KR20180025701A

KR20180025701A - 특정 siRNA을 포함하는 멜라닌 증진용 조성물

Info

Publication number: KR20180025701A
Application number: KR1020160112715A
Authority: KR
Inventors: 최현정; 배일홍; 김형준; 이영진; 이태룡; 조동형
Original assignee: (주)아모레퍼시픽; 경희대학교 산학협력단
Priority date: 2016-09-01
Filing date: 2016-09-01
Publication date: 2018-03-09
Also published as: CN110167600A; JP2019531264A; WO2018044028A1; JP7350652B2

Abstract

본 발명은 일측면에서, 서열번호 1 또는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 siRNA를 유효성분으로 포함하는 모발 흑화용, 모발 백화 방지용, 멜라닌 저하성 질환의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이며, 본 발명의 일 측면을 통해 모발 관련 산업의 발전을 도모하고 관련 소비자의 복지를 증진시킬 수 있다.

Description

특정 siRNA을 포함하는 멜라닌 증진용 조성물{COMPOSITION FOR MELANIN-ENHANCING COMPRISING SPECIFIC SMALL INTERFERING RNA}

본 명세서는 특정 siRNA을 포함하는 모발 흑화용, 멜라닌 저하성 질환의 예방용, 또는 멜라닌 저하성 질환의 개선용 조성물에 관한 것이다.

멜라닌(melanin)은 검은 색소와 단백질의 복합체 형태를 지니는 페놀류의 생체 고분자 물질로서, 사과, 감자, 바나나의 잘린 표면이 공기 중에 노출될 때 발생하는 갈변 또는 동물의 외피 깃털, 피부, 모발, 눈 등에서 관찰된다. 멜라닌이 과잉 생산되어 침착되는 경우 기미, 주근깨 등이 형성되고 모발 흑화 등과도 직결되며, 멜라닌으로 인해 피부 또는 모발 노화도 촉진되고 피부암도 유발될 수 있다.

자외선, 염증, 호르몬 등에 의해서 멜라닌 형성 세포 자극 호르몬(melanocyte stimulating hormone, MSH)이 분비되고, MSH는 수용체와 반응하여 멜라닌 형성 세포 내에 cAMP를 향상시켜 멜라닌을 합성하며, 합성된 멜라닌은 멜라닌 형성 세포의 외부로 분비되어 자외선 등으로부터 피부 또는 모발을 보호하는 역할을 하게 된다. 멜라닌의 합성은 주로 α-MSH에 의해 조절되고, 멜라닌의 합성에 관여하는 단백질로는 MITF, TYR, TRP1, TRP2 등이 알려져 있다.

모발에 있어서의 멜라닌은 모발의 색상을 결정하는 중요한 인자로서, 모낭에 존재하는 멜라닌 형성 세포 내에서 생성된 멜라닌은 모발피질세포 케라티노사이트에 전달된 후, 모발의 성장과 함께 위쪽으로 이동한다. 생리적 노화의 한 현상으로서 인식되는 모발 백화는 모발 멜라닌 형성 세포의 수적 감소 및 멜라닌 형성 세포의 기능저하 등에 의한 멜라닌 생성의 감소에 의해 유발된다. 현재 모발 백화의 해결방안으로 염색 시술이 사용되고 있으나, 염색은 일시적인 방법으로 백발의 성장에 의해 다시 염색하지 않으면 안되고, 모발 염색약의 염료 속에 포함되어 있는 성분이 자극성분이 되어 접촉성 피부염 또는 피부 알러지를 일으켜 문제시 되고 있다.

또한, 멜라닌 생합성에 이상이 생기면 비정상적인 착색에 의해 피부의 비정상적 백화 등이 나타나는데, 이로 인해 백화증(백색증, albinism), 백반증 등의 질병이 발생하기도 한다.

한편, 10-60개 정도의 핵산으로 구성된 간섭 RNA인 에스아이알엔에이(siRNA, small interfering RNA)는 세포 내에서 RISC(RNA-induced silencing complex) 등과 결합하여 세포 내 상보적인 염기 서열을 가진 mRNA 등에 특이적으로 작용하여 표적 mRNA 등을 억제하는 RNA 간섭 작용을 하는 것으로 매우 잘 알려져 있다. siRNA는 안티센스 올리고 뉴클레오티드에 비해 4-10배 정도 적은 양으로도 유전자 발현을 저해할 수 있어 세포 독성이 적고 유전자의 선택적 발현 저해가 뛰어나 이를 이용하여 암이나 유전적 질병을 유도하는 유전자가 단백질을 발현시키는 것을 저해하면 질병의 원인을 없앨 수 있게 되므로, 새로운 효과적인 질병치료제로 많은 관심을 받고 있다.

J. A. SWIFT, Transfer of Melanin Granules from Melanocytes to the Cortical Cells of Human Hair, Nature 203, 976-977 (29 August 1964)

본 발명은 일 측면에서, 서열번호 1 또는 서열번호 2 의 염기서열로 이루어진 siRNA를 유효성분으로 포함하는 모발 흑화용, 모발 백화 방지용, 멜라닌 저하성 질환의 예방용, 멜라닌 저하성 질환의 치료용, 또는 멜라닌 저하성 질환의 개선용 조성물을 제공하여, 백모 케어 분야 및 멜라닌 저하성 질환 관련 분야의 발전을 도모하고, 관련 소비자 및 환자의 복지를 증진시키기 위한 목적을 가진다.

상기 과제를 해결하기 위하여 본 발명은 일 측면에서, 서열번호 1 또는 서열번호 2 의 염기서열로 이루어진 siRNA를 유효성분으로 포함하는 모발 흑화용, 모발 백화 방지용 멜라닌 저하성 질환의 예방용, 멜라닌 저하성 질환의 치료용, 또는 멜라닌 저하성 질환의 개선용 조성물을 제공한다.

