KR20060016552A

KR20060016552A - 알코올 유도 ｃｙｐ２ｅ１이 생성한 활성산소종으로부터간세포 보호활성을 갖는 카테킨류 화합물

Info

Publication number: KR20060016552A
Application number: KR1020040065040A
Authority: KR
Inventors: 조홍연; 홍범식; 신동훈; 김혜경; 이유현; 호진녕; 김은주; 김춘화
Original assignee: 고려대학교 산학협력단
Priority date: 2004-08-18
Filing date: 2004-08-18
Publication date: 2006-02-22

Abstract

본 발명은 특정 카테킨류를 함유하는 알코올 유도 cytochromeP450 2E1(CYP2E1)이 생성한 활성산소종으로부터 간세포 보호용 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 조성물은 (-)epigallocatechin gallate(EGCG), (-)catechin gallate(CG), (-)epicatechin(EC), (-)epicatechin gallate(ECG) 중에서 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 유효성분으로 함유하며, 알코올성 간질환 예방용 기능성식품이나 식품첨가물 또는 약물에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

알코올 유도 ＣＹＰ２Ｅ１이 생성한 활성산소종으로부터 간세포 보호활성을 갖는 카테킨류 화합물{Catechins for protective effects on alcoholic liver damage}

도 1은 녹차에서 분리 정제된 카테킨의 크로마토그램이다.

도 2는 8종의 카테킨의 농도별 간세포 보호활성을 본 도표이다.

도 3는 (-)EGCG, (-)CG, (-)EC, (-)ECG 화합물이 알코올 투여 후 간세포 보호 활성을 보이는 도표이다.

도 4는 상기의 화합물들이 알코올 투여 후 간세포 보호효과를 나타내는 세포형태관찰 사진이다.

도 5은 상기의 화합물이 알코올 투여 후 활성산소종 생성 억제효과를 비교하는 도표이다.

도 6는 상기의 화합물이 CYP2E1의 활성저해효과를 비교하는 도표이다.

알코올에 의한 간 손상은 ①지방간, ②알코올성 간염, ③간경화의 세 가지 주요한 형태로 구분한다. 이들 손상을 야기하는 가장 중요한 위험요인은 알코올 섭취의 양과 기간으로 남자는 매일 40-80 mg 알코올을 10년에서 20년간 섭취하면 지방간을, 80-160 mg 섭취하면 간경화를 초래하며, 여성의 경우는 알코올성 간 손상에 훨씬 민감하여 하루 20 mg 이상일 때 알코올성 간질환을 야기한다. 대부분의 알코올은 간에서 주로 아세트알데히드로 대사되는데, 가장 중요한 대사경로는 세포의 사이토졸에서 alcohol dehydrogenase에 의해 아세트알데히드로 대사되고, 이 대사물은 사이토졸과 미토콘드리아에 있는 aldehyde dehydrogenase에 의해 다시 대사된다. 두 번째 경로는 microsomal ethanol oxidizing system(MEOS)계라고 하는 곳에서 일어나는데 알코올 산화의 10%정도를 담당한다. 여기서 알코올 산화시 CYP2E1이 관여하게 되고 이 효소는 만성적으로 알코올을 과량 섭취시 유도된다(참조 : 대한내과학회, Harrison's principle of internal medicine, Vol. 2, 2643-2646, MIP, 2003, Cameron, R. G. et al. Toxicology in vitro, 12, 111-122, 1998)

