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KR102699872B1 - 약물전달물질로서의 대장암 특이적 표적 엑소좀 조성물 및 이의 용도 - Google Patents

약물전달물질로서의 대장암 특이적 표적 엑소좀 조성물 및 이의 용도 Download PDF

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KR102699872B1
KR102699872B1 KR1020210055792A KR20210055792A KR102699872B1 KR 102699872 B1 KR102699872 B1 KR 102699872B1 KR 1020210055792 A KR1020210055792 A KR 1020210055792A KR 20210055792 A KR20210055792 A KR 20210055792A KR 102699872 B1 KR102699872 B1 KR 102699872B1
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Abstract

본 발명은 줄기세포의 세포외소포체로 발현되는 유전자 내에 대장암 세포의 수용체와 결합하는 리간드를 발현시키는 유전자가 삽입된 재조합 발현벡터, 상기 발현벡터로 형질전환된 세포외소포체를 포함하는 약학적 조성물 및 대장암 예방 또는 치료용 발현벡터 제조방법에 대한 것으로, 본 발명은 세포외소포체로서 엑소좀을 약물전달물질로서 활용하여 표적 세포인 대장암 세포에 선별적으로 결합하여 대장암을 표적으로 특이적 작용이 가능한 이점이 있다.

Description

약물전달물질로서의 대장암 특이적 표적 엑소좀 조성물 및 이의 용도{Colorectal cancer specific targeting exosome composition as a drug anticancer delivery and use thereof}
본 발명은 재조합 발현벡터로부터 형질전환된 엑소좀을 포함하는 대장암 특이적 표적 엑소좀 조성물 및 이의 용도에 관한 것이다.
대장암은 결장 또는 직장에서 발생하는 악성종양(선암)으로 대부분 점막에서 발생하는 암으로, 암이 발생하는 위치에 따라 결장에 생기는 경우에는 결장암, 직장에 생기는 경우에는 직장암이라 하며, 이를 통칭하여 대장암이라고 한다. 2017년에 발표된 중앙암등록본부 자료에 의하면 2015년에 우리나라에서는 214,701건의 암이 발생했는데, 그 중 대장암은 남녀를 합쳐 26,790건으로 전체의 12.5%로 2위를 차지하였으며, 남녀의 성비는 1.5:1로 남성에게 더 많이 발생하였다. 특히, 발생 건수는 남자가 15,911건으로 남성의 암 중 3위, 여자는 10,879건으로 여성의 암 중 3위에 해당할 만큼 수치가 높은 것으로 알려져 있다.
엑소좀은 그 크기가 30-100nm에 불과하지만, 원세포에 들어있는 단백질, 핵산, 지질 등 여러 물질을 포함하고 있는 물질로서, 면역세포나 줄기세포 등 우리 지방유래줄기세포가 분비하는 나노입자이다. 엑소좀의 세포간 정보 전달체 역할을 하는 기능이 알려지면서 차세대 항암물질로 주목받고 있다.
이에, 본 발명자들은 약물전달물질로서의 대장암 특이적 표적 세포외소포체를 개발하기 위하여 예의 노력한 결과, 지방유래줄기세포로부터 추출된 엑소좀이 대장암 표적 항암제의 기능이 있음을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
대한민국 특허공개공보 제10-2020-0092712호 (2020.08.04)
본 발명의 목적은 줄기세포의 세포외소포체로 발현되는 유전자 내에 대장암 세포의 수용체와 결합하는 리간드를 발현시키는 유전자가 삽입된 재조합 발현벡터를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 재조합 발현벡터로 형질전환된 세포외소포체를 포함하는 대장암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 (a) 지방유래줄기세포의 세포외소포체로 발현되는 유전자 내에 대장암 세포의 수용체와 결합하는 리간드를 발현시키는 유전자를 도입하는 단계; 및 (b) 상기 유전자가 도입된 세포를 배지에서 배양하여 세포외소포체를 수득하는 단계;를 포함하는 대장암 예방 또는 치료용 발현벡터 제조방법을 제공하는 것이다.
본 출원에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 출원에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 출원의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 출원의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.
