NaAc pH 6,2 i dodaje se 100 |iL IC mix (50 mM NaAc pH 6,2, 0,1% NaAzid, 12 mM CaCI2, 1% BSA i 0,15 uCi/mL<125>l-cAMP).

(i

Nakon 18-časovne inkubacije na 4 °C ploče se operu jedanput i računaju u VVallac TriLux brojaču.

Serotonin5-HT2A receptori

2 ili 3 dana pre eksperimenta, CHO ćelije koje ekspresuju 250 fmol/mg 5-HT2Areceptore se postave na ploču pri gustini dovoljnoj da da prinos mono-sastavljenog sloja na dan eksperimenta. Ćelije se napune bojom (Ca<2+->pribor od Molecular Devices i upotrebom Hank-ove balansirane soli w/o fenol crveno, dodatog 20 mM HEPES i podešenim pH na 7,4 sa 2M NaOH kao oglednog pufera) za 60 minuta na 37 °C u 5% C02inkubatoru pri 95% vlažnosti. Intenzitet kidanja se podešava do pogodnog nivoa da se dobiju bazalne vrednosti od otprilike 8000-10000 fluorescentnih jedinica. Varijacije u bazalnoj fluorescenciji treba da budu manje od 10%. IC50vrednosti se utvrđuju izazivanjem istog raspona koncentracija test supstanci sa EC85od 5-HT. Kjvrednosti se izračunavaju upotrebom Cheng-Prusoff jednačine. % Stimulacije koncentracije test jedinjenja se meri prema maksimalnoj koncentraciji 5-HT (100%). % Inhibicije koncentracije test jedinjenja se meri kao procenat za koji je odgovor EC85od 5-HT snižen. Maksimalna inhibicija je na onom nivou i upotrebljava se da se utvrdi razlika između punih i delimičnih antagonista.

In vitro određivanje interakcije jedinjenja sa CYP2D6 (CYP2D6 inhibitor ogled)

Princip: Inhibicija humanog CYP2D6 se procenjuje upotrebom mikrozoma pripremljenih od bakulovirus/ćelije insekta cDNK koje ekspresuju CYP2D6 kao izvore enzima i specifičnog CYP2D6 supstrata AMMC (3-[2-(N,N-dietil-N-metilamonijum)-etil]-7-metoksi-4-metilkumarin). AMMC je O-demetilovan do AHMC (3-[2-(N,N-dietilamino)etil]-7-hidroksi-4-metilkumarin) koji se detektuje merenjem pojavljivanja fluorescencije. Pretpostavljena jedinjenja sadašnjeg pronalaska prikazuju IC50 viši od 5 mikromolarnih za CYP2D6 aktivnost, IC50 koji je u koncentraciji jedinjenja koje daje 50 % inhibicije CYP2D6 aktivnosti.

Materijali i postupci:

Mikrozomi pripremljeni od bakulovirus/ćelije insekta cDNK koja ekspresuje CYP2D6 se dobijaju od BD Biosciences (Gentest 456217). Izmerena fluorescencija Ex. (405 nm) Em. (465 nm) sa SpectroFluor Plus čitač ploče (Tečan Nordic). Inkubacije sa rekombinantnim CYP2D6 mikrozomama koje sadrže 1,5 pmol rekombinantnog CYP2D6 u 0,2 ml_ ukupne zapremine 100 mM fosfatnog pufera na pH 7,4 koji sadrži 1,5 AMMC (3-[2-(N,N-dietil-N-metilamonijum)-eti!]-7-metoksi-4-metilkumarin) sa niskim NADPH-regenerišućim sistemom koji se sastoji od 0,0082 mM NADP<+>, 0,41 mM gluokoza 6-fosfata, 0,41 mM magnezijumhlorida i 0,4 jedinice/mL glukoza-6-fosfat dehidrogenaze. Vreme inkubacije je 45 minuta i inkubacije se priguše dodavanjem 0,075 ml_ 80% acetonitrila 20 % 0,5 M Tris baze. Sve hemikalije su analitičkog stepena od Sigma-e (St. Louis, MO). IC50 krive se proizvode upotrebom 8 koncentracija između 40 i 0,02 mikromolara jedinjenje koje se ima testirati rastvoreni u DMSO (dimetil sulfoksid) - konačna koncentracija u inkubaciji je ispod 1,0%

(Modifikovano u odnosu na N. Chauret et. al. DMD Vol. 29, Issue 9, 1196-1200, 2001). IC50vrednosti se izračunavaju linearnom interpolacijom.

