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KR20250130357A - 신생아 fc 수용체 (fcrn)에 대한 결합이 변경된 폴리펩타이드 및 사용 방법 - Google Patents

신생아 fc 수용체 (fcrn)에 대한 결합이 변경된 폴리펩타이드 및 사용 방법

Info

Publication number
KR20250130357A
KR20250130357A KR1020257025208A KR20257025208A KR20250130357A KR 20250130357 A KR20250130357 A KR 20250130357A KR 1020257025208 A KR1020257025208 A KR 1020257025208A KR 20257025208 A KR20257025208 A KR 20257025208A KR 20250130357 A KR20250130357 A KR 20250130357A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
amino acid
acid position
wild
position corresponding
feline igg
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
KR1020257025208A
Other languages
English (en)
Inventor
윌리엄 브론디크
Original Assignee
인베티엑스 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 인베티엑스 인코포레이티드 filed Critical 인베티엑스 인코포레이티드
Publication of KR20250130357A publication Critical patent/KR20250130357A/ko
Pending legal-status Critical Current

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Abstract

고양이에서 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 반감기를 증가시키기 위한 조성물 및 이들의 사용 방법이 제공된다. 상기 조성물은 변이체 고양이 IgG Fc 영역을 포함한다.

Description

신생아 FC 수용체 (FCRN)에 대한 결합이 변경된 폴리펩타이드 및 사용 방법
서열 목록
본 출원은 XML 형식으로 전자적으로 제출되고 본원에 그 전문이 참조로 포함된 서열목록을 포함한다. 상기 XML 사본은 2023년 12월 11일에 작성되었으며, 명칭은 "51682-007WO3_Sequence_Listing_12_11_23.xml"이고, 크기는 164,984 바이트이다.
기술분야
본 개시내용은 일반적으로 야생형 대응물에 비해 고양이(feline)에서 반감기가 증가된 폴리펩타이드(예를 들어, 융합 폴리펩타이드, 예컨대 폴리펩타이드-Fc 영역 융합체; 또는 결합 분자, 예컨대 항체, 항원-결합 항체 단편, 또는 수용체-Fc 융합체의 리간드-결합 부분)에 관한 것이다.
항체의 Fc 영역은 리소좀 경로를 통한 분해로부터 항체를 보호하고 항체 이펙터 기능을 매개하는 것을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다수의 기능적 역할을 수행한다. 치료제로서 고양이 항체의 사용이 증가함에 따라, 최적의 항체 또는 항체 단편(예를 들어, Fab)을 선택하는 것뿐만 아니라, 원하는 반감기 및 이펙터 기능을 위해 적절한 Fc와 조합시키는 것에 대한 관심이 높아지고 있다.
고양이(cat)에서 사용하기 위한 폴리펩타이드 치료제(예를 들어, 항체)의 반감기 증가와 관련된 지침은 당업계에 거의 없다. 따라서, 고양이에서 폴리펩타이드(예를 들어, 항체)의 혈청 지속성을 개선시키는 Fc 영역 변이체가 필요하다.
본원에는 치료용 폴리펩타이드에 유용한 고양이 Fc 영역(예를 들어, 고양이 IgG Fc 영역 변이체) 또는 이의 고양이 FcRn 결합 단편이 제공된다. 예를 들어, 본원에는 고양이 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드가 제공되며, 여기서 고양이 IgG Fc 영역 변이체는 야생형 대응물에 비해 고양이에서 증가된 반감기를 갖는다.
제1 양태에서, 본 발명은 고양이 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드를 특징으로 하며, 여기서 고양이 IgG Fc 영역 변이체는 (i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치에서 Tyr, 및 (ii) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고:
(i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치;
(ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 위치;
(iii) 아미노산 치환이 Asp 또는 Val인, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치;
(iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 위치; 및
(v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 위치;
여기서 상기 아미노산 위치는 EU 넘버링에 기반하며, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인에 비해 고양이 FcRn에 대한 증가된 결합 친화도를 갖는다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 또는 Glu를 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu, Tyr, 또는 Val을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 또는 Tyr을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 또는 Glu를 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 다음을 포함한다:
(i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
(ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu;
(iii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
(iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
(v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
(vi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
(vii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
(viii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
(ix) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
(x) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp; 또는
(xi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu.
또 다른 양태에서, 본 발명은 고양이 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드를 특징으로 하며, 여기서 고양이 IgG Fc 영역 변이체는 (i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치에 Met, 및 (ii) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고:
(i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치;
(ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 위치;
(iii) 아미노산 치환이 Asp 또는 Val인, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치;
(iv) 아미노산 치환이 Val인, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치;
(v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 위치; 및
(vi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 위치;
여기서 상기 아미노산 위치는 EU 넘버링에 기반하며, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인에 비해 고양이 FcRn에 대한 증가된 결합 친화도를 갖는다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 또는 Glu를 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu, Tyr, 또는 Val을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 아미노산 위치 Val을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 또는 Tyr을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 또는 Glu를 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 다음을 포함한다:
(i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
(ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu;
(iii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
(iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
(v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
(vi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
(vii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
(viii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
(ix) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
(x) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
(xi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp; 또는
(xii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu.
또 다른 양태에서, 본 발명은 고양이 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드를 특징으로 하며, 여기서 고양이 IgG Fc 영역 변이체는 (i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치에서 Met, 및 (ii) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고:
(i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치;
(ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 위치;
(iii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치;
(iv) 아미노산 치환이 Val인, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치;
(v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 위치; 및
(vi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 위치;
여기서 상기 아미노산 위치는 EU 넘버링에 기반하며, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인에 비해 고양이 FcRn에 대한 증가된 결합 친화도를 갖는다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 또는 Glu를 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu, Tyr, 또는 Val을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp, Glu, 또는 Val을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 아미노산 위치에서 Val을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 또는 Tyr을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 또는 Glu를 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 다음을 포함한다:
(i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
(ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu;
(iii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
(iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
(v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
(vi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
(vii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu;
(viii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
(ix) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
(x) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
(xi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
(xii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp; 또는
(xiii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu.
또 다른 양태에서, 본 발명은 고양이 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드를 특징으로 하며, 여기서 고양이 IgG Fc 영역 변이체는 (i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치에서 Leu, 및 (ii) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고:
(i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치;
(ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 위치;
(iii) 아미노산 치환이 Asp인, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치;
(iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 위치; 및
(v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 위치;
여기서 상기 아미노산 위치는 EU 넘버링에 기반하며, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인에 비해 고양이 FcRn에 대한 증가된 결합 친화도를 갖는다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu, Tyr, 또는 Val을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 또는 Tyr을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 또는 Glu를 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 다음을 포함한다:
(i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
(ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
(iii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
(iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
(v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
(vi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
(vii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
(viii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp; 또는
(ix) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu.
선행하는 양태 중 어느 하나의 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG는 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 Fc 도메인을 포함하는 고양이 IgG1a, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 Fc 도메인을 포함하는 고양이 IgG1b, 또는 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 Fc 도메인을 포함하는 고양이 IgG2이다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG는 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 Fc 도메인을 포함하는 고양이 IgG1a이다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 Fc 도메인을 포함하는 고양이 IgG1b이다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG는 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 Fc 도메인을 포함하는 고양이 IgG2이다.
선행하는 양태 중 어느 하나의 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 중성 pH보다 산성 pH에서 더 높은 수준으로 고양이 FcRn에 결합한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 pH 7.4보다 pH 5.5 내지 6.0(예를 들어, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9 또는 6.0)에서 더 높은 수준으로 고양이 FcRn에 결합한다.
선행하는 양태 중 어느 하나의 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 EPO, CTLA4, LFA3, VEGFR1, VEGFR3, IL-1R, IL-4R, GLP-1 수용체 작용제, 및 트롬보포이에틴 결합 펩타이드로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질을 추가로 포함한다.
선행하는 양태 중 어느 하나의 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 결합 도메인을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 결합 도메인은 항체, 항체 단편, 또는 수용체의 리간드-결합 부분을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항체 단편은 면역글로불린 분자의 6개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 단편은 Fab, 단일 사슬 가변 단편(scFv), Fv, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, 나노바디, 및 디아바디로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 수용체의 리간드-결합 부분은 고양이 수용체 단백질의 리간드 결합 도메인 또는 고양이 수용체 단백질의 세포외 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, 결합 도메인은 NGF, TrKA, ADAMTS, IL-1, IL-2, IL-4, IL-4R, 안지오텐신 1형(AT1) 수용체, 안지오텐신 2형(AT2) 수용체, IL-5, IL-12, IL-13, IL-31, IL-33, CD3, CD20, CD47, CD52, 및 보체계 복합체로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 (i) 본원에 개시된 폴리펩타이드 중 어느 하나, 및 (ii) 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 특징으로 한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 폴리펩타이드 중 어느 하나를 암호화하는 핵산 또는 핵산들을 특징으로 한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 폴리펩타이드 중 어느 하나를 암호화하는 핵산 또는 핵산들을 포함하는 발현 벡터 또는 발현 벡터들을 특징으로 한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 폴리펩타이드 중 어느 하나를 암호화하는 핵산 또는 핵산들을 포함하는 숙주 세포, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 중 어느 하나를 암호화하는 핵산 또는 핵산들을 포함하는 발현 벡터 또는 발현 벡터들을 특징으로 한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 폴리펩타이드를 제조하는 방법을 특징으로 하며, 상기 방법은:
(i) 본원에 개시된 폴리펩타이드 중 어느 하나를 암호화하는 핵산 또는 핵산들을 제공하는 단계;
(ii) 상기 핵산 또는 핵산들을 숙주 세포 배양물에서 발현시켜 폴리펩타이드를 생성하는 단계; 및 선택적으로,
(iii) (ii)에서 생성된 상기 폴리펩타이드를 상기 숙주 세포 배양물로부터 수집하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 고양이 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 필요로 하는 고양이에서 고양이 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법을 특징으로 하고, 상기 방법은 본원에 개시된 폴리펩타이드 중 어느 하나를 포함하는 조성물, 또는 (i) 본원에 개시된 폴리펩타이드 중 어느 하나, 및 (ii) 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 고양이 질환 또는 장애는 알레르기성 질환, 만성 통증, 급성 통증, 염증성 질환, 자가면역 질환, 내분비 질환, 위장관 질환, 심혈관 질환, 신장 질환, 가임 관련 장애, 감염성 질환, 또는 암이다.
다른 실시양태에서, 고양이 질환 또는 장애는 아토피성 피부염, 알레르기성 피부염, 골관절염 통증, 관절염, 빈혈, 또는 비만이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 고양이 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 필요로 하는 고양이에서 고양이 질환 또는 장애의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 본원에 개시된 폴리펩타이드 중 어느 하나, 또는 (i) 본원에 개시된 폴리펩타이드 중 어느 하나, 및 (ii) 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 특징으로 한다.
일부 실시양태에서, 고양이 질환 또는 장애는 알레르기성 질환, 만성 통증, 급성 통증, 염증성 질환, 자가면역 질환, 내분비 질환, 위장관 질환, 심혈관 질환, 신장 질환, 가임 관련 장애, 감염성 질환, 또는 암이다.
다른 실시양태에서, 고양이 질환 또는 장애는 아토피성 피부염, 알레르기성 피부염, 골관절염 통증, 관절염, 빈혈, 또는 비만이다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야의 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 개지된 것들과 유사하거나 동등한 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 시험에서 사용될 수 있지만, 예시적인 방법 및 물질은 아래에 기재되어 있다. 본원에 언급된 모든 공보, 특허 출원, 특허, 및 다른 참조문헌은 그 전체가 참조로 포함된다. 상충되는 경우, 정의를 포함한 본 출원이 우선할 것이다. 물질, 방법, 및 실시예는 단지 설명일 뿐이고 제한적인 것으로 의도되지 않는다.
본 발명의 다른 특징 및 이점은 다음과 같은 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백해질 것이다.
도 1은 야생형 고양이 IgG1a Fc 영역(서열 번호 1) 및 야생형 고양이 IgG1b Fc 영역(서열 번호 2)과 추정 야생형 고양이 IgG2 Fc 영역(서열 번호 3)의 아미노산 서열의 정렬을 나타낸다. 힌지 영역은 삼각형 사이에 놓인다. 화살표는 두 중쇄 사이의 이황화물 브릿지에 관여할 가능성이 있는 힌지 영역의 시스테인 잔기를 나타낸다(문헌[Strietzel et al., 2014, Vet. Immunol., Immunopathol., 158: 214-223]으로부터).
도 2는 EU 넘버링에 기반하여 야생형 고양이 IgG1a Fc(서열 번호 1) 및 인간 IgG1 Fc 영역의 아미노산 서열의 정렬을 나타낸다.
다양한 고양이 질환의 예방 및 치료를 위한 치료제로서 폴리펩타이드(예를 들어, 항체, 항원-결합 항체 단편, 수용체의 리간드-결합 도메인, 효소, 리간드, 및 펩타이드)의 사용이 증가함에 따라, 특히 폴리펩타이드를 반복적으로 투여해야 하는 만성 질환의 예방 또는 치료를 위해, 연장된 반감기를 갖는 폴리펩타이드를 개발하는 것이 중요하다.
따라서, 본 개시내용은 이러한 서열을 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 반감기를 향상시키는 돌연변이를 포함하는 고양이 면역글로불린 Fc 영역 또는 이의 고양이 FcRn-결합 영역을 특징으로 한다. 또한, 이러한 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 및 이의 사용 방법이 개시된다. 이러한 폴리펩타이드는 다양한 치료 및 진단 목적을 위해 사용될 수 있다.
예를 들어, 본 개시내용은 치료용 폴리펩타이드에 유용한, 고양이 FcRn 또는 이의 고양이 FcRn 결합 단편에 대한 결합이 증가된 폴리펩타이드를 특징으로 한다. 예를 들어, 본원에는 대조군 폴리펩타이드(예를 들어, 야생형 대응물 IgG 고양이 Fc 영역)보다 고양이 FcRn에 대한 결합이 증가된 폴리펩타이드가 제공된다. 일부 경우에, 이러한 폴리펩타이드는, 예를 들어, 중성 pH(예를 들어, pH 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 또는 7.5)보다 산성 pH(예를 들어, pH 5.5, pH 6.0, 또는 pH 6.5)에서 더 높은 수준으로(즉, 더 강한 친화성으로) 고양이 FcRn에 결합할 수 있다. 일부 경우에, 이러한 폴리펩타이드는 pH 7.4보다 pH 5.5 및/또는 6.0에서 더 높은 수준으로 고양이 FcRn에 결합한다. 본 개시내용은 또한 부분적으로, 야생형 대응물보다 고양이에서 반감기가 증가된 폴리펩타이드에 관한 것이다. 예를 들어, 본원에 개시된 Fc 영역 또는 고양이 FcRn 결합 영역에 부착되지 않은 이러한 폴리펩타이드의 버전에 비해 반감기가 증가된 폴리펩타이드(예를 들어, 결합 분자, 예컨대 항체, 항원-결합 항체 단편, 또는 수용체의 리간드-결합 부분)가 제공된다. 또한, 효소-Fc 영역 융합체, 리간드-Fc 영역 융합체, 나노바디-Fc 융합체, 및 펩타이드-Fc 영역 융합체가 제공되고, 여기서 융합체는 그들의 야생형 대응물에 비해 증가된 반감기를 갖는다. Fc 영역은, 반감기를 증가시키는 치환 또는 치환들(야생형 고양이 Fc 영역에 비해)을 갖는 것 이외에, 예를 들어, 이펙터 기능을 증가시키고, 이펙터 기능을 감소시키고, 단백질 A에 대한 결합을 증가시키고/시키거나 (예를 들어, Fc 영역에서 하나 이상의 번역후 변형을 제거함으로써) 폴리펩타이드의 이질성을 감소시키는 다른 치환들을 또한 포함할 수 있다. 고양이 Fc 영역 서열은 임의의 고양이 항체로부터 유래될 수 있다. 일부 경우에, 고양이 Fc 영역 서열은 고양이 IgG(예를 들어, IgG1a, IgG1b, IgG2)로부터 유래된다.
값이 범위의 관점에서 설명되는 경우, 설명은 그러한 범위들 내의 모든 가능한 하위-범위들뿐만 아니라, 특정 수치 값 또는 특정 하위-범위가 명시적으로 언급되는지 여부에 관계없이 그러한 범위 내에 속하는 특정 수치 값의 개시내용을 포함한다는 것이 이해되어야 한다. 모든 수치 표시, 예를 들어, pH, KD, 온도, 시간, 농도, 및 분자량(범위 포함)은 근사치이며, 이는 필요에 따라 1.0 또는 0.1의 증가로 (+) 또는 (-) 변화되거나, 대안적으로 +/- 15%, 또는 대안적으로 10%, 또는 대안적으로 5%, 또는 대안적으로 2% 변동으로 변화된다. 항상 명시적으로 언급되지는 않지만, 모든 수치 표시는 "약"이라는 용어가 선행하고, 수치 표시는 가장 가까운 유효 숫자로 반올림되는 수치 값을 포함할 수 있음이 이해되어야 한다. 또한, 항상 명시적으로 언급되는 것은 아니지만, 본원에 기재된 시약은 단지 예시적이고, 이러한 균등물이 당해 기술분야에 알려져 있음이 이해되어야 한다.
달리 정의되지 않는 한, 본 개시내용과 관련하여 사용되는 과학 및 기술 용어는 당해 기술분야의 숙련가에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 가질 것이다. 또한, 문맥상 달리 요구되거나 명시적으로 지시되지 않는 한, 단수 용어는 복수를 포함하고, 복수 용어는 단수를 포함한다. 다양한 출처 또는 참조문헌 간의 정의에서 임의의 상충에 대해서는 본원에 제공된 정의가 우선할 것이다.
본원에 기재된 본 발명의 실시양태는 양태 및 실시양태를 "포함하는", "이루어진," 및 "본질적으로 이루어진"을 포함하는 것으로 이해된다. 본원에 사용된 바와 같이, 단수 형태("a", "an", 및 "the")는 달리 나타내지 않는 한 복수의 지시대상(예를 들어, 적어도 하나, 하나 이상)을 포함한다. 본원에서 "또는"이라는 용어의 사용은 "및/또는"을 의미하며, 달리 명시되지 않는 한 대안들이 상호 배타적임을 암시하는 것을 의미하는 것은 아니다. 복수의 종속항의 맥락에서, 다른 청구항들을 인용할 때 "또는"의 사용은 대안적인 청구항만을 지칭한다.
본 출원에서, "또는"의 사용은 당해 기술분야의 숙련가에 의해 명시적으로 언급되거나 이해되지 않는 한 "및/또는"을 의미한다. 다중 종속항의 맥락에서, "또는"의 사용은 하나 초과의 선행하는 독립항 또는 종속항을 인용한다.
