KR20190075968A

KR20190075968A - 심혈관-관련 질환의 치료를 위한 아펠린의 신규 peg화 리포솜 제제

Info

Publication number: KR20190075968A
Application number: KR1020197014198A
Authority: KR
Inventors: 자야쿠마르 라자다스
Original assignee: 어바이브, 인크.
Priority date: 2016-10-19
Filing date: 2017-10-19
Publication date: 2019-07-01
Also published as: JP2022164821A; WO2018075822A1; EP3528820A1; US20200054556A1; IL266034B; EP3528820A4; EP3528820B1; IL266034B2; CA3040517A1; US11400049B2; CN121081388A; AU2023251404A1; IL266034A; EP3528820C0; JP7200100B2; CN110072531A; AU2017345493A1; JP2019532087A

Abstract

본 개시내용은 일반적으로 심혈관-관련 질환의 치료를 위한 아펠린의 PEG화 리포솜 제제를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
[대표도]
도 1a, 1b

Description

심혈관-관련 질환의 치료를 위한 아펠린의 신규 PEG화 리포솜 제제

[우선권 주장]

본 출원은 2016년 10월 19일자 U.S. 가출원 62/410,160호 및 2017년 2월 28일자 U.S. 가출원 62/464,594호를 우선권 주장하며, 그 전체 내용이 본원에 참조로 포함된다.

[분야]

본 개시내용은 아펠린(apelin)의 조성물, 예를 들면 아펠린의 PEG화 리포솜 제제, 그리고 심혈관-관련 질환 및 장애의 치료 방법을 제공한다.

아펠린은 체액 항상성, 혈압, 심장 발생 및 기능, 그리고 다-혈관 리모델링을 포함한 다양한 생물학적 기능을 조절하는 G-단백질-커플링된 APJ 수용체의 내인성 리간드이다. 아펠린 펩티드의 치료적 사용은 생체 내에서의 생체활성 펩티드의 빠른 대사에 기인하는 그의 상당히 짧은 혈장 반감기에 의해 제한되어 왔다.

이에 따라, 향상된 안정성 및 치료 효능을 가지는 아펠린 제제에 대한 필요성이 남아 있다.

[발명의 개요]

일부 측면에서, 본원에서 제공되는 것은 소정량의 적어도 1종의 폴록사머, 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (DSPC), 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (DPPC) 및 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함하는 리포좀 내에 적어도 부분적으로 캡슐화되어 있는 유효량의 치료제를 포함하는 조성물이다.

일부 측면에서, 본원에서 제공되는 것은 심혈관-관련 질환의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 심혈관-관련 질환을 치료 또는 예방하는 방법이며, 상기 방법은 본 개시내용의 실시양태에 따른 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함한다.

일부 측면에서, 본원에서 제공되는 것은 DSPC 및 DPPC를 에탄올에 용해시키고, 용해물이 제1 조성물을 형성할 때까지 초음파처리하는 것; PEG 및 폴록사머를 메탄올에 용해시키고, 용해물이 제2 조성물을 형성할 때까지 초음파처리하는 것; 제1 조성물 및 제2 조성물로부터 지질 필름을 형성시키는 것; 및 치료제를 지질 필름과 혼합하여 리포좀을 형성시키는 것을 포함하는, 본 개시내용의 실시양태에 따른 조성물의 제조 방법이다.

일부 측면에서, 본원에서 제공되는 것은 본 개시내용의 실시양태에 따른 조성물, 및 심혈관-관련 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 위한 지침을 포함하는 키트이다.

일부 실시양태에서, 치료제는 아펠린 펩티드이다.

일부 실시양태에서, 적어도 1종의 폴록사머는 폴록사머 124, 폴록사머 181, 폴록사머 184, 폴록사머 188, 폴록사머 331 및 폴록사머 407, 또는 이들의 임의의 조합이다.

일부 실시양태에서, PEG는 약 200 내지 약 20000 달톤의 평균 분자량을 가지며 (PEG 200 내지 PEG 20000), 예를 들면 PEG 8000이다.

일부 실시양태에서, 아펠린 펩티드는 약 15 중량% 내지 약 60 중량%를 구성한다. 일부 실시양태에서, 폴록사머는 약 1 중량% 내지 약 20 중량%를 구성한다. 일부 실시양태에서, DSPC는 약 5 중량% 내지 약 30 중량%를 구성한다. 일부 실시양태에서, DPPC는 약 5 중량% 내지 약 30 중량%를 구성한다. 일부 실시양태에서, PEG는 약 10 중량% 내지 약 20 중량%를 구성한다.

일부 실시양태에서, 조성물은 추가로 콜레스테롤을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 콜레스테롤은 약 1 중량% 내지 약 10 중량%를 구성한다.

일부 실시양태에서, 조성물은 추가로 제약상 허용되는 부형제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 추가로 적어도 1종의 추가적인 치료제, 예를 들면 안지오텐신-전환 효소 (ACE) 억제제, 릴랙신, 나트륨이뇨 펩티드, 그렐린 또는 다른 생체활성 펩티드를 포함한다.

일부 실시양태에서, 조성물은 약 25 중량%의 아펠린 펩티드, 약 17 중량%의 폴록사머 188, 약 25 중량%의 DSPC, 약 25 중량%의 DPPC 및 약 8 중량%의 PEG 8000을 포함한다. 다른 실시양태에서, 조성물은 약 45 중량%의 아펠린 펩티드, 약 15 중량%의 폴록사머 188, 약 10 중량%의 DSPC, 약 10 중량%의 DPPC, 약 15 중량%의 PEG 8000 및 약 5 중량%의 콜레스테롤을 포함한다.

일부 실시양태에서, 심혈관-관련 질환은 폐고혈압, 심부전, 심근경색, 당뇨병성 신장병증, 만성 신장 질환, 급성 신장 질환, 발기 기능장애, 당뇨병 또는 대사-관련 장애이다.

일부 실시양태에서, 조성물은 정맥내로, 피하로, 경구로, 또는 흡입을 통하여 투여된다.

일부 실시양태에서, 리포좀은 동결건조된다.

하기 도면을 참조하여, 본 개시내용의 많은 측면들이 더 잘 이해될 수 있다.
도 1a 및 1b는 모의 (PBS), 대조 (아펠린 없음), 제제 B (아펠린 단독) 또는 제제 C (아펠린 리포좀)의 매주 투여 (2주; 1일차 및 7일차)를 사용한 수술 전, 그리고 수술 1일-, 7일- 및 14일- 후의 박출률 (EF)의 변화를 나타낸다.
도 2a 및 2b는 모의 (PBS), 대조 (아펠린 없음), 제제 B (아펠린 단독) 또는 제제 C (아펠린 리포좀)의 매주 투여 (2주; 1일차 및 7일차)를 사용한 수술 전, 그리고 수술 1일-, 7일- 및 14일- 후의 좌심실 구획단축률 (FS)의 변화를 나타낸다.
도 3a 및 3b는 모의 (PBS), 대조 (아펠린 없음), 제제 B (아펠린 단독) 또는 제제 C (아펠린 리포좀)의 매주 투여 (2주; 1일차 및 7일차)를 사용한 수술 전, 그리고 수술 1일-, 7일- 및 14일- 후의 좌심실 수축기 직경 (LVIDs)의 변화를 나타낸다.
도 4a 및 4b는 모의 (PBS), 대조 (아펠린 없음), 제제 B (아펠린 단독) 또는 제제 C (아펠린 리포좀)의 매주 투여 (2주; 1일차 및 7일차)를 사용한 수술 전, 그리고 수술 1일-, 7일- 및 14일- 후의 좌심실 확장기 직경 (LVIDd)의 변화를 나타낸다.
도 5a 및 5b는 모의 (PBS), 대조 (아펠린 없음), 제제 B (아펠린 단독) 또는 제제 C (아펠린 리포좀)의 매주 투여 (2주; 1일차 및 7일차)를 사용한 수술 전, 그리고 수술 1일-, 7일- 및 14일- 후의 확장기 좌심실 후방 벽 두께 (LVPWd)의 변화를 나타낸다.
도 6a는 심장 초음파촬영법의 1일차 변화를 나타낸다 (1일차/기준선 (%)).
도 6b는 심장 초음파촬영법의 7일차 변화를 나타낸다 (7일차/기준선 (%)).
도 6c는 심장 초음파촬영법의 14일차 변화를 나타낸다 (14일차/기준선 (%)).
도 7a-7d는 심장 구조 완전성을 보여주는 대표적인 H&E 염색 이미지를 나타낸다.
도 8a-8d는 심장 구조 완전성을 보여주는 대표적인 매슨 염색 이미지를 나타낸다.
도 9a-9d는 대표적인 생체활성 펩티드들을 나타낸다.

본 개시내용은 심혈관-관련 질환의 치료 방법, 및 이러한 방법에서 사용하기 위한 조성물에 관한 것이다.

범위를 포함한 모든 숫자 지정, 예컨대 pH, 온도, 시간, 농도 및 분자량은 해당될 경우 0.1 또는 1.0의 증분만큼 (+) 또는 (-)로 달라지는 근사치이다. 항상 명시적으로 언급되는 것은 아니지만, 모든 숫자 지정에는 "약"이라는 용어가 선행한다는 것이 이해되어야 한다. 또한, 항상 명시적으로 언급되는 것은 아니지만, 본원에서 기술되는 반응물들이 단순히 예시라는 것, 그리고 그의 등가물들이 관련 기술분야에 알려져 있다는 것도 이해되어야 한다.

본원 및 첨부된 청구범위에서 사용될 때, 문맥상 분명하게 달리 지시되지 않는 한, 단수 형태는 복수의 언급을 포함한다는 것에 유의해야 한다. 따라서, 예를 들어 "리포좀"이라는 언급은 복수의 리포좀을 포함한다.

본원에서 사용될 때, 하기의 용어들은 하기의 의미를 가진다.

범위를 포함한 숫자 지정, 예컨대 온도, 시간, 양, 농도 등의 앞에 사용될 경우, "약"이라는 용어는 ( + ) 또는 ( - ) 20 %, 10 %, 5 % 또는 1 %만큼 가변적일 수 있는 근사치를 표시한다.

역시 본원에서 사용될 때, "및/또는"은 관련 열거 항목들 중 하나 이상의 임의의 모든 가능한 조합은 물론, 양자택일 ("또는")로 해석되는 경우에서의 조합의 부재도 지칭하여 포괄한다.

"투여하는 것", "투여하다" 등의 용어는 대상체에 작용제 (예컨대 아펠린)를 도입하는 것을 지칭한다. 통상적으로, 유효량이 투여되는데, 그 양은 치료 의사 등에 의해 결정될 수 있다. 국소, 피하, 복막, 정맥내, 동맥내, 흡입, 질, 직장, 협측, 뇌척수액에의 도입, 또는 신체 구획으로의 점적과 같은 임의의 투여 경로가 사용될 수 있다. 조성물과 함께 사용될 때의 "투여하는 것" 및 "~의 투여"라는 용어 및 구 (및 문법적 등가물)는 의료 전문가에 의한 환자에의 투여 또는 환자에 의한 자가-투여일 수 있는 직접 투여, 및/또는 약물을 처방하는 행위일 수 있는 간접 투여 모두를 지칭한다. 예를 들어, 작용제 (예컨대 아펠린)를 자가-투여할 것을 환자에게 지시하고/거나 약물 처방전을 환자에게 제공하는 의사는 환자에게 작용제를 투여하고 있는 것이다. "주기적인 투여" 또는 "주기적으로 투여하는 것"은 매일, 매주 또는 매월 기준으로 이루어지는 다수의 치료를 지칭한다. 주기적인 투여는 일 당 1회, 2회, 3회 또는 그 이상 회수(들)의 작용제의 투여를 지칭할 수도 있다.

