KR20230147900A

KR20230147900A - Composition for improving skin condition comprising extracellular vesicles from Asimina triloba

Info

Publication number: KR20230147900A
Application number: KR1020220046825A
Authority: KR
Inventors: 류영배; 김우식
Original assignee: 한국생명공학연구원; 농업회사법인 향지 유한회사
Priority date: 2022-04-15
Filing date: 2022-04-15
Publication date: 2023-10-24

Abstract

본 발명은 포포나무(Asimina triloba) 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicles, EV)를 포함하는 조성물에 관한 것으로, 상기 포포나무 유래 세포 외 소포체는 천연물로서 피부에 안전하고 독성이 없고 부작용을 최소화할 뿐만 아니라, 티로시나아제 활성을 억제함으로써 피부 내 멜라닌 형성을 저해하는 효과를 가져 피부 미백 용도 또는 피부 색소침착 질환 치료에 사용할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 포포나무 유래 세포 외 소포체는 염증성 사이토카인의 발현을 저해하는 효과를 가져 항염증 및 염증성 질환 치료 용도로 사용할 수 있다.The present invention relates to a composition containing extracellular vesicles (EV) derived from Asimina triloba . As a natural product, the extracellular vesicles are safe for the skin, are non-toxic, and have minimal side effects. , It has the effect of inhibiting melanin formation in the skin by inhibiting tyrosinase activity, so it can be used for skin whitening or to treat skin pigmentation diseases. In addition, the pawpaw-derived extracellular vesicles according to the present invention have the effect of inhibiting the expression of inflammatory cytokines and can be used for anti-inflammatory and inflammatory disease treatment purposes.

Description

Composition for improving skin condition comprising extracellular vesicles from Asimina triloba}

본 발명은 포포나무 유래 세포 외 소포체를 포함하는 피부 상태 개선용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 포포나무 잎, 줄기 및/또는 수액으로부터 분리된 세포 외 소포체를 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물, 피부 외용제 조성물, 식품조성물, 건강기능식품, 의약외품 조성물 또는 피부 색소침착 질환 또는 염증성 질환 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for improving skin condition containing extracellular vesicles derived from pawpaw tree, and more specifically, to a cosmetic composition for improving skin condition containing extracellular vesicles isolated from pawpaw tree leaves, stems and/or sap, It relates to a composition for external application to the skin, a food composition, a health functional food, a quasi-drug composition, or a pharmaceutical composition for treating skin pigmentation disease or inflammatory disease.

피부는 물리적, 화학적인 외부의 자극으로부터 1차적으로 체내를 보호하는 기능을 갖는다. 피부에 존재하는 멜라닌은 자연계에 널리 분포하는 페놀류의 생 고분자 물질로 검은 색소와 단백질의 복합체로써 자외선 등으로부터 신체를 보호하며, 환경에 대한 세포의 생존력과 경쟁력을 높여주는 물질로 알려져 있다. 하지만 멜라닌의 과잉생산은 기미, 주근깨, 검버섯 등을 생성하고 피부노화를 촉진시키고 피부암 유발과도 관련이 있다고 보고되고 있다.The skin primarily has the function of protecting the body from external physical and chemical stimuli. Melanin, which exists in the skin, is a phenolic biopolymer widely distributed in the natural world and is a complex of black pigment and protein. It protects the body from ultraviolet rays and is known as a substance that increases the viability and competitiveness of cells against the environment. However, it has been reported that overproduction of melanin produces spots, freckles, age spots, etc., accelerates skin aging, and is also related to skin cancer.

피부 미백에 영향을 미치는 색소침착(pigmentation)은 피부 표피 기저층에 있는 멜라닌 세포(melanocyte)에서 일어나며 티로시나아제(tyrosinase)의 활성에 의하여 크게 영향을 받는 것으로 알려져 있고, 주로 자외선, 염증, DNA 손상, 활성산소에 의하여 과색소침착(hyperpigmentation)이 유도된다. 최근 건강, 미용지향의 증가에 영향을 받아 하얗고 깨끗한 피부에 대한 선호도가 높아짐에 따라 피부 미백에 대한 관심이 점점 늘어감에 딸라 미백, 노화방지, 주름개선, 자외선 차단 등 다양한 기능성을 갖는 기능성 화장품에 대한 수요가 증가하고 있다.Pigmentation, which affects skin whitening, occurs in melanocytes in the basal layer of the skin's epidermis and is known to be greatly influenced by the activity of tyrosinase, mainly due to ultraviolet rays, inflammation, DNA damage, Hyperpigmentation is induced by active oxygen. Recently, as the preference for white and clean skin has increased due to the increase in health and beauty orientation, interest in skin whitening has increased, leading to the introduction of functional cosmetics with various functions such as whitening, anti-aging, wrinkle improvement, and UV protection. demand is increasing.

그러나, 기존 화장품 원료들은 대부분 효능이 미진하거나 피부 부작용을 유발하거나 유해성 성분을 함유하고 있어 여러가지 문제점을 가지고 있다. 또한, 화장품 성분의 유전자 변형이나 환경호르몬으로 인한 문제점이 대두되면서 장기적으로 인체에 유해하지 않고 안전하게 사용할 수 있는 천연물질 추출물을 주성분으로 하는 기능성 화장품에 대한 기대가 높아지고 있다.However, most existing cosmetic raw materials have various problems as they have poor efficacy, cause skin side effects, or contain harmful ingredients. In addition, as problems caused by genetic modification or environmental hormones in cosmetic ingredients emerge, expectations are rising for functional cosmetics whose main ingredients are extracts of natural substances that are not harmful to the human body in the long term and can be used safely.

또한, 염증은 조직의 손상, 외부의 자극 또는 다양한 감염원에 대한 생체조직의 방어기작 중 하나로, 외부로부터 유입된 유해물질이나 유기체 등 다양한 요인에 의해 세포나 조직이 손상을 입거나 파괴되었을 때, 이를 최소화하고 손상된 부위를 원상으로 회복시키기 위해 국소적으로 일어나는 면역반응이다. 즉, 염증반응은 생체를 보호하고 조직 손상으로 생성된 산물들을 제거하는데 필요하다. 다만, 이러한 염증반응이 일정수준 이상으로 발생하거나 만성적으로 발생하게 되면, 만성염증과 같은 질병 상태로 진행되며, 심각한 이상장애를 초래하게 된다.In addition, inflammation is one of the defense mechanisms of biological tissues against tissue damage, external stimulation, or various infectious agents. It occurs when cells or tissues are damaged or destroyed by various factors such as harmful substances or organisms introduced from the outside. It is an immune response that occurs locally to minimize damage and restore damaged areas to their original state. In other words, the inflammatory response is necessary to protect the living body and remove products generated from tissue damage. However, if this inflammatory reaction occurs above a certain level or occurs chronically, it progresses to a disease state such as chronic inflammation and causes serious abnormalities.

현재 가장 강력한 항염작용을 지니고 있는 약제로는 스테로이드 제제이다. 그러나 대부분의 스테로이드 제제는 화학적으로 합성된 물질로, 장기간 사용하는 경우 부신억제, 체액의 저류, 백내장 등의 부작용을 수반하게 되는 경우가 많다. 따라서, 부작용이 적으면서도 다양한 염증을 억제할 수 있는 물질에 대한 연구가 필요한 실정이다.Currently, the drugs with the most powerful anti-inflammatory action are steroids. However, most steroid preparations are chemically synthesized substances, and long-term use often causes side effects such as adrenal suppression, fluid retention, and cataracts. Therefore, there is a need for research into substances that can suppress various inflammations while having fewer side effects.

식물유래 세포외 소포체는 동물세포 유래 세포외 소포체와 유사하게 주로 여러 물질의 세포간 수송을 위한 보호 구회 역할을 하며 식물 성장 및 방달, 방어 반응, 식물-미생물 공생에 기여하는 것으로 알려져 있다. 이러한 EV는 10-1000 nm 크기의 나노입자를 포괄적으로 총칭하는 명칭으로 다양한 생리활성 물질(DNA, RNAs, Proteins, lipids, metabolites 등)들을 포함할 수 있다. 중요한 것은 이러한 세포외 소포체는 합성 소포체와는 달리 세포로부터 유래한 것이기 때문에 생체 친화적인 장점을 가진다. 최근에는 이러한 이점들 때문에 동물세포와 더불어 식물유래 세포외 소포체를 이용한 건강기능식품 및 기능성 화장품 개발 시장에서 관심도가 높아지고 있다. Plant-derived extracellular vesicles, similar to animal cell-derived extracellular vesicles, mainly serve as a protective shell for intercellular transport of various substances and are known to contribute to plant growth and development, defense responses, and plant-microbe symbiosis. These EVs are a comprehensive term for nanoparticles with a size of 10-1000 nm and may contain various bioactive substances (DNA, RNAs, proteins, lipids, metabolites, etc.). Importantly, these extracellular vesicles have the advantage of being biocompatible because they are derived from cells, unlike synthetic vesicles. Recently, due to these advantages, interest in the market for developing health functional foods and functional cosmetics using plant-derived extracellular vesicles along with animal cells is increasing.

이러한 배경 하에서, 식물, 특히 포포나무 잎을 바탕으로 인체 피부 안정성이 우수하고 피부 상태를 개선하고, 미백활성 및 항염증 효능을 갖는 세포외 소포체를 분리하고, 이들이 멜라닌 합성을 억제하는 미백 효과를 가지며 항염증 효과를 갖는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.Under this background, based on plants, especially pawpaw leaves, it has excellent human skin stability, improves skin condition, isolates extracellular vesicles with whitening activity and anti-inflammatory effects, and has a whitening effect by inhibiting melanin synthesis. The present invention was completed by confirming that it has an anti-inflammatory effect.

본 발명은 포포나무(Asimina triloba) 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicles)를 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.The purpose of the present invention is to provide a cosmetic composition for improving skin condition containing extracellular vesicles derived from Asimina triloba .

또한, 본 발명은 포포나무(Asimina triloba) 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicles)를 포함하는 피부 상태 개선용 피부 외용제 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.Additionally, the present invention aims to provide a composition for topical skin application for improving skin condition containing extracellular vesicles derived from Asimina triloba .

또한, 본 발명은 포포나무(Asimina triloba) 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicles)를 포함하는 피부 상태 개선용 식품 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.In addition, the present invention aims to provide a food composition for improving skin condition containing extracellular vesicles derived from Asimina triloba .

또한, 본 발명은 포포나무(Asimina triloba) 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicles)를 포함하는 피부 상태 개선용 건강기능식품을 제공하는 것을 목적으로 한다.In addition, the present invention aims to provide a health functional food for improving skin condition containing extracellular vesicles derived from Asimina triloba .

또한, 본 발명은 포포나무(Asimina triloba) 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicles)를 포함하는 피부 색소침착 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.Additionally, the present invention aims to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of skin pigmentation disease containing extracellular vesicles derived from Asimina triloba .

또한, 본 발명은 포포나무(Asimina triloba) 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicles)를 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.Additionally, the present invention aims to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of inflammatory diseases containing extracellular vesicles derived from Asimina triloba .

또한, 본 발명은 포포나무(Asimina triloba) 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicles)를 포함하는 피부 상태 개선용 의약외품 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.Additionally, the present invention aims to provide a quasi-drug composition for improving skin condition containing extracellular vesicles derived from Asimina triloba .

본 출원에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로서 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 출원에서, “포함하다” 또는 “가지다” 등의 용어는 명에서 상에 기재된 특징, 단계, 구조 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 단계, 구조 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.The terms used in this application are only used to describe specific embodiments and are not intended to limit the invention. Singular expressions include plural expressions unless the context clearly dictates otherwise. In this application, terms such as “comprise” or “have” are intended to designate the presence of the features, steps, structures, or combinations thereof described above in the name, but are intended to indicate the presence of one or more other features, steps, structures, or these. It should be understood that the existence or addition of combinations is not excluded in advance.

다르게 정의하지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥 상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.Unless otherwise defined, all terms used herein, including technical or scientific terms, have the same meaning as generally understood by a person of ordinary skill in the technical field to which the present invention pertains. Terms defined in commonly used dictionaries should be interpreted as having a meaning consistent with the meaning in the context of the related technology, and unless explicitly defined in the present application, should not be interpreted in an ideal or excessively formal sense. No.

이밖에 본 명세서에서 사용된 용어들과 약어들은 달리 정의되지 않는 한, 그 본래의 의미를 갖는다.In addition, terms and abbreviations used in this specification have their original meanings unless otherwise defined.

본 발명자는 상기 과제를 해결하기 위하여 포포나무 잎으로부터 분리된 세포 외 소포체가 멜라닌 생성을 억제함을 확인하고, 염증성 사이토카인의 발현을 감소시키고 손상된 피부의 재생을 촉진하여 피부상태를 개선시키는 뛰어난 효과가 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.In order to solve the above problem, the present inventor confirmed that extracellular vesicles isolated from pawpaw leaves inhibit melanin production, and have an excellent effect in improving skin condition by reducing the expression of inflammatory cytokines and promoting regeneration of damaged skin. The present invention was completed by confirming that there was a .

이하에서는 본 발명의 포포나무 유래 세포 외 소포체, 및 이를 포함하는 조성물과 이의 제조방법 각각에 대하여 구체적으로 설명한다.Hereinafter, the pawpaw tree-derived extracellular vesicles of the present invention, the composition containing the same, and the method for producing the same will be described in detail.

포포나무 유래 세포 외 소포체를 포함하는 조성물, 피부 상태 개선 방법 및 치료방법Composition containing pawpaw-derived extracellular vesicles, method for improving skin condition, and method for treatment

본 발명의 일 측면에 있어서, 포포나무(Asimina triloba) 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicles, EV)를 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물을 제공한다.In one aspect of the present invention, a cosmetic composition for improving skin condition containing extracellular vesicles (EV) derived from Asimina triloba is provided.

