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KR20070023761A - 암포테리신 ｂ 포함 조성물, 방법 및 시스템 - Google Patents

암포테리신 ｂ 포함 조성물, 방법 및 시스템 Download PDF

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KR20070023761A
KR20070023761A KR1020067027004A KR20067027004A KR20070023761A KR 20070023761 A KR20070023761 A KR 20070023761A KR 1020067027004 A KR1020067027004 A KR 1020067027004A KR 20067027004 A KR20067027004 A KR 20067027004A KR 20070023761 A KR20070023761 A KR 20070023761A
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KR
South Korea
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amphotericin
pharmaceutical composition
pharmaceutically acceptable
acceptable excipient
particles
Prior art date
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Withdrawn
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KR1020067027004A
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English (en)
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사르마 두두
스리니바스 팔라코다티
데이비드 레처가-발레스터로스
댄포스 밀러
앨런 알 쿠글러
크리스토퍼 프란츠
트릭시 탠
리차드 말콤슨
케이트 와시코
테레사 스위니
토마스 이 타라라
사르뱌나 드위베디
마이클 에이 엘던
Original Assignee
넥타르 테라퓨틱스
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
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Abstract

본 발명의 조성물은 약 95 중량％ 이상의 암포테리신 B를 포함한 입자를 포함하며, 이때 상기 입자의 질량 중앙 직경은 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛이다. 다른 조성물은 또한 약 95 중량％ 이상의 암포테리신 B를 포함한 입자를 포함하며, 이때 상기 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경이 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛이다. 또다른 조성물은 암포테리신 B를 포함한 입자를 포함하며, 이때, 상기 입자의 질량 중앙 직경은 약 1.9 ㎛ 미만이고, 암포테리신 B의 결정도 수준은 약 20％ 이상이다. 단위 투여 형태, 전달 시스템 및 방법이 유사한 조성물을 포함할 수 있다.
암포테리신 B, 질량 중앙 직경, 기하 직경, 결정도 수준, 전달 시스템

Description

암포테리신 Ｂ 포함 조성물, 방법 및 시스템 {COMPOSITION COMPRISING AMPHOTERICINB METHODS AND SYSTEMS}
본 발명의 하나 이상의 실시양태는 암포테리신 B를 포함하는 조성물, 암포테리신 B 조성물의 제조 및 사용 방법, 및 암포테리신 B 조성물을 사용하기 위한 시스템을 포함한다.
침습성 사상 폐 진균 감염 (IFPFI)과 같은 폐 진균 감염은 면역저하 환자에서의 이환율 및 사망률에 대한 주요 원인이다. 개체의 면역계는 후천성 면역결핍증 (AIDS)과 같은 몇몇 질환에 의해 손상될 수 있고/있거나 면역억제 요법에 의해 고의적으로 손상될 수 있다. 면역억제 요법은 종종 암 치료를 받고 있는 환자 및/또는 이식 절차를 진행 중인 환자에게 투여된다.
면역저하 환자는 폐 및/또는 비내 진균 감염에 대한 위험도(susceptibility)가 증가한다. 특히, 호중구감소증을 장기간 앓은 환자와 같은 심각한 면역저하 환자, 또는 이들의 다른 면역억제제 이외에도 1 mg/kg/일 이상의 프레드니손을 연속 21일 이상 투여할 필요가 있는 환자는 폐 및/또는 비내 진균 감염에 걸리기 쉽다. 면역저하 환자 중에서, 전체 진균 감염 비율은 0.5 내지 28％이다. 프레드 헛친슨 암 센터(Fred Hutchinson Cancer Center)에서, 특발성 폐렴 증후군 (IPS)을 앓는 검시된 골수 이식 환자 중 7.3％가 IFPFI에 걸렸다. 보게세르(Vogeser) 등에 의한 또다른 연구에서는, IFPFI의 비율 4％가 1993년 내지 1996년의 기간 동안 임의의 원인으로 사망한 유럽인 환자 중 1187명의 일관된 검시에서 발견되었다. 이러한 유럽인 환자 중 절대적인 다수는 (1) 고용량 스테로이드 투여제; (2) 악성종양 치료제; (3) 고형 기관 이식; 또는 (4) 일부 골수 이식 형태를 투여받은 바 있다.
면역저하 환자에서 가장 일반적인 폐 및/또는 비내 진균 감염은 폐 및/또는 비내 아스페로길로스증이다. 아스페로길로스증은 아스페르길루스(Aspergillus) 진균 종 (아스페르길루스 종)에 의해 발병된 질환으로서, 상기 아스페르길루스 종은 우선 폐를 통해 신체로 침입한다. 아스페로길로스증의 발병률은 호중구감소증의 지속기간 및 정도, 환자의 인자 (예를 들어, 연령, 코르티코스테로이드 사용, 및 사전 폐 및/또는 비내 질환), 환경 오염 수준, 진단 기준 및 병인 측정의 지속성에 의존적이다.
기타 사상 및 이상 진균류도 또한 폐 진균 감염을 유도할 수 있다. 이러한 추가적인 진균류는 일반적으로 풍토적 및 지역적이고, 예를 들어 블라스토마이세스증(blastomycosis), 파종성 칸디다증(disseminated candidiasis), 콕시디오이데스진균증(coccidioidomycosis), 크립토콕쿠스증(cryptococcosis), 히스토플라스마증histoplasmosis), 털곰팡이증(mucormycosis) 및 스포로트리쿰증(sporotrichosis)을 포함할 수 있다. 폐계에 전형적으로 영향을 미치지는 않지만, 칸디다(Candida) 종에 의해 유발되는 감염은 일반적으로 전신적이고 체내 유치물 또는 IV형 카테터(catheter), 창상 또는 감염된 고형 기관 이식물을 통한 감염으로부터 가장 자주 발생하고, 면역저하 환자 중 전체 진균 감염의 50 내지 67％를 차지한다.
암포테리신 B는 아스페로길로스증을 치료하기 위해 현재 사용되고 있는 유일한 승인 살진균성 화합물이고 일반적으로 정맥내로 전달된다. 암포테리신 B는 스트렙토마이세스 노도수스(Streptomyces nodosus) 균주로부터 얻어진 양성적 폴리엔 마크롤리드(polyene macrolide)이다. 이의 시판 형태에서, 암포테리신 B는 무정형 및 결정질 형태 둘다로 존재한다. 나트륨 데옥시콜레이트와 함께 제제화된 암포테리신 B는 암포테리신 B의 시판 제1 모 제제였다. 전신 정맥내 요법은 치료 효과를 방해하고 암포테리신 B의 예방적 용도의 바람직함을 감소시키는, 신 독성 및 간 독성과 같은 투여량-의존적 독성에 의해 억제된다. 승인된 요법으로도, 아스페로길로스증의 발병률은 증가하고 있고, 사망률이 치료받은 감염자의 50％를 초과하는 것으로 평가된다.
안전하고 효과적인 암포테리신 B 조성물, 이러한 조성물의 제조 및 사용 방법, 및 이러한 조성물을 사용하기 위한 시스템에 대한 필요성이 당업계에 존재한다. 예를 들어, 폐 및/또는 비내 진균 감염이 발병된 환자를 안전하고 효과적으로 치료 및/또는 예방하는 조성물 및 방법에 대한 필요성이 남아있다.
<발명의 요약>
따라서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 암포테리신 B를 포함하는 조성물, 암포테리신 B 조성물의 제조 및 사용 방법, 및 암포테리신 B 조성물을 사용하기 위한 시스템을 포함한다. 본 발명의 다른 특징 및 이점은 하기 본 발명의 기재내용에 설명될 것이고, 부분적으로 기재내용으로부터 명백해질 수 있거나 발명의 수행에 의해 학습될 수 있다. 본 발명의 실시양태는 실현되고, 기재된 상세설명 및 청구범위에 구체적으로 지적된 조성물 및 방법에 의해 습득될 것이다.
한 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 약 95 중량％ 이상의 암포테리신 B를 포함한 입자를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 상기 입자의 질량 중앙 직경은 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛이다.
다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 약 95 중량％ 이상의 암포테리신 B를 포함한 입자를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하(geometric) 직경은 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛이다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 암포테리신 B를 포함한 입자를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 상기 입자의 질량 중앙 직경은 약 1.9 ㎛ 미만이고, 암포테리신 B의 결정도 수준은 약 20％ 이상이다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 유효량의 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 상기 제약 조성물은 질량 중앙 직경이 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조된다.
다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 유효량의 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 상기 제약 조성물은 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조되고, 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경은 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛이다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 유효량의 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 상기 암포테리신 B의 결정도 수준은 약 20％ 내지 약 99％이다.
다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 결정도 수준이 약 20％ 이상인 암포테리신 B를 포함하는 건조 분말에 관한 것이다. 상기 건조 분말은 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만인 입자를 포함한다.
추가 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 제약 조성물을 함유한 용기를 포함하는 단위 투여 형태에 관한 것이다. 상기 제약 조성물은 유효량의 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제를 포함한다. 상기 제약 조성물은 질량 중앙 직경이 약 1.9 ㎛ 미만인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조된다.
다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 제약 조성물을 함유한 용기를 포함하는 단위 투여 형태에 관한 것이다. 상기 제약 조성물은 유효량의 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제를 포함한다. 상기 제약 조성물은 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조되고, 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경은 약 1.9 ㎛ 미만이다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 제약 조성물을 함유한 용기를 포함하는 단위 투여 형태에 관한 것이다. 상기 제약 조성물은 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제를 포함한다. 상기 암포테리신 B의 결정도 수준은 약 20％ 내지 약 99％이다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 흡입기 및 제약 조성물을 포함하는 전달 시스템에 관한 것이다. 상기 제약 조성물은 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제를 포함한 미립자를 포함한다. 상기 미립자는 질량 중앙 직경이 약 1.9 ㎛ 미만인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조된다.
추가 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 흡입기 및 제약 조성물을 포함하는 전달 시스템에 관한 것이다. 상기 제약 조성물은 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제를 포함한 미립자를 포함한다. 상기 미립자는 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조되며, 이때 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경은 약 1.9 ㎛ 미만이다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 흡입기 및 제약 조성물을 포함하는 전달 시스템에 관한 것이다. 상기 제약 조성물은 결정도 수준이 약 20％ 내지 약 99％인 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제를 포함한 미립자를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 제약 조성물 제조용 암포테리신 B의 특성규명 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 암포테리신 B 조성물의 결정도 수준을 측정하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 또한, 제약상 허용되는 부형제와 배합하기 위한 암포테리신 B 조성물을 방출하여 제약 조성물을 형성하기 전에, 상기 결정도 수준이 제1 소정 수준 초과임을 확인하는 단계를 포함한다.
다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 제약 조성물 제조용 암포테리신 B의 특성규명 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 암포테리신 B 조성물의 무정형도 측정 단계를 포함한다. 상기 방법은 또한, 제약상 허용되는 부형제와의 배합을 위한 암포테리신 B 조성물을 방출하여 제약 조성물을 형성하기 전에, 상기 무 정형도가 소정 수준 미만임을 확인하는 단계를 포함한다.
다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 건조 분말 제약 조성물의 제조 및 특성규명 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 암포테리신 B 조성물을 제약상 허용되는 부형제와 배합하여 건조 분말 제약 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 또한 건조 분말 제약 조성물의 질량 중앙 공기역학적 직경을 결정하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 추가로 환자 투여용 건조 분말 제약 조성물을 방출하기 전에 질량 중앙 공기역학적 직경이 소정 수준 미만임을 확인하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 건조 분말 제약 조성물의 제조 및 특성규명 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 암포테리신 B 조성물을 제약상 허용되는 부형제와 배합하여 건조 분말 제약 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 또한 건조 분말 제약 조성물의 균질도 측정 단계를 포함한다. 상기 방법은 추가로 환자 투여용 건조 분말 제약 조성물을 방출하기 전에 균질도가 소정 수준 초과임을 확인하는 단계를 포함한다.
다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 분무 건조 입자 제조 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 암포테리신 B를 포함하는 입자를 액체 중에 현탁시켜 공급원액을 형성하는 단계를 포함한다. 상기 입자의 질량 중앙 직경은 약 3 ㎛ 미만이다. 상기 방법은 또한 상기 공급원액을 분무 건조시켜 분무 건조 입자를 생성하는 단계를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 분무 건조 입자 제조 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 암포테리신 B를 포함하는 입자를 액체 중에 현탁시켜 공급원액을 형성하는 단계를 포함하며, 이때 암포테리신 B의 결정도 수준은 약 20％ 이상이다. 상기 방법은 추가로 상기 공급원액을 분무 건조시켜 분무 건조 입자를 생성하는 단계를 포함한다.
다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 진균 감염에 대한 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 암포테리신 B를 포함하는 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함하며, 이때 상기 조성물은 질량 중앙 직경이 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조된다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 진균 감염에 대한 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 암포테리신 B를 포함하는 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함하며, 이때 상기 조성물은 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조되고, 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경은 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛이다.
다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 진균 감염에 대한 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 암포테리신 B를 포함하는 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함하며, 이때 암포테리신 B의 결정도 수준은 약 20％ 이상이다.
추가 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 진균 감염에 대한 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 암포테리신 B를 포함하는 조성물 의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함한다. 상기 암포테리신 B의 결정도 수준은 약 20％ 이상이고, 폐 조직 생검에 의해 측정된 암포테리신 B의 폐 고형 조직 체류 반감기는 약 1 주 이상이다.
다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 진균 감염에 대한 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 암포테리신 B를 포함하는 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함한다. 상기 암포테리신 B의 결정도 수준은 약 20％ 이상이고, 기관지폐포 세척으로 측정된 암포테리신 B의 폐 상피 내막 유체 체류 반감기는 약 10 시간 이상이다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 진균 감염에 대한 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 약 0.01 mg/kg 내지 7.0 mg/kg 양의 암포테리신 B를 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함한다. 상기 암포테리신 B의 결정도 수준은 약 20％ 이상이고, 혈장 암포테리신 B 농도는 약 1000 ng/mL 미만으로 유지된다.
다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 진균 감염에 대한 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 약 0.01 mg/kg 내지 7.0 mg/kg 양의 암포테리신 B를 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함한다. 상기 암포테리신 B의 결정도 수준은 약 20％ 이상이고, 혈장 암포테리신 B 농도는 신 독성 및/또는 간 독성을 피하기에 충분히 낮게 유지된다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 진균 감염에 대한 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 암포테리신 B를 포함하는 조성 물을 이를 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함한다. 암포테리신 B의 결정도 수준은 약 20％ 이상이다. 기관지폐포 세척으로 측정된 폐 암포테리신 B 농도는 적어도 일부 치료 기간 동안 최소 억제 농도의 약 5배 이상에 도달한다. 혈장 암포테리신 B 농도는 약 1000 ng/mL 미만으로 유지된다.
다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 진균 감염에 대한 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 암포테리신 B를 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함한다. 상기 암포테리신 B의 결정도 수준은 약 20％ 이상이다. 치료 기간은 약 15 주 내지 약 20 주이다. 기관지폐포 세척으로 측정된 폐 암포테리신 B 농도는 적어도 일부 치료 기간 동안 최소 억제 농도의 약 5배 이상에 도달한다.
추가 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 진균 감염에 대한 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것이다. 본 발명은 약 2 mg 내지 약 50 mg의 양의 암포테리신 B를 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함한다. 암포테리신 B의 결정도 수준은 약 20％ 이상이다. 투여는 약 5 분 미만으로 수행된다.
다른 측면에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 진균 감염에 대한 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 암포테리신 B를 포함하는 건조 분말의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함한다. 암포테리신 B의 결정도 수준은 약 20％ 이상이고, 건조 분말은 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만인 입자를 포함한다.
본 발명의 실시양태는 하기 언급된 다수의 비제한적인 도면을 참조로 하여 본 발명의 상세한 설명에서 추가로 기재된다.
도 1은 본 발명에 따른 제약 조성물을 투여한 후에 폐에서 예측된 암포테리신 B 농도를 나타낸다.
도 2는 본 발명에 따른 제약 조성물을 투여한 후에 예측된 암포테리신 B 혈장 농도를 나타낸다.
도 3A 내지 3E는 본 발명의 제약 조성물을 에어로졸화하기 위해 이용될 수 있는 건조 분말 흡입기의 작동을 보여주는 개략적인 측단면도이다.
도 4는 본 발명의 암포테리신 B 분말용 앤더슨 캐스케이드 임팩터(Anderson Cascade Impactor) (ACI)에서 침착의 유속 의존도에 대한 플롯을 보여주는 대표 그래프이다.
도 5는 터보스핀(Trubospin)® DPI 장치를 60 L/분으로 이용하여 본 발명의 암포테리신 B 분말의 방사 용량 (ED)의 안정성을 보여주는 대표 그래프이다.
도 6은 터보스핀® DPI 장치를 28.3 L/분으로 이용하여 본 발명의 암포테리신 B 분말의 에어로졸 성능의 안정성의 플롯을 보여주는 대표 그래프이다.
도 7은 암포테리신 B 및 다양한 포스파티딜콜린을 포함한 본 발명의 제약 조성물의 에어로졸 성능의 플롯을 보여주는 대표 그래프이다.
도 8은 다양한 수동 DPI 장치를 56.6L/분으로 이용하여 70 중량％ 암포테리 신 B를 포함한 본 발명이 제약 조성물의 에어로졸 성능의 플롯을 보여주는 대표 그래프이다.
도 9는 수집기 당 본 발명의 분말로부터 얻어진 ED를 나타낸다.
도 10은 로트번호(lot) 당 본 발명의 분말로부터의 평균 ED를 나타낸다.
도 11은 수집기 당 본 발명의 분말의 질량 중앙 공기역학적 직경 (MMAD)을 나타낸다.
도 12는 수집기 당 본 발명의 분말의 미립자 투여량 (％FPD <3.3 ㎛)을 나타낸다.
도 13은 수집기 당 본 발명의 분말의 ED (mg/캡슐)를 나타낸다.
도 14는 수집기 당 및 로트번호 당 본 발명의 분말의 평균 ED를 나타낸다.
도 15는 수집기 당 본 발명의 분말의 MMAD를 나타낸다.
도 16은 수집기 당 본 발명의 분말의 ％FPD <3.3 ㎛를 나타낸다
도 17은 2종의 본 발명의 분말에 대한 ED (mg/캡슐)를 나타낸다.
도 18은 기관내 투여 및 정맥내 투여 후에 래트의 신체 내 다양한 위치에서의 암포테리신 B 농도를 나타내는 대표 그래프이다.
도 19는 폐 투여 14일 후에 개의 폐 내 평균 암포테리신 B 농도-시간 프로파일을 나타내는 대표 그래프이다.
도 20은 본 발명의 한 형태의 효과를 나타내는 카플란-마이어 생존 곡선(Kaplan-Meier Survival Curve)이다.
도 21은 토끼에게 흡입으로 전달된, 폐 조직 중의 그룹 평균 암포테리신 B 농도를 나타낸다.
도 22는 토끼에게 흡입으로 전달된, 폐 조직 내 그룹 평균 암포테리신 B 농도를 나타낸다.
도 23은 본 발명의 한 형태의 효과를 나타내는 카플란-마이어 생존 곡선이다.
도 24는 2종의 본 발명의 분말에 대한 중량측정 입도 분포 및 약물-특이적 입도 분포를 비교한 플롯이다.
달리 명시하지 않는 한, 본 발명은 특정 제제 성분, 약물 전달 시스템, 제조 기술, 투여 단계 등에 제한되지 않으므로 달라질 수 있음을 이해해야 한다. 이와 관련하여, 달리 명시하지 않는 한, 화합물 또는 성분을 언급하는 것은 화합물 또는 성분 그 자체 뿐만 아니라 다른 화합물 또는 성분과 조합된 화합물, 예를 들어 화합물의 혼합물도 포함한다.
추가로 논의하기 전에, 하기 용어들의 정의가 본 발명의 실시양태의 이해를 도와줄 것이다.
본원에 사용된 단수형은 내용에 명확히 다르게 명시되지 않는 한 복수형의 언급을 포함한다. 따라서, 예를 들면, "인지질"에 대한 언급은 내용에 명확히 다르게 명시되지 않는 한 하나의 인지질 뿐만 아니라 둘 이상의 인지질의 조합 또는 혼합물을 포함한다.
본원에 사용된 "미립자"는 암포테리신 B 및 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 입자를 의미한다. 미립자는 중공 및/또는 다공성 미세구조와 같은 다양한 모양 및 형태를 가질 수 있다. 중공 및/또는 다공성 미세구조는 공극, 세공, 흠, 중공, 스페이스, 간질성 스페이스, 틈, 천공 또는 구멍을 나타내거나 규정하거나 포함할 수 있고, 구형이거나 붕괴되거나 변형되거나 파쇄된 입자일 수 있다.
활성제를 언급할 때, 용어는 특정된 분자의 실체 뿐만 아니라, 염, 에스테르, 아미드, 히드라지드, N-알킬 유도체, N-아실 유도체, 프로드럭, 접합체, 활성 대사물질 및 다른 이러한 유도체, 유사체 및 관련 화합물을 포함하나 이에 제한되지 않는 제약상 허용되며 제약상 활성인 유사체도 또한 포함한다. 그러므로, 본원에 사용된 용어 "암포테리신 B"는 암포테리신 B 그 자체, 또는 이러한 암포테리신 B 유도체, 유사체 또는 관련 화합물이 항진균 활성을 나타내는 한, 상기 언급한 유도체, 유사체 또는 관련 화합물을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "치료하는" 및 "치료"는 증상의 중증도 및/또는 빈도의 감소, 증상 및/또는 근본 원인의 제거, 증상 및/또는 근본 원인의 발생 가능성 감소 및 손상의 개선 또는 교정을 의미한다. 따라서, 본원에 제시한 바와 같은 활성제로 환자를 "치료하는" 것은 임상적 증상이 있는 개인의 치료 뿐 아니라 병에 걸리기 쉬운 개인에서의 특정 증상, 질환 또는 장애의 예방도 포함한다.
본원에 사용된 "유효량"은 치료 유효량 및 예방 유효량 둘 다를 아우르는 양을 의미한다.
본원에 사용된 "치료 유효량"은 원하는 치료 결과를 달성하는 데 유효한 양을 의미한다. 주어진 활성제의 치료 유효량은 전형적으로 치료할 장애 또는 질환의 유형 및 중증도 및 환자의 연령, 성별 및 체중과 같은 인자에 따라 달라질 것이다.
본원에 사용된 "예방 유효량"은 원하는 예방 결과를 달성하는 데 유효한 양을 의미한다. 질환의 개시 전에 예방적 용량을 환자에게 투여하기 때문에, 예방 유효량은 전형적으로 치료 유효량보다 적다.
본원에 사용된 "질량 중앙 직경" 또는 "MMD"는 전형적으로는 다분산 입자 집단에서, 즉, 다양한 입도로 이루어진 집단에서 복수개의 입자의 중앙 직경을 의미한다. 본원에 보고한 바와 같은 MMD 값은 내용에 다르게 명시되지 않는 한 레이저 회절 (심파텍 헬로스(Sympatec Helos), 독일 클라우스탈-젤러펠트 소재)로 결정한다. 전형적으로, 분말 샘플을 심파텍 RODOS 건조 분말 분산 유닛의 공급 깔때기로 직접 첨가한다. 이는 수동으로 또는 VIBRI 진동 공급 부재의 끝으로부터 기계적으로 교반함으로써 수행할 수 있다. 샘플은 주어진 분산 압력에 대해 최대인 진공 강하 (석션)를 이용하여 가압 공기 (2 내지 3 bar)의 적용을 통해 초기 입자로 분산된다. 분산된 입자는 분산된 입자의 탄도를 정확한 각도로 가로지르는 632.8 nm 레이저 빔으로 검사된다. 입자 전체로부터 산란된 레이저 광은 역-푸리에(reverse-Fourier) 렌즈 어셈블리를 이용하여 광전자증배기 검출기 부재의 동심 배열로 이미지화된다. 산란광은 5 ms의 시간-절편(time-slice)으로 수득된다. 입도 분포는 독점적 알고리즘을 이용하여 산란 광 공간/세기 분포로부터 역계산된다.
본원에 사용된 "기하 직경"은 내용에 다르게 명시되지 않는 한 현미경으로 결정된 단일 입자의 직경을 의미한다.
본원에 사용된 "질량 중앙 공기역학적 직경" 또는 "MMAD"는 전형적으로는 다분산 집단에서 복수개의 입자 또는 미립자의 중앙 공기역학적 크기를 의미한다. "공기역학적 직경"은 일반적으로 대기에서 분말과 동일한 침강 속도를 갖는 단위 밀도 구의 직경이며, 그러므로 이는 그의 침강 거동 면에서 에어로졸화된 분말 또는 다른 분산 입자 또는 미립자 제제를 특성화하는 유용한 수단이다. 공기역학적 직경은 입자 또는 미립자 모양, 밀도, 및 입자 또는 미립자의 물리학적 크기를 포함한다. 본원에 사용된 MMAD는 내용에 다르게 명시되지 않는 한 연속 충돌로 결정된 에어로졸화된 분말의 공기역학적 입자 또는 미립자 크기 분포의 중앙을 의미한다.
본원에 사용된 "결정도 수준"은 암포테리신 B의 총량에 대한 결정질 형태인 암포테리신 B의 퍼센트를 의미한다. 내용에 반대로 명시되지 않는 한, 본 문헌에서의 결정도 수준은 광각 X-선 분말 회절로 측정한다. X-선 회절 분말 패턴은 2초의 유지 시간 (고정 시간 스캔), 0.02°2θ의 단계 크기, 3-42°2θ의 스캔 범위, 0.5° 발산 슬릿, 1° 산란 슬릿 및 0.3 mm 수용 슬릿을 가진 시마즈(Shimadzu) X-선 회절장치 모델 XRD-6000으로 측정하였으며, 이는 실시예 1에 보다 상세히 기재되어 있다.
본원에 사용된 "무정형도"는 암포테리신 B의 총량에 대한 무정형인 암포테리신 B의 퍼센트를 의미한다. 내용에 반대로 명시되지 않는 한, 본문에서의 무정형도 수준은 광각 X-선 분말 회절로 측정한다.
본원에 사용된 용어 "방사 용량" 또는 "ED"는 분말 단위 또는 저장소로부터의 작동 또는 분산 발생 후, 흡입기 장치로부터의 건조 분말의 전달을 지적하는 것을 의미한다. ED는 명목상의 용량 (즉, 발포 전 적합한 흡입기 장치에 놓여진 단위 투여량 당 분말의 질량)에 대한 흡입기 장치로 전달되는 용량의 비로 정의된다. ED는 실험적으로 결정된 양이며, 환자 투여를 모방한 시험관 내 장치 설비를 이용하여 결정할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 ED 값을 결정하기 위해, 건조 분말 (상기 정의한 바와 같음)의 명목상의 용량을 전문이 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제4,069,819호 및 동 제4,995,385호에 기재된 터보스핀(Turbospin) (등록상표) DPI 장치 (PH&T, 이탈리아)에 놓는다. 터보스핀 (등록상표) DPI를 작동시켜 분말을 분산시킨다. 그 후, 생성된 에어로졸 구름을 작동 후 2.5초 동안 진공 (30 L/분)에 의해 장치로부터 배출시키는데, 이 때 이는 장치 마우스피스에 부착된 타르를 입힌 유리 섬유 필터 (겔만(Gelman), 47 mm 직경) 상에 포착된다. 필터에 도달한 분말의 양은 전달 용량을 구성한다. 예를 들면, 흡입기 장치에 놓인 건조 분말 5 mg을 함유하는 캡슐의 경우, 분말의 분산으로 인해 상기 기재한 바와 같은 타르를 입힌 필터 상에서 분말 4 mg이 회수되는 경우, 건조 분말 조성물에 대한 ED는 80％ [= 4 mg (전달된 용량) /5 mg (명목상의 용량)]이다.
본원에 사용된 "수동적 건조 분말 흡입기"는 저장소 또는 단위 투여량 형태인 장치 내에 함유된 제약 조성물을 분산시키고 에어로졸화시키기 위해서 숨을 들이마시려는 환자의 노력에 의존하며, 약물 조성물을 분산시키고 에어로졸화하기 위해 가압 기체와 같은 에너지 공급 수단 및 진동 또는 회전 부재를 포함하는 흡입기 장치를 포함하지 않는 흡입기 장치를 의미한다.
본원에 사용된 "능동적 건조 분말 흡입기"는 저장소 또는 단위 투여량 형태인 장치 내에 함유된 제약 조성물을 분산시키고 에어로졸화시키기 위해서 숨을 들이마시려는 환자의 노력에만 의존하지 않고, 약물 조성물을 분산시키고 에어로졸화하기 위해 가압 기체와 같은 에너지 공급 수단 및 진동 또는 회전 부재를 포함하는 흡입기 장치를 포함하는 흡입기 장치를 의미한다.
본 발명의 몇몇 실시양태의 개요를 본 명세서의 발명의 요약란에 기재한다. 간략함을 위하여, 이 개요는 그의 전문이 본원에 참고로 포함된다.
본 발명의 하나 이상의 실시양태는 특정 암포테리신 B 조성물이 감소된 독성을 갖는다는 놀랍고도 예기치 못한 발견에 관한 것이다. 이론에 구속되기를 바라지 않지만, 몇가지 인자가 암포테리신 B 독성에 영향을 미치는 것으로 여겨진다. 이들 인자에는 암포테리신 B의 결정도 수준, 암포테리신 B 입자의 크기, 암포테리신 B 입자를 포함하는 미립자의 균질성 및 암포테리신 B 입자를 포함하는 미립자의 크기가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 상황에 따라, 이들 인자 중 하나 이상이 독성에 영향을 미치는 것으로 여겨진다.
본 발명의 하나 이상의 실시양태에서, 조성물은 암포테리신 B를 포함한다. 암포테리신 B는 트랜스 위치인 7개 접합된 이중 결합 및 글리코시드 결합에 의해 주요 고리에 연결된 3-아미노-3,6-디데옥시만노스 (미코스아민) 부위를 함유하는 헵타엔 마크롤리드이다. 암포테리신 B 벌크 약물 재료는 덴마크 코펜하겐 소재의 알파마(Alpharma) 또는 미국 코넥티커트주 우드브릿지 소재의 켐워트(Chemwerth)로부터 입수할 수 있다.
본 발명의 하나 이상의 실시양태에서, 조성물은 항진균 활성을 갖는 암포테리신 B 유도체를 포함한다. 암포테리신 B 유도체는 에스테르, 아미드, 히드라지드, N-알킬, 및/또는 N-아미노 아실일 수 있다. 암포테리신 B의 에스테르 유도체의 예로는 메틸 에스테르, 콜린 에스테르, 및 디메틸아미노프로필 에스테르가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 암포테리신 B의 아미드 유도체의 예로는 암포테리신 B의 1급, 2급 및 3급 아미드가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 암포테리신 B의 히드라지드 유도체의 예로는 N-메틸피페라진 히드라지드가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 암포테리신 B의 N-알킬 유도체의 예로는 암포테리신 B 메틸 에스테르의 N',N',N'-트리메틸 및 N',N'-디메틸아미노프로필 숙시닌이미딜 유도체가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 암포테리신 B의 N-아미노아실 유도체의 예로는 N-오르니틸-, N-디아미노프로피오닐-, N-리실-, N-헥사메틸리실-, 및 N-피페리딘-프로피오닐- 또는 N',N'-메틸-1-피페라진-프로피오닐-암포테리신 B 메틸 에스테르가 포함되나 이에 제한되지 않는다.
암포테리신 B를 포함하는 조성물은 암포테리신 B의 다양한 양을 포함할 수 있다. 예를 들면, 암포테리신 B의 양은 약 0.01 중량％ 이상, 예를 들어 약 1 중량％ 이상, 약 10 중량％ 이상, 약 50 중량％ 이상, 약 90 중량％ 이상, 약 95 중량％ 이상, 또는 약 98 중량％ 이상의 범위일 수 있다.
상기 언급한 바와 같이, 암포테리신 B의 결정도 수준은 독성을 감소시키는 인자일 수 있다고 여겨진다. 예를 들어, 폐에 투여하는 경우, 암포테리신 B의 보다 결정질인 형태는 암포테리신 B의 보다 무정형인 형태보다 더욱 느리게 용해되고 더욱 긴 반감기를 가진다고 여겨진다. 이론에 구속되기를 바라지 않지만, 느린 용해 및 긴 반감기는 독성을 감소시킨다고 여겨진다. 반대로, 이론에 구속되기를 바라지 않지만, 무정형은 폐 조직에 독성일 수 있는 가용성 응집물로 발전된다고 여겨진다. 이론에 구속되기를 바라지 않지만, 상기 원칙은 폐에 제한되지 않는다고 여겨진다.
암포테리신 B의 원하는 결정도 수준은 투여량 및 치료 섭생과 같은 인자에 따라 달라질 것이다. 암포테리신 B의 결정도 수준은 약 10％ 이상, 약 20％ 이상, 약 30％ 이상, 약 40％ 이상, 약 50％ 이상, 약 60％ 이상, 약 70％ 이상, 예를 들어 약 80％ 이상, 약 90％ 이상, 약 95％ 이상, 또는 약 99％ 이상일 수 있다. 따라서, 결정도 수준은 약 10％ 내지 100％, 예를 들어 약 20％ 내지 약 99％, 약 50％ 내지 약 99％, 약 70％ 내지 약 99％, 약 70％ 내지 약 98％, 약 80％ 내지 약 98％, 또는 약 90％ 내지 약 97％의 범위일 수 있다.
결정도 수준은 몇가지 공지된 임의의 기술로 결정할 수 있다. 예를 들어, 결정도 수준은 X-선 회절, 라만(Raman) 및/또는 적외선 분광법, 동적 증기 흡착, 용액 열량측정법의 열, 또는 등온 미세열량측정법으로 결정할 수 있다. 상기 언급한 바와 같이, 내용에 반대로 명시되지 않는 한, 본 명세서에서 결정도 수준은 실시예 1에 기재된 방법을 이용하여 X-선 회절로 측정한다.
몇몇 경우에, 직경이 작은 암포테리신 B 입자를 사용한다. 한 형태에서, 암포테리신 B의 입자는 약 3 ㎛ 미만, 예를 들어 약 2.5 ㎛ 미만, 약 2 ㎛ 미만, 약 1.9 ㎛ 미만 또는 약 1.5 ㎛ 미만의 질량 중앙 직경을 갖는다. 예를 들면, 암포테리신 B의 입자는 약 0.5 ㎛ 내지 약 3 ㎛, 예를 들어 약 0.5 ㎛ 내지 약 1.8 ㎛, 약 0.8 ㎛ 내지 약 2.5 ㎛, 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛, 약 1.2 ㎛ 내지 약 1.8 ㎛, 또는 약 1 ㎛ 내지 약 2 ㎛ 범위의 질량 중앙 직경을 가질 수 있다. 몇몇 형태에서, 암포테리신 B 입자의 약 20％ 이상은 직경으로 약 3 ㎛ 미만의 크기를 갖는데, 예를 들어 약 50％ 이상이 약 3 ㎛ 미만이거나, 약 90％ 이상이 약 3 ㎛ 미만이거나, 약 95％ 이상이 약 3 ㎛ 미만이다. 예를 들면, 입자의 60 중량％, 70 중량％, 80 중량％, 또는 90 중량％가 약 1.1 ㎛ 내지 1.9 ㎛의 질량 중앙 직경을 가질 수 있다.
몇몇 형태에서, 암포테리신 B의 결정도 수준은 높고, 암포테리신 B 입도는 작다. 결정도 수준은 상기 논의한 것 중 임의의 것일 수 있으며, 입도는 상기 논의한 것 중 임의의 것일 수 있다. 예를 들어, 한 형태에서, 결정도 수준은 약 50％ 이상이고, 질량 중앙 직경은 약 3 ㎛ 미만이다. 다른 형태에서, 결정도 수준은 약 70％ 이상이고, 질량 중앙 직경은 약 2.8 ㎛ 미만이다. 또다른 형태에서, 결정도 수준은 약 80％ 이상이고, 질량 중앙 직경은 약 2.6 ㎛ 미만이다. 또다른 형태에서, 결정도 수준은 약 90％ 이상이고, 질량 중앙 직경은 약 2.4 ㎛ 미만이다.
결정도 수준은 상기 논의한 수준일 수 있고, 암포테리신 B 입도는 상기 논의한 크기보다 더 클 수 있다. 예를 들어, 결정도 수준은 약 50％ 이상일 수 있고, 질량 중앙 직경은 약 3 ㎛보다 더 클 수 있다. 거꾸로, 암포테리신 B 입도는 상기 논의한 크기 이내일 수 있고, 결정도 수준은 상기 논의한 수준 밖에 있을 수 있다. 예를 들어, 질량 중앙 직경은 약 3 ㎛ 미만일 수 있고, 결정도 수준은 약 50％ 미만일 수 있다.
본 발명의 하나 이상의 실시양태에 따른 제약 조성물은 암포테리신 B와 임의로 하나 이상의 다른 활성 성분 및/또는 제약상 허용되는 부형제를 포함할 수 있다. 예를 들면, 제약 조성물은 암포테리신 B의 순수한 입자를 포함할 수 있고/있거나, 다른 입자와 함께 암포테리신 B의 순수한 입자를 포함할 수 있고/있거나, 암포테리신 B 및 하나 이상의 활성 성분 및/또는 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 미립자를 포함할 수 있다.
따라서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태에 따른 제약 조성물은 원한다면 암포테리신 B 및 하나 이상의 다른 활성 성분의 조합을 함유할 수 있다. 다른 활성제의 예로는 폐 또는 비도를 통해 전달될 수 있는 활성제가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 예를 들면, 다른 활성제(들)은 폐 및/또는 비내 감염에 대해 활성인 장기-작용제 및/또는 활성제, 예를 들어 항바이러스제, 항진균제 및/또는 항생제일 수 있다.
