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PT1485360E - Bloqueadores do canal de sódio - Google Patents

Bloqueadores do canal de sódio Download PDF

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PT1485360E
PT1485360E PT03742810T PT03742810T PT1485360E PT 1485360 E PT1485360 E PT 1485360E PT 03742810 T PT03742810 T PT 03742810T PT 03742810 T PT03742810 T PT 03742810T PT 1485360 E PT1485360 E PT 1485360E
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PT
Portugal
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compound according
compound
medicament
hydrogen
phenyl
Prior art date
Application number
PT03742810T
Other languages
English (en)
Inventor
Michael R Johnson
Original Assignee
Parion Sciences Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
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Application filed by Parion Sciences Inc filed Critical Parion Sciences Inc
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Description

1
DESCRIÇÃO "BLOQUEADORES DO CANAL DE SÓDIO"
Campo da invenção A presente invenção diz respeito a bloqueadores do canal de sódio. A presente invenção também descreve diversos métodos de tratamento utilizando estes bloqueadores do canal de sódio da invenção.
Descrição dos antecedentes
As superfícies mucosas na interface entre o ambiente e o corpo desenvolveram diversas "defesas inatas", v.g., mecanismos de protecção. Uma forma principal de tal defesa inata é a limpeza destas superfícies com líquido.
Tipicamente, a quantidade da camada de líquido sobre a superfície mucosa reflecte o equilíbrio entre a secreção liquida epitelial, muitas vezes reflectindo a secreção de aniões (Cl- e/ou HCO3-) acoplada a água (e um catião contra-ião) e a absorção de líquido epitelial, muitas vezes reflectindo a absorção de Na+, acoplada a água e um contra-ião (Cl- e/ou HCO3-) . Muitas doenças da superfície mucosa são provocadas pela pequena quantidade de líquido protector nessas superfícies mucosas criadas por um desequilíbrio entre a secreção (muito pouca) e absorção (relativamente excessiva). Os processos deficientes de transporte de sal que caracterizam estas disfunções mucosais residem na camada epitelial da superfície mucosa.
Uma abordagem para restabelecer a camada líquida protectora sobre as superfícies mucosas é o "reequilíbrio" do sistema por meio do bloqueio do canal de Na+ e da 2 absorção de líquido. A proteína epitelial que medeia o passo de limitação da velocidade de absorção de Na+ e de líquido é o canal de Na+ epitelial (ENaC) . 0 ENaC está localizado na superfície apical do epitélio, isto é, na interface-ambiente. Assim sendo, para inibir a absorção de Na+ e de líquido mediada pelo ENaC, é necessário administrar um bloqueador do ENaC da classe de amilorida (que bloqueia a partir do domínio extracelular de ENaC) à superfície mucosa e, mais importante, manter neste local para se obter utilidade terapêutica. A presente invenção diz respeito a doenças caracterizadas por uma pequena quantidade de líquido nas superfícies mucosas e a bloqueadores "tópicos" do canal de sódio concebidos para exibir uma potência aumentada, uma absorção mucosal reduzida e uma dissociação lenta ("separação" ou libertação) a partir do ENaC, que são necessárias para a terapêutica destas doenças. A bronquite crónica (CB), incluindo a forma genética letal mais comum de bronquite crónica, fibrose cística (CF), é uma doença que reflecte a deficiência do corpo para limpar o muco normalmente a partir dos pulmões, o que produz geralmente uma infecção crónica das vias aéreas. Num pulmão normal, a defesa principal contra uma infecção crónica intrapulmonar das vias aéreas (bronquite crónica) é mediada pela limpeza continua de muco a partir das superfícies brônquicas das vias aéreas. Esta função em indivíduos saudáveis remove eficazmente a partir do pulmão toxinas e patogénios potencialmente nocivos. Dados recentes indicam que o problema inicial, isto é, o "defeito básico", em CB e CF é a insuficiência para limpar o muco a partir das superfícies das vias aéreas. Esta falha para limpar o 3 muco reflecte-se no desequilíbrio entre a quantidade de líquido e a mucina nas superfícies das vias aéreas. Este "líquido da superfície das vias aéreas" (ASL) é principalmente constituído por sal e água em proporções idênticas às do plasma (isto é, isotónica). As macromoléculas de mucina estão organizadas numa "camada de muco" bem definida que normalmente prende as bactérias inaladas e é transportada para fora do pulmão por meio da acção dos cílios que ocorrem numa solução aquosa de baixa viscosidade designada por "líquido perciliar" (PCL) . No estado doente, existe um desequilíbrio entre as quantidades de muco sob a forma de ASL nas superfícies das vias aéreas. Tal provoca uma redução relativa na ASL que causa a concentração de muco, a redução na actividade lubrificante do PCL e a falha para limpar o muco através da actividade ciliar para a boca. A redução da limpeza mecânica de muco a partir do pulmão provoca uma colonização bacteriana crónica no muco aderente às superfícies das vias aéreas. É a retenção crónica de bactérias, a incapacidade de substâncias antimicrobianas locais para matar as bactérias presas ao muco numa base crónica e as consequentes respostas inflamatórias crónicas do corpo a este tipo de infecção da superfície que provoca as síndromes de CB e CF. A população afligida corrente nos E.U.A. é de 12 000 000 pacientes com a forma adquirida (principalmente devido à exposição ao fumo de cigarros) de bronquite crónica e de cerca de 30 000 pacientes com a forma genética, fibrose cística. Na Europa os números são aproximadamente iguais em ambas as populações. Na Ásia, existe pouca incidência de CF mas a incidência de CB é elevada, e, tal como no resto do mundo, os números estão a aumentar. 4
Neste momento existe uma elevada necessidade médica não satisfeita de produtos que tratem especificamente CB e CF ao nivel do defeito básico que provoca estas doenças. As terapias correntes para a bronquite crónica e para a fibrose cística estão dirigidas ao tratamento dos sintomas e/ou dos efeitos tardios destas doenças. Assim, para a bronquite crónica, estão em desenvolvimento β-agonistas, esteróides inaláveis, agentes anti-colinérgicos e inibidores orais de teofilinas e fosfodiesterase. No entanto, nenhum destes fármacos trata de um modo eficaz o problema fundamental da falha na limpeza de muco a partir do pulmão. De igual modo, para a fibrose cística, é utilizado o mesmo espectro de agentes farmacológicos. Estas estratégias têm vindo a ser complementadas por estratégias recentes concebidas para limpar a CF pulmonar do ADN ("Pulmozima"; Genentech), que é depositado no pulmão por neutrófilos que tentam futilmente matar as bactérias que se desenvolvem nas massas de muco aderente e através da utilização de antibióticos inaláveis ("TOBI") concebidos para aumentar os próprios mecanismos de extermínio dos pulmões para se libertar as placas de muco aderente de bactérias. Um princípio geral do corpo é o facto de se não se tratar a lesão inicial, neste caso a retenção/obstrução de muco, então as infecções tornam-se crónicas e bastante mais refractórias face à terapêutica antimicrobiana. Assim, constitui uma necessidade médica não satisfeita principal para as doenças do pulmão CB e CF um meio eficaz para re-hidratar o muco das vias aéreas (isto é, restaurar/ /expandir o volume do ASL) e promover a sua limpeza, com bactérias, a partir dos pulmões. 5 R.C. Boucher, no documento U.S. 6264975, descreve a utilização de bloqueadores do canal de sódio de ofpirazinoilguanidina para a hidratação das superfícies mucosas. Estes compostos, tipificados pelos bem conhecidos diuréticos amilorida, benzamilo e fenamilo, são eficazes. No entanto, estes compostos possuem uma desvantagem significativa por serem (1) relativamente impotentes, o que é importante uma vez que a massa de fármaco que pode ser inalada pelo pulmão é limitada; (2) rapidamente absorvidos, o que limita o período de semi-vida do fármaco na superfície mucosa; e (3) livremente dissociáveis do ENaC. A soma destas desvantagens presentes nestes diuréticos bem conhecidos produz compostos com uma potência e/ou período de semi-vida eficaz insuficiente nas superfícies mucosas para possuírem um benefício terapêutico para a hidratação das superfícies mucosas. J. VELLY ET AL. : "Effects of amiloride and its analogues on [3 H]batrachotoxinin-A 20-Alpha benzoate binding, [3 H]tetracaine binding and 22Na influx" EUROPEAN JOURNAL OF PHARMACOLOGY, vol. 149, no. 1-2, 1988, págs. 97-105, descrevem os análogos de amilorida benzamilo e 3'-4'-diclorobenzamilo, os quais são inibidores mais potentes do fluxo de entrada de 22Na do que a próprio amilorida.
Evidentemente, o que é necessário são fármacos que sejam mais eficazes na restauração da limpeza de muco a partir dos pulmões de pacientes com CB/CF. A importância destas novas terapêuticas irá se reflectir em melhorias na qualidade e na duração da vida das populações com CF e com CB. Há outras superfícies mucosas no corpo e sobre este que exibem diferenças subtis na fisiologia normal de 6 líquidos protectores da superfície sobre as suas superfícies, embora a patofisiologia da doença apresente um tema comum, isto é, uma pequena quantidade de líquido protector de superfícies. Por exemplo, em xerostomia (boca seca) a cavidade oral está isenta de líquido devido a uma deficiência das glândulas parótidas sublingual e submandibular para segregarem líquidos apesar da absorção contínua de líquido mediada pelo transporte de Na+ (ENaC) a partir da cavidade oral. De igual modo, a ceratoconjuntivite (olhos secos) é provocada pela deficiência das glândulas lacrimais para segregarem líquidos face à absorção contínua de líquido dependente de Na+ em superfícies conjuncionais. Na rinossinusite, existe um desequilíbrio, tal como na CB, entre a segregação de mucina e a esgotamento relativo de ASL. Por último, no tracto gastrointestinal, a deficiência na segregação de Cl-(e de líquido) no intestino delgado proximal, em combinação com um aumento da absorção de Na+ (e de liquido) no ileu terminal provoca a síndrome de obstrução intestinal distai (DIOS). Em pacientes com mais idade, uma absorção de Na+ (e de volume) excessiva no cólon descendente produz obstipação e diverticulite.
Cinquenta milhões de americanos e centenas de milhões de outros indivíduos em todo o mundo sofrem de pressão arterial elevada e das sequelas subsequentes que provocam as insuficiências cardíacas congestivas e um aumento na mortalidade. Estas doenças constituem a principal causa de morte no mundo ocidental, existindo assim uma necessidade de novos fármacos para o tratamento destas doenças. Assim sendo, alguns dos novos bloqueadores do canal de sódio da presente invenção podem ser concebidos para se dirigirem ao 7 rim e, como tal, podem ser utilizados como diuréticos para o tratamento de hipertensão, insuficiências cardíacas congestivas (CHF) e outras doenças cardiovasculares. Estes novos agentes podem ser utilizados por si só ou em combinação com bloqueadores beta, inibidores de ACE, inibidores de HMGCoA-reductase, bloqueadores do canal de cálcio e outros agentes cardiovasculares.
DESCRIÇÃO ABREVIADA DA INVENÇÃO
Constitui um objecto da presente invenção proporcionar compostos que sejam mais potentes e/ou que sejam absorvidos mais lentamente pelas superfícies mucosas e/ou que sejam menos reversíveis em comparação com compostos conhecidos.
Constitui um outro aspecto da presente invenção proporcionar compostos que seja mais potentes e/ou que sejam absorvidos mais lentamente e/ou que exibam menos reversibilidade em comparação com compostos, tais como amilorida, benzamilo e fenamilo. Assim sendo, os compostos irão proporcionar um período de semi-vida farmacodinâmico prolongado sobre as superfícies mucosas em comparação com compostos conhecidos.
Constitui um outro objecto da presente invenção proporcionar compostos (1) que sejam absorvidos mais lentamente a partir das superfícies mucosas, em particular pelas superfícies das vias aéreas, em comparação com compostos conhecidos e (2) que quando absorvidos a partir das superfícies mucosas após administração às superfícies mucosas, sejam convertidos in vivo em seus derivados metabólicos que possuam uma eficácia reduzida no bloqueio dos canais de sódio em comparação com o composto original administrado.
Constitui um outro objecto da presente invenção proporcionar compostos que sejam mais potentes e/ou que sejam absorvidos mais lentamente e/ou que exibam uma reversibilidade inferior em comparação com compostos, tais como amilorida, benzamilo e fenamilo. Assim sendo, tais compostos irão proporcionar um período de semi-vida farmacodinâmico prolongado nas superfícies mucosas em comparação com os compostos anteriores.
Constitui um outro objecto da presente invenção proporcionar compostos que são dirigidos ao rim para utilização no tratamento de doenças cardiovasculares. São aqui descritos métodos de tratamento que beneficiam das propriedades farmacológicas dos compostos descritos antes, em particular os métodos de tratamento que são suportados na re-hidratação das superfícies mucosas.
Também são aqui descritos métodos para o tratamento de doenças cardiovasculares.
Os objectos da presente invenção podem ser atingidos com uma classe de compostos de pirazinoilguanidina representados pela fórmula estrutural (I):
R em que o símbolo X representa hidrogénio, halogéneo, trifluorometilo, alquilo (Ci-Cs) , fenilo não substituído ou substituído com halo, alquil(Ci-Cs)-tio, fenil-alquil(Ci~ 9 C8) -tio, alquil (Ci-C8)-sulf onilo ou fenil-alquil (Ci-C8) -sulfonilo; o símbolo Y representa hidrogénio, hidroxilo, mercapto, alcoxi (Ci-C8) , alquil (Ci-C8)-tio, halogéneo, alquilo (Ci-C8) , arilo mononuclear não substituído ou substituído com halo ou -N (R2) 2 ; o símbolo R1 representa hidrogénio ou alquilo(Ci-C8) ; cada um dos símbolos R2 representa independentemente -R7, -(CH2)m-OR8, - (CH2) m—NR7R10, - (CH2) n (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8 , -(CH2CH20) m-R8, - (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, - (CH2) n-C (=0) NR7R10, - (CH2)n-Z8-R7, -(CH2 )m-NR10-CH2( CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -(CH2)n- C02R7 ou
cada um dos símbolos R3 e R4 representa independentemente hidrogénio, um grupo representa pela fórmula estrutural (A), alquilo(Ci-C8) , hidroxi-alquilo(Ci-C8) , fenilo, fenil-alquilo(Ci-C8) , (halofenil)-alquilo(Ci~C8) , (alquilfenil- alquilo) (Ci-C8) , (alcoxifenil) (Ci-C8)-alquilo (Ci-C8) , naftil- alquilo (Ci-C8) ou piridil-alquilo (Ci-C8) , desde que pelo menos um dos símbolos R3 e R4 representa um grupo representado pela fórmula estrutural (A):
em que cada um dos símbolos R1 representa independentemente -R7, -(CH2)n-OR8, -0- (CH2) m-0R8, — (CH2) n—NR7R10, -0-(CH2) m-NR7R10, - 10 (CH2)n(CHOR8) (CHOR8)n-CH2OR8, -O- (CH2) m (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, - (CH2CH20)m-R8, -0-(CH2CH20)m-R8, - (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, -0- (CH2CH20) m-CH2CH2NR10, - (CH2) n-C (=0) NR7R10, -O- (CH2) m-C (=0) NR7R10, - (CH2) n-(Z) g-R7, -0-(CH2)m-(Z)g-R7, -(CH2)n-NR10-CH2(CHOR8)- (CHOR8) n-CH2OR8, -0- (CH2) m-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -(CH2)n-C02R7 , -0-(CH2) m-C02R7, -0S03H, -O-glucuronida, -O-glicose,
cada símbolo o representa independentemente um número inteiro entre 0 e 10; cada símbolo p representa um inteiro entre 0 e 10; desde que a soma dos símbolos o e p em cada cadeia contígua esteja compreendida entre 1 e 10; cada símbolo x representa independentemente 0, NR10, C(=0), CH0H, C(=N-R10), CHNR7R10 ou representa uma ligação simples; cada símbolo R5 representa independentemente -0-(CH2) m-0R8, -(CH2)n-NR7R10, -0-(CH2)m-NR7R10, - (CH2) n (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -0- (CH2) m (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, - (CH2CH20) m-R8, -0- (CH2CH20) m- R8, - (CH2CH20)m-CH2CH2NR7R10, -0-(CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, (CH2) n—C (=0) NR7R10, -0- (CH2) m-C (=0) NR7R10, - (CH2) n- (Z) g-R7, -0- (CH2)m-(Z)g-R7, -(CHz)n-NR10-CH2-(CHOR8)-(CHOR8) n-CH20R8, -0- (CH2)m-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -0-(CH2) m-C02R7, -OSO3H, -O-glucuronida, -O-glicose, 11
cada um dos símbolos R6 represente independentemente -R7, -OR11, -N(R7)2 , - (CH2)m-OR8, -0- (CH2) m-0R8, - (CH2) n-NR7R10, -0- (CH2)m-NR7R10, -(CH2)n(CHOR8) (CHOR8)n-CH2OR8, -0-(CH2)m (CHOR8) -(CHOR8) n-CH2OR8, - (CH2CH20)m-R8, -0-(CH2CH20) m-R8, -(CH2CH20)m- CH2CH2NR7R10, -0- (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, - (CH2) n-C (=0) NR7R10, - 0- (CH2) m-C (=0) NR7R10, _ (CH2) n- ( Z ) g-R7, -0- (CH2) m- ( Z ) g-R7, - (CH2) n-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -0-(CH2) m-NR10-CH2- (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, - (CH2) n-C02R7, -0- (CH2) m-C02R7, -0S03H, -O-glucuronida, -O-glicose,
»· em que no caso de dois símbolos R6 representarem -OR11 e estarem localizados adjacentes entre si num anel fenilo, então os radicais alquilo dos dois símbolos R6 podem estar ligados entre si para formar um grupo metilenodioxi; 12 cada um dos símbolos R7 representa independentemente hidrogénio ou alquilo de cadeia curta; cada um dos símbolos R8 representa independentemente hidrogénio, alquilo(Ci-Cg), -C(=0)-Rn, glucuronida, 2-tetra- hidropiranilo ou
cada símbolo R9 representa independentemente -CO2R7, CON(R7)2, -SO2CH3 ou -C (=0) R7; cada símbolo R10 representa independentemente -H, -SO2CH3, - CO2R7 , -C(=0)NR7R9, -C(=0)R7 ou -CH2-(CHOH)n-CH20H; cada simbolo Z representa independentemente CHOH, »·. O II 0 CHNR7 R10, C=NR: L0 ou NR10; cada Cq) · símbolo R11 representa independentemente alquilo(Ci~ ^8 ) r cada símbolo g representa independentemente um número inteiro entre 1 e 6; cada símbolo m representa independentemente um número inteiro entre 1 e 7; cada símbolo n representa independentemente um número inteiro entre 0 e 7; cada símbolo Q representa independentemente C-R5, C-R6 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, incluindo todos os seus enantiómeros, diastereómeros e misturas racémicas. 13 A presente invenção também proporciona composições farmacêuticas que contêm um composto, tal como descrito a antes .
Assim, a presente invenção também proporciona a utilização pelo menos de um composto descrito antes para a produção de um medicamento para promover a hidratação de superfícies mucosas: promover a hidratação de superfícies mucosas, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) a uma superfície mucosa de um sujeito, - restaurar as defesas das mucosas, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração por via tópica de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) , - bloquear o EnaC, por exemplo, e um tal contacto não constitui um objecto da invenção, por meio do contacto dos canais de sódio com uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I), - promover a limpeza do muco nas superfícies mucosas, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) a uma superfície mucosa de um sujeito, tratar a bronquite crónica, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administraçao de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) a uma superfície mucosa de um sujeito que de tal necessite, 14 tratar a fibrose cística, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) a uma superfície mucosa de um sujeito que de tal necessite, tratar a rinossinusite, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) a uma superfície mucosa de um sujeito que de tal necessite, - tratar a desidratação nasal, em particular no caso da desidratação nasal ser provocada pela administração de oxigénio anidro ao sujeito, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) às vias nasais a um sujeito que de tal necessite, - tratar a sinusite, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) a um sujeito que de tal necessite, - tratar a pneumonia, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) a um sujeito que de tal necessite, prevenir a pneumonia induzida por ventilador, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade 15 eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) a um sujeito por meio de um ventilador, - tratar a asma, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) a um sujeito que de tal necessite, - tratar a discinésia ciliar primária, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) a um sujeito que de tal necessite, - tratar otite média, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) a um sujeito que de tal necessite, induzir expectoração para fins de diagnóstico, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) a uma superfície mucosa de um sujeito que de tal necessite, tratar uma doença pulmonar obstrutiva crónica, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) a um sujeito que de tal necessite, - tratar um enfisema, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto 16 representado pela fórmula estrutural (I) a um sujeito que de tal necessite, - tratar os olhos secos, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) ao olho do sujeito que de tal necessite, - promover a hidratação ocular, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) ao olho do sujeito, - promover a hidratação da córnea, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) ao olho do sujeito, - tratar a doença de Sjõgren, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) a uma superfície mucosa de um sujeito que de tal necessite, tratar a secura vaginal, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) ao tracto vaginal de um sujeito que de tal necessite, - tratar a pele seca, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto 17 representado pela fórmula estrutural (I) à pele de um sujeito que de tal necessite, - tratar a boca seca (xerostomia) , por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) à boca de um sujeito que de tal necessite, - tratar a sindrome de obstrução intestinal distai, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) a uma superfície mucosa de um sujeito que de tal necessite, - tratar a esofagite, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) a um sujeito que de tal necessite, - tratar a obstipação, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) a um sujeito que de tal necessite, de preferência por via oral ou por via de um supositório ou enema, - tratar a diverticulite crónica, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração de uma quantidade eficaz de um composto representado pela fórmula estrutural (I) a um sujeito que de tal necessite, tratar a hipertensão, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por 18 meio da administração do composto representado pela fórmula estrutural (I) a um sujeito que de tal necessite, reduzir a pressão arterial, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração do composto representado pela fórmula estrutural (I) a um sujeito que de tal necessite, - tratar um edema, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração do composto representado pela fórmula estrutural (I) a um sujeito que de tal necessite, - promover a diurese, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração do composto representado pela fórmula estrutural (I) a um sujeito que de tal necessite, promover a natriurese, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração do composto representado pela fórmula estrutural (I) a um sujeito que de tal necessite, - promover a salurese, por exemplo, e uma tal administração não constitui um objecto da invenção, por meio da administração do composto representado pela fórmula estrutural (I) a um sujeito que de tal necessite.
DESCRIÇÃO ABREVIADA DAS FIGURAS
Uma melhor apreciação da invenção e das suas vantagens subjacentes poderá ser facilmente obtida na medida em que esta é melhor entendida por referência à seguinte descrição minuciosa em conjunto com as figuras seguintes.
Figura 1: efeito de um composto da presente invenção sobre MCC a t = 0 horas, conforme aqui descrito no exemplo 32 . 19 19 Figura 2 : sobre MCC a t 32 . Figura 3: sobre MCC a t 32. Figura 4: sobre MCC a t 32 . Figura 5: sobre MCC a t 32. Figura 6: sobre MCC a t 32 . Figura 7: sobre MCC a t 32. Figura 8 : sobre MCC a t 32 . efeito de um composto da presente invenção 4 horas, conforme aqui descrito no exemplo efeito de um composto da presente invenção 0 horas, conforme aqui descrito no exemplo efeito de um composto da presente invenção 4 horas, conforme aqui descrito no exemplo efeito de um composto da presente invenção 0 horas, conforme aqui descrito no exemplo efeito de um composto da presente invenção 4 horas, conforme aqui descrito no exemplo efeito de um composto da presente invenção 0 horas, conforme aqui descrito no exemplo efeito de um composto da presente invenção 4 horas, conforme aqui descrito no exemplo
DESCRIÇÃO MINUCIOSA DA INVENÇÃO A presente invenção diz respeito à descoberta de que os compostos de fórmula estrutural (I) são mais potentes e/ou são absorvidos menos rapidamente a partir das superfícies mucosas, em particular das superfícies das vias aéreas, e/ou são menos reversíveis a partir de interacções com ENaC em comparação com compostos, tais como amilorida, benzamilo e fenamilo. Assim sendo, os compostos de fórmula 20 estrutural (I) possuem um período de semi-vida mais longo nas superfícies mucosas em comparação com estes compostos. A presente invenção também tem por base a descoberta de que determinados compostos abrangidos pela fórmula estrutural (I) são convertidos ín vivo em seus derivados metabólicos que possuem uma actividade reduzida no bloqueio dos canais de sódio em comparação com o composto original administrado, após serem absorvidos a partir das superfícies mucosas depois da administração. Esta propriedade importante significa que os compostos irão apresentar uma tendência inferior para provocar efeitos secundários indesejados pelo bloqueio dos canais de sódio localizados em locais não alvejados no corpo do recipiente, v.g., nos rins. A presente invenção também tem por base a descoberta de que certos compostos abrangidos pela fórmula estrutural (I) são dirigidos aos rins, podendo assim ser utilizados como agentes cardiovasculares.
Nos compostos representados pela fórmula estrutural (I), o símbolo X representa hidrogénio, halogéneo, trifluorometilo, alquilo de cadeia curta, cicloalquilo de cadeia curta, fenilo não substituído ou substituído, (alquil de cadeia curta)-tio, fenil-(alquil de cadeia curta)-tio, (alquil de cadeia curta)-sulfonilo ou fenil-(alquil de cadeia curta)-sulfonilo. 0 halogéneo é preferível.
Como exemplos de halogéneo refere-se flúor, cloro, bromo e iodo. Como halogéneos preferidos refere-se o cloro e o bromo. O cloro é particularmente preferido. Esta descrição é aplicável ao termo "halogéneo", conforme utilizado ao longo da presente memória descritiva. 21
Tal como aqui utilizado, o termo "alquilo de cadeia curta" designa um grupo alquilo que possui menos de 8 átomos de carbono. Este intervalo compreende todos os valores específicos de átomos de carbono e sub-intervalos entre eles, tais como 1, 2, 3, 4, 5, 6 e 7 átomos de carbono. 0 termo "alquilo" abrange todos os tipos de tais grupos, v.g., grupo alquilo lineares, ramificados e cíclicos. Esta descrição é aplicável ao termo "alquilo de cadeia curta", conforme utilizado ao longo da presente memória descritiva. Como exemplos de grupos alquilo de cadeia curta adequados refere-se metilo, etilo, propilo, ciclopropilo, butilo, isobutilo, etc..
Como substituintes para o grupo fenilo refere-se halogéneos. Como substituintes halogéneo particularmente preferidos refere-se cloro e bromo. 0 símbolo Y representa hidrogénio, hidroxilo, mercapto, alcoxi de cadeia curta, (alquil de cadeia curta)-tio, halogéneo, alquilo de cadeia curta, cicloalquilo de cadeia curta, arilo mononuclear ou -N(R2)2· 0 radical alquilo dos grupos alcoxi de cadeia curta possui as mesmas significações definidas antes. Como exemplos de arilo mononuclear refere-se grupos fenilo. 0 grupo fenilo pode ser não substituído ou substituído conforme descrito antes. A identidade preferida do símbolo Y é -N(R2)2. São particularmente preferidos os compostos em que cada símbolo R2 representa hidrogénio. 0 símbolo R1 representa hidrogénio ou alquilo de cadeia curta. De preferência, o símbolo R1 representa hidrogénio.
Cada um dos símbolos R2 representa independentemente -R7, - (CH2) m-0R8, - (CH2) m-NR7R10, - (CH2) n (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, - (CH2CH20) m-R8, - (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, (CH2) n~C (=0) NR7R10, - 22 (CH2)n-Zg-R7, - (CH2)m-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8)n-CH2OR8, (CH2)n- C02R7 ou
*
De preferência, o símbolo R2 representa hidrogénio e alquilo de cadeia curta, em particular alquilo(C1-C3). 0 hidrogénio é particularmente preferido.
Cada um dos símbolos R3 e R4 representa independentemente hidrogénio, um grupo representado pela fórmula estrutural (A) , alquilo de cadeia curta, hidroxi-(alquilo de cadeia curta), fenilo, fenil-(alquilo de cadeia curta), (halofenil)-(alquilo de cadeia curta), (alquilfenilalquilo)-(de cadeia curta), (alcoxifenil de cadeia curta)-(alquilo de cadeia curta), naftil-(alquilo de cadeia curta) ou piridil-(alquilo de cadeia curta), desde que pelo menos um dos símbolos R3 e R4 representa um grupo que satisfaça a fórmula estrutural (A).
Como compostos preferidos refere-se aqueles em que um dos símbolos R3 e R4 representa hidrogénio e o outro representa um grupo de fórmula estrutural (A).
Na fórmula estrutural (A), o radical - (C (RL) 2) o_x_ (C(RL)2)P- designa um grupo alquileno ligado ao anel aromático. Cada uma das variáveis o e p representa um número inteiro entre 0 e 10, desde que a soma de o e p na cadeia esteja compreendida entre 1 e 10. Assim, cada uma das variáveis o e p representa 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10. De preferência, a soma de o e p está compreendida entre 2 e 6. De acordo com uma variante particularmente preferida, a soma de o e p é 4. 23 0 grupo ligador na cadeia alquileno, x, pode representar independentemente 0, NR10, C(=0), CHOH, C(=N- 10 7 10 R ), CHNR R ou representar uma ligação simples.
Assim sendo, no caso de o símbolo x representar uma ligação simples, a cadeia alquileno ligada ao anel é representa pela fórmula geral - (C (RL) 2) 0+P-, em que a soma o+p está compreendida entre 1 e 10.
Cada um dos símbolos RL representa independentemente -R7, -(CH2)n-OR8, -0- (CH2) m-0R8, - (CH2) n-NR7R10, -0-(CH2)m- NR7R10, - (CH2) n (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -0-(CH2) m (CHOR8) (CH0R8)n-CH2OR8, -(CH2CH20)m-R8, -0-(CH2CH20)m-R8, -(CH2CH20)m- CH2CH2NR7R10, -0-(CH2CH20)m-CH2CH2NR7R10, - (CH2) n-C (=0) NR7R10, - 0- (CH2)m-C (=0) NR7R10, - (CH2) n- (Z) g-R7, -0- (CH2) m- ( Z ) g-R7, (CH2) n-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -O-(CH2)m-NR10-CH2- (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, - (CH2) n-C02R7, -0- (CH2) m-C02R7, -0S03H, -0-glucuronida, -0-glicose,
em particular em que cada símbolo R7 representa hidrogénio.
Na cadeia alquileno de fórmula estrutural (A) , é preferível que no caso de um grupo RL ligado a átomos de carbono representa um grupo diferente de hidrogénio, então o outro grupo RL ligado ao átomo de carbono representa hidrogénio, isto é, de fórmula geral -CHRL-. Também é preferível que no máximo dois grupos RL numa cadeia alquileno sejam diferentes de hidrogénio, em que os outros grupos RL na cadeia sejam hidrogénio. Ainda mais preferencialmente, apenas um grupo RL na cadeia alquileno é 24 diferente de hidrogénio, em que os outros grupos RL na cadeia são hidrogénios. De acordo com estas variantes, é preferível que o símbolo x representa uma ligação simples.
De acordo com outra variante particular da invenção, todos os grupos RL na cadeia alquileno são hidrogénio. De acordo com estas variantes, a cadeia alquileno é representada pela fórmula geral - (CH2) 0—x- (CH2) p-.
