[go: up one dir, main page]

KR20160040627A - 소포체 - Google Patents

소포체 Download PDF

Info

Publication number
KR20160040627A
KR20160040627A KR1020167005351A KR20167005351A KR20160040627A KR 20160040627 A KR20160040627 A KR 20160040627A KR 1020167005351 A KR1020167005351 A KR 1020167005351A KR 20167005351 A KR20167005351 A KR 20167005351A KR 20160040627 A KR20160040627 A KR 20160040627A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
aoi
vesicle
formulation
formulation according
skin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
KR1020167005351A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102325654B1 (ko
Inventor
리차드 울프 갈라웨이
윌리암 헨리
Original Assignee
시퀘솜 네크놀로지 홀딩스 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB1313735.1A external-priority patent/GB201313735D0/en
Priority claimed from GB201313734A external-priority patent/GB201313734D0/en
Application filed by 시퀘솜 네크놀로지 홀딩스 리미티드 filed Critical 시퀘솜 네크놀로지 홀딩스 리미티드
Priority to KR1020217029392A priority Critical patent/KR20210116701A/ko
Publication of KR20160040627A publication Critical patent/KR20160040627A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102325654B1 publication Critical patent/KR102325654B1/ko
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/664—Amides of phosphorus acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
    • A61K47/48038—
    • A61K47/48092—
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/542—Carboxylic acids, e.g. a fatty acid or an amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/543—Lipids, e.g. triglycerides; Polyamines, e.g. spermine or spermidine
    • A61K47/544—Phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
    • A61K8/04—Dispersions; Emulsions
    • A61K8/06—Emulsions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
    • A61K8/14—Liposomes; Vesicles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/33—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing oxygen
    • A61K8/39—Derivatives containing from 2 to 10 oxyalkylene groups
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/55—Phosphorus compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/55—Phosphorus compounds
    • A61K8/553—Phospholipids, e.g. lecithin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/67—Vitamins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/67—Vitamins
    • A61K8/676—Ascorbic acid, i.e. vitamin C
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
    • A61Q17/04—Topical preparations for affording protection against sunlight or other radiation; Topical sun tanning preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/10—General cosmetic use

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

본 발명은 치료용, 대사성, 미용 또는 구조적 관심 작용제 ("AOI")의 국부적인 투여에서 이용하기 위한 소포성 제제 그리고 AOI를 투여하는 방법과 관련된다.