알코올은 간내 산화시 필수적으로 활성산소종을 생성한다. 따라서 알코올에 의한 간손상은 활성산소종에 의한 손상이라 할 수도 있다. 이들은 주로 MEOS계의 CYP2E1에 의해 생성되나 일부는 다른 계에서도 생성되어 대부분은 간내 존재하는 antioxidant(GSH 등) 또는 antioxidant enzyme(SOD 등)에 의해 소거되지만 잔존할 경우 간 손상의 주요 원인물질로 작용한다. 활성산소종들 중 O₂ ^-·, ·OH, H ₂O₂ 및 1-hydroxyethyl radical(HER)은 CYP2E1에 의해 주로 생성되지만 ADH계에 의한 redox shift와 acetaldehyde로부터 aldehyde oxidase 및 xanthine oxidase에 의해 O₂ ^-·, ·OH 등도 생성된다. 이들은 간의 지질을 과산화시킴으로써 간의 섬유화에 관여하고, 단백질을 carbonyl화하여 transferrin, ferritin 등의 간 단백질 변성과 지방간을 촉진시키며, 간세포의 DNA를 fragmentation시킨다. 특히도 hydroxy radical과 alcohol의 반응에 의해 생성되는 hydroxyethyl radical은 간내에 이들을 소거하는 효소계가 존재하지 않기 때문에 최근 간손상의 핵심 radical로 주목을 받고 있다. 따라서 알코올성 간질환의 예방 및 치료용 소재개발에 있어 활성산소종의 생성억제 물질, 생성된 활성산소종의 소거 물질 또는 활성산소종의 산화적 손상에 대한 세포보호성 물질의 검색 및 소재화는 알코올성 간질환의 예방에 있어 핵심분야이다. (참조 : Alcolado, R. et al. Clinical Science, 92, 103-11,.1997, Moncada, C. et al, Molecular Pharmacology, 46, 786-791, 1994).

카테킨류(catechins)는 녹차(Camelia sinensis)의 주요 구성 polyphenol류로서, 녹차 이외에도 홍차와 적포도주 등에 함유되어 있다. 녹차를 구성하는 카테킨류 중 epicatechin(EC), epicatechin gallate(ECG), epigallocatechin gallate(EGCG)는 녹차건량에 각각 1-3%, 3-6%, 7-13%을 차지하는 주요성분이며, catechin gallate(CG)도 다른 카테킨류와 함께 주요 카테킨에 포함된다(참조 : Muto, S., et al., Mutation Research, 479, 197-206, 2001). 녹차 카테킨류들은 ischemia-reperfusion 에 의한 간 손상억제 및 보호효과와 화학물질이나 자외선으로 유도되는 활성산소 관련 질병에 대한 예방 및 완화효과는 in vivo상으로 이미 많은 보고가 되어 있으나, 알코올성 간손상에 대한 in vitro 실험의 경우, EGCG의 경우가 아라키돈산과 철로 유도한 간손상에 효과가 있음이 밝혀져 있을 뿐(참조 : Jimenez-Lopez, J. M. et al., Free Radical Biology and Medicine, 36, 3, 359-370, 2004), 직접적인 알코올 투여손상에 대한 보호효과와 EGCG 이외 polyphenol들의 알코올성 간손상에 대한 보호효과는 보고 된 바 없다.

따라서 본 발명자들은 만성 알코올 섭취시 과다 발현되는 CYP2E1에 의해 발생하는 활성산소종을 대상으로 보호물질을 탐색한 결과, 녹차의 주성분인 카테킨류 중, (-)EGCG, (-)CG, (-)EC, (-)ECG 화합물에서 보호효과를 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명은 특정 카테킨류를 함유하는 알코올성 간손상을 유발하는 활성산소 억제제를 제공하고자 하는 것이다.

또한 본 발명의 또 다른 목적은 본 발명의 활성산소 억제제를 함유하는 간세포 보호용 기능성 식품이나 약학적 조성물을 제공함에 있다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (-)에피갈로카테킨 갈레이트(epigallocatechin gallate), (-)에피카테킨(epicatechin), (-)카테킨 갈레이트(catechin gallate) 및 (-)에피카테킨 갈레이트(epicatechingallte)로 구성된 군에서 선택된 카테킨류 화합물을 유효성분으로 함유하는 알코올 유도 CYP 2E1에 의한 활성산소 억제제를 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 카테킨류 화합물은 정제되어 상용화된 카테킨류 화합물일 수도 있고, 녹차, 홍차, 적포도주 등에서 직접 추출된 카테킨류 화합물일 수도 있다. 상기 각 카테킨류 화합물의 화학식은 다음과 같다.

