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KR20020003413A - 옥수수불검화 정량 추출물 및 후박 추출물을 함유하는치주질환 예방 및 치료제 조성물 - Google Patents

옥수수불검화 정량 추출물 및 후박 추출물을 함유하는치주질환 예방 및 치료제 조성물 Download PDF

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KR20020003413A
KR20020003413A KR1020000034478A KR20000034478A KR20020003413A KR 20020003413 A KR20020003413 A KR 20020003413A KR 1020000034478 A KR1020000034478 A KR 1020000034478A KR 20000034478 A KR20000034478 A KR 20000034478A KR 20020003413 A KR20020003413 A KR 20020003413A
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periodontal disease
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정종평
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강재헌
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Abstract

본 발명은 옥수수불검화 정량 추출물과 후박 추출물을 유효성분으로 함유하는 치주질환 예방 및 치료제의 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 조성물은 치조골 흡수 및 치주인대 파괴에 대한 예방 및 재생효과가 있는 옥수수불검화 정량 추출물과 치주질환의 원인균의 하나인 혐기성 그람음성균 프레보텔라 인터미디아에 대해 우수한 살균작용을 가지는 후박 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 항염작용을 나타내어 기존의 치주질환 예방 및 치료제에 비하여 월등히 우수한 치주질환을 예방 및 치료 효과를 나타낸다.

Description

옥수수불검화 정량 추출물 및 후박 추출물을 함유하는 치주질환 예방 및 치료제 조성물{Compositions of containing titrated extract of the unsaponifiable fraction of Zea Mays L. and extract of Magnoliae Cortex for prevention and treatment of periodontal disease}
본 발명은 옥수수불검화 정량 추출물과 후박 추출물을 유효성분으로 함유하는 치주질환 예방 및 치료제 조성물에 관한 것이다.
치주질환에 이환되게 되면 임상적으로 치은 출혈과 종창, 치주낭의 형성 및 치조골의 파괴 등으로 치아의 상실을 가져오게 된다. 이러한 치주질환의 원인으로서는 국소적 요인과 전신적 요인이 있는데, 국소적 요인으로 치태가 치주낭 내에 기계적으로 축적되면 주변에 존재하는 세균들의 서식처가 되며 이러한 서식은 점차 호기성, 통기성, 그람 양성 세균에서 혐기성 그람음성 세균으로 점차 이행되며, 치주낭의 심부로 증식되게 된다. 이때 증식된 혐기성 그람음성 세균으로 점차 이행되며, 치주낭의 심부로 증식되게 된다. 이때 증식된 혐기성 그람음성 세균의 독소 및 모든 산물이 직접 조직을 파괴하거나 면역계를 자극하여 자극된 면역계에서부터 여러 가지 작용에 의하여 치주조직파괴와 더불어 염증을 유발하게 된다.
이에 대한 방어기전으로서 다형핵 백혈구의 기능과 면역반응이 전신적인 요인으로서 작용하게 된다. 그러나, 근원적인 인자인 혐기성 그람음성 세균에 대한 항균작용 및 정균작용과 이들 세균의 독성산물을 제거하고 파괴, 소실된 치주조직을 원상 회복시키는 것이 치주질환의 예방 및 치료에 중요한 관건이 되는 것으로 알려져 있다.
치주질환 예방 및 치료제는 1920년대부터 많은 연구가 진행되어 왔으며 특히, 구미 각국에서는 항생제 및 화학요법제를 이용한 치태제거에 주력하여 왔다. 이러한 연구는 치태내에 존재하는 세균 중 치주병인균의 윤곽이 밝혀지고 있는 1970년 이후에 더욱 활발히 개발되어 페놀성 화합물 제제인 리스테린, 4급 암모니움 화합물 제제인 스코푸, 클로르헥시딘 제제인 페리덱스 등이 현재 구미에서 시판되고 있으며, 국내에서도 수입 판매되고 있다.
제제중 리스테린이나 스코푸는 화학요법 제제로 부작용이 경미한 반면 치태 제거 및 항균효과가 월등하지 못한 실정이고, 클로르헥시딘 제제인 페리덱스는 상당히 효과적으로 치태제거 및 항균작용을 보이나 부작용이 심하여 통상 사용하는 0.12% 농도에서도 구강 점막 궤양, 박리성 치은염 유발, 착색 등이 나타나고, 장기간 사용할 시 구강건조증 등의 부작용이 있다고 보고되고 있다. 따라서, 완벽한 치주질환 예방 및 치료효과를 발현하기 위해서는 혐기성 그람음성 세균에 대해 항균작용 및 정균작용을 가지고 동시에 발생된 염증을 제거하고 파괴 및 소실된 치주조직을 원상시키는 활성을 지니는 제제의 출현이 필요하였다.
