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KR102750159B1 - Rip-1 키나아제 억제제인 바이사이클릭 화합물 및 이의 응용 - Google Patents

Rip-1 키나아제 억제제인 바이사이클릭 화합물 및 이의 응용 Download PDF

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KR102750159B1
KR102750159B1 KR1020217043320A KR20217043320A KR102750159B1 KR 102750159 B1 KR102750159 B1 KR 102750159B1 KR 1020217043320 A KR1020217043320 A KR 1020217043320A KR 20217043320 A KR20217043320 A KR 20217043320A KR 102750159 B1 KR102750159 B1 KR 102750159B1
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KR
South Korea
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compound
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mmol
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ethyl acetate
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웨이 웨이
펭 리
하이잉 헤
슈후이 첸
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메드샤인 디스커버리 아이엔씨.
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Abstract

화학식 (I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 이성질체 또는 약제학적으로 허용가능한 염과, RIP-1 (수용체 상호작용 단백질, receptor interacting protein) 키나아제와 관련된 질병을 치료하기 위한 약물의 제조에서의 이의 용도에 관한 것이다.
[화학식 (I)]

Description

RIP-1 키나아제 억제제인 바이사이클릭 화합물 및 이의 응용
본 출원은 다음의 우선권을 주장한다:
2019년 5월 31일에 출원된 CN201910471672.3;
2019년 11월 8일에 출원된 CN201911089490.6; 및
2020년 5월 20일에 출원된 CN202010432710.7.
본 발명의 분야
본 개시 내용은 화학식 (I)로 표시된 화합물, 또는 이의 이성질체 또는 약제학적으로 허용가능한 염, 및 RIP-1 (수용체-상호작용 단백질, receptor-interacting protein) 키나아제와 관련된 질병을 치료하기 위한 약제의 제조에서의 이의 용도에 관한 것이다.
RIP1은 세포 괴사(necrosis) 및 아폽토시스 (apoptosis)를 조절하는 중요한 업스트림 키나아제 (upstream kinase)이다. RIP1은 또한 다양한 염증 신호전달 경로에 관여되고, 염증 반응을 일으키는 TNF 및 TLR 패밀리 리간드에 의해 자극될(stimulated) 수 있다 (Weinlich, R. Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 2017, 18, 127; Pasparakis M. et al. Nature 2015, 517, 311; Berger, S.B. Cell Death Discovery, 2016, 2, e16056). RIP1는 TNF 수용체 1을 통해 다양한 염증 신호전달 경로 [Fas 리간드, TNF-관련 아폽토시스 유발 리간드 (TNF-related apoptosis inducing ligand; TRAIL), TLR3 및 TLR4]를 작동시킨다 (drive) (Lukens J. R., et al. Nature, 2013, 498, 224). RIP1의 활성을 저해시키는 것은 많은 염증성 질병의 치료로 사용될 수 있다.
발명의 요약
본 개시 내용은 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 이성질체 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
[화학식 (I)]
Figure 112021152936115-pct00001
상기 화학식 (I)에서,
T1은 N 및 CR1t로부터 선택되고;
T2은 N 및 CR2t로부터 선택되고;
T3은 N 및 CR3t로부터 선택되고;
T4은 N 및 CR4t로부터 선택되고;
E1은 C(R1e)2, O, C(=O), S, 및 NR2e로부터 선택되고;
고리 A은 1,2,4-트리아졸릴 (1,2,4-triazolyl), 1,2,3-트리아졸릴, 이미다졸릴 (imidazolyl), 이속사졸릴 (isoxazolyl), 1,3,4-옥사디아졸릴 (1,3,4-oxadiazolyl), , 테트라졸릴 (tetrazolyl), 피리딜 (pyridyl), 및 로부터 선택되되, 이때 상기 1,2,4-트리아졸릴, 1,2,3-트리아졸릴, 이미다졸릴, 이속사졸릴, 1,3,4-옥사디아졸릴, , 테트라졸릴, 피리딜, 및 은 1, 2 또는 3 개의 할로겐 또는 C1-3 알킬로 치환되거나 치환되지 않고;
고리 B은 페닐 및 로부터 선택되고;
L은 단일 결합, O, C(=O), S, NH, 및 C1-3 알킬렌으로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬렌은 1, 2 또는 3개의 Ra로 치환되거나 치환되지 않고;
R1은 H 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rb로 치환되거나 치환되지 않고;
R1t, R2t, R3t, 및 R4t은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, C1-3 알킬, COOH, 및 -C(=O)NH2로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rc로 치환되거나 치환되지 않고;
R1e은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rd로 치환되거나 치환되지 않고;
R2e은 H 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Re로 치환되거나 치환되지 않고;
R2은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, C1-3 알킬, 및 C1-3 알콕시로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬 및 C1-3 알콕시는 1, 2 또는 3개의 Rf로 치환되거나 치환되지 않고;
n은 1, 2, 3, 4, 또는 5이고;
Ra, Rb, Rc, Rd, Re, 및 Rf은 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, 및 D로부터 선택된다.
본 개시 내용은 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 이성질체 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
[화학식 (I)]
Figure 112021152936115-pct00007
,
상기 화학식 (I)에서,
T1은 N 및 CR1t로부터 선택되고;
T2은 N 및 CR2t로부터 선택되고;
T3은 N 및 CR3t로부터 선택되고;
T4은 N 및 CR4t로부터 선택되고;
E1은 C(R1e)2, O, C(=O), S, 및 NR2e로부터 선택되고;
고리 A은 1,2,4-트리아졸릴, 1,2,3-트리아졸릴, 이미다졸릴, 이속사졸릴, 1,3,4-옥사디아졸릴, 및 로부터 선택되되, 이때 상기 1,2,4-트리아졸릴, 1,2,3-트리아졸릴, 이미다졸릴, 이속사졸릴, 1,3,4-옥사디아졸릴, 및 은 1, 2 또는 3 개의 할로겐 또는 C1-3 알킬로 치환되거나 치환되지 않고;
고리 B은 페닐이고;
L은 단일 결합, O, C(=O), S, NH, 및 C1-3 알킬렌으로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬렌은 1, 2 또는 3개의 Ra로 치환되거나 치환되지 않고;
R1은 H 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rb로 치환되거나 치환되지 않고;
R1t, R2t, R3t, 및 R4t은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rc로 치환되거나 치환되지 않고;
R1e은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rd로 치환되거나 치환되지 않고;
R2e은 H 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Re로 치환되거나 치환되지 않고;
R2은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rf로 치환되거나 치환되지 않고;
n은 1, 2, 3, 4, 또는 5이고;
Ra, Rb, Rc, Rd, Re, 및 Rf은 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, 및 D로부터 선택된다.
본 개시 내용은 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 이성질체 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
[화학식 (I)]
Figure 112021152936115-pct00010
,
상기 화학식 (I)에서,
T1은 N 또는 CR1t이고;
T2은 N 또는 CR2t이고;
T3은 N 또는 CR3t이고;
T4은 N 또는 CR4t이고;
E1은 C(R1e)2, O, C(=O), S, 또는 NR2e이고;
고리 A은 C1-3 알킬로 치환되거나 치환되지 않은 5-원 (5-membered) 헤테로아릴이고;
고리 B는 페닐 또는 6-원 헤테로아릴이고;
L은 O, C(=O), S, NH, 또는 C1-3 알킬렌이되, 이때 상기 C1-3 알킬렌은 1, 2 또는 3개의 Ra로 치환되거나 치환되지 않고;
R1은 H 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rb로 치환되거나 치환되지 않고;
R1t, R2t, R3t, 및 R4t은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rc로 치환되거나 치환되지 않고;
R1e은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rd로 치환되거나 치환되지 않고;
R2e은 H 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Re로 치환되거나 치환되지 않고;
R2은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rf로 치환되거나 치환되지 않고;
n은 1, 2, 3, 4, 또는 5이고;
Ra, Rb, Rc, Rd, Re, 및 Rf은 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, CN, 및 NH2로부터 선택된다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 R1은 H 및 CH3로부터 선택되되, 이때 상기 CH3은 1, 2 또는 3개의 Rb로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 변형은 본 명세서에 정의된 것과 같다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 R1은 H, CH3, 및 CD3로부터 선택되고, 다른 변형은 본 명세서에 정의된 것과 같다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 R1은 H 및 CH3로부터 선택되고, 다른 변형은 본 명세서에 정의된 것과 같다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 R1t, R2t, R3t, 및 R4t은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, CH3, COOH, 및 -C(=O)NH2로부터 선택되고, 이때 상기 CH3은 1, 2 또는 3개의 Rc로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 변형은 본 명세서에 정의된 것과 같다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 R1t, R2t, R3t, 및 R4t은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, 및 CH3로부터 선택되되, 이때 상기 CH3은 1, 2 또는 3개의 Rc로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 변형은 본 명세서에 정의된 것과 같다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 R1t, R2t, R3t, 및 R4t은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, 및 CH3로부터 선택되고, 다른 변형은 본 명세서에 정의된 것과 같다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 R1e은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, 및 CH3로부터 선택되고, 다른 변형은 본 명세서에 정의된 것과 같다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 R2e은 H 및 CH3로부터 선택되고, 다른 변형은 본 명세서에 정의된 것과 같다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 E1은 CH2, O, C(=O), S, 또는 NH이고, 다른 변형은 본 명세서에 정의된 것과 같다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 R2은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, CH3, 및 OCH3로부터 선택되되, 이때 상기 CH3 및 OCH3은 1, 2 또는 3개의 Rf로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 변형은 본 명세서에 정의된 것과 같다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 R2은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, CH3, OCH3, CF3, 및 OCF3로부터 선택되고, 다른 변형은 본 명세서에 정의된 것과 같다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 R2은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, 및 CN로부터 선택되고, 다른 변형은 본 명세서에 정의된 것과 같다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 고리 A는
로부터 선택되고,
이때 상기
1, 2 또는 3개의 할로겐 또는 C1-3 알킬로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 변형은 본 명세서에 정의된 것과 같다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 고리 A는 다음으로부터 선택된다:
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 고리 A는 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 퓨릴(furyl), 티에닐(thienyl), 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴 (thiazolyl), 1,2,3-트리아졸릴, 1,2,4-트리아졸릴, 또는 1,3,4-티아디아졸릴이고, 상기 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 퓨릴, 티에닐, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 1,2,3-트리아졸릴, 1,2,4-트리아졸릴, 또는 1,3,4-티아디아졸릴은 C1-3 알킬로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 변형은 본 명세서에 정의된 것과 같다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 L은 단일 결합, -CH2-, 및 -O-로부터 선택되고, 다른 변형은 본 명세서에 정의된 것과 같다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 L은 단일 결합 및 -CH2-로부터 선택되고, 다른 변형은 본 명세서에 정의된 것과 같다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 고리 A는 이고, 다른 변형은 본 명세서에 정의된 것과 같다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 고리 B는 페닐 또는 피리딜이고, 다른 변형은 본 명세서에 정의된 것과 같다.
본 개시 내용은 또한 전술한 변형들 중 임의의 변형들을 결합함으로써 얻어지는 일부 양태를 포함한다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 화합물은 다음으로부터 선택된 화합물, 또는 이의 이성질체 또는 약제학적으로 허용가능한 염이다:
상기 화학식에서,
n, T1, T2, T3, R1, R2, 및 R은 본 명세서에서 정의된 것과 같고;
"*"를 갖는 탄소 원자는 카이랄 탄소 원자이며, 이는 단일 (R) 거울상 이성질체, 단일 (S) 거울상 이성질체, 또는 하나의 거울상 이성질체가 풍부한 (enriched) 혼합물의 형태로 존재한다.
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 화합물은 다음으로부터 선택된 화합물, 또는 이의 이성질체 또는 약제학적으로 허용가능한 염이다:
상기 화학식에서,
n, T1, T2, T3, R1, R2, 및 R은 본 명세서에서 정의된 것과 같다.
본 개시 내용은 또한, 아래의 화학식의 화합물, 또는 이의 이성질체 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
본 명세서에 개시된 일부 양태에서, 전술한 화합물은 다음으로부터 선택된 화합물 또는 이의 이성질체 또는 약제학적으로 허용가능한 염이다:
본 개시 내용은 또한 RIP-1 키나아제와 관련된 질병을 치료하기 위한 약제(medicament)의 제조에서의, 전술한 화합물, 또는 이의 이성질체 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다.
기술적인 효과
신규한 RIP-1 키나아제 억제제로서, 본 개시 내용의 화합물은 TNFα/QVD-OPh에 의해 유도된 U937 세포의 세포 예정 괴사 (programmed cell necrosis) (세포자멸괴사, Necroptosis)에 대한 우수한 억제 효과를 갖고, TNF-추진된(TNF-driven) 전신 염증 반응 증후군의 모델인 마우스에서 체온의 감소를 억제하는 우수한 효과를 달성했다.
정의 및 용어
본 명세서에서 사용되는 다음의 용어 및 구절(phrase)은, 달리 명시되지 않는 한, 다음과 같은 의미를 갖는 것으로 의도된다. 특정 용어 또는 구절은 특별한 정의가 없을 때 불분명하거나 불명확한 것으로 생각되어서는 안 되며, 통상적인 의미에서 이해되어야 한다. 상표명이 본 명세서에 나타날 때, 이의 해당 상품(commodity) 또는 활성 성분을 가리키는 것으로 의도된다.
용어 "약제학적으로 허용가능한(pharmaceutically acceptable)"은, 합리적인 이익/위험 비율에 상응하면서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 다른 문제점 또는 합병증 없이, 신뢰할 수 있는 의학적 판단의 범위 내에서 인간 및 동물 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 제형(dosage form)과 관련해서 본 명세서에서 사용된다.
용어 "약제학적으로 허용가능한 염"은 본 명세서에 개시된 화합물의 염으로서, 본 명세서에 개시된 특정 치환기를 갖는 화합물을 비교적 독성이 없는 산 또는 염기와 반응시켜 제조된 화합물의 염을 의미한다. 본 명세서에 개시된 화합물이 비교적 산성인 작용기를 함유하는 경우, 중성 형태의 화합물을, 순수한 용액 또는 적절한 비활성 용매 중에서 충분한 양의 염기와 접촉시켜, 염기 부가 염(base addition salt)이 수득될 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 염기 부가 염은 나트륨, 칼륨, 칼슘, 암모늄, 유기 아민 또는 마그네슘의 염, 또는 유사한 염을 포함한다. 본 명세서에 개시된 화합물이 비교적 염기성인 작용기를 함유하는 경우, 중성 형태의 화합물을, 순수한 용액 또는 적절한 비활성 용매 중에서 충분한 양의 산과 접촉시켜, 산 부가 염(acid addition salt)이 수득될 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 산 부가 염의 예시는 다음을 포함한다: 무기산 염 (여기서 무기산은, 예를 들면, 염산, 브롬화수소산, 질산, 탄산, 중탄산염, 인산, 인산일수소염(monohydrogen phosphate), 인산이수소염(dihydrogen phosphate), 황산, 황산 수소염(hydrogen sulfate), 요오드화수소산, 아인산 등을 포함한다); 및 유기산 염 (여기서, 유기산은, 예를 들면, 아세트산, 프로피온산(propionic acid), 이소부티르산(isobutyric acid), 말레산(maleic acid), 말론산(malonic acid), 벤조산, 숙신산, 수베르산(suberic acid), 푸마르산(fumaric acid), 젖산, 만델산(mandelic acid), 프탈산(phthalic acid), 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산, 시트르산, 타르타르산(tartaric acid), 및 메탄설폰산 등을 포함한다); 및 아미노산의 염(예를 들면, 아르기닌 등), 및 글루쿠론산(glucuronic acid) 등의 유기산의 염. 본 명세서에 개시된 특정 화합물은 염기성 및 산성 작용기를 모두 함유하고 임의의 염기 또는 산 부가 염으로 전환될 수 있다.
본 명세서에 개시된 약제학적으로 허용가능한 염은, 통상적인 화학적 방법에 의해, 산성 또는 염기성 모이어티(moiety)를 함유하는 모 화합물(parent compound)로부터 제조될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은, 유리 산 또는 염기 형태의 화합물을, 물 또는 유기 용매 또는 이들의 혼합물 중에서, 화학량론적(stoichiometric) 양의 적절한 염기 또는 산과 반응시켜 제조될 수 있다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "이성질체"는 기하 이성질체(geometric isomer), 시스(cis)- 또는 트랜스(trans)- 이성질체, 입체 이성질체(stereoisomer), 거울상 이성질체(enantiomer), 광학 이성질체, 부분입체 이성질체(diastereomer), 및 호변 이성질체(tautomer)를 포함하는 것으로 의도된다.
개시된 화합물은 특정 기하 이성질체 또는 입체 이성질체 형태로 존재할 수 있다. 본 개시 내용은 시스 및 트랜스 이성질체들, (-)- 및 (+)-거울상 이성질체들, (R)- 및 (S)-거울상 이성질체들, 부분입체 이성질체, (D)-이성질체, (L)-이성질체, 및 라세미 혼합물, 및 다른 혼합물, 예를 들면, 거울상이성질체 또는 부분입체 이성질체가 풍부한 혼합물을 포함하는 이러한 모든 화합물들을 고려하며, 이들 모두는 본 명세서에 개시된 범위 내에 포함된다. 알킬과 같은 치환기는 추가적인 비대칭 탄소 원자를 가질 수 있다. 모든 이러한 이성질체들 및 이들의 혼합물은 본 명세서에 개시된 범위 내에 포함된다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "거울상 이성질체" 또는 "광학 이성질체"는 서로 거울상(mirrored) 관계에 있는 입체 이성질체를 의미한다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "시스-트랜스 이성질체" 또는 "기하 이성질체"는 고리를 형성하는 탄소 원자들 사이의 단일 결합 또는 이중 결합의 자유로운 회전에 대한 불능에 의해 생성된다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "부분입체 이성질체"는 한 분자 내에 2개 이상의 키랄 중심이 포함되고 분자들 간에 거울상 관계가 아닌 입체 이성질체를 의미한다.
달리 명시되지 않는 한, "(D)" 또는 "(+)"는 덱스트로이성질체(dextroisomer)를 의미하고, "(L)" 또는 "(-)"는 레보이성질체(levoisomer)를 의미하고, "(DL)" 또는 "(±)"는 라세미체를 의미한다.
달리 명시되지 않는 한, 쐐기형(wedged) 실선 결합(solid bond) () 및 쐐기형 점선 결합(dashed bond) ()은 입체 중심(stereocenter)의 절대 배치(absolute configuration)를 나타내거나; 직선 실선 결합 () 및 직선 점선 결합 ()은 입체 중심의 상대 배치(relative configuration)를 나타내거나; 물결선 ()은 쐐기형 실선 결합 () 또는 쐐기형 점선 결합 ()을 나타내거나; 또는 물결선 ()은 직선 실선 결합 ()과 직선 점선 결합 ()을 나타낸다.
달리 명시되지 않는 한, 탄소-탄소 이중 결합, 탄소-질소 이중 결합, 및 질소-질소 이중 결합과 같은 이중 결합 구조가 화합물 중에 존재하고, 이중 결합에 있는 각 원자가 상이한 두개의 치환체들에 부착될 때 (질소 원자를 함유하는 이중 결합에서, 질소 원자 상의 고립 전자쌍 한 쌍은 질소에 부착된 치환기들 중 하나로 간주됨), 화합물의 이중 결합에 있는 원자가 물결선 ()에 의해 이들의 치환기에 부착되어 있다면, 화합물은 (Z) 이성질체, (E) 이성질체, 또는 화합물의 두 이성질체들의 혼합물을 표현한다. 예를 들면, 하기 화학식 (A)를 갖는 화합물은 화합물이 화학식 (A-1)의 단일 이성질체 또는 화학식 (A-2)의 단일 이성질체로 존재하거나 또는 화학식 (A-1) 및 화학식 (A-2)의 2개 이성질체들의 혼합물로 존재함을 의미하고; 하기 화학식 (B)를 갖는 화합물은 화합물이 화학식 (B-1)의 단일 이성질체 또는 화학식 (B-2)의 단일 이성질체로 존재하거나 또는 화학식 (B-1) 및 화학식 (B-2)의 2개 이성질체들의 혼합물로 존재함을 의미한다. 하기 화학식 (C)를 갖는 화합물은 화합물이 화학식 (C-1)의 단일 이성질체 또는 화학식 (C-2)의 단일 이성질체로 존재하거나 또는 화학식 (C-1) 및 화학식 (C-2)의 2개 이성질체들의 혼합물로 존재함을 의미한다.
본 명세서에 개시된 화합물은 특정 형태로 존재할 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 용어 "호변 이성질체" 또는 "호변 이성질체 형태"는 상이한 작용기가 실온에서 동적 평형 상태에 있고 서로 빠르게 전환될 수 있음을 의미한다. 호변 이성질체들이 가능한 경우 (용액에서와 같이), 호변 이성질체들의 화학적 평형이 달성될 수 있다. 예를 들면, 양성자 호변 이성질체(proton tautomer) (프로토트로피성 (prototropic) 호변 이성질체로도 알려짐)는 케토-엔올(keto-enol) 이성질체화 및 이민-엔아민(imine-enamine) 이성질체화와 같은 양성자 이동에 의한 상호전환을 포함한다. 원자가 호변 이성질체(Valence tautomer)는 일부 결합 전자들의 재조합(recombination)에 의한 상호전환을 포함한다. 케토-엔올 호변 이성질체화의 구체적인 예시는 2개의 호변 이성질체들인 펜탄-2,4-디온(pentane-2, 4-dione) 및 4-히드록시펜트-3-엔-2-온(4-hydroxypent-3-en-2-one) 사이의 상호전환이다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "하나의 이성질체가 풍부한(enriched in one isomer)", "이성질체가 풍부한(isomer enriched)", "하나의 거울상 이성질체가 풍부한(enriched in one enantiomer)" 또는 "거울상 이성질체가 풍부한(enantiomeric enriched)"은, 하나의 이성질체 또는 거울상 이성질체의 함량이 100% 미만이고, 이성질체 또는 거울상 이성질체의 함량이 60% 이상, 또는 70% 이상, 또는 80% 이상, 또는 90% 이상, 또는 95% 이상, 또는 96% 이상, 또는 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상, 99.5% 이상, 99.6% 이상, 99.7% 이상, 99.8% 이상, 또는 99.9% 이상인 것을 의미한다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "이성질체 과잉률(isomer excess)" 또는 "거울상 이성질체 과잉률(enantiomeric excess)"은 2개의 이성질체들 또는 2개의 거울상 이성질체들의 상대 백분율 간의 차이를 의미한다. 예를 들면, 하나의 이성질체 또는 거울상 이성질체가 90%의 양으로 존재하고 다른 이성질체 또는 거울상 이성질체가 10%의 양으로 존재하는 경우, 이성질체 또는 거울상 이성질체 과잉률(ee 값)은 80%이다.
광학 활성 (R)- 및 (S)-이성질체, 또는 D 및 L 이성질체는 키랄 합성 또는 키랄 시약 또는 다른 통상적인 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 본 명세서에 개시된 특정 화합물의 한 종류의 거울상 이성질체를 얻으려면, 비대칭 합성에 의해, 또는 키랄 보조제(chiral auxiliary)의 유도체 작용에 이어서 생성된 부분입체 이성질체 혼합물의 분리 및 보조 기(auxiliary group)의 절단에 의해, 순수한 원하는 거울상 이성질체가 수득될 수 있다. 대안적으로, 분자가 염기성 작용기(예를 들면, 아미노 기) 또는 산성 작용기(예를 들면, 카르복실 기)를 함유하는 경우, 화합물은 적절한 광학 활성 산 또는 염기와 반응하여, 부분입체 이성질체의 염을 형성하고, 이는 이어서 순수한 거울상 이성질체를 얻기 위한 당업계의 통상적인 방법을 통한 부분입체 이성질체의 분해(diastereomeric resolution)를 겪게 된다. 또한, 거울상 이성질체 및 부분입체 이성질체는, 키랄 고정상(stationary phase)을 사용하고 임의로 화학적 유도체 방법(예를 들면, 아민에서 생성된 카바메이트)과 합쳐진 크로마토그래피를 통해, 주로 분리된다.
본 명세서에 개시된 화합물은 화합물을 구성하는 하나 이상의 원자들에서 자연상의 비율이 아닌 비율의(unnatural proportion) 원자 동위원소(atomic isotope)를 함유할 수 있다. 예를 들면, 화합물은 삼중수소(tritium)(3H), 요오드-125(125I) 또는 C-14(14C)와 같은 방사성 동위원소로 표지될 수 있다. 또다른 예시에서, 수소는 중수소(heavy hydrogen)로 대체되어 중수소화 약물(deuterated drug)을 형성할 수 있다. 중수소와 탄소의 결합은 일반 수소와 탄소의 결합보다 강하다. 비중수소화 약물(undeuterated drug)과 비교하면, 중수소화 약물은 감소된 독성 부작용, 증가된 약물 안정성, 강화된 효능 및 약물의 연장된 생물학적 반감기의 이점을 갖는다. 본 명세서에 개시된 화합물의 동위원소 조성의 모든 변화는, 방사능에 관계없이, 본 개시 내용의 범위 내에 포함된다.
용어 "임의의(optional)" 또는 "임의로(optionally)"는 후속 이벤트 또는 조건이 발생할 수 있지만 필수는 아님을 의미하며, 상기 용어는 상기 이벤트 또는 조건이 발생하는 경우와 상기 이벤트 또는 조건이 발생하지 않는 경우를 포함한다.
용어 "치환된"은, 특정 원자의 원자가가 정상이고 치환된 화합물이 안정적인 한, 상기 특정 원자 상의 하나 이상의 수소 원자(들)가 치환기 (중수소 및 수소 변이체(hydrogen variant)를 포함함)로 치환됨을 의미한다. 치환기가 옥소(즉, =O)인 경우, 2개의 수소 원자들이 치환됨을 의미한다. 방향족 고리 상 위치는 옥소로 치환될 수 없다. 용어 "치환되거나 치환되지 않은"은 원자가 치환기에 의해 치환될 수 있거나 치환되지 않을 수 있음을 의미하며, 달리 명시되지 않는 한, 치환기의 종 및 숫자는, 화학적으로 달성 가능한 한, 임의적(arbitrary)일 수 있다.
어떠한 변수(예를 들면, R)가 화합물의 구성이나 구조에 한 번 넘게 나타날 때, 각 발생에서 변수의 정의는 독립적이다. 따라서, 예를 들면, 한 기(group)가 0 내지 2개의 R로 치환되는 경우, 상기 기는 최대 2개의 R로 치환되거나 치환되지 않을 수 있으며, 여기서 R의 정의는 각 경우에 독립적이다. 또한, 치환기 및/또는 이의 변형물(variant)의 조합은, 조합이 안정한 화합물을 생성하는 경우에만 허용된다.
-(CRR)0-와 같이 연결기의 수가 0인 경우, 연결기가 단일 결합임을 의미한다.
변수들 중 하나가 단일 결합인 경우, 단일 결합으로 연결된 두 기들이 직접 연결되어 있음을 의미한다. 예를 들면, A-L-Z 중 L이 단일 결합을 나타낼 때, A-L-Z의 구조는 실제로 A-Z이다.
치환기가 비어 있을(vacant) 경우, 치환기가 존재하지 않는 것을 의미한다. 예를 들면, A-X 중 X가 비어 있을 때, A-X의 구조는 실제로 A이다.
열거된 치환기가, 상기 열거된 치환기가 치환된 기에 연결되는 원자를, 나타내지 않는 경우, 이러한 치환기는 이의 원자들 중 임의의 원자를 통해 결합될 수 있다. 예를 들면, 치환기인 피리딜 기는 피리딘 고리 상의 탄소 원자들 중 어느 하나를 통해 치환기에 연결될 수 있다.
