KR940011838B1 - 유전자 조작 미생물 발효에 의한 l-페닐알라닌의 제조방법 - Google Patents
유전자 조작 미생물 발효에 의한 l-페닐알라닌의 제조방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR940011838B1 KR940011838B1 KR1019910015909A KR910015909A KR940011838B1 KR 940011838 B1 KR940011838 B1 KR 940011838B1 KR 1019910015909 A KR1019910015909 A KR 1019910015909A KR 910015909 A KR910015909 A KR 910015909A KR 940011838 B1 KR940011838 B1 KR 940011838B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- phenylalanine
- plasmid
- promoter
- gene
- genes
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 title claims description 56
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 title claims description 29
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title description 9
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 11
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 7
- 101150019536 aroF gene Proteins 0.000 claims description 7
- 101100435903 Corynebacterium glutamicum (strain ATCC 13032 / DSM 20300 / BCRC 11384 / JCM 1318 / LMG 3730 / NCIMB 10025) aroG gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101150042732 aroC gene Proteins 0.000 claims description 5
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 4
- 101000644386 Brevibacillus parabrevis Phenylalanine racemase [ATP-hydrolyzing] Proteins 0.000 claims 2
- 101000906861 Chondromyces crocatus ATP-dependent tyrosine adenylase Proteins 0.000 claims 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 13
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 101150023849 pheA gene Proteins 0.000 description 6
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 6
- 108010080376 3-Deoxy-7-Phosphoheptulonate Synthase Proteins 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 3
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 3
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 3
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical class C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 3
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 3
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 3
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 3
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 3
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 3
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 3
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010011485 Aspartame Proteins 0.000 description 1
- 241000186146 Brevibacterium Species 0.000 description 1
- 108010000898 Chorismate mutase Proteins 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 241001131785 Escherichia coli HB101 Species 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004867 Hydro-Lyases Human genes 0.000 description 1
- 108090001042 Hydro-Lyases Proteins 0.000 description 1
- 102100024319 Intestinal-type alkaline phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 101710184243 Intestinal-type alkaline phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 1
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101100002724 Thermus thermophilus aroH gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 101150076125 aroG gene Proteins 0.000 description 1
- 101150018055 aroH gene Proteins 0.000 description 1
- -1 aromatic amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000010357 aspartame Nutrition 0.000 description 1
- 239000000605 aspartame Substances 0.000 description 1
- IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N aspartame Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 229960003438 aspartame Drugs 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N chloroform;phenol Chemical compound ClC(Cl)Cl.OC1=CC=CC=C1 YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 1
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229940111685 dibasic potassium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- FBAFATDZDUQKNH-UHFFFAOYSA-M iron chloride Chemical compound [Cl-].[Fe] FBAFATDZDUQKNH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 description 1
- 235000002867 manganese chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229940099607 manganese chloride Drugs 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 235000013615 non-nutritive sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000013492 plasmid preparation Methods 0.000 description 1
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 description 1
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/22—Tryptophan; Tyrosine; Phenylalanine; 3,4-Dihydroxyphenylalanine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/06—Alanine; Leucine; Isoleucine; Serine; Homoserine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/22—Tryptophan; Tyrosine; Phenylalanine; 3,4-Dihydroxyphenylalanine
- C12P13/222—Phenylalanine
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/848—Escherichia
- Y10S435/849—Escherichia coli
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
내용 없음.
Description
제1도는 에쉬리시아 콜리(Escherichia coli)에 있어서 방향족 아미노산의 생합성 경로 및 조절 기작을 나타낸 것이며,
제2도는 본 발명의 재조합 플라스미드 pMW16의 제조 공정도 및 제한효소 부위도를 나타낸 것이다.
본 발명은 유전자 재조합 기술에 의하여 L-페닐알라닌 생합성에 관여하는 유전자가 재조합된 플라스미드를 함유한 새로운 에쉬리시아 콜리(Escherichia coli)를 배양하여 L-페닐알라닌을 제조하는 방법에 관한 것이다.
L-페닐알라닌은 필수 아미노산의 일종으로 주로 의약품 원료 및 저칼로리 감미료인 아스파탐의 원료로 사용되고, 일부 식품의 첨가제로도 사용되는 물질이다.