QT-interval

Anestetizovani zec:

Opisani model koji sledi je originalno dizajniran kao proaritmički model od strane Carlsson et al, [J Cardiovasc Pharmacol. 1990; 16:276-85.] i modifikovan je da odgovara u postavku pretraživanja kao što je to u donjem tekstu opisano pod "pripremanje životinje".

Pripremanje životinje

Zečevi mužjaci (Hsdf:NZW, uzgoj sa strane) težine 2,0 - 2,8 kg se kupuju od Harlan-a (Holandija). Individualna telesna težina se meri i beleži na dan eksperimenta. Generalna anestezija se uvodi ptuem marginaln ušne vene putem intravenozne infuzije pentobarbitala (10 mg/mL, 18 mg/kg) praćeno sa alfa-hloralozom (100 mg/kg, zaprmina infuzije 4 mL/kg dato tokom vremenskog perioda od 20 minuta),. U traheu se uvodi kanila i zečevi se ventiliraju vazduhom na 45 udara po minutu i tidalnom zapreminom od 6 mL/kg. Vaskularni kateter se implantira u vratnu venu za davanje test jedinjenja. Dodatni kateteri se implantiraju u levu karotidnu arteriju za uzimanje uzoraka krvi i praćenje krvnog pritiska. Igle elektrode se postavljaju potkožno da se zabeleži standardni bipolarni vođenje II: negativna elektroda se postavlja ispred desnog ramena, pozitivna elektroda blizu leve slabine.

Eksperimentalni protokol

Nakon kraćeg perioda izjednačavanja, prethodne vrednosti doze se dobijaju na -20, -10 i 0 minuta pre IV bolus davanja nosača ili test jedinjenja. Dejstvo bolus davanja se prati tokom perioda od 40 minuta.

Uzimanje podataka od uzorcima i izračunavanje

ECG, krvni pritisak i HR se kontinuirano beleže na Maclab 8/s upotrebom Chart softvera v3.6.1 za Macintosh kompjuter. Frekvencija uzoraka je 1000 Hz. Dejstva elektrokardiograma (PQ-, QRS-, QT-, QTc-intervali i srčani puls) i srednjeg arterijskog krvnog pritiska (MAP) se beleže i mere elektronski.

ANALITIČKI POSTUPCI

Enantiomerni višak jedinjenje ( Va) u Primeru 1a se utvrđuje hiralnom HPLC upotrebom CHIRALCEL®OD kolone, 0,46 cm ID X 25 cm L, 10 u.M na 40 °C. Upotrebljava se kao mobilna faza n-Heksan/etanol 95:5 (zaprem./zaprem.) pri brzini protoka od 1,0 mL/min, detekcija se obavlja upotrebom UV detektora na 220 nm.

HPLC analiza za brzinu konverzije upotrebljenu za Primere 1b:

Kolona: Lichrospher RP-8 kolona, 250 x 4 mm (5 \ xm veličina čestice) Eluent: Puferovan MeOH/voda pripremljen na sledeći način: 1,1 mL Et3N dodat u 150 mL vode, 10% H3P04(vod) se dodaje do pH=7 i voda se dodaje do ukupno 200 mL. Smeša se dodaj u 1,8 L MeOH.

Enantiomerni višak jedinjenja ( Va) u primeru 1b se utvrđuje hiralnom HPLC upotrebom CHIRALPAK®AD kolone, 0,46 cm ID X 25 cm L, 10^m na 21 °C.

Heptan/etanol/dietilamin 89,9:10:0,1 (zapr/zapr/zapr) se upotrebljava kao mobilna faza pri brzini protoka od 1,0 mL/min, detekcija se obavlja upotrebom UV detektora na 220 nm.

Enantiomerni višak jedinjenja ( I) se utvrđuje stopljenom silika kapilarnom elektroforezom (CE) upotrebom sledećih uslova: Kapilar: 50^m ID X 48,5 cm L, pufer koji radi: 1,25 mM p ciklo dekstrin u 25 mM natrijumhidrofosfatu, pH 1,5, voltaža: 16 kV, temperatura: 22°C, ubrizgavanje: 40 mbar za 4 sekunde, detekcija: detekcija niza kolone diode 195 nm, koncentracija uzorka: 500ng/mL.U ovom sistemu, Jedinjenje I ima vreme zadržavanja od otprilike 10 minuta, i drugi enantiomer ima vreme zadržavanja od otprilike 11 minuta.