항바이러스제의 예로는 아시클로버, 강시클로버, 아지도티미딘, 사이티딘 아라비노시드, 리바비린, 리팜파신, 아만타딘, 요오도데옥시우리딘, 포스카르네트 및 트리플루리딘이 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
항진균제의 예로는 아졸 (예컨대, 이미다졸, 이트라코나졸, 포자코나졸), 미카펑긴, 카스파펑긴, 살리실산, 옥시코나졸 니트레이트, 시클로피록스 올라민, 케토코나졸, 미코나졸 니트레이트 및 부토코나졸 니트레이트가 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
항생제의 예로는 페니실린, 및 페니실린-G, 페니실린-V, 페네티실린, 암피실린, 아목사실린, 시클라실린, 바캄피실린, 헤타실린, 클록사실린, 디클록사실린, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 아즐로실린, 카르베니실린, 메즐로실린, 피페라실린, 티카리실린 및 이미페님을 포함하나 이에 제한되지 않는 항균 약물 중 페니실린 족 약물; 세팔로스포린, 및 세파드록실, 세파졸린, 카팔렉신, 세팔로틴, 세파피린, 세프라딘, 세파클로르, 세파만돌, 세포니시드, 세폭신, 세푸록심, 세포라니드, 세포테탄, 세피네타졸, 세포페라존, 세포탁심, 세프티족심, 세프티존, 목살락탐, 세프타지딤 및 세픽심을 포함하나 이에 제한되지 않는 세팔로스포린 족 약물; 아미노글리코시드 약물, 및 스트렙토마이신, 네오마이신, 카나마이신, 겐타마이신, 토브라마이신, 아미카신 및 네틸미신을 포함하나 이에 제한되지 않는 아미노글리코시드 족 약물; 마크롤리드, 및 아지쓰로마이신, 클라리쓰로마이신, 록시쓰로마이신, 에리쓰로마이신, 린코마이신 및 클린다마이신으로 예시되는 마크롤리드 족 약물; 테트라사이클린 및 테트라사이클린 족 약물, 예를 들면, 테트라사이클린, 옥시테트라사이클린, 데모클로사이클린, 메타사이클린, 독시사이클린, 및 미노사이클린; 퀴놀린 및 퀴놀린-유사 약물, 예를 들어 날리딕스산, 시녹사신, 노르플록사신, 시프로플록사신, 오플록사신, 에녹사신 및 페플록사신; 폴리믹신 B, 콜리스틴 및 바카트라신을 포함하나 이에 제한되지 않는 항균 펩티드 뿐만 아니라 펩티드를 병원체-특이적인 프로테아제의 작용에 내성이게 하는 자연 발생적으로 또는 유전공학의 결과 얻어진 데펜신, 마가이닌, 세크로핀 및 기타와 같은 다른 항균 펩티드 및 기타 비활성화 효소; 클로람페니콜, 반코마이신, 리팜피신, 메트로니다졸, 보리코나졸, 플루코나졸, 에탐부톨, 피라진아미드, 설폰아미드, 이소니아지드 및 에리쓰로마이신을 비롯한 기타 항균 약물을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
활성제의 조합물이 사용되는 경우, 활성제는 제약 조성물의 단일 종의 조합 또는 개별적으로 제약 조성물들의 별개의 종의 조합으로 제공될 수 있다. 또한, 제약 조성물은 원하는 분산 안정성 또는 분말 분산성을 제공하는 하나 이상의 다른 활성제 또는 생체활성제와 조합될 수 있다.
제약 조성물 중 활성제(들), 암포테리신 B의 양은 달라질 수 있다. 활성제(들)의 양은 제약 조성물의 총량에 대하여 전형적으로 약 5 중량％ 이상, 예를 들어 약 10 중량％ 이상, 약 20 중량％ 이상, 약 30 중량％ 이상, 약 40 중량％ 이상, 약 50 중량％ 이상, 약 60 중량％ 이상, 약 70 중량％ 이상 또는 약 80 중량％ 이상이다. 활성제(들)의 양은 일반적으로 약 0.1 중량％ 내지 100 중량％, 예를 들어 약 5 중량％ 내지 약 95 중량％, 약 10 중량％ 내지 약 90 중량％, 약 30 중량％ 내지 약 80 중량％, 약 40 중량％ 내지 약 70 중량％, 또는 약 50 중량％ 내지 약 60 중량％로 달라질 수 있다.
상기 언급한 바와 같이, 제약 조성물은 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함할 수 있다. 제약상 허용되는 부형제의 예로는 지질, 금속 이온, 계면활성제, 아미노산, 탄수화물, 완충액, 염, 중합체 등 및 이의 조합이 포함되나 이에 제한되지 않는다.
지질의 예로는 인지질, 당지질, 강글리오시드 GM1, 스핑고미엘린, 포스파티드산, 카디올리핀; 중합체 쇄를 보유하는 지질, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜, 키틴, 히알루론산, 또는 폴리비닐피롤리돈; 설폰화된 일당류, 이당류 및 다당류를 보유하는 지질; 지방산, 예를 들어 팔미트산, 스테아르산 및 올레산; 콜레스테롤, 콜레스테롤 에스테르, 및 콜레스테롤 헤미숙시네이트가 포함되나 이에 제한되지 않는다.
하나 이상의 실시양태에서, 인지질은 포화 인지질, 예를 들어 하나 이상의 포스파티딜콜린을 포함한다. 예시적인 아실 쇄 길이는 16:0 및 18:0 (즉, 팔미토일 및 스테아로일)이다. 인지질 함량은 활성제 활성, 전달 방식 및 다른 인자에 의해 결정될 수 있다.
천연 및 합성 원료로부터 얻은 인지질은 다양한 양으로 사용할 수 있다. 인지질이 존재하는 경우, 그 양은 전형적으로 활성제(들)을 인지질의 적어도 단일 분자층으로 코팅하기에 충분한 것이다. 일반적으로, 인지질 함량은 약 5 중량％ 내지 약 99.9 중량％, 예를 들어 약 20 중량％ 내지 약 80 중량％의 범위이다.
일반적으로, 상용가능한(compatible) 인지질은 약 40℃ 초과, 예를 들어 약 60℃ 초과 또는 약 80℃ 초과의 겔-액정 상 전이를 갖는 것을 포함한다. 포함된 인지질은 비교적 장쇄의 (예컨대, C16-C22) 포화 지질일 수 있다. 개시된 안정화된 제제에서 유용한 인지질의 예로는 포스포글리세리드, 예를 들어 디팔미토일포스파티딜콜린, 디스테아로일포스파티딜콜린, 디아라키도일포스파티딜콜린, 디베헤노일포스파티딜콜린, 디포스파티딜 글리세롤, 단쇄 포스파티딜콜린, 수소첨가된 포스파티딜콜린, E-100-3 (독일 루드빅샤펜 소재의 리포이드 카게(Lipoid KG)), 장쇄 포화 포스파티딜에탄올아민, 장쇄 포화 포스파티딜세린, 장쇄 포화 포스파티딜글리세롤, 장쇄 포화 포스파티딜이노시톨, 포스파티드산, 포스파티딜이노시톨, 및 스핑고미엘린이 포함되나 이에 제한되지 않는다.
금속 이온의 예로는 칼슘, 마그네슘, 아연, 철 등을 비롯한 2가 양이온이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, 인지질을 사용하는 경우, 제약 조성물은 전문이 본원에 참고로 포함되는 WO 01/85136 및 WO 01/85137에 기재된 바와 같은 다가 양이온을 또한 포함할 수 있다. 다가 양이온은 제약 조성물이 그의 저장 온도 (Ts)보다 약 20 ℃ 이상, 예를 들어 약 40 ℃ 이상 큰 Tm을 나타내도록 인지질의 용융 온도 (Tm)를 상승시키는 유효량으로 존재할 수 있다. 다가 양이온 대 인지질의 몰비는 약 0.05:1 이상, 예를 들어 약 0.05:1 내지 약 2.0:1 또는 약 0.25:1 내지 약 1.0:1일 수 있다. 다가 양이온:인지질의 몰비의 예는 약 0.50:1이다. 다가 양이온이 칼슘인 경우, 이는 염화칼슘의 형태로 존재할 수 있다. 금속 이온, 예를 들어 칼슘이 인지질과 함께 종종 포함되지만, 이들이 반드시 필요한 것은 아니다.
상기 언급한 바와 같이, 제약 조성물은 하나 이상의 계면활성제를 포함할 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 계면활성제는 이들 하나 이상이 조성물의 고체 입자 또는 미립자와 회합된 액체상으로 존재할 수 있다. "회합된"이란, 제약 조성물이 계면활성제를 포함하거나, 흡착하거나, 흡수하거나, 계면활성제로 코팅되거나, 계면활성제에 의해 형성될 수 있음을 의미한다. 계면활성제로는 불화 및 비불화 화합물, 예를 들어 포화 및 불포화 지질, 비이온성 세제, 비이온성 블록 공중합체, 이온성 계면활성제, 및 이의 조합이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 상기 언급한 계면활성제 이외에, 적합한 불화 계면활성제가 본원의 교시에 따라 상용가능하며, 원하는 제제를 제공하기 위해 사용될 수 있음이 강조되어야 한다.
비이온성 세제의 예로는 소르비탄 트리올레에이트 (스팬TM 85)를 비롯한 소르비탄 에스테르, 소르비탄 세스퀴올레에이트, 소르비탄 모노올레에이트, 소르비탄 모노라우레이트, 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노라우레이트, 및 폴리옥시에틸렌 (20) 소르비탄 모노올레에이트, 올레일 폴리옥시에틸렌 (2) 에테르, 스테아릴 폴리옥시에틸렌 (2) 에테르, 라우릴 폴리옥시에틸렌 (4) 에테르, 글리세롤 에스테르, 및 수크로스 에스테르가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 다른 적합한 비이온성 세제는 전문이 본원에 참고로 포함되는 문헌 [McCutcheon's Emulsifiers and Detergents (McPublishing Co., Glen Rock, New Jersey)]을 이용하여 쉽게 확인할 수 있다.
블록 공중합체의 예로는 폴록사머 188 (플루로닉(Pluronic)TM F-68), 폴록사머 407 (플루로닉TM F-127), 및 폴록사머 338을 비롯한 폴리옥시에틸렌 및 폴리옥시프로필렌의 이블록 및 삼블록 공중합체가 포함되나 이에 제한되지 않는다.
이온성 계면활성제의 예로는 설포숙신산나트륨 및 지방산 비누가 포함되나 이에 제한되지 않는다.
아미노산의 예로는 소수성 아미노산이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 제약상 허용되는 부형제로서의 아미노산의 용도는 전문이 본원에 참고로 포함되는 WO 95/31479, WO 96/32096, 및 WO 96/32149에 기재되어 있는 바와 같이, 당업계에 공지되어 있다.
탄수화물의 예로는 단당류, 이당류 및 다당류가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 예를 들면, 단당류, 예컨대 덱스트로스 (무수 및 일수화물), 갈락토스, 만니톨, D-만노스, 소르비톨, 소르보스 등; 이당류, 예컨대 락토스, 말토스, 수크로스, 트레할로스 등; 삼당류, 예컨대 라피노스 등; 및 기타 탄수화물, 예컨대 전분 (히드록시에틸전분), 시클로덱스트린 및 말토덱스트린이 있다.
완충액의 예로는 트리스 또는 시트레이트가 포함되나 이에 제한되지 않는다.
산의 예로는 카르복실산이 포함되나 이에 제한되지 않는다.
염의 예로는 염화나트륨, 카르복실산의 염 (예컨대, 시트르산나트륨, 아스코르브산나트륨, 글루콘산마그네슘, 글루콘산나트륨, 트로메트아민 히드로클로라이드 등), 탄산암모늄, 아세트산암모늄, 염화암모늄 등이 포함되나 이에 제한되지 않는다.
유기 고체의 예로는 캠퍼 등이 포함되나 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 하나 이상의 실시양태의 제약 조성물은 생물학적으로 상용가능한, 예를 들어 생분해성인 중합체, 공중합체, 또는 이의 블렌드 또는 다른 조합을 포함할 수 있다. 이와 관련하여, 유용한 중합체는 폴리락타이드, 폴리락타이드-글리콜라이드, 시클로덱스트린, 폴리아크릴레이트, 메틸셀룰로스, 카르복시메틸셀룰로스, 폴리비닐 알콜, 폴리무수물, 폴리락탐, 폴리비닐 피롤리돈, 다당류 (덱스트란, 전분, 키틴, 키토산 등), 히알루론산, 단백질 (알부민, 콜라겐, 젤라틴 등)을 포함한다. 당업자는 적절한 중합체를 선택함으로써, 조성물의 전달 효율성 및/또는 분산물의 안정성을 조정하여 활성제(들)의 효과를 최적화할 수 있음을 이해할 것이다.
상기 언급한 제약상 허용되는 부형제 이외에, 다른 제약상 허용되는 부형제를 제약 조성물로 첨가하여 미립자 강직성, 수율, 방사 용량 및 침착, 저장 수명, 및 환자 수용성을 개선시키는 것이 바람직할 것이다. 이러한 최적의 제약상 허용되는 부형제로는 착색제, 미각 마스킹제, 완충제, 흡습제, 산화방지제 및 화학물질 안정화제가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 추가로, 다양한 제약상 허용되는 부형제를 사용하여 미립자 조성물에 대한 구조 및 형태 (예컨대, 라텍스 입자)를 제공할 수 있다. 이와 관련하여, 선택적 용매 추출과 같은 제조후 기술을 이용하여 강직화 성분을 제거할 수 있음을 이해할 것이다.
또한, 제약 조성물은 제약상 허용되는 부형제들의 혼합물을 포함할 수 있다. 예를 들어, 탄수화물 및 아미노산의 혼합물은 본 발명의 범위 내에 포함된다.
본 발명의 하나 이상의 실시양태의 조성물은 다양한 형태, 예를 들어 건조 분말, 캡슐, 정제, 재구성된 분말, 현탁액, 또는 비수성 상, 예를 들어 추진체 (예컨대, 염화불화탄소, 히드로플루오로알칸)를 포함하는 분산물일 수 있다. 건조 분말의 수분 함량은 약 15 중량％ 미만, 예를 들어 약 10 중량％ 미만, 약 5 중량％ 미만, 약 2 중량％ 미만, 약 1 중량％ 미만, 또는 약 0.5 중량％ 미만일 수 있다. 이러한 분말은 전문이 본원에 참고로 포함되는 WO 95/24183, WO 96/32149, WO 99/16419, WO 99/16420, 및 WO 99/16422에 기재되어 있다.
본 발명의 하나 이상의 실시양태는, 비혼입된 암포테리신 B 입자가 존재한다면 약간의 비혼입된 암포테리신 B 입자와 함께 매트릭스 물질에 혼입된 암포테리신 B의 균질 조성물을 포함한다. 예를 들어, 조성물의 약 40 중량％ 이상, 약 50 중량％ 이상, 약 60 중량％ 이상, 약 70 중량％ 이상, 약 80 중량％ 이상, 약 90 중량％ 이상, 약 95 중량％ 이상 또는 약 99 중량％ 이상은 암포테리신 B 및 매트릭스 물질 둘 다를 포함하는 미립자를 포함할 수 있다.
그러나, 몇몇 경우에, 투여할 암포테리신 B의 원하는 약동학적 프로파일을 얻기 위해 불균질 조성물이 바람직할 수 있고, 이런 경우, 큰 암포테리신 B 입자 (예컨대, 질량 중앙 직경이 약 3 ㎛ 내지 약 10 ㎛ 또는 그 이상)를 사용할 수 있다.
균질 조성물은 작은 암포테리신 B 입자를 포함할 수 있다. 상기 논의한 바와 같이 질량 중앙 직경이 약 3 ㎛ 미만인 암포테리신 B 입자는 분산성일 수 있고, 매트릭스 물질에 혼입된 암포테리신 B의 균질 조성물의 제조를 용이하게 할 수 있다. 암포테리신 B 질량 중앙 직경이 약 3 ㎛ 초과인 경우, 결과는 매트릭스 물질에 혼입된 암포테리신 B를 포함하는 불균질 조성물 및 매트릭스 물질이 전혀 없는 암포테리신 B를 포함하는 입자일 수 있음을 발견하였다. 상기 불균질 조성물은 종종 분말 유동성 및 분산성이 불량하고, 이는 용량 변동을 야기할 수 있다. 보다 큰 암포테리신 B 입자로 제조된 조성물은 또한 래트에서 독성을 야기하였다. 그러나, 불균질 분포는 분무화 공정을 통해 개선시킬 수 있어, 보다 큰 암포테리신 B 입자에 대한 균질한 분포를 얻을 수 있음을 주목해야 한다.
상기 관점에서, 몇몇 형태에서는 제약 조성물이 높은 균질성을 갖고, 암포테리신 B가 높은 결정도 수준을 가지며, 조성물을 형성하는 암포테리신 B 입자의 크기가 작다. 균질성의 정도, 결정도 수준, 및 입도는 상기 논의한 것 중 임의의 것일 수 있다. 예를 들어, 한 형태에서는 결정도 수준이 약 50％ 이상이고, 질량 중앙 직경이 약 3 ㎛ 미만이다. 다른 형태에서는, 결정도 수준이 약 70％ 이상이고, 질량 중앙 직경이 약 2.8 ㎛ 미만이다. 또다른 형태에서는, 결정도 수준이 약 80％ 이상이고, 질량 중앙 직경이 약 2.6 ㎛ 미만이다. 또다른 형태에서는, 결정도 수준이 약 90％ 이상이고, 질량 중앙 직경이 약 2.4 ㎛ 미만이다.
그러나, 몇몇 경우에는, 균질성의 정도가 높고, 결정도 수준 및 암포테리신 B 중 하나 이상이 상기 논의된 범위 밖에 존재한다. 또는, 몇몇 경우에, 균질성의 정도가 낮고, 결정도 수준 및 암포테리신 B 중 하나 이상이 상기 논의된 범위 내에 존재한다.
한 형태에서, 제약 조성물은 인지질 매트릭스로 혼입된 암포테리신 B를 포함한다. 전문이 본원에 참고로 포함되는 상기 언급한 WO 99/16419, WO 99/16420, WO 99/16422, WO01/85136, 및 WO 01/85137에 기재된 바와 같이, 상기 제약 조성물은 중공 및/또는 다공성 미세구조인 미립자 형태이며 활성제를 포함하는 인지질 매트릭스를 포함할 수 있다. 중공 및/또는 다공성 미세구조의 밀도, 크기, 및 공기역학적 성질이 사용자의 흡입 동안 깊은 폐로의 수송을 용이하게 하므로, 중공 및/또는 다공성 미세구조는 암포테리신 B를 폐로 전달하는 데에 유용하다. 또한, 인지질-기재의 중공 및/또는 다공성 미세구조는 미립자들 사이의 인력을 감소시켜, 에어로졸화 동안 제약 조성물이 탈응집하기 쉽게 만들고, 제약 조성물의 유동성을 개선시켜 가공하기 쉽게 만든다.
한 형태에서, 제약 조성물은 벌크 밀도가 약 1.0 g/cm3 미만, 약 0.5 g/cm3 미만, 약 0.3 g/cm3 미만, 약 0.2 g/cm3 미만, 또는 약 0.1 g/cm3 미만인 중공 및/또는 다공성 미세구조로 이루어진다. 낮은 벌크 밀도의 입자 또는 미립자를 제공함으로써, 단위 투여량 용기로 충전할 수 있는 최소 분말 질량이 감소되고, 이로써 담체 입자의 필요성이 제거된다. 즉, 본 발명의 하나 이상의 실시양태에서의 분말의 비교적 낮은 밀도는 비교적 낮은 용량의 제약 화합물의 투여를 재현가능하게 한다. 더욱이, 큰 담체 입자, 예컨대 락토스 입자는 그의 크기 때문에 인후 및 상기도를 자극하게 되기 때문에, 담체 입자의 제거는 인후 침착 및 임의의 "구역(gag)" 효과 또는 기침을 잠재적으로 감소시킬 것이다.
한 형태에서, 제약 조성물은 건조 분말 형태이고, 제약 조성물의 단위 투여량을 에어로졸화하는 에어로졸화 기구로 또는 그 기구 가까이로 삽입될 수 있는 단위 투여량 저장소 내에 함유된다. 상기 형태는 건조 분말 형태가 장기간 그의 단위 투여량 저장소 내에 안정하게 저장될 수 있는 경우 유용하다. 몇몇 예에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태의 제약 조성물은 약 2년 이상 동안 안정하였다. 몇몇 형태에서, 안정성을 얻기 위해 냉장고가 요구되지는 않는다. 다른 형태에서, 감소된 온도, 예컨대 2 내지 8℃를 사용하여 안정된 저장을 지속한다. 많은 형태에서, 저장 안정성 때문에 외부 전력 공급을 이용하여 에어로졸화하는 것이 허용된다.
본원에 개시된 제약 조성물은 공극, 세공, 흠, 중공, 스페이스, 간질성 스페이스, 틈, 천공 또는 구멍을 나타내거나 규정하거나 포함하는 구조적 매트릭스를 포함할 수 있음을 이해할 것이다. 천공된 미세구조의 절대 형상 (모르폴로지(morphology)과 반대임)은 일반적으로 중요하지 않으며, 원하는 특성을 제공하는 임의의 전체적인 형상은 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 여겨진다. 따라서, 몇몇 실시양태는 대략 구형인 형상을 포함한다. 그러나, 붕괴되거나 변형되거나 파쇄된 미립자도 상용가능하다.
한 형태에서, 암포테리신 B는 별개의 미립자를 형성하는 매트릭스 내에 혼입되고, 제약 조성물은 복수개의 별개의 미립자를 포함한다. 별개의 미립자는 효과적으로 투여되고/되거나 필요한 경우 이용가능하게 하는 크기일 수 있다. 예를 들면, 에어로졸화된 제약 조성물의 경우, 미립자는 미립자가 에어로졸화되어 사용자가 흡입하는 동안 사용자의 호흡기로 전달되게 하는 크기이다.
몇몇 형태에서, 제약 조성물은 질량 중앙 직경이 약 20 ㎛ 미만, 예를 들어 약 10 ㎛ 미만, 약 7 ㎛ 미만, 또는 약 5 ㎛ 미만인 미립자를 포함한다. 미립자는 약 1 ㎛ 내지 약 6 ㎛, 예를 들어 약 1.5 ㎛ 내지 약 5 ㎛, 또는 약 2 ㎛ 내지 약 4 ㎛ 범위의 질량 중앙 공기역학적 직경을 가질 수 있다. 미립자가 너무 큰 경우, 래트에서의 독성이 관찰되었다. 미립자가 너무 작은 경우, 보다 큰 퍼센트의 미립자가 방출될 수 있다.
상기 관점에서, 몇몇 형태에서, 제약 조성물은 작은 질량 중앙 공기역학적 직경을 갖는 미립자를 포함하고, 제약 조성물은 높은 균질성을 갖고, 암포테리신 B는 높은 결정도 수준을 가지며, 제약 조성물을 형성하는 암포테리신 B 입자의 크기는 작다. 질량 중앙 공기역학적 직경, 균질성의 정도, 결정도 수준, 및 암포테리신 B 입도는 상기 논의된 임의의 것일 수 있다. 예를 들어, 한 형태에서, 질량 중앙 공기역학적 직경은 약 20 ㎛ 미만이고, 제약 조성물 중 약 60 중량％ 이상은 암포테리신 B 및 매트릭스 물질 둘 다를 포함하고, 결정도 수준은 약 50％ 이상이고, 질량 중앙 직경은 약 3 ㎛ 미만이다. 다른 형태에서, 질량 중앙 공기역학적 직경은 약 10 ㎛ 미만이고, 제약 조성물 중 약 70 중량％ 이상은 암포테리신 B 및 매트릭스 물질 둘 다를 포함하고, 결정도 수준은 약 70％ 이상이고, 질량 중앙 직경은 약 2.8 ㎛ 미만이다. 또다른 형태에서, 질량 중앙 공기역학적 직경은 약 7 ㎛ 미만이고, 제약 조성물 중 약 80 중량％ 이상은 암포테리신 B 및 매트릭스 물질 둘 다를 포함하고, 결정도 수준은 약 80％ 이상이고, 질량 중앙 직경은 약 2.6 ㎛ 미만이다. 또다른 형태에서, 질량 중앙 공기역학적 직경은 약 7 ㎛ 미만이고, 제약 조성물 중 약 90 중량％ 이상은 암포테리신 B 및 매트릭스 물질 둘 다를 포함하고, 결정도 수준은 약 90％ 이상이고, 질량 중앙 직경은 약 2.4 ㎛ 미만이다.
그러나, 몇몇 경우에, 질량 중앙 공기역학적 직경이 작고, 균질성, 결정도 수준 및 암포테리신 B 입도 중 하나 이상이 상기 논의된 범위 밖에 존재한다. 유사하게, 다른 경우에, 질량 중앙 공기역학적 직경이 크고, 균질성, 결정도 수준 및 암포테리신 B 입도 중 하나 이상이 상기 논의된 범위 내에 존재한다.
상기 관점에서, 래트에서 흡입된 암포테리신 B 미립자 또는 입자의 독성은 몇가지 인자에 의존한다. 이론에 구속되기를 바라지 않지만, 상기 인자로는 암포테리신 B 결정도 수준, 흡입된 입자 또는 미립자를 제조하기 위해 사용된 암포테리신 B 입도, 흡입된 미립자의 균질성, 및 흡입된 입자 또는 미립자의 크기가 포함되는 것으로 여겨지나 이에 제한되지 않는다.
매트릭스 물질은 소수성 또는 부분적으로 소수성인 물질을 포함할 수 있다. 예를 들면, 매트릭스 물질은 지질, 예를 들어 인지질, 및/또는 소수성 아미노산, 예를 들어 류신 또는 트리-류신을 포함할 수 있다. 인지질 매트릭스의 예는 WO 99/16419, WO 99/16420, WO 99/16422, WO 01185136, 및 WO 01/85137 및 미국 특허 제5,874,064호; 동 제5,855,913호; 동 제5,985,309호; 및 동 제6,503,480호 및 2003년 12월 31일자로 출원된 공동계류중인 공동소유의 미국 출원 제10/750,934호에 기재되어 있으며, 이들 모두 전문이 본원에 참고로 포함된다. 소수성 아미노산 매트릭스의 예는 미국 특허 제6,372,258호 및 동 제6,358,530호, 및 2001년 12월 21일자로 출원된 미국 출원 제10/032,239호에 기재되어 있으며, 이들 모두 전문이 본원에 참고로 포함된다.
인지질이 매트릭스 물질로서 사용되는 경우, 제약 조성물은 전문이 본원에 참고로 포함되는 WO 01/85136 및 WO 01/85137에 개시된 바와 같이 다가 양이온을 포함할 수도 있다.
다른 실시양태에 따르면, 활성제(들) 함유 조성물의 방출 동력학이 제어된다. 하나 이상의 실시양태에 따르면, 본 발명의 조성물은 활성제(들)의 즉시 방출을 제공한다. 다르게는, 항진균제의 바람직한 방출 속도를 제공하기 위하여, 본 발명의 다른 실시양태의 조성물은 매트릭스 물질로 혼입된 활성제 및 미혼입 활성제의 불균질 혼합물로서 제공될 수 있다. 상기 실시양태에 따르면, 본 발명의 하나 이상의 실시양태의 에멀젼-기재 제조 공정을 이용하여 제조된 항진균제는 호흡기에 투여되는 경우 즉시 방출 적용에 유용성을 갖는다. 신속한 방출은 (a) 저밀도 다공성 분말의 높은 비표면적; (b) 상기 분말에 혼입된 약물 결정의 작은 크기; 및 (c) 미립자의 낮은 표면 에너지에 의해 촉진된다.
다르게는, 활성제(들)의 연장 방출을 수행하도록 미립자 매트릭스를 조종하는 것이 바람직할 수 있다. 이는 활성제(들)이 폐로부터 신속하게 청소되는 경우 또는 지속 방출을 원하는 경우 특히 바람직할 수 있다. 예를 들면, 인지질 분자의 상 거동 성질은 분무-건조 공급원액에서의 그의 화학적 구조 및/또는 제조 방법 및 건조 조건 및 사용된 다른 조성물 성분의 성질에 의해 영향받는다. 소단층 소포 (Small Unilamellar Vesicle; SUV) 또는 다중층 소포 (Multilamellar Vesicle; MLV) 내에 가용화된 활성제(들)을 분무-건조하는 경우, 활성제(들)은 다중 이중층 내에 캡슐화되고, 연장된 시간에 걸쳐 방출된다.
반대로, 본원의 교시에 따른 에멀젼 소적 및 분산되거나 용해된 활성제(들)로 이루어진 공급원액의 분무-건조는 보다 작은 장거리 질서(long-range order)를 갖는 인지질 매트릭스를 생성함으로써, 신속한 방출을 촉진시킨다. 어떠한 특정 이론에도 구속되지 않지만, 이는 일부는 활성제(들)이 인지질 내에 형식적으로 캡슐화되지 않는다는 사실 및 인지질이 초기에 단층으로서 (리포솜의 경우와 같이 이층이 아님) 에멀젼 소적의 표면에 존재한다는 사실 때문이라고 여겨진다. 본 발명의 하나 이상의 실시양태의 에멀젼-기재 제조 공정에 의해 제조된 분무-건조된 미립자는 종종 높은 무질서도를 가진다. 또한, 분무-건조된 미립자는 전형적으로 낮은 표면 에너지를 가지며, 20 mN/m만큼 낮은 값이 분무-건조된 DSPC 미립자에 대해 관찰되었다 (역 기체 크로마토그래피로 결정함). 분무-건조된 인지질 미립자로 수행한 소각 X-선 산란 (SAXS) 연구는 지질에 대해 높은 무질서도를 나타내었고, 산란 피크가 선명치 않고, 몇몇 경우에 길이 치수는 약간의 가장 가까운 이웃상에서만 연장되었다.
겔-액정 상 전이 온도가 높은 매트릭스는 그 자체로는 활성제(들)의 지속 방출을 달성하기에 충분하지 않음을 주목해야 한다. 이층 구조에 충분한 질서를 갖는 것은 또한 지속 방출을 달성하기 위해 중요하다. 신속한 방출을 촉진하기 위하여, 높은 다공도 (높은 표면적)의 에멀젼-시스템 및 약물 재료와 인지질 사이의 최소한의 상호작용을 이용할 수 있다. 제약 조성물 제조 공정은 또한 이층 구조를 파괴하기 위한 다른 조성물 성분 (예컨대, 소 중합체, 예를 들어 플루로닉 F-68; 탄수화물, 염, 굴수성 물질(hydrotrope))의 첨가를 포함할 수 있음을 또한 고려한다.
지속 방출을 달성하기 위하여, 특히 활성제가 거기에 캡슐화되는 경우 이층 형태인 인지질의 혼입을 이용할 수 있다. 이 경우, 인지질의 Tm을 증가시키는 것은 2가 반대이온 또는 콜레스테롤의 혼입을 통해 잇점을 제공할 수 있다. 또한, 이온쌍의 형성을 통한 인지질과 약물 재료 사이의 상호작용 (음으로 하전된 활성 + 스테아릴아민, 음으로 하전된 활성 + 포스파티딜글리세롤) 증가는 용해 속도를 감소시키는 경향이 있을 수 있다. 활성제가 양친성인 경우, 계면활성제/계면활성제 상호작용은 또한 활성제 용해를 늦출 수 있다.
장쇄 포화 포스파티딜콜린으로의 2가 반대이온 (예컨대, 칼슘 또는 마그네슘 이온)의 첨가는 쯔비터이온성 헤드그룹의 음으로 하전된 포스페이트 부분과 양으로 하전된 금속 이온 사이의 상호작용을 야기시킨다. 이는 수화수의 치환 및 아실 쇄 및 인지질 지질 헤드그룹의 패킹의 축합을 야기시킨다. 추가로, 이는 인지질의 Tm 증가를 야기시킨다. 헤드그룹 수화의 감소는 물과 접촉하고 있는 분무-건조된 인지질 미립자의 퍼짐성에 큰 영향을 줄 수 있다. 완전히 수화된 포스파티딜콜린 분자는 수상을 통한 분자 확산을 통해 분산된 결정으로 매우 느리게 확산될 것이다. 이 과정은 물 중의 인지질의 용해도가 매우 낮기 때문에 (DPPC의 경우 약 10-10 mol/L) 매우 느리다. 상기 현상을 극복하기 위한 선행 기술의 시도로는 인지질의 존재하에 결정을 균질화하는 것을 들 수 있다. 이 경우, 균질화된 결정의 높은 전단도 및 곡률 반경은 결정에 대한 인지질의 코팅을 촉진시킨다. 반대로, 본 발명의 하나 이상의 실시양태에 따른 "건조" 인지질 분말은 수상과 접촉하는 경우 신속하게 퍼지므로, 고 에너지를 적용할 필요 없이 분산된 결정을 코팅할 수 있다.
예를 들면, 재구성시, 대기/물 계면에서의 분무-건조된 DSPC/Ca 혼합물의 표면 장력은 측정이 가능할 정도로 빠르게 평형값 (약 20 mN/m)까지 감소된다. 반대로, DSPC의 리포솜은 일정 시간에 걸쳐 표면 장력 (약 50 mN/m)을 매우 조금 감소시키는데, 이러한 감소는 인지질 중의 유리 지방산과 같은 가수분해 분해 생성물의 존재로 인한 것일 가능성이 크다. 단일-꼬리 지방산은 소수성 모화합물보다 공기/물 계면에 훨씬 더 신속하게 확산될 수 있다. 따라서, 포스파티딜콜린으로의 칼슘 이온의 첨가는 결정질 약물의 신속한 캡슐화를 보다 낮은 에너지로 보다 신속하게 수행할 수 있다.
다른 형태에서, 제약 조성물은 물-중-퍼플루오로카본 에멀젼을 이용한 동시-분무-건조 나노결정으로 달성된 저밀도 미립자를 포함한다. 상기 나노결정은 침전으로 형성될 수 있고, 예컨대 크기가 약 45 ㎛ 내지 약 80 ㎛의 범위일 수 있다. 퍼플루오로카본의 예로는 퍼플루오로헥산, 퍼플루오로옥틸 브로마이드, 퍼플루오로옥틸 에탄, 퍼플루오로데칼린, 퍼플루오로부틸 에탄이 포함되나 이에 제한되지 않는다.
본원의 교시에 따르면, 미립자 조성물은 바람직하게는 "건조" 상태로 제공될 것이다. 즉, 하나 이상의 실시양태에서, 미립자는 분말이 상온 또는 감온에서 저장되는 동안 화학적 물리적으로 안정하게 유지되고 분산가능하게 유지되게 하는 수분 함량을 가질 것이다. 이와 관련하여, 주요 미립자 크기, 함량, 순도, 및 공기역학적 미립자 크기 분포에는 거의 변화가 없거나 전혀 변화가 없다.
따라서, 미립자의 수분 함량은 전형적으로 약 10 중량％ 미만, 예를 들어 약 6 중량％ 미만, 약 3 중량％ 미만, 또는 약 1 중량％ 미만이다. 수분 함량은 적어도 일부는 조성물에 의해 결정되며, 사용한 방법 조건, 예컨대 입구 온도, 공급 농도, 펌프 속도 및 발포제 유형, 농도 및 후건조에 의해 제어된다. 결합된 물의 감소는 인지질 기재 분말의 분산성 및 유동성에서의 현저한 개선을 야기시키고, 인지질에 분산된 활성제를 포함하는 분말화된 폐 계면활성제 또는 미립자 조성물의 고도로 효율적인 전달에 대한 가능성을 야기시킨다. 개선된 분산성으로 인해, 단순 수동 DPI 장치를 사용하여 상기 분말을 효과적으로 전달할 수 있다.
제약 조성물의 또다른 형태는 접촉 시점에서 체류 시간을 연장시키거나 점막을 통한 투과를 향상시키는 하전된 종을 포함하거나, 상기 종으로 부분 또는 완전히 코팅될 수 있는 미립자 조성물을 포함한다. 예를 들면, 양이온 전하는 형성된 미립자를 유전 물질과 같은 음으로 하전된 생체활성제와 회합시키기 위해 사용할 수 있는 반면, 음이온 전하는 점막부착에 호의적인 것으로 알려져 있다. 전하는 폴리음이온성 또는 폴리양이온성 물질, 예컨대 폴리아크릴산, 폴리리신, 폴리락트산 및 키토산의 회합 또는 혼입을 통해 부여될 수 있다.
상기 단위 투여량 제약 조성물은 용기 내에 함유될 수 있다. 용기의 예로는 캡슐, 블리스터, 바이알, 앰퓰, 또는 금속, 중합체 (예컨대, 플라스틱, 엘라스토머), 유리 등으로 제조된 용기 폐쇄 시스템이 포함되나 이에 제한되지 않는다.