종래의 미생물에 의한 L-페닐알라닌 제조방법으로는 고전적인 돌연변이 방법을 이용한 브레비박테리움(Brevibacterium)속 혹은 코리네박테리움(Corynebacterium)속의 타이로신 변이주에 의한 방법(일본특허공개 37-6345, 60-160890). 에쉬리시아 콜리(Esherichia coli)의 타이로신 요구성 및 트립토판 아날로그 내성을 갖는 변이주에 의한 방법(일본특허공개 55-165797), 타이로신 및 트립토판 영양 요구성 복귀변이주이면서 페닐알라닌, 타이로신, 트립토판, 아날로그에 대해 내성을 갖는 변이주에 의한 방법(한국특허공개 88-11331, 88-11332)등이 알려져 있으나, 이들 방법은 모두 L-페닐알라닌 생산성이 비교적 낮은 결점을 갖는다.
또한, 유전자 재조합 기술을 이용하여 에쉬리시아 콜리에서 L-페닐알라닌 생합성 관련 유전자를 증폭 및 조절한 재조합 미생물에 의한 방법(한국특허공보 89-3682, 89-3714)이 알려져 있으나, 이들 방법 역시 L-페닐알라닌의 생산성이 낮은 단점을 갖는다. 따라서 세포안에서 생합성 관련 유전자들의 발현을 최적화하여 L-페닐알라닌의 생산성을 향상시킨 새로운 우수한 균주의 개발이 요구 되어왔다.
본 발명자들은 이러한 상황하에서 유전자 재조합 기술을 이용하여 생합성관련 유전자의 발현이 증가된 L-페닐알라닌의 생산성이 우수한 새로운 균주를 개발하고자 연구한 결과 본원 발명을 완성하게 되었다.
즉, 본원발명의 목적은 유전자 재조합 기술에 의해 재조합된, 코리스메이트 뮤타아제 p-프리페네이트 디히드라타제를 코딩하는 pheA유전자, 3-데옥시-D-아리비노헵툴로소네이트-7-포스페이트 신타아제를 코딩하는 aroF, 이들 두 유전자의 발현을 위한 두개의 프로모터 및 온도 감수성 리프레서 유전자를 함유하는 새로운 플라스미드 pMW16을 제공하는 것이다.
본원 발명의 다른 목적은 상기 플라스미드 pMW16에 의해 형질전환된 재조합 세포를 제공하는 것이다.
본원 발명의 또 다른 목적은 상기 형질전환주를 배양하므로써 L-페닐알라닌을 고수율로 생산하는 방법을 제공하는 것이다.
이하 본원 발명을 상세히 설명한다.
제1도에서 볼 수 있는 바와같이 대장균에서의 L-페닐알라닌의 생합성은 2개의 효소 반응에 의해 엄밀한 제어를 받는 것으로 알려져 있다. 그 하나는 pheA 유전자에 의해 코딩되는 코리스메이트 뮤타아제 P-프리페네이트 디하이드라타아제(chorismate mutase P-prephenate dehydratase)가 촉매하는 반응이고, 다른 하나는 aroF, aroG 및 aroH 유전자에 코딩되는 3가지 동종효소(isozyme)인 3-데옥시-D-아라비노-헵툴로소네이트-7-포스페이트 신타아제(3-deoxy-D-arabino-heptulosonate-7-phosphate synthase, 이하 DAHP 신타아제라 한다)가 촉매하는 반응이다. 상기 pheA 유전자와 aroF 유전자는 염색체 DNA상에서 각각 독립적으로 전사된다고 알려져 있다.
본 발명은 상술한 바와 같이 L-페닐알라닌 생합성에 중요한 유전자인 aroF와 pheA의 발현을 최대로 증가시키기 위해 강력한 프로모터의 하나로 알려진 λ파아지의 PL프로모터를 각각의 유전자에 연결시킨 후 유전자 발현을 조절하기 위해 온도 감수성 리프레서(repressor)를 사용하였다.
본 발명에 따라 제공되는 재조합 플라스미드의 제작공정 및 제한효소 부위도는 제2도와 같다. 본 발명의 플라스미드 제작방법에서 사용한 유전자 조작 방법은 주로 Molecular Cloning a Laboratory Manual(T. Maniatis et al.) 및 Current Protocols in Molecular Biology(Frederick M. Ausubel et al.)의 방법에 준하여 실시하였다.
이하, 실시예에 의해 본 발명을 상세히 설명한다. 그러나, 본원 발명이 이들 실시예에만 한정되는 것은 아니다.
