PL188811B1 - Metalowane syntetyczne pochodne bakteriochlorofilu, sposób ich wytwarzania, kompozycja farmaceutyczna i jej zastosowanie - Google Patents
Metalowane syntetyczne pochodne bakteriochlorofilu, sposób ich wytwarzania, kompozycja farmaceutyczna i jej zastosowanieInfo
- Publication number
- PL188811B1 PL188811B1 PL96326745A PL32674596A PL188811B1 PL 188811 B1 PL188811 B1 PL 188811B1 PL 96326745 A PL96326745 A PL 96326745A PL 32674596 A PL32674596 A PL 32674596A PL 188811 B1 PL188811 B1 PL 188811B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- group
- bchl
- formula
- ethyl
- derivative
- Prior art date
Links
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 60
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims abstract description 60
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims abstract description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 40
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 38
- DSJXIQQMORJERS-AGGZHOMASA-M bacteriochlorophyll a Chemical class C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC([C@H](CC)[C@H]3C)=[N+]4C3=CC3=C(C(C)=O)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 DSJXIQQMORJERS-AGGZHOMASA-M 0.000 claims abstract description 32
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 claims abstract description 27
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 claims abstract description 19
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 17
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 11
- 125000001189 phytyl group Chemical group [H]C([*])([H])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@](C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@](C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims abstract description 11
- 125000004400 (C1-C12) alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims abstract description 7
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 claims abstract description 6
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims abstract description 6
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 claims abstract description 6
- 125000004066 1-hydroxyethyl group Chemical group [H]OC([H])([*])C([H])([H])[H] 0.000 claims abstract description 5
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 229910052718 tin Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 108010003118 Bacteriochlorophylls Proteins 0.000 claims description 24
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 21
- 108090000765 processed proteins & peptides Chemical group 0.000 claims description 19
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 14
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 14
- 238000002428 photodynamic therapy Methods 0.000 claims description 14
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 13
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 13
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 12
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 claims description 12
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 12
- -1 tert-butoxy, carbobenzoxy Chemical group 0.000 claims description 11
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 10
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 9
- 125000002686 geranylgeranyl group Chemical group [H]C([*])([H])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 8
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 150000002367 halogens Chemical group 0.000 claims description 8
- KWOZSBGNAHVCKG-WFDCHTCOSA-N bacteriopheophytin a Chemical class N1C(C=C2[C@H]([C@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)C(=N2)C2=C3NC(=C4)C(C)=C3C(=O)[C@@H]2C(=O)OC)C)=C(C)C(C(C)=O)=C1C=C1[C@H](C)[C@@H](CC)C4=N1 KWOZSBGNAHVCKG-WFDCHTCOSA-N 0.000 claims description 7
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 7
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 7
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 claims description 6
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 239000001707 (E,7R,11R)-3,7,11,15-tetramethylhexadec-2-en-1-ol Substances 0.000 claims description 5
- BLUHKGOSFDHHGX-UHFFFAOYSA-N Phytol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C=CO BLUHKGOSFDHHGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- HNZBNQYXWOLKBA-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofarnesol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)=CCO HNZBNQYXWOLKBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- BOTWFXYSPFMFNR-OALUTQOASA-N all-rac-phytol Natural products CC(C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)=CCO BOTWFXYSPFMFNR-OALUTQOASA-N 0.000 claims description 5
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 5
- BOTWFXYSPFMFNR-PYDDKJGSSA-N phytol Chemical compound CC(C)CCC[C@@H](C)CCC[C@@H](C)CCC\C(C)=C\CO BOTWFXYSPFMFNR-PYDDKJGSSA-N 0.000 claims description 5
- 238000005809 transesterification reaction Methods 0.000 claims description 5
- 229910001510 metal chloride Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 claims description 3
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 3
- POILWHVDKZOXJZ-ARJAWSKDSA-M (z)-4-oxopent-2-en-2-olate Chemical compound C\C([O-])=C\C(C)=O POILWHVDKZOXJZ-ARJAWSKDSA-M 0.000 claims description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 claims 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 abstract description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 abstract description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 28
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 27
- BHPNXACHQYJJJS-UHFFFAOYSA-N bacteriochlorin Chemical compound N1C(C=C2N=C(C=C3NC(=C4)C=C3)CC2)=CC=C1C=C1CCC4=N1 BHPNXACHQYJJJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 22
- 238000006263 metalation reaction Methods 0.000 description 16
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 14
- 150000004036 bacteriochlorins Chemical class 0.000 description 13
- XZSVAMUZTKNGDN-JBRJOJLESA-L bacteriochlorophylls Chemical compound [Mg+2].[N-]1C2=C(C=3C(C(C)C(=CC=4C(=C(C(C)=O)C(=C5)N=4)C)N=3)CCC(=O)OC\C=C(/C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)C(C(=O)OC)C([O-])=C2C(C)=C1C=C1C(CC)C(C)C5=N1 XZSVAMUZTKNGDN-JBRJOJLESA-L 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- 238000006478 transmetalation reaction Methods 0.000 description 13
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 10
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 10
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 10
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 10
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 9
- 150000004032 porphyrins Chemical class 0.000 description 9
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 9
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 9
- 239000001752 chlorophylls and chlorophyllins Substances 0.000 description 8
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 8
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 8
- 239000003504 photosensitizing agent Substances 0.000 description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 6
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 6
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 5
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 5
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 5
- 235000010378 sodium ascorbate Nutrition 0.000 description 5
- PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M sodium ascorbate Substances [Na+].OC[C@@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M 0.000 description 5
- 229960005055 sodium ascorbate Drugs 0.000 description 5
- PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M sodium-L-ascorbate Chemical compound [Na+].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 4
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010034972 Photosensitivity reaction Diseases 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 4
- 229930002868 chlorophyll a Natural products 0.000 description 4
- 238000007324 demetalation reaction Methods 0.000 description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 4
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 4
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 208000007578 phototoxic dermatitis Diseases 0.000 description 4
- 231100000018 phototoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 125000000168 pyrrolyl group Chemical group 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 4
- 108010070075 Bacteriochlorophyll A Proteins 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UJKPHYRXOLRVJJ-MLSVHJFASA-N CC(O)C1=C(C)/C2=C/C3=N/C(=C\C4=C(CCC(O)=O)C(C)=C(N4)/C=C4\N=C(\C=C\1/N\2)C(C)=C4C(C)O)/C(CCC(O)=O)=C3C Chemical class CC(O)C1=C(C)/C2=C/C3=N/C(=C\C4=C(CCC(O)=O)C(C)=C(N4)/C=C4\N=C(\C=C\1/N\2)C(C)=C4C(C)O)/C(CCC(O)=O)=C3C UJKPHYRXOLRVJJ-MLSVHJFASA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 108010025790 chlorophyllase Proteins 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- KAFZOLYKKCWUBI-HPMAGDRPSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-1-[(2s)-3-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-(3-cyclohexylpropanoylamino)-4-methylpentanoyl]amino]-5-methylhexanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]butanediamide Chemical compound N([C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(C)C)C(=O)N[C@@H](CN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(N)=O)C(=O)CCC1CCCCC1 KAFZOLYKKCWUBI-HPMAGDRPSA-N 0.000 description 2
- IGVKWAAPMVVTFX-BUHFOSPRSA-N (e)-octadec-5-en-7,9-diynoic acid Chemical compound CCCCCCCCC#CC#C\C=C\CCCC(O)=O IGVKWAAPMVVTFX-BUHFOSPRSA-N 0.000 description 2
- OKVJCVWFVRATSG-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxybenzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC(O)=C1 OKVJCVWFVRATSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241000191025 Rhodobacter Species 0.000 description 2
- 101150054451 Rtel1 gene Proteins 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 230000005281 excited state Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 229910052745 lead Inorganic materials 0.000 description 2
- AMXOYNBUYSYVKV-UHFFFAOYSA-M lithium bromide Chemical compound [Li+].[Br-] AMXOYNBUYSYVKV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 2
- ANSUDRATXSJBLY-VKHMYHEASA-N methyl (2s)-2-amino-3-hydroxypropanoate Chemical group COC(=O)[C@@H](N)CO ANSUDRATXSJBLY-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- WMKCPTRURVRKRM-RYUDHWBXSA-N methyl (2s)-3-hydroxy-2-[[(2s)-3-hydroxy-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoyl]amino]propanoate Chemical group COC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 WMKCPTRURVRKRM-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 2
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 2
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 230000002165 photosensitisation Effects 0.000 description 2
- 238000010672 photosynthesis Methods 0.000 description 2
- 230000029553 photosynthesis Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 229910052724 xenon Inorganic materials 0.000 description 2
- FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N xenon atom Chemical compound [Xe] FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LJIOTBMDLVHTBO-CUYJMHBOSA-N (2s)-2-amino-n-[(1r,2r)-1-cyano-2-[4-[4-(4-methylpiperazin-1-yl)sulfonylphenyl]phenyl]cyclopropyl]butanamide Chemical compound CC[C@H](N)C(=O)N[C@]1(C#N)C[C@@H]1C1=CC=C(C=2C=CC(=CC=2)S(=O)(=O)N2CCN(C)CC2)C=C1 LJIOTBMDLVHTBO-CUYJMHBOSA-N 0.000 description 1
- VUDZSIYXZUYWSC-DBRKOABJSA-N (4r)-1-[(2r,4r,5r)-3,3-difluoro-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-4-hydroxy-1,3-diazinan-2-one Chemical compound FC1(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)N[C@H](O)CC1 VUDZSIYXZUYWSC-DBRKOABJSA-N 0.000 description 1
- IOOQHEFLQLMYPZ-GNQFORKWSA-M (7R,8Z)-bacteriochlorophyll b Chemical compound O=C([C@@H](C1=C2N3[Mg]N45)C(=O)OC)C2=C(C)\C3=C\C(\C(\[C@H]/2C)=C/C)=N\C\2=C/C4=C(C(C)=O)C(C)=C5\C=C/2[C@@H](C)[C@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)C1=N\2 IOOQHEFLQLMYPZ-GNQFORKWSA-M 0.000 description 1
- AZUYLZMQTIKGSC-UHFFFAOYSA-N 1-[6-[4-(5-chloro-6-methyl-1H-indazol-4-yl)-5-methyl-3-(1-methylindazol-5-yl)pyrazol-1-yl]-2-azaspiro[3.3]heptan-2-yl]prop-2-en-1-one Chemical compound ClC=1C(=C2C=NNC2=CC=1C)C=1C(=NN(C=1C)C1CC2(CN(C2)C(C=C)=O)C1)C=1C=C2C=NN(C2=CC=1)C AZUYLZMQTIKGSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CFIHLFGSTIFVLP-UHFFFAOYSA-N 1-pentoxyethane-1,2-diol Chemical compound CCCCCOC(O)CO CFIHLFGSTIFVLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KFKRXESVMDBTNQ-UHFFFAOYSA-N 3-[18-(2-carboxylatoethyl)-8,13-bis(1-hydroxyethyl)-3,7,12,17-tetramethyl-22,23-dihydroporphyrin-21,24-diium-2-yl]propanoate Chemical compound N1C2=C(C)C(C(C)O)=C1C=C(N1)C(C)=C(C(O)C)C1=CC(C(C)=C1CCC(O)=O)=NC1=CC(C(CCC(O)=O)=C1C)=NC1=C2 KFKRXESVMDBTNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010013593 3-acetyl-chlorophyll Proteins 0.000 description 1
- JOFDSYLCZIHGGO-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-cyclohexylphenyl)methyl-[2-[[5-(dimethylamino)naphthalen-1-yl]sulfonyl-methylamino]acetyl]amino]-2-hydroxybenzoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(N(C)C)=CC=CC2=C1S(=O)(=O)N(C)CC(=O)N(C=1C=C(O)C(C(O)=O)=CC=1)CC(C=C1)=CC=C1C1CCCCC1 JOFDSYLCZIHGGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 208000020154 Acnes Diseases 0.000 description 1