포포나무는 목련목(Magnoliales) 포포나무과(Annonaceae)에 속하는 낙엽교목 또는 관목으로, papaw, pawpaw, paw paw 등으로 쓰이며, 아시미나 트릴로바(Asimina triloba) 등의 학명을 갖는 식물을 포함한다. 미국이 원산지로 대서양 연안에서 북쪽으로 뉴욕 주까지, 서쪽으로 미시간과 캔자스 주에 이르는 지역에 주로 분포한다. 키가 12 m까지 자라며, 늘어지는 잎은 넓고 긴 타원형으로 끝이 뾰족하고 길이가 30 ㎝에 이른다. 다른 아시미나속(Asimina)에 속하는 포포나무로는 아시미나 스페키오사(A. speciosa)와 아시미나 앙구스티폴리아(A. angustifolia) 등이 있다.The pawpaw tree is a deciduous tree or shrub belonging to the Annonaceae family of the order Magnoliales. It is also used as papaw, pawpaw, paw paw, etc., and includes plants with scientific names such as Asimina triloba . It is native to the United States and is mainly distributed from the Atlantic coast to New York State in the north and Michigan and Kansas in the west. It grows up to 12 m tall, and its drooping leaves are wide and long oval with pointed tips, reaching a length of 30 cm. Other pawpaw trees belonging to the genus Asimina include A. speciosa and A. angustifolia .

상기 포포나무는 그 수목의 지상부의 전체, 그 일부분, 또는 이들로부터 유래된 재료로부터 용매에 의하여 추출된 추출물로부터 세포 외 소포체를 분리할 수 있다. 상기 일부분은 수목의 잎, 줄기, 뿌리, 과육, 꽃, 꽃잎, 종실(씨앗), 열매 껍질 또는 열매일 수 있다. 추출에 사용된 상기 수목의 전체, 그 일부분, 또는 이들로부터 유래된 재료는 분쇄 또는 세절될 수 있다. The extracellular vesicles of the pawpaw tree can be isolated from extracts extracted by solvent from the entire aerial part of the tree, a part thereof, or materials derived therefrom. The part may be a tree's leaves, stems, roots, pulp, flowers, petals, seeds, fruit skins, or fruits. The whole tree, part thereof, or material derived from the tree used for extraction may be ground or shredded.

본 발명에 있어서, 상기 포포나무는 건조되지 않은 상태의 수목의 전체, 그 일부분, 또는 이들로부터 유래된 재료를 사용하는 것이 바람직하다. 보다 바람직하게 세포외 소포체 추출을 위하여 살아있는 지상부를 사용하는 것일 수 있다. In the present invention, it is preferable to use the entire undried pawpaw tree, a part thereof, or materials derived from them. More preferably, living aerial parts may be used to extract extracellular vesicles.

본 발명에 있어서, 상기 포포나무는 포포나무의 잎, 줄기 또는 수액일 수 있으며, 바람직하게는 포포나무의 잎을 사용하며, 상기 포포나무의 잎은 건조되지 않은 생잎이 바람직하다.In the present invention, the pawpaw tree may be the leaf, stem or sap of the pawpaw tree, and preferably the leaves of the pawpaw tree are used, and the leaves of the pawpaw tree are preferably fresh, not dried leaves.

세포는 세포외 환경에 따라 다양한 막(membrane) 유형의 소포체를 방출하는데, 통상 이러한 방출 소포체들을 세포 외 소포체(extracellular vesicle, EV)라고 지칭한다. 모든 세포들은 세포외 소포체를 분비하며, 이는 박테리아로부터 인간과 식물에 이르기까지 진화적으로 보존된 현상이다. 세포외 소포체는 단백질, 지질, 유전물질 등 세포 간의 물질 교환을 가능하게하며, 생리적/병리적으로 신호를 전달하는 매개체로서 작용한다. 세포들은 생리적 상태에 따라 세포외 소포체를 다르게 생성하고, 특정한 지질/단백질/핵산 조성을 갖는 세포외 소포체를 분비한다. 세포외 소포체의 특정한 조성은 세포외 소포체의 기능 등을 결정하게 된다.Cells release vesicles of various membrane types depending on the extracellular environment, and these released vesicles are usually referred to as extracellular vesicles (EV). All cells secrete extracellular vesicles, a phenomenon that is evolutionarily conserved from bacteria to humans and plants. Extracellular endoplasmic reticulum enables the exchange of substances such as proteins, lipids, and genetic materials between cells, and acts as a medium to transmit physiological and pathological signals. Cells produce extracellular vesicles differently depending on their physiological state and secrete extracellular vesicles with specific lipid/protein/nucleic acid composition. The specific composition of the extracellular vesicles determines the function of the extracellular vesicles.

본 명세서에서, “세포 외 소포체(extracellular vesicle)”는 세포 밖 소포체, 엑소좀(exosome), 엑토좀(ectosome), 마이크로소낭(microvesicle), 마이크로입자(microparticle), 등의 다수의 상이한 종을 포함할 수 있다. 세포 외 소포체는 분비하는 기원 세포(공여 세포)의 상태를 반영할 수 있으며, 어떤 세포에서 분비되었는가에 따라 다양한 생물학적 활성을 나타내고, 세포들 사이에 유전 물질과 단백질을 옮기면서 세포 간 상호작용에 중요한 역할을 할 수 있다.As used herein, “extracellular vesicle” includes a number of different species such as extracellular vesicles, exosomes, ectosomes, microvesicles, microparticles, etc. can do. Extracellular vesicles can reflect the state of the secreting cell of origin (donor cell), exhibit various biological activities depending on which cell they are secreted from, and play an important role in intercellular interactions by transferring genetic material and proteins between cells. can do.

본 발명에서, “포포나무 유래 세포 외 소포체”는 포포나무로부터 추출물로부터 분리되거나 추출된 세포 외 소포체일 수 있으며, 바람직하게는 포포나무 잎 추출물, 더욱 바람직하게는 건조되지 않은 포포나무 잎 추출물로부터 분리되거나 추출된 세포 외 소포체일 수 있다. In the present invention, “extracellular vesicles derived from pawpaw tree” may be extracellular vesicles isolated or extracted from an extract from pawpaw tree, preferably isolated from a leaf extract of pawpaw tree, more preferably from a non-dried leaf extract of pawpaw tree. It may be extracted or extracted extracellular vesicles.

또한, 본 발명에서, 상기 포포나무 유래 세포 외 소포체는 포포나무로부터 분리된 세포 외 소포체를 포함하는 세포 유래 조성물일 수 있다.Additionally, in the present invention, the extracellular vesicles derived from pawpaw trees may be a cell-derived composition containing extracellular vesicles isolated from pawpaw trees.

상기 세포 유래 조성물은 세포는 실질적으로 포함하지 않으면서, 세포가 분비하는 물질을 포함하는 조성물을 의미할 수 있다.The cell-derived composition may refer to a composition that does not substantially contain cells but contains substances secreted by cells.

본 발명에 있어서, 상기 포포나무 유래 세포 외 소포체는 직경이 50 내지 500 nm이고, 바람직하게는 직경이 150 내지 250 nm이다.In the present invention, the extracellular vesicles derived from pawpaw tree have a diameter of 50 to 500 nm, and preferably have a diameter of 150 to 250 nm.

본 발명에서 "피부"는 동물의 체표를 덮는 조직을 의미하는 것으로서, 얼굴 또는 바디 등의 체표를 덮는 조직뿐만 아니라, 두피와 모발을 포함하는 광범위한 개념이다.In the present invention, “skin” refers to the tissue that covers the body surface of an animal, and is a broad concept that includes not only the tissue that covers the body surface of the face or body, but also the scalp and hair.

본 발명에서, 상기 피부 상태 개선은 항염증, 피부 미백, 피부 보습, 항노화, 피부 재생, 상처 개선 및 여드름 개선으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있다. In the present invention, the skin condition improvement may be one or more selected from the group consisting of anti-inflammatory, skin whitening, skin moisturizing, anti-aging, skin regeneration, wound improvement, and acne improvement.

본 발명에서, “개선”은 상태의 완화 또는 치료와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미할 수 있다.In the present invention, “improvement” may mean any action that at least reduces the degree of symptoms, for example, parameters related to the alleviation or treatment of a condition.

본 발명에서, “항염증”은 “염증 억제 또는 개선”과 혼용될 수 있으며, 염증성 사이토카인인 TNF-α, IL-6 또는 IL-12p70 발현을 감소시키는 모든 작용을 의미할 수 있다. 본 발명에서 항염증은 또는 염증성 질환 중 하나인 여드름의 개선을 포함할 수 있다.In the present invention, “anti-inflammatory” may be used interchangeably with “inhibiting or improving inflammation,” and may refer to any action that reduces the expression of inflammatory cytokines, such as TNF-α, IL-6, or IL-12p70. In the present invention, anti-inflammatory may include improvement of acne, which is one of the inflammatory diseases.

본 발명에서 “피부 미백”은 피부 색이나 톤을 밝게 하거나, 색소침착, 기미 잡티 등 피부 결점을 커버하여 미화하는 효과를 의미하고, 기미, 주근깨, 흑색점, 모반, 약물에 의한 색소침착, 염증 후 색소침착 및 피부염에서 발생하는 색소침착된 부위 등을 밝게 하거나 색이 희미하게 하는 효과를 의미한다. In the present invention, “skin whitening” refers to the effect of brightening skin color or tone or beautifying skin defects such as pigmentation and freckles, as well as freckles, freckles, lentigines, birthmarks, pigmentation caused by drugs, and inflammation. It refers to the effect of brightening or fading the color of pigmented areas that occur in post-pigmentation and dermatitis.

용어 “피부 보습”은 피부 수분을 유지하거나 수분 손실을 방지하는 모든 작용을 의미할 수 있다.The term “skin moisturizing” can refer to any action that maintains skin moisture or prevents moisture loss.

본 발명에서, “항노화”는 피부 노화를 방지하거나 억제하는 모든 작용을 의마할 수 있다. 피부 노화는 시간의 흐름에 따른 내인성 노화 및 외부 환경에 의한 외인성 노화를 포함한다. 상기 피부 노화는 피부 주름, 잡티, 기미 등을 포함할 수 있다. 상기 피부 주름은 피부가 쇠하여 생긴 잔주름일 수 있다. 상기 피부 주름은 광노화, 연령, 얼굴 표정, 수분 부족, 또는 이들의 조합에 의한 것일 수 있다. 상기 광노화는 자외선(UVA, UVB, 및 UVC 포함) 노출에 의한 피부 노화일 수 있다. 용어 “피부 주름 개선”은 피부에 주름이 생성되는 것을 억제 또는 저해하거나, 이미 생성된 주름을 완화시키는 것일 수 있다. In the present invention, “anti-aging” can mean any action that prevents or suppresses skin aging. Skin aging includes intrinsic aging over time and extrinsic aging due to the external environment. The skin aging may include skin wrinkles, blemishes, blemishes, etc. The skin wrinkles may be fine wrinkles caused by deterioration of the skin. The skin wrinkles may be due to photoaging, age, facial expression, lack of moisture, or a combination thereof. The photoaging may be skin aging caused by exposure to ultraviolet rays (including UVA, UVB, and UVC). The term “skin wrinkle improvement” may refer to suppressing or inhibiting the formation of wrinkles on the skin, or alleviating wrinkles that have already been formed.

본 발명에서 "피부 재생"은 피부의 일부분이 소실되었을 경우 그 부분을 보충하거나 피부 세포의 증식을 증진시키는 모든 작용을 의미할 수 있다. In the present invention, “skin regeneration” may mean any action that replenishes a lost part of the skin or enhances the proliferation of skin cells.

본 발명에서 “상처 개선”은 피부의 재생을 촉진시켜 상처의 정도를 낮추어주거나 완화시키는 용도를 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 상처 개선은 피부 재생을 촉진시켜 이미 발생한 상처의 정도를 낮추거나 완화시키는 것일 수 있다. 용어 "상처"는 창상, 화상, 찰과상, 자외선(UV)에 의한 광손상 및 흉터로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있다.In the present invention, “wound improvement” may include the use of reducing or alleviating the severity of the wound by promoting skin regeneration. For example, the wound improvement may be to promote skin regeneration and reduce or alleviate the severity of the wound that has already occurred. The term “wound” may be one or more selected from the group consisting of cuts, burns, abrasions, photodamage caused by ultraviolet rays (UV), and scars.

본 발명에서, "여드름"은 당업계에서 여드름으로 통칭되는 모든 피부질환, 또는 여드름과 유사한 기전을 통해 발명되는 모든 피부 질환을 포함하는 것으로, 본 발명에서의 피부 상태 개선은 여드름의 개선을 의미하는 것일 수 있다. 여드름은 호르몬의 작용, 과도한 피지 분비, 세균의 감염 등에 의한 모피지선, 모낭 및 주변 조직의 염증성 질환을 말하며, 예컨대, 집합성 여드름, 일반적 여드름, 응괴 여드름(congoblate acne), 화장품 사용에 의한 여드름, 디터지칸 여드름(acne dtergicans), 청춘기 여드름, 섬광모양의 여드름(acne fulminans), 절성 여드름(acne furunculoid), 할로겐에 의한 여드름, 경결성 여드름, 켈로이드성 여드름, 물리적 자극에 의한 여드름(mechanical acne), 약물성 여드름, 괴사성 여드름, 속립성 여드름, 신생아 여드름(acne neonatorum), 지성 여드름(acne oil), 구진성 여드름, 적창(pomade acne), 월경전 여드름, 주사 여드름(acne rosacea), 모창성 여드름, 열대성 여드름(tropical acne), 중독성 여드름(acne venenata), 및 심상성 여드름 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, “acne” includes all skin diseases commonly referred to as acne in the art, or all skin diseases that occur through mechanisms similar to acne. In the present invention, improving skin condition means improving acne. It may be. Acne refers to an inflammatory disease of the sebaceous glands, hair follicles, and surrounding tissues caused by the action of hormones, excessive sebum secretion, bacterial infection, etc., such as collective acne, general acne, congoblate acne, acne caused by the use of cosmetics, and acne due to use of cosmetics. Acne dtergicans, adolescent acne, acne fulminans, acne furunculoid, acne caused by halogens, acne indurated, keloid acne, acne caused by physical stimulation (mechanical acne), Drug-induced acne, necrotic acne, migratory acne, neonatal acne (acne neonatorum), oily acne (acne oil), papular acne, pomade acne, premenstrual acne, rosacea acne, prickly acne. , tropical acne, acne venenata, and acne vulgaris, but are not limited thereto.