양 또는 농도 등과 같은 측정 가능한 값을 지칭할 때 본원에 사용된 용어 "약"은 특정된 양의 20%, 10%, 5%, 1%, 0.5%, 또는 심지어 0.1%의 변동을 포함하는 것을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, 핵산 또는 폴리펩타이드 서열과 관련하여 "아미노 서열 동일성 퍼센트(%) ", "동일성 %" 및 "상동성"은 서열을 정렬하고 필요한 경우 갭을 도입하여 최대 서열 동일성 백분율을 달성한 후, 특정 핵산 또는 폴리펩타이드 서열의 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기와 동일한 참조 서열의 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기의 백분율로 정의되며, 임의의 보존적 치환은 서열 동일성의 일부로 간주하지 않는다. 서열 동일성 백분율을 결정하기 위한 목적을 위한 정렬은, 예를 들어, 공개적으로 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST, BLAST-2, CLUSTAL OMEGA, ALIGN, 또는 MEGALIGNTM(DNASTAR) 소프트웨어를 사용하여 당해 기술분야 내의 기술에 포함되는 다양한 방식으로 달성될 수 있다. 당해 기술분야의 숙련가는 비교될 서열의 전장에 걸쳐 최대 정렬을 달성하는 데 필요한 임의의 매개변수를 포함하여, 정렬 측정에 적절한 매개변수를 결정할 수 있다. 일부 실시양태에서, 변이체는 서열을 정렬하고 필요한 경우 갭을 도입하여 최대 서열 동일성 백분율을 달성한 후, 참조 핵산 분자 또는 폴리펩타이드와 적어도 50% 서열 동일성을 가지며, 임의의 보존적 치환은 서열 동일성의 일부로 간주하지 않는다. 이러한 변이체는, 예를 들어, 하나 이상의 아미노산 잔기가 폴리펩타이드의 N 또는 C-말단에서 첨가되거나 결실된 폴리펩타이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체는 참조 핵산 또는 폴리펩타이드의 서열과 적어도 50% 서열 동일성, 적어도 60% 서열 동일성, 적어도 65% 서열 동일성, 적어도 70% 서열 동일성, 적어도 75% 서열 동일성, 적어도 80% 서열 동일성, 적어도 85% 서열 동일성, 적어도 90% 서열 동일성, 적어도 95% 서열 동일성, 적어도 97% 서열 동일성, 적어도 98% 서열 동일성, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는다.
용어 "아미노산 치환"은 폴리펩타이드의 한 아미노산이 다른 아미노산으로 대체되는 것을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 보존적 치환이다. 아미노산 치환은 원하는 활성을 위해 스크리닝된 폴리펩타이드에 도입될 수 있으며, 예를 들어, FcRn에 대한 결합 유지 또는 개선, 항원 결합 유지 또는 개선, 면역원성 감소, 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC) 또는 보체 의존성 세포독성(CDC) 개선, 또는 약동학 강화가 있다.
본원에 사용된 용어 "보존적 치환"은 하나의 아미노산 잔기가 전하, 소수성 및 크기와 같은 유사한 특성을 갖는 또 다른 아미노산 잔기로 치환된 것을 지칭한다. 예를 들어, 아미노산은 일반적인 측쇄 특성에 따라 다음과 같이 그룹화될 수 있다:
(i) 소수성: 노르류신(Nle), Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(ii) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(iii) 산성: Asp, Glu;
(iv) 염기성: His, Lys, Arg;
(v) 강성: Gly, Pro;
(vi) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
보존적 치환은 이러한 부류 중 하나의 구성원을 동일한 부류의 또 다른 부류로 교환하는 것을 수반할 것이다. 비보존적 치환은 이러한 부류 중 하나의 구성원을 또 다른 부류로 교환하는 것을 수반할 것이다. 일부 실시양태에서, 보존적 아미노산 치환은 또 다른 아미노산 치환과 유사한 특성 또는 기능을 초래하는 치환을 지칭한다. 예를 들어, A426Y의 보존적 아미노산 치환은 A426F, A426T, 또는 A426W일 수 있다. 보존적 아미노산 치환에 대한 추가의 비제한적인 예는 표 1에 나타낸다.
[표 1]
용어 "친화도"는 분자(예를 들어, 항체 또는 수용체)의 단일 결합 부위와 이의 결합 파트너(예를 들어, 항원 또는 리간드) 간의 비공유 상호작용의 총합의 강도를 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 바와 같이, "결합 친화도"는 결합 쌍(예를 들어, 항체와 항원, 수용체와 리간드)의 구성원 간의 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화도를 지칭한다. 분자 X의 그 파트너 Y에 대한 친화도는 일반적으로 해리 상수(KD)로 나타낼 수 있다. 친화도는, 예를 들어, 면역블롯, 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA), 동역학적 배제 검정(KinExA), 바이오레이어 간섭측정법(BLI), 또는 표면 플라스몬 공명(SPR) 장치와 같은 당업계에 알려진 통상적인 단백질-단백질 상호작용 도구에 의해 측정될 수 있다. 결합 친화도를 측정하기 위한 특정의 구체적인 예시적 및 예시적인 실시양태가 아래에 설명되어 있다.
"표면 플라스몬 공명(SPR)"은, 예를 들어, BIAcoreTM 시스템(BIAcore International AB, a GE Healthcare company, Uppsala, Sweden and Piscataway, N.J.)을 사용하여, 바이오센서 매트릭스 내의 단백질 농도 변화를 검출하여 실시간 생물특이적 상호작용의 분석을 허용하는 광학 현상을 나타낸다. 추가 기술에 대해서는 문헌(Jonsson et al., 1993, Ann. Biol. Clin. 51: 19-26)을 참조한다.
용어 "아미노산 서열"은 펩타이드 또는 단백질 내의 아미노산 잔기의 서열을 지칭한다. 용어 "폴리펩타이드" 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하는 데 상호 교환적으로 사용되며, 최소 길이에 제한되지 않는다. 아미노산 잔기의 그러한 중합체는 천연 또는 비천연 아미노산 잔기를 함유할 수 있고, 아미노산 잔기의 펩타이드, 올리고펩타이드, 이량체, 삼량체, 및 다량체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 전장 단백질 및 이의 단편 둘 모두는 정의에 의해 포괄된다. 용어는 또한 폴리펩타이드의 발현 후 변형, 예를 들어, 글리코실화, 시아릴화, 아세틸화, 인산화 등을 포함한다. 또한, 본 개시내용의 목적을 위해, "폴리펩타이드"는 단백질이 원하는 활성을 유지하는 한, 천연 서열에 대한 변형, 예컨대 결실, 첨가, 및 치환(일반적으로 특성에서 보존적)을 포함하는 단백질을 지칭한다. 이러한 변형은 부위 지향적 돌연변이유발을 통하는 것과 같이 의도적일 수 있거나, 단백질을 생성하는 숙주의 돌연변이를 통해 또는 PCR 증폭으로 인한 오류와 같은 우발적인 것일 수 있다.
본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체), 및 항체 단편(예를 들어, Fab)을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 항체 구조를 지칭하며, 단 이들이 원하는 항원-결합 활성을 나타내는 한 그러하다.
용어 "항체 단편"은 전장 항체가 아닌, 전장 항체가 결합하는 항원에 결합하는 전장 항체의 일부를 포함하는 분자를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 항체 단편은 Fab; 단일 사슬 가변 단편(예를 들어, scFv); Fv; Fab'; Fab'-SH; F(ab')2; 나노바디; 디아바디; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본원에서 용어 "전장 항체" 및 "전체 항체"는 천연 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖거나 본원에 정의된 바와 같은 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭하기 위해 상호 교환적으로 사용된다.
본원에서 상호 교환적으로 사용되는 용어 "나노바디", "VHH", "VHH 항체 단편" 및 "단일 도메인 항체"는 낙타과에서 발견되는 것들의 유형의 항체의 단일 중쇄의 가변 도메인을 나타내고, 이러한 항체는 전형적으로 자연적으로 경쇄가 결여된 형태로 발견된다. 적합한 나노바디는 당해 기술분야의 숙련가에게 친숙할 것이며, 그의 예시된 예로는 낙타, 단봉낙타, 라마, 및 알파카의 나노바디가 포함된다. 그러나, 단일 도메인 항체는 낙타과가 아닌 공급원으로부터 유래될 수도 있다.
용어 "결합 도메인"은 표적 에피토프, 항원, 리간드, 또는 수용체에 특이적으로 결합하는 화합물 또는 분자의 일부를 지칭한다. 결합 도메인은 항체(예를 들어, 모노클로날, 폴리클로날, 재조합, 및 키메라 항체), 항체 단편 또는 이의 일부(예를 들어, Fab, scFv, Fv, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, 나노바디, 및 디아바디), 수용체 또는 이의 단편(예를 들어, 고양이 수용체 단백질의 세포외 도메인), 리간드, 앱타머, 및 확인된 결합 파트너를 갖는 기타 분자를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
용어 "키메라" 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 공급원 또는 종으로부터 유도되는 반면 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지는 상이한 공급원 또는 종으로부터 유래된 항체를 지칭한다.
용어 "Fc 영역", "Fc 도메인" 및 "Fc 폴리펩타이드"는 불변 영역의 적어도 일부를 함유하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 지칭한다. 용어 "야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인"은 고양이 항체의 천연 Fc 영역을 지칭한다. 용어 "고양이 IgG Fc 영역 변이체"는 야생형 고양이 Fc 영역에 비해 치환 또는 치환들을 갖는 고양이 항체의 Fc 영역의 변이체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 고양이 Fc 영역 서열은 고양이 IgG(예를 들어, IgG1a, IgG1b, 또는 IgG2)로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, IgG Fc 폴리펩타이드는 힌지, CH2, 및 CH3을 포함하지만, CH1 또는 CL을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, IgG Fc 폴리펩타이드는 CH2 및 CH3을 포함하지만, CH1, 힌지, 또는 CL을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, IgG Fc 폴리펩타이드는 CLI를 포함하거나 포함하지 않는 CH1, 힌지, CH2, 및 CH3을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 폴리펩타이드, 예컨대 IgG Fc 폴리펩타이드는 생물학적 활성을 유지하면서 하나 이상의 C-말단 아미노산, 예컨대 1 내지 20개, 1 내지 15개, 1 내지 10개, 1 내지 5개, 또는 1 내지 2개의 아미노산이 결여된다. 일부 실시양태에서, Fc 폴리펩타이드의 생물학적 활성은 FcRn에 결합하는 능력이다. 본원에 달리 명시되지 않는 한, Fc 영역 또는 불변 영역에서의 아미노산 잔기의 넘버링은 문헌(Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991)에 기재된 바와 같이 EU 인덱스로도 불리는 EU 넘버링 시스템을 따른다.
용어 "야생형"은 자연에서 발생하는 돌연변이되지 않은 버전의 폴리펩타이드 또는 이의 단편을 지칭한다. 야생형 폴리펩타이드는 재조합적으로 생성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 야생형 IgG Fc 도메인은 서열 번호 1-3 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다.
용어 "장애"는 포유류가 해당 장애에 걸리기 쉬운 병리학적 상태를 포함하는 만성 및 급성 장애 또는 질환을 포함하지만 이에 제한되지 않는 치료로부터 이점을 얻을 임의의 병태를 지칭한다.
용어 "암"은 전형적으로 조절되지 않은 세포 성장/증식을 특징으로 하는 포유류에서 생리적 병태를 지칭하거나 설명한다. 암의 예는 골수종, 암종, 림프종(예를 들어, 호지킨 및 비-호지킨 림프종), 모세포종, 육종(예를 들어, 혈관육종, 골육종, 연조직 육종, 및 조직구 육종), 백혈병, 두경부 편평 세포 암종, 타액 선암종, 유방암, 비만세포종, 흑색종, 폐암(예를 들어, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 폐의 선암종, 및 폐의 편평 세포 암종), 복막암, 간세포 암종, 편평 세포 암종, 수막종, 신경교종, 위암, 장암, 결장암, 결장직장암, 췌장 선암종, 신경교모세포종, 자궁경부암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 난소암, 방광암, 전립선암, 신장암, 외음부암, 갑상선암, 및 이행세포 암종을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
본원에서 사용된 용어 "종양"은 악성 또는 양성이든, 모든 신생물 세포 성장 및 증식, 그리고 모든 전암성 및 암성 세포 및 조직을 지칭한다. 용어 "암", "암성", "세포 증식성 장애", "증식성 장애" 및 "종양"은 본원에 언급된 바와 같이 상호 배타적이지 않다.
용어 "이펙터 기능"은 항체의 Fc 영역에 기인한 이러한 생물학적 활성을 지칭하고, 이들은 항체 이소형에 따라 달라진다. 항체 이펙터 기능의 예는 다음을 포함한다: C1q 결합 및 CDC; Fc 수용체 결합; ADCC; 식세포작용; 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체)의 하향조절; 및 B 세포 활성화.
조성물, 예를 들어, 본 개시내용의 폴리펩타이드 또는 이의 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)의 "유효량"은 특정 장애(예를 들어, 고양이에게 영향을 미치는 임의의 장애, 예를 들어, 세포 증식성 장애, 예를 들어, 암)의 측정 가능한 개선 또는 예방과 같은 원하는 치료 또는 예방 결과를 달성하는 데 필요한 적어도 최소량을 지칭한다. 본원의 유효량은 동물의 질환 상태, 연령, 성별, 및 체중, 그리고 항체가 동물에서 원하는 반응을 유도하는 능력과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 유효량은 또한 치료의 임의의 독성 또는 유해한 효과가 치료적 유익한 효과보다 크지 않은 양이다. 예방적 용도를 위해, 유익한 또는 원하는 결과에는 질환의 생화학적, 조직학적 및/또는 행동적 증상, 그 합병증, 그리고 질환 발병 동안 나타나는 중간 단계의 병리학적 표현형을 포함하여 질환의 위험을 제거 또는 감소시키거나, 중증도를 완화시키거나, 발병을 지연시키는 것과 같은 결과가 포함된다. 치료적 용도를 위해, 유익한 또는 원하는 결과에는 질환으로부터 초래되는 하나 이상의 증상 감소, 질환으로 고통받는 환자의 삶의 질 증가, 질환을 치료하는 데 필요한 다른 약제의 용량 감소, 표적화 등을 통한 또 다른 약제의 효과 향상, 질환 진행 지연 및/또는 생존 연장과 같은 임상 결과를 포함한다. 유효량은 1회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 약물, 화합물, 또는 약제학적 조성물의 유효량은 직접적 또는 간접적으로 예방적 또는 치료적 치료를 달성하는 데 충분한 양이다. 임상적 맥락에서 이해되는 바와 같이, 약물, 화합물 또는 약제학적 조성물의 유효량은 또 다른 약물, 화합물 또는 약제학적 조성물과 함께 달성될 수도 있고 달성되지 않을 수도 있다. 따라서, "유효량"은 하나 이상의 치료제 투여의 맥락에서 고려될 수 있고, 만일 하나 이상의 다른 제제와 함께 바람직한 결과가 달성될 수 있거나 달성된다면, 단일 제제는 유효량으로 제공되는 것으로 간주될 수 있다.
용어 "숙주 세포"및 "숙주 세포 배양물"은 상호 교환적으로 사용되고 상기 세포의 자손을 포함하는, 외인성 핵산이 도입된 세포를 지칭한다. 숙주 세포는 박테리아(예를 들어, 이. 콜리(E. coli) 세포) 및 진핵 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 효모 세포(예를 들어, 피치아(Pichia)(예를 들어, 문헌(Powers et al., 2001, J Immunol Methods. 251: 123-135) 참조), 한슬라(Hanseula), 또는 사카로미세스(Saccharomyces))를 포함한다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 또한 "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"를 포함하며, 이는 1차 형질전환된 세포주(예를 들어, CHO, 293E, COS, 293T 및 HeLa) 및 계대배양 횟수와 상관없이 이로부터 유래된 자손을 포함한다. 자손은 핵산 함량에 있어서 모 세포와 완전히 동일하지 않을 수 있지만, 돌연변이를 함유할 수 있다. 원래 형질전환된 세포에 대해 선별되거나 선택된 바와 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이 자손이 본원에 포함된다.
본원에 사용된 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하며, 즉, 집단을 구성하는 개별 항체는, 예를 들어, 천연 발생 돌연변이 함유하거나 모노클로날 항체 제제의 제조 동안 발생하는 가능한 변이체 항체(상기 변이체는 일반적으로 소량으로 존재한다)를 제외하고, 동일하고/하거나 동일한 에피토프에 결합한다. 전형적으로 상이한 결정기(에피토프)에 대한 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와 달리, 모노클로날 항체 제제의 각 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정인자에 대한 항체이다. 따라서, "모노클로날"이라는 수식어는 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 얻어진 항체의 특징을 나타내며, 임의의 특정 방법에 의해 항체 생산을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용될 모노클로날 항체는 하이브리도마 방법, 재조합 DNA 방법, 파아지-디스플레이 방법, 및 인간 면역글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부를 함유하는 형질전환 동물을 사용하는 방법을 포함하지만 이에 제한되지 않는 각종 기술에 의해 제조될 수 있으며, 이러한 방법 및 모노클로날 항체를 제조하기 위한 기타의 예시적인 방법이 본원에 기재되어 있다.
용어 "약제학적 조성물"은 그안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이도록 하는 형태이며, 제형이 투여될 대상체에게 허용할 수 없을 정도로 독성이 있는 추가 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다.
용어 "약제학적으로 허용되는 담체"는 활성 성분 이외의, 대상체에게 비독성인 약제학적 제형 내 성분을 지칭한다. 약제학적으로 허용되는 담체에는 완충액, 부형제, 안정제 또는 보존제가 포함되지만 이에 제한되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, "치료" (및 "치료하다" 또는 "치료하는"과 같은 이의 문법적 변형)는 치료되는 개체의 자연적인 과정을 변경하려는 임상적 개입을 지칭하며, 예방을 위해 또는 임상 병리 과정 동안 수행될 수 있다. 바람직한 치료 효과는 질환의 발병 또는 재발 방지, 증상의 완화, 질환의 임의의 직접적 또는 간접적 병리학적 결과의 감소, 전이 방지, 질환 진행 속도 감소, 질환 상태의 개선 또는 완화, 및 차도 또는 개선된 예후를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 폴리펩타이는 질환의 발병을 지연시키거나 질환의 진행을 느리게 하는데 사용된다.
본원에 사용된 바와 같이, 질환 또는 장애의 "진행 지연"이라는 용어는 질환 또는 장애(예를 들어, 세포 증식성 장애, 예를 들어, 암)의 발병을 지연, 방해, 둔화, 저지, 안정화 및/또는 지연시키는 것을 의미한다. 이러한 지연은 질환의 병력 및/또는 치료받는 개체에 따라 다양한 기간일 수 있다. 당해 기술분야의 숙련가에게 명백한 바와 같이, 충분한 또는 유의미한 지연은, 사실상, 개체에서 질환이 발병하지 않는다는 점에서, 예방을 포함할 수 있다. 예를 들어, 말기 암, 예컨대 전이의 발병이 지연될 수 있다.
용어 "에피토프"는 항체가 결합하는 항원 분자 상의 특정 부위 또는 부위들을 지칭한다. 예를 들어, 에피토프는 선형 에피토프 또는 입체형태 에피토프일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "감소시키다" 및 "억제하다"는, 예를 들어, 참조 또는 대조군과 비교하여, 예를 들어, 20% 이상, 50% 이상, 또는 75%, 85%, 90%, 95%, 또는 그 이상의 전반적인 감소를 야기하는 능력을 지칭한다.
용어 "증가시키다" 및 "향상시키다"는, 예를 들어, 참조 또는 대조군과 비교하여, 예를 들어, 20% 이상, 50% 이상, 또는 75%, 85%, 90%, 95%, 또는 그 이상의 전반적인 증가를 야기하는 능력을 지칭한다.