[실시예 1]
플라스미드 pMW16의 제작
(1) pMW12의 선형화
pheA 및 aroF-tyrA 유전자가 재조합된 플라스미드 pMW 12(한국특허공고 89-3714)를 제한효소 EcoRV를 이용하여 제한효소 완충액[50mM NaCl, 10mM Tris-HCl(pH7.5), 10mM MgCl2, 1mM 디티오트레톨]에서 37℃, 16시간 절단했다.
절단된 DNA를 페놀-클로로포름 혼합 용액으로 처리하고 에탄올로 침전시켜 선형 DNA를 얻었다. 이 선형 DNA를 송아지 장 알칼리 포스파타아제(calf intestinal alkaline phosphatase(CIP))로 처리하여, 5'-말단의 인산기를 제거해서 선형 pMW12가 자기폐환(self-ligation)되는 것을 방지하였다.
(2) PL프로모터 단편의 수득
PL프로모터 단편을 얻기위해 플라스미드 pPLc2833을 제한효소 HaeII 및 BamHI으로 절단하고, 저융점 이가로스 겔상에서 전기영동하여 0.26Kb PL단편을 회수하고 정제하였다. 점착성 말단(cohesive end)을 갖는 0.26Kb PL단편을 반응액[50mM Tris-HCl(pH8.0), 5mM MgCl2, 5mM 디티오트레톨, 50ug/ml소혈청 알부민(BSA), 100uM dATP, 100uM dGTP, 100μM dCTP, 100uM dTTP]에서 DNA중합효소인 T4 DNA 폴리머라제로 11℃, 20분간 처리하여 블런트 말단(blunt end)을 만들었다.
(3) pMW14의 제작
상기 (1)에서 얻은 5'-말단의 인산기가 제거된 선형 pMW12와 상기(2)에서 얻은 블런트 말단화된 PL단편을 1 : 3 비율로 혼합한 후 T4 DNA 리가아제로 16℃, 16시간 처리하여 결합시켰다. 결합된 재조합 플라스미드를 pheA 유전자가 결손된 페닐알라닌 영양 요구성 변이주 MWEC203-7주에 통상의 염화칼슘 방법에 따라 형질전환시키고 가나마이신(Kanamycin) 50ug/ml을 첨가한 MM한천배지[포도당 10g, 황산암모늄 4g, 제1인산칼륨 2g, 티아민염산염 1mg, 푸마르산 0.5g, 한천 20g, 증류수 1l, pH7.4]상에서 배양하고, 생육한 균체중에서 플라스미드 검색을 통해 pMW12보다 크기가 0.26Kb 큰 재조합 플라스미드 pMW14를 분리하였다.
(4) pMW15의 제작
온도에 의해 재조합 유전자의 발현을 조절하기 위해 온도 감수성 억제체인 CI857유전자를 함유한 플라스미드 pMK5를 제한효소 BglII로 절단하여 0.9% 이가로스 겔상에서 0.9Kb DNA 단편을 회수하고 T4 DNA 폴리머라제를 처리하여 블런트 말단을 만들었다. aroF 유전자 앞에 PL프로모터가 결합된 상기(3)의 pMW14를 DraIII로 절단하고 CIP 처리하여 5'-말단의 인산기를 제거한후 CI857유전자 단편과 혼합하고 T4 DNA리가아제를 이용하여 두 단편을 블런트 말단 결찰 시켰다. 결찰된 단편을 에쉬리시아 콜리 HB101주에 형질 전환하여 pMW14보다 0.9Kb 큰 플라스미드 pMW15를 얻었다.
(5) pMW16의 제작
분리한 플라스미드 pMW15를 BamHI, Bg-1 II로 절단하고 T4 DNA리가아제로 처리하여 tryA 유전자의 일부인 0.7Kb 단편이 제거된 pMW16을 만들었다.
이 재조합 플라스미드 pMW16은 온도 감수성 타이로신 누수(leaky)주인 에쉬리시아 콜리 MWWJ304(KFCC 10737, 1991년 8월 30일 KFCC기탁)에 형질전환하여 50ug/ml 가나마이신이 포함된 한천배지에 도말후 37℃, 24시간 배양하여 생육한 균주중 DAHP 신타아제 활성이 증가되고, L-페닐알라닌 생산성이 우수한 균주 MWPWJ304를 스크리닝 하였다.
