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KR20190038106A - Composition comprising fermented tea extract for Enhancing Skin Barrier - Google Patents

Composition comprising fermented tea extract for Enhancing Skin Barrier Download PDF

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KR20190038106A
KR20190038106A KR1020170128159A KR20170128159A KR20190038106A KR 20190038106 A KR20190038106 A KR 20190038106A KR 1020170128159 A KR1020170128159 A KR 1020170128159A KR 20170128159 A KR20170128159 A KR 20170128159A KR 20190038106 A KR20190038106 A KR 20190038106A
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fermented tea
skin barrier
tea extract
skin
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이태룡
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(주)아모레퍼시픽
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Abstract

Disclosed in the present specification is a composition comprising a fermented tea extract as an active ingredient for strengthening a skin barrier, wherein the expression of at least one selected from the group consisting of S100A7 (NM_002963), IL-36G (NM_019618) and LCE3D (NM_032563), which are genes in skin cells, having expression levels affected by stimuli that weaken the skin barrier, is regulated to a normal level. By using the composition for strengthening the skin barrier, gene expression changed by the stimuli that weaken the skin barrier can return to a normal level to reduce skin cell damage.

Description

발효차 추출물을 포함하는 피부장벽 강화용 조성물{Composition comprising fermented tea extract for Enhancing Skin Barrier}[0001] The present invention relates to a composition for enhancing skin barrier comprising a fermented tea extract,

본 명세서에는 피부장벽 강화용 조성물이 개시된다. 보다 상세하게, 정상 상태의 피부 세포와 비교하여 피부장벽의 약화에 의해 발현 정도가 변화되는 피부 세포 유전자인 바이오마커 등을 유의미하게 변화시켜서 피부장벽을 강화시키는, 발효차 추출물을 포함하는 조성물이 개시된다.Disclosed herein are compositions for enhancing skin barrier. More specifically, a composition comprising a fermented tea extract that strengthens a skin barrier by significantly changing a biomarker such as a skin cell gene whose expression level is changed by attenuation of a skin barrier as compared with a normal skin cell is disclosed do.

피부의 구성층 중 표피는 인체 내부의 수분 증발을 방지하는 중요한 역할을 한다. 표피는 외부로부터 순서대로 각질층, 과립층, 유극층, 기저층으로 구분되며, 각질층의 세포들은 벽돌과 같은 역할을 하고 각질세포 사이의 세포간 지질들은 모르타르와 같은 역할로 작용하여 피부 장벽을 구성한다. 또한, 건강한 사람의 각질세포에는 고농도의 자연보습인자(Natural Moisturing Factor, NMF)가 존재하여 피부의 수분 보유를 돕는데, 예를 들면 아미노산과 같은 물질은 수용성이기 때문에 효과적으로 수분과 결합하여 피부에서 수분이 건조되는 것을 억제한다.Among the constitutive layers of the skin, the epidermis plays an important role in preventing water evaporation inside the human body. The epidermis is divided into stratum corneum, granular layer, superficial layer, and basal layer in order from the outside. Cells of stratum corneum act like bricks, and interstitial lipids between keratinocytes act like mortar to form skin barrier. In addition, a healthy human keratinocyte has a high concentration of natural moisturizing factor (NMF) to help maintain moisture in the skin. For example, substances such as amino acids are water-soluble, Thereby suppressing drying.

그러나, 요즘과 같이 환경의 변화나 생활 패턴의 변화에 따른 냉/난방의 인위적인 온도 조절, 사회 생활에서 발생되는 각종 스트레스와 환경 오염으로 인한 피부 스트레스, 화장 습관에 따른 잦은 세안 및 연령 증가에 따른 자연적인 피부 노화 등의 여러 가지 원인으로 인하여 각질층의 수분이 감소하여 피부가 건조해지고 표면이 거칠게 되며 피부가 푸석거리고 촉촉함을 잃어 생기가 없어 보이는 등의 현상이 발생하기 때문에 피부 보습제의 필요가 증가하고 있다. 또한 외부로부터 받는 과도한 물리적, 화학적 자극, 자외선, 스트레스 및 영양결핍 등은 피부의 정상기능을 저하시키고 탄력손실, 각질화, 주름생성 등의 현상을 촉진시키게 되는데, 특히 자외선에 의해 표피 진피 경계부는 심하게 손상을 받는다. 또한, 외부로부터 받는 과도한 물리적, 화학적 자극, 자외선 및 스트레스 등은 피부의 정상기능을 저하시키고 탄력손실, 각질화, 주름생성 등의 피부노화현상을 촉진시키게 되는데, 특히 자외선에 의해 표피 진피 경계부는 심하게 손상을 받는다.However, as it is nowadays, there is a tendency to adjust the temperature of the air / heating due to the change of environment or life pattern, the stress caused by various stresses and environmental pollution in the social life, frequent washing according to make- Due to various causes such as aging of the skin, the skin becomes dry, the surface becomes rough, the skin becomes loose, the moisture is lost, and the appearance of the skin does not appear, and thus the need for a skin moisturizer increases . Excessive physical and chemical stimuli, ultraviolet rays, stress and nutrient deficiency, which are externally received, can lower the normal functions of the skin and promote elasticity loss, keratinization and wrinkle formation. Especially, . Excessive physical, chemical stimuli, ultraviolet rays, and stress from the outside of the skin lower the normal functions of the skin and promote skin aging phenomenon such as loss of elasticity, keratinization, and wrinkle formation. Especially, .

IL-36G는 피부장벽 약화로 인하여 발생하는 건선 등에 있어서의 유용한 바이오마커라는 것이 알려져 있다(비특허문헌 1 참조). 또한, S100A7은 피부장벽 기능의 장애로 인한 아토피 피부염 및 건선과 관련된 지표임이 알려져 있다(비특허문헌 2 참조). 또한, LCE3D 또한 건선 리스크 유전자와 관련된 지표임이 알려져 있다(비특허문헌 3 참조). 상기 문헌들은 그 전체가 참조로 본 명세서의 일부로서 통합된다.It is known that IL-36G is a useful biomarker in psoriasis caused by skin barrier weakness (see Non-Patent Document 1). It is also known that S100A7 is an index related to atopic dermatitis and psoriasis due to impairment of skin barrier function (see Non-Patent Document 2). It is also known that LCE3D is an index related to the psoriasis risk gene (see Non-Patent Document 3). Which are incorporated herein by reference in their entirety.

AM D'Erme et al, "IL-36c (IL-1F9) Is a Biomarker for Psoriasis Skin Lesions", Journal of Investigative Dermatology, Volume 135, 2015.AM D'Erme, " IL-36c (IL-lF9) Is a Biomarker for Psoriasis Skin Lesions ", Journal of Investigative Dermatology, Volume 135, 2015. Son et al, "S100A7 (psoriasin) inhibits human epidermal differentiation by enhanced IL-6 secretion through IjB/NF-jB signalling", Experimental Dermatology, John Wiley & Sons A/S, 2016.Son et al, " S100A7 (psoriasin) inhibits human epidermal differentiation by enhanced IL-6 secretion through IJB / NF-JB signaling ", Experimental Dermatology, John Wiley & Sons A / S, Bergboer et al, "Psoriasis Risk Genes of the Late Cornified Envelope-3 Group Are Distinctly Expressed Compared with Genes of Other LCE Groups", The American Journal of Pathology, Vol. 178, No. 4, April 2011.Bergboer et al, " Psoriasis Risk Genes of the Late Corned Envelope-3 Group Are Distinctly Expressed Compared with Genes of Other LCE Groups ", The American Journal of Pathology, Vol. 178, No. 4, April 2011.

이에 본 발명자는 피부장벽 약화를 일으키는 자극원이 피부에 유해한 영향을 미치며, 이러한 영향에 의하여 피부 세포 유전자의 발현에 영향을 미침으로써 피부장벽 약화를 일으키는 자극원 등과 같은 증상이 나타나게 된다는 것을 발견하다.Thus, the present inventors have found that a stimulus source that causes skin barrier weakness has a detrimental effect on the skin, and by such influence, affects the expression of a skin cell gene, thereby causing symptoms such as a stimulus source that causes skin barrier weakness.

