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KR20160023651A - 상처 치유를 위한 방법 및 조성물 - Google Patents

상처 치유를 위한 방법 및 조성물 Download PDF

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KR20160023651A
KR20160023651A KR1020157032991A KR20157032991A KR20160023651A KR 20160023651 A KR20160023651 A KR 20160023651A KR 1020157032991 A KR1020157032991 A KR 1020157032991A KR 20157032991 A KR20157032991 A KR 20157032991A KR 20160023651 A KR20160023651 A KR 20160023651A
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thymlien
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폴 워렌 레델
빅토리아 앤 고든
라이언 모슬리
로버트 스테드먼
레이첼 루이스 모제스
글렌 매튜 보일
피터 고든 파슨스
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큐바이오틱스 리미티드
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Abstract

본 발명은 에폭시-티글리안(tigliane) 화합물 및 상처 치유 촉진에 사용되는 이의 용도에 관한 것이다. 구체적 양태에 따르면, 에폭시-티글리안 화합물은 에폭시-티글리엔(tigliaen)-3-온 화합물이다. 상처 치유를 유도하거나 촉진하는 방법뿐만 아니라 흉터형성을 감소시키는 방법 및 상처 치유 시 미용적 결과를 향상시키는 방법도 기술한다. 또한, 상처 치유에 사용하기 위한 화합물 및 조성물도 기술한다.

Description

상처 치유를 위한 방법 및 조성물{METHODS AND COMPOSITIONS FOR WOUND HEALING}
본 발명은 에폭시-티글리안(epoxy-tigliane) 화합물 및 상처 치유 촉진에 사용되는 이의 용도에 관한 것이다. 구체적 양태에 따르면, 에폭시-티글리안 화합물은 에폭시-티글리엔(tigliaen)-3-온 화합물이다. 상처 치유를 유도하거나 촉진하는 방법뿐만 아니라 흉터형성을 감소시키는 방법 및 상처 치유 시 미용적 결과를 향상시키는 방법도 기술한다. 또한, 상처 치유에 사용하기 위한 화합물 및 조성물도 기술한다.
상처 치유는 피부 또는 다른 기관 또는 조직이 상처 후 자신을 수복하는 복잡한 공정이다. 정상 피부에서 표피(최외각 층) 및 진피(내부 또는 심부 층)는 안정상태 평형으로 존재하여 외부 환경에 대하여 보호 장벽을 형성한다. 일단 보호 장벽이 깨지면 상처 치유의 정상적인 생리적 공정이 즉시 가동된다. 상처 치유의 고전적 모델은 3개의 연속되지만 중첩되는 단계들, 즉 염증 단계, 증식 단계 및 마지막으로 리모델링 단계로 나뉜다.
상처 치유의 염증 단계 동안에는 호중구와 그 다음 단핵구가 주위 혈관조직으로부터 상처로 활발하게 모집된다. 호중구는 상처에서 세균 및 진균 감염의 초기 방제 및 구제에 필수적이다. 단핵구는 대식세포(macrophage)로 성숙하여, 상처로 유입되고, 여기서 초기 식세포작용 및 기질(matrix)과 세포 찌꺼기의 청소를 비롯한 상처 소산(resolution) 과정 동안 수많은 역할을 한다. 상처 내 호중구 및 대식세포 모두에 의한 효소, 사이토킨(cytokine) 및 성장 인자(growth factor)의 방출은 이후 상처와 주 조직 에서 다른 세포들에 심오한 영향을 발휘할 수 있다. 예를 들어, 대식세포는 상처를 제거하는 콜라게나제; 섬유아세포를 자극하고 혈관형성(angiogenesis)을 촉진하는 인터루킨 및 종양괴사인자(TNF); 및 각질세포를 자극하는 전환성장인자(TGF)를 분비한다. 또한, 대식세포는 육아조직의 형성을 개시하고, 이로써 증식 단계 및 리모델링 단계로의 전이를 개시하는 혈소판-유래 성장인자 및 혈관 내피세포 성장인자도 분비한다. 빠르고 강하지만 일시적인 염증 단계는 종종 양호한 상처 치유 결과와 관련된다.
상처 치유의 제2 단계는 세포 증식과 이동 및 상처 수축을 수반한다. 이 단계는 상처 내의 세포가 취하는 작용을 수반하여 상처 간격의 폐쇄 및 상실된 조직의 보충을 달성한다. 각질세포의 이동 및 증식은 상처의 재상피화를 달성하는데 기본적인 한편, 기저 진피의 재구성은 상처 폐쇄 유도를 돕고 콜라겐 섬유의 합성, 다발화(bundling) 및 정렬에 기여하는 섬유아세포의 이동, 증식 및 분화로부터 초래된다.
최종 리모델링 단계에서, 상처 가장자리에 이동성 및 증식성 각질세포는 상처를 밀봉하고 연속 표피를 형성하도록 재층상화한다. 이 단계 동안에도 정상 피부 구조 및 혈관구조를 복원시키는 세포외 기질의 리모델링을 수반하는 많은 변화가 진피에서 일어난다.
특정 경우에, 상처는 치유가 지연되거나 전혀 치유되지 않을 수 있다. 상처 치유에는 많은 요인들, 예컨대 부상자의 일반적인 건강, 부상자의 연령, 당뇨와 같은 질환 또는 혈행에 영향을 미칠 수 있는 다른 질환, 감염, 이물체 또는 괴사 조직의 존재가 영향을 미칠 수 있고, 또는 일부 경우에는 약물이 상처 치유 속도에 영향을 미칠 수도 있다.
나아가, 일부 상처들에서 상처 소산의 불완전한 조절은 섬유증 및 과도한 흉터 형성을 초래하여 기능적 및 미용적으로 정상 조직보다 열등한 흉터 조직을 남긴다.
상처 치유의 개선과 흉터 조직의 감소에 대한 연구는 많다. 하지만, 상처 치유를 촉진할 수 있는, 예컨대 특히 만성 상처에서 상처 치유 속도를 증가시킬 수 있는 제제는 여전히 필요한 실정이다. 또한, 흉터 형성이 자연적으로 발생할 수 있는 것보다 감소되게 흉터가 치유되도록 하는 제제도 필요한 실정이다.
본 발명은 적어도 부분적으로 에폭시-티글리안 화합물을 함유하는 식물 유래의 추출물이 상처 치유를 촉진할 수 있고, 상처 치유시에 형성된 흉터 조직을 감소시킬 수도 있다는 발견을 기반으로 한다.
본 발명의 제1 관점으로서, 본 발명은 에폭시-티글리안 화합물 또는 이의 약학적 허용성 염을 검체(subject)에게 투여하는 것을 함유하여, 검체의 상처 치유를 촉진하는 방법을 제공한다.
일부 양태들에서, 에폭시-티글리안 화합물은 식물 추출물, 특히 에탄올 추출물 형태다. 일부 양태들에서, 식물 추출물은 폰테이니아(Fontainea) 종 또는 하일란디아(Hylandia) 종인 식물로부터 수득하거나 수득할 수 있다. 일부 양태들에서, 에폭시-티글리안 화합물은 식물 추출물로부터 분리된다. 다른 양태들에서, 에폭시-티글리안 화합물은 분리된 티글리안 화합물의 합성 또는 반합성(semi-synthetic) 유도체이다.
일부 양태들에서, 촉진성 상처 치유는 상처 치유 속도의 증가를 포함한다. 일부 양태들에서, 촉진성 상처 치유는 상처 조직에 흉터형성의 감소를 포함한다. 일부 양태들에서, 촉진성 상처 치유는 상처 치유 속도의 증가 및 상처 조직에 흉터형성의 감소를 포함한다. 일부 양태들에서, 상처는 만성 상처, 급성 상처 또는 기존 상처이다.
본 발명의 또 다른 관점으로서, 본 발명은 상처 또는 흉터에 에폭시-티글리안 화합물 또는 이의 약학적 허용성 염을 적용하는 것을 포함하여 과도한 흉터형성을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
일부 양태들에서, 과도한 흉터형성은 켈로이드(keloid) 또는 비후 흉터형성이다.
본 발명의 또 다른 관점에 따르면, 본 발명은 검체의 상처 치유를 촉진하기 위한 약제의 제조에 사용되는 에폭시-티글리안 화합물 또는 이의 약학적 허용성 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 또 다른 관점에 따르면, 본 발명은 검체의 상처 치유 촉진에 사용되는 에폭시-티글리안 화합물 또는 이의 약학적 허용성 염의 용도를 제공한다.
도 1은 스크래치 24시간 후 매개제 단독 대조군으로 처리된 사람 신생아 섬유아세포의 스크래치 폐쇄(scratch closure)를 촬영한 사진이다.
도 2는 스크래치 24시간 후에 30 ng/ml 화합물 1로 처리된 사람 신생아 섬유아세포의 스크래치 폐쇄를 촬영한 사진이다.
도 3은 매개제 단독 대조군 대비, 10 ng/ml 또는 30 ng/ml 화합물 1로 처리된 사람 신생아 섬유아세포의 매트리겔 침입(matrigel invasion) 분석을 도시한 그래프이다. 세포는 24시간 항온배양 후 계수했다. * p<0.05; *** p<0.001.
도 4는 화합물 1로 처리된 사람 신생아 섬유아세포의 웨스턴 블롯 분석이며, 상처 수복 및 치유에 관여하는 핵심 시그널링 분자의 활성화 및 이후의 억제조절(downregulation)을 보여준다.
도 5는 섬유아세포(TGF-β1 존재 하에 배양)를 화합물 1의 다양한 농도에 노출 시, α-평활근 액틴 및 스트레스 섬유(stress fibre) 형성의 발현 증가를 특징으로 하는 근섬유아세포로의 분화에 미치는 효과를 촬영한 사진이다.
도 6은 섬유아세포(TGF-β1 존재 하에 배양)를 화합물 37의 다양한 농도에 노출 시, α-평활근 액틴 및 스트레스 섬유 형성의 발현 증가를 특징으로 하는 근섬유아세포로의 분화에 미치는 효과를 촬영한 사진이다.
정의
다른 정의가 없는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야의 숙련된 자가 일반적으로 이해하는 것과 같은 의미인 것이다. 본원에 기술된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 재료는 본 발명의 수행 또는 시험에 사용될 수 있을지라도, 바람직한 방법 및 재료가 기술된다. 본 발명의 목적상, 다음과 같은 용어들은 이하에 정의된다.
본원에 사용된 단수 용어들은 물품의 하나 또는 하나보다 많은(즉, 2개 이상) 문법적 대상을 의미한다. 한 예로서, "요소"는 하나의 요소 또는 하나보다 많은 요소를 의미한다.
본원에 사용된, "약"이란 용어는 참조 양, 수준, 값, 치수, 크기 또는 양에 대해 30%, 25%, 20%, 15% 또는 10% 정도 다른 양, 수준, 값, 치수, 크기 또는 양을 의미한다.
본 명세서 전반에서, 문맥이 다른 것을 필요로 하지 않는 한, "함유한다", "함유하고" 및 "함유하는"이란 용어는 진술한 단계 또는 요소 또는 단계들이나 요소들의 그룹의 내포를 암시하는 것으로 이해되어야 하지만, 임의의 다른 단계 또는 요소 또는 단계들이나 요소들의 그룹을 배제하는 것은 아니다.
"알킬"이란 용어는 탄소 원자가 1 내지 20개인 경우에 따라 치환된 선형 및 분지형 탄화수소 기를 의미한다. 적당한 경우, 알킬 기는 특정한 수의 탄소 원자를 보유할 수 있고, 예컨대 선형 또는 분지형 배열에 탄소 원자가 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개인 알킬 기를 포함하는 -C1-C6 알킬이다. 알킬 기의 비제한적 예로는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, s- 및 t-부틸, 펜틸, 2-메틸부틸, 3-메틸부틸, 헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 4-메틸펜틸, 2-에틸부틸, 3-에틸부틸, 헵틸, 옥틸, 노닐, 데실, 운데실, 도데실, 트리데실, 테트라데실 및 펜타데실을 포함한다.
"알케닐"이란 용어는 탄소 원자 2 내지 20개를 보유하고 하나 이상의 이중 결합을 보유하는, 경우에 따라 치환된, 불포화 선형 또는 분지형 탄화수소를 의미한다. 적당한 경우, 알케닐 기는 특정한 수의 탄소 원자를 보유할 수 있고, 예컨대 선형 또는 분지형 배열에 탄소 원자 2, 3, 4, 5 또는 6개를 보유하는 알케닐 기를 포함하는 C2-C6 알케닐이다. 알케닐 기의 비제한적 예로는 에테닐, 프로페닐, 이소프로페닐, 부테닐, s- 및 t-부테닐, 펜테닐, 헥세닐, 헵트-1,3-디엔, 헥스-1,3-디엔, 비-1,3,5-트리엔 및 이의 유사물을 포함한다.
"알키닐"이란 용어는 탄소 원자를 2 내지 20개 보유하고, 하나 이상의 삼중 결합을 보유하는, 경우에 따라 치환된 불포화 선형 또는 분지형 탄화수소를 의미한다. 적당한 경우, 알키닐 기는 특정한 수의 탄소 원자를 보유할 수 있고, 예컨대 선형 또는 분지형 배열에 탄소 원자 2, 3, 4, 5 또는 6개를 보유하는 알키닐 기를 포함하는 C2-C6 알키닐이다. 비제한적 예로는 에티닐, 프로피닐, 부티닐, 펜티닐 및 헥시닐을 포함한다.
"사이클로알킬" 및 "탄소고리(carbocyclic)"란 용어는 경우에 따라 치환된 포화 또는 불포화 일환식, 이환식 또는 삼환식 탄화수소 기를 의미한다. 적당한 경우, 사이클로알킬 기는 특정한 수의 탄소 원자를 보유할 수 있고, 예컨대 C3-C6 사이클로알킬은 탄소 원자 3, 4, 5 또는 6개를 보유하는 탄소고리 기이다. 비제한적 예로는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로펜테닐, 사이클로헥실, 사이클로헥세닐, 사이클로헥사디에닐 및 이의 유사물을 포함할 수 있다.
"아릴"은 각 고리에 7개 이하의 원자를 보유하고, 적어도 하나의 고리가 방향족인, C6-C14 원성 일환식, 이환식 또는 삼환식 탄소고리성 고리 시스템을 의미한다. 아릴 기의 예로는 페닐, 나프틸, 테트라하이드로나프틸, 인다닐 및 비페닐을 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다. 아릴은 1 내지 3개의 벤젠 고리를 함유할 수 있다. 2개 또는 그 이상의 방향족 고리가 존재한다면, 이 고리들은 함께 융합되어 인접 고리들이 공통 결합을 공유할 수 있다.
각 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬 및 아릴은 각각의 엔타이티(entity)이든지 또는 더 큰 엔타이티의 일부이든지 간에, 하나 이상의 선택적 치환체들로 경우에 따라 치환될 수 있으며, 그 예로는 C1-6알킬, C2-6알케닐, C3-6사이클로알킬, 옥소(=O), -OH, -SH, C1 - 6알킬O-, C2 - 6알케닐O-, C3 - 6사이클로알킬O-, -C1 - 6알킬S-, C2 - 6알케닐S-, C3 - 6사이클로알킬S-, -CO2H, CO2C1 - 6알킬, -NH2, -NH(C1 - 6알킬), -N(C1 - 6알킬)2, -NH(페닐), -N(페닐)2, -CN, -NO2, -할로겐, -CF3, -OCF3, -SCF3, -CHF2, -OCHF2, -SCHF2, -페닐, -O페닐, -C(O)페닐, -C(O)C1-6알킬로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. 적당한 치환체의 예로는 비제한적으로 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, sec-부틸, tert-부틸, 비닐, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소프로폭시, 부톡시, 메틸티오, 에틸티오, 프로필티오, 이소프로필티오, 부틸티오, 하이드록시, 하이드록시메틸, 하이드록시에틸, 하이드록시프로필, 하이드록시부틸, 플루오로, 클로로, 브로모, 요오도, 시아노, 니트로, -CO2H, -CO2CH3, 트리플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, 트리플루오로메틸티오, 디플루오로메틸, 디플루오로메톡시, 디플루오로메틸티오, 모르폴리노, 아미노, 메틸아미노, 디메틸아미노, 페닐, 페녹시, 페닐카르보닐, 벤질 및 아세틸을 포함한다.
본 발명의 화합물들은 약학적 허용성 염 형태일 수 있다. 하지만, 비-약학적 허용성 염도 본 발명의 범위에 속하는 것으로 이해되어야 하며, 그 이유는 비-약학적 허용성 염이 약학적 허용성 염의 제조에 중간체로서 유용할 수 있고, 또는 저장 또는 수송에 유용할 수 있기 때문이다. 적당한 약학적 허용성 염으로는 비제한적으로 약학적 허용성 무기 산, 예컨대 염산, 황산, 인산, 질산, 탄산, 붕산, 설팜산 및 브롬화수소산의 염, 또는 아세트산, 프로피온산, 부티르산, 타르타르산, 말레산, 하이드록시말레산, 푸마르산, 말레산, 시트르산, 젖산, 뮤신산, 글루콘산, 벤조산, 석신산, 옥살산, 페닐아세트산, 메탄설폰산, 톨루엔설폰산, 벤젠설폰산, 살리시클릭 설파닐산, 아스파르트산, 글루탐산, 에데트산, 스테아르산, 팔미트산, 올레산, 라우르산, 판토텐산, 탄닌산, 아스코르브산 및 발레르산의 염을 포함한다.
기본 염으로는 비제한적으로 약학적 허용성 양이온, 예컨대 나트륨, 칼륨, 리튬, 칼슘, 마그네슘, 암모늄 및 알킬암모늄으로 제조된 것을 포함한다.
염기성 질소-함유 기는 저급 알킬 할라이드, 예컨대 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸의 클로라이드, 브로마이드 및 요오다이드; 디알킬 설페이트, 예컨대 디메틸 및 디에틸의 설페이트 등과 같은 제제로 4차화될 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물은 비대칭 중심을 보유하여 하나보다 많은 입체이성질체 형태로 존재할 수 있다는 것도 인식할 수 있을 것이다. 따라서, 본 발명은 하나 이상의 비대칭 중심에서 실질적으로 순수한 이성질체 형태, 예컨대 약 90% ee 초과, 예컨대 약 95% 또는 97% ee 또는 99% ee 초과인 화합물, 뿐만 아니라 이의 혼합물, 예컨대 라세미 혼합물에 관한 것이다. 이러한 이성질체는 천연 급원에서 분리하거나, 예컨대 키랄 중간체를 사용하여 비대칭 합성하거나, 또는 키랄 분할하여 수득할 수 있다. 본 발명의 화합물은 기하학적 이성질체로서 존재할 수 있다. 또한, 본 발명은 실질적으로 순수한 시스(Z) 또는 트란스(E) 형태의 화합물 또는 이의 혼합물에 관한 것이다.
본 발명의 화합물은 식물 또는 식물 일부로부터 분리하여 수득하거나, 또는 분리된 화합물을 유도체화하거나, 또는 관련 화합물을 유도체화하여 수득할 수 있다.
본원에 사용된 "상처"란 용어는 조직 구조의 연속성 또는 무결성의 물리적 파괴를 의미한다. 상처는 급성 또는 만성일 수 있고, 절개 및 열상, 외과적 절제 또는 상처, 천공, 찰과상(graze), 스크래치(scratch), 압박 상처, 찰과성(abrasion), 마찰 상처, 욕창성 궤양(예, 욕창(pressure sores) 또는 침대 앓이 욕창); 열처리 효과 상처(냉각원 및 열원에 의한 화상), 화학적 상처(예, 산 또는 알칼리 화상); 또는 병원성 감염(예, 바이러스, 세균 또는 진균), 예컨대 오픈 또는 무침습 종기, 피부 발진, 잡티 및 여드름, 궤양, 만성 상처, (예컨대 당뇨 관련 상처, 예컨대 종아리 및 발 궤양, 정맥성 다리 궤양 및 욕창), 피부 이식 공여체 및 수용체 부위, 면역반응 상태, 예컨대 건선 및 습진, 위 또는 장의 궤양, 구강 상처, 예컨대 입의 궤양, 손상 연골 또는 골(bone), 절단 상처 및 각막 병변을 포함한다.
본원에 사용된, "만성 상처"란 용어는 건강한 검체에서 정상적인 치유 기간 내에 치유되지 않는 상처를 의미한다. 만성 상처는 검체의 건강으로 인해, 예컨대 검체가 혈행이 좋지 않은 경우, 또는 당뇨와 같은 질환이 있는 경우, 또는 검체가 정상 치유 과정을 억제하는 약물 치료 중인 경우에 치유되지 않는 것일 수 있다. 또한, 치유는 세균, 진균 또는 기생충 감염과 같은 감염의 존재로 인해 악화될 수도 있다. 일부 경우에, 만성 상처는 수 주, 수 개월 또는 심지어 수 년 동안 치유되지 않은 채 유지될 수 있다. 만성 상처의 예로는 비제한적으로 당뇨성 궤양, 욕창 및 국소 궤양을 포함한다.
본원에 사용된 "상처 치유의 촉진"이란 용어는 미치료 상처에서 관찰될 수 있는 상처 치유와 비교했을 때 상처 치유의 호전을 의미한다. 상처 치유의 촉진은 상처 치유 속도의 증가를 포함하고, 예컨대 상처가 미치료 상태로 남아 있는 경우보다 수 시간, 수 일 또는 수 주까지 더 빠른 속도로 치유될 수 있다. 상처 치유의 촉진은 또한 미치료 상태로 남아 있을 때 예상한 것에 비해, 치유 중인 상처 또는 치유된 상처에서의 흉터 조직의 감소를 포함할 수도 있다.
"상처 치유"란 용어는 부분적 또는 전체적으로 조직 무결성(integrity)의 복원을 의미한다.
본원에 언급된 "흉터형성 감소" 또는 "흉터 조직 감소"란 용어는 상처가 미치료 상태로 남아 있는 경우에 비해 상처 치유로 인해 유발되는 비정상적 조직의 감소 및/또는 미용적 결과의 향상에 관한 것이다. 일부 양태에 따르면, 흉터 조직의 감소는 상처가 미치료 상태로 남아 있는 경우에 비해 비정상 조직의 감소 또는 최소화, 또는 피부 착색 변화의 감소 또는 최소화, 및/또는 모발 재성장의 향상을 포함한다.
"에폭시-티글리안 화합물"이란 용어는 다음과 같은 기본 탄소 고리 구조 중 하나를 가진 화합물을 의미한다:
Figure pct00001
이 화합물들은 융합된 사이클로프로판 고리가 6원 고리에 달려 있는 트리사이클로[9.3.0.0]테트라데칸 시스템을 보유한다. 에폭사이드는 5,6- 또는 6,7-위치에서 7원 고리에 융합되어 있다.
"에폭시-티글리엔-3-온 화합물"이란 용어는 앞서 정의한 에폭시-티글리안 구조를 보유하고, 5원 고리가 다음과 같은 1,2-엔-3-온 구조인 화합물을 의미한다:
Figure pct00002
상처 치유 방법
본 발명의 제1 관점에 따르면, 본 발명은 검체에게 에폭시-티글리안 화합물 또는 이의 약학적 허용성 염을 투여하는 것을 포함하여, 검체의 상처 치유를 촉진하는 방법을 제공한다.
치유될 상처는 임의의 기관 또는 조직에 존재할 수 있고, 그 예로는 내부 기관 또는 조직 또는 외부 조직, 예컨대 피부를 포함한다. 상처는 상해, 교상 또는 화상의 결과일 수 있다. 기관 또는 조직은 피부, 근육, 간, 신장, 폐, 심장, 췌장, 비장, 위, 창자, 방광, 난소, 정소, 자궁, 연골, 건, 인대, 골 등 중 어느 하나 이상일 수 있다. 특정 양태에 따르면, 상처는 피부 및/또는 근육에 있다.
일부 양태들에 따르면, 에폭시-티글리안 화합물은 상처가 발생한 직후에 투여된다. 다른 양태들에 따르면, 상처는 수 일, 수 주, 수 개월 또는 수 년 동안 치유하지 못한 만성 상처이다. 또 다른 양태에 따르면, 상처는 정상 속도로 치유되지 않는 또는 다른 치료법들에 반응하지 않는 기존 상처이다.
또한, 본 발명의 화합물은 치유 중이거나 치유되었지만 과도한 흉터형성이 있는 상처에 적용될 수도 있다. 이러한 상처의 예는 켈로이드 흉터 또는 비후 흉터가 야기되는 중이거나 야기된 상처이다.
일부 양태들에서, 상처는 세균 감염으로 감염된다. 세균 감염은 그람 양성균 또는 그람 음성균, 특히 그람 양성균에 의해 유발될 수 있다. 본 발명의 화합물에 의해 방제되지 않는 세균의 비제한적 예로는 바실러스 속, 예컨대 B.서브틸리스, B.안트라시스, B.세레우스, B.퍼미스, B.리체니포미스, B.메가테리움, B.푸밀러스, B.코아귤란스, B.판토텐티커스, B.알베이, B.브레비스, B.서큐빈스, B.라테로스포루스, B.마세란스, B.폴리믹사, B.스테아로써모필러스, B.투린지엔시스 및 B.스페리커스; 스타필로코커스 속, 예컨대 S.아우레우스, S.에피더미디스, S.헤몰리티커스, S.사프로피티커스; 스트렙토코커스 속, 예컨대 S.파이로게네스, S.뉴모니애, S.알라각티애, S.디스갈락티애, S.이퀴시밀리스, S.이퀴, S.주에피데미쿠스, S.안지노수스, S.살와리우스, S.밀레리, S.생귀스, S.미티오르, S.뮤탄스, S.페칼리스, S.페슘, S.보비스, S.이퀴누스, S.우베루스 및 S.아비움; 에어로코커스 종, 게멜라 종, 코리네박테리움 종, 리스테리아 종, 커티아 종, 락토바실러스 종, 에리시펠로트릭스 종, 아라크니아 종, 액티노마이세스 종, 프로피오니박테리움 종, 로티아 종, 비피도박테리움 종, 클로스트리디움 종, 유박테리움 종, 세라티아 종, 크렙시엘라 종, 프로테우스 종, 엔테로코커스 종, 슈도모나스 종, 노카디아 종 및 마이코박테리움 종의 세균을 포함한다.
일부 양태에 따르면, 상처는 진균 감염으로 감염된다. 진균 감염은 사상균 또는 효모에 의해 유발될 수 있다. 본 발명의 화합물에 의해 방제되는 진균의 비제한적 예로는 아스퍼질러스 종, 뮤코 종, 트리크토피톤 종, 클라도스포리움 종, 울로클라디움 종, 커뷸라리아 종, 오레오바시디움 종, 칸디다 알비칸스, 칸디다 종, 크립토코커스 종, 말레세지아 파치데마티스, 말레세지아 종 및 트리코스포론 종의 진균을 포함한다.
일부 양태에 따르면, 상처는 세균과 진균 모두의 감염에 의해, 예컨대 생물막(biofilm)으로 감염된다.
치유될 상처를 가진 검체는 포유동물, 조류, 어류 및 파충류를 비롯한 임의의 검체일 수 있다. 일부 양태에서, 검체는 사람, 반려동물, 실험실 동물, 가축, 농장 조류, 경주용 동물 또는 포획한 야생 동물, 예컨대 동물원 동물이다. 적당한 검체의 예로는 비제한적으로 사람, 개, 고양이, 토끼, 햄스터, 기니아 피그, 마우스, 래트, 말, 소, 양, 염소, 사슴, 돼지, 원숭이, 유대동물, 병아리, 거위, 카나리아, 작은앵무새, 악어, 뱀, 도마뱀 등을 포함한다. 특별한 양태에 따르면, 검체는 포유동물 검체, 예컨대 사람, 개, 고양이, 말, 소, 양, 염소, 돼지, 사슴, 래트, 기니아 피그, 캥거루, 토끼 또는 마우스이다.
일부 양태에서, 에폭시-티글리안 화합물의 투여는 상처 치유 속도를 증가시켜 상처 치유를 촉진한다. 일부 양태에서, 에폭시-티글리안 화합물의 투여는 치료 부재 시 형성될 수 있는 흉터 조직의 양 또는 흉터형성을 감소시켜 치유를 촉진한다. 일부 양태에서, 치료는 일단 치유된 상처의 미용적 결과 또는 결말 또는 외관을 향상시키며, 예컨대 치료되지 않은 상처에 비해 피부 착색의 향상 및 모발 재성장의 향상을 포함한다.
상처 치유 촉진의 특정 양태에 따르면, 치료법은 국재적 효과를 제공하기 위해 병변내 투여되거나 또는 부위에 또는 그 주변에 국소적인 것이 바람직하다.
"유효량"은 적어도 부분적으로 원하는 반응을 얻는데 필요한 양, 예컨대 상처 치유를 개시하거나 또는 상처 치유 속도를 증가시키는데 필요한 양을 의미한다. 이 양은 치료받는 개체의 건강 및 신체 상태, 치료받는 개체의 분류학적 그룹, 조성물의 포뮬레이션, 의학적 상황의 평가 및 기타 관련 요인들에 따라 달라진다. 이 양은 통상의 실험들을 통해 결정될 수 있는 비교적 광범한 범위에 속할 것으로 예상된다. 사람 환자의 경우 유효량은, 예컨대 투여량(dosage) 당 약 0.1 ng/체중kg 내지 1g/체중kg 범위일 수 있다. 투여량은 투여량당 1㎍/체중kg 내지 1g/체중kg 범위, 예컨대 투여량당 0.5mg 내지 1g/체중kg 범위인 것이 바람직하다. 한 양태에 따르면, 투여량은 투여량당 1mg 내지 500mg 범위이다. 다른 양태에 따르면, 투여량은 투여량당 1mg 내지 250mg 범위이다. 또 다른 양태에 따르면, 투여량은 투여량당 1mg 내지 100mg 범위, 예컨대 투여량당 50mg 이하이다. 또 다른 양태에 따르면, 투여량은 투여량당 1㎍ 내지 1mg/체중kg 범위이다. 투여 요법은 최적의 치료 반응을 제공하도록 조정될 수 있다. 예를 들어, 매일, 매주, 매달 또는 다른 적당한 시간 간격으로 투여될 수 있거나, 또는 용량은 상황의 필요에 따라 비례적으로 감소할 수 있다.
일부 양태에서, 에폭시-티글리안 화합물 또는 하나 이상의 에폭시-티글리안 화합물을 함유하는 식물 추출물은 별도로, 동시에 또는 연속해서, 또는 상처 치유에 유용한 다른 약학적 활성제와 같은 조성물로 투여할 수 있다. 예를 들어, 에폭시-티글리안 화합물은 항생제 및/또는 소염제와 함께 투여할 수 있다. 적당한 항생제로는 베타-락탐 항생제, 예컨대 페니실린, 암피실린, 아목시실린, 플루클록사실린, 디클록사실린, 메타실린, 카르베니실린 및 노로실린; 세팔로스포린, 예컨대 세팔렉신, 세파세트릴, 세파드록실, 세팔로글리신, 세팔로늄, 세팔로르디딘, 세파트리진, 세아클로르, 세프프록실, 세푸조남, 세프메토졸, 로라카르베프, 세프미녹스, 세프디니르, 세프포독심 및 세프피롬; 카바페넴, 예컨대 이미페넴, 메로페넴, 에르타페넴, 다리페넴, 파니페넴 및 비아페넴; 아미노글리코시드, 예컨대 젠타미신, 스트렙토마이신, 네오마이신, 카나마이신, 반코마이신, 에리트로마이신 및 아시트로마이신; 옥사졸리디논, 예컨대 리네졸리드 및 포시졸리드, 린코사미드, 예컨대 클린다마이신, 퀴놀린, 예컨대 옥솔린산, 시프로플록사신, 에녹사신, 오플록사신, 로메플록사신, 레보플록사신 및 디플록사신; 및 설폰아미드, 예컨대 설파메톡사졸, 설포아디아진 및 설프아세트아미드, 또는 이의 혼합물, 예컨대 아목시클라브(아목시실린과 클라불린산)를 포함한다. 적당한 소염제로는 비-스테로이드성 소염 약물, 예컨대 멜록시캄, 피록시캄, 옥시캄, 아스피린, 디푸니살, 이부프로펜, 덱시부프로펜, 나프록센, 케토프로펜, 인도메타신, 톨메틴, 메페남산, 누미술리드 및 이의 유사물과 코르티코스테로이드, 예컨대 하이드로코르티손, 프레드니솔론, 메틸프레드니솔론, 프레드니손, 부데소니드, 베타메타손 및 덱사메타손을 포함한다.
에폭시-티글리안 화합물은 다른 상처 치유 요법, 예컨대 드레싱 및 연고, 로션 및 젤과 함께 사용될 수 있다. 예컨대, 에폭시-티글리안 화합물은 요오드, 알로에베라, 포포(paw paw), 또는 의학적 활성 벌꿀, 예컨대 마누카 꿀 또는 다른 생물학적 또는 생리적 활성제, 예컨대 항바이러스제, 항균제, 항진균제, 및 비타민, 예컨대 A, C, D 및 E와 이들의 에스테르와 같은 치료제를 함유하는 겔(gel), 로션, 연고, 드레싱 및 실버 드레싱(silver dressing)과 함께 사용될 수 있다. 또한, 에폭시-티글리안 화합물은 상처에 분자 구조를 제공하는 드레싱과 함께 사용될 수도 있다. 이러한 드레싱은 중합체 필름 및 가교된 중합체 필름, 예컨대 히알우론산 및 관련 구조, 예컨대 가교된 히알우론산을 포함할 수 있다.