[화학식 1] EGCG(C₂₂H₁₈O₁₁)

[화학식 2] (-)CG (C₂₂H₁₈O₁₀)

[화학식 3] (-)EC(C₁₅H₁₄O₆)

[화학식 4] ECG(C₂₂H₁₈O₁₀)

본 발명에 있어서, 상기 카테킨류 화합물은 녹차, 홍차, 적포도주 등 천역식물에서 분리할 수 있는데, 바람직하게는 녹차 유래 카테킨류 화합물인 것을 특징으로 한다. 상기 녹차 유래 카테킨류 화합물은 녹차를 각종 유기용매로 분획한 후 각종 크로마토그래피로 정제될 수 있는데, 바람직하게는 녹차의 메탄올 추출물을 핵산, 클로로포름, 에틸아세테이트 순으로 분획한 후, 소수성 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 및 HPLC(High Performance Liquid Chromatography)의 일련의 과정을 거쳐 정제된 것을 특징으로 한다. 구체적으로 본 발명은 크로마토그래피를 위해 1차, 2차 실리카겔 60 컬럼 크로마토그래피 및 HPLC(u-Bondapak C₁₈)를 사용하여 카테킨류를 정제하였다.

본 발명에 있어서, 상기 알코올 유도 CYP 2E1에 의한 활성산소 억제제는 간세포 보호를 위해 사용되는 것을 특징으로 한다. CYP2E1에 의한 활성산소의 발생이 알코올성 간손상과 밀접한 관련을 맺고 있다는 사실은 당업계에 잘 알려져 이으므로(Alcolado, R. et al. Clinical Science, 92, 103-11,.1997; Moncada, C. et al, Molecular Pharmacology, 46, 786-791, 1994; Jimenez-Lopez, J. M. et al., Free Radical Biology and Medicine, 36, 3, 359-370, 2004), 본 발명의 카테킨류는 알코올 유도 CYP 2E1에 의한 활성산소를 억제함으로써 간세포 보호제로 유용성이 높을 것이다. 또한, 본 발명의 카테킨류는 식용식물인 녹차의 주요 구성성분으로서 기존의 유기합성약제에 비해 부작용이 없고, 안전성이 매우 높다.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 상기 본 발명에 따른 활성산소 억제제를 유효성분으로 함유하는 간세포 보호용 기능성 식품을 제공한다.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 상기 본 발명에 따른 활성산소 억제제를 유효성분으로 함유하는 간세포 보호용 약학적 조성물을 제공한다.

상기와 같이 구성된 본 발명은 (-)EGCG, (-)CG, (-)EC, (-)ECG 화합물들의 알코올 유도 CYP2E1에 의한 활성산소종으로부터의 간세포 보호효과를 더욱 상세하게 설명하면 다음과 같다.

본 발명은 만성 알코올 섭취 후 과다 유도되는 CYP2E1에 의해 생성된 활성산소종의 간 손상으로부터 간세포를 보호하는 물질을 식용생물자원을 대상으로 검색하기 위해 CYP2E1이 transfection된 간세포주인 HepG2/2E1을 작제한 후 재조합 세포주를 이용하여 보호물질을 in vitro로 검색한 결과 녹차 추출물에서 가장 높은 활성을 확인하고 추출물 구성성분 중 보호효과가 높은 (-)EGCG, (-)CG, (-)EC, (-)ECG 화합물 및 이들을 함유하는 조성물을 제공하는 것으로 이루어진다.

우선, 본 발명자들은 8종의 녹차 유래 카테킨류로부터 상기 4종 화합물의 효과가 우수함을 확인하였다. 이에 알코올에 의한 손상세포의 형태 변화 관찰과 활성산소종 생성억제효과 및 CYP2E1 활성저해능을 통하여 알코올성 간손상에 대한 보호 효과를 확인할 수 있었다.