따라서, 일 측면에서 본 발명은 피부장벽 강화용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.Therefore, in one aspect, the present invention aims to provide a composition for skin barrier enhancement.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 일 측면에서, 본 발명은 발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물로서, 피부장벽 약화를 일으키는 자극원에 의해 발현량이 영향을 받는 피부 세포 내 유전자인 S100A7(NM_002963), IL-36G(NM_019618) 및 LCE3D(NM_032563)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 발현량을 정상 수준으로 조절하는 피부장벽 강화용 조성물을 제공한다.In order to attain the above object, in one aspect, the present invention provides a composition comprising an extract of fermented tea as an active ingredient, wherein S100A7 (NM_002963), a gene in a skin cell to which an expression amount is influenced by a stimulus source causing skin barrier weakness, , IL-36G (NM_019618), and LCE3D (NM_032563) to a normal level.

일 측면에서, 본 발명에 의해 제공되는 피부장벽 강화용 조성물을 이용함으로써, 피부장벽 약화를 일으키는 자극원에 의해 변화되는 유전자 발현량을 정상 수준으로 되돌려 피부 세포의 손상을 저하시킬 수 있다.In one aspect, by using the composition for skin barrier enhancement provided by the present invention, it is possible to reduce the damage of skin cells by returning the amount of gene expression, which is changed by a stimulus source causing skin barrier weakness, to a normal level.

도 1은 자극원 처리에 의한 세포생존율을 나타낸 것이며, 여기에서 ADSP는 아시아 먼지 바람 입자(Asian dust storm particle)로서 황사를 나타내고, PM10(Particulate matter 10)은 입자크기가 10㎛인 미세먼지를 나타내며, PM2.5(Particulate matter 2.5)는 입자크기가 2.5㎛인 미세먼지를 나타낸다.
도 2a는 피부장벽 약화를 일으키는 자극이 가해진 피부 세포 내에서 IL-36G 유전자의 mRNA 발현량이 증가하였고, 발효차의 처리에 의해 정상 수준으로 되돌아감을 나타낸 것이다.
도 2b는 피부장벽 약화를 일으키는 자극이 가해진 피부 세포 내에서 LCE3D 유전자의 mRNA 발현량이 증가하였고, 발효차의 처리에 의해 정상 수준으로 되돌아감을 나타낸 것이다.
도 2c는 피부장벽 약화를 일으키는 자극이 가해진 피부 세포 내에서 S100A7 유전자의 mRNA 발현량이 증가하였고, 발효차의 처리에 의해 정상 수준으로 되돌아감을 나타낸 것이다.
도 3은 액체 크로마토그래피-질량 분석(High Resolution LC-MS)을 통하여 발효차 성분을 분석한 결과로서, 각각 원료 TIC, 원료 내 퀴닉 에씨드, 퀴닉 에씨드 표준품의 크로마토그램이다.
1 shows the cell survival rate by stimulus treatment, wherein ADSP represents Asian dust-storm particles, and PM10 (Particulate matter 10) represents fine dust particles having a particle size of 10 μm And PM 2.5 (Particulate matter 2.5) represent fine dust particles having a particle size of 2.5 μm.
FIG. 2A shows that mRNA expression of IL-36G gene was increased in skin cells stimulated with skin barrier weakness and returned to a normal level by treatment with fermentation tea.
FIG. 2B shows an increase in the mRNA expression level of the LCE3D gene in the skin cells to which the stimulus causing the weakening of the skin barrier was applied, and returned to the normal level by the treatment of the fermentation tea.
FIG. 2C shows that the mRNA expression level of the S100A7 gene was increased in the skin cells stimulated to cause skin barrier weakness, and returned to the normal level by the fermentation tea treatment.
FIG. 3 is a chromatogram of the raw material TIC, the crude chicic acid seeds, and the crude chicic acid standard product as a result of analyzing the fermented tea components through liquid chromatography-mass spectrometry (High Resolution LC-MS).

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명의 일 측면에서, 상기 피부장벽 강화용 조성물은 발효차 추출물을 유효성분으로 포함할 수 있다.In one aspect of the present invention, the skin barrier enhancer composition may include a fermented tea extract as an active ingredient.

본 명세서에서 사용되는 "발효차"라 함은, 발효된 상태의 차(tea)를 의미하는 것으로, 구체적으로 후발효차(post-fermented tea)를 의미한다. As used herein, the term " fermented tea " means a fermented tea, and specifically means a post-fermented tea.

본 명세서에서 사용되는 “후발효차”는 적정한 수분과 온도 등의 조건 하에서 미생물을 이용하여 발효 및 숙성시킨 차를 의미한다.As used herein, the term " post fermentation tea " means a tea fermented and aged using microorganisms under appropriate moisture and temperature conditions.

일 측면에서, 본 명세서에서 사용되는 후발효차는 후발효차 자체의 분쇄물, 또는 후발효차의 건조 분쇄물로서 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In one aspect, the post-fermentation tea used herein may be included as a pulverized product of the post-fermentation tea itself, or as a dry pulverized product of a post-fermentation tea, but is not limited thereto.

본 발명의 일 측면에서, 상기 발효차는 퀴닉 에씨드(quinic acid)을 포함할 수 있다.In one aspect of the present invention, the fermentation car may contain quinic acid.

본 발명의 일 실시예에 따른 피부장벽 강화용 조성물에서, 상기 차는 녹차일 수 있다. 본 발명의 또 다른 일 측면에서, 상기 차는 녹차를 발효시킨 차일 수 있다.In the composition for skin barrier strengthening according to an embodiment of the present invention, the tea may be green tea. In another aspect of the present invention, the tea may be a tea fermented with green tea.

일 측면에서, 상기 발효차는 발효 및 숙성된 것일 수 있다.In one aspect, the fermentation tea may be fermented and aged.

일 측면에서, 상기 발효차는 상기 발효차는 내부 효소가 불활성화된 차 잎을 자연 발효시킨 것일 수 있다.In one aspect, the fermentation tea may be a fermentation tea obtained by naturally fermenting a tea leaf in which an internal enzyme is inactivated.

본 발명의 일 측면에서, 상기 발효차는 특정 추출용매로 추출되어 발효차 추출물을 형성할 수 있다.In one aspect of the present invention, the fermented tea may be extracted with a specific extraction solvent to form a fermented tea extract.

본 발명의 일 측면인, 상기 발효차 추출물은 발효차를 물 또는 유기용매로 추출하여 제조될 수 있다. 구체적으로, 발효차를 물, C1 -C6의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 부틸렌글리콜, 에틸아세테이트, 디에틸아세테이트, 디에틸에테르, 벤젠, 클로로포름 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출용매로 추출하여 제조될 수 있다. In one aspect of the present invention, the fermented tea extract may be prepared by extracting a fermented tea with water or an organic solvent. Concretely, the fermentation tea is mixed with water, at least one selected from the group consisting of C 1 -C 6 anhydrous or lower alcohol, acetone, butylene glycol, ethyl acetate, diethyl acetate, diethyl ether, benzene, chloroform and hexane And extracting it with an extraction solvent.

일 측면에서, 상기 발효차 추출물은 상온 추출된 것일 수 있다.In one aspect, the fermented tea extract may be extracted at room temperature.

일 측면에서, 상기 발효차 추출물은 상기 추출용매로 추출된 이후에, 여과, 농축, 분리 또는 건조 과정 중 하나 이상을 추가적으로 거쳐서 얻어진 것일 수 있다. 특히, 상기 발효차 추출물은 1회 이상의 여과 과정을 거친 것일 수 있으며, 일 실시예에서 2회의 여과 과정을 거친다.In one aspect, the fermented tea extract may be obtained by extracting with the extraction solvent, followed by addition of one or more of filtration, concentration, separation or drying. In particular, the fermented tea extract may be subjected to one or more filtration processes, and in one embodiment, it is subjected to two filtration processes.

일 실시예에서 상기 분리 과정은 원심분리 과정을 포함할 수 있다.In one embodiment, the separation process may include a centrifugation process.

