KR20160006694A

KR20160006694A - 매트릭스 메탈로프로테나아제 및 그의 용도

Info

Publication number: KR20160006694A
Application number: KR1020157031871A
Authority: KR
Inventors: 클라우디아 질버버그; 그레그 비. 필즈
Original assignee: 클라우디아 질버버그; 그레그 비. 필즈
Priority date: 2013-04-05
Filing date: 2014-04-04
Publication date: 2016-01-19
Also published as: RU2015147878A; CN105246500A; BR112015025390A2; SG11201508199QA; HK1221405A1; EP2981276A4; CA2908739A1; US20160053250A1; PH12015502306A1; WO2014165780A2; CR20150603A; MX2015014053A; AU2014248002A1; WO2014165780A3; EP2981276A2; JP2016520550A; EP3290047A1

Abstract

매트릭스 메탈로프로테나아제의 조성물이 개시된다. 그 용도는, 조직으로부터의 세포, 구체적으로 줄기 세포의 단리, 조직, 단백질의 해리, 및 다양한 증상의 치료를 포함하는 것이다.

Description

매트릭스 메탈로프로테나아제 및 그의 용도{MATRIX METALLOPROTEINASES AND USES THEREOF}

본 출원은 "매트릭스 메탈로프로테나아제 및 그의 용도"를 발명의 명칭으로 하여 2013. 4. 5.자로 출원된 미국 가출원 제61/808,861호에 대한 우선권을 주장하는 것이다.

구현예들은 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP)의 조성물, 사용 방법 및 치료학적 용도에 관한 것이다.

중간엽 줄기세포(mesenchymal stem cells, MSCs)는 골모세포(osteoblast), 지방세포(adipocytes), 연골세포(chondrocyte), 건세포(tenocyte) 및 근아세포(myoblast)를 포함하는 중간엽 혈통 세포 유형으로 분화 및 자기 재생 능력을 가지며, 다양한 중간엽 조직의 재생에 기여하는 것으로 알려져 있다. MSCs는 세포 치골수 채취 과정을 통해 얻어질 수 있으며 줄기 세포 잠재력에 대해 손실 없이 세포 치료에 효과적인 표적을 만들면서 시험관 내에서 배양될 수 있다. 그러나, 기존의 골수 채취 과정은 고통과 질병을 동반하므로 환자에서 괴롭고, 보통 가공을 거쳐도 적은 양의 MSC가 얻어진다. 골수 같은 지방 조직은 중간엽 조직으로부터 유래되며 쉽게 단리되는 보조 기질을 포함한다. 지방 조직은 중간엽 줄기세포의 풍부한 공급원을 나타내고(Zuk PA, et al. Mol. Biol. Cell 2002, 13:4279-4295; Bunnell BA, et al. Methods 2008, 45: 115- 120), 환자 불편을 최소화하면서 성인 줄기세포의 풍부하고 이용 가능한 공급원을 제공한다. 지방 조직 유래 줄기세포(Adipose tissue-derived stem cells, ADSCs)는 인간 지질 흡인물로부터 쉽게 단리될 수 있고 골수 줄기세포(bone marrow stem cells, BMSCs)와 같은 혈통으로 분화될 수 있다. 여러 연구는 인간 ADSCs는 시험관 내 및 생체 내에서 BMSCs와 유사한 특성을 나타냄을 보여줬다. 따라서, 지방 조직은 BMSCs보다 덜 외과적인 방법에 의해 대량의 자가 줄기세포를 얻을 수 있는 이상적인 공급원일 수 있다.

ADSCs의 단리는 주로 클로스트리디움 히스톨리티쿰 콜라게나제(clostridium histolyticum collagenases) I과 II 및 서몰리신(thermolysin)으로 구성된 리버라아제 HI(Liberase HI)(Roche Diagnostics)로 이루어진다. 모든 리버라아제 제제는 내(內)독소(endotoxin)을 포함한다. 이전 연구는 다양한 콜라게나제 제제에서 내독소의 상대적인 양과 단리된 세포의 건강에 미치는 영향을 조사하였고(Linetsky E. et al, Transplantation Proc. 1998; 30:345-346; Jahr H. et al, J. Mol. Med. (Berl.) 1999;77:118-120; Salamone M, et al, Transplantation Proc. 2010, 42:2043-2048), 내독소의 존재가 ADSC 생존도에 유해한 것으로 나타났다. 내독소 오염 문제에 대한 해결책은 ADSC 단리에 사용되는 재조합 효소의 생산이다. 세포 단리는 리버라아제 HI에 비해 단일 콜라게나제를 사용하는 경우 효율적이지 않았다(Wolters G.HJ. et al, Diabetes 1995; 44:227-234). 중요한 문제는 콜라게나제 I은 Ia 형태(Ia form)가 빠르게 자가 촉매적으로 Ib 형태(Ib form)로 분해되는 리버라아제 HI 중 가장 불안정한 조성이라는 것이다. 분해된 콜라게나제는 췌도(islet) 세포 생존도에 악영향을 줄 수 있다.

본 발명의 구현예들은 하나 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), MMP의 비활성 형태 (예컨대, proMMP), 절편, 돌연변이체, 변형체 또는 이들의 조합들을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 약학적 조성물은 약학적 담체 내의 상기의 하나 이상을 포함하는 것이다.

구현예에서, 조성물은 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성(inactive) MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)의 적어도 하나를 포함하는 것으로서, 상기 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편(fragments), 돌연변이체, 변형체 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다.

바람직한 구현예에서, 조성물은 적어도 둘 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)의 펩티드 또는 단백질을 포함하는 것으로서, 상기 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP -23 A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다.

바람직한 구현예에서, 조성물은 셋 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 것으로, 상기 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다.

바람직한 구현예에서, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 프로엔자임(proMMP)은 단백질, 펩티드, 폴리펩티드, 핵산 서열, cDNA, 리보핵산 서열, 키메라 분자, 펩티도 모방체(petidomimetics), 펩티드 핵산(PNA), 또는 이들의 조합들을 포함하는 것이다.

구현예에서, 조성물은 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)의 펩티드 또는 단백질을 포함하는 것으로서, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP -23 A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다. 바람직한 구현예에서, 상기 조성물은 약학적으로 허용가능한 제제, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그를 더 포함하는 것이다.

일부 구현예에서, 상기 조성물은 둘 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)의 펩티드 또는 단백질을 포함하는 것으로서, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP -23 A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 변형체, 돌연변이체, 약학적으로 허용가능한 제제, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다.

일부 구현예에서, 상기 조성물은 셋 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)의 펩티드 또는 단백질을 포함하는 것으로서, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP -23 A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 변형체, 돌연변이체, 약학적으로 허용가능한 제제, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다. 일부 구현예에서, 상기 조성물은 넷 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)의 펩티드 또는 단백질을 포함하는 것이다. 일부 구현예에서, 상기 조성물은 다섯 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)의 유효량의 펩티드 또는 단백질을 포함하는 것이다.

일부 구현예에서, 조성물은 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)의 핵산 서열을 포함하는 것으로서, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP -23 A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, cDNA 서열, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다.

일부 구현예에서, 조성물은 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)의 둘 이상의 핵산 서열을 포함하는 것으로서, 상기 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP -23 A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, cDNA 서열, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다.

일부 구현예에서, 상기 조성물은 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)의 둘 이상, 셋 이상, 넷 이상의 핵산 서열을 포함하는 것이다.

일부 구현예에서, 상기 조성물은 적어도 하나의 MMP 활성화 제제, 적어도 하나의 MMP 저해제, 또는 이들의 조합들을 선택적으로 포함하는 것이다. 상기 적어도 하나의 MMP 활성화 제제, 또는 상기 적어도 하나의 MMP 저해제, 또는 이들의 조합들은 소정의 기간, 생리적 조건, 온도 등에 걸쳐서 제어 또는 지속 방출을 위하여 선택적으로 캡슐화 된다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 MMP, 적어도 하나의 MMP 활성화 제제, 또는 적어도 하나의 MMP 저해제, 또는 이들의 조합들은 제어 방출 제형을 포함하는 것이다.

다른 구현예에서, 조성물은 유효량의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 것으로서, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1 , MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-11, MMP- 12, MMP- 13, MMP- 19, MMP-25, 활성 절편, 변형체, 돌연변이체, 약학적으로 허용가능한 제제, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다. 바람직하게는, 상기 유효량의 어느 하나의 MMP 또는 그의 프로엔자임은 지방 조직을 이화하거나(catabolize) 또는 해리하는(dissociate) 것이다. 다른 구현예에서, 유효량의 임의의 둘 이상의 MMP 또는 그의 proMMP는 지방 조직을 이화하거나 또는 해리하는 것이다.

다른 구현예에서, 활성 절편을 포함하는 하나 이상의 MMP 또는 proMMP의 하나 이상의 활성 절편을 포함하는 것으로서, 상기 활성 절편은 지방 조직을 이화하는 것이다. 일부 구현예에서, MMP는 활성 또는 비활성 또는 이들의 조합들인 것이다. 다른 바람직한 구현예에서, 상기 조성물은 비활성 MMP를 활성화하는 하나 이상의 제제를 더 포함하는 것이다. 일부 구현예에서, 상기 조성물은 약학적으로 허용가능한 부형제, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그를 더 포함하는 것이다. 구현예에서, 상기 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)은 핵산 서열, 단백질, 폴리펩티드, 펩티드, 또는 그의 돌연변이체 또는 변형체를 포함하는 것이다.

다른 바람직한 구현예에서, 생물학적 시료로부터 줄기세포를 단리하는 방법은 유효량의 적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물과 생물학적 시료를 접촉시키는 것을 포함하며, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하고, 상기 조성물은 상기 생물학적 시료를 이화하거나 또는 해리하여서 시료로부터 줄기세포를 단리하는 것이다. 일부 구현예에서, 상기 조성물은 유효량의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 것으로서, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하고, 상기 조성물은 상기 생물학적 시료를 이화하거나 또는 해리하여서 시료로부터 줄기세포를 단리하는 것이다. 바람직하게, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 활성 절편을 포함하는 하나 이상의 MMP, 비활성 MMP 또는 proMMP의 하나 이상의 활성 절편을 선택적으로 포함하는 것이다. 다른 바람직한 구현예에서, 상기 방법은 비활성 MMP 또는 그의 절편을 활성화하는 하나 이상의 제제를 투여하는 것을 더 포함하는 것이다. 바람직한 구현예에서, 상기 생물학적 시료는 상피, 결합 조직, 지방 조직, 내피, 기저막(basement membrane), 기저판(basal lamina), 심장 조직, 심내막(endocardium), 첨단막(apical membrane), 기저외측막(basolateral membrane), 세포외 기질, 치밀성(dense) 결합 조직, 섬유성(fibrous) 결합 조직, 후각 상피, 소성(loose) 결합 조직, 뮤신, 중피, 간질, 세망(reticular) 결합 조직, 골수, 혈액, 혈관, 림프 조직, 폐, 심혈관(cardiovascular) 조직, 뇌 조직, 뇌척수(cerebrospinal) 조직 및 체액, 뇌혈관(cerebrovascular) 조직 및 체액, 신경 조직, 뇌, 뼈 조직, 피부, 근육, 췌장 조직, 난포(ovarian follicles), 제대혈(cord blood) 조직, 태반, 소장 내벽(intestine lining), 뇌 조직, 척추 조직, 심혈관 조직, 결합 조직, 뇌척수 체액 또는 조직, 골수, 진피, 혈액, 골막, 섬유증(fibrotic) 조직, 반흔(scar) 조직, 또는 임의의 기관 조직을 포함하는 것이다.

다른 바람직한 구현예에서, 과도한 지방 조직 침착(deposit)에 관련된 증상을 갖는 개체를 치료하는 방법은 유효량의 적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물을 상기 개체에 투여하는 것을 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP, 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-11, MMP- 12, MMP- 13, MMP-19, MMP-25, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하며, 상기 조성물은 상기 지방 조직을 해리하거나 또는 이화하는 것이다. 일부 구현예에서, 과도한 지방 조직 침착에 관련된 증상을 갖는 개체를 치료하는 방법은 유효량의 둘 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물을 상기 개체에 투여하는 것을 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP, 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-11, MMP- 12, MMP- 13, MMP-19, MMP-25, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하며, 상기 조성물은 상기 지방 조직을 해리하거나 또는 이화하는 것이다. 지방 조직에 관련된 증상의 예로서는, 셀룰라이트, 지방 침착, 비만, 대사성 질환 또는 이들의 조합들을 포함한다.

다른 바람직한 구현예에서, 개체에서의 국부(regional) 지방 침착을 감소시키는 방법은 유효량의 적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 것을 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP, 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-11, MMP- 12, MMP- 13, MMP-19, MMP-25, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하며, 상기 국부 지방 침착이 감소되는 것이다. 일부 구현예에서, 상기 약학적 조성물은 유효량의 둘 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 것이다. 일부 구현예에서, 상기 약학적 조성물은 비경구, 국소, 근육내, 피하 또는 경피 경로의 투여에 의해 투여되는 것이다. 일부 구현예에서, 상기 약학적 조성물은 국부 지방 침착 부위 또는 근방에 투여되는 것이다.

다른 바람직한 구현예에서, 조직으로부터 줄기세포를 단리하는 방법은 유효량의 적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물과 조직을 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하며, 상기 조성물은 상기 조직을 해리하여서 조직으로부터 줄기세포를 단리하는 것이다. 바람직하게는, 상기 조성물은 유효량의 적어도 둘 이상, 적어도 셋 이상, 적어도 넷 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 것으로서, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다. 바람직한 구현예에서, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 활성 절편을 포함하는 하나 이상의 MMP, 비활성 MMP 또는 proMMP의 하나 이상의 활성 절편을 선택적으로 포함하는 것이다. 일부 구현예에서, 상기 MMP 또는 그의 절편은 활성 또는 비활성 또는 이들의 조합들인 것이다. 일부 바람직한 구현예에서, 상기 방법은 비활성 MMP 또는 그의 절편을 활성화하는 하나 이상의 제제를 투여하는 것을 더 포함한다.

또다른 구현예에서, 섬유증(fibrotic) 질환을 앓는 환자를 치료하는 방법은 치료학적 유효량의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물을 환자에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다.

다른 바람직한 구현예에서, 발현 벡터는 적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)에 대하여 암호화하는 것으로서, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP가 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다.

다른 바람직한 구현예에서, 발현 벡터는 둘 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)에 대하여 암호화하는 것으로서, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP가 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다.

다른 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)에 대하여 암호화하는 발현 벡터를 포함하는 것으로서, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP가 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다.

다른 바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 둘 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)에 대하여 암호화하는 발현 벡터를 포함하는 것으로서, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP가 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다.

다른 바람직한 구현예에서, 시간 방출 제형은 적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 것으로서, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)를 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다. 다른 바람직한 구현예에서, 시간 방출 제형은 둘 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 것으로서, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)를 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다. 일부 구현예에서, 상기 시간 방출 제형은 적어도 하나의 MMP 활성화 제제, MMP 저해제 또는 이들의 조합들을 선택적으로 포함한다.

다른 바람직한 구현예에서, 조직을 해리하는 방법은 유효량의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물과 조직을 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다. 다른 바람직한 구현예에서, 조직을 해리하는 방법은 유효량의 둘 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물과 조직을 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다.

바람직한 구현예에서, 상기 조직은 상피, 결합 조직, 지방 조직, 내피, 기저막, 기저판, 심장 조직, 심내막, 첨단막, 기저외측막, 세포외 기질, 치밀성 결합 조직, 섬유성 결합 조직, 후각 상피, 소성 결합 조직, 뮤신, 중피, 간질, 세망 결합 조직, 골수, 혈액, 혈관, 림프 조직, 폐, 심혈관 조직, 뇌 조직, 뇌척수 조직 및 체액, 뇌혈관 조직 및 체액, 신경 조직, 뇌, 뼈 조직, 피부, 근육, 췌장 조직, 난포, 제대혈 조직, 태반, 소장 내벽, 뇌 조직, 척추 조직, 심혈관 조직, 결합 조직, 뇌척수 체액 또는 조직, 골수, 진피, 혈액, 골막, 섬유증 조직, 반흔 조직, 또는 임의의 기관 조직을 포함하는 것이다.

다른 바람직한 구현예에서, 단백질 매트릭스를 해리하는 방법은 유효량의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물과 단백질 매트릭스를 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다. 다른 바람직한 구현예에서, 단백질 매트릭스를 해리하는 방법은 유효량의 둘 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물과 단백질 매트릭스를 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다.

바람직한 구현예에서, 상기 단백질 매트릭스는 콜라겐, 피브로넥틴, 겔라틴, 라미닌, 아그레칸, 엘라스틴, 피브린, 피브리노겐, 또는 이들의 조합을 포함하는 것이다.

다른 바람직한 구현예에서, 반흔 또는 창상을 치료 또는 치유하는 방법은 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)의 적어도 하나를 포함하는 조성물과 반흔 조직 또는 창상(wound)을 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다. 바람직하게, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 프로엔자임(proMMP)은 단백질, 펩티드, 폴리펩티드, 핵산 서열, cDNA, 리보핵산 서열, 키메라 분자, 펩티도 모방체, 펩티드 핵산(PNA), 또는 이들의 조합들을 포함하는 것이다. 바람직하게, 상기 조성물은 약학적으로 허용가능한 제제, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그를 더 포함하는 것이다. 다른 바람직한 구현예에서, 상기 조성물은 유효량의 임의의 둘 이상의 MMP 또는 proMMP, 활성 절편, 변형체, 돌연변이체, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하여서 상기 반흔 조직 또는 창상을 해리하거나 또는 이화하는 것이다.

다른 바람직한 구현예에서, 섬유증 조직을 해리하는 방법은 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)의 적어도 하나를 포함하는 조성물과 섬유증 조직을 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다. 바람직하게, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)은 단백질, 펩티드, 폴리펩티드, 핵산 서열, cDNA, 리보핵산 서열, 키메라 분자, 펩티도 모방체, 펩티드 핵산(PNA), 또는 이들의 조합들을 포함하는 것이다.

바람직하게, 상기 조성물은 약학적으로 허용가능한 제제, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그를 더 포함하는 것이다. 다른 바람직한 구현예에서, 상기 조성물은 유효량의 임의의 둘 이상의 MMP 또는 proMMP, 활성 절편, 변형체, 돌연변이체, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하여서, 상기 섬유증 조직을 해리하거나 또는 이화하는 것이다.

다른 바람직한 구현예에서, 키트는 적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 것으로서, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 proMMP는 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 것이며, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것이다.

일부 구현예에서, 상기 키트는 적어도 하나의 MMP 활성화 제제 또는 적어도 하나의 MMP 저해제, 또는 이들의 조합들을 더 포함하는 것이다.

본 발명의 다른 태양, 목적 및 장점들은, 본 발명의 특정한 구현예에 대하여 설명 및 실시예를 통하여 기재되어 있는 이하의 상세한 설명 및 첨부 도면으로부터 자명해 질 것이다. 상기 도면은 본 명세서의 일부를 구성하는 것이고, 본 발명의 예시적인 구현예를 포함하는 것이며, 본 발명의 다양한 목적 및 특징들을 설명하는 것이다.

도 1은 재조합 효소 활성을 보여주는 그래프이다. MMP-3은 37 ℃에서 30 분간 5 ㎍/㎖ 키모트립신(chymotrypsin)으로 활성화하였고(연청색), 반면에 MMP-12는 37 ℃에서 하룻밤 동안 TSB에서 자기 활성하였다. MMP-9-는 활성화 형태를 구매하였다. 효소 활성은 30 분동안 5 μΜ Knight 배지(substrate)에서 테스트하였다.
도 2는 단리된 MSCs의 형태를 보여주는 사진의 스캔본이다. MSCs의 형태는 지방 조직으로부터 단리한 직후 조직 배양 접시에서 6-7 일간 성장시켰고(0 계대, 윗줄), 5 계대(아랫줄)는 LIBERASE^™ (A), MMP-3 (B), MMP-12 (C) 및 콜라게나제 I (D) 단리 세포 사이에는 어떤 명백한 차이점도 드러나지 않았다.
도 3은 유동 세포 분석법에 의해 MSCs의 면역 표현형(immunophenotyping)을 보여준다. 표면 마커의 감지는 LIBERASE^™, MMP-3 및 MMP-12-단리 MSCs에 의해서 표현되었다. 빈 히스토그램은 동종형(isotype) 대조 항체로 염색한 세포들을 나타내고, 채워진 히스토그램은 특정 마커로 염색된 세포들을 나타낸다. 양성 세포의 비율은 각 패널에 도시되어 있다.
도 4는 LIBERASE^™, MMP-3 및 MMP-12에 의해 단리된 MSCs에서 CD73, CD90 및 CD105의 평균 형광 강도(Median Fluorescence Intensity, MFI)를 보여주는 그래프이다.
도 5는 지방세포에서 유도된 MSCs의 조직 화학적인 염색을 보여주는 사진의 스캔이다(Oil Red O). MSCs는 10 일간 지방생성으로 유도되었다. 오일 방울은 "9일 유도된" 패널에 흑색 점으로 보여진다.
도 6은 동결에 의한 효소 저장 후에 효소 활성을 보여주는 일련의 그래프들이다. **모든 효소는 30 분간 활성화시켰다. x-축은 효소 활성을 측정하는 시간을 나타내고, 표제는 효소가 동결된 시간을 나타낸다.
도 7은 MSC 양성 마커에 대한 유동 세포 분석법의 결과를 보여주는 그래프이다. *** 리버라아제에 의해 단리된 MSC 샘플은 6 % 비-MSC 세포를 포함하였고(PE-음성 대조), 반면에 다른 샘플들은 1 % 미만의 비-MSC 세포를 포함하였다. *** MSCs는 회전 플랫폼에서 37 ℃로 30 분간 각각 MMP의 13 Wiinsch Units/㎖ and 400 ng/㎖에서 LIBERASE^™로 지방 조직으로 배양하여 단리되었다. Lib = LIBERASE^™, Ml = MMP-1, M3 = MMP-3, M8 - MMP-8, M12 = MMP-12, SIC = MMP-1 촉매 도메인, S3C = MMP-3 촉매 도메인, S12C = MMP-12 촉매 도메인, S19C = MMP-19 촉매 도메인, S25C = MMP-25 촉매 도메인, 및 S19FL = MMP-19.
도 8은 CD73 강도에 의해 측정된 MMP와 LIBERASE^™을 사용한 줄기세포 단리를 위해 얻어진 유동 세포 분석법의 결과의 비교를 보여주는 그래프이다. Lib = LIBERASE^™, Ml = MMP-1, M3 = MMP-3, M8 - MMP-8, M12 = MMP-12, SIC = MMP-1 촉매 도메인, S3C = MMP-3 촉매 도메인, S12C = MMP-12 촉매 도메인, S19C = MMP-19 촉매 도메인, S25C = MMP-25 촉매 도메인, 및 S19FL = MMP-19.
도 9는 CD90 강도에 의해 측정된 MMP와 LIBERASE^™을 사용한 줄기세포 단리를 위해 얻어진 유동 세포 분석법의 결과의 비교를 보여주는 그래프이다. Lib = LIBERASE^™, Ml = MMP-1, M3 = MMP-3, M8 - MMP-8, M12 = MMP-12, SIC = MMP-1 촉매 도메인, S3C = MMP-3 촉매 도메인, S12C = MMP-12 촉매 도메인, S19C = MMP-19 촉매 도메인, S25C = MMP-25 촉매 도메인, 및 S19FL = MMP-19.
도 10은 CD105 강도에 의해 측정된 MMP와 LIBERASE^™을 사용한 줄기세포 단리를 위해 얻어진 유동 세포 분석법의 결과의 비교를 보여주는 그래프이다. Lib = LIBERASE^™, Ml = MMP-1, M3 = MMP-3, M8 - MMP-8, M12 = MMP-12, SIC = MMP-1 촉매 도메인, S3C = MMP-3 촉매 도메인, S12C = MMP-12 촉매 도메인, S19C = MMP-19 촉매 도메인, S25C = MMP-25 촉매 도메인, 및 S19FL = MMP-19.
도 11은 MMP-12 촉매 도메인을 사용하여 단리된 MSCs가 다양한 혈통(지방세포, 골모세포, 및 연골세포)으로 분화되도록 유도시킬 수 있음을 보여주는 현미경 사진의 스캔이다.

ADSCs의 단리는 주로 클로스트리디움 히스톨리티쿰 콜라게나제(clostridium histolyticum collagenases) I과 II 및 서몰리신(thermolysin)으로 구성된 LIBERASE^™(Roche Diagnostics)로 이루어진다. 클로스트리디움 히스톨리티쿰(clostridium histolyticum)으로부터 천연 제제는 여러 콜라게나제 뿐만 아니라 설히드릴 프로테아제, 클로스트리파인(clostripain), 트립신과 같은 효소, 및 아미노펩타아제도 포함한다. LIBERASE^™효소 생산 동안에, 콜라게나제 동종효소는 원료 중 존재하는 내독소의 상당량을 제거하는 과정에 의해 정제된다. LIBERASE^™의 내독소 수준에 비해 전통적인 콜라게나제 제제의 내독소 오염의 범위는 넓다. 그러나 모든 LIBERASE^™제제가 내독소를 포함하고 있다. 따라서, 원료에 상관없이, 박테리아 집단에서 나온 모든 정제된 콜로게나제와 중성 프로테아제는 내독소로 오염되어 있다. 이전 연구는 다른 콜로게나제 제제 상에 내독소의 상대적인 양과 단리된 세포 건강에 영향을 조사하였고 내독소의 존재는 ADSC 생존도에 해롭다.

고품질의 결합조직 분해 효소 없이 적절하고 안정적인 증식 능력을 갖춘 실행가능한 ADSCs를 자유롭게 하는 것은 사실상 불가능하기 때문에 본 발명의 이점은 여러가지이다. 세포 이식 성공은 단리된 줄기세포, 배양된 세포, 그리고 준비된 동종이식(allografts)의 품질에 직접적으로 비례한다. 이하에 구현된 조성물과 방법은 공중 보건에 엄청난 도움이 될 것이다. 첫째, MSCs 단리와 이식 기술의 전 분야에서 획기적인 진보가 이루게 된다. 둘째, 기대 수명이 긴 고품질의 MSCs 집합, 셋째, 독성을 제거하여, 지방 조직 처리 및 MSCs 단리를 위한 표준 프로토콜이 제공된다. 넷째, 고도로 정제된 재조합 MMP-혼합제는 현재 미생물 기원의 콜로게나제를 대체하고 새로운 표준이 되는 조직 해리 실시(지방 조직 해리뿐만 아니라)이 제공되어질 것이다. 다섯째, 조성물은 치료와 미용 수술 방법에서 유용하다. 다른 이점은 상세한 설명으로부터 명백해질 것이다.

바람직한 구현예의 아래 설명은 단시 예시적인 것에 불과하며 본 발명, 그 응용 또는 용도를 제한하는 것은 아니다.

본 발명의 구현예들은 제시된 이론적인 태양이 없이 실시되어질 수 있다. 또한, 이론적인 태양들은 본 출원인이 제시한 이론에 의해 구속되도록 의도하는 것이 아니라는 이해를 바탕으로 제공된다.

다수의 구체적인 상세한 설명, 관련성 및 방법들은 본 발명에 대한 충분한 이해를 제공하기 위한 것으로 이해되어야 한다. 그러나, 당해 기술 분야의 당업자라면, 본 발명이 한가지 이상의 구체적인 상세한 설명 없이도 또는 기타 방법으로도 실시될 수 있음을, 쉽게 인지할 것이다. 본 발명은, 일부 행위들이 여러 순서로 및/또는 다른 행위나 현상과 동시에 행해질 수 있는 바와 같이, 예시된 순서의 행위나 현상으로만 제한되지 않는다. 아울러, 예시된 행위나 현상은 본 발명에 따른 방법을 구현하는데 반드시 필요한 것은 아니다.

이하에 개시된 모든 유전자, 유전자 이름, 및 유전자 산물은 이하에 개시된 조성물과 방법에 적용되는 어떤 종으로부터 동족체에 상응하도록 의도된다. 따라서, 용어는 포함하지만, 인간과 생쥐로부터의 유전자 또는 유전자 산물에 한정되지 않는다. 특정 종으로부터의 유전자 또는 유전자 산물이 개시되는 경우, 본 개시는 단지 예시적인 것으로 의도되고, 명확하게 가리키는 바를 나타내는 문맥이 없는 한 한정하는 것으로 해석되지 않는다. 따라서, 예를 들어, 포유류의 핵산과 아미노산 서열과 관련한 본 발명의 구현예에서, 이하에 개시된 유전자 또는 유전자 산물에 대해 다른 동물로부터의 상동 또는 이종상동성 유전자와 유전자 산물을 포함하지만, 다른 포유류, 어류, 양서류, 파충류, 및 조류에 한정되지 않는다. 바람직한 구현예에서, 유전자, 핵산 서열, 아미노산 서열, 펩티드, 폴리펩티드 및 단백질은 인간 유래이다.

이하에 사용된 모든 용어들(기술적이고 과학적인 용어를 포함)은, 이와는 달리 정의되지 않는 한, 본 발명이 속하는 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 것으로 해석되어야 하며, 이하에서 명백하게 정의하지 않는 한 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미를 지니는 것으로 해석될 수 없다는 것을 추라적으로 이해되어야 한다.

정의

본 발명에서 사용된 용어는 특정한 구현예만을 설명하기 위한 목적이며, 본 발명의 제한하기 위한 것이 아니다. 본 발명에서 사용된 것과 같은 단수형 "한(a)", "하나(an)" 및 "상기(the)"는 문맥이 별도로 분명히 나타내지 않는 한 복수형을 포함하기 위한 것이다. 또한, 상기 용어 "포함하는(including)", "포함한다(includes)", "가지는(having)", "갖는다(has)", "있는(with)" 또는 이들의 변형체가 상세한 설명 및/또는 청구항에서 사용되는 범위에 대하여, 이러한 용어는 상기 용어 "포함하는(comprising)"과 어느 정도 유사하게 포함되기 위한 것이다.

본 발명에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "포함하는(comprising)", "포함하다(comprise)" 또는 "포함된다(comprised)" 및 이들의 변형체는 물품, 조성물, 장치, 방법, 공정, 시스템 등의 정의되거나 설명된 요소에 관하여 추가적인 요소를 허용하면서 포함되거나 오픈 엔디드(open ended)를 의미하는 것이며, 그로 인해 상기 정의되거나 설명된 물품, 조성물, 장치, 방법, 공정, 시스템 등은 그 명시된 요소, 또는 적절한 것과 같은, 다른 요소가 상기 정의된 물품, 조성물, 장치, 방법, 공정, 시스템 등의 범위/정의 내에 포함될 수 있으며, 여전히 있을 수 있는 이의 등가물을 포함하는 것을 나타낸다.

