PT981328E - Composição formadora de uma emulsão para um composto taxóide. - Google Patents

Description

ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ

DESCRIÇÃO "Composição formadora de uma emulsão para um composto taxóide"

Antecedentes do invento São descobertos em cada ano centenas de compostos medicinalmente úteis, mas a utilização clinica destes fármacos é apenas possível se for desenvolvido um veículo de entrega para os transportar para o seu alvo terapêutico no corpo humano. Este problema é particularmente crítico para fármacos que requerem injecção intravenosa para atingirem o seu alvo ou dosagem terapêutica mas que são insolúveis em água ou pouco solúveis em água. Para esses compostos hidrófobos, a injecção directa pode ser impossível ou altamente perigosa, e pode resultar em hemólise, flebite, hipersensibilidade, falha de órgãos e/ou morte. Tais compostos são denominados pelos farmacêuticos como "lipófilos", "hidrófobos", ou na sua forma mais difícil "anfifóbicos".

Alguns exemplos de substâncias terapêuticas nestas categorias são ibuprofeno, diazepam, griseofulvina, ciclosporina, cortisona, proleucina, etoposido e paclitaxel. Kagkadis, KA et al. (1996), PDA j Pharm Sei Tech 50(5):317-323; Dardel, 0. (1976), Anaesth Scand 20:221-24; Sweetana, S e MJU Akers (1996), PDA J Pharm Sei Tech 50(5):330-342. A administração de agentes quimioterapêuticos ou anti-cancro é particularmente problemática. Os agentes anti-cancro de baixa solubilidade são difíceis de solubilizar e fornecer a níveis terapeuticamente úteis. Por outro lado, os agentes anti-cancro solúveis em água são geralmente absorvidos tanto por células cancerosas como não cancerosas, pelo que exibem uma não especificidade.

Os esforços para melhorar a solubilidade em água e conforto de administração de tais agentes não resolveram, e podem ter piorado, os dois problemas fundamentais da quimioterapia do cancro: 1) toxicidade não específica e 2) rápida eliminação da corrente sanguínea por mecanismos não específicos. No caso de citotoxinas, que formam a maior parte das quimioterapias correntemente disponíveis, estes dois 2 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ problemas estão claramente relacionados. Quando a terapêutica é tomada pelas células não cancerosas, uma quantidade diminuída do fármaco permanece disponível para tratar o cancro e, mais importante, a célula normal que ingere o fármaco é morta.

Para ser eficaz no tratamento do cancro, o quimioterapêutico tem de estar presente através dos tecidos afectados a uma elevada concentração durante um período de tempo prolongado, de modo a poder ser absorvido pelas células cancerosas, mas a uma concentração não tão elevada que as células normais sejam danificadas para além de uma reparação possível. Obviamente, as moléculas solúveis em água podem ser administradas desta maneira, mas apenas por infusão lenta e contínua e monitorização, aspectos que envolvem grande dificuldade, despesa e inconveniência.

Um processo mais eficaz de administração de uma terapia do cancro, particularmente uma citotoxina, está na forma de uma dispersão de um óleo em que o fármaco está dissolvido. Estas partículas oleosas são tornadas neutras electricamente e revestidas de tal forma que não interagem com partículas de plasma e não são retidas pelo sistema reticuloendotelial (RES), permanecendo pelo contrário intactas no tecido ou no sangue durante horas, dia ou mesmo semanas. Na maior parte dos casos, é desejável que as partículas também se distribuam nos nódulos linfáticos vizinhos que são injectados no local de um cancro. Nakamoto, Y et al. (1975), Chem Pharm Buli, 23(10):2232-2238; Takahashi, T et al. (1977), Tohoku J Exp Med, 123:235-246. Em muitos casos, a injecção directa no sangue é a via de escolha para a administração. Ainda mais preferivelmente, após a injecção intravenosa, as partículas transportadas pelo sangue podem ser preferencialmente capturadas e ingeridas pelas próprias células cancerosas. Uma vantagem acrescentada de uma emulsão em partículas para a entrega de um quimioterapêutico é a propriedade de disseminação dos tensioactivos utilizados nas emulsões para ultrapassar a resistência multi-fármaco.

Para fármacos que não podem ser formulados como uma solução aquosa, as emulsões têm sido tipicamente muito rentáveis e fáceis de administrar, embora tenha havido 3 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ problemas graves para as tornar estéreis e isentas de endotoxinas de modo a poderem ser administradas por injecção intravenosa. Os óleos tipicamente utilizados para emulsões farmacêuticas incluem óleos saponifiçáveis a partir da familia de triglicéridos, por exemplo óleo de soja, óleo de semente de soja, óleo de semente de algodão, óleo de cártamo e similares. Hansrani, PK et al. (1983), J Parenter Sei Technol 37:145-150. São utilizados um ou mais tensioactivos para estabilizar a emulsão, e são adicionados excipientes para tornar a emulsão mais biocompativel, estável e menos tóxica. Lecitina proveniente de gema de ovo ou feijão de soja é um tensioactivo habitualmente utilizado. Uma produção estéril pode ser conseguida por esterilização absoluta de todos os componentes antes do fabrico, seguida de técnicas absolutamente assépticas em todas as etapas de produção. Contudo, uma maior facilidade de fabrico e garantia de esterilidade é obtida por esterilização terminal após fabrico sanitário, por calor ou por filtração. Infelizmente, nem todas as emulsões são adequadas para tratamentos por calor ou por filtração. A estabilidade mostrou ser influenciada pelo tamanho e homogeneidade da emulsão. A emulsão preferida consiste numa suspensão de partículas sub-micrónicas, com um tamanho médio não superior a 200 nanómetros. Uma dispersão estável nesta gama de tamanhos não é conseguida facilmente, mas tem a vantagem de se esperar que circule mais na corrente sanguínea. Além disso, menos dispersão estável é fagocitizada não especificamente pelo sistema reticuloendotelial. Como resultado, é mais provável que o fármaco atinja o seu alvo terapêutico. Assim, uma emulsão de fármaco preferida será concebida para ser activamente absorvida pela célula ou órgão alvo, e é desviada do RES.

Em WO-A-89/03689 divulga-se um lipossoma estável que compreende hemi-succinato de alfa-tocoferol, um bioactivo, um detergente como TPGS e uma fase aquosa.

Em WO-A-96/15774 divulga-se uma composição de lipossoma que compreende um fosfolípido, um fármaco hidrófobo como paclitaxel e uma fase aquosa. A utilização de alfa-tocoferol como estabilizante anti-oxidante também é divulgada. 4 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ

Em US 5534499 divulgam-se derivados de um fármaco lipófilo tal como paclitaxel, que são formulados em lipossomas ou micelas. Os derivados estão ligados covalentemente a uma cadeia de ácido gordo de um fosfolipido, glicérido, ceramida ou 1,2-diaciloxipropano-3-amina. A ligação pode ser cindida in vivo para separar o fármaco da formulação lipossomal ou micelar.

Em WO-A-95/31217 divulga-se a utilização de um tocoferol ou um derivado de tocoferol como solvente e/ou emulsionante para fármacos substancialmente insolúveis e pouco solúveis, no fabrico de composições farmacêuticas. Estas composições são adequadas para administração transmucosal, em especial administração intranasal.

Em WO-A-97/03651 descreve-se uma composição de entrega de fármaco que compreende um veiculo de lipido que contém um fármaco e vitamina E para melhorar a solubilidade do fármaco activo no veiculo de lipido. A composição pode estar na forma de um lipossoma ou uma emulsão de óleo-em-água. A utilização de vitamina E em emulsões é conhecida. Para além de centenas de exemplos em que a vitamina E é utilizada em pequenas quantidades [por exemplo, menos de 1%, RT Lyons, Pharm Res 13(9) :S—226, (1996) "Formulation development of an injectable oil-in-água emulsion containing the lipophilic antioxidants K-tocoferol and P-carotene"] como anti-oxidante em emulsões, as primeiras emulsões primitivas e injectáveis de vitamina E per se foram fabricadas por Hidiroglou para suplementação dietética em ovelhas e para pesquisa sobre a farmacocinética da vitamina E e seus derivados. Hidiroglou M. e Karpinski K. (1988), Brit J Nutrit 59:509-518.

Para ratinhos, uma forma injectável de vitamina E foi preparada por Kato e colaboradores. Kato Y. et al. (1993), Chem Pharm Buli 41(3):599-604. Soluções micelares foram formuladas com Tween 80, Brij 58 e HCO-60. Foi utilizado isopropanol como co-solvente, e depois removido por evaporação sob vácuo; o óleo vitroso residual foi depois tomado em água com agitação em vórtice como uma suspensão micelar. Também foi preparada uma emulsão por dissolução de vitamina E com fosfatidilcolina de soja (lecitina) e óleo de 5 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ soja. Juntou-se água e a emulsão foi preparada com ultrassons.

Em 1983 foi introduzido o E-Ferol, uma emulsão de vitamina E, para suplementação e terapia de vitamina E em recém-nascidos. Alade SL et al. (1986), Pediatrics 77(4):593-597. Em poucos meses, mais de 30 bebés tinham falecido como resultado de receberem o produto, e o produto foi rapidamente retirado por ordem da FDA. A mistura de tensioactivo utilizada no E-Ferol para emulsionar 25 mg/mL de vitamina E consistia em 9% de Tween 80 e 1% de Tween 20. Estes tensioactivos parecem ter sido finalmente os responsáveis pelas infelizes mortes. Esta experiência ilustra a necessidade de formulações melhoradas e a importância da selecção de tensioactivos biocompativeis adequados e cuidadosa monitoração dos seus niveis em emulsões parentéricas.

Um meio alternativo para solubilizar compostos de baixa solubilidade é a solubilização directa num meio não aquoso, por exemplo álcool (tal como etanol), dimetilsulfóxido ou triacetina. Um exemplo no pedido PCT WO 95/11039 descreve a utilização de vitamina E e do derivado de vitamina E TPGS em combinação com etanol e a molécula imunossuppressora ciclosporina. Soluções contendo álcool podem ser fornecidas com cuidado, mas são dadas tipicamente por gotejamento intravenoso para evitar dor, irritação vascular e toxicidade associada à injecção de um bólus destas soluções.

