KR20160055721A

KR20160055721A - 장용 투여에 적합한 영양소 및 소화 효소를 함유하는 조성물

Info

Publication number: KR20160055721A
Application number: KR1020157028961A
Authority: KR
Inventors: 빈센자 피론티; 엠마누엘라 론다; 루이지 볼트리
Original assignee: 앨러간 파마슈티컬스 인터내셔널 리미티드
Priority date: 2013-03-15
Filing date: 2014-03-13
Publication date: 2016-05-18
Also published as: AU2014229330B2; IL241540A; JP2016513634A; HK1216845A1; EP2996712B1; RU2015138541A; MX2015012078A; US20140276632A1; US20250325012A1; WO2014141121A1; ES2707211T3; CA2905159A1; CN105209062A; AU2014229330A1; BR112015023278A2; CA2905159C; US20200221748A1; RU2651458C2; EP2996712A1

Abstract

본 발명은 소화 효소 산물 및 특정량의 영양소를 갖는 뉴트리션 포뮬라로부터의 영양소를 포함하는 장용 투여에 적합한 안정하고 균질한 액체 조성물을 제조하기 위한 공정을 제공한다. 본 발명은 장용 튜브를 사용하여 안정하고 균질한 액체 조성물의 치료적 유효량을 유효하고 효과적으로 투여하기 위한 방법을 더 제공한다.

Description

장용 투여에 적합한 영양소 및 소화 효소를 함유하는 조성물{COMPOSITION CONTAINING DIGESTIVE ENZYMES AND NUTRIENTS SUITABLE FOR ENTERAL ADMINISTRATION}

본원은 2013년 3월 15일에 출원된 미국 가출원번호 제61/798,027호의 우선권을 주장하고, 공개문헌은 그 전체가 참조로서 본원에 포함된다.

본 발명은 안정하고 균질한 액체 조성물의 제조 공정에 관한 것으로, 상기 조성물은 장용 투여에 적합한 뉴트리션 포뮬라(nutritional formula)로부터의 영양소 및 소화 효소 제품을 포함한다. 상기 공정은 소화 효소 제품 기-현탁물(pre-suspension)의 제조 및 그것을 뉴트리션 포뮬라에 첨가하는 것을 포함한다. 본 발명은 장용 튜브를 사용하여 뉴트리션 포뮬라로부터의 영양소 및 소화 효소 제품을 포함하는 안정하고 균질한 액체 조성물의 치료학적 유효 용량을 효과적이고 유효하게 투여하는 방법을 더 제공한다.

환자에게 약물의 적절한 용량 투여는 의학 분야에서 매우 중요하다. 유아, 어린 아이들, 및 노인들 특히 가끔은 성인에 있어서도, 약물의 투여 및 투여 방법은 종종 실질적인 쟁점을 제시한다. 당해 분야에 잘 알려진 바와 같이, 약물은 다양한 형태로 제공되고(예, 액형, 고형, 및 액체 중에 고형의 조합), 환자에게 다양한 방식으로 전달된다(예, 경구, 주사, 경피). 그럼에도 불구하고, 췌장 효소 보충 제형의 효능 및 그의 사용에서 환자의 순응성을 모두 개선하기 위해 이를 최적화할 필요성이 여전히 존재한다. 따라서, 췌장 효소가 주기적으로 사용되는 상태(예, 외분비성췌장기능부전증, EPI)로 고통받는 환자에 대해 의심스러운 것은 어떻게 가장 적은 용량에서 가장 효과적이고 좋은 안정성 프로파일을 갖는 췌장 효소 보충제를 얻는 것인지 이다.

FDA에 의해 200,000명 초과의 미국인이 고통받는다고 예측된 외분비성췌장기능부전증(EPI)의 경우에, 환자들은 그들의 췌장에 의해 만들어지는 소화 효소의 결핍으로 인해 음식을 적절히 소화시킬 수 없다. 소화 효소의 부족은 영양소의 소화불량 및 흡수불량과 같은 상태로 이어져서, 영양실조 및 이후에 이와 관련된 다른 바람직하지 않은 생리학적 상태로 이어진다. 이러한 상태는 낭포성 섬유증(CF) 및 췌장암, 췌장절제, 및 췌장염과 같은 췌장의 불충분한 외분비 기능을 위태롭게하는 다른 상태들로부터 고통받는 환자들에게 일반적이다. 이런 영양실조는 치료하지 않고 방치하면 특히 유아 및 낭포성 섬유증 환자 경우에 생명이 위태로울 수 있고, 장애들은 어린이의 장애가 있는 성장, 위태로운 면역 반응, 및 짧은 기대 수명을 초래한다.

췌장 효소가 주기적으로 사용되는 다른 상태들은 보통 위장의 구조를 변화시키는 상태(위장 접합술, 췌십이지장절제술, 소장 절제술 등), 장 기능을 손상시켜서 흡수불량을 초래하는 상태(소아 지방변증, 크론병, 당뇨병, 세균과다증식 등), 또는 흡수를 변화시키는 다른 2차적 생리학적 상태(위장관 종양, 약리학제[즉, 옥트레오티드(octreotide)] 등)이다.

췌장리파아제 효소 및 다른 췌장 효소 제품(PEP)과 같은 소화 효소는 EPI를 적어도 부분적으로 치료하기 위해 투여될 수 있다. 소화 효소 보충제의 투여는 환자가 그들의 음식을 더 효과적으로 소화하도록 할 수 있다.

EPI를 치료하기 위해 사용된 췌장리파아제 효소는 주로 세 개의 효소류인 리파아제, 프로테아제, 아밀라아제의 조합이며, 이와 함께 그들의 다양한 보조 인자(co-factor) 및 보조효소(co-enzyme)가 조합된다. 이러한 효소들은 췌장에서 자연적으로 생성되고 지방, 단백질 및 탄수화물의 소화에서 중요하다. 췌장리파아제 효소는 보통 돼지 췌장샘(pancreatic gland)으로부터 제조될 수 있지만, 다른 공급원들 예컨대 US6,051,220, US2004/0057944, 2001/0046493 및 WO2006044529에서 설명된 것이 사용될 수도 있다. 효소는 글리세롤 및 지방산으로 지방의 가수분해, 덱스트린 및 당으로 녹말의 가수분해, 및 아미노산 및 유래 성분들로 단백질의 가수분해를 촉진시킨다.

췌장 효소는 거의 중성 및 약 알칼리 조건하에서 최적의 활성을 보인다. 위 조건 하에서, 췌장 효소는 생물학적 활성의 소실로 인해 비활성화될 수 있으며; 흡수불량의 치료에 중요한 췌장리파아제는 위의 비활성에 특히 민감하다. 따라서, 리파아제 활성은 리파아제를 함유하는 효소 조성물의 안정성을 결정하기 위하여 보통 모니터링된다.

췌장리파아제 효소와 같은 소화 효소를 함유하는 조성물은 캡슐제(Zenpep^®, Creon^®, Cotazym^® 및 Pancreaze^®), 정제(Viokace^TM, Viokase^®), 과립제(Eurobiol^®)의 형태로 경구 투여하기 위해 개발되어왔다. 그러나, 만일 환자가 캡슐제를 삼키지 못한다면, 각각의 캡슐제는 개봉될 수 있고 그 내용물은 소량의 음식, 보통 약 산성 음식(예, 구입가능한 사과 소스)에 뿌린 뒤 스푼으로 환자에게 경구적으로 투여될 수 있다. 대안으로, 이러한 약물은 투여에 적합한 배지에 현탁된 내용물을 함유한 주사기 장치를 사용하여 유아 및 어린이에게 경구적으로 투여될 수 있다.

위 및 공장 급식튜브와 같은 장용 튜브를 통해 급식하는 EPI를 앓는 소아 및 성인 환자를 포함하는 일부 환자들에 대하여 요구된다고 생각된다. 따라서, 소화 효소를 경구적으로 섭취할 수 없는 환자들에게 췌장리파아제 효소와 같은 소화 효소의 장용 투여가 명백히 필요하다. 소화 효소가 입자의 형태인 경우에, 그들은 투여를 위한 뉴트리션 포뮬라로서 첨가될 수 있지만, 쟁점은 소화 효소가 뉴트리션 포뮬라에서 효소 활성에 민감한 성분들 상에서 그들의 소화 활성을 효과적으로 행사하고 장용 급식에서 미립자들에 의한 잠재적 장애를 배제하는 것을 어떻게 보장하는지 이다. 소화 효소 제품의 정제 형태의 사용은 동일한 이유 때문에 고민된다.

WO 2012042372는 장용 투여에 의한 것을 포함하여 환자에게 투여하기 위한 기소화된(predigested) 뉴트리션 포뮬라를 제조하는 방법을 개시한다. 상기 문헌은 코팅을 용해시키고 뉴트리션 포뮬라의 소화에 유효하도록 효소를 자유롭게 하기 위하여 장용 코팅된 췌장 효소 제품을 어떻게 기계적 또는 화학적으로 처리하는지를 개시한다. 혼합물은 환자에게 투여하는 과정에서 발생하는 성분 및 효소 반응의 관점에서 매우 복잡하고, 불안정할 수 있고, 지질 및 수성 상의 분리를 일으키고, 불용성 성분의 침전이 발생할 가능성이 높다. 이 문헌은 장용 투여에 적합하도록 충분히 안정하고 균질한 기소화된 뉴트리션 포뮬라를 어떻게 제조하는지에 대해 개시하고 있지 않다.

장용 급식은 입(구위관(orogastric tube) 또는 OG); 코(비위관(nasogastric tube), 또는 NG); 위(위루관(gastrostomy tube) 또는 GT); 장(경관(jejunostomy tube) 또는 JT)을 통해 제공될 수 있으며, 그들은 저녁이나 낮 시간 동안 잠자면서 칼로리 및 영양소를 전달하기 위해 사용될 수 있다. 비위관 급식 튜브, 또는 "NG-튜브"는 코를 지나 식도를 거쳐서 위 안으로 진입한다. 다른 한편으로, 위루 급식 튜브, 또는 "G-튜브"는 복부에 작은 절개를 통해 위 안으로 직접 삽입되고, 만성 체중 감소를 보이고 및 장시간 장용 영양이 필요한 낭포성 섬유증 환자들과 같은 많은 환자들에 있어서 점점 더 통상적 치료가 되어 가고 있다.

진입의 루트에 관계없이, 더 긴 급식 튜브(OG 또는 NG)는 또한 위를 건너뛰고 십이지장 또는 공장에 직접적으로 영양소를 전달하기 위해 사용된다.

급식 튜브의 배치는 전반적인 환자의 건강 및 연령, 상태의 심각도, 배치의 기간, 튜브의 유형, 배치의 수단, 환자의 편안함, 정상참작 문제(mitigating complications), 감염의 가능성, 경제적 고려, 유효성, 접근 및 용도를 포함하는 다양한 상태에 따른다. 따라서, 다양한 튜브는 이러한 응용을 위해 다양한 크기를 구할 수 있다.

장용 급식의 단기간의 이점은 즉각적인 체중 증가 및 에너지 증가를 포함한다. 장시간의 이득은 신체 지방의 증가, 순수 근육 질량의 증가, 강화된 기운, 더 강한 면역 시스템, 폐 감염 중 중량 손실 감소, 체중의 우수한 통제력 및 다른 다양한 이점들을 포함한다.

그러나, 장용 영양에 의해 제공된 명백한 이점에도 불구하고, 고형 경구 제형 약물의 위루관 투여는 활성 약학적 성분을 비효과적으로 만들 수 있는 많은 제조의 및 투여의 어려움에 의해 까다로워진다. 또한, 주사기 배출구를 통과하여 G-관의 루멘을 통해 막힘이나 끈적임 없이 췌장리파아제 효소의 일관되고 완벽한 전달을 보장하기 위하여 조성물이 이용 가능한 안정하고 균질한 복합 조성물이어야만 한다.

전술한 바에 비추어볼 때, 상이한 사람들에 의해 상이한 장비를 사용하여 적용될 수 있는 소화 효소 영양 조성물을 제조하기 위한 신속하고, 실용적이고, 저렴하고, 간단하고, 효율적인 겅정에 대한 필요성이 존재하며; 더 구체적으로는 장용 급식 튜브의 장애물에 대한 민감성 및 임의의 상 분리가 없이 장용 투여가 가능한 적절한 기간동안 안정하고 균질한 조성물에 대한 필요성이 존재한다.

본 발명은 안정하고 균질한 액체 조성물의 제조 공정에 관한 것으로, 상기 조성물은 장용 투여에 적합한 특정 뉴트리션 포뮬라(nutritional formula)로부터의 영양소 및 소화 효소 제품을 포함한다. 상기 공정은 소화 효소 제품 기-현탁물(pre-suspension)의 제조 및 그것을 뉴트리션 포뮬라에 첨가하는 것을 포함한다. 본 발명은 장용 튜브를 사용하여 뉴트리션 포뮬라로부터의 영양소 및 소화 효소 제품을 포함하는 안정하고 균질한 액체 조성물의 치료학적 유효 용량을 효과적이고 유효하게 투여하는 방법을 더 제공한다.

본 발명은 안정하고 균질한 액체 조성물의 제조 공정에 관한 것으로, 상기 조성물은 뉴트리션 포뮬라(nutritional formula)로부터의 영양소 및 소화 효소 제품을 포함하며, 상기 공정은 수용액 중에 소화 효소 제품의 현탁물을 제조한 후에, 영양소를 특정량 함유하는 액체 뉴트리션 포뮬라와 상기 현탁물을 혼합하는 것을 포함한다. 액체 조성물은 그의 제조로부터 적어도 약 8시간 동안 효소적 활성(리파아제, 아밀라아제, 프로테아제)을 보유한다.

