KR20000016432A

KR20000016432A - 디벤조-옥사제핀과 디벤조-디옥세핀 유도체, 및항종양제로서의이들의 용도

Info

Publication number: KR20000016432A
Application number: KR1019980710016A
Authority: KR
Inventors: 우바시 후다 드힝그라; 하루요시 쉬라이; 유키 다케하나; 피터 마이클 워브쿠리치; 나미 야부키
Original assignee: 프리돌린 클라우스너, 롤란드 비. 보레르; 에프. 호프만-라 로슈 아게
Priority date: 1996-06-07
Filing date: 1997-05-30
Publication date: 2000-03-25
Anticipated expiration: 2017-05-30
Also published as: BR9709773A; DE69707672T2; ES2166087T3; YU55898A; HUP0001792A3; JP3199752B2; PL330346A1; US5811420A; NO985685L; NO985685D0; WO1997047611A1; HK1019063A1; KR100300152B1; HRP970313A2; IL127137A0; CO4940487A1; AU725649B2; ATE207471T1; ZA974886B; CN1072650C

Abstract

하기 화학식 I의 화합물 및 그의 에피머와 거울상 이성질체 또는 이들의 생리적으로 사용가능한 염은 항종양제로서 유용하다. 이들은 아스페르질루스 종의 발효로 제조되고 선택적으로 작용기를 후속적으로 개질할 수 있다:

화학식 I

상기 식에서,

R¹및 R²는 독립적으로 수소; 치환되지 않거나 저급 알콕시 또는 저급 알킬 티오로 치환된 저급 알킬; 또는 치환되지 않거나 하나 이상의 저급 알킬, 할로겐으로 치환된 저급 알킬, 및 저급 알콕시로 치환된 아실이고;

X는 CO 또는 CHOH이고;

Y는 CO 또는 CH₂이고;

Z는 O 또는 NH이다.

Description

디벤조-옥사제핀과 디벤조-디옥세핀 유도체, 및 항종양제로서의 이들의 용도

본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 및 그의 에피머 또는 거울상 이성질체, 또는 이들의 생리적으로 사용가능한 염에 관한 것이다:

상기 식에서,

R¹및 R²는 독립적으로 수소; 치환되지 않은 저급 알킬; 저급 알콕시 또는 저급 알킬 티오로 치환된 저급 알킬; 또는 치환되지 않거나 하나 이상의 저급 알킬, 저급 알콕시, 수소 또는 할로겐으로 치환된 저급 알킬로 치환된 아실이고;

X는 CO 또는 CHOH이고;

Y는 CO 또는 CH₂이고;

Z는 O 또는 NH이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "저급 알킬"이란 다른 언급이 없는 한 치환되지 않거나 저급 알콕시 또는 저급 알킬 티오로 치환될 수 있는 탄소수 6 이하, 바람직하게는 1 내지 2의 탄화수소기를 지칭한다. 따라서, 예를 들면, "저급 알킬"은 메틸, 에틸, t-부틸, n-펜틸, 치환된 메틸(예: 메톡시메틸, 메틸티오메틸)을 들 수 있다.

"아실"은 지방족 아실, 방향족-지방족 아실, 또는 방향족 아실일 수 있다. 바람직하게는, 지방족 아실은 탄소수 1 내지 6을 함유하고, 예를 들면 포르밀, 아세틸, 프로피오닐, n-부티릴, 이소-부티릴 및 피발로일을 들 수 있다. 방향족-지방족 아실은 예를 들면 하나 이상의 치환체(예: 할로겐으로 치환된 저급 알콕시 및 저급 알킬)로 치환될 수 있는 페닐아세틸(예: α-메톡시-α-(트리플루오로메틸)-페닐아세틸)이다. 바람직하게는, 방향족 아실은 치환되지 않거나 저급 알킬(예: 메틸, 에틸, t-부틸 및 n-펜틸) 또는 할로겐(예: 불소, 염소, 브롬 또는 요오드)으로 치환될 수도 있는 벤조일이다.

또한, 본 발명은 상기 화학식 I에서 정의한 1종 이상의 화합물 또는 이들의 생리적으로 사용가능한 염을 함유하는 조성물; 및 항종양제로서의 이러한 화합물 또는 이들의 생리적으로 사용가능한 염의 용도; 이러한 화합물 또는 이들의 생리적으로 사용가능한 염의 제조 방법 및 특정 이러한 화합물을 제조할 수 있는 미생물에 관한 것이다.

보다 구체적으로, 본 발명은 하기 기술하는 바와 같이 화학식 I의 화학식 A, 화학식 A-1, 화학식 A-2, 화학식 A-3, 화학식 A-4, 화학식 A-5, 화학식 A-6, 화학식 A-7, 화학식 A-8, 화학식 A-9 및 화학식 A-10으로 명시된 화합물 및 이들의 각각의 에피머 화합물인 화학식 B, 화학식 B-1, 화학식 B-2, 화학식 B-3, 화학식 B-4, 화학식 B-5 및 화학식 B-6의 화합물에 관한 것이다:

화학식 A의 화합물: R¹이 H이고, R²가 H이고, X가 CO이고, Y가 CO이고, Z가 O인 화학식 I의 화합물(3,7-디하이드록시-6-메톡시-1,4,6,9-테트라메틸-6,7-디하이드로-5aH-디벤조[b,e][1,4]디옥세핀-8,11-디온);

(1) 성상: 백색 분말

(2) 융점: 187-188℃

(3) 고유 광회전도: [α]²³ _D=+272°(메탄올에서 c=0.56임)

(4) 분자량(FAB-MS 방법); 음이온 모드 : m/z 347(M-H)^-

(5) 분자식: C₁₈H₂₀O₇

(6) 고분별능 질량 분석(M-H에 대한):

측정치: 347.1146

C₁₈H₁₉O₇에 대한 계산치: 347.1131

(7) 자외선(UV) 흡수(λ_max㎚(ε)):

MeOH에서 : 213(20,100), 282(14,500)

MeOH + N/10 HCl : 215(18,400), 278(14,200)

MeOH + N/10 NaOH : 248(16,100), 297(13,900), 328(17,000)

(8) 적외선(IR) 스펙트럼(KBr 정제):

주흡수띠의 파수(㎝^-1): 3410, 2932, 1729, 1678, 1639, 1604, 1232, 1126.

(9)¹H-NMR 스펙트럼: 400 MHz, 내부표준물질로 TMS 사용, DMSO-d₆(용매로 사용함)

δ: 1.01(3H, s), 1.77(3H, d, J=2Hz), 2.09(3H, s), 2.38(3H, s), 3.28(3H, s), 4.32(1H, d, J=5Hz), 5.35(1H, q, J=2Hz), 5.52(1H, d, J=5Hz, D₂O 교환가능함), 6.62(1H, s), 10.60(1H, s, D₂O 교환가능함).

(10)¹³C-NMR 스펙트럼: 100 MHz, 내부표준물질로 TMS 사용, DMSO-d₆(용매로 사용함)

δ: 8.3, 8.4, 13.3, 21.8, 50.1, 74.6, 80.2, 82.8, 110.8, 113.7, 114.6, 117.1, 142.1, 159.2, 160.2, 160.8, 161.1, 197.5.

(11) 용해도:

디메틸 설폭사이드, 에틸 아세테이트, 메탄올에서는 가용성,

n-헥산, 물에서는 불용성임.

화학식 A-1의 화합물: R¹이 아세틸이고, R²가 아세틸이고, X가 CO이고, Y가 CO이고, Z가 O인 화학식 I의 화합물(3,7-디(메틸카보닐옥시)-6-메톡시-1,4,6,9-테트라메틸-6,7-디하이드로-5aH-디벤조[b,e][1,4]디옥세핀-8,11-디온);

(1) 성상: 백색 분말

(2) 분자량(FAB-MS 방법); 양이온 모드 : m/z 433(M+H)⁺

(3) 분자식: C₂₂H₂₄O₉

(4)¹H-NMR 스펙트럼: 400 MHz, 내부표준물질로 TMS 사용, DMSO-d₆(용매로 사용함)

δ: 1.09(3H, s), 1.80(3H, d, J=2Hz), 2.10(3H, s), 2.17(3H, s), 2.34(3H, s), 2.45(3H, s), 3.23(3H, s), 5.69(1H, s), 5.78(1H, q, J=2Hz), 7.04(1H, s).

화학식 A-2의 화합물: R¹이 H이고, R²가 p-브로모벤조일이고, X가 CO이고, Y가 CO이고, Z가 O인 화학식 I의 화합물(3-(4-브로모벤조일)-7-하이드록시-6-메톡시-1,4,6,9-테트라메틸-6,7-디하이드로-5aH-디벤조[b,e][1,4]디옥세핀-8,11-디온);

(1) 성상: 백색 분말

(2) 분자량(FAB-MS 방법); 양이온 모드 : m/z 531(M+H)⁺

(3) 분자식: C₂₅H₂₃BrO₈

δ: 1.00(3H, s), 1.80(3H, d, J=2Hz), 2.14(3H, s), 2.45(3H, s), 3.31(3H, s), 4.29(1H, s), 5.56(1H, d, J=2Hz), 5.71(1H, b, s), 7.17(1H, s), 7.85(2H, d, J=8.5Hz), 8.08(2H, d, J=8.5Hz).

