PL236769B1 - New Pediococcus acidilactici bacterial strain with ability to metabolize 1,2-propanediol, a starter culture and a preparation containing the strain - Google Patents
New Pediococcus acidilactici bacterial strain with ability to metabolize 1,2-propanediol, a starter culture and a preparation containing the strain Download PDFInfo
- Publication number
- PL236769B1 PL236769B1 PL426522A PL42652218A PL236769B1 PL 236769 B1 PL236769 B1 PL 236769B1 PL 426522 A PL426522 A PL 426522A PL 42652218 A PL42652218 A PL 42652218A PL 236769 B1 PL236769 B1 PL 236769B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- strain
- propanediol
- bacterial
- pediococcus acidilactici
- kkp
- Prior art date
Links
- DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N (R)-(-)-Propylene glycol Chemical compound C[C@@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N 0.000 title claims description 38
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N monopropylene glycol Natural products CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 38
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 title claims description 38
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title claims description 35
- 241000191998 Pediococcus acidilactici Species 0.000 title claims description 30
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 20
- 239000007858 starting material Substances 0.000 title claims description 9
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 44
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 29
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 claims description 23
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 claims description 22
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 11
- 239000004460 silage Substances 0.000 claims description 11
- FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+3].N#[C-].N([C@@H]([C@]1(C)[N-]\C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C(\C)/C1=N/C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C\C1=N\C([C@H](C1(C)C)CCC(N)=O)=C/1C)[C@@H]2CC(N)=O)=C\1[C@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O[C@@H]1CO FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L 0.000 claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 6
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 claims description 5
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 claims description 5
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 claims description 5
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 claims description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000004459 forage Substances 0.000 claims description 3
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 2
- 229960004063 propylene glycol Drugs 0.000 description 36
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 10
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 10
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 241000894007 species Species 0.000 description 9
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 9
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 7
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000790171 Lactobacillus diolivorans Species 0.000 description 5
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 5
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 5
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 5
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 5
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 3
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 3
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 3
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 2
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 2
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 1
- 239000005696 Diammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 241001057636 Dracaena deremensis Species 0.000 description 1
- 241000186679 Lactobacillus buchneri Species 0.000 description 1
- 241000186610 Lactobacillus sp. Species 0.000 description 1
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 1
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 description 1
- 108010080032 Pediocins Proteins 0.000 description 1
- 241000209504 Poaceae Species 0.000 description 1
- 108010065027 Propanediol Dehydratase Proteins 0.000 description 1
- 241000219793 Trifolium Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 150000001243 acetic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000388 diammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019838 diammonium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011785 micronutrient Substances 0.000 description 1
- 235000013369 micronutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 150000004672 propanoic acids Chemical class 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/12—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes by fermentation of natural products, e.g. of vegetable material, animal waste material or biomass
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/174—Vitamins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/04—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/52—Propionic acid; Butyric acids
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Opis wynalazkuDescription of the invention
Dziedzina technikiThe field of technology
Przedmiotem wynalazku jest nowy szczep bakterii Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p o zdolności syntezy kwasu propionowego z 1,2-propanodiolu. Wynalazek dotyczy także kultury starterowej i preparatu obejmujących nowy szczep.The subject of the invention is a new bacterial strain Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p with the ability to synthesize propionic acid from 1,2-propanediol. The invention also relates to a starter culture and a formulation comprising the new strain.
Stan technikiState of the art
Znane szczepy należące do gatunku Pediococcus acidilactici opisane np. w zgłoszeniach patentowych: US 2011/0195152, US 2015/0246082 i CN 104388345 A (2017-grant) wytwarzające bakteriocynę - pediocynę, charakteryzują się wysokim antagonizmem w stosunku do mikroorganizmów patogennych i wirusów. Z tego względu szczepy z tego gatunku bakterii wchodzą często w skład medycznych preparatów probiotycznych, są stosowane jako probiotyczne dodatki do żywności oraz jako kultury starterowe do kiszenia żywności i pasz.Known strains belonging to the species Pediococcus acidilactici described e.g. in patent applications: US 2011/0195152, US 2015/0246082 and CN 104388345 A (2017-grant) producing the bacteriocin - pediocin, are characterized by high antagonism towards pathogenic microorganisms and viruses. For this reason, strains of this species of bacteria are often included in medical probiotic preparations, are used as probiotic food additives and as starter cultures for fermenting food and fodder.
Inokulanty bakteryjne nowej generacji powinny łączyć, synergicznie działające w procesie kiszenia roślin, szczepy bakterii pochodzące z rodzajów i gatunków LAB (bakterii fermentacji mlekowej), które zapewnią bezpieczeństwo mikrobiologiczne kiszonek roślinnych oraz stabilność tlenową w czasie długotrwałego, ponad rocznego przechowywania. Dlatego tak ważne jest poszukiwanie nowych ef ektywnych szczepów LAB, które są zdolne do hamowania rozwoju mikroorganizmów patogennych, a jednocześnie do efektywnej syntezy kwasów: octowego i propionowego, odpowiedzialnych za stabilność tlenową kiszonek.The new generation bacterial inoculants should combine bacterial strains from the types and species of LAB (lactic fermentation bacteria) synergistically acting in the process of silage, which will ensure microbiological safety of plant silages and aerobic stability during long-term, over a year's storage. That is why it is so important to search for new, effective LAB strains that are capable of inhibiting the development of pathogenic microorganisms, and at the same time of effective synthesis of acetic and propionic acids, responsible for the aerobic stability of silages.