구체적으로, 상기 추출은 물, C1 - C6의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤 및 부틸렌글리콜을 포함하는 극성 용매 및 에틸아세테이트, 디에틸아세테이트, 디에틸에테르, 벤젠, 클로로포름 및 헥산을 포함하는 저극성 용매 중 어느 하나 이상을 용매로 사용하는 것일 수 있다. Specifically, the extraction can be carried out in the presence of water, a C 1 -C 6 anhydrous or a lower alcohol, a polar solvent comprising acetone and butylene glycol, and a polar solvent including ethyl acetate, diethyl acetate, diethyl ether, benzene, chloroform and hexane And a low polarity solvent may be used as a solvent.

더 구체적으로, 상기 용매는 50 - 90%의 에탄올 수용액일 수 있으며, 60 - 80% 또는 65 - 75%의 에탄올 수용액일 수 있다. 상기 용매가 50 - 90%의 에탄올 수용액인 경우, 발효차에서 유효성분을 효과적으로 추출할 수 있다. 일 실시예에서, 상기 용매는 약 70%의 에탄올 수용액일 수 있다.More specifically, the solvent may be 50-90% ethanol aqueous solution, and may be 60-80% ethanol or 65-75% ethanol aqueous solution. When the solvent is 50-90% aqueous ethanol solution, the active ingredient can be effectively extracted from the fermented tea. In one embodiment, the solvent may be about 70% aqueous ethanol solution.

일 측면에서, 상기 추출물은 추출 후 냉각 콘덴서가 달린 증류 장치에서 적정 온도로 감압 농축될 수 있다.In one aspect, the extract may be concentrated under reduced pressure to an appropriate temperature in a distillation apparatus equipped with a cooling condenser after extraction.

다만, 본 발명에 따른 발효차 추출물은 당해 기술 분야의 통상적인 방법으로 추출하여 얻을 수 있으며, 전술한 방법에 의하여 한정되는 것은 아니다.However, the fermented tea extract according to the present invention can be extracted by a conventional method in the art, and is not limited by the above-mentioned method.

본 발명의 일 관점인, 조성물에 있어서, 상기 조성물은 발효차 추출물을, 조성물 총 중량을 기준으로 0.000001 내지 30중량%로 포함할 수 있다. 그 함량이 0.000001 내지 30중량%인 경우, 발효차 추출물에 의한 피부장벽 강화 효과가 우수하였다.In one aspect of the present invention, the composition may comprise from 0.000001 to 30% by weight of fermented tea extract, based on the total weight of the composition. When the content is 0.000001 to 30% by weight, the skin barrier enhancement effect by the fermented tea extract is excellent.

구체적으로, 0.0000001 중량% 이상, 0.0000005 중량% 이상, 0.0000007 중량% 이상, 0.0000009 중량% 이상, 0.000001 중량% 이상, 0.000002 중량% 이상, 0.000004 중량% 이상, 0.000006 중량% 이상, 0.000008 중량% 이상, 0.00001 중량% 이상, 0.00003 중량% 이상, 0.00005 중량% 이상, 0.00007 중량% 이상, 0.00009 중량% 이상, 0.0001 중량% 이상, 0.0003 중량% 이상, 0.0005 중량% 이상, 0.0007 중량% 이상, 0.0009 중량% 이상, 0.001 중량% 이상, 0.01 중량% 이상, 0.1 중량% 이상, 1 중량% 이상, 3 중량% 이상, 5 중량% 이상, 7 중량% 이상, 9 중량% 이상, 10 중량% 이상, 13 중량% 이상, 15 중량% 이상, 17 중량% 이상, 19 중량% 이상, 21 중량% 이상, 23 중량% 이상, 25 중량% 이상, 27 중량% 이상, 29 중량% 이상, 30 중량% 이상, 31 중량% 이상일 수 있고, 32 중량% 이하, 31 중량% 이하, 30 중량% 이하, 29 중량% 이하, 28 중량% 이하, 26 중량% 이하, 24 중량% 이하, 22 중량% 이하, 20 중량% 이하, 18 중량% 이하, 16 중량% 이하, 14 중량% 이하, 12 중량% 이하, 10 중량% 이하, 9 중량% 이하, 8 중량% 이하, 6 중량% 이하, 4 중량% 이하, 2 중량% 이하, 1 중량% 이하, 0.1 중량% 이하, 0.09 중량% 이하, 0.04 중량% 이하, 0.01 중량% 이하, 0.006 중량% 이하, 0.001 중량% 이하, 0.0009 중량% 이하, 0.0007 중량% 이하, 0.00005 중량% 이하, 0.00003 중량% 이하, 0.00001 중량% 이하, 0.000009 중량% 이하, 0.000007 중량% 이하, 0.000005 중량% 이하, 0.000003 중량% 이하, 0.000001 중량% 이하, 0.0000009 중량% 이하, 0.0000007 중량% 이하, 0.0000005 중량% 이하, 0.0000003 중량% 이하, 0.0000002 중량% 이하, 0.0000001 중량% 이하, 0.00000009 중량% 이하일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.More specifically, 0.0000001 wt% or more, 0.0000005 wt% or more, 0.0000007 wt% or more, 0.0000009 wt% or more, 0.0000009 wt% or more, 0.000001 wt% or more, 0.000002 wt% or more, 0.000004 wt% or more, 0.000006 wt% or more, 0.000008 wt. At least 0.00003% by weight, at least 0.00005% by weight, at least 0.00007% by weight, at least 0.00009% by weight, at least 0.00009% by weight, at least 0.0001% by weight, at least 0.0003% by weight, at least 0.0005% by weight, at least 0.0007% by weight, % Or more, 0.01 wt% or more, 0.1 wt% or more, 1 wt% or more, 3 wt% or more, 5 wt% or more, 7 wt% or more, 9 wt% or more, 10 wt% or more, 13 wt% or more, Or more, 17 wt% or more, 19 wt% or more, 21 wt% or more, 23 wt% or more, 25 wt% or more, 27 wt% or more, 29 wt% or more, 30 wt% or more, 31 wt% 32 weight% or less, 31 weight% or less, 30 weight% or less, 29 weight% or less, 28 weight% or less, 26 weight% or less, 24 weight % Or less, 22 wt% or less, 20 wt% or less, 18 wt% or less, 16 wt% or less, 14 wt% or less, 12 wt% or less, 10 wt% or less, 9 wt% or less, 8 wt% % Or less, 4 wt% or less, 2 wt% or less, 1 wt% or less, 0.1 wt% or less, 0.09 wt% or less, 0.04 wt% or less, 0.01 wt% or less, 0.006 wt% or less, 0.001 wt% 0.000003 wt.% Or less, 0.00003 wt.% Or less, 0.00001 wt.% Or less, 0.00001 wt.% Or less, 0.000009 wt.% Or less, 0.000007 wt.% Or less, 0.000005 wt. %, 0.0000007 wt% or less, 0.0000005 wt% or less, 0.0000003 wt% or less, 0.0000002 wt% or less, 0.0000001 wt% or less, or 0.00000009 wt% or less.

본 발명의 다른 측면은, 본 발명의 조성물의 피부장벽 강화 용도를 포함한다.Another aspect of the invention includes the use of the composition of the present invention to enhance skin barrier.

일 측면에서, 본 발명은 피부장벽 약화를 일으키는 자극에 의해 손상된 피부 세포에서 특정 유전자의 발현량을 정상 수준으로 조절함으로써, 피부장벽을 강화시키는 조성물을 제공한다.In one aspect, the present invention provides a composition for enhancing skin barrier by regulating the expression level of a specific gene in skin cells damaged by a stimulus causing skin barrier weakness to a normal level.

일 측면에서, 상기 조성물은 각질형성세포(keratinocyte)에 적용될 수 있다.In one aspect, the composition can be applied to keratinocytes.