- 241000974482 Aricia saepiolus Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 238000005684 Liebig rearrangement reaction Methods 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000000233 Melia azedarach Species 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium on carbon Substances [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002666 PdCl2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 241000190984 Rhodospirillum rubrum Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 208000000260 Warts Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000007171 acid catalysis Methods 0.000 description 1
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000032 aromatic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 108010010589 bacteriochlorophyll b Proteins 0.000 description 1
- JFDZBHWFFUWGJE-UHFFFAOYSA-N benzonitrile Substances N#CC1=CC=CC=C1 JFDZBHWFFUWGJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 229910052793 cadmium Inorganic materials 0.000 description 1
- LHQLJMJLROMYRN-UHFFFAOYSA-L cadmium acetate Chemical compound [Cd+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O LHQLJMJLROMYRN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000017168 chlorine Nutrition 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001309 chloro group Chemical class Cl* 0.000 description 1
- 229930002869 chlorophyll b Natural products 0.000 description 1
- NSMUHPMZFPKNMZ-VBYMZDBQSA-M chlorophyll b Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C=O)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 NSMUHPMZFPKNMZ-VBYMZDBQSA-M 0.000 description 1
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 1
- 238000001142 circular dichroism spectrum Methods 0.000 description 1
- 229910052681 coesite Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002485 combustion reaction Methods 0.000 description 1
- 229940125890 compound Ia Drugs 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 229910052906 cristobalite Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000007323 disproportionation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 208000014205 familial febrile seizures Diseases 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BCDGQXUMWHRQCB-UHFFFAOYSA-N glycine methyl ketone Natural products CC(=O)CN BCDGQXUMWHRQCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 1
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000001095 inductively coupled plasma mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- UEGPKNKPLBYCNK-UHFFFAOYSA-L magnesium acetate Chemical compound [Mg+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O UEGPKNKPLBYCNK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- NDBQJIBNNUJNHA-DFWYDOINSA-N methyl (2s)-2-amino-3-hydroxypropanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.COC(=O)[C@@H](N)CO NDBQJIBNNUJNHA-DFWYDOINSA-N 0.000 description 1
- ULJQVGJBSXJXPX-LBPRGKRZSA-N methyl (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxyamino]propanoate Chemical compound CC(C)(C)ON[C@H](C(=O)OC)CC1=CC=C(O)C=C1 ULJQVGJBSXJXPX-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- LXAWQKKSNNYYEK-NRFANRHFSA-N methyl (2s)-3-hydroxy-2-(tritylamino)propanoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(C=1C=CC=CC=1)(N[C@@H](CO)C(=O)OC)C1=CC=CC=C1 LXAWQKKSNNYYEK-NRFANRHFSA-N 0.000 description 1
- MWZPENIJLUWBSY-VIFPVBQESA-N methyl L-tyrosinate Chemical compound COC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 MWZPENIJLUWBSY-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- XKRQLFAFMZSNJH-UHFFFAOYSA-N n,n-diethyl-3-iodopropan-1-amine Chemical compound CCN(CC)CCCI XKRQLFAFMZSNJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 238000005691 oxidative coupling reaction Methods 0.000 description 1
- PIBWKRNGBLPSSY-UHFFFAOYSA-L palladium(II) chloride Chemical compound Cl[Pd]Cl PIBWKRNGBLPSSY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000003154 papilloma Diseases 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- CQIKWXUXPNUNDV-AXRVZGOCSA-N pheophytin a Chemical group N1C(C=C2[C@H]([C@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)C(=N2)C2=C3NC(=C4)C(C)=C3C(=O)[C@@H]2C(=O)OC)C)=C(C)C(C=C)=C1C=C1C(C)=C(CC)C4=N1 CQIKWXUXPNUNDV-AXRVZGOCSA-N 0.000 description 1
- 230000002186 photoactivation Effects 0.000 description 1
- 231100000760 phototoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004694 pigment cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 150000004033 porphyrin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000012746 preparative thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- JUJWROOIHBZHMG-RALIUCGRSA-N pyridine-d5 Chemical compound [2H]C1=NC([2H])=C([2H])C([2H])=C1[2H] JUJWROOIHBZHMG-RALIUCGRSA-N 0.000 description 1
- 150000003233 pyrroles Chemical class 0.000 description 1
- 238000006862 quantum yield reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000002468 redox effect Effects 0.000 description 1
- 238000006479 redox reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 1
- 150000003354 serine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 201000010153 skin papilloma Diseases 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229910052682 stishovite Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- BWMISRWJRUSYEX-SZKNIZGXSA-N terbinafine hydrochloride Chemical compound Cl.C1=CC=C2C(CN(C\C=C\C#CC(C)(C)C)C)=CC=CC2=C1 BWMISRWJRUSYEX-SZKNIZGXSA-N 0.000 description 1
- CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N tetramethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)C CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 201000004647 tinea pedis Diseases 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052905 tridymite Inorganic materials 0.000 description 1
- JSPLKZUTYZBBKA-UHFFFAOYSA-N trioxidane Chemical class OOO JSPLKZUTYZBBKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003667 tyrosine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 description 1
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
- C07D487/22—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
- A61K41/0071—PDT with porphyrins having exactly 20 ring atoms, i.e. based on the non-expanded tetrapyrrolic ring system, e.g. bacteriochlorin, chlorin-e6, or phthalocyanines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/10—Anti-acne agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/12—Keratolytics, e.g. wart or anti-corn preparations
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
- C07D491/22—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Virology (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
1 . Sposób wytwarzania syntetycznej metalowanej pochodnej bakteriochlorofilu o wzorze: [M]-BChl w którym pochodna [M]-BChl jest wybrana z grupy obejmujacej zwiazek o wzorze I, II lub III: w którym R 1 oznacza reszte weglow odorowa C 1-C25; R2 oznaczaH, OH lub COOR5 , w którym R5 oznacza C1 - C l2 alkilo lub C3-C l2 cykloalkilo; R3 oznacza H. OH lub C 1 -C 12 alkilo lub alkoksy; R4 kazdy jest niezaleznie wybrany z grupy obejmujacej winylo, etylo, acetylo, 1 -hydroksyetylo i ich etery i estry oraz M oznacza metal o promieniu jonu mniejszym niz promien Cd (r= 95 pm), gdzie metal M jest wybrany z grupy obej- mujacej dwuwartosciowy metal wybrany z grupy obejmujacej Pd, Co, Ni i Mn, trójwartosciowy metal wybrany z grupy obejmujacej Fe, Mn i Cr, i czterowartosciowy metal wybrany z grupy obejmujacej Sn i Pt; z wykluczeniem zwiazków o wzorze 1, w którym R 2 oznacza COOCH3, R3 oznacza H, R4 w pozycji 3 oznacza acetylo i w pozycji 8 oznacza etylo, R 1 oznacza fitylo lub etylo i M jest Pd; znam ienny tym , ze:........................ PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest nowy sposób wytwarzania metalowanych syntetycznych pochodnych bakteriochlorofilu, metalowane syntetyczne pochodne bakteriochlorofilu, kompozycja farmaceutyczna zawierająca te związki i jej zastosowanie w terapii fotodynamicznej in vivo (PDT), diagnostyce oraz w fotodynamicznym niszczeniu in vitro wirusów i drobnoustrojów.
Poniżej przestawiono określenia terminów i skrótów stosowane w zgłoszeniu:
BChl = bakteriochlorofil a (zawierająca Mg 7,8,17,18-czterowodoroporfiryna o przedstawionym niżej wzorze I, w którym M oznacza Mg, R1 oznacza fitylo lub geranylogeranylo, R2 oznacza COOCH3, R3 jest wodorem, R4 w położeniu 3 oznacza acetylo, a R4 w położeniu 8 oznacza etylo).
Pochodna BChl = pochodna BChl z modyfikacjami w makropierścieniu, centralnym atomie i ewentualnie na obrzeżu, włącznie z pochodnymi o poniższych wzorach I, II, III i I', II' i III',
BPhe = bakteriofeofityna a (BChl, w którym centralny atom Mg jest zastąpiony dwoma atomami wodoru),
Chl = chlorofil (zawierająca Mg pochodna 17,18-dwuwodoroporfiryny, utworzona z makropierścienia składającego się z 4 piroli i jednego pierścienia izocyklicznego, które są sprzężone ze sobą i połączone z atomem Mg). Chlorofil a ma wzór I, przedstawiony dalej, w którym R1 oznacza fitylo, R2 oznacza COOCH3, R3 jest wodorem, R4 w położeniu 3 oznacza winylo, a R4 w położeniu 8 oznacza etylo, [M]-BChl = pochodna BChl, w której centralny atom Mg zastąpiono metalem M, jak określono niżej,
188 811
PDT = terapia fotodynamiczna,
Phe = feofityna a (Chl, w którym centralny atom Mg zastąpiono dwoma atomami wodoru).
(Bakterio)chlorofile ((B)Chl) zawierające Mg oraz ich wolne zasady odgrywają zasadniczą rolę w fotosyntezie. Działają one jak pigmenty antenowe lub redoks, umożliwiające indukowane światłem rozdzielenie ładunków w centrum reakcyjnym. Pigmenty są także potencjalnie użytecznymi fotouczulaczami, na przykład w fotodynamicznej terapii nowotworowej.
Wykazano, że w wyniku napromienienia tkanki nowotworowej porfiryny gromadzą się w tej tkance, pochłaniając światło in situ, stanowiąc środek do wykrywania nowotworów dzięki zlokalizowaniu fluorescencji. Nie poddają obróbce pochodną hematoporfiryny, znaną jako pochodną hematoporfirynową lub HPD, zaproponowano zarówno do wykrywania nowotworów, jak i w terapii fotodynamicznej nowotworów. Postać HPD, uznana jako bardziej skuteczna, zawiera część HPD, o masie agregatu ponad 10 000 i jest przedmiotem patentu amerykańskiego nr 4649151. HPD lub jej aktywne składniki opisano w patencie amerykańskim nr 4753958 do miejscowego leczenia chorób skóry, a przez Matthews i wsp. (Matthews, J.L. i wsp., 1988, Transfusion, strony 81-83), do sterylizacji próbek biologicznych zawierających organizmy zakażające, takie jak bakterie i wirusy.
W terapii i diagnostyce zaproponowano szereg pochodnych porfiryny do zoptymalizowania skuteczności leków porfirynowych, które zwierają na przykład centralny atom metalu skompleksowany z czterema pierścieniami pirolowymi, peryferyjne podstawniki pierścieni pirolowych są ewentualnie zmodyfikowane, a makropierścień jest ewentualnie dwuuwodorniony do pochodnych Chl (chloryny) lub czterouwodomiony do pochodnych BChl (bakteriochloryny).
W celu zrozumienia właściwości spektroskopowych i redoks tych związków (Hynninen P.H., w: Sheer, 1991, strony 145-209) kompleksy cyklicznych czteropiroli z metalami innymi niż Mg badano w szeregu porfiryn i 17,18-dwuwodoroporfiryn. Bakteriochlorofile są potencjalnie korzystniejsze w porównaniu z chlorofilami ponieważ wykazują intensywne pasma w bliskiej podczerwieni, to jest przy znacznie dłuższych falach, niż pochodne chlorofilowe. Jednakże dostępne jest niewiele informacji na temat bakteriochlorofilów z atomami centralnymi innymi niż Mg.
Z międzynarodowego zgłoszenia patentowego nr WO 90/12573 Dougherety znane są pochodne bakteriochlorofilowe a lub b albo odpowiednie bakteriochloryny pozbawione centralnego atomu metalu lub w których centralny atom węgla może być metalem nieparamagnetycznym wybranym z Mg2+, Sn2+ i Zn2+, a grupa C-173-karboksylowa jest estryfikowaną nasyconą lub nienasyconą resztą wodorokarbylową 8-25°C, stosowane do wytwarzania kompozycji do destrukcji lub uszkodzenia niepożądanych, docelowych materiałów biologicznych, przy czym sposób niszczenia polega na fotouczulaniu wymienionego materiału za pomocą skutecznej dawki wymienionej pochodnej, a następnie napromienieniu docelowego miejsca promieniowaniem o długości fali pochłanianej przez pochodną w ciągu czasu skutecznego do uszkodzenia lub zniszczenia materiału. Ponadto uważa się, że związki są użyteczne w terapii fotodynamicznej i diagnostyce. Należy nadmienić, że chociaż zastrzeżone są kompleksy Sn2+ i Zn2* z bakteriochlorofilem a lub b, to w opisie zgłoszenia patentowego nr WO 90/12573 te pochodne metali nie zostały podane jako przykłady, ani nie opisano żadnego sposobu ich wytwarzania.
Losev i wsp., 1990 (Losev i wsp., 1990, Opt. Spektrosk., tom 69, strony 97-101), opisują, że kompleksy [Pd]-BChl i [Cu]-BChl wytwarza się przez bezpośrednią metalację BPhe odpowiednio za pomocą Pd-benzonitrylu w benzenie w strumieniu azotu albo za pomocą stężonego roztworu CuCb w metanolu. Jednakże w publikacji brak jest szczegółów sposobu wytwarzania i charakterystyki kompleksów metali. Co więcej, otrzymywanie kompleksu [Pd]-BChl według Loseva nie mogło być przez nas powtórzone.
W normalnych warunkach podawania, to jest w obecności tlenu w temperaturze pokojowej i w normalnych warunkach światła, ugrupowania BChl sąlabilne i mają nieco mniejsze wydajności kwantowe przy przechodzeniu w stan tripletowy, w porównaniu na przykład z pochodną hematoporfiryny (HPD). Jednakże możliwe inicjowanie przez nie biologicznych reakcji redoks, korzystne charakterystyki spektralne oraz ich łatwa degradacja in vivo dają w wyniku potencjalną wyższość bakteriochlorofilów nad innymi związkami, na przykład por188 811 firynami i chlorofilami, w terapii PDT i diagnostyce oraz przy niszczeniu komórek, wirusów i bakterii, w próbkach i w żywej tkance. Należy spodziewać się, że chemiczna modyfikacja bakteriochlorofilów polepszy jeszcze ich właściwości, co jest bardzo ograniczone na skutek braku odpowiednich sposobów wytwarzania takich zmodyfikowanych bakteriochlorofilów (Hynninen P.H., w: Sheer, 1991, strony 145-209).