Preparaty LAB przeznaczone do stymulowania procesu kiszenia pasz i poprawy ich stabilności tlenowej znane z następujących zgłoszeń patentowych: US 2005/0281917 A1, WO 2014105847 A1 i polskiego patentu PL228711 zawierają szczepy bakterii z gatunków: Lactobacillus buchneri i Lactobacillus diolivorans odpowiedzialnych za syntezę i/lub metabolizm 1,2-propanodiolu do kwasu propionowego.LAB preparations intended to stimulate the process of fodder ensilage and improve their aerobic stability, known from the following patent applications: US 2005/0281917 A1, WO 2014105847 A1 and Polish patent PL228711 contain strains of bacteria from the species: Lactobacillus buchneri and Lactobacillus diolivorans responsible for synthesis and / or metabolism 1,2-propanediol to propionic acid.
Celem niniejszego wynalazku było wyizolowanie z kiszonego ziarna kukurydzy, szczepu bakterii fermentacji mlekowej, który bez modyfikacji genetycznych, będzie charakteryzował się zdolnością do metabolizowania 1,2-propanodiolu i efektywnej syntezy kwasu propionowego.The aim of the present invention was to isolate from the ensiled maize grain, a strain of lactic acid bacteria, which, without genetic modification, would be characterized by the ability to metabolize 1,2-propanediol and efficiently synthesize propionic acid.
Przedmiotem wynalazku jest nowy szczep bakterii, który został określony jako Pediococcus acidilactici PD2 i został zdeponowany 15 września 2017 w Kolekcji Kultur Drobnoustrojów Przemysłowych Instytutu Biotechnologii Przemysłu Rolno-Spożywczego im. prof. Wacława Dąbrowskiego, pod numerem depozytu KKP 2065 p, przy czym wymieniony szczep ma zdolność metabolizowania 1,2-propanodiolu i wykazuje zdolność syntezy kwasu propionowego, w ilościach efektywnych do zastosowania do przedłużania stabilności tlenowej kiszonek.The subject of the invention is a new bacterial strain, which was designated as Pediococcus acidilactici PD2 and was deposited on September 15, 2017 in the Collection of Industrial Microbial Cultures of the Institute of Agricultural and Food Biotechnology of prof. Wacław Dąbrowski, under the deposit number KKP 2065 p, where the said strain is capable of metabolizing 1,2-propanediol and is capable of synthesizing propionic acid in amounts effective to be used to extend the aerobic stability of silages.
Szczep Pediococcus acidilactici PD2 został wyizolowany z kiszonego ziarna kukurydzy, przechowywanego w warunkach beztlenowych przez 3 lata.The Pediococcus acidilactici PD2 strain was isolated from pickled maize grains stored under anaerobic conditions for 3 years.
Nieoczekiwanie okazało się, że nowy szczep Pediococcus acidilactici PD2 zdeponowany jako KKP 2065p charakteryzuje się zdolnością do wykorzystywania 1,2-propanodiolu jako źródła węgla do namnażania biomasy bakterii i syntezy metabolitów, w tym kwasu propionowego, a zatem do m etabolizowania 1,2-propanodiolu do kwasu propionowego, co nie jest cechą oczywistą dla tego gatunku bakterii.Unexpectedly, it turned out that the new strain of Pediococcus acidilactici PD2 deposited as KKP 2065p is characterized by the ability to use 1,2-propanediol as a carbon source for the proliferation of bacterial biomass and the synthesis of metabolites, including propionic acid, and thus to metabolize 1,2-propanediol to propionic acid, which is not obvious for this species of bacteria.
Przedmiotem wynalazku jest również kultura starterowa preparatu bakteryjnego do przedłużania stabilności tlenowej kiszonych pasz i/lub roślinnych surowców odnawialnych, która obejmuje szczep bakterii Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p, według wynalazku.The invention also relates to a starter culture of a bacterial preparation for extending the aerobic stability of ensiled feed and / or renewable vegetable raw materials, which comprises the bacterial strain Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p, according to the invention.
Przedmiotem wynalazku jest również preparat do przedłużania stabilności tlenowej kiszonych pasz i/lub roślinnych surowców odnawialnych który obejmuje szczep według wynalazku lub kulturę starterową według wynalazku i przynajmniej jeden składnik pomocniczy, przy czym korzystnie składnikiem pomocniczym jest - witamina B12.The invention also relates to a preparation for extending the aerobic stability of ensiled feed and / or renewable vegetable raw materials, which comprises the strain according to the invention or the starter culture according to the invention and at least one auxiliary component, preferably vitamin B12 as the auxiliary component.
Składnikiem pomocniczym w preparacie według wynalazku może być dowolny składnik pomocniczy spośród znanych w dziedzinie i stosowanych w preparatach bakteryjnych. Przykładowe składniki pomocnicze obejmują bufory (np. bufor fosforanowy), pożywkę do hodowli bakteryjnej w tym mikroelementy i witaminy.The adjunct component in the formulation of the invention may be any adjunct ingredient known in the art for use in bacterial formulations. Exemplary auxiliary ingredients include buffers (e.g., phosphate buffer), bacterial culture medium including micronutrients and vitamins.
Kiszonymi paszami w rozumieniu wynalazku mogą być przykładowo, ale nie wyłącznie: lucerna, koniczyna, ruń łąkowa, rośliny zbożowe w tym kukurydza.In the context of the invention, ensiled feeds can be, for example, but not limited to: alfalfa, clover, meadow sward, cereals including corn.