용어 "가변 영역" 및 "가변 도메인"은 항체를 항원에 결합시키는 데 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄(각각 VH 및 VL)의 가변 도메인은 일반적으로 유사한 구조를 갖고, 각각의 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역(FR) 및 3개의 초가변 영역(HVR)을 포함한다. (예를 들어, 문헌[Kindt et al., 2007, Kuby Immunology, 6th ed. W.H. Freeman and Co., page 91] 참조) 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원-결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 또한, 특정 항원에 결합하는 항체는 항원에 결합하는 항체의 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리하여 각각 상보적인 VL 또는 VH 도메인 라이브러리를 스크리닝할 수 있다. 예를 들어, 문헌(Portolano et al., 1993, J. Immunol. 150: 880-887; and Clarkson et al., 1991, Nature 352: 624-628)을 참조한다.
"변이체"는 단일 또는 다중 비천연 아미노산 치환, 결실, 및/또는 부가에 의해 참조 폴리펩타이드와 상이한 폴리펩타이드이다. 일부 실시양태에서, 변이체 폴리펩타이드는 참조 폴리펩타이드의 적어도 하나의 생물학적 활성을 유지한다. 일부 실시양태에서, 변이체는 참조 폴리펩타이드가 실질적으로 결여된 생물학적 활성을 갖는다. "고양이 IgG Fc 영역 변이체"는 야생형 고양이 IgG Fc 영역과 적어도 하나의 아미노산 변형, 바람직하게는 하나 이상의 아미노산 치환(들)이 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 고양이 IgG Fc 영역 변이체는 야생형 고양이 IgG Fc 영역에 비해 적어도 하나의 아미노산 치환을 가지며, 예를 들어, 1 내지 10개의 아미노산 치환, 바람직하게는 1 내지 5개의 아미노산 치환을 야생형 고양이 IgG Fc 영역에서 갖는다. 본원에서 고양이 IgG Fc 영역 변이체는 바람직하게는 야생형 고양이 IgG Fc 영역과 적어도 80%의 상동성, 가장 바람직하게는 적어도 90%의 상동성, 보다 바람직하게는 적어도 95%의 상동성을 가질 것이다. 일부 실시양태에서, 고양이 IgG Fc 영역은 고양이 IgG1a Fc 영역 변이체, 고양이 IgG1b Fc 영역 변이체 또는 고양이 IgG2 Fc 영역 변이체이다.
본원에 사용된 용어 "벡터"는 연결되는 또 다른 핵산을 전파시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 용어는 자가-복제 핵산 구조로서의 벡터뿐만 아니라 벡터가 도입되는 숙주 세포의 게놈에 통합된 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 이들이 작동적으로 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 상기 벡터는 본원에서 "발현 벡터"로서 지칭된다.
본원에 사용된 바와 같이, "투여하는"은 화합물(예를 들어, 본 개시내용의 폴리펩타이드) 또는 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물, 예를 들어, 본 개시내용의 폴리펩타이드를 포함하는 약제학적 조성물)의 용량을 환자에게 투여하는 방법을 의미한다. 본원에 기재된 방법에 사용되는 조성물은, 예를 들어, 비경구로, 근육내로, 정맥내로, 피내로, 경피로, 동맥내로, 복강내로, 병변내로, 두개내로, 관절내로, 전립선내로, 흉막내로, 기관내로, 비강내로, 유리체내로, 질내로, 직장내로, 국소로, 종양내로, 복강내로, 피하로, 결막하로, 방광내로, 점막으로, 심낭내로, 제대내로, 안구내로, 경구로, 국소적으로, 부분적으로, 흡입에 의해, 주사에 의해, 주입에 의해, 연속 주입에 의해, 표적 세포를 직접 세척하는 국소 관류에 의해, 카테터에 의해, 세정에 의해, 크림으로 또는 지질 조성물로 투여될 수 있다. 투여는 국소 또는 전신일 수 있다. 투여 방법은 다양한 인자(예를 들어, 투여되는 화합물 또는 조성물 및 치료되는 병태, 질환, 또는 장애의 중증도)에 따라 달라질 수 있다.
하나 이상의 추가의 치료제와 "조합하여" 투여하는 것은 동시(병행) 투여 및 임의의 순서로 연속 또는 순차적인 투여를 포함한다. 본원에서 "병행하여"라는 용어는 둘 이상의 치료제를 투여하는 것을 지칭하기 위해 사용되며, 여기서 투여의 적어도 일부가 시간적으로 겹치거나, 한 치료제의 투여가 다른 치료제의 투여에 비해 짧은 기간 내에 이루어진다. 예를 들어, 둘 이상의 치료제가 대략 명시된 분(minute) 수 이내의 시간 간격을 두고 투여된다. 본원에서 "순차적으로"라는 용어는 둘 이상의 치료제를 투여하는 것을 지칭하기 위해 사용되며, 여기서 하나 이상의 제제(들)의 투여가 하나 이상의 다른 제제(들)의 투여를 중단한 후에도 계속되거나, 하나 이상의 제제(들)의 투여가 하나 이상의 다른 제제(들)의 투여보다 먼저 시작된다. 예를 들어, 둘 이상의 치료제의 투여는 대략 명시된 분(minute) 수보다 긴 시간 간격을 두고 투여된다. 본원에 사용된 바와 같이, "와 함께"는 또 다른 치료 양식 외에도 하나의 치료 양식을 투여하는 것을 지칭한다. 따라서, "~와 함께"는 동물에게 다른 치료 양식을 투여하기 전, 동안, 또는 후에 하나의 치료 양식을 투여하는 것을 지칭한다.
고양이 폴리펩타이드
고양이는 전형적으로 IgG1a, IgG1b, 및 IgG2로 지칭되는 3개의 IgG 중쇄를 갖는다. 이러한 중쇄는 고양이 IgG의 세 가지 다른 하위 부류를 나타낸다. 이러한 중쇄에 대한 아미노산 및 DNA 서열은 문헌(Tang et al., 2001, Vet. Immunol., Immunopathol., 80: 259-270) 및 GENBANK 데이터베이스로부터 이용 가능하다. 예를 들어, 고양이 IgG1a 중쇄의 아미노산 서열은 GENBANK 수탁 번호 BAA32229.1을 갖고, 고양이 IgG1b 중쇄는 GENBANK 수탁 번호 BAA32230.1을 갖고, 고양이 IgG2 중쇄는 GENBANK 수탁 번호 KF811175.1을 갖는다. 고양이 항체는 또한 2가지 유형의 경쇄: 카파 및 람다를 포함한다. 이러한 경쇄의 DNA 및 아미노산 서열은 또한 GENBANK 데이터베이스로부터 얻을 수 있다. 예를 들어, 고양이 카파 경쇄 아미노산 서열은 수탁 번호 AF198257.1을 갖고 고양이 람다 경쇄는 수탁 번호 E07339.1을 갖는다.
고양이 Fc 영역의 CH2 영역:
고양이 항체의 CH2 영역은 고양이 IgG 항체의 아미노산 231 내지 340(EU 넘버링에 따름)을 포함하거나 이로 이루어진다. CH2 영역은 N 및/또는 C-말단에 1 내지 6개(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개)의 추가 아미노산 또는 결실을 포함할 수 있음을 이해해야 한다.
고양이 IgG1a의 CH2 영역의 아미노산 서열은 하기에 제공된다:
PPEMLGGPSIFIFPPKPKDTLSISRTPEVTCLVVDLGPDDSDVQITWFVDNTQVYTAKTSPREEQFNSTYRVVSVLPILHQDWLKGKEFKCKVNSKSLPSPIERTISKAK (서열 번호 4)
고양이 IgG1b의 CH2 도메인의 아미노산 서열은 하기에 제공된다:
PPEMLGGPSIFIFPPKPKDTLSISRTPEVTCLVVDLGPDDSDVQITWFVDNTQVYTAKTSPREEQFNSTYRVVSVLPILHQDWLKGKEFKCKVNSKSLPSPIERTISKDK (서열 번호 5)
고양이 IgG2의 CH2 도메인의 아미노산 서열은 하기에 제공된다:
VPEIPGAPSVFIFPPKPKDTLSISRTPEVTCLVVDLGPDDSNVQITWFVDNTEMHTAKTRPREEQFNSTYRVVSVLPILHQDWLKGKEFKCKVNSKSLPSAMERTISKAK (서열 번호 6)
고양이 Fc 영역의 CH3 영역:
고양이 항체의 CH3 영역은 고양이 IgG 항체의 아미노산 341 내지 447(EU 넘버링에 따름)을 포함하거나 이로 이루어진다. CH3 영역은 N 및/또는 C-말단에 1 내지 6개(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개)의 추가 아미노산 또는 결실을 포함할 수 있음을 이해해야 한다.
고양이 IgG1a의 CH3 도메인의 아미노산 서열은 하기에 제공된다:
GQPHEPQVYVLPPAQEELSRNKVSVTCLIKSFHPPDIAVEWEITGQPEPENNYRTTPPQLDSDGTYFVYSKLSVDRSHWQRGNTYTCSVSHEALHSHHTQKSLTQSPGK (서열 번호 7)
고양이 IgG1b의 CH3 도메인의 아미노산 서열은 하기에 제공된다:
GQPHEPQVYVLPPAQEELSRNKVSVTCLIEGFYPSDIAVEWEITGQPEPENNYRTTPPQLDSDGTYFLYSRLSVDRSRWQRGNTYTCSVSHEALHSHHTQKSLTQSPGK (서열 번호 8)
고양이 IgG2의 CH3 도메인의 아미노산 서열은 하기에 제공된다:
GQPHEPQVYVLPPTQEELSENKVSVTCLIKGFHPPDIAVEWEITGQPEPENNYQTTPPQLDSDGTYFLYSRLSVDRSHWQRGNTYTCSVSHEALHSHHTQKSLTQSPGK (서열 번호 9)
고양이 Fc 영역의 Fc 영역:
고양이 IgG 항체의 Fc 영역은 고양이 IgG 항체의 아미노산 231 내지 447(EU 넘버링에 따름)을 포함하거나 이로 이루어진다.
고양이 IgG1a의 Fc 도메인 아미노산 서열은 하기에 제공된다:
PPEMLGGPSIFIFPPKPKDTLSISRTPEVTCLVVDLGPDDSDVQITWFVDNTQVYTAKTSPREEQFNSTYRVVSVLPILHQDWLKGKEFKCKVNSKSLPSPIERTISKAKGQPHEPQVYVLPPAQEELSRNKVSVTCLIKSFHPPDIAVEWEITGQPEPENNYRTTPPQLDSDGTYFVYSKLSVDRSHWQRGNTYTCSVSHEALHSHHTQKSLTQSPGK (서열 번호 1)
고양이 IgG1b의 Fc 도메인 아미노산 서열은 하기에 제공된다:
PPEMLGGPSIFIFPPKPKDTLSISRTPEVTCLVVDLGPDDSDVQITWFVDNTQVYTAKTSPREEQFNSTYRVVSVLPILHQDWLKGKEFKCKVNSKSLPSPIERTISKDKGQPHEPQVYVLPPAQEELSRNKVSVTCLIEGFYPSDIAVEWEITGQPEPENNYRTTPPQLDSDGTYFLYSRLSVDRSRWQRGNTYTCSVSHEALHSHHTQKSLTQSPGK (서열 번호 2)
고양이 IgG2의 Fc 도메인 아미노산 서열은 하기에 제공된다:
VPEIPGAPSVFIFPPKPKDTLSISRTPEVTCLVVDLGPDDSNVQITWFVDNTEMHTAKTRPREEQFNSTYRVVSVLPILHQDWLKGKEFKCKVNSKSLPSAMERTISKAKGQPHEPQVYVLPPTQEELSENKVSVTCLIKGFHPPDIAVEWEITGQPEPENNYQTTPPQLDSDGTYFLYSRLSVDRSHWQRGNTYTCSVSHEALHSHHTQKSLTQSPGK (서열 번호 3)
하기 표 2는 EU 넘버링에 기반하여 인간 IgG1, 고양이 IgG1a, 고양이 IgG1b, 및 고양이 IgG2의 CH2 및 CH3 도메인의 아미노산 서열을 비교한다:
[표 2]
반감기를 개선시키는 고양이 IgG Fc에서의 치환
증가된 혈청 지속성은 치료용 폴리펩타이드에 유리한 특성이다. 본 개시내용은 대조군 폴리펩타이드 또는 대조군 폴리펩타이드들에 비해 고양이에서 이러한 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 반감기를 향상시키는 야생형 고양이 IgG1a, IgG1b, 및 IgG2 Fc 영역에서의 치환을 특징으로 하고, 여기서 대조군 폴리펩타이드 또는 대조군 폴리펩타이드들은 IgG Fc 영역 변이체 대신에 상응하는 야생형 고양이 IgG Fc 영역을 갖는 것을 제외하고는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들과 동일하다. 반감기를 증가시키기 위한 치환은 고양이 CH2 영역, 고양이 CH3 영역, 또는 고양이 Fc(예를 들어, CH2+CH3) 영역의 맥락에서 하나 이상에서 이루어질 수 있다.
본 개시내용은 고양이 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드를 제공하며, 여기서 고양이 IgG Fc 영역 변이체는 (i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치에 아미노산 치환(예를 들어, Tyr), 및 (ii) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고:
(i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치;
(ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 위치;
(iii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치;
(iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 위치; 및
(v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 위치;
여기서 상기 아미노산 위치는 EU 넘버링에 기반하며, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인에 비해 고양이 FcRn에 대한 증가된 결합 친화도를 갖는다. 일부 예에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Tyr의 보존적 아미노산 치환이다. 일부 예에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Asp 또는 Val의 보존적 아미노산 치환이다.
예를 들어, 본 개시내용은 고양이 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드를 제공하며, 여기서 고양이 IgG Fc 영역 변이체는 (i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치에서 Tyr, 및 (ii) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고:
(i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치;
(ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 위치;
(iii) 아미노산 치환이 Asp 또는 Val인, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치;
(iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 위치; 및
(v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 위치;
여기서 상기 아미노산 위치는 EU 넘버링에 기반하며, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인에 비해 고양이 FcRn에 대한 증가된 결합 친화도를 갖는다. 일부 예에서, IgG Fc 영역 변이체는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 예에서, IgG Fc 영역 변이체는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치에서 Val을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 또는 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Asp 또는 Glu의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu, Tyr, 또는 Val을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Val을 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Leu, Tyr, 또는 Val의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 또는 Tyr을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Leu 또는 Tyr의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 또는 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Asp 또는 Glu의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 다음을 포함한다:
(i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
(ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu;
(iii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
(iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
(v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치의 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
(vi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
(vii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
(viii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
(ix) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
(x) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp; 또는
(xi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu.
또 다른 양태에서, 본 발명은 고양이 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드를 특징으로 하며, 여기서 고양이 IgG Fc 영역 변이체는 (i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환(예를 들어, Met), 및 (ii) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고:
(i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치;
(ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 위치;
(iii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치;
(iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치;
(v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 위치; 및
(vi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 위치;
여기서 상기 아미노산 위치는 EU 넘버링에 기반하며, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인에 비해 고양이 FcRn에 대한 증가된 결합 친화도를 갖는다. 일부 예에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Met의 보존적 아미노산 치환이다. 일부 예에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Asp 또는 Val의 보존적 아미노산 치환이다. 일부 예에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Val의 보존적 아미노산 치환이다.
예를 들어, 본 발명은 고양이 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드를 특징으로 하며, 여기서 고양이 IgG Fc 영역 변이체는 (i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치에서 Met, 및 (ii) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고:
(i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치;
(ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 위치;
(iii) 아미노산 치환이 Asp 또는 Val인, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치;
(iv) 아미노산 치환이 Val인, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치;
(v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 위치; 및
(vi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 위치;
여기서 상기 아미노산 위치는 EU 넘버링에 기반하며, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인에 비해 고양이 FcRn에 대한 증가된 결합 친화도를 갖는다. 일부 예에서, IgG Fc 영역 변이체는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 예에서, IgG Fc 영역 변이체는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치에서 Val을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 또는 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Asp 또는 Glu의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu, Tyr, 또는 Val을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Val을 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Leu, Tyr, 또는 Val의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 아미노산 위치에서 Val을 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Val의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 또는 Tyr을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Leu 또는 Tyr의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 또는 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Asp 또는 Glu의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 다음을 포함한다:
(i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
(ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu;
(iii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
(iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
(v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
(vi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
(vii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
(viii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
(ix) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
(x) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
(xi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp; 또는
(xii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu.
또 다른 양태에서, 본 발명은 고양이 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드를 특징으로 하며, 여기서 고양이 IgG Fc 영역 변이체는 (i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환(예를 들어, Met), 및 (ii) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고:
(i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치;
(ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 위치;
(iii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치;
(iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치;
(v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 위치; 및
(vi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 위치;
여기서 상기 아미노산 위치는 EU 넘버링에 기반하며, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인에 비해 고양이 FcRn에 대한 증가된 결합 친화도를 갖는다. 일부 예에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Val의 보존적 아미노산 치환이다. 일부 예에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Met의 보존적 아미노산 치환이다.
예를 들어, 본 발명은 고양이 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드를 특징으로 하며, 여기서 고양이 IgG Fc 영역 변이체는 (i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치에서 Met, 및 (ii) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고:
(i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치;
(ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 위치;
(iii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치;
(iv) 아미노산 치환이 Val인, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치;
(v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 위치; 및
(vi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 위치;
여기서 상기 아미노산 위치는 EU 넘버링에 기반하며, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인에 비해 고양이 FcRn에 대한 증가된 결합 친화도를 갖는다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 또는 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Asp 또는 Glu의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu, Tyr, 또는 Val을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Val을 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Leu, Tyr, 또는 Val의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp, Glu, 또는 Val을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Val을 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Asp, Glu, 또는 Val의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 아미노산 위치에서 Val을 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Val의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 또는 Tyr을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Leu 또는 Tyr의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 또는 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Asp 또는 Glu의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 다음을 포함한다:
(i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
(ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu;
(iii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
(iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
(v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
(vi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
(vii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu;
(viii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
(ix) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
(x) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
(xi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
(xii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp; 또는
(xiii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu.
또 다른 양태에서, 본 발명은 고양이 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드를 특징으로 하며, 여기서 고양이 IgG Fc 영역 변이체는 (i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환(예를 들어, Leu), 및 (ii) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고:
(i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치;
(ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 위치;
(iii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치;
(iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 위치; 및
(v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 위치;
여기서 상기 아미노산 위치는 EU 넘버링에 기반하며, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인에 비해 고양이 FcRn에 대한 증가된 결합 친화도를 갖는다. 일부 예에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Asp의 보존적 아미노산 치환이다. 일부 예에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Leu의 보존적 아미노산 치환이다.
예를 들어, 본 발명은 고양이 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드를 특징으로 하며, 여기서 고양이 IgG Fc 영역 변이체는 (i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치에서 Leu, 및 (ii) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고:
(i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치;
(ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 위치;
(iii) 아미노산 치환이 Asp인, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치;
(iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 위치; 및
(v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 위치;
여기서 상기 아미노산 위치는 EU 넘버링에 기반하며, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인에 비해 고양이 FcRn에 대한 증가된 결합 친화도를 갖는다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Asp의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu, Tyr, 또는 Val을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Val을 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Leu, Tyr, 또는 Val의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Asp의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 또는 Tyr을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Leu 또는 Tyr의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 또는 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 위치에서의 아미노산 치환은 Asp 또는 Glu의 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 다음을 포함한다:
(i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
(ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
(iii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
(iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
(v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
(vi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
(vii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
(viii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp; 또는
(ix) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu.