열거된 연결 기가 이의 연결 방향을 나타내지 않는 경우, 이의 연결 방향은 임의적이다. 예를 들면, 중 연결기 L이 -M-W-인 경우, 상기 -M-W-는 왼쪽에서 오른쪽으로 읽는 순서와 동일한 방향으로 고리 A 및 고리 B에 연결되어 를 구성되거나, 왼쪽에서 오른쪽으로 읽는 순서와 반대 방향으로 고리 A 및 고리 B에 연결되어 를 구성할 수 있다. 연결기, 치환기 및/또는 이의 변형물의 조합은 이러한 조합이 안정한 화합물을 생성할 수 있는 경우에만 허용된다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "할로(halo)" 또는 "할로겐(halogen)"은, 그 자체로 또는 다른 치환기의 일부로서, 불소, 염소, 브롬 또는 요오드 원자를 나타낸다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "C1-3 알콕시"는, 1 내지 3개의 탄소 원자를 함유하고 산소 원자에 의해 분자의 나머지 부분에 부착된 알킬 기를 지칭한다. C1-3 알콕시 기는 C1-2, C2-3, C3, C2 알콕시 기 등을 포함한다. C1-3 알콕시 기의 예시는 메톡시, 에톡시, 프로폭시 (n-프로폭시 및 이소프로폭시를 포함함) 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "C1-3 알킬"은 1 내지 3개의 탄소 원자로 이루어지는 선형 또는 분지형 포화 탄화수소 기를 나타내기 위해 사용된다. C1-3 알킬기는 C1-2 및 C2-3 알킬기 등을 포함한다. 1가 (예를 들면, 메틸), 2가 (예를 들면, 메틸렌) 또는 다가(multivalent) (예를 들면, 메테닐(methenyl))일 수 있다. C1-3 알킬 기의 예시는 메틸 (Me), 에틸 (Et), 프로필 (n-프로필 및 이소프로필을 포함함) 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "5- 내지 6-원 헤테로방향족 고리(5- to 6-membered heteroaromatic ring)" 및 "5- 내지 6-원 헤테로아릴("5- to 6-membered heteroaryl)"은 상호교환적으로 사용될 수 있다. 용어 "5- 내지 6-원 헤테로아릴"은 공액 파이 전자 시스템(conjugated pi electron system)을 갖고 5 내지 6개의 고리 원자들로 이루어진 모노사이클릭(monocyclic) 기를 의미하며, 이때 이들 중 1, 2, 3 또는 4개의 고리 원자는 O, S 및 N으로부터 독립적으로 선택된 헤테로원자이고, 나머지 원자는 탄소 원자이며, 여기서 질소 원자는 임의로 4차화(quaternized)되고 질소 및 황 헤테로원자는 임의로 산화된다 (즉, NO 및 S(O)p, 이때 p는 1 또는 2임). 5- 내지 6-원 헤테로아릴 기는 헤테로원자 또는 탄소 원자에 의해 분자의 나머지 부분에 부착될 수 있다. 5- 내지 6-원 헤테로아릴 기는 5-원 및 6-원 헤테로아릴 기를 포함한다. 5- 내지 6-원 헤테로아릴 기의 예시는 다음을 포함하지만 이로 제한되지 않는다: 피롤릴 (pyrrolyl) (N-피롤릴, 2-피롤릴, 3-피롤릴 등 포함), 피라졸릴 (pyrazolyl) (2-피라졸릴 및 3-피라졸릴 등 포함), 이미다졸릴(imidazolyl) (N-이미다졸릴, 2-이미다졸릴, 4-이미다졸릴 및 5-이미다졸릴 등 포함), 옥사졸릴 (oxazolyl) (2-옥사졸릴, 4-옥사졸릴 및 5-옥사졸릴 등 포함), 트리아졸릴 (triazolyl) (1H-1,2,3-트리아졸릴, 2H-1,2,3-트리아졸릴, 1H-1,2,4-트리아졸릴 및 4H-1,2,4-트리아졸릴 등), 테트라졸릴 (tetrazolyl), 이속사졸릴 (isoxazolyl) (3-이속사졸릴, 4-이속사졸릴 및 5-이속사졸릴 등), 티아졸릴 (thiazolyl) (2-티아졸릴, 4-티아졸릴 및 5-티아졸릴 등 포함), 퓨릴 (furyl) (2-퓨릴 및 3-퓨릴 등 포함), 티에닐 (thienyl) (2-티에닐 및 3-티에닐 등 포함), 피리딜 (2-피리딜, 3-피리딜 및 4-피리딜 등 포함), 피라지닐 (pyrazinyl) 또는 피리미디닐 (pyrimidinyl) (2-피리미디닐 및 4-피리미디닐 등 포함).
달리 명시되지 않는 한, Cn-n+m 또는 Cn-Cn+m은 n 내지 n+m 중 어느 하나의 개수의 탄소를 포함한다. 예를 들어, C1-12는 C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, C10, C11, 및 C12를 포함한다. Cn-n+m 또는 Cn-Cn+m은 또한 n부터 n+m까지의 임의의 범위를 포함한다. 예를 들면, C1-12는 C1-3, C1-6, C1-9, C3-6, C3-9, C3-12, C6-9, C6-12, C9-12 등을 포함한다. 유사하게, n-원 내지 n+m-원 고리는 고리 상의 원자의 개수가 n 내지 n+m임을 의미한다. 예를 들면, 3- 내지 12-원 고리는 3-원 고리, 4-원 고리, 5-원 고리, 6-원 고리, 7-원 고리, 8-원 고리, 9-원 고리, 10-원 고리, 11원 고리, 및 12-원 고리를 포함한다. n-원 내지 n+m-원 고리는 또한 고리 상의 원자의 개수가 n부터 n+m까지의 임의의 범위를 포함함을 의미한다. 예를 들어, 3- 내지 12-원 고리는 3- 내지 6-원 고리, 3- 내지 9-원 고리, 5- 내지 6-원 고리, 5- 내지 7-원 고리, 6- 내지 7-원 고리, 6- 내지 8-원 고리, 및 6- 내지 10-원 고리 등을 포함한다.
용어 "이탈기(leaving group)"는, 치환 반응(예를 들면, 친화성 치환 반응 (affinity substitution reaction))을 통해 다른 작용기 또는 원자로 대체될 수 있는 작용기 또는 원자를 의미한다. 예를 들면, 대표적인 이탈기는 다음을 포함한다: 트리플레이트(triflate); 염소, 브롬 및 요오드; 설포네이트(sulfonate) 기, 예를 들면 메실레이트, 토실레이트, p-브로모벤젠설포네이트, p-톨루엔설포네이트 등; 아실옥시, 예를 들어 아세톡시, 트리플루오로아세톡시 등.
용어 "보호기(protecting group)"는 "아미노 보호기", "하이드록시 보호기" 또는 "티오 보호기"를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 용어 "아미노 보호기"는 아미노의 질소에 대한 부반응을 차단하기에 적합한 보호기를 의미한다. 대표적인 아미노 보호기는 다음을 포함하지만 이에 제한되지 않는다: 포르밀 (formyl); 아실 (acyl), 예를 들면, 알카노일 (alkanoyl) (예를 들면, 아세틸, 트리클로로아세틸 또는 트리플루오로아세틸); 알콕시카르보닐, 예를 들면, 터트-부톡시카르보닐(Boc); 아릴메톡시카보닐, 예를 들면, 벤질옥시카보닐 (Cbz) 및 9-플루오레닐메톡시카보닐(Fmoc); 아릴메틸, 예를 들면, 벤질(Bn), 트리틸(Tr), 1,1-비스-(4'-메톡시페닐)메틸; 실릴, 예를 들면, 트리메틸실릴 (TMS) 및 터트-부틸디메틸실릴(TBS) 등. 용어 "하이드록시 보호기"는 하이드록시에 대한 부반응을 차단하기에 적합한 보호기를 지칭한다. 대표적인 하이드록시 보호기는 다음을 포함하지만 이에 제한되지 않는다: 알킬, 예를 들면, 메틸, 에틸 및 터트-부틸; 아실, 예를 들면, 알카노일 (예를 들면, 아세틸); 아릴메틸, 예를 들면, 벤질(Bn), p-메톡시벤질(PMB), 9-플루오레닐메틸(Fm) 및 디페닐메틸(벤즈하이드릴, DPM); 실릴, 예를 들면 트리메틸실릴(TMS) 및 터트-부틸 디메틸 실릴(TBS) 등.
본 명세서에 개시된 화합물의 구조는 당업자에게 잘 알려진 통상적인 방법에 의해 확인될 수 있다. 본 개시 내용이 화합물의 절대 배치에 관한 것이라면, 절대 배치는 단결정 X선 회절(SXRD)과 같은 당업계의 통상적인 기술에 의해 확인할 수 있다. 단결정 X선 회절(SXRD)에서, 배양된 단결정(cultivated single crystal)의 회절 강도 데이터는 스캔의 스캐닝 모드에서 CuKα 방사선의 광원을 갖는 Bruker D8 벤처 회절계를 사용하여 수집된다; 관련 데이터를 수집한 후, 결정 구조를 직접 방법 (Shelxs97)으로 추가 분석하여 절대 배치를 확인한다.
본 명세서에 개시된 화합물은, 하기 열거된 양태, 다른 화학적 합성 방법과 조합하여 하기 열거된 양태에 의해 형성된 양태, 및 당업자에게 잘 알려진 균등한 대체물을 포함하여, 당업자에게 잘 알려진 다양한 합성 방법에 의해 제조될 수 있다. 대안적인 양태는 본 명세서에 개시된 양태를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
본 개시 내용에서 사용된 용매는 상업적으로 입수 가능한 것이다.
하기 약어가 본 개시 내용에서 사용된다: aq는 수성(aqueous)을 나타내고; NaNO2는 질산나트륨을 나타내고; H2SO4는 황산을 나타내고; CuCl2는 염화구리를 나타내고; LiOH·H2O는 수산화리튬 일수화물(lithium hydroxide monohydrate)을 나타내고; NaBH3CN은 소듐 시아노보로하이드라이드(cyanoborohydride)를 나타내고; HCl/EtOAc는 에틸 아세테이트 중 염산 용액을 나타내고; HCl은 염산을 나타내고; CO2는 이산화탄소를 나타내고; ACN은 아세토나이트릴을 나타내고; FA는 포름산을 나타내고; H2O는 물을 나타내고; NH3H2O는 암모니아를 나타내고; Na2SO4는 황산나트륨을 나타내고; MgSO4는 황산 마그네슘을 나타내고; NCS는 N-클로로숙신이미드(N-chlorosuccinimide)를 나타내고; NH4HCO3는 중탄산암모늄(ammonium bicarbonate)을 나타내고; Pd/C는 탄소 상의 팔라듐을 나타내고; psi는 압력 단위를 나타내고; MeCN은 아세토나이트릴을 나타내고; TsOH·H2O는 p-톨루엔설폰산 일수화물(p-toluenesulfonic acid monohydrate)을 나타내고; Pd(dppf)Cl2는 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐 디클로라이드 ([1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]palladium dichloride)를 나타내고; Neu는 중성을 나타내고; HPLC는 고성능 액체 크로마토그래피를 나타내고; HATU는 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (O-(7-azabenzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate)를 나타내고; K2CO3는 탄산칼륨을 나타내고; EDC는 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드 염산염(N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride)을 나타내고; m-CPBA는 3-클로로퍼옥시벤조산을 나타내고; eq는 당량의(equivalent) 또는 당량(equivalence)을 나타내고; T3P는 프로필포스폰산 무수물(propylphosphonic anhydride)을 나타내고; CDI는 카르보닐 디이미다졸을 나타내고; DCM은 디클로로메탄을 나타내고; PE는 석유 에테르(petroleum ether)를 나타내고; DIAD는 디이소프로필 아조디카르복실레이트(diisopropyl azodicarboxylate)를 나타내고; DMF는 N,N-디메틸포름아마이드를 나타내고; DMSO는 디메틸 설폭사이드를 나타내고; EtOAc는 에틸 아세테이트를 나타내고; EtOH는 에탄올을 나타내고; MeOH는 메탄올을 나타내고; CBz는 아미노 보호기인 벤질옥시카보닐을 나타내고; BOC는 아미노 보호기인 터트-부톡시카보닐을 나타내고; HOAc는 아세트산을 나타내고; NaCNBH3는 소듐 시아노보로하이드라이드(sodium cyanoborohydride)를 나타내고; r.t. 실온을 나타내고; O/N은 하룻밤 동안을 나타내고; THF는 테트라하이드로류란을 나타내고; Boc2O는 디-터트-부틸 디카보네이트를 나타내고; TFA는 트리플루오로아세트산을 나타내고; SOCl2는 티오닐 클로라이드를 나타내고; CS2는 이황화탄소를 나타내고; TsOH는 p-톨루엔설폰산을 나타내고; NFSI는 N-플루오로-N-(페닐설포닐)벤젠설폰아마이드를 나타내고; n-Bu4NF는 테트라부틸암모늄 플루오라이드를 나타내고; iPrOH는 2-프로판올을 나타내고; mp는 융점을 나타내고; LDA는 리튬 디이소프로필아마이드를 나타내고; IPAm은 이소프로필아민을 나타내고; DIPEA는 N,N-디이소프로필에틸아민을 나타내고; Xantphos는 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸크산텐(4,5-bis(diphenylphosphino)-9,9-dimethylxanthene)을 나타내고; t-Bu Xphos는 2-디-터트-부틸포스피노-2',4',6'-트리이소프로필바이페닐을 나타내고; DPPP는 1,3-비스(디페닐포스피노)프로판을 나타내고; Et3SiH는 트리에틸실란을 나타내고; DMAP는 4-디메틸아미노피리딘을 나타내고; Py는 피리딘을 나타내고; DPBS는 Dulbecco의 인산염 완충액을 나타내고; TNF-α는 종양 괴사 인자(tumor necrosis factor)를 나타내고; IC50은 최대 억제 농도의 절반을 나타내고; mg은 밀리그램을 나타내고, kg은 킬로그램을 나타내고; HEPES는 N-2-하이드록시에틸피페라진-N-2-에탄 설폰산 완충액을 나타낸다.
화합물은, 당업계의 일반적인 명명 원칙에 따라 또는 ChemDraw® 소프트웨어에 의해 명명되고, 상업적으로 이용 가능한 화합물은 판매 회사 디렉토리명(directory name)으로 명명된다.
본 개시 내용은 실시예에 의해 하기에서 상세히 설명된다. 그러나, 이러한 실시예가 본 개시 내용에 불리한 제한을 갖는 것으로 의도되지 않는다. 본 개시 내용은 본 명세서에서 상세하게 설명되었고, 양태들 또한 본 명세서에서 개시된다. 본 명세서에 개시된 사상 및 범위를 벗어나지 않으면서 본 명세서에 개시된 양태에 다양한 변경 및 수정이 이루어질 수 있음은 당업자에게 명백할 것이다.
참고 실시예 1: 부분(Fragment) BB-1
합성 경로:
단계 1: 화합물 BB-1-3의 합성
미리 건조된 100 mL 플라스크에, BB-1-1 (2.60 g, 17.31 mmol, 1.00 eq) 및 용매 EtOH (11.25 mL) 및 이소프로필 에테르 (37.50 mL)를 첨가했다. 교반 하에서, BB-1-2 (2.59 g, 17.83 mmol, 1.03 eq)를 천천히 첨가했고, 반응 용액을 12 시간 동안 20 ℃에서 교반했다. 반응 용액을 여과시켰고, 생성된 여과 케이크 (filter cake)를 이소프로필 에테르 (30 mL * 3)로 세척하여 화합물 BB-1-3를 얻었다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 9.95 (s, 1H), 9.90 (s, 1H), 7.39 - 7.08 (m, 6H), 4.21 - 4.19 (m, 2H), 3.82 (s, 2H), 1.27 - 1.23 (m, 3H); LCMS m/z = 250.1 [M+H]+.
단계 2: 화합물 BB-1-4의 합성
미리 건조된 250 mL 플라스크에, BB-1-3 (7.00 g, 28.08 mmol, 1.00 eq) 및 자일렌 (100.00 mL)을 첨가했다. 딘-스타크 트랩 (Dean-Stark trap)을 설치했다. 반응 시스템을 10 시간 동안 180 ℃에서 반응시켰다. 100 mL의 이소프로필 에테르를 반응 시스템에 첨가했고, 혼합물을 얼음-물 욕(ice-water bath) 내에서 30 분 동안 교반했다. 반응 시스템을 여과시켰고, 생성된 여과 케이크를 50 mL의 n-헥산으로 세척하여 화합물 BB-1-4을 얻었다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 14.44 (br s, 1H), 7.42 - 7.14 (m, 4H), 4.29 (q, J = 6.5 Hz, 2H), 4.13 (br s, 2H), 1.28 (br t, J = 7.0 Hz, 3H); LCMS m/z = 232.2 [M+H]+.
단계 3: 화합물 BB-1의 합성
썸브 보틀 (thumb bottle)에, 화합물 BB-1-4 (4.10 g, 17.73 mmol, 1.00 eq), 테트라하이드로퓨란 (1.00 mL) 및 물 (200.00 μL)을 첨가했고, 이어서 수산화리튬 일수화물 (lithium hydroxide monohydrate) (1.74 g, 41.49 mmol, 2.34 eq)을 첨가했다. 용액을 12 시간 동안 20 ℃에서 교반했다. 용매를 감압 하에서 제거했다. 시스템의 pH가 2에 도달할 때까지 교반하면서 25 mL의 1N 수성 염산 용액을 적가했다 (added dropwise). 흡인 여과 (suction filtration) 후 화합물 BB-1을 수득했다. LCMS m/z = 202.1 [M-H]-.
참고 실시예 2: 부분 BB-2
합성 경로:
단계 1: 화합물 BB-2-2의 합성
23 ℃에서 디클로로메탄 (40 mL) 중 BB-2-1 (2.5 g, 15.51 mmol, 2.94 mL, 1 eq)의 용액에, 메탄올 (4.97 g, 155.13 mmol, 6.28 mL, 10 eq)을 첨가했다. 이어서 TMSCHN2 (2 M, 9.31 mL, 1.2 eq)을 첨가하고 혼합물을 또다른 2시간 동안 교반했다. TLC (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 5:1) 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었다. 0.1 mL의 빙초산 (glacial acetic acid)을 반응 용액에 첨가했고, 반응 용액을 감압 하에서 농축시켜 BB-2-2을 얻었다.
단계 2: 화합물 BB-2-3의 합성
메탄올 (30 mL) 중 BB-2-2 (3 g, 17.12 mmol, 1 eq)의 용액에, 히드라진 수화물 (hydrazine hydrate) (3.21 g, 51.37 mmol, 3.12 mL, 80% 순도, 3 eq)을 첨가하고, 이어서 혼합물을 2 시간 동안 70 ℃에서 오일 욕 내에서 교반하였다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 반응 용액을 감압 하에서 농축시켜 용매를 제거하였고, 50 mL의 에틸 아세테이트를 첨가했다. 혼합물을 30 mL의 포화 브라인 (saturated brine)으로 세척했다. 무수 황산나트륨 (anhydrous sodium sulfate)을 이용해 유기상을 건조시키고, 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 BB-2-3을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 9.25 (br s, 1 H), 7.66 - 7.74 (m, 2 H), 7.45 - 7.65 (m, 2 H), 4.24 (s, 2 H), 3.43 (s, 2 H); LCMS m/z = 176.1 [M+H]+.
단계 3: 화합물 BB-2-4의 합성
사전 건조된 3구 병 (three-necked bottle)에, BB-1-2 (2.07 g, 14.27 mmol, 1 eq), 에탄올 (10 mL), 및 이소프로필 에테르 (20 mL)을 첨가했고, 이어서 BB-2-3 (2.5 g, 14.27 mmol, 1 eq)을 첨가했다. 혼합물을 5 시간 동안 25 ℃에서 반응시켰다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 반응 용액을 여과했고, 여과 케이크를 50 mL 석유 에테르로 세척하여 BB-2-4을 얻었다. LCMS m/z = 275.2 [M+H]+.
단계 4: 화합물 BB-2-5의 합성
마이크로파 관에 BB-2-4 (0.5 g, 1.82 mmol, 1 eq), 분자 체(molecular sieves) (4 Å, 0.05 g) 및 자일렌 (15 mL)을 첨가했다. 마이크로파 관을 밀봉하고 반응물을 4 시간 동안 150 ℃에서 마이크로파 반응기 내에서 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 목표 신호가 나타났다. 30 mL의 아세토나이트릴을 반응 용액에 첨가했고, 혼합물을 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 BB-2-5을 얻었다. LCMS m/z = 257.1 [M+H]+.
단계 5: 화합물 BB-2의 합성
테트라하이드로퓨란 (50 mL) 중 BB-2-5 (1 g, 3.90 mmol, 1 eq)의 용액에 21 ℃에서 물 (15 mL) 중 수산화리튬 일수화물 (654.96 mg, 15.61 mmol, 4 eq)의 용액을 첨가하고, 이어서 혼합물을 또다른 12시간 동안 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 15 mL의 물을 반응 용액에 첨가했고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mL)로 추출했다. 2 N 수성 염산 용액을 이용해 생성된 수성 상을 약 3의 pH가 되도록 조절했고, 동결건조하여 (lyophilize) BB-2을 얻었다.
LCMS m/z = 227.0 [M-H]-.
참고 실시예 3: 부분 BB-3
합성 경로:
단계 1: 화합물 BB-3-3의 합성
DMF (50 mL) 중에 BB-3-2 (20.00 g, 97.46 mmol, 1.00 eq)을 용해시키고, DMF (150 mL) 중 NaH (8.19 g, 204.67 mmol, 60% 순도, 2.10 eq)의 현탁액에 용액을 적가했다. 이어서 화합물 BB-3-1 (13.75 g, 97.46 mmol, 10.26 mL, 1.00 eq)을 적가했다. 반응 용액을 16 시간 동안 20 ℃에서 교반했다. 이어서 에틸 아세테이트 (200 mL) 및 물 (200 mL)을 반응 용액에 첨가했고, 염산을 이용해 수성상을 약 1의 pH로 조절했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 추출했다. 무수 황산 마그네슘을 이용해 유기 상을 건조시키고, 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 BB-3-3을 얻었다.
LCMS m/z = 227.1 [M-100+H]+.
단계 2: 화합물 BB-3-4의 합성
메탄올 (200.00 mL) 중 습윤(wet) Pd/C (5.00 g, 5% 순도) 및 화합물 BB-3-3 (20.00 g, 61.29 mmol, 1.00 eq)의 용액을 5 시간 동안 수소 분위기 (15 psi) 하에서 20 ℃에서 교반했다. 반응의 완료 후, 반응 용액을 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 BB-3-4을 얻었다.
LCMS m/z = 297.1 [M+H]+.
단계 3: 화합물 BB-3-5의 합성
DMSO (100.00 mL) 중 화합물 BB-3-4 (10.00 g, 33.75 mmol, 1.00 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (4.36 g, 33.75 mmol, 5.89 mL, 1.00 eq)의 용액에 HATU (12.83 g, 33.75 mmol, 1.00 eq)을 첨가했다. 반응물을 2 시간 동안 20 ℃에서 교반했다. 반응의 완료 후, 물 (200 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)를 반응 용액에 첨가했고, 층들이 분리되었다. 유기상을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물 (crude product)을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:1 ~ 1:1)로 정제하여 화합물 BB-3-5을 얻었다.
LCMS m/z = 223.1 [M-56+H]+.
단계 4: 화합물 BB-3-6의 합성
건조 250 mL 3구 플라스크에, 화합물 BB-3-5 (6.00 g, 21.56mmol, 1.00 eq), DMF (60.00 mL) 및 탄산세슘 (cesium carbonate) (10.54 g, 32.34 mmol, 1.50 eq)을 첨가하고, 이어서 아이오도메탄 (iodomethane) (3.06 g, 21.56 mmol, 1.34 mL, 1.00 eq)을 적가했다. 내부 온도를 20 ℃ 미만으로 조절했다. 반응물을 16시간 동안 16 ℃에서 교반했다. 반응의 완료 후, 물 (100 mL) 및 에틸 아세테이트 (100 mL)을 시스템에 첨가했고, 층들이 분리되었다. 포화 브라인 (100 mL * 2)으로 유기 상을 세척하고, 황산 마그네슘을 이용해 건조시키고, 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 BB-3-6을 얻었다.
LCMS m/z = 237.1 [M-56+H]+.
단계 5: 화합물 BB-3-7의 합성
THF (10 mL) 중 오황화인 (phosphorus pentasulfide) (760.35 mg, 3.42 mmol, 363.80 μL, 5 eq)의 용액에 탄산나트륨 (362.57 mg, 3.42 mmol, 5 eq)을 20 ℃에서 첨가했고, 혼합물을 또다른 0.5 시간 동안 교반했다. 이어서 BB-3-6 (0.2 g, 684.16 μmol, 1 eq)을 첨가했고, 반응 용액을 70 ℃에서 요일 욕 내에 위치시켰고, 9.5 시간 동안 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 목표 신호가 나타났다. 20 mL의 에틸 아세테이트를 반응 용액에 첨가했고, 혼합물을 여과했다. 생성된 여과액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 BB-3-7을 얻었다.
LCMS m/z = 253.1 [M-56+H]+.
단계 6: 화합물 BB-3의 합성
BB-3-7 (630.84 mg, 2.05 mmol, 1 eq)에 에틸 아세테이트 중의 염산 용액(4 M, 20.00 mL, 39.11 eq)을 첨가하고, 혼합물을 1 시간 동안 23 ℃에서 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 반응 용액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었고, 이어서 30 mL의 포화 수성 중탄산나트륨 용액을 첨가했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (15 mL * 3)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 무수 황산나트륨을 이용해 건조하고 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 BB-3을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.21 - 7.32 (m, 3 H), 7.15 - 7.19 (m, 1 H), 4.40 (dd, J = 9.92, 6.62 Hz, 1 H), 4.10 (dd, J = 11.36, 9.81 Hz, 1 H), 3.77 - 3.94 (m, 4 H); LCMS m/z = 209.1 [M+H]+.
참고 실시예 4: 부분 BB-4
합성 경로:
단계 1: 화합물 BB-4-2의 합성
DMF (100 mL) 중 BB-3-2 (13.13 g, 63.98 mmol, 1 eq)의 용액에 0 ℃에서 NaH (5.12 g, 127.96 mmol, 60% 순도, 2 eq)을 첨가했고, 혼합물을 또다른 1 시간 동안 교반했다. 이어서 BB-4-1 (10 g, 70.38 mmol, 1.1 eq)을 첨가했고, 혼합물을 9 시간 동안 28 ℃에서 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 목표 신호가 나타났다. 반응 용액을 1000 mL의 물에 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (300 mL * 4)로 추출했다. 생성된 수성 상을, 2 N 염산을 이용해 약 5의 pH로 조절하고, 이어서 에틸 아세테이트 (300 mL * 5)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 무수 황산나트륨을 이용해 건조하고 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 BB-4-2을 얻었다.
LCMS m/z = 326.0 [M-H]-.
단계 2: 화합물 BB-4-3의 합성
메탄올 (200 mL) 중 BB-4-2 (20.00 g, 61.11 mmol, 1 eq)의 용액에 23 ℃에서 습윤 Pd/C (10 g, 30.55 mmol, 5 % 순도)를 첨가했다. 혼합물을 수소 분위기 (15 psi) 하에서 10 시간 동안 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 반응 용액을 여과하고, 생성된 여과액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 BB-4-3을 얻었다.
LCMS m/z = 298.1 [M+H]+.
단계 3: 화합물 BB-4-4의 합성
23 ℃에서 에틸 아세테이트 (400 mL) 중 BB-4-3 (16.00 g, 53.82 mmol, 1 eq)의 용액에, N,N-디이소프로필에틸아민 (20.87 g, 161.45 mmol, 28.12 mL, 3 eq) 및 2,4,6-트리부틸-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥사이드 (2,4,6-tributyl-1,3,5,2,4,6-trioxatriphosphinane 2,4,6-trioxide) (68.49 g, 107.63 mmol, 64.01 mL, 에틸 아세테이트 중 50% 순도, 2 eq)를 첨가했다. 혼합물을 또다른 2 시간 동안 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 반응 용액을 포화 브라인(200 mL * 2)으로 세척했다. 유기상을 무수 황산나트륨을 이용해 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:1 ~ 1:1)로 정제하여 화합물 BB-4-4을 얻었다.
LCMS m/z = 224.1 [M-56+H]+.
단계 4: 화합물 BB-4-5의 합성
DMF (30 mL) 중 BB-4-4 (1 g, 3.58 mmol, 1 eq)의 용액에, 20 ℃에서 탄산세슘 (1.40 g, 4.30 mmol, 1.2 eq) 및 아이오도메탄 (609.86 mg, 4.30 mmol, 267.48 μL, 1.2 eq)을 첨가했다. 혼합물을 또다른 1 시간 동안 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 반응 용액을 100 mL의 물에 첨가했고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mL * 5)로 추출했다. 유기 상들을 합하고, 50 mL의 포화 브라인으로 세척했다. 유기상을 무수 황산나트륨을 이용해 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 BB-4-5을 얻었다.
LCMS m/z = 238.1 [M-56+H]+.
단계 5: 화합물 BB-4-6의 합성
THF (30 mL) 중 오황화인 (3.79 g, 17.05 mmol, 10 eq)의 용액에, 20 ℃에서 탄산나트륨 (1.81 g, 17.05 mmol, 10 eq)을 첨가했고, 혼합물을 또다른 0.5 시간 동안 교반했다. 이어서 BB-4-5 (0.5 g, 1.70 mmol, 1 eq)을 첨가했고, 반응 용액을 70 ℃에서 요일 욕 내에 위치시키고, 9.5 시간 동안 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 실질적으로 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 반응 용액을 여과하여 여과액을 얻었다. 50 mL의 에틸 아세테이트를 여과액에 첨가하고, 혼합물을 30 mL의 포화 브라인으로 세척했다. 유기상을 무수 황산나트륨을 이용해 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:1 ~ 1:1)로 정제하여 화합물 BB-4-6을 얻었다.
LCMS m/z = 310.3 [M+H]+.
단계 6: 화합물 BB-4의 합성
BB-4-6 (0.6 g, 1.94 mmol, 1 eq)에 에틸 아세테이트 (4 M, 20 mL, 41.25 eq) 중 염산 용액을 첨가하고, 혼합물을 1 시간 동안 23 ℃에서 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 반응 용액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었고, 30 mL의 포화 중탄산나트륨을 첨가했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL * 3)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 무수 황산나트륨을 이용해 건조하고 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 BB-4을 얻었다.
LCMS m/z = 210.1 [M+H]+.
참고 실시예 5: 부분 BB-5
합성 경로:
단계 1: 화합물 BB-5-1의 합성
테트라하이드로퓨란 (5 mL) 중 BB-4-4 (0.1 g, 358.05 μmol, 1 eq)의 용액에, 25 ℃에서 중수소 치환된(deuterated) 아이오도메탄 (101.64 mg, 716.10 μmol, 43.62 μL, 2 eq) 및 탄산세슘(349.98 mg, 1.07 mmol, 3 eq)을 첨가했고, 혼합물을 또다른 2 시간 동안 교반했다. 에틸 아세테이트 (20 mL)를 반응 용액에 첨가했고, 이어서 혼합물을 포화 브라인 (10 mL)으로 세척하고, 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을, 메틸 터트-부틸 에테르 (5 mL)를 이용해 슬러리화함(slurrying)으로써, 정제하여, 화합물 BB-5-1을 얻었다.
LCMS m/z = 297.2 [M+H]+.