이러한 관점으로부터 본 발명자는 치주질환 예방 및 치료에 유용한 생약제제를 연구하던 중 치주병인균에 선택적으로 항균작용을 나타내면서 기존의 항생제나 항균제인 클로르헥시딘, 페놀화합물인 리스테린, 4급 암모늄 화합물 제제인 스코푸 등이 지니는 장기간 사용할 때의 균교대 현상, 균내성 발현, 치주조직의 박리성 탈락 및 발암성의 위험 등이 없는 제제로, 충치 원인균인 스트렙토코쿠스 뮤탄스(Streptococcus mutans)에 대하여 항균작용을 가지는 것으로 발표되어 있고(일본 특허출원 공고 제 평 2-17524호), 치주질환의 원인균의 하나인 혐기성 그람음성균 프레보텔라 인터미디아(Prevotella intermedia)에 대해 우수한 살균작용을 가지는 것으로 본 발명자가 보고한(한국특허출원 제 92-16516호) 후박 추출물을 기존에 상품화되어 있던 옥수수불검화 정량 추출물과 혼합하여 실험한 결과 기존의 옥수수불검화 정량 추출물의 효과를 훨씬 더 강화시킨다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다. 옥수수불검화 정량 추출물은 규칙적으로 계속 복용시 치조골 흡수 및 치주인대 파괴에 대한 예방 및 재생효과가 있다고 보고되었고(Chaput, L'information Dentaire, 1964, 23, 2148-2153), 치아동요도도 약간 감소했으며, 치주낭 깊이도 감소했다고 보고되었다(Ackerman et al.L'information Dentaire, 1968, 8:751-758). 또, 옥수수불검화 정량 추출물을 투여하고 변형 Widman 판막수술을 시행한 후 치아동요도가 감소했고, 치조백선 출현율도 높았다고 보고하였다(최 등, 대한치주과학회지, 1989, 19(1):63-70;권 등, 대한치주과학회지, 1994, 24(3):649-660). 이것은 이러한 결과 등을 바탕으로 상업적으로 제품화되어 있으며, 현재에도 여러 가지로 시판되고 있다.
후박 추출물을 유효성분으로 함유하는 치주질환 예방 및 치료제 조성물에 대한 선행기술은 여러 문헌이나 특허에서 공지되어 있는 바, 예컨대 대한민국 등록특허공보 제98-0176015호, 제 98-0143191호, 대한민국 특허공보 제96-0007923호, 대한치주과학회지 vol.22, No.3, 1992, vol.25, No.3, 1995, vol.26, No.2, 1996, vol.27, No.1, 1997, vol.28, No.4, 1998 등에 그 조성물이 기재되어 있다.
상기 선행기술들은 후박에서 추출분리한 마그놀올이나 호노키올이 치주질환의 원인균인 클로로헥시딘과 같은 기존의 항생물질보다 훨씬 안전하고 클로로헥시딘과 혼합 조성하는 경우 상승효과를 나타내었고 프레보텔라 인터메디아(Prevotella intermedia)에 우수한 살균작용을 발휘함을 밝혀내었다(대한민국특허공보 제96-0007923호). 치주질환의 원인균의 하나인 혐기성 그람 음성균 프레보텔라 인터메디아(Prevotella intermedia)에 대해 우수한 살균작용을 가지는 후박 추출물과 콜라게나아제 억제효과 및 조직재생효과가 뛰어난 은행엽 엑스를 유효성분으로 배합조성하여 우수한 항균작용, 정균작용, 항염작용 및 조직재생효과를 나타냄을 밝혀내었으며(대한민국등록특허공보 제98-0143191호), 마그놀올, 호키노올을 주성분으로 함유하는 후박 추출물과 대추 추출물을 유효성분으로 배합 조성하여 우수한 조직재생 및 항균, 항염 효과가 있으며, 특히 고온에서 치주조직세포의 활성을 억제하는 후박 추출물의 단점을 극복하여 우수한 조직재생효과를 나타냄을 밝혀내었다(대한민국등록특허공보 제98-0176015호).
상기 선행기술들은 후박 추출물을 단독으로 또는 대추 추출물, 은행엽 추출물과 특정한 배합비로 배합하여 치주질환의 예방 및 치료에 광범위한 효과, 즉 (1) 약화되거나 파괴된 치주조직에 대한 우수한 재생효과와 (2) 치주조직을 파괴하는염증반응을 억제하며, (3) 치주질환 원인균에 대한 우수한 항균효과를 가지며 기존의 항생제 사용시의 문제점인 부작용을 없애는 것이다. 그러나, 후박 추출물은 우수한 항염, 항균 효과가 있으나 고용량으로 갈수록 치주조직세포의 활성을 저하시키는 단점이 있으며, 대추 추출물과 은행잎 추출물은 우수한 조직 재생효과가 있으나 항균 효과가 미흡하다는, 즉 치주질환 예방 및 치료에 관한 여러 가지 기전중에서 단지 일부의 경로를 통해서만 효과를 나타낸다는 단점이 있다.