Os problemas com formulações farmacêuticas em solventes e solubilizantes não aquosos tais como álcool (etanol, isopropanol, álcool benzilico, etc.) referem-se à capacidade destes solventes para extrair substâncias tóxicas, por exemplo plastificantes, a partir dos seus recipientes. Por exemplo, a actual formulação comercial para o fármaco anti-cancro paclitaxel, consiste numa mistura de óleo de ricino hidroxilado e etanol, e rapidamente extrai plastificantes tais como di-(2-etil-hexil)ftalato das tubagens e sacos habitualmente utilizados em infusão intravenosa. Têm sido referidas reacções adversas aos plastificantes, tais como distúrbios respiratórios, requerendo a utilização se sistemas de infusão especiais a custo e tempo extra. Waugh, et al. (1991), Am J Hosp Pharmacists 48:1520. 6 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ

Face a estes problemas, pode ser observado que o veículo ideal para emulsão seria barato, não irritante ou até nutritivo e paliativo por si, esterilizável terminalmente por calor ou filtração, estável durante pelo menos 1 ano sob condições de armazenamento controladas, acomodando uma ampla variedade e fármacos insolúveis em água e pouco solúveis em água e substancialmente isento de etanol. Para além dos fármacos que são lipófilos e se dissolvem em óleos, também é necessário um veículo que estabilize, e transporte na forma de uma emulsão, fármacos que são pouco solúveis em lípidos e em água.

Sumário do invento

Para satisfazer estas necessidades, o presente invento refere-se a composições farmacêuticas que incluem: α-tocoferol, um tensioactivo ou misturas de tensioactivos contendo polietilenoglicol-succinato de α-tocoferol com e sem uma fase aquosa, e um composto taxóide em que a composição está na forma de uma emulsão, solução micelar ou um sistema de entrega de fármaco auto-emulsionante. Numa forma preferida, a solução é substancialmente isenta de etanol.

As composições farmacêuticas podem ser estabilizadas pela adição de diversas moléculas anfifílicas, incluindo tensioactivos aniónicos, não iónicos, catiónicos e zwitteriónicos. Preferivelmente, estas moléculas são tensioactivos PEGuilados e optimamente α-tocoferol PEGuilado.

As moléculas anfifílicas incluem adicionalmente tensioactivos tais como palmitato de 6-ascorbilo; estearilamina; ésteres de ácidos gordos de sacarose, vários derivados de vitamina E e tensioactivos contendo flúor, tais como a série da marca Zonyl e um copolímero não iónico em blocos de polioxipropileno-polioxietilenoglicol. O agente terapêutico da emulsão pode ser um agente quimioterapêutico, preferivelmente um análogo taxóide e, muito preferivelmente, o paclitaxel.

As emulsões do invento podem compreender um meio aquoso quando na forma de uma emulsão ou solução micelar. Este meio 7 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ pode conter vários aditivos para ajudar a estabilizar a emulsão ou a tornar a formulação biocompativel.

As composições farmacêuticas do invento são tipicamente formadas por dissolução de um agente terapêutico em etanol, para formar uma solução de agente terapêutico. Junta-se depois o α-tocoferol à solução de agente terapêutico para formar uma solução de α-tocoferol e agente terapêutico. Em seguida, o etanol é removido para formar uma solução de α-tocoferol e agente terapêutico substancialmente isenta de etanol. A solução de α-tocoferol e agente terapêutico substancialmente isenta de etanol é misturada com e sem uma fase aquosa incorporando um tensioactivo para formar uma pré-emulsão. Para entrega IV, a pré-emulsão é então homogeneizada para formar uma emulsão fina. Para entrega oral, a pré-emulsão é tipicamente encapsulada numa cápsula de gelatina.

Em algumas concretizações, as composições farmacêuticas do invento são formadas por a) preparação de uma fase oleosa que compreende um taxóide e α-tocoferol; e b) combinação da fase oleosa com uma fase aquosa para formar uma emulsão, em que a fase oleosa ou a fase aquosa adicionalmente compreendem polietilenoglicolsuccinato de a-tocoferol.

Breve descrição das Figuras 0 invento será mais bem entendido por referência às Figuras, em que: A Figura IA mostra o tamanho de partícula de uma emulsão de paclitaxel (QWA) a 7°C ao longo do tempo; A Figura 1B mostra o tamanho de partícula de uma emulsão de paclitaxel (QWA) a 25°C ao longo do tempo; A Figura 2 é um cromatograma HPLC que mostra a integridade de um paclitaxel numa emulsão como descrita no Exemplo 5; A Figura 3A mostra a concentração de paclitaxel de uma emulsão de paclitaxel (QWA) a 4°C ao longo do tempo; 8 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ A Figura 3Β mostra a concentração de paclitaxel de uma emulsão de paclitaxel (QWA) a 25°C ao longo do tempo; e A Figura 4 mostra a percentagem de paclitaxel libertado ao longo do tempo a partir de três emulsões diferentes. 0 simbolo · representa a percentagem de paclitaxel libertado ao longo do tempo a partir de uma emulsão comercialmente disponível em Bristol Myers Squibb. O símbolo A representa a percentagem de paclitaxel libertado ao longo do tempo a partir de uma emulsão deste invento contendo 6 mg/ml de paclitaxel (QWA) como descrito no Exemplo 6. 0 símbolo 0 representa a percentagem de paclitaxel libertado ao longo do tempo a partir de uma emulsão deste invento (QWB) contendo 7 mg/ml de paclitaxel como descrito no Exemplo 7.

Descrição detalhada do invento

Para assegurar um entendimento completo do invento, são proporcionadas as seguintes definições: g-Tocoferol: 0 α-tocoferol, também conhecido como vitamina E, é uma molécula orgânica com a seguinte estrutura química (Esquema I):

(D

Para além da sua utilização como solvente primário, o α-tocoferol e os seus derivados são úteis como agentes terapêuticos.

Tensioactivos: Grupo de moléculas anfifílicas com actividade superficial que são fabricadas por processos químicos ou purificadas a partir de fontes ou processos naturais. Estes podem ser aniónicos, catiónicos, não iónicos e zwitteriónicos. Tensioactivos típicos são descritos em "Emulsions: Theory and Practice", Paul Becher, Robert E. Krieger Publishing, Malabar, Florida, 1965; "Pharmaceutical Dosage Forms: Dispersed Systems" Vol. I, Martin M. Rigear, Surfactants e Patente US N.° 5595723 que foi transmitida para 9 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ ο cessionário deste invento, Sonus Pharmaceuticals. TPGS: O TPGS ou vitamina E PEGuilada é um derivado de vitamina E em que subunidades de polietilenoglicol estão ligadas por um diéster de ácido succinico ao hidroxilo do anel da molécula de vitamina E. TPGS representa polietilenoglicol-lOOO-succinato de D-a-tocoferol (PM = 530). O TPGS é um tensioactivo não iónico (HLB = 16-18) com a estrutura do Esquema II:

Vários derivados químicos da vitamina E TPGS que incluem ligações éster e éter de várias porções químicas estão incluídos na definição de vitamina E TPGS.

Polietilenoglicol: O polietilenoglicol (PEG) é uma forma hidrófila e polimerizada de etilenoglicol, que consiste em unidades repetitivas da estrutura química —(CH2-CH2-0-) . AUC: AUC é a área sob a curva de concentração no plasma -tempo, habitualmente utilizada em farmacocinética para quantificar a percentagem de absorção e eliminação de fármaco. Uma elevada AUC geralmente indica que o fármaco irá atingir com sucesso o tecido ou órgão alvo.

Poloxamer ou Pluronic: são copolímeros sintéticos em blocos de óxido de etileno e óxido de propileno que possuem a estrutura geral:

OH (OCH2CH2) a (OCH2CH2CH2) b (OCH2CH2) aH

As seguintes variantes com base nos valores de a e b estão comercialmente disponíveis em BASF Performance Chemicals (Parsippany, New Jersey) sob a marca Pluronic e que consistem no grupo de tensioactivos designados pelo nome CTFA de Poloxamer 108, 188, 217, 237, 238, 288, 338, 407, 101, 105, 10 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ 122, 123, 124, 181, 182, 183, 184, 212, 231, 282, 331, 401, 402, 185, 215, 234, 235, 284, 333, 334, 335 e 403. Para os Poloxamer mais comummente utilizados 124, 188, 237, 338 e 407, os valores de a e b são 12/20, 79/28, 64/37, 141/44 e 101/56, respectivamente.

Solutol HS-15: é um hidroxiesterarato de polietilenoglicol 660 fabricado por BASF (Parsippany, NJ). Para além do polietilenoglicol livre e seus monoésteres, os diésteres também são detectáveis. De acordo com o fabricante, um lote tipico de Solutol HS-15 contém aproximadamente 30% de polietilenoglicol livre e 70% de ésteres de polietilenoglicol.

Outros tensioactivos: Outros tensioactivos úteis no invento incluem palmitato de 6-ascorbilo (Roche Vitamins, Nutley NJ), estearilamina e ésteres de ácidos gordos de sacarose (Mitsubishi Chemicals). Tensioactivos habituais incluem os compostos com extremidades de cabeça polares que gostam de água e caudas hidrófobas, tais como um derivado de vitamina E que compreende um poliglutamato ligado a péptido unido ao hidroxilo do anel e fitosterol PEGuilado.

Balanço hidrófilo-lipófilo: Uma fórmula empírica utilizada para indexar tensioactivos. Os seus valores variam de 1-45 e no caso de tensioactivos não iónicos de cerca de 1-20. Em geral, para tensioactivos lipófilos, o HLB é inferior a 10 e para os hidrófilos o HLB é superior a 10.

Biocompatível: Capaz de desempenhar funções dentro ou sobre um organismo vivo de um modo aceitável, sem toxicidade indevida ou efeitos fisiológicos ou farmacológicos.

Substancialmente isento de etanol: Uma composição que possui uma concentração de etanol inferior a cerca de 1,0% (w/v) de etanol.

Emulsão: Uma dispersão coloidal de dois líquidos imiscíveis na forma de gotículas, cujos diâmetros, em geral, estão entre 0,1 e 3,0 mícrons e que é tipicamente opticamente opaca, excepto se as fases dispersa e contínua têm índices de refracção compatíveis. Tais sistemas possuem uma estabilidade finita, geralmente definida pela aplicação ou sistema de 11 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ referência relevante, que pode ser melhorada pela adição de moléculas anfifilicas ou melhoradores de viscosidade.