Description

소포체{VESICLES}
본 발명은 치료용, 대사성, 미용 또는 구조적 관심 작용제(Agent Of Interest ("AOI"))의 국부적인 투여에서 이용하기 위한 소포성 제제 그리고 AOI를 투여하는 방법과 관련된다.
미국 특허 번호 제6,165,500호는 특히 피부 및 유사한 물질과 같은 천연 장벽 내로 및 이를 통해 작용제를 수송하기 위하여, 양친매성 분자의 하나 이상의 층, 또는 양친매성 담체 물질로 구성된 막-유사 구조와 함께 제공되는 작용제의 적용을 위한 제조를 설명한다. 이들 트랜스퍼솜™(Transfersomes™)은 하나 이상의 성분, 가장 일반적으로 기본 물질, 하나 이상의 모서리-활성 물질, 및 작용제의 혼합물로 구성된다.
미국 특허 출원 공개공보 번호 제US 2004/0071767호는 제약학적으로 허용되는 배지에서 현탁되는 적어도 3개의 양쪽 친매성 성분과의 복합 응집물에 기반한 비스테로이드성 항-염증 약물 (NSAID)의 조제를 설명한다.
미국 특허 출원 공개공보 번호 제US 2004/0105881호는 적합한 액상 배지에서 현탁가능하고 적어도 3개의 양쪽 친매성 물질 (양쪽 친매성 성분)을 포함하는 확대 표면 응집물 그리고 특히 이러한 응집물에 의한 장벽 침투로 생체내 비-침습성 약물 적용을 위하여, 피부와 같은 반-침투성 장벽을 통한 활성제의 수송을 개선시킬 수 있는 확대 표면 응집물을 설명한다. WO　2010/140061은 심부 조직 통증의 치료를 위한 "빈(empty)" 소포성 제제의 용도를 설명한다. WO　2011/022707은 지방산 결핍과 관련 있는 장애 그리고 무엇보다도 염증과 관련된 장애를 치료하기 위한 "빈" 소포체의 다른 제제의 용도를 설명한다. 치료용 엔티티가 부착될 수 있는 소포성 제제는 WO2011/022707 및 WO2010/140061에서 설명된다.
이들 문헌은 AOI의 국부적인 투여에서의 이용을 위한 소포성 제제를 개시하거나 교시하지 않고, 대다수의 AOI가 소포의 외부에 있도록 AOI가 소포의 성분에 공유 결합될 수 있다는 점도 개시하거나 교시하지 않는다. 본 출원의 이 섹션에서 임의의 참고문헌의 인용은 참고문헌이 본 발명에 대한 선행 기술이라는 점을 인정하는 것은 아니다. 상기 언급된 공개공보들은 이들 전체로 참조로서 본 명세서에 편입된다.
리포좀 소포체는 과거에 신체 내로 활성 화합물 (AOI)을 전달하려는 시도로 사용되어 왔다.
유연성 있는 형태의 리포좀 ("트랜스퍼솜®")은 피부 표면을 통과할 수 있는 계면활성제 (예를 들어, 트윈(Tween)) 또는 지방 (예를 들어, 대두 포스파티딜콜린) 및 지방산의 조합으로 만들어진 소포체이다. 이들 소포체의 계면활성제에서 폴리에틸렌 글리콜 ("PEG")은 흡습성이며 물 구배를 따라 모공을 관통한다. 이들 소포체는 막 성분들 중 하나로서, 소포의 막 내로 AOI를 편입시킴으로써 또는 소포의 내강 안쪽으로 수송되도록 AOI를 배치함으로써, 경피 경로를 통해 신체 내로 다른 AOI를 수송하기 위한 비히클(vehicle)로서 검사되었다.
이들 방법 중 하나는 AOI를 방출하기 위하여 몇 가지 형태의 소포 붕괴에 의존할 것이다.
추가로, 피부를 통해 수송하길 원하는 산물이 있으며, 이때 상기 산물은 이러한 방식으로 트랜스퍼솜 내로 편입되기에는 너무 크거나 이들 소포체의 정상적인 화학 성질과는 양립할 수 없는 화학 성질을 지닌다.
추가로, 몇 가지 PEG-함유 계면활성제 성분이 AOI로 대체되는 경우, 이것은 소포의 유연성에 영향을 미치고 몇 가지 원동력을 제거한다.
본 발명은 소포에 AOI를 물리적으로 부착시킴으로써 이러한 문제들을 회피하고, 따라서 소포는 피부 표면 아래에 바람직한 AOI를 당기는, 기계적 장치로서 순전히 작용한다.
본 발명의 이들 소포체는 경피 경로를 통하여 신체 내로 다른 모이어티/AOI를 수송하기 위해 이용될 수 있는데, 이는 AOI가 소포의 바깥쪽에 놓이도록, 소포 성분에 이러한 모이어티 또는 AOI를 부착시킴으로써 이루어진다.
이에 따라, 본 발명은 첫 번째 측면에서, 지질, 계면활성제 및 AOI를 포함한 소포성 제제를 제공하고, 여기서 AOI는 AOI의 적어도 일부분이 소포의 외부 표면 상에 있어 소포막의 외부에 있도록 소포의 성분에 결합된다. 바람직하게, AOI가 결합되는 성분은 지질 및/또는 계면활성제 성분이다. 적어도 일부분은 소포의 외부에 있는 전체 AOI 중 (분자의 크기 또는 부피 측면에서) 각각의 분자의 적어도 5%, 10% 또는 20%, 적합하게는 40%, 또는 50% 초과가 트랜스퍼솜의 막의 외부에 있다는 점을 의미한다. 바람직하게 대다수의 AOI, 더욱 바람직하게는 전체 AOI 분자는 소포의 외부에 있다. AOI는 이것이 소포의 외부 표면 상에 존재하도록 성분에 공유 결합될 수 있다.
소포의 외부에 있는 AOI라 하면, '바깥쪽을 향하고 있는' 이들 AOI를 의미한다. AOI에 결합되는 계면활성제 또는 지질 성분이 비변형 성분과 혼합되는, 소포체의 제작 동안에, 변형된 분자의 배향은 제어될 수 없다. 따라서, AOI가 부착되는 분자의 대략 50%는 '부정확한' 배향으로 있을 것이고, 이는 AOI의 일부분이 소포의 내강에 존재할 것이라는 점을 의미한다. AOI가 소포의 외부에 있도록 "정확한" 배향으로 있는 변형된 분자들 중에서, 적어도 50%의 AOI 분자 자체는, 물리적 크기/부피에 관하여, 소포막의 외부에 있다. 제조 공정은 소포의 외부에 있는, 더 낮은 비율의 AOI를 초래할 수 있고, 즉 AOI의 외부 농도는 제제에서 전체 AOI의 1% 내지 10% (2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8% 또는 9%를 포함) 10% 내지 50%, 15% 내지 45%, 20% 내지 40% 또는 25% 내지 30% (wt/vol)일 수 있다. 외부 농도라 하면, 소포체가 피부를 관통하자마자 방출을 위한 및/또는 이의 치료학적 활성을 발휘하기 위한 이용가능한 AOI의 농도를 의미한다.
본 발명의 소포성 제제의 혜택은 AOI가 소포에 결합되고 국부적으로 적용될 때, 피부를 관통하는 AOI의 속도, 깊이 및 양 그리고 그 AOI의 크기 및 성질과 관련된다.
제제는 크림(cream), 로션(lotion), 연고, 겔(gel), 용액, 스프레이(spray), 래커(lacquer), 무스(mousse) 또는 막 형성 용액일 수 있다.
소포성 제제는 소포체에 결합된 AOI 외에도, 임의의 공지된 치료제를 함유할 수도 있고 함유하지 않을 수도 있다. AOI를 포함하는 소포성 제제는 임의의 더욱 생물학적으로 활성인 산물 또는 제약학적으로 활성인 산물이 없을 수도 있고 있을 수도 있다. 생물학적 활성 작용제 또는 제약학적 활성 작용제는 약물학적 활성, 대사 활성 또는 면역학적 활성을 갖는 작용제로서 본 명세서에서 정의된다.
본 발명은 AOI의 전달에 효과적인 하나 이상의 계면활성제 그리고 하나 이상의 인지질 또는 황지질을 포함한 소포성 제제를 아우른다. 계면활성제는 비-이온성일 수 있다.
본 발명의 소포성 제제는 대두 포스파티딜콜린과 같이, 지질 및 계면활성제로 구성된 이중층 소포체인, 소포체의 독특한 특성을 통해 이의 기능을 성취할 수 있다 (이론에 한정됨 없이). 소포체의 고유성은 특정한 양의 비-이온성 계면활성제의 제제내 포함으로부터 파생되며, 이는 결과적 소포체가 영구한 액상 결정 상태로 있을 정도로 인지질 막을 변형시키고, 그리고 계면활성제가 또한 막 안정성에도 기여하기 때문에, 소포체는 극도로 변형가능하기도 하고 안정하기도 하다 (파괴시키는 것 없이 강성을 감소시킴).
소포성 제제는 예를 들어, 국부적으로 적용되는 수성 완충액에서 현탁된 소포체를 포함하거나/형성한다. 소포성 제제의 소포체는 비어 있는 중심부를 둘러싸는 이중층 막 또는 단일라멜라 막을 포함한다. 그들은 크기가 지름 60 nm 내지 지름 200 nm의 범위에 있고, 그리고 지름 100 nm 내지 150 nm의 범위에 있을 수도 있다. 소포체는 매우 친수성이고 그리고 그들의 초변형성과 함께, 이 특성은 피부를 가로질러 수송되어야 하는 그들의 능력에 중요하다. 본 발명의 제제가 피부에 적용되고 건조되는 것이 허용될 때, 그들의 변형성과 조합된 소포체의 재수화 추진력은 피부 투과 장벽 상에 및 아래에 더 높은 수분 함량의 영역으로 소포체의 이동을 일으킨다. 이것은 모공 및 세포간 틈을 통한 그들의 이동을 유도한다. 계면활성제 대 비-이온성 계면활성제의 특정한 비는 소포체의 경피 전달을 촉진시킨다. 구멍과 세포간 틈을 통한 소포체의 이동은 그들과 함께 AOI를 나르거나 끌어 당긴다.
일단 그들이 피부를 통과하면, 본 발명의 소포체는 궁극적으로 완전한 소포체로서 존재한다. 소포체의 효율적인 소거(clearance)는 피부 혈액 미소혈관계 (모세혈관)를 통해 일어나지 않는데, 그 이유는 그들의 상대적으로 큰 크기 때문이고, 하지만 그들은 진피 적용 부위 아래의 다른 조직 및/또는 더 깊은 조직 내로 간질액과 함께 수송될 것으로 가정된다. 마커 분자 (케토프로펜)로 표지된 본 발명의 소포체로 수행된 전임상 연구는 소포체가 혈관계로 유입되지 않았는데, 그 이유는 국부적 적용 후, 고농도의 마커 분자가 낮은 전신 흡수로 국소적으로 관찰되었기 때문이라는 점을 보여주었다.
AOI는 소포의 지질 성분에 또는 계면활성제 성분에 결합될 수 있다. 대안으로, 소포의 지질 성분 및 계면활성제 성분 모두, 그들에 결합된 AOI를 가질 수 있다.
제제의 소포는 이의 외부 표면에 결합된 단일 또는 복수의 AOI를 가질 수 있다. 복수의 AOI가 결합된 경우, AOI는 모두 동일, 즉 동종일 수 있고, 또는 AOI는 상이, 즉 이종일 수 있다.
AOI는 요소, 이온, 소분자, 탄수화물, 지질, 아미노산, 펩티드, 단백질, 거대 분자 또는 거대 고리 분자일 수 있다. AOI는 미량 영양소일 수 있다.
AOI는 피부 구조 단백질 (가령 엘라스틴 또는 콜라겐), 치료학적 단백질, 거대분자를 함유한 발색단 또는 포르피린, 비타민, 티타늄 디옥사이드, 징크 옥사이드, 멜라닌 또는 멜라닌 유사체일 수 있다. AOI는 펩티드 또는 항-염증 약물, 가령 NSAID일 수 있다. 구체적으로, AOI는 테트라펩티드-7, 트리펩티드 1, 아스코르브산, 나프록센(Naproxen) 또는 디클로페낙(Diclofenac)일 수 있다.
결합되어야 하는 AOI는 소포의 지질 성분 또는 소포의 계면활성제 성분 또는 인지질과 공유 결합될 수 있고 또는 그렇지 않으면 직접 결합될 수 있다. 지방산, 계면활성제 또는 지질 성분 그리고 AOI에 공유 결합되는 또는 그렇지 않으면 결합되는 연결(link) 또는 가교(bridge)를 이용하는 것이 바람직할 수 있다. 한 가지 예시에서, 무기 AOI가 첨가되어야 한다면 (예를 들어 금속염 또는 산화물), 추가적인 링커(linker), 예를 들어 금속 킬레이트제, 가령 EDTA가 소포 성분에 우선적으로 접합될 수도 있다. 또 다른 예시에서, 결합 과정의 효율 및/또는 결합된 AOI의 효과성을 촉진시키기 위해, 더 긴 분자, 예를 들어 폴리머 (가령 폴리에틸렌 글리콜; PEG)를 이용하는 것이 바람직할 수 있다. 막 자체를 방해하는 것을 방지하기 위하여 소포체로부터 먼 거리에 있는 AOI를 보유하는 것이 바람직할 때 이러한 링커/더 긴 가교 분자가 특히 유익하다. 이것은 AOI가 특히 소수성인 경우 일어날 수 있다.
큰 분자 또는 거대분자는 소포 성분(들)에 공유 결합될 수 있다. 예시는 구조적 피부 단백질, 가령 콜라겐 및 엘라스틴; 치료학적 단백질; 그리고 효소를 포함한다.
복수의 AOI는, 피부로 일단 흡수되면, 그들이 소포의 표면 상에 계속 존재하도록 소포의 외부 표면 상에 존재하기 위한 지질 또는 계면활성제 성분에 결합될 수 있다. 예시로는 광역동 치료법에서 이용하기 위해 항산화제; 비타민; 무기 화합물, 가령 TiO2 및 ZnO; 포르피린 분자를 포함한다.
피부를 통해 신체 내로 비타민을 수송하는 것은 손실된 비타민 발생 능력을 대체하고 (예를 들어, 비타민 D), 스스로 보호하고 복구시키는 피부 (또는 임의의 다른 기관)의 능력을 증진시키고 (예를 들어, 비타민 C 및 E), 또는 피부 질환 또는 다른 질환, 가령 지루성 피부염을 치료할 수 있다 (예를 들어 비타민 B7). 피부에 대한 언급은 신체의 일반적인 피부 및 임의의 다른 바깥쪽 외피, 가령 귀, 코, 목 및 눈의 공막을 비롯한 눈의 상피, 그리고 질 및 항문/직장과 같은 다른 점막을 포함한다.
비타민 D는 실제로, 칼슘 및 포스페이트의 장내 흡수를 담당하는 지용성 화합물의 군이다. 이 군에서 가장 중요한 것은 D3 (콜레칼시페롤) 및 D2 (에르고칼시페롤)이다. 비타민 D 결핍은 골연화증 (어린이에게서는 구루병)을 야기하고 낮은 수준은 낮은 골밀도(bone mineral density)와 연관되었다.
포유류 피부는 이의 전구체, 7-데하이드로콜레스테롤 상에서 UV 복사의 작용을 통하여 비타민 D3을 만들고, 인간의 비타민 D의 약 90퍼센트를 제공한다. 자외선 차단제는 자외선을 흡수하여 자외선이 피부로 도달하는 것을 방지한다. UVB 스펙트럼에 기반하여 자외선 차단 지수 (SPF)가 8인 자외선 차단제(sunscreen)는 95 퍼센트만큼 비타민 D 합성 능력을 감소시킬 수 있는 반면에, SPF가 15인 자외선 차단제는 98 퍼센트만큼 합성 능력을 감소시킬 수 있다는 점이 보고되었다.
최근, 태닝의 위험성에 대한 대중의 인식이 증가하면서 더 높은 SPF 자외선 차단제 (25 SPF 내지 50 SPF) 그리고 완벽한 선블록(sunblock) 제품의 사용이 증가하는 경향이 있었다. 추가로, 미용 피부관리 제품 및 색조 화장품 모두, 어느 정도의 자외선 차단을 제공하기 위해 이들 제형에 첨가된 15, 20 및 25 SPF의 자외선 차단제를 가진다.
제제가 비타민 D3 (비타민 C 및/또는 E 및/또는 B7을 또한 포함하진 않더라도)을 포함할 때, 제제는 낮은 비타민 D 수준을 보충하기 위한 자외선 차단 제품, 선블록 제품, 애프터-선크림 제품(after-sun product) 또는 다른 피부관리 제품 또는 화장품 내로 편입될 수 있다. 신체 내에서 비타민 D의 제조를 방지할 수 있는, 선블록의 사용, 또는 저광 조건(low light condition)에 의해 낮은 비타민 D 수준이 야기될 수 있다.
따라서, 본 발명은 비타민을 이의 외부 표면에 결속(tethering)시킴으로써, 유연한 경피 소포, 즉 지질 및 계면활성제를 포함한 제제와 비타민 D3 / 콜레칼시페롤를 연합시킬 수 있다. 이후 결과적 제제는 자외선 차단제, 애프터-선크림 제형 그리고 자외선 차단제를 포함한 화장품 안에 포함될 수 있다. 이 "소포/비타민 D 조합"은 피부를 통과할 것이고 표피내 기저층 및 유극층에 대한 이의 페이로드(payload)를 전달할 것이다.
신체에서, 콜레칼시페롤 (비타민 D3)은 우선, 간에서 칼시디올로 전환된다. 순환하는 칼시디올은 이후, 신장에서, 비타민 D의 생물학적 활성 형태인, 칼시트리올로 전환된다. 낮은 혈중 칼시디올 (25-하이드록시-비타민 D)은 햇빛을 피하는 것으로부터 기인할 수 있다. 이에 따라 본 발명은 소포 성분에 결합시키거나 결속시킴으로써, 칼시디올 또는 칼시트리올 중 하나를 경피 소포와 연합시키는 것을 포함한다.
특정한 다른 비타민, 예를 들어, 비타민 C 및 비타민 E는 중요한 항산화 특성을 가지며 이것은 그들이 노화 및 피부 손상의 징후를 감소시키기 위한 피부관리 제품 내로 편입되는 것으로 간주되었다.
비타민 E의 가장 생물학적으로 활성인 형태는 지용성 α-토코페롤이고 본 발명의 한 가지 구체예는 햇빛 손상을 개선시키기 위한 애프터-선크림 제품 및 자외선 차단제를 비롯하여, 피부관리 제조물 내로 편입을 위해 소포 성분과 α-토코페롤을 연합시킬 것으로 기대한다.
비타민 C (수용성 아스코르베이트)는 여러 가지 콜라겐 합성 반응을 비롯하여 많은 효소 반응에서의 보조 인자이다. 이들 반응은 모세혈관으로부터 출혈을 방지하는 것에 있어 그리고 상처 치유에 있어 중요하다. 이에 따라, 본 발명은 콜라겐에 대한 손상을 개선시키기 위한 피부관리 및 선케어(suncare) 제조물 내로 편입을 위해, 그리고 상처 치료 제품 내로 편입을 위해, 소포 성분과 아스코르베이트를 연합시키는 것을 포함한다.
따라서, 미량영양소가 비타민 C 및/또는 비타민 E를 포함할 때, 제제는 표피와 진피 비타민 C 및/또는 비타민 E를 보충하고 햇빛-손상 또는 피부 노화를 예방하거나 이의 복구를 보조하기 위한 자외선 차단 제품, 선블록 제품, 애프터-선크림 제품 또는 다른 피부관리 제품 또는 화장품 내로 편입될 수 있다.
비타민 B7 (수용성 비오틴(Biotin))은 카르복실라아제 효소를 위한 조효소(co-enzyme)이다. 비오틴에서의 결핍은 발진 형태의 피부염을 야기할 수 있다. 추가로, 페닐케톤뇨증 (페닐알라닌을 파괴하는 것에 대한 불능)을 가진 환자는 식이요법의 비오틴을 증가시킴으로써 개선될 수 있는 습진 및 지루성 피부염의 형태를 나타낸다.
따라서, 미량영양소가 비타민 B7을 포함할 때, 제제는 표피와 진피 비타민 B7을 보충하고 이 비타민의 결핍과 연관된 피부병을 개선시키기 위한 자외선 차단 제품, 선블록 제품, 애프터-선크림 제품 또는 다른 피부관리 제품 또는 화장품 내로 편입될 수 있다.
펩티드, 가령 테트라펩티드-7 또는 트리펩티드-1은 소포막의 계면활성제 성분 또는 지방산에 결합될 수 있다. 테트라펩티드-7은 염증에 맞서는 데에서 유용할 수 있고 그리고 콜라겐 생성에 의해 피부 재생을 자극 시키는 작용을 할 수 있다. 이것은 피부 관리, 및 노화-방지 제품에서 특히 유용하다는 것을 의미한다. 트리펩티드-1은 유사한 작용을 갖는다. 피부의 외부층을 통한 효율적인 전달은 더 낮은 수준/농도에서 증가된 효과를 제공할 수 있고 따라서 인터류킨의 억제에 기인한, 가능성 있는 부작용을 최소화한다.
비-스테로이드성 항-염증 약물 (NSAID)은 골관절염, 스포츠 연관 관절 통증, 요통, 두통 및 치통의 증상을 완화시키는 데에 일반적으로 이용되는 진통제이다. NSAID의 예시는 아스피린, 이부프로펜, 디클로페낙 및 나프록센이다. 다시 말해, 통증 및 염증 부위에 직접적으로 이러한 약물의 효과적이고 효율적인 전달은 더 낮은 및/또는 표적된 투약량의 사용을 야기할 수 있고 따라서 위장 문제, 신장 문제 및 심장 문제와 같은 부작용의 감소 또는 제거를 야기할 수 있다.
본 발명은 소포의 표면에 다수의 작고, 불활성인 AOI를 결합시키는 것을 포함할 수 있으며, 따라서 일단 피부 아래에서 이는 고정되고 그리고 소포 자체의 존재의 혜택, 예를 들어 수분 보유, 구조 지지의 수명이 연장될 수 있다.
AOI는 소포의 계면활성제 성분에 결합 (또는 부착 또는 결속)될 수 있다. 계면활성제와의 결합은 분자가 하이드록실기를 갖는다면 에스테르 결합에 의해 계면활성제 상에서 직접 이루어질 수 있다. 결합의 대안 방법은 계면활성제 (예를 들어, 트윈의 경우에 폴리에틸렌 글리콜 폴리머)의 작용기 또는 원자를 AOI로 치환하는 것이다. 세 번째 결합 방법은 선택적으로 에스테르 결합을 통해, 지방산에 직접 이루어진다. AOI가 무기 분자라면, 추가적인 연결 분자, 예를 들어 금속염의 경우 금속 킬레이트제, 가령 EDTA는 소포 성분에 우선적으로 접합될 수 있다. AOI를, 이의 효능을 최대화하기 위하여 (예를 들어 효소인 AOI 상의 활성 부위에 노출시키기 위하여) 소포로부터 어느 정도의 거리에서 보유하는 것이 바람직하다면, 연결 분자, 예를 들어 폴리머 사슬 (예를 들어 폴리에틸렌 글리콜)은 AOI 및 소포의 성분 모두에 결합될 수 있다.
AOI는 소포의 지질 성분에 부착 (결합 또는 결속)될 수 있다. 지질과의 결합은 에스테르 결합에 의해, 예를 들어 지방산을 제거함으로써 그리고 AOI로 대체함으로써 임의의 글리세롤 하이드록실기를 통해 성취될 수도 있다. 대안으로, 부착 방법은 포스파티딜 모이어티의 대체에 의해 이루어질 수 있고, 따라서 최종 분자는 결속된 AOI와 함께 2개의 지방산 사슬을 갖는다. 변형된 지질은 일반적으로 지방족 영역에 삽입하고 그리고 자유 회전이 글리세롤 템플레이트 상에서 이용가능한 상태로, 결속된 AOI는 소포의 바깥쪽에 위치할 것이다. AOI가 더 긴 지속기간 동안 소포에 결속되도록 요구된다면, 아미드 결합이 더 안정한 대안을 위해 이용될 수 있다. 이것은 예를 들어, AOI에 대한 표적이 상부 진피 층보다는, 깊은 조직, 가령 관절이라면, 바람직할 수 있다. 덜 안정한 결합 및 더 안정한 결합의 조합은 AOI의 시차를 둔 방출을 성취하는 데에 이용될 수 있다 (가령 각각, 에스테르 및 아미드).