"유효량"은 유익하거나 원하는 결과를 도출하기에 충분한 작용제 또는 화합물 (예컨대 아펠린)의 양이다. 유효량은 1회 이상 투여, 적용 또는 투약에서의 것일 수 있다. 이러한 파라미터들의 결정은 전적으로 관련 기술분야 통상의 기술자에게 귀속된다. 이러한 고려사항은 물론, 효과적인 제제 및 투여 절차에 대해서는 관련 기술분야에 잘 알려져 있으며, 표준 교재에 기술되어 있다.

"대상체", "개체" 또는 "환자"는 본원에서 호환가능하게 사용되며, 척추동물, 예를 들면 영장류, 포유동물 또는 바람직하게는 인간을 지칭한다. 포유동물에는 말, 개, 소, 양, 뮤린, 래트, 유인원, 인간, 농장 동물, 스포츠 동물 및 애완 동물이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.

단백질 또는 아미노산 서열 (또는 DNA 또는 RNA 서열)과 관련한 "서열 동일성"이라는 용어는 서열을 정렬하고 필요할 경우 갭을 도입함으로써 최대 % 서열 동일성을 달성한 후의, 그리고 어떠한 보존성 치환도 서열 동일성의 일부로 간주하지 않는, 특정 단백질 또는 아미노산 서열 중 아미노산 잔기 (또는 특정 DNA 또는 RNA 서열 중 뉴클레오티드 잔기)와 동일한 후보 서열 중 아미노산 잔기 (또는 뉴클레이티드 잔기)의 백분율을 지칭한다. 정렬은 관련 기술분야 통상의 기술자에게 알려져 있는 임의의 방법에 의해, 예를 들면 블라스트(BLAST) 및 엠보스(EMBOSS)와 같이 대중적으로 이용가능한 프로그램을 사용하는 것에 의해 달성될 수 있다. 관련 기술분야 통상의 기술자라면, 비교되는 서열들의 전체 길이에 걸쳐 최대 정렬을 달성하는 데에 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여, 정렬을 측정하기 위한 적절한 파라미터들을 결정할 수 있다.

"제약상 허용되는"이라는 구는 본원에서 철저한 의학적 판단의 영역하에서 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 합리적인 이익/위험 비에 부합하는, 인간 및 동물의 조직과 접촉시켜 사용하기에 적합한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투약 형태를 지칭하는 데에 사용된다.

조성물 및 제제

본원에서 제공되는 것은 적어도 부분적으로 리포좀 내에 캡슐화되어 있는 적어도 1종의 치료제를 포함하는 조성물 및 제제이다.

일부 실시양태에서, 상기 치료제는 아펠린 펩티드이다. 일부 실시양태에서, 상기 아펠린 펩티드는 하기 표 1에 제시되어 있는 바와 같은 서열식별번호(SEQ ID NO): 1-7로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열, 또는 그에 대하여 적어도 약 60 %, 약 65 %, 약 70 %, 약 75 %, 약 80 %, 약 85 %, 약 90 %, 약 95 %, 약 96 %, 약 97 %, 약 98 %, 약 99 % 또는 100 %의 서열 동일성을 가지는 서열을 포함한다. 적합한 아펠린 펩티드 동형의 비-제한적인 예에는 아펠린-12, 아펠린-13, 피로글루타밀 아펠린-13 ([Pyr1]-아펠린-13]), 아펠린 17, 아펠린-19 및 아펠린 36이 포함된다. 일부 실시양태에서, 아펠린 펩티드는 피로글루타밀 아펠린-13이다. 적합한 아펠린 펩티드 및 생물학적으로 활성인 변이들에 대해서는 그 전체가 참조로 포함되는 U.S. 특허 공개 제2016/0058705호에 기술되어 있다.

일부 실시양태에서, 치료제 (예컨대 아펠린 펩티드) 및/또는 적어도 1종의 추가적인 치료제는 약 15 중량% 내지 약 60 중량%를 구성한다.

일부 실시양태에서, 치료제는 약 5 중량% 내지 약 30 중량%, 약 10 중량% 내지 약 25 중량%, 또는 약 15 중량% 내지 약 20 %를 구성한다. 일부 실시양태에서, 치료제는 약 5 중량%, 약 10 중량%, 약 15 중량%, 약 20 중량%, 약 21 중량%, 약 22 중량%, 약 23 중량%, 약 24 중량%, 약 25 중량%, 약 26 중량%, 약 27 중량%, 약 28 중량%, 약 29 중량% 또는 약 30 중량%를 구성한다. 일부 실시양태에서, 치료제는 약 30 중량% 미만, 약 29 중량% 미만, 약 28 중량% 미만, 약 27 중량% 미만, 약 26 중량% 미만, 약 25 중량% 미만, 약 24 중량% 미만, 약 23 중량% 미만, 약 22 중량% 미만, 약 21 중량% 미만, 약 20 중량% 미만, 약 19 중량% 미만, 약 18 중량% 미만, 약 17 중량% 미만, 약 16 중량% 미만, 약 15 중량% 미만, 약 14 중량% 미만, 약 13 중량% 미만, 약 12 중량% 미만, 약 11 중량% 미만, 약 10 중량% 미만, 약 9 중량% 미만, 약 8 중량% 미만, 약 7 중량% 미만, 약 6 중량% 미만, 약 5 중량% 미만, 약 4 중량% 미만, 약 3 중량% 미만, 약 2 중량% 미만 또는 약 1 중량% 미만을 구성한다.

일부 실시양태에서, 치료제는 약 35 중량% 내지 약 60 중량%, 약 35 중량% 내지 약 55 중량%, 약 35 중량% 내지 약 50%, 약 35 중량% 내지 약 45 %, 또는 약 35 중량% 내지 약 40 %를 구성한다. 일부 실시양태에서, 치료제는 약 40 중량% 내지 약 60 중량%, 약 40 중량% 내지 약 55 중량%, 약 40 중량% 내지 약 50 %, 또는 약 40 중량% 내지 약 45 %를 구성한다. 일부 실시양태에서, 치료제는 약 35 중량%, 약 36 중량%, 약 37 중량%, 약 38 중량%, 약 39 중량%, 약 40 중량%, 약 41 중량%, 약 42 중량%, 약 43 중량%, 약 44 중량%, 약 45 중량%, 약 46 중량%, 약 47 중량%, 약 48 중량%, 약 49 %, 약 50 중량%, 약 51 중량%, 약 52 중량%, 약 53 중량%, 약 54 중량%, 약 55 중량%, 약 56 중량%, 약 57 중량%, 약 58 중량%, 약 59 % 또는 약 60 중량%를 구성한다. 일부 실시양태에서, 치료제는 약 35 중량% 초과, 약 36 중량% 초과, 약 37 중량% 초과, 약 38 중량% 초과, 약 39 중량% 초과, 약 40 중량% 초과, 약 41 중량% 초과, 약 42 중량% 초과, 약 43 중량% 초과, 약 44 중량% 초과, 약 45 중량% 초과, 약 46 중량% 초과, 약 47 중량% 초과, 약 48 중량% 초과, 약 49 중량% 초과, 약 50 중량% 초과, 약 51 중량% 초과, 약 52 중량% 초과, 약 53 중량% 초과, 약 54 중량% 초과, 약 55 중량% 초과, 약 56 중량% 초과, 약 57 중량% 초과, 약 58 중량% 초과, 약 59 중량% 초과 또는 약 60 중량% 초과를 구성한다.

일부 실시양태에서, 치료제는 소정량의 적어도 1종의 폴록사머, 적어도 1종의 지질 및 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)를 포함하는 리포좀 내에 적어도 부분적으로 캡슐화된다.

적합한 폴록사머의 비-제한적인 예에는 폴록사머 124, 폴록사머 181, 폴록사머 184, 폴록사머 188, 폴록사머 331 및 폴록사머 407, 또는 이들의 임의의 조합이 포함된다. 일부 실시양태에서, 폴록사머는 폴록사머 188이다.

일부 실시양태에서, 폴록사머 (예컨대 폴록사머 188)는 약 1 중량% 내지 약 20 중량%를 구성한다.

일부 실시양태에서, 폴록사머는 약 1 중량% 내지 약 14 중량%, 약 2 중량% 내지 약 12 중량%, 약 4 중량% 내지 약 10 %, 또는 약 6 중량% 내지 약 8 %를 구성한다. 일부 실시양태에서, 폴록사머는 약 1 중량%, 약 2 중량%, 약 3 중량%, 약 4 중량%, 약 5 중량%, 약 6 중량%, 약 7 중량%, 약 8 중량%, 약 9 중량%, 약 10 중량%, 약 11 중량%, 약 12 중량%, 약 13 중량% 또는 약 14 중량%를 구성한다. 일부 실시양태에서, 폴록사머는 약 14 중량% 미만, 약 13 중량% 미만, 약 12 중량% 미만, 약 11 중량% 미만, 약 10 중량% 미만, 약 9 중량% 미만, 약 8 중량% 미만, 약 7 중량% 미만, 약 6 중량% 미만, 약 5 중량% 미만, 약 4 중량% 미만, 약 3 중량% 미만, 약 2 중량% 미만 또는 약 1 중량% 미만을 구성한다.

일부 실시양태에서, 폴록사머는 약 12 중량% 내지 약 20 중량%, 약 12 중량% 내지 약 18 중량%, 약 12 중량% 내지 약 16 %, 또는 약 12 중량% 내지 약 14 %를 구성한다. 일부 실시양태에서, 폴록사머는 약 12 중량%, 약 13 중량%, 약 14 중량%, 약 15 중량%, 약 16 중량%, 약 17 중량%, 약 18 중량%, 약 19 중량% 또는 약 20 중량%를 구성한다. 일부 실시양태에서, 폴록사머는 약 12 중량% 초과, 약 13 중량% 초과, 약 14 중량% 초과, 약 15 중량% 초과, 약 16 중량% 초과, 약 17 중량% 초과, 약 18 중량% 초과, 약 19 중량% 초과 또는 약 20 중량% 초과를 구성한다.

일부 실시양태에서, 적어도 1종의 지질 (예컨대 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (DPSC) 및/또는 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (DPPC))은 약 5 중량% 내지 약 30 중량%를 구성한다. 적합한 지질의 비-제한적인 예에는 대두 포스파티딜콜린 (SPC), 수소화된 대두 포스파티딜콜린 (HSPC), 달걀 스핑고마이엘린 (ESM), 달걀 포스파티딜콜린 (EPC), 디미리스토일 포스파티딜콜린 (DMPC), 디팔미토일 포스파티딜콜린 (DPPC), 디올레오일 포스파티딜콜린 (DOPC), 디미리스토일 포스파티딜글리세롤 (DMPG), 디팔미토일 포스파티딜글리세롤 (DPPG), 디올레오일 포스파티딜글리세롤 (DOPG), 디미리스토일 포스파티딜에탄올아민 (DMPE), 디팔미토일 포스파티딜에탄올아민 (DPPE), 디올레오일 포스파티딜에탄올아민 (DOPE), 디미리스토일 포스파티딜세린 (DMPS), 디팔미토일 포스파티딜세린 (DPPS), 디올레오일 포스파티딜세린 (DOPS)이 포함된다.

