PT98121B

PT98121B - Processo para a preparacao de novos 3,3'-ditio-bis (acidos propionicos) e seus esteres e de composicoes farmaceuticas que os contem

Info

Publication number: PT98121B
Application number: PT98121A
Authority: PT
Inventors: Carl-Magnus Alexande Andersson; Sten Hakan Axel Bergstrand; Anders Rudolf Hallberg; Bengt Olof Sarnstrand; Per Anders Sigvard Tunek
Original assignee: Astra Ab
Priority date: 1990-06-28
Filing date: 1991-06-27
Publication date: 1998-12-31
Also published as: TW221376B; ATE120730T1; CN1039318C; HU912169D0; SI9111086A; IL98389A; FI913131A0; IE71024B1; IE912223A1; NO175307B; JPH04230359A; HRP920766A2; IL98389A0; YU108691A; EG20191A; DK0463514T3; KR920000714A; CS199091A3; PL290857A1; ES2070370T3

Description

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE NOVOS 3,3'-DITIO-BIS(ÃCIDOS

PROPIÕNICOS) E SEUS. ÉSTERES E DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE OS CONTEM

Campo da Invenção

A presente invenção refere-se a novos derivados de cistina com actividade imunomoduladora, processos para a sua prepa ração, composições farmacêuticas que os contêm e a métodos para a sua aplicação farmacológica.

O objectivo da presente invenção é proporcionar um deri. vado da cistina com actividade imunomoduladora. Esta substância serã útil para o tratamento de doenças diversas.

Antecedentes da Invenção

A N-acetil-L-cisteína ê um composto largamente utilizado para o tratamento de doenças obstrutivas crónicas das vias aéreas bronquite crónica [para mais referências consultar Mulcentre Study Group, Long-term oral acetylcysteine in chronic bronchitis. A double-blind controlled study, Eur. J. Respir. Pis., 61 (suppl., 111) , (1980) 93-108; Boman, G., Backer, U.,

Larsson, S., Melander, B., e Wahlander, L. Oral acetylcysteine reduces exacerbation rate in chronic bronchitis. Report of a trial organized by the Swedish Society for Pulmonary Disease, Eur. J. Respir. Pis., 64 (1983) 405-415; e British Thoracic

Society Research Committee, Oral N-acetylcysteine and exacer-

bation rates in patients with chronic bronchitis and severe airway obstruction, Thorax, 40 (1985) 832-835]. O mecanismo da acção dos compostos não está descrito; o seu efeito tem sido atribuído a propriedades mucolíticas [consultar Multicen tre Study Group, Long-term oral acetylcysteine in chronic bronchitis. A double-blind controlled study, Eur. J. Respir. Pis., 61 (suppl. 111) (1980) 93-108; Boman, G./Backer, U., Larson,

S., Melander, B., e Wahlander, L. Oral acetylcysteine reduces exacerbation rate in chronic bronchitis. Report of a trial or ganized.. . by the Swedish Society for Pulmonary Disease, Eur.

J. Respir. Pis.,, 64, (1983) 405-415 e British Thoracic Socie ty Research Committee, Oral N-acetylcysteine and exacerbation rates in patients with chronic bronchitis and severe airway obs truction, Thorax, 40, (1985) 832-835], propriedades anti-oxidantes [consultar Aruoma, 0. I., Halliwell, B., Hoey, Β. Μ., e Butler, J. Free Radical Biol. Med., 6, (1989) 593-597] e também propriedades imunomoduladoras [consultar Bergstrand, H., Bjorn son, A., Eklund, A., Hernbrand, R., Eklund, A., Larsson, K., Linden Μ., e Nilsson, A., Stimuli-induced superoxide radical generation in vitro by human alveolar macrophages from smokers: Modulation by N-acetylcysteine tratment in vivo, J. Free Radicais Biol. & Med., 2 (1986), 119-127],

Também é conhecida a N,N*-diacetil-L-cistina. Este composto já foi referido anteriormente de forma breve em literatura de patentes de invenção, assim como em bibliografia cien tífica [patentes de invenção norte-americana nQ 4827016; europeia nQ 300100; norte-americana 4724239 ; norte-americana 4708965; alemã 2326444; Wilson, I. D. e Nicholson, J. K. Analysis of thiols and disulfides in Sulphur-containing drugs and

-3¹ related organic compounds. Chemistry, Biochemistry and Toxicology (ed. L. A. Damani), Vol. 2A, Analytical, biochemical and toxicological aspects of sulphur xenobiochemistry, Ellis Horwood Series in Biochemical Pharmacology (Halstred Press: uma sucursal de John Wiley & Sons), Chichester, 1989, p. 45? e Sjcf din, K., Nilsson, E., Hallberg, A., e Tunek, A., Metabolism of N-acetyl-L-cysteine. Some strutctural requirements for the deacetylation and consequences for the oral bioavailability, Brochem. Pharmacol., 38 (1989), 3981-3985]. Na patente de invenção norte-americana nQ 4827016 o composto é reivindicado como eficaz para o tratamento tópico de inflamações dêrmicas que são induzidas e propagadas por leucotrienos. Contudo, nada foi referido ou conhecido na generalidade referente às suas propriedades farmacológicas e/ou terapêuticas relativamente ãs doenças do sistema imunológico e inflamatórias do pulmão, tais como a bronquite crónica.

Previamente, as propriedades imuno-estimuladoras foram descritas para dissulfuretos simples, tais como o hidroxietildissulfureto (HEDS, ver: St. Georgiev, V., New syntetic immunomodulating agents. Trends in Pharmacological Science, 1988 , pp. 446-451.

Descrição da Invenção

De acordo com a presente invenção verificou-se que os compostos de fórmula geral

S

I s

ch₂	COOR- 1 ³ - CH - NH -	R
ch₂	- CH - NH - I	CO
	1 COOR-

^R2

-4-.

na qual,

R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo de fórmula geral -CO-R.^ na qual R^ representa um gru po metilo, etilo, n-propilo, n-butilo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo, n-nonilo, n-decilo, n-undecilo, isopropilo, 1-metilpropilo, t-butilo, 3-metilbutilo ou 2-metilbutilo;

Rg representa um grupo metilo, etilo, n-propilo, n-bu tilo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo , n-nonilo, n-decilo, n-undecilo, isopropilo, 1-metilpropilo, t-butilo, 3-metilbutilo ou 2-metilbutilo; e

Rg representa um átomo de hidrogénio ou um grupo meti_ lo, etilo, propilo, isopropilo, butilo ou isobutilo, com a condição de R^ e Rg não representarem, simultaneamente, um grupo metilo e ainda com a con dição de R^ e Rg não representarem, simultaneamente, um grupo n-propilo ou n-heptilo quando Rg representa um átomo de hidrogénio e os seus sais e/ou isómeros estereoquímicos aceitáveis sob o pon to de vista fisiológico, são imunomoduladores, particularmente agentes imuno-estimulantes.

Portanto, os compostos da presente invenção podem ser utilizados no tratamento de doenças em que existe uma deficiên cia do sistema imunológico e/ou se suspeita de uma defesa ineficaz do hospedeiro.

São exemplos destas doenças a bronquite crónica e outras doenças inflamatórias das vias aéreas, tais como a asma, rinite mas também certas formas de doenças auto-imunes, como a diabetes e a artrite reumatóide e/ou diversas doenças malignas. A infecção por HIV ou a SIDA declarada pode ser tratada com os pre sentes compostos. Também a doença aterosclerótica pode ser tratada com os presentes compostos.

As quantidades eficazes dos compostos da presente inven ção para se utilizarem no tratamento das doenças mencionadas an teriormente estão compreendidas entre 0,5 e 500 mg, de preferên cia entre 5 e 50 mg, como dose diária.

Os compostos preferidos de fórmula geral I citada antes são aqueles em que R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo -CO-R^ na qual R^ representa um grupo metilo, etilo, n-pro pilo, n-butilo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo, n-nonilo, n-decilo, n-undecilo, isopropilo, 1-metilpropilo, t-butilo, 3-metilbutilo ou 2-metilbutilo; R₂ representa um grupo meti lo, etilo, n-propilo, n-butilo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo, n-nonilo, n-decilo, n-undecilo, isopropilo, 1-metilpropilo, t-butilo, 3-metilbutilo ou 2-metilbutilo; e R^ represen ta um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo ou etilo, com a condição de e R₂ não representarem, simultaneamente, um grupo metilo e ainda com a condição de R^ e R₂ não representarem, simultaneamente, um grupo n-propilo ou n-heptilo quando R^ re presenta um átomo de hidrogénio.

Os compostos preferidos de fórmula geral I, quando R^ representa um átomo de hidrogénio, são aqueles em que e R₂representam, simultaneamente, um grupo isopropilo e t-butilo, respectivamente.

Os compostos preferidos de fórmula geral I, referida anteriormente, quando R^ não representa um átomo de hidrogénio, são aqueles em que os grupos representados por R^ e R₂ contêm 3

a 7 átomos de carbono.