용기는 에어로졸화 장치에 삽입될 수 있다. 용기는 제약 조성물을 함유하고 제약 조성물을 유용한 상태로 제공하기에 적합한 모양, 크기 및 물질일 수 있다. 예를 들면, 캡슐 또는 블리스터는 제약 조성물에 역으로 반응하지 않는 물질을 포함하는 벽(wall)을 포함할 수 있다. 또한, 상기 벽은 캡슐을 개봉시켜 제약 조성물을 에어로졸화시키는 물질을 포함할 수 있다. 한 형태에서, 벽은 젤라틴, 히드록시프로필 메틸셀룰로스 (HPMC), 폴리에틸렌글리콜-화합된 HPMC, 히드록시프로필셀룰로스, 한천, 알루미늄 호일 등 중 하나 이상을 포함한다. 한 형태에서, 캡슐은 예를 들면 전문이 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제4,247,066호에 기재된 바와 같이, 텔레스코픽으로 연결된 구획을 포함할 수 있다. 캡슐의 크기는 제약 조성물의 용량을 적당하게 함유하도록 선택될 수 있다. 상기 크기는 일반적으로 크기 5 내지 크기 000 범위이며, 외부 직경이 약 4.91 mm 내지 9.97 mm 범위이고, 높이가 약 11.10 mm 내지 약 26.14 mm 범위이고, 부피가 약 0.13 mL 내지 약 1.37 mL 범위이다. 적합한 캡슐은 예를 들면, 일본 나라 소재의 시오노기 콸리캡스 캄파니(Shionogi Qualicaps Co.) 및 미국 사우쓰 캐롤라이나주 그린우드 소재의 캡슈겔(Capsugel)로부터 시판된다. 충전 후, 전문이 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제4,846,876호 및 동 제6,357,490호 및 WO 00/07572에 기재된 바와 같이, 상부를 하부 위에 위치시켜 캡슐 형태를 형성하고 캡슐 내에 분말을 함유시킬 수 있다. 상부를 하부 위에 위치시킨 후, 임의로 캡슐에 식별밴드를 달 수 있다.
한 형태에서, 결정질 암포테리신 B를 포함하는 제약 조성물은 환자가 흡입하는 동안 환자의 폐로 전달될 수 있도록 에어로졸화된다. 이러한 방식으로, 제약 조성물 중의 암포테리신 B는 감염 부위로 직접 전달된다. 이는 전신 투여에 비해 유리하다. 활성제(들)이 신 독성 또는 다른 독성을 가지기 때문에, 전신 노출을 최소화하는 것이 전형적으로 바람직하다. 그러므로, 폐로 전달될 수 있는 활성제(들)의 양은 최소 약리학적 유효량으로 제한되는 것이 바람직하다. 활성제(들)을 폐로 직접 투여함으로써, 전신 노출을 현저히 감소시키면서 치료가 요구되는 부위로 보다 많은 양을 전달시킬 수 있다. 또한, 암포테리신 B를 주로 그의 결정질 형태로 전달시킴으로써, 폐 내의 독성 효과 발생의 가능성을 줄이면서 일정 시간에 걸쳐 감염 부위에서의 암포테리신 B의 원하는 농도를 유지할 수 있다.
본 발명의 하나 이상의 실시양태의 제약 조성물은 무미(無味)이다. 이와 관련하여, 임의로 미각 마스킹제가 조성물 내에 포함되지만, 조성물은 종종 미각 마스킹제가 없어도 무미이다.
본 발명의 하나 이상의 실시양태의 입자, 미립자, 및 조성물은 당업자에게 공지되고 당업자에게 이용가능한 임의의 다양한 방법 및 기술에 의해 제조될 수 있다.
상기 언급한 바와 같이, 암포테리신 B의 결정도 수준은 성능에 영향을 준다. 당업자는 결정화 조건을 조정함으로써 암포테리신 B의 결정도 수준을 조정할 수 있다. 예를 들어, 결정도 수준은 용매, 암포테리신 B 농도, pH, pH 조정 속도, 순도 수준, 온도, 냉각/가열 속도, 어닐링 시간, 종정(seed) 결정의 사용, 용매 첨가 속도, 교반 속도, 공용매 종류/농도, 및 결정화 동안의 유지 기간을 변화시킴으로써 조정할 수 있다.
다르게는, 결정도 수준은 재결정화를 통해 조정할 수 있다. 재결정화 기술은 당업계에 공지되어 있다. 예시적인 재결정화 기술을 하기 기재한다.
재결정화 과정 동안, 암포테리신 B를 빛으로부터 보호하는 것이 바람직하다. 암포테리신 B는 용매 중에 용해될 수 있다. 용매의 예로는 메탄올, 디메틸포름아미드, 및 시트르산 일수화물을 포함하는 것과 같은 용매 시스템을 들 수 있다. 일단 고체가 본질적으로 용해되면, 용액을 임의로 여과한다.
여과 후, 추가의 용매, 예컨대 염화메틸렌을 여액에 첨가할 수 있다. 그 후, 교반하면서 냉각수를 첨가할 수 있다.
트리에탄올아민과 같은 염기를 첨가하여 용액의 pH를, 예컨대 pH 약 7로 조정함으로써 암포테리신 B의 침전을 수행할 수 있다. 이론에 구속되기를 바라지 않지만, 침전 속도는 결정도 수준에 영향을 준다. 침전이 느리면 일반적으로 결정도가 높아진다.
따라서, 보다 무정형인 암포테리신 B를 수득하기 위해서는, 염기를 재빨리, 예컨대, 교반하면서 한번에 붓는 식으로 첨가할 수 있다. 그 후, 생성된 비교적 무정형인 암포테리신 B를 단리할 수 있다. 예를 들면, 슬러리를 원심분리한 후 상청액을 따라냄으로써 무정형 암포테리신 B를 단리할 수 있다. 생성물은 케이크를 예컨대 냉각된 메탄올 중에 재현탁시킨 후, 원심분리하고 따라냄으로써 세척할 수 있다. 세척 공정은 반복될 수 있거나, 추가의 세척 단계, 예컨대 실온에서 아세톤을 이용하는 단계를 포함할 수 있다.
보다 결정질인 암포테리신 B를 수득하기 위해서는, 염기를 천천히, 예컨대 교반하면서 소적으로 첨가할 수 있다. 그 후, 생성된 슬러리를 예컨대 44 내지 46℃로 90분 동안 가열한 후, 예컨대 실온으로 30분 동안, 이어서 2 내지 8℃로 60분 동안 냉각할 수 있다. 그 후, 결정질 형태는 단리하기에 적당할 수 있다. 예를 들면, 암포테리신 B의 결정질 형태는 진공 여과로 포획될 수 있다. 생성물은 예컨대, 냉각된 40％ 메탄올, 이어서 아세톤을 이용하여 실온에서 세척할 수 있다.
암포테리신 B를 단리하고 세척한 후, 이를 건조할 수 있다. 예를 들면, 생성물을 차광시킨 상태에서 암포테리신 B를 예컨대, 1 내지 3일 동안 실온에서 진공 건조할 수 있다. 임의로, 건조 공정 동안 예컨대 스패츌라를 이용하여 큰 응집물을 파괴하여 잔류 용매의 증발을 촉진할 수 있다.
상기 언급한 바와 같이, 보다 작은 암포테리신 B 입도가 종종 바람직하다. 많은 사례에서, 벌크 형태인 암포테리신 B의 질량 중앙 직경은 약 3.0 ㎛ 초과이고, 다수의 경우 약 10 ㎛ 초과이다. 따라서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태에서, 벌크 암포테리신 B를 크기 감소 공정에 적용시켜, 사용 전에 질량 중앙 직경을 약 3 ㎛ 미만으로 감소시킨다. 적합한 크기 감소 공정은 당업계에 공지되어 있으며, 여기에는 전문이 본원에 참고로 포함되는 WO 95/01221, WO 96/00610, 및 WO 98/36825에 기재된 것과 같은 초임계 유체 가공 방법, 극저온 밀링, 습윤 밀링, 초음파, 고압 균질화, 미세유동화, 결정화 공정 및 전문이 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제5,858,410호에 기재된 공정이 포함된다.
본 발명의 하나 이상의 실시양태에서, 제약 조성물의 제조 방법은 암포테리신 B의 입자를 출발 물질로 제공하는 것을 포함하며, 여기서 암포테리신 B의 약 50％ 이상이 결정질 형태이다. 다른 형태에서, 암포테리신 B의 약 60％ 이상, 약 70％ 이상, 약 80％ 이상, 약 90％ 이상, 약 95％ 이상, 또는 약 99％ 이상이 결정질 형태이다. 출발 물질인 암포테리신 B 입자는 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제를 임의로 포함하는 액체 공급원액 중에 현탁될 수 있다. 이어서, 현탁 공급원액을 예를 들어 분무 건조로 건조하여, 결정질 암포테리신 B 및 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 미립자를 제조한다. 한 형태에서, 제조된 암포테리신 B를 포함하는 미립자에서, 제조된 미립자 중 암포테리신 B의 약 70％ 이상이 결정질 형태이다. 다른 형태에서, 암포테리신 B의 약 80％ 이상, 약 85％ 이상, 약 90％ 이상, 약 95％ 이상, 또는 약 99％ 이상이 결정질 형태이다.
한 형태에서는, 암포테리신 B 입자의 출발 물질의 결정도 수준을 결정한다. 예를 들면, 공급원액으로 도입하기 전에, 물질의 X-선 분말 회절 패턴을 측정할 수 있다. 상기 데이타로부터 결정도 수준을 결정할 수 있다. 다르게는, 당업자가 인식할 수 있는 바와 같이, 적외선 분광법, 라만 분광법, 동적 증기 흡착, 용액 열량측정법의 열, 또는 등온 미세열량측정법을 사용하여 결정도 수준을 결정할 수 있다. 결정도 수준이 예정된 양, 예를 들어 상기 퍼센트를 초과하는 경우, 상기 출발 물질을 사용한다. 결정도 수준이 예정된 양 미만인 경우, 상기 출발 물질을 예컨대 폐기하거나 재결정화할 수 있다.
다른 형태에서는, 암포테리신 B의 무정형도를 결정한다. 따라서, 한 형태에서, 제약 조성물의 제조 방법은 암포테리신 B의 입자를 출발 물질로서 제공하는 것을 포함하며, 여기서 암포테리신 B의 약 50％ 미만이 무정형 형태이다. 다른 형태에서, 암포테리신 B의 약 40％ 미만, 약 30％ 미만, 약 20％ 미만, 약 10％ 미만, 약 5％ 미만, 또는 약 1％ 미만이 무정형 형태이다. 출발 물질인 암포테리신 B 입자는 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제를 임의로 포함하는 액체 공급원액 중에 현탁될 수 있다. 이어서, 현탁 공급원액을 예를 들어 분무 건조로 건조하여, 암포테리신 B 및 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 미립자를 제조한다. 한 형태에서, 제조된 암포테리신 B를 포함하는 미립자에서, 제조된 미립자 중 암포테리신 B의 약 70％ 이상이 결정질 형태이다. 다른 형태에서, 제조된 미립자 중 암포테리신 B의 약 80％ 이상, 약 85％ 이상, 약 90％ 이상, 약 95％ 이상, 또는 약 99％ 이상이 결정질 형태이다.
무정형도는 공지된 기술을 이용하여 결정할 수 있다. 예를 들면, 무정형도는 적외선 분광법, 라만 분광법, 동적 증기 흡착, 시차 주사 열량측정법, 등을 이용하여 결정할 수 있다. 무정형도가 예정된 양, 예를 들어 상기 퍼센트 미만인 경우, 상기 출발 물질을 사용한다. 무정형도가 예정된 양을 초과하는 경우, 상기 출발 물질을 폐기하거나 재결정화할 수 있다.
또다른 형태에서, 결정도 수준의 결정 대신에 또는 추가로, 제조 방법의 일부로서 재결정화 공정을 수행할 수 있다. 재결정화 공정은 적합한 용매, 예를 들어 에탄올 또는 다른 극성 용매 중에 암포테리신 B를 용해시키고, 용액을 서서히 건조하여 결정질 암포테리신 B를 발생시키거나 결정질 암포테리신 B를 용액으로부터 침전시킴으로써 수행할 수 있다. 한 형태에서, 전문이 본원에 참고로 포함되는 WO 95/01221, WO 96/00610, 및 WO 98/36825에 개시된 바와 같이, 초임계 유체를 사용하여 결정질 물질을 동시에 분산 및 추출할 수 있다. 다른 형태에서, 전문이 본원에 참고로 포함되는 WO 01/00312에 개시된 바와 같이, 다중 분무-건조 공정을 사용하여 결정질 암포테리신 B를 형성할 수 있다.
다른 형태는 결정질 암포테리신 B 및 임의로 제약상 허용되는 부형제 및/또는 다른 활성 성분(들)을 포함할 수 있는, 제조된 입자 또는 미립자의 결정도 수준을 결정하는 것을 포함한다. 제조된 입자 또는 미립자에서의 결정도 수준은 상기 예정된 퍼센트 초과, 예를 들어 약 70％ 초과, 약 80％ 초과, 약 90％ 초과, 약 95％ 초과, 또는 약 99％ 초과일 수 있고, 그 후, 환자로의 투여를 위해 제조된 입자 또는 미립자를 방출시킬 수 있다. 결정도 수준이 예정된 양 미만인 경우, 제조된 입자 또는 미립자를 폐기하거나 재결정화할 수 있다.
제약 조성물은 다양한 공지된 기술을 이용하여 제조할 수 있다. 예를 들면, 조성물은 분무 건조, 동결건조, 밀링 (예컨대, 습윤 밀링, 건조 밀링) 등으로 형성될 수 있다.
분무 건조에서, 분무 건조될 제제 또는 공급원액은 선택된 분무 건조 기구를 이용하여 분무화될 수 있는 임의의 용액, 조질 현탁액, 슬러리, 콜로이드성 분산물, 또는 페이스트일 수 있다. 불용성 작용제의 경우, 공급원액은 상기 기재된 바와 같은 현탁액을 포함할 수 있다. 다르게는, 희석액 및/또는 하나 이상의 용매를 공급원액에 사용할 수 있다. 하나 이상의 실시양태에서, 공급 원액은 콜로이드계, 예컨대 에멀젼, 역 에멀젼, 마이크로에멀젼, 다중 에멀젼, 입자 분산물, 또는 슬러리를 포함할 것이다.
한 형태에서, 암포테리신 B 및 매트릭스 물질을 수성 공급원액으로 첨가하여 공급원액 용액, 현탁액, 또는 에멀젼을 형성한다. 그 후, 공급원액을 분무 건조하여 매트릭스 물질 및 결정질 암포테리신 B를 포함하는 건조된 미립자를 제조한다. 적합한 분무-건조 공정은 예를 들면 전문이 본원에 참고로 포함되는 WO 99/16419 및 미국 특허 제6,077,543호; 동 제6,051,256호; 동 제6,001,336호; 동 제 5,985,248호; 및 동 제5,976,574호에 기재된 바와 같이 당업계에 공지되어 있다.
어떤 성분을 선택하든, 미립자 생산에서의 제1 단계는 전형적으로 공급원액 제조를 포함한다. 인지질-기재의 미립자를 암포테리신 B에 대한 담체로서 작용시키려는 경우, 선택된 활성제(들)을 액체, 예를 들어 물로 도입시켜 농축 현탁액을 제조할 수 있다. 암포테리신 B 및 임의의 활성제의 농도는 전형적으로 최종 분말에서 요구되는 작용제의 양 및 사용된 전달 장치의 성능 (예컨대, 정량식 흡입기 (MDI) 또는 건조 분말 흡입기 (DPI)에 대한 미세 입자 용량)에 따라 달라진다.
임의의 추가 활성제(들)을 단일 공급원액 제제에 도입하고 분무 건조하여, 다수개의 활성제를 포함하는 단일 제약 조성물 종을 제공할 수 있다. 거꾸로, 각각의 활성제를 별개의 원료에 첨가하고 별도로 분무 건조하여, 상이한 조성을 가진 다수개의 제약 조성물 종을 제공할 수 있다. 상기 각각의 종을 임의의 원하는 비율로 현탁액 매질 또는 건조 분말 분배 구획에 첨가하고, 하기 기재한 바와 같이 에어로졸 전달계에 넣을 수 있다.
다가 양이온은 암포테리신 B 현탁액과 합하거나, 인지질 에멀젼과 합하거나, 또는 별도의 용기에서 형성된 수중유형 에멀젼과 합할 수 있다. 암포테리신 B를 에멀젼에 직접 분산시킬 수도 있다.
예를 들면, 다가 양이온 및 인지질은 적합한 고전단 기계적 혼합기 (예컨대, 울트라-투락스(Ultra-Turrax) 모델 T-25 혼합기)를 이용하여 8000 rpm에서 2 내지 5분 동안 뜨거운 증류수 (예컨대, 70℃) 중에서 균질화될 수 있다. 전형적으로, 플루오로카본 5 내지 25 g을 분산된 계면활성제 용액에 혼합하면서 적가한다. 그 후, 생성된 수 에멀젼 중의 다가 양이온-함유 퍼플루오로카본을 고압 균질화기를 이용하여 가공하여 입도를 줄일 수 있다. 전형적으로, 에멀젼을 12,000 내지 18,000 PSI에서 5개의 분리된 경로로 진행시키고, 약 50℃ 내지 약 80℃에서 유지한다.
다가 양이온을 수중유형 에멀젼과 합하는 경우, 전문이 본원에 참고로 포함되는 WO 99/16419에 기재된 바와 같이, 발포제를 이용하여 분무 건조된 제약 조성물의 분산 안정성 및 분산성을 개선시킬 수 있다. 이 과정은 전형적으로는 수성 연속상에 분산된 수-비혼화성 발포제의 서브마이크론 소적을 포함하는 혼입된 계면활성제에 의해 임의로 안정화된 에멀젼을 형성한다. 발포제는 분무-건조 공정 동안 증발되는 불화 화합물 (예컨대 퍼플루오로헥산, 퍼플루오로옥틸 브로마이드, 퍼플루오로옥틸 에탄, 퍼플루오로데칼린, 퍼플루오로부틸 에탄)일 수 있으며, 일반적으로 공기역학적으로 가벼운 중공의 다공성 미립자를 남긴다. 다른 적합한 액체 발포제로는 비-불화 오일, 클로로포름, 프레온 (등록상표) 플루오로카본, 에틸 아세테이트, 알콜, 탄화수소, 질소, 및 이산화탄소 기체가 포함된다. 발포제는 인지질로 유화될 수 있다.
제약 조성물은 상기 기재된 바와 같은 발포제를 이용하여 형성될 수 있지만, 몇몇 경우에는 추가의 발포제가 필요하지 않으며, 암포테리신 B 및/또는 제약상 허용되는 부형제 및 계면활성제(들)의 수성 분산물을 직접 분무 건조시킨다는 것을 이해할 것이다. 이러한 경우, 제약 조성물은 이러한 기술에 사용되기에 특히 적합한 특정한 물리화학적 성질 (예컨대, 높은 결정도, 상승된 용융 온도, 표면 활성 등)을 가질 수 있다.
필요하다면, 폴록사머 188 또는 스팬 80과 같은 공계면활성제를 상기 부속 용액으로 분산시킬 수 있다. 또한, 당 및 전분과 같은 제약상 허용되는 부형제를 첨가할 수도 있다.
그 후, 공급원액(들)을 분무 건조기로 공급한다. 전형적으로, 공급원액은 용매를 증발시키고 건조된 생성물을 수집기로 옮기는 따뜻한 여과 공기의 흐름으로 분무된다. 그 후, 소비된 공기는 용매와 함께 소모된다. 뷔치 엘티디.(Buechi Ltd.) 또는 니로 코포레이션(Niro Corp.)에서 제조하는 시판 분무 건조기를 제약 조성물의 제조에 사용하기 위해 조작할 수 있다. 본 발명의 하나 이상의 실시양태의 건조 분말의 제조에 적합한 분무 건조 방법 및 시스템의 예는 미국 특허 제6,077,543호; 동 제6,051,256호; 동 제6,001,336호; 동 제5,985,248호; 및 동 제5,976,574호에 기재되어 있으며, 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다.
분무 건조기의 작동 조건, 예컨대 입구 및 출구 온도, 공급 속도, 분무화 압력, 건조시키는 공기의 유속 및 노즐 형상은 요구되는 미립자 크기 및 생성된 건조 미립자의 제조 수율을 제공하기 위하여 조정될 수 있다. 적절한 기구 및 가공 조건의 선택은 본원의 교시에 따라 당업자의 판단 범위 내에 존재하며, 과도한 실험 없이 달성할 수 있다. 설정예는 하기와 같다: 입구 온도 약 60℃ 내지 약 170℃; 공기 출구 약 40℃ 내지 약 120℃; 공급 속도 약 3 mL/분 내지 약 15 mL/분; 흡기시 공기 유동 약 300 L/분; 및 분무화 공기 유속 약 25 L/분 내지 약 50 L/분. 상기 설정은 물론 사용되는 장치의 종류에 따라 달라질 것이다. 어떠한 경우에도, 상기 방법 및 유사한 방법을 사용하면, 폐로의 에어로졸 침착에 적절한 직경을 갖는 공기역학적으로 가벼운 미립자가 형성된다.
중공 및/또는 다공성 미세구조는 본원에 참고로 포함되는 WO 99/16419에 개시된 바와 같이, 분무 건조로 형성될 수 있다. 분무-건조 공정으로 인해 큰 내부 공극을 규정하는 비교적 얇은 다공성 벽을 갖는 미립자를 포함하는 제약 조성물의 형성될 수 있다. 분무-건조 공정은 또한 형성된 미립자가 가공 중에 또는 탈응집화 중에 동안 파괴될 가능성이 적어진다는 점에서 다른 공정에 비해 종종 유리하다.
다르게는, 본 발명의 하나 이상의 실시양태에서 유용한 제약 조성물은 동결건조로 형성될 수 있다. 동결건조란 물이 동결된 후 조성물로부터 승화되는 동결-건조 공정이다. 동결건조 공정은 수성 용액 중에서 비교적 불안정한 생물제제 및 제약제제가 승온에 노출되지 않으면서 건조되어, 그 후 안정성 문제가 보다 적은 건조 상태로 저장될 수 있기 때문에 종종 사용된다. 본 발명의 하나 이상의 실시양태와 관련하여, 이러한 기술은 생리학적 활성의 손상 없이 제약 조성물 중 펩티드, 단백질, 유전 물질 및 기타 천연 및 합성 거대분자의 혼입과 함께 특히 상용가능하다. 미세한 발포체 유사 구조를 함유하는 동결건조된 케이크는 당업계에 공지된 기술을 이용하여 미세화되어 원하는 크기의 미립자를 제공할 수 있다.
본 발명의 하나 이상의 실시양태의 조성물은 공지된 기술, 예를 들어 흡입, 경구, 근육내, 정맥내, 기관내, 복강내, 피하 및 경피로 투여될 수 있다.
예를 들면, 본 발명의 하나 이상의 실시양태의 제약 조성물은 폐 및/또는 비내 진균 감염의 보조적 치료를 비롯한 치료에 유효하다. 암포테리신 B는 폐 및/또는 비내 진균 감염을 치료하고/하거나 폐 및/또는 비내 진균 감염의 개시를 예방하는 항진균제로서 작용한다. 암포테리신 B는 감수성 진균류의 성장 및 증식의 속도를 늦추는 작용을 한다고 여겨진다. 암포테리신 B의 농도가 충분히 높다면, 이는 또한 진균류를 파괴할 수 있다. 암포테리신 B는 진균류의 세포막에 작용하여 세포막의 일체성을 변경시키는 것으로 보인다.
한 형태에서, 조성물은 흡입되면, 비강 및/또는 폐의 기도로 침투하여, 예를 들어 감염된 분비물, 및 상피 내막 유체, 폐포 대식세포 및 중성구를 비롯한 폐 조직에서의 유효한 암포테리신 B 농도를 달성한다. 더욱이, 흡입된 조성물을 진균 감염 부위로 직접 효율적으로 표적화하기 때문에, 흡입된 조성물의 용량은 전형적으로 다른 경로로 투여하여 항진균 효과를 얻기 위해 요구되는 양보다 훨씬 적다.
본 발명의 하나 이상의 실시양태에서, 암포테리신 B의 우세한 양이 결정질 형태로 존재하는 암포테리신 B를 포함하는 제약 조성물을 상기 제약 조성물의 투여가 필요한 환자의 폐로 투여한다. 예를 들면, 상기 환자는 폐 및/또는 비내 진균 감염이 있다고 진단되었을 수 있거나, 상기 환자는 폐 및/또는 비내 진균 감염에 감수성이라고 결정될 수 있다. 폐 및/또는 비내 진균 감염의 예로는 아스페로길루스증, 블라스토마이세스증, 파종성 칸디다증, 콕시디오이데스진균증, 크립토콕쿠스증, 히스토플라스마증, 모균증, 스포로트리쿰증, 칸디다 종으로 유발되는 일부 감염 및 당업계에 공지된 다른 것들이 포함된다.
따라서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태의 제약 조성물은 광범위한 환자를 치료하고/하거나 예방하기 위해 사용할 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 치료 및/또는 예방을 받아들이기에 적합한 환자는 상기 치료 및/또는 예방이 필요한 임의의 포유동물 환자이며, 바람직하게는 이러한 포유동물은 인간이다. 환자의 예로는 소아 환자, 성인 환자 및 노인 환자가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 환자는 전형적으로 진균에 감염될 위험이 있다.
한 형태에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태의 제약 조성물은 예를 들어 면역저하 환자, 예컨대 암에 대한 화학요법 또는 방사선 요법을 받고 있는 개인, 기관 이식 수용자, 면역 시스템에 악영향을 주는 질환, 예를 들어 HIV, 또는 환자가 폐 및/또는 비내 진균 감염에 걸리게 하는 임의의 다른 질환을 앓는 환자에 대해, 폐 및/또는 비내 진균 감염을 예방하는 데에 유용하다. 제약 조성물은 또한 활성 폐 및/또는 비내 진균 감염, 예를 들어 아스페르길루스증 (대부분 보통 아스페로길루스 푸미가투스, 아스페로길루스 플라버스, 아스페로길루스 나이거, 아스페로길루스 니둘란스 및 아스페로길루스 테레우스로 인함), 콕시디오이데스진균증, 히스토플라스마증, 블라스토마이세스증 및 기타 진균 병증의 치료에 사용할 수 있다.
한 형태에서, 암포테리신 B를 포함하는 에어로졸화 가능한 제약 조성물은 진균의 최소 억제 농도 (MIC)보다 큰 암포테리신 B 농도를 유발하는 방식으로 환자의 폐 및/또는 비강에 투여된다. MIC는 진균 성장을 억제하는 암포테리신 B의 최소 농도로 정의된다. MIC는 특정 농도값 또는 일정 범위의 농도로서 표현할 수 있다. 본 발명의 하나 이상의 실시양태에 따른 방법에서는 MIC 값의 범위 내에 포함되거나 특정 MIC 값을 초과하는 암포테리신 B의 표적 폐 농도를 달성하기에 충분한 제약 조성물의 양을 투여한다. 다른 형태에서, 암포테리신 B의 표적 폐 농도는 MIC 범위를 초과한다. 다른 형태에서, 암포테리신 B의 표적 폐 농도는 MIC 범위의 최소 값을 초과한다. 다른 형태에서, 표적 암포테리신 B 농도는 MIC 범위를 초과하며, MIC 범위의 최대값의 약 2배 이상, 예를 들어 약 3배 이상, 약 4배 이상, 또는 약 5배 이상인 농도이다. 표적 암포테리신 B 농도는 표적 폐 농도 범위일 수 있다. 한 형태에서, 표적 폐 암포테리신 B 농도 범위는 MIC 범위의 중간 값의 약 2 내지 약 20배, 예를 들어 중간 값의 약 3 내지 약 10배 또는 중간 값의 약 5배인 값 이상 및 이하로 변동된다. 한 형태에서, 암포테리신 B 농도 및 MIC 결정은 상피 내막 유체에서의 농도를 기준으로 한다. 다른 형태에서, 암포테리신 B 농도 및 MIC 결정은 고형 폐 조직에서의 농도를 기준으로 한다. 달리 명시하지 않는 한, 본원에 사용된 MIC 값은 특정 MIC 값이 결정된 경우에는 특정 값을 취할 것이고, 일정 범위의 MIC 값이 결정된 경우에는 중간 값을 취할 것이다. MIC 결정은 당업계에 공지된 방법에 따라 수행할 수 있다.
한 형태에서, 암포테리신 B를 포함하는 제약 조성물은 표적 농도가 원하는 기간에 걸쳐 유지되도록 투여된다. 예를 들면, 투여 절차가 약 2배 이상, 예를 들어 약 3배 이상인 암포테리신 B의 표적 농도를 유지하는 경우, 결정된 MIC 값은 폐 및/또는 비내 진균 감염을 치료하고/하거나 예방하는 데에 유효함이 결정되었다. 일부 환자에서 약 1주 이상, 예를 들어 약 2주 이상, 또는 약 3주 이상의 기간 동안 암포테리신 B 농도를 표적 폐 농도로 유지함으로써, 폐 및/또는 비내 진균 감염을 효과적으로 치료할 수 있음이 또한 결정되었다. 추가로 또는 다르게는, 면역저하 환자에서 상기 기간 동안 암포테리신 B 농도를 표적 폐 농도로 유지함으로써, 폐 및/또는 비내 진균 감염으로 발전될 환자의 가능성이 감소될 수 있다. 많은 경우에, 치료 기간 및/또는 예방 기간은 약 1개월 초과, 약 2개월 초과, 약 3개월 초과 (예컨대, 17주), 약 4개월 초과, 또는 그보다 긴 기간으로 연장될 수 있다.
한 형태에서, 결정질 암포테리신 B의 투여 방법은 암포테리신 B를 포함하는 제약 조성물의 폐 체류성에서 유리하다. 이와 관련하여, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 제약 조성물의 암포테리신 B가 (1) 기관지폐포 세척으로 측정했을 때 폐 상피 유체에서 약 10시간 이상, 예를 들어 약 15시간 이상 또는 약 20시간 이상, 및/또는 (2) 폐 조직 균질화로 측정했을 때 폐 조직에서 약 1주 이상, 예를 들어 약 2주 이상이라는 암포테리신 B 폐-체류 반감기를 갖는다는 발견을 포함한다.
암포테리신 B의 폐-체류 반감기가 길고, 하나 이상의 실시양태에서 낮은 용량을 사용할 수 있기 때문에, 전신 노출 (혈액/혈장 암포테리신 B 농도)은 신 독성 및/또는 간 독성을 피하기에 충분히 낮게 유지된다. 예를 들어, 흡입된 암포테리신 B의 5 mg 투여 후, 암포테리신 B의 혈액 수준은 약 1000 ng/mL 미만, 예를 들어 약 750 ng/mL 미만, 약 500 ng/mL 미만, 약 250 ng/mL 미만, 약 100 ng/mL 미만, 약 80 ng/mL 미만, 약 60 ng/mL 미만, 또는 약 40 ng/mL 미만으로 유지될 수 있다.
긴 체류 반감기와 관련하여, 표적 폐 조직 암포테리신 B 농도에 일단 도달하면, 폐 조직 암포테리신 B 농도를 유지하기 위해서는 제한된 용량이 요구된다. 예를 들면, 폐 암포테리신 B 농도를 표적 내로 유지하기 위해서는 제약 조성물을 1주 당 1회로 투여할 수 있다.
암포테리신 B 농도를 표적 농도 내로 유지하기 위해 필요한 투여량 및 투여 빈도는 조성물 및 조성물 내의 암포테리신 B의 농도에 따라 달라진다. 각각의 투여 섭생에서, 투여량 및 빈도는 폐 암포테리신 B 농도가 특정 표적 범위 내로 유지되도록 결정된다. 한 형태에서, 암포테리신 B는 매주 투여할 수 있다. 이 형태에서, 암포테리신 B의 매주 투여량은 약 2 mg 내지 약 75 mg, 예를 들어 약 2 mg 내지 약 50 mg, 약 4 mg 내지 약 25 mg, 약 5 mg 내지 약 20 mg, 및 약 7 mg 내지 약 10 mg 범위이다.
상기 용량은 단일 흡입 동안 투여될 수 있거나, 여러회의 흡입 동안 투여될 수 있다. 폐 암포테리신 B 농도의 변동은 제약 조성물을 보다 빈번하게 투여함으로써 감소될 수 있거나, 제약 조성물을 덜 빈번하게 투여함으로써 증가될 수 있다. 그러므로, 본 발명의 하나 이상의 실시양태의 제약 조성물은 약 1일 3회 내지 약 1개월 1회, 예를 들어 약 1일 1회 내지 약 2주마다 1회, 약 2일마다 1회 내지 약 1주 1회, 및 1주 당 1회로 투여할 수 있다.
한 형태에서, 제약 조성물은 면역저하가 되기 쉬운 환자에게 예방적으로 투여된다. 예를 들면, 약물 면역억제 요법을 받을 환자, 예를 들어 골수 이식이 예상되는 환자를 결정질 암포테리신 B를 포함하는 제약 조성물로 예방적으로 처리하여 면역저하 위험 기간 동안 진균 감염의 발전 가능성을 감소시킬 수 있다. 이 형태에서, 암포테리신 B 투여는 환자가 면역저하되기 충분한 시간 이전에 개시하여, 면역저하의 시점에 또는 그 전에 폐 암포테리신 B 농도가 표적 농도에 도달하도록 한다. 용량을 1주 1회 투여하는 경우, 예방 기간은 조성물 및 투여량에 따라 약 1주 내지 약 20주로 달라질 수 있다. 그러나, 본 발명의 하나 이상의 실시양태에서, 유효한 예방적 암포테리신 B 농도까지의 시간은 초기 예방적 기간 동안 고용량의 암포테리신 B를 제공하고/하거나 초기 예방 기간 동안 투여량 (예컨대, 로딩 용량)을 보다 빈번하게 투여함으로써 짧아진다. 이 형태에서, 요법의 제1 주 동안 추가의 용량을 투여한다. 예를 들면, 용량은 제1일, 제2일, 제3일, 및 제4일 (또는 제1일에 4개의 용량), 이어서 그 후 매7일째에 투여할 수 있다. 상기 조기 로딩으로 표적 폐 암포테리신 B 농도가 보다 빨리 달성된다. 따라서, 유효한 예방을 달성하기 위한 시간이 감소되고, 환자는 그의 면역저하 기간을 보다 빨리 시작할 수 있다. 몇몇 예에서, 환자는 1 내지 4일 후에 폐 및/또는 비내 진균 감염이 발전될 가능성이 현저히 줄어들면서 면역저하될 수 있다. 추가로 또는 다르게는, 면역억제 이전의 기간 동안 투여된 투여량은 표적 폐 암포테리신 B 농도를 유지하기 위해 투여되는 투여량 (예컨대, 로딩 용량)보다 높을 수 있다. 예를 들면, 한 형태에서, 일단 표적 폐 암포테리신 B 농도가 달성되면, 제1 용량은 정상(steady-state) 투여량의 약 2배 이상일 수 있다.
따라서, 한 형태에서, 암포테리신 B를 로딩 용량으로 투여한 후, 유지 용량으로 투여한다. 암포테리신의 로딩 용량은 예컨대 약 5 mg 내지 약 75 mg, 예를 들어 약 10 mg 내지 약 50 mg, 약 15 mg 내지 약 40 mg, 또는 약 20 mg 내지 약 30 mg 범위, 예를 들어 약 25 mg일 수 있다. 유지 용량은 로딩 용량 후 규칙적으로 예컨대 매주 투여될 수 있다. 유지 용량은 전형적으로 약 2 mg 내지 약 20 mg, 예를 들어 약 3 mg 내지 약 15 mg 또는 약 4 mg 내지 약 10 mg 범위, 예를 들어 약 5 mg이다.
조기 로딩은 또한 폐 및/또는 비내 진균 감염으로 진단된 환자를 치료할 때 바람직할 수 있다. 조기 로딩에 의해, 조기 로딩을 투여하지 않는 경우보다 더 빨리 표적 폐 암포테리신 B 농도가 달성된다. 그러므로, 폐 및/또는 비내 진균 감염의 치료가 보다 신속하게 개시되거나 제공될 수 있다.
한 특정 치료 방법에서는, 면역억제 요법을 받는 환자에게 폐 및/또는 비내 진균 감염의 예방을 제공한다. 이 형태에 따르면, 환자에게는 초기 기간 동안 1주 당 약 2회 이상 환자의 흡입 동안 에어로졸화되는 암포테리신 B 약 5 mg 이상, 예를 들어 약 5 mg 내지 약 10 mg이 투여된다. 에어로졸화된 암포테리신 B는 초기 기간 동안 1주 당 약 3회 이상 투여된다. 한 형태에서, 초기 기간은 약 1주 내지 약 3주 지속될 수 있다. 초기 기간 후에는, 환자에게 동일한 투여량을 덜 빈번하게 투여한다. 예를 들면, 에어로졸화된 암포테리신 B는 2주마다 1회, 더욱 바람직하게는 1주 1회로 투여될 수 있다. 초기 기간 후에 또는 초기 기간의 마지막 즈음에, 면역억제 요법을 시작할 수 있다. 제2 투여 기간은 필요한 경우 또는 폐 및/또는 비내 진균 감염이 발전되는 경우, 표적 폐 암포테리신 B 농도가 적어도 면역저하 위험 기간 및 그보다 오랜 기간에 걸쳐 유지되도록 계속된다. 추가로 또는 다르게는, 제1 기간 동안 투여되는 투여량은 제2 기간 동안 투여되는 투여량보다 더 클 수 있다. 예를 들면, 제1 기간 동안 암포테리신 B 약 10 mg 내지 약 20 mg을 투여할 수 있고, 제2 기간 동안 더 적은 양, 예를 들어 약 5 mg 내지 약 10 mg을 투여한다. 임의로, 투여량이 제2 기간에서보다 덜 빈번하게 및/또는 보다 적은 양으로 투여되는 제3 투여 기간이 제공될 수 있다. 제3 투여 기간은 면역저하 기간의 마지막 즈음에, 예를 들어 면역억제 요법이 종료되거나 심각성 면에서 감소된 경우에 시작할 수 있다.
