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KR20120019391A - 이소말토올리고사카라이드의 제조 및 이의 용도 - Google Patents

이소말토올리고사카라이드의 제조 및 이의 용도 Download PDF

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KR20120019391A
KR20120019391A KR1020110083982A KR20110083982A KR20120019391A KR 20120019391 A KR20120019391 A KR 20120019391A KR 1020110083982 A KR1020110083982 A KR 1020110083982A KR 20110083982 A KR20110083982 A KR 20110083982A KR 20120019391 A KR20120019391 A KR 20120019391A
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KR
South Korea
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starch
enzyme
invertase
reaction
imo
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KR1020110083982A
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권혁곤
정해석
이재호
Original Assignee
콘 프로덕츠 인터내셔널 인코포레이티드
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Abstract

탄수화물 기질로부터 이소말토올리고사카라이드 (IMOs)를 제조하는 방법 및 이의 용도가 개시된다. 말토게닉 효소 및 부가적인 IMO 전구체의 존재 하에, Aspergillus sp. 전화효소는 전분 슬러리로부터 IMOs를 생산할 수 있다. 상기 전화효소의 트랜스글루코시다아제 효소로서 작용하는 능력은 IMO 당화를 위한 동시 메커니즘을 부여한다.

Description

이소말토올리고사카라이드의 제조 및 이의 용도{PRODUCTION OF ISOMALTOOLIGOSACCHARIDES AND USES THEREFOR}
우선권
본원은 2010, 8, 24 출원된 미국 가출원 제 61/376,545 호에 대한 우선권을 주장하며, 상기 문헌의 내용 전체는 본원에 참조로 포함된다.
기술분야
본 발명은 일반적으로 아스퍼질러스 나이거 (Aspergillus niger ) 및/또는 아스퍼질러스 오리재 (Aspergillus oryzae ) 로부터 유도되는 전화효소를 이용하여 이소말토올리고사카라이드를 제조하는 방법 및 이의 용도에 관한 것이다. 상기 방법은 탄수화물 기질로부터 이소말토올리고사카라이드를 제조한다.
다음의 기재는 읽는 사람의 이해를 돕기 위하여 제공된다. 제공되는 정보 또는 인용되는 문헌 중 어떠한 것도 종래기술로 인정되지 않는다.
이소말토올리고사카라이드 (IMO 또는 IMOs)는 α-(1,4)- 및/또는 α-(1,6)-글루코시드 결합의 혼합물을 가지는 혼합된 결합 올리고사카라이드이다. IMOs는 이소말토오스, 판노오스, 이소말토트리오스, 이소말토테트라오스, 이소판노오스, 및 프럭토올리고사카라이드, 갈락토올리고사카라이드, 자일로올리고사카라이드, 및 겐티오올리고사카라이드와 같은 기타 고급 분지형 올리고사카라이드를 포함한다. IMO 생산은 출발 원료 물질이 말토오스 기질, 예를 들어 콘 시럽으로 전환되는 복합 효소 공정을 통하여 일어난다. 이어서, IMOs는 효소-촉매화 트랜스글루코시드 반응에 의하여 합성된다.
IMOs는 건강 기능 식품 올리고사카라이드(FHFO)로 분류되는 올리고사카라이드 군에 속한다. IMOs는 규칙적으로 섭취될 때 건강 증진과 관련이 있으며, 때때로 "프리바이오틱스"로 불리운다. 프리바이오틱스는 공생하는 또는 유리한 미생물의 성장을 자극시켜 개개인에 생물학적 효과를 발휘하는 비-소화성 물질, 예를 들어, 식이 섬유로 정의된다. IMOs는 식품 및 음료에 사용될 수 있는 감미료 제품으로 사용될 수 있다.
발명의 개요
일 측면에서, 본 발명은 (a) 전분 슬러리를 액화 효소와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 단계 (a)의 생성물을 말토게닉 효소 및 전화효소와 접촉시키는 단계를 포함하는 이소말토올리고사카라이드 조성물의 제조 방법으로서, 상기 말토게닉 효소 및 상기 전화효소는 별개로, 순차적으로, 또는 동시에 접촉하여 이소말토올리고사카라이드(IMO)를 생산하는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
일 구현예에서, 상기 말토게닉 효소 및 전화효소는 동시에 접촉한다. 일 구현예에서, 상기 슬러리는 15 내지 45 중량%의 전분을 포함한다. 일 구현예에서, 상기 전화효소는 (b)의 모든 반응물의 적어도 0.0009 중량%이다. 일 구현예에서, 상기 전화효소는 (b)의 모든 반응물의 2 중량% 미만이다. 일 구현예에서, (b)는 pH 2 이상 10 이하에서 일어난다. 일 구현예에서, (b)는 10℃ 이상 85℃ 이하의 온도에서 일어난다.
일 측면에서, 상기 이소말토올리고사카라이드는 이소말토오스, 분지형 글루코오스, DP3 글로코오스, 판노오스, 이소말토트리오스, 이소말토테트라오스, 이소말토펜타오스, 이소말토헥사오스, 및 이소말토헵토오스, 또는 이의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서, 생산된 이소말토올리고사카라이드의 적어도 10%가 판노오스이다. 일 구현예에서, 상기 방법은 상기 이소말토올리고사카라이드를 정제하는 단계를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 상기 액화 효소는 알파-아밀라아제이다. 일 구현예에서, 상기 말토게닉 효소는 베타-아밀라아제이다. 일 구현예에서, 상기 전화효소는 트랜스글루코시다아제 활성을 가진다. 일 구현예에서, 상기 전화효소는 아스퍼질러스 (Aspergillus) 전화효소이다. 일 구현예에서, 상기 Aspergillus 전화효소는 아스퍼질러스 (Aspeillus niger) 전화효소이다. 부가적으로 또는 대안적으로, 일 구현예에서, 상기 Aspergillus 전화효소는 아스퍼질러스 오리재 (Aspergillus oryzae) 전화효소이다.
일 구현예에서, 상기 슬러리는 하나 이상의 전분 및 액체로부터 형성된다. 일 구현예에서, 상기 하나 이상의 전분은 옥수수 전분, 쌀 전분, 밀 전분, 타피오카, 감자 전분, 고구마 전분, 사고 전분, 보리 전분, 열/산 처리 전분, 펄 전분, 왁시 콘 전분, 수수 전분, 고 아밀라아제 옥수수 전분, 액체 덱스트로오스, 및 이의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서, 상기 전분은 옥수수 전분이다.
일 측면에서, (a) 전분 슬러리를 액화 효소와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 단계 (a)의 생성물을 말토게닉 효소 및 전화효소와 접촉시키는 단계를 포함하고, 상기 말토게닉 효소 및 상기 전화효소는 별개로, 순차적으로, 또는 동시에 접촉하여 이소말토올리고사카라이드(IMO)를 생산하는 것을 특징으로 하는 이소말토올리고사카라이드 조성물의 제조 방법에 의하여 이소말토올리고사카라이드 조성물이 제조된다.
일 측면에서, (a) 전분 슬러리를 액화 효소와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 단계 (a)의 생성물을 말토게닉 효소 및 전화효소와 접촉시키는 단계를 포함하고, 상기 말토게닉 효소 및 상기 전화효소는 별개로, 순차적으로, 또는 동시에 접촉하여 이소말토올리고사카라이드(IMO)를 생산하는 것을 특징으로 하는 이소말토올리고사카라이드 조성물의 제조 방법에 의하여 이소말토올리고사카라이드를 포함하는 식품 첨가물이 제공된다.
일 측면에서, (a) 전분 슬러리를 액화 효소와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 단계 (a)의 생성물을 말토게닉 효소 및 전화효소와 접촉시키는 단계를 포함하고, 상기 말토게닉 효소 및 상기 전화효소는 별개로, 순차적으로, 또는 동시에 접촉하여 이소말토올리고사카라이드(IMO)를 생산하는 것을 특징으로 하는 이소말토올리고사카라이드 조성물의 제조 방법에 의하여 적어도 하나의 식품 성분 및 이소말토올리고사카라이드를 포함하는 식료품이 제공된다.
본 발명에 따르면, 탄수화물 기질로부터 이소말토올리고사카라이드 (IMOs)를 제조하는 방법 및 이의 용도가 개시된다. 말토게닉 효소 및 부가적인 IMO 전구체의 존재 하에, Aspergillus sp. 전화효소는 전분 슬러리로부터 IMOs를 생산할 수 있다. 상기 전화효소의 트랜스글루코시다아제 효소로서 작용하는 능력은 IMO 당화를 위한 동시 메커니즘을 부여한다.
