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KR20090010504A - 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터분리한 플라보노이드계 화합물을 유효성분으로 함유하는심장순환계 질환의 예방 및 치료용 조성물 - Google Patents

고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터분리한 플라보노이드계 화합물을 유효성분으로 함유하는심장순환계 질환의 예방 및 치료용 조성물 Download PDF

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KR20090010504A
KR20090010504A KR1020070073649A KR20070073649A KR20090010504A KR 20090010504 A KR20090010504 A KR 20090010504A KR 1020070073649 A KR1020070073649 A KR 1020070073649A KR 20070073649 A KR20070073649 A KR 20070073649A KR 20090010504 A KR20090010504 A KR 20090010504A
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KR
South Korea
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extract
composition
soluble extract
ginseng
treatment
Prior art date
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Ceased
Application number
KR1020070073649A
Other languages
English (en)
Inventor
정태숙
이우송
박기훈
한종민
김민정
Original Assignee
한국생명공학연구원
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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Abstract

본 발명은 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물을 유효성분으로 함유하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 특히, 본 발명에 따른 상기 조성물에 포함되는 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물은 저밀도 지단백질(low-density lipoprotein; LDL)에 대한 항산화 활성효과가 매우 우수할 뿐만 아니라, 아실 코에이: 콜레스테롤 아실 전이효소(acyl-CoA: cholesterol acyltransferase, ACAT)의 활성을 효과적으로 억제하기 때문에, 본 발명의 조성물은 LDL의 산화 또는 콜레스테릴 에스테르의 합성 및 축적으로 유발되는 것으로 알려진 고지혈증, 관상동맥 심장병, 동맥경화, 심근경색 등의 심혈관계 질환의 예방 및 치료제로 유용하게 사용될 수 있다.
고삼 추출물, 가용추출물, 분획물, 플라보노이드계 화합물, 심혈관계 질환, 예방 및 치료

Description

고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물을 유효성분으로 함유하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료용 조성물{Compositions for the prevention and treatment of cardiovascular diseases containing Sophora flavascens extracts, soluble extracts thereof, fractions thereof or flavonoid compounds isolated therefrom as an active ingredient}
본 발명은 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물을 유효성분으로 함유하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.
최근 성인병 증가와 더불어 동맥경화 등의 혈관장애 질환이 크게 증가하고 있다. 대표적인 혈관장애 질환으로서 동맥경화는 지질대사와 관련된 유전적 요인과 식습관, 흡연, 운동부족 등의 환경적 요인에 의하여 동맥이 경화되는 질환으로, 뇌동맥 또는 관상동맥에서 일어나기 쉬우며, 이로 인하여 심장질환, 뇌혈관 질환 등의 순환계 질환으로 발전하게 된다. 뇌동맥경화의 경우에는 두통, 현기증, 정신 장애 등을 나타내고 뇌연화증의 원인이 되며, 관상동맥경화의 경우에는 심장부에 동통과 부정맥을 일으켜 협심증, 심근경색 등의 원인이 되는 것으로 알려져 있다. 또한 이로 인해 고혈압, 심장병, 뇌일혈 등이 유발되어, 동맥경화로 인한 질병이 현대 사회에 있어, 특히 50~60 대의 남성들에게 가장 큰 사망요인으로 부각되고 있다.
혈관 내벽의 플라그(plaque) 형성 및 혈관파열은 심근경색 발병의 주요한 요인이며, 동맥경화의 초기 발생에 관한 가설은 혈관벽의 손상에 대한 만성 염증과정으로, 손상기작 보다는 오히려 방어기작인 '손상에 대한 반응(response-to-injury hypothesis)'으로 제시되고 있다(Nature 1993, 362, 801-809). 이는 유전적 변이, 과산화물, 고혈압, 당뇨, 혈장 호모시스테인 농도 증가 또는 미생물 감염 등의 원인에 의하여 혈관 내피세포가 정상적인 항상성을 유지하지 못하는 기능부전 상태가 되는 것이다.
보다 상세하게, 상기의 원인들로 인하여 혈중 저밀도 지단백질(low-density lipoprotein; LDL)이 산화, 당결합, 집적화, 당단백 결합 등을 거쳐 변형-LDL(highly modified-LDL; HM-LDL)로 변화하게 되고, 이들은 혈관 내피세포 및 평활근을 자극하고 손상을 유발한다. 이로 인하여, 내피세포의 혈관세포부착물질-1(vascular cell adhesion molecule-1; VCAM-1)의 발현 및 염증세포의 염증매개인자 방출이 촉진되면 LDL은 내피세포 아래에 유입 및 축적되고, 축적된 LDL 및 산화된 HM-LDL은 다시 대식세포, T 임파구 등의 면역세포의 유입 및 활성화를 유발하는 과정을 되풀이하여 병변의 염증반응을 촉진시키게 된다. 그 다음, 유입된 대식세포나 임파구로부터 방출된 가수분해효소, 염증매개인자, 성장인자 등의 작용으로 병반은 괴사하게 되고, 괴사된 병소 부위로 단핵구의 유입, 평활근의 이동 및 분화, 섬유성 조직의 형성 등의 반복적인 과정이 이루어진다. 상기 과정을 통해 병변 조직은 HM-LDL을 핵으로 한 괴사조직에 섬유질이 덮인 복잡한 구조의 섬유질 병변으로 발달하게 되며, 발달된 병변 조직으로부터 혈전이 생성되고 동맥이 경화되어 혈류장애 등 순환기 질환이 나타나게 되는 것이다.
LDL 산화는 죽상경화증(atherosclerosis)을 포함하는 동맥경화를 유발하는 초기 요인으로 가장 중시되고 있다(Circulation, 1995, 91, 2488-2496; Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 1997, 17, 3338-3346). 생체 내외에서 생성되는 산화적 스트레스(oxidative stress)는 혈액 내의 LDL을 산화된-LDL(oxidized-LDL)로 변형시키게 되고, 이것이 부착분자(adhesion molecule)를 통해 맥관내막(intima) 내로 유입된다. 유입된 산화된-LDL을 단핵구(monocyte)가 탐식하여 거품세포(foam cell)를 형성하면서 동맥경화 초기 병변인 지방선조(fatty streak)를 생성하게 된다. 동맥경화 초기 병변의 특징은 동맥 내피세포에서 생성되는 부착분자인 VCAM-1, ICAM-1(intracellular adhesion molecule-1) 및 MCP-1(monocyte chemoattractant protein-1)이 발현된다는 것인데, 이들은 전사인자(transcription factor)인 NF-κB(nuclear factor-κB)에 의해 유도된다. 또한, NF-κB로 인하여 혈관벽 내에 플라그(plaque)의 형성 및 파열이 일어난다. NF-κB는 활성 산소종이 나 사이토카인(cytokine) 등과 같은 다양한 요인에 의해 활성화되며, p50과 p65로 구성된 이형 이합체(hetero dimer)로서 많은 세포의 타겟 유전자(target gene)를 조절하는데 포함되는 전사인자이다. 활성화된 NF-κB는 IL-1, VCAM-1, ICAM-1 및 죽상동맥경화(atherosclerosis)의 진행에 관여하는 다른 인자들과 같이 특이적인 프로모터 유전자(promoter gene)에 결합하여 다양한 염증인자의 발현을 조절한다.
항산화제 및 유리기 소거제는 이러한 NF-κB의 활성을 저해하는 것으로 밝혀지고 있으므로 항산화제를 적절히 섭취할 경우, 생체 내(in vivo)에서 LDL의 산화를 저해하고 부착분자의 발현을 억제하며 NF-κB의 활성을 감소시켜 동맥경화를 억제할 것으로 기대되며, 이에 대한 연구들이 진행되고 있다(대한민국 공개특허 제2003-0014155호). 또한, 고지혈증이나 동맥경화 환자에 있어서 LDL 퍼옥사이드의 생성요인과 제거에 관한 연구(Curr. Atheroscler. Res., 2000, 2, 363-372)도 활발히 진행되고 있다.
