[go: up one dir, main page]

KR20160126605A - 프로바이오틱스로 사용될 수 있는 신규 유산균 및 이의 용도 - Google Patents

프로바이오틱스로 사용될 수 있는 신규 유산균 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20160126605A
KR20160126605A KR1020150057880A KR20150057880A KR20160126605A KR 20160126605 A KR20160126605 A KR 20160126605A KR 1020150057880 A KR1020150057880 A KR 1020150057880A KR 20150057880 A KR20150057880 A KR 20150057880A KR 20160126605 A KR20160126605 A KR 20160126605A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
lactis
rice bran
lactic acid
acid
composition
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
KR1020150057880A
Other languages
English (en)
Other versions
KR101689746B1 (ko
Inventor
서주원
양승환
사시쿠마
다모다란 카티
이성권
김정은
Original Assignee
명지대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 명지대학교 산학협력단 filed Critical 명지대학교 산학협력단
Priority to KR1020150057880A priority Critical patent/KR101689746B1/ko
Publication of KR20160126605A publication Critical patent/KR20160126605A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101689746B1 publication Critical patent/KR101689746B1/ko
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
    • A23L7/10—Cereal-derived products
    • A23L7/104—Fermentation of farinaceous cereal or cereal material; Addition of enzymes or microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/3262—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on blood cholesterol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/332—Promoters of weight control and weight loss
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2250/00—Food ingredients
    • A23V2250/02—Acid
    • A23Y2240/41—
    • C12R1/46—
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 혈중 콜레스테롤 저하 활성 등을 갖는 신규 락토코커스속 균주를 제공한다. 본 발명에 따른 특정 락토코커스속 균주는 내산성 및 내담즙성이 우수하여 인체에 경구투여시 대부분이 장에 도달할 수 있고, 장내에서 유해균의 번식을 효과적으로 억제하거나 혈중 콜레스테롤 수준을 감소시킬 수 있으며, 식품학적 안전성이 우수하기 때문에 프로바이오틱 소재로 유용하다. 또한, 본 발명에 따른 특정 락토코커스속 균주는 미강을 발효시켜 미강의 항산화 활성 또는 미강에 함유된 활성 성분의 함량을 증가시킬 수 있다. 따라서, 상기 발효 산물 또는 이의 추출물은 산화에 의한 노화, 산화 반응에 의해 유래되는 질환 등을 예방, 개선 또는 치료하는데에 유용한 식의약 소재 또는 화장료 소재로 사용될 수 있다.