일부 실시양태에서, DSPC는 약 20 중량% 내지 약 30 중량%, 약 22 중량% 내지 약 28 중량%, 또는 약 24 중량% 내지 약 26 %를 구성한다. 일부 실시양태에서, DSPC는 약 20 중량%, 약 21 중량%, 약 22 중량%, 약 23 중량%, 약 24 중량%, 약 25 중량%, 약 26 중량%, 약 27 중량%, 약 28 중량%, 약 29 중량% 또는 약 30 중량%를 구성한다. 일부 실시양태에서, DSPC는 약 20 중량% 초과, 약 21 중량% 초과, 약 22 중량% 초과, 약 23 중량% 초과, 약 24 중량% 초과, 약 25 중량% 초과, 약 26 중량% 초과, 약 27 중량% 초과, 약 28 중량% 초과, 약 29 중량% 초과 또는 약 30 중량% 초과를 구성한다.

일부 실시양태에서, DSPC는 약 5 중량% 내지 약 15 중량%, 약 7 중량% 내지 약 13 중량%, 또는 약 9 중량% 내지 약 11 %를 구성한다. 일부 실시양태에서, DSPC는 약 5 중량%, 약 6 중량%, 약 7 중량%, 약 8 중량%, 약 9 중량%, 약 10 중량%, 약 11 중량%, 약 12 중량%, 약 13 중량%, 약 14 중량% 또는 약 15 중량%를 구성한다. 일부 실시양태에서, DSPC는 약 15 중량% 미만, 약 14 중량% 미만, 약 13 중량% 미만, 약 12 중량% 미만, 약 11 중량% 미만, 약 10 중량% 미만, 약 9 중량% 미만, 약 8 중량% 미만, 약 7 중량% 미만, 약 6 중량% 미만 또는 약 5 중량% 미만을 구성한다.

일부 실시양태에서, DPPC는 약 5 중량% 내지 약 30 중량%를 구성한다.

일부 실시양태에서, DPPC는 약 20 중량% 내지 약 30 중량%, 약 22 중량% 내지 약 28 중량%, 또는 약 24 중량% 내지 약 26 %를 구성한다. 일부 실시양태에서, DPPC는 약 20 중량%, 약 21 중량%, 약 22 중량%, 약 23 중량%, 약 24 중량%, 약 25 중량%, 약 26 중량%, 약 27 중량%, 약 28 중량%, 약 29 중량% 또는 약 30 중량%를 구성한다. 일부 실시양태에서, DPPC는 약 20 중량% 초과, 약 21 중량% 초과, 약 22 중량% 초과, 약 23 중량% 초과, 약 24 중량% 초과, 약 25 중량% 초과, 약 26 중량% 초과, 약 27 중량% 초과, 약 28 중량% 초과, 약 29 중량% 초과 또는 약 30 중량% 초과를 구성한다.

일부 실시양태에서, DPPC는 약 5 중량% 내지 약 15 중량%, 약 7 중량% 내지 약 13 중량%, 또는 약 9 중량% 내지 약 11 %를 구성한다. 일부 실시양태에서, DPPC는 약 5 중량%, 약 6 중량%, 약 7 중량%, 약 8 중량%, 약 9 중량%, 약 10 중량%, 약 11 중량%, 약 12 중량%, 약 13 중량%, 약 14 중량% 또는 약 15 중량%를 구성한다. 일부 실시양태에서, DPPC는 약 15 중량% 미만, 약 14 중량% 미만, 약 13 중량% 미만, 약 12 중량% 미만, 약 11 중량% 미만, 약 10 중량% 미만, 약 9 중량% 미만, 약 8 중량% 미만, 약 7 중량% 미만, 약 6 중량% 미만 또는 약 5 중량% 미만을 구성한다.

일부 실시양태에서, 상기 PEG는 약 200 내지 약 20000 달톤의 평균 분자량을 가진다. 적합한 PEG의 비-제한적인 예에는 PEG 200, PEG 300, PEG 400, PEG 1000, PEG 1540, PEG 4000, PEG 5000, PEG 6000, PEG 7000, PEG 8000, PEG 9000 또는 PEG 10000이 포함된다. 일부 실시양태에서, PEG는 PEG 8000이다. 일부 실시양태에서, PEG는 약 10 중량% 내지 약 20 중량%, 약 12 중량% 내지 약 18 중량%, 약 12 중량% 내지 약 16 %, 또는 약 12 중량% 내지 약 14 %를 구성한다. 일부 실시양태에서, PEG는 약 10 중량%, 약 11 중량%, 약 12 중량%, 약 13 중량%, 약 14 중량%, 약 15 중량%, 약 16 중량%, 약 17 중량%, 약 18 중량%, 약 19 중량% 또는 약 20 중량%를 구성한다. 일부 실시양태에서, 폴록사머는 약 10 중량% 초과, 약 11 중량% 초과, 약 12 중량% 초과, 약 13 중량% 초과, 약 14 중량% 초과, 약 15 중량% 초과, 약 16 중량% 초과, 약 17 중량% 초과, 약 18 중량% 초과, 약 19 중량% 초과 또는 약 20 중량% 초과를 구성한다. 일부 실시양태에서, PEG는 약 20 중량% 미만, 약 19 중량% 미만, 약 18 중량% 미만, 약 17 중량% 미만, 약 16 중량% 미만, 약 15 중량% 미만, 약 14 중량% 미만, 약 13 중량% 미만, 약 12 중량% 미만, 약 11 중량% 미만 또는 약 10 중량% 미만을 구성한다.

일부 실시양태에서, 조성물은 추가로 콜레스테롤을 포함한다. 일부 실시양태에서, 콜레스테롤은 약 1 중량% 내지 약 10 중량%, 약 2 중량% 내지 약 8 중량%, 또는 약 4 중량% 내지 약 6 %를 구성한다. 일부 실시양태에서, 콜레스테롤은 약 1 중량%, 약 2 중량%, 약 3 중량%, 약 4 중량%, 약 5 중량%, 약 6 중량%, 약 7 중량%, 약 8 중량%, 약 9 중량% 또는 약 10 중량%를 구성한다. 일부 실시양태에서, 폴록사머는 약 10 중량% 미만, 약 9 중량% 미만, 약 8 중량% 미만, 약 7 중량% 미만, 약 6 중량% 미만, 약 5 중량% 미만, 약 4 중량% 미만, 약 3 중량% 미만, 약 2 중량% 미만 또는 약 1 중량% 미만을 구성한다.

일부 실시양태에서, 조성물은 약 5 중량% 내지 약 30 중량%, 약 10 중량% 내지 약 25 중량%, 또는 약 15 중량% 내지 약 20 % 양의 치료제 (예컨대 아펠린); 약 1 중량% 내지 약 14 중량%, 약 2 중량% 내지 약 12 중량%, 약 4 중량% 내지 약 10 %, 또는 약 6 중량% 내지 약 8 % 양의 폴록사머 (예컨대 폴록사머 188); 약 20 중량% 내지 약 30 중량%, 약 22 중량% 내지 약 28 중량% 또는 약 24 중량% 내지 약 26 % 양의 DSPC; 약 20 중량% 내지 약 30 중량%, 약 22 중량% 내지 약 28 중량%, 또는 약 24 중량% 내지 약 26 % 양의 DPPC; 및 약 10 중량% 내지 약 20 중량%, 약 12 중량% 내지 약 18 중량%, 약 12 중량% 내지 약 16 %, 또는 약 12 중량% 내지 약 14 % 양의 PEG (예컨대 PEG 8000)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 약 25 중량%의 아펠린 펩티드, 약 17 중량%의 폴록사머 188, 약 25 중량%의 DSPC, 약 25 중량%의 DPPC 및 약 8 중량%의 PEG 8000을 포함한다.

일부 실시양태에서, 조성물은 약 35 중량% 내지 약 60 중량%, 약 35 중량% 내지 약 55 중량%, 약 35 중량% 내지 약 50%, 약 35 중량% 내지 약 45 %, 또는 약 35 중량% 내지 약 40 % 양의 치료제 (예컨대 아펠린); 약 12 중량% 내지 약 20 중량%, 약 12 중량% 내지 약 18 중량%, 약 12 중량% 내지 약 16 %, 또는 약 12 중량% 내지 약 14 % 양의 폴록사머 (예컨대 폴록사머 188); 약 5 중량% 내지 약 15 중량%, 약 7 중량% 내지 약 13 중량%, 또는 약 9 중량% 내지 약 11 % 양의 DSPC; 약 5 중량% 내지 약 15 중량%, 약 7 중량% 내지 약 13 중량%, 또는 약 9 중량% 내지 약 11 % 양의 DPPC; 약 10 중량% 내지 약 20 중량%, 약 12 중량% 내지 약 18 중량%, 약 12 중량% 내지 약 16 %, 또는 약 12 중량% 내지 약 14 % 양의 PEG (예컨대 PEG 8000); 및 약 1 중량% 내지 약 10 중량%, 약 2 중량% 내지 약 8 중량%, 또는 약 4 중량% 내지 약 6 % 양의 콜레스테롤을 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 약 45 중량%의 아펠린 펩티드, 약 15 중량%의 폴록사머 188, 약 10 중량%의 DSPC, 약 10 중량%의 DPPC, 약 15 중량%의 PEG 8000 및 약 5 중량%의 콜레스테롤을 포함한다.

일부 실시양태에서, 조성물은 치료제 (예컨대 아펠린 펩티드) 및 폴록사머 (예컨대 폴록사머 188)를 포함한다.

한 실시양태에서, 조성물은 하기에서 제시되는 바와 같은 "제제 1"이다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 하기에서 제시되는 바와 같은 "제제 2"이다. 다른 실시양태에서, 조성물은 제제 1 또는 2와 동일한 성분 및 중량%를 포함하나, 상이한 중량을 가진다.

일부 실시양태에서, 조성물은 추가로 적어도 1종의 추가적인 치료제를 포함한다. 적합한 추가적인 치료제에는 수축촉진제, 베타 아드레날린 수용체 차단제, HMG-Co-A 리덕타제 억제제, 안지오텐신 II 수용체 길항제, 안지오텐신 전환 효소 (ACE) 억제제, 칼슘 채널 차단제 (CCB), 엔도텔린 길항제, 레닌 억제제, 이뇨제, ApoA-1 모방체, 항-당뇨병제, 비만-감소제, 알도스테론 수용체 차단제, 엔도텔린 수용체 차단제, 알도스테론 신타제 억제제 (ASI), CETP 억제제, 항-응고제, 릴랙신, BNP (네시리티드) 및/또는 NEP 억제제가 포함된다. 일부 실시양태에서, 추가적인 치료제는 ACE 억제제, 릴랙신, 나트륨이뇨 펩티드, 그렐린 또는 다른 생체활성 펩티드이다. 적합한 생체활성 펩티드의 비-제한적인 예로는 도 9a-d의 생체활성 펩티드들 중 어느 것이 포함된다 (예컨대 문헌 [Erdmann 2008]; [Chakrabarti 2016]도 참조).