São particularmente preferidos os compostos de fórmula geral I, referida antes, na qual Rg não representa um ãtomo de hidrogénio e R^ e Rg representam, cada um, um grupo isopropilo e Rg representa um grupo metilo; e Rg representam um grupo n-pentilo e Rg representa um grupo metilo; R^ e Rg representam, cada um, um grupo n-heptilo e Rg representa um grupo metilo ou etilo.

As formas estereoisoméricas dos compostos da presente invenção particularmente preferidas são as do isómero L, isto ê, os compostos derivados da L-cistina.

Os sais aceitáveis sob o ponto de vista fisiológico dos compostos de fórmula geral I, quando Rg representa um ãtomo de hidrogénio, são os sais, por exemplo, de sódio, amónio, cálcio ou de magnésio, conjuntamente com os seus sais de adição de ácidos não tóxicos. Também estão incluídos os sais derivados de arginina, lisina, histidina, etanolamina, dietanolamina, etileno diamina e colina e outras aminas orgânicas apropriadas.

Os sais aceitáveis sob o ponto de vista fisiológico dos compostos de fórmula geral I, quando Rg não representa um ãtomo de hidrogénio e R representa um átomo de hidrogénio são o clori^ drato, bromidrato, hidrogeno-sulfato, oxalato, tartarato, etc.

Os sais podem estar também sob a forma de produtos de solvatação, tais como, por exemplo, hidratos.

Composições Farmacêuticas

As substâncias activas descritas podem ser incluídas em diversas formas de dosagem, tais como, por exemplo, compri-

midos, comprimidos revestidos, cápsulas de gelatina, soluções e aerossóis.

Para a preparação de comprimidos, comprimidos revesti, dos e cápsulas de gelatina, a substância activa pode ser asso ciada a substâncias aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, tais como, por exemplo, lactose, amido, fosfato de dicãlcio , celulose microcristalina, polivinilpirrolidona, gelatina, derivados de celulose, sílica coloidal, talco, ãcido esteárico e seus sais.

Para a preparação de soluções orais são excipientes apropriados água, sacarose, glucose, sorbitol, frutose e xilitol.

As formas de dosagem podem conter, além dos excipientes mencionados, agentes conservantes, agentes estabilizantes, agentes que regulam a viscosidade, agentes emulsionantes, agentes apaladantes, agentes corantes, agentes aromatizantes, agentes que regulam a tonicidade, agentes-tampão e agentes anti-oxi_ dantes. Podem ainda conter outras substâncias com valor terapêutico.

Métodos de Preparação

Os compostos da presente invenção podem obter-se por qualquer um dos processos seguintes:

A. Oxidação de um derivado de N-acilcisteína de fórmula ge ral

C00R_o

I ³

HS - CH₂ - CH - NH - CO - R₁

na qual R^ e R^ têm os significados definidos antes ou, quando representa um átomo de hidrogénio, oxidação de , eventualmente, um seu sal, para obter um composto de fórmula geral

S - CH. CH»

COOR.

I ³

CH - NH - CO - R,

CH - NH

I

COOR.

- CO - R„

Como agente oxidante pode utilizar-se:

peróxido de hidrogénio, ar sob condições alcalinas, alquil-hidro peróxidos, perácidos, halogéneos, óxido nitroso ou nítrico, metais oxidantes, tais como o tálio (III), sais de trialquilsulfó nio ou óxido de selénio ou de telúrio. A oxidação pode também realizar-se por via electroquímica.

Um halogéneo é, por exemplo, o cloro, o bromo ou o iodo. Como sais incluídos no processo A e seguintes pode utilizar-se os sais de sódio, potássio, cálcio, amónio, etc.

B. A reacção, na presença de uma base apropriada, de um composto de fórmula geral

S

I s

	COOR. 1 ³
CH.	1 - CH - NH
- 2
CH.	- CH - NH

00R, na qual R₃ tem o significado definido antes, ou de um seu sal, com um composto de fórmula geral

R-^COX na qual R^ tem os significados definidos antes e COX representa um grupo reactivo capaz de reagir com um grupo amino com formação de um radical amida, para obter um composto de fórmula geral

S I

S -

	COOR-, 1 ³
CH₂	- CH - NH -	CO
^CH2	- CH - NH - 1 COOR-,	CO

agente de acilação de fórmula geral R^-COX pode ser, por exemplo, um halogeneto de ácido, um anidrido, uma amida ou um ácido ou éster activados. Um sal do processo B e nos proces^ sos seguintes em que se pode utilizar um sal pode ser um cloridrato, bromidrato, hidrogeno-sulfato, oxalato, tartarato, etc.

Um sal no processo B pode também ser qualquer dos sais alcalinos mencionados no processo A.

C. Reacção de um derivado do ácido-2-(N-acilamino)-3-halogenopropiõnico de fórmula geral

COOR-,

Y - CH₂ - CH - NH - CO - R₁ na qual R_n tem o significado definido, R, tem o significado definido antes para o símbolo R₃ ou representa um grupo orgânico lábil, ãcido ou básico e Y representa um átomo de hidrogénio, com enxofre ou com um dianião dissulfureto, na presença de uma base, para se obter um composto de fórmula geral

COOR,

I ³1

S - CH- - CH - NH - CO - R

I

S - CH„ - CH - NH - CO - R

COOR^J1 após o que, se se obtiver um composto em que Rg representa um átomo de hidrogénio, se faz a remoção do grupo protector repre sentado por R- .

^J1

O grupo protector representado por R- pode ser orgâni^J1 co lãbil, ácido ou básico, tal como um grupo alquilo, benzilo, arilo, vinilo ou alilo.

D. Oxidação de uma mistura de derivados de N-acilcisteína de fórmulas gerais

COOR,

I ³

HS - CH₂ - CH - NH - CO - R^ e

COOR,

I ³

HS - CH₂ - CH - NH - CO - Rg em que R^, R₂ e Rg têm os significados definidos antes ou, quan do Rg representa um átomo de hidrogénio, oxidação opcional dos seus sais alcalinos, para obter um composto de fórmula geral

	C00R_o 1 ³
CH₂	1 - CH - NH - CO
ch₂	- CH - NH - CO 1 COOR_

São aplicáveis os agentes oxidantes referidos no processo A.

E. Oxidação de uma mistura de cisteína ou de um éster de cisteína de fórmula geral

COOR„

I ³

HS - CH₂ - CH - NH₂ na qual R₃ tem o significado definido antes ou de um seu sal.

e de um derivado de N-acilcisteína de fórmula geral

C00R_o

I ³

HS - CH₂ - CH - NH - CO - R_t na qual R^ e R^ têm os significados definidos antes, ou um seu sal alcalino, para se obter um composto de fórmula geral

C00R_o

I

S - CH„ - CH - NH_nj z z

S - CH„ - CH - NH - CO - R² I ¹

COOR₃ ou um seu sal.

Os agentes de oxidação a utilizar podem ser referidos no proces^ so A.

12F. Reacçao, na presença de uma base apropriada, de um excesso de cistina ou de um diéster de cistina de fórmula geral

CH₂	COOR., 1 ³ - CH - NH
CH₂	- CH - NH 1 COOR-

na qual R tem o significado definido antes, ou de um seu sal, com um composto de fórmula geral r₂-cox na qual R₂ e COX têm os significados definidos antes, para obter um composto de fórmula geral

COORI

S - CH„ - CH - NHI z z

S - CH- - CH - CO - R„ | 2 coor₃

G. Reacção, na presença de uma base apropriada, de um composto de fórmula geral

COOR-,

I ³

S - CH- - CH - NH - CO - R.

I ^{2 1}

S - CH„ - CH - NHZ | Z

COOR₃ na qual R^ e R₃ têm os significados definidos antes, ou de um seu sal, com um composto de fórmula geral r₂cox

na qual R₂ ^e COX têm os significados definidos antes, para obter um composto de fórmula geral

COORI ³

S - CH- - CH - NH - CO - ΚΙ

S - CH- - CH - NH - CO - RZ j Z coor₃

H. Reacção de um derivado de N-acilcisteína de fórmula geral

COORI ³

HS - CH₂ - CH - NH - CO - R₁ ou de um seu sal, com um reagente de activação, tal como o azo dicarboxilato de dietilo, para se obter um composto de adição, por exemplo, de fórmula geral

COOC-H- COORI ^{2 5} I ³

N - S - CH. - CH - NH - CO - R.

I z 1

NH

I

COOC-H2 5 seguida da reacção com um segundo N-acilcisteina ou éster de N-acilcisteína, igual ou diferente, para se obter um composto de fórmula geral

COORI

S - CH- - CH - NH - CO - RI ^{2 1}

S - CH₂ - CH - NH - CO - R₂ coor₃

4I. Reacção de um composto de fórmula geral

COORI ³

R₄ - S - CH₂ - CH - NH - CO - R_x na qual representa um átomo de cloro, um grupo de fórmula

ou um grupo de fórmula geral

COOR.