본 발명의 다른 측면에서, 상기 조성물은 약학 조성물 또는 화장료 조성물일 수 있다.

본 발명의 일 측면에 따른, 서열번호 1 또는 서열번호 2 의 염기서열로 이루어진 siRNA를 유효성분으로 포함하는 조성물을 사용할 경우, 모발 흑화, 모발 백화 방지, 멜라닌 저하성 질환의 예방, 또는 멜라닌 저하성 질환의 치료 및 개선을 효과적으로 도모할 수 있다.

도 1은 멜란-a 세포에서 서열번호 1 또는 2 의 염기서열로 이루어진 siRNA에 의해 멜라닌 함량이 현저하게 증가됨을 나타낸 것이다.
도 2는 멜란-a 세포에서 서열번호 1 또는 2 의 염기서열로 이루어진 siRNA에 의해 타이로시나제, TRP1이 현저하게 증가됨을 나타낸 웨스턴 블럿 자료이다.
도 3은 B16F1 세포에서 서열번호 1 또는 2 의 염기서열로 이루어진 siRNA에 의해 멜라닌 함량이 현저하게 증가됨을 나타낸 것이다.
도 4는 B16F1 세포에서 서열번호 1 또는 2 의 염기서열로 이루어진 siRNA에 의해 타이로시나제, TRP1이 현저하게 증가됨을 나타낸 웨스턴 블럿 자료이다.

이하, 본 발명에 대하여 상세히 설명한다.

본 명세서에서 "모발"이라 함은, 각질화된 상피세포로 이루어져 피부 표면으로 나오는 실 모양으로 된 구조물로서, 구체적으로 신체의 털을 의미하며, 머리카락 및 체모를 포함하는 최광의의 개념이다.

본 명세서에서 "피부"라 함은, 동물의 체표를 덮는 조직을 의미하는 것으로서, 얼굴 또는 바디 등의 체표를 덮는 조직뿐만 아니라, 두피와 모발을 포함하는 최광의의 개념이다.

본 명세서에서 “흑화”라 함은, 피부 또는 모발의 유색 색소가 증가되는 것을 의미하며, 특히 멜라닌 색소의 양이 증가되어 피부 또는 모발이 짙은 색을 나타내게 되는 현상을 의미할 수 있다. 예를 들어 모발 흑화는 머리카락이 검게 변하는 현상을 포함하며, 모발의 백화나 백발을 예방 및 방지하는 것도 포함한다.

본 명세서에서 “백화”라 함은, 피부 또는 모발의 유색 색소가 감소하는 것을 의미하며, 특히 멜라닌 색소의 양이 감소되어 피부 또는 모발이 옅은 색을 나타내게 되는 현상을 의미할 수 있다. 예를 들어 모발 백화 또는 백발은 머리카락이 희게 변하는 현상을 포함한다.

본 명세서에서 "모발 흑화 효능 물질" 또는 “모발 백화 방지 효능 물질”은, 모발의 밝기를 어둡게 하거나 모발의 백화가 더 이상 진행되지 않도록 하는 물질을 총칭하는 것일 수 있다. 또한, 유색 색소 특히 멜라닌의 침착을 유도, 개선 및 증진시키는 등의 작용을 하는 물질을 총칭할 수 있으며, 단일 화합물, 중합체, DNA, RNA, siRNA, miRNA, 펩티드, 단백질 등을 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다.

본 명세서에서 “멜라닌 저하성 질환”은, 멜라닌 색소의 합성 또는 분해의 이상에 따라 비정상적으로 멜라닌 침착이 억제되거나, 멜라닌 생성이 저하되는 질환, 또는 멜라닌이 과도하게 제거되는 질환을 포함한다. 예를 들어, 백화증(백색증, Albinism), 백색피부증(leukoderma), 부분 백피증, 어루러기, 백반증(vitiligo), 쿼디크롬 백반증(quadrichrome vitiligo), 반점성 백반증(vitiligo ponctue), 특발성 적상 저색소증, 점상 백피증, 백색증 증후군(syndromic Albinism)(예컨대, 알레잔드리니 증후군(Alezzandrinisyndrome), 헤르만스키-푸들라크 증후군(Hermansky-Pudlak syndrome), 세디아크-히가시 증후군(Chediak-Higashi syndrome), 그리셀리 증후군(Griscelli syndrome)(엘레잘데 증후군(Elejalde syndrome), 그리셀리 증후군 타입 2(Griscelli syndrome type 2) 및 그리셀리 증후군 타입 3(Griscelli syndrome type 3)), 바르덴부르크 증후군(Waardenburg syndrome), 티쩨 증후군(Tietz syndrome), 크로스-먹큐직-브린 증후군(Cross-MuKusick-Breen syndrome), ABCD 증후군(ABCD syndrome), 백색증-청각장애 증후군(Albinism-deafness syndrome) 및 보그트-고야나기-하라다 증후군(Vogt-Koyanagi-Harada syndrome)), 눈 피부 백색증(oculocutaneous albinism), 저멜라닌증(hypomelanosis)(물방울모양 저멜라닌증(idiopathic guttate hypomelanosis), 잎모양 저멜라닌증(phylloid hypomelanosis), 진행성 반상 저멜라닌증(progressive macular hypomelanosis)), 반상 경피증, 얼룩백색증(piebaldism), 탈색소 모반(nevus depigmentosus), 염증 후 색소침착저하증(염증 후 탈색증, postinflammatory hypopigmentation), 백색 비강진(pityriasis alba), 바가본드 백반흑피증(Vagabond's leukomelanoderma), 예맨 시청각장애 색소침착저하 증후군(Yemenite deaf-blind hypopigmentation syndrome), 웬드-바우쿠스 증후군(Wende-Bauckus syndrome), 워로노프 반지증(Woronoff's ring), 멜라닌결핍증(amelanism), 및 루시즘(Leucism)을 포함한다.