본 발명의 일 측면은 줄기세포의 세포외소포체로 발현되는 유전자 내에 대장암 세포의 수용체와 결합하는 리간드를 발현시키는 유전자가 삽입된 재조합 발현벡터를 제공한다.
본 발명에서의 "발현벡터"는 선형 DNA 벡터, 플라스미드 DNA 벡터 및 재조합 바이러스 벡터로 이루어진 군에서 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며 당업계에서 형질전환을 위해 사용되는 통상적인 벡터들은 모두 본 발명의 방법에 사용될 수 있다. 본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기　발현벡터는 pDisplay 벡터일 수 있다.
본 발명에서의 "리간드"는 줄기세포의 세포외소포체로 발현되는 유전자 내에 내에 삽입되어 세포외소포체로 발현 시 대장암 세포의 수용체와 결합하는 물질을 의미한다. 바람직하게, 상기 리간드는 서열번호 1의 아미노산 서열로 표시되는 것일 수 있다.
또한, 본 발명의 또 다른 측면은 상기 재조합 발현벡터로 형질전환된 세포외소포체를 포함하는 대장암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서의 "세포외소포체"는 세포에서 유래되는 막으로 둘러싸인 작은 구체를 의미하는 것으로, 상기 세포외소포체는 자연계, 예컨대 식물, 동물, 미생물로부터 유래된 세포외 소포체 또는 인공적으로 제조된 세포외소포체일 수 있다. 또한, 상기 세포는 자연계 생물 개체로부터 분리된 세포인 것일 수 있다.
상기 "세포외소포체"는 엑소좀(exosome), 엑토솜(ectosome) 또는 미세소포(microvesicle)일 수 있으나, 본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기 "세포외소포체"는 엑소좀일 수 있다.
본 발명에서의 "엑소좀"은 다양한 세포들로부터 분비되는 막 구조의 작은 소낭으로서, 다낭체와 원형질막의 융합이 일어나 세포 밖 환경으로 방출되는 소낭을 의미한다. 본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기　엑소좀은 지방유래줄기세포로부터 유래 또는 분리한 것일 수 있다.
본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기　엑소좀은 50 내지 150 nm의 직경을 갖는 것일 수 있다. 또한, 상기 엑소좀은 1 내지 50 μL/ml의 농도로 포함될 수 있다.
본 발명에서의 "줄기세포(stem cells)"는 미분화 상태에서 적절한 조건을 맞춰주면 다양한 조직 세포로 분화될 수 있는 만능세포로서 다양한 유래의 세포를 의미한다.
상기 줄기세포는 골수유래줄기세포, 제대혈유래줄기세포 또는 지방유래줄기세포일 수 있다. 본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기　줄기세포는 지방유래줄기세포일 수 있다. 또한, 상기 골수유래줄기세포, 제대혈유래줄기세포 또는 지방유래줄기세포는 인체 또는 동물유래 줄기세포인 것일 수 있다.
본 발명에서의 "지방유래줄기세포"는 지방 조직으로부터 유래한 줄기세포로서, 다분화능 및 자기증식능을 가진 세포를 의미하며, 본 발명의 지방유래줄기세포는 지방흡입술 및 다양한 외과적 수술을 통해 수득할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기　엑소좀은 줄기세포 등 호스트세포의 엑소좀으로 발현하는 유전자 내에 대장암 세포의 수용체와 결합하는 리간드를 발현시키도록 형질전환되어 대장암 세포에 표적으로 작용할 수 있는 것을 의미한다.
또한, 본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기 엑소좀은 BET 저해제를 추가로 장착한 것일 수 있다.
본 발명에서의 "BET 저해제"는 종양인자의 활성을 유도하는 Bromodomain and extra-terminal(BET) family proteins을 억제하는 물질로서, 대장암에서 활성도가 증가되어 있는 유전자의 super enhancer 부위에 위치한 BRD4에 전달하여 super enhancer 활성도를 감소시켜 종양유전자를 억제한다.