일부 양태에서, 에폭시-티글리안 화합물은 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 기하학적 이성질체, 입체이성질체, 또는 약학적 허용성 염이다:
화학식 (I)
Figure pct00003
여기서,
R1은 수소이고 R2는 -OR17이며; 또는 R1과 R2는 함께 카르보닐 기(=O)를 형성하고;
R3은 수소 또는 C1-6알킬이고;
R4 및 R5는 독립적으로 수소 또는 -OR17이고; 또는 R4와 R5는 함께 이중 결합 또는 에폭사이드(-O-)를 형성하고;
R6은 수소 또는 C1-6 알킬이고;
R7은 -OH 또는 -OR18이며;
R8은 -OH 또는 -OR18이고; 단 R7과 R8은 둘 다 -OH는 아니고;
R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 C1-6 알킬 중에서 선택되고;
R11 및 R12 또는 R12 및 R13은 함께 에폭사이드를 형성하고, R11 및 R13 중 나머지 기는 수소, -OH 또는 -OR17이며;
R14는 수소 또는 -R17이고;
R15는 수소 또는 -R17이며;
R16은 수소 또는 -R17이고;
R17은 수소, -C1-6 알킬, -C2-6 알케닐, -C2-6 알키닐, -C(O)C1-6 알킬, -C(O)C2-6 알케닐 또는 -C(O)C2-6 알키닐이고;
R18은 C1-20 알킬, -C2-20 알케닐, -C2-20 알키닐, -C(O)C1-20 알킬, -C(O)C2-20 알케닐, -C(O)C2-20 알키닐, -C(O)사이클로알킬, -C(O)C1-10 알킬사이클로알킬; -C(O)C2-10 알케닐사이클로알킬, -C(O)C2-10 알키닐사이클로알킬, -C(O)아릴, -C(O)C1-10 알킬아릴, -C(O)C2-10 알케닐아릴, -C(O)C2-10 알키닐아릴, -C(O)C1-10알킬C(O)R19, -C(O)C2-10알케닐C(O)R19, -C(O)C2-10알키닐C(O)R19, -C(O)C1-10알킬CH(OR19)(OR19), -C(O)C2-10알케닐CH(OR19)(OR19), -C(O)C2-10알키닐CH(OR19)(OR19), -C(O)C1-10 알킬SR19, -C(O)C2-10알케닐SR19, -C(O)C2- 10알키닐SR19, -C(O)C1- 10알킬C(O)OR19, -C(O)C2- 10알케닐C(O)OR19, -C(O)C2-10알키닐C(O)OR19, -C(O)C1- 10알킬C(O)SR19, -C(O)C2- 10알케닐C(O)SR19, -C(O)C2- 10알키닐C(O)SR19,
Figure pct00004
R19는 수소, -C1 - 10알킬, -C2 - 10알케닐, -C2 - 10알키닐, 사이클로알킬 또는 아릴이고;
이때, 각 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬 또는 아릴 기는 경우에 따라 치환된다.
일부 양태에서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화학식 (II)의 에폭시-티글리엔-3-온 화합물이다:
화학식 (II)
Figure pct00005
여기서, R3, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13 및 R15는 화학식 (I)에 정의된 바와 같다.
일부 양태들에서, 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물은 하기 화학식 (III)의 화합물이다:
화학식 (III)
Figure pct00006
여기서, R7, R8, R11, R12, R13 및 R15는 화학식 (I)에서 정의된 바와 같다.
화학식 (I), 화학식 (II) 또는 화학식 (III)의 특정 양태들에 따르면, 다음 중 하나 이상이 적용된다:
R1은 수소이고 R2는 OH 또는 -OC(O)C1-6알킬, -OC(O)C2-6알케닐 또는 -OC(O)C2-6알키닐이고, 또는 R1 및 R2는 함께 카르보닐 기를 형성하고; 특히 R1 및 R2가 함께 카르보닐 기를 형성하고;
R3은 수소 또는 -C1-3알킬이고, 특히 -C1-3알킬이며, 더욱 특히 메틸이고;
R4는 수소 또는 -OH, -OC(O)C1-6알킬, -OC(O)C2-6알케닐 또는 -OC(O)C2-6알키닐이며,
R5는 수소 또는 -OH, -OC(O)C1-6알킬, -OC(O)C2-6알케닐, 또는 -OC(O)C2-6알키닐이고; 또는 R4 및 R5는 함께 이중결합 또는 에폭사이드를 형성하고; 특히 R4 및 R5는 함께 이중결합을 형성하고;
R6은 수소 또는 -C1-3알킬, 특히 -C1-3알킬, 더욱 특히 메틸이고;
R7은 -OH, -OC(O)C1-15알킬, -OC(O)C2-15알케닐, -OC(O)C2-15알키닐, -OC(O)아릴(여기서, 아릴 기는 경우에 따라 치환된다), -OC(O)C1-15알킬아릴, -OC(O)C1-10알킬C(O)H, -OC(O)C2-10알케닐C(O)H, -OC(O)C1-10알킬C(O)C1-6알킬, -OC(O)C2-10알케닐C(O)C1-6알킬, -OC(O)C1-10알킬CH(OC1-3알킬)(OC1-3알킬), -OC(O)C2-10알케닐CH(OC1-3알킬)(OC1-3알킬), -OC(O)C1-10알킬SC1-6알킬, -OC(O)C2-10알케닐SC1-6알킬, -OC(O)C1-10알킬C(O)OC1-6알킬 또는 -OC(O)C2-10알킬C(O)OC1-6알킬이고; 특히 -OH, -OC(O)C1-15알킬, -OC(O)C2-12알케닐, -OC(O)C2-12알키닐, -OC(O)아릴 (여기서, 아릴 기는 경우에 따라 치환된다), -OC(O)C1-12알킬아릴, -OC(O)C1-6알킬C(O)H, -OC(O)C2-6알케닐C(O)H, -OC(O)C1-6알킬C(O)C1-6알킬, -OC(O)C2-6알케닐C(O)C1-6알킬, -OC(O)C1-6알킬CH(OC1-3알킬)(OC1-3알킬), -OC(O)C2-6알케닐CH(OC1-3알킬)(OC1-3알킬), -OC(O)C1-6알킬SC1-3알킬, -OC(O)C2-6알케닐SC1-3알킬, -OC(O)C1-6알킬C(O)OC1-3알킬 또는 -OC(O)C2-6알킬C(O)OC1-3알킬이며;
R8은 -OC(O)C1-15알킬, -OC(O)C2-15알케닐, -OC(O)C2-15알키닐, 또는 -OC(O)아릴(여기서, 아릴 기는 경우에 따라 치환된다), 특히 -OC(O)C1-10알킬, -OC(O)C2-10알케닐, -OC(O)C2-10알키닐 또는 -OC(O)아릴(여기서, 아릴 기는 경우에 따라 치환된다)이며; 더욱 특히 -OC(O)C1-10알킬, -C(O)C2-10알케닐 및 -OC(O)아릴(여기서, 아릴 기는 경우에 따라 치환된다)이고;
R9 및 R10은 독립적으로 -C1-3알킬이고, 특히 R9 및 R10은 둘 다 메틸이며;
R11 및 R12는 함께 에폭사이드를 형성하고, R13은 -OH, -OC(O)C1-6알킬, -OC(O)C2-6알케닐 또는 -OC(O)C2-6알키닐, 특히 -OH 또는 -C(O)C1-3알킬이거나; 또는
R12 및 R13이 함께 에폭사이드를 형성하고, R11이 -OH, -OC(O)C1-6알킬, -OC(O)C2-6알케닐 또는 -OC(O)C2-6알키닐, 특히 -OH이고;
R14는 수소, -C(O)C1-6알킬, -C(O)C2-6알케닐 또는 -C(O)C2-6알키닐, 특히 수소이고;
R15는 수소, -C(O)C1-6알킬, -C(O)C2-6알케닐 또는 -C(O)C2-6알키닐, 특히 수소 또는 -C(O)C1-3알킬이고;
R16은 수소, -C(O)C1-6알킬, -C(O)C2-6알케닐 또는 -C(O)C2-6알키닐, 특히 수소이다.
특정 양태에 따르면, 에폭시-티글리안 화합물은 이하 표 1 내지 6에 기재된 화합물 중 하나로부터 선택된다:
[표 1]
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
[표 2]
Figure pct00011
Figure pct00012
[표 3]
Figure pct00013
Figure pct00014
[표 4]
Figure pct00015
Figure pct00016
[표 5]
Figure pct00017
Figure pct00018
[표 6]
Figure pct00019
Figure pct00020
본 발명의 화합물은 순수 화합물 형태 또는 식물 추출물의 형태일 수 있다.
화합물이 입체화학이 있는 것으로 묘사될 때, 묘사된 입체화학은 상대적 입체화학이고, 생합성 경로 및 화학 분석의 지식을 기반으로 한다.
일부 양태들에서, 식물 추출물은 폰타이니아(Fontainea) 또는 하일란디아(Hylandia) 속의 식물에서 유래된 것이고, 특히 종은 폰타이니아 판체리, 폰타이니아 아우스트랄리스, 폰타이니아 보레알리스, 폰타이니아 푸각스, 폰타이니아 오라리아, 폰타이니아 피크로스퍼마, 폰타이니아 로스트라타, 폰타이니아 서브파푸아나, 폰타이니아 베노사 또는 하일란디아 도크릴리, 특히 폰타이니아 피크로스퍼마, 폰타이니아 아우스트랄리스, 폰타이니아 로스트라타 또는 하일란디아 도크릴리이다.
식물의 부분은 과실, 종자, 외피, 줄기, 잎, 꽃, 뿌리, 배젖, 외과피 및 나무를 포함할 수 있고, 특히 추출물은 종자에서 수득된다.
식물의 추출물은 표준 방법으로 수득할 수 있고, 예컨대 식물의 종자, 잎, 과실, 배젖, 외과피, 줄기 또는 외피에서 수득되는 생물자원은 에탄올과 같은 극성 용매 등을 이용한 1차 용매 추출로 처리된다. 1차 추출 다음으로 농축되고 물로 희석된 후, 2차 용매, 예컨대 에틸아세테이트로 추출된다. 2차 추출 후 용매 샘플은 수집하여 정제용 HPLC 분별로 분리한다. 분획들을 분석용 HPLC로 분석하고 샘플에서 발견되는 화합물들의 체류 시간에 따라 수집한다. 수집한 분획을 칭량하고, 생물검정하고 분석용 HPLC로 분석한다. 특정 화합물을 분리하기 위해 하나 이상의 정제용 HPLC를 이용한 추가 분별을 수행한다. 각 화합물은 생물검정하고 그 구조는 UV, NMR 및 질량 분광분석 기술로 동정한다.
본 발명의 다른 화합물들은 식물 또는 식물의 일부, 특히 폰타이니아 속에서, 특히 폰타이니아 피크로스퍼마 종에서, 특히 폰타이니아 피크로스퍼마의 종자에서 분리된 화합물을 유도체화하여 수득할 수 있다.
천연 화합물의 유도체는 당해 기술분야에 공지된 기술로 수득할 수 있다. 예를 들어, 하이드록시 기는 크롬산, 존스 시약, KMnO4, 과산, 예컨대 mCPBA(메타클로로퍼벤조산) 또는 디옥시란, 예컨대 디메틸디옥시란(DMDO) 및 메틸(트리플루오로메틸)디옥시란(TFDO)과 같은 산화제에 노출시켜 산화시킬 수 있다. 산화제는 분자 내의 다른 작용기는 산화되거나 또는 산화되지 않도록 선택할 수 있다. 예를 들어, 1차 알코올은 RuCl2(PPh3)3-벤젠과 같은 시약을 사용함으로써 2차 알코올의 존재 하에 알데하이드 또는 카르복시산으로 선택적으로 산화될 수 있다. 2차 알코올은 Cl2-피리딘 또는 NaBrO3-세릭-암모늄 니트레이트를 사용하여 1차 알코올의 존재 하에 케톤으로 선택적으로 산화될 수 있다. 알코올은 이중 결합 및 삼중 결합의 존재 하에 인접 입체중심에서 에피머화 없이, 셀라이트(또는 염화암모늄)의 존재 또는 부재 하에 존스 시약을 이용하여 산화시킬 수 있다. 대안적으로, 선택한 시약은 덜 선택적이어서 하나보다 많은 작용기에서 산화를 초래할 수 있다.
또한, 하이드록시 기는 에테르화 또는 아실화에 의해 유도체화될 수도 있다. 예를 들어, 에테르는 염기의 존재 하에 알콕사이드 이온을 형성시키고, 이 알콕사이드를 적당한 알킬할라이드, 알케닐할라이드, 알키닐할라이드 또는 아릴할라이드와 반응시켜 제조할 수 있다. 이와 마찬가지로, 아실화는 알콕사이드 이온을 형성시키고 적당한 카르복시산 또는 활성화된 카르복시산(예컨대, 무수물 또는 아실클로라이드)과 반응시켜 달성할 수 있다.
아실 기는 당업계에 공지된 바와 같이 산 또는 염기 가수분해에 의해 가수분해되어 알코올을 제공할 수 있고, 이 알코올은 전술한 바와 같이 추가로 유도체화될 수 있다.
케톤은 이중 결합을 환원시킴이 없이 리튬 알루미늄 하이드라이드 및 다른 금속 하이드라이드와 같은 환원제에 의해 2차 알코올로 환원될 수 있으며, 그 예로는 α-불포화 케톤을 포함한다.
이중 결합 및 삼중 결합은 촉매적 환원, 예컨대 H2/Pd를 사용하여 단일 결합으로 환원될 수 있다. 이중 결합은 또한 과산, 예컨대 mCPBA 또는 디옥시란, 예컨대 DMDO 및 TFDO와 같은 산화제를 사용하여 에폭사이드로 산화될 수도 있다. 또한, 이중 결합은 할로 기, 하이드록시 또는 알콕시 기와 같은 치환체를 도입시키기 위해 첨가 반응으로 처리될 수도 있다.
당업자는 합성 방법에 관한 서적, 예컨대 Smith M.B. and March J., March's Advanced Organic Chemistry, Fifth Edition, John Wiley & Sons Inc., 2001 및 Larock R.C., Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers Ltd., 1989를 참조로 하여, 분리된 화합물의 유도체를 수득하기에 적당한 조건을 결정할 수 있을 것이다. 또한, 작용기의 선택적 조작은 다른 작용기의 보호를 필요로 하기도 한다. 불필요한 부반응을 방지하기에 적당한 보호 기는 문헌[Green and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons Inc., 3rd Edition, 1999]에 제공되어 있다.
본 발명의 화합물
본 발명의 다른 관점에 따르면, 다음과 같은 신규 화합물 또는 이의 약학적 허용성 염이 제공된다:
12-헥사노일-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 5);
12-아세틸-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 6);
12-프로파노일-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 7);
12-부타노일-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 8);
12-[(2E,4E)-(6,6-디메톡시헥사-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 9);
12-[(2E,4E)-6-옥소헥사-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9, 12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 10);
12-[(2E,4E)-6,7-디하이드록시도데카-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 11);
12-[(2E)-4,5-디하이드록시-데카-2-에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 12);
12-티글로일-13-(2-메틸프로파노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 13);
12-[(2E)-3-메틸티오프로프-2-에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9, 12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 14);
12-(2-메틸프로프-2-에노일-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 15);
12-[(2E,4E)-헥사-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13, 20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 16);
12-[(2E,4E)-8-옥소도데카-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5, 9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물17);
12-[(2Z,4E)-데카-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13, 20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 18);
13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 19);
12-[(2E)-부트-2-에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 20);
12-티글로일-13-부타노일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 21);
12-(3-부테노일)-13-노나노일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 22);
12-벤조일-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 23);
12-[(2Z,4E)-데카-2,4-디에노일]-13-(2-메틸프로파노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12, 13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 25);
12-[(2E,4E)-6,7-(안티)-에폭시-도데카-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 26);
12,13-디부타노일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 27);
12-벤조일-13-부타노일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 28);
12-티글로일-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 29);
13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 30);
12-아세틸-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 31);
12,13-디-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 32);
12-프로파노일-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 33);
12-헥사노일-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 34);
12-티글로일-13-(2-메틸프로파노일)-5,6-에폭시-4,7,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 35);
12-[(2E)-3-메틸티오프로프-2-에노일]-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9, 12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 36);
12-{[2-(메틸설파닐)카르보닐]-아세토일}-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9, 12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 39);
12-[(2-메톡시카르보닐)-아세토일]-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,12, 13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 40);
12,13-디-노노일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 41);
12,13-디-헥사노일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 42);
12,13-디-펜타노일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 43);
12,13-디-티글로일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 44)
5,20-디아세틸-12-티글로일-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 45);
12,13-디-(2E,4E)-헥스-2,4-에노일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 46);
12-헥사노일-13-[2-(N-메틸안트라닐로일)]-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 47);
12-아세틸-13-[2-(N-메틸안트라닐로일)]-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 48);
12,13-디-헵타노일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 49);
12-미리스토일-13-아세틸-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 50);
12-미리스토일-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 51);
12-(2-메틸부타노일)-13-아세틸-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 52); 및
13-헥사노일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 53);
12,13-디-(3-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3온 (화합물 60).
본 발명의 또 다른 관점에 따르면, 화합물 5 내지 53 또는 60 또는 이의 약학적 허용성 염 중 어느 하나는 약학적 허용성 담체, 희석제 및/또는 부형제와 함께 약학 조성물의 형태로 존재할 수 있다.
조성물
에폭시-티글리안 화합물 또는 이의 약학적 허용성 염은 순물질로서 투여될 수 있지만, 에폭시-티글리안 화합물을 약학적 허용성 담체, 희석제 및/또는 부형제와 함께 약학 조성물의 형태로 투여하는 것이 더욱 편리할 수 있다.
약학적 용도 및 조성물을 위한 투여량 형태 및 투여 속도는 당업자라면 쉽게 결정할 수 있다.
투여량 형태는 정제, 분산액, 현탁액, 주사제, 용액제, 시럽, 트로키(troches), 캡슐, 좌약, 에어로졸, 경피 패치, 함침(폐쇄) 드레싱, 크림, 겔 등을 포함한다. 이 투여량 형태는 또한 약학 조성물의 조절 방출을 위해 특별히 설계되거나 또는 변형된 주사 또는 이식 장치를 포함할 수도 있다. 치료제의 조절 방출은 치료제를 예컨대 소수성 중합체, 예컨대 아크릴 수지, 왁스, 고급 지방족 알코올, 폴리락트산 및 폴리글리콜산 및 특정한 셀룰로오스 유도체, 예컨대 하이드록시프로필메틸 셀룰로오스로 코팅하여 달성할 수 있다. 또한, 조절 방출은 다른 중합체 매트릭스, 리포좀 및/또는 마이크로구(microsphere)를 사용하여 달성할 수도 있다.
또한, 전신 투여를 위한 허용성 담체 및 약학적 허용성 담체는 본 발명의 조성물에 첨가될 수 있다.
적당하게는 약학 조성물은 약학적 허용성 부형제 또는 허용성 부형제를 함유한다. "약학적 허용성 부형제"란, 안전하게 사용될 수 있는 고체 또는 액체 충전제, 희석제 또는 캡슐화 물질을 의미한다. 특정 투여 경로에 따라, 당업계에 공지된 다양한 담체가 사용될 수 있다. 이러한 담체 또는 부형제는 당, 전분, 셀룰로오스 및 이의 유도체, 맥아, 젤라틴 또는 다른 겔화제, 탈크, 황산칼슘, 식물유, 합성 오일, 알코올 및/또는 폴리올, 알긴산, 인산염완충용액, 유화제, 등장성 식염수 및 발열원 제거수를 포함하는 그룹 중에서 선택될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물을 사람 또는 사람외 환자에게 제공하기 위해서는 임의의 적당한 투여 경로가 이용될 수 있다. 예를 들어, 경부, 국소, 직장, 비경구, 설하, 협측, 정맥내, 동맥내, 근육내, 피내, 피하, 흡입, 안내, 복강내, 뇌실내, 경피 등이 이용될 수 있다.
투여에 적합한 본 발명의 약학 조성물은 본 발명의 하나 이상의 약학적 활성 화합물 또는 본 발명의 추출물의 소정량을 분말 또는 과립으로서, 또는 수성 액체, 사이클로덱스트린 용액, 비-수성 액체, 수중유 에멀젼 또는 유중수 에멀젼 중의 용액 또는 현탁액으로서, 또는 크림 또는 겔 중의 용액 또는 현탁액으로서, 또는 본 발명의 화합물을 포함하는 마이크로입자 또는 나노입자의 현탁액으로서, 예컨대 비제한적으로 실리카 또는 폴리락타이드 마이크로입자 또는 나노입자로서 주사기, 바이엘, 튜브, 캡슐, 사셋(sachet) 또는 정제와 같은 분리 단위들에 각각 제공될 수 있다. 이러한 조성물들은 임의의 제약법으로 제조할 수 있지만, 모든 방법들은 본 발명의 하나 이상의 약학적 활성 화합물을 하나 이상의 필수 성분들을 구성하는 담체와 연합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 조성물은 본 발명의 제제를 액체 담체 또는 미분형 고체 담체 또는 이 둘 모두와 균일하고 세밀하게 혼합하고, 그 다음 필요하다면 산물을 원하는 형상으로 성형함으로써 제조한다.
분말인 경우, 담체는 미분형 활성 성분과 혼합물로 존재하는 미분형 고체이다.
정제인 경우, 활성 성분은 필요한 결합 능력을 가진 담체와 적당한 비율로 혼합되고 원하는 형태와 크기로 압축된다.
분말 및 정제에 적당한 담체로는 마그네슘 카보네이트, 마그네슘 스테아레이트, 탈크, 당, 락토오스, 펙틴, 덱스트린, 전분, 젤라틴, 트라가칸트, 메틸셀룰로오스, 소듐 카르복시메틸셀룰로오스, 저 융점 왁스, 코코아 버터 및 이의 유사물을 포함한다. "제제"란 용어는 활성 성분이 담체와 또는 담체 없이, 담체에 둘러싸여 담체와 연합되어 있는 캡슐을 제공하는 담체로서 캡슐화 물질과 활성 화합물의 포뮬레이션을 포함하는 것으로 생각한다. 이와 마찬가지로, 카셋 및 로젠지도 포함된다. 정제, 분말제, 캡슐, 환약, 카셋 및 로젠지는 경구 투여에 적합한 고체 형태로서 사용될 수 있다.
좌약을 제조하기 위해서는, 먼저 지방산 글리세라이드 또는 코코아 버터의 혼합물과 같은 저융점 왁스를 용융시키고, 여기에 활성 성분을 교반 등으로 균질하게 분산시킨다. 용융된 균질 혼합물을 그 다음 간편한 크기의 주형에 붓고, 냉각시켜 고화시킨다.
질 투여에 적합한 포뮬레이션은 활성 성분 외에 당해 기술분야에서 적당한 것으로 공지된 바와 같은 담체를 함유하는 페사리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 폼(foam) 또는 스프레이로서 제공될 수 있다.
액체 형태의 제제는 용액제, 현탁액 및 유탁액, 예컨대 수용액 또는 프로필렌 글리콜 수용액을 포함한다. 예를 들어, 비경구 주사용 액체 제제는 수성 1,2-프로판디올, 디메틸설폭사이드(DMSO), 감마 사이클로덱스트린 또는 2-하이드록시프로필-베타-사이클로덱스트린의 수용액, 식염수 용액 또는 폴리에틸렌 글리콜 용액으로서, 완충액과 함께 또는 완충액 없이 조제될 수 있다. 바람직한 pH 범위는 3.5 내지 4.5이다. 적당한 완충액은 제제를 pH 3.5 내지 4.5로 완충시키고, 비제한적으로 아세테이트 완충액 및 시트레이트 완충액을 포함한다.
따라서, 본 발명에 따른 화합물은 비경구 투여용으로(예컨대, 볼러스(bolus) 주사 또는 연속 주입과 같은 주사로) 조제될 수 있고, 앰플, 사전충전된 주사기, 소용량 주입제 또는 보존제가 첨가된 다중용량 용기에 단위 용량 형태로 제공될 수 있다. 조성물은 오일성 또는 수성 매개제에 현탁액, 용액제 또는 유탁액와 같은 형태일 수 있고, 현탁화제, 안정제 및/또는 분산제와 같은 조제용 제제를 함유할 수 있다. 대안적으로, 활성 성분은 멸균 고체의 무균 분리에 의해 또는 용액으로부터 동결건조에 의해 수득되는 분말 형태로 존재할 수 있고, 사용 전에 적당한 매개제, 예컨대 멸균된 발열원 제거수에 의해 구성될 수 있다.
구강용에 적합한 수성 용액은 활성 성분을 물에 용해하고, 적당한 착색제, 향미제, 안정제 및 점증제를 필요한 경우 첨가하여 제조할 수 있다.
구강용에 적합한 수성 현탁액은 미분형 활성 성분을 점성 물질, 예컨대 천연 또는 합성 검(gum), 수지, 메틸셀룰로오스, 소듐 카르복시메틸셀룰로오스 또는 다른 공지된 현탁화제와 함께 물에 분산시켜 제조할 수 있다.
또한, 사용 직전에 경구 투여용 액체 제형으로 변환시킬 수 있는 고체 제형도 포함된다. 이러한 액체 제형은 용액제, 현탁액 및 유탁액를 포함한다. 이 제제들은 활성 성분 외에, 착색제, 향미제, 안정제, 완충액, 인공 및 천연 감미제, 분산제, 점증제, 가용화제 등을 함유할 수 있다.
표피 또는 다른 기관에 국소 투여하기 위해서는, 본 발명에 따른 화합물은 겔, 연고, 유탁액, 페이스트, 크림 또는 로션으로, 또는 경피용 패치로 조제될 수 있다. 겔은 적당한 점증제를 사용하고, 화합물의 수성/알코올성 조성물에 점증제를 첨가하여 제조할 수 있다. 적당한 점증제 또는 겔화제는 당해 기술분야에 공지되어 있고, 예컨대 폴리비닐 카르복시 중합체, Carbomer 940이 있다. 연고 및 크림은 예컨대 적당한 점증제 및/또는 겔화제를 첨가하여 수성 또는 오일성 베이스로 조제할 수 있다. 로션은 수성 또는 오일성 베이스로 조제할 수 있고, 일반적으로 하나 이상의 유화제, 안정제, 분산제, 현탁화제, 점증제 또는 착색제를 함유할 수 있다.
또한, 국소 투여에 적합한 포뮬레이션은 배스(bath) 또는 침지 용액 또는 스프레이 형태로 국소적으로 투여될 수 있는 용액 또는 현탁액을 포함한다. 이 포뮬레이션은 피부 자극, 곤충 물림 및 발 상처를 방지하기 위해 적당히 적용될 수 있다.
구강에 국소 투여하기에 적합한 포뮬레이션은 착향 베이스, 일반적으로 수크로오스 및 아카시아 또는 트라가간트에 활성제제를 함유하는 로젠지; 불활성 베이스, 예컨대 젤라틴 및 글리세린 또는 수크로오스 및 아카시아에 활성 성분을 함유하는 파스틸(pastilles); 및 적당한 액체 담체에 활성 성분을 함유하는 구강세정제(mouthwashes)를 포함한다.
용액 또는 현탁액은 통상적인 수단, 예컨대 점적기(dropper), 피펫 또는 스프레이로 비강에 직접 적용한다. 이 포뮬레이션은 단일용량 또는 다중용량 형태로 제공될 수 있다. 점적기 또는 피펫과 같은 후자의 경우에는 환자에게 적당한 소정 부피의 용액 또는 현탁액을 투여하여 달성할 수 있다. 스프레이의 경우에는, 예컨대 계량형 분무 스프레이 펌프를 이용하여 달성할 수 있다. 비측 전달 및 체류를 향상시키기 위해서, 본 발명에 따른 화합물은 사이클로덱스트린에 의해 캡슐화될 수 있고, 또는 비측 점막에 전달 및 체류를 증대시킬 것으로 예상되는 제제를 이용하여 조제할 수 있다.
또한, 기도로의 투여는 활성 성분이 적당한 추진체, 예컨대 클로로플루오로카본(CFC), 예를 들어 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄 또는 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 다른 적당한 기체와 함께 압축 팩에 제공된 에어로졸 포뮬레이션을 이용하여 달성할 수 있다. 에어로졸은 편리하게는 레시틴과 같은 계면활성제를 함유할 수도 있다. 약물의 용량은 계량형 밸브를 제공하여 조절할 수 있다.
대안적으로, 활성 성분은 건조 분말, 예컨대 락토오스, 전분, 전분 유도체, 예컨대 하이드록시프로필메틸 셀룰로오스 및 폴리비닐피롤리돈(PVP)과 같은 적당한 분말 베이스에 화합물의 분말 혼합물의 형태로 제공될 수 있다.
편리하게는, 분말 담체는 비강에서 겔을 형성할 것이다. 분말 조성물은 예컨대 젤라틴 등의 캡슐 또는 카트리지, 또는 분말이 흡입기를 통해 투여될 수 있는 블리스터 팩과 같은 단위 용량 형태로 제공될 수 있다.
기도에 투여하기 위한 포뮬레이션, 예컨대 비내 포뮬레이션인 경우, 화합물은 일반적으로 입자 크기가 예컨대 1 내지 10 미크론 또는 그 이하의 정도로 작은 입자 크기인 것일 것이다. 이러한 입자 크기는 당해 기술분야에서 마이크론화와 같은 수법에 의해 수득할 수 있다.
이제, 본 발명은 이하에 본 발명의 일부 바람직한 관점을 예시한 실시예들을 참조로 하여 설명될 것이다. 하지만, 다음과 같은 본 발명의 상세한 설명의 특별성은 본 발명의 이전 설명의 일반성을 대체하는 것이 아니라는 것을 알고 있어야 한다.
실시예
실시예 1: 식물 추출물
모든 식물 추출물은 식물 재료를 잘게 썰어, 식물 재료 1부 대 에탄올 2 내지 5부(w/w)의 대략적 비율의 에탄올로 추출하여 제조했다. 이 추출물을 4℃에서 밤새 방치한 다음, 따라낸 상청액을 사용 시까지 4℃에 보관했다.
식물 추출물 중의 에폭시-티글리안 화합물의 존재는 ABI3200 삼중 사극자 질량 분광계에 연결된 시마즈(Shimadzu) HPLC를 사용하여 LCMSMS로 확인했다. 혼합물 중의 화합물을 분리하기 위해 할로 아미드 C18 컬럼을 이용했고, 용매계로써 아세토니트릴/물 혼합물을 사용했다.
대부분의 샘플은 C18 Kinetix 4.6mm x 100mm 2.6 미크론 C18 컬럼을 사용하여 KinC18Gen 방법으로 진행시켰다:
Figure pct00021
일부 샘플은 Halo 아미드 컬럼 RP 4.6mm x 150mm, 2.7 미크론(Advanced Materials Technology)을 사용하여 아미드 롱(Amide Long) 방법으로 진행시켰다:
Figure pct00022
실시예 2: 에폭시- 티글리안 화합물의 분리 및 설명
화합물은 폰타이니아 피크로스퍼마의 종자로부터 추출, 및 실리카겔 크로마토그래피, 그 다음 정제용 HPLC(C18 컬럼, 메탄올/물 용매 조합)를 통해 이하에 기술되는 일반적 방법을 사용하여 정제했다.
약 1 내지 2kg의 식물 재료(잎, 과실, 종자, 줄기, 뿌리, 꽃, 외피 또는 나무)를 매우 잘게 썰고, 2부의 에탄올(w/v)로 3회 추출하고, 이 추출물을 합하여, 증발시키고, 잔류물을 물과 비혼화성 유기 용매(일반적으로, 석유 스피릿 bp 40-60(PE) 또는 에틸 아세테이트 EtOAc) 사이에 분획화했다. 유기 용매의 증발 후 잔류물은 실리카겔 상에서 PE 또는 헵탄부터 시작해서 EtOAc로 전진시키고, 그 다음 메탄올을 사용하는 증가하는 극성의 용매 혼합물로 크로마토그래피했다. 실리카겔의 분획들은 그 다음 정제용 HPLC로 C18 컬럼에서 일반적으로 메탄올-물 구배를 사용하여 정제했다. 후자의 분획들을 생물활성에 대해 분석하고, 분석용 HPLC에서 발견된 화합물의 체류 시간에 따라 수집하고, 다시 정제용 HPLC로 처리하여 순수 화합물을 수득했다. 각 화합물은 생물검정하고, 그 구조는 UV, NMR 및 질량분광분석 기술로 확인했다.
실시예 1: 12-티글리올-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00023
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.84 (3H (18), d, J=6.4 Hz), 0.92 (3H (4"), t, J=7.3 Hz), 1.11 (3H (5"), d, J=6.8 Hz), 1.21 (3H (16), s), 1.24 (3H (17), s), 1.26 (1H (14), d, J=6.8 Hz), 1.43 (1H (3"), m, J=14.1, 7.3, 7.2 Hz), 1.69 (1H (3"), m), 1.73 (3H (19), dd, J=2.9, 1.5 Hz), 1.77 (3H (4'), dd, J=7.1, 1.2 Hz), 1.8 (3H (5'), d, J=1.5 Hz), 1.94 (1H (11), m), 2.37 (1H (2"), qt, J=7.0, 6.8 Hz), 3.17 (1H (8), d), 3.26 (1H (7), s), 3.69 (1H, OH, br.s), 3.80, (1H (20), d, J=12.7 Hz), 3.83 (1H (20), d, J=12.2 Hz), 4.06 (1H (10), t, J=2.7 Hz), 4.22 (1H (5), s), 5.42 (1H (12), d, J=9.8 Hz), 6.02 (1H, OH, br.s), 6.79 (1H (3'), m, J=7.2, 7.0, 1.2 Hz), 7.71 (1H, (1), dd).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.6 (4"), 12.2 (5'), 14.4 (4'), 15.1 (18), 16.1 (5"), 17.2 (16), 23.6 (17), 26.1 (3"), 26.6 (15), 36.0 (8), 36.1 (14), 41.2 (2"), 45.9 (11), 48.9 (10,) 61.8 (6), 64.6 (20), 65.2 (7), 65.5 (13), 71.3 (5), 72.4 (4), 76.7 (12), 77.2 (9), 128.4 (2'), 133.4 (2), 137.6 (3'), 164.7 (1), 167.4 (1'), 178.9 (1"), 209.9 (3).
