PT2173750E

PT2173750E - Espirociclos como inibidores de 11-beta-hidroxil-esteróide desidrogenase de tipo 1

Info

Publication number: PT2173750E
Application number: PT08771573T
Authority: PT
Inventors: Wenqing Yao; Jincong Zhuo; Colin Zhang
Original assignee: Incyte Corp
Priority date: 2007-06-21
Filing date: 2008-06-20
Publication date: 2012-10-11
Also published as: US20150210692A1; DK2540723T3; AR067090A1; US20080318991A1; EP2540723B1; AU2008265656A1; CY1113212T1; RS53839B1; CA2691150C; SI2540723T1; KR101554471B1; MX2009014274A; US8278318B2; IL202842A0; US20130018068A1; PL2540723T3; EP2173750B9; HK1180325A1; SI2173750T1; TWI428340B

Description

1

DESCRIÇÃO

"ESPIROCICLOS COMO INIBIDORES DE 11—BETA—HIDROXIL—ESTERÓIDE DESIDROGENASE DE TIPO 1"

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção diz respeito a determinados compostos espirociclicos que são inibidores de 11-β-hidroxil-esteróide desidrogenase de tipo 1 (ΙΙβΗΞϋΙ), a composições que os contenham e a métodos para a sua utilização no tratamento de diabetes, obesidade e outras doenças.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A importância do eixo hipotalâmico-pitiuitária-adrenal (HPA) no controlo de excursões de corticóideglucocorticóides é evidente a partir do facto de uma perturbação na homeostase no eixo uma vez que uma secreção ou acção, excessiva ou deficiente, dá origem à sindrome de Cushing ou à doença de Addison, respectivamente (Miller and Chrousos (2001) Endocrinology and Metabolism, eds. Felig and Frohman (McGraw-Hill, New York), 4a Ed. : 387-524) . Os pacientes com sindrome de Cushing (que é uma doença rara caracterizada por um excesso sistémico de glucocorticóides com origem em tumores adrenais e pituitários) ou aos quais é administrada terapia com glucocorticóides desenvolvem uma obesidade de gordura visceral reversível. De um modo interessante, o fenótipo de pacientes com a sindrome de Cushing é parecido com o da sindrome metabólica de Reaven (também conhecida como sindrome X ou sindrome de resistência à insulina), cujos 2 sintomas compreendem obesidade visceral, intolerância à glucose, resistência à insulina, hipertensão, diabetes de tipo 2 e hiperlipidemia (Reaven (1993) Ann. Rev. Med. 44: 121-131). No enanto, o papel dos glucocorticóides em formas prevalentes de obesidade humana permanece ainda obscuro visto que as concentrações de glucocorticóides em circulação não são elevadas para a maior parte dos pacientes com sindrome metabólicas. De facto, a acção de glucocorticóides sobre tecidos alvo depende não apenas dos niveis em circulação mas também da concentração intracelular, foi já demonstrada uma acção localizada aumentada dos glucocorticóides em tecidos adiposos e em músculos do esqueleto em sindromes metabólicas. Têm vindo a ser acumuladas provas de que a actividade enzimática de HPHSDI, a qual regenera glucocorticóides activos a partir de formas inactivas e que desempenha um papel central no controlo da concentração intracelular, é normalmente elevada em depósitos de gordura de indivíduos obesos. Tal sugere um papel para a reactivação local de glucocorticóides na obesidade e na sindrome metabólica.

Devido à aptidão de lipHSDl para regenerar cortisol a partir de cortisona inerte em circulação, foi prestada uma atenção considerável ao seu papel na amplificação da função dos glucocorticóides. A lipHSDl é expressa em muitos tecidos ricos em GR importantes, incluindo tecidos com uma considerável importância metabólica, tais como tecidos do fígado, adiposos e dos músculos do esqueleto, e, por tal motivo, foi postulado que auxiliam a potenciação específica para tecidos do antagonismo mediado por glucocorticóides na função da insulina. Considerando a) a semelhança fenotípica entre o excesso de glucocorticóides (sindrome de Cushing) e 3 a síndrome metabólica com os glucocorticóides normais em circulação neste último caso, bem como b) a aptidão de 11 PHSD1 para gerar cortisol activo a partir de cortisona inactiva de um modo especifico do tecido, tem sido sugerido que a obesidade central e as complicações metabólicas associadas na sindrome X são provocadas pela actividade aumentada de ΙΙβΗΞϋΙ nos tecidos adiposos, provocando a 'doença de Cushing no omento' (Bujalska et al. (1997)

Lancet 349: 1210-1213). De facto, a ΙΙβΗΞϋΙ tem mostrado ser aumentada nos tecidos adiposos de roedores e de seres humanos obesos (Livingstone et al. (2000) Endocrinology 131: 560-563; Rask et al. (2001) J. Clin. Endocrinol.

Metab. 86: 1418-1421; Lindsay et al. (2003) J. Clin.

Endocrinol. Metab. 88: 2738-2744; Wake et al. (2003) J. Clin. Endocrinol. Metab. 88: 3983-3988).

Esta noção é apoiada suplementarmente a partir de estudos em modelos de murganhos transgénicos. A sobre- expressão especifica de adipose de ΙΙβΗεϋΙ sob o controlo do promotor aP2 em murganhos produz um fenótipo excepcionalmente reminiscente em relação à sindrome metabólica humana (Masuzaki et al. (2001) Science 294: 2166-2170; Masuzaki et al. (2003) J. Clinicai Invest. 112: 83-90). De um modo importante, este fenótipo ocorre na ausência de um aumento na corticosterona total em circulação, sendo em vez disso conduzido por uma produção local de corticosterona nos depósitos adiposos. O aumento na actividade de ΙΙβΗεϋΙ nestes murganhos (2 a 3 vezes) é bastante semelhante ao observado na obesidade humana (Rask et al. (2001) J. Clin. Endocrinol. Metab. 86: 1418-1421).

Tal sugere que a conversão local mediada por l^HSDl de glucocorticóides inertes em glucocorticóides activos pode 4 ter uma profunda influência na sensibilidade à insulina em todo o corpo.

Com base nestes dados, é previsível que a perda de lipHSDl irá proporcionar um aumento na sensibilidade à insulina e na tolerância à glucose devido a uma deficiência específica de tecidos em níveis de glucocorticóides activos. De facto, como demonstrado em estudos, tal é o caso nos murganhos deficientes em ΙΙβΗΞϋΙ, produzidos por recombinação homóloga (Kotelevstev et al. (1997) Proc. Natl. Acad. Sei. 94: 14924-14929; Morton et al. (2001) J.

Biol. Chem. 276: 41293-41300; Morton et al. (2004) Diabetes 53: 931-938). Estes murganhos são completamente isentos de actividade de 11-ceto-reductase, o que confirma que a lipHSDl codifica a única actividade capaz de gerar corticosterona activa a partir de 11-desidrocorticosterona inerte. Os murganhos deficientes em lipHSDl são resistentes a hiperglicemia induzida por dieta e stress, exibem uma indução atenuada de enzimas gluconeogénicas hepáticas (PEPCK, G6P), apresentam uma sensibilidade aumentada à insulina nos tecidos adiposos e possuem um perfil lípido melhorado (diminuição nos triglicéridos e aumento no HDL protector cardíaco). Além do mais, estes animais mostram resistência a obesidade induzida por uma dieta em gorduras. Considerados em conjunto, estes estudos em murganhos transgénicos confirmam o papel da reactivação local de glucocorticóides no controlo da sensibilidade à insulina hepática e periférica e sugerem que a inibição da actividade de ΙΙβΗΞϋΙ pode revelar ser benéfica para o tratamento de diversos distúrbios associados aos glucocorticóides, incluindo obesidade, resistência à insulina, hiperglicemia e hiperlipidemia. 5

Foram já publicados dados que apoiam esta hipótese. Recentemente, foi descrito que ΙΙβΗεΌΙ desempenha um papel na patogénese da obesidade central e no desenvolvimento da sindrome metabólica em seres humanos. 0 aumento da expressão do gene de lipHSDl está associado a anormalidades metabólicas em mulheres obesas, sendo o aumento da expressão deste gene suspeito de contribuir para o aumento da conversão local de cortisona em cortisol nos tecidos adiposos de indivíduos obesos (Engeli, et al., (2004) Obes. Res. 12: 9-17) .

Uma nova classe de inibidores de lipHSDl, os aril-sulfonamidotiazoles, demonstrou melhorar a sensibilidade a insulina hepática e reduzir os níveis de glucose no sangue em estirpes hiperglicémicas de murganhos (Barf et al. (2002) J. Med. Chem. 45: 3813-3815; Alberts et al. Endocrinology (2003) 144: 4755-4762). Além do mais, foi recentemente descrito que inibidores selectivos de lipHSDl podem melhorar a hiperglicemia grave em murganhos geneticamente obesos diabéticos. Assim, a lipHSDl constitui um alvo farmacêutico promissor para o tratamento da sindrome metabólica (Masuzaki, et al., (2003) Curr. Drug Targets Immune Endocr. Metabol. Disord. 3: 255-62). A. Obesidade e sindrome metabólica

Conforme descrito antes, diversas provas sugerem que a inibição da actividade de lipHSDl pode ser eficaz no combate à obesidade e/ou a aspectos do conjunto de síndromes metabólicas, incluindo a intolerância a glucose, resistência a insulina, hiperglicemia, hipertensão e/ou hiperlipidemia. Os glucocorticóides são antagonistas conhecidos da acção de insulina, e as reduções nos níveis 6 locais de glucocorticóides por meio da inibição da conversão intracelular de cortisona em cortisol deverão aumentar a sensibilidade a insulina hepática e/ou periférica e, potencialmente, reduzir a adiposidade visceral. Conforme descrito antes, os murganhos transgénicos em ΙΙβΗεϋΙ são resistentes a hiperglicemia, exibem uma indução atenuada de enzimas gluconeogénicas hepáticas cruciais, apresentam um aumento notório na resistência a insulina na adipose e possuem um perfil lipidico melhorado. Além do mais, estes animais apresentam resistência a obesidade induzida por uma dieta rica em gorduras (Kotelevstev et al. (1997) Proc. Natl. Acad. Sei. 94: 14924-14929; Morton et al. (2001) J. Biol. Chem. 276: 41293-41300; Morton et al. (2004) Diabetes 53: 931-938). Assim, prevê-se que a inibição de ΙΙβΗΞϋΙ apresente diversos efeitos benéficos no figado, adipose e/ou músculos do esqueleto, em particular associados ao alivio do(s) componente(s) da sindrome metabólica e/ou da obesidade. B. Função pancreática