한 실시양태에서, 추가적인 치료제는 수축촉진제, 베타 아드레날린 수용체 차단제, HMG-Co-A 리덕타제 억제제, 안지오텐신 II 수용체 길항제, 안지오텐신 전환 효소 (ACE) 억제제, 칼슘 채널 차단제 (CCB), 엔도텔린 길항제, 레닌 억제제, 이뇨제, ApoA-1 모방체, 항-당뇨병제, 비만-감소제, 알도스테론 수용체 차단제, 엔도텔린 수용체 차단제, 알도스테론 신타제 억제제 (ASI), CETP 억제제, 항-응고제, 릴랙신, BNP (네시리티드), NEP 억제제 및 안지오텐신 전환 효소-2 (ACE-2)에서 선택된다. 제2 작용제 또는 치료"와의 조합으로써"라는 용어는 본원에서 개시 및 기술되는 조성물 (예컨대 아펠린 리포좀)의 제2 작용제 또는 치료와의 공동-투여, 본원에서 개시 및 기술되는 조성물의 투여 후 이어지는 제2 작용제 또는 치료의 투여, 및 일차적인 제2 작용제 또는 치료의 투여 후 이어지는 본원에서 개시 및 기술되는 조성물의 투여를 포함한다. 본원에서 사용될 때의 수축촉진제에는 예를 들면 도부타민, 이소프로테레놀, 밀리논, 아미리논, 레보시멘단, 에피네프린, 노르에피네프린, 이소프로테레놀 및 디곡신이 포함된다. 본원에서 사용될 때의 베타 아드레날린 수용체 차단제에는 예를 들면 아세부톨롤, 아테놀롤, 베탁솔롤, 비소프롤롤, 카르테올롤, 메토프롤롤, 나돌롤, 프로프라놀롤, 소탈롤 및 티몰롤이 포함된다. 본원에서 사용될 때의 항-응고제에는 달테파린, 다나파로이드, 에녹사파린, 헤파린, 틴자파린 및 와르파린이 포함된다. "HMG-Co-A 리덕타제 억제제" (베타-히드록시-베타-메틸글루타릴-조-효소-A 리덕타제 억제제로도 지칭됨)라는 용어는 혈액 중 콜레스테롤을 포함한 지질 수준을 낮추는 데에 사용될 수 있는 활성 작용제를 포함한다. 예로는 아토르바스타틴, 세리바스타틴, 콤팩틴, 달바스타틴, 디히드로콤팩틴, 플루인도스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 피타바스타틴, 메바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴, 리바스타틴, 심바스타틴, 벨로스타틴 및 이들의 제약상 허용되는 염이 포함된다. "ACE-억제제" (안지오텐신 전환 효소 억제제로도 지칭됨)라는 용어는 안지오텐신 I의 안지오텐신 II로의 효소적 분해를 중단시키는 분자들을 포함한다. 이와 같은 화합물은 혈압의 조절 및 울혈성 심부전의 치료에 사용될 수 있다. 예로는 알라세프릴, 베나제프릴, 베나제프릴라트, 카프토프릴, 세로나프릴, 실라자프릴, 델라프릴, 에날라프릴, 에나프릴라트, 포시노프릴, 이미다프릴, 리시노프릴, 모엑시프릴, 모벨토프릴, 페린도프릴, 퀴나프릴, 라미프릴, 스피라프릴, 테모카프릴 및 트란도라프릴, 조페노프릴, 또는 이들의 제약상 허용되는 염이 포함된다. "엔도텔린 길항제"라는 용어에는 보센탄, 테조센탄 및 이들의 제약상 허용되는 염이 포함된다. 허용되는 추가적인 치료제의 추가적인 예들은 거기에 인용되어 있는 참고문헌들과 함께 그 전체가 참조로 포함되는 PCT 공개 제WO/2013/111110호에 나와 있다.

일부 실시양태에서, 추가적인 치료제는 발사르탄, 칸데사르탄 또는 로사르탄을 포함한다.

일부 실시양태에서, 조성물은 추가로 제약상 허용되는 부형제, 희석제, 캐리어 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 제약상 허용되는 부형제에 가용성이다. 일부 실시양태에서, 조성물은 약 30분, 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 12시간, 약 1일, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 1개월 또는 그보다 긴 시간 기간 동안 제약상 허용되는 부형제 중에 가용성이며, 그로부터 침전되지 않는다.

조성물은 제약상 허용되는 부형제, 제약상 허용되는 염, 희석제, 캐리어, 비히클, 및 통상의 기술자에게 잘 알려져 있는 기타 다른 불활성 작용제들을 포함할 수 있다. 제약 제제에 통상적으로 사용되는 비히클 및 부형제에는 예를 들면 활석, 아라비아 검, 락토스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 코코아 버터, 수성 또는 비-수성 용매, 오일, 파라핀 유도체, 글리콜 등이 포함된다. 용액은 물 또는 생리학적으로 상용성인 유기 용매 예컨대 에탄올, 1,2-프로필렌 글리콜, 폴리글리콜, 디메틸술폭시드, 지방 알콜, 트리글리세리드, 글리세린의 부분 에스테르 등을 사용하여 제조될 수 있다. 조성물은 멸균 등장 식염수, 물, 1,3-부탄디올, 에탄올, 1,2-프로필렌 글리콜, 물과 혼합된 폴리글리콜, 링거 용액 등을 포함할 수 있는 통상적인 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 한 실시양태에서는, 원하는 치료 부위에 조성물을 위치시켜 적정하게 안착시키는 것을 용이하게 하기 위하여 착색제가 첨가된다.

조성물은 보존제 및/또는 안정화제를 포함할 수 있다. 보존제의 비-제한적인 예에는 메틸-, 에틸-, 프로필- 파라벤, 나트륨 벤조에이트, 벤조산, 소르브산, 칼륨 소르베이트, 프로피온산, 벤즈알코늄 클로라이드, 벤질 알콜, 티메로살, 페닐머큐레이트 염, 클로르헥시딘, 페놀, 3-크레졸, 사차 암모늄 화합물 (QAC), 클로르부탄올, 2-에톡시에탄올 및 이미드우레아가 포함된다.

장성을 조절하기 위하여, 조성물은 생리학적 염, 예컨대 나트륨염을 포함할 수 있다. 나트륨 클로라이드 (NaCl)가 바람직하며, 1 내지 20 mg/ml로 존재할 수 있다. 존재할 수 있는 다른 염으로는 칼륨 클로라이드, 칼륨 이수소 포스페이트, 디나트륨 포스페이트 탈수화물, 마그네슘 클로라이드 및 칼슘 클로라이드가 포함된다.

조성물은 1종 이상의 완충제를 포함할 수 있다. 통상적인 완충제에는 하기가 포함된다: 포스페이트 완충제; 트리스(Tris) 완충제; 보레이트 완충제; 숙시네이트 완충제; 히스티딘 완충제; 또는 시트레이트 완충제. 완충제는 통상적으로 5-20 mM 범위의 농도로 포함되게 된다. 조성물의 pH는 일반적으로 5 내지 8, 더욱 통상적으로는 6 내지 8, 예컨대 6.5 내지 7.5, 또는 7.0 내지 7.8이 된다.

일부 실시양태에서, 조성물은 냉동보호제를 포함할 수 있다. 냉동보호제의 비-제한적인 예에는 글리콜 (예컨대 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 및 글리세롤), 디메틸 술폭시드 (DMSO), 포름아미드, 수크로스, 트레할로스, 덱스트로스 및 이들의 임의의 조합이 포함된다.

조성물은 이식가능 장치 중에 포함될 수 있다. 본 발명에 의해 고려되는 적합한 이식가능 장치에는 혈관내 스텐트 (예컨대 자가-팽창성 스텐트, 풍선-팽창성 스텐트 및 스텐트-그래프트), 스캐폴드, 그래프트 등이 포함된다. 그와 같은 이식가능 장치는 본원에서 개시 및 기술되는 실시양태에 따른 조성물에 의해 적어도 하나의 표면상에서 코팅되거나, 또는 그에 의해 함침될 수 있다.

치료 방법

본원에서 제공되는 것은 그를 필요로 하는 대상체에서의 심혈관-관련 질환의 치료 또는 예방 방법이다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 본원에서 개시 및 기술되는 조성물의 치료 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.

적합한 심혈관-관련 질환의 비-제한적인 예에는 심장 질환, 혈관 질환 및 대사 질환이 포함된다. 본원에서 개시 및 기술되는 조성물을 사용한 치료에 유용한 다른 적합한 이상에는 수분 저류 및 화상 손상이 포함된다. 심장 질환의 비-제한적인 예에는 만성 심부전, 급성 보상실패 심부전, 심근경색-후증, 심방 세동, 브루가다 증후군, 심실성 빈맥, 죽상경화증, 허혈성 심혈관 질환, 심근병증, 심장 섬유증, 심장 허혈/재관류 손상, 부정맥 및 아밀로이드증이 포함된다. 혈관 질환의 비-제한적인 예에는 고혈압, 내성 고혈압, 폐고혈압, 말초 동맥 질환, 발기 기능장애, 재협착 및 자간전증이 포함된다. 대사 질환의 비-제한적인 예에는 유형 2 당뇨병, 유형 1 당뇨병, 당뇨병성 신장병증, 당뇨병성 망막병증, 만성 신장 질환, 급성 신장 질환, 신장 섬유증, 신장 허혈/재관류 손상, 다낭성 신장 질환, 혈액투석 및 비만이 포함된다.

일부 실시양태에서, 심혈관-관련 질환은 폐고혈압, 심부전, 심근경색, 당뇨병성 신장병증, 만성 신장 질환, 급성 신장 질환, 발기 기능장애, 당뇨병 및 대사-관련 장애로 이루어진 군으로부터 선택된다.

조성물은 임의의 적합한 양식 및 경로에 의해 대상체에게 투여될 수 있다. 비-제한적인 예에는 내부, 폐, 직장, 질, 설측, 정맥내, 동맥내, 근육내, 복막내, 피내 및 피하 경로가 포함된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 정맥내 또는 피하로 투여된다. 조성물은 크림, 젤 또는 패치의 일부로서의 경피 전달에 적합할 수도 있다. 다른 투약 형태로는 정제, 캡슐, 환약, 분말, 에어로졸, 좌약, 비경구제, 그리고 현탁액, 용액 및 에멀션을 포함한 경구 액체가 포함된다. 지속- 또는 가속-방출 투약 형태 역시 사용될 수 있다.

한 실시양태에서는, 약 25 중량% 양의 DSPC, 약 25 중량% 양의 DPPC, 약 8.33 중량% 양의 폴록사머 188, 약 16.67 중량% 양의 PEG 8000 및 약 25 중량% 양의 [Pyr1]-아펠린-13을 포함하는 조성물 치료 유효량이 심혈관-관련 질환이 있는 대상체에게 투여된다.

한 실시양태에서는, 약 10 중량% 양의 DSPC, 약 10 중량% 양의 DPPC, 약 15 중량% 양의 폴록사머 188, 약 15 중량% 양의 PEG 8000, 약 45 중량% 양의 [Pyr1]-아펠린-13 및 약 5 중량% 양의 콜레스테롤을 포함하는 조성물 치료 유효량이 심혈관-관련 질환이 있는 대상체에게 투여된다.