화합물 2: 12,13-디-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00024
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.85 (3H (18), d, J=6.4 Hz), 0.89 (3H (4"), J=7.3Hz), 0.91 (3H (4'), t, J=7.8 Hz), 1.11 (3H (5"), d, J=6.8 Hz), 1.12 (3H (5'), d, J=6.8 Hz), 1.21 (3H (17), s), 1.22 (3H (16), s), 1.26 (1H (14), d, J=6.8 Hz), 1.44 (1H (3'), td, J=13.9, 7.3 Hz), 1.44 (1H (3"), td, J=13.9, 7.3 Hz), 1.63 (1H (3'), dd, J=7.8, 5.9 Hz), 1.69 (1H (3"), dd, J=13.9, 7.1 Hz), 1.74 (3H (19), dd, J=2.7, 1.2 Hz), 1.90 (1H (11), dd, J=10.0, 6.6 Hz), 2.36 (1H (2'), q, J=7.0 Hz), 2.36 (1H (2"), q, J=7.0 Hz), 3.16 (1H (8), d, J=6.8 Hz), 3.26 (1H (7), s), 3.61 (1H (OH), m), 3.78 (1H (20), m, J=12.7 Hz), 3.85 (1H (20), d, J=12.2 Hz), 4.06 (1H (10), t, J=2.7 Hz), 4.22 (1H (5), s), 5.40 (1H (12), d, J=10.3 Hz), 5.98 (1H (9-OH), m), 7.71 (1H (1), dd, J=2.4, 1.5 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.6 (4'), 11.6 (4"), 15.0 (18), 16.1 (5"), 17.0 (5'), 17.2 (17), 23.7 (16), 26.2 (3"), 26.5 (15), 26.7 (3'), 36.0 (8), 36.0 (14), 41.2 (2"), 41.8 (2'), 45.5 (11), 48.9 (10), 61.7 (6), 64.5 (20), 65.2 (7), 65.5 (13), 71.5 (5), 72.4 (4), 76.2 (12), 77.2 (9), 133.5 (2), 164.7 (1), 175.9 (1'), 178.8 (1"), 209.9 (3).
화합물 3: 12-[(2E,4E,6E)-도데카-2,4,6-트리에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00025
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.86 (3H (18), d, J=7.0 Hz), 0.87 (3H (12'), m, J=7.0 Hz), 0.92 (3H (4"), t, J=7.5 Hz), 1.12 (3H (5"), d, J=7.0 Hz), 1.22 (3H (17), s), 1.24 (3H (16), s), 1.26 (2H (10'), m), 1.27 (1H (14), m), 1.29 (2H (11'), m), 1.39 (2H (9'), m), 1.45 (1H (3"), dd, J=14.1, 7.0 Hz), 1.71 (1H (3"), m), 1.74 (3H (19), dd, J=2.8, 1.2 Hz), 1.95 (1H (11), dq), 2.12 (2H (8'), q), 2.38 (1H (2"), sxt, J=7.0 Hz), 3.17 (1H (8), d, J=6.7 Hz), 3.27 (1H (7), s), 3.57 (1H, (4-OH), s), (3.78 (1H (20), m), 3.86 (1H (20), m), 4.06 (1H (10), d, J=2.7 Hz), 4.22 (1H (5), s), 5.41 (1H (12), d), 5.79 (1H (2'), d, J=15.2 Hz), 5.92 (1H (7'), dt, J=15.2, 7.2 Hz), 6.04 (1H (OH), m), 6.11 (1H (6'), dd, J=15.1, 10.7 Hz), 6.19 (1H (4'), dd, J=14.8, 11.2 Hz), 6.51 (1H (5'), dd, J=14.9, 10.7 Hz), 7.23 (1H (3'), dd, J=15.5, 10.9 Hz), 7.72 (1H (1), dd, J=2.4, 1.3 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.6 (4"), 14.0 (12'), 15.1 (18), 16.2 (5"), 17.2 (16), 22.5 (11'), 23.6 (17), 26.2 (3"), 26.7 (15), 28.6 (9'), 31.4 (10'), 33.0 (8'), 36.0 (8), 36.2 (14), 41.2 (2"), 45.9 (11), 48.9 (10), 61.6 (6), 64.5 (20), 65.3 (7), 65.5 (13), 71.6 (5), 72.4 (4), 76.7 (9), 77.1 (12), 119.5 (2'), 127.5 (4'), 129.7 (6'), 133.5 (2), 141.1 (7'), 141.7 (5'), 145.3 (3'), 164.8 (1), 166.6 (1'), 170.0 (1"), 210.0 (3).
화합물 4: 12-[(2E,4E)-데카-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00026
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.87 (3H (18), d, J=6.4 Hz), 0.87 (3H (10'), s), 0.93 (3H (4"), t, J=7.5 Hz), 1.13 (3H (5"), d, J=7.1 Hz), 1.23 (3H (16), s), 1.25 (3H (17), s), 1.27 (1H (14), d, J=1.6 Hz), 1.27 (2H (9'), m), 1.30 (2H (8'), m), 1.40 (2H (7'), m), 1.46 (1H (3"), dd, J=14.2, 6.9 Hz), 1.71 (1H (3"), m), 1.75 (3H (19), dd, J=2.9, 1.3 Hz), 1.95 (1H (11), d, J=3.3 Hz), 2.11 (1H (20-OH), m), 2.26 (2H (6'), m), 2.38 (1H (2"), q, J=7.0 Hz), 3.18 (1H (8), d, J=6.6 Hz), 3.28 (1H (7), s), 3.53 (1H (4-OH), d, J=0.9 Hz), 3.77 (1H (20), m), 3.81 (1H (5-OH), d, J=2.8 Hz), 3.87 (1H (20), dd, J=12.4, 7.6 Hz), 4.06 (1H (10), d, J=2.7 Hz), 4.22 (1H (5), d, J=1.7 Hz), 5.43 (1H (12), d, J=9.9 Hz), 5.83 (1H (2'), d, J=15.2 Hz), 5.86 (1H (5'), ddd, J=10.8, 7.9, 7.8 Hz), 6.03 (1H (9-OH), m), 6.10 (1H (4'), td, J=11.2, 0.7 Hz), 7.56 (1H (3'), ddd, J=15.3, 11.7, 1.1 Hz), 7.72 (1H (1), dd, J=2.5, 1.4 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.6 (4"), 14.0 (10'), 15.2 (18), 16.2 (5"), 17.2 (17), 22.5 (9'), 23.7 (16), 26.2 (3"), 26.7 (15), 28.3 (6'), 29.0 (7'), 31.4 (8'), 36.1 (8), 36.2 (14), 41.2 (2"), 45.9 (11), 49.0 (10), 61.6 (6), 64.5 (20), 65.3 (7), 65.5 (13), 71.7 (5), 72.3 (4), 76.8 (12), 77.1 (9), 120.8 (2'), 126.4 (4'), 133.5 (2), 140.0 (3'), 142.2 (5'), 164.8 (1), 166.6 (1'), 179.0 (1"), 210.0 (3).
화합물 5: 12-헥사노일-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00027
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.84 (3H (18), d, J=6.5 Hz), 0.87 (3H (6'), t, J=7.0 Hz), 0.91 (3H (4"), t, J=7.5 Hz), 1.11 (3H (5"), d, J=7.0 Hz), 1.21, (3H (16), s), 1.21, (3H (17), s), 1.25 (1H (14), d, J=6.6 Hz), 1.43 (1H (3"), m, J=14.1, 7.4, 7.1 Hz), 1.60 (2H (3'), quin, J=7.4 Hz), 1.70 (1H (3"), ddd, J=13.9, 7.3, 7.1 Hz), 1.74 (3H (19), dd, J=2.9, 1.3 Hz), 1.9 (1H (11), dq, J=10.0, 6.5 Hz), 2.27 (2H (2'), dt, J=7.4, 3.7 Hz), 1.29 (2H (4'), m, J=7.5, 7.2, 3.9 Hz), 1.29 (2H (5'), m, J=7.5, 7.2, 3.9 Hz), 2.36 (1H (2"), sxt, J=7.0 Hz), 3.14 (1H (8), d, J=6.6 Hz), 3.25 (1H (7), s), 3.64 (1H, (OH), s), 3.83 (1H (OH), dd, J=12.5, 7.9 Hz), 3.79 (2H (20), dd, J=12.5, 5.7 Hz), 3.94, (1H (OH), d, J=2.5 Hz), 4.06 (1H (10), t, J=2.6 Hz), 4.22 (1H (5), s), 5.37 (1H (12), d, J=10.0 Hz), 5.95 (1H (OH), br. s.) 7.7 (1H (1), dd, J=2.4, 1.3 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.6 (4"), 13.9 (6'), 15.0 (18), 16.1 (5"), 17.1 (16), 22.3 (5'), 23.6 (17), 24.9 (3'), 26.2 (3"), 26.6 (15), 31.1 (4'), 34.5 (2'), 35.96 (8), 36.04 (14), 41.2 (2"), 45.6 (11), 48.9 (10), 61.8 (6), 64.6 (20), 65.2 (7), 65.5 (13), 71.4 (5), 72.4 (4), 76.5 (12), 77.1 (9), 133.4 (2), 164.6 (1), 173.3 (1'), 178.8 (1"), 209.9 (3).
화합물 6: 12-아세틸-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00028
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.85 (3H (18), d, J=6.4 Hz), 0.92 (3H (4"), t, J=7.6 Hz), 1.12 (3H (5"), d, J=6.8 Hz), 1.21 (3H (16), s), 1.23 (3H (17), s), 1.25 (1H (14), d, J=6.8 Hz), 1.44 (1H (3"), m, J=14.1, 7.3, 7.2 Hz), 1.71 (1H (3"), dd), 1.75 (3H (19), dd, J=2.9, 1.0 Hz), 1.91 (1H (11), m), 2.04 (3H (2'), s), 2.36 (1H (2"), m, J=7.0, 6.8 Hz), 3.14 (1H (8), d, J=6.8 Hz), 3.26 (1H (7), s), 3.78 (1H (20), d, J=12.7 Hz), 3.85 (1H (20), d, J=12.7 Hz), 4.04 (1H (10), t, J=2.7 Hz), 4.21 (1H (5), s), 5.33 (1H (12), d, J=9.8 Hz), 7.7 (1H (1), s).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.6 (4"), 15.1 (18), 16.2 (5"), 17.1 (16), 21.0 (2'), 23.7 (17), 26.2 (3"), 26.7 (15), 36.0 (8), 36.1 (14), 41.2 (2"), 45.7 (11), 48.9 (10), 61.7 (6), 64.5 (20), 65.2 (7), 65.4 (13), 71.5 (5), 72.4 (4), 76.8 (9), 77.1 (12), 133.5 (2), 164.6 (1), 170.6 (1'), 178.9 (1"), 209.9 (3).
화합물 7: 12-프로파노일-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00029
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.85 (3H (18), d, J=6.8 Hz), 0.92 (3H (4"), t, J=7.6 Hz), 1.12 (3H (5"), d, J=7.3 Hz), 1.13 (3H (3'), t), 1.21 (3H (16), s), 1.22 (3H (17), s), 1.25 (1H (14), dd, J=10.3, 6.8 Hz), 1.44 (1H (3"), m J=14.0, 7.0, 6.6 Hz), 1.70 (1H (3"), dd, J=14.2, 6.8 Hz), 1.74 (3H (19), dd, J=2.9, 1.5 Hz), 1.91 (1H (11), m), 2.31 (2H (2'), m), 2.37 (1H (2"), dd, J=13.7, 6.8 Hz), 3.15 (1H (8), d, J=6.8 Hz), 3.26 (1H (7), s), 3.78 (1H (20), d, J=12.2 Hz), 3.84 (1H (20), d, J=12.7 Hz), 4.05 (1H (10), m), 4.21 (1H (5), s), 5.35 (1H (12), d, J=9.8 Hz), 5.92 (1H (OH), br.s.), 7.71 (1H (1), m).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.3 (3'), 9.7 (19), 11.6 (4"), 15.1 (18), 16.1 (5"), 17.1 (16), 23.7 (17), 26.2 (3"), 26.7 (15), 27.8 (2'), 36.0 (8), 36.1 (14), 41.2 (2"), 45.7 (11), 48.9 (10), 61.7 (6), 64.6 (20), 65.2 (7), 65.4 (13), 71.5 (5), 72.4 (4), 76.8 (12), 77.1 (9), 133.5 (2), 164.6 (1), 173.9 (1'), 178.9 (1"), 209.9 (3).
화합물 8: 12-부타노일-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00030
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.85 (3H (18), d, J=6.4 Hz), 0.92 (3H (4"), t, J=7.6 Hz), 0.94 (3H (4'), t, J=7.3 Hz), 1.12 (3H (5"), d), 1.22 (3H (16), s), 1.23 (3H (17), s), 1.26 (1H (14), d, J=6.8 Hz), 1.45 (1H (3"), dq, J=14.0, 7.1 Hz) 1.64 (2H (3'), m, J=14.6, 7.2, 7.1 Hz), 1.71 (1H (3"), dd, J=13.7, 6.8 Hz), 1.75 (3H (19), d, J=2.9 Hz), 1.90 (1H (11), dd, J=10.0, 6.6 Hz), 2.27 (2H (2'), m), 2.37 (1H (2"), qt, J=7.0, 6.8 Hz), 3.15 (1H (8), d, J=6.4 Hz), 3.27 (1H (7), s), 3.77 (1H (20), m, J=12.2 Hz), 3.86 (1H (20), m, J=12.7 Hz), 4.05 (1H (10), d, J=2.4 Hz), 4.21 (1H (5), s), 7.71 (1H (1), dd, J=2.4, 1.0 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.6 (4"), 13.5 (4'), 15.1 (18), 16.1 (5"), 17.1 (16), 18.7 (3'), 23.7 (17), 26.2 (3"), 26.6 (15), 36.0 (8), 36.1 (14), 36.4 (2'), 41.2 (2"), 45.6 (11), 48.9 (10), 61.6 (6), 64.5 (20), 65.2 (7), 65.5 (13), 71.7 (5), 72.3 (4), 76.6 (12), 77.1 (9), 133.5 (2), 164.7 (1), 173.1 (1'), 178.8 (1"), 209.9 (3).
화합물 9: 12-[(2E,4E)-(6,6-디메톡시헥사-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00031
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.86 (3H (18), d, J=6.4 Hz), 0.92 (3H (4"), t, J=7.3 Hz), 1.12 (3H (5"), d, J=6.8 Hz), 1.22 (3H (17), s), 1.24 (3H (16), s), 1.27 (1H (14), dd, J=11.2, 6.8 Hz), 1.44 (1H, (3"), m), 1.72 (1H (3"), m), 1.75 (3H (19), dd, J=2.9, 1.5 Hz), 1.96 (1H (11), dd, J=10.0, 6.6 Hz), 2.37 (1H (2"), m), 3.17 (1H (8), d, J=6.8 Hz), 3.27 (1H (7), s), 3.31 (3H (7'), s), 3.31 (3H (8'), s), 3.79, (1H (20), m, J=12.2 Hz), 3.86 (1H (20), m), 4.06 (1H (10), br. s.), 4.22 (1H (5), d, J=2.4 Hz), 4.89 (1H (6'), dd, J=4.4, 1.0 Hz), 5.42 (1H (12), d, J=9.8 Hz), 5.91 (1H (2'), d, J=15.7 Hz), 5.98 (1H (5'), dd, J=15.7, 4.4 Hz), 6.47 (1H (4'), dd, 15.6, 11.2 Hz), 7.21 (1H (3'), dd, J=15.6, 11.2 Hz), 7.71 (1H (1), s).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.6 (4"), 15.1 (18), 16.2 (5"), 17.2 (17), 23.6 (16), 26.2 (3"), 26.8 (15), 36.0 (8), 36.2 (14), 41.2 (2"), 45.8 (11), 48.9 (10), 52.7 (7'), 52.7 (8'), 61.7 (6), 64.5 (20), 65.2 (7), 65.4 (13), 71.6 (5), 72.4 (4), 77.1 (9), 77.1 (12), 101.3 (6'), 122.8 (2'), 131.0 (4'), 133.5 (2), 137.9 (5'), 143.4 (3'), 164.7 (1), 166.1 (1'), 178.9 (1"), 209.9 (3).
화합물 10: 12-[(2E,4E)-6-옥소헥사-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00032
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.88 (3H (18), d, J=6.4 Hz), 0.93 (3H (4"), t, J=7.5 Hz), 1.13 (3H (5"), d, J=7.1 Hz), 1.24 (3H (17), s), 1.25 (3H (16), s), 1.28 (1H (14), m), 1.46 (1H (3"), td, J=14.1, 7.3 Hz), 1.70 (1H (3"), m), 1.75 (3H (19), dd, J=2.9, 1.2 Hz), 1.99 (1H (11), dddd, J=9.8, 6.5, 6.4, 6.1 Hz), 2.38 (1H (2"), d, J=6.8 Hz), 3.19 (1H (8), d, J=6.8 Hz), 3.28 (1H (7), s), 3.77 (1H (20), m, J=12.5 Hz), 3.87 (1H (20), d, J=13.0 Hz), 4.06 (1H (10), d, J=2.7 Hz), 4.22 (1H (5), s), 5.46 (1H (12), d, J=9.8 Hz), 6.28 (1H (2'), d, J=15.4 Hz), 6.40 (1H (5'), dd, J=15.4, 7.8 Hz), 7.14 (1H (4'), dd, J=14.9, 11.2 Hz), 7.36 (1H (3'), dd, J=15.4, 11.2 Hz), 7.71 (1H (1), dd, J=2.6, 1.3 Hz), 9.66 (1H (6'), d, J=7.6 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.6 (4"), 15.2 (18), 16.2 (5"), 17.2 (16), 23.6 (17), 26.2 (3"), 26.9 (15), 36.0 (8), 36.3 (14), 41.2 (2"), 45.8 (11), 48.9 (10), 61.7 (6), 64.5 (20), 65.1 (7), 65.3 (13), 71.6 (5), 72.3 (4), 77.1 (9), 78.2 (12), 129.4 (2'), 133.6 (2), 137.2 (5'), 140.8 (3'), 146.9 (4'), 164.4 (1), 165.0 (1'), 178.9 (1"), 192.8 (6;), 209.8 (3).
화합물 11: 12-[(2E,4E)-6,7-디하이드록시도데카-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00033
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.87 (3H (18), d, J=2.0 Hz), 0.87 (3H (12'), d, J=2.0 Hz), 0.92 (3H (4"), t, J=7.3 Hz), 1.12 (3H (5"), d, J=6.8 Hz), 1.22 (3H (17), s), 1.24 (3H (16), s), 1.28 (1H (14), d, J=6.4 Hz), 1.28 (2H (11'), d, J=6.4 Hz), 1.44 (2H (8'), d, J=6.8 Hz), 1.46 (1H (3"), d, J=6.8 Hz), 1.47 (2H (9'), d, J=2.9 Hz), 1.69 (1H (3"), m), 1.76 (3H (19), m), 1.95 (1H (11), dd, J=9.5, 6.6 Hz), 2.38 (1H (2"), dq, J=13.7, 6.8 Hz), 3.17 (1H (8), d, J=6.4 Hz), 3.27 (1H (7), s), 3.49 (1H (7'), br. s.), 3.60 (1H (OH), s), 3.82 (2H (20)), 4.03 (1H (6'), m), 4.06 (1H (10), br. s.), 4.22 (1H (5), d, J=2.9 Hz), 5.42 (1H (12), d, J=9.8 Hz), 5.88 (1H (2'), d, J=15.2 Hz), 6.08 (1H (OH), t, J=6.1 Hz), 6.11 (1H (5'), t, J=6.1 Hz), 6.43 (1H (OH), m), 6.47 (1H (4'), m), 7.21 (1H (OH), dd, J=13.2, 2.0 Hz), 7.24 (1H (3'), s), 7.71 (1H (1), s).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.6 (4"), 14.0 (12'), 15.1 (18), 16.2 (5"), 17.2 (16), 22.6 (11'), 23.6 (17), 25.3 (9'), 26.2 (3"), 26.8 (15), 31.7 (10'), 33.1 (8'), 36.0 (8), 36.2 (14), 41.2 (2"), 45.8 (11), 48.9 (10), 61.7 (6), 64.5 (20), 65.2 (7), 65.4 (13), 71.6 (5), 72.4 (4), 74.5 (7'), 75.1 (6'), 77.1 (9), 77.1 (12), 133.5 (2), 121.8 (2'), 129.7 (4'), 141.6 (5'), 143.8 (3'), 164.6 (1), 166.2 (1'), 178.9 (1"), 209.9 (3).
화합물 12: 12-[(2E)-4,5-디하이드록시-데카-2-에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00034
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.86 (3H (18), d), 0.87 (3H (10'), t), 0.93 (3H (4"), t, J=7.5 Hz), 1.12 (3H (5"), d, J=7.0 Hz), 1.22 (3H (17), s), 1.23 (3H (16), s), 1.26 (2H (9'), m), 1.27 (1H (14), m), 1.28 (2H (8'), m), 1.30 (1H (7'), m), 1.42 (2H (6'), m), 1.44 (1H (3"), m), 1.46 (1H (7'), m), 1.70 (1H (3"), m), 1.74 (3H (19), d, J=1.6 Hz), 1.95 (1H (11), m), 2.37 (1H (2"), m), 3.16 (1H (8), d, J=6.5 Hz), 3.27 (1H (7), s), 3.75 (1H (5'), m), 3.77 (1H (20), m), 3.85 (1H (20), d, J=19.3 Hz), 4.05 (1H (10), br. s.), 4.21 (1H (5), s), 4.32 (1H (4'), m), 5.41 (1H (12), d, J=9.5 Hz), 6.11 (1H (2'), dd, J=8.8, 1.8 Hz), 6.92 (1H (3'), dd, J=4.9, 1.6 Hz), 7.71 (1H (1), dd).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.6 (4"), 14 (10'), 15.1 (18), 16.2 (5"), 17.2 (16), 22.5 (9'), 23.7 (17), 25.5 (7'), 26.2 (3"), 26.8 (15), 31.7 (8'), 32.0 (6'), 36.0 (8), 36.2 (14), 41.2 (2"), 45.8 (11), 48.9 (10), 61.7 (6), 64.5 (20), 65.2 (7), 65.4 (13), 71.6 (5), 72.3 (4), 73.9 (4'), 74.1 (5'), 77.1 (12), 77.3 (9), 122.5 (2'), 133.6 (2), 145.9 (3'), 164.6 (1), 165.5 (1'), 179 (1"), 209.9 (3).
화합물 13: 12-티글로일-13-(2-메틸프로파노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00035
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.84 (3H (18), d, J=6.4 Hz), 1.14 (3H (4") d, J=7.3 Hz, 1.17 (3H (3"), d, J=6.8 Hz), 1.22 (3H (16), s), 1.24 (3H (17), s), 1.28 (1H (8), m), 1.74 (3H (19), s), 1.77 (3H (4'), d, J=7.3 Hz), 1.95 (1H (11), dd, J=10.0, 6.6 Hz), 2.56 (1H, (2"), m, J=7.3, 7.1, 7.0 Hz), 3.16 (1H (14), d, J=6.4 Hz), 3.26 (1H (7), s), 3.82 (2H (20), m), 4.06 (1H (10), br. s.), 4.22 (1H (5), d, J=2.4 Hz), 5.41 (1H (12), d, J=9.8 Hz), 6.80 (1H (3'), m), 7.71 (1H (1), s).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 12.2 (5'), 14.4 (4'), 15.1 (18), 17.2 (17), 18.5 (3"), 18.6 (4"), 23.7 (16), 26.5 (15), 34.1 (2"), 36.0 (8), 36.1 (14), 45.8 (11), 48.9 (10), 61.7 (6), 64.6 (20), 65.2 (7), 65.5 (13), 71.4 (5), 72.4 (4), 76.6 (12), 77.2 (9), 128.4 (2'), 133.4 (2), 137.6 (3'), 164.7 (1), 167.5 (1'), 179.3 (1"), 209.9 (3).
화합물 14: 12-[(2E)-3-메틸티오프로프-2-에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00036
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.86 (3H (18), d, J=6.4 Hz), 0.92 (3H (4"), t, J=7.3 Hz), 1.12 (3H (5"), d, J=6.8 Hz), 1.23 (3H (17), s), 1.24 (3H (16), s), 1.27 (1H (14), d, J=6.8 Hz), 1.44 (1H (3"), m), 1.71 (1H (3"), m), 1.75 (3H (19), s), 1.94 (1H (11), m), 2.14 (1H (OH), t, J=5.9 Hz), 2.32 (3H (4'), s), 2.38 (1H (2"), m), 3.16 (1H (8), d, J=6.8 Hz), 3.27 (1H (7), s), 3.55 (1H (4-OH), s), 3.78 (1H (20), dd, J=12.7, 5.9 Hz), 3.84 (1H (5-OH), s), 3.85 (1H (20), s), 4.05 (1H (10), m), 4.21 (1H (5), d, J=2.4 Hz), 5.41 (1H (12), d, J=9.8 Hz), 5.61 (1H (2'), d, J=14.7 Hz), 6.02 (1H (9-OH), m), 7.69 (1H (3'), d, J=14.7 Hz), 7.71 (1H (1), s).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.6 (4"), 14.3 (4'), 15.1 (18), 16.2 (5"), 17.2 (16), 23.7 (17), 26.2 (3"), 26.7 (15), 36.1 (8), 36.2 (14), 41.2 (2"), 45.9 (11), 49.0 (10), 61.6 (6), 64.5 (20), 65.2 (7), 65.5 (13), 71.7 (5), 72.4 (4), 76.8 (12), 77.1 (9), 112.8 (2'), 133.5 (2), 147.5 (3'), 164.5 (1'), 164.8 (1), 178.9 (1"), 210.0 (3).
화합물 15: 12-(2-메틸프로프-2-에노일-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00037
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.86 (3H (18), d), 0.92 (3H (4"), t, J=7.3 Hz), 1.12 (3H (5"), d, J=6.8 Hz), 1.23 (3H (17), br. s.), 1.25 (3H (16), s), 1.27 (1H (14), dd, J=11.2, 6.4 Hz), 1.45 (1H (3"), m), 1.72 (1H (3"), m), 1.75 (3H (19), dd, J=2.9, 1.0 Hz), 1.92 (3H (4'), s), 1.95 (1H (11), m), 2.38 (1H (2"), m), 3.18 (1H (8), d), 3.28 (1H (7), s), 3.54 (1H (OH), d, J=1.0 Hz), 3.78 (1H (20), m), 3.87 (1H (20), dd), 4.06 (1H (10), m), 4.22 (1H (5), d, J=2.0 Hz), 5.42 (1H (12), s), 5.56 (1H (3'), dt, J=2.9, 1.5 Hz), 6.05 (1H (3'), m), 7.72 (1H (1), dd, J=2.4, 1.5 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.6 (4"), 15.1 (18), 16.2 (5"), 17.2 (17), 18.5 (4'), 23.7 (16), 26.2 (3"), 26.7 (15), 36.1 (8), 36.2 (14), 41.2 (2"), 45.9 (11), 49.0 (10), 61.6 (6), 64.5 (20), 65.2 (7), 65.5 (13), 71.7 (5), 72.3 (4), 77.1 (9), 77.3 (12), 125.8 (3'), 133.5 (2), 136.2 (2'), 164.7 (1), 166.8 (1'), 178.9 (1"), 209.9 (3).
화합물 16: 12-[(2E,4E)-헥사-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00038
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.87 (3H (18), d, J=6.5 Hz), 0.93 (3H (4"), t), 1.13 (3H (5"), m, J=6.8 Hz), 1.23 (3H (16), br. s.), 1.26 (3H (17), s), 1.27 (1H (14), m), 1.45 (1H (3"), s), 1.70 (1H (3"), m), 1.75 (3H (19), dd, J=2.8, 1.2 Hz), 1.86 (3H (6'), dd, J=7.3, 1.7 Hz), 1.96 (1H (11), dd, J=9.8, 6.2 Hz), 2.37 (1H (2"), m), 3.18 (1H (8), d, J=6.7 Hz), 3.28 (1H (7), s), 3.78 (1H (20), m), 3.87 (1H (20), m), 4.06 (1H (10), br. s.), 4.21 (1H (5), br. s.), 5.44 (1H (12), d, J=10.1 Hz), 5.83 (1H (2'), d, J=15.0 Hz), 5.94 (1H (5'), m), 6.14 (1H (4'), m), 7.59 (1H (3'), ddd, J=15.3, 11.7, 1.2 Hz), 7.72 (1H (1), dd, J=2.2, 1.3 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.6 (4"), 14.1 (6'), 15.2 (18), 16.2 (5"), 17.2 (17), 23.7 (16), 26.2 (3"), 26.7 (15), 36.1 (8), 36.2 (14), 41.2 (2"), 45.9 (11), 49.0 (10), 61.6 (6), 64.5 (20), 65.3 (7), 65.5 (13), 71.7 (5), 72.4 (4), 76.8 (12), 77.1 (9), 120.7 (2'), 127.3 (4'), 133.5 (2), 136.2 (5'), 139.6 (3'), 164.8 (1), 166.6 (1'), 179.0 (1"), 210.0 (3).
화합물 17: 12-[(2E,4E)-8-옥소도데카-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5, 9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00039
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.85 (3H (18), d, J=5.3 Hz), 0.88 (3H (12'), t, J=7.3 Hz), 0.92 (3H (4"), t, J=7.4 Hz), 1.12 (3H (5"), d, J=7.0 Hz), 1.22 (3H (16), br. s.), 1.23 (3H (17), s), 1.26 (1H (14), d, J=5.4 Hz), 1.28 (2H (11'), d, J=2.8 Hz), 1.43 (1H (3"), br. s.), 1.53 (2H (10'), m), 1.71 (1H (3"), m), 1.75 (3H (19), dd, J=2.9, 1.3 Hz), 1.95 (1H (11), m), 2.37 (1H (2"), m), 2.38 (2H (9'), d, J=7.2 Hz), 2.42 (2H (6'), m), 2.52 (2H (7'), s), 3.17 (1H (8), d, J=6.6 Hz), 3.27 (1H (7), s), 3.53 (1H (OH), s), 3.81 (1H (20), br. s.), 3.86 (1H (20), m), 4.05 (1H (10), m), 4.22 (1H (5), d, J=2.4 Hz), 5.41 (1H (12), d, J=9.8 Hz), 5.76 (1H (2'), d, J=15.4 Hz), 6.09 (1H (5'), t, J=6.8 Hz), 6.15, (1H (4'), d, J=10.6 Hz), 7.16 (1H (3'), dd, J=15.4, 10.6 Hz), 7.71 (1H (1), dd, J=2.6, 1.3 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.6 (4"), 13.8 (12'), 15.1 (18), 16.2 (5"), 17.2 (17), 22.3 (11'), 23.7 (16), 25.9 (10'), 26.2 (3"), 26.7 (15), 26.9 (6'), 36.1 (8), 36.1 (14), 41.2 (2"), 41.3 (7'), 42.7 (9'), 45.9 (11), 49.0 (10), 61.6 (6), 64.5 (20), 65.3 (7), 65.5 (13), 71.7 (5), 72.3 (4), 77.1 (12), 77.2 (9), 119.6 (2'), 129.1 (4'), 133.5 (2), 142.8 (5'), 145.0 (3'), 164.8 (1), 166.6 (1'), 179.0 (1"), 209.7 (8'), 210.1 (3).
화합물 18: 12-[(2Z,4E)-데카-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00040
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.86 (3H (10'), t, J=6.9 Hz), 0.87 (3H (18), d, J=6.6 Hz), 0.94 (3H (4"), t, J=7.5 Hz), 1.14 (3H (5"), d, J=7.1 Hz), 1.22 (3H (16), s), 1.23 (3H (17), s), 1.25 (1H (14), br. s.), 1.27 (2H (8'), br. s.), 1.28 (2H, (9'), br. s.), 1.41 (2H (7'), m), 1.46 (1H (3"), m), 1.71 (1H (3"), m), 1.75 (3H (19), dd, J=2.9, 1.3 Hz), 1.94 (1H (11), dd, J=10.0, 6.4 Hz), 2.16 (2H (6'), s), 2.39 (1H (2"), m, J=7.2, 7.0 Hz), 3.16 (1H (8), d, J=6.8 Hz), 3.27 (1H (7), s), 3.53 (1H (4-OH), d, J=0.6 Hz), 3.77 (1H (20), dd, J=12.7, 5.7 Hz), 3.83 (1H (5-OH), d, J=3.1 Hz), 3.86 (1H (20), m, J=12.6, 7.7 Hz), 4.05 (1H (10), t, J=2.7 Hz), 4.21 (1H (5), d, J=2.9 Hz), 5.43 (1H (12), d, J=9.9 Hz), 5.51 (1H (2'), d, J=11.4 Hz), 6.06 (1H (5'), ddd, J=15.1, 7.2, 6.8 Hz), 6.55 (1H (3'). t, J=11.6 Hz), 7.29 (1H (4'), ddd, J=15.1, 7.2, 6.8 Hz), 7.72 (1H (1), dd, J=2.3, 1.3 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.6 (4"), 14.0 (10'), 15.1 (18), 16.2 (5"), 17.1 (16), 22.5 (9'), 23.7 (17), 26.2 (3"), 26.6 (15), 28.3 (7'), 31.4 (8'), 33.0 (6'), 36.0 (14), 36.1 (8), 41.2 (2"), 45.8 (11), 49.0 (10), 61.6 (6), 64.5 (20), 65.3 (7), 65.5 (13), 71.7 (5), 72.3 (4), 76.1 (12), 77.1 (9), 115.0 (2'), 126.9 (4'), 145.9 (3'), 146.1 (5'), 133.5 (2), 164.8 (1), 165.9 (1'), 178.9 (1"), 210.0 (3).