상기 용어 "약" 또는 "대략"은 본 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 결정된 것과 같은 특정한 수치를 위한 허용가능한 오차 범위 내를 의미하고, 이는 상기 수치가 측정되거나 결정되는 방법, 즉 측정 시스템의 제한에 부분적으로 의존할 것이다. 예를 들면, "약"은 본 기술 분야에서 실무에 대하여 1 또는 1 이상의 표준 편차 내를 의미할 수 있다. 다른 한편으로는, "약"은 20%까지의 범위, 바람직하게는 10%까지, 더욱 바람직하게는 5%까지, 및 더욱 바람직하게는 주어진 수치의 1%까지 여전히 의미할 수 있다. 다른 한편으로는, 특히 생물학적 시스템 또는 공정에 대하여 상기 용어는 수치의 자릿수(orders of magnitude) 내, 바람직하게는 5배 내, 더욱 바람직하게는 2배 내를 의미할 수 있다. 본 출원 및 청구항에서 특정한 수치가 설명될 때, 별도로 언급하지 않는 한 상기 용어 "약"은 추정되어야 하는 특정한 수치에 대하여 허용가능한 오차 범위 내를 의미한다.

"선택적인" 또는 "선택적으로"는 이어서 설명된 경우 또는 환경이 일어날 수 있거나, 일어날 수 없는 것을 의미하고, 상기 설명은 경우 또는 환경이 일어나는 사례 및 이것이 일어나지 않는 사례를 포함한다.

본 발명에서 사용된 바와 같이, 별도로 나타내지 않는 한, 상기 용어 "펩티드", "폴리펩티드" 또는 "단백질"은 본 발명에서 상호교환가능하게 사용되고, 다양한 크기의 아미노산 폴리머, 예를 들면 MMP의 단편을 나타낸다. 이러한 용어는 특정한 길이의 아미노산 폴리머를 내포하지 않는다. 따라서, 예를 들면 상기 용어 올리고펩티드, 단백질 및 효소는 재조합 기술, 화학적 또는 효소 합성을 이용하여 생산되거나, 자연적으로 발생된 폴리펩티드 또는 펩티드의 정의 내에 포함된다. 이 용어는 또한 예컨대 글리코실화, 아세틸화, 인산화 등으로 변형되거나 유도된 폴리펩티드를 포함한다.

본 발명에서 사용된 바와 같이, "핵산" 또는 "핵산 서열" 또는 "cDNA"는 핵산 절편 또는 자연적으로 발생하는 상태에서 그것이 측면에 있는 서열로부터 분리된 단편을 나타내고, 예를 들면, DNA 단편은 상기 단편에 정상적으로 인접한 상기 서열로부터 제거된 DNA 단편이고, 예를 들면, 유전체에서 그것이 자연적으로 발생하는 상기 단편에 인접한 서열이며, 하나 이상의 인트론이 제거된 핵산 서열을 나타낸다. 상기 용어는 또한 자연적으로 상기 핵산, 예를 들면 RNA 또는 DNA, 또는 세포에서 자연적으로 그것을 동반하는 단백질을 동반하는 다른 성분으로부터 실질적으로 정제되는 핵산에 적용한다. 따라서, 상기 용어는 예를 들면 재조합 DNA를 포함하며, 이는 벡터로, 자체적으로 복제하는 플라스미드 또는 바이러스로, 또는 원핵 세포 또는 진핵 세포의 게놈 DNA로 포함되거나, 다른 서열과 관계없이 별도의 분자(예를 들면, cDNA 또는 게놈 또는 PCR 또는 제한 효소 분해에 의해 제조된 cDNA 단편과 같은)로서 존재한다. 그것은 또한 재조합 DNA를 포함하며, 예를 들면 DNA는 추가적인 폴리펩티드 서열을 암호화하는 하이브리드 유전자의 일부이다.

"폴리뉴클레오티드"는 핵산의 단일 가닥 또는 병렬 및 역-병렬 가닥을 의미한다. 따라서, 폴리뉴클레오티드는 단일-가닥 또는 이중-가닥 핵산일 수 있다.

상기 용어 "변형체"는 폴리뉴클레오티드 서열에서 사용될 때 야생형 유전자와 관련있는 폴리뉴클레오티드 서열을 포괄할 수 있다. 이 정의는 또한, 예를 들면 "대립(allelic)", "스플라이스(splice)", "종(species)" 또는 "다형성인(polymorphic)" 변형체를 포함할 수 있다. 스플라이스 변형체는 참조 분자와 유의한 동일성을 가질 수 있으나, mRNA 처리 단계 동안에 엑손의 선택적 스플라이싱으로 인하여 일반적으로 더 많거나 적은 폴리뉴클레오티드 수를 가질 것이다. 상기 상응하는 폴리펩티드는 추가적인 기능 도메인을 가질 수 있거나, 도메인이 부재할 수 있다. 종 변형체는 하나의 종에서 다른 종까지 다양한 폴리뉴클레오티드 서열이다. 본 발명에서 특정한 유용성은 야생형 유전자 생산물의 변형체이다. 변형체는 상기 핵산 서열에서 적어도 하나의 돌연변이로부터 생길 수 있고, 선택된 mRNA; 또는 구조 또는 기능이 선택되거나 선택되지 않을 수 있는 폴리펩티드를 야기할 수 있다. 임의의 주어진 자연 또는 재조합 유전자는 없거나, 하나 또는 많은 대립 형태(allelic form)를 가질 수 있다. 변형체를 생기게 하는 보통 돌연변이 변화는 일반적으로 뉴클레오티드의 자연적 결실, 추가 또는 치환에 의한 것이다. 각 이러한 유형의 변화는 단독으로, 또는 다른 것과 조합으로, 1회 이상 주어진 서열에서 일어날 수 있다.

"암호화하는"은 생물학적 처리에서 다른 폴리머 및 고분자의 합성을 위한 주형으로서 제공하기 위하여 정의된 뉴클레오티드 서열(즉, rRNA, tRNA 및 mRNA) 또는 정의된 아미노산 서열을 가지는 폴리뉴클레오티드, 예컨대 유전자, cDNA, 또는 mRNA에 뉴클레오티드의 특정한 서열의 고유 특성을 나타내고, 생물학적 특성이 그것으로부터 야기한다. 따라서, 만약 mRNA의 전사 및 번역이 유전자가 세포 또는 다른 생물학적 시스템에서 단백질을 생산하는 것에 상응하는 경우, 유전자는 단백질을 암호화한다. 암호화된 가닥 모두인 상기 mRNA 서열과 동일하고 서열 목록에서 통상 제공되는 뉴클레오티드 서열, 및 유전자 또는 cDNA의 전사를 위한 주형으로 사용된 비-암호화 가닥은 단백질 또는 그 유전자 또는 cDNA의 다른 생산물을 "암호화하는" 것으로 나타낼 수 있다. 명시된 핵산에 대하여 "암호화하는" 또는 "암호화된", "암호화하다"는 상기 명시된 단백질로 번역을 위한 정보를 포함하는 것을 의미한다. 단백질을 암호화하는 핵산은 상기 핵산의 번역된 영역 내의 비-번역 서열(예를 들면, 인트론)을 포함할 수 있거나, 이러한 개입하는 비-번역 서열(예를 들면, cDNA에서 같이)이 없을 수 있다. 단백질이 암호화된 상기 정보는 코돈을 이용하여 명시된다. 전형적으로, 상기 아미노산 서열은 "보편적인" 유전 코드를 이용하여 상기 핵산에 의해 암호화된다.

별도로 명시되지 않는 한, "아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열"은 서로의 퇴화된 버전(degenerate versions)이고, 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 모든 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 단백질 및 RNA를 암호화하는 뉴클레오티드 서열은 인트론을 포함할 수 있다.

본 발명에서 사용된 바와 같이, "proMMP"는 매트릭스 메탈로프로테이나제(매트릭스 메탈로프로테아제로도 알려짐)의 전(pro) 형태의 발현의 결과로서 얻어진 단백질을 의미하는 것으로 사용된다. 이 용어의 의미 내에서, proMMP는 proMMP 유전자; 또는 cDNA; 결실, 치환 및 잘려짐(truncation)뿐만 아니라, 이의 변형된 형태를 포함하는 이들의 돌연변이체에 의해 암호화되는 모든 단백질을 포괄하는 것으로 이해될 것이다. 본 발명에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "proMMP"는 또한 아직 완전히 활성형으로 처리되지 않은 proMMP의 부분적으로 처리된 형태를 포함한다.

본 발명에서 사용된 바와 같이, "매트릭스 메탈로프로테이나제"(MMP), 예를 들면 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28는 임의의 MMP 활성을 가지는 임의의 단백질, 펩티드 또는 폴리펩티드를 나타낸다. 상기 용어 "MMP"는 또한 임의의 MMP 활성을 가지는 임의의 MMP-단백질, 펩티드 또는 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 서열을 나타낸다. 상기 용어 "MMP"는 또한 다른 MMP 서열, 예컨대 다른 MMP 아형(isoform), 돌연변이체 MMP 유전자, MMP 유전자의 스플라이스 변형체 및 MMP 유전자 다형성(polymorphism)을 포함하는 것을 의미한다. 따라서, 예를 들면 MMP-12는 또한 다른 MMP-12 암호화 서열, 예컨대 다른 MMP-12 아형, 돌연변이체 MMP-12 유전자, MMP-12 유전자의 스플라이스 변형체 및 MMP 유전자 다형성을 포함하는 것을 의미한다.

본 발명에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "활성화"는 비활성 전 형태의 매트릭스 메탈로프로테이나제(proMMP)를 활성형인 매트릭스 메탈로프로테이나제(MMP)로 변화시키기 위하여 일어나는 처리 단계를 나타낸다. "MMP 활성화 제제"는 상기 MMP를 활성형으로 활성화하거나 변환하는 분자이고, 그것은 상기 MMP에 특이적이다. 역으로, "MMP 저해제"는 상기 MMP를 억제하거나 저해하거나, 녹이는(render) 분자이며, 그것은 특이적으로 작용시 상기 MMP는 비활성이다.

본 발명에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "활성" 또는 "활성형"은 표준 기술에 따라 생체 내에서 또는 시험관 내에서 결정된 바와 같은 매트릭스 메탈로프로테이나제(MMP)에 의해 가해지는 활성을 나타낸다. 상기 용어 "활성 단편"은 활성을 부여하는 상기 분자의 활성 부위 또는 절편을 함유한다. 이러한 활성의 예는 직접 활성, 예컨대 세포외 매트릭스 성분(예를 들면, 콜라겐, 라미닌, 파이브로넥틴, 엘라스틴 등)의 촉매 활성, 또는 리간드 또는 이의 유사체(analog)에 부착하기 위한 능력, 전사 활성에서의 변화 또는 MMP-활성에 의해 직접적으로 또는 간접적으로 조절되는 유전자 또는 유전자 생산물의 수준에서의 변화, 발현이 MMP-활성에 의해 직접적으로 또는 간접적으로 영향을 받을 수 있는 다른 단백질의 발현에 대하여 효소 활성의 변화 또는 MMP-활성 변화로부터 생기는 세포 생리학의 기능적 변화를 포함하지만, 이에 한정되지 아니한다.

본 발명에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "활성 부위"는 활성 MMP 또는 동물 조직, 예를 들면 지방의 촉매 활성에 직접적으로 포함되는 활성 MMP의 구조 모티프의 영역을 나타낸다. 바람직한 구현예에서, 상기 동물은 인간이다. 특징화된 매트릭스 메탈로프로테이나제의 폴리펩티드에 대하여, 적어도 90% 동일성, 및 더욱 바람직하게는 95% 동일성을 가지는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 함유물은 상기 MMP, 예컨대 소수의 돌연변이 또는 다른 변화를 포함하지만, 효소 활성을 유지하는 것과 같은 밀접하게 관련된 형태를 포함하기 위한 것이다. 상기 유사성은 구조 유사성으로 나타내고, 관심있는 서열과 후보 폴리펩티드의 잔기를 얼라이닝(aligning)함으로써 일반적으로 결정된다. 예를 들면, MMP-12와, 후보 MMP-12 효소 아미노산 서열은 그들의 서열 길이에 따라 동일한 아미노산의 수를 최적화하기 위하여 알려진 MMP-12 서열과 얼라이닝된다. 동일한 아미노산의 수를 최적화하기 위하여 얼라인먼트(alignment)를 만드는데 서열 각각 또는 모두에서 갭이 허용되지만, 각 서열에서 아미노산은 그들의 올바른 순서로 유지해야 한다. 바람직하게, 2개의 아미노산 서열은 Tatusova 등(FEMS Microbiol. Lett, 174:247-250(1999))에 의해 설명된 바와 같이 BLAST 2 탐색 알고리즘의 Blastp 프로그램을 이용하여 비교된다.

본 발명에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "핵산 서열", "폴리뉴클레오티드" 및 "유전자"는 본 명세서 도처에서 상호교환가능하게 사용되고, 상보적 DNA(cDNA); 데옥시리보뉴클레오시드, 리보뉴클레오시드, 치환된 및 이의 알파-아노머 형태, 펩티드 핵산(PNA), 봉쇄형 핵산(locked nucleic acids, LNA), 포스포로티오에이트, 메틸포스포네이트 등을 포함하는 자연 및/또는 변형된 모노머 또는 연결의 선형 또는 환형 올리고머 또는 폴리머;를 포함한다.

상기 핵산 서열은 "키메라", 즉 상이한 영역으로 이루어질 수 있다. 본 발명에서 "키메라" 화합물은 둘 이상의 키메라 영역, 예를 들면 DNA 영역(들), RNA 영역(들), PNA 영역(들) 등을 함유하는 올리고뉴클레오티드이다. 각 화합물 영역은 적어도 하나의 모노머 단위, 즉 뉴클레오티드로 이루어진다. 이러한 서열은 전형적으로 하나 이상의 원하는 특성을 나타내기 위하여 상기 서열이 변형된 적어도 하나의 영역을 포함한다.

본 발명에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "모노머"는 전형적으로 적은 모노머 단위, 예를 들면 약 3-4 내지 약 몇백 모노머 단위로부터 크기의 범위인 올리고뉴클레오티드를 형성하기 위하여 포스포디에스테르 결합 또는 이의 유사체에 의해 연결되는 모노머를 나타낸다. 포스포디에스테르 연결의 유사체는 하기를 포함한다: 하기에 더욱 충분히 설명된 바와 같은 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 메틸포스포네이트, 포스포로셀레노에이트, 포스포아미데이트 등.

본 명세서에서, 상기 용어 "핵염기(nucleobase)"는 자연적으로 발생하는 핵염기뿐만 아니라 비-자연적으로 발생하는 핵염기를 포함한다. 이전에 "비-자연적으로 발생하는"으로 여겨지는 다양한 핵염기가 자연에서 이어서 발견되는 것이 본 기술 분야의 통상의 기술자에게 분명해야 한다. 따라서, "핵염기"는 알려진 퓨린 및 피리미딘 헤테로사이클뿐만 아니라, 헤테로사이클릭 유사체 및 이의 호변체(tautomer)를 포함한다. 핵염기의 예시적인 예는 아데닌, 구아닌, 티민, 시토신, 우라실, 퓨린, 크산틴, 디아미노퓨린, 8-옥소-N6-메틸아데닌, 7-디아자크산틴, 7-아자구아닌, N4,N4-에타노시토신, N6,N6-에타노-2,6-디아미노퓨린, 5-메틸시토신, 5-(C3-C6)-알키닐시토신, 5-플루오로우라실, 5-브로모우라실, 슈도이소시토신, 2-히드록시-5-메틸-4-트리아졸피리딘, 이소시토신, 이소구아닌, 이노신 및 Benner 등 미국 등록번호 제5,432,272호에 설명된 상기 "비-자연적으로 발생하는" 핵염기이다. 상기 용어 "핵염기"는 모든 이러한 예뿐만 아니라 유사체 및 이의 호변체를 포함하기 위한 것이다. 특히 관심있는 핵염기는 인간에서 치료적 및 진단 적용에 관하여 자연적으로 발생하는 핵염기로 여겨지는 아데닌, 구아닌, 티민, 시토신 및 우라실이다.

본 발명에서 사용된 바와 같이, "뉴클레오시드"는, 예를 들면 Kornberg 및 Baker, DNA Replication, 2nd Ed.(Freeman, San Francisco, 1992)에 설명된 바와 같은 2'-데옥시 및 2'-히드록실 형태를 포함하는 상기 자연 뉴클레오시드를 포함한다.

뉴클레오시드에 대한 "유사체"는, 예를 들면 Scheit, Nucleotide analogs, John Wiley, New York, 1980; Freier & Altmann, Nucl. Acid. Res., 1997, 25(22), 4429-4443, Toulme, J.J., Nature Biotechnology 19:17-18(2001); Manoharan M., Biochemica et Biophysica Acta 1489:117-139(1999); Freier S. M., Nucleic Acid Research, 25:4429-4443(1997), Uhlman, E., Drug Discovery & Development, 3: 203-213(2000), Herdewin P., Antisense & Nucleic Acid Drug Dev., 10:297-310(2000),); 2'-0, S'-C-linked [3.2.0] bicycloarabinonucleosides(see e.g. N.K Christiensen., et al, J. Am. Chem. Soc, 120: 5458-5463(1998)에 의해 일반적으로 설명되는 변형된 염기 모이어티 및/또는 변형된 당 모이어티를 가지는 합성 뉴클레오시드를 포함한다. 이러한 유사체는 결합 특성, 예를 들면 이중 또는 삼중 안정성, 특이성 등을 향상시키기 위하여 설계된 합성 뉴클레오시드를 포함한다.

상기 용어 "변형체"는 폴리뉴클레오티드 서열에서 사용시 야생형 유전자와 관련있는 폴리뉴클레오티드 서열을 포괄할 수 있다. 이 정의는 또한, 예를 들면 "대립", "스플라이스", "종" 또는 "다형성인" 변형체를 포함할 수 있다. 스플라이스 변형체는 참조 분자와 유의한 동일성을 가질 수 있으나, mRNA 처리 단계 동안에 엑손의 선택적 스플라이싱으로 인하여 일반적으로 더 많거나 적은 폴리뉴클레오티드 수를 가질 것이다. 상기 상응하는 폴리펩티드는 추가적인 기능 도메인을 가질 수 있거나, 도메인이 부재할 수 있다. 종 변형체는 하나의 종에서 다른 종까지 다양한 폴리뉴클레오티드 서열이다. 본 발명에서 특정한 유용성은 야생형 표적 유전자 생산물의 변형체이다. 변형체는 상기 핵산 서열에서 적어도 하나의 돌연변이로부터 생길 수 있고, 선택된 mRNA; 또는 구조 또는 기능이 선택되거나 선택되지 않을 수 있는 폴리펩티드를 야기할 수 있다. 임의의 주어진 자연 또는 재조합 유전자는 없거나, 하나 또는 많은 대립 형태(allelic form)를 가질 수 있다. 변형체를 생기게 하는 보통 돌연변이 변화는 일반적으로 뉴클레오티드의 자연적 결실, 추가 또는 치환에 의한 것이다. 각 이러한 유형의 변화는 단독으로, 또는 다른 것과 조합으로, 1회 이상 주어진 서열에서 일어날 수 있다.

상기 결과물인 폴리펩티드는 일반적으로 서로와 관련된 유의한 아미노산 동일성을 가질 것이다. 다형성인 변형체는 주어진 종 개체(subject) 사이의 특정한 유전자의 폴리뉴클레오티드 서열에서의 변형(variation)이다. 다형성인 변형체는 또한 "단일 뉴클레오티드 다형성(SNP)" 또는 상기 폴리뉴클레오티드 서열이 하나의 염기에 의해 달라지는 단일 염기 돌연변이를 포괄할 수 있다. SNP의 존재는, 예를 들면 질환 상태에 대한 경향, 즉 민감성 대 저항성이 있는 특정한 개체군을 나타낼 수 있다.

본 발명에서 사용된 바와 같이, 폴리펩티드의 "변형체"는 하나 이상의 아미노산 잔기에 의해 선택된 아미노산 서열을 나타낸다. 상기 변형체는 치환된 아미노산이 유사한 구조 또는 화학적 특성(예를 들면, 루신과 이소루신의 교체)을 갖는 "보존적인" 변화를 가질 수 있다. 더욱 드물게, 변형체는 "비보존적인" 변화(예를 들면, 글리신과 트립토판의 교체)를 가질 수 있다. 유사한 소수의 변이는 또한 아미노산 결실 또는 삽입 또는 둘 모두를 포함할 수 있다. 생물학적 활성이 제거되는 것 없이 치환, 삽입 또는 결실될 수 있는 아미노산 잔기 결정에 있어서 참조는 본 기술 분야에 잘 알려진 컴퓨터 프로그램, 예를 들면 LASERGENE software(DNASTAR)를 이용하여 알 수 있다.

본 발명에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "조직"은 환자의 구조 또는 다른 물질을 형성하는 세포의 응집체(aggregate)를 그 세포외 기질과 함께 나타내는 것이다. 본 발명에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "조직"은 신체의 임의의 조직을 포함하기 위한 것이고, 모세혈관, 혈관, 근육 및 기관 조직, 외상 조직, 암 조직, 골 조직 또는 연골 조직을 포함하지만, 이에 한정되지 아니한다. 또한, 본 발명에서 사용된 바와 같이 상기 용어 "조직"은 또한 개별 세포를 나타낼 수 있다.

본 명세서에서, "기질 혈관 분획(stromal vascular fraction, SVF)은 지방 조직으로부터 단리된 세포를 나타내고, 지방 조직에 본 발명에서 구현된 조성물을 처리함으로써 대부분의 성숙한 지방세포를 제거한 후에 남아있는 세포군을 의미한다.

"지방-유래 기질 줄기세포"는 상기 SVF로부터 얻어진 중간엽 줄기 세포를 의미하고, 또한 "지방-유래 줄기세포(adipose-derived stem cells, ASC)", "지방-유래 줄기세포(adipose-derived stem cells, ADSC)", "지방 줄기 세포" 등으로 표기될 수 있다. 본 발명에서 지방-유래 기질 줄기 세포는 특히 그것에 제한없이 지방 흡입술 또는 수술적 적출에 의해 인간 피하 지방 조직으로부터 단리될 수 있다.

"골수 유래 전구체 세포(bone marrow derived progenitor cell, BMDC)" 또는 "골수 유래 줄기세포"는 원시 줄기세포와 구성적으로 활성인 자기 재생을 위한 기관(machinery)을 나타낸다. 이 정의에 전분화, 다분화 및 전구체인 줄기세포가 포함된다. "전구체 세포"는 더 성숙한 세포로 분화할 수 있는 세포 분화 경로에서 임의의 세포일 수 있다. 따라서, 상기 용어 "전구체 세포군"은 더 성숙한 세포로 발달할 수 있는 세포 그룹을 나타낸다. 전구체 세포군은 전분화 세포, 다분화 세포 및 제한된 계열 줄기세포인 세포(즉, 모든 조혈 계열보다 덜 발달할 수 있는 세포, 예를 들면 적혈구 계열의 세포만으로)를 포함할 수 있다. 본 발명에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "전분화 세포"는 모든 세포 계열로 발달할 수 있는 세포를 나타낸다. 유사하게, 상기 용어 "전분화 세포군"은 모든 세포 계열로 발달할 수 있는 세포의 조성물을 나타낸다. 또한 본 발명에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "전분화 세포"는 다양한(비록 모든 것은 아닐지라도) 계열로 발달할 수 있는 세포를 나타내고, 적어도 모든 조혈 계열(예를 들면, 림프구, 적혈구 및 혈소판 계열)로 발달할 수 있다. 골수 유래 줄기세포는 2가지 잘 특징화된 유형의 줄기세포를 함유한다. 중간엽 줄기세포(MSC)는 정상적으로 연골세포와 골아세포를 형성한다. 조혈 줄기세포(HSC)는 혈액 및 면역 시스템의 세포(예를 들면, 적혈구, 과립구/대식세포, 거핵구 및 림프구 계열)를 정상적으로 생기게 하는 중배엽 기원이다. 게다가, 조혈 줄기세포는 또한 간(간세포, 담관 상피 세포를 포함하는), 폐, 신장(예를 들면, 신세뇨관 상피 세포 및 신장 유연조직), 위장관, 골격근 섬유, CNS의 성상세포, 푸르킨예 뉴런, 심근(예를 들면, 심장 근육 세포), 내피 및 피부의 세포로 분화하기 위한 잠재력을 가지는 것으로 나타났다. 본 발명에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "줄기세포"는 일반적인 용어이고, 모든 유형의 줄기세포를 포함하는 것을 의미한다.

세포 또는 줄기세포를 "단리하는"은 조직 시료로부터 세포 또는 줄기세포를 제거 및 원하는 세포가 아닌 다른 세포로부터 또는 조직의 줄기세포를 분리하는 공정을 나타낸다. 단리된 줄기세포는 일반적으로 다른 세포 유형으로 오염이 없을 것이고, 그것이 단리된 조직의 성숙한 세포를 생산하기 위하여 증식 및 분화 능력을 가질 것이다. 하지만, 줄기세포의 수집 처리시, 예를 들면 줄기세포의 배양에서, 100% 순수한 줄기세포의 수집물을 얻는 것은 사실상 불가능한 것으로 이해된다. 따라서, 단리된 줄기세포는 분석 또는 다른, 분화된 세포 유형의 생산을 위하여 상기 줄기세포의 사용을 방해하지 않는 다른 세포 유형의 작은 분획의 존재 하에 존재할 수 있다. 단리된 줄기세포는 일반적으로 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 순수할 것이다. 바람직하게, 본 발명에 따라 단리된 줄기세포는 적어도 98% 또는 적어도 99% 순수할 것이다. 상기 줄기세포는 임의의 조직으로부터 단리될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 조직은 지방 조직이다.

"생물학적 시료"는 고체(예를 들면, 조직, 기관) 및 체액 시료를 포함한다. 본 발명에서 사용된 상기 생물학적 시료는 세포, 단백질, 세포막 추출물, 혈액 또는 생물학적 유체, 예컨대 복수액(ascites fluid) 또는 뇌액(brain fluid)(예를 들면, 뇌척수액)을 포함할 수 있다. 고체 생물학적 시료의 예는 중추신경계, 뼈, 유방, 신장, 자궁 경부, 자궁 내막, 머리/목, 담낭, 이하선, 전립선, 뇌하수체, 근육, 식도, 위, 소장, 결장, 간, 비장, 췌장, 갑상선, 심장, 폐, 방광, 지방, 림프절, 자궁, 난소, 부신, 고환, 편도선 및 흉선의 조직으로부터 얻은 시료를 포함하지만, 이에 한정되지 아니한다. "체액 시료"의 예는 혈액, 혈청, 정액, 전립선액, 정장(seminal fluid), 소변, 타액, 가래, 점액, 골수, 림프액 및 눈물을 포함하지만, 이에 한정되지 아니한다.

상기 용어 "이식"은 수용자 개체 포유동물에서 면역 반응을 유발할 수 있는 임의의 세포, 기관, 기관 시스템 또는 조직을 포함한다. 따라서, 보통 이식은 동종 이식 또는 이종 이식 세포, 기관, 기관 시스템 또는 조직을 포함한다. 동종 이식은 상기 수용자와 동일한 종의 일원으로부터 얻어진 이식편(세포, 기관, 기관 시스템 또는 조직)을 나타낸다. 이종 이식은 상기 수용자와 상이한 종의 일원으로부터 얻어진 이식편(세포, 기관, 기관 시스템 또는 조직)을 나타낸다.

"치료"는 질환의 발달을 예방하거나, 질환의 병리학 또는 징후를 고치기 위하여 수행된 개입이다. 따라서, "치료"는 치료적 처리 및 방지(prophylactic) 또는 예방 수단 모두를 나타낸다. "치료"는 또한 완화 치료로서 명시될 수 있다. 치료가 필요한 것은 이미 질환인 것뿐만 아니라 질환이 예방되는 것을 포함한다. 따라서, "치료하는" 또는 "치료"의 상태, 장애 또는 증상은 하기를 포함한다: (1) 상기 상태, 장애 또는 증상을 앓거나, 걸릴 수 있지만, 상기 상태, 장애 또는 증상의 임상 또는 준임상 증상을 아직 겪지 않거나, 나타내지 않은 인간 또는 다른 포유동물에서 발달하는 상기 상태, 장애 또는 증상의 외관 임상 징후를 예방하거나 지연시키는 것; (2) 상기 상태, 장애 또는 증상을 저해하는 것, 즉 상기 질환의 발달 또는 이의 재발(유지 치료의 경우에서) 또는 적어도 하나의 이의 임상 또는 준임상적 징후를 저지하는 것, 감소시키는 것 또는 지연하는 것; 또는 (3) 상기 질환을 완화시키는 것, 즉 상기 상태, 장애 또는 증상 또는 적어도 하나의 임상 또는 준임상적 징후의 퇴행을 유발하는 것. 치료되는 개인(individual)에 대한 이점은 통계상으로 유의하거나, 상기 환자 또는 의사가 적어도 인지할 수 있다.

상기 용어들 "환자" 또는 "개인" 또는 "개체"는 본 발명에서 상호교환가능하게 사용되고, 치료되는 포유동물 개체를, 바람직하게는 인간 환자를 나타낸다. 일부 경우에서, 본 발명의 방법은 실험 동물에서, 가축 적용으로, 및 마우스, 랫 및 햄스터를 포함하는 설치류, 및 영장류를 포함하지만, 이에 한정되지 않는 질환에 대한 동물 모델의 개발에서 사용된다.

본 발명에서 정의된 바와 같이, 화합물 또는 제제의 "치료적으로 유효"량(즉, 유효 용량)은 치료적으로(예를 들면, 임상적으로) 원하는 결과를 만들기에 충분한 양을 의미한다. 상기 조성물은 1일 1회 이상 내지 1주 1회 이상으로 투여될 수 있다; 매일 다른 날에 1회를 포함함. 본 기술분야의 통상의 기술자는 상기 질환 또는 질환의 심각성, 이전 치료, 개체의 일반적인 건강 및/또는 나이 및 겪고 있는 다른 질환을 포함하지만, 이에 한정되지 않는 특정한 요인이 개체를 유효하게 치료하기 위하여 필요한 용량 및 시기에 영향을 줄 수 있는 것을 인식할 것이다. 게다가, 개체에 본 발명의 화합물의 치료적으로 유효량의 처리는 단일 처리 또는 연속 처리를 포함할 수 있다.

화합물 또는 제제의 "유효"량(즉, 유효 용량)은 원하는 결과(예를 들면, 임상적으로)를 만들기에 충분한 양을 나타낸다. 일부 구현예에서, 상기 원하는 결과는 지방 조직 또는 지방 축적물의 분해이다. 다른 구현예에서, 상기 원하는 결과는 다양한 조직, 골수, 기관으로부터 줄기세포의 단리이다. 다른 구현예에서, 상기 원하는 결과는 췌장으로부터 췌도 단리이다. 다른 구현예에서, 상기 원하는 결과는 인간 난소 조직으로부터 생존가능한 여포의 단리이다. 다른 구현예에서, 상기 원하는 결과는 심근세포, 섬유아세포 및 수지상세포를 포함하는 다양한 세포 유형을 단리하기 위한 조직 해리이다.