임의의 성분에 결합시키는 방법은 가수분해성 또는 비-가수분해성일 수 있다. AOI가 일단 피부 내에 있거나 피부 아래에 있을 때 분리되어야 하는 것이 바람직하다면, 연결은 가수분해성이어야 한다. 결합된 AOI가 일단 피부 내에 있거나 피부 아래에 있을 때 소포에 결합된 채로 남아있어야 하는 것이 바람직하다면, 연결은 비-가수분해성이어야 한다.
AOI는 막 성분에 공유 결합되거나 접합될 수 있다; 결합은 친수성 또는 소수성 또는 유체정역학적일 수 있다; 결합은 수소 결합, 이온 결합일 수 있다.
용어 "결합하는", "부착하는" 및 "결속하는"은 본 명세서 전체에 걸쳐 상호교환적으로, 상기 언급된 모든 결합을 아우르는 데에 사용된다.
본 발명은 포유 동물의 피부에 AOI를 투여하는 데에 이용될 수 있다. 인간, 개, 고양이, 말, 식품 생산 동물 및 애완동물을 비롯하여, 임의의 포유 동물이 포함될 수 있다. AOI는 치료용 엔티티 또는 미용 엔티티 또는 비-치료용 또는 비-미용 엔티티일 수 있고, 대안으로 또는 추가로 AOI는 대사성 및/또는 구조적일 수 있다.
이에 따라, 본 발명의 두 번째 측면은 지질, 계면활성제 및 AOI를 포함한 소포성 제제를 제공하고, 여기서 AOI는 대다수의 AOI가 대상의 피부를 통해 AOI를 전달하는 데에서 이용하기 위한 소포의 외부에 있도록 소포의 성분에 결합되거나 부착되고, 이때 제제는 국부적으로 적용된다.
본 발명의 세 번째 측면은 대상의 피부를 통하여 AOI를 전달하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 AOI를 전달하기 위해 피부를 관통하는 데에 충분한 양으로 본 발명의 소포성 제제를 환자의 피부에 국부적으로 적용시키는 단계를 포함한다.
본 발명은 또한, 환자의 피부를 통해 하나 초과의 AOI를 전달하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 소포체가 그들에 결합된 복수의 이종 AOI를 갖는 경우의 본 발명의 소포성 제제를 국부적으로 적용시키는 단계 및/또는 제제가 소포체의 블렌드(blend))이고, 이때 각각의 제제는 소포체에 결합된 상이한 단일 또는 복수의 동종 AOI를 가지는 소포체를 갖는 경우의 본 발명의 소포성 제제를 국부적으로 적용시키는 단계를 포함한다.
소포성 제제내 지질은 인지질일 수 있다. 리소인지질일 수 있는 이차 지질이 존재할 수 있다. 지질은 황지질일 수 있다. 계면활성제는 비-이온성 계면활성제일 수 있다.
본 발명의 제제는 소포체 또는 다른 확대 표면 응집물 (ESA)을 형성하고, 여기서 소포성 제조물은 반-침투성 장벽, 가령 피부를 통한 침투 능력을 개선시켰다. 소포의 크기는 혈관계 내로 침투를 방지하고 그리고 결과로서 전신 전달을 방지한다. 작용의 임의의 기작에 한정됨 없이, 본 발명의 제제는 그들의 변형성 및/또는 순응성으로 특징되는 소포체를 형성할 수 있다.
소포성 제제의 특정한 조성물은 AOI가 피부의 어떤 층에 전달될 수 있을지 결정할 것이다. 특정한 제제는 오로지 피부의 상부층을 투과할 것이지만 다른 제제는 더 깊은 층까지 이동할 것이다. 소포성 제제는 전달되어야 하는 AOI에 따라 선택될 것이다. 예를 들어, 콜라겐이 피부내 깊이 전달되어야 하는 AOI라면, 이는 피부의 더 깊은 층을 투과할 수 있는 소포성 제제에 부착될 것이다.
네 번째 측면으로서, 본 발명은 본 발명의 첫 번째 내지 세 번째 측면에 따라 소포성 제제를 만드는 방법을 제공한다. 상기 방법은 소포 성분에 AOI를 부착하고, AOI/성분을 비변형 인지질 및 계면활성제와 혼합하여 본 발명의 소포성 제제를 형성하는 단계를 포함한다.
본 발명의 다섯 번째 측면은 질병의 치료에서 이용하기 위한 첫 번째 측면의 소포성 제제와 관련된다. 치료되어야 할 질병은 소포체에 결속되는 AOI에 의해 결정될 것이다.
본 발명은 첫 번째 측면에 따른 소포성 제제를 제공하고, 이때 AOI는 피부 관리 제품에서 이용하기 위한, 노화-방지 제품에서 이용하기 위한 또는 자외선 차단 (UV 차단) 제품에서 이용하기 위한, 비타민, 가령 비타민 C, 비타민 E, 비타민 D 또는 비타민 A이다.
AOI는 노화-방지 제품에서 이용하기 위한, 콜라겐 생성의 장려 또는 촉진에서 이용하기 위한, 또는 화장품에서 이용하기 위한, 펩티드, 가령 테트라-펩티드 7 또는 트리-펩티드 1인, 본 발명에 따른 소포성 제제가 또한 제공된다.
AOI는 골관절염의 치료에서 이용하기 위한, 관절염 관절 통증의 치료에서 이용하기 위한, 근육 통증의 치료에서 이용하기 위한, 근육 좌상의 치료에서 이용하기 위한 또는 염증의 치료에서 이용하기 위한, NSAID, 가령 나프록센 또는 디클로페낙인, 본 발명에 따른 소포성 제제가 또한 제공된다.
인지되는 바와 같이, 다른 AOI는 매우 다양한 질병을 치료하기 위하여 본 발명의 소포체에 결속될 수 있다.
본 발명의 첫 번째 측면의 모든 특징은 필요한 변경을 가하여 두 번째 내지 다섯 번째 측면에 적용한다.
소포체의 제조 동안에, 변형된 성분 (즉 부착된 AOI를 가짐) 대 비-변형 성분 (즉 부착된 AOI가 없음)의 비는 다수의 변형된 성분 (그리고 이에 따라 AOI)이 소포체 내로 편입되는 정도 그리고 또한 적어도 하나의 AOI를 함유한 소포체의 수를 조절하도록 조정된다. 비변형 소포체의 일부가 최종 제조물에 남아있는 경우, 이들은 모공 내로 변형된 형태를 따라가 뒤에서 "밀어냄"으로써 변형 형태의 "당기는" 작용을 보완할 것이다. 최종 제조물내 변형된 소포체의 백분율 (전체 소포체의 일부로서)은 0.1% 내지 100%, 또는 1% 내지 100%, 10% 내지 90%, 25% 내지 75% 또는 50%의 범위에 있을 수 있다.
높은 비율의 소포체가 바람직한, 부착된 AOI를 가지거나 다수의 부착된 AOI를 가진다는 점을 보장하기 위하여, 100% 변형된 계면활성제가 지질과 혼합하는 데에 (또는 그 반대로) 이용될 수 있다. 다른 한편으로는, 더욱 희석되는 효과를 위하여, 오로지 약간의 소포체만 부착된 AOI를 가지거나 오로지 단일 AOI만 소포체에 부착되는 경우, 예를 들어, 5% 변형 대 95% 비변형 계면활성제의 블렌드가 이용된다. 일반적으로, 80% 내지 10%의 지질 또는 계면활성제는 변형된 지질 또는 계면활성제 성분으로 대체될 수 있다. 75% 내지 15%의 지질 또는 계면활성제 성분이 대체될 수 있다. 적합하게, 약 70%, 65%, 60%, 50%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15% 또는 10% 사이에서 또는 이들 값 사이의 임의의 범위에서, 지질 성분 또는 계면활성제 성분은 각각, AOI에 결합된, 변형된 지질 또는 변형된 계면활성제 성분으로 대체될 수 있다. 지질 및 계면활성제 성분의 일부가 대체될 수 있다. 변형된 소포체를 추출하고 그들을 순수한 비변형 소포체와 정확한 "용량"으로 혼합함으로써, 또는 상이한 AOI로 변형된 소포체와 혼합함으로써 추가적인 정제가 수행될 수 있다. 일반적으로 본 명세서에서 사용된 명명법 및 본 명세서에서 설명된 유기 화학, 의료 화학, 및 약리학에서의 실험 절차는 잘 공지된 것들이고 해당 분야에서 일반적으로 이용된다. 달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시가 속하는 해당 분야의 통상의 기술자에게 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 특정한 결과를 성취하는 데에 "충분량", "효과적인 양" 또는 "충분한 양"은 선택적으로는 치료학적 효과인, 바람직한 효과 (즉, 치료학적으로 효과적인 양의 투여에 의함)를 유도하는 데에 효과적인 본 발명의 제제의 양을 나타낸다. 대안으로 명시된, "치료학적으로 효과적인" 양은 적어도 하나의 임상 증상에서 어느 정도의 완화, 경감, 및/또는 감소를 제공하는 양이다. 본 발명의 방법에 의해 치료될 수 있는 장애와 연관된 임상 증상은 해당 분야의 통상의 기술자에게 잘 공지된다. 추가로, 해당 분야의 통상의 기술자는 몇 가지 혜택이 대상에게 제공되는 한, 치료학적 효과가 완벽하거나 치유력이 있어야 할 필요가 없다는 점을 인지할 것이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 대상의 질환의 중증도가 감소되거나 적어도 부분적으로 향상되고 또는 개선된 것을 의미하고 및/또는 적어도 하나의 임상 증상에서 어느 정도의 완화, 경감 또는 감소가 성취된 것을 의미하고 및/또는 질환의 진행의 저해 또는 지연 및/또는 질병 또는 병 개시의 진행의 지연이 있다는 점을 의미한다. 용어 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 또한 질병 상태를 관리하는 것을 의미한다. "예방"은 예방적 치료를 의미한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 본 발명의 제제에 대한 언급에서 사용할 때, 용어 "제약학적으로 허용되는"은 제제가 허용되지 않은 수준의 자극을 제제가 투여된 대상에서 야기시키지 않는다는 점을 나타낸다. 바람직하게, 이러한 수준은 규제 기관에 의한 승인에 적합한 제제를 제공하기 위해 충분히 낮을 것이다.
수치에 관하여 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "약"은 측정을 하는 데에 있어 정상적인 실험 오차에서 기인할 것으로 예상되는 것을 포함하는 특정 수치 주위의 범위를 의미한다. 예를 들어, 특정한 구체예에서, 특정 수치와 관련되어 이용될 때 용어 "약"은 +-20%, 구체적으로 명시되지 않는 한 +-1%, +-2%, +-3%, +-4%, +-5%, +-10%. +-15%, 또는 +-20%의 수치를 의미한다.
본 명세서에서 제공된 본 발명의 제제는 3.5 내지 9.0, 바람직하게는 4 내지 7.5의 범위의 pH를 갖는, 제약학적으로 허용되는 매체, 바람직하게는 수성 용액에서 선택적으로 현탁되는, 적어도 하나의 지질, 바람직하게는 인지질 또는 황지질, 적어도 하나의 계면활성제, 바람직하게는 비이온성 계면활성제를 포함한다. 본 발명의 제제는 완충액, 항산화제, 보존제, 살균제, 항균제, 완화제, 조용매(co-solvent), 및/또는 증점제를 선택적으로 함유할 수 있다. 본 발명의 제제는 하나 초과의 지질, 바람직하게는 하나 초과의 인지질의 혼합물을 포함할 수 있다. 본 발명의 제제는 본질적으로, 적어도 하나의 지질, 바람직하게는 인지질, 적어도 하나의 계면활성제, 바람직하게는 비이온성 계면활성제, 제약학적으로 허용되는 담체, 및 선택적으로 완충액, 항산화제, 보존제, 살균제, 항균제, 완화제, 조용매, 및/또는 증점제로 구성될 수 있다. 본 발명의 제제는 적어도 하나의 지질, 바람직하게는 인지질, 적어도 하나의 계면활성제, 바람직하게는 비이온성 계면활성제, 제약학적으로 허용되는 담체, 그리고 다음 중 하나 이상으로 구성될 수 있다: 완충액, 항산화제, 보존제, 살균제, 항균제, 완화제, 조용매, 및 증점제.
표 1은 본 발명에 따른 바람직한 인지질을 열거한다.
Figure pct00001
본 발명의 맥락에서 바람직한 지질은 하전되지 않고 그리고 안정하고 잘 수화되는 이중층을 형성한다; 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 및 스핑고마이엘린은 이러한 지질들 중 가장 두드러지는 대표적인 것들이다. 이들 중 어느 하나는 표 1에서 열거된 바와 같은 사슬; 유동상 이중층을 형성하는 것을 가질 수 있고, 여기서 지질 사슬은 무질서한 상태에 있으며, 이러한 것이 바람직하다.
음성으로 하전된, 즉 음이온성의 상이한 지질이 또한, 소포 지질 이중층 내로 편입될 수 있다. 이러한 하전된 지질의 흥미로운 예시는 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜이노시톨 그리고 다소 덜 바람직하지만, 포스파티드산 (그리고 이의 알킬 에스테르) 또는 포스파티딜세린이다. 하전된 지질로부터 바로 소포체를 만드는 것이 전기적-중성 이중층 성분(들)와 조합하여 그들을 이용하는 것보다 덜 추천된다는 점이 해당 분야의 통상의 기술자에게 인식될 것이다. 하전된 지질을 이용하는 경우에, 반대 위치에 있는, 하전된 약물과 지질 분자 사이에서 바람직한 정도의 정전기 상호작용 및/또는 바람직한 정도의 지질 헤드기(head-group) 이온화를 보장하기 위하여 완충 조성물 및/또는 pH 케어(pH care)가 선택되어야 한다. 더욱이, 중성 지질과 마찬가지로, 하전된 이중층 지질 성분은 이론상으로, 표 1에서 열거된 바와 같은 인지질의 임의의 사슬을 가질 수 있다. 유동상 지질 이중층을 형성하는 사슬이 분명히 바람직하지만, 이는 증가하는 지방산 유동성의 역할을 증가시키는 소포 순응성 그리고 유동상에서 서로 혼합하는 지질의 더 나은 능력 때문이다.
지질의 지방산- 또는 지방 알코올-유도 사슬은 아래의 기본적인 지방족 사슬 유형들 중에서 전형적으로 선택된다:
Figure pct00002
다른 이중 결합 조합 또는 위치도 또한 가능성 있다.
본 발명의 바람직한 지질은 예를 들어, 천연 포스파티딜콜린이고, 이는 레시틴으로 불려었다. 이것은 알 (팔미트산, C16:0, 및 올레산, C18:1에서 풍부하지만, 또한 스테아르산, C18:0, 팔미톨레산, C16:1, 리놀렌산, C18:2, 및 아라키돈산, C20:4(M, 라디칼)도 포함), 대두 (불포화 C18 사슬에서 풍부하지만, 또한 몇 가지 다른 것들 중에서, 몇몇 팔미트산 라디칼을 함유), 코코넛 (포화 사슬에서 풍부), 올리브 (단일 불포화 사슬에서 풍부), 사프란 (홍화) 및 해바라기 (n-6 리놀레산에서 풍부), 아마씨 (n-3 리놀레산에서 풍부), 고래 지방 (단일 불포화 n-3 사슬에서 풍부), 프림로즈 또는 프리뮬러 (n-3 사슬에서 풍부)로부터 얻을 수 있다. 바람직한 천연 포스파티딜 에탄올아민 (세팔린으로 불렸었음)은 주로, 알 또는 대두에서 유래된다. 생물학적 기원의 바람직한 스핑고마이엘린은 알 또는 뇌 조직으로부터 전형적으로 제조된다. 바람직한 포스파티딜세린도 또한 뇌물질에서 전형적으로 유래되지만, 포스파티딜글리세롤은 대장균(E. coli)과 같은 박테리아로부터 바람직하게 추출되고, 그렇지 않으면 천연 포스파티딜콜린으로 시작해서, 포스포리파아제 D를 이용하여, 트랜스포스파티딜화(transphosphatidylation)에 의해 제조된다. 바람직하게 이용되는 포스파티딜이노시톨은 시판용 대두 인지질 또는 소 간 추출물로부터 단리된다. 바람직한 포스파티드산은 언급된 공급원들 중 어느 하나로부터 추출되거나 적합한 포스파티딜콜린으로부터 포스포리파아제 D를 이용하여 제조된다.
추가적으로, 합성 포스파티딜콜린이 이용될 수 있다.
제제내 지질의 양은 중량으로 약 1% 내지 약 12%, 약 1% 내지 약 10%, 약 1% 내지 약 4%, 약 4% 내지 약 7% 또는 약 7% 내지 약 10%이다. 지질은 인지질일 수 있다. 인지질은 포스파티딜콜린일 수 있다.
제제내 지질은 알킬-리소인지질을 포함하지 않을 수 있다. 제제내 지질은 폴리엔일포스파티딜콜린을 포함하지 않을 수 있다.
용어 "계면활성제"는 이의 통상적인 의미를 갖는다. 적절한 계면활성제의 목록 그리고 계면활성제 관련된 정의는 EP 0 475 160 A1 (가령, p. 6, 1. 5 내지 p.14. 1.17을 참고) 그리고 미국 특허 번호 제6,165,500호 (가령, col. 7, 1. 60 내지 col. 19, 1. 64를 참고)에서 제공되고, 이들 각각은 이들 전체로 참조로서 본 명세서에 편입되고, 그리고 적합한 계면활성제 또는 제약 안내서, 가령 산업용 계면 활성제 핸드북(Handbook of Industrial Surfactants) 또는 미국 파마코포이어(US Pharmacopoeia, Pharm. Eu)에서 제공된다. 몇몇 구체예에서, 계면활성제는 2002년 1월 31일에 발행된, 미국 특허 출원 공개공보 번호 제2002/0012680 A1호의 표 1-18에서 설명된 것들이고, 이의 개시는 이의 전체로 참조로서 본 명세서에 편입된다. 이에 따라 다음 목록은 오로지, 본 특허 출원과 함께 특히 일반적이거나 유용한 여러 가지 계면활성제 종류의 선택을 제안하며, 이는 결코 완전한 것도 아니고 독점적인 것도 아니다. 본 발명에 따라 이용되어야 하는 바람직한 계면활성제는 12보다 큰 친수친유성밸런스(HLB)를 가진 것들을 포함한다. 목록은 이온화된 긴-사슬 지방산 또는 긴 사슬 지방 알코올, 장쇄 지방 암모늄 염, 가령, 알킬- 또는 알케노일-트리메틸-, -디메틸- 및 -메틸-암모늄 염, 알킬- 또는 알케노일-설페이트 염, 긴 지방 사슬 디메틸-아미녹사이드, 가령 알킬- 또는 알케노일-디메틸-아미녹사이드, 긴 지방 사슬, 예를 들어 알카노일, 디메틸-아미녹사이드 및 특히 도데실 디메틸-아미녹사이드, 긴 지방 사슬, 예를 들어 알킬-N-메틸글루카미드 및 알카노일-N-메틸글루카미드, 가령 MEGA-8, MEGA-9 및 MEGA-10, N-긴 지방 사슬-N,N-디메틸글리신, 예를 들어 N-알킬-N,N-디메틸글리신, 3-(긴 지방 사슬-디메틸암모니오)-알칸-설포네이트, 예를 들어 3-(아시이디메틸암모니오)-알칸설포네이트, 설포석시네이트 염의 긴 지방 사슬 유도체, 가령 비스(2-에틸알킬) 설포석시네이트 염, 긴 지방 사슬-설포베타인, 예를 들어 아실-설포베타인, 긴 지방 사슬 베타인, 가령 엠피젠 비비(EMPIGEN BB) 또는 쯔비터전트(ZWITTERGENT)-3-16, -3-14, -3-12, -3-10, 또는 -3-8, 또는 폴리에틸렌-글리콜-아실페닐 에테르, 특히 노나에틸렌-글리콜-옥틸-페닐 에테르, 폴리에틸렌-긴 지방 사슬-에테르, 특히 폴리에틸렌-아실 에테르, 가령 나에틸렌-데실 에테르, 노나에틸렌-도데실 에테르 또는 옥타에틸렌-도데실 에테르, 폴리에틸렌글리콜-이소아실 에테르, 가령, 옥타에틸렌글리콜-이소트리데실 에테르, 폴리에틸렌글리콜-소르비탄-긴 지방 사슬 에스테르, 예를 들어 폴리에틸렌글리콜-소르비탄-아실 에스테르 및 특히 폴리옥시에틸렌-모노라우레이트 (가령 폴리소르베이트 20 또는 트윈 20), 폴리옥시에틸렌-소르비탄-모노올리에이트 (가령 폴리소르베이트 80 또는 트윈 80), 폴리옥시에틸렌-소르비탄-모노라우롤레일레이트, 폴리옥시에틸렌-소르비탄-모노페트로셀리네이트, 폴리옥시에틸렌-소르비탄-모노엘라이데이트, 폴리옥시에틸렌-소르비탄-미리스톨레일레이트, 폴리옥시에틸렌-소르비탄-팔미톨레이닐레이트, 폴리옥시에틸렌-소르비탄-페트로셀리닐레이트, 폴리하이드록시에틸렌-긴 지방 사슬 에테르, 예를 들어 폴리하이드록시에틸렌-아실에테르, 가령 폴리하이드록시에틸렌-라우릴 에테르, 폴리하이드록시에틸렌-미리스토일 에테르, 폴리하이드록시에틸렌-세틸스테아릴, 폴리하이드록시에틸렌-팔미틸 에테르, 폴리하이드록시에틸렌-올레오일 에테르, 폴리하이드록시에틸렌-팔미톨레오일 에테르, 폴리하이드록시에틸렌-리노-레일, 폴리하이드록시에틸렌-4, 또는 6, 또는 8, 또는 10, 또는 12-라우릴, 미리스토일, 팔미토일, 팔미톨레일, 올레오일 또는 리노에일 에테르 (Brij 시리즈), 또는 상응하는 에스테르에서, 폴리하이드록시에틸렌-라우레이트, -미리스테이트, -팔미테이트, -스테아레이트 또는 -올리에이트, 특히 폴리하이드록시에틸렌-8-스테아레이트 (Myrj 45) 및 폴리하이드록시에틸렌-8-올리에이트, 폴리에톡실화 피마자유 40 (Cremophor EL), 소르비탄-모노 긴 지방 사슬, 예를 들어 알킬레이트 (Arlacel 또는 Span 시리즈), 특히 소르비탄-모노라우레이트 (Arlacel 20, Span 20)로서, 긴 지방 사슬, 예를 들어 아실-N-메틸글루카미드, 알카노일-N-메틸글루카미드, 특히 데카노일-N-메틸글루카미드, 도데카노일-N-메틸글루카미드, 긴 지방 사슬 설페이트, 예를 들어 알킬-설페이트, 알킬 설페이트 염, 가령 라우릴-설페이트 (SDS), 올레오일-설페이트: 긴 지방 사슬 티오글루코사이드, 가령 알킬티오글루코사이드 및 특히 헵틸-, 옥틸- 및 노닐-베타-D-티오글루코피라노사이드; 여러 가지 탄수화물, 가령 펜토오스, 헥소오스, 및 디사카라이드의 긴 지방 사슬 유도체, 특히 알킬-글루코사이드 및 말토사이드, 가령 헥실-, 헵틸-, 옥틸-, 노닐- 및 데실-베타-D-글루코피라노사이드 또는 D-말토피라노사이드; 추가로 콜레이트, 데옥시콜레이트, 글리코콜레이트, 글리코데옥시콜레이트, 타우로데옥시콜레이트, 타우로콜레이트의 염, 특히 소듐 염, 지방산 염, 특히 올리에이트, 엘라이데이트, 리놀리에이트, 라우레이트, 또는 미리스테이트, 가장 흔히 소듐 형태, 리소인지질, n-옥타데실렌-글리세로포스파티드산, 옥타데실렌-포스포릴글리세롤, 옥타데실렌-포스포릴세린, n-긴 지방 사슬-글리세로-포스파티드산, 가령 n-아실-글리세로-포스파티드산, 특히 라우릴 글리세로-포스파티드산, 올레오일-글리세로-포스파티드산, n-긴 지방 사슬-포스포릴 글리세롤, 가령 n-아실-포스포릴글리세롤, 특히 라우릴-, 미리스토일-, 올레오일- 또는 팔미토엘로일-포스포릴글리세롤, n-긴 지방 사슬-포스포릴세린, 가령 n-아실-포스포릴세린, 특히 라우릴-, 미리스토일-, 올레오일- 또는 팔미토엘로일-포스포릴세린, n-테트라데실-글리세로-포스파티드산, n-테트라데실-포스포릴글리세롤, n-테트라데실-포스포릴세린, 상응하는-, 엘라이도일-, 백세닐-리소인지질, 상응하는 짧은-사슬 인지질, 그리고 모두 표면 활성이고 따라서 막 불안정인 폴리펩티드를 포함한다. 계면활성제 사슬은 유체 상태에 있는 것으로 또는 담체 응집물내 유동-사슬 상태의 유지와 적어도 양립가능한 것으로 전형적으로 선택된다.