단계 2: 화합물 BB-5-2의 합성
THF (10 mL) 중 오황화인 (2.25 g, 10.12 mmol, 1.08 mL, 10 eq)의 용액에, 30 ℃에서 탄산나트륨 1.07 g, 10.12 mmol, 10 eq)을 첨가하고, 혼합물을 0.5 시간 동안 교반했다. 이어서 BB-5-1(0.3 g, 1.01 mmol, 1 eq)을 첨가하고, 반응 용액을 10 시간 동안 70 ℃에서 요일 욕 내에서 교반했다. 에틸 아세테이트 (20 mL)를 반응 용액에 첨가했다. 혼합물을 셀라이트 (Celite)를 통해 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:1 ~ 1:1)로 정제하여 화합물 BB-5-2을 얻었다.
LCMS m/z = 312.9 [M+H]+.
단계 3: 화합물 BB-5의 합성
HCl/EtOAc (4 M, 5.69 mL, 59.27 eq)을 28 ℃에서 BB-5-2 (0.12 g, 384.12 μmol, 1 eq)에 첨가하고, 혼합물을 1 시간 동안 교반했다. 반응 용액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 BB-5을 얻었다.
LCMS m/z = 213.1 [M+H]+.
참고 실시예 6: 부분 BB-6
합성 경로:
단계 1: 화합물 BB-6-2의 합성
DMF (20 mL) 중 BB-6-1 (2 g, 14.27 mmol, 1 eq) 및 Cs2CO3 (5.11 g, 15.70 mmol, 1.1 eq)의 용액에, 25 ℃에서 벤질 브로마이드 (2.44 g, 14.27 mmol, 1.70 mL, 1 eq)를 첨가했고, 혼합물을 또다른 3 시간 동안 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 MS가 나타났다. 반응 용액을 물 (100 mL)에 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mL*5)로 추출했다. 유기상을 무수 황산나트륨을 이용해 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬(flash) 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:1 ~ 1:1)로 정제하여 BB-6-2를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.58 (d, J = 1.00 Hz, 1 H), 7.55 (s, 1 H), 7.33 - 7.40 (m, 3 H), 7.14 - 7.20 (m, 2 H), 5.13 (s, 2 H), 4.34 (q, J = 7.20 Hz, 2 H), 1.36 (t, J = 7.20 Hz, 3 H); LCMS m/z = 231.1 [M+1]+.
단계 2: 화합물 BB-6의 합성
테트라하이드로퓨란 (26 mL) 중 BB-6-2 (1.50 g, 6.51 mmol, 1 eq)의 용액에, 28 ℃에서 물 (26 mL) 중 수산화리튬 일수화물 (2.19 g, 52.11 mmol, 8 eq)의 용액을 첨가하고, 혼합물을 또다른 12 시간 동안 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 MS가 나타났다. 반응 용액을 감압 하에서 농축시켰다. 용매의 제거 후, 물 (20 mL)을 첨가했고, 혼합물을 2 N 염산을 이용해 약 2의 pH를 갖도록 조절했다. 이어서 침전된 고체를 여과해 BB-6를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.87 (d, J = 2.20 Hz, 2 H), 7.27 - 7.43 (m, 5 H), 5.24 (s, 2 H); LCMS m/z = 201.1 [M-1]-.
참고 실시예 7: 부분 BB-7
합성 경로:
단계 1: 화합물 BB-7-2의 합성
톨루엔 (70 mL) 중 BB-7-1 (5 g, 29.65 mmol, 1 eq)의 용액에, 0 ℃에서 디에틸 옥살레이트 (diethyl oxalate) (4.77 g, 32.62 mmol, 4.45 mL, 1.1 eq) 및 소듐 에톡사이드 (sodium ethoxide) (2.62 g, 38.55 mmol, 1.3 eq)을 첨가하고, 혼합물을 12 시간 동안 20 ℃에서 반응시켰다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 반응 용액을 감압 하에서 농축시키고, 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석시키고, 포화 브라인 (200 mL)으로 세척했다. 유기상을 무수 황산나트륨을 이용해 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이는 정제 없이 다음 단계에서 바로 사용되었다. 화합물 BB-7-2가 얻어졌다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 6.87 - 7.19 (m, 4 H), 5.78 (br s, 1 H), 4.04 (br s, 2 H), 2.92 - 3.44 (m, 2 H), 1.18 (br s, 3 H); LCMS m/z = 269.1[M+1]+.
단계 2: 화합물 BB-7-3의 합성
에탄올 (200 mL) 중 BB-7-2 (7 g, 26.05 mmol, 1 eq)의 용액에, 하이드록실아민 염산염 (hydroxylamine hydrochloride) (1.81 g, 26.05 mmol, 1 eq)을 첨가하고, 혼합물을 12 시간 동안 80 ℃에서 반응시켰다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 반응 용액을 감압 하에서 농축시켜 BB-7-3을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.33 (m, 2 H); 7.20 (m, 2 H), 6.35 (s, 1 H), 4.41 - 4.47 (m, 2 H), 4.13 (q, J = 7.20 Hz, 2 H), 1.30 - 1.33 (t, 3 H); LCMS m/z = 266.1[M+1]+.
단계 3: 화합물 BB-7-4의 합성
에탄올 (100 mL) 중 BB-7-3 (4 g, 15.06 mmol, 1 eq)의 용액에, Pd/C (4 g, 5% 순도)를 첨가하고, 혼합물을 12 시간 동안 H2 분위기 (30 psi) 하에서 30 ℃에서 반응시켰다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 반응 용액을 셀라이트를 통해 여과시키고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (디클로로메탄:메탄올 = 10:1)로 정제하여 화합물 BB-7-4을 얻었다.
LCMS m/z = 232.1[M+1]+.
단계 4: 화합물 BB-7의 합성
테트라하이드로퓨란 (15 mL) 및 물 (5 mL) 중 BB-7-4 (0.5 g, 2.16 mmol, 1 eq)의 용액에, 수산화리튬 일수화물 (453.17 mg, 10.80 mmol, 5 eq)을 첨가하고, 혼합물을 2 시간 동안 30 ℃에서 반응시켰다. TLC (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 5:1) 모니터링에 의할 때, 원료가 완전히 소비되었고, 새로운 스팟(spot)이 나타났다. 반응 용액을 감압 하에서 농축시켜 유기 용매를 제거하고, 2 M 염산 용액을 첨가하여 pH를 약 2로 조절하였다. 백색 고체가 침전되었다. 혼합물을 여과시키고, 여과 케이크를 수집하여 BB-7를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.24 - 7.41 (m, 5 H), 6.57 (s, 1 H), 4.22 (s, 2 H).
참고 실시예 8: 부분 BB-8
합성 경로:
단계 1: 화합물 BB-8-2의 합성
DMF (32 mL) 중 BB-8-1(2 g, 15.74 mmol, 1 eq)의 용액에, 탄산 세슘 (6.67 g, 20.46 mmol, 1.3 eq) 및 벤질 브로마이드 (3.23 g, 18.88 mmol, 2.24 mL, 1.2 eq)을 첨가하고, 혼합물을 2 시간 동안 20 ℃에서 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 물 (30 mL) 및 에틸 아세테이트 (30 mL)을 반응 용액에 첨가하였고, 층들이 분리되었다. 유기상을 포화 브라인으로 세척하고, 무수 황산나트륨를 이용해 건조하고, 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 플래쉬 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:1-3:1)로 정제하여 BB-8-2를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.11 (s, 1 H), 7.34 - 7.43 (m, 3 H), 7.27 - 7.33 (m, 2 H), 5.43 (s, 2 H), 4.00 (s, 3 H); LCMS m/z = 218.1 [M+1]+.
단계 2: 화합물 BB-8의 합성
테트라하이드로퓨란 (12 mL) 및 물 (4 mL) 중에 BB-8-2 (0.3 g, 1.38 mmol, 1 eq)을 용해시키고, 수산화리튬 일수화물 (173.85 mg, 4.14 mmol, 3 eq)을 첨가했다. 반응물을 12 시간 동안 25 ℃에서 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호 피크가 나타났다. 에틸 아세테이트 (10 mL)를 반응 용액에 첨가하고, 수성상을 1 M 염산을 이용해 3-4의 pH를 갖도록 조절했다. 고체가 침전되었다. 혼합물을 여과해 BB-8을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ=13.25 (br s, 1 H), 8.78 (s, 1 H), 7.27 - 7.40 (m, 5 H), 5.47 (s, 2 H); LCMS m/z = 204.1 [M+1]+.
참고 실시예 9: 부분 BB-9
합성 경로:
단계 1: 화합물 BB-9-2의 합성
0 ℃에서 H2SO4 (1 M, 12.80 mL, 2 eq) 및 물 (10 mL) 중 BB-9-1 (1 g, 6.40 mmol, 1 eq)의 용액에 NaNO2 (662.86 mg, 9.60 mmol, 1.5 eq)을 첨가하고, 혼합물을 0.5 시간 동안 0 ℃에서 교반했다. CuCl2 (1.72 g, 12.80 mmol, 2 eq)을 농축된 염산 (15 mL) 중에 용해시키고, 용액을 상기 혼합물에 첨가했다. 수득된 혼합물을 1.5 시간 동안 0 ℃에서 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호 피크가 나타났다. 에틸 아세테이트 (10 mL)를 반응 용액에 첨가하고, 수성상을 에틸 아세테이트 (15 mL*2)로 추출했다. 유기상을 포화 브라인으로 세척하고, 무수 황산나트륨을 이용해 건조하고, 여과시켰다. 여과액을 감압 하에서 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:1 ~ 1:2)로 정제하여 BB-9-2을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) = 4.46 (q, J = 21.60 Hz, 2 H), 1.38 (t, J = 14.40 Hz, 3 H); LCMS m/z = 176.0 [M+1]+.
단계 2: 화합물 BB-9-3의 합성
DMF (5 mL) 중 BB-9-2 (760.78 mg, 4.33 mmol, 1 eq)의 용액에, 탄산 세슘 (1.84 g, 5.63 mmol, 1.3 eq) 및 3-시아노벤질 브로마이드 (3-cyanobenzyl bromide) (889.31 mg, 5.20 mmol, 617.58 μL, 1.2 eq)를 첨가하고, 반응물을 2 시간 동안 20 ℃에서 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호 피크가 나타났다. 물 (10 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (10 mL*2)로 추출했다. 유기상을 포화 브라인으로 세척하고, 무수 황산나트륨로 건조하고, 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켰고, 조 생성물을 플래쉬 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 20:1 ~ 2:1)로 정제하여 BB-9-3을 얻었다.
LCMS m/z = 291.0 [M+1]+.
단계 3: 화합물 BB-9의 합성
테트라하이드로퓨란 (6 mL) 및 물 (2 mL) 중에 BB-9-3 (0.08 g, 301.10 μmol, 1 eq)을 용해시키고, 수산화리튬 일수화물 (37.90 mg, 903.29 μmol, 3 eq)을 첨가했다. 혼합물을 12 시간 동안 2 ℃에서 반응시켰다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호 피크가 나타났다. 에틸 아세테이트 (5 mL)을 반응 용액에 첨가했다. 수성상을 1 M 염산을 이용해 약 6의 pH를 갖도록 조절하고, 동결건조하여 BB-9을 얻었다.
LCMS m/z = 263.1 [M+1]+.
참고 실시예 10: 부분 BB-10
합성 경로:
단계 1: 화합물 BB-10-1의 합성
디클로로메탄 (90 mL) 중 BB-1-1 (3 g, 19.98 mmol, 1 eq)의 용액에, 트리에틸아민 (6.06 g, 59.93 mmol, 8.34 mL, 3 eq)을 첨가했다. 에틸 클로로옥소아세테이트 (Ethyl chlorooxoacetate) (3.55 g, 25.97 mmol, 2.91 mL, 1.3 eq)을 첨가하고, 혼합물을 5 시간 동안 25 ℃에서 교반했다. LCMS 분석에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호 피크가 나타났다. 물 (60 mL)을 첨가하여 반응 용액을 퀀칭시켰고(quenching), 디클로로메탄 (60 mL*3)으로 추출했다. 유기상을 무수 황산나트륨을 이용해 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 5:1-1:1)로 정제하여 BB-10-1를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 10.73 (br s, 1 H), 10.30 (br s, 1 H), 7.22 - 7.34 (m, 5 H), 4.26 (q, J = 7.00 Hz, 2 H), 3.51 (s, 2 H), 1.27 (t, J = 7.10 Hz, 3 H); LCMS m/z = 251.1[M+1]+.
단계 2: 화합물 BB-10의 합성
아세토나이트릴 (15 mL) 중 BB-10-1 (529.69 mg, 2.12 mmol, 1 eq)의 용액에, 옥시염화인 (phosphorus oxychloride) (486.82 mg, 3.17 mmol, 295.04 μL, 1.5 eq)을 첨가했다. 반응물을 2 시간 동안 90 ℃에서 교반했다. 반응 용액을 포화 중탄산나트륨 용액 (20 mL)에 첨가하고, 혼합물을 5 분 동안 격하게 (vigorously) 교반했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL)로 2번 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 BB-10를 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.23 - 7.10 (m, 5H), 4.36 - 4.29 (m, 2H), 4.12 (s, 2H), 1.34 - 1.23 (m, 3H); LCMS m/z = 233.1[M+1]+.
참고 실시예 11: 부분 BB-11A, BB-11B
합성 경로:
단계 1: 화합물 BB-11-2의 합성
빙초산 (39 mL) 및 테트라하이드로퓨란 (150 mL) 중 BB-11-1 (5 g, 26.01 mmol, 1 eq)의 용액에, 터트-부틸 카바제이트 (tert-butyl carbazate) (17.19 g, 130.07 mmol, 5 eq)을 첨가하고, 혼합물을 12 시간 동안 55 ℃에서 반응시켰다. 혼합물을 실온 (25°C)으로 냉각시키고, NaBH3CN (8.17 g, 130.07 mmol, 5 eq)을 배치들에 첨가했다. 혼합물을 55 ℃로 가열했고, 또다른 12 시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 포화 중탄산나트륨 용액을 반응 용액에 첨가하여 pH를 7~8로 조절했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (150 mL*2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 BB-11-2을 얻었다.
LCMS m/z = 221.1 [M-56+1]+.
단계 2: 화합물 BB-11-3의 합성
11-2 (7 g, 25.33 mmol, 1 eq)을 HCl/EtOAc (4 M, 60 mL)에 첨가하고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 반응시켰다. 반응 용액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물에 포화 중탄산나트륨 용액을 첨가하여 pH를 7~8로 조절했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mL*2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물 BB-11-3을 얻었다.
LCMS m/z = 177.1 [M+1]+.
단계 3: 화합물 BB-11-4의 합성
에탄올 (50 mL) 중 BB-11-3 (4 g, 22.70 mmol, 1 eq)의 용액에 에틸 2-에톡시-2-이미노아세테이트 (ethyl 2-ethoxy-2-iminoacetate) (16.47 g, 113.50 mmol, 5 eq)를 첨가하고, 혼합물을 12 시간 동안 85 ℃에서 반응시켰다. 반응 용액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (디클로로메탄:메탄올 = 10:0 내지 5:1)로 정제하여 BB-11-4을 얻었다.
LCMS m/z = 276.2 [M+1]+.
단계 4: 화합물 BB-11-5의 합성
BB-11-4 (1.3 g, 4.72 mmol, 1 eq)을 25 ℃에서 옥시염화인 (30 mL)에 첨가하고, 혼합물을 3시간 동안 120 ℃에서 반응시켰다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 이어서 가온된(warm) 물 (150 mL)에 천천히 부었다. 혼합물을 포화 중탄산나트륨을 이용해 7~8의 pH를 갖도록 조절했고, 에틸 아세테이트 (100 mL*2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (디클로로메탄:메탄올 = 10:0 내지 10:1)로 정제하여 BB-11-5을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.34 - 7.43 (m, 3 H), 7.21 - 7.28 (m, 2 H), 5.58 (br t, J = 7.12 Hz, 1 H), 4.27 (br dd, J = 6.80, 5.04 Hz, 2 H), 2.88 - 3.28 (m, 4 H), 1.26 (br t, J = 7.12 Hz, 3 H). LCMS m/z = 258.2 [M+1]+.
단계 5: 화합물 BB-11A 및 BB-11B의 합성
화합물 BB-11을 초임계 유체 크로마토그래피 (supercritical fluid chromatography) (Chiralcel AD-3 3μm, 0.46cm id x 15mL; 이동상: A는 SFC CO2 및 B는 MeOH(0.05%IPAm); 구배: A 내 B는 6분 내 10%부터 40%로; 유량: 4.0mL/min; 파장: 220nm)로 분석하였고, BB-11A 및 BB-11B의 체류 시간은 각각 2.217 분 및 2.427 분으로 나타났다. BB-11A 및 BB-11B은 초임계 유체 크로마토그래피 (Column: DAICEL CHIRALPAK AD (250mm*50mm, 10μm); 이동상: [0.1%NH3H2O MEOH]; MeOH%: 30%-30%, 2.56분)에서 분리되어 얻어졌다. 화합물 BB-11A은 초임계 유체 크로마토그래피 (Chiralcel AD-3 3μm, 0.46cm id x 15mL; 이동상: A는 초임계 이산화탄소, B는 메탄올 (0.05% IPAm 함유); 구배: B는 6분 내 10%부터 40%로; 유량: 4.0mL/min; 파장: 220nm)에 의해 분석되었고, BB-11A의 체류 시간은 2.235 분이고, BB-11B의 체류 시간은 2.439 분인 것으로 나타났다.
참고 실시예 12: 부분 BB-12
합성 경로:
단계 1: 화합물 BB-12의 합성
에탄올 (100 mL) 중 BB-12-1의 용액에 25 ℃에서 I2 (11.40 g, 44.92 mmol, 9.05 mL, 1 eq) 및 Ag2SO4 (14.01 g, 44.92 mmol, 7.61 mL, 1 eq)을 첨가하고, 혼합물을 또다른 12 시간 동안 교반했다. 반응 용액을 셀라이트를 통해 여과했다. 물 (150 mL) 및 에틸 아세테이트 (150 mL)을 여과액에 첨가했고, 층들이 분리되었다. 수성상을 에틸 아세테이트 (50 mL*2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 염산/에틸 아세테이트 (4 M)을 첨가했다. 혼합물을 0.5 시간 동안 실온에서 교반했고, 이어서 여과했다. 여과 케이크를 수집했다. 에틸 아세테이트 (50 mL)를 여과 케이크에 첨가하고, 포화 중탄산나트륨을 첨가하여 pH를 8~9로 조절하였다. 층들이 분리되었다. 수성상을 에틸 아세테이트 (25 mL*2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 (물 펌프, 45°C) 조 생성물을 얻었고, 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:1 ~ 1:1)로 정제하여 BB-12을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.22 (dt, J = 7.68, 2.37 Hz, 1 H), 6.83 (ddd, J = 10.85, 8.22, 2.76 Hz, 1 H), 3.97 (br s, 2 H).
참고 실시예 13: 부분 BB-13
합성 경로:
단계 1: 화합물 BB-13-1의 합성
DMF (5 mL) 중 BB-9-2 (760.78 mg, 4.33 mmol, 1 eq)의 용액에 탄산 세슘 (1.84 g, 5.63 mmol, 1.3 eq) 및 벤질 브로마이드 (889.31 mg, 5.20 mmol, 617.58 μL, 1.2 eq)를 첨가하고, 반응물을 2 시간 동안 20 ℃에서 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호 피크가 나타났다. 물 (10 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (10 mL*2)로 추출했다. 유기상을 포화 브라인으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 20:1~2:1)로 정제하여 BB-13-1을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=7.34 - 7.41 (m, 3 H), 7.29 - 7.34 (m, 2 H), 5.42 (s, 2 H), 4.47 (q, J = 22.40 Hz, 2 H), 1.43 (t, J = 15.60 Hz, 3 H); LCMS m/z = 266.0 [M+1]+.
단계 2: 화합물 BB-13의 합성
테트라하이드로퓨란 (6 mL) 및 물 (2 mL) 중에 BB-13-1 (0.08 g, 301.10 μmol, 1 eq)을 용해시키고, 수산화리튬 일수화물 (37.90 mg, 903.29 μmol, 3 eq)을 첨가했다. 혼합물을 12 시간 동안 25 ℃에서 반응시켰다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호 피크가 나타났다. 5 mL의 에틸 아세테이트를 반응 용액에 첨가했다. 수성상을 1 M 염산을 이용해 약 6의 pH를 갖도록 조절하고, 동결건조하여 BB-13을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.32 - 7.42 (m, 3 H), 7.25 - 7.30 (m, 2 H), 5.48 (s, 2 H); LCMS m/z = 238.1 [M+1]+.
실시예 1: WX001
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX001의 합성
화합물 BB-3 (0.58 g, 2.78 mmol, 1 eq), 화합물 BB-1 (849 mg, 4.18 mmol, 1.5 eq), N,N-디이소프로필에틸아민 (1.26 g, 9.75 mmol, 1.70 mL, 3.5 eq)을 에틸 아세테이트 (10 mL) 중에 용해시킨 다음, 2,4,6-트리부틸-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥사이드 (4.43 g, 6.96 mmol, 4.14 mL, 에틸 아세테이트 중 50% 순도, 2.5 eq)을 적가했다. 첨가가 완료된 후, 혼합물을 12시간 동안 25℃에서 교반했다. 20 mL의 물을 반응 용액에 첨가했고 혼합물을 에틸 아세테이트 (5 mL * 2)로 추출했다. 유기상들을 합하고 포화 브라인 (10 mL)으로 세척했다. 유기상을 무수 황산 나트륨을 이용해 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼으로 정제했고, 이어서 SFC(Chiralcel OJ-3, 3μm, 0.46cm id x 5cm L; 이동상: A는 초임계 이산화탄소, B는 메탄올 (0.05% IPAm 함유); 구배: B는 5분 내 10%에서 40%; 유속: 4.0mL/min; 파장 h: 220nm)로 분리하여 화합물 WX001을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.71 (d, J = 7.53 Hz, 1H), 7.20-7.38 (m, 9H), 5.15 - 5.25 (m, 1H), 4.67 (dd, J = 6.53, 9.54 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 9.79, 10.79 Hz, 1H), 4.21 (s, 2H), 3.89 (s, 3H); LCMS m/z = 394.1 [M+H]+.
초임계 유체 크로마토그래피 (카이랄 칼럼: 칼럼: Chiralpak OD -3, 3μm, 0.46cm id x 5cm L; 이동상: A: CO2, B: MeOH (0.05% IPAm); 구배: B/A = 3분 내 10% - 40%; 유속: 4.0 mL/min; 파장: 220nm)로 분석한 결과, ee %는 96.36 %이었다.
실시예 2: WX002
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX002의 합성
DMF (10 mL) 중 BB-3 (0.06 g, 288.07 μmol, 1 eq) 및 BB-2 (131.48 mg, 576.15 μmol, 2 eq)의 용액에 2,4,6-트리부틸-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥사이드 (458.30 mg, 720.19 μmol, 428.32 μL, 에틸 아세테이트 중 50 % 순도, 2.5 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (111.69 mg, 864.22 μmol, 150.53 μL, 3 eq)을 첨가하고, 혼합물을 10시간 동안 25℃에서 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 20 mL의 에틸 아세테이트를 반응 용액에 첨가하고 혼합물을 15 mL의 포화 브라인으로 세척했다. 유기상을 무수 황산 나트륨을 이용해 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 분취(preparative) HPLC (칼럼: Xtimate C18 150mm*25mm*5μm; 이동상: [물 (10mM NH4HCO3)-ACN]; 아세토니트릴%: 35%-65%, 10.5분)로 정제하여 화합물 WX002를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.60 (br d, J = 8.16 Hz, 1 H), 7.69 - 7.81 (m, 2 H), 7.51 - 7.65 (m, 3 H), 7.36 - 7.46 (m, 2 H), 7.25 - 7.33 (m, 1 H), 4.97 (dt, J = 10.58, 7.72 Hz, 1 H), 4.35 - 4.52 (m, 2 H), 4.21 (s, 2 H), 3.79 (s, 3 H); LCMS m/z = 419.1 [M+H]+.
초임계 유체 크로마토그래피 (카이랄 칼럼: 칼럼: Chiralpak OD-3, 3μm, 0.46cm id x 5cm L; 이동상: A: CO2, B: MeOH (0.05% IPAm); 구배: B/A = 3분 내 10% - 40%; 유속: 4.0 mL/min; 파장: 220nm)로 분석한 결과, ee %는 100 %이었다.
실시예 3: WX003
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX003의 합성
DMF (10 mL) 중 BB-4 (60 mg, 286.71 μmol, 1 eq) 및 BB-1 (87.39 mg, 430.07 μmol, 1.5 eq)의 용액에 2,4,6-트리부틸-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥사이드 (456.13 mg, 716.78 μmol, 426.29 μL, 에틸 아세테이트 중 50 % 순도, 2.5 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (111.16 mg, 860.13 μmol, 149.82 μL, 3 eq)을 첨가하고, 혼합물을 10시간 동안 25℃에서 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 30 mL의 에틸 아세테이트를 반응 용액에 첨가하고 혼합물을 20 mL의 포화 브라인으로 세척했다. 유기상을 무수 황산 나트륨을 이용해 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 분취 HPLC (칼럼: Xtimate C18 150mm*25mm*5μm; 이동상: [물 (10mM NH4HCO3)-ACN]; 아세토니트릴%: 35%-65%, 10.5 분)로 정제하여 화합물 WX003을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.63 (br s, 1 H), 8.46 (dd, J = 4.63, 1.54 Hz, 1 H), 7.79 (d, J = 7.94 Hz, 1 H), 7.48 (dd, J = 8.05, 4.74 Hz, 1 H), 7.23 - 7.37 (m, 5 H), 5.01 (dt, J = 10.80, 7.28 Hz, 1 H), 4.43 - 4.72 (m, 2 H), 4.14 (br s, 2 H), 3.80 (s, 3 H); LCMS m/z = 395.2 [M+H]+.
초임계 유체 크로마토그래피 (카이랄 칼럼: 칼럼: Chiralpak OD -3, 3μm, 0.46cm id x 5cm L; 이동상: A: CO2, B: MeOH (0.05% IPAm); 구배: B/A = 3분 내 10% - 40%; 유속: 4.0 mL/min; 파장: 220nm)로 분석한 결과, ee %는 96.3 %이었다.
실시예 4: WX004
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX004의 합성
DMF (10 mL) 중 BB-4 (60 mg, 286.71 μmol, 1 eq) 및 BB-2 (130.86 mg, 573.43 μmol, 2 eq)의 용액에 2,4,6-트리부틸-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥사이드 (456.13 mg, 716.78 μmol, 426.29 μL, 에틸 아세테이트 중 50 % 순도, 2.5 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (111.16 mg, 860.14 μmol, 149.82 μL, 3 eq)을 첨가하고, 혼합물을 10시간 동안 25℃에서 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 30 mL의 에틸 아세테이트를 반응 용액에 첨가하고 혼합물을 20 mL의 포화 브라인으로 세척했다. 유기상을 무수 황산 나트륨을 이용해 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 분취 HPLC (칼럼: Xtimate C18 15 mm*25mm*5μm; 이동상: [물 (10mM NH4HCO3)-ACN]; 아세토니트릴%: 35%-65%, 10.5 분)로 정제하여 화합물 WX004를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.73 (br s, 1 H), 8.46 (d, J = 4.85 Hz, 1 H), 7.69 - 7.86 (m, 3 H), 7.44 - 7.65 (m, 3 H), 5.01 (dt, J = 11.08, 7.14 Hz, 1 H), 4.48 - 4.68 (m, 2 H), 4.22 (s, 2 H), 3.80 (s, 3 H); LCMS m/z = 420.1 [M+H]+.
초임계 유체 크로마토그래피 (카이랄 칼럼: 칼럼: Chiralpak OD -3, 3μm, 0.46cm id x 5cm L; 이동상: A: CO2, B: MeOH (0.05% IPAm); 구배: B/A = 3분 내 10% - 40%; 유속: 4.0 mL/min; 파장: 220nm)로 분석한 결과, ee %는 100 %이었다.
실시예 5: WX005
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX005의 합성
DMF (10 mL) 중 BB-5 (100 mg, 471.06 μmol, 1 eq) 및 BB-1 (130.86 mg, 573.43 μmol, 1.2 eq)의 용액에 2,4,6-트리부틸-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥사이드 (599.53 mg, 942.12 μmol, 560.31 μL, 에틸 아세테이트 중 50 % 순도, 2.5 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (182.64 mg, 1.41 mmol, 246.15 μL, 3 eq)을 첨가하고, 혼합물을 10시간 동안 25℃에서 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 에틸 아세테이트 (30 mL)를 반응 용액에 첨가하고, 혼합물을 포화 브라인 (20 mL)으로 세척했다. 유기상을 무수 황산 나트륨을 이용해 건조하고, 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 분취 HPLC (칼럼: Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm; 이동상: [물 (0.05%HCl)-ACN]; 아세토니트릴%: 20%-50%, 12 분)로 정제하여 화합물 WX005를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.62 (br s, 1H), 8.46 (dd, J = 1.75, 4.82 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 1.32, 7.89 Hz, 1H), 7.48 (dd, J = 4.82, 7.89 Hz, 1H), 7.20-7.37 (m, 5H), 5.01 (td, J = 7.34, 11.18 Hz, 1H), 4.60 (br s, 1H), 4.49-4.55 (m, 1H), 4.14 (br s, 2H); LCMS m/z = 398.2 [M+H]+.
초임계 유체 크로마토그래피 (카이랄 칼럼: 칼럼: Chiralpak OD -3, 3μm, 0.46cm id x 5cm L; 이동상: A: CO2, B: MeOH (0.05% IPAm); 구배: B/A = 3분 내 10% - 40%; 유속: 4.0 mL/min; 파장: 220nm)로 분석한 결과, ee %는 100 %이었다.