Sabe-se que os glucocorticóides inibem a secreção de insulina estimulada por glucose a partir de células beta pancreáticas (Billaudel e Sutter (1979) Horm. Metab. Res. 11: 555-560) . Tanto em ratos Zucker fa/fa de sindrome de Cushing como em ratos Zucker fa/fa diabéticos, a secreção de inculina estimulada por glucose é notoriamente reduzida (Ogawa et al. (1992) J. Clin. Invest. 90: 497-504). Foi já descrito que o ARNm e a actividade de ΙΙβΗΞϋΙ em células de ilhotas pancreáticas de murganhos ob/ob e a inibição desta actividade com carbenoxolona, um inibidor de ΙΙβΗεϋΙ, melhora a libertação de insulina estimulada por glucose 7 (Davani et al. (2000) J. Biol. Chem. 275: 34841-34844). Assim, prevê-se que a inibição de lipHSDl possua efeitos benéficos sobre o pâncreas, incluindo o aumento da libertação de insulina estimulada pela glucose. C. Cognição e demência A lesão cognitiva ligeira constitui uma característica comum da idade que pode estar essencialmente associada à progressão de demência. Tanto em animais como em humanos com idades avançadas, as diferenças inter-individuais na função cognitiva geral foi associada à variabilidade na exposição de longo termo a glucocorticóides (Lupien et al. (1998) Nat. Neurosci. 1: 69-73). Além disso, foi proposto que a desregulação do eixo HPA que provoca uma exposição crónica a um excesso em glucocorticóides em determinadas sub-regiões cerebrais contribua para o declínio da função cognitiva (McEwen e Sapolsky (1995) Curr. Opin. Neurobiol. 5: 205-216). A lipHSDl é abundante no cérebro e é expressa em múltiplas sub-regiões, incluindo o hipocampo, o córtex frontal e o cerebelo (Sandeep et al. (2004) Proc. Natl. Acad. Sei., Early Edition: 1-6) . O tratamento de células hipocampais principais com o inibidor de lipHSDl, carbenoxolona, protege as células de exacerbação mediada por glucocorticóides de neurotoxicidade excitatória de aminoácidos (Rajan et al. (1996) J. Neurosci. 16: 65-70). Além disso, os murganhos deficientes em ΙΙβΗεϋΙ são protegidos de disfunção hipocampal associada a glucocorticóides que está associada ao envelhecimento (Yau et al. (2001) Proc. Natl. Acad. Sei. 98: 4716-4721). Em dois estudos, intereruzados controlados com placebo, com dupla ocultação, aleatórios, a administração de carbenoxolona melhorou a fluência verbal e a memória verbal (Sandeep et ai. (2004) Proc. Natl. Acad. Sei. Early Edition: 1-6). Assim, prevê-se que a inibição de ΙΙβΗΞϋΙ reduza a exposição a glucocorticóides no cérebro e proteja contra efeitos prejudiciais de glucocorticóides sobre a função neuronal, incluindo lesão cognitiva, demência e/ou depressão. D. Pressão intra-ocular

Os glucocorticóides podem ser utilizados topicamente e sistemicamente para um conjunto amplo de condições em oftalmologia clinica. Uma complicação particular com estes regimes de tratamento é o glaucoma induzido por corticosteroides. Esta patologia é caracterizada por um aumento significativo na pressão intra-ocular (IOP). Na sua forma mais avançada e não tratada, a IOP pode causar uma perda parcial do campo de visão e, eventualmente, cegueira. A IOP é produzida pela relação entre a produção de humor aquoso e a drenagem. A produção de humor aquoso ocorre nas células epiteliais não pigmentadas (NPE) e a sua drenagem é efectuada através de células da trabecular. A lipHSDl foi localizada em células NPE (Stokes et al. (2000) Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. 41: 1629-1683; Rauz et al. (2001) Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. 42: 2037-2042) e a sua função é igualmente relevante na amplificação da actividade de glucocorticóides nestas células. Esta noção foi confirmada pela observação de que a concentração de cortisol livre excede bastante a concentração de cortisona no humor aquoso (proporção de 14:1). A significância funcional de lipHSDl no olho foi avaliada utilizando o inibidor carbenoxolona em voluntários saudáveis (Rauz et al. (2001) Invest. 9

Ophthalmol. Vis. Sei. 42: 2037-2042). Decorridos sete dias de tratamento com carbenoxolona, a IOP foi reduzida em 18%. Assim, prevê-se que a inibição de lipHSDl no olho reduza as concentrações locais de glucocorticóides e a IOP, produzindo efeitos benéficos na gestão do glaucoma e de outros distúrbios visuais. E. Hipertensão

Foi proposto que substâncias hipertensivas provenientes de adipócitos, tais como leptina e angiotensinogénio, estejam implicadas na patogénese da hipertensão associada a obesidade (Matsuzawa et al. (1999) Ann. N.Y. Acad. Sei. 892: 146-154; Wajchenberg (2000) Endocr. Rev. 21: 697-738) . A leptina, que é segregada em excesso em murganhos transgénicos aP2-l^HSDl (Masuzaki et al. (2003) J. Clinicai Invest. 112: 83-90), pode activar várias vias do sistema nervoso simpático, incluindo aquelas que regulam a pressão sanguínea (Matsuzawa et al. (1999) Ann. N.Y. Acad. Sei. 892: 146-154). Além disso, o sistema renina-angiotensina (RAS) tem demonstrado ser um determinante principal para a pressão sanguínea (Walker et al. (1979) Hypertension 1: 287-291). O angiotensinogénio, que é produzido no fígado e nos tecidos adiposos, é o substrato chave para a renina e promove a activação do RAS. Os níveis de angiotensinogénio no plasma são notoriamente elevados em murganhos transgénicos aP2-113HSDl, tal como são os níveis de angiotensina II e aldosterona (Masuzaki et al. (2003) J. Clinicai Invest. 112: 83-90). Estas forças conduzem, provavelmente, à pressão sanguínea elevada observada em murganhos transgénicos aP2-113HSDl. O tratamento destes murganhos com doses reduzidas de um 10 antagonista do receptor de angiotensina II elimina esta hipertensão (Masuzaki et al. (2003) J. Clinicai Invest. 112 : 83-90) . Estes dados ilustram a importância da reactivação local de glucocorticóides nos tecidos adiposos e no fígado e sugerem que a hipertensão pode ser provocada ou potenciada pela actividade de lipHSDl. Assim, prevê-se que a inibição de lipHSDl e a redução dos níveis de glucocorticóides em tecidos adiposos e/ou no fígado possua em um efeito benéfico sobre a hipertensão e distúrbios cardiovasculares associados à hipertensão. F. Doença óssea

Os glucocorticóides podem possuir efeitos adversos em tecidos do esqueleto. Uma exposição contínua mesmo em doses moderadas de glucocorticóides pode causar osteoporose (Cannalis (1996) J. Clin. Endocrinol. Metab. 81: 3441-3447) e um risco aumentado de fracturas. Experiências in vitro confirmaram os efeitos prejudiciais dos glucocorticóides em células reabsorvedoras de osso (também designadas por osteoclastos) e células formadoras de osso (osteoblastos). Ο ΙΙβΗΞΌΙ tem demonstrado estar presente em culturas de osteoblastos primários humanos, bem como em células de ossos de adultos, tipicamente uma mistura de osteoclastos e de osteoblastos (Cooper et al. (2000) Bone 27: 375-381), tendo o inibidor de lipHSDl, carbenoxolona, demonstrado atenuar os efeitos negativos dos glucocorticóides na formação de nódulos ósseos (Bellows et al. (1998) Bone 23: 119-125). Assim, prevê-se que a inibição de ΙΙβΗΞϋΙ diminua a concentração local em glucocorticóides nos osteoblastos e osteoclastos, 11 produzindo efeitos em diversas formas de doenças ósseas, incluindo osteoporose.

Os inibidores de pequenas moléculas de l^HSDl estão presentemente a ser desenvolvidos para o tratamento ou para a prevenção de doenças associadas a lipHSDl, tais como as descritas antes. Por exemplo, determinados inibidores com base em amida encontram-se descritos nos documentos WO 2004/089470, WO 2004/089896, WO 2004/056745 e WO 2004/065351. Inibidores de pequenas moléculas suplementares de lipHSDl encontram-se descritos nos documentos US

2005/0282858, US 2006/0009471, US 2005/0288338, US 2006/0009491, US 2006/0004049, US 2005/0288317, US 2005/0288329, US 2006/0122197, US 2006/0116382 e US 2006/0122210.

No documento W02007/067504 encontram-se descritos compostos úteis para o tratamento de diversas doenças associadas à expressão ou à actividade de 1Ι-β-hidroxil-esteroide desidrogenase de tipo 1. 11) INCY0035 (US 2007/0066584) .

Os antagonistas de ΙΙβΗεϋΙ foram avaliados em ensaios clínicos com humanos (Kurukulasuriya, et al., (2003) Curr. Med. Chem. 10: 123-53). A luz destes dados experimentais, os quais indicam um papel para 113HSD1 em distúrbios associados a glucocorticóides, síndrome metabólica, hipertensão, obesidade, resistência a insulina, hiperglicemia, hiperlipidemia, diabetes de tipo 2, excesso de androgénio (hirsutismo, irregularidade menstrual, hiperandrogenismo) e síndrome do ovário poliquístico (PCOS), são desejados agentes terapêuticos dirigidos ao aumento ou à supressão 12 destas vias metabólicas, por modulação da transdução do sinal de glucocorticóides ao nível de l^HSDl.

Tal como aqui evidenciado, existe uma necessidade contínua para fármacos novos e melhorados que sejam dirigidos a lipHSDl. Os compostos, composições e métodos aqui descritos ajudam a satisfazer este e outras necessidades.

DESCRIÇÃO ABREVIADA DA INVENÇÃO A presente invenção proporciona, inter alia, inibidores de lipHSDl que satisfazem a fórmula estrutural:

ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, em que as variáveis possuem as significações a seguir definidas. A presente invenção proporciona ainda composições que compreende um composto de fórmula estrutural I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável. A presente invenção proporciona ainda métodos para inibir lipHSDl por meio do contacto de lipHSDl com um composto de fórmula estrutural I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. A presente invenção proporciona ainda métodos para inibir a conversão de cortisona em cortisol numa célula, que compreendem fazer contactar a célula com um composto de 13 fórmula estrutural I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. A presente invenção proporciona ainda métodos para inibir a produção de cortisol numa célula, que compreendem fazer contactar a célula com um composto de fórmula estrutural I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. A presente invenção proporciona ainda métodos para o tratamento de diversas doenças, incluindo qualquer um dos distúrbios sequintes, ou uma qualquer combinação de dois ou mais dos distúrbios seguintes: obesidade; diabetes; intolerância a glucose; resistência a insulina; hiperglicemia; hipertensão; hiperlipidemia; deficiência cognitiva; depressão; demência; glaucoma; distúrbios cardiovasculares; osteoporose; inflamação; síndrome metabólica; excesso de androgénio ou síndrome do ovário poliquístico (PCOS) num paciente, o qual compreende a administração ao paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula estrutural I, ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável. A presente invenção proporciona ainda um composto de fórmula estrutural I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para utilização no tratamento do corpo de um ser humano ou de um animal por terapia. A presente invenção proporciona ainda a utilização de um composto de fórmula estrutural I, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para a preparação de um medicamento utilizável em terapia.