<1>H NMR spektra se beleži na 500,13 MHz na Bruker Avance DRX500 instrumentu ili na 250,13 MHz na Bruker AC 250 instrumentu. Kao rastvarači se upotrebljavaju hlooroform (99,8%D) ili dimetil sulfoksid (99,8%D), i tetrametilsilan (TMS) se upotrebljava kao unutrašnji referentni standard.

Cis / transodnos jedinjenja I se utvrđuje upotrebom<1>H NMR kao što je opisano kod Bogeso et al.,J. Med. Chem.1995, 38, 4380-4392 (strana 4388, desna kolona).Cis/ transodnos jedinjenja VI se utvrđuje sa 1H NMR u hloroformu, upotrebom integrala signala na 5,3 ppm zacisizomer i signala na 5,5 ppm zatransizomer. Generalno, sadržaj otprilike 1% neželjenog izomera može biti detektovan sa NMR.

Tačke topljenja se mere upotrebom diferencijalne kalorimetrije skeniranjem (DSC). Oprema je TA-Instruments DSC-2920 kalibrirana na 5°/min da da tačku topljenja kao početnu vrednost. Oko 2 mg uzorka se zagreva 5°/min u labavo zatvorenom sudu uz protok azota.

SINTEZA

Sinteza ključnog početnog materijala

Jedinjenje V se sintetiše iz IV redukcijom sa natrijumborhidridom (NaBH4) adaptiranjem postupka opisanog kod BogesoJ. Med. Chem.1983, 26, 935, upotrebom etanola kao rastvarača, i obavljajući reakciju na otprilike 0 °C. Oba jedinjenja su opisana kod Bogeso et al.J. Med. Chem.1995,38, 4380-4392. Jedinjenje IV se sintetiše iz II upotrebom opštih postupaka opisanih kod Sommer et al.,J. Org. Chem.1990,55, 4822, gde je takođe opisan II i njegova sinteza.

Primerla Sinteza (1S,3S)-6-hloro-3-fenilindan-1-ola (Va) upotrebom

hi ral nehromatografije

Racemski c/s-6-hloro-3-fenilindan-1-ol (V) (492 grama) se razdvaja preparatiovnom hromatografijom, upotrebom CHIRALPAK<®>AD kolone, 10 cm ID X 50 cm L, 10 (am na 40°C. Metanol se upotrebljava kao mobilna faza pri brzini protoka od 190 mL/min, detekcija se obavlja upotrebom UV detektora na 287 nm. Racemski alkohol (V) se ubrizgava kao 50.000 ppm rastvor u metanolu; 90 mL se ubrizgava sa intervalima od 28 minuta. Sve frakcije, koje sadrže jedinjenje iz naslova sa više od 98% enantiomernog viška, se kombinuju i isparavaju do suvog stanja upotrebom rotacionog isparivača, praćeno sušenjem "in vacuo" na 40°C. Prinos je 220 grama u čvrstom obliku. Elementarna analiza i NMR usklađeni su sa strukturom, enantiomerni višak je veći od 98% prem hiralnoj HPLC, [a]D<20>+44,5°

(c=1,0, metanol).

Primerlb Sinteza (1S,3S)-6-hloro-3-fenilindan-1-ola (Va) upotrebom

enzimskog razdvajanja

Jedinjenje V (5 g, 20,4 mmol) se rastvori u 150 mL anhidrovanog toluena. 0,5 g Novozvm 435 (Candida Antarctica lipaza B) (Novozvmes A/S, Fluka Cat.-No. 73940) se doda praćeno vinilbutiratom (13 mL, 102,2 mmol). Smeša se meša upotrebom mehaničke mešalice na 21 °C. Nakon jednog dana, dodaje se dodatnih 0,5 g Novozvm 435. Nakon 4 dana pri konverziji od 54% smeša se filtrira i koncentriše in vacuo da se dobije ulje koje sadrži smešu (1R,3R)-cis-6-hloro-3-fenilindan-1-ol-butirat estra i željenog jedinjenja Va sa enantiomernim viškom od 99,2% (99,6% jedinjenje Va i 0,4% (1 R,3R)-cis-6-hloro-3-fenilindan-1-ol).