일 측면에서 구체적으로, 본 발명에서 피부장벽 약화를 일으키는 자극에 의해 발현량이 영향을 받는 피부 세포 내 유전자로는 S100A7(NM_002963), IL-36G(NM_019618) 및 LCE3D(NM_032563) 등을 포함한다. 상기 S100A7(NM_002963), IL-36G(NM_019618) 및 LCE3D(NM_032563)는 피부장벽 약화를 일으키는 자극에 의해 발현량이 증가하는 유전자이므로, 이들 유전자의 발현량을 억제하여 정상 수준으로 조절함으로써 피부장벽을 강화시킬 수 있다.Specifically, in the present invention, the genes in the skin cells to which the expression level is influenced by the stimuli that cause skin barrier weakness include S100A7 (NM_002963), IL-36G (NM_019618), and LCE3D (NM_032563). Since the expression levels of S100A7 (NM_002963), IL-36G (NM_019618) and LCE3D (NM_032563) are increased by stimulation that causes skin barrier weakness, the expression level of these genes is suppressed and regulated to a normal level .

일 측면에서, 본 발명에서 사용되는 피부장벽 약화를 일으키는 자극에 의해 발현량이 증가되는 유전자는 [표 1]에 제시되어 있다. 표에서 Name은 NCBI의 genebank accession ID를 의미하는 것이고, Gene Symbol은 공식 유전자 심볼을 의미하며, Gene title은 각 유전자의 이름을 의미한다. In one aspect, the genes whose expression levels are increased by the stimuli causing skin barrier weakness used in the present invention are shown in [Table 1]. In the table, Name means the genebank accession ID of NCBI, Gene Symbol means the official gene symbol, and Gene title means the name of each gene.

증가유전자Increase gene NameName Gene
Symbol
Gene
Symbol
Gene titleGene title
NM_002963NM_002963 S100A7S100A7 S100 calcium binding protein A7S100 calcium binding protein A7 NM_019618NM_019618 IL36GIL36G interleukin 36, gammainterleukin 36, gamma NM_032563NM_032563 LCE3DLCE3D late cornified envelope 3Dlate cornified envelope 3D

상기 유전자 또는 단백질의 발현량 분석은 마이크로어레이, PCR, NGS(Nest Generation Sequencing; 차세대 염기서열분석), 웨스턴 블럿, 노던 블럿, ELISA, 방사선 면역 분석, 방사 면역 확산법, 조직면역 염색, 면역침전 분석법 등 당업계에 공지된 다양한 분석 방법을 이용하여 분석될 수 있다.Analysis of the expression level of the gene or protein can be performed using a microarray, PCR, NGS (Nest Generation Sequencing), Western blot, northern blot, ELISA, radioimmunoassay, radioimmunoassay, tissue immuno staining, Can be analyzed using a variety of analytical methods known in the art.

본 발명의 일 관점인, 상기 조성물은, 화장료 조성물일 수 있고, 약학적 조성물일 수 있으며, 건강기능식품 조성물일 수 있다. In one aspect of the present invention, the composition may be a cosmetic composition, a pharmaceutical composition, or a health functional food composition.

상기 화장료 조성물은, 예컨대, 각종 크림, 로션 각종 크림, 로션, 스킨 등과 같은 화장품 류와 클렌징, 세안제, 비누, 미용액 등이 있다.Examples of the cosmetic composition include cosmetics such as various creams, lotion creams, lotions, skins, and the like, and cleansing, cleansing agents, soaps, and essences.

일 측면에서, 본 발명의 상기 발효차 추출물을 함유하는 조성물이 첨가된 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.In one aspect, the cosmetic composition to which the composition containing the fermented tea extract of the present invention is added may take the form of a solution, an emulsion, a viscous mixture or the like.

즉, 본 발명의 일 측면인 화장료는 그 제형에 있어서 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 에센스, 팩, 젤, 파우더, 메이크업 베이스, 파운데이션, 로션, 연고, 패취, 미용액, 클렌징폼, 클렌징크림, 클렌징워터, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 샴푸, 린스, 바디세정제, 비누, 염모제, 분무제 등과 같은 제형을 들 수 있다.That is, the cosmetic as one aspect of the present invention is not particularly limited in its formulation and may be, for example, an emulsion, cream, lotion, essence, pack, gel, powder, makeup base, foundation, Formulations such as foam, cleansing cream, cleansing water, body lotion, body cream, body oil, body essence, shampoo, rinse, body cleanser, soap, hair dye, spray and the like.

각 제형의 화장료 조성물에 있어서, 상기 발효차 추출물 이외에 다른 성분들은 기타 화장료의 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.In the cosmetic composition of each formulation, the components other than the fermented tea extract may be mixed and selected without difficulty by those skilled in the art depending on the formulations of the other cosmetic preparations or the intended use.

또한, 본 발명의 일 측면인 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함할 수 있다.The cosmetic composition according to one aspect of the present invention may further comprise a composition selected from the group consisting of water-soluble vitamins, oil-soluble vitamins, polymer peptides, polymeric polysaccharides, sphingolipids and seaweed extracts.

일 측면에서, 본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.In one aspect, the cosmetic composition of the present invention may contain, in addition to the above essential ingredients, other ingredients usually added to cosmetics, if necessary.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.Examples of the compounding ingredients that may be added include organic solvents such as a preservative component, a moisturizer, an emollient, a surfactant, an organic and inorganic pigment, an organic powder, an ultraviolet absorbent, a preservative, a bactericide, an antioxidant, a plant extract, a pH adjuster, A blood circulation accelerator, a cold agent, an antiperspirant agent, and purified water.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하다.The components to be added in addition to these components are not limited thereto, and any of the above components can be compounded within a range that does not impair the objects and effects of the present invention.

일 측면에서, 본 발명의 발효차 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 약학조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.In one aspect, the pharmaceutical compositions comprising the fermented tea extract of the present invention may further comprise suitable carriers, excipients and diluents conventionally used in the manufacture of pharmaceutical compositions.

그 제형으로는, 상기 발효차 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 정제, 캡슐, 산제 또는 시럽 등의 경구제, 또는 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제 등의 외용제 등을 비롯하여 약제학적 제제에 적합한 어떠한 형태로든 제형화하여 사용할 수 있다.The pharmaceutical composition containing the fermented tea extract may be formulated into tablets, capsules, powders or syrups, or external preparations such as ointments, gels, creams, patches or sprays according to a conventional method, And can be formulated and used in any form suitable for pharmaceutical preparations.

일반적으로 상기 약학적 조성물에 의해 투여되는 유효성분의 실제 투여량은 증상의 중증도, 선택된 투여 경로, 대상의 연령, 성별, 체중 및 건강상태 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 한다. 일반적으로 유효성분의 투여량은 0.0001mg/kg/일 내지 3000mg/kg/일, 예를 들어 10 mg/kg/일 내지 500mg/kg/일 일 수 있다.In general, it is to be understood that the actual dosage of the active ingredient administered by the pharmaceutical composition should be determined in light of various relevant factors such as the severity of the symptoms, the route of administration selected, the age, sex, weight and health status of the subject. In general, the dosage of the active ingredient may be from 0.0001 mg / kg / day to 3000 mg / kg / day, for example from 10 mg / kg / day to 500 mg / kg / day.

본 발명의 일 관점인 건강 기능식품 조성물에서, 건강식품은, 일상 식사에서 결핍되기 쉬운 영양소나 인체에 유용한 기능을 가진 원료나 성분(기능성원료)을 사용하여 제조한 것으로, 인체의 정상적인 기능을 유지하거나 생리기능 활성화를 통하여 건강을 유지하고 개선하는 식품을 의미할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 건강식품은 정제, 캡슐, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조, 가공될 수 있으나, 이에 한정되지 않으며 법률에 따라 어떤 형태로든지 제조, 가공될 수 있다.In the health functional food composition as one aspect of the present invention, the health food is produced by using a raw material or a component (functional raw material) having a function useful for a nutrient or a human body which is likely to be deficient in a daily meal, Or to maintain or improve health through the activation of physiological functions. However, the present invention is not limited thereto. The health food may be manufactured and processed in the form of tablets, capsules, powders, granules, liquids, and circles, but is not limited thereto and may be manufactured and processed in any form according to the law.