본 발명의 포포나무로부터 분리 또는 추출된 세포 외 소포체는 항염증 활성이 있어 여드름과 같은 염증성 피부질환 개선 또는 치료, 및 여드름 피부 상태 개선용 성분으로서 효과가 있다.The extracellular vesicles isolated or extracted from the pawpaw tree of the present invention have anti-inflammatory activity and are effective as an ingredient for improving or treating inflammatory skin diseases such as acne and improving acne skin conditions.

본 발명의 포포나무로부터 분리 또는 추출된 세포 외 소포체는 피부 미백 효과가 우수하여 피부 상태를 개선시키며, 항염증 활성이 있어 여드름과 같이 염증성 피부 상태 또는 염증성 피부 질환을 개선하거나 치료하는 효과가 있다. Extracellular vesicles isolated or extracted from the pawpaw tree of the present invention have an excellent skin whitening effect, improving skin condition, and have anti-inflammatory activity, so they are effective in improving or treating inflammatory skin conditions or inflammatory skin diseases such as acne.

본 발명에서 상기 포포나무 유래 세포 외 소포체는 상기 화장료 조성물에 유효성분으로 포함되는 것으로, 멜라닌 생성 억제 등의 미백 효과 또는 염증성 사이토카인 발현 억제 등의 항염증 효과를 나타낼 수 있는 정도로 본 명세서의 세포외 소포체가 포함될 수 있으며, 전달 및 안정화 등을 위하여 다양한 성분을 부성분으로 첨가하여 다양한 형태로 포뮬레이션(formulation)될 수 있다.본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 미스트, 세럼, 영양화장수, 유연화장수, 유연수, 유탁액, 현탁액, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 파우더, 메이크업베이스, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 세안제, 트리트먼트, 미용액, 미용팩, 연고제, 겔제, 리니멘트제, 액제, 패치, 분무제, 입욕제, 선스크린제, 선오일 및 헤어제품 등의 제형을 가질 수 있다. 제형의 범위가 여기에 한정되는 것은 아니며, 상기 화장료 조성물의 제형은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다.In the present invention, the pawpaw-derived extracellular vesicles are included as an active ingredient in the cosmetic composition, and are used as extracellular vesicles of the present specification to the extent that they can exhibit whitening effects such as inhibition of melanin production or anti-inflammatory effects such as inhibition of inflammatory cytokine expression. It may contain endoplasmic reticulum, and may be formulated in various forms by adding various ingredients as sub-ingredients for delivery and stabilization. In the present invention, the cosmetic composition includes mist, serum, nourishing lotion, softening lotion, Softening water, emulsion, suspension, skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisture lotion, nutritional lotion, massage cream, nutritional cream, moisture cream, hand cream, foundation, powder, makeup base, essence, Nutritional essence, pack, soap, cleansing foam, cleansing lotion, cleansing cream, body lotion, body cleanser, face wash, treatment, serum, beauty pack, ointment, gel, linement, liquid, patch, spray, bath agent, sunscreen , sun oil, and hair products. The scope of the formulation is not limited here, and the formulation of the cosmetic composition may be prepared in any formulation commonly manufactured in the art.

본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 화장학품적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다. 본원의 화장품학적으로 허용 가능한 담체의 종류는 본원 화장료 조성물의 활성 및 특성을 저해하지 않는 한 특별히 제한되지 아니하며 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되고 화장품학적으로 허용되는 담체라면 어느 것이든 사용할 수 있다. 상기 화장품학적으로 허용되는 담체의 비제한적인 예로는, 식염수, 멸균수, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤 및 에탄올 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다. In the present invention, the cosmetic composition may further include a cosmetically acceptable carrier. The type of the cosmetically acceptable carrier herein is not particularly limited as long as it does not inhibit the activity and properties of the cosmetic composition herein, and any carrier commonly used in the art and cosmetically acceptable can be used. Non-limiting examples of the cosmetically acceptable carrier include saline solution, sterile water, buffered saline solution, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, and ethanol. These may be used alone or in combination of two or more types.

본 발명에 있어서, 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 화장료 조성물의 제형에 따라 다양하다.In the present invention, cosmetically acceptable carriers vary depending on the formulation of the cosmetic composition.

상기 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation is a paste, cream or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracant, cellulose derivatives, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide can be used as the carrier ingredient. .

상기 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.If the formulation is a powder or spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate, or polyamide powder may be used as the carrier ingredient. In particular, in the case of a spray, chlorofluorohydrocarbon, propane/butane may be used as the carrier ingredient. Alternatively, it may include a propellant such as dimethyl ether.

상기 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.When the formulation is a solution or emulsion, a solvent, solubilizing agent or emulsifying agent is used as a carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1,3 -Butyl glycol oil, fatty esters of glycerol, fatty acid esters of polyethylene glycol or sorbitan.

상기 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.When the formulation is a suspension, the carrier ingredients include water, a liquid diluent such as ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, and microcrystalline cellulose. , aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracant, etc. can be used.

상기 화장료 조성물의 제형이 비누인 경우에는, 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.When the formulation of the cosmetic composition is soap, alkali metal salts of fatty acids, fatty acid hemiester salts, fatty acid protein hydrolysates, isethionates, lanolin derivatives, fatty alcohols, vegetable oils, glycerol, sugars, etc. are used as carrier ingredients. It may be, but is not limited to this.

상기 화장료 조성물의 제형이 팩인 경우에는, 폴리비닐알코올 등을 함유하는 필오프 팩, 일반유화형 화장료에 카올린, 탈크, 산화아연, 또는 이산화티탄 등의 안료가 함유된 워시오프(wash off) 팩, 또는 마스크 시트 팩의 형태를 모두 포함하며, 특별히 이에 제한되는 것은 아니다.When the formulation of the cosmetic composition is a pack, a peel-off pack containing polyvinyl alcohol, etc., a wash-off pack containing a general emulsified cosmetic and a pigment such as kaolin, talc, zinc oxide, or titanium dioxide, or a mask sheet pack, but is not particularly limited thereto.

상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 포포나무 유래 세포 외 소포체 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 방부제, 보습제, 색소, 살균제, 산화방지제, 계면활성제 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있다. 또한, 상기 화장료 조성물은 그 효과를 증진시키기 위해 피부 흡수 촉진제를 추가로 포함할 수 있다.Ingredients included in the cosmetic composition may include ingredients commonly used in cosmetic compositions in addition to extracellular vesicles derived from pawpaw trees as active ingredients, for example, stabilizers, solubilizers, preservatives, moisturizers, pigments, disinfectants, It may contain conventional auxiliaries and carriers such as antioxidants, surfactants, vitamins, pigments and flavorings. Additionally, the cosmetic composition may further include a skin absorption accelerator to enhance its effect.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 상기 포포나무 유래 세포 외 소포체 외에 동일 또는 유사한 효능를 나타내는 유효성분을 1 종 이상 더 포함할 수 있다.In the present invention, the composition may further include one or more active ingredients showing the same or similar efficacy in addition to the extracellular vesicles derived from the pawpaw tree.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 0.000000001 중량% 내지 90 중량%, 예를 들면, 0.000000001 중량% 내지 80 중량%, 0.000000001 중량% 내지 60 중량%, 0.000000001 중량% 내지 30 중량%, 0.000000001 중량% 내지 20중량%, 0.000000001 중량% 내지 10 중량%, 0.000000001 중량% 내지 5 중량%, 0.000000001 중량% 내지 0.001 중량%, 0.000000001 중량% 내지 0.0001 중량%, 0.000000001 중량% 내지 0.00001 중량%, 0.0001 중량% 내지 90 중량%, 0.0001 중량% 내지 80 중량%, 0.0001 중량% 내지 60 중량%, 0.0001 중량% 내지 30 중량%, 0.0001 중량% 내지 20 중량%, 0.0001 중량% 내지 10 중량%, 0.0001 중량% 내지 5 중량%, 0.001 중량% 내지 90 중량%, 0.001 중량% 내지 80 중량%, 0.001 중량% 내지 60 중량%, 0.001 중량% 내지 30 중량%, 0.001 중량% 내지 20 중량%, 0.001 중량% 내지 10 중량%, 0.001 중량% 내지 5 중량%, 0.01 중량% 내지 90 중량%, 0.01 중량% 내지 80 중량%, 0.01 중량% 내지 60 중량%, 0.01 중량% 내지 30 중량%, 0.01 중량% 내지 20 중량%, 0.01 중량% 내지 10 중량%, 0.01 중량% 내지 5 중량%, 0.1 중량% 내지 90 중량%, 0.1 중량% 내지 80 중량%, 0.1 중량% 내지 60 중량 %, 0.1 중량% 내지 30 중량%, 0.1 중량% 내지 20 중량%, 0.1 중량% 내지 10 중량%, 0.1 중량% 내지 5 중량%의 포포나무 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicle)를 포함할 수 있다. 0.000000001 중량% 미만으로 포함되는 경우에는 피부개선효과 등이 미미하고, 90.0 중량%를 초과하는 경우에는 재료 투입량 대비 효율성이 떨어져 경제적이지 않다.In the present invention, the composition is 0.000000001% by weight to 90% by weight, for example, 0.000000001% by weight to 80% by weight, 0.000000001% by weight to 60% by weight, 0.000000001% by weight to 30% by weight, 0.000000001% by weight, based on the total weight of the composition. Weight % to 20 weight %, 0.000000001 weight % to 10 weight %, 0.000000001 weight % to 5 weight %, 0.000000001 weight % to 0.001 weight %, 0.000000001 weight % to 0.0001 weight %, 0.000000001 weight % to 0.0000 1% by weight, 0.0001% by weight to 90% by weight, 0.0001% to 80% by weight, 0.0001% to 60% by weight, 0.0001% to 30% by weight, 0.0001% to 20% by weight, 0.0001% to 10% by weight, 0.0001% to 5% by weight. Weight%, 0.001% to 90% by weight, 0.001% to 80% by weight, 0.001% to 60% by weight, 0.001% to 30% by weight, 0.001% to 20% by weight, 0.001% to 10% by weight. , 0.001% to 5% by weight, 0.01% to 90% by weight, 0.01% to 80% by weight, 0.01% to 60% by weight, 0.01% to 30% by weight, 0.01% to 20% by weight, 0.01% by weight. Weight % to 10 weight %, 0.01 weight % to 5 weight %, 0.1 weight % to 90 weight %, 0.1 weight % to 80 weight %, 0.1 weight % to 60 weight %, 0.1 weight % to 30 weight %, 0.1 weight % It may contain from 20% by weight, 0.1% to 10% by weight, and 0.1% to 5% by weight of extracellular vesicles derived from pawpaw trees. If it is included in less than 0.000000001% by weight, the skin improvement effect is minimal, and if it is included in more than 90.0% by weight, the efficiency is low compared to the amount of material input, making it uneconomical.

일 구체예에 있어서, 상기 조성물은 세포 외 소포체가 10⁵개/ml 내지 10¹⁰개/ml, 예를 들어, 10⁵개/ml 내지 10⁹개/ml, 10⁵개/ml 내지 10⁸개/ml, 10⁵개/ml 내지 10⁷개/ml, 10⁵개/ml 내지 10⁶개/ml, 10⁶개/ml 내지 10¹⁰개/ml, 10⁶개/ml 내지 10⁹개/ml, 10⁶개/ml 내지 10⁸개/ml, 10⁶개/ml 내지 10⁷개/ml, 10⁷개/ml 내지 10¹⁰ 개/ml, 10⁷개/ml 내지 10⁹개/ml, 10⁷개/ml 내지 10⁸개/ml, 10⁸개/ml 내지 10¹⁰개/ml, 10⁸개/ml 내지 10⁹개/ml, 10⁹개/ml 내지 10¹⁰개/ml의 농도로 포함된 것일 수 있다. 세포 외 소포체가 조성물 내에 10⁵개/ml 미만으로 포함될 경우 유의한 피부 상태 개선 효과가 나타나지 않을 수 있고, 10¹⁰개/ml 초과로 포함될 경우 제형 안정성이 저하될 수 있다.In one embodiment, the composition has 10 ⁵ to 10 ¹⁰ extracellular vesicles/ml, for example, 10 ⁵ to 10 ⁹ /ml, 10 ⁵ to 10 ⁸ /ml. /ml, 10 ⁵ /ml to 10 ⁷ /ml, 10 ⁵ /ml to 10 ⁶ /ml, 10 ⁶ /ml to 10 ¹⁰ /ml, 10 ⁶ /ml to 10 ⁹ /ml , 10 ⁶ pieces/ml to 10 ⁸ pieces/ml, 10 ⁶ pieces/ml to 10 ⁷ pieces/ml, 10 ⁷ pieces/ml to 10 ¹⁰ pieces/ml, 10 ⁷ pieces/ml to 10 ⁹ pieces/ml, 10 Concentrations of ⁷ /ml to 10 ⁸ /ml, 10 ⁸ /ml to 10 ¹⁰ /ml, 10 ⁸ /ml to 10 ⁹ /ml, 10 ⁹ /ml to 10 ¹⁰ /ml. It may have happened. If the extracellular vesicles are included in the composition at less than 10 ⁵ pieces/ml, a significant skin condition improvement effect may not appear, and if they are included in more than 10 ¹⁰ pieces/ml, the formulation stability may be reduced.

일 실시예에서, 상기 포포나무 유래 세포 외 소포체는 세포 내에 존재하는 멜라닌 생성을 억제하는 효과가 있음을 실시예를 통해 확인하였다(도 5 및 6). 이와 같은 멜라닌 생성 억제는 티로시나아제의 활성을 억제함으로써 나타난 효과이다. 이에, 본 발명의 포포나무 잎으로부터 분리된 세포 외 소포체는 피부 미백 용도의 화장품의 유효성분으로 이용할 수 있다.In one example, it was confirmed through examples that the pawpaw-derived extracellular vesicles have an effect of suppressing melanin production present in cells (FIGS. 5 and 6). This inhibition of melanin production is an effect achieved by inhibiting the activity of tyrosinase. Accordingly, the extracellular vesicles isolated from the pawpaw leaves of the present invention can be used as an active ingredient in cosmetics for skin whitening.