Primer2 Sinteza (1 S,3S)-3,5-dihloro-1 -fenilindana (VI, LG=CI)C/'s-(1S,3S)-6-hloro-3-fenilindan-1-ol(Va) (204 grama) dobijen kao što je to opisano u Primeru 1a se rastvori u THF (1500 mL) tokom perioda od 1 h. Smeša se meša na sobnoj temperaturi preko noći. Dodaje se led (100 g) reakcionoj smeši. Kada se led otopi vodena faza (A) i organska faza (B) se odvajaju, i organska faza B se opere dva puta sa zasićenim natrijum bikarbonatom (200 mL). Faze natrijum bikarbonata se kombinuju sa vodenom fazom A, podesi se pH 9 sa natrijumhidroksidom (28%), i upotrebljava se da se opere organska faza B još jedanput. Rezultirajuća vodena faza (C) i organska faza B se odvajaju, i vodena faza C se ekstrakuje sa etilacetatom. Faza etilacetata se kombinuje sa organskom fazom B, osuši sa magnezijumsulfatom, i isparava do suvog stanja upotrebom rotacionog isparivača, dajući jedinjenje iz naslova kao ulje. Prinos 240 grama, koji se upotrebljava direktno u primeru 5.Cis/ transodnos 77:23 prema NMR.

Primer 3 Sinteza 3,3-dimetilpiperazin-2-ona

Kalijumkarbonat (390 grama) i etilen diamin (1001 grama) se mešaju sa toluenom (1,50 L). Dodaje se rastvor etil-2-bromoizobutirata (500 grama)

u toluenu (750 mL). Suspenzija se zagreje do refluksa preko noći, i filtrira. Filter kolač se opere sa toluenom (500 mL). Kombinovani filtrati (zapremina 4,0 L) se zagreje u vodenom kupatilu i destiluje na 0,3 atm., upotrebom Claisen aparata; prvih 1200 mL destilata se sakupi na 35 °C (temperatura u smeši je 75 °C). Dodaje se više toluena (600 mL), i sledećih 1200 mL destilata se sakupi na 76 °C (temperatura u smeši je 80°C). Ponovo se doda toluen (750 mL), i 1100 destilata se sakupi na 66°C

(temperatura u smeši je 71 °C). Smeša se meša u ledenom kupatilu i kalemi, gde se proizvod taloži. Proizvod se izoluje filtriranjem, opere sa toluenom, i osuši preko noći u vakuum peći na 50 °C. Prinos 171 g (52 %) 3,3-dimetilpiperazin-2-ona. NMR je konzistentna sa strukturom.

Primer 4 Sinteza 2,2-dimetilpiperazina

Smeša 3,3-dimetilpiperazin-2-ona (8,28 kg, 64,6 mol) i tetrahidrofurana (THF) (60 kg) se zagreva do 50-60 °C, dajući blago zamućeni rastvor. THF (50 kg) se meša pod azotom, i dodaje se LiAIH4(250 g, u rastvorljivoj plastičnoj kesici, od Chemetall-a), što daje sporu evoluciju gasa. Pošto je evolucija gasa završena, dodaje se još LJAIH4 (ukupno se upotrebljava 3,0 kg, 79,1 mol), i temperatura se penje sa 22°C na 50°C usled ekzoterma. Rastvor 3,3-dimetilpiperazin-2-ona se dodaje sporo tokom 2 sata na 41-59°C. Suspenzija se meša naredni sat na 59°C (temperatura košuljice 60°C). Smeša se ohladi, i dodaje se voda (3 L) tokom dva sata, održavajući temperaturu ispod 25°C (neophodno je ohladiti sa temperaturom košuljice od 0°C). Onda se dodaje natrijumhidroksid (15%, 3,50 kg) tokom 20 minuta na 23°C, neophodno hlađenje. Dodaje se još vode (9 L) tokom pola sata (neophodno hlađenje), i smeša se meša preko noći pod azotom. Dodaje se filter agens Celit (4 kg), i smeša se filtrira. Filter kolač se opere sa THF (40 kg). Kombinovani filtrati se koncentrišu u reaktoru sve dok temperatura u reaktoru ne bude 70 °C (temperatura destilacije 66°C) na 800 mbar. Ostatak (12,8 kg) se dalje koncentriše na rotacionom isparivaču do otprilike 10 L. Konačno, smeša se frakciono destilira na atmosferskom pritisku, i proizvod se sakuplja na 163-4°C. Prinos 5,3 kg (72%). NMR je u skladu sa strukturom.