화학식 A-3의 화합물: R¹이 p-브로모벤조일이고, R²가 p-브로모벤조일이고, X가 CO이고, Y가 CO이고, Z가 O인 화학식 I의 화합물(3,7-디(4-브로모벤조일)-6-메톡시-1,4,6,9-테트라메틸-6,7-디하이드로-5aH-디벤조[b.e][1,4]디옥세핀-8,11-디온);

(1) 성상: 백색 분말

(2) 분자량(FAB-MS 방법); 양이온 모드 : m/z 713(M+H)⁺

(3) 분자식: C₃₂H₂₆Br₂O₉

(4)¹H-NMR 스펙트럼: 400 MHz, 내부표준물질로 TMS 사용, CDCl₃(용매로 사용함)

δ: 1.44(3H, s), 1.97(3H, d, J=2Hz), 2.19(3H, s), 2.57(3H, s), 3.38(3H, s), 5.21(1H, d, J=2Hz), 5.73(1H, s), 6.97(1H, s), 7.62(2H, d, J=8.5Hz), 7.69(2H, d, J=8.5Hz), 7.95(2H, d, J=9Hz), 8.05(2H, d, J=9Hz)

화학식 A-4의 화합물: R¹이 H이고, R²가 CH₃이고, X가 CO이고, Y가 CO이고, Z가 O인 화학식 I의 화합물((5aS, 6S, 7S)-7-하이드록시-3,6-디메톡시-1,4,6,9-테트라메틸-6,7-디하이드로-5aH-디벤조[b,e][1,4]디옥세핀-8,11-디온);

(1) 성상: 백색 분말

(2) 분자량(EI-MS 방법); 양이온 모드 : m/z 362(M+H)⁺

(3) 분자식: C₁₉H₂₂O₇

(4)¹H-NMR 스펙트럼: 270 MHz, 내부표준물질로 TMS 사용, CDCl₃(용매로 사용함)

δ: 1.20(3H, s), 1.97(3H, d, J=2Hz), 2.20(3H, s), 2.56(3H, s), 3.50(3H, s), 3.81(1H, d, J=2.5Hz), 3.89(3H, s), 4.22(1H, d, J=2.5Hz), 4.91(1H, q, J=2Hz), 6.60(1H,s).

화학식 A-5의 화합물: R¹이 (-)-α-메톡시-α-(트리플루오로메틸)-페닐아세틸이고, R²가 CH₃이고, X가 CO이고, Y가 CO이고, Z가 O인 화학식 I의 화합물((S)-3,3,3-틀리플루오로-2-메톡시-2-페닐-프로페닐-프로피온산(5aS, 6R, 7R)-2,6-디메톡시-1,4,6,9-테트라메틸-8,11-디옥소-5a, 6, 7, 8-테트라하이드로-11H-디벤조[b,e][1, 4]디옥세핀-7-일 에스테르);

(1) 성상: 백색 분말

(2) 분자량(FAB-MS 방법); 양이온 모드 : m/z 579(M+H)⁺

(3) 분자식: C₂₉H₂₉F₃O₉

δ: 1.29(3H, s), 1.97(3H, d, J=2Hz), 2.13(3H, s), 2.57(3H, s), 3.09(3H, s), 3.72(3H, d, J=1Hz), 3.89(3H, s), 4.98(1H, d, J=2Hz), 5.60(1H, s), 6.61(1H, s), 7.42(3H, m), 7.74(2H, m).

화학식 A-6의 화합물: R¹이 (+)-α-메톡시-α-(트리플루오로메틸)-페닐아세틸이고, R²가 CH₃이고, X가 CO이고, Y가 CO이고, Z가 O인 화학식 I의 화합물((R)-3,3,3-트리플루오로-2-페닐-프로피온산(5aS, 6R, 7S)-2,6-디메톡시-1,4,6,9-테트라메틸-8,11-디옥소-5a, 6, 7, 8-테트라하이드로-11H-디벤조[b,e][1,4]디옥세핀-7-일 에스테르);

(1) 성상: 백색 분말

(2) 분자량(FAB-MS 방법); 양이온 모드 : m/z 579(M+H)⁺

(3) 분자식: C₂₉H₂₉F₃O₉

δ: 1.38(3H, s), 1.96(3H, d, J=2Hz), 2.20(3H, s), 2.58(3H, s), 3.33(3H, s), 3.63(3H, d, J=1Hz), 3.91(3H, s), 5.07(1H, d, J=2Hz), 5.66(1H, s), 6.62(1H, s), 7.44(3H, m), 7.70(2H, m).

화학식 A-7의 화합물: R¹이 CH₂SCH₃이고, R²가 CH₃이고, X가 CO이고, Y가 CO이고, Z가 O인 화학식 I의 화합물((5aS, 6R, 7S)-3,6-디메톡시-1,4,6,9-테트라메틸-7-메틸설파닐메톡시-6,7-디하이드로-5aH-디벤조[b,e][1,4]디옥세핀-8,11-디온);

(1) 성상: 백색 분말

(2) 분자량(FAB-MS 방법); 양이온 모드 : m/z 423(M+H)⁺

(3) 분자식: C₂₁H₂₆O₇S

(4)¹H-NMR 스펙트럼: 500 MHz, 내부표준물질로 TMS 사용, CDCl₃(용매로 사용함)

δ: 1.40(3H, s), 1.88(3H, d, J=1.5Hz), 2.16(3H, s), 2.18(3H, s), 2.53(3H, s), 3.43(3H, s), 3.88(3H, s), 4.29(1H, s), 4.86(2H, d, J=12.5Hz), 4.93(1H, q, J=1.5Hz), 6.55(1H, s).

화학식 A-8의 화합물: R¹이 H이고, R²가 H이고, X가 CHOH이고, Y가 CO이고, Z가 O인 화학식 I의 화합물(3,7,8-트리하이드록시-6-메톡시-1,4,6,9-테트라메틸-6,7-디하이드로-5aH-디벤조[b,e][1,4]디옥세핀-11-온);

(1) 성상: 백색 분말

(2) 분자량(EI-MS 방법); 양이온 모드 : m/z 350(M+H)^+·

(3) 분자식: C₁₈H₂₂O₇

(4)¹H-NMR 스펙트럼: 500 MHz, 내부표준물질로 TMS 사용, DMSO-d₆(용매로 사용함)

δ: 1.43(3H, s), 1.63(3H, s), 2.01(3H, s), 2.21(3H, s), 3.28(3H, s), 3.56(1H, d, J=5, 4.5Hz), 4.07(1H, ddd, J=8, 4.5, 1Hz), 4.59(1H, d, J=5Hz, D₂O 교환가능함), 4.67(1H, d, J=1Hz), 4.77(1H, d, J=8Hz, D₂O 교환가능함), 6.40(1H, s), 9.82(1H, bs, D₂O 교환가능함).

화학식 A-9의 화합물:R¹이 H이고, R²가 H이고, X가 CO이고, Y가 CH₂이고, Z가 O인 화학식 I의 화합물((5aS, 6s, 7s)-3,7-디하이드록시-6-메톡시-1,4,6,9-테트라메틸-6,7-디하이드로-5aH, 11H-디벤조[b,e][1,4]디옥세핀-8-온);

(1) 성상: 백색 분말

(2) 분자량(FAB-MS 방법); 양이온 모드 : m/z 335(M+H)⁺

(3) 분자식: C₁₈H₂₂O₆

δ: 1.15(3H, s), 1.66(3H, s), 2.01(3H, s), 2.12(3H, s), 3.27(3H, s), 4.26(1H, d, J=5Hz), 5.18(1H, d, J=14Hz), 5.22(1H, d, J=5Hz, D₂O로 교환가능함) 5.23(1H, s), 5.29(1H, d, J=14Hz), 6.39(1H, s), 9.33(1H, s, D₂O 교환가능함).

화학식 A-10의 화합물: R¹이 H이고, R²가 H이고, X가 CO이고, Y가 CO이고, Z가 NH인 화학식 I의 화합물;

(1) 성상: 백색 분말

(2) 분자량(FAB-MS 방법); 양이온 모드 : m/z 348(M+H)⁺

(3) 분자식: C₁₈H₂₁NO₆

(4)¹H-NMR 스펙트럼: 400 MHz, 내부표준물질로 TMS 사용, MeOH-d₄(용매로 사용함)

δ: 1.25(3H, s), 1.90(3H, d, J=1.2Hz), 2.20(3H, s), 2.44(3H, s), 3.36(3H, s), 4.35(1H, s), 4.95(1H, bs), 6.56(1H, s).

화학식 B의 화합물:화학식 A(3,7-디하이드록시-6-메톡시-1,4,6,9-테트라메틸-6,7-디하이드로-5aH-디벤조[b,e][1,4]디옥세핀-8,11-디온)의 화합물의 에피머;

(1) 성상: 백색 결정

(2) 융점: 198-199℃

(3) 고유 광회전도: [α]²³ _D=-8°(메탄올에서 c=0.52임)

(4) 분자량(FAB-MS 방법); 음이온 모드 : m/z 347(M-H)^-

(5) 분자식: C₁₈H₂₀O₇

(6) 고분별능 질량 분석(M-H에 대한):

측정치: 347.1140

C₁₈H₁₉O₇에 대한 계산치: 347.1131

(7) 자외선(UV) 흡수(λ_max㎚(ε)):

MeOH에서 : 220(21,300), 290(8,400)

MeOH + N/10 HCl : 220(20,100), 289(8,000)

MeOH + N/10 NaOH : 249(17,100), 335(12,800)

(8) 적외선 스펙트럼(KBr 정제):

주 흡수띠의 파수(㎝^-1): 3424, 2932, 1744, 1657, 1600, 1247, 1128.

δ: 1.53(3H, s), 1.66(3H, s), 2.00(3H, s), 2.32(3H, s), 3.24(3H, s), 4.27(1H, d, J=6Hz), 5.13(1H, s), 5.42(1H, d, J=6Hz, D₂O 교환가능함), 6.54(1H, s), 10.38(1H, bs, D₂O 교환가능함).

(10)¹³C-NMR 스펙트럼: 125 MHz, 내부표준물질로 TMS 사용, DMSO-d₆(용매로 사용함)

δ: 7.7 8.6, 15.7, 22.3, 51.3, 75.4, 77.0, 79.9, 107.9, 111.0, 113.0, 117.3, 139.7, 155.2, 155.8, 159.8, 162.2, 196.5.

(11) 용해도:

n-헥산, 물에서는 불용성임.