한 실시양태에서는, 약 25 중량% 양의 DSPC, 약 25 중량% 양의 DPPC, 약 8.33 중량% 양의 폴록사머 188, 약 16.67 중량% 양의 PEG 8000 및 약 25 중량% 양의 [Pyr1]-아펠린-13을 포함하는 조성물 치료 유효량이 정맥내로, 피하로, 경구로, 또는 흡입을 통하여 심혈관-관련 질환이 있는 대상체에게 투여된다.

한 실시양태에서는, 약 10 중량% 양의 DSPC, 약 10 중량% 양의 DPPC, 약 15 중량% 양의 폴록사머 188, 약 15 중량% 양의 PEG 8000, 약 45 중량% 양의 [Pyr1]-아펠린-13 및 약 5 중량% 양의 콜레스테롤을 포함하는 조성물 치료 유효량이 정맥내로, 피하로, 경구로, 또는 흡입을 통하여 심혈관-관련 질환이 있는 대상체에게 투여된다.

한 실시양태에서, 본 개시내용의 조성물은 약 1 mg 내지 약 10,000 mg, 약 25 mg 내지 약 5000 mg, 약 50 mg 내지 약 3000 mg, 약 75 mg 내지 약 2500 mg, 또는 약 100 mg 내지 약 1000 mg, 예를 들면 약 75 mg, 약 100 mg, 약 125 mg, 약 150 mg, 약 175 mg, 약 200 mg, 약 225 mg, 약 250 mg, 약 275 mg, 약 300 mg, 약 325 mg, 약 350 mg, 약 375 mg, 약 400 mg, 약 425 mg, 약 450 mg, 약 475 mg, 약 500 mg, 약 525 mg, 약 550 mg, 약 575 mg, 약 600 mg, 약 625 mg, 약 650 mg, 약 675 mg, 약 700 mg, 약 725 mg, 약 750 mg, 약 775 mg, 약 800 mg, 약 825 mg, 약 850 mg, 약 875 mg, 약 900 mg, 약 925 mg, 약 950 mg, 약 975 mg, 약 1000 mg, 약 1025 mg, 약 1050 mg, 약 1075 mg, 약 1100 mg, 약 1025 mg, 약 1050 mg, 약 1075 mg, 약 1200 mg, 약 1225 mg, 약 1250 mg, 약 1275 mg, 약 1300 mg, 약 1325 mg, 약 1350 mg, 약 1375 mg, 약 1400 mg, 약 1425 mg, 약 1450 mg, 약 1475 mg, 약 1500 mg, 약 1525 mg, 약 1550 mg, 약 1575 mg, 약 1600 mg, 약 1625 mg, 약 1650 mg, 약 1675 mg, 약 1700 mg, 약 1725 mg, 약 1750 mg, 약 1775 mg, 약 1800 mg, 약 1825 mg, 약 1850 mg, 약 1875 mg, 약 1900 mg, 약 1925 mg, 약 1950 mg, 약 1975 mg, 약 2000 mg, 약 2025 mg, 약 2050 mg, 약 2075 mg, 약 2100 mg, 약 2125 mg, 약 2150 mg, 약 2175 mg, 약 2200 mg, 약 2225 mg, 약 2250 mg, 약 2275 mg, 약 2300 mg, 약 2325 mg, 약 2350 mg, 약 2375 mg, 약 2400 mg, 약 2425 mg, 약 2450 mg, 약 2475 mg 또는 약 2500 mg의 치료제의 매일 투여량을 제공하기에 충분한 양으로 대상체에게 투여된다.

한 실시양태에서, 본 개시내용의 조성물은 약 1 mg 내지 약 10,000 mg, 약 25 mg 내지 약 5000 mg, 약 50 mg 내지 약 3000 mg, 약 75 mg 내지 약 2500 mg, 또는 약 100 mg 내지 약 1000 mg, 예를 들면 약 75 mg, 약 100 mg, 약 125 mg, 약 150 mg, 약 175 mg, 약 200 mg, 약 225 mg, 약 250 mg, 약 275 mg, 약 300 mg, 약 325 mg, 약 350 mg, 약 375 mg, 약 400 mg, 약 425 mg, 약 450 mg, 약 475 mg, 약 500 mg, 약 525 mg, 약 550 mg, 약 575 mg, 약 600 mg, 약 625 mg, 약 650 mg, 약 675 mg, 약 700 mg, 약 725 mg, 약 750 mg, 약 775 mg, 약 800 mg, 약 825 mg, 약 850 mg, 약 875 mg, 약 900 mg, 약 925 mg, 약 950 mg, 약 975 mg, 약 1000 mg, 약 1025 mg, 약 1050 mg, 약 1075 mg, 약 1100 mg, 약 1025 mg, 약 1050 mg, 약 1075 mg, 약 1200 mg, 약 1225 mg, 약 1250 mg, 약 1275 mg, 약 1300 mg, 약 1325 mg, 약 1350 mg, 약 1375 mg, 약 1400 mg, 약 1425 mg, 약 1450 mg, 약 1475 mg, 약 1500 mg, 약 1525 mg, 약 1550 mg, 약 1575 mg, 약 1600 mg, 약 1625 mg, 약 1650 mg, 약 1675 mg, 약 1700 mg, 약 1725 mg, 약 1750 mg, 약 1775 mg, 약 1800 mg, 약 1825 mg, 약 1850 mg, 약 1875 mg, 약 1900 mg, 약 1925 mg, 약 1950 mg, 약 1975 mg, 약 2000 mg, 약 2025 mg, 약 2050 mg, 약 2075 mg, 약 2100 mg, 약 2125 mg, 약 2150 mg, 약 2175 mg, 약 2200 mg, 약 2225 mg, 약 2250 mg, 약 2275 mg, 약 2300 mg, 약 2325 mg, 약 2350 mg, 약 2375 mg, 약 2400 mg, 약 2425 mg, 약 2450 mg, 약 2475 mg 또는 약 2500 mg의 치료제의 매주 및/또는 격주 투여량을 제공하기에 충분한 양으로 대상체에게 투여된다.

한 실시양태에서, 본 개시내용의 조성물은 약 1 mg 내지 약 10,000 mg, 약 25 mg 내지 약 5000 mg, 약 50 mg 내지 약 3000 mg, 약 75 mg 내지 약 2500 mg, 또는 약 100 mg 내지 약 1000 mg, 예를 들면 약 75 mg, 약 100 mg, 약 125 mg, 약 150 mg, 약 175 mg, 약 200 mg, 약 225 mg, 약 250 mg, 약 275 mg, 약 300 mg, 약 325 mg, 약 350 mg, 약 375 mg, 약 400 mg, 약 425 mg, 약 450 mg, 약 475 mg, 약 500 mg, 약 525 mg, 약 550 mg, 약 575 mg, 약 600 mg, 약 625 mg, 약 650 mg, 약 675 mg, 약 700 mg, 약 725 mg, 약 750 mg, 약 775 mg, 약 800 mg, 약 825 mg, 약 850 mg, 약 875 mg, 약 900 mg, 약 925 mg, 약 950 mg, 약 975 mg, 약 1000 mg, 약 1025 mg, 약 1050 mg, 약 1075 mg, 약 1100 mg, 약 1025 mg, 약 1050 mg, 약 1075 mg, 약 1200 mg, 약 1225 mg, 약 1250 mg, 약 1275 mg, 약 1300 mg, 약 1325 mg, 약 1350 mg, 약 1375 mg, 약 1400 mg, 약 1425 mg, 약 1450 mg, 약 1475 mg, 약 1500 mg, 약 1525 mg, 약 1550 mg, 약 1575 mg, 약 1600 mg, 약 1625 mg, 약 1650 mg, 약 1675 mg, 약 1700 mg, 약 1725 mg, 약 1750 mg, 약 1775 mg, 약 1800 mg, 약 1825 mg, 약 1850 mg, 약 1875 mg, 약 1900 mg, 약 1925 mg, 약 1950 mg, 약 1975 mg, 약 2000 mg, 약 2025 mg, 약 2050 mg, 약 2075 mg, 약 2100 mg, 약 2125 mg, 약 2150 mg, 약 2175 mg, 약 2200 mg, 약 2225 mg, 약 2250 mg, 약 2275 mg, 약 2300 mg, 약 2325 mg, 약 2350 mg, 약 2375 mg, 약 2400 mg, 약 2425 mg, 약 2450 mg, 약 2475 mg 또는 약 2500 mg의 치료제의 매월 투여량을 제공하기에 충분한 양으로 대상체에게 투여된다.

[ 실시예 ]

실시예 1: 심근 비대 및 심부전 의 마우스 모델에서의 아펠린 제제의 약력학

동물. 6 내지 8주 및 8 내지 10주령의 C57BL/6J 마우스를 횡단 대동맥 협착 (TAC)-유도 심근 비대 및 심부전의 약력학 동물 모델로 사용하였다. 마우스들을 하기 표 3에 나타낸 바와 같은 처리 군으로 적절하게 그룹화하였다. 100 μL PBS (모의(sham) 군), 부형제 (리포좀) 단독 대조 군, 아펠린 단독 (제제 B 군) 또는 아펠린 리포좀 (제제 C 군) 중 어느 하나의 복막내 주사를 마우스에 투여하였다.

TAC 수술 절차. 수술 영역을 양안시 입체영상 수술용으로 소독하였다. 절개를 수행하여 심장 및 좌심방 부속기를 드러내었다. 다음에, 프리-헤드 암 스템(free-head arm stem)과 좌측 온 목동맥 사이의 대동맥 궁 영역을 입체현미경하에서 신중하게 관찰하였다. 대동맥을 헤드 암 스템과 좌측 온 목동맥 사이에서 4-게이지 바늘 (직경 0.4 mm)상에 위치시킴으로써, 대동맥 협착을 발생시켰다. 수술 부위를 봉합하고, 정상적인 가슴 파동에 대하여 마우스를 관찰하였다. 마우스를 무작위로 상기 표에서 개괄된 4개 군으로 분할하였다. 간단하게 말하자면, 대조 군 (약물은 없는 바탕 부형제의 복막내 주사), 제제 B 군 (아펠린 단독), 제제 C 군 (아펠린 리포좀)이며; 다른 군은 마우스의 상응하는 수술 시술이 있으나 대동맥을 좁히지는 않은 모의 군이었다.

심초음파 기능의 평가. 최초 투여 1시간 전, 최초 투여 1시간 후, 그리고 수술 1주 및 2주 후에 마우스를 평가하였다. 간단하게 말하자면, M-모드 심초음파법을 사용하여 수술후 마우스에서 심장 기능의 변화를 검출하였다. M-모드 초음파에 의해 2D 이미지로 좌심실 전방 및 후방 벽의 변화를 기록하였다. M-곡선은 수축기 및 확장기 말 좌심실 전후 직경 크기를 측정하기 위한 심장내막의 위치 및 동역학을 보여준다. 좌심실 수축기 직경 (LVIDs), 좌심실 확장기 말 직경 (LVIDd), 좌심실 박출률 (EF), 좌심실 구획단축률 (FS), 좌심실 후방 벽 두께 (LVPWd)를 계산하고, 기타 파라미터들을 측정하였다.