도 1은 종래 및 동시 당화 (saccharification) 반응을 나타내는 차트이다.
도 2는 종래 및 동시 당화 반응 중 IMO 함량 변화를 나타내는 그래프이다.
올리고사카라이드, 특히 IMOs의 제조 방법이 개시된다. 또한, 편리한 IMO 제조를 위한 향상된 방법을 제공하는 단계들을 이용하는 IMOs의 상업적 제조를 위한 방법, 단계 및 반응들이 개시된다.
이하 상세한 설명, 도면 및 청구범위에 기재되는 예시적 구현예들은 제한적인 것으로 의도되지 않는다. 기타 구현예들을 이용할 수 있고, 본원에 제시되는 요지의 범위 또는 사상으로부터 이탈됨이 없이 기타 변화들을 행할 수 있다. 이하 기재되는 용어들은 명세서를 전체로서 참조하여 보다 완전히 이해된다. 단위, 접두어 및 기호들은 인정되는 SI 형태로 표시될 수 있다.
본원에서 단수는 하나임이 분명히 명시되지 않는 한 "하나 이상"을 의미한다. 따라서, 예를 들어, "탄수화물"은 단일 탄수화물뿐 아니라 2 이상의 탄수화물의 혼합물을 포함한다.
본원에서 "약"은 당업자에 의하여 이해될 것이며 사용되는 문맥에 따라 어느 정도 변화할 것이다. 당업자에게 분명하지 않은 용어의 사용이 있는 경우, 사용되는 문맥을 고려하여 "약"은 특정 용어의 플러스 또는 마이너스 10%까지 의미할 것이다.
본원에 사용되는 용어 "탄수화물"은 당업자에 의하여 폴리히드록시-알데히드 또는 -케톤 및 이로부터 유도되는 화합물을 포함하는 것으로 이해될 것이다. 탄수화물은 적어도 하나의 기본 모노사카라이드 단위로 이루어지는 화합물을 포함할 수 있다. 이들은 단순 탄수화물 및 복합 탄수화물로 분류될 수 있다. 단순 탄수화물은 모노사카라이드 및 디사카라이드이다. 복합 탄수화물은 폴리사카라이드, 또는 모노사카라이드의 직쇄 또는 분지쇄로 이루어지는 큰 분자이다.
본원에 사용되는 용어 "액화(liquefaction 또는 liquefying) 시럽"은 이에 제한되지 않으나 α-아밀라아제와 같은 액화 효소와 반응한 탄수화물 기질을 의미한다. 액화 시럽은 액화 반응을 통하여 생산된다.
본원에 사용되는 용어 "액화 반응"은 혼합물 내 하나 이상의 탄수화물의 점도를 감소시키고/거나 유동도를 증가시키는 효소적 또는 화학적 반응을 의미한다.
본원에 사용되는 용어 "트랜스글루코시드" 또는 "트랜스글루코시다아제"는 가수분해 및/또는 전이(transfer) 반응을 촉매하여 새로운 α-1,6 결합을 형성하는 효소 또는 활성을 의미한다. 이러한 효소는 이에 제한되지 않으나 트랜스글루코시다아제 및 전화효소를 포함한다.
본원에 사용되는 용어 "액화 효소"는 많은 α-아밀라아제 또는 기타 아밀라아제 중 하나일 수 있다. 액화 효소는 전분의 유동도 또는 점도, 즉 전분 유동화에 영향을 미친다. 예시적 전분 액화 효소는 α-아밀라아제를 포함한다.
본원에 사용되는 용어 "말토게닉(maltogenic) 효소"는 더 큰 탄수화물 폴리머로부터 말토오스의 생산을 촉매하는 효소를 의미한다. 말토게닉 효소는 많은 β-아밀라아제 또는 기타 아밀라아제 중 하나일 수 있다. 말토게닉 반응은 말토오스를 생산한다.
본원에 사용되는 용어 "전화효소(invertase)" 또는 "전화효소들"은 가수분해 및 전이 반응을 촉매하여 새로운 α-1,6 결합을 형성하는 효소류를 의미한다. 전화효소는 트랜스글리코실화 반응을 통하여 모노사카라이드를 전이함으로써 당(sugar) 합성을 촉매한다. 예를 들어, 본 발명의 방법에 유용한 전화효소는 트랜스글루코시다아제 활성을 가진다, 즉, 글리코시드 결합을 가수분해하여 사카라이드의 가수분해를 촉매한다. 전화효소는 식물, 동물, 박테리아, 또는 균류 전화효소일 수 있다. 일 구현예에서, 상기 전화효소는 Aspergillus sp. 전화효소이다. 비제한적인 예시로서, 일부 구현예에서, 전화효소는 Aspergillus niger 및/또는 Aspergillus oryza로부터 유도된다. 본원에 사용되는 "트랜스글루코시다아제 활성을 가지는 전화효소" 또는 "본 발명의 전화효소"는 당화 반응을 촉해할 수 있는 전화효소를 의미한다.
본원에 사용되는 용어 "당화(saccharification) 반응" 또는 "당화"는 말토게닉 및 트랜스글루코시드 반응을 통하여 액화 시럽을 IMOs로 전환시키는 공정을 의미한다. 본원에 기재되는 당화 반응은 하나 이상의 단계 또는 반응으로 일어날 수 있으며, 상기 단계 또는 반응은 별개로, 순차적으로 또는 동시에 일어난다.
IMO 제조 방법
본 발명은 IMO 제조를 위한 향상된 방법에 관한 것이다. 상기 IMO 제조를 위한 향상된 방법은 별개의, 순차적인 또는 동시의 당화 반응에 부가하여, 탄수화물 기질이 액화 효소와 반응하여 IMO 생성물을 제조할 때 일어난다.
일 측면에서, 본 발명은 (a) 전분 슬러리를 액화 효소와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 단계 (a)의 생성물을 말토게닉 효소 및 전화효소와 접촉시키는 단계를 포함하는 이소말토올리고사카라이드 조성물의 제조 방법으로서, 상기 말토게닉 효소 및 상기 전화효소는 별개로, 순차적으로, 또는 동시에 접촉하여 이소말토올리고사카라이드(IMO)를 생산하는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
일부 구현에에서, 본 발명의 방법은 제1 당화 반응 및 제2 당화 반응, 또는 동시 당화 반응을 포함한다. 일 구현예에서, 상기 제1 당화 반응은 말토게닉 생성물, 즉, 말토오스 또는 말토오스 시럽을 생산한다. 상기 제2 당화 반응은 트랜스글루코시드 활성을 가지는 전화효소와 같은 하나 이상의 효소를 상기 말토게닉 생성물에 적용하여, 상기 말토게닉 생성물의 일부 또는 전부를 IMOs로 전환시키는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 원료 물질, 즉 전분 슬러리의 말토오스로의 전환이 제1 당화 반응, 즉, 말토게닉 반응 중에 일어난다. 트랜스글루코시드 활성을 가지는 전화효소가 반응 중에 사용되는 제2 당화 반응, 즉, 트랜스글루코시드 반응 중 IMO 생산이 일어난다.
기질
본 발명의 방법은 탄수화물 기질을 사용한다. 본원에 사용되는 용어 "탄수화물" 또는 "탄수화물 기질"은 이에 제한되지 않으나, 전분, 천연 비변성 전분, 옥수수 전분, 밀 전분, 타피오카 전분, 감자 전분, 고구마 전분, 사고 전분, 보리 전분, 쌀 전분, 열/산 처리 전분 (덱스트린), 펄 전분, 왁시 콘 전분, 수수 전분, 고 아밀로오스 옥수수 전분, 높은 고체 함량의 액체 덱스트로스, 및 이의 조합을 의미한다.