II

-S-CH₂-CH-NH-COR₁ e R^ e R^ têm os significados definidos antes, com um compos1 to de fórmula geral

COOR.

H - S - CH₂ - CH - NH - CO - R₂ na qual R₂ e R_? têm os significados definidos antes, para se “1 obter um composto de fórmula geral

5s - ch₉

I ²s - CH₂

COOR-.

I ¹

CH - NH - CO - R₁

CH - NH - CO - R_ I ²

COOR³,1 após o que, se se pretender um um ãtomo de hidrogénio, se faz presentado por R3 · composto em que R^ representa a remoção do grupo protector re

J. Esterificação de um composto de fórmula geral

COX.,

I ¹

S - CH„ - CH - NH - R

I

S - CH- - CH - NH - CO - RZ j z cox^ na qual R^ e R₂ têm os significados definidos antes e X^ representa um grupo hidroxi ou um ãtomo de halogéneo, com um composto de fórmula geral ^R3E ~ θ^Η na qual R_3E representa um grupo metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo ou isobutilo para obter um composto de fórmula geral

Ç°°R_3e

CH - NH - R

CH - NH - CO - RS - CH„ I ²s - cb₂ COOR

κ.

Alquilação de um composto de fórmula geral

C00^(_)

I

S - CH„ - CH - NH - R I ²

S - CH_O - CH - NH - CO - R„ ζ ι z ¹ (-) coo' ’ na qual R e R^ têm os significados definidos antes, com um com posto de fórmula geral ^R3E“^Z na qual R^ tem o significado definido antes e Z representa um átomo de halogéneo, um grupo alquilsulfato, tosilato ou outro nucleófago, para obter um composto de fórmula geral “°^R3E

S - CH. - CH - NH - R

I ²

S - CH₂ - CH - NH - CO - R₂ ^c°or_3e

L. Reacção, na presença de uma base apropriada, de um derivado de cistina carboxil-protegido de fórmula geral

	COOR.	3P
CH₂	- CH -	NH
CH₂	- CH -	NH
	COOR

3na qual R^p representa um grupo orgânico lábil, ácido ou básico, ou de um seu cloridrato, com um composto de fórmula geral

R₁-COX na qual R^ tem o significado definido antes e COX representa um grupo reactivo capaz de reagir com um grupo amino com forma ção de um radical amida, seguida da remoção do grupo protector R_3p para se obter um composto de fórmula geral

COOH

I

S - CH„ - CH - NH - CO - R.

I 2 1

S - CH„ - CH - NH - CO - R.

² I ¹

COOH agente de acilação de fórmula geral R^-COX é o de finido na alínea B. 0 grupo protector R_3p pode ser um grupo orgânico lãbil, ácido ou básico, tal como um grupo alquilo, ben zilo, arilo, vinilo ou alilo.

M. Reacção, sob condições alcalinas, de um derivado de cistina carboxil-protegido de fórmula geral ch₂

CH₂

COOR I ^3P

CH - NH

CH - NH₂ coor_3p na qual R_3p tem o significado definido antes, ou de um seu cio ridrato, com um composto de fórmula geral

r₂-cox na qual R₂ e COX têm os significados definidos antes, seguida da remoção do grupo protector representado por R_3p para se ob ter um composto de fórmula geral

S

I s

	COOH I
ch₂	1 - CH -	NH
CH₂	- CH 1 COOH	NH

co

N. Reacção de um derivado da cistina carboxil-protegido de fórmula geral

S - CH„

I ²s - CH₂

C°°_E3p

CH - NH₂

CH - NH - CO I coor_3p

- R.

na qual R₂ e R_3p têm os significados definidos antes, ou de um seu cloridrato, com um composto de fórmula geral , para se

R _X-COX na qual R₂ e COX têm os significados definidos antes, seguida da remoção do grupo protector representado por R_3p obter um composto de fórmula geral

-19COOH

S - CH„

I

S - CHg

CH - NH - CO - R CH - NH - CO - Rg

COOH

O. Equilibrar, em uma solução alcoólica ou aquosa, uma mis tura de um derivado de cistina de fórmula geral

COOH

I

S - CHg - CH - NH - CO - R₁S - CH_O - CH - NH - CO - R-, ² I ¹

COOH na qual R^ tem o significado definido antes, e de um derivado, de cisteína de fórmula geral

COOH

I

HS - CHg - CH - NH - CO - Rg na qual Rg tem o significado definido antes, ou dos seus sais alcalinos, para se obter um composto de fórmula geral

CHg	COOH 1 - CH -	NH	- CO
CHg	- CH \|	NH	- CO
	1 COOH

Um passo opcional em todos os processos A a O consiste em conver ter o composto obtido em um seu sal aceitável sob o ponto de vis ta fisiológico.

Exemplos Práticos

Exemplo 1 . - Éster dimetílico do ãcido (R,R)-N,N'-dipentanoil-3 , 3'-ditiobis(2-aminopropiónico): Com agitação, arrefe ceu-se até à temperatura de 0°C uma suspensão de 1,0 g (3 mmo les) do dicloridrato do éster dimetílico de L-cistina em 20 ml de tetra-hidrofurano (pasta branca). Adicionaram-se ã mistura reaccional 4 equivalentes (2,0 ml) de N-etildiisopropilamina e 2,2 equivalentes (0,8 ml, 6,6 mmoles), de cloreto de pentanoilo. Agitou-se a mistura durante 4 horas num banho de gelo e retirou-se o precipitado branco de cloreto de N-etildiisopro pilamónio, por filtração. Removeu-se o dissolvente por evaporação e redissolveu-se o produto impuro em diclorometano. Após lavagem com água da fase orgânica, secou-se esta sobre sulfato de sódio. Mediante filtração e evaporação do dissolvente obte ve-se o composto em título não purificado, que se recristalizou com acetato de etilo.

Dados físicos:

RMN ¹H (300 MHz, CDC1₃) : á 6,42 (2H, d, NH.) , 4,88 (2H, dt,

NCH), 3,77 (6H, s, OCH₃), 3,21 (4H, m, SCH₂), 2,27 (4H, t,

COCH₂), 1,63 (4H, m, CH₃CH₂CH₂), 1,36 (4H, m, CH₃CH₂), 0,92 (6H, t, CHJ.0/ ²⁵=-146° (C=0,490, MeOH). Mp=110°-112°C.

D

Anãl. Cale para ^cig^H32°6^N2^S2^: C, 49,52; H, 7,39; N, 6,42;

S, 14,69. Encontrado: C, 49,40; H, 7,40; N, 6,40; S, 14,70.

Exemplo 2 . - Éster dimetílico do ãcido (R,R)-N,N*-dipropio nil-3,3'-ditiobis(2-aminopropiónico): Este composto foi prepa rado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 1, utili

zando como reagente de acilação o cloreto de propionilo.

Dados físicos:

RMN ^XH (300 MHz, CDCip: £ 6,44 (2H, d, NH), 4,89 (2H, dt,

NCH), 3,78 (6H, s, OCH₃) , 3,22 (4H, m, SCHp, 2,31 (4H, q, CH₃CH₂CH₂), 1,18 (6H, t, CH₃).

Exemplo 3 . - Éster dimetilico do ácido (R,R)-Ν,Ν¹-dipentanoil-3,3'-ditiobis(2-aminopropiónico): Este composto foi pre parado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 1, a partir do dicloridrato do éster dietílico de L-cistina e uti. lizando o cloreto de pentanoílo como reagente de acilação.

Dados físicos:

RMN ¹H (300 MHz, CDC1₃): £ 6,43 (2H, d, NH), 4,85 ((2H, dt,

NCH), 4,23 (4H, m, OCH₂), 3,22 (4H, m, SCH₂), 2,27 (4H, t,

COCH₂), 1,63 (6H, m, CH₃CH₂CH₂), 1,37 (4H, m, CH₃CH₂), 1,30 (6H, t, OCH₂CH₃), 0,92 (6H, t, CH^. C{ _D ²⁸=-130° (C=0,514 MeOH).

P.F.: 109°C. Anál. Cale, para ^C20^H36°6^N2^2^: C, 51,70; H, 7,81

N, 6,03; S, 13,80. Encontrado: C, 5185; H, 7,75; N, 6,10;

S, 1360.

Exemplo 4 . - Éster dietílico do ácido (R,R)-Ν,Ν¹-dipropionil-3,3'-ditiobis(2-aminopropiónico): Este composto foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 1, a partir do dicloridrato do éster dietílico L-cistina e utilizan do o cloreto de propionilo como reagente de acilação.

Dados físicos:

RMN ^ΧΗ (300 MHz, CDCl-j) : £ 6,44 (2H, d, NH) , 4,86 (2H, dt, NCH), 4,23 (4H, m, OCH₂), 3,22 (4H, m, SCH₂), 2,31 (4H, q, COCH₂), 1,30 (6H, t, CO₂CH₂CH₃), 1,18 (6H, t, CH^ .