병리학적 평가. 연구 종료시, 동물들을 희생시키고, 개흉술을 수행하여 심장을 분리하였다. 심장을 표준 식염수에서 세정하고, 새로운 4 % 파라포름알데히드 중에 고정하였다. 매슨(Masson) 염색으로 처리한 후, 샘플을 파라핀 매립하고, 현미경 관찰을 수행하였다. HE 염색을 사용하여 유사한 절차를 수행하였다. 평가 지표: 병리학적 특징, 비대에 대한 주 연구.

통계 분석. 각 군의 실험 데이터는 평균 ± 표준 편차로 기술하였다. 정상 및 변이 군들 사이의 차이를 비교하는 데에는 일-원 ANOVA를 사용하였다. 2개 군들 사이의 차이를 비교하는 데에는 LSD 검정을 사용하였다. 2개 군들 사이의 차이 및 표준 분포 또는 분산을 검정하는 데에는 크루스탈-왈리스(Kruskal-Wallis) H 검정 (KW)을 사용하였다. 군들 사이의 다중 비교에는 만-휘트니(Mann-Whitney) U 방법을 사용하였다. p <0.05의 차이가 통계적으로 유의하였다. 모든 통계 분석은 윈도즈 소프트웨어용 SPSS 22.0을 사용하여 수행하였다.

상기한 방법 후, 심장 기능의 변화를 확인하기 위하여 흉골 좌심실의 EF, FS, LVIDs, LVIDd 및 LVPWd를 측정하는 데에는 초음파-안내 M-모드 초음파촬영법을 사용하였다.

박출률 (EF)은 각 심박에 의해 심장의 심실로부터 유출되는 혈액의 분율이다. EF는 박동 부피를 확장기-말 부피로 나누어 계산하는 것으로써, 심장 펌핑 효율의 고유 부피 척도이다. 박출률은 심장 기능의 중요한 지표이다. 도 1a 및 1b에 나타낸 바와 같이, 수술 1일 (1D) 후, 모의 군은 가슴 손상에 기인하는 것으로 보이는 약간 감소된 EF 값을 가졌으나; 수술 7일 후 (7D)에는 EF 값이 복구되었으며, 이후 상대적으로 안정된 상태로 유지되었다. 대조 군에서는, 7일 후까지 EF 값이 계속 감소하였으며, 7일 후에는 감소가 더욱 심각하였다. 대동맥 협착 직후 발생한 심장 손상 및 손상 7D 후의 보상 효과가 후속 손상이 계속되면서 더욱 분명해지는 것으로 추정된다. 2개 투여 군에서, 1D 후 천천히 EF 수준의 감소가 완화되었다.

좌심실 구획단축률 (FS)은 EF와 유사한 것으로써, 심장 수축기 기능의 중요한 지표이다. 도 2a 및 2b에 나타낸 바와 같이, 1D 후 모의 군은 가슴 손상에 기인하는 것으로 보이는 약간 감소된 FS 값을 가졌다. 7D에, FS 값은 복구되었으며, 이후 안정한 상태로 유지되었다. 대조 군에서는, 7D 후까지 FS 값이 계속 감소하였으며, 7D 후에는 감소가 더욱 심각하였다. 대동맥 협착 직후 발생한 심장 손상 및 손상 7D 후의 보상 효과가 추가적인 손상이 발생하면서 더욱 분명해지는 것으로 추정된다. 2개 투여 군에서, 1D 후 천천히 FS 수준의 감소가 감쇠되었다.

좌심실 수축기 직경 (LVIDs) 변화는 심장 리모델링을 반영할 수 있다. 도 3a 및 3b에서, 1D 후 모의 군의 LVIDs가 약간 증가하였는데, 가슴 손상에 기인하는 것으로 보인다. 7D에, LVIDs는 복구되었으며, 이후 안정한 상태로 유지되었다. 대조 군의 LVIDs는 7일 후 계속하여 증가하였다. 대동맥 협착 직후 발생한 심장 손상 및 손상 7D 후의 보상 효과가 추가적인 손상이 발생하면서 더욱 분명해지는 것으로 추정된다. 2개 투여 군에서 수술후 1D에 LVIDs의 증가가 관찰되었으나, 이와 같은 증가는 14D 내내 침묵하였다.

좌심실 확장기 직경 (LVIDd) 변화는 심장 리모델링을 반영할 수 있다. 도 4a 및 4b에 나타낸 바와 같이, 7D 후 모의 군의 LVIDd가 약간 증가하였는데, 가슴 손상에 기인하는 것으로 보인다. 7D 후, LVIDd는 감소하기 시작하였다. 대조 군의 LVIDd는 수술 후 계속 증가함으로써, 대동맥 협착 직후 발생한 손상 및 추가적인 손상이 발생하였음을 시사하였다. 2개 투여 군에서 1D에 LVIDd 수준이 증가하였으나, 이와 같이 상승된 수준은 이후 침묵하였다.

좌심실 확장기 말 벽 두께 (LVPWd) 변화는 심장 리모델링을 반영할 수 있다. 도 5a 및 5b에 나타낸 바와 같이, 1D 후 모의 군 LVPWd 값이 상대적으로 안정하였으며; 7D에는 이것이 약간 상승하였는데, 개흉술 손상에 의해 야기되는 것으로 보인다. 대조 군의 LVPWd는 수술 후 증가하였다. 2개 투여 군에서, LVPWd는 1D에서 증가하였으나, 이후 증가가 침묵하였다.

LVIDs, LVIDd 및 LVPWd는 수술 1D 후에 모든 군에서 증가하였으며, EF 및 FS 값은 수술 1D 후 모든 군에서 감소하였다 (도 6a 참조). 손상은 주로 대동맥 협착에 의해 야기되는 것으로 추정된다. 또한, 모의 군과 제제 C 군 사이에서 최소의 변화가 관찰되었는데, 이는 제제 C (아펠린 리포좀)가 손상을 치료하는 데에 있어서 제제 B (아펠린 단독)에 비해 더 효과가 있다는 것을 시사한다. 도 6b는 7D 후 각 군에서 LVIDs, LVIDd, LVPWd가 증가하였으며, 모의 군이 최저 증분을 가졌음을 나타낸다. 이는 수술 외상이 투여 군에서 점차적으로 복구되었으며, 제제 C 군은 덜 증가하였음을 시사한다. 이와 같은 결과는 또한 아펠린이 D7에도 계속 역할을 한다는 것을 시사한다. 모의 군 EF 및 FS는 기준선과 균일해서, 수술 외상에 의해 야기된 감소된 심장 기능이 복구되었음을 시사한다. 마지막으로, 도 6c에 나타낸 바와 같이, 14D에 모의 군 LVIDs, LVIDd, LVPWd, EF 및 FS는 기준선과 균일해서, 수술 외상에 의해 야기된 심장 기능장애가 복구되었음을 시사한다. 변화는 예상대로 대조 군에서 가장 컸다. 2개 치료 군에서는, 모든 지수가 약물이 효과적이라는 것을 나타내었는데, 제제 C 군의 변화가 모의 군에 가장 가까웠다. 이와 같은 결과는 아펠린 리포좀이 손상을 치료하는 데에 있어서 아펠린 단독에 비해 탁월하다는 것을 시사한다.

실험 종료시, 모든 마우스를 희생시킨 후, 조직학적 분석을 수행하였다. HE 염색에 따르면, 도 7a-7d에 나타낸 바와 같이, 모의 군은 규칙적이고 균일하게 분포된 심근 및 얇은 혈관 벽을 나타내었다 (도 7a). 반면, 대조 군은 손상된 심장 구조 완전성, 심근 부정맥, 혈관 벽의 팽창 및 비후화를 나타내었다 (도 7b). 제제 B로 처리된 마우스는 완전성이 유지되는 심장 구조, 심근의 규칙적 배열을 나타내었으나, 다발성 심근경색 또는 출혈을 나타내는 커다란 심근 간질도 나타내었다 (도 7c). 제제 C로 처리된 마우스 역시 완전성이 유지되는 심장 구조, 심근의 규칙적 배열을 나타냄으로써, 다발성 심근경색 또는 출혈을 표시하였다 (도 7d). 심근경색 또는 출혈의 양은 제제 B (아펠린 단독)에 비해 제제 C 군 (아펠린 리포좀)에서 적었다. 매슨 트리크롬 염색에 따르면, 도 8a-8d에서 나타낸 바와 같이, 모의 군은 규칙적인 대형으로 배열된 심근 - 꽉 차 압축된 얇은 혈관 벽을 가지는 심장 근육 세포 -를 나타내었다 (도 8a). 소량의 콜라겐 침착이 존재하였다. 반면, 대조 군은 커다란 콜라겐 침착 영역을 가졌다 (도 8b). 제제 B로 처리된 마우스는 상당한 심근 콜라겐 침착을 나타내었으나 (도 8c), 대조 군에서 관찰된 만큼 많지는 않았다. 제제 C로 처리된 마우스는 제제 B에 비해 소량의 콜라겐 침착만을 나타내었다 (도 8d). 아펠린 리포좀은 아펠린 단독에 비해 더 큰 정도로 섬유증을 감소시켰다.

제제 B (아펠린 단독) 및 제제 C (아펠린 리포좀)의 둘 다의 투여는 유도된 심부전 후 수축성 (EF 및 FS)을 복구하였다. 또한, 대동맥 협착 후 LVIDs, LVIDd 및 LVPWd 증가의 감쇠에 의해 입증되는 바와 같이, 그들은 비대 성장을 억제하였다. 직접 비교에서, 제제 C (아펠린 리포좀)는 제제 B (아펠린 단독)에 비해 더 바람직한 치료 이익을 제공하였다.

합쳐보면, 이러한 데이터는 아펠린 리포좀이 심장 비대 및 심부전을 치료하는 데에 사용될 수 있다는 것을 시사한다.

실시예 2: 심근경색의 치료에 있어서의 아펠린 제제

동물 실험 프로토콜. 표준 공급원으로부터 체중 180-220 g의 수컷 스프래그-도울리(Sprague-Dawley) 래트 (연령, 8년-령)를 입수한다. 마우스를 온도-조절 (20-22 ℃) 환경에서 12시간 명암 주기하에 유지한다. 래트를 하기와 같은 3개 군 (n=6/군)으로 분할한다: 모의; 좌측 전방 하행 동맥 (LAD) 결찰; 및 LAD+ 아펠린 군. 아펠린 군에는 하기 표 4에 제시한 배합에 따른 아펠린 리포좀들을 투여한다.