본 발명은 상기와 같은 사실에 의거하여 안출한 것으로서, 본 발명자들은 옥수수불검화 정량 추출물을 후박 추출물과 적정비율로 혼합하여 실험한 결과 기존의 옥수수불검화 정량 추출물의 효과를 훨씬 더 강화시킨다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다. 따라서, 본 발명의 목적은 옥수수불검화 정량 추출물에 후박 추출물을 첨가한 치주질환 예방 및 치료제 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명에 사용한 옥수수불검화 정량 추출물은 옥수수의 배아로부터 채취한 옥수수기름을 가성소오다 용액과 유기용매를 사용하여 연속적인 일차검화를 통하여 약 40%의 불검화물을 함유하는 엑스를 제조하고 이것을 알콜성 가성소오다 용액과 환류시키고 검화물을 추출하여 농축시킨다음, 알콜을 가하고 여과하여 스테롤은 회수하고 여과액은 농축하여 불검화물 엑스를 제조한다. 후박 추출물은 중국산 후박 또는 일본 후박에 알콜을 가하여 가온 추출하고 여과, 여과액을 농축하여 사용한다. 이때, 후박 엑스에는 주성분인 magnolol이 1.0% 이상인 것을 사용하였다.
본 발명의 옥수수불검화 정량 추출물과 후박 추출물 배합 조성물은 통상적인 약제학적 부형제를 첨가할 수 있으며, 제형으로는 정제, 연고제, 치약 액제(가글), 분무제의 형태로 조제할 수 있다. 예를 들면, 단독으로서 치약조성물에 포함시킬 수 있고, 통상적인 담체와 혼합하여 연고제나 용액제로 제형화하여 치주질환의 예방 및 치료제로서 사용할 수 있다.
또한, 통상적인 가글제에 포함시켜 양치질 후에 입안을 헹구거나, 분산제를 포함시켜 압축용기에 포장하여 치주질환 부위에 분무할 수도 있고, 치약성분에 포함시켜 계속적으로 장기간 동안 치주질환의 예방 및 치료효과를 얻을 수도 있다. 이러한 제형에 있어서 옥수수불검화 정량 추출물과 후박 추출물의 배합비는 다양하게 변화시킬 수 있고 외용제제와 내부제제와의 약효차이에 따라 약간의 차이는 있으나, 바람직하게는 옥수수불검화 정량 추출물: 후박 추출물의 비율이 0.5:1 내지 1:1(중량비)이다. 이 범위의 비율로 혼합한 경우에서 가장 효과가 우수하였고, 1.5:1 내지 2.0:1로 혼합한 경우에는 그 효과가 다소 0.5:1 내지 1.0:1로 혼합한 경우보다 다소 약했다.
이하, 본 발명을 참고예, 실험예 및 실시예를 통하여 보다 구체적으로 설명하면 다음과 같다.
참고예 1: 옥수수불검화 정량 추출물의 제조
옥수수의 배아에서 채취한 옥수수기름(corn oil) 1kg을 라운드플라스크에 넣고 n-헥산 10L를 가하여 점성이 적은 용액으로 한 다음, 여기에 5% 가성소다 용액 0.68L를 가하여 55℃에서 3시간 환류시키고 냉각하여 2시간 방치시키면 2층으로 분리되는데, 옥수수 기름중의 지방과 기름 및 유리지방산은 검화와 중화에 의하여 대부분 수층에 녹아 나오는 것을 제거하였다. 남은 잔사는 불검화물 함량이 약 40%인 진한 갈색의 점조한 물질로 0.045kg이었다. 이것을 제 2차 검화를 위하여 라운드플라스크에 옮기고, 위의 검화조작을 2회 반복하였다. 이러한 과정에 의하여 얻은 불검화물을 농축하여 무색의 백색결정인 베타-시토스테롤을 주성분으로 하는 건조물을 얻었다. 이것을 가스크로마토그래피 분석을 해보면 베타-시토스테롤이 약 70%, 캄페스테롤이 6%이며, 알파-시토스테롤이 약 16% 함유된 것으로서, 전체 스테롤 성분이 약 93%인 비교적 순수한 물질이다.
참고예 2: 후박 추출물의 제조
후박(Magnolia officinalisL.) 또는 일본후박(M. obovataThunb) 500g을 작게 절단하고 라운드플라스크에 넣고 75% 에탄올 3L를 가하여 60℃의 수욕에서 2시간 추출하고 냉각하여 여과한 다음 여과액을 얻었다. 남은 잔사에 상기 조작을 다시 하여 2차 여과액을 얻고, 1, 2차 여과액을 합하여 감압 농축하여 에탄올추출물(90g, 18%)을 얻었다. 이 추출물을 HPLC로 주성분인 magnolol을 지표로 정량하여 이 물질이 0.5% 이상 함유된 것(일본약국방에서 magnolol 함량이 0.8% 이상으로 규정)을 실험에 사용하였다.
참고예 3: 옥수수불검화 정량 추출물과 후박 추출물의 혼합물 제조
옥수수불검화 정량 추출물과 후박 추출물을 각각 0.4% 및 0.3%의 수용액으로만든 후에, 옥수수불검화 정량 추출물:후박 추출물=0.5:1, 1.0:1, 1.5:1, 2.0:1(중량비)의 비율로 혼합하여 실험에 이용하였다.