본 명세서에서 "멜라닌 저하성 질환 예방, 개선 및 치료 효능 물질"은, 멜라닌 저하성 질환의 이환을 사전에 방지 또는 억제하는 물질, 이환된 멜라닌 저하성 질환의 증상을 경감 또는 완화시키는 물질, 멜라닌 저하성 질환의 원인을 해소시키는 물질, 멜라닌 합성을 증진시키는 물질, 멜라닌 합성의 억제를 방지하는 물질, 멜라닌의 분해를 억제시키는 물질을 포함하는 것으로서, 전체 피부, 전체 모발, 특정 모발 또는 특정 피부 부위의 밝기를 어둡게 하거나 멜라닌 색소의 침착을 유도, 개선 및 증진시키는 등의 작용을 하는 물질을 총칭하며, 단일 화합물, 중합체, DNA, RNA, siRNA, miRNA, 펩티드, 단백질 등을 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다.

본 발명은 일 측면에서, 서열번호 1 또는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 siRNA를 유효성분으로 포함하는 모발 흑화용, 모발 백화 방지용, 멜라닌 저하성 질환의 예방용, 멜라닌 저하성 질환의 치료용, 또는 멜라닌 저하성 질환의 개선용 조성물을 제공한다.

일 구현예에 의하면, 상기 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 siRNA는 “#1”으로 표현될 수 있고, 상기 서열번호 2의 염기서열을 포함하는 siRNA는 “#2”로 표현될 수 있으며, 각각의 siRNA의 서열은 아래와 같은 염기서열을 포함하는 것일 수 있다.

#1의 염기서열(서열번호 1) : 5'-CCAACCAGAACAAGCAGAACA-3'

#2의 염기서열(서열번호 2) : 5'-GAACACGAAGGCUGUAACAAA-3'

상기 siRNA는 서열번호 1 또는 서열번호 2로 표시되는 염기서열과 80%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 100%의 상동성을 갖는 염기서열을 포함할 수 있다.

상기 siRNA는 상기 서열 또는 상기 서열과 80 내지 100%의 상동성을 갖는 서열을 포함하는 독립적인 단일사슬 RNA 가닥일 수도 있고, 이중사슬 RNA 가닥일 수도 있다. 상기 siRNA는 센스 RNA 가닥 및 이에 상보적인 안티센스 RNA 가닥을 포함하거나 상기 센스RNA 가닥 및 안티센스 RNA 가닥이 루프에 의해 연결된 스템-루프(stem-loop) 구조의 단일 RNA 가닥일 수도 있다. 한편, 상기 이중사슬 또는 스템 부위는 미스매치(대응하는 염기가 상보적이지 않음), 벌지(일방의 사슬에 대응하는 염기가 없음) 등에 의하여 쌍을 이루지 않는 부분이 포함될 수도 있다. 상기 siRNA의 전체 길이는 10 내지 60염기, 바람직하게는 15 내지 40 염기, 더욱 바람직하게는 18 내지 30 염기이다. 또한, 상기 루프 영역은 서열에 특별한 의미가 없으며, 단지 서열을 적당한 간격으로 연결하기 위하여 3-10 정도의 염기를 가지고 있으면 족하다. siRNA 말단 구조는 평활(blunt)말단 혹은 점착(cohesive) 말단 모두 가능하다. 점착 말단 구조는 3'말단 돌출한 구조(protruding structure) 및/또는 5' 말단 쪽이 돌출한 구조가 모두 가능하고 돌출하는 염기 수는 한정되지 않는다. 또한, siRNA는 표적유전자의 발현억제 효과를 유지할 수 있는 범위에서 예를 들어, 한쪽 말단의 돌출 부분에 저분자 RNA(예를 들어, tRNA, rRNA, 바이러스 RNA와 같은 천연의 RNA분자 또는 인공의 RNA분자)를 포함할 수 있다. siRNA 말단구조는 양측 모두 절단 구조를 가질 필요는 없고, siRNA의 일방의 말단 부위가 링커 RNA에 의하여 접속된 구조일 수도 있다. 링커의 길이는 스템 부분의 쌍을 이루는 데 지장이 없는 길이이면 특별히 한정되지 않는다.

더불어, 본 발명의 일 측면에 의한 상기 siRNA에서, RNA 가닥은 이의 당 부분, 뉴클레오베이스 부분 또는 인터뉴클레오타이드 구조 내에 최소한 1개의 화학적 변형을 포함하는 것이 가능하다. 이러한 변형은 생체 내에서 뉴클레아제에 의해 siRNA의 파괴를 저해하는 것을 가능하게 할 수 있다. 본 발명의 일 측면에 따른 siRNA의 안정성과 생적합성을 생체 내에서 향상시킬 수 있는 모든 화학적 변형이 본 발명의 범위에 포함된다. 당 부분에 대한 바람직한 변형 중에서, 언급될 수 있는 것은 2'-데옥시, 2'-플루오로, 2'-아미노, 2'-티오, 또는 2'-O-알킬과 같은 리보오스의 포지션 2', 그리고 바람직하게는 리보뉴클레오타이드 상의 정상 2'-OH 그룹을 대체하는 2'-O-메틸 또는 LNA의 포지션 2' 및 4' 사이에 있는 메틸렌 브릿지의 존재에서 일어나는 변형이다. 뉴클레오베이스의 경우, 5-브로모-유리딘, 5-이오도-유리딘, N3-메틸-유리딘, 2,6-디아미노퓨린(DAP, 5-메틸-2'-데옥시시티딘, 5-(1-프로피닐)-2'-데옥시-유리딘(pdU), 5-(1-프로피닐)-2'-데옥시시티딘(pdC)과 같은 변형된 염기 또는 콜레스테롤과 결합한 염기를 이용하는 것이 가능하다. 인터뉴클레오타이드 골격의 바람직한 변형은 포스포로티오에이트(phosphorothioate), 메틸포스포네이트, 포스포로디아미데이트 그룹에 의한 골격에 있는 포스포디에스터 그룹을 치환하는 것을 포함하거나, 펩타이드 결합에 의해 연결된 N-(2-아미노에틸)-글리신(PNA, 펩타이드 핵산)으로 구성되는 골격을 이용하는 것을 포함한다. 다양하게 변형된 염기, 당, 골격은 몰포리노(morpholino) 타입의 변형된 핵산(몰포린 링에 고정되고 포스포로디아미데이트 그룹에 의해 연결된 염기) 또는 PNA(펩타이드 결합에 의해 연결된 N-(2-아미노에틸)-글리신 단위에 고정된 염기)에 결합될 수 있다.