Description

프로바이오틱스로 사용될 수 있는 신규 유산균 및 이의 용도{Novel lactic acid bacteria usable as probiotics and use thereof}
본 발명은 신규 유산균에 관한 것으로서, 더 상세하게는 프로바이오틱스에 요구되는 다양한 기능성을 가진 신규 유산균에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 신규 유산균의 용도에 관한 것으로서, 더 상세하게는 신규 유산균의 다양한 약학적 용도 등에 관한 것이다.
유산균은 인체의 소화계에 공생하면서 섬유질 및 복합 단백질들을 분해하여 중요한 영양성분으로 만드는 역할을 담당한다. 이와 같이 사람을 포함한 동물의 위장관 내에서 숙주의 장내 미생물 환경을 개선하여 숙주의 건강에 유익한 영향을 주는 살아있는 미생물을 통칭하여 프로바이오틱스라고 한다. 대표적인 프로바이오틱스로는 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.) 유산균, 락토코커스 속(Lactococcus sp.) 유산균 등이 있다. 프로바이오틱스가 나타내는 건강증진 효과로는 면역기능 개선, 감염예방, 무기물의 흡수개량, 장내 유해세균 억제에 의한 정장작용, 젖당불내증(lactose intolerance)의 경감, 변비 방지, 혈중 콜레스테롤의 감소, 항종양 작용, 당뇨 예방, 혈압강하 등이 있다. 프로바이오틱스로서 효과가 있기 위해서는 경구로 섭취된 후 위장관(gastrointestinal tract)을 통과하여 대부분이 대장에 도달하여야 하므로 기본적으로 내산성, 내담즙성 등이 우수하여야 한다.
최근 소득수준이 높아짐에 따라 식생활 문화에 있어서 고칼로리 식품의 섭취가 늘어 비만 및 각종 성인질환 발병율이 높아지고 있다. 성인성 질환을 유발시키는 요인 중에서도 가장 주된 요인은 동물성 지방의 과다한 섭취로 인한 혈중 고콜레스테롤로서 고지혈증, 동맥경화증, 지질 관련 대사증후군과 같은 질환의 위험 지표가 된다. 콜레스테롤을 저하시키는 유산균의 선발에 대한 많은 연구를 토대로, 유산균에 의한 콜레스테롤 흡수의 저하 기작을 보통 세 가지로 설명할 수 있다(대한민국 등록특허 제10-0930251호 참조). 첫번째는 유산균이 장내에 정착 증식하면서 콜레스테롤을 흡착하여 배설시키는 것이고 두번째는 유산균이 담즙산을 흡착하여 배설시키는 것이다. 이런 경우 콜레스테롤은 담즙산의 전구체이므로 부족한 담즙산을 보충하기 위해 콜레스테롤을 이용하게 되어 결과적으로 장내 콜레스테롤 농도를 감소시킬 수 있다. 그리고 세번째 기작은 유산균이 포합담즙산(conjugated bile acid)을 탈포합시키는 작용이다. 간에서 생성된 프리 담즙산(free bile acid)은 소장에서 타우린 또는 글라이신과 결합하여 포합담즙산(conjugated bile acid)이 된다. 포합담즙산은 지질 용해도가 높아 소장에서 콜레스테롤 등의 지질 흡수를 용이하게 한다. 그러므로, 포합담즙산이 많은 경우 혈중으로 흡수되는 콜레스테롤양이 많아져 혈중 콜레스테롤 농도가 높아진다. 그러나, 탈포합된 담즙산(deconjugated bile acid)은 지질용해도가 낮아 콜레스테롤 등 지질의 혈중 이행을 저하시키는 작용을 한다. 따라서, 포합담즙산을 탈포합시키는 담즙산 분해효소(bile salt hydrolase)를 갖는 균주는 지질 용해도를 낮추어 소장에서 콜레스테롤의 흡수를 저하시킬 수 있다. 따라서, 인체에 안전하면서도 콜레스테롤 저하 기능이 우수한 균주를 개발하고 이를 의약품 또는 기능성 식품으로 적용하는 것이 필요하다.
대한민국 등록특허공보 제10-0901190호에는 바다어류의 위장관 내에서 분리되며, 항균활성을 갖는 바다어류 유래의 락토코쿠스 락티스 젠64(KACC 91328P)가 개시되어 있다. 또한, 대한민국 공개특허공보 제10-2014-0020685호에는 수탁번호 KCTC 12170BP의 락토코쿠스 종(Lactococcus sp.) KR-050L과 이를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 또는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물이 개시되어 있다. 또한, 대한민국 공개특허공보 제10-2012-0118570호에는 다양한 식품 병원성균에 대한 생육억제 활성 갖는 김치 유래 락토코커스 락티스 (Lactococcus lactis) ET45 (KCTC 11767BP)가 개시되어 있다.
한편, 벼는 크게 왕겨층, 쌀겨층(米糠層), 눈(胚芽) 및 배유(胚乳)로 구성되어 있는데, 벼를 탈곡하여 겉껍질인 왕겨 층을 벗겨낸 것을 현미라 하고, 현미를 도정하여 쌀눈, 과피(果皮), 종피(種皮), 호분층(糊紛層) 등 쌀겨를 제거한 것이 백미이다. 이렇게 현미를 백미로 도정하는 과정에서 얻어진 쌀눈과 쌀겨 분말을 미강(rice bran)이라 한다.
미강은 약 30% 이상이 식이섬유이며, 15% 정도의 단백질과 10~15% 정도의 지방이 함유되어 있다. 현미는 백미보다 수 배 이상의 식이섬유를 공급할 수 있고, 알부민과 글로불린 등 양질의 단백질과 칼슘, 인, 나트륨, 철분 등의 무기질과 비타민 E, 니코틴산, 엽산, 판토텐산 등의 영양소를 다량 함유하고 있다. 현미가 건강식품소재로서의 식품학적 가치가 높은 것은 미강 부위에 기인한다고 볼 수 있다.
미강에 함유된 기능성을 가지는 인자들로는 이노시톨(inositol), 페룰산(ferulic acid), γ-오리자놀(γ-oryzanol), 불포화지방, 토코트리에놀(tocotrienol), β-시토스테롤(β-sitosterol) 등이 있다. 또한, 미강에는 마이오이노시톨(myoinositol), 콜린(choline) 및 나이아신(niacin) 등의 비타민 B와 세포 노화 및 손상을 야기 시키는 자유 래디컬이나 활성산소를 제거하는 항산화 물질인 비타민 E(토코페롤; Tocopherol)도 포함되어 있다. 특히, 미강에 함유된 페놀 화합물은 항산화성, 항콜레스테롤, 성장 촉진, 항균, 항암 활성 등 다양한 기능을 갖는 것으로 보고되고 있다(Cheruvanky R. 2000. Phytochemical functional Food, Phytochemical Products; Rice Bran. CRC Press, Boca raton, FL, USA. pp.347-376; Ogiwara T. et al. 2002. Radical scavenging activity and cytotoxicity of ferulic acid. Anticancer Res. 22: 2711-2717; Chun HS. et al. 1999. Comparative antimutagenic and antioxidative activities of rice with different milling fractions. Korean J. Food Sci. Technol. 31: 1371-1377).
최근에는 미강의 기능성을 증대하기 위해 미강을 다양한 미생물로 발효시키는 연구가 진행되고 있다. 예를 들어, 대한민국 등록특허공보 제10-1076104호에는 쌀겨에 곡물 및 우유를 첨가한 혼합물에 발효유 또는 효모액을 첨가하고 발효시켜 복용이 편리하고 풍미가 개선된 쌀겨 발효 조성물을 제조하는 방법이 개시되어 있다. 또한, 대한민국 공개특허공보 제10-2014-0143692호 및 대한민국 공개특허공보 제10-2015-0037226호에는 미강 열수 추출물을 락토바실러스 프랜타럼 홍(Lactobacillus plantarum HONG, 기탁번호: KFCC11556P)으로 발효시켜 제조한 미강 발효 추출물과, 상기 미강 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 뇌졸중 또는 심혈관계 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물이 개시되어 있다.
본 발명은 이러한 종래 배경하에서 도출된 것으로서, 본 발명의 일 목적은 혈중 콜레스테롤 저하 활성, 내산성, 내담즙성 또는 항균 활성 등의 다양한 기능성을 가져 프로바이오틱스로 사용될 수 있거나, 미강을 발효시켜 미강의 항산화 활성을 증가시키거나 미강에 함유된 활성 성분의 함량을 증대시킬 수 있는 신규 유산균을 제공하는데에 있다.
또한, 본 발명의 일 목적은 신규 유산균의 다양한 용도를 제공하는데에 있다.
본 발명의 발명자들은 손가락조(Finger Millet; 학명:Eleusine coracana) 죽으로부터 무수한 유산균을 스크리닝하고, 이 중 특정 락토코커스속(Lactococcus sp.) 균주가 혈중 콜레스테롤 저하 활성 등 다양한 생리화학적 활성을 가지고, 미강의 발효 균주로 사용될 때 미강의 기능성을 크게 향상시키는 점을 발견하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 일 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 예는 16S rDNA로 서열번호 1에 기재된 염기서열을 포함하는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis)로서, 혈중 콜레스테롤 저하 활성, 내산성, 내담즙성 또는 항균 활성에서 선택되는 1종 이상의 성질을 갖는 것을 특징으로 하는 유산균을 제공한다. 상기 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis)는 바람직하게는 미강을 발효시켜 미강의 항산화 활성 또는 미강에 함유된 활성 성분의 함량을 증가시킬 수 있다. 상기 미강에 함유된 활성 성분은 페놀산(Phenolic acid)일 수 있고, 바람직하게는 쿠마린산(Coumaric acid) 또는 페룰산(Ferulic acid)일 수 있다. 또한, 상기 미강에 함유된 활성 성분은 오리자놀(Oryzanol)일 수 있다. 또한, 상기 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis)는 바람직하게는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp. lactis) MJM60392(수탁번호: KACC 92029P)이다.
본 발명의 일 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 예는 16S rDNA로 서열번호 1에 기재된 염기서열을 포함하고 혈중 콜레스테롤 저하 활성, 내산성, 내담즙성 또는 항균 활성에서 선택되는 1종 이상의 성질을 갖는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis), 이의 배양물, 이의 파쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈중 콜레스테롤 저하용 조성물을 제공한다. 상기 혈중 콜레스테롤 저하용 조성물은 바람직하게는 약학 조성물 또는 식품 조성물일 수 있다. 또한, 본 발명의 일 예는 16S rDNA로 서열번호 1에 기재된 염기서열을 포함하고 혈중 콜레스테롤 저하 활성, 내산성, 내담즙성 또는 항균 활성에서 선택되는 1종 이상의 성질을 갖는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis), 이의 배양물, 이의 파쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하고, 비만, 고지혈증, 동맥경화증 또는 지질 관련 대사증후군에서 선택되는 어느 하나를 예방 또는 치료하기 위한 용도로 사용되는 약학 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명의 일 예는 16S rDNA로 서열번호 1에 기재된 염기서열을 포함하고 혈중 콜레스테롤 저하 활성, 내산성, 내담즙성 또는 항균 활성에서 선택되는 1종 이상의 성질을 갖는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis), 이의 배양물, 이의 파쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하고, 비만, 고지혈증, 동맥경화증 또는 지질 관련 대사증후군에서 선택되는 어느 하나를 예방 또는 개선하기 위한 용도로 사용되는 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 예는 페놀산을 함유하는 원료를 16S rDNA로 서열번호 1에 기재된 염기서열을 포함하고 혈중 콜레스테롤 저하 활성, 내산성, 내담즙성 또는 항균 활성에서 선택되는 1종 이상의 성질을 갖는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis)로 발효시킨 산물로서, 상기 발효에 의해 원료에 함유된 페놀산의 함량이 증가하는 것을 특징으로 하는 유산균 발효물을 제공한다. 상기 페놀산을 함유하는 원료는 미강인 것이 바람직하다. 상기 페놀산은 쿠마린산(Coumaric acid) 또는 페룰산(Ferulic acid)인 것이 바람직하다.
본 발명의 일 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 예는 오리자놀(Oryzanol)을 함유하는 원료를 16S rDNA로 서열번호 1에 기재된 염기서열을 포함하고 혈중 콜레스테롤 저하 활성, 내산성, 내담즙성 또는 항균 활성에서 선택되는 1종 이상의 성질을 갖는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis)로 발효시킨 산물로서, 상기 발효에 의해 원료에 함유된 오리자놀의 함량이 증가하는 것을 특징으로 하는 유산균 발효물을 제공한다. 상기 오리자놀(Oryzanol)을 함유하는 원료는 미강(rice bran)인 것이 바람직하다.
본 발명의 일 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 예는 미강(rice bran)을 16S rDNA로 서열번호 1에 기재된 염기서열을 포함하고 혈중 콜레스테롤 저하 활성, 내산성, 내담즙성 또는 항균 활성에서 선택되는 1종 이상의 성질을 갖는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis)로 발효시킨 산물로서, 상기 발효에 의해 미강의 항산화 활성 또는 미강에 함유된 활성 성분의 함량이 증가하는 것을 특징으로 하는 유산균 발효물을 제공한다. 상기 미강에 함유된 활성 성분은 페놀산(Phenolic acid)일 수 있고, 바람직하게는 쿠마린산(Coumaric acid) 또는 페룰산(Ferulic acid)일 수 있다. 또한, 상기 미강에 함유된 활성 성분은 오리자놀(Oryzanol)일 수 있다.