Exemplo 5 . - Éster dietílico do ácido (R,R)-Ν,Ν'-di-hexanoil-3,3'-ditiobis(2-aminopropiónico): Este composto foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 1, a partir do dicloridrato do éster dietílico de L-cistina e utilizando o cloreto de hexanoílo como reagente de acilação.

Dados físicos:

RMN ^TH (300 MHz, CDClg): 6 6,44 (2H, d, NH), 4,86 (2H, dt, NCH), 4,23 (4H, m, OCHg), 3,21 (4H, m, SCHg), 2,26 (4H, t, COCHg),

1,65 (4H, m, COCHgCHg), 1,31 (4H, m, CHgCHgCHg), 1,31 (4H, m, CHgCHg), 1,31 (6H, t, OCHgCHg), 0,90 (6H, t, CHg).

Exemplo 6 . - Éster dietílico do ácido (R,R)-N,N'-di(2-metilpropionil)-3,3¹-ditiobis(2-aminopropiónico): Este composto foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 1 a partir do dicloridrato do éster dietílico de L-cistina e utili zando o cloreto de 2-metilpropanoílo como reagente de acilação. Dados físicos:

RMN ¹H (300 MHz, CDCl_g): £ 6,42 (2H, d, NH), 4,84 (2H, dt,

NCH), 4,23 (4H, m, OCHg), 3,22 (4H, m, SCHg), 2,46 (2H, m, (CHg)₂CH), 1,30 (6H, t, OCHgCHg), 1,18 (12H, d, (CHgJg).

²⁵ _D =-127° (C=0,512, MeOH). P. F.: 140°-141 C. Anál. Cale, para ^C18^H32^O6^N2^S2^: C, 49,52; H, 7,39; N, 6,42; S, 14,69. Encontrado: C, 49,15; H, 7,40; N, 6,30; S, 14,75.

Exemplo 7 . - Éster dimetílico do ácido (R,R)-N,N'-di(1-oxo-dodecanil)-3,3'-ditiobis(2-aminopropiónico): Este composto foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 1, a partir do dicloridrato do éster dimetílico do ácido

-23— * (R,R)-3,3¹-ditiobis(2-aminopropiónico) utilizando o cloreto do ácido dodecanóico como reagente de acilação.

Rendimento total: 40%

Dados físicos:

P. F.: 98°-99°C. [¢(]^⁵ = 93° (c= 0,531, MeOH). RMN ¹H (300 MHz CDC1₃) £ 6,42 (2H, d, NH), 4,88 (2H, dt, NCH), 3,77 (6H, s, OCH₃), 3,21 (4H, m, SCH₂), 2,26 (4H, t, OCH₂), 1,64 (4H, m, OCH₂CH₂), 1,26 (32H, m, (ΟΗ^θ), 0,88 (6H, t, CH₂CH₃) . Anãl. Cale, para ^C32^H60^N2°6^2^{: C}' ^0,72; H, 9,56; N, 4,43;

S, 10,13.

Encontrado: C, 60,4; H, 9,3; N, 4,5; S, 10,1.

Exemplo 8. - Éster dimetílico do ãcido S,S-N,N'-di(2-metilpropionil)-3,3'-ditiobis(2-aminopropiónico): Dissolveram-se 1,86 g (4,9 mmoles) de Ν,Ν'-diisobutiril-D-cistina em 10 ml de metanol contendo uma gota de ãcido clorídrico. Adicionou-se

O, 6 ml (5,5 mmoles) de ortoformato de trimetilo e agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 4 dias. Após a evaporação do dissolvente, purificou-se o produto por cromatografia em coluna (dissolvente: heptano/acetato de etilo a 1:5).

Dados físicos:

P. F.: 145,5°-147,5°C. RMN ·*·Η (300 MHz CDC1₃) £ 6,39 (2H, d,

NH) 4,86 (2H, dt, NCH), 3,78 (6H, s, OCH₃), 3,21 (4H, m,

SCH₂) 2,47 (2H, h, CH(CH₃)₂) 1,18 (12H, d, CH(CH₃)₂.

[ tf l²⁵ = + 135,2 ( C = 0,42, MeOH).

D

Exemplo 9 . - Éster dimetílico do ácido (R,R)-Ν,Ν¹-di-hexanoil-3,3'-ditiobis(2-aminopropiónico): Este composto foi pre-24parado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 1, utilizando o cloreto de hexanoílo como reagente de acilação.

Dados físicos:

2036262'

H, 7,81; N, 6,03; S, 13,80.

Encontrado: C, 51,90; H, 7,95; N, 6,10; S, 13,75.

Exemplo 10 . - Éster dimetílico do ácido (R,R)-N,N-di(1-oxo-octil)-3,3¹-ditiobis(2-aminopropiõnico): Este composto foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 1, utilizando o cloreto de octanoílo como reagente de acilação.

S, 11,80.

Exemplo 11 . - Éster dietilico do ácido (R,R)-Ν,Ν¹-di(1-oxo-octil)-3,3'-ditiobis(2-aminopropiónico): Este composto foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 1, a partir do dicloridrato do éster dietilico de L-cistina, utilizando o cloreto de octanoílo como reagente de acilação.

Dados físicos:

<25-

RMN ¹H	(300 MHz, CDC1₃): &	6,43	(2H, d,	NH), 4,85 (2H, dt,
NCH), 4	,23 (4H, m_? CH₃CH₂O),	3,21	(4H, m,	SCH₂), 2,26 (4H, t,
coch₂),	1,65 (4H, t, COCH₂CH	₂) z !z	30 (6H,	m, OCH₂CH₃), 1,30

(16Η, m, CH₃(CH₂)l-4), 0,88 (6H, t, CH₂CH₃).

Exemplo 12 . - Éster dietílico do ácido (R,R)-Ν,Ν'-di(2,2-di metilpropion.il) -3,3 ' -ditiobis (2-aminopropiónico) : Este composto foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exem pio 1, a partir do dicloridrato do éster dietílico de L-cistina, utilizando o cloreto de 2,2-dimetilpropanoílo como reagente de acilação.

Dados físicos:

RMN ¹H (300 MHz, CDC1₃): £ 6,52 <^2H* ^â' NH) , ⁴'⁸⁰ <^2H' ^dt'

NCH), 4,22 (4H, m, CH₃CH₂O), 3,22 (4H, m, SCH₂), 1,30 (6H, t, OCH₂CH₃), 1,23 (18H, s, C(CH₃)₃).

Exemplo 13 . - Éster dimetílico do ãcido (R,R)-Ν,Ν¹-di(2-2-dimetilpropionil)-3,3¹-ditiobis(2-aminopropiónico): Este com posto foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 1, utilizando como reagente de acilação o cloreto de 2,2-dimetilpropanoílo.

Dados físicos:

RMN ¹H (300 MHz, CDC13): <5 6/51 (^2H/ ^d/ NH), 4,83 (2H, dt, NCH), 3,78 (6H, s, OCH3), 3,21 (4H, m, SCH₂), 1,23 (18H, s, ^C(CH3⁾3⁾ ’

Exemplo 14 . - Éster dimetílico do ãcido (R,R)-Ν,Ν¹-di(2-me tilpropionil)-3,3’-ditiobis(2-aminopropiónico): Este composto foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exem

pio 1 mas substituindo o cloreto de pentanoílo pelo cloreto de 2-metilpropionilo.

Dados físicos:

P.F.: 142°-145°C. £ 6,40 (2H, d, NH), 4,86 (2H, dt, NCH),

3,78 (6H, s, OCH₃), 3,21 (4H, m, SCHp, 2,47 (2H, h, CH(CH₃)₂) 1,18 (12H, d, CH(CH₃)₂).

Exemplo 15 . - Éster dimetílico do ãcido (R,R)-N-acetil-N'-hexanoíl-3,3'-ditiobis(2-aminopropiónico): Agitaram-se 690 mg (2 mmoles) do dicloridrato do éster dimetílico do ãcido (R,R)~ -3,3’-ditibiobis(2-aminopropiónico) juntamente com 1,39 ml (10 mmoles) de trietilamina em 20 ml de tetra-hidrofurano, num balão de fundo redondo de 100 ml. Arrefeceu-se a solução turva até à temperatura de 0°C com um banho de gelo, antes de se adicionar, gota a gota, uma solução de 142 jil (2 mmoles) de cloreto de acetilo e 276 jil (2 mmoles) de cloreto de hexanoilo em 3 ml de tetra-hidrofurano. Agitou-se a solução turva durante 1 hora à temperatura de 0°C. Separou-se por filtração um precipitado branco de 1 g (rendimento de 100%) de cloreto de trietilamina e evaporou-se o filtrado para se obter um resíduo oleoso, que se partilhou entre 10 ml de ãgua e 10 ml de clorofórmio. Após a separação das fases, extraiu-se a fase aquosa por três vezes com 10 ml de clorofórmio, de cada vez. Após a evaporação das fases clorofórmicas reunidas, separou-se o pro duto não purificado (contendo o produto pretendido e os derivados simétricos), por cromatografia rãpida de acordo com o mé todo de Still et al. [ J. Org. Chem., 43 , (1978) 2923] sobre gel de sílica 60 (E. Merck 5735, 230 a 400 malhas, ASTM), uti lizando como eluente uma mistura de acetato de etilo/heptano/

-27/metanol a 6:3:1. Controlou-se a separação por cromatografia em camada fina (placas plásticas de gel de sílica 60 WF₂54s ,

E. Merck 16483, utilizando como eluente uma mistura de acetato de etilo/heptano/metanol a 6:3:1 e iodo como agente de visualização) . Reuniram-se as fracções com pureza aceitável e eva poraram-se para se obter um resíduo oleoso. Este resíduo dissol^ veu-se em acetona e evaporou-se de novo a solução para se obter o composto em título sob a forma de um sólido incolor. Rendimento: 184 mg, 25%.