Cada um dos símbolos R5 representa independentemente -(CH2) m-0R8, -0-(CH2)m-0R8, - (CH2) n—NR7R10, -0-(CH2) m-NR7R10, - (CH2) n (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -0-(CH2) m (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, - (CH2CH20) m-R8, -0- (CH2CH20) m-R8, - (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, -0- (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, - (CH2) n-C (=0) NR7R10, -0-(CH2)m-C(=0)- NR7R10, - (CH2) n- (Z) g-R7, -0- (CH2) m- (Z) g-R7, - (CH2) n-NR10-CH2- (CH0R8) (CHOR8) n-CH2OR8, -0- (CH2) m-NR10-CH2 (CHOR8) (CH0R8)n- CH2OR8, - (CH2) n-C02R7, -0-(CH2)m-C02R7, -OSO3H, -O-glucuronida, -O-glicose ou 25
Assim, o símbolo R5 pode representar um dos grupos seguintes : -(CH2)m-OR8, para- (CH2)4-OH, -0- (CH2) m-0R8, para-0- (CH2)4-OH, -(CH2)n-NR7R10, para-NHS02CH3, para-CH2NH (C=0) - (0CH3) 3, para-NH(C=0)CH3, para-CH2NH2, para-NH-C02C2H5, para-CH2NH(C=0)CH3, para-CH2NHC02CH3, 26 para-CH2NHS02CH3, para- (CH2) 4-NH (C=0) 0 (CH3) 3, para- (CH2) 4-NH2, para- (CH2) 3-NH (C=0) 0 (CH3) 3, para- (CH2) 3-NH2, -0-(CH2)m-NR7R10, para-0CH2CH2NHC02 (CH3) 3, para-0CH2CH2NHC02C2H5, para-O- (CH2) 3-NH-C02- (CH3) 3, para-O- (CH2) 3-NH2, para-0CH2CH2NHS02CH3, - (CH2) n (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -0- (CH2)m(CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, para-0CH2CH0HCH20-glucuronida, para-OCH2CH2CHOHCH2OH, para-OCH2-(α-CHOH)2CH2OH, para-OCH2-(CHOH)2CH2OH, -(CH2CH20)m-R8, -0- (CH2CH20) m-R8, - (CH2CH20)m-CH2CH2NR7R10, -0- (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, - (CH2) n-C (=0) NR7R10, para-C (=0) NH2, -0- (CH2)m-C (=0) NR7R10, para-0-CH2-(C=0)NHCH2CHOH, para-0-CH2-(C=0)NHCH2CHOHCH2OH, para-0-CH2(C=0)NHCH2(CHOH)2CH2OH, para-0-CH2C (C=0) NHS02CH3, para-0-CH2(C=0)NHC02CH3, para-0-CH2-C(C=0)NH-C(C=0)NH2, -0-CH2- (C=0) NH- (C=0) CH3, 27 -(CH2)n-(Z)g-R7, -(CH2)n(C=N) -NH2, para-(C=NH)NH2, - (CH2) n-NH-C (=NH) -NH2, para- (CH2) 3-NH-C (=NH) -NH2, para-CH2NH-C(=NH)-NH2, - (CH2) n-CONHCH2 (CHOH) n-CH2OH, -NH-C (=0) -CH2- (CHOH) nCH2OH, -NH- (C=0) -NH-CH2 (CHOH) 2CHOH, para-NHC (C=0) NHCH2CH2OH, -0- (CH2) m- (Z) g-R7, -0- ( CH2 ) m-NH-C ( =NH) -N (R7) 2, para-0 (CH2) 3-NH-C (=NH) -NH2, -0- (CH2) m-CHNH2-C02NR7R10, para-0CH2-CHNH2-C02NH2, -0-(CH2)m-CHNH2-C02NR7R10, em que o composto é (R) , -0-(CH2)m-CHNH2-C02NR7R10, em que o composto é (S) , para-0CH2CH0H-CH2NHC02 (CH3) 3, - (CH2) n-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, para-NHCH2(CHOH)2CH2OH, -0- (CH2)m-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -0- (CH2)m-C02R7, para-0CH2CH2C02(CH3)3, para-0CH2C02H, para-0CH2C02C2H5, -0- (CH2) m-Boc, - (CH2) m-Boc, -0- ( CH2 ) m-NH-C ( =NH) -N (R7) 2, - (CH2) n-NH-C (=NH) -N (R7) 2, o enantiómero o enantiómero 28 -(CH2)m-NH-C(=0) -OR7, -O- (CH2)m-NH-C (=0) -OR7, - (CH2) n-NH-C (=0) -R11, -0- (CH2) m-NH-C (=0) -R11, -0- (CH2)m-C (= 0) N (R7) 2, - (CH2)m-CHOH-CH2-NHBoc, -0- (CH2)m-CHOH-CH2-NHBoc, _ (CH2) m-NHC (0) OR7, -0- (CH2)m-NHC (0) OR7, -0- (CH2)m-C (=NH) -N (R7) 2, _ (CH2) n-C (=NH) -N (R7) 2 .
De acordo com outra variante, o símbolo R5 representa um grupo seleccionado entre o conjunto constituído por -0-(CH2)3-OH, -NH2, -0-CH2-(CHOH)2-CH20H-0-CH2-CH0H-CH20H, -0- CH2CH2-0-tetra-hidropirano-2-ilo, -0-CH2CH0H-CH2-0- glucuronida, -0-CH2CH20H, -0-(CH2CH20) 4-CH3, -0-CH2CH20CH3, -0-CH2-(CHOC (=0) CH3) -CH2-0C (=0) CH3, -0-(CH2CH20) 2-ch3, -och2- choh-choh-ch2oh, -ch2oh, -co2ch3,
e 29
De acordo com outra variante, o simbolo representa um grupo seleccionado entre o conjunto constituído por -0-(CH2)3-OH, para-NH2, para-0-CH2- (CHOH) 2-CH2OH, orto—0-CH2- CH0H-CH20H, meta-0-CH2-CH0H-CH20H, para-0-CH2CH2-0-tetra-hidropirano-2-ilo, para-0-CH2CH0H-CH2 -O-glucuronida, para-0-CH2CH20H, para-0-(CH2CH20) 4-CH3, para-0-CH2CH20CH3, para-0-CH2-(CHOC (=0) CH3) -CH2-0C (=0) CH3, para-o-(CH2CH20) 2-CH3, -0CH2-CH0H-CH0H-CH20H, para-CH20H, para-C02CH3, para-S03H, para-0-glucuronida,
De acordo com uma variante preferida, cada grupo -(CH2) n- (z) g-R7 está abrangido pelo âmbito da estrutura descrita antes e representa independentemente 30 - (CH2) n- (C=N) -NH2, - (CH2) n-NH-C (=NH) NH2, - (CH2) n-CONHCH2 (CHOH) n-CH2OH ou -NH-C (=0) -CH2- (CHOH) nCH2OH . grupo -0-estrutura
De acordo com outra variante preferida, cada (CH2) m-( Z) g-R7 está abrangido pelo âmbito da descrita antes e representa independentemente -0-(CH2)m-NH-C (=NH)-N(R7) 2 ou -0- (CH2) m-CHNH2-C02NR7R10. símbolo R5
De acordo com outra variante preferida, o pode representar um grupo dos seguintes: -0-CH2CH0HCH20-giucuronida, -OCH2CHOHCH3, -OCH2CH2NH2, -OCH2CH2NHCO (CH3) 3, -CH2CH2OH, -och2ch2oh, -0- (CH2) m-Boc, _ (CH2) m-BoC, -OCH2CH2OH, -och2co2h, -0- ( CH2 ) m-NH-C ( =NH) -N (R7) 2, - (CH2) n-NH-C (=NH) -N (R7) 2, -NHCH2(CHOH)2-CH2OH, -0CH2C02Et, -NHS02CH3, -(CH2)m-NH-C(=0)-0R7, -0- (CH2)m-NH-C (=0) -0R7, _ (CH2) n-NH-C (=0) -R11, -0- (CH2) m-NH-C (=0) -R11, -0-CH2C(=0)NH2, 31 -CH2NH2, -NHC02Et, -OCH2CH2CH2CH2OH, -ch2nhso2ch3, -och2ch2chohch2oh, -0CH2CH2NHC02Et, -NH-C (=NH2) -NH2, -OCH2-(α-CHOH)2-CH2OH, -OCH2CHOHCH2NH2, - (CH2)m-CHOH-CH2-NHBoc, -O- (CH2)m-CHOH-CH2-NHBoc, -(CH2)m-NHC(0)0R7, -O- (CH2)m-NHC (O) OR7, -OCH2CH2CH2NH2, -OCH2CH2NHCH2 (CHOH) 2CH2OH, -OCH2CH2NH (CH2[(CHOH)2CH2OH) ]2, - (CH2) 4-NHBoc, -(ch2) 4-nh2, -(CH2) 4-OH, -och2ch2nhso2ch3, -O- (CH2)m-C (=ΝΗ) -N (R7) 2, - (CH2) n—C (=NH) —N (R7) 2, - (CH2) 3-NHBoc, -(CH2)3NH2, -O- (CH2) m-NH-NH-C (=NH) -N (R7) 2, - (CH2) n-NH-NH-C (=NH)-N (R7) 2 ou -0-CH2-CH0H-CH2-NH-C(=NH)-N (R7)2 .
Existem quatro grupos R6 presentes no anel de fórmula estrutural (A) . Cada grupo R6 pode ser, independentemente, -R7, -OR11, —N (R7) 2 , _ (CH2) m-0R8, -0-(CH2) m-0R8, -(CH2)n-
- (CH2) n (CHOR ) (CHOR ) n-CH20R -0- NR7R10, -0-(CH2)m-NR7R10, 32 (CH2) m (CHOR8) (CHOR8)n-CH2OR8, - (CH2CH20)m-R8, -O- (CH2CH20) m-R8, - (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, -O- (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, -(CH2)n- C(=0)NR7R10, -O- (CH2)m-C (=0) NR7R10, - (CH2) n- ( Z ) g-R7, -0-(CH2)m- (Z)g - (CH2)n-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -0-(CH2)m- NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, - (CH2) n-C02R7, -0- (CH2) m-C02R7, -0S03H, -O-glucuronida, -O-glicose ou
Além disso, um ou vários dos grupos R6 pode ser um dos grupos R5' os quais estão abrangidos pela definição mais ampla para R6 apresentada antes.
No caso de dois grupos R6 representarem -0R11 e estarem localizados adjacentemente entre si num anel fenilo, os radicais alquilo dos dois grupos R6 podem ser ligados entre si para formarem um grupo metilenodioxi, isto é, um grupo de fórmula geral -0-CH2-0-.
Conforme descrito antes, o grupo R6 pode ser um hidrogénio. Assim sendo, 1, 2, 3 ou 4 grupos R6 podem ser diferentes de hidrogénio. De preferência, no máximo 3 dos grupos R6 são diferentes de hidrogénio.
Cada símbolo g representa independentemente um número inteiro entre 1 e 6. Assim sendo, cada símbolo g pode representar 1, 2, 3, 4, 5 ou 6.
Cada símbolo m representa um número inteiro entre 1 e 7. Assim sendo, cada símbolo m pode representar 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7. Cada símbolo n representa um número inteiro entre 0 e 7. Assim sendo, cada símbolo n pode representar 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7. 33
Cada símbolo Q na fórmula estrutural (A) representa C-R5, C-R6 ou um átomo de azoto, em que no máximo três grupos Q no anel são átomos de azoto. Assim, podem existir 1, 2 ou 3 átomos de azoto no anel. De preferência, no máximo dois grupos Q são átomos de azoto. Mais preferencialmente, no máximo um grupo Q é um átomo de azoto. De acordo com uma variante particular, o átomo de azoto está na posição 3 do anel. De acordo com outra variante da invenção, cada grupo Q é C-R5 ou C-R6, isto é, não existem átomos de azoto no anel.
Como exemplos mais específicos de grupos adequados representados pela fórmula estrutural (A) refere-se os apresentados nas fórmulas estruturais (B) a (E) seguintes:
em que os símbolos o, x, p, R5 e R6 possuem as significações definidas antes;
em que o símbolo n representa um número inteiro entre 1 e 10 e o símbolo R5possui as significações definidas antes;
em que o símbolo n representa um número inteiro entre 1 e 10 e o símbolo R5 possui as significações definidas antes; 34
em que os símbolos o, x, p e R5 possuem as significações definidas antes.
De acordo com uma variante preferida da invenção, o símbolo Y representa -NH2.
De acordo com outra variante preferida, o símbolo R representa hidrogénio.
De acordo com outra variante preferida, o símbolo R1 representa hidrogénio.
De acordo com outra variante preferida, o símbolo X representa cloro.
De acordo com outra variante preferida, o símbolo R3 representa hidrogénio.
De acordo com outra variante preferida, o símbolo RL representa hidrogénio.
De acordo com outra variante preferida, o símbolo o representa 4.
De acordo com outra variante preferida, o símbolo p representa 0.
De acordo com outra variante preferida, a soma de o e p é 4.
De acordo com outra variante preferida, o símbolo x representa uma ligação simples.
De acordo com outra variante preferida, o símbolo R6 representa hidrogénio.
De acordo com outra variante preferida, pelo menos um dos grupos Q é um átomo de azoto.
De acordo com outra variante preferida, nenhum grupo Q é um átomo de azoto. 35
De acordo com uma variante preferida da presente invenção: o símbolo X representa halogéneo; o símbolo Y representa -N(R7)2; o símbolo R1 representa hidrogénio ou alquilo(C1-C3) ; o símbolo R2 representa -R7, -0R7, CH2OR7 ou -C02R7; o símbolo R3 representa um grupo que satisfaz a fórmula estrutural (A) e o símbolo R4 representa hidrogénio, um grupo representado pela fórmula estrutural (A) ou alquilo de cadeia curta.
De acordo com outra variante preferida da presente invenção: o símbolo X representa cloro ou bromo; o símbolo Y representa -N(R7)2; o símbolo R2 representa hidrogénio ou alquilo(C1-C3) ; no máximo três grupos R6 são diferentes de hidrogénio conforme descrito antes; no máximo três grupos RL são diferentes de hidrogénio conforme descrito antes e no máximo 2 grupos Q são átomos de azoto.
De acordo com outra variante preferida da presente invenção: 0 símbolo Y representa -NH2.
De acordo com outra variante preferida da presente invenção: o símbolo R4 representa hidrogénio; no máximo um grupo RL é diferente de hidrogénio conforme descrito antes; no máximo dois grupos R6 são diferentes de hidrogénio conforme descrito antes e 36 no máximo 1 grupo Q é um átomo de azoto.
Os compostos de fórmula estrutural (I) podem ser preparados e utilizados como base livre. Em alternativa, os compostos podem ser preparados e utilizados como um sal farmaceuticamente aceitável. Os sais farmaceuticamente aceitáveis são sais que mantêm ou que aumentar a actividade biológica desejada do composto original e não conferem efeitos toxicológicos indesejados. Como exemplos de tais sais refere-se (a) sais de adição de ácidos formados a partir de ácidos inorgânicos, por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido nítrico e semelhantes; (b) sais formados com ácidos orgânicos, tais como, por exemplo, ácido acético, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido glucónico, ácido cítrico, ácido málico, ácido ascórbico, ácido benzóico, ácido tânico, ácido palmítico, ácido algínico, ácido poliglutâmico, ácido naftaleno-sulfónico, ácido metano-sulfónico, ácido p-tolueno-sulfónico, ácido naftaleno-dissulfónico, ácido poligalacturónico, ácido malónico, ácido sulfo-salicílico, ácido glicólico, 2-hidroxi-3-naftoato, pamoato, ácido salicílico, ácido esteárico, ácido ftálico, ácido mandélico, ácido láctico e semelhantes; e (c) sais formados a partir de aniões elementares, por exemplo, cloro, bromo e iodo.
Faz-se observar que todos os enantiómeros, diastereómeros e misturas racémicas dos compostos que satisfazem o âmbito da fórmula estrutural (I) estão abrangidos pela presente invenção. Todas as misturas de tais enantiómeros e diastereómeros pertencem ao âmbito da presente invenção. 37
Sem estar limitado por qualquer teoria particular, crê-se que os compostos de fórmula estrutural (I) actuem in vivo como bloqueadores do canal de sódio. Por meio do bloqueio dos canais de sódio epiteliais presentes nas superfícies mucosas, os compostos de fórmula estrutural (I) reduzem a absorção de água por parte das superfícies mucosas. Este efeito faz aumentar o volume de líquidos protectores sobre as superfícies mucosas, reequilibra o sistema e permite assim o tratamento das doenças. A presente invenção também diz respeito a métodos de tratamento que beneficiem das propriedades dos compostos de fórmula estrutural (I), descritas antes. Assim, como sujeitos que podem ser tratados pelos métodos descritos na presente invenção refere-se, mas sem que isso constitua qualquer limitação, pacientes que padeçam de fibrose cística, discinesia ciliar primária, bronquite crónica, doença das vias áreas obstrutiva crónica, pacientes ventilados artificialmente, pacientes com pneumonia aguda, etc.. A presente invenção pode ser utilizada para se obter uma amostra de expectoração a partir de um paciente por meio da administração dos compostos activos pelo menos a um pulmão de um paciente, e subsequentemente induzir ou recolher a amostra de expectoração a partir do paciente. Tipicamente, a invenção irá ser administrada às superfícies mucosas respiratórias por meio de um aerossol (líquido ou pós secos) ou por lavagem.
Como sujeitos que podem ser tratados pelo método descrito na presente invenção refere-se também pacientes aos quais se administra um suplemento de oxigénio por via nasal (um regime que possui a tendência de secar as superfícies aéreas); pacientes que padecem de uma doença ou 38 resposta alérgica (v.g., uma resposta alérgica a pólen, pó, pelos ou partículas de animais, insectos ou partículas de insectos, etc.) que afectem as superfícies nasais aéreas; pacientes que padecem de uma infecção bacteriana, v.g., infecções com staphylococcus (tais como infecções com Staphylococcus aureus, infecções com Hemophilus influenza, infecções com Streptococcus pneumoniae, infecções com Pseudomonas aeuriginosa, etc.) das superfícies nasais aéreas; pacientes que padecem de uma doença inflamatória que afecte as superfícies nasais aéreas; ou pacientes que padecem de sinusite (em que o agente activo ou os agentes activos são administrados para promover a drenagem de secreções mucosais congestionantes nos sinos por meio da administração de uma quantidade eficaz para a promoção da drenagem de fluidos congestionantes nos sinos), ou rino-sinusite. A invenção pode ser administrada a superfícies rino-sinais por via tópica, incluindo aerossóis e gotas. A presente invenção pode ser utilizada para hidratar as outras superfícies mucosas para além das superfícies das vias aéreas. Como outras superfícies mucosas refere-se superfícies gastrointestinais, superfícies orais, superfícies genito-uretrais, superfícies oculares ou superfícies do olho, do ouvido interno e do ouvido médio. Por exemplo, os compostos activos da presente invenção podem ser administrados por quaisquer meios adequados, por exemplo, incluindo as vias local/tópica, oral ou rectal, numa quantidade eficaz.
Os compostos da presente invenção também são úteis para o tratamento de diversas das funções de alívio do sistema cardiovascular. Assim, os compostos da presente invenção são úteis para utilização como agentes anti- 39 hipertensivos. Os compostos também podem ser utilizados para reduzir a pressão arterial e para o tratamento de edemas. Além disso, os compostos da presente invenção também são úteis para promover a diurese, natriurese e salurese. Os compostos podem ser utilizados por si sós ou em combinação com bloqueadores beta, inibidores de ACE, inibidores de HMGCoA-reductase, bloqueadores do canal de cálcio e outros agentes cardiovasculares para o tratamento de hipertensão, deficiência cardíaca congestiva e para reduzir a mortalidade cardiovascular. A presente invenção diz respeito principalmente ao tratamento de sujeitos humanos, embora também possa ser utilizada para o tratamento de outros sujeitos mamíferos, tais como cães e gatos, para fins veterinários.
Conforme descrito antes, os compostos utilizados para a preparação de composições da presente invenção podem encontrar-se sob a forma de uma base livre farmaceuticamente aceitável. Uma vez que a base livre do composto é normalmente menos solúvel em soluções aquosas do que o sal, as composições de base livre são utilizadas para proporcionar uma libertação mais prolongada do agente activo aos pulmões. Um agente activo presente nos pulmões sob a forma de partículas que não foi dissolvido numa solução não está disponível para induzir uma resposta fisiológica, mas pode servir como depósito do fármaco biodisponível que se dissolve gradualmente em solução.
De acordo com um outro aspecto, a presente invenção diz respeito a uma composição farmacêutica que compreende um composto de fórmula estrutural (I) num veículo farmaceuticamente aceitável (v.g., uma solução aquosa de veículo) . De um modo geral, o composto de fórmula 40 estrutural é incluído na composição numa quantidade eficaz para inibir a reabsorção de água pelas superfícies mucosas.
Os compostos da presente invenção também podem ser utilizados em conjunto com um agonista do receptor P2Y2 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável (aqui por vezes referido como "agente activo"). As composições podem ainda compreender um agonista do receptor P2Y2 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável (aqui por vezes designado como um "agente activo"). Tipicamente, o agonista do receptor P2Y2 é incluído numa quantidade eficaz para estimular a secreção de cloreto e de água pelas superfícies das vias aéreas, em particular das superfícies nasais aéreas. Como agonistas do receptor P2Y2 adequados refere-se os descritos nas colunas 9-10 dos documentos U.S. 6 264 975, U.S. 5 656 256 e U.S. 5 292 498.
Também é possível utilizar broncodilatadores em combinação com os compostos da presente invenção. Estes broncodilatadores compreendem, mas sem que isso constitua qualquer limitação, agonistas β-adrenérgicos, incluindo, mas sem que isso constitua qualquer limitação, epinefrina, isoproterenol, fenoterol, albutereol, terbutalina, pirbuterol, bitolterol, metaproterenol, iosetarina, xinafoato de salmeterol, bem como agentes anticolinérgicos, incluindo, mas sem que isso constitua qualquer limitação, brometo de ipratrópio, bem assim compostos tais como teofilina e aminofilina. Estes compostos podem ser administrados de acordo com técnicas conhecidas, antes ou em simultâneo com os compostos activos aqui descritos.
De acordo com outro aspecto, a presente invenção diz respeito a uma formulação farmacêutica que compreende um composto activo tal como descrito antes num veículo 41 farmaceuticamente aceitável (v.g., uma solução aquosa de veículo) . De um modo geral, o composto está incluído na composição numa quantidade eficaz para o tratamento das superfícies mucosas, tais como inibindo a reabsorção de água pelas superfícies mucosas, incluindo as superfícies das vias aéreas e outras superfícies.
Os compostos activos aqui descritos podem ser administrados às superfícies mucosas por quaisquer meios adequados, incluindo as vias tópica, oral, rectal, vaginal e dérmica, etc.. Por exemplo, para o tratamento de obstipação, os compostos activos podem ser administrados por via oral ou rectal à superfície mucosa gastrointestinal. 0 composto activo pode ser combinado com um veículo farmaceuticamente aceitável sob qualquer forma adequada, tal como uma solução tópica ou uma solução de soluto salino diluído ou uma solução fisiologicamente estéril, como gotículas, comprimidos ou semelhantes para administração por via oral, como supositório para administração por via rectal ou genito-uretral, etc.. É possível incluir excipientes na formulação para aumentar a solubilidade dos compostos activos, consoante desejado.
Os compostos activos aqui descritos podem ser administrados às superfícies das vias aéreas de um paciente por qualquer meio adequado, incluindo sob a forma de uma pulverização, nébula ou gotículas dos compostos activos, num veículo farmaceuticamente aceitável, tal como soluções fisiológicas ou soluções de soluto salino diluídas ou água destilada. Por exemplo, os compostos activos podem ser preparados como formulações e podem ser administrados tal com descrito na patente de invenção norte-americana n° 5 789 391 de Jacobus. 42
As partículas de agentes activos sólidos ou líquidos preparadas para a prática da presente invenção podem, conforme salientado antes, incluir partículas com um tamanho respirável ou não respirável; isto é, para as partículas respiráveis, partículas com um tamanho suficientemente pequeno para passar através da boca e da laringe após inalação e para os brônquios e alvéolos dos pulmões, e, para as partículas não respiráveis, partículas suficientemente grandes de modo a serem retidas nas passagens das vias aéreas nasais em vez de passarem através da laringe e para os brônquios e alvéolos dos pulmões. De um modo geral, as partículas com um tamanho compreendido entre cerca de 1 e 5 mícron (mais particularmente, com um tamanho inferior a cerca de 4,7 mícron) são respiráveis. As partículas com um tamanho não respirável possuem um tamanho superior a cerca de 5 mícron e até um tamanho de gotículas visíveis. Assim, para a administração por via nasal, é possível utilizar um tamanho de partícula compreendido entre 10 e 500 pm para garantir um a retenção na cavidade nasal.
Na preparação de uma formulação de acordo com a invenção, os agentes activos ou os seus sais fisiologicamente aceitáveis ou bases livres são tipicamente misturados com, inter alia, um veículo aceitável. Evidentemente, o veiculo deverá ser compatível com quaisquer outros ingredientes na formulação e não deverá ser prejudicial para o paciente. O veículo deverá ser sólido ou líquido, ou ambos, e deverá ser, preferencialmente, formulado com o composto sob a forma de uma formulação de dose unitária, por exemplo, uma cápsula, que poderá conter entre 0,5% e 99% em peso do composto 43 activo. É possível incorporar um ou vários compostos activos na formulação da invenção, formulações essas que poderão ser preparadas por meio de quaisquer técnicas conhecidas na especialidade de farmácia, as quais compreendem essencialmente a mistura dos componentes.
As composições que contêm partículas secas respiráveis ou não respiráveis de agente activo micronizado podem ser preparadas por moagem do agente activo seco com um almofariz e um pistão, sendo a composição micronizada depois passada através de um crivo de 400 mesh para quebrar ou separar os aglomerados grandes. A composição de agente activo em partículas pode conter, facultativamente, um dispersante que serve para facilitar a formulação de um aerossol. Como dispersante adequado refere-se a lactose, a qual pode ser misturada com o agente activo numa proporção adequada qualquer (v.g., uma proporção de 1:1 em peso).
Os compostos activos aqui descritos podem ser administrados às superfícies das vias aéreas, incluindo as passagens nasais, sinos e pulmões de um sujeito, por meios adequados conhecidos na especialidade, tais como por gotas para o nariz, nébulas, etc.. De acordo com uma variante da invenção, os compostos activos da presente invenção são administrados por lavagem transbroncoscópica. De acordo com uma variante preferida da invenção, os compostos activos da presente invenção são depositados nas superfícies das vias aéreas dos pulmões por meio da administração de uma suspensão de aerossóis de partículas respiráveis que compreendem o composto activo, a qual é inalada pelo sujeito. As partículas respiráveis podem ser líquidas ou sólidas. São conhecidos diversos inaladores para a 44 administração de partículas em aerossol aos pulmões de um sujeito. É possível utilizar inaladores, tais como os desenvolvidos pela empresa Inhale Therapeutic Systems, Paio Alto, Califórnia, EUA, incluindo, mas sem que isso constitua qualquer limitação, os descritos nas patentes de invenção norte-americanas nos 5 740 794; 5 654 007; 5 458 135; 5 775 320 e 5 785 049. É possível utilizar inaladores tais como os desenvolvidos pela empresa Dura
Pharmaceuticals, Inc., San Diego, Califórnia, EUA, incluindo, mas sem que isso constitua qualquer limitação, os descritos nas patentes de invenção norte-americanas nos 5 622 166; 5 577 497; 5 645 051 e 5 492 112. Além disso, também é possível utilizar inaladores tais como os desenvolvidos pela empresa Aradigm Corp., Hayward, Califórnia, EUA, incluindo, mas sem que isso constitua qualquer limitação, os descritos nas patentes de invenção norte-americanas nos 5 826 570; 5 813 397; 5 819 726 e 5 655 516. Estes dispositivos são particularmente adequados como inaladores de partículas anidras.
Os aerossóis de partículas líquidas que compreendem o composto activo podem ser produzidos por quaisquer meios adequados, tais como com um nebulizador de aerossóis sob pressão ou um nebulizador de ultra-sons. Ver, v. g. , a patente de invenção norte-americana n° 4 501 729 . Os nebulizadores são dispositivos comercialmente disponíveis que transformam soluções ou suspensões de ingrediente activo numa nébula terapêutica de aerossóis por meio da aceleração de gás comprimido, tipicamente ar ou oxigénio, através de um orifício de venturi estreito ou por meio de agitação com ultra-sons. Como formulações adequadas para 45 utilização em nebulizadores refere-se as constituídas pelo ingrediente activo num veiculo liquido, em que o ingrediente activo constitui até 40% p/p da formulação, mas preferencialmente é inferior a 20% p/p. 0 veiculo é tipicamente água (e mais preferencialmente água estéril isenta de pirogénio) ou uma solução aquosa alcoólica diluida. É possível utilizar veículos de perfluorocarbono. Como aditivos facultativos refere-se conservantes, no caso de a formulação não ser esterilizada, por exemplo, hidroxibenzoato de metilo, antioxidantes, edulcorantes; óleos voláteis, agentes de tamponamento e tensioactivos.
Os aerossóis de partículas sólidas que compreendem o composto activo também podem ser produzidos com qualquer gerador de medicamentos em aerossóis de partículas sólidas. Os geradores de aerossóis para a administração de medicamentos de partículas sólidas a um sujeito produzem partículas que são respiráveis, conforme explicado antes, e geram um volume de aerossol que contém uma dose pré-determinada de medicamento numa taxa adequada para administração a um ser humano. Um insuflador constitui um tipo ilustrativo de um gerador de aerossóis de partículas sólidas. Como formulações adequadas para administração por insuflação refere-se pós finamente divididos, os quais podem ser administrados por meio de um insuflador ou transportados até à cavidade nasal sob a forma de uma pulverização. No insuflador, o pó (v.g., uma dose determinada eficaz para efectuar os tratamentos aqui descritos) está contido em cápsulas ou cartuchos, tipicamente de gelatina ou de plástico, os quais são furados ou abertos in situ, sendo o pó administrado por meio do ar puxado através do dispositivo durante a inalação 46 ou por meio de uma bomba manual. 0 pó utilizado no insuflador é constituído apenas pelo ingrediente activo ou por uma mistura de pó que compreende o ingrediente activo, um diluente de pó adequado, tal como lactose, e um tensioactivo facultativo. Tipicamente, o ingrediente activo compreende entre 0,1% e 100% p/p da formulação. Um inalador de dose determinada constitui um segundo tipo ilustrativo de um gerador de aerossóis. Os inaladores de dose determinada são dispositivos pressurizados de aerossóis, que contêm tipicamente uma formulação em suspensão ou solução de ingrediente activo num propulsor liquefeito. Durante a utilização, estes dispositivos dispensam a formulação através de uma válvula adaptada de modo a administrar um volume determinado, tipicamente compreendido entre 10 e 150 pL, para produzir uma pulverização de partículas finas que contêm o ingrediente activo. Como propulsores adequados refere-se determinados compostos clorofluorocarbonados, por exemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano e suas misturas. A formulação pode ainda conter um ou vários co-solventes, por exemplo, etanol, tensioactivos, tais como ácido oleico ou trioleato de sorbitano, antioxidantes e edulcorantes adequados. O aerossol, quer seja formado a partir de partículas sólidas ou líquidas, pode ser produzido pelo gerador de aerossóis a uma taxa compreendida entre cerca de 10 a 150 litros por minuto, mais preferencialmente entre 30 e 150 litros por minuto e ainda mais preferencialmente a cerca de 60 litros por minuto. Os aerossóis que contêm quantidades superiores de medicamente podem ser administrados mais rapidamente. 47 A dosagem dos compostos activos aqui descritos irá variar em função da patologia que se pretende tratar e do estado do sujeito, mas irá estar normalmente compreendida entre cerca de 0,01, 0,03, 0,05, 0,1 e 1, 5, 10 ou 20 mg de agente farmacêutico, depositado sobre as superfícies das vias aéreas. A dose diária pode ser dividida entre a administração de uma dose unitária ou múltiplas doses unitárias. O objectivo é alcançar uma concentração de agentes farmacêuticos nas superfícies das vias aéreas do pulmão compreendida entre 10~9 e 104 M.