실험예 1: 옥수수불검화 정량 추출물과 후박 추출물 혼합물의 치은섬유아세포 활성도 효과 시험
치은섬유아세포 배양을 위하여 교정치료를 하는 환자를 대상으로 제일 소구치의 치은부위를 채취하였다. 채취직전에 큐렛을 이용하여 치석 및 치태 등을 제거하고 생리 식염수로 여러 번 씻어 내었다. 치간부위에 내사면 절제를 가한 다음 정상치은조직을 채취하였다. 채취한 조직편을 100U/㎖ Penicillin과 100㎍/㎖ Streptomycin 및 10% fetal bovine serum(FBS)가 첨가된 α-minimal essential medium(α-MEM)을 이용하여 세포배양을 시행하였으며 3일 간격으로 배양액을 교환해주면서 5계대 배양시켰다. 배양시 습도는 95%, 온도는 37℃를 유지하면서 95% 공기와 5%의 CO2를 계속 공급하였다. 계대배양한 치은섬유아세포를 0.25% Trypsin-EDTA용액으로 처리한 후 원심분리하여 배양액으로부터 세포부유액을 만들고 표준혈구계산기로 well 당 1×105개의 세포수가 되게 하여 접종하였다. 각각의 well에 추출물 또는 그 혼합조성물을 각각 20㎕씩 넣고 배양액을 180㎕씩 넣어 전부 200㎕가 되게 하였다. 이들을 95% 습도, 37℃를 유지하면서 95% 공기와 5%의 CO2를 계속 공급하면서 24시간 배양하고 배양이 끝난 후 생리식염수에 용해한 MTT(methyl thiazol-2-YL-2,5-diphenyl tetraolium bromide, Sigma Co., St. Louis, M.O,U.S.A.) 용액 50㎕를 각 well에 넣고 4시간동안 배양한 후 MTT용액을 제거하고 formazon 결정을 용해시키기 위해 DMSO를 각 50㎕씩 첨가하였다. Plate를 잘 흔든 후 Enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) reader(Thermo max, molecular devices, Menlo Park C.A. U.S.A.)로 570nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 매 실험마다 실험용액이 들어있지 않은 α-MEM 배양액 well을 사용하였다. 모든 실험결과는 대조군에 대한 백분율로 계산하였다. 실험물질로는 0.4%, 0.3%의 옥수수불검화 정량 추출물, 0.4%, 0.3%의 후박 추출물, 그리고 각각 옥수수불검화 정량 추출물:후박 추출물의 혼합물(0.5:1, 1:1, 1.5:1, 2:1)을 사용하였다.
그 결과 옥수수불검화 정량 추출물:후박 추출물이 0.5:1인 경우에 옥수수불검화 정량 추출물 단독 혹은 후박 추출물 단독으로 존재할 때에 비해 현저하게 높은 세포활성도를 나타내었다. 1:1로 혼합된 경우에도 각 추출물이 단독으로 존재할 때보다 현저히 높은 세포활성도를 나타내었고, 1.5:1, 2:1 혼합비율에서도 0.5:1, 1:1의 혼합비율일 때보다는 낮지만 여전히 각 추출물이 단독으로 존재할 때에 비해 현저히 높은 세포활성도를 나타내었다. 이 결과는 옥수수불검화 정량 추출물과 후박 추출물을 혼합한 경우에 두가지 추출물이 함께 작용하여 상승효과(Synergism)를 나타내었기 때문인 것으로 여겨진다.(표 1. 참조)
각 추출물과 그 혼합물이 치은섬유아세포의 활성도에 미치는 영향
시험대상 추출물 세포 활성도(%) 세포 활성도 증가율(각실험군-대조군) 세포 활성도의 증가율 비교(%) (혼합물/0.4%옥수수 불검화 정량 추출물)
대조군(Nothing added) 100 ·
0.4% 옥수수불검화 정량 추출물 120.5 20.5 ·
0.4% 후박 추출물 120.3 20.3 ·
0.4%옥수수불검화 정량 추출물(A)과0.4%후박 추출물(B) 혼합물 A:B= 0.5:1 142.2 42.2 205.9%
A:B= 1.0:1 138.8 38.8 189.3%
A:B= 1.5:1 138.5 38.5 188.8%
A:B= 2.0:1 122.4 22.4 109.3%
* 실험시에 이용한 각 추출물 혹은 그 혼합물의 양은 동일하였음(20㎕).
* 세포활성도 증가율 비교(%)에서 0.4% 옥수수불검화 정량 추출물을 기준으로 하였음.
각 추출물과 그 혼합물이 치은섬유아세포의 활성도에 미치는 영향
시험대상 추출물 세포 활성도(%) 세포 활성도 증가율 (각실험군-대조군) 세포 활성도의 증가율 비교(%) (혼합물/0.3%옥수수 불검화 정량 추출물)
대조군(Nothing added) 100 ·
0.3% 옥수수불검화 정량 추출물 116.7 16.7 ·
0.3% 후박 추출물 117.1 17.1 ·
0.3%옥수수불검화 정량 추출물(A)과0.3%후박 추출물(B) 혼합물 A:B= 0.5:1 141.1 41.1 246.1%
A:B= 1.0:1 133.6 33.6 201.2%
A:B= 1.5:1 129.5 29.5 176.6%
A:B= 2.0:1 118.6 18.6 111.4%
* 실험시에 이용한 각 추출물 혹은 그 혼합물의 양은 동일하였음(20㎕).