본 발명에 따른 siRNA는 "분리된 것"이거나, 다른 전달 및 운반 수단 등에 “결합된 것”도 포함하며, 이는 자연 상태에 있지 않은 것을 의미하지만, 자연 상태에서 구할 수 있는 것도 포함하며, 인간의 개입과 관련된 모든 수단에 의해 얻어질 수 있는 것을 의미한다. 특히, 본 발명에 따른 siRNA는 화학적 합성, 효소적 방법, 중합효소 연쇄반응(PCR)을 이용하여 제조할 수 있고, 특정 뉴클레오타이드 서열의 증폭, 또는 재조합 합성에 의해 이미 존재하는 다양한 핵산 구조나 siRNA를 정제함으로써 얻어질 수 있다.

다른 구현 예에 의하면, 상기 siRNA는 멜라닌 생성 또는 침착을 증진시키는 것일 수 있다.

다른 구현 예에 의하면, 상기 siRNA는 티로시나제(tyrosinase) 및 TRP1(Tyrosinase-Related Protein 1) 중 하나 이상의 발현을 증진시키는 것일 수 있다.

본 발명의 일 측면에 의한 상기 siRNA는 멜라닌 형성 세포인 멜란-a 세포 및 B16F1 세포에서 멜라닌 생성 또는 침착을 촉진하고, 멜라닌을 생성시키는 효소인 티로시나제와 멜라닌 형성에 관여하는 TRP1 단백질의 발현을 증진시키는 것으로 확인되었다. 또한, 상기 siRNA를 처리할 경우 티로시나제 또는 TRP1이 발현되는 세포수가 증가되기도 한다. 티로시나제는 멜라닌의 형성 등에 관여하는 효소로서, 티로시나제의 발현이 증진되면 멜라닌 생성 또는 침착이 증가한다. 또한 TRP1은 멜라닌 합성에 관여하는 단백질로서, 티로시나제와 마찬가지로 TRP1의 발현이 증진되면 멜라닌 생성 또는 침착이 증가한다. 모발에 있어서의 멜라닌은 모발의 색상을 결정하는 중요한 인자로서, 모낭에 존재하는 멜라닌 형성 세포 내에서 생성된 멜라닌은 모발피질세포 케라티노사이트에 전달된 후, 모발의 성장과 함께 위쪽으로 이동하므로, 모발 백화는 모발 멜라닌 형성 세포의 수적 감소 및 멜라닌 형성 세포의 기능저하 등에 의한 멜라닌 생성의 감소에 의해 유발된다. 상기 siRNA를 통해 멜라닌 생성 촉진 및 이에 관여하는 효소 및 단백질의 발현 증진을 실현할 수 있으므로 이를 통해 피부 및 모발을 흑화시킬 수 있고, 피부 및 모발의 백화를 방지할 수 있는 것이다.

또한, 본 발명은 일 측면에서, 상기 siRNA를 통해 멜라닌 생성 촉진 및 이에 관여하는 효소 및 단백질의 발현 증진을 실현할 수 있으므로 멜라닌 저하성 질환 및 증상에 대해서도 예방, 치료, 및 개선할 수 있음을 규명한 것이기도 하다.

본 발명의 다른 측면에 의하면, 상기 조성물은 본 발명에 따른 siRNA의 생체적합성과 전달성의 향상을 가능하게 하는 모든 운반체를 추가로 포함할 수 있다. 특히, siRNA와 함께 사용될 수 있는 운반체는 리포좀, 엑소좀, 펩타이드(예를 들어, 세포-투과성 펩타이드) 및 다양한 나노입자를 포함한다. 또한 상기 siRNA를 포함하는 재조합벡터, 플라스미드 등을 전달 또는 운반 수단으로 이용할 수도 있다. 상기 전달 또는 운반 수단은 당해 분야에 공지된 다양한 기술과 방법을 적용할 수 있고, 제형에 따라 변형, 개선 등을 거칠 수도 있다.

상기 siRNA는 전달된 세포에서 적절히 전사되기 위하여 적어도 프로모터에 작동가능하게 연결되는 것이 바람직하나 이에 제한되지는 않는다. 상기 프로모터는 세포에서 기능할 수 있는 프로모터라면 어떤 것이든지 무방하다. 본 발명의 일 측면에 의한 상기 siRNA는 효율적인 작용를 위하여 필요에 따라 리더 서열, 폴리아데닐화 서열, 프로모터, 인핸서, 업스트림 활성화 서열, 신호 펩타이드 서열 및 전사 종결인자를 비롯한 조절 서열을 추가로 포함할 수도 있다.