화합물 19: 13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00041
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.92 (3H (4'), t, J=7.6 Hz), 1.07 (3H (18), d, J=6.4 Hz), 1.16 (3H (5'), d, J=6.8 Hz), 1.20 (3H (16), s), 1.24 (1H (14), m), 1.26 (3H (17), s), 1.45 (1H (3'), ddd, J=13.8, 7.1, 7.0 Hz), 1.71 (1H (3'), dt, J=13.7, 7.3 Hz), 1.76 (1H (11), d, J=15.7 Hz), 1.77 (3H (19), dd, J=2.7, 1.2 Hz), 2.41 (1H (2'), m, J=7.0, 6.8 Hz), 3.08 (1H (8), d, J=7.3 Hz), 3.27 (1H (7), s), 3.79 (1H (10), d, J=2.9 Hz), 3.81 (2H (20), m), 3.90 (1H (12), d, J=9.8 Hz), 4.20 (1H (5), s), 7.70 (1H (1), dd, J=2.4, 1.5 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.8 (19), 11.7 (4'). 16.6 (5'), 16.2 (18), 17.2 (17), 23.4 (16), 26.5 (3'), 27.9 (15), 34.8 (14), 36.5 (8), 41.0 (2'), 47.3 (11), 50.7 (10), 62.4 (6), 65.0 (20), 66.0 (7), 68.4 (13), 71.5 (5), 72.1 (4), 77.6 (9), 78.3 (12), 133.9 (2), 163.8 (1), 180.1 (1'), 209.7 (3).
화합물 20: 12-[(2E)-부트-2-에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00042
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.85 (3H, (18), d, J=6.4 Hz), 0.92 (3H (4"), t, J=7.5 Hz), 1.12 (3H (5"), d, J=7.1 Hz), 1.22 (3H (17), s), 1.24 (3H (16), s), 1.26 (1H (14), d, J=6.7 Hz), 1.45 (1H (3"), dd, J=14.5, 6.4 Hz), 1.72 (1H (3"), dd, J=14.1, 6.8 Hz), 1.75 (3H (19), dd, J=2.8, 1.3 Hz), 1.87 (3H (4'), dd, J=6.9, 1.7 Hz), 1.94 (1H (11), dd, J=9.8, 6.4 Hz), 2.37 (1H (2"), dd, J=13.8, 6.8 Hz), 3.16 (1H (8), d, J=6.5 Hz), 3.27 (1H (7), s), 3.78 (1H (20), d, J=12.2 Hz), 3.87 (1H (20), m), 4.05 (1H (10), m), 4.21 (1H (5), s), 5.40 (1H (12), d, J=9.9 Hz), 5.81 (1H (2'), dddd, J=15.5, 1.6, 1.5, 1.2 Hz), 6.92 (1H (3'), dd, J=15.5, 7.0 Hz), 7.71 (1H (1), m).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.6 (4"), 15.1 (18), 16.2 (5"), 17.2 (17), 18.1 (4'), 23.7 (16), 26.2 (3"), 26.7 (15), 36.1 (8), 36.2 (14), 41.2 (2"), 45.9 (11), 49.0 (10), 61.6 (6), 64.5 (20), 65.3 (7), 65.5 (13), 71.7 (5), 72.3 (4), 76.7 (12), 77.1 (9), 122.6 (2'), 133.6 (2), 145.0 (3'), 164.8 (1), 166.1 (1'), 178.9 (1"). 210.2 (3).
화합물 24: 12-[(2E,4E)-데카-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00043
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.86 (3H (18), d, J=5.6 Hz), 0.87 (3H (10'), d J=11.7 Hz), 0.93 (3H (4"), t, J=7.5 Hz), 1.12 (3H (5"), d, J=7.0 Hz), 1.22 (3H (16), s), 1.24 (3H (17), s), 1.26 (1H (14), m), 1.26 (2H (8'), br. s.), 1.29 (2H (9'), m), 1.45 (1H (3"), m), 1.41 (2H (7'), m), 1.73 (1H (3"), m), 1.75 (3H (19), dd, J=2.9, 1.3 Hz), 1.95 (1H (11), dd, J=9.7, 6.4 Hz), 2.15 (2H (6'), m), 2.38 (1H (2"), m), 3.17 (1H (8), d, J=6.6 Hz), 3.27 (1H (7), s), 3.55 (1H (OH), m), 3.78 (1H (20), dd, J=12.0, 4.6 Hz), 3.87 (1H (20), m), 4.05 (1H (10), m), 4.22 (1H (5), m), 5.41 (1H (12), d, J=9.9 Hz), 5.75 (1H (2'), d, J=15.4 Hz), 6.13 (1H (5'), dd, J=6.7, 6.2 Hz), 6.16 (1H (4'), s), 7.20 (1H (3'), dd, J=15.5, 9.9 Hz), 7.72 (1H (1), dt, J=2.5, 1.3 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.6 (4"), 14.0 (10'), 15.1 (18), 16.2 (5"), 17.2 (17), 22.4 (9'), 23.6 (16), 26.2 (3"), 26.7 (15), 28.4 (7'), 31.3 (8'), 33.0 (6'), 36.1 (8), 36.2 (14), 41.2 (2"), 45.9 (11), 49.0 (10), 61.6 (6), 64.5 (20), 65.3 (7), 65.5 (13), 71.7 (5), 72.3 (4), 76.7 (12), 77.1 (9), 118.8 (2'), 128.3 (4'), 133.5 (2), 145.3 (5'), 145.6 (3'), 164.8 (1), 166.6 (1'), 178.9 (1"), 210.0 (3).
화합물 25: 12-[(2Z,4E)-데카-2,4-디에노일]-13-(2-메틸프로파노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00044
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.85 (3H (18), d), 0.86 (3H (10'), t), 1.16 (3H (4"), d), 1.19 (3H (3"), d, J=7.0 Hz), 1.22 (3H (16), s), 1.22 (3H (17), s), 1.25 (2H (8'), m), 1.27 (1H (14), d, J=3.1 Hz), 1.29 (2H (9'), m), 1.41 (2H (7'), br. s.), 1.75 (3H (19), s), 1.94 (1H (11), dd, J=10.0, 6.4 Hz), 2.16 (2H (6'), s), 2.58 (1H (2"), dt, J=14.0, 7.0 Hz), 3.16 (1H (8), d, J=6.7 Hz), 3.27 (1H (7), s), 3.55 (1H (OH), br. s), 3.78 (1H (20), d, J=12.5 Hz), 3.86 (1H (20), d, J=13.1 Hz), 4.05 (1H (10), d, J=5.4 Hz), 4.21 (1H (5), s), 5.41 (1H (12), d, J=9.9 Hz), 5.51 (1H (2'), d, J=11.2 Hz), 6.06 (1H (5'), dd, J=15.3, 7.0 Hz), 6.55 (1H (3'), t, J=11.4 Hz), 7.29 (1H (4'), dd, J=15.3, 7.0 Hz), 7.71 (1H (1), s).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 14.7 (10'), 15.1 (18), 17.1 (16), 18.6 (3"), 18.6 (4"), 22.5 (9'), 23.7 (17), 26.6 (15), 28.4 (7'), 31.4 (8'), 33.0 (6'), 34.2 (2"), 36.0 (14), 36.1 (8), 45.7 (11), 49.0 (10), 61.6 (6), 64.5 (20), 65.3 (7), 65.5 (13), 71.7 (5), 72.3 (4), 76.0 (12), 77.2 (9), 115.0 (2'), 126.9 (4'), 133.5 (2), 145.9 (3'), 146.2 (5'), 164.8 (1), 165.9 (1'), 179.3 (1"), 210.0 (3).
화합물 26: 12-[(2E,4E)-6,7-(안티)-에폭시-도데카-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00045
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.87 (3H (18), d, J=4.4 Hz), 0.86 (3H (12'), br. s.), 0.92 (3H (4"), t, J=7.3 Hz), 1.12 (3H (5"), d, J=6.8 Hz), 1.22 (3H (17), br. s.), 1.24 (3H (16), s), 1.27 (1H (14), d, J=7.3 Hz), 1.28 (2H (11'), m), 1.29 (2H (10'), m), 1.44 (2H (9'), m), 1.57 (2H (8'), m), 1.72 (2H (3"), dd, J=13.9, 7.1 Hz), 1.75 (3H (19), d, J=1.5 Hz), 1.95 (1H (11), m), 2.37 (1H (2"), m), 2.85 (1H (7'), tt, J=5.6, 2.0 Hz), 3.15 (1H (6'), d, J=7.8 Hz), 3.17 (1H (8), s), 3.28 (1H (7), s), 3.52 (1H (OH), d, J=2.9 Hz), 3.76 (1H (OH), m), 3.79 (1H (20), d, J=2.9 Hz), 3.87 (1H (20), m), 4.05 (1H (10), d, J=2.0 Hz), 4.22 (1H (5), d), 5.42 (1H (12), d, J=10.3 Hz), 5.83 (1H (5'), d, J=15.2, 7.8 Hz), 5.87 (1H (2'), d, J=15.7 Hz), 6.00 (1H (OH), m), 6.47 (1H (4'), dd, J=14.7, 11.2 Hz), 7.20 (1H (3'), dd, J=15.2, 11.2 Hz), 7.71 (1H (1), br. s.).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.6 (4"), 14.0 (12'), 15.1 (18), 16.2 (5"), 17.2 (16), 22.5 (11'), 23.7 (17), 25.5 (9'), 26.2 (3"), 26.8 (15), 31.5 (10'), 31.9 (8'), 36.1 (8), 36.2 (14), 41.2 (2"), 45.9 (11), 49.0 (10), 57.5 (6'), 61.6 (7'), 61.7 (6), 64.5 (20), 65.2 (7), 65.4 (13), 71.7 (5), 72.3 (4), 77.1 (9), 77.1 (12), 121.6 (2'), 130.9 (4'), 133.5 (2), 139.7 (5'), 143.3 (3'), 164.7 (1), 166.2 (1'), 179.0 (1"), 210.1 (3).
화합물 29: 12-티글로일-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00046
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.83 (3H (18), d, J=6.8 Hz), 0.92 (3H (4"), t, J=7.6 Hz), 1.13 (3H (5"), d, J=6.8 Hz), 1.20 (1H (14), d, J=5.9 Hz), 1.22 (3H (17), s), 1.23 (3H (16), s), 1.45 (1H (3"), tt, J=14.2, 7.3 Hz), 1.72 (1H (3"), dd), 1.77 (3H (5'), dd, J=7.1, 1.2 Hz), 1.80 (3H (4'), d, J=1.5 Hz), 1.81 (3H (19), dd, J=2.9, 1.5 Hz), 2.11 (1H (11), dq), 2.29 (1H (8), d, J=5.4 Hz), 2.38 (1H (2"), m, J=7.0, 6.8 Hz), 2.47 (1H (20-OH), t, J=6.8 Hz), 2.98 (1H (4-OH), s), 3.53 (1H (10), m), 3.73 (1H (5), d, J=1.0 Hz), 3.81 (1H (20), dd, J=12.7, 6.8 Hz), 3.92 (1H (20), m, J=12.7, 6.8 Hz), 4.46 (1H (7), d, J=5.4 Hz), 5.10 (1H (7-OH), d, J=5.4 Hz), 5.39 (1H (12), d, J=10.3 Hz), 6.55 (1H (9-OH), m), 6.80 (1H (3'), m, J=7.1, 6.8, 1.5 Hz), 7.58 (1H (1), s),
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 10.3 (19), 11.6 (4"), 12.2 (4'), 14.0 (18), 14.4 (5'), 16.2 (5"), 17.0 (17), 23.5 (16), 26.2 (15), 26.2 (3"), 34.7 (14), 35.2 (8), 41.3 (2"), 43.7 (11), 57.3 (10), 62.6 (5), 64.2 (20), 67.0 (6), 67.0 (13), 71.3 (4), 75.8 (12), 77.3 (7), 79.1 (9), 128.3 (2'), 134.7 (2), 137.8 (3'), 159.7 (1), 167.4 (1'), 179.7 (1"), 205.7 (3).
화합물 30: 13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00047
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.91 (3H (4'), t, J=7.6 Hz), 1.02 (3H (18), d, J=6.4 Hz), 1.15 (1H (14), d, J=5.9 Hz), 1.15 (3H (5'), d, J=7.3 Hz), 1.19 (3H (16), s), 1.22 (3H (17), s), 1.46 (1H (3'), ddd, J=14.1, 7.0, 6.8 Hz), 1.70 (1H (3'), dt, J=13.7, 7.3 Hz), 1.81 (3H (19), dd, J=2.9, 1.5 Hz), 1.93 (1H (11), dq, J=9.8, 6.6, 6.5 Hz), 2.24 (1H (8), d, J=5.9 Hz), 2.40 (1H (2'), m, J=7.0, 6.8 Hz), 2.84 (1H (20-OH), br. s.), 3.44 (1H (4-OH), s), 3.50 (1H (10), t, J=2.4 Hz), 3.76 (1H (5), s), 3.84 (1H (20), dd, J=12.2, 3.9 Hz), 3.88 (1H (12), dd, J=10.0, 3.7 Hz), 3.92 (1H (20), d, J=12.2, 5.9 Hz), 4.46 (1H (7), d, J=4.4 Hz), 4.57 (1H (OH), m), 5.20 (1H (OH), m), 7.60 (1H (1), s).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 10.3 (19), 11.7 (4'), 14.6 (18), 16.5 (5'), 16.7 (16), 23.6 (17), 26.4 (15), 26.5 (3'), 33.8 (14), 35.5 (8), 41.1 (2'), 45.5 (11), 57.8 (10), 62.6 (5), 64.1 (20), 66.9 (6), 68.0 (13), 71.3 (4), 76.8 (12), 77.3 (7), 78.8 (9), 134.4 (2), 160.2 (1), 180.0 (1'), 206.2 (3).
화합물 31: 12-아세틸-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00048
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.84 (3H (18), d, J=6.6 Hz), 0.92 (3H (4"), t, J=7.5 Hz), 1.12 (3H (5"), d, J=7.0 Hz), 1.17 (3H (16), s), 1.18 (1H (14), s), 1.22 (3H (17), s), 1.44 (1H (3"), m, J=14.1, 7.3, 7.1 Hz), 1.81 (3H (19), dd, J=2.8, 1.2 Hz), 2.04 (3H (2'), s), 2.09 (1H (11), dq, J=10.2, 6.5 Hz), 2.31 (1H (8), d, J=5.6 Hz), 2.37 (1H (2"), sxt, J=7.0 Hz), 2.88 (1H (20-OH), m), 3.52 (1H (10), d, J=2.6 Hz), 3.59 (1H (4-OH), s), 3.81 (1H (5), d, J=0.9 Hz), 3.83 (1H (20), d, J=12.4 Hz), 3.96 (1H (20), d), 4.39 (1H (7), d, J=5.1 Hz), 5.04 (1H (7-OH), d, J=5.5 Hz), 5.3 (1H (12), d, J=10.1 Hz), 6.48 (1H (9-OH), br. s.), 7.58 (1H (1), s).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 10.3 (19), 11.6 (4"), 14.0 (18), 16.2 (5"), 16.7 (16), 20.9 (2'), 23.5 (17), 26.1 (3"), 26.2 (15), 34.6 (14), 35.1 (8), 41.3 (2"), 43.4 (11), 57.3 (10), 62.4 (5), 63.7 (20), 65.6 (13), 67.3 (6), 71.3 (4), 76.1 (12), 77.2 (7), 79.0 (9), 134.6 (2), 159.8 (1), 170.6 (1'), 179.7 (1"), 206.1 (3).
화합물 32: 12,13-디-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00049
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.84 (3H (18), d, J=6.6 Hz), 0.89 (3H (4'), m, J=7.6 Hz), 0.91 (3H (4"), d, J=7.5 Hz), 1.11 (3H (5"), d, J=7.0 Hz), 1.12 (3H (5'), d, J=7.0 Hz), 1.17 (3H (16), s), 1.18 (1H (14), d, J=5.7 Hz), 1.19 (3H (17), s), 1.42 (1H (3'), m), 1.46 (1H (3"), dt, J=6.8, 3.3 Hz), 1.62 (1H (3'), dt, J=8.2, 6.9 Hz), 1.68 (1H (3"), d, J=7.1 Hz), 1.80 (3H (19), dd, J=2.8, 1.3 Hz), 2.10 (1H (11), dd, J=10.2, 6. Hz), 2.33 (1H (8), d, J=5.4 Hz), 2.35 (1H (2'), m), 2.38 (1H (2"), d, J=4.3 Hz), 3.14 (1H (20-OH), br. s.), 3.54 (1H (10), dd, J=2.4, 2.2 Hz), 3.83 (1H (20), d, J=13.0 Hz), 3.85 (1H (5), d, J=1.0 Hz), 3.96 (1H (4-OH), s), 3.98 (1H (20), m, J=12.8 Hz), 4.37 (1H (7), d, J=5.3 Hz), 5.03 (1H (7-OH), d, J=5.5 Hz), 5.36 (1H (12), d, J=10.3 Hz), 6.46 (1H (9-OH), s), 7.59 (1H (1) s).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 10.3 (19), 11.6 (4"), 11.6 (4'), 13.9 (18), 16.1 (5"), 16.8 (5'), 16.9 (16), 23.5 (17), 26.0 (15), 26.2 (3"), 26.7 (3'), 34.6 (14), 35.1 (8), 41.3 (2"), 41.7 (2'), 43.3 (11), 57.2 (10), 62.2 (5), 63.2 (20), 65.6 (13), 67.6 (6), 71.3 (4), 75.4 (12), 77.2 (7), 79.1 (9), 134.6 (2), 160.0 (1), 175.9 (1'), 179.6 (1"), 206.3 (3).
화합물 33: 12-프로파노일-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00050
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.83 (3H (18), d), 0.92 (3H (4"), t, J=7.5 Hz), 1.12 (3H (5"), d, J=7.0 Hz), 1.13 (3H (3'), t, J=7.6 Hz), 1.18 (3H (16), s), 1.19 (1H (14), s), 1.22 (3H (17), s), 1.44 (1H (3"), m, J=14.1, 7.5, 7.1 Hz), 1.71 (1H (3"), ddd, J=13.9, 7.3, 7.1 Hz), 1.81, (3H (19), dd, J=2.8, 1.3 Hz), 2.08 (1H (11), dd, J=10.2, 6.5 Hz), 2.29 (1H (8), m), 2.31 (2H (2'), m), 2.37 (1H (2"), d, J=7.0 Hz), 2.72 (1H (20-OH), t, J=6.7 Hz), 3.34 (1H (4-OH), s), 3.53 (1H (10), d, J=2.4 Hz), 3.78 (1H (5), d), 3.82 (1H (20), dd, J=12.7, 5.9 Hz), 3.94 (1H (20), dd, J=12.7, 5.9 Hz), 4.42 (1H (7), d, J=5.6 Hz), 5.06 (1H (7-OH), d, J=5.6 Hz), 5.32 (1H (12), d, J=10.3 Hz), 6.49 (1H (9-OH), s), 7.58 (1H (1), d, J=1.3 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.3 (3'), 10.3 (19), 11.6 (4"), 14.0 (18), 16.2 (5"), 16.8 (16), 23.5 (17), 26.1 (3"), 26.2 (15), 27.8 (2'), 34.6 (14), 35.1 (8), 41.3 (2"), 43.4 (11), 57.3 (10), 62.5 (5), 63.8 (20), 65.6 (13), 67.2 (6), 71.3 (4), 75.9 (12), 77.3 (7), 79.1 (9), 134.6 (2), 159.8 (1), 173.9 (1'), 179.7 (1"), 206.0 (3).
화합물 34: 12-헥사노일-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00051
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.83 (3H (18), d), 0.88 (3H (6'), t, J=6.9 Hz), 0.92 (3H (4"), t, J=7.5 Hz), 1.12 (3H (5"), d, J=7.1 Hz), 1.18 (3H (16), s), 1.19 (1H (14), s), 1.21 (3H (17), s), 1.29 (2H (4'), m), 1.30 (2H (5'), m, J=7.6, 7.3, 3.6 Hz), 1.44 (1H, (3"), dt, J=14.1, 7.0 Hz), 1.61 (2H (3'), m), 1.70 (1H (3"), m, J=14.1, 7.3, 7.1 Hz), 1.81 (3H (19), dd, J=2.8, 1.3 Hz), 2.08 (1H (11), dq, J=10.3, 6.5 Hz), 2.3 (1H (8), d, J=3.8 Hz), 2.28 (2H (2'), m), 2.37 (1H (2"), q, J=7.0 Hz), 2.73 (1H (20-OH), m), 3.35 (1H (4-OH), br. s.), 3.53 (1H (10), t, J=2.5 Hz), 3.78 (1H (5), d, J=1.1 Hz), 3.82 (1H (20), d, J=12.6 Hz), 3.94 (1H (20), d, J=12.5 Hz), 4.42 (1H (7), d, J=3.9 Hz), 5.06 (1H (7-OH), d, J=5.4 Hz), 5.34 (1H (12), d, J=10.3 Hz), 6.48 (1H (9-OH), s), 7.58 (1H (1), d, J=1.5 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 10.3 (19), 11.6 (4"), 13.9 (18), 13.9 (6'), 16.1 (5"), 16.8 (16), 22.3 (5'), 23.5 (17), 24.9 (3'), 26.1 (15), 26.2 (3"), 31.1 (4'), 34.5 (2'), 34.6 (14), 35.2 (8), 41.3 (2"), 43.3 (11), 57.3 (10), 62.5 (5), 64.0 (20), 65.6 (13), 67.1 (6), 71.3 (4), 75.6 (12), 77.2 (7), 79.1 (9), 134.6 (2), 159.8 (1), 173.3 (1'), 179.6 (1"), 206.0 (3).
화합물 35: 12-티글로일-13-(2-메틸프로파노일)-5,6-에폭시-4,7,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00052
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.84 (3H (18), d), 1.15 (3H (3"), d, J=7.0 Hz), 1.17 (3H (4"), d, J=7.0 Hz), 1.21 (1H (14), m), 1.21 (3H (16), s), 1.21 (3H (17), s), 1.77 (3H (4'), dd, J=7.1, 1.1 Hz), 1.80 (3H (5'), d, J=1.3 Hz), 1.81 (3H (19), dd, J=2.9, 1.4 Hz), 2.13 (1H (11), dd, J=9.6, 6.3 Hz), 2.32 (1H (8), d, J=6.1 Hz), 2.58 (1H (2"), spt, J=7.0 Hz), 3.46 (1H (4-OH), s), 3.54 (1H (10), d, J=2.5 Hz), 3.81 (1H (5), d, J=1.2 Hz), 3.82 (1H (20), m), 3.96 (1H (20), d, J=13.0 Hz), 4.42 (1H (7), d, J=4.9 Hz), 5.07 (1H (7-OH), d, J=5.5 Hz), 5.37 (1H (12), d, J=10.2 Hz), 6.52 (1H (9-OH), s), 6.80 (1H (3'), dq, J=7.0, 1.4 Hz), 7.58 (1H (1), dd, J=2.0, 1.4 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 10.3 (19), 12.2 (5'), 14.0 (18), 14.4 (4'), 16.9 (16), 18.5 (3"), 18.6 (4"), 23.5 (17), 26.0 (15), 34.2 (2"), 34.6 (14), 35.2 (8), 43.6 (11), 57.3 (10), 62.4 (5), 63.7 (20), 65.7 (13), 67.3 (6), 71.3 (4), 75.7 (12), 77.2 (7), 79.1 (9), 128.3 (2'), 134.6 (2), 137.8 (3'), 159.9 (1), 167.5 (1'), 180.1 (1"), 206.0 (3).
화합물 36: 12-[(2E)-3-메틸티오프로프-2-에노일]-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00053
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.92 (3H (4"), t, J=7.0 Hz), 0.84 (3H (18), d, J=6.5 Hz), 1.13 (3H (5") d, J=7.0 Hz), 1.18 (1H (14), s), 1.20 (3H (16), s), 1.22 (3H (17), s), 1.44 (1H (3"), dt, J=13.9, 7.0 Hz), 1.72 (1H (3"), d, J=13.8 Hz), 1.81 (3H (19), dd, J=2.7, 1.2 Hz), 2.12 (1H (11), dd, J=9.4, 5.6 Hz), 2.31 (1H (8), d, J=6.0 Hz), 2.32 (3H (5'), s), 2.38 (1H (2"), q, J=7.0 Hz), 3.36 (1H (4-OH), s), 3.53 (1H (10), d, J=2.3 Hz), 3.78 (1H (5), d, J=0.9 Hz), 3.82 (1H (20), d, J=12.6 Hz), 3.94 (1H (20), d), 4.43 (1H (7), d, J=4.6 Hz), 5.08 (1H (7-OH), d), 5.37 (1H (12), d, J=10.2 Hz), 5.61 (1H (2'), d, J=14.9 Hz), 6.53 (1H (9-OH), s), 7.58 (1H (1), d, J=1.9 Hz), 7.68 (1H (3'), d, J=14.9 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 10.3 (19), 11.6 (4"), 14.0 (18), 14.3 (5'), 16.2 (5"), 16.9 (16), 23.5 (17), 26.2 (15), 26.2 (3"), 34.7 (14), 35.2 (8), 41.3 (2"), 43.6 (11), 57.3 (10), 62.5 (5), 64.0 (20), 65.6 (13), 67.1 (6), 71.3 (4), 75.8 (12), 77.3 (7), 79.1 (9), 112.7 (2'), 134.6 (2), 147.7 (3'), 159.8 (1), 164.5 (1'), 179.8 (1"), 206.0 (3).
화합물 37: 12-티글리올-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00054
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.84 (2H (18), d, J=6.6 Hz), 0.92 (3H (4"), t, J=7.5 Hz), 1.12 (3H (5"), d, J=6.9 Hz), 1.19 (1H (14), s), 1.20 (1H (16), s), 1.21 (1H (17), s), 1.44 (1H (3"), dt, J=14.1, 7.0 Hz), 1.72 (1H (3"), dq), 1.77 (3H (4'), dd, J=7.1, 1.1 Hz), 1.8 (3H (5'), t, J=1.3 Hz), 1.81 (3H (19), dd, J=2.9, 1.5 Hz), 2.13 (1H (11), q, J=2.9 Hz), 2.33 (1H (8), d, J=5.7 Hz), 2.38 (1H (2"), q, J=7.0 Hz), 2.99 (1H (20-OH), br. s.), 3.55 (1H (10), t, J=2.6 Hz), 3.70 (1H (4-OH), br. s.), 3.83 (1H (20), dd, J=12.8, 4.9 Hz), 3.84 (1H (5),d, J=1.1 Hz), 3.98 (1H (20), dd, J=12.8, 7.3 Hz), 4.39 (1H (7), d, J=5.5 Hz), 5.06 (1H (7-OH), d, J=5.5 Hz), 5.39 (1H (12), d, J=10.2 Hz), 6.53 (1H (9-OH), br. s.), 6.8 (1H (3'), dd, J=7.1, 1.5 Hz), 7.59 (1H (1), dd, J=2.0, 1.5 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 10.3 (19), 11.6 (4"), 12.2 (5'), 14.0 (18), 14.4 (4'), 16.2 (5"), 17.0 (16), 23.5 (17), 26.1 (15), 26.1 (3"), 34.7 (14), 35.2 (8), 41.2 (2"), 43.7 (11), 57.2 (10), 62.3 (5), 63.5 (20), 65.7 (13), 67.5 (6), 71.3 (4), 75.9 (12), 77.2 (7), 79.1 (9), 128.3 (2'), 134.6 (2), 137.7 (3'), 159.9 (1), 167.4 (1'), 179.7 (1"), 206.1 (3).
화합물 38: 12,13-디-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00055
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.84 (3H (18), d, J=6.6 Hz), 0.89 (3H (4'), t, J=7.4 Hz), 0.92 (3H (4"), t, J=7.5 Hz), 1.12 (3H (5'), d, J=7.0 Hz), 1.12 (3H (5"), d, J=7.0 Hz), 1.19 (1H (14), d, J=1.5 Hz), 1.20 (3H (16) s), 1.21 (3H (17), s), 1.45 (1H (3'), dd, J=14.1, 6.8 Hz), 1.45 (1H (3"), dd, J=14.1, 6.8 Hz), 1.62 (1H (3'), dd, J=8.3, 7.5 Hz), 1.68 (1H (3"), dd, J=14.1, 6.9 Hz), 1.81 (3H (19), dd, J=2.8, 1.3 Hz), 2.08 (1H (11), dd, J=10.3, 6.5 Hz), 2.30 (1H (8), d, J=5.5 Hz), 2.36 (1H (2'), m), 2.36 (1H (2"), m), 2.62 (1H (10-OH), t, J=6.8 Hz), 3.22 (1H (4-OH), s), 3.53 (1H (10), br. s.), 3.76 (1H (5), d, J=1.1 Hz), 3.82 (1H (20), dd, J=12.5, 6.3 Hz), 3.93 (1H (20), dd, J=12.6, 7.0 Hz), 4.44 (1H (7), d, J=5.5 Hz), 5.06 (1H (7-OH), d, J=5.6 Hz), 5.36 (1H (12), d, J=10.3 Hz), 6.48 (1H (9-OH), s), 7.58 (1H (1), d, J=2.0 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 10.3 (19), 11.6 (4'), 11.6 (4"), 13.9 (18), 16.1 (5"), 16.9 (5'), 17.0 (16), 23.5 (17), 26.0 (15), 26.2 (3"), 26.7 (3'), 34.6 (14), 35.2 (8), 41.3 (2'), 41.8 (2"), 43.3 (11), 57.3 (10), 62.5 (5), 63.9 (20), 65.6 (13), 67.2 (6), 71.3 (4), 75.4 (12), 77.3 (7), 79.1 (9), 134.7 (2), 159.8 (1), 175.9 (1'), 179.6 (1"), 205.9 (3).
화합물 39: 12-{[2-(메틸설파닐)카르보닐]-아세토일}-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00056
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.87 (3H (18), d, J=6.6 Hz, 0.92 (3H (4"), t, J=7.5 Hz), 1.13 (3H (5"), d, J=7.0 Hz), 1.16 (3H (16), s), 1.20 (1H (14), d, J=5.9 Hz), 1.23 (17), br. s.), 1.45 (1H (3"), td, J=14.1, 7.2 Hz), 1.70 (1H (3"), td, J=14.0, 7.2 Hz), 1.82 (3H (19), dd, J=2.8, 1.3 Hz), 2.05 (1H (OH), d, J=3.40 Hz), 2.09 (1H (11), dd, J=10.3, 6.5 Hz), 2.27 (1H (8), d, J=5.9 Hz), 2.34 (3H (4'), s), 2.38 (1H (2"), t, J=7.0 Hz), 2.85 (1H (4-OH), s), 3.52 (1H (10), dd, J=2.6, 2.3 Hz), 3.57 (2H (2'), d, J=4.5 Hz), 3.70 (1H (5), d, J=1.1 Hz), 3.81 (1H (20), dd, J=12.2, 6.2 Hz), 3.89 (1H (20), m), 4.46 (1H (7), d, J=5.7 Hz), 5.02 (1H (7-OH), d, J=5.9 Hz), 5.35 (1H (12), d, J=10.3 Hz), 6.47 (1H (9-OH), m), 7.56 (1H (1), dd, J=2.0, 1.3 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 10.3 (19), 11.6 (4"), 12.1 (4'), 14.0 (18), 16.2 (5"), 16.6 (16), 23.5 (17), 26.2 (3"), 26.5 (15), 34.8 (14), 35.2 (8), 41.3 (2"), 43.3 (11), 49.5 (2'), 57.4 (10), 62.7 (5), 64.4 (20), 65.3 (13), 66.8 (6), 71.3 (4), 77.2 (7), 77.9 (12), 79.1 (9), 134.7 (2), 159.5 (1), 165.7 (1'), 179.8 (1"), 190.9 (3'), 205.6 (3).
화합물 40: 12-[(2-메톡시카르보닐)-아세토일]-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,12, 13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온
Figure pct00057
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.88 (3H (18), d), 0.92 (3H (4"), t, J=7.6 Hz), 1.13 (3H (5"), d, J=6.8 Hz), 1.17 (3H (16), s), 1.21 (1H (14), d, J=5.9 Hz), 1.23 (3H (17), s), 1.45 (1H (3"), dt, J=14.2, 6.8 Hz), 1.70 (1H (3"), dd, J=14.2, 6.8 Hz), 1.82 (3H (19), dd, J=2.7, 1.2 Hz), 2.09 (1H (11), dd, J=10.3, 6.4 Hz), 2.27 (1H (8), d, J=4.9 Hz), 2.38 (1H (2"), m, J=14.1, 7.0, 6.8 Hz), 2.72 (1H (4-OH), s), 3.37 (2H (2'), s), 3.53 (1H (10), d, J=2.4 Hz), 3.70 (1H (5), d, J=1.0 Hz), 3.72 (3H (4'), s), 3.80 (1H (20), m), 3.90 (1H (20), m), 4.46 (1H (7), d, J=2.4 Hz), 5.02 (1H (7-OH), d, J=5.9 Hz), 6.49 (1H (9-OH), s), 7.56 (1H (1), d, J=2.0 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 10.3 (19), 11.6 (4"), 13.9 (18), 16.2 (5"), 16.7 (16), 23.5 (17), 26.2 (3"), 26.5 (15), 34.8 (14), 35.2 (8), 41.3 (2"), 41.4 (2'), 43.3 (11), 52.5 (4'), 57.4 (10), 62.7 (5), 64.7 (20), 65.3 (13), 66.6 (6), 71.3 (4), 77.2 (7), 77.7 (12), 79.1 (9), 134.8 (2), 159.4 (1), 166.1 (1'), 166.1 (3'), 179.8 (1"), 205.5 (3).