* 세포활성도 증가율 비교(%)에서 0.3% 옥수수불검화 정량 추출물을 기준으로 하였음.
실험예 2: 옥수수불검화 정량 추출물과 후박 추출물 혼합물의 항염효과 실험
1) 섬유아세포의 Interleukin-1β(IL-1β) 생산 억제 효과
표준혈구계산기로 세포수를 센 다음 24-well plate에 well당 5×105개의 세포를 접종하였다. 24시간동안 배양한 다음 배양액을 제거하여 Hank's balanced salt solutions(HBSS)로 세척하였다. 각 추출물이 함유된 배양액으로 다시 24시간 배양한 후 배양액을 모으고 HBSS로 세척하여 이를 다시 모은 뒤 0.02% EDTA-2.5% trypsin-PBS(Phosphate buffer solutions)(10:1:9)로 세포를 분리해서 이를 원심분리하여 상층액을 모은 뒤 세포들은 따로 모았다. 세포 속에 함유되어 있는 IL-1β를 추출하기 위해 세포를 3회 냉동-해동시킨 다음 4℃에서 30분동안 0.5ml의 phosphate buffer(pH=7.2, 13mM phosphate, 0.15M NaCl)에 녹이고 suspend 시킨 뒤 2000×g에서 10분동안 원심분리하였다. Sample A라고 정한 상층액은 Interleukin-1β(IL-1β)의 정량분석에 사용하였고, 침전물은 branson sonifier cell disrupter B15(Fisher, U.S.A.)로 4℃에서 2분동안 sonication 시킨 후 0.5ml의 PBS에서 부유시켰다. 이 튜부를 원심분리시키고 IL-1β 결정을 위해서 상층액을 모았다(Sample B). 그리고, pellet은 냉동-해동 cycle을 통해서 0.5ml PBS에 다시 부유시킨후 원심 분리시켰다. 상층액은 다시 IL-1β의 결정을 위해서 모았다(Sample C). IL-1β를 함유한 sample A, B, C 총량을 더해서 IL-1β의 총량이라 하였다. IL-1β의 농도는 민감도가 높은 Interleukin-1β ELISA kit(Cistron Biotechnology, U.S.A.)를이용하여 측정하였다. 상기 ELISA kit의 well에 각각의 추출물 및 그 혼합물과 non-specific binding(NSB) well을 복제로 측정하였다. 각 well에 100㎕씩 첨가하였고 NSB well을 zero standard 로 하였다(Matrix with No IL-lβ). Well을 덮고 plate를 37℃에서 20분간 배양하였다. Well을 wash buffer로 3회 세척하였다. 세척과정중 buffer로 각 well당 200-300㎕를 dispend 한 뒤 30초후 aspiration하고 이를 반복하여 마지막 세척 후 clean paper towel로 잔존하는 wash buffer를 제거하였다. 각 well에 100㎕ IL-1β antiserum(rabbit)을 첨가하고, 다시 37℃에서 20분간 배양하였다. 상기한 방법으로 반복 세척한 후 각 well에 100㎕의 anti-rabbit IgG-HRP conjugate를 첨가하였다. well을 덮은 뒤 plate를 실온에서 20분간 배양한 뒤 상기한 방법으로 세척하고 각 well에 100㎕ IL-1β antiserum(rabbit)을 첨가한 채 실온에서 10분간 배양하였다. 각 well에 4N sulfuric acid를 50㎕ 첨가하고 15분 이내에 측정하였다. microtitration plate reader(THERMO maxTM, Molecular Devices Co., U.S.A.)를 450nm에 맞추고 흡광도를 측정하였다.
인터류킨-1β의 생산차단효과에 대한 실험에서, 0.4%, 0.3%의 옥수수불검화 정량 추출물 두 가지 모두에서 단독으로 이용된 경우보다 옥수수불검화 정량 추출물:후박 추출물 0.5:1로 혼합한 조성물에서 억제하는 효과가 훨씬 컸다. 이 경우에는 두 추출물을 혼합함으로써 상승효과(Synergism)를 나타내었다. 이런 상승작용은 옥수수불검화 정량 추출물:후박 추출물을 1:1로 혼합한 조성물에서도 나타났으며, 1.5:1, 2:1로 혼합한 조성물에서도 옥수수불검화 정량 추출물을 단독으로 실험한 경우보다 인터류킨-1β의 생산을 억제하는 효과가 뛰어났다(표 2 참조).