화학식 B-1의 화합물:화학식 A-1(3,7-디(메틸카보닐옥시)-6-메톡시-1,4,6,9-테트라메틸-6,7-디하이드로-5aH-디벤조[b,e][1,4]디옥세핀-8,11-디온)의 화합물의 에피머;

(1) 성상: 백색 분말

(2) 분자량(FAB-MS 방법); 양이온 모드 : m/z 433(M+H)⁺

(3) 분자식: C₂₂H₂₄O₉

δ: 1.51(3H, s), 1.69(3H, s), 1.98(3H, s), 2.21(3H, s), 2.33(3H, s), 2.39(3H, s), 3.28(3H, s), 5.55(1H, s), 5.56(1H, s), 6.92(1H, s).

화학식 B-2의 화합물:화학식 A-2(3-(4-브로모벤조일)-7-하이드록시-6-메톡시-1,4,6,9-테트라메틸-6,7-디하이드로-5aH-디벤조[b,e][1,4]디옥세핀-8,11-디온)의 화합물의 에피머;

(1) 성상: 백색 분말

(2) 분자량(FAB-MS 방법); 양이온 모드 : m/z 531(M+H)⁺

(3) 분자식: C₂₅H₂₃BrO₈

δ: 1.55(3H, s), 1.71(3H, s), 2.04(3H, s), 2.41(3H, s), 3.26(3H, s), 4.23(1H, d, J=6Hz), 5.37(1H, s), 5.46(1H, d, J=6Hz), 7.07(1H, s), 7.86(2H, d,

J=8Hz), 8.06(2H, d, J=8Hz).

화학식 B-3의 화합물:화학식 A-3의 화합물의 에피머;

(1) 성상: 백색 분말

(2) 분자량(FAB-MS 방법); 양이온 모드 : m/z 713(M+H)⁺

(3) 분자식: C₃₂H₂₆Br₂O₉

δ: 1.63(3H, s), 1.87(3H, s), 2.13(3H, s), 2.50(3H, s), 3.47(3H, s), 4.92(1H, s), 5.95(1H, s), 6.86(1H, s), 7.63(2H, d, J=9Hz), 7.69(2H, d, J=9Hz), 7.98(2H, d, J=8Hz), 8.06(2H, d, J=8Hz).

화학식 B-4의 화합물:화학식 A-4((5aS, 6S, 7R)-7-하이드록시-3,6-디메톡시-1,4,6,9-테트라메틸-6,7-디하이드로-5aH-디벤조[b,e][1,4]디옥세핀-8,11-디온)의화합물의 에피머;

(1) 성상: 백색 분말

(2) 분자량(EI-MS 방법); 양이온 모드 : m/z 362(M+H)⁺

(3) 분자식: C₁₉H₂₂O₇

δ: 1.71(3H, s), 1.84(3H, s), 2.08(3H, s), 2.51(3H, s), 3.35(3H, s), 3.53(1H, d, J=3.5Hz, D₂O 교환가능함), 3.87(3H, s), 4.43(1H, d, J=3.5Hz), 4.76(1H, s), 6.54(1H, s).

화학식 B-5의 화합물:화학식 A-5((S)-3,3,3-트리플루오로-2-메톡시-2-페닐-프로피온산(5aS, 6R, 7S)-2,6-디메톡시-1,4,6,9-테트라메틸-8,11-디옥소-5a,6,7,8-테트라하이드로-11H-디벤조[b,e][1,4]디옥세핀-7-일 에스테르)의 화합물의 에피머;

(1) 성상: 백색 분말

(2) 분자량(FAB-MS 방법); 양이온 모드 : m/z 579(M+H)⁺

(3) 분자식: C₂₉H₂₉F₃O₉

δ: 1.61(3H, s), 1.82(3H, s), 2.11(3H, s), 2.51(3H, s), 3.30(3H, s), 3.59(3H, s), 3.88(3H, s), 4.78(1H, s), 5.81(1H, s), 6.55(1H, s), 7.45(3H, m), 7.69(2H, m).

화학식 B-6의 화합물:화학식 A-6((R)-3,3,3-트리플루오로-2-메톡시-2-페닐-프로피온산(5aS,6R,7R)-2,6-디메톡시-1,4,6,9-테트라메틸-8,11-디옥소-5a,6,7,8-테트라하이드로-11H-디벤조[b,e][1,4]디옥세핀-7-일 에스테르)의 화합물의 에피머;

(1) 성상: 백색 분말

(2) 분자량(FAB-MS 방법); 양이온 모드 : m/z 579(M+H)⁺

(3) 분자식: C₂₉H₂₉F₃O₉

δ: 1.37(3H, s), 1.83(3H, s), 2.10(3H, s), 2.50(3H, s), 3.18(3H, s), 3.72(3H, s), 3.88(3H, s), 4.72(1H, s), 5.80(1H, s), 6.55(1H, s), 7.45(3H, m), 7.80(2H, m).

본 발명에 의해 제공된 방법에 따르면, 화학식 A의 화합물(R¹=H, R²=H, X=CO, Z=O) 및 화학식 B의 그의 에피머 화합물(R¹=H, R²=H, X=CO, Z=O)은, 호기성 조건하에서 배양 매질내에서 화학식 A의 화합물 및/또는 화학식 B의 화합물을 제조할 수 있는 아스페르질루스 속에 속하는 미생물을 배양하고 이러한 배양액으로부터 화학식 A의 화합물 및 화학식 B의 화합물을 단리함으로써 수득할 수 있다.

상기 방법에서 사용되는 미생물로는 이러한 화합물을 제조할 수 있는 아스페르질루스 속에 속하는 임의의 균주(돌연변이 및 변종을 포함함)가 사용될 수도 있다. 구체적으로, 바람직한 균주로는 아스페르질루스 야포니쿠스 NR 7328, 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7329, 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7330, 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7331, 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7332 및 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7334 및 그의 돌연변이와 변종을 들 수 있다. 아스페르질루스 야포니쿠스 NR 7328, 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7329, 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7330, 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7331, 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7332 및 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7334는 옥수수 또는 콩 샘플로부터 분리되어 각각 아스페르질루스 야코니쿠스 및 아스페르질루스 푸미가투스에 속하는 균주임을 확인하였다.

아스페르질루스 야코니쿠스 NR 7328, 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7329, 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7330, 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7331, 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7332 및 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7334로서 표시되는 균주는 부다페스트 조약에 의거하여 1996년 5월 9일자로 독일 소재의 데에스엠체트 도이췌 잠룽 폰 미크로오르가니스멘 운트 첼쿨투렌 게엠베하(DMSZ Deutsche Sammlug von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH)에서 아스페르질루스 야포니쿠스 NR 7328(DSM 10677), 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7329(DSM 10678), 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7330(DSM 10679), 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7331(DSM 10680), 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7332(DSM 10681) 및 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7334(DSM 10682)로 기탁되었다.

아스페르질루스 야포니쿠스 NR 7328(DSM 10677), 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7329(DSM 10678), 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7330(DSM 10679), 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7331(DSM 10680), 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7332(DSM 10681) 및 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7334(DSM 10682)의 배양 및 형태학적 특성은 하기와 같다.

균주 NR 7328의 배양 특성

크자펙-효모 추출 아가(Czapek-Yeast extrac agar; CYA)에서, 콜로니는 빠르게 성장하고, 25℃에서 7일 후에 페트리 디쉬(Petri dish)를 채웠으며, 이것은 밀도가 높은 모상 균사체 매트의 중심에 분생포자의 발생이 풍부함을 나타낸다. 콜로니의 색은 진갈색 내지 암갈색(문셀(Munsell), 7.5YR2/2-7.5YR/2)이었다. 균사체는 백색이었다. 반대면의 색은 밝은 황색(문셀, 2.5Y8/6)이었다. 삼출액 및 가용성 색소는 생성되지 않았다.

맥아 추출 아가(MEA)에서, 콜로니는 25℃의 CYA에 비해서는 비교적 느리게 성장하여, 25℃에서 7일 후에 48 내지 50㎜의 직경을 형성하였으며, 편평하고 밀도가 높고 포자형성이 활발한 콜로니를 형성하였다. 콜로니의 색은 암황갈색(문셀, 10YR3/2)이었다. 균사체는 백색이었지만 두드러지지는 않았다. 반대면의 색은 연황색(문셀, 5Y8/4)을 나타내었다. 삼출액 및 가용성 색소는 관찰되지 않았다.

25℃에서 20%의 수크로즈(CY20S)를 함유하는 크자펙-효모 추출 아가에서, 콜로니는 25℃의 CYA에서와 유사한 정도로 빠르게 성장하였다. 또한, 콜로니의 색은 암갈색이었다. 균사체는 백색이고 모상이었다. 반대면의 색은 황백색이었다.

37℃의 CYA에서는, 콜로니가 적당하게 성장하여 7일이 경과한 후 직경이 17 내지 18㎜가 되었고, 이것은 주름진 혹 모양의 콜로리를 나타냈다. 분생포자의 발생은 불량하였다. 콜로니의 색은 암황색계 회색(문셀, 5Y5/2)이었다. 반대면의 색은 진한 황갈색(문셀 5Y3/2)였다.

5℃의 CYA에서는, 분생포자의 발생이 관찰되지 않았다.

균주 NR 7328의 형태학적 특성

분생포자의 헤드부는 처음에는 방사상이고, 몇개의 긴 줄기로 갈라졌다. 스트리그마타(strigmata)는 촘촘하게 패킹되어 소낭의 대부분의 표면을 덮고 있는 분생자병과 일렬에 있다. 소낭은 두꺼운 벽을 가지고 다소 갈색을 나타내는 직경이 35 내지 55(내지 75)㎛인 공모양 또는 이와 거의 비슷한 모양이었다. 줄기는 두껍고 편탄한 벽으로 둘러싸였고, 7.5 내지 20 × 250 내지 700(내지 1000)㎛였다. 분생 포자는 공 모양 내지 거의 공모양이고, 때때로 타원형이고, 어둡게 착색되어 있고, 직경은 3.5 내지 5.0㎛였다. 분생포자의 표면은 넓게 간격을 둔 융기부를 갖는, 가시가 있는 모양이다.