본 발명에서 사용된 바와 같이 상기 용어 "약학적으로 허용가능한 프로드러그(prodrug)"는 본 발명의 공정에 의해 형성된 MMP 화합물의 그 프로드러그를 나타내고, 이는 정상적 의료 평가(sound medical judgment)의 범위 내에서, 과도한 독성, 조사, 알러지 반응 등이 있는 인간 및 하등 동물의 조직과의 접촉에 이용하기에 적합하고, 합리적인 이점/위험 비율에도 상응하며(commensurate), 그들의 의도된 사용에 대해 유효한 것이며, 뿐만 아니라 가능한 경우에는 본 발명의 화합물의 쌍성이온 형태도 나타내는 것이다. 본 발명에서 사용된 바와 같은 "프로드러그"는 본 발명의 화학식에 의해 기술된 임의의 화합물을 제공하기 위하여 대사 수단(예를 들면, 가수분해)에 의해 생체 내에서 변환가능한 화합물을 의미한다. 다양한 형태의 프로드러그가, 예를 들면 Bundgaard,(ed.), Design of Prodrugs, Elsevier(1985); Widder, et al.(ed.), Methods in Enzymology, vol. 4, Academic Press(1985); rogsgaard-Larsen, et al.,(ed). "Design and Application of Prodrugs, Textbook of Drug Design and Development, Chapter 5, 1 13-191(1991); Bundgaard, et ah, Journal of Drug Deliver Reviews, 8:1-38(1992); Bundgaard, J. of Pharmaceutical Sciences, 77:285 et seq. (1988); Higuchi and Stella(eds.) Prodrugs as Novel Drug Delivery Systems, American Chemical Society(1975); and Bernard Testa & Joachim Mayer, "Hydrolysis In Drug And Prodrug Metabolism: Chemistry, Biochemistry And Enzymology," John Wiley and Sons, Ltd.(2002)에 기재된 바와 같이 본 기술분야에 알려져 있다.

본 발명에서 사용된 바와 같이 상기 용어 "약학적으로 허용가능한 염"은 본 발명의 공정에 의해 형성된 상기 화합물의 그 염을 나타내고, 이는 정상적 의료 평가의 범위 내이며, 과도한 독성, 조사, 알러지 반응 등이 없이 인간 및 하등 동물의 조직에 접촉에 이용하기에 적합하고, 타당한 이점/위험 비율과 비례한다. 약학적으로 허용가능한 염은 본 기술 분야에 잘 알려져 있다. 예를 들면, S. M. Berge 등은 J. Pharmaceutical Sciences, 66:1-19(1977)에서 약학적으로 허용가능한 염을 상세하게 설명한다. 상기 염은 본 발명의 분자의 최종 단리 및 정제 동안 제자리에서 제조될 수 있거나, 유리 염기 기능기와 적합한 유기산을 별도로 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 약학적으로 허용가능한 염의 예는 무독성 산 추가 염을 포함하지만, 이에 한정되지 않으며, 무기산, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 인산, 황산 및 과염소산, 또는 유기산, 예컨대 아세트산, 말레산, 타르타르산, 시트르산, 숙신산 또는 말론산으로 형성되거나, 이온 교환과 같은 본 기술 분야에서 사용되는 다른 방법을 이용하여 형성된 아미노기의 염이다. 다른 약학적으로 허용가능한 염은 아디페이트, 알지네이트, 아스코르베이트, 아스파테이트, 벤젠설포네이트, 벤조에이트, 비설페이트, 보레이트, 뷰티레이트, 캄포레이트, 캄포설포네이트, 시트레이트, 시클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실설페이트, 에탄설포네이트, 포메이트, 퓨마레이트, 글루코헵토네이트, 글리세로포스페이트, 글루코네이트, 헤미설페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 히드로디오다이드, 2-히드록시-에탄설포네이트, 락토비오네이트, 락테이트, 라우레이트, 라우릴 설페이트, 말레이트, 말리에이트, 말로네이트, 메탄설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 나이트레이트, 올리에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 설페이트, 타르타르에이트, 티오시아네이트, p-톨루엔설포네이트, 운데카노에이트, 발레르산염 등을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 대표적인 알카리 또는 알카라인 토류 금속염은 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 등을 포함한다. 또한 약학적으로 허용가능한 염은 적절한 때에 무독성 암모늄, 4차 암모늄 및 반대이온, 예컨대 할라이드, 수산화물, 카르복실레이트, 설페이트, 포스페이트, 나이트레이트, 1 내지 6개 탄소 원자를 가지는 알킬, 설포네이트 및 아릴 설포네이트를 이용하여 형성된 아민 양이온을 포함한다.

본 발명에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "키트"는 물질을 전달하기 위한 임의의 전달 시스템을 나타낸다. 상기 용어 "키트"는 연구 및 임상 적용 모두를 위한 키트를 포함한다. 반응 분석에서, 이러한 전달 시스템은 한 장소에서 다른 장소로 반응 시약(예를 들면, 적절한 용기에 올리고뉴클레오티드, 효소 등) 및/또는 지지 물질(예를 들면, 완충액, 분석을 수행하기 위한 서면 설명 등)의 보관, 운반 또는 전달을 허용하는 시스템을 포함한다. 예를 들면, 키트는 관련있는 반응 시약 및/또는 지지 물질을 함유하는 하나 이상의 동봉물(예를 들면, 박스)을 포함한다. 본 발명에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "단편화된 키트"는 총 키트 성분의 일부분(subportion)을 함유하는 2개 이상의 별도의 용기를 포함하는 전달 시스템을 나타낸다. 상기 용기는 대상 수용자에게 함께 또는 별도로 전달될 수 있다. 예를 들면, 제1 용기는 분석에서 사용하기 위한 효소를 함유하면서, 제2 용기는 올리고뉴클레오티드를 함유할 수 있다. 상기 용어 "단편화된 키트"는 연방 식품, 약품 및 화장품 작용(Federal Food, Drug, and Cosmetic Act)의 섹션 520(e) 하에 규정된 분석물 특이적 시약(Analyte specific reagents, ASR's)을 함유하는 키트를 포괄하기 위한 것이다. 실제로, 총 키트 성분의 일부분을 함유하는 각 2개 이상의 별도의 용기를 포함하는 임의의 전달 시스템은 상기 용어 "단편화된 키트"에 포함된다. 대조적으로, "조합된 키트"는 단일 용기(예를 들면, 각 원하는 성분을 하우징한 단일 박스 내에)에 반응 분석의 모든 성분을 함유하는 전달 시스템을 나타낸다. 상기 용어 "키트"는 단편화된 및 조합된 키트를 포함한다.

일반적인 기술

본 발명의 실무에 사용가능한 일반적인 기술의 추가적인 정교화를 위하여 실무자는 표준 교과서 및 세포 생물학, 조직 배양, 발생학 및 생리학에서 리뷰를 참조할 수 있다.

조직 배양 및 배아 줄기세포에 대하여, 독자는 기형암종 및 배아 줄기세포를 참조하는 것을 바란다: A practical approach(E. J. Robertson, ed., IRL Press Ltd. 1987); Guide to Techniques in Mouse Development(P. M. Wasserman et al. eds., Academic Press 1993); Embryonic Stem Cell Differentiation in vitro(M. V. Wiles, Meth. Enzymol. 225:900, 1993); Properties and uses of Embryonic Stem Cells: Prospects for Application to Human Biology and Gene Therapy(P. D. Rathjen et al, Reprod. Fertil. Dev. 10:31, 1998).

분자 및 세포 생화학에서 일반적인 방법은 이러한 표준 교과서로서 분자 클로닝(Molecular Cloning)에서 확인할 수 있다: A Laboratory Manual, 3rd Ed.(Sambrook et al., Harbor Laboratory Press 2001); Short Protocols in Molecular Biology, 4th Ed.(Ausubel et al. eds., John Wiley & Sons 1999); Protein Methods(Bollag et al., John Wiley & Sons 1996); Nonviral Vectors for Gene Therapy(Wagner et al. eds., Academic Press 1999); Viral Vectors(Kaplift & Loewy eds., Academic Press 1995); Immunology Methods Manual(I. Lefkovits ed., Academic Press 1997); and Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures in Biotechnology(Doyle & Griffiths, John Wiley & Sons 1998). 이 개시에서 참조된 유전 조작을 위한 시약, 클로닝 벡터 및 키트는 상업 판매자, 예컨대 BioRad, Stratagene, Invitrogen, Sigma-Aldrich, 및 ClonTech으로부터 구입가능하다.

조성물

매트릭스 메탈로프로테나아제 (MMP)는 콜라겐, 엘라스틴, 라미닌 및 피브로넥틴과 같은 세포외 매트릭스 단백질 소화에 구조적으로 관련하는 아연-의존성 단백질 분해 효소 군이다. 적어도 22 종류 포유류의 MMP-단백질들이 확인되었으며, 이들은 기질 특이성과 도메인 구조를 기초로 하여 분류된다. MMP의 효소 활동은 다양한 세포 타입에서의 유전자 발현에 의해서 뿐만 아니라 그들의 비활성 치모겐(zymogen) 전구체 (proMMP) 활성화 및 메탈로프로테나아제(TIMPs)의 내생 억제제와 조직 억제제의 비활성화에 의해 정확하게 제어된다. 상기 효소는 정상적인 항상성 조직 리모델링 이벤트에서 중요한 역할을 할 뿐만 아니라, 관절염, 치주염, 조직 궤양 등과 같은 다양한 결합 조직 질환에서의 상기 매트릭스의 병리학적 파괴 및 암세포의 침윤과 전이에서 중요한 역할을 한다.

본 발명의 구현예는 하나 또는 그 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP)를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 상기 MMP는 예를 들어, 프로엔자임 형태 (proMMP), 또는 활성 절편을 포함하는 활성화된 상태 또는 비활성 형태일 수 있다. 본 명세서의 다양한 조성물의 구현예에서 상기 MMP는 적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 proMMP를 포함한다. 다른 구현예에서, 본 명세서의 다양한 조성물의 구현예에서 상기 MMP는 적어도 두개의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 이의 proMMP를 포함한다. 다른 구현예에서, 본 명세서의 다양한 조성물의 구현예에서 상기 MMP는 적어도 세개의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 이의 proMMP를 포함한다. 다른 구현예에서, 본 명세서의 다양한 조성물의 구현예에서 상기 MMP는 적어도 네개의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 이의 proMMP를 포함한다. 다른 구현예에서, 본 명세서의 다양한 조성물의 구현예에서 상기 MMP는 적어도 다섯개의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 이의 proMMP를 포함한다. 다른 구현예에서, 본 명세서의 다양한 조성물의 구현예에서 상기 MMP는 적어도 여섯, 일곱 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 이의 proMMP 포함한다.

상술한 바와 같이, 본 명세서의 다양한 조성물의 구현예에서 상기 용어 "MMP" 또는 proMMP"는 달리 언급이 없는 한, 삭제, 치환, 및 절단 뿐만 아니라 이들의 수정된 형태, 유도체, 변형체, 동종 및/또는 이종상동성 유전자, cDNA, RNA, 키메라 분자, 이성질체, 돌연변이 유전자, 접합 변형체 유전자, 유전자 다형체 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 핵산 서열, 아미노산 서열, 활성 절편, 합성 단편, 돌연변이체를 포함한다. 본 명세서의 구현예로서 상기 분자는 이들의 약학적 조성물, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함한다.

우선, 특정 조직 성분, 예를 들면 콜라겐을 분해하는 것이 바람직할 수 있다. 본 발명의 구현예에서, 상기 조성물은 MMP의 활성 및 비활성 형태 모두를 포함한다. 예를 들어, 하나의 MMP가 활성 형태로 존재할 수 있으며, 두번째MMP는 불활성 형태일 수 있다. 상기 비활성 MMP는 예를 들어 활성화제로서 효소를 첨가하여 언제든지 활성화 될 수 있다. 따라서, 하나의 조직 성분이 분해되고, 이어서 다른 성분 등이 따라서 분해될 수 있다.

바람직한 구현예에서, 조성물은 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 이들의 proMMP을 유효량 포함할 수 있으며, 상기 MMP 또는 이들의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP -21, MMP-23A, 23B-MMP, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 이들의 약학적 조성물, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함한다.

바람직한 구현예에서, 조성물은 적어도 두개의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 이들의 proMMP을 유효량 포함할 수 있으며, 상기 MMP 또는 이들의 proMMP는, MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 이들의 약학적 조성물, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함한다.

바람직한 구현예에서, 조성물은 적어도 세개의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 이들의 proMMP을 유효량 포함할 수 있으며, 상기 MMP 또는 이들의 proMMP는, MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 이들의 약학적 조성물, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함한다.

바람직한 구현예에서, 조성물은 적어도 네개, 적어도 다섯개, 적어도 여섯개, 또는 일곱개 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 이들의 proMMP을 유효량 포함할 수 있으며, 상기 MMP 또는 이들의 proMMP는, MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 이들의 약학적 조성물, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함한다.

바람직한 구현예에서, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 프로엔자임(proMMP)은 단백질, 펩티드, 폴리펩티드, 핵산 서열, cDNA, 리보핵산 서열, 키메라 분자, 펩티도 모방체, 펩티드 핵산(PNA), 또는 이들의 조합들을 포함한다.

다른 구현예에서, 상기 조성물은 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 이들의 proMMP을 유효량 포함할 수 있으며, 상기 MMP 또는 이들의 proMMP는, MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-11, MMP- 12, MMP-13, MMP- 19, MMP-25, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 이들의 약학적 조성물, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함한다. 다른 구현예에서 상기 조성물은 적어도 두 개, 적어도 세 개, 넷 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 이들의 proMMP을 유효량 포함할 수 있으며, 상기 MMP 또는 이들의 proMMP는, MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-19, MMP-25, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 이들의 약학적 조성물, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함한다.

바람직한 구현예에서, 조성물은 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 이들의 proMMP을 유효량 포함할 수 있으며, 상기 MMP 또는 이들의 proMMP는, 약학적 조성물에서 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함한다.

바람직한 구현예에서, 조성물은 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 이들의 proMMP을 유효량 포함할 수 있으며, 상기 MMP 또는 이들의 proMMP는, 약학적 조성물에서 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-11, MMP-12, MMP- 13, MMP-19, MMP-25, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함한다.

일부 구현예에서, 어느 하나의 MMP 또는 이들의 프로엔자임(예를 들어, proMMP)의 유효량은 지방 조직을 해리 또는 이화한다. 다른 구현예에서, 임의의 둘 이상의 MMP 또는 이들의 proMMP의 유효량은 지방 조직을 해리 또는 이화한다.

지방 조직 세포외 매트릭스(ECM)는 "소성결합조직"으로 설명된다. 소과 지방 조직 ECM의 형광항체법은 타입 I, III, IV, V, 및 VI형 콜라겐, 라미닌, 및 피브로넥틴을 드러내 보인다. 보다 상세한 프로테오믹 분석은 종에 근거하여 약간의 변수를 가지지만, 콜라겐의 경우는 일정하다. 디코린 또는 다른 프로테오글리건은 지방 조직 ECM에서 중요할 수 있다. 인간 지방 조직 ECM의 정량화는 중요 수위의 산 가용성 콜라겐 및 엘라스틴 뿐만 아니라 낮은 수위의 황산화 글리코아미노글리칸(GAGs)를 나타낸다. 상기 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP)는 콜라겐, 라미닌, 피브로넥틴, 및 엘라스틴을 포함하는 실질적으로 모든 EMC 성분의 분해를 촉진 할 수 있는 효소 군이다. MMP-3 및 MMP-11이 결핍된 쥐들은 야생형 쥐들 보다 지방 조직이 더 성장하는데 반하여 MMP의 넓은 스펙트의 억제는 지방 조직 성장을 손상시킨다. 이것은 MMP가 지방 조직의 리모델링에 참가하는 것을 나타낸다.

상기 지방 조직 ECM 조성물을 고려하면, 일부 구현예에서는 상기 조성물은 효율적인 ECM 의 소화 및 ADSCs의 방출을 위한 MMP의 혼합물을 포함한다. 예를 들어, MMP-1 또는 MMP-8(타입 I 및 III형 콜라겐), MMP-3또는 MMP-19(IV형 콜라겐, 피브로넥틴, 및 라미닌), 및 MMP-2 또는 MMP-9(타입 IV 및 V형 콜라겐)의 조합이 필요할 수 있다. VI형 콜라겐의 소화가 요구되는 경우, MMP-11을 사용할 수 있고, 반면에 엘라스틴 소화는 MMP-12를 필요로 한다.

MMP 및 이들의 특정 기질들의 예로서는 비제한적으로 하기의 것들을 포함한다: MMP-1, 기질은 콜라겐 I, II, III, VII, VIII, X, 젤라틴을 포함함. MMP-2, 기질은 젤라틴, 콜라겐 I, II, III, IV, VII, X를 포함함. MMP-3, 기질은 콜라겐 II, IV, IX, X, XI, 젤라틴을 포함함. MMP-7, 기질은 피브로넥틴, 라미닌, 콜라겐 IV, 젤라틴을 포함함. MMP-8, 기질은 콜라겐 I, II, III, VII, VIII, X, 아그레칸, 젤라틴을 포함함. MMP-9, 기질은 젤라틴, 콜라겐 IV, V를 포함함. MMP-10, 기질은 콜라겐 IV, 라미닌, 피브로넥틴, 엘라스틴을 포함함. MMP-11, 기질은 콜라겐 IV, 피브로넥틴, 라미닌, 아그레칸을 포함함. MMP-12, 기질은 엘라스틴, 피브로넥틴, 콜라겐 IV를 포함함. MMP-13, 기질은 콜라겐 I, II, III, IV, IX, X, XIV, 젤라틴을 포함함. MMP-14, 기질은 젤라틴, 피브로넥틴, 라미닌을 포함함. MMP-15, 기질은 젤라틴, 피브로넥틴, 라미닌을 포함함. MMP-16, 기질은 젤라틴, 피브로넥틴, 라미닌을 포함함. MMP-17, 기질은 피브리노겐, 피브린을 포함함. MMP-18, 콜라게나아제 4, xcol4, Xenopus 콜라게나아제로도 알려져 있음. MMP-19, RASI-1으로도 알려져 있고, 때때로 스트로멜리신(stromelysin)-4라고도 불림. MMP-20, 에나멜리신(enamelysin)으로도 알려져 있음. MMP-21, X-MMP-로도 알려져 있음. MMP-23A (CA-MMP-) 막-결합형 타입-II 막관통 시스테인 배열(array). MMP-23B-막-결합형 타입-I 막관통 시스테인 배열. MMP-24 (MT5-MMP-) 막-결합형 타입-I 막관통 MMP-. MMP-25 (MT6-MMP-) 막-결합형 글리코실 포스파티딜이노시톨(phosphatidylinositol)-부착형. MMP-26, 매트릴리신(Matrilysin)-2, endometase로도 알려져 있음. MMP-27, MMP-22, C-MMP-로도 알려져 있음. MMP-28, 에필리신(epilysin)으로도 알려져 있음.

따라서, 세포 덩어리(예를 들어, 종양), 단백질, 조직 및 기관을 해리하거나, 또는 다양한 조직 및 기관으로부터 다른 세포 유형을 단리하는데 이용되는 MMP의 조성물은 해리되어야 할 세포 덩어리, 단백질, 조직 또는 기관의 유형, 또는 단리용으로 원하는 세포를 포함하는 조직 또는 기관의 해리에 의존하여 변화될 수 있다. 예를 들어, 지방 조직의 효과적인 이화작용을 위한 MMP의 혼합물은 2 이상의 MMP 를 포함하며, 예를 들면, MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-11, MMP-12, MMP-19 및 MMP-25을 포함한다. 본 발명에서는 MMP-1 및 MMP-8이 I-III형 콜라겐의 효율적인 절단 능력을 근거로 하여 선택될 수 있다. MMP-2 및 MMP-9는 IV 및 V형 콜라겐을 절단한다. MMP-3및 MMP-19는 IV형 콜라겐, 피브로넥틴 및 라미닌에 활성을 가지고, MMP-12는 엘라스틴의 절단에 효율적이며, MMP-11은 VI형 콜라겐을 절단한다. MMP는 일반적으로 세린 단백질 분해효소(트립신, 키모트립신)을 이용하여 활성화되고, 이어서 세린 단백질 분해효소 억제제가 된다.

또 다른 구현예에서는 췌장 또는 췌장 조직으로부터 췌도 세포(islet cell)를 단리하기 위한 조성물은 유효량의 적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 비활성 MMP 또는 그의 proMMP을 포함하며, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함한다.

또 다른 바람직한 구현예에서는 췌장 또는 췌장 조직으로부터 췌도 세포(islet cell)를 단리하는 방법으로서 유효량의 둘 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물과 상기 생물학적 시료를 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하며, 상기 조성물은 상기 췌장 또는 췌장 조직을 이화하거나 또는 해리하여서 줄기세포를 단리하는 방법이다. 바람직하게는, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 활성 절편을 포함하는 하나 이상의 MMP, 비활성 MMP 또는 proMMP의 하나 이상의 활성 절편을 선택적으로 포함한다. 또 다른 구현예에서는, 상기 방법은 비활성 MMP 또는 그의 절편을 활성화하는 하나 이상의 제제를 투여하는 것을 더 포함한다.

또 다른 구현예에서, 심장 근육 세포를 단리하기 위한 조성물은 유효량의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 그의 proMMP을 포함하며, 상기 MMP, 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11 , MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함한다. 일부 구현예에서는 상기 조성물은 유효량의 둘 이상, 셋 이상, 넷 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함한다.

또 다른 구현예에서, 조직의 단리를 위한 조성물은 유효량의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 그의 proMMP을 포함하며, 상기 MMP, 또는 그의 proMMP는 MMP-1 , MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함한다. 일부 구현예에서는 상기 조성물은 유효량의 둘 이상, 셋 이상, 넷 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함한다. 상술한 바와 같이 상기 조직은 임의 형태의 조직일 수 있으며, 상기 세포는 임의 형태의 세포일 수 있다. 예를 들어, 섬유아세포(fibroblasts), 수상돌기세포(dendritic cells), 줄기 세포(dendritic cells) 등을 들 수 있다.

또 다른 구현예에서, 인간 난소 조직으로부터 생존 가능한 여포(follicles)의 단리를 위한 조성물은 유효량의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 그의 proMMP을 포함하며, 상기 MMP, 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함한다. 일부 구현예에서 상기 조성물은 유효량의 둘 이상, 셋 이상, 넷 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함한다.

상기 단리된 세포는 상기 조성물의 무독성 때문에 환자의 치료를 위한 다양한 종류의 절차에 이용할 수 있으며, 그 예로서는, 세포의 체외 증폭(ex vivo expansion) 및 개체로의 세포 재주입(re-infusion), 이식, 단리된 세포의 이식, 재생 의료에서의 줄기 세포의 이용, 예를 들어 섬유성 질환 치료 등과 같은 세포 또는 조식 덩어리의 파괴를 들 수 있다.

다른 구현예에서, 조성물은 유효량의 하나 이상의 MMP 또는 그의 proMMP의 하나 이상의 활성 절편을 포함하며, 상기 활성 절편을 포함하고, 상기 활성 절편은 지방 조직을 이화 시킨다. 몇몇 실시예에서 상기 MMP는 활성 또는 비활성 또는 활성 또는 비활성 형태의 MMP의 조합을 포함하는 조성물이다. 다른 구현예에서 상기 조성물은 엔자임과 같은 활성화 제제를 더 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 활성화 제제는 독립적으로 투여되거나 상기 조성물의 성분이 될 수 있다. 다른 실시예에서는 상기 조성물은 약학적 염을 포함한다.

본원에서 구현된 상기 조성물은 하나 이상의 MMP의 다양한 농도, 비율, 유형을 포함한다. 특정 조성물에 존재하는 MMP는. 특정 세포 유형의 단리 또는 조직의 소화 또는 해리를 위한 조직 또는 기관의 유형에 따라서, 조직 및 세포 덩어리 또는 기관 등의 유형, 양 등에 있어서 변화될 수 있다. 예를 들면, 만일 조직이 간질(interstitial) 콜라겐을 포함한다면, "교원 용해(collagenolytic)" MMP-[3중 헬리컬 도메인 내의 하나 이상의 간질 콜라겐(I-III형) 가수분해 촉매의 일종]을 이용할 수 있다. 교원 용해 MMP는 분비된 프로테아제 MMP-1, MMP-2, MMP-8, MMP-9, 및 MMP-13 및 상기 막 결합 단백질 분해효소 MT1-MMP- 및 MT2-MMP-를 포함한다. 이 특정 조직을 소화시키기 위하고, 소망한다면 특정 세포의 단리를 위하여 상기 조성물은 MMP-1 및/또는 MMP-8 (I 및 III형 콜라겐), MMP-3 및/또는 MMP- 19 (IV형 콜라겐, 피브로넥틴, 및 라미닌), and MMP-2 및/또는 MMP-9 (IV형 및 V형 콜라겐)의 조합을 포함한다. 만약 상기 조직이 VI형 콜라겐을 포함한다면, MMP-11가 MMP- 조성물의 성분이 될 수 있다. 만일 엘라스틴 소화가 요구된다면, MMP-12를 이용할 수 있다.

다른 실시예에서, 조성물은 한가지 형태의 MMP 및/또는 그의 프로엔자임 MMP를 포함할 수 있다. 또 다른 실시예에서, 조성물은 두가지 형태의 MMP 및/또는 그의 프로엔자임 MMP를 포함한다. 또 다른 실시예에서, 조성물은 하나 이상의 비활성 MMP를 포함한다. 또 다른 실시예에서, 조성물은 하나 이상의 MMP 또는 그의 프로엔자임, 활성화 제제, 및 그의 억제제를 포함한다. 이러한 구현예에서 상기 조성물은 하나 이상의 활성화 제제(예를 들어, 트립신, 키모드립신, 4-아미노 페닐산화수은 아세테이트(4-aminophenylmercuric acetate)) 또는 또 다른 MMP의 억제제(예를 들어, 메탈로프로테나아제(TIMPs)의 조직 억제제, 마리마스태트(marimastat))를 포함하는 조성물로부터 단리를 유지할 수 있는 MMP, 그의 프로엔자임으로 단리될 수 있다.

예를 들어, MMP는 프로테나아제에 의해 활성화 될 수 있거나, 티올-수정 제제(4-아미노페닐산화수은 아세테이트, HgCl₂ _-, 및 N-에틸마레이미드(ethylmaleimide)), 산화 글루타티온, SDS, 카오트로픽(chaotropic) 제제 및 활성 산소와 같은 제회 화학 제제에 의해 체외에서 활성화 될 수 있다. 낮은 pH 및 가열 처리 또한 활성을 유도할 수 있다. MMP의 단백질 가수분해 활성은 많은 경우에서 단계적이다. 최초 단백질 가수분해 공격은 첫번째 및 두번째 프로펩티드의 나선 사이의 노출된 루프(loop) 지역에서 발생한다. 미끼(bait) 지역의 절단 특이성은 각각의 MMP에서 발견된 서열에 의해서 지시되는 것이다. 상기 프로펩티드의 일부분이 제거되면, 아마도 잔존 프로펩티드를 비안정화시킬 것이며, 이로써 부분적으로 활성화된 MMP 중간체 또는 다른 활성 MMP에 의해 분자간 프로세싱이 가능해진다. 따라서 활성화의 마지막 단계는 MMP에 의해 실시된다.

플라스민에 의한 proMMP의 활성화는 인 비보에서의 적절한 경로이다. 플라스민은 피브린에 결합한 조직 플라스미노겐 활성제(activator) 및 특정 세포 표면 수용체에 결합한 우로키나아제(urokinase)에 의한 플라스미노겐으로부터 생성된다. 플라스미노겐 및 우로키나아제 플라스미노겐 활성제는 모두 막-결합형이고, 이로써 국소적인 proMMP 활성화 및 후속적인 ECM 턴오버가 발생한다. 플라스민은 proMMP-1, proMMP-3, proMMP-7, proMMP-9, proMMP-10, 및 proMMP-13를 활성화 하는 것으로 보고되어 있다. 활성화된 MMP는 다른 MMP의 처리 과정에 참여할 수 있다. 단계적인 활성화 시스템은 파괴 엔자임을 조절하기 위해 더 미세한 조절 메커니즘을 수용할 수 있도록 발전했을 것이다.

대부분의 proMMP는 세포로부터 분비되고, 세포밖에서 활성화된다. 예를 들어, proMMP-11(스트로멜리신(stromelysin) 3)은 퓨린에 의해 세포 내에서 활성화 된다. proMMP-11 는 펩티드 단부의 C-터미날에서의 KX(R/K)R 퓨린 인식 서열을 가진다. 6개의 MP-MMP, MMP-23, 및 에필리신(epilysin)(MMP-28)을 포함하는 몇몇 다른 MMP는 프로펩티드 내에서 유사한 기초 모티프를 가진다. 왜냐하면, 이 단백질들은 활성 효소 인 것 처럼 분비되고, 내인성 억제제에 의한 이들의 유전자 발현 및 억제는 활성의 조절에 중요한 것이다.

TIMPs는 화학양론적으로 MMP와 1:1 로 결합하는 특정한 억제제이다. 네개의 TIMPs(TIMP-1, TIMP-2, TIMP-3, 및 TIMP-4)는 척추동물에서 규명되었으며, 그들의 발현은 발달 및 조직 리모델링 중에 조절된다. MMP 활동의 균형이 무너진 것과 관련된 병리학적 상태 하에서, TIMP 수준의 변화는 그들이 MMP 활성화 수준에 직접적인 영향을 미치기 때문에 중요한 것으로 간주된다.

플라즈마 a-매크로글로불린(macroglobulins)과 같은 단백질은 억제제의 미끼 영역의 단백질 분해 후의 매크로글로불린 내에서 대부분의 프로테나아제를 트랩핑에의해 억제하는 일반적인 엔토펩티다아제의 억제제이다. MMP-1은 용액 내에서 TIMP-1 보다 a2-매크로글로불린에 보다 손쉽게 반응한다.

다른 구현예에서, 상기 MMP 또는 그의 proMMP는 선택적으로 활성 절편을 포함하는 하나 이상의 MMP 또는 그의 proMMP의 활성 절편을 포함하며, 상기 활성 절편은 지방 조직을 이화한다.

다른 구현예에서, 상기 MMP 또는 그의 절편은 활성 또는 비활성 또는 MMP 또는 그의 절편의 조합을 함유하는 조성물이다. 일부 구현예에서 조성물은 하나 이상의 비활성 MMP 또는 그의 절편을 활성화시키는 하나 이상의 제제를 포함한다.

펩티드 : 설명의 목적으로만, 용어 "MMP"는 proMMP 형태, 활성 형태, 비활성 형태, 및 그의 활성 절편을 포함하는 것일 수 있다. 상기 용어는 제한 없이, 대립 유전자 변형체, 종 변형체, 스플라이싱 변형체, 돌연변이체, 절편 등을 포함한다.

구현예에서, 조성물은 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 의 펩티드 또는 단백질, 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체 또는 이들의 임의의 조합들을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 상기 조성물은 약학적으로 허용가능한 제제, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그를 더 포함한다.

일부 구현예에서, 상기 조성물은 적어도 두 개의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP)의 펩티드 또는 단백질, 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 변형체, 돌연변이체 약학적으로 허용가능한 제제, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.

몇몇의 구현예에 있어서, 상기 조성물은 펩티드 또는 3개 이상의 매트릭스 금속 단백질(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임은 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 변형체(variant), 돌연변이체(mutant), 약학적으로 허용 가능한 물질, 이들의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 프로드러그, 또는 이들의 조합을 포함한다.