각 추출물과 그 혼합물의 Interleukin-1β(IL-1β) 생산 억제효과
시험대상 추출물 Interleukin-1β의 생산량(pg) Interleukin-1β의 생산 억제율 비교 (100-혼합물/0.4%옥수수불검화 정량 추출물(%))
대조군 89
0.4% 옥수수불검화 정량 추출물 40 ·
0.4% 후박 추출물 26 ·
0.4%옥수수불검화 정량 추출물(A)과0.4%후박 추출물(B) 혼합물 A:B= 0.5:1 20 50%
A:B= 1.0:1 24 40%
A:B= 1.5:1 25 37.5%
A:B= 2.0:1 28 30%
* 대조군은 Lipopolysaccharide로 자극한 후, 특별한 투약이 없었음.
* 실험군은 Lipopolysaccharide로 자극한 후, 각 실험약을 투약하였음.
* Lipopolysaccharide: Interleukin-1β 생산을 자극하는 물질.
* Interleukin-1β: 염증의 매개물질.
* 실험시에 이용한 각 추출물 혹은 그 혼합물의 양은 동일하였음(20㎕).
* pg: picogram
* Interleukin-1β의 생산 억제율 비교(%)에서 0.4% 옥수수불검화 정량 추출물을 기준으로 하였음.
각 추출물과 그 혼합물의 Interleukin-1β(IL-1β) 생산 억제효과
시험대상 추출물 Interleukin-1β의 생산량(pg) Interleukin-1β의 생산 억제율 비교 (100-혼합물/0.3%옥수수불검화 정량 추출물(%))
대조군(Lipopolysaccharide 자극군) 89 ·
0.3% 옥수수불검화 정량 추출물 44 ·
0.3% 후박 추출물 28 ·
0.3%옥수수불검화 정량 추출물(A)과0.3%후박 추출물(B) 혼합물 A:B= 0.5:1 24 45.5%
A:B= 1.0:1 26 40.9%
A:B= 1.5:1 29 34.1%
A:B= 2.0:1 31 29.5%
* 대조군은 Lipopolysaccharide로 자극한 후, 특별한 투약이 없었음.
* 실험군은 Lipopolysaccharide로 자극한 후, 각 실험약을 투약하였음.
* Lipopolysaccharide: Interleukin-1β 생산을 자극하는 물질.
* Interleukin-1β: 염증의 매개물질.
* 실험시에 이용한 각 추출물 혹은 그 혼합물의 양은 동일하였음(20㎕).
* pg: picogram
* Interleukin-1β의 생산 억제율 비교(%)에서 0.3% 옥수수불검화 정량 추출물을 기준으로 하였음.
2) 섬유아세포의 Prostaglandin E 2 (PGE 2 ) 생산 차단 효과
5회 내지 7회 계대배양된 치은섬유아세포를 24 well plate에 α-MEM 배지에서 105cell/well로 분주한 후 recombinant Human Interleukin-1β(rHuIl-1β, Genzyme, Co., Cambridge, M.A., U.S.A.) 1ng/ml을 첨가하여 Prostaglandin E2(PGE2)생성을 유도하고 각각의 추출물 및 그 혼합물을 첨가하여 PGE2생성차단 효과를 관찰하였다. 아무런 첨가제를 가하지 않은 well을 대조군으로 하였다. 각 well을 48시간동안 무균적으로 배양한 후, 각 well의 배지를 수집하여 배지내의 PGE2를 PGE2enzyme immunoassay system(Amersham, In, Buckinghamshire, U.K)을 이용하여 ELISA reader로 450nm에서 비색정량하였다.
PGE2의 생산차단효과에 대한 실험에서 0.4%, 0.3%의 옥수수불검화 정량 추출물 두 가지 모두에서 단독으로 이용된 경우보다 옥수수불검화 정량 추출물:후박 추출물 0.5:1로 혼합한 조성물에서 억제하는 효과가 훨씬 컸다. 이 경우에서도 두 추출물을 혼합함으로써 상승효과(Synergism)를 보여주었다. 억제하는 효과는 1:1로 혼합한 조성물, 1.5:1로 혼합한 조성물에서도 나타났으며, 2:1로 혼합한 조성물에서도 효과는 있었다(표 3 참조).
이 두 가지 실험에서 옥수수불검화 정량 추출물과 후박 추출물의 혼합 조성물이 항염 작용을 나타내고, 그 효과가 옥수수불검화 정량 추출물이 단독으로 존재할 때보다 우수함을 확인하였다. 이 항염효과는 옥수수불검화 정량 추출물:후박 추출물의 혼합비율이 0.5:1, 1.0:1 인 경우에 더욱 우수하게 나타났다.
각 추출물과 그 혼합물의 Prostaglandin E2(PGE2) 생산 차단효과
시험대상 추출물 Prostaglandin E 2 의 생산량(pg) Prostaglandin E 2 의 생산 억제율 비교 (100-혼합물/0.4%옥수수불검화 정량 추출물(%))
대조군 62
0.4% 옥수수불검화 정량 추출물 16.5 ·
0.4% 후박 추출물 8.6 ·
0.4%옥수수불검화 정량 추출물(A)과0.4%후박 추출물(B) 혼합물 A:B= 0.5:1 6.8 58.8%
A:B= 1.0:1 7.8 52.7%
A:B= 1.5:1 7.6 53.9%
A:B= 2.0:1 8.6 47.9%
* 대조군은 Interleukin-1β로 자극한 후, 특별한 투약이 없었음.