De acordo com outra variante, estes são administrados por meio da administração de uma suspensão em aerossol de partículas respiráveis ou não respiráveis (de preferência não respiráveis) que compreendem o composto activo, as quais sao inaladas pelo sujeito através do nariz. As partículas respiráveis ou não respiráveis podem ser líquidas ou sólidas. A quantidade de agente activo incluído pode ser uma quantidade suficiente para se alcançar concentrações dissolvidas de agente activo nas superfícies das vias aéreas do sujeito compreendidas entre cerca de 1CT 9, IO-8 ou 10~7 e cerca de IO-3, 1CT2 ou 10_1 moles/litro e mais preferencialmente entre cerca de IO-9 e cerca de 1CT4 moles/litro. A dosagem de composto activo irá variar em função da patologia que se pretende tratar e do estado do sujeito, mas irá ser normalmente uma quantidade suficiente para se alcançar concentrações dissolvidas de composto activo nas superfícies das vias aéreas nasais do sujeito compreendidas entre cerca de 1CT9, IO-8, 1CT7 e cerca de 10 3, 10-2 ou 10~4 moles/litro e mais preferencialmente entre cerca de 10“7 e cerca de 10“4 moles/litro. Em função da solubilidade da 48 formulação particular de composto activo administrada, a dose diária pode ser dividida entre a administração de uma dose unitária ou várias doses unitárias. A dose diária em peso pode estar compreendida entre cerca de 0,01, 0,03, 0,1, 0,5 ou 1,0 e 10 ou 20 miligramas de partículas de agente activo para um ser humano, em função da idade e do estado do sujeito. Uma dose unitária preferida é de cerca de 0,5 miligramas de agente activo administrada num regime de 2 a 10 administrações por dia. A dosagem pode ser fornecida como uma unidade pré-embalada por quaisquer meios adequados (v.g.r por encapsulação de uma cápsula de gelatina).
De acordo com uma variante da invenção, a composição de agente activo em partículas pode conter uma base livre de agente activo e um sal farmaceuticamente aceitável para proporcionar uma libertação inicial e uma libertação prolongada de agente activo para dissolução nas secreções mucosas do nariz. Tal composição serve para proporcionar o alívio inicial do paciente e o alívio prolongado ao longo do tempo. É esperado que o alívio prolongado, diminuindo a número de administrações diárias necessárias, aumente a aceitação por parte do paciente no decorrer dos tratamentos com o agente activo.
Como formulações farmacêuticas adequadas para administração às vias aéreas refere-se formulações de soluções, emulsões, suspensões e extractos. Ver, J. Nairn, Solutions, Emulsions, Suspensions and Extracts, na obra Remington: The Science and Practice of Pharmacy, cap. 86 (19a ed. 1995) . As formulações farmacêuticas para administração por via nasal podem ser preparadas conforme descrito nas patentes de invenção norte-americanas nos 4 49 389 393 de Schor; 5 707 644 de Illum; 4 294 829 de Suzuki e 4 835 142 de Suzuki.
As nébulas ou aerossóis de partículas líquidas que compreendem o composto activo podem ser preparadas por quaisquer meios adequados, tais como por meio de pulverização nasal individual com o agente activo num veículo aquoso farmaceuticamente aceitável, tal como uma solução estéril de soluto salino ou água estéril. A administração pode ser efectuada por meio de um nebulizador de aerossóis pressurizado ou por meio de um nebulizador de ultra-sons. Ver, v.g., as patentes de invenção norte-americanas nos 4 501 729 e 5 656 256. As formulações adequadas para utilização em gotículas nasais ou num frasco de pulverização nasal são constituídas pelo ingrediente activo num veiculo líquido, em que o ingrediente activo compreende até 40% p/p da formulação, mas preferencialmente é inferior a 20% p/p. tipicamente, o veículo é água (e mais preferencialmente água estéril isenta de pirogénio) ou uma solução aquosa alcoólica diluída, de preferência preparada numa solução de cloreto de sódio a 0,12%-0,8%. Como aditivos facultativos refere-se conservantes, no caso de a formulação não ser esterilizada, por exemplo, hidroxibenzoato de metilo, antioxidantes, edulcorantes, óleos voláteis, agentes de tamponamento, agentes osmoticamente activos (v.g., manitol, xilitol, eritritol) e tensioactivos.
As composições que contêm partículas anidras respiráveis ou não respiráveis do agente activo micronizado podem ser preparadas por moagem do agente activo seco com um almofariz e um pistão, e subsequente passagem da 50 composição micronizada através de um crivo de 400 mesh para quebrar ou separar os aglomerados grandes. A composição de partículas pode conter, facultativamente, um dispersante que serve para facilitar a formação de aerossol. Como dispersante adequado refere-se lactose, que pode ser misturada com o agente activo numa proporção adequada (v.g., uma proporção de 1:1 em peso).
Os compostos de fórmula estrutural (I) podem ser sintetizados de acordo com procedimentos conhecidos na especialidade. Um procedimento sintético representativo é apresentado no esquema seguinte:
Estes procedimentos encontram-se descritos, por exemplo, por E.J. Cragoe, "The Synthesis of Amiloride and Its Analogs" (Capítulo 3) na obra 'Amiloride and Its Analogs', págs. 25-36. Outros métodos para a preparação dos compostos encontram-se descritos, por exemplo, no documento U.S. 3 313 813, aqui incorporado por referência. Ver, em particular, os métodos A, B, C e D descritos no documento U.S. 3 313 813. É possível utilizar diversos ensaios para caracterizar os compostos da presente invenção. A seguir, são descritos ensaios representativos.
Medição in vitro da actividade e reversibilidade do bloqueio do canal de sódio 51
Um ensaio utilizado para avaliar o mecanismo de acção e/ou a potência dos compostos da presente invenção implica a determinação da inibição lumenal do fármaco das correntes de sódio epitelial nas vias aéreas medida sob uma corrente de curto-circuito (ISc)f utilizando monocamadas epiteliais das vias aéreas montadas em câmaras de Ussing. As células obtidas a partir das vias aéreas de seres humanos, cães, ovelhas ou roedores, excisados no momento, são desenvolvidas em inserções porosas Snapwell™ de 0,4 micron (CoStar), mantidas em cultura em condições de interface de ar-liquido (ALI) em meio hormonalmente definido, e testadas quanto à actividade de transporte de sódio (Isc), banhadas em Krebs Bicarbonate Ringer (KBR) em câmaras de Using. Todas as adições de fármaco de teste são efectuadas ao banho lumenal utilizando protocolos de adição de metade de log(dose) (entre 1 x 10-11 M e 3 x 10“5 M) , sendo registada a alteração cumulativa em Isc (inibição). Todos os fármacos são preparados em sulfóxido como soluções de reserva a uma concentração de 1 x 1CT2 M e armazenadas a -20°C. São tipicamente testadas oito preparações em paralelo; duas preparações por ciclo incorporam amilorida e/ou benzamilo como controlos positivos. Após a administração da concentração máxima (5 x ΙΟ-5 Μ), o banho lumenal é trocado três vezes com uma solução de isenta de KBR fresca e mede-se o valor de ISc resultante após cada lavagem, aproximadamente durante 5 minutos. Define-se a reversibilidade como a percentagem de regresso ao valor da linha de base para a corrente de sódio após a terceira lavagem. Todos os dados provenientes dos grampos de voltagem são recolhidos por meio de um programa informático e analisados autonomamente. 52
As relações dose-efeito para todos os compostos são consideradas e analisadas pelo programa informático 'Prism 3.0'. São calculados os valores de CI50, concentrações de máxima eficácia e reversibilidade e comparados com amilorida e benzamilo, como controlos positivos.
Ensaios farmacológicos de absorção (1) Ensaio de desaparecimento apical Células dos brônquios (células de cães, seres humanos, ovelhas e roedores) são desenvolvidas a uma densidade de 0,25 x 106/cm2 numa membrana porosa revestida com colagénio ' Transwell-Col' com uma área de crescimento de 1,13 cm2 numa interface ar-líquido em meio hormonalmente definido, o qual promove um epitélio polarizado. Entre 12 e 20 dias após o desenvolvimento de uma interface ar-liquido (ALI), espera-se que as culturas sejam > 90% ciliadas e que as mucinas se acumulem nas células. Para se garantir a integridade das preparações de células epiteliais das vias aéreas primárias, determina-se a resistência transepitelial (Rt) e as diferenças de potencial transepiteliais (PD), as quais constituem indicadores da integridade da natureza polarizada da cultura. São preferíveis os sistemas de células humanas para os estudos das taxas de absorção a partir de superfícies apicais. 0 ensaio de desaparecimento é efectuado sob condições que imitam as películas "finas" in vivo (-25 pL) e têm início por meio da adição de bloqueadores experimentais do canal de sódio ou de controlos positivos (amilorida, benzamilo, fenamilo) à superfície apical numa concentração inicial de 10 μΜ. Recolhe-se um conjunto de amostras (5 pL de volume por 53 amostra) em diversos instantes, incluindo 0, 5, 20, 40, 90 e 240 minutos. Determina-se as concentrações por medição da fluorescência intrínseca de cada bloqueador do canal de sódio, utilizando um fluorómetro de microplacas 'Fluorocount' ou HPLC. A análise quantitativa utiliza uma curva padrão gerada a partir de materiais padrão autênticos de referência com uma concentração e pureza conhecidas. A análise dos dados da taxa de desaparecimento é efectuada utilizando uma regressão não linear, decaimento exponencial de uma fase (Prism V 3.0). 2. Ensaio microscópico confocal da absorção de congéneres de amilorida
Praticamente todas as moléculas do tipo amilorida possuem fluorescência na zona do ultravioleta. Esta propriedade destas moléculas pode ser utilizada para medir directamente a absorção molecular utilizando microscopia confocal x-z. São colocadas concentrações equimolares dos compostos experimentais e dos controlos positivos, incluindo amilorida e compostos que demonstrem uma rápida absorção no compartimento celular (benzamilo e fenamilo) , sobre a superfície apical de culturas de vias aéreas sob o microscópio confocal. São obtidas imagens x-z em série ao longo do tempo e a magnitude da fluorescência acumulada no compartimento celular é quantificada e representada como uma alteração na fluorescência versus tempo. 3. Ensaios in vitro do metabolismo do composto
As células epiteliais das vias aéreas possuem a capacidade de metabolizar fármacos durante o processo de absorção transepitelial. Além disso, embora menos provável, 54 é possível que os fármacos sejam metabolizados nas superfícies epiteliais das vias aéreas por actividades ectoenzimáticas específicas. Possivelmente como um evento ecto-superfície mais provável, os compostos podem ser metabolizados pelas secreções infectadas que ocupam os lúmenes das vias aéreas de pacientes com uma doença do pulmão, v.g.f fibrose cística. Assim, foram realizados um conjunto de ensaios para caracterizar o metabolismo do composto que resulta da interacção dos compostos de ensaios com epitélios das vias aéreas humanas e/ou produtos lumenais do epitélio das vias aéreas humanas.
No primeiro conjunto de ensaios, a interacção dos compostos de ensaio em KBR, como um estimulador de "ASL", é aplicada à superfície apical de células epiteliais das vias aéreas humanas desenvolvidas no sistema de inserção T-Col. Para a maior parte dos compostos, testa-se o metabolismo (geração de novas espécies) utilizando cromatografia líquida de elevado rendimento (HPLC) para resolver espécies químicas e as propriedades de fluorescência endógenas destes compostos para estimar as quantidades relativas do composto de teste e dos novos metabolitos. Para um ensaio típico, coloca-se uma solução de teste (25 pL de KBR que contém 10 μΜ de composto de teste) na superfície lumenal epitelial. Obtêm-se amostras sequenciais de 5 a 10 pL a partir dos compartimentos lumenal e serossal para análise por HPLC (1) da massa de composto de teste difundida a partir do banho lumenal para o banho serosal e (2) a formação potencial de metabolitos a partir do composto original. Nos casos em que as propriedades de fluorescência da molécula de teste não são adequadas para tais caracterizações, são utilizados compostos radiomarcados 55 nestes ensaios. A partir dos dados de HPLC, é quantificado a taxa de desaparecimento e/ou de formação de novos compostos metabolitos na superfície lumenal e o aparecimento do composto de ensaio e/ou de novos metabolitos na solução basolateral. Os dados referentes à mobilidade cromatográfica de novos metabolitos potenciais com referentes ao composto original também são quantificados.
Para se analisar o metabolismo potencial dos compostos de teste por expectoração em CF, recolhe-se uma mistura "representativa" de expectoração em CF obtida a partir de 10 pacientes com 10 (sob aprovação de IRB). A expectoração é solubilizada numa mistura a 1:5 de solução de KBR com agitação vigorosa, após a qual a mistura é separada em aliquotas de expectoração "limpas", em que uma aliquota é submetida a ultracentrifugação para que se obtenha uma aliquota de "sobrenadante" (limpo = celular; supernadante = fase líquida). Os estudos típicos do metabolismo de compostos por expectoração em CF implicam a adição de massas conhecidas de composto de teste a expectoração de CF "limpa" e a aliquotas de "sobrenadante" de expectoração de CF incubado a 37°C, e subsequente amostragem sequencial de aliquotas provenientes de cada tipo de expectoração para caraterização da estabilidade/metabolismo do composto por análise de HPLC, conforme descrita antes. Conforme descrita antes, a análise do desaparecimento do composto, as taxas de formação de novos metabolitos e as mobilidades em HPLC de novos metabolitos são então efectuadas. 4. Efeitos farmacológicos e mecanismo de acção do fármaco em animais 56 0 efeito dos compostos para aumentar a limpeza mucociliar (MCC) pode ser determinado utilizando um modelo in vivo descrito por Sabater et ai., Journal of Applied Physiology, 1999, págs. 2191 -2196.
EXEMPLOS
Após esta descrição geral da invenção, é possível obter uma compreensão mais ampla por referência a determinados exemplos específicos, os quais são aqui apresentados para fins meramente ilustrativos e não deverão ser considerados como limitativos, salvo quando especificado de outro modo.
Preparação de blogueadores do canal de sódio
Materiais e métodos. Todos os reagentes e solventes foram adquiridos à empresa Aldrich Chemical Corp. e foram utilizados sem mais purificação. Os espectros de NMR foram obtidos num aparelho 'Bruker WM 360' (1H-NMR a 360 MHz e 13C-NMR a 90 MHz) ou num aparelho 'Bruker AC 300' (1H-NMR a 300 MHz e 13C-NMR a 75 MHz) . A cromatografia rápida foi efectuada num sistema Elute™ rápido da empresa Elution Solution (PO Box 5147, Charlottesville, Virgínia 22905), carregado com um cartucho de 90 g de gel de sílica (40M FSO-0110-040155, 32-63 pm) a 20 psi (N2) . A análise de GC foi realizada numa coluna 'Shimadzu GC-17', equipada com uma coluna 'Heliflex Capillary' (Alltech); fase: AT-1, comprimento: 10 metros, Dl: 0,53 mm, película: 0,25 micrómetros. Parâmetros de GC: injector a 320°C, detector a 320°C, caudal de gás FID: H2 a 40 mL/minuto, ar a 400 mL/minuto. Veículo gasoso: proporção de separação 16:1, caudal de N2 de 15 mL/minuto, velocidade de N2 de 18 57 cm/segundo. 0 programa de temperatura é de 70°C entre os 0 e os 3 minutos, 70°C-300°C entre os 3 e os 10 minutos, 300°C entre os 10 e os 15 minutos. A análise de HPLC foi efectuada numa bomba Gilson 322, um detector UV/Vis-156 a 360 nm, equipado com uma coluna 'Microsorb MV C8', 100 A, 25 cm. Fase móvel: A = acetonitrilo com 0,1% de TFA, B = água com 0,1% de TFA. Programa de gradiente: 95:5 de B:A durante 1 minuto, depois 20:80 de B:A ao longo de 7 minutos, depois até 100% de A ao longo de 1 minuto e depois lavagem com 100% de A durante 11 minutos, caudal: 1 mL/minuto.
Exemplo 1
Cloridrato de 4-(4-carboximetilfenil)-butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (9)
9 Éster 4-(4-carboximetilfenil)-butilico do ácido metano-sulfónico (6) . O composto 6 foi preparado de acordo com o procedimento publicado1, 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1,75 (m, 4H) , 2,78 (m, 2H) , 3,12 (s, 3H) , 3,88 (s, 3H) , 4,22 (m, 2H), 7,28 (d, 2H), 7,98 (d, 2H). 58 4-(4-Carboximetilfenil)-butilazida (7). Procedimento típico C.
Dissolveu-se o composto 6 (6 g, 0,02 mol) em 80 mL de DMF anidro e depois adicionou-se azida de sódio (1,8 g, 0, 027 mol) . Agitou-se a suspensão a 80°C (banho de óleo) durante 3 horas. Removeu-se então o solvente sob pressão reduzida e tratou-se o óleo residual com CH2C12 (100 mL) . Lavou-se a solução resultante com água (2 x 100 mL) e com salmoura e secou-se sobre sulfato de magnésio. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida, depois dissolveu-se novamente o resíduo numa mistura a 1:1 de acetato de etilo/hexano (200 mL) e fez-se passar através de uma camada de gel de sílica. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida para se obter 4,1 g (85%) do composto 7 com o aspecto de um óleo límpido. 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1,68 (m, 4H), 2,22 (t, 2H), 3,29 (t, 3H), 3,92 (s, 3H) , 7,28 (d, 2H), 7,98 (d, 2H). 4-(4-Carboximetilfenil)-butilamina (8) .
Dissolveu-se a azida 7 (1,7 g, 7,2 mmol) e trifenil- fosfina (1,9 g, 7,2 mmol) numa solução a 10% de água em THF (66 mL) e agitou-se de um dia para o outro a 25°C. Depois adicionou-se mais trifenilfosfina (0,8 g, 3 mmol) e manteve-se sob aquecimento a 60°C (banho de óleo) durante 6 horas. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida, tratou-se o resíduo com HC1 2 M (100 mL) e extraiu-se com acetato de etilo (2 x 50 mL) . Recolheu-se a fracção de água e adicionou-se hidróxido de amónio até o pH atingir aproximadamente 13. Extraiu-se a mistura com acetato de etilo (2 x 100 mL), depois lavou-se a fracção orgânica com salmoura e com água e secou-se sobre sulfato de sódio. 59
Removeu-se o acetato de etilo sob pressão reduzida para se obter 0,8 g (53%) da amina 8.
Cloridrato de 4-(4-carboximetilfenil)-butilamidino-3, 5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (9) . Procedimento típico D.
Adicionou-se iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloro- pirazinoí 1-2-metil-pseudotioureia (0,2 g, 0,5 mmol) ) a uma solução do composto 8 (0,7 g, 3,4 mmol) em THF (20 mL) .
Agitou-se a mistura de reacção ao refluxo durante 6 horas, depois evaporou-se o solvente e tratou-se o óleo resultante com HC1 a 10% (15 mL) . Isolou-se o precipitado e deixou-se cristalizar duas vezes a partir de etanol para se obter o composto 9 (53 mg, 25%) com o aspecto de um sólido amarelo. ΧΗ NMR (300 MHz, DMS0-d6) δ 1,59 (s lr, 4H) , 2,71 (m, 2H) , 3,83 (s, 3H), 7,40 (d, 2H), 7,48 (s lr, 2H), 7,80 (d, 2H), 8,92 (s lr, 2H), 9,00 (s lr, 1H) , 9,48 (s lr, 2H) , 10,55 (s, 1H) . APCI MS m/z = 420 [C18H22CIN7O3 + H]+.
Exemplo 2 4- (4-Sulfatofenil) -butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazina-carboxamida (10)
60 4- (4-Sulfatofenil) -butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazina-carboxamida (10).
Dissolveu-se cloridrato de 4-(4-hidroxifenil)-butil-amidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida 5 (0,2 g, 0,5 mmol) em 5 mL de piridina anidra e adicionou-se trióxido de enxofre-piridina (450 mg, 2,5 mmol). Agitou-se a mistura de reacção de um dia para o outro à temperatura ambiente, isolou-se por filtração o precipitado formado e lavou-se com acetato de etilo (2 x 25 mL) para se obter o produto impuro 10 (180 mg, pureza de 39%, pureza de 87% por HPLC). Purificou-se uma aliquota do composto impuro 10 (67 mg) por cromatografia rápida (gel de silica, cloreto de metileno/metanol/hidróxido de amónio concentrado a 6:3:0,1) para se obter o composto 10 com o aspecto de um sólido amarelo (9,3 mg, 4% com base no composto de partida 5) . ΧΗ NMR (300 MHz, DMSO-cU δ 1,59 (s lr, 4H) , 2,58 (m, 2H) , 3,28 (m, 2H), 7,08 (s, 4H), 7,1-7,9 (m, 6H). ESI MS m/z = 456 [Ci6H2oC1N705S - H] .
Exemplo 3
Cloridrato de 4-[4-(2,3-di-hidroxipropiloxil)-fenil]-butil-amidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (33)
OH
N-Cbz-4- (4-hidroxifenil) -butilamina (29) . 61 A uma suspensão agitada vigorosamente de composto 4 (10,5 g, 0,043 mol) em THF (aprox. 150 mL) adicionou-se hidrogeno-carbonato de sódio (11 g, 0,13 mol) e depois água até se obter uma solução limpida (aprox. 50 mL). Arrefeceu-se a mistura de reacção até 0°C, depois adicionou-se cloroformato de benzilo (10 mL, 0,07 mol) e agitou-se a mistura de reacção de um dia para o outro. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e depois adicionou-se acetato de etilo (aprox. 100 mL) ao residuo. Lavou-se os materiais orgânicos com HC1 (solução 2 M, 2 x 30 mL) , com água (2 x 50 mL) e secou-se sobre sulfato de sódio. Removeu-se o solvente e purificou-se o residuo por cromatografia em coluna (gel de sílica, acetato de etilo/hexano a 1:1) para se obter o composto 29 (10 g, 85%) com o aspecto de um sólido branco. 1 H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1,55 (s lr, 4H) , 2,53 (m, 2H) , 3,19 (m, 2H) , 5,05 (s, 2H) , 5,83 (s, 1H) , 6,73 (d, 2H), 7,00 (d, 2H), 7,38 (m, 5H). N-Cbz-4- (4-aliloxifenil) -butilamina (30) .
Adicionou-se terc-butóxido de potássio (1,7 g, 15,2 mmol) e 18-coroa-6 (0,1 g, 0,3 mmol) a uma solução do composto 29 (4,3 g, 14,3 mmol) em MeCN anidro (80 mL) e agitou-se a mistura durante 20 minutos à temperatura ambiente. Decorrido este tempo, adicionou-se brometo de alilo (1,2 mL, 14,3 mmol) em MeCN (10 mL) . Agitou-se a mistura de reacção de um dia para o outro à temperatura ambiente, depois removeu-se por filtração o precipitado e lavou-se com acetato de etilo. Combinou-se as fracções orgânicas, removeu-se o solvente sob pressão reduzida e purificou-se o resíduo duas vezes por cromatografia rápida (gel de sílica, acetato de etilo/hexano a 1:1) para se 62 obter o composto 30 (3,4 g, 71%) com o aspecto de um sólido branco. 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 1,55 (m, 4H) , 2, 54 (t 2H) , 3,20 (m, 2H) , 4, 50 (d, 2H), 5,08 (s, 2H) , 5, 28 (d 1H) , 5, 40 (d, 1H) , 6,06 (m, 1H), 6,82 (d, 2H) , 7, 05 (d 2H) , 7,33 (s, 5H) . N-Cbz-4- [ (2,3-di-hidroxipropiloxi) -fenil] -butilamina (31) .
Adicionou-se uma solução de tetróxido de ósmio (50 mg, 0,2 mmol) em terc-butanol (8 mL) a uma solução de mono-hidrato de N-óxido de 4-metilmorfolina (1,2 g, 9,1 mmol) em 100 mL (a 1:1) de uma solução de acetona/água e agitou-se a mistura durante 10 minutos à temperatura ambiente. Após este período, adicionou-se o composto 30 (3,1 g, 9,0 mmol) em 50 mL (a 1:1) de uma solução de acetona/água. Agitou-se a mistura de reacção à temperatura ambiente de um dia para o outro, depois adicionou-se NaHS03 (0,5 g) e manteve-se sob agitação durante 15 minutos. Evaporou-se a acetona, ajustou-se o valor de pH até 5,5 por meio da adição de HC1 2 N e depois extraiu-se a mistura com acetato de etilo. Isolou-se a fracção orgânica, secou-se sobre sulfato de sódio e filtrou-se através de gel de sílica. Isolou-se o composto 31 (2,1 g, 62%) com o aspecto de um sólido branco, após remoção do solvente e secagem sob uma pressão hipobárica. 1H NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 1 OO (m, 2H), 1,50 (m, 2H), 2,46 (m, 2H), 3,00 (m, 2H), 3,43 (m, 2H) , 3,80 (m, 2H), 3,93 (t, 1H) , 4,66 (d, 1H), 4,99 (s, 2H) , 6,82 (d, 2H), 7,07 (d, 2H) , 7,26 (s, 1H), 7,33 (s, 5H) 4-[ (2,3-Di-hidroxipropiloxi)-fenilbutilamina (32) .
Dissolveu-se a amina 31 protegida com Cbz (2,1 g, 5,6 mmol) em metanol (50 mL) e adicionou-se Pd/C (0,46 g, 5% 63 húmido) em metanol (20 mL) . Agitou-se a mistura de reacção durante 3 horas sob 1 atmosfera de hidrogénio e depois filtrou-se a solução através de uma camada de gel de silica. Evaporou-se então o solvente para se obter a amina livre 32 (0,9 g, 66%). NMR (300 MHz, DMS0-d6) δ 1,37 (m, 2H), 1,50 (m, 2H), 2,92 (m, 1H), 3,22-4, 05 (s lr, 4H) , 3,43 (m, 2H), 3,93 (m, 1H), 6,82 (d, 2H), 7,07 (d, 2H).
Cloridrato de 4- [4- (2,3-Di-hidroxipropiloxil) -fenil] - butilamidino-3, 5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (33) . (procedimento geral Z)
Adicionou-se iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloro-pirazinoil-2-metil-pseudotioureia (1,5 g, 3,8 mmol) a uma solução do composto 32 (0,9 g, 3,7 mmol) numa mistura de THF (50 mL) e diisopropiletilamina (2 mL) . Agitou-se a mistura de reacção ao refluxo (66°C) durante 4 horas. Decorrido este período, arrefeceu-se a mistura de reacção até à temperatura ambiente e isolou-se o precipitado formado com o aspecto de um sólido amarelo. Lavou-se o sólido obtido com HC1 a 5% e com água e secou-se sob uma pressão hipobárica para se obter o composto 33 (0,88 g) com o aspecto de um sólido amarelo. Evaporou-se as águas-mãe e purificou-se o resíduo por cromatografia rápida (gel de sílica, clorofórmio/metanol/hidróxido de amónio concentrado a 5:1:05). Tratou-se o composto amino livre isolado com HC1 a 5% para se obter uma porção adicional do composto 33 (0 ,12 g) . 0 rendimento total de composto 33 foi de 53% NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 1,56 (m, 4H), 2,56 (s lr, 2H) 3, 31 (m, 2H) , 3,42 (m, 2H), 3,82 (m, 2H) , 3, 93 (m, 2H) 4,32 (s lr, 4H) , 6,84 (d, 2H) , 7,10 (d, 2H) , 7,45 (s lr, 64 2Η), 8,81 (s lr, 1H) , 8,94 (s lr, 1H) , 9,25 (s lr, 1H) , 10,52 (s, 1H) . APCI MS m/z = 452 [C19H26CIN7O4 + H]+.
Exemplo 4 3,5-Diamino-6-cloropirazinacarboxamida-amidinas substituídas (cont.)· Preparação alternativa da amina 32 4-(4-Metoxifenil)-butiramida (117) .
Combinou-se ácido 4-(4-metoxifenil)-butírico (1) (450 g, 2,32 mol) com THF anidro (4 L) e 4-metilmorfolina (268 mL, 2,43 mol) num frasco com três entradas de 12 L equipado com uma agitadora mecânica, um banho de arrefecimento de gelo-metanol e sob uma atmosfera de azoto. Utilizou-se pequenos bocados de gelo fundente para levar a temperatura do banho até um valor inferior a -20°C. Adicionou-se cloroformato de isobutilo a uma velocidade tal que a temperatura interna não excedesse -10°C. Depois de se agitar durante 30 minutos a uma temperatura entre -10°C e -20 °C, adicionou-se de uma só vez uma solução 4,7 M de amónia em metanol (990 mL, 4,64 mol). Durante a adição, a temperatura aumentou até 0°C. Manteve-se a mistura de reacção sob agitação durante 30 minutos e depois manteve-se em repouso de um dia para o outro. Transferiu-se a mistura de produto para um funil de separação de 22 L com acetato de etilo (6 L) e uma solução de cloreto de sódio a 10% (1,5 L). Separou-se as camadas e lavou-se a solução orgânica com uma solução de cloreto de sódio a 10% (4 x 1 L) e depois com salmoura (3 x 500 mL). Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de sódio, filtrou-se, evaporou-se e colocou-se sob uma pressão hipobárica de um dia para o outro. Obteve-se 65 432 g (97%) de amina pura (117) com o aspecto de um sólido esbranquiçado. 65
XH NMR (300 MHz, CD3OD) δ 1, 81- -1,93 (m, 2H) , 2,20 (t, J= 7,7 Hz, 2H), 2,57 (t, J= 7,7 Hz, 2H) , 3,74 (s, 3H), 6,82 (d, J= 8,7 Hz), 7,09 (d, J-- = 8, 7 Hz , 1H) . Cl MS m/z = 194 [CnH15N02 + H] +.
í m 1. (1 r*fius.*, 2h 2. ssti.fição/es'™p®3E,açãss njjst-sraítl 1. 4&%nm, -mnwmA-Tb açte.nmah HjO, )»4· tiicusanc.
OH 33M «asi EtOH 5% aiol dss m,. > 1 -5h
Bromidrato de 4-(4-hidroxifenil)-butilamina (4) .
Combinou-se 4-(4-metoxifenil)-butiramida (117) (200 g, 1,0 mol) e THF (300 mL) num frasco com três entradas de 12 L equipado com uma manta de aquecimento, um termómetro interno e um condensador de refluxo. Agitou-se lenta e mecanicamente a suspensão e em simultâneo adicionou-se, gota a gota, complexo de borano.THF 1 Μ (1 L, 1 mol) com o auxilio de um funil de adição de equilíbrio de pressão ao longo de 20 minutos. Adicionou-se, gota a gota, mais 2,2 L (2,2 mol) de complexo borano*THF 1 M ao longo de 20 minutos. A temperatura da mistura de reacção aumentou até 45°C durante a adição. Agitou-se a mistura de reacção e aqueceu-se ao refluxo durante 1 hora, ao refluxo durante 2 horas e depois deixou-se arrefecer durante 2 horas. Adicionou-se, gota a gota, lenta e cuidadosamente, metanol (500 mL) à mistura de reacção. Observou-se uma forte libertação de H2. Aqueceu-se a mistura de reacção ao refluxo durante 2 horas e deixou-se arrefecer de um dia para o outro. Evaporou-se a mistura de reacção e depois co-evaporou-se com tolueno (500 mL) até se obter um óleo espesso. Adicionou-se, lenta e cuidadosamente, HBr a 48% (3 L) à mistura de reacção. Observou-se borbulhamento e formação de espuma durante esta adição, que era exotérmica. Após a adição, a mistura de reacção pôde ser agitada e agitou-se ao refluxo durante 7 horas. Deixou-se arrefecer a mistura de reacção sob agitação de um dia para o outro. Agitou-se a mistura de reacção com arrefecimento em banho de gelo e depois filtrou-se com sucção para se recolher um sólido esbranquiçado. Co-evaporou-se o sólido com tolueno/ /metanol (a 1:1) e depois secou-se sob uma pressão hipobárica a 60°C de um dia para o outro. Obteve-se 197 g 67 (77%) do composto (4) com o aspecto de um sólido cristalino esbranquiçado. XH NMR (300 MHz, CD3OD) δ 1,66 (m, 4H), 2,57 (m, 2H) , 2,92 (m, 2H), 6,70 (d, J= 8,5 Hz, 2H) , 7,01 (d, J= 8,5, Hz, 2H) . Cl MS m / z =166 [Ci0Hi5NO + H]+. W-Cbz-4- (4-hidroxifenil) -butilamina (29) .
