KR19990035280A

KR19990035280A - 락토바실러스 애시도필러스 ky 2104 및 그 용도

Info

Publication number: KR19990035280A
Application number: KR1019970057071A
Authority: KR
Inventors: 신명수; 이정준; 나석환; 배형석; 백영진; 김경태
Original assignee: 이은선; 주식회사 한국야쿠르트
Priority date: 1997-10-31
Filing date: 1997-10-31
Publication date: 1999-05-15
Anticipated expiration: 2017-10-31
Also published as: KR100240687B1

Abstract

본 발명은 한국인의 분변으로부터 분리한 내산성 및 내담즙산성이 우수한 새로운 락토바실러스 애시도필러스에 관한 것으로서, 본 발명에 따른 새로운 균주인 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104(기탁기관 : 한국과학기술연구원부설 생명공학 연구소, 수탁일 : 1997년 9월 29일, 수탁번호 : KCTC 8833P)는 일반적인 락토바실러스 애시도필러스에 비해 특히 내산성이 우수하며, 내담즙산성과 병원성균에 대한 생육억제능력이 있으며, 사람으로부터 유래되어 인체에 사용하기에 적합하다.

본 균주는 (i) 한국인의 분변으로부터 먼저 내산성을 지닌 락토바실러스를 1차 분리한 후, (ii) 분리된 균주로부터 산성 pH에 대한 내성이 강한 균주를 2차 선발하고, (iii) 선발된 균주중에서 담즙산에 대한 내성이 높은 내담즙산성균주를 선발하고, (iv) 선발된 균주중에서 병원성균에 대한 생육억제능력이 있는 균주를 최종적으로 분리하여, (v) 동정함으로써 분리해 낼 수 있다.

본 발명의 락토바실러스 애시도필러스 KY 2140는 프로바이오틱스로서 발효제품, 유아용 식품, 기능성 식품, 건강식품 등의 식품과 정장제 등의 의약품에 유용하게 이용될 수 있으며, 이 밖에도 동물사료 첨가제를 비롯한 다양한 분야에서 널리 활용될 수 있다.

Description

락토바실러스 애시도필러스 KY 2104 및 그 용도

본 발명은 한국인의 분변으로부터 분리한 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104(기탁기관 : 한국과학기술연구원부설 생명공학연구소, 수탁일 : 1997년 9월 29일, 수탁번호 : KCTC 8833P)에 관한 것으로서, 내산성과 내담즙산성이 우수하며 병원성균에 대한 생육억제 능력이 있어 식품, 의약품 등에 광범위하게 사용될 수 있는 새로운 락토바실러스 애시도필러스 및 그 용도에 관한 것이다.

숙주의 건강을 증진시켜 주는 살아있는 미생물을 프로바이오틱스(probiotics, 생균제)라고 하며, 프로바이오틱스는 장내균총의 안정화, 유해세균의 정착 억제에 따른 부패산물 생성 감소 및 질병 예방, 면역활성화에 따른 항암작용, 콜레스테롤 저하 및 장질환 예방효과를 갖고 있다. 프로바이오틱스로 주로 사용되는 유산균으로는 락토바실러스(Lactobacillus), 비피도박테리아(Bifidobacterium), 엔테로코커스(Enterococcus) 등이 있으며, 이중 락토바실러스는 통성혐기성 간균으로서 가장 먼저 동물 장내균총의 평형을 유지하기 위해 사용되어 왔다. 현재 프로바이오틱스로 사용되고 있거나 사용가능한 락토바실러스로는 락토바실러스 애시도필러스(L. acidophilus), 락토바실러스 카제이(L. casei), 락토바실러스 플라타룸(L. plantarum), 락토바실러스 살리바리우스(L. salivarius), 락토바실러스 로이테리(L. reuteri) 등 다양한 정상젖산발효균 또는 이상젖산발효균이 있다. 그러나 이러한 균주들이 사람에 대한 프로바이오틱스로 사용되기 위해서는 다음과 같은 조건들을 구비해야 한다고 알려져 있다. 즉, i) 가축이나 동물이 아닌 사람의 장관내에서 분리되어 안전한 것이어야 하며, ii) 위의 낮은 pH에서 생존하여 장관에 도달하여야 하며, iii) 소장으로 분비되는 담즙에 대해 내성을 지녀야 하며, iv) 병원성균에 대한 억제 등 장내에서 유익한 작용을 하여야 한다.