본 발명의 일 실시예에서, 소화 효소의 현탁물의 제조는 1) 파쇄(crushing), 분쇄(pulverizing) 또는 으깸(mashing)과 같은 방식에 의해 소화 효소의 크기를 감소시키는 단계; 2) 적은 부피의 수용액을 첨가하는 단계; 및 3) 현탁액을 형성하기 위하여 수용액과 소화효소를 혼합하는 단계를 포함한다. 수득한 소화 효소 현탁액은 특정량의 영양소를 갖는 액체 뉴트리션 포뮬라에 첨가되지 이전에 단기간 동안 유지된다.

본 발명에 의하면 사용된 소화 효소 제품은 정제형, 캡슐형, 과립형, 또는 사세형을 포함하여 임의의 적합한 제형일 수 있다. 본 발명에 의하면 적합한 소화 효소 제품은 비-위내성 췌장리파아제 효소가 바람직하다. 비-위내성 제품은 위액에 내성을 갖지 않는 제품이다. 비-위내성 제품은 비코팅이거나 코팅될 수 있다. 만일 제품이 코팅되면, 코팅은 위액에 용해된다. 코팅은 pH 독립적 수용성 폴리머가 바람직하다. 코팅은 pH 의존적 수용성 폴리머일 수도 있지만 이 경우에서는 매우 소량으로 존재하고/존재하거나, 만일 이것이 제품 내에서 비균일하게 존재하여 제품으로부터 쉽게 벗어나서 위 환경에 직접 노출되면 비-위내성으로 관찰된다.

옹어 비코팅 또는 코팅은 각각 제품 주변에 폴리머층의 부재 또는 존재로 식별되었다. pH 독립적 수용성 폴리머의 예는 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 또는 폴리비닐 알콜이 있다. pH-의존적 수용성 폴리머의 예는 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스 프탈레이트, 히드록시프로필메틸셀룰로오스 아세테이트 숙시네이트, 셸락, 메틸메타크릴레이트 코폴리머, 및 메타크릴산/메틸메타크릴레이트 코폴리머, 메타크릴산-에틸 아크릴레이트 코폴리머(1:1)(예, Eudragit^® L30D55)가 있다. 본 발명에 의하면 사용하기 위한 췌장리파아제 효소 제품은 비코팅된 것이 바람직하다.

본 발명에서 유용한 소화 효소 제품은 임의의 즉각 방출성 췌장리파아제 효소 제품 또는 제형일 수 있다.

이러한 췌장리파아제 효소 제품의 예는 Viokace^TM(USA에서 판매), Viokase^®(캐나다에서 판매), Eurobiol^® 12,500 PhEur 리파아제 단위(프랑스에서 판매), 그리고 Cotazym^®(캐나다에서 판매)을 포함한다.

본원에서 사용된 용어 "소화 효소"는 장기에 의해 섭취되거나 흡수될 수 있도록 음식의 성분들을 분해하는 소화관 내의 효소를 의미한다. 소화 효소의 비-제한 예는 췌장리파아제 효소(췌장리파아제 효소 또는 췌장효소라고도 불림), 리파아제, 코-리파아제(co-lipase), 트립신, 키모트립신, 키모트립신 B, 췌장성펩티다아제(pancreatopeptidase), 카복시펩티다아제 A, 카복시펩티다아제 B, 글리세롤 에스테르 히드롤라아제, 포스포리파아제, 스테롤 에스테르 히드롤라아제, 엘라스타아제, 키니노게나아제(kininogenase), 리보뉴클레아제, 데옥시리보뉴클레아제, α-아밀라아제, 파파인, 키모파파인, 글루테나아제, 브로멜라인(bromelain), 피신(ficin), β-아밀라아제, 셀룰라아제, β-갈락토시다아제, 락타아제, 수크라아제, 이소말타아제, 및 그의 혼합물을 포함한다.

소화 효소는 분말, 과립, 정제, 구, 미니정제, 마이크로정제, 마이크로입자, 마이크로구, 마이크로캡슐, 마이크로펠릿 뿐만 아니라 직경이 최대 약 5 mm인 임의의 입자를 포함하며; 여기서 입자는 임의의 크기 또는 형상을 가질 수 있다.

본원에서 사용된 용어 "췌장 효소"는 아밀라아제, 리파아제, 프로테아제, 또는 그의 혼합물과 같은 췌장 분비액에 존재하는 효소 유형들 중 임의의 하나를 지칭하거나, 췌장액과 같은 효소 활성을 갖는 췌장 유래의 임의의 추출물을 지칭한다.

용어 "췌장리파아제 효소" 또는 "췌장리파아제 효소" 또는 "췌장액"은 아밀라아제, 리파아제, 및 프로테아제 효소를 포함하는 효소들 중 몇몇 유형의 혼합물을 지시한다. 췌장리파아제 효소는 예컨대 Nordma가 Arzeimittel GmbH, 또는 Scientific Protein Laboratories LLC로부터 구입할 수 있다.

용어 "리파아제"는 글리세롤 및 간단한 지방산으로 지질의 가수분해를 촉진하는 효소를 지시한다. 본 발명에 적합한 리파아제의 예는 동물 리파아제(예, 돼지 리파아제), 박테리아 리파아제(예, 슈도모나스 리파아제 및/또는 부르크홀데리아 리파아제), 진균 리파아제(fungal lipase), 식물 리파아제, 재조합 리파아제(예, 배양 중에 박테리아, 효모, 진균, 식물, 곤충 또는 포유류 숙주 세포 중 어느 하나로부터 선택된 적절한 숙주 세포에 의해 재조합 DNA 기술을 통해 생산됨, 또는 자연 발생적 리파아제-인코딩 핵산에 실질적으로 동일하거나 상동인 핵산에 의해 인코딩된 자연 발생적 서열의 리파아제에 실질적으로 동일하거나 상동인 아미노산 서열을 포함하는 재조합 리파아제 등), 합성 리파아제, 화학적으로 개질된 리파아제, 및 그의 혼합물을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 용어 "지질"은 지방, 왁스, 스테롤, 지용성 비타민(예, 비타민 A, D, E 및 K), 모노글리세리드, 디글리세리드, 트리글리세리드, 인지질 등을 포함하여 자연 발생적 분자들을 광범위하게 포함한다.

용어 "아밀라아제"는 α-아밀라아제, β-아밀라아제, γ-아밀라아제, 산 α-글루코시다아제, 프티알린(ptyalin)과 같은 침의 아밀라아제 등과 같은 녹말을 분해하는 글리코시드 가수분해 효소를 지칭한다. 본 발명에서 사용하기에 적합한 아밀라아제는 동물 아밀라아제, 박테리아 아밀라아제, 진균 아밀라아제(예, 아스페르길루스(Aspergillus) 아밀라아제, 예컨대 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae) 아밀라아제), 식물 아밀라아제, 재조합 아밀라아제(예, 배양 중에 박테리아, 효모, 진균, 식물, 곤충 또는 포유류 숙주 세포 중 어느 하나로부터 선택된 적절한 숙주 세포에 의해 재조합 DNA 기술을 통해 생산됨, 또는 자연 발생적 아밀라아제-인코딩 핵산에 실질적으로 동일하거나 상동인 핵산에 의해 인코딩된 자연 발생적 서열의 아밀라아제에 실질적으로 동일하거나 상동인 아미노산 서열을 포함하는 재조합 아밀라아제 등), 화학적으로 개질된 아밀라아제, 및 그의 혼합물을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

용어 "프로테아제"는 단백질의 아미노산들 사이의 펩티드 결합을 끊는 효소(예, 프로테이나제(proteinase), 펩티다아제, 또는 프로테올리틱 효소(proteolytic enzyme))로 일반적으로 지칭된다. 프로테아제는 그들의 촉매 유형에 의해 일반적으로 구별되며, 예를 들어, 아스파르트산 펩티다아제, 시스테인(티올) 펩티다아제, 메탈로펩티다아제(metallopeptidase), 세린 펩티다아제, 트레오닌 펩티다아제, 알칼리 또는 세미-알칼리 프로테아제, 알려지지 않은 촉매 기작의 중성 및 펩티다아제가 있다. 본 발명에 사용하기에 적합한 프로테아제의 비-제한 예는 세린 프로테아제, 트레오닌 프로테아제, 시스테인 프로테아제, 아스파르트산 프로테아제(예, 플라스멥신), 메탈로프로테아제 및 글루탐산 프로테아제를 포함한다. 그 밖에, 본 발명에서 사용하기에 적합한 프로테아제는 동물 프로테아제, 박테리아 프로테아제, 진균 프로테아제(예, 아스페르길루스 멜레우스(Aspergillus melleus) 프로테아제), 식물 프로테아제, 재조합 프로테아제(예, 배양 중에 박테리아, 효모, 진균, 식물, 곤충 또는 포유류 숙주 세포 중 어느 하나로부터 선택된 적절한 숙주 세포에 의해 재조합 DNA 기술을 통해 생산됨, 또는 자연 발생적 프로테아제-인코딩 핵산에 실질적으로 동일하거나 상동인 핵산에 의해 인코딩된 자연 발생적 서열의 프로테아제에 실질적으로 동일하거나 상동인 아미노산 서열을 포함하는 재조합 프로테아제 등), 화학적으로 개질된 아밀라아제, 및 그의 혼합물을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 조성물의 췌장리파아제 효소는 하나 이상의 리파아제(즉, 하나의 리파아제, 또는 두개 이상의 리파아제), 하나 이상의 아밀라아제(즉, 하나의 아밀라아제, 또는 두개 이상의 아밀라아제), 하나 이상의 프로테아제(즉, 하나의 프로테아제, 또는 두개 이상의 프로테아제), 뿐만 아니라 이러한 효소들의 다양한 조합 및 다양한 비율의 혼합물을 포함할 수 있다.

본 발명에서 유용한 조성물에서 리파아제 활성은 약 650 내지 약 45,000 IU(USP 방법)(또는 45,000 USP 단위), 약 675 내지 약 825 IU, 약 2,500 내지 약 28,000 IU, 약 2,700 내지 약 3,300 IU, 약 4,500 내지 약 5,500 IU, 약 8,000 내지 약 11,000 IU, 약 13,500 내지 약 16,500 IU, 및 약 18,000 내지 약 22,000 IU, 약 22,500 내지 약 27,500 IU, 약 36,000 내지 약 44,000 IU, 및 이들 사이의 모든 범위 및 부분범위일 수 있다. 또한, 리파아제 활성은 약 5,000 PhEur 리파아제 단위 내지 약 30,000 PhEur 리파아제 단위일 수 있고, 이것은 약 5,000, 또는 약 10,000, 또는 약 12,500, 약 15,000 또는 약 20,000 또는 약 30,000, 또는 약 40,000 PhEur 리파아제 단위일 수 있다.

조성물에서 아밀라아제 활성은 약 1,600 내지 약 6,575 IU (USP)(또는 6,575 USP 단위), 약 6,000 내지 약 225,000 IU, 예컨대 약 6,400 내지 약 26,300 IU, 약 10,700 내지 약 43,800 IU, 약 21,500 내지 약 87,500 IU, 약 32,100 내지 약 131,300 IU, 약 42,900 내지 약 175,000 IU, 약 53,600 내지 약 218,700 IU 및 이들 사이의 모든 범위 및 부분범위일 수 있다.

조성물에서 프로테아제 활성은 약 1,250 내지 약 3,850 IU (USP)(또는 3,850 USP 단위), 약 5,000 내지 약 130,000 IU, 예컨대 약 5,000 내지 약 15,400 IU, 약 8,400 내지 약 25,700 IU, 약 16,800 내지 약 51,300 IU, 약 25,000 내지 약 77,000 IU, 약 33,500 내지 약 102,800 IU, 약 41,800 IU 내지 약 128,300 IU 및 이들 사이의 모든 범위 및 부분범위일 수 있다.

리파아제 활성은 약 675 내지 약 825 IU (또는 825 USP 단위)일 수 있고, 아밀라아제 활성은 약 1,600 내지 약 6,575 IU일 수 있고, 그리고 프로테아제 활성은 약 1,250 내지 약 3,850 IU (USP)일 수 있다. 또는, 리파아제 활성은 약 2,700 내지 약 3,300 IU일 수 있고, 아밀라아제 활성은 약 6,400 내지 약 26,300 IU일 수 있고, 그리고 프로테아제 활성은 약 5,000 내지 약 15,400 IU (USP)(또는 15,400 USP 단위)일 수 있다. 또는, 리파아제 활성은 약 4,500 내지 약 5,500 IU일 수 있고, 아밀라아제 활성은 약 10,700 내지 약 43,800 IU일 수 있고, 그리고 프로테아제 활성은 약 8,400 내지 약 25,700 IU (USP)(또는 25,700 USP 단위)일 수 있다. 또는, 리파아제 활성은 약 9,000 내지 약 11,000 IU일 수 있고, 아밀라아제 활성은 약 21,500 내지 약 87,500 IU일 수 있고, 그리고 프로테아제 활성은 약 16,800 내지 약 51,300 IU (USP)(또는 51,300 USP 단위)일 수 있다. 또는, 리파아제 활성은 약 13,500 내지 약 16,500 IU일 수 있고, 아밀라아제 활성은 약 32,100 내지 약 131,300 IU일 수 있고, 그리고 프로테아제 활성은 약 25,000 내지 약 77,000 IU (USP)(또는 77,000 USP 단위)일 수 있다. 리파아제 활성은 약 18,000 내지 약 22,000 IU일 수 있고, 아밀라아제 활성은 약 42,900 내지 약 175,000 IU일 수 있고, 그리고 프로테아제 활성은 약 33,500 내지 약 102,600 IU (USP)(또는 102,500 USP 단위)일 수 있다. 리파아제 활성은 약 22,000 내지 약 27,500 IU일 수 있고, 아밀라아제 활성은 약 53,600 내지 약 218,700 IU일 수 있고, 그리고 프로테아제 활성은 약 41,800 IU 내지 약 128,300 IU (USP)(또는 128,300 USP 단위)일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 나열된 아밀라아제 활성의 일부를 함유하는 단일 단위는 본원 공정에서 사용될 수 있다. 본 발명의 공정에서, 췌장리파아제의 유효량이 현탁물을 제조하기 위해 사용되었고; 상기 효소의 유효량은 총 약 3,000, 약 4,200, 약 5,000, 약 6,000, 약 8000, 약 10,000, 약 10,440, 약 10,500, 약 15,000, 약 16,000, 약 16,800, 16,800, 약 20,000, 약 20,880, 약 21,000, 약 24,000, 또는 25,000 USP, 리파아제 단위 또는 그의 다중 단위, 또는 약 5,000, 또는 약 12,500, 또는 약 30,000 PhEur 리파아제 단위 또는 그의 다중 단위일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서, 소화 효소 현탁액의 제조는 1) 파쇄(crushing), 분쇄(pulverizing) 또는 으깸(mashing)과 같은 방식에 의해 소화 효소(비-위내성이 바람직함)의 크기를 감소시키는 단계; 2) 적은 부피의 수용액을 첨가하는 단계; 및 3) 현탁액을 형성하기 위하여 혼합하는 단계를 포함한다. 수득한 현탁액은 특정량의 영양소를 갖는 액체 뉴트리션 포뮬라에 첨가되지 이전에 단기간 동안 유지되며; 이 기간은 5분보다 길어야하고, 더 바람직하게는 10분보다 길어야하며; 약 15분 내지 약 30분인 것이 바람직하며; 바람직하게는 약 15분동안 유지된다.