일 구현예에서, 상기 탄수화물 기질은 전분 기질이다. 상기 전분 기질은 이에 제한되지 않으나, 옥수수 전분일 수 있다. 일 구현예에서, 상기 탄수화물 기질은 전분 슬러리이다. 본원에 기재되는 용어 "슬러리"는 이에 제한되지 않으나 전분 과립과 같은 불용성 성분을 함유하는 수성 혼합물을 의미한다. 때때로, 용어 "슬러리" 또는 "시럽" 또는 "현탁액"은 상호 교환가능하게 사용된다. 본원에 기재되는 용어 "전분 기질" 또는 "전분 슬러리"는 전분과 조합되는 액체 용액을 의미하며, 여기서 전분은 식 (C6H10O5)x (x는 임의의 숫자일 수 있다)을 가지는 복합 폴리사카라이드 탄수화물로 이루어지는 임의의 물질이다. 상기 액체는 수성 용매, 예를 들어 물일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 전분 슬러리는 하나 이상의 다양한 형태의 전분을 포함한다. 미국 특허 제 7,638,151 호에 기재된 바와 같이, 전분의 일 형태는 선형 사슬 폴리사카라이드인 아밀로오스이다. 기타 형태의 전분은 분지형 사슬 폴리사카라이드인 아밀로펙틴을 포함한다. 아밀로오스는 모든 D-글루코오스 단위가 α-(1,4)-결합, 즉 "α-(1,4)-결합" 또는 "1,-α-D-글루코실 결합"에 의하여 연결되는 긴 비분지형 사슬을 함유한다. 아밀로펙틴은 백본 글루코시드 결합이 α-(1,4-)-결합인 매우 분지형이나, 상기 분지점 또한 α-(1,6)-결합을 제공한다. 본원에 사용되는 용어 "결합" 또는 "결합들"은 글루코오스 또는 기타 분자가 부착되는 탄소 모이어티의 수를 의미한다. 상기 α(알파) 및 β (베타) 접두어는 상기 결합이 탄소 고리에 각각 축 방향인지 적도 방향인지를 나타낸다. 따라서, 알파 결합은 고리에 적도 방향이고 베타 결합은 축 방향이다.
일 구현예에서, 전분 기질의 양 또는 농도, 즉, 전분 슬러리의 농도는 1-60%, 5-45%, 10-40%, 20-40%, 또는 25-35% 용해가능한 고체 (ds) 사이의 농도를 가지는 수성 슬러리일 수 있다. 본원에 기재되는 용어 "용해가능한 고체" 또는 "ds"는 용액 내 현탁되는 고체 즉 전분의 백분율을 의미한다. 일 구현예에서, 상기 슬러리의 pH는 1.0-9.0, 2.0-8.0, 3.0-7.5-, 4.0-6.5, 또는 4.5-6.0 사이이다. 다른 구현예에서, 상기 슬러리의 pH는 5.8-6.1 사이이다. 일 측면에서, 본 발명은 5-25, 10-25, 15-23, 또는 18-22°Be 사이의 전분 슬러리 농도 또는 밀도를 제공한다. 일 구현예에서, 상기 슬러리의 밀도는 19-22°Be 사이이다. 본원에 사용되는 "Be" 또는 "Baum" 밀도는 특정 온도에서 전분 슬러리의 비중의 함수로서 결정된다.
액화 반응
일 구현예에서, 상기 전분 슬러리는 액화 효소와 접촉함으로써, 액화 시럽을 생산한다. 일 구현예에서, 액화는 전분의 주요 성분의 효소적 가수분해를 포함한다. 일 구현예에서, 아밀로오스가 α-아밀라아제, 예를 들어, α-(1,4)-글루칸 4-글루카노히드로라아제에 의하여 가수분해될 수 있다. 상기 α-아밀라아제는 α-(1,4)-결합을 가수분해하여 글루코오스, 말토오스, 말토트리오스 및 그 이상의당의 혼합물을 생산한다. 예를 들어, 미국 특허 제 4,113,509 호를 참조한다. 아밀로오스 또한 β-아밀라아제에 의하여 가수분해될 수 있다. β-아밀라아제는 비환원 말단에서 시작하여 연속적인 말토오스 단위를 절단하여 정량적으로 말토오스를 생산한다. 상기 α- 및 β-아밀라아제는 또한 아밀로펙틴을 가수분해한다. α- 또는 β-아밀라아제 중 어떠한 것도 아밀로펙틴의 분지점에서 α-(1,6)-결합을 가수분해하지 못한다. 아밀로펙틴에 대한 완벽한 β-아밀라아제 활성의 최종 생성물은 큰, 고도로 분지된 코어 또는 β-한계 덱스트린이다. 탈분지 효소, 예를 들어, 풀루라나아제 또는 α-(1,6)-글루칸-6-글루카노하이드로라아제, 또는 α-(1,6)-글루코시다아제는 분지점에서 α-(1,6)-결합을 가수분해할 수 있다. 본원에 사용되는 용어 "탈분지(debranching) 효소"는 α-(1,6)-결합의 가수분해를 촉매하는 효소를 의미한다. 예시적인 탈분지 효소는 α-덱스트린-엔도-(1,6)-α-글루코시다아제, 한계 덱스트리나아제, 탈분지 효소, 또는 (1,6)-글루카노히드로라아제로도 알려져 있는 풀루라나아제이다. 예를 들어, Schulein, et al ., Characterization of a New Class of Thermophilic Pullulanases from Bacillus acidopullulyticus, Annals of the New York Academy of Sciences, Vol. 434, Issue 1, pp. 271-74 (2006)을 참조한다.
일 측면에서, 상기 액화 효소는 박테리아, 균류, 식물 또는 기타 급원으로부터 유도, 분리 또는 추출된 효소이다. 일 구현예에서, 상기 박테리아 급원은 Bacillus sp.α-아밀라아제이다. 일 구현예에서, 상기 α-아밀라아제는 B. subtilis, B. licheniformis, B. stearothermophilus, B. coagulans, B. amyloliquefaciens, 및 B. lentus로부터 선택되는 적어도 한의 박테리아 급원으로부터 유도되는 것들을 포함하는, Bacillus sp.로부터 유도된다. 일 구현예에서, B.licheniformis or B. stearothermophilus로부터의 α-아밀라아제가 액화 효소이다. 다른 구현예에서, α-아밀라아제 이외의 다른 아밀라아제가 액화 효소로서 사용된다. 일 구현예에서, 미국 특허 제 5,763,385호, 제 5,824,532호, 제 5,958,739호, 및 제 6,008,026 호에 기재된 바와 같은, 돌연변이, 유전적으로 변형된 아밀라아제, 또는 변이체 아밀라아제를 포함하는, 증가된 산화 또는 열안정성을 특징으로 하는 아밀라아제가 고려된다. 일 구현예에서, 상기 액화 효소는 알 안정성 α-아밀라아제이다.
일 구현예에서, 상기 액화 효소는 전분 슬러리와 접촉하여 액화된 또는 가용화된 전분의 점도를 감소시킨다. 불용성 전분 성분이 덱스트린화를 통하여 가용성 물질로 전환된다. 본원에 사용되는 용어 "덱스트린화(dextrinization)"는 가용성 폴리사카라이드 또는 올리고사카라이드로의 전분의 전환을 의미한다. 일 구현예에서, 하나 이상의 액화 효소를 전분 슬러리에 첨가한다. 상기 액화 효소는 상기 슬러리에 수동적으로 또는 자동적으로 0.0001-10%, 0.001-5% 또는 0.01-1% (w/w/ds)의 양으로 첨가될 수 있다. 일 구현에에서, 상기 액화 효소는 상기 슬러리에 0.40-0.70%, 0.50-0.60%, 또는 0.55% (w/w/ds)의 양으로 첨가될 수 있다. 일 구현예에서, 상기 액화 효소는 상기 슬러리에 0.55% (w/w/ds)의 양으로 첨가될 수 있다.
일 구현예에서, 액화 효소 농도는 0.0001-10%, 0.001-5% 또는 0.005-1% (w/w/ds)의 액화 효소 대 전분 슬러리의 ds이다. 일 구현예에서, 액화 효소 농도는 0.015-0.035% 또는 0.022-0.025% (w/w/ds)의 액화 효소 대 전분 슬러리의 ds이다. 다른 구현예에에서, 0.04-0.07%, 0.05-0.06%, 또는 0.04-0.05% (w/w/ds)의 액화 효소 농도가 사용된다. 일 구현예에서, 상기 액화 효소 농도는 0.045% (w/w/ds)의 액화 효소 대 ds 전분 슬러리이다.
일 구현예에서, 액화 효소는 전분 슬러리가 15-210 분, 60-21 분, 90-180 분, 또는 120-150 분 동안 적합한 온도에서 반응한다. 일 구현예에서, 액화 효소는 전분 슬러리와 약 130분 동안 적합한 온도에서 반응한다. 상기 액화 효소는 상기 슬러리에 수동적으로 또는 자동적으로 90-125℃, 95-115℃, 100-110℃ 또는 100-108℃에서 첨가된다. 일 구현예에서, 상기 액화 효소의 pH는 4.0-8.0, 5.0-7.0, 또는 5.8-6.1 사이의 범위로 유지된다. 당업자는 상기 액화 효소의 pH를 적합한 양의 산 또는 염기, 예를 들어, (염산 HCl) 또는 수산화나트륨 (NaOH)를 필요시 사용 및 적용하여 유지할 수 있음을 인지할 것이다. 일 구현예에서, IMO 전구체를 함유하는 액화 시럽을 액화 반응을 통하여 생산한다.