DESCRIÇÃO MINUCIOSA DA INVENÇÃO A presente invenção proporciona, inter alia, inibidores de ΙΙβΗΞϋΙ que satisfazem a fórmula estrutural I: 14

ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, em que: o símbolo R' representa F, Cl, Br ou I e os símbolos R2 e R3 representam um radical seleccionado independentemente entre H, alquilo (Ci-Cõ) e cicloalquilo(C3-C6) .

De acordo com algumas variantes: o símbolo R' representa F e Cl e os símbolos R2 e R3 representam um radical seleccionado independentemente entre H e alquilo(Ci-C4) .

De acordo com algumas variantes, o símbolo R1 representa F ou Cl.

De acordo com algumas variantes, o símbolo R1 representa F.

De acordo com algumas variantes, o símbolo R1 representa Cl.

De acordo com algumas variantes, os símbolos R2 e R3 representam um radical seleccionado independentemente entre H, metilo e etilo.

De acordo com algumas variantes, pelo menos um dos símbolos R2 e R3 representa um radical diferente de H.

De acordo com algumas variantes, os compostos da invenção satisfazem a fórmula estrutural II: 15

Em diversos momentos da presente memória descritiva, os substituintes dos compostos da invenção são descritos nos grupos ou nos intervalos. É pretendido que a invenção inclua especificamente cada uma e qualquer subcombinação individual dos membros de tais grupos e intervalos. Por exemplo, o termo "alquilo (Ci-Cô) " pretende incluir, especifica e individualmente, metilo, etilo, alquilo(C3), alquilo (C4), alquilo (C5) e alquilo (Ce). É ainda apreciado que diversas caracteristicas da invenção, as quais, para efeitos de clareza, são descritas no contexto de variantes em separado, possam ainda ser apresentadas em combinação com uma variante individual. Pelo contrário, há diversas caracteristicas da invenção que são, resumidamente, descritas no contexto de uma variante individual, que também podem ser apresentadas em separado ou numa qualquer subcombinação adequada.

Tal como aqui utilizado, o termo "alquilo" pretende designar um grupo hidrocarboneto saturado que possui uma cadeia linear ou ramificada. Como exemplos de grupos alquilo refere-se metilo (Me), etilo (Et), propilo (v.g., n-propilo e isopropilo), butilo (v.g., n-butilo, isobutilo, t-butilo), pentilo (v.g., n-pentilo, isopentilo, neo-pentilo) e semelhantes.

Tal como aqui utilizado, o termo "cicloalquilo" designa carbociclos não aromáticos com 3 a 7 membros, 16 incluindo, por exemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo e ciclo-hexilo.

Os compostos aqui descritos são assimétricos (v.g., possuem um ou vários estereocentros). Todos os estereoisómeros, tais como enantiómeros, estão abrangidos, salvo quando indicado de outro modo. Os compostos da presente invenção que contêm átomos de carbono assimetricamente substituídos podem ser isolados em formas opticamente activas ou em formas racémicas. Os métodos sobre a preparação de formas activamente puras a partir de materiais de partida opticamente activas são conhecidos na especialidade, tais como por resolução de misturas racémicas ou por síntese estereosselectiva. Os isómeros cis e trans dos compostos da presente invenção encontram-se descritos e podem ser isolados como uma mistura de isómeros ou como formas isoméricas separadas.

Os compostos da invenção também podem compreender formas tautoméricas. As formas tautoméricas são obtidas por meio da mudança de um ligação dupla com uma ligação dupla adjacente em conjunto com a migração concomitante de u protão. As formas tautoméricas compreendem tautómeros prototrópicos, os quais são estados de protonação isoméricos que possuem a mesma fórmula empírica e carga total. Como exemplos de tautómeros prototrópicos refere-se pares cetona - enol, pares amida - ácido imídico, pares lactama - lactima, pares amida - ácido imídico, pares enamina - imina, e formas anelares em que um protão pode ocupar duas ou mais posições de um sistema heterocíclico, por exemplo, 1H- e 3H-imidazole, 1H-, 2H- e 4H-1,2,4-triazole, 1H- e 2H-isoindole e 1H- e 2H-pyrazole. As formas 17 tautoméricas podem estar em equilíbrio ou estericamente fixadas a uma forma por substituição adequada.

Os compostos da invenção também compreendem todos os isótopos de átomos que ocorram nos intermediários ou nos compostos finais. Com isótopos refere-se aqueles átomos que possuem o mesmo número atómico mas que possuem números de massa diferentes. Por exemplo, os isótopos de hidrogénio incluem o trítio e o deutério.

Todos os compostos, e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, podem ser obtidos em diversas formas sólidas, tais como formas solvatadas ou hidratadas. De acordo com algumas variantes, a forma sólida é uma forma cristalina. Os métodos para a preparação e para a obtenção de diferentes formas sólidas são rotineiros na especialidade e compreendem, por exemplo, difracção de raio-X no pó, calorimetria de varrimento diferencial, análise termogravimétrica, absorção dinâmica no vapor, FT-IV, métodos dispersivos de Raman, NMR em estado sólido, titulação de Karl-Fischer, etc..

De acordo com algumas variantes, os compostos da invenção, e os seus sais, encontram-se sob uma forma substancialmente isolada. A expressão "substancialmente isolado" pretende designar que o composto está pelo menos parcial ou substancialmente separado do ambiente no qual é formado ou detectado. A separação parcial pode compreender, por exemplo, uma composição enriquecida no composto da invenção. A separação substancial pode compreender composições que contêm pelo menos cerca de 50%, pelo menos cerca de 60%, pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 97% ou pelo menos cerca de 99% em peso do 18 composto da invenção, ou de um seu sal. Os métodos para isolar os compostos e os seus sais são rotineiros na especialidade. A presente invenção também compreende sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos aqui descritos. Tal como aqui utilizada, a expressão "sais farmaceuticamente aceitáveis" diz respeito a derivados dos compostos descritos em que o composto original é modificado por meio da conversão de um radical acidico ou básico existente na sua forma de sal. Como exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis refere-se, mas sem que isso constitua qualquer limitação, sais de ácidos minerais ou orgânicos de resíduos básicos, tais como aminas; sais alcalinos ou orgânicos de resíduos acídicos, tais como ácidos carboxílicos; e semelhantes. Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção compreendem sais não tóxicos convencionais do composto original formado, por exemplo, a partir de ácidos inorgânicos ou orgânicos não tóxicos. Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser sintetizados a partir do composto original que contém um radical básico ou acidico por métodos químicos convencionais. De um modo geral, tais sais podem ser preparados por meio da reacção das formas livres de ácido ou base destes compostos com uma quantidade estequiométrica da base ou do ácido adequada em água ou num solvente orgânico, ou numa mistura de ambos; de um modo geral, são preferíveis meios não aquosos de tipo éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol ou acetonitrilo. É possível encontrar listas de sais adequados na obra Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a ed., Mack Publishing Company, 19

Easton, Pa., 1985, pág. 1418 e em Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977), cada uma das quais se considera aqui incorporada na sua totalidade por referência. A expressão "farmaceuticamente aceitável" é aqui utilizada para designar os compostos, materiais, composições e/ou formas de dosagem que são, no âmbito do julgamento médico, adequados para utilização em contacto com os tecidos de seres humanos e de animais, sem apresentar uma toxicidade, irritação, resposta alérgica ou outro problema ou complicação excessivos, possuindo um rácio beneficio/risco aceitável.

Os compostos da invenção podem modular a actividade de lipHSDl. 0 termo "modular" pretende designar a aptidão para aumentar ou diminuir a actividade de uma enzima ou receptor. Assim sendo, os compostos da invenção podem ser utilizados em métodos de modulação de lipHSDl fazendo contactar a enzima ou o receptor com qualquer um ou mais do que um dos compostos ou composições aqui descritos. De acordo com algumas variantes, os compostos da presente invenção podem actuar como inibidores de ΙΙβΗεϋΙ. De acordo com outras variantes, os compostos da invenção podem ser utilizados para modular a actividade de lipHSDl num indivíduo que necessite de modulação da enzima ou do receptor por meio da administração de uma quantidade de modulação de um composto da invenção. A presente invenção proporciona ainda métodos para inibir a conversão de cortisona em cortisol numa célula ou inibir a produção de cortisol numa célula, em que a conversão ou produção de cortisol é mediada, pelo menos em parte, pela actividade de ΙΙβΗΞϋΙ. Os métodos para a medição de taxas de conversão de cortisona em cortisol e 20 vice-versa, bem como os métodos para a medição dos níveis de cortisona e de cortisol nas células, são rotineiros na especialidade. A presente invenção proporciona ainda métodos para aumentar a sensibilidade a insulina de uma célula, fazendo contactar a célula com um composto da invenção. Os métodos de medição da sensibilidade a insulina são rotineiros na especialidade. A in proporciona ainda métodos para o tratamento de doenças associadas à actividade ou expressão, incluindo a uma actividade anormal e sobreexpressão, de lipHSDl num indivíduo (v.g., paciente) por meio da administração ao indivíduo que necessite de tal tratamento de uma quantidade ou dose terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção, ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, ou uma sua composição farmacêutica. Como exemplos de doenças refere-se qualquer doença, distúrbio ou patologia que esteja directa ou indirectamente ligada à expressão ou actividade da enzima. Uma doença associada a lipHSDl também pode compreender qualquer doença, distúrbio ou patologia que possa ser prevenido, melhorado ou curado pela modulação da actividade da enzima.

Como exemplos de doenças associadas a lipHSDl refere-se obesidade, diabetes, intolerância a glucose, resistência a insulina, hiperglicemia, hipertensão, hiperlipidemia, deficiência cognitiva, demência, depressão (v.g., depressão psicótica), glaucoma, distúrbios cardiovasculares, osteoporose e inflamação. Como outros exemplos de doenças associadas a ΙΙβΗΞΌΙ refere-se síndrome metabólica, diabetes de tipo 2, androgénio em excesso (hirsutismo, 21 irregularidade menstrual, hiperandrogenismo) e sindrome do ovário poliquistico (PCOS).

Tal como aqui utilizado, o termo "célula" pretende designar uma célula que está in vitro, ex vivo ou in vivo. De acordo com algumas variantes, uma célula ex vivo pode fazer parte de uma amostra de tecido excisado a partir de um organismo, tal como um mamífero. De acordo com algumas variantes, uma célula in vitro pode ser uma célula numa cultura de células. De acordo com algumas variantes, uma célula in vivo é uma célula que vive num organismo, tal como um mamífero. De acordo com algumas variantes, a célula é um adipócito, uma célula pancreática, um hepatócito, um neurónio ou uma célula constituinte do olho (célula ocular).

Tal como aqui utilizado, o termo "fazer contactar" designa unir os radicais indicados num sistema in vitro ou num sistema in vivo. Por exemplo, "fazer contactar" a enzima lipHSDl com um composto da invenção compreende a administração de um composto da presente invenção a um indivíduo ou paciente, tal como um ser humano, que possui lipHSDl, bem como, por exemplo, introduzir um composto da invenção numa amostra que contém uma preparação celular ou preparação purificada que contenha a enzima lipHSDl.