Combinou-se bromidrato de 4-( 4-hidroxifenil)-butilamina (4) (197 g, 0,80 mol), água (1 L) , 1,4-dioxano (1 L) e bicarbonato de sódio (336 g, 4 mole) e agitou-se num banho de arrefecimento de gelo-metanol. Adicionou-se, gota a gota, cloroformato de benzilo (141 mL, 0,96 mol) ao longo de 5 minutos a -2°C, não se tendo verificado qualquer exotermia apreciável. Agitou-se e deixou-se aquecer até à temperatura ambiente, à medida que o banho de arrefecimento arrefecia de um dia para o outro. Adicionou-se, gota a gota, uma quantidade suplementar de cloroformato de benzilo (8 mL, 0,54 mol) e manteve-se sob agitação durante 2 horas. Evaporou-se então a mistura de produto até cerca de 500 mL e transferiu-se para um funil de separação de 12 L com acetato de etilo, decantando em simultâneo a partir dos sólidos. Extraiu-se a camada aquosa com acetato de etilo (3 x 1 L) . Combinou-se os extractos, lavou-se com salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio, filtrou-se e evaporou-se para se obter 265 g do produto impuro. Submeteu-se uma porção do produto impuro (130 g) a cromatografia (gel de silica, hexano/acetato de etilo a 5:1) utilizando tolueno para carregar a coluna. Deixou-se cristalizar o material impuro restante a partir de tolueno/heptano a 1:1. Filtrou-se com sucção este material para recolher o sólido e lavou-se com tolueno/heptano a 1:1. 68
Submeteu-se este material a secagem sob uma pressão hipobárica a 45°C durante 2 horas. 0 rendimento combinado do composto (29) foi de 150 g (62%) de um sólido cristalino branco. 1E NMR (300 MHz, CDC13) δ 1, 43-1,65 (m, 4H) , 2,52 (t, J= 7,4 Hz, 2H), 3,19 (q, J= 6,4 Hz, 2H) , 4,78 (s lr, 1H), 5,09 (s, 2H), 5,77 (s, 1H), 6,74 (d, J= 8,5 Hz, 2H) , 6,98 (d, J= 8,5 Hz, 2H), 7,34 (s, 5). Cl MS m/z = 300 [Ci8H21N03 + H]+. W-Cbz-4-[4-(2,3-di-hidroxipropiloxi) -fenil] -butilamina (31) .
Durante 2 horas, agitou-se ao refluxo, sob uma atmosfera de árgon, W-Cbz-4-( 4-hidroxifenil) -butilamina (31) (30 g, 0,10 mol), glicidol (8,0 mL, 0,12 mol), etanol (30 mL) e trietilamina (0,7 mL, 0,005 mol). Evaporou-se a mistura de produto, retomou-se em acetato de etilo quente e filtrou-se com sucção através de uma camada de gel de sílica, eluindo com acetato de etilo. Depois de se evaporar até se obter um sólido branco, deixou-se recristalizar este sólido a partir de tolueno para se obter 21,8 g (58%) do composto (31). 1R NMR (300 MHz, CD3OD) δ 1, 42-1,65 (m, 4H) , 2,54 (t, J= 7,5 Hz, 2H), 3,11 (t, J= 6,4 Hz, 2H), 3,58-3,71 (m, 2H), 3,88-4, 04 (m, 3H) , 5,05 (s, 2H) , 6,84 (d, J= 8,7 Hz, 2H) , 7,06 (d, J= 8,5 Hz, 2H), 7,32 (s, 5H). 4-[4-(2,3-Propanodiol-l-oxi)-fenil]-butilamina (32) .
Sob pressão atmosférica de H2, agitou-se N-Cbz-4-[4-(2,3-di-hidroxipropiloxi)-fenil]-butilamina (31) (67 g, 0,179 mol), etanol (900 mL), ácido acético (50 mL) e paládio a 10% sob carvão a 50% húmido (10 g). Depois de se agitar de um dia para o outro, purgou-se a mistura de 69 reacção com azoto e filtrou-se com sucção através de uma camada de celite. Evaporou-se esta mistura e depois co-evaporou-se 3 vezes com etanol (500 mL) . Submeteu-se o resíduo a cromatografia (gel de sílica, cloreto de metileno/metanol/hidróxido de amónio concentrado a 100:10:1) para se obter 38 g (89%) do composto puro (32). XH NMR (300 MHz, CD3OD) δ 1,42-1,55 (m, 2H), 1,55-1,68 (m, 2H), 2,56 (t, J= 7,5 Hz, 2H), 2,65 (t, J= 7,2 Hz, 2H), 3,58-3, 72 (m, 2H) , 3, 89-4, 05 (m, 3H) , 6,85 (d, J= 8,7 Hz, 2H), 7,08 (d, J= 8,7 Hz, 2H).
Exemplo 5 4- [4- (2,3-Diacetoxipropiloxi) -fenil] -butilamidino-3, 5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (36)
W-Cbz-4-[ (2,3-diacetoxipropiloxi) -fenil] -butilamina (34) .
Adicionou-se anidrido acético (0,6 ml, 6 mmol) a uma solução do composto 31 (0,55 g, 1,5 mmol) em piridina anidra (50 mL), sob agitação. Agitou-se a mistura de reacção durante 3 horas a 25°C e durante 3 horas a 40°C (banho de óleo) . Decorrido este período, extinguiu-se a mistura de reacção com HC1 2 N (100 mL) e extraiu-se com acetato de etilo. Lavou-se a fracção orgânica com água e secou-se sobre sulfato de sódio. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida para se obter o composto 34 (0,6 g, 86%) 70 com o aspecto de um pó branco. *Η NMR (300 MHz, CD1C •3) δ 1, 55 (m, 4H) , 1,98 (s, 3H), 2,02 (s, 3H) , 2,55 (m, 2H) , 4, 08 (m, 2H) , 4,30 (m, 2H), 4,45 (m, 1H ), 4, 80 (s lr, 1H) , 5, 08 (s, 2H) , 5,38 (m, 1H), 6,82 (d, 2H) , 7, 08 (d, 2H) , 7,35 (s, 5H). 4-[(2,3-Diacetoxipropiloxi)-fenil]-butilamina (35).
Dissolveu-se a amina 34 protegida com Cbz (0,6 g, 1,3 iranol) em metanol (25 mL) que continha 1% de ácido acético, e depois adicionou-se Pd/C (0,22 g, 5% húmido). Agitou-se a mistura de reacção durante 3 horas em ambiente de hidrogénio (1 atm), depois filtrou-se a solução através de uma camada de gel de sílica e evaporou-se o solvente para se obter a amina 35 (0,37 g, 86%) com o aspecto de um óleo límpido. 4- [4- (2,3-Diacetoxipropiloxi) -fenil] -butilamidino-3, 5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (36) .
Adicionou-se iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloro-pirazinoí1-2-metil-pseudotioureia (0,37g, 0,95 mmol) a uma solução do composto 35 (0,27 g, 0,7 mmol) numa mistura de THF (40 mL) e diisopropiletilamina (1 mL) . Agitou-se a mistura de reacção ao refluxo (66°C) durante 6 horas. Decorrido este período, evaporou-se o solvente e dissolveu-se o resíduo em MeOH. Adicionou-se gel de sílica (25 mL) e removeu-se o solvente sob pressão reduzida para adsorver o composto em gel de sílica. Adicionou-se este gel de sílica ao topo de uma coluna de gel de sílica e submeteu-se a cromatografia rápida (gel de sílica, clorofórmio/metanol/ /hidróxido de amónio concentrado a 10:1:0,1) para se obter o composto impuro 36 (128 mg). Uma segunda cromatografia 71 proporcionou o composto puro 36 (14 mg, 3,7%) com o aspecto de um pó amarelo. ΧΗ NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 1,56 (m, 4H) , 2,05 (s, 6H) , 2,58 (m, 2H) , 3,14 (m, 2H) , 4,10 (m, 2H) , 4,28 (m, 2H), 5,28 (s lr, 1H) , 6,58 (s lr, 2H) , 6,82 (m, 2H) , 7,10 (m, 2H) . APCI MS m/z = 536 [C23H3oC1N706 + H]+-
Exemplo 6 4- [4- (2,2-Dimetil- [1,3] dioxolano-4-il) -metiloxifenil] -butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazina-carboxamida (37)
4- [4- (2,2-Dimetil- [1,3] dioxolano-4-il) -metiloxifenil] -butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazina-carboxamida (37) .
Colocou-se em suspensão o composto 33 (150 mg, 0,3 mmol) em acetona anidra (50 mL) e depois adicionou-se metanol até se obter uma solução límpida (aprox. 15 mL) . Adicionou-se mono-hidrato do ácido p-tolueno-sulfónico (25 mg) em conjunto com crivos moleculares (5 A) e agitou-se a mistura de reacção durante 48 horas à temperatura ambiente. Decorrido este período, filtrou-se a mistura de reacção, adicionou-se gel de sílica (20 mL) e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Adicionou-se esta mistura de reacção adsorvida em gel de sílica ao topo de uma coluna de cromatografia rápida de gel de sílica. Isolou-se o composto 37 (120 mg, 81%) por cromatograf ia rápida (gel de sílica, 72 clorofórmio/metanol/hidróxido de amónio concentrado a 10:1:0,1) com o aspecto de um sólido amarelo. 1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) δ : 1,30 (s, 3H), 1,34 (s, 3H) , 1,52 (s lr, 4H) , 2,56 (s lr, 2H) , 3,13 (s lr, 2H), 3 ,71 (m, 1H) , 3 ,92 (m, 2H) , 4 , 08 (m, 1H) , 4, 45 (m , 1H) , 6,64 (s lr, 2H) 1 , 6 , 82 (m, 2H) , 7 ,12 (m, 2H) . APCI MS m/ z = 492 [ :c22h 30CIN7O4 + h; ]+.
Exemplo 7 4- [4- (Metil-2,3,4-tri-O-acetil-glucopiranonuronato-l-O-il) -fenil] -butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (40)
Ester metilico do ácido 2,3,4-tri-O-acetil-l-O-[4-(4-benziloxicarbonilaminobutil)-fenil]-glucopiranurónico (38) .
Adicionou-se tricloroimidato do éster metilico do ácido 2,3,4-tri-O-acetil-a-D-glucurónico (1,6 g, 3,3 mmol), sob uma atmosfera de árgon, a aminofenol protegido 29 em cloreto de metileno anidro (40 mL) e depois arrefeceu-se a solução até -25°C. Depois de se agitar durante 10 minutos, 73 adicionou-se BF3*OEt2 (0,045 mL, 0,33 mmol) em cloreto de metileno (5 mL) . Agitou-se a mistura de reacção durante 1,5 horas a -25°C, depois deixou-se aquecer até -10°C e manteve-se sob agitação durante 1 hora a essa temperatura. Decorrido este período, aumentou-se a temperatura até 25°C, agitou-se a mistura de reacção durante 1 hora e depois extinguiu-se com cloreto de amónio saturado (25 mL). Extraiu-se a mistura com cloreto de metileno, depois lavou-se a fracção orgânica com água e secou-se sobre sulfato de sódio. Evaporou-se o solvente e purificou-se o resíduo por cromatografia rápida (gel de sílica, acetato de etilo/hexano a 1:2) para se obter o composto 38 (1,5 g, 72%) com 0 aspecto de um sólido branco. 1H NMR (300 MHz, DMSO- -d6) δ 1,41 (m, 2H) , 1,51 (m, 2H), 1,99-2,02 (m, 9H) , 2,54 (m, 2H), 3,00 (m,2H), 3,63 (s, 3H), 4,69 (m, 1H) , 4, 99 (s, 2H) , 5,04-5,10 (m, 2H) , 5,46 (m, 1H) , 5,60 (m, 1H) , 6,88 (d, 2H), 7 12 (d, 2H), 7,27 (m, 1H), 7,33 (s, 5H) . APCI MS m/z = 616 [C31H37NO12 + H]+. Éster metilico do ácido 2,3,4-tri-O-acetil-l-O-[4-(4- aminobutil) -fenil] -glucopiranurónico (39) .
Dissolveu-se o glucuronido 38 (1,5 g, 2,4 mmol) em
metanol anidro (100 mL) e adicionou-se Pd/C (0,62 g, 5%). Agitou-se a mistura de reacção em ambiente de hidrogénio (1 atm) durante 2,5 horas à temperatura ambiente. Decorrido este período, fez-se passar a solução através de uma camada de gel de sílica e evaporou-se o solvente sob pressão reduzida para se obter a amina 39 (0,94 g, 84%) . 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1,46 (m, 2H) , 1,60 (m, 2H) , 2,08 (m, 9H), 2,58 (m, 2H) , 2,72 (m, 2H) , 3,63 (s, 3H) , 4,14 (m, 74 1Η), 5,10 (m, 1H), 5,34 (m, 3H) , 6,90 (d, 2H) , 7,12 (d, 2H) . 4- [4- (Metil-2,3,4-tri-O-acetil-glucopiranonuronato-l-O-il) -fenil] -butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (40) .
Adicionou-se iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloro-pirazinoí 1-2-metil-pseudotioureia (0,30 g, 0,8 mmol) a uma solução de composto 39 (0,4 g, 0,8 mmol) numa mistura de THF (40 mL) e diisopropiletilamina (3 mL) . Agitou-se a mistura de reacção ao refluxo (66°C) durante 2 horas. Decorrido este período, evaporou-se o solvente e colocou-se em suspensão o resíduo em THF. Adicionou-se gel de sílica (15 mL) e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Transferiu-se este gel de sílica para o topo de uma coluna de cromatografia de gel de sílica. Purificou-se o composto alvo 40 (0,32 g, 48%) por cromatograf ia rápida (gel de silica, clorofórmio/etanol/hidróxido de amónio concentrado a 12:1:0,1) e isolou-se sob a forma de um pó amarelo. NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1,61 (s lr, 4H) , 2, 05 (s, 9H) , 2, 55 (m, 2H) , 3,49 (s lr, 2H), 3,71 (m, 3H) , 4,22 (m, 1H) , 5, 12 (m, 1H) , 5,34 (m, 3H) , 6,88 (m, 2H) , 7 04 (d, 2H) . APCI MS m/z = 694 [C29H36CIN7O11 + H]+.
Exemplo 8 4- [4- (5-Carboxi-glucopiranonuronato-l-O-il) -fenil] -butil-amidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (41) 75
4- [4- (5-Carboxi-2,3, 4-tri-O-acetil-glucopiranonuronato-l-O-il) -fenil] -butilamidino-3, 5-diamino-6-cloropirazina-carboxamida (41).
Adicionou-se o composto 40 (0,31 g, 0,44 mmol) a uma mistura de THF/água (a 1:1, 40 mL) e arrefeceu-se a solução turva resultante até -10°C. Adicionou-se uma solução de NaOH em água (4 mL de uma solução a 1,24 N) e manteve-se sob agitação a 10°C durante 1,5 horas. Decorrido este período, deixou-se aquecer a mistura de reacção até à temperatura ambiente e removeu-se o THF sob pressão reduzida. Ajustou-se o valor de pH da solução restante até 6 por adição, gota a gota, de HC1 1 N. Recolheu-se por centrifugação o precipitado formado e lavou-se com água fria (3 x 20 mL). Isolou-se o composto 41 (0,18 g, 75%) com o aspecto de um pó amarelo, após secagem sob uma pressão hipobárica durante 48 horas. 1H NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 1,56 (s lr, 4H), 2,56 (m, 2H), 3,19 (m, 2H), 3,15 -3,40 (s lr, 1H), 3,25 (m, 2H) , 3,57 (m, 1H) , 4,87 (m, 1H) , 5,10-5,40 (d lr, 1H), 6,89 (m, 2H), 7,06 (m, 2H). APCI MS m/z = 554 [C29H36CIN7O11 + H ] + . 76
Exemplo 9
Trifluoroacetato de 4-[4-(5-carboxi-glucopiranonuronato-l-0-il) -fenil] -butilamidino-3, 5-diamino-6-cloropirazina-carboxamida (42)
H 42 Éster 4-(4-metoxifenil)-butilico do ácido 4-metilfenil-sulfónico (1).
Adicionou-se, gota a gota, piridina (15 mL) a uma solução arrefecida (0°C) de 4-(4-metoxifenil)-butanol (10,0 g, 0,055 mol) e cloreto de p-tolueno-sulfonilo (13,6 g, 0, 072 mol) em clorofórmio anidro (100 mL) , sob agitação. Agitou-se a mistura de reacção de um dia para o outro à temperatura ambiente. Decorrido este período, extinguiu-se a mistura de reacção com HC1 a 10% (300 mL) e extraiu-se com clorofórmio. Lavou-se a fracção orgânica com NaHC03 saturado e com água e secou-se sobre sulfato de magnésio. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e purificou-se o resíduo por cromatografia rápida (eluente: hexano/acetato de etilo a 15:1) para se obter 12,9 g (66%) do composto 1 com o aspecto de um óleo límpido. 1H NMR (360 MHz, CDCI3) δ 77
1,61 (m, 4H) , 2, 44 (s, 3H) , 2,52 (m, 2H) , 3,78 (s, 3H LO O (m, 2H) , 6, 77 (d, 2H) , 7, 05 (d, 2H) , 7,34 (d, 2H 7, 78 (d, 2H) . 4-(4-Metoxifenil)-butilazida (2).
Adicionou-se azida de sódio (3,07 g, 0,047 mol) a uma solução do composto 1 (12,9 g, 0,04 mol) em DMF anidra (70 mL) e agitou-se a mistura de reacção durante 12 horas a 80°C (banho de óleo) . Depois removeu-se o solvente sob pressão reduzida e tratou-se o óleo residual com uma mistura de CH2Cl2/éter a 3:1 (100 mL) . Lavou-se a solução resultante com água (2 x 100 mL) e com salmoura e secou-se sobre sulfato de magnésio. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e obteve-se 7,6 g (95%) do composto 2. Determinou-se a pureza do composto 2 (99%) por GC e por TLC (eluente: hexano/acetato de etilo a 1:1), Rf = 0,84.
4-(4-Metoxifenil)-butilamina (3). Procedimento tipico A
Adicionou-se, gota a gota, hidreto de lítio-alumínio (LAH) (55 mL de uma solução a 1,0 M em THF, 0, 055 mol) a uma solução do composto 2 (7,6 g, 0,037 mol) em THF anidro (70 mL) a 0°C. Agitou-se a mistura de um dia para o outro à temperatura ambiente sob uma atmosfera de árgon, depois tratou-se a mistura com água (1,5 mL) , depois com NaOH a 15% (1,5 mL) e depois com mais água (3 mL) e filtrou-se.
Lavou-se o precipitado sólido com THF. Secou-se as fracções orgânicas combinadas sobre sulfato de magnésio e removeu-se o solvente sob pressão reduzida para se obter 6,2 g (94%) de composto 3. Determinou-se a pureza do composto 3 (99%) por GC. 1E NMR (360 MHz, DMS0-d6) δ 1,34 (m, 2H) , 1,54 (m, 78 2H) , 2,51 (m, 4H) , 3,70 (s, 3H) , 6,83 (d, 2H), 7,08 (d, 2H) . 13C (90 MHz, DMSO-dg) δ 28,6, 33,0, 34, 1, 41,5, 54, 8, 113,1, 129,1, 132, 2, 157,3
Bromidrato de 4-(4-hidroxifenil)-butilamina (4) . Procedimento tipico B
Agitou-se a amina 3 (2,32 g, 0,012 mol) em HBr a 48% em ebulição (50 mL) durante 3 horas. Depois de se completar a reacção, fez-se borbulhar árgon através da solução e evaporou-se o solvente sob pressão reduzida. Secou-se o resíduo sólido sobre KOH para se obter 3,1 g (90%) do composto 4. APCI MS m/z = 166 [C10H15NO +H]+.
Cloridrato de 4-(4-hidroxifenil)-butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (5).
Adicionou-se iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloro-pirazinoí 1-2-metil-pseudotioureia (0,4 g, 1,03 mmol) a uma suspensão de bromidrato de 4-(4-hidroxifenil)-butilamina (4) (0,8 g, 32 mmol) numa mistura de THF (35 mL) e trietilamina (3 mL) . Agitou-se a mistura de reacção em solvente em ebulição durante 3 horas, depois separou-se o sobrenadante e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Lavou-se o resíduo oleoso com água (2 x 30 mL) e com éter (3 x 30 mL) e depois adicionou-se HC1 a 10% (40 mL) . Agitou-se vigorosamente a mistura durante 10 minutos, depois removeu-se por filtração o sólido amarelo, secou-se e deixou-se recristalizar duas vezes a partir de etanol para se obter o composto 5 (0,18 g, 41%) com o aspecto de um sólido amarelo. Pureza de 98% por HPLC, tempo de retenção de 9,77 minutos. *H NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 1,56 (s lr, 4H) , 2,48 (s lr, 2H) , 3,35 (m, 2H) , 6,65 (d, 2H) , 79 6,95 (d, 2H), 7,50 (s lr, 2H), 8,75 (s lr, 1H) , 9,05 (s lr, 1H) , 9,33 (s lr, 2H) , 10,55 (s, 1H) . 13C NMR (75 MHz, CD3OD) 28,7, 29,8, 35,4, 42,4, 111,2, 116,1, 122,0, 130,0, 134,0, 155,0, 156,1, 156,8, 157,5, 167,0, APCI MS m/z = 378 [Ci6H2oC1N702 + H]+.
Trifluoroacetato de 4-[4-(5-carboxi-glucopiranonuronato-l-O-il) -fenil] -butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazina-carboxamida (42).
Dissolveu-se o composto 5 (29 mg, 0,07 mmol) em DMF (2 mL). Preparou-se uma solução de tampão TRIS 100 mM, pH 7,5, que continha MgCl2 10 mM, ditiotreitol 1,0 mM, sacarolactona 10 mM, e CMP 2 mM (mono-fosfato de citidina). Dissolveu-se 176 mg de UDP-GA (ácido uridina-di-fosfo-glucurónico) na solução tampão (30 mL) e adicionou-se a 600 mg de microssomas de fígado de bovino (produzido pela AMRI Biocatalysis Division) num frasco de 50 mL com uma boca larga. Adicionou-se a solução de DMF do composto 5 para se dar início à reacção. Deixou-se decorrer a reacção à temperatura ambiente com agitação periódica manual e interrompeu-se por meio da adição de um volume idêntico de MeCN, decorridas 42 horas. Dividiu-se a solução de reacção em dois (50 mL) tubos de centrifugação e centrifugou-se para se remover a enzima. Colocou-se novamente em suspensão a enzima precipitada em MeCN (40 mL) e centrifugou-se novamente. Repetiu-se esta lavagem da enzima três vezes até a análise por LC/MS indicar apenas quantidades vestigiais de produto restante. Combinou-se os sobrenadantes e removeu-se o MeCN aquoso sob uma pressão hipobárica a 30°C. Reduziu-se o xarope resultante por meio da adição de MeCN e secou-se ainda sob uma pressão hipobárica de um dia para o 80 outro. Após a secagem, purificou-se o xarope por HPLC-FI (Luna C18 (2) 250 x 21,2 mm, 5 pm) com um gradiente de água/acetonitrilo (ambos contendo 0,1% de TFA). Combinou-se as fracções adequadas e secou-se sob uma pressão hipobárica para se obter o composto 42 (14,8 mg, 28,2%) com uma pureza de 98,4% (por análise por HPLC) e com o aspecto de um sólido branco. APCI MS m/z = 554 [C29H36ClN70n + H]+ , m/z = 552 [C29H36C1N70ii - H]".
Exemplo 10
Cloridrato de 4- [4-(1, 4-dioxapent-l-il) -fenil] -butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (66)
66 N-Cbz-4-[4-(1,4-dioxapent-l-il) -fenil] -butilamina (64) . A uma solução vigorosamente agitada do composto 29 (4 g, 0,013 mol) em THF anidro (150 mL), sob uma atmosfera de azoto e a 0°C, adicionou-se hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo mineral, 0,64 g, 0,016 mol). Agitou-se a mistura durante 15 minutos, depois adicionou-se iodeto de tetrabutil-amónio (0,5 g, 0,0013 mol) e éter 2-bromoetil-metilico (2,04 g, 0,015 mol) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente de um dia para o outro. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e purificou-se o material por cromatografia em coluna (gel de sílica, cloreto de metileno/acetato de etilo a 10:1) para se obter o composto 81
64 (3 ,1 g, 64%). XH NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1, 60 (m, 4H 2,59 (m, 2H), 3, 23 (m, 2H) , 3,45 (s, 3H), 3, 77 (m, 2H 4, 10 (m, 2H), 5, 13 (s, 2H) , 6,88 (d, 2H) , 7, 08 (d, 2H 7,47 ( s, 5H) . 4-(1,4-Dioxapent-l-il)-fenilbutilamina (65) . A uma solução do composto 64 (2,27 g, 6,4 mmol) em etanol (60 mL) com ácido acético (1% em peso) adicionou-se catalisador Pd/C (300 mg, 10% húmido) e depois agitou-se a mistura durante 18 horas a 30 psi de hidrogénio num hidrogenador de Parr. Libertou-se a pressão e removeu-se por filtração o catalisador através de uma camada de gel de sílica. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida para se obter o composto 65 (1,3 g, 92%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1,60 (s lr, 4H) , 2,00 (s, 2H) 2,55 (s lr, 2H), 2,85 (s lr, 2H) , 3,47 (s, 3H), 3,73 (m, 2H) , 4,10 (m, 2H) , 6,82 (d, 2H) , 7, 08 (d, 2H) .
Cloridrato de 4-[4-(1,4-dioxapent-l-il)-fenil]-butil-amidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (66) .
Adicionou-se iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloro-pirazinoí 1-2-metil-pseudotioureia (0,3 g, 0,77 mmol) a uma solução de THF anidro (20 mL) do composto 65 (0, 48 g, 2,3 mmol). Agitou-se a mistura de reacção ao refluxo durante 11 horas e depois evaporou-se o solvente. Purificou-se o resíduo num sistema Biotage (gel de sílica, clorofórmio/ /metanol/hidróxido de amónio concentrado a 10:1:0,1). Recolheu-se as fracções adequadas, evaporou-se o solvente e tratou-se o resíduo com HC1 a 3%. Separou-se o precipitado amarelo formado, lavou-se com acetato de etilo e com água e secou-se para se obter o composto 66 (160 mg, 34%) com o 82 aspecto de um sólido amarelo. 1H NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 1,57 (s lr, 4H), 2,52 (m, 4H), 3,30 (s, 3H), 3,63 (m, 2H), 4,03 (m, 2H) 6,85 (d, 2H) , 7,12 (d, 2H) , 7,46 (s lr, 2H) , 8,00 (s lr, 1H), 8,85 (s lr, 1H), 8,99 (s lr, 1H), 9,32 (s lr, 1H), 10,03 (s, 1H) . APCI MS m/z 436 [C19H26CIN7O3 + H]+.
Exemplo 11
Cloridrato de 4-(4-hidroximetilfenil)-butilamidi.no-3, 5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (68)
m 4-(4-Hidroximetilfenil)-butilamina (67) .
Adicionou-se, gota a gota, hidreto de lítio-alumínio (35 mL de uma solução 1,0 M em THF, 0,035 mol) a uma solução vigorosamente agitada de 4-(4-carboximetilfenil)-butilazida 8 (2,4 g, 0,010 mol) em THF anidro (120 mL) a 0°C e agitou-se de um dia para o outro à temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto. Para quebrar o complexo adicionou-se, gota a gota, água (1,5 mL), NaOH 15% (1,5 mL) e água (4,5 mL) à mistura de reacção arrefecida. Removeu-se por filtração o precipitado sólido branco e lavou-se com THF. Combinou-se todas as fases orgânicas e evaporou-se. Purificou-se o material por cromatografia em coluna (gel de sílica, clorofórmio/etanol/hidróxido de amónio concentrado a 2:1:0,05) para se obter o composto 67 83 (1,17 g, 64%) com o aspecto de um sólido branco. 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 1,15 (s lr, 2H), 1,54 (s lr, 2H) 1,70 (s lr, 2H), 2,60 (m, 4H), 3,77 (s, 1H), 4,67 (s, 2H) , 7,47 (s, 2H), 7,60 (s, 2H).
Cloridrato de 4-(4-hidroximetilfenil)-butilamidino-3, 5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (68) .
Adicionou-se iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloro-pirazinoí 1-2-metil-pseudotioureia (0,2 g, 0,52 mmol) a uma suspensão em THF anidro (20 mL) do composto 67 (0,37 g, 2,06 mmol). Agitou-se a mistura de reacção ao refluxo durante 3 horas e depois evaporou-se o solvente. Lavou-se o resíduo com acetato de etilo (3 x 15 mL) , secou-se e tratou-se com HC1 3% (15 mL) . Filtrou-se o sólido amarelo formado, lavou-se com água (2 x 10 mL) e secou-se para se obter o composto 68 (216 mg, 98%). 1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) δ 1,57 (s lr, 4H) , 2,62 (m, 2H) , 3,35 (m, 2H) , 3,73 (s lr, 4H), 4,45 (s, 2H), 7,12 (d, 2H), 7,24 (d, 2H), 8,85 (s lr, 1H), 9,98 (s lr, 1H) , 9,32 (s lr, 1H) , 10,55 (s, 1H) . APCI MS m/z 392 [C17H22CIN7O3 + H]+.
Exemplo 12
Cloridrato de 4-{4-[ (2R)-2,3-di-hidroxipropiloxi]-fenil] }-butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (71) 84
OH
71 N-Cbz-4-{ [ (2R) -2,3-di-hidroxipropiloxi] -fenil}-butilamina (69) . A N-Cbz-4-(4-aliloxifenil)-butilamina 30 arrefecida (0°C) (1,94 g, 5,7 mmol), sob uma atmosfera de azoto, adicionou-se AD-Mix-a arrefecida (0°C) (12 g) em terc- butanol (100 mL) e água (100 mL) . Deixou-se aguecer a mistura até à temperatura ambiente de um dia para o outro. Extinguiu-se então a mistura com uma solução saturada de sulfito de sódio (200 mL), extraiu-se com acetato de etilo (3 x 100 mL) , secou-se (Na2S04) e concentrou-se para se obter o composto 69 (2 g, 95%) com o aspecto de um sólido bege. NMR (300 MHz, DMSO) δ 1,40 (m, 2H) , 1,54 (m , 2H) 2, 55 (s lr, 2H) , 3 , 00 (m, 2H) , 3,44 (s, 2H) , 3,78 (m, 2H) , 3, 94 (m, 1H) , 4, 68 (s lr, 1H) , 4,93 (s, 1H) , 5,00 (s, 2H) , 6, 83 (d, 2H) , 7, 08 (d, 2H) , 7, 30 (s lr, 1H) , 7,35 (s, 5H) . 4-{ [ (2R) -2,3-di-hidroxipropiloxi] -fenilj-butilamina (70) A uma solução vigorosamente agitada do composto 69 (2 g, 5,4 mmol) em metanol (60 mL) , sob uma atmosfera de azoto, adicionou-se Pd/C (10% húmido, 0,5 g) . Agitou-se a mistura durante 2 horas à temperatura ambiente sob uma atmosfera de hidrogénio, depois libertou-se a pressão e filtrou-se a mistura através de uma camada de gel de 85 sílica. Removeu-se o solvente e purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna (gel de sílica, clorofórmio/etanol/ /hidróxido de amónio concentrado a 2:1:0,2) para se obter o composto 70 (1,18 g, 92%) com o aspecto de um sólido branco. ΧΗ NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 1,32 (m, 2H) , 1,54 (m, 2H), 2,55 (m, 2H) , 3,45 (m, 2H) , 3,82 (m, 3H) , 3,94 (m, 2H), 6,83 (d, 2H), 7,08 (d, 2H).