계면활성제는 비이온성 계면활성제일 수 있다. 계면활성제는 중량으로 약 0.2 내지 10%, 약 1% 내지 약 10%, 약 1% 내지 약 7% 또는 약 2% 내지 5%로 제제에 존재할 수 있다. 비이온성 계면활성제는 다음으로 구성된 군에서 선택될 수 있다: 폴리옥시에틸렌 소르비탄 (폴리소베이트 계면활성제), 폴리하이드록시에틸렌 스테아레이트 또는 폴리하이드록시에틸렌 라우릴에테르 (Brij 계면활성제). 계면활성제는 폴리옥시에틸렌-소르비탄-모노올리에이트 (가령 폴리소르베이트 80 또는 트윈 80) 또는 트윈 20, 40 또는 60일 수 있다. 폴리소르베이트는 12 내지 20개의 탄소 원자를 가진 임의의 사슬을 가질 수 있다. 폴리소르베이트는 제제에서 유동일 수 있고, 이는 하나 이상의 이중 결합, 분지형, 또는 사이클로-기를 함유할 수 있다.
계면활성제는 추가적인 PEG 분자 또는 다른 친수성 모이어티로 변형될 수 있다.
본 발명의 제제는 변형된 지질 또는 계면활성제 외에도 오로지 1개의 지질 그리고 오로지 1개의 계면활성제를 포함할 수 있다. 대안으로, 본 발명의 제제는 1개 초과의 지질 그리고 오로지 1개의 계면활성제, 가령 2개, 3개, 4개, 또는 그 이상의 지질과 오로지 1개의 계면활성제를 포함할 수 있다. 대안으로, 본 발명의 제제는 오로지 1개의 지질 및 1개 초과의 계면활성제, 가령 2개, 3개, 4개, 또는 그 이상의 계면활성제 그리고 1개의 지질을 포함할 수 있다. 본 발명의 제제는 1개 초과의 지질 및 1개 초과의 계면활성제, 가령, 2개, 3개, 4개, 또는 그 이상의 지질 그리고 2개, 3개, 4개, 또는 그 이상의 계면활성제를 포함할 수 있다.
본 발명의 제제는 다양한 지질 대 계면활성제 비 (AOI에 결합된 지질 및/또는 계면활성제를 포함)를 가질 수 있다. 비는 몰 용어 (지질 mol/계면활성제 mol)에 관하여 표현될 수 있다. 제제내 지질 대 계면활성제의 몰비는 약 1:3 내지 약 30:1, 약 1:2 내지 약 30:1, 약 1:1 내지 약 30:1, 약 2:1 내지 약 20:1, 약 5:1 내지 약 30:1, 약 10:1 내지 약 30:1, 약 15:1 내지 약 30:1, 또는 약 20:1 내지 약 30:1일 수 있다. 본 발명의 제제내 지질 대 계면활성제의 몰비는 약 1:2 내지 약 10:1일 수 있다. 비는 약 1:1 내지 약 2:1, 약 2:1 내지 약 3:1, 약 3:1 내지 약 4:1, 약 4:1 내지 약 5:1 또는 약 5:1 내지 약 10:1일 수 있다. 몰비는 약 10:1 내지 약 30:1, 약 10:1 내지 약 20:1, 약 10:1 내지 약 25:1, 및 약 20:1 내지 약 25:1일 수 있다. 지질 대 계면활성제 비는 약 1.0:1.0, 약 1.25:1.0, 약 1.5/1.0, 약 1.75/1.0, 약 2.0/1.0, 약 2.5/1.0, 약 3.0/1.0 또는 약 4.0/1.0일 수 있다. 본 발명의 제제는 또한, 다음 성분의 총량의 변화량을 가질 수 있다: 조합된 지질 및 계면활성제 (TA). TA량은 전체 조성물의 중량 퍼센트에 관하여 명시될 수 있다. TA는 약 1% 내지 약 40%, 약 5% 내지 약 30%, 약 7.5% 내지 약 15%, 약 6% 내지 약 14%, 약 8% 내지 약 12%, 약 5% 내지 약 10%, 약 10% 내지 약 20% 또는 약 20% 내지 약 30%일 수 있다. TA는 6%, 8%, 9%, 10%, 12%, 14%, 15% 또는 20%일 수 있다.
본 발명의 제제에 대한 전체 지질 양 및 지질/계면활성제 비 (mol/mol)에 대한 선택된 범위는 아래 표에서 설명된다:
Figure pct00003
본 발명의 제제는 다음 재료들 중 하나 이상을 선택적으로 함유할 수 있다: 조용매, 킬레이터, 완충액, 항산화제, 보존제, 살균제, 완화제, 습윤제, 윤활제 및 증점제. 선택적인 성분의 바람직한 양은 다음과 같이 설명된다.
Figure pct00004
본 발명의 제제는 pH 3.5 내지 pH 9, pH 4 내지 pH 7.5, 또는 pH 6 내지 pH 7의 범위까지 수성 용액의 pH를 조정하기 위한 완충액을 포함할 수 있다. 완충액의 예시는 아세테이트 완충액, 락테이트 완충액, 포스페이트 완충액 및 프로피오네이트 완충액을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 제제는 수성 매체에서 전형적으로 조제된다. 제제는 저급 알코올과 같은 조용매로 또는 상기 조용매 없이 조제될 수 있다. 본 발명의 제제는 물 중량으로 적어도 20%를 포함할 수 있다. 본 발명의 제제는 물 중량으로 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60% about 70%, 약 80%, 약 90%를 포함할 수 있다. 제제는 물 중량으로 약 70% 내지 약 80%를 포함할 수 있다.
"살균제" 또는 "항균제"는 제약학적 제제에서 박테리아 수를 감소시키기 위해 일반적으로 첨가된다. 살균제의 몇몇 예시는 에틸 및 이소프로필 알코올, 클로르부탄올, 벤질 알코올, 클로르벤질 알코올, 디클로르벤질알코올, 헥사클로로펜을 비롯하여, 짧은 사슬 알코올; 페놀 화합물, 가령 크레솔, 4-클로로-m-크레솔, p-클로로-m-자일레놀, 디클로로펜, 헥사클로로펜, 포비돈-아이오딘; 파라벤, 특히 알킬-파라벤, 가령 메틸-, 에틸-, 프로필-, 또는 부틸-파라벤, 벤질 파라벤; 산, 가령, 소르브산, 벤조산 및 이들 염; 사차 암모늄 화합물, 가령 알코늄 염, 가령, 브로마이드, 벤잘코늄 염, 가령 클로라이드 또는 브로마이드, 세트리모늄 염, 가령, 브로마이드, 페노알케시늄 염, 가령 페노도데시늄 브로마이드, 세틸피리디늄 클로라이드 및 다른 염; 추가적으로, 수은 화합물, 가령 페닐수은 아세테이트, 보레이트, 또는 니트레이트, 티오메르살, 클로르헥시딘 또는 이의 글루코네이트, 또는 생물학적 기원의 임의의 항생 활성 화합물, 또는 이의 임의의 적합한 혼합물이다.
"항산화제"의 예시는 부틸화 하이드록시아니솔 (BHA), 부틸화 하이드록시톨루엔 (BHT) 및 디-삼차-부틸페놀 (LY178002, LY256548, HWA-131, BF-389, CI-986, PD-127443, E-51 또는 19, BI-L-239XX 등), 삼차 부틸하이드로퀴논 (TBHQ), 프로필 갈레이트 (PG), 1-O-헥실-2,3,5-트리메틸하이드로퀴논 (HTHQ); 방향족 아민 (디페닐아민, p-알킬티오-o-아니시딘, 에틸렌디아민 유도체, 카르바졸, 테트라하이드로인데노인돌); 페놀 및 페놀산 (구아이아콜, 하이드로퀴논, 바닐린, 갈산 및 이들 에스테르, 프로토카테츄산, 퀸산, 시링산, 엘라그산, 살리실산, 노르디하이드로구아이아레트산 (NDGA), 유게놀); 토코페롤 (토코페롤 (알파, 베타, 감마, 델타) 및 이들 유도체, 가령 토코페릴-아실레이트 (가령 -아세테이트, -라우레이트, 미리스테이트, -팔미테이트, -올리에이트, -리놀올리에이트 등, 또는 임의의 다른 적합한 토코페릴-리포에이트를 포함), 토코페릴-POE-석시네이트; 트롤록스 및 상응하는 아미드 및 티오카르복스아미드 유사체; 아스코르브산 및 이의 염, 이소아스코르베이트, (2 또는 3 또는 6)-o-알킬아스코르브산, 아스코르빌 에스테르 (가령, 6-o-라우로일, 미리스토일, 팔미토일-, 올레오일, 또는 리놀레오일-L-아스코르브산 등)이다. 또한 바람직하게 산화된 화합물, 가령 소듐 비설파이트, 소듐 메타비설파이트, 티오우레아; 킬레이트제, 가령 EDTA, GDTA, 데스페랄: 여러 종류의 내생 방어 시스템, 가령 트랜스페린, 락토페린, 페리틴, 세아룰로플라스민, 합토글로비온, 헤모펙신, 알부민, 글루코오스, 유비퀴놀-10); 효소 항산화제, 가령 카탈라아제, 글루타티온 퍼옥시다아제, 및 덜 복합된 분자, 가령 베타-카로텐, 빌리루빈, 요산을 비롯하여, 수퍼옥사이드 디스무타아제 및 유사한 활성을 가진 금속 복합체; 플라보노이드 (플라본, 플라보놀, 플라보논, 플라바노날, 샤콘, 안토시아닌), N-아세틸시스테인, 메스나, 글루타티온, 티오히스티딘 유도체, 트리아졸; 탄닌, 신남산, 하이드록시신남산 및 이들 에스테르 (쿠마르 산 및 에스테르, 카페산 및 이들 에스테르, 페롤산, (이소-) 클로로겐산, 시나핀산); 향신료(spice) 추출물 (가령, 클로브, 시나몬, 세이지, 로즈마리, 메이스, 오레가노, 알스파이스, 넛메그로부터); 카르노스산, 카르노솔, 카르솔린산; 로즈마린산, 로즈마리디페놀, 겐티신산, 페룰산; 귀리 가루 추출물, 가령 아베난트라미드 1 및 2; 티오에테르, 디티오에테르, 설폭사이드, 테트라알킬티우람 디설파이드; 피트산, 스테로이드 유도체 (가령, U74006F); 트리토판 대사물질 (가령, 3-하이드록시키누레닌, 3-하이드록시안트라닐산), 및 오르가노칼코게나이드도 유용하다.
"증점제"는 제약학적 제제의 점도를 증가시키는 데에 이용되고 그리고 제약학적으로 허용되는 친수성 폴리머, 가령, 카르복시메틸-, 하이드록시에틸-, 하이드록시프로필-, 하이드록시프로필메틸 - 또는 메틸-셀룰로오스를 포함한, 부분적으로 에테르화된 셀룰로오스 유도체; 폴리아크릴레이트, 폴리메타크릴레이트, 폴리(하이드록시에틸)-, 폴리(하이드록시프로필)-, 폴리(하이드록시프로필메틸)메타크릴레이트, 폴리아크릴로니트릴, 메탈릴-설포네이트, 폴리에틸렌, 폴리옥시에틸렌, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜-락티드, 폴리에틸렌 글리콜-디아크릴레이트, 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐 알코올, 폴리(프로필메타크릴아미드), 폴리(프로필렌 푸마레이트-코-에틸렌 글리콜), 폴록사머, 폴리아스파르타미드. (하이드라진 교차-결합된) 히알루론산, 실리콘을 포함한, 완전하게 합성된 친수성 폴리머; 알기네이트, 카라기난, 구아-검, 젤라틴, 트래거캔스, (아미드화) 펙틴, 잔탄, 키토산 콜라겐, 아가로오스를 포함한 천연 검; 이의 혼합물 및 추가적인 유도체 또는 코-폴리머 및/또는 다른 제약학적으로, 또는 적어도 생물학적으로, 허용되는 폴리머에서 선택될 수 있다.
본 발명의 제제는 또한, 극성 액체 매질을 포함할 수 있다. 본 발명의 제제는 수성 매체에 투여될 수 있다. 본 발명의 제제는 용액, 현탁액, 에멀젼, 크림, 로션, 연고, 겔, 스프레이, 막 형성 용액 또는 래커의 형태로 있을 수 있다.
작용의 임의의 기작 또는 임의의 이론에 제한됨 없이, 본 발명의 제제는 이들의 순응성, 변형성, 또는 투과성으로 특징되는 소포체 또는 ESA를 형성할 수 있다. 유사한 소포체 (결합된 치료용 엔티티 없이)는 WO　2010/140061와 WO　2011/022707에서 설명된다.
본 발명의 제제는 상기 언급된 바와 같이, AOI에 따라, 여러 가지 질병 또는 질환의 예방 또는 치료에서 유용하다.
예를 들어, 본 발명의 소포성 제제는 비타민 D3, C, E 또는 B7 중 1, 2, 또는 3가지를 포함할 수 있다. 제제는 단독으로 이용되거나 더욱 복합된 피부 관리 제품, 가령 자외선 차단제, 선블록, 수분 크림, 세럼, 또는 화장품의 성분 또는 재료로서 이용될 수 있다. 제제 또는 최종 피부 관리 제품은 크림, 겔, 로션, 무스 또는 스프레이의 형태일 수 있다.
상기 정의된 바와 같은 용도를 위한 소포성 제제가 본 발명에 의해 제공되며, 미량영양소가 비타민 D3인 경우, 제제는 낮은 비타민 D 수준을 보충하기 위한 자외선 차단제, 선블록 제품, 애프터-선크림 제품 또는 다른 피부관리 제품 또는 화장품 내로 편입될 수 있고; 미량영양소가 비타민 C 또는 비타민 E인 경우, 제제는 표피와 진피 비타민 C 또는 비타민 E를 보충하고 햇빛-손상 또는 피부 노화의 예방 또는 복구를 보조하기 위한 자외선 차단 제품, 선블록 제품, 애프터-선크림 제품 또는 다른 피부관리 제품 또는 화장품 내로 편입될 수 있고; 미량영양소가 비타민 B7인 경우, 제제는 이 미량영양소의 결핍과 연관된 피부병을 감소시키거나 제거하기 위한 자외선 차단 제품, 선블록 제품, 애프터-선크림 제품 또는 다른 피부관리 제품 또는 화장품 내로 편입될 수 있다.
본 발명의 소포성 제제는 국부적으로 적용되어야 하는 상처-치유 제품에서 제공될 수 있다. 따라서, 본 발명은 피부 상처를 치료하는 데에서 이용하기 위한 첫 번째 측면의 제제를 제공하고, 이때 AOI는 아스코르브산 (비타민 C)이다.
본 발명은 다음 비제한 예시 및 도면에 관하여 아래에서 설명되며, 여기서:
도 1은 나프록센 또는 디클로페낙에 결속된 소포체에 대한 반응 속도에 대비하여 플롯팅된 아라키돈 기질 농도를 보여주고;
도 2는 도 1의 역수 (Lineweaver Burk) 플롯을 보여주고;
도 3은 CMA 어세이 후 나프록센 또는 디클로페낙에 결속된 소포체에 대한 반응 속도에 대비하여 플롯팅된 아라키돈 기질 농도를 보여주고; 그리고
도 4는 도 3의 역수 (Lineweaver Burk) 플롯을 보여준다.
예시 제제
예시 소포성 제제
예시 제제 1
제제 1은 지질로서 스핑고마이엘린 (뇌) (47.944 mg/g), 계면활성제로서 트윈 80 (42.05mg/g), 락테이트 완충액 (pH 4), 항미생물제로서 벤질 알코올 또는 파라벤 (5.000 mg/g), 항산화제로서 BHT (0.200 mg/g) 및 소듐 메타비설파이트 (.0500 mg/g), 글리세롤 (30.000 mg/g), 킬레이트제로서 EDTA (3.000 mg/g), 및 에탄올 (30.000 mg/g)을 포함한다.
예시 제제 2
제제 2는 지질로서 스핑고마이엘린 (뇌) (53.750 mg/g), 계면활성제로서 트윈 80 (31.250 mg/g), 락테이트 (pH 4) 완충액, 항미생물제로서 벤질 알코올 또는 파라벤 (5.000 mg/g), 항산화제로서 BHT (0.200 mg/g) 및 소듐 메타비설파이트 (0.500 mg/g), 글리세롤 (30.000 mg/g), 킬레이트제로서 EDTA (3.000 mg/g), 및 에탄올 (15.000 mg/g)을 포함한다.
예시 제제 3
제제 3은 지질로서 스핑고마이엘린 (뇌) (90.561 mg/g), 계면활성제로서 트윈 80 (79.439 mg/g), 락테이트 (pH 4) 완충액, 항미생물제로서 벤질 알코올 또는 파라벤 (5.000 mg/g), 항산화제로서 BHT (0.200 mg/g) 및 소듐 메타비설파이트 (0.500 mg/g), 글리세롤 (30.000 mg/g), 킬레이트제로서 EDTA (3.000 mg/g), 및 에탄올 (30.000 mg/g)을 포함한다.
예시 제제 4
제제 4는 지질로서 포스파티딜 콜린 (68.700 mg/g), 계면활성제로서 트윈 80 (8.500 mg/g), 포스페이트 (pH 7.5) 완충액, 항산화제로서 BHT (0.200 mg/g) 및 소듐 메타비설파이트 (0.500 mg/g), 항미생물제로서 벤질 알코올 또는 파라벤 (5.000 mg/g), 글리세롤 (30.000 mg/g), 킬레이트제로서 EDTA (1.000 mg/g), 및 에탄올 (36.51 mg/g)을 포함한다.
예시 제제 5
제제 5는 지질로서 포스파티딜 콜린 (71.460 mg/g), 계면활성제로서 트윈 80 (4.720 mg/g), 포스페이트 (pH 7.8) 완충액, 항산화제로서 BHA (0.200 mg/g) 및 소듐 메타비설파이트 (0.500 mg/g), 항미생물제로서 벤질 알코올 또는 파라벤 (5.000 mg/g), 글리세롤 (15.000 mg/g), 킬레이트제로서 EDTA (3.000 mg/g), 및 에탄올 (35.000 mg/g)을 포함한다.
예시 제제 6
제제 6은 지질로서 포스파티딜 콜린 (71.460 mg/g), 계면활성제로서 트윈 80 (4.720 mg/g), 포스페이트 (pH 7.8) 완충액, 항산화제로서 BHA (0.200 mg/g) 및 소듐 메타비설파이트 (0.500 mg/g), 글리세롤 (50.000 mg/g), 킬레이트제로서 EDTA (3.000 mg/g), 및 에탄올 (15.000 mg/g)을 포함한다.
예시 제제 7
제제 7은 지질로서 포스파티딜 콜린 (71.4600 mg/g), 계면활성제로서 트윈 80 (4.720 mg/g), 포스페이트 (pH 7.5) 완충액, 항산화제로서 BHA (0.200 mg/g) 및 소듐 메타비설파이트 (0.500 mg/g), 글리세롤 (50.000 mg/g), 킬레이트제로서 EDTA (3.000 mg/g), 및 에탄올 (35.000 mg/g)을 포함한다.
예시 제제 8
제제 8은 지질로서 포스파티딜 콜린 (64.516 mg/g), 계면활성제로서 트윈 80 (35.484 mg/g), 포스페이트 (pH 6.7) 완충액, 항산화제로서 BHA (0.200 mg/g), 항미생물제로서 벤질 알코올 또는 파라벤 (4.200 mg/g), 글리세롤 (30.000 mg/g), 킬레이트제로서 EDTA (3.000 mg/g), 및 에탄올 (30.000 mg/g)을 포함한다.
예시 제제 9
지질로서 포스파티딜콜린 (64.516 mg/g), 계면활성제로서 트윈 80 (35.484 mg/g), 포스페이트 (pH 6.7) 완충액, 항산화제로서 BHA (0.200 mg/g), 용매로서 벤질 알코올 (5.250 mg/g) 또는 파라벤 (4.200 mg/g), 글리세롤 (30.000 mg/g), 킬레이트제로서 EDTA (3.000 mg/g), 및 에탄올 (30.000 mg/g).
예시 제제 10
지질로서 포스파티딜 콜린 (71.460 mg/g), 계면활성제로서 트윈 80 (4.720 mg/g), 포스페이트 (pH 6.7) 완충액, 항산화제로서 BHA (0.200 mg/g), 용매로서 벤질 알코올 또는 파라벤 (10.000 mg/g), 글리세롤 (50.000 mg/g), 킬레이트제로서 EDTA (3.000 mg/g), 및 에탄올 (30.000 mg/g).
부착된 AOI를 가진 예시 소포성 제제
예시 제제 11
제제 11은 지질로서 포스파티딜 콜린 (68.700 mg/g), 계면활성제로서 트윈 80 (8.500 mg/g), AOI로서 콜라게닐 포스파티딜콜린 (1 mg/g), 포스페이트 (pH 7.5) 완충액, 항산화제로서 BHT (0.200 mg/g) 및 소듐 메타비설파이트 (0.500 mg/g), 항미생물제로서 벤질 알코올 또는 파라벤 (5.000 mg/g), 글리세롤 (30.000 mg/g), 킬레이트제로서 EDTA (1.000 mg/g), 및 에탄올 (36.51 mg/g)을 포함한다.
예시 제제 12
제제 12는 지질로서 포스파티딜 콜린 (68.700 mg/g), 계면활성제로서 트윈 80 (8.500 mg/g), AOI로서 콜라게닐 포스파티딜콜린 (0.5 mg/g), 포스페이트 (pH 7.5) 완충액, 항산화제로서 BHT (0.200 mg/g) 및 소듐 메타비설파이트 (0.500 mg/g), 항미생물제로서 벤질 알코올 또는 파라벤 (5.000 mg/g), 글리세롤 (30.000 mg/g), 킬레이트제로서 EDTA (1.000 mg/g), 및 에탄올 (36.51 mg/g)을 포함한다.
예시 제제 13
제제 13은 지질로서 포스파티딜 콜린 (68.700 mg/g), 계면활성제로서 트윈 80 (8.500 mg/g), 콜라게닐 트윈 (0.5 mg/g), 포스페이트 (pH 7.5) 완충액, 항산화제로서 BHT (0.200 mg/g) 및 소듐 메타비설파이트 (0.500 mg/g), 항미생물제로서 벤질 알코올 또는 파라벤 (5.000 mg/g), 글리세롤 (30.000 mg/g), 킬레이트제로서 EDTA (1.000 mg/g), 및 에탄올 (36.51 mg/g)을 포함한다.
예시 14 그리고 이의 제작 및 검사
제제 14는 지질로서 포스파티딜 콜린 (68.700 mg/g), 계면활성제로서 트윈 80 (6.800mg/g), AOI로서 아스코르빌 팔미테이트 (0.530 mg/g), 시트레이트 포스페이트 (pH 5.4) 완충액, 항산화제로서 BHT (0.200 mg/g) 및 소듐 메타비설파이트 (0.500 mg/g), 킬레이트제로서 EDTA (1.000 mg/g), 및 에탄올 (48.87 mg/g)을 포함한다.