말토게닉 반응
일 구현예에서, 전분 슬러리를 액화 효소와 접촉시킨 다음, 말토게닉 효소와 접촉시킴으로써 말토오스를 제조한다. 일 구현예에서, 전분 슬러리를 말토게닉 효소 작용성을 함유하는 액화 효소와 접촉시킴으로써 말토오스를 함유하는 액화 시럽을 제조한다. 본원에 사용되는 용어 "말토게닉 효소"는 탄수화물을 말토오스 및 그 유도체로 전환시키는 효소를 의미한다. 예시적인 말토게닉 효소는 이에 제한되지 않으나, 균류, 박테리아 및 식물 유도 α-아밀라아제 및 β-아밀라아제를 포함한다. 본원에 사용되는 용어 "말토오스"는 α-(1,4)-글루코시드 결합에 의하여 연결되는 두 개의 글루코실 잔기를 가지는 디사카라이드를 의미한다. 일 구현예에서, 상기 말토오스는 말토오스 풍부 슬러리 또는 전분, 즉, 액화 시럽으로부터 제조된다.
일부 구현예에서, 당화 반응은 액화 탄화수소 기질, 즉 액화 시럽의 가수분해를 포함한다. 상기 당화 반응은 말토게닉 반응 및 트랜스글루코시드 반응을 포함하며, 상기 반응은 별도로, 순차적으로, 또는 동시에 일어날 수 있다. 상기 당화 반응은 일반적으로 하나 이상의 당화 효소를 상기 액화 시럽에 첨가함으로써 수행된다. 일 구현예에서, β-아밀라아제, 트랜스글루코시다아제, 전화효소, 풀루라나아제, 및 이의 조합으로부터 선택되는 하나 이상의 당화 효소가 액화 시럽과 반응하여 IMOs 또는 IMO 전구체를 제조한다. 본원에 사용되는 "IMO 전구체"는 IMOs를 형성하는데 요구되는 IMO의 임의의 구성 성분을 함유하는 조성물을 의미한다. 일 구현예에서, IMO 전구체는 말토오스 또는 그 유도체이다.
일부 구현예에서, 액화 시럽의 가수분해는 말토게닉 효소의 존재 하에 일어난다. 일 구현예에서, 상기 말토게닉 효소는 β-아밀라아제이다. 몇몇 α-아밀라아제는 α-아밀라아제와 전분 기질의 접촉이 말토오스를 생산할 수 있을 정도로 말토게닉이지만, β-아밀라아제가 다양한 전분과의 접촉이 증가된 양의 IMO 전구체, 즉, 말토오스를 글루코오스와 같은 기타 사카라이드를 배제하고 제공한다는 점에서 유리하다. 예를 들어, 미국 특허 제 4,970,158 호 및 제 4,647,538 호를 참조한다. 일 구현예에서, 상기 β-아밀라아제는 식물, 미생물 효소, 또는 열안정성 박테리아 β-아밀라아제이다. 적합한 β-아밀라아제는 재조합 및 돌연변이 β-아밀라아제뿐 아니라 천연발생일 수 있는 것으로 당업자에게 쉽게 이해될 것이다. 본원에 사용되는 용어 "β-아밀라아제"는 α-(1,4)-글루코시드 결합의 가수분해를 촉매함으로써 말토오스 단위를 배출하는 효소를 의미한다. β-아밀라아제는 또한 폴리사카라이드 내 (1,4)-α-D-글루코시드 결합의 가수분해를 실행하여 사카라이드 체인의 비환원 말단으로부터 말토오스 단위를 순차적으로 제거하는 효소로서 기재되어 있다. 예를 들어, 미국 특허 제 7,638,151 호를 참조한다.
일 구현예에서, 상기 말토게닉 반응은 적어도 12, 20, 72 또는 120 시간 (h) 동안 수행된다. 일 구현예에서, 말토게닉 반응은 40℃, 50℃, 55℃, 60℃, 및 65℃ 내지 90℃ 범위의 온도에서 수행된다. 일 구현예에서, 상기 말토게닉 반응은 60-65℃ 사이의 온도에서 일어난다. 일 구현예에서, 상기 말토게닉 반응은 4,0-, 5.0-, 5,5-, 6.0- 내지 7.0 사이의 알칼리 pH에서 일어난다. 일 구현예에서, 상기 말토게닉 반응의 pH는 5.0-5.5 사이이다. 당업자는 상기 말토게닉 반응의 pH가 적합한 양의 산 또는 염기, 예를 들어 염산 (HCl) 또는 수산화나트륨 (NaOH)를 필요시 사용 및 적용하여 유지할 수 있음을 인지할 것이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 액화 시럽 내에 존재하는 용해된 말토오스의 양의 함수로서 말토게닉 반응 중에 적용되는 말토게닉 효소의 적합한 양을 포함한다. 이를 위하여, 탄수화물, 즉 전분의 액화 후, 상기 액화 시럽의 용해된 말토오스 함량을 측정하고 적합한 양의 말토게닉 효소를 말토게닉 반응에 적용한다. 말토게닉 효소의 양은 첨가되는 특정 말토게닉 효소, 액화 시럽의 총양, 즉 시럽의 고체 함량에 따라 0.0001-10% (w/w), 또는 0.0005-1% (w/w), 또는 0.001-0.25% (w/w)의 범위이다.
일 구현예에서, 말토게닉 반응 중에 0.0001-10% (w/w) 풀루라나아제를 당화 반응에 적용한다. 일 구현예에서, 말토게닉 반응 중에 0.01-1% (w/w) 풀루라나아제를 당화 반응에 적용한다. 다른 구현예에서, 말토게닉 반응 중에 0.05-0.1% (w/w) 풀루라나아제를 당화 반응에 적용한다.
일 구현예에서, 말토게닉 효소 및/또는 풀루라나아제를 제1 당화 또는 말토게닉 반응에 0.001-1% (w/w) 농도로 35-40°Bx의 Brix 상대 밀도로 첨가할 수 있다. 본원에 기재되는 용어 "Birx 상대 밀도", "Brix" 또는 "°Bx"는 소정의 온도에서 용액의 당 함량을 측정하기 위한 주지된 비중계 눈금이다. 따라서, 단위 °Bx는 용액 내 가용화된 당의 측정이다. 상기 Brix 눈금은 100 g의 수성 당 용액 당 존재하는 당의 그램 수를 측정한다 (총 가용화된 고체 함량). 예를 들어, 1.0°Bx 측정값은 용액 내 10mg/ml의 당을 의미한다. 일 구현예에서, 0.01-0.1% (w/w)의 말토게닉 효소 및/또는 풀루라나아제를 35-40°Bx로 제1 당화 반응 또는 말토게닉 반응에 적용한다. 일 구현예에서, β-아밀라아제가 상기 제1 당화 반응에 적용되는 말토게닉 효소이다. 일 구현예에서, β-아밀라아제 및 풀루라나아제가 제1 당화 반응에 적용된다.
일 구현예에서, β-아밀라아제는 0.005-5%, 0.01-1%, 또는 0.02-0.05% (w/w) 농도로, 풀루라나아제의 존재 또는 부재 하에, 35-40°Bx로 제1 당화 반응 또는 말토게닉 반응에 적용된다. 다른 구현예에서, 풀루라나아제는 0.005-5%, 0.01-1%, 또는 0.02-0.05% (w/w) 농도로 35-40°Bx로 제1 당화 반응 또는 말토게닉 반응에 적용된다. 일 구현예에서, 풀루라나아제는 0.025% (w/w)의 농도로 35-40°Bx로 제1 당화 반응 또는 말토게닉 반응에 적용된다.
일부 구현예에서, 상기 말토게닉 반응은 10-100 시간 (h) 동안 진행된다. 일 구현예에서, 상기 말토게닉 반응은 15-30h 동안 진행된다. 일 구현예에서, 상기 말토게닉 반응은 20-24h 동안 진행된다. 일 구현예에서, 상기 말토게닉 반응은 50-70℃의 온도에서 일어난다. 다른 구현예에서, 상기 말토게닉 반응은 55-65℃의 온도에서 일어난다. 일 구현예에서, 상기 말토게닉 반응은 알칼리 pH에서 일어난다. 일 구현예에서, 상기 말토게닉 반응의 pH는 4.0-7.0이다. 일 구현예에서,상기 말토게닉 반응의 pH는 5.5-5.8 사이이다. 당업자는 적합한 양의 산 또는 염기, 예를 들어, 염산 (HCl) 또는 수산화나트륨 (NaOH)를 필요시 사용 및 적용하여 상기 말토게닉 반응의 pH를 유지할 수 있음을 인지할 것이다.