* 실험군은 Interleukin-1β로 자극한 후, 각 실험약을 투약하였음.
* Interleukin-1β: Prostaglandin E2생산을 자극하는 물질.
* Prostaglandin E2: 염증의 매개물질.
* 실험시에 이용한 각 추출물 혹은 그 혼합물의 양은 동일하였음(20㎕).
* pg: picogram
* Prostaglandin E2의 생산 억제율 비교(%)에서 0.4% 옥수수불검화 정량 추출물을 기준으로 하였음.
각 추출물과 그 혼합물의 Prostaglandin E2(PGE2) 생산 차단효과
시험대상 추출물 Prostaglandin E 2 의 생산량(pg) Prostaglandin E 2 의 생산 억제율 비교 (100-혼합물/0.3%옥수수불검화 정량 추출물(%))
대조군 62
0.3% 옥수수불검화 정량 추출물 18 ·
0.3% 후박 추출물 10.5 ·
0.3%옥수수불검화 정량 추출물(A)과0.3%후박추출물(B) 혼합물 A:B= 0.5:1 7.9 56.2%
A:B= 1.0:1 8.6 52.2%
A:B= 1.5:1 9.6 46.7%
A:B= 2.0:1 10.5 41.7%
* 대조군은 Interleukin-1β로 자극한 후, 특별한 투약이 없었음.
* 실험군은 Interleukin-1β로 자극한 후, 각 실험약을 투약하였음.
* Interleukin-1β: Prostaglandin E2생산을 자극하는 물질.
* Prostaglandin E2: 염증의 매개물질.
* 실험시에 이용한 각 추출물 혹은 그 혼합물의 양은 동일하였음(20㎕).
* pg: picogram
* Prostaglandin E2의 생산 억제율 비교(%)에서 0.3% 옥수수불검화 정량 추출물을 기준으로 하였음.
본 발명의 옥수수불검화 정량 추출물과 후박 추출물의 배합 조성물은 통상적인 약제학적 방법으로, 예를들면, 정제, 연고제, 치약, 액제, 분무제의 제형으로 제조할 수 있으며, 두 추출물의 배합비는 바람직하게는 옥수수불검화 정량 추출물:후박 추출물의 혼합 비율이 1:0.5 내지 1:2 (중량비), 특히 바람직하게는 1:0.5 내지 1:1 (중량비)이며, 그 조성물들의 예를 들면 다음과 같다.
이하, 본 발명의 구체적인 구성과 작용을 실시예를 들어 더욱 상세히 설명하면 하기과 같고, 하기 실시예에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 필림코팅정-1정(600mg중)
옥수수불검화 정량 추출물 20mg
후박 추출물 40mg
유당 525mg
히드록시프로필셀룰로오스 5mg
스테아린산마그네슘 3mg
글리세린 2mg
히드록시프로필메틸셀룰로오스 5mg
통상적인 정제 제조방법에 따라 제조하고 복용량으로서 1일 3회, 1회 1정씩 복용한다.
실시예 2: 필림코팅정-1정(600mg중)
옥수수불검화 정량 추출물 30mg
후박 추출물 30mg
유당 525mg
히드록시프로필셀룰로오스 5mg
스테아린산마그네슘 3mg
글리세린 2mg
히드록시프로필메틸셀룰로오스 5mg
통상적인 정제 제조방법에 따라 제조하고 복용량으로서 1일 3회, 1회 1정씩 복용한다.
실시예 3: 필림코팅정-1정(600mg중)
옥수수불검화 정량 추출물 40mg
후박 추출물 20mg
유당 525mg
히드록시프로필셀룰로오스 5mg
스테아린산마그네슘 3mg
글리세린 2mg
히드록시프로필메틸셀룰로오스 5mg
통상적인 정제 제조방법에 따라 제조하고 복용량으로서 1일 3회, 1회 1정씩 복용한다.
실시예 4: 연고제(수치는 중량%)
옥수수불검화 정량 추출물 0.20
후박 추출물 0.40
카복시비닐폴리머 7.00
글리세롤 30.00
페퍼민트오일 0.006
프로필렌글리콜 30.00
증류수를 가하여 100이 되게 한다.
상기 조성물을 통상적인 연고제 제조방법으로 혼합하여 연고제를 제조하고, 구강 내 치주염이 있는 치아 주위에 수시로 도포하여 치주염 또는 치은염을 치료한다.
실시예 5: 연고제(수치는 중량%)
옥수수불검화 정량 추출물 0.30
후박 추출물 0.30
카복시비닐폴리머 7.00
글리세롤 30.00
페퍼민트오일 0.006
프로필렌글리콜 30.00
증류수를 가하여 100이 되게 한다.