요약
20% 폴리소르베이트 80 몰 치환에서 공유 결합 아스코르브산을 함유하도록 성공적으로 트랜스퍼솜 제조물을 제작하였다. 검사 결과는 트랜스퍼솜의 크기 분포, 변형성 특징 및 전하가 아스코르브산의 포함에 영향을 받지 않았다는 점, L-아스코르빌 팔미테이트 에스테르가 트랜스퍼솜의 외부 표면 상에서 카르복실에스테라아제 효소에 접근가능하였다는 점, 아스코르빌 팔미테이트 트랜스퍼솜이 Fe3 + 환원 어세이에서 활성이었다는 점 그리고 그들은 그들의 평균 크기보다 더 작은 구멍을 통과하도록 변형된 후에도 그들의 환원 활성을 보유하였다는 점을 보여주었다.
제작
대두 포스파티딜콜린 (Lipoid SPC S-100) 및 폴리소르베이트 80을 이용하여 L-아스코르빌 팔미테이트 (Sigma 7618)을 함유한, 트랜스퍼솜을 제조하였다. 대조 배치(batch)의 트랜스퍼솜도 또한 만들었다. 부틸 하이드록시톨루엔, EDTA 및 소듐 메타비설파이트를 트랜스퍼솜에 첨가하여 L-아스코르빌 팔미테이트의 산화를 최소화시켰다.
L-아스코르빌 팔미테이트 트랜스퍼솜의 제조
13.3:0.8:0.2의 대두 포스파티딜콜린: 폴리소르베이트 80: L-아스코르빌 팔미테이트 몰비로 50g의 배치의 L-아스코르빌 팔미테이트 트랜스퍼솜을 제조하였다.
약한 열과 교반을 이용하여, 대두 포스파티딜콜린 (3.44g), 폴리소르베이트 80 (0.34g), 부틸하이드록시톨루엔 (0.01g) 및 L-아스코르빌 팔미테이트 (0.0265g)를 에탄올에서 용해시켜 6.26g의 전체 무게를 제공하였다.
대두 포스파티딜콜린 제조물을 넓은 게이지 바늘이 장착된 주사기로 첨가하면서 0.1% EDTA 및 0.05% 소듐 메타비설파이트, (43.74g)와 함께, 25mM 시트레이트 포스페이트 완충액 pH5.4를 35℃에서 격렬하게 교반하였다. 대략 15분 동안 혼합물을 교반하였다.
4 bar 압력에서 질소와 함께 35℃에서 Sartorius 47mm 여과 시스템을 이용하여 0.2μm 여과기, 그 다음 0.1μm 여과기 그리고 추가로 0.1μm 여과기를 통한 압출로 트랜스퍼솜을 제조하였다. 각각의 여과기는 상부에 유리 섬유 전치-여과기(pre-filter)를 가졌다. +5℃의 어두운 곳에서 트랜스퍼솜을 저장하였다.
대조 트랜스퍼솜의 제조
13.3:1의 대두 포스파티딜콜린: 폴리소르베이트 80 몰비로 50g 배치의 대조 트랜스퍼솜을 제조하였다.
약한 열과 교반을 이용하여, 대두 포스파티딜콜린 (3.44g), 폴리소르베이트 80 (0.425g) 및 부틸하이드록시톨루엔 (0.01g)을 에탄올에서 용해시켜 6.26g의 전체 무게를 제공하였다.
대두 포스파티딜콜린 제조물을 넓은 게이지 바늘이 장착된 주사기로 첨가하면서 0.1% EDTA 및 0.05% 소듐 메타비설파이트, (43.74g)와 함께, 25mM 시트레이트 포스페이트 완충액 pH5.4를 35℃에서 격렬하게 교반하였다. 대략 15분 동안 혼합물을 교반하였다.
L-아스코르빌 팔미테이트 트랜스퍼솜 배치 PD-14-0035에 대해 설명된 바와 같이 대조 트랜스퍼솜을 압출시켰다. +5℃의 어두운 곳에서 트랜스퍼솜을 저장하였다.
분석 방법
입자 크기 측정
트랜스퍼솜 제조물에 대한 평균 입자 크키 및 입자 크기 분포를 광자 상관 분광계를 이용한 동적 광 산란으로 결정하였다. 간섭 광이 입자의 현탁액을 통과할 때, 빛은 모든 방향으로 산란된다. 입자 현탁액의 산란된 빛 강도의 측정 및 상관관계로써, 현탁액내 입자의 크기과 크기 분포를 결정하는 것이 가능하다.
ALV-5000/E 광자 상관 분광계를 이용하여 각각의 샘플에 대한 평균 입자 크기 및 입자 크기 분포를 결정하였다. 탈-이온수에서 샘플을 희석시켜 50-500 kHz의 범위 내에 있는 검출가능한 신호를 제공하고, 이후 6번의 측정에 걸쳐, 각각 30초 동안, 분석하였다. 온도를 25℃에서 제어하였다. 데이터를 정규화 적합 누적 이차 분석하여 샘플에 대한 평균 입자 크기 (r 또는 평균 반지름으로서 보고됨) 그리고 입자 크기 분포 (w 또는 너비로서 보고됨)를 산출하였다. 평균 반지름에 2를 곱하여 평균 지름 (nm)을 산출하였다.
다음 식에 따라 각각의 샘플에 대한 다분산 지수 (PDI)를 계산하였다:
Figure pct00005
여기서: w = 너비 그리고 r = 평균 반지름.
연속막 순응성 어세이
연속막 순응성 (CMA) 어세이는 트랜스퍼솜에 활성 에너지를 제공하기 위해 적용된 압력을 이용하여 트랜스퍼솜을 변형될 수 있게 하여 트랜스퍼솜의 평균 크기보다 더 작은 여과 구멍을 통과할 수 있게 하였다.
여과 장치의 기부의 여과 지지체 상에 아노디스크(Anodisc) 13 막 여과기 (구멍 크기 20nm)를 고정시켰고 상부 스테인리스강 배럴을 부착하였다. 25℃에서 미리 평형시킨 3ml 트랜스퍼솜 샘플을 배럴에 두었고 이를 열순환기 (25℃)에 연결된 열 전달 튜브로 둘러쌌다. 배럴을 질소 실린더에 연결된 압력 튜브에 연결시켰다. 일련의 밸브를 이용하여, 9.5bar 압력의 설정치로 시스템을 준비시켜 7.5bar 시작 압력을 제공하였다. 엑셀(Excel) 컴퓨터 프로그램에 연결된 정밀 무게 저울 상에 위치한 수집관 위에 여과 장치를 배치하였다. 압력을 제어하고 모니터링하는 데에 브롱쿠르스트(Bronkhurst) 압력 제어기를 이용하였고 그리고 시스템 벨브가 열리고 시간 측정(timing)이 시작되었을 때, 압력은 감소하고 시간은 증가하는 것에 대비하여 저울에 수집되는 트랜스퍼솜 여과물의 증가하는 질량을 기록하였다.
매쓰캐드(MathCAD) 프로그램에서 시간, 압력, 질량 데이터를 평가하여 P* 값을 결정하였다. P*는 구멍 침투를 위해 요구되는 활성화 압력의 척도이고 이에 따라 트랜스퍼솜 막 강성 및 변형성의 척도이다. CMA 여과 전후에 광자 상관 분광계로 트랜스퍼솜의 평균 입자 크기를 측정하였다.
아스코르브산 어세이
아스코르브산 어세이 키트 (Abcam ab65656)를 이용하여 아스코르빌 팔미테이트 및 아스코르브산 농도를 측정하였다. 이 어세이에서, Fe3 +은 아스코르브산과 같은 항산화제의 존재에서 Fe2 +로 환원된다. Fe2 +는 비색 프로브(colorimetric probe)로 킬레이트화되어 593nm에서 흡광도를 갖는 산물을 생산한다.
전체 아스코르빌 팔미테이트 농도를 결정하기 위하여, 트랜스퍼솜을 에탄올 및 5% 트리톤 X-100으로 1:7:2 v/v 희석하여 용해시켰다. 0.0125 내지 0.25mM의 농도 범위까지 에탄올에서의 초기 희석으로 아스코르빌 팔미테이트 표준 곡선을 준비하였고, 이후 0.01 내지 0.175mM의 농도 범위까지 물 및 5% 트리톤 X-100에서 7:1:2로 추가 희석하였다. 0mM 아스코르빌 팔미테이트 블랭크(blank)를 포함시켰다. 표준물 및 샘플을 미량역가 플레이트(microtitre plate) 상에 로딩하였고 키트 완충액, Fe3 + 및 비색 프로브를 함유한 반응 혼합물과 1:1 v/v 혼합하였다. 실온에서 1분 인큐베이션 후, 플레이트를 593nm에서 판독하였다. 0mM 아스코르빌 팔미테이트 블랭크를 모든 표준물 및 샘플로부터 공제하였고 대조 '빈' 트랜스퍼솜에 대한 흡광도를 아스코르빌 팔미테이트 트랜스퍼솜의 흡광도로부터 공제하였다. 최종 흡광도를 아스코르빌 팔미테이트 표준 곡선과 비교하여 전체 아스코르빌 팔미테이트 (아스코르브산) 농도 (mM)를 얻었다.
외부 아스코르브산 농도를 결정하기 위하여, 0.025 내지 0.2mM의 농도 범위까지 물에서 아스코르브산을 희석시킴으로써 아스코르브산 표준 곡선을 준비하였다. 표준물 및 트랜스퍼솜 샘플을 미량역가 플레이트 상에 로딩하였고 키트 완충액, Fe3+ 및 비색 프로브를 함유한 반응 혼합물과 1:1 v/v 혼합하였다. 실온에서 1분 인큐베이션 후, 플레이트를 593nm에서 판독하였다. 플레이트 블랭크를 모든 표준물 및 샘플로부터 공제하였고 대조 '빈' 트랜스퍼솜에 대한 흡광도를 아스코르빌 팔미테이트 트랜스퍼솜의 흡광도로부터 공제하였다. 최종 흡광도를 아스코르브산 표준 곡선과 비교하여 아스코르브산 농도를 얻었다. 농도를 전체 아스코르빌 팔미테이트 (아스코르브산) 농도와 비교하여 아스코르빌 팔미테이트 트랜스퍼솜의 외부 표면 상에 결속된 아스코르브산 %를 계산하였다.
카르복실에스테라아제 분해 및 RP-HPLC
아스코르빌 팔미테이트를 함유한 트랜스퍼솜으로부터 아스코르브산의 방출은 카르복실에스테라아제 1 동형 B (Sigma E0287)를 이용한 에스테르의 효소 분해에 의해 수행되었다. +37℃에서의 인큐베이션 전에, 트랜스퍼솜의 ml 당 960 단위의 효소를 첨가하였다. 샘플을 2시간 및 4시간에 채취하였고 1 부피의 아세토니트릴/메탄올/포름산 (80v/20v/0.2v)을 첨가하고 그 다음 5분 동안 초음파처리하고 그리고 원심분리함으로써 방출된 아스코르브산을 추출하여 불용성 성분을 작은 알갱이로 만들었다. 이후, 초고 순도수(ultra-high purity water)로 10분의 1로 희석하기 전에 상청액 샘플을 0.2 μm 막을 통해 여과시켰다.
+25℃에서 루나(Luna) C18(2) 100A 5 μm 4.6x250mm 칼럼 및 워터스(Waters) 2695 분리 모듈을 이용한 역상 고압 액체 크로마토그래피 (RP-HPLC) 방법 그리고 아래 표에 따른 구배법으로 샘플을 어세이하였고, 이때 용리액 A는 20mM 포타슘 포스페이트 pH3.0이고 용리액 B는 아세토니트릴이었다. Waters 2487 검출기를 이용하여 260nm의 파장에서 검출을 수행하였다.
Figure pct00006
추가로, 0.4 내지 100μg/ml의 범위에서 아스코르브산의 표준 곡선을 동일한 RP-HPLC 방법을 이용하여 분석하였다. 아스코르브산 피크(peak)를 샘플 및 표준물에 대한 결과적 크로마토그램에서 통합시켰다. 표준물의 피크 면적을 선형 회귀로 분석하여 표준 곡선에 대한 식을 만들었다. 이후, 추출 방법으로부터 희석을 고려하여 표준 곡선에 대한 식으로부터 아스코르브산 농도를 결정하는 데에 샘플에 대한 피크 면적을 이용하였다. 농도를 전체 아스코르브산 농도와 비교하여 아스코르빌 팔미테이트 트랜스퍼솜의 외부 표면으로부터 방출된 아스코르브산 %를 계산하였다.
종이 전기영동
종이 전기영동을 이용하여 트랜스퍼솜 제조물의 전하 특징을 조사하였고 이때 종이 스트립(paper strip)은 완충액으로 채워진 두 가지 저장기 사이에서 현탁하였고, 검사 샘플을 종이 스트립에 적용시켰고 그리고 종이 스트립에 걸쳐 전류를 적용시켰다. 하전된 입자는 종이 스트립을 가로질러 이동하였고, 여기서 이동되는 방향과 거리는 완충액 pH에서 입자의 순전하(net charge)에 의해 결정된다.
개별적인 2 x 20cm 왔스만(Whatman) 여과 스트립 (pH5.75에서 러닝 완충액(running buffer); 2.3mg/ml 소듐 클로라이드, 1.5mg/ml 칼슘 클로라이드, 1.3mg/ml 글리실 글리신, 25mg/ml 만니톨, 10mg/ml 수크로오스 및 0.5mg/ml 메티오닌에서 미리 적셔둠)의 중앙에 각각의 검사 샘플의 부피 (100μl)를 적용시켰고 그리고 2시간 동안 130V에서 러닝시켰다. 각각의 스트립을 5% w/v 바륨 클로라이드 및 0.05M 아이오딘으로 PEG (폴리소르베이트 80의 성분) 염색시키고 이후 건조시켰다. 각각의 샘플에 대한 중심점에서 벗어나는 트랜스퍼솜의 이동 정도를 스트립의 양극측 및 음극측 모두에 대해 측정하여 소포 순전하를 결정하였다.
결과 및 논의
결과는 표 4에서 요약된다. 아스코르빌 팔미테이트 트랜스퍼솜의 샘플을 0.2μm 멸균 여과시켰고 정보를 위해 샘플의 통합을 재확인하기 위하여 여과 후 재검사하였다.
Figure pct00007
입자 크기 측정
평균 입자 지름 및 다분산 지수는 대조 트랜스퍼솜 그리고 아스코르빌 팔미테이트 함유한 트랜스퍼솜과 유사하였다. 이것은 트랜스퍼솜에서 에스테르로 폴리소르베이트 80의 20% 치환이 크기 특징에 영향을 미치지 않았다는 점을 나타내었다. 0.2 μm 멸균 여과 후 크기에서 유의적인 변화는 없었다.
연속막 순응성 어세이
변형성 P* 값은 아스코르빌 팔미테이트를 함유한 트랜스퍼솜 및 대조 트랜스퍼솜과 사실상 동일하였고, 이는 에스테르로 폴리소르베이트 80의 20% 치환이 트랜스퍼솜의 변형성 특성에 유의적으로 영향을 미치지 않았다는 점을 나타낸다. 여과 회수 %는 대조 트랜스퍼솜보다 약간 더 높았으며 이는 아스코르빌 팔미테이트의 포함이 소포막 상에 아주 약간의 강성 효과를 준다는 점을 나타낼 수 있었다.
CMA 여과-후 평균 입자 지름은 대조 트랜스퍼솜 및 아스코르빌 팔미테이트 에스테르를 함유한 트랜스퍼솜 모두에 대해 여과-전과 비교하여 거의 50%만큼 감소되었다. 다분산 지수는 약간 더 높았으며, 이는 더 광범위한 크기 분포를 나타낸다. 이들 특징은 트랜스퍼솜 소포체에 대해 예상된 바와 같다.
아스코르브산 어세이
아스코르빌 팔미테이트 트랜스퍼솜내 전체 아스코르빌 팔미테이트 농도는 0.61mM로서 결정되었다. 이것은 253μg/ml 아스코르빌 팔미테이트 또는 107μg/ml 아스코르브산에 해당한다. 농도는 제조 공정의 시작에서의 농도의 대략 50%였고, 이는 아마도 여과 및 아스코르브산 산화의 조합을 통하여, 손실이 발생했을 것이라는 점을 나타낸다. 하지만, 결과는 Fe3 +을 환원시킬 수 있는 활성 아스코르브산이 최종 트랜스퍼솜 제조물에 존재하였다는 점을 보여주었다.
아스코르빌 팔미테이트 트랜스퍼솜의 외부 표면 상에서 반응된 아스코르브산의 농도는 0.13mM으로서 결정되었다. 이것은 외부에 결속되는 전체 아스코르브산 농도의 21% 또는 23μg/ml에 해당한다.
0.2μm 멸균 여과 후 전체 또는 외부 아스코르브산 농도에서 유의적인 변화는 없었다.
연속막 순응성 (CMA) 어세이를 하였던 트랜스퍼솜의 전체 아스코르빌 팔미테이트 농도는 CMA-전보다 약간 더 높았다. 외부 아스코르브산 농도는 CMA-전/후와 사실상 동일하였다. 이것은 트랜스퍼솜의 평균 지름보다 더 작은 구멍 크기를 통과하도록 변형된 트랜스퍼솜이 그들의 어떠한 환원 활성도 상실하지 않았다는 점을 보여주었다.
카르복실에스테라아제 분해 및 RP-HPLC
아스코르빌 팔미테이트 에스테르를 함유한 트랜스퍼솜과 카르복실에스테라아제 1 효소의 인큐베이션은 37℃에서 2시간의 인큐베이션 후 전체 아스코르브산의 15% (16μg/ml)의 방출을 그리고 37℃에서 4시간 후 36% (38μg/ml)의 방출을 야기하였다. 이에 따라 트랜스퍼솜의 외부 표면에 결속된 아스코르브산은 효소에 접근가능하였다. 외부 아스코르브산에 대해 얻은 농도는 아스코르브산 어세이에서 얻은 농도와 유사하였다.
CMA 변형성 여과 어세이를 하였던 트랜스퍼솜도 또한 카르복실에스테라아제 1 효소와 인큐베이션하였고 이는 37℃에서 2시간의 인큐베이션 후 전체 아스코르브산의 9% (13μg/ml)의 방출을 그리고 37℃에서 4시간 후 19% (26μg/ml)의 방출을 야기하였다. 왜 방출 백분율이 CMA 후에 더 낮았는지에 대해 불명확하지만, 아마도 소포 크기에서의 변화가 효소에 대한 아스코르빌 팔미테이트의 접근성을 감소시켰을 것이다.
종이 전기영동
대조 트랜스퍼솜 및 아스코르빌 팔미테이트를 함유한 트랜스퍼솜은 둘 다, 전기영동 장치의 음극 쪽으로 이동하였고, 이는 순 양전하를 입증한다. 이에 따라 아스코르빌 팔미테이트의 존재는 트랜스퍼솜의 전하 특징을 변경시키지 않았다.
예시 제제 15 그리고 이의 제작 및 검사
제제 15는 지질로서 포스파티딜 콜린 (68.700 mg/g), 계면활성제로서 트윈 80 (7.66mg/g), AOI로서 팔미토일 트리펩티드 1 (0.370 mg/g), 포스페이트 (pH 7.7) 완충액 및 에탄올 (48.10 mg/g), 또는 지질로서 포스파티딜 콜린 (68.700 mg/g), 계면활성제로서 트윈 80 (7.66mg/g), AOI로서 팔미토일 트리펩티드 7 (0.450 mg/g), 포스페이트 (pH 7.7) 완충액 및 에탄올 (48.40 mg/g)을 포함한다.
요약
10% 폴리소르베이트 80 몰 치환에서; 공유 결합 펩티드; 테트라펩티드-7 및 트리펩티드-1을 함유하도록 트랜스퍼솜 제조물을 성공적으로 제작하였다. 검사 결과는 트랜스퍼솜의 크기 분포, 변형성 특징 및 전하가 펩티드의 포함에 영향을 받지 않았다는 점을 보여주었다.
제작
대두 포스파티딜콜린 (Lipoid SPC S-100) 및 폴리소르베이트 80을 이용하여 팔미토일 테트라펩티드-7 (PAL-GQPR) 또는 팔미토일 트리펩티드-1 (PAL-GHK) (Sinoway Industrial Co. Ltd) 중 하나를 함유한 트랜스퍼솜을 제조하였다. 대조 배치의 트랜스퍼솜도 또한 만들었다.
팔미토일 펩티드 트랜스퍼솜의 제조
13.3:0.9:0.1의 대두 포스파티딜콜린: 폴리소르베이트 80: 팔미토일 펩티드 몰비로 50g의 배치의 팔미토일 테트라펩티드-7 트랜스퍼솜 및 50g의 배치의 팔미토일 트리펩티드-1 트랜스퍼솜을 제조하였다.
약한 열과 교반을 이용하여, 대두 포스파티딜콜린 (3.44g), 폴리소르베이트 80 (0.383g) 그리고 팔미토일 테트라펩티드-7 (0.0224g) 또는 팔미토일 트리펩티드-1 (0.0186g) 중 하나를 에탄올에서 용해시켜 6.26g의 전체 무게를 제공하였다.
대두 포스파티딜콜린 제조물을 넓은 게이지 바늘이 장착된 주사기로 첨가하면서 포스페이트 완충액, pH7.7 (43.74g)을 35℃에서 격렬하게 교반하였다. 대략 15분 동안 혼합물을 교반하였다.
4 bar 압력에서 질소와 함께 35℃에서 Sartorius 47mm 여과 시스템을 이용하여 0.2μm 여과기, 그 다음 0.1μm 여과기 그리고 추가로 0.1μm 여과기를 통한 압출로 트랜스퍼솜을 제조하였다. 각각의 여과기는 상부에 유리 섬유 전치-여과기를 가졌다. +5℃의 어두운 곳에서 트랜스퍼솜을 저장하였다.
대조 트랜스퍼솜의 제조
13.3:1의 대두 포스파티딜콜린: 폴리소르베이트 80 몰비로 50g 배치의 대조 트랜스퍼솜을 제조하였다.
약한 열과 교반을 이용하여, 대두 포스파티딜콜린 (3.44g) 및 폴리소르베이트 80 (0.425g)을 에탄올에서 용해시켜 6.26g의 전체 무게를 제공하였다.
대두 포스파티딜콜린 제조물을 넓은 게이지 바늘이 장착된 주사기로 첨가하면서 포스페이트 완충액, pH7.7 (43.74g)을 35℃에서 격렬하게 교반하였다. 대략 15분 동안 혼합물을 교반하였다.
팔미토일 펩티드 트랜스퍼솜 배치에 대해 설명된 바와 같이 대조 트랜스퍼솜을 압출시켰다. +5℃의 어두운 곳에서 트랜스퍼솜을 저장하였다.
분석 방법
입자 크기 측정
트랜스퍼솜 제조물에 대한 평균 입자 크키 및 입자 크기 분포를 광자 상관 분광계를 이용한 동적 광 산란으로 결정하였다. 간섭 광이 입자의 현탁액을 통과할 때, 빛은 모든 방향으로 산란된다. 입자 현탁액의 산란된 빛 강도의 측정 및 상관관계로써, 현탁액내 입자의 크기과 크기 분포를 결정하는 것이 가능하다.
ALV-5000/E 광자 상관 분광계를 이용하여 각각의 샘플에 대한 평균 입자 크기 및 입자 크기 분포를 결정하였다. 탈-이온수에서 샘플을 희석시켜 50-500 kHz의 범위 내에 있는 검출가능한 신호를 제공하고, 이후 6번의 측정에 걸쳐, 각각 30초 동안, 분석하였다. 온도를 25℃에서 제어하였다. 데이터를 정규화 적합 누적 이차 분석하여 샘플에 대한 평균 입자 크기 (r 또는 평균 반지름으로서 보고됨) 그리고 입자 크기 분포 (w 또는 너비로서 보고됨)를 산출하였다. 평균 반지름에 2를 곱하여 평균 지름 (nm)을 산출하였다.
다음 식에 따라 각각의 샘플에 대한 다분산 지수 (PDI)를 계산하였다:
Figure pct00008
여기서: w = 너비 그리고 r = 평균 반지름.
연속막 순응성 어세이
연속막 순응성 (CMA) 어세이는 트랜스퍼솜에 활성 에너지를 제공하기 위해 적용된 압력을 이용하여 트랜스퍼솜을 변형될 수 있게 하여 트랜스퍼솜의 평균 크기보다 더 작은 여과 구멍을 통과할 수 있게 하였다.
여과 장치의 기부의 여과 지지체 상에 Anodisc 13 막 여과기 (구멍 크기 20nm)를 고정시켰고 상부 스테인리스강 배럴을 부착하였다. 25℃에서 미리 평형시킨 3ml 트랜스퍼솜 샘플을 배럴에 두었고 이를 열순환기 (25℃)에 연결된 열 전달 튜브로 둘러쌌다. 배럴을 질소 실린더에 연결된 압력 튜브에 연결시켰다. 일련의 밸브를 이용하여, 9.5bar 압력의 설정치로 시스템을 준비시켜 7.5bar 시작 압력을 제공하였다. 엑셀 컴퓨터 프로그램에 연결된 정밀 무게 저울 상에 위치한 수집관 위에 여과 장치를 배치하였다. 압력을 제어하고 모니터링하는 데에 Bronkhurst 압력 제어기를 이용하였고 그리고 시스템 벨브가 열리고 시간 측정이 시작되었을 때, 압력은 감소하고 시간은 증가하는 것에 대비하여 저울에 수집되는 트랜스퍼솜 여과물의 증가하는 질량을 기록하였다.