Roślinnymi surowcami odnawialnymi w rozumieniu wynalazku mogą być, przykładowo, ale nie wyłącznie: trawy, ruń łąkowa i całe rośliny kukurydzy.Vegetable renewable raw materials within the meaning of the invention can be, for example, but not limited to: grasses, meadow sward and whole corn plants.
PL 236 769 B1PL 236 769 B1
W korzystnym przykładzie wykonania preparatu według wynalazku, zawarte bakterie są liofilizowane.In a preferred embodiment of the formulation according to the invention, the bacteria contained are freeze-dried.
W korzystnym przykładzie wykonania preparatu według wynalazku, preparat o zawartości suchej masy około 94% zawiera w 1 g liczbę bakterii wynoszącą około 2 x 1010 jednostek tworzących kolonie bakterii.In a preferred embodiment of the formulation according to the invention, a formulation with a dry matter content of approximately 94% has a bacterial count per g of approximately 2 × 10 10 bacterial colony forming units.
Opis figurDescription of the figures
Fig. 1 przedstawia zmiany zawartości 1,2-propanodiolu, 1-propanolu i kwasu propionowego w podłożu w czasie hodowli bakterii szczepu według wynalazku.Fig. 1 shows the changes in the content of 1,2-propanediol, 1-propanol and propionic acid in the medium during the cultivation of the bacteria of the strain according to the invention.
Fig. 2 przedstawia wyniki testów dla stabilności tlenowej kiszonek z runi łąkowej wykonanych bez i z dodatkiem preparatu według wynalazku.Fig. 2 shows the test results for the aerobic stability of meadow sward silages made without and with the addition of the formulation according to the invention.
PRZYKŁADYEXAMPLES
P r z y k ł a d 1. Izolacja i charakterystyka nowego szczepu Pediococcus acidilacticiExample 1. Isolation and characterization of a new strain of Pediococcus acidilactici
Szczep Pediococcus acidilactici PD2 został wyizolowany z kiszonego ziarna kukurydzy, przechowywanego w warunkach beztlenowych przez 3 lata. Szczep wyizolowano na drodze wielokrotnej selekcji kolonii rosnących na stałych podłożach MRS, zawierających jako jedyne źródło węgla 1,2 -propanodiol.The Pediococcus acidilactici PD2 strain was isolated from pickled maize grains stored under anaerobic conditions for 3 years. The strain was isolated by multiple selection of colonies growing on solid MRS media containing 1,2-propanediol as the sole carbon source.
Identyfikację genetyczną szczepu wykonano metodą sekwencjonowania fragmentu genu 16S rRNA i porównania uzyskanych wyników z publikowanymi w bazach danych genetycznej identyfikacji bakterii tego gatunku.The genetic identification of the strain was performed by sequencing a fragment of the 16S rRNA gene and comparing the obtained results with those published in the databases of genetic identification of bacteria of this species.
Nowy szczep bakterii określono przy 98% zgodności z gatunkiem szczepu testowego jako Pediococcus acidilactici.The new bacterial strain was determined with 98% agreement with the species of the test strain as Pediococcus acidilactici.
Wyniki analizy genetycznej odcinka 16S rRNA, określonego niniejszym wynalazkiem, szczepu Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p przedstawia SEQ ID NO: 1. Oznaczenia nukleotydów zgodne z IUPAC, przy czym Y oznacza nukleotyd C lub T, W oznacza A lub T, R oznacza A lub G, K oznacza G lub T.The results of the genetic analysis of the 16S rRNA segment of the Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p strain defined by the present invention shows SEQ ID NO: 1. Nucleotide designations according to IUPAC, Y being a C or T nucleotide, W being A or T, R being A or G , K is G or T.
Nowy szczep został zdeponowany w dniu 19 września 2017 roku w Kolekcji Kultur Przemysłowych Instytutu Biotechnologii Przemysłu Rolno-Spożywczego im. prof. Wacława Dąbrowskiego, Warszawa, Polska pod numerem kolekcyjnym KKP 2065 p.The new strain was deposited on September 19, 2017 in the Collection of Industrial Cultures of the Institute of Agricultural and Food Biotechnology of prof. Wacław Dąbrowskiego, Warsaw, Poland under the collection number KKP 2065 p.
Szczep Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p charakteryzuje się następującymi cechami morfologicznymi:The Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p strain is characterized by the following morphological features:
- kolonie bakterii rosnące w warunkach beztlenowych na specyficznej dla rodzaju Lactobacillus sp. pożywce MRS zestalonej agarem (wg. de Man, Rogosa i Sharpe), mają kształt owalny, są koloru białego, o wielkości około 0,6 -1,0 μm.- colonies of bacteria growing in anaerobic conditions on a specific for the genus Lactobacillus sp. agar-solidified MRS medium (according to de Man, Rogosa and Sharpe), have an oval shape, are white in color, with a size of about 0.6 -1.0 μm.
- komórki bakterii nie wytwarzają przetrwalników, są Gram +, mają postać ziarniaków, występują w parach lub tetradach, są charakterystyczne dla rodzaju Pedioccocus sp. Optymalna temperatura wzrostu szczepu wynosi 37°C.- bacterial cells do not produce spores, are Gram +, have the form of cocci, occur in pairs or tetrads, are characteristic of the genus Pedioccocus sp. The optimal growth temperature of the strain is 37 ° C.
Warunki namnażania biomasy szczepu bakterii według wynalazku.Conditions for the propagation of the biomass of the bacterial strain according to the invention.