본 발명의 다른 측면에 의하면, 상기 조성물 내 siRNA의 함량은 상기 조성물 총 중량 대비 0.000000001 중량% 내지 20 중량%일 수 있다. 또한, 상기 함량은 상기 조성물 총중량 대비 0.000000001 중량% 이상, 0.000000005 중량% 이상, 0.00000001 중량% 이상, 0.00000005 중량% 이상, 0.0000001 중량% 이상, 0.0000005 중량% 이상, 0.000001 중량% 이상, 0.000005 중량% 이상, 0.00001 중량% 이상, 0.00005 중량% 이상, 0.0001 중량% 이상, 0.0005 중량% 이상, 0.001 중량% 이상, 0.005 중량% 이상, 0.01 중량% 이상, 0.05 중량% 이상, 0.1 중량% 이상, 0.3 중량% 이상, 0.5 중량% 이상, 0.8 중량% 이상, 1 중량% 이상, 3 중량% 이상, 5 중량% 이상, 8 중량% 이상, 10 중량% 이상, 12 중량% 이상, 15 중량% 이상, 또는 18 중량% 이상일 수 있다. 또한, 상기 함량은 상기 조성물 총 중량 대비 20 중량% 이하, 18 중량% 이하, 15 중량% 이하, 12 중량% 이하, 10 중량% 이하, 8 중량% 이하, 5 중량% 이하, 3 중량% 이하, 1 중량% 이하, 0.8 중량% 이하, 0.5 중량% 이하, 0.3 중량% 이하, 0.1 중량% 이하, 0.05 중량% 이하, 0.01 중량% 이하, 0.005 중량% 이하, 0.001 중량% 이하, 0.0005 중량% 이하, 0.0001 중량% 이하, 0.00005 중량% 이하, 0.00001 중량% 이하, 0.000005 중량% 이하, 0.000001 중량% 이하, 0.0000005 중량% 이하, 0.0000001 중량% 이하, 0.00000005 중량% 이하, 0.00000001 중량% 이하, 또는 0.000000005 중량% 이하일 수 있다.

본 발명의 또다른 측면에 의하면, 상기 siRNA의 투여량은 0.000001mg/kg/일 내지 20mg/kg/일일 수 있다. 또한, 상기 투여량은 0.000001mg/kg/일 이상, 0.000005mg/kg/일 이상, 0.00001mg/kg/일 이상, 0.00005mg/kg/일 이상, 0.00001mg/kg/일 이상, 0.0005mg/kg/일 이상, 0.0001 mg/kg/일 이상, 0.0005 mg/kg/일 이상, 0.001 mg/kg/일 이상, 0.005 mg/kg/일 이상, 0.01 mg/kg/일 이상, 0.05 mg/kg/일 이상, 0.1 mg/kg/일 이상, 0.5 mg/kg/일 이상, 0.8 mg/kg/일 이상, 1 mg/kg/일 이상, 2 mg/kg/일 이상, 3 mg/kg/일 이상, 5 mg/kg/일 이상, 8 mg/kg/일 이상, 10 mg/kg/일 이상, 12 mg/kg/일 이상, 15 mg/kg/일 이상, 또는 18 mg/kg/일 이상일 수 있다. 또한, 상기 투여량은 20 mg/kg/일 이하, 18 mg/kg/일 이하, 15 mg/kg/일 이하, 12 mg/kg/일 이하, 10 mg/kg/일 이하, 8 mg/kg/일 이하, 5 mg/kg/일 이하, 3 mg/kg/일 이하, 2 mg/kg/일 이하, 1 mg/kg/일 이하, 0.8 mg/kg/일 이하, 0.5 mg/kg/일 이하, 0.1 mg/kg/일 이하, 0.05 mg/kg/일 이하, 0.01 mg/kg/일 이하, 0.005 mg/kg/일 이하, 0.001 mg/kg/일 이하, 0.0005 mg/kg/일 이하, 0.00001 mg/kg/일 이하, 0.00005 mg/kg/일 이하, 0.00001 mg/kg/일 이하, 또는 0.000005 mg/kg/일 이하 일 수 있다. 상기 유효성분의 투여량 결정은 통상의 기술자의 수준 내에 있으며, 약물의 1일 투여 용량은 투여하고자 하는 대상의 진행 정도, 발병 시기, 연령, 건강상태, 합병증 등의 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.

본 발명은 다른 측면에서, 서열번호 1 또는 서열번호 2 의 염기서열로 이루어진 siRNA를 유효성분으로 포함하는 멜라닌 저하성 질환의 예방, 치료 및 개선용 조성물일 수 있다.

일 구현 예에 의하면, 상기 멜라닌 저하성 질환은, 백반증, 탈색소 모반, 백색 비강진, 어루러기, 염증후 탈색증, 반상 경피증, 부분 백피증, 특발성 적상 저색소증 및 점상 백피증으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있다. 멜라닌(melanin)은 동물의 외피 깃털, 털, 피부, 머리, 눈 등에서 관찰되는데, 멜라닌이 생산이 부족하거나 침착이 억제되거나 또는 분해가 과도할 경우 멜라닌 저하성 질환이 초래될 수 있다. 본 발명은 일 측면에서 멜라닌 생성 또는 침착을 증진시키기도 하고, 티로시나제 및 TRP1의 발현을 증진시키기도 하므로, 상기 멜라닌 저하성 질환의 예방, 개선, 및 치료에 사용될 수 있다.

본 발명의 일 측면에 의하면, 상기 조성물은 약학 조성물일 수 있다.

상기 약학 조성물은 담체, 부형제, 보존제, 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 약제학적 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 추가로 함유할 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 다양한 경구 투여제 또는 비경구 투여제 형태로 제형화할 수 있다.

상기 경구 투여제는 예를 들면, 정제, 환제, 경질 및 연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 분제, 산제, 세립제, 과립제, 펠렛제 등이 있으며, 이들 제형은 유효성분 이외에 계면 활성제, 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로오스 및 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및 폴리에틸렌 글리콜)를 함유할 수 있다. 정제는 또한 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로오스, 나트륨 카복시메틸셀룰로오스 및 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제, 흡수제, 착색제, 향미제, 및 감미제 등의 약제학적 첨가제를 함유할 수 있다. 상기 정제는 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.