Z europejskiego zgłoszenia patentowego nr 0584552 tego samego zgłaszającego niniejszego zgłoszenie znane są nowe produkty sprzężenia Chi i BChl z aminokwasami, peptydami i białkami celem wykorzystania w terapii PDT i w diagnostyce. Reszta aminokwasu, peptydu lub białka jest połączona bezpośrednio lub poprzez człon pośredni z grupą C-173-karboksylową cząsteczki Chi lub BChl. Takie produkty sprzężenia otrzymuje się sposobami, które są dosyć łagodne dla zachowania labilnego wobec kwasów, centralnego atomu Mg. Opisane są tu także kompleksy Zn i Cu chlorofil a-173-ester metylowy seryny, lecz brak jest opisu metalowanych bakteriochlorofilów i sposobu ich wytwarzania.
Z niemieckiego zgłoszenia patentowego nr DE 4121876 znane są pochodne bakteriochlorofilu, w których estry modyfikowane w położeniu C-132 i C-173 otrzymuje się w łagodnych warunkach drogą szybkiej transestryfikacji alkalicznej, dopuszczając dalej do zmian w pierścieniu izocyklicznym, a zachowując centralny atom Mg, dzięki czemu absorpcja pigmentu jest przesunięta poza 800 nm. W zgłoszeniu wspomina się o kompleksach z metalami wymienionych pochodnych BChl z Zn lub Ni, lecz wymienione kompleksy nie były ilustrowane przykładami, ani nie opisuje się sposobu ich wytwarzania.
Pożądane jest otrzymywanie nowych metalowanych kompleksów BChl do stosowania w terapii PDT celem zachowania lub nawet polepszenia korzystnych, optycznych i fizjologicznych właściwości związków BChl, optymalizując jednocześnie ich skuteczność fotouczuleniową oraz zwiększając ich trwałość chemiczną i optymalizując ich fizjologiczne okresy użytkowania. Transmetalacja daje w wyniku różne zmiany reaktywności chemicznej oraz trwałość związków BChl, które są ważne w nowych modyfikacjach makaopierścienia i podstawników peryferyjnych, a zwłaszcza w optymalizacji ich podawania, działania docelowego i biologicznego czasu trwania oraz minimalizowania toksycznych skutków ubocznych. Transmetalacja prowadzi także do różnych zmian właściwości stanów wzbudzonych, włącznie z wydajnością tripletową i czasem życia, dostępnością wyższych stanów wzbudzonych oraz wytwarzania cytotoksycznych szczepów tlenowych.
Znany jest szereg sposobów zmiany centralnego atomu metalu w porfirynach (patrz Buchler, J.W., 1975, „Static coordination chemistry of metalloporphyrins”, w Porphyr-ins and Metalloporphyrins, Smith, K.M., wydawca, strony 157-232, Elsevier, Nowy Jork). Same porfiryny są łatwo dostępne i chemicznie trwałe, lecz niekorzystne pod względem spektralnym i fizjologicznym.
Znanych jest kilka sposobów bezpośredniej lub pośredniej metalacji chlorofilów. Strell i Urumow, 1977 (Strell, M. i Urumow, T., 1977, Liebigs Ann. Chem., strony 970-974), opisują kompleksy [Cr]-Chi i [Mn]-Chl, otrzymywane drogą transmetalacji kompleksu [Cd]-Chl (otrzymanego drogą reakcji odmetalowanejpochodnej Chll z octanem kadmu w metanolu lub pirydynie) za pomocą octanu Cr++ lub Mn w metanolu w atmosferze N 2. Taki sposób transmetalacji uważa się za odpowiedni także dla kompleksów Cu, Zn, Co i Pb pochodnych chlorofilów, lecz nie dla Fe3+, Ni i Mg. Ponieważ jednakże kompleksy Cu, Zn, Co i Pb można otrzymać przez bezpośrednią metalację do Phe, to sposób byłby korzystny tylko dla Cr i Mn. Autorzy opisują także otrzymywanie kompleksu [Mg]-Chl przez bezpośrednią metalację Phe w acetonie za pomocą octanu Mg w sulfotlenku dwumetylu.
Aktualnie dostępne jest niewiele informacji na temat bakteriochlorofilów z centralnymi atomami metali innymi niż Mg. Wiadomo, ze metaiacja bakteriochlorofilów jest trudniejsza niż metaiacja chlorofilów na skutek ich mniejszej odpowiedzi na metalację i zwiększonej reaktywności w reakcjach ubocznych. Znany jest specyficzny sposób wprowadzania Mg do bakteriofeofityny (Wasielewsky, M.R., 1977, „A mild method for the introduction of Magnesium into bacteriopheophytin-a”, Tetrahedron Letters, strony 1373-76). W niniejszym wynalazku próbowano bezpośredniej metalacji i transmetalacji w pochodnych chlorofilowych opisanych przez Strella i Urumowa do otrzymania kompleksów metali pochodnych bakteriochlorofilu, lecz wszystkie próby zakończyły się niepowodzeniem. Bezpośrednia metaiacja
188 811 pochodnych bakteriofeofityny nie udała się z żadnym badanym metalem, z wyjątkiem Cu i Zn, i dala w wyniku mieszaninę nieprzereagowanej bakteriofeofityny i metalowanych produktów utleniania typu 3-acetylochlorofilu a.
Z polskiego opisu patentowego PL-173150 znana jest pochodna serynobakteriofilu zawierająca centralny atom Mg, która wykazywała pewne właściwości odpowiednie w metodzie PDT. Związek ten został wykluczony z zakresu niniejszego opisu i zastrzeżeń. Wadą tego związku była jego niska stabilność przy przedłużonym przechowywaniu.
Stwierdzono zgodnie z niniejszym wynalazkiem, że kompleksy pochodnych bakteriochlorofilowych z metalami można otrzymać drogą modyfikacji procesu transmetalacji w metalacji pochodnych chlorofilowych, opublikowanego przez Strella i Urumowa, stosując odpowiednie sole metali i rozpuszczalniki.
Przedmiotem wynalazku jest nowy sposób wytwarzania syntetycznej metalowanej pochodnej bakteriochlorofilu o wzorze:
[M]-BChl w którym pochodna [M]-BChl jest wybrana z grupy obejmującej związek o wzorze I, II lub DI:
II
Tił
1CA
188 811 w którym Ri oznacza resztę węglowodorową Ci-C25;
R2 oznacza H, OH lub COOR5, w którym R5 oznacza Ci-C 12 alkilo lub C3-C12 cykloalkilo;
R 3 oznacza H, OH lub C1-C12 alkilo lub alkoksy;
R4 każdy jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej winylo, etylo, acetylo, 1 -hydroksyetylo i ich etery i estry oraz
M oznacza metal o promieniu jonu mniejszym niż promień Cd (rs95 pm), gdzie metal M jest wybrany z grupy obejmującej dwuwartościowy metal wybrany z grupy obejmującej Pd, Co, Ni i Mn, trójwartościowy metal wybrany z grupy obejmującej Fe, Mn i Cr, i czterowartościowy metal wybrany z grupy obejmującej Sn i Pt;
z wykluczeniem związków o wzorze I, w którym R2 oznacza COOCH3, R3 oznacza H, R4 w pozycji 3 oznacza acetylo i w pozycji 8 oznacza etylo, Ri oznacza fitylo lub etylo i M jest Pd. Istotą wynalazku jest sposób w którym:
(i) prowadzi się reakcję pochodnej bakteriofeofityny odpowiadającej BChl, rozpuszczonej w dimetyloformamidzie, z dehydratowanym octanem Cd w atmosferze Ar i odzyskuje się kompleks [Cd]-BChl z mieszaniny reakcyjnej drogą chromatografii w warunkach redukujących;
(ii) prowadzi się reakcję kompleksu [Cd]-BChl wytworzonego w etapie (i) rozpuszczonego w suchym acetonie z odpowiednią dehydratowaną solą metalu M wybraną z grupy obejmującej chlorek, octan i acetylo-acetonian metalu M, w atmosferze Ar oraz (iii) odzyskuje się z mieszaniny reakcyjnej żądaną pochodną metalowaną [M]-BChl.
Korzystnie w sposobie według wynalazku pochodną [M]-BChl o wzorze I, II lub III poddaje się dalszej reakcji ze związkiem o wzorze R'i-OH w warunkach transesteryfikacji w położeniu 173, otrzymując związek o wzorze I', II' lub III':
R'.OOC
188 811 w którym R'i jest wybrany z grupy obejmującej:
(i) resztę węglowodorową C1-C25 podstawioną ewentualnie przez chlorowiec, OH, okso, CHO, COOH, lub NIH lub taką resztę przerwaną jednym lub więcej niż jednym heteroatomem wybranym z grupy obejmującej O, S i NH, albo przez pierścień fenylowy;
(ii) resztę aminokwasu lub peptydu zawierającą grupę hydroksylową lub ich pochodną wybraną z grupy obejmującej estry alkilowe i pochodne N-zabezpieczone, w których ta grupa zabezpieczająca N jest tert-butoksy, karbobenzoksy lub tritylo oraz hydroksylowany aminokwas lub jego pochodna jest połączona z resztą COO- przez grupę hydroksylową;
(iii) resztę peptydu jak zdefiniowano w (ii) połączoną z resztą COO- przez resztę węglowodorową C1-C25 ewentualnie podstawioną przez chlorowiec, OH, okso, CHO, COOH lub NH2, lub taką resztę przerwaną jednym lub więcej heteroatomami wybranymi z grupy obejmującej O, S i NH, lub przez pierścień fenylowy, również podstawioną przez końcową grupę funkcyjną wybraną z grupy obejmującej OH, COOH, lub NH2; i (iv) resztę specyficznego dla komórki ligandu wybranego z grupy obejmującej peptyd i białko bezpośrednio połączone z resztą COO- lub poprzez resztę węglowodorową Ci-C25 ewentualnie podstawioną przez chlorowiec, OH, okso, CHO, COOH lub NH2, lub przerwaną jednym lub więcej heteroatomów wybranych z grupy obejmującej O, S i NH, lub przez pierścień fenylowy, również podstawioną przez końcową grupę funkcyjną wybraną z grupy obejmującej OH, COOH, lub NH2;
R2 oznacza H, OH lub COOR5, w którym R5 oznacza C i-C 12 alkilo lub C 3-C12 cykloalkilo;
R3 oznacza H, OH lub C1-C12 alkilo lub alkoksy;
R4 każdy jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej winylo, etylo, acetylo, 1-hydroksyetylo i etery i estry oraz
M oznacza metal o promieniu jonu mniejszym niż Cd (rs95 pm), metal M jest wybrany z grupy obejmującej dwuwartościowy metal wybrany z grupy obejmującej Pd, Co, Ni i Mn, trójwartościowy metal wybrany z grupy obejmującej Fe, Mn i Cr, i cz.terowartościowy metal wybrany z grupy obejmującej Sn i Pt;
z wykluczeniem związków o wzorze I', w którym R2 oznacza COOCH3, R3 oznacza H, R4 w pozycji 3 oznacza acetylo i w pozycji 8 oznacza etylo, R'i oznacza fitylo lub etylo i M oznacza Pd.
W innym rozwiązaniu jako metal M stosuje się Pd, Ni, Co lub Mn, i BChl jest resztą pochodnej bakteriochlorofilu o wzorze I, w którym Ri oznacza fitylo lub geranylgeranylo, R2 oznacza COOCH3, R3 oznacza H lub OH, R4 w pozycji 3 oznacza acetylo i w pozycji 8 oznacza etylo, lecz inny niż związek w którym M jest Pd, R'i oznacza fitylo, R2 oznacza COOCH3, R3 oznacza H, R4 w pozycji 3 oznacza acetylo i w pozycji 8 oznacza etylo.
Korzystnie w sposobie według wynalazku jako sól metalu M w etapie (ii) stosuje się chlorek metalu.
W sposobie według wynalazku korzystnie etapy (i) i (ii) łączy się w jeden pojedynczy etap i pochodną bakteriofeofityny poddaje się reakcji z nadmiarem odpowiedniej dehydratowanej soli metalu M, w obecności katalitycznych ilości dehydratowanego octanu Cd w dimetyloformamidzie lub acetonie.
Innym przedmiotem wynalazku jest metalowana pochodna bakteriochlorofilu o wzorze I', II' lub III' jak zdefiniowano powyżej, z wykluczeniem związków o wzorze I', w którym R2 oznacza COOCH3, R3 oznacza H, R4 w pozycji 3 oznacza acetylo i w pozycji 8 oznacza etylo, R'i oznacza fitylo lub etylo i M jest Pd.