구체적으로, 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드 폴리사카라이드, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제 (타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.Specifically, the health beverage composition has no particular limitation on the other ingredients other than the above-mentioned compounds as essential ingredients in the indicated ratios, and may contain various flavors or natural carbohydrates as additional ingredients such as ordinary beverages. Examples of natural carbohydrates are conventional sugars such as monosaccharide polysaccharides, cyclodextrins and the like, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol. Natural flavors (tau martin, stevia extract (e.g., rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavors (saccharin, aspartame, etc.) can be used as flavorings other than those described above.

일반적으로 상기 건강 기능식품 조성물에 의해 투여되는 유효성분의 실제 투여량은 증상의 중증도, 선택된 투여 경로, 대상의 연령, 성별, 체중 및 건강상태 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 한다. 일반적으로 유효성분의 투여량은 0.0001mg/kg/일 내지 1000mg/kg/일, 예를 들어 0.02 mg/kg/일 내지 6mg/kg/일 일 수 있다.In general, it should be understood that the actual dosage of the active ingredient administered by the health functional food composition should be determined in light of various relevant factors such as the severity of the symptoms, the selected route of administration, the age, sex, weight and health status of the subject . In general, the dosage of the active ingredient may be from 0.0001 mg / kg / day to 1000 mg / kg / day, for example from 0.02 mg / kg / day to 6 mg / kg / day.

이하, 실시예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 하기 예에 의해 제한되는 것은 아니다.Hereinafter, the configuration and effects of the present invention will be described in more detail with reference to examples. However, these examples are provided for illustrative purposes only in order to facilitate understanding of the present invention, and the scope and scope of the present invention are not limited by the following examples.

[실시예 1] 발효차 제조[Example 1] Production of fermented tea

1-1 발효 단계1-1 Fermentation Stage

발효차는 건조된 녹차 잎을 두텁게 쌓아서 준비 하였으며, 녹차 잎의 수분함량이 30-50%가 될 수 있도록 고온 다습한 환경을 만들어 주어 자연 발효 시켰다. 준비된 녹차 잎은 45℃의 온도에서 6주간 발효하였다.The fermented tea was prepared by piled up dried green tea leaves. The fermented tea was naturally fermented by making a hot and humid environment so that the moisture content of green tea leaves could be 30-50%. The prepared green tea leaves were fermented at 45 ℃ for 6 weeks.

1-2 숙성 단계1-2 Ripening stage

1-1 발효 단계에서 발효된 발효차를 제주 옹기에 담아 50일간 숙성시켜서 발효차를 제조하였다.The fermented tea fermented in the fermentation stage was placed in Jejun Onggi and fermented for 50 days.

[실시예 2] 발효차의 성분 분석[Example 2] Analysis of components of fermented tea

써모 社(Thermo)의 액체 크로마토그래피-질량분석기(Q Exactive High Resolution LC-MS)를 통해 실시예 1에서 제조한 발효차 성분을 분석하였다. 도 3의 크로마토그램에서 알 수 있듯이, 퀴닉애시드 표준품은 0.65분에서 검출되었고 이론상 음이온 모드(negative ion mode)에서 m/z 191.05556의 값을 갖는다. 발효차의 음이온 모드 TIC(negative ion mode TIC)에서 분자량 191.05400에서 191.05650의 범위로 이온 추출(ion extraction) 하였을 때 표준품과 동일한 RT 0.65분에서 피크가 검출되었다. 해당 피크는 191.05505의 m/z 값을 나타냈으며 이는 퀴닉애시드의 이론상 m/z 191.05556과 error ppm 2.6 내 값으로 소수점 넷째자리까지 동일한 분자량으로 볼 수 있다. 따라서, 원료 내 0.65분 피크는 퀴닉애시드로 동정 할 수 있다.The fermented tea component prepared in Example 1 was analyzed via Thermo's Q Exact High Resolution LC-MS. As can be seen in the chromatogram of Figure 3, the cicinacid standard was detected at 0.65 min and theoretically had a value of m / z 191.05556 in negative ion mode. Peaks were detected in the negative ion mode TIC of the fermented tea when the ion extraction was performed in the molecular weight range of 191.05400 to 191.05650 at the same RT 0.65 min as the standard product. The peak exhibited an m / z value of 191.05505, which is the same as the m / z 191.05556 and the error ppm 2.6 in the theoretical m / z of the acetic acid, to the fourth decimal place. Therefore, the 0.65 minute peak in the raw material can be identified as a cicinic acid.

[실시예 3] 발효차 추출물 제조[Example 3] Preparation of fermented tea extract

실시예 1의 발효차를 정제수와 에탄올을 3:7의 비율로 혼합한 추출용매, 즉 70% 에탄올을 추출용매로 하여 상온 추출하였다. 상온 추출 후 1차 여과를 하여 추출물에 포함된 고형상의 재료를 제거하였고, 그런 뒤 추출물을 농축하여 에탄올을 제거한 후 이를 분리 및 정제하였다. 그리고 원심분리 및 2차 여과 후 건조하여 발효차 추출물을 얻었다.The fermentation tea of Example 1 was extracted at room temperature using an extraction solvent in which purified water and ethanol were mixed at a ratio of 3: 7, that is, 70% ethanol as an extraction solvent. After extracting at room temperature, primary filtration was performed to remove the solid material contained in the extract. Then, the extract was concentrated to remove ethanol, and then it was separated and purified. After centrifugation, secondary filtration and drying, a fermented tea extract was obtained.

[실시예 4] 피부장벽 약화 자극원의 준비[Example 4] Preparation of skin barrier weakening stimulus source

피부장벽 약화 자극원인 미세먼지의 포집은 로우 볼륨 에어 샘플러(Sensidyne, Gillian, Low Volume Air Sampler, FL, U.S.A.)를 이용하였고, Filter pack은 매 측정일 오전 10시 전후에 필터와 디누더를 교체하여 약 24시간 동안 시료를 채취하였다. 28일간 서울의 풍하지역(경기도 용인시 처인구 소재, 한국외국어대학교 외국학 종합연구센터 생활관 6층 옥상)에서 매일 미세먼지를 포집하였으며, 측정시간은 진공펌프를 켜면서 타이머를 작동시키고 진공펌프를 끌 때 타이머의 시간을 기록하였다. 채취 유량은 16.7L/min으로 하여 측정 시작시 유량계(Model 4143, TSI Inc.)로 유량을 측정하고 측정이 끝날 때 다시 유량을 측정하였다. 필터팩(filter pack)에 들어가는 Teflon 필터는 시료 채취 전과 후에 무게를 측정하였다. Teflon 필터의 무게를 측정하기 전 24 시간 동안 상대습도 40%의 데시케이터(NIKKO, Japan)에 항량시킨 후 소수점 5자리가 표시되는 전자저울(DVG215CD, Ohaus)에 무게를 두 번 측정하여 평균값을 기록하였다. 시료를 채취한 후에도 무게를 측정하기 전에 데시케이터에서 24시간 항량시킨 후 무게를 두 번 측정하여 채취 전에 측정한 무게와 비교하여 질량농도를 산출하였다. 미세먼지의 추출은 Teflon 필터를 1mL의 에탄올에 적신 후 14mL의 DW를 넣어 필터의 에어로졸 포집면이 수면에 닿도록 한 상태에서 뚜껑을 닫은 후 초음파 세척기로 30분간 초음파를 주어 실행하였다. 여과단계에서 수분에 의한 오차를 최소화하기 위하여 건조기(decicator)에서 48시간 동안 필터의 수분을 완전히 제거한 후, 0.1mg까지 측정할 수 있는 초정밀저울계(Mettler Toledo Company 社)를 이용하여 필터의 무게를 칭량하여 필터의 추출 전, 후 무게를 칭량하였다.The filter pack used a low volume air sampler (Sensidyne, Gillian, Low Volume Air Sampler, FL, USA) for the collection of fine dusts that caused skin barrier weakness. The filter pack replaced filter and denuder at around 10:00 am Samples were taken for about 24 hours. For 28 days, fine dust was collected daily from the windy area of Seoul (Gyeonggi-do, Korea), and the measurement time was measured by turning on the timer while turning on the vacuum pump and turning off the timer Time was recorded. The flow rate was measured with a flow meter (Model 4143, TSI Inc.) at the start of the measurement at a flow rate of 16.7 L / min, and the flow rate was measured again at the end of the measurement. The Teflon filter in the filter pack weighed before and after sampling. Before measuring the weight of the Teflon filter, the sample was weighed into a desiccator (NIKKO, Japan) with a relative humidity of 40% for 24 hours and then weighed twice on an electronic balance (DVG215CD, Ohaus) . After the sample was collected, the sample was weighed in a desiccator for 24 hours before measuring the weight, and then the weight was measured twice, and the mass concentration was calculated by comparing with the weight measured before the sampling. The extraction of fine dust was carried out by wetting the Teflon filter with 1 mL of ethanol, placing the filter with 14 mL of DW, closing the lid with the filter surface of the filter touching the water surface, and ultrasonically applying the filter with the ultrasonic cleaner for 30 minutes. In order to minimize the error caused by moisture in the filtration step, the water content of the filter was completely removed for 48 hours in a decicator, and then the weight of the filter was measured using a super-precision scale system (Mettler Toledo Company) Weighed and weighed before and after filter extraction.