Microemulsão: Dispersão isotropicamente límpida e estável termodinamicamente de dois líquidos imiscíveis, tal como óleo e água, estabilizada por uma película interfacial de moléculas de tensioactivo. A microemulsão possui um diâmetro médio de gotícula inferior a 200 nm, em geral entre 10-50 nm. Na ausência de água, misturas de óleo(s) e tensioactivo(s) não iónico(s) formam soluções límpidas e isotrópicas que são conhecidas como sistemas de entrega de fármaco auto-emulsionantes (SEDDS) e que têm sido utilizados com sucesso para melhorar a dissolução e a absorção oral de fármacos lipófilos.

Meio aquoso: Líquido que contém água e que pode conter aditivos farmaceuticamente aceitáveis tais como agentes acidificantes, alcalinizantes, tamponantes, quelantes, complexantes e solubilizantes, conservantes anti-oxidantes e anti-microbianos, humectantes, agentes suspensores e/ou modificadores de viscosidade, agente de tonicidade e molhantes ou outros materiais biocompatíveis.

Agente terapêutico: Qualquer composto natural ou sintético que possui actividade biológica, é solúvel na fase de óleo e possui um coeficiente de partição octanol-tampão (Log P) de pelo menos 2 para assegurar que o agente terapêutico está preferencialmente dissolvido na fase oleosa em vez da fase aquosa. Isto inclui péptidos, não péptidos e nucleótidos. Conjugados de lípido/profármacos de moléculas solúveis em água estão dentro do âmbito do agente terapêutico.

Quimioterapêutico: Qualquer molécula natural ou sintética que seja eficaz contra uma ou mais formas de cancro, e em particular as moléculas que são ligeira ou completamente lipófilas ou que podem ser modificadas para se tornarem lipófilas. Esta definição inclui moléculas que pelo seu mecanismo de acção são citotóxicas (agentes anti-cancro), as que estimulam o sistema imunitário (imuno-estimulantes) e moduladores de angiogénese. O resultado em qualquer caso é o retardamento do crescimento das células cancerosas. 12 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ

Os quimioterapêuticos incluem Taxol (paclitaxel) e moléculas relacionadas denominadas colectivamente taxóides, taxinas ou taxanos. A estrutura do paclitaxel é mostrada na figura seguinte (Esquema III).

(III) O

Incluídas na definição de "taxóides" estão diversas modificações e ligações à estrutura anelar básica (núcleo taxóide) que se podem mostrar ser eficazes para reduzir o crescimento das células cancerosas e para repartir no óleo (fase de lípido) e que podem ser construídas através de técnicas da química orgânica conhecidas dos peritos na especialidade. A estrutura do núcleo taxóide é mostrada no Esquema IV.

(IV) i

Os quimioterapêuticos incluem podofilotoxinas e os seus derivados e análogos. A estrutura anelar central destas moléculas é mostrada na figura seguinte (Esquema V):

OH 13 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ

Outra importante classe de quimioterapêuticos úteis neste invento são as camptotecinas, cuja estrutura anelar básica é mostrada na figura seguinte, mas que inclui quaisquer derivados e modificações desta estrutura básica que mantenham a eficácia e conservem o carácter lipófilo da molécula mostrada em seguida (Esquema vi).

(VI)

Outra classe preferida de quimioterapêuticos úteis neste invento são as antraciclinas lipófilas, cuja estrutura anelar básica é mostrada na figura seguintes (Esquema VII):

(VII)

Outras modificações lipófilas adequadas do Esquema VII incluem substituições no grupo hidroxilo do anel ou grupo amino do açúcar.

Outra importante classe de quimioterapêuticos são compostos que são lipófilos ou que podem ser tornados lipófilos por meio de modificações quimiossintéticas moleculares bem conhecidas dos peritos na especialidade, por exemplo por quimica combinatória e por modelação molecular, e que são retirados da lista seguinte: Taxotere, Amonafide, Illudin S, 6-hidroximetilacilfulveno, Briostatina 1, 26-succinilbriostatina 1, Palmitoil-rizoxina, DUP 941,

Mitomicina B, Mitomicina C, Penclomedina, Interferão a2b, 14 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ compostos inibidores de angiogénese, complexos hidrófobos de cisplatina tais como 2-hidrazino-4,5-di-hidro-lH-imidazole com cloreto de platina e 5-hidrazino-3,4-di-hidro-2H-pirrole com cloreto de platina, vitamina A, vitamina E e seus derivados, em particular o succinato de tocoferol.

Outros compostos úteis no invento incluem: l,3-bis(2-cloroetil-l-nitrosureia ("carmustina" ou "BCNU"), 5-fluoro-uracilo, doxorubicina ("adriamicina"), epirubicina, aclarubicina, bisantreno (bis(2-imidazolen-2-il-hidrazona)-9,10-antracenodicarboxaldeído, mitoxantrona, metotrexato, edatrexato, tripéptido de muramilo, dipéptido de muramilo, lipopolissacáridos, 9-b-d-arabinofuranosiladenina ("vidarabina") e o seu derivado 2-fluoro, resveratrol, ácido retinóico e retinol, carotenóides e tamoxifeno.

Outros compostos úteis na aplicação deste invento incluem: Palmitoil-rizoxina, DUP 941, Mitomicina B, Mitomicina C, Penclomedina, Interferão a2b, Decarbazina, Lonidamina, Piroxantrona, Antrapirazoles, Etoposido, Camptotecina, 9-aminocamptotecina, 9-nitrocamptotecina, camptotecina-11 ("Irinotecan"), Topotecan, Bleomicina, os alcaloides de Vinca e seus análogos [Vincristina, Vinorelbina, Vindesina, Vintripol, Vinxaltina, Ancitabina], 6-aminocriseno e navelbina.

Outros compostos úteis na aplicação do invento são mimético de taxol, eleuterobinas, sarcodictinas, discodermolidas e epotiolonas.

Tendo em conta estas definições, o presente invento dirige-se a composições farmacêuticas na forma de emulsões, soluções micelares ou sistemas de entrega de fármaco auto-emulsionantes que estão substancialmente isentos de solvente de etanol.

Os agentes terapêuticos das composições deste invento podem inicialmente ser solubilizados em etanol. Contudo, o etanol é removido para formar uma composição substancialmente isenta de etanol. A concentração de etanol é inferior a 1% (w/v), preferivelmente inferior a 0,5% e muito preferivelmente inferior a 0,3%. Os agentes terapêuticos podem também ser 15 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΙ solubilizados em metanol, propanol, clorofórmio, isopropanol, butanol e pentanol. Estes solventes são também removidos antes de utilização.

As composições do invento contêm α-tocoferol como portador para fármacos terapêuticos, que podem ser administradas a animais ou seres humanos pelas vias intravascular, oral, intramuscular, cutânea e subcutânea. Especificamente, as emulsões podem ser dadas por qualquer das seguintes vias, entre outras: intra-abdominal, intra-arterial, intra-articular, intracapsular, intracervical, intracranial, intraductal, intradural, intralesional, intralocular, intralombar, intramural, intra-ocular, intra-operativa, intraparietal, intraperitoneal, intrapleural, intrapulmonar, intra-espinal, intratoráxica, intratraqueal, intratimpânica, intra-uterina e intraventricular. As emulsões do presente invento podem ser nebulizadas utilizando propulsores de aerossol adequados que são conhecidos na arte para entrega pulmonar de compostos lipófilos.

No seu primeiro aspecto, o invento refere-se à utilização de α-tocoferol como fase dispersa hidrófoba de emulsões contendo agentes terapêuticos insolúveis em água ou pouco solúveis em água, agentes terapêuticos solúveis em água que foram modificados para se tornarem menos solúveis ou suas misturas. Também chamado vitamina E, o α-tocoferol não é um óleo lípido típico. Possui uma polaridade maior que a da maioria dos óleos lípidos, particularmente de triglicéridos, e não é saponificável. Praticamente não possui solubilidade em água.

Num segundo aspecto, o invento é uma emulsão de α-tocoferol na forma de um sistema auto-emulsionante em que o sistema se destina a ser utilizado para a administração oral de fármacos insolúveis em água (ou agentes pouco solúveis em água ou solúveis em água modificados para serem menos solúveis ou suas misturas) quando é desejado. Nesta concretização, uma fase oleosa com tensioactivo e fármaco ou mistura de fármaco é encapsulada numa cápsula de gelatina mole ou dura. Agentes de solidificação adequados com pontos de fusão na gama de 40 a 60°C tais como polietilenoglicóis de elevado peso molecular (PM>1000) e glicéridos tais como os 16 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ disponíveis sob a marca Gellucires (Gattefose Corp., Saint Priest, França) podem ser adicionados para permitir o enchimento da formulação numa cápsula de gelatina dura a temperatura elevada. Formulações semi-sólidas são formadas sob equilíbrio à temperatura ambiente. Sob dissolução da gelatina no estômago e duodeno, o óleo é libertado e forma espontaneamente uma emulsão fina com um diâmetro de gotícula médio entre 2-5 mícrons. A emulsão é depois absorvida pelos microvilosidades do intestino e libertada na corrente sanguínea.

Num terceiro aspecto, o invento compreende microemulsões contendo α-tocoferol. Microemulsões refere-se a uma subclasse de emulsões em que a suspensão da emulsão é essencialmente límpida e indefinidamente estável em virtude do tamanho extremamente pequeno dos microagregados de óleo/fármaco nela dispersos.

Num quarto aspecto do invento, a vitamina E PEGuilada (TPGS) é utilizada como tensioactivo primário em emulsões de vitamina E. A vitamina E PEGuilada é utilizada como um tensioactivo primário, um estabilizante e também como um solvente suplementar em emulsões de vitamina E. 0 polietileno-glicol (PEG) é também útil como solvente secundário nas emulsões deste invento. A concentração de α-tocoferol das emulsões deste invento pode ser de cerca de 2 a cerca de 10% w/v. A razão de α-tocoferol para TPGS é optimamente de cerca de 1:1 a cerca de 10:1 (p/p).

As emulsões do invento podem ainda incluir tensioactivos tais como palmitato de 6-ascorbilo; estearilamina; ésteres de ácidos gordos de sacarose e vários derivados de vitamina E que compreendem nicotinato de α-tocoferol, fosfato de tocoferol, e misturas de tensioactivo sintético não iónico contendo um tensioactivo contendo flúor, tais como a série de marca Zonyl e um copolímero não iónico em blocos de polioxipropileno-polioxietilenoglicol.