바람직한 구현예에 있어서, MMP 펩티드는 이들이 "활성" 펩티드라는 점을 포함하여 적어도 5개의 연속 아미노산 잔기를 포함한다. "활성"은 본 명세서에 기재된 공지된 기능들을 포함하는 각 MMP의 하나 이상의 기능을 포함할 뿐만 아니라, 상기 MMP 분자들 또는 최종 사용자에 의한 조작에 따라서 변경될 수 있는 것에 내재되어 있는(innate) 다른 기능을 포함한다.

다른 바람직한 구현예에 있에서, MMP 펩티드는 펩티드 그 자체, 그의 화학적 등가물, 그의 이성질체(예컨대, 이성질체, 입체 이성질체, 레트로(retro) 이성질체, 레트로-인버소(retro-inverso) 이성질체, 올(all)-[D]이성질체, 올-[L]이성질체, 또는 그의 [L] 및 [D] 이성질체의 혼합물), 그 중의 보존적 치환물, 그의 전구체 형태, 그의 내부단백질분해적으로 가공된(endoproteolytically-processed) 형태, N 또는 C 말단 또는 본 발명의 펩티드의 활성 대사물질로부터의 단일 아미노 산들의 분열과 같은, 그의 약학적으로 허용 가능한 염 및 그의 에스테르, 및 번역 후변형(post-translational modification)에 의한 다른 형태들을 포함한다. 또한, 길이가 10, 9, 8, 7, 6, 5 및 4개의 아미노산까지 및 이를 포함하는 (상기 코어 모 서열로부터의 환형, 선형, 또는 분지형인), 특정 서열이 부서열(subsequence)인 임의의 모 서열을 포함한다. 당업자는 어디에서 상기 펩티드가 모노머, 다이머, 트라이머 등일 수 있는지 이해할 수 있다. 본 발명의 펩티드의 이용은 활성 단편 또는 단편이 하나 이상의 결합 대상과 복합화된 펩티드의 이용을 포함한다. 본 발명의 상기 펩티드의 활성을 유지하는 수정된 펩티드는 본 발명의 범위 내에 포함된다.

다른 구현예에 있어서, MMP 펩티드는 하나 이상의 비-천연(non-native) 아미노산 잔기 또는 비 아미노산 분자를 포함한다. "비-천연" 아미노산 잔기는 MMP 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산으로의 변화를 포함한다. 따라서, 비-천연 아미노산 잔기 또는 비 아미노산 분자는 비제한적으로, 화학적 등가물, 아날로그, 합성 분자, 유도체, 변형체(variant), 치환체, 펩티드 핵산, 결합 분자, 무기 분자 등을 포함한다.

돌연변이체는, 핵산 수준 또는 아미노산 수준에서 도입될 수 있다. 특정한 핵산 서열에 있어서, 유전코드의 퇴화로 인해 다수의 기능적으로 동일한 핵산이 소정의 단백질로 암호화 된다. 예컨대, 코돈 GCA, GCC, GCG 및 GCU는 모두 아미노산 알라닌을 암호화한다. 따라서, 알라닌은 코돈에 의해 결정되는 모든 위치에서, 암호화된 폴리펩티드의 변경없이, 상기 코돈은 상응하는 코돈들 중 어느 하나로 변경될 수 있다. 이와 같은 핵산 변이를 "침묵 변이(silent variations)"라고 하며, 이는 보존적으로 변형된 변이의 한 종류이다. 만일 핵산 수준에서의 돌연변이들이 특정 아미노산의 암호화에 도입되면, 하나 이상의 핵산이 바뀌게 된다. 예컨대, 프롤린은 CCC, CCA, CCG, CCU에 의해 암호화 되며, 따라서 염기의 하나의 변화, 즉 CCC(프롤린)가 GCC로 변하면 알라닌이 된다. 따라서, 일례로서 본 명세서에서의 천연 또는 비-천연 폴리펩티드를 암호화하는 모든 천연 또는 비-천연 핵산 서열은 천연 또는 비-천연 핵산의 모든 가능한 침묵 변이에 대해 기술하고 있는 것이다. 당업자는 천연 또는 비-천연 핵산에서의 각 코돈(통상 메티오닌에 대한 유일한 코돈인 AUG, 및 통상 트립토판에 대한 유일한 코돈인 TGC 제외)은 기능적으로 동일한 분자 또는 다른 분자를 얻기 위해 변형할 수 있다는 점을 이해할 수 있다. 따라서, 천연 및 비-천연 폴리펩티드를 암호화하는 천연 및 비-천연 핵산의 각각의 침묵 변이는 각각의 기재된 서열 상에 함축되어 있다.

아미노산 서열에 관하여, 핵산, 펩티드, 폴리펩티드, 단백질 서열에 대한 개별적인 치환, 결실(deletion) 또는 첨가(additon)는 단일 천연 및 비-천연 아미노산 또는 암호화된 서열에서의 적은 백분율의 천연 및 비-천연 아미노산을 변화(alter), 첨가 또는 결실하는 것이며, 상기 변화는 아미노산의 결실, 아미노산의 첨가, 또는 천연 및 비-천연 아미노산의 화학적으로 유사한 아미노산으로의 치환을 일으킨다. 기능적으로 유사한 천연 아미노산을 제공하는 보존적치환의 목록은 당 분야에 널리 알려져 있다. 이와 같은 보존적 변형 변형체(variants) 외에도 본 명세서에 기재된 다형성 변형체, 이종간의 상동체, 및 체계성의 대립 및 조성물들을 배제하지 않는다.

"비-천연 아미노산"은 20개의 공통 아미노산 중의 하나 또는 피롤라이신 또는 셀레노시스테인이 아닌 아미노산을 나타낸다. "비-천연 아미노산"과 같은 의미로 사용될 수 있는 다른 용어들은 "비-천연 암호화 아미노산", "비자연 아미노산", "비-자연-발생 아미노산", 및 그를 다양한 하이픈으로 연결하거나 하이픈으로 연결하지 않은 형태일 수 있다. 상기 용어 "비-천연 아미노산"은, 비제한적으로 자연적으로 암호화된 아미노산(비제한적으로 20개의 공통 아미노산 또는 피롤라이신 및 셀레노시스테인을 포함)의 변형에 의해 자연적으로 발생하지만, 그들 자체적으로는 사용자 조작 없이는 성장하는 폴리펩티드 사슬에는 번역 복합체에 의해서 포함되지는 않는 아미노산을 포함한다. 자연-암호화되지 않은 자연-발생 아미노산의 예는 비제한적으로 N-아세틸글루코사민일-L-세린, N-아세틸글루코사민일-L-acetylglucosaminyl-L-트레오닌, 및 O-포스포티로신을 포함한다. 또한, 용어 "비-천연 아미노산"은 비제한 적으로 자연적으로 발생한 것이 아닌 아미노산 및 합성에 의해 얻어질 수 있거나 또는 비-천연 아미노산의 변형에 의해 얻어질 수 있는 아미노산을 포함한다.

경우에 따라, 상기 비-천연 아미노산 치환체 또는 결합체는 다른 화학적, 물리적, 약학적 및/또는 생물학적 특성에 영향을 미치기 위하여 상기 폴리펩타이드 내에서 다른 첨가, 치환, 또는 결실과 결합될 수 있을 것이다. 경우에 따라, 상기 다른 첨가, 치환, 또는 결실은 상기 폴리펩타이드의 안정도(비제한 적으로 단백직 가수분해저하에 대한 저항을 포함)를 증가시키거나, 또는 그의 적절한 수용기, 리간드 및/또는 결합 단백질에 대한 상기 폴리펩타이드의 친화도를 증가시킬 수 있다. 경우에 따라, 상기 다른 첨가, 치환, 또는 결실은 상기 폴리펩타이드의 용해도를 증가시킬 수 있다. 몇몇 구현예의 위치는 비-천연 아미노산의 결합을 위한 또 다른 위치에 더하여 재조합형 숙주 세포에서의 발현에 이은 상기 폴리펩타이드의 용해도를 증가시키기 위해 자연적으로 암호화된 아미노산 또는 비천연 아미노산과의 치환을 위해 선택될 수 있다. 경우에 따라, 상기 폴리펩타이드는 관련된 리간드, 결합 단백질, 및/또는 수용체와의 친화도를 조절하고, 수용체 이량체화(dimerization)를 조절(비제한적으로 증가 또는 감소를 포함)하며, 수용체 이량체를 안정화하고, 순환하는 반감기를 조절하며, 방출 또는 바이오-가용성을 조절하고, 정제를 촉진하며, 또는 특정 투여 경로를 증가 또는 조절하는, 또다른 부가, 치환 또는 결실을 포함한다. 유사하게, 상기 비-천연 아미노산 폴리펩타이드는 화학적 또는 효소 절단 서열, 프로테아제 절단 순서, 작용군, 항체-결합 영역(비제한 적으로 FLAG 또는 poly-His 포함) 또는 다른 친화 염기 결합 서열(비제한 적으로 FLAG, poly-His, GST 등 포함), 또는 검출(비제한적으로 GFP 포함), 정제, 조직 또는 세포막을 통한 이송, 프로드러그 방출 또는 활성화, 크기 감소, 또는 폴리펩타이드의 다른 특성을 향상시키는 연결된 분자(비제한적으로 바이오틴 포함)를 포함할 수 있다.

본 명세서에 기재된 상기 방법 또는 조성물은 폴리펩티드와 하나 이상의 비-천연 아미노산의 결합을 포함한다. 하나 이상의 비-천연 아미노산은 폴리 펩티드의 활성을 방해하지 않는 하나 이상의 특정 위치에 결합될 수 있다. 이는 비-천연 또는 천연 소수성 아미노산과 소수성 아미노산과의 치환, 비-천연 또는 천연 거대 아미노산과 거대 아미노산과의 치환, 비-천연 또는 천연 친수성 아미노산과 친수성 아미노산과의 치환, 및/또는 활성을 요구하지 않는 위치로의 비-천연 아미노산의 삽입을 비제한 적으로 포함하는 "보존적인" 치환에 의해 달성될 수 있다.

다양한 생화학적 및 구조적인 접근들이 적용되어서, 폴리펩티드 내에서의 비-천연 아미노산으로의 치환을 위한 원하는 위치를 선택할 수 있다. 폴리펩티드 사슬의 어느 위치든 비-천연 아미노산을 포함시키기 위한 선택에 적합하고, 선택은 이론적인 설계에 바탕을 두거나, 또는 어떠한 원하는 목적 또는 특별히 원하는 목적이 없는 경우의 랜덤 선택에 의할 수 있다. 원하는 위치의 선택은 원하는 특성 또는 활성을 가지는 비-천연 아미노산 펩티드(추가적으로 변형되거나 비변형 상태일 수 있음)의 제조에 바탕을 둘 수 있고, 비제한 적으로 작용제(agonist), 과작용제(super-agonist), 부분 작용제(partial agonist), 역작용제(inverse agonist), 길항제(antagonist), 수용체 결합 조절제(receptor binding modulator), 결합 파트너(binding partner)과의 결합의 조절제, 결합 파트너 활성 조절제, 결합 파트너 형태 조절제(conformation modulator), 이량체 또는 다량체 형태, 원 분자와 비교한 활성 또는 특성의 불변, 또는 용해도, 응집력 또는 용해도와 같은 폴리펩티드의 어떤 물리적인 또는 화학적인 특성의 조작을 포함한다. 예컨대, 폴리펩티드의 생물학적 활성을 위해 요구되는 폴리펩티드에서의 위치는 비제한적으로 점 돌연변이 분석, 알라닌 스캐닝 또는 상동 스캐닝 방법을 포함한다. 방법들에 의한 생물학적 활성에 중요한 그들의 확인된 것 외의 잔여물(residue)은 비 제한적으로, 상기 폴리펩티드에 대해 강구된 원하는 활성에 따른 비-천연 아미노산과의 치환을 위한 좋은 후보일 수 있는 알라닌 또는 상동 스캐닝 돌연변이 유발(mutagenesis)을 포함한다. 다르게는, 생물학적 활성에 중요한 상기 확인된 위치들은 또한 다시 상기 폴리펩티드에 대해 강구된 원하는 활성에 따른 비-천연 아미노산과의 치환을 위한 좋은 후보일 수 있다. 다른 대안은 비-천연 아미노산과의 상기 폴리펩티드 사슬에서의 각 위치의 연쇄 치환을 일으키는 것일 수 있고, 상기 폴리펩티드의 활성에의 영향을 관찰하는 것일 수 있다. 어떠한 폴리펩티드로의 비-천연 아미노산과의 치환을 위한 위치를 선택하기 위한 어떠한 수단, 기법, 또는 방법은 본 명세서에 기재된 방법, 기법 및 조성물에 적합하다.

결실을 함유하는 펩티드의 자연적으로 발생된 돌연변이의 구조 및 활성은 비-천연 아미노산과의 치환을 견뎌낼 수 있는 상기 단백질의 영역을 결정하는 것에 의해 시험될 수 있다. 일단 비-천연 아미노산과의 치환을 견뎌낼 수 없는 잔여물이 제거되면, 남아있는 각 위치들에서의 제안된 치환물의 영향은 비제한 적으로 관련 폴리펩티드의 삼차원 구조, 및 관련 리간드 또는 결합 단백질을 포함하는 방법들을 이용하여 시험될 수 있다. 많은 폴리펩티드의 X-선 결정학 및 NMR 구조는 담백질 및 핵산의 큰 분자의 삼차원 구조 데이터를 포함하는 중앙 집중형 데이터 베이스인 프로틴 데이터 뱅크(PDB, rcsb.org)에서 얻을 수 있으며, 비-천연 아미노산과 치환될 수 있는 아미노 산의 위치의 규명에 사용될 수 있다. 또한, 만일 삼차원 구조 데이터가 없을 경우, 모델들은 폴리펩티드의 제 2 차 또는 제 3 차 구조를 조사하여 만들어질 수 있다. 따라서, 비-천연 아미노산과 치환될 수 있는 아미노 산의 위치의 규명은 쉽게 이루어질 수 있다. 비-천연 아미노산의 결합의 예시적인 위치는 비제한적으로 수용기 전위 결합 영역(potential receptor binding region)에서 제외된 것들을 포함하거나, 또는 전체적이거나 부분적으로 용매 노출될 수 있는 결합 단백질 또는 리간드와 결합하기 위한 영역일 수 있고, 최소한의 또는 근처의 잔여물과 수소결합 인력이 없으며, 그리고/또는 그와의 연관 수용체, 리간드 또는 결합 단백질과의 특정 폴리펩티드의 삼차원 결정구조에 의해 예상되는 바와 같이 매우 유연한 영역일 수 있다.

매우 다양한 비-천연 아미노산은 폴리펩티드의 주어진 위치에 대체되거나 포함될 수 있다. 일례로서, 특정 비-천연 아미노산은, 보존적 치환을 선호하는, 관련된 리간드를 갖는 폴리펩티드, 수용체 및/또는 결합 단백질의 삼차원 결정 구조의 평가에 바탕을 둔 도입을 위해 선택될 수 있다.

또한 본 발명의 명세서에 있어서, 본 발명의 펩티드의 "화학적 등가물"은 여기서 기술된 펩티드로서 동일한 원하는 활성도(예컨대, 콜라게나아제 활성(collagenase activity))를 보유한 분자이며, 사소한 화학적 차이를 나타내고, 또는 온화한 조건에서 본 발명의 펩티드로 변환되는 분자(예컨대, 에스테르, 에테르, 환원 생성물, 및 본 발명의 펩티드의 복합체)이다.

또한, 본 발명의 명세서에 있어서, "보존적 치환"은 치환된 아미노산 잔기와 기능적으로 동등한 아미노산 치환이며, 그들이 유사한 극성 또는 입체 배열을 갖기 때문이거나 그들이 치환된 잔여물(예컨대, 소수성, 산성 또는 염기성)로서 같은 유형에 속하기 때문일 수 있다. 본 발명의 명세서에 있어서 상기 용어 "보존적 치환"은 선천면역(innate immunity)의 향상을 위해 본 발명의 펩티드의 기능에 중요하지 않은 영향을 미치는 치환기를 포함할 수 있다. 보존적 치환의 예는 다른 하나(예컨대, 알기닌/리신, 글루타민/아스파라긴, 또는 트레오닌/세린)를 위한 극성(친수성) 잔여물의 치환; 다른 하나(예컨대, 이소류신, 류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 티로신)를 위한 비극성(소수성) 잔여물의 치환, 다른 하나를 위한 산성 잔여물(예컨대, 아스파트 산 또는 글루탐 산)의 치환; 또는 다른 하나를 위한 염기성 잔여물(예컨대, 알기닌, 히스티딘, 리신 또는 오르니틴)의 치환을 포함한다.

본 발명의 명세서에 있어서 상기 용어 "유사체"는 본 명세서에 기술된 서열과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 가지는 펩티드를 포함하고, 적어도 하나의 잔여물은 기능적으로 유사한 잔여물과 보존적으로 치환되어 있다. "유사체"는 기능적인 변형체 및 MMP-펩티드의 아미노산 서열의 명백한 화학적 등가물을 포함한다. 또한, 본 발명의 명세서에 있어서 용어 "기능적인 변형체"는 예컨대, 하나 이상의 간질 콜라겐(interstitial collagen)의 가수분해를 촉진시키는 것과 같은, 효소의 능력을 증명하는 펩티드의 활성을 나타낸다. "유사체"는 또한 본 발명의 명세서에 기재된 유사체의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다.

본 발명의 명세서에서 "유도체"는 기능적 사이드 기(functional side group)의 반응에 의해 화학적으로 유도된 하나 이상의 아미노산을 포함하는 본 발명의 펩티드를 나타낸다. 예시적으로 유도된 분자는 비제한 적으로, 아세틸 기, 아민 염산염, 카보벤조일 기, 클로로아세틸 기, 포르밀 기, p-톨루엔 설포닐 기 또는 t-부틸옥시카보닐 기가 첨가됨에 따라, 자유 아미노기가 염 또는 아미드를 형성하기 위해 유도된 펩티드 분자를 포함한다. 자유 하이드록실 기는 O-아실 또는 O-알킬 유도체를 형성하기 위해 유도될 수 있다. 또한, 자유 카복실 기는 염, 에스터(예컨대 메틸 및 에킬 에스터) 또는 하이드라진을 형성하기 위해 유도될 수 있다. 따라서, "유도체"는 또한 본 발명의 명세서 기술된 유도체의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 MMP peptide는 변형된 C-말단 및/또는 변형된 N-말단을 포함한다. 예컨대, 분리된 펩티드는 아미드화된 C-말단을 가질 수 있다. 예컨대, 상기 아미노 말단은 아세틸화(Ac)될 수 있고, 또는 상기 카르복시 말단은 아미드화(NH2)될 수 있다. 그러나, 본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 본 발명의 펩티드는 바람직하게는 만일 이와 같은 변형이 원하는 활성의 상실을 초래할 경우 아세틸화되지 않을 수 있다. 아미노 말단 변형은 메틸화(즉, ~NHCH3 또는 --NH(CH3)2), 아세틸화, 카보벤조일 기의 첨가, 또는 RCOO―로 정의되는 카복실레이트 기능을 함유하는 차단 기(blocking group)에 의한 아미노 말단의 차단을 포함할 수 있으며, 여기서 R은 나프틸, 아크리디닐, 스테로이딜 및 유사기로 이루어진 군으로부터 선택된다. 카르복시 말단 변형은 카복스아미드 기와 자유 산의 대체 또는 카복시 말단에 구조적인 제한을 도입하기 위한 사이클릭 락탐의 형성을 포함한다.

일 구현예에 있어서, 골격(backbone) 치환은 NH를 NCH₃로 만드는 것과 같이 이루어질 수 있다. 상기 펩티드는 변형(예컨대, 삽입 또는 결실, 또는 절단과 같은 점 돌연변이)을 가질 수 있다. 일례로서, 상기 펩티드는 원하는 활성이 유지되는 한 D 아미노산의 하나 이상의 점 삽입에 의해 변형된 잔기를 포함하는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예컨대, 프롤린 잔여물의 고리 크기가 5원에서 4, 6 또는 7원으로 변화된 프롤린 유사체가 적용될 수 있다. 사이클릭 기는 포화된 것이거나 포화되지 않은 것일 수 있고, 만일 포화되지 않은 것일 경우 방향족이거나 또는 비-방향족일 수 있다.

다른 바람직한 구현예에 있어서, 20개의 유전학적으로 암호화된 아미노산(또는 D 아미노산)의 자연 발생적인 측쇄는 유사한 특상을 가지는 다른 측쇄와 교체될 수 있고, 다른 측쇄로는 예컨대 알킬, 저급 알킬, 사이클릭 4-, 5-, 6-, 및 7-원 알킬 아미드, 아미드 저급 알킬 아미드 디(저급 알킬), 저급 알콕시, 하이드록시, 카르복시 및 그의 저급 에스터 유도체, 및 4-, 5-, 6-, 및 7-원 헤테로사이클을 들 수 있다.

이러한 치환물은 비제한 적으로 (1) 비 표준(non-standard) 양전하 하전 아미노산, 예컨대 오르니틴, Nlys; "N-말단"에 부착된 리신 측쇄를 가지는 N-(4-아미노부틸)-글리신 및 글리신의 아미노기에 아미노프로필 또는 아미노에틸기가 부착된 화합물; (2) 순전하(net charge) 가 없고 알기닌과 유사한 측쇄를 가지는 비 자연 발생적 아미노산, 예컨대, Cit; 시트룰린 및 Hci; 하나 이상의 메틸렌 기를 가지는 시트룰렌; (3) OH를 가지는 비 표준(non-standard) 비 자연 발생적 아미노산(예컨대 세린 등), 예컨대, hSer; 호모세린(하나 이상의 메틸렌기, Hyp; 하이드로프롤린, Val(βOH); 하이드록시발린, Pen; 페니실라민, (Val(βSH); (4) 프롤린 유도체, 예컨대, D-Pro, 예컨대 3,4-데하이드로프롤린, Pyr; 파이로글루타민, 고리에 불소 치환체를 가지는 프롤린, 1,3-티아졸리딘-+카복실 산 (고리에 S를 가지는 프롤린); (5) 히스티딘 유도체, 예컨대, Thi; 베타-(2-티에닐)-알라닌; 또는 (6) 알킬 유도체, 예컨대 Abu; 2-아미노부티르산(Cα 상 에틸 기), Nva; 노르발린(Cα 상 프로필 기), Nle; 노르노이신(Cα 상 부틸 기), Hoi; 호모류신(Cα 상 프로필 기), Aib, 알파-아미노이소부티르산(메틸렌기를 포함하지 않는 발린)을 포함할 수 있다. 당업자는 이러한 모 펩티드/서열의 활성을 유지하는 치환물을 인식할 수 있을 것이다.

또 다른 구현예에 있어서, 상기 C-말단 카복실 기 또는 C-말단 에스터는 각각 사이클릭 펩티드를 형성하기 위한 N-말단 아미노기와 카복실 기 또는 에스터의 상기 ―OH 또는 상기 에스터(―OR)의 내부적 이동에 의해 고리화될 수 있다. 예컨대, 펩티드 산을 주기 위한 합성 및 절단 후, 상기 자유산은 예컨대 메틸렌 클로라이드(CH₂Cl₂). 디메틸포름아미드(DMF) 혼합물 등의 용액 중의 디사이클로헥실카보디이미드(DCC)와 같은 적절한 카복실 기 활성제에 의해 활성화 에스터로 변환될 수 있다. 그 다음, 상기 사이클릭 펩티드는 N-말단 아민과 활성화 에스터의 내부적 이동에 의해 형성될 수 있다. 중합과 대조적으로 내부 고리화(internal cyclization)는 매우 묽은 용액의 사용에 의해 향상될 수 있다. 이러한 방법은 당 분야에 널리 알려져 있다.

본 발명의 펩티드는 고리화되거나, 펩티드의 말단에서의 데스아미노(desamino) 또는 데스카르복시(descarboxy) 잔여물은 포함될 수 있고, 따라서 예컨대 활성화제가 투여되는 시간까지 불활성으로 남아있거나 펩티드의 형태를 제한하기 위한 말단 아미노 또는 카복실기는 없다. 본 발명의 화합물의 C-말단 기능기는 아미드, 아미드 저급 알킬, 아미드 디(저급 알킬), 저급 알콕시, 하이드록시, 및 카복시, 및 그 저급 에스터 유도체, 및 그 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다.

본 발명의 펩티드는 N 및/또는 C 말단 시스테인의 첨가 및 디설파이드 연결 또는 다른 측쇄 상호작용을 통한 펩티드의 고리화에 의해 고리화될 수 있다.

핵산: 본 발명의 구현예는 또한 핵산 서열, MMP, 프로MMP, 그 활성 절편을 암호화하는 핵산을 포함하는 조성물, 돌연변이체, 변형체 또는 그 조합을 포함한다. 상기 MMP- 핵산 서열은 하나 이상의 돌연변이체, 치환물, 결실, 삽입, 변형, 변형된 핵염기, 결합(linkage), 유사체 및 유도체 등을 포함할 수 있다. 상기 용어 "MMP"는 이들 분자들 모두를 포괄할 수 있다. 따라서, MMP-1를 나타낼 때, MMP-1, 단백질, 프로MMP-1, 그의 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 하나 이상의 돌연변이체를 포함하는 MMP-1 핵산 서열, 치환물, 결실, 삽입, 변형, 변형된 핵염기, 결합, 유사체, 및 유도체 등을 포함할 수 있다. 상기 용어 "핵산 서열"은 간결함을 이유로 사용될 수 있고, 제한 없이 단리된(isolated) 핵산 또는 cDNA 서열, 합성되거나 또는 합성의 핵산 서열, 키메라 핵산 서열(chimeric nucleic acid sequence), 상동체(homolog), 이종상동체(ortholog), 변형체, 돌연변이 또는 그 조합을 포함할 수 있다.

몇몇 구현예에 있어서, 조성물은 단리된 핵산 또는 cDNA 서열 또는 합성의 핵산 서열, 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 가지는 발현 벡터를 포함하고, 여기서, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)은 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용되는 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함한다. 몇몇 구현예에 있어서, 상기 조성물은 둘 이상, 또는 셋 이상, 또는 넷 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 암호화하는, 단리된 핵산 또는 cDNA 서열 또는 합성의 핵산 서열을 가지는 발현 벡터를 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, cDNA 서열, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용되는 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함한다. 몇몇 구현예에 있어서, 상기 발현 벡터는 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)의 핵산 서열을 암호화 하고, 여기서 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)은 적어도 약 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 99% 또는 99.9%의 야생형(wild type) 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)와의 서열 일치를 포함한다.

몇몇 구현예에 있어서, 조성물은 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)의 핵산 서열을 포함하고, 여기서 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 프로MMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP- 10, MMP-1 1, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, cDNA 서열, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용되는 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함한다.

특정 구현예에서, 조성물은 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)의 둘 이상의 핵산 서열을 포함하는데, 상기 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)은 다음을 포함한다: MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, cDNA 서열, 돌연변이체, 변형체, 이들의 약학적 조성물, 이들의 약학적으로 허용가능한 염 또는 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합.

특정 구현예에서, 상기 조성물은 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)의 둘 이상, 셋 이상, 넷 이상의 핵산 서열을 포함한다.

특정 구현예에서, 조성물은 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)의 하나의 핵산 서열을 포함하는데, 상기 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)은 야생형 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)과 적어도 약 50%의 서열 동일성을 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 이들의 proMMP는 다음을 포함한다: MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, cDNA 서열, 돌연변이체, 변형체, 이들의 약학적 조성물, 이들의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합.

특정 구현예에서, 상기 조성물은 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP), 활성 절편, cDNA 서열, 돌연변이체, 변형체, 이들의 약학적 조성물, 이들의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합의 둘 이상, 셋 이상, 넷 이상의 핵산 서열을 포함한다.

다른 구현예에서, MMP 핵산 서열은 야생형 MMP 또는 그의 cDNA 서열과 적어도 약 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%의 서열 동일성을 포함한다.

다른 구현예에서, 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP) 핵산 서열은 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 또는 이들의 활성 절편, 또는 cDNA 서열을 포함하며, MMP, 비활성 MMP 또는 이들의 proMMP 핵산 서열은 야생형 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 또는 이들의 활성 절편, 또는 cDNA 서열과 적어도 약 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%의 서열 동일성을 포함한다.

특정 구현예에서, MMP의 핵산 서열은 하나 이상의 돌연변이체, 치환, 결손, 변형체 또는 이들의 조합을 추가로 포함한다.

특정 구현예에서, 돌연변이체, 치환, 결손, 변형체 또는 이들의 조합을 하나 이상 포함하는 MMP 핵산 서열과, MMP의 천연 또는 야생형 또는 cDNA 서열 간의 상동성, 서열 동일성 또는 상보성은 약 50% 내지 약 60%이다. 특정 구현예에서, 상동성, 서열 동일성 또는 상보성은 약 60% 내지 약 70%이다. 특정 구현예에서, 상동성, 서열 동일성 또는 상보성은 약 70% 내지 약 80%이다. 특정 구현예에서, 상동성, 서열 동일성 또는 상보성은 약 80% 내지 약 90%이다. 특정 구현예에서, 상동성, 서열 동일성 또는 상보성은 약 90%, 약 92%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 100%이다.

한 구현예에서, 벡터는, MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 이들의 변형체, 돌연변이체 또는 활성 절편을 포함하는 MMP 또는 이들의 proMMP를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.

한 구현예에서. 하나 이상의 MMP를 발현하는 벡터가 환자에게 투여될 수 있으며, MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 이들의 변형체, 돌연변이체 또는 활성 절편을 포함하는 MMP 또는 이들의 proMMP의 발현은 처치되는 조건과 관련된 조직 또는 단백질을 해리한다.

당업계에 알려지고 본 명세서에 기재된 바와 같이, 많은 벡터가 포유류 세포에 유전자 생성물이 전이되는 것을 매개할 수 있다고 알려져 있다. "벡터"(때로 유전자 전달 또는 유전자 전이 "매체(vehicle)"로 불린다)는 인 비트로 또는 인 비보로 숙주 세포에 전달되는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 분자의 복합체 또는 거대 분자를 의미한다. 전달되는 폴리뉴클레오티드는 유전자 치료에서 관심을 받는 코딩 서열을 포함할 수 있다. 벡터는 예를 들면, (아데노바이러스("AV"), 아데노-연관 바이러스(AAV) 및 수포성 구내염 바이러스(VSV) 및 레트로바이러스와 같은) 바이러스 벡터, 리포솜 및 다른 지질-함유 복합체, 및 폴리뉴클레오티드의 숙주 세포로의 전달을 매개할 수 있는 다른 거대 분자 복합체를 포함한다. 벡터는 유전자 전달 및/또는 유전자 발현을 추가로 조절하거나, 그렇지 않으면 표적 셀에 유리한 특성을 제공하는 다른 성분 또는 기능성을 추가로 포함할 수도 있다. 하기에 더욱 상세하게 기재되고 설명되는 바와 같이, 이러한 다른 성분은 예를 들어 세포에 결합하거나 표적화하는데 영향을 미치는 성분(세포-유형 또는 조직-특이 결합을 매개하는 성분을 포함); 세포에 의한 벡터 핵산의 섭취에 영향을 미치는 성분; (핵 이동을 매개하는 제제와 같이) 섭취 후 세포 내에서 폴리뉴클레오티드의 이동에 영향을 미치는 성분; 및 폴리뉴클레오티드의 발현에 영향을 미치는 성분을 포함한다. 이러한 성분들은, 벡터에 의해 전달된 핵산을 섭취하고 발현하는 세포를 탐지하거나 선택하는데 사용될 수 있는 탐지가능하고/하거나 선택가능한 마커와 같은 마커를 포함할 수 있다. 이러한 성분은 (결합 및 섭취를 매개하는 기능 또는 성분을 갖는 특정 바이러스 벡터를 사용하는 것과 같이) 벡터의 본래 특징으로서 제공될 수 있고, 또는 이러한 기능을 제공하기 위하여 벡터가 변형될 수 있다. 다른 벡터는 Chen et al; BioTechniques, 34:167-171 (2003)에 개시된 것을 포함한다. 매우 다양한 이러한 벡터가 당업계에 알려져 있으며 일반적으로 입수 가능하다.