첫 번째 단계에서, 1) 췌장리파아제 효소 입자를 파쇄하여 고운 분말을 얻었으며; 수동 공정(세라믹 막자사발 및 막자; 커피 머그 및 금속 스푼을 사용) 또는 환(pills) 파쇄 장치 중 어느 하나를 이용하여 수행될 수 있는 이 단계에서 용량 손실은 발생하면 안 된다. 파쇄 장치는 GIMA^®(S), Genious^®(S), Apex Ultra Pulls Crusher^®(S)와 같은 나사(S) 유형일 수 있다. 입자 치수 및 용량 회복의 관점에서 재현성 때문에 환 파쇄기를 사용하는 것이 바람직하다.

이후에, 분쇄된 췌장리파아제 효소는 소량 부피의 적절한 투여 비히클에 첨가하고, 혼합함에 따라 균질한 현탁액의 형성이 가능하게 된다. 투여 비히클은 수용액이다. 이것은 1) 멸균 조건을 준수하지 않는 것을 제외하고는 비-비경구 투여용 멸균수에 필적하는 정제수 또는 탈이온수; 2) 멸균수; 3) 생리식염수(0.9% NaCl); 또는 4) 수돗물일 수 있다. 정제수 또는 멸균수 또는 생리식염수(또는 식염수)는 대부분의 약품에 대하여 바람직한 희석제이기 때문에 바람직하다.

균질한 소화 효소 현탁액을 얻는 것은 고 밀도의 농축된 현탁물을 제조하기 위하여 적은 부피의 용액에 가하는 것(단계 2)이 중요하며; 여기서 부피는 10 mL 미만이어햐 한다. 바람직하게는, 소화 효소는 대응하는 강도에 따르면 적은 부피의 수용액에 현탁되어야 한다. 사실, 리파아제의 약 9,190 USP 단위 또는 약 10,400 USP 단위의 용량에 대하여 2.5 mL의 부피가 가해지는 것이 바람직하며; 다중 USP 단위를 갖는 제형에 대하여 해당 다중 부피가 가해진다. 예로서, 리파아제(예, Viokace^TM)의 10,440 USP 단위를 갖는 췌장리파아제 효소의 한 정제는 정제수 2.5 mL(1/2 티스푼) 중에 현탁되며; 리파아제(예, Eurobiol^®, 12,500 PhEur 단위 리파아제는 9,191 USP 단위에 해당하며; PhEur 리파아제 단위로부터 USP 리파아제 단위로의 전환 인자는 1 PhEur 단위 = 1.36 USP 단위임)의 12,500 PhEur 단위를 갖는 췌장리파아제 효소의 일 용량은 정제수 2.5 mL(1/2 티스푼) 중에 현탁되며; 리파아제(예, Viokace^TM)의 20,880 USP 단위를 갖는 췌장 리파아제 효소의 일 용량은 정제수 5 mL(1 티스푼) 중에 현탁된다. 효소 안정성은 유지되고, 이런 고 농축된 현탁액을 획득하기 위하도록 제조되어야 하며, 희석 인자는 이것이 효소 활성 저하와 직접적으로 관련되기 때문에 안정성에 대한 측면에서 대단히 중요하다.

균질한 현탁물을 얻는 것은 혼합한 후 혼합물을 액체 뉴트리션 포뮬라에 첨가하기 이전에 실온에서 짧은 기간 동안 유지하는데 중요하며; 이 기간은 5분을 초과하고, 더 바람직하게는 10분을 초과하며; 바람직하게는 약 15분 내지 약 30분이다. 약 15분은 선택된 파쇄 장치의 유형 또는 환 파쇄 장치의 유형에 독립적으로 눈에 띄는 크기의 조각 또는 온전한 입자가 없는 현탁액을 제조하기에 특히 적합하다. 이런 유지기간은 균질한 현탁물의 제조 뿐만 아니라 리파아제 활성 유지를 보장한다. 실제로도, 사용된 췌장리파아제 효소 용량 강도에 독립적으로 항상 완전한 용량 회복을 갖는 것이 중요하다. 현탁물은 이것을 뉴트리션 포뮬라에 첨가하기 전에 스푼 또는 스패툴라(spatula)를 이용하여 몇초간 온화하게 교반되었다.

수성 용매 내에 현탁된 분쇄된 췌장리파아제 효소는 탄수화물, 지질, 단백질 및 물의 혼합물인 특정량의 영양소를 포함하는 액체 뉴트리션 포뮬라에 첨가된 후, 장용 튜브를 통해 급식 백(feeding bag)으로부터 환자에게 조성물이 지급되기 이전에 약 15초와 같은 적절한 시간 동안 흔들어 혼합되었다. 뉴트리션 포뮬라에 현탁물의 첨가는 이미 뉴트리션 포뮬라를 함유하는 급식(또는 지급) 백에 직접적으로 이루어지는 것이 바람직하다.

본 발명의 공정은 주어진 용량 강도의 보전을 가능하게 하여, 소화 효소 제품의 완전한 전달을 가능하게 하며; 실제로도, 효소 활성의 손실이 발생하지 않고; 액체 조성물의 제조 과정에서 활성 효소의 임의의 기계적 제거나 분해가 발생하지 않았다.

본 발명은 또한 특정량의 영양소를 갖는 뉴트리션 포뮬라 중에 췌장리파아제 효소의 안정하고 균질한 분산인 췌장리파아제 효소 및 영양소(Pan+NF)의 액체 조성물에 관한 것이다. 이런 액체 조성물은 효소 활성에 대하여(리파아제, 프로테아제 및 아밀라아제 활성) 안정하게 유지된다. 사실, 이런 혼합물은 뉴트리션 포뮬라에 효소를 첨가한 직후에 측정된 활성인 0시간에서 뉴트리션 포뮬라 중에 리파아제 활성에 대한 주어진 시간(t)에서 조성물 중에 리파아제 활성의 비율의 퍼센트로서 계산되는 리파아제 활성을 보유한다. 실온에서 약 8시간 후에, 리파아제 활성은 약 90% 초과, 또는 약 100%이고, 프로페아제 활성은 약 90% 초과, 또는 약 100%이고, 아밀라아제 활성은 85% 초과, 또는 100%이다. 소화 효소-영양소 조성물에서 효소 활성 회복은 주어진 시간(t)에서의 효소 활성 및 첨가 직후에 혼합물에서 계산된 0 시간에서의 효소 활성 사이에 비율이다. 또한, 적어도 약 8-10시간의 적어도 동일한 시간동안에, 조성물 중에 상분리(예, 지질 및 수성 성분, 단백질 침전물들 사이의 분리)는 관찰되지 않는다. 이와 같이, 본 발명의 조성물은 일정한 용량 및 균질한 영양소 전달을 가능하게 한다.

이런 췌장리파아제 효소 및 영양소 조성물은 소아과 및 성인 환자의 손상된 위장관 기능의 영양학적 관리를 위해 사용되고 투여 기간동안 눈에 띄는 상 분리 없이 급식 펌프 및 G-튜브를 사용하여 연속적인 주입을 통해 투여하기에 적절하다.

본 발명에서 사용된 뉴트리션 포뮬라는 탄수화물, 지질, 단백질의 혼합물인 특정량의 영양소; 가수분해 형태일 수 있는 폴리머 성분을 포함하는 성인/어린이 또는 유아의 뉴트리션 포뮬라일 수 있다. 뉴트리션 포뮬라는 미량 원소 및 섬유질과 같은 다른 성분들을 더 포함할 수 있다.

본 발명에 의해 유용한 포뮬라는 특정량의 영양소를 갖는 뉴트리션 포뮬라이다. 총 지방 및 단백질 및 탄수화물 영양소 함량은 약 10 내지 약 35g/100mL이고; 더 바람직하게는 약 12 내지 약 32이다. 뉴트리션 포뮬라가 성인/어린이 뉴트리션 포뮬라인 경우에, 총 지방 및 단백질 및 탄수화물 함량은 약 20 내지 약 32g/100mL이고; 뉴트리션 포뮬라가 유아의 뉴트리션 포뮬라인 경우에, 총 지방 및 단백질 및 탄수화물 영양소 함량은 약 12 내지 약 14g/100mL이다.

본 발명에 의해 유용한 또 다른 실시예는 총 지방 및 단백질 영양소 함량이 약 4.5 내지 약 11.5g/100mL; 더 바람직하게는 약 4.9 내지 약 11.3인 뉴트리션 포뮬라이다. 뉴트리션 포뮬라가 성인/어린이의 뉴트리션 포뮬라인 경우에, 총 지방 및 단백질 함량은 약 6.8 내지 11.3/100mL이고; 뉴트리션 포뮬라가 유아의 뉴트리션 포뮬라인 경우에, 총 지방 및 단백질 함량은 약 4.9 내지 약 5.3g/100mL이다.

본 발명에 의해 유용한 또 다른 실시예는 총 지방 영양소 함량이 약 3.0 내지 약 7.0g/100mL; 바람직하게는 약 3.3 내지 약 6.8인 뉴트리션 포뮬라이다. 뉴트리션 포뮬라가 성인/어린이의 뉴트리션 포뮬라인 경우에, 총 지방 함량은 약 3.8 내지 약 6.8g/100mL이고; 뉴트리션 포뮬라가 유아의 뉴트리션 포뮬라인 경우에, 총 지방 함량은 약 3.3 내지 약 3.7g/100mL이다.

본 발명에 의해 유용한 또 다른 실시예는 총 단백질 영양소 함량이 약 1.3 내지 약 6.3g/100mL; 바람직하게는 약 1.4 내지 약 6.2인 뉴트리션 포뮬라이다. 뉴트리션 포뮬라가 성인/어린이의 뉴트리션 포뮬라인 경우에, 총 단백질 함량은 약 3 내지 약 6.2g/100mL이고; 뉴트리션 포뮬라가 유아의 뉴트리션 포뮬라인 경우에, 총 단백질 함량은 약 1.4 내지 약 1.6g/100mL이다.

흔히 사용된 장용 액상제는 폴리머 또는 다른 전문화된 제형을 포함한다. 유유-기반 또는 락토오스-미함유 상업적 제형을 포함하는 폴리머제는 상업적으로 구입할 수 있고 일반적으로 완전히 균형잡힌 식사를 제공한다. 전문화된 제형은 복합 단백질을 소화시키기 어려운 환자를 위해 사용되는 가수분해된 단백질 또는 종종 아미노산을 포함한다.

본 발명에 적합한 구입가능한 액체 성인/어린이 장용제는 Peptamen^® Junior 1, Peptamen^® Junior 1.5, Ensure^® Plus, Fortimel^®와 같은 것들이 제한됨 없이 사용될 수 있고, 다른 유사 제품들도 사용될 수 있다. 구입가능한 유아의 제제는 Humana^® 1, Neolatte^® 1, 및 Neolatte^® 2이다.

본 발명에서 사용된 소화 효소 제품은 치료적 유효량이다. 췌장리파아제 효소는 액체 뉴트리션 포뮬라안으로 투여되어야 하며; 상기 투여는 연령, 임상적 증산에 따라 개별 환자에 대해 맞춰질 수 있다. 본 발명에 따른 공정에서, 액체 뉴트리션 포뮬라와 혼합되는 경우에 뉴트리션 포뮬라 중에 1g의 지방 당 대략적으로 약 1,000 내지 약 5,000, 바람직하게는 약 1,000 내지 약 4,500 리파아제 USP 단위 사이의 용량이 초기 투여량으로 권고된다.

주입도중에, 지질, 단백질, 탄수화물 및 소화 영양소 상에서 췌장리파아제 효소의 효소 활성이 형성되기 때문에 영양소의 변형이 발생하며; 이는 소화가 발생한다는 것을 보장한다. 영양소 및 소화 제품의 유형 및 비율에 이러한 변화에도 불구하고, 본 발명의 조성물은 8-10시간 넘게 균질하고 안정한 상태로 남아있는다.