본 발명이 균주 에쉬리시아 콜리 MWPWJ304는 1991년 8월 30일자로 한국종균협회(KFCC)에 기탁되어 KFCC 10738에 수탁번호를 받았다.
[실험예 1]
본원 발명 균주의 생리적 특성을 조사한 결과 재조합 플라스미드의 수용균주인 MWWJ304주에 비해 생육 및 L-페닐알라닌 생산성에 필요한 타이로신이 좀더 요구되었으나, 그외 다른 성질들은 동일하였다.
DAHP신타아제의 활성도 및 배양 온도에 따른 L-페닐알라닌 생산성 변화는 표1 및 표2와 같다.
[표 1]
DAHP 신타아제 효소 활성도 비교
측정방법은 I. Shiio et al.[Journal of Biochemistry, 75,987~997,1974]변형방법으로 하였으며 활성도는 MWPEC 13-60(KAIST, KCTC 8337 P)주의 값에 대한 상대치로 표현하였다. 배양배지에 L-타이로신을 각각 100mg/l씩 첨가하여 MWWJ 304 및 MWPWJ304주를 배양하였다.
[표 2]
배양온도에 따른 L-페닐알라닌 생산성(g/l)
배양방법은 각 온도별로 실시예 3의 방법으로 행하였으며 MWWJ304주의 배양시 L-타이로신 200mg/l를 첨가하였다.
[실시예 2]
L-페닐알라닌의 생산
<배지조성>
종배지 : 포도당 3%, 트립톤 1%, 효모액기스 1%, 염화나트륨 0.1%, 가나마이신 10mg/l, pH 7.0
발효배지 : 포도당 6%, 황산칼륨 0.04%, 유안 2%, 구연산나트륨 0.05%, 푸마르산 0.05%, 염화마그네슘 0.08%, 제1인산칼륨 0.1%, 제2인산칼륨 0.1%, 효모액기스 0.1%, 글루타민산 0.05%, 염화코발트 0.1mg/l, 황산아연 1mg/l, 염화망간 2mg/l, 염화칼슘 5mg/l, 염화철 20mg/l, L-타이로신 300mg/l, 티아민산염 5mg/l, 니코틴산 10mg/l, pH 7.0
상기 종배지 40ml을 500ml 진탕플라스크에 분주하여 120℃, 20분간 가압 멸균한 후 실시예 1에서 얻은 본 발명균주 MWPWJ304를 접종하고 37℃에서 16시간 진탕배양하여 종균 배양액으로 하였다. 발효배지를 상기 동일조건으로 준비한 후 탄산칼슘 3.5%를 별도 멸균첨가하여 위의 종균 배양액 2ml을 무균적으로 접종하여 37℃에서 36시간 진탕 배양하였다. 배양완료 후 배양액중의 L-페닐알라닌 축적량은 16.2g/l이였다.
[실시예 3]
L-페닐알라닌의 생산
발효배지 : L-타이로신 400mg/l의 실시예 2의 배지
배양방법 : 발효배지를 2L소형 발효조에 1L삽입하여 120℃에서 15분간 가압 멸균후 실시예 2에서와 같이 미리 준비한 종균 배양액 50ml을 접종하고 1000rpm, 1.0vvm, 조건으로 37℃에서 48시간 배양하였다. 배양중의 pH는 암모니아수로 7.0으로 조절하였으며 60%포도당액을 잔당 1%일 때 3회 추가하였다. 발효에 사용된 총 당량은 185g/l였으며 이때 L-페닐알라닌 축적량은 50.8g/l였다. 배양액 1L를 통상의 방법에 따라 이온교환 수지에 흡착시킨 후 용리시켜 농축 후 L-페닐알라닌 조결정 45.7g/l를 얻었다.
[실시예 4]
L-페닐알라닌의 생산
50L발효조에 실시예 3과 동일한 방법으로 발효배지 27L를 삽입 멸균한 후 종배양액 1.3L를 접종하여 450rpm, 1.0vvm조건으로 37℃에서 48시간 배양하였다. 배양중 pH는 암모니아를 사용하여 7.0으로 조절하였으며 60%포도당액을 잔당 1%일때 3회 추가하였다. 발효에 사용된 총 당량은 180g/l였으며 이때 L-페닐알라닌 축적량은 49.1g/l였다.