또한, 혈중 콜레스테롤 농도가 높으면 관상동맥성 심혈관 질환이 유발되기 쉬우므로, 혈중 콜레스테롤 농도를 줄이기 위해서는 콜레스테롤 및 지방의 섭취를 줄이는 식이요법을 시행하거나 지질대사와 관련된 효소를 저해함으로써 콜레스테롤의 흡수를 억제해야 한다. 이에, 콜레스테롤을 에스테르화하는 효소인 아실 코에이: 콜레스테롤 아실 전이효소(acyl-CoA: cholesterol acyltransferase; ACAT)에 관한 연구가 많이 행해지고 있다.
ACAT의 작용 기작은 크게 체내의 장, 간 및 혈관벽 세포의 세 부위에서 일어 난다.
첫째, 장에서 ACAT는 섭취된 콜레스테롤을 에스테르의 형태로 바꾸어 장내로 흡수되는 것을 촉진시킨다. 둘째, 외부로부터 흡수되거나 체내에서 생합성된 콜레스테롤은 간에서 VLDL(very low-density lipoprotein)이라는 운반체 안에 축적된 후 혈관을 통해 신체 각 기관으로 공급되는데, 이때 ACAT에 의하여 콜레스테롤이 콜레스테릴 에스테르 형태로 전환됨으로써 운반체 내에 콜레스테롤 축적이 가능하게 된다. 셋째, 동맥혈관벽을 이루는 세포 내에서 ACAT는 콜레스테롤을 그의 에스테르 형태로 전환시켜 세포 내에 콜레스테롤이 축적되는 것을 촉진시키는데, 이는 동맥경화를 일으키는 직접적인 원인이 된다. 또한, ACAT 활성에 의해 거품세포가 콜레스테롤로부터 유도된 다량의 콜레스테릴 에스테르를 포함하기 때문에, 실험적, 임상적인 측면에서 대식세포와 평활근세포로부터 유도된 거품세포의 형성은 매우 중요하다. 혈관벽 내의 거품세포의 증식은 ACAT 활성 증가와 직접적으로 연관되어 있기 때문에 강력한 항동맥경화제로서 ACAT 저해제의 개발은 바람직하다.
따라서, ACAT의 활성을 억제하는 약물은 첫째, 장내 콜레스테롤의 흡수를 억제하여 체내로 유입되는 콜레스테롤의 양을 감소시킬 수 있을 것이며, 둘째, 간에서 혈관 내로 콜레스테롤이 방출되는 것을 억제하여 혈중 콜레스테롤 농도를 떨어뜨릴 수 있고, 셋째, 혈관벽 세포에 콜레스테롤이 축적되는 것을 방지하여 직접적으로 동맥경화를 예방할 수 있을 것으로 기대된다.
지금까지 보고된 ACAT 활성 저해제는 쥐간 마이크로좀 ACAT 또는 쥐간 대식세포(J774) ACAT에 대한 활성 저해제이다. 사람의 ACAT에는 hACAT-1(50 kDa) 및 hACAT-2(46 kDa)가 있는데, hACAT-1은 성인의 간, 부신, 대식세포, 신장에서 주로 작용하며, hACAT-2는 소장 및 간에서 작용한다(Rudel, L. L. et al., Curr. Opin. Lipidol. 12, 121-127, 2001). 사람 ACAT 활성을 저해하는 물질은 음식으로부터 유입되는 콜레스테롤의 흡수를 억제하고, 혈관 내벽에 콜레스테릴 에스테르의 축적을 억제하는 기작을 통해 고콜레스테롤증, 콜레스테롤 결석 또는 동맥경화 예방 및 치료제의 표적이 되고 있다(Buhman, K. K. et al., Nature Med. 6, 1341-1347, 2000).
현재 고지혈증 치료제로 사용되고 있는 프로부콜(Probucol), N,N'-디페닐렌디아민(N,N'-diphenylenediamine), 페놀계 합성 항산화제인 BHA(butylated hydroxyanisol) 및 BHT(butylated hydroxytoluene)는 LDL 내 콜레스테롤을 감소시키고, 산화 정도를 약화시켜 병변형성을 감소시키며, 상기 고지혈증 치료제는 항산화력은 우수하지만, 부작용이 많아 사용이 제한되고 있다.
따라서, 이러한 질병을 예방하려는 목적으로 종전부터 콜레스테롤 흡수의 억제와 생합성의 저해를 통한 혈장 LDL 양을 감소시키려는 시도가 진행되어 왔다(Principles in Biochemistry, lipid biosynthesis, 770-817, 3rd Edition, 2000 Worth Publishers, New York; Steinberg, N. Engl. J. Med., 1989, 320, 915-924). 또한, 고지혈증이나 동맥경화 환자에 있어서 LDL 항산화제와 함께 지질강하제의 병행투여 요법에 대한 관심도가 높아지고 있다.
한편, 고삼(Sophora flavescens: 도둑놈의 지팡이)은 콩과의 다년생 초본으 로서 한국과 일본, 중국, 시베리아 등지에 주로 분포하는 식물이다. 한방에서는 뿌리를 말린 것을 고삼이라 하여 맛이 쓰고 소화불량, 신경통, 간염, 황달, 치질 등에 처방하며, 민간에서는 줄기나 잎을 달여서 해열과 진통제로 쓰기도 하였다. 고삼은 주로 1957년부터 일본에서 성분연구가 시작되어 주성분으로 알카로이드(Saito, K. et al ., Planta Med., 56: 487, 1990; Atta. R. et al ., J. Nat. Prod., 54: 929, 1991)와 플라보노이드(Iinuma, M. et al ., Phytochemistry, 29, 2667, 1990; Shirataki, Y. et al ., Chem . Pharm . Bull ., 38, 1712, 1990)를 함유하고 있는 것으로 알려져 있다. 특히 고삼에서는 플라보노이드 기본구조에 탄소 5 개의 이소프레닐(isoprenyl)기와 탄소 10 개의 라벤둘릴(lavendulyl)기를 가지는 프레닐기들이 치환된 플라보노이드를 다량 함유하고 있는 것으로 잘 알려져 있다(Kim, S. J. et al ., Biol . Pharm . Bull ., 26, 1348, 2003) 그러나 이들에 대한 활성 연구는 세포독성(Kang, T. H. et al ., J. Nat . Prod ., 63, 680, 2000)과 항염증(Chi, Y. S. et al ., Biochem . Pharm ., 62, 1185, 2001)에 그치고 있고 아직까지 이에 대한 고지혈증, 동맥경화증 관련 대사에 미치는 영향에 대해서는 발표된 바 없다.
이에, 본 발명자들은 부작용이 적은 새로운 고지혈증 또는 동맥경화증 치료제를 천연물에서 탐색하던 중, 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물에서 LDL에 대한 항산화 활성 및 ACAT에 대한 억제효과가 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물을 유효성분으로 함유하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료용 조성물을 제공하고자 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물을 유효성분으로 함유하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명에 따른 상기 조성물의 고삼 추출물은 고삼 뿌리로부터 추출하여 얻은 것이 바람직한데, 상기 고삼은 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 상기 고삼 추출물을 제조하는 방법은 당업계의 통상적인 추출방법을 사용할 수 있다. 상기 고삼 추출물은 고삼 건조물을 물, C1~C4의 알코올, 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 얻을 수 있고, 메탄올, 에탄올 또는 부탄올로 추출하는 것이 바람직하다. 특히 에탄올로 추출하는 것이 더욱 바람직하다. 이때, 추출용매의 양은 고삼의 건중량의 2~20 배로 하는 것이 바람직하다. 추출용매로 물, C1~C4의 알코올, 또는 이들의 혼합용매를 사용할 경우, 상온에서 2일 내지 20일 동안 방치하여 추출할 수 있다. 또한, 상기 추출물은 고삼을 열수로 추출하여 제조될 수 있다. 열수로 추출할 경우, 고삼 건조물을 증류수에서 끓이면서 교반하여 1 내지 3시간 동안 방치하여 추출할 수 있다. 상기 추출과정은 수회 반복할 수 있으며, 이후에 여과, 정제, 농축 또는 동결건조 등의 방법을 추가적으로 거칠 수 있다.