Po namnożeniu inokulum (stadium probówkowe oraz stadium kolbkowe w trzech etapach) hodowlę bakterii prowadzono w pożywce o składzie (w g/l wody): sacharoza - 20, ekstrakt drożdżowy 10, namok kukurydziany - 5, fosforan dwuamonowy - 0,2, siarczan magnezowy - 0,08, siarczan amonowy - 0,35, siarczan manganowy - 0,01; w fermentorach o pojemności 150 I, w temperaturze 35°C, przy pH regulowanym wodą amoniakalną do wartości 5,8.After multiplication of the inoculum (the test tube stage and the cob stage in three stages), the bacteria were grown in a nutrient medium with the following composition (g / l of water): sucrose - 20, yeast extract 10, corn steep - 5, diammonium phosphate - 0.2, magnesium sulphate - 0.08, ammonium sulfate - 0.35, manganese sulfate - 0.01; in 150 l fermentors, at 35 ° C, with pH adjusted to 5.8 with ammonia water.
Do wydzielania biomasy użyto wirówki o współczynniku rozdziału (współczynniku uwielokrotnienia przyspieszenia ziemskiego) powyżej 13000 x g.A centrifuge with a separation factor (multiplication factor of gravitational acceleration) over 13,000 x g was used to separate the biomass.
Po przeprowadzeniu hodowli w podanych wyżej warunkach uzyskano 1000 g biomasy bakterii o zawartości 30% s.m.After culturing in the above-mentioned conditions, 1000 g of bacterial biomass were obtained with the content of 30% DM.
Otrzymaną po wirowaniu biomasę bakterii, po wymieszaniu z nośnikami liofilizowano według znanego przepisu podanego w patencie PL228552. W skrócie, wodną zawiesinę biomasy bakterii doprowadza się do zawartości suchej masy od 14% do 16% poprzez dodatek soli fizjologicznej, miesza się z glicerolem jako krioprotektantem, dodanym w ilości 20% w stosunku do zawartości suchej masy w biomasie, a następnie dodaje się odtłuszczone, granulowane mleko w proszku w stosunku do biomasy jak 0,75:1, przy czym 0,75 stanowi ilość mleka w stosunku do nierozcieńczonej solą fizjologiczną ilości biomasy. Następnie, całość dokładnie miesza się i zamraża. W końcowym etapie, półprodukt poddaje się procesowi liofilizacji metodą suszenia sublimacyjnego do uzyskania produktu o zawartości suchejThe bacterial biomass obtained after centrifugation, after mixing with the carriers, was lyophilized according to the known recipe provided in the patent PL228552. Briefly, the aqueous suspension of bacterial biomass is brought to a dry matter content of 14% to 16% by the addition of physiological saline, mixed with glycerol as a cryoprotectant, added in an amount of 20% based on the dry matter content of the biomass, and then degreased , powdered granulated milk to the biomass of 0.75: 1, with 0.75 being the amount of milk to the undiluted amount of biomass with physiological saline. Then, everything is thoroughly mixed and frozen. In the final stage, the intermediate is subjected to the freeze-drying process by means of freeze-drying to obtain a product with a dry content.
PL 236 769 Β1 masy powyżej 94-98%. Liofilizat bakterii o zawartości suchej masy około 94% zawiera w 1 g liczbę bakterii około 2 χ 1011 jednostek tworzących kolonie.PL 236 769 Β1 by weight above 94-98%. Bacterial lyophilisate with a dry matter content of about 94% contains in 1 g the number of bacteria about 2 × 10 11 colony forming units.
Liofilizat szczepu Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p jest przeznaczony jako komponent kultury starterowej i/lub preparatu bakteryjnego o działaniu przedłużającym stabilność tlenową kiszonych pasz i surowców odnawialnych.The lyophilisate of the Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p strain is intended as a component of a starter culture and / or a bacterial preparation prolonging the aerobic stability of silage forage and renewable raw materials.
Preparat otrzymywany jest po zmieszaniu liofilizatu bakterii, stanowiącego 10% preparatu, z nośnikiem - sproszkowaną sacharozą z dodatkiem 0,1 % witaminy B12. Preparat, o zawartości suchej masy około 94%, zawiera w 1 g liczbę bakterii około 2 x1010 jednostek tworzących kolonie.The preparation is obtained after mixing the bacterial lyophilisate, constituting 10% of the preparation, with the carrier - powdered sucrose with the addition of 0.1% vitamin B12. The preparation, with a dry matter content of about 94%, contains in 1 g a number of bacteria of about 2 × 10 10 colony-forming units.
W tabeli 1 przedstawiono wyniki badań modelowych dotyczące wykorzystania glukozy, w czasie hodowli szczepu Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p w podłożu MRS, do syntezy kwasów organicznych, w tym kwasu propionowego oraz 1,2-propanodiolu. Bakterie hodowano w temperaturze 37°C, w czasie 21 dni.Table 1 shows the results of model studies on the use of glucose during the cultivation of Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p in MRS medium for the synthesis of organic acids, including propionic acid and 1,2-propanediol. The bacteria were grown at 37 ° C for 21 days.
W czasie hodowli bakterii Pediococcus acidilactici PD2 najwyższa zawartość 1,2-propanodiolu i kwasu propionowego w podłożu wynosiła odpowiednio 2,60 i 0,26 mg w 100 ml podłoża czyli pozostawała na bardzo niskim poziomie. Zawartość kwasu mlekowego i octowego wzrastała do 7 dnia hodowli bakterii do wartości odpowiednio 1,6 i 0,28%, po tym czasie wykazywała tendencje zniżkowe.During the cultivation of Pediococcus acidilactici PD2 bacteria, the highest content of 1,2-propanediol and propionic acid in the medium was 2.60 and 0.26 mg in 100 ml of medium, respectively, i.e. it remained at a very low level. The content of lactic acid and acetic acid increased until the 7th day of bacterial cultivation to the values of 1.6 and 0.28%, respectively, after this time it showed a downward trend.