Primer 5 Sinteza frans-1-(1/?,3S)-6-hloro-3-fenilindan-1-il)-3,3-dimetilpiperazinium (Jedinjenje I) vodonik maleat soli C/s-(1S,3S)-3,5-dihloro-1-fenilindan (VI, LG=CI) (240 g) se rastvori u butan-2-onu (1800 mL). Dodaju se kalijumkarbonat (272 g) i 2,2-dimetil piperazin (pripremljeno u Primeru 4) i smeša se zagreva na temperaturi refluksa 40 h. Reakcionoj smeši se doda dietil etar (2 L) i hlorovodonična kiselina (1M, 6 L). Faze se odvajaju, i pH u vodenoj fazi se snizi sa 8 na 1 sa koncentrovanom hlorovodoničnom kiselinom. Vodena faza se upotrebljava da se opre organska faza još jedanput da bi se obazbedilo da je ceo proizvod u vodenoj fazi. Dodaje se natrijumhidroksid (28%) vodenoj fazi sve dok pH nije 1, i vodena faza se ekstrakuje dva puta sa dietil etrom (2 L). Dietil etar ekstrakti se kombinuju, osuše sa natrijumsulfatom, i isparavaju do suvog stanja upotrebom rotacionog isparivača. Prinos 251 g jedinjenje iz naslova kao ulja.Cis/ transodnos, 82:18 prema NMR. Sirovo ulje (ukupno 20 grama) se dalje prečišćava fleš hromatografijom na silikagelu (eluent: etilacetat/etanol/trietilamin 90:5:5) praćeno isparavanjem do suvog stanja na rotacionom isparivaču. Prinos 12 grama jedinjenja iz naslova kao ulja( cis/ transodnos, 90:10 prema NMR). Ulje se rastvori u etanolu (100 mL), i ovom rastvoru se doda rastvor maleinske kiseline u etanolu do pH 3. Rezultirajuća smeša se meša na sobnoj temperaturi 16 sati, i formirani talog se sakuplja filtriranjem. Zapremina etanola je redukovana i sakuplja se sledeća šarža taloga. Prinos 3,5 grama u čvrstom obliku (nije detektovancisizomer prema NMR) jedinjenja iz naslova. Enantiomerni višak je >99%. Tačka topljenja 175-178°C. NMR je u skladu sa strukturom.

Primer 6 Sinteza Jedinjenja I

Smeša frans-1-((1R,3S)-6-hloro-3-fenilindan-1-il)-3,3-dimetilpiperazinium vodonik maleata (I) (9,9 g), koncentrovanog vodenog rastvora amonijaka (100 mL), slanog rastvora (150 mL) i etilacetata (250 mL) se meša na sobnoj temperaturi 30 minuta. Faze se odvajaju, i vodena faza se ekstrakuje sa etilacetatom još jedanput. Kombinovane organske faze se operu sa slanim rastvorom, osuše preko magnezijumsulfata, filtriraju i isparavaju do suvog stanja in vacuo. Prinos 7,5 grama ulja. NMR je u skladu sa strukturom.

Primer 7 Sinteza traA7s-1-((1f?,3S)-6-hloro-3-fenilindan-1-il)-3,3-dimetilpiperazinium (Jedinjenje I) fumarat soli

Rastvorfrans-1-((1R,3S)-6-hloro-3-fenilindan-1-il)-3,3-dimetilpiperazina(dobijenog kao što je to opisano u Primeru 6) (1 g) se rastvori u acetonu (100 mL). Ovom rastvoru se dodaje fumarna kiselina u etanolu sve dok pH rezultirajućeg rastvora nije 4. Rezultirajuća smeša se hladi u ledenom kupatilu 1,5 sat pri čemu se formira talog. Jedinjenje se osuši in vacuo dajući belo čvrsto jedinjenej (1,0 g). Enantiomerni višak je >99%. Tačka topljenja 193-196°C. NMR je u skladu sa strukturom.

Claims

1. Jedinjenje,naznačeno time,što ima formulu (Jedinjenje 1,trans- l-((1 R,3S)-6-hloro-3-fenilindan-1 -il)-3,3-dimetilpiperazin) ili njegova sp.