Tal como aqui utilizado, o termo "indivíduo" ou "paciente", utilizados de um modo interpermutável, designam qualquer animal, incluindo mamíferos, de preferência murganhos, ratos, outros roedores, coelhos, cães, gatos, suínos, gado, ovelhas, cavalos ou primatas e mais preferencialmente seres humanos.

Tal como aqui utilizado, o termo "tratar" ou "tratamento" designa uma ou mais das seguintes: (1) 22 prevenção da doença; por exemplo, prevenir uma doença, patologia ou distúrbio num indivíduo que pode apresentar uma predisposição à doença, patologia ou distúrbio mas que ainda não padeça ou evidencie a patologia ou sintomatologia da doença; (2) inibição da doença; por exemplo, inibir a doença, patologia ou distúrbio num indivíduo que padeça ou que apresente a patologia ou sintomatologia da doença, patologia ou distúrbio; e (3) melhoria da doença; por exemplo, melhorar a doença, patologia ou distúrbio num paciente que padeça ou que apresente a patologia ou sintomatologia da doença, patologia ou distúrbio (isto é, inverter a patologia e/ou a sintomatologia) , tal como diminuir a gravidade da doença.

No caso de serem utilizados como farmacêuticos, os compostos da invenção podem ser administrados sob a forma de composições farmacêuticas, as quais são uma combinação de um composto da invenção e pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável. Estas composições podem ser preparadas de um modo bem conhecido na especialidade farmacêutica e podem ser administradas por diversas vias, em função de se pretender um tratamento local ou sistémico e da área que se pretende tratar. A administração pode ser por via tópica (incluindo oftálmica e às membranas mucosas, incluindo a administração por via intranasal, vaginal e rectal), pulmonar (v.g., por inalação ou insuflação de pó e ou aerossóis, incluindo por meio de um nebulizador; intratraqueal, intranasal, epidérmica e transdérmica) , ocular, oral ou parentérica. Os métodos para a administração por via ocular podem compreender a administração por via tópica (gotas para olhos), injecção ou introdução subconjunctival, periocular ou intravitreal 23 por cateter com balão ou inserções cirúrgicas oftálmicas colocadas no saco conjunctival. A administração por via parentérica compreende injecção ou infusão por via intravenosa, intra-arterial, subcutânea, intraperitoneal ou intramuscular; ou intracraniana, v.g., intra-tecal ou intraventricular. A administração por via parentérica pode assumir a forma de uma dose de bolus individual ou pode ser, por exemplo, por meio de bomba de perfusão continua. As composições e formulações farmacêuticas para administração por via tópica podem compreender adesivos transdérmicos, unguentos, loções, cremes, geles, gotas, supositórios, pulverizações, líquidos e pós. Poderão ser necessários ou desejáveis veículos farmacêuticos convencionais, bases aquosas, para pós ou oleosas, espessantes e semelhantes. A presente invenção também compreende composições farmacêuticas que contenham, como ingrediente activo, um ou vários dos compostos da invenção em combinação com um ou vários veículos farmaceuticamente aceitáveis. Na preparação das composições da invenção, o ingrediente activo é tipicamente misturado com um excipiente, diluído por um excipiente ou envolvido num tal veículo sob a forma de, por exemplo, uma cápsula, uma saqueta, um papel ou outro recipiente. No caso de o excipiente servir como diluente, então este pode ser um material sólido, semi-sólido ou líquido, que actua como um veículo, carga ou meio para o ingrediente activo. Assim, as composições podem ser apresentadas sob a forma de comprimidos, pílulas, pós, trociscos, saquetas, aglomerados, elixires, suspensões, emulsões, soluções, xaropes, aerossóis (como um sólido ou num meio líquido), unguentos que contenham, por exemplo, 24 até 10% em peso do composto activo, cápsulas de gelatina mole ou dura, supositórios, soluções injectáveis estéreis e pós embalados estéreis.

Na preparação da formulação, o composto activo pode ser moído para proporcionar o tamanho de partícula adequado antes da sua combinação com os outros ingredientes. No caso do composto activo ser substancialmente insolúvel, então pode ser moído até um tamanho de partícula inferior a malha 200. No caso do composto activo ser substancialmente solúvel em água, então o tamanho de partícula pode ser ajustado por moagem para proporcionar uma distribuição praticamente uniforme na formulação, v.g., cerca de malha 40 .

Os compostos da invenção podem ser moídos utilizando procedimentos de moagem conhecidos, tais como moagem a húmido, para se obter um tamanho de partícula adequado para a formação de comprimidos e para outros tipos de formulação. As preparações finamente divididas (nanoparticulados) dos compostos da invenção podem ser preparadas por processos conhecidos na especialidade, por exemplo, veja-se o pedido de patente de invenção internacional n° WO 2002/000196.

Como alguns exemplos de excipientes adequados refere-se lactose, dextrose, sacarose, sorbitol, manitol, amidos, goma de acácia, fosfato de cálcio, alginatos, goma adragante, gelatina, silicato de cálcio, celulose microcristalina, polivinilpirrolidona, celulose, água, xarope e metil-celulose. As formulações podem incluir adicionalmente: agentes lubrificantes, tais como talco, estearato de magnésio e óleo mineral; agentes humectantes; agentes emulsionantes e de suspensão; agentes conservantes, 25 tais como metil-benzoatos e propil-hidroxi-benzoatos; agentes humectantes e agentes edulcorantes. As composições da invenção podem ser formuladas de modo a proporcionarem uma libertação rápida, prolongada ou retardada do ingrediente activo, após a administração ao paciente, utilizando procedimentos conhecidos na especialidade.

As composições podem ser formuladas numa forma de dosagem unitária, em que cada dosagem contém entre cerca de 5 e cerca de 100 mg, mais tipicamente entre cerca de 10 e cerca de 30 mg de ingrediente activo. A expressão "forma de dosagem unitária" designa unidades fisicamente discretas que são adequadas como dosagens unitárias para sujeitos humanos e para outros mamíferos, em que cada unidade contém uma quantidade predeterminada de material activo que é calculado para produzir o efeito terapêutico desejado, em conjunto com um excipiente farmaceuticamente aceitável. 0 composto activo pode ser eficaz num intervalo de dosagem amplo e é normalmente administrado numa quantidade farmaceuticamente eficaz. No entanto, faz-se observar que a quantidade de compostos realmente administrada irá normalmente ser determinada pelo médico assistente, em conformidade com as circunstâncias de relevantes, incluindo a patologia que se pretende tratar, a via de administração seleccionada, o composto actualmente administrado, a idade, peso e a resposta do paciente individual, a gravidade dos sintomas do paciente e semelhantes.

Para a preparação de composições sólidas, tais como comprimidos, o ingrediente activo principal é misturado com um excipiente farmacêutico para formar uma composição em pré-formulação sólida que contém uma mistura homogénea de um composto da presente invenção. 26

Quando se refere a estas composições em pré-formulação como homogéneas, o ingrediente activo é tipicamente disperso uniformemente na composição, de modo que a composição possa ser subdividida facilmente em formas de dosagem unitárias igualmente eficazes, tais como comprimidos, pílulas e cápsulas. Esta pré-formulação sólida é então subdividida em formas de dosagem unitárias do tipo descrito antes, as quais contêm, por exemplo, entre 0,1 e cerca de 500 mg do ingrediente activo da presente invenção.

Os comprimidos ou pílulas da presente invenção podem ser vestidos ou de qualquer outro modo preparados em compostos para proporcionar uma forma de dosagem que apresente a vantagem de uma acção prolongada. Por exemplo, o comprimido ou pílula pode compreender um componente de dosagem interna e um componente de dosagem externa, em que este último se encontra sob a forma de um invólucro sobre o primeiro. Os dois componentes podem ser separados por uma camada entérica que serve para resistir à degradação no estômago e para permitir que o componente interno passe intacto para o duodeno ou que apresente uma libertação retardada. É possível utilizar diversos materiais para tais camadas ou revestimentos entéricos, em que tais materiais compreendem diversos ácidos poliméricos e misturas de ácidos poliméricos com materiais tais como goma-laca, álcool cetílico e acetato de celulose.

As formas liquidas em que os compostos e composições da presente invenção podem ser incorporados para administração por via oral ou por injecção compreendem soluções aquosas, xaropes adequadamente edulcorados, suspensões aquosas ou oleosas e emulsões edulcoradas com óleos comestíveis, tais como óleo de sementes de algodão, 27 óleo de sésamo, óleo de coco ou óleo de amendoim, bem como elixires e veículos farmacêuticos semelhantes.

As composições para inalação ou insuflação compreendem soluções e suspensões em solventes aquosos ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis, ou suas misturas, e pós. As composições liquidas ou sólidas podem conter excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados, conforme descrito antes. De acordo com algumas variantes, as composições são administradas por via respiratória oral ou nasal para proporcionar um efeito local ou sistémico. As composições podem ser nebulizadas por meio da utilização de gases inertes. As soluções nebulizadas podem ser respiradas directamente a partir do dispositivo de nebulização ou então o dispositivo de nebulização pode ser ligado a máscaras para a cara ou a uma máquina de respiração intermitente de pressão positiva. As composições em solução, suspensão ou pó podem ser administradas por via oral ou nasal a partir de dispositivos que administram a formulação de um modo adequado. A quantidade de composto ou de composição administrada a um paciente irá variar em função do que se pretende administrar, do propósito da administração, tal como profilaxia ou terapia, do estado geral do paciente, do modo de administração e semelhantes. Para aplicações terapêuticas, as composições podem ser administradas a uma paciente que já padeça da doença numa quantidade suficiente para a cura ou interromper pelo menos parcialmente os sintomas da doença e das suas complicações. As doses eficazes irão depender do estado da doença que se pretende tratar bem como do julgamento do médico assistente em função de factores tais como a gravidade da doença, da 28 idade, do peso e do estado geral de saúde do paciente, e outros que tais.