본 발명에 따른 상기 조성물의 가용추출물은 상기 고삼 추출물을 농축하여 용매를 완전히 제거한 후, 물, C1~C4의 알코올, 또는 이들의 혼합용매로 현탁시키고, n-헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 n-헥산 가용추출물, 클로로포름 가용추출물 또는 에틸아세테이트 가용추출물이다. 상기 가용추출물 중에서 클로로포름 가용추출물이 바람직하다. 이 과정은 통상의 분별 추출 방법을 이용할 수 있으며, 바람직하게는 분별 깔데기를 사용할 수 있다. 이때, 상기 현탁 용매는 물과 메탄올의 혼합용매를 사용하는 것이 바람직하고, 상기 혼합용매는 물:메탄올이 9:1의 부피비로 혼합되는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 상기 조성물의 분획물은 상기 클로로포름 가용추출물에 대하여 100% 클로로포름, n-헥산/아세톤(100:1~1:5, 부피비) 혼합용매 및 클로로포름/아세톤(150:1~1:4, 부피비) 혼합용매를 이동상으로 하고 실리카겔 크로마토그래피 를 수행하여 얻을 수 있다. 이때, 상기 실리카겔은 230~400 메쉬(mesh)가 바람직하다.
상기 실리카겔 크로마토그래피를 수행하여 얻은 특정의 분획물을 이동상으로 클로로포름/아세톤(80:1~1:4, 부피비) 혼합용매 또는 n-헥산/아세톤(100:1~1:1, 부피비) 혼합용매를 사용하고, 추가의 실리카겔 크로마토그래피를 수행하여 얻어진 분획물을 감압, 농축함으로써 6 개의 플라보노이드계 화합물을 얻을 수 있다.
상기 플라보노이드계 화합물의 바람직한 예는 다음과 같다.
1) 5,7,2',4'-테트라히드록시-8-라벤둘릴플라바논;
2) 5-메톡시-7,2',4'-트리히드록시-8-라벤둘릴플라바논;
3) 5,7,4'-트리히드록시-8-라벤둘릴-2'-메톡시플라바논;
4) 5,7,2'-트리히드록시-8-라벤둘릴플라바논;
5) 5,7,2'-트리히드록시-8-(5-히드록시-2-이소프로페닐-5-메틸헥실)-플라바논; 또는
6) 5,2'-디메톡시-7,4'-디히드록시-8-라벤둘릴플라바논.
상기 크로마토그래피는 단일 화합물이 정제될 때까지 1 회 내지 수 회에 걸쳐 수행할 수 있으며, 필요에 따라 농축, 재결정을 실시할 수 있다. 분리한 화합물은 분자량 측정, NMR 측정 등의 통상적인 분광학적 분석 방법으로 분석할 수 있다.
상기와 같은 방법에 따라 얻은 상기 6 개의 화합물의 구조식은 하기 표 1에 나타내었다.
화학식 구조 명명
1
Figure 112007053326965-PAT00001
 5,7,2',4'-테트라히드록시-8-라벤둘릴플라바논 (소포라플라바논 G)
2
Figure 112007053326965-PAT00002
 5-메톡시-7,2',4'-트리히드록시-8-라벤둘릴플라바논 ((-)-쿠라니논)
3
Figure 112007053326965-PAT00003
 5,7,4'-트리히드록시-8-라벤둘릴-2'-메톡시플라바논 (리치아논 A)
4
Figure 112007053326965-PAT00004
 5,7,2'-트리히드록시-8-라벤둘릴플라바논 (쿠세놀 A)
5
Figure 112007053326965-PAT00005
 5,7,2'-트리히드록시-8-(5-히드록시-2-이소프로페닐-5-메틸헥실)-플라바논 (쿠세놀 T)
6
Figure 112007053326965-PAT00006
 5,2'-디메톡시-7,4'-디히드록시-8-라벤둘릴플라바논 ((2S)-2'-메톡시-쿠라니논)
상기 플라보노이드계 화합물은 약학적으로 허용되는 염의 형태로 사용될 수 있으며, 통상의 방법에 의해 제조되는 모든 염, 수화물 및 용매화물, 시판되는 시약을 사용할 수 있으며, 본 발명에서는 고삼으로부터 추출, 분리 및 정제하여 사용한다.
본 발명에 따른 상기 조성물에 포함되는 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물은 항산화 활성 및 아실 코에이: 콜레스테롤 아실 전이효소 억제활성을 갖는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 상기 조성물에 포함되는 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물의 항산화 활성을 확인하기 위하여, LDL에 대한 항산화 활성을 TBARS(thiobarbituric acid-reactive substances)법으로 측정한 결과, 상기 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물은 LDL에 대한 항산화 활성이 우수함을 알 수 있었다. 특히, 플라보노이드계 화합물인 5,7,2',4'-테트라히드록시-8-라벤둘릴플라바논 및 5-메톡시-7,2',4'-트리히드록시-8-라벤둘릴플라바논은 80% 이상의 뛰어난 산화 억제율을 나타내었다(표 2 참조).
또한, 본 발명에 따른 상기 조성물에 포함되는 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물의 아실 코에이: 콜레스테롤 아실 전이효소 억제활성을 확인하기 위하여, 사람 ACAT-1 및 ACAT-2을 대상으로 수행한 실험 결과, 상기 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물은 ACAT 활성에 대한 억제능이 우수함을 알 수 있었다. 특히, 플라보노이드계 화합물인 5,7,2'-트리히드록시-8-라벤둘릴플라바논는 사람 ACAT-1의 활성을 70% 이상 억제하였고, 사람 ACAT-2의 활성을 50% 이상 억제하였다(표 3 참조).
지금까지 보고된 ACAT 활성 저해제는 쥐간 마이크로좀 ACAT 또는 쥐간 대식세포(J774) ACAT에 대한 활성 저해제이다. 사람의 ACAT에는 hACAT-1(50 kDa) 및 hACAT-2(46 kDa)가 있는데, hACAT-1은 성인의 간, 부신, 대식세포, 신장에서 주로 작용하며, hACAT-2는 소장 및 간에서 작용한다(Rudel, L. L. et al., Curr. Opin. Lipidol. 12, 121-127, 2001). 사람 ACAT 활성을 저해하는 물질은 음식으로부터 유입되는 콜레스테롤의 흡수를 억제하고, 혈관 내벽에 콜레스테릴 에스테르의 축적을 억제하는 기작을 통해 고콜레스테롤증, 콜레스테롤 결석 또는 동맥경화 예방 및 치료제의 표적이 되고 있다(Buhman, K. K. et al., Nature Med. 6, 1341-1347, 2000). 현재 고지혈증 치료제로 사용되고 있는 프로부콜(Probucol), N,N'-디페닐렌디아민(N,N'-diphenylenediamine), 페놀계 합성 항산화제인 BHA(butylated hydroxyanisol) 및 BHT(butylated hydroxytoluene)는 LDL 내 콜레스테롤을 감소시키고, 산화 정도를 약화시켜 병변형성을 감소되며, 상기 고지혈증 치료제는 항산화력은 우수하지만, 부작용이 많아 사용이 제한되고 있다.
이러한 질병을 예방하려는 목적으로 종전부터 콜레스테롤 흡수의 억제와 생합성의 저해를 통한 혈장 LDL 양을 감소시키려는 시도가 진행되어 왔다(Principles in Biochemistry, lipid biosynthesis, 770-817, 3rd Edition, 2000 Worth Publishers, New York; Steinberg, N. Engl. J. Med., 1989, 320, 915-924). 또한, 고지혈증이나 동맥경화 환자에 있어서 LDL 항산화제와 함께 지질강하제의 병행투여 요법에 대한 관심도가 높아지고 있다.
따라서, 본 발명에 따른 상기 조성물에 포함되는 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물은 항산화 활성 및 아실 코에이: 콜레스테롤 아실 전이효소 억제활성을 갖으므로, 본 발명의 조성물은 LDL의 산화 또는 콜레스테릴 에스테르의 합성 및 축적으로 유발되는 것으로 알려진 고지혈증, 관상동맥 심장병, 동맥경화, 심근경색 등의 심혈관계 질환의 예방 및 치료제로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 상기 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1 종 이상을 함유할 수 있다.