본 발명에서의 "BET 저해제"는 JQ1, I-BET 151, I-BET 762, OTX-015, TEN-010, CPI-203, CPI-0610, RVX-208, ABBV-744, LY294002, AZD5153, MT-1, MS645 일 수 있으나, 본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기 " BET 저해제"는 JQ1일 수 있다.
본 발명에서의 "JQ1"는 transcription factor로서 c-myc의 transcription을 촉진하는 BRD4의 활성을 억제하는 물질을 의미한다.
또한, 본 발명의 또 다른 측면은 (a) 지방유래줄기세포의 세포외소포체로 발현되는 유전자 내에 대장암 세포의 수용체와 결합하는 리간드를 발현시키는 유전자를 도입하는 단계; 및 (b) 상기 유전자가 도입된 세포를 배지에서 배양하여 세포외소포체를 수득하는 단계;를 포함하는 대장암 예방 또는 치료용 발현벡터 제조방법을 제공한다.
본 발명에서의 "세포외소포체"는 엑소좀(exosome), 엑토솜(ectosome) 또는 미세소포(microvesicle)일 수 있으나, 본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기 "세포외소포체"는 엑소좀일 수 있다.
본 발명에서의 "배지"는 지방유래줄기세포 배양배지인 것일 수 있다. 본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기 지방유래줄기세포 배양배지는 지방유래줄기세포를 FBS(inactivated fetal bovine serum) 및 P/S(penicillin-streptomycin)을 첨가한 DMEM high low glucose 배지 또는 FBS-Free DMEM low glucose로 배지일 수 있다.
본 발명에서의 “예방”은 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 대장암을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서의 “치료”는 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 대장암에 대한 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서의 "대장암(colorectal cancer)"은 대장에 생긴 암세포로 이루어진 악성 종양을 의미한다. 대장암은 병리학적으로 대부분 융종(polyp)의 형태에서 발전된 선암(adenocarcinoma)이며 드물게 유암종(carcinoid), 림프종(lymphoma) 등에 의한 암이 발생하기도 한다. 부위별로는 크게 결장암과 직장암으로 나뉜다.
본 발명의 줄기세포의 세포외소포체로 발현되는 유전자 내에 대장암 세포의 수용체와 결합하는 리간드를 발현시키는 유전자가 삽입된 재조합 발현벡터, 상기 발현벡터로 형질전환된 세포외소포체를 포함하는 약학적 조성물은 세포외소포체로서 엑소좀을 약물전달물질로서 활용하여 표적 세포인 대장암 세포에 선별적으로 결합하여 대장암에 특이적으로 작용할 수 있다. 따라서, 상기 표적 엑소좀은 대장암 치료 분야, 특히 임상적 적용 기술로 응용될 수 있다.
도 1은 발현벡터를 통하여 엑소좀에 타겟팅 리간드를 발현시켜 표적 세포인 암세포에 엑소좀이 결합하는 모습을 나타낸 모식도이다. 대장암 표적 엑소좀을 처리 시 JQ1 loaded-EV가 형질도입(transduction)에 따라 정상세포 대비 대장암 세포에 효율적으로 전달하여 super enhancer의 BRD4를 억제할 수 있다.
도 2의 A는 본 발명의 재조합 단백질의 발현을 위한 pDisplay에서의 벡터 구성이고, B는 벡터의 발현에 따른 양상을 나타낸 것이다.
도 3은 엑소좀에 대한 구조 분석을 위하여 투과전자현미경(TEM) 및 유세포분석기 (FACS)을 이용하여 분석한 결과이다.
도 4는 MTT assay 방법을 통하여 엑소좀의 세포 독성 평가한 결과이다.
도 5는 엑소좀의 wound　healing　assay에 따른 cell migration을 나타낸 결과이다.
도 6은 colony assay에 따른 colony 억제능을 나타낸 결과이다.
도 7은 대장암세포주인 HCT116에서의 세포사멸 인자(pro-apoptotic factor)인 cleaved PARP, cleaved caspase3, cleaved caspase9, Bax의 발현 수준 및 항-세포사멸 인자(anti-apoptotic factor)인 Bcl-2의 발현 수준을 확인한 결과이다.