분생포자의 발생이 풍부한, 다소 흑색을 띠고 밀도가 높은 콜로니에서 어두은 색을 나타내는 균주 NR 7328이 형성되었다. 소낭은 공모양 또는 거의 공모양이었다. 스트리그마타는 단일 시리즈였다. 분생포자는 가시가 있고 어두운 색을 띠는 공모양 내지 타원형이었다. 이러한 특징적 특성을 바탕으로, 본 발명의 균주 NR 7328이 아스페르질루스 야포니쿠스 NR 7328(DSM 10677)로 표시되는 아스페르질루스 야포니쿠스의 균주임을 확인하였다.

균주 NR 7329, NR 7330, NR 7331, NR 7332 및 NR 7334의 배양 특성

CYA상에서, 이러한 균주의 콜로니는 빠르게 성장하여 직경이 53 내지 61㎜에 도달했고, 다른 균주보다 늦은 NR 7334는 25℃에서 7일 후에 44 내지 45㎜에 도달하였다. 모든 콜로니는 분생포자의 발생이 풍부하고 다산이었으며, 편평하고, 벨벳 모양의 조직을 나타냈다. 콜로니의 색은 흐릿한 붉은 녹색(문셀, 7.5BG4/4) 또는 진한 청녹색 내지 연한 청녹색(문셀, 5BG4/2-7/4)이었다. 균사체는 가장자리만 백색이었지만 다소 명확하지는 않았다. NR 7329의 반대면의 색은 콜로니알 황색(문셀, 5Y7/6)이고 다른 균주의 반대면의 색은 내이플 황색(Naple yellow)(문셀, 2.5 Y8/6) 내지 연한 황녹색(문셀, 2.5GY7/2)이었다. 삼출물 및 가용성 색소는 제조되지 않았다.

MEA에서, 콜로니는 빠르게 성장하여 25℃에서 7일이 경과한 후 직경이 52 내지 63㎜이고, 편평하고 밀도가 높고 때때로 펠트 모양의 콜로니가 형성되었고, 이것은 25℃에서의 CYA에서의 콜로니보다 느슨한 조직을 나타낸다. 콜로니의 색은 희미한 녹색 내지 녹회색(문셀, 5G5/4-7/12)이었다. 균사체는 명확하지 않았다. 반대면의 색은 무색이거나 흐린 황녹색(문셀, 7.5GY6/4)이었다. 삼출물 및 가용성 색소는 관찰되지 않았다.

25℃의 CY20S에서, 콜로니는 빠르게 성장하여 7일이 경화한 후 직경이 50 내지 56㎜이고, 밀도가 크고 벨벳 같거나 펠트같은 콜로니를 형성하였다. 콜로리의 색 및 조직은 25℃의 CYA에서와 동일하였다. 균사체는 단지 가장자리만 백색이거나 밝은 녹황색(문셀, 10Y9/4)이었다. 콜로니의 반대면의 색은 크림색 내지 중간 녹황색(문셀, 10Y7/6)이었다. 단지 균주 FE 6425는 희미하게 적갈색 가용성 색소를 제조하였다.

37℃의 CYA에서, 콜로니는 빠르게 성장하여, 페트리 디쉬를 채우고, 편평하고 분말같은 콜로니를 형성하였다. 콜로니의 색은 회색계 황녹색 내지 쑥색(문셀, 7.5GY6/2-5GY6/2)이었다. 분생포자의 발생은 매우 풍부하였지만 균사체는 명확하지 않거나 단지 가장자리에만 나타났다. 콜로니의 반대면은 주름이 있고 담황색 내지 밝은 적황색(문셀, 2.5Y6/6-7/6)을 띠었다. 이러한 콜로니의 일부는 맑은 삼출물을 생성하였다.

5℃의 CYA에서, 모든 균주에서 발효는 관찰되지 않았다.

균주 NR 7329, NR 7330, NR 7331, NR 7332 및 NR 7334의 형태학적 특성

분생 포자의 헤드는 원주모양이었다. 스트리그마타는 서로 및 줄기 축에 평행하여 촘촘하게 패킹되어 있는 분생자병과 일렬에 있다. 분생자병은 소낭의 상부 ½ 내지 ⅔을 덮는다. 소낭은 폭이 13 내지 30㎛이고 벽이 두꺼운 주걱 모양 또는 깔대기 모양이다. 줄기는 색을 띠지 않고 평탄한 벽으로 둘러싸였고 점차적으로 길이가 400㎛ 이하, 때때로는 500㎛ 이하가 되도록 소낭으로 연장되었다. 분생포자는 직경이 2.5 내지 4.0㎛인 공모양 또는 거의 공모양 내지 타원형이다. 표면은 다양하고, 부드럽거나 거칠고, 때때로 가시로 덮여 있다.

콜로니는 25℃에서, 또한 37℃에서도 빠르게 성장하고, 일부에서 희미한 녹색을 띠고, 밀도가 높고, 분생 포자의 발생이 풍부하다. 분생포자의 헤드부는 원주모양이다. 소낭은 주걱 모양이고, 소낭의 ½ 내지 ⅔는 서로에게 평행하거나 축에 평행하여 촘촘히 패킹된 분생자병에 의해 번식력이 왕성하다. 스트리그마타는 단일 시리즈이다. 분생포자는 작고, 공모양 내지 타원형이다. 이러한 뚜렷한 특징을 바탕으로, 본 발명의 균주인 NR 7329, NR 7330, NR 7331, NR 7332 및 NR 7334가 각각 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7329(DSM 10678), 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7330(DSM 10679), 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7331(DSM 10680), 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7332(DSM 10681) 및 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7334(DSM 10682)로 표시되는 아스페르질루스 푸미가투스의 균주임을 확인하였다.

본 발명의 화학식 A의 화합물 및 화학식 B의 화합물은, 배양성 매질에서 호기성 조건하에서 화학식 A의 화합물 및/또는 화학식 B의 화합물을 제조할 수 있는 아스페르질루스 속에 속하는 미생물을 배양하고, 배양액으로부터 화학식 A의 화합물 및 화학식 B의 화합물을 분리함으로써 제조할 수 있다.

본 발명에 따른 배양은 미생물을 배양하는데 사용가능한 통상적인 영양분을 함유하는 배양용 매질에서 수행될 수 있다. 탄소 공급원으로는, 예를 들어 글루코즈, 수크로즈, 전분, 글리세롤, 몰라세스, 덱스트린 및 이들의 혼합물을 들 수 있다. 질소 공급원으로는, 예를 들어 콩기름 밀(meal), 목화씨 밀, 고기 추출액, 펩톤, 건조 효모, 옥수수 담금액, 황산 암모늄, 질산 나트륨 및 이들의 혼합물을 들 수 있다. 게다가, 미생물의 성장을 촉진시키고 펀가르레스틴(Fungarrestin)의 제조를 증가시키기 위해 배양 매질에 그밖의 유기 또는 무기 물질을 첨가할 수도 있다. 이러한 물질의 예로는 무기염, 예를 들어 탄산 칼슘, 염화 나트륨, 인산염 등을 들 수 있다.

호기성 조건하에서 수성 매질내에서 바람직하게는 액내 발효로 배양을 수행하였다. 배양은 20℃ 내지 37℃의 온도에서 수행되었으며, 최적 온도는 27℃이다. 배양은 바람직하게는 pH 3 내지 9에서 수행된다. 배양 시간은 배양이 수행되는 조건에 좌우된다. 일반적으로, 20 내지 200 시간 동안 배양을 지속시키면 충분하다.

배양액으로부터 화학식 A의 화합물 및 화학식 B의 화합물을 단리시키기 위해서, 배양액으로부터 세균에 의해 제조된 대사 산물을 단리시키기 위해 일반적으로 사용되는 분리 방법을 사용할 수 있다. 예를 들어, 균사체는 발효액으로부터 원심분리 또는 여과를 통해 분리될 수 있고 목적하는 화합물은 물과 섞이지 않는 유기 용매(예: n-부탄올과 같은 알칸올 및 에틸 아세테이트, 부틸 아세테이트 등과 같은 에스테르)로 여액으로부터 추출될 수 있다. 한편으로, 분리된 균사체내에 함유되어 있는 목적하는 화합물은, 예를 들어 균사체를 용매(예: 아세톤 수용액 또는 메탄올 수용액)로 추출하고, 용매를 제거하고, 추가로 물과 섞이지 않는 유기 용매로 잔류물을 추출함으로써 수득될 수 있다. 이렇게, 수득된 용매층은 황산 나트륨 등과 같은 탈수제로 건조시킨 다음, 감압하에서 농축한다. 생성된 조질의 화학식 A의 화합물 및 화학식 B의 화합물은 분배방법, 컬럼 크로마토그래피 방법(실리카겔, 알루미늄 산화물, 옥타데실-실리카 겔, 세파덱스(Sephadex) LH-20 등을 흡착제로 사용함) 및 고성능 액체 크로마토그래피(흡착제로 실리카 겔, 옥타데실-실리카 겔 및 페닐-실리카 겔 등을 사용함)의 방법으로 정제할 수 있다.

화학식 A의 화합물 및 화학식 B의 화합물은 유리 형태로 단리될 수 있지만, 요구되는 경우 종래의 방법으로 생리적으로 사용가능한 염(예: 나트륨 염, 암모늄 염 등)으로 전환할 수 있다.

화학식 A의 화합물 및 화학식 B의 화합물은 하기에서 기술할 방법 A 내지 방법 F에 따라 각각 화학식 A-1의 화합물 내지 화학식 A-10의 화합물 및 화학식 B-1 내지 화학식 B-6의 화합물로 전환될 수 있다.