As composições administradas a um paciente podem ser apresentadas sob a forma das composições farmacêuticas descritas antes. Estas composições podem ser esterilizadas por técnicas de esterilização convencionais ou podem ser submetidas a filtração estéril. As soluções aquosas podem ser embaladas para utilização tal qual, ou liofilizadas, sendo a preparação liofilizada combinada com um veículo aquoso estéril antes da administração. 0 valor de pH das preparações do composto irá estar tipicamente compreendido entre 3 e 11, mais preferencialmente entre 5 e 9 e ainda mais preferencialmente entre 7 e 8. Faz-se observar que a utilização de terminados dos excipientes, veículos ou estabilizadores referidos antes irá resultar na formação de sais farmacêuticos. A dosagem terapêutica dos compostos da presente invenção pode variar em função, por exemplo, da utilização particular para o qual o tratamento é feito, do modo de administração do composto, da saúde e do estado geral do paciente e do julgamento do médico assistente. A proporção ou concentração de um composto da invenção numa composição farmacêutica pode variar em função de diversos factores, incluindo a dosagem, as caracteristicas químicas (v.g., hidrofobicidade) e da via de administração. Por exemplo, os compostos da invenção podem ser fornecidos numa solução aquosa de tampão fisiológica que contenha cerca de 0,1% a cerca de 10% p/v do composto para administração por via parentérica. Alguns intervalos típicos de doses estão compreendidos entre cerca de 1 pg/kg e cerca de 1 g/kg de peso corporal por dia. De acordo com algumas variantes, o 29 intervalo de dose está compreendido entre cerca de 0,01 mg/kg e cerca de 100 mg/kg de peso corporal por dia. a dosagem irá provavelmente depender de variáveis, tais como o tipo e a extensão da progressão da doença ou do distúrbio, do estado geral de saúde global do paciente particular, da eficácia biológica relativa do composto seleccionado, da formulação do excipiente e da via de administração. As doses eficazes podem ser extrapoladas a partir de curvas dose-resposta provenientes de sistemas in vitro ou de sistemas de teste em modelos com animais.

Os compostos da invenção também podem ser formulados em combinação com um ou mais ingredientes activos suplementares, os quais podem incluir qualquer agente farmacêutico, tais como agentes antivirais, vacinas, anticorpos, potenciadores imunes, supressores imunes, agentes anti-inflamatórios, analgésicos e fármacos para o tratamento de diabetes ou de obesidade, hiperglicemia, hipertensão, hiperlipidemia e semelhantes. Como agentes para o tratamento de distúrbios metabólicos com os quais o composto da invenção pode ser combinado refere-se, mas sem que isso constitua qualquer limitação, análogos de amilina, miméticos de incretina, inibidores da enzima de degradação de incretina dipeptidil-peptidase-IV, agonistas do receptor activado pelo proliferador de peroxisoma (PPAR)-a e PPAR-g e inibidores do receptor canabinóide CB1. A invenção será descrita mais minuciosamente através dos exemplos específicos. Os exemplos seguintes são apresentados para propósitos ilustrativos, não pretendendo limitar de qualquer modo o âmbito da invenção. Será facilmente reconhecido pelos especialistas na matéria que é 30 possível alterar ou modificar diversos parâmetros não críticos para se obter essencialmente os mesmos resultados.

EXEMPLOS

Purificou-se todos os compostos por cromatografia em coluna rápida ou por cromatografia líquida de fase inversa utilizando um sistema 'Waters FractionLynx LC-MS' com fraccionamento de massa. Coluna: 'Waters XBridge' Ci8, 5 pm, 19 x 100 mm; fase móvel A: 0,15% de NH4OH em água e fase móvel B: 0,15% de NH4OH em acetonitrilo; o caudal foi de 30 mL/m, o gradiente de separação foi optimizado para cada composto utilizando o protocolo de optimização do método específico para o composto, conforme descrito na literatura ["Preparative LC-MS Purification: Improved

Compound Specific Method Optimization", K. Blom, B. Glass, R. Sparks, A. Combs, J. Combi. Chem., 2004, 6, 874-883].

Tipicamente, o produto separado é então submetido a análise por LC/MS para verificação da pureza sob as condições seguintes: instrumento; 'Agilent 1100 series', LC/MSD, coluna: 'Waters Sunfire™' Cis 5 pm, 2,1 x 5,0 mm, tampões: fase móvel A: 0, 025% de TFA em água e fase móvel B: 0,025% de TFA em acetonitrilo; gradiente de 2% a 80% de tampão B durante 3 minutos com um caudal de 1,5 mL/minuto.

Exemplo 1 5-{3-Flúor-4-[(5S)-2-(cis-4-hidroxi-ciclo-hexil)-l-oxo-2,7-diaza-espiro[4.5]dec-7-il]-fenil}-N-metilpiridina-2-carboxamlda 31

*ÓH

Passo 1: l-benzil-3-etil-piperidina-l,3-dicarboxilato

Adicionou-se lentamente cloroformato de benzilo (Aldrich, n° cat.: 119938) (191 mL, 1,34 mol) a uma mistura arrefecida (a 0 °C) de piperidina-3-carboxilato de etilo (Aldrich, n° cat.: 194360) (200 g, 1,27 mol) e trietilamina (266 mL, 1,91 mol) em cloreto de metileno (1000 mL). Deixou-se aquecer gradualmente a mistura de reacção até à temperatura ambiente e agitou-se durante 3 horas.

Extinguiu-se a mistura de reacção por adição de uma solução aquosa de HC1 1 N e extraiu-se o produto diversas vezes com cloreto de metileno. Lavou-se os extractos combinados com água, com uma solução aquosa saturada de NaHCCh, com água, com salmoura, secou-se sobre MgS04, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida para se obter o produto desejado com o aspecto de um óleo (359,8 g, 97%). LC/MS 292,2 (Μ + H)+.

Passo 2: l-benzil-3-etil-3- (3-metilbut-l-eno-l-il)-piperidina-1, 3-dicarboxilato 32

A uma solução de l-benzil-3-etil-piperidina-l, 3-dicarboxilato (120,0 g, 0,412 mol) em THF (400 mL) , arrefecida a -78 °C, adicionou-se, gota a gota, 270 mL de uma solução de bis(trimetilsilil)-amida de sódio (solução 1 M em THF da Aldrich, n° cat.: 245585), ao longo de 2 horas. Agitou-se a mistura a -78 °C durante mais 1 hora. Do adicionou-se lentamente l-bromo-3-metilbut-2-eno (Aldrich n° cat.: 249904) (71 mL, 0,62 mol) ao longo de 1 hora.

Agitou-se a mistura a -78 °C durante 30 minutos, deixou-se aquecer até à temperatura ambiente e agitou-se durante mais 3 horas. Extinguiu-se a mistura de reacção com uma solução aquosa de HC1 1 N. Removeu-se a maior parte de THF sob pressão reduzida. Extraiu-se o resíduo com acetato de etilo. Lavou-se os extractos combinados com uma solução aquosa saturada de NaHCCp e com salmoura, depois secou-se sobre MgSCq, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo impuro por cromatografia em coluna rápida através numa coluna de gel de sílica, com 10% a 20% de acetato de etilo em hexano, para se obter o produto desejado (140 g, 94%). LC/MS: m/e = 332,2 (M+H)+.

Passo 3: l-benzil-3-etil-3- (2-oxoetil)-piperidina-1, 3- dicarboxilato

33

Fez-se passar ozono através de uma solução de 1-benzil-3-etil-3-(3-metilbut-2-eno-l-il)-piperidina-1,3-dicarboxilato (35,2 g, 0,0979 mol) em cloreto de metileno (800 mL) a -78 °C, até a coloração da solução ficar azul. Passou-se então uma corrente de azoto através da mistura de reacção até a coloração azul desaparecer. Adicionou-se dimetilsulfureto (Aldrich, n° cat.: 274380) (14 mL, 0,19 mol) e trietilamina (26,5 mL, 0,19 mol) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente de um dia para o outro. Removeu-se o solvente volátil sob pressão reduzida e purificou-se por cromatografia rápida através numa coluna de gel de sílica, com 20% de acetato de etilo em hexano, para se obter o produto desejado com um rendimento quantitativo. LC/MS 334,2 (M + H)+.

Passo 4: 2-(cis-4-hidroxiciclo-hexil)-l-oxo-2, 7-diaza- espiro[4.5]decano-7-carboxilato de benzilo

A uma suspensão de cloridrato de cis-4-aminociclo-hexanol (comercializado por Sijia Medchem Lab, China) (13,8 g, 0,0910 mol) e l-benzil-3-etil-3-(2-oxoetil)-piperidina-1,3-dicarboxilato (31,0 g, 0,0930 mol) em 1,2-dicloroetano (250 mL) adicionou-se trietilamina (23,3 mL, 0,167 mol) à temperatura ambiente. Agitou-se a mistura a 40 °C de um dia para o outro. Adicionou-se boro-hidreto de triacetoxi (Aldrich, n° cat.: 316393) (49,3 g, 0,232 mol) à mistura anterior e agitou-se à temperatura ambiente durante 1 hora. Os dados de LC/MS indicam que o material de partida foi 34 consumido, observando-se um produto intermediário com m/e: 433.2 (M+H)+ .

Aqueceu-se então a mistura a 80 °C durante 4 horas ou até a análise por LC/MS indicar o consumo do intermediário amina (m/e: 433,2). Extinguiu-se a mistura de reacção com uma solução aquosa de NaHCCp. Lavou-se a camada orgânica com salmoura, secou-se sobre MgS04, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Secou-se o material impuro sob pressão reduzida de um dia para o outro para se obter um óleo viscoso incolor (26,9 g, 66,8%). LC/MS m/e 387.2 (M+H)+ .

Passo 5: (5S)-2- (cis-4-hidroxiciclo-hexil)-l-oxo-2, 7-diaza- espiro[4.5]decano-7-carboxilato de benzilo

Purificou-se a mistura racémica obtida no passo anterior (26,9 g) num sistema de preparação 'Agilent 1100 series', utilizando uma coluna Chiralcel OD-H (3,0 x 25 cm, tamanho de partícula de 5 mícron, Chiral Technologies), efectuando a eluição com 30% de etanol/hexano (isocrático, 22 mL/minuto). A carga da coluna foi de aproximadamente 150 mg/injecção e a recolha de picos foi desencadeada por absorvência UV a 220 nm. A eluição do pico 1 deu-se aproximadamente aos 8,5 minutos e a eluição do pico 2 deu-se aproximadamente aos 9,8 minutos. Combinou-se as fracções do pico 2 e concentrou-se para proporcionar o produto desejado (11,9 g) com o aspecto de um sólido branco espumoso. Determinou-se a pureza óptica do material reunido 35 proveniente do pico 2 utilizando um sistema analítico 'Agilent 1100 series' equipado com uma coluna 'Chiralcel OD-H' (4, 6 x 250 mm, tamanho de partícula de 5 mícron, Chiral Technologies) e efectuando a eluição com 30% de etanol/hexano (isocrático, 0,8 mL/minuto) . LC/MS m/e 387,2 (M+H)+. Estabeleceu-se a estereoquímica absoluta do pico 2 com base na determinação da estrutura de cristal único por raio-X de análogos próximos: (5S)-2-(trans-4-hidroxiciclo-hexil)-1-oxo-2,7-diaza-espiro[4.5]decano-7-carboxilato de benzilo e (5S)-2-(cis-4-{[terc-butil(dimetil)-silil]-oxi}-ciclo-hexil)-2,7-diaza-espiro[4.5]decano-l-ona, preparados conforme descrito nos passos 5a-c.