실시예 6: WX006
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX006의 합성
DMF (1 mL) 중 BB-4 (10 mg, 47.79 μmol, 1 eq) 및 BB-1 (11.60 mg, 57.34 μmol, 1.2 eq)의 용액에 2,4,6-트리부틸-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥사이드 (60.82 mg, 95.57 μmol, 56.84 μL, 에틸 아세테이트 중 50 % 순도, 2.5 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (18.53 mg, 143.36 μmol, 24.97 μL, 3 eq)을 첨가하고, 혼합물을 10시간 동안 25℃에서 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 반응 용액을 분취 HPLC (칼럼: Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm; 이동상: [물 (0.05%HCl)-ACN]; 아세토니트릴%: 20%-50%, 12분)로 직접 정제하여 화합물 WX006을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 9.01 (br s, 1H), 8.34-8.46 (m, 2H), 7.51-7.64 (m, 2H), 7.43 (br s, 3H), 7.28-7.31 (m, 2H), 7.22-7.26 (m, 1H), 5.29 (br s, 2H), 5.20 (br d, J = 7.02 Hz, 1H), 4.58-4.69 (m, 2H), 3.91 (s, 3H); LCMS m/z = 394.2 [M+H]+.
초임계 유체 크로마토그래피 (카이랄 칼럼: 칼럼: Chiralpak OD -3, 3μm, 0.46cm id x 5cm L; 이동상: A: CO2, B: MeOH (0.05% IPAm); 구배: B/A = 3분 내 10% - 40%; 유속: 4.0 mL/min; 파장: 220nm)로 분석한 결과, ee %는 100 %이었다.
실시예 7: WX007
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX007의 합성
DMF (1 mL) 중 BB-4 (10 mg, 47.79 μmol, 1 eq) 및 BB-7 (11.65 mg, 57.35 μmol, 1.2 eq)의 용액에 2,4,6-트리부틸-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥사이드 (60.82 mg, 95.57 μmol, 56.84 μL, 에틸 아세테이트 중 50 % 순도, 2.5 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (18.53 mg, 143.36 μmol, 24.97 μL, 3 eq)을 첨가하고, 혼합물을 10시간 동안 25℃에서 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 반응 용액을 분취 HPLC (칼럼: Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm; 이동상: [물 (0.05%HCl)-ACN]; 아세토니트릴%: 20%-50%, 12분)로 직접 정제하여 화합물 WX007을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 8.98 (d, J = 8.33 Hz, 1H), 8.46 (dd, J = 1.32, 4.82 Hz, 1H), 7.77 (dd, J = 1.75, 7.89 Hz, 1H), 7.47 (dd, J = 4.60, 8.11 Hz, 1H), 7.22-7.40 (m, 5H), 6.54 (s, 1H), 5.00 (td, J = 7.45, 11.40 Hz, 1H), 4.59-4.70 (m, 1H), 4.48-4.56 (m, 1H), 4.22 (s, 2H), 3.79 (s, 3H); LCMS m/z = 395.1 [M+H]+.
초임계 유체 크로마토그래피 (카이랄 칼럼: 칼럼: Chiralpak OD -3, 3μm, 0.46cm id x 5cm L; 이동상: A: CO2, B: MeOH (0.05% IPAm); 구배: B/A = 3분 내 10% - 40%; 유속: 4.0 mL/min; 파장: 220nm)로 분석한 결과, ee %는 100 %이었다.
실시예 8: WX008
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX008의 합성
DMF (1 mL) 중 BB-4 (10 mg, 47.79 μmol, 1 eq) 및 BB-8 (15.06 mg, 57.35 μmol, 1.2 eq)의 용액에 2,4,6-트리부틸-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥사이드 (60.82 mg, 95.57 μmol, 56.84 μL, 에틸 아세테이트 중 50 % 순도, 2.5 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (18.53 mg, 143.36 μmol, 24.97 μL, 3 eq)을 첨가하고, 혼합물을 10시간 동안 25℃에서 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 반응 용액을 분취 HPLC (칼럼: Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm; 이동상: [물 (0.05%HCl)-ACN]; 아세토니트릴%: 20%-50%, 12분)로 직접 정제하여 화합물 WX008을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 8.85 (d, J = 7.89 Hz, 1H), 8.46 (d, J = 3.07 Hz, 1H), 7.75-7.89 (m, 3H), 7.61 (d, J = 4.82 Hz, 2H), 7.48 (dd, J = 4.82, 7.89 Hz, 1H), 5.58 (s, 2H), 4.94-5.06 (m, 1H), 4.65 (t, J = 10.74 Hz, 1H), 4.45-4.57 (m, 1H), 3.80 (s, 3H); LCMS m/z = 454.1 [M+H]+.
초임계 유체 크로마토그래피 (카이랄 칼럼: 칼럼: Chiralpak OD -3, 3μm, 0.46cm id x 5cm L; 이동상: A: CO2, B: MeOH (0.05% IPAm); 구배: B/A = 3분 내 10% - 40%; 유속: 4.0 mL/min; 파장: 220nm)로 분석한 결과, ee %는 100 %이었다.
실시예 9: WX009
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX009의 합성
DMF (1 mL) 중 BB-4 (10 mg, 47.79 μmol, 1 eq) 및 BB-9 (11.65 mg, 57.35 μmol, 1.2 eq)의 용액에 2,4,6-트리부틸-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥사이드 (60.82 mg, 95.57 μmol, 56.84 μL, 에틸 아세테이트 중 50 % 순도, 2.5 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (18.53 mg, 143.36 μmol, 24.97 μL, 3 eq)을 첨가하고, 혼합물을 10시간 동안 25℃에서 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 반응 용액을 분취 HPLC (칼럼: Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm; 이동상: [물 (0.05%HCl)-ACN]; 아세토니트릴%: 20%-50%, 12분)로 직접 정제하여 화합물 WX009를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 8.84 (s, 1H), 8.71 (d, J = 7.89 Hz, 1H), 8.46 (dd, J = 1.53, 4.60 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 1.53, 8.11 Hz, 1H), 7.48 (dd, J = 4.82, 7.89 Hz, 1H), 7.26-7.42 (m, 5H), 5.49 (s, 2H), 4.94-5.08 (m, 1H), 4.48-4.63 (m, 2H), 3.80 (s, 3H); LCMS m/z = 395.1 [M+H]+.
초임계 유체 크로마토그래피 (카이랄 칼럼: 칼럼: Chiralpak OD -3, 3μm, 0.46cm id x 5cm L; 이동상: A: CO2, B: MeOH (0.05% IPAm); 구배: B/A = 3분 내 10% - 40%; 유속: 4.0 mL/min; 파장: 220nm)로 분석한 결과, ee %는 100 %이었다.
실시예 10: WX010
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX010의 합성
DMF (1 mL) 중 BB-4 (10 mg, 47.79 μmol, 1 eq) 및 WX010-1 (11.65 mg, 57.35 μmol, 1.2 eq)의 용액에 2,4,6-트리부틸-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥사이드 (60.82 mg, 95.57 μmol, 56.84 μL, 에틸 아세테이트 중 50 % 순도, 2.5 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (18.53 mg, 143.36 μmol, 24.97 μL, 3 eq)을 첨가하고, 혼합물을 10시간 동안 25℃에서 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 반응 용액을 분취 HPLC (칼럼: Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm; 이동상: [물 (0.05%HCl)-ACN]; 아세토니트릴%: 20%-50%, 12분)로 직접 정제하여 화합물 WX010을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 8.75 (d, J = 8.33 Hz, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.46 (dd, J = 1.53, 4.60 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 1.53, 8.11 Hz, 1H), 7.48 (dd, J = 4.82, 7.89 Hz, 1H), 7.30-7.41 (m, 5H), 5.65 (s, 2H), 4.97-5.10 (m, 1H), 4.58-4.68 (m, 1H), 4.47-4.57 (m, 1H), 3.80 (s, 3H); LCMS m/z = 395.1 [M+H]+.
초임계 유체 크로마토그래피 (카이랄 칼럼: 칼럼: Chiralpak OD -3, 3μm, 0.46cm id x 5cm L; 이동상: A: CO2, B: MeOH (0.05% IPAm); 구배: B/A = 3분 내 10% - 40%; 유속: 4.0 mL/min; 파장: 220nm)로 분석한 결과, ee %는 100 %이었다.
실시예 11: WX011
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX011의 합성
DMF (1 mL) 중 BB-4 (10 mg, 47.79 μmol, 1 eq) 및 BB-13 (14.76 mg, 62.13 μmol, 1.2 eq)의 용액에 2,4,6-트리부틸-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥사이드 (60.82 mg, 95.57 μmol, 56.84 μL, 에틸 아세테이트 중 50 % 순도, 2.5 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (18.53 mg, 143.36 μmol, 24.97 μL, 3 eq)을 첨가하고, 혼합물을 10시간 동안 25℃에서 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 반응 용액을 분취 HPLC (칼럼: Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm; 이동상: [물 (0.05%HCl)-ACN]; 아세토니트릴%: 20%-50%, 12min)로 직접 정제하여 화합물 WX011을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.83 (d, J = 7.89 Hz, 1H), 8.41-8.49 (m, 1H), 7.77 (dd, J = 1.32, 7.89 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 4.82, 7.89 Hz, 1H), 7.30-7.42 (m, 3H), 7.26 (d, J = 7.02 Hz, 2H), 5.48 (s, 2H), 4.98 (td, J = 7.13, 11.62 Hz, 1H), 4.59-4.67 (m, 1H), 4.49 (dd, J = 6.80, 9.87 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H); LCMS m/z = 429.0 [M+H]+. 초임계 유체 크로마토그래피 (카이랄 칼럼: 칼럼: Chiralpak OD -3, 3μm, 0.46cm id x 5cm L; 이동상: A: CO2, B: MeOH (0.05% IPAm); 구배: B/A = 3분 내 10% - 40%; 유속: 4.0 mL/min; 파장: 220nm)로 분석한 결과, ee %는 100 %이었다.
실시예 12: WX012
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX012의 합성
톨루엔 (3 mL) 중 BB-4 (15 mg, 71.68 μmol, 1 eq) 및 BB-10 (33.29 mg, 143.36 μmol, 2 eq)의 용액에 트리메틸 알루미늄 (2 M, 53.76 μL, 1.5 eq)을 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 25℃에서 교반했다. LCMS 모니터링에 의할 때 원료가 완전히 소비되었고, 목표 신호가 나타났다. 반응 용액을 분취 HPLC (칼럼: Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm; 이동상: [물 (0.05%HCl)-ACN]; 아세토니트릴%: 20%-50%, 12min)로 직접 정제하여 화합물 WX012를 얻었다.
LCMS m/z = 396.2 [M+H]+.
실시예 13: WX013
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX013-1의 합성
LiOH·H2O (245.59 mg, 5.85 mmol, 3 eq)를 테트라하이드로퓨란 (9 mL) 및 물 (3 mL) 중 BB-11B (501.93 mg, 1.95 mmol, 1 eq)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 25℃에서 반응시켰다. 물 (10 mL) 및 에틸 아세테이트 (10 mL)를 반응 용액에 첨가했고, 층들이 분리되었다. 수성상을 에틸 아세테이트 (10 mL*2)로 추출했다. 생성된 수성상을 1 M HCl을 이용해 5-6의 pH로 조절하고, 에틸 아세테이트 (10 mL*2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인으로 세척하고, 무수 황산 나트륨을 이용해 건조하고, 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 (물 펌프, 45℃) WX013-1을 얻었다.
LCMS m/z = 230.2 [M+1]+.1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 12.75 - 13.57 (m, 1 H), 7.33 - 7.44 (m, 3 H), 7.18 - 7.28 (m, 2 H), 5.57 (dd, J = 7.97, 6.21 Hz, 1 H), 3.06 - 3.22 (m, 2 H), 2.94 - 3.03 (m, 1 H), 2.53 - 2.61 (m, 1 H).
단계 2: 화합물 WX013의 합성
N,N-디이소프로필에틸아민 (23.16 mg, 179.20 μmol, 31.21 μL, 2.5 eq) 및 WX013-1 (24.65 mg, 107.52 μmol, 1.5 eq)을 DMF (1.5 mL) 중 BB-1 (15 mg, 71.68 μmol, 1 eq)의 용액에 첨가했고, 이어서 프로필포스폰산 무수물 (T3P, 68.42 mg, 107.52 μmol, 63.94 μL, 50% 순도, 1.5 eq)을 첨가했다. 혼합물을 1시간 동안 25℃에서 반응시켰다. 반응 용액을 여과하고, 여과액을 수집했다. 수집된 여과액을 분취 HPLC (칼럼: Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm; 이동상: [물 (0.05%HCl)-ACN]; 아세토니트릴%: 20%-50%, 12분)로 정제하여 WX013을 얻었다.
LCMS m/z = 421.1 [M+1]+.1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.68 (d, J = 8.04 Hz, 1 H), 8.46 (dd, J = 4.72, 1.32 Hz, 1 H), 7.78 (dd, J = 8.04, 1.38 Hz, 1 H), 7.47 (dd, J = 8.04, 4.64 Hz, 1 H), 7.32 - 7.43 (m, 3 H), 7.24 (br d, J = 6.65 Hz, 2 H), 5.44 - 5.68 (m, 1 H), 5.00 (dt, J = 11.40, 7.40 Hz, 1 H), 4.42 - 4.68 (m, 2 H), 3.79 (s, 3 H), 2.90 - 3.23 (m, 4 H).
실시예 14: WX014
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX014-2의 합성
WX014-1을 THF (100 mL) 및 MeOH (100 mL)의 용액 중에 용해시키고, 반응 플라스크를 얼음 물 욕 (0℃) 내에 위치시켰다. 트리메틸실릴 디아조메탄 (2 M, 47.89 mL, 2.1 eq)을 플라스크에 첨가하고, 혼합물을 25℃로 데우고 2시간 동안 교반했다. 반응 용액이 옅은 노란색(pale yellow)이 될 때까지 빙초산을 적가했다. 반응 용액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 WX014-2를 얻었다.
단계 2: 화합물 WX014-3의 합성
25℃에서 디클로로메탄 (120 mL) 중에 트리페닐포스핀 (14.30 g, 54.53 mmol, 1.2 eq) 및 이미다졸 (3.71 g, 54.53 mmol, 1.2 eq)을 용해시키고, I2 (13.84 g, 54.53 mmol, 10.98 mL, 1.2 eq)을 상기 혼합 용액에 천천히 첨가했다. 혼합 용액을 10분 동안 교반하고, DCM (80 mL) 중 WX014-2의 용액을 상기 용액에 첨가했다. 혼합물을 12시간 동안 25℃에서 반응시켰다. 반응 용액을 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:1 ~ 1:1)로 정제하여 WX014-3을 얻었다.
LCMS m/z = 244.1 [M-100+1]+.1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 5.10 (br d, J = 4.82 Hz, 1 H), 4.35 (br d, J = 3.96 Hz, 1 H), 3.77 (s, 3 H), 3.18 (t, J = 7.46 Hz, 2 H), 2.30 - 2.49 (m, 1 H), 2.18 (dq, J = 14.32, 7.22 Hz, 1 H), 1.43 - 1.47 (m, 9 H).
단계 3: 화합물 WX014-4의 합성
1,2-디브로모에탄 (82.12 mg, 437.12 μmol, 32.98 μL, 0.3 eq)을 DMF (2 mL) 중 아연 분말(zinc powder) (285.83 mg, 4.37 mmol, 3 eq)에 첨가했다. 혼합물을 30분 동안 60℃에서 교반했고, 이어서 실온 (25℃)으로 냉각시켰다. 트리메틸클로로실란 (9.50 mg, 87.42 μmol, 11.10 μL, 0.06 eq)을 반응 플라스크 내에 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 25℃에서 교반했다. DMF (2 mL) 중 WX014-2의 용액을 상기 용액에 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 25℃에서 반응시켰고, 이어서 30분 동안 방치(stand)했다. 상부 에멀젼(upper emulsion)을 꺼내고 DMF (2 mL) 중 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(tris(dibenzylideneacetone)dipalladium) (44.08 mg, 48.14 μmol, 0.05 eq), 트리-o-메틸페닐포스핀 (58.61 mg, 192.55 μmol, 0.2 eq), 및 BB-12의 용액에 천천히 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 20℃에서 반응시켰다. 물 (5 mL) 및 메틸 터트-부틸 에테르 (5 mL)를 반응 용액에 첨가했고, 층들이 분리되었다. 수성상을 메틸 터트-부틸 에테르 (5 mL*2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인으로 세척하고, 무수 황산 나트륨을 이용해 건조하고, 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 WX014-4를 얻었다. LCMS m/z = 289.1 [M-56+1]+.
단계 4: 화합물 WX014-5의 합성
LiOH·H2O (219.33 mg, 5.23 mmol, 3 eq)를 테트라하이드로퓨란 (15 mL) 및 물 (15 mL) 중 WX014-4의 용액에 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 25℃에서 반응시켰다. 10 mL의 물 및 10 mL의 에틸 아세테이트를 반응 용액에 첨가했고, 층들이 분리되었다. 수성상을 에틸 아세테이트 (10 mL*2)로 추출했다. 생성된 수성상을 1M HCl을 이용해 5~6의 pH로 조절하고, 에틸 아세테이트 (10 mL*2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인으로 세척하고, 무수 황산 나트륨을 이용해 건조하고, 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 WX014-5를 얻었다. LCMS m/z = 275.1 [M-56+1]+.
단계 5: 화합물 WX014-6의 합성
프로필포스폰산 무수물 (895.80 mg, 1.41 mmol, 837.20 μL, 50% 순도, 1.5 eq)을 DMF (20 mL) 중 N,N-디이소프로필에틸아민 (303.22 mg, 2.35 mmol, 408.65 μL, 2.5 eq) 및 WX014-5의 용액에 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 25℃에서 반응시켰다. 물 (15 mL) 및 에틸 아세테이트 (15 mL)를 반응 용액에 첨가했고, 층들이 분리되었다. 수성상을 에틸 아세테이트 (15 mL*2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인으로 세척하고, 무수 황산 나트륨을 이용해 건조하고, 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:1 ~ 1:1)로 정제하여 WX014-6을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.40 (br s, 1 H), 6.76 - 6.87 (m, 2 H), 5.46 (br d, J = 7.46 Hz, 1 H), 4.22 - 4.37 (m, 2 H), 2.88 - 3.03 (m, 1 H), 2.63 - 2.73 (m, 2 H), 1.42 (s, 9 H).
단계 6: 화합물 WX014-7의 합성
20℃에서 라웨슨 시약 (Lawsson's reagent) (77.70 mg, 192.12 μmol, 1.5 eq)을 톨루엔 (5 mL) 중 WX014-6 (40 mg, 128.08 μmol, 1 eq)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 12시간 동안 70℃에서 반응시켰다. 반응 용액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:1 ~ 1:1)로 정제하여 WX014-7을 얻었다. LCMS m/z = 273.1 [M-56+1]+.
단계 7: 화합물 WX014-8의 합성
HCl/EtOAc (4M, 2 mL)를 에틸 아세테이트 (3 mL) 중 WX014-7의 용액에 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 25℃에서 반응시켰다. 반응 용액을 감압 하에서 농축시켜 (물 펌프, 40℃) 조 생성물 WX014-8을 얻었다. LCMS m/z = 229.2 [M+1]+.
단계 8: 화합물 WX014의 합성
DIPEA (18.31 mg, 141.66 μmol, 24.67 μL, 2.5 eq) 및 T3P (54.09 mg, 84.99 μmol, 50.55 μL, 50% 순도, 1.5 eq)를 DMF (2 mL) 중 WX014-8 (15 mg, 56.66 μmol, 1 eq, HCl) 및 BB-1 (14.97 mg, 73.66 μmol, 1.3 eq)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 25℃에서 반응시켰다. 물 (5 mL) 및 에틸 아세테이트 (5 mL)를 반응 용액에 첨가했고, 층들이 분리되었다. 수성상을 에틸 아세테이트 (5 mL*2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인으로 세척하고, 무수 황산 나트륨을 이용해 건조하고, 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 분취 HPLC (칼럼: Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm; 이동상: [물 (0.05%HCl)-ACN]; 아세토니트릴%: 20%-50%, 12min)로 정제하여 WX014를 얻었다.
LCMS m/z = 414.2 [M+1]+.1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 7.21 - 7.37 (m, 5 H), 6.97 - 7.13 (m, 2 H), 4.71 (br d, J = 4.14 Hz, 1 H), 4.18 (br s, 2 H), 2.84 - 2.96 (m, 1 H), 2.64 - 2.83 (m, 2 H), 2.17 (td, J = 11.67, 7.78 Hz, 1 H).
실시예 15: WX015
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX015의 합성
N,N-디메틸포름아마이드 (10 mL)를 함유하는 둥근 바닥 플라스크에, BB-3 (20 mg, 96.02 μmol, 1.1 eq) 및 DIPEA (23.69 mg, 183.32 μmol, 31.93 μL, 2.1 eq)을 첨가했다. 용해 후, BB-14 (21.24 mg, 87.30 μmol, 1 eq) 및 T3P (55.55 mg, 87.30 μmol, 51.92 μL, 50% 순도, 1 eq)를 첨가했고, 이어서 혼합물을 12시간 동안 25℃에서 교반하면서 반응시켰다. LCMS는 원료가 근본적으로(basically) 소비되었음을 나타냈다. 반응 용액을 감압 하에서 농축하여 약 5 mL로 만들었다. HPLC (칼럼: Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; 아세토니트릴%: 35%-65%, 8min)를 정제를 위해 사용하여 생성물 WX015를 얻었다. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.78 (br d, J=7.5 Hz, 1H), 7.43 - 7.35 (m, 5H), 7.35 - 7.26 (m, 4H), 5.82 (s, 2H), 5.21 (td, J=6.9, 11.0 Hz, 1H), 4.71 (dd, J=6.5, 9.5 Hz, 1H), 4.33 - 4.21 (m, 1H), 3.87 (s, 3H); LCMS m/z = 395.1 [M+1]+.
실시예 16: WX016
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX016-2의 합성
둥근 바닥 플라스크에 DMSO (10 mL)를 첨가했고, 이어서 WX016-1 (1.31 g, 8.44 mmol, 1 eq), K2CO3 (1.40 g, 10.13 mmol, 1.2 eq) 및 벤질 브로마이드 (1.59 g, 9.29 mmol, 1.10 mL, 1.1 eq)를 천천히 첨가했다. 혼합물을 12시간 동안 25℃에서 연속적으로 교반했다. 반응이 완료된 후, 물 (50 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mLx2)로 2번 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인 (5 mLx2)으로 세척하고, 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 100:1~1:1)로 정제하여 WX016-2를 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.39 - 7.30 (m, 3H), 7.19 (dd, J=1.8, 7.6 Hz, 2H), 5.39 (s, 2H), 4.49 (q, J=7.1 Hz, 2H), 2.43 (s, 3H), 1.44 (t, J=7.1 Hz, 3H); LCMS m/z = 246.1 [M+1]+.
단계 2: 화합물 WX016-3의 합성
둥근 바닥 플라스크에 THF (7.5 mL) 및 H2O (2.5 mL)를 첨가했고, 이어서 WX016-2 (1 g, 4.08 mmol, 1 eq) 및 LiOH·H2O (513.26 mg, 12.23 mmol, 3 eq)를 천천히 첨가했다. 혼합물을 2시간 동안 25℃에서 교반하면서 반응시켰다. 반응 용액을 감압 하에서 농축시켰고, 2N 염산을 적가하여 pH를 산성으로 조절했다. 혼합물을 여과시켜 타겟 화합물 WX016-3인 여과 케이크를 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.42 - 7.28 (m, 3H), 7.25 - 7.19 (m, 2H), 5.40 (s, 2H), 2.56 (s, 3H); LCMS m/z = 217.9 [M+1]+.
단계 3: 화합물 WX016의 합성
둥근 바닥 플라스크에, N,N-디메틸포름아마이드 (1 mL), WX016-3 (80 mg, 368.28 μmol, 1 eq) 및 BB-4 (77.07 mg, 368.28 μmol, 1 eq)를 첨가했고, 이어서 T3P (351.54 mg, 552.43 μmol, 328.55 μL, 50% 순도, 1.5 eq) 및 DIPEA (142.79 mg, 1.10 mmol, 192.45 μL, 3 eq)를 첨가했다. 혼합물을 5시간 동안 25℃에서 연속적으로 교반했고, 이어서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 분취 HPLC (칼럼: Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; 아세토니트릴%: 35%-65%, 8min)로 정제하여 화합물 WX016을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.72 (br d, J=7.3 Hz, 1H), 8.37 (dd, J=1.4, 4.6 Hz, 1H), 7.56 (dd, J=1.3, 8.0 Hz, 1H), 7.38 - 7.27 (m, 4H), 7.18 (br d, J=6.0 Hz, 2H), 5.36 (s, 2H), 5.23 (td, J=6.8, 11.0 Hz, 1H), 4.78 (dd, J=6.5, 9.5 Hz, 1H), 4.32 (dd, J=9.8, 11.0 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 2.41 (s, 3H); LCMS m/z = 409.1 [M+1]+.
실시예 17: WX017
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX017-2의 합성
반응 플라스크에 25℃에서 리튬 알루미늄 하이드라이드 (lithium aluminum hydride) (629.99 mg, 16.60 mmol, 2 eq) 및 THF (5 mL)를 첨가했고, 이어서 THF (5 mL) 중 WX017-1 (1.08 g, 8.30 mmol, 1 eq)의 용액을 천천히 적가했다. 첨가가 완료된 후, 혼합물을 35℃로 가열하고, 1시간 동안 연속적으로 교반했다. 6 mL의 포화 수성 Na2SO4 용액을 가하여 반응을 퀀칭시켰다. 혼합물을 여과하고, 에틸 아세테이트 (10 mLХ3번)로 세척했다. 유기상들을 합하고, 무수 MgSO4-를 이용해 건조하고, 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1~5:1)로 정제하여 화합물 WX017-2를 얻었다. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 3.84 (s, 2H), 2.01 (d, J=2.5 Hz, 6H).
단계 2: 화합물 WX017-3의 합성
반응 플라스크에, WX017-2, DCM (10 mL), 및 피리딘 (1.40 g, 17.70 mmol, 1.43 mL, 4.11 eq)을 첨가했고, 이어서 p-톨루엔설포닐 클로라이드 (1.23 g, 6.46 mmol, 1.5 eq)를 천천히 첨가했다. 혼합물을 40℃로 가열하고 24시간 동안 반응시켰다. TLC (석유 에테르:에틸 아세테이트 =5:1) 모니터링에 의하면 새로운 스팟 (Rf=0.7)이 나타났다. 반응 용액을 감압 하에서 직접 농축시키고, 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1~30:1)로 정제하여 화합물 WX017-3을 얻었다. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.78 (d, J=8.3 Hz, 2H), 7.35 (d, J=8.0 Hz, 2H), 4.24 (s, 2H), 2.46 (s, 3H), 1.99 (d, J=2.3 Hz, 6H).
단계 3: 화합물 WX017-4의 합성
25℃에서 가지 모양의 보틀(eggplant-shaped bottle)에, 아세토니트릴 (10 mL), WX017-3 (500 mg, 1.85 mmol, 1.1 eq) 및 BB-8-1 (213.72 mg, 1.68 mmol, 1 eq)을 첨가했고, 이어서 K2CO3 (278.88 mg, 2.02 mmol, 1.2 eq)를 첨가했다. 혼합물을 70℃로 가열하고 48시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 농축시키고, 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 (용리액: 석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1~1:2)으로 정제하여 화합물 WX017-4를 얻었다. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.12 (s, 1H), 4.57 (s, 2H), 4.01 (s, 3H), 2.05 (d, J=2.5 Hz, 6H).
단계 4: 화합물 WX017-5의 합성
25℃에서 THF (2 mL)를 함유하는 둥근 바닥 플라스크에 WX017-4 (100 mg, 444.01 μmol, 1 eq)를 첨가했다. 용해 후, MeOH (1 mL) 중 LiOH·H2O (55.90 mg, 1.33 mmol, 3 eq)의 용액을 적가하고, 혼합물을 5시간 동안 25℃에서 반응시켰다. 혼합물을 감압 하에서 농축시키고 잔여물을 테트라하이드로퓨란 (5 mL) 중에 용해시켰다. 1N 희석 염산을 첨가해 pH를 4로 조정했고, 톨루엔 (5 mL)을 첨가했다. 혼합물을 잘 혼합했고, 이어서 용매가 건조되도록 감압 하에서 증발시켜 WX017-5의 조 생성물을 얻었고, 이는 정제 없이 다음 단계에서 바로 사용되었다.
단계 5: 화합물 WX017의 합성
25℃에서 반응 플라스크에, 에틸 아세테이트 (10 mL), WX017-5 (207 mg, 588.09 μmol, 1 eq), 및 BB-4 (143.52 mg, 588.09 μmol, 1 eq)를 첨가했다. 용해 후, T3P (1.12 g, 1.76 mmol, 1.05 mL, 50% 순도, 3 eq) 및 DIPEA (228.02 mg, 1.76 mmol, 307.30 μL, 3 eq)를 첨가하고, 혼합물을 8시간 동안 25℃에서 반응시켰다. 반응이 완료된 후, 에틸 아세테이트 (10 mL)를 첨가했다. 유기상을 물 (10 mLХ3번)로 세척하고, 이어서 포화 브라인 (10 mLХ1번)으로 세척하고, 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 분취 HPLC (칼럼: Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm; 이동상: [물 (0.05%NH3H2O)-ACN]; 아세토니트릴%: 35%-65%, 8min)로 정제하여 화합물 WX017을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.83 (br d, J=6.8 Hz, 1H), 8.37 (dd, J=1.4, 4.6 Hz, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.57 (dd, J=1.3, 8.0 Hz, 1H), 7.29 (dd, J=4.8, 8.0 Hz, 1H), 5.20 (td, J=6.7, 11.2 Hz, 1H), 4.80 (dd, J=6.4, 9.4 Hz, 1H), 4.54 (s, 2H), 4.33 (dd, J=9.8, 11.0 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 2.05 (d, J=2.3 Hz, 6H); LCMS m/z = 403.2 [M+1]+.