방법 A

R¹이 저급 알킬이고 R²가 수소이고 X 및 Y가 CO이고 Z가 O인 화학식 I의 화합물; 또는 R¹이 수소이고 R²가 저급 알킬이고 X 및 Y가 CO이고 Z가 O인 화학식 I의 화합물; 또는 R¹및 R²가 저급 알킬이고 X 및 Y가 CO이고 Z가 O인 화학식 I의 화합물은, 불활성 용매(예: 아세톤 또는 N,N-디메틸 포름아미드)에서 탄산칼륨 또는 은 산화물과 같은 염기의 존재하에서 알킬 할라이드 또는 알킬설페이트로 화학식 A의 화합물 또는 화학식 B의 화합물을 알킬화시킴으로써 제조할 수 있다. 반응 온도는 약 -50℃ 내지 150℃, 바람직하게는 약 0℃ 내지 100℃로 다양하다. 또한, 메틸화는 화학식 A의 화합물 또는 화학식 B의 화합물을, 클로로포름 또는 메탄올과 같은 용매에서 디아조메탄으로 처리함으로써 수행될 수 있다. 반응 온도는 약 -0℃ 내지 80℃, 바람직하게는 약 10℃ 내지 30℃로 다양하다.

방법 B

R¹이 아실이고 R²가 수소이고 X 및 Y가 CO이고 Z가 O인 화학식 I의 화합물; 또는 R¹이 수소이고 R²가 아실이고 X 및 Y가 CO이고 Z가 O인 화학식 I의 화합물; 또는 R¹및 R²가 아실이고 X 및 Y가 CO이고 Z가 O인 화학식 I의 화합물은 불활성 용매(예: 아세토니트릴 또는 디옥산)에서 카보디이미드와 같은 커플링제의 존재하에서 카복실산으로 화학식 A의 화합물 또는 화학식 B의 화합물을 알실화함으로써 제조할 수 있다. 반응 온도는 약 -50℃ 내지 100℃, 바람직하게는 약 -20℃ 내지 50℃로 변할 수 있다. 또한, 아실화는, 예를 들어 산 클로라이드 또는 그밖의 유기 산(예: 벤젠 설폰산)과의 혼합된 무수물과 같은 상기 카복실산의 반응성 유도체를 사용하여 수행될 수 있다. 아실화는 선택적으로 중탄산나트륨, 피리딘, 트리에틸아민 또는 N,N-디메틸아미노피리딘과 같은 염기의 존재하에서 메틸렌 클로라이드, 클로로포름, 아세토니트릴 또는 N,N-디메틸포름아미드와 같은 불활성 용매하에서 수행된다.

방법 C

R¹이 저금 알킬이고 R²가 아실이고 X 및 Y가 CO이고 Z가 O인 화학식 I의 화합물; 및 R¹이 저급 아실이고 R²가 저급 알킬이고 X 및 Y가 CO이고 Z가 O인 화학식 I의 화합물은, 아세토니트릴 또는 디옥산과 같은 불활성 용매내에서 카보디이미드와 같은 커플링제의 존재하에서 카복실산으로, R¹이 저급 알킬이고 R²가 수소이고 X 및 Y가 CO이고 Z가 O인 화학식 I의 화합물; 또는 R¹이 수소이고 R²가 저급 알킬이고 X 및 Y가 CO이고 Z가 O인 화학식 I의 화합물(방법 A에 따라 제조됨)을 아실화시킴으로써 제조될 수 있다. 반응 온도는 약 -50℃ 내지 100℃, 바람직하게는 약 -20℃ 내지 50℃에서 변할 것이다. 또한, 아실화는 카복실산 유도체(예: 산 클로라이드 또는 그밖의 유기산(예: 벤젠 설폰산)과의 혼합된 무수물)를 사용하여 수행될 수 있다. 선택적으로 알실화는 중탄산나트륨, 피리딘, 트리에틸아민 또는 N,N-디메틸아미노피리딘과 같은 염기의 존재하에서 불활성 용매(예: 메틸렌 클로라이드, 클로로포름, 아세토니트릴 또는 N,N-디메틸포름아미드)의 존재하에서 수행될 수 있거나, 탄산 칼륨 또는 은 산화물과 같은 염기의 존재하에서 불활성 용매(예: 아세톤 또는 N,N-디메틸포름아미드)에서 알킬 할라이드 또는 알킬설페이트로 R¹이 아실이고 R²가 수소이고 X 및 Y가 CO이고 Z가 O인 화학식 I의 화합물; 또는 R¹이 수소이고 R²가 아실이고 X 및 Y가 CO이고 Z가 O인 화학식 I의 화합물(상기 방법 B에 따라 제조됨)을 알킬화시킴으로써 제조될 수 있다. 반응 온도는 약 -50℃ 내지 100℃, 바람직하게는 약 -20℃ 내지 50℃에서 폭넓게 변할 것이다. 메틸화는 클로로포름 또는 메탄올과 같은 용매에서 디아조메탄으로 화학식 A의 화합물 또는 화학식 B의 화합물을 처리함으로써 수행될 수 있다. 반응 온도는 약 -0℃ 내지 80℃, 바람직하게는 약 10℃ 내지 30℃에서 폭넓게 변할 것이다.

방법 D

X가 CHOH이고 R¹및 R²가 각각 수소, 저급 알킬 또는 아실이고 Y가 CO이고 Z가 O인 화학식 I의 화합물은, 화학식 A의 화합물 또는 화학식 B의 화합물 또는 전술한 방법 A, 방법 B 또는 방법 C에서 기술한 방법에 따라 제조한 화합물을 적당한 용매(예: 에틸 알콜 또는 아세트산)에서 선택적으로는 가압상태에서 촉매(예: 목탄상 팔라듐 또는 백금)로 수소화시킴으로써 환원시키거나, 에틸 알콜과 같은 적당한 유기 용매에서 나트륨 보로하이드라이드로 처리함으로써 환원시킴으로써 제조할 수 있다. 반응 온도는 약 -80 내지 50℃, 바람직하게는 약 약 0℃ 내지 30℃로 폭넓게 변할 수 있다.

방법 E

Y가 CH₂이고 R¹및 R²가 각각 수소, 저급 알킬 또는 아실이고 X가 CO 또는 CHOH이고 Z가 O인 화학식 I의 화합물은 화학식 A의 화합물 또는 화학식 B의 화합물 또는 전술한 방법 A, 방법 B, 방법 C 또는 방법 D에 따라 제조된 화합물을 에틸 알콜과 같은 적당한 유기 용매에서 나트륨 보로하이드라이드로 처리함으로써 환원시킴으로써 제조할 수 있다. 반응 온도는 약 -80℃ 내지 50℃, 바람직하게는 약 0℃ 내지 30℃로 폭넓게 변할 수 있다.

방법 F

Z가 NH이고 R¹및 R²가 각각 수소, 저급 알킬 또는 아실이고 X가 CO 또는 CHOH이고 Y가 CO 또는 CH₂인 화학식 I의 화합물은, 화학식 A의 화합물 또는 화학식 B의 화합물 또는 전술한 방법 A, 방법 B, 방법 C, 방법 D 또는 방법 E에서 기술한 방법에 따라 제조된 화합물을 적당한 유기 용매(예: N,N-디메틸포름아미드)내 암모니아로 -40℃ 내지 80℃, 바람직하게는 약 0℃ 내지 30℃에서 처리한 후, 적당한 용매(예: 톨루엔 및 벤젠)에서 약산(예: 피리디늄 p-톨루엔설포네이트)의 존재하에서 약 40℃ 내지 200℃, 바람직하게는 약 80℃ 내지 150℃로 가열함으로써 제조될 수 있다.

다수의 형실전환된 세포주에서의 화학식 I의 화합물의 항증식 활성

결장직장암 세포주(HT-29 및 SW480), 폐암 세포주(H460a), 골육종 세포주(사오스(Saos)-2) 및 췌장 세포주(ASPC-1)는 전부 ATCC(어메리칸 타입 셀 컬쳐 콜렉션(American type Cell Culture Collection))에서 구입하고 ATCC에서 권하는 바와 같은 매질의 배양액에서 성장시켰다. 유방암 세포주(T-47D 및 MCF-7), 결장직장암 세포주(COLO-320 DM 및 HCT 116) 및 폐암 세포주(H1299)에 대한 화합물의 항증식 활성을 시험하였다. 이러한 세포의 성장에 대한 다양한 화합물의 효과를 분석하기 위해서, 분석의 최종 단계에서 최소한 4회 계대하게 하는 농도에 플레이팅(plating)하였다. 분석할 화합물을 100%의 DMSO에 용해시켜 10mM의 원료 용액을 수득하였다. 각각의 화합물을 H₂O로 희석하여 1mM로 만들고, 최종 농도가 40μM이 되도록 하는 매질이 함유되어 있는 96개의 웰 마스터(master) 플레이트의 제 1 열의 3개씩의 웰에 첨가하였다. 그다음, 화합물을 연속적으로 "마스터 플레이트"의 매질로 희석하였다. 그다음, 희석된 화합물을 세포를 포함하고 있는 시험용 플레이트로 옮겼다. 각각의 웰에서의 DMSO의 최종 온도는 0.1% DMSO였다. MTT 분석은 화합물을 첨가한 후 상이한 시간후에 수행하였다. MTT(3-(4,5-메틸 티아졸-2-일)-2,5-디페닐 테트라졸리움 브로마이드 티아졸릴 블루)를 각각의 웰에 첨가하여 최종 농도가 1㎎/㎖가 되도록 하였다. 그다음, 플레이트를 2.5 내지 3 시간 동안 37℃에서 배양하였다. 그다음, MTT 함유 매질을 제거하고 각각의 웰에 50㎕의 100% 에탄올을 첨가하여 포르마잔을 용해하였다. 그다음, 자동화 플레이트 해독기(바이오-테크(Bio-tek) 마이크로플레이트 해독기)를 사용하여 흡광도를 측정하였다. 사오스-2 세포의 경우, 세포를 6개의 웰 플레이트에 플레이팅하고, 플레이팅한 후 24시간 후에 화합물을 상이한 농도로 첨가하고, 약품을 첨가한 후 상이한 시간(일)이 경과한 후 세포를 계수하였다. 결과를 하기 표 1에 제시하였다.