한 형태에서, 예를 들어 전문이 본원에 참고로 포함되는 2003년 12월 31일자로 출원된 미국 출원 제10/751,342호에 기재된 바와 같이, 암포테리신 B 농도는 결정된 최소 억제 농도 초과의 농도로 일정 기간 동안 유지된다. 폐 암포테리신 B 농도는 상피 내막에서의 암포테리신 B 농도 또는 고체 폐 조직에서의 암포테리신 B 농도일 수 있고, 바람직하게는 후자이다. 몇몇 형태에서, 폐 암포테리신 B 농도는 약 4 ㎍/g 이상, 예를 들어 약 9 ㎍/g 이상이고, 약 4.5 ㎍/g 내지 약 20 ㎍/g, 예를 들어 약 9 ㎍/g 내지 약 15 ㎍/g 범위일 수 있다.
예방을 위해, 암포테리신 B의 투여량 당 양은 진균에 의한 폐 및/또는 비내 감염을 예방하기에 유효한 양일 수 있고, 일반적으로 약 0.01 mg/kg 내지 약 5.0 mg/kg, 예를 들어 약 0.4 mg/kg 내지 약 4.0 mg/kg, 또는 약 0.7 mg/kg 내지 약 3.0 mg/kg 범위이다.
제약 조성물은 진균에 의한 폐 감염을 예방하기에 유효한 임의의 섭생으로 환자에 투여될 수 있다. 예시적인 예방적 섭생으로는 본원에 기재한 바와 같은 항진균 건조 분말을 1주 내지 6주의 기간에 걸쳐 1주 1회 내지 21회 투여한 후, 필요하다면 1주 1회 또는 2회 투여하는 것을 들 수 있다.
주로 결정질인 에어로졸화된 암포테리신 B의 투여에 대한 본 발명의 실시양태의 예는 예방적 로딩을 나타낸 도 1에 나타나 있다. 이 형태에서 암포테리신 B에 대한 MIC 값은 블록 (300)에 나타난 바와 같이 약 0.5 ㎍/g 내지 약 4 ㎍/g 범위로 결정되었다. 중간 MIC 값 (300')는 약 2.25 ㎍/g이다. 곡선 (301)은 특정 투여 섭생에 따라 예측되는 폐 암포테리신 B 농도를 나타낸다. 알 수 있는 바와 같이, 암포테리신 B 농도는 상기 MIC 범위 (300) 초과인 표적 폐 암포테리신 B 농도 범위 (302)에 도달하며, 이는 중간 MIC 값 (300')보다 2배 이상 크다. 이 형태에서, 표적 폐 암포테리신 B 농도 범위 (302)는 4 ㎍/g 내지 50 ㎍/g, 더욱 바람직하게는 4.5 ㎍/g 내지 20 ㎍/g 범위일 수 있다. 나타낸 특정 형태에서, 표적 폐 암포테리신 B 농도 범위 (302)는 9 ㎍/g 내지 15 ㎍/g 범위이고, 대략 MIC 범위 (300)의 중점 값 (300')의 약 5배 농도 값 정도에서 변화된다.
본 발명의 하나 이상의 실시양태에 따라 표적 폐 암포테리신 B 농도 범위 내에 폐 암포테리신 B 농도를 유지시키는 것은, 진균 감염의 치료 및/또는 예방에서의 그의 유효성 면에서 유리하며, 또한 통상적인 치료보다 안전하다. 도 2는 본 발명의 하나 이상의 실시양태에 따른 암포테리신 B의 투여 동안 얻어진 예측된 혈장 암포테리신 B 농도 (400)을 나타낸다. 알 수 있는 바와 같이, 암포테리신 B 농도는 혈장 암포테리신 B 농도 최소 독성 농도 (401)보다 현저히 적고, 그러므로 투여의 안전성이 증가된다.
폐 및/또는 비내 진균 감염을 앓는 환자를 치료하기 위하여, 투여된 암포테리신 B의 용량 당 양은 감염을 치료하기에 유효한 양일 수 있다. 감염의 치료를 위한 암포테리신 B의 양은 일반적으로 예방에 사용되는 양보다 높을 것이고, 전형적으로는 약 0.01 mg/kg 내지 7.0 mg/kg, 예를 들어 약 0.2 mg/kg 내지 약 6.0 mg/kg, 또는 약 0.8 mg/kg 내지 약 5.0 mg/kg 범위이다. 한 예시적인 치료 섭생에서, 본 발명의 하나 이상의 실시양태에 따른 항진균 산제를 약 7 내지 약 28일의 기간에 걸쳐 1일 약 1회 내지 약 8회, 바람직하게는 1일 약 2회 내지 약 6회 투여할 수 있다.
상기 호흡기 진균 질환을 치료할 때, 제약 조성물은 전형적으로 원인 진균 병원체의 MIC의 약 3 내지 약 10배 이상의 용량으로 투여한다. 일반적으로, 환자에게 전달되는 암포테리신 B의 용량은 치료할 질환, 환자의 연령 및 체중 등에 따라 1일 약 2 mg 내지 약 400 mg, 예를 들어 1일 약 10 mg 내지 200 mg 범위일 것이다.
이론에 구속되기를 바라지 않지만, 본 발명의 하나 이상의 실시양태에 따라 암포테리신 B를 제공함으로써, 암포테리신 B의 용해 속도를 감소시킴으로써 및/또는 폐 전반에 침착을 증가시키고 상부 폐에서의 국소 독성을 회피함으로써, 암포테리신 B의 국소 독성을 감소시킬 수 있다. 따라서, 결정질 암포테리신 B의 투여는 암포테리신 B의 주로 무정형인 형태의 투여보다 더 안전하다고 여겨진다. 또한, 더 작은 암포테리신 B 입자로부터 형성된 더 작은 흡입 미립자의 투여는 안전성을 개선시키는 경향이 있다.
보다 큰 용량을 투여하는 경우, 안전성은 보다 중요한 문제가 된다. 따라서, 고용량의 경우, 보다 높은 결정도 암포테리신 B, 보다 작은 암포테리신 B 입도, 및 보다 작은 흡입 입자 또는 미립자 크기가 제안된다. 예를 들어, 50 mg 초과의 용량의 경우, 당업자는 암포테리신 B 결정도 수준이 약 90％ 이상이고, 암포테리신 B 질량 중앙 직경이 약 2.8 ㎛ 미만이고, 흡입된 입자 또는 미립자의 MMAD가 약 2.8 ㎛ 미만인 조성물을 사용하는 것을 원할 수 있다.
암포테리신 B를 포함하는 고체 입자 또는 미립자가 폐로 투여되는 경우, 폐 내의 고체 입자 또는 미립자의 용해 속도를 제어하는 것이 바람직함이 결정되었다. 용해 속도가 바람직하지 못하게 높은 경우, 폐 내의 국소 부위에서 가용성 초분자 응집물이 형성된다. 상기 가용성 응집물은 몇몇 경우에 폐 조직에 독성일 수 있다. 그러나, 용해 속도가 충분히 낮은 경우, 가용성 독성 응집물이 발전될 가능성은 낮아진다. 이론에 구속되기를 바라지 않지만, 결정질 암포테리신 B를 포함하는 고체 입자 또는 미립자를 제공하는 것은 무정형 형태인 암포테리신 B에 비해 용해 속도를 낮춘다고 여겨진다. 또한, 결정질 형태인 폐 암포테리신 B 농도는 독성 가용성 응집물을 현저히 감소시키거나 예방하면서 폐 및/또는 비내 진균 감염에 대한 치료 효과를 제공하기에 충분히 높은 농도로 유지될 수 있다는 것이 밝혀졌다.
따라서, 한 형태에서, 제약 조성물은 건조 분말의 형태로 환자의 폐로 전달될 수 있다. 따라서, 상기 제약 조성물은 폐 깊은 곳 또는 다른 표적 부위로 효과적으로 전달될 수 있는 건조 분말을 포함한다. 상기 제약 조성물은 폐의 폐포로 투과되도록 선택된 크기를 갖는 입자 또는 미립자를 포함하는 건조 분말의 형태이다.
몇몇 예에서, 단위 투여량, 예를 들어 암포테리신 B의 5 mg 또는 10 mg 이상의 용량을 단일 흡입으로 폐로 전달하는 것이 바람직하다. 상기 기재된 인지질 중공 및/또는 다공성 건조 분말 미립자는 단일 흡입 및 유리한 방식으로 약 5 mg 이상, 종종 약 10 mg 초과, 때때로 약 25 mg 초과의 용량을 전달시킨다. 다르게는, 용량은 2회 이상의 흡입을 통해 전달될 수 있다. 예를 들면, 10 mg 투여량은 각각 5 mg인 2개의 단위 투여량을 제공함으로써 전달될 수 있고, 상기 2개의 단위 투여량은 개별적으로 흡입될 수 있다.
분산물 또는 분말 제약 조성물은 에어로졸화 장치를 이용하여 투여할 수 있다. 에어로졸화 장치는 네불라이저(nebulizer), 정량식 흡입기, 액체 용량 점적 장치, 또는 건조 분말 흡입기일 수 있다. 분말 제약 조성물은 WO 99/16420에 기재된 바와 같은 네불라이저, WO 99/16422에 기재된 바와 같은 정량식 흡입기, WO 99/16421에 기재된 바와 같은 액체 용량 점적주입 기구, 및 2001년 6월 22일자로 출원된 미국 출원 제09/888,311호, WO 99/16419, WO 02/83220, 미국 특허 제6,546,929호, 및 2003년 7월 8일자로 출원된 미국 출원 제10/616,448호에 기재된 바와 같은 건조 분말 흡입기에 의해 전달될 수 있으며, 상기 문헌은 그의 전문이 본원에 참고로 포함된다. 이에 따라, 흡입기는 입자 또는 미립자 및 추진체를 함유하는 캐니스터(canister)를 포함할 수 있고, 여기서 흡입기는 캐니스터의 내부와 연결된 계량 밸브를 포함한다. 추진체는 히드로플루오로알칸일 수 있다.
본 발명의 하나 이상의 실시양태의 제약 조성물은 전형적으로 개선된 방사 용량 효율을 갖는다. 따라서, 다양한 에어로졸화 장치 및 기술을 이용하여 고용량의 제약 조성물이 전달될 수 있다.
상기 분말의 방사 용량 (ED)은 약 30％ 초과, 예를 들어 약 40％ 초과, 약 50％ 초과, 약 60％ 초과 또는 약 70％ 초과일 수 있다.
본 발명의 하나 이상의 실시양태에 따른 제약 조성물 (100)을 에어로졸화하는 데에 특히 유용한 건조 분말 에어로졸화 기구의 예는 도 3A에 도식적으로 나타나 있다. 에어로졸화 기구 (200)은 하나 이상의 공기 입구 (215) 및 하나 이상의 공기 출구 (220)를 갖는 챔버 (210)을 규정하는 하우징 (205)를 포함한다. 챔버 (210)는 결정질 암포테리신 B를 포함하는 에어로졸화 가능한 제약 조성물을 함유하는 캡슐 (225)를 수용하는 크기이다. 천공기 (230)은 챔버 (210) 내에서 이동가능한 천공 부재 (235)를 포함한다. 사용자가 출구 (220)와 연결되는 단부 (240)에서의 개구부 (245)를 통해 흡입할 수 있도록, 사용자의 입 또는 코로 투여되는 크기 및 형상일 수 있는 단부 (240)가 출구 (220)과 가까이 또는 인접하여 존재한다.
건조 분말 에어로졸화 기구 (200)은 챔버 (210)를 통한 공기 유동을 사용하여 캡슐 (225) 내의 제약 조성물을 에어로졸화한다. 예를 들면, 도 3A 내지 3E는 한 형태의 에어로졸화 기구 (200)의 작동을 예시하는데, 여기서 입구 (215)를 통한 공기 유동을 이용하여 제약 조성물을 에어로졸화하고, 에어로졸화된 제약 조성물은 출구 (220)을 통해 유동하여 단부 (240)에서의 개구부 (245)를 통해 사용자로 전달될 수 있다. 건조 분말 에어로졸화 기구 (200)의 처음 상태를 도 3A에 나타낸다. 캡슐 (225)는 챔버 (210) 내에 위치하고, 제약 조성물은 캡슐 (225) 내에 함유된다.
에어로졸화 기구 (200)을 사용하기 위해서는, 캡슐 (225) 내의 제약 조성물이 노출되어 에어로졸화된다. 도 3A 내지 3E의 형태에서, 천공기 (230)에 힘 (250)을 가함으로써 천공기 (230)은 챔버 (210) 내로 전진한다. 예를 들면, 도 3B에 나타낸 바와 같이, 천공 부재 (235)가 챔버 (210) 내에 캡슐 (225)와 접촉하도록, 사용자는 천공기 (230)의 표면 (255)을 눌러 천공기 (230)가 하우징 (205) 내에서 미끄러지게 한다. 도 3C에 나타낸 바와 같이, 힘 (250)을 계속해서 가함으로써, 천공 부재 (235)는 캡슐 (225)의 벽을 통과하여 전진한다. 천공 부재가 하나 이상의 예리한 첨단 (252)를 포함하게 하면 캡슐 (225)의 벽을 통과하여 전진하는 것을 용이하게 할 수 있다. 그 후, 천공기 (230)를 도 3D에 나타낸 위치로 집어 넣으면, 캡슐 (225)의 벽에 개구부 (260)이 남아 캡슐 (225) 중의 제약 조성물을 노출시킨다.
그 후, 도 3E에서 화살표 (265)로 나타낸 바와 같이, 공기 또는 다른 기체를 입구 (215)를 통해 유동시킨다. 공기의 흐름으로 인해 제약 조성물이 에어로졸화된다. 사용자가 단부 (240)을 통해 흡입하면 (270), 에어로졸화된 제약 조성물이 사용자의 호흡기로 전달된다. 한 형태에서, 공기 흐름 (265)는 사용자의 흡입 (270)에 의해 유발될 수 있다. 다른 형태에서, 압착된 공기 또는 다른 기체는 입구 (215)로 분출되어 공기 흐름 (265)를 에어로졸화시킬 수 있다.
특정 형태의 건조 분말 에어로졸화 기구 (200)이 미국 특허 제4,069,819호 및 동 제4,995,385호에 기재되어 있으며, 그의 전문은 본원에 참고로 포함된다. 이러한 배열에서, 챔버 (210)은 일반적으로 흡입 방향으로 뻗어 있는 세로축을 포함하고, 캡슐 (225)는 캡슐의 세로축이 챔버 (210)의 세로축과 평행할 수 있도록 챔버 (210)으로 삽입가능한 길이이다. 챔버 (210)은, 캡슐을 챔버 (210) 내로 이동하게 하는 방식으로 제약 조성물을 함유하는 캡슐 (225)를 수용하는 크기이다. 입구 (215)는 다수개의 접선 방향의 슬롯을 포함한다. 사용자가 끝부분을 통해 흡입할 때, 외부 공기는 접선 슬롯을 통해 유동하게 된다. 이러한 공기흐름은 챔버 (210) 내에서 소용돌이 공기흐름을 생성한다. 소용돌이 공기흐름에 의해 캡슐 (225)는 칸막이와 접촉하게 되고, 그 후 제약 조성물이 캡슐 (225)에서 나가 소용돌이 공기흐름 내에 혼입되게 되는 방식으로 캡슐 (225)가 챔버 (210) 내로 이동하게 된다. 상기 형태는 고용량의 제약 조성물을 일관적으로 에어로졸화하는 데에 특히 효과적이다. 한 형태에서, 캡슐 (225)는 캡슐의 세로축이 챔버의 세로축으로부터 80도 미만, 바람직하게는 45도 미만의 각으로 남아 있는 방식으로 챔버 (210) 내에서 회전한다. 챔버 (210)에서 캡슐 (225)의 이동은 챔버 (210)의 길이가 캡슐 (225)의 길이보다 작기 때문에 유발될 수 있다. 한 특정 형태에서, 챔버 (210)은 한쪽 가장자리에서 끝나는 테이퍼형 구역을 포함한다. 챔버 (210)에서의 소용돌이 공기가 유동하는 동안, 캡슐 (225)의 전방 단부는 칸막이와 접촉하여 칸막이 상에 잔류하고, 캡슐 (225)의 측벽은 가장자리와 접촉하여 미끄러지고/지거나 가장자리를 따라 회전한다. 이러한 캡슐의 운동은 다량의 제약 조성물을 캡슐 (225)의 뒤에 있는 하나 이상의 개구부 (260)을 통해 밀어 낼 때에 특히 효과적이다.
다른 수동적 건조 분말 흡입기 형태에서, 건조 분말 에어로졸화 기구 (200)은 도 3A 내지 3E에 나타낸 것과 상이한 형상일 수 있다. 예를 들면, 전문이 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제3,991,761호에 기재된 바와 같이, 챔버 (210)은 캡슐 (225)가 흡입 방향과 직각이도록 캡슐 (225)을 받아들이는 크기 및 형상일 수 있다. 또한 미국 특허 제3,991,761호에 기재된 바와 같이, 천공기 (230)은 캡슐 (225)의 양쪽 끝 모두를 천공시킬 수 있다. 다른 형태에서, 예를 들면 미국 특허 제4,338,931호 및 동 제5,619,985호에 기재된 바와 같이, 챔버는 공기가 캡슐 (225)를 통해 유동하는 방식으로 캡슐 (225)를 받아들일 수 있다. 다른 형태에서, 제약 조성물의 에어로졸화는 예를 들면 미국 특허 제5,458,135호; 동 제5,785,049호; 및 동 제6,257,233호에 기재된 바와 같이 입구를 통해, 또는 WO 00/72904 및 미국 특허 제4,114,615호에 기재된 바와 같이 추진체를 통해, 기체를 유동시킴으로써 달성할 수 있으며, 상기 문헌은 그의 전문이 본원에 참고로 포함된다. 상기 유형의 건조 분말 흡입기는 일반적으로 능동적 건조 분말 흡입기라고 일컬어진다.
본원에 개시된 제약 조성물은 또한 에어로졸화를 통해, 예를 들어 정량식 흡입기를 이용하여 환자의 폐 및/또는 비내 공기 경로로 투여될 수 있다. 전문이 본원에 참고로 포함되는 WO 99/16422에 개시된 바와 같이, 이러한 안정화된 제제의 사용은 우수한 용량 재현성 및 개선된 폐 침착을 제공한다. MDI는 당업계에 익히 공지되어 있고, 암포테리신 B의 투여를 위해 사용할 수 있다. 호흡 활성화 MDI 뿐 아니라 개발되었거나 개발될 다른 유형의 개선품을 포함하는 것들 또한 본 발명의 하나 이상의 실시양태의 제약 조성물과 상용가능하다.
네불라이저는 당업계에 공지되어 있고, 과도한 실험 없이 청구된 분산물을 투여하기 위해 쉽게 사용할 수 있다. 호흡으로 활성화되는 네불라이저 뿐 아니라 개발되었거나 개발될 다른 유형의 개선품을 포함하는 것들 또한 안정화된 분산물과 상용가능하며, 이는 본 발명의 하나 이상의 실시양태의 범위 내에 포함되는 것으로 간주한다. 상기 언급한 실시양태와 함께, 본 발명의 하나 이상의 실시양태의 안정화된 분산물은 또한 전문이 본원에 참고로 포함되는 WO 99/16420에 개시된 바와 같이, 투여가 필요한 환자의 폐 및/또는 비내 공기 통로로 투여될 수 있는 에어로졸화된 의약을 제공하기 위하여 네불라이저와 함께 사용될 수 있다.
DPI, MDI 및 네불라이저와 함께, 본 발명의 하나 이상의 실시양태의 안정화된 분산물은, 예를 들면 전문이 본원에 참고로 포함되는 WO 99/16421에 개시된 바와 같이, 액체 용량 점적주입 또는 LDI 기술과 함께 사용될 수 있음을 이해할 것이다. 액체 용량 점적주입은 폐로 안정화된 분산물을 직접 투여하는 것과 관련된다. 이와 관련하여, 생물작용 화합물의 직접적인 폐 및/또는 비내 투여는, 특히 폐 질환 부분의 불량한 혈관 순환이 정맥내 약물 전달의 효과를 감소시키는 장애의 치료에 특히 효과적이다. LDI와 관련하여, 안정화된 분산물은 바람직하게는 부분 액체 환기 또는 전체 액체 환기와 함께 사용된다. 더욱이, 본 발명의 하나 이상의 실시양태는 투여 중에 또는 투여 후에 생리학적으로 허용되는 기체 (예컨대 산화질소 또는 산소)의 치료적 유효량을 제약 미세분산물로 도입하는 것을 추가로 포함할 수 있다.
투여 시간은 전형적으로 짧다. 단일 캡슐 (예컨대, 5 mg 용량)의 경우, 총 투여 시간은 보통 약 1분 미만이다. 2 캡슐 투여 (예컨대, 10 mg)는 보통 약 1분이 소요된다. 5 캡슐 투여 (예컨대, 25 mg)는 관리자에게 약 3.5분이 소요될 수 있다. 따라서, 투여 시간은 약 5분 미만, 예를 들어 약 4분 미만, 약 3분 미만, 약 2분 미만 또는 약 1분 미만일 수 있다.
상기 기재는 하기 실시예를 참고로 보다 완전히 이해될 것이다. 그러나, 이러한 실시예는 단지 본 발명의 하나 이상의 실시양태를 실시하는 대표적인 방법일 뿐이며, 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해해서는 안된다.
실시예 1
상이한 로트번호 간의 암포테리신 B의 결정도 수준의 변화성
본 실시예는 정량 X-선 분말 회절에 의해 여러 로트번호의 암포테리신 B의 결정도 백분율 값을 결정하는 것을 포함한다. 본 실시예는 상이한 로트번호의 암포테리신 B에 대한 결정도 수준의 범위를 나타낸다.
장비 및 물질
장비
샘플 홀더
시마즈 X-선 회절분석기 모델 XRD-6000
물질
규소 참조 표준, NIST (National Institute of Standards and Technology) 640c
플루오르화리튬, 입도 < 5 ㎛
암포테리신 B 결정형 표준, 체 < 48 ㎛
암포테리신 B "무정형", 체 < 48 ㎛
비히클 분말 (2:1 몰비의 DSPC/CaCl2)
방법
시마즈 X-선 회절분석기 모델 XRD-6000의 정렬 확인을 규소 참조 표준으로 수행하였다. 정렬 확인 중에, 분산 슬릿을 1°에 설정하고, 산란 슬릿을 1.0°에 설정하고, 수용 슬릿을 0.15 mm에 설정하였다.
회절분석기를 교정하여, X-선 분말 회절 데이타를 비공지 결정도 (약 60 mg의 샘플 크기)의 교정 표준 및 로트번호에 대하여 획득하였다. 하기 설정을 본 데이타 획득에 사용하였다.
체류 시간: 2 초 (고정 시간 스캔)
단계 크기: 0.02°2θ
스캐닝 범위:3-42°2θ
슬릿: 0.5° 분산 슬릿, 1° 산란 슬릿 및 0.3 mm 수용 슬릿.
샘플 중 암포테리신 B의 결정도를 결정하기 위한 교정 플롯을 제조하기 위하여 내부 표준 방법을 이용하였다. 내부 표준은 LiF이었다. 결정형 및 광각 X-선 무정형 표준의 물리적 혼합물을 제조하였다. 본 실시예에서 이후, 광각 X-선 무정형 표준은 "무정형"이라고 언급될 것이다. 그 후, 이들 물리적 혼합물을 20 중량％에서 LiF로 도핑하였다.
결정형 표준은 여러 로트번호의 고결정형 암포테리신 B로부터 선택하였다. X-선 분말 회절 패턴의 정성 비교를 기준으로, 최소의 무정형 배경을 갖는 물질을 선택하였다. 무정형 표준을 결정형 물질의 냉동 밀링에 의해 제조하였다 (즉, 동일한 로트번호의 암포테리신 B를 무정형 및 결정형 암포테리신 B 표준 모두에 대하 여 사용함). 물리적 혼합물의 제조 전에 두가지 표준 모두를 48 ㎛ 미만의 체로 쳤다. 물리적 혼합물을 40±5％RH (20-25℃)에서 제조하였다. 모든 중량 측정은 0.01 mg 이상의 해상도를 갖는 분석 균형으로 수행하였다.
데이타 분석
결정형 암포테리신 B의 회절 피크 대 LiF의 피크의 적분된 세기의 비율을 각각의 LiF-도핑 물리적 혼합물의 회절 패턴으로부터 계산하였다. 적분된 세기 비율 IIR은 아래와 같다.
Figure 112006095172914-PCT00001
식 중, IAmB,Cr 및 ILiF는 결정형 암포테리신 B 및 LiF 각각의 선택된 참조 피크의 적분된 세기이다.
단일 회절 피크 (38 내지 39.5°2θ)는 LiF에 대하여 선택되고, 좁은 각도 범위는 암포테리신 B (12.75 내지 16.25°2θ)에 대하여 선택되었다. 한쌍의 암포테리신 B 피크만을 사용하는데, 이는 곡선 기준선의 작성/내삽에 대한 필요성을 제거하기 때문이며, 이들 피크는 초기 결정도에 대하여 민감하다. 피크는 제이드 소프트웨어 (MDI 인크.) 버전 7.1.2를 이용하여 적분하였다.
결과 및 논의
표 1은 여러 로트번호의 암포테리신 B에 대한 결정도 결과를 나타낸다. 약물 물질 방법의 최대 변화도는 약 ±10％ 결정형이고, 백분율 결정도에 따라 달라진다. 이론에 구속되는 것을 원하지는 않지만, 선택된 표준의 매우 상이한 벌크 밀도로 인한 결과의 불확실성은 샘플 홀더를 충전하는데 사용된 압축의 변화성으로 인한 것이다. 정밀도의 개선은 더 낮은 샘플 중량을 사용함으로써 (샘플 압축에 대한 보다 낮은 필요성의 결과로) 성취될 수 있다.
Figure 112006095172914-PCT00002
실시예 2
분무-건조 암포테리신 B 미립자의 제조
암포테리신 B 미립자를 2-단계 공정에 의해 제조하였다. 제1 단계에서, 암포테리신 B (덴마크 코페하겐 소재의 알파마(Alpharma)) 10.52 g, 디스테아로일 포스파티딜콜린 (DSPC) (미국 매사추세츠주 캠브리지 소재의 겐자임(Genzyme) 10.12 g 및 염화칼슘 (미국 뉴저지주 필립스버그 소재의 제이티 베이커(JT Baker)) 0.84 g을 10,000 rpm에서 2 내지 5분 동안 울트라-터락스(Ultra-Turrax) 믹서 (모델 T-25)를 이용하여 고온의 탈이온수 (T = 70℃) 1045 g에 분산시켰다. DSPC 및 암포테리신 B를 시각적으로 분산된 것으로 보일 때까지 계속 혼합하였다.
그 후, 퍼플루오로옥틸 에탄 (PFOE) 381 g을 혼합하면서 대략 50 내지 60 mL/분의 속도로 천천히 첨가하였다. 첨가를 완료한 후, 에멀젼/약물 분산액을 5 분 이상의 추가 기간 동안 12,000 rpm에서 혼합하였다. 그 후, 조 에멀젼을 고압 호모게나이저 (캐나다 오타와 소재의 아베스틴(Avestin))를 통해 12,000 내지 18,000 psi에서 3회 통과시킨 후, 20,000 내지 23,000 psi에서 2회 통과시켰다.
얻어진 미세 에멀젼을 제2 단계, 즉 나이로 모바일 마이너(Niro Mobile Minor) 상에서의 분무-건조를 위하여 공급원액으로서 사용하였다. 하기 분무 조건을 사용하였다: 전체 유속 = 70 SCFM, 입구 온도 = 110℃, 출구 온도 = 57℃, 공급 펌프 = 38 mL/분, 아토마이저 압력 = 105 psig, 아토마이저 유속 = 12 SCFM.
자유-유동 옅은 황색 분말을 사이클론 분리기를 이용하여 수집하였다. 수집 효율은 60％이었다. 암포테리신 B 미립자의 기하 직경은 레이저 회절 (독일 클라우스탈-첼러펠트 소재의 심파테크 헬로스(Sympatec Helos))에 의해 확인하였으며, 부피 중량 평균 직경 (VMD)이 2.44 ㎛이었다. 주사 전자 현미경 (SEM) 분석은 분말이 높은 표면 거칠기를 갖는 작은 다공성 미립자임을 나타냈다. 각각의 수집기로부터의 분말의 5 SEM 관측에서 비혼입된 암포테리신 B 결정의 어떠한 증거도 없었다. 건조 미립자의 시차 주사 열량측정 분석은 분말 중 디스테아로일 포스파티딜콜린의 Tm이 78℃인 것으로 나타으며, 이는 분무-건조된 순수한 디스테아로일 포스파티딜콜린에서 관찰된 바와 유사하였다.
실시예 3
분무-건조 암포테리신 B 미립자에 대한 에어로졸 성능
실시예 2에서 제조된 얻어진 건조 암포테리신 B 미립자를 수동으로 #2 HPMC 캡슐 (일본 소재의 시오노기(Shionogi))에 충전하였으며, 이를 15 내지 20％ RH에서 밤새 주변 온도에서 평형에 도달시켰다. 대략 10 mg의 충전 중량을 사용하였으며, 이는 #2 HPMC 캡슐의 충전 부피의 대략 1/2을 나타내었다.
공기역학 미립자 크기 분포를 앤더슨 캐스케이드 임팩터(ACI) 상에서 중량분석으로 결정하였다. 미립자 크기 분포를 28.3 L/분 (즉, 편안한 흡입 노력) 및 56.6 L/분 (즉, 강력한 흡입 노력)의 유속으로 본원에서 전체가 참고문헌으로 도입된 U.S. 특허 4,069,819 및 4,995,385에 기재된 터보스핀® DPI 장치를 이용하여 측정하였다. 전체 부피 2 리터를 장치를 통해 인취하였다. 더 높은 유속에서, 2개의 ACI를 교정된 유속 28.3L/분 및 장치를 통한 전체 유속 56.6 L/분에서 평형하게 사용하였다. 두 경우 모두에서, 설정은 ACI 임팩터 플레이트가 교정된 조건을 나타낸다. 우수한 에어로졸 특징이 관찰되었으며, 이는 MMAD 2.6 ㎛ 미만 및 FPF<3.3 ㎛ 72％ 초과에 의해 입증되었다. 또한, 성능에 대한 유속의 효과를 56.6 L/분에서 평형하게 사용되는 2개의 ACI으로 작동하는 터보스핀® (PH&T, 이탈리아) DPI 장치를 이용하여 평가하였다 (도 4). 최소 유속 의존적 성능을 나타내는, 침착 프로파일에서 더 높은 유속에서 유의한 상이점은 관찰되지 않았다. 상기 언급된 본 실시예는 상기 분말의 에어로졸 성능이 유속에 독립적이라는 것을 나타내며, 이는 보다 재현가능한 환자 투여를 가져온다.
실시예 4
암포테리신 B 미립자의 에어로졸화에 대한 저장 효과
실시예 2에서 제조된 얻어진 건조 암포테리신 B 미립자를 수동으로 #2 HPMC 캡슐 (일본 소재의 시오노기)에 충전하였으며, 이를 15 내지 20％ RH에서 밤새 평형에 도달시켰다. 대략 10 mg의 충전 중량을 사용하였으며, 이는 #2 HPMC 캡슐의 충전 부피의 대략 1/2을 나타내었다. 충전된 캡슐을 적층 호일-밀봉된 파우치에 포장된 개별적으로 색인 붙은 유리 바이알에 둔 후, 25℃/60％RH 또는 40℃/75％RH에서 저장하였다.
방사 용량 (ED) 측정을 전체 부피 2 리터를 사용하고 60 L/분의 최적 샘플링 유속으로 작동되는 U.S. 특허 4,069,819 및 U.S. 특허 4,995,385에 기재된 터보스핀® (PH&T, 이탈리아) DPI 장치를 이용하여 수행하였다. 총 10회 측정을 각각의 저장 변형에 대하여 결정하였다.
공기역학 미립자 크기 분포를 앤더슨 캐스케이드 임팩터(ACI) 상에서 중량분석으로 결정하였다. 미립자 크기 분포를 전체 부피 2 리터를 사용하고 28.3 L/분의 유속으로 터보스핀® DPI 장치를 이용하여 측정하였다.
우수한 에어로졸 특징이 관찰되었으며, 이는 평균 ED 93％±5.3％, MMAD = 2.6 ㎛ 및 FPF<3.3 ㎛ = 72％ (도 5 및 6)에 의해 입증되었다. 우수한 안정성 특징을 나타내는 상승된 온도 및 습도에서의 저장 후 에어로졸 성능 (ED, MMAD 또는 FPF)의 유의적 변화는 관찰되지 않았다. ED 성능에 대한 현재 USP는 전달된 용량의 >90％이 ±25％ 초과 ±35％내의 용량의 10％ 미만으로 표지 청구물의 ±25％내에 있어야 한다는 것을 요건으로 요구한다. FDA에 의해 출판된 최근 초안 견본은 한계를 엄격하게 제안하여, 전달된 용량의 >90％이 ±25％ 미만으로 표지 청구물의 ±20％내에 있어야 한다고 한다. 통계학적으로, RSD 6％는 제안된 FDA 세부사항의 요건을 충족할 것이 요구된다.
상기 실시예의 결과는 현재 가이드라인 내에 있을 뿐만 아니라, 제안된 가이드라인의 한계 내에 있다. 따라서, 조성물은 양호한 분산성, 에어로졸 특징 및 안정성을 갖는다.
실시예 5
다양한 포스파티딜콜린을 사용한 분무-건조 암포테리신 B 미립자
대략 50 중량％ 암포테리신 B를 포함하는 분무-건조 미립자을 실시예 2에 기재된 2-단계 공정에 따라 다양한 포스파티딜콜린 (PC)을 계면활성제로서 사용하여 제조하였다. 디팔미토일 포스파티딜콜린 (DPPC) (미국 매사추세츠주 캠브리지 소재의 겐자임), 디스테아로일 포스파티딜콜린 (DSPC) (미국 매사추세츠주 캠브리지 소재의 겐자임) 및 SPC-3 (독일 루드빅샤펜 소재의 리포이드 케이지(Lipoid KG))를 사용하여 조성물을 제조하였다. 본원에 기재된 바와 동일한 장비 및 공정 조건을 이용하여 공급 용액을 제조하였다. 50 중량％ 암포테리신 B 조성은 아래와 같다:
암포테리신 B 0.733 g
PC 0.714 g
CaCl2 60 mg
PFOB 32 g
탈이온수 75 g
얻어진 다중-미립자 에멀젼을 제2 단계, 즉 B-191 미니 분무-건조기(스위스 플라빌 소재의 뷔시(Buechi)) 상에서의 분무-건조를 위한 공급원액으로서 사용하였다. 하기 명목 분무 조건을 사용하였다: 흡인=100％, 입구 온도=85℃, 출구 온도=60℃, 공급 펌프=1.9 mL/분, 아토마이저 압력=60 내지 65 psig, 아토마이저 유속=30 내지 35 cm. 흡인 유속 (69 내지 75％)을 조절하여 배기 주머니 압력 30 내지 31 mbar를 유지하였다. 자유 유동 황색 분말을 표준 사이클론 분리기를 이용하여 수집하였다. 암포테리신 B 미립자의 기하 직경을 레이저 회절 ((독일 클라우스탈-첼러펠트 소재의 심파테크 헬로스)에 의해 측정하였으며, 부피 중량 평균 직경 (VMD)이 2.65 내지 2.75 ㎛의 범위이었다. 주사 전자 현미경 (SEM) 분석은 분말이 높은 표면 거칠기를 갖는 작은 다공성 미립자임을 나타냈다.
공기역학 미립자 크기 분포를 앤더슨 캐스케이드 임팩터(ACI) 상에서 중량분석으로 결정하였다 (도 7 참조). 미립자 크기 분포를 56.6 L/분 (즉, 강력한 흡입 노력)의 유속으로 터보스핀® DPI 장치를 이용하여 측정하였다. 전체 부피 2 리터를 장치를 통해 인취하였다. 2개의 ACI를 교정된 유속 28.3L/분 및 장치를 통한 전체 유속 56.6 L/분에서 평형하게 사용하였다. MMAD 2.5 ㎛ 미만 및 FPF<3.3 ㎛ 72％ 초과를 갖는, 포스파티딜콜린 세가지 유형으로 제조된 암포테리신 B에서 유사한 에어로졸 특징이 관찰되었다. 상기 언급된 본 실시예는 암포테리신 B 분말을 제조하는 조성 기술의 적응성은 사용된 포스파티딜콜린 유형에 독립적이라는 것을 나타낸다.
실시예 6
70 중량％ 암포테리신 B 분무-건조 미립자의 제조
암포테리신 미립자를 실시예 2에 기재된 2-단계 공정에 따라 제조하였다. 공급 용액을 본원에 기재된 바와 동일한 장비 및 공정 조건을 이용하여 제조하였다. 70 중량％ 암포테리신 B 조성물은 아래와 같다:
암포테리신 B 0.70 g
DSPC 0.265 g
CaCl2 24 mg
PFOB 12 g
탈이온수 35 g
얻어진 다중-미립자 에멀젼을 제2 단계, 즉 B-191 미니 분무-건조기(스위스 플라빌 소재의 뷔시) 상에서의 분무-건조를 위한 공급원액으로서 사용하였다. 하기 분무 조건을 사용하였다: 흡인=100％, 입구 온도=85℃, 출구 온도=60℃, 공급 펌프=1.9 mL/분, 아토마이저 압력=60 내지 65 psig, 아토마이저 유속=30 내지 35 cm. 흡인 유속 (69 내지 75％)을 조절하여 배기 주머니 압력 30 내지 31 mbar를 유지하였다. 자유 유동 황색 분말을 표준 사이클론 분리기를 이용하여 수집하였다. 암포테리신 B 미립자의 기하 직경을 레이저 회절 ((독일 클라우스탈-첼러펠트 소재의 심파테크 헬로스)에 의해 측정하였으며, 부피 중량 평균 직경 (VMD)이 2.96 ㎛였다. 주사 전자 현미경 (SEM) 분석은 분말이 높은 표면 거칠기를 갖는 작은 다공성 미립자임을 나타냈다. 상기 본 실시예는 분말 공학 기술의 적응성이 본원에 기재된 다중-미립자 접근법을 이용하여 높은 암포테리신 B 함량을 제조하는 것을 예시한다.