도 8은 대장암세포주인 HCT116에서의 세포사멸 인자(pro-apoptotic factor)인 cleaved PARP, cleaved caspase3, cleaved caspase9, Bax의 발현 수준 및 항-세포사멸 인자(anti-apoptotic factor)인 Bcl-2의 발현 수준을 확인한 결과이다.
도 9는 BALB/C Nude mouse에 대장암세포주인 HCT116을 이식한 대장암 동물 모델에서의 세포사멸 인자(pro-apoptotic factor)인 cleaved PARP, cleaved caspase3, cleaved caspase9, Bid의 발현 수준 및 항-세포사멸 인자(anti-apoptotic factor)인 Bcl-XL의 발현 수준을 확인한 결과이다.
도 10은 BALB/C Nude mouse에 대장암세포주인 HCT116을 이식한 대장암 동물 모델에서의 세포사멸 인자(pro-apoptotic factor)인 cleaved PARP, cleaved caspase3, cleaved caspase9, Bid의 발현 수준 및 항-세포사멸 인자(anti-apoptotic factor)인 Bcl-XL의 발현 수준을 확인한 결과이다.
도 11은 BALB/C Nude mouse에 대장암세포주인 HCT116을 이식하여 구축된 대장암 동물 모델에서의 외형 관찰 결과를 나타낸 것이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1. 지방유래줄기세포 유래의　표적 엑소좀　제작 및 확인
본 발명의 대장암에 특이적으로 작용하는 표적 엑소좀을 제작하기 위하여 지방유래줄기세포를 사용하여 엑소좀을 추출하였다. 참고적으로, 본 발명에서는 표적 엑소좀을 생산하기 위한 donor cells로서 지방유래줄기세포를 사용하였지만, NK세포와 같은 면역세포도 가능하므로, 이에 한정하지 않는다.
지방유래줄기세포를 제조사의 지침에 따라 형질감염시약(lipofectamine, invitrogen)을 사용하여 pDisplay 벡터(invitrogen)에 대장암세포 표적 리간드를 인코딩하는 아미노산 서열(ACA GCA GGA GCA TAC TTG TTG AAT AGA ACC CTG TGG GAC CGA TGC GAA GCT CCA CCC CGA GTA GTT CCG TGG AAT GTT ACT)로 형질도입(transduction)시켰다. 상기 벡터를 클로닝한 후 해당 벡터가 클로닝된 결과를 확인하였으며(도 2), 지방유래줄기세포에 삽입하여 표적 엑소좀을 제작하였다.
제작된 표적 엑소좀을 추출하기 위하여 지방유래줄기세포를 10% FBS(inactivated fetal bovine serum) 및 1% P/S(penicillin-streptomycin)을 첨가한 DMEM low glucose 배지에서 37
Figure 112021050315304-pat00001
, 5% CO2조건으로 배양하였다.
24시간 경과 후 상기 배지를 FBS-Free DMEM low glucose로 배지를 교환하였으며, 배지 교환 후 24시간 경과 후 지방유래줄기세포의 배양 배지를 걷어 분별원심분리(differential centrifugation) 방법으로 1000rpm조건으로 원심분리하여 세포를 제거하였다.
상기 세포가 제거된 배양 배지를 thermo exosome 추출 kit(Thermo Fisher scientific)을 사용하여 제조사의 지침에 따라 대장암 표적 엑소좀을 확보하였다.
여기에, 상기 과정을 통하여 확보한 표적 엑소좀에 Neon(invitrogen)을 사용하여 BRD4 저해제로서 JQ1을 전기천공법(electroporation)을 사용하여 표적 엑소좀 내에 형질전환하였으며 이를 통해 대장암 및 super enhancer 부위 모두에 이중 표적이 가능한 엑소좀을 추가적으로 제작하였다.
실시예 2. 지방유래줄기세포 유래의　표적 엑소좀의 특성 분석
본 발명의 대장암에 특이적으로 작용하는 표적 엑소좀에 대한 구조 분석을 위하여 투과전자현미경(TEM) 및 유세포분석기 (FACS)을 이용하여 분석하였다. 이에 대한, 엑소좀의 FACs,　TEM　분석 결과를 도 3에 나타내었다.