[실시예 5] (정상사람)각질형성세포주의 배양[Example 5] (normal human) Culturing of keratinocyte cell line

(정상사람)각질형성세포주(Human normal epidermal keratinocytes)는 론자 社(Lonza, Inc. 미국 메릴랜드주 워커스빌 소재)에서 구입하여 계대배양한 후 CO2 배양기(CO2 incubator)에서 37℃, 5% CO2 조건 하에서 배양하였다. 세포 배양액은 론자 社의 지침서에 따랐다. 500ml의 KBM-2(KBMTM-2, CC-3103) 배지에 KGM-2 불렛 키트 CC-4152(KGM TM-2 Bullet kit, CC-4152)(성분: BPE(Bovine pituitary extract)), 인간표피 성장인자(human epidermal growth factor, hEGF), 인슐린(Insulin), 하이드로코티손(Hydrocortisone), 트랜스페린(Transferrin), 에피네프린(Epinephrine), 및 젠타마이신 설페이트 + 암포페리신-B(Gentamycin Suflate + Amphofericin-B: GA-1000))를 첨가한 KGM-2 불렛키트 CC-3107(KGM TM-2 Bullet Kit, CC-3107)을 사용하였다.Human normal epidermal keratinocytes were purchased from Lonza, Inc. (Walkersville, Maryland, USA), subcultured and cultured in a CO 2 incubator at 37 ° C under 5% CO 2 Lt; / RTI > The cell culture was in accordance with Lonza's guidelines. (KGM-2 Bullet kit, CC-4152) (ingredient: BPE (bovine pituitary extract)), human epidermal growths (KBM- (Gentamycin Suflate + Amphofericin-B: GA), human epidermal growth factor (hEGF), insulin, Hydrocortisone, Transferrin, Epinephrine and gentamycin sulfate (KGM-2 Bullet Kit, CC-3107) was added to the reaction mixture.

[실시예 6] (정상사람)각질형성세포주에 미세먼지의 처리 및 세포독성 측정[Example 6] (Normal human) Treatment of fine dust and cytotoxicity measurement on keratinocyte cell line

미세먼지 처리를 통한 세포독성 여부 확인을 위하여, Mossman 등(J.Immunol. Methods, 65, 55-63, 1983)의 방법으로 (정상사람)각질형성세포주를 이용한 MTT 실험을 수행하였다. MTT experiments were carried out using keratinocyte lines (normal human) by the method of Mossman et al. (J. Immunol. Methods, 65, 55-63, 1983) in order to confirm cytotoxicity through fine dusting.

구체적으로, 24-웰 플레이트를 사용하고 상기 실시예 4의 채취하여 얻은 직경이 2.5㎛인 미세먼지를 정제수에 분산시켜서 미세먼지 분산액을 제조한 다음, 실시예 5의 세포배양조건으로 2.5 × 105 웰 세포수인 조건에서 배양한 세포에 상기 미세먼지 분산액을 처리하여 24시간 동안 배양한 후, MTT(3-4,5-dimethylthiazol-2,5-diphenyltetra zolium bromide) 5㎎/㎖을 혼합하여 37℃에서 3시간 동안 추가 배양하였다. 이 후 배지를 제거하고 형성된 포르마잔 크리스탈(formazan crystal)을 DMSO 500㎕에 용해하였다. 그 용해물을 96-웰 플레이트로 옮겨 분주(aliquot)하고 흡광도 540nm에서 OD값을 측정하였다. 측정 결과는 도 1에 나타내었다.Specifically, using a 24-well plate, and the cell culture conditions in Example 4 were collected to prepare a dispersion of fine particles by dispersing the fine particles in the obtained diameter 2.5㎛ in purified water, and then, a 2.5 × 10 5 Example 5 Cells cultured under the conditions of the number of well cells were treated with the fine dust dispersion and cultured for 24 hours. Then, 5 mg / ml of MTT (3-4,5-dimethylthiazol-2,5-diphenyltetra zolium bromide) Lt; 0 > C for 3 hours. The medium was then removed and the formazan crystal formed was dissolved in 500 占 퐇 of DMSO. The lysate was transferred to a 96-well plate and aliquoted and the OD value measured at 540 nm absorbance. The measurement results are shown in Fig.

도 1에 나타낸 바와 같이, 상기 세포주에서 2.5 마이크로미터 이하 미세먼지를 분산시킨 분산액에 의한 세포독성에 대하여 80% 생존율을 보이는 농도(IC20)값은 2.5 마이크로미터 이하 미세먼지 수용성 추출액의 경우 12.5㎍/㎖ 이었다.As shown in FIG. 1, the concentration (IC20) showing an 80% survival rate with respect to cytotoxicity by a dispersion in which fine particles of 2.5 micrometer or less were dispersed in the cell line was 12.5 g / Ml.

[실시예 7] 차세대 염기서열분석(Next Generation Sequencing)을 통한 미세먼지의 세포 유전자 변화 확인[Example 7] Confirmation of cellular genetic changes of fine dusts through next generation sequencing

RNA-염기서열 데이터 처리 및 분석을 위해, Trapnell et al.(2012)에 의해 개발된 일반적인 분석 단계를 참조하였다. FastQC(http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/)를 사용하여 RNA-seq 데이터 품질을 확인하였고, FASTX(http://hannonlab.cshl.edu/fastx_toolkit/)를 사용하여, 정확도가 떨어지는 베이스 및 어탭터 서열을 제거하였다. 이후 Tophat(Trapnell et al., 2009)과 인간 유전체(hg19)를 사용하여 얼라인먼트를 수행하였고, 각 샘플의 데이터량을 RSeQC로 재명명된 EVER-seq을 사용하여 확인하였다(Wang et al., 2012). 또한, Cufflinks를 사용하여 전사체(transcript)의 발현 수준을 정량하였고, 미세먼지 분산액 처리 샘플과 정상 샘플의 사이에서 전사 수준을 비교하였다(Trapnell et al., 2010). FDR adjusted p-value<0.05로, ≥2.0 fold-change의 엄격한 컷오프를 적용하여, 직경이 2.5㎛인 미세먼지의 분산액의 처리시 유의미한 발현 차이를 나타내는 유전자를 결정하였다. 측정 결과는 하기 [표 2] 및 [도 2a] 내지 [도 2c]에 나타나 있다.For RNA-base sequence data processing and analysis, reference was made to the general analysis step developed by Trapnell et al. (2012). We confirmed the RNA-seq data quality using FastQC (http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/) and used FASTX (http://hannonlab.cshl.edu/fastx_toolkit/) , Thereby removing the base and the adder sequences with low accuracy. Afterwards, alignment was performed using Tophat (Trapnell et al., 2009) and human genome (hg19), and the amount of data for each sample was confirmed using EVER-seq renamed RSeQC (Wang et al., 2012 ). In addition, the level of expression of transcripts was quantified using Cufflinks, and transcription levels were compared between the fine dust dispersion treated and normal samples (Trapnell et al., 2010). A stringent cutoff of ≥2.0 fold-change was applied to the FDR adjusted p-value <0.05 to determine the gene that showed significant expression differences in the treatment of the dispersion of fine dust with a diameter of 2.5 μm. The measurement results are shown in the following [Table 2] and [Figure 2a] to [Figure 2c].