실시예 7
분무-건조 암포테리신 B 미립자의 에어로졸 성능
실시예 6에서 제조된 얻어진 건조 암포테리신 B 미립자를 수동으로 #2 HPMC 캡슐 (일본 소재의 시오노기) 또는 #3 HPMC (미국 사우스 캐롤라이나주 그린우드 소재의 캡수겔(Capsugel)) 캡슐에 충전하였으며, 이를 15 내지 20％ RH에서 밤새 평형에 도달시켰다. 대략 10 mg의 충전 중량을 사용하였으며, 이는 #2 HPMC 캡슐의 충전 부피의 대략 1/2 또는 #3 HPMC 캡슐의 5/8을 나타내었다. 에어로졸 특징을 터보스핀® (이탈리아 소재의 PH&T), 이클립스(Eclipse)® (영국 소재의 아벤티스(Aventis)) 및 시클로할러® (스위스 소재의 노파르티스(Novartis)) DPI 장치를 이용하여 시험하였다. 시클로할러®는 #3 HPMC 캡슐을 사용하는 반면, 터보스핀® 및 이클립스®는 크기 #2 HPMC 캡슐을 사용한다.
공기역학 미립자 크기 분포를 앤더슨 캐스케이드 임팩터(ACI) 상에서 중량분석으로 결정하였다 (도 8 참조). 미립자 크기 분포를 56.6 L/분의 유속으로 측정하였으며, 터보스핀® 및 이클립스® DPI 장치는 강력한 흡입 노력을, 시클로할러® 장치는 편안한 흡입 노력을 나타낸다. 전체 부피 2 리터를 장치를 통해 인취하였다. 2개의 ACI를 교정된 유속 28.3L/분 및 장치를 통한 전체 유속 56.6 L/분에서 평형하게 사용하였다. 모든 장치에서 유사한 에어로졸 특징이 관찰되었으며, 이는 MMAD 2.5 ㎛ 미만 및 FPF<3.3 ㎛ 71％ 초과에 의해 입증되었다. 상기 언급된 본 실시예는 상기 분말의 에어로졸 성능이 매질 및 낮은 저항성을 갖는 장치 디자인에 독립적이며, 캡슐 크기에 독립적이며, 이는 시험된 암포테리신 B 분말의 분산성을 나타낸다.
실시예 8
분무-건조 암포테리신 B 미립자의 에어로졸 성능
본 실시예는 개발 로트번호의 암포테리신 B 미립자의 에어로졸 성능을 추가로 시험하였다.
하기 암포테리신 B 미립자를 실시예 2의 방법을 이용하여 형성시켰으며, 여기서 암포테리신 B는 알파마로부터 얻었다.
- 4000T
- 4001T
도 9 및 10 각각은 수집기 당 방사 용량 (ED) (mg/캡슐) 및 로트번호 당 평균 ED를 나타낸다. ED를 결정하기 위하여, 본원에서 전체가 참고문헌으로 도입된 U.S. 출원 번호 10/298,177에 나타낸 바와 같은 흡입기 장치를 이용하였다.
도 11 및 12 각각은 수집기 당 질량 중앙 공기역학적 직경 (MMAD) 및 미세 입자 용량 (％FPD<3.3 ㎛)을 나타낸다.
실시예 2의 방법을 이용하여 하기 암포테리신 B 미립자를 형성시켰으며, 여기서 암포테리신 B는 켐웨트(Chemwerth)로부터 얻었다.
- 4024T
- 4025T
- 4026T
- 4027T
- 4028T
- 4029T
- 4030T
도 13 및 14 각각은 수집기 및 로트번호 당 방사 용량 (ED) (mg/캡슐) 및 평균 ED를 나타낸다.
도 15 및 16 각각은 수집기 당 질량 중앙 공기역학적 직경 (MMAD) 및 ％FPD<3.3 ㎛을 나타낸다.
하기 보다 상세하게 기재하는 바와 같이, 하기 암포테리신 B 미립자를 가공된 암포테리신 B를 이용하여 형성시켰다.
- N020226 (고결정형 API로부터)
- N020227 (고무정형 API로부터)
이들 암포테리신 B 미립자를 실시예 2의 방법의 변형법을 이용하여 형성시켰으며, 여기서 암포테리신 B는 본래 알파마에 의해 제조되었다. 그러나, 분무 건조 전에, 암포테리신 B를 가공하여 (i) 고무정형; 또는 (ii) 고결정형 API 배치 (X-선 분말 회절에 의해 결정됨)을 성취하였다.
구체적으로, 암포테리신 B의 재가공 절차를 하기 제공한다. 하기 흐름도 및 하기 기재에 나타낸 바와 같이, 결정형 및 무정형 형태 모두 동일한 출발 물질로부터 제조하였다.
Figure 112006095172914-PCT00003
암포테리신 B 약물 물질 ( API )의 재가공 절차에 대한 기재
가용화 및 여과
암포테리신 B 대략 20 g을 메탄올 1130 mL에 실온에서 교반하면서 첨가하였다. 디메틸포름아미드 대략 450 mL 그 다음 시트르산 모노히드레이트 39 g을 암포테리신 B 현탁액에 연속 교반하면서 첨가하였다. 모든 고체가 본질적으로 용해되고 나면, 용액을 여과에 의해 맑게 하였다.
메틸렌 클로라이드 대략 280 mL를 여과물에 첨가하였다. 생성물을 함유하는 용기를 재가공 기간 동안 빛으로부터 보호하였다. 냉수 (2 내지 8℃) 대략 450 mL를 첨가하고, 용액을 15 분 동안 교반하였다.
pH 조절 및 침전/결정화
40％ 트리에탄올아민(약 140 mL)을 사용하여 용액의 pH를 약 7로 조절함으로써 암포테리신 B를 침전시켰다. 무정형 형태에 대하여, 염기를 교반하면서 한번에 첨가하였다. 그 후, 무정형 형태를 하기 기재된 바와 같이 단리를 위해 준비하였다.
결정형 형태에 대하여, 염기를 교반하면서 30 분에 걸쳐서 적가하였다. 그 후, 슬러리를 44 내지 46℃로 90 분 동안 가열한 후, 실온으로 30 분 동안 냉각시켰다. 마지막으로, 슬러리를 2 내지 8℃에서 60분 동안 냉각시켰다. 그 후, 결정형 형태를 단리를 위해 준비하였다.
결정형 형태의 수집 및 세척
종이 필터를 안에 붙인 큰 스테인레스 스틸 흡인 여과기를 이용하여 진공 여과에 의해 암포테리신 B의 결정형 형태를 포획하였다. 냉 40％ 메탄올 (2 내지 8℃) 170 mL 그 다음 아세톤 (실온) 100 mL를 사용하여 생성물을 세척하였다.
무정형 형태의 수집 및 세척
슬러리를 원심분리하여 암포테리신 B의 무정형 형태를 포획한 후, 상등액을 기울여 따랐다. 냉 40％ 메탄올 (2 내지 8℃) 600 mL에 케이크를 재현탁한 후, 원심분리하고 기울여 따름으로써 생성물을 세척하였다. 아세톤 (실온) 600 mL를 사용하여 세척 공정을 반복하였다.
결정형 및 무정형 형태의 건조
세척된 결정형 암포테리신 B를 함유하는 필터 종이를 진공 챔버 내 스테인레스 스틸 트레이에 두었다. 유사하게, 세척된 무정형 암포테리신 B를 원심분리 병으로부터 제거하고, 챔버 내 종이 필터를 안에 붙인 스테인레스 스틸 트레이 상에 산포시켰다. 생성물을 빛으로부터 보호하면서 건조 공정을 1 내지 3일 동안 실온에서 진행시켰다. 때때로, 건조 공정 도중에, 잔류 용매의 증발을 용이하게 하기 위하여 스페츌라를 이용하여 큰 입자를 분쇄하였다. 최종 암포테리신 B 생성물을 2 내지 8℃에서 저장을 위해 호박색 유리 통으로 옮겼다.
상기 나타낸 바와 같이, 그 후 암포테리신 B 미립자를 실시예 2의 방법을 이용하여 형성시켰다. 도 17은 N020226 및 N020227 모두에 대한 방사 용량 (ED) (mg/캡슐)을 나타낸다. N020226 및 N020227에 대한 질량 중앙 공기역학적 직경 (MMAD)은 각각 2.4 ㎛ 및 2.6 ㎛이었다. N020226 및 N020227에 대한 ％FPD<3.3 ㎛은 각각 55％ 및 47％이었다.
실시예 9 및 비교 실시예 1
기관내 및 정맥내 투여의 비교
본 실시예는 암포테리신 B 용액의 기관내 투여 또는 시판되는 암포테리신 B 데옥시콜레이트 용액의 정맥내 투여 후 혈장, 폐 세척액 및 폐 조직 중 암포테리신 B의 농도 결정을 포함한다.
물질 및 방법
예비삽관된 (경정맥 삽관 [JVC]) 334 내지 366 g 무게의 스프라그-돌리 래트 (미국 펜실바니아주 스코트데일 소재의 힐탑 랩 애니멀즈 인크(Hilltop Lab Animals Inc))를 본 실시예에서 사용하였다. 암포테리신 B를 기관내 점적주입 또는 정맥내 주사에 의해 투여하였다. 연구 디자인을 하기 표 2에 나타낸다.
그룹 투여 경로 동물 수/성별 용량 용량 부피 (mL) 혈액, 폐 조직, BAL 수집 (일)
암포테리신 B 분말 기관내 (IT) 32 M 4.0 mg (약 11 mg/kg) 0.3 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 11 및 14
암포테리신 B 데옥시콜레이트 제제 정맥내 (IV) 24 M 0.5 mg (약 1.4 mg/kg) 1.0 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 11 및 14
BAL = 기관지폐포 세척 M = 수컷
기관내 점적주입을 위한 암포테리신 B 용액을 포스페이트 완충 염수 (PBS) 중 암포테리신 B 13.3 mg/mL의 농도로 제조하였다. 암포테리신 B 데옥시콜레이트 정맥내 제제를 암포테리신 B 동결건조 케이크 50 mg로서 제공하고, 재구성하여 1 mg/mL 함유 용액을 제조하였다.
연구 종말점 및 절차는 용량 투여 전 체중, 약물 농도 분석 및 육안 부검 관찰을 위한 혈액, BAL 및 조직의 수집을 포함한다.
혈액, BAL 및 폐 조직 샘플을 투여 후 12 시간, 1, 2, 4, 6, 8, 11 및 14일에 수집하였다. 각각의 샘플링 시간에, IT 그룹의 동물 4마리 및 IV 그룹의 동물 3마리를 희생시키고, 혈액, 폐 세척액 및 폐 조직 샘플을 취하였다.
혈장 및 세척 샘플을 캐나다 몬트리올 소재의 엠디에스 파마 서비시스(MDS Pharma Services)에 의해 암포테리신 B 농도에 대하여 분석하였다. 폐 조직 샘플을 미국 미네소타주 세인트 폴 소재의 메드톡스 래보러토리즈(MedTox Laboratories)에 의해 암포테리신 B 농도에 대하여 분석하였다.
결과
육안 부검 관찰
암포테리신 B가 기관내 점적주입에 의해 투여된 래트는 폐 독성의 육안 증상을 나타냈다. 관찰은 폐 부종, 폐에서의 출혈 및 폐 조직의 변색을 포함하였다.
BAL , 폐 조직 및 혈장 중 암포테리신 B 농도
혈장, BAL 및 폐 조직 암포테리신 B 농도 및 암포테리신 B 기관내 100 및 정맥내 200의 전달 후 추정 ELF 암포테리신 B 농도를 도 18에 나타낸다. 나타낸 바와 같이, 기도로 투여한 경우에 암포테리신 B가 전신적으로 거의 존재하지 않았다. 대조적으로, 정맥내 투여 후 4일까지의 기간 동안 높은 농도의 암포테리신 B가 혈액에 존재하였다. 또한, 도 18에 나타낸 바와 같이, 암포테리신 B의 폐 농도가 정맥내 투여 200보다 기관내 투여 100이 더 높았다. 수행된 실험에서, 암포테리신 B의 혈장 농도가 기관내 투여에서 더 낮은 반면, 암포테리신 B의 폐 농도는 정맥내 투여보다 기관내 투여일 때 수배 높았다.
결론 및 논의
암포테리신 B가 기관내 액체 점적주입에 의해 투여된 래트는 독성의 육안 증상을 나타냈다. 관찰은 폐 부종, 폐에서의 출혈 및 폐 조직의 변색을 포함하였다.
기관내 투여를 통해 시험 물품을 받은 동물로부터 취한 혈장 샘플에서는 암포테리신 B를 측정할 수 없었다. 암포테리신 B가 기관내 점적주입에 의해 투여된 동물로부터의 BAL 및 폐 조직에서는 농도가 측정가능하였다. IT 투여 후 2일 동안 모든 동물 및 투여 후 8일 동안 동물 4마리 중 1마리의 BAL에서 약물을 측정하였다. IT 투여 후 14일에 모든 동물의 폐 조직에서 약물을 측정하였다.
암포테리신 B가 정맥내로 투여된 동물에서, 투여 후 2일까지 혈장에서 약물을 측정하였으나, 임의의 시점에서 폐에서 약물이 측정가능한 동물은 없었으며, 1마리의 동물만이 투여 후 12시간에서 BAL에서 암포테리신 B의 측정가능한 농도를 가졌다.
결론적으로, 13.3 mg/mL 농도의 용액 중 암포테리신 B 11 mg/kg의 기관내 전달은 국소 폐 독성을 가져왔다. 또한, 기관내 투여는 상기 농도에서 용량 투여 후 14일 동안 정량의 한계를 가져왔다. 대조적으로, 암포테리신 B의 농도는 암포테리신 B가 정맥내 투여된 동물의 폐 조직에서의 정량의 한계 미만이었다.
실시예 10 및 비교 실시예 2
에어로졸화 및 정맥내 투여의 비교
에어로졸화가능한 암포테리신 B 분말을 개에게 14일 동안 폐로 투여하였다. 암포테리신 B를 11.5 mg/kg까지의 1일 용량으로 전달하였다. 호기 공기를 배기하는 한방향 밸브를 함유하는 안면 마스크 및 에어로졸화 분말을 함유하는 중심 홀딩 챔버에 연결된 흡입선을 이용하여 의식있는 개에게 암포테리신 B 분말의 용량을 전달하였다. 회전식 부러시 생성기로 분말을 분산시키고 흡입 노출 30 분 동안 중심 챔버에 전달함으로써 제제화된 암포테리신 B 분말의 호흡가능한 건조 분말 에어로졸을 제조하였다.
도 19는 투여 후 101마리의 개에서의 평균 폐 암포테리신 B 농도-시간 프로파일을 나타낸다. 나타낸 바와 같이, 투여 후 수일 동안 폐에 잔류하는 암포테리신 B는 대략 19일의 관찰 반감기를 가졌다. 대조적으로, 약 28 시간의 관찰 반감기를 갖는 정맥내 투여 201은 잘 유지되지 않았다.
실시예 11
예방적 투여에 의해 증가된 생존율
요약
본 실시예는 흡입을 통해 예방적으로 투여된 암포테리신 B가 면역억제된 토끼 모델에서 아스페르길루스 푸미가투스에 대하여 효능이 있는지를 결정하는 것을 포함한다. 본 연구의 목적은 아스페르길루스 푸미가투스 접종 전에 흡입에 의해 암포테리신 B를 단일 투여하는 것이 생존 시간을 증가시키고/거나 전체 사망률을 감소시키는 가를 결정하는 것이다.
본 연구는 한 그룹당 동물 10마리씩 세 그룹을 포함한다. 그룹 1은 정맥내 시타라빈 및 메틸 프레드니솔론의 면역억제 요법 및 가짜의 염수 접종을 받았다. 그룹 2는 면역억제 요법 및 5 x 107 분생포자의 아스페르길루스 푸미가투스를 받았다. 그룹 3은 5 x 107 분생포자의 아스페르길루스 푸미가투스의 접종 하루 전에 흡입을 통해 면역억제 요법 및 1.5 mg/kg의 암포테리신 B의 추정 용량을 받았다. 암포테리신 B 건조 분말 제제 및 아스페르길루스 푸미가투스를 기관내 튜브를 통해 마취된 토끼에게 투여하였다. 면역억제제를 정맥내 주사에 의해 투여하였다. 세균 감염을 예방하기 위한 항생제를 정맥내 주사에 의해 또는 음용수로 투여하였다.
본 연구에서 수행된 평가는 사망률 및 이환율, 1일 임상 관찰, 체중, 임상 병리학 (혈액학 및 임상 화학), 육안 부검, 폐 중량, 가시성 폐 경색의 산출, BAL, 혈액 및 폐 조직 샘플에서의 진균 집락 형성 단위(CFU) 측정 및 폐 조직의 조직병리학적 평가를 포함한다.
14일에 연구의 계획된 결론까지 동물의 생존 백분율은 그룹 1에서 60％, 그룹 2에서 20％, 그룹 3에서 70％이었다. 그룹 1 및 3에서 동물의 평균 생존 시간은 13일이고, 두 그룹 모두에서 사망 또는 희생의 중앙 일은 14일이었다. 대조적으로, 그룹 2에서 동물의 평균 생존은 10일이고, 사망 또는 희생의 중앙 일은 10일이었다. 카플란-마이어(KM) 분석은 아스페르길루스 푸미가투스만을 투여받은 동물 (그룹 2)과 비교하여, 아스페르길루스 푸미가투스 접종 전에 암포테리신 B가 투여된 동물 (그룹 3)의 생존이 유의적으로 (p <0.05) 증가했음을 나타냈다. 그룹 1 (대조군) 동물의 생존도 그룹 2와 비교하여 유의적으로 증가했다. 그룹 1 및 3을 비교시 유의적 상이함은 없었다.
가쁜호흡, 천명 또는 수포음을 비롯한 호흡 효과의 임상 증상이 그룹 2 및 3의 동물에서 관찰되었다. 이들 증상은 그룹 1의 동물에서는 관찰되지 않았다. 그룹 2에서 7마리의 동물 그룹은 연구 7일에 시작하여 가쁜호흡, 천명 또는 수포음을 나타냈다. 호흡 효과의 증상을 나타낸 그룹 2의 모든 동물은 증상을 나타낸 1일 내에 사망하거나 빈사 상태가 되었다. 그룹 3에서, 5마리의 동물들은 천명, 가쁜호흡 또는 수포음을 갖는 것으로 관찰되었다. 그러나, 호흡 증상의 최초 발병이 또한 7일에 일어났지만, 호흡 효과의 증상을 나타낸 동물 중 2 마리 만이 빈사 상태가 되었다. 다른 3 마리의 동물들은 3 마리 중 2 마리 (둘 모두 수포음을 가짐)가 그의 계획된 부검으로 14일까지 호흡 효과의 증상을 나타내는 것을 중단할 때까지 생존하였다.
체중에 대한 효과가 모든 그룹에서 관찰되었다. 체중은 모든 그룹에서 대략 8일에 감소되었다. 모든 그룹은 8일까지 대략 6％의 감소를 나타냈다. 초기 감소 후, 그룹 1 및 그룹 2의 남은 동물의 체중은 연구 기간 동안 안정하게 유지되었다. 대조적으로, 14일까지 계속 감소된 그룹 3의 동물의 평균 그룹 체중은 그의 출발 체중보다 18％ 적고, 그룹 1의 체중 평균보다 10％ 적었다.
효과는 모든 그룹에서 측정된 혈액학 및 임상 화학 파라미터에서 나타났다. 혈액학 파라미터에 나타낸 1차 효과는 감소된 분엽 중성구 (ANS) 및 혈소판 (PLC)을 비롯하여 백혈구 (WBC)의 감소된 수준이었다. 이들 효과는 모든 그룹에서 나타났다.
추가의 효과는 그룹 2 및 3에서 적혈구, 헤모글로빈, 적혈구용적율, 전체 단백질, 알부민, 아스파르테이트 아미노트랜스페라제, 알라닌 아미노트랜스페라제, 전체 빌리루빈, 직접형 빌리루빈, 콜레스테롤, 글로불린 및 트리글리세리드의 수준 상에 나타났다. 그룹 2 및 3에 나타난 적혈구 (RBC), 헤모글로빈 (HGB) 및 적혈구용적율 (HCT)의 감소된 수준은 빈혈의 징조이고, 폐 조직에 현미경적으로 나타난 출혈과 일치한다. 그룹 2 및 3에 나타난 아스파르테이트 아미노트랜스페라제 (AST), 알라닌 아미노트랜스페라제 (ALT), 전체 빌리루빈 (TBI) 및 직접형 빌리루빈 (DBI) 및 콜레스테롤 (CHO)의 증가된 수준과 함께 전체 단백질 (TPR), 알부민 (ALB)의 감소된 수준은 간 효과와 일치한다. 증가된 글로불린 (GLO)은 현미경적으로 폐에서 관찰된 진균 감염 및/또는 염증에 대한 반응의 소견일 것이다. 증가된 트리글리세리드 (TRI) 수준은 본 연구에서 관찰된 감소된 음식 소비 및 체중과 함께 나타난 지방 동원과 일치한다.
빈사 상태가 된 후 희생된 동물 뿐만 아니라 생존 동물에서 14일에 육안 부검을 수행하였다. 동물 당 폐 경색의 수를 육안 부검 중에 계수하였다. 그룹 1에서는 가시성 경색이 없었다. 부검에 이용가능한 그룹 2의 동물 8 마리 중 7 마리 (88％)는 가시성 폐 경색을 가지고, 이들 동물 8 마리 중 6 마리 (75％)는 육안으로 가시성 경색 20개 이상을 가졌다. 그룹 3에서, 동물 10 마리 중 8 마리 (80％)는 가시성 폐 경색을 가지나, 그룹 2는 대조적으로 동물 10 마리 중 2 마리 (20％)가 육안으로 가시성 폐 경색 20개 이상을 가졌다.
부검에서 취한 기관지폐포 세척액, 혈액 및 폐 조직 샘플의 미생물학적 평가를 수행하였다. 그룹 1로부터의 샘플 어디서도 집락 형성 단위 (CFU)가 검출되지 않았다. 그룹 2에서는, 배양용 샘플을 동물 10 마리 중 8 마리로부터 얻었다. 사망한 동물 2 마리로부터는 이용가능한 샘플이 없었다. 평가된 동물 중 6 마리 (75％)는 진균에 대하여 양성인 조직 하나 이상을 가졌다. 그룹 3에서는, 배양용 샘플을 동물 10 마리 중 9 마리로부터 얻었으며, 동물 중 4 마리 (44％)는 진균에 대하여 양성인 조직 하나 이상을 가졌다.
절대 폐 중량 뿐만 아니라 폐-대-체중이 그룹 1과 비교하여 그룹 2 및 3에서 증가하였다.
폐 조직병리학적 평가는 대조군 토끼로부터 평가된 폐 조직 어디에서도 진균성 균사가 존재하지 않는 것으로 나타냈다. 진균성 균사는 평가된 그룹 2 동물의 44％ 및 그룹 3 동물의 50％에 존재하였다. 그룹의 조직 간에 현미경적 상이점은 없었다. 진균성 감염이 있는 토끼로부터의 폐 단면은 또한 부종, 괴사, 출혈, 폐포 대식세포 증식, 간질 염증 및/또는 혈관주위 염증을 비롯한 2차 변화와 관련된다. 존재하는 변화는 중증도 및 유병률에서 유사하였다. 이용가능한 조직 단면의 현미경적 평가에 의해 평가된 동물의 대략 절반에서 진균 감염을 확인할 수 있었다. 그룹 2 또는 3에서 조직 또는 진균성 균사 간의 현미경적 상이점은 없었다.
결론적으로, 지지되는 임상 관찰, 미생물학 데이타 및 폐 경색과 함께 사망률 데이타에 기초하여, 암포테리신 B는 본 연구에서 사용된 면역억제된 토끼 모델에서 사망률을 유도하는 아스페르길루스 푸미가투스에 대하여 예방적 효과를 제공하였다.
연구 디자인
본 실험은 한 그룹당 동물 10마리씩 세 그룹을 포함한다. 그룹 1은 정맥내 시타라빈 및 메틸 프레드니솔론의 면역억제 요법 및 가짜의 염수 접종을 받았다. 그룹 2는 면역억제 요법 및 5 x 107 분생포자의 아스페르길루스 푸미가투스를 받았다. 그룹 3은 5 x 107 분생포자의 아스페르길루스 푸미가투스의 접종 하루 전에 면역억제 요법 및 1.5 mg/kg의 암포테리신 B의 추정 폐 용량을 받았다. 일반적인 디자인은 하기 표 3에 제공한다.
그룹 면역억제 요법 암포테리신 B의 표적 용량 (mg/kg) 아스페르길루스 푸미가투스 (분생포자/동물)
1 예 없음 0a
2 예 없음 5 x 107
3 예 1.5b 5 x 107
a 희석시켜 접종함 (0.9％ 염화나트륨 중 0.025％ 트윈 20) b -1일에 암포테리신 B로 처리함
포유동물 시험 시스템 및 축산
혈관 통로 포트(VAP)로 이중 삽관되고 체중이 2.5 내지 4.0 kg인 뉴질랜드 화이트 SPF 토끼를 연구 초기에 사용하였다. 토끼를 전산화 체중 층화 절차를 이용하여 처리 그룹으로 무작위로 할당하였다.
그룹 당 수/성별
그룹 당 10/암컷; 3 그룹
면역억제 및 호중구감소증
하기 표 4에 나타낸 바와 같이 인간 환자의 조건을 모방하여 토끼에서 면역억제를 유도하였다.
약물 목적 용량 수준 투여 경로 빈도 연구일
시타라빈 면역억제 44 mg/kg IV sid -1, 1, 2, 3, 4
시타라빈 호중구감소증 유지 40 mg/kg IV sid 7, 8, 12, 13
메틸프레드니솔론 대식세포 형성 억제 5 mg/kg IV sid -1,1
세프타지딤 세균 감염 예방 75 mg/kg IV bid 3 내지 13
겐타마이신 세균 감염 예방 5 mg/kg IV qod 3, 5, 7, 9, 11, 13
반코마이신 세균 감염 예방 15 mg/kg IV sid 3 내지 13
반코마이신 세균 감염 예방 50 mg/L 음용수 sid 3 내지 13
iv = 정맥내 sid = 1일 1회 투여 bid = 1일 2회 투여 qod = 격일마다
작은 동물 에어로졸 전달 시스템의 시험관내 전달 효율 결정
작은 동물 인공호흡기에 연결된, 본원에서 전문이 참고문헌으로 도입된 U.S. 특허 6,257,233에 개시된 바와 같은 에어로졸 전달 장치를 포함하는 작은 동물 에어로졸 전달 시스템에 연결된 기관내 튜브를 이용하여 흡입 (IH) 경로를 통해 마취된 토끼에게 건조 분말 암포테리신 B를 전달하였다. 이와 관련하여, 블리스터 팩으로부터의 분말을 흡입기로부터 챔버로 작용시켰다. 작은 동물 인공호흡기는 분산된 분말을 기관내 튜브로 밀었다. 동물로의 전달 효율은 기관내 튜브의 말단에 연결된 필터 상에 수집된 분말의 중력 중량을 측정함으로써 결정하였다. 필터 상에 수집된 중량은 실제 블리스터 팩 충전 중량으로 표준화하였다. 전달 효율을 이용하여 생체내 실험에 대한 추정 용량 (mg)을 계산하였다.
처리 그룹
하기 표 5에 처리 요법을 요약하였다.
그룹 번호 시험 물품 투여 경로 블리스터 팩의 평균 수 AmB의 표적 용량 (mg/kg) 추정 전달된 용량 (mg/kg) 동물의 수/성별
1 NA NA 0 0 0 10/F
2 NA NA 0 0 0 10/F
3 AmB 흡입 20 1.5 0.6 10/F
도 20은 호중구감소증에 걸린 토끼로부터의 카플란-마이어 생존 곡선을 나타낸다. 면역억제되고 아스페르길루스 푸미가투스 600에 실제로 노출된 토끼 중에서 50％만이 9일 지나서까지 생존하였다. 대조적으로, 면역억제되고 아스페르길루스 푸미가투스에 노출되고 암포테리신 B 601이 투여된 토끼 중에서 100％가 9일 지나서까지 생존하였다. 곡선 602는 오직 면역억제된 토끼의 대조군 그룹을 나타낸다. 장기간에서, 비처리되고 노출된 토끼 600 중 25％ 미만이 14일 지나서까지 생존한 반면, 처리되고 노출된 토끼 602 중 약 70％가 14일 지나서까지 생존하였다.
실시예 12
토끼에서 흡입에 의해 전달된 암포테리신 B의 약동학
본 실시예는 흡입에 의한 암포테리신 B 분말의 단일 투여 후 토끼의 혈장, 기관지폐포 세척 (BAL) 체액 및 폐 조직 중 암포테리신 B 농도의 결정을 포함한다. 본 실시예는 혈장 및 폐 조직에서 얻은 결과만을 기재한다.
물질 및 방법
암포테리신 B (AmB)를 실시예 2에 기재된 방법을 이용하여 50 중량％ 활성 성분을 함유하는 흡입가능한 분말로서 제제화하였다. 제제의 로트번호는 N020042였다. 시험 분말을 블리스터 팩 당 대략 1.5 mg의 대략 충전 중량으로 블리스터 팩에 수동으로 충전하고, 340 ℉에서 1.0 초 동안 접촉 밀봉하였다.
작은 동물 인공호흡기에 연결된, 본원에서 전문이 참고문헌으로 도입된 U.S. 특허 6,257,233에 개시된 바와 같은 에어로졸 전달 장치를 포함하는 작은 동물 에어로졸 전달 시스템에 연결된 기관내 튜브를 이용하여 흡입 (IH) 경로를 통해 마취된 토끼에게 시험 물품을 전달하였다. 시험 흡입을 단일 흡입 노출로 투여하였다.
본 연구는 한 그룹당 동물 48마리씩 두 그룹을 포함한다. 그룹 1 및 2 각각은 암포테리신 B 0.25 및 1.5 mg/kg IH의 표적 용량을 받았다. 4마리의 동물을 투여 후 0.16, 0.3, 1, 1.3, 2, 3, 4, 5, 14, 21, 28 및 45일 시점 각각에 희생시켰다. 혈장 및 폐 조직을 수집하고, LC/MS를 이용하여 암포테리신 B 함량에 대하여 분석하였다. 분석의 정량 한계 (LOQ)는 혈장에서 5 ng/ml, 폐 조직에서 20 ng/g이었다.
논의 및 결론
본 실시예의 목적은 흡입에 의한 암포테리신 B 분말의 단일 투여 후 토끼의 혈장, BAL 체액 및 폐 조직 중 암포테리신 B의 농도를 결정하는 것이다. 0.25 및 1.5 mg/kg의 두가지 표적 폐 용량을 시험하였다. 본 실시예는 혈장 및 폐 조직에서 얻은 결과만을 기재한다.
혈장 중 정량 한계 (LOQ)는 5 ng/ml였다. 모든 시점에서 시험된 용량 모두에서 모든 동물의 혈장 암포테리신 B 농도는 LOQ 미만이었다. 따라서, 암포테리신 B의 IH 투여 후 전신적 노출은 거의 없었다.
그러나, 암포테리신 B의 IH 투여는 폐 중 약물의 높고 지속적인 농도를 가져왔다. 약물 농도는 빠르게 성취되었다. 4.2 및 24.2 ㎍/g의 그룹 평균 농도는 제1 샘플링 시간인 4 시간에 성취되었다. Tmax는 그룹 1 및 2 각각에 대하여 0.25 및 1.5 mg/kg 용량 투여 후 32 및 24 시간에 관찰되었다. 그룹 평균 Cmax 값은 0.25 및 1.5 mg/kg 용량 각각에 대하여 8.0 및 46.6 ㎍/g이었다. Cmax 값은 용량에 비례하였다.
약물 농도는 IH 투여 후 수주 동안 유지되었다. 도 21 및 22에 나타낸 바와 같이, 그룹 평균 암포테리신 B 농도는 최종 샘플링 시간, 즉, 45일 투여 후에 지속적으로 상승하였다. 폐로부터의 암포테리신 B 제거에 대한 반감기 (t1 /2)는 0.25 mg/kg 용량에 대하여 292 시간, 1.5 mg/kg 용량에 대하여 254 시간이었다.
본 실시예의 결과는 토끼에게의 암포테리신 B의 IH 투여가 균일하게 LOQ 미만 (<5 ng/ml)인 혈장 암포테리신 B 농도를 가져온다는 것을 나타낸다. 추가로, 암포테리신 B의 높고 지속적인 농도가 폐 조직에서 성취된다는 것을 나타낸다.
실시예 13
토끼에서 예방을 위한 흡입된 암포테리신 B의 효능
본 실시예는 (1) 상피 내막 체액 (ELF) 또는 폐 실질 중 암포테리신 B (AmB) 농도가 아스페르길루스 푸미가투스 이환율에 대한 보호에서 보다 적절한가에 대한 결정; 및 (2) 효과적인 예방 용량의 확립을 포함한다.
물질 및 방법
실시예 14의 암포테리신 B 흡입가능한 분말 로트번호 N020042를 사용하였다. 시험 분말을 블리스터 팩 당 대략 1.5 mg의 대략 충전 중량으로 블리스터 팩에 수동으로 충전하고, 340 ℉에서 1.0 초 동안 접촉 밀봉하였다.
작은 동물 인공호흡기에 연결된, 본원에서 전문이 참고문헌으로 도입된 U.S. 특허 6,257,233에 개시된 바와 같은 에어로졸 전달 장치를 포함하는 작은 동물 에어로졸 전달 시스템에 연결된 기관내 튜브를 이용하여 흡입 (IH) 경로를 통해 마취된 토끼에게 시험 물품을 전달하였다. 시험 흡입을 단일 흡입 노출로 투여하였다.
혈관 통로 포트로 대퇴 정맥에 이중 삽관되고 체중이 약 2.5 내지 4.0 kg인 뉴질랜드 화이트 SPF 토끼를 연구 초기에 사용하였으며, 이는 미국 펜실바니아주 덴버 소재의 콘반스 리써치 프로덕츠로부터 입수하였다.
아스페르길루스 푸미가투스, NIH 균주 4215를 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (ATCC)로부터 입수하였다. 아스페르길루스 푸미가투스의 접종을 사브로 덱스트로스 플라스크 상에 하였다. 분생포자를 0.9％ 염화나트륨 중 0.025％ 트윈 20의 용액으로 수확하고, 코니칼 튜브로 옮기고, 세척하고, 계수하였다. 농도를 동일한 용액으로 조절하여 300 ㎕ 중 5 X 107 분생포자를 얻었다. 시험된 그룹의 동물을 동일한 부피로 접종하였다. 접종을 마취된 토끼에 수행하였다. 토끼를 기관내 튜브를 이용하여 삽관한 후, 접종을 기관내 튜브를 통해 도입된 카테터에 부착된 튜베르쿨린 주사기로 기관내 투여하였다.
본 연구는 한 그룹당 토끼 10마리씩 여섯 그룹을 포함한다. 이들 그룹은 하기 표 6에 기재하였다. 모든 그릅은 면역억제되고, 세균 감염을 예방하기 위해 항생제로 처리되었다. 면역억제 및 항생제 커버 요법은 하기 표 7에 상세하게 기재하였다. 그룹 1은 아스페르길루스 푸미가투스를 접종받지 않았으며, 암포테리신 B로 처리되지도 않았고, 면역억제 요법을 위한 대조군으로서 작용하였다. 그룹 2는 아스페르길루스 푸미가투스를 접종받았으나, 암포테리신 B로 처리되지는 않았다. 그룹 3은 아스페르길루스 푸미가투스 접종 12일 전에 암포테리신 B 1.5 mg/kg으로 처리되었다. 그룹 4는 아스페르길루스 푸미가투스 접종 1일 전에 암포테리신 B 0.15 mg/kg으로 처리되었다. 그룹 5는 아스페르길루스 푸미가투스 접종 1일 전에 암포테리신 B 0.5 mg/kg으로 처리되었다. 그룹 6은 아스페르길루스 푸미가투스 접종 1일 전에 암포테리신 B 1.5 mg/kg으로 처리되었다.
그룹 설명 면역억제 아스페르길루스 푸미가투스 접종 AmB 처리 (mg/kg) AmB 처리 (일)
1 면역억제 비접종 예 아니오 0 NA*
2 면역억제 접종/비처리 예 예 0 NA
3 면역억제 접종/12일 고용량 예 예 1.5 12일
4 면역억제 접종/1일 저용량 예 예 0.15 1일
5 면역억제 접종/1일 중용량 예 예 0.5 1일
6 면역억제 접종/1일 고용량 예 예 1.5 1일
*NA = 이용가능하지 않음
약물 목적 용량 수준 (mg/kg) 투여 경로 빈도 연구 일B
시타라빈 면역억제 44 mg/kg iv sid -1,1,2,3,4
시타라빈 호중구감소증 유지 40 mg/kg iv sid 7,8,12,13
메틸프레드니솔론 대식세포 기능 억제 5 iv sid -1,1
세프타지딤 세균 감염 예방 75 iv bid 3 13
겐타마이신 세균 감염 예방 5 iv qod 3,5,7,9,11,13
반코마이신 세균 감염 예방 15 iv sid 3 13
반코마이신 세균 감염 예방 50 mg/LA 음용수 sid 3 13
암포테리신 치료 처리 저, 중, 고 용량 흡입 sid -12 또는 -1
A: mg/음용수 리터 B: 연구 1일 = 아스페르길루스 푸미가투스로 접종한 날
결과
생존 데이타는 도 23에 나타낸다. 그룹 1은 면역억제되었으나, 암포테리신 B로 처리되지 않고 아스페르길루스 푸미가투스로 접종되지 않았다. 그룹 1의 토끼 중 1마리를 제외한 모든 토끼가 생존하여, 14일 연구에서 생존율 90％의 결론을 얻었다.