지방유래줄기세포 배양액에서 분리된 엑소좀은 나노미터 단위의 미세한 구형 구조를 갖는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 유세포분석기 (FACS)를 이용하여 엑소좀 표면 마커인　CD81, CD63, 및 CD9의 발현이 확인됨에 따라 분리된 엑소좀은 전형적인 엑소좀의 특성을 갖는 것을 알 수 있다(도 3).
실시예 3. 지방유래줄기세포 유래의　표적 엑소좀의 세포 독성 평가
엑소좀(Cont), 표적 엑소좀(T-Exo), BRD4 저해제로서 JQ1을 12.5uM를 주입한 표적 엑소좀(T-Exo+JQ1(12.5)) 및 BRD4 저해제로서 JQ1을 25uM를 주입한 표적 엑소좀(T-Exo+JQ1(25))에 MTT assay 방법을 통하여 24시간, 48시간 동안 처리 시의 세포독성을 측정하였다.
MTT assay 방법을 통하여, 엑소좀(Cont) 및 표적 엑소좀(T-Exo) 대지 JQ1을 12.5uM를 주입한 표적 엑소좀(T-Exo+JQ1(12.5)) 및 JQ1을 25uM를 주입한 표적 엑소좀(T-Exo+JQ1(25))에서 cell viability가 억제됨을 알 수 있었으며, 이 중 JQ1을 12.5uM 보다 25uM으로 첨가한 경우 보다 cell viability가 억제됨을 확인할 수 있었다(도 4).
실시예 4. 지방유래줄기세포 유래의　표적 엑소좀의 종양생성 억제능 평가
표적 엑소좀(T-Exo), BRD4 저해제로서 JQ1을 12.5uM를 주입한 표적 엑소좀(T-Exo+JQ1(12.5)) 및 BRD4 저해제로서 JQ1을 25uM를 주입한 표적 엑소좀(T-Exo+JQ1(25))을 준비하였다.
여기에, 세포의 전이능을 관찰하기 위하여　wound　healing　assay를 진행하였다. 실험결과, wound healing assay(48h)를 수행했을 때 농도 의존적으로 cell migration이 억제됨을 확인할 수 있었다(도 5).
추가적으로, colony 억제능을 확인하기 위하여 colony assay를 수행하였으며, 농도 의존적으로 colony가 억제됨을 확인할 수 있었다(도 6).
실시예 5. 대장암세포주인 HCT116에서의 지방유래줄기세포 유래 표적 엑소좀의 효능 평가
지방유래줄기세포 유래 엑소좀 대비 본 발명에 따른 재조합 벡터가 클로닝된 지방유래줄기세포 유래 대장암 표적 엑소좀의 항암 효능을 평가하기 위하여 대장암세포주인 HCT116에 지방유래줄기세포 유래 엑소좀(Exo), BRD4 저해제로서 JQ1을 12.5uM를 주입한 엑소좀(Exo+JQ) 및 BRD4 저해제로서 JQ1을 12.5uM를 주입한 본 발명에 따른 재조합 벡터가 클로닝된 지방유래줄기세포 유래 대장 암 표적 엑소좀(T-Exo+JQ)를 처리하였다.
세포사멸 기전에 관여하는 세포사멸 인자(pro-apoptotic factor)인 cleaved PARP, cleaved caspase3, cleaved caspase9, Bax의 발현 수준 및 항-세포사멸 인자(anti-apoptotic factor)인 Bcl-2의 발현 수준을 비교함으로써, 변화를 관찰하였다(도 7 및 도 8).
그 결과, 도 7 및 도 8에 나타낸 바와 같이, BRD4 저해제로서 JQ1을 12.5uM를 처리한 군에서 cleaved PARP, cleaved caspase3, cleaved caspase9 과 Bax의 발현 수준이 Exo+JQ 보다 tExo+JQ 에서 증가하고, Exo+JQ 보다 tExo+JQ 에서 BCL-2의 발현 수준이 감소되는 경향을 확인할 수 있었다.