증가유전자Increase gene NameName Gene
Symbol
Gene
Symbol
배수 변화량Drainage variation
NM_019618NM_019618 IL36GIL36G 7.17.1 NM_002963NM_002963 S100A7S100A7 23.823.8 NM_032563NM_032563 LCE3DLCE3D 12.012.0

[실시예 8] 실시간 RT-PCR 정량[Example 8] Real-time RT-PCR quantification

실시예 4에서 추출한 직경이 2.5㎛인 미세먼지를 실시예 5에서 배양한 인간정상각질피부세포에 세포배양배지 1ml에 12.5㎍의 양으로 처리하고, 하기 표 3에 나타낸 유전자의 프라미어(applied biosystems TaqMan® Primers)로 상대적 mRNA 발현양을 측정하였다. 발효차 추출물은 실시예 3에서 제조한 것을 사용하였다. Human microkeratome cells cultured in Example 5 were cultured in the amount of 12.5 占 퐇 in 1 ml of the cell culture medium and microspheres having a diameter of 2.5 占 퐉 extracted in Example 4 were treated with applied primers TaqMan® Primers) to determine the relative mRNA expression levels. The fermented tea extract used in Example 3 was used.

증가유전자Increase gene NameName Gene
Symbol
Gene
Symbol
TaqMan® 프라이머TaqMan® primer
NM_019618NM_019618 IL36GIL36G Hs00219742_m1Hs00219742_m1 NM_002963NM_002963 S100A7S100A7 Hs00161488_m1Hs00161488_m1 NM_032563NM_032563 LCE3DLCE3D Hs00754375_s1Hs00754375_s1

배지에 발효차 추출물을 20 ppm의 농도로 처리하고 24시간 경과 후, 배양액을 제거하고, 2ml의 인산염 완충액(Phosphate Buffered Saline, PBS)으로 세포를 세척한 다음, 트리졸 시약(Trizol reagent, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 세포 내의 RNA를 분리하였다. 분리된 RNA를 키아젠사의 RNA 키트(QIAGEN RNeasy kt, QIAGEN, Valencia, CA)로 한번 더 정제한 후, 애질런트 社의 바이오어낼라이저 2100 모델 기기(Agilent 2100 BioAnalyzer, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)를 사용하여 RNA의 질(quality)을 확인하였다. 인비트로젠사의 역전사키트(Superscript Reverse Transcriptase (RT) kit, Invitrogen, Carlsbad, CA)를 이용하여 상기 RNA로부터 cDNA를 합성하였고, 이를 상기 [표 3]의 프라이머를 이용한 실시간 역전사 중합 효소 연쇄반응(Q-RT-PCR: real time-reverse transcription polymerase chain reaction)을 통해 정량적으로 분석하였다. 유전자의 발현 패턴 변화를 어플라이드바이오시스템사의 택맨 유전자 발현 시스템(TaqMan gene expression assay kit, Applied Biosystems, Foster City, CA)을 이용하여 세포의 유전자 변화를 실시간 PCR로 평가하였으며, 그 결과를 [도 2a] 내지 [도 2c]에 나타내었다. 이용한 Q-RT-PCR과 실시간 PCR은 모두 라이프테크놀로지에서 배포하는 표준 프로토콜에 따라서 실행하였으며, 구체적으로 95℃에서 20초 동안 처리한 후, 95℃에서 3초 및 60℃에서 30초를 처리하는 공정을 40주기 진행하였다.After the fermented tea extract was treated at a concentration of 20 ppm for 24 hours, the culture solution was removed, and the cells were washed with 2 ml of phosphate buffered saline (PBS). Then, the triazol reagent (Trizol reagent, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). The separated RNA was further purified with an RNA kit (QIAGEN RNeasykt, QIAGEN, Valencia, Calif.) From Agilent Technologies, Inc., Agilent 2100 BioAnalyzer, Agilent Technologies, Santa Clara, ) Was used to confirm the quality of the RNA. CDNA was synthesized from the above RNA using a reverse transcription kit (Invitrogen, Carlsbad, Calif.) Of Invitrogen, and the cDNA was synthesized using the primers in the real time reverse transcription polymerase chain reaction (Q -RT-PCR: real-time reverse transcription polymerase chain reaction). The change in gene expression pattern was evaluated by real-time PCR using a TaqMan gene expression assay kit (Applied Biosystems, Foster City, Calif.) Of Applied Biosystems. As shown in Fig. 2C. Both Q-RT-PCR and real-time PCR were performed according to the standard protocols distributed by Life Technologies. Specifically, the Q-RT-PCR was performed at 95 ° C for 20 seconds, followed by 95 ° C for 3 seconds and 60 ° C for 30 seconds For 40 cycles.

[도 2a] 내지 [도 2c]에 나타낸 바와 같이, 미세먼지에 의해 자극된 피부 세포에서 발현량이 증가 또는 감소하는 유전자가 존재하며, 발효차 추출물의 처리에 의하여 인터류킨 1 베타(IL-1B), 인터류킨 36 감마(IL-36G), S100 칼슘 바인딩 프로틴 A7(S100A7), 후기 각질화피 3D(LCE3D), 프로스타글라딘-엔도과산화물 합성효소 2(PTGS2), 잔틴 탈수소효소(XDH) 유전자의 발현량이 감소됨을 확인할 수 있었다.As shown in FIGS. 2A to 2C, there is a gene whose expression level is increased or decreased in skin cells stimulated by fine dusts. The interleukin-1 beta (IL-1B) The expression level of interleukin-36 gamma (IL-36G), S100 calcium binding protein A7 (S100A7), late keratin hyaluronan 3D (LCE3D), prostaglandin-endo peroxidase 2 (PTGS2) and xanthine dehydrogenase Respectively.

따라서, 발효차 추출물은 피부장벽 약화를 일으키는 자극으로 인한 피부 세포 손상으로부터 피부 세포를 효과적으로 보호하고, 상기 피부장벽 약화를 일으키는 자극에 의하여 전술한 특정 유전자의 발현량이 변화하는 것을 억제 또는 방지하여, 정상 수준의 발현량을 갖도록 할 수 있음을 알 수 있다.Accordingly, the fermented tea extract effectively protects skin cells from skin cell damage caused by stimulation that causes skin barrier weakness, suppresses or prevents the change in the expression level of the specific gene described above by stimulation that causes skin barrier weakness, Lt; RTI ID = 0.0 &gt; of &lt; / RTI &gt;

이하, 본 발명에 따른 조성물의 제형예를 설명하나, 화장료 조성물, 약학적 조성물 및 건강 기능식품 조성물은 여러 가지 제형으로 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.Hereinafter, formulation examples of the composition according to the present invention will be described. However, the cosmetic composition, the pharmaceutical composition and the health functional food composition can be applied to various formulations, and the present invention is not limited thereto .

[제형예 1] 정제[Formulation Example 1] Tablets

본 발명 실시예에 따른 발효차 추출물 100mg, 락토오스 400mg, 옥수수 전분 400mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.100 mg of the fermented tea extract according to the present invention, 400 mg of lactose, 400 mg of corn starch and 2 mg of magnesium stearate were mixed, and tablets were prepared by tableting according to a conventional preparation method of tablets.

배합성분Compounding ingredient 함량(mg)Content (mg) 발효차 추출물Fermented tea extract 100100 락토오스Lactose 400400 옥수수 전분Corn starch 400400 스테아린산 마그네슘Magnesium stearate 22

[제형예 2] 캡슐제[Formulation Example 2]

본 발명 실시예에 따른 발효차 추출물 100mg, 락토오스 400mg, 옥수수 전분 400mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조 방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.100 mg of the fermented tea extract according to the present invention, 400 mg of lactose, 400 mg of corn starch and 2 mg of magnesium stearate were mixed and filled in gelatin capsules according to the conventional preparation method of capsules to prepare capsules.