그룹 2는 면역억제되었으나, 암포테리신 B로 처리되지 않고 아스페르길루스 푸미가투스로 접종되었다. 그룹 2의 모든 토끼가 사망하여 생존율이 0％이었다. 중앙 생존 시간은 6일이었다.
그룹 3은 면역억제되고, -12일에 암포테리신 B 1.5 mg/kg으로 처리되고 아스페르길루스 푸미가투스로 접종되었다. 그룹 3의 모든 토끼가 사망하여 생존율이 0％이었다. 중앙 생존 시간은 10일이었다.
그룹 4는 면역억제되고, -1일에 암포테리신 B 0.15 mg/kg으로 처리되고 아스페르길루스 푸미가투스로 접종되었다. 그룹 4의 토끼 9 마리가 사망하여 생존율이 10％이었다. 중앙 생존 시간은 9일이었다.
그룹 5는 면역억제되고, -1일에 암포테리신 B 0.5 mg/kg으로 처리되고 아스페르길루스 푸미가투스로 접종되었다. 그룹 5의 토끼 9 마리가 사망하여 생존율이 10％이었다. 중앙 생존 시간은 10.5일이었다.
그룹 6은 면역억제되고, -1일에 암포테리신 B 1.5 mg/kg으로 처리되고 아스페르길루스 푸미가투스로 접종되었다. 그룹 6의 토끼 9 마리가 사망하여 생존율이 10％이었다. 중앙 생존 시간은 10일이었다.
로그랭크 시험을 이용한 그룹 2 대 3, 2 대 4, 2 대 5 및 2 대 6의 짝방식의 통계학적 비교는 흡입된 암포테리신 B가 아스페르길루스 푸미가투스 접종에 대하여 유의적 (P<0.001) 보호를 부여한다는 것을 나타내었다. 동일한 시험을 이용한 그룹 3, 4, 5 및 6의 짝방식의 비교는 상이한 처리로부터 얻어진 생존 곡선에서 어떠한 상이점도 나타내지 않았다.
논의 및 결론
본 실시예는 아스페르길루스 푸미가투스 포자로 접종된 면역억제된 토끼에 대한 흡입된 암포테리신 B의 보호 효과를 시험하였다. 아스페르길루스 푸미가투스로 접종되었으나 비처리된 그룹 2와 처리된 그룹의 생존 곡선의 비교는 암포테리신 B의 흡입에 의한 처리가 면역억제된 토끼에서 보호 효과를 갖는 것을 나타낸다. 모든 용량을 시험하였다 (0.15, 0.5 및 1.5 mg/kg). 아스페르길루스 푸미가투스 접종 전 1 또는 12일에 토끼를 처리하였다.
실시예 14
래트에서의 1개월 흡입 독성 연구
본 실시예는 흡입 투여 후 래트에서의 암포테리신 B의 건조 분말 제제의 독성 평가 및 대략 1개월 회복 기간 후 임의의 효과의 가역성 평가를 포함한다. 본 실시예는 기도에서 국소적으로 유도된 독성 및 전신 독성에 대한 연구를 포함한다.
활성 성분 50 중량％를 함유하는 암포테리신 B 분말을 실시예 2에 기재된 방법을 이용하여 제제화하였다. 얻어진 분말은 하기 표 8에 나타낸 바와 같은 특징을 갖는다.
API 로트번호 Mfg. API, 결정형％ API 입도, x50 (㎛) 분말 로트번호 분말, 결정형％ 분말 MMAD, 중력 (㎛) 분말 MMAD, 약물 특이성 (㎛)
101677 켐웨트 90 1.25 4001T 95 2.2 2.3
래트 (198 M 및 198 F)를 6개의 용량 그룹으로 배분하고, 하기 표 9에 나타낸 바와 같이 처리하였다.
용량 그룹/ 처리 1일 표적 제제 용량 수준 (mg/kg/일) 8, 15, 22 및 29일 표적 제제 용량 수준 (mg/kg/일) 동물 수
수컷 암컷
공기 대조군 0 0 주연구 독성역학 101-110 111-128 129-138 139-156
비히클 대조군 80 80 주연구 회복 독성역학 201-210 211-216 217-234 235-244 245-250 251-268
저용량 2* 0.4* 주연구 회복 독성역학 301-310 311-316 317-334 335-344 711, 346-550 351-368
중간 용량 I 10* 2* 주연구 회복 독성역학 401-409,701 411-416 417-434 435, 712, 437-444 445-450 451-468
중간 용량 II 30* 6* 주연구 회복 독성역학 501-510 511-516 517-534 535-540, 713, 542-544 545-550 551-568
고용량 80* 80* 주연구 회복 독성역학 601-610 611-616 617-634 635-644 645-650 651-668
* 암포테리신 B 약 50 중량％를 함유하는 건조 분말 제제 회복 동물은 투여 후 대략 1개월 회복 기간 동안 유지하였다. 동물 410M은 -1일에 조기 사망하여 701M으로 대체하였다. 예비시행 검안경검사 시험 후, 동물 345F, 436F 및 541F를 각각 711F, 712F 및 713F로 대체하였다.
코만을 노출하는 기술을 이용하여 약 60 분 동안 5 실행에서 주간격으로 동물에게 투여하였다. 회복 동물을 대략 1개월 회복 기간 동안 유지하였다.
하기 조사를 수행하였다: 임상 관찰, 체중, 음식 소비, 안과학, 혈액학, 임상 화학, 요검사, 조직병리학 및 독성역학.
비히클 제제 에어로졸의 모든 그룹 평균 노출 챔버 농도는 2.35 mg/L이었다. 암포테리신 B 제제의 모든 그룹 평균 노출 챔버 농도는 그룹 3, 4 및 5 각각에 대하여 1일에 0.06, 0.39 및 0.91 mg/L이고, 다음날에 0.02, 0.06 및 0.16 mg/L이었다. 암포테리신 B 단독의 모든 그룹 평균 노출 챔버 농도 (분석적으로 결정됨)는 그룹 3, 4 및 5 각각에 대하여 1일에 0.0290, 0.152 및 0.389 mg/L이고, 다음날에 0.00847, 0.0214 및 0.0519 mg/L이었다. 그룹 6에 대하여, 암포테리신 B 제제의 모든 그룹 평균 노출 챔버 농도는 암포테리신 B 단독에 대하여 2.22 mg/L 또는 0.694 mg/L이었다.
모든 (성별 합함) 그룹 평균 추정 성취된 비히클 제제의 투여량은 73.56 mg/kg/용량이었다. 암포테리신 B 제제의 모든 (성별 합함) 그룹 평균 추정 성취된 투여량은 그룹 3, 4 및 5 각각에 대하여 1일에 1.89, 12.27 및 28.45 mg/kg이고, 다음날에 0.528, 1.74 및 4.87 mg/kg/일이었다. 암포테리신 B 단독의 모든 (성별 합함) 그룹 평균 추정 성취된 투여량 (분석적으로 결정됨)은 그룹 3, 4 및 5 각각에 대하여 1일에 0.914, 4.78 및 12.36 mg/kg이고, 다음날에 0.256, 0.646 및 1.58 mg/kg이었다. 그룹 6에 대하여, 암포테리신 B 제제의 모든 (성별 합함) 그룹 평균 추정 성취된 투여량은 암포테리신 B 단독에 대하여 68.24 mg/kg/용량 또는 21.64 mg/kg/용량이었다.
입도 분포 데이타는, 비히클 에어로졸 입자의 64.7％가 3.5 ㎛ 미만이고, 질량 중앙 공기역학적 직경 (MMAD)(± 기하 표준 편차 (GSD))가 1.61 ㎛ (3.244)이며, 암포테리신 B 제제 미립자의 81.2％, 60.6％ 및 70.7％가 1일에 3.5 ㎛ 미만이고, 68.2％, 59.0％ 및 83.6％가 다음날에 3.5 ㎛ 미만이고, 그룹 3, 4 및 5 각각에 대하여 MMAD (GSD)가 1일에 1.35 ㎛ (2.382), 1.46 ㎛ (4.508) 및 1.43 ㎛ (2.560)이고, 다음날에 1.42 ㎛ (3.572), 1.89 ㎛ (2.710) 및 0.81 ㎛ (4.329)라는 것을 나타냈다.
암포테리신 B 단독 (분석적으로 결정됨)에 대하여, 미립자의 68.1％, 58.1％ 및 68.6％가 1일에 3.5 ㎛ 미만이고, 66.2％, 55.6％ 및 71.1％가 다음날에 3.5 ㎛ 미만이며, 그룹 3, 4 및 5 각각에 대하여 MMAD (GSD)가 1일에 1.69 ㎛ (2.755), 1.71 ㎛ (3.351) 및 1.55 ㎛ (2.652)이고, 다음날에 1.47 ㎛ (3.599), 2.29 ㎛ (2.525) 및 1.06 ㎛ (6.077)이었다. 그룹 6에 대하여, 입도 데이타는 암포테리신 B 제제 미립자의 57.8％가 3.5 ㎛ 미만이고, MMAD (±GSD)가 2.11 ㎛ (3.089)라는 것을 나타냈다. 암포테리신 B 단독 (분석적으로 결정됨)에 대하여, 미립자의 54.3％가 3.5 ㎛ 미만이고, MMAD (±GSD)가 2.29 ㎛ (2.966)이었다.
미립자는 시험 종에게 호흡가능하다고 고려되었다.
체중, 음식 소비, 안과학, 혈액학, 임상 화학 또는 기관 중량에 대한 부작용은 없었다.
연구 기간 중에 181 마리의 사망이 있었으며, 이들 대부분은 천명, 파열 및 가쁜호흡을 비롯한 호흡 곤란의 임상 증상 징조와 관련되었으며, 이는 모든 암포테리신 B 처리된 그룹의 동물에서 관찰되었다. 1마리는 처리 전에 사망하였으며, 따라서 이는 처리와 관련된 것으로 고려되지 않았다.
암포테리신 B의 투여와 관련된 폐의 부검 소견은 중량, 유착, 비정상적 내용물, 높아진 영역/병소, 옅은 병소, 경화, 뿐만 아니라 짙은 병소 및 짙은, 변색 또는 해면 폐를 포함한다. 비정상적 내용물이 그룹 6 (고용량) 동물 2 마리의 기관 또는 기관지에서 나타났다. 대략 1개월 회복 기간 후, 그룹 3 (저용량)의 암컷 동물 1마리에서 폐 유착이 있었다.
현미경적으로, 암포테리신 B가 투여된 동물의 폐에서의 소견은 폐렴, 흉막염, 폐엽 허탈, 기관지/세기관지 중 관강 삼출물, 기관지 점막 비대, 증가된 염증 세포 침윤, 폐포 염증 및 호산구 침윤, 뿐만 아니라 울혈/출혈을 포함한다. 주연구에서 그룹 3 내지 6의 동물 17/110에서 폐렴/흉막염, 허탈 또는 폐포 염증이 발견되었다.
폐에서의 부검과 조직학 소견, 특히 유착과 흉막염; 중량, 경화, 높아진 영역/병소 또는 비정상적 내용물과 폐렴 간에 상관관계가 있었다. 폐렴에 대해 2차로, 다른 소견으로는 비장 및 간에서의 염증 동반 괴사, 흉골 및 대퇴골에서의 증가된 과립구조혈, 림프 조직의 위축, 말초 간세포 공포형성 및 미만성 부신 피질 세포 비대가 있다.
암포테리신 B 처리된 그룹 간에 이들 소견의 발병률 또는 중증도에 유의한 상이함은 없었다.
대략 1개월 회복 기간 후, 최소 또는 경증 기관 점막 비대가 암포테리신 B가 투여된 몇몇의 동물에서 여전히 존재하였다. 회복 연구에서 그룹 3 및 4의 동물 18 마리 중 한 마리, 즉 동물 344의 폐에 만성 염증 및 흉막염이 있었다. 염증은 림프구 병소 및 색소 대식세포의 축적에 의해 특성화되었다.
독성역학 분석은 최대 혈장 농도가 일반적으로 용량과 함께 증가하고 일반적으로 투여 중단 4 시간 내에 도달하는 것으로 나타냈다. 공기 또는 비히클 대조군 샘플에서 암포테리신 B의 정량가능한 수준이 검출되지 않았다.
결론적으로, 21.64 mg/kg/용량까지의 투여량으로 암포테리신 B를 코로만 투여하는 것은 그룹 5 및 6의 모든 동물을 포함하여 모든 암포테리신 B 처리된 그룹의 많은 동물의 호흡 곤란의 중증 임상 증상 징조 및 조기 중단을 가져왔다. 암포테리신 B의 흡입 투여는 모든 용량에서 관강 삼출물 및/또는 미만성 염증 세포 침윤과 관련된 기관 점막 비대; 및 폐렴, 흉막염, 폐엽 허탈, 기관지세기관지에서의 관강 삼출물, 기관지 점막 비대 및 증가된 염증 세포 침윤, 폐포 염증 및 호산구 침윤, 뿐만 아니라 울혈/출혈이 있는 폐와 관련되어 있다. 대략 1개월 회복 기간 후, 기관 점막 비대 및 폐 염증의 발병률 및 중증도가 감소되었다.
실시예 15
일단위 또는 주단위 투여에 의한 래트에서의 건조 분말 독성학 연구
본 실시예는 두가지 상이한 투여 요법을 이용하여 흡입 투여 후 래트에서 암포테리신 B의 두가지 상이한 건조 분말 배치의 독성을 결정하는 것을 포함한다. 얻은 정보는 후속 독성 연구를 위한 용량 수준 및/또는 용량 요법을 선택하는데 이용하였다.
활성 성분 50 중량％를 함유하는 암포테리신 B 분말을 실시예 2에 기재된 방법을 이용하여 제제화하였다. 얻어진 분말은 하기 표 10에 나타낸 바와 같은 특징을 갖는다. 또한, 도 24에 나타낸 바와 같이, 분말은 본원에서 전체가 참고문헌으로 도입된 U.S. 출원 No. 10/298,177에 나타낸 바와 같은 흡입기 장치를 이용하여 약물-특이적 에어로졸 입도 대 중력 입도 분석에서 측정한 바와 같이 불균질하였다.
API 로트번호 Mfg. API, 결정형％ API 입도, x50 (㎛) 분말 로트번호 분말, 결정형％ 분말 MMAD, 중력 (㎛) 분말 MMAD, 약물 특이성 (㎛)
100370 알파마 11 NA 4001T NA NA 2.8
100581 알파마 48 3.53 4019T 56 2.3 2.8
NA = 이용가능하지 않음
90마리의 수컷 래트를 10개의 용량 그룹으로 배분하고, 하기 표 11에 나타낸 바와 같이 처리하였다.
용량 그룹/처리 1일 표적 제제 용량 수준 (mg/kg) 2일 및 3일 제제 용량 수준 (mg/kg) 8일 및 15일 제제 용량 수준 (mg/kg) 동물 수
1. 비히클 대조군 80 80 N/A 1-9
2. 저용량A 30* 6* N/A 10-18
3. 고용량A 80* 80* N/A 19-27
4. 저용량 2B 30* 6* N/A 28-36
5. 고용량 2B 80* 80* N/A 37-45
6. 비히클 대조군 2 80 N/A 80 46-54
7. 저용량 3A 30* N/A 6* 55-63
8. 고용량 3A 80* N/A 80* 64-71,91
9. 저용량 4B 30* N/A 6* 73-81
10. 고용량 4B 80* N/A 80* 82-90
* = 50 중량％ 암포테리신 B를 함유하는 건조 분말 제제 A = 암포테리신 B 로트번호 4001T를 사용하여 투여함 B = 암포테리신 B 로트번호 4019T를 사용하여 투여함 N/A = 이용가능하지 않음 동물 72 (그룹 9)를 투여 개시 전에 동물 91로 대체하였다.
코만을 노출하는 기술을 이용하여 상기 표 11에 따라 1일 1회 1시간 동안 동물에게 투여하였다.
하기 조사를 수행하였다: 임상 관찰, 체중, 혈액학, 임상 화학, 기관 중량, 조직병리학, 독성역학 및 생물분석 화학.
비히클 제제 에어로졸의 모든 그룹 평균 노출 농도는 그룹 1 및 6 각각에 대하여 2.23 및 2.11 mg/L이었다. 암포테리신 B 제제의 모든 그룹 평균 노출 챔버 농도는 그룹 2, 4, 7 및 9 각각에 대하여 1일에 1.01, 0.88, 1.01 및 0.88 mg/L이고, 다음날에 0.18, 0.17, 0.17 및 0.18 mg/L이었다. 암포테리신 B 제제의 모든 노출 챔버 농도는 그룹 3, 5, 8 및 10 각각에 대하여 2.25, 2.33, 2.51 및 2.41 mg/L이었다.
암포테리신 B 단독의 모든 그룹 평균 노출 챔버 농도 (분석적으로 결정됨)는 그룹 2, 4, 7 및 9 각각에 대하여 1일에 0.353, 0.306, 0.353 및 0.306 mg/L이고, 다음날에 0.0684, 0.0598, 0.0615 및 0.0783 mg/L이었다. 암포테리신 B 단독의 모든 그룹 평균 노출 챔버 농도 (분석적으로 결정됨)는 그룹 3, 5, 8 및 10 각각에 대하여 0.856, 0.927, 0.963 및 0.987 mg/L이었다.
비히클 제제의 모든 그룹 평균 추정 성취된 투여량은 그룹 1 및 6 각각에 대하여 72.79 및 66.34 mg/kg/일이었다. 암포테리신 B 제제의 모든 그룹 평균 추정 성취된 투여량은 그룹 2, 4, 7 및 9 각각에 대하여 1일에 33.44, 29.14, 33.44 및 28.95 mg/kg이고, 다음날에 2.25, 5.55, 5.22 및 5.49 mg/kg이었다. 암포테리신 B 제제의 모든 그룹 평균 추정 성취된 투여량은 그룹 3, 5, 8 및 10 각각에 대하여 74.85, 75.00, 77.81 및 77.41 mg/kg/용량이었다.
암포테리신 B 단독의 모든 그룹 평균 추정 성취된 투여량 (분석적으로 결정됨)는 그룹 2, 4, 7 및 9 각각에 대하여 1일에 11.69, 10.13, 11.69 및 10.07 mg/kg이고, 다음날에 2.25, 1.96, 1.89 및 2.38 mg/kg이었다. 암포테리신 B 단독의 모든 그룹 평균 추정 성취된 투여량 (분석적으로 결정됨)는 그룹 3, 5, 8 및 10 각각에 대하여 24.45, 29.97, 29.91 및 30.60 mg/kg이었다.
입자 분포 데이타는, 그룹 1 및 6 각각에 대하여 비히클 에어로졸 입자의 69.7％ 및 77.6％가 3.5 ㎛ 미만이고, 질량 중앙 공기역학적 직경 (MMAD)(± 기하 표준 편차 (GSD))가 1.38 ㎛ (2.880) 및 1.43 ㎛ (2.281)라는 것을 나타냈다. 그룹 2, 4, 7 및 9 각각에 대하여 1일에 암포테리신 B 제제 미립자의 63.0％, 69.2％, 63.0％ 및 69.2％가 3.5 ㎛ 미만이고, MMAD (GSD)가 1.36 ㎛ (4.603), 1.54 ㎛ (2.502), 1.36 ㎛ (4.603) 및 1.54 ㎛ (2.502)이었다. 그룹 2, 4, 7 및 9 각각에 대하여 다음날에 암포테리신 B 제제 미립자의 77.2％, 69.8％, 71.3％ 및 61.3％가 3.5 ㎛ 미만이고, MMAD (GSD)가 0.79 ㎛ (4.541), 1.75 ㎛ (2.455), 1.56 ㎛ (3.618) 및 2.16 ㎛ (3.228)이었다. 그룹 3, 5, 8 및 10 각각에 대하여 암포테리신 B 제제 미립자의 69.2％, 63.4％, 64.7％ 및 61.8％가 3.5 ㎛ 미만이고, MMAD (GSD)가 0.95 ㎛ (4.344), 1.44 ㎛ (4.312), 1.10 ㎛ (4.759) 및 1.52 ㎛ (4.233)이었다.
암포테리신 B 단독 (분석적으로 결정됨)에 대하여, 그룹 2, 4, 7 및 9 각각에 대하여 1일에 에어로졸 입자의 56.4％, 61.9％, 56.4％ 및 61.9％가 3.5 ㎛ 미만이고, MMAD (GSD)가 1.58 ㎛ (3.563), 1.71 ㎛ (3.309), 1.58 ㎛ (3.563) 및 1.71 ㎛ (3.309)이었다. 그룹 2, 4, 7 및 9 각각에 대하여 다음날에 에어로졸 입자의 66.8％, 57.4％, 62.0％ 및 63.0％가 3.5 ㎛ 미만이고, MMAD (GSD)가 1.09 ㎛ (4.181), 1.95 ㎛ (3.386), 1.42 ㎛ (3.372) 및 1.83 ㎛ (3.075)이었다.
그룹 3, 5, 8 및 10 각각에 대하여, 암포테리신 B 단독 (분석적으로 결정됨)의 61.9％, 57.6％, 63.8％ 및 61.5％가 3.5 ㎛ 미만이고, MMAD (GSD)가 1.30 ㎛ (4.208), 1.77 ㎛ (3.782), 1.20 ㎛ (4.608) 및 1.58 ㎛ (4.097)이었다.
암포테리신 B의 흡입과 관련된 부검 소견은 폐의 짙은 병소, 짙은, 붉어진 또는 해면 폐, 기관 및 비대 기관지 중 비정상적 내용물 및 경부 림프절을 포함한다. 또한, 팽창된 위 및 장은 동물이 조기 사망했음을 나타냈다.
조직학적 평가는 용량 요법 둘 모두에서 암포테리신 B의 로트번호 둘 모두로 흡입에 의해 처리된 대부분의 동물에서 기관에서 미만성 점막 비대를 나타냈다. 제1 용량 요법 (1, 2 및 3일에 암포테리신 B 흡입)과 비교하여 제2 용량 요법 (1, 8 및 15일에 암포테리신 B 흡입)에 의하여 점막 비대의 중증도가 증가되었다. 본 소견의 발병률 및 중증도의 측면에서 로트번호 4001T (A)와 로트번호 4019T (B) 간의 유의적 상이함은 없었다.
기관에서의 점막하 염증 세포 침윤 및 관강 삼출물은 흡입에 의한 암포테리신 B의 투여에 의해서도 예상되었다. 이들 소견은 제2 용량 요법 (1, 8 및 15일에 암포테리신 B 흡입)을 이용하여 처리된 동물의 기관에서 대부분 관찰되었다. 제1 용량 요법 그룹에서 이들 증상의 더 낮은 발병률 및 명백한 용량-반응성 관계의 부재는 단기간의 상기 요법 (1, 2 및 3일에 암포테리신 B 흡입, 4일에 동물의 제거)으로 인한 것으로 생각되었다.
기관지 관강 삼출물, 기관지폐렴 및 기관지주위/세기관지주위 염증 또는 염증 세포 침윤이 폐에 존재하였으며, 이는 또한 암포테리신 B의 투여에 의한 것으로 예상되었다. 기관지폐렴이 있는 동물에서, 기관지 삼출물이 또한 존재하였으며, 기관지폐렴은 더 큰 기도의 전색으로부터 얻어진 2차 감염에 의해 유발된 것이라고 생각되었다. 제1 용량 요법 그룹에서 폐 중 기관지 관강 삼출물의 더 낮은 발병률은 단기간의 상기 요법에 의한 것이라고 생각되었다. 폐 소견의 발병률은 일반적으로 저용량 그룹에서보다 고용량 그룹에서 더 높았다.
독성역학 분석은 혈장 농도가 용량과 함께 증가하였음을 나타냈다. 비히클 대조군 샘플에서 암포테리신 B의 정량가능한 수준이 검출되지 않았다.
결론적으로, 30.60 mg/kg/용량까지의 투여량으로 암포테리신 B를 코로만 투여하는 것은 동물 3마리에서 호흡 곤란 및/또는 자극의 임상 증상 징조 및 조기 사망의 결과를 가져왔다. 암포테리신 B의 흡입 투여는 모든 용량에서 기관에서의 미만성 점막 비대, 점막하 염증 세포 침윤, 기관 및 기관지에서의 관강 삼출물, 기관지폐렴 및 기관지주위/세기관지주위 염증 또는 폐에서의 염증 세포 침윤과 관련되어 있다. 이들 소견의 중증도는 제2 용량 요법 (1, 8 및 15일에 암포테리신 B 흡입)에서 증가되었다. 상기 폐 소견은 폐 중량의 명백한 용량-관련 증가와 관련되어 있으며, 이는 제2 요법을 이용하여 투여된 동물에서보다 유의적이었다. 상기 증가는 암포테리신 B 로트번호 4001T로 처리된 동물에서 가장 유의적이었다.
실시예 16
두가지 건조 분말의 일단위 또는 주단위 투여에 의한 래트에서의 독성
본 실시예는 두가지 상이한 투여 요법을 이용한 흡입 투여 후 래트에서 암포테리신 B의 두가지 상이한 건조 분말 배치의 독성을 결정하는 것을 포함한다.
활성 성분 50 중량％를 함유하는 암포테리신 B 분말을 실시예 8에 기재된 방법을 이용하여 제제화하였다. 얻어진 분말은 하기 표 12에 나타낸 바와 같은 특징을 갖는다.
API, 결정형％ API 입도, x50 (㎛) ABIP 로트번호 ABIP, 결정형％ ABIP MMAD, 중력 (㎛) ABIP MMAD, 약물 특이성 (㎛)
94 NA N020226 100 2.3 2.3
6 3.05 N020227 4 2.5 3.2
NA = 이용가능하지 않음
120마리 수컷 래트를 10개의 용량 그룹으로 배분하고, 하기 표 13에 나타낸 바와 같이 처리하였다.
용량 그룹/처리 1일 표적 제제 용량 수준 (mg/kg) 2일 및 3일 제제 용량 수준 (mg/kg) 8일 및 15일 제제 용량 수준 (mg/kg) 동물 수/지정
1. 비히클 대조군 30 6 N/A 주연구 독성역학 1-6 7-12
2. 저용량A 10* 2* N/A 주연구 독성역학 13-18 19-24
3. 고용량A 30* 6* N/A 주연구 독성역학 25-30 31-36
4. 저용량 2B 10* 2* N/A 주연구 독성역학 37-42 43-48
5. 고용량 2B 30* 6* N/A 주연구 독성역학 49-54 55-60
6. 비히클 대조군 2 30 N/A 6 주연구 독성역학 61-66 67-72
7. 저용량 3A 10* N/A 2* 주연구 독성역학 73-78 79-84
8. 고용량 3A 30* N/A 6* 주연구 독성역학 85-90 91-96
9. 저용량 4B 10* N/A 2* 주연구 독성역학 97-102 103-108
10. 고용량 4B 30* N/A 6* 주연구 독성역학 109-114 115-120
* = 50 중량％ 암포테리신 B를 함유하는 건조 분말 제제 A = 암포테리신 B 로트번호 N020226 (고결정형)을 사용하여 투여함 B = 암포테리신 B 로트번호 N020227 (고무정형)을 사용하여 투여함 N/A = 이용가능하지 않음 여분 동물을 121-126으로 숫자를 매겼다.
코만을 노출하는 기술을 이용하여 상기 표 13에 따라 1일 1회 1시간 동안 동물에게 투여하였다.
하기 조사를 수행하였다: 임상 관찰, 체중, 호흡 측정, 혈액학, 임상 화학, 조직병리학, 독성역학 및 생물분석 화학.
비히클 제제의 모든 그룹 평균 노출 챔버 농도는 그룹 1 및 6 각각에 대하여 1일에 0.91 mg/L, 다음날에 0.22 및 0.17 mg/L이었다. 암포테리신 B 제제의 모든 그룹 평균 노출 챔버 농도는 그룹 2, 4, 7 및 9 각각에 대하여 1일에 0.31, 0.36, 0.31 및 0.36 mg/L이고, 다음날에 0.056, 0.078, 0.073 및 0.088 mg/L이고, 그룹 3, 5, 8 및 10 각각에 대하여 1일에 1.04, 0.94, 1.04 및 0.94 mg/L이고, 다음날에 0.18, 0.21, 0.18 및 0.19 mg/L이었다.
암포테리신 B 단독의 모든 그룹 평균 노출 챔버 농도 (분석적으로 결정됨)는 그룹 2, 4, 7 및 9 각각에 대하여 1일에 0.125, 0.124, 0.125 및 0.124 mg/L이고, 다음날에 0.0166, 0.0249, 0.0277 및 0.0278 mg/L이고, 그룹 3, 5, 8 및 10 각각에 대하여 1일에 0.455, 0.330, 0.455 및 0.330 mg/L이고, 다음날에 0.0686, 0.0717, 0.0724 및 0.0687 mg/L이었다.
비히클 제제의 모든 그룹 평균 추정 성취된 투여량은 그룹 1 및 6 각각에 대하여 1일에 29.29 및 29.40 mg/kg이고, 다음날에 6.87 및 4.98 mg/kg이었다. 암포테리신 B 제제의 모든 그룹 평균 추정 성취된 투여량은 그룹 2, 4, 7 및 9 각각에 대하여 1일에 10.03, 11.63, 9.93 및 11.65 mg/kg이고, 다음날에 1.80, 2.50, 2.19 및 2.66 mg/kg이고, 그룹 3, 5, 8 및 10 각각에 대하여 1일에 33.48, 30.54, 33.83 및 30.58 mg/kg이고, 다음날에 5.75, 6.76, 5.47 및 5.81 mg/kg이었다.
암포테리신 B 단독의 모든 그룹 평균 추정 성취된 투여량 (분석적으로 결정됨)는 그룹 2, 4, 7 및 9 각각에 대하여 1일에 4.04, 4.01, 4.00 및 4.01 mg/kg이고, 다음날에 0.53, 0.79, 0.83 및 0.84 mg/kg이고, 그룹 3, 5, 8 및 10 각각에 대하여 1일에 14.65, 10.72, 14.80 및 10.74 mg/kg이고, 다음날에 2.19, 2.31, 2.20 및 2.11 mg/kg이었다.
입자 분포 데이타는, 비히클 에어로졸 입자의 70.8％가 1일에 3.5 ㎛ 미만이고, 그룹 1 및 6 각각에 대하여 다음날에 77.1％ 및 75.6％가 3.5 ㎛ 미만이고, 질량 중앙 공기역학적 직경 (MMAD)(± 기하 표준 편차 (GSD))가 1일에 1.56 ㎛ (2.832)이고 그룹 1 및 6 각각에 대하여 다음날에 0.84 ㎛ (3.446) 및 1.24 (2.948)이고, 그룹 2, 4, 7 및 9 각각에 대하여 1일에 암포테리신 B 제제 에어로졸 입자의 65.1％, 75.7％, 65.1％ 및 75.7％가 3.5 ㎛ 미만이고, 다음날에 52.2％, 79.4％, 65.8％ 및 75.2％가 3.5 ㎛ 미만이고, MMAD (GSD)가 1일에 1.77 ㎛ (3.787), 2.06 ㎛ (2.805), 1.77 ㎛ (3.787) 및 2.06 ㎛ (2.805)이고, 다음날에 2.88 ㎛ (2.269), 1.81 ㎛ (2.540), 1.97 ㎛ (2.719) 및 2.14 ㎛ (2.288)이라는 것을 나타냈다. 그룹 3, 5, 8 및 10 각각에 대하여 암포테리신 B 제제 미립자의 72.0％, 78.9％, 72.0％ 및 78.9％가 1일에 3.5 ㎛ 미만이고, 68.6％, 76.0％, 72.4％ 및 77.5％가 다음날에 3.5 ㎛ 미만이고, MMAD (GSD)가 1일에 2.07 ㎛ (2.368), 1.87 ㎛ (2.464), 2.07 ㎛ (2.368) 및 1.87 ㎛ (2.464)이고, 다음날에 1.67 ㎛ (3.466), 1.77 ㎛ (2.378), 1.42 ㎛ (2.965) 및 1.40 ㎛ (2.911)이었다.
암포테리신 B 단독 (분석적으로 결정됨)에 대하여, 그룹 2, 4, 7 및 9 각각에 대하여 미립자의 70.4％, 72.6％, 70.4％ 및 72.6％가 1일에 3.5 ㎛ 미만이고, 68.0％, 75.3％, 77.3％ 및 63.0％가 다음날에 3.5 ㎛ 미만이고, MMAD (GSD)가 1일에 1.80 ㎛ (2.563), 2.06 ㎛ (2.702), 1.80 ㎛ (2.563) 및 2.06 ㎛ (2.702)이고, 다음날에 2.05 ㎛ (2.230), 2.01 ㎛ (2.752), 1.99 ㎛ (2.005) 및 2.60 ㎛ (2.463)이었다. 그룹 3, 5, 8 및 10 각각에 대하여 미립자의 55.4％, 69.9％, 68.0％ 및 69.6％가 1일에 3.5 ㎛ 미만이고, 67.9％, 63.6％, 67.8％ 및 63.3％가 다음날에 3.5 ㎛ 미만이고, MMAD (GSD)가 1일에 2.74 ㎛ (2.116), 2.03 ㎛ (2.788), 2.05 ㎛ (2.230) 및 2.03 ㎛ (2.788)이고, 다음날에 1.81 ㎛ (2.428), 1.94 ㎛ (3.310), 1.92 ㎛ (2.402) 및 2.04 ㎛ (3.236)이었다.
독성역학 분석은 암포테리신 B의 혈장 농도가 용량과 함께 증가하였음을 나타냈다. 비히클 대조군 샘플에서 암포테리신 B의 정량가능한 수준이 검출되지 않았다.
암포테리신 B의 흡입과 관련된 중요한 부검 소견은 없었다.
조직학적 평가는 용량 요법 둘 모두에서 암포테리신 B의 건조 분말 배치 둘 모두로 처리된 많은 동물에서 미만성 점막 비대를 나타냈다. 암포테리신 B N020226 (고결정형)과 비교하여 암포테리신 B N020227 (고무정형)에 의한 비대의 발병률 및 중증도가 증가하였다. 제1 용량 요법 (1, 2 및 3일)과 비교하여 제2 용량 요법 (1, 8 및 15일)에 의하여 비대의 발병률 및 중증도가 거의 증가되지 않았다.
미만성 기관 염증이 또한 암포테리신 B의 흡입에 의해 예상되었다. 이들 병변의 발병률 및 중증도는 암포테리신 B N020226 (고결정형)과 비교하여 암포테리신 B N020227 (고무정형)에 의하여 증가하였다. 병변의 발병률이 제1 용량 요법 (일단위)과 비교하여 제2 용량 요법 (주단위)에 의하여 감소되었다.
기관 및 기관지 관강 삼출물은 암포테리신 B N020227 (고무정형)으로 처리된 동물에서만 발견되었다.
결론적으로, 14.80 mg/kg까지의 투여량으로 암포테리신 B (단독)를 코로만 투여하는 것은 호흡 곤란의 임상 증상 징조를 가져왔다. 1, 2 및 3일 또는 1, 8 및 15일에 암포테리신 B 건조 분말 제제 N020226 (고결정형) 및 N020227 (무정형)의 흡입은 기관 및 기관지 점막 비대, 기관 염증, 기관지 점막 염증 세포 침윤 및 기관 및 기관지 관강 삼출물과 관련되어 있다. 암포테리신 B N020226 (고결정형)과 비교하여 암포테리신 B N020227 (무정형)에 의해서 상기 소견의 발병률 및 중증도가 증가되었다. 제1 용량 요법 (1, 2 및 3일)과 비교하여 제2 용량 요법 (1, 8 및 15일)에 의하여 비대의 발병률 및 중증도가 거의 증가되지 않았으나, 기관 염증의 중증도 및 발병률은 감소되었다. 암포테리신 B N020227 (고무정형)의 제1 또는 제2 요법으로 처리된 고용량 및 저용량 그룹 간의 상이함은 거의 없었다. 용량 요법 둘 모두에서 암포테리신 B N020226 (고결정형)로 처리된 저용량 그룹에서 중증도 및 발병률의 감소 효과가 거의 없었다.
실시예 17
두가지 건조 분말의 일단위 또는 주단위 투여에 의한 개에서의 독성
본 실시예는 흡입 경로에 의한 매주 1회 투여 후 비글개에서의 암포테리신 B의 두가지 상이한 건조 분말 배치의 독성을 결정하는 것을 포함한다.
활성 성분 50 중량％를 함유하는 암포테리신 B 분말을 실시예 8에 기재된 방법을 이용하여 제제화하였다. 얻어진 분말은 하기 표 14에 나타낸 바와 같은 특징을 갖는다.
API, 결정형％ API 입도, x50 (㎛) 분말 로트번호 분말, 결정형％ 분말 MMAD, 중력 (㎛) 분말 MMAD, 약물 특이성 (㎛)
94 NA N020226 100 2.3 2.3
6 3.05 N020227 4 2.5 3.2
NA = 이용가능하지 않음
4마리 수컷 및 4마리 암컷 비글개를 4개의 용량 그룹으로 배분하고, 하기 표 15에 나타낸 바와 같이 처리하였다.