트랜스글루코시드 반응
글루코오스 모이어티 및 그 유도체의 전이는 트랜스글루코시드 효소의 존재하에 일어날 수 있다. 상기 말토게닉 반응 및 트랜스글루코시드 반응은 특정 반응에 적용되는 당화 효소에 따라 별개로, 순차적으로, 또는 동시에 일어날 수 있다. 일 구현예에서, 동시 당화 반응이 전화효소의 존재하에 일어난다. 일 구현예에서, 상기 동시 당화 반응은 말토게닉 반응 및 트랜스글루코시드 반응을 포함한다. 예를 들어, 트랜스글루코시드 반응은 말토게닉 반응과 동시에 일어나, 동시 당화 반응을 제공할 수 있다. 본원에 사용되는 "동시 당화 반응"은 시간상 및 공간상 근접하여 일어나는 제1 당화 반응 및 제2 당화 반응을 의미한다. 동시 당화 반응에서, 제1 당화 반응의 생성물은 제2 당화 반응 내 기질로서 사용되기에 즉시 유용하다. 일 구현예에서, 상기 동시 당화 반응은 말토게닉 효소 및 트랜스글루코시드 활성을 가지는 전화효소의 존재하에 일어난다. 본 발명의 다른 측면은 말토게닉 기질과 반응하는 전화효소를 개시한다. 일 구현예에서, 트랜스글루코시드 활성을 가지는 전화효소는 말토게닉 기질과 반응한다.
일 구현예에서, 상기 트랜스글루코시드 반응은 하나 이상의 당화 효소를 말토게닉 반응 생성물에 첨가하여 순차적으로 수행된다. 일 구현예에서, 하나 이상의 효소는 β-아밀라아제, 트랜스글루코시다아제, 전화효소, 풀루라나아제, 및 이의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 액화 시럽 또는 말토게닉 반응 생성물과 반응하여 트랜스글루코시드 반응 중 IMOs를 생산한다. 일 구현예에서, 전화효소가 상기 액화 시럽과 반응하여 트랜스글루코시드 반응 중 IMOs를 생산하는 트랜스글루코시드 효소이다. 다른 구현예에서, Aspergillus sp.가 상기 액화 시럽과 반응하여 트랜스글루코시드 반응 중 IMOs를 생산하는 트랜스글루코시드 효소이다.
다른 구현예에서, 상기 트랜스글루코시드 반응은 2 이상의 효소에 의하여 촉매된다. 예를 들어, 트랜스글루코시드 활성을 가지는 전화효소와 트랜스글루코시다아제 (TG)의 조합을 당화 반응에 이용할 수 있다. 일 구현예에서, 상기 트랜스글루코시드 효소는 Aspergillus sp.이다. 일 구현예에서, 상기 트랜스글루코시드 효소는 Aspergillus niger TG이다. 앞서 기재한 바와 같은 TG가 트랜스글루코시다아제로서 작용할 수 있으나, 전화효소가 다양한 전분- 및 말토오스계 기질과 접촉하여 TG를 이용하는 전형적인 방법과 비교하여 증가된 IMO 생산을 제공하므로 전화효소의 이용이 유리하다.
일 구현예에서, 상기 트랜스글루코시드 반응, 즉, 제2 당화 반응은 10-100h 동안 수행된다. 일 구현예에서, 상기 제2 당화 반응은 30-90h 동안 수행된다. 일 구현예에서, 상기 제2 당화 반응은 48-72h 동안 일어난다. 일 구현예에서, 상기 제2 당화 반응은 10-100h, 30-90h, 또는 48-72h 동안 50-70℃의 온도에서 가열된다. 다른 구현예에서, 상기 제2 당화 반응은 10-100h, 30-90h, 또는 48-72h 동안 55-65℃의 온도에서 가열된다. 일 구현예에서, 상기 제2 당화 반응은 60-65℃에서 일어난다. 일 구현예에서, 상기 반응은 4.0-, 5.0-, 5.5-, 6.0-, 내지 7.0의 알칼리 pH에서 일어난다. 일 구현예에서, 상기 제2 당화 반응의 pH는 5.0-5.5 사이이다. 당업자는 적합한 양의 산 또는 염기, 예를 들어 염산 (HCl) 또는 수산화나트륨 (NaOH)을 필요시 사용 및 적용하여 제2 당화 반응의 pH를 유지할 수 있음을 인지할 것이다.
일부 구현예에서, 적합한 양의 전화효소를 액화 시럽 내 기질의 양의 함수로서 동시 당화 반응에 적용한다. 이 점에서, 탄수화물, 즉 전분의 액화 후, 시럽의 용해된 말토오스 함량을 결정할 수 있으며, 적합한 양의 효소를 동시 당화 반응을 위하여 적용한다. 효소의 양은 액화 시럽의 총 중량, 즉 건조 고체 함량에 따라 변화할 것이다. 전화효소를 적용하는 것에 부가하여, 하나 이상의 말토게닉 효소를 또한 동시 당화 반응에 적용한다.
일 구현예에서, 0.0001-10% (w/w) 사이의 전화효소를 당화 효소로서 당화 반응에 적용한다. 일 구현예에서, 0.001-5% (w/w) 전화효소를 당화 효소로서 당화 반응에 적용한다. 일 구현예에서, 0.01-1% (w/w) 전화효소를 당화 반응에 적용한다. 일 구현예에서, 0.05-0.5% (w/w) 전화효소를 당화 반응에 적용한다. 일 구현예에서, 0.016% (w/w) 전화효소를 당화 반응에 적용한다.
당화 효소는 동시 당화 반응에 수동적으로 또는 자동적으로, 단독으로 또는 조합으로, 앞서 기재한 농도로 첨가할 수 있으며, 여기서 액화 시럽의 Brix 밀도는 35-40°Bx이다. 일 구현예에서, 액화 시럽의 Brix 밀도는 36°Bx이다. 일 측면에서, 당화 반응은 말토게닉 생성물 일부 또는 전부를 IMOs로 전환시킨다.
IMO 정제 및 그 용도
일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 IMO 반응으로부터 이물질을 제거하는 단계를 포함한다. 이물질은 이에 제한되지 않으나, 미반응 원료 물질 및 변성 단백질, 탄수화물, 및 전분을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 정제 단계는 이에 제한되지 않으나, 여과, 침강 및 응고, 및 이의 변형 및 조합을 포함한다. 일 구현예에서, IMO 시럽을 여과 장치를 이용하여 여과한다. 여과 장치는 압축하여 여과를 보조하며, 드럼 필터; 회전 드럼 필터; 펄라이트; 셀라이트; 및 이의 조합을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 탈색 단계를 포함한다. 탈색은 IMO 생성물 또는 IMO 시럽을 입상 활성탄과 같은 색상 유도 물질을 제거할 수 있는 물질로 처리함으로써 달성된다. 일 구현예에서, 상기 IMO 시럽을 60-90℃ 또는 70-75℃ 온도에서 입상 활성탄으로 충전되는 탄소 컬럼을 통과시킨다. 일 구현예에서, 상기 IMO 시럽을 10분 내지 15 시간 동안 36°Bx에서 탄소 컬럼을 통과시킬 수 있다. 일 구현예에서, 상기 IMO 시럽을 1 내지 15 시간 동안 36°Bx에서 탄소 컬럼을 통과시킬 수 있다. 일 구현예에서, 상기 IMO 시럽을 5 내지 10 시간 동안 36°Bx에서 탄소 컬럼을 통과시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 IMO 시럽으로부터 이온 성분을 분리하는 단계를 포함한다. IMO 시럽으로부터 이온 종을 제거할 수 있는 분리를 위한 첫번째 수단은, 이에 제한되지 않으나, 이온 교환 수지, 한외여과, 역삼투압, 및 당업자에게 잘 알려진 기타 크로마토그래피 기법을 포함한다. 일 구현예에서, 제1 분리 단계는 40-75℃ 또는 55-60℃의 온도에서 수행된다.