실시예 3: 티글리안 유도체의 제조
다수의 화합물들은 화합물 1 및 관련 화합물들과 같은 티글리안 화합물의 5,20-아세토나이드 혼합물의 C-12 및 C-13 에스테르를 가수분해한 다음, 다음과 같은 방법을 사용하여 표준 시약으로 C-12 및 C-13에서 재에스테르화하여 반(semi)-합성적으로 제조했다.
티글리안 유사체를 합성하기 위한 티글리안 에스테르의 미정제 혼합물은 폰타이니아 피크로스퍼마의 종자(seed) 150g을 조(coarsely) 분말화한 뒤, 1L 플라스크에서 아세톤과 함께 교반하여 추출하여 제조했다. 4hr 후 이 현탁액을 진공 여과하고, 여과 케익(cake)은 TLC(PE:EtOAc: 4:6)에서 티글리안 에스테르의 부재가 확인될 때까지 아세톤으로 세척했다. 수집한 여액을 증발시켜 에스테르의 미정제 혼합물을 수득했다. 그 다음, 실리카겔을 이용한 짧은 중력 컬럼 크로마토그래피(용출제로서 석유에테르/에틸아세테이트; PE/EtOAc 8:2 → 4:6)로 지방을 제거하여 8.2g(5.5%)의 미정제 에스테르 혼합물을 수득했다.
이 에스테르 혼합물은 그 다음 다양한 아실 기를 사용하여 다음과 같은 반응에 예시된 바와 같이 C-12 및 C-13 위치에서 보호, 탈에스테르화 및 재에스테르화하여, 화합물 21, 22, 23, 27, 28, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53 및 60을 제공했다.
Figure pct00058
에스테르 혼합물 A를 디메틸포름아미드(DMF)에 용해시킨 10ml 용액을, 피리디늄-p-톨루엔설포네이트(PPTS, 4.1g, 과량)를 DMF(10ml)에 용해시킨 50ml 용액에 첨가하고, 실온에서 2분 동안 교반했다. 그 다음, 2,2-디메톡시프로판(DMP) 120ml를 첨가하고, 이 용액을 24hr 동안 교반했다. 이 반응을 NaCl 용액(150ml)으로 희석하고 에틸아세테이트(EtOAc 50ml)로 세척했다. 유기 상은 NaCl 용액으로 세척하고, 건조하고(Na2SO4), 여과 및 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔 중력 컬럼 크로마토그래피(용출제로서 PE/EtOAc 8:2→6:4)로 정제하여 5.2g(3.5%)의 5,20-아세토나이드 에스테르 혼합물 B를 제공했다. 미반응 출발 물질은 다시 동일한 조건 하에 반응시켜 추가 에스테르 혼합물 B를 제공했다.
Figure pct00059
교반된 메탄올(HPLC 등급 2L)에 작은 조각의 나트륨(9.7g)을 천천히 첨가하여 0.21N NaOMe 용액을 새로 제조했다. 강력한 교반 하에, 이 용액 128ml를 그 다음 5,20-아세토나이드 에스테르 혼합물 B 6.4g에 빠르게 첨가했다. 최종 용액의 pH는 pH 12.5를 초과하지 않도록 0.21M NaOMe를 신중하게 첨가하여 11.5 내지 12.0의 범위로 유지시켜야 한다. 실온에서 24시간 동안 교반한 후, 이 반응을 아세트산으로 중화시키고, 여과한 뒤, 초기 부피의 약 1/20로 증발시켰다. EtOAc(20ml)을 첨가하고, 이 용액을 2N H2SO4(100ml)로 세척했다. 산성 세척물은 EtOAc로 역추출하고, 수집한 EtOAc 용액은 NaCl 용액(2x300ml)으로 세척했다. 건조(Na2SO4), 여과 및 증발 후, 잔류물을 실리카겔 중력 컬럼 크로마토그래피(용출제로서 PE/EtOAc 6:4→4:6)로 정제하여 1.4g의 백색 분말을 제공했다.
대칭되는 에스테르 패턴을 보유한 티글리안 유사체의 합성; 예시적 방법
변형된 슈테글리히 에스테르화
1.
Figure pct00060
데아실-티글리안 아세토나이드(100mg; 0.23 mMol)를 THF(5ml)에 용해시킨 용액에, 4-디메틸아미노피리딘(DMAP) (15mg; 0.12 mMol)을 첨가하고, 이 용액을 60℃로 가열했다(오일 배쓰 온도). 별도로, THF(10ml/g) 중의 에스테르화 카르복시산(10Eq) 용액에, N,N'-디사이클로헥실카르보디이미드(DCC, 10 Eq)를 첨가하고; 약 15분 동안 교반한 후, 현탁액을 솜뭉치를 통해 여과하고, 데아실-티글리안 아세토나이드의 THF 용액에 적가했다. 60℃에서 24시간 동안 교반한 후, 반응을 EtOAc(∼200ml)로 희석하고 2N H2SO4(∼50ml), 염수(2x ∼50ml) 및 그 다음 포화 NaHCO3 (∼50ml) 및 염수(2x ∼50ml)로 세척하여 완수했다. 건조(Na2SO4), 여과 및 증발 후, 잔류물을 실리카겔 중력 컬럼 크로마토그래피(용출제로서 PE/EtOAc 9:1 → 6:4)로 정제하여 111mg(80%) 백색 분말을 제공했다.
3.2 탈보호
Figure pct00061
방법 A ( CH 2 Cl 2 중의 TFA )
새로 제조한 CH2Cl2 (2% V/V; 200㎕, 2㎕/mg) 중의 트리플루오로아세트산(TFA) 용액에 아세토나이드 디에스테르(100mg)를 첨가했다. 실온에서 6 내지 12h 동안 교반한 후, 반응을 포화 NaHCO3 (∼10ml) 및 염수(∼40ml)의 혼합물, 및 그 다음 염수 만(2x ∼40ml)으로 세척하여 완수했다. 건조(Na2SO4), 여과 및 증발 후, 잔류물을 실리카겔 중력 컬럼 크로마토그래피(용출제로서 PE/EtOAc 8:2 → 2:8)로 정제하여 티글리안 유사체(수율 약 60 내지 70%)를 제공했다.
방법 B( MeOH 중의 HClO 4 )
새로 제조한 MeOH 중의 HClO4 용액[pH 범위: 1.5-2.0]에 아세토나이드 디에스테르(100mg)를 첨가했다. 실온에서 6 내지 24h 동안 교반한 후, 반응을 아세트산나트륨으로 중화시키고 여과한 뒤, 원 부피의 1/20로 증발시켜 완수했다. 그 다음 EtOAc(10ml)를 첨가하고, 이 용액을 2N H2SO4(30ml) 및 그 다음 염수(30ml)로 세척했다. 건조(Na2SO4), 여과 및 증발 후, 잔류물을 실리카겔 중력 컬럼 크로마토그래피(용출제로서 PE/EtOAc - → 4:6)로 정제하여 디에스테르를 약 60 내지 70%의 수율로 제공했다.
이 방법은 화합물 27, 41, 42, 43, 44, 46, 49 및 60을 제조하는데 사용했다.
비대칭 디에스테르의 합성, 예시적 방법들:
1.
Figure pct00062
12,13-데아실-5,20-아세토나이드(C)(1.4g; 3.4mMol)를 10ml 테트라하이드로푸란(THF)에 용해시킨 용액에, 34mMol 트리에틸아민(TEA) 740ml를 첨가하고 이 용액을 60℃까지 가열했다. 이와 별도로, (S)-(+)-2-메틸부티르산(3,702ml; 34mMol)을 THF(20ml)에 용해시킨 용액에, N,N'-디사이클로헥실카르보디이미드(DCC, 7,015g;34mMol)를 첨가했다. 약 15분 동안 교반한 후, 현탁액을 여과하고 가온된 출발 디올 용액(C)에 첨가했다. 60℃에서 24시간 동안 교반한 후, 반응물을 EtOAc(약 200ml)로 희석하고 2N H2SO4(약 50ml), NaCl 용액(2 x 약 50ml) 및 그 다음 NaHCO3 용액(약 50ml)과 NaCl 용액(2x 약 50ml)으로 세척했다. 건조(Na2SO4), 여과 및 증발 후, 잔류물을 실리카겔 중력 컬럼 크로마토그래피(용출제로서 PE/EtOAc 9:1→6:4)로 정제하여 12-데아실-5,20-아세토나이드-13-[(S)-(+)-2-메틸부티레이트](D)를 백색 분말로서 제공했다.
2.
Figure pct00063
12,13-데아실-5,20-아세토나이드(C)(100mg; 0.25mMol)를 THF(5ml)에 용해시킨 용액에, (S)-(+)-2-메틸부티르산(109㎕; 1.00mMol) 및 N,N'-디사이클로헥실카르보디이미드(DCC, 206.33mg; 1.00mMol)를 첨가했다. 이 용액을 60℃(오일 배스 온도)에서 24시간 동안 교반한 후, EtOAc(약 20ml)로 희석하고 2N H2SO4(약 50ml), 염수(2 x 약 50ml), 포화 NaHCO3 용액(약 50ml) 및 염수(2x 약 50ml)로 세척하여 완수했다. 건조(Na2SO4), 여과 및 증발 후, 잔류물을 실리카겔 중력 컬럼 크로마토그래피(용출제로서 PE/EtOAc 9:1→6:4)로 정제하여 106.2mg(60%)의 12-데아실-5,20-아세토나이드-13-((S)-2-메틸부티레이트)(D)를 백색 분말로서 제공했다.
3.
Figure pct00064
12,13-데아실-5,20-아세토나이드 C(100mg; 0.25 mMol)를 THF(5ml)에 용해시킨 용액에, 디이소프로필에틸아민(DIPEA) (131㎕; 0.75mMol) 및 아세트산 무수물(94㎕; 0.75mMol)을 첨가했다. 실온에서 72시간 동안 교반한 후, EtOAc(10ml)를 첨가하고, 이 용액을 2N H2SO4(2 x 20ml) 및 염수(20ml)로 세척했다. 건조(Na2SO4), 여과 및 증발 후, 잔류물을 실리카겔 중력 컬럼 크로마토그래피(용출제로서 PE/EtOAc - →4:6)로 정제하여 12-데아실-13-아세틸-5,20-아세토나이드 104mg(87%)을 백색 분말로서 제공했다.
4.
Figure pct00065
데아실-5,20-아세토나이드(100mg; 0.25mMol)를 톨루엔(5ml)/디메틸포름아미드(2ml)에 용해시킨 용액에, N-메틸이사토산 무수물(266mg; 1.50mMol) 및 디메틸아미노피리딘(DMAP) (31mg; 0.25mMol)을 첨가했다. 80℃에서 24시간 동안 교반한 후, 반응물을 EtOAc(약 10ml)로 희석하고, 이어서 [2N H2SO4(약 20ml) + 염수(약 60ml)](x2), 및 [포화 NaHCO3 (약 20ml) + 염수 (약 60ml)](x2)로 연속 세척했다. 건조(Na2SO4), 여과 및 증발 후, 잔류물을 실리카겔 중력 컬럼 크로마토그래피(용출제로서 PE/EtOAc 9:1 →7:3)로 정제하여 12-데아실-13-[(N-메틸)-안트라닐레이트-5,20-아세토나이드 114mg(80%)을 백색 분말로서 제공했다.
13- 모노에스테르의 아실화 : 예시적 방법들
1.
Figure pct00066
12-데아실-5,20-아세토나이드-13-[(S)-(+)-2-메틸부티레이트 (D) (1062mg; 2.04 mMol)를 톨루엔(10ml)에 용해시킨 용액에, 디메틸아미노피리딘(DMAP)(249mg; 2.04mMol)을 첨가했다. 별도로, 벤조산(1224mg; 10.02mMol)을 톨루엔(20ml)에 용해시킨 용액에, 트리에틸아민(1.397ml; 10.02mMol)을 첨가하고, 이 용액을 약 2분 동안 교반하여 완전히 용해시키고; 그 다음 2,4,6-트리클로로벤조일 클로라이드(1.566ml; 10.02mMol)를 첨가했다(용액 1). 화합물 D를 함유하는 조성물을 6시간 동안 교반한 후, 현탁액을 여과하고 용액 1에 투입했다. 60℃에서 24 내지 48시간 동안 교반한 후, 반응물을 EtOAc(약 10ml)로 희석하고 NH2SO4 용액(약 40ml), NaCl 용액(2x 약 40ml), 그 다음 NaHCO3 용액(약 40ml) 및 NaCl 용액(2x 약 40ml)으로 세척했다. 건조(Na2SO4), 여과 및 증발 후, 잔류물을 실리카겔 중력 컬럼 크로마토그래피(용출제로서 PE/EtOAc 9:1 →7:3)로 정제하여 5,20-아세토나이드-12-벤조에이트-13-[(S)-(+)-2-메틸부티레이트] E를 백색 분말로서 제공했다.
2.
Figure pct00067
데아실-13-(N-메틸안트라노일)-5,20-아세토나이드(100mg; 0.18mMol)를 테트라하이드로푸란(THF, 5ml)에 용해한 용액에, 아세트산 무수물(51mg; 0.54mMol) 및 디메틸아미노피리딘(DMAP)(2.2mg; 0.018mMol)을 연속해서 첨가했다. 50℃에서 6시간 교반한 후, 반응물을 EtOAc(약 10ml)로 희석하고, 2N H2SO4(2x 약 40ml), 포화 NaHCO3(2x 약 40ml) 및 염수(2x 약 40ml)로 연속 세척하여 반응을 완수했다. 건조(Na2SO4), 여과 및 증발 후, 잔류물을 실리카겔 중력 컬럼 크로마토그래피(용출제로서 PE/EtOAc 95:5→7:3)로 정제하여 12-아세틸-13-(N-메틸)안트라닐레이트-5,20-아세토나이드, 105mg(95%)을 백색 분말로서 제공했다.
3.
12-데아실-5,20-아세토나이드-13-[(S)-2-메틸부티레이트](100mg; 0.19mMol)를 톨루엔(5ml)에 용해한 용액에 디메틸아미노피리딘(DMAP)(23mg; 0.19mMol)을 첨가했다. 별도로, 티글리산(95mg; 0.95mMol)을 톨루엔(5ml)에 용해시킨 용액에, 트리에틸아민(132㎕; 0.95mMol)을 첨가하고, 이 용액을 완전한 용액으로 약 2분 동안 교반하고; 그 다음 2,4,6-트리클로로벤조일 클로라이드(148㎕; 0.95mMol)를 첨가하고, 실온에서 6시간 동안 교반한 후, 현탁액을 여과하고(솜뭉치), 톨루엔 중의 디테르페노이드 모노에스테르 용액에 적가했다. 60℃에서 24 내지 48h 동안 교반한 후, 반응물을 EtOAc(약 10ml)로 희석하고, 2N H2SO4(약 40ml), 염수(2x 약 40ml)로 세척하고, 그 다음 포화 NaHCO3(약 40ml) 및 염수(2x 약 40ml)로 세척하여 반응을 완수했다. 건조(Na2SO4), 여과 및 증발 후, 잔류물을 실리카겔 중력 컬럼 크로마토그래피(용출제로서 PE/EtOAc 9:1→7:3)로 정제하여 12-티글로일-13-메틸부티릴-5,20-아세토나이드, 59mg(50%)을 백색 분말로서 제공했다.
4.
Figure pct00069
12-데아실-5,20-아세토나이드-13-(S)-2-메틸부티레이트(100mg; 0.19mMol)를 톨루엔(10ml)에 용해시킨 용액을 60℃까지 가열하고, 미리스트산(217mg; 0.95mMol), N,N'-디사이클로헥실카르보디이미드(DCC) (196mg; 0.95mMol) 및 디메틸아미노피리딘(DMAP) (23mg; 0.19mMol)을 연속 첨가했다. 60℃에서 12시간 동안 교반한 후, 반응물을 EtOAc(약 10ml)로 희석하고, 2N H2SO4(2x 약 40ml), 포화 NaHCO3(2x 약 40ml) 및 염수(2x 약 40ml)로 세척하여 반응을 완수했다. 건조(Na2SO4), 여과 및 증발 후, 잔류물을 실리카겔 중력 컬럼 크로마토그래피(용출제로서 PE/EtOAc 9:1→7:3)로 정제하여 12-미리스토일-13-(2-메틸부타노일)-5,20-아세토나이드, 121mg(70%)을 백색 분말로서 제공했다.
5.
Figure pct00070
12-데아실-5,20-아세토나이드-13-아세테이트(100mg; 0.25mMol)를 톨루엔(10ml)에 용해시킨 용액을 60℃(오일 배스 온도)까지 가열하고, 미리스트산(286mg; 1.00mMol), N,N'-디사이클로헥실카르보디이미드(DCC) (206mg; 1.00mMol) 및 디메틸아미노피리딘(DMAP) (31mg; 0.25mMol)을 그 다음 첨가했다. 60℃에서 12시간 동안 교반한 후, 반응물을 EtOAc(약 10ml)로 희석하고, 2N H2SO4(2x 약 40ml), 포화 NaHCO3(2x 약 40ml) 및 염수(2x 약 40ml)로 세척하여 반응을 완수했다. 건조(Na2SO4), 여과 및 증발 후, 잔류물을 실리카겔 중력 컬럼 크로마토그래피(용출제로서 PE/EtOAc 9:1→7:3)로 정제하여 12-미리스틸-13-아세틸-5,20-아세토나이드, 121mg(70%)을 백색 분말로서 제공했다.
6.
Figure pct00071
톨루엔(10ml)에 데아실-13-(N-메틸안트라노일)-5,20-아세토나이드(100mg; 0.18 mMol)를 용해시킨 가열된(60℃, 오일 배스 온도) 용액에, 헥산산(84mg; 0.72mMol), 디시클로헥실카르보디이미드(DCC, 149mg; 0.72mMol), 및 디메틸아미노피리딘(DMAP 22mg; 0.18mMol)을 연속 첨가했다. 60℃에서 12시간 동안 교반한 후, 반응물을 EtOAc(약 10ml)로 희석하고, 2N H2SO4(2x 약 40ml), 포화 NaHCO3(2x 약 40ml) 및 염수(2x 약 40ml)로 연속 세척하여 반응을 완수했다. 건조(Na2SO4), 여과 및 증발 후, 잔류물을 실리카겔 중력 컬럼 크로마토그래피(용출제로서 PE/EtOAc 9:1→7:3)로 정제하여 12-헥사노일-13-(N-메틸안트라노일)-5,20-아세토나이드, 108mg(90%)을 백색 분말로서 제공했다.
탈보호
1.
Figure pct00072
새로 제조한 MeOH 중의 HClO4 용액[1.5 < pH < 2.0]에 5,20-아세토나이드-12-벤조에이트-13-[(S)-(+)-2-메틸부티레이트 E(637mg; 1.02mMol)를 첨가했다. 6 내지 24시간 동안 교반한 후, 반응물을 아세트산나트륨으로 중화시키고, 여과하고 원 부피의 약 1/20로 증발시켰다. EtOAc(10ml)를 첨가하고, 용액을 2N H2SO4(30ml)로 세척한 다음, NaCl 용액(30ml)으로 세척했다. 건조(Na2SO4), 여과 및 증발 후, 잔류물을 실리카겔 중력 컬럼 크로마토그래피(용출제로서 PE/EtOAc - →4:6)로 정제하여 12-벤조에이트-13-[(S)-(+)-2-메틸부티레이트] F(화합물 23)를 백색 분말로서 제공했다.
2.
Figure pct00073
대표로써 12-아세틸-13-N-메틸안트라노일-5,20-아세토나이드와의 반응: 12-아세틸-13-N-메틸안트라노일-5,20-아세토나이드(100mg; 0.16mMol)를 CH2Cl2 (10ml)에 용해시킨 용액에, 트리플루오로아세트산(TFA) (300㎕; 3% V/V)을 첨가했다. 약 12시간 교반한 후, 반응물을 [NaHCO3 (약 10ml) + 염수(약 40ml)]로 세척한 다음 염수(2x 약 40ml)로 세척하여 반응을 완수했다. 건조(Na2SO4), 여과 및 증발 후, 잔류물을 실리카겔 중력 컬럼 크로마토그래피(용출제로서 PE/EtOAc 8:2→2:8)로 정제하여 12-아세틸-13-(N-메틸안트라노일)-티글리안, 69mg(75%)을 백색 분말로서 제공했다.
화합물 21, 22, 23, 28, 45, 47, 48, 50, 51, 52 및 53을 이러한 방법들로 제조했다.
화합물 21
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.84 (3H, d, J=6.6 Hz), 0.93 (3 H, t, J=7.4 Hz), 1.21 (3 H, s), 1.23 (3 H, s), 1.29 (1 H, d, J=6.7 Hz), 1.64 (2 H, sxt, J=7.6 Hz), 1.73 (3 H, dd, J=2.9, 1.3 Hz), 1.77 (3 H, dq, J=7.2, 1.2 Hz), 1.79-1.81 (3 H, m), 1.95 (1 H, dd, J=9.9, 6.5 Hz), 2.24-2.38 (2 H, m), 3.16 (1 H, d, J=6.7 Hz), 3.26 (1 H, d, J=0.5 Hz), 3.65 (1 H, s), 3.83 (2H, dd, J=13.3, 12.5 Hz), 3.94 (1 H, d, J=3.1 Hz, OH), 4.06 (1 H, t, J=2.6 Hz), 4.22 (1 H, s), 5.41 (1 H, d, J=9.9 Hz), 5.82-6.00 (1 H, br. s., OH), 6.80 (1 H, qq, J=7.1, 1.4 Hz), 7.71 (1 H, dd, J=2.6, 1.3 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.72, 12.20, 13.62, 14.43, 15.07, 17.12, 18.03, 23.66, 26.35, 35.98, 36.03, 36.13, 45.76, 48.92, 61.77, 64.56, 65.23, 65.65, 71.36, 72.41, 76.74, 77.20, 128.38, 133.46, 137.73, 164.63, 167.62, 176.12, 209.88.
화합물 22
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.85 (3 H, d, J=7.3 Hz), 0.86 (3 H, t, J=7.2 Hz), 1.20 (3 H, s), 1.21 (3 H, s), 1.20-1.40 (10 H, m), 1.29 (1 H, d, J=6.8 Hz), 1.67 (2 H, d, J=13.7 Hz), 1.75 (3 H, dd, J=2.9, 1.0 Hz), 1.88-1.92 (2H, m) 1.89-1.95 (1H, m), 3.07 (2H, dd, J=6.8, 1.5 Hz), 3.15 (1 H, d, J=6.4 Hz), 3.26 (1 H, s), 3.85 (2 H, dd, J=12.7, 4.4 Hz), 4.04 (1 H, d, J=2.9 Hz), 4.21 (1 H, s), 5.13-5.15 (1 H, m), 5.16-5.18 (1 H, m), 5.35 (1 H, d, J=9.8 Hz), 5.82-5.92 (1 H, m), 7.70 (1 H, dd, J=2.4, 1.0 Hz).
13C NMR (125 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm: 9.74, 14.08, 15.12, 17.03, 22.63, 23.69, 24.48, 26.51, 29.07, 29.08, 29.19, 31.81, 34.25, 36.01, 36.04, 39.29, 45.50, 48.94, 61.69, 64.54, 65.21, 65.49, 71.58, 72.35, 77.17, 77.41, 118.62, 130.03, 133.55, 164.54, 171.11, 176.25, 209.86.
화합물 23
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.90 (3 H, d, J=6.5 Hz), 0.94 (3 H, t, J=7.5 Hz), 1.14 (3 H, d, J=7.1 Hz), 1.22 (3 H, s), 1.32 (1 H, d, J=6.6 Hz), 1.35 (3 H, s), 1.41-1.51 (1 H, m, J=14.1, 7.5, 7.0 Hz), 1.69-1.79 (1 H, m), 1.73 (3 H, dd, J=2.9, 1.3 Hz), 2.08 (1 H, dq, J=9.9, 6.5 Hz), 2.39 (1 H, sxt, J=7.0 Hz), 3.24 (1 H, d, J=6.6 Hz), 3.29 (1 H, s), 3.84 (2 H, dd, J=12.8, 1.3 Hz), 4.10 (1 H, t, J=2.5 Hz), 4.24 (1 H, d, J=0.7 Hz), 5.62 (1 H, d, J=9.9 Hz), 6.07 (1 H, br. s., OH), 7.43 (2 H, t, J=7.7 Hz), 7.55 (1 H, tt, J=7.5, 1.3 Hz), 7.72 (1 H, dd, J=2.6, 1.3 Hz), 7.99 (2 H, dm, J=8.4, 1.3 Hz)
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.73, 11.61, 15.14, 16.14, 17.32, 23.63, 26.18, 26.82, 36.03, 36.34, 41.22, 45.92, 48.92, 61.86, 64.59, 65.20, 65.48, 71.27, 72.46, 77.23, 77.60, 128.44 (2 C), 129.70 (2 C), 130.02, 133.07, 133.52, 164.54, 165.94, 179.00, 209.84.
화합물 27
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.85 (3 H, d, J=6.5 Hz), 0.93 (6 H, t, J=7.4 Hz), 1.20 (6 H, s), 1.28 (1 H, d, J=6.6 Hz), 1.58-1.68 (4 H, m), 1.74 (3 H, d, J=1.8 Hz), 1.91 (1 H, dq, J=10.0, 6.4 Hz), 2.20-2.36 (4 H, m), 3.14 (1 H, d, J=6.6 Hz), 3.25 (1 H, s), 3.63 (1 H, s, OH), 3.76-3.86 (1 H, m), 3.93 (1 H, d, J=3.1 Hz, OH), 4.05 (1 H, d, J=2.4 Hz), 4.21 (1 H, d, J=2.4 Hz), 5.36 (1 H, d, J=10.0 Hz), 5.84 (1 H, br. s., OH), 7.70 (1 H, s).
13C NMR (125 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm: 9.72, 13.46, 13.62, 15.04, 17.02, 18.01, 18.61, 23.66, 26.34, 35.90, 35.95, 36.14, 36.38, 45.42, 48.90, 61.79, 64.58, 65.21, 65.60, 71.34, 72.40, 76.59, 77.18, 133.49, 164.54, 173.30, 176.05, 209.85.
화합물 28
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.91 (3 H, d, J=6.6 Hz), 0.96 (3 H, t, J=7.4 Hz), 1.21 (3 H, s), 1.34 (3 H, s), 1.36 (1 H, d, J=3.4 Hz), 1.60 - 1.72 (2 H, m), 1.74 (3 H, d, J=2.1 Hz), 2.09 (1 H, dd, J=9.8, 6.5 Hz), 2.31 (1 H, t, J=15.9, 7.6 Hz), 2.38 (1 H, t, J=15.9, 7.6 Hz), 3.24 (1 H, d, J=6.7 Hz), 3.29 (1 H, s), 3.80 (1 H, d, J=12.4 Hz), 3.87 (1 H, d, J=12.4 Hz), 4.09 (1 H, d, J=2.7 Hz), 4.24 (1 H, s), 5.62 (1 H, d, J=9.9 Hz), 7.43 (2 H, t, J=7.7 Hz), 7.56 (1 H, t, J=7.4 Hz), 7.73 (1 H, s), 7.99 (2 H, d, J=7.3 Hz)
13C NMR (125 MHz, CDCl3) - ppm: 9.73, 13.65, 15.16, 17.25, 18.07, 23.66, 26.59, 36.07, 36.18, 36.23, 45.80, 48.95, 61.74, 64.55, 65.23, 65.62, 71.54, 72.40, 77.21, 77.63, 128.46 (2 C), 129.72 (2 C), 129.98, 133.12, 133.56, 164.57, 166.15, 176.19, 209.88.
화합물 41
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.85 (3H (18), d, J=7.3 Hz), 0.85 (3H (9'), t, J=7.3 Hz), 0.86 (3H (9"), t, J=6.8 Hz), 1.20 (3H (16), s), 1.20 (3H (17), s), 1.22-1.30 (10H (4', 5', 6', 7', 8'), m), 1.22-1.30 (10H, 4", 5", 6", 7", 8"), m), 1.28 (1H (14), d, J=6.8 Hz), 1.53-1.62 (2H (3"), m), 1.56-1.63 (2H (3'), m), 1.74 (3H (19), dd, J=2.9, 1.3 Hz), 1.90 (1H (11), dq, J=10.1, 6.5 Hz), 2.19 (1H (20-OH), t, J=6.8 Hz), 2.24-2.32 (2H (2'), m), 2.29-2.37 (2H (2"), m), 3.14 (1H (8), d, J=6.8 Hz), 3.26 (1H (7), s), 3.59 (1H (4-OH), s), 3.78 (1H (20), dd, J=12.5, 5.2 Hz), 3.82-3.87 (1H (20), m, J=12.5, 7.3 Hz), 3.89 (1H (5-OH), d, J=3.1 Hz), 4.05 (1H (10), dq), 4.21 (1H (5), d, J=2.6 Hz), 5.36 (1H (12), d, J=10.4 Hz), 5.86 (1H 9-OH), br. s.), 7.70 (1H (1), dd, J=2.6, 1.6 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 14.1 (9"), 14.1 (9'), 15.1 (18), 17.0 (16), 22.6 (8"), 22.6 (8'), 23.7 (17), 24.5 (3"), 25.2 (3'), 26.3 (15), 28.99 (4"), 29.07 (6'), 29.07 (6"), 29.15 (4'), 29.18 (5"), 29.2 (4'), 29.22 (5'), 31.78 (7"), 31.80 (7'), 34.3 (2"), 34.5 (2'), 35.9 (14), 36.0 (8), 45.4 (11), 48.9 (10), 61.7 (6), 64.5 (20), 65.2 (7), 65.6 (13), 71.5 (5), 72.4 (4), 76.5 (12), 77.2 (9), 133.5 (2), 164.6 (1), 173.5 (1'), 176.2 (1"), 209.9 (3).
화합물 42
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.84 (3H (18), d, J=6.2 Hz), 0.87 (3H (6'), t, J=7.0 Hz), 0.88 (3H (6"), t, J=7.0 Hz), 1.20 (3H (17), s), 1.21 (3H (16), s), 1.25-1.31 (2H (4'), m), 1.25-1.31 (2H (4"), m), 1.26-1.32 (2H (5"), m), 1.26-1.32 (2H (5'), m), 1.27-1.29 (1H (14), m, J=6.8 Hz), 1.57-1.62 (2H (3"), m), 1.58-1.63 (2H (3'), m), 1.74 (3H (19), dd, J=2.9, 1.3 Hz), 1.91 (1H (11), dq, J=10.1, 6.5 Hz), 2.20 (1H (20-OH), t, J=6.8 Hz), 2.26-2.30 (2'), m), 2.29-2.34 (2H (2"), m), 3.14 (1H (8), d, J=6.8 Hz), 3.26 (1H (7), s), 3.59 (1H (4-OH), d, J=1.0 Hz), 3.78 (1H (20), dd, J=12.5, 5.2 Hz), 3.82-3.87 (1H, (20), m), 3.88 (1H (5-OH), d, J=3.1 Hz), 4.05 (1H (10), t, J=2.6 Hz), 4.21 (1H (5), d, J=3.6 Hz), 5.36 (1H (12), d, J=9.9 Hz), 5.86 (1H, (9-OH), br.s.), 7.70 (1H (1), dd, J=2.3, 1.3 Hz),
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 13.8 (6"), 13.9 (6'), 15.1 (18), 17.0 (16), 22.26 (5"), 22.3 (5'), 23.7 (17), 24.1 (3"), 24.8 (3'), 26.3 (15), 31.1 (4"), 31.2 (4'), 34.2 (2"), 34.5 (2'), 35.9 (14), 36.0 (8), 45.4 (11), 48.9 (10), 61.7 (6), 64.5 (20), 65.2 (7), 65.6 (13), 71.5 (5), 72.4 (4), 76.5 (12), 77.2 (9), 133.5 (2), 164.6 (1), 173.5 (1'), 176.2 (1"), 210.0 (3).
화합물 43
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.85 (3H (18), d, J=6.5 Hz), 0.89 (3H (5'), t, J=7.2 Hz), 0.90, (3H (5"), t, J=7.3 Hz), 1.21 (3H (16), s), 1.21 (3H (17), s), 1.28 (1H (14), d, J=6.6 Hz), 1.29-1.37 (2H (4"), m), 1.29-1.38 (2H (4'), m), 1.55-1.59 (2H (3"), m), 1.56-1.62 (2H (3'), m), 1.75 (3H (19), dd, J=2.9, 1.2 Hz), 1.91 (1H (11), dq, J=10.1, 6.5 Hz), 2.19 (1H (20-OH), t, J=6.6 Hz), 2.24-2.32 (2H (2'), m), 2.30-2.38 (2H (2"), m), 3.15 (1H (8), d, J=6.6 Hz), 3.25 (1H (7), s), 3.59 (1H (4-OH), s), 3.78 (1H (20), dd, J=12.6, 5.2 Hz), 3.85 (1H (20), dd, J=12.6, 7.4 Hz), 3.88 (1H (20-OH), d, J=3.1 Hz), 4.05 (1H (10), t, J=2.6 Hz), 4.21 (1H (5), d, J=2.3 Hz), 5.36 (1H (12), d, J=10.0 Hz), 5.85 (1H (9-OH), br. s.), 7.70 (1H (1), dd, J=2.3, 1.4 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 13.65 (5"), 13.68 (5'), 15.1 (18), 17.0 (16), 22.1 (4"), 22.2 (4'), 23.7 (17), 26.4 (15), 26.5 (3"), 27.2 (3'), 34.0 (2"), 34.2 (2'), 35.9 (14), 36.0 (8), 45.5 (11), 48.9 (10), 61.7 (6), 64.6 (20), 65.2 (7), 65.6 (13), 71.5 (5), 72.4 (4), 76.6 (12), 77.2 (9), 133.5 (2), 164.6 (1), 173.5 (1'), 176.2 (1"), 209.9 (3).