2. Jedinjenje ili so prema zahtevu 1,naznačeno time,što je suštinski čisto.

3. Farmaceutski sastav,naznačen time,što se sastoji od jedinjenja ili soli prema zahtevu 1 ili 2 zajedno sa bar jedinim farmaceutski prihvatljivim nosačem, puniocem ili razređivačem.

4. Farmaceutski sastava prema zahtevu 3,naznačen time,što je enantiomerni višak Jedinjenja I bar 90%, bar 96%, ili bar 98%.

5. Jedinjenje ili so prema zahtevu 1 ili 2,naznačeno time,što služi za upotrebu u medicini.

6. Upotreba jedinjenja ili soli prema zahtevu 1 ili 2 u pripremanju medikamenta za lečenje bolesti odabrane od grupe koja se sastoji od bolesti koja uključuje psihotičke simptome, šizofrenije, poremećaja anksioznosti, afektivnih poremećaja uključujući depresiju, poremećaje sna, migrenu, neuroleptikom-izazvani parkinskonizam, i poremećaje zloupotrebe, n.pr., zloupotreba kokaina, zloupotreba nikotina, ili zloupotreba alkohola.

7. Upotreba prema zahtevu 6 u pripremanju medikamenta za lečenje šizofrenije ili drugih psihotičkih poremećaja.

8. Upotreba prema zahtevu 7 u pripremanju medikamenta za lečenje jednog ili više: pozitivnih simptoma, negativnih simptoma i depresivnih simptoma šizofrenije.

9. Upotreba jedinjenja ili soli prema zahtevu 1 ili 2 u pripremanju medikamenta za lečenje bilesti odabrane od grupe koja se sastoji od šizofrenije, poremećaja šizofrenog oblika, šizoafektivnog poremećaja, poremećaja priviđanja, kratkog psihotičkog poremećaja, deljenog psihotičkog poremećaja, i manije u bipolarnom poremećaju.

10. Upotreba prema bilo kom od zahteva 6-9 pri čemu je navedeno jedinjenje ili njegova so u obliku farmaceutskog sastava kako je definisan u zahtevu 4.

11. Postupak lečenja bolesti odabrane od grupe koja se sastoji od bolesti koja uključuje psihotičke simptome, šizofrenije, poremećaja anksioznosti, afektivnih poremećaja uključujući depresiju, poremećaje sna, migrenu, neuroleptikom-izazvani parkinskonizam, i poremećaje zloupotrebe, n.pr., zloupotreba kokaina, zloupotreba nikotina, ili zloupotreba alkohola,naznačen time,što se sastoji od davanja terapeutski efektivne količine jedinjenja ili soli kako su definisani u zahtevu 1 ili 2.

12. Postupak prema zahtevu 11,naznačen time,što služi za lečenje šizofrenije ili drugih psihotičkih poremećaja.

13. Postupak prema zahtevu 12,naznačen time,što služi za lečenje jednog ili više: pozitivnih simptoma, negativnih simptoma i depresivnih simptoma šizofrenije.

14. Postupak lečenja bolesti odabrane od grupe koja se sastoji od šizofrenije, poremećaja šizofrenog oblika, šizoafektivnog poremećaja, poremećaja priviđanja, kratkog psihotičkog poremećaja, deljenog psihotičkog poremećaja, i manije u bipolarnom poremećaju,naznačen time,što se sastoji od davanja terapeutski efektivne količine jedinjenja ili soli kako su definisani u zahtevu 1 ili 2.

15. Postupak prema bilo kom od zahteva 11-14,naznačen time,što se pacijent koji se leči sa Jedinjenjem I ili njegovom soli takođe leči sa drugim medikamentom(ima).

16. Postupak prema zahtevu 12,naznačen time,što se pacijent koji se leči sa Jedinjenjem I ili njegovom soli takođe leči sa bar još jednim medikamentom.

17. Postupak prema bilo kom od zahteva 11-16,naznačen time,što je navedeno jedinjenje ili njegova so u obliku farmaceutskog sastava kako je definisan u zahtevu 4.

18. Jedinjenje transi-(-6-hloro-3-fenilindan-1-il)-3,3-dimetilpiperazin ili njegova so,naznačeno time,što služi za upotrebu u medicini.

19. Farmaceutski sastav,naznačen time,što se sastoji od jedinjenja ili soli prema zahtevu 18 zajedno sa bar jednim farmaceutski prihvatljivim nosačem, puniocem ili razređivačem.