본 발명의 일 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 예는 미강(rice bran)을 16S rDNA로 서열번호 1에 기재된 염기서열을 포함하고 혈중 콜레스테롤 저하 활성, 내산성, 내담즙성 또는 항균 활성에서 선택되는 1종 이상의 성질을 갖는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis)로 발효시켜 수득한 발효물 또는 상기 발효물의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 혈당 저하, 미백 또는 항염증용 조성물을 제공한다. 상기 발효물은 바람직하게는 발효 전보다 항산화 활성 또는 활성 성분의 함량이 증가한다. 또한, 상기활성 성분은 페놀산(Phenolic acid)일 수 있고, 바람직하게는 쿠마린산(Coumaric acid) 또는 페룰산(Ferulic acid)일 수 있다. 또한, 상기 활성 성분은 오리자놀(Oryzanol)일 수 있다. 또한, 상기 항산화, 혈당 저하, 미백 또는 항염증용 조성물은 바람직하게는 약학 조성물, 식품 조성물 또는 화장료 조성물일 수 있다.
본 발명에 따른 특정 락토코커스속 균주는 내산성 및 내담즙성이 우수하여 인체에 경구투여시 대부분이 장에 도달할 수 있고, 장내에서 유해균의 번식을 효과적으로 억제하거나 혈중 콜레스테롤 수준을 감소시킬 수 있으며, 식품학적 안전성이 우수하기 때문에 프로바이오틱 소재로 유용하다.
또한, 본 발명에 따른 특정 락토코커스속 균주는 혈중 콜레스테롤 강하 효능 등과 같은 다양한 기능성을 갖기 때문에 비만, 고지혈증, 동맥경화증 또는 지질 관련 대사증후군과 같은 질환을 예방, 개선 또는 치료하는데에 유용한 식의약 소재로 사용될 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 특정 락토코커스속 균주는 미강을 발효시켜 미강의 항산화 활성 또는 미강에 함유된 활성 성분의 함량을 증가시킬 수 있다. 따라서, 상기 발효 산물 또는 이의 추출물은 산화에 의한 노화, 산화 반응에 의해 유래되는 질환 등을 예방, 개선 또는 치료하는데에 유용한 식의약 소재 또는 화장료 소재로 사용될 수 있다.
도 1은 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 진화관계도를 나타낸 도면이다.
도 2는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 내산성 및 내담즙성 실험 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 안전성 평가 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 콜레스테롤 저하능 측정 결과에 대한 그래프이다.
도 5는 미강 유산균 발효물 등에 존재하는 페놀산을 HPLC로 분석한 결과이다.
도 6은 미강 유산균 발효물 등에 존재하는 γ-오리자놀을 HPLC로 분석한 결과이다.
이하, 본 발명에서 사용한 용어를 설명한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "배양물"이란 미생물을 공지의 액체 배지 또는 고체 배지에서 배양시켜 수득한 산물을 의미하며, 미생물이 포함되는 개념이다.
본 발명에서 "약학적으로 허용가능한" 및 "식품학적으로 허용가능한"이란 생물체를 상당히 자극하지 않고 투여 활성 물질의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 것을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "예방"은 본 발명의 조성물의 투여로 특정 질환의 증상을 억제하거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "치료"는 본 발명의 조성물의 투여로 특정 질환의 증상을 호전 또는 이롭게 변경시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "개선"은 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다. 이 때, 개체는 본 발명의 조성물을 투여하여 특정 질환의 증상이 호전될 수 있는 질환을 가진 인간, 원숭이, 개, 염소, 돼지 또는 쥐 등 모든 동물을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜 또는 위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 이는 개체의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시에 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 일 측면은 프로바이오틱스로 사용될 수 있는 신규 유산균에 관한 것이다. 본 발명의 일 예에 따른 신규 유산균은 16S rDNA로 서열번호 1에 기재된 염기서열을 포함하고, 혈중 콜레스테롤 저하 활성, 내산성, 내담즙성 또는 항균 활성에서 선택되는 1종 이상의 성질을 갖는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp. lactis)이다. 또한, 상기 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis)는 미강을 발효시켜 미강의 항산화 활성 또는 미강에 함유된 활성 성분의 함량을 증가시킬 수 있다. 본 발명에서 사용되는 용어인 "활성 성분"은 영양학적으로 유용하거나 생리학적으로 유용한 물질을 모두 포함한다. 상기 미강에 함유된 활성 성분은 페놀산(Phenolic acid)일 수 있고, 바람직하게는 쿠마린산(Coumaric acid) 또는 페룰산(Ferulic acid)일 수 있다. 상기 페놀산은 벤젠 핵에 페놀성 수산기(OH)와 카르복실기(COOH)를 가지는 살리실산 등의 방향족 카르복실산이다. 또한, 상기 미강에 함유된 활성 성분은 오리자놀(Oryzanol)일 수 있다. 또한, 상기 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis)는 바람직하게는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392(수탁번호: KACC 92029P)이다.
본 발명의 다른 측면은 신규 유산균의 다양한 용도에 관한 것이다. 예를 들어, 본 발명은 신규 유산균의 일 용도로 전술한 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis), 이의 배양물, 이의 파쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈중 콜레스테롤 저하용 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 신규 유산균의 일 용도로 전술한 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis), 이의 배양물, 이의 파쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하고, 비만, 고지혈증, 동맥경화증 또는 지질 관련 대사증후군에서 선택되는 어느 하나를 예방, 개선 또는 치료하기 위한 용도로 사용되는 조성물을 제공한다. 본 발명에서 유산균의 배양물은 락토코커스속 균주를 배지에서 배양시켜 수득한 산물로서, 상기 배지는 공지의 액체 배지 또는 고체 배지에서 선택될 수 있으며, 예를 들어 MRS 액체 배지, MRS 한천 배지일 수 있다.
또한, 본 발명은 신규 유산균의 다른 용도로 페놀산을 함유하는 원료를 전술한 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis)로 발효시킨 산물로서, 상기 발효에 의해 원료에 함유된 페놀산의 함량이 증가하는 것을 특징으로 하는 유산균 발효물을 제공한다. 상기 페놀산을 함유하는 원료는 그 종류가 크게 제한되지 않으며, 예를 들어 현미, 미강 등에서 선택될 수 있다. 상기 페놀산은 벤젠 핵에 페놀성 수산기(OH)와 카르복실기(COOH)를 가지는 살리실산 등의 방향족 카르복실산이라면 그 종류가 크게 제한되지 않으며, 예를 들어 쿠마린산(Coumaric acid) 또는 페룰산(Ferulic acid)에서 선택될 수 있다.
또한, 선에 본 발명은 신규 유산균의 다른 용도로 오리자놀(Oryzanol)을 함유하는 원료를 전술한 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis)로 발효시킨 산물로서, 상기 발효에 의해 원료에 함유된 오리자놀의 함량이 증가하는 것을 특징으로 하는 유산균 발효물을 제공한다. 상기 오리자놀(Oryzanol)을 함유하는 원료는 그 종류가 크게 제한되지 않으며, 예를 들어 현미, 미강(rice bran)에서 선택될 수 있다.
또한, 본 발명은 신규 유산균의 다른 용도로 미강을 전술한 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis)로 발효시킨 산물로서, 상기 발효에 의해 미강의 항산화 활성 또는 미강에 함유된 활성 성분의 함량이 증가하는 것을 특징으로 하는 유산균 발효물을 제공한다. 상기 미강에 함유된 활성 성분은 바람직하게는 페놀산 또는 오리자놀이다. 또한, 상기 페놀산은 바람직하게는 쿠마린산(Coumaric acid) 또는 페룰산(Ferulic acid)이다.
또한, 본 발명은 신규 유산균의 다른 용도로 미강을 전술한 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis)로 발효시켜 수득한 발효물 또는 상기 발효물의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 혈당 저하, 미백 또는 항염증용 조성물을 제공한다. 상기 발효물은 발효 전보다 항산화 활성이 증가하기 때문에 항산화용 소재로 사용될 수 있다. 또한, 상기 발효물은 발효 전보다 활성 성분의 함량이 증가하기 때문에 활성 성분의 기능성에 기초하여 혈당 저하, 미백 또는 항염증용 소재로 사용할 수 있다. 상기 활성 성분은 페놀산(Phenolic acid)인 것이 바람직하고, 쿠마린산(Coumaric acid) 또는 페룰산(Ferulic acid)인 것이 더 바람직하다. 또한, 상기 활성 성분은 오리자놀(Oryzanol)인 것이 더 바람직하다. 파라-쿠마린산은 대한민국 공개특허공보 제10-2009-0115787호에 의하면 미백용 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있다. 또한, 페룰산은 대한민국 공개특허공보 제10-2006-0033071호에 의하면 항산화, 항노화 또는 항염증용 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있다. 또한, 감마-오리자놀은 대한민국 등록특허공보 제10-0496019호에 의하면 혈당 저하용 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있다. 본 발명은 유산균에 의한 미강 발효물 또는 이의 추출물의 용도와 관련하여 대한민국 공개특허공보 제10-2009-0115787호, 대한민국 공개특허공보 제10-2006-0033071호 및 대한민국 등록특허공보 제10-0496019호에 개시된 내용을 참조한다.
상기 발효물의 추출물은 다양한 방법으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 미강을 본 발명의 신규 유산균으로 발효시킨 산물로부터 추출물을 얻는 방법 또는 미강의 추출물을 본 발명의 신규 유산균으로 발효시키는 방법 등이 있다. 한편, 발효물의 추출물을 얻기 위해서는 추출 과정이 필요한데, 이때 추출 방법으로는 당업계에 공지된 통상의 추출 방법, 예를 들어 용매 추출법을 사용할 수 있다. 용매 추출법을 이용하여 발효물의 추출물을 제조할 때 사용될 수 있는 추출 용매는 물, 탄소 수가 1 내지 4인 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올) 또는 이들의 혼합물인 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 추출 용매로 물을 사용하는 경우 물은 열수인 것이 바람직하다. 또한, 추출 용매로 알코올을 사용하는 경우 알코올은 탄소 수가 1 내지 4인 저급 알코올인 것이 바람직하고, 저급 알코올은 메탄올 또는 에탄올에서 선택되는 것이 더 바람직하다. 또한, 추출 용매로 함수 알코올을 사용하는 경우 알코올 함량은 50~90%인 것이 바람직하다. 한편, 발효물의 추출물은 상기 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다. 예를 들어, 이산화탄소를 이용한 초임계 유체 추출법(supercritical fluid extraction)에 의한 추출, 초음파를 이용한 추출법에 의한 추출, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리 또는 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 및 추출방법을 통해 얻어진 활성 분획도 본 발명의 추출물에 포함된다. 일반적으로 초임계 유체는 기체가 고온 고압 조건에서 임계점에 도달하였을 때 갖는 액체 및 기체의 성질을 지니고 있으며, 화학적으로 비극성 용매와 유사한 극성을 지니고 있으며 이러한 특성으로 인해 초임계 유체는 지용성 물질의 추출에 사용되고 있다(J. Chromatogr. A. 1998;479:200-205). 이산화탄소는 초임계 유체기기의 작동으로 압력 및 온도가 임계점까지 이르는 과정을 거치면서 액체 및 기체 성질을 동시에 지닌 초임계 유체가 되고 그 결과 지용성 용질에 대한 용해도가 증가한다. 초임계 이산화탄소가 일정량의 시료를 함유한 추출 용기를 통과하게 되면 시료에 함유된 지용성 물질은 초임계 이산화탄소에 추출되어 나온다. 지용성 물질을 추출한 후 추출 용기에 남아있는 시료에 다시 소량의 공용매가 함유된 초임계 이산화탄소를 흘려 통과시키면 순수한 초임계 이산화탄소만으로는 추출되지 않았던 성분들이 추출되어 나오게 할 수 있다. 본 발명의 초임계 추출법에 사용되는 초임계 유체는 초임계 이산화탄소 또는 이산화탄소에 추가적으로 공용매를 혼합한 혼합유체를 사용함으로써 효과적으로 유효 성분을 추출할 수 있다. 이러한 공용매로 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다. 추출된 시료는 대부분 이산화탄소를 함유하고 있는데 이산화탄소는 실온에서 공기 중으로 휘발되고, 공용매는 감압증발기로 제거할 수 있다. 또한, 상기 초음파 추출법은 초음파 진동에 의해 발생되는 에너지를 이용하는 추출방법으로, 초음파가 수용성 용매 속에서 시료에 포함된 불용성인 용매를 파괴시킬 수 있으며, 이때 발생되는 높은 국부온도로 인하여 주위에 위치하는 반응물 입자들의 운동에너지를 크게 하기 때문에 반응에 필요한 충분한 에너지를 얻게 되고, 초음파 에너지의 충격효과로 높은 압력을 유도하여 시료에 함유된 물질과 용매의 혼합 효과를 높여주어 추출효율을 증가시키게 된다. 초음파 추출법에 사용할 수 있는 추출용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸 에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다. 