As emulsões do invento podem compreender um meio aquoso. A fase aquosa possui uma osmolalidade de cerca de 300 mOsm e 17 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ pode incluir cloreto de potássio ou sódio, sorbitol, manitol, polietilenoglicol, propilenoglicol, albumina, PolyPep e suas misturas. Este meio pode também conter vários aditivos para ajudar a estabilizar a emulsão ou tornar a formulação biocompativel. Aditivos aceitáveis incluem agentes acidificantes, agentes alcalinizantes, conservantes anti-microbianos, anti-oxidantes, agentes tamponantes, agentes quelantes, agentes suspensores e/ou de aumento da viscosidade e agentes de tonicidade. Preferivelmente, são incluídos agentes para controlar o pH, tonicidade e aumentar a viscosidade. Optimamente, é conseguida uma tonicidade de pelo menos 250 mOsm com um agente que também aumenta a viscosidade, tal como sorbitol ou sacarose.

As emulsões do invento para injecção intravenosa possuem um tamanho de partícula de 10 a 500 nm, preferivelmente de 10 a 200 nm e muito preferivelmente de 10 a 100 nm. Para emulsões intravenosas, o baço e o fígado irão eliminar partículas com tamanhos maiores que 500 nm através do RES.

Uma forma preferida do invento inclui paclitaxel, uma citotoxina muito insolúvel em água utilizada no tratamento de cancro do útero e outros carcinomas. Uma composição de emulsão do presente invento compreende uma solução de vitamina E contendo paclitaxel a uma concentração de até 20 mg/mL, quatro vezes a actualmente disponível por receita, e um tensioactivo biocompativel de modo que as microgotículas da emulsão sejam inferiores a 0,2 pm (mícrons) e sejam esterilizáveis terminalmente por filtração.

Uma concretização adicional do invento é o tratamento de carcinomas compreendendo a administração parentérica de uma dose em bólus de paclitaxel em emulsão de vitamina E com vitamina E PEGuilada, por injecção intravenosa uma vez por dia ou de dois em dois dias ao longo de um decurso terapêutico de várias semanas. Pode ser o tratamento de carcinomas da mama, pulmão, pele e útero.

Os princípios gerais do presente invento podem ser apreciados mais completamente por referência aos seguintes Exemplos não limitativos. 18 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ

Exemplos

Exemplo 1

Dissolução de paclitaxel em a-tocoferol 0 a-tocoferol foi obtido em Sigma Chemical Company (St Louis MO) na forma de um dl-a-tocoferol sintético de 95% de pureza, preparado a partir de fitol. 0 óleo era de cor âmbar e muito viscoso. 0 paclitaxel foi adquirido em Hauser Chemical Research (Boulder CO), e tinha 99,9% de pureza por HPLC. Dissolveram-se 200 mg de paclitaxel em 6 mL de etanol absoluto seco (Spectrum Chemical Manufacturing Corp, Gardenia CA) e juntou-se 1 g (gm) de α-tocoferol. O etanol foi então removido sob vácuo a 42°C até o residuo ser levado a peso constante. Estudos independentes mostraram que o teor em etanol era inferior a 0,3% (p/v). A solução resultante era límpida, âmbar e muito viscosa, com uma concentração nominal de 200 mg/g (mg/gm) (p/p) de paclitaxel em α-tocoferol. Maiores concentrações de paclitaxel (até 400 mg/g (mg/gm) p/p) podem ser solubilizadas em a-tocoferol.

Exemplo 2

Tensioactivo aniónico utilizado para preparar emulsões de a-tocoferol

Paclitaxel, 2 mg em 10 gm de α-tocoferol, preparado como descrito no Exemplo 1, foi emulsionado com palmitato de ascorbilo como o sal de trietanolamina através do seguinte processo. Uma solução consistindo em ácido ascórbico 20 mM foi tamponada a pH 6,8 com trietanolamina como base livre para formar tampão 2x. Colocaram-se 50 mL do tampão 2x num misturador Waring. Juntaram-se 0,5 g (gm) de palmitato de β-ascorbilo (Roche Vitamins and Fine Chemicals, Nutley NJ), um tensioactivo aniónico, e a solução misturada a velocidade elevada durante 2 min a 40°C sob árgon. O a-tocoferol contendo paclitaxel foi depois adicionado ao misturador com o tensioactivo e tampão. A mistura foi mantida sob árgon até ser obtida uma pré-emulsão grosseira, leitosa, após cerca de 1 min a 40°C. Juntou-se então água para injecção, levando o volume final a 100 mL. 19 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ A pré-emulsão foi transferida para o vaso de alimentação de um Microfluidizer Model 110Y (Microfluidics Inc, Newton MA). A unidade foi imersa num banho para manter uma temperatura de processo de cerca de 60°C durante a homogeneização, e foi purgada com árgon antes de utilização. Após iniciação, a emulsão foi passada através do homogeneizador num reciclo continuo durante 10 minutos a um gradiente de pressão de cerca de 124 kPa (18 kpsi) através da cabeça de interacção. O caudal era cerca de 300 mL/min, indicando que resultaram cerca de 25 passagens através do homogeneizador. A emulsão de paclitaxel resultante num veiculo de α-tocoferol foi engarrafada em frascos âmbar sob árgon e armazenada com refrigeração a 7°C e 25°C. Foram tomadas amostras a intervalos de tempo discretos para medição do tamanho de partícula e análise quimica.

Os dados obtidos com um medidor de partículas submicrónicas Nicomp Model 370 (Particle Sizing Systems Inc, Santa Barbara CA) mostraram que a emulsão possuía um diâmetro de partícula médio de 280 nm.

Exemplo 3

Utilização de Vitamina E PEGuilada (TPGS)

Foi construído um diagrama de fases ternário para α-tocoferol, vitamina E PEGuilada (TPGS, polioxietileno-glicol-1000-succinato de vitamina E, obtida em Eastman Chemical Co., Kingsport TN), e água. A TPGS foi primeiro fundida a 42°C e misturada gravimetricamente com a-tocoferol a várias proporções de 1 a 100% de TPGS, sendo o balanço α-tocoferol. As misturas eram miscíveis a todas as concentrações. Foi então adicionada água a cada mistura de tal modo que a concentração final de água foi aumentada passo a passo de zero até 97,5%. A cada passo foram efectuadas observações sobre o comportamento das fases da mistura. Conforme apropriado, a mistura foi realizada por vórtice e ultrassons, e a mistura foi aquecida ou centrifugada para avaliar a sua composição de fases. 20 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ

Uma ampla área de emulsões o/a bifásicas adequadas para administração parentérica foi encontrada a concentrações de água acima de 80%. As emulsões formadas eram líquidos brancos leitosos de escoamento livre que continham micropartículas dispersas de α-tocoferol estabilizadas por tensioactivo não iónico. Também nesta área, microemulsões potencialmente adequadas como portadores de fármaco foram observadas a razões de TPGS para óleo acima de cerca de 1:1. A um teor de água mais baixo, foi notada uma ampla área contendo géis transparentes (emulsões inversas). Separando as duas áreas (de teores de água elevado e reduzido) está uma área composta por cristais líquidos opacos, tipo sabão.

Os diagramas de fase de α-tocoferol com combinações de tensioactivo, por exemplo TPGS com um co-tensioactivo não iónico, aniónico ou catiónico (por exemplo estearato de glutamilo, palmitato de ascorbilo ou Pluronic F-68), ou fármaco podem ser preparados de um modo similar.

Exemplo 4

Emulsão de α-tocoferol para entrega intravenosa de paclitaxel

Preparou-se uma formulação com a seguinte composição:

Paclitaxel 1,0 g(gm)% α-Tocoferol 3,0 g (gm)% TPGS 2,0 g (gm)% Palmitato de 6-ascorbilo 0,25 g (gm)% Sorbitol 5,0 g (gm)% Trietanolamina para pH 6,8 Água q.s. para 100 mL O processo de preparação foi o seguinte: a-tocoferol sintético (Roche Vitamins, Nutley NJ), paclitaxel (Hauser, Boulder CO), palmitato de 6-ascorbilo (Aldrich Chemical Co, Milwaukee WI) e TPGS foram dissolvidos em 10 volumes de etanol não desnaturado anidro (Spectrum Quality Products, Gardenia CA) com aquecimento a 40-45°C. O etanol foi depois removido com vácuo até não permanecer mais de 0,3% em peso. 21 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ

Uma solução aquosa pré-aquecida contendo um osmolito biocompatível e tampão foram adicionados com agitação suave e formou-se imediatamente um leite branco. Esta mistura foi ainda melhorada por rotação suave durante 10 minutos com aquecimento contínuo a 40-45°C. Esta pré-mistura a cerca de pH 7 foi depois adicionalmente emulsionada como descrito em seguida. A pré-mistura a 40-45°C foi homogeneizada num homogeneizador Avestin C5 (Avestin, Ottawa, Canada) a 179 kPa (26 kpsi) durante 12 minutos a 44°C. A mistura resultante continha micropartícuias de α-tocoferol com um tamanho médio de cerca de 200 nm. Ajustou-se ainda o pH com uma solução alcalina de trietanolamina 1M (Spectrum Quality Products).

Para evitar a gelificação da TPGS durante uma etapa inicial da emulsionação, todas as operações foram realizadas acima de 40°C e tomou-se cuidado para evitar exposição das soluções ao ar frio, tapando todos os recipientes contendo a mistura. Em segundo lugar, menos de 2% de TPGS deveria geralmente estar dissolvida em óleo de α-tocoferol antes da pre-emulsionação, sendo o balanço de TPGS primeiro dissolvido no tampão aquoso antes da pré-emulsão ser preparada. Os géis de solução a concentrações de TPGS superiores a 2%. A estabilidade física da emulsão foi então examinada colocando múltiplos frascos em armazém a 4°C e 25°C. Ao longo de vários meses, os frascos foram periodicamente retirados para medição das partículas. O tamanho de partícula médio, tal como determinado com o Nicomp Model 370 (Particle Sizing Systems, Santa Barbara CA), é mostrado para as duas temperaturas de armazenamento na Figura 1. A distribuição do tamanho de partícula era bi-modal.