20. Upotreba jedinjenja ili soli prema, zahtevu 18 u pripremanju medikamenta za lečenje bolesti odabranih od grupe koja se sastoji od bolesti koje uključuju psihotičke simptome, šizofreniju (n.pr., jedan ili više od pozitivnih simptoma, negativnih simptoma i depresivnih simptoma šizofrenije), poremećaja šizofrenog oblika, šizoafektivnog poremećaja, poremećaja priviđanja, kratkog psihotičkog poremećaja, deljenog psihotičkog poremećaja, manije u bipolarnom poremećaju, poremećaja anksioznosti, afektivnih poremećaja uključujući depresiju, poremećaje sna, migrenu, neuroleptikom-izazvani parkinsonizam, poremećaje zloupotrebe,n. pr.,zloupotreba kokaina, zloupotreba nikotina, ili zloupotreba alkohola.

21. Postupak za lečenje bolesti odabranih od grupe koja se sastoji od bolesti koje uključuju psihotičke simptome, šizofreniju (n.pr., jedan ili više od pozitivnih simptoma, negativnih simptoma i depresivnih simptoma šizofrenije), poremećaja šizofrenog oblika, šizoafektivnog poremećaja, poremećaja priviđanja, kratkog psihotičkog poremećaja, deljenog psihotičkog poremećaja, manije u bipolarnom poremećaju, poremećaja anksioznosti, afektivnih poremećaja uključujući depresiju, poremećaje sna, migrenu, neuroleptikom-izazvani parkinsonizam, poremećaje zloupotrebe,n. pr.,zloupotreba kokaina, zloupotreba nikotina, ili zloupotreba alkohola,naznačen time,što se sastoji od davanja terapeutsko efektivne količine jedinjenja ili soli kako je definisano u zahtevu 18.

22. Postupak proizvodnje jedinjenja formule I (Jedinjenje I) ili njegove soli,naznačen time,što se postupak sastoji od konverzije jedinjenja formule Va (Jedinjenje Va) u c/s-kcnfjguraciji u jedinjenje formule I, pri čemu su I i Va kako dalje sledi:

23. Postupak prema zahtevu 22,naznačen time,što se sastoji od konverzije alkohol grupe cis-alkohol formule Va u odgovarajuću odlazeću grupu LG, rezultirajući u jedinjenju formule VI.

24. Postupak prema zahtevu 23,naznačen time,što je LG halogen, n.pr. Cl ili Br, pretpostavljeno Cl, ili sulfonat.

25. Postupak prema bilo kom od zahteva 22-24,naznačen time,što se Jedinjenje VI taloži iz odgovarajućeg rastvarača.

26. Postupak prema zahtevu 25,naznačen time,što je LG halogen, pretpostavljeno Cl, i rastvarač je alkan,n. pr.,heptan.

27. Postupak prema bilo kom od zahteva 22-26,naznačen time,što Jedinjenje VI reaguje sa 2,2-dimetilpiperazinom da se dobije Jedinjenje I.

28. Postupak prema zahtevu 27,naznačen time,što se Jedinjenje I taloži kao odgovarajuća so,n. pr.,so organske kiseline kao što je organska dvobazna kiselina.

29. Postupak prema zahtevu 28,naznačen time,što je formirana so fumarat so ili maleat so Jedinjenja I.

30. Postupak prema bilo kom od zahteva 22-26,naznačen time,što se sastoji od - reagovanja Jedinjenja VI sa 1-zaštićenim 2,2-dimetilpiperazinom (VII), pri čemu je PG zaštitna grupa, n.pr., odabrana od grupe od fenilmetoksikarbonila, terc-butiloksikarbonila, etoksikarbonila i benzila, time dajući jedinjenje formule VIII; i - deprotektovanje Jedinjenja VIII da se dobije Jedinjenje I, gde su Jedinjenja VII i VIII kako dalje sledi:

31. Postupak za pripremanje Jedinjenja I ili njegove soli,naznačen time,što se sastoji od reagovanja jedinjenja formule Via (odnosno Jedinjenje VI za koje je LG=CI) sa 2,2-dimetilpiperazinom.

32. Postupak za pripremanje Jedinjenja I ili njegove soli,naznačen time, što se sastoji od reagovanja jedinjenja formule Via sa 2,2-dimetilpiperazinom u prisustvu baze.

33. Postupak prema bilo kom od zahteva 22-32,naznačen time,što se Jedinjenje Va dobija enzimskim razdvajanjem Jedinjenja V.