선행하는 양태 중 어느 하나의 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG는 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 Fc 도메인을 포함하는 고양이 IgG1a, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 Fc 도메인을 포함하는 고양이 IgG1b, 또는 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 Fc 도메인을 포함하는 고양이 IgG2이다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG는 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 Fc 도메인을 포함하는 고양이 IgG1a이다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 Fc 도메인을 포함하는 고양이 IgG1b이다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG는 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 Fc 도메인을 포함하는 고양이 IgG2이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252, 286, 301, 309, 311, 377, 392, 및 428 중 하나 이상에 상응하는 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서 아미노산 위치는 EU 넘버링에 기반하고, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인에 비해 고양이 FcRn에 대한 증가된 결합을 갖는다. 본 개시내용에 의해 포함되는 적어도 하나의 아미노산 치환은 표 3에 개시된 것들 중 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개)을 포함할 수 있다.
[표 3]
선행하는 양태 중 어느 하나의 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 중성 pH(예를 들어, pH 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4 또는 7.5)보다 산성 pH(예를 들어, pH 5.5, pH 6.0 또는 pH 6.5)에서 더 높은 수준으로 고양이 FcRn에 결합한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 pH 7.4보다 pH 5.5 내지 6.0에서 더 높은 수준으로 고양이 FcRn에 결합한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 pH 7.4보다 pH 5.5에서 더 높은 수준으로 고양이 FcRn에 결합한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 pH 7.4보다 pH 6.0에서 더 높은 수준으로 고양이 FcRn에 결합한다.
본원에 개시된 임의의 폴리펩타이드는 미국 특허 출원 공개 제2022/0259282호, 미국 특허 출원 제18/046,082호 및 미국 특허 제11,498,953호에 개시된 바와 같은 임의의 아미노산 치환을 포함하는 하나 이상의 추가 아미노산 치환을 포함할 수 있으며, 이들 각각은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
본 개시내용은 고양이 IgG Fc 영역 변이체 또는 이의 고양이 FcRn-결합 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 제공하며, 여기서 상기 폴리펩타이드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 위치에서 아미노산 치환을 포함하고:
(i) 아미노산 치환이 S252W인, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치;
(ii) 아미노산 치환이 S254R 및 S254K로 이루어진 군으로부터 선택되는, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 254에 상응하는 위치;
(iii) 아미노산 치환이 L309V 또는 L309Y인, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치;
(iv) 아미노산 치환이 Q311R, Q311V, Q311L 및 Q311K로 이루어진 군으로부터 선택된, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치;
(v) 아미노산 치환이 S428M, S428Y, S428H 및 S428R로 이루어진 군으로부터 선택된, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치; 및
(vi) 야생형 고양이 IgG의 262, 286, 289, 290, 293, 301, 312, 326, 334, 347, 355, 377, 380, 383, 389c, 392, 426 및 437로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 위치에 상응하는 하나 이상의 위치;
여기서 상기 아미노산 위치는 EU 넘버링에 기반하며, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인와 비교할 때 고양이 FcRn에 대한 증가된 결합 친화도를 갖는다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인과 비교할 때 약 5.0 내지 약 6. 5(예를 들어, 약 5.5 또는 약 6.0)의 pH에서 고양이 FcRn에 대한 증가된 결합 친화도를 갖는다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 위치 252에서의 아미노산 치환은 S252W이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 254에 상응하는 위치에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 위치 254에서의 아미노산 치환은 S254R이다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 위치 254에서의 아미노산 치환은 S254K이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 아미노산 치환 L309V 또는 L309Y를 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 위치 311에서의 아미노산 치환은 Q311R이다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 위치 311에서의 아미노산 치환은 Q311V이다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 위치 311에서의 아미노산 치환은 Q311K이다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 위치 311에서의 아미노산 치환은 Q311L이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 위치 428에서의 아미노산 치환은 S428M이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 적어도 아미노산 치환 S428Y를 포함한다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 위치 428에서의 아미노산 치환은 S428Y이다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 위치 428에서의 아미노산 치환은 S428R이다. 일부 실시양태에서, 야생형 고양이 IgG의 위치 428에서의 아미노산 치환은 S428H이다.
또 다른 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 262, 286, 289, 290, 293, 301, 312, 326, 334, 347, 355, 377, 380, 383, 389c, 392, 426 및 437로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 위치에 상응하는 하나 이상의 위치에서의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 L262Q, L262E, T286E, T286D, T289K, S290V, S290Y, E293D, E293H, E293K, R301L, D312T, K326D, R334D, Q347L, Q355L, I377V, I377Y, E380D, E380V, E380T, I383L, N389c-R, R392E, S426L, S426H 및 T437L, 및 상기 중 임의의 것의 보존적 아미노산 치환으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 L262Q, L262E, T286E, T286D, T289K, S290V, S290Y, E293D, E293H, E293K, R301L, D312T, K326D, R334D, Q347L, Q355L, I377V, I377Y, E380D, E380V, E380T, I383L, N389c-R, R392E, S426L, S426H 및 T437L로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 고양이 IgG Fc 영역 변이체 또는 이의 고양이 FcRn-결합 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 제공하고, 여기서 폴리펩타이드는 2개 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서 2개 이상의 아미노산 치환은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
(i) 아미노산 치환이 S252W, S252Y, S252F 및 S252R로 이루어진 군으로부터 선택된, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치에서 아미노산 치환;
(ii) 아미노산 치환이 S254R 및 S254K로 이루어진 군으로부터 선택된 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 254에 상응하는 위치에서 아미노산 치환;
(iii) 아미노산 치환이 L309V, L309Y 및 L309E로 이루어진 군으로부터 선택된 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치에서 아미노산 치환;
(iv) 아미노산 치환이 Q311R, Q311V, Q311L 및 Q311K로 이루어진 군으로부터 선택된, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치에서 아미노산 치환;
(v) 아미노산 치환이 S428L, S428M, S428Y, S428H 및 S428R 로 이루어진 군으로부터 선택된 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치에서 아미노산 치환;
(vi) 야생형 고양이 IgG의 262, 286, 289, 290, 293, 301, 312, 326, 334, 347, 355, 377, 380, 383, 389c, 392, 426 및 437로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 위치에 상응하는 하나 이상의 위치에서 아미노산 치환; 및
(vii) 아미노산 치환이 S434F, S434W, S434H, S434R, 및 S434Y로 이루어진 군으로부터 선택된 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치에서 아미노산 치환;
여기서 상기 아미노산 위치는 EU 넘버링에 기반하고, 상기 2개 이상의 아미노산 치환은 상이한 위치에 있고, 상기 폴리펩타이드는 (a) 야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인, 및 (b) 2개 이상의 아미노산 치환 중 하나만을 포함하는 폴리펩타이드와 비교할 때 고양이 FcRn에 대해 증가된 결합 친화도를 갖는다.
일부 실시양태에서, 2개 이상의 아미노산 치환은 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치에서 아미노산 치환을 포함하고, 여기서 아미노산 치환은 T286E 및 T286D로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 2개 이상의 아미노산 치환은 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 289에 상응하는 위치에서 아미노산 치환을 포함하고, 여기서 아미노산 치환은 T289K 및 T289H로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 2개 이상의 아미노산 치환은 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 위치에서 아미노산 치환을 포함하고, 여기서 아미노산 치환은 R301L이다.
일부 실시양태에서, 2개 이상의 아미노산 치환은 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 334에 상응하는 위치에서 아미노산 치환을 포함하고, 여기서 아미노산 치환은 R334D이다.
일부 실시양태에서, 2개 이상의 아미노산 치환은 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 426에 상응하는 위치에서 아미노산 치환을 포함하고, 여기서 아미노산 치환은 S426L 및 S426H로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 2개 이상의 아미노산 치환은 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 437에 상응하는 위치에서 아미노산 치환을 포함하고, 여기서 아미노산 치환은 T437L이다.
일부 실시양태에서, 2개 이상의 아미노산 치환은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다:
(i) Q311R 및/또는 Q311L과 조합된 S252Y;
(ii) S254R, S254K, L262E, T286D, T286E, T289K, E293D, E293K, L309V, L309E, K326D 및 Q347L 중 하나 이상과 조합된 S434Y;
(iii) S434F 및 E380D;
(iv) S252R, T286E, Q311V, Q311K, D312T, I377V, I383L, N389cR 중 하나 이상과 조합된 S428L;
(v) S428L, E380D 및 S434R;
(vi) S428L, E380T 및 S434R;
(vii) L262Q와 조합된 S252R;
(viii) T260E, L309E 및 Q355L;
(ix) S290V 및 R344D; 및
(x) R301L, E380V 및 T437L.
일부 실시양태에서, 2개 이상의 아미노산 치환은 T286E, Q311V 및 S428Y이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 서열 번호　1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 경우에, 본 개시내용은 서열 번호 4 내지 6 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 고양이 IgG CH2 영역 변이체를 제공한다. 또한, 서열 번호 4 내지 6 중 어느 하나로부터 1 내지 15개(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15개)까지 변하는 아미노산 서열을 포함하는 고양이 IgG CH2 영역 변이체를 제공한다.
다른 경우에, 본 개시내용은 서열 번호 7 내지 9 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97% 또는 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 고양이 IgG CH3 영역 변이체를 특징으로 한다. 또한, 서열 번호 7 내지 9 중 어느 하나로부터 1 내지 15개(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15개)까지 변하는 아미노산 서열을 포함하는 고양이 IgG CH3 영역 변이체를 특징으로 한다.
특정 경우에, 본 개시내용은 서열 번호 1 내지 3 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 고양이 IgG Fc 영역 변이체를 특징으로 한다. 또한, 서열 번호 1 내지 3 중 어느 하나로부터 1 내지 20개(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개)까지 변하는 아미노산 서열을 포함하는 고양이 IgG Fc 영역 변이체가 개시되어 있다.
일부 실시양태에서, 고양이 IgG Fc CH2 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들이 제공되며, CH2 영역 변이체는 서열 번호 4 내지 6 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 고양이 IgG Fc CH3 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 특징으로 하며, CH3 영역 변이체는 서열 번호 7 내지 9 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 고양이 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 특징으로 하며, Fc 영역 변이체는 서열 번호 1 내지 3 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
다른 곳에서 언급된 바와 같이, 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 250-256, 아미노산 위치 285-288; 아미노산 위치 307-315; 아미노산 위치 376-380, 아미노산 위치 383 내지 392; 또는 아미노산 위치 428-437에 상응하는 영역에서 적어도 하나의 추가 아미노산 치환을 추가로 포함하며, 여기서 아미노산 위치는 EU 넘버링에 기반하고, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인에 비해 고양이 FcRn에 대한 증가된 결합을 갖는다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 하기 표 4에 개시된 것들로부터 선택된 적어도 하나(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개)의 추가의 아미노산 치환을 포함한다.
[표 4] 고양이 FcRN에 대한 고양이 IgG1a Fc 변이체의 결합을 증가시키는 아미노산 치환 목록(군 1 및 2)
아미노산 치환은 CH2 도메인, CH3 도메인, 또는 Fc 도메인의 하나 또는 둘 모두의 사슬 상에서 이루어질 수 있다. 일부 경우에서, CH2 도메인, CH3 도메인, 또는 Fc 도메인의 사슬 둘 모두 상의 치환은 동일하다. 일부 경우에, CH2 도메인, CH3 도메인, 또는 Fc 도메인의 사슬 둘 모두 상의 치환은 동일하지 않다. 일부 경우에, Fc 영역은 이펙터 기능을 증가 또는 감소시키고/시키거나 생성물 이질성을 개선하는 하나 이상의 추가의 치환을 포함한다.
반감기 향상 치환과 조합될 수 있는 다른 치환
치료용 폴리펩타이드/단백질(예를 들어, 모노클로날 항체)의 개발은 원하는 폴리펩타이드/단백질을 생성하기 위한 복잡한 일련의 활동을 조율하는 복잡한 과정이다. 여기에는 특이성, 친화성, 기능적 활성, 조작된 세포주에서의 발현 수준의 최적화, 장기 안정성, 이펙터 기능의 제거 또는 향상 및 상업적으로 실행 가능한 제조 및 정제 방법의 개발이 포함된다. 본 개시내용은 상기 목적 중 임의의 하나 이상을 용이하게 하는 Fc 영역 변이체의 하나 이상의 추가의 아미노산 위치에서의 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, Fc 영역 변이체는 이펙터 기능을 증가 또는 감소시키고/시키거나 생성물 이질성을 개선하는 하나 이상의 추가의 아미노산 위치에서의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 치환은 고양이 Fc 영역의 이펙터 기능을 감소시키기 위해 도입된다. 이러한 치환은 당해 기술분야의 숙련가에게 친숙할 것이며, 고양이 IgG의 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7)의 위치에 존재할 수 있다. 예시적인 예는 WO 2019/035010 A1을 포함한다.
일부 실시양태에서, 치환은 단백질 A 크로마토그래피에 의한 정제를 용이하게 하기 위해 야생형 고양이 IgG Fc 영역에 치환을 도입하여 단백질 A에 대한 결합을 향상시킨다. 이러한 치환은 고양이 IgG의 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7)의 위치에 존재할 수 있다. 예시적인 예는 WO 2019/035010 A1을 포함한다.
일부 실시양태에서, 모 폴리펩타이드 또는 야생형 폴리펩타이드와 비교하여 FcRn에 대한 결합 친화도를 변경하기 위해 (예를 들어, FcRn과의 결합 친화도를 증가 또는 감소시키기 위해) 추가의 아미노산 치환이 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 모 폴리펩타이드 또는 야생형 폴리펩타이드와 비교하여 FcRn에 대한 결합 친화도를 변경하기 위해 (예를 들어, FcRn과의 결합 친화도를 증가 또는 감소시키기 위해) 치환이 이루어진다. 일부 변형에서, 변형은 308F, 428L, 434M 및 434S로 이루어진 군으로부터 선택된 1개, 2개, 3개, 또는 4개의 변형일 수 있으며, 여기서 넘버링은 EU 넘버링에 따른다. 일부 실시양태에서, Fc 변이체는 252Y/428L, 428L/434H, 428L/434F, 428L/434Y, 428L/434A, 428L/434M, 및 428L/434S로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 변형을 포함하며, 여기서 넘버링은 EU 넘버링에 따른다. 일부 실시양태에서, Fc 변이체는 428L/434S, 308F/428L/434S로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 변형을 포함하며, 여기서 넘버링은 EU 넘버링에 따른다. 일부 실시양태에서, Fc 변이체는 259I/434S, 308F/434S, 308F/428L/434S, 259I/308F/434S, 307Q/308F/434S, 250I/308F/434S, 및 308F/319L/434S로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 변형을 포함하며, 여기서 넘버링은 EU 넘버링에 따른다. 이러한 변형에 대한 상세한 설명은, 예를 들어, US8883973B2에 기재되어 있으며, 이는 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 고양이 항체의 힌지 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 반감기를 증가시키기 위해 고양이 항체의 힌지 영역에 대한 변형이 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 변형은 EU 넘버링에 따라 228P이다.
일부 실시양태에서, FcRn과의 결합은 pH-의존성이다. H310 및 H435(EU 넘버링)는 pH-의존성 결합에 중요할 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 위치 310(EU 넘버링)에서의 아미노산은 히스티딘이다. 일부 실시양태에서, 위치 435(EU 넘버링)에서의 아미노산 잔기는 Ala이다. 일부 실시양태에서, 두 위치 모두에서의 아미노산은 히스티딘이다.
일부 실시양태에서, Fc 영역은 LALA 돌연변이(EU 넘버링에서 L234A 및 L235A 돌연변이), 또는 LALA-PG 돌연변이(EU 넘버링에서 L234A, L235A, P329G 돌연변이)를 갖는다. 일부 실시양태에서, LALA 돌연변이는 P234A, M234A, 또는 S234A이다. 일부 실시양태에서, 위치 234(EU 넘버링)에서의 아미노산 잔기는 Ala이다. 일부 실시양태에서, 위치 234(EU 넘버링)에서의 아미노산 잔기는 Ala이다. 일부 실시양태에서, 위치 234 및 235(EU 넘버링)에서의 아미노산 잔기는 Ala이다.
고양이 IgG Fc 변이체를 포함하는 폴리펩타이드
본 개시내용은 고양이에서 반감기 증가가 유익할 수 있는 임의의 폴리펩타이드를 포함한다. 반감기를 증가시키기 위해, 이러한 폴리펩타이드는 상기 개시된 Fc 영역 변이체(예를 들어, CH2 영역, CH3 영역, 또는 CH2+CH3 영역)를 포함하도록 설계된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 폴리펩타이드는 항체 힌지 영역을 포함한다. 힌지 영역은 폴리펩타이드의 항원 또는 리간드-결합 도메인 및 Fc 영역 변이체 사이에 위치할 수 있다. 일부 경우에, 힌지 영역은 사이토카인, 성장 인자, 효소 또는 펩타이드의 C-말단에 부착되고, 힌지 영역은 Fc 영역 변이체의 N-말단에 부착된다. 예시적 힌지 영역 서열은 하기에 제공된다.
IgG1a: KTDHPPGPKPCDCPKCP(서열 번호 10);
IgG1b: KTDHPPGPKPCDCPKCP(서열 번호 11); 및
IgG2: KTASTIESKTGEGPKCP(서열 번호 12);
본 개시내용의 재조합 단백질에서 힌지 영역은, 사용되는 경우, 서열 번호 10-12 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열에 대해 0 내지 6개(즉, 0, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개)의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 본 개시내용의 재조합 단백질에 사용된 힌지 영역은 서열 번호 10-12 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일하다.
일부 실시양태에서, 항체 힌지 서열 대신 링커 서열을 사용하여 폴리펩타이드(예를 들어, 항체, 수용체의 리간드-결합 도메인, 효소, 리간드, 펩타이드)를 본원에 개시된 고양이 Fc 영역 변이체에 연결할 수 있다. 특정 실시양태에서, 링커는 펩타이드 결합에 의해 연결된 1 내지 20개의 아미노산으로 구성되고, 여기서 아미노산은 20개의 천연 발생 아미노산으로부터 선택된다. 이러한 아미노산 중 일부는 당해 기술분야의 숙련가게 잘 알려진 바와 같이 글리코실화될 수 있다. 다른 실시양태에서, 1 내지 20개의 아미노산은 글리신, 알라닌, 프롤린, 아스파라긴, 글루타민, 및 리신으로부터 선택된다. 다른 실시양태에서, 링커는 글리신 및 알라닌과 같이 입체적으로 방해받지 않는 아미노산으로 대부분으로 구성된다. 펩타이드 링커의 예는: Gly, Ser; Gly Ser; Gly Gly Ser; Ser Gly Gly; Gly Gly Gly Ser(서열 번호 13); Ser Gly Gly Gly (서열 번호 14); Gly Gly Gly Gly Ser(서열 번호 15); Ser Gly Gly Gly Gly(서열 번호 16); Gly Gly Gly Gly Gly Ser(서열 번호 17); Ser Gly Gly Gly Gly Gly(서열 번호 18); Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser(서열 번호 19); Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly(서열 번호 20); (Gly Gly Gly Gly Ser)n(서열 번호 15)을 포함하고, 여기서 n은 1 이상의 정수(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5)이고; (Ser Gly Gly Gly Gly)n(서열 번호 16)을 포함하고, 여기서 n은 1 이상의 정수(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5)이다.