추출된 시료는 진공 여과하여 여과액을 회수한 후 감압증발기로 제거하고, 동결 건조하는 통상의 추출물 제조방법을 통해 추출물을 얻을 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 조성물들은 사용 목적 내지 양상에 따라 약학 조성물, 식품 첨가제, 식품 조성물(특히 기능성 식품 조성물), 화장료 조성물 또는 사료 첨가제 등으로 구체화될 수 있고, 조성물 내에서 유효성분인 특정 락토코커스속 균주 또는 특정 락토코커스속 균주로 발효시킨 발효물의 함량도 조성물의 구체적인 형태, 사용 목적 내지 양상에 따라 다양한 범위에서 조정될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물에서 유효성분인 신규 유산균, 이의 배양물, 이의 파쇄물 또는 이의 추출물의 함량은 크게 제한되지 않는다. 또한, 본 발명에 따른 약학 조성물에서 유효성분인 미강을 신규 유산균으로 발효시켜 수득한 발효물 또는 이의 추출물의 함량은 크게 제한되지 않는다. 예를 들어, 본 발명에 따른 약학 조성물에서 유효성분의 함량은 조성물 총 중량을 기준으로 0.01~99 중량%, 바람직하게는 0.5~50 중량%, 더 바람직하게는 1~30 중량%일 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 약학 조성물은 유효성분 외에 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제와 같은 첨가제를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 또한, 본 발명의 약학 조성물은 신규 유산균, 이의 배양물, 이의 파쇄물 또는 이의 추출물 외에 비만, 고지혈증, 동맥경화증, 지질 관련 대사증후군의 예방 또는 치료 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 더 함유할 수 있다. 또한, 본 발명의 약학 조성물은 미강을 신규 유산균으로 발효시켜 수득한 발효물 또는 이의 추출물 외에 비만, 고지혈증, 동맥경화증, 지질 관련 대사증후군 등에 대해 예방 또는 치료 효과를 갖거나 항산화 활성을 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 더 함유할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 통상의 방법에 의해 경구 투여를 위한 제형 또는 비경구 투여를 위한 제형으로 제제화될 수 있고, 제제화할 경우 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 유효성분에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스(Sucrose), 락토오스(Lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 더 나아가 당 분야의 적정한 방법으로 또는 Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 목적하는 방법에 따라 인간을 포함한 포유류에 경구 투여되거나 비경구 투여될 수 있으며, 비경구 투여 방식으로는 피부 외용, 복강내주사, 직장내주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식 등이 있다. 본 발명의 약학 조성물의 투여량은 약학적으로 유효한 양이라면 크게 제한되지 않으며, 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하다. 본 발명의 약학 조성물의 통상적인 1일 투여량은 크게 제한되지 않으나 바람직하게는 유효성분을 기준으로 할 때 0.1 내지 3000 ㎎/㎏이고, 더 바람직하게는 1 내지 2000 ㎎/㎏이며, 하루 1회 또는 수회로 나누어 투여될 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 식품 조성물에서 유효성분인 신규 유산균, 이의 배양물, 이의 파쇄물 또는 이의 추출물의 함량은 조성물 총 중량을 기준으로 0.01~50 중량%, 바람직하게는 0.1~25 중량%, 더 바람직하게는 0.5~10 중량%이나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 본 발명에 따른 식품 조성물에서 유효성분인 미강을 신규 유산균으로 발효시켜 수득한 발효물 또는 이의 추출물의 함량은 조성물 총 중량을 기준으로 0.01~50 중량%, 바람직하게는 0.1~25 중량%, 더 바람직하게는 0.5~10 중량%이나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 식품 조성물은 환제, 분말, 과립, 침제, 정제, 캡슐, 또는 액제 등의 형태를 포함하며, 구체적인 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 기능수, 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다. 본 발명의 식품 조성물은 유효성분 외에 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 또한, 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분들은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 향미제로는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 향미제나 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 향미제 등을 사용할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물에서 유효성분인 미강을 신규 유산균으로 발효시켜 수득한 발효물 또는 이의 추출물의 함량은 조성물 총 중량을 기준으로 0.01~30 중량%, 바람직하게는 0.01~20 중량%, 더 바람직하게는 0.1~10 중량%이나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 화장료 조성물은 유효성분 외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다. 본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다. 본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용될 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.
이하, 본 발명을 실시예를 통하여 보다 구체적으로 설명한다. 다만, 하기 실시예는 본 발명의 기술적 특징을 명확하게 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 보호범위를 한정하는 것은 아니다.
1. 유산균의 분리 및 동정
(1) 유산균의 분리
인도 전통 음식인 손가락조(Finger Millet; 학명: Eleusine coracana) 죽을 멸균수로 10배 내지 107배로 희석하고, 희석액을 1.5%의 한천이 포함된 MRS 배지(Difco, USA), GYP(Glucose Yeast Extract Peptone) 배지 및 YPD(Yeast Extract Peptone Dextrose) 배지에 도말한 후, 37℃에서 약 24시간 동안 배양하였다. 이후, 노란색 콜로니를 형성한 균주들을 분리하고 해당 배지에 계대배양한 후, 해당 균주를 순수분리하였다.
(2) 선별한 유산균의 동정
손가락조 죽으로부터 분리된 25개 균주들의 생리학적 특성 및 16S rDNA 서열을 분석하여 균주의 종을 확정하고, 균주명을 부여하였다.
상기 균주들 중 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 생리학적 특성은 하기 표 1과 같다. 또한, 상기 유산균의 생리학적 특성을 대표적인 유산균인 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) GG의 생리학적 특성과 비교하여 나타내었다. 하기 표 1에 기된 “+”는 양성 반응을 의미하고, “-“는 음성 반응을 의미한다.
표현형 특성 Lactobacillus lactis subsp. lactis MJM60392 Lactobacillus rhamnosus GG
Gram 염색 + +
Catalase 활성 - -
β-galactosidase activity - +
β-glucosidase activity - +
발효 패턴 Homo-발효 Homo-발효
* 발효 패턴 : HHD(Homofermentative-Heterofermentative Differential) 배지에서 콜로니를 형성하면 Homo-발효 패턴을 가지는 것으로 표시함.
또한, 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 화학분류학적 특성으로 16S rDNA를 측정하였고, 그 결과 서열번호 1의 염기서열을 갖는 것으로 나타났다. 상기 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) 균주의 16S rDNA 염기서열의 유사성을 Genebank(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)의 BLAST 검색으로 분석한 결과, 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) 표준 균주의 16S rDNA와 99%의 상동성을 보였다.
도 1은 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 진화관계도를 나타낸 도면이다. 도 1의 진화관계도는 Clustral X 프로그램을 사용하여 다수 균주의 연관관계를 분석하여 서열을 정렬하였고, MEGA 5 소프트웨어를 사용하여 완성하였다.
2. 유산균의 내산성 및 내담즙성에 대한 in-vitro 실험
(1) 실험 방법
락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주를 MRS 액체 배지에 접종하고 37℃에서 약 24시간 동안 배양하였다. 이후, 상기 배양액을 원심 분리하여 균주를 침전시키고 PBS 용액(pH 7.2)으로 2회 세척하여 균주를 1차 회수하였다. 1차 회수한 균주를 완충용액(pH 2 및 pH 3)에 1×105 CFU/㎖ 수준으로 각각 접종하고 37℃에서 3시간 동안 배양하였다. 상기 배양액을 다시 원심 분리한 후 PBS 용액으로 세척하여 균주를 2차 회수하였다. 2차 회수한 균주를 MRS 한천 배지에 접종하고 37˚C에서 약 24시간 동안 배양한 후 600㎚에서 배양액의 흡광도를 측정하여 내산성을 평가하였다.
내담즙성은 2차 회수한 균주를 0.3%의 농도로 담즙이 첨가된 MRS 고체 배지에 접종하고, 37˚C에서 약 24시간 동안 배양한 후 600㎚에서 배양액의 흡광도를 측정하여 평가하였다.
(2) 측정 결과
도 2는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 내산성 및 내담즙성 실험 결과를 나타낸 것이다.
도 2에서 보이는 바와 같이 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주는 내산성 및 내담즙성을 갖는 것으로 확인되었다. 이는 본 발명에 따른 신규 균주가 체내에서 위액의 영향을 받지 않고 장까지 도달할 수 있으며 장내에서는 담즙의 영향을 받지 않고 생존할 수 있음을 나타낸다.
3. 유산균의 안전성 평가
(1) 생체 유래 아민 생성 확인 방법
락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주를 L-phenlyalanine, L-lysine, L-tryptophan, L-tyrosine, L-argnine, L-ornithine, L-histidine을 각각 추가한 decarboxylase 배지에서 배양한 후, Bover-Cid와 Holzapfel의 방법(Bover-Cid S, Hozapfel WH. Improved screening procedure for biogenic amine production by lactic acid bacteria. International Journal of Food Microbiology, 1999)에 따라 생체 유래 아민 생성 여부를 확인하였으며, 양성 대조 균주로 엔테로코커스 피아칼리스(Enterococcus feacalis)를 사용하였다.
(2) 뮤신 분해 확인 방법
돼지의 위에서 분리한 Type Ⅲ 뮤신(Sigma, Korea)을 이용하여 Abe 등의 방법(Abe et al., Safety evaluation of probiotic bifidobacteria by analysis of mucin degradation activity and translocation ability, Anaerobe, 2010)과 Oh 등의 방법(Oh et al., Isolation of bacteria from chunggukjang prepared by rice straw and identification of protease secreted, Journal of Life Science, 2009)에 따라 뮤신 분해 여부를 확인하였으며, 양성 대조 균주로 슈도모나스 아에루지노사(Pseudomonas aeruginosa) KCCM 11802를 사용하였다.
(3) 용혈 현상 검사 방법
Abe 등의 방법(Abe et al., Safety evaluation of probiotic bifidobacteria by analysis of mucin degradation activity and translocation ability, Anaerobe, 2010)과 Oh 등의 방법(Oh et al., Isolation of bacteria from chunggukjang prepared by rice straw and identification of protease secreted, Journal of Life Science, 2009)에 따라 용혈 현상 여부를 확인하였으며, 양성 대조 균주로 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KACC 11240을 사용하였다.
(4) 측정 결과
도 3은 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 안전성 평가 결과를 나타낸 것이다.
도 3의 a)는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 생체 유래 아민 생성 여부를 측정한 결과를 나타낸 도면이다. 도 3의 a)에서 보이는 control 사진은, 아미노산을 첨가하지 않은 decarboxylase 배지를 사용한 실험 결과를 나타낸 것이다. 도 3의 a)에서 보이는 바와 같이 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주는 생체 유래 아민을 생성하지 않는 것으로 확인되었다.
도 3의 b)는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 뮤신 분해 여부를 측정한 결과를 나타낸 도면이다. 도 4의 b)에서 보이는 바와 같이 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp. lactis) MJM60392 균주는 뮤신 분해를 하지 않는 것으로 확인되었다.