Claims (6)
- 코리스메이트 뮤타아제 p-프리페네이트 디히드라타제를 코딩하는 pheA 유전자, 3-데옥시-D-아라비노헵툴로소네이트-7-포스페이트 신타아제를 코딩하는 aroF, 이들 두 유전자의 발현을 위한 두개의 프로모터 및 온도 감수성 리프레서 유전자를 함유하는 플라스미드에 의해 형질전환된 재조합 세포를 배지에서 배양하여 L-페닐알라닌을 생산 축적하고, 배양액으로부터 L-페닐알라닌을 회수함을 특징으로 하는 L-페닐알라닌의 제조방법.
- 제1항에 있어서, 형질전환된 재조합 세포는 에쉬리시아 콜리(Escherichia coli) MWPWJ304(KFCC 10738)임을 특징으로 하는 제조방법.
- 제1항에 있어서, 프로모터는 PL프로모터임을 특징으로 하는 제조방법.
- 제1항에 있어서, 온도 감수성 리프레서는 CI857리프레서임을 특징으로 하는 방법.
- 코리스메이트 뮤타아제 p-프리퍼네이트 디히드라타제를 코딩하는 pheA 유전자, 3-데옥시-D-아라비노헵툴로소네이트-7-포스페이트 신타아제를 코딩하는 aroF, 이들 두 유전자의 발현을 위한 두개의 프로모터 및 온도 감수성 리프레서 유전자를 함유함을 특징으로 하는 플라스미드 pMW16.
- 플라스미드 PMW16에 의해 형질전환된 것임을 특징으로 하는 재조합 세포.
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1019910015909A KR940011838B1 (ko) | 1991-09-12 | 1991-09-12 | 유전자 조작 미생물 발효에 의한 l-페닐알라닌의 제조방법 |
| US07/851,682 US5304475A (en) | 1991-09-12 | 1992-03-12 | Method for production of L-phenylalanine by recombinant E. coli |
| FR9209146A FR2681330B1 (fr) | 1991-09-12 | 1992-07-24 | Nouveau plasmide recombinant replicable pour la production de phenylalanine. |
| DE4228525A DE4228525C2 (de) | 1991-09-12 | 1992-08-27 | Verfahren zur Herstellung von L-Phenylalanin durch rekombinante E.coli |
| ITTO920742A IT1257392B (it) | 1991-09-12 | 1992-09-04 | Un metodo per la produzione di l-fenilalanina mediante e.coli ricombinante |
| JP4241745A JPH05244956A (ja) | 1991-09-12 | 1992-09-10 | 組換大腸菌によるｌ−フェニルアラニンの製造方法 |
| GB9219344A GB2259512B (en) | 1991-09-12 | 1992-09-10 | Plasmid for the production of phenylalanine |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1019910015909A KR940011838B1 (ko) | 1991-09-12 | 1991-09-12 | 유전자 조작 미생물 발효에 의한 l-페닐알라닌의 제조방법 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR930006159A KR930006159A (ko) | 1993-04-20 |
| KR940011838B1 true KR940011838B1 (ko) | 1994-12-26 |
Family
ID=19319858
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1019910015909A Expired - Lifetime KR940011838B1 (ko) | 1991-09-12 | 1991-09-12 | 유전자 조작 미생물 발효에 의한 l-페닐알라닌의 제조방법 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5304475A (ko) |
| JP (1) | JPH05244956A (ko) |
| KR (1) | KR940011838B1 (ko) |
| DE (1) | DE4228525C2 (ko) |
| FR (1) | FR2681330B1 (ko) |
| GB (1) | GB2259512B (ko) |
| IT (1) | IT1257392B (ko) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5776736A (en) * | 1992-12-21 | 1998-07-07 | Purdue Research Foundation | Deblocking the common pathway of aromatic amino acid synthesis |
| RU2229514C2 (ru) * | 2000-11-13 | 2004-05-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" | 3-дезокси-d-арабиногептулозонат-7-фосфатсинтаза и фрагмент днк, кодирующий 3-дезокси-d-арабиногептулозонат-7-фосфатсинтазу из methylophilus methylotrophus |
| RU2250261C1 (ru) * | 2003-09-30 | 2005-04-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | ПРЕФЕНАТДЕГИДРАТАЗА-ХОРИЗМАТМУТАЗА И ФРАГМЕНТ ДНК, КОДИРУЮЩИЙ ПРЕФЕНАТДЕГИДРАТАЗУ-ХОРИЗМАТМУТАЗУ, ИЗ БАКТЕРИИ Methylophilus methylotrophus |
| US8048654B2 (en) * | 2010-06-09 | 2011-11-01 | Joule Unlimited Technologies, Inc. | Methods and compositions for the recombinant biosynthesis of fatty acids and esters |
| US7981647B2 (en) | 2008-03-03 | 2011-07-19 | Joule Unlimited, Inc. | Engineered CO2 fixing microorganisms producing carbon-based products of interest |
| CN103725717A (zh) | 2008-10-17 | 2014-04-16 | 焦耳无限科技公司 | 微生物的乙醇生产 |
| US20110020867A1 (en) * | 2009-07-20 | 2011-01-27 | Joule Unlimited, Inc. | Constructs And Methods For Efficient Transformation Of Micro-Organisms For Production Of Carbon-Based Products Of Interest |