다른 일 측면에 있어서, 포포나무(Asimina triloba) 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicles, EV)를 포함하는 피부 상태 개선용 피부 외용제 조성물을 제공한다.In another aspect, an external skin composition for improving skin condition containing extracellular vesicles (EV) derived from Asimina triloba is provided.

상기 피부 외용제 조성물에 있어서, “포포나무”, “세포 외 소포체”, “피부 상태 개선” 및 “조성물”에 대해서는 상술한 바와 같다.In the above skin external composition, “pawpaw tree”, “extracellular vesicles”, “skin condition improvement” and “composition” are as described above.

상기 피부 외용제 조성물은 피부에 점착하거나 도포할 수 있는 제형을 가지는 것으로, 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 팩, 젤 또는 피부 점착타입 화장료의 제형을 갖는 화장료 조성물일 수 있으며, 또한, 로션, 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제와 같은 경피 투여형 제형일 수 있으며, 피부 외용제 조성물의 제형 범위는 여기에 한정되는 것은 아니며 피부에 바를 수 있는 제형이면 제한없이 가능하다.The composition for external application to the skin has a formulation that can be adhered or applied to the skin, and there is no particular limitation in the formulation, for example, softening lotion, nourishing lotion, massage cream, nourishing cream, pack, gel, or skin adhesive type. It may be a cosmetic composition having a cosmetic formulation, and may also be a transdermal administration formulation such as lotion, ointment, gel, cream, patch, or spray. The formulation range of the external skin composition is not limited to this and may be applied to the skin. Any formulation that can be used is possible without limitation.

상기 피부 외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부 외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제, 또는 이들의 조합과 필요에 따라서 적절하게 배합될 수 있다. The skin external preparations include ingredients commonly used in skin external preparations such as cosmetics and medicines, such as aqueous ingredients, oil-based ingredients, powder ingredients, alcohols, moisturizers, thickeners, ultraviolet absorbers, whitening agents, preservatives, antioxidants, surfactants, and fragrances. , colorants, various skin nutrients, or a combination thereof may be appropriately mixed according to need.

상기 피부 외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염등의 약제, 비타민 C, 아스코르브산인산마그네슘, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산, 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류등도 적절하게 배합할 수 있다.The skin external preparations include metal sequestrants such as disodium edetate, trisodium edetate, sodium citrate, sodium polyphosphate, sodium metaphosphate, and gluconic acid, caffeine, tannin, belafamil, licorice extract, glablidin, and calin. Hot water extract of fruit, various herbal medicines, drugs such as tocopherol acetate, glytylitinic acid, tranexamic acid and its derivatives or salts, vitamin C, magnesium ascorbate phosphate, ascorbate glucoside, arbutin, kojic acid, glucose, fructose, Sugars such as trehalose can also be appropriately mixed.

다른 일 측면에 있어서, 포포나무(Asimina triloba) 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicles, EV)를 포함하는 피부 상태 개선용 식품 조성물을 제공한다.In another aspect, a food composition for improving skin condition containing extracellular vesicles (EV) derived from Asimina triloba is provided.

상기 식품 조성물에 있어서, “포포나무”, “세포 외 소포체”, “피부 상태 개선” 및 “조성물”에 대해서는 상술한 바와 같다.In the above food composition, “pawpaw tree”, “extracellular vesicles”, “improvement of skin condition” and “composition” are as described above.

일 실시예에서, 상기 피부 상태 개선용 식품 조성물은 피부 미백용, 여드름 개선용 또는 항염증용 식품 조성물일 수 있다.In one embodiment, the food composition for improving skin condition may be a food composition for skin whitening, improving acne, or anti-inflammatory.

상기 조성물에는 유효성분 이외에 식품학적으로 허용가능한 식품보조첨가제가 포함될 수 있다. The composition may include food additives that are foodologically acceptable in addition to the active ingredients.

본 발명에서 사용되는 용어 "식품보조첨가제"란 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 건강기능식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품보조첨가제의 예로는 여러가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.The term "food supplement" used in the present invention refers to a component that can be added as an auxiliary food additive, and can be appropriately selected and used by a person skilled in the art as it is added to manufacture each type of health functional food. Examples of food supplements include various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavoring agents such as synthetic and natural flavors, colorants and fillers, pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohol, carbonating agents used in carbonated beverages, etc. are included, but the types of food supplements of the present invention are not limited to the above examples.

본 발명의 식품 조성물에는 건강기능식품이 포함될 수 있다. 본 발명에서 사용되는 용어 "건강기능식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 '기능성'이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 당 업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조시에는 당 업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 상기 건강기능식품의 제형 또한 건강기능식품으로 인정되는 제형이면 제한없이 제조될 수 있다. 본 발명의 식품용 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 본 발명의 건강기능식품은 피부 상태 개선의 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다. The food composition of the present invention may include health functional foods. The term “health functional food” used in the present invention refers to food manufactured and processed in the form of tablets, capsules, powders, granules, liquids, and pills using raw materials or ingredients with functional properties useful to the human body. Here, ‘functionality’ means controlling nutrients for the structure and function of the human body or obtaining useful effects for health purposes, such as physiological effects. The health functional food of the present invention can be manufactured by a method commonly used in the industry, and can be manufactured by adding raw materials and components commonly added in the industry. Additionally, the formulation of the health functional food can also be manufactured without limitation as long as it is a formulation recognized as a health functional food. The food composition of the present invention can be manufactured in various types of formulations, and unlike general drugs, it is made from food as a raw material and has the advantage of not having side effects that may occur when taking the drug for a long period of time, and is excellent in portability, so the present invention Health functional foods can be consumed as supplements to enhance the effect of improving skin condition.

또 다른 일 측면에 있어서, 포포나무(Asimina triloba) 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicles, EV)를 포함하는 피부 색소침착 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.In another aspect, a pharmaceutical composition for preventing or treating skin pigmentation disease containing extracellular vesicles (EV) derived from Asimina triloba is provided.

다른 또 하나의 측면에 있어서, 포포나무(Asimina triloba) 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicles, EV)를 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.In another aspect, a pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory diseases containing extracellular vesicles (EV) derived from Asimina triloba is provided.

상기 약학적 조성물에 있어서, “포포나무”, “세포 외 소포체”, 및 “조성물”에 대해서는 상술한 바와 같다.In the pharmaceutical composition, “pawpaw tree”, “extracellular vesicle”, and “composition” are as described above.

상기 피부 색소침착 질환은 피부에 색소가 과다하게 침작되는 증상을 가진 질환을 의미할 수 있으며, 상세하게는 기미, 주근깨, 흑색점, 모반, 약물에 의한 색소침착, 염증 후 색소침착 및 피부염에서 발생하는 색소침착으로 이루어진 군에서 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다.The skin pigmentation disease may refer to a disease with symptoms of excessive pigment deposition in the skin, and specifically occurs in blemishes, freckles, lentigo, nevus, drug-induced pigmentation, post-inflammatory pigmentation, and dermatitis. It may be selected from the group consisting of pigmentation, but it is not limited thereto.

본 발명의 포포나무로부터 분리 또는 추출된 세포 외 소포체는 멜라닌 생성 억제 효과가 있어 색소침착 질환을 개선 또는 치료 효과가 있다.The extracellular vesicles isolated or extracted from the pawpaw tree of the present invention have an effect of suppressing melanin production and are effective in improving or treating pigmentation diseases.

상기 염증성 질환은 바람직하게는 염증성 피부질환이며, 상기 염증성 피부질환은 아토피 피부염, 여드름, 건선, 접촉성 피부염, 습진성 피부염, 광선피부염, 지루피부염, 포진성피부염, 편평태선, 경화태선, 괴저성 노피증, 천포창, 수포성 표피박리증, 알러지 및 과민증으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나일 수 있다.The inflammatory disease is preferably an inflammatory skin disease, and the inflammatory skin disease includes atopic dermatitis, acne, psoriasis, contact dermatitis, eczematous dermatitis, actinic dermatitis, seborrheic dermatitis, dermatitis herpetiformis, lichen planus, lichen sclerosus, and gangrenous dermatitis. It may be any one selected from the group consisting of noderma, pemphigus, epidermolysis bullosa, allergy, and hypersensitivity.

본 발명에 있어서, 상기 약학적 조성물은 염증성 사이토카인인 TNF-α 발현을 억제하는 것일 수 있다.In the present invention, the pharmaceutical composition may inhibit the expression of TNF-α, an inflammatory cytokine.

본 발명에 있어서, 상기 약학적 조성물은 염증성 사이토카인인 IL-6 단백질의 발현을 억제하는 것일 수 있다.In the present invention, the pharmaceutical composition may inhibit the expression of IL-6 protein, an inflammatory cytokine.

본 발명에 있어서, 상기 약학적 조성물은 염증성 사이토카인인 IL-12p70 발현을 억제하는 것일 수 있다.In the present invention, the pharmaceutical composition may inhibit the expression of IL-12p70, an inflammatory cytokine.

본 발명의 상기 약학적 조성물은 항염증 활성을 갖는 포포나무로부터 분리 또는 추출된 세포 외 소포체를 유효성분으로 포함하고 있어 여드름과 같은 염증성 피부질환 개선 또는 치료, 및 여드름 피부 상태 개선용 성분으로서 효과가 있다.The pharmaceutical composition of the present invention contains extracellular vesicles isolated or extracted from the pawpaw tree, which has anti-inflammatory activity, as an active ingredient, and is effective as an ingredient for improving or treating inflammatory skin diseases such as acne and improving acne skin conditions. there is.

본 발명의 약학적 조성물은 투여를 위해서 유효성분인 포포나무 유래 세포 외 소포체 외에 추가로 약학적으로 허용가능한 담체를 1 종 이상 더 포함할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 따라서, 본 발명의 약학 조성물은 패치제, 액제, 환약, 캡슐, 과립, 정제, 좌제 등일 수 있다. 이들 제제는 당 분야에서 제제화에 사용되는 통상의 방법 또는 Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법으로 제조될 수 있으며 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 다양한 제제로 제제화될 수 있다.For administration, the pharmaceutical composition of the present invention may further include one or more pharmaceutically acceptable carriers in addition to the pawpaw-derived extracellular vesicles, which are the active ingredient. Pharmaceutically acceptable carriers can be saline solution, sterile water, Ringer's solution, buffered saline solution, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol, and a mixture of one or more of these ingredients, and if necessary, antioxidants and buffer solutions. Other common additives such as bacteriostatic agents can be added. In addition, diluents, dispersants, surfactants, binders, and lubricants can be additionally added to formulate injectable formulations such as aqueous solutions, suspensions, emulsions, etc., pills, capsules, granules, or tablets. Accordingly, the pharmaceutical composition of the present invention may be a patch, solution, pill, capsule, granule, tablet, suppository, etc. These preparations can be manufactured by conventional methods used for formulation in the art or by methods disclosed in Remington's Pharmaceutical Science (recent edition), Mack Publishing Company, Easton PA, and can be formulated into various preparations depending on each disease or ingredient. It can be.

본 발명의 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 상기 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 건강상태, 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 본 발명의 화학식 1의 화합물의 일일 투여량은 약 0.01 내지 1000 ㎎/㎏ 이고, 바람직하게는 0.1 내지 100 ㎎/㎏ 이며, 하루 일 회 내지 수 회에 나누어 투여할 수 있다. The composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount. The term "pharmaceutically effective amount" refers to an amount that is sufficient to treat a disease with a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment and does not cause side effects, and the effective dose level is determined by the patient's health status and the severity of the disease. It can be determined based on factors including type, severity, activity of the drug, sensitivity to the drug, method of administration, time of administration, route of administration and excretion rate, duration of treatment, drugs combined or used simultaneously, and other factors well known in the medical field. . The composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and may be administered singly or multiple times. Considering all of the above factors, it is important to administer an amount that can achieve maximum effect with the minimum amount without side effects, and this can be easily determined by a person skilled in the art. The daily dosage of the compound of Formula 1 of the present invention is about 0.01 to 1000 mg/kg, preferably 0.1 to 100 mg/kg, and can be administered once to several times a day.

본 발명의 용어 "투여"란 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며 상기 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 활성 물질이 목적 조직으로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수도 있다. 예를 들면, 경피 투여, 경구 투여, 경막내 투여, 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여, 내이 투여, 자궁내 경막 투여, 설하 투여, 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. The term "administration" of the present invention means introducing a predetermined substance into a patient by an appropriate method, and the composition may be administered through any general route as long as it can reach the target tissue. Additionally, the pharmaceutical composition of the present invention may be administered by any device that allows the active substance to move to the target tissue. For example, transdermal administration, oral administration, intrathecal administration, intraperitoneal administration, intravenous administration, intramuscular administration, subcutaneous administration, intradermal administration, topical administration, intranasal administration, intrapulmonary administration, intrarectal administration, inner ear administration, intrauterine administration. It may be administered by intrathecal administration, sublingual administration, or intracerebrovascular injection, but is not limited thereto.

본 발명에 있어서, 상기 약학적 조성물은 그 투여방법이나 제형에 따라 필요한 경우, 현탁제, 용해보조제, 안정화제, 등장화제, 보존제, 흡착방지제, 계면활성화제, 희석제, 부형제, pH 조정제, 무통화제, 완충제, 환원제, 산화방지제 등을 적절히 포함할 수 있다. 상기에 예시된 것들을 비롯하여 본 발명에 적합한 약학적으로 허용되는 담체 및 제제는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., 1995]에 상세히 기재되어 있다. 상기 약학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질 중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 분말, 과립, 정제 또는 캡슐 형태일 수 있다In the present invention, the pharmaceutical composition may be used as a suspending agent, solubilizing agent, stabilizer, isotonic agent, preservative, anti-adsorption agent, surfactant, diluent, excipient, pH adjuster, analgesic agent, if necessary depending on the administration method or dosage form. , buffering agents, reducing agents, antioxidants, etc. may be appropriately included. Pharmaceutically acceptable carriers and agents suitable for the present invention, including those exemplified above, are described in detail in Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., 1995. The pharmaceutical composition is prepared in unit dosage form by formulating using a pharmaceutically acceptable carrier and/or excipient according to a method that can be easily performed by a person skilled in the art to which the invention pertains. It can be manufactured by placing it in a multi-capacity container. At this time, the formulation may be in the form of a solution, suspension, or emulsion in an oil or aqueous medium, or in the form of powder, granules, tablets, or capsules.