도 3의 c)는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 용혈 현상 여부를 측정한 결과를 나타낸 도면이다. 도 4의 c)에서 보이는 바와 같이 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp. lactis) MJM60392 균주는 용혈현상을 보이지 않는 것으로 확인되었다.
따라서, 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주는 인체에 투여할 수 있는 안전한 균주인 것으로 확인되었다.
4. 유산균의 항생제 감수성 검사
각각의 항생제 100㎍을 종이 디스크에 사전 로딩한 후, 디스크 확산법을 통해 유산균의 항생제 감수성 여부를 검사하였다.
락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 항생제 감수성 검사에 대한 결과를 하기 표 2와 같이 나타내었다.
항생제(Antibiotics) 항생제를 중심으로 한 성장저해영역 반지름(mm)
Chloramphenicol 40
Tetracyclin 22
Lincomycin 22
Erythromycin 48
Penicillin 12
Ampicillin 52
Vancomycin 25
Novobiocin 31
Rifampicin 36
Neomycin 10
상기 표 2에 나타낸 바와 같이 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주는 Chloramphenicol, Tetracyclin, Lincomycin, Erythromycin, Penicillin, Ampicillin, Vancomycin, Novobiocin, Rifampicin 및 Neomycin 같은 항생제에 내성을 갖지 않는 것으로 확인되었다.
5. 유산균의 항미생물 활성 검사
(1) 실험 방법
락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 항미생물 활성 검사는 인간, 동물 및 음식의 유해미생물을 사용하여 수행하였다. 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주 배양액을 Cellulose acetate filter(pore size 0.2㎛)로 여과하고, 여과 배양액을 원심진공증발기(Buchi, Switzerland)를 사용하여 10배로 농축시킨 후, 상기 농축 배양액을 멸균한 증류수에 혼합하여 희석하였다. 이후, 희석된 농축 배양액 100㎕를 8㎜ 직경의 종이 디스크에 로딩하여 건조시켰다. 이후, 종이 디스크를 유해 미생물이 도포된 LB 한천 플레이트 상에서 18시간 동안 배양한 후, 저해 영역을 확인하였다. 전체 실험은 재현성을 점검하기 위해 3회 반복 수행되었다.
(2) 측정 결과
락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 항미생물 활성에 대한 측정 결과를 하기 표 3에 나타내었다.
유해 미생물 MJM60392 배양액의 유해 미생물에 대한 성장저해영역 반지름(㎜)
Staphylococcus aureus KCCM 11335 13
Salmonella gallinarum KCTC 2931 24
Methicillin-resistant S. aureus KCCM 40510 16
Escherichia coli O138 KCTC 2615 17
Escherichia coli O1 KCTC 2441 12
Escherichia coli K99 13
Salmonella typhi KCTC 2514 15
Salmonella choleraesuis KCTC 2932 16
Pseudomonas aeruginosa KCCM 11802 13
상기 표 3에 나타낸 바와 같이 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주는 해로운 균의 성장을 저해하는 항미생물 물질을 생산한다. 이러한 해로운 균에는 E. coli O138 KCTC 2615, E. coli O1 KCTC 2441, E. coli K99, Salmonella typhi KCTC 2514, Salmonella choleraesuis KCTC 2932, Pseudomonas aeruginosa KCCM 11802, Staphylococcus aureus KCCM 11335, Salmonella gallinarum KCTC 2931 및 Methicillin- resistant Staphylococcus aureus KCCM 40510 등이 포함되고, 장내 다른 미생물도 포함될 수 있다.
6. 유산균의 콜레스테롤 저하능 측정
(1) 실험 방법
에탄올과 Tween 80(polyoxyethylene sorbitan mono-oleate)을 3:1의 부피비로 혼합한 용액에 콜레스테롤을 100㎍/㎖의 농도로 녹인 후, 상기 혼합액을 멸균한 MRS 액체 배지에 첨가하여 콜레스테롤-MRS 배지 혼합액을 제조하였다. 그리고 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주를 MRS 액체 배지에 배양하고, 이 배양액을 1×107 CFU/㎖의 양으로 상기 콜레스테롤-MRS 배지 혼합액에 접종한 후, 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 이후, 상기 배양액을 4℃에서 약 10분 동안 3,000rpm의 속도로 원심분리하여 균체를 회수하였고, BCS Total cholesterol kit(Bioclinical system, Korea)을 이용하여 남은 배지의 콜레스테롤 농도를 측정하였다. 양성 대조 균주로 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) GG 균주를 사용하였다.
(2) 측정 결과
도 4는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 콜레스테롤 저하능 측정 결과에 대한 그래프이다.
도 4에서 보이는 바와 같이, 나타낸 바와 같이 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 콜레스테롤 저하율은 약 58%로서 양성 대조 균주로 사용된 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) GG 균주의 약 32%보다 약 1.8배 높은 것을 확인할 수 있다.
7. 유산균을 이용한 미강 발효의 최적화 조건 탐색 실험
(1) 미강의 최적 발효 시간 및 최적 발효 온도 탐색 실험
미강 분말을 20 중량%의 함량이 되도록 증류수에 현탁한 후, 121℃에서 20분간 가압 멸균하였다.
-80℃의 온도하에 저장되어 있는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 순수 배양물을 MRS 액체 배지에서 재생시켰다. 이후 15㎖의 테스트 튜브에서 5㎖의 종균(seed) 배양물을 준비하였다.
순수하게 배양된 종균(seed) 배양물을 미강 분말 현탁액에 총 부피의 1% 농도로 접종하고, 30℃, 37℃, 40℃에서 24시간 동안 혐기적 조건하에서 정치 배양하여 유산균 발효를 수행하였다. 또한, 대조 균주로 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) GG ATCC 53103 균주를 사용하여 동일한 방법으로 유산균 발효를 수행하였다.
이후, pH 미터기를 이용하여 발효액의 pH를 측정하였다. 또한, 발효액을 MRS 한천 배지에 도말한 후 생성되는 콜로니수를 측정하고 균체수를 계산하였다.
(2) 실험 결과
미강 분말 현탁액의 발효 시간에 따른 발효액의 pH 및 균체수 측정 결과를 하기 표 4에 나타내었다.
발효 시간
(hr)		 Lactococcus lactis subsp . lactis MJM60392 Lactobacillus rhamnosus GG
pH cell counts
(CFU/㎖)		 pH cell counts
(CFU/㎖)
0 5.5 1.4×106 4.1 1.4×106
18 4.7 2.9×109 4.1 2.4×108
24 4.5 4.3×109 4.2 9.0×109
* 표 4에서 발효 온도는 37℃임
표 4에 따르면 발효액 내 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 균체수는 발효 후 24 시간이 경과하였을 때 가장 많았다. 미강의 함량이 10 중량%인 미강 분말 현탁액을 사용한 경우에도 거의 비슷한 수치가 측정되었다.
또한, 발효 온도별 발효액의 pH 및 균체수 측정 결과를 하기 표 5에 나타내었다.
발효 온도
(℃)		 Lactococcus lactis subsp . lactis MJM60392 Lactobacillus rhamnosus GG
pH cell counts
(CFU/㎖)		 pH cell counts
(CFU/㎖)
30 4.7 3.2×109 4.1 7.6×109
37 4.5 4.3×109 4.2 9.0×109
40 5.1 5.2×108 4.1 8.4×108
* 표 5에서 미강 분말 현탁액 내의 미강 함량은 20 중량%이고, 발효 시간은 24 hr임
표 5에 따르면, 발효액 내 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 균체수는 발효 온도가 37℃이었을 때 가장 많았고, 이를 통해 최적의 발효 온도는 37℃로 확인되었다.
8. 미강 유산균 발효물 제조 및 발효에 따른 활성 성분 함량 변화 분석
(1) 미강 유산균 발효물의 제조
미강 분말을 20 중량%의 함량이 되도록 증류수에 현탁한 후, 121℃에서 20분간 가압 멸균하였다.
-80℃의 온도하에 저장되어 있는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 순수 배양물을 MRS 액체 배지에서 재생시켰다. 이후 250㎖의 플라스크에서 100㎖의 종균(seed) 배양물을 준비하였다.
순수하게 배양된 종균(seed) 배양물을 미강 분말 현탁액에 총 부피의 1% 농도로 접종하고, 37℃에서 24시간 동안 혐기적 조건하에서 정치 배양하여 액상의 미강 유산균 발효물을 제조하였다. 또한, 발효 종료 후 액상의 미강 유산균 발효물을 -20℃에서 12시간 동안 냉동 저장한 후, 16시간 이상 동결건조시켜 수분 함량이 약 2~4 중량%인 분말 형태의 미강 유산균 발효물을 제조하였다.
또한, 양성 대조 균주로 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) GG ATCC 53103 균주를 사용하여 동일한 조건에서 미강 유산균 발효물을 제조하였다.
(2) 미강 유산균 발효물의 페놀산 함량 변화 분석
추출 용매로 에틸아세테이트를 사용하여 액상의 미강 유산균 발효물 또는 분석 원료로부터 추출물을 제조하였다. 상기 추출물의 일정량을 필터로 여과하여 분석 시료를 제조하였다. 이후, 분석 시료에 존재하는 페놀산의 함량을 고속액체크로마토그래피(HPLC)로 분석하였다. 고속액체크로마토그래피(HPLC) 분석 조건은 다음과 같다.
* 분석 컬럼 : YMC-Pack ODS-A 컬럼(250ⅹ4.6mm, 5μm, No.0425040678, YMC)
* 분석 시료 주입 부피 : 20㎕
* 이성분계 이동상 : 제1상으로 증류수와 아세트산을 99.8:0.2의 부피비로 혼합한 용액을 사용하였고, 제2상으로 메탄올을 사용하였고, 이동상의 유속은 1.0㎖/min이고, 제1상 대 제2상의 부피비를 100:0으로 시작하여 11분에 걸쳐 75:25로 변화시킨 후, 4분에 걸쳐 71.25:28.75로 변화시킨 후, 10분에 걸쳐 64:36으로 변화시킨 후, 10분에 걸쳐 55:45로 변화시킨 후, 3분에 걸쳐 35:65로 변화시킨 후, 3분에 걸쳐 0:100으로 변화시키고 4분간 유지하는 선형 구배 용매 조성법을 사용함
* 검출기 : 190~400㎚ 파장으로 고정된 UV detector
이후, 바닐산(vanillic acid), 카페인산(caffeic acid), 시린직산(syringic acid), 파라-쿠마린산(p-coumaric acid), 페룰산(ferulic acid), 시내픽산(sinapic acid)과 같은 표준물질(Sigma Chemical, U.S.A)을 농도별로 분석하여 표준검량곡선을 작성하고, 표준검량곡선을 이용하여 분석 시료에 존재하는 페놀산의 함량을 계산하였다.
도 5는 미강 유산균 발효물 등에 존재하는 페놀산을 HPLC로 분석한 결과이다. 도 5의 (a)는 바닐산(vanillic acid), 카페인산(caffeic acid), 시린직산(syringic acid), 파라-쿠마린산(p-coumaric acid), 페룰산(ferulic acid), 시내픽산(sinapic acid)의 표준물질(Sigma Chemical, U.S.A)을 HPLC로 분석한 결과이다. 도 5의 (b)는 미발효 미강 분말의 HPLC 분석 결과이다. 도 5의 (c)는 미강 분말을 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) GG 균주로 발효시켜 수득한 발효물의 HPLC 분석 결과이다. 도 5의 (d)는 A사에서 상업적으로 판매하고 있는 미강 유산균 발효물 제품의 HPLC 분석 결과이다. 도 5의 (e)는 미강 분말을 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주로 발효시켜 수득한 발효물의 HPLC 분석 결과이다.
도 5의 HPLC 결과를 기초로 분석 시료별로 바닐산(vanillic acid), 카페인산(caffeic acid), 시린직산(syringic acid), 파라-쿠마린산(p-coumaric acid), 페룰산(ferulic acid), 시내픽산(sinapic acid)의 함량을 하기 표 6에 나타내었다.
분석 시료 페놀산 함량(㎍/g)
바닐산 카페인산 시린직산 파라-쿠마린산 페룰산 시내픽산
미발효 미강 미검출 미검출 미검출 214.3 309.9 미검출
LGG 미강 발효물 미검출 미검출 미검출 236.8 359.5 미검출
A사 미강 유산균 발효물 미검출 미검출 미검출 155.5 338.4 미검출
MJM60392 미강 발효물 미검출 미검출 미검출 277.1 420.2 미검출
도 5 및 표 6에서 나타내는 바와 같이 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주를 이용하여 미강 분말을 24시간 동안 발효하였을 경우, 액상의 미강 유산균 발효물 1g당 파라-쿠마린산 277.1㎍, 페룰산 420.2㎍이 함유되어있는 것으로 분석되었다. 한편, 양성 대조 균주인 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) GG 균주를 이용하여 미강 분말을 24시간 동안 발효하였을 경우, 액상의 미강 유산균 발효물 1g당 파라-쿠마린산 236.8㎍, 페룰산 359.5㎍이 함유되어있는 것으로 분석되었다. 이로부터 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주가 대조 균주에 비해 발효를 통하여 미강에 함유된 페놀산의 함량을 증가시키는 능력이 월등하게 높은 것을 알 수 있다.
(3) 미강 유산균 발효물의 γ-오리자놀(γ-oryzanol) 함량 변화 분석