Exemplo 5

Estabilidade química de paclitaxel numa emulsão de α-tocoferol

Após emulsionação, a formulação do Exemplo 4 foi analisada quanto a paclitaxel numa coluna Phenosphere CN (5 μ (mícrons), 150x4,6 mm). A fase móvel consistia num gradiente metanol/água, com um caudal de 1,0 mL/min. Um detector de UV 22 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ ajustado a 230 nm foi utilizado para detectar e quantificar o paclitaxel. Foi detectado um único pico (Figura 2), que tinha um tempo de retenção e um espectrograma de massa consistente com o paclitaxel de referência original obtido em Hauser Chemical (Boulder CO). A estabilidade química da emulsão do Exemplo 4 foi examinada por HPLC durante o armazenamento. Os dados da Figura 3 demonstram que o paclitaxel permanece estável na emulsão durante períodos de pelo menos 3 meses, independente da temperatura de armazenamento. Tomados em conjunto, os dados da Figura 2 e 3 demonstram uma retenção bem sucedida da potência do fármaco e estabilidade da emulsão quando armazenada a 4°C durante um período de pelo menos 3 meses.

Exemplo 6

Formulação QWA de emulsão de paclitaxel

Uma emulsão de paclitaxel a 10 mg/ml para entrega intravenosa de fármaco, possuindo a composição seguinte, foi preparada como descrito no Exemplo 4.

Paclitaxel 1,0 g (gm)% α-Tocoferol 3,0 g (gm)% TPGS 1,5 g (gm)% Palmitato de 6-ascorbilo 0,25 g (gm)% Sorbitol 4, 0 g (gm)% Trietanolamina para pH 6,8 Agua q.s. para 100 mL

Exemplo 7

Formulação QWB de emulsão de paclitaxel

Uma segunda emulsão de paclitaxel a 10 mg/ml para entrega intravenosa de fármaco, possuindo a composição seguinte, foi preparada como descrito no Exemplo 4. 23 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΙ

Paclitaxel 1,0 g (gm)% cc-Tocof erol 3,0 g (gm)% TPGS 1,5 g (gm)% Solutol HS-15 1,0 g (gm)% Sorbitol 4,0 g (gm)% Trietanolamina para pH 6,8 Agua q.s. para 100 mL

Solutol HS-15 é um produto de BASF Corp, Mount Olive, NJ. Exemplo 8

Formulação QWC de emulsão de paclitaxel a 10 mg/mL

Uma terceira formulação de emulsão de paclitaxel a 10 mg/ml foi preparada como segue, utilizando Poloxamer 407 (BASF Corp, Parsippany NJ) como co-tensioactivo.

Paclitaxel 1,0 g (gm)% α-Tocoferol 6,0 g (gm)% TPGS 3,0 g (gm)% Poloxamer 407 1,0 g (gm)% Sorbitol 4,0 g (gm)% Trietanolamina para pH 6,8 Água para injecção q.s. para 100 mL

Neste exemplo, 1,0 g (gm) de Poloxamer 407 e 1,0 g (gm) de paclitaxel foram dissolvidos em 6,0 g (gm) de a-tocoferol com etanol a 10 volumes e aquecimento suave. O etanol foi depois removido sob vácuo. Em separado, um tampão aquoso foi preparado por dissolução de 3,0 g (gm) de TPGS e 4,0 g (gm) de sorbitol num volume final de 90 mL de água para injecção. Ambas soluções de óleo e água foram aquecidas a 45°C e misturadas com ultrassons para produzir uma pré-emulsão. Utilizou-se vácuo para remover o excesso de ar da pré-emulsão antes da homogeneização. A homogeneização foi realizada num Avestin C5 como descrito anteriormente. O diferencial de pressão através da válvula de homogeneização era de 172 kPa (25 kpsi) e a temperatura da alimentação de 42-45°C. Foi utilizado um 24 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ refrigerador para assegurar que o produto à saída do homogeneizador não excedia uma temperatura de 50°C. Foram obtidos caudais de 50 mL/min durante a homogeneização. Após cerca de 20 passagens num modo de reciclo, a emulsão tornou-se mais translúcida. A homogeneização foi mantida durante 20 min. Foram recolhidas amostras e seladas em frascos como descrito anteriormente. Foi obtida uma emulsão fina de α-tocoferol para entrega intravenosa de paclitaxel. O diâmetro de partícula médio da emulsão era de 77 nm. Após uma filtração estéril a 0,22 pm (mícron) através de um filtro Durapore de 0,22 pm (mícron) (Millipore Corp, Bedford MA), a emulsão foi colocada em frascos e armazenada a 4°C até ser utilizada para injecção intravenosa.

Exemplo 9

Formulação QWC de emulsão de paclitaxel a 5 mg/mL

Foi preparada uma emulsão adicional de paclitaxel como descrito no Exemplo 8, mas incorporando 5 em vez de 10 mg/ml de fármaco. A composição desta emulsão era a seguinte:

Paclitaxel 0,5 g (gm)% α-Tocoferol 6,0 g (gm)% TPGS 3,0 g (gm)% Poloxamer 407 1,0 g (gm)% Sorbitol 4,0 g (gm)% Trietanolamina para pH 6,8 Agua para injecção q.s. para 100 mL

Após homogeneização como descrito no Exemplo 8, foi obtida uma emulsão algo translúcida de α-tocoferol e paclitaxel com um diâmetro de partícula médio de 52 nm. Após filtração estéril através de um filtro Durapore de 0,22 pm (mícron) (Millipore Corp, Bedford MA), a emulsão foi colocada em frascos e armazenada a 4°C até ser utilizada para injecção intravenosa. As perdas de fármaco na filtração foram inferiores a 1%. 25 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ

Exemplo 10

Formulação QWD de emulsão de paclitaxel

Foi preparada uma quinta emulsão de α-tocoferol para administração intravenosa de paclitaxel como segue:

Paclitaxel 0,5 g (gm) % α-Tocoferol 6,0 g (gm)% TPGS 3,0 g (gm)% Poloxamer 407 1,5 g (gm)% Polietilenoglicol 200 0,7 g (gm)% Sorbitol 4,0 g (gm)% Trietanolamina para pH 6,8 Água para injecção q.s. para 100 mL

Foi utilizado nesta formulação α-tocoferol sintético USP-FCC obtido em Roche Vitamins (Nutley, NJ) . Foi obtido em Sigma Chemical Co o polietilenoglicol 200 (PEG-200).

Após homogeneização, foi obtida uma emulsão algo translúcida com um diâmetro de partícula médio de 60 nm. Após filtração estéril a 0,22 pm através de um filtro Durapore de 0,22 micron (Millipore Corp, Bedford MA), a emulsão foi colocada em frascos e armazenada a 4°C até ser utilizada para injecção intravenosa. As perdas de fármaco na filtração foram inferiores a 1%.

Exemplo 11

Dissolução de paclitaxel em TPGS e preparação de soluções micelares

Observou-se uma boa solubilidade do paclitaxel em TPGS, cerca de 100 mg de fármaco por 1,0 gm de TPGS. Foram preparadas soluções micelares de TPGS contendo paclitaxel, como segue. Uma solução de reserva de paclitaxel em TPGS foi preparada por dissolução de 90 mg de paclitaxel em 1,0 g (gm) de TPGS a 45°C com etanol, que depois foi removido sob vácuo. Foram depois preparadas diluições em série, diluindo a reserva de paclitaxel com TPGS adicional para obter paclitaxel em TPGS a concentrações de 0, 1, 1, 5, 10, 25, 50, 75 e 90 mg/mL. Utilizando tubos de ensaio frescos, 100 mg de cada 26 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ concentração de paclitaxel em TPGS foram dissolvidos em 0,9 mL de água. Todos os tubos de ensaio foram misturados por vórtice e ultrassons a 45°C. Foram obtidas soluções micelares límpidas em água, correspondendo a concentrações finais de paclitaxel de 0,01, 0,1, 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 7,5 e 9,0 mg/mL.

Um analisador laser de partículas Nicomp Model 370 (Particle Sizing Systems, Santa Barbara CA) foi utilizado para examinar as soluções. Foram obtidos tamanhos de partícula na ordem de 10 nm, consistentes com a presença de micelas de TPGS e paclitaxel.

As soluções micelares de paclitaxel em TPGS contendo até 2,5 mg/mL de paclitaxel eram estáveis durante pelo menos 24 horas, enquanto as de 5,0, 7,5 e 9,0 mg/mL eram instáveis e cristais de fármaco se formaram rápida e irreversivelmente. Estas observações sugerem que o paclitaxel permanece solubilizado apenas na presença de um domínio rico em α-tocoferol dentro das partículas da emulsão. Assim, é necessária uma razão óptima de α-tocoferol para TPGS, a fim de produzir emulsões em que concentrações mais elevadas de paclitaxel possam ser estabilizadas.

Quando ajustadas a tonicidade e pH adequados, as soluções micelares são úteis para uma administração gota a gota IV lenta de paclitaxel a pacientes com cancro, embora seja expectável uma AUC baixa. A utilidade das emulsões de TPGS em α-tocoferol é uma sinergia de diversas características desejáveis. Primeiro, possuem a sua própria afinidade para o paclitaxel, provavelmente em virtude do α-tocoferol que constitui a porção hidrófoba da sua estrutura molecular. Segundo, a tensão interfacial de TPGS em água com α-tocoferol é cerca de 10 dynes/cm, suficiente para emulsionar o α-tocoferol livre, especialmente quando utilizado com um co-tensioactivo. Terceiro, os tensioactivos polioxietilados como o TPGS possuem propriedades superiores e bem estabelecidas como "revestimento furtivo" para partículas injectáveis, por redução dramática da retenção das partículas no fígado e baço, como é bem sabido na arte. Mas a inesperada e singular constatação com TPGS como tensioactivo para emulsões de 27 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ α-tocoferol, foi a verificação de todas as três caracteristicas desejadas numa única molécula. Uma vantagem adicional do TPGS é o facto de formar sistemas auto- emulsionantes estáveis em misturas com óleos e solventes tais como propilenoglicol e polietileno-glicol, sugerindo uma sinergia quando utilizado com α-tocoferol para entrega oral de fármaco.

Quando ajustadas a tonicidade e pH adequados, as soluções micelares têm utilizada para administração gota a gota IV lenta de paclitaxel a pacientes com cancro, embora seja expectável uma AUC baixa.

Exemplo 12

Formulação de emulsão de paclitaxel a 20 mg/mL

Foi obtida uma emulsão grosseira contendo 20 mg/mL de paclitaxel em α-tocoferol, com 5% de α-tocoferol e 5% de TPGS por meio dos processos descritos no Exemplo 4, simplesmente por aumento das concentrações. Não foi feito esforço para testar concentrações mais elevadas apenas porque não é necessário nenhum aumento adicional para emulsões intravenosas clinicamente úteis.