경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 탄산칼슘, 수크로스, 락토즈, 젤라틴 등을 혼합하여 제형화한다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크와 같은 윤활제가 사용될 수 있다.Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc., and these solid preparations contain at least one excipient, such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, gelatin, etc. Formulated by mixing. Additionally, in addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc may be used.

경구용 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 예시될 수 있으며, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 액체 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.Liquid preparations for oral use include suspensions, oral solutions, emulsions, and syrups. In addition to the commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin, they may contain various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives. You can.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액제, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈61. 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 한편, 주사제에는 용해제, 등장화제, 현탁화제, 유화제, 안정화제, 방부제 등과 같은 종래의 첨가제가 포함될 수 있다.Preparations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, and suppositories. Non-aqueous solvents and suspensions may include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, and injectable ester such as ethyl oleate. The basis of suppositories is Wethepsol, Macrogol, and Twin 61. Cacao, laurel, glycerogeratin, etc. can be used. Meanwhile, injectables may contain conventional additives such as solubilizers, isotonic agents, suspending agents, emulsifiers, stabilizers, preservatives, etc.

본 발명의 약학적 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있으나, 삼투압 펌프(osmotic pump)를 이용한 피하주사(subcutaneous injection), 피내주사(intradermal injection), 정맥주사(intravein injection), 복강주사(intraperitoneal injection) 또는 안구 주사 (intravitreal injection) 등을 통해 투여될 수 있다. The administration route of the pharmaceutical composition of the present invention may be administered through any general route as long as it can reach the target tissue, but may include subcutaneous injection using an osmotic pump, intradermal injection, It can be administered through intravenous injection, intraperitoneal injection, or intravitreal injection.

본 발명의 약학적 조성물은 포포나무 유래 세포 외 소포체 외에 동일 또는 유사한 약효를 나타내는 유효성분을 1 종 이상 더 포함할 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may further include one or more active ingredients that exhibit the same or similar medicinal efficacy in addition to the extracellular vesicles derived from pawpaw tree.

본 발명에서 사용되는 용어 “예방”은 조성물의 투여로 피부 색소침착 질환 또는 염증성 질환을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다. The term “prevention” used in the present invention refers to any action that suppresses or delays the onset of skin pigmentation disease or inflammatory disease by administering a composition.

본 발명에 있어서, “치료”란 조성물의 투여로 상기 피부 색소침착 질환 또는 염증성 질환의 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.In the present invention, “treatment” means any action in which the symptoms of the skin pigmentation disease or inflammatory disease are improved or beneficially changed by administration of the composition.

또 다른 일 측면에 있어서, 포포나무(Asimina triloba) 유래 세포 외 소포체(extracellular vesicles, EV)를 포함하는 피부 상태 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.In another aspect, a quasi-drug composition for improving skin condition containing extracellular vesicles (EV) derived from Asimina triloba is provided.

상기 의약외품 조성물에 있어서, “포포나무”, “세포 외 소포체”, “피부 상태 개선” 및 “조성물”에 대해서는 상술한 바와 같다.In the above-mentioned quasi-drug composition, “pawpaw tree”, “extracellular vesicles”, “improvement of skin condition” and “composition” are as described above.

본 발명에서, 용어 "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미하는 것으로, 예를 들어 대한민국 약사법에 따르면 의약외품이란 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로, 사람ㆍ동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않는 제품 등이 포함된다.In the present invention, the term "quasi-drug" refers to products that have a milder effect than pharmaceuticals among products used for the purpose of diagnosing, treating, improving, alleviating, treating, or preventing diseases in humans or animals. For example, according to the Pharmaceutical Affairs Act of the Republic of Korea. According to it, quasi-drugs exclude products used for medicinal purposes and include products used to treat or prevent diseases in humans and animals, and products that have a mild or no direct effect on the human body.

본 발명에서, 의약외품 조성물은 바디 클렌저, 폼, 비누, 마스크, 연고제, 크림, 로션, 에센스 및 스프레이로 이루어진 군에서 선택되는 형태로 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the quasi-drug composition may be manufactured in a form selected from the group consisting of body cleanser, foam, soap, mask, ointment, cream, lotion, essence, and spray, but is not limited thereto.

본 발명의 포포나무(Asimina triloba) 유래 세포 외 소포체를 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 본 발명의 포포나무(Asimina triloba) 유래 세포 외 소포체을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다.When using the extracellular vesicles derived from Asimina triloba of the present invention as a quasi-drug additive, the extracellular vesicles derived from Asimina triloba of the present invention can be added as is or used with other quasi-drugs or quasi-drug ingredients, using the usual method. It can be used appropriately.

다른 또 하나의 측면에 있어서, 본 발명은 포포나무(Asimina triloba) 유래 세포 외 소포체 또는 포포나무(Asimina triloba) 유래 세포 외 소포체을 포함하는 상기 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 피부 상태 개선 방법을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a skin treatment comprising the step of administering the composition comprising extracellular vesicles derived from Asimina triloba or extracellular vesicles derived from Asimina triloba to a subject in need thereof. Provides ways to improve the condition.

상기 피부 상태 개선 방법에 있어서, “포포나무”, “세포 외 소포체”, “피부 상태 개선” “조성물” 및 “투여”에 대해서는 상술한 바와 같다.In the above skin condition improvement method, “pawpaw tree”, “extracellular vesicles”, “skin condition improvement”, “composition”, and “administration” are as described above.

본 발명의 포포나무(Asimina triloba) 유래 세포 외 소포체은 유효량으로 이를 필요로 하는 개체에게 투여될 수 있다. 유효량의 수준은 목적하는 피부 상태 개선 효과, 구체적으로는 피부 미백 효과가 나타나는 정도로 당업자가 통상적인 상식에 기초하여 결정할 수 있다.The extracellular vesicles derived from Asimina triloba of the present invention can be administered to an individual in need thereof in an effective amount. The level of the effective amount can be determined by a person skilled in the art based on common sense to the degree to which the desired skin condition improvement effect, specifically the skin whitening effect, is achieved.

다른 또 하나의 측면에 있어서, 상기 포포나무 유래 세포 외 소포체를 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 피부 색소침착 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.In yet another aspect, a method for preventing or treating skin pigmentation disease is provided, comprising administering the pawpaw-derived extracellular vesicles to an individual in need thereof.

다른 하나의 측면에 있어서, 상기 포포나무 유래 세포 외 소포체를 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.In another aspect, a method for preventing or treating an inflammatory disease is provided, comprising the step of administering the pawpaw-derived extracellular vesicles to an individual in need thereof.

상기 치료 방법에 있어서, “포포나무”, “세포 외 소포체”, “피부 색소침착 질환”, “염증성 질환”, “예방”, “치료” 및 “조성물”에 대해서는 상술한 바와 같다.In the above treatment method, “pawpaw tree”, “extracellular vesicles”, “skin pigmentation disease”, “inflammatory disease”, “prevention”, “treatment” and “composition” are as described above.

본 발명의 용어 "개체"란 피부 색소침착 질환 또는 염증성 질환이 발병하였거나 발병할 수 있는 모든 동물을 의미하며, 전형적으로 본 발명의 포포나무 유래 세포 외 소포체를 이용한 치료로 유익한 효과를 나타낼 수 있는 동물일 수 있으나, 피부 색소침착 질환 또는 염증성 질환의 증상을 갖거나 이러한 증상을 가질 가능성이 있는 개체이면 제한없이 포함한다. 전술한 바와 같이, 본 발명의 약학적 조성물을 개체에게 투여함으로써 상기 피부 색소침착 질환 또는 염증성 질환을 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나, 기존의 피부 색소침착 질환 치료제 또는 염증성 질환 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다.The term "subject" of the present invention refers to any animal that has developed or can develop a skin pigmentation disease or an inflammatory disease, and is typically an animal that can show beneficial effects from treatment using the extracellular vesicles derived from the pawpaw tree of the present invention. However, individuals with symptoms of skin pigmentation disease or inflammatory disease or those likely to have such symptoms are included without limitation. As described above, the skin pigmentation disease or inflammatory disease can be effectively prevented or treated by administering the pharmaceutical composition of the present invention to an individual. The pharmaceutical composition of the present invention can be administered as an individual treatment or in combination with existing treatments for skin pigmentation disease or inflammatory diseases, and may be administered sequentially or simultaneously with conventional treatments.

본 발명의 용어 "투여"란 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며 상기 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 약학 조성물은 활성 물질이 목적 조직으로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수도 있다. 예를 들면, 경구 투여, 경막내 투여, 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여, 내이 투여, 자궁내 경막 투여, 설하 투여, 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다.The term "administration" of the present invention means introducing a predetermined substance into a patient by an appropriate method, and the composition may be administered through any general route as long as it can reach the target tissue. Additionally, the pharmaceutical composition of the present invention may be administered by any device that allows the active substance to move to the target tissue. For example, oral administration, intrathecal administration, intraperitoneal administration, intravenous administration, intramuscular administration, subcutaneous administration, intradermal administration, topical administration, intranasal administration, intrapulmonary administration, intrarectal administration, inner ear administration, intrauterine intrathecal administration, It may be administered by sublingual administration or intracerebrovascular injection, but is not limited thereto. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc., and preparations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories.

본 발명의 약학적 조성물의 투여는 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양으로 투여할 수 있으며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, and may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents. Considering all of the above factors, it can be administered in an amount that can achieve maximum effect with the minimum amount without side effects, and this can be easily determined by a person skilled in the art.

본 발명은 또한 피부 색소침착 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 상기 포포나무 유래 세포 외 소포체의 용도를 제공하고자 한다. The present invention also seeks to provide the use of the extracellular vesicles derived from the pawpaw tree for the production of a medicament for the treatment of skin pigmentation diseases.

또한, 본 발명은 염증성 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 상기 포포나무 유래 세포 외 소포체의 용도를 제공하고자 한다. In addition, the present invention seeks to provide the use of the extracellular vesicles derived from the pawpaw tree for the production of drugs for the treatment of inflammatory diseases.

약제의 제조를 위한 상기 언급된 세포 외 소포체는 허용되는 보조제, 희석제, 담체 등을 혼합할 수 있으며, 기타 활성제제와 함께 복합 제제로 제조되어 활성 성분들의 상승 작용을 가질 수 있다.The above-mentioned extracellular vesicles for the production of drugs can be mixed with acceptable auxiliaries, diluents, carriers, etc., and can be prepared as a complex preparation with other active agents to have a synergistic effect of the active ingredients.

본 발명의 용도, 조성물, 방법에서 언급된 사항은 서로 모순되지 않는 한 동일하게 적용된다.Matters mentioned in the uses, compositions, and methods of the present invention apply equally unless they contradict each other.

포포나무 유래 세포 외 소포체의 제조방법Method for producing extracellular vesicles derived from pawpaw tree

본 발명의 일 측면에 있어서, 포포나무(Asimina triloba)로부터 세포 외 소포체(extracellular vesicles)를 수득하는 단계;를 포함하는 세포 외 소포체의 제조방법을 제공한다.In one aspect of the present invention, a method for producing extracellular vesicles comprising the step of obtaining extracellular vesicles from Asimina triloba is provided.

본 발명에서 세포 외 소포체의 분리하는 방법은 특별히 제한되지 않고, 예를 들어 초원심분리기, 크기 배제 크로마토그래피, Polyethylen glycol(PEG) 침전, 엑소좀 분리 kit 등의 방법을 통하여 제조될 수 있다. In the present invention, the method for isolating extracellular vesicles is not particularly limited, and may be prepared through methods such as ultracentrifugation, size exclusion chromatography, polyethylene glycol (PEG) precipitation, and exosome isolation kit.

상기 포포나무 유래 세포 외 소포체는 하기 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다:The pawpaw-derived extracellular vesicles can be prepared by a production method including the following steps, but are not limited to this:

1) 포포나무(Asimina triloba) 및 용매를 혼합하고 분쇄하여 파쇄물을 수득하는 단계;1) mixing and pulverizing pawpaw tree ( Asimina triloba ) and solvent to obtain crushed material;

2) 상기 파쇄물을 여과하는 단계; 및2) filtering the shredded material; and

3) 상기 여과된 파쇄물을 한외여과 하여 포포나무로부터 분리된 세포 외 소포체를 수득하는 단계.3) Obtaining extracellular vesicles isolated from the pawpaw tree by ultrafiltration of the filtered lysate.

본 발명에 있어서, 상기 포포나무는 건조되지 않은 포포나무의 잎 또는 줄기를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 건조되지 않은 포포나무의 잎을 사용할 수 있다.In the present invention, the leaves or stems of the pawpaw tree that have not been dried can be used as the pawpaw tree, and preferably, the leaves of the pawpaw tree that have not been dried can be used.

상기 (a) 단계에서, 상기 (a) 단계에서 용매는 인산완충생리식염수　(Phosphate-buffered saline, PBS), 사카라이드(saccharide) 및정제수이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함할 수 있으며, 바람직하게는 인산완충생리식염수　(Phosphate-buffered saline, PBS)를 사용할 수 있다.In step (a), the solvent in step (a) may include at least one selected from the group consisting of phosphate-buffered saline (PBS), saccharide, and purified water, preferably Alternatively, phosphate-buffered saline (PBS) can be used.