Korzystna jest metalowana pochodna bakterii^ochlor<^ofilu o wzorze I', w którym R'i oznacza fitylo lub geranylgeranylo, R2 oznacza COOCHj, R3 oznacza H, R4 w pozycji 3 oznacza acetylo i w pozycji 8 oznacza etylo, i M oznacza Co, Ni lub Mn albo R'i oznacza fitylo lub geranylgeranylo, R2 oznacza COOCH3, R3 oznacza OH, R4 w pozycji 3 oznacza acetylo i w pozycji 8 oznacza etylo, i M oznacza Pd, Co, Ni lub Mn albo R'i oznacza etylo, R2 oznacza COOCH3, R3 oznacza H, R4 w pozycji 3 oznacza acetylo i w pozycji 8 oznacza etylo, i M oznacza Ni albo R\ oznacza ester metylowy serylu, R2 oznacza COOCH3, R3 oznacza H, R4 w pozycji 3 oznacza acetylo i w pozycji 8 oznacza etylo, i M oznacza Pd.
Kolejnym rozwiązaniem wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna zawierająca metalowany bakteriochlorofil o wzorze I', II' lub III' jak zdefiniowano powyżej i farmaceutycznie
188 811 dopuszczalny nośnik. Korzystnie metalowany bakteriochlorofil jest związkiem o wzorze I', w którym R'1 oznacza ester metylowy serylu, R2 oznacza COOCH3, R3 oznacza H, R4 w pozycji 3 oznacza acetylo i w pozycji 8 oznacza etylo, i M oznacza Pd.
Przedmiotem wynalazku jest również zastosowanie metalowanego bakteriochlorofilu o wzorze I', II' lub III jak zdefiniowano powyżej do wytwarzania kompozycji farmaceutycznej do terapii fotodynamicznej albo do diagnozy nowotworów. Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie metalowanego bakteriochlorofilu o wzorze I', II' lub III' jak zdefiniowano powyżej do wytwarzania kompozycji farmaceutycznej do niszczenia komórek lub czynników infekcyjnych obejmujących bakterie i wirusy. Korzystnie kompozycja farmaceutyczna jest stosowana do niszczenia czynników infekcyjnych w produktach biologicznych.
Na fig. 1 przedstawiono fototoksyczność kompleksu [Pd]-BChl-173 - ester metylowy serylu ([Pd]-BChl-Ser) i kompleksu BChl-173 - ester metylowy serylu (BChl-Ser) na zawiesiny bakterii S. Aureus; na fig. 2 przedstawiono fototoksyczność [Pd]-BChl-Ser na komórki czerniaka M2R w hodowli poprzez wbudowanie [C3]tymidyny.
W przeciwieństwie do porfiryn i chlorofilów bezpośrednie metalowanie bakteriochlorofilów jest trudne. Sposób według niniejszego wynalazku pozwala na uzyskanie metalowanych pochodnych bakteriochlorofilowych o lepszych właściwościach do zastosowania jako fotouczulaczy drogątransmetalacji odpowiednich pochodnych [Cd]-BChl.
Zgodnie z niniejszym wynalazkiem kompleksy [Cd]-BChl, które są łatwo dostępne do otrzymania sposobem octanowo/dwumetyloformamidowym, mogą być w łagodnych warunkach poddane transmetalacji z doskonałą wydajnością do innych kompleksów metali. Transmetalacja z zastosowaniem [Cd]-BChl jako prekursora jest zadziwiająco łatwa i prawdopodobnie spowodowana częściowo dużym promieniem jonowym (rM) Cd2 (95 pm) w porównaniu z Mg2+ (rM=72 pm). Innym czynnikiem jest rozpuszczalnik (aceton) w połączeniu z przeciwjonami metali (chlorki) stosowanymi do reakcji. W czasie transmetalacji, CdCf i [M]BChl tworzą się w równowadze z eduktami, a bardzo niska rozpuszczalność CdCh w acetonie przesuwa równowagę w stronę produktów.
W jednym z rozwiązań niniejszego wynalazku Ri oznacza jakikolwiek, prosty lub rozgałęziony, nasycony lub nienasycony, włącznie z aromatycznym, rodnik węglowodorowy', zawierający korzystnie od 1 do 25 atomów węgla, taki jak alkil, alkenyl, fenyl, korzystnie niższy alkil zawierający od 1 do 4 atomów węgla, a zwłaszcza etyl, albo rodnik pochodzący z naturalnych związków BChl, na przykład geranylogeranyl (2,6-dwumetylo-2,6-oktadienyl) lub fityl (2,6,10,14-czterometyloheksadecen-14-yl-16), a R'1 ma znaczenie jak dla Ri albo jest takim łańcuchem węglowodorowym podstawionym atomem chlorowca wybranym z F, Br, Cl, 1 J albo podstawionym przez OH, grupę okso, CHO, COOH lub NH2 albo takim ewentualnie podstawionym łańcuchem węglowodorowym, przerwanym przez O, S lub NH, korzystnie przez O, na przykład R'1 jest resztą glikolu oligooksyetylenowego zawierającą od 4 do 10 atomów węgla, korzystnie glikolu pentaoksyetylenowego. Jeżeli R'1 służy jako ugrupowanie pośrednie dla peptydu lub białka, tak jak tu określono, to ma końcową grupę funkcyjną wybraną z OH, COOH i NH2, i za pośrednictwem tej końcowej grupy funkcyjnej peptyd lub białko łączy się wiązaniem estrowym lub amidowym.
W innym rozwiązaniu R'1 oznacza resztę aminokwasu lub peptydu zawierającą grupę hydroksylową, taką jak seryna, treonina i tyrozyna, albo zawierające je peptydy, albo pochodną wymienionego aminokwasu lub peptydu wybraną z estrów, na przykład estrów alkilowych, i N-zabezpieczonych pochodnych, w których grupa N-zabezpieczająca jest na przykład tert-butoksylem, karbobenzoksylem lub trytylem, a wymieniony aminokwas lub peptyd albo ich pochodna są przyłączone do grupy COO- poprzez grupę hydroksylową.
Przykładem takiej pochodnej aminokwasów jest esier metylowy seryny, ester metylowy N-trytylo-seryny, ester metylowy tyrozyny i ester metylowy N-tert-butoksytyrozyny, a przykładem takiego peptydu jest ester metylowy N-karbobenzoksyseryloseryny, przy czym wszystkie one otrzymywane są w sposób opisany w europejskim opisie patentowym nr EP 0584552. W najkorzystniejszym rozwiązaniu pochodna [M]-BChl jest [Pd]-BChl estryfikowanym estrem metylowym L-seryny.
W innym rozwiązaniu R'1 oznacza resztę ligandu specyficznego dla komórek, wybranego z peptydów i białek, na przykład, lecz nie tylko, peptydów hormonów, na przykład hormo12
188 811 nów stymulujących komórki barwnikowe (melanotropiny), i przeciwciał, na przykład immunoglobulin i przeciwciał specyficznych dla nowotworów.
Pochodne [MJBChl według wynalazku o wzorze I', w którym M jest Zn lub Cu, można otrzymać także przez bezpośrednią metalację odmetalowanej pochodnej BChl, jak opisano dalej w przykładach 1-4.
Niektóre kompleksy bakteriochlorofilów z metalami są bardzo trwałe, a zatem mogą być wykorzystane do dalszych modyfikacji na obrzeżu układu pierścieni pirolowych, co wymaga ostrych warunków, takich jak użycie kwasu octowego albo silnego kwasu mineralnego, takiego jak kwas chlorowodorowy lub siarkowy. Zatem estry, na przykład estry podstawione ewentualnie alkilem lub arylem, można wytwarzać drogą reakcji grup hydroksylowych, na przykład w położeniu 31 lub 132, z odpowiednimi kwasami alifatycznymi lub aromatycznymi, chlorkami kwasowymi lub aminokwasami, natomiast etery w tych samych położeniach można otrzymać drogą reakcji z odpowiednimi alkoholami alifatycznymi lub aromatycznymi. Związki zawierające grupę hydroksylową w położeniu 31, na przykład pochodne 3-hydroksyetylo-BChl, albo w położeniu 132, na przykład pochodne 132-OH-BChl, są dostępne standardowymi sposobami (patrz Struck, A. i wsp., 1992, Bacteriochlorophylls modified at position C-3: Long-range intramolecular with position C-13.2, Biochim. Biophys. Acta, 1101-321-328, i Hinninen, 1991). Naturalnie występujące estry fitylowe i geranylogeranylowe w położeniu 173 można transestryfikować w drodze katalizy kwasowej do innych estrów, na przykład estru etylowego, poprzez reakcję z odpowiednim alkoholem. Inne podstawniki można wprowadzać do makropierścienia drogą reakcji Witta naturalnych grup Co, takich jak 3-acetyl w BChl, albo chemicznie wprowadzonych, takich jak ketoalkohole zestryfikowane do C-173, jak również drogą sprzężenia oksydacyjnego grup OH, tworząc wiązania eterowe w położeniu C-132, albo drogą katalizowanej kwasami estryfikacji grup OH, na przykład w położeniu C-3', C-131, C-132, za pomocą kwasów karboksylowych.
W innym rozwiązaniu modyfikacje na obrzeżu układu czterech pierścieni pirolowych prowadzi się w naturalnej, zawierającej Mg pochodnej BChl przed demetalacją.
Pochodne BChl o wzorach II i III można otrzymać z odpowiednich, naturalnie występujących pochodnych BChl o wzorze I, w sposób opisany uprzednio (Struck, A., 1990, „Chemisch modifizierte Bakteriochlorophylle und -phaeophytine in den Bindungsstellen BA,B und ha,b von photosynthetischen Reaktionszentren aus Rhodobacter spaheroides R26: Pigmentsynthese, PigmentaustauscH und Spektroskopie”, Ph. D. THesis, University of MunicH, Germany).
Związki według wynalazku, w których R'i jest resztą aminokwasu, peptydu lub białka, na przykład przeciwciała, otrzymuje się po transmetalacji według wynalazku drogą transestryfikacji z enzymem chlorofilazą, albo drogą kondensacji katalitycznej odpowiedniego BakteriocHlorofilidu (wolny kwas BCh-173-COOH) z hydroksylowanym aminokwasem, peptydem luB Białkiem, stosując dwucykloheksylokarbodwuimid (DCC) i N-hydroksysukcynimid (NHS) albo 4-dwumetyloaminopirydynę (DMAP), jak opisano w europejskim patencie nr EP 0584552, albo drogą katalizowanych kwasami reakcji nie tolerowanych przez kompleksy Mg, takie jak naturalny BChl.
Nowe pochodne, metalobakteriochlorofilowe według wynalazku przeznaczone są do stosowania jako fotouczulacze, jako środki terapeutyczne i diagnostyczne, do niszczenia komórek, wirusów i bakterii w próbkach i żywych tkankach, jak również są znane w tej dziedzinie do HPD i innych fotouczulaczy. Takie związki są użyteczne na przykład przy uczulaniu komórek neoplastycznych lub innych nienormalnych tkanek do destrukcji przez napromienienie in vivo luB ex vivo korzystając ze światła o odpowiedniej długości fali. Sądzi się, że energia fotoaktywacji jest przenoszona do endogenicznego tlenu przekształcając go w tlen singletowy, który to tlen singletowy uważa się za odpowiedzialny za skutek cytotoksyczny. Fotozaktywowane postacie bakteriochlorofilów fluoryzują, przy czym fluorescencja może pomóc przy zlokalizowaniu nowotworów lub innych miejsc, do których doprowadza się metalowane Bakteriochlorofile.
Przykłady zastosowań, znanych w tej dziedzinie, w których można użyć nowych, metaloBakteriochlorofilowycH pochodnych według wynalazku, obejmują destrukcję tkanki nowotworowej w nowotworach stałych, rozpuszczanie płytek w naczyniach krwionośnych (patrz na
188 811 przykład patent amerykański nr US 45I2762), leczenie stanów miejscowych, takich jak trądzik, grzybica międzypalcowa stóp, brodawki, brodawczak i łuszczyca, oraz obróbka produktów biologicznych (takich jak krew do transfuzji) w ceiu usunięcia środków zakażających.
Pochodne metalobakteriochlorofilowe według wynalazku komponowane są w postaci kompozycji farmaceutycznych do podawania pacjentowi lub stosowane do centrów docelowych in vitro przy zastosowaniu technik znanych w tej dziedzinie, takich jak na przykład te zebrane w Remington's Pharmaceutical Sciences, Mac Publishing Co., Easton, Penna, ostatnie wydanie. Kompozycje można podawać systemowo, zwłaszcza przez zastrzyk, albo można je stosować domiejscowo.
Dla celów diagnostycznych pochodne metalobakteriochlorofilowe można stosować samodzielnie albo mogą być one znaczone radioizotopem lub innym środkiem do wykrywania, znanym w tej dziedzinie.
Ilość podawanej pochodnej metalochlorofilowej zależy od doświadczenia zgromadzonego przy innych porfirynach stosowanych na przykład w PDT i zależy od wyboru pochodnej stosowanej jako składnik czynny, leczonego stanu chorobowego, sposobu podawania, wieku i stanu pacjenta oraz oceny lekarza.