본 발명의 특정 실시예는 비-위내성 췌장리파아제 효소 제품 및 뉴트리션 포뮬라로부터의 영양소를 포함하는 장용 투여에 적합한 안정하고 균질한 액체 조성물의 제조를 위한 공정에 있어서, 상기 공정은 하기 단계들을 포함한다: a) 다음의 1) 내지 4) 단계를 포함하는 수용액 중 췌장리파아제 효소의 현탁물을 제조하는 단계: 1) 소화 효소 제품의 크기를 감소시키는 단계, 2) 리파아제의 약 10,400 USP 단위를 갖는 소화 효소 제품에 대해 약 2.5 mL의 수용액을 첨가하거나, 리파아제의 복합 USP 단위를 갖는 제품에 대하여 상응하는 복합량의 용액을 첨가하는 단계, 3) 현탁물을 형성하도록 혼합하는 단계, 및 4) 약 5분 초과의 시간동안 유지시키는 단계(바람직하게는 약 5분 내지 약 30분; 바람직하게는 약 15분); b) 안정하고 균질한 액체 조성물을 형성하기 위하여 액체 뉴트리션 포뮬라와 현탁물을 혼합하는 단계; 이때, 상기 뉴트리션 포뮬라는 총 지방 및 단백질 및 탄수화물 영양소 함량이 약 10 내지 약 35g/100mL이고, 더 바람직하게는 약 20 내지 약 32g/100mL이며; 이때 상기 조성물은 제조시로부터 적어도 8시간 안정한 채로 남아있고(상 분리 발생하지 않음) 효소는 약 실온에서 약 8시간 저장 후에 약 90% 초과의 리파아제 활성을 가지며, 이러한 활성은 액체 뉴트리션 포뮬라에 첨가된 리파아제 활성의 단위의 퍼센트로 계산되었다.

본 발명의 또 다른 특정 실시예는 비-위내성 췌장리파아제 효소 제품 및 뉴트리션 포뮬라로부터의 영양소를 포함하는 장용 투여에 적합한 안정하고 균질한 액체 조성물의 제조를 위한 공정에 있어서, 상기 공정은 하기 단계들을 포함한다: a) 다음의 1) 내지 4) 단계를 포함하는 수용액 중 췌장리파아제 효소의 현탁물을 제조하는 단계: 1) 소화 효소 제품의 크기를 감소시키는 단계, 2) 리파아제의 약 10,400 USP 단위를 갖는 소화 효소 제품에 대해 약 2.5 mL의 수용액을 첨가하거나, 리파아제의 복합 USP 단위를 갖는 제품에 대하여 상응하는 복합량의 용액을 첨가하는 단계, 3) 현탁물을 형성하도록 혼합하는 단계, 및 4) 약 5분 초과의 시간동안 유지시키는 단계(바람직하게는 약 5분 내지 약 30분; 바람직하게는 약 15분); b) 안정하고 균질한 액체 조성물을 형성하기 위하여 액체 뉴트리션 포뮬라와 현탁물을 혼합하는 단계; 이때, 상기 뉴트리션 포뮬라는 총 지방 및 단백질 영양소 함량이 약 4.5 내지 약 11.5g/100mL이고, 더 바람직하게는 약 6.8 내지 약 11.3g/100mL이며; 이때 상기 액체 조성물은 제조시로부터 적어도 8시간 안정한 채로 남아있고(상 분리 발생하지 않음) 효소는 약 실온에서 약 8시간 저장 후에 약 90% 초과의 리파아제 활성을 가지며, 이러한 활성은 액체 뉴트리션 포뮬라에 첨가된 리파아제 활성의 단위의 퍼센트로 계산되었다.

본 발명의 특정 실시예는 비-위내성 췌장리파아제 효소 제품 및 뉴트리션 포뮬라로부터의 영양소를 포함하는 장용 투여에 적합한 안정하고 균질한 액체 조성물의 제조를 위한 공정에 있어서, 상기 공정은 하기 단계들을 포함한다: a) 다음의 1) 내지 4) 단계를 포함하는 수용액 중 췌장리파아제 효소의 현탁물을 제조하는 단계: 1) 소화 효소 제품의 크기를 감소시키는 단계, 2) 리파아제의 약 10,400 USP 단위를 갖는 소화 효소 제품에 대해 약 2.5 mL의 수용액을 첨가하거나, 리파아제의 복합 USP 단위를 갖는 제품에 대하여 상응하는 복합량의 용액을 첨가하는 단계, 3) 현탁물을 형성하도록 혼합하는 단계, 및 4) 5분 초과의 시간동안 유지시키는 단계(바람직하게는 약 5분 내지 약 30분; 바람직하게는 약 15분); b) 안정하고 균질한 액체 조성물을 형성하기 위하여 액체 뉴트리션 포뮬라와 현탁물을 혼합하는 단계; 이때, 상기 뉴트리션 포뮬라는 총 지방 영양소 함량이 약 3.0 내지 약 7.0g/100mL이고, 더 바람직하게는 약 3.8 내지 약 6.8g/100mL이며; 이때 상기 액체 조성물은 제조시로부터 적어도 8시간 안정한 채로 남아있고(상 분리 발생하지 않음) 효소는 약 실온에서 약 8시간 저장 후에 약 90% 초과의 리파아제 활성을 가지며, 이러한 활성은 액체 뉴트리션 포뮬라에 첨가된 리파아제 활성의 단위의 퍼센트로 계산되었다.

본 발명의 특정 실시예는 비-위내성 췌장리파아제 효소 제품 및 뉴트리션 포뮬라로부터의 영양소를 포함하는 장용 투여에 적합한 안정하고 균질한 액체 조성물의 제조를 위한 공정에 있어서, 상기 공정은 하기 단계들을 포함한다: a) 다음의 1) 내지 4) 단계를 포함하는 수용액 중 췌장리파아제 효소의 현탁물을 제조하는 단계: 1) 소화 효소 제품의 크기를 감소시키는 단계, 2) 리파아제의 약 10,400 USP 단위를 갖는 소화 효소 제품에 대해 약 2.5 mL의 수용액을 첨가하거나, 리파아제의 복합 USP 단위를 갖는 제품에 대하여 상응하는 복합량의 용액을 첨가하는 단계, 3) 현탁물을 형성하도록 혼합하는 단계, 및 4) 5분 초과의 시간동안 유지시키는 단계(바람직하게는 약 5분 내지 약 30분; 바람직하게는 약 15분); b) 안정하고 균질한 액체 조성물을 형성하기 위하여 액체 뉴트리션 포뮬라와 현탁물을 혼합하는 단계; 이때, 상기 뉴트리션 포뮬라는 총 단백질 영양소 함량이 약 1.3 내지 약 6.3g/100mL이고, 더 바람직하게는 약 3 내지 약 6.2g/100mL이며; 이때 상기 액체 조성물은 제조시로부터 적어도 8시간 안정한 채로 남아있고(상 분리 발생하지 않음) 효소는 약 실온에서 약 8시간 저장 후에 약 90% 초과의 리파아제 활성을 가지며, 이러한 활성은 액체 뉴트리션 포뮬라에 첨가된 리파아제 활성의 단위의 퍼센트로 계산되었다.

췌장리파아제 효소 및 영양소 조성물은 EPI를 앓는 유아, 어린이, 성인, 노인 환자, 또는 다른 환자들에 투여하기에 적합하며, 이는 약물을 조절된 투여로 그리고 조심스럽게 지급될 수 있도록 한다.

본 발명은 본 발명의 영양소들 및 소화 효소들(췌장 효소)의 조성물을 소아과 또는 성인 환자들에게 투여하는 방법도 포함한다. 상기 방법은 하기 단계들을 포함한다: a) 파쇄(crushing), 분쇄(pulverizing) 또는 으깸(mashing)과 같은 방식에 의해 소화 효소의 크기를 감소시키는 단계; b) 적은 부피의 수용약을 첨가하는 단계; c) 혼합하여 현탁물을 형성하고 5분 이상 유지시키는 단계; d) 특정량의 영양소를 포함하는 액체 뉴트리션 포뮬라와 현탁물을 혼합하여 지급 백(dispensing bag) 또는 다른 용기(container) 중 어느 하나 내에 소화 효소-영양소 조성물을 형성하는 단계; e) 장용 튜브를 통해 환자에게 급식 백으로부터 조성물을 지급하는 단계; 이때 효소 및 영양소 조성물은 지급전에 온화하게 교반될 수 있다.

본 발명은 위루관 또는 비위관을 통해 액체 췌장리파아제 효소 및 영양소의 투여에 적합하며, 그리고 막힘과 끈적임이 없고 및 튜브 개방성을 보존하는 튜브의 루멘을 통해 용량의 한결같은 전달을 보장하는 신뢰할만한 방법 설명한다. 투여는 신생아로부터 유아 성인 환자에 이르기까지 환자에 따라 선택되는 상이한 장용 튜브를 통해 이루어진다. 본원에서 제시된 직경 크기의 성공적인 시험은 동일한 유형의 임의의 큰 직경 튜브의 사용 및 제조자가 설명된 투여 방법을 사용하는 경우에 용인될 수 있다고 보여진다.

전술한 설명 및 실험부분으로부터, 본 발명은 몇몇 중요한 이점을 제공하는 것을 알 수 있다. 본 발명은 췌장리파아제 효소 및 특정 뉴트리션 포뮬라로부터의 영양소의 혼합물의 제조에 대한 간단하고 신속한 공정을 제공하며; 상기 혼합물은 적어도 약 8시간동안 균질함을 유지하고; 리파아제 활성은 현탁된 췌장리파아제 효소를 액체 뉴트리션 포뮬라에 첨가한 후에 유지되며; 리파아제는 약 8시간 넘는 시간 동안 조성물 중에서 안정하고, 지방분해는 효과적으로 달성된다.

실험

재료

- 췌장리파아제 효소: 췌장리파아제 효소 표준 시료 USP 배치 8(아밀라아제 활성 검정: 344 USP 단위/mg, 프로테아제 활성 검정 358 USP 단위/mg), 췌장리파아제 효소 표준 시료 USP 배치 3(리파아제 활성 검정: 93.3 USP 단위/mg).

- 췌장리파아제 효소 제품: 미국에서 판매된 Viokace^TM (10,440 또는 20,880 USP 단위 리파아제) 제품; 부형제: 크로스카멜로오스 소듐, 콜로이드성 실리콘 디옥시드(colloidal silicon dioxide), 셀룰로오스 미세결정(cellulose microcrystalline), 스테아르산(stearic acid), 활석(talc); 캐나다에서 판매된 Viokase^® (8,000 또는 16,000 USP 단위 리파아제) 제품; 부형제: 크로스카멜로오스 소듐(croscarmellose sodium), 콜로이드성 실리콘 디옥시드, 셀룰로오스 미세결정, 스테아르산, 활석; Mayolyl Spindler에서 판매된 Eurobiol^® 12,500 PhEur 단위 리파아제/용량(20 gr); 부형제: 셀루로오스 미세결정, 크로스포비돈(crospovidone), 콜로이드성 실리카 무수물(colloidal silica anhydrous), 마그네슘 스테아레이트(magnesium stearate), 코팅(coating): 메타크릴산-에틸 아크릴레이트 코폴리머(methacrylic acid-ethyl acrylate copolymer)(1:1), 트리에틸시트레이트(trietylcitrate), 활석, 시메티콘 에멀젼(simethicone emulsion).

- 장용 포뮬라: Peptamen^® Junior 1 Cal (Nestle, 250 mL 패키지, 바닐라, 인공 풍미), Peptamen^® Junior 1.5 Cal (Nestle, 250 mL 패키지, 무풍미), Ensure^® Plus (200 mL의 Abbott Italia 패키지, 딸기 인공 풍미), Nutren^® 2.0 (Nestle, 250 mL 패키지), TwoCal^® HN (Abbott Nutrition, 237 mL 패키지), 및 Fortimel^® (Nutricia, 200 ml 패키지).

- 유아의 포뮬라: Neolatte^®1 (Unifarm, 포뮬라는 제조자에 의해 설명된 ㅂ바와 같이 재구성됨), Neolatte^® 2 (Unifarm, 포뮬라는 제조자에 의해 설명된 ㅂ바와 같이 재구성됨), Humana^® 1 (Unifarm, 470 mL 패키지), 및 Nutramigen^TM DHA & ARA (Enfamil, 946 mL 패키지).

장용 및 유아의 포뮬라의 영양소(지방 + 단백질 + 탄수화물) 함량은 표 1에서 보여진다.

뉴트리션 포뮬라	칼로리 밀도 (cal/mL)	지방 함량 (g/100 ml)	단백질 함량 (g/100 ml)	탄수화물 함량 (g/100 ml)	지방 + 단백질 + 탄수화물 함량 (g/100 mL)
EF1 Peptamen Jr^®	1	3.8	3.0	13.6	20.4
EF2 Peptamen^® Jr^®	1.5	6.8	4.5	18.0	29.3
EF3 Ensure^® Plus	1.5	4.9	6.2	20.2	313
EF4 Nutren^® 2.0	2	10.4	19.6	8	38
EF5 Two Cal^® HN	2	9.0	8.4	21.8	39.2
IF1 Neolatte^® 1	0.68	3.7	1.4	7.7	12.8
IF2 Neolatte^® 2	0.68	3.3	1.6	8.2	13.1
IF3 Humana^® 1	0.68	3.7	1.6	6.9	12.2
IF4 Nutramigen^®	0.68	2.1	1.1	4.1	7.3

방법

지방분해 활성

측정은 pH-스타트(stat) 방법을 사용하여, 이용된 기질(올리브 오일) 중에 에스테르화 지방산의 가수분해로부터 형성된 유리 지방산의 적정에 기초한 췌장리파아제 효소 USP 논문에서 설명된 리파아제 검정의 개요과정에 기반한 방법으로 수행된다. 이것은 하기 원리에 기초한다: 리파아제는 유리 지방산(FFA)의 형성으로 이어지는 트리글리세리드의 가수분해를 촉진한다. 시간에 따라 형성된 FFA의 적정은 리파아제의 효소 활성의 확인을 위해 제공되며, 그 활성은 단위(U)로 표현될 수 있다: 1 U = 1분 당 형성된 FFA의 1 μ몰. pH 값이 고정 값에 비해 변화되는 경우에(pH 스타트 방법) NaOH(적정제)의 첨가를 돕기 위해 제공되는 실험 시스템을 통해 정지 pH 값을 유지하는 것에 의해 반응이 일어난다. 시간에 따라 첨가된 적정제의 양은 트리글리세리드 상에서 리파아제 작용에 의해 형성된 FFA의 양에 대응한다. 곡선 기울기{첨가된 적정제 = f(부피(mL)/시간(분))}는 리파아제 효소 활성을 나타낸다.