또한, 비펩타이드 링커를 사용하여 관심 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 본원에 개시된 Fc 영역 변이체에 연결할 수 있다. 예를 들어, n이 2 내지 20인 -NH(CH2) nC(O)-와 같은 알킬 링커가 사용될 수 있다. 이러한 알킬 링커는 저급 알킬(예를 들어, C1-C6) 저급 아실, 할로겐(예를 들어, Cl, Br), CN, NH2, 페닐 등과 같은 임의의 비입체 장애 기로 추가로 치환될 수 있다.
본 개시내용의 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 결합 도메인을 포함할 수 있다. 결합 도메인은 본원에 기재된 선택된 표적의 단백질, 서브유닛, 도메인, 모티프, 및/또는 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 결합 도메인은 항체, 항체 단편, 또는 수용체의 리간드-결합 부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항체 단편은 면역글로불린 분자의 6개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 단편은 Fab, 단일 사슬 가변 단편(scFv), Fv, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, 나노바디, 및 디아바디로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 수용체의 리간드-결합 부분은 고양이 수용체 단백질의 리간드 결합 도메인 또는 고양이 수용체 단백질의 세포외 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들(예를 들어, 융합 폴리펩타이드)은 단백질을 포함할 수 있으며, 여기서 단백질은 본원에 기재된 치료용 단백질이다. 일부 실시양태에서, 표적(예를 들어, 결합 도메인의 표적의 경우) 또는 치료용 단백질(예를 들어, 융합 폴리펩타이드의 경우)은 17-IA, 4-1BB, 4Dc, 6-케토-PGF1a, 8-이소-PGF2a, 8-옥소-dG, A1 아데노신 수용체, A33, ACE, ACE-2, 액티빈, 액티빈 A, 액티빈 AB, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 RIA, 액티빈 RIA ALK-2, 액티빈 RIB ALK-4, 액티빈 RIIA, 액티빈 RIIB, ADAM, ADAM10, ADAM12, ADAM15, ADAM17/TACE, ADAMS, ADAM9, ADAMTS, ADAMTS4, ADAMTS5, 어드레신, aFGF, ALCAM, ALK, ALK-1, ALK-7, 알파-1-항트립신, 알파-V/베타-1 길항제, ANG, Ang, APAF-1, APE, APJ, APP, APRIL, AR, IgE, 안지오텐신 1형(AT1) 수용체, 안지오텐신 2형(AT2) 수용체, ARC, ART, 아르테민, 항-Id, ASPARTIC, 심방나트륨 이뇨 인자, av/b3 인테그린, Axl, b2M, B7-1, B7-2, B7-H, B-림프구 자극인자(BlyS), BACE, BACE-1, Bad, BAFF, BAFF-R, Bag-1, BAK, Bax, BCA-1, BCAM, Bcl, BCMA, BDNF, b-ECGF, bFGF, BID, Bik, BIM, BLC, BL-CAM, BLK, BMP, BMP-2 BMP-2a, BMP-3 오스테오게닌, BMP-4 BMP-2b, BMP-5, BMP-6 Vgr-1, BMP-7 (OP-1), BMP-8(BMP-8a, OP-2), BMPR, BMPR-IA(ALK-3), BMPR-IB(ALK-6), BRK-2, RPK-1, BMPR-II(BRK-3), BMPs, b-NGF, BOK, 봄베신, 골 유래 신경영양 인자, BPDE, BPDE-DNA, BTC, 보체 인자 3 (C3), C3a, C4, C5, C5a, C10, CA125, CAD-8, 칼시토닌, cAMP, 암배아항원(CEA), 암종 관련 항원, 카텝신 A, 카텝신 B, 카텝신 C/DPPI, 카텝신 D, 카텝신 E, 카텝신 H, 카텝신 L, 카텝신 O, 카텝신 S, 카텝신 V, 카텝신 X/Z/P, CBL, CC1, CCK2, CCL, CCL1, CCL11, CCL12, CCL13, CCL14, CCL15, CCL16, CCL17, CCL18, CCL19, CCL2, CCL20, CCL21, CCL22, CCL23, CCL24, CCL25, CCL26, CCL27, CCL28, CCL3, CCL4, CCL5, CCL6, CCL7, CCL8, CCL9/10, CCR, CCR1, CCR10, CCR10, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CD1, CD2, CD3, CD3E, CD4, CD5, CD6, CD7, CD8, CD10, CD11a, CD11b, CD11c, CD13, CD14, CD15, CD16, CD18, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD25, CD27L, CD28, CD29, CD30, CD30L, CD32, CD33 (p67 단백질), CD34, CD38, CD40, CD40L, CD44, CD45, CD46, CD47, CD49a, CD52, CD54, CD55, CD56, CD61, CD64, CD66e, CD74, CD80 (B7-1), CD89, CD95, CD123, CD137, CD138, CD140a, CD146, CD147, CD148, CD152, CD164, CEACAM5, CFTR, cGMP, CINC, 클로스트리디움 보툴리눔 독소, 클로스트리디움 퍼프린젠스 독소, CKb8-1, CLC, CMV, CMV UL, CNTF, CNTN-1, COX, C-Ret, CRG-2, CT-1, CTACK, CTGF, CTLA-4, CX3CL1, CX3CR1, CXCL, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL4, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL11, CXCL12, CXCL13, CXCL14, CXCL15, CXCL16, CXCR, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, 사이토케라틴 종양 관련 항원, DAN, DCC, DcR3, DC-SIGN, Decay 가속 인자, des(1-3)-IGF-I(뇌 IGF-1), Dhh, 디곡신, DNAM-1, Dnase, Dpp, DPPIV/CD26, Dtk, ECAD, EDA, EDA-A1, EDA-A2, EDAR, EGF, EGFR(ErbB-1), EMA, EMMPRIN, ENA, 엔도텔린 수용체, 엔케팔리나제, eNOS, Eot, eotaxin1, EpCAM, Ephrin B2/EphB4, EPO, ERCC, E-셀렉틴, ET-1, 인자 IIa, 인자 VII, 인자 VIIIc, 인자 IX, 섬유아세포 활성화 단백질(FAP), Fas, FcR1, FEN-1, 페리틴, FGF, FGF-19, FGF-2, FGF3, FGF-8, FGFR, FGFR-3, 피브린, FL, FLIP, Flt-3, Flt-4, 난포 자극 호르몬, 프랙탈킨, FZD1, FZD2, FZD3, FZD4, FZD5, FZD6, FZD7, FZD8, FZD9, FZD10, G250, 가스 6, GCP-2, GCSF, GD2, GD3, GDF, GDF-1, GDF-3(Vgr-2), GDF-5(BMP-14, CDMP-1), GDF-6(BMP-13, CDMP-2), GDF-7(BMP-12, CDMP-3), GDF-8(미오스타틴), GDF-9, GDF-15(MIC-1), GDNF, GDNF, GFAP, GFRa-1, GFR-알파1, GFR-알파2, GFR-알파3, GITR, GLP1, GLP2, 글루카곤, Glut 4, 당단백질 IIb/IIIa(GP IIb/IIIa), GM-CSF, gp130, gp72, GRO, GnRH, 성장 호르몬 방출 인자, 합텐(NP-cap 또는 NIP-cap), HB-EGF, HCC, HCMV gB 외피 당단백질, HCMV) gH 외피 당단백질, HCMV UL, 조혈성장인자(HGF), B형 간염 gp120, 헤파라나제, Her2, Her2/neu(ErbB-2), Her3(ErbB-3), Her4(ErbB-4), 단순포진바이러스(HSV) gB 당단백질, HSV gD 당단백질, HGFA, 고분자량 흑색종 관련 항원(HMW-MAA), HIV gp120, HIV IIIB gp120 V3 루프, HLA, HLA-DR, HM1.24, HMFG PEM, HRG, Hrk, 심장 미오신, 거대세포바이러스(CMV), 성장 호르몬(GH), HVEM, 1-309, IAP, ICAM, ICAM-1, ICAM-3, ICE, ICOS, IFNg, Ig, IgA 수용체, IgE, IGF, IGF 결합 단백질, IGF-1R, IGFBP, IGF-I, IGF-II, IL, IL-1, IL-1R, IL-2, IL-2R, IL-4, IL-4R, IL-5, IL-5R, IL-6, IL-6R, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-18, IL-18R, IL-21, IL-22, IL-23, IL-25, IL-31, IL-33, 인터루킨 수용체(예를 들어, IL-1R, IL-2R, IL-4R, IL-5R, IL-6R, IL-8R, IL-9R, IL-10R, IL-12R, IL-13R, IL-15R, IL-17R, IL-18R, IL-21R, IL-22R, IL-23R, IL-25R, IL-31R, IL-33R), 인터페론(INF)-알파, INF-베타, INF-감마, 인히빈, iNOS, 인슐린 A-사슬, 인슐린 B-사슬, 인슐린 유사 성장 인자 1, 인테그린 알파2, 인테그린 알파3, 인테그린 알파4, 인테그린 알파4/베타1, 인테그린 알파4/베타7, 인테그린 알파5(알파V), 인테그린 알파5/베타1, 인테그린 알파5/베타3, 인테그린 알파6, 인테그린 베타1, 인테그린 베타2, 인터페론 감마, IP-10, I-TAC, JE, 칼리크레인 2, 칼리크레인 5, 칼리크레인 6, 칼리크레인 11, 칼리크레인 12, 칼리크레인 14, 칼리크레인 15, 칼리크레인 L1, 칼리크레인 L2, 칼리크레인 L3, 칼리크레인 L4, KC, KDR, 각질세포 성장 인자(KGF), 라미닌 5, LAMP, LAP, LAP(TGF-1), 잠재성 TGF-1, 잠재성 TGF-1 bp1, LBP, LDGF, LECT2, Lefty, 루이스-Y 항원, 루이스-Y 관련 항원, LFA-1, LFA-3, Lfo, LIF, LIGHT, 지단백질, LIX, LKN, Lptn, L-셀렉틴, LT-a, LT-b, LTB4, LTBP-1, 폐 계면활성제, 황체형성호르몬, 림프독소 베타 수용체, Mac-1, MAdCAM, MAG, MAP2, MARC, MCAM, MCAM, MCK-2, MCP, M-CSF, MDC, Mer, 메탈로프로테아제, MGDF 수용체, MGMT, MHC(HLA-DR), MIF, MIG, MIP, MIP-1-알파, MK, MMAC1, MMP, MMP-1, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-2, MMP-24, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MPIF, Mpo, MSK, MSP, 뮤신(Muc1), MUC18, 뮐러관 억제 물질, Mug, MuSK, NAIP, NAP, NAV 1.7, NCAD, N-카데린, NCA 90, NCAM, NCAM, 네프릴리신, 뉴로트로핀-3, -4 또는 -6, 뉴르투린, 신경 성장 인자(NGF), NGFR, NGF-베타, nNOS, NO, NOS, Npn, NRG-3, NT, NTN, OB, OGG1, 온코스타틴 M 수용체(OSMR), OPG, OPN, OSM, OX40L, OX40R, p150, p95, PADPr, 부갑상선 호르몬, PARC, PARP, PBR, PBSF, PCAD, P-카데린, PCNA, PD1, PDL1, PDGF, PDGF, PDK-1, PECAM, PEM, PF4, PGE, PGF, PGI2, PGJ2, PIN, PLA2, 태반 알칼리성 인산가수분해효소(PLAP), P1GF, PLP, PP14, 프로인슐린, 프로릴랙신, 단백질 C, PS, PSA, PSCA, 전립선 특이 막 항원(PSMA), PTEN, PTHrp, Ptk, PTN, R51, RANK, RANKL, RANTES, RANTES, 릴랙신 A-사슬, 릴랙신 B-사슬, 레닌, 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV) F, RSV Fgp, Ret, 류마티스 인자, RLIP76, RPA2, RSK, S100, SCF/KL, SDF-1, SERINE, 혈청 알부민, sFRP-3, Shh, SIGIRR, SK-1, SLAM, SLPI, SMAC, SMDF, SMOH, SOD, SPARC, Stat, STEAP, STEAP-II, TACE, TACI, TAG-72(종양 관련 당단백질-72), TARC, TCA-3, T-세포 수용체(예: T-세포 수용체 알파/베타), TdT, TECK, TEM1, TEM5, TEM7, TEM8, TERT, 고환 PLAP 유사 알칼리성 포스파타제, TfR, TGF, TGF-알파, TGF-베타, TGF-베타 범특이적, TGF-베타 R1(ALK-5), TGF-베타 R11, TGF-베타 RIIb, TGF-베타 RIII, TGF-베타1, TGF-베타2, TGF-베타3, TGF-베타4, TGF-베타5, 트롬빈, 흉선 Ck-1, 갑상선 자극 호르몬, Tie, TIMP, TIQ, 조직 인자, TMEFF2, Tmpo, TMPRSS2, TNF, TNF-알파, TNF-알파 베타, TNF-베타2, TNFc, TNF-RI, TNF-RII, TNFRSF10A (TRAIL R1Apo-2, DR4), TNFRSF10B (TRAIL R2DR5, KILLER, TRICK-2A, TRICK-B), TNFRSF10C (TRAIL R3DcR1, LIT, TRID), TNFRSF10D (TRAIL R4 DcR2, TRUNDD), TNFRSF11A (RANK ODF R, TRANCE R), TNFRSF11B (OPG OCIF, TR1), TNFRSF12 (TWEAK R FN14), TNFRSF13B (TACI), TNFRSF13C (BAFF R), TNFRSF14 (HVEM ATAR, HveA, LIGHT R, TR2), TNFRSF16 (NGFR p75NTR), TNFRSF17 (BCMA), TNFRSF18 (GITR AITR), TNFRSF19 (TROY TAJ, TRADE), TNFRSF19L (RELT), TNFRSF1A (TNF R1CD120a, p55-60), TNFRSF1B (TNF RII CD120b, p75-80), TNFRSF26 (TNFRH3), TNFRSF3 (LTbR TNF RIII, TNFC R), TNFRSF4 (OX40 ACT35, TXGP1 R), TNFRSF5 (CD40 p50), TNFRSF6 (Fas Apo-1, APT1, CD95), TNFRSF6B (DcR3M68, TR6), TNFRSF7 (CD27), TNFRSF8 (CD30), TNFRSF9 (4-1BB CD137, ILA), TNFRSF21 (DR6), TNFRSF22 (DCTRAIL R2 TNFRH2), TNFRST23 (DCTRAIL R1TNFRH1), TNFRSF25 (DR3Apo-3, LARD, TR-3, TRAMP, WSL-1), TNFSF10(TRAIL Apo-2 리간드, TL2), TNFSF11(TRANCE/RANK 리간드 ODF, OPG 리간드), TNFSF12(TWEAK Apo-3 리간드, DR3 리간드), TNFSF13(APRIL TALL2), TNFSF13B(BAFF BLYS, TALL1, THANK, TNFSF20), TNFSF14(LIGHT HVEM 리간드, LTg), TNFSF15(TL1A/VEGI), TNFSF18(GITR 리간드 AITR 리간드, TL6), TNFSF1A(TNF-a 코넥틴, DIF, TNFSF2), TNFSF1B(TNF-b LTa, TNFSF1), TNFSF3(LTb TNFC, p33), TNFSF4(OX40 리간드 gp34, TXGP1), TNFSF5 (CD40 리간드 CD154, gp39, HIGM1, IMD3, TRAP), TNFSF6(Fas 리간드 Apo-1 리간드, APT1 리간드), TNFSF7(CD27 리간드 CD70), TNFSF8(CD30 리간드 CD153), TNFSF9(4-1BB 리간드 CD137 리간드), TP-1, t-PA, Tpo, TRAIL, TRAIL R, TRAIL-R1, TRAIL-R2, TRANCE, 전달 수용체, TRF, Trk(예를 들어, TrkA), TROP-2, TSG, TSLP, 종양 관련 항원 CA 125, 루이스 Y 관련 탄수화물을 발현하는 종양 관련 항원, TWEAK, TXB2, Ung, UPAR, uPAR-1, 유로키나제, VCAM, VCAM-1, VECAD, VE-카데린, VE-카데린-2, VEFGR-1(fit-1), VEGF, VEGFR, VEGFR-3(flt-4), VEGI, VIM, 바이러스 항원, VLA, VLA-1, VLA-4, VNR 인테그린, 폰 빌레브란트 인자, WIF-1, WNT1, WNT2, WNT2B/13, WNT3, WNT3A, WNT4, WNT5A, WNT5B, WNT6, WNT7A, WNT7B, WNT8A, WNT8B, WNT9A, WNT9A, WNT9B, WNT10A, WNT10B, WNT11, WNT16, XCL1, XCL2, XCR1, XCR1, XEDAR, XIAP, XPD 및 호르몬과 성장 인자 수용체로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항체 단편은 하기 표 5로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 예를 들어, 항체 또는 항체 단편은 표 5로부터 선택된 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함할 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 항체 단편은 표 5에서 특정 표적에 결합하는 것으로 나열된 항체에 대한 6개의 CDR을 모두 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항체 단편은 미국 특허 출원 공개 번호 US 2020/0062840, US 2022/0119513, US 2022/0106391, US 2022/0177594, 또는 US 2022/0127351; 미국 특허 번호 US 9,328,164; 및 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2020/056393 또는 WO 2023/097275에 개지된 임의의 항체 또는 항체 단편일 수 있다.