추출 용매로 헥산과 이소프로판올을 사용하여 액상의 미강 유산균 발효물 또는 분석 원료로부터 추출물을 제조하였다. 상기 추출물의 일정량을 필터로 여과하여 분석 시료를 제조하였다. 이후, 분석 시료에 존재하는 γ-오리자놀의 함량을 고속액체크로마토그래피(HPLC)로 분석하였다. 고속액체크로마토그래피(HPLC) 분석 조건은 다음과 같다.
* 분석 컬럼 : YMC-Pack ODS-A 컬럼(250ⅹ4.6mm, 5μm, No.0425040678, YMC)
* 분석 시료 주입 부피 : 10㎕
* 이동상 : 이동상으로 메탄올, 아세토나이트릴 및 아세트산을 52:45:3의 부피비로 혼합한 용액을 사용하였고, 이동상의 유속은 1.2㎖/min이이고, 이동상을 60분간 유지하는 방법을 사용함
* 검출기 : 300㎚ 파장으로 고정된 UV detector
이후, γ-오리자놀 표준물질(Sigma Chemical, U.S.A)을 농도별로 분석하여 표준검량곡선을 작성하고, 표준검량곡선을 이용하여 분석 시료에 존재하는 γ-오리자놀(γ-oryzanol)의 함량을 계산하였다.
도 6은 미강 유산균 발효물 등에 존재하는 γ-오리자놀을 HPLC로 분석한 결과이다. 도 6의 (a)는 γ-오리자놀 표준물질(Sigma Chemical, U.S.A)을 HPLC로 분석한 결과이다. 도 6의 (b)는 미발효 미강 분말의 HPLC 분석 결과이다. 도 6의 (c)는 미강 분말을 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) GG 균주로 발효시켜 수득한 발효물의 HPLC 분석 결과이다. 도 6의 (d)는 A사에서 상업적으로 판매하고 있는 미강 유산균 발효물 제품의 HPLC 분석 결과이다. 도 6의 (e)는 미강 분말을 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주로 발효시켜 수득한 발효물의 HPLC 분석 결과이다.
도 6의 HPLC 결과를 기초로 분석 시료별로 γ-오리자놀의 함량을 하기 표 7에 나타내었다.
분석 시료 γ-오리자놀 함량(㎎/g)
미발효 미강 6.6
LGG 미강 발효물 2.1
A사 미강 유산균 발효물 4.9
MJM60392 미강 발효물 6.9
도 6 및 표 7에서 나타내는 바와 같이 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주를 이용하여 미강 분말을 24시간 동안 발효하였을 경우, 액상의 미강 유산균 발효물 1g당 γ-오리자놀 6.9㎎이 함유되어있는 것으로 분석되었다. 한편, 양성 대조 균주인 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) GG 균주를 이용하여 미강 분말을 24시간 동안 발효하였을 경우, 액상의 미강 유산균 발효물 1g당 γ-오리자놀 2.1㎎이 함유되어있는 것으로 분석되었다. 이로부터 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp. lactis) MJM60392 균주는 발효를 통해 미강에 함유된 γ-오리자놀의 함량을 증가시키는 반면, 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) GG 균주는 미강에 함유된 γ-오리자놀의 함량을 감소시키는 것을 알 수 있다.
9. 미강 유산균 발효물의 항산화 활성 분석
(1) 분석 시료의 준비
미강 분말을 20 중량%의 함량이 되도록 증류수에 현탁한 후, 121℃에서 20분간 가압 멸균하였다.
-80℃의 온도하에 저장되어 있는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392 균주의 순수 배양물을 MRS 액체 배지에서 재생시켰다. 이후 250㎖의 플라스크에서 100㎖의 종균(seed) 배양물을 준비하였다.
순수하게 배양된 종균(seed) 배양물을 미강 분말 현탁액에 총 부피의 1% 농도로 접종하고, 37℃에서 24시간 동안 혐기적 조건하에서 정치 배양하여 액상의 미강 유산균 발효물을 제조하였다. 또한, 양성 대조 균주로 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) GG ATCC 53103 균주를 사용하여 동일한 조건에서 액상의 미강 유산균 발효물을 제조하였다.
액상의 미강 유산균 발효물에 동량의 에틸아세테이트를 첨가하여 추출한 후, 추출물을 여과 및 감압농축하여 미강 유산균 발효물의 건조 추출물을 수득하였다. 이후, 미강 유산균 발효물의 건조 추출물을 메탄올에 농도별로 용해시켜 항산화 활성 측정 실험에 사용한 분석 시료를 준비하였다.
또한, 미발효 미강 분말 및 A사의 미강 유산균 발효물에 대해서도 에틸아세테이트로 추출하고 여과 및 감압농축하여 건조 추출물을 수득하고, 건초 추출물을 메탄올에 용해시켜 항산화 활성 측정 실험에 사용한 분석 시료를 준비하였다.
(2) NO(Nitric Oxide) 라디칼 소거법에 의한 항산화 활성 측정
Sodium nitroprusside(SNP; 100uM) 100㎕에 메탄올에 녹여 농도별로 희석한 분석 시료 50㎕를 첨가하고 암소 조건에서 1시간 30분 동안 반응시켰다. 반응이 끝난 후 반응액과 동일한 양의 Griess reagent(1% sulphanilamide and 0.1% naphthyletylenediamine dihydrochloride in 2.5% H3PO4)를 첨가하여 반응시킨 후 540㎚에서 흡광도를 측정하였다. 분석 시료의 항산화 활성은 아래의 계산식을 이용하여 대조군인 메탄올에 대한 상대적인 값으로 나타내었다.
NO radical scavenging activity (%) = (1-Atest/Acontrol)×100
상기 식에서, Atest는 분석 시료를 사용하였을 때의 흡광도를 나타내고, Acontrol은 대조군인 메탄올만을 사용하였을 때의 흡광도를 나타낸다.
하기 표 8은 NO(Nitric Oxide) 라디칼 소거법에 의해 측정한 미강 유산균 발효물 등의 항산화 활성을 나타낸 것이다.
구분 NO radical scavenging activity(%)
시료 농도(㎍/㎖) 31.25 62.5 125 250 500 1000 2000
분석
시료		 Ascorbic acid 72.2 90.5 91.6 91.6 91.5 91.5 91.5
미발효 미강 42.8 48.6 64.4 72 78.2 79.1 80.7
MJM60392 미강 발효물 52.1 59.3 71.9 77.5 80.1 81.9 86.1
LGG 미강 발효물 49.9 60.7 63.9 71.2 79.7 81.1 83.2
A사 미강 유산균 발효물 0 0 0 0 0 28.2 47.7
(3) DPPH 라디칼 소거법에 의한 항산화 활성 측정
메탄올에 녹여 농도별로 희석한 분석 시료 50㎕에 100μM DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl) 용액 200㎕를 가하고 37℃에서 30분간 반응시킨 후 570㎚에서 흡광도를 측정하였다. 분석 시료의 항산화 활성은 아래의 계산식을 이용하여 대조군인 메탄올에 대한 상대적인 값으로 나타내었다.
DPPH radical scavenging activity (%) = (1-Atest/Acontrol)×100
상기 식에서, Atest는 분석 시료를 사용하였을 때의 흡광도를 나타내고, Acontrol은 대조군인 메탄올만을 사용하였을 때의 흡광도를 나타낸다.
하기 표 9는 DPPH 라디칼 소거법에 의해 측정한 미강 유산균 발효물 등의 항산화 활성을 나타낸 것이다.
구분 DPPH radical scavenging activity(%)
시료 농도(㎍/㎖) 31.25 62.5 125 250 500 1000 2000
분석
시료		 Ascorbic acid 33.1 58.6 69.6 76.9 77.7 83.9 84.2
미발효 미강 60.3 64.8 65.4 66.3 70.5 72.2 75.6
MJM60392 미강 발효물 61.3 67.1 70.6 75.5 76.3 78.6 80.3
LGG 미강 발효물 0 0 0 7.7 11.4 30.1 48.4
A사 미강 유산균 발효물 23.3 25.5 29.0 31.7 32.5 35.7 38.8
(4) ABTS 라디칼 소거법에 의한 항산화 활성 측정
7 mM ABTS[2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid)]와 2.45 mM 포타슘퍼설페이트(potassium persulfate)를 최종 농도가 되게 혼합하고 암소 조건에서 24시간 동안 방치하여 ABTS 라디칼을 형성시킨 후, 730㎚에서 흡광도 값이 0.9가 되도록 PBS 용액(Phosphate buffered saline solution, pH 7.4)으로 희석하여 ABTS 표준 용액을 제조하였다. 상기 ABTS 표준 용액 980㎕에 메탄올에 녹여 농도별로 희석한 분석 시료 20㎕를 가하고 5분간 반응시킨 후에 730㎚에서 흡광도를 측정하였다. 분석 시료의 항산화 활성은 아래의 계산식을 이용하여 대조군인 메탄올에 대한 상대적인 값으로 나타내었다.
ABTS radical scavenging activity (%) = (1-Atest/Acontrol)×100
상기 식에서, Atest는 분석 시료를 사용하였을 때의 흡광도를 나타내고, Acontrol은 대조군인 메탄올만을 사용하였을 때의 흡광도를 나타낸다.
하기 표 10은 ABTS 라디칼 소거법에 의해 측정한 미강 유산균 발효물 등의 항산화 활성을 나타낸 것이다.
구분 ABTS radical scavenging activity(%)
시료 농도(㎍/㎖) 31.25 62.5 125 250 500 1000 2000
분석
시료		 Ascorbic acid 6.4 19.7 51.6 94.4 94.3 94.3 94.1
미발효 미강 7.1 12.3 21.2 40.2 62 73.4 91.1
MJM60392 미강 발효물 6.5 12.4 26 44.4 59.3 77.1 92.9
LGG 미강 발효물 4 8.9 19.8 39.3 69.1 89.7 93.8
A사 미강 유산균 발효물 0 0 3.6 8.3 11.3 16.2 22.7
10. 유산균의 수탁 정보
본 발명의 발명자들은 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392를 2015년 2월 10일에 공인기탁기관인 한국농업미생물자원센터에 특허기탁 하여 KACC 92030P의 수탁번호를 부여받았다.
이상에서와 같이 본 발명을 상기의 실시예를 통해 설명하였지만 본 발명이 반드시 여기에만 한정되는 것은 아니며 본 발명의 범주와 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 다양한 변형실시가 가능함은 물론이다. 따라서, 본 발명의 보호범위는 본 발명에 첨부된 특허청구의 범위에 속하는 모든 실시 형태를 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
한국농업미생물자원센터 KACC92029P 20150210
<110> Myongji University Industry and Academia Cooperation Foundation <120> Novel lactic acid bacteria usable as probiotics and use thereof <130> DP-15-150 <160> 1 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 1480 <212> DNA <213> 16S rDNA of Lactococcus lactis subsp. lactis MJM60392 <400> 1 ggcgggtgct atacatgcag ttgagcgctg aaggttggta cttgtaccag actggatgag 60 cagcgaacgg gtgagtaacg cgtggggaat ctgcctttga gcgggggaca acatttggaa 120 acgaatgcta ataccgcata aaaactttaa acacaagttt taagtttgaa agatgcaatt 180 gcatcactca aagatgatcc cgcgttgtat tagctagttg gtgaggtaaa ggctcaccaa 240 ggcgatgata catagccgac ctgagagggt gatcggccac attgggactg agacacggcc 300 caaactccta cgggaggcag cagtagggaa tcttcggcaa tggacgaaag tctgaccgag 360 caacgccgcg tgagtgaaga aggttttcgg atcgtaaaac tctgttggta gagaagaacg 420 ttggtgagag tggaaagctc atcaagtgac ggtaactacc cagaaaggga cggctaacta 480 cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtc ccgagcgttg tccggattta ttgggcgtaa 540 agcgagcgca ggtggtttat taagtctggt gtaaaaggca gtggctcaac cattgtatgc 600 attggaaact ggtagacttg agtgcaggag aggagagtgg aattccatgt gtagcggtga 660 aatgcgtaga tatatggagg aacaccggtg gcgaaagcgg ctctctggcc tgtaactgac 720 actgaggctc gaaagcgtgg ggagcaaaca ggattagata ccctggtagt ccacgccgta 780 aacgatgagt gctagatgta gggagctata agttctctgt atcgcagcta acgcaataag 840 cactccgcct ggggagtacg accgcaaggt tgaaactcaa aggaattgac gggggcccgc 900 acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcga agaaccttac caggtcttga 960 catactcgtg ctattcctag agataggaag ttccttcggg acacgggata caggtggtgc 1020 atggttgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg agcgcaaccc 1080 ctattgttag ttgccatcat taagttgggc actctaacga gactgccggt gataaaccgg 1140 aggaaggtgg ggatgacgtc aaatcatcat gccccttatg acctgggcta cacacgtgct 1200 acaatggatg gtacaacgag tcgcgagaca gtgatgttta gctaatctct taaaaccatt 1260 ctcagttcgg attgtaggct gcaactcgcc tacatgaagt cggaatcgct agtaatcgcg 1320 gatcagcacg ccgcggtgaa tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg tcacaccacg 1380 ggagttggga gtacccgaag taggttgcct aaccgcaagg agggcgcttc ctaaggtaag 1440 accgatgact ggggtgaagt cgtaacaggg aaacccgaaa 1480