본 발명의 상기 조성물은 투여를 위해서 상기에 기재한 유효성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1 종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로오스 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 사용하여 제조할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 당 분야의 적정한 방법으로 또는 Remington's Pharmaceutical Science(최근판)(Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.
본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 비경구 투여(예를 들어 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)하거나 경구 투여할 수 있으며, 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 일일 투여량은 본 발명의 조성물 내에 포함되는 고삼 추출물, 이의 가용추출물 또는 이의 분획물을 기준으로 0.1~1000 ㎎/㎏ 이고, 바람직하게는 0.1~500 ㎎/㎏이며, 하루 일회 내지 수회에 나누어 투여하는 것이 더욱 바람직하다. 플라보노이드계 화합물의 일일 투여량은 0.1 ~ 100 ㎎/㎏ 이고, 바람직하게는 0.5 ~ 10 ㎎/㎏이며, 하루 일회 내지 수회에 나누어 투여하는 것이 더욱 바람직하다.
본 발명에 따른 상기 조성물에 포함되는 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물을 마우스에 경구 투여하여 독성 실험을 수행한 결과, 상기 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 플라보노이드계 화합물은 경구 독성시험에 의한 50% 치사량(LD50)은 적어도 1000 ㎎/㎏ 이상인 것으로 나타났다(실험예 3 참조).
본 발명의 상기 조성물은 심혈관계 질환의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 약물 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 상기 조성물은 심혈관계 질환의 개선을 목적으로 건강식품에 첨가될 수 있다. 상기 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에는 상기 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물은 원료에 대하여 1~20 중량%, 바람직하게는 5~10 중량%의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스, 수크로오스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1~20 g, 바람직하게는 약 5~12 g이다.
본 발명의 상기 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.
또한, 본 발명의 상기 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만, 본 발명의 조성물을 일반적으로 100 중량부 당 0~20 중량부의 범위에서 선택된다.
이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명에 따른 상기 조성물에 포함되는 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물은 저밀도 지단백질(low-density lipoprotein; LDL)에 대한 항산화 활성효과가 매우 우수할 뿐만 아니라, 아실 코에이: 콜레스테롤 아실 전이효소(acyl-CoA: cholesterol acyltransferase, ACAT)의 활성을 효과적으로 억제하기 때문에, 본 발명의 조서물은 LDL의 산화 또는 콜레스테릴 에스테르의 합성 및 축적으로 유발되는 것으로 알려진 고지혈증, 관상동맥 심장병, 동맥경화, 심근경색 등의 심혈관계 질환의 예방 및 치료제로 유용하게 사용될 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 상세하게 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1> 고삼 추출물의 제조
<1-1> 고삼 에탄올 추출물의 제조
본 실험에 사용된 고삼은 경상남도 진주시 인근에 있는 한약건재상에서 음건세절한 제품을 구입하였다. 구입한 고삼 1 kg을 95% 에탄올 10 ℓ에 넣어 상온에서 10일 동안 방치하면서 2회 반복 추출하였다. 추출액을 여과지(Advantec N0. 2, filter paper)로 여과하여 침전물을 제거하고 여과액을 수득하였다. 상기 여과액 을 감압하에서 농축하여 갈색의 유성물질인 에탄올 추출물(44 g)을 얻었다.
<1-2> 고삼 열수 추출물 제조
상기 한약건재상에서 구입한 고삼 100 g에 증류수 1 ℓ를 첨가한 후 교반하면서 2 시간 동안 추출하였다. 상기 추출과정을 2회 반복하였다. 상기에서 수득한 추출물을 여과지(Advantec N0. 2, filter paper)로 여과하여 침전물을 제거하고 여과액을 수득하였다. 상기 여과액을 감압하에서 농축하여 고삼 열수 추출물(14 g)을 얻었다.
< 실시예 2> 고삼 추출물로부터 플라보노이드계 화합물의 분리 및 정제
상기 실시예 1에서 얻은 고삼 에탄올 추출물(44 g)을 물 및 메탄올(9:1 부피비)의 혼합용액 2.0 ℓ에 넣어 현탁시키고, n-헥산과 클로로포름으로 순서대로 분획하여 14.3 g의 n-헥산 가용추출물과 29.8 g의 클로로포름 가용추출물의 유성물질을 얻었다.
<2-1> 5,7,2',4'- 테트라히드록시 -8- 라벤둘릴플라바논의 분리
상기에서 얻은 클로로포름 가용추출물 29.8 g에 대해 100% 클로로포름 및클로로포름/아세톤(150:1 ~ 1:2 부피비)의 혼합용매를 이동상으로 하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(실리카겔 450 g. 230~400 메쉬(mesh))를 수행하여 35 개의 분획(Fr.1 ~ 35, 30 ml/분획)으로 분리하였다. 이중 여섯 번째 분획(Fr.6, 1.2 g)에 대해 클로로포름/아세톤(40:1 ~ 10:1 부피비)의 혼합용매를 이동상으로 하여 다시 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(200g, 230~400 메쉬)를 수행하여 20 개의 분획(Fr.6-1 ~ 6-20, 20 ml/분획)을 얻었다. 이중 11 ~ 15 분획(Fr.6-11 ~ 6-15)을 감압, 농축하여 노란색 침상형(needle)의 5,7,2',4'-테트라히드록시-8-라벤둘릴플라바논(1, 110 ㎎)을 얻었다.
m.p. 178 ~ 180 ℃;
분자량 424;
분자식 C25H28O6;
1H-NMR(MeOD, 500㎒) δ 1.48 (3H, s, H-6"), 1.56 (3H, s, H-7"), 1.63 (3H, s, H-10"), 2.00 (2H, m, H-3"), 2.47 (1H, m, H-2"), 2.58 (2H, m, H-1'), 2.73 (1H, dd, J = 17.1, 2.8 Hz, H-3a), 2.97 (1H, dd, J = 17.1, 13.2 Hz, H-3b), 4.55 (2H, m, H-9"), 4.90 (1H, m, H-4"), 5.56 (1H, dd, J = 13.2, 2.7 Hz, H-2), 5.92 (1H, s, H-6), 6.35 (1H, m, H-5'), 6.37 (1H, d, J = 2.3 Hz, H-3'), 7.30 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-6');
EIMS m/z 424 [M]+ (10), 301 (80), 283 (100), 219 (13), 165 (80).
<2-2> 5- 메톡시 -7,2',4'- 트리히드록시 -8- 라벤둘릴플라바논의 분리
클로로포름 가용추출물의 여덟 번째 분획(Fr.8, 1.3 g)에 대해 헥산/아세톤(100:1 ~ 1:1 부피비)의 혼합용매를 이동상으로 하여 다시 실리카겔 컬럼 크로마 토그래피(180g, 230~400 메쉬)를 수행하여 40 개의 분획(Fr.8-1 ~ 8-40, 10 ml/분획)을 얻었다. 이중 22 ~ 26 분획(Fr.8-22 ~ 8-26)을 감압, 농축하여 주황색 침상형의 5-메톡시-7,2',4'-트리히드록시-8-라벤둘릴플라바논(2, 50 ㎎)을 얻었다.
m.p. 117 ~ 121 ℃;
분자량 438;
분자식 C26H30O6;
1H-NMR(MeOD, 500㎒) δ 1.46 (3H, s, H-6"), 1.56 (3H, s, H-7"), 1.63 (3H, s, H-10"), 1.99 (2H, m, H-3"), 2.49 (1H, m, H-2"), 2.62 (2H, m, H-1"), 2.69 (1H, dd, J = 16.7, 2.8 Hz, H-3b), 2.87 (1H, dd, J = 16.7, 13.2 Hz, H-3a), 3.80 (3H, s, -OCH3), 4.51 (1H, m, H-9"b), 4.57 (1H, m, H-9"a), 4.96 (1H, m, H-1"), 5.54 (1H, dd, J = 13.2, 2.7 Hz, H-2), 6.10 (1H, s, H-6), 6.34 (1H, m, H-5'), 6.36 (1H, d, J = 2.3 Hz, H-3'), 7.29 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-6');
EIMS m/z 438 [M]+ (5), 422 (18), 418 (18), 299 (100), 179 (28), 153 (32).