그러나 지금까지 개발된 유산균들은 대부분 사람이 아닌 자돈 등의 가축이나 동물에서 분리되었으므로 사람에 사용할 경우 안정성에 문제가 있었다. 또한 이러한 균주 중 일부는 내산성과 내담즙산성이 약하여 프로바이오틱스로서의 역할을 기대하기 어려웠다.

이에 본 발명자들은 사람의 분변으로부터 살아있는 균주를 분리함으로써 위산 및 담즙에서 생존할 수 있으며, 인체에 안전한 균주를 얻고자 연구하던 중 한국인의 분변으로부터 내산성이 우수한 새로운 락토바실러스 애시도필러스를 분리함으로써 본 발명을 완성하게 되었다. 본 발명에 앞서 본 발명자들은 사람의 분변으로부터 유래되어 내산성 및 내담즙산성이 우수하며 병원성균에 대한 생육억제능력이 있는 새로운 비피도 박테리아인 비피도박테리움 비피덤 HY 43(특허출원 제95-29985호), 비피도박테리움 롱검 HY 8001(특허출원 제95-30301호), 비피도박테리움 브레베 HY 16(특허출원 제96-10935호)등을 특허출원한 바 있다.

본 발명은 한국인의 분변으로부터 분리되어 내산성이 매우 우수하고 내담즙산성이 있으며 병원성균에 대한 생육억제능력이 있는 새로운 균주인 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104(기탁기관 : 한국과학기술연구원부설 생명공학연구소, 수탁일 : 1997년 9월 29일, 수탁번호 : KCTC 8833P)를 제공하고자 한다.

또한 본 발명은 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104의 용도를 제공하고자 한다.

본 발명은 한국인의 분변으로부터 분리한 내산성 및 내담즙산성이 우수한 새로운 락토바실러스 애시도필러스에 관한 것으로서, 본 발명에 따른 새로운 균주인 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104((기탁기관 : 한국과학기술연구원부설 생명공학연구소, 수탁일 : 1997년 9월 29일, 수탁번호 : KCTC 8833P)는 일반적인 락토바실러스 애시도필러스에 비해 특히 내산성이 우수하며, 내담즙산성과 병원성균에 대한 생육억제능력이 있으며, 사람으로부터 유래되어 인체에 사용하기에 적합하다. 이하, 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104의 분리방법, 균학적 성질 및 용도에 대한 상세하게 설명한다.

[락토바실러스 애시도필러스 KY 2104의 분리 및 동정]

(i). 먼저 한국인의 분변을 채취하여 pH 2.5의 완충용액에 넣어 혼합한 다음, pH를 2.3으로 보정하고 2시간동안 진탕한 후, LBS 한천평판배지에 도말하여 37℃에서 48시간 호기배양한다. 이때 성장한 집락을 우선 분리하고, 이를 다시 그람염색, 검경 그리고 우유배지에서의 커드형성의 확인을 통해 지닌 락토바실러스로 1차분리한다.

(ii). 분리된 균주들을 다시 pH 2.3의 완충용액에서 2시간 동안 정치한 후, 산성 pH에 대해 내성이 강한 균주를 2차 선발한다.

(iii). 선발된 균주를 0.3%의 옥스갈(Bacto oxgall, Difco)이 함유된 LBS 한천평판배지에 도말하고, 37℃에서 48시간 호기배양하여 담즙산에 대한 내성이 높은 내담즙산성균주를 선발한다.

(iv). 선발된 균주중에서 병원성균에 대한 생육억제능력이 있는 균주를 최종적으로 분리한다.

(v). 버기스 매뉴얼(Bergey's manual)과 탄수화물 분해실험 등을 통해 분리된 균주를 동정함으로써 분리된 균주가 락토바실러스 애시도필러스의 새로운 균주임을 확인한다.