실시예 18: WX018
합성 경로:
화합물 WX018의 합성
N,N-디메틸포름아마이드 (10 mL)를 함유하는 둥근 바닥 플라스크에, BB-4 (200 mg, 955.71 μmol, 1.1 eq) 및 DIPEA (235.80 mg, 1.82 mmol, 317.80 μL, 2.1 eq)를 첨가했다. 용해 후, BB-14 (210.50 mg, 868.83 μmol, 1 eq) 및 T3P (552.89 mg, 868.83 μmol, 516.72 μL, 50% 순도, 1 eq)를 첨가했고, 이어서 혼합물을 12시간 동안 25℃에서 교반했다. 반응 용액을 감압 하에서 농축하여 약 5 mL로 만들었다. HPLC (칼럼: Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; 아세토니트릴%: 35%-65%, 8min)를 정제를 위해 사용하여 화합물 WX018을 얻었다.
1HNMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.86 (br d, J=6.8 Hz, 1H), 8.38 (dd, J=1.6, 4.6 Hz, 1H), 7.69 - 7.27 (m, 7H), 5.83 (s, 2H), 5.20 (td, J=6.7, 11.2 Hz, 1H), 4.78 (dd, J=6.3, 9.5 Hz, 1H), 4.33 (dd, J=9.7, 11.2 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H); LCMS m/z = 396.1 [M+1]+.
실시예 19: WX019
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX019의 합성
N,N-디메틸포름아마이드 (10 mL)를 함유하는 둥근 바닥 플라스크에, BB-15 (156.11mg, 745.97 μmol, 1.1 eq), BB-4 (150 mg, 678.16 μmol, 1 eq), T3P (431.55 mg, 678.16 μmol, 403.32 μL, 50% 순도, 1 eq), 및 DIPEA (184.06 mg, 1.42 mmol, 248.06 μL, 2.1 eq)를 첨가했고, 이어서 교반을 시작했다. 혼합물을 12시간 동안 25℃에서 교반하면서 반응시켰다. 반응이 완료된 후, 반응 용액을 감압 하에서 농축하여 약 5 mL로 만들었다. HPLC (칼럼: Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm; 이동상: [물 (0.225%FA)- ACN]; 아세토니트릴%: 35%-65%, 8min)를 정제를 위해 사용하여 생성물 WX019를 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.81 (br d, J=7.3 Hz, 1H), 8.37(dd, J=1.5, 4.8 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.56 (dd, J=1.5, 8.0 Hz, 1H), 7.41 - 7.27 (m, 3H), 7.21 - 7.06 (m, 2H), 5.45 (s, 2H), 5.20(td, J=6.7, 11.2 Hz, 1H), 4.78 (dd, J=6.5, 9.5 Hz, 1H), 4.31 (dd, J=9.5, 11.0 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H); 19F NMR (376MHz, CDCl3) δ= -109.59 ~ -130.05 (m, 1F); LCMS m/z = 413.1 [M+1]+.
실시예 20: WX020
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX020-2의 합성
아세토나이트릴 (15 mL)에 WX020-1 (3 g, 23.60 mmol, 1 eq), 2,6-디플루오로벤질 브로마이드 (5.37 g, 25.96 mmol, 1.1 eq), 및 K2CO3 (3.91 g, 28.32 mmol, 1.2 eq)을 첨가하고, 이어서 교반을 시작했다. 혼합물을 12 시간 동안 50 ℃에서 반응시켰다. TLC 모니터링에 의할 때 반응이 완료된 후, 반응 용액을 여과하여 K2CO3을 제거하고, 여과 케이크를 에틸 아세테이트 (15 mL)로 3번 세척하였다. 포화 브라인 (50 mL)을 여과액에 첨가하고, 이어서 추출 후 유기상을 수득했다. 수성상을 EA (30 mL)로 다시 추출했다. 유기상들을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 (용리액: 석유 에테르:에틸 아세테이트 = 100:1~100:100)로 정제하여 화합물 WX020-2을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.17 (s, 1H), 7.46 - 7.33 (m, 1H), 7.04- 6.91 (m, 2H), 5.51 (s, 2H), 4.13 - 3.85 (m, 3H).
단계 2: 화합물 WX020-3의 합성
THF (30 mL)를 함유하는 둥근 바닥 플라스크에 WX020-2 (1 g, 3.95 mmol, 1 eq)을 첨가했다. 용해 후, H2O (5 mL) 중 LiOH·H2O (331.43 mg, 7.90 mmol, 2 eq)의 용액을 첨가하고, 혼합물을 2 시간 동안 20 ℃에서 교반하면서 반응시켰다. 1M 희석된 염산을 이용하여 반응 용액을 6의 pH를 갖도록 조절하고, 이어서 혼합물을 감압 하에서 농축하여 용매를 제거하여 조 생성물 WX020-3을 얻었다;
LCMS m/z = 239.9 [M+1]+.
단계 3: 화합물 WX020의 합성
N,N-디메틸포름아마이드 (10 mL)를 함유하는 둥근 바닥 플라스크에, BB-4 (192.49 mg, 919.82 μmol, 1.1 eq), WX020-3 (200 mg, 836.20 μmol, 1 eq), T3P(532.12 mg, 836.20 μmol, 497.31 μL, 50% 순도, 1 eq), 및 DIPEA (226.95 mg, 1.76 mmol, 305.86 μL, 2.1 eq)을 첨가하고, 혼합물을 12 시간 동안 25 ℃에서 교반하면서 반응시켰다. 반응 용액을 감압 하에서 농축시켜 약 5 mL로 만들었고, 잔여물을 분취 (preparative) HPLC (칼럼: Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; 아세토나이트릴%: 35%-65%, 8분)로 정제하여 화합물 WX020을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.79 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 8.36 (dd, J=1.5, 4.8 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.55 (dd, J=1.5, 8.0 Hz, 1H), 7.43 - 7.26 (m, 2H), 6.97 (t, J=7.9 Hz, 2H), 5.49 (s, 2H), 5.19 (td, J=6.7, 11.1 Hz, 1H), 4.77 (dd, J=6.3, 9.5 Hz, 1H), 4.30 (dd, J=9.7, 10.9 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H); 19F NMR (376MHz, CDCl3) δ = -104.74 ~ -120.36 (m, 1F); LCMS m/z =431.1 [M+1]+.
실시예 21: WX021
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX021-1의 합성
DCM (20 mL)를 함유하는 둥근 바닥 플라스크에 BB-3-4 (2 g, 6.73mmol, 1 eq)를 첨가하고, 혼합물을 40 ℃에서 교반했다. NCS (988.11 mg, 7.40 mmol, 1.1 eq)을 천천히 첨가하고, 이어서 반응물을 5 시간 동안 40 ℃에서 천천히 교반했다. 반응 용액을 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 (용리액: DCM:MeOH=100:1~100:10)로 정제하여 화합물 WX021-1을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CD3OD) δ= 7.54 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.34 (d, J=1.8 Hz, 1H), 6.95 - 6.77 (m, 1H), 5.49 (s, 2H), 4.70 - 4.60 (m, 2H), 4.53 (br dd, J=4.3, 9.5 Hz, 1H), 4.39 - 4.26 (m, 1H), 1.46 (s, 9H). LCMS m/z = 331.9 [M+1]+.
단계 2: 화합물 WX021-2의 합성
DCM (10 mL)를 함유하는 둥근 바닥 플라스크에 WX021-1 (1.60 g, 4.82 mmol, 1 eq), T3P (6.14 g, 9.65 mmol, 5.74 mL, 50% 순도, 2 eq), 및 DIPEA (1.87 g, 14.47 mmol, 2.52 mL, 3 eq)를 첨가하고, 혼합물을 3 시간 동안 20 ℃에서 반응시켰다. 반응 용액을 포화 브라인 (300 mL)에 부었고, 층들이 분리되어 유기상을 얻었다. 수성상을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 2번 추출했다. 유기상들을 합하고 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:20~100:100)로 정제하여 화합물 WX021-2을 얻었다.
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ= 8.22 (br s, 1H), 8.04 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.41(d, J=2.3 Hz, 1H), 5.59 (br s, 1H), 4.71 - 4.46 (m, 2H), 4.23 - 4.05 (m, 1H), 1.46 (s, 9H); LCMS m/z = 257.8 [M-56+1]+.
단계 3: 화합물 WX021-3의 합성
N,N-디메틸아세트아마이드 (10 mL)를 함유하는 둥근 바닥 플라스크에 WX021-2 (200 mg, 637.48 μmol, 1 eq), 아이오도메탄 (1.17 g, 8.24 mmol, 513.16 μL, 12.93 eq), 및 탄산 세슘 (415.41 mg, 1.27 mmol, 2 eq)를 첨가했다. 혼합물을 1 시간 동안 질소 하에서 25 ℃에서 교반하면서 반응시켰다. 반응의 완료 후, 반응 용액을 포화 브라인 (20 mL)에 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (15 mL)로 3번 추출했다. 유기상들을 합하고 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 에틸 아세테이트 (2 mL) 중에 용해시키고, 분취 TLC (석유 에테르:에틸 아세테이트=3:1)로 정제하여 생성물 WX021-3 을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.23 (d, J=2.3 Hz, 1H), 7.47 (d, J=2.0 Hz, 1H), 5.55 (br s, 1H), 4.82 - 4.49 (m, 2H), 4.35 - 4.14 (m, 1H), 3.47 (s, 3H), 1.41 (s, 9H).
단계 4: 화합물 WX021-4의 합성
톨루엔 (10 mL)를 함유하는 둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 WX021-3 (177 mg, 540.02 μmol, 1 eq) 및 라웨슨 시약 (Lawsson's reagent) (327.63 mg, 810.04 μmol, 1.5 eq)을 첨가하고, 혼합물을 110 ℃로 천천히 가열하고, 12 시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 포화 브라인 (100 mL)에 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mL)로 3번 추출했다. 유기상들을 합하고 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 분취 TLC (석유 에테르:에틸 아세테이트 =3:1)로 정제하여 화합물 WX021-4을 얻었다.
LCMS m/z = 287.8 [M-56+1]+.
단계 5: 화합물 WX021-5의 합성
디클로로메탄 (5 mL)을 함유하는 둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 WX021-4 (35 mg, 101.80 μmol, 1 eq)를 첨가했다. 트리플루오로아세트산 (174.10 mg, 1.53 mmol, 113.06 μL, 15 eq)을 교반하면서 적가했고, 혼합물을 2 시간 동안 연속적으로 반응시켰다. 반응 용액을 건조되도록 감압 하에서 증발시켜 WX021-5의 조 생성물을 얻었고, 이는 다음 단계에서 바로 사용되었다.
단계 6: 화합물 WX021의 합성
N,N-디메틸아세트아마이드 (5 mL)를 함유하는 둥근 바닥 플라스크에 WX021-5 (20 mg, 82.06 μmol, 1 eq), BB-8 (16.68 mg, 82.06 μmol, 1 eq), T3P (52.22 mg, 82.06 μmol, 48.81 μL, 50% 순도, 1 eq), 및 DIPEA (22.27 mg, 172.33 μmol, 30.02 μL, 2.1 eq)을 첨가하고, 혼합물을 5 시간 동안 25 ℃에서 반응시켰다. 포화 브라인 (30 mL)을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mLХ3)로 추출했다. 유기상을 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 HPLC (포름산 시스템) (칼럼: Xtimate C18 100*30mm*3μm; 이동상 [물 (0.225%FA)-ACN]; 아세토나이트릴%: 40%-70%, 8분)로 정제하여 화합물 WX021을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.77 (br d, J=7.3 Hz, 1H), 8.32 (d, J=2.3 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.57 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.44 - 7.34 (m, 3H), 7.32 - 7.27 (m, 2H), 5.40 (s, 2H), 5.26 - 5.16 (m, 1H), 4.77 (dd, J=6.3, 9.5 Hz, 1H), 4.39 - 4.27 (m, 1H), 3.90 (s, 3H); LCMS m/z = 429.0 [M+1]+.
실시예 22: WX022
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX022의 합성
N,N-디메틸아세트아마이드 (5 mL)에 WX021-5 (20 mg, 82.06 μmol, 1 eq), BB-15 (18.15 mg, 82.06 μmol, 1 eq), T3P (52.22 mg, 82.06 μmol, 48.81 μL, 50% 순도, 1 eq), 및 DIPEA (22.27 mg, 172.33 μmol, 30.02 μL, 2.1 eq)을 첨가하고, 혼합물을 5 시간 동안 25 ℃에서 반응시켰다. 30 mL의 포화 브라인을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mLХ3)로 추출하여 유기상을 얻었다. 유기상을 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 분취 HPLC (칼럼: Xtimate C18 100*30mm*3μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; 아세토나이트릴%: 42%-72%, 8분)로 정제하여 화합물 WX022을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.77 (br d, J=6.5 Hz, 1H), 8.32 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.57 (d, J=2.3 Hz, 1H), 7.41 - 7.31 (m, 2H), 7.20 - 7.07 (m, 2H), 5.45 (s, 2H), 5.30 - 5.08 (m, 1H), 4.76 (dd, J=6.3, 9.5 Hz, 1H), 4.32 (t, J=10.3 Hz, 1H), 3.93 - 3.87 (m, 1H); 19F NMR (376MHz, CDCl3) δ= -110.66 ~ -127.90 (m, 1F); LCMS m/z = 447.1[M+1]+.
실시예 23: WX023
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX023-1의 합성
BB-4-3 (3.00 g, 10.09 mmol, 1 eq) 및 N-브로모숙신이미드 (1.98 g, 11.10 mmol, 1.1eq)을 25 ℃에서 DCM (30 mL)에 천천히 첨가했고, 반응 용액을 12 시간 동안 질소 하에서 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 물 (100 mL)에 천천히 부었고, 혼합물을 디클로로메탄 (100 mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 물 (100 mL) 및 포화 브라인 (100 mL)으로 잇따라 세척하여 유기상을 얻었다. 유기상을 감압 하에서 농축하였다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (디클로로메탄:메탄올 = 100:1~100:5)로 정제하여 화합물 WX023-1을 얻었다.
단계 2: 화합물 WX023-2의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 에틸 아세테이트 (100 mL)를 첨가했다. 이어서 WX023-1 (5.60 g, 14.89 mmol, 1 eq), T3P (14.21 g, 22.33 mmol, 13.28 mL, 50% 순도, 1.5eq) 및 DIPEA (3.85 g, 29.77 mmol, 5.19 mL, 2 eq)을 천천히 첨가했다. 반응 용액을 1 시간 동안 질소 하에서 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 물 (200 mL)에 천천히 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 물 (200 mL) 및 포화 브라인 (200 mL)으로 잇따라 세척하여 유기상을 얻었다. 유기상을 감압 하에서 농축하였다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 =100:1~1:1)로 정제하여 화합물 WX023-2을 얻었다.
단계 3: 화합물 WX023-3의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 N,N-디메틸포름아마이드 (10 mL)을 첨가했다. 이어서 WX023-2 (1.80 g, 5.03 mmol, 1 eq), 아이오도메탄 (5.71 g, 40.23 mmol, 2.50 mL, 8.01 eq) 및 탄산 세슘 (3.60g, 11.06 mmol, 2.2 eq)을 천천히 첨가했다. 반응 용액을 1 시간 동안 질소 하에서 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 물 (100 mL)에 천천히 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고 물 (100 mL) 및 포화 브라인 (100 mL)로 잇따라 세척했다. 유기상을 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1~3:1)로 정제하여 화합물 WX023-3을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.32 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.61 (d, J=2.3 Hz, 1H), 5.55 (brd, J=4.8 Hz, 1H), 4.79 - 4.44 (m, 2H), 4.34 - 4.11 (m, 1H), 3.46 (s, 3H), 1.40 (s, 9H).
단계 4: 화합물 WX023-4의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 톨루엔 (50 mL)을 첨가하고, 이어서 WX023-3 (1.35 g, 3.63 mmol, 1 eq) 및 라웨슨 시약 (2.20 g, 5.44 mmol, 1.5eq)을 천천히 첨가했다. 반응 용액을 11 시간 동안 질소 하에서 110 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 물 (100 mL)에 천천히 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 물 (100 mL) 및 포화 브라인 (100 mL)으로 잇따라 세척했다. 유기상을 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1~1:1)로 정제하여 화합물 WX023-4을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.38 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.65 (d, J=2.3 Hz, 1H), 6.10 (br d, J=7.3 Hz, 1H), 4.81 - 4.67 (m, 1H), 4.58 (dd, J=6.1, 9.4 Hz, 1H), 4.23 (dd, J=9.5, 11.3 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 1.41 (s, 9H).
단계 5: 화합물 WX023-5의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 디클로로메탄 (40 mL)을 첨가하고, 이어서 WX023-4 (980 mg, 2.52 mmol, 1 eq) 및 트리플루오로아세트산 (6.16 g, 54.02 mmol, 4, 21.40eq)을 천천히 첨가했다. 반응 용액을 11 시간 동안 질소 하에서 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 포화 수성 중탄산나트륨 용액 (100 mL)에 천천히 붓고, 혼합물을 디클로로메탄 (100 mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 물 (100 mL) 및 포화 브라인 (100 mL)으로 잇따라 세척했다. 유기상을 감압 하에서 농축하여 조 화합물 WX023-5을 얻었고, 이는 정제 없이 다음 단계에서 바로 사용되었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.32 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.59 (d, J=2.3 Hz, 1H), 4.40 (dd, J=6.3, 10.0 Hz, 1H), 4.10 (t, J=10.8 Hz, 1H), 3.88 - 3.71 (m, 4H).
단계 6: 화합물 WX023의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 N,N-디메틸아세트아마이드 (5 mL)을 첨가했다. 이어서 WX023-5 (288 mg, 999.43 μmol, 1 eq), T3P (954.00 mg, 1.50 mmol, 891.59 μL, 50% 순도, 1.5 eq), BB-8 (406.16 mg, 2.00 mmol, 2 eq) 및 DIPEA (387.50 mg, 3.00 mmol, 522.24 μL, 3 eq)을 천천히 첨가했다. 반응 용액을 2 시간 동안 질소 하에서 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 물 (100 mL)에 천천히 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 물 (100 mL) 및 포화 브라인 (100 mL)으로 잇따라 세척했다. 유기상을 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 분취 HPLC (칼럼: Xtimate C18 100*30mm*3μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; 아세토나이트릴%: 42%-72%, 8분) 로 정제하여 화합물 WX023을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.77 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 8.42 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.71 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.45 - 7.33 (m, 3H), 7.33 - 7.27 (m, 2H), 5.40 (s, 2H), 5.21 (td, J=6.7, 11.3 Hz, 1H), 4.77 (dd, J=6.3, 9.5 Hz, 1H), 4.33 (dd, J=9.8, 11.0 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H); LCMS m/z =475.0 [M+1]+.
실시예 24: WX024
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX024-2의 합성
둥근 바닥 플라스크에 THF (100 mL)을 첨가했다. 이어서 WX024-1 (10 g, 50.22 mmol, 1 eq), BB-3-2 (11.34 g, 55.24 mmol, 1.1 eq) 및 탄산 세슘 (29.45 g, 90.39 mmol, 1.8 eq)을 천천히 첨가했다. 혼합물을 16 시간 동안 65 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 물 (300 mL)에 붓고, 2 M 희석된 염산을 이어서 적가하여 pH를 3으로 조절했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (500 mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인 (50 mLХ2)로 추출했다. 유기상을 감압 하에서 농축하여 화합물 WX024-2을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.46 (d, J=1.8 Hz, 1H), 8.20 (dd, J=2.0, 8.8 Hz, 1H), 7.12 (d, J=8.8 Hz, 1H), 5.62 (br d, J=8.0 Hz, 1H), 4.83 - 4.61 (m, 2H), 4.45 (dd, J=3.0, 9.3 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 1.45 (s, 10H).
단계 2: 화합물 WX024-3의 합성
수소화 병 (hydrogenation bottle)에, MeOH (300 mL)을 첨가했다. WX024-2 (25.8 g, 67.13 mmol, 1 eq) 및 Pd/C (2.6 g, 26.02 mmol, 10% 순도)을 이어서 천천히 첨가했다. 대기를 아르곤 기체로 3번 교체했고, 혼합물을 24 시간 동안 H2 (40 Psi) 분위기 하에서 30 ℃에서 연속적으로 교반했다. 새로운 스팟이 TLC (석유 에테르:에틸 아세테이트:아세트산 =1:1:0.1) 모니터링에 의할 때 나타났다. 반응 용액을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 WX024-3을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.50 - 7.44 (m, 1H), 7.39 (br s, 1H), 6.70 (d, J=8.5 Hz, 1H), 6.53 (br s, 2H), 6.00 (br d, J=7.5 Hz, 1H), 4.73 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 4.43 (br d, J=8.5 Hz, 1H), 4.31 - 4.24 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 1.41 (s, 9H).
단계 3: 화합물 WX024-4의 합성
둥근 바닥 플라스크에 에틸 아세테이트 (200 mL)를 첨가했다. WX024-3, T3P (33.67 g, 52.91 mmol, 31.47 mL, 50% 순도, 1.5 eq), 및 DIEA (13.68 g, 105.83 mmol, 18.43 mL, 3 eq)을 이어서 천천히 첨가하고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 물 (200 mL)로 추출했고, 층들이 분리되었다. 유기상을 에틸 아세테이트 (200 mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인 (100 mLХ2)으로 세척하고, 감압 하에서 농축하여. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1~1:1)로 정제하여 화합물 WX024-4을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.15 (br s, 1H), 7.80 (dd, J=2.0, 8.5 Hz, 1H), 7.73 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.13 (d, J=8.3 Hz, 1H), 5.62 (br d, J=5.3 Hz, 1H), 4.71 - 4.59 (m, 2H), 4.33 - 4.23 (m, 1H), 3.95 - 3.89 (m, 3H), 1.43 (s, 9H).
단계 4: 화합물 WX024-5의 합성
둥근 바닥 플라스크에 N,N-디메틸포름아마이드 (200 mL)을 첨가했다. WX024-4 (17 g, 50.54 mmol, 1 eq), 탄산 세슘 (49.40 g, 151.63 mmol, 3 eq) 및 아이오도메탄 (21.52 g, 151.63 mmol, 9.44 mL, 3 eq)을 이어서 천천히 첨가하고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 물 (300 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (300mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인 (100 mLХ2)로 세척하고, 감압 하에서 농축하였다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1~1:1)로 정제하여 화합물 WX024-5을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 7.92 - 7.83 (m, 2H), 7.18 (d, J=8.4 Hz, 1H), 5.50 (br d, J=6.1 Hz, 1H), 4.72 - 4.52 (m, 2H), 4.28 - 4.17 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.42 (s, 3H), 1.38 (s, 9H).
단계 5: 화합물 WX024-6의 합성
둥근 바닥 플라스크에 톨루엔 (40 mL)을 첨가했다. WX024-5 (4.01 g, 11.45 mmol, 1 eq), 라웨슨 시약 (5.09 g, 12.59 mmol, 1.1 eq) 및 Boc2O (10.60 g, 48.55 mmol, 11.15 mL, 4.24 eq)을 이어서 천천히 첨가했다. 혼합물을 110 ℃로 가열하고, 12 시간 동안 교반했다. 반응 용액을 포화 브라인 (30 mL)에 천천히 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (100mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인 (30 mLХ2)로 세척하고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1~1:1)로 정제하여 화합물 WX024-6을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 7.99 - 7.92 (m, 2H), 7.21 (d, J=8.3 Hz, 1H), 6.02 (br d, J=7.8 Hz, 1H), 4.80 - 4.69 (m, 1H), 4.53 (dd, J=6.3, 9.5 Hz, 1H), 4.22 (dd, J=9.5, 11.3 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 1.46 - 1.33 (m, 9H).
단계 6: 화합물 WX024-7의 합성
둥근 바닥 플라스크에 에틸 아세테이트 (10 mL)을 첨가했다. WX024-6 (500 mg, 1.36 mmol, 1 eq) 및 HCl/에틸 아세테이트 (4 M, 10 mL, 29.31 eq)을 이어서 천천히 첨가했고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 감압 하에서 농축하여 화합물 WX024-7을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.04 - 7.89 (m, 2H), 7.28 (br s, 1H), 4.93 (br s, 1H), 4.63 (br s, 1H), 4.44 (br s, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.88 - 3.85 (m, 1H), 3.81 (s, 3H).
단계 7: 화합물 WX024-8의 합성
둥근 바닥 플라스크에 N,N-디메틸포름아마이드 (5 mL)을 첨가했다. WX024-7 (245 mg, 809.18 μmol, 1 eq, HCl), BB-8 (164.42 mg, 809.18 μmol, 1 eq), HATU (461.51 mg, 1.21 mmol, 1.5 eq) 및 DIPEA (313.74 mg, 2.43 mmol, 422.83 μL, 3 eq)을 이어서 천천히 첨가하고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 물 (20 mL)에 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인 (5 mLХ2)로 세척하고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1~1:100)로 정제하여 화합물 WX024-8을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.70 (br d, J=7.3 Hz, 1H), 8.02 - 7.94 (m, 3H), 7.42 - 7.34 (m, 3H), 7.31 - 7.28 (m, 2H), 5.39 (s, 2H), 5.20 (td, J=6.8, 11.0 Hz, 1H), 4.72 (dd, J=6.5, 9.4 Hz, 1H), 4.31 (t, J=10.3 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.89 (s, 3H).
단계 8: 화합물 WX024의 합성
둥근 바닥 플라스크에 THF (4 mL) 및 H2O (1 mL)을 첨가했다. WX024-8 (50 mg, 110.74 μmol, 1 eq) 및 LiOH·H2O (4.65 mg, 110.74 μmol, 12.79 μL, 1 eq)을 이어서 천천히 첨가하고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini-NX 80*40mm*3μm; 이동상: [물 (0.05% NH3·H2O + 10mM NH4HCO3) -ACN]; 아세토나이트릴%:11%-31%, 8분)로 분리하여 화합물 WX024을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.78 (br s, 1H), 8.18 - 7.82 (m, 3H), 7.36 (br s, 5H), 5.64 - 5.32 (m, 2H), 5.26 (br s, 1H), 4.72 (br s, 1H), 4.32 (br s, 1H), 3.86 (br s, 3H); LCMS m/z = 438.1 [M+1]+.
실시예 25: WX025
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX025-2의 합성
NaH (2.78 g, 69.38 mmol, 60% 순도, 2.2 eq)을, 질소 하에서 0 ℃에서 N,N-디메틸포름아마이드 (80 mL) 중 BB-3-2 (7.12 g, 34.69 mmol, 1.1 eq)의 용액에 첨가했고, 혼합물을 2 시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 얼음-물 욕 내에 위치시키고, WX025-1 (5 g, 31.54 mmol, 1 eq)을 상기 용액에 첨가했다. 반응 용액을 25 ℃로 가열하고, 12 시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 얼음 물 (100 mL)에 천천히 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (150 mLХ2)로 추출했다. 수성 상을 1 M HCl를 이용해 5~6의 pH를 갖도록 조절하고, 에틸 아세테이트 (150 mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 WX025-2을 얻었다.
LCMS m/z = 328.1 [M+1]+.
단계 2: 화합물 WX025-3의 합성
Pd/C (3 g, 5% 순도)을 에틸 아세테이트 (60 mL) 및 메탄올 (30 mL) 중 WX025-2 (9 g, 27.50 mmol, 1 eq)의 용액에 첨가했다. 분위기를 H2로 3번 교체했고, 혼합물을 12 시간 동안 H2 (15 Psi) 분위기 하에서 25 ℃에서 반응시켰다. 반응 용액을 셀라이트로 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 WX025-3을 얻었다.
LCMS m/z = 298.1 [M+1]+.
단계 3: 화합물 WX025-4의 합성
T3P (20.87 g, 32.79 mmol, 19.50 mL, 50% 순도, 1.5 eq)을 N,N-디메틸포름아마이드 (200 mL) 중 DIPEA (7.06 g, 54.66 mmol, 9.52 mL, 2.5 eq) 및 WX025-3 (6.5 g, 21.86 mmol, 1 eq)의 용액에 첨가했고, 혼합물을 3 시간 동안 25 ℃에서 반응시켰다. 물 (200 mL)을 얼음 욕 내 반응 용액에 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (200mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트= 10:1~1:2)로 정제하여 화합물 WX025-4을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.37 (br s, 1 H), 8.20 - 8.31 (m, 2 H), 6.97 (d, J = 5.70 Hz, 1 H), 5.69 (br d, J = 4.38 Hz, 1 H), 4.54 - 4.71 (m, 2 H), 4.22 - 4.35 (m, 1 H), 1.45 - 1.52 (m, 9 H); LCMS m/z = 280.1[M+1]+.
단계 4: 화합물 WX025-5의 합성
아이오도메탄 (384.21 mg, 2.71 mmol, 168.51 μL, 1.05 eq)을 테트라하이드로퓨란 (14 mL) 중 WX025-4 (0.72 g, 2.58 mmol, 1 eq) 및 탄산 세슘 (1.01 g, 3.09 mmol, 1.2 eq)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 12 시간 동안 20 ℃에서 반응시켰다. 물 (25 mL) 및 에틸 아세테이트 (25 mL)을 반응 용액에 첨가했고, 층들이 분리되었다. 유기상을 에틸 아세테이트 (25 mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (디클로로메탄:메탄올 = 10:0~10:1)로 정제하여 화합물 WX025-5을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.50 (s, 1 H), 8.39 (d, J = 5.27 Hz, 1 H), 7.06 (d, J = 5.40 Hz, 1 H), 5.54 (br d, J = 6.02 Hz, 1 H), 4.56 - 4.73 (m, 2 H), 4.25 - 4.37 (m, 1 H), 3.47 (s, 3 H), 1.41 (s, 9 H); LCMS m/z = 294.1 [M+1]+.