"재조합 바이러스 벡터"는 하나 이상의 이종 유전자 생성물 또는 서열을 포함하는 바이러스 벡터를 의미한다. 많은 바이러스 벡터가 포장과 관련되어 크기-제한을 나타내기 때문에, 이종 유전자 생성물 또는 서열은 바이러스 게놈의 하나 이상의 부위를 치환함으로써 전형적으로 도입된다. 이러한 바이러스는 복제-결함이 될 수 있고, 바이러스 복제 및 캡시드화(encapsidation)하는 동안 결손된 기능이 트랜스로 제공될 필요가 있다(복제 및/또는 캡시드화에 필요한 유전자 생물을 운반하는 포장 세포주 또는 헬퍼 바이러스를 이용하는 것에 의하여). 변형된 바이러스 벡터로 전달될 폴리뉴클레오티드가 바이러스 입자의 외부로 운반되는 것 역시 개시되어 있다(예를 들어, Curiel, D T, et al. PNAS SS: 8850-8854, 1991 참조).

적합한 핵산 전달 시스템은 바이러스 벡터, 전형적으로, 적어도 하나의 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스(AAV), 헬퍼-의존성 아데노바이러스, 레트로바이러스, 또는 일본-리포솜 혈액응집 바이러스(HVJ) 복합체로부터의 서열을 포함한다. 바람직하게는, 상기 바이러스 벡터는 폴리뉴클레오티드, 예컨대 거대세포 바이러스(CMV) 프로모터에 작동 가능하게 연결된 강한 진핵생물 프로모터를 포함한다.

추가로 바람직한 벡터는 바이러스 벡터, 융합 단백질 및 화학적 컨쥬게이트를 포함하다. 레트로바이러스 벡터는 몰로니 설치류 백혈병 바이러스 및 HIV-계열 바이러스를 포함한다. HIV-계열 바이러스의 바람직한 예는 적어도 두 개의 벡터를 포함하는데, gag 및 pol 유전자는 HIV 게놈에서 유래하고, env 유전자는 다른 바이러스에서 유래한다. DNA 바이러스 벡터가 바람직하다. 이들 벡터는 orthopox 또는 avipox 벡터와 같은 pox 벡터, 단순 포진 바이러스(herpes simplex I virus(HSV)) 벡터와 같은 헤르페스 바이러스 벡터[Geller, A. I. et al ., J. Neurochem, 64:487 (1995); Lim, F., et al ., in DNA Cloning: Mammalian Systems, D. Glover, Ed. (Oxford Univ. Press, Oxford England) (1995); Geller, A. I. et al ., Proc Natl . Acad. Sci .: U.S.A.: 90 7603 (1993); Geller, A. I., et al ., Proc Natl . Acad . Sci. USA: 87:1149 (1990)], 아데노바이러스 벡터[LeGal LaSalle et al ., Science, 259:988 (1993); Davidson, et al ., Nat . Genet . 3: 219 (1993); Yang, et al ., J. Virol. 69: 2004 (1995)] 및 아데노-연관 바이러스 벡터 [Kaplitt, M. G., et al ., Nat. Genet. 8:148 (1994)]를 포함한다.

Pox 바이러스 벡터는 유전자를 세포질 내로 도입한다. Avipox 바이러스 벡터는 핵산의 단기 발현만 일으킨다. 아데노바이러스 벡터, 아데노-연관 바이러스 벡터 및 단순 포진 바이러스(HSV) 벡터는 특정 발명 구현예에 대해서는 표지(indication)가 될 수 있다. 아데노바이러스 벡터는 아데노-연관 바이러스보다는 단기 발현 (예컨대 약 한달 미만)을 일으키지만, 특정 구현예에서는 보다 긴 기간의 발현을 나타낼 수 있다. 선택된 특정 벡터는 표적 세포와 처치되는 조건에 의존할 것이다. 적절한 프로모터의 선택은 용이하게 달성될 수 있다. 바람직하게는, 고발현 프로모터를 사용한다. 적합한 프로모터의 예는 763 염기 쌍의 거대세포 바이러스(CMV) 프로모터이다. 라우스 육종 바이러스(RSV) (Davis, et al ., Hum Gene Ther 4:151 (1993)) 및 MMT 프로모터도 사용될 수 있다. 특정 단백질은 그들의 고유 프로모터를 사용하여 발현될 수 있다. tat 유전자 및 tar 요소와 같이 높은 수준의 발현을 일으키는 시스템 또는 증강제와 같은, 발현을 증강시킬 수 있는 다른 요소도 포함될 수 있다. 다음, 이 카세트는 벡터, 예컨대 pUC19, pUC118, pBR322 또는 다른 알려진 플라스미드 벡터와 같은 플라스미드 벡터 내에 삽입될 수 있으며, 예를 들어 E. coli 복제 원점을 포함한다. Sambrook, et al ., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory press, (1989) 참조. 마커 폴리펩티드가 처치되는 생체의 대사에 부정적인 영향을 미치지 않는다면, 플라스미드 벡터는 암피실린 내성에 대해 β-락타마아제 유전자와 같은 선택 가능한 마커를 포함할 수도 있다. 이 카세트는 합성 전달 시스템에서 핵산 결합 모이어티에 결합될 수도 있다.

원한다면, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 양이온성 리포솜 및 아데노바이러스 벡터와 같은 마이크로전달 매체와 함께 사용될 수도 있다.

복제-결함 재조합 아데노바이러스 벡터는 공지의 기술에 따라 생산될 수 있다. Quantin, et al ., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 89:2581-2584 (1992); Stratford-Perricadet, et al ., J. Clin . Invest . 90:626-630 (1992); 및 Rosenfeld, et al., Cell, 68:143-155 (1992) 참조.

MMP의 발현은 당업계에 알려진 임의의 프로모터/증강제 요소에 의해 제어될 수 있지만, 이들 조절 요소는 발현을 위해 선택된 숙주 내에서 기능적이어야 한다. MMP-유전자 발현을 제어하는데 사용될 수 있는 프로모터는 거대세포 바이러스(CMV) 프로모터(U.S. 특허 번호 5,385,839 및 5,168,062), SV40 초기 프로모터 영역(Benoist and Chambon, 1981, Nature 290:304-310), 라우스 육종 바이러스의 3' 장말단 반복부 내에 함유된 프로모터(Yamamoto, et al ., Cell 22:787-797, 1980), 헤르페스 티미딘 키나아제 프로모터(Wagner et al ., Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A. 78:1441-1445, 1981), 메탈로티오닌 유전자의 조절 서열(Brinster et al ., Nature 296:39-42, 1982); β-락타마제 프로모터(VIIIa-Kamaroff, et al ., Proc . Natl. Acad . Sci . U.S.A. 75:3727-3731, 1978) 또는 tac 프로모터(DeBoer, et al ., Proc. Natl . Acad . Sci . U.S.A. 80:21-25, 1983)와 같은 원핵 발현 벡터; Gal 4 프로모터, ADC(알코올 탈수소효소) 프로모터, PGK(포스포글리세롤 키나제) 프로모터, 알칼리성 포스파타아제 프로모터와 같은 효모 또는 기타 진균 유래의 프로모터 요소; 및 형질전환 동물에 조직 특이성을 보이며 이용되어 온 동물 전사 제어 영역: 췌장 꽈리 세포 내에서 활성이 있는 엘라스타아제 I 유전자 제어 영역(Swift et al., Cell 38:639-646, 1984; Ornitz et al ., Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50:399-409, 1986; MacDonald, Hepatology 7:425-515, 1987); 췌장 베타 세포 내에서 활성이 있는 인슐린 유전자 제어 영역(Hanahan, Nature 315:115-122, 1985), 림프성 세포 내에서 활성이 있는 이뮤노글로블린 유전자 제어 영역(Grosschedl et al ., Cell 38:647-658, 1984; Adames et al ., Nature 318:533-538, 1985; Alexander et al ., Mol . Cell . Biol 7:1436-1444, 1987), 고환, 유방, 림포이드성 및 비만 세포 내에서 활성이 있는 마우스 유방 종양 바이러스 제어 영역(Leder et al ., Cell 45:485-495, 1986), 간 내에서 활성이 있는 알부민 유전자 제어 영역(Pinkert et al ., Genes and Devel . 1:268-276, 1987), 간 내에서 활성이 있는 알파-페토프로테인 유전자 제어 영역(Krumlauf et al ., Mol . Cell . Biol . 5:1639-1648, 1985; Hammer et al ., Science 235:53-58, 1987), 간 내에서 활성이 있는 알파 1-안티트립신 유전자 제어 영역(Kelsey et al ., Genes and Devel . 1:161-171, 1987), 골수 세포 내에서 활성이 있는 베타-글로빈 유전자 제어 영역(Mogram et al ., Nature 315:338-340, 1985; Kollias et al ., Cell 46:89-94, 1986), 뇌 속의 흰돌기교세포 내에서 활성이 있는 마이엘린 염기성 단백질 유전자 제어 영역(Readhead et al ., Cell 48:703-712, 1987), 골격근 내에서 활성이 있는 마이오신 라이트 체인-2 유전자 제어 영역(Sani, Nature 314:283-286, 1985), 및 시상하부 내에서 활성이 있는 성선자극 방출 호르몬(Mason et al ., Science 234:1372-1378, 1986)을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다.

매우 다양한 숙주/발현 벡터 조합이 본 발명의 DNA 서열을 발현하는데 사용될 수 있다. 예를 들어 유용한 발현 벡터는 염색체, 비염색체 및 합성 DNA 서열의 세그먼트로 구성될 수 있다. 적합한 벡터는 SV40의 유도체 및 알려진 세균 플라스미드, 예를 들어 E. coli 플라스미드 col El, pCRl, pBR322, pMal-C2, pET, pGEX (Smith et al ., Gene 67:31-40, 1988), pMB9 및 그들의 유도체, RP4와 같은 플라스미드; 파지 DNAs, 예를 들어 NM989와 같은 파지 1의 다양한 유도체 및 M13 및 섬유상 단일 가닥 파지 DNA와 같은 다른 파지 DNA; 2μ 플라스미드 또는 그의 유도체와 같은 효모 플라스미드, 곤충 또는 포유류 세포에 유용한 벡터와 같은 진핵 세포에 유용한 벡터; 파지 DNA를 이용하기 위해 변형되어 온 플라스미드 또는 기타 발현 제어 서열과 같은 플라스미드와 파지 DNA의 조합으로부터 유래된 벡터; 등을 포함한다.

MMP를 발현하기 위해 본 발명에 따라 효모 발현 시스템을 이용할 수도 있다. 예를 들어, 두 가지만 언급하면, 비융합 pYES2 벡터(XbaI, SphI, ShoI, NotI, GstXI, EcoRI, BstXI, BamHl, SacI, KpnI, 및 HindⅢ 복제 부위; Invitrogen) 또는 융합 pYESHisA, B, C(XbaI, SphI, ShoI, NotI, BstXI, EcoRI, BamHl, SacI, KpnI, 및 HindⅢ 복제 부위, ProBond 수지로 정제되고 엔테로키나제로 절단된 N-말단 펩티드; Invitrogen)가 본 발명에 따라 이용될 수 있다. 본 발명에 따라 효모 이중-교잡 발현 시스템이 준비될 수 있다.

하나의 바람직한 전달 시스템은 하나 이상의 폴리뉴클레오티드, 바람직하게는 약 하나의 폴리뉴클레오티드를 내부에 결합시킨 재조합 바이러스 벡터이다. 바람직하게는, 본 발명 방법에 이용되는 바이러스 벡터는 약 10⁸ 내지 약 5×10¹⁰ pfu의 pfu(plaque forming unit)를 갖는다. 폴리뉴클레오티드가 비바이러스 벡터와 함께 투여되는 구현예에서 약 0.1 나노그램 내지 약 4000 마이크로그램, 예를 들어 약 1 나노그램에서 약 100 마이크로그램을 사용하는 것이 종종 유용하다.

용도, 제형, 투어

상기 조성물은 인 비트로 및 인 비보에서, 다양한 절차 및 방법에서 유용하다. 예를 들어 줄기 세포 단리, 췌장에서 섬세포 단리, 또는 임의의 조직 또는 기관에서 임의 유형의 세포 단리, 선택 조직의 분해, 조직 또는 세포성 매스(cellular mass)의 분해, 조직 성분 또는 조직 지지체(예: 피브린, 콜라겐, 엘라스틴 등)의 분해, 화장품 용도, 예를 들어 지방 축적, 셀룰라이트 등의 촉매 작용 등.

줄기 세포 : 하나의 바람직한 구현예에서, 췌장에서 섬세포를 단리하는 방법은 유효량의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 그의 proMMP를 포함하는 조성물을 췌장과 접촉하는 것을 포함하는데, 상기 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 이들의 약학적 조성물, 이들의 약학적으로 허용가능한 염 또는 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 췌장은 MMP 칵테일로 관류될 수 있고, 또는 췌장은 본 명세서에 구현된 상기 조성물로 배양하기 전에 슬라이스 될 수 있으며, 섬세포는 당업계에 알려진 방법에 의해 단리되고 정제될 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 조성물은 둘 이상, 셋 이상, 넷 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함한다.

다른 바람직한 구현예에서, 다양한 세포 유형을 단리하기 위해 조직 또는 기관을 해리하는 방법은 유효량의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 그의 proMMP를 포함하는 조성물을 상기 조직 또는 기관과 접촉하는 것을 포함하는데, 상기 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 이들의 약학적 조성물, 이들의 약학적으로 허용가능한 염 또는 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 조성물은 둘 이상, 셋 이상, 넷 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함한다.

상기 조직 또는 기관은 MMP 칵테일(둘 이상의 MMP 분자의 조합)로 관류될 수 있고, 또는 상기 기관은 본 명세서에 구현된 상기 조성물로 배양하기 전에 슬라이스 될 수 있으며, 원하는 세포는 당업계에 알려진 방법에 의해 단리되고 정제될 수 있다. 세포 유형의 예는 한정 없이 심장근육 세포, 섬유 아세포, 가지 세포, 난소 조직의 소포 등을 포함한다.

한 구현예에서, 지방 조직으로부터 줄기 세포를 단리하는 방법은 유효량의 적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 그의 proMMP를 포함하는 조성물을 상기 지방 조직과 접촉하는 것을 포함하는데, 상기 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 이들의 약학적 조성물, 이들의 약학적으로 허용가능한 염 또는 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하고, 상기 조성물은 상기 조직을 이화함으로써 조직으로부터 줄기 세포를 단리한다. 특정 구현예에서, 상기 조성물은 둘 이상, 셋 이상, 넷 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함한다.

한 구현예에서, 생물학적 시료로부터 줄기 세포를 단리하는 방법은 유효량의 적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 그의 proMMP를 포함하는 조성물을 상기 생물학적 시료와 접촉하는 것을 포함하는데, 상기 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 이들의 약학적 조성물, 이들의 약학적으로 허용가능한 염 또는 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 예를 들어, 상기 생물학적 시료는 제대혈, 골수, 뼈, 태반, 지방 조직, 췌장, 심장 등일 수 있다. 제대혈 내의 줄기 세포의 예: (a) 체세포; (b) 간엽 줄기 세포; (c) 혈관내피 전구 세포 및 혈관신생 촉진 세포; 및 (d) 조혈 줄기 세포. 특정 구현예에서, 생물학적 시료는 상피, 결합 조직, 지방 조직, 내피, 기저막, 기저판, 심장 조직, 심내막, 첨단막, 기저외측막, 세포외 기질, 치밀성 결합 조직, 섬유성 결합 조직, 후각 상피, 소성 결합 조직, 뮤신, 중피, 간질, 세망 결합 조직, 골수, 혈액, 혈관, 림프 조직, 폐, 심혈관 조직, 뇌 조직, 뇌척수 조직 및 체액, 뇌혈관 조직 및 체액, 신경 조직, 뇌, 뼈 조직, 피부, 근육, 췌장 조직, 난포, 제대혈 조직, 태반, 소장 내벽, 뇌 조직, 척추 조직, 심혈관 조직, 결합 조직, 뇌척수 체액 또는 조직, 골수, 진피, 혈액, 골막, 섬유증 조직, 반흔(scar) 조직, 또는 임의의 기관 조직을 포함한다.

조직으로부터 단리될 수 있는 줄기 세포 또는 전구체는 예를 들어 말초 혈액 줄기 세포(PBSC), 골수(골수 세포; BMC)로부터 단리되는 줄기 세포; 지방 조직으로부터 단리되는 줄기 세포; 간엽 줄기 세포(MSC), 제대혈, 생리 유체, 심장 유래 세포, 배아 줄기 세포, CD30⁺ 세포, CD34⁺ 세포, CD34^- 세포, CD9⁺ 세포, CD29⁺ 세포, CD44⁺ 세포, CD45⁺ 세포, CD49⁺ 세포, CD54⁺ 세포, CD56⁺ 세포, CD59⁺ 세포, CD71⁺ 세포, CD90⁺ 세포, 예를 들어, CD90.1⁺ 또는 CD90.2⁺ 세포, CD105⁺ 세포, CD133⁺ 세포, CD135⁺ (flt-3⁺) 세포, CD140a⁺ 세포, CDCP1⁺ 세포, CD146⁺ (muc-18⁺) 세포, ABCG2⁺ 세포, CD144⁺ 세포, 태아 간 키나제 1⁺ 세포, Stro-l⁺ 세포, CD117⁺ (c-kit⁺) 세포, nestin⁺ 세포, PSA-NCAm⁺ 세포, CD30⁺ 세포, p75neurotophin⁺ 세포, CD106⁺ 세포, CD120a⁺ 세포, CD124⁺ 세포, CD166⁺ 세포, 줄기 세포 인자⁺ (SCF⁺) 세포, Sca-1⁺ 세포, SH2⁺ 세포, SH3⁺ 세포, HLA, 예를 들어, HLA-ABC 세포, 골 형성 단백질⁺ (BMP) 세포, 예를 들어, BMP2⁺ 및 BMP4⁺ 세포, Gap43⁺ 세포, 아교 섬유성 산성 단백질⁺ (GFAP⁺) 세포, 마이엘린 염기성 단백질⁺ (MBP⁺) 세포, 04⁺ 세포, 01⁺ 세포, 시냅토파이신⁺ 세포, 알칼리성 포스파타아제⁺ 세포, 크립토⁺ (TDGF-1⁺) 세포, 포도칼리신⁺ 세포, 황화 프로테오글리칸⁺ 세포, 예를 들어, 실릴화 케라틴 설페이트 프로테오글리칸⁺ 세포, 단계-특이적 배아 항원⁺ (예컨대, SSEA-1, -3 및 -4) 세포, TRA-l-60⁺ 세포, TRA-1-81⁺ 세포, 오스테오칼신⁺ 세포, 매트릭스 gla 단백질⁺ 세포, 오스테오폰틴⁺ 세포, Thyl⁺ 세포, 콜라겐 타입 Ⅱ⁺ 세포, 콜라겐 타입 IV⁺ 세포, 지방산 수송체⁺ 세포, 및 β1 인테그린⁺ 세포로부터 단리되는 줄기 세포를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

중간엽 줄기 세포(Mesenchymal stem cells, MSCs)는 특히 골수, 혈액, 피부 및 골막(periosteum)에서 발견되고, 사이토카인과 같은 생존도 인자로부터의 다양한 영향에 따라 하나 이상의 특정 유형의 중간엽 또는 결합 조직(예컨대, 분화된 요소들, 예를 들어, 지방 조직, 골 조직, 간질(stroma), 연골 조직, 탄성 조직, 섬유 결합 조직을 지지하는 신체의 조직)으로 분화할 수 있는 발달에 중요한 만능성의 미분화 세포이다.

대략적으로, 플라스틱에 부착되는 인간 골수 천자 세포들(human marrow aspirate cells) 중 30%가 MSCs로 여겨진다. 이러한 세포들은 인 비트로에서 확장된 다음 분화가 유도된다. 성체 MSCs가 인 비트로에서 확장될 수 있고 자극되어 골 세포, 연골 세포, 힘줄 세포 또는 지방 세포를 형성할 수 있다는 사실은 그것들을 조직 공학 및 유전자 치료 전략에 매력적이게 한다. 인 비보 분석은 MSC 기능을 분석하도록 개발되어 왔다. 순환기로 주입된 MSCs는 상술된 수 많은 조직들로 통합될 수 있다. 특히, 골격 및 심장 근육은 5-아자시티딘에 노출시킴으로써 유도될 수 있고, 배양 중인 쥐 및 인간의 MSCs의 신경 분화는 β-메르캅토에탄올, DMSO 또는 뷰틸하이드록시아니솔에 노출시킴으로써 유도될 수 있다[Woodbury (2000) J. Neurosci. Res. 61 :364-370]. 더욱이, MSC-유도 세포는 쥐 뇌로 인간 MSCs의 직접 주사 후 뿐만 아니라, 말초 주사 후에도 뇌의 깊숙한 곳으로 통합되는 것으로 보인다; 그것들은 발달상 신경 줄기 세포의 이동 과정에서 이용되는 경로를 따라 이동하여 넓게 분포되고 HSC 분화의 마커를 상실하기 시작한다[Azizi (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:3908-3913]. 중간엽 줄기 및 계통-특이적 세포 증식을 촉진시키는 방법은 미국 등록특허 제6,248,587호에 개시되어 있다.

인간 중간엽 줄기 세포(hMSCs)의 표면 상에 있는, 미국 등록특허 제5,486,359호에 개시된 SH2, SH3 및 SH4와 같은 항원결정부는 예를 들어 골수에 존재하는 바와 같이 이종이 혼합된 세포 집단에서 중간엽 줄기 세포 집단을 선별 및 포획하는 시약으로 이용될 수 있다. 전구체 중간엽 줄기 세포는 CD45에 양성이다. 이러한 전구체 중간엽 줄기 세포는 다양한 중간엽 계통으로 분화될 수 있다.

다른 바람직한 구현예에서, 분리된 줄기 세포는 배아 줄기 세포, 성체 줄기 세포, 제대혈 줄기 세포, 체세포 줄기 세포, 암 줄기 세포, 또는 심장 줄기 세포이다.

추가적으로, 본 발명의 줄기 세포는 조혈 줄기 세포 도는 중간엽 줄기 세포일 수 있다. 본 발명의 줄기 세포는 전능성(totipotent), 만능성(pluripotent), 다능성(multipotent) 또는 단능성(unipotent) 줄기 세포이다. 본 발명의 줄기 세포는 1차 줄기 세포일 수 있고, 확립된 줄기 세포주, 전암성 줄기 세포주, 암 줄기 세포주 또는 임의의 줄기 세포 마커를 나타내는 모든 세포주로부터 유래한 것일 수 있다. 1차 줄기 세포는 암 환자 또는 건강한 환자로부터 유래한 것일 수 있다.

본 발명의 이러한 측면에 따라 바람직한 줄기 세포는 인간 줄기 세포이다.

일부 구현예들에서, 상기 줄기 세포는 지방 조직에서 분리된다. 상기 줄기 세포는 CD44, CD73, CD90, CD105 또는 이들의 조합을 포함하는 마커에 의해 확인된다.

지방, 지방 침착물 , 셀룰라이트 : 상기 조성물은 지방 침착물을 감소시키거나 예를 들어 지방종과 같은 지방 침착물과 관련된 질환의 치료를 위한 미용 목적으로 이용될 수 있다. 지방 저장물의 축적은 신체에 불균일하게 일어날 수 있다. 예를 들어, 일부 사람들은 복강에 주로 지방이 축적될 수 있는 반면, 다른 사람들은 피하 조직에 주로 축적될 수 있다. 넓적다리 및 둔부 측면(lateral buttocks)에 지방을 축적하는 여성과 허리에 지방을 축적하는 남성과 같이, 성별의 차이 또한 뚜렷이 나타날 수 있다. 여성은 주름이 있거나 또는 "오렌지 껍질 같은(peau-de-orange)" 외관을 가진 넓적다리의 지방성 침착물을 축적하여 셀룰라이트라고 불리는 상태에 이를 수 있다. 셀룰라이트는 종종 지방 유두로 지칭되는 피하 지방 이탈층을 생기게 하는 피부 구조물과 관련된 것일 수 있다. 셀룰라이트와 관련이 있을 수 있는 다른 요인으로는 변경 및/또는 감소된 결합 조직 격막(septae), 유체 축적을 일으키는 혈관 및 림프 변화 및 염증을 포함한다. 지방 조직은 또한 지방종으로 알려진 섬유성 지방 침착물의 형태로 축적될 수 있다. 지방 저장물의 활용은 불균일하게 일어날 수 있다. 실제 체중 감량을 한 개인은 건강에 좋지 않은 방식으로 과도하게 체중 감량을 달성한 것이 아니라면, 여전히 감량에 내성을 가진 지방 축적의 국부적인 포켓(pocket)을 가질 수 있다. 운동이 피하의 지방 저장물에 다르게 영향을 미칠 수 있는데, 심부 조직은 지방 분해로 반응을 보이지만, 표면 저장물은 보다 큰 내성을 띨 수 있다. 또한 체중 감량에도 불구하고 셀룰라이트는 여전히 존재할 수 있으며, 전형적으로 지방종은 체중 감량에 의해 영향을 받지 않는다.

본 발명에서는 국부적 지방, 지방 조직, 셀룰라이트 및 지방세포 감소 치료법을 달성하기 위한 약학적 조성물, 제형, 방법 및 시스템이 제공된다.

일부 구현예에서, 필요한 개체(예컨대, 비만을 겪고 있는 개체)에서 국부적인 지방 침착물을 감소시키는 방법은, 유효한 양의 적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(matrix metalloproteinase, MMP) 또는 그의 proMMP를 포함하는 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하고, 상기 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1 , MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP- 10, MMP-1 1, MMP- 12, MMP- 13, MMP- 14, MMP-15, MMP- 16, MMP- 17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체(mutants), 변종(variants), 그의 약학적 조성물, 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 프로드러그, 또는 그의 모든 조합을 포함하며, 상기 국부적인 지방 침착물은 감소된다.

일 구현예에서는, 필요한 개체(예컨대, 비만을 겪고 있는 개체)에서 국부적인 지방 침착물을 감소시키는 방법이, 유효한 양의 적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 그의 proMMP를 포함하는 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하고, 상기 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-19, MMP-25, 활성 절편, 돌연변이체(mutants), 변종(variants), 그의 약학적 조성물, 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 프로드러그, 또는 그의 모든 조합을 포함하며, 상기 국부적인 지방 침착물은 감소된다. 일부 구현예에서는, 상기 조성물이 둘 이상, 셋 이상, 넷 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그들의 프로엔자임(proMMP)을 포함한다.

구현예에서, 상기 약학적 조성물은 비경구, 국소, 근육내, 피하 또는 경피성 경로의 투여에 의해 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 상기 약학적 조성물은 국부적인 지방 침착물에, 또는 그 근처에 투여될 수 있다.

일 구현예에서, 증가된 지방 조직과 관련된 증상(condition)을 가진 개체를 치료하는 방법은, 유효한 양의 적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 그의 proMMP를 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하고, 상기 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP- 15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체(mutants), 변종(variants), 그의 약학적 조성물, 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 프로드러그, 또는 그의 모든 조합을 포함하며, 상기 조성물은 지방 조직을 이화한다. 일부 구현예에서는, 상기 조성물이 둘 이상, 셋 이상, 넷 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그들의 프로엔자임(proMMP)을 포함한다.

구현예에서, 상기 MMP 또는 그의 proMMP가 선택적으로 활성 절편을 포함하는 하나 이상의 MMP 또는 proMMP의 하나 이상의 활성 절편을 포함하고, 상기 활성 절편은 지방 조직을 이화한다. 지방 조직 증가와 관련된 증상의 예는 셀룰라이트, 지방 침착물, 지방종, 비만, 당뇨, 대사 질환, 또는 이들의 조합을 포함한다. 따라서 상기 조성물은 미용 또는 건강 중 어느 이유로든 모든 지질 또는 지방 침착물을 이화하는데 효과적이다.

일부 구현예에서는, 상기 조성물이 피하 또는 근육내 주사를 통해 국지적으로 투여된다. 일부 구현예에서는, 하나 이상의 MMP 또는 proMMP가 캡슐화되어 개체에 한번 투여된 후 시간의 경과에 따라 방출된다.

일부 구현예에서는, 약학적으로 유효한 양의 지방 조직을 이화하기 위한 적어도 하나의 화합물을 포함하는 약학적 조성물 또는 서방형 약학적 조성물이 투여된 개체에, 지방흡입술 과정이 수행될 수 있다.

조직, 단백질, 기질, 기관 : 다른 구현예에서는, 본 발명에서 구체화한 상기 조성물이 단백질, 기질, 조직 또는 기관을 해리시킨다. 바람직한 구현예에서, 조직을 해리하는 방법은 상기 조직을 유효한 양의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그들의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그들의 프로엔자임(proMMP)은 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체(mutants), 변종(variants), 그의 약학적 조성물, 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 프로드러그, 또는 그의 모든 조합을 포함한다. 상기 조직의 비-제한적인 예는 상피 조직(epithelium), 결합 조직, 지방 조직, 내피 조직(endothelium), 기저막(basement membranes), 기저판(basal lamina), 심장 조직, 심장 내막(endocardium), 첨단막(apical membrane), 혈관 측막(basolateral membrane), 세포외기질, 조밀 결합 조직, 섬유성 결합 조직, 후각 상피 조직(olfactory epithelium), 소성 결합 조직(loose connective tissue), 점액소(mucins), 중피 조직(mesothelium), 간질(stroma), 망상 결합 조직(reticular connective tissue), 골수, 혈액, 혈관, 림프 조직, 폐, 심혈관 조직, 뇌 조직, 뇌척수 조직(cerebrospinal tissues) 및 뇌척수액, 뇌혈관 조직(cerebrovascular tissues) 및 뇌혈관액, 신경 조직, 뇌, 골 조직, 피부, 근육, 췌장 조직, 난소 여포(ovarian follicles), 제대혈 조직, 태반(placenta), 장 내벽(intestine lining), 뇌 조직, 척추 조직, 심혈관 조직, 결합 조직, 뇌척수 조직(cerebrospinal tissue) 또는 뇌척수액, 골수, 피부, 혈액, 골막(periosteum), 섬유증 조직(fibrotic tissue), 반흔 조직(scar tissue), 또는 모든 기관 조직을 포함한다. 조직 또는 기관의 특이적인 공급원은 제한없이 지방(adipose/fat), 부신(adrenal), 골, 뇌, 연골, 결장, 내피, 상피, 눈, 심장, 장, 신장, 간, 폐, 림프절, 유방, 기타 근육(miscellaneous muscle), 신경, 췌장, 이하선(parotid), 뇌하수체, 전립선, 생식기, 스케일(scales), 피부, 비장, 뇌 줄기, 흉선, 갑상선/부갑상선, 편도 또는 암을 포함한다.