[표 5] 고양이 항체에 대한 예시적인 CDR 서열
일부 실시양태에서, 결합 도메인은 고양이의 하나 이상의 치료 표적 또는 항원, 예컨대 ACE, ACE-2, 액티빈, 액티빈 A, 액티빈 AB, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 RIA, 액티빈 RIA ALK-2, 액티빈 RIB ALK-4, 액티빈 RIIA, 액티빈 RIIB, ADAM, ADAM10, ADAM12, ADAM15, ADAM17/TACE, ADAMS, ADAM9, ADAMTS, ADAMTS4, ADAMTS5, ANG, Ang, 안지오텐신 1형(AT1) 수용체, 안지오텐신 2형(AT2) 수용체, 심방나트륨 이뇨 인자, av/b3 인테그린, b-ECGF, CD19, CD20, CD30, CD34, CD40, CD40L, CD47, COX, CTLA-4, EGFR(ErbB-1), EPO, 난포 자극 호르몬, GDF-8(미오스타틴), GLP1, GLP2, GnRH, 성장 호르몬 방출 인자, IgE, IL, IL-1, IL-1R, IL-2, IL-2R, IL-4, IL-4R, IL-5, IL-5R, IL-6, IL-6R, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-18, IL-18R, IL-21, IL-22, IL-23, IL-25, IL-31, IL-33, 인터루킨 수용체(예를 들어, IL-1R, IL-2R, IL-4R, IL-5R, IL-6R, IL-8R, IL-9R, IL-10R, IL-12R, IL-13R, IL-15R, IL-17R, IL-18R, IL-21R, IL-22R, IL-23R, IL-25R, IL-31R, IL-33R), LAP(TGF-1), 잠재성 TGF-1, 잠재성 TGF-1 bp1, LFA-1, 신경 성장 인자(NGF), NGFR, NGF-베타, OSMR, OX40L, OX40R, PD1, PDL1, TGF, TGF-알파, TGF-베타, TGF-베타 범특이적, TGF-베타 R1(ALK-5), TGF-베타 R11, TGF-베타 RIIb, TGF-베타 RIII, TGF-베타1, TGF-베타2, TGF-베타3, TGF-베타4, TGF-베타5, TNF, TNF-알파, TNF-알파 베타, TNF-베타2, TNFc, TNF-RI, TNF-RII, TNFRSF16(NGFR p75NTR), TNFRSF9(4-1BB CD137, ILA), VEFGR-1(fit-1), VEGF, VEGFR 및 VEGFR-3(flt-4)에 특이적으로 결합하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 단백질을 포함할 수 있고, 여기서 단백질은 치료용 단백질, 예를 들어, EPO, CTLA4, LFA3, VEGFR1/VEGFR3, IL-1R, IL-4R, GLP-1 수용체 작용제, 또는 트롬보포이에틴 결합 펩타이드이다. 일부 실시양태에서, 결합 도메인은 ACE, ACE-2, 액티빈, 액티빈 A, 액티빈 AB, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 RIA, 액티빈 RIA ALK-2, 액티빈 RIB ALK-4, 액티빈 RIIA, 액티빈 RIIB, ADAM, ADAM10, ADAM12, ADAM15, ADAM17/TACE, ADAMS, ADAM9, ADAMTS, ADAMTS4, ADAMTS5, ANG, Ang, 안지오텐신 1형(AT1) 수용체, 안지오텐신 2형(AT2) 수용체, 심방나트륨 이뇨 인자, av/b3 인테그린, b-ECGF, CD19, CD20, CD30, CD34, CD40, CD40L, CD47, COX, CTLA-4, EGFR(ErbB-1), EPO, 난포 자극 호르몬, GDF-8(미오스타틴), GLP1, GLP2, GnRH, 성장호르몬 방출 인자, IgE, IL, IL-1, IL-1R, IL-2, IL-2R, IL-4, IL-4R, IL-5, IL-5R, IL-6, IL-6R, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-18, IL-18R, IL-21, IL-22, IL-23, IL-25, IL 31, IL-33, 인터루킨 수용체(예를 들어, IL-1R, IL-2R, IL-4R, IL-5R, IL-6R, IL-8R, IL-9R, IL-10R, IL-12R, IL 13R, IL-15R, IL-17R, IL-18R, IL-21R, IL-22R, IL-23R, IL-25R, IL-31R, IL-33R), LAP (TGF-1), 잠재성 TGF-1, 잠재성 TGF-1 bp1, LFA-1, 신경 성장 인자(NGF), NGFR, NGF-베타, OSMR, OX40L, OX40R, PD1, PDL1, TGF, TGF-알파, TGF-베타, TGF-베타 범특이적, TGF-베타 R1(ALK-5), TGF-베타 R11, TGF-베타 RIIb, TGF-베타 RIII, TGF-베타1, TGF-베타2, TGF-베타3, TGF-베타4, TGF-베타5, TNF, TNF 알파, TNF-알파 베타, TNF-베타2, TNFc, TNF-RI, TNF-RII, TNFRSF16(NGFR p75NTR), TNFRSF9(4-1BB CD137, ILA), VEFGR-1(fit-1), VEGF, VEGFR 또는 VEGFR-3(flt-4)이다.
예를 들어, 본 개시내용의 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 면역글로불린 분자의 6개의 CDR을 포함하는 결합 도메인을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 결합 도메인은 NGF에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 결합 도메인은 항체 또는 항체 단편이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항체 단편은 서열 번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열 번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열 번호 159의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, ATS의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호 161의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 중쇄 및 경쇄를 포함하며, 여기서 중쇄는 서열 번호 101-150 중 어느 하나와 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 101과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 102와 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 103과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 104와 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 105와 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Val을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 106과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 107과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Val을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 108과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 109와 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Try를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 110과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 111과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 112와 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 113과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 114와 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 115와 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 116과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 117과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Val을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 118과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 119와 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Val을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 120과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 121과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 아미노산 위치에서 Val을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 122와 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Try를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 123과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 124와 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 125와 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 126과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 127과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 128과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 129와 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 130과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Val을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 131과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 132와 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Val을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 133과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 134와 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 135와 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 아미노산 위치에서 Val을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 136과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Try를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 137과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 138과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 139와 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 140과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 141과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 142와 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 143과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Val을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 144와 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 145와 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 146과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Try를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 147과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 148과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 149와 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu를 포함하고, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄는 서열 번호 150과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄는 서열 번호 100과 적어도 80%(예를 들어, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%)의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 치료용 단백질은 본원에 기재된 임의의 단백질이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 본원에 기재된 바와 같은 고양이 IgG CH2 도메인, IgG CH3 도메인, 또는 IgG Fc 영역을 추가로 포함한다. 변형된 고양이 IgG CH2 도메인, IgG CH3 도메인, 또는 IgG Fc 영역은 생체내 치료용 단백질의 반감기를 향상시킬 수 있다.
약제학적 조성물
일 양태에서, 본 발명은 (i) 본원에 개시된 임의의 폴리펩타이드, 및 (ii) 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 특징으로 한다.
본원에 기재된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 약제학적 또는 멸균 조성물들을 제조하기 위해, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 혼합될 수 있다. (예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences and U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, Pa. (1984)] 참조).
치료제 및 진단제 제형은 허용되는 담체, 부형제 또는 안정제와 혼합하여, 예를 들어, 동결건조된 분말, 슬러리, 수용액 또는 현탁액의 형태로 제조할 수 있다(예를 들어, 문헌[Hardman, et al. (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, N.Y.; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, N.Y.; Avis, et al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner and Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y.] 참조). 일 실시양태에서, 본 발명의 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 pH 5-6의 아세트산나트륨 용액에서 적절한 농도로 희석되고, 긴장성을 위해 NaCl 또는 수크로스가 첨가된다. 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80과 같은 추가의 제제가 안정성을 향상시키기 위해 첨가될 수 있다.
단독으로 또는 또 다른 제제와 조합하여 투여되는 폴리펩타이드 조성물의 독성 및 치료 유효성은, 예를 들어, LD50(집단의 50%에게 치명적인 용량) 및 ED50(집단의 50%에게 치료적으로 유효한 용량)을 결정하기 위해 세포 배양 또는 실험 동물에서 표준 약제학적 절차에 의해 결정될 수 있다. 독성 효과와 치료 효과 간의 용량 비율은 치료 지수(LD50/ED50)이다. 특정 양태에서, 높은 치료 지수를 나타내는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이들이 바람직하다. 이러한 세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 얻은 데이터는 고양이에서 사용하기 위한 용량 범위를 정하는 데 사용될 수 있다. 이러한 화합물의 용량은 바람직하게는 독성이 거의 없거나 전혀 없는 ED50을 포함하는 순환 농도 범위 내에 있다. 용량은 사용되는 투여 형태 및 투여 경로에 따라 이 범위 내에서 변할 수 있다.
임의의 적합한 투여 모드가 사용될 수 있다. 적합한 투여 경로의 예는 경구, 직장, 경점막, 장, 비경구; 근육내, 피하, 피내, 골수내, 척수강내, 직접 심실내, 정맥내, 복강내, 비강내, 안내, 흡입, 통기, 국소, 피부, 경피 또는 동맥내를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 주사와 같은 침습적 경로로 투여될 수 있다. 추가의 실시양태에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 정맥내, 피하, 근육내, 동맥내, 종양내, 또는 흡입, 에어로졸 전달에 의해 투여된다.
본원에 개시된 약제학적 조성물은 주입에 의해 투여될 수 있다. 약제학적 조성물을 투여하는 잘 알려진 임플란트 및 모듈의 예는 다음을 포함한다: 제어된 속도로 약제를 분배하기 위한 이식 가능 한 미세-주입 펌프를 개시하는 미국 특허 제4,487,603호; 정확한 주입 속도로 약제를 전달하기 위한 약제 주입 펌프를 개시하는 미국 특허 제4,447,233호; 연속 약물 전달을 위한 가변 유동 이식 가능한 주입 장치를 개시하는 미국 특허 제4,447,224호; 다중-챔버 구획을 갖는 삼투성 약물 전달 시스템을 개시하는 미국 특허 제4,439,196호. 이러한 다른 많은 임플란트, 전달 시스템, 및 모듈은 당해 기술분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다.
대안적으로, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 전신적 방식보다는 국소 방식으로, 예를 들어, 면역병리학을 특징으로 하는 관절염 관절 또는 병원체 유발 병변 내로의 항체의 직접 주사를 통해 투여할 수 있는데, 이는 종종 데포 또는 서방성 제형으로 투여된다. 또한, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 표적 약물 전달 시스템, 예를 들어 조직 특이적 항체로 코팅된 리포좀 형태로 투여할 수 있으며, 이는 예를 들어, 면역병리학적 특징을 보이는 관절염 관절 또는 병원체 유발 병변을 표적으로 한다. 리포좀은 병변 조직을 표적으로 하여 선택적으로 흡수될 것이다.
투여 용법은 치료되는 고양이의 연령, 체중 및 신체 상태, 치료 항체의 혈청 또는 조직 교체율, 증상 수준, 치료용 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 면역원성, 및 생물학적 기질 내 표적 세포의 접근성을 포함하지만 이에 제한되지 않는 여러 인자에 따라 달라진다. 바람직하게는, 투여 용법은 표적 질환 상태에서 개선을 달성하는 한편, 동시에 바람직하지 않은 부작용을 최소화하기에 충분한 치료용 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 전달한다. 따라서, 전달되는 생물학적 제제의 양은 특정 치료용 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들 및 치료되는 질환의 중증도에 따라 부분적으로 달라진다. 치료용 항체의 적절한 용량을 선택하는 것에 대한 지침이 이용 가능하다(예를 들어, 문헌[Wawrzynczak Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK (1996); Milgrom et al. New Engl. J. Med. 341: 1966-1973 (1999); Slamon et al. New Engl. J. Med. 344: 783-792 (2001); Beniaminovitz et al. New Engl. J. Med. 342: 613-619 (2000); Ghosh et al. New Engl. J. Med. 348: 24-32 (2003); Lipsky et al. New Engl. J. Med. 343: 1594-1602 (2000)] 참조).
폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 적절한 용량은 당해 기술분야의 숙련가에 의해, 예를 들어, 치료에 영향을 미치는 것으로 당업계에 알려지거나 의심되는 매개변수 또는 인자를 사용하여 결정된다. 일반적으로, 용량은 최적의 용량보다 다소 적은 양으로 시작하고, 그 후 임의의 부작용에 대해 원하는 또는 최적의 효과가 달성될 때까지 적은 증분으로 증가된다. 중요한 진단 지표에는, 예를 들어, 염증의 증상 또는 생성된 염증성 사이토카인의 수준이 포함된다.
핵산, 벡터, 숙주 세포, 및 제조 방법
본 개시내용은 또한 본원에 기재된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 암호화하는 핵산 또는 핵산들, 핵산 또는 핵산들을 포함하는 벡터 또는 벡터들, 및 핵산 또는 핵산들 또는 벡터 또는 벡터들을 포함하는 숙주 세포들을 포함한다.
일 양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 임의의 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 또는 핵산들을 특징으로 한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 임의의 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 또는 핵산들을 포함하는 발현 벡터 또는 발현 벡터들을 특징으로 한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 임의의 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 또는 핵산들을 포함하는 숙주 세포, 또는 본원에 개시된 임의의 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 또는 핵산들을 포함하는 발현 벡터 또는 발현 벡터들을 특징으로 한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 폴리펩타이드를 제조하는 방법을 특징으로 하며, 상기 방법은:
(i) 본원에 개시된 임의의 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 또는 핵산들을 제공하는 단계;
(ii) 상기 핵산 또는 핵산들을 숙주 세포 배양물에서 발현시켜 폴리펩타이드를 생성하는 단계; 및 선택적으로,
(iii) (ii)에서 생성된 상기 폴리펩타이드를 숙주 세포 배양물로부터 수집하는 단계를 포함한다.
본원에 기재된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 박테리아 또는 진핵 세포에서 생성될 수 있다. 일부 폴리펩타이드, 예를 들어, Fab는 박테리아 세포, 예를 들어, 이. 콜리(E. coli) 세포에서 생산될 수 있다. 폴리펩타이드는 또한 진핵 세포, 예컨대 형질전환된 세포주(예를 들어, CHO, 293E, COS, 293T, Hela)에서 생성될 수 있다. 또한, 폴리펩타이드(예를 들어, scFvs)는 효모 세포, 예컨대 피치아(예를 들어, 문헌[Powers et al., J Immunol Methods. 251: 123-35 (2001)] 참조), 한슬라, 또는 사카로미세스에서 발현될 수 있다. 관심 항체를 생성하기 위해, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드들을 작제하여 발현 벡터 또는 발현 벡터들 내로 도입한 다음, 적합한 숙주 세포에서 발현시킨다. 발현을 개선하기 위해, 유전자의 뉴클레오티드 서열은 아미노산 서열을 변화시키지 않고(또는 최소한의 변화 -예를 들어, 중쇄 또는 경쇄의 C-말단 잔기의 제거) 재암호화될 수 있다. 잠재적인 기록을 위한 영역은 번역 개시, 코돈 사용 및 의도치 않은 mRNA 스플라이싱과 관련된 영역을 포함한다. 본원에 기재된 Fc 영역 변이체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 당해 기술분야의 숙련가에 의해 용이하게 구상될 것이다.
표준 분자 생물학 기술을 사용하여 재조합 발현 벡터(들)를 제조하고, 숙주 세포를 형질감염시키고, 형질전환체를 선택하고, 숙주 세포를 배양하고, 폴리펩타이드(예를 들어, 항체)를 회수하는 데 사용될 수 있다.
폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들이 박테리아 세포들(예를 들어, 이. 콜리)에서 발현되어야 하는 경우, 발현 벡터는 박테리아 세포에서 벡터의 증폭을 허용하는 특성을 가질 수 있다. 또한, 이. 콜리, 예컨대 JM109, DH5α, HB101, 또는 XL1-Blue을 숙주로서 사용하는 경우, 벡터는 프로모터, 예를 들어, lacZ 프로모터(Ward et al., 341: 544-546 (1989), araB 프로모터(Better et al., Science, 240: 1041-1043 (1988)), 또는 T7 프로모터를 가질 수 있으며, 이는 이. 콜리에서 효율적인 발현을 가능하게 할 수 있다. 이러한 벡터의 예는, 예를 들어, M13-시리즈 벡터, pUC-시리즈 벡터, pBR322, p블루스크립트, pCR-스크립트, pGEX-5X-1(Pharmacia), "QIAexpress system" (QIAGEN), pEGFP, 및 pET(이러한 발현 벡터가 사용되는 경우, 호스트는 바람직하게는 BL21 발현 T7 RNA 폴리머라제임)를 포함한다. 발현 벡터는 항체 분비를 위한 신호 서열을 함유할 수 있다. 이. 콜리의 주변세포질 내로의 생성을 위해, pelB 신호 서열(Lei et al., J. Bacteriol., 169:4379 (1987))을 항체 분비를 위한 신호 서열로서 사용될 수 있다. 박테리아 발현의 경우, 염화칼슘 방법 또는 전기천공 방법을 사용하여 발현 벡터를 박테리아 세포 내로 도입할 수 있다.
폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들이 CHO, COS 및 NIH3T3 세포와 같은 동물 세포에서 발현되는 경우, 발현 벡터는 이러한 세포에서의 발현을 위한 프로모터, 예를 들어, SV40 프로모터(Mulligan et al., Nature, 277: 108 (1979)) (예를 들어, 초기 원숭이 바이러스 40 프로모터), MMLV-LTR 프로모터, EF1α 프로모터(Mizushima et al., Nucleic Acids Res., 18: 5322 (1990)), 또는 CMV 프로모터(예를 들어, 인간 거대세포바이러스 즉시 초기 프로모터)를 포함할 수 있다. Fc 영역 변이체를 암호화하는 핵산 서열 이외에, 재조합 발현 벡터는 숙주 세포에서 벡터의 복제를 조절하는 서열(예를 들어, 복제 기원) 및 선택 가능한 마커 유전자와 같은 추가 서열을 보유할 수 있다. 선택 가능한 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포의 선택을 용이하게 한다(예를 들어, 미국 특허 제 4,399,216호, 제4,634,665호, 및 제5,179,017호 참조). 예를 들어, 전형적으로 선택 가능한 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포 상에서 G418, 하이그로마이신, 또는 메토트렉세이트와 같은 약물에 대한 내성을 부여한다. 선택 가능한 마커를 갖는 벡터의 예는 pMAM, pDR2, pBK-RSV, pBK-CMV, pOPRSV, 및 pOP13을 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 포유동물 세포에서 생성된다. 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 발현하기 위한 예시적인 포유류 숙주 세포는 중국 햄스터 난소(CHO 세포) (문헌[Urlaub and Chasin (1980), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 4216-4220]에 기재된 dhfr- CHO 세포 포함, 예를 들어, 문헌[Kaufman and Sharp (1982), Mol. Biol. 159: 601 621]에 기재된 바와 같이 DHFR 선택 가능한 마커와 함께 사용됨), 인간 배아 신장 293 세포(예를 들어, 293, 293E, 293T), COS 세포, NIH3T3 세포, 림프구 세포주, 예를 들어, NS0 골수종 세포 및 SP2 세포, 및 형질전환 동물, 예를 들어, 형질전환 포유류로부터의 세포를 포함한다. 예를 들어, 세포는 유선 상피 세포이다.
항체 발현을 위한 예시적인 시스템에서, 항체의 항체 중쇄 및 항체 경쇄를 둘 모두 암호화하는 재조합 발현 벡터를 인산칼슘 매개 형질감염에 의해 dhfr-CHO 세포에 도입한다. 재조합 발현 벡터 내에서, 항체 중쇄 및 경쇄 유전자는 각각 인핸서/프로모터 조절 요소(예를 들어, CMV 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 요소 또는 SV40 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 요소와 같은 SV40, CMV, 아데노바이러스 등으로부터 유래됨)에 작동적으로 연결되어 유전자의 높은 전사 수준을 유도한다. 재조합 발현 벡터는 또한 DHFR 유전자를 보유하며, 이는 메토트렉세이트 선택/증폭을 사용하여 벡터로 형질감염된 CHO 세포를 선택할 수 있게 한다. 선택된 형질전환체 숙주 세포를 항체 중쇄 및 경쇄의 발현을 가능하게 하기 위해 배양하고, 온전한 항체는 배양 배지로부터 회수한다.
치료 방법
본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 고양이 질환 또는 장애의 치료 또는 예방 필요로 하는 고양이에서 임의의 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용될 수 있다. 본 발명은 반복 투여가 요구되는 만성 병태의 치료에 특히 유용하다. 단백질 치료제의 증가된 반감기 때문에, 덜 빈번한 투여 및/또는 감소된 용량 수준이 가능할 수 있다.
일 양태에서, 본 발명은 고양이 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 필요로 하는 고양이에서 고양이 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법을 특징으로 하고, 상기 방법은 본원에 개시된 임의의 폴리펩타이드를 포함하는 조성물, 또는 (i) 본원에 개시된 임의의 폴리펩타이드, 및 (ii) 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 고양이 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 필요로 하는 고양이에서 고양이 질환 또는 장애의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 본원에 개시된 임의의 폴리펩타이드, 또는 (i) 본원에 개시된 임의의 폴리펩타이드, 및 (ii) 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 특징으로 한다.