MathCAD 프로그램에서 시간, 압력, 질량 데이터를 평가하여 P* 값을 결정하였다. P*는 구멍 침투를 위해 요구되는 활성화 압력의 척도이고 이에 따라 트랜스퍼솜 막 강성의 척도이다. CMA 여과 전후에 광자 상관 분광계로 트랜스퍼솜의 평균 입자 크기를 측정하였다.
펩티드 농도 (CBQCA) 어세이
형광 산물을 수득하기 위해 시약 3-(4-카르복시벤조일)퀴놀론-2-카르복스알데하이드 (CBQCA)를 이용한 리신 아미노산의 일차 아민기의 유도체화로 아미노산 서열 글리신-히스티딘-리신을 가진 팔미토일 트리펩티드-1의 펩티드 부분의 농도를 측정하였다.
팔미토일 트립펩티드-1 트랜스퍼솜 및 대조 트랜스퍼솜의 샘플을 0.1mM 소듐 보레이트 완충액 pH 9.3에서 400분의 1 내지 3200분의 1의 범위로 희석시켰다. 이 어세이에 적합한 수성 조건에서 팔미토일 트립펩티드 1을 용해시키는 것이 가능하지 않았기 때문에; 트랜스퍼솜내 트리펩티드 1의 농도 결정은 소 혈청 알부민 (BSA) 표준 곡선과 대비하여 이루어졌다. 공지된 농도의 BSA를 제조하여 6.7μg/ml 내지 0.33mg/m의 범위를 수득하였다. 1시간 동안 포타슘 시아나이드의 존재에서 CBQCA 시약으로 실온의 마이크로-플레이트 형식에서 표준물 및 샘플의 일차 아민의 유도체화를 수행하였다. 여기(excitation) 파장 485nm 및 형광 방사 파장 520nm으로 BMG Fluostar Optima 형광 광도계를 이용하여 판독함으로써 측정을 수행하였다.
0.1mM 소듐 보레이트 완충액 pH 9.3의 블랭크 샘플의 형광 판독을 모든 데이터에서 공제하였다. BSA 표준물로부터 결과적인 형광 측정을 선형 회귀로 분석하여 표준 곡선에 대한 식을 만들었다. 이후 등가 희석에서 대조 트랜스퍼솜의 형광의 공제 후, BSA 곡선에 비례하는 팔미토일 트립펩티드-1 트랜스퍼솜내 펩티드의 양을 결정하였다.
종이 전기영동
종이 전기영동을 이용하여 트랜스퍼솜 제조물의 전하 특징을 조사하였고 이때 종이 스트립은 완충액으로 채워진 두 가지 저장기 사이에서 현탁하였고, 검사 샘플을 종이 스트립에 적용시켰고 그리고 종이 스트립에 걸쳐 전류를 적용시켰다. 하전된 입자는 종이 스트립을 가로질러 이동하였고, 여기서 이동되는 방향과 거리는 완충액 pH에서 입자의 순전하(net charge)에 의해 결정된다.
개별적인 2 x 20cm Whatman 여과 스트립 (pH5.75에서 러닝 완충액; 2.3mg/ml 소듐 클로라이드, 1.5mg/ml 칼슘 클로라이드, 1.3mg/ml 글리실 글리신, 25mg/ml 만니톨, 10mg/ml 수크로오스 및 0.5mg/ml 메티오닌에서 미리 적셔둠)의 중앙에 각각의 검사 샘플의 부피 (100μl)를 적용시켰고 그리고 2시간 동안 130V에서 러닝시켰다. 각각의 스트립을 5% w/v 바륨 클로라이드 및 0.05M 아이오딘으로 PEG (폴리소르베이트 80의 성분) 염색시키고 이후 건조시켰다. 각각의 샘플에 대한 중심점에서 벗어나는 트랜스퍼솜의 이동 정도를 스트립의 양극측 및 음극측 모두에 대해 측정하여 소포 순전하를 결정하였다.
결과 및 논의
결과는 표 5에서 요약된다.
Figure pct00009
입자 크기 측정
평균 입자 지름 및 다분산 지수는 대조 트랜스퍼솜 그리고 팔미토일 펩티드를 함유한 트랜스퍼솜과 유사하였다. 이것은 트랜스퍼솜에서 팔미토일 펩티드로 폴리소르베이트 80의 10% 치환이 크기 특징에 영향을 미치지 않았다는 점을 나타내었다.
연속막 순응성 어세이
변형성 P* 값은 대조 트랜스퍼솜 및 팔미토일 펩티드를 함유한 트랜스퍼솜과 유사하였다. 팔미토일 테트라펩티드 7 트랜스퍼솜에 대한 값은 약간 더 낮았으며, 이는 에스테르로 폴리소르베이트 80의 10% 치환이 막에 약간의 연화 효과(softening effect)를 주어 소포체를 더욱 변형시킬 수도 있다는 점을 나타낸다. 하지만, 이것은 대조와 비교하여 팔미토일 펩티드 트랜스퍼솜과 유사한 여과 회수 %에서 입증되지 않았으며, 그러므로 더 낮은 P*는 아마도 유의적이지 않을 것이다.
CMA 여과-후 평균 입자 지름은 대조 트랜스퍼솜 및 팔미토일 펩티드를 함유한 트랜스퍼솜 모두에 대해 여과-전과 비교하여 거의 50%만큼 감소되었다. 다분산 지수는 약간 더 높았으며, 이는 더 광범위한 크기 분포를 나타낸다. 이들 특징은 트랜스퍼솜 소포체에 대해 예상된 바와 같다.
펩티드 농도 (CBQCA) 어세이
팔미토일 테트라펩티드 7 트랜스퍼솜은 시약과 반응하기 위한 서열에서 리신 잔기의 결핍으로 인해 CBQCA 어세이에서의 결과를 산출하지 않았다. 하지만, 팔미토일 트립펩티드 1은 이것이 리신을 함유하므로 검출가능하였다. 어세이에 적합한 수성 용액에서 팔미토일 트립펩티드 1을 용해시키는 것이 가능하지 않았기 때문에; 트랜스퍼솜내 트리펩티드 1의 농도 결정은 소 혈청 알부민 (BSA) 표준과 대비하여 이루어졌다. BSA는 58개의 리신 잔기를 가진 66kDa 단백질이다; 1138Da의 펩티드 당 ~1. 펩티드는 340Da에서 1개의 리신을 함유한다. 펩티드가 검출되었고 BSA와 펩티드 간의 리신 농도의 차이에 대해 교정함으로써 양을 정량화하려는 시도가 이루어졌지만, 전체 펩티드는 여전히 과대평가되는 것으로 나타났다; 이론적인 221μg/ml와 비교하여 424μg/ml.
종이 전기영동
대조 트랜스퍼솜 및 팔미토일 펩티드를 함유한 트랜스퍼솜은 모두, 전기영동 장치의 음극 쪽으로 이동하였고, 이는 순 양전하를 입증한다. 이에 따라 팔미토일 테트라펩티드 7 또는 팔미토일 트립펩티드 1의 존재는 트랜스퍼솜의 전하 특징을 변경시키지 않았다.
예시 제제 16 그리고 이의 제작 및 검사
제제 16은 지질로서 포스파티딜 콜린 (68.700 mg/g), 계면활성제로서 트윈 80 (6.55mg/g), AOI로서 나프록센-폴리소르베이트 (2.195 mg/g), 포스페이트 (pH 7.7) 완충액 및 에탄올 (47.56 mg/g), 또는 지질로서 포스파티딜 콜린 (68.700 mg/g), 계면활성제로서 트윈 80 (5.80mg/g), AOI로서 디클로페낙-폴리소르베이트 (2.96 mg/g), 포스페이트 (pH 7.7) 완충액 및 에탄올 (47.54 mg/g)을 포함한다.
요약
20% 폴리소르베이트 80 몰 치환에서; 공유 결합된, 비-스테로이드성 항-염증 약물 (NSAID); 나프록센 및 디클로페낙을 함유하도록 트랜스퍼솜 제조물을 성공적으로 제작하였다. 검사 결과는 트랜스퍼솜의 크기 분포, 변형성 특징 및 전하가 NSAID의 포함에 영향을 받지 않았다는 점, NASID 에스테르가 트랜스퍼솜의 외부 표면 상에서 카르복실에스테라아제 효소에 접근가능하였다는 점 그리고 NSAID 트랜스퍼솜이 COX-1 효소 저해 어세이에서 대조 트랜스퍼솜 단독보다 더 큰 저해 효과를 보유하였다는 점을 보여주었다. NSAID 트랜스퍼솜은 그들의 평균 크기보다 더 작은 구멍을 통과하도록 변형된 후에도 그들의 저해 활성을 보유하였다.
제작
대두 포스파티딜콜린 (Lipoid SPC S-100) 및 폴리소르베이트 80을 이용하여 나프록센-폴리소르베이트 80 에스테르 (Key Organics DK-0035-3) 또는 디클로페낙-폴리소르베이트 80 에스테르 (Key Organics DK-0036-3) 중 하나를 함유한, 트랜스퍼솜을 제조하였다. 대조 배치의 트랜스퍼솜도 또한 만들었다.
NSAID 트랜스퍼솜의 제조
13.3:0.8:0.2 (NSAID-폴리소르베이트 80 에스테르의 순도를 차지함)의 대두 포스파티딜콜린: 폴리소르베이트 80: NSAID-폴리소르베이트 80 몰비로 20g 배치의 나프록센-폴리소르베이트 트랜스퍼솜 및 20g 배치의 디클로페낙-폴리소르베이트 트랜스퍼솜을 제조하였다.
약한 열과 교반을 이용하여, 폴리소르베이트 80 (0.131g) 및 나프록센-폴리소르베이트 (0.0439g) 또는 폴리소르베이트 80 (0.116g) 및 디클로페낙-폴리소르베이트 (0.0592g) 중 하나와 대두 포스파티딜콜린 (1.374g)을 에탄올에서 용해시켜 2.50g의 전체 무게를 제공하였다.
대두 포스파티딜콜린 제조물을 넓은 게이지 바늘이 장착된 주사기로 첨가하면서 포스페이트 완충액, pH7.7 (17.50g)을 35℃에서 격렬하게 교반하였다. 대략 15분 동안 혼합물을 교반하였다.
4 bar 압력에서 질소와 함께 35℃에서 Sartorius 47mm 여과 시스템을 이용하여 0.2μm 여과기, 그 다음 0.1μm 여과기 그리고 추가로 0.1μm 여과기를 통한 압출로 트랜스퍼솜을 제조하였다. 각각의 여과기는 상부에 유리 섬유 전치-여과기를 가졌다. +5℃의 어두운 곳에서 트랜스퍼솜을 저장하였다.
대조 트랜스퍼솜의 제조
13.3:1의 대두 포스파티딜콜린: 폴리소르베이트 80 몰비로 50g 배치의 대조 트랜스퍼솜을 제조하였다.
약한 열과 교반을 이용하여, 대두 포스파티딜콜린 (3.44g) 및 폴리소르베이트 80 (0.425g)을 에탄올에서 용해시켜 6.26g의 전체 무게를 제공하였다.
대두 포스파티딜콜린 제조물을 넓은 게이지 바늘이 장착된 주사기로 첨가하면서 포스페이트 완충액, pH7.7 (43.74g)을 35℃에서 격렬하게 교반하였다. 대략 15분 동안 혼합물을 교반하였다.
NSAID 트랜스퍼솜 배치에 대해 설명된 바와 같이 대조 트랜스퍼솜을 압출시켰다. +5℃의 어두운 곳에서 트랜스퍼솜을 저장하였다.
분석 방법
입자 크기 측정
트랜스퍼솜 제조물에 대한 평균 입자 크키 및 입자 크기 분포를 광자 상관 분광계를 이용한 동적 광 산란으로 결정하였다. 간섭 광이 입자의 현탁액을 통과할 때, 빛은 모든 방향으로 산란된다. 입자 현탁액의 산란된 빛 강도의 측정 및 상관관계로써, 현탁액내 입자의 크기과 크기 분포를 결정하는 것이 가능하다.
ALV-5000/E 광자 상관 분광계를 이용하여 각각의 샘플에 대한 평균 입자 크기 및 입자 크기 분포를 결정하였다. 탈-이온수에서 샘플을 희석시켜 50-500 kHz의 범위 내에 있는 검출가능한 신호를 제공하고, 이후 6번의 측정에 걸쳐, 각각 30초 동안, 분석하였다. 온도를 25℃에서 제어하였다. 데이터를 정규화 적합 누적 이차 분석하여 샘플에 대한 평균 입자 크기 (r 또는 평균 반지름으로서 보고됨) 그리고 입자 크기 분포 (w 또는 너비로서 보고됨)를 산출하였다. 평균 반지름에 2를 곱하여 평균 지름 (nm)을 산출하였다.
다음 식에 따라 각각의 샘플에 대한 다분산 지수 (PDI)를 계산하였다:
Figure pct00010
여기서: w = 너비 그리고 r = 평균 반지름.
연속막 순응성 어세이
연속막 순응성 (CMA) 어세이는 트랜스퍼솜에 활성 에너지를 제공하기 위해 적용된 압력을 이용하여 트랜스퍼솜을 변형될 수 있게 하여 트랜스퍼솜의 평균 크기보다 더 작은 여과 구멍을 통과할 수 있게 하였다.
여과 장치의 기부의 여과 지지체 상에 Anodisc 13 막 여과기 (구멍 크기 20nm)를 고정시켰고 상부 스테인리스강 배럴을 부착하였다. 25℃에서 미리 평형시킨 3ml 트랜스퍼솜 샘플을 배럴에 두었고 이를 열순환기 (25℃)에 연결된 열 전달 튜브로 둘러쌌다. 배럴을 질소 실린더에 연결된 압력 튜브에 연결시켰다. 일련의 밸브를 이용하여, 9.5bar 압력의 설정치로 시스템을 준비시켜 7.5bar 시작 압력을 제공하였다. 엑셀 컴퓨터 프로그램에 연결된 정밀 무게 저울 상에 위치한 수집관 위에 여과 장치를 배치하였다. 압력을 제어하고 모니터링하는 데에 Bronkhurst 압력 제어기를 이용하였고 그리고 시스템 벨브가 열리고 시간 측정이 시작되었을 때, 압력은 감소하고 시간은 증가하는 것에 대비하여 저울에 수집되는 트랜스퍼솜 여과물의 증가하는 질량을 기록하였다.
MathCAD 프로그램에서 시간, 압력, 질량 데이터를 평가하여 P* 값을 결정하였다. P*는 구멍 침투를 위해 요구되는 활성화 압력의 척도이고 이에 따라 트랜스퍼솜 막 강성 및 변형성의 척도이다. CMA 여과 전후에 광자 상관 분광계로 트랜스퍼솜의 평균 입자 크기를 측정하였다.
카르복실에스테라아제 분해 및 RP-HPLC
2개의 화합물 중 하나의 폴리소르베이트 80 에스테르를 함유한 트랜스퍼솜의 외부 표면으로부터; 결속된 비-스테로이드성 항-염증 약물 (NSAID); 디클로페낙 또는 나프록센의 방출은 카르복실에스테라아제 1 동형 B (Sigma E0287)를 이용한 에스테르의 효소 분해에 의해 수행되었다. +37℃에서의 인큐베이션 전에, 트랜스퍼솜의 ml당 960 단위의 효소를 첨가하였다. 샘플을 4시간에 채취하였고 1 부피의 아세토니트릴/메탄올/포름산 (80v/20v/0.2v)을 첨가하고 그 다음 5분 동안 초음파처리하고 그리고 원심분리함으로써 방출된 NSAID를 추출하여 불용성 성분을 작은 알갱이로 만들었다. 이후, 초고 순도수(ultra-high purity water)로 10분의 1로 희석하기 전에 상청액 샘플을 0.2 μm 막을 통해 여과시켰다.
+25℃에서 Kinetex C18 5μm 100A 4.6x150mm 칼럼 및 Waters 2695 분리 모듈을 이용한 역상 고압 액체 크로마토그래피 (RP-HPLC) 방법 그리고 아래 표에 따른 구배법으로 샘플을 어세이하였고, 이때 용리액 A는 초고 순도수내 0.1% 트리플루오로아세트산이고 용리액 B는 아세토니트릴내 0.1% 트리플루오로아세트산이었다. Waters 2487 검출기를 이용하여 254nm의 파장에서 두 가지 NSAID 모두에 대한 검출을 수행하였다.
Figure pct00011
추가로, 0.4 내지 91μg/ml의 범위에서 NSAID 각각의 표준 곡선을 동일한 RP-HPLC 방법을 이용하여 분석하였다. NSAID 피크(peak)를 샘플 및 표준물에 대한 결과적 크로마토그램에서 통합시켰다. 표준물의 피크 면적을 선형 회귀로 분석하여 표준 곡선에 대한 식을 만들었다. 이후, 추출 방법으로부터 희석을 고려하여 각각의 표준 곡선에 대한 식으로부터 방출된 NSAID 농도를 결정하는 데에 샘플에 대한 피크 면적을 이용하였다. 농도를 이론적인 전체 NSAID 농도와 비교하여 NSAID 트랜스퍼솜의 외부 표면으로부터 방출된 NSAID %를 계산하였다.
사이클로옥시게나아제-1 저해 어세이
사이클로옥시게나아제 1 (COX-1) 저해 어세이는 COX-1 효소의 활성을 저해하는 NSAID와 같은 약물의 능력을 측정한다. COX-1은 아라키돈산에서 프로스타글란딘 H2로의 전환을 촉매한다. 반응 동안에 효소는 산소를 소모한다. 산소 소모 속도 (nmol/ml/분)는 반응 속도의 척도이고 저해제의 존재에서 감소된다.
Oxygraph Plus 소프트웨어 연결된 보정된(calibrated) Clark 산소 전극으로 구성되는 Hansatech Oxygraph를 이용하여 COX 저해 어세이를 설치하였다. 안정한 산소 기준치를 얻을 때까지 37℃의 반응 챔버에서 0.1mM 포타슘 포스페이트 pH7.2, 2.0mM 페놀, 1μM 헤마틴을 함유한 반응 혼합물을 교반하였다. 340 유닛의 COX-1 효소 (Cayman Chemicals CAY60100)를 첨가하였고 그리고 아라키돈산 기질의 첨가 전 1분 동안 평형되도록 하였다. 최종 농도 8, 16, 32 및 64μM에서 아라키돈산을 이용하여 일련의 대조 반응을 수행하였다. 각각의 반응에 대하여, Oxygraph 산소 곡선 상에서 최대 반응 속도를 측정하였다.
트랜스퍼솜 샘플의 저해 효과를 결정하기 위하여; 반응에 아라키돈산 혼합물의 첨가에 앞서 실온에서 10분 동안 대조, 나프록센 또는 디클로페낙 트랜스퍼솜을 아라키돈산과 미리 혼합하였다. 반응에서 최종 아라키돈산 농도가 8, 16, 32 및 64μM가 되도록 농도를 선택하였다.
대조, 대조 트랜스퍼솜 및 NSAID 트랜스퍼솜 반응에 대한 반응 속도 (산소nmol/ml/분)에 대비하여 아라키돈산 농도를 플롯팅하였고 네 가지 기질 농도에서 반응 속도를 비교함으로써 그리고 속도 감소의 평균을 냄으로써 트랜스퍼솜에 의한 저해 %에 대해 값을 계산하였다. 라인위버-버크(Lineweaver-Burk) 역수 플롯 (1/반응 속도에 대비한 1/아라키돈산 농도)도 또한 플롯팅하였다.
활성 에너지를 제공하기 위해 적용된 압력을 이용하여 소포체를 변형될 수 있게 하여 소포의 평균 지름보다 더 작은 구멍을 통과할 수 있게 한 연속막 순응성 (CMA) 어세이에서 가공처리된 트랜스퍼솜의 샘플에서 COX-1 저해 어세이를 또한 수행하였다.
종이 전기영동
종이 전기영동을 이용하여 트랜스퍼솜 제조물의 전하 특징을 조사하였고 이때 종이 스트립은 완충액으로 채워진 두 가지 저장기 사이에서 현탁하였고, 검사 샘플을 종이 스트립에 적용시켰고 그리고 종이 스트립에 걸쳐 전류를 적용시켰다. 하전된 입자는 종이 스트립을 가로질러 이동하였고, 여기서 이동되는 방향과 거리는 완충액 pH에서 입자의 순전하에 의해 결정된다.
개별적인 2 x 20cm Whatman 여과 스트립 (pH5.75에서 러닝 완충액; 2.3mg/ml 소듐 클로라이드, 1.5mg/ml 칼슘 클로라이드, 1.3mg/ml 글리실 글리신, 25mg/ml 만니톨, 10mg/ml 수크로오스 및 0.5mg/ml 메티오닌에서 미리 적셔둠)의 중앙에 각각의 검사 샘플의 부피 (100μl)를 적용시켰고 그리고 2시간 동안 130V에서 러닝시켰다. 각각의 스트립을 5% w/v 바륨 클로라이드 및 0.05M 아이오딘으로 PEG (폴리소르베이트 80의 성분) 염색시키고 이후 건조시켰다. 각각의 샘플에 대한 중심점에서 벗어나는 트랜스퍼솜의 이동 정도를 스트립의 양극측 및 음극측 모두에 대해 측정하여 소포 순전하를 결정하였다.
결과 및 논의
결과는 표 6에서 요약된다.
Figure pct00012
입자 크기 측정
평균 입자 지름 및 다분산 지수는 대조 트랜스퍼솜 그리고 NSAID-폴리소르베이트 80 에스테르를 함유한 트랜스퍼솜과 유사하였다. 이것은 트랜스퍼솜에서 나프록센-폴리소르베이트 80 또는 디클로페낙-폴리소르베이트 중 하나로 폴리소르베이트 80의 20% 치환이 크기 특징에 영향을 미치지 않았다는 점을 나타내었다.
연속막 순응성 어세이
변형성 P* 값은 대조 트랜스퍼솜보다 NSAID-폴리소르베이트 에스테르를 함유한 트랜스퍼솜에 대해 약간 더 낮았으며, 이는 나프록센-폴리소르베이트 80 또는 디클로페낙-폴리소르베이트 중 하나로 폴리소르베이트 80의 20% 치환이 막에 약간의 연화 효과를 주어 소포체를 더욱 변형시킬 수 있다는 점을 나타낸다. 이것은 또한, 대조와 비교하여 나프록센 또는 디클로페낙 트랜스퍼솜에 대해 증가된 여과 회수 %에서 입증되었다.
CMA 여과 후 평균 입자 지름은 대조 트랜스퍼솜 및 NSAID-폴리소르베이트 에스테르를 함유한 트랜스퍼솜 모두에 대해 여과-전과 비교하여 거의 50%만큼 감소되었다. 다분산 지수는 약간 더 높았으며, 이는 더 광범위한 크기 분포를 나타낸다. 이들 특징은 트랜스퍼솜 소포체에 대해 예상된 바와 같다.
카르복실에스테라아제 분해 및 RP-HPLC
카르복실에스테라아제 1 효소와 NSAID-폴리소르베이트 에스테르를 함유한 트랜스퍼솜의 인큐베이션은 전체 NSAID 농도의 3 내지 6%의 방출을 야기하였고, 이는 트랜스퍼솜의 외부 표면에 결속된 나프록센 또는 디클로페낙의 작은 일부가 효소에 접근가능하였다는 점을 나타낸다.
사이클로옥시게나아제-1 저해 어세이
NSAID-폴리소르베이트 에스테르를 함유한 트랜스퍼솜은 대조 트랜스퍼솜보다 더 큰 백분율로 사이클로옥시게나아제 1 (COX-1)의 반응 속도를 저해하였다. 대조 트랜스퍼솜은 COX-1 효소를 저해할 것으로 예상되었고 그리고 트랜스퍼솜의 외부 표면에, 공지된 COX-1 저해제, 나프록센 또는 디클로페낙을 결속하는 것은 상기 저해 효과를 더욱 증진시켰다.
도 1과 2는 각각, 반응 속도에 대비하여 플롯팅된 아라키돈 기질 농도 및 역수 (Lineweaver Burk) 플롯을 보여준다.
연속막 순응성 (CMA) 어세이에서 트랜스퍼솜의 평균 크기보다 더 작은 구멍을 통과하도록 변형된 트랜스퍼솜은 COX-1 효소를 저해하는 능력을 보유하였다.
도 3과 4는 CMA-후 샘플에 대하여 각각, 반응 속도에 대비하여 플롯팅된 아라키돈 기질 농도 및 역수 (Lineweaver Burk) 플롯을 보여준다.
3가지 트랜스퍼솜 제조물 모두에 대하여 COX-1 효소의 저해 %는 CMA 어세이-후 약간 더 낮았다. 이것은 NSAID 활성의 손실로 인한 것보다는, 여과에 의해 유발된 트랜스퍼솜 및 연관 NSAID의 농도의 감소로 인한 것으로 가정되었다. 비교 트랜스퍼솜 농도의 표시는 광자 상관 분광법으로부터 얻었다. CMA-후 샘플에 대한 주파 신호의 강도는 CMA-전 샘플과 비교할 때 감소되었지만, CMA-후 변화하는 여과 회수에도 불구하고, 대조 및 NSAID 트랜스퍼솜과는 유사한 것으로 밝혀졌다.
종이 전기영동
대조 트랜스퍼솜 및 NSAID-폴리소르베이트 에스테르를 함유한 트랜스퍼솜은 모두, 전기영동 장치의 음극 쪽으로 이동하였고, 이는 순 양전하를 입증한다. 이에 따라 나프록센 또는 디클로페낙의 존재는 트랜스퍼솜의 전하 특징을 변경시키지 않았다.