세포주	IC50(μM)
세포주	화합물 A	화합물 B
유방암
T-47D	5.8
MCF-7	1.5
결장직장암
HT29	5.8	4.8
COLO-320DM	2.6
SW480	3-10
HCT116	1.3
폐암
H1299	3-4
H460A	2.3	2.2
골육종
사오스-2	0.3-1
췌장
ASPC-1	6.2

표 1에서 제시하는 바와 같이, 화학식 A의 화합물 및 화학식 B의 화합물은 형질전환 세포주의 증식에 대해 억제 활성을 나타낸다. 따라서, 본 발명에 의해 제공된 화학식 I의 화합물은 인간 및 인간 이외의 포유동물에게 적당하게 투여함으로써 유방암, 결장직장암, 폐암, 골육종암 등에 대한 항종양제로서 유용하다.

본 발명에 의해 제공된 화학식 I의 화합물의 치명적인 독성이 관찰되지 않았다.

본 발명에 따른 생성물은 예를 들어 경구 투여를 위한 약학 제제의 형태로 약제로서 사용될 수 있다. 본 발명에 다른 생성물은 정제, 피복된 정제, 당의정, 경질 및 연질 젤라틴 캡슐, 용액, 유화액 또는 현탁액의 형태로 경구 투여될 수 있고, 좌제 형태로 직장으로 투여될 수 있다.

치료적인 용도를 위해, 화학식 I의 화합물 및 이들의 생리적으로 사용가능한 염은 다양한 형태의 약학 조성물로 제조될 수 있다. 이러한 화합물을 함유하는 약학 조성물은 당 분야의 숙련자들에게 익숙한 방법, 예를 들면 성분을 적당하고 비독성이고 불활성이고 치료적으로 상용가능한 고체 또는 액체 담체 물질 및 요구되는 경우 일반적인 약학적인 보조제와 함께 혼합되어 투여 형태를 형성하도록 제조될 수 있다.

화합물을, 결국에는 적당한 경구 투여 형태 또는 비경구 투여 형태로 조성물을 제형하시키는 것이 기대된다. 본 발명의 조성물은 선택 성분으로 약학 제제의 제조에서 통상적으로 사용되는 다양한 보조제를 함유할 수 있다. 따라서, 예를 들면, 본 발명의 조성물을 목적하는 경구 투여 형태로 제형화하는데 있어서, 선택성분으로써, 충전제(예: 공침된 수산화 알루미늄-탄산칼슘, 인산 이칼슘 또는 락토즈), 붕해제(예: 옥수수 전분); 및 윤활제(예: 활석, 칼슘 스테아레이트 등)을 사용할 수도 있다. 그러나 본원에서 지칭한 선택 성분은 단지 예를 들기 위한 것이지 본 발명이 그의 용도를 제한하려는 것이 아님을 충분히 이해해야만 한다. 당 분야에 공지되어 있는 그밖의 다른 보조제도 본 발명을 수행하는데 사용될 수 있다.

무기 담체 물질 뿐만 아니라 유기 담체 물질도 이러한 담체 물질로서 적당하다. 따라서, 정제, 피복된 정제, 당의정 및 경질 젤라틴 캡슐용 담체로서, 락토즈, 옥수수 전분 또는 그의 유도체, 활석, 스테아르산 또는 그의 염 등을 사용할 수 있다. 연질 젤라틴 캡슐용으로 적절한 담체로는, 예를 들면 식물성 오일, 왁스, 지방, 반-고체 및 액체 폴리올 등을 들 수 있으며, 이는 활성 물질의 특성에 좌우되며 일반적으로 연질 젤라틴 캡슐의 경우는 어떠한 담체도 필요하지 않다. 용액 및 시럽의 제조에 적절한 담체로는 예를 들어 물, 폴리올, 수크로즈, 전화당 및 글루코즈를 들 수 있다. 좌제에 적절한 담체로는, 예를 들어 천연 또는 경질화된 오일, 왁스, 지방, 반-액체 또는 액체 폴리올 등을 들 수 있다.

약학 보조제로서 유용한 방부제, 가용화제, 안정제, 습윤제, 유화제, 감미제, 착색제, 향료, 삼투압을 변화시키기 위한 염, 완충액, 피복제 또는 산화방지제를 들 수 있다.

화학식 I의 화합물 또는 그의 염은 바람직하게는 비경구 투여를 위해 사용될 수 있고, 이러한 목적을 위해서 물 또는 등장액 염수와 같은 종래의 담체로 희석되는 동결건조물 또는 건조 분말로 제공되는 것이 바람직하다.

예를 들어 화학식 A의 화합물은, 편리하게는 생리 식염수내, 1 내지 50㎎/㎏/일, 바람직하게는 1 내지 20㎎/㎏/일의 투여량으로 혈관내, 피하지방 또는 근육내에 투여할 수 있거나, 일반적으로 1 내지 100㎎/㎏/일, 바람직하게는 5 내지 50㎎/㎏/일의 투여량으로 캡슐 또는 당-피복된 정제로 투여할 수 있다.

하기 실시예는 본 발명을 보다 자세하게 설명하고 있으며, 이것은 본 발명을 이로서 제한하려는 것은 아니다. 다른 언급이 없으면, %는 중량/체적%를 의미한다.

플라스크 배양

아스페르질루스 푸미가투스 NR 7329(DSM 10678)의 원료 배양액(0.1㎖)의 분획을 0.05%의 Mg₃(PO₄)₂·8H₂O, 0.8%의 KCl, 5.0%의 수크로즈, 1.0%의 옥수수 담금액, 2.0%의 토스트 소야(Toast soya)(일본 소재의 니스힌 세이유 캄파니 리미티드(Nisshin Seiyu Co. Ltd)) 및 0.03%의 니산 디스포움(Nissan disfoam) CA-123(일본 소재의 니폰 유시 캄파니 리미티드(Nippon Yushi Co.Ltd))로 구성되어 있는 매질 100㎖를 함유하는 500㎖ 들이의 삼감 플라스크에 접종시켰다. 매질의 pH를 6.5로 조절하였다. 시드(seed) 배양액을 3일 동안 220 rpm의 회전 셰이커에서 27℃에서 배양하였다. 그다음, 2㎖의 분획을, 상기와 동일한 매질을 100㎖ 각각 함유하는 100개의 500㎖들이의 플라스크로 이동시켰다. 발효는 시드 배양액과 동일한 조건하에서 회전 셰이커에서 수행되었다. 약 96 시간 후에, 화합물의 수득량이 최대에 도달하였다. 그다음, 발효액을 하기와 같은 단리 방법에 적용시켰다.

자르(jar) 발효

아스페르질루스 푸미가투스 NR 7329(DSM 10678)의 원료 배양액(0.1㎖)의 일분획을 상기와 동일한 매질 100㎖를 함유하고 있는 500㎖들이의 삼각 플라스크에 접종시켰다. 제 1 시드 배양액을 220rpm의 회전 셰이커에서 27℃에서 배양시켰다. 그다음, 2㎖의 분획을 상기와 동일한 매질 100㎖를 함유하고 있는 24개의 500㎖의 플라스크로 옮겼다. 동일한 조건하에서 3일동안 발효시켰다. 생성된 배양액 각각의 600㎖를, 니산 디스포움 CA-123 500㎖를 추가로 함유하는 동일한 매질 30ℓ를 각각 함유하는 4개의 50ℓ들이의 자르에 접종하였다. 400 rpm으로 교반하고 30ℓ/분의 공기 유속하에서 27℃의 자르에서 발효시켰다. 화합물의 최대 수득량은 발효한 지 약 91 시간 후에 도달하였고, 전체 발효액을 하기의 단리 방법에 적용시켰다.

단리 방법-I

상기 플라스크 발효로 수득된 배양액(10ℓ)를 원심분리하여 상청액 및 균사체 덩어리로 분리하였다. 상청액(6.4ℓ)를 에틸 아세테이트(6.4ℓ)로 추출하고, 유기층을 감압하에서 농축하여 건조시켰다. 농출물(6.9g)을 메탄올(1ℓ)에 용해시키고 n-헥산(2ℓ)로 분배하여 n-헥산 층을 제거하였다. 그다음, 메탄올 층을 감압하에서 농축하여 건조하였다(조질의 추출물 I: 5.2g). 다른 한편으로, 균사체 덩어리를 메탄올(4.5ℓ)로 추출하고, 혼합물을 여과하여 메탄올 추출액을 수득하였다. 이렇게 수득된 메탄올 추출액을 감압하에서 농축하고 농축액(1.5ℓ)를 n-헥산(1.5ℓ)로 세척하였다. 아래층을 감압하에서 농축하여 건조하였다. 잔류물을 물(1.5ℓ)에 용해시킨 다음, 수득된 현탁액을 에틸 아세테이트(1.5ℓ)로 추출하였다. 그다음, 에틸 아세테이트 층을 감압하에서 농축하여 건조시켰다(조질의 추출물 II: 4.0g). 조질의 추출물 I 및 조질의 추출물 II를 모아, YMC-GEL ODS-A 60-60/30(50g, 일본 소재의 YMC 캄파니 리미티드(YMC Co., LTD))의 컬럼 크로마토그래피에 적용시켰다. 컬럼을 물 및 메탄올의 혼합물로 용리시켰다. 활성 화합물을 함유하는 용리액을 모아 감압하에서 농축하여 건조시켰다. 그다음, 잔류물(7.1g)을, 메탄올을 용리액으로 사용하는, 세파덱스 LH-20(4ℓ, 스웨덴 소재의 파마시아(Pharmacia))의 컬럼 크로마토그래피에 적용시켰다. 활성 화합물을 함유하는 용리액을 모아 2개의 분획을 수득하였다(분획 1: 1.98g, 분획 2: 63㎎). 분획 1을, 용리액으로 30%의 아세토니트릴 수용액을 사용하는 제조용 HPLC(카프셀 팩(CAPCELL PAK) C18 UG-120A; 일본 소재의 시세이도(Shiseido))에 적용하였다. 화학식 A의 화합물 및 화학식 B의 화합물을 함유하는 분획을 각각 감압하에서 농축시켜 건조하였다. 화학식 A의 화합물을 함유하는 잔류물(275㎎)을, 용리액으로 30% 아세토니트릴 수용액을 사용하는, 제조용 HPLC(YMC-팩(Pack) Ph A-414; 일본 YMC 캄파니 리미티드)에 재적용시켰다. 화학식 A의 화합물을 함유하는 분획을 감압하에서 농축시켜 건조시키고, 그다음 메탄올로부터 결정화하여 화학식 A의 화합물의 백색 결정(132㎎)을 수득하였다. 화학식 B의 화합물을 함유하는 잔류물(115㎎)을 동일한 방법으로 처리하여 화학식 B의 화합물의 백색 결정(74㎎)을 수득하였다.