또한, 상기 비경구 투여 형태로는 경피 투여형 제형일 수 있으며, 예를 들어 주사제, 점적제, 연고, 로션, 겔, 크림, 스프레이, 현탁제, 유제, 좌제(坐劑), 패취 등의 제형일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 약학 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있고, 비경구 투여시 피부 외용, 복강내, 직장, 정맥, 근육, 피하, 피내, 흉부내 또는 뇌혈관내 주사 주입방식을 선택할 수 있다.

상기 약학 조성물은 피부 외용제일 수 있으며, 상기 피부 외용제는 피부 외부에서 도포되는 어떠한 것이라도 포함될 수 있는 총칭으로서 다양한 제형의 의약품 또는 의약외품이 여기에 포함될 수 있다.

본 발명의 다른 측면에 의하면, 상기 조성물은 모발 흑화용, 모발 백화 방지용, 멜라닌 저하성 질환의 예방 및 개선용 화장료 조성물일 수 있다.

상기 화장료 조성물에는 기능성 첨가물 및 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분이 추가로 포함될 수 있다. 상기 기능성 첨가물로는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 성분을 포함할 수 있다. 이외에 포함되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

상기 화장료 조성물은 제형이 특별히 한정되지 않으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택할 수 있다. 예를 들어, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일 측면에 의한 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 일 측면에 의한 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 일 측면에 의한 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 일 측면에 의한 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 일 측면에 의한 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 다른 측면에 의하면, 상기 조성물은 식품 또는 건강식품 조성물일 수 있다.

상기 식품 또는 건강식품 조성물은 액상 또는 고체 상태의 제형일 수 있고, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강기능식품류, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용될 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.

본 명세서에 개시된 유효성분 외에 함유할 수 있는 액체 성분에는 특별한 제한점이 없으며, 통상의 음료와 같이 여러가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가성분으로 포함할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 예로는 모노사카라이드, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 말토스, 슈크로스 등의 폴리사카라이드, 덱스트린, 시클로덱스트린 등의 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당 알코올 등이 있다. 상기의 향미제로는 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(예를 들어 사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 명세서에 개시된 조성물 100ml 당 일반적으로 약 1 내지 20g, 일측면에서 약 5 내지 12g일 수 있다.

상기 식품 조성물은 일 측면에서 여러가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그 염, 알긴산 및 그 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 다른 측면에서 천연 과일 주스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 상기 성분들은 독립적으로 또는 조합하여 사용될 수 있다. 상기 첨가제의 비율은 다양할 수 있으나, 본 명세서에 개시된 조성물 100 중량부 당 0.001 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 실시예, 실험예를 통하여, 본 발명 일측면의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 아래 예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 그에 의해 제한되는 것은 아니다.

[실시예 1]

세포 및 피부 모델 준비

인간 표피 멜라닌 형성 세포(Normal human epidermal melanocytes, NHEMs, Cascade Biologics, Portland, OR, USA)를 입수하고, C57BL/6 J (black, a/a) 마우스에서 유래한 멜라닌 형성 세포인 멜란-A(Melan-A) 세포주를 Dorothy C. Bennett 박사(St. George's Hospital Medical School, London, UK)로부터 입수하였다. B16F1 마우스 흑색종(melanoma) 세포주는 ATCC (Manassas, VA, USA)에서 입수하였다.

인간 표피 멜라닌 형성 세포는 M-254 배지에서 인간 멜라닌 형성 세포 성장 보충제(Human Melanocyte Growth Supplements, HMGS) (Cascade Biologics, Inc., Mansfield, UK)하에서 유지시켰다. Melan-A세포는 RPMI 1640배지에서 10%(v/v) 우태아혈정, 1%(v/v) 페니실린-스트렙토마이신, 및 0.2 μM phorbol 12-myristate 13-acetate 하에서 유지시켰다. B16F1 마우스 흑색종 세포주는 10% (v/v) 우태아혈청 및 1% (v/v) 페니실린-스트렙토마이신을 첨가한 DMEM에서 배양하였다.

시약 및 siRNA 트랜스펙션(transfection)

α-MSH, 알부틴(arbutin), 및 코지산(kojic acid)은 Sigma-Aldrich사 (St. Louis, MO, USA)에서 입수하였다. siRNA인 #1 (5'-CCAACCAGAACAAGCAGAACA-3'), #2 (5'-GAACACGAAGGCUGUAACAAA-3'), 및 음성 대조군 siRNA (scrambled control siRNA, siNC)(5'-CCUACGCCACCAAUUUCGU-3')는 제놀루션사(Genolution, 서울, 대한민국)에서 입수하였다. Lipofectamine^® RNAi MAX (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)를 이용하여 60 mm 디쉬에서 배양한 멜란-a(Melan-a) 및 B16F1 세포에 siRNA를 트랜스펙션시켰다. siRNA와 함께 24시간 동안 배양한 뒤, 세포에 대해 각각의 화합물(시약)로 처리하고 48시간 동안 유지하였다.

멜라닌 에세이

세포를 트립신/EDTA로 처리 후 1000 x g에서 5분간 원심분리하고, PBS로 2회 세척하였다. 튜브 내의 최종 세포 펠렛을 사진으로 찍고, 세포 펠렛은 1 N NaOH에 용해시켰다. 균질화시킨 세포 추출물을 96-웰(well) 플레이트에 옮기고, ELISA 플레이트 리더를 이용하여 흡광도 405 nm에서 상대적 멜라닌 양을 측정하였다.