Dados físicos:

CCF: R_f=0,30 (EtOAc/Heptano/MeOH = 6/3/1).

RMN ¹H (300 MHz, CDC1₃): 6 6,53 (1H, d, NH), 6,43 (1H, d, NH),

4,88	(2H,	m,	NCH) ,	3,78	(6H, s, CO₂CH₃), 3,22	(4H, m, SCH₂),
2,26	(2H,	t,	coch₂)	ι , 2,	07 (3H, s, COCH₃), 1,65	(2H, m, CH₂) ,
1,32	(4H,	m,	^ch2),	0,90	(3H, t, CH₃). FAB-MS	(m/z): 431 [MNa]t,

409 [MH]⁺, 311' [MH-C₇H_i;lO]⁺.

Exemplo 16 . - Ácido (R,R)-N,N-di(2-metilpropionil)-3,3'-di tiobis(2-aminopropiónico): Dissolveram-se 9,5 g (50 mmoles ) de N-isobutiril-L-cisteína em 50 ml de ãgua. Adicionaram-se 3,1 ml (30 mmoles) de peróxido de hidrogénio a 30% e agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 6 horas. Após a evaporação do dissolvente sob pressão reduzida, obtiveram-se 9,8 g de um óleo branco cristalizado.

A recristalização com acetato de etilo deu o composto em título sob a forma de um sólido branco que se secou sob vazio.

Rendimento: 4,8 g, 50%.

Dados físicos:

P. F.: 143°-145°C; RMN ¹H (300 MHz, DMSO-dJ, $ (2H, b,

Ό

CO₂H), 8,16 (2H, d, NH), 4,47 (2H, m, CHN), 3,15 (2H, dd,

CH₂S, J=14Hz, 5Hz), 2,92 (2H, dd, CH₂S, J=14Hz, 9Hz), 2,43 (2H, h, CH(CH₃)₂, J=7Hz), 1,01 (12H, d, CH₃, J=7Hz).

[ ]_d ²⁵ = -169/8 (MeOH, C=0,510).

Exemplo 17 . - Ácido (R,R)-N-acetil-3,3'-ditiobis(2-aminopro piónico): Dissolveram-se 2,42 g (20 mmoles) de L-cisteína e 3,26 g (20 mmoles) de N-acetil-L-cisteína em 25 ml de ãgua.

De acordo com o papel de Tornesol o pH desta solução era 2,6. Adicionaram-se 2,3 ml (21 mmoles) de peróxido de hidrogénio aquoso a 30% e deixou-se a mistura reaccional ã temperatura ambiente durante a noite. Por repouso depositou-se um precipj. tado branco durante a noite ã temperatura ambiente. Filtrou-se este precipitado branco (1,26 g). Este produto demonstrou ser L-cistina por comparação do espectro com o de uma amostra autêntica. Submeteu-se o filtrado amarelado contendo o compos. to pretendido e os dois compostos simétricos, (R,R)-N,N'-diace tilcistina e, em menores quantidades, cistina, a separação por HPLC preparativa, utilizando uma coluna Dynamax C^8 (8 jirn,

A, 21,4 x 250 mm) com uma coluna de protecção Dynamax 0^8 (8 ^im, 21,4 x 50 mm) e com um sistema de fornecimento do dissolvente duplo de Gilson (bomba 305, com uma actuação de bomba gem 100 SC, como bomba de fornecimento do dissolvente, actuando a 5 SC como um injector da amostra, módulo 806 manométrico, misturador dinâmico 811B, detector UV 115, colector de fracção 201, controlador de fracção 201-202). Os dissolventes uti_ lizados foram: A=10mM acetato de etilo/água e B=metanol, com uma relação 95:5 de A:B. O caudal do dissolvente foi 10 ml/mi

29.*· nuto e a separação foi registada a 230 nm. Após a detecção de cada fracção por CCF (placas de plástico de gel de sílica 60 WF 254s, Merck 16483, eluente, n-butanol/ãcido acético/água a 1:1:1, iodo como agente de visualização), reuniram-se as fracções com pureza aceitável e evaporou-se para se obter um resíduo oleoso. Dissolveu-se este resíduo em acetona (pa) e evaporou-se a solução, obtendo-se o composto em titulo sob a forma de cristais brancos, com um rendimento de 10%.

Dados físicos:

CCF: R_f=0,69 (n-BuOH/HOAc/H₂O=l/l/l). RMN ¹H (300 MHz, D₂O):

S 4,73 (ÍH, dd, NCH), 4,18 (ÍH, dd, NCH), 3,37 (2H, m, SCH₂),

3,10 (2H, m, SCH₂) , 2-,..06 (3H, s, CH₃) . TSP-MS (m/z): 283 [MH]⁺,

164 [MH-C₃H₅NO₂]⁺.

Exemplo 18. - Ácido (R,R)-N-acetil-N'-(2-metilpropionil)-3,3'-ditiobis(2-aminopropiónico): Agitou-se uma mistura de 0,652 g (4 mmoles) de N-acetil-L-cisteína e 0,764 g (4 mmoles) de N-iso butiril-L-cisteína em 10 ml de metanol, enquanto se adicionava, gota a gota, 0,60 ml (5 mmoles) de peróxido de hidrogénio a 30%. Manteve-se a agitação durante 3 horas à temperatura ambiente, após o que se eliminou o dissolvente num evaporador ro tativo. A adição de 25 ml de acetona e evaporação repetida de ram 1,5 g de produto não purificado sob a forma de um óleo que solidificou por repouso. Isolou-se o composto em título, pretendido, desta mistura por HPLC preparativa do modo descrito no Exemplo 17. Rendimento: 31%.

Dados físicos:

Eluição de HPLC com A a 60% (isocrática, para dissolventes ver Exemplo 17). CCF: R£=o,76 (n-butanol/hidrogénio/ácido acético

Ça 1:1:1).

RMN ¹H (300 MHz, D₂O):

<5 4,73 (2H, m, NCH), 3,33 (2H, m, SCH₂), 3,03 ( 2H, m,

SCH₂), 2,59 (1H, η, Η), 2,06 (3H, s, COH₃), 1,13 (3H, d, CH₃),

1,11 (3H, s, CH₃). FAB-MS (m/z): 376 [MNa]⁺, 353 [ΜΗ]\

Exemplo 19. - Ácido (R,R)-N-(2-metilpropionil)-3,3'-ditiobis (2-aminopropiónico): Preparou-se o composto pelo procedimento descrito no Exemplo 17 a partir de L-cisteína e de N-iso butiril-L-cisteína.

Rendimento: 8 %.

Dados físicos:

HPLC eluição com A a 55% (isocrática, ver Exemplo 17 para dij; solventes). CCF: R_f=0,67 n-BuOH/Hy/HOAc = 1/1/1). RMN ^ΧΗ (300 MHz, D₂O): 6 4,73 (1H, dd, NCH), 4,14 (1H, dd, NCH),

3,38 (2H, n, SCH₂), 3,08 (2H, m, SCH₂), 2,06 (1H, n, CH),

1,15 (3H, d, CH₃), 1,13 (3H, d, CH ).

TSP-MS (m/z): 311 [MH]⁺.

Exemplo 20. - Ácido (R,R)-N-acetil-N¹-(2,2-dimetilpropionil)-3,3¹-ditiobis(2-aminopropiónico): Obteve-se o composto seguin do o procedimento descrito no Exemplo 18, a partir de N-acetil-L-cisteina e de N-pivaloíl-L-cisteína.

Rendimento: 21%.

Dados físicos:

Gradiente de eluição de HPLC: A a 50%/15 minutos, 50 A a 30%/5 minutos,

R_f=0,78, n-BuOH/H₂O/HOAc = 1/1/1).

RMN ¹H (300 MHz, DgO) : £> 4,72 (2H, m, NCH) , 3,35 (2H, m ,

CHg), 3,04 (2H, m, SCHg), 2,06 (3H, s, CHg), 1,21 (9H, s,

CCHg).

FAB-MS (m/z): 411 [MNag] ⁺ , 389 [MNa]⁺, 367 [MH] ,⁺ 349 [MH-Hg°]⁺.