Cloridrato de 4-{ 4-[ (2.R)-2,3-di-hidroxipropiloxi]-fenil] }-butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (71) .
Adicionou-se iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloro-pirazinoí 1-2-metil-pseudotioureia (0,4 g, 1,03 mmol) a uma suspensão em THF anidro (50 mL) do composto 70 (0,49 g, 2,00 mmol) . Agitou-se a mistura de reacção ao refluxo durante 5 horas, depois arrefeceu-se a mistura, recolheu-se o precipitado formado, lavou-se com HC1 a 3% (2x5 mL) e depois secou-se para se obter o composto 71 (290 mg, 58%) com o aspecto de um sólido amarelo. 1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) δ 1,57 (s , 4H ), 2,55 (d, 2H) , 3,35 (d, 2H), 3,90 (m, 5H) , 6,82 (d, 2H) , 7,10 (d, 2H), 7,47 (s lr, 2H), 8,75 (s lr, 1H) , 8 ,90 (s lr, 1H), 10,5 (s, 1H). APCI MS m/ z 452 [ C is ,Η26<31Ν70. 4 + H]+.
Exemplo 13
Cloridrato de 4-{4-[ (2S)-2,3-di-hidroxipropiloxil]-fenil] }-butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (74) 86
74 W-Cbz-4-{ [ (2S) -2,3-di-hidroxipropiloxi] -fenil}-butilamina (72) . A W-Cbz-4-(4-aliloxifenil)-butilamina 30 arrefecida (0°C) (1,53 g, 4,5 mmol), sob uma atmosfera de azoto, adicionou-se AD-Mix-β arrefecida (0°C) (9,2 g) em terc- butanol (100 mL) e água (100 mL) . Deixou-se aquecer a mistura até à temperatura ambiente de um dia para o outro. Extinguiu-se a mistura com uma solução saturada de sulfito de sódio (200 mL), extraiu-se com acetato de etilo (3 x 100 mL) , secou-se (Na2SC>4) e concentrou-se para se obter o composto 72 (1,67 g, 99%) com o aspecto de um sólido bege. *Η NMR (300 MHz, CDC13) δ 1,54 (m, 4H) 2,55 (s lr, 2H) , 3,18 (m, 2H), 3,70 (s, 3H) , 4,02 (d, 2H) , 4,10 (m, 1H) , 4,73 (s lr, 1H), 5,08 (s, 2H), 6,83 (d, 2H), 7,08 (d, 2H), 7,38 (s, 1H), 7,35 (s, 5H). 4-{ [ (2S) -2,3-di-hidroxipropiloxi] -fenil}-butilamina (73) .
Preparou-se o composto 73 de um modo idêntico ao descrito na síntese do composto 70, partindo do composto 72 (1,67 g, 4,5 mmol). Isolou-se a amina 73 (1,06 g, 99%) com o aspecto de um sólido branco. *H NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 1,32 (m, 2H) , 1,54 (m, 2H) , 2,55 (m, 2H) , 3,45 (m, 3, 75 (m, 3H) , 3,94 (m, 2H), 6,83 (d, 2H), 7, 08 (d, 2H) . 87
Cloridrato de 4-{4-[ (2S)-2,3-di-hidroxipropiloxi]-fenil] }-butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (74) .
Preparou-se o composto 74 de um modo idêntico ao descrito na síntese do composto 71 partindo do composto 73 (0,74 g, 3,09 mmol). Isolou-se o composto 74 (0,38 g, 76%) com o aspecto de um sólido amarelo. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 1,57 (s, 4H) , 2,55 (d, 2H) , 3,35 (d, 2H) , 3,85 (m, 5H) , 6,82 (d, 2H), 7,10 (d, 2H) , 7,47 (s lr, 2H), 8,75 (s lr, 1H), 8,90 (s lr, 1H) , 10,5 (s, 1H) . APCI MS m/z 452 [Ci9H26C1N704 + H] +.
Exemplo 14
Cloridrato de 4-(4-aminofenil)-etilamidino-3, 5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (83)
1
Cloridrato de 4-(4-aminofenil)-etilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (83).
Preparou-se uma mistura de cloridrato de 1-H-pirazolecarboxamidina (2,8 g, 19 mmol), 4-aminoetilanilina (1,3 mL, 9 mmol) e diisopropiletilamina (1,3 ml) e agitou-se em DMF anidra (5 mL), sob uma atmosfera de árgon durante 18 horas. Decorrido este período, adicionou-se éter (30 mL) 88 para se produzir um óleo límpido. Lavou-se o óleo obtido (82) com éter e secou-se sob uma pressão hipobárica (40 mTorr) de um dia para o outro. Após secagem, retomou-se 70 mg de óleo em metanol anidro (3 mL) e adicionou-se NaOH a 25% (0,14 mL). Diminuiu-se o volume de reacção até 1,0 mL e adicionou-se éster metílico do ácido 3,5-diamino-6-cloro-pirazina-2-carboxílico (0,1 g, 0,5 mmol) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente de um dia para o outro. Dissolveu-se uma outra porção do composto 82 (0,1 g) em metanol (1 mL) , tratou-se com NaOH a 25% (0,15 mL) e adicionou-se a solução resultante à mistura de reacção. Agitou-se a mistura de reacção durante 3 horas ao refluxo, depois arrefeceu-se até à temperatura ambiente e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Dissolveu-se o resíduo num volume mínimo de DMF e separou-se por HPLC preparativa. Analisou-se por LC/MS as fracções obtidas. Recolheu-se as fracções que continham produto com M+H = 349 e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Dissolveu-se o resíduo em HC1 a 10% e evaporou-se até à secura para se obter o composto 83 (23,5 mg, 11%) com o aspecto de um sólido amarelo. ΧΗ NMR (360 MHz, DMS0-d6) δ 2,91 (m, 2H) , 3,59 (m, 2H) , 7,31 (d, 2H), 7,42 (m, 4H) , 9,02 (s lr, 2H) , 9,41 (s lr, 1H), 10,56 (s, 1H) . 13C NMR (90 MHz, DMSO-dg) 33,1, 42,0, 108,9, 119,6, 120,7, 129,9 (2C), 131,0 (2C), 153,1, 154, 1, 155, 8, 165,2, API MS m/z = 349 [Ci4Hi7C1N80 + H]+.
Efectuou-se a HPLC preparativa numa 'Gilson Combichem' utilizando uma coluna Luna C18(2), 5 μ, 250 x 21,2 mm; caudal = 20 mL/minuto; fase móvel constituída por MeCN/água que continha 0,1% de TFA; gradiente: 10% de MeCN a partir do intervalo entre 0 e 2 minutos, concentração de MeCN aumentou desde 10% até 40% entre os 2 e os 10 minutos, de 89 40% até 100% de MeCN entre os 10 a 19 minutos, 100% de MeCN entre os 19 a 23 minutos, MeCN diminuiu desde 100% até 10% entre os 23 e 25 minutos.
Exemplo 15
Cloridrato de 4-[4-(1,4,7-trioxaoct-l-il)-fenil]-butil-amidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (108) .
!08 4- [4- (1,4,7-Trioxaoct-l-il) -fenil] -W-benziloxicarbonil-butilamina (106).
Combinou-se 4- ( 4-hidroxifenil)-N-benziloxicarbonilbutil-amina (29) (1,0 g, 3,3 mmol), l-bromo-2-(2-metoxietoxi) - etano (0,67 g, 3,7 mmol) e carbonato de potássio (0,60 g, 4,3 mmol) em acetona (20 mL) e agitou-se ao refluxo de um dia para o outro. Deixou-se arrefecer a mistura de reacção, depois filtrou-se e evaporou-se. Submeteu-se novamente o resíduo a metil-etil-cetona (10 mL), l-bromo-2-(2-metoxietoxi) -etano (0,91 g, 5,0 mmol), carbonato de potássio (0,74 g, 5,3 mmol) e iodeto de sódio (0,5 g, 3,3 mmol) com agitação ao refluxo durante 2,5 horas. Deixou-se arrefecer a mistura de reacção, filtrou-se e evaporou-se. Submeteu-se novamente o resíduo em DMF (10 mL) a l-bromo-2-(2-metoxietoxi)-etano (1,8 g, 9,8 mmol), carbonato de potássio (1,60 g, 11,6 mmol) e iodeto de sódio (0,4 g, 2,7 mmol) de um dia para o outro sob agitação a 70°C. Evaporou-se a mistura de reacção para se remover o solvente e depois dissolveu-se em 90 acetato de etilo (70 mL) . Lavou-se o extracto orgânico com água (3 x 20 mL) , secou-se sobre carbonato de potássio e filtrou-se. Evaporou-se para se obter 1,1 g de um óleo, o qual se purificou por cromatograf ia em coluna (gel de sílica, hexano/acetato de etilo a 2:1) para se obter 800 mg (70%) 1 de produto puro 106. *H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1,42 1,68 (m, 4H) , 2,55 (t , J= = 7, 5 Hz, 2H), 3,20 (q, J= = 6, 2 Hz 2H) , 3,39 1 (s, 3H) , 3 , 55 -3, 6 10 (m, 2H), 3,69 -3, 74 (m, 2H) 3, 82- -3, 87 (m, 2H) , 4, 11 (t, 5, ,3 H: z, 2H), 4, 71 (s lr, 1H) 5,09 (s, 2H) , 6,82 (d , J = = 8, 5 Hz, 2H), 7,05 (d, J= = 8, 5 Hz 2H) , 7,34 (s, 5H) . Cl MS m/ z = 402 [C23H31NO5 f H]+. 4-[4-(1,4,7-Trioxaoct-l-il)-fenil]-butilamina (107) .
Submeteu-se o composto 106 (800 mg, 2,0 mmol) em etanol (20 mL) a 1 atmosfera de H2 na presença de paládio a 10% sobre carvão (100 mg, cat.), sob agitação e durante 5 horas. Depois de se manter em repouso de um dia para o outro, purgou-se a mistura de reacção com N2, depois filtrou-se com sucção através de celite e lavou-se a celite com cloreto de metileno. Evaporou-se os solventes e submeteu-se a cromatografia (gel de sílica, cloreto de metileno/metanol/hidróxido de amónio concentrado a 200:10:1) para se obter 530 mg (> 99%) da amina 107. 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1,31 (s lr, 2H) , 1,41-1,52 (m, 2H) , 1, 55-1, 67 (m, 2H), 2,56 (t, J= 7,7 Hz, 2H) , 2,70 (t, J= 7,0 Hz, 2H), 3,39 (s, 3H), 3,58 (m, 2H), 3,72 (m, 2H), 3,84 (t, J= 4,9 Hz, 2H), 4,12 (t, J= 5,3 Hz, 2H) , 6,83 (d, J= 8,7
Hz, 2H), 7,07 (d, J= 8,7 Hz, 2H) . Cl MS m/z = 268 [C15H25NO3 + H] +. 91
Cloridrato de 4-[4-(1,4,7-trioxaoct-l-il)-fenil]-butil-amidino-3, 5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (108) .
Combinou-se a amina 107 (200 mg, 0,75 mmol), iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloropirazinoí1-2-metil-pseudotioureia (296 mg, 0,76 mmol) e trietilamina (0,52 mL, 3,73 mmol) em THF (5 mL) e agitou-se ao refluxo em ambiente de N2 durante 1,5 horas. Depois de se agitar à temperatura ambiente durante dois dias, evaporou-se a mistura de reacção. Submeteu-se o resíduo a cromatografia (gel de sílica, eluição em gradiente desde 400:10:1 até 200:10:1 de cloreto de metileno/metanol/hidróxido de amónio concentrado) para se obter a base livre do produto (290 mg) . Agitou-se este material em metanol (20 mL) a 0°C e depois adicionou-se HC1 1 M (3 mL). Evaporou-se a solução sem aquecimento e depois co-evaporou-se com metanol. Dissolveu-se o resíduo em metanol e depois fez-se precipitar por meio da adição de acetato de etilo. Centrifugou-se este precipitado e decantou-se o sobrenadante. Evaporou-se os grânulos tipo gel, co-evaporou-se com água (2 mL) e depois submeteu-se a uma pressão hipobárica elevada de um dia para o outro. Obteve-se 129 mg (42%) do composto 108 com o aspecto de um sólido amarelo. 1H NMR (300 MHz , DMSO-dg) 1,58 (m, 4H) 2,58 (s lr, 2H), 3,25 (s, 3H) , 3, 33 (m, 2H), 3,45 (m, 2H) 3,58 (m , 2H), 3,72 (m, 2H), 3,04 (m, 2H), 4,92 (s lr, 4H) 6, 85 (d, J= 8,5 Hz, 2H), 7,12 (d, J= 8,4 Hz, 2H), 8,10 to 7, 26 (m lr, 3H) , 8,94 (d lr, 2H) , 9,32 (s lr, 1H), P.F.= 110 °C-125 °C. APCI MS m/z = 480 [C2iH3oClN704 + H]+.
Exemplo 16 92
Cloridrato de 4-[4-(1,4,7,10,13-pentoxatetradec-l-il) -fenil] -butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (112) . 92
QMe
Eter metilico de O-tosiltetraetilenoglicol (109).
Combinou-se éter monometílico de tetraetilene-glicol (2,0 g, 9,6 mmol) com piridina (0,93 mL, 11,5 mmol) em cloreto de metileno (20 mL) a 0°C. Adicionou-se, gota a gota, cloreto de p-tolueno-sulf onilo (2,2 g, 11,5 mmol) dissolvido em cloreto de metileno (10 mL) e deixou-se aquecer a mistura de reacção até à temperatura ambiente, na medida que o banho de gelo arrefecia. Depois de se agitar durante nove dias, transferiu-se a mistura de produto para um funil de separação com água (70 mL) . Separou-se as camadas e extraiu-se a camada aquosa com cloreto de metileno (3 x 20 mL) . Combinou-se os extractos e evaporou-se. Submeteu-se o resíduo (3,3 g) a cromatograf ia (gel de silica, eluição em gradiente desde 4:1 até 3:1 de cloreto de metileno/acetato de etilo) para se obter 2,5 g (70%) do composto 109 com o aspecto de um óleo. 1H NMR (300 MHz, DMSO-ds) δ 1,56 (s lr, 4H) , 2,42 (s lr, 2H) , 3,34 (s lr, 4H) , 6,05 (s, 3H) , 7,09 (s, 0,5H), 7,26 (s, 0,5H), 7,42 (s lr, 2H), 7,70 (s lr, 2H) , 8,87 (d lr, 2H) , 9,07 (s, 2H), 9,22 (s lr, 1H ) , 10,51 (s, 1H). Cl MS m/ z = 363 [Ci6H2607S + H]+. 93 4- [4- (1,4,7,10,13-Pentoxatetradec-l-il) -fenil] -N-benziloxi-carbonilbutilamina (110).
Combinou-se 4- ( 4-hidroxifenil)-N-benziloxicarbonilbutil-amina (29) (0,30 g, 1,0 mmol), éter metílico de 0- tosiltetraetileno-glicol (109) (1,45 g, 4,0 mmol), carbonato de potássio (0,69 g, 5 mmol) e iodeto de sódio (0,6 g, 4,0 mmol) em DMF (5 mL) e agitou-se a 55°C de um dia para o outro. Adicionou-se carbonato de césio (0,33 g, 1,0 mmol) e agitou-se a mistura de reacção a 70°C de um dia para o outro. Deixou-se arrefecer a mistura de reacção e depois repartiu-se entre tolueno/acetato de etilo a 1:1 (70 mL) e água (20 mL) . Separou-se as camadas, lavou-se a camada orgânica com água (4 x 10 mL) e com salmoura (2 x 30 mL) , secou-se sobre sulfato de sódio e evaporou-se. Submeteu-se a cromatografia (gel de sílica, cloreto de metileno/acetato de etilo a 3:1) para se obter 400 mg (81%) do composto 110. ΧΗ NMR (300 MHz, CDCI3 ) δ 1,44-1, 67 (m, 4H) , 2, 55 (t, J= 7 ,7 Hz, 2H) , 3,20 (q, J= 6 ,0 Hz, 2H) 3,37 (s, 3H) , 3,54 (m, 2H ), 3 r61-3, 75 (m, 10H) r 3, 84 (t, J= 4,9 Hz, 2H) , 4, 10 (t, 5, 5 H; 2, 2H) , 4, 71 (s lr f 1H), 5, 09 (s, 2H) f 6, 82 (d, J= 8 ,5 Hz, 2H) , 7, 05 (d, J= 8 ,6 Hz, 2H] 1 , 7,34 (s, 5H) 4- [4- (1,4,7,10,13-pentoxatetradec-l-il) -fenil] -butilamina (Hl) ·
Este composto foi preparado de um modo idêntico ao descrito na síntese da amina 107 a partir do composto 110 (385 mg, 0,78 mmol) para se obter 266 mg (95%) do composto 111. 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 1,41-1,54 (m, 2H) , 1,60 (s lr, 2H), 2,56 (t, J= 7,5 Hz, 2H), 2,70 (t, J= 7,0 Hz, 2H), 3,37 (s, 3H), 3,51-3,58 (m, 2H), 3,60-3, 77 (m, 10H) , 3,84 94 (m, 2H) , 4,10 (t, 5,5 Hz, 2H) , 6,83 (d, J= 8,3 Hz, 2H) , 7,07 (d, J=8,7 Hz, 2H).
Cloridrato de 4-[4-(1,4,7,10,13-pentoxatetradec-l-il) -fenil] -butilamidino-3, 5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (112) .
Este composto foi preparado de um modo idêntico ao descrito na síntese do composto 108 a partir do composto 111 (250 mg, 0,70 mmol) e de iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloro- pir azinoí1 -2-metil-pseudotioureia (20 0 mg, 0,51 mmol) para se obter 13 0 mg (46%) do composto 112 . 1n NMR (30 0 MHz, DMSO-ds) δ 1,57 (s lr, 4H), 2,55 (s lr, 2H), 3,05 a 3,90 (m, 21H) , 6,85 (d, J= 7, 6 Hz, 2H), 7, 12 (d , J= 7,4 Hz, 2H) , 7,44 (s lr, 1H), 8,10-7,40 (m, 2H) , 8,93 (d lr, 2H) , 9,32 (s, 1H), 10,55 (s, 1H) . APCI MS m/z = 568 [C25H38C1N706S + H ] +.
Exemplo 17
Cloridrato de 4-[4-(2-hidroxietiloxi)-fenil) ]-butilamidino-3, 5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (116) .
116 N-{4- [4- (2-hidroxietiloxi) -fenil] -but-3-ino-l-il}-ftalimida (113).
Dissolveu-se 2-(4-bromofenoxi)-etanol (3 g, 14,5 1,1 mmol) e mmol), cloreto de paládio(II) (0,2 g, 95 trifenilfosfina (0,6 g, 2,2 mmol) em trietilamina (70 mL) e depois adicionou-se iodeto de cobre(I) (0,45 g, 2,1 mmol) e N-(but-3-ino)-ftalimida (3,2 g, 16 mmol). Agitou-se a mistura de reacção durante 72 horas à temperatura ambiente e durante 5 horas a 50°C (banho de óleo) e depois removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Adicionou-se acetato de etilo (150 mL) ao residuo e lavou-se a mistura com HC1 2 N, com salmoura e com água. Isolou-se a fracção orgânica, secou-se sobre sulfato de sódio e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Isolou-se o produto 113 (1,7 g, 43%) por cromatografia rápida (gel de sílica, cloreto de metileno/ /acetato de etilo/hexano a 10:1:2) com o aspecto de um sólido castanho. 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 2, 80 (m, 2H) 3,95 (m, 4H) , 4,08 (m, 2H), 6,83 (d, 2H), 7, 35 (m, 2H) 7, 72 (m, 2H) , 7,88 (m, 2H) . N-{4-[4-(2-Hidroxietiloxi) -fenil] -butil}-ftalimida (114) .
Colocou-se uma solução do composto 113 (1,7 g, 5,1 mmol) numa mistura de metanol/acetato de etilo (80 e 10 mL, respectivamente) num balão de Parr de 0,5 L e adicionou-se paládio sobre carvão (1,1 g, 5% húmido, Pd/C). Agitou-se a mistura de reacção a 50 psi em ambiente de hidrogénio e à temperatura ambiente, de um dia para o outro. Decorrido este período, filtrou-se a mistura através de uma camada de gel de sílica e removeu-se o solvente sob pressão reduzida para se obter o composto impuro 114 (1,2 g) com o aspecto de um óleo castanho. Utilizou-se o composto impuro 114 no passo subsequente sem mais purificação. 4- [4-(2-hidroxietiloxi) -fenil] -butilamina (115) . 96
Dissolveu-se a amina protegida impura 114 (1,2 g, 35 mmol) em 40 mL de uma solução 2 N de metilamina em metanol anidro e agitou-se a mistura de reacção de um dia para o outro à temperatura ambiente. Decorrido este período, removeu-se o solvente sob pressão reduzida e purificou-se o resíduo por cromatografia rápida (gel de sílica, clorofórmio/metanol/hidróxido de amónio concentrado a 5:1:0,1) para se obter a amina livre 115 (0,25 g, 35%) com o aspecto de um óleo límpido. 1H NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 1,58 (m, 4H) , 2,55 (m, 2H) , 2,73 (m, 2H) , 3,83 (m, 3,97 (m, 2H) , 6,83 (d, 2H), 7,07 (d, 2H), 7, 82 (s, 1H) .
Cloridrato de 4-[4-(2-hidroxietiloxi)-fenil) ]-butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida (116) .
Adicionou-se iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloro-pirazinoí 1-2-metil-pseudotioureia (0,32 g, 0,8 mmol) a uma solução da amina 115 (0,25 g, 1,2 mmol) numa mistura de THF (15 mL) , metanol (5 mL) e diisopropiletilamina (1 mL) . Agitou-se a mistura de reacção ao refluxo durante 3,5 horas e depois arrefeceu-se até à temperatura ambiente. Isolou-se o precipitado formado, lavou-se com acetato de etilo (2x5 mL) e tratou-se com HC1 a 5% (10 mL) . Isolou-se o sólido resultante por filtração, lavou-se com água e secou-se sob uma pressão hipobárica para se obter 0 composto 116 (0,25 g, 73%) com 0 aspecto de um sólido amarelo . ΧΗ NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 1,56 (m , 4H) , 2,57 (m, 2H), 3,32 (m, 2H) , 3,70 (m, 2H) , 3,93 (m, 2H) , 4,90 (t, 1H), 6,84 (d, 2H) , 7, 12 (d, 2H), 7,45 (s, 2H) , 8,70 (s lr, 1H) , 8, 88 (s lr, 1H) , 9,12 (s lr, 1H) 10, 45 (s, 1H). APCI MS m/z = = 422 [ C18H24CIN7O3 + H]+. 97
Exemplo 18
Cloridrato de 4-[4-(2-hidroxipropiloxi)-fenil) ]-butil- amidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida
Utilizando o procedimento geral Z, converteu-se a 4-[4-(2-hidroxipropiloxi)-fenil]-butilamina em cloridrato de 4—[4— (2-hidroxipropiloxi)-fenil)]-butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida, p.f. 212°C-214°C, APCI MS, M/Z = 436 [C19H26CIN7O3 + H ] +.
Exemplo 19
Cloridrato de 4-[4-(3-hidroxipropiloxi)-fenil) ]-butil amidino-3 , 5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida
Utilizando o procedimento geral Z, converteu-se 4— [4— (3-hidroxipropiloxi)-fenil]-butilamina em cloridrato de 4-[4-(3-hidroxipropiloxi)-fenil)]-butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida, p.f. 211°C-213°C, APCI MS, M/Z = 436 [C 19H26CIN7O3 + H]+. 98
Exemplo 20 4- [4- (2-{Tetra-hidropirano-2-il}-oxietiloxi) -fenil) ] -butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida
Utilizando o procedimento geral Z, converteu-se 4—[4— (2-{tetra-hidropirano-2-il}-oxietiloxi)-fenil]-butilamina em 4-[4-(2-{tetra-hidropirano-2-il}-oxietiloxi)-fenil)]-but ilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida, p. f . 161°C, espectro de massa APCI, M/Z = 506 [C23H32CIN7O4 + H]+.
Exemplo 21
Cloridrato de 4- [3- (2,3-di-hidroxipropiloxil) -fenil) ] - but ilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida
Utilizando o procedimento geral Z, converteu-se 4—[3— (2,3-di-hidroxipropiloxi)-fenil]-butilamina em cloridrato 99 de 4- [3-(2,3-di-hidroxipropiloxi)-fenil]-butilamidino-3,5- diamino-6-cloropirazinacarboxamida, p.f. 91°-93°C, espectro de massa APCI, M/Z = 452 [C19H26CIN7O4 + H]+.
Exemplo 22
Cloridrato de 4-[2- (2,3-di-hidroxipropiloxi) -fenil) ] -butil-amidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida
Utilizando o procedimento geral Z, converteu-se 4—[2— (2,3-di-hidroxipropiloxi)-fenil]-butilamina em cloridrato de 4- [ 2-(2,3-di-hidroxipropiloxi)-fenil]-butilamidino-3,5- diamino-6-cloropirazinacarboxamida, p.f. 200°C-205°C, espectro de massa APCI, M/Z = 452 [C19H26CIN7O4 + H]+.
Exemplo 23
Cloridrato de 4-[4-(2,3,4-tri-hidroxibutiloxi)-fenil)]-but ilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida 100
Utilizando o procedimento geral Z, converteu-se 4-[4(2,3,4-tri-hidroxibutiloxi)-fenil]-butilamina em cloridrato de 4- [ 4-(2,3,4-tri-hidroxibutiloxi)-fenil]-butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida, p.f. 148°C (dec.), espectro de massa APCI, M/Z = 482 [C20H28CIN7O5 + H]+.
Exemplo 24
Cloridrato de 4-[4-(4-amino)-fenil) ]-butilamidino-3, 5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida
Utilizando o procedimento geral Z, converteu-se 4—[(4— amino)-fenil]-butilamina em cloridrato de 4-[4-(4-amino)-fenil] -butilamidino-3, 5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida. P.f. 195°C-200°(dec.), espectro de massa APCI, M/Z = 377 [Ci6H2iC1N804 + H+]+.
Exemplo 25
Cloridrato de 4-[4- (2-aminoetiloxi) -fenil) -butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida 101
Utilizando o procedimento geral Z, converteu-se 4—[4— (2-{t-butoxicarbonilamino}-etiloxi) -fenil] -butilamina em 4-[4- (2-{t-butoxicarbonilamino}-etiloxi) -fenil) ] -butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida, p.f. 118°C, APCI MS M/Z = 521 [C23H33CIN8O4 + H]+, o qual foi hidrolisado e acidificado com HC1 para se obter o cloridrato de 4—[4—(2— aminoetiloxi) -fenil) -butilamidino-3, 5-diamino-6-cloro-pirazinacarboxamida, p.f. > 178°C (dec.), M/Z = 421 [Ci8H25C1N802] .
Exemplo 26
Cloridrato de 4-{4-(2-hidroxietil)-fenil)-butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida
406
Utilizando o procedimento geral Z, converteu-se 4— [4— (2-hidroxietil)-fenil)]-butilamina em cloridrato de 4— [4—(2— hidroxietil)-fenil)]-butilamidino-3,5-diamino-6-cloro-pirazinacarboxamida, p.f. 218°C-219°C, API M/Z = [ Ci8ÍÍ24C1N702 + H]+. 102
Exemplo 27
Cloridrato de 4-[3-(2-hidroxietiloxi)-fenil)-butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida
Utilizando o procedimento geral Z, converteu-se 4—[3— (2-hidroxietiloxi)-fenil)-butilamina em cloridrato de 4—[(3 — (2-hidroxietiloxi)-fenil)]-butilamidino-3,5-diamino-6-cloropirazinacarboxamida, p.f. 161°C-163°C (dec.), AMPI MS M/Z = 422 [C18H24CIN7O3 + H]\
Referências: 1. Taylor, E.C.; Harrington, P.M.; Schin, C. Heterocycles, 1989, 28, 1169, 2. Widsheis et al, Synthesis, 1994, 87-92.
Actividade de bloqueio do canal de sódio
Os compostos apresentados nos quadros seguintes foram testados quanto à potência em epitélias bronquiais caninas utilizando o ensaio in vitro descrito antes. A amilorida também foi testada neste ensaio como controlo positivo. Os resultados para os compostos da presente invenção são apresentados como número de vezes do aumento em relação à amilorida.
Exemplo 28 103
Exemplo 2 9
R N° de vezes de aumento em relaçao a amilorida H 124 36 ff H3CxCH3* 91 * = os grupos R são ligados entre si por meio de -C(CH 3 ) 2 -
Exemplo 30 104 Ο
2 4 42 28,7
Exemplo 31 2
R5 40 N° de vezes de aumento em relação a amilorida 65 -O-SO3H 27,7
Sal -O-Glucuronida Na+ 11,2 -CH2OH 57 -C02CH3 26,5
Exemplo 32
Efeito do composto (33) do exemplo 3 sobre MCC
Estes ensaios foram realizados com o composto (33) do exemplo 3, utilizando o veículo como controlo. Os 105 resultados estão apresentados nas figuras 1 (t = 0 horas) e 2 (t = 4 horas) . Métodos
Preparação do animal: ovelhas adultas (com um peso compreendido entre 25 e 35 kg) foram mantidas numa posição direita através de arreio corporal especializado que é adaptado para um carrinho de compras modificado. As cabeças dos animais são imobilizadas e induz-se uma anestesia local da passagem nasal com lidocaina a 2%. Então, entuba-se nasalmente os animais com um tubo endotraqueal com um diâmetro interno de 7,5 mm (ETT) . A parte final do ETT é colocada logo abaixo das cordas vocais e verifica-se a sua posição com um broncoscópio flexível. Após a intubação, deixa-se os animais restabelecer o equilíbrio durante aproximadamente 20 minutos e depois dá-se início às medições da limpeza mucociliar.