임의의 적합한 고양이 질환 또는 장애가 치료될 수 있다. 일부 실시양태에서, 고양이 질환 또는 장애는 알레르기성 질환, 만성 통증, 급성 통증, 염증성 질환, 자가면역 질환, 내분비 질환, 위장관 질환, 심혈관 질환, 신장 질환, 가임 관련 장애, 감염성 질환, 또는 암이다.
또 다른 실시양태에서, 고양이 질환 또는 장애는 아토피성 피부염, 알레르기성 피부염, 골관절염 통증, 관절염, 빈혈, 또는 비만이다.
일부 실시양태에서, 치료 또는 예방되는 질환, 장애, 병태 또는 증상은 알레르기성 질환, 만성 통증, 급성 통증, 염증성 질환, 자가면역 질환, 내분비 질환, 위장관 질환, 골격/근골격 질환, 심혈관 질환, 신경계 질환, 신장 질환, 대사 질환, 면역계 질환, 유전/유전적 질환, 가임 관련 질환, 감염성 질환, 또는 암이다. 특정 실시양태에서, 치료 또는 예방되는 질환 또는 장애는 아토피성 피부염, 알레르기성 피부염, 식품 알레르기, 골관절염 통증, 수술 전후 통증, 치통, 암 통증, 관절염, 빈혈, 비만, 또는 당뇨병이다.
항체는 질환을 치료하거나 예방하기 위해 사용될 뿐만 아니라 정상적인 생물학적 기능, 예를 들어, 생식력 또는 행동을 조절하기 위해 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은 비경구, 피하 투여, 정맥내 주입, 또는 근육내 주사에 의해 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은 일정 기간에 걸쳐 볼루스 주사(bolus injection)로서 또는 연속 주입에 의해 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은 근육내, 복강내, 뇌척수내, 피하, 동맥내, 활막내, 척수강내, 또는 흡입 경로에 의해 투여된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은 용량당 0.01 mg/kg 체중 내지 50 mg/kg 체중 범위의 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은, 예를 들어, 매일, 매주, 매월, 2개월마다, 3개월마다, 4개월마다, 5개월마다, 또는 6개월마다 0.01 내지 55 mg/kg, 0.01 내지 50 mg/kg, 0.01 내지 45 mg/kg, 0.01 내지 40 mg/kg, 0.01 내지 35 mg/kg, 0.01 내지 30 mg/kg, 0.01 내지 25 mg/kg, 0.01 내지 20 mg/kg, 0.01 내지 15 mg/kg, 0.01 내지 10 mg/kg, 0.01 내지 5 mg/kg, 또는 0.01 내지 1 mg/kg으로 투여된다. 항체의 하나의 예시적 용량은 약 0.01 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 범위일 것이다. 따라서, 0.01 mg/kg, 0.02 mg/kg, 0.04 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.2 mg/kg, 0.4 mg/kg, 1.0 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4.0 mg/kg, 또는 10 mg/kg (또는 이들의 임의의 조합)의 하나 이상의 용량이 동물에게 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은 용량당 2 mg/kg 체중으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은 서로 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월 또는 6개월 이내에, 또는 1주, 2주 또는 3주 이내에 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은 매주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은 2주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은 3주마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은 매달 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은 2개월마다주 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은 3개월마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은 4개월마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은 5개월마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은 6개월마다 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은 고양이에게 한 번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 투여된다. 일부 실시양태에서, 용량은 적어도 2주 또는 3주 연속 동안 주 1회 투여되고, 일부 실시양태에서, 치료 주기는 2회 이상 반복되고, 선택적으로 1주 이상 치료하지 않는 기간이 중간에 삽입될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은 하나 이상의 추가 치료제와 조합하여, 동시에, 순차적으로, 또는 함께 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은 하나 이상의 추가 치료제와 조합하여 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은 하나 이상의 추가 치료제와 동시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은 하나 이상의 추가 치료제와 순차적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들, 또는 본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 포함하는 약제학적 조성물은 하나 이상의 추가 치료제와 함께 투여된다. 임의의 적합한 추가의 치료제가 사용될 수 있다.
진단
본원에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 또한 다양한 진단 목적을 위해, 예를 들어, 고양이가 임의의 특정 질환 또는 장애를 갖는지 여부를 결정하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 결합 도메인을 포함할 수 있다. 결합 도메인은 본원에 기재된 바와 같은 단백질, 서브유닛, 도메인, 모티프, 및/또는 에피토프(예를 들어, 암 세포용 마커)에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 표지기(labeling group)를 추가로 포함한다. 일반적으로, 표지기는 이들이 검출되는 검정에 따라 다양한 부류로 분류된다: a) 방사성 또는 중동위원소일 수 있는 동위원소 표지; b) 자성 표지(예를 들어, 자성 입자); c) 산화활성 모이어티; d) 광학 염료; 효소기(예를 들어, 양고추냉이 퍼옥시다제, β-갈락토시다제, 루시퍼라제, 알칼리성 포스파타제); e) 비오틴화기; 및 f) 2차 리포터에 의해 인식되는 미리 정해진 폴리펩타이드 에피토프(예를 들어, 류신 지퍼 쌍 서열, 2차 항체 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그 등). 일부 실시양태에서, 표지기는 잠재적인 입체 장애를 감소시키기 위한 다양한 길이의 스페이서 아암을 통해 항체에 결합된다. 단백질을 표지하기 위한 다양한 방법은 당업계에 알려져 있으며, 본 발명을 수행하는 데 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 표지기는 프로브, 염료(예를 들어, 형광 염료), 또는 방사성 동위원소(예를 들어, 3H, 14C, 22Na, 36Cl, 35S, 33P, 또는 125I)이다.
특정 표지에는 발색단, 인광체 및 형광체를 포함하지만 이에 제한되지 않는 광학 염료도 포함될 수 있으며, 후자는 많은 경우 특이적이다. 형광단은 "소분자" 형광체, 또는 단백질성 형광체 중 하나 일 수 있다.
형광 표지는 고유한 형광 특성을 통해 검출될 수 있는 임의의 분자일 수 있다. 적합한 형광 표지는 플루오레세인, 로다민, 테트라메틸로다민, 에오신, 에리트로신, 쿠마린, 메틸-쿠마린, 피렌, 말라카이트 그린, 스틸벤, 루시퍼 옐로우, 캐스케이드 블루J, 텍사스 레드, IAEDANS, EDANS, BODIPY FL, LC Red 640, Cy 5, Cy 5.5, LC Red 705, 오레곤 그린, Alexa-Fluor 염료(Alexa Fluor 350, Alexa Fluor 430, Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 568, Alexa Fluor 594, Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 660, Alexa Fluor 680), 캐스케이드 블루, 캐스케이드 옐로우 및 R-피코에리트린(PE)(분자 프로브, Eugene, Oreg.), FITC, 로다민, 및 텍사스 레드(Pierce, Rockford, Ill.), Cy5, Cy5.5, Cy7(Amersham Life Science, Pittsburgh, PA.)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 형광체를 포함하는 적합한 광학 염료는 그 전문이 참조로 포함된 문헌[Molecular Probes Handbook by Richard P. Haugland]에 기재되어 있다.
적합한 단백질성 형광 표지에는 또한 Renilla, Ptilosarcus, 또는 Aequorea 종의 GFP(Chalfie et al., 1994, Science, 263: 802-805)를 포함하는 녹색 형광 단백질, EGFP(Clontech Laboratories, Inc., Genbank Accession Number U55762), 청색 형광 단백질(BFP, Quantum Biotechnologies, Inc. 1801 de Maisonneuve Blvd. West, 8th Floor, Montreal, Quebec, Canada H3H1J9; Stauber, 1998, Biotechniques, 24: 462-471; Heim et al., 1996, Curr. Biol., 6: 178-182), 강화된 황색 형광 단백질(EYFP, Clontech Laboratories, Inc.), 루시퍼라제(Ichiki et al., 1993, J. Immunol., 150: 5408-5417), β-갈락토시다제 (Nolan et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 2603-2607) 및 레닐라(WO 92/15673, WO 95/07463, WO 98/14605, WO 98/26277, WO 99/49019, 미국 특허 번호 5,292,658, 5,418,155, 5,683,888, 5,741,668, 5,777,079, 5,804,387, 5,874,304, 5,876,995, 및 5,925,558)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 본 문단에서 상기 인용된 모든 참조문헌은 그 전체가 본원에 명시적으로 참조로서 포함된다.
검정
Fc γ RI 및 FcγRIII 결합:
FcγRI 및 FcγRIII에 대한 결합은 ADCC를 매개하는 항체의 능력의 척도이다. 항체에 대한 이러한 특성을 평가하기 위해, FcγRI 및 FcγRIII에 대한 항체의 결합을 측정하는 검정은 당업계에 알려진 방법을 사용하여 수행될 수 있다.
C1q 결합:
보체의 제1 성분인 C1q에 대한 결합은 CDC를 매개하는 항체의 능력의 척도이다. 항체에 대한 이러한 특성을 평가하기 위해, C1q에 대한 항체의 결합을 측정하는 검정은 당업계에 알려진 방법을 사용하여 수행될 수 있다.
반감기
항체의 반감기를 측정하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 문헌[Booth et al., MAbs, 10(7): 1098-1110 (2018)]을 참조한다. 예시적인 동물 모델에는 비인간 영장류 모델 및 형질전환 마우스 모델이 포함된다. 형질전환 마우스 모델은 마우스 FcRn 알파 사슬이 결손되어 있을 수 있고, 고양이 FcRn 알파 형질전환 유전자를 (예를 들어, 구성적 프로모터의 제어 하에) 발현할 수 있다. 고양이 FcRn 알파 사슬은 생체내에서 마우스 β2-마이크로글로불린 단백질과 쌍을 이루어 기능적 키메라 FcRn 이종이량체를 형성할 수 있다. 예로서, 항체(예를 들어, 고양이 항체)의 반감기는 고양이 모델에 항체를 주입하고 특정 기간에 걸쳐 혈청 내의 항체의 수준을 측정함으로써 측정될 수 있다.
실시예
실시예 1: Biacore TM 8K를 사용한 표면 플라스몬 공명 분석
BiacoreTM 8K를 사용한 표면 플라스몬 공명(SPR) 분석을 위해, 소 혈청 알부민(BSA)을 CM5 센서 칩에 고정화한다. 유동 셀 1 및 2의 센서 칩 표면은 50 mmol/L N-하이드록시석신이미드 및 200 mmol/L 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카보디이미드 하이드로클로라이드를 새로 혼합하여 420초(10 μL/분) 동안 활성화된다. 그 후, 10 mM 아세트산나트륨 (pH 4.5)에 희석된 BSA를 유동 셀 2에 주입하여 접합을 달성하고, 유동 셀 1은 블랭크로서 설정한다. 아민 커플링 반응 후, 칩 표면 상의 나머지 활성 커플링 부위를 1 mM 에탄올아민 하이드로클로라이드를 420초 주입하여 차단한다. 결합 실험에 사용된 러닝 완충액은 HBS-EP(10 mM HEPES, 500 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% Tween 20, pH 5.5)이며, 이는 25℃에서 실행된다. 변이체로부터의 상층액을 칩 표면 상에 주입하고, SASA(혈청 알부민에 대한 단일-도메인 항체) 태그(예를 들어, US 2013/0129727A1 참조)를 통해 고정화된 BSA에 60초 동안 포집한다. 고양이 FcRn(GenBank KF773786(IgG 수용체 FcRn 대형 서브유닛 p51) 및 유럽 뉴클레오티드 아카이브 AY829266.1(고양이 베타-2-마이클로글로불린))을 200 nM으로 120초 동안 주사하고, 러닝 완충액을 사용하여 120초 동안 해리를 완료한다. BSA의 고정화 단계에 대한 유속은 10 μl/분이었고, 회합 및 해리 단계에 대한 유속은 30 μl/분이다. 모든 데이터는 BiacoreTM 8K 평가 소프트웨어 버전 1.1을 사용하여 처리된다.
실시예 2: C1 바이오센서를 사용하여 고양이 FcRn에 대한 고양이 IgG1a 변이체의 결합 동역학
고양이 IgG1a 변이체(S252Y, S252M, T286D, T286E, R301L, R301V, R301Y, L309V, L309E, Q311V, I377Y, I377L, R392D, R392E, S428M, S428L, S252Y + T286D, S252Y + T286E, S252Y + R301L, S252Y + R301V, S252Y + R301Y, S252Y + L309V, S252Y + L309D, S252Y + I377Y, S252Y + I377L, S252Y + R392D, S252Y + R392E, S252M + T286D, S252M + T286E, S252M + R301L, S252M + R301V, S252M + R301Y, S252M + L309V, S252M + L309D, S252M + Q311V, S252M + I377Y, S252M + I377L, S252M + R392D, S252M + R392E, S428M + T286D, S428M + T286E, S428M + R301L, S428M + R301V, S428M + R301Y, S428M + L309V, S428M + L309E, S428M + L309D, S428M + Q311V, S428M + I377Y, S428M + I377L, S428M + R392D, S428M + R392E, S428L + T286D, S428L + R301L, S428L + R301V, S428L + R301Y, S428L + L309D, S428L + I377Y, S428L + I377L, S428L + R392D, S428L + R392E, 및 야생형)를 pH 6.0에서 고양이 FcRn(GenBank KF773786(고양이 FcRn 대형 서브유닛 p51) 및 유럽 뉴클레오티드 아카이브 AY829266.1(고양이 베타-2-마이크로글루린))과의 결합 동역학을 평가한다. EU 넘버링은 위치를 식별하는 데 사용된다. 본 연구에서, 단일 아미노산 치환 또는 아미노산 치환의 조합을 갖는 고양이 Fc 변이체는 고양이 IgG1a (Kanai et al., 2000, Vet. Immunol., Immunopathol. 73: 53)로 합성되는데, 이는 Gearing DP 등(2016, J Vet Intern Med, 30: 1129)에 의해 기재된 가변 도메인을 사용한다. 합성된 고양이 IgGa 변이체 DNA를 포유류 발현 벡터 내로 서브클로닝하고, CHO 세포 내로 일시적으로 형질감염시킨다. 컨디셔닝된 배지는 단백질 A 크로마토그래피를 사용하여 정제된다.
고양이 FcRn 결합 실험의 경우, 모든 검정은 25℃에서 BiacoreTM 8K+ 시스템에서 수행된다. 이러한 실험 세트에서, 항체는 표준 아민 커플링 시약을 사용하여 Series S C1 센서 칩에 고정시킨다. 200 mmol/L 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카보디이미드 하이드로클로라이드(EDC)와 50 mmol/L N-하이드록시석신이미드(NHS)의 혼합물을 420초 동안 주입하여 표면을 활성화시킨다. 이어서, 항체를 10 mM 아세트산나트륨 pH 5.0에 0.5 내지 2 μg/ml 농도로 120초 동안 주입한다. 마지막으로, 1 M 에탄올아민을 420초 동안 주입한다. 러닝 완충액은 pH 6.0으로 조정된 1X 인산염 완충 식염수(PBS)-P+ (Cytiva, Cat # 28995084)이다.
pH 6.0에서 고양이 FcRn에 대한 고양이 IgG1a 변이체의 결합 친화도를 평가하기 위해, 1.56 내지 2000 nM의 고양이 FcRn 농도 범위를 선택하여 단일 주기 모드로 주입한다.
항체당 4가지 농도를 5 μl/분으로 90초 동안 주입한 후, 180초 해리시킨다. 각 농도 시리즈는 이 방식으로 3회 주입되며, 적절한 참조값 감산을 위해 적어도 3회 완충액 전용 주기가 포함된다. 표면은 1X PBS-P+, pH 7.4를 30초 동안 2회 주입하여 재생시킨 후 60초 동안 대기 명령을 따른다. 분석 전에 표면을 안정화시키기 위해 3개의 스타트업 주기가 포함된다.
데이터는 Insight Evaluation Software를 사용하여 1:1 동역학적 상호작용 모델 또는 정상 상태 친화도에 맞춰 평가한다. U-값 및 T-값을 포함한 품질 지표를 사용하여 매개변수들을 선택한다. 15 미만의 U-값은 동역학적 속도 상수에 대해 허용 가능한 것으로 간주되는 반면, 100 초과의 T-값은 동역학적 속도 상수에 대해 허용 가능한 것으로 간주된다. 이러한 값이 범위 밖에 있는 경우, 정상 상태 친화도 매개변수는 허용 가능한 것으로 간주된다.
야생형뿐만 아니라 모든 변이체는 pH 7.4에서 고양이 FcRn에 결합하지 않을 것이고, 시험된 변이체는 야생형 Fc에 비해 산성 pH(예를 들어, pH 5.5 또는 pH 6.0)에서 고양이 FcRn에 대해 증가된 친화도를 나타낼 것으로 예상된다.
실시예 3: FcRn 결합이 증가된 고양이 IgG1a Fc 변이체와 야생형 고양이 IgG1a의 약동학 연구
약동학(PK) 연구는 수컷 및 암컷 고양이를 대상으로 실시된다. 야생형 고양이 IgG1a Fc 도메인(서열 번호 1)을 갖는 항체를 포함한 고양이 IgG1a Fc 변이체는 Gearing 등(2016, J Vet Intern Med, 30: 1129)이 이전에 기술한 바와 같이 항-NGF 가변 도메인을 사용하여 제조된다.
각 군에 동일한 수의 수컷과 암컷이 포함되도록 동물을 무작위로 배정된다. 각 동물에게 2 mg/kg의 항체를 단일 정맥 용량으로 투여된다. 대략 0.5 ml의 전혈을 하기 시점에서 수집한다: 0 (투여 전), 4시간, 및 주사 후 1, 2, 4, 6, 10, 14, 18, 22, 30, 34, 38, 42일. 혈청을 전혈로부터 분리하고, 항-NGF 항체에 특이적인 ELISA에 의해 항체의 존재에 대해 검정한다. 6개의 항-NGF 모노클로날 항체(mAb) 변이체의 혈청 농도는 비선형 혼합 효과(NLME) 모델링을 사용하여 선형 클리어런스를 갖는 2구획 약동학(PK) 모델로 설명된다. 모집단 모수(population parameter)는 Monolix Suite 2019R1(Monolix version 2019R1. Antony, France: Lixoft SAS, 2019)에서 구현된 SAEM(stochastic approximation of expectation-maximization) 알고리즘을 사용하여 추정된다. 개별 매개변수는 로그 정규 분포를 갖는 랜덤 변수로 모델링된다. PK 매개변수는 mAb-전형적 계수(βBW,Cl = 0.75, βBW,V1 = βBW,V2 = 1, βBW,Q = 2/3)를 사용하여 체중(BW)에 따라 달라진다. 식(Dong et al. 2011. Clin Pharmacokinet, 50: 131)은 개별 매개변수 에 대해 다음과 같다:
여기서 은 전형적 모집단 모수이고, η는 평균이 0이고 표준 편차가 ω인 랜덤 변수이고, 는 동물 ι의 체중이고, 은 참조 체중 2 kg이다.
항체 변이체는 다음 식에 따라 클리어런스, 구획간 교환 계수 및 주변 부피에 대한 범주형 공변량(categorial covariate)을 사용하여 구별된다:
여기서 개별 변이 공변량이 범주에 있는 경우 이고, 그렇지 않으면 이다. 야생형(WT) mAb 변이체를 참조로 사용한다. 고양이 IgG1a Fc 변이체를 포함하는 항체는 야생형 고양이 IgG1a Fc를 포함하는 항체에 비해 최종 반감기가 증가할 것으로 예상된다.