본 발명의 원료인 카테킨류 화합물은 당업계에 알려진 통상의 방법에 의해 과립, 정제, 캡슐 또는 드링크제 등의 형태로 제제화될 수 있다. 또한, 보존이나 취급을 용이하게 하기 위하여 덱스트린, 사이클로덱스트린 등의 통상 제제화에 사용되는 캐리어, 그 밖의 임의의 조제를 부가하여도 좋다. 또한, 식품 또는 약물에 통상적으로 첨가되는 보조적인 원료 또는 첨가물로는 특히 제한되지 않으나, 예컨대, 포도당, 과당, 자당, 말토오스, 솔비톨, 스테비오사이드, 롭소사이드, 콘시럽, 유당, 구연산, 주석산, 사과산, 호박산, 유산, L-아스코르빈산, d1-α-토코페롤, 엘리솔빈산 나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 글리세린지방산 에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 자당지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, 아라비아껌, 칼라기난, 카제인, 젤라틴, 펙틴, 한천, 비타민 B류, 니코틴산 아미드, 팬트텐산 칼슘, 아미노산류, 칼슘염류, 색소, 향료, 보존제 등을 들 수 있다.

본 발명의 카테킨류는 이를 그대로 또는 가공하여 음식물중에 식품첨가제로 첨가되어 알코올성 간손상의 예방 및 치료용의 음식물을 만들 수 있다. 이와 같이 하여 얻어지는 본 발명의 음식물은, 일상적으로 섭취하는 것이 가능하기 때문에, 높은 간 기능 개선 효과를 기대할 수 있어, 매우 유용하다.

이와 같은 음식물에 있어서의 카테킨류의 첨가량은, 대상인 음식물의 종류에 따라 달라 일률적으로 규정할 수 없지만, 음식물 본래의 맛을 손상시키지 않는 범위에서 첨가하면 되며, 대상음식물에 대하여 통상 0.01~50질량%, 바람직하기로는 0.1~20질량%의 범위이다. 또한, 과립, 정제 또는 캡슐형태의 음식물의 경우에는 통 상 0.1~100질량%, 바람직하기로는 5~100질량%의 범위에서 첨가하면 된다.

또한, 본 발명의 알코올 유도 CYP2E1에 의한 활성산소 억제제의 유효성분인 카테킨류는, 성인 하루당 섭취량이 1~3000mg이 되도록 투여하는 것이 적당하다. 또한, 투여량은 연령, 증상 등에 따라 적당히 증감하는 것이 가능하다.

다음은 상기와 같이 구성된 본 발명에 대해 실시예를 통해 보다 구체적으로 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서는 자명할 것이다.

실시예 1: 카테킨류 화합물의 정제

녹차를 100℃에서 5분간 blanching하여 생체세포내 효소를 불활성화시키고 분쇄한 후, 실온에서 시료의 다섯배의 100% 메탄올로 24시간 정치하여 추출하는 방법을 3회 반복한 다음, 그 추출물을 감압 농축한다(C-M). 상기의 농축물에 1L의 핵산, 클로로포름, 에틸아세테이트 순으로, 각 용매당 36시간 동안 3회 용매를 교환하여 분획깔대기로 분획하고(M-H, M-C, M-E) 남은 것을 메탄올에 녹이며(M-M) 각각의 용매 분획물을 여과포로 여과하고 여액을 감압 농축한 후 건조하여 추출물을 얻는다.메탄올 분획물(M-M)로부터 우선 클로로포름으로 활성화된 실리카겔 60 컬럼에 시료인 메탄올 분획을 loading하고 클로로포름과 메탄올(CHCl₃ : MeOH = 100 : 0 ∼ 0 : 100) 혼합용액으로 3 bed volume씩 전개한 후, 활성을 검토하여 소분획(M-Ma)을 분리하고 이 분획물을 동일한 컬럼을 사용하여 클로로포름과 메탄올(CHCl₃ : MeOH = 100 : 0 ∼ 0 : 100) 혼합용액으로 1 ∼ 5 bed volume씩 전개하면서 1 ∼ 2개의 분획으로 분리한 후 활성이 가장 높은 클로로포름과 메탄올 용출분획(M-Mb)을 분리한다. 고활성의 상기 분획물을 HPLC(u-Bondapak C₁₈, 3.9 × 150 mm)에 주입하고 물과 메탄올 gradient(H₂O : MeOH = 100 : 0 ∼ 0 : 100) 조건에서 1 ml/min의 유속으로 용출하여, 활성분획만을 농축한 후 활성분획을 동일한 조건에서 HPLC를 실시한 결과 좌우 대칭성이 높은 단일 peak를 얻어 상기 카테킨류 화합물을 정제하였다(도 1). 상기 단일 peak는 retention time(RT)이 17.395로서 reference와 비교하여 카테킨류의 일종인 Epicatechin gallate(ECG)로 동정되었다.