상기 (b) 단계는 상기 (a) 단계에서 수득된 파쇄물을 원심분리하여 잔해를 제거하고 회수한 상등액을 여과하는 것일 수 있으며, (b) 단계 이후 상기 여과된 파쇄물을 0.01 내지 0.4 ㎛ 필터로 여과하는 단계를 더 포함할 수 있으며, 상기 여과를 통해 미생물 오염을 제거할 수 있다. 상기 필터는 바람직하게는 0.1 내지 0.3 ㎛ 필터일 수 있고, 더 바람직하게는 0.15 내지 0.25 ㎛ 필터일 수 있다.Step (b) may be centrifuging the lysate obtained in step (a) to remove debris and filtering the recovered supernatant, and after step (b), the filtered lysate is filtered through a 0.01 to 0.4 ㎛ filter. The step may further be included, and microbial contamination can be removed through the filtration. The filter may preferably be a 0.1 to 0.3 ㎛ filter, and more preferably a 0.15 to 0.25 ㎛ filter.

또한, 상기 (b) 단계는 연속으로 2회 이상 수행될 수 있다. 구체적으로, 상기 (b) 단계에서 여과된 상등액을 다시 원심분리하여 잔해를 제거하고 회수하여 상등액을 여과할 수 있다.Additionally, step (b) may be performed two or more times in succession. Specifically, the supernatant filtered in step (b) may be centrifuged again to remove debris, recover the supernatant, and filter the supernatant.

상기 (c) 단계는 100 kDa 내지 1000 kDa의 필터를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 200 kDa 내지 800 kDa, 더 바람직하게는 300 kDa 내지 700 kDa, 더욱 바람직하게는 400 kDa 내지 600 kDa의 필터를 사용할 수 있지만, 본 발명의 범위가 반드시 여기에 한정되는 것은 아니다.In step (c), a filter of 100 kDa to 1000 kDa can be used, preferably a filter of 200 kDa to 800 kDa, more preferably 300 kDa to 700 kDa, and even more preferably a filter of 400 kDa to 600 kDa. However, the scope of the present invention is not necessarily limited thereto.

또한, 상기 (c) 단계 이후 상기 여과된 파쇄물을 0.01 내지 0.45 ㎛ 필터로 여과하는 단계를 더 포함할 수 있으며, 상기 여과를 통해 미생물 오염을 제거할 수 있다. 상기 필터는 바람직하게는 0.1 내지 0.3 ㎛ 필터일 수 있고, 더 바람직하게는 0.15 내지 0.25 ㎛ 필터일 수 있다.In addition, after step (c), the step of filtering the filtered shredded material through a 0.01 to 0.45 ㎛ filter may be further included, and microbial contamination can be removed through the filtration. The filter may preferably be a 0.1 to 0.3 ㎛ filter, and more preferably a 0.15 to 0.25 ㎛ filter.

일 실시예에서, 본 발명에 따라 수득된 상기 세포 외 소포체는 Phosphate-Buffered Saline (PBS)로 분산하여 0.22 내지 0.45 ㎛ 필터 후 사용할 수 있다.In one embodiment, the extracellular vesicles obtained according to the present invention can be dispersed in Phosphate-Buffered Saline (PBS) and used after filtering 0.22 to 0.45 ㎛.

본 발명에 따른 포포나무 유래 세포 외 소포체는 천연물로서 피부에 안전하고 독성이 없고 부작용을 최소화할 뿐만 아니라, 티로시나아제 활성을 억제함으로써 피부 내 멜라닌 형성을 저해하는 효과를 가져 피부 미백 용도 또는 피부 색소침착 질환에 사용할 수 있다.The pawpaw tree-derived extracellular vesicle according to the present invention is a natural product that is not only safe for the skin, non-toxic, and minimizes side effects, but also has the effect of inhibiting melanin formation in the skin by inhibiting tyrosinase activity, so it is used for skin whitening or skin pigmentation. It can be used for deposition diseases.

또한, 본 발명에 따른 포포나무 유래 세포 외 소포체는 염증성 사이토카인의 발현을 저해하는 효과를 가져 항염증 및 염증성 질환 치료 용도로 사용할 수 있다.In addition, the pawpaw-derived extracellular vesicles according to the present invention have the effect of inhibiting the expression of inflammatory cytokines and can be used for anti-inflammatory and inflammatory disease treatment purposes.

도 1은 본 발명의 포포나무(Asimina triloba) 잎으로부터 분리된 세포외 소포체의 크기를 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 포포나무(Asimina triloba) 잎으로부터 분리된 세포외 소포체의 B16F10 멜라닌 세포에 대한 독성 평가 결과를 나타낸 것이다.
도 3는 본 발명의 포포나무(Asimina triloba) 잎으로부터 분리된 세포외 소포체와 포포나무 잎 추출물 및 포포나무 과일 추출물의 B16F10 멜라닌 세포에 대한 독성을 비교 평가한 결과를 나타낸 것이다.
도 4은 본 발명의 포포나무(Asimina triloba) 잎으로부터 분리된 세포외 소포체의 16F10 멜라닌 세포의 멜라닌 합성 유도 조건하에 세포 독성 평가 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 포포나무(Asimina triloba) 잎으로부터 분리된 세포외 소포체의 16F10 멜라닌 세포의 멜라닌 합성 유도 조건하에 멜라닌 합성 저해성을 평가한 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 본 발명의 포포나무(Asimina triloba) 잎으로부터 분리된 세포외 소포체와 포포나무 잎 추출물의 16F10 멜라닌 세포의 멜라닌 합성 유도 조건하에 멜라닌 합성 저해성을 비교 평가한 결과를 나타낸 것이다.
도 7은 본 발명의 포포나무(Asimina triloba) 잎으로부터 분리된 세포외 소포체의 활성 수지상세포에 대한 항염증 효과를 평가한 결과를 나타낸 것이다.Figure 1 shows the results of analyzing the size of extracellular vesicles isolated from Asimina triloba leaves of the present invention.
Figure 2 shows the results of evaluating the toxicity of extracellular vesicles isolated from Asimina triloba leaves of the present invention to B16F10 melanocytes.
Figure 3 shows the results of comparative evaluation of the toxicity of extracellular vesicles isolated from Asimina triloba leaves of the present invention, Asimina triloba leaf extract, and Asimina triloba fruit extract to B16F10 melanocytes.
Figure 4 shows the results of cytotoxicity evaluation of extracellular vesicles isolated from Asimina triloba leaves of the present invention under melanin synthesis inducing conditions in 16F10 melanocytes.
Figure 5 shows the results of evaluating the inhibition of melanin synthesis of extracellular vesicles isolated from Asimina triloba leaves of the present invention under melanin synthesis inducing conditions in 16F10 melanocytes.
Figure 6 shows the results of comparative evaluation of the inhibition of melanin synthesis of extracellular vesicles isolated from Asimina triloba leaves of the present invention and Asimina triloba leaf extract under melanin synthesis inducing conditions in 16F10 melanocytes.
Figure 7 shows the results of evaluating the anti-inflammatory effect of extracellular vesicles isolated from Asimina triloba leaves of the present invention on activated dendritic cells.

이하, 실시예에 의해 상세히 설명한다.Hereinafter, it will be described in detail through examples.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.However, the following examples only illustrate the present invention, and the content of the present invention is not limited to the following examples.

<실시예 1> 포포나무 잎으로부터 세포 외 소포체 제조(ATL-EV)<Example 1> Preparation of extracellular vesicles from pawpaw leaves (ATL-EV)

포포나무 잎을 70% 에탄올 수용액으로 3회 세척한 후, 다시 멸균 증류수로 3회 세척하여 미생물 오염을 제거하였다. 세척된 포포나무 잎 200 g과 인산완충생리식염수 (Phosphate-Buffered Saline, PBS) 1 L를 조직 파쇄기에 넣고 3분 동안 잎을 파쇄하여 파쇄물을 제조하였다. 확보된 파쇄물이 혼합된 PBS는 4℃의 조건하에 1,800×g로 20 분간 2회 원심 분리하였다. 이 후 상층액을 분리 후 다시 4℃의 조건하에 12,000×g로 20 분간 2회 원심 분리를 진행하여 다시 상층액을 얻었다. 확보된 상층액은 0.22 ㎛ 필터를 통해 미생물 오염을 제거하였고, 필터가 완료된 상층액들은 tangential flow filtration (TFF)와 500 kDa 필터를 기반으로 1 L의 상층액을 30 mL까지 농축하였으며, 농축된 상층액을 300 mL의 PBS와 다시 혼합 후 30 mL까지 다시 농축하였다. 이러한 과정을 통해 세포외 소포체를 습득하였다. The pawpaw leaves were washed three times with a 70% ethanol aqueous solution and then washed again three times with sterilized distilled water to remove microbial contamination. 200 g of washed pawpaw leaves and 1 L of phosphate-buffered saline (PBS) were placed in a tissue crusher and the leaves were crushed for 3 minutes to prepare shredded material. The obtained PBS mixed with the lysate was centrifuged twice for 20 minutes at 1,800 × g under conditions of 4°C. Afterwards, the supernatant was separated and centrifuged twice at 12,000 × g for 20 minutes at 4°C to obtain the supernatant again. The secured supernatant was removed from microbial contamination through a 0.22 ㎛ filter, and the filtered supernatant was concentrated to 30 mL based on tangential flow filtration (TFF) and a 500 kDa filter. The solution was mixed again with 300 mL of PBS and concentrated again to 30 mL. Through this process, extracellular vesicles were acquired.

<실시예 2> 포포나무 잎 유래 세포외 소포체 농도 및 크기 분석 <Example 2> Analysis of concentration and size of extracellular vesicles derived from pawpaw leaves

실시예 1에 따라 수득된 포포나무 잎 유래 세포 외 소포체를 0.22 ㎛ 필터를 통해 미생물 오염을 제거한 후, BCA 단백질 정량을 통하여 농도를 측정하였으며, 세포외 소포체의 크기는 동적광학산란광도계(Dynamic Light Scattering)를 바탕으로 측정하였다. After removing microbial contamination from the extracellular vesicles derived from pawpaw leaves obtained according to Example 1 through a 0.22 ㎛ filter, the concentration was measured through BCA protein quantification, and the size of the extracellular vesicles was measured using a Dynamic Light Scattering Photometer. ) was measured based on.

구체적으로, 세포 외 소포체의 크기는 분산 내 나노 입자의 크기를 측정하는 비침투성 기법인 동적 광산란법(DLS)를 통하여 실시예 1에서 제조한 포포나무(Asimina triloba) 잎으로부터 분리된 세포외 소포체(ATL-EV)의 크기를 측정하였으며, 그 결과는 도 1과 같다.Specifically, the size of extracellular vesicles was measured using dynamic light scattering (DLS), a non-invasive technique for measuring the size of nanoparticles in the dispersion. Extracellular vesicles isolated from Asimina triloba leaves prepared in Example 1 were measured ( The size of ATL-EV) was measured, and the results are shown in Figure 1.

도 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, 포포나무 잎 유래 세포외 소포체는 대략 203±6 nm의 나노사이즈의 크기를 가지는 것으로 확인되었다.As can be seen in Figure 1, the extracellular vesicles derived from the leaves of Pawpaw tree were confirmed to have a nano-sized size of approximately 203 ± 6 nm.

<비교예 1> 포포나무 잎 추출물의 제조(ATL-leaf)<Comparative Example 1> Preparation of pawpaw leaf extract (ATL-leaf)

건조된 포포나무 잎 시료 800 g을 50% 프레타놀 20 L와 혼합한 후, 1 주일 동안 침지시킨 뒤 침지된 시료를 제거하여 추출액을 얻었다. 수득된 추출액을 최전증발 농축기를 통해 용매를 제거하였다. 용매를 제거한 추출물을 PBS로 희석하여 세포에 처리하여, 최종적으로 포포나무 잎 추출물을 제조하였다.800 g of dried pawpaw leaf sample was mixed with 20 L of 50% pretanol, soaked for 1 week, and then the soaked sample was removed to obtain an extract. The solvent was removed from the obtained extract through a final evaporation concentrator. The extract from which the solvent was removed was diluted with PBS and treated with cells to finally prepare a Paw tree leaf extract.

<비교예 2> 포포나무 열매 추출물의 제조(ATL-fruit)<Comparative Example 2> Preparation of pawpaw fruit extract (ATL-fruit)

동결건조된 포포나무 열매 시료 70 g을 50% 프레타놀 1L와 혼합한 후, 1 주일 동안 침지시킨 뒤 침지된 시료를 제거하여 추출액을 얻었다. 수득된 추출액을 최전증발 농축기를 통해 용매를 제거하였다. 용매를 제거한 추출물을 PBS로 희석하여 세포에 처리하여 최종적으로 포포나무 열매 추출물을 제조하였다.70 g of freeze-dried pawpaw fruit sample was mixed with 1L of 50% pretanol, soaked for 1 week, and then the soaked sample was removed to obtain an extract. The solvent was removed from the obtained extract through a final evaporation concentrator. The extract from which the solvent was removed was diluted with PBS and treated with cells to finally prepare a pawpaw fruit extract.

<실험예><Experimental example>

멜라닌 세포 배양Melanocyte culture

피부미백 효과를 확인하기 위한 실험을 위하여 사용한 멜라닌 생성 세포인 B16F10 세포는 우태아혈청(fetal bovine serum; FBS)이 10% 함유된 Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) 배지에서 배양하였다. 즉, 175 ㎠ 플라스틱 플라스크(SPL life science Co., Ltd. Korea)에 멜라닌 세포주를 10% FBS, 1% 항생제(antibiotic)/항진균제(antimycotics)가 함유된 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO₂의 조건 하에서 배양하였다. 2~3일마다 한 번씩 2차 배양하여 세포주를 유지하였다.B16F10 cells, melanin-producing cells used in an experiment to confirm the skin whitening effect, were cultured in Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) medium containing 10% fetal bovine serum (FBS). That is, the melanin cell line was cultured in a 175 ㎠ plastic flask (SPL life science Co., Ltd. Korea) in DMEM medium containing 10% FBS and 1% antibiotic/antimycotics at 37°C and 5% CO₂. It was cultured under Cell lines were maintained by secondary culture once every 2 to 3 days.