[균주의 특성]

(1) 균의 형태

앰알에스(MRS) 한천평판배지에서 37℃, 48시간 배양했을 때의 균의 형태

1) 세포의 형상 : 막대형

2) 그람염색 : 양성

3) 운동성 : 없음

4) 포자형성능 : 없음

(2) 집락의 형태

앰알에스 한천평판배지에서 37℃, 48시간 배양했을때의 균의 형태

1) 형상 : 원형 또는 불규칙

2) 크기 : 0.5~3.0㎜ (직경)

3) 색조 : 회백색

4 ) 표면 : 약감 거침

5) 융기 : 납작 또는 평면

(3) 생리학적 성질

1) 생육 온도 : 생육범위 : 20~40℃

최적온도 : 30~37℃

2) 생육 pH : 생육범위 : pH 2.0~8.0

최적 pH : pH 5.0~7.0

3) 산소의 영향 : 통성 혐기성

4) 우유응고성 : +

5) 카탈라제 : -

6) 베타-칼락토오스 분해효소 : +

7) 알파-글루코오스 분해효소 : +

8) 당이용성

에리스리톨 : -

아라비노오스 : -

리보스 : -

아도니톨 : -

갈락토오스 : +

글루코오스 : +

프럭토오스 : +

만노스 : +

만니톨 : -

솔비톨 : -

N-아세틸글루코사민 : +

아미그달린 : +

알부틴 : -

에스뮬린 : +

살리신 : +

셀로비오스 : +

말토오스 : +

락토오스 : +

멜리비오스 : +

슈크로오스 : +

트레할노오스 : +

이눌린 : -

라피노오스 : +

아미돈 : -

스타치 : -

젠티오비스 : +

글루코네이트 : -

(4) 내산성

락토바실러스 애시도필러스 KY 2104는 pH는 2.0의 산성완충용액에서 60분간 배양하는 경우에도 50% 이상의 높은 생존률을 보일 정도로 내산성이 우수하다. 특히, 발효유제품, 유산균 정장제 등에 포함되어 있는 다른 락토바실러스 애시도필러스와 비교실험할 경우, 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104는 pH는 3.0에서 2시간이 지난 후에도 초기 접종 농도와 유사하게 생존하며, 다른 락토바실러스 애시도필러스 균주들이 거의 사멸하는 pH 2.3과 pH 2.0에서도 각각 10⁶cfu/ml, 10⁴cfu/ml 이상의 높은 생존률을 보인다. 이러한 결과로부터 본 발명에 따른 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104가 다른 락토바실러스 애시도필러스 균주에 비해 탁월한 내산성을 가진 새로운 균주임을 알 수 있다.

(5) 내담즙산성

락토바실러스 애시도필러스 KY 2104를 담즙산이 첨가된 배지에서 배양한 결과, 담즙산이 0.5%(w/v) 함유된 배지에서도 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104의 생육이 관찰되었다. 이로부터 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104가 담즙산에 대한 내성이 있다는 것을 알 수 있다.

(6) 병원성균에 대한 생육억제능력

대장균, 살모넬라, 쉬겔라, 포도상구균 등의 병원성균을 락토바실러스 애시도필러스, KY 2104와 혼합배양하면 단독배양할 경우에 비해 생균수가 크게 감소된다.

즉, 대장균, 살모넬라, 쉬겔라, 포도상구균 같은 병원성균과 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104를 같은 농도로 엠알에스 액체배지에 혼합접종하여, 37℃에서 24시간 동안 배양하면, 단독배양 때의 생균수에 비해 생균수가 10⁸→10⁷내지 10⁸→10²으로 감소되어 생육억제율이 90~100%에 이르는 것으로 나타난다. 이로써 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104가 병원성균에 대해 뛰어난 생육억제능력이 있음을 알 수 있다.