Tabela 1Table 1
Dynamika syntezy kwasów organicznych i 1,2-propanodiolu oraz przyrostu biomasy bakterii Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p, w czasie 21 dniowej hodowli bakterii w podłożu MRSDynamics of the synthesis of organic acids and 1,2-propanediol and the growth of the biomass of Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p bacteria during 21 days of bacterial cultivation in the MRS medium
Czas hodowli 21 dni, temp. 37°C, wyniki są średnimi z trzech doświadczeń.Culture time 21 days, temperature 37 ° C, results are average of three experiments.
W tym doświadczeniu wykazano, że wyizolowany szczep bakterii Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p hodowany przez 21 dni w podłożu MRS, zawierającym jako jedyne źródło węgla glukozę, nie wykazywał zdolności do syntezy 1,2-propanodiolu.In this experiment it was shown that the isolated bacterial strain Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p grown for 21 days in MRS medium containing glucose as the only carbon source was not able to synthesize 1,2-propanediol.
W tabeli 2 przedstawiono wyniki badań modelowych dotyczących hodowli bakterii szczepu Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p w modyfikowanym podłożu MRS, w którym 50% ilości glukozy zastąpiono dodatkiem 1,2-propanodiolu w ilości 800,0 mg/100 ml. Stosunek molowy glukozy do 1,2-propanodiolu wynosił jak 1:2. Skład modyfikowanego podłoża MRS uzupełniono dodatkiem kobalaminy w ilości 20 μ/100 ml. Kobalamina jest kofaktorem enzymu diol dehydratazy, który katalizuje reakcje przemiany 1,2-propanodiolu do kwasu propionowego.Table 2 presents the results of model studies on the cultivation of Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p bacteria in the modified MRS medium, in which 50% of the glucose was replaced by the addition of 1,2-propanediol in the amount of 800.0 mg / 100 ml. The molar ratio of glucose to 1,2-propanediol was 1: 2. The composition of the modified MRS medium was supplemented with the addition of 20 μ / 100 ml of cobalamin. Cobalamin is a cofactor of the enzyme diol dehydratase, which catalyzes the conversion of 1,2-propanediol to propionic acid.
Nieoczekiwanie okazało się, że nowy szczep Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p wykazuje zdolności do efektywnego wykorzystywania 1,2-propanodiolu, wchodzącego w skład podłoża, do namnażania biomasy bakterii, a zatem jest zdolny do jego metabolizowania, co nie jestUnexpectedly, it turned out that the new strain Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p has the ability to effectively use 1,2-propanediol, which is part of the medium, to multiply the biomass of bacteria, and therefore is able to metabolize it, which is not
PL 236 769 Β1 oczywiste dla tego gatunku bakterii. W celu udokumentowania dynamiki przemiany 1,2-propanodiolu poprzez 1-propanol do kwasu propionowego przez bakterie szczepu Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p w tabeli 2 podano również procent jego ubytku z podłoża w czasie ich hodowli. Bakterie hodowano w temperaturze 37°C, w czasie 21 dni.PL 236 769 Β1 obvious for this species of bacteria. In order to document the dynamics of the conversion of 1,2-propanediol through 1-propanol to propionic acid by the bacteria of the Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p strain, Table 2 also shows the percentage of its loss from the medium during their cultivation. The bacteria were grown at 37 ° C for 21 days.
Tabela 2Table 2
Stopień wykorzystania 1,2-propanodiolu na przyrost biomasy bakterii Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p i syntezę metabolitówThe degree of 1,2-propanediol utilization for the growth of Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p bacterial biomass and the synthesis of metabolites
Czas hodowli 21 dni, temp. 37°C. Podłoże MRS: glukoza - 1 g/100 ml,1,2-propanodiol - 800 mg/100 ml, witamina B12.20 μ/100 ml. Wyniki są średnimi z trzech doświadczeń.Culture time 21 days, temperature 37 ° C. MRS vehicle: glucose - 1 g / 100 ml, 1,2-propanediol - 800 mg / 100 ml, vitamin B12.20 μ / 100 ml. The results are the mean of three experiments.
Zmiany zawartości 1,2-propanodiolu, 1-propanolu i kwasu propionowego w podłożu w czasie hodowli bakterii szczepu według wynalazku przedstawiono na Fig. 1.The changes in the content of 1,2-propanediol, 1-propanol and propionic acid in the medium during the cultivation of the bacteria of the strain according to the invention are shown in Fig. 1.