Claims (18)

  1. 지질, 계면활성제 및 관심 작용제(Agent Of Interest (AOI))를 포함하는 소포성 제제에 있어서, 상기 AOI가 각각의 AOI 분자의 일부분이 소포의 바깥쪽에 위치하여 소포막의 외부에 있도록 소포의 성분에 결합되는 것을 특징으로 하는 소포성 제제.
  2. 제1항에 따른 제제에 있어서, AOI는 상기 소포의 계면활성제 성분에 결합되는 것임을 특징으로 하는 소포성 제제.
  3. 제1항 또는 제2항에 따른 제제에 있어서, AOI는 상기 소포의 지질 성분에 결합되는 것임을 특징으로 하는 소포성 제제.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 제제에 있어서, 소포의 계면활성제 성분과 지질 성분 둘다, 그들에 결합된 AOI를 갖는 것을 특징으로 하는 소포성 제제.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 제제에 있어서, 단일 AOI가 하나의 소포 성분에 결합된 것을 특징으로 하는 소포성 제제.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 제제에 있어서, 복수의 AOI가 하나의 소포 성분에 결합되는 것을 특징으로 하는 소포성 제제.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 제제에 있어서, 상기 결합은 공유 결합인 것을 특징으로 하는 소포성 제제.
  8. 제6항에 따른 제제에 있어서, AOI 둘이 동종인 것임을 특징으로 하는 소포성 제제.
  9. 제6항에 따른 제제에 있어서, AOI 둘이 이종인 것임을 특징으로 하는 소포성 제제.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 제제에 있어서, AOI는 원소, 이온, 무기염, 소분자, 아미노산, 펩티드, 단백질, 미량 영양소, 거대 분자 또는 거대 고리 분자로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 소포성 제제.
  11. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 제제에 있어서, AOI는 피부 구조 단백질 (가령 엘라스틴 또는 콜라겐), 치료학적 단백질, 탄수화물, 발색단-함유 거대 분자 (가령 포르피린), 비타민, 금속 또는 금속 염, 비-금속 원소 또는 비-금속 염, 멜라닌 또는 멜라닌 유사체, 또는 항-염증성 (가령 NSAID)으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 소포성 제제.
  12. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 제제에 있어서, 환자의 피부를 통해 AOI를 전달하는 데에 있어 이용하기 위한 것을 특징으로 하는 소포성 제제.
  13. 제12항에 따른 제제에 있어서, 제제가 국부적으로 적용되는 것을 특징으로 하는 소포성 제제.
  14. 환자의 피부를 통한 AOI 전달 방법에 있어서, 상기 방법은 AOI를 전달하기 위해 피부를 관통하는 데에 충분한 양으로 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 소포성 제제를 환자의 피부에 국부적으로 적용시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 제14항에 따른 AOI 전달 방법에 있어서, 상기 소포성 제제는 각각 상이한 AOI를 가진, 제8항 내지 제11항에 따른 것이거나, 제1항 내지 제6항 또는 제10항 또는 제11항에 따른 소포체의 블렌드(blend)를 함유한 제제인 것을 특징으로 하는 AOI 전달 방법.
  16. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 제제를 제조하는 방법에 있어서, 상기 방법은 AOI의 일부분이 소포의 바깥쪽에 있어 소포막의 외부에 있도록 소포 성분에 AOI를 부착시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 제1항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 따른 소포성 제제가 질병을 치료하는 데에 이용하기 위한 것임을 특징으로 하는 소포성 제제.
  18. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 소포성 제제가, 피부 관리, 또는 화장품에 이용하기 위한 것임을 특징으로 하는 소포성 제제.
KR1020167005351A 2013-07-31 2014-07-31 소포체 Expired - Fee Related KR102325654B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020217029392A KR20210116701A (ko) 2013-07-31 2014-07-31 소포체