Exemplo 13

Utilização de outros tensioactivos de PEG em emulsões de α-tocoferol

Uma variedade de outros tensioactivos PEGuilados, por exemplo Triton X-100, estearato de propilenoglicol PEG 25, Brij 35 (Sigma Chemical Co), Myrj 45, 52 e 100, Tween 80 (Spectrum Quality Products), trioleato de glicerilo PEG 25 (Goldschmidt Chemical Corp, Hopewell VA) tem utilidade para emulsionar α-tocoferol.

Contudo, experiências com outros tensioactivos PEGuilados falharam em estabilizar convincentemente o paclitaxel numa emulsão de α-tocoferol. Para demonstrar a utilidade singular do TPGS, foram preparadas três emulsões como descrito no Exemplo 9, mas Tween 80 e Myrj 52 substituíram o TPGS como tensioactivo primário nas emulsões separadas. Estes dois tensioactivos foram escolhidos porque Tween 80 e Myrj 52 28 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ possuem valores de HLB essencialmente equivalentes ao do TPGS e formam emulsões razoavelmente boas de α-tocoferol. Contudo, quando se incluíram 5 mg/mL de paclitaxel na formulação, foi notada muito rapidamente uma cristalização do fármaco após preparação da pré-emulsão, e as emulsões processadas de Tween 80 e Myrj 52 foram caracterizadas como grosseiras, contendo partículas com forma de bastão com comprimento de até vários mícrons, consistentes com cristais de paclitaxel. Ao contrário da emulsão de TPGS, que passou facilmente através de um filtro de 0,22 pm (mícron) com menos de 1% de perda de fármaco, as emulsões de Tween e Myrj não eram filtráveis devido à presença deste material cristalino de fármaco.

Existem várias explicações possíveis para a inesperada melhoria das emulsões de paclitaxel em α-tocoferol com TPGS. O fármaco possui boa solubilidade em TPGS, até cerca de 100 mg/mL. Muito provavelmente, é a força da afinidade das cadeias laterais de benzilo do paclitaxel com a estrutura planar do anel fenólico do α-tocoferol na molécula de TPGS que estabiliza o complexo de fármaco e portador. Além disso, o ligante de succinato entre o α-tocoferol e a cauda PEG é uma característica nova desta molécula, que distingue a sua estrutura de outros tensioactivos PEGuilados ensaiados.

Exemplo 14

Emulsão de α-tocoferol baseada em Poloxamer

a-Tocoferol 6,0 g (gm)% Poloxamer 407 2,5 g (gm)% Palmitato de ascorbilo 0,3 g (gm)% Sorbitol 6,0 g (gm)% Trietanolamina para pH 7,4 Agua g.s. para 100 mL

Foi preparada uma emulsão de α-tocoferol utilizando Poloxamer 407 (BASF) como tensioactivo primário. A pré-mistura branca leitosa foi homogeneizada com reciclo contínuo durante 10 minutos a 172 kPa (25 kpsi) num homogeneizador C5 (Avestin, Ottawa Canada) com uma temperatura de alimentação de 45°C e um anel de refrigeração ajustado a 15°C para o produto de saída. Resultou uma emulsão estéril, fina e 29 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ filtrável de micropartículas de α-tocoferol. Contudo, quando esta formulação foi feita com paclitaxel, foi notada a precipitação do paclitaxel após armazenamento durante a noite no refrigerador, de novo sublinhando a superior utilidade do TPGS com tensioactivo de principio.

Exemplo 15

Formulação de emulsão liofilizada

Adicionou-se Maltrin M100 (Grain Processing Corporation, Muscatine IA) a uma reserva 2x em água à emulsão do Exemplo 14. Aliquotas foram depois congeladas num congelador de invólucro e liofilizadas sob vácuo. Sob reconstituição com água, foi recuperada uma emulsão fina.

As formulações liofilizadas são úteis quando se prefere uma vida em prateleira indefinida para uma preparação liofilizada. Também podem ser preparadas formulações liofilizáveis contendo outros sacáridos, tais como manitol, albumina ou PolyPep de Sigma Chemicals, St. Louis, Mo.

Exemplo 16

Libertação in vitro de paclitaxel a partir de emulsões de a-tocoferol

Uma das características desejadas de um veiculo de entrega de fármaco é que proporcione uma libertação prolongada do fármaco incorporado, uma caracteristica muitas vezes correlacionada com eficácia e farmacocinética melhoradas. Em particular, as emulsões de paclitaxel de grande circulação podem melhorar a entrega do fármaco nos locais do cancro no corpo. Verificámos surpreendentemente que as emulsões do presente invento proporcionam uma libertação prolongada de paclitaxel quando comparadas com a única

formulação de paclitaxel actualmente com aprovação FDA

[Taxol®, Bristol Myers Squibb (BMS), Princeton NJ] . Foram preparadas emulsões possuindo concentrações de paclitaxel de 6 mg/mL (QWA) e 7 mg/mL (QWB) . Para comparação, o Taxol contém 6 mg/ml de paclitaxel dissolvido em etanol:cremoforo EL 1:1 (v/v). A libertação in vitro do paclitaxel a partir das diferentes formulações para uma solução de salino tamponado com fosfato (PBS) a 37°C foi monitorizada 30 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ utilizando uma membrana de diálise que é livremente permeável ao paclitaxel (PM limitado a 10 quilodaltons). A quantificação do fármaco nas amostras pré- e pós-diálise foi realizada por HPLC. Foram gerados perfis de libertação de fármaco em termos de percentagem de libertação e concentração de paclitaxel libertado ao longo do tempo. Como se pode observar a partir dos dados na Figura 4, menos de 5% do paclitaxel foi dialisado das emulsões ao longo de 24 horas, enquanto cerca de 12% foi recuperado fora do saco de diálise a partir da formulação BMS comercializada. Isto indica que a libertação de fármaco a partir da emulsão era significativamente retardada em relação à solução disponível comercialmente.

Exemplo 17

Biocompatibilidade das emulsões de α-tocoferol contendo paclitaxel

Foi realizado um estudo de toxicidade aguda de dose única. Foram adquiridos ratinhos com 20-25 gm cada um e aclimatizaram-se numa instalação para animais aprovada. Grupos de ratinhos (n=3) receberam doses da formulação contendo de 30 a 90 mg/kg de paclitaxel na emulsão de α-tocoferol preparada como descrito no Exemplo 6. Todas as injecções foram dadas intravenosamente por bólus na veia da cauda.

Embora todas as injecções tenham sido dadas por bólus IV directo, nenhuma morte ou toxicidade imediata foi observada a qualquer dose, mesmo a 90 mg/kg. Os resultados para o peso corporal são mostrados na Tabela 1. A perda de peso foi de 17% no grupo mais elevado mas todos os grupos, mesmo a 90 mg/kg, recuperaram ou ganharam peso corporal durante um período de 10 dias após injecção.

Também foi realizado um estudo da toxicidade do veículo. Os animais que receberam uma emulsão isenta de fármaco cresceram rapidamente e ganharam um pouco mais de peso que os animais que receberam salino ou que não foram injectados. Isto foi atribuído à vitamina e ao teor calórico da formulação. 31 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ

Foi observada uma dose máxima tolerada (MTD) para o paclitaxel superior a 90 mg/kg (Tabela 1), sem serem notadas reacções adversas. Isto é mais do dobro dos melhores valores relatados na literatura, em que foram observadas mortes a muito menores doses. Taxol, a formulação BMS com aprovação fda, provoca morte em ratinhos a doses de bólus intravenoso de 10 mg/kg, uma constatação repetida por nós. No ratinho, o BMS Taxol foi uniformemente fatal a todas as diluições e regimes de dosagem testados. Em contraste, a composição do Exemplo 6 foi bem tolerada em ratinhos, e é até melhor que o Taxotere, um análogo menos tóxico do paclitaxel comercializado por Rhone-Poulenc Rorer.

Uma explicação possivel para esta elevada tolerância ao fármaco é que a emulsão se comporta como um depósito de libertação retardada para o fármaco, como sugerido a partir dos dados da libertação in vitro no Exemplo 16.

Tabela 1

Variação no peso corporal médio de ratinhos tratados com emulsão de paclitaxel Tratamento (dose, mg/kg) Número de animais Alteração no P.C. (gm) Dia 2 Dia 7 Salino 4 1,0 3,4 Veículo 4 1,2 3,5 Emulsão de paclitaxel (QWA) (36,3) 2 O τ—1 1 2,2 Emulsão de paclitaxel (QWA) (54,4) 4 -1,8 1,7 Emulsão de paclitaxel (QWA) (72,6) 4 -1,5 1,6 Emulsão de paclitaxel (QWA) (90,7) 1 -1,6

Exemplo 18

Avaliação da eficácia da emulsão de paclitaxel A emulsão de paclitaxel do Exemplo 6 foi também avaliada quanto à eficácia contra tumores instalados de melanoma B16 em ratinhos nús, e os dados são mostrados na Tabela 2. De novo, o produto comercializado BMS Taxol foi utilizado como formulação de referência. As células de tumor foram administradas subcutaneamente e a terapia foi iniciada por uma injecção na veia da cauda ao dia 4 após administração do 32 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ tumor conforme ο programa de dosagem indicado. A eficácia foi expressa como aumento percentual na duração de vida (% ILS).

Podem ser retiradas as seguintes conclusões a partir dos dados na Tabela 2: a) uma duração de vida aumentada em cerca de 10% foi obtida por administração de BMS Taxol a 10 mg/kg Q2Dx4; b) os valores de %ILS melhoraram em 30-50% por administração da emulsão em α-tocoferol de paclitaxel a 30, 40 ou 50 mg/kg Q2Dx4, niveis de dosagem tornados possíveis pelo MTD mais elevado; c) uma boa resposta à dose foi observada quando a emulsão foi administrada a 30, 50 e 70 mg/kg Q4Dx3, sendo observado cerca de 80% de ILS a 70 mg/kg; e d) mesmo a 90 mg/kg doseados apenas uma vez ao dia 4, havia cerca de 36% de ILS. Estes dados ilustram claramente o potencial das emulsões do presente invento para melhorarem substancialmente a eficácia do paclitaxel.