다른 바람직한 구현예에서는, 단백질 매트릭스(protein matrix)을 해리하는 방법이 상기 단백질 기질을 유효한 양의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그들의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그들의 프로엔자임(proMMP)은 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체(mutants), 변종(variants), 그의 약학적 조성물, 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 프로드러그, 또는 그의 모든 조합을 포함한다. 단백질 매트릭스의 예는 콜라겐, 피브로넥틴, 젤라틴, 라미닌(laminin), 아그레간(aggregan), 엘라스틴(elastin), 피브린(fibrin), 피브리노겐(fibrinogen), 또는 이들의 조합을 포함한다. 상기 조성물은 많은 의료 또는 미용 분야에서 적용될 수 있다. 예를 들어, 흉터, 조직 덩어리의 감소 또는 제거, 상처 치유, 조직의 선택적 제거 등.

다른 바람직한 구현예에서는, 흉터 또는 상처를 치료 또는 치유하는 방법이 흉터 조직 또는 상처를 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그들의 프로엔자임(proMMP)을 적어도 하나 포함하는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그들의 프로엔자임(proMMP)은 MMP-1 , MMP-2, MMP-3 , MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11 , MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체(mutants), 변종(variants) 또는 그의 모든 조합을 포함한다. 바람직하게는 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그들의 프로엔자임(proMMP)이 단백질, 펩티드, 폴리펩티드, 핵산 서열, cDNA, 리보핵산 서열, 키메라 분자(chimeric molecules), 펩티도모방체(peptidomimetics), 펩티드 핵산(peptide nucleic acids, PNA), 또는 이들의 조합을 포함한다. 바람직하게는, 상기 조성물이 약학적으로 허용가능한 제제, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그를 더 포함한다. 다른 바람직한 구현예에서는, 상기 조성물이 유효한 양의, 흉터 조직 또는 상처를 해리시키거나 이화시키는 둘 이상의 MMP 또는 proMMP, 활성 절편, 돌연변이체 또는 그의 모든 조합을 포함한다.

다른 바람직한 구현예에서는, 섬유성 조직(fibrotic tissue)을 해리시키는 방법이 상기 섬유성 조직을 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그들의 프로엔자임(proMMP)을 적어도 하나 포함하는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그들의 프로엔자임(proMMP)은 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체(mutants), 변종(variants) 또는 그의 모든 조합을 포함한다. 바람직하게는, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그들의 프로엔자임(proMMP)이 단백질, 펩티드, 폴리펩티드, 핵산 서열, cDNA, 리보핵산 서열, 키메라 분자(chimeric molecules), 펩티도모방체(peptidomimetics), 펩티드 핵산(peptide nucleic acids, PNA), 또는 이들의 조합을 포함한다. 바람직하게는, 상기 조성물이 약학적으로 허용가능한 제제, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그를 더 포함한다. 다른 바람직한 구현예에서는, 상기 조성물이 유효한 양의, 섬유성 조직을 해리시키거나 이화시키는 둘 이상의 MMP 또는 proMMP, 활성 절편, 돌연변이체 또는 그의 모든 조합을 포함한다.

따라서, 상기 조성물은 화상 또는 궤양 제거, 상처 치유, 흉터 또는 흉터 조직 치료, 페이로니병의 치료, 골의 치료(예를 들어, 비정상적 골 형성 또는 성장), 비정상적인 또는 탈출된 디스크의 교정을 위한 국소적 치료에도 유용하다.

질환( disease ): 본 발명에서 구체화한 상기 조성물은 MMP의 칵테일이 유용할 수 있는 질환의 인 비보 치료 또는 예방에 도움이 된다. 이들은 바이러스성 질환, 세균 감염, 기생충 또는 원충 감염, 암, 자가면역 질환, 염증, 이식, 신경 질환 또는 장애, 파킨슨 병, ALS(Amyotrophic Lateral Sclerosis), COPD(chronic obstructive pulmonary disease), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 알츠하이머 병, 간 질환 또는 장애, 위장 질환 또는 장애, 당뇨, 암, 자가면역(autoimmunity), 면역 관련 질환 또는 장애, 신경 질환 또는 장애, 신경퇴행성 질환 또는 장애, 신경 재생 및 마비(nerve repair and paralysis), 신경내분비 분화, 염증성 질환, 근육 질환 또는 장애, 감염성 생물체와 관련된 질환 또는 장애 등을 포함한다.

특정 실시예에서, 본 발명에서의 상기 조성물은 예를 들어, 섬유성 질환, 암, 단백질 침착과 관련된 질환, 예컨대 알츠하이머 병 등, 종양성 질환(neoplastic diseases), 염증성 질환, 관상 동맥 질환(coronary artery diseases), 폐색성 심혈관 질환(occlusive cardiovascular diseases), 퇴행성 질환 및 감염성 질환, 백내장(cataracts), 비정상적 단백질 침착 등의 치료에 이용될 수 있다. 종양성 질환의 일부 예는 암, 림프종, 백혈병 및 뇌종양일 수 있으나, 이에 한정되지 아니한다. 염증성 질환의 일부 예는 관절염, 천식, 죽상동맥경화증, 크론병, 대장염, 피부염, 홍반성 루푸스 등일 수 있으나, 이에 한정되지 아니한다. 감염성 질환의 일부 예는 세균성, 바이러스성, 진균성, 마이코플라즈마성, 어떤 유전적 질환 및 다른 감염증을 포함하나, 이에 한정되지 아니한다.

바람직한 일 구현예에서는, 섬유성 질환을 겪고 있거나 섬유성 질환이 진행될 위험이 있는 환자를 치료하는 방법이 치료학적으로 유효한 양의, 유효한 양의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 그의 proMMP를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11 , MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체(mutants), 변종(variants), 그의 약학적 조성물, 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 프로드러그, 또는 그의 모든 조합을 포함한다. 일부 구현예에서는 상기 조성물이 둘 이상, 셋 이상, 넷 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그들의 프로엔자임(proMMP)을 포함한다.

"치료학적으로 유효한 양"은 질환을 치료하기 위해 개체에 투여되었을 때, 질환에 대한 치료와 같은 효과가 충분한 화합물의 양을 의미한다. 상기 "치료학적으로 유효한 양"은 화합물, 질환 및 그의 중증, 그리고 치료될 개체의 연령, 체중 등에 따라 달라질 수 있다. 상기 "약학적으로 허용가능한" 이라는 구절은 인간에 투여되었을 때 생리학적으로 견딜수 있고 전형적으로 알러지 반응이나, 위산 역류, 어지럼증 등과 같은 유사한 부반응이 일어나지 않는 분자체(molecular entities) 또는 조성물을 일컫는다.

치료학적 화합물로 이용되는 MMP의 유형 및 양은 당업자가 입수가능한 모든 정보에 기초하여 치료학적 활성을 가질 것으로 예상될 수 있다. 예를 들어, 원 화합물(prototype compound)는 PDR(Physician's Desk Reference)에 담긴 정보에 기초하여 치료학적 활성을 가질 것으로 예상될 수 있다. 추가적으로, 비-제한적인 예로, 치료학적 화합물은 임상의의 경험, 화합물의 구조, 구조 활성 관련성 데이터, EC₅₀, IC₅₀ 분석 데이터, 동물 또는 임상 연구 또는 다른 기초, 또는 이들의 조합에 기초하여 치료학적 활성을 가질 것으로 예상될 수 있다.

치료학적으로-활성인 화합물은 예를 들어, 개체에 투여되거나 인 비트로에서 시험되었을 때 특정된 반응을 유도하는 화합물의 능력을 포함하는, 치료학적 활성을 가지는 화합물이다. 치료학적 활성은 질환 또는 장애의, 예방 및 개선적 치료를 모두 포함하는 치료를 포함한다. 질환 또는 장애의 치료는, 질환 또는 장애의 예방, 개선 및 제거를 포함하여, 질환 또는 장애가 어느 정도 개선되는 것을 포함할 수 있다. 치료학적 활성은 모든 질환 또는 장애에 대해, 바람직한 구현예에서는 예를 들어 조직 또는 세포 덩어리의 해리가 유익한 모든 질환 또는 장애에 대해 나타날 수 있다. 치료학적 활성을 측정하기 위해, 화합물의 치료학적 활성을 평가할 수 있는 모든 방법이 이용될 수 있다. 예를 들어, 임상 평가, EC₅₀ 및 IC₅₀ 분석 및 용량반응곡선을 포함하는 인 비보 또는 인 비트로 방법이 모두 이용될 수 있다.

제형, 투여 : 본 발명에서 구체화한 상기 조성물은 예를 들어, Remington: The Science And Practice Of Pharmacy (21st ed., Lippincott Williams & Wilkins)에 설명된 바와 같은 모든 적절한 방법으로 투여를 위해 제형화된다. 예시적인 투여 경로는 비경구, 경구, 피하, 국소, 근육내, 경피, 경점막(transmucosal), 설하(sublingual), 비강내, 혈관 경유(transvascular), 피하, 안와(orbital) 또는 이들의조합을 포함하나, 이에 한정되지 아니한다. 일부 구현예에서는, 상기 조성물이 치료를 원하는 영역, 예를 들어 국부 지방 침착물에의 주사를 위해 제형화된다. 다른 구현예에서는, 상기 조성물이 예를 들어 개체에서 흉터를 제거 또는 감소시키기 위한 국소 제형으로 제형화될 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물은 적어도 하나 이상, 또는 적어도 둘 이상, 또는 적어도 셋 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그들의 프로엔자임(proMMP)을 포함하고, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그들의 프로엔자임(proMMP)은 MMP-1 , MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP- 14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체(mutants), 변종(variants), 그의 약학적 조성물, 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 프로드러그, 또는 그의 모든 조합을 포함한다.

일부 구현예에서는, 상기 조성물이 넷 이상, 또는 다섯 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP, 또는 이들의 프로엔자임(proMMP)을 포함한다.

본 발명의 핵산, 단백질, 펩티드, 또는 제제는 치료가 필요한 환자에게 혈관내, 복강내, 근육내 주사 또는 경구를 포함하는 적절한 경로를 통해 투여될 수 있다. 정확한 용량은 핵산, 단백질, 펩티드 또는 제제가 진단을 위한 것인지, 치료를 위한 것인지 또는 예방을 위한 것인지 여부를 포함하는 다양한 요인들에 의해 달라질 것이다. 성인 환자의 투여량 또는 투여 요법(dosing regime)은 아동 및 유아의 경우에 비례하여 조정될 수 있고, 예를 들어 다른 투여 또는 다른 형태(format)의 경우에 분자량에 비례하여 조정될 수 있다. 투여 또는 치료는 의료진의 재량에 따라 적절한 간격으로 반복될 수 있다.

본 발명의 핵산, 단백질, 펩티드 또는 제제는 주로 핵산, 단백질, 펩티드 또는 제제에 더하여 적어도 하나의 구성을 포함할 수 있는 약학적 조성물의 형태로 투여될 것이다. 따라서 본 발명에 따른 약학적 조성물 및 본 발명에 따른 용도는 활성 성분에 더하여, 약학적으로 허용가능한 부형제, 담체, 완충용액, 안정화제 또는 당업자들에게 잘 알려진 다른 물질들을 포함할 수 있다. 그러한 물질들은 비-독성이어야 하고, 상기 활성 성분의 효능을 방해하지 않아야 한다. 상기 담체 또는 다른 물질의 정확한 특성은, 경구일 수 있거나 예컨대 혈관내 주사에 의할 수 있거나, 또는 종양 부위로의 침착에 의할 수 있는 투여 경로에 따라 달라질 것이다.

일부 구현예에서는, MMP, proMMP, 활성화 제제, MMP의 억제제 또는 이들의 조합이 결정성 마이크로입자 현택액으로 제형화되어 방출을 연장할 수 있고, 그로 인해 조직, 단백질 기질, 기관 등의 이화가 더욱 지속될 수 있다. 상기 조성물은 국소 적용, 혈관내 드립(drip) 또는 주사, 피하, 근육내, 복강내, 두개내 및 척추 주사, 경구를 통한 섭취, 흡입, 상피-통과 확산 또는 이식가능하고 지속-방출형인 약물 전달 기구에 의해 투여될 수 있다.

다른 구현예에서는, 본 발명에서 구체화한 조성물이 담체와 함께 제형화되어, MMP, proMMP, 활성화 제제, MMP의 억제제 또는 이들의 조합의 지속 방출형(time release)으로 구성될 수 있다. 다양한 지속 방출형 변환(permutations)이 고려될 수 있다. 예를 들어, 특정 MMP이 연속적 또는 지속적 방출되는 것과 같이, 조성물 내에서 MMP의 순차적인 방출이 유익할 수 있다. 이는 특히 다른 물질의 층이 존재하는 조직, 기질, 기관에 적용할 때 바람직할 수 있다. 예를 들어, 제1층이 콜라겐이고 제2층이 피브로넥틴이라면, MMP-2를 방출하여 상기 콜라겐을 분해한 다음, MMP12를 방출하여 피브로넥틴을 이화하는 것이 바람직하다. 추가적으로, 비활성 형태의 MMP가 이용되는 경우, MMP와 특정 활성화 제제가 동시에, 다른 하나보다 먼저, 다른 하나 이후에, 또는 이들의 조합으로 방출되는 것이 바람직할 수 있다. 추가적으로, MMP에 특이적인 억제제를 포함하는 것이 바람직한 경우, 이들은 MMP가 원하는 조직 또는 단백질 기질을 이화시킨 후의 시점에서 방출되도록 제형화될 수 있다.

다른 측면에서, 본 발명은 MMP, proMMP, 활성화 제제, MMP의 억제제 또는 이들의 조합, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 에스터, 염 또는 프로드러그와 함께 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 본 발명에서 구체화하는 조성물은 통상적인 경로, 특히 장으로, 예를 들어 경구로, 예컨대 정제 또는 캡슐의 형태로, 또는 비경구로, 예컨대 주사가능한 용액 또는 현탁액의 형태로, 국소적으로, 예컨대 로션, 겔, 연고 또는 크림의 형태로, 또는 비강으로 또는 좌약의 형태의 약학적 조성물로 투여될 수 있다. MMP, proMMP, 활성화 제제, MMP의 억제제 또는 이들의 조합을 유리 형태 또는 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제와 함께 포함하는 본 발명의 약학적 조성물은 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 통상적인 방법으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 경구 조성물은 활성 성분과 함께, a) 희석제, 예를 들어 락토오스, 텍스트로오스, 수크로오스, 만니톨, 소르비톨, 셀룰로오스 및/또는 글리신; b) 윤활유, 예를 들어 실리카, 활석(talcum), 스테아르산(stearic acid), 그의 마그네슘 또는 칼슘 염 및/또는 폴리에틸렌글리콜; 또한 정제의 경우 c) 결합제, 예를 들어 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 녹말풀, 젤라틴, 트라가칸트(tragacanth), 메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨 및/또는 폴리비닐피롤리돈; 필요한 경우 d) 붕괴제(disintegrants), 예를 들어 녹말, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염, 또는 포화제(effervescent mixtures); 및/또는 e) 흡착제(absorbents), 착색제(colorants), 향미료(flavors) 및 감미료(sweeteners)를 포함하는 정제 또는 젤라틴 캡슐일 수 있다. 주사가능한 조성물은 수성 등장성 용액 또는 현탁액일 수 있고, 좌약은 지방성 유화액 또는 현탁액으로부터 준비될 수 있다. 상기 조성물은 안정화되고/안정화되거나 보존제(reserving), 안정화제(stabilizing), 습윤 또는 유화 제제, 용액 촉진제(solution promoters), 삼투압을 조절하기 위한 염 및/또는 완충용액과 같은 보조제(adjuvants)를 포함할 수 있다. 더욱이, 그것들은 다른 치료학적으로 가치있는 물질들을 포함할 수도 있다. 경피 적용을 위해 적절한 제형은 유효한 양의 본 발명의 화합물을 담체와 함께 포함한다. 담체는 개체의 피부를 통한 전달을 돕기 위해 흡수 가능한 약학적으로 허용가능한 용매를 포함할 수 있다. 예를 들어, 경피 기구는 지지부(backing member), 상기 화합물 및 선택적으로 담체를 포함하는 저장부(reservoir), 선택적으로 상기 화합물을 연장된 기간에 걸쳐 조절된 그리고 미리 정해진 속도로 개체의 피부로 전달하기 위한 속도 조절 장벽(rate controlling barrier), 및 상기 기구를 피부에 고정하는 수단을 포함하는 붕대(bandage)의 형태이다. 매트릭스 경피 제형도 이용될 수 있다. 국소 적용, 예를 들어 피부 및 눈으로의 적용을 위해 적절한 제형은 바람직하게 당업계에 잘 알려진 수성 용액, 연고, 크림 또는 겔이다. 이들은 용해제, 안정화제, 긴장성 증강제(tonicity enhancing agents), 완충용약 및 보존제를 포함할 수 있다. 특정 투여 경로에 적합한 모든 적당한 약학적으로 허용가능한 부형제가 이용될 수 있다. 약학적으로 허용가능한 담체의 예는 완충용액, 식염수 또는 다른 수성 매체를 포함하나, 이에 한정되지 아니한다. 본 발명의 화합물은 바람직하게 그들의 투여(예를 들어, 피하)를 위해 적용되는 담체 내에서 용해된다. 대안으로, 상기 활성 화합물의 현탁액 또는 적절한 담체 내의 화합물(예를 들어, 결정성 마이크로입자의 현탁액)이 적용될 수 있다. 일부 구현예에서는, 하나 이상의 MMP 또는 proMMP가 액상 담체, 예를 들면 용액, 현탁액, 겔 및/또는 유화액으로 제형화된다. 일부 구현예는 임의의 적절한 친유성 담체, 예를 들어 변성 기름(modified oil)(예를 들어, CREMOPHOR™ BASF, 독일), 콩기름, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 유도체화된 폴리에테르, 이들의 조합 등을 포함한다. 일부 구현예는 적어도 하나의 MMP 또는 proMMP를 위한 마이크로입자화 및/또는 나노입자화 된 담체를 포함한다. 일부 구현예는 하나 이상의 지속 방출형 제제, 서방출 또는 조절된 방출 담체 또는 제제, 예를 들어 고분자 미립구를 포함한다. 지속 방출형 제제의 예는 글리세롤, 클리콜, 에리스리톨, 아라비톨, 자일리톨, 만니톨, 소르비톨, 이소말트, 말티톨, 락티톨 및 폴리비닐 알코올, 단당류 및 이당류를 포함한다. MMP 등은 캡슐화되어 지속적으로 방출될 수 있다. 일부 구현예는 MMP, proMMP, 또는 이들의 활성 절편, 이들의 활성화 제제 또는 억제제의 미세입자를 위한 안정한 현탁액에 적절한 부형제를 포함한다.

본 명세서에서 구현된 조성물은, 하나 이상의 MMP, proMMP, 활성화 제제, MMP의 저해제 또는 이들의 조합을 방출하기 위한 운반 비히클을 제공하면서, 생체호환성, 및 바람직하게는 생체분해성 및 생체흡수성과 같은 물리적 특성들의 조합을 나타내도록 적응된 담체 물질로 제형화될 수 있다. 사용되는 담체 물질은 생체호환성이어서, 이식, 분해 또는 흡수될 때 염증 또는 자극을 유도하지 않게 된다.

따라서, 본 발명에 따른 담체는 생체분해성이거나 비-생체분해성일 수 있다. 생체분해성 조성물의 대표적인 예는 알부민, 히알루론산, 전분, 셀룰로오스 및 셀룰로오스 유도체(예컨대, 메틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필-메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트, 셀룰로오스 아세테이트 숙시네이트, 히드록시프로필메틸셀룰로오스 프탈레이트), 카세인, 덱스트란, 폴리사카라이드, 피브리노겐, 폴리(D,L-락티드), 폴리(D,L-락티드-코-글리콜라이드), 폴리(글리콜라이드), 폴리(히드록시부티레이트), 폴리(알킬카보네이트) 및 폴리(오르토에스테르), 폴리에스테르, 폴리(히드록시발레르산), 폴리디옥사논, 폴리(에틸렌 테레프탈레이트), 폴리(말레산), 폴리(타르트론산), 폴리안하이드라이드, 폴리포스파젠, 폴리(아미노산) 및 그의 코폴리머를 포함한다.

비-생체분해성 폴리머의 대표적인 예는 폴리(에틸렌-비닐 아세테이트)("EVA") 코폴리머, 실리콘 고무, 아크릴성 폴리머(폴리아크릴산, 폴리메틸아크릴산, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리알킬사이노아크릴레이트), 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리아미드(나일론 6,6), 폴리우레탄, 폴리(에스테르 우레탄), 폴리(에테르 우레탄), 폴리(에스테르-우레아), 폴리에테르(폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(프로필렌 옥사이드), 플루로닉 및 폴리(테트라메틸렌 글리콜)), 실리콘 고무 및 비닐 폴리머(폴리비닐피롤리돈, 폴리(비닐 알코올), 폴리(비닐 아세테이트 프탈레이트)를 포함한다. 또한, 음이온성(예컨대, 알기네이트, 카르복시메틸 셀룰로오스 및 폴리(아크릴산)) 또는 양이온성(예컨대, 키토산, 폴리-L-라이신, 폴리에틸렌이민 및 폴리(알릴 아민))인 폴리머가 개발될 수 있다.

폴리머 담체는 폴리(에틸렌-비닐 아세테이트), 폴리우레탄, 폴리(D,L-락트산) 올리고머 및 폴리머, 폴리(L-락트산) 올리고머 및 폴리머, 폴리(글리콜산), 락트산 및 글리콜산의 코폴리머, 폴리(카프로락톤), 폴리(발레로락톤), 폴리안하이드라이드, 폴리(카프로락톤) 또는 폴리(락트산)과 폴리에틸렌 글리콜(예컨대, MePEG)의 코폴리머, 및 전술한 임의의 것들의 블렌드, 혼합물 또는 코폴리머를 포함한다. 다른 바람직한 폴리머는 히알루론산, 키토산 및 푸칸과 같은 폴리사카라이드, 및 폴리사카라이드와 분해가능한 폴리머의 코폴리머를 포함한다.

상기 적용분야용으로 유용한 다른 폴리머는 카르복시성 폴리머, 폴리아세테이트, 폴리아크릴아미드, 폴리카보네이트, 폴리에테르, 폴리에스테르, 폴리에틸렌, 폴리비닐부티랄, 폴리실란, 폴리우레아, 폴리우레탄, 폴리옥사이드, 폴리스티렌, 폴리설파이드, 폴리설폰, 폴리설포나이드, 폴리비닐할라이드, 피롤리돈, 열경화성 폴리머, 가교가능한 아크릴성 및 메타크릴성 폴리머, 에틸렌 아크릴산 코폴리머, 스티렌 아크릴성 코폴리머, 비닐 아세테이트 폴리머 및 코폴리머, 비닐 아세탈 폴리머 및 코폴리머, 에폭시, 멜라민, 다른 아미노 수지, 페놀성 폴리머 및 이들의 코폴리머, 수-불용성 셀룰로오스 에스테르 폴리머(셀룰로오스 아세테이트 프로피오네이트, 셀룰로오스 아세테이트, 셀룰로오스 아세테이트 부티레이트, 셀룰로오스 나이트레이트, 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트 및 이들의 혼합물을 포함함), 폴리비닐피롤리돈, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 옥사이드, 폴리비닐 알코올, 폴리에테르, 폴리사카라이드, 친수성 폴리우레탄, 폴리히드록시아크릴레이트, 덱스트란, 잔탄, 히드록시프로필 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 및 N-비닐피롤리돈, N-비닐락탐, N-비닐 부티로락탐, N-비닐 카프로락탐, 극성 펜던트기(pendant group)를 갖는 다른 비닐 화합물의 호모폴리머 및 코폴리머, 친수성 에스테르화기를 갖는 아크릴레이트 및 메타크릴레이트, 히드록시아크릴레이트 및 아크릴산 및 이들의 조합, 셀룰로오스 에스테르 및 에테르, 에틸 셀룰로오스, 히드록시에틸 셀룰로오스, 셀룰로오스 나이트레이트, 셀룰로오스 아세테이트, 셀룰로오스 아세테이트 부티레이트, 셀룰로오스 아세테이트 프로피오네이트, 폴리우레탄, 폴리아크릴레이트, 천연 또는 합성 엘라스토머, 고무, 아세탈, 나일론, 폴리에스테르, 스티렌 폴리부타디엔, 아크릴성 수지, 폴리비닐리덴 클로라이드, 폴리카보네이트, 비닐 화합물의 호모폴리머 및 코폴리머, 폴리비닐클로라이드, 폴리비닐클로라이드 아세테이트를 포함한다. 일반적으로는, 윌리암스(Williams)의 미국 특허 제6,514,515호; 팍(Park) 등의 미국 특허 제6,506,410호; 매티오위츠(Mathiowitz) 등의 미국 특허 제6,531,154, 추드직(Chudzik) 등의 미국 특허 제6,344,035호; 즈라할라(Zdrahala) 등의 미국 특허 제6,376,742호; 및 Griffith, L.A., Ann. N.Y. Acad. of Sciences, 961:83-95 (2002); 및 Chaikof, et al, Ann. N.Y. Acad. of Sciences, 961:96-105 (2002) 참조.

추가적으로, 본 명세서에 개시된 것과 같은 폴리머는 또한 필요에 따라 다양한 조성물 내에 블렌드화 또는 코폴리머화될 수 있다. 논의된 것과 같은 폴리머성 담체는 원하는 방출 특성 및/또는 특정한 원하는 특성을 갖는 다양한 형태로 만들어질 수 있다. 예를 들면, 폴리머성 코팅은 pH와 같은 구체적인 촉발 사건(triggering event)에 노출시 MMP를 방출하도록 만들어질 수 있다. pH-민감성 폴리머의 대표적인 예는 폴리(아크릴산) 및 그의 유도체(예를 들면, 폴리(아미노카르복시산); 폴리(아크릴산); 폴리(메틸 아크릴산)과 같은 호모폴리머, 이러한 호모폴리머의 코폴리머, 및 폴리(아크릴산) 및 상기 논의된 것과 같은 아크릴모노머의 코폴리머를 포함함)를 포함한다. 다른 pH 민감성 폴리머는 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트; 히드록시프로필메틸셀룰로오스 프탈레이트; 히드록시프로필 메틸셀룰로오스 아세테이트 숙시네이트; 셀룰로오스 아세테이트 트리멜릴레이트; 및 키토산과 같은 폴리사카라이드를 포함한다. 또 다른 pH 민감성 폴리머는 pH 민감성 폴리머 및 수용성 폴리머의 임의의 혼합물을 포함한다.

마찬가지로, 온도 민감성인 폴리머성 담체가 만들어질 수 있다. 열겔화(thermogelling) 폴리머 및 그의 겔라틴 온도의 대표적인 예는 폴리(N-메틸-N-n-프로필아크릴아미드)(19.8℃); 폴리(N-n-프로필아크릴아미드)(21.5℃); 폴리(N-메틸-N-이소프로필아크릴아미드)(22.3℃); 폴리(N-n-프로필메타크릴아미드)(28.0℃); 폴리(N-이소프로필아크릴아미드)(30.9℃); 폴리(N,n-디에틸아크릴아미드)(32.0℃); 폴리(N-이소프로필메타크릴아미드)(44.0℃); 폴리(N-시클로프로필아크릴아미드)(45.5℃); 폴리(N-에틸메틸아크릴아미드)(50.0℃); 폴리(N-메틸-N-에틸아크릴아미드)(56.0℃); 폴리(N-시클로프로필메타크릴아미드)(59.0℃); 폴리(N-에틸아크릴아미드)(72.0℃)와 같은 호모폴리머를 포함한다. 또한, 열겔화 폴리머는 전술한 모노머들 간의 코폴리머를 제조함으로써, 또는 이러한 호모폴리머와 아크릴모노머(예컨대, 아크릴산 및 메틸아크릴산과 같은 그의 유도체, 아크릴레이트 및 부틸 메타크릴레이트와 같은 그의 유도체, 아크릴아미드 및 N-n-부틸 아크릴아미드)와 같은 다른 수용성 폴리머를 조합함으로써 만들어질 수 있다.

주사가능한 제형은 본 기술분야에 알려진 임의의 방법을 이용하여, 예를 들면, 단일 바늘, 다중 바늘을 이용하거나, 및/또는 바늘이 없는 주사 장치를 이용하여 투여된다. 일부 구현예에서, 적합한 담체 내에 제형화된 활성 성분의 조직 부하(loading) 용량은 주사에 의해 운반된다. 일부 구현예에서, 운반은 단일 바늘 주사를 포함한다. 일부 구현예에서, 운반은 다중-바늘 배열을 이용한 주사를 포함하며, 이는 일부 구현예에서 표적 조직 내에서 제형의 넓은 분산을 제공한다. 일부 구현예에서, 제형은 국소 지방 영역 내의 조직 또는 피하 지방의 적절한 층 내로 분산되게 하는 방식으로 주사된다.

일부 구현예에서, 예를 들면 별도의 제형으로, 또는 대안적으로 주사된 MMP, proMMP, 활성화 제제 또는 이들의 임의의 조합은 별도의 경로에 의해 투여된다.

일부 구현예에서, 제형은 MMP, 또는 proMMP, 또는 활성화 제제 또는 활성 절편 또는 이들의 임의의 조합의 지속된(sustained) 또는 제어된 방출을 제공하기 위한 하나 이상의 지속 또는 제어 방출 제제를 포함한다. 이러한 제형에서, 상기 MMP, 또는 proMMP, 또는 활성화 제제 또는 활성 절편 또는 이들의 임의의 조합은 지속 또는 제어 방출 제제 또는 담체 내에 캡슐화되거나, 결합되거나, 및/또는 접합된다. 일부 구현예에서, 생체호환성, 생체분해성 지속 또는 제어 방출 제형은 국소 조직 활성을 제공한다. 지속 방출은 약 12시간 내지 약 12개월의 기간 이상, 예컨대 1일, 3일, 7일, 10일, 1개월, 45일, 2개월, 3개월, 4개월, 6개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 또는 약 12시간 내지 약 12개월의 임의의 다른 기간일 수 있다. 적합한 지속 또는 제어 방출 제제 또는 담체는 폴리머, 거대분자, 활성 성분 접합체, 하이드로겔, 이들의 오염물 등을 포함한다. 상기 지속 방출 담체의 일부 구현예는 지방, 예를 들면, 리포좀을 표적으로 한다. 바람직하게는, 상기 지속 방출 물질은 단위 시간 당 실질적으로 동일한 양의 활성 물질의 운반을 촉진하도록 선택된다. 단일 영역을 치료하기 위하여 시간에 따라 상기 지속 방출 제형의 몇 번의 라운드의 주사가 행해질 수 있다. 일부 구현예에서, 지속 방출은 결정형 약물 미세입자의 현탁액으로서 상기 MMP 등을 제형화한 결과이다.