Długość fali światła napromieniającego dobiera się korzystnie tak, aby maksimum absorpcji dostosować do fotouczulacza metalobakteriochlorofilowego. Odpowiednią długość fali dla każdego ze związków można łatwo określić z jego widma absorpcyjnego.
Oprócz zastosowania in vivo pochodne metalobakteriochlorofilowe według wynalazku można stosować przy obróbce materiałów in vitro do niszczenia szkodliwych wirusów lub czynników zakażających, takich jak szkodliwe bakterie. Na przykład krew i plazmę krwi, stosowane do przyszłej transfuzji, można potraktować związkiem według wynalazku i napromieniować w celu sterylizacji.
Przedmiotem wynalazku są także kompozycje farmaceutyczne, zawierające metalowane pochodne bakteriochlorofilowe o wzorach I', II' i III', do terapii dynamicznej i diagnozy charakteru nowotworowego oraz do fotodynamicznego niszczenia komórek, bakterii i wirusów.
Do tych celów kompozycje otrzymuje się i podaje konwencjonalnymi sposobami, tak jak na przykład opisano w amerykańskim patencie nr US 4649I5I, nr 4753958, nr 5256840 i nr 5238940, europejskim zgłoszeniu patentowym nr 0584552 i zgłoszeniu PCT nr WO 90/I2573, wszystkie włączone tu tytułem referencji.
Wynalazek jest zilustrowany poniższymi, nieograniczającymi przykładami.
Przykłady
W przykładach i w tabeli I otrzymane związki wyjściowe i kompleksy metali identyfikuje się następującymi liczbami:
| Ia- | BPhe | Ib | BPhe-132-OH |
| 2a- | [Pd]-BChI | 2b- | [Pd]-BChI-I32-OH |
| 3a- | [Co]-BChl | 3b- | [Co]-BChl-I32-OH |
| 4a- | [Ni]-BChl | 4b- | [Ni]-BChl-I32-OH |
| 5a- | [Cu]-BChl | 5b- | [Cu]-BChl-I32-OH |
| 6a- | [Zn]-BChl | 6b- | [Zn]-BChl-I32-OH |
| 7a- | BChl | 7b- | [BCh]-I32-OH |
| 8a- | [Cd]-BChl | 8b- | [Cd]-BCh!-I32-OH |
| 9a- | [Mn]-BChl | 9b- | [Mnj-BChl-irf-OH |
Materiały i metody (i) Wyodrębnianie BChl. BChl [związek 7a] wyodrębniono z fotosyntetyzujących bakterii, takich jak Rhodobacter (Rb) sphaeroldes lub Rhodospirillum rubrum według Scherza i Parsona, I984 (Scherz, A. i W.W. Parson, I984, Biochim. Biophys. Acta, tom 766, strony 653-55), Strucka i wsp., I992, lub Sveca, I99I (Svec, W.A., I99l, „The distribution and
188 811 extraction of the Chlorophylls”, w: Scheer, 1991, strony 89-102). Oczyszczanie prowadzono w DEAE-Sepharose według Omata i Murata, 1983 (Omata, T. i N. Murata, 1983, „Preparation of Chlorophyll a, Chlorophyll b and Bacteriochlorophyll a by column chromatography with DEAE-Sepharose C1-6B and Sepharose C1-6B”, Plant Cell Physiol., tom -24, strony 1093-1100).
(ii) Otrzymywanie 132-hydroksybakteriochlorofilu a [BChl-132-OH]. BChl-132-OH [związek 7b], związek o wzorze I, w którym R1 oznacza fityl, R2 oznacza COOCH3, R4 oznacza Oh, R4 w położeniu 3 oznacza acetyl, a R4 w położeniu 8 oznacza etyl, otrzymywano drogą hydroksylowania BChl [7a] w położeniu C-132 przez utrzymywanie 7a w metanolu w ciągu 5-7 dni w ciemności, w temperaturze 4°C (Struck, A. i Scheer, H., 1990, „Modified reaction centers from Khodobacter sphaeroides R26.1. Exchange of monomeric bacteriochlorophyll with AAhydroksybacterio-chlorophyll” FEBs Lett. 261, strony 385-388). Alternatywnie stosowano sposób postępowania LiBr według Shabera i wsp., 1984, w którym otrzymuje się mniej produktów ubocznych. Oczyszczanie prowadzono w każdym przypadku na preparatywnych płytkach z żelu krzemionkowego (20x20 cm2) (Silica gel 60 H, Merck) lub kolumnach z toluenem/acetonem (9:1 objętościowo, jako eluentem). Zielonkawo-niebieskie pasmo zawierające związek tytułowy (Rf~0,4) oddzielano mechanicznie, a nieprzereagowany BChl a ekstrahowano z SiO2 za pomocą acetonu.
(iii) Demetalacja BChl i BChl-132-OH. BPhe [związek Ia] i BPhe-132-OH [związek Ib] otrzymywano drogą demetalacji odpowiednio BChl [7a] i BChl-132 [7b] według Rosenbacha-Belkina, 1988 (Rosenbach-Belkin, V., 1988, „Tnę primary reactants in bacterial photosynthesis modelling by in vitro preparation”, Ph. D. Thesis, Weizmann Institute of Science, Israel.), za pomocą niewielkiej ilości kwasu octowego (pigment jest już rozpuszczony). Po demetalacji, która zachodzi natychmiast, usuwa się kwas octowy strumieniem azotu, a BPhe i BPhe-132-OH wydzielono w postaci produktów stałych.
, (iv) Chlorofilaza (Chlaza). Proszek acetonu chlazy otrzymywano z liści drzewa chińskiego Melia azedarach L, jak opisano w patencie europejskim nr EP 0584552.
(v) Hodowla komórek. Komórki czerniaka myszy M2R poddano hodowli w postaci pojedynczych warstw w pożywce F12 Eagle modyfikowanej według Dulbecco, zawierającej 25 mM HEPES, pH 7,4, 10% surowicę płodową bydlęcą, glutaminę 2 mM, penicylinę 0,06 mg/ml oraz streptomycynę 0,1 mg/ml w temperaturze 37°C w wilgotnej atmosferze 8% CO2, jak opisano wcześniej (Gerst, J.E., J. Sole, J.P. Mather i Y. Salomon, 1986, Mol. Celi. Endocrinol., tom 46, strony 137-47).
(vi) Badania fotocytotoksyczności w komórkach. Komórki czerniaka myszy M2R (1x10 5 komórek, studzienkę płytki) poddawano hodowli na szalkach mikrotitracyjnych z 24 studzienkami w ciągu 24 godzin do około 2x105 komórek/studzienkę, przy konfluencji w przybliżeniu 70-80%. Pochodną [M]-BChl rozpuszcza się w pożywce hodowlanej i dysperguje drogą sonikacji. Photosan-3 (dostępny w handlu HPD) rozpuszcza się do stężenia końcowego w pożywce hodowlanej. Pożywkę zastępuje się pożywką bez surowicy, a komórki poddaje się inkubacji w ciemności z pożądanym stężeniem fotouczulaczy. Po dwóch godzinach inkubacji komórki napromienia się w temperaturze pokojowej w ciągu 5 minut od spodu szalki. Pożywkę zastępuje się pożywką zawierającą surowicę, a szalki z hodowlą umieszcza się ponownie w inkubatorze na 24 godziny. Wydajność cytotoksyczną w hodowli komórek oznacza się (i) drogą mikroskopowego badania morfologii komórek, (ii) za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej komórek po potraktowaniu barwnikiem przeżycia (jodek propidium [PID] [jodek 2,7-dwuamino-9-fenylo-10-(dwuietyloaminopropylo)fenatrydyniowy, metiodid], który gromadzi się selektywnie w jądrach uszkodzonych komórek, oraz (iii) wbudowanie [3H]tymidyny, jak będzie opisane niżej. Doświadczenia kontrolne obejmują (1) nietraktowane komórki, utrzymywane w ciemności, (2) nietraktowane komórki, naświetlone oraz (3) komórki potraktowane lekiem, lecz utrzymywane w ciemności.
(vii) Źródło światła. Źródło światła do napromienienia jest domową, 250 W lampą halogenową, skupioną przez 10 cm filtr wodny na podłożu szklanym i wyposażoną w filtr cieczowy (chlorofil a O.D. = 10,00 przy 660 nm). Dawka światła jest we wszystkich przypadkach nastawiona na 45 m W/cm .
(viii) Wbudowanie [3H]tymidyny. Dwadzieścia cztery godziny po PDT, hodowlom komórek poddano pulsowo 1 pCi/ml [3Hjtymidyny w ciągu 2 godzin w temperaturze 37°C. Na188 811 stępnie kultury przemywano dwukrotnie roztworem soli buforowanym fosforanem, traktowano zimnym 7,5% kwasem trichlorooctowym w ciągu 30 minut w temperaturze 4°C i przemywano dwa razy etanolem. Następnie dodano wodorotlenek sodu (IN, 300 ąl/studzienkę) i utrzymywano szalki przez 10 minut w temperaturze 37°C. Próbki po 100 μΐ przenoszono do fiolek scyntylacyjnych, zobojętniano za pomocą 100 μΐ IN HCl i mierzono radioaktywność za pomocą cieczowego licznika scyntylacyjnego w 4 ml (20:8 objętościowo) ksylenowej mieszaniny scyntylatorowej lumax według Chen, L., Y. Mory, A. Zilberstein i M. Revel, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, tom 85, strony 8037-41.
Przykład 1: Otrzymywanie [Zn]-BChl i [Zn]-BChl-ISAOH drogą metalacji bezpośredniej [ZnJBChl [związek 6a] i [Zn]-BChl-132-OH [związek 6b] otrzymywano drogą bezpośredniej metalacji odpowiednio BPhe [la] i BPhe-132-OH [Ib] sposobem octan/kwas octowy lub octan/dwumetyloformamid.
1a. Sposób octan/dwumetyloformamid (DMF) [ZnjBChl i [Zn]-BChl-13“-OH [6 a, 6b] otrzymywano przez ogrzewanie pod chłodnicą zwrotną odpowiednio BPhe i BPhe-13-OH (1a, 1b), (-70 μM) w DMF z 1000-krotnym nadmiarem bezwodnego Zn(OAc)2 w ciągu 60 (75) minut w temperaturze 110°C (ogrzewanie pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 163°C skraca czas reakcji do 5 minut). Reakcję kontrolowano spektroskopowo i doprowadzono do zakończenia. Wydzielenie i oczyszczenie produktów prowadzono jak dla kompleksów Cd 8a, 8b, opisanych dalej (wydajność: -80%).
lb: Sposób octan/kwas octowy [Zn]BChl i [Zn]-BChl-132-OH [6a, 6b] otrzymywano drogą ogrzewania la, lb lub 7a, 7b pod chłodnicą zwrotną (-70 (ilM) w lodowatym kwasie octowym z 250-krotnym nadmiarem bezwodnego Zn(OAc)2 i askorbinianu sodowego 50 mM w ciągu 120 (30) minut w temperaturze 100°C. Następnie odparowano kwas octowy w strumieniu N 2, kompleks Zn ekstrahowano eterem dwuetylowym i oczyszczono na preparatywnej kolumnie ModCol HPLC (250x25,4 mm) wypełnionej Bakerbond Silica NP (wielkość cząstek 10 μm, średnica porów 150). Związek 6 a eluowano izokratycznie (10 ml/min) za pomocą 2-propanolu (5%), metanolu (5%) i n-heksanu (90% objętościowo) z czasem retencji około 17 minut, z wydajnością -75% czystego związku. Związek 6b oczyszczono drogą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym stosując taką samą mieszaninę rozpuszczalników, jak w przypadku HPLC, uzyskując wydajność 90-95%.
Przykład 2: Otrzymywanie [Zn]-BChl-3-winylu i [Zn]-BChl-3-winylo-132-OH drogą metalacji bezpośredniej
Metalację sposobem octan/DMF, jak w przykładzie la wyżej, można rozciągnąć na inne pochodne BPhe, jeżeli warunki reakcji zmieniają się nieznacznie. Na przykład instalacja 3-winylo-BPhe lub 3-winyio-132-hydroksy-BPhe za pomocą Zn(OAc)2 biegnie w identycznych warunkach w ciągu -40 minut w temperaturze 120°C.
Przykład 3: Otrzymywanie [Zn]-BChl-132-dekarbometoksy drogą metalacji bezpośredniej
Kompleksy cynkowe 132-dekarbometoksy-BPhe (lub ^-dekarbometoksy-BChl) otrzymuje się w takich samych warunkach, jak opisano wyżej w przykładzie lb. Czas reakcji wynosi 30 minut, a wydzielanie i oczyszczanie są identyczne jak dla 6b.