단계 5: 화합물 WX025-6의 합성
라웨슨 시약 (110.32 mg, 272.74 μmol, 0.8 eq)을 20 ℃에서 톨루엔 (2 mL) 중 WX025-5 (0.1 g, 340.93 μmol, 1 eq)의 용액에 첨가했고, 혼합물을 12 시간 동안 90 ℃에서 반응시켰다. 에틸 아세테이트 (5 mL)을 반응 용액에 첨가했다. 혼합물을 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트= 10:1~1:2)로 정제하여 화합물 WX025-6을 얻었다.
LCMS m/z = 310.1 [M+1]+.
단계 6: 화합물 WX025-7의 합성
HCl/에틸 아세테이트 (3 mL)을 에틸 아세테이트 (3 mL) 중 WX025-6 (53 mg, 171.31 μmol, 1 eq)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 반응시켰다. 반응 용액을 감압 하에서 농축하여 화합물 WX025-7을 얻었다.
LCMS m/z = 210.1 [M+1]+.
단계 7: 화합물 WX025의 합성
DIPEA (77.82 mg, 602.10 μmol, 104.87 μL, 3 eq) 및 T3P (127.72 mg, 401.40 μmol, 119.36 μL, 2 eq)을 N,N-디메틸포름아마이드 (3 mL) 중 WX025-7 (42 mg, 200.70 μmol, 1 eq) 및 BB-8 (61.17 mg, 301.05 μmol, 1.5 eq)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 반응시켰다. 물 (5 mL) 및 에틸 아세테이트 (5 mL)을 반응 용액에 첨가했고, 층들이 분리되었다. 유기상을 에틸 아세테이트 (5 mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과했다. 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 분취 HPLC (칼럼: Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm; 이동상: [물 (0.05%HCl)-ACN]; 아세토나이트릴%: 20%-50%, 12min)로 분리하여 화합물 WX025을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 8.83 (d, J = 8.16 Hz, 2 H), 8.64 - 8.65 (m, 1 H), 8.67 (d, J = 7.72 Hz, 1 H), 8.54 (d, J = 5.28 Hz, 1 H), 7.26 - 7.42 (m, 6 H), 5.49 (s, 2 H), 5.04 (dt, J = 11.24, 6.84 Hz, 1 H), 4.44 - 4.64 (m, 2 H), 3.83 (s, 3 H); LCMS m/z = 395.2 [M+1]+.
실시예 26: WX026
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX026-2의 합성
N,N-디메틸포름아마이드 (10 mL) 중 WX026-1 (1 g, 4.63 mmol, 1 eq) 및 페놀 (871.27 mg, 9.26 mmol, 814.27 μL, 2 eq)의 용액에, 탄산칼륨 (1.28 g, 9.26 mmol, 2 eq), 브롬화제일구리 (cuprous bromide) (66.40 mg, 462.89 μmol, 14.10 μL, 0.1 eq), 및 아세틸아세톤 (23.17 mg, 231.45 μmol, 23.77 μL, 0.05 eq)을 첨가했고, 혼합물을 또다른 10 시간 동안 90 ℃에서 교반했다. 물 (100 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mLХ3)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 무수 황산나트륨을 이용해 건조하고 여과했고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 WX026-2을 얻었다.
LCMS m/z = 230.2 [M+1]+.
단계 2: 화합물 WX026-3의 합성
테트라하이드로퓨란 (5 mL) 중 WX026-2 (0.45 g, 1.96 mmol, 1 eq)의 용액에 물 (1 mL) 중 LiOH·H2O (164.76 mg, 3.93 mmol, 2 eq)의 용액에 첨가했고, 혼합물을 1 시간 동안 18 ℃에서 교반했다. 에틸 아세테이트 (20 mL)를 반응 용액에 첨가했고, 혼합물을 2 N 염산을 이용해 2의 pH를 갖도록 조절했다. 유기상을 무수 황산나트륨을 이용해 건조하고, 여과하고, 감압 하에서 농축하여 화합물 WX026-3을 얻었다.
LCMS m/z = 216.1 [M+1]+.
단계 3: 화합물 WX026의 합성
N,N-디메틸포름아마이드 (2 mL) 중 BB-4 (0.3 g, 679.40 μmol, 1 eq)의 용액에, 18 ℃에서 WX026-3 (153.52 mg, 713.37 μmol, 1.05 eq), DIPEA (263.42 mg, 2.04 mmol, 355.01 μL, 3 eq), 및 T3P (648.52 mg, 1.02 mmol, 606.09 μL, 50% 순도, 1.5 eq)을 첨가했고, 혼합물을 1 시간 동안 교반했다. 반응 용액을 HPLC (칼럼: Phenomenex Luna C18 150mm*30mm*5μm; 이동상: [물 (0.05%HCl)-ACN]; 아세토나이트릴%: 20%-50%, 12분)로 정제하여 화합물 WX026을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.84 (s, 1H), 8.60 (d, J = 7.89 Hz, 1H), 8.36 (dd, J = 1.32, 4.82 Hz, 1H), 7.70 (dd, J = 1.53, 8.11 Hz, 1H), 7.25-7.46 (m, 5H), 5.49 (s, 2H), 4.85 (td, J = 7.67, 11.40 Hz, 1H), 4.63-4.75 (m, 1H), 4.51 (dd, J = 7.45, 9.65 Hz, 1H), 4.03 (br s, 3H); LCMS m/z = 407.1 [M+1]+.
실시예 27: WX027
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX027의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 N,N-디메틸아세트아마이드 (5 mL)를 첨가했다. BB-4 (20 mg, 45.29 μmol, 1 eq), T3P (43.23 mg, 67.94 μmol, 40.41 μL, 50% 순도, 1.5 eq), BB-16 (15.85 mg, 67.94 μmol, 1.5 eq) 및 DIPEA (17.56 mg, 135.88 μmol, 23.67 μL, 3 eq)을 천천히 첨가하고, 반응 용액을 2 시간 동안 질소 하에서 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 물 (100 mL)에 천천히 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mLХ 2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 물 (100 mL) 및 포화 브라인 (100 mL)으로 잇따라 세척했고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 분취 HPLC (칼럼: Xtimate C18 100*30mm*3μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; 아세토나이트릴%: 42%-72%, 8분)로 분리하여 화합물 WX027을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.78 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 8.47 - 8.25 (m, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.60 - 7.50 (m, 1H), 7.35 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.32 - 7.26 (m, 2H), 6.96 (t, J=7.4 Hz, 1H), 6.91 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.38 (s, 2H), 5.20 (td, J=6.7, 11.4 Hz, 1H), 4.77 (dd, J=6.3, 9.5 Hz, 1H), 4.38 - 4.23 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.84 (s, 3H); LCMS m/z =425.1 [M+1]+.
실시예 28: WX028
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX028-2의 합성
둥근 바닥 플라스크에 MeCN (80 mL)을 첨가하고, WX028-1 (4 g, 17.63 mmol, 1 eq)을 이어서 천천히 첨가했다. 용해 후, 2-(2-브로모에톡시)테트라하이드로피란 (2-(2-bromoethoxy)tetrahydropyran) (4.42 g, 21.16 mmol, 3.21 mL, 1.2 eq) 및 DIPEA (2.51 g, 19.40 mmol, 3.38 mL, 1.1 eq)을 첨가하고, 혼합물을 90 ℃로 가열하고, 3 시간 동안 연속적으로 교반했다. 물 (100 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (100mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인 (30 mLХ2)로 세척하고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1~1:1)로 정제하여 화합물 WX028-2을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 4.55 (br s, 1H), 4.34 (t, J=5.3 Hz, 2H), 4.12 - 4.06 (m, 1H), 3.79 (td, J=5.4, 10.8 Hz, 1H), 3.64 - 3.53 (m, 1H), 3.50 - 3.41 (m, 1H), 1.76 - 1.58 (m, 2H), 1.57 - 1.43 (m, 4H).
단계 2: 화합물 WX028-3의 합성
둥근 바닥 플라스크에 THF (50 mL)를 첨가하고, WX028-2 (4.99 g, 14.06 mmol, 1 eq)을 이어서 천천히 첨가했다. 혼합물을 -78 ℃로 냉각시키고, n-부틸리튬 (n-butyllithium) (2.5 M, 6.75 mL, 1.2 eq)을 첨가했다. 혼합물을 1 시간 동안 교반하고, 벤질알데히드 (2.98 g, 28.11 mmol, 2.84 mL, 2 eq)를 천천히 첨가했다. 혼합물을 0.5 시간 동안 -78 ℃에서 교반하고, 이어서 -50 ℃로 가열하고 또다른 0.5 시간 동안 교반했다. 반응의 완료 후, 반응 용액을 포화 염화 암모늄 (200 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)의 혼합 용액에 부었고, 층들이 분리되었다. 수성상을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인 (50 mLХ2)로 세척하고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1~1:1)로 정제하여 화합물 WX028-3을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 7.45 - 7.29 (m, 5H), 6.09 (d, J=5.8 Hz, 1H), 4.51 (br s, 1H), 4.34 (ddq, J=3.5, 5.5, 7.2 Hz, 1H), 4.26 - 4.15 (m, 1H), 4.07 - 3.97 (m, 1H), 3.78 - 3.56 (m, 2H), 3.47 (dt, J=5.9, 10.7 Hz, 1H), 1.85 - 1.64 (m, 2H), 1.52 (br d, J=6.3 Hz, 4H).
단계 3: 화합물 WX028-4의 합성
둥근 바닥 플라스크에 톨루엔 (50 mL)을 첨가했다. WX028-3 (4.7 g, 12.30 mmol, 1 eq) 및 TsOH·H2O (3.04 g, 15.98 mmol, 1.3 eq)을 이어서 천천히 첨가했고, 혼합물을 5 시간 동안 110 ℃에서 연속적으로 교반했다. 물 (50 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (50mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인 (20 mLХ2)로 세척하고, 감압 하에서 농축하였다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1~1:1)로 정제하여 화합물 WX028-4을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 7.45 - 7.34 (m, 5H), 5.87 (s, 1H), 4.33 - 4.27 (m, 2H), 4.19 - 4.06 (m, 2H).
단계 4: 화합물 WX028-5의 합성
고압멸균기 (autoclave)에 EtOH (20 mL)을 첨가했다. WX028-4 (500 mg, 1.78 mmol, 1 eq), Pd(dppf)Cl2 (261.21 mg, 356.99 μmol, 0.2 eq) 및 TEA (1.81 g, 17.85 mmol, 2.48 mL, 10 eq)을 천천히 첨가했다. 분위기를 아르곤 기체로 3번 교체했고, 혼합물을 24 시간 동안 CO (1 MPa) 분위기 하에서 100 ℃에서 연속적으로 교반했다. 물 (50 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (50mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인 (10 mLХ2)로 세척하고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 분취 HPLC (칼럼: Xtimate C18 100*30mm*3μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; 아세토나이트릴%: 42%-72%, 8분)로 분리하여 화합물 WX028-5 을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.47 - 7.31 (m, 5H), 6.02 - 5.93 (m, 1H), 4.54 - 4.38 (m, 4H), 4.34 - 4.25 (m, 1H), 4.19 - 4.10 (m, 1H), 1.42 (t, J=7.1 Hz, 3H).
단계 5: 화합물 WX028-6의 합성
둥근 바닥 플라스크에 THF (4 mL) 및 H2O(1 mL)을 첨가했다. WX028-5 (260 mg, 951.38 μmol, 1 eq) 및 LiOH·H2O (119.77 mg, 2.85 mmol, 3 eq)을 천천히 첨가했다. 혼합물을 1시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 건조시키기 위해 감압 하에서 회전 증발기에 의해 농축하여 THF를 제거했다. 1 M 수성 HCl 용액을 적가하여 pH를 3으로 조절하고, 혼합물을 여과하여 생성물 WX028-6을 얻었다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ= 7.40 (s, 5H), 6.00 (s, 1H), 4.50 - 4.40 (m, 1H), 4.40 - 4.29 (m, 2H), 4.26 - 4.11 (m, 1H).
단계 6: 화합물 WX028-7의 합성
둥근 바닥 플라스크에 N,N-디메틸포름아마이드 (1 mL)를 첨가했다. WX028-6 (30 mg, 122.33 μmol, 1 eq), BB-4 (54.02 mg, 122.33 μmol, 1 eq), T3P (116.77 mg, 183.50 μmol, 109.13 μL, 50% 순도, 1.5 eq) 및 DIPEA (47.43 mg, 366.99 μmol, 63.92 μL, 3 eq)을 천천히 첨가했고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 분취 HPLC (칼럼: Xtimate C18 100*30 mm*3μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; 아세토나이트릴%: 35%-65%, 8분)로 분리하여 화합물 WX028의 라세미체를 얻었고, 이어서 키랄 SFC (칼럼: DAICEL CHIRALCEL OD (250mm*30mm, 10μm); 이동상: [Neu-ETOH]; 에탄올 %: 45%-45%, 분)로 분해하여 활성 이성질체 (active isomer) WX028을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.65 (br d, J=7.1 Hz, 1H), 8.37 (br d, J=3.3 Hz, 1H), 7.56 (br d, J=7.8 Hz, 1H), 7.48 - 7.36 (m, 5H), 7.32 - 7.27 (m, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.33 - 5.16 (m, 1H), 4.74 (dd, J=6.4, 9.5 Hz, 1H), 4.40 (br d, J=4.3 Hz, 2H), 4.36 - 4.24 (m, 2H), 4.19 - 4.07 (m, 1H), 3.92 (s, 3H); LCMS m/z = 437.1 [M+1]+.
실시예 29: WX029
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX029-2의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 MeCN (20 mL)을 첨가하고, WX029-1 (2.02 g, 15.89 mmol, 1eq), K2CO3 (4.39 g, 31.79 mmol, 2 eq) 및 3-플루오로벤질 클로라이드 (2.76 g, 19.07 mmol, 2.28 mL, 1.2 eq)을 천천히 첨가했다. 반응 용액을 12 시간 동안 질소 하에서 60 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 물 (100 mL)에 천천히 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mLХ 2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 물 (100 mL) 및 포화 브라인 (100 mL)으로 잇따라 세척했고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:20~100:75)로 정제하여 화합물 WX029-2을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.14 (s, 1H), 7.36 (dt, J=5.9, 8.0 Hz, 1H), 7.11 - 7.03(m, 2H), 6.99 (br d, J=9.0 Hz, 1H), 5.42 (s, 2H), 4.14 - 3.89 (m, 3H).
단계 2: 화합물 WX029-3의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 THF (14 mL) 및 H2O (2 mL)을 첨가하고, WX029-2 및 LiOH·H2O (642.21 mg, 15.31 mmol, 3 eq)을 천천히 첨가했다. 반응 용액을 1 시간 동안 질소 하에서 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 희석 염산 (1 M)을 이용해 6~7의 pH를 갖도록 조절하고, 침전물을 여과하고 건조시켜 화합물 WX029-3을 얻었다.
단계 3: 화합물 WX029의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 N,N-디메틸아세트아마이드 (5 mL)를 첨가했고, WX029-3 (15.03 mg, 67.94 umol, 1.5 eq), T3P (43.23 mg, 67.94 μmol, 40.41 μL, 50% 순도, 1.5 eq), BB-4 (15.03 mg, 67.94 μmol, 1.5 eq) 및 DIPEA (17.56 mg, 135.87 μmol, 23.67 μL, 3 eq)을 천천히 첨가했다. 반응 용액을 2 시간 동안 질소 하에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 물 (100 mL)에 천천히 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mLХ 2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 물 (100 mL) 및 포화 브라인 (100 mL)으로 잇따라 세척했고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 분취 HPLC (칼럼: Xtimate C18 100*30 mm*3μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; 아세토나이트릴%: 35%-65%, 8분)로 정제하여 생성물 WX029을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.83 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 8.37 (d, J=3.8 Hz, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.57 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.40 - 7.27 (m, 2H), 7.15 - 6.87 (m, 3H), 5.40 (s, 2H), 5.29 - 5.07 (m, 1H), 4.79 (dd, J=6.3, 9.3 Hz, 1H), 4.32 (t, J=10.3 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H); 19F NMR (376MHz, CDCl3) δ = -111.33 (s, 1F); LCMS m/z =413.0 [M+1]+.
실시예 30: WX030
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX030-2의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 MeCN을 첨가하고, WX030-1 (2.04 g, 16.05 mmol, 1eq), K2CO3 (4.44 g, 32.10 mmol, 2 eq) 및 4-메톡시벤질 클로라이드 (3.02 g, 19.26 mmol, 2.62 mL, 1.2 eq)를 천천히 첨가했다. 반응 용액을 12 시간 동안 질소 하에서 60 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 물 (100 mL)에 천천히 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mLХ 2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 물 (100 mL) 및 포화 브라인 (100 mL)으로 잇따라 세척했고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:20~100:75)로 정제하여 화합물 WX030-2 을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.05 (s, 1H), 7.27 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.98 - 6.87 (m, 2H), 5.43 - 5.26 (m, 2H), 4.03 - 3.97 (m, 3H), 3.82 (s, 3H).
단계 2: 화합물 WX030-3의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 THF (14 mL) 및 H2O (2 mL)를 첨가하고, WX030-2 (1.5 g, 6.07 mmol, 1 eq) 및 LiOH·H2O (763.68 mg, 18.20 mmol, 3 eq)을 천천히 첨가했다. 반응 용액을 1 시간 동안 질소 하에서 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 희석 염산 (1 M)를 이용해 6~7의 pH를 갖도록 조절하고, 침전물을 여과하고 건조하여 화합물 WX030-3을 얻었다.
단계 3: 화합물 WX030의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 N,N-디메틸아세트아마이드 (5 mL)을 첨가하고, WX030-3 (15.84 mg, 67.94 μmol, 1.5 eq), T3P (43.23 mg, 67.94 μmol, 40.41 μL, 50% 순도, 1.5 eq), BB-4 (15.84 mg, 67.94 μmol, 1.5 eq) 및 DIPEA (17.56 mg, 135.87 μmol, 23.67 μL, 3 eq)을 천천히 첨가했고, 반응 용액을 2 시간 동안 질소 하에서 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 천천히 물 (100 mL)에 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mLХ 2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 물 (100 mL) 및 포화 브라인 (100 mL)으로 잇따라 세척했고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 분취 HPLC (칼럼: Xtimate C18 100*30 mm*3μm; 이동상: [물 (0.225% FA)- ACN]; 아세토나이트릴%: 35%-65%, 8분)로 분리하여 생성물 WX030을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.80 (br s, 1H), 8.37 (br s, 1H), 7.98 (br s, 1H), 7.56 (brs, 1H), 7.38 - 7.28 (m, 1H), 7.26 (br s, 2H), 6.91 (br s, 2H), 5.41 - 5.10 (m, 3H), 4.78 (br s, 1H), 4.31(br s, 1H), 3.98 - 3.73 (m, 6H); LCMS m/z =425.1 [M+1]+.
실시예 31: WX031
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX031-2의 합성
둥근 바닥 플라스크에 MeCN (20 mL)을 첨가했다. WX031-1 (1.5 g, 11.80 mmol, 1 eq), K2CO3 (2.45 g, 17.70 mmol, 1.5 eq) 및 4-플루오로벤질 클로라이드 (1.88 g, 12.98 mmol, 1.55 mL, 1.1 eq)을 이어서 첨가하고, 혼합물을 12 시간 동안 50 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 물 (50 mL)에 붓고 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인 (10 mLХ2)로 세척하고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 100:1~1:100)로 정제하여 화합물 WX031-2을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.09 (s, 1H), 7.30 (dd, J=5.3, 8.3 Hz, 2H), 7.08 (t, J=8.5 Hz, 2H), 5.39 (s, 2H), 4.00 (s, 3H).
단계 2: 화합물 WX031-3의 합성
둥근 바닥 플라스크에 THF (8 mL) 및 H2O (2 mL)을 첨가했다. WX031-2 (1.06 g, 4.52 mmol, 1 eq) 및 LiOH·H2O (569.16 mg, 13.56 mmol, 3 eq)을 이어서 첨가했고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 감압 하에서 농축하여 THF를 제거했다. 1 M 희석 염산 용액을 반응 용액에 적가하여 pH를 3 미만으로 조절하고, 혼합물을 여과하여 화합물 WX031-3을 얻었다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ= 8.79 (s, 1H), 7.39 (dd, J=5.5, 8.8 Hz, 2H), 7.25 - 7.17 (m, 2H), 5.47 (s, 2H).
단계 3: 화합물 WX031의 합성
둥근 바닥 플라스크에 N,N-디메틸포름아마이드 (1 mL)을 첨가했다. WX031-3 (18.03 mg, 81.53 μmol, 1.2 eq), BB-4 (30 mg, 67.94 μmol, 1 eq), DIPEA (26.34 mg, 203.82 μmol, 35.50 μL, 3 eq) 및 T3P (64.85 mg, 101.91 μmol, 60.61 μL, 50% 순도, 1.5 eq)을 천천히 첨가했고, 혼합물을 연속적으로 2 시간 동안 25 ℃에서 교반했다. 반응 용액을 HPLC (칼럼: Xtimate C18 100*30mm*3μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; 아세토나이트릴%: 40%-70%, 8분)로 바로 분리하여 화합물 WX031을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.81 (br d, J=7.3 Hz, 1H), 8.37 (dd, J=1.4, 4.6 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.56 (dd, J=1.4, 7.9 Hz, 1H), 7.33 - 7.27 (m, 3H), 7.07 (t, J=8.5 Hz, 2H), 5.37 (s, 2H), 5.20 (td, J=6.7, 11.2 Hz, 1H), 4.78 (dd, J=6.4, 9.4 Hz, 1H), 4.32 (dd, J=9.7, 10.9 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H); LCMS m/z = 413.1 [M+1]+.
실시예 32: WX032
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX032-2의 합성
MeCN (20 mL)에 WX032-1 (1.5 g, 11.80 mmol, 1 eq), 3-클로로메틸 벤조나이트릴 (1.97 g, 12.98 mmol, 1.72 mL, 1.1 eq) 및 K2CO3 (2.45 g, 17.70 mmol, 1.5 eq)을 첨가하고, 반응 용액을 12 시간 동안 50 ℃에서 연속적으로 교반했다. 물 (50 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인 (20 mLХ2)로 세척하고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1~1:100)로 정제하여 화합물 WX032-2 을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.21 (s, 1H), 7.67 (t, J=4.3 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.52 (d, J=4.8 Hz, 2H), 5.47 (s, 2H), 4.01 (s, 3H).
단계 2: 화합물 WX032-3의 합성
둥근 바닥 플라스크에 THF (8 mL) 및 H2O (2 mL)을 첨가했다. WX032-2 (1.4 g, 5.78 mmol, 1 eq) 및 LiOH·H2O (727.53 mg, 17.34 mmol, 3 eq)을 이어서 첨가하고, 반응 용액을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 감압 하에서 농축하여 THF를 제거했다. 1 M 희석 염산 용액을 반응 용액에 적가하여 pH를 3 미만으로 조절했고, 혼합물을 여과하여 타겟 화합물 WX032-3을 얻었다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ= 8.83 - 8.80 (m, 1H), 7.86 - 7.80 (m, 2H), 7.68 - 7.57 (m, 2H), 5.59 - 5.52 (m, 2H).
단계 3: 화합물 WX032의 합성
둥근 바닥 플라스크에 N,N-디메틸포름아마이드 (1 mL)을 첨가했다. WX032-3 (15.50 mg, 67.94 μmol, 1 eq), BB-4 (30 mg, 67.94 μmol, 1 eq), DIPEA (26.34 mg, 203.82 μmol, 35.50 μL, 3 eq) 및 T3P (64.85 mg, 101.91 μmol, 60.61 μL, 50% 순도, 1.5 eq)을 천천히 첨가했고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 HPLC (칼럼: Xtimate C18 100*30mm*3μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; 아세토나이트릴%: 35%-65%, 8분)로 바로 분리하여 화합물 WX032을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.85 (br d, J=7.3 Hz, 1H), 8.37 (d, J=3.3 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.65 (br d, J=2.8 Hz, 1H), 7.60 - 7.55 (m, 2H), 7.53 - 7.47 (m, 2H), 7.29 (dd, J=4.6, 7.9 Hz, 1H), 5.45 (s, 2H), 5.26 - 5.15 (m, 1H), 4.79 (dd, J=6.3, 9.5 Hz, 1H), 4.38 - 4.28 (m, 1H), 3.93 (s, 3H); LCMS m/z = 420.1 [M+1]+.
실시예 33: WX033
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX033-2의 합성
둥근 바닥 플라스크에 MeCN (20 mL)을 첨가했다. WX033-1(1.5 g, 11.80 mmol, 1 eq), 3-메틸벤질 클로라이드 (1.83 g, 12.98 mmol, 1.72 mL, 1.1 eq) 및 K2CO3 (2.45 g, 17.70 mmol, 1.5 eq)을 첨가하고, 혼합물을 12 시간 동안 50 ℃에서 연속적으로 교반했다. 물 (50 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인 (10 mLХ2)로 세척하고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1~1:100)로 정제하여 화합물 WX033-2을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.08 (s, 1H), 7.33 - 7.27 (m, 1H), 7.18 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.10 (br d, J=1.8 Hz, 2H), 5.38 (s, 2H), 4.05 - 3.97 (m, 3H), 2.38 - 2.31 (m, 3H).
단계 2: 화합물 WX033-3의 합성
둥근 바닥 플라스크에 THF (8 mL) 및 H2O (2 mL)을 첨가했다. WX033-2 (1.6 g, 6.92 mmol, 1 eq) 및 LiOH·H2O (870.95 mg, 20.76 mmol, 3 eq)을 이어서 첨가했고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 감압 하에서 농축하여 THF를 제거했다. 1 M 희석 염산 용액을 반응 용액에 적가하여 pH를 3 미만으로 조절했고, 혼합물을 여과하여 화합물 WX033-3을 얻었다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ= 13.28 (br s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.30 - 7.23 (m, 1H), 7.17 - 7.07 (m, 3H), 5.43 (s, 2H), 2.29 (s, 3H).
단계 3: 화합물 WX033의 합성
둥근 바닥 플라스크에 N,N-디메틸포름아마이드 (1 mL)을 첨가했다. WX033-3 (17.71 mg, 81.53 μmol, 1.2 eq), BB-4 (30 mg, 67.94 μmol, 1 eq), DIPEA (26.34 mg, 203.82 μmol, 35.50 μL, 3 eq) 및 T3P (64.85 mg, 101.91 μmol, 60.61 μL, 50% 순도, 1.5 eq)을 천천히 첨가했고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 HPLC (칼럼: Xtimate C18 100*30mm*3μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; 아세토나이트릴%: 37%-67%, 8분)로 직접 분리하여 화합물 WX033을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.81 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 8.37 (d, J=3.3 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.57 (d, J=6.8 Hz, 1H), 7.31 - 7.27 (m, 2H), 7.20 - 7.15 (m, 1H), 7.11 - 7.07 (m, 2H), 5.36 (s, 2H), 5.22 (td, J=6.8, 11.5 Hz, 1H), 4.79 (dd, J=6.4, 9.4 Hz, 1H), 4.36 - 4.27 (m, 1H), 3.93 (s, 3H), 2.34 (s, 3H); LCMS m/z = 409.1 [M+1]+.
실시예 34: WX034
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX034-2의 합성
단일구 병 (single-neck bottle)에 MeCN (20 mL)을 첨가했다. 1-클로로메틸-3,5-디플루오로벤젠 (2.11 g, 12.98 mmol, 573.45 μL, 1.1 eq), WX034-1 (1.5 g, 11.80 mmol, 1 eq) 및 K2CO3 (2.45 g, 17.70 mmol, 1.5 eq)을 이어서 첨가하고, 혼합물을 12 시간 동안 50 ℃에서 연속적으로 교반했다. TLC (석유 에테르:에틸 아세테이트=1:2) 모니터링에 의하면 새로운 스팟이 나타났다. 물 (50 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인 (20 mLХ2)로 세척하고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1~1:100)로 정제하여 화합물 WX034-2 을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.22 (s, 1H), 6.92 - 6.77 (m, 3H), 5.50 - 5.38 (m, 2H), 4.11 - 3.99 (m, 3H).
단계 2: 화합물 WX034-3의 합성
둥근 바닥 플라스크에 THF (8 mL) 및 H2O (2 mL)을 첨가했다. WX034-2 (1 g, 3.95 mmol, 1 eq) 및 LiOH·H2O (497.15 mg, 11.85 mmol, 3 eq)을 이어서 첨가하고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 감압 하에서 농축하여 THF을 제거했다. 1 M 희석 염산 용액을 남아있는 용액에 적가하여 pH를 3 미만으로 조절했고, 혼합물을 여과하여 화합물 WX034-3을 얻었다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ= 8.80 (s, 1H), 7.24 (br t, J=9.4 Hz, 1H), 7.07 (br d, J=6.3 Hz, 2H), 5.52 (s, 2H).