용량 그룹/처리 1일 표적 제제 용량 수준 (mg/kg) 8일 및 15일 제제 용량 수준 (mg/kg) 동물 수/성별
1. 비히클 대조군 30 6 1M, 5F
2. 저용량A 10* 2* 2M, 6F
3. 고용량A 30* 6* 3M, 7F
4. 고용량B 30* 6* 4M, 8F
* = 50 중량％ 암포테리신 B를 함유하는 건조 분말 제제 A = 암포테리신 B 로트번호 N020226 (고결정형)을 사용하여 투여함 B = 암포테리신 B 로트번호 N020227 (고무정형)을 사용하여 투여함
꼭 맞는 안면 마스크 (구강 튜브에 맞음) 시스템을 이용하여 상기 표 15에 따라 1일 30분 동안 동물에게 투여하였다.
하기 조사를 수행하였다: 임상 관찰, 체중, 음식 소비, 혈액학, 임상 화학, 호흡 측정 (일회호흡량, 호흡률, 매분호흡량), 조직병리학, 독성역학 및 생물분석 화학.
비히클 제제의 모든 그룹 평균 노출 챔버 농도는 1일에 1.34 mg/L, 다음날에 0.31 mg/L이었다. 암포테리신 B 제제의 모든 그룹 평균 노출 챔버 농도는 그룹 2, 3 및 4 각각에 대하여 1일에 0.73, 1.80 및 1.58 mg/L이고, 다음날에 0.13, 0.33 및 0.33 mg/L이었다. 암포테리신 B 단독의 모든 그룹 평균 노출 챔버 농도 (분석적으로 결정됨)는 그룹 2, 3 및 4 각각에 대하여 1일에 0.236, 0.521 및 0.769 mg/L이고, 다음날에 0.0427, 0.120 및 0.154 mg/L이었다.
비히클 제제의 모든 (성별 합함) 그룹 평균 추정 성취된 용량 수준은 1일에 29.3 mg/kg이고, 다음날에 6.9 mg/kg이었다. 암포테리신 B 제제의 모든 (성별 합함) 그룹 평균 추정 성취된 용량 수준은 그룹 2, 3 및 4 각각에 대하여 1일에 16.3, 45.1 및 33.0 mg/kg이고, 다음날에 2.9, 8.1 및 6.7 mg/kg/일이었다. 암포테리신 B 단독의 모든 (성별 합함) 그룹 평균 추정 성취된 용량 수준 (분석적으로 결정됨)은 그룹 2, 3 및 4 각각에 대하여 1일에 5.3, 13.0 및 16.0 mg/kg이고, 다음날에 0.96, 3.0 및 3.2 mg/kg이었다.
입자 분포 데이타는, 비히클 에어로졸 입자의 81.1％가 1일에 5 ㎛ 미만이고, 다음날에 78.9％가 5 ㎛ 미만이고, 질량 중앙 공기역학적 직경 (MMAD)(± 기하 표준 편차 (GSD))가 1일에 0.84 ㎛ (4.553), 다음날에 1.41 ㎛ (3.104)이라는 것을 나타냈다. 그룹 2, 3 및 4 각각에 대하여 암포테리신 B 제제 미립자의 69.0％, 83.1％ 및 43.3％가 1일에 5 ㎛ 미만이고, 85.9％, 67.6％ 및 57.3％가 다음날에 5 ㎛ 미만이고, MMAD (GSD)가 1일에 1.96 ㎛ (2.406), 1.17 ㎛ (2.725) 및 3.26 ㎛ (2.789)이고, 다음날에 0.69 ㎛ (4.623), 1.62 ㎛ (3.137) 및 2.85 ㎛ (2.692)이었다. 암포테리신 B 단독 (분석적으로 결정됨)에 대하여, 그룹 2, 3 및 4 각각에 대하여 미립자의 57.7％, 73.6％ 및 46.2％가 1일에 5 ㎛ 미만이고, 72.6％, 63.6％ 및 62.8％가 다음날에 5 ㎛ 미만이고, MMAD (GSD)가 1일에 2.20 ㎛ (2.644), 1.79 ㎛ (2.378) 및 3.32 ㎛ (2.482)이고, 다음날에 1.96 ㎛ (2.507), 2.00 ㎛ (2.526) 및 2.48 ㎛ (2.168)이었다.
체중, 혈액학, 임상 화학, 음식 소비 또는 호흡 측정 파라미터에서 유의적 변화가 관찰되지 않았다.
모든 부검 소견은 이 나이의 개에서 자발적으로 일어나는 배경 소견이었다. 암포테리신 B의 투여에 의한 부검 소견은 없었다.
모든 조직병리학 소견은 이 나이의 개에서 자발적으로 일어나는 배경 소견이었다. 암포테리신 B의 투여에 의한 조직병리학 소견은 없었다.
독성역학 분석은 암포테리신 B의 정량가능한 수준이 모든 처리된 동물 (그룹 4의 동물 4M을 제외)의 혈장에서 검출된 것을 나타냈다. 검출된 수준은 모든 처리된 용량 그룹에 걸쳐 비교가능하였다. 암포테리신 B의 정량가능한 수준은 비히클 대조군 샘플에서 검출되지 않았다.
결론적으로, 8.2 (3.2) mg/kg까지의 용량으로 비글개에게 암포테리신 B 제제 (또는 분석적으로 결정된 암포테리신 B)를 매주 1회 흡입 투여하는 것은 모든 용량 그룹 (비히클 대조군 포함)에서의 침분비와 관련되어 있다. 붉어진 잇몸을 비롯한 부수적인 임상 증상이 또한 그룹 2 및 4의 개개의 동물에서 관찰되었으며, 붉어진 귀가 그룹 2의 동물 1마리에서 관찰되었다. 음식의 구토 및 역류는 그룹 3의 동물 1마리에서 관찰되었다. 체중, 음식 소비, 혈액학, 임상 화학 또는 호흡 측정 프로파일에서 관찰된 변화는 없었다. 암포테리신 B의 투여에 의한 부검 또는 조직병리학 소견은 없었다. 입도 분포 측정은 고용량 수준의 암포테리신 B 로트번호 N020227 (고무정형)이 암포테리신 B 로트번호 N020226 (고결정형)보다 유의적으로 더 큰 입도를 갖는 것으로 나타냈다.
실시예 18
래트에서의 14-일 흡입 독성 연구
본 실시예는 실시예 2의 방법을 이용하여 제조된 암포테리신 B 제제의 14-일 독성학 연구를 포함한다. 래트 80마리에게 0 mg/kg (오직 공기 대조군 또는 비히클), 2.5 mg/kg, 10 mg/kg 또는 25 mg/kg의 표적 용량으로 14일 이상 1일 60 분 동안 코로만 투여하는 기술을 이용하여 투여하였다.
회복 동물을 14-일 투여 후 회복 기간 동안 유지하였다. 연구 1일 및 14일에, 독성역학 분석을 위한 혈액 샘플을 투여전, 투여 2시간 후 및 투여 4시간 후에 비히클만 투여되는 동물 및 고용량 (25 mg/kg) 그룹의 동물로부터 얻었다. 또한, 독성역학 혈액 샘플을 14-일 회복 기간 동안 수컷에 대해서는 회복 7일 및 14일, 암컷에 대해서는 더 적은 체중으로 인해 회복 14일에만 얻었다.
모든 연구 동물을 14-일 처리 기간의 완료일 (15일)에 또는 14-일 회복 기간의 완료일 (29일)에 상세하게 부검하였다. 부검 중에, 독성역학 분석을 위한 폐 조직 샘플을 각각의 동물로부터 얻었다. 혈장 중 암포테리신 B 농도를 액체 크로마토그래피-직렬 질량 분광광도계 (LC-MS/MS) 방법 (더 낮은 정량 한계 [LLQ] = 10 ng/mL)을 이용하여 결정하고, 폐 조직 중 암포테리신 B 농도를 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) 방법 및 가시광선 검출 (LLQ = 4 ㎍/g)을 이용하여 결정하였다.
암포테리신 B 분말을 받은 샘플링된 모든 동물의 혈장 및 폐 조직에서 암포테리신 B가 검출가능하였다. 혈장 또는 폐에서의 농도-시간 프로파일은 두 성별에서 유사하고, 용량에 독립적이었다.
암포테리신 B는 투여 14일 후 혈장에 다소 축적되지 않았으며, 정맥내 (IV) 투여 후 암포테리신 B 제거 반감기에 대한 발표된 값에 의해 예상되는 바와 같이 감소되었다. 혈장 Cmax 값은 리포솜 암포테리신 B의 비교가능한 IV 용량의 1/1000 내지 1/3000이었다.
폐 농도는 증가되는 용량과 함께 증가하였으나, 비례보다는 덜 증가하였다. 투여 종료시 평균 폐 농도는 리포솜 암포테리신 B의 비교가능한 용량의 IV 투여 후 폐 중 암포테리신 B에 대해 보고된 농도 보다 10 내지 30배 높았다. 본 실시예에서의 폐 조직 노출은 장기간 IV 투여 후 이미 보고된 것보다 더 컸다. 회복 기간 중에, 폐 농도는 22 및 34일의 제거 반감기 (t1 /2) 값을 나타내는 비율로 1.1 및 12.4 mg/kg 용량 수준에서 각각 감소하였으며, 이는 리포솜 암포테리신 B의 IV 및 흡입 투여 후 폐 중 암포테리신 B의 농도에 대하여 보고된 바와 유사하였다.
실시예 19
개에서의 14-일 흡입 독성 연구
본 실시예는 실시예 2의 방법을 이용하여 제조된 암포테리신 B 제제의, 총 28마리의 개 (14 M, 14 F)에서 14일간 연속하여 흡입 투여 후 폐 및 전신 독성, 및 14-일 회복 기간 후 고용량 수준에서 임의의 효과의 가역성의 분석을 포함한다.
활성 약물을 1.4, 5.6 및 11.5 mg/kg의 용량으로 폐쇄 안면 마스크 시스템을 이용하여 1일 30 분 동안 투여하였다. 연구 1 및 14일에, 독성역학 분석을 위한 혈액 샘플을 노출전 및 노출 후 2, 4, 8, 12 및 24시간 및 14-일 회복 기간 동안 매일 비히클 및 고용량 그룹의 동물로부터 얻었다. 주연구 동물을 15일에 마취시켜 부검하고, 회복 동물을 29일에 마취시켜 부검하고, 이 때 각각의 동물의 우측 전엽을 독성역학 분석을 위하여 얻었다. 혈장 중 암포테리신 B 농도를 액체 크로마토그래피-직렬 질량 분광광도계 (LC-MS/MS) 방법 (더 낮은 정량 한계 [LLQ] = 10 ng/mL)을 이용하여 결정하고, 폐 조직 중 암포테리신 B 농도를 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) 방법 및 가시광선 검출 (LLQ = 4 ㎍/g)을 이용하여 결정하였다.
암포테리신 B는 투여 14일 후 혈장에 축적되었으며, 본 실시예에서 관찰된 혈장 제거 반감기 값에 의해 예상되는 바와 같이 감소되었다. 11.5 mg/kg을 받은 개의 평균 혈장 Cmax 값은 IV 암포테리신 데스옥시콜레이트를 받은 개에 대하여 보고된 값의 1/25이고, 동일한 기간 매일 IV 리포솜 암포테리신 B를 투여받은 개에 대하여 보고된 값의 1/1000이었다.
폐 농도는 증가되는 용량과 함께 증가하였으나, 비례보다는 덜 증가하였다. 노출 기간 종료시 평균 암포테리신 B 폐 농도는 암포테리신 B 데스옥시콜레이트 또는 리포솜 암포테리신 B의 IV 투여 후 보고된 농도 보다 22 내지 44배 높았다. 본 개 연구에서의 폐 조직 노출은 장기간 IV 투여 후 이미 보고된 것보다 더 컸다. 회복 기간 중에, 폐 농도는 18.8일의 명백한 제거 반감기를 나타내는 비율로 감소하였으며, 이는 래트에게 리포솜 암포테리신 B의 IV 및 흡입 투여 후 보고된 바와 유사하였다.
실시예 20
약물 생성물 안정성 연구
암포테리신 B 분말의 안정성을 하기 표 16에 나타낸 바와 같이 평가하였다. 각각의 경우에, 분말을 HPMC 캡슐에 포함시켰다. 캡슐을 25 cc HDPE 병에 두었다. 각각의 병을 바깥 파우치에 건조제가 있는 이중-파우치에 넣었다.
로트번호 강도 (중량％) 로트번호 표적 충전 중량 (캡슐 당 분말 mg) 2 내지 8℃(mos.)에서 이용가능한 데이타
10017 5 9.43 18
10029 50 9.52 18
10247 50 10.62 9
이들 안정성 관찰의 요약 및 결론을 아래 제공한다.
외관
3개의 로트번호 모두가 모든 시험 시점 및 모든 조건에서 외관에 대한 허용 기준을 만족시켰다.
함량
5 중량％ 암포테리신 B: 로트번호 10017에 대하여 초기 결과는 분말 mg 당 암포테리신 B 0.053 mg이었다. 18 개월의 기간에 걸쳐서, 결과는 저장 조건 모두에서 분말 mg 당 암포테리신 B 0.049 내지 0.053 mg의 범위이었다.
50 중량％ 암포테리신 B: 로트번호 10029에 대하여 초기 결과는 분말 mg 당 암포테리신 B 0.507 mg이었다. 18 개월의 기간에 걸쳐서, 결과는 저장 조건 모두에서 분말 mg 당 암포테리신 B 0.469 내지 0.508 mg의 범위이었다.
로트번호 10247에 대하여 초기 결과는 분말 mg 당 암포테리신 B 0.470 mg이었다. 2 내지 8℃에서 9 개월 저장 후, 결과는 분말 mg 당 암포테리신 B 0.448 내지 0.446 mg이었다. 25℃/60％RH에서 1 개월, 3 개월 및 6 개월 저장 후, 각각 분말 mg 당 암포테리신 B 0.441, 0.399 및 0.385 mg이었다.
습기
로트번호 3개에 대한 초기 결과는 3 내지 5 중량％의 범위이었다. 물 함량은 정상 및 가속 저장 조건 모두에서 저장 후 3 내지 6 중량％ 내의 범위이었다.
방사 용량
모든 로트번호에 대한 초기 평균 ED는 89 내지 94％ (8.9 mg/캡슐 내지 10.0 mg/캡슐)의 범위이었다. 정상 및 가속 조건에서 저장 후 결과는 88 내지 96％ (8.8 내지 10.2 mg/캡슐)의 범위이었다.
잔류 퍼플루브론 ( PFOB )
PFOB 분석을 캡슐에 충전 전에 벌크 분말 상에서 수행하였다. 시험된 모든 로트번호로부터의 벌크 분말에 대한 결과는 < 0.1 중량％이었다. PFOB를 로트번호 10017 및 10029에 대하여 12 개월 시점에 시험하였다. 수준은 < 0.05 내지 0.1 중량％이었다.
호기성 계수 및 특이적 병원체
미생물 한계 시험을 모든 로트번호에 대한 초기 시험 시점에 수행하였다. 또한, 로트번호 10017 및 10029에 대하여 25℃/60％RH에서 12 개월 저장 후 시험을 수행하였으며, 허용 기준을 만족시켰다.
순도
모든 로트번호에 대한 초기 영역 표준화된 주 피크 순도는 93.6 내지 96.4％의 범위이었다. 정상 및 가속 조건에서 저장 중에, 주 피크 순도는 94.0 내지 96.5％의 범위이었다.
에어로졸 입도
MMAD: 로트번호에 대한 질량 중앙 공기역학적 직경 (MMAD)의 초기 결과는 2.7 내지 3.0 ㎛의 범위이었다. 정상 및 가속 조건에서 저장 중에, MMAD는 2.6 내지 3.1 ㎛의 범위이었다.
결론
본원에 나타낸 안정성 결과는 5 중량％ 암포테리신 B 분말 (10 mg) 및 50 중량％ 암포테리신 B 분말 (10 mg)이 안정하고, 2 내지 8℃에서 포장 및 저장 시 외관, 암포테리신 B 함량, 순도, 물 함량, 미생물 속성 및 에어로졸 성능을 비롯한 허용가능한 생성물 속성을 나타내는 것으로 나타났다.
실시예 21
높은 습도에 노출 후 성능
본 실시예는 캡슐이 70％ RH에서 파우치에서 제거되고 방사 용량 허용 기준 (％ED ≥ 85％ 및 ED ≥ 8.5 mg)을 여전히 만족시킬 수 있는 적절한 시간 기간을 정의하는 것을 포함한다.
두가지 제제를 시험하였다: 5 중량％ 암포테리신 B 분말 (로트번호 X1429) 및 50 중량％ 암포테리신 B 분말 (로트번호 N020242). 제제를 파우치에 함유된 캡슐 내에 함유시켰다. ED를 결정하기 위하여, 본원에서 전체가 참고문헌으로 도입된 U.S. 출원 번호 10/298,177에 나타낸 바와 같은 흡입기 장치를 이용하였다. 장치를 25℃/70％RH에서 평형에 도달시켰다.
캡슐을 특정 간격 및 실시 전에 25℃/70％RH에 노출시켰다. 하기 표 17에 나타낸 바와 같이 제제 당 총 10회 ED 실시 동안 10 시점에서 ED를 측정하였다.
Figure 112006095172914-PCT00004
로트번호 N020242에 대한 결과를 하기 표 18에 나타낸다.
Figure 112006095172914-PCT00005
로트번호 X1249에 대한 결과를 하기 표 19에 나타낸다.
Figure 112006095172914-PCT00006
상기 데이타는 높은 습도에 증가된 노출과 ED 성능 간에 상관관계가 없음을 나타낸다. 평균 ED 성능은 높은 습도 환경하에 감소하지만, 허용 기준을 여전히 만족시킨다. 로트번호 N020042 (50 중량％ 제제)의 평균 ED 성능은 허용 기준을 만족시키나, 모든 개개의 ED는 ≥ 85％ 및 ≥ 8.5 mg가 아니었다.
선택된 실시예의 요약
선택된 실시예의 요약을 하기 표 20에 나타낸다.
실시예 종 (수/그룹) 분말 제제의 제제 용량의 평균 흡입된 용량 수준 (활성 약물의 용량) 유의적 소견
14 래트 lOM/lOF(주) 5M/5F(회복) 18M/18F(TK) 1일 용량 수준 8, 15, 22 및 29일
0 (공기 대조군) 0 (공기 대조군) 없음
73.6(O;비히클)mg/kg 73.6(O;비히클)mg/kg 없음 [회복:없음]
1.9(0.9) mg/kg [저용량] 0.5(0.26) mg/kg 28일까지 약 35％ 이환율 또는 사망률 임상 증상: 호흡 효과 (천명, 가쁜호흡). 육안 부검 관찰: 폐: 유착, 병소 (짙은), 변색 또는 해면 폐. 조직병리학: 기관; 최소-내지-중등도 점막 비대, 염증 세포 침윤. 폐; 염증 세포 침윤, 울혈/출혈. [회복: 최소 기관 점막 비대]
12.3(4.8) mg/kg [mid-1용량] 1.7(0.65) mg/kg 28일까지 약 26％ 이환율 또는 사망률 임상 증상: 호흡 효과 (천명, 가쁜호흡). 육안 부검 관찰: 폐: 병소 (짙은), 경화, 변색 또는 해면 폐. 조직병리학: 기관; 최소-내지-중등도 점막 비대, 염증 세포 침윤 및 관강 삼출물. 폐; 중등도 기관지 점막 비대, 관강 삼출물, 울혈/출혈, 흉막염 및 폐렴. [회복: 조직병리학: 최소 기관 점막 비대]
실시예 종 (수/그룹) ABIP 제제의 제제 용량의 평균 흡입된 용량 수준 (활성 약물의 용량) 유의적 소견
14 래트 lOM/lOF(주) 5M/5F(회복) 18M/18F(TK) 1일 용량 수준 8, 15, 22 및 29일
28.5(12.4) mg/kg [mid-2용량] 4.9(1.6) mg/kg 19일까지 100％ 이환율 또는 사망률 임상 증상: 호흡 효과 (천명, 가쁜호흡). 육안 부검 관찰: 폐: 비정상적 내용물, 병소 (옅은 또는 짙은), 변색 및 해면 폐. 기관에서의 점막. 조직병리학: 기관; 최소-내지-중등도 점막 비대. 폐; 최소-내지-중등도 기관지 점막 비대, 관강 삼출물, 염증 세포 침윤, 울혈/출혈, 흉막염 및 폐렴. [회복: 생존 동물 없음]
68.2(21.6) mg/kg [고용량] 68.2(21.6) mg/kg 20일까지 100％ 이환율 또는 사망률 임상 증상: 호흡 효과 (천명, 가쁜호흡). 육안 부검 관찰: 폐: 비정상적 내용물, 병소 (옅은 또는 짙은), 변색 및 해면 폐. 조직병리학: 기관; 최소-내지-중등도 점막 비대. 염증 세포 침윤 및 관강 삼출물. 폐; 최소-내지-중등도 기관지 점막 비대, 관강 삼출물, 염증 세포 침윤, 울혈/출혈, 흉막염 및 폐렴. [회복: 생존 동물 없음]
실시예 종 (수/그룹) ABIP 제제의 제제 용량의 평균 흡입된 용량 수준 (활성 약물의 용량) 유의적 소견
15 래트 lOM(주) 1일 용량 수준 2 및 3일(일단위), 또는 8 및 15일(주단위)
72.8(O;비히클) 72.8(O;비히클) 없음
로트번호 4001T; 33.4(11.7) mg/kg 로트번호 4001T; 5.6(2.1) mg/kg 1일 X3 용량 그룹 중 동물 1마리는 빈사 상태가 되었다(2일). 호흡 효과의 임상 증상 (경증-내지-중증 천명 또는 폐 소리). 빈사 상태 동물에서 팽창된 위 및 장. 기관 중 비정상적 내용물. 짙은 병소를 갖는 폐, 붉어진 폐. 조직병리학: 기관; 점막하 염증 세포 침윤 및 관강 삼출물을 갖는 최소-내지-경증 점막 비대. 폐; 기관지주위/세기관지주위 염증, 폐포 대식세포 축적 및 울혈/출혈.
로트번호 4001T; 73.4(27.2) mg/kg 로트번호 4001T; 73.4(27.2) mg/kg 1일 X3 용량 그룹 중 동물 1마리는 빈사 상태가 되었고(2일), 매주 X3 그룹 중 동물 1마리는 죽은채 발견되었다(8일). 호흡 효과의 임상 증상 (경증-내지-중증 천명 또는 폐 소리). 빈사 상태 동물에서 팽창된 위 및 장. 짙은 병소를 갖는 폐. 조직병리학: 기관; 점막하 염증 세포 침윤 및 관강 삼출물을 갖는 최소-내지-중등도 미만성 점막 비대. 폐; 기관지 삼출물, 기관지주위/세기관지주위 염증, 폐포 대식세포 축적, 울혈/출혈 및 기관지폐렴.
실시예 종 (수/그룹) 분말 제제의 제제 용량의 평균 흡입된 용량 수준 (활성 약물의 용량) 유의적 소견
15 래트 lOM(주) 1일 용량 수준 2 및 3일(일단위), 또는 8 및 15일(주단위)
로트번호 4019T; 29.1(10.9) mg/kg 로트번호 4019T; 5.6(2.2) mg/kg 호흡 효과의 임상 증상 (경증-내지-중증 천명 또는 폐 소리). 기관 중 비정상적 내용물. 짙은 병소를 갖는 폐. 조직병리학: 기관; 점막하 염증 세포 침윤 및 관강 삼출물을 갖는 최소-내지-경증 점막 비대. 폐; 기관지주위/세기관지주위 염증, 폐포 대식세포 축적 및 울혈/출혈.
로트번호 4019T; 76.2(30.3) mg/kg 로트번호 4019T; 76.2(30.3) mg/kg 호흡 효과의 임상 증상 (경증-내지-중증 천명 또는 폐 소리). 기관 중 비정상적 내용물. 짙은 병소를 갖는 폐, 붉어진 또는 해면 폐. 조직병리학: 기관; 점막하 염증 세포 침윤 및 관강 삼출물을 갖는 최소-내지-경증 점막 비대. 폐; 기관지주위/세기관지주위 염증, 폐포 대식세포 축적 및 울혈/출혈 및 기관지폐렴.
실시예 종 (수/그룹) 분말 제제의 제제 용량의 평균 흡입된 용량 수준 (활성 약물의 용량) 유의적 소견
16 래트 6M(주) 6M(TK) 1일 용량 수준 2 및 3일(일단위), 또는 8 및 15일(주단위)
비히클; 29.4(0) mg/kg 비히클; 29.4(0) mg/kg 없음
로트번호 N020226; 10.0(4.0) mg/kg 로트번호 N020226; 2(0.7) mg/kg 없음 (주단위 요법)
로트번호 N020226; 33.7(14.8) mg/kg 로트번호 N020226; 5.7(2.2) mg/kg 기관, 최소 미만성 점막 비대 및 최소 염증 (일단위 및 주단위 요법)
로트번호 N020227; 11.7(4.0) mg/kg 로트번호 N020227; 2.6(0.8) mg/kg 기관기관지, 최소-내지-경증 미만성 점막 비대, 최소-내지-경증 염증 및 삼출물 (일단위 및 주단위 요법)
로트번호 N020227; 30.6(10.7) mg/kg 로트번호 N020227; 6.3(2.2) mg/kg 기관기관지, 최소-내지-경증 미만성 점막 비대, 최소-내지-경증 염증 및 삼출물 (일단위 및 주단위 요법) 로트번호 N020226에 대한 NOEL = 1일에 10 mg/kg 및 8 및 15일에 2 mg/kg의 단일 용량 요법
실시예 종 (수/그룹) 분말 제제의 제제 용량의 평균 흡입된 용량 수준 (활성 약물의 용량) 유의적 소견
17 비글 4F 1일 용량 수준 8 및 15일
비히클; 29.3(0) mg/kg 비히클; 6.9(0) mg/kg 없음
로트번호 N020226; 16.3(5.3) mg/kg 로트번호 N020226; 2.9(1.0) mg/kg 없음
로트번호 N020226; 45.1(13.0) mg/kg 로트번호 N020226; 8.1(3.0) mg/kg 없음
로트번호 N020227; 33.0(16.0) mg/kg 로트번호 N020227; 6.7(3.2) mg/kg 없음
NOEL; 로트번호 N020226; = 1일에 45.1(13.0) mg/kg 및 8 및 15일에 8.1(3.0) mg/kg의 단일 용량 요법 NOEL; 로트번호 N020227; = 1일에 33.0(16.0) mg/kg 및 8 및 15일에 6.7(3.2) mg/kg의 단일 용량 요법
본 발명의 여러 실시양태가 그의 특정 바람직한 변형에 대하여 상당히 상세하게 기재되어 있으나, 다른 변형이 가능하고, 나타낸 변형의 별법, 변경 및 등가물이 본원 명세서를 읽고 및 도면을 연구하면 당업자들에게 명백하게 될 것이다. 예를 들어, 에어로졸화 장치의 구성요소의 상대적 위치를 변화시킬 수 있고, 가요성 부분의 작용을 모방하는 경첩이 달리거나 아니면 이동가능한 보다 강성 부분에 의해 가요성 부분을 대체할 수 있다. 또한, 경로는 도면에 나타낸 바와 같이 실질적으로 선형일 필요는 없으며 예를 들어 곡선이거나 비스듬할 수 있다. 또한, 본원에서 변형의 여러 특성은 본 발명의 추가 실시양태를 제공하는 여러 방법으로 조합될 수 있다. 또한, 특정 용어는 기재의 명확화를 위하여 사용되었으며, 본 발명을 제한하려는 것이 아니다. 그러므로, 본 개시에 대하여 제출된 첨부된 특허청구의 범위는 본원에 포함된 바람직한 변형의 기재에 제한되서는 안되며, 본 발명의 취지 및 범위 내에 포함되는 모든 상기 별법, 변경 및 등가물을 포함해야 한다.

Claims (355)

  1. 약 95 중량％ 이상의 암포테리신 B를 포함한 입자를 포함하며, 이때 상기 입자의 질량 중앙 직경이 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛인 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 질량 중앙 직경이 약 1.2 ㎛ 내지 약 1.8 ㎛인 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하(geometric) 직경이 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛인 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 입자 중 약 90 중량％ 이상의 기하 직경이 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛인 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 20％ 이상인 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 이상인 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 90％ 이상인 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 50％ 내지 약 99％인 조 성물.
  9. 약 95 중량％ 이상의 암포테리신 B를 포함한 입자를 포함하며, 이때 상기 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경이 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛인 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 입자 중 약 90 중량％ 이상의 기하 직경이 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛인 조성물.
  11. 제9항에 있어서, 입자의 질량 중앙 직경이 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛인 조성물.
  12. 제9항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 20％ 이상인 조성물.
  13. 제9항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 이상인 조성물.
  14. 제9항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 90％ 이상인 조성물.
  15. 제9항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 50％ 내지 약 99％인 조성물.
  16. 암포테리신 B를 포함한 입자를 포함하며, 이때 상기 입자의 질량 중앙 직경이 약 1.9 ㎛ 미만이고, 상기 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 20％ 이상인 조성물.
  17. 제16항에 있어서, 질량 중앙 직경이 약 0.5 ㎛ 내지 약 1.8 ㎛인 조성물.
  18. 제16항에 있어서, 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경이 약 3 ㎛ 미만인 조성물.
  19. 제16항에 있어서, 입자 중 약 90 중량％ 이상의 기하 직경이 약 3 ㎛ 미만인 조성물.
  20. 제16항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 이상인 조성물.
  21. 제16항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준 약 90％ 이상인 조성물.
  22. 제16항에 있어서, 입자 내 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 50％ 내지 약 99％인 조성물.
  23. 유효량의 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물 로서, 질량 중앙 직경이 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조되는 제약 조성물.
  24. 제23항에 있어서, 질량 중앙 직경이 약 1.2 ㎛ 내지 약 1.8 ㎛인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조된 제약 조성물.
  25. 제23항에 있어서, 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경이 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛인 조성물.
  26. 제23항에 있어서, 입자 중 약 90 중량％ 이상의 기하 직경이 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛인 조성물.
  27. 제23항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 50％ 이상인 제약 조성물.
  28. 제23항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 이상인 제약 조성물.
  29. 제23항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 80％ 이상인 제약 조성물.
  30. 제23항에 있어서, 미립자를 포함하는 제약 조성물.
  31. 제30항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 m인 제약 조성물.
  32. 제23항에 있어서, 약 80 중량％ 이상이 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제 둘다를 포함한 미립자를 포함하는 제약 조성물.
  33. 제23항에 있어서, 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만인 미립자를 포함하며, 이때 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 이상인 제약 조성물.
  34. 제23항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 탄수화물, 지질, 아미노산, 완충액 및 염으로부터 선택되는 하나 이상의 성분을 포함하는 것인 제약 조성물.
  35. 제23항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 인지질을 포함하는 것인 제약 조성물.
  36. 제23항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 금속 이온을 포함하는 것인 제약 조성물.
  37. 제23항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 인지질 및 금속 이온을 포함하는 것인 제약 조성물.
  38. 제23항에 있어서, 중공 및/또는 다공성 미립자를 포함하는 제약 조성물.
  39. 제23항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제에 의해 형성되는 매트릭스 내에 암포테리신 B를 포함한 미립자를 포함하는 제약 조성물.
  40. 제39항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 1종 이상의 인지질을 포함하는 것인 제약 조성물.
  41. 제23항에 있어서, 건조 분말을 포함하는 제약 조성물.
  42. 제23항에 있어서, 추진제를 더 포함하는 제약 조성물.
  43. 제42항에 있어서, 추진제가 1종 이상의 히드로플루오로알칸을 포함하는 것인 제약 조성물.
  44. 제23항에 있어서, 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 ㎛인 미 립자를 포함하는 제약 조성물로서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 이상이고, 약 80 중량％ 이상의 제약 조성물이 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 매트릭스 내에 암포테리신 B를 포함한 미립자를 포함하고, 상기 제약상 허용되는 부형제는 1종 이상의 인지질을 포함하는 것인 제약 조성물.
  45. 유효량의 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물로서, 이때 상기 제약 조성물이 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조되고, 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경이 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛인 제약 조성물.
  46. 제45항에 있어서, 입자 중 약 90 중량％ 이상의 기하 직경이 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛인 조성물.
  47. 제45항에 있어서, 질량 중앙 직경이 약 1.2 ㎛ 내지 약 1.8 ㎛인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조되는 제약 조성물.
  48. 제45항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 50％ 이상인 제약 조성물.
  49. 제45항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 이상인 제약 조성 물.
  50. 제45항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 80％ 이상인 제약 조성물.
  51. 제45항에 있어서, 미립자를 포함하는 제약 조성물.
  52. 제51항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 m인 제약 조성물.
  53. 제45항에 있어서, 약 80 중량％ 이상이 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제 둘다를 포함한 미립자를 포함하는 제약 조성물.
  54. 제45항에 있어서, 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만인 미립자를 포함하는 제약 조성물로서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 이상인 제약 조성물.
  55. 제45항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 탄수화물, 지질, 아미노산, 완충액 및 염으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하는 것인 제약 조성물.
  56. 제45항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 인지질을 포함하는 것인 제약 조성물.
  57. 제45항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 금속 이온을 포함하는 것인 제약 조성물.
  58. 제45항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 인지질 및 금속 이온을 포함하는 것인 제약 조성물.
  59. 제45항에 있어서, 중공 및/또는 다공성 미립자를 포함하는 제약 조성물.
  60. 제45항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제에 의해 형성된 매트릭스 내에 암포테리신 B를 포함한 미립자를 포함하는 제약 조성물.
  61. 제60항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 1종 이상의 인지질을 포함하는 것인 제약 조성물.
  62. 제45항에 있어서, 건조 분말을 포함하는 제약 조성물.
  63. 제45항에 있어서, 추진제를 더 포함하는 제약 조성물.
  64. 제63항에 있어서, 추진제가 1종 이상의 히드로플루오로알칸을 포함하는 것인 제약 조성물.
  65. 제45항에 있어서, 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 ㎛인 미립자를 포함하는 제약 조성물로서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 이상이고, 약 80 중량％ 이상의 제약 조성물이 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 매트릭스 내에 암포테리신 B를 포함한 미립자를 포함하고, 상기 제약상 허용되는 부형제가 1종 이상의 인지질을 포함하는 것인 제약 조성물.
  66. 유효량의 암포테리신 B; 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하며, 이때 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 20％ 내지 약 99％인 제약 조성물.
  67. 제66항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 내지 약 98％인 제약 조성물.
  68. 제66항에 있어서, 질량 중앙 직경이 약 3 ㎛ 미만인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조되는 제약 조성물.
  69. 제66항에 있어서, 질량 중앙 직경이 약 2 ㎛ 미만인 암포테리신 B를 포함하 는 입자로부터 제조되는 제약 조성물.
  70. 제66항에 있어서, 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조되며, 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경이 약 3 ㎛ 미만인 제약 조성물.
  71. 제66항에 있어서, 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조되며, 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 90 중량％ 이상의 기하 직경이 약 3 ㎛ 미만인 제약 조성물.
  72. 제66항에 있어서, 미립자를 포함하는 제약 조성물.
  73. 제72항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만인 제약 조성물.
  74. 제72항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 ㎛인 제약 조성물.
  75. 제66항에 있어서, 약 80 중량％ 이상이 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제 둘다를 포함한 미립자를 포함하는 제약 조성물.
  76. 제66항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 탄수화물, 지질, 아미노산, 완충액 및 염으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하는 것인 제약 조성물.
  77. 제66항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 인지질을 포함하는 것인 제약 조성물.
  78. 제66항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 금속 이온을 포함하는 것인 제약 조성물.
  79. 제66항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 인지질 및 금속 이온을 포함하는 것인 제약 조성물.
  80. 제66항에 있어서, 중공 및/또는 다공성 미립자를 포함하는 제약 조성물.
  81. 제66항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 매트릭스 내에 암포테리신 B를 포함한 미립자를 포함하는 제약 조성물.
  82. 제81항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 1종 이상의 인지질을 포함하는 것인 제약 조성물.
  83. 제66항에 있어서, 건조 분말을 포함하는 제약 조성물.
  84. 제66항에 있어서, 추진제를 더 포함하는 제약 조성물.
  85. 제84항에 있어서, 추진제가 1종 이상의 히드로플루오로알칸을 포함하는 것인 제약 조성물.
  86. 제66항에 있어서, 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 ㎛인 미립자를 포함하는 제약 조성물로서, 약 80 중량％ 이상의 제약 조성물이 제약상 허용되는 부형제를 포함한 매트릭스 내에 암포테리신 B를 포함한 미립자를 포함하고, 상기 제약상 허용되는 부형제가 1종 이상의 인지질을 포함하는 것인 제약 조성물.
  87. 결정도 수준이 약 20％ 이상인 암포테리신 B를 포함하며, 이때 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만인 입자를 포함하는 건조 분말.
  88. 제87항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 내지 약 99％인 건조 분말.
  89. 제87항에 있어서, 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 ㎛인 입 자를 포함하는 건조 분말.
  90. 제87항에 있어서, 제약 조성물이 질량 중앙 직경이 약 3 ㎛ 미만인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조된 것인 건조 분말.
  91. 제87항에 있어서, 제약 조성물이 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조되고, 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경이 약 3 ㎛ 미만인 건조 분말.
  92. 제87항에 있어서, 약 80 중량％ 이상의 제약 조성물이 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제 둘다를 포함한 미립자를 포함하는 것인 건조 분말.
  93. 제87항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제를 더 포함하는 건조 분말.
  94. 제93항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 탄수화물, 지질, 아미노산, 완충액 및 염으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하는 것인 건조 분말.
  95. 제93항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 인지질을 포함하는 것인 건조 분말.
  96. 제93항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 금속 이온을 포함하는 것인 건조 분말.
  97. 제93항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 인지질 및 금속 이온을 포함하는 것인 건조 분말.