일 구현예에서, 분리를 위한 첫번째 수단은 양이온 교환 수지, 음이온 교환 수지, 또는 이의 조합을 포함한다. 적합한 양이온 수지 부피는 IMO 시럽 부피를 기준으로 하여 0.1-100% (v/v) 또는 1-5% (v/v) 을 포함한다. 일 구현예에서, 음이온 교환 수지를 사용할 수 있다. 적합한 음이온 수지 부피는 IMO 시럽 부피를 기준으로 하여 0.1-100% (v/v) 또는 2-10% (v/v) 를 포함한다.
일 구현예에서, 이온 교환은 IMO 시럽을 이온 교환 컬럼을 통과시킴으로써 수행될 수 있다. 일 구현예에서, 이온 교환 컬럼은 양이온 교환 수지, 음이온 교환 수지, 또는 이들 모두를 함유한다. 일 구현예에서, 상기 이온 교환 컬럼 내 IMO 시럽의 유동 속도는 0.1㎖/분 내지 1000ℓ/분 또는 10-50ℓ/분이다.
일 구현예에서, 상기 IMO 시럽은 별개의 교환 수지를 이용하여 가공된다. 이를 위하여, IMO 시럽을 양이온 교환 수지를 먼저 통과시키고, 연이어 음이온 교환 수지를 통과시킨다. 일 구현예에서, 상기 IMO 시럽은 부가적으로 또는 대안적으로 양이온 및 음이온 수지 종 모두를 함유하는 수지를 통과한다. 일 구현예에서, 이송 펌프를 사용하여 IMO 시럽을 본원에 기재되는 교환 수지를 통과시킨다. 일 구현예에서, 이온 교환 크로마토그래피를 40-75℃에서 수행한다. 일 구현예에서, 상기 이온 교환 크로마토그래피는 55-60℃에서 수행한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 IMO 시럽을 원하는 습기 또는 고체 함량으로 농축시키는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 IMO 시럽은 30-75°Bx, 40-50°Bx, 또는 45-50°Bx로 농축된다. 이를 위하여, 상기 IMO 시럽을 습기를 제거하여 IMO 시럽을 농축시키기 위한 수단을 통하여 가공한다. 일 구현예에서, 습기 제거 수단은 증발이다. 일 구현예에서, 연속 또는 불연속 기계적 증기 재압축기 (MVR: Mechanical Vapor Recompressor)를 사용할 수 있다. 3중 증발기와 같은 기타 당업계에 공지된 증발 또는 증기 장치를 또한 사용할 수 있으며, 이는 당업자에게 잘 알려져 있다.
일 구현예에서, IMO 시럽을 농축시킨 후, 촉매적 IMO 수소화를 수행한다. 일 구현예에서, 촉매는 백금, 팔라듐, 로듐 및 루테늄과 같은 백금 군 금속을 포함한다. 니켈, 니켈 합금, 레이니 니켈 및 Urushibara 니켈과 같은 비-귀금속 촉매를 본 발명을 위한 촉매로서 사용할 수 있다.
일 측면에서, 본 발명은 본원에 기재되는 방법을 이용하여 제조되는 IMOs를 제공한다. 상기 방법을 이용하여 다양한 IMOs를 제조할 수 있다. 일 구현예에서, 분지형 글루코오스, DP3 글루코오스, 판노오스, 이소말토트리오스, 이소말토테트라오스, 이소말토헵토오스, 또는 이의 조합이 제조된다.
일 구현예에서, 본 발명의 방법을 이용하여 제조되는 IMOs는 식품 첨가제 또는 감미제로서 사용될 수 있다. 일 구현예에서, IMO 시럽, 슬러리, 분리된 불용성 성분, 및/또는 분리된 가용성 성분들을 농축 및 건조시킴으로써, 밀가루 또는 기타 건조 분말을 얻을 수 있다. 결과 생성되는 분말 또는 밀가루를 IMOs의 존재가 바람직한 조성물, 예를 들어 식품류, 즉, 아침식사용 시리얼, 파스타, 또는 식품 첨가제, 및 제과류 내에 포함시킬 수 있다. 본원에 기재되는 용어 "식품 첨가제" 또는 "식품 첨가제들"은 IMO 또는 IMOs을 위에 뿌리는 재료, 기타 식품 제조에 사용하기 위한 성분, 및/또는 식품 및/또는 액체에 첨가되는 국부 성분으로 이용하는 것을 의미한다.
다른 구현예에서, 상기 건조 분말은 식품 보충제 내로 포함될 수 있다. 상기 건조 분말의 식품 보충제 내 포함은 임의의 허용가능한 보충제 또는 형태로 제공될 수 있다. 식이 보충제는 매트릭스 내 경구 투여용으로, 예를 들어, 약물 분말, 결정, 과립, 소 입자 (마이크로스피어 및 마이크로캡슐과 같은 마이크로미터 크기 입자를 포함), 입자 (밀리미터 크기 입자를 포함), 비드, 마이크로비드, 펠릿, 알약, 미세정제, 압축정제 또는 정제 가루약(tablet triturates), 성형 정제 또는 정제 가루약, 및 경질 또는 연질이며 분말, 입자, 비드, 용액 또는 현탁액으로서 조성물을 함유하는 캡슐 내에 제제화될 있다. 상기 식이 보충제는 또한 수성 액체 내에 용액 또는 현탁액으로서, 또는 겔 캡슐 내로 포함되는 액체로서, 또는 투여 또는 직장 투여를 위한 임의의 다른 편리한 형태로서, 좌제로서, 관장 또는 기타 편리한 형태로서 경구 투여용으로 제제화될 수 있다. 상기 IMOs는 또한 조절 방출 시스템으로서 제공될 수 있다.
실시예
본 발명의 방법은 이하 실시예에 의해서 더욱 예시되며, 이들 실시예들은 어떠한 방식으로도 제한적인 것으로 해석되지 말아야 한다. 이하 실시예들은 본 발명에 속하는 IMOs의 생산 또는 제조 방법을 예시한다. 실시예에서, Aspergillus niger 전화효소를 이용하여 말토오스계(콘 시럽) 기질로부터 IMOs를 생산하였다. 다른 급원, 예를 들어 Aspergillus oryzae로부터 유도되는 전화효소 또한 사용할 수 있는 것으로 이해된다. 말토오스의 가수분해 및 트랜스글리코실화가 IMO 생산에 필수적이다. 전형적인 IMO 생산은 2단계 당화 과정을 통하여 수행된다. 두 반응은 별개의 또는 순차적인 말토게닉 및 트랜스글루코시드 반응을 포함한다. 종래 방법에서는, β-아밀라아제를 먼저 액화 시럽과 반응시켜 말토오스를 생산하고, 트랜스글루코시다아제, 즉 TG를 연이어 첨가하여 IMOs를 생산한다. 그러나, 이하 추가적으로 기재되는 향상된 동시 방법을 이용하여, 이제 IMO 생산을 위하여 β-아밀라아제의 존재하에 전화효소를 동시에 당화 시럽에 첨가하는 것이 가능하다. 따라서, 이하 실시예들은 Aspergillus niger 로부터의 전화효소가 이전에 발견되지 않은 트랜스글루코시드 메커니즘을 통하여 말토오스 기질로부터 IMOs를 생산할 수 있는 작용성을 가짐을 입증한다.
실시예 1 - IMO 제조를 위한 종래 방법
1kg의 옥수수 전분 및 1.5kg의 물을 최종 농도 19-22°Be가 되도록 용기 내로 첨가하여 전분 슬러리를 제조하였다. 액화 효소, Bacillus lichemiformis로부터 열 안정성 α-아밀라아제 (Novo Nordsik, Denmark) 0.04-0.05% (w/w/ds)를 105℃에서 10분 동안 5.8-6.1의pH에서 상기 슬러리에 첨가하였다. 연이어, 액화 시럽을 2 시간 동안 플러싱 탱크를 통과시켜 제2 액화 과정을 적용함으로써 최종 10-12 덱트스로오트 당량(DE) 시럽을 생산하였다. 그 다음, 보리로부터 β-아밀라아제 (Genencor, Rochester, NY) 0.052% (w/w), 및 Bacillus lichemiformis로부터 풀루라나아제 (Amano Pharmaceuticals, Japan) 0.07% (w/w)를 60-65℃에서 5.0-5.5의 pH에서 48-72 시간 동안 첨가함으로써, 상기 액화된 슬러리를 제1 당화 반응시켰다. Aspergillus niger로부터 트랜스글루코시다아제 (Genencor, Rochester, NY)의 0.01% (w/w) 용액을 첨가하고 상기 혼합물을 55-60℃에서 48-72 시간 동안 반응시킴으로써 제2 당화 반응을 수행하였다. 미반응 물질을 여과에 의하여 상기 당화 용액으로부터 제거하고, 당화 용액을 활성탄으로 처리하여 색상을 제거하였다. 상기 당화 용액을 60-75℃의 온도에서 대략 30분 내지 3 시간 동안 입상 활성탄으로 충전된 탄소 컬럼을 통과시켰다. 양이온, 음이온, 및 혼합 베드 교환 수지 (Samyang Genex, Korea)를 사용하여 30-50℃에서 5-10 m3/hr의 유속으로 상기 용액으로부터 이온 성분을 크로마토그래피 분리하였다. 최종적으로, 상기 IMO 시럽을 MVR 증발기를 통하여 약 75°Bx로 농축시켰다.