<2-3> 5,7,4'- 트리히드록시 -8- 라벤둘릴 -2'- 메톡시플라바논의 분리
클로로포름 가용추출물의 열 세번째 분획(Fr.13, 1.5 g)에 대해 클로로포름/아세톤(80:1 ~ 10:1 부피비)의 혼합용매를 이동상으로 하여 다시 실리카겔 컬럼 크 로마토그래피(230g, 230~400 메쉬)를 수행하여 50 개의 분획(Fr.13-1 ~ 13-50, 10 ml/분획)을 얻었다. 이중 31 ~ 38 분획(Fr.13-31 ~ 13-38)을 감압, 농축하여 노란색 침상형의 5,7,4'-트리히드록시-8-라벤둘릴-2'-메톡시플라바논(3, 70 ㎎)을 얻었다.
m.p. 155 ~ 156 ℃;
분자량 438;
분자식 C26H30O6;
1H-NMR(Acetone-d 6, 500㎒) δ 1.49 (3H, s ,7"-Me), 1.57 (3H, s, 6"-Me), 1.64 (3H, s, 10"-Me), 2.08 (2H, m, H-3"), 2.53 (1H, m, H-2'), 2.65 (2H, m, H-1"), 2.72 (1H, dd, J = 16.8, 2.9 Hz, H-3), 3.03 (1H, dd, J = 16.8, 13.2 Hz, H-3), 3.83 (3H, s, OMe), 4.55 (2H, m, H-9"), 2.97 (1H, t, J = 6.9 Hz, H-4"), 5.68 (1H, dd, J = 13.2, 2.9 Hz, H-2), 6.01 (1H, s, H-6), 6.51 ~ 6.57 (2H, m, H-3', H-5'), 7.42 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-6'), 8.52 (1H, br s, 4'-OH), 9.91 (1H, br s, 7-OH), 12.16 (1H, s, C5-OH);
EIMS m/z 438 [M]+ (15), 423 (12), 315 (100), 219 (11), 165 (80), 135 (10).
<2-4> 5,7,2'- 트리히드록시 -8- 라벤둘릴플라바논의 분리
클로로포름 가용추출물의 열다섯 번째 분획(Fr.15, 300 ㎎)에 대해 클로로포름/아세톤(50:1 ~ 5:1 부피비)의 혼합용매를 이동상으로 하여 다시 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(50 g, 230~400 메쉬)를 수행하여 15 개의 분획(Fr.15-1 ~ 15-15, 10 ml/분획)을 얻었다. 이중 7 ~ 10 분획(Fr.15-7 ~ 15-10)을 감압, 농축하여 흰색 분말의 5,7,2'-트리히드록시-8-라벤둘릴플라바논(4, 80 ㎎)을 얻었다.
m.p. 175 ~ 176 ℃;
분자량 408;
분자식 C25H28O5;
1H-NMR (CDCl3, 500 ㎒) δ 1.46 (3H, s, H-6"), 1.55 (3H, s, H-7"), 1.64 (3H, s, H-9"), 2.00 (2H, m, H-3"), 2.48 (1H, m, H-2"), 2.61 (2H, m, H-1"), 2.87 (2H, m, H-3), 4.59 (2H, m, H-10"), 4.96 (1H, m, H-4"), 5.63 (1H, dd, J = 12.24, 3.7 Hz, H-2), 5.93 (1H, s, H-6), 6.83 (1H, dd, J = 8.12, 0.9 Hz, H-3'), 6.90 (1H, ddd, J = 15.04, 7.6, 0.9 Hz, H-5'), 7.17 (1H, ddd, J = 15.47, 7.9, 1.6 Hz, H-4'), 7.54 (1H, dd, J = 7.6, 1.4 Hz, H-6');
EIMS m/z 408 [M]+(100), 286 (100), 268 (100), 220 (40), 120 (70).
<2-5> 5,7,2'- 트리히드록시 -8-(5-히드록시-2- 이소프로페닐 -5- 메틸헥실 )- 플라바논의 분리
클로로포름 가용추출물의 스무 번째 분획(Fr.20, 800 ㎎)에 대해 클로로포름/아세톤(40:1 ~ 2:1 부피비)의 혼합용매를 이동상으로 하여 다시 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(80 g, 230~400 메쉬)를 수행하여 30 개의 분획(Fr.20-1 ~ 20-30)을 얻었다. 이중 21 ~ 23 분획(Fr.20-21 ~ 20-23, 5 ml/분획)을 감압, 농축하여 노란색 침상형의 5,7,2'-트리히드록시-8-(5-히드록시-2-이소프로페닐-5-메틸헥실)-플라바논(5, 30 ㎎)을 얻었다.
m.p. 165 ~ 166 ℃;
분자량 426;
분자식 C25H30O6;
1H-NMR(CDCl3, 500㎒) δ 1.09 (3H, s, H-6"), 1.16 (3H, s, H-7"), 1.63 (3H, s, H-10"), 1.25-1.50 (4H, m, H-3", 4"), 2.20 (1H, dd, J = 13.6, 5.6 Hz, H-1"), 2.62 (1H, dd, J = 13.6, 8.4 Hz H-1"), 2.89 (1H, dd, J = 17.6, 2.4 Hz, H-3a), 3.03 (1H, dd, J = 17.6, 13.2 Hz, H-3b), 4.62 (1H, s, H-9"), 4.69 (1H, s, H-9"), 5.67 (1H, dd, J = 13.2, 2.4 Hz, H-2), 6.02 (1H, s, H-6), 6.87 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-3'), 6.98 (1H, t, J = 7.6 Hz, H-5'), 7.22 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-6'), 12.18 (1H, s, OH C-5);
EIMS m/z 426 [M]+(5), 408 (10), 285 (100), 267 (80), 165 (65).
<2-6> 5,2'- 디메톡시 -7,4'-디히드록시-8- 라벤둘릴플라바논의 분리
클로로포름 가용추출물의 서른 두번째 분획(Fr.32, 400 ㎎)에 대해 클로로포름/아세톤(10:1 ~ 1:4 부피비)의 혼합용매를 이동상으로 하여 다시 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(50 g, 230~400 메쉬)를 수행하여 35개의 분획(Fr.32-1 ~ 32-35, 5 ml/분획)을 얻었다. 이중 11 ~ 16 분획(Fr.32-11 ~ 32-16)을 감압, 농축하여 노란색 침상형의 5,2'-디메톡시-7,4'-디히드록시-8-라벤둘릴플라바논(6, 20 ㎎)을 얻었다.
m.p. 112 ~ 115 ℃;
분자량 452;
분자식 C27H32O6;
1H-NMR(CDCl3, 500㎒) δ 1.45 (3H, s, H-6"), 1.56 (3H, s, H-7"), 1.63 (3H, s, H-9"), 2.00 (2H, m, H-3"), 2.49 (1H, m, H-2"), 2.62 (2H, m, H-1"), 2.69 (1H, dd, J = 16.7, 2.9 Hz, H-3), 2.87 (1H, dd, J = 16.7, 13.2 Hz, H-3), 3.79 (3H, s, H-11"), 3.80 (3H, s, H-12"), 4.57 (2H, m, H-10), 4.96 (1H, m, H-4"), 5.54 (1H, dd, J = 13.2, 2.7 Hz, H-2), 6.10 (1H, s, H-6), 6.34 (1H, s, H-5'), 6.36 (1H, d, J = 2.3 Hz, H-3'), 7.34 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-6');
EIMS m/z 452 [M]+(10), 329 (25), 233 (95), 179 (100).
<실험예 1> TBARS법에 의한 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물의 항산화 활성 측정
상기 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물의 LDL에 대한 항산화 활성을 알아보기 위하여, 하기와 같이 실험을 수행하였다.