| CN103074292B (zh) * | 2013-01-22 | 2014-07-09 | 江南大学 | 一种高产l-苯丙氨酸的重组谷氨酸棒杆菌及其应用 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60160890A (ja) * | 1984-01-30 | 1985-08-22 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Ｌ−フエニルアラニンの製造法 |
| JPS61247392A (ja) * | 1985-02-04 | 1986-11-04 | エンジニツクス インコ−ポレ−テツド | ２種またはより多くのアミノ酸を同時に産生できる組換え微生物 |
| KR890003680A (ko) * | 1986-10-16 | 1989-04-17 | 죤 알.페넬 | 2-(2-치환 벤조일)-4-(치환)-1,3-시클로헥산디온 및 그 제조방법과 이를 이용한 조성물 및 식물체의 억제방법 |
| US4783213A (en) * | 1986-10-16 | 1988-11-08 | Stauffer Chemical Company | Certain 2-(2-substituted benzoyl)-4-(substituted oxy or substituted thio)-1,3-cyclohexanediones |
| KR890003714B1 (ko) * | 1987-03-26 | 1989-09-30 | 주식회사 미원 | 유전자 조작 미생물에 의한 l-페닐알라닌 제조방법 |
| KR890003682B1 (ko) * | 1987-03-26 | 1989-09-30 | 주식회사 미원 | 유전자조작 미생물에 의한 l-페닐알라닌의 제조방법 |
| US5026730A (en) * | 1987-08-21 | 1991-06-25 | Ciba-Geigy Corporation | Anilinophenylthioureas, compositions containing them, and the use thereof in pest control |
| IL87542A (en) * | 1987-08-28 | 1993-01-31 | Uniroyal Chem Co Inc | Arylenediamino substituted triazine derivatives, processes for the preparation thereof and compositions containing the same |
-
1991
- 1991-09-12 KR KR1019910015909A patent/KR940011838B1/ko not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-03-12 US US07/851,682 patent/US5304475A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-24 FR FR9209146A patent/FR2681330B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1992-08-27 DE DE4228525A patent/DE4228525C2/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-09-04 IT ITTO920742A patent/IT1257392B/it active IP Right Grant
- 1992-09-10 GB GB9219344A patent/GB2259512B/en not_active Expired - Fee Related
- 1992-09-10 JP JP4241745A patent/JPH05244956A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB2259512B (en) | 1995-06-21 |
| DE4228525A1 (de) | 1993-06-09 |
| FR2681330B1 (fr) | 1996-01-12 |
| IT1257392B (it) | 1996-01-15 |
| DE4228525C2 (de) | 1994-11-03 |
| FR2681330A1 (fr) | 1993-03-19 |
| US5304475A (en) | 1994-04-19 |
| GB9219344D0 (en) | 1992-10-28 |
| GB2259512A (en) | 1993-03-17 |
| KR930006159A (ko) | 1993-04-20 |
| ITTO920742A0 (it) | 1992-09-04 |
| ITTO920742A1 (it) | 1994-03-04 |
| JPH05244956A (ja) | 1993-09-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0931833B1 (en) | Method of producing L-serine by fermentation | |
| KR100838038B1 (ko) | Ｌ-라이신 생산능이 향상된 코리네박테리움 속 미생물 및그를 이용한 ｌ-라이신 생산 방법 | |
| EP0332234B1 (en) | Process for preparing l-tyrosine | |
| KR100630604B1 (ko) | 아미노산 생산균의 작제 방법 및 작제된 아미노산생산균을 사용하는 발효법에 의한 아미노산의 제조 방법 | |
| EP0955368B1 (en) | L-glutamic acid-producing bacterium and method for producing l-glutamic acid | |
| EP1149911B1 (en) | Amino acid producing strains belonging to the genus Escherichia and method for producing an amino acid | |
| EP0943687B1 (en) | Method of producing L-serine by fermentation | |
| PL183472B1 (pl) | Sposób wytwarzania L-aminokwasów | |
| IL166145A (en) | A method for preparing a strain of E. COLI that produces an amino acid | |
| US5929221A (en) | Gene derived from coryneform bacteria and use thereof | |
| EP1484410A1 (en) | Fermentation methods and genetically modified bacteria with increased substrate and byproduct uptake. | |
| KR100838035B1 (ko) | Ｌ-라이신 생산능이 향상된 코리네박테리움 속 미생물 및그를 이용한 ｌ-라이신 생산 방법 | |
| WO2001005939A1 (fr) | Procede de production d'une substance cible par fermentation | |
| JP2002512802A6 (ja) | 芳香族代謝／ｉｉｉ物質の微生物による製造 | |
| KR970001238B1 (ko) | L-트립토판의 제조방법 | |