Exemplo 19

Avaliação da eficácia das emulsões de paclitaxel

As emulsões dos Exemplos 6, 7 e 8 (QWA, QWB e QWC, respectivamente) foram comparadas quanto a eficácia contra melanoma B16 em ratinhos; o BMS Taxol foi de novo utilizado como formulação de referência. Foram utilizados processos essencialmente idênticos aos do Exemplo 18. Os dados deste estudo estão resumidos na Tabela 3. A eficácia foi expressa como: a) percentagem de inibição do crescimento do tumor (% T/C, em que τ e C representam animais tratados e de controlo, respectivamente); b) valor de atraso do crescimento do tumor (T-C); e c) log da morte celular, que é definida como a razão do valor de T-C sobre 3,32 χ tempo de duplicação do tumor. Este último parâmetro para este modelo de tumor particular foi calculado como sendo de 1,75 dias. Como se pode observar a partir dos resultados na Tabela 3, todas as medições de eficácia: inibição de crescimento do tumor, valor de atraso do crescimento do tumor e log da morte celular demonstram uma superior eficácia das emulsões de α-tocoferol emulsões como veiculo de entrega de fármaco em relação ao BMS Taxol, particularmente quando as emulsões foram doseadas a cada quatro dias a 70 mg/kg. Como foi explicado no Exemplo 16, esta eficácia incrementada é provavelmente um resultado de melhores biocompatibilidade do fármaco e/ou libertação prolongada. 33 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ

Tabela 2

Sobrevivência de ratinhos com tumores BI6 tratados com QWA e BMS Taxol Grupo de tratamento & Programa Tempo de sobrevivência médio, Dias (Média+EPM a) %ILS b (vs. veículo) (Média+EPM) Veículo controlo (Dias 4, 8, 12) 13,2±0,9 — Salino controlo (Dias 4, 8, 12) 15,8±1,2 19,7± 8,6 BMS Taxol (10 mg/kg) (Dias 4, 6, 8, 10) 16,4±0,7 24,2± 5,4 QWA (30 mg/kg) (Dias 4, 6, 8) 19,2±1,4 45,4± 10,3 QWA (40 mg/kg) (Dias 4, 6, 8) 21,3±1,4 61,4± 10,3 QWA (50 mg/kg) (Dias 4, 6, 8) 18,8+0,7 42,4+ 5,7 QWA (30 mg/kg) (Dias 4, 8, 12) 15,3+0,8 15,9+ 6,4 QWA (50 mg/kg) (Dias 4, 8, 12) 20,7+1,3 56,8+ 9,5 QWA (70 mg/kg) (Dias 4, 8, 12) 24,2+0,9 83,3+ 6,4 QWA (90 mg/kg) (Dia 4 apenas) 18,0 + 0,6 36,4+ 4,4 3 SEM = Erro padrão da média b%ILS = % de aumento na duração de vida = [(T-C)/C]xlOO, em que: T = sobrevivência média dos tratados; e C = sobrevivência média do controlo

De acordo com os padrões NCI, um valor de ILS superior a 50% indica uma significativa actividade anti-tumoral.

Tabela 3

Comparação de 3 emulsões de paclitaxel e BMS Taxol contra melanoma BI6 inicial Artigo em Dosagem Programa de Dose Peso médio Peso médio do %T/C T-C Log morte teste mg/kg/dia dosagem total do tumor ao tumor ao dia Dia (dias) cel. (dias) (mg/kg) dia 15 (mg) 18 mg (gama) 15 total Controlo 0 tf* σ'! 00 h-1 o 0 836 2139 — — — BMS Taxol 20 4,6,8,10 80 383 1217 46 2 0,34 QWA 20 4,6,8,10 80 381 1197 46 2 0,34 QWA 40 4,6,8,10 160 104 306 12 7 1,2 QWA 70 4,8,12,16,20 350 15 11 -2 QWB 20 4,6,8,10 80 197 653 24 5 0, 86 QWB 30 4,6,8,10 120 139 449 17 5 0,86 QWB 40 Tóxico QWC 20 4,6,8,10 80 319 848 34 3 0,52 QWC 40 4,6,8,10 160 53 194 6 8 1,4 QWC 70 4,8,12,16,20 350 33 66 4 >15 >2,6 Tempo de duplicação do tumor calculado como .r 75 dias. % T/C = Inibição de crescimento do tumor (Dia 15) = (pese médio do tumor tratado/peso médio do tumor de controlo)xlOO T-C = Valor de atraso do crescimento do tumor = tempo médio para tumores do grupo de tratamento (T) e grupo de controlo (C) atingirem um tamanho predeterminado (normalmente 750-1000 mg) Log morte celular = (valor T-C)/(3,32 x tempo de duplicação do tumor) 34 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ

Exemplo 20

Auto-emulsionação de uma mistura α-tocoferol/Tagat TO

Dissolveram-se em conjunto 2,0 g (gm) de α-tocoferol e 800 mg de Tagat TO (Goldschmidt Chemical Corp, Hopewell VA) . Cerca de 80 mg da mistura oleosa foram transferidos ara um tubo de ensaio e juntou-se depois água. Com agitação manual suave, ocorreu um desenvolvimento imediato de uma emulsão rica e leitosa, consistente com "sistemas auto-emulsionantes" propostos como sistemas de entrega de fármaco, em que misturas tensioactivo-óleo formam espontaneamente uma emulsão sob exposição a meios aquosos.

Exemplo 21

Formulação auto-emulsionante contendo paclitaxel

Preparou-se paclitaxel, 50 mg/ml em α-tocoferol, pelo processo descrito no Exemplo 1. Juntou-se Tagat TO 20% (p/p). A mistura resultante era límpida, viscosa e de cor âmbar. Uma quantidade de 100 mg de mistura oleosa foi transferida para um tubo de ensaio. Sob adição de 1 mL de água, com agitação em vórtice, resultou uma emulsão fina.

Exemplo 22

Formulação auto-emulsionante de paclitaxel

Preparou-se paclitaxel, 50 mg/ml em α-tocoferol, pelo processo descrito no Exemplo 1. Após remoção do etanol sob vácuo, juntaram-se 20% de TPGS e 10% de polioxietilenoglicol 200 (Sigma Chemical Co) em peso. Foi depois realizada uma demonstração da capacidade auto-emulsionante deste sistema, pela adição de 20 mL de água desionizada a 100 mg da mistura oleosa a 37°C. Sob agitação suave, formou-se uma emulsão fina e branca, consistindo em partículas de emulsão fina, exibindo com um Malvern Mastersizer (Malvern Instruments, Worcester MA) um tamanho médio de 2 pm (mícrons), e uma distribuição cumulativa em que 90% era inferior a 10 mícrons. 35 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ

Exemplo 23

Formulação de emulsão de etoposido em a-tocoferol

Dissolveram-se 4 mg de etoposido (Sigma Chemical Co) na seguinte mistura tensioactivo-óleo:

Etoposido 4 mg a-Tocoferol 300 mg TPGS 50 mg Poloxamer 407 50 mg

Utilizaram-se etanol e aquecimento suave para formar uma solução âmbar límpida de fármaco em óleo. 0 etanol foi depois removido sob vácuo.

Formou-se uma pré-emulsão pela adição de 4,5 mL de água contendo 4% de sorbitol e 100 mg de TPGS a 45°C com ultrassons. O tamanho de partícula foi adicionalmente reduzido por processamento num Emulsiflex 1000 (Avestin, Ottawa Canada) . O corpo do Emulsiflex 1000 foi equipado com um par de seringas de 5 mL e todo o aparelho aquecido a 45°C antes da utilização. Os 5 mL de emulsão foram depois passados manualmente através dele cerca de 10 vezes. Resultou uma emulsão prática de etoposido num veículo de α-tocoferol, de escoamento livre.

Notou-se que a forma solubilizada de etoposido em α-tocoferol também pode ser utilizada como forma de dosagem oral, por adaptação dos processos dos exemplos precedentes.

Exemplo 24

Dissolução de ibuprofeno ou griseofulvina em a-tocoferol O ibuprofeno é um analgésico, e pode ser administrado por injecção quando requerido se existe o perigo de o fármaco irritar o estômago. A seguinte solução de ibuprofeno em α-tocoferol pode ser emulsionada para administração intravenosa.

Dissolveu-se ibuprofeno (Sigma Chemicals), cristalino, 12 mg, sem solvente em a-tocoferol, 120 mg, por aquecimento suave. A resultante solução a 10% de ibuprofeno em vitamina E 36 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ pode ser emulsionada pelos processos descritos nos Exemplos 4, 6, 7, 8 ou 22.

Um composto antifúngico, griseofulvina, 12 mg, foi primeiro dissolvido em 3 mL de etanol anidro; foi então adicionado a-tocoferol, 180 mg, e o etanol foi removido com aquecimento suave sob vácuo. A resultante solução de griseofulvina em α-tocoferol é límpida e pode ser emulsionada pelos processos descritos nos Exemplos 4, 6, 7, 8 ou 22.

Exemplo 25

Formulação de emulsão de succinato de vitamina E O succinato de vitamina E foi sugerido como terapêutico para o tratamento de linfomas e leucemias e para a quimioprevenção do cancro. Segue-se uma composição e processo para a emulsionação de succinato de vitamina E em a-tocoferol. O éster de sacarose S 1170 é um produto Mitsubishi Kagaku Foods Corp, Tokyo Japan. O succinato de vitamina E, como ácido livre, foi obtido como um pó esbranquiçado em ICN Biomedicals, Aurora, OH. Emulsões incorporando outros tensioactivos tais como Pluronic e TPGS junto com a-tocoferol e succinato de α-tocoferol podem ser preparadas de um modo similar com e sem um agente terapêutico.

Dissolveram-se 8 g (gm) de α-tocoferol e 0,8 g (gm) de succinato de vitamina E juntamente em etanol num frasco de fundo redondo. Após remoção do solvente, juntaram-se 100 mL de um tampão aquoso. O tampão alcalino consistia em glicerol a 2%, trietanolamina 10 mM e 0,5 g (gm)% de éster de sacarose S 1170. Após mistura durante 2 min, a pré-emulsão foi transferida para um homogeneizador Avestin Model C-5 e a homogeneização foi mantida durante cerca de 12 minutos a uma temperatura de alimentação ao processo de 58°C. O diferencial de pressão através da cabeça de interacção era de 172 a 179 kPa (25 to 26 kpsi) . Durante a homogeneização, o pH foi cuidadosamente monitorado e ajustado se requerido a pH 7,0. Foi tomado cuidado para excluir oxigénio durante o processo. Resultou uma emulsão fina e branca. 37 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ

Exemplo 26 Níveis de α-tocoferol em ésteres Níveis de α-tocoferol em ésteres comercialmente disponíveis: acetato, succinato, nicotinato e fosfato de tocoferol e TPGS foram fornecidos pelo produtor ou determinados por HPLC. A concentração de α-tocoferol livre nestas soluções é inferior a 1,0%, geralmente inferior a 0,5%.