LAD 군의 래트는 LAD 결찰 수술 (문헌 [Patten 1998]; [Ahn 2004])을 받는다. 간단하게 말하자면, 복막내 주사를 통한 10 % 클로랄 수화물 (3.5 ml/kg)을 사용하여 래트를 마취한다. 바로 누운 자세에서, 기관내 삽관을 수행하고, 설치류 인공호흡기를 사용하여 래트를 환기시킨다 (속도, 80 호흡/분; 1회 호흡량, 6-8 ml/kg). 다음에, 흉강을 개방하고, 심장을 노출시킨다. 7-0 실크를 사용하여 LAD를 결찰시킨다. 심근 표백에 의해 성공적인 LAD 결찰을 확인한 후, 흉강을 한층 한층 폐쇄한다. LAD 결찰 수술 후, 래트에게 2.5x104 U의 페니실린 근육내 주사를 투여한다. 모의 군의 래트는 결찰 없이 동등한 수술을 받는다. LAD+ 아펠린 군의 래트에게는 LAD 결찰 수술 후 4주 동안 매일 아펠린 투여를 사용한 복막내 주사를 투여한다. 모의 및 LAD 군의 래트에게는 동일한 양의 표준 식염수를 투여한다. 4주 후, 10 % 클로랄 수화물을 사용하여 각 군의 래트를 마취한다. 좌심실 수축기 압력 (LVSP), 좌심실 확장기-말 압력 (LVEDP), 좌심실 최대 압력 상승 속도 (LV+dp/dtmax) 및 좌심실 최대 압력 감소 속도 (LV-dp/dtmax)의 수준을 측정한다. 10 % 클로랄 수화물 (3.5 ml/kg; 복막내 주사)을 사용하여 래트를 마취한다. 혈액을 수확하여, 실온에서 2-4시간 동안 저장한 후, 4,000 rpm에서 10분 동안 원심분리한다. 상청액을 수집하여, 혈청을 수득한다. 모든 동물 실험은 실험 동물 관리 및 사용 지침(Guide for the Care and Use of Laboratory Animals)에 따라 수행한다.

아펠린 리포좀을 사용한 처리는 하기 결과들 중 하나 이상을 발생시키게 될 것으로 생각된다: 심근-경색-유도 좌심실 기능장애 (예컨대 LVSP, LVEDP)를 경감하는 것; 심근-경색-유도 심근 섬유증을 감쇠시키는 것 (매슨 트리크롬 염색에 의해 측정됨); 섬유증 마커들 (예컨대 TGF-β, CTGF, Col-I, MMP-2 및 MMP-9)을 감소시키는 것; 및 안지오텐신 II 및 NF-κB 수준을 감소시키는 것.

실시예 3: 폐고혈압 ( PAH )의 치료에 있어서의 아펠린 제제

PAH가 있는 20명의 환자가 우심 카테터삽입 (문헌 [Vestbo 2013]; [Vestbo 2015]) 동안의 아펠린 리포좀 및 부합하는 식염수 위약 주입의 무작위화 이중-맹검 위약-대조 연구에 참여하게 될 것이다. 아펠린 군에게는 상기 표 4에 제시된 동일한 배합에 따른 아펠린 리포좀을 투여한다.

평균 폐 동맥 압력, 폐 동맥 쐐기압 및 심장 박출량을 측정한다. 아펠린 리포좀을 사용한 치료는 심장 박출량의 증가를 발생시키게 될 것으로 생각된다.

실시예 4: 당뇨병 치료에 있어서의 아펠린 제제

건강한 과체중 남성들을 두 가지 아펠린 리포좀 투여량의 효능 및 허용성을 계속 고려하는 무작위화 이중-맹검 위약-대조 교차 연구에 등록시킨다. 첫 번째 군의 대상체는 아펠린 리포좀의 투여분을 투여받게 되며, 안전성 데이터 조사 후, 두 번째 군은 더 높은 투여량을 투여받게 된다 (n=8). 아펠린 군에게는 상기 표 4에 제시된 배합에 따른 아펠린 리포좀을 투여한다.

각 지원자는 90분부터 120분까지 (레벨 1) 글루코스 주입 속도 (GIR)의 기본 수준이 측정되는 2개의 고인슐린혈증-정상혈당 클램프에 적용된다. 다음에, 2시간 동안 아펠린 또는 위약 연속 i.v. 투여를 개시하고, 최종적으로 210분부터 240분까지 (레벨 2) GIR을 평가한다. 일차 평가 종료점은 레벨 2와 레벨 1 사이의 GIR 차이 (ΔGIR)이다. 아펠린 리포좀을 사용한 치료는 ΔGIR 대 대조의 증가를 발생시키게 될 것으로 생각된다.

실시예 5: 당뇨병성 신장병증 치료에 있어서의 아펠린 제제

C57BL/6 바탕의 아키타(Akita) (인슐린2+/-) 마우스의 번식 쌍을 입수한다.

온도-조절실 (22±2 ℃)에서 12시간 광-암흑 주기로 물 및 음식에 자유롭게 접근하게 하여, 환기가 되는 미세분리기 케이지에 동물들을 수용한다. 본 연구에서는 수컷 아키타 마우스 (인슐린2+/-) 및 그의 비-당뇨병 한배새끼 (인슐린2+/+, 야생형 (WT))를 사용한다.

마우스를 하기 4개 군으로 분리한다: PBS-처리 WT 마우스 (WT); 아펠린-처리 WT 마우스 (WT+Ap); PBS-처리 아키타 마우스 (AK); 및 아펠린-처리 아키타 마우스 (AK+Ap). 9주령에 실험을 개시하는데, 수컷 아키타 마우스는 4-7주령에 고혈당증을 나타내기 시작하기 때문이다. 이에 따라, 실험 개시시의 동물의 증상은 초기-단계 당뇨병 환자의 것과 유사하다. 1일 2회의 꼬리 정맥 주사를 통하여 아펠린 리포좀을 아키타 마우스에 투여한다. 아펠린 군에게는 상기 표 4에 제시된 배합에 따른 아펠린 리포좀들을 투여한다.

본 연구에서, 아펠린 리포좀 또는 PBS는 꼬리 기저부에서 가장 먼 단부 꼬리 정맥을 통하여 주사된다. 신장 및 혈청의 수확을 가능하게 하기 위하여, 동물은 클로랄 수화물 (IP, 500 mg kg-1)을 사용하여 19주에 차후 실혈에 의한 사망을 발생시키는 종말 마취를 받게 된다.

아펠린 리포좀을 사용한 처리는 하기 결과들 중 하나 이상을 발생시키게 될 것으로 생각된다: 당뇨병-유도 신장 기능장애 (예컨대 신장 중량, 신장 지수 (KI), 단백뇨, 알부민/글로불린 (A/G) 및 사구체 여과율 (GFR)) 및 신장 조직학 변화를 억제하는 것; HDAC를 상향조절하는 것에 의한 신장에서의 당뇨병-유도 히스톤 과도아세틸화 (예컨대 ac-H3K9, ac-H3K18 및 ac-H3K23)를 억제하는 것; 아키타 마우스에서 당뇨병-유도 신장 염증 (예컨대 MCP-1, ICAM-1 및 iNOS)을 억제하는 것. 또한, 아펠린 리포좀을 사용한 처리는 하기 결과들 중 하나 이상을 발생시키게 될 것으로 생각된다: 신장 비대를 억제하는 것; 사구체 비대를 억제하는 것; 알부민뇨를 감소시키는 것; 단핵구 침윤을 감소시키는 것; 신장 염증을 감소시키는 것 (예컨대 MCP1 및 VCAM1 양 감소); 및 항-산화제 카탈라제 수준을 복구하는 것.

실시예 6: 만성 신장 질환의 치료에 있어서의 아펠린 제제

7-주-령 수컷 C57Bl/6j 마우스 (체중 대략 20-22 g)를 입수한다. 동물들을 하기 4개 군 (n=5)으로 무작위 할당한다: (1) 모의 + 비히클, (2) UUO (편측 요관 폐쇄) + 비히클, (3) UUO + 아펠린 리포좀, 및 (4) 모의 + 아펠린 리포좀. UUO는 확립되어 있는 프로토콜 (문헌 [Jones 2009])을 사용하여 수행한다.

간단하게 말하자면, 나트륨 펜토바르비탈 (50 mg/kg 체중)을 사용하여 마우스를 마취하고, 좌측 요관을 이중 결찰한다. 모의-수술 마우스는 그의 요관이 노출되기는 하나 결찰되지 않게 된다. 수술일로부터 시작하여, 마우스에게 24시간마다 복막내 주사에 의해 아펠린 리포좀 또는 비히클 단독을 투여한다. 아펠린 군에게는 상기 표 4에서 제시된 배합에 따른 아펠린 리포좀들을 투여한다.

2주 후, 마우스를 사망시키고, 다양한 분석을 위하여 그의 신장 조직을 분리한다. 아펠린 리포좀을 사용한 처리는 하기 결과들 중 하나 이상을 발생시키게 될 것으로 생각된다: 신장 간질 섬유증을 개선하는 것 (매슨 트리크롬에서 섬유증 영역을 감소시킴, 피브로넥틴 및 콜라겐 I 침착을 감소시킴); 상피-중간엽 전이 (EMT) 마커들의 발현을 억제하는 것 (라미닌을 유지함, 상피 E-카데린을 보존함, 및 α-SMA (윤활근 액틴) 발현을 억제함); TGF-β1 및 SMAD2 경로를 억제하는 것 (TGF-β 및 TGF-β 수용체 수준 및 p-SMAD2 수준을 감소시킴).

실시예 7: 급성 신장 질환의 치료에 있어서의 아펠린 제제

동물들 및 신장 허혈/재관류 (I/R) 모델 수컷 위스타(Wistar) 래트를 입수하고, 물 및 음식에 자유롭게 접근하게 하여, 환기가 되는 미세분리기 케이지에 수용한다. 체중 180±20 g의 래트들이 사용되며, 하기 군들 중 하나로 할당된다: 비히클 투여를 동반하는 비손상 래트들의 CT 군; 비히클 투여를 동반하는, I/R 손상을 겪은 래트들의 I/R 군; 아펠린 리포좀을 사용하는, I/R 손상을 겪은 래트들의 I/R+Ap 군. 아펠린 군에게는 상기 표 4에서 제시된 배합에 따른 아펠린 리포좀들을 투여한다.

I/R 손상은 이전에 기술된 바와 같이 (문헌 [Supavekin 2003]) 수행된다. 간단하게 말하자면, 래트를 마취한 후, 중심선 복부 절개를 적용하고, 그의 좌측 신경(renal pedicle)을 30분 동안 클램프에 의해 무디게 클램핑한다 (편측 신장 폐색). 클램프를 제거한 후, 상처를 봉합하고, 동물들을 3일 동안 회복시킨 후, 희생시킨다. 대조 동물은 모의 수술된 것이다.

아펠린 리포좀을 사용한 처리는 하기 결과들 중 하나 이상을 발생시키게 될 것으로 생각된다: 신장 I/R 손상 유도 형태구조 및 기능 변화 (HE 염색에서의 형태구조 변화; 신장 기능장애에는 소변 부피 증가, 단백뇨 및 크레아티닌 방출이 포함됨)로부터 보호하는 것; 신장에서 I/R 손상 유도 염증 및 세포자멸사를 억제하는 것 (염증 마커 MCP-1 및 ICAM-1를 감소시킴, 세포자멸사 마커 카스파제-3 및 카스파제-8을 감소시킴); 신장에서 히스톤 고도메틸화를 억제하는 것 (H3K4me2 및 H3K79me1을 감소시킴); 및 Tgf-β1의 I/R 유도 상향-조절을 억제하는 것 (Tgf-β1 수준을 감소시킴).

실시예 8: 발기 기능장애 (ED)의 치료에 있어서의 아펠린 제제

본 연구에서는 수컷 C57BL/6J 마우스가 사용될 것이다. 해면체 조직에서의 아펠린 및 APJ의 차등적인 유전자 발현을 조사하기 위하여, 2종의 서로 다른 혈관생성 ED 모델이 사용될 수 있다. 한 가지 모델은 내부 엉덩 동맥의 양측 폐색에 의해 유도되는 급성 해면 허혈 모델이다. 다른 모델은 각각 고-콜레스테롤 음식을 섭취하는 것, 또는 STZ의 복막내 주사에 의해 고콜레스테롤혈증 또는 당뇨병 중 어느 하나가 유도되는 만성 혈관생성 ED 모델이다.