| EP1408123A1 (en) | A microorganism in which the fadR gene is knocked out and a process for producing L-threonine using the microorganism | |
| KR940011838B1 (ko) | 유전자 조작 미생물 발효에 의한 l-페닐알라닌의 제조방법 | |
| EP0338474B1 (en) | Process for producing L-tryptophan | |
| KR20070056805A (ko) | Ｌ-라이신 생산능이 향상된 코리네박테리움 속 미생물 및그를 이용하여 ｌ-라이신을 생산하는 방법 | |
| EP1002866B1 (en) | TEMPERATURE SENSITIVE dtsR GENES | |
| KR20220110992A (ko) | 프리페네이트 탈수 효소 (Prephenate dehydratase) 변이체 및 이를 이용한 분지쇄 아미노산 생산 방법 | |
| EP0183006B1 (en) | A recombinant dna-molecule, coryneform bacteria carrying recombinant dna and process for producing an aromatic amino acid by using the same | |
| KR102285951B1 (ko) | 시트레이트 신타아제의 활성이 약화된 신규한 변이형 폴리펩티드 및 이를 이용한 l-아미노산 생산 방법 | |
| KR890003682B1 (ko) | 유전자조작 미생물에 의한 l-페닐알라닌의 제조방법 | |
| KR890003714B1 (ko) | 유전자 조작 미생물에 의한 l-페닐알라닌 제조방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| PA0109 | Patent application |
Patent event code: PA01091R01D Comment text: Patent Application Patent event date: 19910912 |
|
| PA0201 | Request for examination |
Patent event code: PA02012R01D Patent event date: 19910912 Comment text: Request for Examination of Application |
|
| PG1501 | Laying open of application | ||
| G160 | Decision to publish patent application | ||
| PG1605 | Publication of application before grant of patent |
Comment text: Decision on Publication of Application Patent event code: PG16051S01I Patent event date: 19941130 |
|
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| PE0701 | Decision of registration |
Patent event code: PE07011S01D Comment text: Decision to Grant Registration Patent event date: 19950320 |
|
| GRNT | Written decision to grant | ||
| PR0701 | Registration of establishment |
Comment text: Registration of Establishment Patent event date: 19950322 Patent event code: PR07011E01D |
|
| PR1002 | Payment of registration fee |
Payment date: 19950322 End annual number: 3 Start annual number: 1 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 19971119 Start annual number: 4 End annual number: 4 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 19981226 Start annual number: 5 End annual number: 5 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20000512 Start annual number: 6 End annual number: 6 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20000927 Start annual number: 7 End annual number: 7 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20011005 Start annual number: 8 End annual number: 8 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20021002 Start annual number: 9 End annual number: 9 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20030901 Start annual number: 10 End annual number: 10 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20040917 Start annual number: 11 End annual number: 11 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20050901 Start annual number: 12 End annual number: 12 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20060908 Start annual number: 13 End annual number: 13 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20070927 Start annual number: 14 End annual number: 14 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20080909 Start annual number: 15 End annual number: 15 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20090925 Start annual number: 16 End annual number: 16 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20100927 Year of fee payment: 17 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20100927 Start annual number: 17 End annual number: 17 |
|
| EXPY | Expiration of term | ||
| PC1801 | Expiration of term |