실시예 2 - 전화효소를 이용한 IMO 제조를 위한 동시 방법
1kg의 옥수수 전분 및 1.5kg의 물을 최종 농도 19-22°Be가 되도록 용기 내로 첨가하여 전분 슬러리를 제조하였다. 액화 효소, 열 안정성 α-아밀라아제 (실시예 1에 기재된 것) 0.04-0.05% (w/w/ds)를 100-108℃에서 2-2.5 시간 동안 5.8-6.1의pH에서 상기 슬러리에 첨가하였다. 연이어, 상기 액화 슬러리에 단일 당화 단계를 적용하였다. 여기서, 보리로부터 β-아밀라아제 (Genencor, Rochester, NY) 0.052% (w/w), Bacillus lichemiformis로부터 풀루라나아제 (Amano Pharmaceuticals, Japan) 0.07% (w/w) , 및 Aspergillus niger 전화효소 0.16% (w/w)를 pH 5.0-5.5에서 최종 농도 35-40°Bx가 되도록 상기 액화 슬러리에 첨가하였다. 상기 당화 혼합물을 60-65℃에서 48-72 시간 동안 반응시켰다. 미반응 물질을 여과에 의하여 당화 용액으로부터 제거하였다. 실시예 1에 기재된 바와 같이, 당화 용액을 활성탄으로 처리하여 색상을 제거하였다. 실시예 1에 기재된 바와 같이, 이온 교환 수지를 이용하여 상기 용액으로부터 이온 성분을 제거하였다. 최종적으로, 상기 IMO 시럽을 MVR 증발기를 통하여 75°Bx로 농축시켰다. 도 1을 참조한다.
실시예 3 - IMO 제조를 위한 종래 방법과 동시 방법과의 비교
본 실시예는 당화 중 IMO 함량 변화를 비교한다. 종래 방법과 동시 방법을 위하여, 상기한 바와 같이 반응을 수행하였다. 도 2는 올리고사카라이드의 건조 기준 백분율 (DB%)이 종래 방법 및 동시 방법에 있어서 동일함을 보인다. 가로 좌표는 완전한 당화 반응을 위한 시간 길이를 시간으로 도시하며, DB%는 세로 좌표에 나타낸다. 도 2를 참조한다.
실시예 4 - 종래 방법 및 동시 방법의 당 프로파일 비교
별도의 실험으로, 종래 방법 및 동시 방법의 IMO 당 프로파일을 비교하였다. 표 1에 의하여 입증되는 바와 같이, 총 IMO 생산 프로필은 종래 방법 및 동시 방법에 있어 동일하였다. 표 1에 나타내는 바와 같이, 총 IMO 생산은 이소말토오스; 분지형 글루코오스; DP3 글루코오스; 판노오스; 이소말토트리오스; 이소말토테트라오스; 및 이소말토헵토오스를 포함한다.
종래 방법 및 동시 방법의 당 프로파일
당 프로파일 (DB%) 종래 방법 동시 방법
글루코오스 18~20 20~22
말토오스 12~15 10~13
이소말토오스 4~6 5~7
분지형 글루코오스,
DP3 글루코오스		 2~4 5~7
말토트리오스 3~5 3~5
판노오스 20~22 18~20
이소말토트리오스 0~2 0~2
이소말토테트라오스 ~
이소말토헵타오스		 18~20 22~24
말토옥타오스 5~10 5~10
총 이소말토올리고사카라이드 50~53 50~53
따라서, 전술한 실시예들에 의하여 입증되는 바와 같이, Aspergillus niger 로부터 분리되는 전화효소는 트랜스글루코시다아제 활성을 가진다. 이러한 새로운 전화효소는 말토오스 기질과 접촉하여 반응할 수 있는 예기치 못한 특징을 가진다. 이와 같은 새로운 전화효소는 놀랍게도 예기치않게 동시, 단일 단계 당화 반응을 촉매함으로써 IMOs의 종래 생산 방법을 향상시킨다. 이러한 새로운 방법은 IMOs 생산에 요구되는 시간 및 에너지를 감소시킴으로써 IMO 제조 비용을 감소시킬 것이다.
본원의 개시는 본원에 기재되는 특성 구현예들로 제한되지 않는다. 본 발명의 사상 및 범위로부터 이탈됨이 없이 많은 변경 및 변화가 가능함이 당업자에게 분명하다. 본원에 열거된 것들 이외에, 본원의 개시 범위 내에서 기능적으로 균등한 방법 및 조성물이 전술한 기재로부터 당업자에게 명백하여질 것이다. 이와 같은 변경 및 변화는 첨부되는 청구항의 범위 내인 것으로 의도된다. 본원의 개시는 첨부되는 청구항과 그러한 청구항에 대한 모든 균등물 범위에 의해서만 제한될 것이다. 본원의 개시는 특정 방법, 시약, 화합물, 조성물 또는 생물학적 시스템에 제한되지 않으며, 이러한 것들은 당연히 변화할 수 있는 것으로 이해될 것이다. 또한, 본원에 사용되는 용어들은 특정 구현예를 기재하기 위한 목적으로만 사용되는 것이며 제한을 의도하는 것이 아닌 것으로 이해될 것이다.
또한, 본원의 개시의 특징 및 측면들이 Markush 군으로 기재되는 경우, 당업자는 그 Markush 군의 개별 멤버 또는 멤버의 서브군에 의해서도 기재됨을 인지할 것이다.
당업자에 의하여 이해되는 바와 같이, 임의의 및 모든 목적으로 위하여, 특히 상세한 설명의 제공 측면에서, 본원에 기재되는 모든 범위들은 또한 임의의 및 모든 가능한 부분범위 및 부분범위들의 조합을 포함한다. 임의의 열거된 범위는 동일 범위가 적어도 동등한 절반, 3분의 1, 4분의 1, 5분의 1, 10분의 등으로 나누어지는 것을 가능케 하는 것으로 용이하게 인지될 수 있다. 비제한적인 예로서, 본원에 논의되는 각각의 범위는 3분의1 아래쪽, 3분의1 중간, 3분의1 위쪽 등으로 쉽게 나누어질 수 있다. 또한, 당업자에 의하여 이해되는 바와 같이, "이하", "적어도", "이상", "미만" 등과 같은 모든 용어는 인용되는 숫자를 포함하고, 상기 논의한 바와 같이 부분범위로 나누어질 수 있는 범위를 의미한다. 마지막으로, 당업자에 의하여 이해되는 바와 같이, 범위는 각각의 개별 멤버를 포함한다. 따라서, 예를 들어, 1-3 성분을 가지는 군은 1, 2 또는 3 성분을 가지는 군을 의미한다. 유사하게, 1-5 성분을 가지는 군은 1, 2, 3, 4 또는 5 성분을 가지는 군을 의미한다.
다양한 측면 및 구현예들이 본원에 개시되었으나, 기타 측면들 및 구현예들이 당업자에게 명백할 것이다. 본원에 개시되는 다양한 측면들 및 구현예들은 예시를 목적으로 한 것이며 제한을 의도하는 것이 아니고, 실제 범위 및 사상은 이하 청구범위에 의하여 나타내어진다.