단백질분해, 녹말분해 활성 측정은 췌장리파아제 효소 USP 논문에서 설명된 개요 방법에 따라 수행된다.

트리글리세리드는 헥산:이소프로판올(3:2)로 추출되며 내부 표준으로서 콜레스테릴팔미테이트(cholesterylpalmitate)를 사용하고 HPLC에 의해 분석되며; 피크는 모든 체류시간에 대하여 표준 트리올레인(triolein) 용액과 비교하여 식별된다.

지방산은 헥산:이소프로판올(3:2) 중에서 추출되며 내부 표준으로서 스테아릴알콜을 사용하고 HPLC에 의해 분석되며; 피크는 모든 체류시간에 대하여 지방산 표준, 즉 리놀레산, 팔미트산, 올레산, 및 스테아르산과 비교하여 식별된다.

단백질 분석 1)총 단백질 함량은 브래드포트 검정(Bradford Assay)으로 정량되며; 2) 트립토판은 5-메틸 트립토판을 내부 표준으로 사용하는 HPLC에 의해 분석된다.

탄수화물 분석 1) 단쇄 당(short chain sugars)은 자일리톨을 내부 표준으로 사용하는 HPLC에 의해 분석되며; 피크는 모든 체류시간에 대하여 당 표준, 즉 수크로오스, 말토오스 및 글루코오스와 비교하여 식별된다. 2) 말토덱스트린은 Carrez I 및 Carrez II의 존재하에서 추출되고 HPLC에 의해 분석되며; 피크는 모든 체류시간에 대하여 말토덱스트린 표준, 즉 말토오스 모노히드레이트, 말토트리오스, 말토테트라오스, 말토펜타오스, 말토헥사오스 및 말토헵타오스와 비교하여 식별된다.

기구

주입 투여용 표준 장비(임상 환경, 또는 집, 유사한 일반적인 급식 과정에서 사용된 것과 동일함)는 급식 백(feeding bag)(Kangaroo Joey^TM 장용 급식 펌프 세트), 펌프(Kangaroo Joey^TM e펌프 장용 급식 펌프) 및 G-튜브(Kimberly Clark MIC-KEY, 기공 길이: 4.0 cm, 외경: 12 Fr (12 Fr= 0.33 mm)). 10 mL/h 주입 급식율을 위하여 다음의 파라미터가 세팅된다: 흐름: 10 mL/h, 4시간마다 30mL의 물로 세척. 125 mL/h 주입 급식율을 위하여 다음의 파라미터가 세팅된다: 흐름: 125 mL/h, 4시간마다 30 mL의 물로 세척.

환 파쇄(Pills crushing): a) 수동 공정, 사용: 세라믹 막자사발 및 막자; 커피 머그 및 금속 스푼; b) 환 파쇄기, 나사(S) 형: GIMA(S), Genius(S), Apex Ultra Pills Crusher^®(S).

실시예

실시예 1. 투여 비히클 내에 췌장리파아제 효소 정제의 현탁물

생리 식염수 및 장용 포뮬라 EF3(Ensure^® Plus) 및 EF6(Fortimel^®) 중에 췌장리파아제 효소(8,000 및 16,000 USP 단위 리파아제의 Viokase 정제)의 직접 용해 시험이 하기에 의해 수행된다: 1) 스패튤라(가정용 스푼을 가정)로 비커(컵으로 가정함)에서 혼합하는 단계 또는 2) 병 내에서 수동으로 흔들어서 혼합하는 단계(원래의 장용 포뮬라 포장을 가정함). 고정된 적은 부피의 투여 비히클 내에, 정제(표 2의 용량 강도에 대응함 참조)는 2분 동안 수동적으로 교반되거나 흔들어 혼합된 뒤, 실온에서 유지된다. 정제의 양태는 시각적으로 시험된다(표 2 참조). 췌장리파아제 효소 정제는 30분 후 생리 식염수를 사용하는 경우에 탁한 현탁물을 제공하지만, 정제는 장용 포뮬라 EF3 및 EF6 내에 온전하게 남아 있으며; EF3 중에 현탁물을 얻기 위해서는 6시간이 필요하다. 수용액 및 장용 포뮬라 모두 췌장리파아제 효소의 직접적인 신속한 붕해 및 용해를 허용하지 않기 때문에 적합하지 않으며; 침전 및 상 분리가 관찰되고; 안정하고 균질한 조성물은 제조될 수 없다.

시험	투여 비히클	용량 강도(USP 단위/정제)	부피 (mL)	용기	시간(분)	혼합물의 시각적 양태
1	EF3	16,000	50	비커	5	정제에 변화없음
2	생리 식염수	16,000	50	비커	5	정제에 변화없음
3	EF6	16,000	50	비커	10	정제에 변화없음
4	EF3	16,000	50	비커	20	정제에 변화없음
5	EF6	16,000	50	비커	20	정제에 변화없음
6	생리 식염수	16,000	50	비커	20	탁한 현탁물
7	EF3	16,000	50	비커	30	정제에 변화없음
8	EF6	16,000	50	비커	30	정제에 변화없음
9	생리 식염수	16,000	50	비커	30	탁한 현탁물
10	생리 식염수	16,000	50	병	5	정제가 얇아짐
11	생리 식염수	16,000	50	병	10	정제가 얇아짐
12	생리 식염수	16,000	50	병	20	정제가 얇아짐
13	생리 식염수	16,000	50	병	30	정제가 얇아짐
14	생리 식염수	16,000	50	비커	10	정제가 얇아짐
15	생리 식염수	16,000	50	비커	20	정제가 얇아짐
16	생리 식염수	16,000	50	비커	30	현탁물
17	생리 식염수	16,000	50	병	10	정제가 얇아짐
18	생리 식염수	16,000	50	병	20	정제가 얇아짐
19	생리 식염수	16,000	50	병	30	정제가 얇아짐
20	EF3	16,000	50	비커	60	정제가 얇아짐
21	EF3	16,000	50	비커	360	현탁물
22	생리 식염수	16,000	50	비커	30	현탁물
23	EF3	8,000 x 2	50	비커	30	정제가 얇아짐
24	생리 식염수	8,000 x 2	50	비커	30	정제가 얇아짐
25	EF3	8,000 x 3	200	비커	30	정제가 얇아짐
26	EF3	16,000/2	50	비커	30	정제가 얇아짐

실시예 2. 정제 파쇄

췌장리파아제 효소 정제(Viokace^TM)는 정제 분쇄화의 재현성, 용량 회복(손실 없이), 가장 큰 식별 입자의 시각적 양태 및 크기를 평가하기 위하여 다른 파쇄 장치를 사용하여 분쇄된다. 다른 환 파쇄기는 다른 크기의 입자들의 균질한 분말을 제공한다. 하기 시험이 이루어진다: Genius 환 파쇄기: 약 2,000 마이크론; Apex 환 파쇄기: 약 4,000 마이크론; Gima 환 파쇄기: 약 5,000 마이크론; 세라믹 막자사발 및 막자: 200-500 마이크론; 약 3,000 마이크론의 조대 입자의 불규칙한 분말을 제공한 커피 머그 및 금속 스푼. Genius, Apex 및 Gima 환 파쇄기 장치는 재현가능한 성능 및 그들의 폐쇄 시스템으로부터 기인한 용이한 용량 회복을 제공한다. 커피 머그 및 금속 스푼은 재현가능한 분말 및 간단한 방법을 제공하지 않고, 용량 손실은 컵으로부터 유출된 정제 조각으로 인해 파쇄 과정의 실행에서 발생할 수 있다. 세라믹 막자사발 및 막자는 분쇄 췌장리파아제 효소 정제 입자 크기의 관점에서 좋은 결과를 제공하지만, 인간 요소의 높은 영향이 관찰된다.

실시예 3. 췌장리파아제 효소 현탁물 제조: 투여 비히클

3개의 현탁물은 하기의 수성 매질 10 mL 중에 20,880 USP 단위 리파아제(Viokace^TM)의 췌장리파아제 효소 정제의 3 개의 분쇄된 정제들 각각으로 제조된다: 1) 정제수(탈이온수); 2) 생리 식염수(0.9% NaCl); 3) 수돗물. 모든 시험된 매질은 분쇄된 췌장리파아제 효소 정제를 적절히 현탁시켜서 입자의 균질한 현탁물을 생성한다.

실시예 4. 췌장리파아제 효소 현탁물 제조: 전달 최적화

16,000 USP 단위 리파아제(Viokase^®)를 갖는 3개의 췌장리파아제 효소 정제는 적절한 파쇄 장치(실시예 2 참조)로 파쇄되고, NG-튜브 및 G-튜브를 통해 투여되기 이전에 적절한 수성 매질(실시예 3에서 설명됨)의 표 3에 보고된 부피 중에 현탁되며; 최악의 경우로서, 외경으로서 12 Fr을 갖는 길이 및 내경의 관점에서 가장 도전적인 G-튜브가 사용된다(즉, Mic Kimberly Clark Bolus). 결과로부터(표 3에서 보고됨), 적어도 15분의 현탁 시간을 적용하는 것에 의해 다른 유형의 환 파쇄기는 현탁된 분쇄 췌장리파아제 효소 정제의 전달능력에 영향을 미치지 않는다고 밝혀졌으며; 막힘이 관찰되지 않는다.

이 과정은 리파아제 활성의 유지를 위해 고려된다: G-튜브 통로 이전의 활성은 19.7 U USP/mg이고 G-튜브 통로 이후의 활성은 19.8 U USP/mg이다; 따라서 완전한 용량 회복이 보장된다.

상기 과정은 광범위한 용량 강도 전달에도 적합하다(8,000의 1개의 췌장리파아제 효소 정제로부터 최대 16,000 USP 리파아제 단위의 3개의 췌장리파아제 효소 정제). 8,000 U USP 리파아제의 정제 각각은 정제수 2.5 mL(티스푼 절반) 중에 현탁되고 적어도 15분간 유지된 후, 추가량의 물이 표 4에 보고된 부피에 이르기까지 첨가된다. 제조된 현탁물이 5 Fr 튜브(예, CORPARK), 또는 8 Fr(예, Tyco-Healthcare 제조사)을 갖는 매우 작은 크기의 NG-튜브 및 G-튜브를 사용하여 NG-투여(Mic-Key)를 할 수 있다고 밝혀졌다. 표 4 참조.

#	부피 (mL)	파쇄 도구	현탁 시간 (분)	물	시각적 검사
1	10	Genius	0.5	탈이온수	OK
2	10	Apex	0.5	탈이온수	막힘
3	10	Gima	5	탈이온수	막힘
4	10	막자사발 및 막자	5	탈이온수	OK
5	10	막자사발 및 막자	5	수돗물	OK
6	10	막자사발 및 막자	5	생리 식염수	OK
7	10	Apex	30	탈이온수	OK
8	10	Gima	30	탈이온수	OK
9	10	Apex	15	탈이온수	OK
10	20	막자사발 및 막자	30	탈이온수	OK
11	20	Apex	15	탈이온수	OK
12	20	막자사발 및 막자	15	탈이온수	OK

#	G-튜브	NG-튜브	기공 길이 (cm)	외경 (Fr)	강도	N°정제	부피 (mL)	파쇄 도구	시각 검사
1	Mic-Key		0.8	12	16,000	3	20	Apex	OK
2	Mic-Key + Secure lok		0.8	12	16,000	3	20	Apex	OK
3		Tyco-Healthcare		8	16,000	3	20	Silent Knight	OK
5		Tyco-Healthcare		8	8,000	4	20	Apex	OK
6		Tyco-Healthcare	107	8	8,000	4	10	Apex	OK
7		Corpak	56	5	8,000	4	10	Apex	OK
8		Corpak	56	5	8,000		2.5	Apex	OK
9		Corpak	56	5	8,000		5	Apex	OK
10		Corpak	56	5	16,000	1	5	Apex	OK
11	Mic-Key + Secure lok		4	12	8,000	1	2.5	Apex	OK
12	Mic-Key + Secure lok		4	12	16,000	1	5	Apex	OK
13	Mic-Key + Secure lok		4	12	8,000	2	5	Apex	OK
14	Mic			12	8,000	1	2.5	Apex	OK
15	Mic			12	16,000	1	2.5	Apex	OK
16	Mic			12	8,000	2	5	Apex	OK
17 10		Corpak	56	5	16,000	2	10	Apex	OK
18	Mic-Key + Secure lok		4	12	16,000	2	10	Apex	OK
19	Mic			12	16,000	2	10	Apex	OK
20		Corpak	56	5	16,000	3	15	Apex	OK
21	Mic-Key + Secure lok		4	12	16,000	3	15	Apex	OK
22		Corpak	56	5	8,000	1	2.5	Apex	OK

실시예 5. 주입(연속 투여)용 췌장리파아제 효소 및 영양소-(Pan+EF) 조성물 - 직접 첨가 접근법

20,880 USP 리파아제 단위의 정제(Viokace^TM)는 적절한 환 파쇄 장치(실시예 2에서 보여줌)를 사용하여 분쇄되고 장용 포뮬라 Ensure^® Plus를 함유하는 급식 백에 직접 첨가된다. 유사한 Pan-EF 조성물은 다른 장용 포뮬라: Peptamen Junior^® 1.5와 함께 제조된다. 이런 접근법은 사용자에 독립적으로 적용하기가 매우 간단하고, 분쇄된 정제는 급식 백 안으로 용이하게 전달된다. 이런 접근법에 의해, 환 조각은 신속히 분산되지 않고 급식 백의 바닥에 남아있으며; 이런 비균질 시스템은 안정성(비정상 용량 투여), 불완전한 용량 전달 및 비균질한 소화 영양소 전달의 관점에서 매우 심각한 문제점을 제공할 수 있다.