Administração de radio-aerossol: os aerossóis de 99mTc-albumina de soro humano (3,1 mg/mL; contendo aproximadamente 20 mCi) foram gerados utilizando um nebulizador 'Raindrop', que produz uma gotícula com um diâmetro aerodinâmico mediano de 3,6 μπι. Ligou-se o nebulizador a um sistema dosimétrico constituído por uma válvula solenoide e uma fonte de ar comprimido (20 psi). O fluxo de saída do nebulizador foi dirigido para um conector T de plástico; uma das suas extremidades estava ligada ao tubo endotraqueal e a outra estava ligada a um respirador por pistão. Activou-se o sistema durante um segundo no início do ciclo inspiratório do respirador. Marcou-se o respirador para um volume de ciclo de 500 mL, uma taxa entre inspiração e expiração de 1:1 e uma velocidade de 20 106 respirações por minuto para maximizar a deposição das vias aéreas centrais. As ovelhas respiraram o aerossol radiomarcado durante 5 minutos. Utilizou-se uma câmara gama para medir a limpeza de 99mTc-alburnina do soro humano a partir das vias aéreas. Colocou-se a câmara por cima do dorso do animal, com o animal numa posição direita normal suportada pelo carro, de modo a que o campo da imagem fosse perpendicular à medula espinal do animal. Colocou-se marcadores radiomarcados externos na ovelha para se garantir o alinhamento correcto sob a câmara gama. Todas as imagens foram armazenadas num computador integrado com a câmara gama. Traçou-se uma região de interesse por cima da imagem correspondente ao pulmão direito da ovelha e registou-se as contagens. Corrigiu-se as contagens para o decaimento e expressou-se em percentagem de radioactividade presente na imagem inicial da linha-base. Excluiu-se o pulmão esquerdo da análise por os resultados estarem sobrepostos ao estômago e as contagens poderem ser engolidas e entrarem no estômago como muco radiomarcado.
Protocolo de tratamento (avaliação de actividade para t = zero) : obteve-se uma imagem da deposição na linha de base imediatamente após a administração de radio-aerossol. No instante zero, após a aquisição da imagem da linha de base, efectua-se a transformação em aerossóis do veiculo de controlo (água destilada), do controlo positivo (amilorida) ou dos compostos experimentais a partir de um volume de 4 ml utilizando um nebulizador 'Pari LC JetPlus' para animais com respiração livre. O nebulizador foi accionado por ar comprimido com um caudal de 8 litros por minuto. O tempo de administração da solução está compreendido entre 10 e 12 minutos. Os animais foram extubados imediatamente após a 107 administração da dose total de modo a prevenir avaliações falsas nas contagens, provocadas por aspiração de um excesso de radiomarcador a partir do ETT. Foram obtidos conjuntos de imagens do pulmão com intervalos de 15 minutos durante as primeiras 2 horas após a dosagem e em intervalos de uma hora durante as 6 horas seguintes após dosagem, para um período de observação total de 8 horas. Utilizou-se um período de lavagem pelo menos de 7 dias, o qual separava as sessões de dosagem com agentes experimentais diferentes.
Protocolo de tratamento (avaliação da actividade para t = 4 horas): utilizou-se a seguinte alteração do protocolo padrão para avaliar a durabilidade da resposta após a exposição única a veículo de controlo (água destilada), compostos de controlo positivo (amilorida ou benzamilo) ou agentes de teste. No instante zero, efectuou-se a transformação em aerossóis de veículo de controlo (água destilada), de controlo positivo (amilorida) ou de compostos de teste a partir de um volume de 4 mL, utilizando um nebulizador 'Pari LC JetPlus' para animais com respiração livre. 0 nebulizador foi accionado por ar comprimido com um caudal de 8 litros por minuto. O tempo de administração da solução está compreendido entre 10 e 12 minutos. Os animais foram mantidos numa posição direita num arreio corporal especializado durante 4 horas. No final do período de 4 horas, administrou-se aos animais uma dose única de 99mTc-alburnina do soro humano em aerossol (3,1 mg/mL; que continha aproximadamente 20 mCi) a partir de um nebulizador 'Raindrop'. Os animais foram extubados imediatamente após a administração da dose total de radiomarcador. Foi obtida uma imagem de deposição na linha-base imediatamente após a administração de radio-aerossol. 108
Foram obtidos conjuntos de imagens do pulmão em intervalos de 15 minutos durante as primeiras 2 horas após a administração do radiomarcador (que representam as horas 4 a 6 após administração do fármaco) e em intervalos de uma hora nas 2 horas seguintes após dosagem, para um período de observação total de 4 horas. Um período de lavagem pelo menos de 7 dias separou as sessões de dosagem com agentes experimentais diferentes.
Estatística: analisou-se os dados utilizando o programa SYSTAT para Windows, versão 5. Analisou-se os dados utilizando ANOVA de dois factores de medidas (para avaliar os efeitos globais), seguindo-se um t-teste emparelhado para identificar as diferenças entre pares específicos. A significância foi aceite quando o valor de P foi inferior ou igual a 0,05. Os valores de declive (calculados a partir dos dados recolhidos durante os 45 minutos iniciais após a dosagem na avaliação para t = zero) para as curvas médias de MCC foram calculados utilizando uma regressão linear usando o método dos mínimos quadrados para avaliar as diferenças nas velocidades iniciais durante a fase de limpeza rápida.
Exemplo 33 Síntese de dicloridrato de N- (3,5-diamino-6-cloropirazina-2-carbonil) -N'-{ 4-[4- (2-guanidinoetoxi) -fenil] -butil}-guanidina (951S) 109
Ester benzilico do ácido {4-[4-(2-terc-butoxicarbonil-aminoetoxi)-fenil]-butil}-carbâmico (1) .
Ao longo de 45 minutos, adicionou-se, gota a gota, diisopropilazodicarboxilato (132 mL) a uma mistura agitada de éster benzilico do ácido [4-(4-hidroxifenil)-butil]-carbâmico (50 g, 0,167 mol), éster terc-butílico do ácido (2-hidroxietil)-carbâmico (103,4 mL, 0,668 mol) e THF (150 mL), em banho de gelo-metanol entre 15°C e 35°C. Quando cessou a reacção exotérmica, removeu-se o banho de arrefecimento e deixou-se agitar a mistura de reacção à temperatura ambiente de um dia para o outro. Evaporou-se o solvente sob pressão reduzida, aplicou-se o resíduo a uma coluna de 1 kg de gel de sílica e efectuou-se a eluição com cloreto de metileno. Repetiu-se a cromatografia duas vezes. Após evaporação, lavou-se o resíduo com hexano (1,5 L) e deixou-se recristalizar o resíduo a partir de uma mistura de hexano e cloreto de metileno (a 4:1, 1 L) para se obter 54 g (73%) de produto puro com o aspecto de um sólido branco. Obteve-se uma segunda colheita proporcionando mais 10 g (13%) de produto. 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 1,45 (s, 9H) , 1,56 (m, 4H) , 2,56 (t, 2H), 3,20 (m, 2H) , 3,50 (m, 2H) , 3,98 (t, 2H), 4,75 (s lr, 1H) , 5, 00 (s lr, 1H), 5,09 (s, 2H) , 6 , 80 (d, 2H), 7,06 (d, 2H) , , 7,34 (m, 5H). 110 Éster terc-butilico do ácido {2-[4-(4-aminobutil)-fenoxi] -etil}-carbâmico (2).
Submeteu-se éster benzílico do ácido {4-[4-(2-terc-butoxicarbonilaminoetoxi)-fenil]-butil}-carbâmico 1 (2,5 g, 5,60 mmol), etanol (20 mL) e paládio a 10% sobre carvão (1 g) a uma atmosfera de hidrogénio durante 4 horas e depois manteve-se em repouso de um dia para o outro. Depois de se agitar sob uma purga de azoto, removeu-se o catalisador por filtração da mistura de reacção através de celite e enxaguamento com cloreto de metileno. Evaporou-se e depois submeteu-se a uma pressão hipobárica durante 2 horas para se obter o produto (1,7 g, 98%) com o aspecto de um óleo. NMR (300 MHz, CDC13) δ 1, 45 (s, 9H) , 1, 47 (m, 2H) , 1, 61 (m, 2H) , 1, 75 (s lr, 2H), 2, , 56 (t, 2H) , 2, 71 (t, 2H) , 3, 51 (m, 2H) , 3, 99 (t, 2H), 5, 07 (s lr, 1H) , 6, 80 (d, 2H) , 7, 08 (d, 2H) . Éster terc-butilico do ácido [2-(4-{4-[N'-(3,5-diamino-6-cloropirazina-2-carbonil) -guanidino] -butil}-fenoxi) -etil] -carbâmico (3) .
Combinou-se éster terc-butilico do ácido {2—[4—(4— aminobutil)-fenoxi]-etil}-carbâmico 2 (1,7 g, 5,5 mmol), iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloropirazina-2-carbonil)-2-metilisotioureia (2,6 g, 6,6 mmol) e trietilamina (3,1 mL) em THF (18 mL) . Agitou-se a mistura de reacção ao refluxo durante 1,5 horas, sob uma atmosfera de árgon. Deixou-se arrefecer a mistura de produto e evaporou-se o solvente. Submeteu-se a cromatografia (gel de sílica, cloreto de metileno/metanol/hidróxido de amónio concentrado, a 100:10:1) para se obter 2,65 g (92%) de produto puro com o aspecto de um sólido espumoso amarelo. 1H NMR (300 MHz, 111 CDC13) δ 1,44 (s, 9H) , 1,62 (m, 2H) , 1,61 (m, 2H) lr, 2H), 2,56 (t, 2H) , 2,71 (t, 2H) , 3,51 (m, 2H) , 1,75 (s 3,99 (t, 2Η), 5,07 (s lr, 1H), 6,80 (d, 2H), 7,08 (d, 2H). W-14-[4-(2-Aminoetoxi)-fenil]-butil}-W -(3,5-diamino-6-cloropirazina-2-carbonil)-guanidina (4, 9308).
Dissolveu-se éster terc-butílico do ácido [ 2-(4-{4-[Ν' -(3,5-diamino-6-cloropirazina-2-carbonil)-guanidino]-butil}-fenoxi)-etil]-carbâmico 3 (2,63 g, 5,0 mmol) em metanol (25 mL) . Adicionou-se HC1 12 N (30 mL) em porções de 10 mL. Depois de se agitar durante 1 hora, completou-se a reacção por TLC (gel de sílica, cloreto de metileno/ /metanol/hidróxido de amónio concentrado a 100:10:1). Evaporou-se o solvente, adicionou-se metanol (300 mL) e repetiu-se este processo. Submeteu-se o resíduo a uma pressão hipobárica elevada de um dia para o outro para se obter o produto (2,65 g, 99%) com o aspecto de um sólido amarelo, o qual foi utilizado sem mais manipulação. 1H NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 1,58 (m, 4H) , 2,57 (m, 2H) , 3,16 (m, 2H) , 3,37 (m, 2H) , 4, 18 (t, 2H), 6,91 (d, 2H) , 7,15 (d, 2H) , 7,45 (m, 4H) , 8,45 (s lr, 3H), 9,03 (s lr, 2H), 9,46 (t, 1H), 10,63 (s, 1H) . N- (4 — {4 — [2- {Ν' , W-Di-terc-butoxicarbonilguanidino) -etoxi] -fenil}-butil)-Ν' -(3,5-diamino-6-cloro-pirazina-2-carbonil)-guanidina (5) .
Adicionou-se, gota a gota e com o auxílio de uma seringa, trietilamina (1,4 mL, 10 mmol) a uma solução agitada de N-{ 4-[4-(2-aminoetoxi)-fenil]-butil}-Ν'-(3,5- diamino-6-cloro-pirazina-2-carbonil)-guanidina 4 (500 mg, 0,943 mmol) em metanol (3 mL) . A esta solução agitada 112
adicionou-se 1,3-diBoc-2-(trifluorometano-sulfonil)-guanidina (reagente de Goodman) (406 mg, 1,04 mmol) e manteve-se sob agitação à temperatura ambiente. Decorridas 2 horas, a análise por TLC indicou a ausência de reagente de Goodman. Adicionou-se uma quantidade suplementar de 40 mg de reagente de Goodman e agitou-se a mistura de reacção durante mais 1 hora. Após evaporação a uma temperatura inferior a 35°C, submeteu-se o produto impuro a cromatografia (gel de sílica, cloreto de metileno/metanol/ /hidróxido de amónio concentrado a 100:10:1) para se obter o produto puro com o aspecto de um sólido amarelo. 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 1, 49 (s, 9H), 1,51 (s, 9H) , 1, 67 (m 4H) , 2,58 (m, 2H) , 3,22 (m, 2H) , 3,82 (q, 2H) , 4, 05 (t 2H) , 5, 22 (s lr, 1H) , 6, 84 (d, 2H), 7,06 (d, 2H) , 8, 73 (t 1H), 11,47 (s lr, 1H).
Dicloridrato de N-(3,5-Diamino-6-cloropirazina-2-carbonil)-N'-{4-[4-(2-guanidinoetoxi) -fenil] -butil}-guanidina (6) .
Adicionou-se, gota a gota, HC1 12 N (15 mL) a uma solução arrefecida em gelo de i\7-( 4-{ 4-[2-(N, N"-di-terc-butoxicarbonilguanidino) -etoxi ] -fenil} -butil) -Ν' - (3,5-diamino-6-cloropirazina-2-carbonil)-guanidina 5 (370 mg, 0,56 mmol) em metanol (15 mL) ao longo de 1 minuto. Após a adição, removeu-se o banho de arrefecimento e deixou-se agitar a mistura de reacção durante 30 minutos. A análise por TLC (gel de sílica, cloreto de metileno/metanol/ /hidróxido de amónio concentrado a 3:3:1) indicou uma progressão lenta da reacção de reacção lenta. Adicionou-se, gota a gota, mais 15 mL de HC1 12 N à temperatura ambiente, e, decorridas 2 horas, a análise por TLC indicou que a reacção estava completa. Evaporou-se o solvente, adicionou- 113
se metanol (100 mL) , depois evaporou-se a uma temperatura inferior a 30°C, repetiu-se este processo mais três vezes e depois submeteu-se o resíduo a uma pressão hipobárica elevada a 40°C durante 2 dias para se obter 300 mg (96%) de produto puro com o aspecto de um sólido amarelo. 1H NMR (300 MHz, DMSC '-de) δ 1,57 (m, 4H), 2,56 (m, 2H) , 3, 52 (m, 2H) , 4, 02 (t, 2H), 4 ,60 (s lr, 2H), 6,88 (d, 2H) , 7, , 14 (d, 2H) , 7, 41 (m, 8H) , 7, 91 ( t, 1H), 8,93 (m, 2H) , 9, 33 (t, 1H) , 10,55 (s , 1H) . P.f. 223 °C-230 °C, m/ 2 : (ESI ) = 463 [CigH 27CIN10 O2 + H]\
Exemplo 34
Dicloridrato de N- [4- (4-{2-[bis- ((2S, 3R) -2,3,4-tri-hidroxi-butil)-amino]-etoxi}-fenil)-butil]-Ν' -(3,5-diamino-6-cloro-pirazina-2-carbonil)-guanidina (10833)
Método A: por meio da reacção de éster benzílico do ácido { 4-[ 4-(2-aminoetoxi)-fenil)-butil}-carbâmico 7 com D-(-)-eritrose.
Cloridrato do éster benzilico do ácido {4-[4-(2-aminoetoxi)-fenil]-butil)-carbâmico (7) .
Dissolveu-se éster benzílico do ácido {4-[4-(2-terc-butoxicarbonilaminoetoxi)-fenil ]-butil}-carbâmico 1 (11,0 114 g, 24,9 mmol) em metanol (110 mL) e THF (20 mL). Adicionou-se, gota a gota, ácido clorídrico 12 N (40 mL) e deixou-se agitar a mistura de reacção. Decorridas 1,5 horas, adicionou-se éter (200 mL) e filtrou-se com sucção a mistura de reacção para se recolher um sólido branco. Lavou-se 0 sólido com éter e secou-se sob uma pressão hipobárica. Obteve- se 7 , 6 g (82%) do composto 7 com 0 aspecto de um sólido branco. 1H NMR (300 MHz, CD30D) δ 1,39 (s lr, 11H), 1,52 (m, 2H). 4- [N,N-bis- ((2S, 3R) -2,3,4-tri-hidroxibutil) -2-aminoetoxi] -fenilbutilamina (9).
Adicionou-se sequencialmente ácido acético (0,18 mL, 3,08 mmol) e D- (-) -eritrose (0,74 g, 6,16 mmol) a uma suspensão de cloridrato do éster benzílico do ácido {4—[4— (2-aminoetoxi)-fenil]-butil}-carbâmico 7 (0,58 g, 1,54 mmol) em metanol (20 mL) . Agitou-se a mistura de reacção durante 20 minutos à temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto; depois adicionou-se cianoboro-hidreto de sódio (0,39 g, 6,16 mmol) -78°C. Deixou-se aquecer a mistura de reacção até à temperatura ambiente. Após agitação de um dia para o outro, evaporou-se o solvente e purificou-se o resíduo por Flash™ (BIOTAGE, Inc) (cartucho de 90 g de gel de sílica 40 M, clorofórmio/metanol/ /hidróxido de amónio concentrado a 5:1:0,1) para se obter o composto 8 (0,61 g, 72%) com o aspecto de um sólido branco. m/z (APCI) = 551 [C28H42N2O9 + H]+.
Dissolveu-se o composto 8 (0,30 g, 0,55 mmol) em metanol (30 mL) e agitou-se com paládio a 10% sobre carvão (0,24 g, húmido) durante 4 horas à temperatura ambiente e sob uma pressão atmosférica de hidrogénio. Filtrou-se a 115 mistura através de uma camada de gel de sílica; evaporou-se o solvente para se obter o composto 9 (0,21 g, 92%) com o aspecto de um sólido branco. 1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 1,55 (m, 2H), 1 ,66 (m, 2H , ) 2, 58 cu e ) , 2,70 (m, 4H) , 2,92 (m, 2H) , 2,96 (m, 2H) t 3, 05 (m , 2H) , 3, 42 (m, 2H) , 3, 55 (m, 2H) , 3,62 (m, 2H) t 3, 70 (m , 2H) , 4, 10 (m, 2H) , 6,86 (d, 2H) , 7, 08 (d, 2H) . Dicloridrato de N- [4- (4- -{2- [bis-( (2S, ,3R) -2,3 ,4-tri -hidroxi butil) -amino] -etoxi}-fenil) -butil] -Ν' - (3,5-diamino-6-cloro-pirazina-2-carbonil) -guanidina (10) .
Adicionou-se sequencialmente iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloropirazinoí1)-2-metilisotioureia (0,196 g, 0,5 mmol) e trietilamina (0,077 mL, 0,55 mmol) a uma suspensão do composto 9 (0,21 g, 0,5 mmol) em 10 mL de etanol.
Agitou-se a mistura de reacção a 65°C durante 3 horas e evaporou-se então o solvente. Purificou-se a base livre do composto desejado 10 (0,166 g, 52%) por Flash™ (BIOTAGE,
Inc) (cartucho de 90 g de gel de sílica 40 M, clorofórmio/ /etanol/hidróxido de amónio concentrado a 3:1:0,3) com o aspecto de um sólido amarelo. Tratou-se então com HC1 a 3 (2 mL) . Recolheu-se por filtração o precipitado, lavou-se com cloreto de metileno (4x5 mL) , depois retomou-se em água (2 mL) e congelou-se de um dia para o outro para se obter 152 mg (44%) do composto 10 com o aspecto de um pó amarelo. XH NMR (300 MHz, CD3OD) δ 1,70 (s lr, 4H) , 2,64 (m, 2H) , 3,28 (m, r 2H), 3,32 (s lr, 2H), 3,49 (m, 2H), 3,55- 3, 80 (m, 8H) , 3, ,87 (m, , 2H) , 4,05 (m, 2H) , 4,35 (m, 2H) , 6,95 (d, 2H) , 7, 15 (d, 2H) . m/z (APCI) = 629 [C26H4iClN808 + H]+ , [a] 25 D — -12 ,6o (c = 1, 03, MeOH). 116 Método B: por meio da reacção de JV-{4-[4-(2- aminoetoxi)-fenil]-butil} -Ν'-(3,5-diamino-6-cloropirazina-2-carbonil)-guanidina 4 com D - (-)-eritrose.
Colocou-se em suspensão o composto 4 (0,2 g, 0,48 itimol) em 7 mL de metanol e adicionou-se D- (-) -eritrose (0,17 g, 1,4 mmol) dissolvida em 0,9 mL de metanol. Agitou-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 30 minutos. Decorrido este período, adicionou-se 25 pL de ácido acético para se obter uma solução límpida. Arrefeceu-se a mistura de reacção até -78°C e adicionou-se cianoboro-hidreto de sódio (0,084 g, 1,4 mmol). Agitou-se a mistura de reacção -78°C durante 2 horas e à temperatura ambiente durante 3 dias. Decorrido este período, removeu-se o solvente sob pressão reduzida e adicionou-se 15 mL de água ao resíduo oleoso. Após 18 horas num congelador, o óleo transformou-se num sólido amarelo. Isolou-se o sólido por centrifugação, lavou-se com água e dissolveu-se em MeOH que continha 0,05 mL de TFA. Adicionou-se gel de sílica (aprox. 20 mL) e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Submeteu-se o gel de sílica impregnado a purificação utilizando Flash™ (Biotage Inc., cartucho de 90 g de gel de sílica, eluente: clorofórmio/metanol/hidróxido de amónio = 4:1:0,2). Dissolveu-se o sólido amarelo resultante em 10 mL de HC1 a 5% e removeu-se o solvente sob pressão reduzida para se obter o composto 10 (100 mg, 30%) com o aspecto de um sólido amarelo. XH NMR (300 MHz, CD3OD) δ 1,70 (s lr, 4H), 2,64 (m, 2H), 3,29-3,70 (m, 20H), 4,07 (m, 2H) 4,37 (s lr, 2H), 6,95 (d, 2H) , 7,15 (d, 2H) . m/z (APCI) = 629 [C26H41C1N808 + H] +. Método C: por meio de 2,4-etilideno-D-eritrose 117 Método C.l - precursor (11) construído directamente a partir da amina pré-montada (4) N -[4-(4-{ 2-Bis- ( (2R, 4S, 5R) -5-hidroxi-2-met il [1,3] dioxano-4-ilmetil)-amino]-etoxi}-fenil)-butil]-Ν' -(3,5-diamino-6-cloropirazina-2-carbonil)-guanidina (11) .
Colocou-se em suspensão a base livre 4 (0,15 g, 0,35 mmol) em 6 mL de metanol. Adicionou-se 2,4-etilideno-D-eritrose1 (0,15 g, 1,05 mmol) em 2 mL de metanol e depois acrescentou-se 20 pL (0,35 mmol) de ácido acético. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente até se formar uma solução límpida (aprox. 10 minutos) . Arrefeceu-se a solução de reacção até -78°C e adicionou-se cianoboro-hidreto de sódio (0,07 g, 1,05 mmol). Agitou-se a mistura de reacção a -78 °C durante 2 horas e à temperatura ambiente durante 2 dias. Decorrido este período, removeu-se o solvente sob pressão reduzida e purificou-se o resíduo por Flash™ (Biotage Inc., cartucho de 90 g de gel de sílica, eluente: clorofórmio/metanol/hidróxido de amónio = 10:1:0,1) para se obter 0,17 g (70%) do composto 11 com o aspecto de um sólido amarelo. XH NMR (300 MHz, CD30D) δ 1,21 (m, 6H) , 1,65 (s lr, 4H), 2,59 (m, 2H), 2,84 (m, 2H), 2,92-3,60 (m, 12H), 4,03 (m, 4H), 6,84 (d, 2H), 7,10 (d, 2H). m/z (APCI) = 681 [C3oH45C1N809 + H] \ Método C.2 - precursor (11) construído após montagem da cadeia lateral
Ester benzilico do ácido 4-(4-{2-[bis- ( (2R, 4S, 5R) -5-hidroxi-2-metil [1,3] dioxano-4-ilmetil) -amino] -etoxi}-fenil) -butilcarbâmico (12). 118
Colocou-se em suspensão o composto 7 (0,5 g, 1,32 mmol) em 8 mL de metanol. Adicionou-se 2,4-etilideno-D-eritrose (0,6 g, 4,1 mmol) em 2 mL de metanol e depois acrescentou-se 80 pL (1,32 mmol) de ácido acético. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente até se formar uma solução límpida (aprox. 10 minutos). Arrefeceu-se a solução de reacção até -78°C e adicionou-se cianoboro-hidreto de sódio (0,260 g, 1,05 mmol). Agitou-se a mistura de reacção a -78°C durante 2 horas e à temperatura ambiente durante 18 horas. Decorrido este período, removeu-se o solvente sob pressão reduzida e isolou-se o composto desejado 12 (0,6 g, 80%) por Flash ™ (Biotage Inc. , cartucho de 90 g de gel de sílica, eluente: diclorometano/metanol/hidróxido de amónio = 17:1:0,1) com o aspecto de um óleo límpido. 1H NMR (300 MH z, CD3OD) δ 1, 24 (m, 2H) , 1,50 (m, 2H) , 2,56 (m, 2H) , 2, 72 (m, 2H) , 3,: L (m , 4H), 3, 31-3,48 (m, 6H), 4, 02 (m, 2H) , 4, 08 (m, 2H) , 4, r 6 5 (m, 2H) , 5,05 (s, 2H) , 6,74 (d, 2H) , 7, 0,5 (d, 2H) , 7, , 23 (m, 5H) . m/z (APCI) = 603 [C32H 46CIN2O9 + H]+. 4- (4 — {2 — [Bis- ( (2R, 4S, 5R) -5-hidroxi-2-metil [1,3] dioxano-4-ilmetil)-amino]-etoxi}-fenil)-butilamina (13) .
Agitou-se a amina protegida 12 à temperatura ambiente de um dia para o outro em 25 mL de metanol com Pd/C (186 mg, 10% húmido), em ambiente de hidrogénio (1 atm). Decorrido este período, filtrou-se o catalisador e removeu-se o solvente sob pressão reduzida para se obter a amina 13 (0,49 g, 93%) com o aspecto de um óleo límpido. Confirmou-se a pureza do composto 13 por TLC através de gel de sílica 119 (eluente: clorofórmio/metanol/hidróxido de amónio = 2,5:1:0,1). N- [4- (4-{2- [Bis- ( (2R, 45, 5R) -5-hidroxi-2-metil [1,3] dioxano-4-ilmetil)-amino]-etoxi)-fenil)-butil]-Ν' -(3,5-diamino-6-cloropirazina-2-carbonil)-guanidina (11) .
Adicionou-se iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloro-pirazinoí1-2-metilisotioureia (0,39 g, 1,0 mmol) a uma solução de composto 13 (0,49 g, 1,07 mmol) em THF (8 mL) que continha diisopropiletilamina (0,18 mL, 2 mmol). Agitou-se a mistura de reacção ao refluxo durante 2,5 horas e depois à temperatura ambiente de um dia para o outro. Decorrido este período, removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Lavou-se o resíduo castanho com éter (2 x 30 mL) e com cloreto de metileno (2 x 10 mL) . Dissolveu-se o resíduo num volume mínimo de metanol (aprox. 2 mL) e verteu-se sobre água. Recolheu-se o precipitado, lavou-se com água e secou-se de um dia para o outro para se obter o composto impuro 11 (0,5 g) com o aspecto de um sólido amarelo. Purificou-se o composto 11 (0,4 g, 54%) por cromatografia rápida através de gel de sílica (eluente: clorofórmio/metanol/hidróxido de amónio = 10:1:0,1) com o aspecto de um sólido amarelo. [oí]d25 = -20,4° (c =1,0, MeOH).
Dicloridrato de N- [4- (4-{2- [bis- ( (2S, 3R) -2,3,4-tri-hidroxi-butil) -amino] -etoxi}-fenil) -butil] -Ν' - (3,5-diamino-6-cloro-pirazina-2-carbonil)-guanidina (10) .
Dissolveu-se o composto 11 (0,18 g, 0,26 mmol) em 15 mL de HC1 a 10% e agitou-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 18 horas. Decorrido este 120 período, removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Secou-se o resíduo resultante de um dia para o outro e purificou-se por cromatografia rápida através de gel de sílica (eluente: clorofórmio/metanol/hidróxido de amónio = 3:1:0,3) para se obter 66 mg de um sólido amarelo. Dissolveu-se o sólido em 2,5 mL de HC1 a 5% e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Dissolveu-se o resíduo em 1,5 mL de metanol e verteu-se a solução de metanol sobre álcool 2-propílico. Recolheu-se o precipitado formado, lavou-se com cloreto de metileno e secou-se sob uma pressão hipobárica. Obteve-se 34 mg (18%) do dicloridrato 10. NMR (300 MHz, CD3OD) δ 1,71 (s lr, 4H) , 2,64 (m, 2H) , 3,29-3,70 (m, 20H), 4,07 (m, 2H), 4,36 (s lr, 2H), 6,96 (d, 2H) , 7,16 (d, 2H) . mlz (APCI) = 629 [C26H4iC1N808 + H]+; [o:]D25 = -12,6° (c = 1,0, MeOH) . Método D: por meio de (2R, 3S)-3,4-epoxibutano-l,2-diol 4- (4 — {2— [Bis- ( (2S, 3R) -2,3,4-tri-hidroxibutil) -amino] -etoxi}-fenil)-butilamina (69).
Preparou-se uma solução constituída por éster terc-butílico do ácido {4-[4-(2-aminoetoxi)-fenil]-butil} - carbâmico 161 (0,21 g, 0,681 mmol) e (2R,3S)~ 3,4- epoxibutano-1,2-diol2 (68) (0,177 g, 1,702 mmol) em etanol (5 mL) e aqueceu-se a 70°C de um dia para o outro. Arrefeceu-se lentamente até à temperatura ambiente e tratou-se com ácido clorídrico concentrado (12 N, 6 mL) à temperatura ambiente durante 3 horas. Concentrou-se a mistura de reacção sob uma pressão hipobárica. Retomou-se o resíduo em etanol (3 mL) e concentrou-se novamente a solução resultante sob uma pressão hipobárica. Repetiu-se o 121 processo mais duas vezes para garantir que não restava solvente aquoso. Submeteu-se o resíduo a cromatografia através de gel de sílica, efectuando a eluição com uma mistura de hidróxido de amónio concentrado (0%-10%), metanol (0%-30%) e cloreto de metileno (100%-60%), para se obter 0,273 g (89%) do produto 69 com o aspecto de um óleo viscoso incolor. [oí]d25 = -33, 1o (c 1,0, MeOH) . NMR (300 MHz, CD3OD) δ 1,49-1,61 (m, 4H) , 2, 53-2,73 (m, 5H) , 2,90- 3, 04 (m, 4H) , 3,52-3,73 (m, 17H), 4, 07 (t, J= 5,7 Hz, 2H) , 6,84 (d, J= 8,4 Hz, 2H), 7,07 (d, J= 8, 4 Hz, 2H) . m/ z (APCI ) = 417 [C20H36N2O7 + H]+.
Dicloridrato de N- [4- (4-{2- [Bis- ( (2S, 3R) -2,3,4-tri-hidroxi-butil) -amino] -etoxi}-fenil) -butil] -Ν' - (3,5-diamino-6-cloro-pirazina-2-carbonil)-guanidina (70, ALB 10833).
Misturou-se o composto 69 (0,112 g, 0,269 mmol) com etanol (5 mL) . Aqueceu-se a mistura a 65°C durante 15 minutos para se atingir uma dissolução completa. À solução límpida adicionou-se sequencialmente trietilamina (23 pL, 0,161 mmol) e iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloro-pirazinoí1)-2-metilisotioureia (0,105 g, 0,269 mmol).