  98. 제87항에 있어서, 중공 및/또는 다공성 입자를 포함하는 건조 분말.
  99. 제87항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제를 포함한 매트릭스 내에 암포테리신 B를 포함한 미립자를 포함하는 건조 분말.
  100. 유효량의 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하고, 질량 중앙 직경이 약 1.9 ㎛ 미만인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조된 제약 조성물을 함유한 용기
    를 포함하는 단위 투여 형태.
  101. 제100항에 있어서, 용기가 캡슐을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  102. 제100항에 있어서, 제약 조성물이 질량 중앙 직경이 약 0.5 ㎛ 내지 약 1.8 ㎛인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조되는 것인 단위 투여 형태.
  103. 제100항에 있어서, 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경이 약 1.9 ㎛ 미만인 단위 투여 형태.
  104. 제100항에 있어서, 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 90 중량％ 이상의 기하 직경이 약 1.9 ㎛ 미만인 단위 투여 형태.
  105. 제100항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 50％ 이상인 단위 투여 형태.
  106. 제100항에 있어서, 제약 조성물이 미립자를 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  107. 제106항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만인 단위 투여 형태.
  108. 제106항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 ㎛인 단위 투여 형태.
  109. 제100항에 있어서, 약 80％ 이상의 제약 조성물이 암포테리신 B와 제약상 허용되는 부형제 둘다를 포함한 미립자를 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  110. 제100항에 있어서, 제약 조성물이 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만인 미립자를 포함하고, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 이상인 단위 투여 형태.
  111. 제100항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 탄수화물, 지질, 아미노산, 완충액 및 염으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  112. 제100항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 인지질을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  113. 제100항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 금속 이온을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  114. 제100항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 인지질 및 금속 이온을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  115. 제100항에 있어서, 제약 조성물이 중공 및/또는 다공성 미립자를 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  116. 제100항에 있어서, 제약 조성물이 제약상 허용되는 부형제를 포함한 매트릭스 내에 암포테리신 B를 포함한 미립자를 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  117. 제100항에 있어서, 제약 조성물이 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 ㎛인 미립자를 포함하고, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 이상이고, 약 80 중량％ 이상의 제약 조성물이 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 매트릭스 내에 암포테리신 B를 포함한 미립자를 포함하고, 상기 제약상 허용되는 부형제가 1종 이상의 인지질을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  118. 유효량의 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 포함한 용기를 포함하며, 이때 상기 제약 조성물이 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조되고, 상기 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경이 약 1.9 ㎛ 미만인 단위 투여 형태.
  119. 제118항에 있어서, 용기가 캡슐을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  120. 제118항에 있어서, 제약 조성물이 질량 중앙 직경이 약 0.5 ㎛ 내지 약 1.8 ㎛인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조된 것인 단위 투여 형태.
  121. 제118항에 있어서, 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 90 중량％ 이상의 기하 직경이 약 1.9 ㎛ 미만인 단위 투여 형태.
  122. 제118항에 있어서, 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 95 중량％ 이상의 기하 직경이 약 1.9 ㎛ 미만인 단위 투여 형태.
  123. 제118항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 50％ 이상인 단위 투여 형태.
  124. 제118항에 있어서, 제약 조성물이 미립자를 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  125. 제124항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만인 단위 투여 형태.
  126. 제124항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 ㎛인 단위 투여 형태.
  127. 제118항에 있어서, 약 80％ 이상의 제약 조성물이 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제 둘다를 포함한 미립자를 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  128. 제118항에 있어서, 제약 조성물이 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미 만인 미립자를 포함하고, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 이상인 단위 투여 형태.
  129. 제118항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 탄수화물, 지질, 아미노산, 완충액 및 염으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  130. 제118항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 인지질을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  131. 제118항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 금속 이온을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  132. 제118항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 인지질 및 금속 이온을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  133. 제118항에 있어서, 제약 조성물이 중공 및/또는 다공성 미립자를 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  134. 제118항에 있어서, 제약 조성물이 제약상 허용되는 부형제를 포함한 매트릭스 내에 암포테리신 B를 포함한 미립자를 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  135. 제134항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 1종 이상의 인지질을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  136. 제118항에 있어서, 제약 조성물이 건조 분말을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  137. 제118항에 있어서, 제약 조성물이 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 ㎛인 미립자를 포함하고, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 이상이고, 약 80 중량％ 이상의 제약 조성물이 제약상 허용되는 부형제를 포함한 매트릭스 내에 암포테리신 B를 포함한 미립자를 포함하고, 상기 제약상 허용되는 부형제가 1종 이상의 인지질을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  138. 결정도 수준이 약 20％ 내지 약 99％인 암포테리신 B, 및 제약상 허용되는 부형제를 포함한 제약 조성물을 함유한 용기
    를 포함하는 단위 투여 형태.
  139. 제138항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 내지 약 98％인 단위 투여 형태.
  140. 제138항에 있어서, 제약 조성물이 질량 중앙 직경이 약 3 ㎛ 미만인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조된 것인 단위 투여 형태.
  141. 제138항에 있어서, 제약 조성물이 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조되고, 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경이 약 3 ㎛ 미만인 단위 투여 형태.
  142. 제138항에 있어서, 제약 조성물이 미립자를 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  143. 제142항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만인 단위 투여 형태.
  144. 제142항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 ㎛인 단위 투여 형태.
  145. 제138항에 있어서, 약 80 중량％ 이상의 제약 조성물이 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제 둘다를 포함한 미립자를 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  146. 제138항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 탄수화물, 지질, 아미노산, 완충액 및 염으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  147. 제138항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 인지질을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  148. 제138항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 금속 이온을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  149. 제138항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 인지질 및 금속 이온을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  150. 제138항에 있어서, 제약 조성물이 중공 및/또는 다공성 미립자를 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  151. 제138항에 있어서, 제약 조성물이 제약상 허용되는 부형제를 포함한 매트릭스 내에 암포테리신 B를 포함한 미립자를 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  152. 제151항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 1종 이상의 인지질을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  153. 제138항에 있어서, 제약 조성물이 건조 분말을 포함하는 것인 단위 투여 형 태.
  154. 제138항에 있어서, 제약 조성물이 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 ㎛인 미립자를 포함하고, 약 80 중량％ 이상의 상기 제약 조성물이 제약상 허용되는 부형제를 포함한 매트릭스 내에 암포테리신 B를 포함한 미립자를 포함하고, 상기 제약상 허용되는 부형제가 1종 이상의 인지질을 포함하는 것인 단위 투여 형태.
  155. 흡입기; 및
    암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하고 질량 중앙 직경이 약 1.9 ㎛ 미만인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조된 미립자를 포함하는 제약 조성물
    을 포함하는 전달 시스템.
  156. 제155항에 있어서, 흡입기가 건조 분말 흡입기를 포함하는 것인 전달 시스템.
  157. 제155항에 있어서, 흡입기가 미립자 및 추진제를 함유한 캐니스터(canister)를 포함하고 캐니스터 내부와 소통하는 계량 밸브를 포함하는 것인 전달 시스템.
  158. 제155항에 있어서, 흡입기가 네불라이저(nebulizer)를 포함하고, 미립자가 액체 중에 현탁된 것인 전달 시스템.
  159. 제155항에 있어서, 미립자가 질량 중앙 직경이 약 0.5 ㎛ 내지 약 1.8 ㎛인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조된 것인 전달 시스템.
  160. 제155항에 있어서, 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경이 약 1.9 ㎛ 미만인 전달 시스템.
  161. 제155항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 50％ 이상인 전달 시스템.
  162. 제155항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 내지 약 99％인 전달 시스템.
  163. 제155항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만인 전달 시스템.
  164. 제155항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 ㎛인 전달 시스템.
  165. 제155항에 있어서, 약 80 중량％ 이상의 제약 조성물이 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제 둘다를 포함한 미립자를 포함하는 것인 전달 시스템.
  166. 제155항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만이고, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 이상인 전달 시스템.
  167. 제155항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 탄수화물, 지질, 아미노산, 완충액 및 염으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하는 것인 전달 시스템.
  168. 제155항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 인지질을 포함하는 것인 전달 시스템.
  169. 제155항에 있어서, 미립자가 제약상 허용되는 부형제를 포함한 매트릭스 내에 암포테리신 B를 포함하는 것인 전달 시스템.
  170. 제155항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 m이고, 약 80 중량％ 이상의 제약 조성물이 제약상 허용되는 부형제를 포함한 매트릭스 내에 암포테리신 B를 포함한 미립자를 포함하고, 상기 제약상 허용되는 부형제가 1종 이상의 인지질을 포함하는 것인 전달 시스템.
  171. 흡입기; 및
    암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제를 포함한 미립자를 포함하는 제약 조성물(여기서, 미립자는 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조되고, 상기 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경은 약 1.9 ㎛ 미만임)
    을 포함하는 전달 시스템.
  172. 제171항에 있어서, 흡입기가 건조 분말 흡입기를 포함하는 것인 전달 시스템.
  173. 제171항에 있어서, 흡입기가 미립자 및 추진제를 함유한 캐니스터를 포함하고 캐니스터 내부와 소통하는 계량 밸브를 포함하는 것인 전달 시스템.
  174. 제171항에 있어서, 흡입기가 네불라이저를 포함하고, 미립자가 액체 중에 현탁된 것인 전달 시스템.
  175. 제171항에 있어서, 미립자가 질량 중앙 직경이 약 0.5 ㎛ 내지 약 1.8 ㎛인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조된 것인 전달 시스템.
  176. 제171항에 있어서, 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경이 약 1.9 ㎛ 미만인 전달 시스템.
  177. 제171항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 50％ 이상인 전달 시스템.
  178. 제171항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 내지 약 99％인 전달 시스템.
  179. 제171항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만인 전달 시스템.
  180. 제171항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 ㎛인 전달 시스템.
  181. 제171항에 있어서, 약 80 중량％ 이상의 제약 조성물이 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제 둘다를 포함한 미립자를 포함하는 것인 전달 시스템.
  182. 제171항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만이고, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 이상인 전달 시스템.
  183. 제171항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 탄수화물, 지질, 아미노산, 완충액 및 염으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하는 것인 전달 시스템.
  184. 제171항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 인지질을 포함하는 것인 전달 시스템.
  185. 제171항에 있어서, 미립자가 제약상 허용되는 부형제를 포함한 매트릭스 내에 암포테리신 B를 포함하는 것인 전달 시스템.
  186. 제171항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 m이고, 약 80 중량％ 이상의 제약 조성물이 제약상 허용되는 부형제를 포함한 매트릭스 내에 암포테리신 B를 포함한 미립자를 포함하고, 상기 제약상 허용되는 부형제가 1종 이상의 인지질을 포함하는 것인 전달 시스템.
  187. 흡입기; 및
    결정도 수준이 약 20％ 내지 약 99％인 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제를 포함한 미립자를 포함하는 제약 조성물
    을 포함하는 전달 시스템.
  188. 제187항에 있어서, 흡입기가 건조 분말 흡입기를 포함하는 것인 전달 시스템.
  189. 제187항에 있어서, 흡입기가 미립자 및 추진제를 함유한 캐니스터를 포함하고 캐니스터 내부와 소통하는 계량 밸브를 포함하는 것인 전달 시스템.
  190. 제187항에 있어서, 흡입기가 네불라이저를 포함하고, 미립자가 액체 중에 현탁된 것인 전달 시스템.
  191. 제187항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 내지 약 98％인 전달 시스템.
  192. 제187항에 있어서, 미립자가 질량 중앙 직경이 약 3 ㎛ 미만인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조된 것인 전달 시스템.
  193. 제187항에 있어서, 미립자가 질량 중앙 직경이 약 2 ㎛ 미만인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조된 것인 전달 시스템.
  194. 제187항에 있어서, 미립자가 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조되고, 상기 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경이 약 3 ㎛ 미만인 전달 시스템.
  195. 제187항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만인 전달 시스템.
  196. 제187항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 ㎛인 전달 시스템.
  197. 제187항에 있어서, 약 80 중량％ 이상의 제약 조성물이 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제 둘다를 포함하는 것인 전달 시스템.
  198. 제187항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만이고, 상기 미립자가 질량 중앙 직경이 약 3 ㎛ 미만인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조된 것인 전달 시스템.
  199. 제187항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 탄수화물, 지질, 아미노산, 완충액 및 염으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하는 것인 전달 시스템.
  200. 제187항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 인지질을 포함하는 것인 전달 시스템.
  201. 제187항에 있어서, 미립자가 제약상 허용되는 부형제를 포함한 매트릭스 내에 암포테리신 B를 포함하는 것인 전달 시스템.
  202. 제187항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 ㎛이고, 약 80 중량％ 이상의 제약 조성물이 제약상 허용되는 부형제를 포함한 매트릭스 내에 암포테리신 B를 포함한 미립자를 포함하고, 상기 제약상 허용되는 부형제가 1종 이상의 인지질을 포함하는 것인 전달 시스템.
  203. 암포테리신 B 조성물의 결정도 수준을 측정하는 단계; 및
    제약상 허용되는 부형제와 배합하기 위한 암포테리신 B 조성물을 방출하여 제약 조성물을 형성하기 전에, 결정도 수준이 제1 소정 수준 초과임을 확인하는 단계
    를 포함하는, 제약 조성물 제조용 암포테리신 B의 특성규명 방법.
  204. 제203항에 있어서, 결정도 수준 측정 단계가 적어도 일부 암포테리신 B 조성물의 X-선 분말 회절을 수행하는 단계를 포함하는 방법.
  205. 제203항에 있어서, 결정도 수준 측정 단계가 적어도 일부 암포테리신 B 조성물에 대하여 적외선 분광법을 수행하는 단계를 포함하는 방법.
  206. 제203항에 있어서, 결정도 수준 측정 단계가 적어도 일부 암포테리신 B 조성물에 대하여 동적 증기 흡착을 수행하는 단계를 포함하는 방법.
  207. 제203항에 있어서, 제1 소정 수준이 약 50％ 이상인 방법.
  208. 제203항에 있어서, 제1 소정 수준이 약 70％ 이상인 방법.
  209. 제203항에 있어서, 제1 소정 수준이 약 90％ 이상인 방법.
  210. 제203항에 있어서, 결정도 수준이 제1 소정 수준 이하인 경우, 암포테리신 B 조성물을 재결정화하는 단계를 더 포함하는 방법.
  211. 제203항에 있어서, 결정도 수준이 제1 소정 수준 이하인 경우, 암포테리신 B 조성물을 제거하는 단계를 더 포함하는 방법.
  212. 제203항에 있어서, 암포테리신 B 조성물을 제약상 허용되는 부형제와 배합하여 제약 조성물을 형성하는 단계를 더 포함하는 방법.
  213. 제212항에 있어서, 암포테리신 B 조성물을 제약상 허용되는 부형제와 배합하 여 제약 조성물을 형성하는 단계가 분무 건조를 포함하는 방법.
  214. 제212항에 있어서, 제약 조성물의 결정도 수준을 측정하는 단계를 더 포함하는 방법.
  215. 제214항에 있어서, 결정도 수준이 제2 소정 수준 이하인 경우, 환자 투여용 제약 조성물을 방출하는 단계를 더 포함하는 방법.
  216. 제215항에 있어서, 제2 소정 수준이 약 50％ 이상인 방법.
  217. 암포테리신 B 조성물의 무정형도(amorphicity)를 측정하는 단계; 및
    제약상 허용되는 부형제와 배합하기 위한 암포테리신 B 조성물을 방출하여 제약 조성물을 제조하기 전에, 무정형도가 소정 수준 미만임을 확인하는 단계
    를 포함하는, 제약 조성물 제조용 암포테리신 B의 특성규명 방법.
  218. 제217항에 있어서, 무정형도 측정 단계가 적어도 일부 암포테리신 B 조성물의 X-선 분말 회절을 수행하는 단계를 포함하는 방법.
  219. 제217항에 있어서, 무정형도 측정 단계가 적어도 일부 암포테리신 B 조성물에 대하여 적외선 분광법을 수행하는 단계를 포함하는 방법.
  220. 제217항에 있어서, 무정형도 측정 단계가 적어도 일부 암포테리신 B 조성물에 대하여 동적 증기 흡착을 수행하는 단계를 포함하는 방법.
  221. 제217항에 있어서, 제1 소정 수준이 약 50％ 미만인 방법.
  222. 제217항에 있어서, 제1 소정 수준이 약 30％ 미만인 방법.
  223. 제217항에 있어서, 제1 소정 수준이 약 10％ 미만인 방법.
  224. 제217항에 있어서, 암포테리신 B 조성물을 제약상 허용되는 부형제와 배합하여 제약 조성물을 형성하는 단계가 분무 건조를 포함하는 방법.
  225. 제217항에 있어서, 제약 조성물의 무정형도를 측정하는 단계를 더 포함하는 방법.
  226. 제225항에 있어서, 무정형도가 제2 소정 수준 초과인 경우, 환자 투여용 제약 조성물을 방출하는 단계를 더 포함하는 방법.
  227. 제226항에 있어서, 제2 소정 수준이 약 50％ 미만인 방법.
  228. 암포테리신 B 조성물을 제약상 허용되는 부형제와 배합하여 건조 분말 제약 조성물을 형성하는 단계;
    건조 분말 제약 조성물의 질량 중앙 공기역학적 직경을 측정하는 단계; 및
    환자 투여용 건조 분말 제약 조성물을 방출하기 전에, 질량 중앙 공기역학적 직경이 소정 수준 미만임을 확인하는 단계
    를 포함하는, 건조 분말 제약 조성물의 제조 및 특성규명 방법.
  229. 제228항에 있어서, 질량 중앙 공기역학적 직경이 연속 충돌(cascade impaction)에 의해 측정되는 것인 방법.
  230. 제228항에 있어서, 제1 소정 수준이 약 10 ㎛ 미만인 방법.
  231. 제228항에 있어서, 제1 소정 수준이 약 5 ㎛ 미만인 방법.
  232. 암포테리신 B 조성물을 제약상 허용되는 부형제와 배합하여 건조 분말 제약 조성물을 형성하는 단계;
    건조 분말 제약 조성물의 균질도를 측정하는 단계; 및
    환자 투여용 건조 분말 제약 조성물을 방출하기 전에 균질도가 소정 수준 초과임을 확인하는 단계
    를 포함하는, 건조 분말 제약 조성물의 제조 및 특성규명 방법.
  233. 제232항에 있어서, 균질도 측정 단계가 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제 둘다를 포함한 미립자를 포함한 건조 분말 제약 조성물이 몇 중량 퍼센트인지 측정하는 단계를 포함하는 방법.
  234. 제232항에 있어서, 중량 퍼센트가 80 중량％ 초과인 수준을 초과하는 경우에 건조 분말 제약 조성물이 투여를 위해 방출되는 것인 방법.
  235. 제232항에 있어서, 중량 퍼센트가 90 중량％ 초과인 수준을 초과하는 경우에 건조 분말 제약 조성물이 투여를 위해 방출되는 것인 방법.
  236. 질량 중앙 직경이 약 3 ㎛ 미만인 암포테리신 B를 포함하는 입자를 액체 중에 현탁시켜 공급원액을 형성하는 단계; 및
    공급원액을 분무 건조시켜 분무 건조 입자를 생성하는 단계
    를 포함하는, 분무 건조 입자 제조 방법.
  237. 제236항에 있어서, 암포테리신 B를 포함하는 입자의 질량 중앙 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 2 ㎛인 방법.
  238. 제236항에 있어서, 암포테리신 B를 포함하는 입자의 결정도 수준이 약 50％ 이상인 방법.
  239. 제236항에 있어서, 분무 건조 입자의 질량 중앙 직경이 약 10 ㎛ 미만인 방법.
  240. 제236항에 있어서, 약 80 중량％ 이상의 분무 건조 입자가 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 것인 방법.
  241. 제236항에 있어서, 분무 건조 입자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만이고, 암포테리신 B를 포함하는 입자의 결정도 수준이 약 50％ 이상인 방법.
  242. 제236항에 있어서, 공급원액이 제약상 허용되는 부형제를 더 포함하는 것인 방법.
  243. 제236항에 있어서, 공급원액의 분무 건조 단계가 제약상 허용되는 부형제를 포함한 추가 공급원액의 분무 건조 단계를 더 포함하는 방법.
  244. 제236항에 있어서, 분무 건조 입자가 제약상 허용되는 부형제를 더 포함하는 것인 방법.
  245. 제236항에 있어서, 분무 건조 입자의 수집 단계를 더 포함하는 방법.
  246. 제236항에 있어서, 공급원액에 유화제를 첨가하는 단계를 더 포함하는 방법.
  247. 제246항에 있어서, 유화제가 포스파티딜콜린을 포함하는 것인 방법.
  248. 제247항에 있어서, 포스파티딜콜린이 디스테아로일 포스파티딜콜린을 포함하는 것인 방법.
  249. 제236항에 있어서, 공급원액에 발포제를 첨가하는 단계를 더 포함하는 방법.
  250. 제236항에 있어서, 분무 건조 입자가 인지질 매트릭스 내에 암포테리신 B 결정을 포함하는 것인 방법.
  251. 제236항에 있어서, 분무 건조 입자가 중공 및/또는 다공성인 것인 방법.
  252. 제251항에 있어서, 공급원액이 소수성 아미노산을 더 포함하는 것인 방법.
  253. 결정도 수준이 약 20％ 이상인 암포테리신 B를 포함하는 입자를 액체 중에 현탁시켜 공급원액을 형성하는 단계; 및
    상기 공급원액을 분무 건조시켜 분무 건조 입자를 생성하는 단계
    를 포함하는, 분무 건조 입자 제조 방법.
  254. 제253항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 50％ 이상인 방법.
  255. 제253항에 있어서, 암포테리신 B를 포함하는 입자의 질량 중앙 직경이 약 3 ㎛ 미만인 방법.
  256. 제253항에 있어서, 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경이 약 3 ㎛ 미만인 방법.
  257. 제253항에 있어서, 분무 건조 입자의 질량 중앙 직경이 약 10 ㎛ 미만인 방법.
  258. 제253항에 있어서, 약 80 중량％ 이상의 분무 건조 입자가 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 것인 방법.
  259. 제253항에 있어서, 분무 건조 입자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만이고, 이때 암포테리신 B를 포함하는 입자의 결정도 수준이 약 50％ 이상인 방 법.
  260. 제253항에 있어서, 공급원액이 제약상 허용되는 부형제를 더 포함하는 것인 방법.
  261. 제253항에 있어서, 공급원액 분무 건조 단계가 제약상 허용되는 부형제를 포함한 추가 공급원액의 분무 건조 단계를 더 포함하는 방법.
  262. 제253항에 있어서, 분무 건조 입자가 제약상 허용되는 부형제를 더 포함하는 것인 방법.
  263. 제253항에 있어서, 분무 건조 입자의 수집 단계를 더 포함하는 방법.
  264. 제253항에 있어서, 공급원액에 유화제를 첨가하는 단계를 더 포함하는 방법.
  265. 제264항에 있어서, 유화제가 포스파티딜콜린을 포함하는 것인 방법.
  266. 제265항에 있어서, 포스파티딜콜린이 디스테아로일 포스파티딜콜린을 포함하는 것인 방법.
  267. 제253항에 있어서, 공급원액에 발포제를 첨가하는 단계를 더 포함하는 방법.
  268. 제253항에 있어서, 분무 건조 입자가 인지질 매트릭스 내에 암포테리신 B 결정을 포함하는 것인 방법.
  269. 제253항에 있어서, 분무 건조 입자가 중공 및/또는 다공성인 것인 방법.
  270. 제269항에 있어서, 공급원액이 소수성 아미노산을 더 포함하는 것인 방법.
  271. 질량 중앙 직경이 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조된 암포테리신 B를 포함하는 조성물의 유효량을 진균 감염의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함하는, 상기 진균 감염의 치료 및/또는 예방 방법.
  272. 제271항에 있어서, 충분한 양의 조성물을 투여하여 표적 폐 암포테리신 B 농도를 소정 최소 억제 농도의 약 5배 이상으로 약 4주 이상 동안 유지하도록 하는 방법.
  273. 제272항에 있어서, 최소 억제 농도가 폐 상피 내막의 최소 억제 농도인 방법.
  274. 제272항에 있어서, 최소 억제 농도가 폐 고형 조직의 최소 억제 농도인 방법.
  275. 제272항에 있어서, 표적 폐 암포테리신 B 농도가 약 8주 이상 동안 유지되는 방법.
  276. 제272항에 있어서, 표적 폐 암포테리신 B 농도가 약 4 ㎍/g 이상인 방법.
  277. 제272항에 있어서, 표적 폐 암포테리신 B 농도가 약 4.5 ㎍/g 내지 약 20 ㎍/g이고, 제약 조성물을 주기적으로 전달하여 폐 암포테리신 B 농도가 표적 암포테리신 B 폐 농도 범위 내로 유지되도록 투여하는 것을 포함하는 방법.
  278. 제272항에 있어서, 투여 제1 주 동안 조성물의 1 투여량을 전달하도록 투여하는 것을 포함하는 방법.
  279. 제271항에 있어서, 투여 제1 주 동안 조성물의 2 투여량을 전달하도록 투여하는 것을 포함하는 방법.
  280. 제271항에 있어서, 투여가 제1 투여 기간 및 제2 투여 기간을 포함하고, 조 성물을 제2 투여 기간 동안보다 제1 투여 기간에 더 자주 투여하거나 또는 더 높은 투여량으로 투여하는 방법.
  281. 제271항에 있어서, 암포테리신 B를 포함하는 입자의 질량 중앙 직경이 약 1.2 ㎛ 내지 약 1.8 ㎛인 방법.
  282. 제271항에 있어서, 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경이 약 1.9 ㎛ 미만인 방법.
  283. 제271항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 50％ 이상인 방법.
  284. 제271항에 있어서, 조성물이 미립자를 포함하는 것인 방법.
  285. 제284항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만인 방법.
  286. 제284항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 ㎛인 방법.
  287. 제271항에 있어서, 약 80 중량％ 이상의 조성물이 암포테리신 B와 제약상 허 용되는 부형제 둘다를 포함한 미립자를 포함하는 것인 방법.
  288. 제271항에 있어서, 조성물이 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만인 미립자를 포함하고, 이때 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 50％ 이상인 방법.
  289. 제271항에 있어서, 조성물이 암포테리신 B를 주성분으로 하여 이루어진 입자를 포함하는 것인 방법.
  290. 제289항에 있어서, 조성물이 제약상 허용되는 부형제를 포함한 입자를 더 포함하는 것인 방법.
  291. 제271항에 있어서, 조성물이 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제를 포함한 미립자를 포함하는 것인 방법.
  292. 제291항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 탄수화물, 지질, 아미노산, 완충액 및 염으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하는 것인 방법.
  293. 제291항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 인지질을 포함하는 것인 방법.
  294. 제291항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 금속 이온을 포함하는 것인 방 법.
  295. 제291항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 인지질 및 금속 이온을 포함하는 것인 방법.
  296. 제271항에 있어서, 조성물이 중공 및/또는 다공성 입자를 포함하는 것인 방법.
  297. 제271항에 있어서, 조성물이 매트릭스 물질 내에 결정질 암포테리신 B를 포함한 미립자를 포함하는 것인 방법.
  298. 제297항에 있어서, 매트릭스 물질이 1종 이상의 인지질을 포함하는 것인 방법.
  299. 제271항에 있어서, 투여가 건조 분말 흡입기를 이용하여 건조 분말 형태로 조성물을 전달하는 것을 포함하는 방법.
  300. 제271항에 있어서, 조성물이 추진제를 포함하고, 투여가 밸브를 개방하여 조성물을 에어로졸화함으로써 조성물을 방출하는 것을 포함하는 방법.
  301. 제300항에 있어서, 추진제가 1종 이상의 히드로플루오로알칸을 포함하는 것인 방법.
  302. 제271항에 있어서, 진균 감염 치료를 포함하는 방법.
  303. 제271항에 있어서, 진균 감염에 대한 예방을 포함하는 방법.
  304. 제271항에 있어서, 진균 감염이 폐 진균 감염을 포함하는 것인 방법.
  305. 제271항에 있어서, 진균 감염이 비내 진균 감염을 포함하는 것인 방법.
  306. 제271항에 있어서, 투여가 폐 투여를 포함하는 방법.
  307. 제271항에 있어서, 투여가 비내 투여를 포함하는 방법.
  308. 제271항에 있어서,
    투여가 폐 투여를 포함하고,
    충분한 양의 조성물을 투여하여 표적 폐 암포테리신 B 농도를 약 8 주 이상 동안 소정 최소 억제 농도의 약 5 배 이상으로 유지하고,
    상기 조성물이 질량 중앙 직경이 약 0.5 ㎛ 내지 약 1.8 ㎛인 암포테리신 B 를 포함하는 입자로부터 제조되고,
    상기 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 50％ 이상이고,
    상기 조성물이 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 ㎛인 미립자를 포함하고,
    약 80 중량％ 이상의 상기 조성물이 암포테리신 B 및 인지질 둘다를 포함한 미립자를 포함하는 것인,
    폐 진균 감염에 대한 예방을 포함하는 방법 .
  309. 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조되고, 상기 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경이 약 1.1 ㎛ 내지 약 1.9 ㎛인,
    암포테리신 B를 포함하는 조성물의 유효량을 진균 감염의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함하는, 상기 진균 감염의 치료 및/또는 예방 방법.
  310. 결정도 수준이 약 20％ 이상인 암포테리신 B를 포함하는 조성물의 유효량을 진균 감염의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함하는, 상기 진균 감염의 치료 및/또는 예방 방법.
  311. 제310항에 있어서, 충분한 양의 조성물을 투여하여 표적 폐 암포테리신 B 농도를 약 4 주 이상 동안 소정 최소 억제 농도의 약 5 배 이상으로 유지하는 방법.
  312. 제311항에 있어서, 최소 억제 농도가 폐 상피 내막의 최소 억제 농도인 방법.
  313. 제311항에 있어서, 최소 억제 농도가 폐 고형 조직의 최소 억제 농도인 방법.
  314. 제311항에 있어서, 표적 폐 암포테리신 B 농도를 약 8 주 이상 동안 유지하는 방법.
  315. 제311항에 있어서, 표적 폐 암포테리신 B 농도가 약 4 ㎍/g 이상인 방법.
  316. 제311항에 있어서, 표적 폐 암포테리신 B 농도가 약 4.5 ㎍/g 내지 약 20 ㎍/g이고, 제약 조성물을 주기적으로 전달하여 폐 암포테리신 B 농도를 표적 폐 암포테리신 B 농도 범위 내로 유지하도록 투여하는 것을 포함하는 방법.
  317. 제311항에 있어서, 투여 제1 주 동안 조성물의 1 투여량을 전달하도록 투여하는 것을 포함하는 방법.
  318. 제310항에 있어서, 투여 제1 주 동안 조성물의 2 투여량을 전달하도록 투여 하는 것을 포함하는 방법.
  319. 제310항에 있어서, 투여가 제1 투여 기간 및 제2 투여 기간을 포함하고, 조성물을 제2 투여 기간 동안보다 제1 투여 기간에 더 자주 투여하거나 또는 더 높은 투여량으로 투여하는 방법.
  320. 제310항에 있어서, 조성물이 질량 중앙 직경이 약 3 ㎛ 미만인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조된 것인 방법.
  321. 제310항에 있어서, 조성물이 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조되고, 상기 암포테리신 B를 포함하는 입자 중 약 80 중량％ 이상의 기하 직경이 약 3 ㎛ 미만인 방법.
  322. 제310항에 있어서, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 이상인 방법.
  323. 제310항에 있어서, 조성물이 미립자를 포함하는 것인 방법.
  324. 제323항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만인 방법.
  325. 제323항에 있어서, 미립자의 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 ㎛인 방법.
  326. 제323항에 있어서, 약 80 중량％ 이상의 조성물이 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제 둘다를 포함한 미립자를 포함하는 것인 방법.
  327. 제310항에 있어서, 조성물이 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만인 미립자를 포함하고, 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 이상인 방법.
  328. 제310항에 있어서, 조성물이 암포테리신 B를 주성분으로 하여 이루어진 입자를 포함하는 것인 방법.
  329. 제328항에 있어서, 조성물이 제약상 허용되는 부형제를 포함한 입자를 더 포함하는 것인 방법.
  330. 제310항에 있어서, 조성물이 암포테리신 B 및 제약상 허용되는 부형제를 포함한 미립자를 포함하는 것인 방법.
  331. 제330항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 탄수화물, 지질, 아미노산, 완충액 및 염으로부터 선택된 하나 이상의 성분을 포함하는 것인 방법.
  332. 제330항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 인지질을 포함하는 것인 방법.
  333. 제330항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 금속 이온을 포함하는 것인 방법.
  334. 제330항에 있어서, 제약상 허용되는 부형제가 인지질 및 금속 이온을 포함하는 것인 방법.
  335. 제310항에 있어서, 조성물이 중공 및/또는 다공성 입자를 포함하는 것인 방법.
  336. 제310항에 있어서, 조성물이 매트릭스 물질 내에 결정질 암포테리신 B를 포함한 미립자를 포함하는 것인 방법.
  337. 제336항에 있어서, 매트릭스 물질이 1종 이상의 인지질을 포함하는 것인 방법.
  338. 제310항에 있어서, 투여가 건조 분말 흡입기를 이용하여 건조 분말 형태로 조성물을 전달하는 것을 포함하는 방법.
  339. 제310항에 있어서, 조성물이 추진제를 포함하고, 투여가 밸브를 개방하여 조성물을 에어로졸화함으로써 조성물을 방출하는 것을 포함하는 방법.
  340. 제339항에 있어서, 추진제가 1종 이상의 히드로플루오로알칸을 포함하는 것인 방법.
  341. 제310항에 있어서, 진균 감염 치료를 포함하는 방법.
  342. 제310항에 있어서, 진균 감염에 대한 예방을 포함하는 방법.
  343. 제310항에 있어서, 진균 감염이 폐 진균 감염을 포함하는 것인 방법.
  344. 제310항에 있어서, 진균 감염이 비내 진균 감염을 포함하는 것인 방법.
  345. 제310항에 있어서, 투여가 폐 투여를 포함하는 방법.
  346. 제310항에 있어서, 투여가 비내 투여를 포함하는 방법.
  347. 제310항에 있어서,
    투여가 폐 투여를 포함하고,
    충분한 양의 조성물을 투여하여 표적 암포테리신 B 폐 농도를 약 8 주 이상 동안 소정 최소 억제 농도의 약 5 배 이상로 유지하고,
    상기 조성물이 질량 중앙 직경이 약 3 ㎛ 미만인 암포테리신 B를 포함하는 입자로부터 제조되고,
    상기 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 70％ 이상이고,
    상기 조성물이 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 6 ㎛인 미립자를 포함하고,
    약 80 중량％ 이상의 상기 조성물이 암포테리신 B 및 인지질 둘다를 포함한 미립자를 포함하는 것인,
    폐 진균 감염에 대한 예방을 포함하는 방법.
  348. 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 20％ 이상이고,
    폐 조직 생검에 의해 측정된 암포테리신 B의 폐 고형 조직 체류 반감기가 약 1 주 이상인,
    암포테리신 B를 포함하는 조성물의 유효량을 진균 감염의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함하는, 상기 진균 감염의 치료 및/또는 예방 방법.
  349. 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 20％ 이상이고,
    기관지폐포 세척에 의해 측정된 암포테리신 B의 폐 상피 내막 유체 체류 반감기가 약 10 시간 이상인,
    암포테리신 B를 포함하는 조성물의 유효량을 진균 감염의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함하는, 상기 진균 감염의 치료 및/또는 예방 방법.
  350. 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 20％ 이상이고,
    혈장 암포테리신 B 농도가 약 1000 ng/mL 미만으로 유지되는,
    약 0.01 mg/kg 내지 7.0 mg/kg의 양의 암포테리신 B를 포함한 조성물을 진균 감염의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함하는, 상기 진균 감염의 치료 및/또는 예방 방법.
  351. 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 20％ 이상이고,
    혈장 암포테리신 B 농도가 신 독성 및/또는 간 독성을 피하기에 충분히 낮게 유지되는,
    약 0.01 mg/kg 내지 7.0 mg/kg의 양의 암포테리신 B를 포함한 조성물을 진균 감염의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함하는, 상기 진균 감염의 치료 및/또는 예방 방법.
  352. 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 20％ 이상이고,
    기관지폐포 세척으로 측정된 폐 암포테리신 B 농도가 적어도 일부 치료 기간 동안 최소 억제 농도의 약 5배 이상에 도달하고,
    혈장 암포테리신 B 농도가 약 1000 ng/mL 미만으로 유지되는,
    암포테리신 B를 포함하는 조성물을 진균 감염의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함하는, 상기 진균 감염의 치료 및/또는 예방 방법.
  353. 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 20％ 이상이고,
    치료 기간이 약 15 주 내지 약 20 주이고,
    기관지폐포 세척으로 측정된 폐 암포테리신 B 농도가 적어도 일부 치료 기간 동안 최소 억제 농도의 약 5 배 이상에 도달하는,
    암포테리신 B를 포함하는 조성물을 진균 감염의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함하는, 상기 진균 감염의 치료 및/또는 예방 방법.
  354. 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 20％ 이상이고,
    투여가 약 5 분 미만으로 수행되는,
    암포테리신 B 약 2 mg 내지 약 50 mg을 포함한 조성물을 진균 감염의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함하는, 상기 진균 감염의 치료 및/또는 예방 방법.
  355. 암포테리신 B의 결정도 수준이 약 20％ 이상이고,
    건조 분말이 질량 중앙 공기역학적 직경이 약 10 ㎛ 미만인 입자를 포함하는,
    암포테리신 B를 포함하는 건조 분말의 유효량을 진균 감염의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 환자에게 흡입으로 투여하는 것을 포함하는, 상기 진균 감염의 치료 및/또는 예방 방법.
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