Exemplo 21. - Ácido (R,R)-N,N'-di(2,2-dimetilpropionil)-3,3'-ditiobis(2-aminopropiónico): Isolou-se o composto do produto não purificado do Exemplo 20.

Rendimento: 15%

Dados físicos:

Gradiente de eluição de HPLC: 50% A/15 min, 50 30% A/15 min,

30%. A/isocrática (ver Exemplo 17 para dissolventes). CCF: R_f=0,88 n-BuOH/HgO/HOAC = 1/1/1).

RMN ¹H (300 MHz, DgO): 6 4,72 (2H, dd, NCH), 3,37 (2H, dd, SCHg), 3,06 (2H, dd, SCHg), 1,21 (18H, s, CCHg).

FAB-MS (m/z): 431 [MNa]⁺, 409 [MH]⁺, 391 [MH-HgO]⁺.

Exemplo 22: - Ácido (R,R)-N-acetil-N¹-pentanol-3,3¹-ditiobis(2-aminopropiónico): Preparou-se este produto como no Exern pio 18, a partir de N-acetilcisteina e de N-pentanoilcisteína. Rendimento: 23%

Dados físicos:

Gradiente de eluição de HPLC: 50% A/20 min, 50 25% A/5 min,

25%.

A/isocrãtica (ver Exemplo 17 para dissolventes). CCF: Rf=0,84 n-BuOH/HgO/HOAc = 1/1/1).

RMN ¹H (300 MHz, DgO): £ 4,70 (2H, m, NCH), 3,30 (2H, n, SCHg),

2,99 (2H, m, SCHg), 2,30 (2H, t, COCHg), 2,04 (3H, s, COCHg),

21,57 (2Η, m, CH₂) , 1,30 (2H, m, CHp , 0,86 (3H, t, CH^ .

FAB-MS (m/z): 389 [MNa]⁺, 367 [MH]⁺, 349 [MH-H₂O]⁺.

Exemplo 23. - Ãcido (R,R)-N,Ν'-di-hexanoil-3,3'-ditiobis(2-aminopropiónico): Agitou-se uma suspensão de 1 equivalente de dicloridrato do éster dimetílico do ácido 3,3'-ditiobis(2-aminopropiónico) em tetra-hidrofurano ) pasta branca) e arre feceu-se atê à temperatura de 0°C. Adicionaram-se ã mistura reaccional 4 equivalentes de N-etildiisopropilamina e 2,2 equi. valentes de cloreto de hexanoílo. Agitou-se a mistura durante 4 horas em um banho de gelo, formando-se um precipitado branco de cloreto de N-etildiisopropilamõnio que se separou por filtra ção. Eliminou-se o dissolvente por evaporação sob pressão redu zida e redissolveu-se o produto não purificado em clorometano. Após lavagem com água, secou-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio. A filtração e evaporação do dissolvente deram o produ to não purificado, o éster dimetílico do ácido (R,R)-N,N'-di-hexanoil-3,3'-ditiobis(2-aminopropiónico), que se recristalizou em metanol/água e se triturou com éter dietilico.

Agitou-se vigorosamente à temperatura ambiente uma. pasta branca (0,1 M) do éster dimetílico obtido anteriormente e de hidróxido de sódio 0,5 M em metanol a 10%. Decorridas cerca de 48 horas, ajustou-se o pH da solução límpida para 2, formando-se um precipitado branco de produto não purificado que se se parou por filtração e se recristalizou em acetona/hexano, para se obter o composto em título sob a forma de cristais brancos. Rendimento total: 28%

Dados físicos:

P.F.: 132°-135°C. [<)/]²⁵: 164° (c=0,501, MeOH). RMN ¹H (300 MHz, ' D

DMSO-dg), 6 8,22 (2H, d, NH), 4,49 (2H, m, CHN), 3,14 (2H, dd, CH₂S), 2,91 (2H, dd, CH₂S), 2,12 (4H, t, CH₂CO), 1,50 (4H, p, CH₂CH₂CO), 1,26 (8H, m, (CH^), 0,87 (6H, t, CH₃). Anãl. Cale, para ^C]_g^H32^N2°6^S2^: C, 49,5; H, 7,4; N, 6,4; S, 14,7. Determ: C, 49,4; H, 7,2; N, 6,2; S, 14,3.

Exemplo 24. - Ãcido (R,R)-Ν,Ν’-di(1-oxo-octil)-3,3’-ditiobis(2 -aminopropiónico): Preparou-se o composto de acordo com o processo descrito no Exemplo 23, utilizando cloreto do ácido octanóico como reagente de acilação.

Recristalizou-se em acetato de etilo o éster dimetílico do ãcido (R,R)-Ν,Ν'-di(1-oxo-octil)-3,3'-ditiobis(2-aminopropiõnico) formado ihicialmente e recristalizou-se o composto em título em acetona/heptano e triturou-se com éter dietílico para obter cristais, brancos.

Rendimento total: 20%.

Dados físicos:

P. F.: 105°-107°C. [ ti ]²⁵:-147° (c= 0,541, MeOH). RMN ¹H , D (300 MHz, DMSO-dg), b 8,18 (2H, d, NH), 4,48 (2H, m, CHN) , 3,17 (2H, dd, CH₂S), 2,89 (2H, dd, CH₂S), 2,12 (4H, t, CH₂CO), 1,49 (4H, m, CH₂CH₂CO), 1,26 (16H, m, (CH₂)₄), 0,87 (6H, t,

CH₃) . Anál. Cale, para ^c22^H40^N2°6^S2: C, 53,6; H, 8,2; N, 5,7; S, 13,0. Encontrado: C, 53,4; H, 8,5; N, 5,7 ; S, 12,6.

Exemplo 25. - Ãcido (R,R)-Ν,Ν'-di(1-oxo-dodecanil)-3,3*-ditiobis (2-aminopropiónico): Preparou-se o composto de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 23, utilizando cloreto do ãcido dodecanóico como reagente de acilação. Realizou-se a hidrólise em metanol a 20%.

Recristalizou-se em acetato de etilo o éster dimetíli. co do ãcido (R,R)-Ν,Ν'-di(1-oxo-dodecanil)3,3¹-ditiobis(2-ami nopropiónico) formado inicialmente. Recristalizou-se o composto em título em tolueno/diclorometano para se obterem cri£ tais brancos.

Rend imento total: 23%.

Dados físicos:

P. F.: 110°-112°C.

²⁵ η 1 tí<]_D :-113 (c=0,507, MeOH). RMN H (300 MHz, DMSO-dg), á 8,19 (2H, d, NH), 4,48 (2H, m, CHN) , 3,15 (2H, dd, CH₂S), 2,89 (2H, dd, CH₂S), 2,11 (4H, t, CH₂CO), 1,49 (4H, m,

CH₂CH₂CO) , 1,25 (32H, m) (ΟΗ^θ), 0,87 (6H, t, CH-^) . Anál. Cale.

para ^C3q^h56^N2^O6^S2^{: Cf 59}'^{6; H}' ⁹'^{3; N}' ⁴'^{6? s}' ¹⁰'⁶·

Encontrado: C, 59,2; H, 9,4; N, 4,6; S, 10,3.

Exemplo 26. - Ácido (S,S)-N,Ν’-di(2-metilpropionil)-3,3'-ditiobis (2-aminopropiónico): Dissolveram-se 17,6 g (127 mmoles) de carbonato de potássio em 40 ml de água e 40 ml de cloreto de metileno, sob atmosfera de azoto. Arrefeceu-se a solução até à temperatura de -10°C e adicionaram-se rapidamente 5,6 ml (40 mmoles) de cloreto de 2-metilpropionilo e 8,7 g (49,5 mmoles) de mono-hidrato do cloridrato de D-cisteína. Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 4 horas, após o que se adicionou ácido clorídrico até o pH da mistura ficar inferior a 1, de acordo com o papel detórnassol. Descartou-se a camada aquosa e adicionou-se gasolina (40°-60°C) à fase orgâ nica, tendo precipitado N-isobutiril-D-cisteína sob a forma de cristais brancos.

Dissolveu-se 1 g (5,2 mmoles) de N-isobutiril-D-cisteí-3 5na em 10 ml de metanol. Adicionou-se 0,3 ml (2,6 mmoles) de per óxido de hidrogénio a 30% e agitou-se a mistura reaccional ã tem peratura ambiente durante 6 horas. Após a evaporação do dissolvente sob pressão reduzida, obteve-se um óleo branco cristalizado. A recristalização em acetato de etilo deu o composto em título, sob a forma de um sólido branco, que se secou sob vazio. Rendimento: 0,55 g (55%) .

Dados físicos: P. F.: 135°-137°C. RMN ¹H (300 MHz, DMSO-dg) £ 8,16 (2H, d, NH), 4,47 (2H, m, CHN) 3,15 (2H, dd, CH₂S,

J = 14 Hz, 5 Hz), 2,93 (2H, dd, CH₂S, J = 14 Hz, 9 Hz, 2,43 (2H, h, CH(CH₃)₂) J = 7 Hz) 1,01 (12H, d, CH₃, J = 7 Hz).