Cu2 +은 LDL의 산화를 유도하는 것으로 알려져 있다. 따라서 본 발명에서는 Cu2+은 LDL의 산화를 유도에 의해 생성된 불포화 지방산의 산화산물인 디알데히(dialdehyde)를 TBARS(thiobarbituric acid-reactive substances)법으로 측정하여, 본 발명에 따른 상기 조성물에 포함되는 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물의 항산화 활성을 조사하였다(Packer, L. Ed. (1994) Methods in Enzymology Vol. 234, Oxygen radicals in biological systems Part D. Academic press, San Diego).
1-1. LDL 의 분리
LDL은 표준 방법을 약간 변형하여 분리하였다. 먼저, 대한적십자혈액원을 통해 건강한 정상인 지원자로부터 전혈을 채취하였다. 상기 혈액을 4 ℃에서 3000 분당회전(revolution per minute; rpm)으로 30분간 원심분리하여 혈장을 얻은 후, 지단백질(lipoprotein)의 변성을 방지하기 위해 EDTA(0.1%), NaN3(0.05%), PMSF(0.015%)를 첨가하여 20 시간 동안 베크만 T8-M 초원심분리기에서 43800 rpm(100000 g)으로 원심분리하였다. 상층에 부유된 킬로마이크론(chylomicron)과 VLDL(very low-density lipoprotein)을 제거하고, 나머지 용액을 수집한 후, NaBr 용액을 이용하여 용액의 비중을 1.063 g/㎖로 조정하였다. 이후, 4 ℃에서 20 시간 동안 43800 rpm으로 원심분리하여 상층 부분에 있는 LDL(1.006<d<1.063 g/㎖)을 분리하였으며, 이를 10 mM의 PBS(pH 7.4)를 이용하여 4 ℃에서 투석하였다. 투석된 LDL을 4 ℃에서 저장한 후 4 주 이내에 사용하였다. LDL의 순도는 아가로즈 젤 전기영동과 SDS-PAGE로 확인하였고(Chapman MJ, et al., J. Lipid Res. 22: 339-358, 1981), LDL 단백질의 함량은 BSA(bovine serum albumin)를 표준물질로 하여 정량하였다(Mahley, RW, et al., J. Lipid Res. 1984; 25: 1277-1294).
1-2. TBARS ( thiobarbituric acid reactive substances ) 측정
상기와 같이 분리한 LDL 20 ㎕(단백질 농도, 50 ~ 100 ㎍/㎖)를 10 mM 인산완충용액(phosphate-buffered saline, PBS) 210 ㎕와 혼합하고, 상기 실시예에서 제조한 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물의 용액을 각각 10 ㎕씩 첨가하였다.
고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물은 DMSO(dimethylsulfoxide)에 녹여 사용하였으며, 실험에 사용하기 전에 여러 농도로 희석하였다. 음성 대조군으로는 용매만을 첨가한 것을 사용하였다.
상기 용액에 0.25 mM의 황산구리 10 ㎕를 첨가하여 37 ℃에서 4 시간 동안 반응시키고, 20% 트리클로로아세트산(trichloroacetic acid, TCA) 용액 1 ㎖를 첨가하여 반응을 중지시켰다. 0.05 N의 수산화나트륨 용액에 녹인 0.67% TBA 용액 1 ㎖를 첨가하고 10 초간 교반시킨 후 95 ℃에서 5분 동안 가열하여 발색반응이 일어나도록 하고 얼음물로 용액을 냉각하였다. 이 용액을 3000 rpm에서 5분 동안 원심분리하여 상등액을 분리하였으며, 자외선-가시광선 분광기로 540 ㎚에서의 흡광도를 측정하여 상기 발색 반응으로 생성된 말론디알데히드(malondialdehyde, MDA)의 양을 구하였다.
테트라메톡시프로판(말론알데히드비스(디메틸아세탈))(tetramethoxy- propane(malonaldehyde bis(dimethylacetal))의 저장용액을 이용하여, 말론디알데히드를 인산완충용액으로 0 ~ 10 n㏖로 희석하여 표준물질을 250 ㎕씩 만들었다. 이 표준물질을 상기와 같은 방법으로 발색시켜 540 ㎚에서의 흡광도를 측정하고, 말론디알데히드의 표준곡선을 구하였다. 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물을 사용한 상기 실험에서 말론디알데히드의 양은 이 표준곡선을 이용하여 정량하였다. 그 결과를 하기의 표 2에 나타내었다.
시료 추출물 또는 화합물 LDL 산화 억제율(%, 10 ㎍/㎖)
고삼 추출물 에탄올 추출물 40 ㎍/㎖에서 88.5% 저해
열수 추출물 40 ㎍/㎖에서 48.1% 저해
n-헥산 가용추출물 40 ㎍/㎖에서 46.5% 저해
클로로포름 가용추출물 40 ㎍/㎖에서 97.0% 저해
에틸아세테이트 가용추출물 40 ㎍/㎖에서 99.0% 저해
플라보노이드계 화합물 5,7,2',4'-테트라히드록시-8-라벤둘릴플라바논 83.3
5-메톡시-7,2',4'-트리히드록시-8-라벤둘릴플라바논 84.3
5,7,4'-트리히드록시-8-라벤둘릴-2'-메톡시플라바논 22.5
5,7,2'-트리히드록시-8-라벤둘릴플라바논 37.8
5,7,2'-트리히드록시-8-(5-히드록시-2-이소프로페닐-5-메틸헥실)-플라바논 31.4
5,2'-디메톡시-7,4'-디히드록시-8-라벤둘릴플라바논 10.5
표 2에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 상기 조성물에 포함되는 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물은 LDL에 대한 항산화 활성이 우수함을 알 수 있었다. 고삼 추출물의 경우 에탄올 추출물, 및 가용추출물의 경우 클로로포름 가용추출물 및 에틸아세테이트 가용추출물이 40 ㎍/㎖에서 85% 이상의 저해율을 보였고, 특히, 플라보노이드계 화합물인 5,7,2',4'-테트라히드록시-8-라벤둘릴플라바논 및 5-메톡시-7,2',4'-트리히드록시-8-라벤둘릴플라바논은 80% 이상의 뛰어난 산화 억제율을 나타내었다.
<실험예 2> 본 발명에 따른 상기 조성물에 포함되는 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 및 플라보노이드계 화합물의 ACAT 활성에 미치는 영향
본 발명에 따른 상기 조성물의 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 및 플라보노이드계 화합물의 ACAT 활성에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.
2-1. ACAT 효소원의 제조
사람 ACAT-1 및 ACAT-2의 활성에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 베큘로바이러스 발현체제를 이용하여 hACAT-1 및 hACAT-2 각각의 단백질을 얻었다. 사람 간 cDNA 라이브러리 스크리닝(library screening)을 통하여 얻어진 hACAT-1 및 hACAT-2 각각의 cDNA를 베큘로바이러스 전달 벡터에 삽입하고, 곤충세포인 sf9 세포에 도입하여 바이러스를 제조하였다. 다음으로, 플라크 정제(plaque purification) 방법으로 hACAT-1 및 hACAT-2 각각의 재조합 바이러스를 분리한 후, 3 차례의 증폭과정을 거쳐 저장용 바이러스(viral stock)의 역가(titer)를 높였다. 단백질 발현 효율이 좋은 Hi5 곤충세포에 재조합 바이러스를 감염다중도(Mutiplicity of Infection)가 1이 되도록 감염시킨 후, 27 ℃에서 하루 동안 진탕배양하였다. 배양된 hACAT-1과 hACAT-2가 각각 과량 발현된 Hi5 세포들로부터 마이크로좀 분획을 분리하기 위하여, 500 rpm에서 15분간 원심분리하여 세포들을 모으고 저장완충액(hypotonic buffer)에서 급냉동, 급해동 방법으로 세포를 깬 후, 100000 rpm에서 한 시간 동안 초원심분리하였다. 얻어진 마이크로좀 분획들은 단백질 농도가 8 ㎎/㎖이 되도록 저장완충액으로 현탁하여 사용 전까지 저온냉동기에 보관하였다.