웨스턴 블럿 분석

모든 용해물은 2 × 램라이 시료 완충액(2 × Laemmli sample buffer, 62.5 mM Tris-HCl, pH 6.8, 25% [v/v] glycerol, 2% [w/v] SDS, 5% [v/v] β-mercaptoethanol, 및 0.01% [w/v] bromophenol blue) (Bio-Rad, Hercules사, CA, USA)을 이용하여 준비하였다. 모든 세포 단백질은 Bradford solution (Bio-Rad)을 이용하여 측정하였다. 그 후, 상기 시료는 SDS-PAGE로 분리하고, PVDF 멤브레인(Bio-Rad)으로 이전하였다. TBST(25 mM Tris, 140 mM NaCl, 및 0.05% [v/v] Tween^® 20) 내의 4% (w/v) 스킴 밀크(skim milk)로 블로킹한 뒤, 멤브레인을 특정 1차 항체들과 함께 오버나이트(overnight) 배양시켰다.

항-액틴 항체(anti-actin antibody, MAB1501, 1:10,000)는 Millipore사 (Temecula, CA, USA)에서 입수하였고, 항-αPEP7(타이로시나제) 항체(anti-αPEP7(tyrosinase) antibody, 1:1000)와 항-αPEP1(TRP1) 항체(anti-αPEP1(TRP1) antibody, 1:1000)는 V. J. Hearing (NIH, Bethesda, MD)로부터 입수하였다. 단백질 검출을 위하여, 상기 멤브레인은 HRP-컨쥬게이티드 이차 항체를 이용하여 배양하였고, 신호는 SuperSignal^® West Dura HRP Detection Kit (Pierce사, Rockford, IL, USA)를 이용하여 측정하였다.

통계 분석

각 데이터는 적어도 3회의 독립적인 실험을 거쳐서 얻었고, 평균±SE(표준오차)로 나타내었다. 결과의 통계적 평가는 일원분산분석(1-way ANOVA)를 이용하여 수행하였다(* p < 0.05, ** p < 0.01).

[실험예 1] siRNA 에 의한 멜라닌 생성, 관련 효소 및 단백질의 조절

멜란-a(Melan-a) 세포를 siRNA(#1, #2), 스크램블 대조군 siRNA(scrambled control siRNA, siNC)로 각각 트랜스펙션 시키고 48시간 후, 멜라닌 생성을 억제시키는 특정물질 D(0.5μM) 처리 또는 무혈청 조건 하에 2일 간 배양한 뒤, 멜라닌 함량을 측정하였다. 도 1을 통해 알 수 있듯, 멜라닌 생성을 억제시키는 특정물질 D의 처리 또는 무혈청 조건 하의 멜란-a 세포 배양은 대조군(siNC)에서 멜라닌 생성을 억제하였으나, 자극(특정물질 D 또는 혈청 기아)으로 억제된 멜라닌 생성은 siRNA(#1, #2)에 의해 현저히 증진되었다(도 1).

또한, 멜라닌 형성 효소 발현에 대해서도 실험을 실시하였다. 웨스턴블럿 분석 결과, 멜란-a세포에서 siRNA(#1, #2)를 트랜스펙션 시킨 경우 야생형 세포와 비교했을 때 타이로시나제 및 TRP1 단백질 수준이 현저하게 증가되었다(도 2).

B16F1 세포에 대해서도 siNC, siRNA(#1, #2)를 트랜스펙션 시키고, 1일 후 멜라닌 형성을 억제시키는 특정물질 D(0.5 μM) 처리 또는 무혈청 배지 처리를 하여 2일 뒤 멜라닌 생성 정도를 확인하였고, 타이로시나제, TRP1에 대해 웨스턴 블럿으로 분석하였다.

그 결과, B16F1 세포에서 특정물질 D 또는 혈청 기아로 억제된 멜라닌 생성이, 멜란-a세포에서와 마찬가지로, siRNA(#1, #2) 트랜스펙션에 의해 현저히 증가하였다(도 3). 또한, 특정물질 D 또는 혈청 기아로 억제된 티로시나제 및 TRP1의 발현이 siRNA(#1, #2) 트랜스펙션에 의해 현저히 증가하였다(도 4).

이러한 결과를 종합할 때, 상기 siRNA(#1, #2)에 의해 멜라닌 합성을 증진시킬 수 있고, 멜라닌 생성 효소 및 멜라닌 생성 관여 단백질의 발현을 증진시킬 수 있으며, 이를 통해 모발의 흑화 및 모발의 백화방지를 도모할 수 있을 것이므로, 본 발명은 일측면에서 모발 흑화 및 백모 케어에 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 일 측면에 따른 이러한 특징을 이용하여 피부의 특정 부위나 전체 피부에 대하여 멜라닌 생성을 증진시킬 수 있으므로, 본 발명의 일 측면을 이용하여 멜라닌 저하성 질환이나 증상의 예방, 치료, 및 개선을 도모할 수 있다.

본 발명의 일 측면에 따른 조성물의 제형예를 아래에서 설명하나, 다른 여러 가지 제형으로도 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

[제형예 1] 연질캅셀제

서열번호 1 또는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 siRNA 2mg을 함유하는 리포좀 10mg, L-카르니틴 80~140mg, 대두유 180mg, 팜유 2mg, 식물성 경화유 8mg, 황납 4mg 및 레시틴 6mg을 혼합하고, 통상의 방법에 따라 1캡슐에 충진하여 연질캅셀제를 제조하였다.

[제형예 2] 정제

서열번호 1 또는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 siRNA 2mg을 포함하는 리포좀 10mg, 갈락토올리고당 200mg, 유당 60mg 및 맥아당 140mg을 혼합하고 유동층 건조기를 이용하여 과립한 후 당 에스테르(sugar ester)를 6mg을 첨가하여 타정기로 타정하여 정제를 제조하였다.