세포 정량cell quantification

본 발명에서 사용한 멜라닌 세포가 자란 175 ㎠ 플라스틱 플라스크에서 배지액을 제거하고, CMF-PBS (calcium magnesium free-phosphate buffered saline, pH 7.2)로 세척한 후, 0.25% 트립신/EDTA를 처리하여 세포를 플라스크 바닥으로부터 떼어내고 세포 배양액으로 중화시킨 후 원심분리(1000 rpm, 3 min) 하였다. 남은 세포의 펠렛(pellet)에 배양액을 가한 다음, 멸균 피펫으로 반복 흡입하여 단일 세포 부유액을 제조하였다. 제조한 세포 부유액과 트립판 블루(trypan blue)를 1:1의 비율로 혼합하여 광학 현미경상에서 혈구계산판(hemocytometer)을 이용하여 세포 정량에 사용하였다.The medium was removed from the 175 cm2 plastic flask in which the melanocytes used in the present invention were grown, washed with CMF-PBS (calcium magnesium free-phosphate buffered saline, pH 7.2), and then treated with 0.25% trypsin/EDTA and the cells were transferred to the flask. It was removed from the bottom, neutralized with cell culture medium, and then centrifuged (1000 rpm, 3 min). Culture medium was added to the pellet of remaining cells, and then suction was repeated with a sterile pipette to prepare a single cell suspension. The prepared cell suspension and trypan blue were mixed at a ratio of 1:1 and used for cell quantification using a hemocytometer under an optical microscope.

수지상 세포 배양Dendritic cell culture

C57BL/6마우스로부터 골수 채취용 주사를 이용해 대퇴부 골수를 채취하였다. 채취한 골수를 세척한 후 적혈구를 염화암모늄을 이용하여 제거하였다. 분리한 세포를 6-웰 플레이트에서 RPMI 1640 (10% FBS(Fetal bovine serum, 송아지 혈청), 2 mM L-글루타민, 100 U/ml 페니실린/스트렙토마이신, 50 μM 머캅토에탄올, 0.1 mM 비필수 아미노산, 1 mM 피루브산 나트륨, 20 ng/ml GM-CSF, 0.5 ng/ml IL-4)을 첨가하여 8 일 동안 배양하였다. GM-CSF 및 IL-4은 수지상 세포로의 분화를 유도하기 위하여 사용하였다.Femoral bone marrow was collected from C57BL/6 mice using a bone marrow collection injection. After the collected bone marrow was washed, red blood cells were removed using ammonium chloride. The separated cells were cultured in RPMI 1640 (10% FBS (Fetal bovine serum), 2 mM L-glutamine, 100 U/ml penicillin/streptomycin, 50 μM mercaptoethanol, 0.1 mM non-essential amino acids) in a 6-well plate. , 1 mM sodium pyruvate, 20 ng/ml GM-CSF, and 0.5 ng/ml IL-4) were added and cultured for 8 days. GM-CSF and IL-4 were used to induce differentiation into dendritic cells.

<실험예 1> 멜라닌 세포에서의 세포 독성 평가 <Experimental Example 1> Evaluation of cytotoxicity in melanocytes

실험예 1-1. 실시예 1의 포포나무 잎으로부터 분리된 세포 외 소포체 처리에 따른 세포 독성 평가Experimental Example 1-1. Evaluation of cytotoxicity following treatment of extracellular vesicles isolated from pawpaw leaves of Example 1

실시예 1에서 제조한 포포나무 잎으로부터 분리된 세포 외 소포체(ATL-EV)의 멜라닌 세포에 대한 세포 독성을 확인하기 위하여 B16F10 세포를 이용하여 세포 독성을 평가하였다. In order to confirm the cytotoxicity of extracellular vesicles (ATL-EV) isolated from pawpaw leaves prepared in Example 1 to melanocytes, the cytotoxicity was evaluated using B16F10 cells.

구체적으로 멜라닌(melanin) 생성 세포인 B16F10을 5% FBS, 1% 항생물질(antibiotics)을 첨가한 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다. 다음으로 포포나무 잎으로부터 분리된 세포외 소포체에 의한 멜라닌 세포 독성 변화를 확인하기 위해 B16F10 cell을 1X10⁴ cells/well의 농도로 5% FBS을 포함하는 DMEM 배지에 현탁시켜 48 well cell culture plate에 넣은 후 4시간 동안 부착시켰다. 부착된 세포에 포포나무 잎으로부터 분리된 세포외 소포체를 1, 5, 10, 15 ug/mL 농도로 각각 첨가하고 3일간 배양하였다. 배양 후 포포나무 잎 유래 세포외 소포체의 세포 독성 유도에 대한 유무를 판단하기 위하여 EZ-Cytox solution을 배지의 1/10 첨가 후 1시간 동안 배양하였다. 1시간 뒤 마이크로플레이트 리더(microplate reader)로 450 nm에서 흡광도를 측정하여 세포의 생존율을 확인하였으며, 그 결과를 도 2에 나타내었다.Specifically, B16F10, a melanin-producing cell, was cultured in DMEM medium supplemented with 5% FBS and 1% antibiotics at 37°C and 5% CO ₂ conditions. Next, to confirm changes in melanin cytotoxicity caused by extracellular vesicles isolated from the leaves of the pawpaw tree, B16F10 cells were suspended in DMEM medium containing 5% FBS at a concentration of ^1X10 cells/well and placed in a 48 well cell culture plate. Afterwards, it was attached for 4 hours. Extracellular vesicles isolated from pawpaw leaves were added to the attached cells at concentrations of 1, 5, 10, and 15 ug/mL and cultured for 3 days. To determine the presence or absence of cytotoxicity induced by extracellular vesicles derived from pawpaw leaves after culturing, EZ-Cytox solution was added at 1/10 of the medium and cultured for 1 hour. After 1 hour, the absorbance was measured at 450 nm using a microplate reader to confirm the viability of the cells, and the results are shown in Figure 2.

도 2에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 포포나무 잎 유래 세포 외 소포체는 1, 5, 10, 15 ug/mL의 농도에서 세포 독성이 없는 것으로 나타났다.As can be seen in Figure 2, the extracellular vesicles derived from the leaves of Pawpaw tree according to the present invention showed no cytotoxicity at concentrations of 1, 5, 10, and 15 ug/mL.

실험예 1-2. 본 발명의 포포나무 잎으로부터 분리된 세포 외 소포체, 포포나무 잎 추출물 및 포포나무 열매 추출물 처리에 따른 세포 독성 평가 비교Experimental Example 1-2. Comparison of cytotoxicity evaluations according to the treatment of extracellular vesicles isolated from the pawpaw leaves of the present invention, the leaf extract of the pawpaw tree, and the fruit extract of the pawpaw tree.

실시예 1의 포포나무 잎으로부터 분리된 세포 외 소포체(ATL-EV), 비교예 1의 포포나무 잎 추출물(ATL-leaf), 비교예 2의 포포나무 열매 추출물(ATL-fruit)이 멜라닌 세포에 대한 세포 생존력에 미치는 영향을 확인하기 위하여 각각을 B16F10 세포에 처리하였다. Extracellular vesicles (ATL-EV) isolated from the pawpaw leaves of Example 1, the pawpaw leaf extract (ATL-leaf) of Comparative Example 1, and the pawpaw fruit extract (ATL-fruit) of Comparative Example 2 were applied to melanocytes. To confirm the effect on cell viability, each was treated with B16F10 cells.

구체적으로 멜라닌(melanin) 생성 세포인 B16F10을 5% FBS, 1% 항생물질(antibiotics)를 첨가한 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다. 이 후 포포나무 잎으로부터 분리된 세포외 소포체에 의한 멜라닌 세포 독성 변화를 확인하기 위해 B16F10 cell을 1X10⁴ cells/well의 농도로 5% FBS을 포함하는 DMEM 배지에 현탁시켜 48 well cell culture plate에 넣은 후 4시간 동안 부착시켰다. 부착된 세포에 포포나무 잎으로부터 분리된 세포외 소포체를 1, 5, 10 ug/mL 농도로 각각 첨가하고 3일간 배양하였다. 배양 후 실시예 1의 포포나무 잎 유래 세포외 소포체(ATL-EV), 비교예 1의 포포나무 잎 추출물(ATL-leaf), 비교예 2의 포포나무 열매 추출물(ATL-fruit)의 세포 생존력에 미치는 영향을 탐색하기 위하여 EZ-Cytox solution을 배지의 1/10 첨가 후 1 시간 동안 배양하였다. 1시간 뒤 microplate reader 로 450 nm에서 흡광도를 측정하여 세포의 생존율을 확인하였으며, 그 결과를 도 3에 나타내었다.Specifically, B16F10, a melanin-producing cell, was cultured in DMEM medium supplemented with 5% FBS and 1% antibiotics at 37°C and 5% CO ₂ conditions. Afterwards, to confirm changes in melanin cytotoxicity caused by extracellular vesicles isolated from pawpaw leaves, B16F10 cells were suspended in DMEM medium containing 5% FBS at a concentration of ^1X10 cells/well and placed in a 48 well cell culture plate. Afterwards, it was attached for 4 hours. Extracellular vesicles isolated from pawpaw leaves were added to the attached cells at concentrations of 1, 5, and 10 ug/mL, respectively, and cultured for 3 days. After culturing, the cell viability of pawpaw leaf-derived extracellular vesicles (ATL-EV) of Example 1, pawpaw leaf extract (ATL-leaf) of Comparative Example 1, and pawpaw fruit extract (ATL-fruit) of Comparative Example 2 were evaluated. To explore the effect, EZ-Cytox solution was added at 1/10 of the medium and incubated for 1 hour. After 1 hour, the absorbance was measured at 450 nm using a microplate reader to check the viability of the cells, and the results are shown in Figure 3.

도 3에서 확인할 수 있는 바와 같이, 실시예 1의 포포나무 잎 유래 세포외 소포체(ATL-EV)는 1, 5, 10 ug/mL의 농도에서 세포 생존율에 큰 차이를 보이지 않았으며 세포 독성을 나타내지 않았다. 그러나, 비교예 1의 포포나무 잎 추출물(ATL-leaf)은 10 ug/mL의 농도에서 세포 생존율을 감소시켰으며, 비교예 2의 포포나무 열매 추출물(ATL-fruit)은 1, 5, 10 ug/mL의 농도에서 모두 세포 생존율을 감소시켜 세포독성이 나타났다. 이에, 실시예 1의 포포나무 잎으로부터 분리된 세포 외 소포체는 비교예 1 및 2의 추출물보다 월등한 세포생존 효과가 있었다.As can be seen in Figure 3, the extracellular vesicles (ATL-EV) derived from pawpaw leaves of Example 1 showed no significant difference in cell viability and did not exhibit cytotoxicity at concentrations of 1, 5, and 10 ug/mL. didn't However, the pawpaw leaf extract (ATL-leaf) of Comparative Example 1 decreased cell viability at a concentration of 10 ug/mL, and the pawpaw fruit extract (ATL-fruit) of Comparative Example 2 decreased cell viability at a concentration of 1, 5, and 10 ug. At all concentrations of /mL, cell viability was reduced and cytotoxicity was observed. Accordingly, the extracellular vesicles isolated from the pawpaw leaves of Example 1 had a superior cell survival effect than the extracts of Comparative Examples 1 and 2.

<실험예 2> 멜라닌 합성과정의 멜라닌 세포에서의 세포 독성 평가<Experimental Example 2> Evaluation of cytotoxicity in melanocytes during the melanin synthesis process

멜라닌 합성과정의 멜라닌 세포에서의 세포 독성을 확인하기 위하여, 멜라닌 합성과정이 진행되는 동안 B16F10 세포에서 실시예 1에 따른 포포나무 잎으로부터 분리된 세포외 소포체(ATL-EV)의 세포독성을 평가하였다. In order to confirm the cytotoxicity in melanocytes during the melanin synthesis process, the cytotoxicity of extracellular vesicles (ATL-EV) isolated from Pawpaw leaves according to Example 1 was evaluated in B16F10 cells during the melanin synthesis process. .

구체적으로, B16F10 세포를 5% FBS, 1% 항생물질(antibiotics)을 첨가한 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다. 배양된 세포를 1X10⁴ cells/well의 농도로 5% FBS을 포함하는 DMEM 배지에 현탁시켜 48 well cell culture plate에 넣은 후 4시간 동안 부착시킨다. 부착된 세포에 200 μM 농도의 α-MSH(melanin stimulating hormone)를 처리하여 멜라닌 합성을 유도하였다. 6 시간 후 1, 5, 10, 15 ug/mL 농도로 세포외 소포체를 각각 첨가하고 3일간 배양하였다. 배양 후 실시예 1의 포포나무 잎 유래 세포외 소포체의 세포 독성 유도에 대한 유무를 판단하기 위하여 EZ-Cytox solution을 배지의 1/10 첨가 후 1 시간 동안 배양하였다. 1시간 뒤 마이크로플레이트 리더(microplate reader)로 450 nm에서 흡광도를 측정하여 세포의 생존율을 확인하였으며, 그 결과는 도 4에 나타내었다.Specifically, B16F10 cells were cultured in DMEM medium supplemented with 5% FBS and 1% antibiotics at 37°C and 5% CO ₂ conditions. Cultured cells are suspended in DMEM medium containing 5% FBS at a concentration of 1X10 ⁴ cells/well, placed in a 48 well cell culture plate, and allowed to attach for 4 hours. The attached cells were treated with α-MSH (melanin stimulating hormone) at a concentration of 200 μM to induce melanin synthesis. After 6 hours, extracellular vesicles were added at concentrations of 1, 5, 10, and 15 ug/mL, respectively, and cultured for 3 days. After culturing, in order to determine whether the extracellular vesicles derived from the pawpaw leaves of Example 1 induced cytotoxicity, EZ-Cytox solution was added at 1/10 of the medium and cultured for 1 hour. After 1 hour, the absorbance was measured at 450 nm using a microplate reader to confirm the viability of the cells, and the results are shown in Figure 4.