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB1313735.1A GB201313735D0 (en) 2013-07-31 2013-07-31 Vesicles
GB201313734A GB201313734D0 (en) 2013-07-31 2013-07-31 Vesicles
GB1313735.1 2013-07-31
GB1313734.4 2013-07-31
PCT/EP2014/066545 WO2015014965A1 (en) 2013-07-31 2014-07-31 Vesicles

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020217029392A Division KR20210116701A (ko) 2013-07-31 2014-07-31 소포체

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20160040627A true KR20160040627A (ko) 2016-04-14
KR102325654B1 KR102325654B1 (ko) 2021-11-12

Family

ID=51292954

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020217029392A Ceased KR20210116701A (ko) 2013-07-31 2014-07-31 소포체
KR1020167005351A Expired - Fee Related KR102325654B1 (ko) 2013-07-31 2014-07-31 소포체

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020217029392A Ceased KR20210116701A (ko) 2013-07-31 2014-07-31 소포체

Country Status (15)

Country Link
US (2) US20160193147A1 (ko)
EP (1) EP3027219A1 (ko)
JP (1) JP2016529242A (ko)
KR (2) KR20210116701A (ko)
CN (2) CN114949237A (ko)
AU (1) AU2014298426B2 (ko)
BR (1) BR112016002182B1 (ko)
CA (1) CA2919971C (ko)
GB (1) GB2533235B (ko)
HK (1) HK1221412A1 (ko)
IL (1) IL243662A0 (ko)
MX (1) MX2016001354A (ko)
PH (1) PH12016500142A1 (ko)
SG (1) SG11201600424VA (ko)
WO (1) WO2015014965A1 (ko)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2486371A (en) 2009-08-21 2012-06-13 Targeted Delivery Technologies Ltd Vesicular formulations
GB201205642D0 (en) 2012-03-29 2012-05-16 Sequessome Technology Holdings Ltd Vesicular formulations
CA3026466A1 (en) * 2015-06-30 2017-01-05 Sequessome Technology Holdings Limited Blended formulations
WO2019118621A1 (en) * 2017-12-12 2019-06-20 The Johns Hopkins University Methods for making giant vesicles and their use
RS67285B1 (sr) * 2020-09-29 2025-11-28 Ishihara Sangyo Kaisha Tečna farmaceutska kompozicija koja ispoljava odličnu efikasnost konzerviranja

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7544375B1 (en) * 2006-06-12 2009-06-09 Swiss Skin Repair, Inc. Composition
US20100105139A1 (en) * 2008-10-27 2010-04-29 Remco Alexander Spanjaard Ligand Targeted Nanocapsules for the delivery of RNAi and other Agents

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US294924A (en) * 1884-03-11 And edward fox
US4372296A (en) * 1980-11-26 1983-02-08 Fahim Mostafa S Treatment of acne and skin disorders and compositions therefor
US5498420A (en) * 1991-04-12 1996-03-12 Merz & Co. Gmbh & Co. Stable small particle liposome preparations, their production and use in topical cosmetic, and pharmaceutical compositions
TR200101790T2 (tr) * 1998-12-23 2001-10-22 Idea Ag. Yayılgan olmayan in vivo topik uygulamalar için geliştirilmiş formül
ES2411656T3 (es) * 2002-03-13 2013-07-08 Thomas SKÖLD Sistemas de administración a base de agua
US7473432B2 (en) * 2002-10-11 2009-01-06 Idea Ag NSAID formulations, based on highly adaptable aggregates, for improved transport through barriers and topical drug delivery
EP1815847A3 (en) * 2002-10-11 2008-11-05 Idea Ag Aggregate with increased deformability, comprising at least three amphipats, for improved transport through semi-permeable barriers and for the non-invasive drug application in vivo, especially through the skin
US20080095722A1 (en) * 2004-11-12 2008-04-24 Idea Ag Extended Surface Aggregates in the Treatment of Skin Conditions
CN101209251A (zh) * 2006-12-28 2008-07-02 中国科学院理化技术研究所 含有紫杉醇或多烯紫杉醇的弹性纳米囊泡制剂及其制备方法
WO2009073193A2 (en) * 2007-12-03 2009-06-11 The Johns Hopkins University Methods of synthesis and use of chemospheres
ES2335636B1 (es) * 2008-02-29 2011-05-11 Lipotec, S.A. Composicion cosmetica o dermofarmaceutica de micelas mixtas.
MY170121A (en) * 2009-06-03 2019-07-05 Ulrich Vierl Formulations for the treatment of deep tissue pain
GB2486371A (en) * 2009-08-21 2012-06-13 Targeted Delivery Technologies Ltd Vesicular formulations
EP2664321B1 (en) * 2009-10-26 2018-08-22 Nissan Chemical Industries, Ltd. Medical instrument and preparation comprising a lipid peptide and gum arabic
EP2382994A1 (en) * 2010-04-26 2011-11-02 Maurizio Victor Cattaneo Ligand targeted nanocapsules for the delivery of RNAi and other agents
US8741373B2 (en) * 2010-06-21 2014-06-03 Virun, Inc. Compositions containing non-polar compounds
US20120045405A1 (en) * 2010-08-18 2012-02-23 Gilman Miles E Under eye cream

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7544375B1 (en) * 2006-06-12 2009-06-09 Swiss Skin Repair, Inc. Composition
US20100105139A1 (en) * 2008-10-27 2010-04-29 Remco Alexander Spanjaard Ligand Targeted Nanocapsules for the delivery of RNAi and other Agents

Also Published As

Publication number Publication date
CA2919971A1 (en) 2015-02-05
WO2015014965A1 (en) 2015-02-05
AU2014298426A1 (en) 2016-02-18
KR20210116701A (ko) 2021-09-27
PH12016500142A1 (en) 2016-04-18
CN105473162A (zh) 2016-04-06
EP3027219A1 (en) 2016-06-08
US20220031615A1 (en) 2022-02-03
CA2919971C (en) 2021-12-14
GB2533235B (en) 2018-11-21
US20160193147A1 (en) 2016-07-07
HK1221412A1 (zh) 2017-06-02
IL243662A0 (en) 2016-02-29
BR112016002182B1 (pt) 2022-09-20
CN114949237A (zh) 2022-08-30
JP2016529242A (ja) 2016-09-23
GB201602798D0 (en) 2016-03-30
KR102325654B1 (ko) 2021-11-12
AU2014298426B2 (en) 2019-07-18
BR112016002182A2 (pt) 2017-08-01
MX2016001354A (es) 2016-04-07
SG11201600424VA (en) 2016-02-26
GB2533235A (en) 2016-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Chen et al. Topical delivery of hyaluronic acid into skin using SPACE-peptide carriers
US20220031615A1 (en) Vesicles
MX2010010713A (es) Composiciones y metodos para el cuidado de la piel.
US11547665B2 (en) Multiphasic compositions
WO2011022707A1 (en) Vesicular formulations
EP2836203B1 (en) Vesicular formulations for use in the treatment of pain or reduced mobility of a joint
Oyarzún et al. Transfersomes as alternative topical nanodosage forms for the treatment of skin disorders
Manconi et al. Eco-scalable baicalin loaded vesicles developed by combining phospholipid with ethanol, glycerol, and propylene glycol to enhance skin permeation and protection
AU2013241701A1 (en) Vesicular formulations
HK40079065A (en) Vesicles
JP2015516453A (ja) ベシクル製剤の使用および方法
US10258694B2 (en) Skin external preparation and skin irritation-reducing method
EA039827B1 (ru) Везикулярная композиция
HK40058716A (en) Multiphasic compositions
HK1254980B (en) Blended formulations
HK1202250B (en) Vesicular formulations for use in the treatment of pain or reduced mobility of a joint
HK1202250A1 (en) Vesicular formulations for use in the treatment of pain or reduced mobility of a joint

Legal Events

Date Code Title Description
PA0105 International application

St.27 status event code: A-0-1-A10-A15-nap-PA0105

P11-X000 Amendment of application requested

St.27 status event code: A-2-2-P10-P11-nap-X000

P13-X000 Application amended

St.27 status event code: A-2-2-P10-P13-nap-X000

AMND Amendment
P11-X000 Amendment of application requested

St.27 status event code: A-2-2-P10-P11-nap-X000

P13-X000 Application amended

St.27 status event code: A-2-2-P10-P13-nap-X000

P11-X000 Amendment of application requested

St.27 status event code: A-2-2-P10-P11-nap-X000

P13-X000 Application amended

St.27 status event code: A-2-2-P10-P13-nap-X000

PG1501 Laying open of application

St.27 status event code: A-1-1-Q10-Q12-nap-PG1501

P22-X000 Classification modified

St.27 status event code: A-2-2-P10-P22-nap-X000

R17-X000 Change to representative recorded

St.27 status event code: A-3-3-R10-R17-oth-X000

P11-X000 Amendment of application requested

St.27 status event code: A-2-2-P10-P11-nap-X000

P11-X000 Amendment of application requested

St.27 status event code: A-2-2-P10-P11-nap-X000

P13-X000 Application amended

St.27 status event code: A-2-2-P10-P13-nap-X000

PE0801 Dismissal of amendment

St.27 status event code: A-2-2-P10-P12-nap-PE0801

R17-X000 Change to representative recorded

St.27 status event code: A-3-3-R10-R17-oth-X000

R17-X000 Change to representative recorded

St.27 status event code: A-3-3-R10-R17-oth-X000

A201 Request for examination
PA0201 Request for examination

St.27 status event code: A-1-2-D10-D11-exm-PA0201

E902 Notification of reason for refusal
PE0902 Notice of grounds for rejection

St.27 status event code: A-1-2-D10-D21-exm-PE0902

AMND Amendment
P11-X000 Amendment of application requested

St.27 status event code: A-2-2-P10-P11-nap-X000

P13-X000 Application amended

St.27 status event code: A-2-2-P10-P13-nap-X000

E601 Decision to refuse application
PE0601 Decision on rejection of patent

St.27 status event code: N-2-6-B10-B15-exm-PE0601

X091 Application refused [patent]
T11-X000 Administrative time limit extension requested

St.27 status event code: U-3-3-T10-T11-oth-X000

T13-X000 Administrative time limit extension granted

St.27 status event code: U-3-3-T10-T13-oth-X000

T13-X000 Administrative time limit extension granted

St.27 status event code: U-3-3-T10-T13-oth-X000

A107 Divisional application of patent
AMND Amendment
E13-X000 Pre-grant limitation requested

St.27 status event code: A-2-3-E10-E13-lim-X000

P11-X000 Amendment of application requested

St.27 status event code: A-2-2-P10-P11-nap-X000

P13-X000 Application amended

St.27 status event code: A-2-2-P10-P13-nap-X000

PA0104 Divisional application for international application

St.27 status event code: A-0-1-A10-A18-div-PA0104

St.27 status event code: A-0-1-A10-A16-div-PA0104

PX0901 Re-examination

St.27 status event code: A-2-3-E10-E12-rex-PX0901

PX0701 Decision of registration after re-examination

St.27 status event code: A-3-4-F10-F13-rex-PX0701

X701 Decision to grant (after re-examination)
GRNT Written decision to grant
PR0701 Registration of establishment

St.27 status event code: A-2-4-F10-F11-exm-PR0701

PR1002 Payment of registration fee

St.27 status event code: A-2-2-U10-U12-oth-PR1002

Fee payment year number: 1

PG1601 Publication of registration

St.27 status event code: A-4-4-Q10-Q13-nap-PG1601

PC1903 Unpaid annual fee

St.27 status event code: A-4-4-U10-U13-oth-PC1903

Not in force date: 20241109

Payment event data comment text: Termination Category : DEFAULT_OF_REGISTRATION_FEE

H13 Ip right lapsed

Free format text: ST27 STATUS EVENT CODE: N-4-6-H10-H13-OTH-PC1903 (AS PROVIDED BY THE NATIONAL OFFICE); TERMINATION CATEGORY : DEFAULT_OF_REGISTRATION_FEE

Effective date: 20241109

PC1903 Unpaid annual fee

St.27 status event code: N-4-6-H10-H13-oth-PC1903

Ip right cessation event data comment text: Termination Category : DEFAULT_OF_REGISTRATION_FEE

Not in force date: 20241109