Claims (20)

16S rDNA로 서열번호 1에 기재된 염기서열을 포함하는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis)로서,
혈중 콜레스테롤 저하 활성, 내산성, 내담즙성 또는 항균 활성에서 선택되는 1종 이상의 성질을 갖는 것을 특징으로 하는 유산균.
제 1항에 있어서, 상기 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp. lactis)는 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp . lactis) MJM60392(수탁번호: KACC 92029P)인 것을 특징으로 하는 유산균.
제 1항에 있어서, 상기 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis subsp. lactis)는 미강을 발효시켜 미강의 항산화 활성 또는 미강에 함유된 활성 성분의 함량을 증가시키는 것을 특징으로 하는 유산균.
제 3항에 있어서, 상기 미강에 함유된 활성 성분은 페놀산(Phenolic acid)인 것을 특징으로 하는 유산균.
제 4항에 있어서, 상기 페놀산은 쿠마린산(Coumaric acid) 또는 페룰산(Ferulic acid)인 것을 특징으로 하는 유산균.
제 3항에 있어서, 상기 미강에 함유된 활성 성분은 오리자놀(Oryzanol)인 것을 특징으로 하는 유산균.
제 1항 내지 제 6항 중 어느 한 항의 유산균, 이의 배양물, 이의 파쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈중 콜레스테롤 저하용 조성물.
제 1항 내지 제 6항 중 어느 한 항의 유산균, 이의 배양물, 이의 파쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하고, 비만, 고지혈증, 동맥경화증 또는 지질 관련 대사증후군에서 선택되는 어느 하나를 예방 또는 치료하기 위한 용도로 사용되는 약학 조성물.
제 1항 내지 제 6항 중 어느 한 항의 유산균, 이의 배양물, 이의 파쇄물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하고, 비만, 고지혈증, 동맥경화증 또는 지질 관련 대사증후군에서 선택되는 어느 하나를 예방 또는 개선하기 위한 용도로 사용되는 식품 조성물.
페놀산을 함유하는 원료를 제 1항 내지 제 6항 중 어느 한 항의 유산균으로 발효시킨 산물로서, 상기 발효에 의해 원료에 함유된 페놀산의 함량이 증가하는 것을 특징으로 하는 유산균 발효물.
제 10항에 있어서, 상기 페놀산을 함유하는 원료는 미강(rice bran)인 것을 특징으로 하는 유산균 발효물.
제 10항에 있어서, 상기 페놀산은 쿠마린산(Coumaric acid) 또는 페룰산(Ferulic acid)인 것을 특징으로 하는 유산균 발효물.
오리자놀(Oryzanol)을 함유하는 원료를 제 1항 내지 제 6항 중 어느 한 항의 유산균으로 발효시킨 산물로서, 상기 발효에 의해 원료에 함유된 오리자놀의 함량이 증가하는 것을 특징으로 하는 유산균 발효물.
제 13항에 있어서, 상기 오리자놀(Oryzanol)을 함유하는 원료는 미강(rice bran)인 것을 특징으로 하는 유산균 발효물.
미강(rice bran)을 제 1항 내지 제 6항 중 어느 한 항의 유산균으로 발효시켜 수득한 발효물 또는 상기 발효물의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 혈당 저하, 미백 또는 항염증용 조성물.
제 15항에 있어서, 상기 발효물은 발효 전보다 항산화 활성 또는 활성 성분의 함량이 증가하는 것을 특징으로 하는 항산화, 혈당 저하, 미백 또는 항염증용 조성물.
제 16항에 있어서, 상기 활성 성분은 페놀산(Phenolic acid)인 것을 특징으로 하는 항산화, 혈당 저하, 미백 또는 항염증용 조성물.
제 17항에 있어서, 상기 페놀산은 쿠마린산(Coumaric acid) 또는 페룰산(Ferulic acid)인 것을 특징으로 하는 항산화, 혈당 저하, 미백 또는 항염증용 조성물.
제 16항에 있어서, 상기 활성 성분은 오리자놀(Oryzanol)인 것을 특징으로 하는 항산화, 혈당 저하, 미백 또는 항염증용 조성물.
제 15항에 있어서, 상기 조성물은 약학 조성물, 식품 조성물 또는 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 항산화, 혈당 저하, 미백 또는 항염증용 조성물.
KR1020150057880A 2015-04-24 2015-04-24 프로바이오틱스로 사용될 수 있는 신규 유산균 및 이의 용도 Active KR101689746B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020150057880A KR101689746B1 (ko) 2015-04-24 2015-04-24 프로바이오틱스로 사용될 수 있는 신규 유산균 및 이의 용도