Aqueceu-se a mistura a 65°C durante mais 2 horas. Ainda quente, adicionou-se lentamente a éter metil-terc—butílico (MTBE, 25 mL) arrefecido em banho de gelo. Formou-se imediatamente um precipitado amarelo claro durante a adição da mistura de reacção. Deixou-se aquecer a suspensão até à temperatura ambiente por remoção do banho de gelo e manteve-se sob agitação durante mais uma hora. Filtrou-se o sólido sob uma pressão hipobárica, lavou-se com MTBE (3x5 mL) e secou-se sob uma pressão hipobárica durante 4 horas. Colocou-se então em suspensa o material seco (0,155 g) em 122 etanol (3 mL) e tratou-se com HC1 concentrado (1 mL) . Adicionou-se água (3 mL) para se dissolver completamente o sólido. Concentrou-se a solução resultante até à secura sob uma pressão hipobárica. Retomou-se o resíduo com metanol (2 mL) . Adicionou-se a solução metanólica resultante a álcool 2-propílico (15 mL) à temperatura ambiente. Agitou-se a suspensão amarela clara resultante à temperatura ambiente de um dia para o outro. Filtrou-se então o sólido sob uma pressão hipobárica, lavou-se com álcool 2-propílico (3x3 mL) e secou-se sob uma pressão hipobárica. Obteve-se 0,093 g (49%) do composto 70 com o aspecto de um sólido amarelo claro. [oí]d25 = -13,9° (c 1,0, MeOH) . XH NMR (300 MHz, DMSO- d6) δ 1, 46-1, 68 (m, 4H) , 2,50-2, 57 (m, 2H) , 3,26- 3, 70 (m, 15H) , 3, 88-4, 98 (m, 2H) , 4,35-4, r72 (m, 2H) , 4,98 -5 ,1< 3 (s lr, 2H) , 5,5( 3-6, 70 (s lr , 2H) , 6,93 (d , J= = 8,3 Hz r 2H) , 7, 16 (d, J= 8 ,3 Hz, 2H) , 7,45 (s lr, 2H) , 7 ,84-8,06 (s lr, 1H) , 8,6 1 (s lr, - 1H), 8, 81 (s lr, 1H), 8, 94 (s lr ! 1H) , 9,25 (s lr, 1H ) , 10,51 (s lr, , 1H) . m/ z (APCI ) = 629 [C26H4iC1N808 + H] +.
Exemplo 35
Dicloridrato de N-[4-(4-{2-[bis-((2R, 3S)-2,3, 4-tri-hidroxi-butil) -amino] -etoxi) -fenil) -butil] -Ν' - (3,5-diamino-6-cloro-pirazina-2-carbonil) -guanidina (14143, o enantiómero de 10833) 123
14143 Éster benzilico do ácido (2-bromoetil)-carbâmico (14).
Adicionou-se num única porção cloroformato de benzilo (26 mL, 0,176 mole) a uma mistura agitada de bromidrato de bromoetilamina (44 g, 0,21 mol), trietilamina (64 mL, 0,46 mole) e cloreto de metileno (1 L), a uma temperatura
inferior a -40°C. Após esta adição, removeu-se o banho de arrefecimento e manteve-se sob agitação a mistura de reacção durante 3 horas. Transferiu-se a mistura para um funil de separação de 2 L e lavou-se sequencialmente com água (2 x 500 mL) , com HC1 2 N (250 mL) e com água (500 mL). Filtrou-se com sucção a solução resultante através de uma camada de 100 g de gel de silica e lavou-se com cloreto de metileno. Evaporou-se os solventes para se obter o produto 14 (40 g, 89%) com o aspecto de um óleo. 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 3,46 (t, 2H) , 3,60 (q, 2H) , 5,11 (s, 2H), 5,20 (s lr, 1H), 7,35 (m, 5H). Éster terc-butilico do ácido { 4-[4-(2-benziloxicarbonil-aminoetoxi) -fenil] -butil)-carbâmico (15) .
Combinou-se éster terc-butilico do ácido [4—(4— hidroxifenil)-butil]-carbâmico (38 g, 0,143 mol), carbonato de césio (84 g, 0,257 mole) e éster benzilico do ácido (2-bromoetil)-carbâmico 14 (59 g, 0,23 mole) em DMF (200 mL) . 124
Agitou-se mecanicamente a mistura sob uma atmosfera de azoto a 63 °C durante 5,5 horas e depois manteve-se em repouso à temperatura ambiente de um dia para o outro. Adicionou-se uma quantidade suplementar de éster benzilico do ácido (2-bromoetil)-carbâmico 14 (5 g, 0,019 mole) e de carbonato de césio (7,1 g, 0,21 mol) e agitou-se novamente a mistura de reacção a 65°C durante 1 hora. Adicionou-se então tolueno e deixou-se arrefecer a mistura agitada até à temperatura ambiente. Filtrou-se com sucção a mistura através de um funil de buchner de frita de vidro e lavou-se com tolueno. Removeu-se os solventes sob uma pressão hipobárica a 75°C. Lavou-se o óleo restante com hexano (2 x 400 mL) , depois dissolveu-se em éter (500 ml) e lavou-se com uma mistura de água e salmoura (a 10:1, 4 x 100 mL) . Filtrou-se com sucção a solução restante através de uma camada de 30 g de gel de sílica e evaporou-se o solvente. Lavou-se o resíduo com hexano (3 x 400 ml) e depois submeteu-se a uma pressão hipobárica durante 2 horas para se obter 61,8 g do produto 15, o qual se utilizou sem mais purificação. XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 1,45 (s, 9H) , 1,54 (m, 4H), 2,56 (t, 2H), 3,20 (m, 2H), 3,50 (m, 2H) , 3, 98 (t, 2H), 4,75 (s lr, 1H), 5,00 (s lr, 1H), 5,09 (s, 2H) , 6,80 (d, 2H), 7,06 (d, 2H), 7,34 (m, 5H) . Éster terc-butilico do ácido {4-[4-(2-aminoetoxi)-fenil]-butil}-carbâmico (16).
Agitou-se éster terc-butilico do ácido {4—[4—(2— benziloxicarbonilaminoetoxi) -f enil ] -butil} -carbâmico 15 (61,8 g) em etanol (500 ml) com paládio a 10% sobre carvão (6 g, húmido), sob uma atmosfera de hidrogénio. Depois de se agitar durante mais de 6 horas, a análise por TLC (gel 125 de sílica, cloreto de metileno/THF a 20:1) indicou que a reacção estava completa. Purgou-se a mistura de reacção completa com azoto, filtrou-se com sucção através de uma camada de celite e lavou-se a camada com cloreto de metileno. Após evaporação do cloreto de metileno, aplicou-se o resíduo (41 g) a uma camada de 800 g de gel de sílica e efectuou-se a eluição sequencialmente com uma mistura de THF e cloreto de metileno (1,4 L, a 2:1) e com uma mistura de cloreto de metileno, metanol e hidróxido de amónio concentrado (a 30:10:1, 2 L) . Recolheu-se a fracção que continha produto. Evaporou-se para se obter o produto puro 16 c 32,8 9f 74% em 2 pas SOS ) • NMR (300 M5 [z, CDC1 3 ) 1, 44 (s, 9H) , i, 50 (s lr, 2H) , 1 , 55 (m, 4H) , 2, 56 (t, 2H) 3, 12 (m, 2H) , 3, 50 (m, 2H) , 3, 98 (t , 2H) , 4, 75 (s lr, 1H) 5, 00 (s lr, 1H) , 5, 09 (s, 2H) , 6 , 80 (d, 2H) , 7, 06 (d, 2H) 7, 34 (m, 5H) Éster terc-butílico do ácido [4-(4-{2-(bis-((2R,3S)-2,3,4-tri-hidroxibutil)-amino]-etoxi}-fenil)-butil]-carbâmico (18) .
Preparou-se uma solução constituída pelo composto 16 (0,4 g, 1,297 mmol) e (2S,3R)-3,4-epoxibutano-l,2-diol2 (17) (0,405 g, 3,891 mmol) em etanol (6 mL) e aqueceu-se a 60°C de um dia para o outro. Concentrou-se então sob uma pressão hipobárica. Carregou-se o resíduo sobre gel de sílica e efectuou-se a eluição com uma mistura de hidróxido de amónio concentrado (0%—3%), metanol (0%-30%) e cloreto de metileno (100%-67%) para se obter 0,592 g (88%) do produto 18 com o aspecto de um óleo viscoso incolor. [a]D25 = +19,9° (c 0,84, MeOH) . ΧΗ NMR (300 MHz, CD30D) : δ 1,32-1, 67 (m, 13H), 2,54 (t, J= 7,1 Hz, 2H), 2, 72-2, 79 (m, 2H) , 2,94 (dd, 126 J= 13,2 Hz, 3,3Hz, 2H) , 3,02-3,09 (m, 2H) , 3,51-3,55 (m, 4H), 3,59 (d, J= 3,0Hz, 2H), 3,67-3,74 (m, 4H), 4,08 (t, J= 5,6 Hz, 2H), 4,63 (lr, 1H) , 6,86 (d, J= 8,4 Hz, 2H), 7,07 (d, J= 8,4 Hz, 2H) . m/z (APCI) = 517 [C25H44N2O9 + H]+. 4- (4-{2- [Bis- ((2R, 3S) -2,3, 4-tri-hidroxibutil) -amino] -etoxi}-fenil)-butilamina (19). A uma solução que contém o composto 18 (0,502 g, 0,972 mmol) em etanol (10 mL) adicionou-se lentamente ácido clorídrico concentrado (12 N, 2 mL) . Agitou-se a solução límpida à temperatura ambiente durante 4 horas. Concentrou-se a mistura de reacção sob uma pressão hipobárica. Retomou-se o resíduo em etanol (3 mL) e concentrou-se novamente a solução resultante sob uma pressão hipobárica. Repetiu-se este procedimento mais duas vezes para garantir que não restava solvente aquoso. Submeteu-se o resíduo a cromatografia através de gel de sílica, efectuando a eluição com uma mistura de hidróxido de amónio concentrado (0%-10%), metano (0%—30%) e cloreto de metileno (100%-60%), para se obter 0,396 g (98%) do produto 19 com o aspecto de um sólido branco de baixo ponto de fusão. [oí]d25 = +24,2 ° (c 0, 265, MeOH) . XH NMR (300 MHz, DMSO-dg) : δ 1,32-1, 52 (m, 4H) , 2, 46- -2,55 (m, 4H) , 2,74-2,79 (m, 2H), 2,84-2, 96 (m, 2H) , 3,31- -3,99 (m, 16H) , 4,01 (t, J= 5,9 Hz, 2H), 6,40 (s lr, 2H), 6,82 (d, J= 8,5 Hz, 2H), 7,09 (d, J= 8,5 Hz, 2H). m/z (APCI) = 417 [C20H36N2O7 + H]+. N- [4- (4-{2- [Bis- ((2R, 3S) -2,3,4-tri-hidroxibutil) -amino] -etoxi}-fenil) -butil] -Ν' - (3,5-diamino-6-cloropirazina-2-carbonil)-guanidina (20, ALB 14143). 127
Misturou-se o composto 19 (0,15 g, 0,331 mmol) com etanol (5 mL) . Aqueceu-se a mistura a 65°C durante 15 minutos para se alcançar uma dissolução completa. À solução limpida adicionou-se sequencialmente diisopropiletilamina (0,26 mL, 1,505 mmol) e iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloropirazinoil)-2-metilisotioureia (0,117 g, 0,301 mmol). Aqueceu-se a mistura a 65°C durante mais 2 horas e depois concentrou-se sob uma pressão hipobárica. Submeteu-se o resíduo a cromatografia através de gel de sílica, efectuando a eluição com uma mistura de hidróxido de amónio concentrado (l%-7%), metanol (10%-30%) e cloreto de metileno (89%-63%), para se obter 0,152 g (80%) da base livre do composto 20 com o aspecto de um sólido amarelo. P.f. 78°C-80°C (decomposição), [oí]d25 = +19,3° (c 1, 075,
MeOH) . XH NMR (300 MHz, DMSO-dg) : δ 1, 46-1, 68 (m, 4H) , 2,48-2,62 (m, 2H), 2,74-2,95 (m, 4H) , 3,08-3,19 (m, 2H) , 3,26-3,70 (m, 12H), 4,03 (t, J= 5,9 Hz, 2H), 4, 35-4, 72 (m, 6H) , 6,60-6,74 (s lr, 3H), 6,83 (d, J= 8,3 Hz, 2H), 7,11 (d, J= 8,3 Hz, 2H), 9,05 (s lr, 2H) . m/z (APCI) = 629 [C26H4iC1N808 + H ] + .
Tratou-se uma amostra da base livre do composto 20 (0,2 g) com HC1 2 N (8 mL) . Concentrou-se a solução até à secura sob uma pressão hipobárica. Retomou-se o resíduo em metanol (2 mL). Adicionou-se a solução metanólica resultante a álcool 2-propílico (15 mL) à temperatura ambiente obtendo-se uma suspensão amarela clara. Filtrou-se o sólido sob uma pressão hipobárica, lavou-se com álcool 2-propílico (3x3 mL) e secou-se sob uma pressão hipobárica. Obteve-se 0,21 g (94%) do composto 20 com o aspecto de um soido amarelo claro. P.f. 93°C-96°C (decomposição); [a]D25 = + 9,06° (c 1,17, MeOH). XH NMR (300 MHz, DMSO-d6) : δ 1,46- 128 1, 68 (m, 4H) , 2 , 48- -2, 62 (m, 2H ) , 3, .26-3, 70 (m, 17H) , 4, 03 (t r J= 5,9 : Hz, 2H) r 4,35-4,72 (m r 2H) , 4,98-5 ,10 (m 2H) , 5, 50 -6,70 (s lr, 2H ), 6,94 (d, J= 8, , 3 Hz, 2H) , 7,14 (d , J= 8, 3 Hz, 2H), 7, 40 (s lr, 1H), 7, 42- -7,67 (s lr, 1H) , 8 ,68- 8, 89 (s lr, 2H) , 9 ,3 1 (s lr, 1H) f 10,53 (s 1: r, 1H). m/z (APCI) = 629 [C26H4iC1N808 + H]+.
Exemplo 36
Dicloridrato de N- [4- (4-{2-[ (2S, 3R) -2,3,4-tri-hidroxibutil-amino] -etoxi}-fenil) -butil] -Ν'-(3,5-diamino-6-cloropirazina-2-carbonil)-guanidina (10733)
10733
Dicloridrato de W-[4-(4-{2-[ (2S, 3.R,)-2,3,4-tri-hidroxibutil-amino] -etoxi}-fenil) -butil] -Ν' - (3,5-diamino-6-cloropirazina-2-carbonil)-guanidina (22).
Colocou-se em suspensão a base livre 4 (0,3 g, 0,71 mmol) em 12 mL de metanol e adicionou-se 0,09 mL (1,4 mmol) de AcOH. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente até se formar uma solução límpida. Adicionou-se então 2,4-etilideno-D-eritrose (0,13 g, 0,92 mmol). Arrefeceu-se a solução de reacção até -78°C e adicionou-se cianoboro-hidreto de sódio (0,06 g, 0,92 mmol) . Agitou-se a mistura de reacção a -78°C durante 2 horas de depois à temperatura ambiente durante 18 horas. Decorrido este período, removeu- 129 se o solvente sob pressão reduzida e purificou-se o resíduo por Flash™ (Biotage Inc., cartucho de 90 g de gel de sílica, eluente: clorofórmio/metano/hidróxido de amónio = 15:1:0,1) para se obter 0,26 g (66%) do composto 21 com o aspecto de um sólido amarelo. Dissolveu-se então uma amostra do composto 21 (0,2 g, 0,36 mmol) em metanol (15 mL) e adicionou-se 300 mg de resina acídica (Dowex 50 WX8-200). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 2 dias. Decorrido este período, removeu-se por filtração a resina e lavou-se com metanol. Depois lavou-se a resina com uma mistura a 1:1 de MeOH/NH4OH (2 x 20 mL) e removeu-se por filtração. Combinou-se os sobrenadantes e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromatografia rápida através de gel de sílica (eluente: clorofórmio/metanol/hidróxido de amónio = 3:1:0,3). Secou-se o composto obtido de um dia para o outro. Decorrido este período, dissolveu-se o resíduo seco em HC1 a 5%. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida e secou-se o sólido amarelo formado de um dia para o outro para se obter o composto 22 (0,12 g, 55%). 1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 1,68 (s lr, 4H), 2,64 (m, 2H), 3,15-3,75 (m, 11H), 3,95 (m, 1H), 6,94 (d, 2H), 7,18 (d, 2H), 9,23 (m, 1H). m/z (APCI) = 525 [C22H33C1N805 + H] +.
Exemplo 37
Dicloridrato de N- [4-(4-{2-[bis-((2R, 35, 4R)-2,3,4,5-tetra-hidroxipentil) -amino] -etoxi}-fenil) -butil] -Ν' - (3,5-diamino-6-cloropirazina-2-carbonil)-guanidina (4330) 130
Dicloridrato de N- [4- (4-{2-[bis- ( (2R, 3S, 4R) -2,3,4,5-tetra-hidropentil) -amino] -etoxi}-fenil) -butil] -Ν' - (3,5-diamino-6-cloropirazina-2-carbonil)-guanidina (23) .
Adicionou-se D-(+)-xilose (0,35 g, 2,6 mmol) a uma solução do cloridrato 4 (0,3 g, 0,65 mmol) em metanol (20 mL) e agitou-se a mistura durante 20 minutos à temperatura ambiente. Depois arrefeceu-se a solução até -78°C e adicionou-se cianoboro-hidreto de sódio (0,17 g, 2,6 mmol). Agitou-se a mistura de reacção a -78°C durante 2 horas e depois à temperatura ambiente durante 4 dias. Decorrido este periodo, removeu-se o solvente sob pressão reduzida e lavou-se o resíduo com água. Isolou-se o sólido amarelo formado e secou-se sob uma pressão hipobárica. Depois dissolveu-se novamente o resíduo em HC1 a 5% e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Dissolveu-se o composto obtido em água que continha 0,1% de TFA e purificou-se por HPLC preparativa (coluna C 18 Luna de ' Phenomenex' 250 x 21,2 mm, 5 μ, método isocrático, água/acetonitrilo 80% : 20%) . Combinou-se as fracções que continham o composto desejado e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Dissolveu-se o resíduo em HC1 a 5% HC1 e removeu-se o solvente sob pressão reduzida (duas vezes). Dissolveu-se o 131 pó amarelo resultante em água e liofilizou-se a solução para se obter 34 mg (7%) do composto 23 com o aspecto de um sólido amarelo. 1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 1,64 (s lr, 4H) , 2,62 (m, 2H), 3,30 (m, 4H) , 3,35-3, 70 (m, 13H) , 4,23 (m, 2H), 4,47 (m, 2H), 6,95 (d, 2H), 7,15 (d, 2H). m/z (APCI) = 689 [C28H45C1N8Oio + H]+. [cx]D25 = -16,1° (c =0,5, MeOH) .
Exemplo 38
Cloridrato de 4-{ 4- [N-(3,5-diamino-6-cloropirazina-2-carbonil) -guanidino] -butil}-N- (2-hidroxietil) -benzamida (11180)
O
11180 A síntese de 4-(4-carboximetilfenil)-butilamina (24) foi descrita nos detalhes experimentais apresentados antes (como composto 8). Éster metilico do ácido 4-(4-terc-butoxicarbonilaminobutil) -benzóico (25).
Adicionou-se dicarbonato de di-terc-butilo (1,64 g, 7,5 1 mmol) a uma solução de composto 24 (1 g, 4,84 mmol) em cloreto de metileno anidro (50 mL) . Agitou-se a mistura de reacção de um dia para o outro sob uma atmosfera de árgon à temperatura ambiente. Depois removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Separou-se o resíduo por Flash™ (BIOTAGE, Inc) (cartucho de 90 g de gel de sílica 40 M, 132 hexano/acetato de etilo a 3:1) para se obter o composto 25 com o aspecto de um sólido branco (1,35 g, 91%) . 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 1,42 (s, 9H) , 1,52 (m, 2H) , 1,64 (m, 2H) , 2,69 (m, 2H) , 3,13 (m, 2H), 3,90 (s, 3H), 4,57 (s lr, 1H) , 7,22 (d, 2H) , 7,95 (d, 2H) .
Acido 4-(4-terc-butoxicarbonilaminobutil)-benzóico (26).
Adicionou-se uma solução aquosa (10 mL) de hidróxido de sódio (0,53 g, 13,18 mmol) e uma solução de composto 25 (1,35 g, 4,39 mmol) em THF (60 mL) e agitou-se a solução resultante à temperatura ambiente durante 48 horas e a 60°C durante 14 horas. Depois removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Adicionou-se água e ajustou-se o valor de pH para 7 com HC1. Removeu-se por filtração o precipitado sólido branco, lavou-se com água e secou-se sob uma pressão hipobárica. Obteve-se 1, 22 g (95%: ) do sólido branco 26 ΧΗ NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 1,39 (s lr, 11H), 1,52 (m, 2H) 1,64 (m, 2H), 2,92 (m, 2H) 1 , 6,84 (m, 1H), 7,28 (d, 2H) 7, 85 (d, 2H) . Éster terc-butílico do ácido { 4-[4-(2-hidroxietilcarbamoil) -fenil]-butil}-carbâmico (27).
Adicionou-se 1,1'-carbonildiimidazole (0,6 g, 3,71 mmol) a uma solução do composto 26 (0,91 g, 3,09 mmol) em THF (50 mL) . Agitou-se a mistura de reacção à temperatura ambiente de um dia para o outro sob uma atmosfera de árgon e depois adicionou-se etanolamina (0,28 mL, 4,64 mmol). Manteve-se sob agitação durante 24 horas à temperatura ambiente e sob uma atmosfera de árgon. Evaporou-se o solvente e purificou-se o resíduo por Flash™ (BIOTAGE, Inc) (cartucho de 90 g de gel de sílica 40M, clorofórmio/ 133 /etanol/hidróxido de amónio concentrado a 18:1:0,1).
Isolou-se 0, 74 g (71%) de um sólido branco 27. NMR (300 MHz, CDC13) δ 1,40 (s , 9H), 1,48 (m, 2H) , 1, 60 (m, 2H) , 2,62 (m, 2H) f 3,10 (m, 2H), 3,79 (m, 2H), 4,55 (s lr, 1H) , 6,74 (m, 1H) f 7,18 (d, 2H), 7,66 (d, 2H).
Cloridrato de 4- (4-aminobutil) -N- (2-hidroxietil) -benzamida (28) .
Agitou-se uma solução do composto 27 (0,4 g, 1,19 mmol) à temperatura ambiente numa mistura de metanol/HCl (a 1:1, 40 mL) . Deu-se a reacção por concluída em 2 horas de acordo com a análise por HPLC. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida para se obter 0,33 g (98%) do composto 28 com o aspecto de um sólido branco. 1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) δ 1,60 (m , 4H) , 2,63 (m, 2H) , 2, 78 (m, 2H) , 3, 31 (m 2H) , 3,50 (m, 2H) , 7,28 (d, 2H), 7,80 (d, 2H), 7, 97 (s lr 2H) , 8,46 (m, 1H) .
Cloridrato de 4- (4- [N- (3,5-diamino-6-cloropirazina-2- carbonil) -guanidino] -butil) -N- (2-hidroxi-etil) -benzamida (29) .
Adicionou-se sequencialmente iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloropirazinoí 1)-2-metilisotioureia (0,48 g, 1,24 mmol) e trietilamina (0,7 mL, 4,74 mmol) a uma solução do composto 28 (0,28 g, 1,19 mmol) numa mistura de THF/MeOH (4 mL, 1/1) . Agitou-se a mistura de reacção no solvente em ebulição durante 4 horas e depois à temperatura ambiente de um dia para o outro. Evaporou-se o solvente. Purificou-se a base livre do composto desejado 29 (0,36 g, 62%) por Flash™ (BIOTAGE, Inc) (cartucho de 90 g de gel de sílica 40M, clorofórmio/etanol/hidróxido de amónio concentrado a 134 12:1:0,1) com o aspecto de um sólido amarelo. Tratou-se 100 mg do sólido amarelo com 2 mL de HC1 a 3%. Recolheu-se por filtração o precipitado, lavou-se com água (2x5 mL) e secou-se sob uma pressão hipobárica para se obter 85 mg (79%) do composto 29 com o aspecto de um pó amarelo. 1H NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 1,60 (m, 4H) , 2,68 (m, 2H) , 3,28 (m, 4H), 3,49 (m, 2H), 4,80 (m, 1H), 7,28 (d, 2H), 7,44 (s lr, 2H), 7,82 (d, 2H), 8,45 (m, 1H). m/z (APCI) = 449 [Ci9H25C1N803 + H] +.
Exemplo 39
Cloridrato de 2-{4-[Ν' - (3,5-diamino-6-cloropirazina-2-carbonil)-guanidino]-4-butilfenoxi}-acetamida (9714)
Éster etilico do ácido [4-(4-benziloxicarbonilaminobutil)-fenoxi]-acético (47).
Adicionou-se hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo mineral) (0,24 g, 10,05 mmol) a uma solução arrefecida (0°C) de 4-(4-hidroxifenil)-butilamina (2 g, 6,68 mmol) em THF (150 mL) , sob uma atmosfera de azoto. Deixou-se aquecer a mistura de reacção até à temperatura ambiente ao longo de 0,5 hora sob agitação e depois adicionou-se sequencialmente bromoacetato de etilo (0,96 mL, 8,02 mmol) e iodeto de 135 tetrabutil-amónio (0,25 g, 0,67 mmol). Agitou-se ainda a mistura de reacção à temperatura ambiente de um dia para o outro. Adicionou-se gel de silica (25 mL) à mistura e evaporou-se o solvente. Submeteu-se o gel de silica impregnado a purificação por cromatografia em coluna (gel de silica, hexano/acetato de etilo a 5:1). Obteve-se 2,42 g (94%) do composto 47 com o aspecto de um sólido branco. NMR (300 MHz, CDC13) δ 1, 30 (t, 3H) , 1, 57 (m, 4H) , 2, • 58 (m, 2H) , 3, 20 (m, 2H), 4, 28 (m, 2H) , 4, 58 (s, 2H) 1, 4, 74 (s lr, 1H) , 5, 10 (s lr, 2H), 61 , 82 (m, 2H) , 7, . 08 (m, 2H) , 7, • 38 (s lr, 5H).
Ester etílico do ácido [4-(4-aminobutil)-fenoxi]-acético (48) .
Agitou-se uma suspensão de composto 47 (1,11 g, 2,88 mmol) e paládio a 10% sobre carvão (0,40 g, húmido) em metanol (50 mL) à temperatura ambiente durante 2 horas, sob pressão atmosférica de hidrogénio. Filtrou-se então a mistura através de uma camada de gel de silica. Evaporou-se o solvente para se obter o composto 48 (0,64 g, 88%) com o aspecto de um sólido branco. 1H NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 1,21 (m, 3H), 1,30-1,63 (m, 6H) , 3,13 (m, 2H) , 4,17 (m, 2H), 4,72 (s lr, 2H), 6,84 (m, 2H), 7,10 (m, 2H). Éster etílico do ácido (4-{4-[N'-(3,5-diamino-6-cloro-pirazina-2-carbonil)-guanidino]-butil)-fenoxi)-acético (49) .
Adicionou-se sequencialmente iodidrato de 1-(3,5-diamino-6-cloropirazinoí1)-2-metilisotioureia (0,74 g, 1,9 mmol) e trietilamina (0,5 mL) a uma solução do composto 48 (0,62 g, 2,47 mmol) em THF (10 mL). Agitou-se a mistura de reacção em solvente em ebulição durante 4 horas e depois à 136 temperatura ambiente de um dia para o outro. Evaporou-se o solvente e purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna (gel de sílica, clorofórmio/etanol/hidróxido de amónio concentrado a 6:1:0,1) para se obter o composto 49 (0,5 g, 57%) com o aspecto de um sólido amarelo. Confirmou-se a pureza do produto por HPLC. m/z (APCI) = 464 [C2oH26C1N704 + H] +.
Cloridrato de 2-{4-[W-(3,5-diamino-6-cloropirazina-2-carbonil)-guanidino]-4-butilfenoxi}-acetamida (50, 9714).
Agitou-se uma solução de composto 49 (0,5 g, 1,08 mmol) em etanol saturado com amónia (100 mL) à temperatura ambiente de um dia para o outro. Evaporou-se o solvente e purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna (gel de sílica, clorofórmio/etanol/hidróxido de amónio concentrado a 4:1:0,1) para se obter a base livre do produto 50 com o aspecto de um sólido amarelo. Tratou-se então com HC1 a 3%. Evaporou-se o solvente. Lavou-se o sólido resultante com água (2 x 5 mL) e depois secou-se sob uma pressão hipobárica para se obter o composto 50 (0,25 g, 49%) com o aspecto de um sólido amarelo. 1H NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 1,57 (s lr, 4H), 2,51 (m, 2H), 3,33 (m, 2H), 4,48 (s, 2H), 6,87 (d, 2H), 7,13 (d, 2H), 7, 37-7, 60 (m, 4H) , 8,88 (s lr, 1H) , 8,99 (s lr, 1H) , 9,32 (m, 1H) , 10,56 (s, 1H) . m/z (APCI) = 435,3 [Ci8H23C1N803 + H] \
Exemplo 40 4-{4- [Ν' - (3,5-Diamino-6-cloropirazina-2-carbonil) -guanidino] -butil}-benzamidina (11157) 137
11157 Éster terc-butilico do ácido [4-(4-cianofenil)-but-3-inil] -carbâmico (56).
Adicionou-se, gota a gota, éster terc-butilico do ácido but-3-inilcarbâmico (3,66 g, 22 mmol) a uma mistura arrefecida com gelo, agitada e purgada com árgon, de 4-iodobenzonitrilo (4,5 g, 19,6 mmol), diclorobis(trifenil-fosfina)-paládio(II) (0,69 g, 0,98 mmol), iodeto de cobre (I) (0,19 g, 0,98 mmol), trietilamina (11 mL, 78,4 mmol) e THF (24 mL). Depois de se agitar durante 10 minutos, removeu-se o banho de gelo e manteve-se sob agitação a mistura de reacção durante mais 2 horas. Fez-se passar a mistura de reacção através de uma camada de gel de sílica, utilizando como eluente cloreto de metileno/acetato de etilo (a 5:1) . Depois de se evaporar o solvente, submeteu-se o produto impuro a cromatografia, utilizando como eluente cloreto de metileno/acetato de etilo (a 20:1). Evaporou-se o solvente e colocou-se sob uma pressão hipobárica durante 1 hora para se obter o produto puro 56 (5,2 g, 99%) com 0 aspecto de um óleo. ΧΗ NMR (30 0 MHz, CDC13) δ 1,46 (s, 9H), 2,64 (t, 2H), 3,37 (m, 2H) , 4,85 (s lr, 1H), 7, 47 (d, 2H), 7,58 (d, 2H) . Éster terc-butilico do ácido [4-(4-cianofenil)-butil]-carbâmico (57) . 138
Preparou-se uma suspensão de éster terc-butílico do ácido [4-(4-cianofenil) -but-3-inil] -carbâmico 56 (5,2 g, 19,2 mmol) e paládio a 10% sobre carvão (2,5 g, húmido) em etanol/THF (30 mL, 1:1) e agitou-se de um dia para o outro sob 1 atmosfera de hidrogénio. Depois de se purgar com azoto, filtrou-se com sucção a mistura de reacção através de uma camada de Celite. Removeu-se o solvente a partir do filtrado por evaporação. Submeteu-se o residuo a cromatografia através de gel de sílica, efectuando a eluição com cloreto de metileno/acetato de etilo (a 30:1), para se obter o produto puro 57 (4,6 g, 87%) com o aspecto de um óleo. ΧΗ NMR (300 MHz, CDC13) δ 1,44 (s, 9H) , 1,51 (m, 2H) , 1,65 (m, 2H) , , 2,69 (t, 2H), 3,14 (m, 2H), 4,52 (s lr, 1H) , 7,27 (d, 2H) , 7,56 (d, 2H) . Éster terc-butilico do ácido [4-(4-tiocarbamoil-fenil)-butil]-carbâmico (58).