도 4에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 포포나무 잎 유래 세포외 소포체(ATL-EV)는 10 ug/mL 이하의 농도에서 멜라닌 합성이 진행되는 멜라닌 세포에 세포 독성이 없음을 확인하였다.As can be seen in Figure 4, it was confirmed that the extracellular vesicles (ATL-EV) derived from pawpaw leaves according to the present invention are not cytotoxic to melanocytes undergoing melanin synthesis at a concentration of 10 ug/mL or less.

<실험예 3> 멜라닌 생성 억제 효과 확인<Experimental Example 3> Confirmation of melanin production inhibition effect

실시예 3-1. 본 발명에 따른 포포나무 잎으로부터 분리된 세포 외 소포체의 멜라닌 합성 억제 효과 비교Example 3-1. Comparison of melanin synthesis inhibition effects of extracellular vesicles isolated from pawpaw leaves according to the present invention

실시예 1의 포포나무 잎으로부터 분리된 세포 외 소포체의 처리에 따른 B16F10 멜라닌 세포에서의 멜라닌 합성 저해 효과를 평가하였다. The effect of inhibiting melanin synthesis in B16F10 melanocytes according to treatment of extracellular vesicles isolated from the leaves of the pawpaw tree in Example 1 was evaluated.

구체적으로, B16F10 세포를 5% FBS, 1% 항생물질(antibiotics)을 첨가한 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다. 배양된 세포를 3X10⁴ cells/well의 농도로 5% FBS을 포함하는 DMEM 배지에 현탁시켜 6 well cell culture plate에 넣은 후 4시간 동안 부착시켰다. 부착된 세포에 200 μM 농도의α-MSH(melanin stimulating hormone)를 처리하여 멜라닌 합성을 유도하였다. 6 시간 후 0.5, 1, 5, 10 ug/mL 농도로 포포나무 잎으로부터 분리된 세포외 소포체를 각각 첨가하고 3일간 배양하였다. 배양 후 B16F10 세포를 phosphate buffered saline (PBS)로 씻고 1N NaOH 용액을 넣어 세포를 녹인 다음, 마이크로플레이트 리더(microplate reader)로 490 nm에서 흡광도를 바탕으로 멜라닌(melanin) 함량을 측정하였으며, 그 결과를 도 5에 나타내었다.Specifically, B16F10 cells were cultured in DMEM medium supplemented with 5% FBS and 1% antibiotics at 37°C and 5% CO ₂ conditions. The cultured cells were suspended in DMEM medium containing 5% FBS at a concentration of ^3X10 cells/well, placed in a 6 well cell culture plate, and allowed to attach for 4 hours. The attached cells were treated with α-MSH (melanin stimulating hormone) at a concentration of 200 μM to induce melanin synthesis. After 6 hours, extracellular vesicles isolated from pawpaw leaves were added at concentrations of 0.5, 1, 5, and 10 ug/mL and cultured for 3 days. After culturing, B16F10 cells were washed with phosphate buffered saline (PBS), 1N NaOH solution was added to dissolve the cells, and melanin content was measured based on absorbance at 490 nm using a microplate reader. It is shown in Figure 5.

도 5에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 포포나무 잎 유래 나노 소포체는 농도 의존적(1, 5, 10 ug/mL)으로 멜라닌의 함량이 낮아졌으며, 색이 희미해지는 미백 효과를 육안으로도 확인할 수 있었다. 이에, 실시예 1의 포포나무 잎 유래 나노 소포체(ATL-EV)는 멜라닌의 합성을 저해하여 우수한 미백 효과가 있는 것으로 나타났다.As can be seen in Figure 5, the nano-vesicles derived from the pawpaw leaves of the present invention have a lower melanin content in a concentration-dependent manner (1, 5, 10 ug/mL), and the whitening effect of fading color can be confirmed with the naked eye. I was able to. Accordingly, the nano-vesicles derived from pawpaw leaves (ATL-EV) of Example 1 were shown to have an excellent whitening effect by inhibiting the synthesis of melanin.

실시예 3-2. 본 발명의 포포나무 잎으로부터 분리된 세포 외 소포체, 포포나무 잎 추출물의 멜라닌 합성 억제 효과 확인Example 3-2. Confirmation of the melanin synthesis inhibition effect of the extracellular vesicles isolated from the pawpaw leaves of the present invention and the pawpaw leaf extract

실시예 1의 포포나무 잎으로부터 분리된 세포외 소포체(ATL-EV) 및 포포나무 잎 추출물(ATL-leaf)을 B16F10 멜라닌 세포에 처리함에 따른 멜라닌 생성 억제 효과를 평가하였다. The effect of inhibiting melanin production by treating B16F10 melanocytes with extracellular vesicles (ATL-EV) and ATL-leaf extract isolated from pawpaw leaves of Example 1 was evaluated.

구체적으로 B16F10 세포를 5% FBS, 1% 항생물질(antibiotics)를 첨가한 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다. 배양된 세포를 3X10⁴ cells/well의 농도로 5% FBS을 포함하는 DMEM 배지에 현탁시켜 6 well cell culture plate에 넣은 후 4시간 동안 부착시켰다. 부착된 세포에 200 μM 농도의α-MSH(melanin stimulating hormone)를 처리하여 멜라닌 합성을 유도하였다. 6 시간 후 실시예 1의 포포나무 잎으로부터 분리된 세포외 소포체를 농도별(0.5, 1, 5, 10 ug/mL 농도)로 각각 첨가하고 3일간 배양하였다. 배양 후 B16F10 세포를 phosphate buffered saline (PBS)로 씻고 1N NaOH 용액을 넣어 세포를 녹인 다음, 마이크로플레이트 리더(microplate reader)로 490 nm에서 흡광도를 바탕으로 melanin 함량을 측정하였으며, 그 결과를 도 6에 나타내었다.Specifically, B16F10 cells were cultured in DMEM medium supplemented with 5% FBS and 1% antibiotics at 37°C and 5% CO ₂ conditions. The cultured cells were suspended in DMEM medium containing 5% FBS at a concentration of ^3X10 cells/well, placed in a 6 well cell culture plate, and allowed to attach for 4 hours. The attached cells were treated with α-MSH (melanin stimulating hormone) at a concentration of 200 μM to induce melanin synthesis. After 6 hours, the extracellular vesicles isolated from the pawpaw leaves of Example 1 were added at different concentrations (0.5, 1, 5, and 10 ug/mL) and cultured for 3 days. After culturing, B16F10 cells were washed with phosphate buffered saline (PBS), 1N NaOH solution was added to dissolve the cells, and melanin content was measured based on absorbance at 490 nm using a microplate reader. The results are shown in Figure 6. indicated.

도 6에서 확인할 수 있는 바와 같이, 실시예 1의 포포나무 잎 유래 세포 외 소포체(ATL-EV)는 멜라닌 합성 억제하는 효과가 우수한 것으로 나타났으나, 비교예 1의 잎 추출물(ATL-leaf)은 멜라닌 합성을 증가시키는 현상이 나타났다.As can be seen in Figure 6, the extracellular vesicles (ATL-EV) derived from pawpaw leaves of Example 1 were found to be excellent in the effect of inhibiting melanin synthesis, but the leaf extract (ATL-leaf) of Comparative Example 1 was A phenomenon that increased melanin synthesis was observed.

따라서, 본 발명에 따른 포포나무 잎 유래 세포 외 소포체는 멜라닌 합성을 억제함으로써 미백 효과를 갖는 것이 확인되었다.Therefore, it was confirmed that the extracellular vesicles derived from pawpaw leaves according to the present invention have a whitening effect by inhibiting melanin synthesis.

<실험예 4> 활성 수지상세포에 대한 항염증 효과 확인<Experimental Example 4> Confirmation of anti-inflammatory effect on activated dendritic cells

실시예 1의 포포나무 잎으로부터 분리된 세포 외 소포체의 처리에 따른 활성 수지상세포에서의 염증성 사이토카인 저해 효과를 평가하였다. The effect of inhibiting inflammatory cytokines on activated dendritic cells according to treatment of extracellular vesicles isolated from the leaves of the pawpaw tree in Example 1 was evaluated.

구체적으로, 본 발명의 포포나무 잎 유래 세포 외 소포체의 항염증 효과를 측정하기 위하여, 8일 동안 배양된 수지상세포를 LPS (lipopolysaccharide)로 2시간 자극 후 10, 200, 500 ug/mL 농도의 실시예 1에 따라 제조된 포포나무 잎으로부터 분리된 세포외 소포체(ATL-EV)를 각각 첨가하고 1일간 배양하였다. LPS는 수지상세포의 활성제로 사용하였다. 1일 후 상층액을 TNF-α, IL-6, 및 IL-12p70에 대한 ELISA 키트에 적용하여 마이크로플레이트 리더(microplate reader)로 450 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 그 결과를 도 7에 나타내었다.Specifically, in order to measure the anti-inflammatory effect of the extracellular vesicles derived from poplar tree leaves of the present invention, dendritic cells cultured for 8 days were stimulated with LPS (lipopolysaccharide) for 2 hours and then administered at concentrations of 10, 200, and 500 ug/mL. Extracellular vesicles (ATL-EV) isolated from pawpaw leaves prepared according to Example 1 were added and cultured for 1 day. LPS was used as an activator of dendritic cells. One day later, the supernatant was applied to an ELISA kit for TNF-α, IL-6, and IL-12p70, and the absorbance was measured at 450 nm with a microplate reader. The results are shown in Figure 7.

도 7에서 확인할 수 있는 바와 같이 실시예 1의 포포나무 잎 유래 세포 외 소포체(ATL-EV)는 농도 의존적으로 LPS에 의해 유도되는 염증성 사이토카인들을 억제하는 효과를 나타내었다. 이에, 본 발명의 포포나무 잎으로부터 분리된 세포 외 소포체는 우수한 항염증 효과를 갖는 것으로 나타났다.As can be seen in Figure 7, the extracellular vesicles (ATL-EV) derived from pawpaw leaves of Example 1 showed an effect of suppressing inflammatory cytokines induced by LPS in a concentration-dependent manner. Accordingly, the extracellular vesicles isolated from the pawpaw leaves of the present invention were shown to have excellent anti-inflammatory effects.

이상, 본 발명을 예시적으로 설명하였으며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가지는 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 다양한 변형이 가능할 것이다. 따라서, 본 명세서에 개시된 실시예들은 본 발명을 한정하기 위한 것이 아니라 설명하기 위한 것이고, 이러한 실시예에 의하여 본 발명의 사상과 범위가 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 보호범위는 아래의 청구범위에 의해서 해석되어야 하며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 기술은 본 발명의 권리범위에 포함하는 것으로 해석되어야 할 것이다.Above, the present invention has been described by way of example, and those skilled in the art will be able to make various modifications without departing from the essential characteristics of the present invention. Accordingly, the embodiments disclosed in this specification are for illustrative purposes rather than limiting the present invention, and the spirit and scope of the present invention are not limited by these embodiments. The scope of protection of the present invention should be interpreted in accordance with the claims below, and all technologies within the equivalent scope should be interpreted as being included in the scope of rights of the present invention.

Claims

A cosmetic composition for improving skin condition containing extracellular vesicles (EV) derived from Asimina triloba .

The cosmetic composition of claim 1, wherein the extracellular vesicles have a diameter of 50 to 500 nm.

The cosmetic composition of claim 1, wherein the extracellular vesicles have a diameter of 150 to 250 nm.

The cosmetic composition of claim 1, wherein the skin condition improvement is one or more selected from the group consisting of anti-inflammatory, skin whitening, skin moisturizing, anti-aging, skin regeneration, wound improvement, and acne improvement.

According to paragraph 1,
The cosmetic composition includes mist, serum, nourishing lotion, softening lotion, softening water, emulsion, skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisture lotion, nourishing lotion, massage cream, nourishing cream, moisture cream, and hand. Cream, foundation, powder, makeup base, essence, nutritional essence, pack, soap, cleansing foam, cleansing lotion, cleansing cream, body lotion, body cleanser, face wash, treatment, serum, beauty pack, ointment, gel, liniment, A cosmetic composition having a formulation selected from the group consisting of liquid, patch, spray, bath agent, sunscreen, sun oil, and hair product.

The cosmetic composition according to claim 1, wherein the extracellular vesicles derived from the pawpaw tree are isolated from the pawpaw tree extract.

The cosmetic composition of claim 1, wherein the pawpaw tree includes leaves, stems or sap of the pawpaw tree.

The cosmetic composition of claim 1, wherein the cosmetic composition contains the pawpaw-derived extracellular vesicles at a concentration of 10 ⁵ to 10 ¹⁰ per unit volume of 1 mL.

The cosmetic composition of claim 1, wherein the extracellular vesicles inhibit melanin production.

The cosmetic composition of claim 1, wherein the extracellular vesicles inhibit tyrosinase activity.

A skin external composition for improving skin condition containing extracellular vesicles (EV) derived from Asimina triloba .

The composition for topical skin application according to claim 11, wherein the skin condition improvement is one or more selected from the group consisting of anti-inflammatory, skin whitening, skin moisturizing, anti-aging, skin regeneration, wound improvement, and acne improvement.

A pharmaceutical composition for preventing or treating skin pigmentation disease, comprising extracellular vesicles (EV) derived from Asimina triloba .

The pharmaceutical composition according to claim 13, wherein the skin pigmentation disease is selected from the group consisting of melasma, freckles, lentigo, nevus, drug-induced pigmentation, post-inflammatory pigmentation, and pigmentation occurring in dermatitis.

A pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory diseases containing extracellular vesicles (EV) derived from Asimina triloba .

The pharmaceutical composition according to claim 15, wherein the inflammatory disease is an inflammatory skin disease.

The method of claim 16, wherein the inflammatory skin diseases include atopic dermatitis, acne, psoriasis, contact dermatitis, eczematous dermatitis, actinic dermatitis, seborrheic dermatitis, dermatitis herpetiformis, lichen planus, lichen sclerosus, noderma gangrenosum, pemphigus, and vulgaris. A pharmaceutical composition selected from the group consisting of epidermolysis bullosa, allergy, and hypersensitivity.