실시예 2: (-)EGCG, (-)CG, (-)EC, (-)ECG 화합물의 알코올에 의한 간손상 보호활성

본 실시예는 녹차 카테킨류 8종(Sigma, St. Louis, USA) (-)catechin gallate (CG), (-)epicatechin gallate(ECG), (-)gallocatechin(GC), (+)epicatechin(EC), epigallocatechin gallate(EGCG), (-)epigallocatechin(EGC), catechin, (-)epicatechin(EC) 의 효과를 농도별로 확인한 후(도 2), 활성이 높은 4가지 화합물인 (-)EGCG, (-)CG, (-)EC, (-)ECG를 선별하여 실험을 통해 결정된 적정 농도에서 세포독성 실험과 세포 형태관찰을 통하여 실시하였다.

사람의 간세포주인 HepG2 세포(ATCC)에 human CYP2E1(Clontech의 human liver cDNA로부터 증폭)을 포함한 pLNCX2 vector(BD science)를 transfection한 세포주인 HepG2/2E1 cell을 5 x 10⁴ cells/well로 24 well에 seeding한 후 37ㅀC에서 20시간 동안 배양하고 배지를 모두 제거하였다. PBS로 세척하고, 5% FBS를 포함하는 IMDM (Iscove's Modified Dulbecco's Medium)을 1 ml 첨가한 후, 0.01 ㎍/㎖의 PMA와 함께 2% ethanol (final concentration)를 넣고 24시간과 48시간 경과한 다음 plate를 꺼내어 각각 재처리를 실시하였다. 72시간 후 MTT[3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide : 0.5 mg/ml]를 넣고 37ㅀC에서 2시간 반응시킨 후, 형성된 formazane을 흡광도 570 nm, reference 630 nm에서 측정하여 확인하였다. 대조군은 알코올을 첨가하지 않고 동일조건에서 처리를 해 주었으며, positive control로 vitamin E를 사용하였다. 상기의 방법으로 시행한 결과, (-)EGCG, (-)CG, (-)EC, (-)ECG 등의 네가지 화합물 모두 25 μM의 농도에서 positive control과 비슷하거나 높은 보호 효과를 확인할 수 있었다(도 3). 도 3은 (-)EGCG, (-)CG, (-)EC, (-)ECG 화합물이 알코올 투여 후 간세포 보호 활성을 보이는 도표이다. 여기서, cell viability(%)는 아래 식에 따라 환산하였다.

cell viability (%)= [1 - (As - Ab / Ac - Ab) ] × 100

Ac : 2% 알코올을 처리한 control cell의 흡광도

Ab : 증류수만을 처리한 well의 흡광도

As : 2% 알코올 및 시료를 처리한 cell의 흡광도

상기의 과정에서 2% ethanol 처리 후 24시간을 배양하고 세포형태를 광학 현미경(20x)으로 관찰하였다. 알코올 처리로 인하여, 대조군의 세포막 손상과 형태의 심각한 변화를 관찰할 수 있었으며, 카테킨 화합물을 처리한 세포주는 거의 대조군과 흡사한 형태를 보여, 카테킨화합물들의 알코올에 의한 간 손상 보호효과를 확인 할 수 있었다 (도 4). 도 4는 상기의 화합물들이 알코올 투여 후 간세포 보호효과를 나타내는 세포형태관찰 사진이다. 여기서, (a)는 no addition, (b)는 incubation with 2% ethanol, (c )는 incubation with 2% ethanol and Vit E, (d)는 incubation with 2% ethanol and catechin gallate, (e)는 incubation with 2% ethanol and epicatechin, (f)는 incubation with 2% ethanol and epicatechin gallate, (g)는 incubation with 2% ethanol and epigallocatechin gallate for 24 hr 이다.