Exemplo 27

Formulação de emulsão de resveratrol O resveratrol é um quimiopreventivo de cancro descoberto inicialmente como um extracto de pele de uva. Foi proposto como suplemento dietético. O resveratrol foi obtido em Sigma Chemical Co. Apesar de se dissolver pouco em etanol, sob adição de 10 mg de resveratrol, 100 mg de a-tocoferol, 100 mg de TPGS e etanol, formou-se rapidamente uma solução límpida. Sob remoção do etanol, permaneceu um límpido óleo âmbar. A solução oleosa de resveratrol pode ser formulada como um sistema auto-emulsionante para entrega oral pelos vários processos dos Exemplos precedentes.

Exemplo 28

Formulação de dipéptido de muramilo

Os dipéptidos de muramilo são derivados a partir de micobactérias e são potentes imunoestimulantes representativos da classe dos péptidos de muramilo, ácido micólico e lipo-polissacáridos. Têm utilização, por exemplo, no tratamento de cancro, estimulando o sistema imunitário para alvejar e remover o cancro. Mais recentemente foi proposta a muroctasina, um análogo sintético, para reduzir os efeitos secundários não específicos dos extractos das paredes bacterianas. A N-acetilmuramil-6-O-esteroil-l-alanil-d-isoglutamina foi adquirida em Sigma Chemical Co. e dissolveram-se 10 mg em 100 mg de α-tocoferol e 80 mg de TPGS. Utilizou-se etanol 38 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ como co-solvente para ajudar a dissolução do dipéptido, mas foi removido por evaporação sob vácuo, deixando uma solução limpida em α-tocoferol e tensioactivo.

Esta solução do fármaco em óleo pode ser emulsionada para administração parentérica pelos vários processos dos Exemplos precedentes.

Exemplo 29

Emulsão contendo álcool

Numa tentativa para adaptar os ensinamentos do pedido PCT WO 95/11039 à administração oral de paclitaxel, produziu-se a seguinte formulação:

Paclitaxel 0,125 g (gm) Oí-Tocoferol 0,325 g (gm) TPGS 0,425 g (gm) Etanol 0,125 g (gm)

Como anteriormente, o paclitaxel foi dissolvido num α-tocoferol e TPGS com etanol, que depois foi removido sob vácuo. Em peso seco, o etanol residual era inferior a 3 mg (0,3% p/p). Juntaram-se então 0,125 g (gm) de etanol anidro fresco de novo à formulação. Após mistura, a adequabilidade da formulação para administração oral, tal como numa cápsula de gelatina, foi simulada pela seguinte experiência. Uma aliquota de 100 mg do óleo de escoamento livre foi adicionada a 20 mL de água a 37°C e misturado suavemente com um agitador de vórtice. Resultou uma emulsão fina. Mas após vinte minutos, o microscópio revelou o crescimento de grande número de cristais em roseta, característicos da precipitação de paclitaxel. Concluiu-se que esta formulação não era adequada para administração oral de paclitaxel porque grandes quantidades do fármaco estariam na forma de cristais à entrada do duodeno, onde a sua absorção seria inibida devido à sua forma fisica. Especula-se que o excesso de etanol, em combinação com a elevada razão de TPGS para α-tocoferol, seja o responsável pela observada cristalização do fármaco desta formulação. 39 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ

Exemplo 30

Emulsão de α-tocoferol contendo álcool

Numa tentativa para adaptar os ensinamentos do pedido PCT WO 95/11039 à administração intravenosa de paclitaxel, foi produzida a seguinte formulação:

Paclitaxel 0,050 g (gm) α-Tocoferol 0,100 g (gm) Lecitina 0,200 g (gm) Etanol 0,100 g (gm) Butanol 0,500 g (gm)

Tal como anteriormente, o paclitaxel foi dissolvido em α-tocoferol e TPGS com etanol, que foi depois removido sob vácuo. Em peso seco, o etanol residual era inferior a 2 mg (0,5% p/p). Juntaram-se então 0,100 g (gm) de etanol anidro fresco e 0,500 g (gm) de n-butanol de novo à formulação. Resultou um óleo límpido. O concentrado para injecção foi testado quanto a biocompatibilidade em administração pela prática farmacêutica padronizada de mistura e salino. Verteram-se cerca de 200 mg do óleo em 20 mL de salino e misturou-se. De imediato desenvolveram-se grandes flocos de material insolúvel e a maior quantidade de material formou depósitos densos nas paredes do tubo de ensaio. A mistura era claramente inadequada para administração parentérica por qualquer via, e especula-se que tal seria independente da identidade do fármaco contido na formulação. Por tentativa e erro constatou-se que a lecitina é uma escolha pobre como tensioactivo para o α-tocoferol, em virtude do seu baixo HLB (cerca de 4). Outros exemplos de sucesso aqui descritos para emulsões finas adequadas para administração parentérica foram todos realizados com tensioactivos de elevado HLB. Estes tensioactivos incluem TPGS (HLB cerca de 17), Poloxamer 407 (HLB cerca de 22) e Tagat TO (HLB cerca de 14,0). Em geral, verificou-se que a emulsionação de α-tocoferol é mais bem realizada com tensioactivos principais de HLB>10, preferivelmente superiores a 12. A lecitina não está nesta classe, embora pudesse ser usada como co-tensioactivo. Em comparação, emulsões típicas o/a de triglicéridos são feitas com tensioactivos de HLB entre 7 e 12, demonstrando que as 40 ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ emulsões de α-tocoferol são uma classe única em virtude da polaridade e extrema hidrofobia do α-tocoferol, factores que também favorecem a solubilidade de fármacos lipófilos e lipófilos ligeiramente polares em α-tocoferol. Ver "Emulsions: Theory and Practice", 2nd Ed., pp. 248 (1985).

Lisboa,

Claims (23)

1. ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ 1/3 REIVINDICAÇÕES 1. Composição farmacêutica que compreende: • α-tocoferol, • polietilenoglicol-succinato de α-tocoferol, e • um composto taxóide, em que a composição está na forma de uma emulsão, uma solução micelar ou um sistema auto-emulsionante de entrega de fármaco.
2. 2. Composição de acordo com a reivindicação 1, que compreende adicionalmente um tensioactivo.
3. 3. Composição de acordo com a reivindicação 1, em que a referida composição compreende também uma fase aquosa e está na forma de uma emulsão ou solução micelar.
4. 4. Composição de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, que compreende adicionalmente polietilenoglicol.
5. 5. Composição de acordo com a reivindicação 4, em que o referido polietilenoglicol possui um peso molecular médio de 200.
6. 6. Composição de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que o tamanho de partícula da referida emulsão é de 10 a 500 nm.
7. 7. Composição de acordo com a reivindicação 6, em que o tamanho de partícula da referida emulsão é de 10 a 200 nm.
8. 8. Composição de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que o polietilenoglicol-succinato de α-tocoferol é polietilenoglicol-1000-succinato de D-a-tocoferol.
9. 9. Composição de acordo com a reivindicação 8, em que a razão de α-tocoferol para polietilenoglicol-1000-succinato de D-a-tocoferol é de 1:1 a 10:1 p/p. ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ 2/3
10. 10. Composição de acordo com qualquer das reivindicações 2-9, em que o referido tensioactivo é seleccionado do grupo que consiste em tensioactivos aniónicos, catiónicos, não iónicos e zwitteriónicos.
11. 11. Composição de acordo com a reivindicação 10, em que o referido tensioactivo é seleccionado do grupo que consiste em copolimeros não iónicos em blocos de polioxipropileno-polioxietilenoglicol, palmitato de β-ascorbilo, poliglutamato de vitamina E, estearilamina e ésteres de ácidos gordos de sacarose.
12. 12. Composição de acordo com a reivindicação 11, em que o referido copolimero não iónico em blocos de polioxi-propileno-polioxietilenoglicol possui a estrutura: HO (C2H40) a (C3H60) b (C2H4O) aH em que a é 101 e b é 56.
13. 13. Composição de acordo com a reivindicação 10, em que o referido tensioactivo possui um HLB de pelo menos 10.
14. 14. Composição de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que o referido composto taxóide é paclitaxel.
15. 15. Composição de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, para utilização num processo de tratamento de um sujeito humano ou animal.
16. 16. Processo para produção de uma composição farmacêutica que compreende: a) a preparação de uma fase oleosa que compreende um taxóide e α-tocoferol; e b) a combinação da fase oleosa com uma fase aquosa para formar uma emulsão, em que a fase oleosa ou a fase aquosa compreendem adicionalmente polietilenoglicol-succinato de a-tocoferol. ΕΡ Ο 981 328 /ΡΤ 3/3
17. 17. Processo de acordo com a reivindicação 16, em que a fase oleosa compreende adicionalmente um tensioactivo.
18. 18. Processo de acordo com a reivindicação 17, em que o tensioactivo é seleccionado do grupo que consiste em tensioactivos aniónicos, catiónicos, não iónicos e zwitteriónicos.
19. 19. Processo de acordo com a reivindicação 17, em que o tensioactivo é seleccionado do grupo que consiste em copolimeros não iónicos em blocos de polioxipropileno-polioxietilenoglicol, palmitato de 6-ascorbilo, poliglutamato de vitamina E, estearilamina e ésteres de ácidos gordos de sacarose.
20. 20. Processo de acordo com a reivindicação 19, em que o referido copolimero não iónico em blocos de polioxi-propileno-polioxietilenoglicol possui a estrutura: HO (C2H40) a (C3H60) b (C2H40) aH em que a é 101 e b é 56.
21. 21. Processo de acordo com qualquer das reivindicações 16 a 20, em que o taxóide é paclitaxel.
22. 22. Processo de acordo com qualquer das reivindicações 16 a 21, em que o tamanho de partícula da emulsão é de 10 a 500 nm.
23. 23. Processo de acordo com a reivindicação 22, em que o tamanho de partícula da emulsão é de 10 a 200 nm. Lisboa