Passo 5a: 2-(cis-4-{[terc-butil-(dimetil)-silil]-oxi}- ciclo-hexil)-1-oxo-2, 7-diaza-espiro[4.5]decano-7-carboxilato de benzilo

A uma solução agitada de 2-(cis-4-hidroxiciclo-hexil)-l-oxo-2,7-diaza-espiro[4.5]decano-7-carboxilato de benzilo (60,00 g, 155,2 mmol) em N,N-dimetilformamida anidra (160 mL), à temperatura ambiente, adicionou-se lH-imidazole (32,0 g, 466 mmol) e cloreto de terc-butildimetilsililo (36,2 g, 233 mmol). Agitou-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 3 horas, extinguiu-se com água (150 mL) e extraiu-se com EtOAc (3 x 150 mL) . Lavou-se as camadas orgânicas combinadas com salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida para se obter o produto impuro (84 g). Obteve-se o 36 produto puro (55,4 g) por recristalização do produto impuro a partir de heptano. Concentrou-se as águas-mãe e submeteu-se a purificação por cromatografia rápida numa coluna de gel de sílica, efectuando a eluição com AcOEt/hexano, para se obter mais 14,4 g do produto com um rendimento total de 89,7%.

Passo 5b: 2- (cis-4-{[terc-butil-(dimetil)-silil]-oxi} ciclo-hexil)-2, 7-diaza-espiro[4.5]decano-1-ona

A uma solução de 2-(cis-4-{[terc-butil-(dimetil)-silil]-oxi}-ciclo-hexil)-l-oxo-2,7-diaza-espiro[4.5]decano-7-carboxilato de benzilo (18,0 g, 35,9 mmol) em metanol (150 mL) adicionou-se paládio a 10% sobre carvão (Aldrich, n° cat. : 520888) (1, 8 g, 1,5 mmol), sob uma atmosfera de azoto. Submeteu-se a mistura de reacção a hidrogenação e agitou-se a 50 psi durante 20 horas. Filtrou-se a mistura de reacção através de uma camada de Celite e depois lavou-se com metanol (300 mL). Concentrou-se o filtrado sob pressão reduzida para se obter o produto desejado com o aspecto de um sólido branco e num rendimento quantitativo.

Passo 5c: (5S) -2-(cis-4-{[terc-butil-(dimetil)-silil]-oxi} - ciclo-hexil)-2, 7-diaza-espiro[4.5]decano-1-ona \

n 37

Dissolveu-se 2-(cis-4-{[terc-butil-(dimetil)-silil]-oxi}-ciclo-hexil)-2,7-diaza-espiro[4.5]decano-l-ona (7,00 g, 19,1 mmol) em acetonitrilo (50 mL) e metanol (7 mL), à temperatura ambiente. Depois de se dissolver completamente o material de partida, aqueceu-se a solução até 70°C. A esta solução adicionou-se lentamente uma solução de ácido (2R)-hidroxi-(fenil)-acético (1,45 g, 9,55 mmol) em acetonitrilo (20 mL), a 65 °C-70 °C. Após a adição, aqueceu-se a solução a 74 °C durante 10 minutos e deixou-se arrefecer lentamente até à temperatura ambiente de um dia para o outro. Recolheu-se o cristal formado por filtração para se obter 3,38 g do produto desejado sob a forma do sal do ácido (2R)-hidroxi-(fenil)-acético. Dissolveu-se o sal resultante (3,38 g) em água (50 mL) e ajustou-se o valor de pH para 12 com 40 mL de uma solução aquosa de K2CO3 (2,0 M). Extraiu-se a mistura com diclorometano (3 vezes). Secou-se as camadas orgânicas combinadas sobre sulfato de magnésio, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida para se obter o produto desejado sob a forma de base livre (sólido cristalino incolor) (2,37 g). Estabeleceu-se a estereoquímica absoluta deste composto por determinação da estrutura cristalina única por raio-X do sal do ácido (2R)-hidroxi-(fenil)-acético de (5S)-2-(cis-4-{[terc-butil-(dimetil)-silil]-oxi}-ciclo-hexil)-2,7-diaza-espiro[4.5]-decano-l-ona.

Passo 6: (5S)-2-(cis-4-hidroxiciclo-hexil)-2, 7-diaza- espiro [4.5]decano-1-ona

38

Dissolveu-se (5S)-2-(cis-4-hidroxiciclo-hexil)-1-oxo-2,7-diaza-espiro[4.5]decano-7-carboxilato de benzilo preparado no passo 5 (0,266 g, 0,000688 mol) em metanol (5,0 mL) e agitou-se em ambiente de hidrogénio na presença de paládio a 10% sobre carvão (Aldrich, n° cat.: 520888) (20,0 mg), à temperatura ambiente durante 2 horas. Filtrou-se a mistura de reacção e removeu-se os solventes voláteis sob pressão reduzida para se obter o produto desejado com um rendimento quantitativo. LC/MS m/e 253,2 (M+H)+.

Passo 7: (5S)-7-(4-bromo-2-fluorofenil)-2-(cis-4-hidroxi- ciclo-hexil)-2,7-diaza-espiro[4.5]decano-1-ona

8r

Aqueceu-se a 100 °C uma mistura de (5S)-2-(cis-4-hidroxiciclo-hexil)-2,7-diaza-espiro[4.5]decano-1-ona (1,04 g, 0,00412 mol), 4-bromo-2-flúor-l-iodobenzeno (Aldrich, n° cat.: 283304) (1,85 g, 0,00615 mol), iodeto de cobre (I) (Aldrich, n° cat.: 215554) (0,122 g, 0,000640 mol), fosfato de potássio (2,63 g, 0,0124 mol) e 1,2-etanodiol (0,48 mL, 0,0086 mol) em 1-butanol (3,90 mL) , sob uma atmosfera de azoto durante 2 dias. Extinguiu-se a reacção com água e extraiu-se com éter. Combinou-se as camadas orgânicas, lavou-se com água e com salmoura, secou-se sobre Na2S04 e filtrou-se. Evaporou-se o filtrado sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna rápida numa coluna de gel de sílica, efectuando a eluição com 0% a 39 5% de metanol em DCM, para se obter o produto desejado (950 mg, 54,2%). LC/MS m/e 425,1/427,0 (M+H)+.

Passo 8: 5-3-flúor-4-[(5S)-2-(cis-4-hidroxiciclo-hexil)-l-oxo-2, 7-diaza-espiro[4.5]dec-7-il]-fenil-N-metilpiridina-2-carboxamida

Adicionou-se fosfato de potássio (637 mg, 0,00300 mol) em água (3,00 mL) a uma mistura de (5S)-7-(4-bromo-2-fluorofenil)-2-(cis-4-hidroxiciclohexil)-2,7-diaza-espiro-[ 4.5]decano-l-ona (425 mg, 0, 00100 mol), N-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolano-2-il)-piridina-2-carboxamida (Frontier Inc., n° cat.: M10074) (393 mg, 0,00150 mol) e tetraquis-(trifenilfosfina)-paládio (Aldrich, n° cat.: 216666) (35 mg, 0,000030 mol) em 1,4- dioxano (3,00 mL) . Aqueceu-se a mistura resultante a 120°C durante 24 horas. Diluiu-se a mistura com acetato de etilo e lavou-se com água e com salmoura. Secou-se a camada orgânica sobre Na2SC>4, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna rápida numa coluna de gel de sílica, efectuando a eluição com 5% de metanol em DCM, para se obter o produto desejado (285 mg, 59,3 %) . LC/MS m/e 481,2 (M+H)+. TH -NMR (400 MHz , DMSO-de) : 8,89 (1H, dd, J = 2,5, 0,6 Hz ) , 8, 76 (1H, q, J = 4, r 7 Hz ), 8, 22 (1H, dd , J = = 8,4, 2,5 Hz ) , 8, 03 (1H, dd, J = 8 ,4, 0 ,6 Ης :) , 7,65 (1H, dd , J = 14,2, 2 ,1 Hz) , 7,56 (1H , dd, J = 8,5, 2,1 Hz), 7 , 13 ( 1H, t , J = 8 , 5 Hz) , 4,37 d H, d, J = 3,1 Hz), 3, 78 (1H, m) , 3,71 (1H, m) , 3,21- -3,38 (3H, m) , 3,07 (1H, d, J = 11, ,4 Hz) , 2,81 (3H , d, J = 4,7 Hz) , 2, 64- -2, 74 (2H, m) r 2,18- 2,26 (1H, m), r 1 , 60- 1,91 (8H , m) , 1,39- 1,51 (3H, m) , 1 , 21-1 ,30 (2H, m). 40

Exemplo 2 5-{3-Flúor-4-[(5S)-2-(cis-4-hidroxiciclo-hexil)-l-oxo-2,7-diaza-espiro[4.5]dec-7-il]-fenil}-N,N-dimetilpiridina-2-carboxamida

Passo 1: 5-bromo-N,N-dimetilpiridina-l-carboxamida

Adicionou-se cloreto de oxalilo (20,0 mL, 0,236 mol) a uma solução de ácido 5-bromopiridina-2-carboxílico (Alfa Aesar, n° cat.: B25675) (10,1 g, 0,0500 mol) em cloreto de metileno (60 mL), à temperatura ambiente, e depois acrescentou-se 5 gotas de DMF. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 2 horas. Evaporou-se os materiais voláteis sob pressão reduzida. Evaporou-se azeotropicamente o resíduo com tolueno, duas vezes. Dissolveu-se então o resíduo em DCM (30 mL) e depois adicionou-se 30 mL de dimetilamina numa solução de THF (2,0 M) (Aldrich, n° cat.: 391956) e de base de Hunig (20,0 mL) (Aldrich, n° cat.: 496219). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 3 horas. Diluiu-se a mistura de reacção com DCM (100 mL) e lavou-se com água, com HC1 1 N e com salmoura. Secou-se a fase orgânica sobre Na2S04, 41 filtrou-se e concentrou-se para se obter o produto desejado (10,5 g, 91,7%).

Passo 2: N,N-dimetil-5-(4, 4, 5, 5-tetrametil-l, 3, 2-dioxa- borolano-2-il)-piridina-2-carboxamida

O

Durante 20 horas, aqueceu-se a 120 °C uma mistura de 5-bromo-N,N-dimetilpiridina-2-carboxamida (5,73 g, 0,0250 mol), 4,4,5,5,4',4',5',5'-octametil-[2,2']bi[[l,3,2]-dioxa-borolanilo] (6,98 g, 0,0275 mol) (Aldrich, n° cat.: 473294), [1,1'-bis(difenilfosfino)-ferroceno]-dicloro- paládio (II) complexado com diclorometano (a 1:1) (0,6 g, 0,0007 mol) (Aldrich, n° cat.: 379670), l,l'-bis- (difenilfosfino)-ferroceno (0,4 g, 0,8 mmol) (Aldrich, n° cat.: 177261) e acetato de potássio (7,36 g, 0,0750 mol) em 1,4-dioxano (100 mL). Depois de se arrefecer, concentrou-se a mistura, diluiu-se com acetato de etilo, lavou-se com uma solução saturada de NH4C1, com água e com salmoura e secou-se sobre Na2S04. Após filtração, concentrou-se o filtrado e purificou-se novamente o material impuro numa coluna de gel de silica, efectuando a eluição com acetato de etilo/hexano, para se obter o produto desejado (4,7 g, 68%) .