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020150057880A KR101689746B1 (ko) 2015-04-24 2015-04-24 프로바이오틱스로 사용될 수 있는 신규 유산균 및 이의 용도

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20160126605A true KR20160126605A (ko) 2016-11-02
KR101689746B1 KR101689746B1 (ko) 2017-01-02

Family

ID=57518314

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020150057880A Active KR101689746B1 (ko) 2015-04-24 2015-04-24 프로바이오틱스로 사용될 수 있는 신규 유산균 및 이의 용도

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101689746B1 (ko)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101961149B1 (ko) * 2018-11-30 2019-03-25 주식회사 아미코스메틱 락토바실러스 파라플란타룸 ami-1101 균주 및 이의 용도
WO2019066413A1 (ko) * 2017-09-26 2019-04-04 고려대학교 산학협력단 발효된 쌀 부산물 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 피부미백 및 주름 개선용 복합 기능성 화장료 조성물
KR101980816B1 (ko) * 2017-11-15 2019-05-22 대한민국 이탈리안라이그라스로부터 추출된 페룰산을 유효성분으로 함유하는 비만의 예방, 치료 또는 개선용 조성물
KR102381353B1 (ko) * 2021-05-31 2022-04-04 한국식품연구원 항비만 및 면역증진 활성을 동시에 갖는 신규한 락토코커스 락티스 WiKim0124 및 이의 용도
WO2022091193A1 (ja) * 2020-10-27 2022-05-05 国立大学法人弘前大学 白神山地に生息するブナ由来の新規乳酸菌
KR20230158328A (ko) * 2022-05-11 2023-11-20 고려대학교 산학협력단 유산균에 의해 발효된 쌀 부산물 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 피부 미백 및 주름 개선용 복합 기능성 화장료 조성물
WO2024172621A1 (ko) * 2023-02-17 2024-08-22 유호성 신규 락토코커스 락티스 아종 락티스 균주 및 이의 용도
US12156892B2 (en) 2017-04-06 2024-12-03 Korea Food Research Institute Strain having activity of reducing advanced glycation end products and use thereof

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR19990007711A (ko) * 1998-10-22 1999-01-25 이용규 항 콜레스테롤 유산균을 이용한 기능성 발효유 제조 방법
JP2002065203A (ja) * 2000-09-04 2002-03-05 Meiji Seika Kaisha Ltd 乳酸菌によるコレステロールの低減若しくは除去方法
WO2008116319A1 (en) * 2007-03-27 2008-10-02 The Royal Institution For The Advancement Of Learning/Mcgill University Bioproduction of ferulic acid and uses thereof

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR19990007711A (ko) * 1998-10-22 1999-01-25 이용규 항 콜레스테롤 유산균을 이용한 기능성 발효유 제조 방법
JP2002065203A (ja) * 2000-09-04 2002-03-05 Meiji Seika Kaisha Ltd 乳酸菌によるコレステロールの低減若しくは除去方法
WO2008116319A1 (en) * 2007-03-27 2008-10-02 The Royal Institution For The Advancement Of Learning/Mcgill University Bioproduction of ferulic acid and uses thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
African Journal of Microbiology Research, Vol.7, pp.4338-4349(2013.08.) *

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US12156892B2 (en) 2017-04-06 2024-12-03 Korea Food Research Institute Strain having activity of reducing advanced glycation end products and use thereof
WO2019066413A1 (ko) * 2017-09-26 2019-04-04 고려대학교 산학협력단 발효된 쌀 부산물 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 피부미백 및 주름 개선용 복합 기능성 화장료 조성물
KR101980816B1 (ko) * 2017-11-15 2019-05-22 대한민국 이탈리안라이그라스로부터 추출된 페룰산을 유효성분으로 함유하는 비만의 예방, 치료 또는 개선용 조성물
KR101961149B1 (ko) * 2018-11-30 2019-03-25 주식회사 아미코스메틱 락토바실러스 파라플란타룸 ami-1101 균주 및 이의 용도
WO2022091193A1 (ja) * 2020-10-27 2022-05-05 国立大学法人弘前大学 白神山地に生息するブナ由来の新規乳酸菌
JPWO2022091193A1 (ko) * 2020-10-27 2022-05-05
KR102381353B1 (ko) * 2021-05-31 2022-04-04 한국식품연구원 항비만 및 면역증진 활성을 동시에 갖는 신규한 락토코커스 락티스 WiKim0124 및 이의 용도
KR20230158328A (ko) * 2022-05-11 2023-11-20 고려대학교 산학협력단 유산균에 의해 발효된 쌀 부산물 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 피부 미백 및 주름 개선용 복합 기능성 화장료 조성물
WO2024172621A1 (ko) * 2023-02-17 2024-08-22 유호성 신규 락토코커스 락티스 아종 락티스 균주 및 이의 용도

Also Published As

Publication number Publication date
KR101689746B1 (ko) 2017-01-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101689746B1 (ko) 프로바이오틱스로 사용될 수 있는 신규 유산균 및 이의 용도
KR102121461B1 (ko) 비만 억제 효능을 갖는 신규 락토바실러스 사케이 및 이의 용도
US20200255795A1 (en) Method for preparing microbial preparation and microbial preparation produced by the same
KR101772870B1 (ko) 프로바이오틱 활성을 갖는 신규 락토바실러스 플란타럼 및 이의 용도
KR101660272B1 (ko) 비만예방 또는 개선제
KR101992537B1 (ko) 신규한 락토바실러스 사케이 및 이를 포함하는 조성물
KR101807328B1 (ko) 경구용 ｄｎａ 손상 수복 촉진제 및 엘라스타아제 활성 억제제
EP2593570A2 (en) Fermented soya based mixture comprising isoflavones- aglicones, equol and lunasil, process for the preparation and uses thereof in food, medical and cosmetic fields
KR20140140387A (ko) 나노형 김치 유산균
KR101882475B1 (ko) 베타-글루코시다제 활성을 갖는 신규 유산균 및 이의 용도
KR102244492B1 (ko) 신규 락토바실러스 속 균주 및 그의 용도
KR20180011490A (ko) 프로바이오틱 활성을 갖는 신규 락토바실러스 퍼멘텀 및 이의 용도
KR102313770B1 (ko) 제주산 양배추 절임식품에서 유래한 락토바실러스 플란타룸 WiKim0127 균주 및 이를 이용한 조성물 제조방법
JP7430312B2 (ja) 腸内短鎖脂肪酸産生促進用組成物及びこれを含む飲食品
KR102777657B1 (ko) 락토코커스 락티스, 이의 배양물 또는 이의 용출물을 포함하는 각질형성세포 증식 또는 각질형성세포 사멸 억제용 조성물
KR101772875B1 (ko) 프로바이오틱 활성을 갖는 신규 락토바실러스 플란타럼 및 이의 용도
KR102042151B1 (ko) 고춧잎 추출물을 포함하는 장내 균총 개선용 조성물
KR101772872B1 (ko) 프로바이오틱 활성을 갖는 신규 락토바실러스 플란타럼 및 이의 용도
KR20170017176A (ko) 장 내 유산균 증가용 조성물 및 이를 이용한 유산균 생산 방법
KR102048434B1 (ko) 무청 고분자 분획물을 포함하는 장내 균총 개선용 조성물
KR102898704B1 (ko) 마가목 추출물을 유효성분으로 포함하는 엔테로코커스 페칼리스 감염성 질환 예방 또는 치료용 조성물
KR102457366B1 (ko) 제주산 양배추 절임식품에서 유래한 락토바실러스 플란타룸 WiKim0127 균주 및 이를 이용한 조성물 제조방법
KR102802652B1 (ko) 고도의 내산소성을 보유한 아커만시아 뮤시니필라 snuvet05am 균주 및 이의 용도
JP7744664B2 (ja) 抗菌剤、抗菌用経口組成物および抗菌用皮膚外用剤ならびに飲食品において菌の増殖を抑制する方法
KR20200075724A (ko) 무청 추출물을 포함하는 장내 균총 개선용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
PA0109 Patent application

Patent event code: PA01091R01D

Comment text: Patent Application

Patent event date: 20150424

PA0201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
PE0902 Notice of grounds for rejection

Comment text: Notification of reason for refusal

Patent event date: 20160818

Patent event code: PE09021S01D

E701 Decision to grant or registration of patent right
PE0701 Decision of registration

Patent event code: PE07011S01D

Comment text: Decision to Grant Registration

Patent event date: 20161006

PG1501 Laying open of application
GRNT Written decision to grant
PR0701 Registration of establishment

Comment text: Registration of Establishment

Patent event date: 20161220

Patent event code: PR07011E01D

PR1002 Payment of registration fee

Payment date: 20161221

End annual number: 3

Start annual number: 1

PG1601 Publication of registration
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20191223

Year of fee payment: 4

PR1001 Payment of annual fee

Payment date: 20191223

Start annual number: 4

End annual number: 4

PR1001 Payment of annual fee

Payment date: 20201221

Start annual number: 5

End annual number: 5

PR1001 Payment of annual fee

Payment date: 20221205

Start annual number: 7

End annual number: 7