단계 3: 화합물 WX034의 합성
둥근 바닥 플라스크에 N,N-디메틸포름아마이드 (1 mL)을 첨가했다. WX034-3 (19.50 mg, 81.53 μmol, 1.2 eq), BB-4 (30 mg, 67.94 μmol, 1 eq), DIPEA (26.34 mg, 203.82 μmol, 35.50 μL, 3 eq) 및 T3P (64.85 mg, 101.91 μmol, 60.61 μL, 50% 순도, 1.5 eq)을 천천히 첨가했고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 by HPLC (칼럼: Xtimate C18 100*30mm*3μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; 아세토나이트릴%: 37%-67%, 8분)로 바로 분리하여 화합물 WX034을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.85 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 8.37 (dd, J=1.5, 4.6 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.57 (dd, J=1.5, 8.0 Hz, 1H), 7.29 (dd, J=4.7, 7.9 Hz, 1H), 6.85 - 6.73 (m, 3H), 5.38 (s, 2H), 5.21 (td, J=6.6, 11.2 Hz, 1H), 4.79 (dd, J=6.4, 9.5 Hz, 1H), 4.33 (dd, J=9.6, 11.0 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H); LCMS m/z = 431.1 [M+1]+.
실시예 35: WX035
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX035-2의 합성
MeCN (20 mL)에 WX035-1 (1.5 g, 11.80 mmol, 1 eq), 1-클로로메틸-2-톨루엔 (1.83 g, 12.98 mmol, 1.72 mL, 1.1 eq) 및 K2CO3 (2.45 g, 17.70 mmol, 1.5 eq)을 첨가하고, 혼합물을 12 시간 동안 50 ℃에서 연속적으로 교반했다. 물 (50 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인 (20 mLХ2)로 세척하고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1~1:100)로 정제하여 화합물 WX035-2을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 7.89 (s, 1H), 7.36 - 7.29 (m, 1H), 7.26 - 7.16 (m, 3H), 5.42 (s, 2H), 4.00 (s, 3H), 2.27 (s, 3H).
단계 2: 화합물 WX035-3의 합성
둥근 바닥 플라스크에 THF (8 mL) 및 H2O (2 mL)을 첨가했다. WX035-2 (1.6 g, 6.92 mmol, 1 eq) 및 LiOH·H2O (870.95 mg, 20.76 mmol, 3 eq)을 이어서 첨가하고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 감압 하에서 농축하여 THF를 제거했다. 1 M 희석 염산 용액을 남아있는 용액에 적가하여 pH를 3 미만으로 조절했고, 혼합물을 여과하여 WX035-3을 얻었다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ= 13.28 (br s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.30 - 7.23 (m, 1H), 7.17 - 7.07 (m, 3H), 5.43 (s, 2H), 2.29 (s, 3H).
단계 3: 화합물 WX035의 합성
둥근 바닥 플라스크에 N,N-디메틸포름아마이드 (1 mL)을 첨가했다. WX035-3 (17.71 mg, 81.53 μmol, 1.2 eq), BB-4 (30 mg, 67.94 μmol, 1 eq), DIPEA (26.34 mg, 203.82 μmol, 35.50 μL, 3 eq) 및 T3P (64.85 mg, 101.91 μmol, 60.61 μL, 50% 순도, 1.5 eq)을 천천히 첨가했고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 HPLC (칼럼: Xtimate C18 100*30mm*3μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; 아세토나이트릴%: 37%-67%, 8분)로 직접 분리하여 화합물 WX035 을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.81 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 8.37 (d, J=4.5 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.57 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.34 - 7.27 (m, 2H), 7.26 - 7.15 (m, 3H), 5.40 (s, 2H), 5.22 (td, J=6.7, 11.2 Hz, 1H), 4.79 (dd, J=6.4, 9.4 Hz, 1H), 4.38 - 4.26 (m, 1H), 3.93 (s, 3H), 2.29 (s, 3H); LCMS m/z = 409.1 [M+1]+.
실시예 36: WX036
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX036-2의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 MeCN (20 mL)을 첨가했다. WX036-1 (2.02 g, 15.89 mmol, 1eq), K2CO3 (4.39 g, 31.79 mmol, 2 eq) 및 1-클로로-3-클로로메틸벤젠 (3.07 g, 19.07 mmol, 2.42 mL, 1.2 eq)을 천천히 첨가했다. 반응 용액을 12 시간 동안 질소 하에서 60 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 물 (100 mL)에 천천히 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mLХ 2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 물 (100 mL) 및 포화 브라인 (100 mL)으로 잇따라 세척했고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:20~100:75)로 정제하여 화합물 WX036-2을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.15 (s, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 3H), 7.17 (d, J=6.8 Hz, 1H), 5.40 (s, 2H), 4.04 - 3.93 (m, 3H).
단계 2: 화합물 WX036-3의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 THF (14 mL) 및 H2O (2 mL)을 첨가했다. WX036-2 (1.80 g, 7.15 mmol, 1 eq) 및 LiOH·H2O (900.33 mg, 21.46 mmol, 3 eq)을 천천히 첨가했다. 반응 용액을 1 시간 동안 질소 하에서 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 희석된 염산 (1 M)을 이용해 6~7의 pH를 갖도록 조절하고, 침전물을 여과하여 화합물 WX036-3을 얻었다.
단계 3: 화합물 WX036의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 N,N-디메틸아세트아마이드 (5 mL)을 첨가했다. BB-4 (20 mg, 45.29 μmol, 1 eq), T3P (43.23 mg, 67.94 μmol, 40.41 μL, 50% 순도, 1.5 eq), WX036-3 (16.14 mg, 67.94 μmol, 1.5 eq) 및 DIPEA (17.56 mg, 135.87 μmol, 23.67 μL, 3 eq)을 천천히 첨가했고, 반응 용액을 2 시간 동안 질소 하에서 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 물 (100 mL)에 천천히 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mLХ 2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 물 (100 mL) 및 포화 브라인 (100 mL)으로 잇따라 세척했고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 분취 HPLC (칼럼: Xtimate C18 100*30mm*3μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; 아세토나이트릴%: 35%-65%, 8분)로 분리하여 화합물 WX036을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.95 - 8.69 (m, 1H), 8.37 (br d, J=3.1 Hz, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.68 - 7.47 (m, 1H), 7.38 - 7.27 (m, 3H), 7.26 - 7.20 (m, 1H), 7.16 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 5.38 (s, 2H), 5.26 - 5.10 (m, 1H), 4.79 (dd, J=6.5, 9.4 Hz, 1H), 4.41 - 4.20 (m, 1H), 3.93 (s, 3H); LCMS m/z =429.0 [M+1]+.
실시예 37: WX037
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX037-2의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 MeCN (20 mL)을 첨가했다. WX037-1 (2.03 g, 15.97 mmol, 1eq), K2CO3 (4.41 g, 31.94 mmol, 2 eq) 및 1-브로모-3-클로로메틸벤젠 (3.94 g, 19.17 mmol, 241.82 μL, 1.2 eq)을 천천히 첨가했다. 반응 용액을 12 시간 동안 질소 하에서 60 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 물 (100 mL)에 천천히 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mLХ 2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 물 (100 mL) 및 포화 브라인 (100 mL)으로 잇따라 세척했고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:20~100:75)로 정제하여 화합물 WX037-2을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.14 (s, 1H), 7.59 - 7.38 (m, 2H), 7.30 - 7.26 (m, 1H), 7.25 - 7.20 (m, 1H), 5.39 (s, 2H), 4.01 (s, 3H).
단계 2: 화합물 WX037-3의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 THF (14 mL) 및 H2O (2 mL)을 첨가했다. WX037-2 (2.0 g, 6.75 mmol, 1 eq) 및 LiOH·H2O (850.20 mg, 20.26 mmol, 3 eq)을 천천히 첨가했다. 반응 용액을 1 시간 동안 질소 하에서 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 희석된 염산 (1 M)을 이용해 6~7의 pH를 갖도록 조절하고, 침전물을 여과하여 화합물 WX037-3을 얻었다.
단계 3: 화합물 WX037의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 N,N-디메틸아세트아마이드 (5 mL)를 첨가했다. BB-4 (20 mg, 45.29 μmol, 1 eq), T3P (43.23 mg, 67.94 μmol, 40.41 μL, 50% 순도, 1.5 eq), WX037-3 (19.16 mg, 67.94 μmol, 1.5 eq) 및 DIPEA (17.56 mg, 135.87 μmol, 23.67 μL, 3 eq)을 천천히 첨가했고, 반응 용액을 2 시간 동안 질소 하에서 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 물 (100 mL)에 천천히 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mLХ 2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 물 (100 mL) 및 포화 브라인 (100 mL)으로 잇따라 세척했고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 분취 HPLC (칼럼: Xtimate C18 100*30mm*3μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; 아세토나이트릴%: 35%-65%, 8분)로 분리하여 화합물 WX037을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.83 (br d, J=6.4 Hz, 1H), 8.37 (br d, J=4.5 Hz, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.66 - 7.27 (m, 4H), 7.25 - 7.15 (m, 2H), 5.37 (s, 2H), 5.26 - 5.06 (m, 1H), 4.79 (br dd, J=6.5, 9.1 Hz, 1H), 4.33 (br t, J=10.3 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H); LCMS m/z =474.8 [M+1]+.
실시예 38: WX038
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX038-2의 합성
바닥 플라스크에 MeCN (20 mL)을 첨가했다. 1-클로로메틸-4-트리플루오로메톡시벤젠 (2.73 g, 12.98 mmol, 517.03 μL, 1.1 eq), WX038-1 (1.5 g, 11.80 mmol, 1 eq) 및 K2CO3 (2.45 g, 17.70 mmol, 1.5 eq)을 이어서 첨가하고, 혼합물을 12 시간 동안 50 ℃에서 연속적으로 교반했다. 물 (50 mL)을 반응 용액에 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인 (20 mLХ2)로 세척하고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1~1:100)로 정제하여 화합물 WX038-2 을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.17 (s, 1H), 7.36 (d, J=8.5 Hz, 2H), 7.27 - 7.23 (m, 2H), 5.50 - 5.40 (m, 2H), 4.08 - 3.96 (m, 3H).
단계 2: 화합물 WX038-3의 합성
둥근 바닥 플라스크에 THF (16 mL) 및 H2O (4 mL)을 첨가했다. WX038-2 (1.9 g, 6.31 mmol, 1 eq) 및 LiOH·H2O (794.01 mg, 18.92 mmol, 3 eq)을 이어서 첨가하고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 감압 하에서 농축하여 THF를 제거했다. 1 M 희석된 염산 용액을 남아있는 용액에 적가하여 pH를 3으로 조절하였고, 침전물을 여과하여 화합물 WX038-3을 얻었다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ= 8.81 (s, 1H), 7.51 - 7.33 (m, 4H), 5.53 (s, 2H).
단계 3: 화합물 WX038의 합성
둥근 바닥 플라스크에 N,N-디메틸포름아마이드 (1 mL)을 첨가했다. WX038-3 (23.41 mg, 81.53 μmol, 1.2 eq), BB-4 (30 mg, 67.94 μmol, 1 eq), DIPEA (26.34 mg, 203.82 μmol, 35.50 μL, 3 eq) 및 T3P (64.85 mg, 101.91 μmol, 60.61 μL, 50% 순도, 1.5 eq)을 천천히 첨가했고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 HPLC (칼럼: Xtimate C18 100*30mm*3μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; 아세토나이트릴%: 40%-70%, 8분)로 직접 분리하여 화합물 WX038을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.84 (br d, J=7.3 Hz, 1H), 8.38 (dd, J=1.5, 4.5 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.58 (dd, J=1.5, 8.0 Hz, 1H), 7.34 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.32 - 7.29 (m, 1H), 7.27 (s, 5H), 7.26 - 7.22 (m, 2H), 5.42 (s, 2H), 5.28 - 5.15 (m, 1H), 4.80 (dd, J=6.5, 9.5 Hz, 1H), 4.37 - 4.29 (m, 1H), 3.94 (s, 3H); LCMS m/z = 479.1 [M+1]+.
실시예 39: WX039
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX039-2의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 MeCN (20 mL)을 첨가했다. WX039-1 (2.0 g, 15.74 mmol, 1eq), K2CO3 (4.35 g, 31.48 mmol, 2 eq) 및 1-클로로메틸-4-메틸벤젠 (2.66 g, 18.89 mmol, 2.48 mL, 1.2 eq)을 천천히 첨가했다. 반응 용액을 12 시간 동안 질소 하에서 60 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 물 (100 mL)에 천천히 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mLХ 2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 물 (100 mL) 및 포화 브라인 (100 mL)으로 잇따라 세척했고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:20~100:75)로 정제하여 화합물 WX039-2을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.04 (s, 1H), 7.23 - 7.17 (m, 4H), 5.37 (s, 2H), 4.00 (s, 3H), 2.47 - 2.25 (m, 3H).
단계 2: 화합물 WX039-3의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 THF (14 mL) 및 H2O (2 mL)을 첨가했다. WX039-2 (1.5 g, 6.49 mmol, 1 eq) 및 LiOH·H2O (816.52 mg, 19.46 mmol, 3 eq)을 천천히 첨가했다. 반응 용액을 1 시간 동안 질소 하에서 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 희석 염산 (1 M)을 이용해 6~7의 pH를 갖도록 조절하고, 침전물을 여과에 의해 수집하여 화합물 WX039-3을 얻었다.
단계 3: 화합물 WX039의 합성
N,N-디메틸아세트아마이드 (5 mL)에 25 ℃에서 BB-4 (20 mg, 45.29 μmol, 1 eq), T3P (43.23 mg, 67.94 μmol, 40.41 μL, 50% 순도, 1.5 eq), WX039-3 (14.76 mg, 67.94 μmol, 1.5 eq) 및 DIPEA (17.56 mg, 135.87 μmol, 23.67 μL, 3 eq)을 첨가했고, 반응 용액을 2 시간 동안 질소 하에서 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 물 (100 mL)에 천천히 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mLХ 2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 물 (100 mL) 및 포화 브라인 (100 mL)으로 잇따라 세척했고, 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 분취 HPLC (칼럼: Xtimate C18 100*30mm*3μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; 아세토나이트릴%: 40%-70%, 8분)로 분리하여 생성물 WX039을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.80 (br d, J=7.3 Hz, 1H), 8.37 (dd, J=1.5, 4.5 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.56 (dd, J=1.5, 7.8 Hz, 1H), 7.28 (dd, J=4.8, 8.0 Hz, 1H), 7.19 (s, 4H), 5.35 (s, 2H), 5.21 (td, J=6.8, 11.0 Hz, 1H), 4.78 (dd, J=6.4, 9.4 Hz, 1H), 4.32 (dd, J=9.7, 11.2 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 2.63 - 2.13 (m, 3H); LCMS m/z =409.1 [M+1]+.
실시예 40: WX040
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX040-2의 합성
둥근 바닥 플라스크에 THF (100 mL)를 첨가했다. WX040-1 (10 g, 50.22 mmol, 1 eq), BB-3-2 (11.34 g, 55.24 mmol, 1.1 eq) 및 탄산 세슘 (29.45 g, 90.39 mmol, 1.8 eq)을 천천히 첨가했고, 혼합물을 16 시간 동안 65 ℃에서 연속적으로 교반했다. TLC (석유 에테르:에틸 아세테이트:아세트산=1:1:0.1)은 원료가 완전히 소비되었음을 나타냈다. 반응 용액을 poured into 물 (300 mL)에 붓고, 2 M 희석 염산을 이어서 적가하여 pH를 3으로 조절했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (500 mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고 포화 브라인 (50 mLХ2)로 세척했다. 이어서 유기상을 감압 하에서 농축하여 WX040-2을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.46 (d, J=1.8 Hz, 1H), 8.20 (dd, J=2.0, 8.8 Hz, 1H), 7.12 (d, J=8.8 Hz, 1H), 5.62 (br d, J=8.0 Hz, 1H), 4.83 - 4.61 (m, 2H), 4.45 (dd, J=3.0, 9.3 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 1.45 (s, 10H).
단계 2: 화합물 WX040-3의 합성
수소화 병에 MeOH (300 mL)을 첨가했다. WX040-2 (25.8 g, 67.13 mmol, 1 eq) 및 Pd/C (2.6 g, 26.02 mmol, 10% 순도)을 천천히 첨가했다. 분위기를 아르곤 기체로 3번 교체했고, 혼합물을 24 시간 동안 H2 (40Psi) 분위기 하에서 30 ℃에서 연속적으로 교반했다. TLC (석유 에테르:에틸 아세테이트:아세트산 =1:1:0.1) 모니터링에 의할 때 새로운 스팟이 나타났다. 반응 용액을 셀라이트로 여과하였고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 WX040-3을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.50 - 7.44 (m, 1H), 7.39 (br s, 1H), 6.70 (d, J=8.5 Hz, 1H), 6.53 (br s, 2H), 6.00 (br d, J=7.5 Hz, 1H), 4.73 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 4.43 (br d, J=8.5 Hz, 1H), 4.31 - 4.24 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 1.41 (s, 9H).
단계 3: 화합물 WX040-4의 합성
둥근 바닥 플라스크에 에틸 아세테이트 (200 mL)을 첨가했다. WX040-3 (12.5 g, 35.28 mmol, 1 eq), T3P (33.67 g, 52.91 mmol, 31.47 mL, 50% 순도, 1.5 eq) 및 DIPEA (13.68 g, 105.83 mmol, 18.43 mL, 3 eq)을 천천히 첨가했고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 물 (200 mL)을 반응 용액에 첨가하였고, 층들이 분리되었다. 수성상을 에틸 아세테이트 (200 mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인 (100 mLХ2)로 세척하고, 이어서 유기상을 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 = 100:1~1:1)로 정제하여 화합물 WX040-4을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.15 (br s, 1H), 7.80 (dd, J=2.0, 8.5 Hz, 1H), 7.73 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.13 (d, J=8.3 Hz, 1H), 5.62 (br d, J=5.3 Hz, 1H), 4.71 - 4.59 (m, 2H), 4.33 - 4.23 (m, 1H), 3.95 - 3.89 (m, 3H), 1.43 (s, 9H).
단계 4: 화합물 WX040-5의 합성
둥근 바닥 플라스크에 N,N-디메틸포름아마이드 (200 mL)를 첨가했다. WX040-4 (17 g, 50.54 mmol, 1 eq), 탄산 세슘 (49.40 g, 151.63 mmol, 3 eq) 및 아이오도메탄 (21.52 g, 151.63 mmol, 9.44 mL, 3 eq)을 천천히 첨가했고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 물 (300 mL)을 반응 용액에 첨가했고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (300mLХ2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인 (100 mLХ2)로 세척하고, 이어서 유기상을 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1~1:1)로 정제하여 화합물 WX040-5 을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 7.92 - 7.83 (m, 2H), 7.18 (d, J=8.4 Hz, 1H), 5.50 (br d, J=6.1 Hz, 1H), 4.72 - 4.52 (m, 2H), 4.28 - 4.17 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.42 (s, 3H), 1.38 (s, 9H).
단계 5: 화합물 WX040-6의 합성
톨루엔 (40 mL)에 WX040-5 (4.01 g, 11.45 mmol, 1 eq), 라웨슨 시약 (5.09 g, 12.59 mmol, 1.1 eq) 및 Boc2O (10.60 g, 48.55 mmol, 11.15 mL, 4.24 eq)을 천천히 첨가하고, 혼합물을 110 ℃로 가열하고, 12 시간 동안 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 포화 브라인 (30 mL)에 천천히 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mLХ 2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 포화 브라인 (30 mLХ2)로 세척했고, 이어서 유기상을 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1~1:1)로 정제하여 화합물 WX040-6을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 7.99 - 7.92 (m, 2H), 7.21 (d, J=8.3 Hz, 1H), 6.02 (br d, J=7.8 Hz, 1H), 4.80 - 4.69 (m, 1H), 4.53 (dd, J=6.3, 9.5 Hz, 1H), 4.22 (dd, J=9.5, 11.3 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 1.46 - 1.33 (m, 9H).
단계 6: 화합물 WX040-7의 합성
둥근 바닥 플라스크에 THF (8 mL) 및 H2O (2 mL)에 첨가했다. WX040-6 (800 mg, 2.18 mmol, 1 eq) 및 LiOH·H2O (183.23 mg, 4.37 mmol, 2 eq)을 천천히 첨가했고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 희석 염산 용액을 반응 용액에 적가하여 pH를 <3으로 조절하고, 침전물을 여과하고 수집하여 화합물 WX040-7를 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.89 - 7.79 (m, 1H), 7.25 - 7.20 (m, 1H), 7.02 - 6.95 (m, 1H), 6.17 - 6.02 (m, 1H), 4.88 - 4.74 (m, 1H), 4.56 (dd, J=6.4, 9.7 Hz, 1H), 4.31 - 4.17 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 1.41 (s, 9H).
단계 7: 화합물 WX040-8의 합성
둥근 바닥 플라스크에 N,N-디메틸포름아마이드 (5 mL)을 첨가했다. WX040-7 (200 mg, 567.53 μmol, 1 eq), NH4Cl (91.07 mg, 1.70 mmol, 3 eq), HATU (647.37 mg, 1.70 mmol, 253.15 μL, 3.00 eq) 및 DIPEA (366.75 mg, 2.84 mmol, 494.27 μL, 5 eq)을 천천히 첨가했고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 HPLC (칼럼: Xtimate C18 100*30mm*3μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; 아세토나이트릴%: 30%-60%, 8분)로 직접 정제하여 화합물 WX040-8을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 7.82 (s, 1H), 7.64 (br d, J=8.3 Hz, 1H), 7.22 (d, J=8.3 Hz, 1H), 6.98 (s, 2H), 5.01 (br s, 1H), 4.86 - 4.66 (m, 1H), 4.52 (dd, J=6.3, 9.5 Hz, 1H), 4.30 - 4.11 (m, 1H), 3.86 (s, 3H), 1.40 (s, 9H).
단계 8: 화합물 WX040-9의 합성
둥근 바닥 플라스크에 에틸 아세테이트 (10 mL)을 첨가했다. WX040-8 (40 mg, 113.82 μmol, 1 eq) 및 HCl/에틸 아세테이트 (4 M, 10.00 mL, 351.42 eq)을 천천히 첨가했고, 혼합물을 1 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 감압 하에서 농축하여 화합물 WX040-9을 얻었다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ= 8.16 - 8.04 (m, 2H), 7.91 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.37 (d, J=8.3 Hz, 1H), 4.62 - 4.41 (m, 3H), 3.82 (s, 3H).
단계 9: 화합물 WX040의 합성
DMSO (1 mL)에 WX040-9 (30 mg, 119.38 μmol, 1 eq, HCl), BB-8 (24.26 mg, 119.38 μmol, 1 eq), HATU (68.09 mg, 179.07 μmol, 1.5 eq) 및 DIEA (46.28 mg, 358.13 μmol, 62.38 μL, 3 eq)을 천천히 첨가했고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini-NX 80*30mm*3μm; 이동상: [물 (10mM NH4HCO3)-ACN]; 아세토나이트릴%: 28%-58%, 9분)로 직접 분리하여 화합물 WX040을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ=8.70 (br d, J=7.3 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.39 - 7.36 (m, 1H), 7.31 - 7.28 (m, 7H), 5.39 (s, 2H), 5.20 (td, J=6.8, 11.0 Hz, 1H), 4.72 (dd, J=6.5, 9.4 Hz, 1H), 4.31 (t, J=10.3 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H); LCMS m/z = 437.1 [M+1]+.
실시예 41: WX041
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX041-2의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 MeCN (20 mL)을 첨가했다. WX041-1 (2.68 g, 21.09 mmol, 1eq), K2CO3 (5.83 g, 42.17 mmol, 2 eq) 및 4-(클로로메틸)-트리플루오로메틸벤젠 (4.92 g, 25.30 mmol, 3.73 mL, 1.2 eq)을 천천히 첨가했다. 반응 용액을 12 시간 동안 질소 하에서 60 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 물 (100 mL)에 천천히 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mLХ 2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 물 (100 mL) 및 포화 브라인 (100 mL)으로 잇따라 세척했고, 이어서 유기상을 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:20-100:75)로 정제하여 화합물 WX041-2 을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.17 (s, 1H), 7.65 (d, J=8.0 Hz, 2H), 7.40 (d, J=8.0 Hz, 2H), 5.49 (s, 2H), 4.08 - 3.91 (m, 3H).
단계 2: 화합물 WX041-3의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 THF (20 mL) 및 H2O (4 mL)을 첨가했다. WX041-2 (2.40 g, 8.41 mmol, 1 eq) 및 LiOH·H2O (1.06 g, 25.24 mmol, 3 eq)을 천천히 첨가했다. 반응 용액을 1 시간 동안 질소 하에서 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 희석된 염산 (1 M)을 이용해 6~7의 pH를 갖도록 조절하고, 침전물을 여과하고 수집하여 화합물 WX041-3을 얻었다.
단계 3: 화합물 WX041의 합성
둥근 바닥 플라스크에 25 ℃에서 N,N-디메틸아세트아마이드 (5 mL)을 첨가했다. BB-4 (20 mg, 45.29 μmol, 1 eq), T3P (43.23 mg, 67.94 μmol, 40.41 μL, 50% 순도, 1.5 eq), WX041-3 (18.42 mg, 67.94 μmol, 1.5 eq) 및 DIPEA (17.56 mg, 135.87 μmol, 23.67 μL, 3 eq)을 천천히 첨가하고, 반응 용액을 2 시간 동안 질소 하에서 25 ℃에서 연속적으로 교반했다. 반응 용액을 물 (100 mL)에 천천히 붓고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mLХ 2)로 추출했다. 유기상들을 합하고, 물 (100 mL) 및 포화 브라인 (100 mL)으로 잇따라 세척했고, 이어서 유기상을 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 분취 HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini-NX 80*30mm*3μm; 이동상: [물 (10mM NH4HCO3)-ACN]으로 분리하여 화합물 WX041을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.77 (br d, J=7.5 Hz, 1H), 8.31 (br d, J=3.6 Hz, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.65 - 7.45 (m, 3H), 7.33 (br d, J=8.0 Hz, 2H), 7.22 (dd, J=4.8, 7.9 Hz, 1H), 5.40 (s, 2H), 5.23 - 4.97 (m, 1H), 4.72 (dd, J=6.5, 9.4 Hz, 1H), 4.25 (t, J=10.3 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H); 19F NMR (377MHz, CDCl3) δ = -43.60 (s, 1F); LCMS m/z =463.1 [M+1]+.
실시예 42: WX042
합성 경로:
단계 1: 화합물 WX042-2의 합성
MeCN (20 mL)에 WX042-1 (2 g, 15.74 mmol, 1 eq)을 첨가하고, 3-클로로메틸 아니솔 (3-chloromethyl anisole) (2.46 g, 15.74 mmol, 2.14 mL, 1 eq), 및 K2CO3 (2.61 g, 18.88 mmol, 1.2 eq), 혼합물을 12 시간 동안 50 ℃에서 반응시켰다. 반응 용액을 여과하여 K2CO3을 제거했다. 여과 케이크를 에틸 아세테이트 (15 mLХ3)로 세척하고, 여과액을 포화 브라인 (50 mL)로 세척했다. 유기상을 감압 하에서 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1-100:100)로 정제하여 화합물 WX042-2을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.10 - 8.01 (m, 1H), 7.30 - 7.21 (m, 1H), 6.91 - 6.80 (m, 2H), 6.77 (s, 1H), 5.34 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.75 (s, 3H).
단계 2: 화합물 WX042-3의 합성
THF (30 mL)에 WX042-2 (2.5 g, 10.11 mmol, 1 eq)을 첨가했다. 이어서 H2O (3 mL) 중 LiOH·H2O (509.17 mg, 12.13 mmol, 1.2 eq)의 용액을 첨가했다. 반응물을 3 시간 동안 25 ℃에서 교반했다. TLC (석유 에테르:에틸 아세테이트=1:1)는 원료가 완전히 소비되었음을 나타냈다. 반응 용액을 1M 희석 염산을 이용해 6의 pH를 갖도록 조절하고, 혼합물을 감압 하에서 농축하여 용매를 제거했다. 톨루엔 (10 mL)을 남아있는 용액에 첨가하고, 혼합물을 감압 하에서 다시 농축하여 톨루엔을 제거하여 화합물 WX042-3을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 7.19 (s, 4H), 7.21 - 7.17 (m, 1H), 4.65 (s, 2H), 3.79(s, 3H); LCMS m/z = 233.9 [M+1]+.
단계 3: 화합물 WX042의 합성
N,N-디메틸포름아마이드 (5 mL)에 BB-4 (94.67 mg, 214.39 μmol, 1 eq), WX042-3 (50 mg, 214.39 μmol, 1 eq), T3P (163.71 mg, 257.26 μmol, 153.00 μL, 50% 순도, 1.2 eq), 및 DIPEA (41.56 mg, 321.58 μmol, 56.01 μL, 1.5 eq)을 첨가하고, 혼합물을 2 시간 동안 25 ℃에서 반응시켰다. LCMS는 원료가 완전히 소비되었음을 나타냈다. 반응 용액을 감압 하에서 농축하여 약 5 mL로 만들었다. 잔여물을 HPLC (포름산 시스템)로 정제하여 화합물 WX042을 얻었다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 8.81 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 8.37(dd, J=1.6, 4.6 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.57 (dd, J=1.6, 7.9 Hz, 1H), 7.33 - 7.27 (m, 2H), 7.00 - 6.69 (m, 3H), 5.36 (s, 2H), 5.22(td, J=6.7, 11.1 Hz, 1H), 4.79 (dd, J=6.3, 9.5 Hz, 1H), 4.32 (dd, J=9.5, 11.0 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.79 (s, 3H).
분석 평가 실시예 (Assay example) 1: 시험관 내 분석 평가 부분
분석 평가 단계:
1.1 시약들
1.2 기기 및 물질
CULTURPLATE-384 +LID /50W Brand PerkinElmer cat#6007680
인비젼 플레이트 리더기(Envision plate reader) (Perkin Elmer, Cat#2104-0010)
1.3 시약의 제형
(1) 1 Х DPSB: 100 mL of 10ХDPBS에 900 mL의 탈이온수를 첨가했다.