[ Ô< l_d = + 167,6 (c = 0,516, MeOH).

Exemplo 27.

Composição A

Comprimido contendo 10 mg de substância activa por comprimido:

Substância activa	10 mg
Lactose	100 mg
Amido de batata	50 mg
Polivinilpirrolidona	5 mg
Celulose microcristalina	15 mg
Estearato de magnésio	1 mg

Composição B

Comprimido de compressão directa contendo 5 mg de substância activa por comprimido:

Substância activa	5	mg
Lactose anidra	150	mg
Celulose microcristalina	50	mg
Silica coloidal	1	mg
Estearato de magnésio	2	mg

Se apropriado, podem-se revestir por pelicula os compri. midos obtidos, com, por exemplo, hidroxipropil-metilcelulose , hidroxipropil-celulose ou com o copolímero do mètacrilato de dimetilaminoetilo e do ácido metacrilíto.

Composição C

Solução injectável contendo umlmg/ml de substância activa.

Substância activa 1,0 mg

Cloreto de sódio 8,8 mg

Ãgua para injectáveis q.b.p. 1 ml

Composição D

Solução.oral contendo um 1 mg/ml

Substância activa

Sorbitol

Glicerina

Edetato de dissódio

Conservante

Aroma

Água purificada de substância activa.

1,0 mg 150 mg 100 mg

0,5 mg

q.b.

q.b.p. 1 ml

Composição Ε

Aerossol em pó fornecendo 1 mg/dose

Pode introduzir-se a substância activa micronizada num . ~ ér) dispositivo de inalaçao para po, por exemplo, um Turbuhaler^v dando 1 mg/dose.

Efeitos dos compostos da presente invenção numa experiência de hipersensibilidade de tipo retardado no murganho.

A propriedade dos compostos da presente invenção para estimularem a resposta imunológica está ilustrada pela eficácia em uma experiência no murganho, de reacção de hipersensibilidade de tipo retardado (DTH).

Utilizaram-se murganhos Balb/c de ambos os sexos obti. dos de Bomhotsgaard, Dinamarca, e Charlie Rivers, Inglaterra, com pesos compreendidos entre 18 e 20 g. Adquiriu-se 4-etoximetileno-2-feniloxazolona (OXA) a BDH (Inglaterra) que serviu como antigénio neste teste.

Sensibilizaram-se os murganhos no dia 0 por aplicação epicutânea no tórax e no abdómen barbeados, de 150 jil de uma solução a 3:1 de etanol absoluto/acetona contendo 3% de 4-etoximetileno-2-feniloxazolona (OXA). 0 tratamento com o compos^ to em exames, DiNAC (como controlo positivo) ou veículo (tampão de fosfato, pH 7,0) foi iniciado por alimentação oral ime diatamente após a sensibilização e continuou uma vez por dia até ao dia 6. Sete dias (dia 6) após a sensibilização estimularam-se todos os murganhos nas orelhas de ambos os lados por aplicação tópica de 20 jil de OXA a 1% dissolvido em azeite. Determinou-se a espessura da orelha antes e 24 ou 48 horas após

a estimulação, utilizando um calibrador de mola Oditest. As estimulações e avaliações foram realizadas sob anestesia ligeira com pentobarbital. A intensidade da reacção de hipersensibilidade de tipo retardada (DTH) foi expressa de acordo com a fórmula seguinte: ^Tt24/48^-Tt0 ^uni-^âades; ^em G^{ue t0} e t24/48 representam a espessura da orelha antes e 24 ou 48 horas após a estimulação, respectivamente, num teste individual (T). Os resultados foram expressos como: média + erro-padrão médio. 0 nível de significância entre as médias dos grupos foi obtido pelo teste t de duas caudas de Student. No Quadro 1 apresentam-se os resultados representativos das deter minações às 24 e 48 horas, expressas sob a forma do aumento em percentagem da espessura da orelha, relativamente à orelha de referência não estimulada. Um valor 100 indica, portanto, uma espessura de orelha duplicada.

-39Quadro 1

Acção imuno-estimuladora

R	r₂	r₃	% aumento, 24h	% aume 0,03 jjLiao'.	snto, 48h 3,0 Le/kg
0,	03 3,0 jimo le/kg
C(CH₃)₂	c(ch₃)₂	^CH3	440* 92	47**	27***
^n_C5^Hll	^n_C5^Hll	CH₃	73**	86**	54***	45***
n-C_H, 7 15	n-C-H.7 15	ch₃	58***	52***	28**	20*
^n_C7^H15	^n_C7^H15	^C2^H5	49***	7	0	0
coc(ch₃)₃	c(ch₃)₃	H	14*		26*	27*
COCH(CH₃) ₂	CH(CH₃) ₂	H	17	18	27**	62***
COCHg	C(CH₃)₃	H	24*	26*	14	17*
H	ch(ch₃)₂	H	37**	34***

Λ Μ «

Claims

REIVINDICAÇÕES

1.- Processo para a preparação de compostos de fór mula geral

COOR,

I ³

S - CH- - CH - NH - R

I

S - CH₂ - CH - NH - CO - R₂ coor₃ (I) na qual

R representa um ãtomo de hidrogénio ou um grupo de fórmula geral -CO-R^ na qual R^ representa um grupo metilo, etilo, n-propilo, n-butilo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo, n-nonilo, n-decilo, n-undecilo, iso-propilo, 1-metilpropi- lo, t-butilo, 3-metilbutilo ou 2-metilbutilo;

Rg representa um grupo metilo, etilo, n-propilo, n-butilo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octi . lo, n-nonilo, n-decilo, n-undecilo, iso-propilo,

1-metilpropilo, t-butilo, 3-metilbutilo ou 2-metilbutilo; e

Rg representa um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo.ou isobutilo;

com a condição de R^ e Rg não representarem, simultaneamente, um grupo metilo e ainda com a condição de R^ e Rg não representarem, simultaneamente, um grupo n-propilo ou n-heptilo quando Rg representa um átomo de hidrogénio, ou dos seus sais e/ou isómeros estereoquímicos aceitáveis sob o ponto de vista fisiológico, caracterizado pelo facto (a) de se oxidar um derivado da N-acilcisteína de fór mula geral

COORI ³

HS - CHg - CH - NH - CO - R^ na qual

R^ e Rg têm os significados definidos antes, ou, eventualmente, um seu sal alcalino quando Rg representa um átomo de hidrogénio, para a preparação de compostos de fórmula *

geral

S

I s

COOR, 1 ³ - CH₂ - CH - NH - CO - R^ - CH₂ - - CH - NH - CO - R. J ¹ COOR,

ou.

(b) de se fazer reagir um composto de fórmula geral

COOR,

I ³

S - CH₂ - CH - NH₂S - CH, - CH - NH2 j 2

COOR₃ na qual

R₃ tem os significados definidos antes, ou um seu sal, na presença de uma base apropriada, com um campos, to de fórmula geral

R_x - COX na qual

R^ tem os significados definidos antes; e

COX representa um grupo reactivo capaz de reagir com um grupo amino durante a formação da amida, para se obter um composto de fórmula geral

COOR,

I ³

S - CH- - CH - NH - CO - R.

I ^{2 1}

S - CH- - CH - NH - CO - R, ί

COOR₃ (c) de se fazer reagir um derivado de um ãcido
2_ (N-acilamino)-3-halogenopropiónico de. fórmula geral

COOR-.

I ³¹

Y - CH₂ - CH - NH - CO - R^ na qual

R^ tem os significados definidos antes;

R^-j. tem os significados definidos antes para o sím bolo Rg ourepresenta um grupo orgânico lãbil • ãcido ou alcalino; e

Y representa um átomo de halogéneo, com um· ãtomo de enxofre ou'um dianião dissulfureto, na presença de uma base, para se obter um composto de fórmula geral

COORI ³

S - CH- - CH - NH - CO - R.

I ^{2 1}

S - CH- - SH - NH - CO - R.

² I ¹

COORg ou (d) de se oxidar uma mistura de derivados do éster da N-acilcisteína de fórmulas gerais

COOR-,

I ^J

HS - CHg - CH - NH - CO - R^ e

COOR,

I

HS - CH₂ - CH - NH - CO - R₂ em que

R ^R2 ^{e R}3 t®^{111 0S si}9ⁿⁱ^^caâos úsfinidos antes, ou, eventualmente, dos seus sais alcalinos quando representa um átomo de hidrogénio, para se obter um composto de fórmula geral

COOR•I ³

S - CH₂ - CH - NH - CO - R_x

S - CH- - CH - NH - CO - Rí | Z

COOR₃ ou (e) de se oxidar uma mistura de cistéina ou do éster da cistéina e de um derivado da N-acilcisteína de fórmulas gerais

COOR,

I ³

HS - CH₂ - CH - NH₂

COORI ³

HS - CH₂ - CH - NH - CO em que

R^ e R₃ têm os significados definidos antes, ou de .um sal da cistéina e de um sal alcalino ou cloridrato do derivado da N-acilcisteína, para se obter um composto de fórmula geral

COORI ³

S - CH- - CH - NHI s - CH- - CH - NH - CO - R.