(7) 증식성 및 산생성능력

락토바실러스 애시도필러스 KY 2104를 10%(w/v) 환원탈지유에 1% 접종하고 37℃에서 48시간 배양하여 우유를 기초로 한 배양배지에서의 증식성과 산생성능력을 측정하였다. 그 결과 배양완료 후 생균수는 약 5.0×10⁸cfu/ml 정도, pH는 약 3.65정도로 측정되었다. 이로써 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104가 발효유 등의 유제품에 이용하기에 충분한 증식성과 산생성능력이 있음을 알 수 있다.

(8) 기타

락토바실러스 애시도필러스 KY 2104의 인체에 대한 안전성을 시험하기 위하여, 발암효소의 하나인 베타-글루쿠로니다제에 대한 활성여부를 알아 보았다. 효소 활성 측정법의 하나인 에이피아이자임(API ZYME kit)을 사용하여 효소활성을 측정한 결과, 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104는 베타-글루쿠로니다제에 대해 전혀 활성능력이 없는 것으로 나타났다. 따라서 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104가 인체에 안전한 균주임을 확인할 수 있었다.

상술한 바와 같이, 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104는 한국인의 분변으로부터 분리된 유산균으로서, 기존의 락토바실러스 애시도필러스에 비해 탁월한 내산성을 가지고 있으며, 내담즙산성 및 병원균 생육억제능력을 가지고 있으며, 사람으로부터 분리되어 인체에 사용하기에 적합한 새로운 락토바실러스 애시도필러스이다.

[균주의 용도]

본 발명의 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104는 유산균 발효유를 비롯한 발효제품의 발효균주로 사용될 수 있으며, 인체에 유용한 프로바이오틱스로서 균체를 그대로, 또는 건조하거나, 농축하여 유아용 식품, 가능성 식품, 건강식품 등의 식품에 첨가할 수 있다. 특히, 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104는 정장제 등의 의약품에 유용하게 이용될 수 있으며, 이밖에도 동물사료 첨가제를 비롯한 다양한 분야에서 널리 활용될 수 있다.

이하 실시예를 통해 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 다음의 실시예는 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 해석되어서는 아니되며, 본 발명의 범위내에서 당업자에 의해 통상적인 변화가 가능함은 물론이다.

[실시예 1]

락토바실러스 애시도필러스 KY 2104의 분리

한국인의 분변을 채취하여 잘 혼합한 다음, 2.5~5.0g을 취하여 10배 부피의 pH 2.5 완충용액에 넣어 잘 혼합하고, HCl 원액으로 pH를 2.3으로 보정하였다. 37℃에서 2시간 동안 정치한 다음, 시료를 채취하여 희석용 완충용액으로 희석하고, 락토바실러스균의 선택배지인 LBS 한천평판배지에 도말한 후, 37℃에서 48시간동안 배양하였다. 배양후 나타난 집락이 그람양성, 카탈라제 음성, 무포자 형성, 막대기 모양의 간균임을 확인하여 내산성을 지닌 락토바실러스로 1차 분리하였다.

분리된 균주들을 다시 pH 2.3의 완충용액에서 2시간 동안 정치한 다음, 산성 pH에 대해 내성이 강한 균주를 2차 선별하고, 발된 균주를 옥스갈(Bacto oxgall, Difco)이 0.3% 함유된 LBS 한천평판배지에 도말한 후 37℃에서 48시간 호기배양하여 담즙산에 대해 내성이 높은 내담즙산성균주를 선발하였다.

선발된 균주중에서 병원성균에 대한 생육억제능력이 있는 균주를 최종적으로 분리한 후, 버기스 매뉴얼(Bergey's manual)과 탄수화물 분해실험 등에 의한 동정을 통해 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104로 명명하였다.

[실시예 2]

내산성 확인

(1). 실험 1

락토바실러스 애시도필러스 KY 2104를 10ml MRS 액체배지에 접종하여 37℃에서 하룻밤 동안 배양한 후, 배양액을 pH 3.0, 2.5, 2.0 완충용액에 각각 10⁷cfu/ml 정도의 초기농도로 접종하였다. 37℃에서 1시간 동안 정치시킨 후, 1ml를 취해 각각 희석용 생리식염수에 희석하였다. 희석액을 MRS 한천평판배지에 도말하여 37℃에서 48시간 동안 배양한 후, 나타난 집락수를 계수, 비교하였다. 그 결과는 다음의 표 1과 같다.