배합성분Compounding ingredient 함량(mg)Content (mg) 발효차 추출물Fermented tea extract 100100 락토오스Lactose 400400 옥수수 전분Corn starch 400400 스테아린산 마그네슘Magnesium stearate 22

[제형예 3] 과립제[Formulation Example 3]

본 발명 실시예에 따른 발효차 추출물 50mg, 무수결정 포도당 250mg 및 전분 550mg을 혼합하고, 유동층 과립기를 사용하여 과립으로 성형한 후 포에 충진하였다.50 mg of fermented tea extract according to the present invention, 250 mg of anhydrous crystalline glucose and 550 mg of starch were mixed and granulated into granules using a fluidized bed granulator, and filled in a capsule.

배합성분Compounding ingredient 함량(mg)Content (mg) 발효차 추출물Fermented tea extract 5050 무수결정 포도당Anhydrous crystalline glucose 250250 전분Starch 550550

[제형예 4] 비누 [Formulation Example 4] Soap

배합성분Compounding ingredient 함량(%)content(%) 발효차 추출물Fermented tea extract 5.005.00 유지maintain 적량Suitable amount 수산화나트륨Sodium hydroxide 적량Suitable amount 염화나트륨Sodium chloride 적량Suitable amount 향료Spices 적량Suitable amount 정제수Purified water 잔량Balance

[제형예 5] 로션 [Formulation Example 5] Lotion

배합성분Compounding ingredient 함량(%)content(%) 발효차 추출물Fermented tea extract 5.005.00 L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염L-ascorbic acid-2-phosphate magnesium salt 1.001.00 수용성 콜라겐 (1 % 수용액)Water soluble collagen (1% aqueous solution) 1.001.00 시트르산나트륨Sodium citrate 0.100.10 시트르산Citric acid 0.050.05 감초 엑기스Licorice extract 0.200.20 1,3-부틸렌글리콜1,3-butylene glycol 3.003.00 정제수Purified water 잔량Balance

[제형예 6] 크림[Formulation Example 6] Cream

배합성분Compounding ingredient 함량(%)content(%) 발효차 추출물Fermented tea extract 3.003.00 폴리에틸렌글리콜모노스테알레이트Polyethylene glycol monostearate 2.002.00 자기유화형모노스테아르산글리세린Self emulsifying monostearic acid glycerin 5.005.00 세틸알코올Cetyl alcohol 4.004.00 스쿠알렌Squalene 6.006.00 트리2-에틸헥산산글리세릴Tri-2-ethylhexanoic acid glyceryl 6.006.00 스핑고당지질Sphingoglycolipids 1.001.00 1.3-부틸렌글리콜1,3-butylene glycol 7.007.00 정제수Purified water 잔량Balance

[제형예 7] 연고[Formulation Example 7] ointment

배합성분Compounding ingredient 함량(%)content(%) 발효차 추출물Fermented tea extract 5.005.00 폴리비닐알코올Polyvinyl alcohol 13.0013.00 L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염L-ascorbic acid-2-phosphate magnesium salt 1.001.00 라우로일히드록시프롤린Lauroylhydroxyproline 1.001.00 수용성 콜라겐 (1 % 수용액)Water soluble collagen (1% aqueous solution) 2.002.00 1,3-부틸렌글리콜1,3-butylene glycol 3.003.00 에탄올ethanol 5.005.00 정제수Purified water 잔량Balance

[제형예 8] 미용액 제조 [Formulation Example 8] Preparation of serum

배합성분Compounding ingredient 함량(%)content(%) 발효차 추출물Fermented tea extract 3.003.00 히드록시에틸렌셀룰로오스(2 % 수용액)Hydroxyethylene cellulose (2% aqueous solution) 12.0012.00 크산탄검(2 % 수용액)Xanthan gum (2% aqueous solution) 2.002.00 1,3-부틸렌글리콜1,3-butylene glycol 6.006.00 진한 글리세린Concentrated glycerin 4.004.00 히알루론산나트륨 (1 % 수용액)Sodium hyaluronate (1% aqueous solution) 2.002.00 정제수Purified water 잔량Balance

[제형예 9] 건강식품[Formulation Example 9] Health food

배합 성분Compounding ingredient 함량content 발효차 추출물Fermented tea extract 2mg2 mg 비타민 A 아세테이트Vitamin A acetate 70μg70 μg 비타민 EVitamin E 1.0mg1.0 mg 비타민 B1Vitamin B1 0.13mg0.13 mg 비타민 B2Vitamin B2 0.15mg0.15 mg 비타민 B6Vitamin B6 0.5mg0.5 mg 비타민 B12Vitamin B12 0.2μg0.2 μg 비타민 CVitamin C 10mg10 mg 비오틴Biotin 10μg10 μg 니코틴산아미드Nicotinic acid amide 1.7mg1.7 mg 엽산Folic acid 50μg50 μg 판토텐산 칼슘Calcium pantothenate 0.5mg0.5 mg 황산 제1철Ferrous sulfate 1.75mg1.75 mg 산화아연Zinc oxide 0.82mg0.82 mg 탄산마그네슘Magnesium carbonate 25.3mg25.3 mg 제1인산칼륨Potassium monophosphate 15mg15 mg 제2인산칼슘Dicalcium phosphate 55mg55 mg 구연산칼륨Potassium citrate 90mg90 mg 탄산칼슘Calcium carbonate 100mg100 mg 염화마그네슘Magnesium chloride 24.8mg24.8 mg

[제형예 10] 건강음료[Formulation Example 10] Health drinks

배합성분Compounding ingredient 함량content 발효차 추출물Fermented tea extract 50mg50 mg 구연산Citric acid 1000mg1000 mg 올리고당oligosaccharide 100 g100 g 타우린Taurine 1g1g 정제수Purified water 잔량Balance

Claims (10)

발효차 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부장벽 강화용 조성물.A composition for enhancing skin barrier comprising an extract of fermented tea as an active ingredient. 제 1 항에 있어서,
상기 발효차는 내부 효소가 불활성화된 차 잎을 자연 발효시킨 것인, 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the fermentation tea is naturally fermented with tea leaves in which an internal enzyme is inactivated.
제 1 항에 있어서,
상기 발효차 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.000001 내지 30중량%로 포함된, 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the fermented tea extract is included in an amount of 0.000001 to 30% by weight based on the total weight of the composition.
제 1 항에 있어서,
상기 발효차 추출물은 물, C1 - C6의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 부틸렌글리콜, 에틸아세테이트, 디에틸아세테이트, 디에틸에테르, 벤젠, 클로로포름 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출용매로 추출된 것인, 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the fermented tea extract is selected from the group consisting of water, at least one selected from the group consisting of C 1 -C 6 anhydrous or lower alcohol, acetone, butylene glycol, ethyl acetate, diethyl acetate, diethyl ether, benzene, chloroform and hexane &Lt; / RTI &gt; is extracted with a solvent.
제 1 항에 있어서,
상기 조성물은 IL-36G(NM_019618), S100A7(NM_002963) 및 LCE3D(NM_032563)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 발현을 억제하는, 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein said composition inhibits expression of at least one selected from the group consisting of IL-36G (NM_019618), S100A7 (NM_002963) and LCE3D (NM_032563).
제 5 항에 있어서,
상기 조성물은 각질형성세포(keratinocyte)에 적용되는, 조성물.
6. The method of claim 5,
Wherein the composition is applied to keratinocytes.
제 1 항에 있어서,
상기 발효차 추출물은 10 내지 500 mg/kg/일의 투여량으로 투여되는, 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the fermented tea extract is administered at a dose of 10 to 500 mg / kg / day.
제 1 항에 있어서,
상기 조성물은 화장료 조성물인, 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the composition is a cosmetic composition.
제 1 항에 있어서,
상기 조성물은 약학적 조성물인, 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the composition is a pharmaceutical composition.
제 1 항에 있어서,
상기 조성물은 건강 기능식품 조성물인, 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the composition is a health functional food composition.
KR1020170128159A 2017-09-29 2017-09-29 Composition comprising fermented tea extract for Enhancing Skin Barrier Active KR102164345B1 (en)

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