실시예 4: 2개 또는 3개의 Fc 치환을 갖는 고양이 IgG1a Fc 변이체 및 야생형 고양이 IgG1a의 약동학 연구
약동학(PK) 연구는 수컷 및 암컷 고양이를 대상으로 실시된다. 야생형 고양이 IgG1a Fc 도메인을 갖는 항체를 포함한 고양이 IgG1a Fc 변이체는 Gearing 등(2016, J Vet Intern Med, 30: 1129)이 이전에 기술한 바와 같이 항-NGF 가변 도메인을 사용하여 제조된다. 이 연구에서 시험트된 고양이 IgG1a 변이체는 다음을 포함한다: S252Y + T286D, S252Y + T286E, S252Y + R301L, S252Y + R301V, S252Y + R301Y, S252Y + L309V, S252Y + L309D, S252Y + I377Y, S252Y + I377L, S252Y + R392D, S252Y + R392E, S252M + T286D, S252M + T286E, S252M + R301L, S252M + R301V, S252M + R301Y, S252M + L309V, S252M + L309D, S252M + Q311V, S252M + I377Y, S252M + I377L, S252M + R392D, S252M + R392E, S428M + T286D, S428M + T286E, S428M + R301L, S428M + R301V, S428M + R301Y, S428M + L309V, S428M + L309E, S428M + L309D, S428M + Q311V, S428M + I377Y, S428M + I377L, S428M + R392D, S428M + R392E, S428L + T286D, S428L + R301L, S428L + R301V, S428L + R301Y, S428L + L309D, S428L + I377Y, S428L + I377L, S428L + R392D, S428L + R392E, 및 야생형.
동물은 동일한 수의 수컷과 암컷으로 무작위로 배정된다. 각 동물에게 2 mg/kg의 항체를 단일 정맥 용량으로 투여된다. 대략 0.5 ml의 전혈을 하기 시점에서 수집한다: 0 (투여 전), 4시간, 및 주사 후 1, 2, 4, 6, 10, 14, 18, 22, 30, 34, 38, 42일. 혈청을 전혈로부터 분리하고, 고양이 항-NGF 항체에 특이적인 ELISA에 의해 항체의 존재에 대해 검정한다. 7개의 항-NGF 모노클로날 항체(mAb) 변이체의 혈청 농도는 비선형 혼합 효과(NLME) 모델링을 사용하여 선형 클리어런스를 갖는 2구획 약동학(PK) 모델로 설명된다(모집단 모수는 Monolix Suite 2019R1(Monolix version 2019R1. Antony, France: Lixoft SAS, 2019)에서 구현된 SAEM(stochastic approximation of expectation-maximization) 알고리즘을 사용하여 추정됨). 개별 매개변수는 로그 정규 분포를 갖는 랜덤 변수로 모델링된다. PK 매개변수는 mAb-전형적 계수(βBW,Cl = 0.75, βBW,V1 = βBW,V2 = 1, βBW,Q = 2/3)를 사용하여 체중(BW)에 따라 달라진다. 식(Dong et al. 2011. Clin Pharmacokinet, 50: 131)은 개별 매개변수 에 대해 다음과 같다:
여기서 은 전형적 모집단 모수이고, η는 평균이 0이고 표준 편차가 ω인 랜덤 변수이고, 는 동물 ι의 체중이고, 은 참조 체중 2 kg이다.
항체 변이체는 다음 식에 따라 클리어런스, 구획간 교환 계수 및 주변 부피에 대한 범주형 공변량을 사용하여 구별된다:
여기서 개별 변이 공변량이 범주에 있는 경우 이고, 그렇지 않으면 이다. 야생형(WT) mAb를 참조로 사용한다.
IgG Fc 영역에서 아미노산 치환의 조합은 (i) 야생형 고양이 IgG1a Fc 영역 또는 (ii) 단일 아미노산 치환만을 갖는 고양이 IgG1a Fc 변이체를 갖는 항-NGF IgG1a 항체와 비교할 때, 고양이 생체내에서 항-NGF IgG1a 항체의 최종 반감기를 현저하게 개선시킬 것으로 예상된다.
실시예 5: 고양이 IgGFc 변이체의 고양이 FcRn에 대한 결합 동역학
고양이 Fc 변이체 세트를 IgG 형태로 발현시키고 정제하였다. IgG는 서열 번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄와 서열 번호 101-150 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하였다. IgG에 대한 중쇄 및 경쇄에 대한 가변 도메인은 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2023/97275에 기재되어 있으며, 이는 그 전체가 본원에 참고로 포함된다. 고양이 IgG1a 불변 도메인은 MALA 돌연변이(EU 넘버링에 따라 M234A 및 L244A)를 포함하고 있으며, 이는 잠재적인 이펙터 활성(ADCC 및 CDC)을 감소시킨다. 중쇄 및 경쇄를 합성하여 사슬의 N-말단에 신호 서열을 갖는 pcDNATM3.4 벡터(Thermo Fisher Scientific)에 서브클로닝하였다. 중쇄 및 경쇄 작제물을 ExpiCHOTM 세포에 공동 형질감염시키고, 7일 동안 인큐베이션한 후, 조건화 배지를 MabSelectTM SuReTM 단백질 A 수지를 사용하여 정제하였다. 정제된 항체를 PBS, pH 7.4로 완충액 교환하였다. FcRn 복합체는 대형 서브유닛(p51)과 소형 서브유닛(β2-마이크로글로불린, p14)으로 이루어지며, 고양이 FcRn 단백질은 CHO 세포에서 이들 두 단백질을 공동 발현함으로써 생성되었다. C-말단에 6xHis-태그(HHHHHHH, 서열 번호 153) 및 N-말단에 신호 펩타이드(MGWSCIILFLVATATGVHS, 서열 번호 154)를 갖는 고양이 FcRn 대형 서브유닛 p51 이소형 X1(NCBI 참조 서열 번호 XP_044901959.1)의 가용성 부분이 서열 번호 151에 나타낸다. N-말단에 신호 펩타이드(MGWSCIILFLVATATGVHS, 서열 번호 154) 및 C-말단에 Strep-tag® II(WSHPQFEK, 서열 번호 155)를 갖는 고양이 β2-마이크로글로불린(NCBI 참조 서열 번호 NP_001009876.1)이 서열 번호 152에 나타낸다. 형질감염된 CHO 세포로부터의 조건화 배지를 HisTrapTM FF 크로마토그래피를 사용하여 정제하고, PBS, pH 7.2에서 제형화하였다. TSKgel® G3000SWxi 컬럼을 사용하여 분석 크기 배제 크로마토그래피 분석함으로써, 고양이 FcRn은 95% 초과 순수였다.
pH 5.9에서 고양이 FcRn 결합 실험은 BiacoreTM T200 기기에서 완료되었다. 시리즈 S 단백질 L 센서 칩(Cytiva, Cat. No. BR29205137)을 사용하여 카파(κ) 경쇄를 통해 항체 변이체를 포획하였다. 고양이 변이체를 단백질 L 칩 위로 10 μL/분의 유속으로 60초 동안 포획하였다. 1X PBX-P+ (Cytiva Cat 28995084)를 러닝 완충액에 대해 pH 5.9로 조정하였다. 고양이 FcRn을 센서 칩 위로 30 μL/분으로 120초 접촉 시간 및 600초 해리 시간 동안 유동시켰다. 유동 세포의 재생은 10 mM 글리신, pH 1.7을 30 μL/분으로 30초 동안 유동시켜 완료하였다. 데이터는 BiacoreTMT200 평가 소프트웨어 v3.2.1을 사용하여 1:1 동역학적 상호작용 모델에 맞춰 평가하였다. pH 5.9에서 고양이 IgG 변이체에 대한 동역학적 결합 데이터는 하기 표 6에 나타낸다.
[표 6] pH 5.9에서 고양이 Fc 변이체를 갖는 IgG의 고양이 FcRn에 대한 결합 데이터
결론적으로, 이러한 데이터는 시험된 고양이 Fc 변이체가 야생형 고양이 Fc에 비해 우수한 FcRn 결합 특성을 가짐을 보여준다. 예를 들어, S252Y/T286D, S252Y/T286E, S252Y/L309V, S252M/T286D, S252M/T286E, S252M/L309V, S252M/Q311V, S252M/R392E, S428M/T286D, S428M/T286E, S428M/L309V, S428M/L309E, S428M/Q311V, 및 S428L/T286D 치환을 갖는 고양이 Fc 변이체는 야생형 Fc 또는 단일 아미노산 치환(예를 들어, S252Y, S252M, S428M 또는 S428L)을 갖는 고양이 Fc 변이체에 비해 고양이 FcRn에 대한 친화도가 향상되었다.
기타 실시양태
본 발명이 이의 상세한 설명과 함께 설명되었만, 전술한 설명은 본 발명의 범위를 예시하기 위한 것이며 제한하기 위한 것이 아니며, 이는 첨부된 청구범위에 의해 정의된다. 다른 양태, 이점, 및 변형은 하기 청구항의 범위 내에 있다.
서열목록 전자파일 첨부

Claims (49)

  1. 고양이(feline) IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드로서, 상기 고양이 IgG Fc 영역 변이체는 (a) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치에서 Tyr, 및 (b) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하며:
    (i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치;
    (ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 위치;
    (iii) 아미노산 치환이 Asp 또는 Val인, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치;
    (iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 위치; 및
    (v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 위치;
    상기 아미노산 위치는 EU 넘버링에 기반하고, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인에 비해 고양이 FcRn에 대한 증가된 결합 친화도를 갖는, 폴리펩타이드.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 또는 Glu를 포함하는, 폴리펩타이드.
  3. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu, Tyr, 또는 Val을 포함하는, 폴리펩타이드.
  4. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 또는 Tyr을 포함하는, 폴리펩타이드.
  5. 청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 또는 Glu를 포함하는, 폴리펩타이드.
  6. 청구항 1 내지 5 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 하기를 포함하는, 폴리펩타이드:
    (i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
    (ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu;
    (iii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
    (iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
    (v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
    (vi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
    (vii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
    (viii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
    (ix) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
    (x) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp; 또는
    (xi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu.
  7. 고양이 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드로서, 상기 고양이 IgG Fc 영역 변이체는 (a) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치에서 Met, 및 (b) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하며:
    (i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치;
    (ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 위치;
    (iii) 아미노산 치환이 Asp 또는 Val인, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치;
    (iv) 아미노산 치환이 Val인, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치;
    (v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 위치; 및
    (vi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 위치;
    상기 아미노산 위치는 EU 넘버링에 기반하고, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인에 비해 고양이 FcRn에 대한 증가된 결합 친화도를 갖는, 폴리펩타이드.
  8. 청구항 7에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 또는 Glu를 포함하는, 폴리펩타이드.
  9. 청구항 7 또는 8에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu, Tyr, 또는 Val을 포함하는, 폴리펩타이드.
  10. 청구항 7 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 아미노산 위치에서 Val을 포함하는, 폴리펩타이드.
  11. 청구항 7 내지 10 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 또는 Tyr을 포함하는, 폴리펩타이드.
  12. 청구항 7 내지 11 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 또는 Glu를 포함하는, 폴리펩타이드.
  13. 청구항 7 내지 12 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 하기를 포함하는, 폴리펩타이드:
    (i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
    (ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu;
    (iii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
    (iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
    (v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
    (vi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
    (vii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
    (viii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
    (ix) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
    (x) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
    (xi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp; 또는
    (xii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu.
  14. 고양이 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드로서, 상기 고양이 IgG Fc 영역 변이체는 (a) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치에서 Met, 및 (b) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하며:
    (i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치;
    (ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 위치;
    (iii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치;
    (iv) 아미노산 치환이 Val인, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치;
    (v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 위치; 및
    (vi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 위치;
    상기 아미노산 위치는 EU 넘버링에 기반하고, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인에 비해 고양이 FcRn에 대한 증가된 결합 친화도를 갖는, 폴리펩타이드.
  15. 청구항 14에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 또는 Glu를 포함하는, 폴리펩타이드.
  16. 청구항 14 또는 15에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu, Tyr, 또는 Val을 포함하는, 폴리펩타이드.
  17. 청구항 14 내지 16 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp, Glu, 또는 Val을 포함하는, 폴리펩타이드.
  18. 청구항 14 내지 17 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 아미노산 위치에서 Val을 포함하는, 폴리펩타이드.
  19. 청구항 14 내지 18 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 또는 Tyr을 포함하는, 폴리펩타이드.
  20. 청구항 14 내지 19 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 또는 Glu를 포함하는, 폴리펩타이드.
  21. 청구항 14 내지 20 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 하기를 포함하는, 폴리펩타이드:
    (i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
    (ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu;
    (iii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
    (iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
    (v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
    (vi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
    (vii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu;
    (viii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
    (ix) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
    (x) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
    (xi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
    (xii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp; 또는
    (xiii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Met 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu.
  22. 고양이 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드로서, 상기 고양이 IgG Fc 영역 변이체는 (a) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치에서 Leu, 및 (b) 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하며:
    (i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치;
    (ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 위치;
    (iii) 아미노산 치환이 Asp인, 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치;
    (iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 위치; 및
    (v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 위치;
    상기 아미노산 위치는 EU 넘버링에 기반하고, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 Fc 도메인에 비해 고양이 FcRn에 대한 증가된 결합 친화도를 갖는, 폴리펩타이드.
  23. 청구항 22에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함하는, 폴리펩타이드.
  24. 청구항 22 또는 23에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu, Tyr, 또는 Val을 포함하는, 폴리펩타이드.
  25. 청구항 22 내지 24 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp를 포함하는, 폴리펩타이드.
  26. 청구항 22 내지 25 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 또는 Tyr을 포함하는, 폴리펩타이드.
  27. 청구항 22 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp 또는 Glu를 포함하는, 폴리펩타이드.
  28. 청구항 22 내지 27 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 하기를 포함하는, 폴리펩타이드:
    (i) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
    (ii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
    (iii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
    (iv) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 301에 상응하는 아미노산 위치에서 Val;
    (v) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp;
    (vi) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu;
    (vii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 377에 상응하는 아미노산 위치에서 Tyr;
    (viii) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Asp; 또는
    (ix) 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 아미노산 위치에서 Leu 및 야생형 고양이 IgG의 아미노산 위치 392에 상응하는 아미노산 위치에서 Glu.
  29. 청구항 1 내지 28 중 어느 한 항에 있어서, 상기 야생형 고양이 IgG는 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖는 Fc 도메인을 포함하는 고양이 IgG1a, 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 Fc 도메인을 포함하는 고양이 IgG1b, 또는 서열 번호 3의 아미노산 서열을 갖는 Fc 도메인을 포함하는 고양이 IgG2인, 폴리펩타이드.
  30. 청구항 1 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 중성 pH보다 산성 pH에서 더 높은 수준으로 고양이 FcRn에 결합하는, 폴리펩타이드.
  31. 청구항 30에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 pH 7.4보다 pH 5.5 내지 6.0에서 더 높은 수준으로 고양이 FcRn에 결합하는, 폴리펩타이드.
  32. 청구항 1 내지 31 중 어느 한 항에 있어서, EPO, CTLA4, LFA3, VEGFR1, VEGFR3, IL-1R, IL-4R, GLP-1 수용체 작용제, 및 트롬보포이에틴 결합 펩타이드로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질을 추가로 포함하는, 폴리펩타이드.
  33. 청구항 1 내지 32 중 어느 한 항에 있어서, 결합 도메인을 추가로 포함하는, 폴리펩타이드.
  34. 청구항 33에 있어서, 상기 결합 도메인은 항체, 항체 단편, 또는 수용체의 리간드-결합 부분을 포함하는, 폴리펩타이드.
  35. 청구항 34에 있어서, 상기 항체 또는 상기 항체 단편은 면역글로불린 분자의 6개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는, 폴리펩타이드.
  36. 청구항 35에 있어서, 상기 항체 단편은 Fab, 단일 사슬 가변 단편(scFv), Fv, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, 나노바디, 및 디아바디로 이루어진 군으로부터 선택되는, 폴리펩타이드.
  37. 청구항 35에 있어서, 상기 수용체의 리간드-결합 부분은 고양이 수용체 단백질의 리간드 결합 도메인 또는 고양이 수용체 단백질의 세포외 도메인을 포함하는, 폴리펩타이드.
  38. 청구항 35에 있어서, 상기 결합 도메인은 NGF, TrKA, ADAMTS, IL-1, IL-2, IL-4, IL-4R, 안지오텐신 1형(AT1) 수용체, 안지오텐신 2형(AT2) 수용체, IL-5, IL-12, IL-13, IL-31, IL-33, CD3, CD20, CD47, CD52, 및 보체계 복합체로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합하는, 폴리펩타이드.
  39. (i) 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항의 폴리펩타이드, 및 (ii) 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
  40. 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항의 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 또는 핵산들.
  41. 청구항 40의 핵산 또는 핵산들을 포함하는 발현 벡터 또는 발현 벡터들.
  42. 청구항 40의 핵산 또는 핵산들 또는 청구항 41의 발현 벡터 또는 발현 벡터들을 포함하는, 숙주 세포.
  43. 폴리펩타이드를 제조하는 방법으로서, 상기 방법은
    (i) 청구항 40의 핵산 또는 핵산들을 제공하는 단계;
    (ii) 상기 핵산 또는 핵산들을 숙주 세포 배양물에서 발현시켜, 이에 의해 폴리펩타이드를 생성하는 단계; 및 선택적으로,
    (iii) (ii)에서 생성된 상기 폴리펩타이드를 숙주 세포 배양물로부터 수집하는 단계를 포함하는, 방법.
  44. 고양이 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 필요로 하는 고양이(cat)에서 고양이 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법으로서, 상기 방법은 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항의 폴리펩타이드를 포함하는 조성물 또는 청구항 39의 약제학적 조성물의 유효량을 상기 고양이에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  45. 청구항 44에 있어서, 상기 고양이 질환 또는 장애는 알레르기성 질환, 만성 통증, 급성 통증, 염증성 질환, 자가면역 질환, 내분비 질환, 위장관 질환, 심혈관 질환, 신장 질환, 가임 관련 장애, 감염성 질환, 또는 암인, 방법.
  46. 청구항 44에 있어서, 상기 고양이 질환 또는 장애는 아토피성 피부염, 알레르기성 피부염, 골관절염 통증, 관절염, 빈혈, 또는 비만인, 방법.
  47. 고양이 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 필요로 하는 고양이에서 고양이 질환 또는 장애의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항의 폴리펩타이드 또는 청구항 36의 약제학적 조성물.
  48. 청구항 47에 있어서, 상기 고양이 질환 또는 장애는 알레르기성 질환, 만성 통증, 급성 통증, 염증성 질환, 자가면역 질환, 내분비 질환, 위장관 질환, 심혈관 질환, 신장 질환, 가임 관련 장애, 감염성 질환, 또는 암인, 사용을 위한 폴리펩타이드 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  49. 청구항 47에 있어서, 상기 고양이 질환 또는 장애는 아토피성 피부염, 알레르기성 피부염, 골관절염 통증, 관절염, 빈혈 또는 비만인, 사용을 위한 폴리펩타이드 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
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