Passo 3: 5-{3-flúor-4-[(5S)-2-(cis-4-hidroxiciclo-hexil)-1-oxo-1, 7-diaza-espiro[4.5]dec-7-il]-fenil}-N, N-dimetil-piridina-2-carboxamida 42

Preparou-se este composto utilizando procedimentos análogos aos descritos para a síntese do exemplo 1, passo 8, a partir de N,N-dimetil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano-2-il)-piridine-2-carboxamida e (5S)—7—(4 — bromo-2-fluorofenil)-2-(cis-4-hidroxiciclo-hexil)-2,7-diaza-espiro[4.5]decano-l-ona. LC/MS m/e 495,3 (M+H)+. 1H- NMR (400 MHz, DMS0- -d6 ) : 8,86 (1H, d, J 1, 7 Hz ), 8, 15 (1H dd r J = 8,1, 2,3 Hz) , 7,51- 7,65 (3H, m) , 7, 12 (1H, t, J 8, 9 Hz) , 4,37 (1H, d, J = 3, , 1 Hz) , 3, 78 (1H, . m ), 3, 71 (1H m) f 3,22- -3,38 (3H, m) , 3,06 (1H, < d, J = 11, 7 Hz ), 3, 00 (3H s) r 2,97 (3H, s) , 2 ,64-2,7 4 (2H , m) r 2,18 -2, 27 (: 1H, m) 1, 60 -1, 9] - (8H, m) , 1, 39-1,51 (3H, m) , 1, 2 2 — 1, ,30 (2H, m) φ

Exemplo 3 N-Etil-5-{3-flúor-4-[(5S)-2-(cis-4-hidroxiciclo-hexil)-1-oxo-2,7-diaza-espiro[4.5]dec-7-il]-fenil}-piridina-2-carboxamida

Passo 1: N-etil-5- (4, 4, 5, 5-tetrametil-l,3, 2-dioxaborolano-2-il)-piridina-2-carboxamida

43

Preparou-se este composto utilizando procedimentos análogos aos descritos para a síntese do exemplo 2, passos 1 e 2, a partir de ácido 5-bromopiridina-2-carboxílico.

Passo 2: N-etll-5-{3-flúor-4-[(5S)-2-(cis-4-hidroxiciclo-hexil)-1-oxo-2, 7-diaza-espiro[4.5]dec-7-il]-fenil}-piridina-l-carboxamida

Preparou-se este composto utilizando procedimentos análogos aos descritos para a síntese do exemplo 1, passo 8, a partir de N-etil-5-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxa-borolano-2-il)-piridina-2-carboxamida e (5S)-7-(4-bromo-2-fluorofenil)-2-(cis-4-hidroxiciclohexil)-2,7-diaza-espiro [ 4 . 5 ] decano-l-ona . LC/MS m/e 495,3 (M+H)+.

Exemplo 4 5-{3-Cloro-4-[(5S)-2-(cis-4-hidroxiciclo-hexil)-l-oxo-2,7-diaza-espiro[4.5]dec-7-il]-fenil}-N-etilpiridina-2-carboxamida

Passo 1: (5S)-7-(4-bromo-2-clorofenil)-2-(cis-4-{[terc- butil - (dimetil)-silil]-oxi}-ciclo-hexil)-2, 7-diaza-espiro [4.5]decano-1-ona 44

Preparou-se uma mistura de (5S)-2-(cis-4-{[terc-butil-(dimetil)-silil]-oxi}-ciclo-hexil)-2,7-diaza-espiro[4.5]-decano-l-ona (0,282 g, 0,000769 mol), 4-bromo-2-cloro-l-iodobenzeno (0,293 g, 0,000922 mol) (Lancaster, n° cat.: 19245), iodeto de cobre (1' ) (0,015 g* 0,000077 mol), fosfato de potássio (0, 490 g, 0,00231 mol) e 1,2-etanodiol (0,0857 mL, 0,00154 mol) em 1- -butanol (0, 75 mL) e aqueceu- se a 100 °C, sob uma atmosfera de azoto, durante 2 dias. Filtrou-se a mistura de reacção, concentrou-se sob pressão reduzida e purificou-se o resíduo por cromatografia rápida numa coluna de gel de sílica (efectuando a eluição com 0% a 50% de acetato de etilo em hexano) para se obter o produto desejado.

Passo 2: 5-{3-cloro~4-[ (5S)-2-(cis-4-hídroxiciclo-hexil)-1-oxo-2, 7-diaza-espiro[4.5]dec-7-il]-N-etilpiridina-2-carboxamida A uma mistura agitada de (5S)-7-(4-bromo-2-cloro-fenil)-2-(cis-4-{[terc-butil-(dimetil)-silil]-oxi}-ciclo-hexil)-2,7-diaza-espiro[4.5]decano-l-ona (20 mg, 0,00004 mol), complexo de [1,1'-bis-(difenilfosfino)-ferroceno]-dicloro-paládio (II) com diclorometano (a 1:1) (2,0 mg), tetraquis-(trifenilfosfina)-paládio (1,0 mg) e carbonato de potássio (14,9 mg, 0,000108 mol) em N,N-dimetilformamida anidra (1 mL) adicionou-se N-etil-5-(4,4,5,5-tetrametil- 45

1,3,2-dioxaborolano-2-il)-piridina-2-carboxamida (14,5 mg, 0,054 mmol). Aqueceu-se a mistura de reacção resultante a 150 °C, agitou-se de um dia para o outro, depois removeu-se o grupo protector TBS por meio da adição de ácido fluoro-silícico 1,7 M em água (0,10 mL) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente de um dia para o outro. Purificou-se então directamente a mistura de reacção por RP-HPLC para se obter o produto desejado. LC/MS m/e 511,2 (M+H)+. 1H-NMR (400 MHz, DMSO- -d6) : 8, 92 (1H, d, J = 2, 3 Hz) , co > co 4 (1H , t, J = 5,9 Hz ;), 8, 26 (1H, dd , J = 8,2, 2,3 Hz ), 8 , 06 (1H, d, J = 8, 2 Hz) , 7, 89 (1H, d , J = 2 , 2 Hz) , 7, 74 (1H, dd, J = 8,5, 2,2 Hz) , 7,30 (1H, t, J = 8 ,5 Hz) , 4, 39 (1H , d, J = 3,1 Hz) , 3,80 (1H, m) , 3, 72 (1H, m) , 3,24 -3, 44 ( :5h, m) , 3,01 \—1 d, J = 11, 4 Hz) r 2,63-2, 74 (2 H , m) , 2 ,40- 2,53 (1H, m) , \—1 -1, 91 (8H, m) , 1, 41- 1,53 (3H, m) , 1, 20-1 .,32 (2H, m) , 1, 13 (3H, t, J = 7,2 2 H z) .

Exemplo 5

Dados de comparação

Concluiu-se inesperadamente que os compostos da invenção exibem uma inibição favoravelmente reduzida da actividade dos canais de iões (conforme determinado por meio de um ensaio electrofisiológico hERG) em comparação com compostos semelhantes, (5S)-7-(2,4-difluorofenil)-2-(trans-4-hidroxiciclo-hexil)-2,7-diaza-espiro[4.5]decano-lona (exemplo 1 de comparação 1) e 3-flúor-4-[2-(trans-4-hidroxiciclo-hexil)-l-oxo-2,7-diaza-espiro[4.5]dec-7-il]-benzonitrilo (exemplo 2 de comparação); ver o documento WO 2006/053024. No quadro 1 é apresentada a comparação dos dados seguintes para a potência e para a inibição da 46 actividade do canal de iões. Ao passo que os compostos da invenção (representados pelos exemplos 1 e 2) são igualmente potentes em relação aos compostos de comparação, os compostos da invenção inibiram a actividade do canal de iões 3 a 14 vezes menos do que os compostos de comparação. Os compostos dos exemplos 3 e 4 apresentaram propriedades semelhantes.

Quadro 1

Composto CI50 (nM) CI50 (nM) hERG (electrofisiológico) h-HSDl h-PBMC % inibição a @ 10 μΜ Exemplo 1 <20 <20 <10 Exemplo 2 <20 <20 <18 Exemplo 1 de <20 <20 >74 comparação Exemplo 2 de <20 <20 >45 comparação 0 ensaio electrofisiológico hERG foi efectuado de acordo com os procedimentos descritos por Hamill O.P. et al. "Improved patch clamp techniques for high resolution current recording from cells and cell free membrane patches", Pflugers Arch. 1981, v. 391, págs. 85-100. Os dados quanto à potência foram obtidos por meio dos procedimentos descritos nos exemplos 6 e 7 infra.

No quadro 2 seguinte são apresentados dados comparativos suplementares do composto do exemplo 2 e do exemplo 3 de comparação (4-{5-cloro-6-[(5S)-2-(cis-4- hidroxiciclo-hexil)-l-oxo-2,7-diaza-espiro[4.5]dec-7-il]-piridina-3-il}-N,N-dimetilbenzamida; ver o documento WO 2006/053024). 47

Quadro 2

Parâmetros Exemplo 2 Exemplo 3 de comparação Fracção livre no soro humano 22% 4, 4% Potência celular (CI50) 0,3 nM 0,6 nM Concentração do fármaco alvo no plasma humano igual a CI5o 1,4 nM 13,6 nM Ensaio electrofisiológico hERG @) 10 μΜ 14% 33% Concentração máxima no plasma de ratos após uma dose oral de 5 mg/kg 3,36 μΜ 0, 4 μΜ Exposição no plasma após dose oral de 5 8,3 (μΜ * 0,5 (μΜ * h) mg/kg, ASC h) A fracção livre foi determinada por separação do fármaco livre a partir do fármaco ligado no plasma, por diálise em equilíbrio, de acordo com procedimentos convencionais. Os dados de potência celular foram obtidos de acordo com o procedimento descrito no exemplo 7 seguinte. A concentração em fármaco alvo foi calculada por meio da divisão da potência celular pela fracção livre. Os dados do ensaio electrofisiológico hERG foram obtidos de acordo com o procedimento descrito antes. Os estudos farmacocinéticos foram realizados de acordo com procedimentos de rotina em ratos, aos quais foi administrada uma dose oral única de 5 mg/kg. Os dados de concentração-tempo no plasma foram utilizados para determinar os parâmetros farmacocinéticos Cmáx e ASC por métodos não compartimentais convencionais utilizando a aplicação WinNonlin®, versão 5.0.1.

Este exemplo ilustra determinadas propriedades dos compostos reivindicados. Não é feita qualquer representação para o facto de os compostos de comparação representarem os 48 análogos estruturais mais próximos em relação aos compostos da invenção e não é feita qualquer representação no que diz respeito ao facto de serem apresentados todos os dados de comparação possíveis, uma vez que mentes razoáveis podem e diferem o que constitui uma analogia estrutural próxima e o que constitui dados de comparação relevantes.