Claims (22)

  1. (a) 전분 슬러리를 액화 효소와 접촉시키는 단계; 및
    (b) 상기 단계 (a)의 생성물을 말토게닉 효소 및 전화효소와 접촉시키는 단계
    를 포함하는 이소말토올리고사카라이드 조성물의 제조 방법으로서,
    상기 말토게닉 효소 및 상기 전화효소는 별개로, 순차적으로, 또는 동시에 접촉하여 이소말토올리고사카라이드(IMO)를 생산하는 것을 특징으로 하는 방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 말토게닉 효소 및 상기 전화효소는 상기 단계 (a)의 생성물과 동시에 접촉하여 IMO를 생산하는 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 슬러리는 15 내지 45 중량%의 전분을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 전화효소는 상기 단계 (b)의 모든 반응물의 적어도 0.0009 중량%인 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 전화효소는 상기 단계 (b)의 모든 반응물의 2 중량% 미만인 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 단계 (b)는 2 이상 10 이하의 pH에서 일어나는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 단계 (b)는 10℃ 이상 85℃ 이하의 온도에서 일어나는 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 이소말토올리고사카라이드는 이소말토오스, 분지형 글루코오스, DP3 글루코오스, α-1,4 및/또는 α-1.6 결합을 가지는 DP3 글루코오스, 판노오스, 이소말토트리오스, 이소말토테트라오스, 이소말토펜타오스, 이소말토헥사오스, 및 이소말토헵토오스, 또는 이들의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 생산되는 이소말토올리고사카라이드의 적어도 10%가 판노오스인 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 제1항에 있어서,
    상기 이소말토올리고사카라이드를 정제하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  11. 제1항에 있어서,
    상기 액화 효소가 알파-아밀라아제인 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 제1항에 있어서,
    상기 말토게닉 효소가 베타-아밀라아제 또는 균류 α-아밀라아제인 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 제1항에 있어서,
    상기 전화효소는 트랜스글루코시다아제 활성을 가지는 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 제1항에 있어서,
    상기 전화효소는 아스퍼질러스 (Aspergillus) 전화효소인 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 제14항에 있어서,
    상기 아스퍼질러스 전화효소는 아스퍼질러스 나이거 (Aspergillus niger) 전화효소 또는 아스퍼질러스 오리재 (Aspergillus oryzae) 전화효소인 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 제1항에 있어서,
    상기 슬러리는 하나 이상의 전분 및 액체로부터 형성되는 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 제1항에 있어서,
    풀루라나아제를 단계 (b)에 첨가하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  18. 제1항에 있어서,
    상기 하나 이상의 전분은 옥수수 전분, 쌀 전분, 밀 전분, 타피오카, 감자 전분, 고구마 전본, 사고 전분, 보리 전분, 열/산 처리 전분, 펄 전분, 왁시 콘 전분, 수수 전분, 고 아밀로오스 옥수수 전분, 액체 덱스트로오스, 및 이의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  19. 제18항에 있어서,
    상기 전분은 옥수수 전분인 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 제1항의 방법에 따라 제조되는 이소말토올리고사카라이드 조성물.
  21. 제1항의 방법에 따라 제조되는 이소말토올리고사카라이드를 포함하는 식품 첨가물.
  22. 적어도 하나의 식품 성분 및 제1항의 이소말토올리고사카라이드를 포함하는 식료품.


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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2805622A1 (en) 2013-05-20 2014-11-26 Corn Products Development, Inc Isomaltooligosaccharide compositions containing isomaltulose, methods for preparing the same and uses thereof
KR101681495B1 (ko) * 2015-06-10 2016-12-01 재단법인 경북바이오산업연구원 마를 이용한 기능성 식품 제조방법 및 이에 의해 제조된 기능성 식품
KR20190045811A (ko) 2017-10-24 2019-05-03 대한민국(농촌진흥청장) 호화 곡물 또는 호화 곡물 분말을 이용한 구슬형 감미료의 제조방법 및 이를 이용한 조성물

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102747118B (zh) * 2012-06-18 2014-02-12 张雄杰 利用小麦直接生产饲用低聚异麦芽糖浆的生产方法
CN102757990B (zh) * 2012-06-30 2014-04-09 保龄宝生物股份有限公司 一种高纯度低聚异麦芽糖的制备方法
CN103484512B (zh) * 2013-10-14 2015-07-15 保龄宝生物股份有限公司 一种固定化细胞生产高功能性三糖含量的低聚异麦芽糖的方法
CN104273127B (zh) * 2014-10-25 2016-05-18 佛山市盈辉作物科学有限公司 一种含马缨丹烯甲素和氨基寡糖素的杀线虫农药组合物
CN104877911B (zh) * 2015-02-12 2018-05-15 广西南宁智天生物科技有限公司 一种黑曲霉及其在低聚异麦芽糖生产中的应用
MX2019006047A (es) 2016-12-16 2019-10-02 Nestle Sa Oligosacaridos para generacion de sabor.
KR102012440B1 (ko) * 2018-01-02 2019-08-20 인그리디언코리아 유한회사 이소말토올리고당 조성물의 제조 방법
CN108754035B (zh) * 2018-04-19 2022-04-12 华南师范大学 一种甘薯自水解制备麦芽糖的方法
CA3147282A1 (en) * 2019-09-27 2021-04-01 Societe Des Produits Nestle S.A. Cocoa and/or malt beverage products
JP7002624B1 (ja) 2020-11-12 2022-01-20 群栄化学工業株式会社 穀物糖化液およびその製造方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6303346B1 (en) * 1997-11-26 2001-10-16 Novozymes A/S Method of producing saccharide preparations
US20050031734A1 (en) * 2003-03-10 2005-02-10 Gang Duan Grain compositions containing pre-biotic isomalto-oligosaccharides and methods of making and using same

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4113509A (en) 1975-05-14 1978-09-12 Cpc International Inc. Enzymatically produced maltose-maltotriose starch hydrolysate
US4647538A (en) 1984-09-18 1987-03-03 Michigan Biotechnology Institute Thermostable beta-amylase
JPS61219345A (ja) 1985-03-25 1986-09-29 Norin Suisansyo Shokuhin Sogo Kenkyusho 分岐オリゴ糖を多量に含むシラップの製造方法
DK160563C (da) 1986-02-19 1991-09-02 Novo Industri As Beta-amylase, fremgangsmaade til dens fremstilling samt praeparat indeholdende beta-amylasen
JPH07102144B2 (ja) 1986-10-27 1995-11-08 昭和産業株式会社 分岐オリゴ糖シラツプの連続的製造方法
PT867504E (pt) 1993-02-11 2003-08-29 Genencor Int Alfa-amilase estavel a oxidacao
US5763385A (en) 1996-05-14 1998-06-09 Genencor International, Inc. Modified α-amylases having altered calcium binding properties
US5958739A (en) 1996-06-06 1999-09-28 Genencor International Inc. Mutant α-amylase
DE19653354C1 (de) * 1996-12-20 1998-09-03 Hoechst Ag Verwendung von Oligosacchariden zur Verstärkung der Süßkraft und zur Geschmacksverbesserung einer wäßrigen Lösung einer Acesulfam K/Aspartam-Mischung
GB9708893D0 (en) 1997-05-02 1997-06-25 Cerestar Holding Bv Method for the production of isomalto-oligosaccharide rich syrups
US6008026A (en) 1997-07-11 1999-12-28 Genencor International, Inc. Mutant α-amylase having introduced therein a disulfide bond
EP2277393B1 (en) * 1999-04-16 2012-12-12 San-Ei Gen F.F.I., Inc. Sucralose-containing composition
TW200307507A (en) * 2002-02-01 2003-12-16 Hayashibara Biochem Lab Co Ltd Process for producing fermented bread comprising rice flour as the main component
CN1756769A (zh) * 2003-03-10 2006-04-05 金克克国际有限公司 含有益生的异麦芽－寡糖的谷物组合物及其制造和应用方法
WO2009088493A1 (en) * 2008-01-04 2009-07-16 Corn Products International, Inc. Process for the preparation of isomaltooligosaccharide-hydrogenated
JP5643768B2 (ja) * 2009-01-16 2014-12-17 ダニスコ・アクティーゼルスカブＤａｎｉｓｃｏ Ａ／Ｓ 穀物または穀物副生産物由来のオリゴ糖の酵素的産生

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6303346B1 (en) * 1997-11-26 2001-10-16 Novozymes A/S Method of producing saccharide preparations
US20050031734A1 (en) * 2003-03-10 2005-02-10 Gang Duan Grain compositions containing pre-biotic isomalto-oligosaccharides and methods of making and using same
KR20050106110A (ko) * 2003-03-10 2005-11-08 제넨코 인터내셔날 인코포레이티드 선생물적 이소말토-올리고사카라이드를 함유하는 곡물조성물 및 이의 제조 및 이용 방법

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2805622A1 (en) 2013-05-20 2014-11-26 Corn Products Development, Inc Isomaltooligosaccharide compositions containing isomaltulose, methods for preparing the same and uses thereof
KR101681495B1 (ko) * 2015-06-10 2016-12-01 재단법인 경북바이오산업연구원 마를 이용한 기능성 식품 제조방법 및 이에 의해 제조된 기능성 식품
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