급성 해면 허혈 모델의 경우, 케타민 (100 mg/kg) 및 크실라진 (5 mg/kg)을 사용하여 근육내로 12-주-령의 C57BL/6J 마우스를 마취하고, 체온조절 수술 테이블상에 바로 눕혀 위치시킨다. 저부 중심선 복부 절개를 수행한 후, 내부 엉덩 동맥을 클램핑하고, 온 엉덩 동맥의 분기점에서 약간 멀게 양측으로 결찰한다.

만성 혈관생성 ED 모델의 경우, 8-주령 C57BL/6J 마우스에게 3개월 동안 4 % 콜레스테롤 및 1 % 콜산을 함유하는 음식을 섭취시키거나, 또는 이전에 기술된 바와 같이 (예컨대 문헌 [Jin 2009]; [Ryu 2009] 참조) 연속 5일 동안 다수의 저투여량 STZ (0.1 M 시트레이트 완충제 pH 4.5 중 50 mg/kg체중) 복막내 주사를 투여하는 것 중 어느 하나이다.

고-콜레스테롤 음식 개시 3개월 후, 시중에서 구입가능한 키트 (예컨대 뵈링거 만하임(Boehringer Mannheim) GmBH 사, 독일 만하임 소재) 및 자동 분석기 (예컨대 히타치(HITACHI) 7600, 히타치 코키(Hitachi Koki) Co. 사, 일본 히타치나카 소재)를 사용하여 혈청 총 콜레스테롤 수준을 측정한다. 복막내 STZ 주사 전 및 2개월 후, 표준 혈당 측정기 (예컨대 아쿠-체크(Accu-check), 로체 다이아그노스틱스(Roche Diagnostics) 사, 독일 만하임 소재)를 사용하여 공복 및 식후 혈당 수준을 측정한다. 준정량 RT-PCR을 사용하여 각 혈관생성 ED 모델 (내부 엉덩 동맥의 양측 폐색 0, 1, 3, 6, 12, 24 및 72시간 후; 고-콜레스테롤 음식 개시 3개월 후; 및 복막내 STZ 주사 2개월 후) 및 연령-일치 대조의 해면체 조직에서 아펠린 및 APJ의 메신저 RNA (mRNA) 수준을 측정한다.

고콜레스테롤혈증 ED의 마우스 모델에서 발기 기능을 복구하는 데에 있어서의 아펠린 단백질의 효과성 역시 측정될 것이다. 고-콜레스테롤 음식 개시 3개월 후, 아펠린으로 처리된 고콜레스테롤혈증 마우스에서 최고 발기 기능 회복을 나타내는 투여량을 기준으로, 아펠린 리포좀의 단일 해면내 주사 1일 후의 발기 기능의 회복을 위한 최적 아펠린 투여량이 결정될 것이다.

이와 같은 최초 연구를 바탕으로, 동물들은 하기 3개 군으로 분할될 것이다: 군 1, 연령-일치 대조; 군 2, PBS (20 mL)의 단일 해면내 주사를 투여받는 고콜레스테롤혈증 마우스; 및 군 3, 아펠린 리포좀의 단일 해면내 주사를 투여받는 고콜레스테롤혈증 마우스. 아펠린 군들에게는 상기 표 4에서 제시된 배합에 따른 아펠린 리포좀들을 투여한다.

처리 1일 후의 해면 신경의 전기 자극에 의한 발기 기능 (군 당 N=6) 및 음경이 측정될 것이며, 이후 조직학적 조사를 위하여 시편이 수확될 것이다. 별도 동물 군으로부터의 해면 시편들은 웨스턴 블럿 분석 (군 당 N = 4)에 사용될 것이다.

아펠린 리포좀을 사용한 처리는 하기 결과들 중 하나 이상을 발생시키게 될 것으로 생각된다: PBS (또는 다른 대조)를 투여받은 고콜레스테롤혈증 마우스에서의 것과 비교하였을 때 아펠린 리포좀을 투여받은 고콜레스테롤혈증 마우스에서 해면 신경 자극에 대한 발기 반응이 상당히 증가하는 것; 수퍼옥시드 음이온과 같은 반응성 산소 종 (ROS)의 생성을 감소시킴으로써, 해면 eNOS 인산화를 증가시키고 해면 내피 세포 세포자멸사를 감소시키는 것.

실시예 9: 아펠린 제제

하기의 프로토콜을 사용하여 아펠린 리포좀들을 형성시켰다. 리포좀 성분들은 하기 표 5에 개괄하였다.

간단하게 말하자면, DSPC (450 mg) 및 DPPC (450 mg)를 에탄올 (최소량)에 용해시키고, 완전히 용해될 때까지 초음파처리하였다. PEG 8000 (300 mg) 및 폴록사머 188 (150 mg)을 메탄올에 투입하고, 완전히 용해될 때까지 초음파처리하였다. 상기 두 가지 용액을 하나의 바이알에서 혼합하였다. 다음에, 질소를 폭기하여 용매를 제거하였다. 최종 고체를 진공에서 3시간 동안 건조하였다. 지질 필름을 시트르산 (300 mmol) 용액에 용해시켰다. 필름을 15분 동안 현탁하고, 0.2 nm 크기의 폴리카르보네이트를 사용하여 여과하였다. 혼합물을 투석에 의해 증류수와 교환한 다음, 동결건조하였다. 다음에, 아펠린 (180 mg)을 증류수에 용해시키고, 지질 필름에 첨가한 후, 약 30분 내지 1시간 동안 천천히 혼합하면서 추가적인 물을 첨가하였다. 이어서 다음에, 리포좀을 37 ℃에서 90분 동안 인큐베이션한 다음, 동결건조하였다.

기술의 실시양태에 대한 상기 상세한 설명은 완전한 것이거나, 또는 상기에서 개시된 정확한 형태로 기술을 제한하는 것을 의도하지 않는다. 예시 목적으로 상기에서 기술의 구체적인 실시양태 및 예가 기술되기는 하였지만, 관련 기술분야 통상의 기술자라면 알고 있을 바와 같이, 기술의 영역 내에서 다양한 등가의 변형들이 가능하다. 본원에서 기술된 다양한 실시양태들은 추가적인 실시양태를 제공하기 위하여 조합될 수도 있다.

전기에서, 예시 목적으로 기술의 구체적인 실시양태들이 본원에서 기술되기는 하였지만, 불필요하게도 기술 실시양태의 설명을 불명료하게 하는 것을 회피하기 위하여, 잘-알려져 있는 구조 및 기능들은 상세하게 나타내거나 기술되지 않았다는 것을 알고 있을 것이다. 문맥상 허용되는 경우, 단수 또는 복수의 용어는 각각 복수 또는 단수의 용어를 포함할 수도 있다.

구체적인 실시양태들이 본원에서 예시 목적으로 기술되었다는 것, 그러나 기술에서 벗어나지 않고도 다양한 변형들이 이루어질 수 있다는 것 또한 알고 있을 것이다. 또한, 기술의 소정 실시양태와 연관되어 있는 장점들이 그 실시양태의 맥락에서 기술되기는 하였지만, 다른 실시양태가 그와 같은 장점을 나타낼 수도 있으며, 기술의 영역에 속하기 위하여 모든 실시양태가 반드시 그와 같은 장점을 나타낼 필요는 없다. 따라서, 개시내용 및 관련 기술은 본원에서 명백하게 나타내거나 기술되지 않은 다른 실시양태를 포괄할 수 있다.

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Claims

소정량의 적어도 1종의 폴록사머, 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (DSPC), 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (DPPC) 및 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함하는 리포좀 내에 적어도 부분적으로 캡슐화되어 있는 유효량의 치료제를 포함하는 조성물.
제1항에 있어서, 치료제가 아펠린 펩티드인 조성물.
제1항에 있어서, 적어도 1종의 폴록사머가 폴록사머 124, 폴록사머 181, 폴록사머 184, 폴록사머 188, 폴록사머 331 및 폴록사머 407, 또는 이들의 임의의 조합인 조성물.
제1항에 있어서, PEG가 약 200 내지 약 20000 달톤의 평균 분자량을 가지는 것 (PEG 200 내지 PEG 20000)인 조성물.
제4항에 있어서, PEG가 약 8000 달톤의 평균 분자량을 가지는 것 (PEG 8000)인 조성물.
제2항에 있어서, 아펠린 펩티드가 약 15 중량% 내지 약 60 중량%를 구성하는 조성물.
제1항에 있어서, 폴록사머가 약 1 중량% 내지 약 20 중량%를 구성하는 조성물.
제1항에 있어서, DSPC가 약 5 중량% 내지 약 30 중량%를 구성하는 조성물.
제1항에 있어서, DPPC가 약 5 중량% 내지 약 30 중량%를 구성하는 조성물.
제1항에 있어서, PEG가 약 10 중량% 내지 약 20 중량%를 구성하는 조성물.
제1항에 있어서, 콜레스테롤을 추가로 포함하는 조성물.
제11항에 있어서, 콜레스테롤이 약 1 중량% 내지 약 10 중량%를 구성하는 조성물.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제를 추가로 포함하는 조성물.
제13항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제에 가용성인 조성물.
제1항에 있어서, 적어도 1종의 추가적인 치료제를 추가로 포함하는 조성물.
제15항에 있어서, 적어도 1종의 추가적인 치료제가 안지오텐신-전환 효소 (ACE) 억제제, 릴랙신, 나트륨이뇨 펩티드, 그렐린 또는 다른 생체활성 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
약 25 중량%의 아펠린 펩티드, 약 17 중량%의 폴록사머 188, 약 25 중량%의 DSPC, 약 25 중량%의 DPPC 및 약 8 중량%의 PEG 8000을 포함하는 조성물.
약 45 중량%의 아펠린 펩티드, 약 15 중량%의 폴록사머 188, 약 10 중량%의 DSPC, 약 10 중량%의 DPPC, 약 15 중량%의 PEG 8000 및 약 5 중량%의 콜레스테롤을 포함하는 조성물.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 치료 유효량을 심혈관-관련 질환의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 심혈관-관련 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
제19항에 있어서, 심혈관-관련 질환이 폐고혈압, 심부전, 심근경색, 당뇨병성 신장병증, 만성 신장 질환, 급성 신장 질환, 발기 기능장애, 당뇨병 또는 대사-관련 장애인 방법.
제19항에 있어서, 조성물이 정맥내로, 피하로, 경구로, 또는 흡입을 통하여 투여되는 것인 방법.
DSPC 및 DPPC를 에탄올에 용해시키고, 용해물이 제1 조성물을 형성할 때까지 초음파처리하는 것;
PEG 및 폴록사머를 메탄올에 용해시키고, 용해물이 제2 조성물을 형성할 때까지 초음파처리하는 것;
제1 조성물 및 제2 조성물로부터 지질 필름을 형성시키는 것; 및
치료제를 지질 필름과 혼합하여 리포좀을 형성시키는 것
을 포함하는, 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 제조 방법.
제22항에 있어서, 리포좀이 동결건조되는 것인 방법.
제1항에 따른 조성물, 및 심혈관-관련 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 위한 지침을 포함하는 키트.