실시예 6. 주입용 췌장리파아제 효소 및 영양소(Pan+EF) 조성물 - 기-현탁물 첨가 접근법

이런 접근법에 의해, 10,440 U USP 리파아제(Viokace^TM)의 췌장리파아제 효소 정제(EF1용 2개, EF2용 및 EF3용 4개)는 환 파쇄 장치로 파쇄된 후, 탈이온수 중에 기-현탁되고, 15분간 유지한 뒤, 급식 백 내의 장용 포뮬라의 패키지에 첨가되고, 15초간 흔들어서 혼합된다. 다른 장용 포뮬라들이 시험된다: EF3 (Ensure^® Plus), EF1 (Peptamen Junior^®) and EF2 (Peptamen Junior^® 1.5). 이 접근법은 장용 포뮬라 중에 췌장리파아제 효소의 균질한 분산을 제공하고, 그리하여 제조된 조성물은 일정한 용량 및 균질한 영양소 전달을 가능하게 한다. 이런 췌장리파아제 효소 수성 현탁물은 주입 백 안의 내용물이고 전달이 수행된다. 백 안의 혼합물의 시각적 검사는 주기적으로 수행되고(매 시간마다), 상 분리는 관찰되지 않고 사진을 찍었다. 따라서, 이 조성물은 눈에 띄는 상 분리가 없는 최대 적어도 8시간 동안 급식 펌프 및 G-튜브를 사용하여 연속적 주입을 통해 투여하기에 적합하다.

실시예 7. 주입용 췌장리파아제 효소 및 영양소(Pan+EF) 조성물 - 기-현탁물 첨가 접근법

분쇄된 췌장리파아제 효소는 2 용량의 12,500 PhEu 리파아제 단위(Eurobiol^®)로 시작하여 환 파쇄 장치를 사용하여 제조된 후, 탈이온수(5.0 mL) 중에 기-현탁된 후, 15분간 유지되고, 이후에 급식 백에 미리 부어놓은 장용 포뮬라의 패키지에 첨가된 후, 15초동안 흔들며 혼합된다. 다른 장용 포뮬라가 시험된다: EF3, EF1(Peptamen Junior^®) 및 EF2 (Peptamen Junior^® 1.5). 이 접근법은 장용 포뮬라 중에 췌장리파아제 효소의 균질한 분산을 제공하고, 그리하여 일정한 용량 및 균질한 영양소 전달을 가능하게 한다. 이런 pan-EF 조성물은 눈에 띄는 상 분리가 없는 최대 적어도 8-10시간 동안 급식 펌프 및 G-튜브를 사용하여 연속적 주입을 통해 투여하기에 적합하다. 백 안의 혼합물의 시각적 검사는 주기적(매시간)으로 수행되고, 상분리는 관찰되지 않고, 사진을 찍었다.

실시예 8. 주입용 췌장리파아제 효소 및 영양소(Pan+EF) 조성물 - 기현탁물 첨가 접근법

이전 실시예 6과 동일한 접근법 및 동일한 조건은 10,440 USP 리파아제 단위의 4개의 분쇄된 정제로부터 시작하여 현탁물을 제조하기 위하여 적용되고, 15분간 유지한 뒤, 이것을 원래의 패키지내의 장용 포뮬라의 패키지에 첨가하고, 15초간 흔들어 혼합한 뒤, 급식 백 안으로 옮겼다. 하기 유아의 포뮬라는 시험된다: EF4(Nutren^® 2.0) 및 EF5 (TwoCal^® HN): 눈에 띄는 상 분리가 관찰된다. 이 분리는 연속 투여에 대해 시험된 블랭크 샘플(췌장리파아제 효소 정제 첨가 없음)에서는 관찰되지 않는다: 최대 16시간의 물리적 안정성이 관찰된다. 백 안의 혼합물의 시각적 검사는 주기적(매시간)으로 수행되고, 상 분리는 관찰되지 않고, 사진을 찍었다.

실시예 9. 주입용 췌장리파아제 효소 및 영양소(Pan+EF) 조성물 - 기-현탁물 첨가 접근법

이전 실시예 8과 동일한 접근법 및 동일한 조건은 정제수(10mL) 중에 12,500 PhEu 리파아제 단위(Eurobiol^®)의 2 용량의 양으로 분쇄된 췌장리파아제 효소의 기-현탁물을 제조하고, 15분간 유지한 뒤, 이것을 급식 백 안으로 미리 부어놓은 하기 장용 포뮬라의 패키지에 첨가되고 15초간 흔들어 혼합하는 것에 의해 적용된다: EF4(Nutren^® 2.0) 및 EF5 (TwoCal^® HN). 눈에 띄는 상 분리가 관찰된다. 이 분리는 연속 투여에 대해 시험된 블랭크 샘플(췌장리파아제 효소 정제 첨가 없음)에서는 관찰되지 않는다: 최대 16시간의 물리적 안정성이 관찰된다. 백 안의 혼합물의 시각적 검사는 주기적(매시간)으로 수행되고, 상 분리는 관찰되지 않고, 사진을 찍었다.

실시예 10. 주입용 췌장리파아제 효소 및 유아의 포뮬라(Pan+IF) 조성물 - 기-현탁물 첨가 접근법

이전 실시예 6과 동일한 접근법 및 동일한 조건은 5 mL의 정제수 중에 10,440 USP 리파아제 단위(Viokace^TM)의 2개의 분쇄된 췌장리파아제 효소 정제를 첨가하고, 15분간 유지한 뒤, 급식 백에 미리 부어놓은 유아의 포뮬라 250 mL에 현탁물을 첨가하고, 15초간 온화하게 흔들어 혼합한 뒤, 급식 백 안으로 옮기는 것에 의해 적용된다. 하기 유아의 포뮬라가 시험된다: IF1(Neolatte^® 1), IF2 (Neolatte^® 2), IF3 (Humana^® 1), IF4 (Nutramigen^®). 눈에 띄는 상 분리가 IF4에 대해 관찰된다. 반면에, IF1, IF2, IF3에 대해서는 상 분리가 관찰되지 않으며; 이러한 유아의 포뮬라 중에 췌장리파아제 효소의 균질하고 안정한 분산이 최대 8시간 유지되며; 일정한 용량 및 균질한 영양소 전달은 IF1, IF2, IF3에서 달성될 수 있고, 급식 펌프 및 G-튜브를 사용하는 연속적 주입은 수행될 수 없다. 연속 투여에 대해서도 시험된 블랭크 샘플(췌장리파아제 효소 정제 첨가 없음)에서 상 분리는 관찰되지 않는다: 최대 16시간의 물리적 안정성이 관찰된다. 백 안의 혼합물의 시각적 검사는 주기적(매시간)으로 수행되고, 상 분리는 관찰되지 않고, 사진을 찍었다. 이 결과는 췌장리파아제 효소 정제가 안정한 Pan+IF 조성물을 제조하는데에 사용될 수 있다는 것을 보여준다.

실시예 11. 주입용 췌장리파아제 효소 및 영양소(Pan+IF) 조성물 - 기-현탁물 첨가 접근법

이전 실시예 10과 동일한 접근법 및 동일한 조건은 12,500 PhEur 리파아제 단위(Eurobiol) 각각의 분쇄된 췌장리파아제 효소 용량 2개를 5.0 mL의 정제수에 첨가하여 현탁물을 형성하고, 이것을 15분간 유지한 뒤, 급식 백에 미리 부어놓은 유아의 포뮬라 250 mL에 현탁물을 첨가하고, 15초간 온화하게 흔들어 혼합하는 것에 의해 적용된다. 하기 장용 포뮬라들이 시험된다: IF1(Neolatte^® 1), IF2(Neolatte^® 2), IF3(Humana^® 1), IF4(Nutramigen®). 실시예 10에서 보고된 것과 동일한 결과가 여기서도 발견된다: 상 분리가 IF4에 대해 관찰되지만, IF1, IF2, IF3에 대해서는 상 분리가 관찰되지 않으며; IF1, IF2, IF3 중에 췌장리파아제 효소의 균질하고 안정한 분산은 최대 8시간 유지된다. 백 내에 혼합물의 시각적 검사는 주기적(매시간)으로 수행되고, 상 분리는 관찰되지 않고, 사진을 찍었다.

실시예 12. 췌장리파아제 효소 현탁물의 제조(단계 1)

10,440 USP 리파아제 단위의 췌장리파아제 효소 정제(Viokace^TM 10,440 단위)는 환 파쇄 장치(Apex Ultra Pills Crusher^®)를 사용하여 하나씩 파쇄되어서 고운 분말을 생성한다. 분말 췌장리파아제 효소 정제는 작은 유리 용기 안으로 옮겨진다. 10,440 USP 단위의 리파아제 용량을 갖는 각 정제에 대하여 1/2 티스푼(2.5 mL)의 물이 첨가된다. 동시적 실험에서, 20,880 USP 리파아제 단위(Viokace^TM)의 췌장리파아제 효소 정제가 사용되며; 정제 당 1 티스푼(5 mL)의 물이 첨가된다. 물/췌장리파아제 효소 정제 혼합물은 스푼 또는 스패튤라를 이용하여 30초간 교반되어 균일한 현탁물을 형성한다. 현탁물은 용해를 돕기 위하여 실온에서 15분간 방치된다. 현탁물은 투여 전에 몇 초 동안 스푼 또는 스패튤라로 교반된다. 이런 제조된 현탁물은 적어도 30분간 안정하다(리파아제 활성).

실시예 13. 연속적 주입에 의한 췌장리파아제 효소 및 영양소 조성물의 투여(단계 2)

실시예 12의 현탁물은 장용 포뮬라/췌장리파아제 효소 정제의 규정된 양을 함유하는 급식 백에 첨가되고, 췌장리파아제 효소 정제 현탁물 및 장용 포뮬라를 균질하게 하기 위하여 백은 15초간 흔들어 혼합된다. 용기는 추가 10 mL의 물로 세척되어 임의의 남은 잔류물을 회수하고 전술한 바와 같이 투여한다. 장용 급식 펌프는 제조자의 설명서에 따라서 펌프 안으로 삽입되고 G-튜브에 연결된다. 펌프는 전원이 켜지고 정확한 유속은 세팅된다. 튜브는 고정되지 않고 펌프는 작동위치 밑에 세팅된다. 급식은 이것이 작동되고 각 튜브 연결부로부터 누수가 없는지 또는 튜브의 꼬임이 없는지를 확인하기 위해 체크된다. 급식이 완료되는 경우에, 주어진 세트는 고정되고 연결이 끊어진다(펌프는 튜브가 막히거나 공급이 완료되는 경우를 지시하기 위한 알람을 구비함). 규정된 물 세척이 투여된다. 연장 튜브는 고정되고 연결이 끊어진다.

실시예 14. 연속적 주입에 의한 췌장리파아제 효소 및 영양소(Pan+EF) 조성물의 투여 - 유체 전달의 효율

췌장리파아제 효소 물질과 함께 또는 췌장리파아제 효소 물질 없이 급식 기간 동안 시간의 함수로서 전달된 EF의 누적 부피는 G-튜브 전달 이후에 적절한 눈금 실린더를 이용하여 계산된다. Pan-EF는 실시예 12, 13에서 설명된 제조 방법과 함께 대표적인 주입 도구(급식 펌프: Kangaroo^TM ePump Enteral Feeding Pump; 백; Kangaroo Joey^TM Enteral Feeding Pump Sets; G-튜브; Kimberly Clark MIC-KEY 12 Fr 4.0cm)를 사용하여 투여된다. 10 mL/h 내지 125 mL/h의 흐름(소아과 0~14세 환자에게 적용됨)은 장용 급식에 대한 보통의 임상적 투여를 모사하기 위해 사용된다. 블랭크 투여(첨가된 췌장리파아제 효소 현탁물이 없는 EF)도 동일한 도구를 사용하여 수행된다. 주어진 시점에서 전달된 부피: 2, 4, 6 및 8시간(시간(h) = 이론적으로 전달된 부피(mL)/흐름 펌프(mL/g))이 기록된다. Pan+EF 혼합물-조성물의 부피는 세 개의 다른 모의 투여를 고려하여 수집되고 각 시점에서 블랭크 투여와 비교된다. 각 시점에서 Pan+EF 조성물에 대한 유체 전달의 효율은 하기와 같이 계산된다:

표 5의 데이터는 Pan+EF 조성물 전달의 효율이 장용 포뮬라만의 전달의 경우와 동일하다는 것을 보여준다. 시간(t)에서 블랭크에 대한 전달된 부피(%)는 95 내지 105%이다.