2-2. ACAT 활성 측정
ACAT 활성의 측정은 [1-14C] 올레오일-코에이(oleoyl-CoA)(56.0 μCi/μmol; Amersham)를 기질로 하여 Brecher & Chan의 방법(P. Brecher and C. Chan, Biochim. Biophys . Acta , 617, 458, 1980)을 일부 수정하여 사용하였다.
상기 실시예에서 수득한 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물 10 ㎕, 상기 실험예 2-1에서 수득한 마이크로좀 용액 4.0 ㎕, 활성분석 완충액(0.5 M KH2PO4, 10 mM DTT, pH 7.4; Sigma) 20.0 ㎕, 지방이 제거된 우혈청알부민(BSA; bovine serum albumin, 저장액 농도 40 ㎎/㎖; Sigma) 15.0 ㎕, 콜레스테롤(저장액 농도 20 ㎎/㎖; Sigma) 2.0 ㎕, 증류수 41.0 ㎕를 가하여 37 ℃에서 15 분간 예비 반응시켰다. 이 반응액에 [1-14C] 올레오일-코에이(0.05 μCi, 최종농도: 10 μM) 8 ㎕를 첨가하여 다시 37 ℃에서 30 분간 반응시킨 후, 이소프로판올:헵탄 혼합물(4:1 (v/v)) 1 ㎖을 가하여 반응을 정지시켰다. 여기에 600 ㎕의 헵탄과 200 ㎕의 0.1 M KH2PO4(pH 7.4)을 첨가하고, 혼합물을 볼텍서(vortexer)로 격렬하게 혼합한 후, 300 rpm에서 5 분 동안 원심분리를 하였다. 원심분리하여 얻은 100 ㎕의 상층액을 신틸레이션 병(scintillation bottle)에 넣고, 신틸레이션 액(Lipoluma) 4 ㎖을 가하였다. 이 혼합물의 방사선량은 1450 마이크로베타 액체 신틸레이션 계수기(1450 Microbeta liquid scintillation counter, Wallacoy)로 측정하였다.
ACAT 활성은 측정된 방사선량으로부터 시간당 방사선량을 계산하여 1 분 동안 단백질 1 ㎎당 합성된 콜레스테릴 올레이트 피코몰(피코몰/분/㎎ 단백질)로 계산하였다. 그 결과는 표 3에 나타내었다.
추출물 또는 화합물 저해율
hACAT-1(25 ㎍/㎖) hACAT-2(25 ㎍/㎖)
에탄올 추출물 100 /에서 26.9% 저해 100 ㎍/㎖에서 20.5% 저해
열수 추출물 100 /에서 18.6% 저해 100 ㎍/㎖에서 14.8% 저해
n-헥산 가용추출물 100 /에서 23.5% 저해 100 ㎍/㎖에서 11.5% 저해
클로로포름 가용추출물 100 /에서 63.2% 저해 100 ㎍/㎖에서 49.5% 저해
에틸아세테이트 가용추출물 100 /에서 47.5% 저해 100 ㎍/㎖에서 45.0% 저해
5,7,2',4'-테트라히드록시-8-라벤둘릴플라바논 49.9 32.9
5-메톡시-7,2',4'-트리히드록시-8-라벤둘릴플라바논 28.1 32.7
5,7,4'-트리히드록시-8-라벤둘릴-2'-메톡시플라바논 59.4 40.0
5,7,2'-트리히드록시-8-라벤둘릴플라바논 72.6 52.2
5,7,2'-트리히드록시-8-(5-히드록시-2-이소프로페닐-5-메틸헥실)-플라바논 35.8 32.8
5,2'-디메톡시-7,4'-디히드록시-8-라벤둘릴플라바논 30.1 19.7
표 3에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 상기 조성물에 포함되는 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물은 ACAT 활성에 대한 억제능이 우수함을 알 수 있었다. 클로로포름 가용추출물 및 에틸아세테이트 가용추출물은 사람 ACAT-1의 활성 및 사람 ACAT-2의 활성에 대하여, 100 ㎍/㎖에서 40% 이상의 저해율을 보였고, 특히, 플라보노이드계 화합물인 5,7,2'-트리히드록시-8-라벤둘릴플라바논은 사람 ACAT-1의 활성을 70% 이상 억제하였으며, 사람 ACAT-2의 활성을 50% 이상 억제하였다.
<실험예 3> ICR 마우스에 대한 경구투여 급성 독성실험
본 발명에 따른 상기 조성물에 포함되는 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물의 급성 독성을 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험을 실시하였다. 4 주령의 특정 병원체 부재(specific pathogens free) ICR 마우스 암컷 12 마리와 숫컷 12 마리(암수 각각 3마리/용량군)를 온도 22 ± 3 ℃, 습도 55 ± 10%, 조명 12L/12D의 동물실 내에서 사육하였다. 마우스는 실험에 사용되기 전 1주일 정도 순화시켰다. 실험동물용 사료((주)제일제당, 마우스 및 랫트용) 및 음수는 멸균한 후 공급하였으며 자유 섭취시켰다.
상기 실시예에서 제조한 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물을 0.5% 트윈 80을 용매로 하여 50 mg/㎖ 농도로 조제한 후, 마우스 체중 20 g당 0.04 ㎖(100 mg/kg), 0.2 ㎖(500 mg/kg), 0.4 ㎖(1,000 mg/kg)씩 경구 투여하였다. 시료는 단 회 경구 투여하였으며, 투여 후 7일 동안 다음과 같이 부작용 또는 치사 여부를 관찰하였다. 즉, 투여 당일은 투여 후 1 시간, 4 시간, 8 시간, 12 시간 뒤에, 그리고 투여 익일부터 7일째까지는 매일 오전, 오후 1회 이상씩 일반증상의 변화 및 사망동물의 유무를 관찰하였다. 또한, 투여 7일째에 동물을 치사시켜 해부한 후 육안으로 내부 장기를 검사하였다. 투여 당일부터 1일 간격으로 체중의 변화를 측정하여 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 화합물에 의한 동물의 체중 감소 현상을 관찰하였다.
시험 결과, 시험물질을 투여한 모든 마우스에서 특기할 만한 임상증상은 없었고 폐사된 마우스도 없었으며, 또한 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다. 따라서, 본 발명에 따른 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 및 이로부터 분리한 화합물은 모든 마우스에서 1000 mg/kg까지 독성변화를 나타내지 않았으며, 경구투여 최소치사량(LD50)이 적어도 1,000 mg/kg 이상인 안전한 물질로 판단되었다.
이하, 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.
<제제예 1> 약학적 제제의 제조
1-1. 산제의 제조
플라보노이드계 화합물 중 1종 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다. 상기 플라보노이드계 화합물 대신에 고삼 추출물, 이의 가용추출물 또는 이의 분획물을 이용하는 경우, 상기 추출물 또는 분획물은 용매를 완전히 제거하고 정제수에 희석한 것을 사용한다.
1-2. 정제의 제조
플라보노이드계 화합물 중 1종 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유 당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다. 상기 플라보노이드계 화합물 대신에 고삼 추출물, 이의 가용추출물 또는 이의 분획물을 이용하는 경우, 상기 추출물 또는 분획물은 용매를 완전히 제거하고 정제수에 희석한 것을 사용한다.
1-3. 캡슐제의 제조
플라보노이드계 화합물 중 1종 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유 당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다. 상기 플라보노이드계 화합물 대신에 고삼 추출물, 이의 가용추출물 또는 이의 분획물을 이용하는 경우, 상기 추출물 또는 분획물은 용매를 완전히 제거하고 정제수에 희석한 것을 사용한다.