화합물 44
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.86 (3H (18), d, J=6.2 Hz), 1.24 (3H (16), s), 1.26 (3H (17), s), 1.33 (1H (14), d, J=6.8 Hz), 1.74 (3H (19), dd, J=2.9, 1.3 Hz), 1.76-1.78 (2H (4'), m), 1.77-1.79 (2H (4"), m), 1.78-1.79 (3H (5"), m), 1.80-1.81 (3H (5'), m), 1.97 (1H (11), dq, J=9.9, 6.4 Hz), 2.19 (1H (20-OH), br.s.), 3.18 (1H (8), d, J=6.8 Hz), 3.27 (1H (7), s), 3.60 (1H (4-OH), s), 3.74-3.81 (1H (20), m), 3.86 (1H (20), br. s.), 3.89 (1H (5-OH), br. s.), 4.04-4.11 (1H (10), m), 4.22 (1H (5), s), 5.45 (1H (12), d, J=9.9 Hz), 6.28 (1H (9-OH), br. s.), 6.75-6.83 (1H (3'), m), 6.85-6.94 (1H (3"), m), 7.72 (1H (1), dd, J=2.6, 1.6 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.8 (5"), 12.2 (5'), 14.4 (4'), 14.7 (4"), 15.2 (18), 17.3 (16), 23.7 (17), 26.8 (15), 36.1 (8), 36.2 (14), 45.9 (11), 49.0 (10), 61.6 (6), 64.5 (20), 65.3 (7), 65.6 (13), 71.7 (5), 72.4 (4), 77.0 (12), 77.2 (9), 128.2 (2'), 128.5 (2"), 133.4 (2), 137.6 (3'), 139.8 (3"), 164.9 (1), 167.5 (1'), 169.7 (1"), 210.0 (3)..
화합물 45
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.79 (3H (18), d, J=6.6 Hz), 0.93 (3H (4"'), t, J=7.5 Hz), 1.13 (3H (5"'), d, J=7.0 Hz), 1.24 (3H (17), s), 1.28 (3H (16), s), 1.28 (1H (14), d, J=6.7 Hz), 1.45 (1H (3"'), dq, J=14.1, 7.3 Hz), 1.69-1.76 (1H (3"'), m), 1.71 (3H (19), dd, J=2.8, 1.4), 1.77 (3H (4"), dq, J=7.1, 1.1 Hz), 1.79-1.81 (3H (5"), m), 1.90 (1H (11), dq, J=9.8, 6.5 Hz), 2.01 (3H (2""), s), 2.18 (3H (2'), s), 2.38 (1H (2"'), sxt, J=7.0 Hz), 2.99 (1H (4-OH), s), 3.15 (1H (7), s), 3.26 (1H (8), d, J=6.8 Hz), 3.54 (1H (20), d, J=12.1 Hz), 4.14-4.17, (1H (10), m), 4.69 (1H (20), d, J=12.1 Hz), 5.42 (1H (12), d, J=9.9 Hz), 5.52 (1H (5), s), 5.98 (1H (9-OH), br.s.), 6.80 (1H (3"), qq, J=7.1, 1.3 Hz), 7.62 (1H (1), dd, J=2.3, 1.2 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.8 (19), 11.6 (4"'), 12.2 (5"), 14.4 (4"), 15.0 (18), 16.2 (5"'), 17.3 (16), 20.7 (2""), 20.8 (2'), 23.7 (17), 26.2 (3"'), 26.7 (15), 36.0 (14), 36.1 (8), 41.2 (2"'), 45.8 (11), 49.4 (10), 60.4 (6), 65.4 (7), 65.6 (13), 66.3 (20), 68.1 (5), 71.8 (4), 76.7 (12), 76.9 (9), 128.5 (2"), 133.8 (2), 137.6 (3"), 162.5 (1), 167.4 (1"), 168.8 (1'), 170.6 (1""), 178.9 (1"'), 206.3 (2).
화합물 46
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.87 (3H (18), d, J=6.6 Hz), 1.23 (3H (16), s), 1.25 (3H (17), s), 1.34 (1H (14), d, J=6.8 Hz), 1.75 (3H (19), dd, J=2.6, 1.0 Hz), 1.82-1.85 (3H (6'), m), 1.82-1.85 (3H (6"), m), 1.93-1.99 (1H (11), m), 3.17 (1H (8), d, J=6.8 Hz), 3.27 (1H (7), br.s.), 3.78 (1H (20), d, J=12.6 Hz), 3.85 (1H (20), d, J=12.2 Hz), 4.05-4.08 (1H (10), m), 4.22 (1H (5), d, J=1.6 Hz), 5.47 (1H (12), d, J=9.9 Hz), 5.73 (1H (2'), d, J=15.2 Hz), 5.75 (1H (2"), d, J=15.1 Hz), 6.08-6.19 (1H (4'), m), 6.08-6.19 (1H (4"), m), 6.14-6.19 (1H (5'), m), 6.15-6.18 (1H (5"), m), 7.16-7.23 (1H (3'), m), 7.26-7.33 (1H (3"), m), 7.71-7.73, (1H (1), m).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 15.2 (18), 17.2 (16), 18.7 (6'), 18.7 (6"), 23.6 (17), 26.7 (15), 36.1 (8), 36.2 (14), 45.9 (11), 49.0 (10), 61.6 (6), 64.6 (20), 65.3 (7), 65.6 (13), 71.7 (5), 72.4 (4), 77.0 (12), 77.1 (9), 117.7 (2"), 118.7 (2'), 129.7 (4'), 129.7 (4"), 133.4 (2), 139.7 (5'), 141.0 (5"), 145.5 (3'), 147.3 (3"), 164.8 (1), 166.8 (1'), 169.2 (1"), 210.0 (3).
화합물 47
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.89 (3H (18), d, J=6.7 Hz), 0.90 (3H (6'), t, J=6.7 Hz), 1.28 (3H (16), s), 1.29-1.34 (2H (4'), m), 1.30-1.35 (2H (5'), m), 1.31 (3H (17), s), 1.40 (1H (14), d, J=6.6 Hz), 1.60-1.65 (2H (3'), m), 1.77 (3H (19), dd, J=2.7, 1.2 Hz), 1.97 (1H (11), dq, J=9.9, 6.5 Hz), 2.14 (1H (20-OH), dd, J=7.4, 6.4 Hz), 2.30 (2H, (2'), td, J=7.4, 7.3 Hz), 2.87 (3H (MeNH), d, J=4.8 Hz), 3.22 (1H (8), d, J=6.6 Hz), 3.29 (1H (7), s), 3.80 (1H (20), dd, J=12.5, 5.7 Hz), 3.86 (1H (20), dd, J=12.9, 7.8 Hz), 4.08-4.11 (1H (10), m), 4.24 (1H (5), d, J=2.5 Hz), 5.53 (1H (12), d, J=9.9 Hz), 6.30-6.37 (1H (9-OH), m), 6.52 (1H (6"), ddd, J=7.9, 7.0, 0.9 Hz), 6.64 (1H (4"), d, J=8.4 Hz), 7.36 (1H (5"), ddd, J=8.4, 7.1, 1.4 Hz), 7.56 (1H (3"NH), q, J=4.8 Hz), 7.75 (1H, 7"), dd, J=8.2, 1.6 Hz), 7.72-7.76 (1H (1), m).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.8 (19), 14.0 (6'), 15.2 (18), 17.2 (16), 22.4 (5'), 23.9 (17), 24.9 (3'), 27.0 (15), 29.5 (MeNH), 31.2 (4'), 34.5 (2'), 36.1 (8), 36.2 (14), 45.7 (11), 49.0 (10), 61.8 (6), 64.6 (20), 65.4 (7), 65.5 (13), 71.6 (5), 72.4 (4), 76.8 (12), 77.4 (9), 108.6 (2"), 111.0 (4"), 114.5 (6"), 131.8 (7"), 133.6 (2), 135.6 (5"), 152.7 (3"), 164.4 (1), 170.2 (1"), 173.2 (1'), 209.9 (3).
화합물 48
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.9 (3H (18), d, J=6.6 Hz), 1.27 (3H (16), s), 1.32 (3H (17), s), 1.4 (1H (14), d, J=6.6 Hz), 1.77 (3H (19), dd, J=2.7, 1.0 Hz), 1.98 (1H (11), dq, J=9.9, 6.5 Hz), 2.05 (3H (2'), s), 2.88 (3H (MeNH), d, J=5.1 Hz), 3.22 (1H (8), d, J=6.6 Hz), 3.29 (1H (7), s), 3.80 (1H (20), dd, J=12.2, 5.2 Hz), 3.83-3.88 (1H (20), m), 4.09 (1H (10), br.s.), 4.24 (1H (5), d, J=2.9 Hz), 5.49 (1H (12), d, J=9.9 Hz), 6.53 (1H (6"), t, J=7.6 Hz), 6.64 (1H (4"), d, J=8.6 Hz), 7.36 (1H (5"), ddd, J=8.4, 7.0, 1.6 Hz), 7.55 (1H (3"-NH), q, J=4.6 Hz), 7.73 (1H (1), s), 7.78 (1H (7"), dd, J=8.0, 1.6 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.8 (19), 15.3 (18), 17.2 (16), 21.0 (2'), 23.9 (17), 27.1 (15), 29.5 (MeNH), 36.1 (8), 36.3 (14), 45.8 (11), 49.0 (10), 61.8 (6), 64.6 (20), 65.3 (7), 65.4 (13), 71.6 (5), 72.4 (4), 77.3 (9), 77.4 (12), 108.6 (2"), 111.0 (4"), 114.5 (6"), 131.9 (7"), 133.6 (2), 135.6 (5"), 152.7 (3"), 164.4 (1), 170.3 (1"), 170.4 (1'), 209.9 (3).
화합물 49
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.84 (3H (18), d, J=6.8 Hz), 0.86 (3H (7'), t, J=6.7 Hz), 0.86 (3H (7"), t, J=6.7 Hz), 1.20 (3H (16), s), 1.20 (3H (17), s), 1.22-1.32 (12 H, (4', 5', 6', 4", 5", 6"), m), 1.28 (1H (14), d, J=6.7 Hz), 1.55-1.63 (4H (3', 3"), m), 1.74 (3H (19), dd, J=2.6, 1.0 Hz), 1.90 (1H (11), m), 2.28 (2H (2"), m), 2.32 (2H (2'), m), 3.14 (1H (8), d, J=6.7 Hz), 3.25 (1H (7), s), 3.65 (1H (4-OH), s), 3.81 (2H (20), br.s.), 3.97 (1H (5-OH), br.s.), 4.05 (1H (10), t, J=2.6 Hz), 4.21 (1H (5), s), 5.35 (1H (12), d, J=9.9 Hz), 5.85 (1H (9-OH), br.s.), 7.70 (1H (1), dd, J=2.6, 1.6 Hz),
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 14.0 (7'), 14.0 (7"), 15.0 (18), 17.0 (16), 22.4 (6"), 22.5 (6'), 23.7 (17), 24.4 (3'), 25.1 (3"), 26.3 (15), 28.7 (4'), 28.7 (4"), 31.4 (5'), 31.4 (5"), 34.3 (2'), 34.5 (2"), 35.9 (8), 35.9 (14), 45.4 (11), 48.9 (10), 61.8 (6), 64.6 (20), 65.2 (7), 65.6 (13), 71.3 (5), 72.4 (4), 76.5 (9), 77.2 (9), 133.5 (2), 164.5 (1), 173.5 (1'), 176.2 (1"), 209.8 (2).
화합물 50
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.84 (3H (18), d, J=6.8 Hz), 0.85 (3H (14'), t, J=6.8 Hz), 1.20 (3H (16), s), 1.20 (3H (17), s), 1.21-1.28 (20H (4', 5', 6', 7', 8', 9', 10', 11', 12', 13'), m), 1.30 (1H (14), d, J=6.8 Hz), 1.60 (2H (3'), quin, J=7.3 Hz), 1.74 (3H (19), dd, J=2.9, 1.3 Hz), 1.91 (1H (11), dq, J=10.1, 6.5 Hz), 2.07 (3H, (2"), s), 2.23-2.34 (2H (2'), m), 3.14 (1H (8), d, J=6.8 Hz), 3.24 (1H (7), s), 3.46 (1H (5-OH), s), 3.65 (1H (4-OH), s), 3.77-3.83 (2H (20), m, J=3.1 Hz), 3.97 (1H (20-OH), d, J=3.1 Hz), 4.04 (1H (10), t, J=2.6 Hz), 4.21 (1H (5), d, J=2.1 Hz), 5.36 (1H (12), d, J=10.4 Hz), 5.70 (1H (9-OH), br.s.), 7.69 (1H (1), dd, J=2.6, 1.6 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 14.1 (14'), 15.0 (18), 17.0 (16), 21.0 (2"), 22.7 (13'), 23.6 (17), 25.1 (3'), 26.2 (15), 29.0 (4'), 29.2 (5'), 29.3 (6'), 29.5 (7'), 29.6 (8'), 29.6 (8'), 29.6 (9'), 29.6 (10'), 29.6 (11'), 31.9 (12'), 34.5 (2'), 35.8 (14), 35.9 (8), 45.3 (11), 48.9 (10), 61.8 (6), 64.6 (20), 65.2 (7), 65.8 (13), 71.2 (5), 72.4 (4), 76.5 (12), 77.2 (9), 133.5 (2), 164.4 (1), 173.6 (1'), 173.6 (1"), 209.8 (3).
화합물 51
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.84 (3H (18), d, J=6.8 Hz), 0.86 (3H (14'), t, J=7.0 Hz), 0.92 (3H (4"), t, J=7.5 Hz), 1.12 (3H (5"), d, J=6.8 Hz), 1.21 (3H (16), s), 1.22 (3H (17), s), 1.21-1.31 (20H (4', 5', 6', 7', 8', 9', 10', 11', 12', 13'), m), 1.25 (1H (14), d, J=6.2 Hz), 1.44 (1H (3"), ddq, J=14.0, 7.1, 7.1 Hz), 1.60 (2H (3'), m), 1.71 (1H (3"), ddq, J=14.0, 7.5, 7.5 Hz), 1.75 (3H (19), dd, J=2.9, 1.3 Hz), 1.90 (3H (11), dq, J=10.1, 6.5 Hz), 2.18 (1H (20-OH), m, J=6.8, 4.7 Hz), 2.28 (2H (2'), m, J=11.4, 7.4 Hz), 2.36 (2H (2"), sxt, J=7.3 Hz), 3.15 (1H (8), d, J=6.8 Hz), 3.26 (1H (7), s), 3.57 (1H (4-OH), d, J=1.0 Hz), 3.78 (1H (20), dd, J=12.5, 4.2 Hz), 3.86 (1H (20), dd, J=12.5, 6.8 Hz), 3.87 (1H (5-OH), d, J=3.1 Hz), 4.05 (1H (10), m, J=2.6 Hz), 4.21 (1H (5), d, J=2.6 Hz), 5.37 (1H (12), d, J=9.9 Hz), 5.98 (1H (9-OH), br.s.), 7.71 (1H (1), dd, J=2.6, 1.6 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.6 (4"), 14.1 (14'), 15.1 (18), 16.1 (5"), 17.2 (16), 22.7 (13'), 23.7 (17), 25.2 (2'), 26.2 (3"), 26.6 (15), 29.0 (5'), 29.3 (4'), 29.3 (4'), 29.5 (6'), 29.6 (8'), 29.6 (9'), 29.6 (10'), 29.7 (11'), 31.9 (12'), 34.6 (2'), 36.0 (8), 36.1 (14), 41.2 (2"), 45.6 (11), 48.9 (10), 61.7 (6), 64.5 (20), 65.2 (7), 65.5 (13), 71.6 (5), 72.4 (4), 76.5 (12), 77.2 (9), 133.5 (2), 164.7 (1), 173.3 (1'), 178.8 (1"), 209.9 (3).
화합물 52
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.85 (3H (18), d, J=6.8 Hz), 0.90 (3H (4'), t, J=7.5 Hz), 1.11 (3H (5'), d, J=7.3 Hz), 1.19 (3H (16), s), 1.21 (3H (17), s), 1.31 (1H (14), d, J=6.8 Hz), 1.44-1.56 (1H (3'),m), 1.58-1.67 (1H (3'), m), 1.74 (3H (19), dd, J=2.9, 1.3 Hz), 1.88-1.96 (1H (11), m), 2.08 (3H (2"), s), 2.33-2.43 (2H (2'), m), 3.15 (1H (8), d, J=6.2 Hz), 3.25 (1H (7), s), 3.59 (1H (4-OH), br.s.), 3.78 (1H (20), d, J=13.0 Hz), 3.85 (1H (20), d, J=12.5 Hz), 4.05 (1H (10), t, J=2.9 Hz), 4.21 (1H (5), s), 5.38 (1H (12), d, J=10.4 Hz), 5.74 (1H (9-OH), br.s.), 7.71 (1H (1), dd, J=2.3, 1.3 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.7 (19), 11.3 (4'), 15.0 (18), 16.5 (5'), 17.0 (16), 21.0 (2"), 23.6 (17), 26.1 (15), 26.9 (3'), 35.7 (14), 35.9 (8), 41.2 (2'), 45.3 (11), 48.9 (10), 61.7 (6), 64.5 (20), 65.2 (7), 65.8 (13), 71.5 (5), 72.4 (4), 76.2 (12), 76.9 (9), 133.5 (2), 164.6 (1), 173.6 (1"), 176.4 (1'), 209.9 (3).
화합물 53
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm: 0.88 (3H (6'), m, J=7.3 Hz), 1.06 (3H (18), d, J=6.2 Hz), 1.18 (3H (16), s), 1.25 (3H (17), s), 1.25 (1H (14), d, J=7.3 Hz), 1.27-1.33 (4H (4', 5'), m), 1.59-1.65 (2H (3'), m), 1.74-1.80 (1H (11), m), 1.76 (3H (19), dd, J=2.9, 1.3 Hz), 2.23 (1H (20-OH), t, J=6.2), 2.35 (2H (2'), td, J=7.5, 1.6 Hz), 3.06 (1H (8), d, J=7.3 Hz), 3.26 (1H (7), s), 3.57 (1H (4-OH), s), 3.77 (1H (10), t, J=2.6 Hz), 3.81 (2H (20), dd, J=7.3, 4.7 Hz), 3.94 (1H (12), dd, J=9.1, 1.3 Hz), 4.2 (1H (5), s), 7.69, (1H (1), dd, J=2.3, 1.3 Hz).
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ ppm: 9.8 (19), 13.9 (6'), 16.3 (18), 17.2 (16), 22.3 (5'), 23.3 (17), 24.5 (3'), 28.0 (15), 31.3 (4'), 34.0 (2'), 34.8 (14), 36.5 (8), 47.2 (11), 50.8 (10), 62.5 (6), 65.0 (20), 66.0 (7), 68.6 (13), 71.4 (5), 72.1 (4), 77.7 (9), 78.2 (12), 134.0 (2), 163.7 (1), 177.3 (1'), 209.6 (3).
화합물 60
HPLC: Kinetex C18 컬럼 4.6mm, 0.8ml/min, 메탄올-물(70:30). 체류 시간: 10.9분.
상처 치유에 관여하는 세포 종류에 미치는 시험관내 효과의 실시예
실시예 4: 시험관내 스크래치 폐쇄 및 섬유아세포 이동
RPMI 1640-10% 소태아혈청에서 배양된 신생아 포피 섬유아세포(NFF)의 초기 계대배양물이 정제된 화합물 또는 식물 추출물로 처리된 후 융합성 단층에 만들어진 스크래치 상처를 따라 이동하는 능력을 다음과 같은 3가지 방법 중 하나 이상을 사용하여 측정했다.
방법 1
세포를 16mm 직경의 웰(24웰 평판)에 접종하고, 융합성이 될 때까지 배양하고 각 웰마다 2개의 스크래치를 멸균 플라스틱 피펫 팁을 사용하여 만들었다. 배지는 제거하고, 웰을 인산염 완충 식염수 pH 7.2(PBS)로 세척하여 떨어진 세포를 제거하고, 새 배지와 그 다음 10배 연속 희석된 순수 화합물 또는 식물 추출물(2㎕)을 첨가했다. 항온배양을 16 내지 30시간 동안 지속했다. 실험은 미처리 배양물의 스크래치 둘레가 초기 갭의 약 25%가 폐쇄되면 종결시켰다. 단층은 PBS로 세척하고, 에탄올에 고정시킨 뒤, 0.05% 크리스탈 바이올렛으로 염색했다. 각 웰의 현미경 사진(EVOS 현미경)을 인쇄하고, 각 스크래치를 3 위치에서 측정하여 평균 너비(width)를 측정했다. 남은 갭이 미처리 대조군 갭의 <40%이면, 가속된 상처 폐쇄는 유의적인 것으로 간주했다.
방법 2
세포를 6mm 웰(96웰 평판) 또는 16mm(24웰 평판)에 2 내지 6개의 반복 웰/희석로 접종하고, 방법 1에서와 같이 처리했다. 처리 후 즉시, 스크래치 둘레를 웰의 밑면에 미세 포인트 펠트 펜으로 윤곽을 그렸다. 고정 및 염색 후, 현미경 아래에서 눈금판의 도움을 받아 이동(migration)을 평가하여, 이동을 초기 너비의 0, 25, 50, 75 또는 100%(완전 폐쇄)로 평가했다. 반복물의 평균 사분위수가 미처리 대조군의 평균 사분위수 미만이면(p<0.05, t-검정), 가속된 상처 폐쇄는 유의적인 것으로 간주했다. 또한, 3mm 스테인리스 스틸 핀의 존재 하에 세포를 접종하거나(96웰 평판), 또는 둘레가 편평한 테플론 링(Teflon ring)을 삽입하여 "상처" 영역을 형성시켰다. 이 장치들은 NFF 세포를 밤새 배양한 후 제거했다.
방법 3
세포는 방법 2에서와 같이 96웰 평판에 접종하고 처리했지만(희석물 당 5개 반복 웰), 스크래치는 96개의 1mm 두께의 테플론 코팅된 핀을 가진 도구(Essen Bioscience Woundmaker)를 가지고 한번에 만들었다. 그 다음, 평판을 42시간 동안 3hr 간격으로 상대비 하에 각 웰을 사진촬영하도록 프로그램된 IncuCyte FLR 기구에서 37℃, 5% CO2 가습 대기에 집어넣었다. 소프트웨어는 초기 스크래치 경계와 이의 폐쇄율을 측정했다. 초기 폐쇄율이 미처리 대조군의 >10%이면 가속된 상처 폐쇄는 유의적인 것으로 간주했다.
결과는 표 7 내지 9에 제시했다.
[표 7]
순수 화합물로 처리한 후의 사람 신생아 섬유아세포의 스크래치 폐쇄율
Figure pct00074
회색 음영 및 굵은 숫자는 스크래치 폐쇄율이 대조군 처리보다 유의적으로 높은 것을 나타낸다.
순수 화합물은 모두 부형제-만을 이용한 대조군 처리에 비해, 유의적으로 향상된 스크래치 폐쇄율을 나타내는 것으로 입증되었다.
[표 8]
폰타이니아 피크로스퍼마의 여러 식물 부분의 미분별된 에탄올성 추출물로 처리 후 사람 신생아 섬유아세포의 스크래치 폐쇄율
Figure pct00075
회색 음영 및 굵은 숫자는 스크래치 폐쇄율이 대조군 처리보다 유의적으로 높은 것을 나타낸다.
시험된 폰타이니아 피크로스퍼마의 모든 식물 부분의 에탄올성 미정제 추출물은 매개제만의 대조군 처리에 비해 유의적으로 향상된 스크래치 폐쇄율을 나타냈다.
[표 9]
3가지 다른 식물 종의 다른 식물 부분의 미분별된 에탄올성 추출물로 처리 후 사람 신생아 섬유아세포의 스크래치 폐쇄율
Figure pct00076
회색 음영 및 굵은 숫자는 스크래치 폐쇄율이 대조군 처리보다 유의적으로 높은 것을 나타낸다.
폰타이니아의 2가지 다른 종, F.아우스트랄리스(australis) 및 F.로스트라타(rostrata), 및 밀접한 관련 종인 하일란디아 도크릴리(Hylandia dockrillii)의 식물 부분 유래의 추출물은 매개제만의 대조군 처리에 비해 유의적으로 증가된 스크래치 폐쇄율을 입증했다.
또한, 시험 평판의 현미경 관찰(방법 1)에서는 섬유아세포가 화합물 1로 처리 후 육안으로 차이가 나는 염색 패턴을 나타낸다는 것을 암시했다. 더 자세히 조사한 결과, 이것은 분명하게 다층 방식으로 성장하는 세포 때문인 것으로 드러났고, 이 방식은 접촉 억제의 상실, 증식 증가 또는 리모델링 능력을 시사하는 것으로 보인다. 스크래치 후 24시간째 대조군 및 화합물 1 처리에 의한 스크래치 폐쇄의 예는 각각 도 1과 2에 예시했다.
실시예 5: 사람 신생아 섬유아세포의 이동력에 대한 매트리겔 침입 분석
매트리겔 침입 챔버는 세포에게 시험관내 침입성을 평가할 수 있는 조건을 제공한다. 매트리겔 침입 챔버는 박층의 Matrigel Basement Membrane Matrix와 소공크기가 8 미크론인 PET 막을 함유하는 세포배양 인서트(insert)를 구비한 세포 배양 동반 평판으로 이루어진다. 이 매트리겔 매트릭스는 시험관 내에서 재구성된 기저막으로서 작용한다. 이 층은 막의 소공들을 폐쇄시키고, 비침입성 세포의 막을 통한 이동을 차단한다. 이에 반해, 침입성 세포는 스스로 분리될 수 있고, 매트리겔 매트릭스와 8 미크론 막 소공을 통해 침입할 수 있다. 이 막은 광학 및 전자 검경법을 위해 처리할 수 있고, 염색 후 쉽게 분리될 수 있다.
이 챔버는 제조자의 지시에 따라 이하에 기술된 바와 같이 2가지 연구에 사용하여 사람 신생아 섬유아세포의 이동에 미치는 화합물 1, 2, 5 및 42의 효과를 평가했다. 첫번째 연구는 3가지 농도(0, 10 및 30 ng/ml)의 화합물 1이 10% 소 태아 혈청을 보유한 배지를 함유하는 웰에서 신생아 섬유아세포에 미치는 효과를 평가했다. 두번째 연구는 2가지 농도(0 및 30 ng/ml)의 각 화합물 1, 2, 5 및 42를 사용하여 치료전 2일 동안 영양공급을 중단한 신생아 섬유아세포의 이동에 미치는 효과를 조사한 뒤, 1% 소 태아 혈청을 보유한 배지로 전이시켰다.
재수화
챔버를 함유하는 패키지를 -20℃ 저장소에서 꺼내어 실온에 두었다. 인서트의 내부(500㎕)와 웰의 바닥(750㎕)에 가온(37℃)된 중탄산염계 배양 배지를 첨가했다. 매트리겔을 함유하는 챔버를 가습된 조직 배양 항온배양기에서, 37℃, 5% CO2 대기 하에 2시간 동안 재수화시켰다. 재수화 후, 배지는 막 위의 Matrigel™ Matrix 층을 혼란시킴이 없이 흡인에 의해 조심스럽게 제거했다.
침입 연구
세포를 수거하여 1ml당 20,000 세포로 재현탁시켰다. 총 250㎕의 세포 현탁액을 인서트의 내부에 투입했다(5,000 세포). 그 다음, 각 화합물을 함유하는 추가 250㎕ 배지를 인서트의 내부에 첨가하여 두 연구들 각각에 필요한 최종 농도를 제공했다. 각 처리마다 적당한 농도의 각 화합물을 함유하는 배지 총 750㎕를 적당한 인서트 하에 웰에 투입했다. 그 다음, Matrigel 챔버를 가습된 조직 배양 항온배양기에서 37℃, 5% CO2 대기 하에 24시간 동안 항온배양했다.
세포 침입의 측정
비침입성 세포는 막의 상면으로부터 "스크러빙(scrubbing)"에 의해 분리했다. 배지를 제거한 후 솜면봉을 인서트에 침지시키고 면봉 끝이 막 표면 위에서 이동하는 동안 강한 압력을 적용했다. 스크러빙은 PBS를 묻힌 두번째 면봉으로 반복했다. 그 다음, 인서트의 외부 표면에 침입한 세포는 100% 메탄올 500㎕에 5분 이상 동안 방치하여 고정시켰다. 그 후, 인서트는 메탄올 중의 0.1% 크리스탈 바이올렛 500㎕를 함유하는 동반 평판으로 이동시키고, 15분 이상 동안 염색시켰다. 그 후, 물 500㎕를 함유하는 3개의 동반 평판을 통해 인서트를 통과시켜 탈색한 뒤, 공기 건조했다.
다음날, 막은 인서트를 뒤집어 하우징 벽에 인접한 둘레에서 막을 통해 날카로운 메스 날의 선단을 삽입하여 인서트 하우징으로부터 분리했다. 인서트 하우징은 고정 날에 대해서 회전시켰고, 막이 해리되었다. 막을 핀셋으로 하우징으로부터 잡아내어 10㎕ Kaiser의 글리세롤 용액에 아래쪽을 향하게 집어넣고, 커버슬립으로 덮었다. 슬라이드를 밤새 건조한 후, 침입성 세포를 계수했다.
결과
첫 번째 연구에서 10 또는 30ng/ml 화합물 1로 처리된 섬유아세포는 Matrigel 침입 챔버 시스템에서 매개제로만 처리된 세포에 비해 증가된 이동력을 나타냈다(도 3). 두 번째 연구는 화합물 1에 의한 첫 번째 연구의 결과를 확인시켜주었고, 화합물 2, 5 및 42가 유사한 수준의 이동력 증가를 나타낸다는 것을 입증했다(표 10).
[표 10]
30ng/ml의 각 화합물로 처리한 사람 신생아 섬유아세포의 매트리겔 침입 분석. 데이터는 매개제만으로 처리한 대조군 대비 막 침입의 증가율% +/- 2회 반복 실험의 표준편차로 나타냈다. 세포는 항온배양 24시간 후에 계수했다.
Figure pct00077
실시예 6 : 무한증식성 사람 각질세포( HaCaT )에 의한 시험관내 스크래치 재증식 및 폐쇄
화합물 1 또는 화합물 37로 처리 후, 융합성 단층에 만들어진 스크래치 상처를 따라 이동하는 무한증식성 사람 각질세포(HaCaT)의 능력은 다음과 같은 방법으로 측정했다.
트립신처리된 HaCaT 세포는 7.4x104 세포/ml의 세포 밀도로, L-글루타민(2mM), 항생제(100 U/ml 페니실린 G 나트륨, 100㎍/ml 스트렙토마이신 설페이트 및 0.25㎍/ml 암포테리신 B) 및 10% 소 태아 혈청(모두 Invitrogen Ltd., UK)가 보충된 1ml 둘베코 변형 이글배지(DMEM)가 담긴 24웰 BD Falcon 편평 바닥의 조직 배양판(VWR International, UK)에 접종하여 각 웰에 접종된 7.4x104 세포밀도의 세포를 제공했다. 그 다음, 세포를 5% CO2/95% 공기 대기 하에 37℃에서 밤새 유지시켰다. 다음날 아침, 10% 소 태아 혈청 함유 DMEM을 무혈청 DMEM으로 교체하고, HaCaT 세포를 무혈청 DMEM에서 48시간 동안 영양공급을 중단했다.
48시간 후, 무혈청 DMEM은 제거하고, 각 세포 층을 따라 멸균 피펫으로 하나의 스크래치 '상처'를 만들었다. 1ml PBS로 2회 세척한 후, 화합물 1- 또는 화합물 37-함유 배지(1ml)를 각 웰에 첨가했다. 이 배지는 L-글루타민(2mM), 항생제(전술한 바와 같은 것) 및 1% 소 태아 혈청이 보충된 DMEM으로 구성되었고, 이 외에 최종 농도 0, 0.001, 0.01, 0.1, 1.0, 10 또는 100㎍/ml의 화합물 1 또는 화합물 37을 함유했다. 각 화합물의 농도당 3반복 웰을 만들었다.
HaCaT 배양물은 5% CO2/95% 공기 대기 하에 37℃에서 유지시키고, 벗겨진 '상처' 영역의 재증식은 100x 배율의 저속 공초점 검경법(Time-Lapse Confocal Microscopy) (Leica TCS SP5 Confocal Microscope, Leica Microsystems UK Ltd., UK)으로 48h 동안 20분마다 고정된 위치에서 디지털 이미지를 촬영하여 모니터했다. 디지털 이미지는 순서대로 전송되어 LAS AF Software(Leica Microsystems)를 사용하여 .avi 무비 파일로 제조했다. 시험관내 HaCaT 상처 폐쇄율은 ImageJ 소프트웨어(ImageJ 1.37v; http://rsb.info.nih.gov/ij/)를 사용하여 정량분석했다. 이 데이터는 시험후 터키 분석과 일원배치 분산분석으로 분석했다. 각 실험은 3회의 개별 시험마다 수행했다.
적용 후 48시간째, 화합물 1은 0.001, 0.01 및 0.1ng/ml 농도에서 대조군 처리에 비해 유의적으로 증가된 스크래치 폐쇄율(p<0.01)을 나타냈다(표 11). 또한, 48시간째 화합물 37도 0.001, 0.01, 0.1 및 1.0 ㎍/ml의 농도에서 대조군 처리에 비해 증가된 스크래치 폐쇄율(p<0.01)을 나타냈다(표 11).
[표 11]
다양한 농도의 화합물 1 및 화합물 37로 처리한 후 48시간째 무한증식성 사람 각질세포(HaCaT) 세포의 스크래치 재증식 및 폐쇄 정도. 데이터는 처리 후 열려 있는 스크래치 상처 영역 %(± 표준편차)로 나타냈다.