Exemplo 6

Ensaio enzimático de 11|5HSD1

Todos os ensaios in vitro foram efectuados com lisados clarificados como fonte da actividade de lipHSDIl. Transfectantes transientes HEK-293 que expressam uma versão marcada com epítopo de lipHSDl humana de comprimento completo foram colhidos por centrifugação. Colocou-se novamente em suspensão cerca de 2 x 107 células em 40 mL de tampão de lise (Tris-HCl 25 mM, pH 7,5, NaCl 0,1 M, MgCl2 1 mM e sacarose 250 mM) e submeteu-se a lise num microfluidificador. Clarificou-se os lisados por centrifugação, separou-se os sobrenadantes em aliquotas e congelou-se.

Avaliou-se in vitro a inibição de lipHSDl pelos compostos de teste por ensaio de proximidade de cintilação (SPA) . Dissolveu-se os compostos de teste anidros até 5 mM em DMSO. Estes foram diluídos em DMSO até concentrações adequadas para o ensaio de SPA. Colocou-se 0,8 pL de diluições em série 2 vezes dos compostos em placas com 384 cavidades em DMSO, de modo que seja cobertos 3 logs de concentração em composto. Adicionou-se 20 pL de lisado clarificado a cada cavidade. Deu-se início às reacções por meio da adição de 20 pL de mistura de substrato-cofactor em tampão de ensaio (Tris-HCl 25 mM, pH 7,5, NaCl 0,1 M, MgCl2 49 1 mM) até concentrações finais de NADPH 400 μΜ, 3H-cortisona 25 nM e 0,007% de Triton X-100. Manteve-se as placas a incubar a 37°C durante uma hora. Extinguiu-se as reacções por adição de 40 pL de esferas de SPA revestidas anti-murganho, as quais tinham sido pré-incubadas com 10 μΜ de carbenoxolona e com um anticorpos monoclonal especifico para cortisol. Manteve-se a incubar as placas extintas durante um minimo de 30 minutos à temperatura ambiente e depois efectuou-se a leitura num contador de cintilação 'Topcount'. Os controlos sem lisado, com lisado inibidor e sem mAb foram efectuados de um modo rotineiro. Nestas condições, aproximadamente 30% da cortisona de entrada é reduzida pela lipHSDl na reacção não inibida.

Exemplo 7

Ensaio com base em célula para a actividade de 11|3HSD1

Isolou-se células mononucleares de sangue periférico (PBMC) a partir de voluntários humanos normais por centrifugação por densidade de Ficoll. Colocou-se as células em placas a 4xl05 células/cavidade em 200 pL de meio AIM V (Gibco-BRL), em placas com 96 cavidades. Estimulou-se as células de um dia para o outro com 50 ng/mL de IL-4 humano recombinante (R&D Systems). Na manhã seguinte, adicionou-se cortisona 200 nM (Sigma) na presença ou na ausência de diversas concentrações de composto. Manteve-se as células a incubar durante 48 horas e depois colheu-se os sobrenadantes. Determinou-se a conversão de cortisona em cortisol por meio de uma análise ELISA (Assay Design), comercialmente disponível. A partir da descrição seguinte, serão evidentes para os especialistas na matéria diversas modificações da 50 invenção, para além das aqui descritas. Também se pretende que tais modificações façam parte do âmbito das reivindicações anexas. 51

REFERENCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO A presente listagem de referências citadas pela requerente é apresentada meramente por razões de conveniência para o leitor. Não faz parte da patente de invenção europeia. Embora se tenha tomado todo o cuidado durante a compilação das referências, não é possível excluir a existência de erros ou omissões, pelos quais o EPO não assume nenhuma responsabilidade.

Patentes de invenção citadas na descrição wo 2004089470 A [0014] wo 2004089896 A [0014] wo 2004056745 A [0014] wo 2004065351 A [0014] us 20050282858 A [0014] us 20060009471 A [0014] us 20050288338 A [0014] us 20060009491 A [0014] us 20060004049 A [0014] us 20050288317 A [0014] us 20050288329 A [0014] us 20060122197 A [0014] us 20060116382 A [0014] us 20060122210 A [0014] wo 2007067504 A [0015] us 20070066584 A [0015] wo 2002000196 A [0059] wo 2006053024 A [0111] [0113] 52

Literatura citada na descrição, para além das patentes de invenção • Miller; Chrousos. Endocrinology and Metabolism. McGraw-Hill, 2001, 387-524 [0002] • Reaven. Ann. Rev. Med., 1993, vol. 44, 121-131 [0002] • Bujalska et al. Lancet, 1997, vol. 349, 1210-1213 [0003] • Livingstone et al. Endocrinology, 2000, vol. 131, 560-563 [0003] • Rask et al. J. Clin. Endocrinol. Metab., 2001, vol. 86, 1418-1421 [0003] [0004] • Lindsay et al. J. Clin. Endocrinol. Metab., 2003, vol. 88, 2738-2744 [0003] • Wake et al. J. Clin. Endocrinol. Metab., 2 0 03, vol. 88, 3983-3988 [0003] • Masuzaki et al. Science, 2001, vol. 294, 2166-2170 [0004] • Masuzaki et al. J. Clinicai Invest., 2003, vol. 112, 83-90 [0004] [0012] • Kotelevstev et al. Proc. Natl. Acad. Sei., 1997, vol. 94, 14924-14929 [0005] [0008] • Morton et al. J. Biol. Chem., 2001, vol. 276, 41293-41300 [0005] [0008] • Morton et al. Diabetes, 2004, vol. 53, 931-938 [0005] [0008] • Engeli et al. Obes. Res., 2004, vol. 12, 9-17 [0006] • Barf et al. J. Med. Chem., 2002, vol. 45, 3813-3815 [0007] • Alberts et al. Endocrinology, 2003, vol. 144, 4755-4762 [0007] • Masuzaki et al. Curr. Drug Targets Immune Endocr. Metabol. Disord., 2003, vol. 3, 255-62 [0007] 53 • Billaudel; Sutter. Horm. Metab. Res.r 1979, vol. 11, 555-560 [0009] • Ogawa et al. J. Clin. Invest., 1992, vol. 90, 497-504 [0009] • Davani et al. J. Biol. Chem., 2000, vol. 275, 34841-34844 [0009] • Lupien et al. Nat. Neurosci., 1998, vol. 1, 69-73 [0010] • McEwen; Sapolsky. Curr. Opin. Neurobiol., 1995, vol. 5, 205-216 [0010] • Sandeep et al. Proc. Natl. Acad. Sei. 2004, 1-6 [0010] • Rajan et al. J. Neurosci., 1996, vol. 16, 65-70 [0010] • Yau et al. Proc. Natl. Acad. Sei., 2001, vol. 98, 4716- 4721 [0010] • Stokes et al. Invest. Ophthalmol. Vis. Sei., 2000, vol. 41, 1629-1683 [0011] • Rauz et al. Invest. Ophthalmol. Vis. Sei., 2001, vol. 42, 2037-2042 [0011] • Matsuzawa et al. Ann. N.Y. Acad. Sei., 1999, vol. 8 92, 146-154 [0012] • Wajchenberg. Endocr. Rev., 2000, vol. 21, 697-738 [0012] • Masuzaki et al. J. Clinicai Invest, 2003, vol. 112, 83-90 [0012] • Walker et al. Hypertension, 1979, vol. 1, 287-291 [0012] • Cannalis. J. Clin. Endocrinol. Metab., 1996, vol. 81, 3441-3447 [0013] • Cooper et al. Bone, 2000, vol. 27, 375-381 [0013] • Bellows et al. Bone, 1998, vol. 23, 119-125 [0013] • Kurukulasuriya et al. Curr. Med. Chem., 2003, vol. 10, 123-53 [0016] • Remingtor^s Pharmaceutical Sciences. Mack Publishing Company, 1985, 1418 [0045] 54 • Journal of Pharmaceutical Science, 1977, vol. 66, 2 [0045] • K. Blom; B. Glass; R. Sparks; A. Combs. Preparative LC-MS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization. J. Combi. Chem., 2004, vol. 6, 874-883 [0072] • Hamill O.P. et al. Improved patch clamp techniques for high resolution current recording from cells and cell free membrane patches. Pflugers Arch., 1981, vol. 391, 85-100 [0112]

Claims

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto que é: 5-{3-flúor-4-[(5S)—2—(cis-4-hidroxi-ciclo-hexil)-1-oxo-2,7-diaza-espiro[4.5]dec-7-il]-fenil}-N,N-dimetil-piridina-2-carboxamida; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

2. Composto que é: 5-{3-flúor-4-[(5S)—2—(cis-4-hidroxi-ciclo-hexil)-1-oxo-2, 7-diaza-espiro[4.5]dec-7-il]-fenil}-N-metilpiridina-2-carboxamida; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

3. Composto que é: N-etil-5-{3-flúor-4-[(5S)-2-cis-4-hidroxi-ciclo-hexil)-l-oxo-2,7-diaza-espiro[4.5]dec-7-il]-fenil}-piridina-2-carboxamida; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

4. Composto que é: 5-(3-cloro-4-[(5S)-2-(cis-4-hidroxi-ciclo-hexil)-1-oxo-2,7-diaza-espiro[4.5]dec-7-il]-fenil}-N-etilpiridina-2-carboxamida; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

5. Composição que compreende um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 4, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável. 2

6. Método para inibir a actividade de lipHSDl, o qual compreende fazer contactar a referida lipHSDl ex vivo com um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 4, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

7. Método para inibir a conversão de cortisona em cortisol numa célula, o qual compreende fazer contactar a célula ex vivo com um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 4, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

8. Método para inibir a produção de cortisol numa célula, 0 qual compreende fazer contactar a célula ex vivo com um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 4, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

9. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 4, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para o tratamento de obesidade; diabetes; intolerância à glucoseglucose; resistência à insulina; hiperglicemia; hipertensão; hiperlipidemia; deficiência cognitiva; depressão; demência; glaucoma; distúrbios cardiovasculares; osteoporose; inflamação; sindrome metabólica; excesso de androgénio ou sindrome do ovário poliquistico (PCOS) num paciente.

10. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 4, ou um seu sal f armaceuticamente aceitável, utilizável no tratamento de diabetes de tipo II num paciente. 3

11. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 4, ou um seu sal f armaceut icamente aceitável, utilizável no tratamento do corpo de um ser humano ou de um animal por terapia.

12. Utilização de um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 4, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para a preparação de um medicamento utilizável no tratamento de obesidade; diabetes; intolerância à glucoseglucose; resistência à insulina; hiperglicemia; hipertensão; hiperlipidemia; deficiência cognitiva; depressão; demência; glaucoma; distúrbios cardiovasculares; osteoporose; inflamação; sindrome metabólica; excesso de androgénio ou sindrome do ovário poliquístico (PCOS).

13. Utilização de um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 4, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para a preparação de um medicamento utilizável no tratamento de diabetes de tipo II.