W warunkach hodowli bakterii szczepu według wynalazku do 21 dni hodowli w modyfikowanym podłożu MRS, w którym źródłem węgla była glukoza i 1,2-propanodiol w stosunku molowym jak 1:2, zawartość kwasu mlekowego i octowego wzrastała do 14 dnia hodowli, a następnie powoli spadała. Do 14 dnia hodowli bakterii wzrastała zawartość 1-propanolu, związku pośredniego między 1,2-propanodiolem i kwasem propionowym. Z ilości 800 mg/100 ml 1,2-propanodiolu, dodanego do podłoża, bakterie wykorzystały do produkcji biomasy i syntezy metabolitów, w tym kwasu propionowego 99,0 procent początkowej zawartości tego związku w podłożu. Efektywność syntezy kwasu propionowego była wysoka i w 21 dniu hodowli bakterii jego zawartość wynosiła 312,27 mg /100 ml podłoża, (tabela 2 i Fig. 1).Under the conditions of culturing the bacteria of the strain according to the invention, up to 21 days of cultivation in a modified MRS medium, in which the carbon source was glucose and 1,2-propanediol in a molar ratio of 1: 2, the content of lactic and acetic acid increased until the 14th day of cultivation, and then slowly was falling. By the 14th day of bacterial cultivation, the content of 1-propanol, an intermediate between 1,2-propanediol and propionic acid, was increased. From the amount of 800 mg / 100 ml of 1,2-propanediol added to the medium, the bacteria used 99.0 percent of the initial content of this compound in the medium for the production of biomass and the synthesis of metabolites, including propionic acid. The efficiency of propionic acid synthesis was high and on day 21 of bacterial cultivation its content was 312.27 mg / 100 ml of medium (Table 2 and Fig. 1).
Przykład 2. Porównanie zdolności wykorzystania 1,2-propanodiolu szczepu według wynalazku do znanego szczepu o takich zdolnościach metabolicznychExample 2. Comparison of the utilization capacity of 1,2-propanediol of the strain according to the invention to a known strain with such metabolic capacity
W tabeli 3 przedstawiono wyniki efektywności syntezy kwasu propionowego z 1,2-propanodiolu przez dwa szczepy pochodzące z różnych gatunków LAB, a hodowane w tych samych warunkach (czas hodowli 21 dni, temp. 37°C, źródła węgla glukoza i 1,2-propanodiol z dodatkiem witaminy B12):Table 3 presents the results of the efficiency of the synthesis of propionic acid from 1,2-propanediol by two strains derived from different LAB species, and grown under the same conditions (cultivation time 21 days, temperature 37 ° C, carbon sources, glucose and 1,2- propanediol with the addition of vitamin B12):
PL 236 769 Β1PL 236 769 Β1
Lactobacillus diolivorans KKP 2057 p - znany szczep pochodzący z gatunku o udokumentowanej zdolności do metabolizowania 1,2-propanodiolu iLactobacillus diolivorans KKP 2057 p - a known strain derived from a species with documented ability to metabolize 1,2-propanediol and
Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p. — nowo wyizolowany szczep według wynalazku.Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p. - a newly isolated strain according to the invention.
Tabela 3Table 3
Porównanie efektywności metabolizmu 1,2-propanodiolu przez Lactobacillus diolivorans K KKP 2057 p i Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 pComparison of the efficiency of 1,2-propanediol metabolism by Lactobacillus diolivorans K KKP 2057 p and Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p
Czas hodowli 21 dni, temp. 37°C. Podłoże: zmodyfikowany MRS: glukoza - 1 g/100 ml, 1,2-propanodiol - 800 mg/100 ml, witamina B12 - 20 μ/100 ml.Culture time 21 days, temperature 37 ° C. Vehicle: modified MRS: glucose - 1 g / 100 ml, 1,2-propanediol - 800 mg / 100 ml, vitamin B12 - 20 μ / 100 ml.
Wyniki są średnimi z trzech doświadczeń.The results are the mean of three experiments.
Opisany w patencie PL228711, znany ze zdolności do metabolizowania 1,2-propanodiolu do kwasu propionowego, szczep bakterii Lactobacillus diolivorans K KKP 2057 p okazał się mniej efektywny, od nowo wyizolowanego szczepu z gatunku Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p, w tych samych warunkach hodowli. Zawartość kwasu propionowego w podłożu po upływie 21 dni hodowli szczepu według wynalazku była dwu i półkrotnie wyższa, a wykorzystanie 1,2-propanodiolu z podłoża wynosiło 99 procent.The Lactobacillus diolivorans K KKP 2057 p bacterial strain described in the patent PL228711, known for its ability to metabolize 1,2-propanediol to propionic acid, turned out to be less effective than the newly isolated strain of the species Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p, in the same culture conditions . The propionic acid content in the medium after 21 days of culturing the strain according to the invention was two and a half times higher, and the use of 1,2-propanediol from the medium was 99 percent.
Przykład 3. Porównanie stabilności tlenowej kiszonek z runi łąkowej wykonanych bez preparatu i z dodatkiem preparatu według wynalazkuExample 3. Comparison of the aerobic stability of meadow silage made without the preparation and with the addition of the preparation according to the invention
Wyniki testu stabilności tlenowej kiszonek kontrolnych bez dodatku preparatu i doświadczalnych z dodatkiem preparatu przedstawiono na Fig. 2.The results of the aerobic stability test of the control silages without the addition of the preparation and the experimental silages with the addition of the preparation are presented in Fig. 2.
Test stabilności tlenowej kiszonek z runi łąkowej, bez (kontrola) i z dodatkiem preparatu, zawierającego nowy szczep Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p, wykonano metodą temperaturową Honiga. Kiszonki wytworzono w belach cylindrycznych, o masie 500 kg każda, owiniętych trzykrotnie folią. Dawka preparatu wynosiła 5 g/t kiszonych roślin. Preparat, otrzymany jak opisano w Przykładzie 1, podawano na rośliny w formie oprysku po zawieszeniu preparatu w wodzie pitnej. Po upływie 3 miesięcy kiszenia pobrano próby z trzech losowo wybranych bel kiszonek kontrolnych i doświadczalnych i wykonano 11 -dniowy test stabilności w temperaturze 20 stopni C. Wzrost temperatury prób kiszonek w czasie doświadczenia, w danym dniu testu, o ponad 3 stopnie C świadczył o braku stabilności tlenowej kiszonki.The aerobic stability test of meadow sward silages, without (control) and with the addition of a preparation containing a new strain of Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p, was performed using the Honig temperature method. The silage was produced in cylindrical bales, each weighing 500 kg, wrapped three times with foil. The dose of the preparation was 5 g / t of pickled plants. The formulation obtained as described in Example 1 was applied to the plants as a spray after the formulation was suspended in the drinking water. After 3 months of silage, samples were taken from three randomly selected bales of control and experimental silages, and an 11-day stability test was performed at a temperature of 20 degrees C. An increase in the temperature of the silage samples during the experiment by more than 3 degrees C on a given test day indicated no the stability of the aerobic silage.