[표 1]

cfu : colony forming unit

상기 표 1로부터 알 수 있는 바와 같이, 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104는 pH 2.0의 산성용액에서 60분간 배양하는 경우에도 50%이상의 뛰어난 생존률을 보여 내산성이 매우 우수하였다.

락토바실러스 애시도필러스 KY 2104의 내산성 정도를 보다 정확히 평가하기 위해서, 산성용액에서 2시간 배양시의 생존률을 다른 락토바실러스 애시도필러스 균주와 비교측정하는 다음의 실험을 해보았다.

(2) 실험 2 (비교실험)

발효유제품, 유산균정장제 등에서 분리한 락토바실러스 애시도필러스 3종(이하, A, B, C로 칭함)과 본 발명의 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104의 내산성을 비교실험하였다. KY 2104와 3종의 균주를 10ml MRS 액체배지에 접종하고 37℃에서 하룻밤 동안 배양한 후, 이 배양액을 pH 7.0, 3.0, 2.5, 2.3 및 2.0의 완충용액에 각각 10⁷cfu/ml 정도의 초기 접종농도로 접종하였다. 이때 완충용액은 0.05M 소디움 포스페이트(sodium phosphate) 완충용액을 염산(HCL)으로 보정하여 만든 것을 사용했다. 37℃에서 2시간 동안 정치배양한 후, 1ml를 취해 각각 희석용 생리식염수에 희석하고, 희석액을 엠알에스(MRS) 한천평판배지에 도말하여 37℃에서 48시간 동안 배양하였다. 배양 결과 나타난 집락수를 계수함으로써 각 pH에 대한 내성을 비교 측정하였다. 그 결과는 다음의 표 2와 같다.

[표 2]

실험결과, pH 3.0 이하의 산성조건에서 KY 2104는 실험된 A, B, C 균주에 비해 의생존률이 훨씬 뛰어난 것으로 나타났다. 즉, A, B, C 균주와 달리 pH 3.0에서 2시간이 지난 후에도 사멸하지 않고 초기 접종 농도와 유사한 생존률을 보였으며, 미생물의 사멸작용이 급속하게 진행되는 pH 2.5에서도 10⁷cfu/ml 이상의 높은 생존률을 유지하였다. 특히, pH 2.3 이하에서 B, C 균주는 거의 사멸하는데 비해 KY 2104는 10⁶이상의 높은 생존률을 보였으며; A 균주의 경우도 pH 2.0에서 10²의 낮은 생존률을 보이나 KY 2104는 pH 2.0에서도 생존률이 10⁴이상으로 A 균주에 비해 100배 이상의 높은 생존률을 보였다.

이상의 결과로부터 KY 2104가 현재 프로바이오틱스로 사용되고 있는 락토바실러스 애시도필러스 균주들에 비해 상대적으로 훨씬 뛰어난 내산성을 가지고 있다는 것을 알수 있었다. 따라서 식품 또는 의약품의 형태로 인체에 투여될 경우 상당수가 위산을 통과하여 생존상태로 장관에 도달될 것으로 판단되었으며, 앞으로 식품, 의약품 등 여러분야에서 유용성이 클 것으로 생각할 수 있었다.

[실시예 3]

내담즙산성 확인

본 발명의 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104를 10ml MRS 액체배지에 일정량 접종하여 37℃에서 하룻밤 동안 배양한 후, 이 배양액을 옥스갈(Bacto oxgall, Difco)이 0.1, 0.3, 0.5%(w/v) 함유된 엠알에스 한천배지에 접종하였다. 37℃에서 48시간 동안 배양하여 집락의 형성여부를 관찰한 결과, 0.1%와 0.3%는 물론 0.5%의 옥스같이 함유된 배지에서도 본 균주가 생육된다는 것을 확인할 수 있었다. 따라서 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104는 담즙산에 대해서도 내성을 가지고 있음을 알 수 있었다.