실시예 6. 대장암세포주 HCT116 이식에 따른 대장암 동물 모델을 이용한 지방유래줄기세포 유래 표적 엑소좀의 효능 평가
BALB/C Nude mouse(in vivo)에 대장암세포주인 HCT116을 5x105으로 이식하여 대장암을 유도한 뒤, 지방유래줄기세포 유래　엑소좀을 이용한 대장암의 치료 효능을 확인하고자 하였다. 지방유래줄기세포 유래 엑소좀(Exo), BRD4 저해제로서 JQ1을 주입한 엑소좀(Exo+JQ) 및 BRD4 저해제로서 JQ1을 주입한 본 발명에 따른 재조합 벡터가 클로닝된 지방유래줄기세포 유래 대장암 표적 엑소좀(T-Exo+JQ) 각각을 상기 구축된 종양모델에 Tail vein injection 방식으로 2주간 주입한 후, 마우스를 희생하여 대장암의 항 종양효과에 엑소좀이 미치는 영향을 확인하였다.
세포사멸 기전에 관여하는 세포사멸 인자(pro-apoptotic factor)인 cleaved PARP, cleaved caspase3, cleaved caspase9, Bid의 발현 수준 및 항-세포사멸 인자(anti-apoptotic factor)인 Bcl-XL의 발현 수준을 비교함으로써, 변화를 관찰하였다(도 9 및 도 10).
그 결과, 도 9 및 도 10에 나타낸 바와 같이, BRD4 저해제로서 JQ1을 처리한 군에서 cleaved PARP, cleaved caspase3, cleaved caspase9 및 Bid의 발현 수준이 증가하고, Bcl-XL의 발현 수준이 감소되는 경향을 확인할 수 있었다.
또한, 상기 BALB/C Nude mouse(in vivo)에 대장암세포주인 HCT116을 5x105으로 이식하여 구축된 대장암 동물 모델에서의 외형 관찰 결과에 의하여도 BRD4 저해제로서 JQ1을 처리한 군에서 종양의 크기가 억제되는 경향을 확인할 수 있었다(도 11).
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.
<110> The Catholic University of Korea Industry-Academic Cooperation Foundation <120> Colorectal cancer specific targeting exosome composition as a drug anticancer delivery and use thereof <130> DPC212250 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 81 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> incoding sequence <400> 1 acagcaggag catacttgtt gaatagaacc ctgtgggacc gatgcgaagc tccaccccga 60 gtagttccgt ggaatgttac t 81

Claims (10)

  1. 재조합 발현벡터로 형질전환된 엑소좀으로서,
    상기 재조합 발현벡터는 지방유래줄기세포의 엑소좀로 발현되는 유전자 내에 대장암 세포 표적 리간드를 인코딩하는 서열번호 1의 염기 서열로 표시되는 유전자가 삽입된 것을 특징으로 하는, 대장암 특이적 표적 엑소좀.
  2. 제1항에 따른 엑소좀을 포함하는, 대장암 예방 및 치료 약물 전달용 조성물.
  3. 제1항에 따른 엑소좀을 포함하는, 대장암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  4. 삭제
  5. 제3항에 있어서, 상기 엑소좀은 BET 저해제를 추가로 장착한 것을 특징으로 하는 대장암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  6. 제3항에 있어서, 상기 상기　엑소좀은 1 내지 50 μL/ml의 농도로 포함되는 것을 특징으로 하는 대장암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 삭제
  8. 제3항에 있어서, 상기 지방유래줄기세포는 인체 또는 동물유래 줄기세포인 것을 특징으로 하는 대장암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  9. (a) 지방유래줄기세포의 엑소좀으로 발현되는 유전자 내에 대장암 세포 표적 리간드를 인코딩하는 서열번호 1의 염기 서열로 표시되는 유전자를 도입하는 단계; 및
    (b) 상기 유전자가 도입된 세포를 배지에서 배양하여 엑소좀을 수득하는 단계;를 포함하는 대장암 예방 또는 치료용 엑소좀 제조방법.
  10. 삭제
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