Figure pct00078
표 11에 제시한 바와 같이 스크래치 재증식 및 폐쇄를 향상시키는데 있어서 화합물 1 및 화합물 37의 효과가 세포 증식 또는 이동에 의해 중재되었는지를 측정하기 위해 2가지 추가 실험을 수행했다. 이 실험의 첫 번째는 이동 측면을 다루고 스크래치 재증식 연구를 반복하되, 화합물들이 적용됨과 동시에 배지에 미토마이신 C 1㎍/ml를 첨가했다. 미토마이신 C는 HaCaT 세포의 증식을 비롯한 세포 증식을 억제하는 것으로 알려져 있고; 1㎍/ml 농도에서 배양 시스템에 세포독성이 아닌 것으로 측정되었다. 이러한 이동 연구의 결과는 화합물 1 및 화합물 37 둘 모두가 0.001 내지 1.0㎍/ml 사이의 농도에서 스크래치 재증식 및 폐쇄를 증대시키는(p<0.05) 것으로 발견되었다.
증식 실험은 두 화합물이 4회 기간(24시간, 48시간, 120시간 및 168시간)에 배양 시스템에서 HaCaT 증식(MTT로 측정)에 미치는 효과를 평가했다. 두 화합물 1 및 37은 화합물이 첨가되지 않은 대조군 처리에 비해 0.001 내지 10㎍/ml 사이의 농도 범위에서 HaCaT 세포의 증식을 증가시키는 데에 유의적인 효과(p<0.01)가 있었다.
이러한 결과들은 증식 및 증대된 세포 이동 모두, 화합물 1 및 37에 의한 스크래치 재증식 및 폐쇄 과정에 수반된다는 것을 증명하는 것이다.
실시예 7: 화합물들에 의한 단핵구의 대식세포로의 분화
대식세포는 상처 치유에 많은 역할을 하는데, 그 예로는 초기 염증 단계에서 세포 찌꺼기 및 괴사 조직의 제거, 그 다음 이후 치유 단계 동안 세포 증식 및 조직 복원의 지지를 포함한다. M1 표현형은 초기 염증 단계와 연관된 것이고 M2 표현형은 치유 단계와 연관된 것으로 생각한다.
화합물 1과 15가지의 다른 에폭시-티글리안 화합물들이 단핵구 분화 어레이(array)에 미칠 수 있는 효과를 측정하기 위해, 사람 말초혈액 단핵세포(PBMC)를 72세의 남성 공여체 유래의 헤파린처리된 혈액에서 피콜-파크(Ficoll-Paque) 침강법으로 분리했고, RPMI-1640 10% FCS에 100,000 세포/웰로 평판배양했다. 이반복 웰을 화합물의 10배 희석물들로 처리하고 37℃에서 4일 동안 항온배양했다. 웰들을 세포 부착 및 형태에 대해 육안으로 점수를 매긴 다음, PBS로 2회 세척하고, 설퍼로다민으로 염색한 뒤, 혼입된 염색량을 ELISA 판독기로 정량분석했다. 그 다음, 평판은 물로 세척하고, 메탄올 중의 1% 크리스탈 바이올렛으로 염색하여 사진촬영하고 접착성 세포 형태를 계수했다.
사람 PBMC를 이용한 용량-반응 실험의 결과(표 12)는 시험된 총 16가지 에폭시-티글리안 화합물이, M2 표현형의 전형적인 수지상 세포와 M1 표현형의 전형적인 둥근 세포의 혼합물인 접착성과 형태로 판단컨대, ng 농도에서 말초혈액 단핵구를 대식세포로 분화시켰음을 보여주었다.
[표 12]
어레이 중의 에폭시-티글리안 화합물로 사람 말초혈액 단핵구에서 대식세포 표현형을 유도하기 위한 연속 희석물 중의 종점 농도
Figure pct00079
실시예 8: 성인 피부 섬유아세포의 근섬유아세포로의 분화에 미치는 화합물 1 및 37의 효과
섬유아세포는 상처 치유 과정에 중요한 역할을 하고, 활성화되면 α-평활근 액틴(α-SMA)의 발현을 특징으로 하는 근섬유아세포 표현형으로 분화한다. 근섬유아세포는 조직 수복 및 상처 폐쇄에 기여하지만, 이의 과잉발현은 치유 장애 및 과도한 상처형성과 관련이 있다.
화합물 1 및 37이 피부 섬유아세포의 근섬유아세포로의 분화에 미치는 효과는 TGF-β1-자극된 피부 섬유아세포에 의한 α-SMA 발현의 정도를 통해 조사했다.
방법
트립신처리 후, 섬유아세포는 항생제, 2mM L-글루타민 및 10% 소 태아 혈청(250㎕, 모두 Invitrogen에서 구입)을 함유한 DMEM 배지에서 8웰 Permanoxchamber 슬라이드(VWR International)에 2.5x104 세포/웰의 세포 밀도로 접종하고, 5% CO2/95% 공기 하에 37℃에서 48시간 동안 유지시켰다.
48시간째, 섬유아세포는 무혈청 DMEM에서 48시간 동안 증식 정지시키고, 0, 0.001, 0.01, 0.1, 1.0 및 10.0㎍/ml 농도의 화합물 1 또는 37(3웰/농도/화합물) 및 TFG-β1(10ng/ml, Peprotech)을 함유하는 무혈청 DMEM(250㎕)으로 교체했다. 섬유아세포는 37℃에서 5% CO2/95% 공기 하에 72시간 동안 유지시켰다.
72시간째, 챔버 슬라이드 웰은 PBS(x1, 250㎕)로 세척했고, 4% 파라포름알데하이드(100㎕/웰)에 10분 동안 고정시켰다. 그 다음, 챔버 슬라이드 웰을 다시 PBS(x1, 250㎕)로 세척했고, PBS(100㎕, Sigma) 중의 0.1% Triton X-100으로 5분 동안 처리하고, 다시 PBS(x1, 250㎕)로 세척했다. 웰은 PBS 중의 1% BSA(250㎕, Sigma)로 1시간 동안 차단시킨 후, 0.1% BSA/PBS로 세척했다(x3).
웰은 모노클로널 마우스 항-사람 α-SMA, 클론 1A4(1:100, 150㎕, Sigma)와 4℃에서 밤새 항온처리하고, 0.1% BSA/PBS로 세척하고(x6), Alexa Fluor 488 염소 항마우스 IgG 항체(1:1000, 250㎕, Invitrogen)와 실온에서 1시간 동안 암실에서 항온처리했다. 챔버 슬라이드는 0.1% BSA/PBS로 세척하고(x6), 암실에서 30분 동안 Hoescht 33258 용액(1:2000. 250㎕, Sigma)으로 대비염색했다. 이어서 챔버로부터 슬라이드를 꺼내어 Fluorsave(Santa Cruz)로 10분 동안 암실에서 처리했다. 슬라이드는 형광 검경법(Leica Microsystem)으로 조사했고, 디지털 영상은 x200 배율로 촬영했다. 디지털 영상은 HC Image J Software를 사용하여 처리했다.
결과
화합물이 첨가되지 않은 TGF-β1로 처리된 대조군에서, 성인 피부 섬유아세포는 일반적으로 α-SMA 발현의 증가, α-SMA 스트레스 섬유 어셈블리 및 확대된 다각형 세포 형태의 전반적 발달을 특징으로 하는 근섬유아세포로 분화되었다. 이에 반해, TGF-β1로 처리된 성인 피부 섬유아세포의 화합물 1 및 화합물 37에 대한 노출은 농도 의존적 방식으로 근섬유아세포로의 분화에 영향을 미쳤다. 화합물 1이 0.1㎍/ml 농도인 경우에, 섬유아세포 배양물은 근섬유아세포 분화의 대표적인 전형적인 다각형 세포 형태 및 α-SMA 스트레스 섬유 형성이 부족했다(도 5). 화합물 37도 10㎍/ml 농도에서 다각형 형태 발달 및 α-SMA 스트레스 섬유 형성에 붕괴 효과를 나타냈다(도 6).
또한, 화합물 1은 1 내지 10㎍/ml 사이, 화합물 37은 0.1 내지 1.0㎍/ml 사이의 농도 범위에서 근섬유아세포 형태에 다른 미묘한 변경이 있는 것으로 나타난다(도 5 및 6).
섬유아세포/근섬유아세포 분화에 미치는 화합물들의 특이적인 효과는 화합물 1로 생체내 처리된 상처에서 관찰되는 최소의 흉터 형성과 관련이 있을 수 있다(실시예 16 및 17).
실시예 9: 화합물 1에 대한 반응으로 호중구에 의한 반응성 산소 방출의 유도
호중구는 선천적 면역계의 전용 식세포이고, 이의 유입 및 활성화는 상처 치유의 초기 단계 동안 세균, 진균 및 세포 찌꺼기를 청소하는데 필수적이다. 호중구의 넓은 항미생물 활성은 반응성 산소 종(ROS)의 방출을 비롯해서 여러 전략들에 기초가 된다.
화합물 1이 호중구에 의한 반응성 산소 방출을 유도하는데 미치는 잠재적 효과를 평가하기 위한 연구를 수행했다.
호중구는 건강한 사람 공여체의 새 혈액으로부터 피콜-파크 침전법으로 수득한 적혈구 세포 펠릿을 용해시켜 분리했다. 호중구(약 4 x 106 세포/ml)는 미염색 대조군으로써 시험되는 미염색 세포의 일정량과 함께 37℃에서 15분 동안 완전 배양 배지 중의 10㎍/ml 디하이드로에티디움(DHE)(Sigma-Aldrich)과 함께 항온배양했다. 이 항온배양 후, 화합물 1을 다양한 농도(0, 1ng/ml, 10ng/ml, 100ng/ml, 1㎍/ml, 10㎍/ml, 100㎍/ml)로 15분 동안 처리했다. 항온배양 후 반응성 산소 종의 생성은 DHE의 에티디움 이온으로의 산화로 인한 형광을 측정하는 FACS Canto 유세포분석기로 측정했다.
본 연구는 화합물 1이 존재하지 않는 대조군 처리에서는 ROS가 전혀 생산되지 않는다는 것을 밝혀냈다. 이에 반해, 화합물 1은 ROS 생산이 화합물 1의 농도와 함께 증가하는, 용량 의존적 방식으로 반응성 산소 종(ROS)의 유의적인 생산을 유도했다.
향상된 상처 치유 결과와 관련이 있는 단백질, 유전자 및 사이토킨에 미치는 화합물의 효과 실시예
실시예 10: 화합물 1 및 42로 처리된 사람 신생아 섬유아세포의 분자 분석
화합물 1 및 42가 사람 신생아 섬유아세포(NFF)의 상처 수복 및 치유에 관련이 있는 단백질들에 미치는 효과를 동정하기 위해 웨스턴 블롯법을 사용했다. 2가지 연구를 수행했다. 첫 번째 연구에서는 NFF를 10ng 또는 30ng 화합물 1/ml로 6시간 또는 24시간 처리한 후, 수거하여 단백질을 추출했다. 두 번째 연구에서는 NFF를 각각 30ng/ml 농도의 화합물 1과 42로 각각 6시간씩 처리했다. 그 결과 수득되는 두 연구의 용해물을 웨스턴 블롯 분석으로 처리하고, 상처 수복과 치유에 관여하는 핵심 시그널링 분자에 특이적인 항체로 탐침했다.
웨스턴 블로팅을 위한 단백질 샘플의 제조
75㎠ 평판에서 증식된 접착성 사람 신생아 섬유아세포로부터 배지를 제거하고 세포를 빙냉 PBS로 2회 세척했다. 부착된 세포는 세포 스크래퍼(Costar®, Corning)를 사용하여 빙냉 PBS 10ml에 수거하고, 5분 동안 원심분리(1,500 rpm, RTemp)하여 펠릿화한 뒤, 빙냉 PBS 1ml에 재현탁시키고, 1.5ml 미세원심분리(microfuge) 튜브로 전이시켰다. 세포는 원심분리(13,200 rpm, RTemp, 2s)하여 수집하고, PBS를 제거한 뒤, 펠릿은 필요할 때까지 -20℃에서 보관했다.
동결된 펠릿은 얼음 상에서 해동시키고, 펠릿 부피의 3 내지 4배 부피의 세포 용해 완충액에 위아래로 피펫팅을 통해 재현탁시켰다. 세포 현탁액은 4℃에서 60s 동안 초음파처리하고 20분(13,200 rpm, 4℃) 동안 원심분리한 뒤, 단백질을 함유하는 계면상(interphase)을 새로운 1.5ml 미세원심분리 튜브로 전이시켰다. 단백질은 -20℃에서 보관했다.
단백질 농도의 측정
단백질 농도는 BCA 단백질 분석 키트(Pierce)를 사용하여 측정했다. 이 방법은 알칼리 용액에서 단백질에 의한 Cu2 +의 Cu1 +로의 환원을 기반으로 한다. 형성된 Cu1 +는 이어서 자주색 반응 산물을 형성하는 비신크론산(BCA)과 킬레이트화한다.
단백질 샘플은 MilliQ 수(water)로 1/10 및 1/20(v/v) 희석하고 10㎕를 편평 바닥의 96웰 평판(Costar®, Corning)에 이반복으로 플레이팅했다. 소혈청알부민(BSA)의 스톡 용액은 100, 200, 400, 600, 1,000 및 1,200㎍/ml로 제조하고, 10㎕/웰를 이반복으로 플레이팅하고 샘플과 함께 분석했다. BCA 작업 시약은 시약 A 50부를 시약 B 1부와 혼합하고, 각 웰에 100㎕씩 분주하여 제조했다. 반응이 일어나도록 평판을 37℃에서 30 내지 45분 동안 항온배양했다. 미처리 흡광도는 마이크로평판 판독기(VERSAmax, Molecular Devices)에서 A590nm에서 판독하고, SOFTmax PRO 소프트웨어(Molecular Devices)를 사용하여 표준곡선을 만들었다. 미지의 샘플 농도는 곡선으로부터 추정했다.
SDS 폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE)
단백질 샘플은 적당한 부피의 2x SDS 부하 완충액과 혼합하여 준비하고, 70℃에서 10분 동안 가열하여 변성시켰다. SDS-PAGE 겔은 Mini-Protein II 이중 슬랩 겔 장치(Bio-Rad Laboratories)를 Laemmli(6)에 의해 기술된 바와 같이 사용하여 수행했다. 분리용 겔은 0.275M Tris-HCl(pH 8.8), 0.1%(w/v) SDS, 0.05%(w/v) 갓 제조한 과황산암모늄, 1% (v/v) TEMED 및 7.5 내지 12% (w/v) 아크릴아미드/비스아크릴아미드(29:1)로 제조했다. 이 용액을 MilliQ H2O에 최대 5ml로 만들고, 적어도 30min 동안 방치하고(RTemp), 물-포화 부탄올로 중층시켰다. 스택킹 겔을 투입하기 전에, 물-포화 부탄올을 기울여 제거했다. 스택킹 겔은 0.125M Tris-HCl(pH 6.8), 0.1% (w/v) SDS, 0.05% (w/v) 갓 제조한 과황산암모늄, 0.1%(v/v) TEMED 및 4%(w/v) 아크릴아미드/비스아크릴아미드(29:1)로 제조했다. 이 용액을 MilliQ H2O에 겔당 2.5ml로 만들고, 분리용 겔의 상단에 붓고, 10웰 빗(Bio-Rad Laboratories)을 30분 이상 끼워 두었다. 전기영동은 약 1시간 동안 또는 염료가 1x SDS 전개 완충액에서 겔의 바닥(200V, RTemp)까지 전개될 때까지 수행했다.
웨스턴 전이
SDS-PAGE 전기영동 후, 겔 평판은 조심스럽게 분리하고, 스택킹 겔을 절단해내고, Mini Trans-Blot Cell(Bio-Rad Laboratories)로 전이시켰다. "전이 샌드위치"는 다음과 같이 다공성 스폰지, 2 시트의 블로팅(와트만)지(blotting paper), 니트로셀룰로오스 막, 겔, 2장 이상의 블로팅을 위한 블로팅지, 및 다른 다공성 스폰지를 조합시킨 후, 전이 장치에 삽입했다. 스폰지, 막 및 블로팅지는 저온 전기블롯 완충액에 예비습윤화시켰고, 단백질의 불일치 전이를 초래할 수 있는 임의의 기포가 형성되지 않도록 주의를 기울였다. 단백질은 니트로셀룰로스 막(Hybond™-C, Amersham Biosciences)을 음이온 측에 가깝게 두고, 아이스 팩과 자석 교반기를 구비한 상태로 100V(일정전압)에서 1시간 동안 4℃의 빙냉 전이 완충액에서 전이시켰다.
단백질 막의 프로빙
전이된 즉시, 막을 비특이적 결합 부위를 차단하기 위해 저속 궤도식 진탕 하에 적어도 30분 동안 RTemp에서 0.1%(v/v) Tween 20/TBS 중의 5% (w/v) Blotto에 담아서 항온처리했다. 1차 항체는 제조자의 권장에 따라 5%(w/v) BSA에 최종 2ml 부피로 희석했다. 막과 항체를 함유하는 플라스틱 엔벨로프를 만들어 가열밀봉하여 가능한 많은 기포를 제거했다. 엔벨로프는 주문제작한 로터에서 밤새(약 16h) 4℃에서 회전시켰다.
백(bag)에서 막을 꺼내어 0.1%(v/v) Tween 20/TBS가 담긴 플라스틱 트레이에 넣고, 강력한 궤도식 진탕 하에 세척당 15분씩 실온에서 4회 세척했다. 양고추냉이 퍼옥시다제(HRP)에 접합된 적당한 2차 항체는 이를 0.1%(v/v) Tween 20/TBS 중의 5%(w/v) Blotto에 1/1,000로 희석하고, 새 플라스틱 엔벨로프에 넣어 실온에서 2시간 동안 회전시켜 막에 대해 프로빙(probing)했다.
단백질의 면역검출
임의의 미결합 또는 비특이적 결합된 항체를 제거하기 위해, 막을 0.1%(v/v) Tween 20/TBS로 실온에서 각각 15분씩 4회 세척했다. Western Lighting™ Chemiluminescence Reagent Plus(PerkinElmer Life Sciences)를 사용하여 HRP로 표시된 2차 항체로부터 검출가능한 시그널을 만들었다. 이 시약은 HRP에 의해 촉진된 루미놀의 산화적 분해에 의존적이어서, 420nm에서 검출가능하고 필름 상에서 포착할 수 있는 빛을 방출한다. 병 1과 병 2로부터 같은 부피를 검출 직전에 혼합했다. 막당 총 2ml의 부피를 적용하고 실온에서 1분 동안 항온처리했다. 막 전체가 동일하게 노출되도록 주의를 기울였다. 막을 분리하여 일부 블로팅지 위에서 빠르게 건조하고, 필름 카세트(Hypercassette™, Amersham Biosciences)에 2장의 폴리프로필렌 시트 보호지 사이에 삽입하고, 필름(SuperRX, Fujifilm)에 노출시켰다. 최적의 검출 시간을 판단하기 위해 2min의 초기 노출을 사용했다. 필름은 Kodak Image Station(Kodak)에서 현상했다.
[표 13]
본 연구에 사용된 항체
Figure pct00080
화합물 1을 이용한 제1 연구에서 웨스턴 블롯 분석은 화합물 1을 10 또는 30ng/ml로 처리한 지 6시간 후에 MEK1/2 및 ERK1/2가 일시적으로 활성화되고, 이어서 24시간 처리 후에는 활성화가 억제조절된다는 것을 보여준다. MAP Kinase 경로의 MEK/ERK 분지의 활성화는 섬유아세포를 포함한 많은 세포 종류의 이동 표현형에 영향을 미치는 것으로 알려져 있다. MMP9의 수준 차이는 전혀 검출되지 않았다.
Phospho-ERK의 인산화는 30ng/ml 농도의 화합물 1 및 42를 가지고 NFF에 대해 실험한 제2 연구에서 유사한 패턴이 웨스턴 블롯에서 관찰되었다.
실시예 11: 상처 치유에 관여하는 유전자의 발현에 미치는 화합물 1의 효과
상처 치유와 관련이 있는 유전자의 발현에 미치는 화합물 1의 효과는 2가지 상황, (a) 사람 PBMC 및 (b) 사람 종양 이종이식편의 마우스 간질에서 조사했다.
재료 및 방법
사람 말초혈액 단핵세포(PBMC)는 68세 남성 공여체로부터 채취한 헤파린처리된 혈액을 피콜-파크 침전시켜 분리하고, RPMI-1640 10% FCS에서 배양했다. 30ng/ml의 화합물 1로 처리한 후, 단층을 인산염 완충 식염수(PBS)로 1회 세척하고, 세포를 멸균 스크래퍼로 수거하고 펠릿으로서 -80℃에 보관했다.
사람 종양 이종이식편의 마우스 간질은, Sk-Mel-28 사람 흑색종 세포주를 각 BALB/c Foxnlnu 마우스의 옆구리 2 부위(2x106 세포/부위)에 피하 주사하고 약 7mm 직경으로 증식시킨 마우스로부터 수득했다. 각 종양에는 그 다음 30㎍ 화합물 1을 함유하는 20% 프로필렌 글리콜 50㎕ 또는 20% 프로필렌 글리콜 50㎕를 주사했다. 주사 후 다른 시간에 마우스를 안락시키고 종양을 수거한 뒤, 피부 커버를 제거하고, 미처리 종양을 -80℃에 보관했다.
동결된 종양 30mg 또는 1x107 세포로부터 QiagenRNeasyPlus Mini Kit를 제조자의 지시에 따라 사용하여 RNA를 추출한 뒤, NanoDrop 기구로 정량분석하고, 1kb DNA 마커를 보유한 변성 아가로스 겔에서 무결성을 확인하고 에티디움 브로마이드로 염색했다.
RNA 증폭 및 표지화(labelling)
약 500ng의 미표지된 총 RNA는 뉴클레아제-제거 수(water)로 11㎕의 최종 부피로 조정했다. RNA는 역전사효소 마스터 믹스(1㎕ T7 Oligo (dT) 프라이머, 2㎕ 10X 제 1 가닥 완충액, 4㎕ dNTP 혼합물, 1㎕ RNase 억제제 및 1㎕ ArrayScript) 9㎕와 42℃에서 2시간 동안 항온처리했다. 그 다음, 제2 가닥 마스터 믹스(63㎕ 뉴클레아제-제거 수, 10㎕ 10X 제2 가닥 완충액, 4㎕ dNTP 혼합물, 2㎕ DNA 폴리머라제 및 1㎕ RNase H) 80㎕와 16℃에서 2시간 동안 추가 항온처리를 수반하는 제2 가닥 cDNA 합성 단계를 수행했다. cDNA는 cDNA 결합 완충액 250㎕를 이용하여 cDNA Filter Cartridge를 통해 여과하고, 키트에 제공된 세척 완충액 500㎕를 이용하여 세척하여 정제했다. 정제된 cDNA는 55℃ 뉴클레아제 제거 수 20㎕로 용출시켰다. 각 cDNA 샘플은 IVT 마스터 믹스(2.5㎕ T7 10X 반응 완충액, 2.5㎕ T7 효소 혼합물 및 2.5㎕ 비오틴-NTP 혼합물) 7.5㎕와 37℃에서 16시간 동안 항온처리했다. 반응은 각 cRNA 샘플에 뉴클레아제-제거 수 75㎕를 첨가하여 정지시켰다. cRNA 샘플은 필터에 부하하기 전에 함께 혼합한 350㎕ cRNA 결합 완충액 및 250㎕ 100% 에탄올로 cRNA Filter Cartridges를 통해 여과하여 비오틴화된 증폭된 RNA를 정제했다. 그 다음, RNA가 부착된 cRNA 필터 카트리지를 650㎕ 세척 완충액으로 세척한 뒤, 정제된 cRNA를 200㎕ 55℃ 뉴클레아제-제거 수로 용출시켰다.
일루미나 발현 비드칩 하이브리드화 . cRNA 샘플은 65℃에서 5분 동안 가열하고, 펄스(pulse) 원심분리로 수집했다. 65℃에서 5분간 가열한 후, 약 750ng의 cRNA 샘플을 개별 튜브에 분취하고, 각 튜브에 약 5㎕의 RNase-제거 수 및 10㎕ Hyb Mix를 첨가했다. 제조된 cRNA 믹스 약 15㎕를 일루미나 발현 비드칩(Illumina Expression BeadChips) 위에 부하했다. 후속되는 하이브리드화 및 세척 단계들은 Illumina에서 공급한 Whole-Genome Gene Expression Direct Hybridization Assay Guide에 따라 수행했다.
사람 HT-12 v4 발현 비드칩은 사람 전사체해독기술(transcriptome)을 따라 47,000개가 넘는 전사체와 공지된 접목 변형체를 커버한다. MouseRef-8 v2.0 발현 비드칩은 19,000개가 넘는 고유 유전자를 함유하는 약 25,600개의 잘 알려진 RefSeq(참조 서열) 전사체를 커버한다.
데이터 분석 . 비드칩은 iScan System으로 판독하고, GenomeStudio를 통해 GeneSpring GX v12.5(Agilent Technologies, Santa Claram CA, USA)로 전이시켰다. 발현 값은 디폴트 세팅하에 사분위 정규화(quantile normalization)법을 사용하여 정규화했다. 엔타이티(entities)는 GenomeStudio로 계산한 검출 스코어에 기초하여 여과했고, 여기서 p≤0.05는 유의적 값으로 간주했다.
사람 PBMC에서 화합물 1에 의해 유도된 상처 치유-관련 유전자 발현 변화
사람 말초혈액 단핵세포(PBMC)에는 상처 치유 과정에 관련 있는 사이토킨 및 조직 리모델링 효소의 생산에 관여하는 림프구 및 대식세포 전구체(단핵구)가 많다. 표 14는 미처리 PBMC 대조군보다 2배 더 높거나 2배 더 낮아서 상처 치유와 공지된 연관성이 있는, 30ng/ml 화합물 1에 의해 유도된 유전자 발현 변화를 정리한 것이다. 상처 치유는 염증과 같은 후속 과정을 억제조절해야할 필요가 있는 복잡한 다단계 순서이다. 따라서, 표 14에 제시된 유전자들은 생체내 조직 특이적 발현의 순위를 특정화함이 없이 시험관내 혼합 림프구 개체군에서 화합물 1에 의해 조절되는 다양한 관련 분자를 예시한 것임을 유념해야 한다.
유전자들은 감염으로부터 보호에 관여하는 전염증성 사이토킨(IL-1α, IL-1β 및 IL-6), 염증 반응을 완화시키는 사이토킨(IL-10 및 IL-24), 증식인자(GMCSF, CSF1 및 HBEGF) 및 조직 리모델링을 위한 다양한 케모킨 및 기질 메탈로펩티다제(후자는 TIMP2의 억제 조절에 의해 촉진됨)를 포함했다. 육아 조직 형성을 억제하는 THBS1의 억제조절은 또한 상처 치유의 양성 인자이다. KLF10의 상승조절은 혈관형성을 촉진할 것이고, 이는 TGF-β의 유도를 시사한다. 트란스글루타미나제(TGM)는 가교결합에 의해 단백질을 안정화시키고 상처 치유에 다른 유익한 효과를 보유한다.
[표 14]
화합물 1에 의해 사람 PBMC에서 유도된 향상된 상처 치유 결과와 관련 있는 유전자 발현의 변화
Figure pct00081
Figure pct00082
화합물 1에 의한 사람 종양 이종이식편의 마우스 간질에서 유도된 상처 치유-관련 유전자 발현 변화
마우스 및 반려 동물에 존재하는 종양 부위의 우수한 치유는 털 복원 및 털 색뿐 아니라 최소 흉터형성으로 확인했고, 이는 종양내 주사에 의한 화합물 1 처리의 현저한 특징이다(실시예 16 및 17). 따라서, 상처 치유와 관련 있는 유전자 발현의 변화는 종양이 무손상인 상태 동안 주사 후 초기 시간들에서 사람 종양 이종이식편의 마우스 유래 간질에서 분석했다.
마우스 유전자-특이적 마이크로어레이를 이용한 발현 데이터는 30㎍의 화합물 1을 종양내 주사하여 처리한 2 내지 3개의 각각의 사람 SK-Mel-28 이종이식편, 및 이와 함께 3개의 매개제만의 처리 부위에 대하여 수득했고, 데이터는 합산했다. 화합물 1로 처리된 부위에서의 발현이 매개제-주사 부위에서보다 2배 넘게 높거나 또는 2배 미만으로 낮은 마우스 유전자에 대해서만 상처 치유와의 관련성에 대해 조사했다.
표 15는 상처 치유에 공지된 연관성과 상기 기준에 따라 선택한 유전자를 정리한 것이다.
상처 치유에 대해 공지된 바람직한 결과를 가진 다수의 유전자는 화합물 1에 의해 2배 이상 상승조절되었다. 이 유전자들은 근육 수축(ACTA1), 성장(EGR1), 염증의 완화(CXCL1), 각질세포의 재생을 위한 케라틴(krt5, 10, 14, 15, 17, 71, krtdap), 각질세포 이동(Coll7al), 상피 분화 및 세포 통신(lor, Tgm2, Itga7)에 관여하는 유전자였다.
1가지 상처 치유 관련 유전자인 Thrombospondin 2(Thbs2)는 억제조절되었다. 이 유전자의 억제조절은 상처 치유의 초기 단계들에서 피브로넥틴의 증가 및 혈관 밀도의 증가와 관련이 있다.
[표 15]
화합물 1에 의한 사람 종양 이종이식편의 마우스 간질에서 유도된 향상된 상처 치유 결과와 관련 있는 유전자의 발현 변화
Figure pct00083
실시예 12: 사이토킨 생산에 미치는 화합물의 효과
특정 사이토킨은 상처 치유 과정에 중요한 역할을 하며, 이러한 물질을 조절하는 제제는 상처 치료 및/또는 치유의 미용적 결과의 향상(예컨대, 흉터 감소)에 유용할 수 있다. 상처 치유 과정의 초기 단계들에 중요한 것으로 알려진 4가지 사이토킨의 조절에 미치는 화합물 1, 2, 5 및 42의 효과는 사람 말초 혈액 단핵세포(PBMC)에서 조사했다.
PBMC는 72세 남성(공여체 1) 및 34세 남성(공여체 2)으로부터 획득한 헤파린처리된 혈액을 피콜-파크 침전법으로 분리했다. 모든 세포는 전술한 바와 같이 10% FCS, RPMI에서 배양했다.
PBMC는 10% FCS, RPMI에서 웰당 1.5x105 세포의 밀도로 접종했다. 이 세포들의 4가지 화합물에 의한 자극은 4가지 농도(0ng/ml, 3ng/ml, 30ng/ml, 300ng/ml)에서 37℃, 5% CO2의 가습 항온배양기에서 24h 동안 2반복으로 수행했다. 배지 샘플은 각각 필요한 웰로부터 취하여 사용할 때까지 -80℃에 보관했다.
세포분석 비드 어레이(CBA) 분석은 결과를 측정하는데 사용했다. CBA 분석은 공지된 크기의 항체 코팅된 비드와 형광을 이용하는 용해성 피분석물 또는 피분석물 세트를 포획하는 방법을 제공한다. 그 다음, 검출은 다른 형광 표지된 2차 항체로 샌드위치 복합체를 만들어 수행한다. 각 배지 샘플은 BD(Becton Dickinson) CBA 사람 염증 사이토킨 검출 키트를 제조업자의 지시에 따라 사용하여 용해성 IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70 및 TNFα의 존재에 대해 분석했다. 각 샘플의 평균 형광 세기 값은 표준 곡선과 비교하여 사이토킨 농도(pg/ml)를 측정했다.
각 화합물의 CBA 분석 결과는 표 16에 제시했다.
4가지 화합물 모두, 처리된 PBMC로부터 분석된 상청액에서 검출된 4가지 사이토킨(TNFα, IL-1β, IL-6, IL-8)의 수준을 유의적으로 증가시켰고, 이 트렌드는 두 공여체의 PBMC 간에 일치했다. 최고의 사이토킨 수준은 일반적으로 화합물의 가장 높은 2가지 농도(30 및 300ng/ml)에서 나타났다.
[표 16]
화합물 1, 2, 5 및 42를 농도 0, 3, 30 및 300ng 화합물/ml에서 24시간 동안 항온처리 후 PBMC로부터 유래되는 사이토킨의 생산(사이토킨 수준은 pg/ml±표준편차로 나타냈고, 두 공여체 각각에 대해 제시했다.)
Figure pct00084
생체내 활성 실시예
실시예 13: 마우스 피부에 급성 염증성 반응
급성 염증성 반응은 상처 치유 과정의 중요한 초기 단계이다. 전염증성 세포, 주로 호중구 및 대식세포는 상처 부위로 이동하여 감염으로부터 보호하고 이어서 조직 수복의 개시 및 조절에 관여하는 사이토킨 및 케모킨을 방출한다.
수컷 누드 마우스의 각 옆구리에 화합물 1, 2, 5 및 42 100㎍/ml를 각각 20% 프로필렌 글리콜에 용해한 용액 50㎕를 피하 주사했다. 각 부위는 4시간 안에 발적했고, 24시간경 환부는 약 1cm 직경의 피부 범위였다. 그 다음 6일 동안 경화가 형성되었고, 14일경에 부위는 최소의 흉터로 완전히 치유되었다.
마우스 피부에서 화합물들에 의해 개시된 급성 염증성 반응과 그 다음 빠른 소산(resolution)은 전염증성 세포(실시예 7 및 9) 및 PBMC에서의 유전자 발현 및 사이토킨 프로필(실시예 11 및 12)에 미치는 화합물들의 관찰된 직접적인 효과와 일치한다. 이러한 강하지만 일시적인 전염증성 반응은 종종 생체내 양호한 상처 치유 결과와 관련되었다.