단리 방법-II

상기 자르에서 발효하여 수득된 배양액(120ℓ)을 원심분리하여 상청액 및 균사체 덩어리로 분리하였다. 상청액(100ℓ)를 에틸 아세테이트(72ℓ)로 추출하고, 감압하에서 유기층을 농축하여 건조하였다. 농축물(160g)을 메탄올(3ℓ)에 용해시키고 n-헥산(5ℓ)로 분배한 다음, n-헥산 층을 제거하였다. 그다음, 메탄올 층을 감압하에서 농축하여 건조하였다(조질의 추출물 I: 70 g). 다른 한편으로, 균사체 덩어리를 메탄올(36ℓ)로 추출하고, 혼합물을 여거하여 메탄올 추출액을 수득하였다. 이렇게 수득된 메탄올 추출액을 감압하에서 농축하고, 농축액(3ℓ)을 n-헥산(3ℓ)로 세척하였다. 아래층을 감압하에서 농축하여 건조하였다. 잔류물을 물(2ℓ)에 용해시키고, 이렇게 수득된 현탁액을 에틸 아세테이트(2ℓ)로 추출하였다. 그다음, 에틸 아세테이트층을 감압하에서 농축하여 건조시켰다(조질의 추출물 II: 230g). 조질의 추출물 I 및 추출물 II을 모아 실리카겔(300g, 와코겔(Wakogel) C-200; 일본 소재의 와코 푸어 케미칼 인더스트리즈(Wako Pure Chemical Industries, Ltd.))의 컬럼 크로마토그래피에 적용시켰다. 컬럼을 디클로로메탄 및 메탄올의 혼합물로 용리하였다. 활성 화합물을 함유하는 용리액을 감압하에서 농축하여 건조시켰다. 잔류물(77g)을, 용리액으로 메탄올을 사용하는, 세파덱스 LH-20(44ℓ)의 컬럼 크로마토그래피에 적용시켰다. 활성 화합물을 함유하는 용리액을 모아 3개의 분획(분획 1, 분획 2, 분획 3)을 수득하였다. 화학식 A의 화합물 및 화학식 B의 화합물을, 함유하는 분획 1(10.61g)을 용리액으로 디클로로메탄 및 메탄올을 사용하는 로바르(Lobar) 컬럼(리클로프레프(LiChroprep) Si60 사이즈 C; 독일 소재의 메르크(Merck))에 적용시켰다. 화학식 A의 화합물을 함유하는 분획을 감압하에서 농축시켜 건조하고, 그다음 메탄올에서 결정화하여 화학식 A의 화합물의 백색 결정(2.39g)을 수득하였다. 화학식 B의 화합물을 함유하는 분획을 동일한 방법으로 처리하여 백색 결정으로서 화학식 B의 화합물(0.72g)를 수득하였다.

실시예 2

아스페르질루스 푸미가투스 NR 7334(DSM 10682) 및 아스페르질루스 NR 7328(DSM 10677)을 실시예 1과 동일한 방법으로 배양하였다.

화학식 A의 화합물 및 화학식 B의 화합물의 단리 수득량을 표 2에 제시하였다.

균주 번호	화학식 A의 화합물	화학식 B의 화합물
NR 7328	1㎎/ℓ	---
NR 7334	45㎎/ℓ	20㎎/ℓ

실시예 3

플라스크 배양

아스페르질루스 푸미가투스 NR 7330(DSM 0679)의 원료 배양액의 분획을 2%의 글루코즈, 1%의 감자 전분, 1.5%의 글리세롤, 1%의 토스트 소야, 0.25%의 폴리펩톤, 0.35%의 효모 추출액, 0.3%의 NaCl, 0.5%의 CaCO₃, 0.005%의 ZnSO₄·7H₂O, 0.0005% CuSO₄·5H₂O, 0.0005%의 MnSO₄·4H₂O 및 0.03%의 니산 디스포움 CA-123으로 구성되는 있는 매질 100㎖를 함유하는 500㎖들이의 삼각 플라스크에 접종하였다. 매질의 pH는 조정하지 않았다. 시드 배양액 및 생성 배양액의 제조방법 및 조건은 플라스크 배양 1과 동일하였다. 발효시킨지 약 96 시간 후에, 전체 발효액을 단리 방법에 적용시켰다. 아스페르질루스 푸미카투스 NR 7331(DSM 10680) 및 아스페르질루스 푸미가투스 NR 7332(DSM 10681)를 전술한 바와 동일한 방법에서 배양하였다.

화학식 A의 화합물 및 화학식 B의 화합물의 단리 수득량을 표 3에 제시하였다.

균주 번호	화학식 A의 화합물	화학식 B의 화합물
NR 7330	14㎎/ℓ	11㎎/ℓ
NR 7331	2㎎/ℓ	4㎎/ℓ
NR 7332	4㎎/ℓ	7㎎/ℓ

실시예 4

화학식 A-1의 화합물 및 화학식 B-1의 화합물의 비교

피리딘/아세트산 무수물(1:1, v/v) 1.4㎖내 화학식 A의 화합물 21㎎의 용액을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 감압하에서 건조시켜 백색 분말로서 화학식 A-1의 화합물 26㎎을 수득하였다.

피리딘/아세트산 무수물(1:1, v/v) 1.4㎖내 화학식 B의 화합물 21㎎의 용액을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 감압하에서 건조하여 백색 분말로서 화학식 B-1의 화합물 26㎎을 수득하였다.

실시예 5

화학식 A-4의 화합물 및 화학식 B-4의 화합물의 제조

실온에서 메탄올 3㎖내 화학식 A의 화합물 4㎎의 용액에, 에틸 에테르내 과량의 디아조메탄을 첨가하였다. 8시간 후에, 용액을 진공하에서 증발시켰다. 잔류물을 제조용 TLC(카이젤겔(Kieselgel) 60 F₂₅₄, 아트(Art.) 5715; 독일 소재의 메르크)로 정제하여, 백색 분말로 화학식 A-4의 화합물 4㎎을수득하였다.

메탄올 3㎖내 화학식 B의 화합물 6㎎의 용액을 동일한 방법으로 처리하여, 백색 분말로 화학식 B-4의 화합물 5㎎을 수득하였다.

실시예 6

화학식 A-7의 화합물의 제조

실온에서 디메틸설폭사이드 0.2㎖내 화학식 A-4의 화합물 5㎎의 용액에 아세트산 무수물 0.2㎖를 첨가하였다. 혼합물을 17 시간 동안 교반한 후, 감압하에서 증발하고, 잔류물을 제조용 HPLC로 정제하여 백색 분말로서 화학식 A-7의 화합물 0.5㎎을 수득하였다.

실시예 7

화학식 A-8의 화합물의 제조

에틸 알콜 10㎖내 화학식 A의 화합물 50㎎의 용액에 목탄상 팔라듐 15㎎를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 수소 분위기하에서 15시간 동안 교반하였다. 촉매를 제거한 후, 용액을 감압하에서 증발시켰다. 용리액으로 인산 완충액 및 아세토니트릴 혼합물을 사용하는 HPLC(팩셀 팩 C18 SG120A)로 잔류물을 정제하여 백색 분말로서 화학식 A-8의 화합물 5㎎을 수득하였다.

실시예 8

화학식 A-9의 화합물의 제조

아르곤 분위기의 0℃에서 나트륨 보로하이드라이드 2.6㎎을 메탄올 4㎖내 화합물 20㎎의 용액에 첨가하였다. 4시간 동안 교반한 후, 용액을 감압하에서 증발시키고, 잔류물에 4㎖의 에틸 아세테이트 및 4㎖의 증류수를 첨가하였다. 용액을 진탕시키고, 유기층을 감압하에서 증발시키고, 잔류물을 용리액으로 인산 완충액 및 아세토니트릴의 혼합물을 사용하여 HPLC(팩셀 팩 C18 SG120A)로 정제하여 백색 분말로서 화학식 A-8의 화합물 15㎎ 및 화학식 A-9의 화합물 2㎎을 수득하였다.

실시예 9

화학식 A-5의 화합물, 화학식 A-6의 화합물, 화학식 B-5의 화합물 및 화학식 B-6의 화합물의 제조

피리딘 0.2㎖내 화학식 A-4의 화합물 3㎎의 용액에 (-)-α-메톡시-α-트리플루오로메틸페닐아세틸 클로라이드 4.5㎎을 첨가하였다. 혼합물을 5시간 동안 교반하였다. 감압하에서 피리딘을 제거한 후, 제조용 TLC(카이젤겔 60 F₂₅₄, 아트 5715)에서 정제하여 백색 분말로서 화학식 A-5의 화합물 3㎎을 수득하였다.