Fez-se borbulhar azoto através de uma solução agitada de éster terc-butilico do ácido [ 4-(4-cianofenil)-butil]-carbâmico (57) (4,5 g, 16,4 mmol), piridina (60 mL) e trietilamina (60 mL) durante 10 minutos. Fez-se borbulhar lentamente sulfureto de hidrogénio através desta solução agitada durante 10 minutos. Fechou-se estanquemente a mistura de reacção e manteve-se sob agitação de um dia para o outro. Purgou-se então a mistura de reacção com azoto, transferiu-se para um funil de separação com acetato de etilo (500 mL) e lavou-se sequencialmente com água (3 x 100 mL), com uma solução aquosa saturada de hidrogeno-sulfato de potássio (3 x 100 mL) , com água (2 x 50 mL) e com salmoura (2 x 50 mL) . Secou-se a solução sobre sulfato de sódio. Filtrou-se o sólido e concentrou-se o filtrado sob 139 pressão reduzida. Deixou-se recristalizar o sólido resultante a partir de hexano/acetato de etilo (a 10:1) e colocou-se sob uma pressão hipobárica durante 2 horas para se obter o produto puro 58 (4,8 g, 95%) com o aspecto de um sólido amarelo cristalino. 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 1,43 (s, 9H) cn \—1 (m, 2H) , 1,63 (m, 2H), 2,65 (t, 2H) , 3,11 (m, 2H) , 4, 57 (s lr, 1H) , 7, 19 (d, 2H), 7,42 (s lr, 1H), 7,81 (d, 2H) .
Ester terc-butilico do ácido [4-(4-carbamimidoíl-fenil)-butil]-carbâmico (59).
Combinou-se éster terc-butilico do ácido [4—(4— tiocarbamoil-fenil)-butil]-carbâmico (58) (500 mg, 1,6
mmol) e iodometano (4 mL, 6 4 mmol) em cloreto de metileno (8 mL) . Agitou-se a solução ao refluxo durante 3 horas e manteve-se em repouso de um dia para o outro. Removeu-se os materiais voláteis por evaporação e secou-se o resíduo sob uma pressão hipobárica durante 3 horas. Dissolveu-se o sólido cristalino resultante em etanol (5 mL) e adicionou-se acetato de amónio (1,1 g, 14,4 mmol). Agitou-se a solução resultante ao refluxo durante 2 horas e evaporou-se o solvente. Retomou-se o resíduo numa mistura de metanol e de hidróxido de amónio concentrado (20 mL, 10:1) e evaporou-se o solvente. A este resíduo adicionou-se água (20 mL) e hidróxido de amónio concentrado (3 mL). Agitou-se a mistura resultante durante 1 hora, arrefeceu-se em banho de gelo e filtrou-se com sucção para se recolher o sólido. Secou-se o sólido sob uma pressão hipobárica de um dia para o outro para se obter o produto 59 (137 mg, 29%) . 1H NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 1,37 (s, 9H) , 1,38 (m, 2H) , 1,55 (m, 140 2H) , 2,64 (t, 2H) , 2,93 (m, 2H), 6,80 (s lr, 1H) , 7,35 (d, 2H) , 7, 70 (d, 2H) , 9,62 ( s lr, 3H) .
Dicloridrato de 4-(4-aminobutil)-benzamidina (60).
Adicionou-se, gota a gota, ácido clorídrico 12 N (0,71 mL, 8,6 mmol) a uma solução agitada de éster terc-butílico do ácido [ 4-(4-carbamimidoí1-fenil)-butil]-carbâmico (59) (124 mg, 0,43 mmol) em metanol (2 mL) . Depois de se agitar durante 2,5 horas, a análise por TLC (cloreto de metileno/ /metanol/hidróxido de amónio concentrado a 6:3:1) indicou que a reacção estava completa. Filtrou-se a mistura de reacção sob uma pressão hipobárica. Removeu-se o solvente a partir do filtrado por evaporação. Removeu-se ainda a água residual como um azeótropo de tolueno/metanol (1:1). Colocou-se o resíduo sob uma pressão hipobárica durante 2 horas para se obter o produto 60 (106 mg, 94%) com o aspecto de um sólido amarelo espumoso. 1H NMR (300 MHz, DMSO-ds) δ 1,62 (m, 4H) , 2,70 (t, 2H) , 2,78 (m, 2H) , 3,49 (s lr, 1H), 7,47 (d, 2H) , 7,82 (d, 2H) , 8,13 (s lr, 3H) , 9,25 (s, 2H), 9,42 (s, 2H). 4-{4- [Ν' - (3,5-Diamino-6-cloropirazina-2-carbonil) -guanidino] -butil}-benzamidina (61, ALB 11157).
Adicionou-se sequencialmente dicloridrato de 4— (4— aminobutil)-benzamidina (60) (92 mg, 0,35 mmol), trietilamina (0,24 mL, 1,74 mmol) e iodidrato de 1-(3,5-diamino-6- cloropirazinoí1)-2-metilisotioureia (142 mg, 0,37 mmol) a etanol (2 mL). Depois de se agitar ao refluxo durante 2 horas sob protecção de árgon, evaporou-se o solvente.
Agitou-se o resíduo em cloreto de metileno (5 mL) e filtrou-se com sucção para se obter um sólido. Submeteu-se 141 o sólido a cromatografia através de gel de silica, efectuando a eluição com cloreto de metileno/metanol/ /hidróxido de amónio concentrado (6:3:1), para se obter o produto puro 61 com o aspecto de um sólido amarelo. P.f. 140°C-170°C (decomposição). ΧΗ NMR (300 MHz, DMS0-d6) δ 1,96 (m, 2H), 2,09 (m, 2H), 3,43 (m, 2H), 4,08 (s lr, 2H) , 8,00- 10,00 (m, 14H) . m/z (APCI) = 404 (C17H22CIN9O + H)+.
Referências 1. Rappoport, D.A.; Hassid, Z.; J. Amer. Chem. Soc., 1951, 73, 5524-5525, Ruth, J.A. e Claffey, D.J.,
Tetrahedron Lett. 1996, 37 (44), 7929-7932.
Actividade de bloqueio do canal de sódio
Os compostos apresentados nos quadros seguintes foram testados quanto à potência em epitélias bronquiais caninas utilizando o ensaio in vitro descrito antes. A amilorida também foi testada neste ensaio como controlo positivo. Os resultados para os compostos da presente invenção são apresentados como número de vezes do aumento em relação à amilorida.
Exemplo 41
142Exemplo 42 R= N= N° de vezes de amilorida OH 1 50,9 ± 19,8 (3) OH 2 79,2 ± 30,6 (4) OH 4 45,3 ± 27,0 (6) nh2 0 32,6 ± 2,0 (3) nh2 1 26,2 ± 5,1 (3) nh2 3 59 ± 5,5 (4) nh2 4 132,6 ± 47,2 (5)
R= n= N° de vezes de amilorida OH 2 84,9 ± 30,3 (6) OH 3 105,2 ±26,6 (7) OH 4 21 (1) nh2 2 60,1 ± 1,3 (2) nh2 2 56,5 ± 0 (4) nh2 3 102,6 ± 49 (2)
Exemplo 43 143
x= Y= N° de vezes de amilorida o II o nh2 73,1 ± 31,5 (3) O II o NH (CH2) 2-OH 28,5 (1) O II tc nh2 53,2 ± 19,3 (2) NH H 32,6 ± 2 (3) NH COCH3 52,3 ± 16,4 (3) NH so2ch3 38,5 ± 4,2 (3) NH co2c2h5 29,0 ± 5,8 (2) NH C(=NH)NH2 88,0 ± 18,0 (2)
Exemplo 44
R= RX = N° de vezes de amilorida OR1 H 50,9 ± 19,8 (3) NMR1 H 28 (1) NHR1 COCH3 16 (1) NHR1 so2ch3 50,6 ± 11,9 (2) NHR1 co2c2h5 24,1 ± 0,5 (3) NHR1 co2-(ch3)3 29,0 ± 4,1 (2) NHR C(=NH)NH2 66,2 ± 27,4(4) 144
Exemplo 45
x= N° de vezes de amilorida nh2 56,5 ± 24 (4) NH-C(=NH)-NH2 120,6 ± 60,8 (11) nhso2ch3 64,0 (1) NHC02(CH3)3 51,7 ± 10,1(2) nhcoch3 48,5 ± 26,5 (4)
Exemplo 4 6 R= N° de vezes de amilorida -OH 14, 0 ± 4,6 (7) -0(CH3)3 29,2 ± 10,9 (3) -nh2 48,2 ± 24,1 (7)
Exemplo 47 145
N° de vezes de amilorida ch2 ch2 ÕH 79,2 ± 30,6 (4) 0 ch2 ch2 OH 84,9 ± 30,3 (6) 0 ch2 ch2 ch2 OH 105,2 ±26,6 (7) ch2 ch2 ch2 ch2 OH 37,4 (1) 0 ch2 CHOH ch2 OH 51,95 (50) 0 ch2 CHOH ch2 nh2 57,5 ± 24,5 (6) 0 ch2 ch2 ch2 ch2 OH 21 (1) 0 ch2 ch2 CHOH ch2 OH 55,5 ± 19,3 (3) 0 ch2 CHOH CHOH ch2 OH 93,7 ± 42,1 (5) 0 ch2 CHOH CHOH ch2 OH 56,1 ± 15,6 (4) N ch2 CHOH CHOH ch2 OH 44,9 ± 14,7 (8)
Exemplo 48
R2=CH2(CHOH)3CH2OH R=CH2CHOHCHOHCH2OH r1=ch2ch2och3 N° de vezes de amilorida 146 N° de vezes de amilorida nh2 32,6 ± 2 (3) R 44,9 ± 14,7 NH (8) 0 ch2 ch2 nh2 84,9 ± 30,3 (6) 0 ch2 ch2 NH Ra 52,9 ± 14,3 (5) 0 ch2 ch2 NR Ra'c 73,2 ± 49,3 (9) 0 ch2 ch2 0 R1 76,1 (1) 0 ch2 ch2 0 ch3 51,5 ± 14,9 (2) 0 R 93,7 ± 42,1 (5) 0 ch2 CHOH ch2 OH 51,95 (79) 0 ch2 ch2 NR Ra'c 56,0 (1) 0 ch2 ch2 NR2 R2'a a Quiral b Racémico c Enantiómeros
Exemplo 4 9
-co2(ch3)3 + (ch3)3; boc 147 Exemplo 50 N° de vezes de amilorida 0(CH2)NHC02 + 51,7 ± 10,1 (2) och2co2+ 29,2 ± 10,9 (3) och2co2et 20 (1) -nhch2co2+ 29,0 ± 4,1 (2) nhco2et 29,0 ± 5,38 (2) ch2nhco2et 24,1 ± 0,5 (3) 0 (CH2) 2nhco2et 17,7 ± 6,0 (2) och2chohch2nhco2+ 77,9 ± 24,0 (3) 0(CH2)3NHC02+ 37,5 ± 12,8 (4) (CH2) 4-nhco2+ 16,9 ± 2,3 (2)
R= Posição N° de vezes de amilorida H Orto 21,7 ± 4,8 (2) H Meta 41,1 ± 8,5 (2) H Para 80,3 ± 25,5 (9) CH2OH Orto 24,0 ± 1,0 (2) ch2oh Meta 40 (1) ch2oh Para 51,55 (79) 148
Exemplo 51 148
R=\Z= H 0(CH2)2-R o(ch2)3-r CH2R (CH2)3R OH Xamilorida 84,9 ± 30,3 105,2 ± 26,6 50,9 ± 19,8 (3) R=\Z= H 0(CH2)2-R 0(CH2)3-R CH2R -<ch2)3r nh2 Xamilorida 32,6 ± 2 56,5 ± 0 102,6 ± 49 26,2 ± 5,1 (3) 54, 4 ± 43,5 (6) R=\Z= H 0(CH2)2-R 0 (CH2) 3-R CH2R (CH2)3R NH -NHCNHi Xamilorida 8 8,0 ± 18,0 98,0 ± 58,5(18) 50,2 ± 17,4(4) 35 (1) 47,6 (3)
Exemplo 52
Efeito do composto 9518 sobre MCC 4 horas).
Estas experiências foram efectuadas de acordo com os métodos descritos no exemplo 32 com o composto 9518 e o veiculo como controlo. Os resultados estão apresentados nas figuras 3 (t = 0 horas) e 4 (t = 149
Exemplo 53
Efeito do composto 9714 sobre MCC
Estas experiências foram efectuadas de acordo com os métodos descritos no exemplo 32 com o composto 9714 e o veículo como controlo. Os resultados estão apresentados nas figuras 5 (t = 0 horas) e 6 (t = 4 horas).
Exemplo 54
Efeito do composto 10833 sobre MCC
Estas experiências foram efectuadas de acordo com os métodos descritos no exemplo 32 com o composto 10833 e o veículo como controlo. Os resultados estão apresentados nas figuras 7 (t = 0 horas) e 8 (t = 4 horas). 150
REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO A presente listagem de referências citadas pela requerente é apresentada meramente por razões de conveniência para o leitor. Não faz parte da patente de invenção europeia. Embora se tenha tomado todo o cuidado durante a compilação das referências, não é possível excluir a existência de erros ou omissões, pelos quais o IEP não assume nenhuma responsabilidade.
Patentes de invenção citadas na descrição us 6264975 B, R.C. Boucher [0007] us 5656256 A [0083] [0102] us 5292498 A [0083] us 5789391 A, Jacobus [0087] us 5740794 A [0093] us 5654007 A [0093] us 5458135 A [0093] us 5775320 A [0093] us 5785049 A [0093] us 5622166 A [0093] us 5577497 A [0093] us 5645051 A [0093] us 5492112 A [0093] us 5826570 A [0093] us 5813397 A [0093] us 5819726 A [0093] us 5655516 A [0093] us 4501729 A [0094] [0102] us 4389393 A, Schor [0101] us 5707644 A, Illum [0101] us 4294829 A, Suzuki [0101] [0083] 151 • US 4835142 A, Suzuki [0101] • US 3313813 A [0105]
Literatura citada na descrição, para além das patentes de invenção • J. VELLY et ai. Effects of amiloride and its analogues on [3H]batrachotoxinin-A 20-Alpha benzoate binding, [3H]tetracaine binding and 22Na influx. EUROPEAN JOURNAL OF PHARMACOLOGY, 1988, vol. 149 (1-2), 97-105 [0008] • Solutions, Emulsions, Suspensions and Extracts. J. Nairn.
Remington: The Science and Practice of Pharmacy. 1995 [0101] • The Synthesis of Amiloride and Its Analogs. E.J. Cragoe. Amiloride and Its Analogs. 25-36 [0105] • Sabater et al. Journal of Applied Physiology, 1999, 2191-2196 [0113] • Taylor, E.C.; Harrington, P.M.; Schin,C. Heterocycles, 1989, vol. 28, 1169 [0206] • Widsheis et al. Synthesis, 1994, 87-92 [0206] • Rappoport, D.A.; Hassid, Z. J. Amer. Chem. Soc., 1951, vol. 73, 5524-5525 [0274] • Ruth, J.A.; Claffey, D.J. Tetrahedron Lett., 1996, vol. 37 (44), 7929-7932 [0274]

Claims (73)

1 REIVINDICAÇÕES
em que o símbolo X representa hidrogénio, halogéneo, trifluorometilo, alquilo(Ci-Cg) , fenilo não substituído ou substituído com halo, alquil(Ci-Cg)-tio, fenil-alquil(Ci-Cg) -tio, alquil (Ci-Cg)-sulfonilo ou fenil-alquil (Ci-C8) -sulfonilo; o símbolo Y representa hidrogénio, hidroxilo, mercapto, alcoxi(C1-C8) , alquil (Ci-Cg)-tio, halogéneo, alquilo (Ci-Cs) , arilo mononuclear não substituído ou substituído com halo ou -N(R2)2; o símbolo R1 representa hidrogénio ou alquilo (Ci-C8) ; cada símbolo R2 representa independentemente -R7, -(CH2)m- OR8, - (CH2) m-NR7R10, - (CH2) n (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -(CH2CH20)m- R8, - (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, - (CH2) n-C (=0) NR7R10, - (CH2) n-Z8-R7, - (CH2)m-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, - (CH2) n-C02R7 ou
cada um dos símbolos R3 e R4 representa independentemente hidrogénio, um grupo que satisfaz a fórmula estrutural (A), alquilo (Ci-Cg) , hidroxi-alquilo (Ci-C8) , fenilo, fenil- 2 alquilo (Ci-C8) , (halofenil)-alquilo (Ci-C8) , (alquil (Ci-C8) -fenilalquilo) , (alcoxi (Ci-C8) -fenil) -alquilo (Ci-C8) , naftil- alquilo (Ci-C8) ou piridil-alquilo (Ci-C8) , desde que pelo menos um dos símbolos R3 e R4 represente um grupo que satisfaça a fórmula estrutural (A):
em que cada símbolo RL representa independentemente -R7, -(CH2)n- OR8, -0- (CH2)m-0R8, - (CH2) n-NR7R10, -0- (CH2) m-NR7R10, - (CH2) n (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -0-(CH2)m(CHOR8) (CHOR8)n-CH2OR8, - (CH2CH20) m-R8, -0- (CH2CH20)m-R8, - (CH2CH20)m-CH2CH2NR7R10, -0- (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, - (CH2) n-C (=0) NR7R10, -0- (CH2)m-C (=0) NR7R10, - (CH2) n- (Z) g-R7, -0- (CH2) m- ( Z ) g-R7, - (CH2) n-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -0- (CH2)m-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8)n-CH2OR8, - (CH2) n-C02R7, -0-(CH2) m-C02R7, -OSO3H, -O-glucuronida, -0- glicose,
cada símbolo o representa independentemente um número inteiro entre 0 e 10; cada símbolo p representa um número inteiro entre 0 e 10; 3 desde que a soma de o e p, para cada cadeia contíngua, esteja compreendida entre 1 e 10; cada símbolo x representa independentemente O, NR10, C(=0), CHOH, C(=N-R10), CHNR7R10 ou representa uma ligação simples; o simbolo R5 representa -O- (CH2) m-OR8, - (CH2) n-NR7R10, -O-(CH2)m-NR7R10, - (CH2) n (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -O- (CH2) m (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, - (CH2CH20)m-R8, -O- (CH2CH20)m-R8, - (CH2CH20)m-CH2CH2NR7R10, -O- (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, - (CH2) n-C (=0) NR7R10, -O- (CH2)m-C (=0) NR7R10, - (CH2) n- ( Z ) g-R7, -O- (CH2) m- ( Z ) g-R7, - (CH2) n-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -0- (CH2)m-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -O-(CH2) m-C02R7, -OSO3H, -O-glucuronida, -O-glicose,
cadaN(R7; símbolo
-OR11 f 2, -(CH2)m-OR8, -O- (CH2) m-OR8, -(CH2)n-NR7R10, -O- (CH2) m-NR7R10, - (CH2)n(CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -O- (CH2) m (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, - (CH2CH20) m-R8, -O- (CH2CH20) m-R8, - (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, 4 -0- (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, - (CH2) n-C (=0) NR7R10, -0- (CH2) m-C (=0) NR7R10, - (CH2) η- (Z) g-R7, -0- (CH2) m- (Z) g-R7, - (CH2) n-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -0- (CH2)m-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, - (CH2) n-C02R7, -0-(CH2) m-C02R7, -0S03H, -O-glucuronida, -0-
em que no caso de dois grupos R6 representarem -0R11 e estarem localizados adjacentemente entre si num anel fenilo, então os radicais alquilo dos dois grupos R6 podem estar ligados entre si para formarem um grupo metilenodioxi; cada símbolo R7 representa independentemente hidrogénio ou alquilo (Ci-Cg) ; cada símbolo R representa independentemente hidrogénio, alquilo (Ci-Cg) , -C(=0)-Rn, glucuronida, 2-tetra- hidropiranilo ou
10 cada símbolo CON(R7)2, -S02CH3 ou -C(=0)R7; cada símbolo R -C02R7, - representa independentemente -H, -S02CH3, -C02R7, -C(=0)NR7R9 5 -C(=0) R7 ou -CH2-(CHOH)n-CH20H; cada símbolo Z representa independentemente CHOH, C(=0), CHNR7R10, C=NR10 ou NR10; cada símbolo R11 representa independentemente alquilo(Ci-Cs) ; cada símbolo g representa independentemente um número inteiro entre 1 e 6; cada simbolo m representa independentemente um número inteiro entre 1 e 7; cada símbolo n representa independentemente um número inteiro entre 0 e 7; cada simbolo Q representa C-R5 ou C-R1; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, incluindo todos os seus enantiómeros, diastereómeros e misturas racémicas.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o simbolo Y representa -NH2.
3. Composto de acordo com a reivindicação 2, em que o simbolo R2 representa hidrogénio.
4. Composto de acordo com a reivindicação 3, em que o R1 representa hidrogénio.
5. Composto de acordo com a reivindicação 4, em que o símbolo X representa cloro. 1 Composto de acordo com a reivindicação 5, em que o símbolo R3 representa hidrogénio. 6
7. Composto de acordo com a reivindicação 6, em que cada símbolo Rl representa hidrogénio.
8. Composto de acordo com a reivindicação 7, em que o símbolo o representa 4.
9. Composto de acordo com a reivindicação 8, em que o símbolo p representa 0.
10. Composto de acordo com a reivindicação 9, em que o símbolo x representa uma ligação simples.
11. Composto de acordo com a reivindicação 10, em que cada símbolo R6 representa hidrogénio.
12. Composto de acordo com a reivindicação 11, em que o símbolo R5 representa -O-(CH2) m-OR8.
13. Composto de acordo com a reivindicação 12, o qual é representado pela fórmula estrutural seleccionada entre o conjunto constituído por: 7
e
14. Composto de acordo com a reivindicação 11, em que o símbolo R5 representa - (CH2) n-NR7R10.
15. Composto de acordo com a reivindicação 14, o qual é representado pela fórmula estrutural:
8
16. Composto de acordo com a reivindicação 11, em que o símbolo R5 representa -0-(CH2) m-NR7R10 .
17. Composto de acordo com a reivindicação 16, o qual é representado pela fórmula estrutural:
ou
18. Composto de acordo com a reivindicação 11, em que o símbolo R5 representa um grupo seleccionado entre: -(CH2)n(CHOR8) (CHOR8)n-CH2OR8, -(CH2CH20)m-R8 e -(CH2CH20)m- CH2CH2NR7R10.
19. Composto de acordo com a reivindicação 11, em que o símbolo R5 representa -0-(CH2) m (CHOR8)(CHOR8) n-CH2OR8.
20. Composto de acordo com a reivindicação 19, o qual é representado pela fórmula estrutural: 9
21. Composto de acordo com a reivindicação 20 que é o sal do ácido metanossulfónico.
22. Composto de acordo com a reivindicação 19, o qual é representado pela fórmula estrutural seleccionada entre:
OH
10 e
23. Composto de acordo com a reivindicação 11, em que o símbolo R5 representa -O-(CH2CH20) m-R8.
24. Composto de acordo com a reivindicação 23, o qual é representado pela fórmula estrutural:
ou 11
25. Composto de acordo com a reivindicação 11, em que o símbolo R5 representa -0-(CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10.
26. Composto de acordo com a reivindicação 11, em que o símbolo R5 representa - (CH2) n-C (=0) NR7R10.
27. Composto de acordo com a reivindicação 26, em que o símbolo R5 representa para-C(=0)NH2.
28. Composto de acordo com a reivindicação 11, em que o símbolo R5 representa -0-(CH2) m-C (=0) NR7R10.
29. Composto de acordo com a reivindicação 28, o qual é representado pela fórmula estrutural:
30. Composto de acordo com a reivindicação 29 que é o sal do ácido metanossulfónico. 12
31. Composto de acordo com a reivindicação 11, em que o símbolo R5 representa - (CH2) n-( Z ) g-R7 .
32. Composto de acordo com a reivindicação 31, o qual é representado pela fórmula estrutural:
33. Composto de acordo com a reivindicação 31, o qual é representado pela fórmula estrutural:
34. Composto de acordo com a reivindicação 11, em que o símbolo R5 representa - (CH2) n-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8.
35. Composto de acordo com a reivindicação 11, em que o símbolo R5 representa -0-(CH2) m-C02R7 .
36. Composto de acordo com a reivindicação 35, em que o símbolo R5 representa para-0CH2C02C (CH3) 3 ou para-0CH2C02C2H5 .
37. Composto de acordo com a reivindicação 35, em que o símbolo R5 representa para-0CH2C02H. 13
38. Composto de acordo com a reivindicação 11, em que o símbolo R5 representa um grupo seleccionado entre -OSO3H, -O-glucuronida, -O-glicose,
39. Composto de acordo com a reivindicação 11, em que o símbolo R5 representa
40. Composto de acordo com a reivindicação 39, o qual é representado pela fórmula estrutural: 14
41. Composto de acordo com a reivindicação 38, o qual é representado pela fórmula estrutural:
42. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o símbolo X representa halogéneo; o símbolo Y representa -N(R7)2,* o símbolo R1 representa hidrogénio ou alquilo(C1-C3) ; o símbolo R2 representa -R7, -(CH2)m-OR8 ou -(CH2)n-C02R7; '3 ' o símbolo R representa um grupo que satisfaz a formula estrutural (A) e o símbolo R4 representa hidrogénio, um grupo que satisfaz a fórmula estrutural (A) ou alquilo(Ci-Cs) .
43. Composto de acordo com a reivindicação 26, em que o símbolo Y representa -NH2. 15
44. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o símbolo R5 representa um grupo seleccionado entre: -0-(CH2) m-0R8, -(CH2)n-NR7R10, -0-(CH2) m-NR7R10, - (CH2) n (CHOR8) - (CHOR8) n-CH2OR8, -0-(CH2)m(CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8, -(CH2CH20)m-R8, -0- (CH2CH20) m-R8, - (CH2CH20) m-CH2CH2NR7R10, -0-(CH2CH20)m- CH2CH2NR7R10, - (CH2) n-C (=0) NR7R10, -0- (CH2)m-C (=0) NR7R10, (CH2)n-(Z)g-R7, -0- (CH2)m- (Z) g-R7, - (CH2) n-NR10-CH2 (CHOR8) - (CHOR8) n-CH2OR8, -0-(CH2)m-NR10-CH2 (CHOR8) CHOR8) n-CH2OR8, -0-(CH2) m-C02R7, -OSO3H, -O-glucuronida, -O-glicose,
e
45. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o símbolo x representa uma ligação simples. 16
46. Composto de acordo com a reivindicação 1 em que o símbolo X representa cloro; o símbolo Y representa -NH2; o símbolo R1 representa hidrogénio; o símbolo R2 representa hidrogénio; o símbolo R3 representa hidrogénio; o símbolo R4 representa um grupo que satisfaz a fórmula estrutural (A):
em que cada símbolo RL representa hidrogénio; o símbolo o representa 4; o símbolo p representa 0; o símbolo x representa uma ligação simples; cada símbolo R6 representa hidrogénio; o símbolo R5 representa -0-(CH2) m-( Z) 8-R7; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
47. Composto de acordo com a reivindicação 46 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que o símbolo R5 representa -0-(CH2) m-NH-C(=NH)-N(R7) 2 .
48. Composto de acordo com a reivindicação 47 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, o qual é representado pela fórmula estrutural: 17
49. Composto de acordo com a reivindicação 47 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que o símbolo R5 representa para-0(CH2) 3-NH-C(=NH)-NH2 .
50. Composto de acordo com a reivindicação 46 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que o símbolo R5 representa -O- (CH2) m-CHNH2-CONR7R10 .
51. Composto de acordo com a reivindicação 46 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que o símbolo R5 representa para-0-CH2-CHNH2-C0NH2.
52. Composto de acordo com a reivindicação 51 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, o qual é o enantiómero (R) .
53. Composto de acordo com a reivindicação 51 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, o qual é o enantiómero (S) representado pela fórmula estrutural: 18
54. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 46 a 53, o qual está sob a forma de um sal cloridrato.
55. Composto de acordo com a reivindicação 46 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, o qual é representado pela fórmula estrutural:
56. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o símbolo X representa cloro; o símbolo Y representa -NH2; 19 o símbolo R1 representa hidrogénio; o símbolo R2 representa hidrogénio; o símbolo R3 representa hidrogénio; o símbolo R4 representa um grupo que satisfaz a fórmula estrutural (A):
em que cada símbolo RL representa hidrogénio; o símbolo o representa 4; o símbolo p representa 0; o símbolo x representa uma ligação simples; cada símbolo R6 representa hidrogénio; o símbolo R5 representa -O- (CH2) m-NR10-CH2 (CHOR8) (CHOR8) n-CH2OR8; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
57. Composto de acordo com a reivindicação 56 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, o qual é representado pela fórmula estrutural seleccionada entre: 20
21
58. Composto de acordo com a reivindicação 1, o qual está sob a forma de um sal farmaceuticamente aceitável, em particular sob a forma de um sal cloridrato.
59. Composição que compreende: um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58; e um agonista do receptor P2Y2 ou um broncodilatador.
60. Composição farmacêutica que compreende um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58 e um veiculo farmaceuticamente aceitável.
61. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58 para utilização como medicamento num método para promover a hidratação das superfícies mucosas ou a limpeza de muco nas superfícies mucosas, em que o referido medicamento é administrado à superfície mucosa de um sujeito.
62. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58 para utilização como medicamento num método para restaurar as defesas das mucosas, em que o referido medicamento é administrado por via tópica a uma superfície mucosa de um sujeito que de tal necessite.
63. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58 para utilização como medicamento num método para o bloqueio dos canais de sódio, por meio do contacto dos canais de sódio com o referido medicamento. 22
64. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58 para utilização como medicamento num método para o tratamento de bronquite crónica, fibrose cística, sinusite, doença de Sjogren, síndrome de obstrução intestinal distai, esofagite, asma, discinesia ciliar primária, otite média, doença pulmonar obstrutiva crónica, enfisema, pneumonia, obstipação, diverticulite crónica, rino-sinusite, hipertensão ou edema, em que o referido medicamento é administrado a um sujeito que de tal necessite.
65. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58 para utilização como medicamento num método para o tratamento de secura vaginal, em que o referido medicamento é administrado ao tracto vaginal de um sujeito que de tal necessite.
66. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58 para utilização como medicamento num método para o tratamento de secura no olho, em que o referido medicamento é administrado ao olho de um sujeito que de tal necessite.
67. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58 para utilização como medicamento num método para promover a hidratação ocular ou da córnea, em que o referido medicamento é administrado ao olho de um sujeito.
68. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58 para utilização como medicamento num método para o tratamento de pele seca, em que o referido medicamento é administrado à pele de um sujeito que de tal necessite. 23
69. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58 para utilização como medicamento num método para o tratamento de boca seca (xerostomia) , em que o referido medicamento é administrado à boca de um sujeito que de tal necessite.
70. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58 para utilização como medicamento num método para o tratamento de desidratação nasal, em que o referido medicamento é administrado às vias nasais de um sujeito que de tal necessite.
71. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58 para utilização como medicamento num método para prevenir a pneumonia induzida por ventilador, em que o referido medicamento é administrado a um sujeito num ventilador.
72. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58 para utilização como medicamento num método de para induzir expectoração, em que o referido medicamento é administrado a um sujeito que de tal necessite.
73. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58 para utilização como medicamento num método para reduzir a pressão arterial, em que o referido medicamento é administrado a um sujeito que de tal necessite. em que o
74. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58 para utilização como medicamento num método para promover a diurese, natriurese e salurese, 24 referido medicamento é administrado a um sujeito que de tal necessite.
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