[실시예 4]

병원성균 생육억제능력 확인

유아나 성인의 설사원인균으로 알려진 대장균, 살모넬라, 쉬겔라, 포도상구균 등의 병원성균에 대한 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104의 생육억제능력을 시험하였다. 시험방법은 병원성균을 단독으로 배양한 경우의 병원성균을 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104와 혼합접종하여 배양한 경우를 비교·측정함으로써 행하였다.

락토바실러스 애시도필러스 KY 2104와 병원성균들을 10ml MRS 액체배지에 각각 일정량 접종한 후, 37℃에서 하룻밤 배양하여 활성화하였다. 상기와 같은 균주의 활성화 과정을 2회 실시한 후, 일부는 50ml 엠알에스 액체배지에 상기 병원성균을 각각 단독 접종하고, 나머지는 각각 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104와 혼합 접종하였다. 단독접종한 것과 혼합접종한 것을 각각 37℃에서 24시간 동안 배양한 후 병원성균의 생균수를 측정하여 비교하였다. 생균수 측정에는 병원성균 각각의 선택배지를 사용하였다. 즉, 대장균, 살모넬라, 쉬겔라는 맥콩키(MacConkey) 한천평판배지를, 그리고 포도상구균은 스타필로코커스(Stapkylococcus) 110 한천평판배지를 사용하였다. 생균수의 측정결과는 표 3과 같다.

[표 3]

상기 표 3으로부터 알 수 있는 바와 같이, 병원성균을 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104와 혼합배양한 경우에는 병원성균의 생육이 크게 억제되었다. 즉, 대장균의 경우는 단독배양시 생균수가 10⁸인데 비해 혼합배양시에는 10⁷으로 생육억제율이 90% 이상으로 나타났으며, 살모넬라의 경우는 10⁸→10²으로 생균수가 감소되어 생육억제율이 거의 100%로 나타났으며, 쉬겔라와 포도상구균의 경우에도 각각 생균수가 10⁷→10², 10⁸→10³으로 감소되어 생육억제율이 거의 100%로 나타났다. 따라서 본 발명의 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104에는 병원성균에 대해 뛰어난 생육억제능력이 있음을 알 수 있었다.

[실시예 5]

배양예 (증식성 및 생산성능력 시험)

유산균을 발효유 등의 유제품에 이용하기 위해서는 산에 대한 내외성이외에도 우수한 산생성능력이 있어야 하며, 우유를 기초로 한 배양배지에서 높은 증식성을 보여야 하고, 유제품 등에서 높은 생균수를 유지할 수 있어야 한다.

본 발명의 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104를 10%(w/v) 환원탈지유 1,000ml에 1%(w/v) 접종하고 37℃에서 48시간 배양한 후 생균수 및 pH를 측정하였다, 그 결과는 다음의 표 4과 같다.

[표 4]

상기와 같이, 배양완료 후 생균수는 5.0×10⁸cfu/ml이었으며, pH는 3.65로서 발효유를 제조하는데 있어 충분함을 알 수 있었다.

[실시예 6]

효소활성시험

락토바실러스 애시도필러스 KY 2104의 효소활성을 측정해 보았다. 시험효소에는 발암효소의 하나로 알려져 있는 베타-글루쿠로니다제(β-glucuronidase)도 포함하였으며, 효소활성 측정법의 하나인 에이피아이자임(API ZYME Kit)을 사용하여 효소활성을 측정하였다. 결과는 다음의 표 5와 같다.

[표 5] 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104 효소활성

상기와 같이, 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104는 발암효소의 하나인 베타-글루쿠로니다제에 대해 전혀 활성능력이 없다는 것을 알 수 있었으며, 인체에 사용할 수 있는 안전한 균주임을 확인할 수 있었다.