Przykład 4: Otrzymywanie [Cu]-BChl, [Cu]-BChl-132-OH i [Cu]-BChl-132dekarbometoksy drogą metalacji bezpośredniej [Cu]-BChl (5a) otrzymywano przez ogrzewanie pod chłodnicą zwrotną 1a lub 7a (~70 (iM) w lodowatym kwasie octowym z 250-krotnym nadmiarem bezwodnego CU2O i askorbinianem sodowym (50 mM) w ciągu 15 minut w temperaturze 100°C. [Cuj-iBChi-i/r-OH (5b) otrzymywano w temperaturze otoczenia przez zmieszanie lb lub 7b (-70 pM) w lodowatym kwasie octowym z 250-krotnym nadmiarem bezwodnego CU2O i askorbinianem sodowym 50 mM. Pochodne Cu-132-dekarbometoksy-BPhe (lub ^-dekarbometoksy-BChl) otrzymywano w identycznych warunkach, jak opisano dla 5b. Pomimo użycia CU2O, kompleksy Cu tworzyły się we wszystkich przypadkach dzięki obecności resztkowego tlenu lub na skutek dysproporcjonowania. Wydzielanie i oczyszczanie prowadzono w sposób opisany w przykładzie lb wyżej dla kompleksów Zn otrzymywanych
188 811 sposobem z lodowatym kwasem octowym, uzyskując wydajność odpowiednio -75% (5a), -90% (5b) i -90% (pochodna Cu 132-dekarbometoksy-BChl).
Przykład 5: Otrzymywanie [Cd]-BChl drogą bezpośredniej metalacji BPhe [Cd]-BChl otrzymywano przez ogrzewanie pod chłodnicą zwrotną około (-70 pM) BPhe w dwumetyloformamidzie z 300-krotnym nadmiarem bezwodnego Cd(OAc)2 w ciągu 40 minut w temperaturze 130°C. Reakcję kontrolowano spektroskopowo i prowadzono do jej zakończenia. Surowe produkty wydzielone przez rozdzielenie pomiędzy eter dwuetylowy (DE) i wodę nasyconą NaHCO 3 można oczyścić na żelu krzemionkowym w warunkach redukcyjnych (dodany 1,5% askorbinian sodowy) za pomocą mieszaniny toluen/aceton/trój etyloamina (88/10/2 objętościowo) jako eluenta. Reakcję i obróbkę prowadzi się z dokładnym zabezpieczeniem grupy Ar. Niebieskie pasmo czystego [Cd]-BChl (Rf-0,7) oddziela się mechanicznie i ekstrahuje eterem dwuetylowym/wodą, jak opisano wyżej dla produktu surowego. Czysty produkt stosowano we wszystkich procedurach transmetalacji, opisanych niżej. Jego właściwości spektralne (związek 8a) przedstawiono w tabeli 1.
Przykład 6: Otrzymywanie kompleksów Pd, Co, Ni, Cu, Zn, Cd i Mn związków [M]-BChl i [M]-BChl-132-OH drogą transmetalacji [Cd]-BChl i [Cd]-BChl-132-OH
Celem otrzymania pochodnej [Pd]-BChl (2a) [Cd]-BChl (8a) z przykładu 5 rozpuszczono w suchym acetonie (A770 - cm1, -50 pM) z ostrym zabezpieczeniem grupy Ar celem zapobieżenia niekontrolowanemu utlenieniu w położeniu C-7 i C-8. Po około 15 minutach dodano PdCl2 (Merck, p. a. roztwór -30 mg'100 ml) i mieszaninę reakcyjną ogrzewano pod chłodnicą zwrotną w ciągu 40 minut. Reakcję kontrolowano spektroskopowo (przesunięcia pasma Qx od —590 do —530 nm po utworzeniu się produktu). W zasadzie czysty produkt wydzielano przez ekstrakcję eterem etylowym/wodą, jak opisano w przykładzie 5 dla [Cd]-BChl. Jeżeli jest to konieczne, to dalsze oczyszczanie prowadzi się na płytkach pokrytych żelem krzemionkowym, jak opisano dla [Cd]-BChl. Właściwości spektralne Pd-BChl (2a) przedstawiono w tabeli 1.
W podobny sposób [Pd]BChl-132-OH (2b) otrzymywano > przez transmetalację [Cd]-BChl-132-OH, a kompleksy metali Co, Ni, Cu, Zn i Mn z BChl (związki 3a, 4a, 5a, 6 a, 9a) i z BChl-132-OH (związki 3b, 4b, 5b, 6 b, 9b) otrzymywano drogą reakcji odpowiednio [Cd]-BChl i BChl-132-OH z odpowiednimi chlorkami metali. Bezwodne chlorki metali dodawano przy 10-krotnym nadmiarze molowym (Cu: 5a, 5b, Zb: 6 a, 6b), 100-krotnym nadmiarze molowym (Co: 3a, 3b), albo do nasycenia jak w przypadku Pd (Ni: 3a, 3b, Mn: 9a, 9b). Reakcje zachodziły praktycznie natychmiast w temperaturze 25°C, z wyjątkiem Pd i Ni (około 30-40 minut pod chłodnicą zwrotną) i były kontrolowane spektroskopowo. Niewielkie ilości produktów utlenionych w położeniach C7-C8 (Xmax. ~680 nm) tworzyły się na skutek obecności resztkowego tlenu i były tłumione przez dodawanie askorbinianu sodowego (nasyconego). Wydzielanie i oczyszczanie produktów prowadzono jak dla [Cd]-BChl w przykładzie 5 wyżej. Produkty charakteryzowano za pomocą absorpcji, fluorescencji, 'H-NMR i FAB-MS, jak przedstawiono w tabeli 1. Widma absorpcyjne UV/VIS rejestrowano spektrofotometrem Perkin Elmer Lambda 2, 5 intensywność emisji fluorescencji na aparacie Spex Fluorog 221 wyposażonym w 450 W lampę Xenon i znormalizowanym na czułość powielacza fotoelektronowego i energię wzbudzenia. Maksymalne gęstości optyczne dla pomiarów fluorescencyjnych wynosiły < 0,1 cm-1, a wzbudzenie następowało do pasma absorpcyjnego Qx związku la, lb do 9a, 9b. Widma dichroizmu kołowego (CD) rejestrowano na aparacie Dichrograph CD 6 (Jobin Yvon). FAB-MS rejestrowano na spektrometrze masowym CH7a/SS (Varian MAT) lub Finigan MAT 9000 z wyrzutnią Cs, gdzie ciekłą jonizację powierzchniową prowadzono w osnowie alkoholu m-hydroksybenzylowego. Widma Ή-NMR rejestrowano na spektrometrze 360 MHz-Bruker, model AM360. Standardowym rozpuszczalnikiem była pirydyna ds przesunięcia chemiczne były mierzone w ppm w odniesieniu do czterometylosilanu jako wzorca wewnętrznego. Współczynniki ekstynkcji oznaczano za pomocą atomowych widm absorpcyjnych iCP/ICPMS (AAS) centralnych atomów metali. Przed spalaniem rozpuszczalnik w próbkach 1a, 1b do 9a, 9b z kwantyfikowanymi gęstościami optycznymi najpierw odparowywano w probówkach ze szkła kwarcowego, a następnie próbki traktowano stężonym kwasem azotowym celem umożliwienia całkowitego wydzielenia się metalu.
188 811
Tabela I. Właściwości spektralne 1a, 1b-9a, 9ba
| Związek | Absorpcjab λ,ΜΧ [nm] (ε [10’3M'’ cm | Ί) | Emisjac | XrMrid | FAB-MS | ||
| Jon | By | Bx | Qx | Qy | |||
| 1a(+)° | 356(11,3) | 383(62,7) | 525(28,3) | 750(67,5) | 759 | ||
| 362(92,3) | 389(49,3) | 532 | 754(56,4) | ||||
| 2a(+) | 331(18,1) | 383(15,4) | 529(6,0) | 753(38,1) | 764(755) | [3,44] | 992(106Pd) |
| 334(14,0) | 388 | 535(5,6) | 763(25,5) | ||||
| 3a(-) | 336(34,8) | 388(27,1) | 531(8,9) | 766(63,7) | [3,21]9 | 945(59Co) | |
| 355(40,6) | 386 | 562(10,2) | 767(56,3) | -f | |||
| 4a(-)'* | 335(45,7) | 390(30,4) | 531(11,4) | 779(63,0) | -f | [3,18] | 944(58Ni) |
| 366(49,2) | 391 | 598(16,1) | 771(71,8) | ||||
| 5a(-) | 342(53,3) | 390(42,9) | 538(14,5) | 771(64,1) | -f | [3,06] | 949(63Cu) |
| 358(44,7) | 395 | 573 | 780(56,1) | ||||
| 6a(+) | 353(58,9) | 389(39,7) | 558(18,0) | 762(67,7) | 782(772) | [2,48] | 950(6*Zn) |
| 523(64,4) | 390 | 579(16,5) | 773(57,1) | ||||
| 7a(+) | 357(73,3) | 390(48,0) | 573(20,8) | 771(91,0) | 788(778) | 1,82 | 910(24Mg) |
| 574(67 | nie rozdzielone | 612(16,9) | 781(76,0) | ||||
| 8a(i) | 359(80 | 389(53,5) | 575(22,3) | 761(88,3) | 778(774) | 1,78 | 1000(1 |4Cd) |
| 386(65,7) | 391(44,1) | 593(19,4) | 773(69,6) | ||||
| 9a(-) | 362(71,8) | 392(43,0) | 587(18,0) | 770(76,7) | 1,89 | 941 (55Mn) | |
| 373(64,4) | nie rozdzielone | 601 | 780(66,0) | -f |
a Widma absorpcyjne i fluorescencyjne pigmentów 132-OH (1b-9b) nakładały się na widma odnośnych związków macierzystych 132-H, z wyjątkiem systematycznego przesunięcia do błękitu absorpcji Qx (zakres 530600 nm) o około 5 nm. Widma masowe były zawsze przesunięte o 16 jednostek masy do wartości wyższych. Wszystkie długości fal podane są w [nm], b Współczynniki absorpcji i ekstynkcji (za pomocą AAS) przy 298 K w DE (linia górna) i pirydynie (linia niższa, kursywa).
c Fluorescencja w DE/eter naftowy/izopropanol (5:5:2, objętościowo) przy 298K (77K). d Elektroujemność (χΜ) i skuteczne promienie jonowe (rM w 10'14 m) dla koordynacji sześciokrotnej (dane w nawiasach kwadratowych wykorzystują promienie do kordynacji czterokrotnej) z Buchlera, J.W., 1975, „Static coordination chemistry of metalloporphyrins”, w Porphyr-ins and Metalloporphyrins, Smith, K.M., wydawca, strony 157-232, Elsevier, Nowy Jork.
c 'H-NMR w pirydynie-d5: (+): ostre sygnały, (-):
rozciągnięte poszerzenie linii na skutek obecności paramagnetycznego centralnego atomu metalu. f Nie fluorescencyjny (Spex fluorolog 221). h Ostre sygnały 'H-NMR w C2H3CN.
Przykład 7. Transestryfikacja [Pd]-BChl i zmodyfikowanych na obrzeżu BChł-ów do estru 17 -etylowego
Celem otrzymania estru etylowego Pd-bakterio-feo-forbidu a [Pd]-BChl rozpuszczono w chloroformie (1 mg/ml) i dodano taką samą ilość etanolu zawierającego 5% objętościowo H2SO4. Następnie mieszaninę reakcyjną ogrzewano pod chłodnicą zwrotną w ciągu 90 minut w atmosferze Ar. Z kolei [Pd]-BPhe (100 mg) poddano transestryfikacji w 50 ml kwasu siarkowego w etanolu/chloroformie (1:1 objętościowo) przez ogrzewanie pod chłodnicą zwrotną w atmosferze argonu w ciągu 2,5 godziny. Następnie mieszaninę reakcyjną rozcieńczono eterem, przemyto kilka razy 10 % wodnym roztworem wodorowęglanu sodowego, fazę organiczną wysuszono i odparowano. Drogą preparatywnej chromatografii TLC pod azotem na żelu krzemionkowym, eluując za pomocą 8% acetonu w toluenie, ustalono, że pasmo wolniej poruszające się z dwóch uzyskanych pasm odpowiada związkowi tytułowemu (Rf = 0,75). VIS w każdym przypadku: dmax [nm] 29 (0,45), 385 (0,39), 527 (0,13), 045 (0,1). 'H-NMR [ppm]: 9,25, 8,80, 8,70 (każdy s, 1H, 5-, 10, 20-H), 4,55 (q, 1H, 18-H), 4,45 (d, 1H,
188 811
17-H), 4,10 (q, 2H, 8-CH2CH3), 3,85 (s, 3H, L32-CO2C^3a 3,7 (d, 1H, 7-H), 3,6 (q, 3H, 173-CH2CH3), 3,50, 3,32 (każdy s, 3H, 2-, 12-CH3), 3,30 (m, 1H, 8-H), 3,06 (s, 3H, 3-COCH3), 3,04 (d, 3H, 7-CH3), 2,65 (2H, 172-H2), 2,45 (2H, 172-H2), 1,75 (d, 3H, 18-CH3), 1,65 (i, 3H, 8-CH2CH3), 1,38 (t, 3H, 173-CH?CH<), 0,10 i 1,90 (s, 2H, 2NH). FAB-MS obliczone dla Pd-CjjHjGNjOft: 742,38 (M+1), znalezione: 742,2 (M+l).