상기 조성물을 통상적인 연고제 제조방법으로 혼합하여 연고제를 제조하고 구강 내 치주염이 있는 치아 주위에 수시로 도포하여 치주염 또는 치은염을 치료한다.
실시예 6: 연고제(수치는 중량%)
옥수수불검화 정량 추출물 0.40
후박 추출물 0.20
카복시비닐폴리머 7.00
글리세롤 30.00
페퍼민트오일 0.006
프로필렌글리콜 30.00
증류수를 가하여 100이 되게 한다.
상기 조성물을 통상적인 연고제 제조방법으로 혼합하여 연고제를 제조하고 구강 내 치주염이 있는 치아 주위에 수시로 도포하여 치주염 또는 치은염을 치료한다.
실시예 7: 연고제(수치는 중량%)
옥수수불검화 정량 추출물 0.40
후박 추출물 0.80
카복시비닐폴리머 7.00
글리세롤 30.00
페퍼민트오일 0.006
프로필렌글리콜 30.00
증류수를 가하여 100이 되게 한다.
상기 조성물을 통상적인 연고제 제조방법으로 혼합하여 연고제를 제조하고구강 내 치주염이 있는 치아 주위에 수시로 도포하여 치주염 또는 치은염을 치료한다.
실시예 8: 연고제(수치는 중량%)
옥수수불검화 정량 추출물 0.60
후박 추출물 0.60
카복시비닐폴리머 7.00
글리세롤 30.00
페퍼민트오일 0.006
프로필렌글리콜 30.00
증류수를 가하여 100이 되게 한다.
상기 조성물을 통상적인 연고제 제조방법으로 혼합하여 연고제를 제조하고 구강 내 치주염이 있는 치아 주위에 수시로 도포하여 치주염 또는 치은염을 치료한다.
실시예 9: 연고제(수치는 중량%)
옥수수불검화 정량 추출물 0.80
후박 추출물 0.40
카복시비닐폴리머 7.00
글리세롤 30.00
페퍼민트오일 0.006
프로필렌글리콜 30.00
증류수를 가하여 100이 되게 한다.
상기 조성물을 통상적인 연고제 제조방법으로 혼합하여 연고제를 제조하고 구강 내 치주염이 있는 치아 주위에 수시로 도포하여 치주염 또는 치은염을 치료한다.
실시예 10: 분무제 (수치는 중량%)
옥수수불검화 정량 추출물 0.20
후박 추출물 0.40
트리클로로모노플루오르메탄 40.00
디클로로디플루오로메탄 44.85
페퍼민트오일 0.15
에탄올 6.00
폴리에틸렌글리콜 8.40
상기 조성물을 통상적인 분무제 제조방법으로 혼합하고 압축용기에 충전 포장하여 치주질환 부위에 수시로 분무 도포시킴으로써 치주질환을 예방 및 치료할 수 있다.
실시예 11: 분무제 (수치는 중량%)
옥수수불검화 정량 추출물 0.30
후박 추출물 0.30
트리클로로모노플루오르메탄 40.00
디클로로디플루오로메탄 44.85
페퍼민트오일 0.15
에탄올 6.00
폴리에틸렌글리콜 8.40
상기 조성물을 통상적인 분무제 제조방법으로 혼합하고 압축용기에 충전 포장하여 치주질환 부위에 수시로 분무 도포시킴으로써 치주질환을 예방 및 치료할 수 있다.
실시예 12: 분무제 (수치는 중량%)
옥수수불검화 정량 추출물 0.40
후박 추출물 0.20
트리클로로모노플루오르메탄 40.00
디클로로디플루오로메탄 44.85
페퍼민트오일 0.15
에탄올 6.00
폴리에틸렌글리콜 8.40
상기 조성물을 통상적인 분무제 제조방법으로 혼합하고 압축용기에 충전 포장하여 치주질환 부위에 수시로 분무 도포시킴으로써 치주질환을 예방 및 치료할 수 있다.
이상 설명하고 실시예를 통하여 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 조성물은 치조골 흡수 및 치주인대 파괴에 대한 예방 및 재생효과가 있는 옥수수불검화 정량 추출물과 치주질환의 원인균의 하나인 혐기성 그람음성균 프레보텔라 인터미디아에 대해 우수한 살균작용을 가지는 후박 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 상승적인 항염작용을 나타내어 효과적으로 치주질환을 예방 및 치료할 수 있는 효과가 있다.

Claims (3)

  1. 옥수수불검화 정량 추출물 및 후박 추출물을 유효 성분으로 함유하며, 옥수수불검화 정량 추출물과 후박 추출물의 그 배합비율이 중량비로 0.5:1 내지 2.0:1인 것을 특징으로 하는 치주질환 예방 및 치료제 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 옥수수불검화 정량 추출물과 후박 추출물의 배합비율이 중량비로 0.5:1 내지 1.0:1인 것을 특징으로 하는 치주질환 예방 및 치료제 조성물.
  3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 조성물의 제형이 정제, 연고제, 또는 분무제중에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 치주질환 예방 및 치료제 조성물.
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