Wyniki przedstawione na Fig. 2 są średnimi z trzech próbek pobranych z trzech wybranych bel kiszonek z runi łąkowej wykonanych w rolnym gospodarstwie doświadczalnym.The results presented in Fig. 2 are the average of three samples taken from three selected meadow silage bales made on the experimental farm.
Kiszonki doświadczalne z dodatkiem preparatu według wynalazku charakteryzowały się przedłużoną stabilnością tlenową do 7 dni, podczas gdy kiszonki kontrolne bez dodatku preparatu były stabilne tylko przez 4 dni, po otwarciu bel kiszonkarskichThe experimental silages with the addition of the preparation according to the invention were characterized by prolonged aerobic stability up to 7 days, while the control silages without the addition of the preparation were stable only for 4 days after opening the silage bales.
PL 236 769 Β1PL 236 769 Β1
Lista sekwencjiSequence list
110> Instytut Biotechnologii Przemyślu Rolno Spożywczego im. prof. Wacława Dąbrowskiego <120> Nowy szczep bakterii Pediococcus acidilactici o zdolności metabolizowania 1,2-propanodiolu, oraz zawierająca go kultura starterowa i preparat <130> PK-5623-AGR <160> 1 <170> Patentln version 3.5 <210 1 <211> 1359 <212> DNA <213> Pediococcus acidilactici <40 0 1 actgtcactt agacggctag ctcctaaaag gttaccccac cggctttggg tgttacaaac60 tctcatggtg tgacgggcgg tgtgtacaag gcccgggaac gtattcaccg cggcatgctg120 atccgcgatt actagcgatt ccgacttcgt gtaggcgagt tgcagcctac agtccgaact180 gagaatggtt ttaagagatt agctaaacct cgcggtttcg cgactcgttg taccatccat240 tgtagcacgt gtgtagccca ggtcataagg ggcatgatga tttgacgtcg tccccacctt300 cctccggttt gtcaccggca gtctcactag agtgcccaac tgaatgctgg caactagtaa360 taagggttgc gctcgttgcg ggacttaacc caacatctca cgacacgagc tgacgacaac420 catgcaccac ctgtcattct gtccccgaag ggaacgccta atctcttagg ttggcagaag480 atgtcaagac ctggtaaggt tcttcgcgta gcttcgaatt aaaccacatg ctccaccgct540 tgtgcgggcc cccgtcaatt cttttgagtt tcaaccttgc ggtcgtactc cccaggcgga600 ttacttaatg cgttagctgc agcactgaag ggcggaaacc ctccaacact tagtaatcat660 cgtttacggc atggactacc agggtatcta atcctgttcg ctacccatgc tttcgagcct720 cagcgtcagt tacagaccag acagccgcct tcgccactgg tgttcttcca tatatctacg780 catttcaccg ctacacatgg agttccactg tcctcttctg cactcaagtc tcccagtttc840 caatgcactt cttcggttga gccgaaggct ttcacattag acttaaaaga ccgcctgcgc900 tcgctttacg cccaataaat ccggataacg cttgccacct acgtattacc gcggctgctg960 gcacgtagtt agccgtgctt tctggttaaa taccgtcact gggtgaacag ttactctcac1020 ccacgttctt ctttaacaac agagctttac gagccgaaac ccttcttcac tcacgcggcg1080 ttgctccatc agacttgcgt ccattgtgag attccctact gctgcctccg tagagtctgg1140 gccgtgtctc agtcccatgt gcgataccct ctcagtcgct acgcatcatc gctggtgagc1200 gtactcacac tagctatgcg cgcgggtcat cgatgawgcg agcatctttc aagaaacagg1260 cgatttcytg ttwacgatar ccatctgttt caggttatcc cckgatygca gttaccaagt1320 tayacgatcg caattgattc gttagtccat catgcagac1359110> Instytut Biotechnologii Przemyślu Rolno Spożywczego im. prof. Wacława Dąbrowskiego <120> A new strain of Pediococcus acidilactici bacteria with the ability to metabolize 1,2-propanediol, and a starter culture containing it and the preparation <130> PK-5623-AGR <160> 1 <170> Patentln version 3.5 <210 1 <211> 1359 <212> DNA <213> Pediococcus acidilactici <40 0 1 actgtcactt agacggctag ctcctaaaag gttaccccac cggctttggg tgttacaaac60 tctcatggtg tgacgggcgg tgtgtacaag gcccgggaac gtattcaccg cggcatgctg120 atccgcgatt actagcgatt ccgacttcgt gtaggcgagt tgcagcctac agtccgaact180 gagaatggtt ttaagagatt agctaaacct cgcggtttcg cgactcgttg taccatccat240 tgtagcacgt gtgtagccca ggtcataagg ggcatgatga tttgacgtcg tccccacctt300 cctccggttt gtcaccggca gtctcactag agtgcccaac tgaatgctgg caactagtaa360 taagggttgc gctcgttgcg ggacttaacc caacatctca cgacacgagc tgacgacaac420 catgcaccac ctgtcattct gtccccgaag ggaacgccta atctcttagg ttggcagaag480 atgtcaagac ctggtaaggt tcttcgcgta gcttcgaatt aaaccacatg ctccaccgct540 tgtgcgggcc cccgtcaatt cttttgagtt tcaaccttgc ggtcgtactc cccaggcgga600 ttacttaatg cgttagctgc agcactgaag ggcggaaacc ctccaacact tagtaatcat660 cgtttacggc atggactacc agggtatcta atcctgttcg ctacccatgc tttcgagcct720 cagcgtcagt tacagaccag acagccgcct tcgccactgg tgttcttcca tatatctacg780 catttcaccg ctacacatgg agttccactg tcctcttctg cactcaagtc tcccagtttc840 caatgcactt cttcggttga gccgaaggct ttcacattag acttaaaaga ccgcctgcgc900 tcgctttacg cccaataaat ccggataacg cttgccacct acgtattacc gcggctgctg960 gcacgtagtt agccgtgctt tctggttaaa taccgtcact gggtgaacag ttactctcac1020 ccacgttctt ctttaacaac agagctttac gagccgaaac ccttcttcac tcacgcggcg1080 ttgctccatc agacttgcgt ccattgtgag attccctact gctgcctccg tagagtctgg1140 gccgtgtctc agtcccatgt gcgataccct ctcagtcgct acgcatcatc gctggtgagc1200 gtactcacac tagctatgcg cgcgggtcat cgatgawgcg agcatctttc aagaaacagg1260 cgatttcytg ttwacgatar ccatctgttt caggttatcc cckgatygca gttaccaagt1320 tayacgatcg caattgattc gttagtccat catgcagac1359