Etylowe i inne esiry innych kompleksów metali odpornych na kwasy, takich jak kompleksy z Ni, Cu, Zn pochodnych BChl można otrzymać w podobny sposób.
Przykład 8: Otrzymywanie estru metylowego [Pd]-BChl-173-serylu, [Pd]-BChl-173-L-Ser-OMe ([Pd]-BChl-Ser)
TransesIryfikację enzymatyczną [Pd]-BChl otrzymanego w przykładzie 6 wyżej za pomocą chlorowodorku estru metylowego L-seryny (Sigma) prowadzono z proszkiem acetonowym chlorofilazy w sposób opisany w patencie europejskim nr DP 0584552, otrzymując związek tytułowy, oznaczony tu jako [Pd]-BChl-Ser, związek o wzorze I, w którym Rj oznacza resztę estru metylowego serylu połączoną z grupą COO- poprzez grupę hydroksylową seryny.
Drogą takiego samego postępowania Iransestryfikacji enzymatycznej można otrzymać odpowiednie estry metylowe 173-serylu dla innych kompleksów metali, [M]-BChl, według wynalazku, jak również estry [M]-BChl-172 z innymi pochodnymi seryny, na przykład ester metylowy N-Irytylo-L-seryny i ester metylowy N-karbobenzoksyseryloseryny, albo z pochodnymi tyrozyny, na przykład ester metylowy N-Ierl-buloksykarbonylolyrozyny, jak opisano w europejskim patencie nr DP 0584552.
Przykład 9: Fololoksyczność in vitro [Pd]-BCh-Ser
9a. Bakterie i wirusy
Próba fototoksycznosci obejmuje Irzy oddzielne etapy: inkubację roztworu bakteryjnego z uczulaczem, naświetlenie i stwierdzenie fototoksycznosci.
Zawiesiny (około 1x107 bakIerii/200 fil świeżych S. aureus w roztworze soli buforowanym fosforanem (PBS) poddawano inkubacji z podanymi stężeniami uczulaczy [Pd]-BChl-Ser lub BChl-Ser w ciągu 1 godziny w ciemności, a następnie przemywano do usunięcia pigmentu przez wirowanie i ponowne zawieszanie w PBS. Przemyte zawiesiny bakteryjne naświetlano w ciągu 5 minut stosując jako źródło światła własną lampę ksenonową z emisją pionową 1000 luksów/cm2 na poziomie docelowym, stosując filtr cieczowy (chlorofil a O.D. = 10,00 przy, 660 nm). Uszkodzenie folodynamiczne stwierdzano przez oznaczanie przeżycia bakterii: próbki napromienionej zawiesiny bakteryjnej (30 fil) poddawano inkubacji w 3 ml infuzyjnej, ciekłej pożywki hodowlanej bakteryjnej mózgowo-sercowej (BHI) w ciągu 2 godzin w temperaturze 37°C ze wstrząsaniem. Gęstość bakterii mierzono przez zmętnienie przy λ=660 nm.
Każde doświadczenie obejmowało (a) jedną grupę doświadczalną (bakterie poddawane pełnemu potraktowaniu) i Irzy grupy kontrolne: (b) bakterie napromienione bez uczulacza, (c) bakterie nienapromienione, potraktowane uczulaczem i (d) bakterie nietraktowane (100% przeżycia).
Jak przedstawiono na fig. 1, skutki fotoloksyczności [Pd]-BChl-Ser są zależne od podawanych stężeń uczulacza (LD50 około 0,6 μ1) i nie stwierdzono toksyczności w ciemności. Podobne wyniki uzyskano z BChl-Ser, testowanym dla porównania w takich samych warunkach, z nieznaczną, lecz nieznacznie niższą LD50.
Próbę powtórzono z B. subtilis i Propionobacterium acnes oraz Herpes simplex l (HSV-1) zarówno w zawiesinie, jak i w zainfekowanych komórkach, i otrzymano podobne wyniki fololoksyczności (nie pokazane).
9b. Komórki czerniaka
Próbę prowadzono w sposób opisany wyżej w Materiałach i metodach, sekcje (iv) i (vii). Jednowarstwowe komórki M2R poddawano inkubacji przy wskazanych stęźeniacc! [Pd]-BChl-Ser w ciągu 1 godziny, a następnie poddawano traktowaniu fotodynamicznemu, jak opisano wyżej. Folotoksyczność stwierdzono przez wbudowanie 3H-tymidyny i procent przeżycia traktowanych komórek, odpowiednie kontrole przedstawiono na fig. 2.
188 811
Z fig. 2 widać, że działanie fototoksyczne jest zależne od dawki pod względem stężenia [Pd]-BChl-Ser z przybliżoną dawką LD50 wynoszącą 0,05 gM. Działanie toksyczne nie Było widoczne w próBkch wykonywanych w ciemności.
188 811
Przeżycie bakterii (% kontroli) Przeżycie komórek (% kontroli)
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 50 egz. Cena 4,00 zł.
Claims (16)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób wytwarzania syntetycznej metalowanej pochodnej bakteriochlorofilu o wzorze: [M]-BChl w którym pochodna [M]-BChl jest wybrana z grupy obejmującej związek o wzorze I, II lub III:O188 811 w którym Ri oznacza resztę węglowodorową Ci-C25;R2 oznacza H, OH lub COOR5, w którym R5 oznacza C1-C12 alkilo lub C3-C12 cykloalkilo;R3 oznacza H, OH lub C1-C12 alkilo lub alkoksy;R4 każdy jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej winylo, etylo, acetylo, 1-hydroksyetylo i ich etery i estry orazM oznacza metal o promieniu jonu mniejszym niż promień Cd (rs95 pm), gdzie metal M jest wybrany z grupy obejmującej dwuwartościowy metal wybrany z grupy obejmującej Pd, Co, Ni i Mn, trójwartościowy metal wybrany z grupy obejmującej Fe, Mn i Cr, i czterowartościowy metal wybrany z grupy obejmującej Sn i Pt;z wykluczeniem związków o wzorze I, w którym R2 oznacza COOCH3, R3 oznacza H, R4 w pozycji 3 oznacza acetylo i w pozycji 8 oznacza etylo, R] oznacza fitylo lub etylo i M jest Pd; znamienny tym, że:(i) prowadzi się reakcję pochodnej bakteriofeofityny odpowiadającej BChl, rozpuszczonej w dimetyloformamidzie, z dehydratowanym octanem Cd w atmosferze Ar i odzyskuje się kompleks [Cd]-BChl z mieszaniny reakcyjnej drogą chromatografii w warunkach redukujących;(ii) prowadzi się reakcję kompleksu [Cd]-BChl wytworzonego w etapie (i) rozpuszczonego w suchym acetonie z odpowiednią dehydratowaną solą metalu M wybraną z grupy obejmującej chlorek, octan i acetylo-acetonian metalu M, w atmosferze Ar oraz (iii) odzyskuje się z mieszaniny reakcyjnej żądaną pochodną metalowaną [MJ-BChl.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że pochodną [M]-BChl o wzorze I, II lub III poddaje się dalszej reakcji ze związkiem o wzorze R'i-OH w warunkach transesteryfikacji w położeniu 173, otrzymując związek o wzorze Γ, ΙΓ lub IIP:R'.OOc1'Rł HCOCOORR'.OOC188 811 w którym R'i jest wybrany z grupy obejmującej:(i) resztę węglowodorową C1-C25 podstawioną ewentualnie przez chlorowiec, OH, okso, CHO, COOH, lub NH2, lub taką resztę przerwaną jednym lub więcej niż jednym heteroatomem wybranym z grupy obejmującej O, S i NH, albo przez pierścień fenylowy;(ii) resztę aminokwasu lub peptydu zawierającą grupę hydroksylową lub ich pochodną wybraną z grupy obejmującej estry alkilowe i pochodne N-zabezpieczone, w których ta grupa zabezpieczająca N jest tert-butoksy, karbobenzoksy lub tritylo oraz hydroksylowany aminokwas lub jego pochodna jest połączona z resztą COO- przez grupę hydroksylową;(iii) resztę peptydu jak zdefiniowano w (ii) połączoną z resztą COO- przez resztę węglowodorową C1-C25 ewentualnie podstawioną przez chlorowiec, OH, okso, CHO, COOH lub NH2, lub taką resztę przerwaną jednym lub więcej heteroatomami wybranymi z grupy obejmującej O, S i NH, lub przez pierścień fenylowy, również podstawioną przez końcową grupę funkcyjną wybraną z grupy obejmującej OH, COOH, lub NH2; i (iv) resztę specyficznego dla komórki ligandu wybranego z grupy obejmującej peptyd i białko bezpośrednio połączone z resztą COO- lub poprzez resztę węglowodorową C1-C25 ewentualnie podstawioną przez chlorowiec, OH, okso, CHO, COOH lub NH2, lub przerwaną jednym lub więcej heteroatomów wybranych z grupy obejmującej O, S i NH, lub przez pierścień fenylowy, również podstawioną przez końcową grupę funkcyjną wybraną z grupy obejmującej OH, COOH, lub NH2;R2 oznacza H, OH lub COOR5, w którym R5 oznacza C1-C12 alkilo lub C3-C12 cykloalkilo;R3 oznacza H, OH lub Ci-Ci 2 alkilo lub alkoksy;R4 każdy jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej winylo, etylo, acetylo, 1-hydroksyetylo oraz etery i estry;i M oznacza metal o promieniu jonu mniejszym niż Cd (rs 95 pm), gdzie metal M jest wybrany z grupy obejmującej dwuwartościowy metal wybrany z grupy obejmującej Pd, Co, Ni i Mn, trójwartościowy metal wybrany z grupy obejmującej Fe, Mn i Cr, i czterowartościowy metal wybrany z grupy obejmującej Sn i Pt;z wykluczeniem związków o wzorze I', w którym R2 oznacza COOCH3, R3 oznacza H, R4 w pozycji 3 oznacza acetylo i w pozycji 8 oznacza etylo, R'i oznacza fitylo lub etylo i M oznacza Pd.
- 3. Sposób według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że metal M jest Pd, Ni, Co lub Mn, i BChl jest resztą pochodnej bakteriochlorofilu o wzorze I, w którym Ri oznacza fitylo lub geranylgeranylo, R2 oznacza COOCH;,, R3 oznacza H lub OH, R4 w pozycji 3 oznacza acetylo i w pozycji 8 oznacza etylo, lecz inny niż związek w którym M jest Pd, R'i oznacza fitylo, R2 oznacza COOCH3, R3 oznacza H, R4 w pozycji 3 oznacza acetylo i w pozycji 8 oznacza etylo.
- 4. Sposób według zastrz. 3, znamienny tym, że sól metalu M stosowana w etapie (ii) jest chlorkiem metalu.
- 5. Sposób według zastrz. 1 albo 2, albo 4, znamienny tym, że etapy (i) i (ii) łączy się w jeden pojedynczy etap i pochodną bakteriofeofityny poddaje się reakcji z nadmiarem odpowiedniej dehydratowanej soli metalu M, w obecności katalitycznych ilości dehydratowanego octanu Cd w dimetyloformamidzie lub acetonie.188 811
- 6. Metalowana pochodna bakteriochlorofilu o wzorze I', II' lub III' jak zdefiniowano w zastrz. 2, z wykluczeniem związków o wzorze I', w którym R2 oznacza COOCHL, R3 oznacza H, R4 w pozycji 3 oznacza acetylo i w pozycji 8 oznacza etylo, R' 1 oznacza fitylo lub etylo i M jest Pd.
- 7. Metalowana pochodna bakteriochlorofilu według zastrz. 6 o wzorze I', w którym R'1 oznacza fitylo lub geranylgeranylo, R2 oznacza COOCH L, R3 oznacza H, R4 w pozycji 3 oznacza acetylo i w pozycji 8 oznacza etylo, i M oznacza Co, Ni lub Mn.
- 8. Metalowana pochodna bakteriochlorofilu według zastrz. 6 o wzorze I', w którym R'1 oznacza fitylo lub geranylgeranylo, R2 oznacza COOCH3, R3 oznacza OH, R4 w pozycji 3 oznacza acetylo i w pozycji 8 oznacza etylo, i M oznacza Pd, Co, Ni lub Mn.
- 9. Metalowana pochodna bakteriochlorofilu według zastrz. 6 o wzorze I', w którym R'1 oznacza etylo, R2 oznacza COOCH3, R3 oznacza H, R4 w pozycji 3 oznacza acetylo i w pozycji 8 oznacza etylo, i M oznacza Ni.
- 10. Metalowana pochodna bakteriochlorofilu według zastrz. 6 o wzorze I', w którym R'1 oznacza ester metylowy serylu, R2 oznacza COOCH 3, R3 oznacza H, R4 w pozycji 3 oznacza acetylo i w pozycji 8 oznacza etylo, i M oznacza Pd.
- 11. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że zawiera metalowany bakteriochlorofil o wzorze I', II' lub III' jak zdefiniowano w zastrz. 6 i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik.