[실시예 7]

유아임상실험

락토바실러스 애시도필러스 KY 2104를 배양하고 균체를 원심분리한 후, 10% 탈지분유를 사용하여 동결건조분말로 만들었다. 이 균체분말을 6~17개월의 유아 4명(Ⅰ군)에서 14일간 복용시켰으며, 유아들이 하루에 복용한 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104의 균수는 10⁸~10¹⁰개 정도였다. 복용시작전 14일간(a), 복용중인 14일간(b), 복용중단 후 14일간(c)의 분변중의 균총의 변화를 매일 측정하였다.

다른 유아 4명(Ⅱ)에게 동일한 실험을 반복하여 실시한 후, Ⅰ군과 Ⅱ군의 측정치를 모두 평균한 값과 그 편차를 표 6에 나타내었다. 실험기간(복용전 14일~복용중단 후 14일) 중에는 유아에게 유산균이 함유된 제품이나 장내균총에 영향을 미칠수 있는 올리고당과 같은 식품은 먹이지 않았다.

[표 6]

상기 표 6으로부터 알 수 있는 바와같이, 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104 균체분말을 유아에게 복용시킨 결과, 장내에서 유익한 작용을 하는 비피도박테리아, 락토바실러스, 엔테로코커스 등의 유산균은 증가하였으며, 유해균으로 알려진 스타필로코커스는 복용전에 비해 균수가 감소하였다. 이 실험결과는 본 발명의 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104가 사람에게 유익한 작용을 하는 프로바이오틱스로 사용될 수 있음을 나타낸 것이라고 할 수 있다.

상기 실시예로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104는 사람의 분변으로부터 분리되어 내산성이 매우 우수하며, 내담즙산성과 병원성균에 대한 생육억제능력이 있으며, 특히 사람으로부터 분리되어 인체에 대한 프로바이오틱스로 사용하기에 적합한 균주이다. 따라서 본 균주는 유용한 신균주로서 발효제품은 물론, 유아용 식품이나 기능성 식품 등의 식품과 정장제 등의 의약품, 동물사료 첨가제 등의 다양한 분야에서 널리 활용될 수 있다.

Claims

한국인의 분변으로부터 분리된 균주로서,

당이용성에 있어서, 만노스, N-아세틸글루코사민, 아미그달린, 셀로비오스, 슈크로오스, 트레할노오스, 라피노오스, 젠티오비스에 양성이며;

pH 2.0의 완충용액에서 60분간 배양할 때의 생존률이 50% 이상으로 내산성이 우수하며;

내담즙산성이 있어 옥스갈이 0.5%(w/v) 함유된 배지에서 생육되며;

대장균, 쉬겔라, 살모넬라 및 포도상구균에 대한 생육억제능력이 있으며;

베타-글루쿠로니다제(β-glucuronidase)에 대한 활성이 없는 것을 특징으로 하는 락토바실러스 애시도필러스 KY 2104(Lactobacillus acidophilus KY 2104)(기탁기관 : 한국과학기술연구원부설 생명공학연구소, 수탁일 : 1997년 9월 29일, 수탁번호 : KCTC 8833P).
락토바실러스 애시도필러스 KY 2104(기탁기관 : 한국과학기술연구원부설 생명공학연구소, 수탁일 : 1997년 9월 29일, 수탁번호 : KCTC 8833P)를 발효균주로 사용하여 제조하는 것을 특징으로 하는 발효제품.
락토바실러스 애시도필러스 KY 2104(기탁기관 : 한국과학기술연구원부설 생명공학연구소, 수탁일 : 1997년 9월 29일, 수탁번호 : KCTC 8833P)의 균체를 함유하는 것을 특징으로 하는 식품으로서, 특히 유아용 식품 및 건강식품을 포함하는 식품.
락토바실러스 애시도필러스 KY 2104(기탁기관 : 한국과학기술연구원부설 생명공학연구소, 수탁일 : 1997년 9월 29일, 수탁번호 : KCTC 8833P)의 균체를 함유하는 것을 특징으로 하는 정장제.
락토바실러스 애시도필러스 KY 2104(기탁기관 : 한국과학기술연구원부설 생명공학연구소, 수탁일 : 1997년 9월 29일, 수탁번호 : KCTC 8833P)의 균체를 함유하는 것을 특징으로 하는 동물사료 첨가제.