피리딘 0.2㎖내 화학식 A-4의 화합물 3㎎의 용액에 (+)-α-메톡시-α-트리플루오로메틸페닐아세틸 클로라이드 4.5㎎을 첨가하였다. 혼합물을 5시간 동안 교반하였다. 감압하에서 피리딘을 제거한 후, 제조용 TLC(카이젤겔 60 F₂₅₄, 아트 5715)에서 정제하여 백색 분말로서 화학식 A-6의 화합물 3㎎을 수득하였다.

피리딘 0.2㎖내 화학식 B-4의 화합물 2㎎의 용액에 (-)-α-메톡시-α-트리플루오로메틸페닐아세틸 클로라이드 4.5㎎을 첨가하였다. 혼합물을 5시간 동안 교반하였다. 감압하에서 피리딘을 제거한 후, 제조용 TLC(카이젤겔 60 F₂₅₄, 아트 5715)에서 정제하여 백색 분말로서 화학식 B-5의 화합물 2㎎을 수득하였다.

피리딘 0.2㎖내 화학식 B-4의 화합물 2㎎의 용액에, (+)-α-메톡시-α-트리플루오로메틸페닐아세틸 클로라이드 4.5㎎을 첨가하였다. 혼합물을 5시간 동안 교반하였다. 감압하에서 피리딘을 제거한 후, 제조용 TLC(카이젤겔 60 F₂₅₄, 아트 5715)로 정제하여 백색 분말로서 화학식 B-6의 화합물 2㎎을 수득하였다.

실시예 10

화학식 A-3의 화합물 및 화학식 B-3의 화합물의 제조

피리딘 0.8㎖내 화학식 A의 화합물 5㎎의 용액에 p-브로모벤조일 클로라이드 4㎎을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 감압하에서 피리딘을 제거한 후, 제조용 TLC(카이젤겔 60 F₂₅₄, 아트 5715)로 정제하여 백색 분말로서 화학식 A-2의 화합물 2㎎ 및 화학식 A-3의 화합물 2㎎을 수득하였다.

피리딘 0.8㎖내 화학식 B의 화합물 5㎎의 용액을 동일한 방법으로 처리하여 화학식 B-2의 화합물 1㎎ 및 화학식 B-3의 화합물 2㎎을 백색 분말로서 수득하였다.

실시예 11

화학식 A-2의 화합물 및 화학식 B-3의 화합물의 제조

아세토니트릴 20㎖내 화학식 A의 화합물 200㎎의 용액에, p-브로모벤조일 클로라이드 164㎎ 및 탄산 칼륨 120㎎을 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고 증류수로 세척하였다. 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압하에서 증발시켰다. 에틸 아세테이트 및 헥산의 혼합물을 용리액으로 사용하는, 실리카 겔(와코겔 C-200)의 크로마토그래피로 잔류물을 정제하여, 백색 분말로 화학식 A-2의 화합물 100㎎을 수득하였다.

아세토니트릴 20㎖내 화학식 B의 화합물 200㎎ 용액을 동일한 방법으로 처리하여 백색 분말로서 화학식 B-2의 화합물 200㎎을 수득하였다.

실시예 12

화학식 A-10의 화합물의 제조

아르곤 분위기하에서 무수 DMF 0.25㎖내 화학식 A의 화합물 72.9㎎의 용액에 방금 제조한 DMF내 NH₃용액 0.5㎖를 첨가하였다. 30분 후, 감압하에서 휘발성 물질을 제거하였다. 고체 잔류물에, 톨루엔 22㎖ 및 피리디늄 p-톨루엔설포네이트 10㎎을 첨가하였다. 혼합물을 총 125분 동안 환류시킨 후, 냉각하고, 휘발성 물질을 감압하에서 제거하였다. 헥산-에틸 아세테이트(1:1)로 용리시키는, 실리카 겔의 크로마토그래피로 생성물을 정제하여 백색 분말의 화학식 A-10의 화합물 45.9㎎을 수득하였다.

하기 제형예는 본 발명에서 제공하는 화합물을 함유하는 항종양제를 설명하고 있다.

제형예

하기 성분을 함유하는 정제는 종래의 방법으로 제조된다.

화합물 A	100㎎
전분	26㎎
카복실메틸셀룰로즈 칼슘	15㎎
결정성 셀룰로즈	20㎎
마그네슘 스테아레이트	4㎎
총	165㎎

Claims

하기 화학식 I의 화합물 및 그의 에피머와 거울상 이성질체, 또는 이들의 생리적으로 사용가능한 염:

화학식 I

상기 식에서,

R¹및 R²는 독립적으로 수소; 치환되지 않은 저급 알킬; 저급 알콕시 또는 저급 알킬 티오로 치환된 저급 알킬; 또는 치환되지 않거나 하나 이상의 저급 알킬, 할로겐으로 치환된 저급 알킬 또는 저급 알콕시로 치환된 아실이고;

X는 CO 또는 CHOH이고;

Y는 CO 또는 CH₂이고;

Z는 O 또는 NH이다.
제 1 항에 있어서,

X가 CO인 화합물.
제 2 항에 있어서,

Y가 CO인 화합물.
제 3 항에 있어서,

R¹이 수소이고 R²가 수소인 화합물.
제 4 항에 있어서,

Z이 O이고 화합물의 고유 광회전도가 [α]²³ _D=+272°(메탄올에서 c=0.56임)인 화합물.
제 4 항에 있어서,

Z이 O이고 화합물의 고유 광회전도가 [α]²³ _D=-8°(메탄올에서 c=0.52임)인 화합물.
제 2 항에 있어서,

R¹이 아실인 화합물.
제 7 항에 있어서,

R¹이 아세틸인 화합물.
제 8 항에 있어서,

R²가 아실인 화합물.
제 9 항에 있어서,

R²이 아세틸인 화합물.
제 10 항에 있어서,

Z가 O인 화합물 및 그의 에피머.
제 7 항에 있어서,

R¹이 p-브로모벤조일인 화합물.
제 12 항에 있어서,

R²가 수소인 화합물.
제 13 항에 있어서,

Z가 O인 화합물 및 그의 에피머.
제 7 항에 있어서,

R¹이 (-)-α-메톡시-α-(트리플루오로메틸)-페닐아세틸인 화합물.
제 15 항에 있어서,

R²가 저급 알킬인 화합물.
제 16 항에 있어서,

R²가 메틸인 화합물.
제 17 항에 있어서,

Z가 O인 화합물 및 그의 에피머.
제 7 항에 있어서,

R¹이 (+)-α-메톡시-α-(트리플루오로메틸)페닐아세틸인 화합물.
제 19 항에 있어서,

R²가 저급 알킬인 화합물.
제 20 항에 있어서,

R²가 메틸인 화합물.
제 21 항에 있어서,

Z가 O인 화합물 및 그의 에피머.
제 2 항에 있어서,

R¹이 치환된 저급 알킬인 화합물.
제 23 항에 있어서,

R¹이 메틸티오메틸인 화합물.
제 24 항에 있어서,

R²가 저급 알킬인 화합물.
제 25 항에 있어서,

R²가 메틸인 화합물.
제 2 항에 있어서,

R¹이 수소인 화합물.
제 27 항에 있어서,

R²가 아실인 화합물.
제 28 항에 있어서,

R²가 p-브로모벤조일인 화합물.
제 29 항에 있어서,

Z가 O인 화합물 및 그의 에피머.
제 27 항에 있어서,

R²가 저급 알킬인 화합물.
제 31 항에 있어서,

R²가 메틸인 화합물.
제 32 항에 있어서,

Z가 O인 화합물 및 그의 에피머.
제 4 항에 있어서,

Z이 NH인 화합물.
치료 효과량의 하기 화학식 I의 화합물 및 그의 에피머와 거울상 이성질체, 또는 이들의 생리적으로 사용가능한 염, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물:

화학식 I

상기 식에서,

R¹및 R²는 독립적으로 수소; 치환되지 않은 저급 알킬; 저급 알콕시 또는 저급 알킬 티오로 치환된 저급 알킬; 또는 치환되지 않거나 하나 이상의 저급 알킬, 할로겐으로 치환된 저급 알킬, 및 저급 알콕시로 치환된 아실이고;

X는 CO 또는 CHOH이고;

Y는 CO 또는 CH₂이고;

Z는 O 또는 NH이다.
종양 치료가 필요한 대상에게 치료 효과량의 하기 화학식 I의 화합물 및 그의 에피머와 거울상 이성질체, 또는 이들의 생리적으로 사용가능한 염, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 투여함으로써 상기 대상의 종양을 치료하는 방법:

화학식 I

상기 식에서,

R¹및 R²는 독립적으로 수소; 치환되지 않은 저급 알킬; 저급 알콕시 또는 저급 알킬 티오로 치환된 저급 알킬; 또는 치환되지 않거나 하나 이상의 저급 알킬, 할로겐으로 치환된 저급 알킬, 및 저급 알콕시로 치환된 아실이고;

X는 CO 또는 CHOH이고;

Y는 CO 또는 CH₂이고;

Z는 O 또는 NH이다.
아스페르질루스 야포니쿠스(Aspergillus japonicus) NR 7328 (DSM 10677)의 생물학적으로 순수한 배양액.
아스페르질루스 푸미가투스(Aspergillus fumigatus) NR 7329 (DSM 10678)의 생물학적으로 순수한 배양액.
아스페르질루스 푸미가투스 NR 7330 (DSM 10678)의 생물학적으로 순수한 배양액.
아스페르질루스 푸미가투스 NR 7331 (DSM 10680)의 생물학적으로 순수한 배양액.
아스페르질루스 푸미가투스 NR 7332 (DSM 10681)의 생물학적으로 순수한 배양액.
아스페르질루스 푸미가투스 NR 7334 (DSM 10682)의 생물학적으로 순수한 배양액.