실시예 14: 화합물 1의 겔 포뮬레이션
99.5% 이소프로필 알코올(Biotech Pharmaceuticals) 5ml에 30mg 또는 50mg의 화합물 1(HPLC 시, >97% 순도)을 용해하고 밤새 방치했다. 겔화제로서 5ml 멸균수에 0.6% Carbomer 940(Snowdrift Farms) 용액을 제조했다. 그 다음, 화합물 1 농축물과 0.6% Carbomer 940 용액을 20ml 주사기에 함께 첨가하고 충분히 혼합했다. 그 다음 100% 트리에탄올아민(Sigma-Aldrich) 20㎕를 첨가하고 빠르게 혼합했다. 그 결과 수득되는 화합물 1 겔을 개별 1ml 인슐린 주사기에 분배하여 3mg 화합물 1/ml 또는 5mg 화합물 1/ml의 용량을 생산했다.
실시예 15: 화합물 1의 주사용 포뮬레이션
화합물 1(HPLC에서 >97% 순도) 20mg을 20ml 용량의 유리 신틸레이션 바이엘에서 1,2-프로판디올(Sigma-Aldrich) 8ml에 용해하고 실온에서 밤새 방치했다. 그 다음, 이 용액에 30mM 아세테이트 완충액(pH 4.2) 또는 식염수(주사용 염화나트륨 BP 0.9% - AstraZeneca) 12ml를 첨가하고 충분히 혼합했다. 이 용액을 필터 살균하고 1ml 용량의 화합물 1(1mg/ml 농도)로 분배했다.
실시예 16: 비치유 상처 및 현행 실무 표준에 응답하지 않는 상처의 수의학적 임상 치료
2차 유합(second intention) 상처 치유를 향상시키기 위한 목적으로 10마리의 반려(즉, 개인 소유 및 보호 하의) 동물에 존재하는 다루기 힘든 상처들을 치유하는 치료를 위해 화합물 1을 사용했다.
이러한 징후들에 대해 현행 수의학적 실무 표준에 미응답성인 만성, 비치유 상처를 가진 7마리 개(Canis lupus familiaris) 및 1마리의 나무타기 캥거루(Dendrolagus lumholtzii)를 독립 수의사들이 화합물 1로 치료했다. 또한, 현행 실무 표준으로의 초기 치료에 적합하지 않은 상처를 가진 제2의 나무타기 캥거루 및 안경박쥐(Pteropus conspicillatus)도 화합물 1로 처리했다. 모든 증례들은 화합물 1로의 치료 과정 및 후속되는 상처 소산 기간 동안 드레싱 또는 다른 밴디징(bandaging)을 사용함이 없이 상처를 개방시킨 채 관리했다. 개별 증례 연구에서 언급되지 않는 한, 화합물 1에 의한 치료 과정 동안 동반되는 약제는 사용하지 않았다.
이러한 환자들 각각의 증례와 치료 기록은 이하에 정리한다. 치료하는 수의사에게 이 동물들의 재발 표시는 종종 불규칙적이었고, 상처 치유 결과는 재발 평가 방문 훨씬 전에 나타났을 수 있다.
화합물 1에 의한 치료는 8가지 작성된 증례에서 최소의 흉터와 함께 효과적인 상처 소산을 초래했다. 상처 소산은 가장 최근에 치료된 2가지 진행 중인 증례 연구(증례 연구 8 및 10)에서 만족스럽게 진전되었다.
증례 연구 1 내지 8: 비치유성 상처
증례 연구 1: 비치유성 깊은 괴사성 안면 상처, 3살된 버니즈 마운틴 견
증례 기록:
·환자 코 왼쪽 측면에 길이 7cm x 너비 4cm x 깊이 2cm 이하의 큰 난형 안면 상처.
·상처는 괴사 농포성 배출물 패치에 의해 딱딱해졌다.
·조직병리학: 아마도 거미 물림과 관련이 있고 구균의 존재 및 화농성 염증을 특징으로 하는 깊은 괴사성 상처.
·상처는 3개월의 기간 동안 항생제(세팔렉신, 아목시클라브, 젠타마이신) 및 소염제(마크롤론)를 수반하는 표준 상처 치료 프로토콜에 응답하지 않았다.
·상처가 점차 커져서 눈 감음을 유발하고 환자의 시각 및 일반적 태도에 유의적인 영향을 미쳤다. 환자의 하악 림프절이 확대되었다.
·나머지 실무 표준 옵션은 침습적 안면 수술 및 재건에 대한 것이었다.
·초기 치료는 화합물 1 겔(3mg/ml)을 초기 14일 동안 5회 적용(총 5.3ml)했다(1일, 2일, 6일, 10일 및 14일에 적용했다).
·28일에 상처의 부분 소산 후, 환자를 상처 부위 전반의 여러 위치들에서 표면 바로 아래에 단독 1ml 용량의 화합물 1 (0.5mg/ml)을 주사하여 치료했다.
·화합물 1을 주사한 후 35일째, 상처는 건강한 분화성 육아조직으로 채워졌고, 감염의 증거는 전혀 없었다.
·화합물 1로 치료하는 과정 동안 동반 약제는 겔 포뮬레이션에 의한 1차 치료 시에 템제식 및 리그노카인, 주사 치료 시와 바로 그 다음 날(즉, 28일과 29일)에 템제식 및 트라마돌, 그 다음 42일부터 매일 저용량 경구 코르티코스테로이드(마크롤론)의 지지성 커버였다.
·마지막 치료 후 76일째 상처는 치유되었고 정상 조직으로 채워졌고, 흉터는 최소였으며, 털의 재성장도 원 상처 부위의 95%가 넘게 이루어졌다.
증례 연구 2: 파열, 감염된 복부 낭, 13세 복서
증례 내용:
·중증 골관절염이 있는 허약 환자, 어떠한 수술적 중재 시술 시 높은 마취 위험이 예상됨.
· 환자는 5개월 동안 정기적인 배농 및 낭에 항생제(젠타마이신, 엔로플록사신, 노로실린) 주사에 응답하지 않는 꼬리에 근접한 등에 감염 낭이 지속되었다.
· 환자는 낭 파열 및 고열을 나타냈다. 죽은 피부를 제거하기 위해 낭을 청소한 뒤, 식염수와 클로로헥시덴으로 플러싱(flushing)했다. 환자는 항생제(클린다마이신 및 노로실린)와 소염제(메타캄)로 치료했다.
·5일 후, 파열 낭과 관련 있는 상처는 소산의 징후가 전혀 보이지 않았고, 유의적인 국소 염증으로 둘러싸였다. 그 다음, 상처의 노출 부위(대략 길이 5cm x 너비 3cm x 깊이 2.5cm 이하)를 식염수로 플러싱하고, 상처 부위 위에 균일하게 화합물 1 겔(3mg/ml) 0.5ml를 도포했다.
·화합물 1 겔로 치료 후 5일경에 상처는 원 상처(대략적 치수 길이 3cm x 1.5cm 너비 x 1cm 깊이) 부위의 30% 미만으로 유의적으로 수축되었고 건강한 육아조직으로 이루어졌다.
·30일째, 상처는 정상 조직으로 소산되었고, 원 상처 부위 대비 70% 넘게 털이 재성장했다.
·화합물 1로의 치료 과정 동안 이 환자를 위한 동반 약제는 치료 시기에 주사성 비스테로이드성 소염제(메타캄)였다.
증례 연구 3: 비치유성 감염 자창, 11세 차우차우
증례 내용:
· 환자는 개싸움에서 둔부에 크게 물린 2개의 상처(각각 대략 길이 4cm x 너비 1.5cm x 깊이 2cm)가 있다.
· 상처를 세척했고, 항생제(아목시클라브 정제 및 주사용 노로실린)로 환자를 치료했다.
·8일 후 상처는 지속되었고, 봉합되지 않아 감염되었다.
·상처를 깨끗이 닦고 화합물 1 겔(3mg/ml) 0.4ml를 각 상처에 균일하게 피복했다.
·15일경, 화합물 1로 치료 후, 상처는 원 크기의 40% 미만으로 유의적으로 수축했고, 괴사딱지를 형성했고, 감염의 증거는 없었다.
·화합물 1로 치료 후 46일째, 상처는 정상 조직으로 완전히 소산되었고, 흉터도 없었고, 상처 부위에 털이 완전히 재성장했다.
· 화합물 1로 치료 동안 이 환자에게 동반 약제는 적용하지 않았다.
증례 연구 4: 개의 안면과 중족에 비치유성 감염 상처(11세 복서)
증례 내용:
·환자는 2개의 비치유성 감염 및 염증 상처 부위를 보였고, 하나는 안면 왼쪽에, 다른 하나는 왼쪽 뒷다리 중족에 있고, 이들은 항생제(세팔렉신, 독시사이클린) 및 코르티코스테로이드(마크롤론)로 장기적인 8주 과정에 응답하지 않았다.
·화합물 1의 5mg/ml 겔 포뮬레이션의 단독 치료를 안면 상처(0.4ml)와 다리 상처(0.6ml)에 적용했다.
·안면 상처는 화합물 1로의 치료에 빠르게 응답했고, 7일째 작은 괴사딱지가 보였고, 치료 후 14일 경에는 유의적인 털 재성장을 포함한 완전한 상처 폐쇄를 보였다. 상처 부위는 치료 후 63일 경에 완전히 치유되었다.
·또한, 다리의 상처도 빠르게 응답하여 국소 부위에 괴사딱지가 보였다. 14일 경에 괴사딱지는 크게 벗겨졌고, 건강한 기저 육아조직이 관찰되었다. 상처 부위는 완전히 폐쇄되었고, 치료 후 63일째에는 털 피복율이 95%가 넘었다.
·화합물 1로의 치료 과정 동안 이 환자에 대한 동반 약제는 개의 아토피성 피부염 증후군 치료용의 저용량 코르티코스테로이드(마크롤론)를 매일 적용했다.
증례 연구 5: 개의 귀에 생긴 비치유성 감염 상처(4세 불 아랍)
증례 내용:
· 환자는 사냥 사고로 인한 비치유성 열상을 보였고, 이는 6주 이상 왼쪽 귀에 존재한 것이었다.
·화합물 1의 5mg/ml 겔 포뮬레이션 0.1ml로 각각 이루어지는 3회 치료는 8일 간격으로 환부에 적용했다. 환자를 화합물 1로 치료하는 동안에는 동반 약제를 사용하지 않았다.
· 화합물 1로의 1차 치료 후 41일 경에 상처는 완전히 폐쇄되었다. 1차 치료 후 152일째 추가 평가한 결과, 완전한 상처 소산, 원 상처 부위 위에 80%가 넘는 털 피복율을 가진 최소 흉터를 보여주었다.
증례 연구 6: 개의 귀에 있는 비치유성 감염 상처(11세 복서)
증례 내용:
· 환자는 왼쪽 귀 상부에 비치유성(감염 및 염증성) 종기를 보였고, (i) 국소 피부학적 포뮬레이션(네오토픽)과 병용 항균제(네오마이신 설페이트), 소염제(하이드로코르티손) 및 항소양제(리그노카인), 및 (b) 소염제(프레드니솔론), 항진균제(미코나졸 니트레이트) 및 항균제(폴리믹신 B 설페이트) 성분을 보유한 시판 현탁액(Auracol)의 정기적인 적용을 수반하는 실무 표준 프로토콜로 10주 동안 치료했다. 이러한 치료 전에 환자는 만성 개 아토피성 피부염 증후군 치료용의 저용량 경구 코르티코스테로이드(마크롤론) 과정이 진행중이었다.
· 실무 표준 프로토콜 10주 후, 상처 소산의 징후가 없었다.
· 환부에 화합물 1의 5mg/ml 겔 포뮬레이션 3ml를 단독 치료를 적용했고, 화합물 1을 적용한 후 15분 내에 처리된 부위에 식별가능한 발적이 나타났다.
·화합물 1로 치료한 후 4일째부터 환자에게 중증 아토피성 피부염 치료용의 저용량 코르티코스테로이드(마크롤론)을 매일 권장했다. 이 치료는 상처 치유 및 소산의 전 과정 동안 지속했다.
· 화합물 1로 치료 후 17일째, 감염 또는 염증의 징후는 전혀 없었고 치료 부위에 잘 육아된 상처 층이 발달했다.
· 치료 후 83일째, 완전한 상처 폐쇄가 나타났고, 원 상처 부위의 90%가 넘는 부위에 털 재성장이 나타났다.
· 치료 후 139일경에, 원 상처 부위를 식별할 수 없었고, 흉터의 증거도 없고(또는) 치료 부위와 그 주변에 피부 착색 또는 분명한 두께 차이도 없었다.
증례 연구 7: 개의 귀 및 안면에 비치유성 감염 상처(8세 잭 러셀 테리어 )
증례 내용:
· 환자는 오른쪽 귀의 선단 및 기저에 2개의 비치유성 상처를 나타냈고, 주인이 관찰한 코 위의 비치유성 상처는 4주가 넘게 관찰되었다. 가능한 기원은 감염된 거미 또는 다른 곤충에 물림이었다.
· 화합물 1의 5mg/ml 겔 포뮬레이션을 각각 0.1ml씩 적용한 2가지 치료는 5일 간격으로 귀의 양쪽 환부에 적용했다. 화합물 1의 5mg/ml 겔 포뮬레이션 0.1ml로의 단독 치료는 안면 병변에 적용했다.
· 화합물 1로 1차 치료 후 13일 경우에는 귀의 두 상처가 유의적으로 수축했고, 괴사딱지가 형성되었다. 29일경에는 상처가 완전히 폐쇄되었고 털 성장도 완전히 피복되었다.
·치료 후 16일째에는 코 위의 상처는 완전히 소산되었다.
·이 환자의 동반 약제는 초기 치료 시의 경구 항생제 아목시실린 및 클라불란산(아목시클라브) 5일 과정이었다.
증례 연구 8: 나무타기 캥거루(유대목, Dendrolagus lumholtzi )의 다리에 감염된 골 상처
증례 내용:
·환자는 엉치(lacrosacral) 탈구 및 골수염을 초래한 개의 공격으로 상처를 입은 야생 나무타기 캥거루로 제공했다. 환자는 주사용 항생제 세프타지딤(Fortum) 및 트리메토프림 설파메톡사졸(TMS)로 1개월 동안 치료했다. 염증은 감소했지만, 세균 면봉은 그람음성균과 세라티아마르세슨스(Serratiamarcesens)가 여전히 존재한다는 것을 보여주었다. 환부가 있는 사지는 무게를 견디지 못했다.
·다시 2주 동안 세프타지딤으로 치료한 결과, 상태 호전은 없었고, 수의사는 뼈로부터 감염을 없애는데 좋지 않은 예후와 향후 보행을 비롯한 뼈 구조에 유의적인 기계적 파괴 가능성을 충고했다. 이 시기에 비관절 및 발바닥 상의 배출 강으로부터 채취한 새로운 세균 면봉은 혼합된 혐기성 종과 그람양성 악티노마이세스 종을 나타내서, 요오드화나트륨(Sodide)의 1회 저속 IV 주입물을 전달했다.
·다른 치료들에 대한 응답 부족 및 이러한 실무 표준에 의한 전반적으로 좋지 않은 예후로 인해, 화합물 1의 5mg/ml 겔 포뮬레이션을 4회 적용하는 것을 수반하는 구제 치료를 2주 후에 시작했다.
·1차 적용을 위해 화합물 1 겔 0.1ml를 우측 비관절 상의 3 병변(하나는 발목 관절 위, 하나는 발바닥 밑 그리고 힐 기저의 작은 병변) 각각에 적용했고, 요오드화나트륨의 저속 IV 주입을 개시했다. 화합물 1 겔을 적용한 지 10분 안에 처리된 부위로부터 화농성 분비물이 나왔다.
·1차 치료 후 8일째, 화농성 분비물은 다리의 상처 3개 중 2개에서 흘러나왔다. 다른 상처(힐 상의 가장 작은 병변)는 수축했고, 치유를 시작했다. 화합물 1 5mg/ml 겔 포뮬레이션 0.15ml의 추가 처리는 2개의 개방 상처(하나는 발목 지점 위, 다른 하나는 발바닥 기저)를 각각 치료하는데 사용했다. 또한, 요오드화나트륨의 저속 IV 주입도 제공했다.
·다시 15일 후(초기 치료 후 23일째), 발바닥에 있는 상처로부터 농후한 화농성 고름 수 ml를 짜낸 뒤, 빈 상처 공동에 화합물 1의 5mg/ml 겔 포뮬레이션 0.15ml를 집어넣었다.
·1주 후 감염은 유의적으로 호전되었다. 발바닥에 있는 구멍으로부터 작은 뼈 조각을 분리했다. 분명한 고름 증거는 없었지만, 장액성 분비물은 있었다. 추가로 화합물 1 겔 0.2ml를 각 병변, 즉 발목 위 및 발 아래에 적용했다. 요오드화나트륨의 저속 IV 주입물도 전달했다. 이제 사지는 무게를 견딜 수 있었지만, 힐과 발바닥은 여전히 염증으로 매우 딱딱하고 동물의 보행은 매우 고르지 않아서 상해가 없는 뒷다리를 적극적으로 더 좋아한다.
· 다시 15일 후 발목 관절 위의 상처는 완전히 폐쇄되었고, 털이 다시 자라났다. 발바닥 힐에 있는 상처는 이전 방문 시에 잰 크기의 50% 미만으로 수축해 있었고, 주위 피부와 조직은 부드럽고 연하고 정상이었다. 이제 사지는 무게를 완전히 견딜 수 있고, 동물의 보행도 정상이었다.
· 주사성 요오드화나트륨 외에 다른 동반 약제는 화합물 1에 의한 치료 과정 동안 환자에게 투여하지 않았다.
현행 실무 표준에 적합하지 않은 다루기 힘든 상처의 증례 연구
증례 연구 9: 나무타기 캥거루(유대목, Dendrolagus lumholtzi )의 귀에 있는 감염성 혈관염
증례 내용:
·환자는 야생에서 발견된 상처를 입은 어린 동물이었다.
·환자는 매우 약하고 탈수와 빈혈이 있었다. 소변 샘플은 혈액 및 세균 감염, 예컨대 패혈증을 보였다. 환자에게 수액을 처치하고, 구토억제제인 마로피턴트 시트레이트(세레니아) 및 2가지 주사성 항생제 제제인 트리박테랄(트리메토프림, 설파디아진) 및 세프타지딤(포텀)을 처방했다.
·수액 점적 주입 9일 후, 환자의 상태는 호전되었으나, 오른쪽 귀에 외상이 있었고 감염성 혈관염 및 괴저의 가능성이 있었다. 환자가 매우 저항력이 저하된 상태로 인한 유의적인 마취 위험 때문에 수술은 불가능했다. 대신, 화합물 1의 겔 포뮬레이션에 의한 치료를 개시했다.
· 5mg/ml 강도의 화합물 1 겔 0.1ml로 3회 치료를 7일 간격으로 환부에 적용했다. 이 시기 동안 유일한 동반 약제는 세팔로스포린 항생제인 세프타지딤(포텀)이었다.
· 화합물 1 겔로 1차 치료 후 7일째, 상처 표면에는 밀착된 괴사딱지가 덮여있었다. 이 괴사딱지는 10일째 벗기니 잘 발달된 핑크색 육아 층이 드러났다.
· 1차 치료 후 14일째 3차 최종 치료 적용 때까지 상처 부위는 약 50% 감소했고, 25일째 건강한 조직은 상처 전체 부위에 존재했다.
· 67일째 병변은 완전히 소산되었고, 귀 전체에는 털이 피복되어 있었다.
증례 연구 10: 안경박쥐(포유류, Pteropus conspicillatus ) 두부에 있는 중증 열상
증례 내용:
· 환자는 4개월된 날여우박쥐의 두부에 철조망으로 인한 깊은 창상이 있는 4개월된 날여우 박쥐로서 제공했다.
·야생 상해(예컨대, 날여우박쥐)를 예의 실험한 처치 수의사의 의견으로서, 실무 표준의 정상 치료는 수술과 관련 있는 과도한 흉터 조직 형성 또는 상처 치유 드레싱이 적용되었다면 필요한 육아 정도로 인하여, 오른쪽 눈이 모양을 잃어서 눈을 감을 수 없게 하여 매우 문제가 있는 것으로 보였다.
·화합물 1은 28일 기간 동안 5mg/ml 겔 포뮬레이션 0.1ml를 3회 적용(1일, 10일 및 28)으로 상처에 적용했다. 치료 과정 동안 어떠한 다른 동반 약제 또는 중재시술도 사용하지 않았다.
·최초 치료 후 14일째, 유의적인 조직 충전 및 리모델링이 나타났고, 28일경에는 눈을 완전히 감을 수 있었다. 38일경에는 전체 상처 부위에 괴사딱지가 덮였고, 이것은 49일째 벗겨지기 시작하여 양호한 육아 층을 드러냈다.
·초기 치료 후 55일경에는 원 상처 부위 전체에 양호한 조직 충전이 있었고, 오른쪽 눈은 원래의 위치로 복원되었다. 매우 건강한 육아 층이 존재했다.
실시예 17: 화합물 1로 치료된 반려 동물에서 자발성 종양의 괴사 및 딱지형성 후 생성된 상처의 소산 및 미용적 결과
24마리의 반려 동물에서 화합물 1(0.5 또는 1.0mg/ml 농도의 30% 1,2-프로판디올 포뮬레이션)의 종양내 주사에 의해 치료된 자발적 종양의 괴사 및 딱지형성 후 형성된 상처의 소산 속도에 미치는 수의학적 임상 데이터는 표 17에 정리했다.
특히, 모든 상처는 개방 상처로서 관리했고, 이 증례의 어떠한 경우에도 밴디징, 드레싱, 로션 또는 동반 약제는 전혀 사용하지 않았다.
[표 17]
화합물 1의 주사성 포뮬레이션으로 치료된 자발성 종양의 딱지형성 후 반려 동물의 상처 크기 및 소산 속도(폐쇄 시간)
Figure pct00085
또한, 이 증례들의 데이터는 환자의 대부분에서 최소의 흉터형성과 정상 털 재성장을 나타내는 상처 소산의 양호한 미용적 결과도 보여준다(표 18). 흉터형성이 얼어난 몇몇 증례에서는 이 결과는 정상적으로 얇은 피부(예컨대, 말과 개의 사지) 부위와 일치했다.
[표 18]
화합물 1의 주사용 포뮬레이션으로 치료한 자발성 종양의 딱지형성 후 반려 동물의 치유된 상처 부위의 조직, 피부 및 털 특징
Figure pct00086
1 조직 결함 카테고리
없거나 최소: 원 상처 부위를 따라 <5% 조직 결손
소량: 원 상처 부위를 따라 5 내지 10% 조직 결손
상당량: 원 상처 부위를 따라 >10% 조직 결손
2 흉터형성 및 피부 비후화 카테고리:
없거나 최소: 육안으로 또는 접촉 시 명백하지 않은 흉터
소량: 원 상처 부위의 <10%를 덮는 국소 흉터
상당량: 원 상처 부위의 >10%를 덮는 흉터
3 상처 부위 상의 털 재성장 카테고리:
전체: 털이 원 상처 부위의 >95%을 덮음.
일부: 털이 원 상처 부위의 >50%을 덮음.
희박: 털이 원 상처 부위의 <50%을 덮음.

Claims (29)

  1. 검체에게 에폭시-티글리안(epoxy-tigliane) 화합물 또는 이의 약학적 허용성 염을 투여하는 것을 포함하는, 검체의 상처 치유를 촉진하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상처 치유 촉진이 상처 치유율을 증가시키는 것을 포함하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상처 치유 촉진이 상처 조직의 흉터형성을 감소시키는 것을 포함하는 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상처 치유 촉진이 상처 치유율의 증가 및 상처 조직에 흉터형성 감소를 포함하는 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상처 치유 촉진이 치유된 상처의 미용적 결과를 향상시키는 것을 포함하는 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상처가 만성 상처, 급성 상처 또는 기존 상처인 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 에폭시-티글리안 화합물이 식물 추출물 형태인 방법.
  8. 제7항에 있어서, 식물 추출물이 폰타이니아(Fontainea) 종 또는 하일란디아(hylandia) 종인 식물에서 수득할 수 있는 것인 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 에폭시-티글리안 화합물이 화학식 (I)의 화합물; 또는 이의 기하학적 이성질체 또는 입체이성질체 또는 약학적 허용성 염인 방법:
    화학식 (I)

    Figure pct00087

    [여기서,
    R1은 수소이고 R2는 -OR17이며; 또는 R1과 R2는 함께 카르보닐 기(=O)를 형성하고;
    R3은 수소 또는 C1-6알킬이고;
    R4 및 R5는 독립적으로 수소 또는 -OR17이고; 또는 R4와 R5는 함께 이중 결합 또는 에폭사이드(-O-)를 형성하고;
    R6은 수소 또는 C1-6 알킬이고;
    R7은 -OH 또는 -OR18이며;
    R8은 -OH 또는 -OR18이고; 단 R7과 R8은 둘 다 -OH는 아니고;
    R9 및 R10은 독립적으로 수소 및 C1-6 알킬 중에서 선택되고;
    R11 및 R12 또는 R12 및 R13은 함께 에폭사이드를 형성하고, R11 및 R13 중 나머지 기는 수소, -OH 또는 -OR17이며;
    R14는 수소 또는 -R17이고;
    R15는 수소 또는 -R17이며;
    R16은 수소 또는 -R17이고;
    R17은 수소, -C1 -6 알킬, -C2 -6 알케닐, -C2 -6 알키닐, -C(O)C1-6 알킬, -C(O)C2-6 알케닐 또는 -C(O)C2-6 알키닐이고;
    R18은 C1 -20 알킬, -C2 -20 알케닐, -C2 -20 알키닐, -C(O)C1-20 알킬, -C(O)C2-20 알케닐, -C(O)C2-20 알키닐, -C(O)사이클로알킬, -C(O)C1-10 알킬사이클로알킬; -C(O)C2-10 알케닐사이클로알킬, -C(O)C2-10 알키닐사이클로알킬, -C(O)아릴, -C(O)C1-10 알킬아릴, -C(O)C2-10 알케닐아릴, -C(O)C2-10 알키닐아릴, -C(O)C1- 10알킬C(O)R19, -C(O)C2- 10알케닐C(O)R19, -C(O)C2-10알키닐C(O)R19, -C(O)C1- 10알킬CH(OR19)(OR19), -C(O)C2- 10알케닐CH(OR19)(OR19), -C(O)C2-10알키닐CH(OR19)(OR19), -C(O)C1-10 알킬SR19, -C(O)C2- 10알케닐SR19, -C(O)C2-10 알키닐SR19, -C(O)C1- 10알킬C(O)OR19, -C(O)C2- 10알케닐C(O)OR19, -C(O)C2- 10알키닐C(O)OR19, -C(O)C1-10알킬C(O)SR19, -C(O)C2-10알케닐C(O)SR19, -C(O)C2-10알키닐C(O)SR19,
    Figure pct00088

    R19는 수소, -C1-10알킬, -C2-10알케닐, -C2-10알키닐, 사이클로알킬 또는 아릴이고;
    이때, 각 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬 또는 아릴 기는 경우에 따라 치환된다].
  10. 제9항에 있어서, 화학식 (I)의 화합물이 하기 화학식 (II)의 화합물인 방법:
    화학식 (II)
    Figure pct00089

    [여기서, R3, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13 및 R15는 화학식 (I)에 정의된 바와 같다].
  11. 제9항 또는 제10항에 있어서, 화학식 (I) 또는 (II)의 화합물이 화학식 (III)의 화합물인 방법:
    화학식 (III)
    Figure pct00090

    [여기서, R7, R8, R11, R12, R13 및 R15는 화학식 (I)에서 정의된 바와 같다].
  12. 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, R1이 수소이고, R2가 OH 또는 -OC(O)C1-6알킬, -OC(O)C2 - 6알케닐 또는 -OC(O)C2 - 6알키닐이고, 또는 R1과 R2가 함께 카르보닐 기를 형성하는 방법.
  13. 제9항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, R3이 수소 또는 -C1 - 3알킬인 방법.
  14. 제9항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, R4 및 R5가 독립적으로 수소 또는 -OH, -OC(O)C1 - 6알킬, -OC(O)C2 - 6알케닐 또는 -OC(O)C2 - 6알키닐이거나 또는 R4와 R5가 함께 이중 결합 또는 에폭사이드를 형성하는 방법.
  15. 제9항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, R6이 수소 또는 -C1 - 3알킬인 방법.
  16. 제9항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, R7이 -OH, -OC(O)C1 - 15알킬, -OC(O)C2-15알케닐, -OC(O)C2 - 15알키닐, -OC(O)아릴(여기서, 아릴 기는 경우에 따라 치환된다), -OC(O)C1 - 15알킬아릴, -OC(O)C1 - 10알킬C(O)H, -OC(O)C2 - 10알케닐C(O)H, -OC(O)C1 - 10알킬C(O)C1- 6알킬, -OC(O)C2 - 10알케닐C(O)C1- 6알킬, -OC(O)C1 - 10알킬CH(OC1-3알킬)(OC1-3알킬), -OC(O)C2-10알케닐CH(OC1-3알킬)(OC1-3알킬), -OC(O)C1 - 10알킬SC1 - 6알킬, -OC(O)C2 - 10알케닐SC1 -6알킬, -OC(O)C1-10알킬C(O)OC1-6알킬 또는 -OC(O)C2-10알킬C(O)OC1-6알킬인 방법.
  17. 제9항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, R8이 -OC(O)C1 - 15알킬, -OC(O)C2 - 15알케닐, -OC(O)C2 - 15알키닐, 또는 -OC(O)아릴(여기서, 아릴 기는 경우에 따라 치환된다)인 방법.
  18. 제9항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, R9와 R10이 독립적으로 C1 - 3알킬인 방법.
  19. 제9항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, R11 및 R12가 에폭사이드를 형성하고, R13이 -OH, -OC(O)C1-6알킬, -OC(O)C2-6알케닐 또는 -OC(O)C2-6알키닐인 방법.
  20. 제9항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, R12 및 R13이 에폭사이드를 형성하고, R11이 -OH, -OC(O)C1-6알킬, -OC(O)C2-6알케닐 또는 -OC(O)C2-6알키닐인 방법.
  21. 제9항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, R15가 수소, -C(O)C1- 6알킬, -C(O)C2-6알케닐 또는 -C(O)C2-6알키닐인 방법.
  22. 제8항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, R14가 수소인 방법.
  23. 제9항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, R16이 수소인 방법.
  24. 에폭시-티글리안 화합물 또는 이의 약학적 허용성 염을 상처 또는 흉터에 적용하는 것을 포함하여, 과도한 흉터형성을 치료하거나 예방하는 방법.
  25. 제24항에 있어서, 과도한 흉터형성이 켈로이드 또는 비후 흉터인 방법.
  26. 검체의 상처 치유를 촉진하거나 또는 과도한 흉터형성을 치료하거나 예방하기 위한 약제의 제조에 사용되는 에폭시-티글리안 화합물 또는 이의 약학적 허용성 염의 용도.
  27. 검체의 상처 치유를 촉진하거나 또는 과도한 흉터형성을 치료하거나 예방하는데 사용되는 에폭시-티글리안 화합물 또는 이의 약학적 허용성 염의 용도.
  28. 12-헥사노일-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 5);
    12-아세틸-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 6);
    12-프로파노일-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 7);
    12-부타노일-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 8);
    12-[(2E,4E)-(6,6-디메톡시헥사-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 9);
    12-[(2E,4E)-6-옥소헥사-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9, 12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 10);
    12-[(2E,4E)-6,7-디하이드록시도데카-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 11);
    12-[(2E)-4,5-디하이드록시-데카-2-에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 12);
    12-티글로일-13-(2-메틸프로파노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 13);
    12-[(2E)-3-메틸티오프로프-2-에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9, 12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 14);
    12-(2-메틸프로프-2-에노일-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 15);
    12-[(2E,4E)-헥사-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13, 20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 16);
    12-[(2E,4E)-8-옥소도데카-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5, 9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물17);
    12-[(2Z,4E)-데카-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13, 20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 18);
    13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 19);
    12-[(2E)-부트-2-에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 20);
    12-티글로일-13-부타노일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 21);
    12-(3-부테노일)-13-노나노일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 22);
    12-벤조일-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 23);
    12-[(2Z,4E)-데카-2,4-디에노일]-13-(2-메틸프로파노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12, 13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 25);
    12-[(2E,4E)-6,7-(안티)-에폭시-도데카-2,4-디에노일]-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 26);
    12,13-디부타노일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 27);
    12-벤조일-13-부타노일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 28);
    12-티글로일-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 29);
    13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 30);
    12-아세틸-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 31);
    12,13-디-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 32);
    12-프로파노일-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 33);
    12-헥사노일-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 34);
    12-티글로일-13-(2-메틸프로파노일)-5,6-에폭시-4,7,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 35);
    12-[(2E)-3-메틸티오프로프-2-에노일]-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9, 12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 36);
    12-{[2-(메틸설파닐)카르보닐]-아세토일}-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9, 12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 39);
    12-[(2-메톡시카르보닐)-아세토일]-13-(2-메틸부타노일)-5,6-에폭시-4,7,9,12, 13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 40);
    12,13-디-노노일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 41);
    12,13-디-헥사노일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 42);
    12,13-디-펜타노일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 43);
    12,13-디-티글로일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 44)
    5,20-디-아세틸-12-티글로일-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 45);
    12,13-디-(2E,4E)-헥스-2,4-에노일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 46);
    12-헥사노일-13-[2-(N-메틸안트라닐로일)]-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 47);
    12-아세틸-13-[2-(N-메틸안트라닐로일)]-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 48);
    12,13-디-헵타노일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 49);
    12-미리스토일-13-아세틸-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 50);
    12-미리스토일-13-(2-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 51);
    12-(2-메틸부타노일)-13-아세틸-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 52); 및
    12-하이드록시-13-헥사노일-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 53);
    12,13-디-(3-메틸부타노일)-6,7-에폭시-4,5,9,12,13,20-헥사하이드록시-1-티글리엔-3-온 (화합물 60)으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 화합물 또는 이의 약학적 허용성 염.
  29. 제28항의 화합물 또는 이의 약학적 허용성 염 및 약학적 허용성 담체, 희석제 또는 부형제를 함유하는 약학 조성물.
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