² I ^x

COOR₃ ou um seu sal, ou (f) de se fazer reagir cistéina em excesso ou um diéster de cistina de fórmula geral

COORI

S - CH₂ - CH - NH₂S - CH₂ - CH - NH₂ coor₃ na qual

R₃ tem os significados definidos antes, ou um seu sal, na presença de uma base apropriada, com um compos to de fórmula geral ¹ r₂ - COX na qual

R₂ e COX têm os significados definidos antes, para se obter um composto de fórmula geral

COORI ³

S - CH₂ - CH - NH₂

S - CH- - CH - NH - CO - Ri

COOR₃ ou (g) de se fazer reagir um composto de fórmula geral •V

s - ch₂ COOR, 1 - CH - NH - CO - R^

S - CHg - CH - NH₂

na qual COORg

e Rg têm os significados definidos antes, ou um seu sal, na presença de uma base apropriada, com um compo£ to de fórmula geral

na qual r₂ - COX

r₂ e COX têm os significados definidos antes, para se obter um composto de fórmula geral

COOR, l ^J S - CH, - i ^z CH - NH - CO - R^ s - CH₂ - CH - NH - CO - R, 1 ² COORg

(h) de se fazer reagir um derivado da N-acilcisteína

de formula geral HS - CH₂ - COOR, 1 ³ CH - NH - CO - R^ na qual

R^ e Rg têm os significados definidos antes, ou um seu sal, com um reagente de activação para se obter um aducto de fórmula geral

COOC-H- COOR,

I ^{2 5} | ³

N - S — CH- - CH - NH - CO - R. í ²

NH cooc₂h₅ e de. se proceder seguidamente a uma outra reacção com um segundo derivado da N-acilcisteína ou do éster da cisteína, igual ou diferente, para se obter um composto de fórmula geral

COOR, i ³

S - CH- - CH - NH - CO - R,

I

S - CH₂ - CH - NH - CO - R₂coor₃ (i) de se fazer reagir um composto de fórmula geral

COOR,,

I

R₄ - S - CH₂ - CH - NH - CO - R_Tna qual

R, e R^ têm os significados definidos antes; e representa um ãtomo de cloro, um grupo ou um grupo de fórmula geral 0 COOR,, u ³¹

-S—CH--CH-NH—COR,,

II o

ζ •V com um composto de fórmula geral

COOR.,,

1 31

H - S - CHg - CH - NH - CO - Rg na qual

Rg e Rg^ têm os significados definidos antes, para se obter um composto de fórmula geral

COOR-,

1 ³¹ ' S - CH- - CH - NH - CO - R.

I ². ¹ s - CH- - CH - NH - CO - R2 | Z

COORg_x e de remover depois o grupo protector representado pelo símbolo Rgi quando se pretende um composto de fórmula geral I na qual Rg representa um átomo de hidrogénio, ou (j) de se esterificar um composto de fórmula geral cox,

I ¹

S - CH- - CH - NH - CO - R

I ²

S - CH- - CH - NH - CO - Εί

COX-l na qual

R e Rg têm os significados definidos antes; e X^ representa um átomo de halogéneo ou um grupo hidroxi, com um composto de fórmula geral R_3e - OH *

na qual

R representa um grupo metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo ou isobutilo, para se obter um composto de fórmula geral Í^OOR3E.

S - CH- - CH - NH - R

I

S - CH₂ - CH - NH - CO - R₂

COOR
3E ou (k) de sé alquilar um composto de fórmula geral coo

S - CH- - CH - NH - R '1 ²

S - CH₂ - CH - NH - CO - R₂

COO (-) na qual

R e R₂'têm os significados definidos antes, com um composto de fórmula geral ^R3E “ ^Z na qual

R_3E tem os significados definidos antes; e Z representa um átomo de halogéneo, um grupo alquil-sulfato ou tosilato ou outro núcleo removível para se obter um composto de fórmula geral

-50*

S - CHI ²s - CH₂

Ç^00R3E CH - NH

CH - NH - CO - R₂ coor_3e (1) xi-protegido de de se fazer reagir um derivado da cistina carbofórmula geral

S - CH, I ²s - ch₂ ç^oor_3pCH - NH

CH - NH₂ coor_3P na gual

R_3p representa um grupo orgânico lábil ãcido ou básico, ou um seu cloridrato, na presença de uma base apropriada, com um composto de fórmula geral

R_x - COX na qual

R^ tem os significados definidos antes; e

COX representa um grupo reactivo capaz de reagir com um grupo amino durante a formação de uma amilo R_3p para se obter um composto da, e de se remover depois o grupo protector representado pelo símbo ~5H-

COOH

S - CH_O - CH - NH - CO - R-.

I ²

S - CH- - CH - NH - CO - R, ² I ¹

COOH (m) de se fazer reagir, em condições alcalinas, um derivado da cistina carboxi-protegido de fórmula geral coor_3p

S - CH₂ - CH - NH₂s - CH₂ - CH - NH₂

COORgp na qual

R^p tem os significados definidos antes, ou um seu cloridrato, com um composto de fórmula geral

R₂ - COX na qual

R₂ e COX têm os significados definidos antes, e de se remover depois o grupo protector representado pelo símbo lo R^p para se obter um composto de fórmula geral

COOH

S - CH₂ - CH - NH₂

S - CH- - CH - NH - CO - Rz j z

COOH (n) de se fazer reagir um derivado da cistina carboxi-protegido de fórmula geral

COOR

3P

S - CH₂ - CH - NH₂

S - CH₂ - CH - NH - CO - R₂

COOR.

'3P na qual r₂ e Rgp têm os significados definidos antes,· ou um seu cloridrato com um composto de fórmula geral

R_x - COX na qual e COX têm os significados definidos antes, e de. se remover depois o grupo protector representado pelo símbolo Rgp para se obter um composto de fórmula geral

COOH

I

S - CH. - CH - NH - CO - R i ²

S - CH. - CH - NH - CO - R.

2 | 2

COOH (o) de se equilibrar em uma solução aquosa alcalina uma mistura de um derivado de cistina e de um derivado de cisteí na de fórmulas gerais

COOH | S - CH. 1 ² 1 - CH - NH - CO S - CH₂ - CH - 1 NH - CO 1 COOH

COOH

I

HS - CH₂ - CH - NH - CO - R₂em que

R^ e R₂ têm os significados definidos antes, para se obter um composto de fórmula geral

COOH .1

S - CH- - CH - NH - CO - RI ^{2 1} s - CH₂ - ÇH - NH - CO - R₂COOH e de se transformarem, eventualmente, os compostos preparados em uma qualquer das alíneas (a) a (o) em um sal aceitável sob o pon to de vista fisiológico.

2.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R representa um ãtomo de hidrogénio ou um grupo de fórmula geral -COR^ na qual R^ representa um grupo metilo, etilo, n-propilo, n-butilo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo, n-nonilo, n-decilo, n-undecilo, iso-propilo, 1-metilpropilo, t-butilo, 3-metilbutilo ou 2-metilbutilo; R₂ representa um grupo metilo, etilo, n-propilo, n-butilo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo, n-nonilo, n-decilo, n-undecilo, iso-propilo, 1-metilpropilo, t-butilo, 3-metilbutilo ou 2-metilbutilo; e R^ representa um ãtomo de hidro gênio ou um grupo metilo ou etilo com a condição de R^ e R₂ não representarem, simultaneamente, um grupo metilo e ainda de R^ e *

Rg não representarem, simultaneamente, um grupo n-propilo ou n-heptilo quando Rg representa um ãtomo de hidrogénio, caracteri zado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais corresponden temente substituídos.

3. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual e Rg re presentam, cada um, um grupo isopropilo e Rg representa um grupo metilo, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente, substituídos.
4. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual e Rg re presentam, cada um, um grupo n-pentilo e Rg representa um grupo metilo, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
5. - Processo de acordo oom a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R^ e Rg representam, cada um, um grupo n-heptilo e Rg representa um grupo metilo ou etilo, caracterizado pelo facto de se utilizarem compos. tos iniciais correspondentemente substituídos.
6. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R^ e Rg re% presentam, cada um, simultaneamente, um grupo isopropilo e R^ representa um ãtomo de hidrogénio, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
7. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de .compostos. de fórmula geral I, na qual R^ e R₂ re presentam, cada um, simultaneamente um grupo t-butilo e R^ repre senta um ãtomo de hidrogénio, caracterizado pelo facto de se uti lizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
8. - Processo para a preparação de composições farma cêuticas com acção imunomodeladora, caracterizado pelo facto de se converter em uma forma de dosagem galénica uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula geral I, prepara do pelo processo de acordo com as reivindicações 1 a 7 em associação com um veículo aceitável em farmácia.