(2) 1640 완전 배지(complete medium): 89 mL의 RPMI-1640 배지에 10 mL의 FBS 및 1 mL의 페니실린/스트렙토마이신을 첨가했다.
2. 분석 평가 단계
1. U937 세포를 원심분리하고, 이어서 배지를 버렸다. 세포를 1640 완전 배지 중에 재현탁시켰고(resuspend) 카운팅했다. 세포 농도를 사용을 위해 5Х105 세포/mL로 조절했고, 세포를 분석 평가될 화합물에 따라 정렬했다.
2. U937 세포의 제조된 재현탁액에, 25 μM의 최종 농도에서 QVD-OPh, 그리고 100 ng/mL의 최종 농도에서 TNF-α을 첨가하고, 이어서 혼합물을 부드럽게 혼합했다.
3. 384-웰 플레이트에, 25 μM의 QVD-OPh, 및 100 ng/mL의 최종 농도에서의 TNF-α을 함유하는 U937 세포를 첨가하고, QVD-OPh 및 TNF-α 없는 빈(blank) 대조군 웰을 셋팅했다.
4. 투여군 (dosing group)에 미리 설정된 농도의 4배의 농도에서 10 μL의 분석 화합물을 첨가했고, 빈 대조군 웰에 대응하는 농도의 DMSO를 첨가했다.
5. 384-웰 플레이트를 24 시간 동안 37 ℃ 및 5% CO2 세포 배양기 내에 위치시켰다.
6. 24 시간 후, 384-웰 플레이트를 꺼내고 20 분 동안 실온에서 평형을 이루게 하였다 (equilibrate).
7. 40 μL의 CTG를 각 웰에 첨가하고, 이어서 플레이트를 2 분간 어두운 곳에서 (in the dark) 진탕기 (shaker) 상에서 진탕시켰다.
8. 플레이트를 10 분간 어두운 곳에서 실온에서 배양하고, 이어서 인비젼 플레이트 리더기를 이용해 판독했다.
분석 결과:
본 개시 내용의 화합물의 분석 결과를 표 1에 나타냈다.
표 1. 본 개시 내용의 화합물의 U937 세포 활성 분석 결과
화합물 번호 IC50의 세포 분석 (nM) 화합물 번호 IC50의 세포 분석 (nM)
WX001 0.5 WX023 29
WX002 1.8 WX024 43
WX003 0.5 WX025 12
WX004 0.3 WX026 5
WX005 2 WX027 20
WX006 9 WX028 4.7
WX007 70 WX029 2.2
WX008 8.1 WX030 15.6
WX009 1.4 WX031 2.4
WX010 47 WX032 5.7
WX011 1.7 WX033 7.6
WX012 12.1 WX034 3.7
WX013 1.8 WX035 4.9
WX014 3.7 WX036 6.4
WX015 5.1 WX037 24
WX016 9.8 WX038 238
WX017 59 WX039 3.4
WX018 1.3 WX040 4.8
WX019 0.6 WX041 86.5
WX020 0.6 WX042 24.8
WX021 13
WX022 20
분석의 결론:
상기 표로부터, 본 개시 내용의 화합물이, TNFα/QVD-OPh-유도된 세포 예정 괴사 (programmed cell necrosis) (Necroptosis)를 억제하는 세포 활성 분석에서, 우수한 억제 활성을 보인다는 것을 알 수 있다.
분석 평가 실시예 2: 마우스 RIP1의 시험관 내 활성 분석 평가
세포주
L929 (ATCC로부터 구매함, 항목 번호: CCL-1)
시약
기구
마이크로플레이트 리더기 (Microplate reader) (Perkin Elmer, Envision)
시약의 제형
L929 세포 완전 배지: EMEM+10% 말 혈청 (부피비) + 1% 이중 항생제 (부피비)
분석 평가 단계
1. 배양된 L929 세포를 트립신으로 소화시키고 (digest), 원심분리하고, 완전 배양 배지 중에 재현탁시키고, 이어서 카운팅했다. 이어서 완전 배양 배지를 이용해 세포 농도를 1Х105/mL로 희석했다.
2. 세포 현탁액을 웰당 100 μL로 96-웰 플레이트에 첨가하고, 24 시간 동안 37 ℃ 및 5% CO2에서 배양했다.
3. 상이한 농도의 분석 화합물을 각 웰에 첨가하고, 디메틸 설폭사이드를 대조군에 첨가했다. 플레이트를 1 시간 동안 37 ℃ 및 5% CO2에서 배양했다.
4. 각 웰에, 50 ng/mL의 최종 농도에서 TNF-α 및 50 μM의 최종 농도에서 Q-VD를 첨가했고, 플레이트를 24 시간 동안 37 ℃ 및 5% CO2에서 배양했다.
5. 각 웰에, 50 μL의 CellTiter Glo 형광 세포를 첨가하고, 플레이트를 10 분간 어두운 곳에서 진탕했다.
6. 플레이트를 마이크로플레이트 리더기 상에서 판독했다.
분석 결과
본 개시 내용의 화합물의 분석 결과를 표 2에 나타냈다.
표 2. 본 개시 내용의 화합물의 L929 세포 활성 분석 결과
화합물 번호 IC50의 세포 분석 (nM)
WX001 1161
WX003 1213
WX005 1311
WX008 47
WX009 103
WX011 11
WX013 14
WX019 51
WX020 29
WX021 445
WX028 65
WX029 184
WX031 174
WX032 255
WX039 64
분석의 결론:
상기 표로부터, 본 개시 내용의 화합물이, TNFα/QVD-OPh-유도된 세포 예정 괴사 (Necroptosis)를 억제하는 마우스 L929 세포 활성 분석에서, 우수한 억제 활성을 보인다는 것을 알 수 있다.
분석 평가 실시예 3: 화합물의 약물동력학 평가
분석 평가 단계
8마리의 건강한 성인 C57BL/6 마우스 (6-9주 나이(old), Shanghai Lingchang Biotechnology Co., Ltd.에서 구입함)를 선택하고, 무작위로 각 그룹에 4마리의 마우스가 되도록 2 그룹으로 나누었다 (n=2, 교차 혈액 샘플링). 한 그룹에는 0.5 mg/kg의 분석 화합물이 정맥 주사로 제공되었고, 다른 그룹에는 1 mg/kg의 분석 화합물이 위관영양법(정맥 주사)으로 제공되었다. 투여 후 0.083, 0.25, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0, 6.0, 8.0, 24 시간에 정맥내 그룹 및 위관영양법 그룹의 동물로부터 각각 혈장 샘플을 수집하였다. 혈액 농도를 LC-MS/MS 방법으로 측정했다. 관련 약물동력학적 매개변수를, 비-구획 모델 및 선형 대수 사다리꼴 방법 (non-compartmental model and linear logarithmic trapezoidal method)을 사용하여 WinNonlinTM Version 6.3 (Pharsight, Mountain View, CA) 약물동력학 소프트웨어로 계산하였다. AUC0-last는 0 시점에서 최후 검출가능한 농도 시점까지의 혈장 농도-시간 곡선 아래의 면적을 나타내고; Cmax는 피크 농도를 나타내고; Tmax는 피크에 도달하는 시간을 나타내고; T1/2는 반감기를 나타내고; CL은 제거율(clearance rate)을 나타내고; Tlast는 최후 정량화 가능한 시점을 나타내고; p.o.는 경구를 나타내고; i.v. 정맥 주사를 나타내고; F%는 경구 생체이용률을 나타낸다.
분석 결과
본 개시 내용의 화합물의 분석 결과를 표 3에 나타냈다.
표 3. 화합물의 약물동력학적 특성
화합물 WX009
i.v. T1/2 (h) 1.4
Vdss (L/kg) 1.1
CL(mL/min/kg) 9.4
AUC0-last (nM.h) 2210
p.o. Tmax (h) 0.5
Cmax (nM) 1495
AUC0-last (nM.h) 3854
F% 89.1
분석의 결론
본 개시 내용의 화합물은 우수한 약물동력학적 특성, 생체 내 노출 및 생체 이용률 (bioavailability)을 갖는다.
분석 평가 실시예 4: 종양 괴사 인자 (TNF-α) 유도된 전신 염증 반응 증후군 (systemic inflammatory response syndrome; SIRS)의 마우스 모델에서의 생체 내 효능 연구
시약
기기 및 물질
1) 전자 저울: Brand Changzhou Tianzhiping Instrument Equipment Co., Ltd., Model JY20002
2) 항문 체온계(Anal thermometer): Brand PHYSITEMP, model BAT-12
시약의 제형
1) TNF-α: 리드(lid)를 열기 전에 TNF-α을 빠르게 원심분리하였다 (10000 rmp, 30s). 한 병의 TNF-α (1 mg)을 1 mL의 멸균수 중에 용해시켜 1 mg/mL의 농도의 모액 (mother liquor)을 제조했다. 모액을 4 ℃에서 저장시키고 한 주 동안 저장할 수 있다. 1000 μL의 모액을 칭량하고 5667 μL의 멸균수에 첨가했고, 이어서 333 mg의 트레할로스 (trehalose)를 첨가하고 용해시켜 작업 용액 (working solution)을 제조했다.
2) zVAD: 20 mg의 zVAD을 칭량하고 480 μL의 DMSO에 첨가하고, 혼합물을 볼텍스하고(vortex), 초음파처리하고, 37 ℃에서 가열하고, 이어서 15.52 mL의 생리 식염수를 첨가했다. 1.25 mg/mL의 농도를 갖는 작업 용액이 준비되었다.
분석 평가 단계
1) 마우수를 3일 동안 적응하도록 사육하고(rear adaptively), 이어서 무작위로 각 케이지에 5마리의 마우스를 갖도록 케이지들로 분류했다. 귀패 (Ear tag)를 잘랐다.
2) 먼저, 마우스의 체중에 따라 위관영양법으로 해당 화합물을 마우스에 제공하고, 이어서 마우스 당 250 μg의 용량으로 zVAD를 복강내 주사하였다. zVAD의 복강 내 주입 후, 항문 온도를 즉시 측정하고 시간을 기록했다(0시간). 마우스에 zVAD를 제공한 시간을 0시(0h)로 정의했다.
3) 15분 후, TNF-α를 마우스 당 200 μL의 투여량으로 꼬리정맥을 통해 주입하고, 이어서 15분 후 항문온도를 측정하였다 (0.5h).
4) 1시간 후, zVAD를 마우스 당 125 μg의 용량으로 복강내 주사하고, 즉시 항문온도를 측정하였다 (1시간). 항문 온도는 2시간, 3시간, 4시간에 다시 측정했다.
분석 결과
본 개시 내용의 화합물의 분석 결과를 표 4에 나타냈다.
표 4. 마우스의 체온 및 생존율
그룹 각 그룹 내 동물의 수 마우스 체온의 감소 (℃) 동물의 4-시간
생존율
1시간 2시간 3시간 4시간
TNF-α + zVAD+ vehicle 5 2.94 9.02 - - 2시간 후 0%
TNF-α + zVAD + WX009(10 mpk) 5 0.94 1.2 1.42 1.52 100 %
분석의 결론
본 개시 내용의 화합물은 TNF-α/zVAD에 의해 유도된 전신 염증 반응 증후군 (SIRS)을 억제하는 마우스 모델에서 매우 우수한 보호 효과를 보이며, 여기서 마우스의 체온의 감소가 현저히 감소되었고, 동물의 생존율이 0%에서 100%로 증가되었다.
분석 평가 실시예 5: 시험관 내 Caco-2 세포 투과율 분석 평가
세포 배양
2 mM L-글루타민, 10% 소태아혈청 (FBS), 100 U/mL 페니실린-G 및 100 μg/mL 스트렙토마이신이 보충된 MEM (최소 필수 배지)을 세포 배양에 사용했다. 세포 배양을 위한 조건은 37±1 ℃, 5% CO2 및 포화 습도였다. 세포가 80-90% 컨플루언시(confluency)로 성장했을 때, 트립신 (0.05%, w/v)/EDTA(0.02%, w/v) 소화 용액을 첨가하여 씨딩(seeding)을 위해 세포를 소화시켰다. 세포를 BD Falcon's Transwell-96-웰 플레이트 내에 1Х105 cells/cm2의 씨딩 밀도로 씨딩했다. 세포를 이산화탄소 인큐베이터 내에서 22일 동안 배양하고, 이어서 수송 분석에 사용하였다.
수송 분석 (Transport assay)
10 mM HEPES (pH 7.40±0.05)를 함유하는 Hank's 균형 염 완충액(balanced salt buffer)을 이 분석에서 수송 완충액으로 사용했다. 2 μM의 농도에서 분석 화합물 및 양성 약물 디곡신(digoxin)의 양방향 수송(Two-way transport)을, 각각 2개의 복제 샘플을 이용해서(in duplicate), 분석 평가하였다. 정 말단(apical end)에서 기저 말단(basal end) (A-B)으로의 페노테롤(fenoterol) 및 프로프라놀롤(propranolol)의 수송을 분석하였다. 배양 시스템 내 DMSO의 농도는 1% 미만으로 제어되었다. 샘플을 첨가한 후, 세포 플레이트를 37±1 ℃, 5% CO2 및 포화 습도에서 120 분 동안 배양하였다. 모든 샘플을 볼텍스하고, 이어서 3220 rpm 및 20 ℃에서 20분 동안 원심분리했다. 대조군 및 분석 샘플을 초순수로 1:1 (v:v) 희석하고, 이어서 4 ℃에서 보관하였다. 액체 크로마토그래피 탠덤 질량 분석기 (Liquid chromatography tandem mass spectrometry)(LC/MS/MS)을 분석 및 시험에 사용했다.
샘플의 분석
이 분석에서, 액체 크로마토그래피 탠덤 질량분석기(LC/MS/MS)를 사용하여 분석 화합물 및 대조군 물질인 페노테롤, 프로프라놀롤 및 디곡신의 피크 면적비를 출발 용액, 수용 용액(receiving solution) 및 투여 웰의 상등액 중 내부 표준에 대해 반정량적으로(semi-quantitatively) 분석하였다.
데이터 계산
겉보기 투과율 계수 (Apparent permeability coefficient) (Papp, cm/s), 유출율(efflux rate) 및 회수율을 다음 식을 사용하여 계산하였다.
겉보기 투과율 계수(Papp, cm/s)는 다음 식을 사용하여 계산되었다:
[식 1]
Papp = (dCr/dt) Х Vr / (A Х C0)
여기서 dCr/dt는 단위 시간당 수용 말단에서 화합물의 누적 농도(μM/s)이고; Vr은 수용 말단에서 용액의 부피이고(정 말단과 기저 말단에서 용액 부피는 각각 0.075 mL 및 0.250 mL였다); A는 세포 단층의 상대 표면적(0.0804 cm2)이고; CO는 투여 말단에서 분석 물질 또는 대조 물질의 초기 농도(nM)의 피크 면적 비이다.
유출율은 다음 식을 사용하여 계산되었다:
[식 2]
유츌율 = Papp (BA) / Papp (AB)
회수율은 다음 식을 사용하여 계산되었다:
[식 3]
% 회수율 = 100 Х [(Vr Х Cr) + (Vd Х Cd)] / (Vd Х C0)
여기서 CO는 투여 말단에서 분석 물질의 초기 농도(nM) 또는 대조 물질의 피크 면적 비이고; Vd는 투여 말단에서의 부피이고 (정 말단은 0.075mL였고 기저 말단은 0.250mL였음); Cd 및 Cr은 각각 투여 말단 및 수용 말단에서 분석 물질 또는 대조군 물질의 최종 농도(nM)의 피크 면적 비이다.
분석 결과
본 개시 내용의 화합물의 분석 결과는 표 5에서 나타났다.
포 5. Caco-2 세포 투과율 분석의 결과
화합물 겉보기 투과율 계수 (10-6 cm/s) 유출율
WX009 18.35 0.75
분석의 결론
본 개시 내용의 화합물은 높은 투과율을 갖고 낮은 유출율을 갖는 화합물이다.
분석 평가 실시예 6: 혈청 단백질 결합률 (PPB)의 분석 평가
인간, SD 랫트 및 CD-1 마우스(BioreclamationIVT에서 구입한 혈장)로부터의 796 μL의 빈 혈장을 칭량하고, 분석 화합물 작업 용액 또는 와파린(warfarin) 작업 용액을 첨가하여 혈장 샘플 내 분석 화합물 및 와파린의 최종 농도가 2 μM 이 되도록 하였다. 샘플을 철저히 혼합했다. 유기상 중 DMSO의 최종 농도는 0.5%였다. 분석 화합물 및 와파린의 50 μL의 혈장 샘플을 샘플 수용 플레이트에 피펫팅하고, 상응 부피의 상응하는 빈 혈장 또는 완충액의 즉시 첨가하여, 각 샘플 웰의 최종 부피가 100μL가 되도록 하였고, 이때 혈장:투석 완충액의 부피비는 1:1이었다. 이어서 중지 용액(Stop solution)을 이 샘플에 추가했다. 이러한 샘플을 회수 및 안정성의 측정을 위한 T0 샘플로 사용했다. 분석 화합물 및 와파린의 혈장 샘플을 각 투석 웰의 투여 말단에 첨가하고, 빈 투석 완충액을 상응하는 투석 웰의 수용 말단에 첨가하였다. 이어서 투석 플레이트를 통기성 멤브레인(breathable membrane)으로 밀봉하고 습윤 5% CO2 배양기 내에 넣고, 4시간 동안 37 ℃에서 100 rpm으로 진탕하면서 배양했다. 투석이 끝난 후, 50 μL의 투석된 완충액 샘플과 투석된 혈장 샘플을 새로운 샘플 수용 플레이트에 피펫팅했다. 상응 부피의 상응하는 빈 혈장 또는 완충 용액을 샘플에 첨가하여, 각 샘플 웰의 최종 부피가 100 μL가 되도록 하였고, 이때 혈장:투석 완충액의 부피비는 1:1이었다. 모든 샘플을 단백질 침전을 거친 후, LC/MS/MS로 분석하였다. 화합물의 결합되지 않은 비율(% Unbound), 결합된 비율(% Bound) 및 회수율(% Recovery)을 다음 식을 사용하여 계산하였다:
[식 4]
% Unbound = 100 * FC / TC,
% Bound = 100 - % Unbound, 및
% Recovery = 100 * (FC + TC) / T0,
여기서 FC는 투석 플레이트의 완충액 말단에서의 화합물의 농도이고; TC는 투석 플레이트의 혈장 말단에서의 화합물의 농도이고; T0는 0 시점에서의 혈장 샘플 중 화합물의 농도이다.
분석 결과
본 개시 내용의 화합물의 분석 결과를 표 6에 나타냈다.
표 6. 혈장 단백질 결합률의 분석 결과
화합물 PPB_결합되지 않음 (%)
WX009 5.7 (인간) / 29.7 (랫트)/ 7.0 (마우스)
분석의 결론
본 개시 내용의 화합물은 인간, 랫트, 및 마우스에서 합리적인 혈장 단백질 결합율을 가지고, 인간 혈장 중 결합되지 않은 상태의 약물은 5.7%이다.
분석 평가 실시예 7: 개에서 약물동력학적 매개변수의 분석
분석 평가 단계
4 리의 건강한 성체 비글 견을 선택하여 무작위로 2 그룹으로 나누었다. 한 그룹에는 정맥 주사로 분석 화합물을 제공하고, 다른 그룹에는 위관 영양법으로 분석 화합물을 제공했다. 투여 후 0.083, 0.25, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0, 6.0, 8.0, 24 시간에 정맥내 그룹 및 위관 영양 그룹의 동물로부터 각각 혈장 샘플을 수집했다. 혈액 농도를 LC-MS/MS 방법으로 측정했다. 관련 약물동력학적 매개변수를, 비구획 모델 및 선형 대수 사다리꼴 방법을 사용하여 WinNonlinTM Version 6.3 (Pharsight, Mountain View, CA) 약물 동력학적 소프트웨어로 계산하였다. AUC0-last는 0 시점부터 최후 검출가능한 농도 시점까지의 혈장 농도-시간 곡선 아래의 면적을 나타내고; Cmax는 피크 농도를 나타내고; Tmax는 피크에 도달하는 시간을 나타내고; T1/2는 반감기를 나타내고; CL은 제거율을 나타내고; Vdss는 겉보기 부피의 분포도를 나타내고; p.o.는 경구를 나타내고; i.v. 정맥 주사를 나타내고; F%는 경구 생체이용률을 나타낸다.
분석 결과
본 개시 내용의 화합물의 분석 결과를 표 7에 나타냈다.
표 7. 본 개시 내용의 화합물의 약물 동력학적 특성
화합물 WX009 WX013
투여 요법 iv=3mpk; po=10mpk iv=1mpk; po=5mpk
iv T1/2 (h) 5.5 4.89
Vdss (L/kg) 2.4 2.02
CL(mL/min/kg) 6.2 5.18
AUC0-last (nM.h) 20762 7417
po Tmax (h) 2.0 2935
Cmax (nM) 284 1.50
AUC0-last (nM.h) 23640 27744
F% 34.2% 80.1 %
분석의 결론
본 개시 내용의 화합물은 개에서 더 우수한 약물 동력학적 특성 및 더 높은 생체 내 노출을 갖는다. 특히, 본 개시 내용의 화합물의 반감기는 비교적 이상적인 약 5 시간에 도달한다.
분석 평가 실시예 8: 본 개시 내용의 화합물의 키나아제 선택성 분석 평가
이 분석의 목적은 다양한 키나아제에 대한 WX009의 시험관 내 억제 활성을 검출하는 것이었다. 이 분석에 사용된 키나아제는 413 개의 키나아제들을 포함하고 있으며, 활성 검출법은 Eurofins Pharma Discovery Service에서 제공되었다. 33P 방사성 표지된 키나아제 활성을 검출하는 방법을 분석에 사용하였다. WX009의 농도는 1 μM이었고, ATP의 농도는 10 μM이었다. 분석 결과를 표 8에 나타냈다.
표 8. WX009의 키나아제 프로파일 분석 결과
억제율 키나아제의 수 키나아제 이름
> 80% 1 RIP1
50-79% 1 LIMK2
< 50% 411 모든 다른 키나아제
분석의 결론: 본 개시 내용의 화합물은 높은 특이적인 키나아제 선택성을 갖고, 거의 유일하게 RIP1에 대한 높은 활성의 억제 효과를 갖는다. 그러므로, 본 개시 내용의 화합물은 다른 키나아제 타겟을 오프-타겟팅(off-targeting)할 적은 위험성을 갖는다.

Claims (17)

  1. 화학식 (I)로 표시되는 화합물, 또는 이의 부분입체 이성질체(diastereomer), 거울상 이성질체(enantiomer), 또는 약제학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 (I)]
    Figure 112024044726283-pct00166

    (상기 화학식 (I)에서,
    T1은 N 및 CR1t로부터 선택되고;
    T2은 N 및 CR2t로부터 선택되고;
    T3은 N 및 CR3t로부터 선택되고;
    T4은 N 및 CR4t로부터 선택되고;
    E1은 C(R1e)2, O, C(=O), S, 및 NR2e로부터 선택되고;
    고리 A은 1,2,4-트리아졸릴 (1,2,4-triazolyl), 1,2,3-트리아졸릴, 이미다졸릴 (imidazolyl), 이속사졸릴 (isoxazolyl), 1,3,4-옥사디아졸릴 (1,3,4-oxadiazolyl), , 테트라졸릴 (tetrazolyl), 피리딜 (pyridyl), 및 로부터 선택되되, 이때 상기 1,2,4-트리아졸릴, 1,2,3-트리아졸릴, 이미다졸릴, 이속사졸릴, 1,3,4-옥사디아졸릴, , 테트라졸릴, 피리딜, 및 은 1, 2 또는 3 개의 할로겐 또는 C1-3 알킬로 치환되거나 치환되지 않고;
    고리 B은 페닐 및 로부터 선택되고;
    L은 단일 결합, O, C(=O), S, NH, 및 C1-3 알킬렌으로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬렌은 1, 2 또는 3개의 Ra로 치환되거나 치환되지 않고;
    R1은 H 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rb로 치환되거나 치환되지 않고;
    R1t, R2t, R3t, 및 R4t은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, C1-3 알킬, COOH, 및 -C(=O)NH2로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rc로 치환되거나 치환되지 않고;
    R1e은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rd로 치환되거나 치환되지 않고;
    R2e은 H 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Re로 치환되거나 치환되지 않고;
    R2은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, C1-3 알킬, 및 C1-3 알콕시로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬 및 C1-3 알콕시는 1, 2 또는 3개의 Rf로 치환되거나 치환되지 않고;
    n은 1, 2, 3, 4, 또는 5이고;
    Ra, Rb, Rc, Rd, Re, 및 Rf은 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, 및 D로부터 선택된다).
  2. 제1항에 있어서,
    R1은 H 및 CH3로부터 선택되되, 이때 상기 CH3은 1, 2 또는 3개의 Rb로 치환되거나 치환되지 않는 것인, 화합물, 또는 이의 부분입체 이성질체, 거울상 이성질체, 또는 약제학적으로 허용가능한 염.
  3. 제2항에 있어서,
    R1은 H, CH3, 및 CD3로부터 선택된 것인, 화합물, 또는 이의 부분입체 이성질체, 거울상 이성질체, 또는 약제학적으로 허용가능한 염.
  4. 제1항에 있어서,
    R1t, R2t, R3t, 및 R4t은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, CH3, COOH, 및 -C(=O)NH2로부터 선택되되, 이때 상기 CH3은 1, 2 또는 3개의 Rc로 치환되거나 치환되지 않는 것인, 화합물, 또는 이의 부분입체 이성질체, 거울상 이성질체, 또는 약제학적으로 허용가능한 염.
  5. 제4항에 있어서,
    R1t, R2t, R3t, 및 R4t은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, 및 CH3로부터 선택되는 것인, 화합물, 또는 이의 부분입체 이성질체, 거울상 이성질체, 또는 약제학적으로 허용가능한 염.
  6. 제1항에 있어서,
    R1e은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, 및 CH3로부터 선택되는 것인, 화합물, 또는 이의 부분입체 이성질체, 거울상 이성질체, 또는 약제학적으로 허용가능한 염.
  7. 제1항에 있어서,
    R2e은 H 및 CH3로부터 선택되는 것인, 화합물, 또는 이의 부분입체 이성질체, 거울상 이성질체, 또는 약제학적으로 허용가능한 염.
  8. 제1항에 있어서,
    E1은 CH2, O, C(=O), S, 및 NH로부터 선택되는 것인, 화합물, 또는 이의 부분입체 이성질체, 거울상 이성질체, 또는 약제학적으로 허용가능한 염.
  9. 제1항에 있어서,
    R2은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, CH3, 및 OCH3로부터 선택되되, 이때 상기 CH3 및 OCH3은 1, 2 또는 3개의 Rf로 치환되거나 치환되지 않는 것인, 화합물, 또는 이의 부분입체 이성질체, 거울상 이성질체, 또는 약제학적으로 허용가능한 염.
  10. 제9항에 있어서,
    R2은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, CH3, OCH3, CF3, 및 OCF3로부터 선택되는 것인, 화합물, 또는 이의 부분입체 이성질체, 거울상 이성질체, 또는 약제학적으로 허용가능한 염.
  11. 제1항에 있어서,
    고리 A는

    로부터 선택되되,
    이때 상기

    1, 2 또는 3개의 할로겐 또는 C1-3 알킬로 치환되거나 치환되지 않는 것인, 화합물, 또는 이의 부분입체 이성질체, 거울상 이성질체, 또는 약제학적으로 허용가능한 염.
  12. 제1항에 있어서,
    L는 단일 결합, -CH2- 및 -O-로부터 선택되는 것인, 화합물, 또는 이의 부분입체 이성질체, 거울상 이성질체, 또는 약제학적으로 허용가능한 염.
  13. 제1항에 있어서,
    상기 화합물은


    로부터 선택되고,
    상기 화학식에서
    n, T1, T2 및 T3은 제1항에서 정의된 것과 같고;
    R1은 제1항에서 정의된 것과 같고;
    R2은 제1항에서 정의된 것과 같고;
    R은 H 또는 할로겐으로부터 선택되고;
    "*"를 갖는 탄소 원자는 카이랄 탄소 원자이며, 이는 단일 (R) 거울상 이성질체, 단일 (S) 거울상 이성질체, 또는 하나의 거울상 이성질체가 풍부한 (enriched) 혼합물의 형태로 존재하는 것인, 화합물, 또는 이의 부분입체 이성질체, 거울상 이성질체, 또는 약제학적으로 허용가능한 염.
  14. 제13항에 있어서,
    상기 화합물은


    로부터 선택되고,
    상기 화학식에서
    n, T1, T2 및 T3은 제13항에서 정의된 것과 같고;
    R1은 제13항에서 정의된 것과 같고;
    R2은 제13항에서 정의된 것과 같고;
    R은 H 또는 할로겐으로부터 선택된 것인, 화합물, 또는 이의 부분입체 이성질체, 거울상 이성질체, 또는 약제학적으로 허용가능한 염.
  15. 하기 화학식의 화합물, 또는 이의 부분입체 이성질체, 거울상 이성질체, 또는 약제학적으로 허용가능한 염:









    .
  16. 제15항에 있어서,
    상기 화합물은 하기로부터 선택되는 것인, 화합물, 또는 이의 부분입체 이성질체, 거울상 이성질체, 또는 약제학적으로 허용가능한 염:









  17. RIP-1 키나아제와 관련된 질병의 치료에서 사용하기 위한, 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 기재된 화합물, 또는 이의 부분입체 이성질체, 거울상 이성질체, 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 약제학적 조성물로서, 상기 RIP-1 키나아제와 관련된 질병은 염증성 질병인 것인, 약제학적 조성물.
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