				Pan+EF 조성물 전달 부피(mL)
시간 (h)	장용 포뮬라	흐름 (mL/h)	블랭크(EF만) 전달 부피(mL)	#1	블랭크에 대한 %	#2	블랭크에 대한 %	#3	블랭크에 대한 %
2	EF1	10	20	20	100	20	100	20	100
4			68	71	104	69	101	70	103
6			87	91	105	90	103	88	101
8			138	142	103	138	100	138	100
2	EF1	125	252	260	103	245	97	255	101
4			520	535	103	510	98	530	102
6			770	800	104	760	99	782	102
8			1040	1090	105	1017	98	1040	100
2	EF2	10	20	20	100	20	100	19	95
4			69	68	99	69	100	68	99
6			89	87	98	88	99	87	98
8			135	137	101	137	101	135	100
2	EF2	125	250	250	100	245	98	248	99
4			520	520	100	520	100	520	100
6			760	785	103	750	99	770	101
8			1060	1048	99	1070	101	1035	98

실시예 15. 장용 포뮬라 내에서 췌장리파아제 효소 안정성

췌장리파아제 효소 안정성은 전체 급식 기간(8시간)에 걸쳐서 세 개의 효소 의 활성(리파아제, 프로테아제 및 아밀라아제)을 주어진 시점: 0, 2, 4, 8 시간에 측정하는 것에 의해 평가된다. 췌장리파아제 효소 현탁물은 전술한 실시예들에 따라 표 1에 나열된 장용 포뮬라와 함께 혼합되고 실시예 12, 13에 설명된 급식 도구를 사용하여 투여된다. 연속적 주입의 투여는 낮은 췌장리파아제 효소/EF 비율(1 정제 당 10,440 USP 단위 리파아제/250 mL EF)의 Pan+EF 조성물을 사용하여 수행되며, 상기 비율의 조성물은 췌장리파아제 효소 안정성 도전의 관점에서 최악의 경우를 대표한다. 효소 안정성은 0시간(제조 직후의 Pan+EF 조성물)에서 발견된 활성과 비교하여 각 시점에서 회복된 활성으로서 평가되며, 결과는 회복 퍼센트 vs 0시간으로서 표현된다.

15.1 리파아제 활성의 확인. 2시간 및 4시간 시점에서 리파아제 활성 확인을 위한 샘플은 급식 백 내에 함유된 Pan+EF 조성물로부터 그리고 G-튜브를 통해 전달된 수집된 부피로부터 모두 수집되고, 투여의 균질성을 입증한다. 리파아제 활성은 샘플을 취한 부위로부터 독립적인데, 그 이유는 리파아제 활성이 효소 안정성의 관점에서 일관성있는 결과를 제공하기 때문이다. 종결시점에서의 샘플은 G-튜브를 통해 전달된 부피로부터 수집된다.

시간(h) - 샘플링 부위	장용 포뮬라	리파아제 활성 USP 단위/mg		t0에 대한 회복 %
시간(h) - 샘플링 부위	장용 포뮬라	#1 10mL/h	#2 125mL/h	#1	#2
0	EF1	23.8	24.7	NA	NA
2-백		22.7	24.9	95	101
2-튜브		23.8	24.2	100	98
4-백		23.1	23.7	97	96
4-튜브		23.4	25.0	98	101
8-튜브		23.0	25.0	97	101
0	EF2	23.2	23.1	NA	NA
2-백		23.4	23.5	101	102
2-튜브		23.8	22.4	103	97
4-백		24.1	25.5	104	110
4-튜브		24.4	23.5	105	102
8-튜브		24.2	24.3	104	105

리파아제 활성은 8시간 넘게 시험 포뮬라에서 안정하게 유지된다. 실험의 진행에 따라 관찰된 효소 활성의 점진적 증가는 EF 매질에 의해 유도된 효소의 구조적 변화(증가된 리파아제 활성과 연관됨)에 기인한 것이다.

15.2 프로테아제 및 아밀라아제 활성의 확인은 백에서 빼낸 Pan+EF 혼합물-조성물의 샘플들 상에서 수행된다(조성물은 전체 투여 기간 동안 균질함, 상기 실시예 참조). 프로테아제 및 아밀라아제 검정은 표 7, 8에서 요약된다.

시간(h)	장용 포뮬라	프로테아제 활성 USP 단위/mg		t0에 대한 회복 %
시간(h)	장용 포뮬라	#1 10 mL/h	#2 125 mL/h	#1	#2
0	EF1	147.7	138	NA	NA
2		142.6	143.6	97	104
4		145.8	145.4	99	105
8		140.6	137.4	95	100
0	EF2	149.4	160.4	NA	NA
2		138.8	149.3	93	93
4		146.7	160.7	98	100
8		139.6	142.4	93	89

시간(h)	장용 포뮬라	아밀라아제 활성 USP 단위/mg		t0에 대한 회복 %
시간(h)	장용 포뮬라	#1 10 mL/h	#2 125 mL/h	#1	#2
0	EF1	121.9	123.2	NA	NA
2		109.8	117.1	90	95
4		108.0	110.2	89	89
8		120.8	107.3	99	87
0	EF2	136.6	149.6	NA	NA
2		127.0	157.9	93	106
4		130.2	143.5	95	96
8		120.0	133.3	88	89

결과에 따르면, 리파아제, 프로테아제 및 아밀라아제는 최대 8시간까지 주입 조건에서 안정하며; 활성 회복%는 리파아제 및 프로테아제에 대하여 90-110%이고 아밀라아제에 대하여 85-115%이다.

실시예 16. 소화 영양소 평가

Pan+EF 조성물 내의 소화 영양소 프로파일은 하기 두 가지 양태를 고려하여 췌장리파아제 효소에 의해 유도된 영양소의 소화의 운동을 조사하는 것에 의해 확인된다: 1) 장용 포뮬라 내에 함유된 주된 영양소의 감소(트리글리세리드, 총단백질 및 말토덱스트린) 및 2) 영양소의 소화로부터의 산물의 증가된 형성(자유 지방산(FFA), 트립토판(AA) 및 단쇄 당(SCS)). 췌장리파아제 효소의 존재하에서 장용 포뮬라의 영양소의 변화는 모니터링되고, 소화된 영양소의 각 부류에 대한 대표적인 표지가 장용 포뮬라의 투여과정에서 소화 정도를 조사하기 위해 식별된다.

소화 연구. Pan+EF 조성물은 전술한 실시예들에 따라 제조되고 임상 시험을 대표하는 급식 도구(실시예 12, 13)를 사용하여 투여된다. 블랭크(EF만 = 소화 없음)도 동일한 방식으로 제조된다. 주어진 시점(0h, 2h, 4h, 8h)에서 Pan+EF 조성물 및 블랭크 모두는 급식 백으로부터 샘플링된다. 0h는 제조 직후에 현탁물을 샘플링하는 것에 의해 생성된다. 소화 공정은 하기 두 개의 다른 제조에 대해 모의시험된다: 연속적 주입으로 Pan+EF 조성물 투여는 높은 췌장리파아제 효소/EF 비율을 사용하여 수행되며, 상기 비율은 장용 포뮬라 변형의 관점에서 가장 도전적인 조건을 나타낸다(높은 효소 활성은 소화의 증가를 생성한다). 소화의 정도는 하기 이어지는 단락에서 설명된다.

16.1 지방 분석

16.1.1) 트리글리세리드(지방 영양소 표지임) 양은 표지로서 트리올레인을 고려하여 모니터링된다. 실험의 각 시점에서(0, 2, 4 및 8 시간) 각 샘플(EF만 = 블랭크; Pan+EF 조성물) 중 2 mL는 지질 단편을 정량적으로 회수하기 위해 추출된다. 각 샘플링 이전에, 현탁물은 15초동안 온화하게 흔들어 혼합된다. 얻어진 결과는 표 9에 요약된다.

시간 (h)	장용 포뮬라	블랭크(EF만) 투여(100 mL EF 중 트리올레인 mg)	t0에 대한 %	Pan+EF #1 (100 mL EF 중 트리올레인 mg)	t0에 대한 %	Pan+EF #2 (100 mL EF 중 트리올레인 mg)	t0에 대한 %
0	EF1	498.1	NA	402.0	NA	405.8	NA
2		503.8	101	283.6	71	297.1	74
4		510.5	101	220.1	55	266.2	66
8		502.4	98	127.0	32	127.1	32
0	EF2	774.3	NA	749.3	NA	785.1	NA
2		786.1	102	516.6	69	564.2	75
4		822.1	106	444.9	59	382.3	51
8		807.7	104	200.5	27	160.4	21

NA: 해당사항 없음

리파아제의 지방분해 활성은 전체 투여 기간 동안 조성물에서 트리글리세리드 수준의 현저한 감소가 있는 반면 블랭크 투여는 동일한 기간 동안 일정한 트리글리세리드 양을 보이는 것으로부터 분명히 드러난다. 트리올레인의 농도는 2시간 후에 초기값의 69-75%로 떨어지고, 8시간 후에는 초기 TG(TG=트리글리세리드)의 약 21-32%에 도달한다. 8시간 후, 트리올레인의 약 30%는 실험의 종료시점에서 Pan+EF 혼합물-조성물 내에 여전히 존재하여서, 지방산의 가수분해가 완전하지 않다는 것을 보여주며; 이러한 현상은 시험 조건과 같이 오일-물 계면으로부터 반응 생성물을 제거하기 위한 수용체(미셀, 담즙산염, 내장흡수)가 없는 경우에 반응 생성물(FFA)에 의해 지방 분해가 억제되기 때문에 발생한다.

16.1.2) 유리 지방산(지방 소화 산물 표지) 양은 올레산, 리놀레산 및 팔미트산을 표지로서 고려하여 모니터링된다. 실험의 각 시점에서(0, 2, 4 및 8시간) 각 샘플(EF만 = 블랭크; Pan+EF 조성물) 중 2 mL는 지질 단편을 정량적으로 회수하기 위해 추출된다. 각 샘플링 이전에, 현탁물은 15초동안 온화하게 흔들어 혼합된다. 얻어진 결과는 표 10에 요약된다.

시간 (h)	장용 포뮬라	블랭크(EF만) 투여(100 mL EF 중 올레산의 mg)	Pan+EF #1 (100 mL EF 중 올레산의 mg)	Pan+EF #2 (100 mL EF 중 올레산의 mg)
0	EF1	ND	42.6	46.2
2		ND	155.0	86.8
4		ND	130.9	111.0
8		ND	153.8	145.9
0	EF2	ND	18.7	24.9
2		ND	166.2	131.0
4		ND	208.2	190.9
8		ND	284.5	246.3

ND: 검출 안됨

시간 (h)	장용 포뮬라	블랭크(EF만) 투여(100 mL EF 중 리놀레산의 mg)	Pan+EF #1 (100 mL EF 중 리놀레산의 mg)	Pan+EF #2 (100 mL EF 중 리놀레산의 mg)
0	EF1	ND	40.2	42.5
2		ND	72.0	65.4
4		ND	83.2	95.2
8		ND	102.1	116.8
0	EF2	ND	52.8	59.8
2		ND	98.7	167.1
4		ND	118.4	153.4
8		ND	168.6	159.4

ND: 검출 안됨

시간 (h)	장용 포뮬라	블랭크(EF만) 투여(100 mL EF 중 팔미드산의 mg)	Pan+EF #1 (100 mL EF 중 팔미트산의 mg)	Pan+EF #2 (100 mL EF 중 팔미트산의 mg)
0	EF1	ND	ND	ND
2		ND	36.2	36.9
4		ND	37.5	48.9
8		ND	43.7	55.8
0	EF2	ND	ND	19.8
2		ND	45.6	67.2
4		ND	59.2	77.7
8		ND	85.8	83.9

ND: 검출 안됨

그들의 조성물에 따른, 장용 포뮬라는 블랭크의 HPL 크로마토그램에서 이러한 화합물들의 부재에 의해 확인된 바와 같이 FFA를 함유하지 않으며; 반면에 유리 지방산은 Pan+EF 혼합물의 크로마토그램에서 검출되어, Pan+EF 조성물이 제조된 직후에 시간 0에서 지방 분해가 이미 신속히 발생된다는 것이 확인된다.

16.2 단백질 분석

16.2.1) 총단백질(단백질 영양소 표지임) 양은 브래드포드 방법을 이용하여 모니터링된다. 실험의 각 시점에서(0, 2, 4 및 8시간) 각 샘플(EF만 = 블랭크; Pan+EF 조성물) 중 2 mL는 단백질 단편을 정량적으로 회수하기 위해 추출된다. 각 샘플링 이전에, 현탁물은 15초동안 온화하게 흔들어 혼합된다. 얻어진 결과는 표 13에 요약된다.

시간 (h)	장용 포뮬라	블랭크(EF만) 투여(1 mL EF 중 총단백질의 mg)	t0에 대한 %	Pan+EF #1 (1 mL EF 중 총단백질의 mg)	t0에 대한 %	Pan+EF #2 (1 mL EF 중 총단백질의 mg)	t0에 대한 %
0	EF1	14.1	NA	11.4	NA	12.6	NA
2		13.2	94	10.6	93	11.7	93
4		13.8	105	9.3	82	9.1	72
8		14.4	104	7.5	66	8.0	63
0	EF2	20.8	NA	21.5	NA	19.2	NA
2		20.2	97	15.6	73	14.7	77
4		19.2	92	14.4	67	13.8	72
8		21.0	101	14.0	65	13.2	69

NA: 해당사항 없음

총단백질 양은 전체 블랭크의 투여 동안 일정하게 유지되지만, 췌장리파아제 효소 물질에 존재하는 단백질 수준의 현저한 감소(프로테아제 단백질분해 활성의 효과) Pan+EF 조성물에서 관찰되며: 단백질 농도는 8시간 후 초기 값의 약 63-69%로 떨어진다. 단백질분해는 8시간 후에 완료된다.

16.2.2) 트립토판(단백질 소화 산물 표지임) 실험의 각 시점에서(0, 2, 4 및 8시간) 각 샘플(EF만 = 블랭크; Pan+EF 조성물) 중 1 mL는 아미노산 단편을 정량적으로 회수하기 위해 추출된다. 각 샘플링 이전에, 현탁물은 15초동안 온화하게 흔들어 혼합된다. 얻어진 결과는 표 14에 요약된다.