일부 구현예에서, 상기 지속 방출 제제는, 예를 들면, 폴리락티드, 폴리글리콜라이드, 폴리(락티드 글리콜라이드), 폴리아세트산, 폴리글리콜산, 폴리안하이드라이드, 폴리오르토에스테르, 폴리에테르에스테르, 폴리파프로락톤, 폴리에스테르아미드, 폴리카보네이트, 폴리시아노아크릴레이트, 폴리우레탄, 폴리아크릴레이트와 같은 폴리머, 및 이들의 블렌드, 혼합물 또는 코폴리머를 포함하며, 상기 활성 성분(들)을 캡슐화하거나, 결합하거나, 또는 접합하기 위해 사용된다. 지속 방출 폴리머의 일부 구현예는 하나 이상의 활성 성분이 접합되어 있는 폴리에틸렌 글리콜 군을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 지속 방출 제제는 폴리(락티드 글리콜라이드)(PLGA, 폴리(락트산-코-글리콜산)) 코폴리머를 포함한다.

상기 지속 방출 제제의 일부 구현예는 변형된 알기네이트를 포함하는 하나 이상의 하이드로겔을 포함한다. 적합한 변형된 알기네이트의 예는 WO 98/12228에 개시된 것들을 포함한다. 상기 지속 방출 제제의 일부 구현예는 알부민-기반의 나노-입자 담체 또는 부형제를 포함한다.

일부 구현예에서, 프리폴리머 용액을 포함하는 제형은 표적 조직 부위 내로 주사되며, 이후 생체내에서 (예컨대, 광중합에 의해) 폴리머화 또는 (예컨대, 온도 민감성 겔화 물질을 이용함으로써) 고체화된다.

일부 구현예에서, 상기 제어 방출 물질은 조직, 단백질 또는 매트릭스 감소의 특정한 적용분야용으로 디자인된 방출 특성을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 지속 방출 또는 제어 방출 제제는 미세구(microsphere)와 같은 미세입자(microparticle) 내로 형성되며, 주사가능한 용액 및/또는 겔로서 제형화된다. 일부 구현예에서, 상기 미세입자는 약 10 ㎛ 내지 약 100 ㎛ 직경(예컨대, 약 15 ㎛, 20 ㎛, 25 ㎛, 30 ㎛, 40 ㎛, 50 ㎛, 60 ㎛, 70 ㎛, 80 ㎛, 90 ㎛ 또는 약 10 ㎛ 내지 약 100 ㎛의 임의의 다른 직경)의 크기 범위이다. 일부 구현예에서, 상기 미세입자는 크기가 균일하다. 다른 구현예에서, 상기 미세입자는 크기에서 약 10% 내지 약 300%, 예컨대 30%, 40%, 50%, 70%, 80%, 90%, 120%, 150%, 170%, 190%, 200%, 225%, 250%, 275%, 또는 크기에서 약 10% 내지 약 300%까지의 임의의 다른 백분율 변동으로 다양하다. 일부 구현예에서, MMP 등을 포함하는 제형은 주사가능한 겔로서, 또는 미세구 내로 처리되어 제공된다. 다른 구현예에서, 이들은 결정형 미세입자로 형성된다. 미세입자 형성을 위해 적합한 주사가능한 생체분해성, 생체호환성 물질의 다른 예는 키토산, 덱스트란, 수산화인회석 및 실리콘을 포함한다.

미세구 및/또는 미세입자는 용매 증발 및/또는 에멀전 중합에 의한 것을 포함하는 임의의 방법을 이용하여 형성된다. 일부 구현예에서, 상기 미세구는 약 5 ㎛ 내지 약 60 ㎛, 바람직하게는 약 20 ㎛의 평균 직경을 갖는다. 일부 구현예에서, PLGA는 활성 성분(들)의 원하는 방출 속도에 의존하여 다양한 비의 락티드 대 글리콜라이드로 제조된다. 상기 코폴리머의 분해 속도는 그 결정성 및 제형 내의 글리콜라이드의 비율에 비례하기 때문에, 상기 락티드 및/또는 글리콜라이드의 비-라세미 혼합물은 결정성을 증가시키고 분해 속도를 늦춘다. 글리콜라이드의 비율이 높을수록 분해 속도는 증가한다. 일부 구현예에서, 약 65%-75% 락티드 대 약 25%-35% 글리콜라이드의 비는 약 2주 내지 약 45일에 걸친 활성 성분의 방출을 제공한다. 다른 구현예에서, 락티드 대 글리콜라이드의 비는 약 0:100 내지 100:0이며, 이로 인해 다른 방출 속도를 제공한다.

상기 미세구 또는 미세입자의 일부 구현예는 중공형(hollow) 및/또는 다공성(porous) 내부를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 미세구는 고체 또는 다공성 외피를 포함한다.

일부 구현예에서, 다공성 외피 및/또는 미세구를 포함하는 제형은 활성 성분(들)의 초기 방출 버스트(burst)와, 이어서 폴리머성 미세구의 분해와 연관된 지속 방출을 갖는 활성 성분(들)의 2상의(biphasic) 방출 프로필을 나타낸다. 이론에 구애되는 것은 원하지 않지만, 초기 방출 버스트는 조직에 활성 성분(들)의 지방분해 또는 이화작용 농도를 부하하지만, 이후의 더 느린 방출은 원하는 농도를 유지하게 하는 것으로 생각된다.

일부 구현예에서, 하나 이상의 활성 성분은 폴리머 미세구와 비교하여 약 10-12 중량%의 비로 상기 폴리머에 캡슐화, 결합, 및/또는 접합된다. 담체(예컨대, 미세입자 또는 미세구)의 질량 백분율로서 활성 성분의 양은 본 명세서에서 "활성 성분 부하"로 나타낸다. 본 명세서에서 사용된 것과 같이, "부하된" 및 "부하하는"이란 용어는 활성 성분이 담체에 실질적으로 캡슐화, 결합, 및/또는 접합된 것을 나타낸다. 일부 구현예에서, 상기 활성 성분 부하는 약 75% 까지이다. 따라서, 일부 바람직한 제형은 약 10 ㎎ 내지 약 200 ㎎의 폴리머 당 약 1 ㎎ 내지 약 20 ㎎의 활성 성분(예컨대, 약 2 ㎎, 5 ㎎, 7 ㎎, 10 ㎎, 12 ㎎, 14 ㎎, 15 ㎎, 17 ㎎, 18 ㎎, 또는 약 1 ㎎ 내지 약 20 ㎎의 임의의 다른 양의 활성 성분)으로 폴리머 미세구에 부하된 하나 이상의 활성 성분 및/또는 그의 생리학적으로 허용가능한 염 및 용매화물을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 활성 성분 부하를 갖는 제형은 본 명세서에서 구현된 것과 같은 지방분해를 생성하기에 적합한 농도에서 활성 성분 방출을 약 12시간 내지 약 45일 동안(예컨대, 약 3일, 7일, 16일, 20일, 25일, 30일, 35일, 40일, 42일, 또는 약 12시간 내지 약 45일의 임의의 다른 기간 동안) 제공하기에 충분하다.

일부 구현예에서, 2 이상의 활성 성분이 동일한 미세입자, 예를 들면, 리포좀 또는 PLGA 내로 부하된다. 따라서, 일부 구현예에서, 하나 이상의 MMP 등을 캡슐화하는 폴리머는 지방 조직에 동시에 운반된다. 다른 한편으로, 2가지 활성 성분은 별도의 미세입자에 부하된다. 이후, 2가지 유형의 미세구가 혼합되어 각각을 원하는 비로 갖는 제형이 얻어지고, 이후 동시에 투여된다. 다른 한편으로, 2가지 유형의 미세입자가 순차적으로 투여된다.

활성 성분(들)을 포함하는 미세구는 약 10 ㎖ 내지 약 20 ㎖의 적절한 생리학적으로 허용가능한 액체 담체 내에 현탁된다. 활성 성분들의 별도의 미세구를 이용하는 일부 구현예에서, 미세구는 액체 담체 내에 함께 혼합된다. 다른 구현예에서, 각각의 유형의 미세구는 액체 담체와 별도로 혼합된다. 일부 구현예에서, 미세구 현탁액은 이후에, 예를 들면, 셀룰라이트를 치료하기 위하여 1 ㎖의 미세구 현탁액 당 약 2.0 ㎠ 영역을 아우르도록 1.0 ㎖ 분취량(aliquot)으로 진피 바로 아래에 피하 주사된다. 일부 구현예에서, 약 10 내지 약 20회의 주사가 약 20 ㎠ 내지 약 40 ㎠의 영역을 아우르기 위해 투여된다. 더 크거나 및/또는 더 작은 영역이 다양한 구현예에서 처리된다. 다른 한편으로, 일부 구현예에서, 1.0 ㎖ 내지 10.0 ㎖의 볼루스 주사가 턱밑 영역, 측면 둔부, 엉덩이 또는 조직과 같은 지방 침착물 내로 주사된다. 다른 한편으로, 전술한 것과 같은 주사는 각각의 활성 성분을 캡슐화하는 2개의 미세구 제형을 이용하여 동일한 위치에서 별도로 및 순차적으로 행해진다.

일부 구현예에서, 현탁액으로서 또는 분말로 부하된 미세입자로서, 즉 액체 담체없이 미세입자 제형을 투여하기 위하여 바늘 주사가 사용된다.

PLGA 15 미세구는 친수성 화합물보다 신속하게 소수성 화합물을 캡슐화한다. 친수성 활성 성분의 부하를 증가시키기 위하여, 일부 구현예에서, 미세구는 폴리에틸렌 글리콜 단위로 변형된다. 어떤 크기의 미세구는 실질적으로 혈액 내로 흡수되지 않거나, 림프에 의해 제거되고, 이로 인해 표적 영역 내부에 활성 성분(들)을 국소 방출하도록 한다. 예를 들면, 일부 구현예에서, 미세구는 약 20 ㎛ 내지 약 200 ㎛의 직경, 예컨대 약 30 ㎛ 내지 약 175 ㎛, 약 50 ㎛ 내지 약 150 ㎛, 약 75 ㎛ 내지 약 125 ㎛, 또는 약 20 ㎛ 내지 약 200 ㎛의 임의의 다른 직경이다. 또한, 미세구의 크기가 조직 내에서 활성 성분(들)의 방출 프로필에 영향을 미친다. 일반적으로, 더 큰 미세구는 더 길고 보다 균일한 방출 프로필을 제공한다. 따라서, 일부 구현예에서, 제형 내의 평균 입자 크기는 원하는 방출 기간에 기초하여 선택될 것이다.

일부 구현예에서, 치료되는 개체는 비-지속 방출 제형이 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 비-지속 방출 제형은 단일 용량 후에 하나 이상의 MMP 등의 활성을 제공한다.

일부 구현예에서, 제형은 본 기술분야에 알려진 임의의 적합한 방법을 이용하여, 예를 들면, 국소적으로 도포된 크림으로서, 또는 패치를 통해 경피적으로 운반된다. 다른 한편으로, 예를 들면, 전기와 같이 본 기술분야에 알려진 다른 경피적 운반 수단이 또한 유용하다. 또한, 경피적으로 운반가능한 제형의 지속 방출 구현예는, 예를 들면, 본 명세서에서 개시된 것과 같은 생체분해성, 생체호환성 활성 성분-폴리머 제형 또는 리포좀 제형을 이용하여 제공된다.

일부 구현예에서, 약물들 또는 약물의 조합의 국소 적용이 이용된다. 개별 물질의 경우, 분배 계수는 일반적으로 옥탄올:물 비, 또는 "Log P"로서 측정되며, 옥탄올 대 물에 대한 주어진 물질의 상대적 친화도를 측정한 것이다. 상기 Log P가 높을수록, 물질은 옥탄올에 더 끌리는 경향이 있으며, 반대도 마찬가지이다. 달리 말하면, 이것은 주어진 물질에 대해 친유성 대 친수성의 상대적인 측정을 제공한다. 제제를 피부 내로 운반하는 경우, 최적의 Log P는 1.0 내지 5.0의 범위이다. 포모테롤(Formoterol)은 2-4 범위의 Log P를 갖는다. 케토티펜(Ketotifen)은 유사한 물리적 특성을 가져서, 피부 내로 및 피부를 통해 운반되도록 한다.

연고 및 크림을 포함하는 다양한 국소 제형이 약물들 또는 약물 조합의 운반용으로 적합하다. 상기 제안된 조합을 위한 예시적인 국소 비히클은 테르펜(예컨대, 시네올, 리날릴 아세테이트, 멘타논, d/l-멘톨), 지방산 에스테르(예컨대, 이소프로필 미리스테이트, 에틸 올레에이트, 이소프로필 팔미테이트, 부틸 미리스테이트), 및 더 긴 사슬의 알코올(1-옥탄올, 1-데칸올, 1-도데칸올)을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다. N-메틸-피롤리돈은 테르펜, 지방산 에스테르 및 더 긴 사슬의 알코올과 조합된다. 테르펜, 지방산 에스테르 및 더 긴 사슬 알코올 대 N-메틸-피롤리돈의 비는 100:0부터 최대 60:40 중량 대 중량까지일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 약물들 또는 약물 조합의 바늘이 없는 진피내 주사가 주름, 반흔 및 다른 진피 증상의 치료를 위해 사용된다.

본 발명은 본 발명의 화합물의 약학적으로 허용가능한 국소 제형을 포괄한다. 본 명세서에서 사용된 것과 같은 "약학적으로 허용가능한 국소 제형"이란 용어는 상기 제형을 표피에 적용함으로써 본 발명의 화합물을 진피내 투여하기 위한 약학적으로 허용가능한 임의의 제형을 의미한다. 본 발명의 어떤 구현예에서, 국소 제형은 담체 시스템을 포함한다. 약학적으로 유효한 담체는 용매(예컨대, 알코올, 폴리알코올, 물), 크림, 로션, 연고, 오일, 플라스터(plaster), 리포좀, 분말, 에멀전, 미세에멀전, 및 완충 용액(예컨대, 저장액(hypotonic) 또는 완충 식염수), 또는 국소적으로 투여하는 제약물용으로 본 기술분야에 알려진 임의의 다른 담체를 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다. 본 기술분야에 알려진 담체의 보다 완전한 목록은 본 기술분야의 표준인 참조 교과서, 예를 들면 모두 맥 출판사(Mack Publishing Company, Easton, Pa.)에 의해 출판된 문헌들(Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th Edition, 1980 and 17th Edition, 1985)에 의해 제공되며, 그 내용 전체는 인용에 의해 본 명세서에 포함된다. 어떤 다른 구현예에서, 본 발명의 국소 제형은 부형제를 포함할 수 있다. 본 기술분야에 알려진 임의의 약학적으로 허용가능한 부형제가 본 발명의 약학적으로 허용가능한 국소 제형을 제조하기 위해 사용될 수 있다. 본 발명의 국소 제형 내에 포함될 수 있는 부형제의 예는 보존제, 항산화제, 보습제, 완화제, 완충제, 가용화제, 다른 침투 제제, 피부 보호제, 계면활성제, 추진제(propellant), 및/또는 본 발명의 화합물과 조합되어 사용되는 추가적인 치료제를 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다. 적합한 보존제는 알코올, 4차 아민, 유기 산, 파라벤 및 페놀을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다. 적합한 항산화제는 아스코르브산 및 그의 에스테르, 나트륨 비설파이트, 부틸화 히드록시톨루엔, 부틸화 히드록시아니솔, 토코페롤, 및 EDTA와 같은 킬레이트화 제제 및 시트르산을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다. 적합한 보습제는 글리세린, 솔비톨, 폴리에틸렌 글리콜, 우레아 및 프로필렌 글리콜을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명에서 사용하기 위한 적합한 완충제는 시트르산, 염산 및 락트산 완충액을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다. 적합한 가용화제는 4차 염화암모늄, 시클로덱스트린, 벤질 벤조에이트, 레시틴 및 폴리솔베이트를 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 국소 제형에 사용될 수 있는 적합한 피부 보호제는 비타민 E 오일, 알라토인(allatoin), 디메티콘, 글리세린, 페트롤락툼 및 산화아연을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 본 발명의 약학적 조성물은 치료와의 조합으로 도입될 수 있음이 인식될 것이며, 즉 본 명세서에서 구현된 화합물 및 약학적 조성물은 하나 이상의 다른 원하는 치료제 또는 의료 절차와 동시에, 이전에 또는 이후에 투여될 수 있다. 조합 요법에서 도입하기 위한 치료(치료제 또는 절차)의 특정한 조합은 원하는 치료제 및/또는 절차 및 달성하기 위한 치료 효과와의 호환성을 고려할 것이다. 또한, 도입되는 치료는 동일한 질환에 대해 원하는 효과를 달성할 수 있거나, 상이한 효과(예컨대, 임의의 부작용의 조절)를 달성할 수 있음이 인식될 것이다.

어떤 구현예에서, 본 발명의 약학적으로 허용가능한 국소 제형은 적어도 본 발명의 화합물 및 침투 향상 제제를 포함한다. 국소 제형의 선택은 치료되는 증상, 본 발명의 화합물 및 존재하는 다른 부형제의 물리화학적 특성, 제형 내의 이들의 안정성, 이용가능한 제조 설비 및 비용 제약을 포함하는 몇 가지 인자에 의존할 것이다. 본 발명에서 사용된 것과 같은 "침투 향상 자제"란 용어는 약리학적 활성 화합물을 각질층을 통해 상피 또는 진피 내로, 바람직하게는 전신 흡수가 없거나 거의 없이 운송할 수 있는 제제를 의미한다. 다양한 범위의 화합물이 피부를 통해 약물을 침투시키는 속도를 향상시키는 효과에 대해 평가되어 왔다. 예를 들면, 다양한 피부 침투 향상제의 용도와 테스트를 조사하는 마이바흐(Maibach) 등의 문헌(Percutaneous Penetration Enhancers, Maibach H.I. and Smith H.E. (eds.), CRC Press, Inc., Boca Raton, Fla. (1995)) 및 부유크팀킨 등의 문헌(Buyuktimkin et al, Chemical Means of Transdermal Drug Permeation Enhancement in Transdermal and Topical Drug Delivery Systems, Gosh T.K., Pfister W.R., Yum S.I. (Eds.), Interpharm Press Inc., Buffalo Grove, IU. (1997)) 참조. 어떤 예시적인 구현예에서, 본 발명과 함께 사용하기 위한 침투 제제는 트리글리세라이드(예컨대, 대두유), 알로에 조성물(예컨대, 알로에-베라 겔), 에틸 알코올, 이소프로필 알코올, 옥틸페닐폴리에틸렌 글리콜, 올레산, 폴리에틸렌 글리콜 400, 프로필렌 글리콜, N-데실메틸설폭사이드, 지방산 에스테르(예컨대, 이소프로필 미리스테이트, 메틸 라우레이트, 글리세롤 모노올레에이트 및 프로필렌 글리콜 모노올레에이트) 및 N-메틸피롤리딘을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다.

어떤 구현예에서, 상기 조성물은 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 분말, 용액, 스프레이, 흡입제 또는 패치의 형태일 수 있다. 어떤 예시적인 구현예에서, 본 발명에 따른 조성물의 제형은 스테아르산, 팔미트산, 올레산, 팔미토-올레산, 세틸 또는 올레일 알코올, 특히 바람직하게는 스테아르산과 같은 포화 또는 불포화 지방산을 추가로 함유할 수 있는 크림이다. 본 발명의 크림은 또한, 예를 들면, 폴리옥시-40-스테아레이트와 같은 비-이온성 계면활성제를 함유할 수 있다. 어떤 구현예에서, 활성 성분은 필요할 수 있는 약학적으로 허용가능한 담체 및 임의의 필요한 보존제 또는 완충액과 멸균 조건 하에 혼합된다. 안과 제형, 귀약(eardrop), 점안액이 또한 본 발명의 범위 내인 것으로 고려된다. 추가적으로, 본 발명은 신체에 대한 화합물의 조절된 운반을 제공하는 부가적인 이점을 갖는 경피 패치의 사용을 고려한다. 이러한 제형은 상기 화합물을 적당한 매체 내에 용해 또는 분산시킴으로써 만들어진다. 상기 논의한 것과 같이, 침투 향상 제제는 또한 피부를 통한 화합물의 유동(flux)을 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 그 속도는 속도 조절 막을 제공하거나 폴리머 매트릭스 또는 겔 내에 화합물을 분산시킴으로써 조절될 수 있다.

키트

본 발명에서는 키트가 제공되며, 본 발명에 따른 방법에서 즉시 이용가능한 패키지 내에 성분들을 포함한다. 전형적으로, 본 발명의 방법을 실행하기 위한 기록된 설명서가 또한 제공될 것이다. 상기 키트는 하나 이상의 MMP 등과, 매체 등을 포함할 수 있다. 활성 성분을 희석하거나 재구성하기 위한 적합한 완충액이 또한 제공될 수 있다. 일부 성분은 건조된 형태로 제공될 수 있고, 재구성을 필요로 할 수 있다.

구현예에서, 키트는 하나 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)를 포함하며, 상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 구현예에서, 키트는 하나 이상의 MMP, proMMP, 절편 및/또는 활성화 제제를 포함한다. 활성화 제제의 예는 상기 proMMP를 그 활성 형태로 절단하는 프로테아제와 같은 효소를 포함한다. 다른 예에서, MMP-가 예를 들면 상기 MMP-의 활성 부위의 변형, 예컨대 글리코실화 등에 의해 비활성화된다면, 상기 변형을 제거하는 제제는 활성화 제제일 것이다.

일부 구현예에서, 줄기 세포를 단리하기 위한 키트는 하나 이상의 MMP, proMMP, 절편 및/또는 활성화 제제를 포함한다. 활성화 제제의 예는 상기 proMMP를 그 활성 형태로 절단하는 프로테아제와 같은 효소를 포함한다. 다른 예에서, MMP-가 예를 들면 상기 MMP-의 활성 부위의 변형, 예컨대 글리코실화 등에 의해 비활성화된다면, 상기 변형을 제거하는 제제는 활성화 제제일 것이다.

다른 구현예에서, 지방 침착물의 감소, 지방세포 조직의 촉매화를 위한 키트는 하나 이상의 MMP, proMMP, 절편 및/또는 활성화 제제를 포함한다.

본 명세서에서 인용된 모든 출판물 및 특허 문헌은 각각의 개별 출판물 또는 특허 문헌이 개별적으로 나타내는 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 적절한 부분에 인용에 의해 포함된다. 본 명세서에서 다양한 참고문헌을 인용하였지만, 출원인은 임의의 특정한 참고문헌이 본 발명에 대한 "선행기술"임을 인정하는 것은 아니다.

상기 개시된 내용은 본 발명을 일반적으로 개시하는 것이다. 보다 완전한 이해는 다음의 구체적인 실시예를 참조함으로써 얻어질 수 있지만, 본 명세서에서 상기 실시예는 설명을 위한 목적으로만 제공되며, 본 발명의 범위를 제한하기 위한 의도는 아니다.

실시예

실시예 1: 지방 조직으로부터 줄기 세포의 MMP-유도 단리.

지방조직 유래 간질 줄기 세포(ADSC)의 단리는 주로 콜라게나아제 Ⅰ 및 Ⅱ 그리고 써모라이신으로 이루어진 Liberase 또는 Collagenase Ⅰ로 달성되었다(Priya, Sarcar et al ., (2012) J. Tissue Eng . Regen . Med . Jul. 27:1-9). Ⅰ형 및 Ⅱ형 콜라게나아제는 가스 괴저 제제인 매우 위험한 바실러스 클로스트리디움(Clostridium)으로부터 정제된다. 또한, 클로스트리디움 히스토라이티쿰 (Clostridium histolyticum )으로부터의 조정제 제조물은 몇몇 콜라게나아제뿐만 아니라 설프하이드릴 프로테아제, 클로스트리파인, 트립신 유사 효소, 및 아미노펩티다아제도 함유한다. Liberase 효소 생산 동안, 콜라게나아제 동질효소는 원료에 존재하는 상당량의 내독소를 제거하는 공정에 의해 정제된다. Liberase의 내독소 수준에 비해 전통적인 콜라게나아제 제조물에는 매우 광범위한 내독소 오염이 존재한다. 그러나 원천과 무관하게, 박테리아 덩어리로부터 정제된 모든 콜라게나아제 및 중성 프로테아제는 내독소로 오염되어 있다(Priya, Sarcar et al ., (2012) J. Tissue Eng . Regen . Med . Jul. 27:1-9). 이전 연구에서는 상이한 콜라게나아제 제조물 중 내독소의 상대량 및 단리된 세포 건강에 대한 영향을 조사하였고(Linetsky, E., L. Inverardi, et al . (1998). Transplantation Proc . 30: 345-346; Jahr, H., G. Pfeiffer, et al . (1999) J. Mol . Med . (Berl.) 77: 118-120; Salamone, M., G. Seidita, et al . (2010) Transplantation Proc . 42: 2043-2048) 내독소의 존재가 ADSC 생존도에 유해함을 관찰하였다. 또한, 세포 이식에서의 성공은 단리되고 배양된 줄기 세포, 및 제조된 동종이식편의 품질에 직접 비례한다.

내독소 오염 문제에 대한 해결책은 ADSC 단리에 사용하기 위한 재조합 효소의 생산이다. Ia 형태가 Ib 형태에 비해 신속하게 자가촉매적으로 분해되므로, 중요한 문제는 콜라게나아제 Ⅰ이 Liberase의 가장 불안정한 성분이라는 것이다. 분해된 콜라게나아제는 췌도 생존도에 부정적인 효과를 갖는다(Brandhorst, H., N. Raimsch-Guenther, et al . (2008) Transplantation Proc . 40: 370-371).

콜라게나아제 Ⅰ 및 LIBERASE™(Hoffman-La Roche, Ltd.) 대신 MMP-3, MMP-9 및 MMP-12를 이용하는 지방 조직으로부터의 중간엽 줄기 세포(MSC)의 단리가 본원에 기재된다. 단리된 MSC를 조직 배양에서 증식시키고, 형태학적으로 그리고 면역표현형적으로 분석하였다. MSC 분화 역량을 확인하기 위해, 지방세포의 세포 분화를 유도하였다.

물질 및 방법

효소: MMP 혼합물을 이용하여 지방 조직의 효율적 이화작용을 달성하였다. MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-11, MMP-12, MMP-19 및 MMP-25를 포함하는 광범위한 MMP를 유도하였다. Ⅰ-Ⅲ형 콜라겐을 효율적으로 절단하는 이들의 능력에 기반하여 MMP-1 및 MMP-8을 선택하였다. MMP-2 및 MMP-9는 Ⅳ형 및 Ⅴ형 콜라겐을 절단한다. MMP-3 및 MMP-19는 Ⅳ형 콜라겐, 피브로넥틴 및 라미닌에 대한 활성을 가지며, MMP-12는 엘라스틴을 효율적으로 절단하고, MMP-11은 Ⅵ형 콜라겐을 절단한다. 이 실험실에서는 여러 해 동안 재조합 MMP-1, MMP-3, MMP-8, MMP-9, 및 MMP-12를 생산해왔다. 다른 관심 MMP(MMP-11, MMP-19 및 MMP-25)의 재조합 생산은 본 발명자들의 실험실에서 합성할 수 있다.

효소 활성화: 완충액 시약 및 키모트립신은 Sigma(St. Louis, MO)에서 입수하였다. LIBERASE™는 Roche(San Francisco, CA)에서 입수하였다. Collagenease Ⅰ은 Worthington Biochemical(Lakewood, NJ)에서 입수하였다. MMP-3 및 MMP-12는 R&D Biosciences(San Diego, CA)에서 입수한 반면, 활성 MMP-9는 Calbiochem(Billerica, MA)에서 입수하였다. MMP-3을 37℃에서 30분 동안 5 ng 키모트립신/5 ng 트립신 혼합물로 20 ng/㎕ 농도로 활성화하였다. 2 mM PMSF(Biosynth, Itasca, IL) 첨가로 반응을 중단시켰다. MMP-12는 TSB(50mM Tris, 150 mM NaCl, 10 mM CaCl₂, 1 μΜ ZnCl₂, 0.01% Brij-35, pH 7.5) 중에서 30시간 동안 자가 활성화하였다. 효소 활성을 125 ng/㎕의 MMP-3 및 20 ng/㎕의 MMP-12와 TSB 중 5 μΜ Knight 기질로 시험하였다. Knight 단일쇄 펩티드(SSP)[Mca-Lys-Pro-Leu-Gly-Leu-Lys(Dnp)-Ala-Arg-NH₂(서열번호 1)]를 전술된 방법에 의해 합성하였다(Nagase, H., C.G. Fields, et al . (1994). J. Biol . Chem . 269:20952-20957; Neumann, U., H. Kubota, et al. (2004). Anal. Biochem. 328:166-173).

지방 조직으로부터 중간엽 줄기 세포의 단리: 지방흡입물을 지방 흡입에 의해 환자로부터 수집하였다. 조직을 PBS로 1회(50/50) 세척하였다. 이어서 2-10 ㎖의 조직을 간헐적으로 진탕하면서 60분 동안 37℃에서 TSB(50 mM Tris, 150 mM NaCl, 10 mM CaCl₂, 1 μΜ ZnCl₂, 0.01% Brij-35, pH 7.5) 중 효소(각 MMP-의 지방 조직 400 ng/㎖, 120 U/㎖ 지방 조직 콜라게나아제 Ⅰ 및 대조군으로 0.45 Wunsch units/㎖ 지방 조직 LIBERASE™)로 소화시켰다. 동일 부피의 DMEM-LG/10% MSC-적격 FBS를 첨가하고, 20분 동안 3000×g에서 원심분리하여 반응을 중단시켰다. 상부 분획을 버리고, MSC를 함유하는 잔여 간질 혈관 분획(SVF)을 20 ㎖ DMEM-LG/10% FBS 중에 재현탁하고, 100㎛ 나일론 메시를 통해 여과하고, 20분 동안 1,200×g에서 원심분리하였다. 37℃에서 10분 동안 RBC 용해 완충액(8.7 g/L 암모늄 클로라이드) 중 SVF의 인큐베이션으로 잔여 RBC를 제거하였다. 세포를 5분 동안 1,200×g에서 원심분리에 의해 DMEM-LG/10% FBS로 세척하였다. 세포를 DMEM-LG, 10% FBS, 및 1×페니실린/스트렙토마이신 중에 재현탁하고, 조직 배양 접시 내로 5,000 세포/㎠의 밀도로 접종하였다. 배양 배지를 세포 접착 1d 후 교체하였다. 70-80% 세포 융합성에 도달할 때까지 배지를 3일 마다 교체하고, 이 시점에 세포를 TRYPLE™ 시약(Life Technologies, Carlsbad, CA)으로 탈착하고 200 세포/㎠으로 MESENPRO RS™ 배지(Life Technologies, Carlsbad, CA) 내로 계대접종하였다.