- 12. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 11, znamienna tym, że metalowany bakteriochlorofil jest związkiem określonym w zastrz. 10.
- 13. Zastosowanie metalowanego bakteriochlorofilu o wzorze I', II' lub III' jak zdefiniowano w zastrz, 6 do wytwarzania kompozycji farmaceutycznej do terapii fotodynamicznej,
- 14. Zastosowanie metalowanego bakteriochlorofilu o wzorze I', II' lub III' jak zdefiniowano w zastrz. 6 do wytwarzania kompozycji farmaceutycznej do diagnozy nowotworów
- 15. Zastosowanie metalowanego bakteriochlorofilu o wzorze I', II' lub III'jak zdefiniowano w zastrz. 6 do wytwarzania kompozycji farmaceutycznej do niszczenia komórek lub czynników infekcyjnych obejmujących bakterie i wirusy.
- 16. Zastosowanie według zastrz. 15, znamienne tym, że kompozycja farmaceutyczna jest stosowana do niszczenia czynników infekcyjnych w produktach biologicznych.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IL11612695A IL116126A0 (en) | 1995-11-24 | 1995-11-24 | Process for the preparation of bacteriochlorophyllis some novel compounds of this type and pharmaceutical compositions comprising them |
| PCT/IL1996/000161 WO1997019081A1 (en) | 1995-11-24 | 1996-11-24 | Synthetic metal-substituted bacteriochlorophyll derivatives and use thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL326745A1 PL326745A1 (en) | 1998-10-26 |
| PL188811B1 true PL188811B1 (pl) | 2005-04-29 |
Family
ID=11068225
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL96326745A PL188811B1 (pl) | 1995-11-24 | 1996-11-24 | Metalowane syntetyczne pochodne bakteriochlorofilu, sposób ich wytwarzania, kompozycja farmaceutyczna i jej zastosowanie |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6333319B1 (pl) |
| EP (1) | EP0863903B1 (pl) |
| JP (1) | JP2000500763A (pl) |
| CN (1) | CN1085211C (pl) |
| AT (1) | ATE365741T1 (pl) |
| AU (1) | AU718961B2 (pl) |
| BR (1) | BR9611452A (pl) |
| DE (1) | DE69637149T2 (pl) |
| DK (1) | DK0863903T3 (pl) |
| ES (1) | ES2288757T3 (pl) |
| HU (1) | HU223379B1 (pl) |
| IL (1) | IL116126A0 (pl) |
| MX (1) | MX9804143A (pl) |
| NO (1) | NO323478B1 (pl) |
| PL (1) | PL188811B1 (pl) |
| PT (1) | PT863903E (pl) |
| RU (1) | RU2193038C2 (pl) |
| WO (1) | WO1997019081A1 (pl) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6413436B1 (en) * | 1999-01-27 | 2002-07-02 | Semitool, Inc. | Selective treatment of the surface of a microelectronic workpiece |
| JP4796227B2 (ja) | 1998-12-09 | 2011-10-19 | イエダ・リサーチ・アンド・デベロツプメント・カンパニー・リミテツド | パラジウム置換バクテリオクロロフィル誘導体およびその用途 |
| US7045117B2 (en) * | 1999-12-01 | 2006-05-16 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Method for tumor diagnosis comprising administering of palladium-substituted bacteriochlorophyll derivatives |
| IL133253A0 (en) * | 1999-12-01 | 2001-04-30 | Yeda Res & Dev | Chlorophyll and bacteriochlorophyll esters, their preparation and pharmaceutical compositions comprising them |
| EP1318807A4 (en) * | 2000-08-11 | 2008-02-20 | Ceramoptec Gmbh | LIGHT-SENSITIVE OINTMENT |
| RU2183956C1 (ru) * | 2001-03-30 | 2002-06-27 | Общество с ограниченной ответственностью "РАДА-ФАРМА" | Фотосенсибилизатор и способ его получения |
| EP1277470A1 (fr) * | 2001-07-17 | 2003-01-22 | Steba Biotech N.V. | Formulation galénique injectable pour utilisation dans un diagnostic ou une thérapie photodynamique et son procédé de préparation |
| IL148921A0 (en) * | 2002-03-26 | 2002-09-12 | Peptor Ltd | Photo active backbone cyclized somatostatin analogs for optical imaging and photodynamic therapy |
| JP2005524461A (ja) | 2002-05-08 | 2005-08-18 | イエダ リサーチ アンド デベロップメント カンパニー リミテッド | 増感オンラインｂｏｌｄ−ｍｒｉイメージング法 |
| CN2595398Y (zh) | 2002-09-25 | 2003-12-31 | 王健 | 动态加静态磁脉冲理疗仪 |
| IL152900A0 (en) * | 2002-11-17 | 2003-06-24 | Yeda Res & Dev | Water-soluble bacteriochlorophyll derivatives and their pharmaceutical uses |
| CA2437638A1 (en) | 2003-08-20 | 2005-02-20 | John Robert North | Photodynamic therapy |
| CA2457214A1 (en) | 2004-02-06 | 2005-08-06 | Qlt Inc. | Photodynamic therapy for the treatment of acne |
| MXPA06014326A (es) * | 2004-06-07 | 2007-02-19 | Yeda Res & Dev | Derivados de bacterioclorofila cationica y sus usos. |
| EP1755676B1 (en) | 2004-06-09 | 2012-11-28 | QLT, Inc. | Photodynamic therapy for the treatment of hyperactive sebaceous gland disorders using topically applied verteporfin and/or lemuteporfin |
| WO2008018063A2 (en) * | 2006-08-07 | 2008-02-14 | Kodesh S.A | Tetraarylporphine derivatives and uses thereof |
| RU2450018C2 (ru) * | 2006-08-23 | 2012-05-10 | Йеда Рисерч Энд Диверлопмент Ко. Лтд | Конъюгаты rgd-пептидов и фотосенсибилизаторов порфирина или (бактерио)хлорофилла и их применение |
| EP2155691B1 (en) * | 2007-02-23 | 2016-01-13 | Yeda Research and Development Co. Ltd. | Antibodies and pharmaceutical compositions containing same useful for inhibiting activity of metalloproteins |
| US20090036952A1 (en) | 2007-07-30 | 2009-02-05 | National Yang-Ming University | Induction driven light module and use thereof |
| EP2244787A1 (en) * | 2008-01-28 | 2010-11-03 | Yeda Research And Development Company Ltd. | Endoscopic imaging photodynamic therapy system and methods of use |
| DK2257309T3 (da) | 2008-02-27 | 2020-01-20 | Yeda Res And Development Company Ltd | Rgd-(bakterie)chlorophyl-konjugater til anvendelse ved diagnose af tumorer, der omfatter nekrotiske domæner |
| RU2415868C1 (ru) | 2009-09-10 | 2011-04-10 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез" | Производные гемина, обладающие антимикробной активностью, или их фармацевтически приемлемые соли, способ получения, фармкомпозиция и применение |
| CN102584837A (zh) * | 2012-01-18 | 2012-07-18 | 河北联合大学 | 天然叶绿素铁铬盐及制备方法 |
| CN103405769A (zh) * | 2013-03-07 | 2013-11-27 | 北京亿仁赛博医疗科技研发中心有限公司 | 光敏剂在制备治疗疾病的病毒灭活药物中的应用 |
| BR112015022454B1 (pt) | 2013-03-11 | 2021-09-08 | Tookad Ip Sarl | Método de fermentação em batelada alimentada para a produção de bacterioclorofila a a partir de rhodovulum sulfidophilum |
| CN109679110B (zh) * | 2018-12-25 | 2020-10-09 | 北京科技大学 | 一种基于菌绿素的纳米金属-有机框架光敏剂及制备方法 |
| CN114005684B (zh) * | 2021-11-05 | 2023-05-05 | 吉林大学 | 不饱和叶绿素的电化学聚合薄膜及其在超级电容器上的应用 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5171741A (en) * | 1989-04-21 | 1992-12-15 | Health Research, Inc. | Bacteriochlorophyll-a derivatives useful in photodynamic therapy |
| DE4121876A1 (de) * | 1991-07-02 | 1993-01-14 | Scheer Hugo | Modifizierte bakteriochlorophylle, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| IL102645A (en) | 1992-07-26 | 1998-02-22 | Yeda Res & Dev | Chlorophyll and bacteriochlorophyll derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions comprising them |
| US5591847A (en) * | 1994-05-23 | 1997-01-07 | Health Research, Inc. | Long wavelength absorbing photosensitizers related to purpurin-18, bacteriopurpurin-18 and related compounds with imide linkages |
-
1995
- 1995-11-24 IL IL11612695A patent/IL116126A0/xx unknown
-
1996
- 1996-11-24 JP JP9519568A patent/JP2000500763A/ja not_active Ceased
- 1996-11-24 WO PCT/IL1996/000161 patent/WO1997019081A1/en not_active Ceased
- 1996-11-24 DE DE69637149T patent/DE69637149T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1996-11-24 ES ES96938445T patent/ES2288757T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-11-24 RU RU98111943/04A patent/RU2193038C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1996-11-24 US US09/077,208 patent/US6333319B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-11-24 AU AU75857/96A patent/AU718961B2/en not_active Ceased
- 1996-11-24 PL PL96326745A patent/PL188811B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1996-11-24 CN CN96199752A patent/CN1085211C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1996-11-24 HU HU9903582A patent/HU223379B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1996-11-24 BR BR9611452A patent/BR9611452A/pt not_active Application Discontinuation
- 1996-11-24 DK DK96938445T patent/DK0863903T3/da active
- 1996-11-24 PT PT96938445T patent/PT863903E/pt unknown
- 1996-11-24 AT AT96938445T patent/ATE365741T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-11-24 EP EP96938445A patent/EP0863903B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-05-22 NO NO19982348A patent/NO323478B1/no unknown
- 1998-05-25 MX MX9804143A patent/MX9804143A/es unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MX9804143A (es) | 1998-09-30 |
| EP0863903A1 (en) | 1998-09-16 |
| CN1207741A (zh) | 1999-02-10 |
| JP2000500763A (ja) | 2000-01-25 |
| ES2288757T3 (es) | 2008-01-16 |
| EP0863903B1 (en) | 2007-06-27 |
| HUP9903582A2 (hu) | 2000-02-28 |
| NO323478B1 (no) | 2007-05-21 |
| IL116126A0 (en) | 1996-01-31 |
| US6333319B1 (en) | 2001-12-25 |
| AU7585796A (en) | 1997-06-11 |
| CN1085211C (zh) | 2002-05-22 |
| PL326745A1 (en) | 1998-10-26 |
| DK0863903T3 (da) | 2007-09-24 |
| PT863903E (pt) | 2007-09-07 |
| RU2193038C2 (ru) | 2002-11-20 |
| NO982348D0 (no) | 1998-05-22 |
| DE69637149T2 (de) | 2008-02-28 |
| NO982348L (no) | 1998-07-23 |
| AU718961B2 (en) | 2000-05-04 |
| BR9611452A (pt) | 1999-02-17 |
| DE69637149D1 (de) | 2007-08-09 |
| HU223379B1 (hu) | 2004-06-28 |
| HUP9903582A3 (en) | 2002-02-28 |
| WO1997019081A1 (en) | 1997-05-29 |
| ATE365741T1 (de) | 2007-07-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL188811B1 (pl) | Metalowane syntetyczne pochodne bakteriochlorofilu, sposób ich wytwarzania, kompozycja farmaceutyczna i jej zastosowanie | |
| EP1246826B1 (en) | Chlorophyll and bacteriochlorophyll esters, their preparation and pharmaceutical compositions comprising them | |
| US5506255A (en) | Rhodoporphyrin and phylloerythrin related photosensitizers for photodynamic therapy | |
| Pandey et al. | Chlorin and porphyrin derivatives as potential photosensitizers in photodynamic therapy | |
| US6624187B1 (en) | Long wave length absorbing bacteriochlorin alkyl ether analogs | |
| US5591847A (en) | Long wavelength absorbing photosensitizers related to purpurin-18, bacteriopurpurin-18 and related compounds with imide linkages | |
| US7319147B2 (en) | Porphyrins and related compounds | |
| CN102125549B (zh) | 一种二氢卟吩类光敏剂及其制备和应用 | |
| CN101591340B (zh) | 5,10,15,20-四-(5-吗啉戊基)-二氢卟吩及其制备和在医农药领域的应用 | |
| CA2237056C (en) | Synthetic metal-substituted bacteriochlorophyll derivatives and use thereof | |
| CN101606933A (zh) | 二氢卟吩类光敏剂及其制备和应用 | |
| NZ501912A (en) | Synthetic metal-substituted bacteriochlorophyll derivatives and use for killing viruses and microorganisms | |
| WO2008018063A2 (en) | Tetraarylporphine derivatives and uses thereof | |
| PL235382B1 (pl) | Zastosowanie nitroimidazolowych i polieterowo-nitroimidazolowych pochodnych ftalocyjanin |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20081124 |