실시예 3: (-)EGCG, (-)CG, (-)EC, (-)ECG 화합물의 알코올로 유도되는 활성산소억제효과

상기의 4가지 화합물을 대상으로 알코올 유도 활성산소에 대한 억제효과를 확인하기 위해 DCF-DA(2', 7'-dichlorofluorescin diacetate)를 사용하였다(참조:Jimenez-Lopez, J. M. et al., Free Radical Biology and Medicine, 36, 3, 359-370, 2004). DCF-DA는 세포막을 통하여 확산되며, 세포내 에스터라아제에 의해 DCF-H로 효소분해되고, 이는 활성산소종 존재하에서는 높은 형광성을 띄는 DCF의 형태로 빠르게 산화됨으로써 활성산소의 생성을 추적하는 지표로 사용된다.

실시예 2에서 사용한 HepG2/2E1 cell을 이용하여 5 x 10⁴ cells/well로 24 well에 seeding한 후 37℃에서 20시간 동안 배양하고 배지를 모두 제거하였다. PBS로 세척하고, 5% FBS를 포함하는 IMDM(Iscove's Modified Dulbecco's Medium)을 1 ml첨가한 후, 0.01 ㎍/㎖의 PMA와 함께 2% ethanol(final concentration)를 넣고 24시간 경과한 다음 plate를 꺼내어 재처리하였다. 48시간 후 원배지를 모두 제거하고, PBS로 2회 세척한 후 25 μM의 DCF-DA를 PBS로 희석하여 plate에 첨가하였다. 37℃에서 30분 동안 암반응시킨 후, PBS로 다시 2회 세척하고 excitation 485 nm, emission 530 nm에서 spectrofluorometer(Tecan)으로 형광도를 측정하였다. 그 결과 (-)EGCG, (-)CG, (-)EC, (-)ECG 등 카테킨류의 활성산소 생성량은 알코올 처리군과 비교할 때 각각 51%, 51%, 61%, 53%의 감소효과를 보여 positive control인 vitamin E(59%)와 비슷하거나 약간 높은 활성산소 억제능을 확인할 수 있었다(도5). 도 5는 상기의 화합물이 알코올 투여 후 활성산소종 생성 억제효과를 비교하는 도표이다.

실시예 4: (-)EGCG, (-)CG, (-)EC, (-)ECG 화합물의 CYP2E1 저해활성능

알코올 유도 활성산소종을 발생하는 CYP2E1의 저해활성능을 (참조: Phillips et al. cytochromeP450 protocol, 147-161, Human press Inc. 1998) 아래와 같은 실험으로 확인하였다. CYP2E1, cytochromeP450 reductase (bicistronic vector인 pCW vector에 Clontech으로부터 구입한 human liver cDNA에서 증폭시킨 유전자를 coloning)및 cytochrome b₅(pACYC184 vector:ATCC-37033 에 상기와 같은 방식으로 증폭시킨 유전자를 cloning)를(고려대 동미숙 박사 제공) transduction한 DH5α의 membrane fraction을 조제한 후 p-nitrophenol hydroxylation을 실시하였다. 실험실시에서 CYP2E1는 50 pmol, pH 7.6의 phosphate buffer, NGS generation system, 1 mM p-nitrophenol과 0, 10, 25, 50 μM의 네가지 카테킨 화합물을 첨가 하고 37℃ 수조에서 40분간 반응시켰다. 반응은 20% trichloroacetic acid를 100 ㎕ 첨가함으로써 종결되었으며, 5,000 rpm에서 15분간 원심분리하여 상등액만을 취해 2 M NaOH 250 ㎕를 넣어 발색시켜 4-nitrocatechol의 생성을 흡광도 490 nm에서 측정하였다. 그 결과 네가지 카테킨류 화합물의 농도별 저해활성을 확인할 수 있었다 (도6). 도 6은 상기의 화합물이 CYP2E1의 활성저해효과를 비교하는 도표이다. CYP2E1의 활성은 product 생성량, 반응시간과 반응에 사용된 P450의 양, 즉 nmol/min/P450(pmol)로 나타내었다. 도 6으로부터, 50 ㎛의 농도에서, EGCG, EC, ECG, CG순으로 높은 저해능을 나타내는 것을 확인하였다.