1-4. 주사액제의 제조
플라보노이드계 화합물 중 1종 10 ㎍/㎖
묽은 염산 BP pH 3.5로 될 때까지
주사용 염화나트륨 BP 최대 1 ㎖
적당한 용적의 주사용 염화나트륨 BP 중에 플라보노이드계 화합물을 용해시키고, 생성된 용액의 pH를 묽은 염산 BP를 사용하여 pH 3.5로 조절하고, 주사용 염화나트륨 BP를 사용하여 용적을 조절하고 충분히 혼합하였다. 용액을 투명유리로된 5 ㎖ 타입 I 앰플 중에 충전시키고, 유리를 용해시킴으로써 공기의 상부 격자하에 봉입시키고, 120 ℃에서 15분 이상 오토클래이브시켜 살균하여 주사액제를 제조하였다. 상기 플라보노이드계 화합물 대신에 고삼 추출물, 이의 가용추출물 또는 이의 분획물을 이용하는 경우, 상기 추출물 또는 분획물은 용매를 완전히 제거하고 정제수에 희석한 것을 사용한다.
<제제예 2> 식품의 제조
고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물을 포함하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다. 이때의 고삼 추출물, 이의 가용추출물 또는 이의 분획물은 용매를 완전히 제거한 후, 정제수에 희석하여 이용한 것이다.
2-1. 조리용 양념의 제조
고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물 0.2 ~ 10 중량%로 건강 증진용 조리용 양념을 제조하였다. 이때의 고삼 추출물, 이의 가용추출물 또는 이의 분획물은 용매를 완전히 제거한 후, 정제수에 희석하여 이용한 것이다.
2-2. 토마토 케찹 및 소스의 제조
고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물 0.2 ~ 1.0 중량%를 토마토 케찹 또는 소스에 첨가하여 건강 증진용 토마토 케찹 또는 소스를 제조하였다. 이때의 고삼 추출물, 이의 가용추출물 또는 이의 분획물은 용매를 완전히 제거한 후, 정제수에 희석하여 이용한 것이다.
2-3. 밀가루 식품의 제조
고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물 0.1 ~ 5.0 중량%를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다. 이때의 고삼 추출물, 이의 가용추출물 또는 이의 분획물은 용매를 완전히 제거한 후, 정제수에 희석하여 이용한 것이다.
2-4. 스프 및 육즙( gravies )의 제조
고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물 0.1 ~ 1.0 중량%를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다. 상기 고삼 추출물은 용매를 완전히 제거하고 정제수에 희석한 것을 사용한다.
2-5. 그라운드 비프(ground beef)의 제조
고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물 10 중량%를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다. 이때의 고삼 추출물, 이의 가용추출물 또는 이의 분획물은 용매를 완전히 제거한 후, 정제수에 희석하여 이용한 것이다.
2-6. 유제품( dairy products )의 제조
고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물 0.1 ~ 1.0 중량%를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다. 이때의 고삼 추출물, 이의 가용추출물 또는 이의 분획물은 용매를 완전히 제거한 후, 정제수에 희석하여 이용한 것이다.
2-7. 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다. 검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다. 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물을 진공 농축기에서 감압하에서 농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.
상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 고삼 추출물,이의 가용추출물,이의 분획물 또는 플라보노이드계 화합물의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.
곡물류 (현미 30 중량%, 율무 15 중량%, 보리 20 중량%)
종실류 (들깨 7 중량%, 검정콩 8 중량%, 검정깨 7 중량%)
고삼 추출물 또는 플라보노이드계 화합물의 건조분말 (1 중량%)
영지 (0.5 중량%)
지황 (0.5 중량%)
이때의 고삼 추출물, 이의 가용추출물 또는 이의 분획물은 용매를 완전히 제거한 후, 정제수에 희석하여 이용한 것이다.
<제제예 3> 음료의 제조
3-1. 탄산음료의 제조
설탕 5~10%, 구연산 0.05~0.3%, 카라멜 0.005~0.02%, 비타민 C 0.1~1%의 첨가물을 혼합하고, 여기에 79~94%의 정제수를 섞어서 시럽을 만들고, 상기 시럽을 85~98 ℃에서 20~180초간 살균하여 냉각수와 1:4의 비율로 혼합한 다음 탄산가스를 0.5~0.82% 주입하여 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물을 함유하는 탄산음료를 제조하였다. 상기 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 또는 이의 분획물은 용매를 완전히 제거하고 정제수에 희석한 것을 사용한다.
3-2. 건강음료의 제조
액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 건강음료를 제조하였다. 상기 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 또는 이의 분획물은 용매를 완전히 제거하고 정제수에 희석한 것을 사용한다.
3-3. 야채쥬스의 제조
고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물 0.5 g을 토마토 또는 당근 쥬스 1000 ㎖에 가하여 건강 증진용 야채쥬스를 제조하였다. 상기 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 또는 이의 분획물은 용매를 완전히 제거하고 정제수에 희석한 것을 사용한다.
3-4. 과일쥬스의 제조
고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물 0.1 g을 사과 또는 포도 쥬스 1000 ㎖에 가하여 건강 증진용 과일쥬스를 제조하였다. 상기 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 또는 이의 분획물은 용매를 완전히 제거하고 정제수에 희석한 것을 사용한다.

Claims (13)

  1. 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물을 유효성분으로 함유하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료용 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 고삼 추출물은 고삼을 물, C1~C4의 알코올, 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 제조된 것을 특징으로 하는 심혈관계 질환의 예방 및 치료용 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 알코올은 메탄올, 에탄올 또는 부탄올인 것을 특징으로 하는 심혈관계 질환의 예방 및 치료용 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 고삼 추출물은 고삼을 열수로 추출하여 제조된 것을 특징으로 하는 심혈관계 질환의 예방 및 치료용 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 가용추출물은 고삼 추출물을 농축하여 용매를 완전히 제거한 후, 물, C1~C4의 알코올, 또는 이들의 혼합용매로 현탁시키고, n-헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 n-헥산 가용추출물, 클로로포름 가용추출물 또는 에틸아세테이트 가용추출물인 것을 특징으로 하는 심혈관계 질환의 예방 및 치료용 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 현탁 용매는 물과 메탄올의 혼합용매인 것을 특징으로 하는 심혈관계 질환의 예방 및 치료용 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 분획물은 상기 가용추출물에 대하여 100% 클로로포름, n-헥산/아세톤(100:1~1:5, 부피비) 혼합용매 및 클로로포름/아세톤(150:1~1:4, 부피비) 혼합용매를 이동상으로 하고 실리카겔 크로마토그래피를 수행하여 얻은 것을 특징으로 하는 심혈관계 질환의 예방 및 치료용 조성물.
  8. 제7항에 있어서, 상기 가용추출물은 클로로포름 가용추출물인 것을 특징으로 하는 심혈관계 질환의 예방 및 치료용 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 상기 플라보노이드계 화합물은
    1) 5,7,2',4'-테트라히드록시-8-라벤둘릴플라바논;
    2) 5-메톡시-7,2',4'-트리히드록시-8-라벤둘릴플라바논;
    3) 5,7,4'-트리히드록시-8-라벤둘릴-2'-메톡시플라바논;
    4) 5,7,2'-트리히드록시-8-라벤둘릴플라바논;
    5) 5,7,2'-트리히드록시-8-(5-히드록시-2-이소프로페닐-5-메틸헥실)-플라바논; 및
    6) 5,2'-디메톡시-7,4'-디히드록시-8-라벤둘릴플라바논으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 1종 이상인 것을 특징으로 하는 심혈관계 질환의 예방 및 치료용 조성물.
  10. 제1항에 있어서, 상기 심혈관계 질환은 고지혈증, 관상동맥 심장병, 동맥경화 또는 심근경색인 것을 특징으로 하는 심혈관계 질환의 예방 및 치료용 조성물.
  11. 제1항에 있어서, 상기 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이 로부터 분리한 플라보노이드계 화합물은 항산화 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 심혈관계 질환의 예방 및 치료용 조성물.
  12. 제1항에 있어서, 상기 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물은 아실 코에이: 콜레스테롤 아실 전이효소 억제활성을 갖는 것을 특징으로 하는 심혈관계 질환의 예방 및 치료용 조성물.
  13. 제1항의 고삼 추출물, 이의 가용추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 플라보노이드계 화합물을 유효성분으로 함유하는 심장순환계 질환 개선용 식품 조성물.
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