단리된 ADSC - 생존도 평가: 세포를 트립판 블루(Trypan Blue)로 염색하고, Cellometer T4 Auto 자동 세포 계수기(Nexcelom Bioscience, Lawrence, MA)로 평가하였다.

단리된 ADSC - 유세포측정 평가: 유세포측정 실험을 VGTI Flow Cytometry Core Facility(Port St. Lucie, FL)에서 수행하였다. MSC를 hMSC 양성 마커(CD73, CD90, 및 CD105), hMSC 음성 마커(CD11b, CD19, CD34, CD45, 및 HLA-DR) 및 이소형 대조군 항체를 포함하는 BD STEMFLOW™ 인간 MSC 분석 키트(BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ)로 염색하였다. 상이한 방법에 의해 단리되고 5계대까지 성장시킨 MSC를 30분 동안 4℃, 암소에서 양성, 음성 및 이소형 항체 염색 대조군으로 모두 염색하였다. 각 표본에 있어서, BD LSR Ⅱ 분석기(BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ) 상에서 50,000 이벤트를 획득하고, 데이터를 Flowjo 소프트웨어로 분석하였다.

단리된 ADSC -지방생성 분화 평가: 10일 동안 STEMPRO® 지방생성 분화 키트(Life Technologies, Carlsbad, CA)를 이용해서 융합 배양 중 지방생성을 유도하였다. 10일 후, 세포를 실온에서 10분 동안 200㎕의 Oil Red O 용액(Sigma, St. Louis, MO)으로 염색하여 오일 액적 형성을 검출하였다.

결과

효소 활성화: 시판 재조합 MMP-3 및 MMP-12 효소를 제조업체의 지시에 따라 활성화한 반면, MMP-9는 활성 형태로 구입하였다. 효소 활성을 내부 제조된 형광 Knight 기질을 이용해서 시험하였다. 모든 효소는 Knight 기질에 대해 필적하는 활성을 나타내었다(도 1).

MSC 단리: 지방 조직 흡입물을 37℃에서 30분 동안 Collagenase Ⅰ, LIBERASE™, MMP-3, MMP-9 또는 MMP-12로 처리하였다. SVF로 생존성의 총 세포수를 얻었고, MMP-3-처리 샘플에 대한 63.9% 내지 MMP-12-처리 샘플에 대한 최대 82.5%까지의 생존도를 나타내었다(표 1). 단리된 SVF를 10⁴ 세포/㎠ 밀도로 10 ㎤ 조직 배양 접시에 접종하고, 미부착 세포를 24시간 후 제거하였다. 세포를 5-7일 동안 배양하여 80% 융합성 0계대 배양을 달성하였다.

단리된 SVC 총 세포수 및 생존도 백분율.

효소	SVF 세포수/지방 조직 ㎖	생존도 %
Collagenase Ⅰ	1.36×10⁶	74.0
LIBERASE™	2.44×10⁶	70.0
MMP-3	4.16×10⁵	63.9
MMP-9	3.19×10⁵	73.4
MMP-12	3.0×10⁶	82.5

초기 MMP-9-단리된 SVF 표본의 강력한 생존도에도 불구하고, 상기 표본에서는 MSC 성장을 촉진할 수 없었다. SVF가 ADSC뿐만 아니라 전구-지방세포, 섬유아세포, 잔류 단핵구, 림프구, 혈액 평활근 세포 등을 함유하는 이종성 세포 혼합물이므로, 초기 계수 및 생존도에는 단리에 살아남은 ADSC가 없이 상기 모든 세포가 포함되었을 것이다. 모든 다른 가공 표본은 형태적으로 유사한 세포를 포함하는 건강한 MSC 배양물을 생성하였다(도 2). 또한, 5계대 후, 모든 표본으로부터의 세포(상기 언급된 MMP-9-단리물 제외)는 뛰어난 생존도 및 유사한 형태를 보유하였다. 10계대까지 상이한 표본 중 배가 시간 및 세포 확산과 같은 성장 파라미터에서는 차이가 관찰되지 않았다. Collagenase Ⅰ 및 LIBERASE™에 의해 단리된 세포의 유사한 특징으로 인해, 본원에 나타낸 추가 실험을 MMP-3, MMP-12 및 LIBERASE™ 단리된 표본과 비교하였다.

MSC의 면역표현형 분석: MSC를 고유 정의하는 표면 마커는 없지만, 일반 표면 마커 프로필(예로, CD34^-, CD45^-(HSC 마커), CD31^-(내피 세포 마커), CD44⁺, CD90⁺, CD73⁺ 및 CD105⁺)이 MSC를 정의하기 위해 자주 이용되었다. LIBERASE™, MMP-3 및 MMP-12에 의해 단리된 표본 중 표현형 MSC 마커의 유세포측정 분석을 5계대에 수행하였다(도 3). 모든 표본은 MSC 마커 CD73, CD90 및 CD105에 대해 99.8% 이상 양성이었다. 다른 MMP를 이용해서 단리된 MSC의 분석은 유사한 결과를 나타냈다(도 7-10). 또한, 이들 표본 중 MSC는 매우 유사한 수준의 마커 발현을 나타내었다(도 4). MMP-3 및 LIBERASE™에 의해 단리된 세포는 마커 CD44에 대해 100% 양성이었던 반면, MMP-12에 의해 단리된 표본은 표본 중 낮은 세포수로 인해 상기 마커에 대해 신뢰할 수 있는 결과를 나타내지 않았다. 모든 표본을 MSC 음성 마커(CD11b, CD19, CD34, CD45, 및 HLA-DR) 및 이소형 대조군 항체의 발현에 대해 시험하여 음성 결과를 얻었다.

지방생성: MMP-3, MMP-12, LIBERASE™(도 5), 및 Collagenase Ⅰ에 의해 단리된 표본의 지방세포 분화능을 오일 레드 O를 이용한 지방 액적 형성의 염색에 의해 검출하였다. 지방생성은 현미경 평가에서 나타난 바와 같이 모든 표본에서 필적하였다. MMP-12 단리 후 MSC의 골생성 및 연골생성 분화도 관찰하였다(도 11).

논의

중간엽 줄기 세포를 수득하기 위한 풍부한 저장소 및 신뢰할 수 있는 단리 방법은 향후 임상 사용에서 이들 세포의 성공적 적용을 위해 중추적이다. 거의 모든 줄기 세포 적용은 이들의 표적화된 사용 전에 어느 정도의 생체 외 증식 및 조작을 필요로 하므로, 풍부한 MSC 원천이 필요하다. 지방 조직은 골수와 같은 다른 MSC 원천과 달리, 환자 불편을 최소로 하며 성체 줄기 세포의 도처에 존재하고 쉽게 접근 가능한 원천이므로, 이들 MSC(ADSC)의 이상적 원천이다. 이들 ADSC의 단리는 쉽게 접근 가능하고 비용 효율적일 뿐만 아니라 수확된 세포에 유해할 수 있는 독성 부산물이 없어야 한다. 재조합 MMP를 이용한 ADSC의 단리가 이들 요건을 해결할 수 있다.

본 실시예에서, MMP-3 및 MMP-12를 이용한 ADSC의 단리가 성공적으로 나타났으며, 일반적으로 이용되는 Collagenase Ⅰ 및 LIBERASE™로 단리된 ADSC의 형태, 표현형 및 지방생성능을 비교하였다.

ADSC의 형태적 특징은 다음과 같다: 배양 중 섬유아세포 유사 형태, 다능성 분화, 광범위한 증식력, 및 일반 표면 마커 프로필(예로, CD34^-, CD45^-(HSC 마커), CD31^-(내피 세포 마커), CD44⁺, CD90⁺, CD73⁺ 및 CD105⁺). MMP-3 및 MMP-12에 의해 단리된 ADSC는 박테리아 유래 Collagenase Ⅰ 및 LIBERASE™에 의해 단리된 세포와 본질적으로 동일한 형태적 및 표현형 특징을 나타내었다. MMP-3, MMP-12 및 LIBERASE™로 단리된 표본은 유세포측정에 의해 결정된 필적하는 수준의 CD73, CD90 및 CD105를 가졌으며, 음성 마커에 대해 음성이었다. 또한, LIBERASE™ 및 Collagenase Ⅰ로 단리된 세포보다 MMP-3 및 MMP-12에 의해 단리된 ADSC의 지방생성능이 보유되는 것으로 나타났다.

흥미롭게, 지방 조직의 MMP-9 처리는 임의의 ADSC를 생성하지 않았다. 이는 MMP-9가 젤라티나아제이며 지방 조직 내에 함유된 온전한 콜라겐성 ECM 네트워크 내에 잔류하는 ADSC에 접근할 수 없다는 점에 기인할 수 있다. 추가 실험에는 MMP 및 다른 MMP(MMP-1, MMP-8(Ⅰ형 및 Ⅲ형 콜라겐에 있어서), MMP-19(Ⅳ형 콜라겐, 피브로넥틴 및 라미닌에 있어서), 및 MMP-11(Ⅵ형 콜라겐의 소화를 위해))의 시험 칵테일이 포함된다.

결론

최고 품질의 연결 조직 분해 효소 없이 독성 부산물이 없는 생존성의 ADSC를 방출하는 것이 실질적으로 불가능하므로, 본원에 기재된 ADSC를 단리하기 위한 재조합 MMP의 적용은 매우 중요하다. 상기 혁신적 접근은 하기 결과를 산출할 것으로 예상된다. 첫 번째로, MSC 단리 및 이식 기술의 전분야에서 혁신이 달성될 것이다. 두 번째로, 긴 시간의 예상 수명을 갖고 최고 품질의 MSC 수집이 가능할 것이다. 세 번째로, 효소 독성을 없앰함으로써, 지방 조직 가공 및 MSC 단리를 위한 표준 프로토콜이 개발될 것이다. 네 번째로, 고도 정제된 신규 재조합 MMP 칵테일이 조직 해리 실행에 도입되어 현재의 미생물 기원 콜라게나아제를 대체하고 새로운 표준이 될 것이다. 다섯 번째로, 상기 접근은 현재의 표준이 여전히 박테리아 기원의 콜라게나아제에 의존하는 췌도 세포와 같은 다른 세포의 단리에 적용될 수 있다. 결론적으로, 본원에 기재된 연구는 여러 조직 및 기관 기원의 세포 단리에 대해 중요한 영향을 미칠 것이다.

실시예 2: 다양한 세포의 단리

췌장으로부터의 췌도 단리 : 세 가지 메인 단계: MMP-칵테일(예로, 둘 이상의 MMP)을 이용한 원 위치 췌장 관류, 췌장 소화, 및 췌도 정제가 있다.

먼저 마우스를 펜토바르비탈 또는 유사물질로 마취한 뒤 후드로 이동시킨다. 각각의 마우스를 복부쪽을 위로 하여 눕히고, 그 피부를 70% 에탄올로 멸균한다. 상복부 주위를 절개하여 간 및 장을 노출시킨다. 마우스 팽대를 십이지장 벽 상에서 수술 클램프로 클램핑하여 십이지장으로의 담즙 경로를 차단한다. 5 ㎖ 1xHBSS 중에 MMP 칵테일을 용해시켜 3 ㎖ 완충액을 제조하고, 30G1/2-G 바늘이 실장된 5 ㎖ 주사기 내로 흡입한다. 이어서 바늘을 간관 및 담낭관의 연결 부분을 통해 총담관 내로 삽입하고, 현미경 하에 총담관 중앙에 도달시킨다. 용액을 천천히 주사하여 췌장을 팽창시킨다. 췌장을 제거하고, 상기 완충액 2 ㎖을 함유하는 50 ㎖ 튜브에 넣는다. 튜브를 짧게 진탕한 뒤 15분 동안 37.5℃ 수조에 넣는다. 인큐베이션 후, 튜브를 손으로 진탕하여 현탁액이 균질해질 때까지 췌장을 분리한다. 조직 현탁액이 매우 미세한 입자로 용해되면, 튜브를 얼음 상에 놓고 1×HBSS 중 1 mM CaCl₂ 25 ㎖을 첨가하여 소화를 중지시킨다. 이를 4℃에서 30초 동안 290 g에서 원심분리하고 상청액을 버린다. 이어서 펠렛을 1×HBSS 완충액 중 빙냉 1 mM CaCl₂ 20 ㎖로 재현탁하고, 4℃에서 30초 동안 290 g에서 다시 원심분리하고, 상청액을 버린다. 생성 펠렛을 1×HBSS 중 1 mM CaCl₂ 15 ㎖로 재현탁한 뒤 사전-수화된 70 ㎛ 세포 여과기 상에 붓는다. 튜브를 1 mM CaCl₂ 20 ㎖로 세척하여 여과기에 다시 붓는다. 1×HBSS 중 1 mM CaCl₂ 25 ㎖를 필터를 통해 붓는다. 새 페트리 접시 상에서 여과기를 뒤집고 포획된 섬을 RPMI 1640 배지 중 L-글루타민(20 mM), 페니실린(100 U ㎖^-1), 스트렙토마이신(100 ㎍㎖^-1), 및 FBS(10%)로 제조된 완충액 15 ㎖로 접시 내로 헹군다. 단리된 섬을 와이드-오픈 팁을 갖는 피펫을 이용해서 손으로 골라 계수하고, 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에 둔다.

심근 세포, 섬유아세포 및 수지상 세포를 포함하는 다양한 세포 유형을 단리하기 위한 조직 해리: 세포 현탁액의 제조 방법은 하기와 같다: (a) 분쇄, 체질 또는 긁어내기에 의한 기계적 방법; (b) 2가 양이온의 부재 하의 화학적 방법; 및 (c) MMP, 콜라게나아제, DISPASE®, 트립신, 파파인, 엘라스타아제, 프로나아제, 히알루로니다아제를 이용하거나 이들 효소의 선택된 조합을 이용한 소화에 의한 효소적 방법.

Claims

매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성(inactive) MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)의 적어도 하나를 포함하는 조성물로서,
상기 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편(fragments), 돌연변이체(mutants), 변형체(variants) 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것인 조성물.
청구항 1에 있어서,
상기 MMP, 비활성 MMP 또는 프로엔자임(proMMP)은 단백질, 펩티드, 폴리펩티드, 핵산 서열, cDNA, 리보핵산 서열, 키메라 분자, 펩티도 모방체(petidomimetics), 펩티드 핵산(PNA), 또는 이들의 조합들을 포함하는 것인 조성물.
청구항 1에 있어서,
약학적으로 허용가능한 제제, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그를 더 포함하는 조성물.
청구항 1에 있어서,
적어도 하나의 MMP 활성화 제제, 적어도 하나의 MMP 저해제, 또는 이들의 조합들을 선택적으로 포함하는 조성물.
청구항 4에 있어서,
상기 적어도 하나의 MMP 활성화 제제, 또는 적어도 하나의 MMP 저해제, 또는 이들의 조합들은 선택적으로 캡슐화되어 있는 것인 조성물.
청구항 4에 있어서,
상기 적어도 하나의 MMP, 적어도 하나의 MMP 활성화 제제, 또는 적어도 하나의 MMP 저해제, 또는 이들의 조합들은 제어 방출 제형을 포함하는 것인 조성물.
적어도 두 개의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)의 펩티드 또는 단백질을 포함하는 조성물로서,
상기 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP -23 A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것인 조성물.
청구항 7에 있어서,
셋 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 더 포함하는 조성물로서, 상기 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것인 조성물.
청구항 8에 있어서,
약학적으로 허용가능한 제제, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그를 더 포함하는 조성물.
청구항 8에 있어서,
적어도 하나의 MMP 활성화 제제, 적어도 하나의 MMP 저해제, 또는 이들의 조합들을 선택적으로 포함하는 조성물.
청구항 10에 있어서,
상기 적어도 하나의 MMP 활성화 제제, 또는 적어도 하나의 MMP 저해제, 또는 이들의 조합들은 선택적으로 캡슐화되어 있는 것인 조성물.
청구항 10에 있어서,
상기 적어도 하나의 MMP, 적어도 하나의 MMP 활성화 제제, 또는 적어도 하나의 MMP 저해제, 또는 이들의 조합들은 제어 방출 제형을 포함하는 것인 조성물.
유효량의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물로서,
상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1 , MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-11, MMP- 12, MMP- 13, MMP- 19, MMP-25, 활성 절편, 변형체, 돌연변이체, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것인 조성물.
청구항 13에 있어서,
상기 유효량의 어느 하나의 MMP 또는 그의 프로엔자임은 지방 조직(adipose tissue)을 해리하거나(dissociate) 또는 이화하는(catabolize) 것인 조성물.
청구항 13에 있어서,
상기 유효량의 임의의 둘 이상의 MMP 또는 proMMP, 활성 절편, 변형체, 돌연변이체, 또는 이들의 임의의 조합들은 지방 조직을 해리하거나 또는 이화하는 것인 조성물.
청구항 13에 있어서,
활성 절편을 포함하는 하나 이상의 MMP 또는 proMMP의 하나 이상의 활성 절편을 포함하며, 상기 활성 절편은 지방 조직을 이화하는 것인 조성물.
청구항 13에 있어서,
상기 MMP는 활성 또는 비활성 또는 이들의 조합들인 것인 조성물.
청구항 13에 있어서,
비활성 MMP를 활성화하는 하나 이상의 제제를 더 포함하는 조성물.
청구항 13에 있어서,
약학적으로 허용가능한 부형제, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그를 더 포함하는 조성물.
청구항 13에 있어서,
상기 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)은 핵산 서열, 단백질, 폴리펩티드, 펩티드, 또는 이들의 돌연변이체 및 변형체를 포함하는 것인 조성물.
유효량의 적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물과 생물학적 시료를 접촉시키는 것을 포함하는, 생물학적 시료로부터 줄기세포를 단리하는 방법으로서,
상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하며,
상기 조성물은 상기 생물학적 시료를 이화하거나 또는 해리하여서 시료로부터 줄기세포를 단리하는 것인 방법.
청구항 21에 있어서,
상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 활성 절편을 포함하는 하나 이상의 MMP, 비활성 MMP 또는 proMMP의 하나 이상의 활성 절편을 선택적으로 포함하는 것인 방법.
청구항 22에 있어서,
상기 MMP 또는 그의 절편은 활성 또는 비활성 또는 이들의 조합들인 것인 방법.
청구항 22에 있어서,
비활성 MMP 또는 그의 절편을 활성화하는 하나 이상의 제제를 투여하는 것을 더 포함하는 방법.
청구항 22에 있어서,
상기 생물학적 시료는 상피, 결합 조직, 지방 조직, 내피, 기저막(basement membrane), 기저판(basal lamina), 심장 조직, 심내막(endocardium), 첨단막(apical membrane), 기저외측막(basolateral membrane), 세포외 기질, 치밀성(dense) 결합 조직, 섬유성(fibrous) 결합 조직, 후각 상피, 소성(loose) 결합 조직, 뮤신, 중피, 간질, 세망(reticular) 결합 조직, 골수, 혈액, 혈관, 림프 조직, 폐, 심혈관(cardiovascular) 조직, 뇌 조직, 뇌척수(cerebrospinal) 조직 및 체액, 뇌혈관(cerebrovascular) 조직 및 체액, 신경 조직, 뇌, 뼈 조직, 피부, 근육, 췌장 조직, 난포(ovarian follicles), 제대혈(cord blood) 조직, 태반, 소장 내벽(intestine lining), 뇌 조직, 척추 조직, 심혈관 조직, 결합 조직, 뇌척수 체액 또는 조직, 골수, 진피, 혈액, 골막, 또는 임의의 기관 조직인 것인 방법.
청구항 22에 있어서,
상기 유효량의 임의의 둘 이상의 MMP 또는 proMMP, 활성 절편, 변형체, 돌연변이체, 또는 이들의 임의의 조합들은 상기 생물학적 시료를 해리하거나 또는 이화하여서 상기 줄기 세포를 단리하는 것인 방법.
유효량의 적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 것을 포함하는, 과도한 지방 조직 침착(deposit)에 관련된 증상을 갖는 개체를 치료하는 방법으로서,
상기 MMP, 비활성 MMP, 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-11, MMP- 12, MMP- 13, MMP-19, MMP-25, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하며,
상기 조성물은 상기 지방 조직을 해리하거나 또는 이화하는 것인 방법.
청구항 27에 있어서,
상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 활성 절편을 포함하는 하나 이상의 MMP, 비활성 MMP 또는 proMMP의 하나 이상의 활성 절편을 선택적으로 포함하고,
상기 활성 절편은 지방 조직을 해리하거나 또는 이화하는 것인 방법.
청구항 27에 있어서,
지방 조직에 관련된 증상은 셀룰라이트, 지방 침착, 비만, 대사성 질환 또는 이들의 조합들을 포함하는 것인 방법.
청구항 27에 있어서,
상기 유효량의 임의의 둘 이상의 MMP 또는 proMMP, 활성 절편, 변형체, 돌연변이체, 또는 이들의 임의의 조합들은 상기 지방 조직을 해리하거나 또는 이화하는 것인 방법.
유효량의 적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 것을 포함하는, 개체에서의 국부(regional) 지방 침착을 감소시키는 방법으로서,
상기 MMP, 비활성 MMP, 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-11, MMP- 12, MMP- 13, MMP-19, MMP-25, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하며,
상기 국부 지방 침착이 감소되는 것인 방법.
청구항 31에 있어서,
상기 약학적 조성물은 비경구, 국소, 근육내, 피하 또는 경피 경로의 투여에 의해 투여되는 것인 방법.
청구항 31에 있어서,
상기 약학적 조성물은 국부 지방 침착 부위 또는 근방에 투여되는 것인 방법.
청구항 31에 있어서,
상기 유효량의 임의의 둘 이상의 MMP 또는 proMMP, 활성 절편, 변형체, 돌연변이체, 또는 이들의 임의의 조합들은 상기 지방 조직을 해리하거나 또는 이화하는 것인 방법.
유효량의 적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물과 조직을 접촉시키는 것을 포함하는, 조직으로부터 줄기세포를 단리하는 방법으로서,
상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하며,
상기 조성물은 상기 조직을 해리하여서 조직으로부터 줄기세포를 단리하는 것인 방법.
청구항 35에 있어서,
상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 활성 절편을 포함하는 하나 이상의 MMP, 비활성 MMP 또는 proMMP의 하나 이상의 활성 절편을 선택적으로 포함하는 것인 방법.
청구항 35에 있어서,
상기 MMP 또는 그의 절편은 활성 또는 비활성 또는 이들의 조합들인 것인 방법.
청구항 35에 있어서,
비활성 MMP 또는 그의 절편을 활성화하는 하나 이상의 제제를 투여하는 것을 더 포함하는 방법.
청구항 35에 있어서,
상기 유효량의 임의의 둘 이상의 MMP 또는 proMMP, 활성 절편, 변형체, 돌연변이체, 또는 이들의 임의의 조합들은 상기 조직을 해리하거나 이화하는 것인 방법.
청구항 35에 있어서,
상기 조직은 상피, 결합 조직, 지방 조직, 내피, 기저막, 기저판, 심장 조직, 심내막, 첨단막, 기저외측막, 세포외 기질, 치밀성 결합 조직, 섬유성 결합 조직, 후각 상피, 소성 결합 조직, 뮤신, 중피, 간질, 세망 결합 조직, 골수, 혈액, 혈관, 림프 조직, 폐, 심혈관 조직, 뇌 조직, 뇌척수 조직 및 체액, 뇌혈관 조직 및 체액, 신경 조직, 뇌, 뼈 조직, 피부, 근육, 췌장 조직, 난포, 제대혈 조직, 태반, 소장 내벽, 뇌 조직, 척추 조직, 심혈관 조직, 결합 조직, 뇌척수 체액 또는 조직, 골수, 진피, 혈액, 골막, 또는 임의의 기관 조직인 것인 방법.
치료학적 유효량의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 섬유증(fibrotic) 질환을 앓는 환자를 치료하는 방법으로서,
상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것인 방법.
청구항 41에 있어서,
상기 유효량의 임의의 둘 이상의 MMP 또는 proMMP, 활성 절편, 변형체, 돌연변이체, 또는 이들의 임의의 조합들은 상기 섬유증 조직을 해리하거나 또는 이화하는 것인 방법.
적어도 하나 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)에 대하여 암호화하는 발현 벡터로서,
상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것인 발현 벡터.
둘 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)에 대하여 암호화하는 발현 벡터를 포함하는 약학적 조성물로서,
상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것인 약학적 조성물.
적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 시간 방출 제형으로서,
상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)를 포함하고,
상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것인 시간 방출 제형.
청구항 47에 있어서,
적어도 하나의 MMP 활성화 제제, MMP 저해제 또는 이들의 조합들을 선택적으로 포함하는 시간 방출 제형.
청구항 45에 있어서,
유효량의 적어도 둘 이상, 셋 이상, 넷 이상, 또는 다섯 이상의 유효량의 임의의 둘 이상의 MMP 또는 proMMP, 활성 절편, 변형체, 돌연변이체, 또는 이들의 임의의 조합들을 더 포함하는 시간 방출 제형.
유효량의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물과 조직을 접촉시키는 것을 포함하는, 조직을 해리하는 방법으로서,
상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것인 방법.
청구항 48에 있어서,
상기 조성물은 유효량의 적어도 둘 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 것인 방법.
청구항 48에 있어서,
상기 조직은 상피, 결합 조직, 지방 조직, 내피, 기저막, 기저판, 심장 조직, 심내막, 첨단막, 기저외측막, 세포외 기질, 치밀성 결합 조직, 섬유성 결합 조직, 후각 상피, 소성 결합 조직, 뮤신, 중피, 간질, 세망 결합 조직, 골수, 혈액, 혈관, 림프 조직, 폐, 심혈관 조직, 뇌 조직, 뇌척수 조직 및 체액, 뇌혈관 조직 및 체액, 신경 조직, 뇌, 뼈 조직, 피부, 근육, 췌장 조직, 난포, 제대혈 조직, 태반, 소장 내벽, 뇌 조직, 척추 조직, 심혈관 조직, 결합 조직, 뇌척수 체액 또는 조직, 골수, 진피, 혈액, 골막, 섬유증 조직, 반흔(scar) 조직, 또는 임의의 기관 조직인 것인 방법.
유효량의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물과 단백질 매트릭스를 접촉시키는 것을 포함하는, 단백질 매트릭스를 해리하는 방법으로서,
상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것인 방법.
청구항 51에 있어서,
상기 조성물은 유효량의 적어도 둘 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 것인 방법.
청구항 51에 있어서,
상기 단백질 매트릭스는 콜라겐, 피브로넥틴, 겔라틴, 라미닌, 아그레칸, 엘라스틴, 피브린, 피브리노겐, 또는 이들의 조합을 포함하는 것인 방법.
적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 조성물로서,
상기 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것인 조성물.
청구항 54에 있어서,
적어도 둘 이상, 적어도 셋 이상, 적어도 넷 이상, 또는 적어도 다섯 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 암호화하는 핵산 서열을 더 포함하고,
상기 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들인 것인 조성물.
청구항 54에 있어서,
적어도 하나의 MMP 활성화 제제, 적어도 하나의 MMP 저해제, 또는 이들의 조합들을 선택적으로 포함하는 조성물.
청구항 56에 있어서,
상기 적어도 하나의 MMP 활성화 제제, 또는 적어도 하나의 MMP 저해제, 또는 이들의 조합들은 선택적으로 캡슐화 되어 있는 것인 조성물.
청구항 56에 있어서,
상기 적어도 하나의 MMP, 적어도 하나의 MMP 활성화 제제, 또는 적어도 하나의 MMP 저해제, 또는 이들의 조합들은 제어 방출 제형을 포함하는 것인 조성물.
매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)의 적어도 하나를 포함하는 조성물과 반흔 조직 또는 창상(wound)을 접촉시키는 것을 포함하는, 반흔 또는 창상을 치료 또는 치유하는 방법으로서,
상기 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것인 방법.
청구항 59에 있어서,
상기 MMP, 비활성 MMP 또는 프로엔자임(proMMP)은 단백질, 펩티드, 폴리펩티드, 핵산 서열, cDNA, 리보핵산 서열, 키메라 분자, 펩티도 모방체, 펩티드 핵산(PNA), 또는 이들의 조합들을 포함하는 것인 방법.
청구항 61에 있어서,
상기 조성물은 약학적으로 허용가능한 제제, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그를 더 포함하는 것인 방법.
청구항 59에 있어서,
상기 유효량의 임의의 둘 이상의 MMP 또는 proMMP, 활성 절편, 변형체, 돌연변이체, 또는 이들의 임의의 조합들은 상기 반흔 조직 또는 창상을 해리하거나 또는 이화하는 것인 방법.
매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)의 적어도 하나를 포함하는 조성물과 섬유증 조직을 접촉시키는 것을 포함하는, 섬유증 조직을 해리하는 방법으로서,
상기 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것인 방법.
청구항 63에 있어서,
상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)은 단백질, 펩티드, 폴리펩티드, 핵산 서열, cDNA, 리보핵산 서열, 키메라 분자, 펩티도 모방체, 펩티드 핵산(PNA), 또는 이들의 조합들을 포함하는 것인 방법.
청구항 63에 있어서,
상기 조성물은 약학적으로 허용가능한 제제, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그를 더 포함하는 것인 방법.
청구항 63에 있어서,
상기 유효량의 임의의 둘 이상의 MMP 또는 proMMP, 활성 절편, 변형체, 돌연변이체, 또는 이들의 임의의 조합들은 상기 섬유증 조직을 해리하거나 또는 이화하는 것인 방법.
유효량의 적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 조성물과 췌장 또는 췌장 조직을 접촉시키는 것을 포함하는, 췌장 또는 췌장 조직으로부터 췌도 세포(islet cell)를 단리하는 방법으로서,
상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하며,
상기 조성물은 상기 췌장 또는 췌장 조직을 이화하거나 해리하여서 췌도 세포를 단리하는 것인 방법.
청구항 67에 있어서,
상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 활성 절편을 포함하는 하나 이상의 MMP, 비활성 MMP 또는 proMMP의 하나 이상의 활성 절편을 선택적으로 포함하는 것인 방법.
청구항 67에 있어서,
상기 MMP 또는 그의 절편은 활성 또는 비활성 또는 이들의 조합들인 것인 방법.
청구항 67에 있어서,
비활성 MMP 또는 그의 절편을 활성화하는 하나 이상의 제제를 투여하는 것을 더 포함하는 방법.
청구항 67에 있어서,
유효량의 둘 이상의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP) 또는 비활성 MMP 또는 프로엔자임(proMMP), 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 조성물과 췌장 또는 췌장 조직을 접촉시키는 것을 포함하는 방법.
적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 키트로서,
상기 MMP, 비활성 MMP 또는 proMMP는 매트릭스 메탈로프로테나아제(MMP), 비활성 MMP 또는 그의 프로엔자임(proMMP)을 포함하는 것이며,
상기 MMP, 비활성 MMP 또는 그의 proMMP는 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19, MMP-20, MMP-21, MMP-23A, MMP-23B, MMP-24, MMP-25, MMP-26, MMP-27, MMP-28, 활성 절편, 돌연변이체, 변형체, 그의 약학적 조성물, 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 프로드러그, 또는 이들의 임의의 조합들을 포함하는 것인 키트.
청구항 72에 있어서,
적어도 하나의 MMP 활성화 제제 또는 적어도 하나의 MMP 저해제, 또는 이들의 조합들을 더 포함하는 키트.