Claims (5)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL426522A PL236769B1 (en) | 2018-08-01 | 2018-08-01 | New Pediococcus acidilactici bacterial strain with ability to metabolize 1,2-propanediol, a starter culture and a preparation containing the strain |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL426522A PL236769B1 (en) | 2018-08-01 | 2018-08-01 | New Pediococcus acidilactici bacterial strain with ability to metabolize 1,2-propanediol, a starter culture and a preparation containing the strain |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL426522A1 PL426522A1 (en) | 2020-02-10 |
| PL236769B1 true PL236769B1 (en) | 2021-02-22 |
Family
ID=69399772
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL426522A PL236769B1 (en) | 2018-08-01 | 2018-08-01 | New Pediococcus acidilactici bacterial strain with ability to metabolize 1,2-propanediol, a starter culture and a preparation containing the strain |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL236769B1 (en) |
-
2018
- 2018-08-01 PL PL426522A patent/PL236769B1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL426522A1 (en) | 2020-02-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101461453B (en) | Composite microbial feed additive for beasts and birds | |
| CN107164274B (en) | Lactobacillus composite microbial agent and preparation method and application thereof | |
| ES2771857T3 (en) | Fast-acting Lactobacillus strains and their use to improve aerobic stability of silage | |
| CN101586111B (en) | Method for preparing product of active lactic acid galactococcus | |
| CN107801837B (en) | A bio-fermentation process for utilizing chicken manure as feed | |
| CN102226162A (en) | Preparation method and application of composite microbial feed additive | |
| CN102334611A (en) | Solid-state fermentation method for bacillus natto-saccharomycete composite viable bacteria preparation with rice bran as matrix | |
| CN101165162A (en) | Probiotics active preparation | |
| CN113462620A (en) | Preparation method and application of composite microbial agent for feed | |
| US8697423B2 (en) | Strain of Lactobacillus plantarum S, the use of the strain of Lactobacillus plantarum S and the preparation for roughages ensiling | |
| CN102696860A (en) | Highly efficient and low-cost microbiological feed proteins based on vinegar residue and miscellaneous meal | |
| CN109022333A (en) | A kind of preparation method and applications of composite microbial fermentation bacteria agent | |
| CN101700105A (en) | Microecological feed additive for milk cows and preparation method thereof | |
| RU2688429C1 (en) | Method of producing a probiotic additive for quail | |
| KR100287825B1 (en) | Probiotics For Feed Additives | |
| RU2280464C2 (en) | Method for preparing dry probiotic preparation "batsell" | |
| CN101849618A (en) | A kind of production method of compound enzyme for feed | |
| CN105802871B (en) | Lactic acid bacteria and its application in the preparation of straw feed | |
| RU2675934C2 (en) | Combined probiotic preparation based on spore-forming bacteria of bacillus genus (options) for use in animal breeding, method for production thereof (variants) and bacillus subtilis (natto) strain used as additive for preparation | |
| PL236769B1 (en) | New Pediococcus acidilactici bacterial strain with ability to metabolize 1,2-propanediol, a starter culture and a preparation containing the strain | |
| CN101347179A (en) | Method for preparing complex bacterial agent special for frutex biological feed | |
| RU2391859C2 (en) | Method of protein-vitamin fodder production | |
| US9370199B2 (en) | Strain of Lactobacillus buchneri A, composition, a multi-component preparation for starch-rich plant preservation, their use and a method for plant preservation | |
| KR20200103230A (en) | Method for the manufacture of probiotics, feed additive for herbivores with the main ingredient of [jangdae], a new kind of Kenaf | |
| CN103621792A (en) | Feed additive containing L-lysine composite probiotics and preparation method thereof |