실시예 5: 녹차 추출물의 제제화 (정제)

하기의 배합의 정제를 통상의 타정기에 의해 제조하였다.

실시예 1의 녹차추출물의 분말 20질량부

덱스트린 72질량부

분당(粉糖) 80질량부

글리세린지방산에스테르 8질량부

원료의 혼합과 타정은 용이하고, 정미가 양호한 정제가 얻어졌다.

실시예 6: 녹차 추출물의 제제화 (갭슐제)

통상의 방법에 의해, 이하의 조성을 갖는 캡슐제를 제조하였다. 또한, 캡슐에는 1호 하드젤라틴캡슐을 사용하였다.

<1캡슐(1정 200mg)중의 조성>

실시예 1의 녹차추출물의 분말 5mg

콘스타치 60.0mg

유당 100.0mg

유산칼슘 10.0mg

하이드록시프로필셀룰로오스(HPC-L) 10.0mg

실시예 7: 녹차 추출물의 제제화 (과립)

통상의 방법에 의해, 하기의 배합의 인스턴트티 과립을 유동층조립기에 의해 제조하였다.

실시예 1의 녹차추출물의 분말 20질량부

올리고당 40질량부

구연산 50질량부

설탕 50질량부

덱스트린 810질량부

원료의 혼합과 유동층조립기에 의한 과립화는 용이하며, 정미가 양호한 인스턴트티과립이 얻어졌다.

이상에서 살펴 본 바와 같이 본 발명은 (-)EGCG, (-)CG, (-)EC, (-)ECG 화합물들이 알코올 유도 CYP2E1에 의해 생성된 활성산소종으로부터 간세포 보호활성이 뛰어나고, 활성산소종 억제효과가 우수할 뿐만 아니라, 이들 화합물은 녹차의 성분으로 상대적으로 안전성이 뛰어나므로, 이를 유효성분으로 하는 알코올성 간세포 보호용 기능성식품이나 의약품, 식품첨가제로 사용될 수 있다.

Claims

(-)에피갈로카테킨 갈레이트(epigallocatechin gallate), (-)에피카테킨(epicatechin), (-)카테킨 갈레이트(catechin gallate) 및 (-)에피카테킨 갈레이트(epicatechingallte)로 구성된 군에서 선택된 카테킨류 화합물을 유효성분으로 함유하는 알코올 유도 CYP 2E1(cytochromeP450 2E1)에 의한 활성산소 억제제.
제 1항에 있어서, 상기 카테킨류 화합물은 녹차 유래 카테킨류 화합물인 것을 특징으로 하는 알코올 유도 CYP 2E1에 의한 활성산소 억제제.
제 1항에 있어서, 상기 카테킨류 화합물은 녹차의 메탄올 추출물을 핵산, 클로로포름, 에틸아세테이트 순으로 분획한 후, 소수성 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 및 HPLC(High Performance Liquid Chromatography)의 일련의 과정을 거쳐 정제된 것을 특징으로 하는 알코올 유도 CYP 2E1에 의한 활성산소 억제제.
제 1항에 있어서, 간세포 보호를 위해 사용되는 것을 특징으로 하는 알코올 유도 CYP 2E1에 의한 활성산소 억제제.
제 1항에 있어서, 식품첨가제로 사용되는 것을 특징으로 하는 알코올 유도 CYP 2E1에 의한 활성산소 억제제.
제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 따른 활성산소 억제제를 유효성분으로 함유하는 간세포 보호용 기능성 식품.
제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 따른 활성산소 억제제를 유효성분으로 함유하는 간세포 보호용 약학적 조성물.