시간 (h)	장용 포뮬라	블랭크(EF만) 투여(100 mL EF 중 트립토판의 mg)	Pan+EF #1 (100 mL EF 중 트립토판의 mg)	Pan+EF #2 (100 mL EF 중 트립토판의 mg)
0	EF1	ND	1.3	1.7
2		ND	2.8	2.1
4		ND	4.0	5.2
8		ND	6.0	7.2
0	EF2	ND	2.1	1.9
2		ND	4.2	4.3
4		ND	5.3	5.8
8		ND	8.1	8.0

ND: 검출 안됨

그들의 조성물에 따른 장용 포뮬라는 트립토판을 함유하지 않으며, 이는 블랭크 내에 아미노산의 부재에 의해 확인되며(HPLC에 의해 확인됨); 반면에 트립토판은 Pan+EF 조성물에서 검출되며(HPLC에 의해 확인됨), 이는 시간 0(Pan+EF 조성물이 제조된 직후)에서 이미 단백질분해가 신속히 발생한다는 것을 확인한다.

16.3 탄수화물 분석

16.3.1) 말토덱스트린(탄수화물 영양소 표지임)은 말토헵타오스(M7), 말토헥사오스(M6) 및 말토테트라오스(M4)를 표지로서 HPLC 방법에 의해 모니터링된다. 실험의 각 시점에서(0, 2, 4 및 8시간) 각 샘플(EF만 = 블랭크; Pan+EF 조성물) 중 2 mL는 탄수화물 단편을 정량적으로 회수하기 위해 추출된다. 각 샘플링 이전에, 현탁물은 15초동안 온화하게 흔들어 혼합된다. 얻어진 결과는 표 15에 요약된다.

시간 (h)	장용 포뮬라	블랭크(EF만) 투여(M7의 면적%)	t0에 대한 %	Pan+EF #1 (M7의 면적%)	t0에 대한 %	Pan+EF #2 (M7의 면적%)	t0에 대한 %
0	EF1	10.6	NA	10.0	NA	9.0	NA
2		10.6	100	1.0	10	1.3	14
4		9.9	93	1.4	14	2.5	28
8		10.8	102	1.9	19	2.4	27
0	EF2	23.8	NA	21.7	NA	227	NA
2		22.5	95	2.3	11	2.8	12
4		24.6	103	2.6	12	2.6	11
8		26.1	110	1.8	8	1.7	7

NA: 해당사항 없음

시간 (h)	장용 포뮬라	블랭크(EF만) 투여(M6의 면적%)	t0에 대한 %	Pan+EF #1 (M6의 면적%)	Pan+EF #2 (M6의 면적%)
0	EF1	12.0	NA	9.0	10.0
2		12.0	100	ND	ND
4		11.1	93	ND	ND
8		12.2	102	ND	ND
0	EF2	28.4	NA	25.9	26.4
2		24.0	85	ND	ND
4		23.8	84	ND	ND
8		25.5	90	ND	ND

NA: 해당사항 없음

ND: 검출안됨

시간 (h)	장용 포뮬라	블랭크(EF만) 투여(M4의 면적%)	t0에 대한 %	Pan+EF #1 (M4의 면적%)	Pan+EF #2 (M4의 면적%)
0	EF1	3.9	NA	5.5	6.8
2		4	103	0.7	ND
4		5.4	138	0.7	ND
8		3.7	95	ND	ND
0	EF2	8.4	NA	9.1	9.0
2		8.4	100	ND	ND
4		9.2	110	ND	ND
8		8.1	96	ND	ND

NA: 해당사항 없음

ND: 검출안됨

말토덱스트린 양은 블랭크에서 전체 투여 기간 동안에 일정하게 유지되지만(HPLC 방법에 의해 확인됨), Panc+EF 혼합물에서 말토덱스트린 수준의 현저한 감소(췌장리파아제 효소 물질에 존재하는 아밀라아제의 탄수화물분해 활성의 효과로서)는 관찰되며: 말토헵타오스의 농도는 2시간 후에 초기값에 대해 급격히 떨어지며, 게다가 말토헥사오스 및 말토테트라오스는 2시간만에 완전히 소화되었다. 고분자량의 말토덱스트린의 감소와 수반하여 관련 단쇄 당, 즉 말토오스 및 말토트리오스의 증가가 관찰된다.

16.3.2) 단쇄 당(탄수화물 소화 산물 표지임) 양은 말토오스를 표지로 고려하여 모니터링된다. 실험의 각 시점에서(0, 2, 4 및 8시간) 각 샘플(EF만 = 블랭크; Pan+EF 조성물) 중 2 mL는 당 단편을 정량적으로 회수하기 위해 추출된다. 각 샘플링 이전에, 현탁물은 15초동안 온화하게 흔들어 혼합된다. 얻어진 결과는 하기 표에 요약된다.

시간 (h)	장용 포뮬라	블랭크(EF만) 투여(100 mL EF 중 말토오스의 mg)	Pan+EF #1 (100 mL EF 중 말토오스의 mg)	Pan+EF #2 (100 mL EF 중 말토오스의 mg)
0	EF1	226.1	2332.2	2039.6
2		226.8	2964.7	2907.9
4		341.3	3324.6	3277.4
8		191.3	3275.4	3520.7
0	EF2	424.7	2959.5	2967.6
2		370.3	4968.7	4854.9
4		431.5	5181.3	4919.0
8		402.7	5778.7	5381.3

장용 포뮬라는 Pan+EF 조성물에서 검출된 것보다 소량의 말토오스를 보이며(HPLC 방법으로 확인됨), 이는 시간 0(Pan+EF 조성물이 제조된 직후)에서 녹말분해가 이미 신속히 발생되었다는 것을 확인한다. 말토오스는 글루코오스 폴리머 상의 α-아밀라아제의 공격의 최종 생성물이었다. 사카로오스는 EF1의 구성성분이기 때문에 EF1에서도 검출되며, 이 당의 양은 전체 투여 기간 동안에 거의 일정하게 유지되고(표 19 참조), 이는 사카로오스가 아밀라아제의 소화 산물이 아니라고 생각하게 한다.

시간 (h)	장용 포뮬라	블랭크(EF만) 투여(100 mL의 EF에 대한 사카로오스의 mg)	t0에 대한 %	Pan+EF #1 (100 mL의 EF에 대한 사카로오스의 mg)	t0에 대한 %	Pan+EF #2 (100 mL의 EF에 대한 사카로오스의 mg)	t0에 대한 %
0	EF1	2995.6	NA	2690.2	NA	2670.7	NA
2		2927.8	98	2813.4	105	2810.7	104
4		3256.5	109	2902.8	108	2855.2	106
8		3004.2	100	2946.7	110	2840.0	106
0	EF2	ND	NA	ND	NA	ND	NA
2		ND	NA	ND	NA	ND	NA
4		ND	NA	ND	NA	ND	NA
8		ND	NA	ND	NA	ND	NA

NA: 해당사항 없음

ND: 검출안됨

Claims

장용 투여에 적합하며 소화 효소 산물 및 뉴트리션 포뮬라로부터의 영양소를 포함하는 안정하고 균질한 액체 조성물의 제조를 위한 공정에 있어서, 상기 공정은:
a) 하기 1) 내지 4) 단계를 포함하는 수용액 중에 소화 효소의 현탁물을 제조하는 단계:
1) 소화 효소 산물의 크기를 감소시키는 단계;
2) 수용액을 첨가하는 단계;
3) 현탁물을 형성하기 위해 혼합하는 단계; 및
4) 약 5분을 초과한 기간 동안 상기 현탁물을 방치하는 단계, 및
b) 안정하고 균질한 액체 조성물을 형성하기 위하여 액체 뉴트리션 포뮬라와 상기 현탁물을 혼합하는 단계
를 포함하며,
이때, 상기 뉴트리션 포뮬라는 약 10 내지 약 35g/100mL의 총 지방 및 단백질 및 탄수화물 영양소 함량을 갖거나, 약 4.5 내지 약 11.5g/100mL의 총 지방 및 단백질 영양소 함량을 갖거나, 약 3.0 내지 약 7.0g/100mL의 총 지방 영양소 함량을 갖거나, 약 1.3 내지 약 6.3g/100mL의 총 단백질 영양소 함량을 갖는 것을 특징으로 하는 장용 투여에 적합하며 소화 효소 산물 및 뉴트리션 포뮬라로부터의 영양소를 포함하는 안정하고 균질한 액체 조성물의 제조를 위한 공정.
제 1 항에 있어서,
상기 단계 4)의 시간은 약 15분 내지 약 30분인 것을 특징으로 하는 공정.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 단계 2)의 수용액은 10 mL 미만의 양으로 첨가되는 것을 특징으로 하는 공정.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 단계 2)의 수용액은 약 10,400 USP 단위의 리파아제를 갖는 소화 효소 산물에 대하여 약 2.5 mL의 양으로 첨가되거나, 상응하는 다중 양의 용액이 다중 USP 단위의 리파아제를 갖는 산물에 대하여 첨가되는 것을 특징으로 하는 공정.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 소화 효소 산물은 비-위내성 산물(non-gastroresistant product)인 것을 특징으로 하는 공정.
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 소화 효소 산물은 비코팅되거나 코팅된 것을 특징으로 하는 공정.
제 6 항에 있어서,
소화 효소 산물은 비코팅된 췌장리파아제 효소 산물인 것을 특징으로 하는 공정.
제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
췌장리파아제 효소 산물은 분말, 과립, 정제, 구, 미니정제, 마이크로정제, 마이크로입자, 마이크로구, 마이크로캡슐 또는 마이크로환의 형태인 것을 특징으로 하는 공정.
제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
췌장리파아제 효소 산물은 즉시 방출 췌장리파아제 효소 산물(immediate release pancrelipase enzymes product) 또는 제형인 것을 특징으로 하는 공정.
제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
소화 효소 산물은 치료적 유효량으로 포함되는 것을 특징으로 하는 공정.
제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
뉴트리션 포뮬라는 성인/어린이 포뮬라 또는 소아의 포뮬라인 것을 특징으로 하는 공정.
제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
효소는 약 8시간 저장 후에 실온에서 약 90% 초과의 리파아제 활성을 가지며, 약 8시간에서 조성물 내에서 리파아제 활성의 비율은 0시간에 뉴트리션 포뮬라의 리파아제 활성에 대한 퍼센트로서 계산되는 것을 특징으로 하는 공정.
제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
효소는 약 8시간 저장 후에 실온에서 약 100%의 리파아제 활성을 가지며, 약 8시간에서 조성물 내에서 리파아제 활성의 비율은 0시간에 뉴트리션 포뮬라의 리파아제 활성에 대한 퍼센트로서 계산되는 것을 특징으로 하는 공정.
소화 효소 산물 및 뉴트리션 포뮬라로부터의 영양소를 포함하는 장용 투여에 적합한 안정하고 균질한 액체 조성물에 있어서, 상기 뉴트리션 포뮬라는 약 10 내지 약 35g/100mL의 총 지방 및 단백질 및 탄수화물 영양소 함량을 갖거나, 약 4.5 내지 약 11.5g/100mL의 총 지방 및 단백질 영양소 함량을 갖거나, 약 3.0 내지 약 7.0g/100mL의 총 지방 영양소 함량을 갖거나, 약 1.3 내지 약 6.3g/100mL의 총 단백질 영양소 함량을 갖는 것을 특징으로 하는 소화 효소 산물 및 뉴트리션 포뮬라로부터의 영양소를 포함하는 장용 투여에 적합한 안정하고 균질한 액체 조성물.
제 14 항에 있어서,
소화 효소 산물은 비-위내성 산물(non-gastroresistant product)인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 14 항 또는 제 15 항에 있어서,
췌장리파아제 효소 산물은 분말, 과립, 정제, 구, 미니정제, 마이크로정제, 마이크로입자, 마이크로구, 마이크로캡슐 또는 마이크로환의 형태인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 14 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서,
췌장리파아제 효소 산물은 즉시 방출 췌장리파아제 효소 산물(immediate release pancrelipase enzymes product) 또는 제형인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 14 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,
소화 효소 산물은 치료적 유효량으로 포함되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 14 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,
뉴트리션 포뮬라는 성인/어린이 포뮬라 또는 소아의 포뮬라인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 14 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서,
효소는 약 8시간 저장 후에 실온에서 약 90% 초과의 리파아제 활성을 가지며, 약 8시간에서 조성물 내에서 리파아제 활성의 비율은 0시간에 뉴트리션 포뮬라 내의 리파아제 활성에 대한 퍼센트로서 계산되는 것을 특징으로 하는 조성물.
소화 효소 산물 및 뉴트리션 포뮬라로부터의 영양소를 포함하는 조성물을 필요로하는 환자에게 투여하는 방법에 있어서, 상기 방법은:
a) 소화 효소 산물의 크기를 감소시키는 단계;
b) 수용액을 첨가하는 단계;
c) 현탁물을 형성하기 위해 혼합하는 단계;
d) 약 5분을 초과한 기간 동안 상기 현탁물을 방치하는 단계;
e) 안정하고 균질한 액체 조성물을 형성하기 위하여 액체 뉴트리션 포뮬라와 단계 d)의 현탁물을 혼합하는 단계; 및
f) 지급 백(dispensing bag)으로부터 장용 튜브를 통과하여 환자에게 조성물을 지급하는 단계;
를 포함하며,
이때, 상기 뉴트리션 포뮬라는 약 10 내지 약 35g/100mL의 총 지방 및 단백질 및 탄수화물 영양소 함량을 갖거나, 약 4.5 내지 약 11.5g/100mL의 총 지방 및 단백질 영양소 함량을 갖거나, 약 3.0 내지 약 7.0g/100mL의 총 지방 영양소 함량을 갖거나, 약 1.3 내지 약 6.3g/100mL의 총 단백질 영양소 함량을 갖는 것을 특징으로 하는 소화 효소 산물 및 뉴트리션 포뮬라로부터의 영양소를 포함하는 조성물을 필요로하는 환자에게 투여하는 방법.