[제형예 3] 과립제

서열번호 1 또는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 siRNA 2mg을 포함하는 리포좀 10mg, 무수결정 포도당 250mg 및 전분 550mg을 혼합하고, 유동층 과립기를 사용하여 과립으로 성형한 후 포에 충진하여 과립제를 제조하였다.

[제형예 4] 드링크제

서열번호 1 또는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 siRNA 2mg을 포함하는 리포좀 10mg, 포도당 10g, 구연산 0.6g, 및 액상 올리고당 25g을 혼합한 후 정제수 300ml를 가하여 각 병에 200ml씩 충진한다. 병에 충진한 후 130℃ 에서 4~5 초간 살균하여 드링크제를 제조하였다.

[제형예 5] 주사제

서열번호 1 또는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 siRNA 5mg을 포함하는 리포좀 20mg, 주사용 멸균증류수 적량, pH조절제 적량을 이용하여 통상적인 방법으로 주사제를 제조하였다.

[제형예 6] 유연화장수(스킨로션)

서열번호 1 또는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 siRNA 1.0 중량%를 함유하는 리포좀 10중량%, L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염 1.00 중량%, 수용성 콜라겐 (1% 수용액) 1.00 중량%, 시트르산나트륨 0.10 중량%, 시트르산 0.05중량%, 감초 엑기스 0.20 중량%, 1,3-부틸렌글리콜 3.00 중량%, 정제수 잔량을 이용하여 유연화장수(스킨로션)을 제조하였다.

[제형예 7] 크림

서열번호 1 또는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 siRNA 1.00중량%를 함유하는 리포좀 10중량%, 폴리에틸렌글리콜모노스테아레이트 2.00 중량%, 자기유화형 모노스테아르산글리세린 5.00 중량%, 프로필렌글리콜 4.00 중량%, 스쿠알렌 6.00 중량%, 트리2-에틸헥산글리세릴 6.00 중량%, 스핑고당지질 1.00 중량%, 1,3-부틸렌글리콜 7.00 중량%, 밀랍 5.00 중량%, 정제수 잔량을 사용하여 크림형 제제를 제조하였다.

[제형예 8] 팩

서열번호 1 또는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 siRNA 1.00 중량%를 함유하는 리포좀 10중량%, 폴리비닐알코올 13.00 중량%, L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염 1.00 중량%, 라우로일히드록시프롤린 1.00 중량%, 수용성 콜라겐 (1% 수용액) 2.00 중량%, 1,3-부틸렌글리콜 3.00 중량%, 에탄올 5.00 중량%, 정제수 잔량을 사용하여 팩을 제조하였다.

[제형예 9] 건강식품

하기 표에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 건강 식품을 제조하였다.

성분	함량
서열번호 1 또는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 siRNA 1mg를 함유하는 리포좀	10㎎
비타민 혼합물
비타민 A 아세테이트	70 ㎍
비타민 E	1.0 ㎎
비타민 B1	0.13 ㎎
비타민 B2	0.15 ㎎
비타민 B6	0.5 ㎎
비타민 B12	0.2 ㎍
비타민 C	10 ㎎
비오틴	10 ㎍
니코틴산아미드	1.7 ㎎
엽산	50 ㎍
판토텐산 칼슘	0.5 ㎎
무기질 혼합물
황산제1철	1.75 ㎎
산화아연	0.82 ㎎
탄산마그네슘	25.3 ㎎
제1인산칼륨	15 ㎎
제2인산칼슘	55 ㎎
구연산칼륨	90 ㎎
탄산칼슘	100 ㎎
염화마그네슘	24.8 ㎎

상기 비타민 및 무기질 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 예로 혼합 조성하였으나, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

[제형예 10] 건강음료

성분	함량
서열번호 1 또는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 siRNA 1.5mg을 함유하는 리포좀	15㎎
구연산	1000 ㎎
올리고당	100 g
매실농축액	2 g
타우린	1 g
정제수	잔량
총 부피	900 ㎖

상기 표 2와 같이 총 부피 900㎖가 되도록 잔량의 정제수를 첨가하여 통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2리터 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관하여 건강음료를 제조하였다.

이상, 본 발명내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 실시태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의해 정의된다고 할 것이다.

<110> AMOREPACIFIC CORPORATION <120> COMPOSITION FOR MELANIN-ENHANCING COMPRISING SPECIFIC SMALL INTERFERING RNA <130> 16P420/IND <160> 2 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA <400> 1 ccaaccagaa caagcagaac a 21 <210> 2 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA <400> 2 gaacacgaag gcuguaacaa a 21

Claims

서열번호 1 또는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 siRNA를 유효성분으로 포함하는 모발 흑화용 또는 모발 백화 방지용 조성물.
서열번호 1 또는 서열번호 2 의 염기서열로 이루어진 siRNA를 유효성분으로 포함하는 멜라닌 저하성 질환의 예방 및 치료용 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 siRNA는 멜라닌 생성 또는 침착을 증진시키는 것인 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 siRNA는 티로시나제 및 TRP1 중 하나 이상의 발현을 증진시키는 것인 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 조성물 내 siRNA의 함량은 상기 조성물 총 중량 대비 0.000000001 중량% 내지 20 중량%인 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 siRNA의 투여량은 0.000001mg/kg/일 내지 20mg/kg/일인 조성물.
제2항에 있어서, 상기 멜라닌 저하성 질환은 백화증, 백반증, 탈색소 모반, 백색 비강진, 어루러기, 염증후 탈색증, 반상 경피증, 부분 백피증, 특발성 적상 저색소증 및 점상 백피증으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인, 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 조성물은 약학 조성물인 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 조성물은 모발 흑화용, 모발 백화 방지용, 멜라닌 저하성 질환의 예방 및 개선용 화장료 조성물인 조성물.